ES2866948T3 - Dinucleótidos cíclicos como agonistas de STING (estimulador de genes de interferón) - Google Patents

Dinucleótidos cíclicos como agonistas de STING (estimulador de genes de interferón) Download PDF

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Morihisa Saitoh
Taisuke Kato
Yayoi Yoshitomi
Tomohiro Seki
Yasuo Nakagawa
Yusuke Tominari
Masaki Seto
Yusuke Sasaki
Masanori Okaniwa
Tsuneo Oda
Akito Shibuya
Kosuke HIDAKA
Zenyu Shiokawa
Shumpei Murata
Atsutoshi Okabe
Yoshihisa Nakada
Michiyo Mochizuki
Brian Scott Freeze
Taisuke Tawaraishi
Yasufumi Wada
Paul D Greenspan
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Abstract

Un compuesto que posee la fórmula (X): **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde: cada uno de R1 y R2 es independientemente un grupo hidroxi o un átomo de halógeno; B1 es **(Ver fórmula)** R18 es hidrógeno o alquilo C1-6; y R19 es un átomo de halógeno; B2 es: **(Ver fórmula)** o **(Ver fórmula)** y Q2 y Q4 son independientemente un átomo de oxígeno o un átomo de azufre.

Description

DESCRIPCIÓN
Dinucleótidos cíclicos como agonistas de STING (estimulador de genes de interferón)
Campo técnico
La presente divulgación proporciona un dinucleótido cíclico que tiene actividad agonista de STING (estimulador de genes de interferón), que puede ser útil como agente para la profilaxis o el tratamiento de cáncer y otras enfermedades.
Antecedentes de la invención
STING es un ácido nucleico que reconoce receptores diferentes de TLR (receptor tipo toll). Los ejemplos de ligandos naturales que pueden ser reconocidos incluye dinucleótidos cíclicos (CDN) derivados de protozoos/bacterias, 2',3'-cGAMP sintetizado mediante cGAS (GMP-AMP sintasa cíclica) anterior y similares (Trends in Immunology 35:88-93 (2014)). Se ha observado que 2',3'-cGAMP, que es uno de los ligandos naturales, se descompone mediante ENPP1 (ecto-nucleótido -pirofosfatasa/fosfodiesterasa), que es una de las pirofosfatasas/fosfodiesterasas, y que los demás CDN se descomponen mediante fosfodiesterasa (Nat Chem Biol 70:1043-1048 (2014); Cell Res 25:539-550 (2015); Biochemistry 55:837-849 (2016)). STING se activa mediante estos ligandos naturales e induce la fosforilación de TBK1 (cinasa de unión a TANK 1) en la posición posterior y activa la señal de IRF3 (factor de regulación de interferón 3) y la señal de NFkB en una posición posterior subsiguiente y, por lo tanto, se induce la respuesta de interferón (IFN) de tipo I (Trends in Immunology 35:88-93 (2014)). La importancia de la señal de STING sobre el cáncer se indica a través de una prueba mediante el uso de ratones con genes inactivados. Se ha observado que en ratones con aloinjertos tumorales mediante el uso de ratones con genes inactivados para STING y su señal posterior, IRF3, las células cancerosas crecen mediante la supresión del sistema inmunitario canceroso en comparación con ratones de tipo silvestre (Immunity 47: 830-842 (2014)). Además, también se ha observado que se suprime el crecimiento de células cancerosas en un ratón con aloinjerto tumoral mediante terapia de radiación, pero en ratones con genes inactivados para STING e IFNAR1 (receptor de interferón (alfa y beta)1, receptor de IFN tipo I producido por la señal posterior), se reduce el efecto mediante la terapia de radiación (Immunity 47:843-852 (2014)). Por estos motivos, se considera que STING tiene un papel importante en la supresión del crecimiento de células tumorales y la activación de la señal inmunitaria, la cual es inducida por la activación de STING, lleva a una actividad anticancerosa. Por lo tanto, se puede utilizar un agonista de STING como agente anticanceroso dirigido a la inmunidad del cáncer. Además, se considera que la activación de STING tiene un papel importante en el efecto inmunitario de las vacunas, dado que la activación produce una inmunidad natural (Ther Adv Vaccines 7:131-143 (2013)). Por lo tanto, un agonista de STING se puede utilizar como adyuvante para diversas vacunas.
Se conocen los siguientes dinucleótidos cíclicos.
El documento de patente 1 (WO 2014/093936) describe un compuesto representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000002_0001
donde cada símbolo es tal como se define en el documento de patente 1, el cual, de acuerdo con el documento de patente 1 es un activador de TBK1 dependiente de STING y es útil para el tratamiento de cáncer (particularmente cáncer sólido) y similares, y también es útil como adyuvante.
El documento de patente 2 (WO 2014/189805) describe un compuesto representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000003_0001
donde cada símbolo es tal como se define en el documento de patente 2, el cual, de acuerdo con el documento de patente 2 es un estimulador inmunitario por medio de STING y es útil para el tratamiento de cáncer y similares. El documento de patente 3 (WO 2015/077354) y el documento no de patente 8 (Cell reports 11, 1018-1030 (2015)) describen un compuesto representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000003_0002
donde cada símbolo es tal como se define en el documento de patente 3, el cual, de acuerdo con el documento de patente 3 es un agonista de STING y es útil para el tratamiento de cáncer y similares.
El documento de patente 4 (WO 2013/185052) y el documento no de patente 9 (Sci. Transl. Med. 283, 283ra52 (2015)) describen c-di-AMP, c-di-GMP, c-di-IMP, c-AMP-GMP, c-AMP-IMP y c-g Mp -IMP, los cuales, de acuerdo con el documento de patente 4 son activadores de TBK1 dependientes de STING.
El documento de patente 5 (WO 2014/189806) describe un compuesto representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000003_0003
el cual, de acuerdo con el documento de patente 5, inhibe la transducción de señal dependiente de STING y es útil para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias y similares.
El documento de patente 6 (WO 2015/185565) describe un compuesto representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000004_0001
donde cada símbolo es tal como se define en el documento de patente 6, el cual, de acuerdo con el documento de patente 6, es un modulador de STING y es útil para el tratamiento de inflamación, enfermedad autoinmunitaria alérgica, cáncer y similares, y también es útil como adyuvante de vacunas.
El documento de patente 7 (WO 2014/179760) describe un compuesto representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000004_0002
donde cada símbolo es tal como se define en el documento de patente 7, el cual, de acuerdo con el documento de patente 7, puede aumentar la producción de interferón tipo I y es útil para el tratamiento de cáncer, enfermedad autoinmunitaria, reacción alérgica y similares, y también es útil como adyuvante.
El documento de patente 8 (WO 2014/179335) y el documento no de patente 10 (Mol. Cell 154, 748-762 (2013)) describe un compuesto representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000004_0003
donde cada símbolo es tal como se define en el documento de patente 8, el cual, de acuerdo con el documento de patente 8, puede aumentar la producción de interferón tipo I y es útil para el tratamiento de enfermedades caracterizadas por inflamación, enfermedad autoinmunitaria, síndrome de Sjogren y similares.
El documento de patente 9 (WO 2015/017652) describe un compuesto representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000005_0001
el cual, de acuerdo con el documento de patente 9, es un modulador de STING y es útil para el tratamiento del cáncer, enfermedades autoinmunitarias alérgicas y similares, y también es útil como vacuna.
El documento de patente 10 (WO 2016/096577) describe un compuesto representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000005_0002
el cual, de acuerdo con el documento de patente 10, es un agonista de STING y es útil para el tratamiento del cáncer (particularmente cáncer de páncreas sólido) y similares.
El documento de patente 11 (WO 2011/003025) describe un compuesto representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000005_0003
el cual, de acuerdo con el documento de patente 11, es un agonista de STING.
El documento de patente 12 (WO 2016/096174) describe un compuesto representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000005_0004
el cual, de acuerdo con el documento de patente 12, es un agonista de STING.
El documento de patente 13 (WO 2016/120305) describe un compuesto representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000006_0001
el cual, de acuerdo con el documento de patente 13, es un agonista de STING.
El documento de patente 14 (WO 2016/145102) describe un compuesto representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000006_0002
donde cada símbolo es tal como se define en el documento de patente 14, el cual, de acuerdo con el documento de patente 14 es un agonista de STING.
El documento de patente 15 (WO 2017/027646) describe un compuesto representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000006_0003
donde cada símbolo es tal como se define en el documento de patente 15, el cual, de acuerdo con el documento de patente 15 es un agonista de STING.
El documento de patente 16 (WO 2017/075477) describe un compuesto representado por la siguiente fórmula: donde cada símbolo es tal como se define en el documento de patente 16, el cual, de acuerdo con el documento de patente 16 es un agonista de STING.
El documento de patente 17 (WO 2017/027645) describe un compuesto representado por la siguiente fórmula:
Figure imgf000007_0001
donde cada símbolo es tal como se define en el documento de patente 17, el cual, de acuerdo con el documento de patente 17 es un agonista de STING.
Breve sumario de la invención
En el presente documento, se describen compuestos representados por la fórmula (I):
Figure imgf000007_0002
la estructura parcial representada por la fórmula (A-1):
Figure imgf000007_0003
es una estructura parcial representada por la fórmula (IIA):
Figure imgf000007_0004
cada uno de R1 y R2 es independientemente un grupo hidroxi o un átomo de halógeno;
B1 es un grupo representado por
Figure imgf000008_0001
cada uno de R13, R14 y R15 es independientemente un átomo de hidrógeno o un sustituyente;
cada uno de Y11, Y12 y Y13 es independientemente N o CR1a;
cada uno de Z11, Z12 y Z13 es independientemente N o C;
R1a es un átomo de hidrógeno o un sustituyente;
B2 es un grupo representado por
Figure imgf000008_0002
cada uno de R23, R24, R25, R26 y R27 es independientemente un átomo de hidrógeno o un sustituyente; cada uno de Y21, Y22, Y23, Y24, Y25 e Y26 es independientemente N o CR2a;
cada uno de Z21, Z22, Z23, Z24, Z25 y Z26 es independientemente N o C;
R2a es un átomo de hidrógeno o un sustituyente;
siempre que
i) al menos uno de Y11, Y12, Y13, Y14, Y15 e Y16 sea CR1a,
ii) al menos uno de Y21, Y22, Y23, Y24, Y25 e Y26 sea CR2a, o
iii) al menos uno de Z13, Z16, Z23 y Z26 sea C; cada uno de X1 y X2 sea independientemente un átomo de oxígeno o un átomo de azufre; y
cada uno de Q1, Q2, Q3 y Q4 sea independientemente un átomo de oxígeno o un átomo de azufre,
o una sal de estos (mencionada de aquí en adelante a veces como compuesto (I)).
En un primer aspecto, en el presente documento se proporciona un compuesto representado por la fórmula (X):
Figure imgf000008_0003
o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
cada uno de R1 y R2 son independientemente un grupo hidroxi o un átomo de halógeno;
B1 es:
Figure imgf000009_0001
R18 es hidrógeno o alquilo Ci-a; y
R19 es un átomo de halógeno
B2 es:
Figure imgf000009_0002
y
cada uno de Q2 y Q4 son independientemente un átomo oxígeno o un átomo azufre.
En una realización, R19 es fluoro o cloro.
En otra realización, R1 es un grupo hidroxi.
En otra realización, R2 es un grupo hidroxilo o un átomo de fluoro.
En otra realización, Q4 es un átomo azufre.
En otra realización, Q2 es un átomo oxígeno.
En otra realización, Q2 es un átomo azufre.
En otra realización, la divulgación proporciona un compuesto representado por la Fórmula (XII):
Figure imgf000009_0003
o una sal farmacéuticamente aceptable de este.
En otra realización, R18 es hidrógeno o metilo.
En otra realización, R18 es hidrógeno y R19 es un átomo de fluoro.
En otra realización, la divulgación proporciona un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:
Figure imgf000011_0001
y sales farmacéuticamente aceptables de este.
En otra realización, la divulgación proporciona 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10,16-trihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona o una sal de
esta.
En otra realización, la divulgación proporciona 7-((2R,5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona o una sal de
esta.
En otra realización, la divulgación proporciona 7-((2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-hidroxi-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona o una sal de
esta. En otra realización, la sal farmacéuticamente aceptable es la sal trietilamina.
En otra realización, la sal farmacéuticamente aceptable es la sal de sodio.
En otra realización, la divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende el compuesto o la sal
de fórmula (X) y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
En otra realización, la divulgación proporciona un compuesto que tiene la fórmula (X), o una sal farmacéuticamente
aceptable de este, para su uso en el tratamiento del cáncer.
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 es una gráfica
Figure imgf000011_0003
lineal que muestra la liberación de
Figure imgf000011_0002
ADC1 (para r La Figura 2 es una gráfica
Figure imgf000011_0005
lineal que muestra la liberación de
Figure imgf000011_0004
1 de ADC2 (para r La Figura 3 es una gráfica lineal que muestra la liberación de la Carga útil 2 de ADC3 (para r La Figura 4 es una gráfica de barras que muestra que las células HEK293 que expresan los objetivos del receptor
superficial para ADC1 presentan el aumento esperado en el marcador de la vía s T iNG fosfo-IRF3 (pIRF3) cuando
se trata con ADC1 (para referencia).
La Figura 5 es una gráfica de barras que muestra que las células HEK293 que expresan los objetivos del receptor
superficial para ADC2 presentan el aumento esperado en el marcador de la vía s T iNG fosfo-IRF3 (pIRF3) cuando
se trata con ADC2 (para referencia).
La Figura 6 es una gráfica de barras que muestra que las células HEK293 que expresan los objetivos del receptor
superficial para ADC3 presentan el aumento esperado en el marcador de la vía STiNG fosfo-IRF3 (pIRF3) cuando
se trata con ADC3 (para referencia).
La Figura 7 es una gráfica de barras que muestra los análisis de transferencia Western de la activación de la vía
de señalización posterior (TBK1 y IRF3) para el compuesto del Ej. 14.
La Figura 8 es una gráfica lineal que muestra la actividad antitumoral del compuesto del Ej. 3a en el modelo de
ratones singénicos CT-26 con carcinoma de colon.
La Figura 9 es una gráfica lineal que muestra la actividad antitumoral del compuesto del Ej. 14 en el modelo de
ratones singénicos CT-26 con carcinoma de colon.
La Figura 10 es una gráfica lineal que muestra la actividad antitumoral del compuesto del Ej. 3a en el modelo de
ratones singénicos B16F10 con carcinoma de colon.
La Figura 11 es una gráfica lineal que muestra la actividad antitumoral del compuesto del Ej. 14 en el modelo de
ratones singénicos B16F10 con carcinoma de colon.
Descripción detallada de la invención
La presente divulgación se explica en detalle más adelante.
La definición de cada sustituyente utilizado en la presente memoria descriptiva se describe en detalle a continuación. A menos que se especifique lo contrario, cada sustituyente tiene la definición que sigue a continuación.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos de un “átomo de halógeno” incluyen flúor, cloro, bromo y yodo. En la presente memoria descriptiva, los ejemplos de “grupo alquilo C W incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, 1 -etilpropilo, hexilo, isohexilo, 1,1 -dimetilbutilo, 2,2-dimetilbutilo, 3,3-dimetilbutilo y 2-etilbutilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo alquilo C1-6 halogenado opcionalmente” incluyen un grupo alquilo C1-6 que tiene de 1 a 7, preferentemente de 1 a 5, átomos halógenos. Los ejemplos específicos de este incluyen metilo, clorometilo, difluorometilo, triclorometilo, trifluorometilo, etilo, 2-bromoetilo, 2,2,2-trifluoroetilo, tetrafluoroetilo, pentafluoroetilo, propilo, 2,2-difluoropropilo, 3,3,3-trifluoropropilo, isopropilo, butilo, 4,4,4-trifluorobutilo, isobutilo, secbutilo, terc-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, 5,5,5-trifluoropentilo, hexilo y 6,6,6-trifluorohexilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo alquenilo C2-6” incluyen etenilo, 1-propenilo, 2-propenilo, 2-metil-1-propenilo, 1 -butenilo, 2-butenilo, 3-butenilo, 3-metil-2-butenilo, 1-pentenilo, 2-pentenilo, 3-pentenilo, 4-pentenilo, 4-metil-3-pentenilo, 1-hexenilo, 3-hexenilo y 5-hexenilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo alquinilo C2-6” incluyen etinilo, 1 -propinilo, 2-propinilo, 1-butinilo, 2-butinilo, 3-butinilo, 1 -pentinilo, 2-pentinilo, 3-pentinilo, 4-pentinilo, 1 -hexinilo, 2-hexinilo, 3-hexinilo, 4-hexinilo, 5-hexinilo y 4-metilo-2-pentinilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos de “grupo cicloalquilo C3-10” incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, biciclo[2.2.1]heptilo, biciclo[2.2.2]octilo, biciclo[3.2.1]octilo y adamantilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo cicloalquilo C3-10 halogenado opcionalmente” incluyen un grupo cicloalquilo C3-10 que tiene de 1 a 7, preferentemente de 1 a 5, átomos halógenos. Los ejemplos específicos de este incluyen ciclopropilo, 2,2-difluorociclopropilo, 2,3-difluorociclopropilo, ciclobutilo, difluorociclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo cicloalquenilo C3-10” incluyen ciclopropenilo, ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo, cicloheptenilo y ciclooctenilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo arilo C6-14" incluyen fenilo, 1 -naftilo, 2-naftilo, 1 -antrilo, 2-antrilo y 9-antrilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo aralquilo C7-16” incluyen bencilo, fenetilo, naftilmetilo y fenilpropilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo alcoxi C1-6” incluyen metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi, sec-butoxi, terc-butoxi, pentiloxi y hexiloxi.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo alcoxi C1-6 halogenado opcionalmente” incluyen un grupo alcoxi C1-6 que tiene de 1 a 7, preferentemente de 1 a 5, átomos halógenos. Los ejemplos específicos de este incluyen metoxi, difluorometoxi, trifluorometoxi, etoxi, 2,2,2-trifluoroetoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, 4,4,4-trifluorobutoxi, isobutoxi, sec-butoxi, pentiloxi y hexiloxi.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo cicloalquiloxi C3-10” incluyen ciclopropiloxi, ciclobutiloxi, ciclopentiloxi, ciclohexiloxi, cicloheptiloxi y ciclooctiloxi.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo alquiltio C1-6” incluyen metiltio, etiltio, propiltio, isopropiltio, butiltio, sec-butiltio, terc-butiltio, pentiltio y hexiltio.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo alquiltio C1-6 halogenado opcionalmente” incluyen un grupo alquiltio C1-6 que tiene de 1 a 7, preferentemente de 1 a 5, átomos halógenos. Los ejemplos específicos de este incluyen metiltio, difluorometiltio, trifluorometiltio, etiltio, propiltio, isopropiltio, butiltio, 4,4,4-trifluorobutiltio, pentiltio y hexiltio.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del grupo alquilcarbonilo C1-6” incluyen acetilo, propanoilo, butanoilo, 2-metilpropanoilo, pentanoilo, 3-metilbutanoilo, 2-metilbutanoilo, 2,2-dimetilpropanoilo, hexanoilo y heptanoilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo alquilcarbonilo C1-6 halogenado opcionalmente” incluyen un grupo alquilcarbonilo Ci-6 que tiene de 1 a 7, preferentemente de 1 a 5, átomos halógenos. Los ejemplos específicos de este incluyen acetilo, cloroacetilo, trifluoroacetilo, tricloroacetilo, propanoilo, butanoilo, pentanoilo y hexanoilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo alcoxicarbonilo C1-6” incluyen metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, propoxicarbonilo, isopropoxicarbonilo, butoxicarbonilo, isobutoxicarbonilo, sec-butoxicarbonilo, tercbutoxicarbonilo, pentilooxicarbonilo y hexilooxicarbonilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo arilcarbonilo C6-14” incluyen benzoilo, 1 -naftoilo y 2-naftoilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo aralquilcarbonilo C7-16” incluyen fenilacetilo y fenilpropionilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo heterociclilcarbonilo aromático de 5 a 14 miembros” incluyen nicotinoilo, isonicotinoilo, tenoilo y furoilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo heterociclilcarbonilo no aromático de 3 a 14 miembros” incluyen morfolinilcarbonilo, piperidinilcarbonilo y pirrolidinilcarbonilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo mono o dialquicarbamoilo C1-6” incluyen metilcarbamoilo, etilcarbamoilo, dimetilcarbamoilo, dietilcarbamoilo y N-etil-N-metilcarbamoilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo aralquilcarbamoilo C7-16” incluyen bencilcarbamoilo y fenetilcarbamoilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo alquilsulfonilo C1-6” incluyen metilsulfonilo, etilsulfonilo, propilsulfonilo, isopropilsulfonilo, butilsulfonilo, sec-butilsulfonilo y terc-butilsulfonilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo alquilsulfonilo C1-6 halogenado opcionalmente” incluyen un grupo alquilsulfonilo C1-6 que tiene de 1 a 7, preferentemente de 1 a 5, átomos halógenos. Los ejemplos específicos de este incluyen metilsulfonilo, difluorometilsulfonilo, trifluorometilsulfonilo, etilsulfonilo, propilsulfonilo, isopropilsulfonilo, butilsulfonilo, 4,4,4-trifluorobutilsulfonilo, pentilsulfonilo y hexilsulfonilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo arilsulfonilo C6-14” incluyen fenilsulfonilo, 1 -naftilsulfonilo y 2-naftilsulfonilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “sustituyente” incluyen un átomo de halógeno, un grupo ciano, un grupo nitro, un grupo hidrocarburo sustituido opcionalmente, un grupo heterocíclico sustituido opcionalmente, un grupo acilo, un grupo amino sustituido opcionalmente, un grupo carbamoilo sustituido opcionalmente, un grupo tiocarbamoilo sustituido opcionalmente, un grupo sulfamoilo sustituido opcionalmente, un grupo hidroxi sustituido opcionalmente, un grupo sulfanilo (SH) sustituido opcionalmente y un grupo sililo sustituido opcionalmente.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo hidrocarburo” (inclusive el “grupo hidrocarburo” del “grupo hidrocarburo sustituido opcionalmente”) incluyen un grupo alquilo C1-6, un grupo alquenilo C2-6, un grupo alquinilo C2-6, un grupo cicloalquilo C3-10, un grupo cicloalquenilo C3-10, un grupo arilo C6-14 y un grupo aralquilo C7-16.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo hidrocarburo sustituido opcionalmente” incluyen un grupo hidrocarburo que tiene opcionalmente sustituyentes seleccionados del siguiente grupo sustituyente A.
“Grupo sustituyente A":
(1) un átomo de halógeno,
(2) un grupo nitro,
(3) un grupo ciano,
(4) un grupo oxo,
(5) un grupo hidroxi,
(6) un grupo alcoxi C1-6 halogenado opcionalmente,
(7) un grupo ariloxi C6-14 (por ejemplo, fenoxi, naftoxi),
(8) un grupo aralquiloxi C7-16 (por ejemplo, benciloxi),
(9) un grupo heterocicliloxi aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, piridiloxi),
(10) un grupo heterocicliloxi no aromático de 3 a 14 miembros (por ejemplo, morfoliniloxi, piperidiniloxi), (11) un grupo alquilcarboniloxi C1-6 (por ejemplo, acetoxi, propanoiloxi),
(12) un grupo arilcarboniloxi C6-14 (por ejemplo, benzoiloxi, 1-naftoiloxi, 2-naftoiloxi),
(13) un grupo alcoxicarboniloxi C1-6 (por ejemplo, metoxicarboniloxi, etoxicarboniloxi, propoxicarboniloxi, butoxicarboniloxi),
(14) un grupo mono o dialquilcarbamoiloxi C1-6 (por ejemplo, metilcarbamoiloxi, etilcarbamoiloxi, dimetilcarbamoiloxi, dietilcarbamoiloxi),
(15) un grupo arilcarbamoiloxi C6-14 (por ejemplo, fenilcarbamoiloxi, naftilcarbamoiloxi),
(16) un grupo heterociclilcarboniloxi aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, nicotinoiloxi),
(17) un grupo heterociclilcarboniloxi no aromático de 3 a 14 miembros (por ejemplo, morfolinilcarboniloxi, piperidinilcarboniloxi),
(18) un grupo alquilsulfoniloxi C1-6 halogenado opcionalmente (por ejemplo, metilsulfoniloxi, trifluorometilsulfoniloxi),
(19) un grupo arilsulfoniloxi C6-14 sustituido opcionalmente por un grupo alquilo C1-6 (por ejemplo, fenilsulfoniloxi, toluenosulfoniloxi),
(20) un grupo alquiltio C1-6 halogenado opcionalmente,
(21) un grupo heterocíclico aromático de 5 a 14 miembros,
(22) un grupo heterocíclico no aromático de 3 a 14 miembros,
(23) un grupo formilo,
(24) un grupo carboxi,
(25) un grupo alquilcarbonilo C1-6 halogenado opcionalmente,
(26) un grupo arilcarbonilo C6-14,
(27) un grupo heterociclilcarbonilo aromático de 5 a 14 miembros,
(28) un grupo heterociclilcarbonilo no aromático de 3 a 14 miembros,
(29) un grupo alcoxicarbonilo C1-6,
(30) un grupo ariloxicarbonilo C6-14 (por ejemplo, feniloxicarbonilo, 1-naftiloxicarbonilo, 2-naftiloxicarbonilo), (31) un grupo aralquiloxicarbonilo C7-16 (por ejemplo, benciloxicarbonilo, fenetiloxicarbonilo),
(32) un grupo carbamoilo,
(33) un grupo tiocarbamoilo,
(34) un grupo mono o dialquilcarbamoilo C1-6,
(35) un grupo arilcarbamoilo C6-14 (por ejemplo, fenilcarbamoilo),
(36) un grupo heterociclilcarbamoilo aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, piridilcarbamoilo, tienilcarbamoilo),
(37) un grupo heterociclilcarbamoilo no aromático de 3 a 14 miembros (por ejemplo, morfolinilcarbamoilo, piperidinilcarbamoilo),
(38) un grupo alquilsulfonilo C1-6 halogenado opcionalmente,
(39) un grupo arilsulfonilo C6-14,
(40) un grupo heterociclilsulfonilo aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, piridilsulfonilo, tienilsulfonilo), (41) un grupo alquilsulfinilo C1-6 halogenado opcionalmente,
(42) un grupo arilsulfinilo C6-14 (por ejemplo, fenilsulfinilo, 1-naftilsulfinilo, 2-naftilsulfinilo),
(43) un grupo heterociclilsulfinilo aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, piridilsulfinilo, tienilsulfinilo), (44) un grupo amino,
(45) un grupo mono o dialquilamino C1-6 (por ejemplo, metilamino, etilamino, propilamino, isopropilamino, butilamino, dimetilamino, dietilamino, dipropilamino, dibutilamino, N-etil-N-metilamino),
(46) un grupo mono o diarilamino C6-14 (por ejemplo, fenilamino),
(47) un grupo heterociclilamino aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, piridilamino),
(48) un grupo aralquilamino C7-16 (por ejemplo, bencilamino),
(49) un grupo formilamino,
(50) un grupo alquilcarbonilamino C1-6 (por ejemplo, acetilamino, propanoilamino, butanoilamino),
(51) un grupo (alquil C1-6)(alquil-carbonil C1-6) amino (por ejemplo, N-acetil-N-metilamino),
(52) un grupo arilcarbonilamino C6-14 (por ejemplo, fenilcarbonilamino, naftilcarbonilamino),
(53) un grupo alcoxicarbonilamino C1-6 (por ejemplo, metoxicarbonilamino, etoxicarbonilamino, propoxicarbonilamino, butoxicarbonilamino, terc-butoxicarbonilamino),
(54) un grupo aralquiloxicarbonilamino C7-16 (por ejemplo, benciloxicarbonilamino),
(55) un grupo alquilsulfonilamino C1-6 (por ejemplo, metilsulfonilamino, etilsulfonilamino),
(56) un grupo arilsulfonilamino C6-14 sustituido opcionalmente por un grupo alquilo C1-6 (por ejemplo, fenilsulfonilamino, toluenosulfonilamino),
(57) un grupo alquilo C1-6 halogenado opcionalmente,
(58) un grupo alquenilo C2-6,
(59) un grupo alquinilo C2-6,
(60) un grupo cicloalquilo C3-10,
(61) un grupo cicloalquenilo C3-10 y
(62) un grupo arilo C6-14.
La cantidad de los sustituyentes mencionados anteriormente en el “grupo hidrocarburo sustituido opcionalmente” es, por ejemplo, de 1 a 5, preferentemente de 1 a 3. Cuando la cantidad de los sustituyentes es de dos o más, los sustituyentes respectivos pueden ser iguales o diferentes.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo heterocíclico” (incluido el “grupo heterocíclico” del “grupo heterocíclico sustituido opcionalmente”) incluyen (i) un grupo heterocíclico aromático, (ii) un grupo heterocíclico no aromático y (iii) un grupo heterocíclico puenteado de 7 a 10 miembros, donde cada uno contiene, como átomo constituyente del anillo aparte del átomo de carbono, de 1 a 4 heteroátomos seleccionados de un átomo de nitrógeno, un átomo de azufre y un átomo de oxígeno.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo heterocíclico aromático” (incluido el “grupo heterocíclico aromático de 5 a 14 miembros”) incluyen un grupo heterocíclico aromático de 5 a 14 miembros (preferentemente de 5 a 10 miembros) que contiene, como átomo constituyente del anillo aparte del átomo de carbono, de 1 a 4 heteroátomos seleccionados de un átomo de nitrógeno, un átomo de azufre y un átomo de oxígeno.
Los ejemplos preferidos del “grupo heterocíclico aromático” incluyen grupos heterocíclicos aromáticos monocíclicos de 5 o 6 miembros, ales como tienilo, furilo, imidazolilo, pirazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, 1,2,4-tiadiazolilo, 1,3,4-tiadiazolilo, triazolilo, tetrazolilo, triazinilo y similares; y
grupos heterocíclicos aromáticos policíclicos (preferentemente bi o tricíclicos) fusionados de 8 a 14 miembros, tales como benzotiofenilo, benzofuranilo, bencimidazolilo, benzoxazolilo, bencisoxazolilo, benzotiazolilo, bencisotiazolilo, benzotriazolilo, imidazopiridinilo, tienopiridinilo, furopiridinilo, pirrolopiridinilo, pirazolopiridinilo, oxazolopiridinilo, tiazolopiridinilo, imidazopirazinilo, imidazopirimidinilo, tienopirimidinilo, furopirimidinilo, pirrolopirimidinilo, pirazolopirimidinilo, oxazolopirimidinilo, tiazolopirimidinilo, pirazolotriazinilo, nafto[2,3-b]tienilo, fenoxatiinilo, indolilo, isoindolilo, 1 H-indazolilo, purinilo, isoquinolilo, quinolilo, ftalazinilo, naftiridinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, cinnolinilo, carbazolilo, p-carbolinilo, fenantridinilo, acridinilo, fenazinilo, fenotiazinilo, fenoxazinilo y similares.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo heterocíclico aromático” (incluido el “grupo heterocíclico no aromático de 3 a 14 miembros”) incluyen un grupo heterocíclico no aromático de 3 a 14 miembros (preferentemente de 4 a 10 miembros) que contiene, como átomo constituyente del anillo aparte del átomo de carbono, de 1 a 4 heteroátomos seleccionados de un átomo de nitrógeno, un átomo de azufre y un átomo de oxígeno.
Los ejemplos preferidos del “grupo heterocíclico no aromático” incluyen grupos heterocíclicos no aromáticos de 3 a 8 miembros, tales como aziridinilo, oxiranilo, tiiranilo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, tetrahidrotienilo, tetrahidrofuranilo, pirrolinilo, pirrolidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, oxazolinilo, oxazolidinilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, tiazolinilo, tiazolidinilo, tetrahidroisotiazolilo, tetrahidrooxazolilo, tetrahidroisooxazolilo, piperidinilo, piperazinilo, tetrahidropiridinilo, dihidropiridinilo, dihidrotiopiranilo, tetrahidropirimidinilo, tetrahidropiridazinilo, dihidropiranilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, azepanilo, diazepanilo, azepinilo, oxepanilo, azocanilo, diazocanilo y similares; y
grupos heterocíclicos no aromáticos policíclicos (preferentemente bi o tricíclicos) de 9 a 14 miembros, tales como dihidrobenzofuranilo, dihidrobencimidazolilo, dihidrobenzoxazolilo, dihidrobenzotiazolilo, dihidrobencisotiazolilo, dihidronafto[2,3-b]tienilo, tetrahidroisoquinolilo, tetrahidroquinolilo, 4H-quinolizinilo, indolinilo, isoindolinilo, tetrahidrotieno[2,3-c]piridinilo, tetrahidrobenzazepinilo, tetrahidroquinoxalinilo, tetrahidrofenantridinilo, hexahidrofenotiazinilo, hexahidrofenoxazinilo, tetrahidroftalazinilo, tetrahidronaftiridinilo, tetrahidroquinazolinilo, tetrahidrocinnolinilo, tetrahidrocarbazolilo, tetrahidro-p-carbolinilo, tetrahidroacridinilo, tetrahidrofenazinilo, tetrahidrotioxantenilo, octahidroisoquinolilo y similares.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos preferidos del “grupo heterocíclico de 7 a 10 miembros” incluyen quinuclidinilo y 7-azabiciclo[2.2.1]heptanilo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo heterocíclico que contiene nitrógeno” incluyen un “grupo heterocíclico” que contiene al menos un átomo de nitrógeno como átomo constituyente del anillo.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo heterocíclico sustituido opcionalmente” incluyen un grupo heterocíclico que tiene opcionalmente sustituyentes seleccionados del grupo sustituyente A mencionado anteriormente.
La cantidad de los sustituyentes en el “grupo heterocíclico sustituido opcionalmente” es, por ejemplo, de 1 a 3. Cuando la cantidad de los sustituyentes es de dos o más, los sustituyentes respectivos pueden ser iguales o diferentes.
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo acilo” incluyen un grupo formilo, un grupo carboxi, un grupo carbamoilo, un grupo tiocarbamoilo, un grupo sulfino, un grupo sulfo, un grupo sulfamoilo y un grupo fosfono, donde cada uno tiene opcionalmente “1 o 2 sustituyentes seleccionados de un grupo alquilo C1-6, un grupo alquenilo C2-6, un grupo cicloalquilo C3-10, un grupo cicloalquenilo C3-10, un grupo arilo C6-14, un grupo aralquilo C7-16, un grupo heterocíclico aromático de 5 a 14 miembros y un grupo heterocíclico no aromático de 3 a 14 miembros, donde cada uno tiene opcionalmente de 1 a 3 sustituyentes seleccionados de un átomo de halógeno, un grupo alcoxi C1-6 halogenado opcionalmente, un grupo hidroxi, un grupo nitro, un grupo ciano, un grupo amino y un grupo carbamoilo.
Los ejemplos del “grupo acilo” incluyen además un grupo hidrocarburosulfonilo, un grupo heterociclilsulfonilo, un grupo hidrocarburosulfinilo y un grupo heterociclilsulfinilo.
En este caso, el grupo hidrocarburosulfonilo se refiere a un grupo sulfonilo unido a un grupo hidrocarburo, el grupo heterociclilsulfonilo se refiere a un grupo sulfonilo unido a un grupo heterocíclico, el grupo hidrocarburosulfinilo se refiere a un grupo sulfinilo unido a un grupo hidrocarburo y el grupo heterociclilsulfinilo se refiere a un grupo sulfinilo unido a un grupo heterocíclico.
Los ejemplos preferidos del “grupo acilo” incluyen un grupo formilo, un grupo carboxi, un grupo alquilcarbonilo C1-6, un grupo alquenilcarbonilo C2-6 (por ejemplo, crotonoilo), un grupo cicloalquilcarbonilo C3-10 (por ejemplo, ciclobutanocarbonilo, ciclopentanocarbonilo, ciclohexanocarbonilo, cicloheptanocarbonilo), un grupo cicloalquenilcarbonilo C3-10 (por ejemplo, 2-ciclohexenocarbonilo), un grupo arilcarbonilo C6-14, un grupo aralquilcarbonilo C7-16, un grupo heterociclilcarbonilo aromático de 5 a 14 miembros, un grupo heterociclilcarbonilo no aromático de 3 a 14 miembros, un grupo alcoxicarbonilo C1-6, un grupo ariloxicarbonilo C6-14 (por ejemplo, feniloxicarbonilo, naftiloxicarbonilo), un grupo aralquiloxicarbonilo C7-16 (por ejemplo, benciloxicarbonilo, fenetiloxicarbonilo), un grupo carbamoilo, un grupo mono o dialquilcarbamoilo C1-6, un grupo mono o dialquenilcarbamoilo C2-6 (por ejemplo, dialilcarbamoilo), un grupo mono o dicicloalquilcarbamoilo C3-10 (por ejemplo, ciclopropilcarbamoilo), un grupo mono o diarilcarbamoilo Ca-14 (por ejemplo, fenilcarbamoilo), un grupo mono o diaralquilcarbamoilo C7-16, un grupo heterociclilcarbamoilo aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, piridilcarbamoilo), un grupo tiocarbamoilo, un grupo mono o dialquiltiocarbamoilo C1-6 (por ejemplo, metiltiocarbamoilo, N-etil-N-metiltiocarbamoilo), un grupo mono o dialqueniltiocarbamoilo C2-6 (por ejemplo, dialiltiocarbamoilo), un grupo mono o dicicloalquiltiocarbamoilo C3-10 (por ejemplo, ciclopropiltiocarbamoilo, ciclohexiltiocarbamoilo), un grupo mono o diariltiocarbamoilo C6-14 (por ejemplo, feniltiocarbamoilo), un grupo mono o diaralquiltiocarbamoilo C7-16 (por ejemplo, benciltiocarbamoilo, fenetiltiocarbamoilo), un grupo heterocicliltiocarbamoilo aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, piridiltiocarbamoilo), un grupo sulfino, un grupo alquilsulfinilo C1-6 (por ejemplo, metilsulfinilo, etilsulfinilo), un grupo sulfo, un grupo alquilsulfonilo C1-6, un grupo arilsulfonilo C6-14, un grupo fosfono y un grupo mono o dialquilfosfono C1-6 (por ejemplo, dimetilfosfono, dietilfosfono, diisopropilfosfono, dibutilfosfono).
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo amino sustituido opcionalmente” incluyen un grupo amino que tiene opcionalmente “1 o 2 sustituyentes seleccionados de un grupo alquilo C1-6, un grupo C2-6 alquenilo, un grupo cicloalquilo C3-10, un grupo arilo C6-14, un grupo aralquilo C7-16, un grupo alquilcarbonilo C1-6, un grupo arilcarbonilo C6-14, un grupo aralquilcarbonilo C7-16, un grupo heterociclilcarbonilo aromático de 5 a 14 miembros, un grupo heterociclilcarbonilo no aromático de 3 a 14 miembros, un grupo alcoxicarbonilo C1-6, un grupo heterocíclico aromático de 5 a 14 miembros, un grupo carbamoilo, un grupo mono o dialquilcarbamoilo C1-6, un grupo mono o diaralquilcarbamoilo C7-16, un grupo alquilosulfonilo C1-6 y un grupo arilsulfonilo C6-14, donde cada uno tiene opcionalmente de 1 a 3 sustituyentes seleccionados del “grupo sustituyente A”.
Los ejemplos preferidos del grupo amino sustituido opcionalmente incluyen un grupo mono o diamino (alquilo C1-6 halogenado opcionalmente) (por ejemplo, metilamino, trifluorometilamino, dimetilamino, etilamino, dietilamino, propilamino, dibutilamino), un grupo mono o dialquenilamino C2-6 (por ejemplo, dialilamino), un grupo mono o dicicloalquilamino C3-10 (por ejemplo, ciclopropilamino, ciclohexilamino), un grupo mono o diarilamino C6-14 (por ejemplo, fenilamino), un grupo mono o diaralquilamino C7-16 (por ejemplo, bencilamino, dibencilamino), un grupo mono o di(alquil C1-6 halogenado opcionalmente)carbonilamino (por ejemplo, acetilamino, propionilamino), un grupo mono o diarilcarbonilamino C6-14 (por ejemplo, benzoilamino), un grupo mono o diaralquilcarbonilamino C7-16 (por ejemplo, bencilcarbonilamino), un grupo mono o diheterociclilcarbonilamino aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, nicotinoilamino, isonicotinoilamino), un grupo mono o diheterociclilcarbonilamino no aromático de 3 a 14 miembros (por ejemplo, piperidinilcarbonilamino), un grupo mono o dialcoxicarbonilamino C1-6 (por ejemplo, tercbutoxicarbonilamino), un grupo heterociclilamino aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, piridilamino), un grupo carbamoilamino , un grupo (mono o dialquilcarbamoilo C1-6) amino (por ejemplo, metilcarbamoilamino), un grupo (mono o diaralquilcarbamoil C7-16) amino (por ejemplo, bencilcarbamoilamino), un grupo alquilsulfonilamino C1-6 (por ejemplo, metilsulfonilamino, etilsulfonilamino), un grupo arilsulfonilamino C6-14 (por ejemplo, fenilsulfonilamino), un grupo (alquil C1-6)(alquilcarbonil C1-6) amino (por ejemplo, N-acetil-N-metilamino) y un grupo (alquil C1-6)(arilcarbonil C6-14) amino (por ejemplo, N-benzoil-N-metilamino).
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo carbamoilo sustituido opcionalmente” incluyen un grupo carbamoilo que tiene opcionalmente “1 o 2 sustituyentes seleccionados de un grupo alquilo C1-6, un grupo C2-6 alquenilo, un grupo cicloalquilo C3-10, un grupo arilo C6-14, un grupo aralquilo C7-16, un grupo alquilcarbonilo C1-6, un grupo arilcarbonilo C6-14, un grupo aralquilcarbonilo C7-16, un grupo heterociclilcarbonilo aromático de 5 a 14 miembros, un grupo heterociclilcarbonilo no aromático de 3 a 14 miembros, un grupo alcoxicarbonilo C1-6, un grupo heterocíclico aromático de 5 a 14 miembros, un grupo carbamoilo, un grupo mono o dialquilcarbamoilo C1-6, un grupo mono o diaralquilcarbamoilo C7-16, donde cada uno tiene opcionalmente de 1 a 3 sustituyentes seleccionados del “grupo sustituyente A”.
Los ejemplos preferidos del grupo carbamoilo sustituido opcionalmente incluyen un grupo carbamoilo, un grupo mono o dialquilcarbamoilo C1-6, un grupo mono o dialquenilcarbamoilo C2-6 (por ejemplo, dialilcarbamoilo), un grupo mono o dicicloalquilcarbamoilo C3-10 (por ejemplo, ciclopropilcarbamoilo, ciclohexilcarbamoilo), un grupo mono o diarilcarbamoilo C6-14 (por ejemplo, fenilcarbamoilo), un grupo mono o diaralquilcarbamoilo C7-16, un grupo mono o dialquilcarbonilcarbamoilo C1-6 (por ejemplo, acetilcarbamoilo, propionilcarbamoilo), un grupo mono o diarilcarbonilcarbamoilo C6-14 (por ejemplo, benzoilcarbamoilo) y un grupo heterociclilcarbamoilo aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, piridilcarbamoilo).
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo tiocarbamoilo sustituido opcionalmente” incluyen un grupo tiocarbamoilo que tiene opcionalmente “1 o 2 sustituyentes seleccionados de un grupo alquilo C1-6, un grupo alquenilo C2-6, un grupo cicloalquilo C3-10, un grupo arilo C6-14, un grupo aralquilo C7-16, un grupo alquilcarbonilo C1-6, un grupo arilcarbonilo C6-14, un grupo aralquilcarbonilo C7-16, un grupo heterociclilcarbonilo aromático de 5 a 14 miembros, un grupo heterociclilcarbonilo no aromático de 3 a 14 miembros, un grupo alcoxicarbonilo C1-6, un grupo heterocíclico aromático de 5 a 14 miembros, un grupo carbamoilo, un grupo mono o dialquilcarbamoilo C1-6, un grupo mono o diaralquilcarbamoilo C7-16, donde cada uno tiene opcionalmente de 1 a 3 sustituyentes seleccionados del “grupo sustituyente A”.
Los ejemplos preferidos del grupo tiocarbamoilo sustituido opcionalmente incluyen un grupo tiocarbamoilo, un grupo mono o dialquiltiocarbamoilo C1-6 (por ejemplo, metiltiocarbamoilo, etiltiocarbamoilo, dimetiltiocarbamoilo, dietiltiocarbamoilo, N-etil-N-metiltiocarbamoilo), un grupo mono o dialqueniltiocarbamoilo C2-6 (por ejemplo, di aliltiocarbamoilo), un grupo mono o dicicloalquiltiocarbamoilo C3-10 (por ejemplo, ciclopropiltiocarbamoilo, ciclohexiltiocarbamoilo), un grupo mono o diariltiocarbamoilo C6-14 (por ejemplo, feniltiocarbamoilo), un grupo mono o diaralquiltiocarbamoilo C7-16 (por ejemplo, benciltiocarbamoilo, fenetiltiocarbamoilo), un grupo mono o dialquilcarboniltiocarbamoilo C1-6 (por ejemplo, acetiltiocarbamoilo, propioniltiocarbamoilo), un grupo mono o diarilcarboniltiocarbamoilo C6-14 (por ejemplo, benzoiltiocarbamoilo) y un grupo heterocicliltiocarbamoilo aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, piridiltiocarbamoilo).
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo sulfamoilo sustituido opcionalmente” incluyen un grupo sulfamoilo que tiene opcionalmente “1 o 2 sustituyentes seleccionados de un grupo alquilo C1-6, un grupo C2-6 alquenilo, un grupo cicloalquilo C3-10, un grupo arilo C6-14, un grupo aralquilo C7-16, un grupo alquilcarbonilo C1-6, un grupo arilcarbonilo C6-14, un grupo aralquilcarbonilo C7-16, un grupo heterociclilcarbonilo aromático de 5 a 14 miembros, un grupo heterociclilcarbonilo no aromático de 3 a 14 miembros, un grupo alcoxicarbonilo C1-6, un grupo heterocíclico aromático de 5 a 14 miembros, un grupo carbamoilo, un grupo mono o dialquilcarbamoilo C1-6, un grupo mono o diaralquilcarbamoilo C7-16, donde cada uno tiene opcionalmente de 1 a 3 sustituyentes seleccionados del “grupo sustituyente A”.
Los ejemplos preferidos del grupo sulfamoilo sustituido opcionalmente incluyen un grupo sulfamoilo, un grupo mono o dialquilsulfamoilo C1-6 (por ejemplo, metilsulfamoilo, etilsulfamoilo, dimetilsulfamoilo, dietilsulfamoilo, N-etil-N-metilsulfamoilo), un grupo mono o dialquenilsulfamoilo C2-6 (por ejemplo, di alilsulfamoilo), un grupo mono o dicicloalquilsulfamoilo C3-10 (por ejemplo, ciclopropilsulfamoilo, ciclohexilsulfamoilo), un grupo mono o diarilsulfamoilo C6-14 (por ejemplo, fenilsulfamoilo), un grupo mono o diaralquilsulfamoilo C7-16 (por ejemplo, bencilsulfamoilo, fenetilsulfamoilo), un grupo mono o dialquilcarbonilsulfamoilo C1-6 (por ejemplo, acetilsulfamoilo, propionilsulfamoilo), un grupo mono o diarilcarbonilsulfamoilo C6-14 (por ejemplo, benzoilsulfamoilo) y un grupo heterociclilsulfamoilo aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, piridilsulfamoilo).
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo hidroxi sustituido opcionalmente” incluyen un grupo hidroxi que tiene opcionalmente “un sustituyente seleccionado de un grupo alquilo C1-6, un grupo alquenilo C2-6, un grupo cicloalquilo C3-10, un grupo arilo C6-14, un grupo aralquilo C7-16, un grupo alquilcarbonilo C1-6, un grupo arilcarbonilo C6-14, un grupo aralquilcarbonilo C7-16, un grupo heterociclilcarbonilo aromático de 5 a 14 miembros, un grupo heterociclilcarbonilo no aromático de 3 a 14 miembros, un grupo alcoxicarbonilo C1-6, un grupo heterocíclico aromático de 5 a 14 miembros, un grupo carbamoilo, un grupo mono o dialquilcarbamoilo C1-6, un grupo mono o diaralquilcarbamoilo C7-16, un grupo alquilsulfonilo C1-6 y un grupo arilsulfonilo C6-14, donde cada uno tiene opcionalmente de 1 a 3 sustituyentes seleccionados del “grupo sustituyente A”.
Los ejemplos preferidos del grupo hidroxi sustituido opcionalmente incluyen un grupo hidroxi, un grupo alcoxi C1-6, un grupo alqueniloxi C2-6 (por ejemplo, aliloxi, 2-buteniloxi, 2-penteniloxi, 3-hexeniloxi), un grupo cicloalquiloxi C3-10 (por ejemplo, ciclohexiloxi), un grupo ariloxi C6-14 (por ejemplo, fenoxi, naftiloxi), un grupo aralquiloxi C7-16 (por ejemplo, benciloxi, fenetiloxi), un grupo alquilcarboniloxi C1-6 (por ejemplo, acetiloxi, propioniloxi, butiriloxi, isobutiriloxi, pivaloiloxi), un grupo arilcarboniloxi C6-14 (por ejemplo, benzoiloxi), un grupo aralquilcarboniloxi C7-16 (por ejemplo, bencilcarboniloxi), un grupo heterociclilcarboniloxi aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, nicotinoiloxi), un grupo heterociclilcarboniloxi no aromático de 3 a 14 miembros (por ejemplo, piperidinilcarboniloxi), un grupo alcoxicarboniloxi C1-6 (por ejemplo, terc-butoxicarboniloxi), un grupo heterocicliloxi aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, piridiloxi), un grupo carbamoiloxi, un grupo alquilcarbamoiloxi C1-6 (por ejemplo, metilcarbamoiloxi), un grupo aralquilcarbamoiloxi C7-16 (por ejemplo, bencilcarbamoiloxi), un grupo alquilsulfoniloxi C1-6 (por ejemplo, metilsulfoniloxi, etilsulfoniloxi) y un grupo arilsulfoniloxi C6-14 (por ejemplo, fenilsulfoniloxi).
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo sulfanilo sustituido opcionalmente” incluyen un grupo sulfanilo que tiene “un sustituyente seleccionado de un grupo alquilo Ci-6, un grupo alquenilo C2-6, un grupo cicloalquilo C3-10, un grupo arilo C6-14, un grupo aralquilo C7-16, un grupo alquilcarbonilo C1-6, un grupo arilcarbonilo C6-14 y un grupo heterocíclico aromático de 5 a 14 miembros, donde cada uno tiene opcionalmente de 1 a 3 sustituyentes seleccionados del “grupo sustituyente A” y un grupo sulfanilo halogenado.
Los ejemplos preferidos del grupo sulfanilo sustituido opcionalmente incluyen un grupo sulfanilo (-SH), un grupo alquiltio C1-6, un grupo alqueniltio C2-6 (por ejemplo, aliltio, 2-buteniltio, 2-penteniltio, 3-hexeniltio), un grupo cicloalquiltio C3-10 (por ejemplo, ciclohexiltio), un grupo ariltio C6-14 (por ejemplo, feniltio, naftiltio), un grupo aralquiltio C7-16 (por ejemplo, benciltio, fenetiltio), un grupo alquilcarboniltio C1-6 (por ejemplo, acetiltio, propioniltio, butiriltio, isobutiriltio, pivaloiltio), un grupo arilcarboniltio C6-14 (por ejemplo, benzoiltio), un grupo heterocicliltio aromático de 5 a 14 miembros (por ejemplo, piridiltio) y un grupo tio halogenado (por ejemplo, pentafluorotio).
En la presente memoria descriptiva, los ejemplos del “grupo sililo sustituido opcionalmente” incluyen un grupo sililo que tiene “de 1 a 3 sustituyentes seleccionados de un grupo alquilo C1-6, un grupo alquenilo C2-6, un grupo cicloalquilo C3-10, un grupo arilo C6-14 y un grupo aralquilo C7-16, donde cada uno tiene opcionalmente de 1 a 3 sustituyentes seleccionados del “grupo sustituyente A”. Los ejemplos del grupo sililo sustituido opcionalmente incluyen un grupo trialquilsililo C1-6 (por ejemplo, trimetilsililo, terc-butil(dimetil)sililo).
Tal como se usa en la presente, la expresión “conjugado de anticuerpo-fármaco” o “ADC” hace referencia a un compuesto que se une a un anticuerpo y se define mediante la fórmula (CD-L)n-A, donde CD es un grupo representado por cualquiera de las Fórmulas (XX) o (XXIV), ver más adelante, L es un enlazador, A es una proteína, por ejemplo, un anticuerpo, y n es 1-10. En una realización, el enlazador se representa mediante -X3-T-Z-Q-, donde X3 es un radical divalente que conecta a CD al resto del enlazador, o se encuentra ausente, T es un péptido, o se encuentra ausente, Z es un espaciador y Q es un grupo heterobifuncional o un grupo heterotrifuncional. A modo ilustrativo, la siguiente fórmula genérica muestran un ADC de la divulgación con un conector a base de para-aminobencilo, un dipéptido a base de alanina-alanina, un espaciador a base de propanona y un grupo heterobifuncional a base de tioéter de succinimida:
Figure imgf000018_0001
En la presente divulgación, el término “enlazador” hace referencia a cualquier resto químico capaz de enlazar una proteína, por ejemplo, anticuerpo, fragmento de anticuerpo (por ejemplo, fragmentos de unión al anticuerpo) o equivalente funcional a un dinucleótido cíclico. Los enlazadores pueden ser susceptibles a escisión (un “enlazador escindible”), lo que facilita la liberación del dinucleótido cíclico. Por ejemplo, dichos enlazadores escindibles pueden ser susceptibles a la escisión inducida por ácido, escisión fotoinducida, escisión inducida por peptidasa, escisión inducida por esterasa y escisión de enlace de disulfuro, en condiciones en las que el dinucleótido cíclico y/o el anticuerpo permanecen activos. De manera alternativa, los enlazadores pueden ser sustancialmente resistentes a la escisión (un “enlazador no escindible”).
En la presente divulgación, los enlazadores no escindibles son cualquier resto químico capaz de unir a un dinucleótido cíclico a un anticuerpo de una forma covalente estable, y no se encuentran en las categorías enumeradas anteriormente de enlazadores escindibles. Por lo tanto, los enlazadores no escindibles son sustancialmente resistentes a la escisión inducida por ácido, escisión fotoinducida, escisión inducida por peptidasa, escisión inducida por esterasa y escisión por enlace disulfuro. Además, no escindible hace referencia a la capacidad del enlace químico del enlazador o adyacente al enlazador de resistir la escisión inducida por un ácido, agente de escisión fotolábil, una peptidasa, una esterasa o un compuesto fisiológico o químico que escinda a un enlace disulfuro en condiciones en las que un dinucleótido cíclico y/o el anticuerpo no pierdan su actividad.
Algunos enlazadores escindibles son escindidos por peptidasas (“enlazadores escindibles por pepetidasa”). Solamente determinados péptidos pueden escindirse fácilmente dentro o fuera de las células; véase, por ejemplo, Trout et al., 79 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 626-629 (1982) y Umemoto et al. 43 Int. J. Cancer, 677-684 (1989). Además, los péptidos están compuestos por unidades de aminoácidos a y enlaces peptídicos, que químicamente son enlaces de amida entre el carboxilato de un aminoácido y el grupo amino de un segundo aminoácido. Se entiende que otros enlaces amida, tales como el enlace entre un carboxilato y el grupo a aminoácido de lisina, no son enlaces peptídicos y se consideran no escindibles.
Algunos enlazadores son escindidos por esterasas (“enlazadores escindibles por esterasa”). Solo determinados ésteres pueden ser escindidos por esterasas presentes dentro o fuera de las células. Los ésteres se forman mediante la condensación de un ácido carboxílico y un alcohol. Los ésteres simples son ésteres producidos con alcoholes simples, tales como alcoholes alifáticos, y alcoholes aromáticos pequeños y pequeños cíclicos.
En algunas realizaciones, el componente enlazador escindible comprende un péptido que comprende de uno a diez residuos de aminoácido. En estas realizaciones, el péptido permite la escisión del enlazador a través de una proteasa, lo que facilita la liberación del dinucleótido cíclico después de la exposición a proteasas intracelulares, tales como las enzimas lisosomales (Doronina et al. (2003) Nat. Biotechnol. 21:778-784). Los ejemplos de péptidos incluyen, de modo no limitante, dipéptidos, tripéptidos, tetrapéptidos y pentapéptidos. Los ejemplos de dipéptidos incluyen, de modo no limitante, alaina-alanina (ala-ala), valina-citrulina (vc o val-cit), alanina-fenilalanina (af o ala-phe); fenilalanina-lisina (fk o phe-lys); fenilalanina-homolisina (phe-homolys); y N-metil-valina-citrulina (Me-val-cit). Los ejemplos de tripéptidos incluyen, de modo no limitante, glicina-valina-citrulina (gly-val-cit) y glicina-glicina-glicina (gly-gly-gly).
Un péptido puede comprender residuos de aminoácidos de origen natural y/o artificiales. La expresión “aminoácido de origen natural” hace referencia a Ala, Asp, Cys, Glu, Phe, Gly, His, He, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp y Tyr. Los “aminoácidos artificiales” (es decir, aminoácidos que no se producen de forma natural) incluyen, a modo de ejemplo no limitante, homoserina, homoarginina, citrulina, fenilglicina, taurina, yodotirosina, seleno-cisteína, norleucina (“Nle”), norvalina (“Nva”), beta-alanina, L- o D-naftalanina, ornitina (“Orn”) y similares. Los péptidos pueden diseñarse y optimizarse para la escisión enzimática mediante una enzima en particular, por ejemplo, una proteasa asociada a un tumor, catepsina B, C y D, o una proteasa plasmina.
Los aminoácidos incluyen también las formas D de aminoácidos naturales y artificiales. “D-” denota un aminoácido que posee la configuración “D” (dextrógira), en contraposición con la configuración de los aminoácidos de origen natural (“L-”). Los aminoácidos naturales y artificiales pueden adquirirse en el mercado (Sigma Chemical Co., Advanced Chemtec) o sintetizarse mediante el uso de métodos conocidos en la técnica.
En la presente divulgación, la expresión “grupo heterobifuncional” o “grupo heterotrifuncional” hacen referencia a un resto químico que conecta a un enlazador y a otra molécula terapéuticamente activa, por ejemplo, proteína, por ejemplo, un anticuerpo. Ver, por ejemplo, Wo 2017/191579. Los grupos heterobifuncionales y trifuncionales se caracterizan por tener grupos reactivos distintos en cada extremo del resto químico. Los ejemplos no limitantes de grupos heterobifuncionales incluyen:
Figure imgf000019_0001
donde “*” indica el punto de acoplamiento a cualquier átomo de carbono, átomo de nitrógeno, átomo de oxígeno o átomo de azufre disponible acoplado al anticuerpo. En una realización, el grupo heterobifuncional es
Figure imgf000019_0002
y se encuentra unido a un átomo de azufre acoplado al anticuerpo.
Un ejemplo no limitante de grupos heterotrifuncionales es:
Figure imgf000019_0003
En la presente divulgación, el término “espaciador” hace referencia a un resto químico que conecta a un grupo heterobifuncional y trifuncional al resto del enlazador, por ejemplo, un péptido o, si un grupo heterobifuncional o trifuncional se encuentra ausente, conecta al resto del enlazador o dinucleótido cíclico a cualquier átomo de carbono, átomo de nitrógeno, átomo de oxígeno o átomo de azufre disponible acoplado al anticuerpo. Los ejemplos no limitantes de espaciadores incluyen -NH-, -S-, -O-, -NHC(=O)CH2CH2-, -S(=O)2-CH2CH2-, - C(=O)NHNH-, -C(=O)O-, -C(=O)NH-, -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2=CH2-, -C=C-, -CH=N-O-, polietilenglicol (PEG),
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La expresión “relación de fármaco con respecto al anticuerpo” o “DAR” hace referencia a la cantidad de CD enlazados a A (es decir, una proteína, por ejemplo, un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno de este). Por lo tanto, en el ADC que posee la fórmula genérica (CD-L)n-A, la DAR se define mediante la variable “n”.
Cuando se hace referencia a un compuesto que posee la fórmula (CD-L)n-A que representa a un ADC individual, la DAR hace referencia a la cantidad de CD enlazados a A, por ejemplo, n es un número entero de 1 a 10.
Cuando se hace referencia a un compuesto que posee la fórmula (CD-L)n-A que representa a múltiples ADC, la DAR hace referencia a la cantidad promedio de dinucleótidos cíclicos enlazados a A, por ejemplo, n es un número entero o fracción de 1 a 10. Por lo tanto, a modo de ejemplo, un compuesto que posee la fórmula (CD-L)n-A que comprende un primer ADC con 3 dinucleótidos cíclicos por A y un segundo ADC con 4 dinucleótidos cíclicos por A tendrían una DAR, es decir, una “n”, de 3,5.
Los términos “polipéptido”, “péptido” y “proteína” se usan de manera intercambiable en la presente y hacen referencia a polímeros de aminoácidos de cualquier longitud. El polímero puede ser lineal o ramificado, puede comprender aminoácidos modificados y puede ser interrumpido por no aminoácidos. Los términos también comprenden un polímero de aminoácidos que ha sido modificado naturalmente o mediante intervención; por ejemplo, formación de enlace disulfuro, glicosilación, lipidación, acetilación, fosforilación o cualquier otra manipulación o modificación, tal como conjugación con un componente de marcado. También se incluyen en la definición, por ejemplo, polipéptidos que contienen uno o más análogos de un aminoácido (incluso, por ejemplo, aminoácidos no naturales, etc.), así como otras modificaciones conocidas en la técnica. Se entiende que debido a que los polipéptidos de la presente divulgación se basan en anticuerpos, en determinadas realizaciones, los polipéptidos pueden presentarse como cadenas simples o cadenas asociadas.
Un anticuerpo “monoclonal” o fragmento de unión al antígeno de este hace referencia a una población homogénea de anticuerpos o fragmentos de unión al antígeno implicada en la unión y el reconocimiento altamente específicos de un único determinante antigénico o epítopo. Esto se contrapone a los anticuerpos policlonales que incluyen típicamente distintos anticuerpos dirigidos contra distintos determinantes antigénicos. La expresión anticuerpo “monoclonal” o fragmento de unión al antígeno de este abarca tanto anticuerpos monoclonales de longitud completa e intactas como fragmentos de anticuerpos (tales como Fab, Fab', F(ab')2, Fv), mutantes de cadena simple (scFv), proteínas de fusión que comprenden una parte de anticuerpo y cualesquiera otras moléculas de inmunoglobulina modificadas que comprenden un sitio de reconocimiento de antígeno. Además, anticuerpo “monoclonal” o fragmento de unión al antígeno de este hace referencia a dichos anticuerpos y fragmentos de unión al antígeno de estos confeccionados de cualquier cantidad de maneras que incluyen, de modo no limitante, hibridoma, selección de fagos, expresión recombinante y animales transgénicos.
El término anticuerpo “humanizado” o fragmento de unión al antígeno de este hace referencia a formas de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murinos) o fragmentos de unión al antígeno que son cadenas específicas de inmunoglobulina, inmunoglobulinas quiméricas o fragmentos de estas, que contienen secuencias no humanas mínimas (por ejemplo, murinas). Típicamente, los anticuerpos humanizados o fragmentos de unión al antígeno de estos son inmunoglobulinas humanas en las que los residuos de la región determinante de complementariedad (CDR) se reemplazan por residuos de la CDR de una especie no humana (por ejemplo, ratón, rata, conejo, hámster) que poseen la especificidad, afinidad y capacidad deseadas (“CDR injertada”) (Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988)). En algunos casos, los residuos de la región marco (FR) de Fv de una inmunoglobulina humana se reemplazan con los residuos correspondientes en un anticuerpo o fragmento de una especie no humana que posee la especificidad, afinidad y capacidad deseadas. El anticuerpo humanizado o fragmento de unión al antígeno de este puede modificarse adicionalmente mediante la sustitución de residuos adicionales ya sea en la región marco de Fv y/o dentro de los residuos no humanos reemplazados para perfeccionar y optimizar la especificidad, afinidad y/o capacidad del anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno de este. En general, el anticuerpo humanizado o fragmento de unión al antígeno de este comprende sustancialmente la totalidad de al menos uno, y típicamente dos o tres, dominios variables que contienen la totalidad, o sustancialmente la totalidad, de las regiones CDR que corresponden a la inmunoglobulina no humana mientras que la totalidad, o sustancialmente la totalidad, de las regiones FR son aquellas de una secuencia de consenso de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado o fragmento de unión al antígeno de este puede comprender también al menos una parte de una región constante de inmunoglobulina (Fc), comúnmente la de una inmunoglobulina humana. Los ejemplos de métodos utilizados para generar anticuerpos humanizados se describen en la patente estadounidense 5,225,539; Roguska et al., Proc. Nati. Acad. Sci., USA, 91(3):969-973 (1994) y Roguska et al., Protein Eng. 9(10):895-904 (1996). En algunas realizaciones, un “anticuerpo humanizado” es un anticuerpo revestido.
Una “región variable” de un anticuerpo hace referencia a la región variable de la cadena ligera del anticuerpo o a la región variable de la cadena pesada del anticuerpo, ya sea por sí sola o en combinación. Las regiones variables de las cadenas pesada y ligera consisten cada una en cuatro regiones marco (FR) conectadas mediante tres regiones determinantes de complementariedad (CDR), también conocidas como regiones hipervariables. Las CDR de cada cadena se mantienen a gran proximidad mediante las FR y, junto a las CDR de la otra cadena, contribuyen a la formación del sitio de unión al antígeno de los anticuerpos. Existen al menos dos técnicas para determinar las CDR: (1) un enfoque basado en variabilidad de secuencia a través de especies (es decir, Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5a ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda Md.)); y (2) un abordaje basado en estudios cristalográficos de complejos antígeno-anticuerpo (Al-lazikani et al. (1997) J. Moiec. Bioi. 273:927-948)). Asimismo, algunas veces en la técnica se utilizan combinaciones de estos dos abordajes para determinar las CDR.
El sistema de numeración de Kabat se utiliza generalmente cuando se hace referencia a un residuo del dominio variable (aproximadamente los residuos 1-107 de la cadena ligera y residuos 1-113 de la cadena pesada) (por ejemplo, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5.a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). A menos que se indique explícitamente lo contrario, el sistema de numeración utilizado en la presente es el sistema de numeración de Kabat.
La numeración de las posiciones de aminoácidos en Kabat se refiere al sistema de numeración utilizado para los dominios variables de cadena pesada o dominios variables de cadena ligera de la compilación de anticuerpos en Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991). Al utilizar este sistema de numeración, la secuencia de aminoácidos lineal real puede contener una cantidad menor o adicional de aminoácidos que corresponden a un acortamiento, o una inserción, en una FR o una CDR del dominio variable. Por ejemplo, un dominio variable de cadena pesada puede incluir una inserción de un único aminoácido (residuo 52a, de acuerdo con Kabat) después del residuo 52 de H2 y residuos insertados (por ejemplo, residuos 82a, 82b y 82c, etc., de acuerdo con Kabat) después del residuo 82 de FR de cadena pesada. Es posible determinar la numeración de residuos de Kabat para un anticuerpo determinado mediante la alineación en regiones de homología de la secuencia del anticuerpo con una secuencia con numeración de Kabat “estándar”. Por el contrario, Chothia hace referencia a la ubicación de los bucles estructurales (Chothia y Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). El extremo del bucle CDR-H1 de Chothia, cuando se enumera mediante el uso de la convención de numeración de Kabat varía entre H32 y H34 en función de la longitud del bucle (esto se debe a que el esquema de numeración de Kabat ubica las inserciones en H35A y H35B; si 35A y 35B no están presentes, el bucle finaliza en 32; si solo 35A está presente, el bucle termina en 33; si tanto 35A como 35B están presentes, el bucle termina en 34). Las regiones hipervariables de AbM representan un punto intermedio entre las CDR de Kabat y los bucles estructurales de Chothia y las emplea el software de modelado de anticuerpos AbM de Oxford Molecular.
Bucle Kabat AbM Chothia
L1 L24-L34 L24-34 L24-34
L2 L50-L56 L50-L56 L50-L56
L3 L89-L97 L89-L97 L89-L97
H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32...34
(Numeración de Kabat)
H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32
(Numeración de Chothia)
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En determinados aspectos, las CDR de un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de este pueden determinarse de acuerdo con el esquema de numeración de Chothia, que hace referencia a la ubicación de los bucles estructurales de inmunoglobulina (ver, por ejemplo, Chothia C y Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917; Al-Lazikani B et al., (1997) J Mol Biol 273: 927-948; Chothia C et al., (1992) J Mol Biol 227: 799-817; Tramontano A et al., (1990) J Mol Biol 215(1): 175:-82; y la patente estadounidense n.° 7,709,226). Comúnmente, al utilizar la convención de numeración de Kabat, el bucle de CDR-H1 de Chothia está presente en los aminoácidos de cadena pesada 26 a 32, 33 o 34, el bucle de CDR-H2 de Chothia está presente en los aminoácidos de cadena pesada 52 a 56, y el bucle de CDR-H3 de Chothia está presente en los aminoácidos de cadena pesada 95 a 102, mientras que el bucle de CDR-L1 de Chothia está presente en los aminoácidos de cadena ligera 24 a 34, el bucle de CDR-L2 de Chothia está presente en los aminoácidos de cadena ligera 50 a 56, y el bucle de CDR-L3 de Chothia está presente en los aminoácidos de cadena ligera 89 a 97. El extremo del bucle CDR-H1 de Chothia, cuando se enumera mediante el uso de la convención de numeración de Kabat varía entre H32 y H34 en función de la longitud del bucle (esto se debe a que el esquema de numeración de Kabat ubica las inserciones en H35A y H35B; si 35A y 35B no están presentes, el bucle finaliza en 32; si solo 35A está presente, el bucle termina en 33; si tanto 35A como 35B están presentes, el bucle termina en 34).
En determinados aspectos, las CDR de un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de este pueden determinarse de acuerdo con el sistema de numeración de IMGT, como se describe en Lefranc M-P, (1999) The Immunologist 7: 132-136 y Lefranc M-P et al., (1999) Nucleic Acids Res 27: 209-212. De acuerdo con el esquema de numeración de IMGT, VH-CDR1 se encuentra en las posiciones 26 a 35, VH-CDR2 se encuentra en las posiciones 51 a 57, VH-CDR3 se encuentra en las posiciones 93 a 102, VL-CDR1 se encuentra en las posiciones 27 a 32, VL-CDR2 se encuentra en las posiciones 50 a 52, y VL-CDR3 se encuentra en las posiciones 89 a 97.
En determinados aspectos, las CDR de un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno de este pueden determinarse de acuerdo con MacCallum RM et al., (1996) J Mol Biol 262: 732-745. Véase también, por ejemplo, Martin A. “Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains,” en Antibody Engineering, Kontermann y Dübel, ed., capítulo 31, p. 422-439, Springer-Verlag, Berlín (2001).
En determinados aspectos, las CDR de un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno pueden determinarse de acuerdo con el esquema de numeración de AbM, que hace referencia a regiones hipervariables de AbM, que representan un punto intermedio entre las CDR de Kabat y los bucles estructurales de Chothia y se utilizan en el software de modelado de anticuerpos AbM de Oxford Molecular (Oxford Molecular Group, Inc.).
La expresión anticuerpo “humano” hace referencia a un anticuerpo producido por un humano o un anticuerpo que posee una secuencia de aminoácidos que corresponde a un anticuerpo producido por un ser humano mediante el uso de cualquier método conocido en la técnica. Esta definición de anticuerpo humano incluye anticuerpos intactos o de longitud completa, fragmentos de estos y/o anticuerpos que comprenden al menos un polipéptido humano de cadena pesada y/o cadena ligera tal como, por ejemplo, un anticuerpo que comprende polipéptidos murinos de cadena ligera y polipéptidos humanos de cadena pesada.
La expresión anticuerpos “quiméricos” hace referencia a anticuerpos en los que la secuencia de aminoácidos de la molécula de inmunoglobulina se deriva de dos o más especies. Típicamente, la región variable tanto de la cadena ligera como de la cadena pesada corresponde a la región variable de anticuerpos derivados de una especie de mamíferos (por ejemplo, ratón, rata, conejo, etc.) con la especificidad, afinidad y capacidad deseadas, mientras que las regiones constantes son homólogas a las secuencias en anticuerpos derivados de otras (generalmente seres humanos) para evitar provocar una respuesta inmunitaria en dicha especie.
Las expresiones “epítopo” o “determinante antigénico” se utilizan de manera intercambiable en la presente y hacen referencia a la parte de un antígeno que puede ser reconocida y enlazarse de manera específica a un anticuerpo en particular. Cuando el antígeno es un polipéptido, los epítopos pueden formarse tanto a partir de aminoácidos contiguos como de aminoácidos no contiguos yuxtapuestos mediante pliegue terciario de una proteína. Los epítopos formados a partir de aminoácidos contiguos típicamente se conservan tras la desnaturalización de proteínas, mientras que los epítopos formados mediante pliegue terciario típicamente se pierden tras la desnaturalización de proteínas. Un epítopo incluye típicamente al menos 3, y más normalmente, al menos 5 u 8-10 aminoácidos en una formación espacial única.
“Afinidad de unión” generalmente hace referencia a la resistencia de la suma total de las interacciones no covalentes entre un único sitio de unión de una molécula (por ejemplo, un anticuerpo) y su compañero de unión (por ejemplo, un antígeno). A menos que se indique lo contrario, tal como se usa en la presente, “afinidad de unión” hace referencia a afinidad de unión intrínseca que refleja una interacción 1:1 entre los miembros de un par de unión (por ejemplo, anticuerpo y antígeno). La afinidad de una molécula X con respecto a su compañera Y puede representarse generalmente mediante la constante de disociación (Kd). La afinidad puede medirse a través de métodos comunes conocidos en la técnica, que incluyen los que se describen en la presente. Los anticuerpos de baja afinidad por lo general se unen al antígeno lentamente y tienden a disociarse fácilmente, mientras que los anticuerpos de alta afinidad por lo general se unen al antígeno más rápidamente y tienden a permanecer unidos durante más tiempo. Se conocen en la técnica una variedad de métodos para medir la afinidad de unión y cualquiera de ellos puede utilizarse a los efectos de la presente divulgación. Se describen a continuación realizaciones ilustrativas específicas.
Cuando se utiliza en la presente para hacer referencia a la afinidad de unión, “o mejor” hace referencia a una unión más fuerte entre una molécula y su compañero de unión. Cuando se utiliza en la presente, “o mejor” hace referencia a una unión más fuerte representada por un valor numérico de Kd menor. Por ejemplo, para un anticuerpo que posee una afinidad con respecto a un antígeno de “0,6 nM o mejor”, la afinidad del anticuerpo para el antígeno es <0,6 nM, es decir, 0,59 nM, 0,58 nM, 0,57 nM etc. o cualquier otro valor menor que 0,6 nM.
La expresión “se une de forma específica” generalmente indica que un anticuerpo se une a un epítopo a través de su dominio de unión al antígeno y que la unión implica determinada complementariedad entre el dominio de unión al antígeno y el epítopo. De acuerdo con esta definición, se dice que un anticuerpo se “une de manera específica” a un epítopo cuando se une a dicho epítopo a través de su dominio de unión al antígeno más fácilmente de lo que se uniría a un epítopo aleatorio no relacionado. El término “especificidad” se usa en la presente para calificar la afinidad relativa mediante la cual determinado anticuerpo se une a determinado epítopo. Por ejemplo, puede considerarse que el anticuerpo “A” posee una mayor especificidad con respecto a un epítopo específico que el anticuerpo “B”, o puede decirse que el anticuerpo “A” se une al epítopo “C” con una mayor especificidad que la que tiene con respecto al epítopo “D” relacionado.
“Se une preferentemente” significa que el anticuerpo se une específicamente a un epítopo más fácilmente de lo que se uniría a un epítopo relacionado, similar, homólogo o análogo. Por lo tanto, un anticuerpo que “se une preferentemente” a un epítopo dado tendría más probabilidades de unirse a dicho epítopo que a un epítopo relacionado, a pesar de que dicho anticuerpo pueda tener una reacción cruzada con el epítopo relacionado.
Se dice que un anticuerpo “ inhibe de manera competitiva” la unión de un anticuerpo de referencia a un epítopo dado si se une preferentemente a dicho epítopo o a un epítopo superpuesto al punto que bloquea, en cierta medida, la unión del anticuerpo de referencia al epítopo. La inhibición competitiva puede determinarse mediante cualquier método conocido en la técnica, por ejemplo, ensayos ELISA de competición. Puede decirse que un anticuerpo inhibe de forma competitiva la unión del anticuerpo de referencia a un epítopo dado en al menos 90 %, al menos 80 %, al menos 70 %, al menos 60 % o al menos 50 %.
Tal como se usan en la presente, las expresiones “sustancialmente similar” o “sustancialmente igual” indican un grado suficientemente elevado de similitud entre dos valores numéricos (generalmente uno asociado con un anticuerpo de la descripción y el otro asociado con un anticuerpo de referencia o comparación), de modo que un experto en la técnica consideraría que la diferencia entre los dos valores es de poca o nula importancia biológica y/o estadística en el contexto de las características biológicas medidas por dichos valores (por ejemplo, valores de Kd). La diferencia entre dichos dos valores puede ser menor que alrededor de 50 %, menor que alrededor de 40 %, menor que alrededor de 30 %, menor que alrededor de 20 % o menor que alrededor de 10 % en función del valor para el anticuerpo de referencia o comparación.
Un polipéptido, anticuerpo, polinucleótido, vector, célula o composición que está “aislado” es un polipéptido, anticuerpo, polinucleótido, vector, célula o composición que se encuentra en una forma que no se encuentra en la naturaleza. Los polipéptidos, anticuerpos, polinucleótidos, vectores, células o composiciones aislados incluyen aquellos que se purificaron en la medida que ya no se encuentran en una forma en que se encontrarían de forma natural. En algunas realizaciones, un anticuerpo, polinucleótido, vector, célula o composición que se encuentra aislada es sustancialmente pura.
Tal como se usa en la presente, “sustancialmente puro” hace referencia a material que es al menos 50 % puro (es decir, sin contaminantes), al menos 90 % puro, al menos 95 % puro, al menos 98 % puro o al menos 99 % puro.
El término “anticuerpo” hace referencia a una molécula de inmunoglobulina que reconoce y se une de forma específica a un objetivo, tal como una proteína, polipéptido, péptido, carbohidrato, polinucleótido, lípido o combinaciones de estos a través de al menos un sitio de reconocimiento de antígeno dentro de la región variable de la molécula de inmunoglobulina. Tal como se usa en la presente, el término “anticuerpo” abarca anticuerpos policlonales intactos, anticuerpos monoclonales intactos, anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados, anticuerpos humanos, proteínas de fusión que comprenden un anticuerpo y cualquier otra molécula de inmunoglobulina modificada, siempre y cuando los anticuerpos presenten la actividad biológica deseada. Un anticuerpo puede ser de cualquiera de las cinco clases fundamentales de inmunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, o subclases (isotipos) de estas (por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) de acuerdo con la identidad de sus dominios constantes de cadena pesada a los que se hace referencia como alfa, delta, épsilon, gamma y mu, respectivamente. Las distintas clases de inmunoglobulinas poseen estructuras de subunidades y configuraciones tridimensionales diferentes y conocidas. Los anticuerpos pueden ser no conjugados o conjugados a otras moléculas tales como toxinas, radioisótopos, etc. Tal como se usa en la presente, el término “anticuerpo” abarca anticuerpos biespecíficos y multiespecíficos.
La expresión “fragmento de anticuerpo” hace referencia a una parte de un anticuerpo intacto. Un “fragmento de unión al antígeno” hace referencia a una parte de un anticuerpo intacto que se une a un antígeno. Un fragmento de unión al antígeno puede contener las regiones variables de determinación antigénica de un anticuerpo intacto. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen, de modo no limitante, fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y Fv, anticuerpos lineales y anticuerpos de cadena simple. Un “fragmento de unión al antígeno” puede ser un fragmento de unión al antígeno biespecífico o multiespecífico.
La expresión “agente de administración de fármaco”, tal como se usa en la presente, se refiere a un resto químico que altera la distribución, direccionamiento o tiempo de vida de la molécula en la cual se incorpora En algunas realizaciones, un agente de administración de fármaco proporciona una afinidad mejorada para un objetivo seleccionado, por ejemplo, molécula, célula o tipo de célula, compartimento, receptor, por ejemplo, un compartimento celular o de órgano, tejido, órgano o región del cuerpo, en comparación con una especie en ausencia de dicho agente de administración de fármaco. Los agentes de administración de fármaco que proporcionan afinidad mejorada para un objetivo seleccionado se denominan agentes de administración de fármacos de direccionamiento. Véase, por ejemplo, el documento WO 2013/075035 A1.
La expresión “conjugado de administración de fármaco”, tal como se usa en la presente, se refiere a un compuesto que comprende cualquiera de las Fórmulas (XX) o (XXIV), un agente de administración de fármaco y, opcionalmente, un enlazador covalente.
Algunos agentes de administración de fármaco tienen propiedades endosomolíticas. Los agentes de administración de fármacos endosomolíticos promueven la lisis del endosoma y/o transporte de cualquiera de las Fórmulas (XX) o (XXIV) desde el endosoma hacia el citoplasma de la célula. El agente de administración de fármaco endosomolítico puede ser un péptido polianiónico o peptidomimético que muestra actividad de membrana dependiente del pH y fusogenicidad. En una realización, el agente de administración de fármaco endosomolítico asume su conformación activa a pH endosomal. La conformación “activa” es la conformación en la cual el agente de administración de fármaco endosomolítico promueve la lisis del endosoma y/o transporte de la Fórmula (XX) o (XXIV) desde el endosoma hacia el citoplasma de la célula. Algunos agentes de administración de fármaco endosomolíticos ilustrativos incluyen el péptido GALA (Subbarao et al., Biochemistry, 1987, 26: 2964-2972), el péptido EALA (Vogel et al., J. Am. Chem. Soc., 1996, 118: 1581-1586) y sus derivados (Turk et al., Biochem. Biophys. Acta, 2002, 1559: 56-68). En una realización, el componente endosomolítico puede contener un grupo químico, por ejemplo, un aminoácido, el cual experimentará un cambio en la carga o protonación en respuesta a un cambio en el pH. El componente endosomolítico puede ser lineal o ramificado.
Los agentes de administración de fármaco pueden mejorar las propiedades de transporte, hibridación y especificidad del conjugado de administración de fármaco resultante.
Los agentes de administración de fármaco pueden incluir modificadores terapéuticos, por ejemplo, para mejorar la absorción; compuestos de diagnóstico o grupos indicadors, por ejemplo, para monitorear la distribución; y agentes de reticulación. Los ejemplos generales incluyen lípidos, esteroides, vitaminas, carbohidratos, proteínas, péptidos, poliaminas, polímeros sintéticos u oligómeros (tales como PEG), peptidomiméticos o cualquier combinación de estos.
Los agentes de administración de fármaco pueden incluir una sustancia de origen natural, por ejemplo una proteína (por ejemplo, albúmina de suero humano (HSA), lipoproteína de baja densidad (LDL), lipoproteína de alta densidad (HDL) o globulina); un carbohidrato (por ejemplo, un dextrano, pululano, quitina, quitosano, inulina, ciclodextrina o ácido hialurónico); o un lípido. El agente de administración de fármaco también puede ser una molécula recombinante o sintética, por ejemplo un polímero u oligómero sintético, por ejemplo, un ácido de poliamino sintético, un oligonucleótido, por ejemplo un aptámero. Los ejemplos de ácidos de poliamino incluyen una polilisina (PLL), ácido poli L-aspártico, ácido poli L-glutámico. Otros ejemplos de los polímeros u oligómeros sintéticos incluyen un copolímero anhídrido de ácido estireno-maleico, copolímero poli(L-láctido-co-glicólido), copolímero anhídrido éter-maleico de divinilo, copolímero de N-(2-hidroxipropil)metacrilamida (HMPA), polietilenglicol (PEG), polivinilalcohol (PVA), poliuretano, ácido poli(2-etilacrílico), polímeros de N-isopropilacrilamida, o polifosfazina. Algunos ejemplos de poliaminas incluyen: polietilenimina, polilisina (PLL), espermina, espermidina, poliamina, pseudopéptido-poliamina, poliamina peptidomimética, dendrímero de poliamina, arginina, amidina, protamina, lípido catiónico, porfirina catiónica, sal cuaternaria de una poliamina, o un péptido alfahelicoidal.
Los agentes de administración de fármaco también pueden incluir otros grupos de direccionamiento, por ejemplo, un agente de direccionamiento de célula o tejido, por ejemplo, una lectina, glicoproteína, lípido o proteína, por ejemplo, un anticuerpo, que se une a un tipo de célula especificada. Un grupo de direccionamiento puede ser una tirotropina, melanotropina, lectina, glicoproteína, proteína A surfactante, carbohidrato de mucina, lactosa multivalente, galactosa multivalente, N-acetil-galactosamina, mañosa de N-acetil-gulucosamina multivalente, fucosa multivalente, poliaminoácidos glicosilados, galactosa multivalente, transferrina, bisfosfonato, poliglutamato, poliaspartato, un lípido, colesterol, un esteroide, ácido biliar, folato, vitamina B 12, biotina, un péptido RGD, un péptido mimético RGD o un aptámero.
Otros ejemplos de agentes de administración de fármaco incluyen tintes, agentes de intercalación (por ejemplo acridinas), reticulantes (por ejemplo psoraleno, mitomicina C), porfirinas (TPPC4, texafirina, sapfirina), hidrocarburos aromáticos policíclicos (por ejemplo, fenazina, dihidrofenazina), endonucleasas artificiales o un quelante (por ejemplo EDTA), moléculas lipófilas, por ejemplo, colesterol, ácido cólico, ácido acético de adamantano, ácido 1-pirenbutírico, dihidrotestosterona, 1,3-Bis-0(hexadecil)glicerol, grupo geraniloxihexilo, hexadecilglicerol, borneol, mentol, 1,3-propanodiol, grupo heptadecilo, ácido palmítico, ácido mirístico, ácido 03-(oleoil)litocólico, ácido 03-(oleoil)colénico, dimetoxitritilo, o fenoxazina) y conjugados de péptido (por ejemplo, péptido antennapedia, péptido Tat), agentes alquilantes, fosfato, amino, mercapto, PEG (por ejemplo, PEG-40K), MPEG, [MPEG]2, poliamino, alquilo, alquilo sustituido, marcadores radioetiquetados, enzimas, haptenos (por ejemplo biotina), facilitadores del transporte/absorción (por ejemplo, aspirina, vitamina E, ácido fólico), ribonucleasas sintéticas (por ejemplo, imidazol, bisimidazol, histamina, agrupamientos de imidazol, conjugados de acridina-imidazol, complejos Eu3+ de tetraazamacrociclos), dinitrofenilo, HRP o AP.
Los agentes de administración de fármaco también pueden incluir hormonas o receptores de hormonas. También pueden incluir especies no peptídicas, por ejemplo lípidos, lectinas, carbohidratos, vitaminas, cofactores, lactosa multivalente, galactosa multivalente, N-acetil-galactosamina, manosa de N-acetil-gulucosamina multivalente, fucosa multivalente o aptámeros. El agente de administración de fármaco puede ser, por ejemplo, un lipopolisacárido, un activador de cinasa p38 MAP o un activador de NF-KB.
El agente de administración de fármaco puede ser una sustancia, que puede aumentar la absorción de cualquiera de las Fórmulas (XX) o (XXIV) en la célula, por ejemplo, al alterar el citoesqueleto de la célula, por ejemplo, mediante la alteración de microtúbulos, microfilamentos y/o filamentos intermedios de la célula.
El agente de administración de fármaco puede aumentar la absorción de cualquiera de las Fórmulas (XX) o (XXIV) en la célula, por ejemplo, mediante la activación de una respuesta inflamatoria. Algunos agentes de administración de fármaco ejemplares que pueden tener dicho efecto incluyen factor de necrosis tumoral alfa (TNFalfa), interleucina-1 beta o interferón gamma.
En una realización, el agente de administración de fármaco es un lípido o molécula a base de lípido. Dicho lípido o molécula basada en lípidos se puede unir a una proteína de suero, por ejemplo, albúmina de suero humano (HSA). Un agente de administración de fármaco de unión a HSA permite la distribución del conjugado de administración de fármaco a un tejido objetivo, por ejemplo, un tejido objetivo no renal del cuerpo. Otras moléculas que se pueden unir a HSA también se pueden utilizar como agentes de administración de fármaco. Por ejemplo, se pueden utilizar naproxeno o aspirina. Un agente de administración de fármaco de lípido o a base de lípido puede (a) aumentar la resistencia a la degradación del conjugado de administración de fármaco, (b) aumentar el direccionamiento o transporte hacia una célula objetivo o membrana celular, y/o (c) se puede utilizar para ajustar la unión a una proteína de suero, por ejemplo, HSA. Un agente de administración de fármaco de lípido o a base de lípido puede también permitir la formación de nanopartículas, tales como micelas, que pueden impactar sobre la biodistribución de cualquiera de las Fórmulas (XX) o (XXIV).
Se puede utilizar un agente de administración de fármaco a base de lípido para modular, por ejemplo, controlar la unión del conjugado de administración de fármaco a un tejido objetivo. Por ejemplo, es menos probable que un agente de administración de fármaco de lípido o a base de lípido que se une a HSA con más intensidad se dirija hacia el riñón y, por lo tanto, es menos probable que se elimine del cuerpo. Un agente de administración de fármaco de lípido o a base de lípido que se une a HSA con menos intensidad se puede utilizar para dirigir el conjugado hacia el riñón.
En una realización, el agente de administración a base de lípido se une a HSA con una afinidad suficiente de manera que el conjugado de administración de fármaco se distribuya hacia un tejido no renal. En una realización, la afinidad no es tan potente que no se pueda revertir la unión del agente de administración de fármaco de HSA.
En otra realización preferida, el agente de administración de fármaco a base de lípido se une débilmente a HSA o no se une, de manera tal que el conjugado de administración de fármaco se distribuya preferentemente en el riñón. También se pueden utilizar otros restos que se dirigen hacia células de riñón en lugar de, o además de, el agente de administración de fármaco a base de lípido.
En otra realización, el agente de administración de fármaco es un resto, por ejemplo, una vitamina, que se absorbe mediante una célula objetivo, por ejemplo, una célula proliferante. Estos son particularmente útiles para el tratamiento de trastornos caracterizados por la proliferación celular no deseada, por ejemplo, de tipo maligno o no maligno, por ejemplo, células cancerosas. Las vitaminas ilustrativas incluyen vitamina A, E y K. Otras vitaminas ilustrativas incluyen vitaminas B, por ejemplo, ácido fólico, B 12, riboflavina, biotina, piridoxal u otras vitaminas o nutrientes absorbidos por células cancerosas. También se incluyen HAS, lipoproteína de baja densidad (LDL) y lipoproteína de alta densidad (HDL).
En otra realización, el agente de administración de fármaco es un agente de permeación celular, por ejemplo, un agente de permeación celular helicoidal. En una realización, el agente es anfipático. Los agentes anfipáticos ilustrativos incluyen un péptido, tal como tat o antennapedia, y un conjugado de lípido y PEG. Si el agente es un péptido, puede modificarse, incluso un peptidilmimético, invertómeros, enlaces no péptido o pseudo-péptido, y uso de aminoácidos D. En una realización, el agente helicoidal es un agente alfa-helicoidal que tiene una fase lipofílica y una base lipofóbica.
El agente de administración de fármaco puede ser un péptido o peptidomimético. Un peptidomimético (también denominado oligopeptidomimético en la presente) es una molécula capaz de plegarse en una estructura tridimensional definida similar a un péptido natural. El resto péptido o peptidomimético puede tener una longitud de alrededor de 5­ 50 aminoácidos, por ejemplo, una longitud de alrededor de 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 o 50 aminoácidos. Un péptido o peptidomimético, por ejemplo, puede ser un péptido de permeación celular, péptido catiónico, péptido anfipático o péptido hidrofóbico (por ejemplo, que consiste principalmente en Tyr, Trp o Phe). El resto péptido puede ser un péptido dendrímero, péptido limitado o péptido reticulado. En otra realización, el resto péptido puede incluir una secuencia de traslocación de membrana (MTS) hidrofóbica. Un péptido que contiene MTS hidrofóbica ilustrativo es RFGF. Un análogo de RFGF que contiene una MTS hidrofóbica también puede ser un agente de administración de fármaco. El resto péptido puede ser un péptido de “administración”, que puede transportar moléculas polares grandes que incluyen péptidos, oligonucleótidos y proteína a través de las membranas celulares. Por ejemplo, se ha descubierto que las secuencias de la proteína Tat de VIH y la proteína Antennapedia de Drosophila son capaces de funcionar como péptidos de administración. Un péptido o peptidomimético puede ser codificado por una secuencia aleatoria de ADN, por ejemplo un péptido identificado de una biblioteca de expresión de fagos, o una biblioteca combinatoria de una-perla-un-compuesto (OBOC) (Lam et al., Nature, 354:82-84, 1991). En una realización, el péptido o peptidomimético es un péptido de direccionamiento celular tal como un péptido de arginina-glicina-ácido aspártico (RGD), o mimético de RGD. Un resto peptídico puede tener una longitud que oscila entre alrededor de 5 aminoácidos y alrededor de 40 aminoácidos. Los restos peptídicos pueden tener una modificación estructural, por ejemplo, para aumentar la estabilidad o dirigir propiedades conformacionales. Se puede utilizar cualquiera de las modificaciones estructurales descritas más abajo. Un resto peptídico de RGD puede utilizarse para dirigirse a una célula tumoral, tal como una célula tumoral endotelial o una célula tumoral de cáncer de mama (Zitzmann et al., Cancer Res., 62:5139-43, 2002). Un péptido de RGD puede facilitar el direccionamiento de cualquiera de las Fórmulas (XX) o (XXIV) hacia células de diversos tejidos diferentes, que incluyen pulmón, riñón, bazo o hígado (Aoki et al., Cancer Gene Therapy 8:783-787, 2001).
En algunas realizaciones, el péptido de RGD puede facilitar el direccionamiento de un conjugado de administración de fármaco al riñón. El péptido de RGD puede ser lineal o cíclico, y se puede modificar, por ejemplo, glicosilar o metilar para facilitar el direccionamiento hacia tejidos específicos. Por ejemplo, un péptido de r Gd glicosilado puede suministrar un conjugado de administración de fármaco a una célula tumoral que expresa civB3 (Haubner et al., Jour. Nucl. Med., 42:326-336, 2001). Se pueden utilizar péptidos que dirigen marcadores enriquecidos con células proliferantes. Por ejemplo, los péptidos y peptidomiméticos que contienen RGD pueden dirigirse a células de cáncer, en particular células que presentan una integrina. Por tanto, se puede utilizar péptidos de RGD, péptidos cíclicos que contienen RGD, péptidos de RGD que incluyen aminoácidos D, así como miméticos de RGD sintéticos. Además de RGD, se pueden utilizar otros restos que se dirigen al agente de administración de fármaco de integrina. En general, dichos agentes de administración de fármaco pueden utilizarse para controlar las células proliferantes y la angiogénesis. Los conjugados preferidos de este tipo de agente de administración de fármaco se dirigen a PECAM-1, VEGF u otros genes de cáncer, por ejemplo, un gen de cáncer descrito en la presente.
Un “péptido de permeación celular” es capaz de permear una célula, por ejemplo, una célula de mamífero, tal como una célula humana. Un péptido de permeación celular puede incluir un péptido RALA. (Molecular Therapy: Nucleic Acids, 2017, 6, 249-258; J Control Release. 2014, 189:141-9; y Nanomedicine (Lond). 2015, 10(19): 2989-3001). Un péptido de permeación celular también puede incluir una señal de localización nuclear (NLS). Por ejemplo, un péptido de permeación celular puede ser un péptido anfipático bipartito, por ejemplo MPG, que deriva del dominio de péptido de fusión de gp41 de VIH-1 y el NLS de antígeno T grande de SV40 (Simeoni et al., Nucl. Acids Res. 31 :2717-2724, 2003). Un péptido de permeación celular puede formar una nanopartícula.
En una realización, un péptido de direccionamiento puede ser un péptido helicoidal a anfipático. Algunos péptidos helicoidaldes a anfipáticos ilustrativos incluyen, de modo no limitante, cecropinas, licotoxinas, paradaxinas, buforina, CPF, péptido similar a bombinina (BLP), catelicidinas, ceratotoxinas, péptidos de S. clava, péptidos antimicrobianos intestinales de pez bruja (HFIAP), magaininas, brevininas-2, dermaseptinas, melitinas, pleurocidina, péptidos H2A, péptidos de Xenopus, esculentinis-1 y caerinas. Se considerará preferentemente una cantidad de factores para mantener la integridad de la estabilidad de la hélice. Por ejemplo, una cantidad máxima de residuos de estabilización de la hélice se utilizará (por ejemplo, leu, ala o lys) y se utilizará una cantidad mínima de residuos de desestabilización de la hélice (por ejemplo, prolina o unidades monoméricas cíclicas. Se considerará el residuo de casquete (por ejemplo, Gly es un residuo de casquete del extremo N ilustrativo y/o se puede utilizar amidación del extremo C para proporcionar un enlace H extra para estabilizar la hélice. La formación de puentes de sal entre los residuos con cargas opuestas, separados por i 3 o i 4 posiciones, puede proporcionar estabilidad. Por ejemplo, los residuos catiónicos como lisina, arginina, homo-arginina, ornitina o histidina pueden formar puentes de sal con los residuos aniónicos de glutamato o aspartato.
Los agentes de administración de fármaco de péptido y peptidomimético incluyen aquellos que tienen péptidos modificados o de origen natural, por ejemplo, péptidos D o L; péptidos a, p o y; péptidos de N-metilo; azapéptidos; péptidos que tienen una o más enlaces amida, es decir, péptido, reemplazados por uno o más enlaces urea, tiourea, carbamato, o sulfonilurea; o péptidos cíclicos.
El agente de administración de fármaco puede ser cualquier agente de administración de fármaco capaz de dirigirse a un receptor específico. Algunos ejemplos son: folato, GalNAc, galactosa, manosa, manosa-6P, grupos de azúcares tales como grupo GalNAc, grupo de manosa, grupo de galactosa o un aptámero. Un grupo es una combinación de dos o más unidades de azúcar. Los agentes de administración de fármaco incluyen, además, agentes de administración de fármaco de integrina, agentes de administración de fármaco del receptor de quimiocina, transferrina, agentes de administración de fármaco del receptor de serotonina, PSMA, endotelina, GCPII, somatostatina, agentes de administración de fármaco de LDL y HDL. Los agentes de administración de fármaco también pueden ser a base de ácido nucleico, por ejemplo, un aptámero. El aptámero puede ser no modificado o tener cualquier combinación de modificaciones descritas en la presente.
Los agentes de liberación endosomal incluyen imidazoles, poli u oligoimidazoles, PEI, péptidos, péptidos fusogénicos, policaboxilatos, poliacationes, oligo o poli cationes o aniones enmascarados, acetales, poliacetales, cetales/policetiales, ortoésteres, polímeros con cargas catiónicas o aniónicas enmascarados o no enmascarados, dendrímeros con cargas catiónicas o aniónicas enmascarados o no enmascarados.
El agente de administración de fármaco puede ser un modulador PK (modulador farmacocinético). Los moduladores PK incluyen lipófilos, ácidos biliares, esteroides, análogos de fosfolípidos, péptidos, agentes de unión de proteína, PEG, vitaminas, etc. Los moduladores PK ilustrativos incluyen, de modo no limitante, colesterol, ácidos grasos, ácido cólico, ácido litocólico, dialquilgliceridas, diacilglicerida, fosfolípidos, esfingolípidos, naproxeno, ibuprofeno, vitamina E, biotina, etc.
También se conoce que los oligonucleótidos que comprenden una serie de enlaces de fosforotioato se unen a proteína de suero, por ende, los oligonucleótidos cortos, por ejemplo oligonucleótidos de aproximadamente 5 bases, 10 bases, 15 bases o 20 bases, que comprenden múltiples enlaces de fosforotioato en la estructura principal también son aptos para la presente invención como agentes de administración de fármaco (por ejemplo, agentes de administración de fármaco de modulación PK).
Además, los aptámeros que se unen a componentes de suero (por ejemplo, proteínas de suero) también son aptos para la presente divulgación como agentes de administración de fármaco de modulación PK.
Cuando el agente de administración de fármaco comprende una combinación de dos o más restos, por ejemplo, un lípido y un carbohidrato, por ejemplo, un lípido y un péptido, los dos o más restos pueden tener las mismas propiedades, tener todos propiedades diferentes o algunos restos tener las mismas propiedades mientras otros tienen propiedades diferentes. Por ejemplo, un agente de administración de fármaco puede tener propiedades de direccionamiento, actividad endosomolítica y/o propiedades de modulación PK. Por ejemplo, un resto de un agente de administración de fármaco puede ser hidrofílico y el otro puede ser hidrofóbico. En algunas realizaciones, los restos tienen diferentes propiedades.
Se describen agentes de administración de fármaco y enlazadores en los documentos US 7,745,608; US 7,626,014; US 8,034,921; US 2005/0164235; y WO 2013/075035.
En el presente documento se proporciona un compuesto que tiene la Fórmula (X):
Figure imgf000027_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
Cada uno de R1 y R2 es independientemente un grupo hidroxi o un átomo de halógeno.
B1 es:
Figure imgf000028_0001
R18 es hidrógeno o alquilo C1-6; y
R19 es un átomo de halógeno
B2 es:
Figure imgf000028_0002
cada uno de Q2 y Q4 es independientemente un átomo de oxígeno o un átomo de azufre.
Los ejemplos específicos del compuesto (X) incluyen los compuestos de los Ejemplos 1-5, 14, 19-26 y 3a.
Cuando el compuesto (X) se encuentra en forma de sal, la sal es preferentemente una sal farmacológicamente aceptable. Los ejemplos incluyen sales con base inorgánica, sales con base orgánica, sales con ácido inorgánico, sales con ácido orgánico y sales con aminoácido básico o ácido.
Los ejemplos preferidos de la sal con base inorgánica incluyen sales de metal alcalino, tales como sal de sodio, sal de potasio y similares; sales de metal alcalinotérreo, tales como sal de calcio, sal de magnesio y similares; sal de aluminio y sal de amonio.
Los ejemplos preferidos de la sal con base orgánica incluyen sales con trimetilamina, trietilamina, piridina, picolina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina [tris(hidroximetil)metilamina], terc-butilamina, ciclohexilamina, bencilamina, diciclohexilamina y N,N-dibenciletilendiamina.
Los ejemplos preferidos de la sal con ácido inorgánico incluyen sales con ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido nítrico, ácido sulfúrico y ácido fosfórico.
Los ejemplos preferidos de la sal con ácido orgánico incluyen sales con ácido fórmico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido ftálico, ácido fumárico, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido maleico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido málico, ácido metanosulfónico, ácido bencenosulfónico y ácido p-toluenosulfónico.
Los ejemplos preferidos de la sal con aminoácido básico incluyen sales con arginina, lisina y ornitina.
Los ejemplos preferidos de la sal con aminoácido ácido incluyen sales con ácido aspártico y ácido glutámico.
Cuando el compuesto (X) se encuentra en forma de sal, la sal es preferentemente una sal con trietilamina o sodio, más preferentemente una sal con trietilamina.
El método de producción del compuesto de la presente invención se explica a continuación.
El reactivo y compuesto de materia prima utilizados y el compuesto obtenido en cada etapa en el método de producción que sigue a continuación pueden estar cada uno en forma de sal y los ejemplos de dicha sal incluyen las sales similares a las del compuesto de la presente divulgación.
Cuando el compuesto obtenido en cada etapa es una forma libre, puede convertirse en la sal objetivo de acuerdo con un método conocido en sí. Cuando el compuesto obtenido en cada etapa es una sal, puede convertirse en la forma libre objetivo o la otra sal de acuerdo con un método conocido en sí.
El compuesto obtenido en cada etapa puede utilizarse de manera directa como la mezcla de reacción o como un producto en bruto para la siguiente reacción. De manera alternativa, el compuesto obtenido en cada etapa puede aislarse y purificarse a partir de una mezcla de reacción de manera alternativa un método conocido en sí, por ejemplo, un medio de separación tal como concentración, cristalización, recristalización, destilación, extracción de disolvente, destilación fraccional, cromatografía en columna y similares.
Cuando el reactivo y compuesto de materia prima utilizados en cada etapa estén disponibles en el mercado, también puede utilizarse directamente el producto disponible en el mercado.
En la reacción en cada etapa, si bien el tiempo de reacción varía dependiendo del tipo de reactivo y disolvente utilizados, este es generalmente entre 1 minuto - 48 horas, preferentemente entre 10 minutos - 8 horas, a menos que se especifique lo contrario.
En la reacción en cada etapa, si bien la temperatura de reacción varía dependiendo del tipo de reactivo y disolvente utilizados, esta es generalmente entre -78 °C - 300 °C, preferentemente entre -78 °C - 150 °C, a menos que se especifique lo contrario.
En la reacción en cada etapa, si bien la presión varía dependiendo del tipo de reactivo y disolvente utilizados, esta es generalmente entre 1 atmósfera - 20 atmósferas, preferentemente entre 1 atmósfera - 3 atmósferas, a menos que se especifique lo contrario.
Puede utilizarse un sintetizador de microondas, tal como Initiator, fabricado por Biotage, y similares, para la reacción en cada etapa. Si bien la temperatura de reacción varía dependiendo del tipo de reactivo y disolvente utilizados, esta es generalmente entre temperatura ambiente - 300 °C, preferentemente entre 50 °C - 250 °C, a menos que se especifique lo contrario. Si bien el tiempo de reacción varía dependiendo del tipo de reactivo y disolvente utilizados, este es generalmente entre 1 minuto - 48 horas, preferentemente entre 1 minutos - 8 horas, a menos que se especifique lo contrario.
En la reacción en cada etapa, el reactivo se utiliza en una cantidad entre 0,5 equivalentes - 20 equivalentes, preferentemente entre 0,8 equivalentes - 5 equivalentes, en relación con el sustrato, a menos que se especifique lo contrario. Cuando se utiliza el reactivo como catalizador, el reactivo se utiliza en una cantidad entre 0,001 equivalentes - 1 equivalente, preferentemente entre 0,01 equivalentes - 0,2 equivalentes, en relación con el sustrato. Cuando el reactivo se utiliza como disolvente de reacción, el reactivo se utiliza en una cantidad disolvente.
A menos que se especifique lo contrario, la reacción en cada etapa se lleva a cabo sin disolvente, o mediante la disolución o suspensión del compuesto de materia prima en un disolvente adecuado. Los ejemplos del disolvente incluyen los descritos en los Ejemplos y los disolventes a continuación.
alcoholes: metanol, etanol, alcohol terc-butílico, 2-metoxietanol y similares;
éteres: éter dietílico, éter difenílico, tetrahidrofurano, 1,2-dimetoxietano y similares;
hidrocarburos aromáticos: clorobenceno, tolueno, xileno y similares;
hidrocarburos saturados: ciclohexano, hexano y similares;
amidas: N,N-dimetilformamida, N-metilpirrolidona y similares;
hidrocarburos halogenados: diclorometano, tetracloruro de carbono y similares;
nitrilos: acetonitrilo y similares;
sulfóxidos: dimetilsulfóxido y similares;
bases orgánicas aromáticas: piridina y similares;
anhídridos: anhídrido acético y similares;
ácidos orgánicos: ácido fórmico, ácido acético, ácido trifluoroacético y similares;
ácidos inorgánicos: ácido clorhídrico, ácido sulfúrico y similares;
ésteres: acetato de etilo y similares;
cetonas: acetona, metil etil cetona y similares;
agua.
El disolvente mencionado anteriormente puede utilizare en una mezcla de dos o más tipos de este en una proporción adecuada.
Cuando se utiliza una base para la reacción en cada etapa, los ejemplos de esta incluyen los descritos en los Ejemplos y las siguientes bases.
bases inorgánicas: hidróxido de sodio, hidróxido de magnesio, carbonato de sodio, carbonato de calcio, hidrogenocarbonato de sodio y similares;
bases orgánicas: trietilamina, dietilamina, piridina, 4-dimetilaminopiridina, N,N-dimetilanilina, 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7-undeceno, imidazol, piperidina y similares;
alcóxidos metálicos: etóxido de sodio, terc-butóxido de potasio y similares;
hidruros de metal alcalino: hidruro de sodio y similares;
amidas metálicas: amida de sodio, diisopropilamida de litio, hexametildisilazida de litio y similares;
litios orgánicos: n-butillitio y similares.
Cuando se utiliza un ácido o catalizador de ácido para la reacción en cada etapa, los ejemplos de esta incluyen los descritos en los Ejemplos y los siguientes ácidos y catalizadores de ácido.ácidos inorgánicos: ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico y similares;
ácidos orgánicos: ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido cítrico, ácido p-toluenosulfónico, ácido 10-canforsulfónico y similares;
ácido de Lewis: complejo de éter dietílico trifluoruro de boro, yoduro de cinc, cloruro de aluminio anhidro, cloruro de cinc anhidro, cloruro de hierro anhidro y similares.
A menos que se especifique lo contrario, la reacción en cada etapa se lleva a cabo de acuerdo con un método en sí, por ejemplo, el método descrito en Jikken Kagaku Kouza, 5.a edición, vol.13-19 (the Chemical Society of Japan ed.); Shin Jikken Kagaku Kouza, vol.14-15 (the Chemical Society of Japan ed.); Fine Organic Chemistry, 2.a edición revisada (L. F. Tietze, Th. Eicher, Nankodo); Organic Name Reactions, the Reaction Mechanism and Essence, edición revisada (Hideo Togo, Kodansha); ORGANIC SYNTHESES Collective Volume I-VII (John Wiley & Sons Inc); Modern Organic Synthesis in the Laboratory A Collection of Standard Experimental Procedures (Jie Jack Li, OXFo Rd UNIVERSITY); Comprehensive Heterocyclic Chemistry III, Vol.1 -Vol.14 (Elsevier Japan); Strategic Applications of Named Reactions in Organic Synthesis (translated by Kiyoshi Tomioka, Kagakudojin); Comprehensive Organic Transformations (VCH Publishers Inc.), 1989, o similares, o en el método descrito en los Ejemplos.
En cada etapa, la reacción de desprotección o protección de un grupo funcional se lleva a cabo de acuerdo con método conocido en sí, por ejemplo, el método descrito en “Protective Groups in Organic Synthesis, 4.a Ed”, Wiley-Interscience, Inc., 2007 (Theodora W. Greene, Peter G. M. Wuts); “Protecting Groups 3rd Ed.” Thieme, 2004 (P.J.Kocienski), o similares, o el método descrito en los Ejemplos.
Los ejemplos del grupo protector para un grupo hidroxi (por ejemplo, un grupo hidroxi de un alcohol o similar, un grupo hidroxi fenólico) incluyen grupos protectores de tipo éter, tales como éter metoximetílico, éter bencílico, éter tercbutildimetilsilílico, éter tetrahidropiranílico y similares; grupos protectores de tipo éster de carboxilato, tal como éster de acetato y similares; grupos protectores de tipo éster de sulfonato, tal como éster de metanosulfonato y similares; y grupos protectores de tipo de éster de carbonato, tal como terc-butilcarbonato y similares.
Los ejemplos del grupo protector para un grupo carbonilo de un aldehído incluyen grupos protectores de tipo acetal, tal como dimetilacetal y similares; y grupos protectores de tipo acetal cíclico, tal como 1,3-dioxano y similares.
Los ejemplos del grupo protector para un grupo carbonilo de una cetona incluyen grupos protectores de tipo cetal, tal como dimetilcetal y similares; grupos protectores de tipo cetal cíclico, tal como 1,3-dioxano y similares; grupos protectores de tipo oxima, tal como O-metiloxima y similares; y grupos protectores de tipo hidrazona, tal como N,N-dimetilhidrazona y similares.
Los ejemplos del grupo protector para un grupo carboxilo incluyen grupos protectores de tipo éster, tal como éster metílico y similares; y grupos protectores de tipo amida, tal como N,N-dimetilamida y similares.
Los ejemplos del grupo protector para un tiol incluyen grupos protectores de éter, tal como tioéter bencílico y similares; y grupos protectores de tipo éster, tales como éster de tioacetato, tiocarbonato, tiocarbamato y similares.
Los ejemplos del grupo protector para un grupo amino y un heterociclo aromático, tales como imidazol, pirrol, indol y similares incluyen grupos protectores tipo carbamato, tal como carbamato de bencilo y similares; grupos protectores tipo amida, tales como acetamida, benzamida, isobutilamida y similares; grupos protectores tipo alquilamina, tal como N-trifenilmetilamina y similares; y grupos protectores tipo sulfonamida, tal como metanosulfonamida y similares.
Los grupos protectores pueden eliminarse de acuerdo con un método conocido en sí (por ejemplo, un método que utilice ácido, base, rayos ultravioletas, hidrazina, fenilhidrazina, N-metilditiocarbamato de sodio, fluoruro de tetrabutilamonio, acetato de paladio o haluro de trialquilsililo (por ejemplo, yoduro de trimetilsililo, bromuro de trimetilsililo), un método de reducción).
Cuando se lleva a cabo una reacción de reducción en cada etapa, los ejemplos del agente reductor que será utilizado incluyen hidruros metálicos, tales como hidruro de aluminio y litio, triacetoxiborohidruro de sodio, cianoborohidruro de sodio, hidruro de diisobutilaluminio (DIBAL-H), borohidruro de sodio, triacetoxiborohidruro de tetrametilamonio y similares; boranos, tal como complejo de tetrahidrofurano borano y similares; níquel Raney; cobalto Raney; hidrógeno; ácido fórmico; trietilsilano y similares. Cuando se reduce el enlace triple o enlace doble carbono-carbono, se puede emplear un método que utilice un catalizador, tal como paladio-carbono, catalizador de Lindlar y similares.
Cuando se lleva a cabo una reacción de oxidación en cada etapa, los ejemplos del agente oxidante que puede utilizarse incluyen peróxidos, tales como ácido m-cloroperbenzoico (mCPBA), peróxido de hidrógeno, hidroperóxido de terc-butilo y similares; percloratos, tal como perclorato de tetrabutilamonio y similares; cloratos, tal como clorato de sodio y similares; cloritos, tal como clorito de sodio y similares; ácidos periódicos, tal como periodato de sodio y similares; reactivos de yodo hipervalentes, tal como yodosilbenceno y similares; reactivos que contienen manganeso, tales como dióxido de manganeso, permanganato de potasio y similares; plomos, tal como tetraacetato de plomo y similares; reactivos que contienen cromo, tales como clorocromato de piridinio (PCC), dicromato de piridinio (PDC), reactivo de Jones y similares; compuesto halógenos, tal como N-bromosuccinimida (NBS) y similares; oxígeno; ozono; complejo de piridina-trióxido de azufre; tetróxido de osmio; dióxido de selenio; 2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona (DDQ) y similares.
Cuando se lleva a cabo una reacción de ciclación radical en cada etapa, los ejemplos del iniciador radical que será utilizado incluyen compuestos de azo, tal como azobisisobutironitrilo (AIBN) y similares; iniciadores radicales solubles en agua, tal como ácido 4-4'-azobis-4-cianopentanoico (ACPA) y similares; trietilboro en presencia de aire u oxígeno; peróxido de benzoilo y similares. Los ejemplos del reactivo radical que será utilizado incluyen tributilstanano, tristrimetilsililsilano, 1,1,2,2-tetrafenildisilano, difenilsilano, yoduro de samario y similares.
Cuando se lleva a cabo una reacción de Wittig en cada etapa, los ejemplos del reactivo de Wittig que será utilizado incluyen fosforanos de alquilideno y similares. Los fosforanos de alquilideno pueden prepararse de acuerdo con un método conocido en sí, por ejemplo, mediante reacción de una sal de fosfonio con una base fuerte.
Cuando se lleva a cabo una reacción de Horner-Emmons en cada etapa, los ejemplos del reactivo que será utilizado incluyen fosfonoacetatos, tales como dimetilfosfonoacetato de metilo, dietilfosfonoacetato de etilo y similares; y bases, tales como hidruros de metales alcalinos, litios orgánicos y similares.
Cuando se lleva a cabo una reacción de Friedel-Crafts en cada etapa, los ejemplos del reactivo que será utilizado incluyen una combinación de un ácido de Lewis y un cloruro de ácido o una combinación de un ácido de Lewis y un agente alquilante (por ejemplo, un haluro de alquilo, un alcohol, una olefina). De manera alternativa, también puede utilizarse un ácido orgánico o un ácido inorgánico en lugar de un ácido de Lewis, y también puede utilizarse un anhídrido, tal como ácido acético y similares, en lugar de un cloruro de ácido.
Cuando se lleva a cabo una reacción de sustitución nucleofílica aromática en cada etapa, se utiliza un nucleófilo (por ejemplo, una amina, imidazol) y una base (por ejemplo, una base orgánica) como reactivo.
Cuando se lleva a cabo una reacción de adición nucleofílica mediante un carbanión, reacción de adición nucleofílica 1,4 (reacción de adición de Michael) mediante un carbanión o reacción de sustitución nucleofílica mediante un carbanión en cada etapa, los ejemplos de la base que será utilizada para la generación del carbanión incluyen litios, alcóxidos metálicos, bases inorgánicas, bases orgánicas y similares.
Cuando se utiliza un reactivo de Grignard en cada etapa, los ejemplos del reactivo de Grignard que será utilizado incluyen haluros de arilmagnesio, tal como bromuro de fenilmagnesio y similares; haluros de alquilmagnesio, tal como bromuro de metilmagnesio y similares, y similares. El reactivo de Grignard puede prepararse de acuerdo con un método conocido en sí, por ejemplo, mediante la reacción de un haluro de alquilo o un haluro de arilo con magnesio metálico en un éter o tetrahidrofurano como disolvente.
Cuando se lleva a cabo una reacción de condensación de Knoevenagel en cada etapa, un compuesto que tenga un grupo metileno activado con dos grupos aceptores de electrones (por ejemplo, ácido malónico, malonato de dietilo, malononitrilo, etc.) y una base (por ejemplo, una base orgánica, un alcóxido metálico, una base inorgánica) se utilizan como reactivo.
Cuando se lleva a cabo una reacción de Vilsmeier-Haack en cada etapa, se utilizan cloruro de fosforilo y un derivado de amida (por ejemplo, N,N-dimetilformamida, etc.) como reactivo.
Cuando se lleva a cabo una reacción de azidación de un alcohol, un haluro de alcohol o un sulfonato en cada etapa, los ejemplos del agente azidante que será utilizado incluyen difenilfosforilazida (DPPA), trimetilsililazida, azida de sodio y similares. Por ejemplo, para la reacción de azidación de un alcohol, se emplea un método que utiliza difenilfosforilazida y 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU), un método que utiliza trimetilsililazida y un ácido de Lewis, y similares.
Cuando se lleva a cabo una reducción de aminación en cada etapa, los ejemplos del agente reductor que será utilizado incluyen triacetoxiborohidruro de sodio, cianoborohidruro de sodio, hidrógeno y ácido fórmico. Cuando el sustrato es un compuesto de amina, los ejemplos del compuesto de carbonilo que será utilizado incluyen paraformaldehído, aldehídos, tal como acetaldehído y similares, y cetonas, tal como ciclohexanona y similares. Cuando el sustrato es un compuesto de carbonilo, los ejemplos de la amina que será utilizada incluyen amoníaco, aminas primarias, tal como metilamina y similares; aminas secundarias, tal como dimetilamina y similares, y similares.
Cuando se lleva a cabo una reacción de Mitsunobu en cada etapa, se utiliza azodicarboxilato (por ejemplo, azodicarboxilato de dietilo (DEAD), azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD), etc.) y trifenilfosfina como reactivo.
Cuando se lleva a cabo una reacción de esterificación, reacción de amidación o reacción de ureación en cada etapa, los ejemplos del reactivo que será utilizado incluyen haluros de acilo, tales como cloruros de ácido, bromuros de ácido y similares; ácidos carboxílicos activados, tales como anhídridos, ésteres activados, sulfatos y similares. Los ejemplos de agente de activación del ácido carboxílico incluyen agentes de condensación de carbodiimida, tal como clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (WSCD) y similares; agentes de condensación de triazina, tal como 4-n-hidrato de cloruro de (4,6-dimetoxi-1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolinio (DMT-MM) y similares; agentes de condensación de carbonato, tales como 1,1-carbonildiimidazol (CDI) y similares; azida de difenilfosforilo (DPPA); sal de benzotriazol-1-iloxi-trisdimetilaminofosfonio (reactivo de BOP); yoduro de 2-cloro-1-metil-piridinio (reactivo de Mukaiyama); cloruro de tionilo; haloformiatos de alquilo inferior, tal como cloroformiato de etilo y similares; hexafluorofosforato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU); ácido sulfúrico; combinaciones de estos y similares. Cuando se utiliza un agente de condensación de carbodiimida, se puede agregar un aditivo, tal como 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), N-hidroxisuccinimida (HOSu), dimetilaminopiridina (DMAP) y similares al sistema de reacción.
Cuando se lleva a cabo una reacción de acoplamiento en cada etapa, los ejemplos del catalizador metálico que se utilizará incluyen acetato de paladio(II), tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0), diclorobis(trifenilfosfina)paladio(II), diclorobis(trietilfosfina)paladio(II), tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0), cloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno paladio(II) y similares; compuestos de níquel, tal como tetrakis(trifenilfosfina)níquel(0) y similares; compuestos de rodio, tal como cloruro de tris(trifenilfosfina)rodio(III) y similares; compuestos de cobalto; compuestos de cobre, tales como óxido de cobre, yoduro de cobre(I) y similares; compuestos de platino y similares. Además, puede agregarse una base al sistema de reacción y los ejemplos de esta incluyen bases inorgánicas y similares.
Cuando se lleva a cabo una reacción de tiocarbonilación en cada etapa, se utiliza típicamente pentasulfuro de fósforo como el agente de tiocarbonilación. De manera alternativa, también se puede utilizar un reactivo que tenga una estructura de 1,3,2,4-ditiadifosfetano-2,4-disulfuro (por ejemplo, 2,4-bis(4-metoxifenil)-1,3,2,4-ditiadifosfetano-2,4-disulfuro (reactivo de Lawesson), etc.) en lugar de pentasulfuro de fósforo.
Cuando se lleva a cabo una reacción de Wohl-Ziegler en cada etapa, los ejemplos del agente de halogenación que será utilizado incluyen N-yodosuccinimida, N-bromosuccinimida (n Bs ), N-clorosuccinimida (NCS), bromo, cloruro de sulfurilo y similares. Además, la reacción puede acelerarse al someter un iniciador radical, tal como calor, luz, peróxido de benzoilo, azobisisobutironitrilo y similares a la reacción del sistema de reacción.
Cuando se lleva a cabo una reacción de halogenación de un grupo hidroxi en cada etapa, los ejemplos del agente de halogenación que se utilizará incluyen ácidos halhídricos y haluros de ácido de ácidos inorgánicos, específicamente ácido clorhídrico, cloruro de tionilo, oxicloruro de fósforo y similares para la cloración, ácido bromhídrico al 48 % y similares para la bromación. Además, se puede emplear un método para producir un haluro de alquilo mediante la reacción de un alcohol con trifenilfosfina y tetracloruro de carbono o tetrabromuro de carbono o similares. De manera alternativa, se puede emplear un método para producir un haluro de alquilo por medio de dos etapas que comprenden convertir un alquilo en el sulfonato correspondiente y luego hacer reaccionar el sulfonato con bromuro de litio, cloruro de litio o yoduro de sodio.
Cuando se lleva a cabo una reacción de Arbuzov en cada etapa, los ejemplos del reactivo que será utilizado incluyen haluros de alquilo, tal como bromoacetato de etilo y similares; fosfitos, tales como fosfito de trietilo, fosfito de tri(isopropilo) y similares, y similares.
Cuando se lleva a cabo una reacción de esterificación de sulfonato en cada etapa, los ejemplos del agente de sulfonación que será utilizado incluyen cloruro de metanosulfonilo, cloruro de p-toluenosulfonilo, anhídrido metanosulfónico, anhídrido p-toluenosulfónico y similares.
Cuando se lleva a cabo una reacción de hidrólisis en cada etapa, se utiliza un ácido o una base como reactivo. Los ejemplos del ácido incluyen 2,2,2-trifluoroacetato de piridina. Para la reacción de hidrólisis de ácido de éster de t-butilo, se puede agregar ácido fórmico, trietilsilano y similares para atrapar de forma reductora un catión de t-butilo que es un subproducto.
Cuando se lleva a cabo una reacción de deshidratación en cada etapa, los ejemplos del agente de deshidratación que será utilizado incluyen ácido sulfúrico, pentaóxido de difósforo, oxicloruro de fósforo, N,N'-diciclohexilcarbodiimida, alúmina, ácido polifosfórico y similares.
Los ejemplos del grupo protector para un grupo hidroxi que será utilizado en cada etapa incluyen grupos protectores de tipo éter, tal como éter de bis(4-metoxifenil)(fenil)metilo y similares, además de los ejemplos mencionados anteriormente.
Los ejemplos del grupo protector para un grupo amino que será utilizado en cada etapa incluyen grupos protectores de tipo imidamida, tal como éter de N,N-dimetilformimidamida y similares, además de los ejemplos mencionados anteriormente.
La reacción de desprotección en cada etapa se puede llevar a cabo además mediante el uso de ácido acético, 1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-ol, trihidrofluoruro de trietilamina, metilamina, 2-metilpropan-2-amina o fluoruro de hidrógeno-piridina, ácido trifluoroacético, en lugar de los ejemplificados anteriormente.
Cuando se lleva a cabo una reacción de reconfiguración en cada etapa, los ejemplos del reactivo que será utilizado incluyen bases, tal como trietilamina y similares.
Cuando se lleva a cabo una reacción de fosforamidita en cada etapa, se utiliza un agente de fosforamidación (por ejemplo, fosfordiamiditas, tal como 3-((bis(diisorpopilamino)fosfino)oxi)propanonitrilo y similares; clorofosforamiditas, tal como 2-cianoetil diisopropilclorofosforamidita y similares) y una base (por ejemplo, bases orgánicas) como reactivo.
Cuando se lleva a cabo una reacción de tiofosforamidita en cada etapa, se utiliza un agente de tiofosforamidación (por ejemplo, 2-cianoetil dipropan-2-ilfosforamidocloridotioita) y una base (por ejemplo, bases orgánicas) como reactivo.
Cuando se lleva a cabo una reacción de H-fosfonación en cada etapa, los ejemplos del agente de H-fosfonación que se utilizará incluyen fosfito de difenilo y similares.
Cuando se lleva a cabo una reacción de H-tiofosfonación en cada etapa, los ejemplos del agente de H-tiofosfonación que será utilizado incluyen una combinación de un activador, tal como fosfito de difenilo y similares, y una fuente de átomos de azufre, tal como sulfuro de litio y similares, y similares.
Cuando se lleva a cabo una reacción de condensación en cada etapa, los ejemplos del activador que será utilizado incluyen piridina, 2,2,2-trifluoroacetato, 1H-tetrazol, 5-(etilsulfanil)-1H-tetrazol (en lo sucesivo se denomina a veces 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazol) y similares.
Cuando se lleva a cabo una reacción de oxidación en cada etapa, los ejemplos del agente de oxidación que será utilizado incluyen halógenos, tal como yodo y similares, que se utilizan en general para la síntesis de ácido nucleico y similares, además de los ejemplificados anteriormente.
Cuando se lleva a cabo una reacción de sulfuración en cada etapa, los ejemplos del agente sulfurizante que será utilizado incluyen 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-ona, 1,1 -dióxido de 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-ona, ((dimetilaminometiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazoiine-3-tiona y similares. Además, por ejemplo, también se pueden utilizar una suspensión de sulfur-2,6-lutidina, solución de disulfuro de azufre-carbono, disulfuro de tetrametiltiuram (TETD) (H. Vu et al., Tetrahedron Lett., 32, 3005-3008 (1991)), Beauge's reagent (R.P. Lyer et al., J. Am. Chem. Soc., 112, 1253­ 1254 (1990)) y reactivo de Lawesson para la reacción de sulfuración. Asimismo, como método de formación de la estructura de fosforoditioato, se puede utilizar el documento de Marshall et al. (Science 259: 1564-1570, 1993) y el documento de Caruthers y Nielsen et al. (WO 1989/011486) como referencia.
Cuando se lleva a cabo una reacción de ciclación en cada etapa, los ejemplos del activador que será utilizado incluyen 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano, cloruro de pivaloilo, hexafluorato de 2-(benzoiltriazol-1-iloxi)-1,3-dimetil-2-pirrolidin-1-il-1,3,2-diazafosfolidinio (BOMP), cloruro N,N-bis(2-oxazolidinil)fosfónico (BopCl), ácido pirofosfórico y similares. Cuando no se utiliza un activador, la reacción se puede llevar a cabo mediante calentamiento. Además, se puede agregar una base al sistema de reacción. Los ejemplos de la base incluyen bases orgánicas y similares.
Cuando se lleva a cabo una reacción de formación de enlaces entre una nucleobase y ribosa en cada etapa, los ejemplos del activador que será utilizado incluyen N-(trimetilsilil)acetimidato de trimetilsililo, trifluorometanosulfonato de trimetilsililo y similares.
El compuesto (IA) se puede producir a partir del compuesto (1a) o (1b) y el compuesto (2a) o (2b), de acuerdo con el método a continuación.
Figure imgf000034_0001
donde PGa es un grupo protector de hidroxi y los demás símbolos son como se definió anteriormente.
De manera alternativa, el compuesto (IA) también se puede producir a partir del compuesto (8a) o (8b) y el compuesto (9a) o (9b), de acuerdo con el método a continuación.
Figure imgf000034_0002
donde PGb es un grupo protector de hidroxi y los demás símbolos son como se definió anteriormente.
Los ejemplos preferidos del grupo protector de hidroxi para PGa o PGb incluyen grupos protectores de tipo éter, tales como éter de bis(4-metoxifenil)(fenil)metilo, éter de 3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanilo y similares.
Cuando cada uno de R1 y R2 es un grupo hidroxi, el grupo hidroxi puede estar protegido. Los ejemplos preferidos del grupo protector de hidroxi incluyen grupos protectores de tipo éter, tales como éter de terc-butildimetilsililo, éter de 3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanilo y similares.
Cuando R1 es un grupo hidroxilo, el grupo hidroxilo y el grupo hidroxilo representado por PGa pueden estar protegidos por un grupo 1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanilo:
Figure imgf000035_0001
En este caso, un compuesto donde el grupo de hidroxilo R1 está protegido por un grupo 3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanilo:
Figure imgf000035_0002
se produce en la reacción de desprotección para eliminar PGa.
Cuando B1 tiene un grupo funcional, el grupo funcional puede estar protegido. Por ejemplo, cuando B1 es un grupo representado por
Figure imgf000035_0003
y
R14 es un grupo -NH2, el grupo -NH2 puede estar protegido.
Cuando B2 tiene un grupo funcional, el grupo funcional puede estar protegido. Por ejemplo, cuando B2 es un grupo representado por
O
Figure imgf000035_0004
y
R24 es un grupo -NH2, el grupo -NH2 puede estar protegido. Además, por ejemplo, cuando B2 es un grupo representado por
Figure imgf000036_0001
el grupo -NH2 puede estar protegido.
Los ejemplos preferidos del grupo protector para el grupo -NH2 incluyen grupos protectores de tipo amida, tales como benzamida, isobutilamida y similares, y grupos protectores de tipo imidamida, tal como N,N-dimetilformimidamida y similares.
Los compuestos (1a), (1b), (9a) y (9b) mencionados anteriormente se pueden producir a partir del compuesto (27) de acuerdo con el método a continuación.
Figure imgf000036_0002
donde cada símbolo es como se definió anteriormente.
Los compuestos (2a), (2b), (8a) y (8b) mencionados anteriormente se pueden producir a partir del compuesto (29) de acuerdo con el método a continuación.
donde cada símbolo es como se definió anteriormente.
El sustituyente del compuesto (I) obtenido de este modo se puede someter a una modificación (es decir, introducción de un sustituyente, transformación de grupo funcional) de acuerdo con un medio conocido en sí para proporcionar el otro compuesto o una sal de este comprendida por el Compuesto (I). Se pueden emplear métodos generales conocidos para la introducción de un sustituyente y la transformación de un grupo funcional, y los ejemplos de estos incluyen la conversión de un átomo de halógeno (por ejemplo, flúor, cloro, bromo, yodo) o un grupo alquilsulfoniloxi C1-6 halogenado opcionalmente [por ejemplo, metanosulfoniloxi, etanosulfoniloxi, triclorometanosulfoniloxi, trifluorometanosulfoniloxi (triflato)] en un grupo metilo, un grupo ciclopropilo, un grupo vinilo, un grupo ciano, un grupo formilo, un grupo carbonilo, un grupo carboxilo, un grupo hidroxi, un grupo amino, un grupo borilo y similares; conversión de un grupo formilo en un grupo etinilo mediante reacción de homologación de Seyferth-Gilbert; conversión de un éster en un grupo carboxi mediante hidrólisis; conversión de un grupo carboxi mediante en un grupo carbamoilo mediante amidación; conversión de un grupo carboxi mediante un grupo hidroximetilo mediante reducción; conversión de un grupo carbonilo en un alcohol mediante reducción o alquilación; aminación reductora de un grupo carbonilo; oximación de un grupo carbonilo; acilación de un grupo amino; ureación de un grupo amino; sulfonación de un grupo amino; alquilación de un grupo amino; reemplazo o aminación de un halógeno activado mediante una amina; alquilación de un grupo hidroxi; y reemplazo o aminación de un grupo hidroxi.
En caso de la introducción de sustituyente y transformación de grupo funcional, cuando el compuesto tiene un resto activo en el cual pueda producirse una reacción no deseada, puede introducirse un grupo protector en el resto reactivo por adelantado de acuerdo con un método conocido en sí, de ser necesario. Al eliminar el grupo protector de acuerdo con un método conocido en sí después de la reacción objetivo, se puede producir el compuesto comprendido por la presente divulgación.
Por ejemplo, cuando el intermedio o compuesto de materia prima tiene un grupo amino, un grupo carboxilo o un grupo hidroxi, estos grupos se pueden proteger mediante la reacción de un grupo protector utilizado en general en la química de péptidos y similares. Al retirar el grupo protector, según sea necesario, después de la reacción, se puede obtener el compuesto objetivo.
Cuando el compuesto (I) contiene un isómero, tal como un isómero óptico, un estereoisómero, un regioisómero, un rotámero y similares, cualquier isómero o una mezcla de estos también está comprendido por el compuesto (I). Por ejemplo, cuando el compuesto (I) contiene un isómero óptico, un isómero óptico resuelto a partir de un compuesto de racemato también está comprendido por el compuesto (I). Estos isómeros pueden obtenerse como un único producto de acuerdo con un método de síntesis conocido en sí y un método de separación conocido en sí (por ejemplo, concentración, extracción de disolvente, cromatografía en columna y recristalización).
El compuesto (I) puede ser un cristal, y el compuesto (I) comprende tanto una única forma de cristal como una mezcla de formas de cristal. El cristal se puede producir mediante cristalización de acuerdo con un método de cristalización conocido en sí.
El compuesto (I) puede ser un cocristal farmacéuticamente aceptable o una sal de este. El cocristal o sal de este significa una sustancia cristalina constituida por dos o más sólidos especiales a temperatura ambiente, donde cada uno tiene propiedades físicas diferentes (por ejemplo, estructura, punto de fusión, calor de fusión, higroscopicidad y estabilidad). El cocristal o sal de este puede producirse de acuerdo con un método de cocristalización conocido en sí.
El compuesto (I) puede ser un hidrato, un no hidrato, un solvato o un no solvato, y todos están comprendidos por el compuesto (I).
El compuesto (I) también comprende un compuesto marcado o sustituido con un isótopo (por ejemplo, 2H, 3H, 11C, 14C, 18F, 35S, 125I) y similares. El compuesto marcado o sustituido con un isótopo puede utilizarse, por ejemplo, como rastreador (rastreador PET) utilizado en tomografía de emisión de positrones (PET) y es útil en el campo del diagnóstico médico, y similares.
El compuesto (I) puede ser un profármaco.
El profármaco del compuesto (I) significa un compuesto que se convierte en el compuesto (I) con una reacción debido a una enzima, ácido gástrico y similares en condiciones fisiológicas en el cuerpo vivo, es decir, un compuesto que se convierte en el compuesto (I) mediante oxidación enzimática, reducción, hidrólisis y similares; un compuesto que se convierte en el compuesto (I) mediante hidrólisis y similares debido al ácido gástrico, y similares.
Los ejemplos de profármacos para el compuesto (I) incluyen
(1) un compuesto obtenido al someter el amino en el compuesto (I) a acilación, alquilación o fosforilación (por ejemplo, un compuesto obtenido al someter el amino en el compuesto (I) a eicosanoilación, alanilación, pentilaminocarbonilación, (5-metil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metoxicarbonilación, tetrahidrofuranilación,
pirrolidilmetilación, pivaloiloximetilación, terc-butilación, etoxicarbonilación, terc-butoxicarbonilación, acetilación o ciclopropilcarbonilación);
(2) un compuesto obtenido al someter el hidroxi en el compuesto (I) a acilación, alquilación, fosforilación o boración (por ejemplo, un compuesto obtenido al someter el hidroxi en el compuesto (I) a acetilación, palmitoilación, propanoilación, pivaloilación, succinilación, fumarilación, alanilación o dimetilaminometilcarbonilación);
(3) un compuesto obtenido al someter el carboxi en el compuesto (I) a esterificación o amidación (por ejemplo, un compuesto obtenido al someter el carboxi en el compuesto (I) a esterificación de etilo, esterificación de fenilo, esterificación de carboximetilo, esterificación de dimerilaminometilo, esterificación de pivaloiloximetilo, esterificación de etoxicarboniloxietilo, esterificación de ftalidilo, esterificación de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metilo, metilamidación o esterificación de ciclohexiloxicarboniletilo). Estos compuestos se pueden producir a partir del compuesto (I) de acuerdo con un método conocido en sí.
El profármaco del compuesto (I) también puede ser aquel que se convierte en el compuesto (I) en condiciones fisiológicas, tal como se describe en “IYAKUHIN no KAIHATSU (Development of Pharmaceuticals)”, Vol. 7, Design of Molecules, p. 163-198, publicado por HIROKAWA SHOTEN (1990).
En la presente memoria descriptiva, el profármaco puede estar en forma de una sal y los ejemplos de dicha sal incluyen los similares a las sales del compuesto representado por la fórmula (I).
El compuesto (I) también puede utilizarse como carga útil en un conjugado de anticuerpo (o secuencia peptídica de reconocimiento de antígenos) y fármaco (donde la carga útil es el resto correspondiente al fármaco mencionado anteriormente). Cuando el compuesto (I) se utiliza como carga útil, el compuesto (I) puede unirse a un anticuerpo (o una secuencia peptídica de reconocimiento de antígenos) por medio de un enlazador.
Los ejemplos de la carga útil mencionada anteriormente incluyen
(1) compuesto (I), donde B(i) 2 es un grupo representado por
Figure imgf000038_0001
Cuando el compuesto (I) se utiliza como carga útil, el compuesto (I) puede convertirse en un conjugado de anticuerpo (o una secuencia peptídica de reconocimiento de antígenos) y fármaco, de la siguiente manera.
B2 en la fórmula (I) se convierte en un grupo representado por
Figure imgf000038_0002
donde
cada uno de Ra y Rb es independientemente
(i) un grupo alquilo C1-6,
(ii) un grupo acilo o
(iii) un grupo representado por la fórmula:
Figure imgf000039_0001
R es un enlazador que se une con un anticuerpo o una secuencia peptídica de reconocimiento de antígenos (donde el enlace es un enlace covalente entre el enlazador y el grupo funcional en la cadena lateral del anticuerpo o secuencia peptídica de reconocimiento de antígenos) y
cada R' es un átomo de hidrógeno o un sustituyente.
(2) Cada uno de R1 y R2 en la fórmula (I) se convierte independientemente en un grupo representado por la fórmula: -OR3 donde R3 es
(i) un grupo alquilo C1-6,
(ii) un grupo acilo (preferentemente un grupo alcoxicarbonilo C1-6),
(iii) un grupo representado por la fórmula:
Figure imgf000039_0002
ntado por la fórmula:
(v) un grupo representado por la fórmula:
Figure imgf000039_0003
ntado por la fórmula:
(vii) un grupo representado por la fórmula:
Figure imgf000040_0001
(viii) un grupo representado por la fórmula:
Figure imgf000040_0002
o
(ix) un grupo representado por la fórmula:
Figure imgf000040_0003
donde cada R y cada R' en las fórmulas es como se definió anteriormente. (3) cada uno de Q2H y Q4H en la fórmula (I) se convierte independientemente en (i) un grupo representado por la fórmula: -SR4 donde R4 es
(a) un grupo alquilo C1-6,
(b) un grupo acilo o
(c) un grupo representado por la fórmula: -SR,
(d) un grupo representado por la fórmula:
Figure imgf000040_0004
(e) un grupo representado por la fórmula:
Figure imgf000041_0001
sentado por la fórmula:
(g) un grupo representadopor la fórmula:
Figure imgf000041_0002
(h) un grupo representado por la fórmula:
Figure imgf000041_0003
o
(i) un grupo representado por la fórmula:
Figure imgf000041_0004
(ii) un grupo representado por la fórmula: -OR5 donde R5 es
(a) un grupo alquilo C1-6,
(b) un grupo acilo o
(c) un grupo representado por la fórmula:
Figure imgf000042_0003
(e) un grupo representadopor la fórmula:
Figure imgf000042_0001
tado por la fórmula:
(iii) un grupo representado por la fórmula: -NHR6 donde R6 es (a) un grupo alquilo C1-6,
(b) un grupo acilo o
(c) un grupo representado por la fórmula:
Figure imgf000042_0002
un grupo representado por la fórmula:
(e) un grupo representado por la fórmula:
Figure imgf000043_0001
donde cada R y cada R' en las fórmulas es como se definió anteriormente.
Además, cuando el compuesto (I) se utiliza como una carga útil, se puede utilizar el enlazador descrito en Chem. Rev., 114, 9154-9218 (2014), Pharma. Res. 32, 3526-3540 (2015), Bioconjugate Chem. 21, 5-13 (2010), The AAPS journal, 17, 339-351 (2015), WO 2011/005761 y similares.
La divulgación proporciona las siguientes realizaciones particulares.
Realización 1. El compuesto que posee la fórmula (X):
Figure imgf000043_0002
Cada uno de R1 y R2 son independientemente un grupo hidroxi o un átomo de halógeno;
B1 es:
Figure imgf000043_0003
R18 es hidrógeno o alquilo C1-6; y
R19 es un átomo de halógeno
B2 es:
Figure imgf000043_0004
y
cada uno de Q2 y Q4 es independientemente un átomo de oxígeno o un átomo de azufre,
Realización 2. El compuesto de la realización 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R1 es un grupo hidroxi.
Realización 3. El compuesto de la realización 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R1 es un átomo de fluoro.
Realización 4. El compuesto de las realizaciones 1 o 3, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R2 es un grupo hidroxilo.
Realización 5. El compuesto de cualquiera de las realizaciones 1-3, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R2 es un átomo de fluoro.
Realización 6. El compuesto de cualquiera de las realizaciones 1-5, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q4 es un átomo de azufre.
Realización 7. El compuesto de cualquiera de las realizaciones 1-6, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q2 es un átomo de oxígeno.
Realización 8. El compuesto de cualquiera de las realizaciones 1-6, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q2 es un átomo de azufre.
Realización 9. El compuesto de cualquiera de las realizaciones 1-8, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, que posee la fórmula (XII):
Figure imgf000044_0001
Realización 10. El compuesto de cualquiera de las realizaciones 1-9, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R19 es un átomo de fluoro.
Realización 11. El compuesto de cualquiera de las realizaciones 1-10, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R18 es hidrógeno.
Realización 12. El compuesto de cualquiera de las realizaciones 1-10, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R18 es metilo.
Realización 13. El compuesto de cualquiera de las realizaciones 10-12, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde B1 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000044_0002
y
Realización 14. El compuesto de la realización 13, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde B1 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000044_0003
Realización 15. El compuesto de la realización 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, seleccionado del grupo que consiste en:
Figure imgf000047_0001
Realización 16. El compuesto de cualquiera de la realización 15, o una sal farmacéuticamente aceptable de este,
Figure imgf000049_0001
Realización 17. El compuesto de la realización 15, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, seleccionado del grupo que consiste en:
Figure imgf000049_0002
Realización 18. El compuesto de cualquiera de las realizaciones 1-17, donde la sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R18 es metilo.
Realización 19. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de cualquiera de las realizaciones 118, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, y un excipiente farmacéuticamente aceptable. Realización 20. La composición farmacéutica de la realización 19 para su uso en el tratamiento del cáncer. Realización 21. La composición farmacéutica de la realización 20, donde el cáncer es uno o más de cualquiera de los cánceres de la Tabla 7.
Realización 22. La composición farmacéutica de la realización 20, donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en túmor sólido y linfoma.
Realización 23. Un compuesto de una cualquiera de las realizaciones 1-18, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, para su uso en el tratamiento del cáncer.
Realización 24. El compuesto de la realización 23, donde el cáncer es uno o más de cualquiera de los cánceres de la Tabla 7.
Realización 25. El compuesto de la realización 23, donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en túmor sólido y linfoma.
También se describen en el presente documento los siguientes ejemplos.
Ejemplo 1. Un compuesto que tiene la Fórmula (XIV):
(CD-L)n-A (XIV)
o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde
CD es un grupo representado por cualquiera de las Fórmulas (XX) o (XXIV):
Figure imgf000050_0001
cada uno de R1 y R2 es independientemente un grupo hidroxi, hidrógeno, amino o un átomo de halógeno; B3 y B4 son independientemente un grupo heterocíclico aromático de 5 a 14 miembros sustituido opcionalmente;
cada uno de X1 y X2 es independientemente un átomo de oxígeno, CH2 o un átomo de azufre;
cada uno de Q1, Q2, Q3 y Q4 es independientemente un átomo de oxígeno o un átomo de azufre;
L es un enlazador;
A es un anticuerpo, fragmento de anticuerpo o fragmento de unión al anticuerpo; y
n es 1-10.
Ejemplo 2. El compuesto del ejemplo 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde cada uno de R1 y R2 es independientemente un grupo hidroxi o un átomo de halógeno.
Ejemplo 3. El compuesto de los ejemplos 1 o 2, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde cada uno de X1 y X2 es independientemente un átomo de oxígeno o un átomo de azufre.
Ejemplo 4. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 1-3, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q1 y Q3 son un átomo de oxígeno.
Ejemplo 5. El compuesto del ejemplo 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde CD es un grupo representado por la Fórmula (XX-A):
Figure imgf000050_0002
Ejemplo 6. El compuesto del ejemplo 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde CD es un grupo representado por la Fórmula (XXIV-A):
Figure imgf000051_0001
Ejemplo 7. El compuesto de cualquera de los ejemplos 1-6, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde: L es -X3-T-Z-Q-;
Figure imgf000051_0002
X3 está ausente;
T es un péptido o está ausente;
Z es un espaciador;
Q es un grupo heterobifuncional o un grupo heterotrifuncional, o está ausente.
Ejemplo 8. El compuesto del ejemplo 7, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, que posee la fórmula (XXX):
Figure imgf000051_0003
Ejemplo 9. El compuesto de los ejemplos 7 u 8, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
Figure imgf000051_0004
Figure imgf000051_0005
seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
Ejemplo 10. El compuesto del ejemplo 9, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
X3 es
Figure imgf000052_0001
Ejemplo 11. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 7-10, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
Figure imgf000052_0002
o -(C H 2CH2O)s-;
m es 1, 2, 3, 4, 5 o 6; y
s es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10.
Ejemplo 12. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 7 u 8, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
X3 es -CH2-;
Z es
O AAAP ■
y
p es 1, 2, 3, 4, 5 o 6, 7, 8, 9 o 10.
Ejemplo 13. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 7 u 8, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
Figure imgf000052_0003
q es 1, 2, 3, 4, 5 o 6; y
r es 1, 2, 3, 4, 5 o 6.
Ejemplo 14. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 7-13, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
Q es un grupo heterobifuncional que se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000052_0004
Figure imgf000053_0001
R29 es hidrógeno o alquilo Ci-a;
R30a y R30b se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo Ci-a, halo, -C(=O)OR29, -NH2, alcoxi Ci-a, -CN, -NO2 y -OH;
R31a y R31b se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo Ci-a, halo, -C(=O)OR29, -NH2, -N(CH3)2, alcoxi C1-a, -CN, -NO2 y -OH; y
* indica el punto de acoplamiento a cualquier átomo de carbono, átomo de nitrógeno, átomo de oxígeno o átomo de azufre disponible acoplado al anticuerpo, fragmento de anticuerpo o fragmento de unión al antígeno.
Ejemplo 15. El compuesto del ejemplo 11, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, que posee la fórmula (XXXII):
Figure imgf000053_0002
R10a y R10b son independientemente alquilo C1-3; y
m es 2, 3, 4 o 5;
Ejemplo 16. El compuesto del ejemplo 15, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, que posee la fórmula XXXIII :
Figure imgf000053_0003
Ejemplo 17. El compuesto del ejemplo 16, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, que posee la fórmula (XXXIV):
Figure imgf000054_0001
donde:
q es 1, 2 o 3; y
r es 1,2 o 3.
Ejemplo 18. El compuesto de los ejemplos 1-17, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde B3 es:
Figure imgf000054_0002
R18 es hidrógeno o alquilo C1-6; y
R19 es un átomo de halógeno.
Ejemplo 19. El compuesto del ejemplo 18, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R19 es un átomo de fluoro.
Ejemplo 20. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 18 o 19, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R18 es hidrógeno.
Ejemplo 21. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 18-19, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R18 es metilo.
Ejemplo 22. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 18-21, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde B4 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000054_0003
Ejemplo 23. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 1-5 o 7-22, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q2 es un átomo de oxígeno.
Ejemplo 24. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 1-5 o 7-22, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q2 es un átomo de azufre.
Ejemplo 25. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 1-4, 6-7, 9-14 o 18-22, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q4 es un átomo de oxígeno.
Ejemplo 26. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 1-4, 6-7, 9-14 o 18-22, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q4 es un átomo de azufre.
Ejemplo 27. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 1-26, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde X1 y X2 son un átomo de oxígeno y R1 y R2 son independientemente un grupo hidroxi, un átomo de fluoro o átomo de cloro.
Ejemplo 28. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 1-27, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde el anticuerpo es un anticuerpo contra GCC. Los anticuerpos que se unen a la guanilil ciclasa C (GCC) se describen, por ejemplo, en los documentos US 20130315923 y W o 2011050242.
Ejemplo 29. El compuesto del ejemplo 28, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde el anticuerpo es un anticuerpo contra GCC que comprende una región de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ. ID. NO. 1.
Ejemplo 30. El compuesto de los ejemplos 28 o 29, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde el anticuerpo es un anticuerpo contra GCC que comprende una región de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ. ID. NO. 2.
Ejemplo 31. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de cualquiera de los ejemplos 1-30, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Ejemplo 32. La composición farmacéutica del ejmplos 31 para su uso en el tratamiento del cáncer.
Ejemplo 33. La composición farmacéutica del ejemplo 32, donde el cáncer es uno o más de cualquiera de los cánceres de la Tabla 7.
Ejemplo 34. La composición farmacéutica del ejemplo 32, donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en tumor sólido y linfoma.
Ejemplo 35. Un compuesto de cualquiera de los ejemplos 1-30, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, para su uso en el tratamiento de cáncer.
Ejemplo 36. El compuesto del ejemplo 35, donde el cáncer es uno o más de cualquiera de los cánceres de la Tabla 7.
Ejemplo 37. El compuesto del ejemplo 36, donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en tumor sólido y linfoma.
Ejemplo 38. Un kit que comprende el compuesto de cualquiera de los ejemplos 1-18 o ejemplos 1-30, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, e instrucciones para administrar el compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, a un paciente que padece cáncer.
Ejemplo 39. El kit del ejemplo 38, donde el cáncer es uno o más de cualquiera de los cánceres de la Tabla 7. Ejemplo 40. El kit del ejemplo 38, donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en tumor sólido y linfoma. Ejemplo 41. El kit de cualquiera de los ejemplos 38-40 que comprende además uno o más agentes terapéuticos adicionales.
Ejemplo 42. Un compuesto que posee la Fórmula (XL):
CD-L1-R28 (XL)
o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
CD es un grupo representado por cualquiera de las Fórmulas (XX) o (XXIV):
Figure imgf000055_0001
cada uno de R1 y R2 es independientemente un grupo hidroxi, hidrógeno, amino o un átomo de halógeno; B3 y B4 son independientemente un grupo heterocíclico aromático de 5 a 14 miembros sustituido opcionalmente;
cada uno de X1 y X2 es independientemente un átomo de oxígeno, CH2 o un átomo de azufre;
cada uno de Q1, Q2, Q3 y Q4 es independientemente un átomo de oxígeno o un átomo de azufre;
L1 es un enlazador;
R28 se selecciona del grupo que consiste en -Na, -ONH2, -OH, -CN, -NO2, -CHO, -NR29C(=O)CH=CH2, -SH, -S(=O)2(CH=CH2), -NR29C(=O)CH2Br, -NR29C(=O)CH2 l, -C(=O)NHNH2, -CO2H, -NH2, -CeCH,
Figure imgf000056_0001
R29 es hidrógeno o alquilo Ci-a;
R30a y R30b se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo Ci-a, halo, -C(=O)OR29, -NH2, alcoxi Ci-a, -CN, -NO2 y -OH;
R31a y R31b se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo Ci-a, halo, -C(=O)OR29, -NH2, -N(CH3)2, alcoxi C1-a, -CN, -NO2 y -OH; y
el enlazador se acopla al dinucleótido cíclico a través de cualquier átomo disponible de carbono, nitrógeno, oxígeno o azufre.
Ejemplo 43. El compuesto del ejemplo 42, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde cada uno de R1 y R2 es independientemente un grupo hidroxi o un átomo de halógeno.
Ejemplo 44. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 42 o 43, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde cada uno de X1 y X2 es independientemente un átomo de oxígeno o un átomo de azufre.
Ejemplo 45. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 42-44, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q1 y Q3 son un átomo de oxígeno.
Ejemplo 46. El compuesto del ejemplo 42, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde CD es un grupo representado por la Fórmula (XX-A):
Figure imgf000056_0002
Ejemplo 47. El compuesto del ejemplo 42; o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde CD es un grupo representado por la Fórmula (XXIV-A):
Figure imgf000056_0003
Ejemplo 48. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 42-47, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde
L1 es -X3-T-Z-;
X3 es -(C H 2)o-
Figure imgf000057_0001
o
o es 1, 2 o 3; o
X3 está ausente;
T es un péptido o está ausente; y
Z es un espaciador.
Ejemplo 49. El compuesto del ejemplo 48, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
Figure imgf000057_0002
y
R10a y R10b se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C 1-6 opcionalmente sustituido.
Ejemplo 50. El compuesto del ejemplo 49, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
X3 es
Figure imgf000057_0003
Ejemplo 51. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 48-50, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
Figure imgf000057_0004
o -(C H 2CH20 )s-;
m es 1, 2, 3, 4, 5 o 6; y
s es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10.
Ejemplo 52. El compuesto del ejemplo 48, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
Figure imgf000057_0005
y
p es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10.
Ejemplo 53. El compuesto del ejemplo 48, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
X3 es -CH2CH2-;
Z es
Figure imgf000058_0001
q es 1, 2, 3, 4, 5 o 6; y
r es 1,2, 3, 4, 5 o 6.
Ejemplo 54. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 42-53, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde B3 es:
Figure imgf000058_0002
R18 es hidrógeno o alquilo C1-6; y
R19 es un átomo de halógeno.
Ejemplo 55. El compuesto del ejemplo 54, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R19 es un átomo de fluoro.
Ejemplo 56. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 54 o 55, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R18 es hidrógeno.
Ejemplo 57. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 54 o 55, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R18 metilo.
Ejemplo 58. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 54-57, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde B4 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000058_0003
Ejemplo 59. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 42-46 o 48-58, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q2 es un átomo de oxígeno.
Ejemplo 60. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 42-46 o 48-58, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q2 es un átomo de azufre.
Ejemplo 61. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 42-45 o 47-58, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q4 es un átomo de oxígeno.
Ejemplo 62. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 42-45 o 47-58, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q4 es un átomo de azufre.
Ejemplo 63. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 42-62, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde X1 y X2 son un átomo de oxígeno y R1 y R2 son independientemente un grupo hidroxi o un átomo de halógeno.
Ejemplo 64. El compuesto de cualquiera de las realizaciones 42-63, donde R28 es
Figure imgf000058_0004
Ejemplo 65. El compuesto del ejemplo 64, que tiene la fórmula:
Figure imgf000059_0001
Ejemplo 66. Un compuesto que tiene la Formula (XLI):
(CD-L2)u-DA (XLI)
o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
CD es un grupo representado por cualquiera de las Fórmulas (XX) o (XXIV):
Figure imgf000059_0002
o
cada uno de R1 y R2 es independientemente un grupo hidroxi, hidrógeno, grupo amino o un átomo de halógeno; B3 y B4 son independientemente un grupo heterocíclico aromático de 5 a 14 miembros sustituido opcionalmente; cada uno de X1 y X2 es independientemente un átomo de oxígeno, CH2 o un átomo de azufre;
cada uno de Q1, Q2, Q3 y Q4 es independientemente un átomo de oxígeno o un átomo de azufre;
L2 es un enlazador; o
L2 está ausente;
DA es un agente de administración de fármaco; y
u es 1-1000.
Ejemplo 67. El compuesto del ejemplo 66, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R1 y R2 son cada uno independientemente un grupo hidroxi o un átomo de halógeno.
Ejemplo 68. El compuesto de los ejemplos 66 o 67, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde X1 y X2 son cada uno independientemente un átomo de oxígeno o un átomo de azufre.
Ejemplo 69. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 66-68, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q1 y Q3 son un átomo de oxígeno.
Ejemplo 70. El compuesto del ejemplo 66, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde CD es un grupo representado por la Fórmula (XX-A):
Figure imgf000060_0001
Ejemplo 71. El compuesto del ejemplo 66, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde CD es un grupo representado por la Fórmula (XXIV-A):
Figure imgf000060_0002
Ejemplo 72. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 66-71, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde B3 es:
Figure imgf000060_0003
R18 es hidrógeno o alquilo Ci-e; y
R19 es un átomo de halógeno,
Ejemplo 73. El compuesto del ejemplo 72, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R19 es un átomo de fluoro.
Ejemplo 74. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 72 o 73, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R18 es hidrógeno.
Ejemplo 75. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 72 o 73, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R18 es metilo.
Ejemplo 76. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 72-75, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde B4 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000060_0004
y
Ejemplo 77. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 66-70 o 72-76, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q2 es un átomo de oxígeno.
Ejemplo 78. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 66-70 o 72-76, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q2 es un átomo de azufre.
Ejemplo 79. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 66-69 o 71-76, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q4 es un átomo de oxígeno.
Ejemplo 80. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 66-69 o 71-76, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q4 es un átomo de azufre.
Ejemplo 81. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 66-80, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde X1 y X2 son un átomo de oxígeno y R1 y R2 son independientemente un grupo hidroxilo, un átomo de fluoro o un átomo de cloro.
Ejemplo 82. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 66-81, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde u es 1-100.
Ejemplo 83. El compuesto del ejemplo 82, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde u es 1-10. Ejemplo 84. El compuesto del ejemplo 83, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde u es 1-5. Ejemplo 85. El compuesto
Figure imgf000061_0001
del ejemplo 84 o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde u es 1.
Ejemplo 86. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 66-85, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
L2 es -X4-T1-Z1-QA-;
X4 es -(CH2)v-,
Figure imgf000061_0002
v es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 ; o
X4 está ausente;
T1 es un péptido o está ausente;
Z1 es un espaciador;
QA es un grupo heterobifuncional o un grupo heterotrifuncional, o está ausente.
Ejemplo 87. El compuesto del ejemplo 86, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
X4 es
Figure imgf000061_0003
y
R10c y R10d se seleccionan, independientemente, del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-6 sustituido opcionalmente;
Ejemplo 88. El compuesto del ejemplo 87, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
X4 es
Figure imgf000061_0004
Ejemplo 89. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 86-88, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
Figure imgf000061_0005
si es 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10.
Ejemplo 90. El compuesto del ejemplo 86, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
X4 es -CH2-;
Z1 es
Figure imgf000062_0001
y
p1 es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10.
Ejemplo 91. El compuesto del ejemplo 86, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
Figure imgf000062_0002
q1 es 1, 2, 3, 4, 5 o 6; y
r1 es 1, 2, 3, 4, 5 o 6.
Ejemplo 92. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 86, 90 o 91, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde T1 está ausente.
Ejemplo 93. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 86-92, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde QA es un grupo heterobifuncional que se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000062_0003
R29 es hidrógeno o alquilo C1-6;
R30a y R30b se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C 1-6, halo, -C(=O)OR29, -NH2, alcoxi C1-6, -CN, -NO2 y -OH;
R31a y R31b se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C 1-6, halo, C(=O)OR29, -NH2, -N(CH3)2, alcoxi Ci-6, -CN, -NO2 y -OH; y
* indica el punto de acoplamiento de cualquier átomo de carbono, átomo de nitrógeno, átomo de carbono de oxígeno o átomo de azufre variable acoplado al agente de administración de fármaco.
Ejemplo 94. El compuesto del ejemplo 86, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde X4, T1 y QA están ausentes.
Ejemplo 95. El compuesto de cualquiera de los ejemplos 66-94, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde el agente de administración de fármaco comprende lípidos, esteroides, vitaminas, carbohidratos, proteínas, péptidos, poliaminas, polietilenglicoles o peptidomiméticos, o cualquier combinación de estos.
Ejemplo 96. El compuesto del ejemplo 95, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde el agente de administración de fármaco comprende lípidos.
Ejemplo 97. El compuesto del ejemplo 95, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde el agente de administración de fármaco comprende esteroides.
Ejemplo 98. El compuesto del ejemplo 95, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde el agente de administración de fármaco comprende vitaminas.
Ejemplo 99. El compuesto del ejemplo 95, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde el agente de administración de fármaco comprende carbohidratos.
Ejemplo 100. El compuesto del ejemplo 95, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde el agente de administración de fármaco comprende proteínas.
Ejemplo 101. El compuesto del ejemplo 95, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde el agente de administración de fármaco comprende péptidos.
Ejemplo 102. El compuesto del ejemplo 95, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde el agente de administración de fármaco comprende poliaminas.
Ejemplo 103. El compuesto del ejemplo 95, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde el agente de administración de fármaco comprende polietilenglicoles.
Ejemplo 104. El compuesto del ejemplo 95, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde el agente de administración de fármaco comprende peptidomiméticos.
Dado que el compuesto (I) o profármaco de este (en la presente memoria descriptiva abreviados a menudo de manera colectiva como “el compuesto de la presente divulgación”) tiene actividad agonista de STING, puede ser útil como agente para la profilaxis o el tratamiento del cáncer, un inhibidor del crecimiento del cáncer o un inhibidor de la metástasis del cáncer.
Dado que el compuesto de la presente divulgación presenta actividad agonista de STING y es superior en términos de eficacia, expresión, farmacocinética (por ejemplo, absorción, distribución, metabolismo, excreción), solubilidad (por ejemplo, solubilidad al agua), interacción con otros medicamentos (por ejemplo, acción inhibidora de enzimas que metabolizan fármacos), seguridad (por ejemplo, toxicidad aguda, toxicidad crónica, toxicidad genética, toxicidad reproductiva, cardiotoxicidad, carcinogenicidad, toxicidad central) y estabilidad (por ejemplo, estabilidad química, estabilidad a una enzima), puede ser útil como medicamento.
Por lo tanto, el compuesto de la presente divulgación puede utilizarse para aumentar la actividad de STING en un mamífero (por ejemplo, ratón, rata, hámster, conejo, gato, perro, vaca, oveja, mono, ser humano).
El compuesto de la presente divulgación puede utilizarse como medicamento, tal como un agente para la profilaxis o tratamiento de enfermedades que puedan verse afectadas por STING (en la presente memoria descriptiva, a menudo abreviadas como “enfermedades relacionadas con STING”), por ejemplo, cánceres [por ejemplo, cánceres colorrectales (por ejemplo, cáncer colorrectal, cáncer rectal, cáncer anal, cáncer colorrectal familiar, cáncer colorrectal no polipósico hereditario, tumor estromal gastrointestinal), cánceres de pulmón (por ejemplo, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer de pulmón microcítico, mesotelioma maligno), mesotelioma, cánceres pancreáticos (por ejemplo, carcinoma ductal pancreático, tumor endócrino pancreático), cáncer de faringe, cáncer de laringe, cáncer esofágico, cánceres de estómago (por ejemplo, adenocarcinoma papilar, adenocarcinoma mucinoso, carcinoma adenoescamoso), cáncer de duodeno, cáncer de intestino delgado, cánceres de mama (por ejemplo, carcinoma ductal invasivo, carcinoma ductal no invasivo, cáncer de mama inflamatorio), cánceres de ovario (por ejemplo, cáncer epitelial de ovario, tumor extragonadal de células germinales, tumor de ovario de células germinales, tumor de ovario de bajo potencial maligno), tumor testicular, cánceres de próstata (por ejemplo, cáncer de próstata dependiente de hormonas, cáncer de próstata no dependiente de hormonas, cáncer de próstata resistente a la castración), cánceres hepáticos (por ejemplo, cáncer hepatocelular, cáncer hepático primario, cáncer extrahepático del ducto biliar), cánceres de tiroides (por ejemplo, carcinoma tiroideo medular), cánceres renales (por ejemplo, cánceres de células renales (por ejemplo, cáncer de células renales de células claras), cáncer de células transicionales de uretra y pelvis renal), cánceres uterinos (por ejemplo, cáncer del cuello uterino, cáncer del cuerpo uterino, sarcoma de útero), coriocarcinoma gestacional, tumores cerebrales (por ejemplo, meduloblastoma, glioma, tumores astrocíticos pineales, astrocitoma pilocítico, astrocitoma difuso, astrocitoma anaplásico, adenoma pituitario), retinoblastoma, cánceres de piel (por ejemplo, basalioma, melanoma maligno), sarcomas (por ejemplo, rabdomiosarcoma, leiomiosarcoma, sarcoma de tejido blando, sarcoma de células fusiformes), tumor óseo maligno, cáncer de vejiga, cánceres sanguíneos (por ejemplo, mieloma múltiple, leucemias (por ejemplo, leucemia mielógena aguda), linfoma maligno, enfermedad de Hodgkin, enfermedad mieloproliferativa crónica), cáncer de primario desconocido], un inhibidor del crecimiento del cáncer, un inhibidor de la metástasis del cáncer, un promotor de la apoptosis, un agente para el tratamiento de lesiones precancerosas (por ejemplo, síndrome mielodisplásico) y similares.
En otra realización, el cáncer se selecciona de uno o más de cualquiera de los cánceres de la Tabla 7.
Tabla 7
Figure imgf000064_0001
continuación
Figure imgf000065_0001
continuación
Figure imgf000066_0001
En otra realización, el cáncer es un tumor sólido o linfoma.
En particular, el compuesto de la presente divulgación puede utilizarse como un medicamento para el cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de piel, linfoma maligno y cáncer de pulmón.
El compuesto de la presente divulgación puede administrarse por vía oral o parenteral, dado que es o se encuentra en una mezcla con un portador farmacológicamente aceptable, como medicamento a un mamífero (preferentemente seres humanos).
El medicamento que contiene el compuesto de la presente divulgación (abreviado de aquí en adelante a menudo como “el medicamento de la presente divulgación”) se explica en detalle más adelante. Los ejemplos de forma de dosificación del medicamento de la presente divulgación incluyen preparaciones orales, tal como un comprimido (por ejemplo, comprimido recubierto de azúcar, comprimido recubierto de película, comprimido sublingual, comprimido que se desintegra en la cavidad oral, bucal), píldora, gránulo, polvo, cápsula (por ejemplo, cápsula blanda, microcápsula), jarabe, emulsión, suspensión, películas (por ejemplo, películas que se desintegran en la cavidad oral, películas que se adhieren a la mucosa oral) y similares. Además, los ejemplos de la forma de dosificación del medicamento de la presente divulgación incluyen preparaciones parenterales, tales como inyección, infusión por goteo, preparación de tipo de absorción transdérmica (por ejemplo, preparación de tipo de absorción transdérmico por iontoforesis), supositorio, ungüento, preparación nasal, preparación pulmonar, gotas oftálmicas y similares. Asimismo, el medicamento de la presente divulgación puede ser una preparación de liberación controlada, tal como una preparación de liberación inmediata, una preparación de liberación sostenida (por ejemplo, una microcápsula de liberación sostenida) y similares.
También puede utilizarse como forma de dosificación del medicamento de la presente divulgación una preparación de micropartículas y una preparación que utiliza una membrana derivada de bacterias.
El medicamento de la presente divulgación puede prepararse de acuerdo con un método conocido en sí (por ejemplo, el método descrito en la farmacopea japonesa, etc.) utilizado en general en el campo de la preparación. Además, el medicamento de la presente divulgación puede contener una cantidad adecuada de un aditivo, tal como un excipiente, un aglutinante, un desintegrante, un lubricante, un agente endulzante, un tensioactivo, un agente de suspensión, un emulsionante, un colorante, un conservante, un aromático, un corrector, un estabilizante, un agente espesante y similares, que se utilizan en general en el campo de la preparación, según sea necesario. Los ejemplos del portador farmacológicamente aceptable incluyen estos derivados.
Por ejemplo, el comprimido puede prepararse mediante el uso de un excipiente, un aglutinante, un desintegrante, un lubricante y similares, y la píldora o gránulo puede prepararse mediante el uso de un excipiente, un aglutinante y un desintegrante. El polvo o cápsula se puede preparar mediante el uso de un excipiente y similares, el jarabe se puede preparar mediante el uso de un agente endulzante y similares, y la emulsión o suspensión se puede preparar mediante el uso de un agente de suspensión, un tensioactivo, un emulsionante y similares.
Los ejemplos del excipiente incluyen lactosa, sacarosa, glucosa, almidón, sacarosa, celulosa cristalina, glycyrrhiza en polvo, manitol, hidrogenocarbonato de sodio, fosfato de calcio y sulfato de calcio.
Los ejemplos del aglutinante incluyen de 5 a 10 % en peso de pasta de almidón líquido, de 10 a 20 % en peso de solución goma arábiga o solución de gelatina, de 1 a 5 % de solución de tragacanto, solución de carboximetilcelulosa, solución de alginato de sodio y glicerina.
Los ejemplos del desintegrante incluyen almidón y carbonato de calcio.
Los ejemplos del lubricante incluyen estearato de magnesio, ácido esteárico, estearato de calcio y talco purificado.
Los ejemplos del endulzante incluyen glucosa, fructosa, azúcar invertido, sorbitol, xilitol, glicerina y jarabe simple.
Los ejemplos de tensioactivo incluyen lauril sulfato de sodio, polisorbato 80, éster de ácido monograso de sorbitán y estearato de polioxilo 40.
Los ejemplos del agente de suspensión incluyen goma arábiga, alginato de sodio, carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa y bentonita.
Los ejemplos del emulsionante incluyen goma arábiga, tragacanto, gelatina y polisorbato 80.
Por ejemplo, cuando el medicamento de la presente divulgación es un comprimido, se agrega, por ejemplo, un excipiente (por ejemplo, lactosa, sacarosa, almidón), un desintegrante (por ejemplo, almidón, carbonato de calcio), un aglutinante (por ejemplo, almidón, goma arábiga, carboximetilcelulosa, polivinilpirrolidona, hidroxipropilcelulosa) o un lubricante (por ejemplo, talco, estearato de magnesio, polietilenglicol 6000) al compuesto de la presente divulgación y la mezcla se moldea mediante compresión, desintegrante un método conocido en sí, y entonces, de ser necesario, el producto moldeado se recubre de acuerdo con un método conocido en sí con el fin de enmascarar el sabor, otorgar una propiedad entérica o durabilidad, para proporcionar un comprimido. Como agente de recubrimiento para el recubrimiento, por ejemplo, puede utilizarse hidroxipropilmeticelulosa, etilcelulosa, hidroximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, polioxietilenglicol, Tween 80, Pluronic F68, ftalato acetato de celulosa, ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa, succinato acetato de hidroximetilcelulosa, Eudragit (copolímero de ácido metacrílico y ácido acrílico, elaborado por Rohm, Alemania) y pigmento (por ejemplo, rojo de óxido de hierro, dióxido de titanio).
Los ejemplos de inyección incluyen inyección intravenosa, así como inyección subcutánea, inyección intracutánea, inyección intramuscular, inyección intraperitoneal, inyección por goteo y similares.
Dichas inyecciones se preparan de acuerdo con un método conocido en sí, o mediante disolución, suspensión o emulsión del compuesto de la presente divulgación en un líquido oleoso o acuoso esterilizado. Los ejemplos del líquido acuoso incluyen solución salina fisiológica, soluciones isotónicas que contienen glucosa u otros fármacos auxiliares (por ejemplo, D-sorbitol, D-manitol, cloruro de sodio) y similares. El líquido acuoso puede contener un agente solubilizante adecuado, tal como un alcohol (por ejemplo, etanol), un polialcohol (por ejemplo, propilenglicol, polietilenglicol), un tensioactivo no iónico (por ejemplo, polisorbato 80, HCO-50) y similares. Los ejemplos del líquido oleoso incluyen aceite de sésamo, aceite de soja y similares. El líquido oleoso puede contener un agente solubilizante. Los ejemplos del agente solubilizante incluyen benzoato de bencilo, alcohol bencílico y similares. Además, la inyección se puede mezclar con un amortiguador (por ejemplo, amortiguador de fosfato, amortiguador de acetato de sodio), un agente suavizante (por ejemplo, cloruro de benzalconio, clorhidrato de procaína), un estabilizante (por ejemplo, albúmina sérica humana, polietilenglicol), un conservante (por ejemplo, alcohol bencílico, fenol) y similares. Una inyección preparada puede utilizarse generalmente para llenar una ampolla.
Si bien el contenido del compuesto de la presente divulgación en el medicamento de la presente divulgación varía dependiendo de la forma de la preparación farmacéutica, es en general de entre alrededor de 0,01 y 100 % en peso, preferentemente entre alrededor de 2 y alrededor de 85 % en peso, más preferentemente entre alrededor de 5 y alrededor de 70 % en peso, en relación con la preparación completa.
Si bien el contenido del aditivo el medicamento de la presente divulgación varía dependiendo de la forma de la preparación farmacéutica, es en general de entre alrededor de 1 y alrededor de 99,9 % en peso, preferentemente entre alrededor de 10 y alrededor de 90 % en peso, en relación con la preparación completa.
El compuesto de la presente divulgación es estable y tiene toxicidad baja, y puede utilizarse de manera segura. Si bien la dosis diaria del compuesto de la presente divulgación varía dependiendo de la condición y peso corporal de los pacientes, el tipo de compuesto, la vía de administración y similares, en el caso de, por ejemplo, administración oral a pacientes para el tratamiento de cáncer, la dosis diaria a un adulto (peso corporal de alrededor de 60 kg) es de alrededor de 1 a alrededor de 1000 mg, preferentemente de alrededor de 3 a alrededor de 300 mg, más preferentemente de alrededor de 10 a alrededor de 200 mg, como compuesto de la divulgación, que puede administrarse en una única administración o se puede administrar en 2 o 3 partes por día.
Cuando el compuesto de la presente divulgación se administra por vía parenteral, se administra generalmente en forma de líquido (por ejemplo, inyección). Si bien la dosis del compuesto de la presente divulgación varía dependiendo del sujeto de la administración, el órgano objetivo, el síntoma, el método de administración y similares, esta es, por ejemplo, de entre alrededor de 0,01 mg y alrededor de 100 mg, presente entre alrededor de 0,01 y alrededor de 50 mg, más preferentemente entre alrededor de 0,01 y alrededor de 20 mg, en relación con 1 kg de peso corporal, la cual se administra preferentemente mediante inyección intravenosa.
El compuesto de la presente divulgación puede utilizarse de forma simultánea con otros fármacos. Para ser más específicos, el compuesto de la presente divulgación puede utilizarse junto con medicamentos, tales como agentes terapéuticos, agentes quimioterapéuticos, agentes inmunoterapéuticos, medicamentos que inhiben la acción de los factores de crecimiento celular o receptores de factor de crecimiento celular, y similares. En lo que sigue a continuación, los fármacos que pueden utilizarse en combinación con el compuesto de la presente divulgación se abrevian como fármacos concomitantes.
Los ejemplos de “agentes terapéuticos hormonales” incluyen fosfestrol, dietilstilbestrol, clorotrianiseno, acetato de medroxiprogesterona, acetato de megestrol, acetato de clormadinona, acetato de ciproterona, danazol, alilestrenol, gestrinona, mepartricina, raloxifeno, ormeloxifeno, levormeloxifeno, antiestrógenos (por ejemplo, citrato de tamoxifeno, citrato de toremifeno), preparaciones de píldoras, mepitiostano, testrolactona, aminoglutetimida, agonistas de LH-RH (por ejemplo, acetato de goserelina, buserelina, leuprorelina, acetato de leuprorelina), droloxifeno, epitiostanol, sulfonato de etinilestradiol, inhibidores de aromatasa (por ejemplo, clorhidrato de fadrozol, anastrozol, retrozol, exemestano, vorozol, formestano), antiandrógenos (por ejemplo, flutamida, bicartamida, nilutamida, enzalutamida), inhibidores de 5a-reductasa (por ejemplo, finasterida, epristerida, dutasterida), fármacos hormonales de la corteza suprarrenal (por ejemplo, dexametasona, prednisolona, betametasona, triamcinolona), inhibidores de la síntesis de andrógenos (por ejemplo, abiratorona), retinoides y fármacos que retardan el metabolismo de retinoides (por ejemplo, liarozol), hormona tiroides y preparaciones de d Ds (sigla en inglés de sistema de administración de fármacos) de estos.
Los ejemplos de “agentes quimioterapéuticos” incluyen agentes alquilantes, antimetabolitos, antibióticos anticáncer y agentes contra el cáncer derivados de plantas.
Los ejemplos de “agentes alquilantes” incluyen mostaza de nitrógeno, clorhidrato de mostaza-N-óxido de nitrógeno, clorambutilo, ciclofosfamida, ifosfamida, tiotepa, carboquona, tosilato de improsulfano, busulfano, clorhidrato de nimustina, mitobronitol, melfalán, dacarbazina, ranimustina, fosfato de estramustina sódica, trietilenmelamina, carmustina, lomustina, estreptozocina, pipobromán, etoglúcido, carboplatino, cisplatino, miboplatino, nedaplatino, oxaliplatino, altretamina, ambamustina, clorhidrato de dibrospidio, fotemustina, prednimustina, pumitepa, ribomustina, temozolomida, treosulfán, trofosfamida, estilámero de zinaostatina, adozelesina, cistemustina, bizelesina y preparaciones de DDS de estos.
Los ejemplos de los “antimetabolitos” incluyen mercaptopurina, ribósido de 6-mercaptopurina, tioinosina, metotrexato, pemetrexed, enocitabina, citarabina, ocfosfatp de citarabina, clorhidrato de ancitabina, fármacos de 5-FU (por ejemplo, fluorouracilo, tegafur, UFT, doxifluridina, carmofur, galocitabina, emitefur, capecitabina), aminopterina, nelzarabina, leucovorin calcio, tabloide, butocina, folinato de calcio, levofolinato de calcio, cladribina, emitefur, fludarabina, gemcitabina, hidroxicarbamida, pentostatina, piritrexim, idoxuridina, mitoguazona, tiazofrina, ambamustina, bendamustina y preparaciones de DDS de estos.
Los ejemplos de “antibióticos anticancerosos” incluyen actinomicina-D, actinomicina-C, mitomicina-C, cromomicina-A3, clorhidrato de bleomicina, sulfato de bleomicina, sulfato de peplomicina, clorhidrato de daunorrubicina, clorhidrato de doxorrubicina, clorhidrato de aclarrubicina, clorhidrato de pirarrubicina, clorhidrato de epirrubicina, neocarzinostatina, mitramicina, sarcomicina, carzinofilina, mitotano, clorhidrato de zorrubicina, clorhidrato de mitoxantrona, clorhidrato de idarrubicina y preparaciones de DDS de estos (por ejemplo, liposoma de PEG que incluye doxorrubicina).
Los ejemplos de “agentes anticancerosos derivados de plantas” incluyen etopósido, fosfato de etopósido, sulfato de vinblastina, sulfato de vincristina, sulfato de vindesina, tenipósido, paclitaxel, docetaxel, cabazitaxel, vinorelbina y preparaciones de DDS de estos.
Los ejemplos de “agentes inmunoterapéuticos (BRM)” incluyen picibanilo, krestina, sizofirano, lentinano, ubenimex, interferones, interleucinas, factor estimulante del colonias de macrófagos, factor estimulante de colonias de granulocitos, eritropoyetina, linfotoxina, vacuna BCG, Corynebacterium parvum, levamisol, polisacárido K, procodazol, anticuerpos contra CTLA4 (por ejemplo, ipilimumab, tremelimumab), anticuerpos contra PD-1 (por ejemplo, nivolumab, pembrolizumab) y anticuerpos contra PD-L1.
Los ejemplos de los “factores de crecimiento celular” en los “medicamentos que inhiben la acción de los factores de crecimiento celular o los receptores de factor de crecimiento celular” incluyen cualquier sustancia que promueva la proliferación celular, los cuales son péptidos normales que tienen más de 20.000 de peso molecular y que son capaces de presentar su acción a concentraciones bajas mediante la unión con un receptor, inclusive (1) EGF (factor de crecimiento epidérmico) o sustancias que poseen prácticamente la misma actividad que EGF [por ejemplo, TGFa], (2) insulina o sustancias que tienen prácticamente la misma actividad de la insulina [por ejemplo, insulina, IGF (factor de crecimiento similar a la insulina)-1, IGF-2], (3) FGF (factor de crecimiento de fibroblastos) o sustancias que tienen prácticamente la misma actividad que FGF [por ejemplo, FGF ácido, FGF básico, KGF (factor de crecimiento de queratinocitos), FGF-10] y (4) otros factores de crecimiento celular [por ejemplo, CSF (factor estimulante de colonias), EPO (eritropoyetina), iL-2 (interleucina-2), NGF (factor de crecimiento de nervios), PDGF (factor de crecimiento derivado de plaquetas), TGFp (factor de crecimiento transformador p), HGF (factor de crecimiento de hepatocitos), VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular), herregulina, angiopoyetina].
Los ejemplos de los “receptores del factor de crecimiento” incluyen cualquier receptor capaz de unirse a los factores de crecimiento antemencionados, inclusive receptor de EGF, receptor de herregulina (por ejemplo, HER3), receptor de insulina, receptor de IGF-1, receptor de IGF-2, receptor de FGF-1 o receptor de FGF-2, receptor de VEGF, receptor de angiopoyetina (por ejemplo, Tie2), receptor de PDGf y similares.
Los ejemplos de los “medicamentos que iniben la acción de los factores de crecimiento celular o receptores de factor de crecimiento celular” incluyen inhibidor de EGF, inhibidor de TGFa, inhibidor de herregulina, inhibidor de insulina, inhibidor de IGF, inhibidor de FGF, inhibidor de KGF, inhibidor de CSF, inhibidor de EPO, inhibidor de IL-2, inhibidor de NGF, inhibidor de PDGF, inhibidor de TGFp, inhibidor de HGF, inhibidor de VEGF, inhibidor de angiopoyetina, inhibidor del receptor de EGF, inhibidor de HER2, inhibidor de HER4, receptor de insulina, inhibidor del receptor de IGF-1, inhibidor del receptor de IGF-2, inhibidor del receptor de FGF-1, inhibidor del receptor de FGF-2, inhibidor del receptor de FGF-3, inhibidor del receptor de FGF-4, inhibidor del receptor de VEGF, inhibidor de Tie-2, inhibidor del receptor de PDGF, inhibidor de Abl, inhibidor de Raf, inhibidor de FLT3, inhibidor de c-Kit, inhibidor de Src, inhibidor de PKC, inhibidor de Smo, inhibidor de ALK, inhibidor de ROR1, inhibidor de Trk, inhibidor de Ret, inhibidor de mTOR, inhibidor de Aurora, inhibidor de PLK, inhibidor de MEK (MEK1/2), inhibidor de MET, inhibidor de CDK, inhibidor de Akt, inhibidor de ERK, inhibidor de PI3K y similares. Más específicamente, se puede utilizar un anticuerpo contra VEGF (por ejemplo, Bevacizumab, Ramucurumab), anticuerpo contra HER2 (por ejemplo, Trastuzumab, Pertuzumab), anticuerpo contra EGFR (por ejemplo, Cetuximab, Panitumumab, Matuzumab, Nimotuzumab), anticuerpo contra HGF, Imatinib, Erlotinib, Gefitinib, Sorafenib, Sunitinib, Dasatinib, Lapatinib, Vatalanib, Ibrutinib, Bosutinib, Cabozantinib, Crizotinib, Alectinib, Vismodegib, Axitinib, Motesanib, Nilotinib, 6-[4-(4-etilpiperazin-1-ilmetil)fenil]-N-[1(R)-feniletil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (AEE-788), Vandetanib, Temsirolimus, Everolimus, Enzastaurina, Tozasertib, fosfato de 2-[N-[3-[4-[5-[N-(3-fluorofenil)carbamoilmetil]-1H-pirazol-3-ilamino]quinazolin-7-iloxi]propil]-N-etilamino]etilo (AZD-1152), ácido 4-[9-cloro-7-(2,6-difluorofenil)-5H-pirimido[5,4-d][2]benzazepin-2-ilamino]benzoico, sal de amonio de N-[2-metoxi-5-[(E)-2-(2,4,6-trimetoxifenil)vinilsulfonilmetil]fenil]glicina (ON-1910Na), Volasertib, Selumetinib, Trametinib, N-[2(R),3-dihidroxipropoxi]-3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-iodofenilamino)benzamida (PD-0325901), Bosutinib, Regorafenib, Afatinib, Idelalisib, Ceritinib, Dabrafenib y similares.
Además de los fármacos antemencionados, también puede utilizarse L-asparaginasa, L-arginasa, arginina deiminasa, aceglatona, clorhidrato de procarbazina, sal de complejo de cobalto y protoporfirina, hematoporfirina mercúrica-sodio, inhibidores de topoisomerasa I inhibitors (por ejemplo, irinotecano, topotecano, indotecano, Indimitecano), inhibidores de topoisomerasa II (por ejemplo, sobuzoxano), inductores de diferenciación (por ejemplo, retinoide, vitamina D), otros inhibidores de la angiogénesis (por ejemplo, humagilina, extracto de tiburón, inhibidor de COX-2), bloqueadores de a (por ejemplo, clorhidrato de tamsulosina), ácidos bisfosfónicos (por ejemplo, pamidronato, zoledronato), talidomida, lenalidomida, pomalidomida, azacitidina, decitabina, inhibidores de proteasoma (por ejemplo, bortezomib, carfilzomib, ixazomib), inhibidores de NEDD8 (por ejemplo, Pevonedistat), inhibidores de UAE, inhibidores de PARP (por ejemplo, Olaparib, Niraparib, Veliparib), anticuerpos antitumorales, tales como anticuerpos contra CD20 (por ejemplo, Rituximab, Obinutuzumab), anticuerpos contra CCR4 (por ejemplo, Mogamulizumab) y similares, conjugados de anticuerpos y fármaco (por ejemplo, trastuzumab emtansina, Brentuximab vedotina) y similares, como fármaco concomitante.
Al combinar el compuesto de la presente divulgación y un fármaco concomitante, se puede lograr un efecto superior, tal como (1) reducir la dosis en comparación con la administración del combinado de la presente divulgación o un fármaco concomitante, (2) el fármaco que se va a combinar con el compuesto de la presente divulgación puede seleccionarse de acuerdo con la condición del paciente (caso leve, caso grave y similares), (3) se puede establecer un período de tratamiento más largo, (4) se puede diseñar un efecto de tratamiento sostenido, (5) se puede lograr un efecto sinérgico mediante un uso combinado del compuesto de la presente divulgación y un fármaco concomitante y similares.
En la presente memoria descriptiva, el compuesto de la presente divulgación y un fármaco concomitante utilizados en combinación se mencionan como “agente de combinación de la presente divulgación”.
Para utilizar el agente de combinación de la presente divulgación, el tiempo de administración del compuesto de la presente divulgación y el fármaco concomitante no se encuentra restringido y el compuesto de la presente divulgación y el fármaco concomitante pueden administrarse a un sujeto de administración de firma simultánea o pueden administrarse en momentos diferentes. Cuando se administran con un intervalo de tiempo, el intervalo difiere dependiendo del ingrediente eficaz que se administrará, la forma de dosificación y el método de administración y, por ejemplo, cuando el fármaco concomitante se administra primero, el compuesto del a presente descripción puede administrarse dentro de un intervalo de tiempo que oscila entre 1 minuto y 3 días, preferentemente entre 10 minutos y 1 día, más preferentemente entre 15 minutos y 1 hora después de la administración del fármaco concomitante. Cuando el compuesto de la presente divulgación se administra primero, el fármaco concomitante se administra dentro de un intervalo de tiempo que oscila entre 1 minuto y 1 día, preferentemente entre 10 minutos y 6 horas, más preferentemente entre 15 minutos y 1 hora después de la administración del compuesto del compuesto de la presente divulgación. La dosificación del fármaco concomitante puede determinarse determinar la dosis establecida de forma clínica y puede seleccionarse de manera adecuada dependiendo del sujeto de administración, la vía de administración, la enfermedad, la combinación y similares.
Los ejemplos del modo de administración del uso combinado del compuesto de la presente divulgación y el fármaco concomitante incluyen los siguientes métodos: (1) El compuesto de la presente divulgación y el fármaco concomitante se aplican de manera simultánea para proporcionar una única preparación, la cual entonces se administra. (2) El compuesto de la presente divulgación y el fármaco concomitante se aplican por separado para proporcionar dos tipos de preparaciones, las cuales se administran de manera simultánea mediante la misma vía de administración. (3) El compuesto de la presente divulgación y el fármaco concomitante se aplican por separado para proporcionar dos tipos de preparaciones, las cuales se administran de mediante la misma vía de administración en momentos diferentes. (4) El compuesto de la presente divulgación y el fármaco concomitante se aplican por separado para proporcionar dos tipos de preparaciones, las cuales se administran de manera simultánea mediante vías de administración diferentes. (5) El compuesto de la presente divulgación y el fármaco concomitante se aplican por separado para proporcionar dos tipos de preparaciones, las cuales se administran mediante vías de administración diferentes en momentos diferentes (por ejemplo, el compuesto de la presente divulgación y el fármaco concomitante se administran en este orden, o en el orden inverso).
La dosis del fármaco concomitante puede determinarse de manera adecuada de acuerdo con su dosis clínica y la proporción entre el compuesto de la presente divulgación y el fármaco concomitante puede determinarse de manera adecuada dependiendo del sujeto de administración, la vía de administración, la enfermedad objetivo, el síntoma, la combinación y similares. Por ejemplo, cuando el sujeto de administración es un ser humano, el fármaco concomitante se utiliza en una proporción de 0,01 a 100 (partes en peso), en relación con 1 parte en peso del compuesto de la presente divulgación.
Además, el compuesto de la presente divulgación o el agente de combinación de la presente divulgación puede utilizarse de forma simultánea con una terapia que no se base en fármacos. Más precisamente, el compuesto de la presente divulgación o el agente de combinación de la presente divulgación pueden combinarse con una terapia que no se base en fármacos, tal como (1) cirugía, (2) quimioterapia hipertensiva mediante el uso de angiotensina II, etc., (3) terapia genética, (4) termoterapia, (5) crioterapia, (6) cauterización láser y (7) radioterapia.
Por ejemplo, mediante el uso del compuesto de la presente divulgación o el agente de combinación de la presente divulgación antes o después de la cirugía y similares mencionados anteriormente, o antes o después del tratamiento de combinación de dos o tres tipos de estos, pueden lograrse efectos como la prevención de la aparición de resistencia, prolongar la supervivencia libre de enfermedad, suprimir la metástasis o recurrencia del cáncer, prolongar la vida y similares.
Además, es posible combinar un tratamiento con el compuesto de la presente divulgación o el agente de combinación de la presente divulgación con una terapia de apoyo [(i) administración de antibiótico (por ejemplo, tipo p-lactama, tal como pansporina y similares, tipo macrólidos, tal como claritromicina y similares) para complicaciones con diversas enfermedades infecciosas, (ii) administración de infusión de calorías elevadas, preparación de aminoácidos o preparación general de vitaminas para mejorar la malnutrición, (iii) administración de morfina para mitigar el dolor, (iv) administración de un agente farmacéutico para mejorar los efectos secundarios, tales como náuseas, vómitos, diarrea, leucopenia, trombocitopenia, baja concentración de hemoglobina, pérdida del cabello, hepatopatía, renopatía, DIC; fiebre, y similares, y (v) administración de un agente farmacéutico para suprimir la resistencia a múltiples fármacos del cáncer y similares].
Ejemplos
La presente divulgación se explicará en detalle mediante referencia a los siguientes ejemplos, ejemplos experimentales y ejemplos de formulación, los cuales no deben interpretarse como taxativos y la descripción puede modificarse dentro del alcance de la presente divulgación.
En los siguientes ejemplos, la “temperatura ambiente” se refiere en general a alrededor de 10 °C a alrededor de 35 °C. Las proporciones indicadas para disolventes mezclados son proporciones de mezcla en volumen, a menos que se especifique lo contrario. % significa % en peso, a menos que se especifique lo contrario.
En la cromatografía en columna de gel de sílice, “diol” significa gel de sílice unido a 3-(2,3-dihidroxipropoxi)propilsilano. En la cromatografía en columna en gel de sílice y HPLC (cromatografía líquida de alto rendimiento), “C18” significa el uso de gel de sílice unido a octadecilo. Las proporciones de disolventes de elución son proporciones de mezcla en volumen, a menos que se especifique lo contrario.
La medición mediante LC/MS se llevó a cabo en las siguientes condiciones [columna: L-Column2 ODS, 3,0 mmi.D.*50 mm, fase móvil: solución amortiguadora de acetato de amonio 5 mM/acetonitrilo = 900/100)].
En los ejemplos, se utilizan las siguientes abreviaturas:
mp: punto de fusión
MS: espectro de masas
[M+H]+, [M-H]-: pico iónico molecular
M: concentración molar
N: normal
CDCb: cloroformo deuterado
DMSO-d6: dimetilsulfóxido deuterado
D2O: agua deuterada
1H NMR: resonancia magnética nuclear de protones
31P NMR: resonancia magnética nuclear de fósforo
LC/MS: cromatografía líquida - espectrometría de masas
ESI: ionización por electropulverización
APCi: ionización química por presión atmosférica
THF: tetrahidrofurano
DMF: N,N-dimetilformamida
DCM: diclorometano
1H NMR y 31P NMR se midieron mediante NMR de tipo transformada de Fourier. Para el análisis, se utilizó ACD/SpecManager (nombre comercial) y similares. No se describen picos con protones muy leves, tales como un grupo hidroxi, un grupo amino y similares.
MS se midió mediante LC/MS. Como método de ionización, se utilizó un método de ESI o un método de APCi. Los datos indican valores medidos reales (hallados). En general, se observó un pico iónico molecular. En el caso de un compuesto que tenga un grupo terc-butoxicarbonilo, un pico después de la eliminación de un grupo tercbutoxicarbonilo o un grupo terc-butilo se puede observar como un fragmento de ion. En el caso de un compuesto que tenga un grupo hidroxi, un pico después de la eliminación de H2O se puede observar como un fragmento de ion. En el caso de una sal, se observa en general un pico iónico molecular o un pico de fragmento de ion de la forma libre.
Ejemplo 1
Síntesis de sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10,16-trihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-1][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
Figure imgf000072_0001
A) 7-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4(7H)-ona
A una solución de 7-((2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4(7H)-ona (6,26 g) en piridina (100 ml) se le agregó cloruro de 4,4'-dimetoxitritilo (8,92 g) a temperatura ambiente, y la mezcla se agitó durante la noche en una atmósfera de argón a temperatura ambiente. A la mezcla de reacción se le agregó solución de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó sucesivamente con solución de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (8,65 g). MS: [M-H]‘ 586,0.
B) 7-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
A una solución de 7-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4(7H)-ona (2,65 g) en DMF (20 ml) se le agregó imidazol (0,614 g) y tercbutildimetilclorosilano (0,816 g), y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con salmuera saturada, se secó en sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para proporcionar el compuesto del título (1,1 g). MS: [M-H]- 700,2.
C) 7-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2-O-((2-cianoetoxi)(diisopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
7-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (5,43 g) se sometió a deshidratación azeotrópica tres veces con tolueno anhidro y se disolvió en DMF anhidra (15 ml). A la solución se le agregó 3-((bis(diisopropilamino)fosfino)oxi)propanonitrilo (3,19 ml), 1H-tetrazol (0,542 g) y 1-metil-1H-imidazol (0,306 ml), y la mezcla se agitó durante la noche en una atmósfera de argón a temperatura ambiente, se vertió en solución de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó sucesivamente con solución de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DIOL, acetato de etilo/hexano). El producto bruto obtenido se purificó nuevamente mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/hexano, que contenía trietilamina al 0,5 %) para proporcionar el compuesto del título (4,22 g) como una mezcla de diastereómeros. MS: [M-H]‘ 901,2.
D) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2 cianoetoxi)fosforil)oxi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-ilo
N-Benzoil-2'-deoxi-2'-fluoro-3'-O-(hidroxi(oxido)fosforanil)adenosina (1,2 g) y 7-(5-O-([bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)]-3-O-([terc-butil(dimetil)silil)]-2-O-({(2-cianoetoxi)([diisopropilamino)]fosfino)}-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (3,4 g) se sometieron a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro, y se agregaron a estos acetonitrilo anhidro (15 ml) y THF anhidro (5 ml). A la mezcla se le agregó una mezcla de 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazol (1,07 g) (que se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro) y acetonitrilo anhidro (10 ml), y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a 55 °C durante 2 horas. Se agregó a esta una solución acuosa de hidroperóxido de terc-butilo al 70 % (1,12 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. A la mezcla de reacción se le agregó una mezcla de tiosulfato de sodio (5920 mg) y agua (3 ml) y la mezcla se concentró a presión reducida. Al residuo se le agregó ácido acético al 80 % (30 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (1,1 g). MS: [M+H]+ 952,2.
E) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,10-dihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamida
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforil)oxi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-ilo (350 mg) se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y piridina anhidra, y se agregó a este piridina anhidra (15 ml). A la mezcla se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (238 mg) y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1 hora. Se agregaron a esta agua (232 |jl) y yodo (121 mg), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos adicionales. A la mezcla de reacción se le agregó una mezcla de tiosulfato de sodio pentahidratado (91 mg) y agua (1 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se le agregó tolueno y la mezcla se concentró a presión reducida. Al residuo se le agregó acetonitrilo anhidro (15 ml) y 2-metilpropan-2-amina (5,26 ml), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (332 mg). MS: [M+H]+ 897.1.
F) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-16-((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-15-fluoro-2,10-dihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
A N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,10-dihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamida (332 mg) se le agregó una solución de metilamina etanol al 40 % (7,6 ml), y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1 hora y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) y el residuo obtenido se purificó mediante HPLC (L-column2 ODS, 50*150 mm, fase móvil: solución de acetato de amonio acuoso 5 mM/acetonitrilo) para proporcionar el compuesto del título (106,4 mg). MS:
[M+H]+ 793,1.
G) Sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10,16-trihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
A 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-16-((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-15-fluoro-2,10-dihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (106,4 mg) se le agregó trifluorhidrato de trietilamina (1094 jl). La mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 1 hora y se enfrió hasta temperatura ambiente, se le agregó etoxi(trimetil)silano (6266 j l) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y al residuo se le agregó etoxi(trimetil)silano (6266 j l) y metanol (1 ml), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (acetonitrilo/solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM) para proporcionar el compuesto del título (82 mg). 1H NMR (400 MHz, D2O) 6 1,18 (18H, t, J = 7,3 Hz), 3,11 (12H, q, J = 7,4 Hz), 4,01-4,14 (2H, m), 4,17-4,26 (1H, m), 4,34 (2H, d, J = 3,4 Hz), 4,42-4,50 (1H, m), 4,54 (1H, d, J = 4,2 Hz), 4,86-4,99 (2H, m), 5,38-5,60 (1H, m), 6,30-6,45 (2H, m), 7,24 (1H, d, J = 2,0 Hz), 7,91 (1H, s), 8,05 (1H, s), 8,17 (1H, s). 31P NMR (162 MHz, D2O) 6 -2,16, -1,66.
Ejemplo 1a
Síntesis de sal de disodio de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10,16-trihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-l2H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
Figure imgf000074_0001
Se hizo pasar agua desionizada (480 ml) a través de una columna preparada mediante empaque de al colocar resina de intercambio de cationes 50W-X8 AG (nombre comercial) (100-200 mesh, 30 g) en una columna vacía. Entonces, se hicieron pasar una solución de hidróxido de sodio acuoso 1 M (288 ml) y agua desionizada (540 ml) a través de la resina. Se hizo pasar agua desionizada (54 ml) que contenía sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10,16-trihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (1,53 g) a través de la resina después del pretratamiento mencionado anteriormente, y se hizo pasar agua desionizada (72 ml) a través de la resina, y la solución acuosa obtenida se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (1,28 g). 1H NMR (300 MHz, D2O) 64,05-4,17 (2H, m), 4,20-4,28 (1H, m), 4,33-4,40 (2H, m), 4,44-4,51 (1H, m), 4,55 (1H, d, J = 4,2 Hz), 4,84-5,01 (2H, m), 5,39-5,61 (1H, m), 6,31-6,40 (2H, m), 7.25 (1H, d, J = 2,0 Hz), 7,91 (1H, s), 8,07 (1H, s), 8,18 (1H, s). 31P NMR (121 MHz, D2O) 6 -2,2, -1,6.
Ejemplo 2
Síntesis de sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
Figure imgf000074_0002
A) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-16-((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-15-fluoro-10-hidroxi-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforil)oxi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-ilo (700 mg) se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y piridina anhidra, y se agregó a este piridina anhidra (50 ml). A la mezcla se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (475 mg) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1 hora. Se agregaron a esta agua (464 pl) y 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-ona (186 mg), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos adicionales. A la mezcla de reacción se le agregó una mezcla de tiosulfato de sodio (913 mg) y agua (3 ml) y la mezcla se concentró a presión reducida. Al residuo se le agregó acetonitrilo anhidro (30 ml) y 2-metilpropan-2-amina (10 ml), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) y al residuo obtenido se le agregó una solución de metilamina etanol al 40 % (7,3 ml). La mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 30 minutos y la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo). El residuo obtenido se resolvió en dos diastereómeros (tR1 y tR2, cuyos tiempos de retención mediante LC/MS son de más corto a más largo, en este orden) mediante HPLC (L-column2 ODS, 50*150 mm, fase móvil: solución de acetato de amonio acuoso 5 mM/acetonitrilo) para proporcionar el compuesto del título (70 mg, tR1) y el compuesto del título (150 mg, tR2). MS (tR1): [M+H]+ 809,1. MS (tR2): [M+H]+ 809,1.
B) Sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
A 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-16-((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-15-fluoro-10-hidroxi-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico) (70 mg, derivado de tR1) se le agregaron metanol (3,0 ml) y trifluorhidrato de trietilamina (1,41 ml). La mezcla de reacción se concentró para retirar el metanol y el residuo se agitó a 55 °C durante 1 hora. El residuo se enfrió hasta temperatura ambiente, se agregó le etoxi(trimetil)silano (7,8 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (acetonitrilo/solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM) para proporcionar el compuesto del título (56 mg). 1H NMR (400 MHz, D2O) 61,23 (18H, t, J = 7,3 Hz), 3,15 (12H, q, J = 7,3 Hz), 4,15-4,23 (3H, m), 4,37-4,50 (2H, m), 4,54 (1H, d, J = 10,3 Hz), 4,61 (1H, d, J = 3,9 Hz), 4,96 (2H, dt, J = 7,9, 3,9 Hz), 5,77-5,95 (1H, m), 6,36 (1H, d, J = 8,1 Hz), 6,40 (1H, d, J = 15,4 Hz), 7,51 (1H, d, J = 1,7 Hz), 7,99 (2H, d, J = 13,7 Hz), 8,23 (1H, s). 31P NMR (162 MHz, D2O) 6­ 2,43, 54,03.
Ejemplo 3
Síntesis de sal de trietilamina de 7-((2R,5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona 1.7
Figure imgf000075_0001
A 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-16-((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-15-fluoro-10-hidroxi-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico) (150 mg, derivado de tR2) se le agregaron metanol (3,0 ml) y trifluorhidrato de trietilamina (3,02 ml). La mezcla de reacción se concentró para retirar el metanol y el residuo se agitó a 55 °C durante 1 hora. El residuo se enfrió hasta temperatura ambiente, se agregó le etoxi(trimetil)silano (16,4 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (acetonitrilo/solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM) para proporcionar el compuesto del título (155 mg). 1H NMR (400 MHz, D2O) 61,23 (15H, t, J = 7,3 Hz), 3,15 (10H, q, J = 7,3 Hz), 4,06 (1H, dd, J = 11,7, 4,9 Hz), 4,18 (1H, dd, J = 11,6, 2,8 Hz), 4,29-4,47 (3H, m), 4,51 (1H, d, J = 8,8 Hz), 4,58 (1H, d, J = 3,9 Hz), 4,93-5,14 (2H, m), 5,44-5,64 (1H, m), 6,33-6,45 (2H, m), 7,32 (1H, d, J = 1,5 Hz), 7,95 (1H, s), 8,06 (1H, s), 8,24 (1H, s). 31P NMR (162 MHz, D2O) 6­ 2,41,55,33.
Ejemplo 3a
Síntesis de sal de disodio de 7-((2R,5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
Figure imgf000075_0002
Se hizo pasar agua desionizada (400 ml) a través de una columna preparada mediante empaque de al colocar resina de intercambio de cationes 50W-X8 AG (nombre comercial) (100-200 mesh, 25,3 g) en una columna vacía. Entonces, se hicieron pasar una solución de hidróxido de sodio acuoso 1 M (240 ml) y agua desionizada (450 ml) a través de la resina. Se hizo pasar agua desionizada (45 ml) que contenía sal de di-trietilamina de 7-((2R,5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (1,30 g) a través de la resina después del pretratamiento mencionado anteriormente, y se hizo pasar agua desionizada (60 ml) a través de la resina para proporcionar una solución acuosa que contiene el compuesto del título.
Se hizo pasar agua desionizada (400 ml) a través de una columna preparada mediante empaque de al colocar resina de intercambio de cationes 50W-X8 AG (nombre comercial) (100-200 mesh, 26,3 g) en una columna vacía. Entonces, se hicieron pasar una solución de hidróxido de sodio acuoso 1 M (270 ml) y agua desionizada (540 ml) a través de la resina. Se hizo pasar agua desionizada (54 ml) que contenía sal de di-trietilamina de 7-((2R,5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (1,18 g) a través de la resina después del pretratamiento mencionado anteriormente, y se hizo pasar agua desionizada (63 ml) a través de la resina para proporcionar una solución acuosa que contiene el compuesto del título. Las dos soluciones acuosas que contienen el compuesto del título se combinaron y se liofilizaron para proporcionar el compuesto del título (2,0 g). 1H NMR (300 MHz, D2O) 5 3,97-4,07 (1H, m), 4,11-4,20 (1H, m), 4,27-4,42 (3H, m), 4,43-4,51 (1H, m), 4,55 (1H, d, J = 3,8 Hz), 4,88-5,12 (2H, m), 5,34-5,59 (1H, m), 6,30-6,40 (2H, m), 7,28 (1H, d, J = 1,9 Hz), 7,91 (1H, s), 8,01 (1H, s), 8,18 (1H, s). 31P NMR (121 MHz, D2O) 5 -2,38, 55,3.
Ejemplo 4
Síntesis de sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,15,16-tetrahidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
Figure imgf000076_0001
A) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo
N-benzoil-2'-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3'-O-(hidroxi(oxido)fosforanil)adenosina (369 mg) y 7-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2-O-((2-cianoetoxi)(diisopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (817 mg) se sometieron a deshidratación azeotrópica (tres veces) y se suspendió en acetonitrilo anhidro (3,6 ml) y THF anhidro (1,2 ml). A la suspensión se le agregó una mezcla de 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazol (262 mg) (que se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro) y acetonitrilo anhidro (2,4 ml), y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1,5 horas. A la solución de reacción se le agregó solución acuosa de hidroperóxido de terc-butilo al 70 % (0,276 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos adicionales. La mezcla de reacción se inactivó con tiosulfato de sodio (636 mg) y agua (2 ml) y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se disolvió en ácido acético al 80 % (5 ml) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y tolueno. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (538 mg). MS: [M+H]+ 1064,3.
B) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-10-(2-cianoetoxi)-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamida
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (538 mg) se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y piridina anhidra, y se suspendió en piridina anhidra (12 ml). A esto se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (327 mg) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se agregaron a esta agua (0,319 ml) y yodo (167 mg), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos adicionales. La mezcla de reacción se inactivó con tiosulfato de sodio (208 mg) y agua (2 ml) y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (509 mg). MS: [M+H]+ 1062,3.
C) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2,10-dihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-10-(2-cianoetoxi)-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamida (509 mg) se disolvió en una solución de metilamina etanol al 33 % (10 ml), la solución se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1 hora y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo). El residuo obtenido se purificó mediante HPLC (L-column2 ODS, 50*150 mm, fase móvil: solución de acetato de amonio acuoso 5 mM/acetonitrilo) para proporcionar el compuesto del título (227 mg). MS: [M+H]+ 905,2.
D) Sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,15,16-tetrahidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
A 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2,10-dihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (227 mg) se le agregó triofluorhidrato de trietilamina (0,818 ml), y la mezcla se agitó a 50 °C durante 5 horas. El disolvente se evaporó a presión reducida, el residuo se neutralizó con solución de bicarbonato de trietilamonio acuoso 1 M y el disolvente se evaporó nuevamente a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM/acetonitrilo) y el sólido obtenido se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (103 mg). 1H NMR (300 MHz, D2O) 61,26 (18H, t, J = 7,4 Hz), 3,18 (12H, q, J = 7,4 Hz), 4,06-4,29 (3H, m), 4,34-4,52 (3H, m), 4,62 (1H, d, J = 3,8 Hz), 4,69-4,83 (1H, m), 4,84-4,95 (1H, m), 4,98-5,09 (1H, m), 6,14 (1H, d, J = 1,5 Hz), 6,41 (1H, dd, J = 8,3, 1,5 Hz), 7,33 (1H, d, J = 1,9 Hz), 7,99 (1H, s), 8,16 (1H, s), 8,25 (1H, s). 31P NMR (121 MHz, D2O) 6-1,96,-1,21.
Ejemplo 5
Sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
Figure imgf000078_0001
A) 7-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2-O-(hidroxi(oxido)fosforanil)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
7-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (835 mg) se disolvió en piridina (4 ml) y se le agregó fosfito de difenilo (0,456 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se le agregaron agua (1 ml) e hidróxido de amonio (2 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos y la mezcla de reacción se diluyó con agua, y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (611 mg). MS: [M-H] 764,1.
B) 7-(3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2-O-(hidroxi(oxido)fosforanil)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
Una mezcla de 7-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2-O-(hidroxi(oxido)fosforanil)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (611 mg) y ácido acético al 80 % (4 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se diluyó con metanol y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (358 mg). MS: [M+H]+ 464,1.
C) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforotioil)oxi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)tetrahidrofu ran-3-ilo
Una mezcla de 7-(3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2-O-(hidroxi(oxido)fosforanil)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (358 mg) y N-benzoil-5'-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-2'-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3'-O-((2-cianoetoxi)(diisopropilamino)fosfino)adenosina (1,02 g) se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y se suspendió en acetonitrilo anhidro (10 ml). A esto se le agregó 2,2,2-trifluoroacetato de piridina (386 mg) y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1 hora. A esta se le agregó ((dimetilamino-metiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tiona (199 mg) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos adicionales. La mezcla de reacción se inactivó con una solución acuosa (2,5 ml) de tiosulfato de sodio (250 mg) y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se disolvió en 1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-ol (10 ml), la solución se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (328 mg). MS: [M+H]+ 1080,3.
D) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2-(2-cianoetoxi)-7-(5-fluoro-4-oxo-3.4- dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10-oxido-10-sulfanil-2-sulfidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamida (isómero óptico)
A una mezcla de hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforotioil)oxi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)tetrahidrofuran-3-ilo (328 mg) y piridina anhidra (10 ml) se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (196 mg). La mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 30 minutos, se agregaron a esta agua (0,5 ml) y 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-ona (61 mg), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con una solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) y se purificó entonces mediante cromatografía en columna C18 (solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM/acetonitrilo) para proporcionar el compuesto del título (isómero óptico) (92 mg, tR4). MS: [M+H]+ 1094,3.
E) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2-(2-cianoetoxi)-7-(5-fluoro-4-oxo-3.4- dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10-oxido-10-sulfanil-2-sulfidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamida (isómero óptico) (90 mg) se disolvió en una solución de metilamina-metanol al 40 % (3,0 ml), la solución se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1 hora y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (32 mg). MS: [M+H]+ 937,1.
F) Sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
Una mezcla de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((tercbutil(dimetil)silil)oxi)-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico) (32 mg) y triofluorhidrato de trietilamina (0,12 ml) se agitó a 50 °C durante 3 horas. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se neutralizó con solución de bicarbonato de trietilamonio acuoso 1 M y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM/acetonitrilo). El sólido obtenido se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (21 mg). 1H NMR (300 MHz, D2O) 61,23 (18H, t, J = 7,3 Hz), 3,15 (12H, q, J = 7,4 Hz), 3,99-4,09 (1H, m), 4,23­ 4,30 (2H, m), 4,30-4,41 (2H, m), 4,41-4,45 (1H, m), 4,47-4,54 (1H, m), 4,83-4,88 (2H, m), 4,96-5,13 (3H, m), 6,11 (1H, d, J = 1,1 Hz), 6,36 (1H, d, J = 7,4 Hz), 7,31 (1H, d, J = 1,9 Hz), 7,95 (1H, s), 8,11 (1H, s), 8,22 (1H, s). 31P NMR (121 MHz, D2O) 652,25, 54,88.
Ejemplo 6 (Para referencia)
Síntesis de sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
Figure imgf000080_0001
A) 7-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
A una solución de 7-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4(7H)-ona (2,65 g) en DMF (20 ml) se le agregó imidazol (0,614 g) y tercbutildimetilclorosilano (0,816 g), y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con salmuera saturada, se secó en sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para proporcionar el compuesto del título (1,2 g). MS: [M-H]- 700,3.
B) 7-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-((2-cianoetoxi)(diisopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
7-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (2,37 g) se disolvió en DMF (6,75 ml), y a la solución se le agregaron 3-((bis(diisopropilamino)fosfino)oxi)propanonitrilo (2,15 ml), 1H-tetrazol (0,237 g) y 1-metil-1H-imidazol (0,134 ml), y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 20,5 horas. A la solución de reacción se le agregó solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (acetato de etilo/hexano, que contenía trietilamina al 0,5 %) para proporcionar el compuesto del título (2,67 g). MS: [M-H]- 900,2.
C) 7-(2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-(hidroxi(oxido)fosforanil)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
Se disolvió 7-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-((2-cianoetoxi)(diisopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (1,54 g) en acetonitrilo (15 ml), se agregaron 2,2,2-trifluoroacetato de piridina (0,396 g) y agua (0,062 ml) a esta a temperatura ambiente, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 50 minutos. A la solución de reacción se le agregó 2-metilpropan-2-amina (8,07 ml) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, al residuo se le agregó ácido acético al 80 % (8,54 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora.
De manera similar, se disolvió 7-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-((2-cianoetoxi)(diisopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (1,13 g) en acetonitrilo (10 ml), se agregaron 2,2,2-trifluoroacetato de piridina (0,290 g) y agua (0,045 ml) a esta a temperatura ambiente, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 50 minutos. A la solución de reacción se le agregó 2-metilpropan-2-amina (5,92 ml) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, al residuo se le agregó ácido acético al 80 % (6,27 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora.
Se combinaron las mezclas de reacción y se concentraron a presión reducida, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (961 mg). MS: [M+H]+ 464,0.
D) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-2-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforotioil)oxi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-5-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)tetrahidrofuran-3-ilo
7-(2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-(hidroxi(oxido)fosforanil)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (400 mg) y N-benzoil-5'-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-3'-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2'-O-((2-cianoetoxi)(diisopropilamino)fosfino)adenosina (1,02 g) se sometieron a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro (tres veces) y se suspendió en acetonitrilo anhidro (6 ml). A esto se le agregó 2,2,2-trifluoroacetato de piridina (333 mg) y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1 hora. A esta se le agregó (dimetilamino-metiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tiona (195 mg) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos adicionales. La mezcla de reacción se inactivó con tiosulfato de sodio (316 mg) y agua (0,5 ml) y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se disolvió en 1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-ol (5 ml) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y tolueno. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (556 mg). MS: [M+H]+ 1080,3.
E) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-10-(2-cianoetoxi)-14-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroxi-2,10-disulfidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-9H-purin-6-il)benzamida (isómero óptico)
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-2-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforotioil)oxi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-5-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)tetrahidrofuran-3-ilo (556 mg) se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y piridina anhidra, y se disolvió en piridina anhidra (15 ml). A esta solución se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (332 mg) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se agregaron a esta agua (1 ml) y 3H-1,2-benzoditiol-3-ona (108 mg), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora adicional. A la mezcla de reacción se le agregó solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/metanol). El residuo obtenido se resolvió en cuatro diastereómeros (tR1, tR2, tR3 y tR4, cuyos tiempos de retención mediante LC/MS son de más corto a más largo, en este orden) mediante HPLc (L-column2 ODS, 50*150 mm, fase móvil: solución de acetato de amonio acuoso 5 mM/acetonitrilo) para proporcionar el compuesto del título (120 mg, tR2) y el compuesto del título (183 mg, tR4). tR2 MS: [M+H]+ 1094,3. tR4 MS: [M+H]+ 1094,3.
F) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-10-(2-cianoetoxi)-14-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-oxido-2-sulfanil-10-sulfidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-9H-purin-6-il)benzamida (isómero óptico, derivado de tR2) (120 mg) se disolvió en una solución de metilamina etanol al 33 % (5,0 ml), la solución se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1,5 hora y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (84,4 mg). MS: [M+H]+ 937,2.
G) Sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
A 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico, derivado de tR2) (84,4 mg) se le agregó triofluorhidrato de trietilamina (0,294 ml), y la mezcla se agitó a 50 °C durante 2 horas. La solución de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se neutralizó con solución de bicarbonato de trietilamonio acuoso 1 M y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM/acetonitrilo) y el sólido obtenido se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (58,4 mg). 1H NMR (300 MHz, D2O) ó 1,26 (18H, t, J = 7,4 Hz), 3,18 (12H, q, J = 7,3 Hz), 3,94­ 4,05 (1H, m), 4,10-4,20 (1H, m), 4,28-4,45 (2H, m), 4,50 (2H, brs), 4,59 (1H, d, J = 4,2 Hz), 4,71-4,81 (1H, m), 5,32 (2H, d, J = 10,6 Hz), 6,23-6,32 (2H, m), 7,17 (1H, d, J = 2,3 Hz), 8,05 (1H, s), 8,20 (1H, s), 8,66 (1H, s). 31P NMR (121 MHz, D2O) 055,8,59,2.
Ejemplo 7 (Para referencia)
Síntesis de sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-5-fluoro-3,7-d¡h¡dro-4H-pirrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-ona (isómero óptico)
Figure imgf000082_0001
A) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-10-(2-cianoetoxi)-14-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-oxido-2-sulfanil-10-sulfidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-9H-purin-6-il)benzamida (isómero óptico, derivado de tR4) (183 mg) se disolvió en una solución de metilamina etanol al 33 % (5,0 ml), la solución se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1 hora y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (107 mg). MS: [M+H]+ 937,1.
B) Sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
A 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico, derivado de tR4) (107 mg) se le agregó triofluorhidrato de trietilamina (0,372 ml), y la mezcla se agitó a 50 °C durante 2,5 horas. La solución de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se neutralizó con solución de bicarbonato de trietilamonio acuoso 1 M y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM/acetonitrilo) y el sólido obtenido se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (78 mg). 1H NMR (300 MHz, D2O) ó 1,26 (18H, t, J = 7,4 Hz), 3,18 (12H, q, J = 7,2 Hz), 4,09­ 4,18 (1H, m), 4,21-4,29 (2H, m), 4,33-4,43 (1H, m), 4,51 (2H, brs), 4,65-4,71 (1H, m), 4,89 (1H, d, J = 4,2 Hz), 4,99­ 5,11 (1H, m), 5,29-5,42 (1H, m), 6,23-6,31 (2H, m), 7,00 (1H, d, J = 1,9 Hz), 8,03 (1H, s), 8,17 (1H, s), 8,56 (1H, s).
31P NMR (121 MHz, D2O) 052,8,55,1.
Ejemplo 8 (Para referencia)
Síntesis de sal de di-trietilamina de 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(4-amino-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,10,15,16-tetrahidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona
Figure imgf000083_0001
A) N-(7-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)benzamida
Dibenzoato de (2R,3R,4R,5R)-2-((benzoiloxi)metil)-5-(4-chloro-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)tetrahidrofuran-3,4-diilo (14,09 g) se cargó en 17 recipientes de tubo sellados en 17 partes y se agregaron a estos una solución de isopropanol de amoníaco 2 M (20 ml), respectivamente. Cada mezcla se agitó con radiación de microondas a 130 °C durante 5 horas. Las mezclas obtenidas se combinaron y concentraron a presión reducida. El residuo obtenido se sometió a evaporación azeotrópica dos veces con tolueno para retirar el disolvente, se agregó a esta piridina (100 ml) y la mezcla se enfrió hasta 0 °C. Se agregó a este cloruro de bezoilo (26,6 ml) a 0 °C y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se agregó agua a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/hexano). Al compuesto obtenido se le agregó piridina (350 ml) y etanol (100 ml), y la mezcla se enfrió hasta 0 °C. Se le agregó una solución de hidróxido de sodio acuoso 1 M (103 ml) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 1 hora. Se le agregó nuevamente una solución de hidróxido de sodio acuoso 1 M (45,7 ml) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 1 hora. A la mezcla de reacción se le agregó una resina de intercambio de cationes ácida fuerte DOWEXTM 50Wx4 100-200 (95 g) a temperatura ambiente, el sólido se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo). Al producto obtenido (5,71 g) se le agregó piridina (60 ml) y cloruro de 4,4'-dimetoxitritilo (5,98 g) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. A esta se le agregó cloruro de 4,4'-dimetoxitritilo (5,98 g) nuevamente y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se concentró a presión reducida, se le agregó agua y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con agua y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para proporcionar el compuesto del título (8,50 g). MS: [M+H]+ 691,2.
B) N-(7-((2R,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-4-hidroxitetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)benzamida
A una mezcla de N-(7-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)benzamida (7,51 g) y DMF (30 ml) se le agregó imidazol (1,924 g) y tercbutildimetilclorosilano (2,13 g), y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con agua y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para proporcionar el compuesto del título (2,94 g). MS, hallado: 501,2.
C) N-benzoil-7-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-((2-cianoetoxi)(diisopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina N-(7-((2R,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-4-hidroxitetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)benzamida (1,03 g) se sometió a deshidratación azeotrópica con tolueno anhidro y se agregó DMF anhidra (5 ml) a esta en una atmósfera de argón. Se agregaron 3-((bis(diisopropilamino)fosfino)oxi)propanonitrilo (0,771 g), 1H-tetrazol (0,090 g) y 1-metil-1H-imidazol (0,051 ml) a esta y la mezcla se agitó durante 6 horas. A la mezcla de reacción se le agregó solución de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con solución de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (acetato de etilo que contenía 0,5 % de trietilamina/hexano) para proporcionar el compuesto del título (1,12 g). 1H NMR (300 MHz, CDCl3) 6 -0,17 (3H, d, J = 2,6 Hz), -0,04-0,00 (3H, m), 0,78 (9H, s), 1,04 (3H, d, J = 6,8 Hz), 1,13-1,23 (9H, m), 2,32 (1H, t, J = 6,6 Hz), 2,68 (1H, td, J = 6,4, 1,9 Hz), 3,21-3,36 (1H, m), 3,42-3,71 (4H, m), 3,79 (6H, d, J = 1,1 Hz), 3,85-4,05 (1H, m), 4,25-4,45 (2H, m), 4,64-4,82 (1H, m), 6,39 (1H, dd, J = 14,2, 5,9 Hz), 6,74-6,89 (4H, m), 7,19-7,41 (8H, m), 7,43­ 7,67 (5H, m), 7,98 (2H, d, J = 7,6 Hz), 8,50 (1H, s), 8,64 (1H, d, J = 5,3 Hz).
D) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(4-benzamido-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ilo
A N-benzoil-7-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-((2-cianoetoxi)(diisopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (1,12 g) se le agregaron acetonitrilo (5 ml), agua (40 pl) y 2,2,2-trifluoroacetato de piridina (258 mg). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos, se le agregó terc-butilamina (5,43 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, se le agregó ácido acético al 80 % (5,5 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora adicional. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (527 mg). MS: [M+H]+ 567,2.
E) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(4-benzamido-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)-2-(2-isobutilamido-6-oxo-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4F,5R)-5-(4-benzamido-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ilo (527 mg) y 3'-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2'-O-((2-cianoetoxi)(diisopropilamino)fosfino)-N-isobutirilguanosina (1,083 g) se sometieron a deshidratación azeotrópica tres veces con acetonitrilo anhidro y se les agregó acetonitrilo anhidro (10 ml). A esto se le agregó 2,2,2-trifluoroacetato de piridina (359 mg) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se agregó a esta una solución acuosa de hidroperóxido de terc-butilo al 70 % (382 pl) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos más. A la mezcla de reacción se le agregó tiosulfato de sodio (693 mg) y agua (1 ml) y la mezcla se concentró a presión reducida. Al residuo se le agregó ácido acético al 80 % (5 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se sometió a deshidratación azeotrópica tres veces con tolueno. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (175 mg). MS: [M+H]+ 1149,4,
F) N-(7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-10-(2-cianoetoxi)-2-hidroxi-7-(2-((2-metilpropanoil)amino)-6-oxo-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)benzamida
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(4-benzamido-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)-2-(2-isobutilamido-6-oxo-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (175 mg) se sometió a deshidratación azeotrópica tres veces con acetonitrilo anhidro y se le agregó piridina anhidra (3 ml) y 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (98 mg). La mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 10 minutos, se agregaron a esta agua (96 pl) y yodo (50 mg), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos adicionales. La mezcla de reacción se agregó a una mezcla de tiosulfato de sodio (98 mg) y agua (0,4 ml) y la mezcla se agitó durante 5 minutos, y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó dos veces mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (48 mg). MS: [M+H]+ 1147,6.
G) 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(4-amino-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2,10-dihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona
N-(7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-10-(2-cianoetoxi)-2-hidroxi-7-(2-((2-metilpropanoil)amino)-6-oxo-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)benzamida (48 mg) se sometió a deshidratación azeotrópica dos veces con acetonitrilo anhidro, se le agregó una solución de metilamina etanol al 33 % (2 ml) y la mezcla se agitó durante la noche en una atmósfera de argón a temperatura ambiente. La mezcla obtenida se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo). El residuo obtenido se purificó mediante HPLC (L-column2 ODS, 50*150 mm, fase móvil: solución de acetato de amonio acuoso 5 mM/acetonitrilo), la fracción obtenida se concentró a presión reducida y el producto obtenido se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (5 mg). MS: [M+H]+ 920,3.
H) Sal de di-trietilamina de 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(4-amino-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,10,15,16-tetrahidroxi-2,l0-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona
Una mezcla de 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(4-amino-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2,10-dihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (5 mg) y triofluorhidrato de trietilamina (200 pl) se agitó a 50 °C durante 1 hora. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se neutralizó con solución de hidrogenocarbonato de trietilamonio acuoso 1 M. La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna C18 (acetonitrilo/solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM), la fracción objetivo se concentró a presión reducida y el producto obtenido se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (3,2 mg). 1H NMR (600 MHz, D2O) ó 1,23 (18H, t, J = 7,3 Hz), 3,15 (12H, q, J = 7.3 Hz), 4,06-4,11 (1H, m), 4,14-4,19 (1H, m), 4,21-4,26 (1H, m), 4,31-4,37 (2H, m),4,40 (1H, d, J = 1,5 Hz), 4,56 (1H, dd, J = 15,2, 4,3 Hz), 4,61-4,68 (1H, m) , 5,00 (1H, ddd, J = 8,5, 6,6, 4,5 Hz), 5,60 (1H, td, J = 7.9, 4,1 Hz), 5,93 (1H, d, J = 8,5 Hz), 6,26 (1H, s), 7,14 (1H, d, J = 1,6 Hz), 7,87 (1H, s), 8,10 (1H, s).
Ejemplo 10 (Para referencia)
Síntesis de 1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,15,16-tetrahidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-1,5-dihidro-4H-imidazo[4,5-c]piridin-4-ona
Figure imgf000086_0001
A) Dibenzoato de (2R,3R,4R,5R)-2-((benzoiloxi)metil)-5-(4-oxo-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)tetrahidrofuran-3,4-diilo
A una solución de 4-cloro-1H-imidazo[4,5-c]piridina (20 g) se le agregó ácido fórmico (123 ml) y agua (30 ml) a temperatura ambiente, y la mezcla se agitó a 100 °C durante 2 horas. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. Al residuo se le agregó ácido clorhídrico concentrado (100 ml) y la mezcla se agitó a 100 °C durante 1 hora. La mezcla se concentró a presión reducida, el residuo se suspendió en MeOH (100 ml) y se le agregaron éter diisopropílico (100 ml) y trietilamina (50 ml). El sólido resultante se recogió mediante filtración y se disolvió en acetonitrilo (600 ml). A esto se le agregó N-(trimetilsilil)acetimidato de trimetilsililo (38,2 ml) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante 10 minutos. A la mezcla de reacción se le agregó dibenzoato de (2S,3R,4R,5R)-2-acetoxi-5-((benzoiloxi)metil)tetrahidrofuran-3,4-diilo (79,0 g) a temperatura ambiente y la mezcla se calentó hasta 80 °C. A la solución de reacción se le agregó trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (28,2 ml) y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón durante la noche a 80 °C. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se le agregó agua (500 ml) y el sólido resultante se recogió mediante filtración. El sólido se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (25,9 g). 1H NMR (400 MHz, CDCb) 6 4,65-4,96 (3H, m), 5,91 (2H, brs), 6,23-6,42 (1H, m), 6,64 (1H, brs), 7,15 (1H, brs), 7,32-7,56 (9H, m), 7,92-8,15 (7H, m), 12,11-12,50 (1H, m). MS: [M+H]+ 580,1.
B) 1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4(5H)-ona
A dibenzoato de (2R,3R,4R,5R)-2-((benzoiloxi)metil)-5-(4-oxo-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)tetrahidrofuran-3,4-diilo (30,0 g) se le agregó una solución de metilamina metanol al 40 % (200 ml), y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1 hora y se concentró a presión reducida. El residuo se recristalizó a partir de hexano-acetato de etilo para proporcionar el compuesto del título (11,2 g). MS: [M+H]+ 268,1.
C) 1-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)-1H-imidazo[4,5 c]piridin-4(5H)-ona
A una solución de 1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4(5H)-ona (18,0 g) en piridina (140 ml) se le agregó cloruro de 4,4'-dimetoxitritilo (18,46 g) a temperatura ambiente, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, al residuo se le agregó agua y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto obtenido se lavó con salmuera saturada, se secó en sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (18,2 g). MS: [M+H]+ 570,2.
D) 1-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4(5H)-ona
A una solución de 1-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4(5H)-ona (18,02 g) en DMF (158 ml) se le agregó imidazol (4,30 g) y terc-butildimetilclorosilano (5,72 g), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. A esta se le agregó terc-butildimetilclorosilano (2,38 g) nuevamente y la mezcla se agitó durante 3 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con salmuera saturada, se secó en sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/hexano). El regioisómero aislado del compuesto del título se disolvió en MeOH y trietilamina, y la solución se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La solución de reacción se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para proporcionar el compuesto del título (11,5 g). MS: [M+H]+ 684.2.
E) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-(4-oxo-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)tetrahidrofuran-3-ilo
A una mezcla de 1-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4(5H)-ona (8,0 g) y piridina (117 ml) se le agrego fosfito de difenilo (4,5 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió agua (20 ml) a la mezcla de reacción. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos y la mezcla de reacción se diluyó con agua, y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (8,5 g). MS: [M+H]+ 748.3.
F) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)-2-(4-oxo-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)tetrahidrofuran-3-ilo
Una mezcla de hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(4-oxo-4,5-dihidro-1 H-imidazo[4,5-c]piridin-1 -il)tetrahidrofuran-3-ilo (8,2 g) y 1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-ol (30 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se le agregó metanol (10 ml), la mezcla se agitó a 60 °C durante 1 hora y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se recristalizó a partir de acetato de etilo y éter diisopropílico para proporcionar el compuesto del título (4,3 g). MS: [M+H]+ 446,1.
G) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforil)oxi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-(4-oxo-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)tetrahidrofuran-3-ilo
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)-2-(4-oxo-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1 -il)tetrahidrofuran-3-ilo (250 mg) y N-benzoil-5'-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-2'-O-(tercbutil(dimetil)silil)-3'-O-((2-cianoetoxi)(diisopropilamino)fosfino)adenosina (776 mg) se sometieron a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro, y se les agregó acetonitrilo anhidro (5,61 ml). A la mezcla se le agregó 2,2,2-trifluoroacetato de piridina (271 mg) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. Se agregó a esta una solución acuosa de hidroperóxido de terc-butilo al 70 % (231 pl) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. A la mezcla de reacción se le agregó una mezcla de tiosulfato de sodio (1,3 g) y agua (3 ml) y la mezcla se concentró a presión reducida. Al residuo se le agregó 1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-ol (15 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/hexano y metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (170 mg). MS: [M+H]+ 1046,3.
H) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2-(2-cianoetoxi)-10-hidroxi-2,10-dioxido-7-(4-oxo-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)octahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamida
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforil)oxi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-(4-oxo-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)tetrahidrofuran-3-ilo (160 mg) se sometió a deshidratación azeotrópica con piridina anhidra, y se le agregó piridina anhidra (3,0 ml). A la mezcla se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (99 mg) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se agregaron a esta agua (96 pl) y yodo (50,5 mg), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos adicionales. A la mezcla de reacción se le agregó una mezcla de tiosulfato de sodio (190 mg) y agua (0,4 ml) y la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (10,6 mg). MS: [M+H]+ 1044,3.
I) 1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2,10-dihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-1,5-dihidro-4H-imidazo[4,5-c]piridin-4-ona
A N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2-(2-cianoetoxi)-10-hidroxi-2,10-dioxido-7-(4-oxo-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)octahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamida (10,6 mg) se le agregó una solución de metilamina etanol al 40 % (5,0 ml), y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1 hora y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (9,0 mg). MS: [M+H]+ 887.2.
J) 1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,15,16-tetrahidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-1,5-dihidro-4H-imidazo[4,5-c]piridin-4-ona
A 1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2,10-dihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-1,5-dihidro-4H-imidazo[4,5-c]piridin-4-ona (9,0 mg) se le agregaron metanol (1,0 ml) y trifluorhidrato de trietilamina (165 pl). La mezcla de reacción se concentró para retirar el metanol y el residuo se agitó a 55 °C durante 1 hora. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se agregó el etoxi(trimetil)silano (0,90 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (acetonitrilo/solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM) para proporcionar el compuesto del título (0,3 mg). 1H NMR (400 MHz, D2O) a 4,15 (2H, d, J = 11,5 Hz), 4,46 (4H, brs), 4,56-4,62 (1H, m), 4,98-4,99 (2H, m), 6,05-6,20 (2H, m), 6,79-6,87 (1H, m), 7,06-7.12 (1H, m), 8,00 (1H, s), 7,96-8,10 (1H, m), 8,23 (2H, s). 31P NMR (162 MHz, D2O) 6 -2,36,-1,94.
Ejemplo 11 (Para referencia)
Síntesis de sal de di-trietilamina de 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(4-amino-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)-2,10,15,16-tetrahidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona
Figure imgf000089_0001
A) N-benzoil-1-(2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3,5-O-(di-terc-butilsililene)-beta-D-ribofuranosil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amina
Se disolvió N-benzoil-1-(beta-D-ribofuranosil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amina (2,41 g) en DMF (25 ml), se le agregó bis(trifluorometanosulfonato) de di-terc-butilsilanediilo (2,32 ml) a 0 °C, y la mezcla se agitó a 0 °C durante 75 minutos. Se le agregó bis(trifluorometanosulfonato) de di-terc-butilsilanodiilo (0,63 ml) a 0 °C, y la mezcla se agitó a 0 °C durante 30 minutos adicionales. Se le agregó bis(trifluorometanosulfonato) de di-terc-butilsilanediilo (0,63 ml) a 0 °C, y la mezcla se agitó a 0 °C durante 35 minutos adicionales. A la mezcla de reacción se le agregó 1 H-imidazol (2,22 g) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. A esta se le agregó terc-butildimetilclorosilano (1,18 g) y la mezcla se agitó a 60 °C durante 1,5 horas. A esta se le agregó terc-butildimetilclorosilano (0,294 g) y la mezcla se agitó a 60 °C durante 14,5 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para proporcionar el compuesto del título (3,28 g). MS: [M+H]+ 625,2.
B) N-benzoil-1-(2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranosil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amina
Se disolvió poli(hidrógenofluoruro) de piridinio (1,86 ml) en piridina (10 ml) a 0 °C, la solución se agregó a una solución de N-benzoil-1-(2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3,5-O-(di-terc-butilsililen)-beta-D-ribofuranosil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amina (1,64 g) en THF (13 ml) a 0 °C, y la mezcla se agitó a 0 °C durante 8 minutos. Esta reacción se repitió dos veces. Las soluciones de reacción se combinaron, diluyeron con agua y se extrajeron con acetato de etilo. El extracto se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (acetato de etilo/hexano y metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (2,24 g). MS: [M+H]+ 485,1.
C) N-benzoil-1-(5-0-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranosil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amina
Se disolvió N-benzoil-1-(2-0-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranosil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amina (2,24 g) en piridina (25 ml), se le agregó cloruro de 4,4'-dimetoxitritilo (2,04 g) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4,5 horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, al residuo se le agregó agua y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para proporcionar el compuesto del título (3,29 g). MS: [M+H]+ 787,3.
D) N-benzoil-1-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-((2-cianoetoxi)(diisopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranosil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amina
N-benzoil-1-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranosil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amina (3,29 g) se disolvió en DMF anhidra (9,5 ml), a la solución se le agregaron 3-((bis(diisopropilamino)fosfino)oxi)propanonitrilo (2,98 ml), 1H-tetrazol (0,328 g) y 1-metil-1H-imidazol (0,185 ml), y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 2,5 horas. A la solución de reacción se le agregó solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (acetato de etilo/hexano, que contenía trietilamina al 0,5 %) para proporcionar el compuesto del título (3,85 g). MS: [M+H]+ 987,4.
E) N-benzoil-1-(2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-(hidroxi(oxido)fosforanil)-beta-D-ribofuranosil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amina
Se disolvió N-benzoil-1-(5-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-((2-cianoetoxi)(diisopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranosil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amina (3,85 g) en acetonitrilo (30 ml), se agregaron 2,2,2-trifluoroacetato de piridina (0,904 g) y agua (0,141 ml) a esta a temperatura ambiente, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. A la solución de reacción se le agregó 2-metilpropan-2-amina (9 ml) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, al residuo se le agregó 1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-ol (25 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3,5 horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, se le agregó ácido acético (20 ml) y agua (5 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (1,85 g). MS: [M+H]+ 549,1.
F) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(4-benzamido-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)-2-(2-isobutilamido-6-oxo-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo
N-benzoil-1-(2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-(hidroxi(oxido)fosforanil)-beta-D-ribofuranosil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amina (300 mg) y 5'-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-3'-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2'-O-((2-cianoetoxi)(diisopropilamino)fosfino)-N-isobutirilguanosina (637 mg) se sometieron a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro (tres veces) y se suspendió en acetonitrilo anhidro (6 ml). A esto se le agregó 2,2,2-trifluoroacetato de piridina (264 mg) y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1 hora. Se agregó a esta una solución acuosa de hidroperóxido de terc-butilo al 70 % (0,225 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora más. La mezcla de reacción se inactivó con tiosulfato de sodio (400 mg) y agua (1,5 ml) y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se disolvió en ácido acético al 80 % (5 ml) y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y tolueno. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (469 mg). MS: [M+H]+ 1131,4.
G) N-(1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-10-(2-cianoetoxi)-2-hidroxi-7-(2-(isobutirilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)benzamida
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(4-benzamido-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)-2-(2-isobutilamido-6-oxo-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (469 mg) se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y piridina anhidra, y se suspendió en piridina anhidra (10 ml). A esto se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (268 mg) y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 15 minutos. Se agregaron a esta agua (1 ml) y yodo (158 mg), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 13 minutos adicionales. La mezcla de reacción se inactivó con tiosulfato de sodio (170 mg) y agua (0,5 ml), el disolvente se evaporó a presión reducida y el residuo se sometió a deshidratación azeotrópica con tolueno. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (419 mg). MS: [M+H]+ 1129,3.
H) 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(4-amino-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)-15,16-bis((tercbutil(dimetil)silil)oxi)-2,10-dihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona
N-(1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-Bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-10-(2-cianoetoxi)-2-hidroxi-7-(2-(isobutirilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)benzamida (419 mg) se disolvió en una solución de metilamina etanol al 33 % (10,0 ml) y la solución se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 18,5 horas. Se le agregó una solución de metilamina etanol al 33 % (5 ml), la mezcla se agitó durante 3 horas adicionales y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se disolvió en solución de metilamina etanol al 33 % (10,0 ml), la solución se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (173 mg). MS: [M+H]+ 902,3.
I) Sal de di-trietilamina de 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(4-amino-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)-2,10,15,16-tetrahidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona
A 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(4-amino-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)-15,16-bis((tercbutil(dimetil)silil)oxi)-2,10-dihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (173 mg) se le agregó triofluorhidrato de trietilamina (0,625 ml), y la mezcla se agitó a 50 °C durante 3 horas. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se neutralizó con solución de bicarbonato de trietilamonio acuoso 1 M y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM/acetonitrilo) y el sólido obtenido se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (123 mg). 1H NMR (300 MHz, D2O) 61,25 (18H, t, J = 7,4 Hz), 3,17 (12H, q, J = 7,2 Hz), 3,87-4,10 (1H, m), 4,11-4,30 (3H, m), 4,32-4,45 (2H, m), 4,52 (1H, d, J = 3,8 Hz), 4,65 (1H, d, J = 4,2 Hz), 4,97-5,10 (1H, m), 5,79 (1H, brs), 5,94 (2H, d, J = 8,3 Hz), 7,10 (1H, d, J = 6,8 Hz), 7,68-7,78 (1H, m), 7,83 (1H, s), 7.94-8,26 (1H, m). 31P NMR (121 MHz, D2O) 6-1,36.
Ejemplo 12 (Para referencia)
Síntesis de sal de di-trietilamina de 8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aS,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona (isómero óptico)
Figure imgf000092_0001
A) 8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona
A una solución de 4-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-1H-pirazol-5-amina (17,3 g) y carbonato de potasio (24,6 g) en DMF (200 ml) se le agregó clorhidrato formimidato de etilo (19,5 g) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. A la mezcla de reacción se le agregó carbonato de dietilo (126 g) a temperatura ambiente y la mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 1 hora. A la mezcla de reacción se le agregó una solución de etóxido de etanol sódico al 20 % (60,6 g) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se neutralizó con una solución de ácido acético a temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con agua y salmuera saturada, se secó en sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para proporcionar el compuesto del título (5,79 g). MS: [M+H]+ 539,1.
B) 8-((2S,3R,4S,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona
Una solución de 8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona (3,49 g) e hidróxido de paladio (1,37 g, Pd al 10 %) en metanol (30 ml) se agitó en una atmósfera de hidrógeno durante la noche a temperatura ambiente. El catalizador se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto del título (1,72 g). MS: [M+H]+ 269,0.
C) 8-((2S,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona
A una solución de 8-((2S,3R,4S,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona (1,72 g) en piridina deshidratada (30 ml) se le agregó cloruro de 4,4'-dimetoxitritilo (2,39 g) en enfriamiento con hielo. Se agitó la mezcla de reacción bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 2 horas. A la mezcla de reacción se le agregó cloruro de 4,4'-dimetoxitritilo (0,217 g) en enfriamiento con hielo. Se agitó la mezcla de reacción bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 3 horas. A la mezcla de reacción se le agregó cloruro de 4,4'-dimetoxitritilo (0,217 g) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla de reacción bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 30 minutos. A la mezcla de reacción se le agregó solución de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado a temperatura ambiente y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con agua y salmuera saturada, se secó en sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (1,62 g). MS: [M-H]- 569,1.
D) 8-((2S,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-4-hidroxitetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona
Se agregaron terc-butildimetilclorosilano (536 mg) y nitrato de plata(I) (604 mg) a una solución de 8-((2S,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona (1,69 g) y piridina deshidratada (1,20 ml) en THF deshidratado (20 ml) a temperatura ambiente en una atmósfera de argón. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 8 horas y a la mezcla de reacción se le agregó tercbutildimetilclorosilano (89 mg) y nitrato de plata(I) (101 mg) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La sustancia insoluble se eliminó mediante filtración y se lavó con acetato de etilo. Al filtrado se le agregó solución de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con salmuera saturada, se secó en sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (740 mg). MS: [M-H]- 683,1.
E) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4S,5S)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-(4-oxo-3,4-dihidropirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)tetrahidrofuran-3-ilo
Se agregó fosfito de difenilo (0,41 ml) a una solución de 8-((2S,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-4-hidroxitetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona (740 mg) en piridina (10 ml) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla de reacción bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1 horas. A la mezcla de reacción se le agregó agua (20 ml) y la mezcla se agitó durante 1 hora. La mezcla de reacción se vertió en agua a temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con agua y salmuera saturada, se secó en sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (300 mg). MS: [M-H]- 747,1.
F) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4S,5S)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)-5-(4-oxo-3,4-dihidropirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)tetrahidrofuran-3-ilo
A hidrogenofosfonato de (2R,3R,4S,5S)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-(4-oxo-3,4-dihidropirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)tetrahidrofuran-3-ilo (300 mg) se le agregó una solución de ácido acético acuoso al 80 % (10 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (170 mg). MS: [M+H]+ 447,0.
G) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4S,5S)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-2-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforotioil)oxi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-5-(4-oxo-3,4-dihidropirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)tetrahidrofuran-3-ilo
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4S,5S)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)-5-(4-oxo-3,4-dihidropirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)tetrahidrofuran-3-ilo (190 mg) y N-benzoil-5'-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-3'-O-(tercbutil(dimetil)silil)-2'-O-((2-cianoetil)(diisopropilamino)fosfino)adenosina (505 mg) se sometieron a un proceso azeotrópico tres veces con acetonitrilo deshidratado. Al residuo se le agregó acetonitrilo deshidratado (5 ml) y 2,2,2-trifluoroacetato de piridina (164 mg). La mezcla de reacción se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 10 minutos, se agregó ((dimetilamino-metiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-thiona (96 mg) a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. A la mezcla de reacción se le agregó una solución acuosa (0,2 ml) de tiosulfato de sodio (0,2 g) y la mezcla se concentró a presión reducida. Al residuo se le agregó una solución de ácido acético al 80 % (5 ml), la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y la mezcla de reacción se sometió a un proceso azeotrópico dos veces con acetonitrilo. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (260 mg). MS: [M+H]+ 1063,2.
H) 8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aR,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona (isómero óptico)
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4S,5S)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-2-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforotioil)oxi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-5-(4-oxo-3,4-dihidropirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)tetrahidrofuran-3-ilo (260 mg) se sometió dos veces a un proceso azeotrópico con acetonitrilo deshidratado. El residuo se sometió a un proceso azeotrópico una vez con piridina deshidratada. A una solución del residuo en piridina deshidratada (5 ml) se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (158 mg) y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 20 minutos. A la mezcla de reacción se le agregó agua (0,15 ml) y 3H-bezo[c][1,2]ditiol-3-ona (49,4 mg) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. A la mezcla de reacción se le agregó solución de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado a temperatura ambiente y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con solución de tiosulfato de sodio acuoso saturado y salmuera saturada, se secó en sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) y después se purificó mediante HPLC (L-column2 ODS, 50*150 mm, fase móvil: solución de acetato de amonio acuoso 5 mM/acetonitrilo) para proporcionar fracciones y la fracción que tenía el mayor tiempo de retención se concentró a presión reducida. Al residuo se le agregó una solución de metilamina etanol al 33 % (5 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (25 mg). MS: [M+H]+ 920,2.
I) Sal de di-trietilamina de 8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aS,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona (isómero óptico)
A una solución de 8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aR,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((tercbutil(dimetil)silil)oxi)-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona (isómero óptico) (25 mg) en metanol (2 ml) se le agregó triofluorhidrato de trietilamina (0,177 ml), a temperatura ambiente y la mezcla se agitó a 50 °C durante 2 horas. A la mezcla de reacción se le agregó etoxitrimetilsilano (5 ml) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante 10 minutos. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM/acetonitrilo) y el producto obtenido se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (13 mg). 1H NMR (300 MHz, D2O) ó 4,02-4,19 (3H, m), 4,32-4,42 (2H, m), 4,44-4,49 (1H, m), 4,59-4,64 (1H, m), 4,76-4,80 (1H, m), 4,95-5,04 (1H, m), 5,16 (1H, d, J = 4,9 Hz), 5,31 (1H, ddd, J = 9,8, 8,7, 4,2 Hz), 6,22 (1H, d, J = 8,3 Hz), 7,99 (1H, s), 8,00 (1H, s), 8,14 (1H, s), 8,49 (1H, s).
Ejemplo 13 (Para referencia)
Síntesis de sal de di-trietilamina de 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aS,16R)-14-(4-aminopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2,10,15,16-tetrahidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona
Figure imgf000094_0001
A) Dibenzoato de (2S,3S,4R,5R)-2-(4-(N-benzoilbenzamido)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-5-((benzoiloxi)metil)tetrahidrofuran-3,4-diilo
A una solución de (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3,4-diol (2,98 g) y N,N-dimetil-4-aminopiridina (1,36 g) en piridina deshidratada (50 ml) se le agregó cloruro de benzoilo (12,5 g) en enfriamiento con hielo. Se agitó la mezcla de reacción bajo una atmósfera de argón durante 1 hora. A la mezcla de reacción se le agregó cloruro de benzoilo (3,13 g) en enfriamiento con hielo. Se agitó la mezcla de reacción bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 2 horas. Se agregó agua a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con agua y salmuera saturada, se secó en sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para proporcionar el compuesto del título (6,51 g). MS: [M+H]+ 788,2.
B) N-(8-((2S,3R,4S,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)benzamida
A una solución de dibenzoato de (2S,3S,4R,5R)-2-(4-(N-benzoilbenzamido)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-5-((benzoiloxi)metil)tetrahidrofuran-3,4-diilo (6,51 g) en un disolvente mixto de piridina (50 ml) y etanol (25 ml) se le agregó una solución de hidróxido de sodio acuoso 1 M (49,6 ml) en enfriamiento con hielo y la metilo se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. A la mezcla de reacción se le agregó una resina de intercambio de cationes ácida fuerte DOWEX TM 50Wx4 100-200 (40 g) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. El sólido se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. Al residuo se le agregó metanol y el sólido obtenido se recogió mediante filtración para proporcionar el compuesto del título (1,82 g). MS: [M+H]+ 372,1.
C) N-(8-((2S,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)benzamida
A una solución de N-(8-((2S,3R,4S,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)benzamida (1,89 g) en piridina deshidratada (30 ml) se le agregó cloruro de 4,4'-dimetoxitritilo (517 mg) en enfriamiento con hielo. Se agitó la mezcla de reacción bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 3 horas. A la mezcla de reacción se le agregó cloruro de 4,4'-dimetoxitritilo (517 mg) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante la noche en una atmósfera de argón a temperatura ambiente. A la mezcla de reacción se le agregó cloruro de 4,4'-dimetoxitritilo (1035 mg) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1 hora. A la mezcla de reacción se le agregó solución de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado a temperatura ambiente y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con salmuera saturada, se secó en sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (2160 mg). MS: [M-H]- 672,1.
D) N-(8-((2S,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-4-hidroxitetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)benzamida
A una solución de N-(8-((2S,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)benzamida (2,16 g) en THF deshidratado (30 ml) se le agregó nitrato de plata(I) (708 mg) y piridina deshidratada (1,22 g). La mezcla de reacción se agitó en una atmósfera de argón durante 15 minutos y se le agregó terc-butildimetilclorosilano (628 mg). Se agitó la mezcla de reacción bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 2 horas. A la mezcla de reacción se le agregó nitrato de plata(I) (163 mg), tercbutildimetilclorosilano (145 mg) y piridina deshidratada (507 mg) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante la noche en una atmósfera de argón a temperatura ambiente. A la mezcla de reacción se le agregó nitrato de plata(I) (436 mg), terc-butildimetilclorosilano (387 mg) y piridina deshidratada (761 mg) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla de reacción bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 2 horas. A la mezcla de reacción se le agregó solución de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado a temperatura ambiente y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con salmuera saturada, se secó en sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (acetato de etilo/hexano) para proporcionar el compuesto del título (980 mg). MS: [M-H]- 786,2.
E) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4S,5S)-5-(4-benzamidopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil )tetra hidrofuran-3-ilo
N-(8-((2S,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-4-hidroxitetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)benzamida (980 mg) se sometió dos veces a un proceso azeotrópico con tolueno deshidratado y se disolvió en DMF deshidratada (10 ml). A la mezcla de reacción se le agregó 3-((bis(diisopropilamino)fosfino)oxi)propanonitrilo (487 mg), 1H-tetrazol (87 mg) y 1-metil-1H-imidazol (51 mg). Se agitó la mezcla de reacción bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 5 horas. A la mezcla de reacción se le agregó solución de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado a temperatura ambiente y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. El extracto se lavó con salmuera saturada, se secó en sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo que contenía 0,5 % de trietilamina/hexano). A una solución de la mezcla obtenida en acetonitrilo (10 ml) se le agregó agua (0,04 ml) y 2,2,2-trifluoroacetato de piridina (256 mg) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, se le agregó terc-butilamina (5,38 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. El disolvente se evaporó a presión reducida. Al residuo se le agregó una solución de ácido acético acuoso al 80 % (5,4 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (530 mg). MS: [M+H]+ 550,2.
F) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4S,5S)-5-(4-benzamidopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)-2-(2-isobutilamido-6-oxo-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo
Una mezcla de hidrogenofosfonato de (2R,3R,4S,5S)-5-(4-benzamidopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofu ran-3-il (240 mg) y 5'-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-3'-O-(tercbutil(dimetil)silil)-2'-O-((2-cianoetil)(diisopropilamino)fosfino)-N-isobutirilguanosina (635 mg) se sometió a un proceso azeotrópico tres veces con acetonitrilo deshidratado. Al residuo se le agregó una solución de acetonitrilo deshidratado (5 ml), THF deshidratado (2,5 ml) y 5-(etiltio)-2H-tetrazol (171 mg) (que se sometió con anterioridad a un proceso azeotrópico con acetonitrilo) en acetonitrilo deshidratado (2,5 ml). Se agitó la mezcla de reacción bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 2 horas. Se agregó a esta una solución de hidroperóxido de terc-butilo acuoso al 70 % (0,179 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. A la mezcla de reacción se le agregó una solución acuosa (0,12 ml) de tiosulfato de sodio pentahidratado (0,12 g) y la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. Al residuo se le agregó una solución de ácido acético acuoso al 80 % (3 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El residuo se sometió a un proceso azeotrópico dos veces con acetonitrilo. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar un producto bruto (420 mg) que contenía el compuesto del título. MS: [M+H]+ 1132,3.
G) N-(8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-10-(2-cianoetoxi)-2-hidroxi-7-(2-((2-metilpropanoil)amino)-6-oxo-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)benzamida
Al producto bruto que contenía (430 mg) hidrogenofosfonato de (2R,3R,4S,5S)-5-(4-benzamidopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)-2-(2-isobutilamido-6-oxo-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo se sometió a un proceso azeotrópico dos veces con acetonitrilo deshidratado. El residuo obtenido se sometió a un proceso azeotrópico una vez con piridina deshidratada. A una solución del residuo obtenido en piridina deshidratada (3 ml) se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (245 mg) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de argón durante 10 minutos. A la mezcla de reacción se le agregó agua (0,239 ml) y yodo (125 mg), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. A la mezcla de reacción se le agregó una solución acuosa (0,4 ml) de tiosulfato de sodio pentahidratado (245 mg) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se le agregó tolueno y la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar un producto bruto (553 mg) que contenía el compuesto del título. MS: [M+H]+ 1130,4.
H) Sal de di-trietilamina de 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aS,16R)-14-(4-aminopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2,10,15,16-tetrahidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona
Una mezcla de N-(8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-10-(2-cianoetoxi)-2-hidroxi-7-(2-((2-metilpropanoil)amino)-6-oxo-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)benzamida (553 mg) y solución de metilamina etanol al 33 % (20 ml) se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) y entonces se purificó mediante HPLC (ODS, fase móvil: agua/acetonitrilo (que contenía acetato de amonio 5 mM)) para proporcionar una fracción, y la fracción obtenida se concentró a presión reducida. A una solución del residuo obtenido en metanol (3 ml) se le agregó trifluorhidrato de trietilamina (0,072 ml) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó a 50 °C durante 4 horas. A la mezcla de reacción se le agregó trifluorhidrato de trietilamina (0,181 ml) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante la noche a 50 °C. A la mezcla de reacción se le agregó trifluorhidrato de trietilamina (0,181 ml) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó a 50 °C durante 5 horas. A la mezcla de reacción se le agregó etoxitrimetilsilano (1,034 ml) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante 5 minutos. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM/acetonitrilo) y el producto obtenido se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (10 mg). 1H NMR (300 MHz, D2O) 53,99-4,08 (1H, m), 4,11-4,31 (4H, m), 4,34-4,42 (1H, m), 4,52-4,60 (2H, m), 4,94-5,05 (1H, m), 5,27-5,35 (1H, m), 5,51-5,62 (1H, m), 5,94 (1H, d, J = 8,3 Hz), 7.89 (1H, s), 8,07 (1H, s), 8,08 (1H, s).
Ejemplo 14
Sal de disodio de 7-((2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-hidroxi-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
Figure imgf000097_0001
A) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforotioil)oxi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)tetrahidrofuran-3-ilo
7-(3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2-O-(hidroxi(oxido)fosforanil)-beta-D-ribofuranosil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (8,89 g) y N-benzoil-5'-O-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metil)-3'-O-((2-cianoetoxi)(diisopropilamino]fosfino)-2'-deoxi-2'-fluoroadenosina (18,5 g) se sometieron a un proceso azeotrópico tres veces con acetonitrilo deshidratado. Al residuo se le agregó acetonitrilo anhidro (40 ml), THF anhidro (20 ml) y una solución de acetonitrilo anhidro (40 ml) de 5-(etilsulfanil-2H-tetrazol) (7,49 g). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos en una atmósfera de argón, se agregó ((dimetilaminometiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tiona (4,33 g) a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. A la mezcla de reacción se le agregó una solución acuosa (5 ml) que contenía tiosulfato de sodio (5,24 g) y la mezcla se concentró a presión reducida. Al residuo se le agregó una solución de ácido acético al 80 % (100 ml), la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y la mezcla de reacción se sometió a un proceso azeotrópico con tolueno. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (14,3 g). MS: [M+H]+ 968,3.
B) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-2-(2-cianoetoxi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10-oxido-10-sulfanil-2-sulfidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamida (isómero óptico)
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforotioil)oxi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)tetrahidrofuran-3-ilo (1,07 g) se sometió a un proceso azeotrópico tres veces con deshidratación de piridina. A una solución del residuo en piridina anhidra (150 ml) se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (4,66 g) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos en una atmósfera de argón. A la mezcla de reacción se le agregó 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-ona (1,46 g) y agua (4,55 ml) a temperatura ambiente, y la mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos. El análisis de LCMS de la mezcla de reacción mostró cuatro picos con la misma masa ([M+H]+ 971,1), lo que indica que se formaron cuatro diastereómeros. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) y entonces se purificó mediante HPLC (L-column2 ODS, 50*150 mm, fase móvil: solución de acuoso de amonio acuoso 5 mM/acetonitrilo). La fracción que tenía el mayor tiempo de retención se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto del título (379 mg). MS: [M+H]+ 982,1.
C) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-16-((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-15-fluoro-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
Una solución de metilamina metanol al 40 % (10 ml) de N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-((tercbutM(dimetil)silil)oxi)-2-(2-cianoetoxi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-M)-10-oxido-10-sulfanil-2-sulfidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamida (isómero óptico) (379 mg) se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas en una atmósfera de argón. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (319 mg). MS: [M+H]+ 825,1.
D) Sal de di-trietilamina de 7-((2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-hidroxi-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
A una solución de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-16-((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-15-fluoro-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico) (319 mg) en metanol (1 ml) se le agregó triofluorhidrato de trietilamina (2,52 ml) a temperatura ambiente, y la mezcla se agitó a 50 °C durante 3 horas, y se diluyó en metanol (10 ml). A la mezcla de reacción se le agregó etoxitrimetilsilano (12 ml) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante 10 minutos. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se diluyó con metanol y la mezcla se concentró nuevamente a presión reducida. Al residuo se le agregó solución amortiguadora de acetato de trietilamonio, el sólido se recogió mediante filtración y se lavó con acetonitrilo para proporcionar un sólido blanco. El sólido blanco obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (ODS, solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM/acetonitrilo). Por otro lado, el filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) y cromatografía en columna de gel de sílice (ODS, solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM/acetonitrilo). La fracción que comprendía el compuesto del título obtenida mediante cromatografía en columna de gel de sílice (ODS, solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM/acetonitrilo) se concentró a presión reducida y el residuo se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (195 mg). MS: [M+H]+ 711,0.
E) Sal de disodio de 7-((2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-hidroxi-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
Se hizo pasar agua desionizada (60 ml) a través de una columna preparada mediante empaque al colocar resina de intercambio de cationes 50W-X8 AG (nombre comercial) (100-200 mesh, 3,9 g) en una columna vacía. Entonces, se hicieron pasar una solución de hidróxido de sodio acuoso 1 M (36 ml) y agua desionizada (68 ml) a través de la resina. Se hizo pasar agua desionizada (15 ml) que contenía sal de di-trietilamina de 7-((2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-hidroxi-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (195 mg) a través de la resina después del pretratamiento mencionado anteriormente, y se hizo pasar agua desionizada (19 ml) a través de la resina, y la solución acuosa obtenida se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (165 mg). 1H NMR (300 MHz, D2O) ó 4,00-4,08 (1H, m), 4,22-4,45 (4H, m), 4,50­ 4,57 (1H, m), 4,81-4,84 (1H, m), 4,98-5,14 (2H, m), 5,40-5,61 (1H, m), 6,33-6,43 (2H, m), 7,28 (1H, d, J = 1,9 Hz), 7,94 (1H, s), 8,05 (1H, s), 8,21 (1H, s). 31P NMR (121 MHz, D2O) ó 52,1, 55,3.
Ejemplo 15
Síntesis de sal de di-trietilamina de 7-((SR,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,16-dihidroxi-2,10-dioxido-10-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
Figure imgf000099_0001
A) 5-fluoro-7-((6aR,8R,9R,9aS)-9-hidroxi-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
A una solución de 7-((2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4(7H)-ona (37,9 g) en piridina (760 ml) se le agregó 1,3-dicloro-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxano (44,4 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas en una atmósfera de argón. El disolvente se evaporó a presión reducida y se le agregó acetato de etilo y agua al residuo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se diluyó con éter isopropílico (IPE) y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. El sólido se recogió mediante filtración para proporcionar el compuesto del título (32,3 g). El licor madre se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (hexano/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (13,3 g). MS: [M+H]+ 528,2.
B) Diisopropilfosforamidita de 2-cianoetil (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ilo
5-fluoro-7-((6aR,8R,9R,9aS)-9-hidroxi-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (20 g) se sometió tres veces a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y se disolvió en DMF anhidra (100 ml). A esta solución se le agregó 1H-tetrazol (2,79 g), 1-metil-1H-imidazol (1,65 ml) y 3-((bis(diisopropilamino)fosfino)oxi)propanonitrilo (24,1 ml), y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente en una atmósfera de argón, se vertió en solución de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó sucesivamente con solución de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/hexano, que contenía trietilamina al 0,5 %) para proporcionar el compuesto del título (20,8 g) como una mezcla de diastereómeros. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 60,91-1,19 (40H, m), 2,69-2,82 (2H, m), 3,46-3,73 (2H, m), 3,78-4,12 (5H, m), 4,47-4,61 (2H, m), 6,02-6,12 (1H, m), 7,14-7.23 (1H, m), 7,84-7,91 (1H, m), 12,00-12,40 (1H, br).
C) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((((2-cianoetoxi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)oxi)fosforotioil)oxi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-ilo
Una mezcla de hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il (3,48 g) y 2-cianoetil diisopropilfosforamidita de (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ilo (7,82 g) se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y se suspendió en acetonitrilo anhidro (25 ml) y THF anhidro (15 ml). 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazol (3,11 g), que se sometió anteriormente a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro, se disolvió en acetonitrilo anhidro (6 ml), la solución se agregó a la suspensión mencionada anteriormente y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora en una atmósfera de argón. A esto se le agregó ((dimetilaminometiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tiona (3,27 g) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos adicionales. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (6,73 g). MS: [M+H]+ 1096,2.
D) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((((2-cianoetoxi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)fosforotioil)oxi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-ilo
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((((2-cianoetoxi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)oxi)fosforotioil)oxi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-ilo (6,73 g) se disolvió en un disolvente mixto de THF (74,8 ml) y agua (16,6 ml) y la solución se enfrió con hielo. A esta se le agregó ácido trifluoroacético (16,6 ml) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 2 horas. La mezcla de reacción se inactivó con una solución acuosa de bicarbonato de sodio (25,8 g) y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (6,43 g). MS: [M+H]+ 1114,2.
E) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-cianoetoxi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroxi-16-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloxanil)oxi)-2-oxido-10-sulfidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamida
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((((2-cianoetoxi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)fosforotioil)oxi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-ilo (6,43 g) se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y piridina anhidra, y se suspendió en piridina anhidra (130 ml). A esto se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (3,73 g) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora en una atmósfera de argón. Se agregaron a esta agua (5,17 ml) y yodo (1,90 g), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora adicional. La mezcla de reacción se inactivó con tiosulfato de sodio (7,16 g) y agua (3,6 ml) y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (4,60 g). MS: [M+H]+ 1112,2.
F) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2-hidroxi-16-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-2,10-dioxido-10-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
A N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-cianoetoxi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroxi-16-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloxanil)oxi)-2-oxido-10-sulfidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamida (6,42 g) se le agregó una solución de metilamina metanol al 40 % (30 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora en una atmósfera de argón. La mezcla obtenida se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo). El residuo obtenido se purificó mediante HPLC (L-column2 ODS, 50*150 mm, fase móvil: solución de acetato de amonio acuoso 5 mM/acetonitrilo), la fracción obtenida se concentró a presión reducida y el residuo se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (420 mg). MS: [M+H]+ 955,2.
G) Sal de di-trimetilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,16-dihidroxi-2,10-dioxido-10-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
A 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2-hidroxi-16-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-2,10-dioxido-10-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico, derivado de tR2) (420 mg) se le agregó triofluorhidrato de trietilamina (9,68 ml), y la mezcla se agitó a 50 °C durante 7,5 horas. A la mezcla de reacción se le agregó etoxitrimetilsilano (36,3 ml) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante 30 minutos. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM/acetonitrilo) y se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (298 mg). 1H NMR (300 MHz, D2O) 61,13-1,29 (16H, m), 3,12 (11H, q, J = 7,2 Hz), 3,99-4,29 (4H, m), 4,31-4,43 (2H, m), 4,50 (1H, d, J = 9,1 Hz), 4,81-5,08 (3H, m), 5,39-5,61 (1H, m) , 6,30-6,42 (2H, m), 7,24 (1H, d, J = 1,9 Hz), 7,92 (1H, s), 8,09 (1H, s), 8,19 (1H, s). 31P NMR (121 MHz, D2O) 652,2,1,63.
Ejemplo 16 (Para referencia)
Síntesis de sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,18-trihidroxi-2,10-dioxidohexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
Figure imgf000101_0001
A) Hidrogenofosfonato de (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cianoetoxi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)oxi)fosforil)oxi)metil)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptan-7-ilo
Hidrogenofosfonato de (1S,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-(hidroximetil)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptan-7-ilo (2,00 g) y 2-cianoetil diisopropilfosforamidita de (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ilo (4,23 g) se sometieron a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro (alrededor de 50 ml, tres veces) y se suspendieron en THF anhidro (16 ml). 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazol (1,75 g), que se sometió anteriormente a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro (alrededor de 30 ml, tres veces), se disolvió en acetonitrilo anhidro (16 ml), la solución se agregó a la suspensión mencionada anteriormente y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 hora en una corriente de argón. Se agregó a esta una solución acuosa de hidroperóxido de terc-butilo al 70 % (1,86 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos más. La mezcla de reacción se inactivó con sodio de tiosulfato de sodio acuoso al 10 % (13 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió sucesivamente a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo (alrededor de 80 ml) y tolueno (alrededor de 80 ml), el residuo se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) y la fracción objetivo se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto del título (5,36 g) como un sólido blanco amorfo (una mezcla de dos diastereómeros). MS:
[M+H]+ 1090,2.
B) Hidrogenofosfonato de (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cianoetoxi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)fosforil)oxi)metil)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptan-7-ilo
Hidrogenofosfonato de (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cianoetoxi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)oxi)fosforil)oxi)metil)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptan-7-ilo (5,36 g) se disolvió en un disolvente mixto de THF (60 ml) y agua (13 ml) y la solución se enfrió con hielo. A esta se le agregó ácido trifluoroacético (13,18 ml) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 4 horas. La mezcla de reacción se inactivó con una solución de bicarbonato de sodio (20,65 g) en agua (250 ml) poco a poco, se saturó con NaCl y se extrajo con acetato de etilo-THF (3:1). La capa orgánica se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) y la fracción objetivo se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto del título (3,06 g) como un sólido blanco amorfo (una mezcla de dos diastereómeros). MS: [M+H]+ 1108,3.
C) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-cianoetoxi)-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroxi-18-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloxanil)oxi)-2,10-dioxidohexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14(12H)-il)-9H-purin-6-il)benzamida
Hidrogenofosfonato de (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cianoetoxi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro 4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)fosforil)oxi)metil)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptan-7-ilo (3,06 g) se sometió sucesivamente a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro (alrededor de 100 ml) y piridina anhidra (alrededor de 100 ml), y se disolvió en piridina anhidra (75 ml). A esto se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (1,78 g) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora en una corriente de argón. Se agregaron a esta agua (1,74 ml) y yodo (911 mg), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos adicionales. La mezcla de reacción se inactivó con sodio de tiosulfato de sodio acuoso al 10 % (7,5 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (100 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo-THF (3:1). La capa orgánica se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. Se le agregó tolueno (alrededor de 100 ml) y la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) y la fracción objetivo se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto del título (2,38 g) como un sólido blanco amorfo (una mezcla de dos diastereómeros). MS: [M+H]+ 1106,3.
D) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10-dihidroxi-18-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloxanil)oxi)-2,10-dioxidohexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-cianoetoxi)-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroxi-18-((3-hidroxi-1, 1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloxanil)oxi)-2,10-dioxidohexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14(12H)-il)-9H-purin-6-il)benzamida (2,38 g) se disolvió en una solución de metilamina metanol al 40 % (40 ml), la solución se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. Se le agregó tolueno (alrededor de 80 ml) y la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) y la fracción objetivo se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto del título (756 mg) como un sólido blanco. MS: [M+H]+ 949,2.
E) Sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,18-trihidroxi-2,10-dioxidohexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10-dihidroxi-18-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloxanil)oxi)-2,10-dioxidohexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (756 mg) se disolvió en metanol (2 ml) y trietilamina (0,8 ml), se le agregó trifluorhidrato de trietilamina (3,90 ml) y la mezcla se agitó a 50 °C durante 2 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar hasta temperatura ambiente, se neutralizó con solución de hidrogenocarbonato de trietilamonio acuoso 1 M (110 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se sometió cromatografía en columna ODS (acetonitrilo/solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM). La fracción objetivo se concentró a presión reducida y el residuo se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (504 mg) como un sólido blanco. 1H NMR (300 MHz, D2O) 61,20 (18H, t, J = 7,4 Hz), 3,12 (12H, q, J = 7,2 Hz), 4,02-4,16 (4H, m), 4,23-4,37 (3H, m), 4,55 (1H, d, J = 4,5 Hz), 4,82-4,93 (3H, m), 6,12 (1H, s), 6,39 (1H, dd, J = 8,3, 1,5 Hz), 7,19 (1H, d, J = 1,9 Hz), 7,96 (1H, s), 8,11 (1H, s), 8,17 (1H, s). 31P NMR (121 MHz, D2O) 6 -1,91, -1,80,
Ejemplo 17 (Para referencia)
Síntesis de sal de di-trimetilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,18-dihidroxi-2,10-dioxido-2-sulfanilhexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
Figure imgf000103_0001
A) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-cianoetoxi)-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-18-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-2,10-dioxido-2-sulfanilhexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14(12H)-il)-9H-purin-6-il)benzamida
Hidrogenofosfonato de (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cianoetoxi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)fosforil)oxi)metil)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptan-7-ilo (3,71 g) se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y piridina anhidra, y se suspendió en piridina anhidra (70 ml). A esto se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (2,15 g) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora en una atmósfera de argón. Se agregó 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-ona (674 mg), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora adicional. A la mezcla de reacción se le agregó solución de hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (2,78 g). MS: [M+H]+ 1122,2.
B) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10-hidroxi-18-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-2,10-dioxido-2-sulfanilhexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-cianoetoxi)-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-18-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-2,10-dioxido-2-sulfanilhexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14(12H)-il)-9H-purin-6-il)benzamida (2,78 g) se disolvió en una solución de metilamina metanol al 40 % (50 ml), la solución se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora en una atmósfera de argón y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo). El residuo obtenido se purificó mediante HPLC (L-column2 ODS, 50*150 mm, fase móvil: solución de acetato de amonio acuoso 5 mM/acetonitrilo) para proporcionar el compuesto del título (30 mg). MS: [M+H]+ 965,3.
C) Sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,18-dihidroxi-2,10-dioxido-2-sulfanilhexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
A 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10-hidroxi-18-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-2,10-dioxido-2-sulfanilhexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico) (30 mg) se le agregaron trifluorhidrato de trietilamina (0,70 ml) y metanol (1 ml), y la mezcla se agitó a 50 °C durante 3 horas. A la solución de reacción se le agregó etoxi(trimetil)silano (2,5 ml), la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM/acetonitrilo) y el sólido obtenido se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (25 mg). 1H NMR (300 MHz, D2O) 51,19 (18H, t, J = 7,4 Hz), 3,11 (12H, q, J = 7.2 Hz), 3,99-4,09 (3H, m), 4,09-4,17 (2H, m), 4,22-4,29 (1H, m), 4,34-4,38 (1H, m), 4,50-4,54 (2H, m), 4,90-4,96 (1H, m), 5,06 (1H, s), 6,11 (1H, s), 6,35 (1H, dd, J = 8,3, 1,1 Hz), 7,19 (1H, d, J = 2,3 Hz), 7.94 (1H, s), 8,08 (1H, s), 8,16 (1H, s). 31P NMR (121 MHz, D2O) 555,76, -1,56.
Ejemplo 18 (Para referencia)
Síntesis de sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,18-dihidroxi-2,10-dioxido-10-sulfanilhexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
Figure imgf000104_0001
A) Hidrogenofosfonato de (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cianoetoxi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)oxi)fosforotioil)oxi)metil)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptan-7-ilo
Una mezcla de hidrófenofosfonato de (1S,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-(hidroximetil)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptan-7-ilo (3,0 g) y 2-cianoetil diisopropilfosforamidita de (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ilo (5,86 g) se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y se suspendió en THF anhidro (25 ml). 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazol (2,62 g), que se sometió anteriormente a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro, se disolvió en acetonitrilo anhidro (25 ml), la solución se agregó a la suspensión mencionada anteriormente y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente en una atmósfera de argón. A esto se le agregó ((dimetilaminometiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tiona (2,75 g) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos adicionales. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (4,96 g). MS: [M+H]+ 1106,3.
B) Hidrogenofosfonato de (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cianoetoxi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)fosforotioil)oxi)metil)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptan-7-ilo
Hidrogenofosfonato de (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cianoetoxi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)oxi)fosforotioil)oxi)metil)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptan-7-ilo (4,96 g) se disolvió en un disolvente mixto de THF (60 ml) y agua (12 ml) y la solución se enfrió con hielo. A esta se le agregó ácido trifluoroacético (12,1 ml) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se inactivó con una solución de bicarbonato de sodio (18,8 g) en agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo-THF (3:1). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (3,77 g). MS: [M+H]+ 1124,2.
C) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-cianoetoxi)-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroxi-18-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-2-oxido-10-sulfidohexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14(12H)-il)-9H-purin-6-il)benzamida
Hidrogenofosfonato de (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cianoetoxi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)fosforotioil)oxi)metil)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptan-7-ilo (3,77 g) se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y piridina anhidra, y se suspendió en piridina anhidra (70 ml). A esto se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (2,17 g) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora en una atmósfera de argón. Se agregaron a esta agua (2,12 ml) y yodo (1,11 g), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora adicional. La mezcla de reacción se inactivó con sodio de tiosulfato de sodio acuoso al 10 % (15 ml) y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (100 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo-THF (3:1). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (2,21 g). MS: [M+H]+ 1122,2.
D) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2-hidroxi-18-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloxanil)oxi)-2,10-dioxido-10-sulfanil-hexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
A N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-cianoetoxi)-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroxi-18-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-2-oxido-10-sulfidohexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14(12H)-il)-9H-purin-6-il)benzamida (2,38 g) se le agregó una solución de metilamina metanol al 40 % (40 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora en una atmósfera de argón. La mezcla obtenida se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo). El residuo obtenido se purificó mediante HPLC (L-column2 ODS, 50*150 mm, fase móvil: solución de acetato de amonio acuoso 5 mM/acetonitrilo), la fracción obtenida se concentró a presión reducida y el residuo se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (710 mg). MS: [M+H]+ 965,2.
E) Sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,18-dihidroxi-2,10-dioxido-10-sulfanilhexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
A una solución de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2-hidroxi-18-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloxanil)oxi)-2,10-dioxido-10-sulfanilhexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico, derivado de tR2) (710 mg) en metanol (20 ml) se le agregó trifluorhidrato de trietilamina (4,80 ml), y la mezcla se agitó a 50 °C durante 3 horas. A la mezcla de reacción se le agregó etoxitrimetilsilano (2,29 ml) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante 30 minutos. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM/acetonitrilo) y se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (530 mg). 1H NMR (300 MHz, D2O) 61,22 (18H, t, J = 7,2 Hz), 3,14 (12H, q, J = 7,6 Hz), 4,03-4,19 (4H, m), 4,25-4,41 (3H, m), 4,65 (1H, d, J = 4,5 Hz), 4,84 (1H, d, J= 4,5 Hz), 4,91 (1H, s), 4,99 (1H, ddd, J = 10,1, 8,2, 4,3 Hz), 6,14 (1H, s), 6,39 (1H, d, J = 7,9 Hz), 7,17 (1H, d, J = 2,3 Hz), 7,97 (1H, s), 8,11 (1H, s), 8,19 (1H, s). 31P NMR (121 MHz, D2O) 652,5,1,74.
Ejemplo 19
Síntesis de sal de di-trietilamina de 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,10,16-trihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (isómero óptico)
Figure imgf000106_0001
A) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-2-((((2-cianoetoxi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)oxi)fosforil)oxi)metil)-4-fluoro-5-(2-isobutilamido-6-oxo-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-ilo
Diisopropilfosforamidita de 2'-deoxi-2'-fluoro-3'-O-(hidroxi(oxido)fosforanil)-N-isobutirilguanosine (680 mg) y 2-cianoetil (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ilo (1535 mg) se sometieron a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro (tres veces) y se suspendieron en THF anhidro (10,00 ml). A la suspensión se le agregó una mezcla de 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazol (633 mg) (que se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro) y acetonitrilo anhidro (10 ml), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 7 horas en una atmósfera de argón. A la mezcla se le agregó una mezcla de 2-cianoetil diisopropilfosforamidita de (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ilo (1181 mg, 1,62 mmol) (que se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro) y acetonitrilo anhidro (3 ml), y una mezcla de 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazol (633 mg) (que se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro) y acetonitrilo anhidro (3 ml), y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente en una atmósfera de argón. A la mezcla de reacción se le agregó solución acuosa de hidroperóxido de terc-butilo al 70 % (0,674 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos adicionales. A la mezcla de reacción se le agregó una mezcla de tiosulfato de sodio pentahidratado (2817 mg) y agua (4 ml) y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (1260 mg). MS: [M+H]+ 1062,3.
B) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-2-((((2-cianoetoxi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)fosforil)oxi)metil)-4-fluoro-5-(2-isobutilamido-6-oxo-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-ilo
A una mezcla de hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-2-((((2-cianoetoxi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)oxi)fosforil)oxi)metil)-4-fluoro-5-(2-isobutilamido-6-oxo-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-ilo (1,26 g), THF (16 ml) y agua (4 ml) se le agregó ácido trifluoroacético (3,18 ml) a 0° C, y la mezcla se agitó durante 4 horas. A la mezcla se le agregó una solución acuosa de hidrogenocarbonato de sodio (4,98 g) y la mezcla se saturó con cloruro de sodio. La mezcla se extrajo con acetato de etilo/THF y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (1000 mg). MS: [M+H]+ 1080,3.
C) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-cianoetoxi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroxi-16-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-6-oxo-6,9-dihidro-1H-purin-2-il)-2-metilpropanamida
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-2-((((2-cianoetoxi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)fosforil)oxi)metil)-4-fluoro-5-(2-isobutilamido-6-oxo-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-ilo (1 g) se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y piridina anhidra, y se suspendió en piridina anhidra (24 ml). A esto se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (598 mg) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos en una atmósfera de argón. Se agregaron a esta agua (0,584 ml) y yodo (305 mg), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 25 minutos adicionales. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (800 mg). MS: [M+H]+ 1078,2.
D) 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,10-dihidroxi-16-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (isómero óptico)
A N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-cianoetoxi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroxi-16-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-6-oxo-6,9-dihidro-1H-purin-2-il)-2-metilpropanamida (800 mg, 0,74 mmol) se le agregó una solución de metilamina etanol al 33 % (30 ml), la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente en una atmósfera de argón y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo). El residuo obtenido se purificó mediante HPLC (L-column2 ODS, 50*150 mm, fase móvil: solución de acetato de amonio acuoso 5 mM/acetonitrilo) para proporcionar el compuesto del título (163,4 mg). MS: [M+H]+ 955,3.
E) Sal de di-trietilamina de 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,10,16-trihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (isómero óptico)
Una mezcla de 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,10-dihidroxi-16-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (isómero óptico) (21,4 mg), trifluorhidrato de trietilamina (0,183 ml) y metanol (0,07 ml) se agitó a 50 °C durante 1 hora en una atmósfera de argón. A la mezcla de reacción se le agregó etoxi(trimetil)silano (1,046 ml), la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora adicional y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM/acetonitrilo) y se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (4,6 mg). 1H NMR (300 MHz, D2O) 6 1,20 (18H, t, J = 7.3 Hz), 3,13 (12H, q, J = 7,3 Hz), 4,07 (2H, d, J = 11,1 Hz), 4,25 (2H, d, J = 7.6 Hz), 4,33-4,99 (4H, m), 5,04-5,25 (1H, m), 5,41­ 5,70 (1H, m), 6,17 (1H, d, J = 19,0 Hz), 6,38 (1H, d, J = 9,2 Hz), 7,32 (1H, s), 7,79 (1H, brs), 7,95 (1H, s). 31P NMR (121 MHz, D2O) 6 -1,61, -1,52.
Ejemplo 20
Síntesis de sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,15,16-tetrahidroxi-2-oxido-10-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
Figure imgf000108_0001
A) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-((((2-cianoetoxi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)oxi)fosforotioil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo
Una mezcla de hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il (3,0 g) y 2-cianoetil diisopropilfosforamidita de (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ilo (5,36 g) se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y se suspendió en acetonitrilo anhidro (25 ml) y THF anhidro (15 ml). 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazol (2,13 g), que se sometió anteriormente a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro, se disolvió en acetonitrilo anhidro (15 ml), la solución se agregó a la suspensión mencionada anteriormente y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente en una atmósfera de argón. A esto se le agregó ((dimetilaminometiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tiona (2,24 g) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora adicional. El disolvente se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (5,15 g). MS: [M+H]+ 1208,3.
B) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-((((2-cianoetoxi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)fosforotioil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-((((2-cianoetoxi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)oxi)fosforotioil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (5,15 g) se disolvió en un disolvente mixto de THF (48 ml) y agua (10 ml) y la solución se enfrió con hielo. A esta se le agregó ácido trifluoroacético (11,5 ml) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se inactivó con una solución de bicarbonato de sodio (12,5 g) en agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo-THF. La capa orgánica se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (5,13 g). MS: [M+H]+ 1226,4.
C) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-10-(2-cianoetoxi)-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroxi-16-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloxanil)oxi)-2-oxido-10-sulfidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamida
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-Benzamido-9H-purin-9-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-((((2-cianoetoxi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-oxo-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroxi-1,1,3,3 tetraisopropildisiloxanil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il)oxi)fosforotioil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (5,13 g) se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y piridina anhidra, y se suspendió en piridina anhidra (100 ml). A esto se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (2,70 g) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora en una atmósfera de argón. Se agregaron a esta agua (2,64 g) y yodo (1,38 g), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora adicional. La mezcla de reacción se inactivó con tiosulfato de sodio (5,19 g) y agua (2,64 g) y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (3,53 g). MS: [M+H]+ 1224,4.
D) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-(((1,1-dimetiletil)dimetilsilil)oxi)octahidro-2,10-dihidroxi-16-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetrakis(1-metiletil)disiloxanil)oxi)-2-oxido-10-sulfanil-5,8-metano-12H-furo[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
A N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-((terc-butil(dimetil)silil)oxi)-10-(2-cianoetoxi)-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroxi-16-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloxanil)oxi)-2-oxido-10-sulfidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamida (3,5 g) se le agregó una solución de metilamina metanol al 40 % (50 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora en una atmósfera de argón. La mezcla obtenida se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo). El residuo obtenido se purificó mediante HPLC (L-column2 ODS, 50*150 mm, fase móvil: solución de acetato de amonio acuoso 5 mM/acetonitrilo), la fracción obtenida se concentró a presión reducida y el residuo se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (210 mg). MS: [M+H]+ 1067,4.
E) Sal de di-trietilamina de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,15,16-tetrahidroxi-2-oxido-10-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico)
A una solución de 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-(((1,1-dimetiletil)dimetilsilil)oxi)octahidro-2,10-dihidroxi-16-((3-hidroxi-1,1,3,3-tetrakis(1-metiletil)disiloxanil)oxi)-2-oxido-10-sulfanil-5,8-metano-12H-furo[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico, derivado de tR2) (210 mg) en metanol (1,0 ml)-trietilamina (0,4 ml) se le agregó trifluorhidrato de trietilamina (0,962 ml), y la mezcla se agitó a 50 °C durante 2,5 horas. A la mezcla de reacción se le agregó etoxitrimetilsilano (4,59 ml) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante 30 minutos. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM/acetonitrilo) y se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (125 mg).
1H NMR (300 MHz, D2O) 61,13-1,28 (18H, m), 3,12 (12H, q, J = 7,2 Hz), 4,02-4,11 (1H, m), 4,13-4,25 (2H, m), 4,27­ 4,40 (2H, m), 4,46 (1H, d, J = 6,4 Hz), 4,73-4,79 (2H, m), 4,80-4,91 (1H, m), 5,02 (1H, td, J = 8,8, 4,2 Hz), 6,08 (1H, d, J = 1,7 Hz), 6,35 (1H, d, J = 8,1 Hz), 7,27 (1H, d, J = 1,7 Hz), 7,93 (1H, s), 8,14 (1H, s), 8,18 (1H, s). 31P NMR (121 MHz, D2O) 652,4; 1,21.
Ejemplo 23
Síntesis de sal de di-trietilamina de 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,15,16-trihidroxi-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il]-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómeros ópticos 1 y 2)
Figure imgf000110_0001
A) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-2-({[(2-cianoetoxi){[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il]oxi}fosforil]oxi}metil)tetrahidrofuran-3-ilo
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ilo (250 mg) y diisopropilfosforamidita de 2-cianoetilo (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ilo (359 mg) (Ejemplo 24, etapa C) se sometieron a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y se agregó a esto acetonitrilo anhidro (1,1 ml) y tetrahidrofurano anhidro (0,7 ml). A la mezcla se le agregó una solución de 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazol (175 mg) (que se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro) en acetonitrilo anhidro (0,75 ml), y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 2 horas. Se agregó a esta hidroperóxido de terc-butilo (5,5 mol/l) en nonano (0,25 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. La mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo y se agregó una solución de tiosulfato de sodio (345 mg) en agua (0,275 ml). La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 15 minutos y se concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/diclorometano) para proporcionar el compuesto del título (318 mg) como una mezcla de diastereómeros. MS: [M+H]+ 1206,3.
B) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-2-({[(2-cianoetoxi)({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroximetil)-4-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]tetrahidrofuran-3-il}oxi)fosforil]oxi}metil)tetrahidrofuran-3-ilo
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-2-({[(2-cianoetoxi){[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il]oxi}fosforil]oxi}metil)tetrahydrofuran-3-ilo (315 mg) se disolvió en una mezcla de tetrahidrofurano (2,8 ml) y agua (0,71 ml), y la solución se dejó agitar y se enfrió en un baño de hielo. Se agregó por goteo ácido trifluoroacético (0,71 ml) y la mezcla se dejó agitar a 0-5 °C durante 2 horas, 15 minutos. Se agregó gradualmente bicarbonato de sodio (1,14 g) a la mezcla de reacción y se mantuvo una agitación adecuada seguida por adición de agua (3 ml) y acetato de etilo (10 ml). La capa acuosa separada se extrajo con acetato de etilo (10 ml). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (3 ml), se secaron en sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/cloruro de metileno) para proporcionar el compuesto del título (145 mg). MS: [M+H]+ 1224,3.
C) N-(9-{(5R,7R,8R, 12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-10-(2-cianoetoxi)-7-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,l0-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il}-9H-purin-6-il)benzamida
Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-2-({[(2-cianoetoxi)({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-ií)-5-(hidroximetil)-4-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]tetrahidrofuran-3-il}oxi)fosforil]oxi}metil)tetrahidrofuran-3-ilo (143 mg) se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y se le agregó piridina anhidra (2,3 ml). A la mezcla se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (75 mg) y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 45 minutos. Se agregaron a esta agua (75 pl) y 1,1 -dióxido de 3H-1,2-benzoditiol-3-ona (29 mg), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos más. A la mezcla de reacción se le agregó una solución de tiosulfato de sodio pentahidratado (150 mg) en agua (0,35 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. La mezcla se concentró, se le agregó tolueno y la mezcla se concentró a presión reducida (4 repeticiones). El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/diclorometano) para proporcionar el compuesto del título (84 mg) como una mezcla de diastereómeros. MS:
[M+H]+ 1238,3.
D) 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-10-hidroxi-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il}-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
A N-(9-{(5R,7R,8R, 12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-10-(2-cianoetoxi)-7-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il}-9H-purin-6-il)benzamida (83 mg) se le agregó una solución de metilamina etanol al 33 % (2,0 ml), y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1 hora y se concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante cromatografía de fase inversa (columna ISCO RediSepRf Gold HP C18 de 15,5 g) eluida con 0 a 70 % de ACN en NH4OAc acuoso 10mM para proporcionar dos isómeros individuales aislados de los compuestos del título: pico 1 (fracción anterior, 11 mg) y pico 2 (fracción posterior, 44,5 mg). MS: [M+H]+ 1081,3.
E) Sal de di-trietilamina de 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,15,16-trihidroxi-2.10- dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il]-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico 1)
A 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-10-hidroxi-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il}-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (324 mg, pico 2 / fracción posterior de la etapa D) se le agregó piridina (6,0 ml) y trifluorhidrato de trietilamina (0,303 ml). La mezcla de reacción se agitó a 55 °C durante 16 horas. El análisis de LCMS mostró una cantidad de intermedio monoprotegido. Se agregó metanol (2,0 ml) y la mezcla de reacción se agitó a 55 °C durante 3 horas. Luego la LCMS mostró una reacción completa. Se concentró la mezcla de reacción a presión reducida y se agregó agua (6,7 ml) y cloruro de calcio (700 mg). La suspensión resultante se agitó durante 1 hora y se filtró en una almohadilla de Celite®. El filtrado se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó mediante cromatografía de fase inversa (columna ISCO RediSepRf Gold HP C18Aq) eluida con 0 a 15 % de ACN en acetato de trietilamonio acuoso 10 mM para proporcionar el compuesto del título (195 mg). MS: [M+H]+ 707,1 1H NMR (400 MHz, D2O) ó 1,27 (18H, t, J = 7,3 Hz), 3.19 (12H, q, J = 7,3 Hz), 3.35 (3H, s), 4,06-4,10 (1H, m), 4,18-4,26 (1H, m), 4,32-4,37 (1H, m), 4,39-4,54 (3H, m) , 4,63 (1H, d, J = 4,0 Hz), 4,80-4,82 (1H, m), 5,03-5,12 (2H, m), 6,15-6,17 (1H, m), 6,35-6,39 (1H, m), 7,33-7,37 (1H,
19
m), 8,13 (1H, s), 8,15 (1H, s), 8,27 (1H, s). 31P NMR (162 MHz, D2O) ó -2,22, 54,80. F NMR (376 MHz, D2O) ó -164,6.
F) Sal de di-trietilamina de 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,15,16-trihidroxi-2.10- dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il]-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico 2)
El isómero óptico 2 se preparó mediante el uso del mismo procedimiento utilizado para el isómero óptico 1. 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-10-hidroxi-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l] [1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il}-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (24,5
1 mg, pico 1 / fracción anterior de la etapa D) proporcionó el compuesto del título (11,8 mg). MS: [M+H]+ 707.1. H NMR (400 MHz, D2O) ó ppm 1,25 (18 H, t, J=7.22 Hz), 3,17 (q, J=7,24 Hz, 12 H), 3,35 (3H, s), 4,12 - 4,22 (3H, m), 4,40 -4,53 (3H, m), 4,62 (1H, m), 4,83 - 4,90 (1H, m), 4,93 - 4,98 (1H, m), 5,09 - 5,15 (1H, m), 6,16 (1H, s), 6,28 - 6,36 (1H, m) , 7.50 (1H, s), 8,12 (1H, s), 8,15 (1H, s), 8,31 (1H, s). 31P NMR (162 MHz, D2O) ó -2,42, 54,11. F NMR (376 MHz, D2O) ó -165,54.
Ejemplo 24
Síntesis de sal de di-trietilamina de 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il]-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómeros ópticos 1 y 2)
Figure imgf000112_0001
A) 7-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il]-5-fluoro-3-metil-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
Se disolvió 7-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il]-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (300 mg) en N,N-dimetilformamida (3,30 ml) y se agregó carbonato de potasio (192 mg). La suspensión se enfrió en un baño de hielo. Se agregó yodometano (0,080 ml). La mezcla se agitó con enfriamiento durante 5 minutos y luego se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se concentró, se le agregó agua y se neutralizó con HCl 1 M a pH ~6. Se recogió el sólido resultante mediante filtración y se secó al vacío durante la noche para proporcionar el compuesto del título (266 mg). MS: [M+H]+ 300,1.
B) 5-fluoro-7-[(6aR,8R,9R,9aS)-9-hidroxi-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il]-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
7-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximethil)tetrahidrofuran-2-il]-5-fluoro-3-metil-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (985 mg) (previamente destilada de forma azeotrópica con acetonitrilo 3 veces y secada al vacío durante for 5 horas) se disolvió en piridina (9,75 ml) y N,N-dimetilformamida (4,80 ml). Después de agitarla durante 15 minutos, se agregó por goteo 1,3-dicloro-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxano (1,02 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se concentró la mezcla a presión reducida y destiló de forma azeotrópica con tolueno. Se dividió el residuo entre EtOAc (120 ml) y agua (50 ml). La capa orgánica separada se lavó con agua (2 x 50 ml) y salmuera (50 ml), se secó en Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con cromatografía mediante el uso de EtOAc / hexano para proporcionar el compuesto del título (1,41 g). MS: [M+H]+ 542,3.
C) Diisopropilfosforamidita de 2-cianoetil (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ilo
En un matraz de fondo redondo de 15 ml se destiló de forma azeotrópica 5-fluoro-7-[(6aR,8R,9R,9aS)-9-hidroxi-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il]-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (1,41 g) con acetonitrilo en seco (3 X 5 ml), se disolvió en N,N-dimetilformamida en seco (6,17 ml) en argón. Se agregó 1H-tetrazol 0,45 M en acetonitrilo (7.05 ml), 1-metil-1H-imidazol (123 pl) y 2-cianoetil N,N,N',N'-tetraisopropilfosforodiamidita (1,86 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se diluyó la mezcla con 70 ml de EtOAc, se lavó con NaHCO3 saturado (X 2) y salmuera, se secó en Na2SO4 , se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo en bruto se purificó con cromatografía en gel de sílice mediante el uso de EtOAc / hexano (Et3N al 0,5 %) para proporcionar el compuesto del título (1,87 g). MS: [M+H]+ 742,4.
D) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[(2-cianoethoxi){[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il]oxi}fosforil]oxi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-ilo
En un matraz de fondo redondo de 100 ml se destiló de forma azeotrópica diisopropilfosforamidita de 2-cianoetil (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ilo (937 mg) e hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il (425 mg) con CH3CN en seco (3 X 5 ml), se suspendieron en tetrahidrofurano en seco (1,80 ml) y acetonitrilo (2,95 ml) en argón. Se agregó una solución de 5-(etiltio)-1H-tetrazol (380 mg) (destilado previamente de forma azeotrópica con acetonitrilo 3 x 5 ml) en acetonitrilo en seco (1,80 ml). Se dejó agitar la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Se agregó hidroperóxido de terc-butilo (5,5 mol/L) en nonano (425 pl). La mezcla se agitó durante 40 min a temperatura ambiente y luego se enfrió en un baño de hielo. Se agregó una solución de tiosulfato de sodio (500,0 mg) en agua (700 pl) y la mezcla se agitó durante 10 minutos. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/DCM). El compuesto del título (1,10 g) se obtuvo como una mezcla de dos isómeros ópticos. MS: [M+H]+ 1094,3.
E) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[(2-cianoetoxi)({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroximetil)-4-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]tetrahidrofuran-3-il}oxi)fosforil]oxi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-ilo
A una solución de hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[(2-cianoetoxi){[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il]oxi}fosforil]oxi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-ilo (1,10 g) en tetrahidrofurano (11,0 ml) y agua (2,50 ml) enfriada en un baño de hielo se le agregó lentamente ácido trifluoroacético (2,50 ml). La mezcla se agitó con enfriamiento durante 4 horas. Se agregó bicarbonato de sodio (3800 mg), seguido por 8 ml de agua. La mezcla se agitó durante 5 minutos, se llevó a temperatura ambiente y se extrajo con EtOAc dos veces. La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó en Na2SO4, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida para proporcionar un producto bruto. La cromatografía mediante el uso de columna de gel de sílice (metanol/DCM) proporcionó el compuesto del título (1,14 g). MS: [M+H]+ 1112,3.
F) N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-cianoetoxi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il}-9H-purin-6-il)benzamida
En un matraz de fondo redondo de 100 ml se destiló de forma azeotrópica hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[(2-cianoetoxi)({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroximetil)-4-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]tetrahidrofuran-3-il}oxi)fosforil]oxi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-ilo (149 mg) con acetonitrilo (3 X 4 ml) y se secó al vacío, se disolvió en piridina en seco (2,35 ml) y se enfrió en un baño de hielo. Se agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosforinano (180 mg) en piridina (0,120 ml). Se dejó agitar la mezcla a temperatura ambiente durante 1,5 hora. Se agregó agua (70,3 pl), seguida por 3H-1,2-benzoditiol-3-ona (56,2 mg). Se dejó agitar la mezcla a temperatura ambiente durante 40 minutos. Se agregó tiosulfato de sodio (135 mg) en 1 ml de agua. La mezcla se agitó durante 10 minutos, se concentró a presión reducida y se diluyó de forma azeotrópica en tolueno para extraer la piridina. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/DCM) para proporcionar el compuesto del título como una mezcla de dos isómeros ópticos (63,6 mg). MS: [M+H]+ 1126,3.
G) 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10-hidroxi-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il}-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona La mezcla de dos isómeros N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-cianoetoxi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il}-9H-purin-6-il)benzamida (60,7 mg) se agitó en metilamina (33 % en peso) en etanol (3,00 ml) a temperatura ambiente durante 1 hora. Se evaporó la sustancia volátil a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante cromatografía de fase inversa (columna ISCO RediSepRf Gold HP C18) eluida con 0 a 50 % de ACN en NH4OAc acuoso 10mM para proporcionar dos isómeros individuales aislados de los compuestos del título: pico 1 (fracción anterior, 12 mg) y pico 2 (fracción posterior, 35,6 mg). MS: [M+H]+ 969,3.
H) Sal de di-trietilamina de 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il]-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico 1)
Se cargó un tubo cónico de 15 ml de polipropileno con 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10-hidroxi-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il}-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (35,6 mg, pico 2 / fracción posterior de la etapa G). Se agregó piridina (273 pl), seguida por trifluorhidrato de trietilamina (27,3 pl) y trietilamina (414 pl). Se dejó agitar la mezcla a temperatura ambiente durante la noche y a 50 °C durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo y se diluyó con agua (1,3 ml). Se agregó lentamente una solución de cloruro de calcio (146,0 mg) en agua (1,0 ml). La mezcla se agitó durante 30 minutos y luego se filtró a través de un tapón de Celite®. El filtrado se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó mediante cromatografía de fase inversa (columna ISCO RediSepRf Gold HP C18Aq) eluida con 0 a 10 % de ACN en acetato de trietilamonio acuoso 10 mM para proporcionar el compuesto del título (23,9 mg). MS: [M+H]+ 709,2. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) ó = 8,29 - 8,24 (m, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,08 - 8,04 (m, 1H), 7,46 - 7.40 (m, 1H), 6,48 (d, 1H, J=12 Hz), 6,37 (d, 1H, J=16 Hz), 5,80 - 5,57 (m, 1H), 5,33 - 5,12 (m, 1H), 5,05 - 4,95 (m, 1H), 4,50 -4,42 (m, 2H), 4,41 - 4,34 (m, 1H), 4,34 - 4,24 (m, 2H), 4,08 - 3,96 (m, 1H), 3,57 (s, 3H), 3,52 - 3,48 (m, 1H), 3,25 - 3,11 (m, 12H), 1,39 - 1,24 (m, 18H). 31P NMR (162 MHz, D2O) 6-2,45, 55,32. 19F NMR (376,5 MHz, D2O) ó-164,60, -200,71.
I) Sal de di-trietilamina de 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroxi-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il]-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico 2)
Se cargó un tubo cónico de 15 ml de polipropileno con 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10-hidroxi-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,10-dioxido-2-sulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il}-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (12,0 mg, pico 1 / fracción anterior de la etapa G). Se agregó piridina (92 pl), seguida por trifluorhidrato de trietilamina (9,2 pl) y trietilamina (140 pl). Se dejó agitar la mezcla a 50 °C durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió con un baño de hielo y se diluyó con agua (1,0 ml). Se agregó lentamente una solución de cloruro de calcio (6,98 mg) en agua (1,0 ml). La mezcla se agitó durante 30 minutos y luego se filtró a través de un tapón de Celite®. El filtrado se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó mediante cromatografía de fase inversa (columna ISCO RediSepRf Gold HP C18Aq) eluida con 0 a 10 % de ACN en acetato de trietilamonio acuoso 10 mM para proporcionar el compuesto del título (1,94 mg). MS: [M+H]+ 709,3. 1H NMR (400 MHz, ÓXIDO DE DEUTERIO) 6 = 8,20 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,46 - 7.40 (m, 1H), 6,37 (d, 1H, J=16 Hz), 6,27 (d, 1H, J=8 Hz), 5,83 (dd, 1H, J1=52 Hz, J2=4 Hz), 4,98 - 4,84 (m, 2H), 4,57 (br d, J = 3,9 Hz, 2H), 4,54 - 4,48 (m, 2H), 4,46 - 4,36 (m, 3H), 4,20 -4,11 (m, 3H), 3,55 - 3,47 (m, 3H), 3,20 - 3,06 (dd, 12H), 1,28 - 1,12 (t, 18H). 31P NMR (162 MHz, D2O) 6-2,52, 53,94.
19F NMR (376,5 MHz, D2O) 6-165,55, -202,45.
Ejemplo 25
Síntesis de sal de di-trietilamina de 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10,16-trihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il]-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
Figure imgf000115_0001
A) N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-cianoetoxi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroxi-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il}-9H-purin-6-il)benzamida
En un matraz de fondo redondo de 100 ml se destiló de forma azeotrópica hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[(2-cianoetoxi)({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroximetil)-4-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]tetrahidrofuran-3-il}oxi)fosforil]oxi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-ilo (1,14 g) con acetonitrilo (3 X 4 ml) y se secó al vacío, se disolvió en piridina (18,0 ml) y se enfrió en un baño de hielo. Se agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosforinano (586 mg) en 2 partes. Se dejó agitar la mezcla a temperatura ambiente durante 40 minutos. Se agregó agua (0,554 ml), seguida por 1,1 -dióxido de 3H-1,2-benzoditiol-3-ona (251 mg). Se dejó agitar la mezcla a temperatura ambiente durante 40 minutos. Se agregó una solución de tiosulfato de sodio (810 mg) en 2 ml de agua. Se concentró la mezcla a presión reducida y destiló de forma azeotrópica con tolueno para extraer la piridina. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (metanol/DCM) para proporcionar el compuesto del título (650 mg). MS:
[M+H]+ 1111,3
B) 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10-dihidroxi-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il}-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
A un matraz de fondo redondo de 25 ml se le agregó N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-cianoetoxi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-3-metil-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroxi-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il}-9H-purin-6-il)benzamida (650 mg) y metilamina (33 % en masa) en etanol absoluto (22,7 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó mediante cromatografía de fase inversa (columna ISCO RediSepRf Gold HP C18) eluida con 0 a 60 % de ACN en NH4OAc acuoso 10 mM para proporcionar el compuesto del título (32,0 mg). MS: [M+H]+ 953,3.
C) Sal de di-trietilamina de 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10,16-trihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il]-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona
Se cargó un tubo cónico de 15 ml de polipropileno con 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10-dihidroxi-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il}-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (32,0 mg) y se agregó piridina (246 pl). A la suspensión se le agregó trifluorhidrato de trietilamina (24,6 pl), seguido por trietilamina (372 pl). Se dejó agitar la mezcla a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo y se diluyó con agua (1 ml). Se agregó lentamente una solución de cloruro de calcio (18,6 mg) en agua (1 ml). La mezcla se agitó durante 30 minutos y luego se filtró a través de un tapón de Celite®. El filtrado se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó mediante cromatografía de fase inversa (columna ISCO RediSepRf Gold HP C18Aq) eluida con 0 a 5 % de Ac N en acetato de trietilamonio acuoso 10 mM para proporcionar el compuesto del título (8,3 mg). MS: [M+H]+ 693.2. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 68,36 (br, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,38 (d, 1H, j=2), 6,48 (d, 1H, j=8), 6,37 (d, 1H, J=16 Hz), 5,70 (dd, 1H, J1=52 Hz, J2=4 Hz), 5,20 - 5,07 (m, 1H), 4,98 - 4,92 (m, 1H), 4,53 (d, 1H, J=4) Hz, 4,45 - 4,33 (m, 2H), 4,33 - 4,19 (m, 3H), 4,09 - 4,03 (m, 1H), 3,45 (s, 3H), 3,17 (qt, 12H), 1,28(t, 18H). 31P NMR (162 MHz, D2O) 6-1,66, -2,26, 19F NMR (376,5 MHz, D2O) 6-164,5, -201,7.
Ejemplo 26
Síntesis de sal de di-trietilamina de 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-ammo-9H-purrn-9-N)-15-fluoro-16-hidroxi-2,10-dioxido-2,10-disulfamloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaddotetradedn-7-il]-5-doro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico 1 e isómero óptico 2):
Figure imgf000116_0001
A) 2-cianoetil diisopropilfosforamidita de (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-doro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pinmidin-7-N)-2,2,4,4-tetraisopropNtetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]tnoxadisNodn-9-No
En un matraz de fondo redondo de 100 ml se destiló de forma azeotrópica 5-cloro-7-[(6aR,8R,9R,9aS)-9-hidroxi-2.2.4.4- tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il]-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (1,469 g) (sintetizada de la misma forma que en el método del Ejemplo 15 A)) con tolueno (3 x) y se secó al vacío. Se vació el matraz de fondo redondo y se volvió a llenar con argón (3 x). Se agregó N,N-dimetilformamida anhidra (5,00 ml) para disolver el material inicial con sonicación durante un minuto, seguida por 2-cianoetil N,N,N',N'-tetraisopropilfosforodiamidita (2,50 ml), 1-metilimidazol (0,13 ml) y luego 1H-tetrazol (0,45 M en acetonitrilo, 6,70 ml). La mezcla se agitó en atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla se diluyó con EtOAc (200 ml). Se agregó una solución saturada de NaHCO3, Se extrajo la fase acuosa con EtOAc dos veces. La capa combinada de EtOAc se lavó con agua y luego salmuera, se secó en Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar un producto bruto oleoso. El material en bruto se purificó mediante cromatografía en columna (columna ISCO RediSepRf DIOL HP Gold de 100 g) eluida con EtOAc:hexanos (1:9 a 1:1) para proporcionar el compuesto del título (1,77 g). MS: [M+H]+ 661,3 para el fragmento hidrolizado del producto.
B) Hidrógenofosfato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ilo
Se disolvió N-{9-[(2R,3R,4R,5R)-5-{[bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi]metil}-3-fluoro-4-hidroxitetrahidrofuran-2-il]-9H-purin-6-il}benzamida (2,64 g) en piridina anhidra (18,0 ml) en argón y se enfrió en un baño de hielo. Se agregó lentamente fosfito de difenilo (1,60 ml) durante 1 minuto. La solución de reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. Se agregó lentamente la segunda parte de fosfito de difenilo (0,35 ml) y la mezcla se siguió agitando durante 30 minutos más. La mezcla se enfrió con un baño de hielo. Se agregó agua (2,0 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se concentró la mezcla a presión reducida y destiló de forma azeotrópica con tolueno para extraer adicionalmente piridina y agua. El residuo se secó en una bomba de vacío. Al residuo se le agregó ácido acético (10,0 ml) y agua (2,0 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla se concentró a presión reducida y se destiló de forma azeotrópica con tolueno, luego se secó en una bomba de vacío para proporcionar un aceite en bruto, que se sometió a cromatografía en una columna de sílice mediante el uso de MeOH/DCM (0/100 a 50/50) para proporcionar 1,33 g del producto del título como un sólido blanco. MS: [M+H]+ 438,1.
C) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[{[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-cloro-4-oxo-3.4- dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il]oxi}(2-cianoetoxi)fosforotioil]oxi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-ilo
En un matraz de fondo redondo de 250 ml, una mezcla de 2-cianoetil diisopropilfosforamidita de (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-cloro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ilo (2,23 g) e hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ilo (1,17 g) se destiló de forma azeotrópica con acetonitrilo en seco (25 ml x 3) y se secó en bomba de vacío durante 1 hora. A la mezcla se le agregó acetonitrilo anhidro (20,0 ml) en argón, seguido por una solución de 5-(etiltio)-1H-tetrazol (1,00 g) (destilado previamente de forma azeotrópica con acetonitrilo en seco, 10 ml x 3 y secado en bomba de vacío) en acetonitrilo anhidro (10,0 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora 20 minutos. Se le agregó ((dimetilamino-metiliden)amino)-3H-1,2,4-d itiazolin-3-tiona (655 mg) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. Se concentró la mezcla a presión reducida. La cromatografía en columna de sílice mediante el uso de MeOH/DCM (0/100 a 40/60) proporcionó el compuesto del título (1,78 g) como una mezcla de 2 isómeros ópticos. MS: [M+H]+ 1112,4.
E) Hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-chloro-4-oxo-3.4- dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroximetil)-4-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]tetrahidrofuran-3-il}oxi)(2-cianoetoxi)fosforotioil]oxi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-ilo
En un matraz de fondo redondo, se disolvió hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[{[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-cloro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il]oxi}(2-cianoetoxi)fosforotioil]oxi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-ilo (1,73 g) en tetrahidrofurano (16 ml) y agua (4,0 ml). La solución se enfrió con un baño de hielo. Se agregó por goteo ácido trifluoroacético (4,0 ml). La mezcla se agitó con enfriamiento durante 4 horas. A 0 °C, se agregó por partes bicarbonato de sodio (7,00 g), seguido por agua y EtOAc. La mezcla se agitó durante 3 minutos y luego se llevó a temperatura ambiente. Se separaron las capas. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x). La solución combinada de EtOAc se lavó con salmuera, se secó en Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y se secó en una bomba de vacío para proporcionar el producto bruto. El material bruto se purificó en una columna de sílice mediante el uso de MeOH/DCM (0/100 a 40/60) para proporcionar el producto del título (1,43 g) como una mezcla de 2 isómeros ópticos. MS: [M+H]+ 1130,3,
F) N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(5-chloro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10-(2-cianoetoxi)-15-fluoro-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2-oxido-2-sulfanil-10-sulfidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il}-9H-purin-6-il)benzamida (mezcla de dos isómeros ópticos principales)
En un matraz de fondo redondo se destiló de forma azeotrópica hidrogenofosfonato de (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-chloro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroximetil)-4-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]tetrahidrofuran-3-il}oxi)(2-cianoetoxi)fosforotioil]oxi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-ilo (1,20 g) con piridina en seco (botella nueva)/acetonitrilo (x 2) y luego acetonitrilo en seco. El sólido blanco resultante se secó al vacío. En una atmósfera de argón se agregó piridina anhidra (20,0 ml) (botella nueva), seguida por 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (0,700 g). La solución transparente se dejó agitar a temperatura ambiente durante 1 hora 10 minutos. Se agregó agua (0,70 ml), seguida por 1, 1 -dióxido de 3H-1,2-benzoditiol-3-ona (0,300 g). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 20 min. La mezcla se concentró a presión reducida, se destiló de forma azeotrópica con tolueno (x 2), se secó en una bomba de vacío para proporcionar un residuo en bruto. El residuo en bruto se sometió a cromatografía en una columna de sílice mediante el uso de MeOH/DCM (0/100 a 20/80). Los productos del título (590 mg) de la fracción anterior se proporcionaron e identificaron como la mezcla de isómeros principales de los picos 2 y 4 de LCMS; mientras que la segunda tanda de productos (389 mg) de la fracción posterior fue una mezcla de los 4 isómeros. MS: [M+H]+ 1144,2.
G) 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il}-5-cloro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómeros ópticos individuales 1 y 2)
En una atmósfera de N2, se agitó N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(5-cloro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10-(2-cianoetoxi)-15-fluoro-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2-oxido-2-sulfanil-10-sulfidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-14-il}-9H-purin-6-il)benzamida (0,584 g, mezcla de dos isómeros ópticos principales, fracción anterior de cromatografía en columna) en metilamina (33 % en masa) en etanol absoluto (15,0 ml) a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se concentró a presión reducida y se secó en una bomba de vacío para proporcionar el sólido bruto. Dos purificaciones posteriores, mediante el uso de MeOH/EtOAc (0/100 a 40/60) proporcionaron 2 isómeros ópticos individuales de los compuestos del título: isómero 1 (fracción anterior/pico 1, 73 mg) e isómero 2 (fracción posterior/pico 2, 304 mg) y una fracción mixta del pico 1 y 2 (0,30 g). MS (isómero óptico 1): [M+H]+ 987,2. MS (isómero óptico 2): [M+H]+ 987,2.
H) Sal de di-trietilamina de 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-hidroxi-2.10- dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il]-5-cloro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico 1)
A un tubo de polipropileno se le agregó 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadiphosphaciclotetradecin-7-il}-5-chloro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico 1, 69,2 mg, fracción anterior de cromatografía en columna), piridina (0,40 ml), seguida por trifluorhidrato de trietilamina (0,060 ml) y luego trietilamina (0,90 ml). La mezcla de reacción del tubo de propileno sellado se agitó a 50 °C durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con agua (1,30 ml). Se agregó una solución de cloruro de calcio (92,5 mg) en agua (1,30 ml). La mezcla blanca turbia se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, luego se filtró a través de Celite® mediante el uso de un embudo de filtro plástico y se lavó con agua (1 ml x 4). El filtrado acuoso transparente se concentró a presión reducida, se destiló de forma azeotrópica con tolueno varias veces y se secó al vacío durante 10 minutos para proporcionar un residuo en bruto. El residuo en bruto se purificó mediante cromatografía en columna C18 (agua-acetonitrilo/solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM). La fracción de producto se concentró a presión reducida, se destiló de forma azeotrópica con tolueno (x 4) y luego con agua sin endotoxinas (x 5). El residuo final se disolvió en agua sin endotoxinas y se liofilizó para proporcionar el producto del título (isómero óptico 1, 29,0 mg). MS [M+H]+ 727,0. 1H NMR (400 MHz, óxido de deuterio) ó = 8,19 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 6,39 (br d, J = 15,7 Hz, 1H), 6,34 (br d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,60 - 5,41 (m, 1H), 5,22 - 5,14 (m, 1H), 5,14 - 5,02 (m, 1H), 4,55 (br d, J = 3,8 Hz, 1H), 4,51 (br d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,42 (br s, 1H), 4,40 (br s, 1H), 4,35 - 4,28 (m, 1H), 4,16 - 4,10 (m, 1H), 4,06 (br dd, J = 4,3, 11,5 Hz, 1H), 3,13 (q, J = 7,3 Hz, 12H), 1,21 (t, J = 7,3 Hz, 18H). 31P NMR (162 MHz, óxido de deuterio) ó 55,29, 54,54. 19F NMR (376 MHz, óxido de deuterio) ó -200,90.
I) Sal de di-trietilamina de 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-hidroxi-2.10- dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7-il]-5-cloro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico 2)
A un tubo de polipropileno se le agregó 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-[(3-hidroxi-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanil)oxi]-2,10-dioxido-2,10-disulfaniloctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadiphosphaciclotetradecin-7-il}-5-chloro-3,7-dihidro-4H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (isómero óptico 2, 186 mg, fracción posterior de cromatografía). Se agregó piridina (1,1 ml), seguida por trifluorhidrato de trietilamina (0,161 ml) y trietilamina (2,4 ml). La mezcla de reacción del tubo de propileno sellado se agitó a 50 °C durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con agua (3,50 ml). Se agregó una solución de cloruro de calcio (250 mg) en agua (3,50 ml). La mezcla blanca turbia se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se filtró a través de Celite® mediante el uso de un embudo de filtro plástico y se lavó con agua (3 ml x 4). El filtrado acuoso transparente se concentró a presión reducida, se destiló de forma azeotrópica con tolueno varias veces y se secó al vacío durante 10 minutos para proporcionar un residuo en bruto. El residuo en bruto se purificó mediante cromatografía en columna C18 (agua-acetonitrilo/solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM). La fracción de producto se concentró a presión reducida, se destiló de forma azeotrópica con tolueno (x 4) y luego con agua sin endotoxinas (x 5). El residuo final se disolvió en agua sin endotoxinas y se liofilizó para proporcionar el producto del título (isómero óptico 2, 109 mg). MS [M+H]+ 727.0.
1H NMR (400 MHz, óxido de deuterio) ó 8,10 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 6,30 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 6,24 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,49 - 5,27 (m, 1H), 5,07 - 4,86 (m, 2H), 4,85 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 4,44 (br d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,33 (br d, J = 14,7 Hz, 2H), 4,28 - 4,16 (m, 2H), 3,98 (br dd, J = 5,0, 11,8 Hz, 1H), 3,04 (q, J = 7,4 Hz, 12H), 1,12 (t, J = 7,3 Hz, 18H). 31P NMR (162 MHz, óxido de deuterio) ó = 55,12, 52,04. 19F NMR (376 MHz, óxido de deuterio) ó -200,43.
Ejemplo 27 (Para referencia)
Enlazador-carga útil 1
Figure imgf000119_0001
A una mezcla de 6-(2,5-dioxopirrol-1-il)-N-[(1S)-1-[[(1S)-2-[4-(hidroximethil)anilino]-1-metil-2-oxo-etil]carbamoil]-2-metil-propil]hexanamida (mc-Val-Ala-PAB-OH, Synchem, Elk Grove Village, IL, 0,0822 mmol, 40,0 mg) en acetonitrilo anhidro (19,1 mmol, 1,00 ml, 783 mg) se le agregó yoduro de cesio (0,0986 mmol, 25,6 mg) y eterato dietílico de trifluoruro de boro (0,0986 mmol, 0,0125 ml, 14,0 mg). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de 18 horas de agitación, la mezcla se diluyó con ~10 ml de DCM y se filtró a través de una almohadilla de Celite®. El sólido se lavó con DCM. El filtrado se concentró para proporcionar un sólido anaranjado. Se utilizó el producto bruto (mc-Val-Ala-PAB-I) sin purificación adicional.
Un recipiente cargado con una solución de 2,10-dióxido de (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-16-hidroxi-2-sulfidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-10-olato de disodio (Carga útil 1, también “compuesto del Ej. 3a”, 0,0106 mmol, 7.80 mg) y 6-(2,5-dioxopirrol-1-il)-N-[(1S)-1-[[(1S)-2-[4-(iodometil)anilino]-1-metil-2-oxoethil]carbamoil]-2-metil-propil]hexanamida (mc-Val-Ala-PAB-I, 0,0208 mmol, 12,4 mg, bruto) en W,W-dimetilformamida (5,17 mmol, 0,400 ml, 378 mg) se selló y se calentó a 60 °C. En 2 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se purificó mediante cromatografía en una columna C18 (gradiente continuo de 20-60 % CH3CN/agua con ácido fórmico al 0,1 %) para proporcionar N-[(2S)-1-{[(2S)-1-{[4-({[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10,16-dihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-2-il]sulfanil}metil)fenil]amino}-1-oxopropan-2-il]amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]-6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanamida (5,5 mg, 45 % rendimiento) como un sólido blanco. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) ó 8,23-8,35 (m, 2H), 8,10 (s, 1H), 7,89-8,02 (m, 1H), 7.84 (s, 1H), 7,52-7,64 (m, 2H), 7,41 (br d, J=8,53 Hz, 2H), 7,22-7,38 (m, 2H), 6,75-6,83 (m, 2H), 6,32-6,43 (m, 2H), 5,71­ 5,90 (m, 2H), 4,54-4,59 (m, 2H), 4,42-4,51 (m, 2H), 4,07-4,35 (m, 8H), 3,46 (br t, J=7.03 Hz, 2H), 2,27 (br t, J=7,34 Hz, 2H), 2,03-2,15 (m, 2H), 1,53-1,70 (m, 4H), 1,39-1,47 (m, 3H), 1,23-1,37 (m, 2H), 0,92-1,02 (m, 6H). LCMS: m/z 1163, 1164 [M+H].
Ejemplo 28 (Para referencia)
Enlazador-carga útil 2
Figure imgf000120_0001
El enlazador-carga útil 2 se generó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 27, mediante el uso de la sal de sesqui-trietilamina de 2-amino-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,18-dihidroxi-2,10-dioxido-2-sulfanilhexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il]-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (Carga útil 2) en lugar de la carga útil 1.
La carga útil 2 se preparó de acuerdo con el método que figura a continuación.
Sal de sesqui-trietilamina de 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,18-dihidroxi-2,10-oxido-2-sulfanilhexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (isómero óptico).
A) Hidrogenofosfonato de (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((tertbutildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)-2-(2-isobutilamido-6-oxo-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforil)oxi)metil)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptan-7-ilo
Hidrogenofosfonato de (1S,3F,4F,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-(hidroximetil)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptan-7-ilo (700 mg) y 5'-O-[bis(4-metoxifenil)(fenil)metil]-3'-O-[tert-butil(dimetil)silil]-2'-O-{(2-cianoethoxi)[diisopropilamino]fosfanil}-N-(2-metilpropanoil)guanosina (2280 mg) se sometieron a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro, y se agregó a esto acetonitrilo anhidro (15 ml) y tetrahidrofurano anhidro (5 ml). A la mezcla se le agregó una mezcla de 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazol (611 mg) (que se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro) y acetonitrilo anhidro (10 ml), y la mezcla se agitó durante la noche en una atmósfera de argón a temperatura ambiente. Se agregó a esta hidroperóxido de terc-butilo al 70 % (643 pl) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. A la mezcla de reacción se le agregó una mezcla de tiosulfato de sodio (5920 mg) y agua (3 ml) y la mezcla se concentró a presión reducida. Al residuo se le agregó ácido acético al 80 % (30 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) para proporcionar el compuesto del título (980 mg). MS: [M+H]+ 1030,2.
B) 2-amino-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-2,10-dihidroxi-10-oxido-2-sulfidohexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il]-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (isómero óptico)
Hidrogenofosfonato de (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)-2-(2-isobutilamido-6-oxo-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il)oxi)(2-cianoetoxi)fosforil)oxi)metil)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptan-7-ilo (980 mg) se sometió a deshidratación azeotrópica con acetonitrilo anhidro y piridina anhidra, y se agregó a este piridina anhidra (50 ml). A la mezcla se le agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (615 mg) a temperatura ambiente y la mezcla se agitó en una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 1 hora. Se agregaron a esta agua (600 pl) y 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-ona (240 mg), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos adicionales. A la mezcla de reacción se le agregó una mezcla de tiosulfato de sodio (1180 mg) y agua (3 ml) y la mezcla se concentró a presión reducida. Al residuo se le agregó acetonitrilo anhidro (15 ml) y 2-metilpropan-2-amina (5,0 ml), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 hora y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo) y al residuo obtenido se le agregó una solución de metilamina etanol al 40 % (30 ml). La mezcla se agitó durante la noche en una atmósfera de argón a temperatura ambiente y la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/acetato de etilo). El residuo obtenido se resolvió en dos diastereómeros (tR1 y tR2, cuyos tiempos de retención mediante LC/MS son de más corto a más largo, en este orden) mediante HPLC (L-column2 ODS, 50*150 mm, fase móvil: solución de acetato de amonio acuoso 5 mM/acetonitrilo) para proporcionar el compuesto del título (38 mg, tR1) y el compuesto del título (322 mg, tR2). MS (tR1): [M+H]+ 817.1. MS (tR2): [M+H]+ 817,1.
C) Sal de sesqui-trietilamina de 2-amino-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,18-trihidroxi-10-oxido-2-sulfidohexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il]-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (isómero óptico)
A 2-amino-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-2,10-dihidroxi-10-oxido-2-sulfidohexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il]-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (isómero óptico) (38 mg, tR1) se le agregó metanol (3,0 ml) y trifluorhidrato de trietilamina (0,76 ml). La mezcla de reacción se concentró para retirar el metanol y el residuo se agitó a 55 °C durante 1 hora. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se agregó le etoxi(trimetil)silano (4,2 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 hora. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (acetonitrilo/solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM) para proporcionar el compuesto del título (27 mg). 1H NMR (400 MHz, D2O) 6 1,23 (13H, t, J = 7,3 Hz), 3,15 (9H, q, J = 7,3 Hz), 4,04 (1H, d, J = 8,3 Hz), 4,08-4,19 (3H, m), 4,28 (1H, d, J = 12,2 Hz), 4,37-4,52 (2H, m), 4,65 (1H, d, J = 4,2 Hz), 4,90 (1H, d, J = 4,6 Hz), 5,36 (1H, s), 5,55 (1H, td, J = 8,5, 4,0 Hz), 5,98 (1H, d, J = 8,3 Hz), 6,16 (1H, s), 7,94 (1H, s), 8,21 (1H, s), 8,25 (1H, s). 31P NMR (162 MHz, D2O) 6-1,45, 53,78.
Síntesis de sal de sesqui-trietilamina de 2-amino-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,18-dihidroxi-2,10-dioxido-2-sulfanilexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il]-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (isómero óptico; carga útil 2).
A 2-amino-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-2,10-dihidroxi-10-oxido-2-sulfidohexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-7(12H)-il]-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (isómero óptico) (322 mg, tR2) se le agregó metanol (3,0 ml) y trifluorhidrato de trietilamina (3,2 ml). La mezcla de reacción se concentró para retirar el metanol y el residuo se agitó a 55 °C durante 1 hora. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se agregó le etoxi(trimetil)silano (14 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 hora. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna C18 (acetonitrilo/solución amortiguadora de acetato de trietilamonio 10 mM) para proporcionar el compuesto del título (266 mg). 1H NMR (400 MHz, D2O) 6 1,23 (14H, t, J = 7,3 Hz), 3,15 (10H, q, J = 7.3 Hz), 4,02 (1H, d, J = 8,1 Hz), 4,13-4,24 (2H, m), 4,27-4,42 (4H, m), 4,59 (1H, d, J = 4,4 Hz), 5,01 (1H, s), 5,11 (1H, d, J = 4,2 Hz), 5,61-5,73 (1H, m), 5,95 (1H, d, J = 8,3 Hz), 6,15 (1H, s), 7,87 (1H, s), 8,00 (1H, s), 8,25 (1H, s). 31P NMR (162 MHz, D2O) 6-1,93, 55,44.
Ejemplo 29 (Para referencia)
Procedimiento de conjugación de ADC general
Una solución de anticuerpo se diluyó hasta la concentración de reacción deseada con un amortiguador adecuado. El pH se ajustó a 7 mediante la adición de tris 0,5 M, solución de EDTA 25 mM en agua (pH 8,0). Se agregó TCEP (2,2 equiv, 5 mM en agua) con agitación. Después de 1 hora de incubación a temperatura ambiente, se agregaron 5 equiv enlazador-carga útil (5 mM en DMA). Después de 2 horas más de agitación suave a temperatura ambiente, la mezcla se purificó dos veces en columnas de desalación spinOUT de 3 ml (G-Bioscience, equilibradas previamente con amortiguador que contenía histidina 10 mM, sacarosa al 7.5 % (w/v) y polisorbato 20 al 0,08 % (w/v) a pH 5,2), y luego se cambió el amortiguador por PBS de Dulbecco y se concentró a 1 ~3 mg/ml (según se determinó mediante absorción UV mediante el uso de un coeficiente de extinción de IgG1 estándar) mediante el uso de una columna Vivaspin6 (GE Healthcare). Luego se caracterizó la muestra para la relación de fármaco con relación al anticuerpo (DAR) mediante espectrometría de masas QTOF. La composición del monómero del ADC se determinó mediante cromatografía de exclusión por tamaño (SEC).
Protocolo de cromatografía de exclusión por tamaño (SEC)
Preparación de muestras
Preparar un blanco de agua al agregar agua de HPLC a un recipiente de HPLC. Obtener de los químicos controles de anticuerpo no conjugado y las muestras de ADC. Diluir los controles y muestras con 1XPBS si la concentración es mayor que 5 mg/ml, o inyectar en bruto si la concentración es de 5 mg/ml o menor.
Configuración del sistema de HPLC
Se utilizó para el análisis un sistema de HPLC Agilent 1100. El sistema se configura con un lavado de sistema (acetonitrilo al 5 % en agua de HPLC) en un canal de bombeo, y la fase móvil (como se describió anteriormente) en un canal de bombeo distinto. La columna utilizada es Tosoh Biosep TSK Gel, G3000SWxl; P/N 8541; 250A; 5um; 7.8mm x 300mm. La velocidad de flujo se fija en 1 ml/min, y cada análisis es isocrático con 100 % de fase móvil [fosfato de sodio 100 mM, cloruro de sodio 300 mM, pH 6,8, acetonitrilo al 10 % (v/v)] durante 20 minutos. El DAD se fija a 280 nm. El volumen de inyección para cada control, muestra y blanco es típicamente de 10 uL, pero puede ajustarse en función de la absorbancia UV. Análisis de datos: Se integran todos los picos a 280 nm dentro de la ventana temporal adecuada (típicamente 2-10 minutos).
Ejemplo 30 (Para referencia)
Preparación de ADC1
La síntesis se llevó a cabo de acuerdo con el procedimiento de conjugación de ADC general.
Anticuerpo: El Anticuerpo 1, un anticuerpo contra GCC (5F9), 100 uL de una solución de 60 mg/ml en un amortiguador de histidina 50 mM y arginina 100 mM a pH 6,0, receptor objetivo guanilil ciclasa C (GCC) Cadena pesada de anticuerpo 1:
QVQLQQW GAGLLKPSETLSLTCAVFGGSFSGYYW SW IRQPPGKGLEW IGEIN
HRGNTNDNPSLK SRVTIS V D TSKN QF A LK LS S V T A AD T A V Y YC ARERGYT Y GNFDH W GQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGAL TSG VH TFPAVLQ SSG LYSLSSW TVPSSSLG TQ TYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC DKTHTCPPCPAPELLG G PSVFLFPPKPKDTLM ISRTPEVTCVW DVSHEDPEVKFNW YVD G VEVH N AK TKP R E E Q Y N S TY R V V SV LTV LH Q D W LN G K E Y KC KV S N K ALP A PI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPEN NYKTTPPVLDSDG SFFLYSKLTVDKSRW Q Q GNYFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSP GK (SEQ ED No. 1)
Cadena ligera de anticuerpo 1:
ETVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSRNLAWYQQKPGQAPRLLIYGAST
RATGIPARFSGSGSGTEFTLTIGSLQSEDFAVYYCQQYKTWPRTFGQGTNVEIKRTVA
a p s v f i f p p s d e q l k s g t a s v v c l l n n f y p r e a k v q w k v d n a l q s g n s q e s v t e q d s KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID No. 2) Amortiguador: Histidina 50 mM y arginina 100 mM a pH 6,0, 200 uL, concentración final 20 mg/ml Enlazador-carga útil: N-[(2S)-1-{[(2S)-1-{[4-({[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10,16-dihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-2-il]sulfanil}metil)fenil]amino}-1-oxopropan-2-il]amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]-6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanamida (Enlazador-carga útil 1) ADC del producto: ADC1, rendimiento = 1,9 ml a 2,5 mg/ml (79 %), DAR 3,5, 99 % de monómero (es decir, no acumulado)
Ejemplo 31 (Para referencia)
Preparación de ADC2
La síntesis se llevó a cabo de acuerdo con el procedimiento de conjugación de ADC general.
Anticuerpo: El Anticuerpo 2, un anticuerpo no dirigido a GCC dirigido a una proteína anclada en la membrana sobreexpresada en determinados tumores sólidos que incluyen el pulmón y mama, 100 uL a 11,8 mg/ml en acetato de sodio 25 mM, pH 5,5.
Amortiguador: PBS de Dulbecco, pH 7.4, 200 uL, concentración final 4 mg/ml
Enlazador-carga útil: N-[(2S)-1-{[(2S)-1-{[4-({[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-oxo-3,4-dihidro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10,16-dihidroxi-2,10-dioxidooctahidro-12H-5,8metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-2-il]sulfanil}metil)fenil]amino}-1-oxopropan-2-il]amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]-6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanamida (Enlazador-carga útil 1) ADC del producto: ADC2, rendimiento = 0,6 ml a 1,4 mg/ml (70 %), dA r 2,6, 99 % de monómero
Ejemplo 32 (Para referencia)
Preparación de ADC3
La síntesis se llevó a cabo de acuerdo con el procedimiento de conjugación de ADC general.
Anticuerpo: Anticuerpo 1, 33 uL a 60 mg/ml en un amortiguador de histidina 50 mM y arginina 100 mM a pH 6,0 Amortiguador: Histidina 50 mM y arginina 100 mM a pH 6,0, 66 uL, concentración final de solución de anticuerpo 20 mg/ml
Enlazador-carga útil: N-[(2S)-1-{[(2S)-1-{[4-({[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-7-(2-amino-6-oxo-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,18-dihidroxi-2,10-dioxidohexahidro-14H-15,12a-(epoximetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoxadifosfaciclotetradecin-2(12H)-il]sulfanil}metil)fenil]amino}-1-oxopropan-2-il]amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]-6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanamida (Enlazador-carga útil 2) ADC del producto: ADC3, rendimiento = 1,9 ml a 1,0 mg/ml (95 %), DAR 4,3, 98 % de monómero
Ejemplo 33 (Para referencia)
Ensayo de liberación de carga útil tritosomal - medición de la liberación de la carga útil de los sistemas de enlazadorcarga útil o ADC en un modelo lisosomal in vitro
Materiales:
Amortiguador: 47.9 mg/ml de fosfato de potasio monobásico (número de producto Sigma-Aldrich P5379); 6,8 mg/ml de fosfato de sodio dibásico (número de producto Sigma-Aldrich S0876), 1,7 mg/ml de ácido etilendiaminotetraacético (número de producto Sigma-Aldrich ED4SS) en agua purificada. El pH se ajustó a 6,0 mediante el uso de HCl 1 N o KOH 1 N.
Los tritosomas de hígado de rata se adquirieron de XenoTech
Enlazador-carga útil (DMSO 10 mM)
ADC (1-40 uM en el amortiguador de almacenamiento utilizado para la producción).
Procedimiento:
Para la evaluación de la liberación de la carga útil de los compuestos de enlazador-carga útil, se preparó una solución de trabajo de DMSO 120,95 uM a partir de una solución madre 10 mM de los compuestos de enlazador-carga útil. Luego, la solución de trabajo de DMSO 120,95 uM se diluyó a 1 uM en solución 225 uL de amortiguador de tritosoma con 22,4 % de tritosomas de hígado de rata.
Para la evaluación de las moléculas de ADC, se diluyeron 1,86 uL de solución de ADC con 223,1 uL de la mezcla de tritosomas de hígado de rata en amortiguador de tritosoma.
Las soluciones preparadas de esta forma se incubaron durante 24 horas a 37 °C. Se extrajeron alícuotas de 40 uL a las 0,5, 1, 3, 5 y 24 horas, y se diluyeron con 160 uL de ácido fórmico al 0,1 % en solución de metanol en una placa de 96 pocillos, que se almacenó en un congelador a -80 °C hasta la finalización del experimento. Después de recolectar el último punto temporal, se agregó en las muestras una solución fresca de 200 uL de ácido fórmico al 0,1 % en solución de metanol y se agregó carbutamida 150 nM, que es una solución estándar interna. Las muestras se mezclaron bien y se centrifugaron a 4000 g durante 10 minutos, y la placa de 96 pocillos se sometió a análisis de concentración de carga útil mediante LC/MS/MS.
Sistema de LC/MS/MS:
Se inyectaron 5 uL de muestras en la LC/MS/MS con una columna Waters Xselect C18 CSH 3.5u 2,1mmID x 30mm de longitud. El disolvente de fase acuosa móvil contenía ácido fórmico al 0,1 % en agua, y el disolvente orgánico de fase móvil contenía ácido fórmico al 0,1 % en agua al 5 % y acetonitrilo al 95 %. Las muestras se realizaron en un gradiente de 3 minutos a una velocidad de flujo de 1,5 ml/min. Inicialmente, el instrumento analizó 100 % de disolvente de fase móvil acuosa durante 0,5 minutos, y luego aumentó a 100 % de disolvente orgánico en los siguientes 1,5 minutos. El sistema se mantiene a 100 % de disolvente orgánico durante 0,5 minutos más, y luego cambia a 100 % de disolvente de fase acuosa en los siguientes 0,5 minutos.
Análisis:
Para monitorear y calcular la liberación del enlazador-carga útil y carga útil del ADC, se graficó una curva de concentración en función del tiempo o área pico. Los datos se utilizan mediante el uso del programa Excel-Fit para calcular la velocidad en el intervalo lineal y t1/2 de la carga útil de la formación de las moléculas evaluadas.
Datos de liberación de la carga útil tritosomal:
Tal como se muestra en la Figura 1, Figura 2 y Figura 3, cuando se someten al protocolo anterior, ADC1, ADC2 y ADC3 liberan las cargas útiles esperadas.
Protocolo de ensayo fosfo-IRF3
Las células HEK293 modificadas para expresar los objetivos de superficies celulares asociados con el tumor para el Anticuerpo 1 mAbs (ADC1 y ADC3) y Anticuerpo 2 (ADC2), así como células HEK293 que no expresan objetivos (HEK293-Vect), se colocaron a razón de 1,5 * 10E5 células/pocillo (500 uL/pocillo) en placas de 24 pocillos recubiertas con Poli-D-Lisina (Corning) y se cultivaron durante la noche. Después de una privación de suero durante la noche, las células se trataron con diversas concentraciones de ADC durante 6 horas y luego se lisaron en amortiguador RIPA (ThermoFisher Scientific) con inhibidores de proteasa y fosfatasa (ThermoFisher Scientific). Los lisados celulares se sometieron a análisis de transferencia Western para fosfo-IRF3 (CST) e IRF3 (BD Biosciences). El nivel de fosfo-IRF3 se normalizó a su IRF3 total.
Resultados del ensayo fosfo-IRF3
Tal como se muestra en la Figura 4, Figura 5 y Figura 6, las células HEK293 que expresan los objetivos del receptor superficial para ADC1, ADC2 y ADC3 presentan el aumento esperado en el marcador de la vía STING fosfo-IRF3 (pIRF3) cuando se tratan con ADC1, ADC2 y ADC3, respectivamente. Por el contrario, la respuesta de pIRF3 no se regula por aumento tras el tratamiento con ADC en células HEK293 de vector que no expresan los objetivos de receptores superficiales correspondientes.
Ejemplo 34
Perfiles farmacológicos de dinucleótidos cíclicos seleccionados
Los perfiles farmacológicos de los dinucleótidos cíclicos seleccionados se muestran en la Tabla 6.
Figure imgf000124_0001
Protocolo de ensayo de gen indicador Lucia de THP-1-Dual
Se derivaron células THP1-Dual™ (InvivoGen #thpd-nfis) de la línea celular de monocitos THP-1 humanos mediante integración estable del gen de luciferasa Lucia, un gen indicador de luciferasa secretado, bajo el control de un promotor mínimo ISG54 (gen estimulado por interferón) junto con cinco elementos de respuesta estimulada por interferón (IFN). El día del experimento, las células se colocaron en una placa negra de 384 pocillos (Corning 356697) a razón de una densidad de 7500 células/25 pL por pocillo de medio de cultivo (RPMI 1640, L-glutamina 2 mM, HEPES 25 mM, suero fetal bovino al 10 % inactivado por calor, 100 pg/ml de Normocin™, 100 U/ml-100 pg/ml de Pen-Strep, 10 pg/ml de blasticidina y 100 pg/ml de Zeocina). Las placas de células se dosificaron con 62,5 nL de los compuestos de evaluación y luego se incubaron a 37 °C durante 20 horas. Al final de la incubación, se agregaron 15 pL/pocillo del QUANTI-Luc™ (InvivoGen # rep-qlc1), y se midió la luminiscencia de manera inmediata mediante el uso del LeadSeeker.
Protocolo de análisis de transferencia Western de la activación de la vía de señalización posterior (TBK1 y IRF3) 1,5x106 células THP-1-Dual (Invivogen n.° de catálogo thpd-nfis) se trataron con DMSO o las concentraciones indicadas de Ej14 durante 3 horas. Después de la estimulación, las células se recolectaron en hielo, se centrifugaron a 800 RCF durante 5 minutos y se lavaron una vez en PBS helado.
Los sedimentos celulares se lisaron en amortiguador de lisis de células completas Triton X-100 al 1 % (glicerol al 10 %, Tris-HCl 20 mM, pH 7.5, NaCl 150 mM, EDTA 1 pM y DTT 1 pM) con cócteles inhibidores de proteasa y fosfatasa (Sigma n.° P8340 y CalBiochem n.° 524629, respectivamente). Se depuraron los desechos insolubles de los lisados celulares mediante centrifugado a 16000 RCF durante 10 minutos. Las concentraciones de proteínas de los lisados se determinaron mediante ensayo de Bradford con estándares de BSA.
Los lisados se desnaturalizaron en amortiguador de muestras LDS NuPAGE™ (4X, n.° de catálogo NP0008) con DTT como agente de reducción. Los lisados desnaturalizados se resolvieron en geles Bis-Tris NuPAGE™ al 4-12 % en amortiguador de ejecución MES/SDS y se transfirieron a membranas PVDF mediante el uso de un método de transferencia semiseca. Se sondearon las membranas durante la noche a 4 °C para fosfo-TBK1 S172, fosfo-IRF3 S396 y GAPDH mediante el uso de anticuerpos de Cell Signaling Technology (n.° 5483, n.° 4947 y n.° 5174, respectivamente).
Después de un sondeo primario durante la noche, las membranas se lavaron de manera extensiva, luego se sondearon con anticuerpo secundario (Alexa Fluor® 680 IgG de cabra antirratón, Life Technologies n.° A21109) en amortiguador de bloqueo Odyssey® (n.° de catálogo 927-400000) a temperatura ambiente. Después de un lavado extensivo, se desarrollaron las membranas mediante el uso de un LI-COR ODYSSEY CLx.
Las intensidades relativas de las bandas fosfo-TBK1 y fosfo-IRF3 se cuantificaron y normalizaron a los niveles de GAPDH. Los valores de fosfo-TBK1 y fosfo-IRF3 normalizados a GAPDH se graficaron como intensidad múltiplo sobre el control no estimulado (DMSO). Véase la Figura 7.
Protocolo de ensayo de estabilidad en plasma humano
El compuesto se incubó en plasma humano heparinizado a 37 °C durante 0, 1, 2, 4, 8 y 24 horas, y el cambio de la concentración del compuesto se midió a través del método LC/MS/MS. La constante de velocidad de eliminación (=k(/h)) se calculó en función de la curva ajustada al asumir la disminución exponencial de la concentración de la siguiente manera: concentración en el momento x = concentración inicial*exp(-k*x).
Evaluación del modelo de tumor singénico
Ej14 y Ej3a se evaluaron en modelos de tumores singénicos en ratones. Cuando Ej14 y Ej3a se administraron de forma intravenosa (cada 3 días, 3 veces), se observaron efectos antitumorales. Ver la Figura 8 y la Figura 9 en cuanto al efecto antitumoral del modelo de ratones singénicos CT-26 de carcinoma de colon, y la Figura 10 y Figura 11 en cuanto al efecto antitumoral en el modelo de ratones singénicos B16F10 de carcinoma de colon.
Protocolo para la evaluación del efecto antitumoral
Se implantaron de forma subcutánea 8x104 células B16F10 y 2x105 células CT-26 tumorales de ratón en el flanco de ratones hembra C57BL/6 (B16F10) y Balb/C (CT-26) (n=7 por grupo). Se administró por vía intravenosa vehículo (1xPBS), compuesto Ej3a (30 mg/kg) o Ej14 (1,0 mg/kg) (volumen final de 100 pl) a ratones que poseían tumores después de que el volumen de tumor hubiera alcanzado los 100 mm3 (día 0). Se proporcionó vehículo, Ej3a o Ej14 cada 3 días para un total de 3 dosis (q3dx3). Se tomaron mediciones del tumor y del peso corporal tres veces por semana mediante el uso de calibradores Vernier y balanza mettler, respectivamente. Se determinaron los volúmenes de los tumores al multiplicar el cuadrado del ancho (‘W ), medido a lo largo del eje corto del tumor, por la mitad de la longitud (‘L') medida a lo largo del eje corto del tumor (V = W2 x 0,5L).
Los compuestos de los Ejemplos se muestran en las siguientes tablas. MS en las tablas significa valor real medido. El compuesto del ejemplo 9 se sintetizó de la misma manera que en el método del Ejemplo 5.
Tabla 1-1
Figure imgf000125_0001
__
Figure imgf000126_0001
c o n tin u a c ió n
Figure imgf000127_0001
T l ^ 1-2 m l m -1 r ri n r r f r n i
Figure imgf000128_0001
Tabla 1-3 (ejemplos de compuesto 11-13 proporcionados para referencia)
Figure imgf000129_0001
Tabla 1-4 (ejemplos de compuesto 16-18 proporcionados para referencia)
Figure imgf000129_0002
c o n tin u a c ió n
Figure imgf000130_0001
Tabla 1-5
Figure imgf000130_0002
c o n tin u a c ió n
Figure imgf000131_0001
Ejemplo 35
Prueba de unión a STING
Se mezclaron el compuesto de prueba (2 pl), Estreptavidina-Terbium (4 pl, Cisbio), 2',3'-cGAMP marcado con fluoresceína (c[G(2',5')p-2'-Fluo-AHC-A(3',5')p]) (Biolog, Alemania) y proteína STING biotinilada (2 pl, de tipo silvestre, WT) mediante el uso de amortiguador de ensayo (solución salina amortiguada con fosfato de Dulbecco (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) que contenía albúmina de suero bovino libre de ácido graso al 0,01 % (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)), y la mezcla se dejó en reposo a temperatura ambiente durante 3 horas (la concentración final: Estreptavidina-Terbium; diluida a 1/1000, FITC-cGAMP; 1 pM, proteína STING biotinilada; 100 nM). Se midió la transferencia de energía de resonancia de fluorescencia resuelta en el tiempo (TR-FRET) a la longitud de onda de 520 nm y 486 nm mediante EnVision (PerkinElmer, Waltham, MA, EUA). La tasa de inhibición se la unión de la proteína STING de tipo silvestre y 2'-3'-cGAMP del compuesto se prueba se calculó mediante el uso de la proporción entre el conteo a 520 nm dividida por el conteo a 486 nm. Los resultados se muestran en las Tablas 2 y 2A.
La proteína STING biotinilada mencionada anteriormente (tipo silvestre (WT)) se preparó mediante el método que sigue a continuación.
Método de preparación de la proteína STING de tipo silvestre biotinilada
ECOS (nombre comercial) E.coli competente BL21(DE3) se adquirió de Nippon Gene Co., Ltd. Ampicilina, kanamicina, NaCl, glicerol, isopropiltiogalactósido, (+)-biotina, imidazol, SEM nucleasa recombinante y kit de ensayo de proteínas BCA se adquirieron de Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Triptona, Bacto, y extracto de levadura, Bacto se adquirieron de Difco Laboratories, comprimidos de solución salina amortiguada con tris (TBS), pH7,6 se adquirieron de Takara Bio Inc., Lisozima (clara de huevo), 6x Cryst se adquirió de Seikagaku Corporation, y el cóctel inhibidor de proteasa libre de EDTA-free y cOmplet (nombre comercial) se adquirieron de Roche. Se utilizó el cartucho Ni-NTA Superflow fabricado por QIAGEN, y se utilizó HiLoad 26/60 Superdex 200 pg fabricado por GE Healthcare.
Se insertó Escherichia coli BirA en pRSF1b (Novagen), con múltiples sitios de clonación modificados, y se transfectó a ECOS JM109, mediante lo cual se construyó pRH8/FLAG-BirA. Se transfectaron simultáneamente pET21HH/His-Avi-SUMO-FLAG-hTMEM173(139-379)(H232R) (que se construyó mediante el método mencionado en el EJEMPLO 36) y pRH8/FLAG-BirA para biotinilación con etiqueta Avi a ECO (nombre comercial) E.coli competente BL21(DE3) para preparar la línea celular que expresa His-Avi-SUMO-FLAG-hSTING (139-379, H232R). La línea celular expresora se agregó a medio LB (10 g/l de triptona, 5 g/l de extracto de levadura, 5 g/l de NaCl) que contenía ampicilina (100 pg/l) y kanamicina (50 pg/l), y la mezcla se precultivó a 30 °C, y se expandió hasta medio TB (12 g/l de triptona, 24 g/l de extracto de levadura, 4 ml/l de glicerol, 2,3 g/l de KH2PO4, 12,5 g/l de K2HPO4) que contenía los mismos antibióticos y la mezcla se cultivó a 37 °C. Cuando la turbidez de la solución de cultivo alcanzó 500 KU, la temperatura del cultivo se redujo a 16 °C, se le agregaron isopropiltiogalactósido 0,1 mM y (+)-biotina 50 pM y la mezcla se cultivó durante 16 horas adicionales.
La solución de cultivo se centrifugó, los cuerpos fúngicos obtenidos se suspendieron en amortiguador de lisis (TrisHCl 50 mM, NaCl 150 mM, imidazol 20 mM, 1 mg/ml de lisozima, 5 U/ml de SEM nucleasa, recombinante, completo libre de EDTA, pH7.6), y la proteína se extrajo mediante fragmentación ultrasónica. Se le agregó el reactivo y la concentración de sal del extracto se ajustó a NaCl 300 mM y se recogió el sobrenadante mediante centrifugación. El sobrenadante obtenido se pasó a través de un cartucho NiNTA superflow equilibrado con amortiguador de lavado (TrisHCl 50 mM, NaCl 300 mM, imidazol 20 mM, pH 7,6), y el cartucho se lavó con amortiguador de lavado y se eluyó con amortiguador de elusión (TrisHCl 50 mM, NaCl 300 mM, imidazol 250 mM, pH 7,6). El eluido se hizo pasar a través de una columna HiLoad 26/60 Superdex de 200 pg que se equilibró con amortiguador de almacenamiento (TrisHCl 50 mM, NaCl 150 mM, pH 7,6) y la fracción eluida se recogió como His-Avi-SUMO-FLAG-hSTING (139-379, H232R) biotinilada. La concentración de proteína se midió mediante el uso del kit de ensayo de proteína BCA y la fracción se criopreservó a -80 °C hasta su uso.
Tabla 2: Prueba de unión a STING
Figure imgf000132_0001
Tabla 2a: Prueba de unión a STING
Figure imgf000133_0001
Como queda claro a partir de los resultados anteriores, el compuesto de la presente divulgación inhibe la unión de la proteína STING de tipo silvestre y el ligando natural 2'-3'-cGAMP, es decir, el compuesto de la presente divulgación se une a la proteína STING de tipo silvestre.
Ejemplo 36
Ensayo de gen indicador
Preparación de diversos plásmidos
(i) Construcción de plásmido de expresión de TMEM173 humano y similares
El plásmido de expresión de STING humana (en la presente memoria descriptiva mencionado a menudo como TMEM173 humano) en E. coli se obtuvo mediante PCR de extensión superpuesta para introducir una mutación mediante el uso del clon de ADNc de TMEM173 humano (GeneCopoeia) como plantilla. Primero, se llevaron a cabo PCR mediante el uso de dos tipos de cebador (5'-CCTGGCCCCAGCTGAGATCTCTG-3' (C-hTMEM(139aa)-F) (SEQ ID NO. 3) y 5'-GTAAACCCGATCCTTGATGCCAGCACGGTCACCGGTC-3' (hTMEM173(H232R)-R)) (SEQ ID NO. 4) y dos tipos de cebador (5'-CTGCCCCAGCAGACCGGTGACCGTGCTGGCATCAAG-3' (hTMEM173(H232R)-F) (SEQ ID NO. 5) y 5'-ATAATAGCGGCCGCTCAAGAGAAATCCGTGCGGAGAGG-3' (hTMEM173-st-Not-R)) (SEQ ID NO. 6). Cada una de las PCR se llevó a cabo mediante el uso de polimerasa de ADN PrimeStar MAX (Takara Bio Inc.) sucesivamente (1) a 98 °C durante 1 minuto, (2) repeticiones de 25 veces a 98 °C durante 10 segundos y a 72 °C durante 10 segundos, y (3) a 72 °C durante 1 minuto. Entonces, se llevó a cabo la PCR mediante el uso del segmento obtenido como plantilla y mediante el uso de dos tipos de cebador (C- hTMEM(139aa)-F y hTMEM173-st-Not-R). La PCR se realizó mediante el uso de polimerasa de ADN PrimeStar GXL (Takara Bio Inc.) sucesivamente (1) a 98 °C durante 1 minuto, (2) repeticiones de 35 veces a 98 °C durante 10 segundos y a 72 °C durante 1,5 minutos, y (3) a 72 °C durante 1 minuto. El segmento obtenido se cortó con Not I (Takara Bio Inc.), se insertó en el sitio Stu I/Not I del vector donde se acopló la etiqueta His-Avi-SUMO a pET21a (Novagen), mediante el uso de Ligation High (Toyobo Co., Ltd), y se transfectó a ECOS JM109 (Nippon Gene Co., Ltd ), mediante lo cual se construyó pET21HH/His-Avi-SUMO-hTMEM173(139-379)(H232R).
Segundo, la PCR se llevó a cabo mediante el uso de este plásmido como plantilla y mediante el uso de dos tipos de cebador (5'-CGACTACAAGGACGACGATGACAAGGGATCCCTGGCCCCAGCTGAGATCTCTG-3' (C-FLAG-BamhTMEM173(139aa)-F) (sEQ ID NO. 7) y hTMEM173-st-Not-R). La PCR se realizó mediante el uso de polimerasa de ADN PrimeStar m Ax sucesivamente (1) a 98 °C durante 1 minuto, (2) repeticiones de 25 veces a 98 °C durante 10 segundos y a 72 °C durante 10 segundos, y (3) a 72 °C durante 1 minuto. El segmento obtenido se cortó con Not I, se insertó en el sitio Stu I/Not I de pET21a al que se acopló la etiqueta His-Avi-SUMO, mediante el uso de Ligation High, como se mencionó anteriormente, y se transfectó a ECOS JM109, mediante lo cual se construyó pET21HH/His-Avi-SUMO-FLAG-hTMEM173(139-379)(H232R).
El plásmido de expresión para el Ensayo de Indicador se obtuvo mediante PCR de extensión superpuesta para la introducción de mutación mediante el uso de clon de ADNc de TMEM173 humano como plantilla, tal como se mencionó anteriormente. Primero, se llevaron a cabo PCR mediante el uso de dos tipos de cebador (5'-GTACCCATACGATGTTCCAGATTACGCTGGATCCGCCACCATGCCCCACTCCAGCCTGCATC-3' (HA-Bam-kohTMEM173-F) (SEQ ID NO. 8) y hTMEM173(H232R)-R) y dos tipos de cebador (hTMEM173(H232R)-F y hTMEM173-st-Not-R). Cada una de las PCR se llevó a cabo mediante el uso de polimerasa de ADN PrimeStar MAX sucesivamente (1) a 98 °C durante 1 minuto, (2) repeticiones de 25 veces a 98 °C durante 10 segundos y a 72 °C durante 10 segundos, y (3) a 72 °C durante 1 minuto. Entonces, se llevó a cabo la PCR mediante el uso del segmento obtenido como plantilla y mediante el uso de dos tipos de cebador (5'-ATAATATCTAGAATTCGCCACCATGTACCCATACGATGTTCCAGATTACGC-3' (Xba-Eco-ko-HA-F) (SEQ ID NO. 9) y hTMEM173-st-Not-R). La PCR se realizó mediante el uso de polimerasa de ADN PrimeStar GXL sucesivamente (1) a 98 °C durante 1 minuto, (2) repeticiones de 35 veces a 98 °C durante 10 segundos, a 65 °C durante 5 segundos y a 72 °C durante 1,5 minutos, y (3) a 72 °C durante 1 minuto. El segmento obtenido se cortó con Xba I (Takara Bio Inc.) y Not I, se insertó en el sitio de Nhe I/Not I del vector de resistencia a Zeocina, donde múltiples sitios de clonación se insertaron en pcDNA3.3 (Invitrogen), mediante el uso de Ligation High, y se transfectó a ECOS JM109, mediante lo cual se construyó pcDNA3.3zeo/HA-hTMEM173(H232R).
Se construyó mediante PCR un plásmido que expresa TMEM173 de tipo mutado humano (R232H) mediante el uso de clon de ADNc de TMEM173 humano (GeneCopoeia) como plantilla y mediante el uso de dos tipos de cebador (5'-TTCCAGATTACGCTGGATCCGCCACCATGCCCCACTCCAGCCTGCATC-3' (Bam-ko-hTEME173v1-F) (SEQ ID NO. 10) y 5'-CCTCTAGACTCGAGCGGCCGCTCAAGAGAAATCCGTGCGGAGAGG-3' (hTMEM173-st-Not-R2) (SEQ ID NO. 11). La PCR se llevó a cabo mediante el uso de polimerasa de ADN PrimeStar MAX (Takara Bio Inc.) sucesivamente (1) a 98 °C durante 1 minuto, (2) repeticiones de 30 veces a 98 °C durante 10 segundos y a 68 °C durante 10 segundos, y (3) a 72 °C durante 1 minuto. El segmento obtenido se insertó en el sitio de Bam HI/Not I del vector donde se acopló la etiqueta HA a pcDNA3.1(+) (ThermoFischer), mediante el uso de Gibson Assembly (NEB), y se transfectó a ECOS JM109 (Nippon Gene Co., Ltd.), mediante lo cual se construyó pcDNA3.1HA/HA-hTMEM173v1.
Se construyó un plásmido que expresa TMEM173 de tipo silvestre (H232R) mediante PCR mediante el uso de clon del plásmido pcDNA3.3zeo/HA-hTMEM173(H232R) como plantilla y mediante el uso de dos tipos de cebador (5'-GGAGACCCAAGCTGGCTAGCGCCACCATGTACCCATACGATG-3' (Nhe-ko-HA-F) (SEQ ID NO. 12) y 5'-CCTCTAGACTCGAGCGGCCGCTCAAGAGAAATCCGTGCGGAGAGG-3' (hTMEM173-st-Not-R2) (SEQ ID NO. 11). La PCR se llevó a cabo mediante el uso de polimerasa de ADN PrimeStar MAX sucesivamente (1) a 98 °C durante 1 minuto, (2) repeticiones de 30 veces a 98 °C durante 10 segundos y a 72 °C durante 35 segundos, y (3) a 72 °C durante 1 minuto. El segmento obtenido se insertó en el sitio Nhe I/Not I de pcDNA3.1zeo (ThermoFischer) mediante el uso de Gibson Assembly, y se transfectó a ECOS JM109, mediante lo cual se construyó pcDNA3.1zeo/HA-hTMEM173(H232R).
(ii) Construcción de plásmido de expresión de luciferasa de luciérnaga
Se construyó un plásmido de expresión de luciferasa de luciérnaga mediante la inserción de un promotor de CMV en un vector indicador. Se llevó a cabo la PCR mediante el uso del vector pcDNA3.1(+) (Invitrogen) como plantilla y mediante el uso de dos tipos de cebador (5'-ATAATAAGATCTGTTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAG-3' (CMVPro-BglII-F) (SEQ ID NO. 13) y 5'-ATAATAAAGCTTGAGCTCTGCTTATATAGACCTCCC-3' (CMVPro-HindIII-R) (SEQ ID NO. 14). La PCR se llevó a cabo mediante el uso de polimerasa de ADN PrimeStar MAX sucesivamente (1) a 98 °C durante 1 minuto, (2) repeticiones de 25 veces a 98 °C durante 10 segundos y a 68 °C durante 3 segundos, y (3) a 72 °C durante 1 minuto. El segmento obtenido se cortó con Bgl II y Hind III (Takara Bio Inc.), se insertó en el siio Bgl II/Hind III de pGL4.17 (Promega Corporation) mediante el uso de Ligation High (Toyobo Co., Ltd), y se transfectó a ECOS JM109, mediante lo cual se construyó pGL4.17/CMV Pro.
Ensayo de gen indicador (1)
Se construyó una línea celular 293T expresora estable con el vector pNL[NLucP/ISRE/Hygro] (Promega, Fitchburg, WI, EUA). Se transfectó pcDNA3.3zeo/HA-hTMEM173(H232R) a las células mediante el uso de FugeneHD (Promega, Fitchburg, WI, EUA), y las células se cultivaron durante un día mediante el uso de medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) que contenía suero fetal bovino al 10 %. Las células se recogieron y se criopreservaron mediante CELLBANKER 1 (Nippon Zenyaku Kogyo Co., Ltd.).
En el día del ensayo, el compuesto de prueba diluido con amortiguador de ensayo (DMEM que contenía albúmina de suero fetal bovino al 0,1 % libre de ácido graso) se agregó a una placa blanca de 384 pocillos (Corning, NY, EUA) a 10 pl/pocillo. Las células criopreservadas se descongelaron y las células suspendidas en amortiguador de ensayo se colocaron en las palcas a 10 pl/pocillo (10000 células/pocillo). Las células se cultivaron a 37 °C en condición de CO2 al 5 % durante 20 horas, y se agregó a estas una solución de reactivo NanoGlo (Promega, Fitchburg, WI, EUA) (20 pl). Después de incubar durante 5 minutos, se midió el nivel de luminiscencia mediante el uso de EnVision (PerkinElmer, Waltham, MA, EUA). El nivel de actividad de cada compuesto de prueba se calculó cuando el conteo en las células tratadas con 2'-3'-cGAMP (30 pM) se consideró como 100 % y el conteo de las células tratadas con el disolvente se consideró como 0 %. Los resultados se muestran en la Tabla 3.
Tabla 3: Prueba de actividad agonista de STING
Figure imgf000134_0001
(co n tin u a c ió n )
Figure imgf000135_0002
Queda claro a partir de los resultados anteriores que el compuesto de la presente divulgación tiene actividad agonista contra STING de tipo silvestre.
Ensayo de gen indicador (2)
Se construyó una línea celular 293T expresora estable con el vector pNL[NLucP/ISRE/Hygro] (Promega, Fitchburg, WI, EUA). Una suspensión, que se preparó mediante la transfección de pcDNA3.1zeo/HA-hTMEM173(H232R) o pcDNA3.1HA/HA-hTMEM173v1 junto con plásmido de expresión de luciferasa de luciérnaga a las células mediante el uso de FugeneHD (Promega, Fitchburg, W i, EUA), se agregó a una placa de 384 pocillos (Corning, NY, EUA), y las células se cultivaron durante dos días. La solución de cultivo se retiró y el compuesto de prueba diluido con amortiguador de ensayo (HEPES 50 mM, pH 7,0, KCl 100 mM, MgCh 3 mM, sacarosa 85 mM, DTT 0,1 mM, BSA al 0,2 %, ATP 1 mM, GTP 0,1 mM, 10 pg/ml de digitonina) se agregó a esta a 15 pl/pocillo. Las células se cultivaron a 37 °C en condición de CO2 al 5 % durante 30 minutos, y se eliminó el amortiguador de ensayo. A esto se le agregó medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) que contenía suero fetal bovino al 10 % a 20 pl/pocillo, y las células se cultivaron a 37 °C en una condición de CO2 al 5 % durante 4 horas. Cada una de las señales de luminiscencia derivadas de luciferasa de luciérnaga y luciferasa NanoLuc se midió mediante el uso de EnVision (PerkinElmer, Waltham, MA, EUA) de acuerdo con el protocolo del sistema de ensayo indicador Nano-Glo Dual-Luciferase (Promega, Fitchburg, WI, EUA). La proporción del conteo de luciferasa NanoLuc dividida por el conteo de luciferasa de luciérnaga se utilizó para el cálculo. El nivel de actividad de cada compuesto de prueba se calculó cuando la proporción en las células tratadas con 2'-3'-cGAMP (30 pM) se consideró como 100 % y la proporción de las células tratadas con el disolvente se consideró como 0 %. Los resultados se muestran en la Tabla 4.
T l 4 Pr i i ni TI
Figure imgf000135_0001
co n tin u a c ió n
Figure imgf000136_0001
Queda claro a partir de los resultados anteriores que el compuesto de la presente divulgación tiene actividad agonista contra STING de tipo silvestre y STING de tipo mutado (R232H).
Ejemplo 37
Detección de proteína IRF3 fosforilada en células FaDu
Se colocó en placas la línea celular FaDu de células de cáncer humano de laringe (ATCC), el medio se reemplazó con medio libre de suero un día después de la colocación en placas. Después del reemplazo, las células se cultivaron durante un día y se les agregó a las células el ligando natural 2',3'-cGAMP (la concentración final; 30 pM) y compuesto de prueba (la concentración final; 15 pM o 30 pM). 6 horas después de la adición, las células se lavaron con PBS, el extracto celular se preparó y la proteína IRF3 fosforilada se detectó mediante el método ELISA o el método de ensayo de inmunotransferencia Western. La actividad de fosforilación de la proteína IRF3 del compuesto de prueba se calculó cuando el valor de la muestra con la adición del ligando natural 2',3'-cGAMP a la concentración final de 30 pM se consideró como 100 %. Los resultados se muestran en la Tabla 5.
Tabla 5: Prueba de f f ril i n l r ín IRF
Figure imgf000136_0002
Queda claro a partir de los resultados anteriores que el compuesto de la presente divulgación promueve la fosforilación de IRF3, que es la señal posterior de STING, como en el ligando natural 2',3'-cGAMP. Es decir, el compuesto de la presente divulgación activa la señal posterior de STING, como un agonista de STING.
Ejemplo 38
Ejemplo de formulación
Se puede producir un medicamento que contiene el compuesto de la presente divulgación como ingrediente activo, por ejemplo, basándose en la siguiente composición.
1. cápsula
(1) el compuesto obtenido en el Ejemplo 1 10 mg
(2) lactosa 90 mg
(3) celulosa cristalina 70 mg
(4) estearato de magnesio 10 mg
1 cápsula 180 mg
(1), (2), (3) y 5 mg de (4) se mezclan y se granulan. A esto se agregan los restantes 5 mg de (4) y la cantidad total se usa para rellenar una cápsula de gelatina.
2. comprimido
(1) el compuesto obtenido en el Ejemplo 1 10 mg
(2) lactosa 35 mg
(3) almidón de maíz 150 mg
(4) celulosa cristalina 30 mg
(5) estearato de magnesio 5 mg
1 comprimido 230 mg
(1), (2), (3), 20 mg de (4) y 2,5 mg de (5) se mezclan y se granulan. A esto se le agregan los 10 mg restantes de (4) y los 2,5 mg restantes de (5) y la mezcla se comprime para proporcionar un comprimido.
Aplicabilidad industrial
El compuesto de la presente divulgación puede tener una actividad agonista de STING. Por lo tanto, el compuesto de la presente divulgación puede utilizarse como agonista de STING y puede ser útil como agente para la profilaxis y el tratamiento de enfermedades relacionadas con STING, inclusive cáncer y similares.
Se entenderá que no se pretende que las realizaciones descritas y los ejemplos anteriores sean limitantes de modo alguno respecto al alcance de la descripción, y que se pretende que las reivindicaciones que se presentan en la presente abarquen todas las realizaciones y ejemplos, ya sea que se presenten o no de forma explícita en la presente.

Claims (16)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto que posee la fórmula (X):
Figure imgf000144_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde:
cada uno de R1 y R2 es independientemente un grupo hidroxi o un átomo de halógeno;
B1 es
Figure imgf000144_0002
R18 es hidrógeno o alquilo C1-6; y
R19 es un átomo de halógeno;
B2 es:
Figure imgf000144_0003
Q2 y Q4 son independientemente un átomo de oxígeno o un átomo de azufre.
2. El compuesto de la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R19 es fluoro o cloro.
3. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R1 es un grupo hidroxi.
4. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R2 es un grupo hidroxilo o un átomo de fluoro.
5. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q4 es un átomo de azufre.
6. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q2 es un átomo de oxígeno.
7. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde Q2 es un átomo de azufre.
8. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, que posee la fórmula (XII):
Figure imgf000145_0001
9. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-8, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R18 es hidrógeno o metilo.
10. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-8, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde R18 es hidrógeno y R19 es un átomo de fluoro.
11. El compuesto de la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, que se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000146_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable de este.
12. El compuesto de la reivindicación 11 seleccionado del grupo que consiste en:
Figure imgf000147_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable de este.
13. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-12, donde la sal farmacéuticamente aceptable es la sal de trietilamina.
14. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-12, donde la sal farmacéuticamente aceptable es la sal de sodio.
15. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-14, o una sal farmacéuticamente aceptable de esta, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
16. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-14, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, para su uso en el tratamiento del cáncer.
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