ES2864328T3 - Utilización de fibroblastos gingivales en el tratamiento de la alopecia - Google Patents

Abstract

Producto derivado de fibroblastos gingivales para su utilización en el tratamiento o la prevención de la alopecia, caracterizado por que dicho producto derivado de fibroblastos gingivales se selecciona entre i) fibroblastos gingivales, por ejemplo, recogidos directamente del tejido gingival, ii) fibroblastos gingivales cultivados, iii) un extracto de fibroblastos gingivales y iv) un medio acondicionado por fibroblastos gingivales.

Description

DESCRIPCIÓN

Utilización de fibroblastos gingivales en el tratamiento de la alopecia

La presente invención se refiere a la utilización de fibroblastos gingivales o de productos derivados de los mismos para limitar la caída del cabello y/o promover su crecimiento. Más particularmente, la invención se refiere a un producto derivado de fibroblastos gingivales para su utilización en el tratamiento o la prevención de la alopecia, así como en la promoción del crecimiento natural del cabello y/o en la lucha contra la caída natural del mismo.

El crecimiento y la renovación del cabello están determinados principalmente por la actividad de los folículos pilosos. En el ser humano, los folículos pilosos tienen, como en los ratones y otros mamíferos con piel, un ciclo de renovación que comprende las tres fases: anágena, catágena y telógena. La fase anágena, o fase de crecimiento, dura varios años y hace que el pelo crezca más. A esto le sigue una fase catágena, o fase de transición, que dura unas 3 semanas, luego una fase telógena, o fase de reposo, al final de la cual el pelo viejo cae y da paso a un nuevo folículo en fase anágena (Cotsarelis et al., Trends in Molecular Medicine, Vol. 7 n° 7, 2001). Por lo tanto, el cabello se renueva constantemente y, de los 100.000 a 150.000 cabellos de una cabeza, la mayoría está en la fase de crecimiento (es decir, alrededor del 85 % en la fase anágena, el 2 % en la fase telógena y más del 10 % en la fase de caída). De media, el ser humano pierde entre 50 y 150 cabellos al día, esta pérdida de cabello "normal" suele predominar a finales del verano y en primavera (hasta unos 175 cabellos perdidos al día). Una pérdida de cabello de más de 100 a 150 cabellos al día se considerará por tanto patológica si se prolonga durante un largo periodo de tiempo, que puede ser de hasta dos meses.

El término alopecia designa la pérdida parcial o general del cabello. En la alopecia pueden estar implicados muchos factores, como por ejemplo, los factores genéticos, la edad, el sexo, las enfermedades, el estrés, los problemas hormonales, los efectos secundarios de los medicamentos, las cicatrices. Es posible distinguir varias formas de alopecia:

- alopecia androgénica hereditaria: es la más frecuente. La caída temprana del cabello se produce en individuos predispuestos genéticamente y afecta en particular a los hombres. Se manifiesta por una disminución del volumen del cabello, incluso una calvicie, y afecta al 50 % de los hombres mayores de 50 años (Yazdan P. Semin Cutan Med Surg 2012; 31: 258-266);

- alopecia posmenopáusica: se trata de la causa más común de calvicie en las mujeres. En la mujer, la pérdida de cabello es más difusa y extensa que en los hombres. La alopecia difusa femenina es un trastorno que suele comenzar en la menopausia y afecta a cerca del 40 % de las mujeres mayores de 70 años (Yazdan P. Semin Cutan Med Surg 2012; 31: 258-266). El término difuso ilustra que, a diferencia del hombre, la pérdida de cabello afecta a todo el cuero cabelludo, de forma homogénea;

- alopecia aguda: puede estar relacionada con un tratamiento de quimioterapia, estrés, deficiencias nutricionales significativas, carencia de hierro, trastornos hormonales;

- alopecia cicatricial: puede estar causada por problemas de la piel (tumor, quemadura, pelada), radiación aguda, lupus eritematoso o parásitos (tiña, liquen);

- alopecia areata: parece ser de origen autoinmunitario y se caracteriza por una afectación en placas más o menos grandes y en uno o varios lugares; y

- alopecia congénita: rara, corresponde a una ausencia de raíces o a anomalías del cabello (mutaciones).

La alopecia está relacionada esencialmente con una alteración de la renovación capilar que, en un primer momento, causa una aceleración de la frecuencia de los ciclos en detrimento de la calidad del cabello, y después, de su cantidad. El fenómeno más frecuente es la reducción del ciclo de crecimiento (fase anágena) debido a la detención de la proliferación celular. La consecuencia es una inducción prematura de la fase catágena y un mayor número de folículos pilosos en la fase telógena y, por tanto, una mayor pérdida de cabello. Para luchar contra la alopecia, es por tanto necesario reiniciar el ciclo piloso, por ejemplo, activando la fase anágena.

Las industrias cosmética y farmacéutica llevan muchos años buscando composiciones que permitan no sólo eliminar o reducir la alopecia, en particular la androgénica, sino también para estimular el crecimiento natural del cabello y/o ralentizar su caída por razones puramente estéticas, especialmente en los individuos que no padecen alopecia y que, sin embargo, desean tener un cabello más grueso y/o más largo.

El tratamiento de la alopecia, así como el fomento del crecimiento natural del cabello, han sido objeto de numerosas investigaciones y hay disponibles varios productos o técnicas.

Hay muchos compuestos en la bibliografía destinados a tratar o prevenir la alopecia y a restaurar o promover el crecimiento del cabello o del pelo. Por ejemplo, la finasterida (Propecia®) es capaz de estabilizar la caída del cabello y, en algunos casos, permitir un crecimiento más o menos importante. No obstante, este compuesto presenta numerosos efectos secundarios indeseables tales como la disminución de la libido o la depresión. En lo que respecta al minoxidilo (Rogaine®), es otra composición comercializada para tratar la calvicie; no obstante, parece que el cabello obtenido gracias al producto se cae cuando se deja de aplicar.

También se comercializan agentes cosméticos para dar volumen al cabello fino, especialmente en los champús. Sin embargo, no estimulan el crecimiento del cabello y su efecto también cesa una vez que se deja de utilizar.

También se han desarrollado procedimientos de microinjerto. Esta técnica consiste en tomar injertos de cabello de la coronilla (o pelo perenne) e injertarlos en la parte superior de la cabeza. Sin embargo, algunos injertos pueden caerse entre 2 y 4 semanas después del trasplante y esta técnica requiere varias intervenciones para ser eficaz.

Las células madre han recibido recientemente mucha atención debido a su capacidad para regenerar tejidos y órganos. Así, otro método posible sería introducir células madre capaces de diferenciarse en un folículo piloso para promover el crecimiento del cabello en la piel humana (US2008254006).

Así, a pesar de los numerosos avances en este asunto, todavía se necesitan nuevos tratamientos capaces de acelerar el crecimiento/ralentizar la caída del cabello y/o del pelo y de aumentar la densidad de folículos pilosos, ya sea en el caso de una alopecia o de la caída natural del cabello y/o del pelo. Estas necesidades se resuelven con la presente invención, que se describe a continuación.

Resumen de la invención

La presente invención surge del hallazgo inesperado, por los inventores, de que la administración de fibroblastos gingivales es capaz de estimular significativamente el crecimiento del cabello o del pelo.

Así, la invención se refiere a un producto derivado de fibroblastos gingivales para su utilización en el tratamiento o la prevención de la alopecia.

Más particularmente, la invención se refiere a un producto derivado de fibroblastos gingivales para su utilización en el tratamiento o la prevención de la alopecia androgénica hereditaria, la alopecia posmenopáusica, la alopecia aguda o la alopecia areata.

La invención también se refiere a un producto derivado de fibroblastos gingivales, para su utilización en el tratamiento o la prevención de la alopecia, administrado por vía intradérmica o tópica.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a la utilización cosmética de un producto derivado de fibroblastos gingivales para limitar la caída del cabello/pelo y/o promover su crecimiento y/o aumentar la densidad de folículos pilosos. Más particularmente, esta utilización permite promover el crecimiento del cabello y aumenta la densidad de folículos pilosos. De manera preferida, esta utilización cosmética tiene como objetivo luchar contra la caída natural del cabello/pelo y/o estimular su crecimiento natural y/o su densidad natural.

En un aspecto preferido, la presente invención se refiere a la utilización cosmética de un producto derivado de fibroblastos gingivales para limitar la caída del cabello/pelo y/o promover su crecimiento y/o aumentar la densidad de folículos pilosos en un individuo que presenta las consecuencias de una alopecia.

En otro aspecto, la presente invención se refiere igualmente a un procedimiento para limitar la caída del cabello/pelo y/o promover su crecimiento y/o aumentar la densidad de folículos pilosos, comprendiendo una etapa de administración de un producto derivado de fibroblastos gingivales a un individuo.

Más particularmente, este método de tratamiento comprende o consiste en las siguientes etapas:

o extraer fibroblastos gingivales de un individuo,

o eventualmente, cultivar los fibroblastos gingivales,

o obtener un producto derivado de fibroblastos gingivales, y

o administrar el producto derivado de fibroblastos gingivales.

Según la presente invención, el producto derivado de fibroblastos gingivales puede seleccionarse entre i) fibroblastos gingivales, por ejemplo, recogidos directamente del tejido gingival, ii) fibroblastos gingivales cultivados, iii) un extracto de fibroblastos gingivales y, iv) un medio acondicionado por fibroblastos gingivales.

La presente invención puede utilizarse en asociación con tratamientos conocidos para la alopecia o con moléculas conocidas para favorecer el crecimiento del cabello/pelo o limitar su caída, como por ejemplo, la finasterida, el minoxidilo, o beneficiar a un individuo que se ha sometido o se va a someter a un microinjerto.

Descripción de las figuras

Figura 1. Eficacia superior de los fibroblastos gingivales humanos con respecto a las células estromales mesenquimatosas (CEM) para promover el crecimiento del pelo. La observación de los animales 28 días después de la irradiación gamma (25 Gy) de la pata trasera de ratones NOD/SCID injertados al día siguiente de la irradiación muestra que las 3 concentraciones de fibroblastos gingivales humanos utilizadas estimulan el crecimiento del pelaje. Las CEM de médula ósea humana no tienen esta eficacia.

Figura 2. Efecto similar de los fibroblastos gingivales humanos y las CEM en el control de la inflamación y la regulación de la remodelación de la matriz dérmica. Análisis del ARNm de la MMP-9 (A) y de la IL-6 (B), 40 días después de la irradiación (25 Gy) en la piel y los músculos de animales injertados al día siguiente de la irradiación no mostraron diferencias significativas en la expresión entre las CEM (2,5 x 106 células injertadas) y las dos concentraciones más altas de fibroblastos gingivales humanos (2,5 x 106 y 1,5 x 106 células injertadas). Por lo tanto, las CEM y los fibroblastos gingivales inhiben de forma comparable la inducción inducida por la radiación de la expresión de la MMP-9 (metaloproteinasa de la matriz 9; implicada en la degradación de la matriz extracelular) y de la IL-6 (interleucina 6; implicada en el proceso inflamatorio).

Figura 3. Efecto superior de los fibroblastos gingivales humanos con respecto a las CEM en la regulación de la diferenciación epidérmica. El análisis histológico (A) 40 días después de la irradiación (25 Gy) en la piel de los animales trasplantados al día siguiente de la irradiación muestra una disminución del engrosamiento de la epidermis inducido por la radiación por parte de los fibroblastos gingivales humanos. Lo que no es el caso para las CEM. La cuantificación del espesor epidérmico (B) muestra que este efecto regulador de la diferenciación epidérmica por parte de los fibroblastos gingivales es dependiente de la dosis.

Figura 4. Eficacia superior de los fibroblastos gingivales humanos con respecto a las CEM para promover el crecimiento epidérmico. El análisis de los ARNm de los factores considerados como marcadores de proliferación (A; Ki67) o que favorecen la proliferación de los queratinocitos (B; EGF y KGF), 49 días después de la irradiación (30 Gy) en la piel de los animales injertados 21 días después de la irradiación, muestra una estimulación de su expresión por parte de los fibroblastos gingivales humanos (1,5 x 106 células injertadas). Esta estimulación no existe para las CEM (2,5 x 106 células injertadas). La (A)-Ki67 es una proteína nuclear necesaria para la proliferación celular. La expresión de su ARNm desciende 1 semana después de la irradiación gamma, aunque luego vuelve a un valor cercano al existente en la piel no irradiada. Sólo el injerto de fibroblastos gingivales estimula su expresión tardíamente después de la irradiación (49 días), mostrando una multiplicación celular necesaria para la reorganización de la zona lesionada. (B)-Sólo los fibroblastos gingivales humanos permiten recuperar un nivel de expresión del EGF (factor de crecimiento epidérmico) comparable al de una piel no irradiada 49 días después de la irradiación. Con respecto al KGF (factor de crecimiento de los queratinocitos o FGF-7), sólo los fibroblastos gingivales todavía estimulan su expresión 49 días después de la irradiación. Estos dos factores son importantes para permitir el crecimiento de los queratinocitos, que no sólo participan en la organización de la epidermis interfolicular, sino también en la proliferación de los queratinocitos de los folículos pilosos.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a la utilización de un producto derivado de fibroblastos gingivales para limitar la caída del cabello/pelo y/o promover su crecimiento. La invención se refiere igualmente a un producto derivado de fibroblastos gingivales para tratar o prevenir la alopecia, así como su utilización para promover el crecimiento natural del cabello y/o ralentizar la caída normal del cabello en individuos que no padecen alopecia.

Por "cabello/pelo", se entiende cabello, pelo, cejas, pestañas y/o pelaje. Preferentemente, por "cabello/pelo", se entiende cabello.

Así, en el contexto de la presente invención, el término "sujeto" o "individuo" se refiere preferentemente a un mamífero, más preferentemente a un ser humano. El individuo también puede ser una mascota tal como un gato, un perro, un hurón o un conejo.

Por "alopecia" se entiende la pérdida total o parcial del cabello y/o del pelo, por ejemplo, relacionada con la reducción del crecimiento del pelo y/o con la aceleración de la caída del cabello/pelo. Este término incluye, pero no se limita a, la alopecia androgénica hereditaria, la alopecia posmenopáusica, la alopecia aguda, la alopecia cicatricial, la alopecia areata y la alopecia congénita. Las consecuencias de la alopecia son una ausencia parcial o total, temporal o permanente, del cabello.

Por el término "tratamiento" o "tratar la alopecia" se entiende el cese de la alopecia, la reducción de la alopecia y/o el alivio de la alopecia. Así, "tratar la alopecia" comprende limitar la caída del cabello, promover el crecimiento del cabello, aumentar la densidad de folículos pilosos y/o regular las fases del ciclo del folículo piloso. En otras palabras, dicho tratamiento está dirigido a un sujeto que padece alopecia.

Por el término "prevenir" o "prevención de la alopecia" se entiende reducir el riesgo de aparición de la alopecia o ralentizar la progresión de la alopecia en un mamífero susceptible de desarrollar una alopecia. En otras palabras, dicha prevención está dirigida a un sujeto que padece alopecia.

Por "caída natural del cabello y/o del pelo" o "caída normal del cabello y/o del pelo" se entiende aquí una caída de cabello y/o de pelo observada habitualmente en un sujeto que presenta un ciclo piloso fisiológicamente normal (es decir, sano). De manera preferida, dicha caída es como mucho de cien cabellos al día. De manera más preferida, dicho sujeto no padece alopecia.

Por "crecimiento natural del cabello y/o del pelo" o "crecimiento natural del cabello y/o del pelo" se entiende aquí un crecimiento de cabello y/o de pelo observado habitualmente en un sujeto que presenta un ciclo piloso fisiológicamente normal (es decir, sano). De manera preferida, dicho sujeto no padece alopecia.

Por "densidad natural de folículos pilosos" se entiende aquí una densidad de folículos pilosos normalmente observada en un sujeto que presenta un ciclo piloso fisiológicamente normal. Así, en el ser humano, según el ciclo piloso y su proporción de pelo en fase anágena/telógena, dicha densidad varía según la zona del cuerpo de que se trate, con una media de 200 a 300 cabellos/cm2 en el cuero cabelludo, de 50 pelos/cm2 en la cara, y de 10 pelos/cm2 en el resto del cuerpo. De manera preferida, dicho sujeto no padece alopecia.

Por el término "limitar" o "ralentizar" se entiende frenar, reducir, disminuir y/o detener. Así, por "limitar o ralentizar la pérdida de cabello y/o de pelo" se entiende frenar, reducir, disminuir, o incluso detener, la caída de cabello y/o de pelo.

Por el término "promover", "estimular" o "aumentar" se entiende incrementar, amplificar y/o acelerar. Así, por "promover o estimular el crecimiento del cabello y/o del pelo" se entiende aumentar, incrementar, amplificar y/o acelerar, el crecimiento del cabello y/o del pelo.

Por "fibroblasto gingival" se entiende, en el sentido de la invención, las células mesenquimatosas que se encuentran en el tejido conjuntivo blando de las encías y que son capaces de remodelarlo y repararlo gracias a sus propiedades de síntesis, de migración, de adhesión y de proliferación. Los fibroblastos gingivales se describen particularmente en Gogly etal, (1997) Clin. Oral Invest. 1: 147-152; Gogly etal. (1998) Biochem. Pharmacol. 56: 1447-1454; and Ejeil et al. (2003) J. Periodontol. 74: 188-195.

Por "producto derivado de fibroblastos gingivales" se entiende cualquier producto obtenible a partir de fibroblastos gingivales per se o que contenga secreciones de fibroblastos gingivales. Por lo tanto, se prefiere que el producto derivado de fibroblastos gingivales según la invención se seleccione del grupo constituido por: i) fibroblastos gingivales, por ejemplo, recogidos directamente del tejido gingival, ii) fibroblastos gingivales cultivados, iii) un extracto de fibroblastos gingivales y, iv) un medio acondicionado por fibroblastos gingivales.

Los cultivos de fibroblastos gingivales adecuados para su utilización en la presente invención pueden obtenerse mediante las técnicas clásicas, que son conocidas por sí mismas por el experto en la materia (Barlovatz-Meimon et al., Culture de cellules animales, pág. 898, ill. París: INSERM 2003).

El extracto de fibroblastos gingivales según la invención puede obtenerse por cualquier método de fragmentación celular conocido por el experto en la materia. En particular, el extracto de fibroblastos gingivales según la invención puede ser un extracto de membrana, un extracto citoplasmático o un extracto nuclear.

El medio acondicionado por fibroblastos gingivales según la invención se refiere a cualquier medio que se haya puesto en contacto con fibroblastos gingivales. El medio puede ser un medio de cultivo celular líquido, por ejemplo, el medio "Dulbecco's modified Eagle" o, preferentemente, un medio de cultivo sin suero, como por ejemplo, el medio descrito en el documento EP1972685, el documento US7951593 y el documento CN102747033. Preferentemente, el medio se ha puesto en contacto con los fibroblastos gingivales durante un tiempo suficiente para que los fibroblastos gingivales hayan secretado compuestos en el medio. Por ejemplo, el medio se ha puesto en contacto con los fibroblastos gingivales durante 1 a 7 días, preferentemente 1 día y más preferentemente 1 día en un medio sin suero. El medio acondicionado según la invención contiene preferentemente moléculas secretadas por las células como constituyentes de la matriz extracelular, factores de crecimiento y citocinas. De forma preferida, el medio acondicionado no contiene restos celulares.

De forma preferida, los productos derivados de los fibroblastos gingivales según la invención comprenden células vivas que hacen posible una acción duradera. Este modo de realización es particularmente preferido en el marco de la prevención o el tratamiento de la alopecia. Sin embargo, la presencia de células vivas es poco deseable en cosmética. Así, según otro modo de realización preferido de la invención, los productos derivados de los fibroblastos gingivales según la invención no comprenden células vivas, más ventajosamente en el marco de la lucha contra la caída natural del cabello/pelo y/o la promoción natural de su crecimiento y/o el aumento de la densidad natural de folículos pilosos.

Cuando los productos derivados de los fibroblastos gingivales son fibroblastos gingivales, por ejemplo, recogidos directamente del tejido gingival (i), estos pueden obtenerse suspendiendo los fibroblastos gingivales en un medio fisiológicamente aceptable directamente después de la recogida de un individuo o después de una etapa de cultivo como se describió anteriormente.

Como se muestra en los ejemplos, esta invención se basa en los experimentos realizados por los inventores sobre la eficacia de los fibroblastos gingivales en el tratamiento de la alopecia y, particularmente, de las células estromales mesenquimatosas (CEM) de la médula ósea y de los fibroblastos gingivales. Más particularmente, esta invención se basa en el descubrimiento inesperado por parte de los inventores de la eficacia superior de los fibroblastos gingivales y de los productos derivados de los fibroblastos gingivales con respecto a las células estromales mesenquimatosas para promover el crecimiento del cabello/pelo, aumentar la densidad de folículos pilosos y regular las fases del ciclo del folículo piloso.

En efecto, en ensayos in vivo, los inventores han demostrado que la administración de una suspensión de fibroblastos gingivales humanos a una piel irradiada, una lesión reciente o establecida, implicaba un crecimiento denso y uniforme del pelo en pocas semanas. De una forma aún más sorprendente, la comparación de la eficacia de los fibroblastos gingivales humanos con las CEM mostró que la longitud del pelo mejoraba significativamente con los productos derivados de los fibroblastos gingivales en comparación con las CEM.

Un profundo estudio de los mecanismos implicados en este crecimiento acelerado mostró que el efecto de las CEM y de los fibroblastos gingivales o de los productos derivados de los fibroblastos gingivales sobre los marcadores moleculares de la remodelación de la matriz y de la inflamación era similar. Por el contrario, los fibroblastos gingivales y los productos derivados de los fibroblastos gingivales muestran un efecto mejorado en comparación con las CEM en la diferenciación epidérmica y la regulación de su espesor. Esto induce una estimulación de los folículos pilosos, capaces entonces de generar un crecimiento más rápido del cabello/pelo.

Las aplicaciones de los productos derivados de los fibroblastos gingivales según la invención tienen como objetivo limitar la caída del cabello/pelo y/o promover su crecimiento y/o aumentar la densidad de folículos pilosos, más particularmente en un sujeto que padece alopecia o en un sujeto cuyo ciclo piloso es fisiológicamente normal.

La presente invención se refiere, pues, en un primer aspecto, a un producto derivado de fibroblastos gingivales para su utilización en el tratamiento o la prevención de la alopecia. Más particularmente, la presente invención se refiere a un producto derivado de fibroblastos gingivales, como un medicamento, para el tratamiento o la prevención de la alopecia.

Según otro aspecto, la invención se refiere a una combinación del producto derivado de fibroblastos gingivales, tal como se ha definido anteriormente, y al menos un agente anticaída del cabello para una utilización por separado, simultánea o prolongada en el tiempo, en la prevención o el tratamiento de la alopecia. Los agentes anticaída del cabello particularmente preferidos según la invención son la finasterida y el minoxidilo.

Según otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición que comprende un producto derivado de fibroblastos gingivales para su utilización en el tratamiento o la prevención de la alopecia. De manera preferida, dicha composición comprende además al menos un agente anticaída del cabello, tal como se ha definido más arriba. La presente invención se refiere igualmente a la utilización de un producto derivado de fibroblastos gingivales para la preparación de una composición destinada al tratamiento o la prevención de la alopecia.

Tal como se indicó anteriormente, la presente invención tiene por objeto limitar la caída del cabello/pelo y/o promover su crecimiento y/o aumentar la densidad de folículos pilosos. De forma preferida, la presente invención tiene por objeto promover el crecimiento del cabello/pelo y aumentar la densidad de folículos pilosos. Los productos derivados de fibroblastos gingivales según la invención pueden utilizarse en particular con fines puramente estéticos.

Así, otro aspecto de la presente invención se refiere a la utilización cosmética de un producto derivado de fibroblastos gingivales para limitar la caída del cabello/pelo y/o promover su crecimiento y/o aumentar la densidad de folículos pilosos. De manera preferida, dicha pérdida y/o crecimiento y/o densidad del cabello/pelo son naturales según las definiciones proporcionadas anteriormente. De manera más preferida, el sujeto en cuestión no padece alopecia.

La presente invención se refiere igualmente a la utilización cosmética de un producto derivado de fibroblastos gingivales en una composición para limitar la caída del cabello/pelo y/o promover su crecimiento y/o aumentar la densidad de folículos pilosos. De manera preferida, dicha pérdida y/o crecimiento y/o densidad del cabello/pelo son naturales según las definiciones proporcionadas anteriormente. De manera más preferida, el sujeto en cuestión no padece alopecia.

De forma preferida, la presente invención se refiere a la utilización cosmética de un producto derivado de fibroblastos gingivales en una composición para promover el crecimiento del cabello/pelo y/o aumentar la densidad de folículos pilosos. De manera preferida, dicho crecimiento y/o densidad del cabello/pelo son naturales según las definiciones proporcionadas anteriormente. De manera más preferida, el sujeto en cuestión no padece alopecia.

En el marco de una utilización cosmética de un producto derivado de fibroblastos gingivales, dicho producto derivado es preferentemente iv) un medio acondicionado por fibroblastos gingivales. De manera preferida, para esta utilización, dicho medio acondicionado por fibroblastos gingivales no contiene células vivas.

Alternativamente, de forma preferida, la presente invención se refiere a la utilización cosmética de un producto derivado de fibroblastos gingivales en un individuo que presenta una ausencia parcial o total de cabello/pelo. Esta ausencia parcial o total de cabello/pelo puede corresponder a las consecuencias de una alopecia. La ausencia parcial o total de cabello/pelo también puede corresponder a las consecuencias de una operación quirúrgica.

La presente invención se refiere igualmente a un procedimiento para limitar la caída del cabello/pelo y/o promover su crecimiento y/o aumentar la densidad de folículos pilosos, comprendiendo una etapa de administración de un producto derivado de fibroblastos gingivales a un individuo. En el contexto de la presente invención, dicho individuo puede ser preferentemente un sujeto que padece alopecia o un sujeto cuyo ciclo piloso es fisiológicamente normal.

De forma preferida, la invención trata de un procedimiento para promover el crecimiento del cabello que comprende una etapa de administrar un producto derivado de fibroblastos gingivales a un individuo.

De forma más preferida, el procedimiento según la presente invención comprende o consiste en las siguientes etapas: - recoger los fibroblastos gingivales de un individuo,

- eventualmente, cultivar los fibroblastos gingivales,

- obtener un producto derivado de fibroblastos gingivales, y

- administrar el producto derivado de fibroblastos gingivales.

En un aspecto particularmente preferido, la presente invención se refiere a un procedimiento de tratamiento de la alopecia que comprende una etapa de administrar un producto derivado de fibroblastos gingivales a un individuo. Los modos de realización preferidos son como los definidos anteriormente.

En otro aspecto preferido, la presente invención se refiere a un procedimiento para promover el crecimiento natural del cabello/pelo y/o limitar la caída natural del cabello/pelo y/o aumentar la densidad natural de folículos pilosos que comprende una etapa de administrar un producto derivado de fibroblastos gingivales a un individuo. Los modos de realización preferidos son como los definidos anteriormente.

La composición según la invención contiene un producto derivado de fibroblastos gingivales (células, extracto y/o medio acondicionado) en cantidad suficiente para obtener el efecto buscado. El efecto buscado según la presente invención es limitar la caída del cabello/pelo, promover su crecimiento, aumentar la densidad de folículos pilosos y/o regular las fases del ciclo del folículo piloso.

Cuando el producto derivado de fibroblastos gingivales comprende células, éstas están presentes a una concentración comprendida entre 0,25 y 5 x 106 células/ml, y más preferentemente entre 1,5 y 2,5 x 106 células/ml.

Uno de los aspectos sorprendentes de la invención reside en el hecho de que los productos derivados de los fibroblastos gingivales son mucho más eficaces para estimular el folículo piloso que otros productos que contienen células mesenquimatosas, particularmente las CEM de médula ósea. Las CEM de médula ósea comprenden aproximadamente un 10 % de células progenitoras (Umbilical Cord Blood), ISBN: 978-981-283-329-7; Cap. 9 M Prat-Lepesant etal.), mientras que los fibroblastos gingivales según la invención comprenden un máximo del 3 % de células progenitoras (Fournier BP et al., (2010) Tissue Eng Part A. 16 (9): 2891-9). Por lo tanto, este efecto no es el resultado de un mayor número de células progenitoras en los productos de la invención.

En un modo de realización específico, los productos derivados de fibroblastos gingivales pueden comprender además células progenitoras, preferentemente menos del 20, el 10 % o el 5 %.

En un modo de realización específico, los fibroblastos gingivales pueden ser, por ejemplo, los descritos en Fournier BP et al, (2010) Tissue Eng Part A. 16 (9): 2891 -9.

El modo de administración depende del producto derivado y de la localización de la zona tratada.

Según un aspecto de la invención, el producto derivado de fibroblastos gingivales está presente en una composición adaptada para una aplicación intradérmica o tópica en el cuero cabelludo y la piel, que contiene un medio fisiológicamente aceptable.

En particular, una composición "adaptada para la administración tópica" puede presentarse en forma de solución acuosa, de una emulsión de consistencia líquida o semilíquida obtenida por dispersión de una fase grasa en una fase acuosa o viceversa, o incluso de una microemulsión, de microcápsulas, micropartículas. El pH de una composición según la invención, cuando comprende al menos una fase acuosa, está comprendido preferentemente entre 4 y 9, preferentemente entre 4 y 7, ventajosamente de 5 a 6.

Un "medio fisiológicamente aceptable" es, según la invención, un medio cosmética o farmacéuticamente aceptable compatible con la piel, las mucosas, el cabello humano y/o el pelaje de mamíferos.

Preferentemente, el individuo según la invención es un mamífero, más preferentemente se trata de un ser humano. El individuo puede ser igualmente una mascota, como un gato, un perro, un hurón, un conejo.

Los procedimientos para recoger, cultivar y conservar los fibroblastos gingivales son bien conocidos por el experto en la materia y se describen en particular en Naveau et al. (2006) J. Periodontol. 77: 238-47 y en Gogly et al (2007) Arterioscler. Thomb. Vase. Biol. 27: 1984-90.

Los fibroblastos gingivales pueden ser heterólogos, es decir, obtenidos a partir de un individuo de otra especie.

Preferentemente, los fibroblastos gingivales utilizados según la invención son alógenos, es decir, obtenidos a partir de otro individuo de la misma especie. De forma aún más preferida, los fibroblastos gingivales utilizados según la invención son autólogos, es decir, se recogen del individuo al que se le va a administrar el producto derivado de los fibroblastos. Ventajosamente, los fibroblastos gingivales son una fuente casi ilimitada de células autólogas para su administración.

Ventajosamente, los fibroblastos gingivales son fáciles de recoger y cultivar. Además, los fibroblastos gingivales presentan una velocidad de crecimiento elevada.

Ventajosamente, los fibroblastos gingivales son más eficaces para estimular el crecimiento del cabello/pelo que otros fibroblastos o células mesenquimatosas, particularmente las CEM de médula ósea.

La utilización de un producto derivado de fibroblastos gingivales según la invención se aplica preferentemente en las zonas del cuero cabelludo que presentan una caída anormal de cabello o una ausencia de cabello. La identificación de estas zonas se realiza fácilmente antes de la utilización o la aplicación del producto derivado de fibroblastos gingivales según la invención.

La administración a un individuo como el definido anteriormente de un producto derivado de fibroblastos gingivales según la invención, preferentemente cerca o en el lugar del cuerpo que se va a tratar, puede realizarse mediante cualquier método conocido por el experto en la materia. Por ejemplo, inyectándolo en el cuero cabelludo con la ayuda de microagujas.

La composición según la invención es una composición para su aplicación intradérmica o tópica. Ventajosamente, el producto derivado de fibroblastos gingivales está presente en una composición adaptada para una aplicación intradérmica que contiene un medio fisiológicamente aceptable.

Se prefiere que el producto derivado de fibroblastos gingivales o la composición que comprende dicho producto se administre por inyección subcutánea o intramuscular.

Además, el producto derivado de fibroblastos gingivales puede administrarse libre (por ejemplo, en solución o en suspensión) o asociado a un portador (por ejemplo, encapsulado en microcápsulas).

Según la invención, aunque sea eficaz por sí mismo, el producto derivado de fibroblastos gingivales puede utilizarse en asociación con tratamientos conocidos para la alopecia o con moléculas conocidas por favorecer el crecimiento del cabello/pelo o limitar su caída. Por ejemplo, el producto derivado de fibroblastos gingivales puede utilizarse en asociación con finasterida o minoxidilo.

De forma preferida, según la presente invención, el producto derivado de fibroblastos gingivales puede utilizarse antes, durante o después de un microinjerto. Los procedimientos de microinjerto son bien conocidos por el experto en la materia (M.J. Kristine Bunagan et al. 2013 Dermatologie Clinics, 31: 1 págs. 141-153) y podrían beneficiarse ventajosamente del efecto de un producto derivado de fibroblastos gingivales sobre el crecimiento del cabello/pelo y la densidad de folículos pilosos. En efecto, la administración de un producto derivado de fibroblastos gingivales según la invención, debido a su efecto sobre el crecimiento del cabello/pelo y la densidad de folículos pilosos, puede dar lugar a una eficacia superior del microinjerto.

El producto derivado de fibroblastos gingivales según la invención puede utilizarse, por ejemplo, desde un mes antes hasta un mes después de un microinjerto, preferentemente desde 15 días antes hasta 15 días después de un microinjerto.

Ejemplo

Material y método

Cultivo de las células

Los fibroblastos gingivales proceden de donantes sanos. Tras la disociación enzimática de las biopsias de encías (colagenasa, dispasa), los fibroblastos gingivales se cultivan en un medio sin suero, en presencia de lisado de plaquetas (Doucet et al., J Cell Physiol. 2005; 205 (2): 228-36).

Las CEM se recogen a partir de la médula ósea de donantes sanos. Las CEM se cultivan en un medio sin suero, en presencia de lisado de plaquetas (Doucet et al., J Cell Physiol. 2005; 205 (2): 228-36).

Después de la amplificación, los fibroblastos gingivales y/o las CEM se desprenden de su soporte de cultivo y se suspenden en suero fisiológico antes de inyectarlos por vía subcutánea e intramuscular en el lugar de la lesión.

Modelo de ratón

Se irradiaron ratones NOD/SCID inmunocompetentes (posibilidad de injertar células humanas) (25-30 Gy) en una pata trasera (Bensidhoum et al, J Soc Biol. 2005; 199 (4): 337-41).

Injerto

Según la experiencia, el tratamiento se realizó en lesiones agudas (1 día después de la irradiación) o establecidas (21 días después de la irradiación). Cada experimento comprendía normalmente 5 animales por condición.

Las células se inyectaron por vía subcutánea e intramuscular en varios puntos de la zona de la lesión (de 15 a 20 puntos). El volumen de la suspensión celular fue de 200 pl (suero fisiológico). El efecto de la dosis de fibroblastos gingivales se estudió inyectando 2,5 x 106 o 1,5 x 106 o 0,5 x 106 células por ratón. Sólo se retuvo una concentración para las CEM (2,5 x 106) que se corresponde con la concentración utilizada en clínica humana para el tratamiento por irradiación accidental (Lataillade etal, Regen Med. 2007; 2 (5): 785-94. Bey etal., Wound Repair Regen. 2010; 18 (1): 50-8).

Análisis

Se realizó un seguimiento de los animales durante 4 a 6 semanas (dependiendo del experimento). Los animales se sacrificaron al final del experimento para su análisis. Según los experimentos, se realizó una detención intermedia (1 semana después de la terapia celular) en una parte de los animales.

El seguimiento "macroscópico" consistió en una observación regular de los animales, tomando fotografías de la zona lesionada.

Después del sacrificio de los animales, se recogieron los tejidos irradiados. Una parte para permitir el análisis histológico, la otra para realizar una extracción que permite el análisis de la expresión de los ARNm.

Resultados y conclusiones

La observación "macroscópica" muestra una mejora de la lesión tratada por los fibroblastos gingivales y las CEM, si el tratamiento se realizó en una lesión reciente o establecida. En presencia de fibroblastos gingivales se observa un crecimiento significativo del pelo (figura 1). Las CEM no inducen ese efecto en el crecimiento del pelaje.

La expresión de los ARNm de la MMP-9 y de la IL-6 no difiere entre los fibroblastos gingivales y las CEM, demostrando que ambos tipos de células son eficaces para estimular la remodelación dérmica e inhibir el proceso inflamatorio (figura 2). El análisis histológico muestra que los fibroblastos gingivales humanos regulan el espesor epidérmico inhibiendo el aumento de espesor inducido por la radiación (figura 3). Las CEM no regulan esta diferenciación de la epidermis. La estimulación de la expresión de Ki67 (un marcador de la actividad proliferativa) sólo después del trasplante de fibroblastos gingivales demuestra que éstos contribuyen de forma importante y duradera a la estimulación de las divisiones celulares necesarias para la remodelación de los tejidos (figura 4-A). Las CEM sólo tienen un efecto discreto y transitorio.

Los fibroblastos gingivales estimulan igualmente la expresión del EGF de forma duradera, permitiendo recuperar el nivel de expresión de la piel no irradiada. La estimulación de este factor en la lesión contribuye a la estimulación de las divisiones celulares necesarias para la reorganización de los tejidos. Las CEM no lo hacen de la misma manera intensa y duradera (figura 4-B).

Finalmente, la acción estimulante de los fibroblastos gingivales sobre la expresión del KGF indica una acción sobre la epidermis, y más concretamente sobre los queratinocitos; no teniendo este factor una acción estimulante sobre el crecimiento de los fibroblastos dérmicos (Rubin et al., Proc Natl Acad Sci USA. 1989; 86 (3): 802-6) (figura 4-B). En conclusión, a diferencia de las CEM derivadas de la médula ósea humana, los fibroblastos gingivales humanos estimulan fuertemente el crecimiento del pelo. Este efecto está relacionado con una acción más amplia a nivel epidérmico. Los fibroblastos gingivales estimulan igualmente de forma duradera la expresión de factores que favorecen la proliferación de las células epidérmicas, y en particular de los queratinocitos.

Claims (13)

REIVINDICACIONES

1. Producto derivado de fibroblastos gingivales para su utilización en el tratamiento o la prevención de la alopecia, caracterizado por que dicho producto derivado de fibroblastos gingivales se selecciona entre i) fibroblastos gingivales, por ejemplo, recogidos directamente del tejido gingival, ii) fibroblastos gingivales cultivados, iii) un extracto de fibroblastos gingivales y iv) un medio acondicionado por fibroblastos gingivales.

2. Producto derivado de fibroblastos gingivales para su utilización según la reivindicación 1, en donde la alopecia se selecciona del grupo que consiste en la alopecia androgénica hereditaria, la alopecia posmenopáusica, la alopecia aguda, la alopecia areata y la alopecia congénita.

3. Producto derivado de fibroblastos gingivales para su utilización según la reivindicación 1 o 2, caracterizado por que dicho fibroblasto gingival es de origen heterólogo, alógeno o autólogo.

4. Producto derivado de fibroblastos gingivales para su utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que dicho producto derivado de fibroblastos gingivales comprende células vivas.

5. Producto derivado de fibroblastos gingivales para su utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por que dicho producto derivado de fibroblastos gingivales se utiliza en asociación con un tratamiento de la alopecia seleccionado entre la finasterida, el minoxidilo o un microinjerto.

6. Composición que comprende un producto derivado de fibroblastos gingivales como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su utilización en el tratamiento o la prevención de la alopecia.

7. Composición según la reivindicación 6, que comprende además al menos un agente anticaída del cabello.

8. Combinación del producto derivado de fibroblastos gingivales como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y al menos un agente anticaída del cabello para una utilización por separado, simultánea o prolongada en el tiempo, en la prevención o el tratamiento de la alopecia.

9. Composición según la reivindicación 7 o combinación según la reivindicación 8, caracterizada por que dicho agente es finasterida o minoxidilo.

10. Utilización cosmética de un producto derivado de fibroblastos gingivales para limitar la caída del cabello/pelo y/o promover su crecimiento y/o aumentar la densidad de folículos pilosos, caracterizada por que dicho producto derivado de fibroblastos gingivales se selecciona entre i) fibroblastos gingivales, por ejemplo, recogidos directamente del tejido gingival, ii) fibroblastos gingivales cultivados, iii) un extracto de fibroblastos gingivales y iv) un medio acondicionado por fibroblastos gingivales.

11. Utilización según la reivindicación 10, caracterizada por que dicha caída y/o crecimiento y/o densidad son naturales.

12. Utilización según la reivindicación 10 u 11, caracterizada por que dicho fibroblasto gingival es de origen heterólogo, alógeno o autólogo.

13. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, caracterizada por que dicho producto derivado de fibroblastos gingivales no comprende células vivas.