RS61818B1 - Ciklični dinukleotidi kao sting (stimulator gena za interferon) agonisti - Google Patents

Ciklični dinukleotidi kao sting (stimulator gena za interferon) agonisti

Info

Publication number
RS61818B1
RS61818B1 RS20210562A RSP20210562A RS61818B1 RS 61818 B1 RS61818 B1 RS 61818B1 RS 20210562 A RS20210562 A RS 20210562A RS P20210562 A RSP20210562 A RS P20210562A RS 61818 B1 RS61818 B1 RS 61818B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
group
compound
examples
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
Prior art date
Application number
RS20210562A
Other languages
English (en)
Inventor
Masato Yoshikawa
Morihisa Saitoh
Taisuke Kato
Yayoi Yoshitomi
Tomohiro Seki
Yasuo Nakagawa
Yusuke Tominari
Masaki Seto
Yusuke Sasaki
Masanori Okaniwa
Tsuneo Oda
Akito Shibuya
Kosuke HIDAKA
Zenyu Shiokawa
Shumpei Murata
Atsutoshi Okabe
Yoshihisa Nakada
Michiyo Mochizuki
Brian Scott Freeze
Taisuke Tawaraishi
Yasufumi Wada
Paul D Greenspan
Original Assignee
Takeda Pharmaceuticals Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from JP2017107216A external-priority patent/JP2018090562A/ja
Application filed by Takeda Pharmaceuticals Co filed Critical Takeda Pharmaceuticals Co
Publication of RS61818B1 publication Critical patent/RS61818B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7084—Compounds having two nucleosides or nucleotides, e.g. nicotinamide-adenine dinucleotide, flavine-adenine dinucleotide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6871—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting an enzyme
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

Opis
TEHNIČKA OBLAST
[0001] Predmetna objava obezbeđuje ciklični dinukleotid koji ima STING (stimulator gena za interferon) agonističku aktivnost, koji može biti koristan kao agens za profilaksu ili lečenje kancera i drugih bolesti.
POZADINA PRONALASKA
[0002] STING je receptor koji prepoznaje nukleinsku kiselinu različitu od TLR (tol-sličan receptor). Primeri prirodnog liganda koji se prepoznaju uključuju ciklične dinukleotide (CDN) poreklom od bakterija/protozoa, 2',3'-cGAMP sintetisane uzvodnom cGAS (ciklična GMP-AMP sintaza), i slično (Trends In Immunology 35:88-93 (2014)). Objavljeno je da se 2', 3'-cGAMP, koji je jedan od prirodnih liganada, razlaže pomoću ENPP1 (ekto-nukleotidpirofosfataza/fosfodiesteraza), koja je jedna od pirofosfataza/fosfodiesteraza, i da se drugi CDN razlažu fosfodiesterazom (Nat Chem Biol 10:1043-1048 (2014); Cell Res 25:539-550 (2015); Biochemistry 55:837-849 (2016)). STING se aktivira ovim prirodnim ligandima, i indukuje fosforilaciju TBK1 (TANK vezujuća kinaza 1) nizvodno, i aktivira IRF3 (interferon regulatorni faktor 3) signal i NFkB signal dalje nizvodno, i time se indukuje odgovor interferona (IFN) tipa I (Trends in Immunology 35:88-93 (2014)). Na važnost STING signala kod kancera ukazuje test koji upotrebljava nokaut miša. Objavljeno je da kod tumoralograftovanih miševa koji upotrebljavaju nokaut miševe za STING i njegov nizvodni signal, IRF3, ćelije kancera rastu suprimiranjem imunskog sistema kancera, u poređenju sa miševima divljeg tipa (Immunity 41:830-842 (2014)). Pored toga, takođe je objavljeno da je rast ćelija kancera kod tumor-alograftovanog miša suprimiran terapijom zračenjem, ali kod nokaut miševa za STING i IFNAR1 (interferon (alfa i beta) receptor 1, receptor IFN tipa I proizveden nizvodnim signalom), efekat terapije zračenjem je smanjen (Immunity 41:843-852 (2014)). Iz tih razloga, smatra se da STING igra važnu ulogu u suprimiranju rasta ćelija kancera, i aktivacija imunskog signala, koja je indukovana aktivacijom STING, dovodi do antikancerske aktivnosti. Prema tome STING agonist se može upotrebljavati kao antikancerski agens koji ciljno deluje prema imunitetu kancera. Pored toga, smatra se da aktivacija STING igra važnu ulogu u imunskom efektu vakcine, pošto aktivacija aktivira prirodni imunitet (Ther Adv Vaccines 1:131-143 (2013)). Prema tome, STING agonist se može upotrebljavati kao adjuvans za različite vakcine.
[0003] Poznati su sledeći ciklični dinukleotidi.
Patentni dokument 1 (WO 2014/093936) objavljuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
pri čemu je svaki simbol kao što je definisano u Patentnom dokumentu 1, koje je u skladu sa Patentnim dokumentom 1 STING-zavisni TBK1 aktivator, i korisno je za lečenje kancera (posebno čvrstog kancera) i slično, i takođe je korisno kao adjuvans. Patentni dokument 2 (WO 2014/189805) objavljuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
pri čemu je svaki simbol kao što je definisano u Patentnom dokumentu 2, koje je u skladu sa Patentnim dokumentom 2 imunski stimulator putem STING, i korisno je za lečenje kancera i slično.
Patentni dokument 3 (WO 2015/077354) i Nepatentni dokument 8 (Cell reports 11, 1018-1030 (2015)) objavljuju jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
pri čemu je svaki simbol kao što je definisano u Patentnom dokumentu 3, koje je u skladu sa Patentnim dokumentom 3 STING agonist, i korisno je za lečenje kancera i slično.
Patentni dokument 4 (WO 2013/185052) i Nepatentni dokument 9 (Sci. Transl. Med.
283, 283ra52 (2015)) objavljuju c-di-AMP, c-di-GMP, c-di-IMP, c-AMP-GMP, c-AMP-IMP i c-GMP-IMP, koji su u skladu sa Patentnim dokumentom 4 STING-zavisni TBK1 aktivatori.
Patentni dokument 5 (WO 2014/189806) objavljuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
pri čemu je svaki simbol kao što je definisano u Patentnom dokumentu 5,
koje u skladu sa Patentnim dokumentom 5 inhibira STING-zavisnu transdukciju signala, i korisno je za lečenje autoimunskih bolesti i slično.
Patentni dokument 6 (WO 2015/185565) objavljuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
pri čemu je svaki simbol kao što je definisano u Patentnom dokumentu 6, koje je u skladu sa Patentnim dokumentom 6 STING modulator, i korisno je za lečenje inflamacije, alergijske autoimunske bolesti, kancera i slično, i takođe je korisno kao adjuvans za vakcinu.
Patentni dokument 7 (WO 2014/179760) objavljuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
pri čemu je svaki simbol kao što je definisano u Patentnom dokumentu 7, koje u skladu sa Patentnim dokumentom 7 može povećati proizvodnju interferona tipa I, i korisno je za lečenje kancera, autoimunskih bolesti, alergijske reakcije i slično, i takođe je korisno kao adjuvans.
Patentni dokument 8 (WO 2014/179335) i Nepatentni dokument 10 (Mol. Cell 154, 748-762 (2013)) objavljuju jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
pri čemu je svaki simbol kao što je definisano u Patentnom dokumentu 8, koje u skladu sa Patentnim dokumentom 8 može povećati proizvodnju interferona tipa I, i korisno je za lečenje bolesti koje karakteriše inflamacija, autoimunske bolesti, Sjogrenovog (Sjogren’s) sindroma i slično.
Patentni dokument 9 (WO 2015/017652) objavljuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
koje je u skladu sa Patentnim dokumentom 9 STING modulator, i korisno je za lečenje kancera, autoimunskih bolesti i slično, i takođe je korisno kao vakcina.
Patentni dokument 10 (WO 2016/096577) objavljuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
koje je u skladu sa Patentnim dokumentom 10 STING agonist, i korisno je za lečenje kancera (posebno čvrstog kancera pankreasa) i slično.
Patentni dokument 11 (WO 2011/003025) objavljuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
koje je u skladu sa Patentnim dokumentom 11 STING agonist.
Patentni dokument 12 (WO 2016/096174) objavljuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
koje je u skladu sa Patentnim dokumentom 12 STING agonist.
Patentni dokument 13 (WO 2016/120305) objavljuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
koje je u skladu sa Patentnim dokumentom 13 STING agonist.
Patentni dokument 14 (WO 2016/145102) objavljuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
pri čemu je svaki simbol kao što je definisano u Patentnom dokumentu 14, koje je u skladu sa Patentnim dokumentom 14 STING agonist.
Patentni dokument 15 (WO 2017/027646) objavljuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
pri čemu je svaki simbol kao što je definisano u Patentnom dokumentu 15, koje je u skladu sa Patentnim dokumentom 15 STING agonist.
Patentni dokument 16 (WO 2017/075477) objavljuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
pri čemu je svaki simbol kao što je definisano u Patentnom dokumentu 16, koje je u skladu sa Patentnim dokumentom 16 STING agonist.
Patentni dokument 17 (WO 2017/027645) objavljuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom:
pri čemu je svaki simbol kao što je definisano u Patentnom dokumentu 17, koje je u skladu sa Patentnim dokumentom 17 STING agonist.
KRATAK SAŽETAK PRONALASKA
[0004] Ovde se objavljuju jedinjenja predstavljena formulom (I):
pri čemu:
delimična struktura predstavljena formulom (A-1):
je delimična struktura predstavljena formulom (IIA):
R<1>i R<2>su svaki nezavisno hidroksi grupa ili atom halogena; B<1>je grupa predstavljena sa
1
R<13>, R<14>i R<15>su svaki nezavisno atom vodonika ili supstituent;
Y<11>, Y<12>i Y<13>su svaki nezavisno N ili CR<1a>;
Z<11>, Z<12>i Z<13>su svaki nezavisno N ili C;
R<1a>je atom vodonika ili supstituent;
B<2>je grupa predstavljena sa
R<23>, R<24>, R<25>, R<26>i R<27>su svaki nezavisno atom vodonika ili supstituent;
Y<21>, Y<22>, Y<23>, Y<24>, Y<25>i Y<26>su svaki nezavisno N ili CR<2a>;
Z<21>, Z<22>, Z<23>, Z<24>, Z<25>i Z<26>su svaki nezavisno N ili C;
R<2a>je atom vodonika ili supstituent;
pod uslovom da
i) najmanje jedan od Y<11>, Y<12>, Y<13>, Y<14>, Y<15>i Y<16>je C<R1a>,
ii) najmanje jedan od Y<21>, Y<22>, Y<23>, Y<24>, Y<25>i Y<26>je C<R2a>, ili
iii) najmanje jedan od Z<13>, Z<16>, Z<23>i Z<26>je C; X<1>i X<2>su svaki nezavisno atom kiseonika ili atom sumpora; i
Q<1>, Q<2>, Q<3>i Q<4>su svaki nezavisno atom kiseonika ili atom sumpora,
ili njihova so (ovde u daljem tekstu ponekad će biti označeno kao jedinjenje (I)).
[0005] U prvom aspektu, ovde je obezbeđeno jedinjenje predstavljeno formulom (X):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
R<1>i R<2>su svaki nezavisno hidroksi grupa ili atom halogena;
B<1>je:
R<18>je vodonik ili C1-6alkil; i
R<19>atom halogena
B<2>je:
i
Q<2>i Q<4>su svaki nezavisno atom kiseonika ili atom sumpora.
[0006] U jednom primeru izvođenja, R<19>je fluoro ili hloro.
[0007] U sledećem primeru izvođenja, R<1>je hidroksi grupa.
[0008] U sledećem primeru izvođenja, R<2>je hidroksilna grupa ili atom fluora.
[0009] U sledećem primeru izvođenja, Q<4>je atom sumpora.
[0010] U sledećem primeru izvođenja, Q<2>je atom kiseonika.
[0011] U sledećem primeru izvođenja, Q<2>je atom sumpora.
[0012] U sledećem primeru izvođenja, objava obezbeđuje jedinjenje predstavljeno formulom (XII):
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0013] U sledećem primeru izvođenja, R<18>je vodonik ili metil.
[0014] U sledećem primeru izvođenja, R<18>je vodonik i R<19>je atom fluora.
[0015] U sledećem primeru izvođenja, objava obezbeđuje jedinjenje odabrano iz grupe koja se sastoji od:
1
i njihove farmaceutski prihvatljive soli.
[0016] U sledećem primeru izvođenja, objava obezbeđuje 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10,16trihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on, ili njegovu so.
[0017] U sledećem primeru izvođenja, objava obezbeđuje 7-((2R,5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d] pirimidin-4-on, ili njegovu so.
[0018] U sledećem primeru izvođenja, objava obezbeđuje 7-((2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-hidroksi-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d] pirimidin-4-on, ili njegovu so. U sledećem primeru izvođenja, farmaceutski prihvatljiva so je trietilamin so.
[0019] U sledećem primeru izvođenja, farmaceutski prihvatljiva so je natrijumova so.
[0020] U sledećem primeru izvođenja, objava obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje ili so formule (X) i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.
[0021] U sledećem primeru izvođenja, objava obezbeđuje jedinjenje koje ima Formulu (X), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju kancera.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0022]
Sl. 1 je linijski grafikon koji pokazuje oslobađanje korisnog tereta 1 iz ADC1 (za referencu).
Sl. 2 je linijski grafikon koji pokazuje oslobađanje korisnog tereta 1 iz ADC2 (za referencu).
Sl. 3 je linijski grafikon koji pokazuje oslobađanje korisnog tereta 2 iz ADC3 (za referencu).
Sl. 4 je bar grafikon koji pokazuje da HEK293 ćelije koje eksprimiraju površinske receptore ciljeve za ADC1 pokazuju očekivano povećanje markera STING puta fosfo-IRF3 (pIRF3) kada su tretirane sa ADC1 (za referencu).
1
Sl. 5 je bar grafikon koji pokazuje da HEK293 ćelije koje eksprimiraju površinske receptore ciljeve za ADC2 pokazuju očekivano povećanje markera STING puta fosfo-IRF3 (pIRF3) kada su tretirane sa ADC2 (za referencu).
Sl. 6 je bar grafikon koji pokazuje da HEK293 ćelije koje eksprimiraju površinske receptore ciljeve za ADC3 pokazuju očekivano povećanje markera STING puta fosfo-IRF3 (pIRF3) kada su tretirane sa ADC3 (za referencu).
Sl. 7 je bar grafikon koji pokazuje Western blot analize aktiviranja nizvodnog signalnog puta (TBK1 i IRF3) za jedinjenje Pr.14.
Sl. 8 je linijski grafikon koji pokazuje antitumorsku aktivnost jedinjenja Pr. 3a u karcinom kolona CT-26 singenom mišjem modelu.
Sl. 9 je linijski grafikon koji pokazuje antitumorsku aktivnost jedinjenja Pr. 14 u karcinom kolona CT-26 singenom mišjem modelu.
Sl. 10 je linijski grafikon koji pokazuje antitumorsku aktivnost jedinjenja Pr. 3a u karcinom kolona B16F10 singenom mišjem modelu.
Sl. 11 je linijski grafikon koji pokazuje antitumorsku aktivnost jedinjenja Pr. 14 u karcinom kolona B16F10 singenom mišjem modelu.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0023] Predmetna objava je dataljnije objašnjena ispod.
[0024] Definicija svakog supstituenta koji se upotrebljava u predmetnoj specifikaciji detaljno je opisana u nastavku. Ukoliko nije drugačije naznačeno, svaki supstituent ima sledeću definiciju.
[0025] U predmetnoj specifikaciji, primeri "atoma halogena" uključuju fluor, hlor, brom i jod.
[0026] U predmetnoj specifikaciji, primeri "C1-6alkil grupe" uključuju metil, etil, propil, izopropil, butil, izobutil, sek-butil, terc-butil, pentil, izopentil, neopentil, 1-etilpropil, heksil, izoheksil, 1,1-dimetilbutil, 2,2-dimetilbutil, 3,3-dimetilbutil i 2-etilbutil.
[0027] U predmetnoj specifikaciji, primeri "opciono halogenisane C1-6alkil grupe" uključuju C1-6alkil grupu koja opciono ima 1 do 7, poželjno 1 do 5, atoma halogena. Njeni specifični primeri uključuju metil, hlorometil, difluorometil, trihlorometil, trifluorometil, etil, 2-bromoetil, 2,2,2-trifluoroetil, tetrafluoroetil, pentafluoroetil, propil, 2,2-difluoropropil, 3,3,3-trifluoropropil, izopropil, butil, 4,4,4-trifluorobutil, izobutil, sek-butil, terc-butil, pentil, izopentil, neopentil, 5,5,5-trifluoropentil, heksil i 6,6,6-trifluoroheksil.
1
[0028] U predmetnoj specifikaciji, primeri "C2-6alkenil grupe" uključuju etenil, 1-propenil, 2-propenil, 2-metil-1-propenil, 1-butenil, 2-butenil, 3-butenil, 3-metil-2-butenil, 1-pentenil, 2-pentenil, 3-pentenil, 4-pentenil, 4-metil-3-pentenil, 1-heksenil, 3-heksenil i 5-heksenil.
[0029] U predmetnoj specifikaciji, primeri "C2-6alkinil grupe" uključuju etinil, 1-propinil, 2-propinil, 1-butinil, 2-butinil, 3-butinil, 1-pentinil, 2-pentinil, 3-pentinil, 4-pentinil, 1-heksinil, 2-heksinil, 3-heksinil, 4-heksinil, 5-heksinil i 4-metil-2-pentinil.
[0030] U predmetnoj specifikaciji, primeri "C3-10cikloalkil grupe" uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, biciklo[2.2.1]heptil, biciklo[2.2.2]oktil, biciklo[3.2.1]oktil i adamantil.
[0031] U predmetnoj specifikaciji, primeri "opciono halogenisane C3-10cikloalkil grupe" uključuju C3-10cikloalkil grupu koja opciono ima 1 do 7, poželjno 1 do 5, atoma halogena. Njeni specifični primeri uključuju ciklopropil, 2,2-difluorociklopropil, 2,3-difluorociklopropil, ciklobutil, difluorociklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil i ciklooktil.
[0032] U predmetnoj specifikaciji, primeri "C3-10cikloalkenil grupe" uključuju ciklopropenil, ciklobutenil, ciklopentenil, cikloheksenil, cikloheptenil i ciklooktenil.
[0033] U predmetnoj specifikaciji, primeri "C6-14aril grupe" uključuju fenil, 1-naftil, 2-naftil, 1-antril, 2-antril i 9-antril.
[0034] U predmetnoj specifikaciji, primeri "C7-16aralkil grupe" uključuju benzil, fenetil, naftilmetil i fenilpropil.
[0035] U predmetnoj specifikaciji, primeri "C1-6alkoksi grupe" uključuju metoksi, etoksi, propoksi, izopropoksi, butoksi, izobutoksi, sek-butoksi, terc-butoksi, pentiloksi i heksiloksi.
[0036] U predmetnoj specifikaciji, primeri "opciono halogenisane C1-6alkoksi grupe" uključuju C1-6alkoksi grupu koja opciono ima 1 do 7, poželjno 1 do 5, atoma halogena. Njeni specifični primeri uključuju metoksi, difluorometoksi, trifluorometoksi, etoksi, 2,2,2-trifluoroetoksi, propoksi, izopropoksi, butoksi, 4,4,4-trifluorobutoksi, izobutoksi, sek-butoksi, pentiloksi i heksiloksi.
[0037] U predmetnoj specifikaciji, primeri "C3-10cikloalkiloksi grupe" uključuju ciklopropiloksi, ciklobutiloksi, ciklopentiloksi, cikloheksiloksi, cikloheptiloksi i ciklooktiloksi.
[0038] U predmetnoj specifikaciji, primeri "C1-6alkiltio grupe" uključuju metiltio, etiltio, propiltio, izopropiltio, butiltio, sek-butiltio, terc-butiltio, pentiltio i heksiltio.
[0039] U predmetnoj specifikaciji, primeri "opciono halogenisane C1-6alkiltio grupe" uključuju C1-6alkiltio grupu koja opciono ima 1 do 7, poželjno 1 do 5, atoma halogena. Njeni
1
specifični primeri uključuju metiltio, difluorometiltio, trifluorometiltio, etiltio, propiltio, izopropiltio, butiltio, 4,4,4-trifluorobutiltio, pentiltio i heksiltio.
[0040] U predmetnoj specifikaciji, primeri "C1-6alkil-karbonil grupe" uključuju acetil, propanoil, butanoil, 2-metilpropanoil, pentanoil, 3-metilbutanoil, 2-metilbutanoil, 2,2-dimetilpropanoil, heksanoil i heptanoil.
[0041] U predmetnoj specifikaciji, primeri "opciono halogenisane C1-6alkil-karbonil grupe" uključuju C1-6alkil-karbonil grupu koja opciono ima 1 do 7, poželjno 1 do 5, atoma halogena. Njeni specifični primeri uključuju acetil, hloroacetil, trifluoroacetil, trihloroacetil, propanoil, butanoil, pentanoil i heksanoil.
[0042] U predmetnoj specifikaciji, primeri "C1-6alkoksi-karbonil grupe" uključuju metoksikarbonil, etoksikarbonil, propoksikarbonil, izopropoksikarbonil, butoksikarbonil, izobutoksikarbonil, sek-butoksikarbonil, terc-butoksikarbonil, pentiloksikarbonil i heksiloksikarbonil.
[0043] U predmetnoj specifikaciji, primeri "C6-14aril-karbonil grupe" uključuju benzoil, 1-naftoil i 2-naftoil.
[0044] U predmetnoj specifikaciji, primeri "C7-16aralkil-karbonil grupe" uključuju fenilacetil i fenilpropionil.
[0045] U predmetnoj specifikaciji, primeri "aromatične heterociklilkarbonil grupe sa 5 do 14 članova" uključuju nikotinoil, izonikotinoil, tenoil i furoil.
[0046] U predmetnoj specifikaciji, primeri "nearomatične heterociklilkarbonil grupe sa 3 do 14 članova" uključuju morfolinilkarbonil, piperidinilkarbonil i pirolidinilkarbonil.
[0047] U predmetnoj specifikaciji, primeri "mono- ili di-C1-6alkil-karbamoil grupe" uključuju metilkarbamoil, etilkarbamoil, dimetilkarbamoil, dietilkarbamoil i N-etil-N-metilkarbamoil.
[0048] U predmetnoj specifikaciji, primeri "mono- ili di-C7-16aralkil-karbamoil grupe" uključuju benzilkarbamoil i fenetilkarbamoil.
[0049] U predmetnoj specifikaciji, primeri "C1-6alkilsulfonil grupe" uključuju metilsulfonil, etilsulfonil, propilsulfonil, izopropilsulfonil, butilsulfonil, sek-butilsulfonil i tercbutilsulfonil.
[0050] U predmetnoj specifikaciji, primeri "opciono halogenisane C1-6alkilsulfonil grupe" uključuju C1-6alkilsulfonil grupu koja opciono ima 1 do 7, poželjno 1 do 5, atoma halogena. Njeni specifični primeri uključuju metilsulfonil, difluorometilsulfonil, trifluorometilsulfonil, etilsulfonil, propilsulfonil, izopropilsulfonil, butilsulfonil, 4,4,4-trifluorobutilsulfonil, pentilsulfonil i heksilsulfonil.
1
[0051] U predmetnoj specifikaciji, primeri "C6-14arilsulfonil grupe" uključuju fenilsulfonil, 1-naftilsulfonil i 2-naftilsulfonil.
[0052] U predmetnoj specifikaciji, primeri "supstituenta" uključuju atom halogena, cijano grupu, nitro grupu, opciono supstituisanu ugljovodoničnu grupu, opciono supstituisanu heterocikličnu grupu, acil grupu, opciono supstituisanu amino grupu, opciono supstituisanu karbamoil grupu, opciono supstituisanu tiokarbamoil grupu, opciono supstituisanu sulfamoil grupu, opciono supstituisanu hidroksi grupu, opciono supstituisanu sulfanil (SH) grupu i opciono supstituisanu silil grupu.
[0053] U predmetnoj specifikaciji, primeri "ugljovodonične grupe" (uključujući "ugljovodoničnu grupu" "opciono supstituisane ugljovodonične grupe") uključuju C1-6alkil grupu, C2-6alkenil grupu, C2-6alkinil grupu, C3-10cikloalkil grupu, C3-10cikloalkenil grupu, C6-14aril grupu i C7-16aralkil grupu.
[0054] U predmetnoj specifikaciji, primeri "opciono supstituisane ugljovodonične grupe" uključuju ugljovodoničnu grupu koja opciono ima supstituent(e) odabrane iz sledeće Grupe A supstituenata.
"Grupa A supstituenata":
[0055]
(1) atom halogena,
(2) nitro grupa,
(3) cijano grupa,
(4) okso grupa,
(5) hidroksi grupa,
(6) opciono halogenisana C1-6alkoksi grupa,
(7) C6-14ariloksi grupa (npr., fenoksi, naftoksi),
(8) C7-16aralkiloksi grupa (npr., benziloksi),
(9) aromatična heterocikliloksi grupa sa 5 do 14 članova (npr., piridiloksi),
(10) nearomatična heterocikliloksi grupa sa 3 do 14 članova (npr., morfoliniloksi, piperidiniloksi),
(11) C1-6alkil-karboniloksi grupa (npr., acetoksi, propanoiloksi),
(12) C6-14aril-karboniloksi grupa (npr., benzoiloksi, 1-naftoiloksi, 2-naftoiloksi),
1
(13) C1-6alkoksi-karboniloksi grupa (npr., metoksikarboniloksi, etoksikarboniloksi, propoksikarboniloksi, butoksikarboniloksi),
(14) mono- ili di-C1-6alkil-karbamoiloksi grupa (npr., metilkarbamoiloksi, etilkarbamoiloksi, dimetilkarbamoiloksi, dietilkarbamoiloksi),
(15) C6-14aril-karbamoiloksi grupa (npr., fenilkarbamoiloksi, naftilkarbamoiloksi), (16) aromatična heterociklilkarboniloksi grupa sa 5 do 14 članova (npr., nikotinoiloksi), (17) nearomatična heterociklilkarboniloksi grupa sa 3 do 14 članova (npr., morfolinilkarboniloksi, piperidinil karboniloksi),
(18) opciono halogenisana C1-6alkilsulfoniloksi grupa (npr., metilsulfoniloksi, trifluorometilsulfoniloksi),
(19) C6-14arilsulfoniloksi grupa opciono supstituisana sa C1-6alkil grupom (npr., fenilsulfoniloksi, toluensulfoniloksi),
(20) opciono halogenisana C1-6alkiltio grupa,
(21) aromatična heterociklična grupa sa 5 do 14 članova,
(22) nearomatična heterociklična grupa sa 3 do 14 članova,
(23) formil grupa,
(24) karboksi grupa,
(25) opciono halogenisana C1-6alkil-karbonil grupa,
(26) C6-14aril-karbonil grupa,
(27) aromatična heterociklilkarbonil grupa sa 5 do 14 članova,
(28) nearomatična heterociklilkarbonil grupa sa 3 do 14 članova,
(29) C1-6alkoksi-karbonil grupa,
(30) C6-14ariloksi-karbonil grupa (npr., feniloksikarbonil, 1-naftiloksikarbonil, 2-naftiloksikarbonil),
(31) C7-16aralkiloksi-karbonil grupa (npr., benziloksikarbonil, fenetiloksikarbonil), (32) karbamoil grupa,
(33) tiokarbamoil grupa,
(34) mono- ili di-C1-6alkil-karbamoil grupa,
(35) C6-14aril-karbamoil grupa (npr., fenilkarbamoil),
(36) aromatična heterociklilkarbamoil grupa sa 5 do 14 članova (npr., piridilkarbamoil, tienilkarbamoil),
(37) nearomatična heterociklilkarbamoil grupa sa 3 do 14 članova (npr., morfolinilkarbamoil, piperidinilkarbamoil),
(38) opciono halogenisana C1-6alkilsulfonil grupa,
2
(39) C6-14arilsulfonil grupa,
(40) aromatična heterociklilsulfonil grupa sa 5 do 14 članova (npr., piridilsulfonil, tienilsulfonil),
(41) opciono halogenisana C1-6alkilsulfinil grupa,
(42) C6-14arilsulfinil grupa (npr., fenilsulfinil, 1-naftilsulfinil, 2-naftilsulfinil),
(43) aromatična heterociklilsulfinil grupa sa 5 do 14 članova (npr., piridilsulfinil, tienilsulfinil),
(44) amino grupa,
(45) mono- ili di-C1-6alkilamino grupa (npr., metilamino, etilamino, propilamino, izopropilamino, butilamino, dimetilamino, dietilamino, dipropilamino, dibutilamino, N-etil-N-metilamino),
(46) mono- ili di-C6-14arilamino grupa (npr., fenilamino),
(47) aromatična heterociklilamino grupa sa 5 do 14 članova (npr., piridilamino), (48) C7-16aralkilamino grupa (npr., benzilamino),
(49) formilamino grupa,
(50) C1-6alkil-karbonilamino grupa (npr., acetilamino, propanoilamino, butanoilamino), (51) (C1-6alkil) (C1-6alkil-karbonil) amino grupa (npr., N-acetil-N-metilamino), (52) C6-14aril-karbonilamino grupa (npr., fenilkarbonilamino, naftilkarbonilamino), (53) C1-6alkoksi-karbonilamino grupa (npr., metoksikarbonilamino, etoksikarbonilamino, propoksikarbonilamino, butoksikarbonilamino, tercbutoksikarbonilamino),
(54) C7-16aralkiloksi-karbonilamino grupa (npr., benziloksikarbonilamino),
(55) C1-6alkilsulfonilamino grupa (npr., metilsulfonilamino, etilsulfonilamino), (56) C6-14arilsulfonilamino grupa koja je opciono supstituisana C1-6alkil grupom (npr., fenilsulfonilamino, toluensulfonilamino),
(57) opciono halogenisana C1-6alkil grupa,
(58) C2-6alkenil grupa,
(59) C2-6alkinil grupa,
(60) C3-10cikloalkil grupa,
(61) C3-10cikloalkenil grupa, i
(62) C6-14aril grupa.
[0056] Broj gore pomenutih supstituenata u "opciono supstituisanoj ugljovodoničnoj grupi" je, na primer, 1 do 5, poželjno 1 do 3. Kada je broj supstituenata dva ili više, odgovarajući supstituenti mogu biti isti ili različiti.
[0057] U predmetnoj specifikaciji, primeri "heterociklične grupe" (uključujući "heterocikličnu grupu" "opciono supstituisane heterociklične grupe") uključuju (i) aromatičnu heterocikličnu grupu, (ii) nearomatičnu heterocikličku grupu i (iii) premoštenu heterocikličnu grupu sa 7 do 10 članova, od kojih svaka sadrži, kao atom koji čini prsten pored atoma ugljenika, 1 do 4 heteroatoma odabranih od atoma azota, atoma sumpora i atoma kiseonika.
[0058] U predmetnoj specifikaciji, primeri "aromatične heterociklične grupe" (uključujući "aromatičnu heterocikličnu grupu sa 5 do 14 članova") uključuju aromatičnu heterocikličnu grupu sa 5 do 14 članova (poželjno sa 5 do 10 članova) koja sadrži, kao atom koji čini prsten pored atoma ugljenika, 1 do 4 heteroatoma odabranih od atoma azota, atoma sumpora i atoma kiseonika.
[0059] Poželjni primeri "aromatične heterociklične grupe" uključuju monociklične aromatične heterociklične grupe sa 5 ili 6 članova kao što su tienil, furil, pirolil, imidazolil, pirazolil, tiazolil, izotiazolil, oksazolil, izoksazolil, piridil, pirazinil, pirimidinil, piridazinil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil, 1,2,4-tiadiazolil, 1,3,4-tiadiazolil, triazolil, tetrazolil, triazinil i slično; i
[0060] fuzionisane policiklične (poželjno bi ili triciklične) aromatične heterociklične grupe sa 8 do 14 članova kao što su benzotiofenil, benzofuranil, benzimidazolil, benzoksazolil, benzizoksazolil, benzotiazolil, benzizotiazolil, benzotriazolil, imidazopiridinil, tienopiridinil, furopiridinil, pirolopiridinil, pirazolopiridinil, okazolopiridinil, tiazolopiridinil, imidazopirazinil, imidazopirimidinil, tienopirimidinil, furopirimidinil, pirolopirimidinil, pirazolopirimidinil, okazolopirimidinil, tiazolopirimidinil, pirazolotriazinil, nafto[2,3-b]tienil, fenoksatiinil, indolil, izoindolil, 1H-indazolil, purinil, izokvinolil, kvinolil, ftalazinil, naftiridinil, kvinoksalinil, kvinazolinil, cinolinil, karbazolil, β-karbolinil, fenantridinil, akridinil, fenazinil, fenotiazinil, fenoksazinil i slično.
[0061] U predmetnoj specifikaciji, primeri "nearomatične heterociklične grupe" (uključujući "nearomatičnu heterocikličnu grupu sa 3 do 14 članova") uključuju nearomatičnu heterocikličnu grupu sa 3 do 14 članova (poželjno sa 4 do 10 članova) koja sadrži, kao atom koji čini prsten pored atoma ugljenika, 1 do 4 heteroatoma odabranih od atoma azota, atoma sumpora i atoma kiseonika.
[0062] Poželjni primeri "nearomatične heterociklične grupe" uključuju monociklične nearomatične heterociklične grupe sa 3 do 8 članova kao što su aziridinil, oksiranil, tiiranil, azetidinil, oksetanil, tietanil, tetrahidrotienil, tetrahidrofuranil, pirolinil, pirolidinil, imidazolinil, imidazolidinil, oksazolinil, oksazolidinil, pirazolinil, pirazolidinil, tiazolinil, tiazolidinil, tetrahidroizotiazolil, tetrahidrooksazolil, tetrahidroizookazolil, piperidinil, piperazinil, tetrahidropiridinil, dihidropiridinil, dihidrotiopiranil, tetrahidropirimidinil, tetrahidropiridazinil, dihidropiranil, tetrahidropiranil, tetrahidrotiopiranil, morfolinil, tiomorfolinil, azepanil, diazepanil, azepinil, oksepanil, azokanil, diazokanil i slično; i [0063] fuzionisane policiklične (poželjno bi ili triciklične) nearomatične heterociklične grupe sa 9 do 14 članova kao što su dihidrobenzofuranil, dihidrobenzimidazolil, dihidrobenzokazolil, dihidrobenzotiazolil, dihidrobenzizotiazolil, dihidronafto[2,3-b]tienil, tetrahidroizokvinolil, tetrahidrokvinolil, 4H-kvinolizinil, indolinil, izoindolil, tetrahidrotieno[2,3-c]piridinil, tetrahidrobenzazepinil, tetrahidrokvinoksalinil, tetrahidrofenantridinil, heksahidrofenotiazinil, heksahidrofenoksazinil, tetrahidroftalazinil, tetrahidronaftiridinil, tetrahidrokvinazolinil, tetrahidrocinolinil, tetrahidrokarbazolil, tetrahidro-β-karbolinil, tetrahidroakridinil, tetrahidrofenazinil, tetrahidrotioksantenil, oktahidroizokvinolil i slično.
[0064] U predmetnoj specifikaciji, poželjni primeri "premoštene heterociklične grupe sa 7 do 10 članova " uključuju kvinuklidinil i 7-azabiciklo[2.2.1]heptanil.
[0065] U predmetnoj specifikaciji, primeri "heterociklične grupe koja sadrži azot" uključuju "heterocikličnu grupu" koja sadrži najmanje jedan atom azota kao atom koji čini prsten.
[0066] U predmetnoj specifikaciji, primeri "opciono supstituisane heterociklične grupe" uključuju heterocikličnu grupu koja opciono ima supstituent(e) odabrane iz gore pomenute "Grupe A supstituenata".
[0067] Broj supstituenata u "opciono supstituisanoj heterocikličnoj grupi" je, na primer, 1 do 3. Kada je broj supstituenata dva ili više, odgovarajući supstituenti mogu biti isti ili različiti.
[0068] U predmetnoj specifikaciji, primeri "acil grupe" uključuju formil grupu, karboksi grupu, karbamoil grupu, tiokarbamoil grupu, sulfino grupu, sulfo grupu, sulfamoil grupu i fosfono grupu, koja svaka opciono ima "1 ili 2 supstituenta odabrana od C1-6alkil grupe, C2-6alkenil grupe, C3-10cikloalkil grupe, C3-10cikloalkenil grupe, C6-14aril grupe, C7-16aralkil grupe, aromatične heterociklične grupe sa 5 do 14 članova i nearomatične heterociklične grupe sa 3 do 14 članova, od kojih svaka opciono ima 1 do 3 supstituenta odabrana od atoma halogena, opciono halogenisane C1-6alkoksi grupe, hidroksi grupe, nitro grupe, cijano grupe, amino grupe i karbamoil grupe".
[0069] Primeri "acil grupe" takođe uključuju ugljovodoničnu-sulfonil grupu, heterociklilsulfonil grupu, ugljovodoničnu-sulfinil grupu i heterociklilsulfinil grupu.
2
[0070] Ovde ugljovodonična-sulfonil grupa znači sulfonil grupu vezanu na ugljovodoničnu grupu, heterociklilsulfonil grupa znači sulfonil grupu vezanu na heterocikličnu grupu, ugljovodonična-sulfinil grupa znači sulfinil grupu vezanu na ugljovodoničnu grupu i heterociklilsulfinil grupa znači sulfinil grupu vezanu na heterocikličnu grupu.
[0071] Poželjni primeri "acil grupe" uključuju formil grupu, karboksi grupu, C1-6alkilkarbonil grupu, C2-6alkenil-karbonil grupu (npr., krotonoil), C3-10cikloalkilkarbonil grupu (npr., ciklobutankarbonil, ciklopentankarbonil, cikloheksankarbonil, cikloheptankarbonil), C3-10cikloalkenil-karbonil grupu (npr., 2-cikloheksenkarbonil), C6-14aril-karbonil grupu, C7-
16aralkil-karbonil grupu, aromatičnu heterociklilkarbonil grupu sa 5 do 14 članova, nearomatičnu heterociklilkarbonil grupu sa 3 do 14 članova, C1-6alkoksi-karbonil grupu, C6-
14ariloksi-karbonil grupu (npr., feniloksikarbonil, naftiloksikarbonil), C7-16aralkiloksikarbonil grupu (npr., benziloksikarbonil, fenetiloksikarbonil), karbamoil grupu, mono- ili di-C1-6alkil-karbamoil grupu, mono- ili di-C2-6alkenil-karbamoil grupu (npr., dialilkarbamoil), mono- ili di-C3-10cikloalkil-karbamoil grupu (npr., ciklopropilkarbamoil), mono- ili di-C6-14aril-karbamoil grupu (npr., fenilkarbamoil), mono- ili di-C7-16aralkil-karbamoil grupu, aromatičnu heterociklilkarbamoil grupu sa 5 do 14 članova (npr., piridilkarbamoil), tiokarbamoil grupu, mono- ili di-C1-6alkil-tiokarbamoil grupu (npr., metiltiokarbamoil, N-etil-N-metiltiokarbamoil), mono- ili di-C2-6alkenil-tiokarbamoil grupu (npr., dialiltiokarbamoil), mono- ili di-C3-10cikloalkil-tiokarbamoil grupu (npr., ciklopropiltiokarbamoil, cikloheksiltiokarbamoil), mono- ili di-C6-14aril-tiokarbamoil grupu (npr., feniltiokarbamoil), mono- ili di-C7-16aralkil-tiokarbamoil grupu (npr., benziltiokarbamoil, fenetiltiokarbamoil), aromatičnu heterocikliltiokarbamoil grupu sa 5 do 14 članova (npr., piridiltiokarbamoil), sulfino grupu, C1-6alkilsulfinil grupu (npr., metilsulfinil, etilsulfinil), sulfo grupu, C1-6alkilsulfonil grupu, C6-14arilsulfonil grupu, fosfono grupu i mono- ili di-C1-6alkilfosfono grupu (npr., dimetilfosfono, dietilfosfono, diizopropilfosfono, dibutilfosfono).
[0072] U predmetnoj specifikaciji, primeri "opciono supstituisane amino grupe" uključuju amino grupu koja opciono ima "1 ili 2 supstituenta odabrana od C1-6alkil grupe, C2-6alkenil grupe, C3-10cikloalkil grupe, C6-14aril grupe, C7-16aralkil grupe, C1-6alkil-karbonil grupe, C6-
14aril-karbonil grupe, C7-16aralkil-karbonil grupe, aromatične heterociklilkarbonil grupe sa 5 do 14 članova, nearomatične heterociklilkarbonil grupe sa 3 do 14 članova, C1-6alkoksikarbonil grupe, aromatične heterociklične grupe sa 5 do 14 članova, karbamoil grupe, monoili di-C1-6alkil-karbamoil grupe, mono- ili di C7-16aralkil-karbamoil grupe, C1-6alkilsulfonil grupe i C6-14arilsulfonil grupe, od kojih svaka opciono ima 1 do 3 supstituenta odabrana iz "Grupe A supstituenta".
[0073] Poželjni primeri opciono supstituisane amino grupe uključuju amino grupu, mono- ili di-(opciono halogenisanu C1-6alkil) amino grupu (npr., metilamino, trifluorometilamino, dimetilamino, etilamino, dietilamino, propilamino, dibutilamino), mono- ili di-C2-6alkenilamino grupu (npr., dialilamino), mono- ili di-C3-10cikloalkilamino grupu (npr., ciklopropilamino, cikloheksilamino), mono- ili di-C6-14arilamino grupu (npr., fenilamino), mono- ili di-C7-16aralkilamino grupu (npr., benzilamino, dibenzilamino), mono- ili di-(opciono halogenisanu C1-6alkil)-karbonilamino grupu (npr., acetilamino, propionilamino), mono- ili di-C6-14aril-karbonilamino grupu (npr., benzoilamino), mono- ili di-C7-16aralkilkarbonilamino grupu (npr., benzilkarbonilamino), mono- ili di-aromatičnu heterociklilkarbonilamino grupu sa 5 do 14 članova (npr., nikotinoilamino, izonikotinoilamino), mono- ili di-nearomatičnu heterociklilkarbonilamino grupu sa 3 do 14 članova (npr., piperidinilkarbonilamino), mono- ili di-C1-6alkoksi-karbonilamino grupu (npr., terc-butoksikarbonilamino), aromatičnu heterociklilamino grupu sa 5 do 14 članova (npr., piridilamino), karbamoilamino grupu, (mono- ili di-C1-6alkil-karbamoil) amino grupu (npr., metilkarbamoilamino), (mono- ili di-C7-16aralkil-karbamoil) amino grupu (npr., benzilkarbamoilamino), C1-6alkilsulfonilamino grupu (npr., metilsulfonilamino, etilsulfonilamino), C6-14arilsulfonilamino grupu (npr., fenilsulfonilamino), (C1-6alkil)(C1-6alkilkarbonil) amino grupu (npr., N-acetil-N-metilamino) i (C1-6alkil)(C6-14aril-karbonil) amino grupu (npr., N-benzoil-N-metilamino).
[0074] U predmetnoj specifikaciji, primeri "opciono supstituisane karbamoil grupe" uključuju karbamoil grupu koja opciono ima "1 ili 2 supstituenta odabrana od C1-6alkil grupe, C2-6alkenil grupe, C3-10cikloalkil grupe, C6-14aril grupe, C7-16aralkil grupe, C1-6alkil-karbonil grupe, C6-14aril-karbonil grupe, C7-16aralkilkarbonil grupe, aromatične heterociklilkarbonil grupe sa 5 do 14 članova, nearomatične heterociklilkarbonil grupe sa 3 do 14 članova, C1-6alkoksi-karbonil grupe, aromatične heterociklične grupe sa 5 do 14 članova, karbamoil grupe, mono- ili di-C1-6alkil-karbamoil grupe i mono- ili di-C7-16aralkil-karbamoil grupe, od kojih svaka opciono ima 1 do 3 supstituenta odabrana iz "Grupe A supstituenata".
[0075] Poželjni primeri opciono supstituisane karbamoil grupe uključuju karbamoil grupu, mono- ili di-C1-6alkil-karbamoil grupu, mono- ili di-C2-6alkenil-karbamoil grupu (npr., dialilkarbamoil), mono- ili di-C3-10cikloalkil-karbamoil grupu (npr., ciklopropilkarbamoil, cikloheksilkarbamoil), mono- ili di-C6-14aril-karbamoil grupu (npr., fenilkarbamoil), monoili di-C7-16aralkil-karbamoil grupu, mono- ili di-C1-6alkil-karbonil-karbamoil grupu (npr.,
2
acetilkarbamoil, propionilkarbamoil), mono- ili di-C6-14aril-karbonil-karbamoil grupu (npr., benzoilkarbamoil) i aromatičnu heterociklilkarbamoil grupu sa 5 do 14 članova (npr., piridilkarbamoil).
[0076] U predmetnoj specifikaciji, primeri "opciono supstituisane tiokarbamoil grupe" uključuju tiokarbamoil grupu koja opciono ima "1 ili 2 supstituenta odabrana od C1-6alkil grupe, C2-6alkenil grupe, C3-10cikloalkil grupe, C6-14aril grupe, C7-16aralkil grupe, C1-6alkilkarbonil grupe, C6-14aril-karbonil grupe, C7-16aralkil-karbonil grupe, aromatične heterociklilkarbonil grupe sa 5 do 14 članova, nearomatične heterociklilkarbonil grupe sa 3 do 14 članova, C1-6alkoksi-karbonil grupe, aromatične heterociklične grupe sa 5 do 14 članova, karbamoil grupe, mono- ili di-C1-6alkil-karbamoil grupe i mono- ili di-C7-16aralkilkarbamoil grupe, od kojih svaka opciono ima 1 do 3 supstituenta odabrana iz "Grupe A supstituenata".
[0077] Poželjni primeri opciono supstituisane tiokarbamoil grupe uključuju tiokarbamoil grupu, mono- ili di-C1-6alkil-tiokarbamoil grupu (npr., metiltiokarbamoil, etiltiokarbamoil, dimetiltiokarbamoil, dietiltiokarbamoil, N-etil-N-metiltiokarbamoil), mono- ili di-C2-6alkenil-tiokarbamoil grupu (npr., dialiltiokarbamoil), mono- ili di-C3-10cikloalkiltiokarbamoil grupu (npr., ciklopropiltiokarbamoil, cikloheksiltiokarbamoil), mono- ili di-C6-
14aril-tiokarbamoil grupu (npr., feniltiokarbamoil), mono- ili di-C7-16aralkil-tiokarbamoil grupu (npr., benziltiokarbamoil, fenetiltiokarbamoil), mono- ili di-C1-6alkil-karboniltiokarbamoil grupu (npr., acetiltiokarbamoil, propioniltiokarbamoil), mono- ili di-C6-14arilkarbonil-tiokarbamoil grupu (npr., benzoiltiokarbamoil) i aromatičnu heterocikliltiokarbamoil grupu sa 5 do 14 članova (npr., piridiltiokarbamoil).
[0078] U predmetnoj specifikaciji, primeri "opciono supstituisane sulfamoil grupe" uključuju sulfamoil grupu koja opciono ima "1 ili 2 supstituenta odabrana od C1-6alkil grupe, C2-6alkenil grupe, C3-10cikloalkil grupe, C6-14aril grupe, C7-16aralkil grupe, C1-6alkil-karbonil grupe, C6-14aril-karbonil grupe, C7-16aralkil-karbonil grupe, aromatične heterociklilkarbonil grupe sa 5 do 14 članova, nearomatične heterociklilkarbonil grupe sa 3 do 14 članova, C1-6alkoksi-karbonil grupe, aromatične heterociklične grupe sa 5 do 14 članova, karbamoil grupe, mono- ili di-C1-6alkil-karbamoil grupe i mono- ili di-C7-16aralkil-karbamoil grupe, od kojih svaka opciono ima 1 do 3 supstituenta odabrana iz "Grupe A supstituenata".
[0079] Poželjni primeri opciono supstituisane sulfamoil grupe uključuju sulfamoil grupu, mono- ili di-C1-6alkil-sulfamoil grupu (npr., metilsulfamoil, etilsulfamoil, dimetilsulfamoil, dietilsulfamoil, N-etil-N-metilsulfamoil), mono- ili di-C2-6alkenil-sulfamoil grupu (npr., dialilsulfamoil), mono- ili di-C3-10cikloalkil-sulfamoil grupu (npr., ciklopropilsulfamoil,
2
cikloheksilsulfamoil), mono- ili di-C6-14arilsulfamoil grupu (npr., fenilsulfamoil), mono- ili di-C7-16aralkil-sulfamoil grupu (npr., benzilsulfamoil, fenetilsulfamoil), mono- ili di-C1-6alkil-karbonil-sulfamoil grupu (npr., acetilsulfamoil, propionilsulfamoil), mono- ili di-C6-14aril-karbonil-sulfamoil grupu (npr., benzoilsulfamoil) i aromatičnu heterociklilsulfamoil grupu sa 5 do 14 članova (npr., piridilsulfamoil).
[0080] U predmetnoj specifikaciji, primeri "opciono supstituisane hidroksi grupe" uključuju hidroksi grupu koja opciono ima "supstituent odabran od C1-6alkil grupe, C2-6alkenil grupe, C3-10cikloalkil grupe, C6-14aril grupe, C7-16aralkil grupe, C1-6alkil-karbonil grupe, C6-14arilkarbonil grupe, C7-16aralkil-karbonil grupe, aromatične heterociklilkarbonil grupe sa 5 do 14 članova, nearomatične heterociklilkarbonil grupe sa 3 do 14 članova, C1-6alkoksi-karbonil grupe, aromatične heterociklične grupe sa 5 do 14 članova, karbamoil grupe, mono- ili di-C1-6alkil-karbamoil grupe, mono- ili di-C7-16aralkil-karbamoil grupe, C1-6alkilsulfonil grupe i C6-
14arilsulfonil grupe, od kojih svaka opciono ima 1 do 3 supstituenta odabrana iz "Grupe A supstituenata".
[0081] Poželjni primeri opciono supstituisane hidroksi grupe uključuju hidroksi grupu, C1-6alkoksi grupu, C2-6alkeniloksi grupu (npr., aliloksi, 2-buteniloksi, 2-penteniloksi, 3-hekseniloksi), C3-10cikloalkiloksi grupu (npr., cikloheksiloksi), C6-14ariloksi grupu (npr., fenoksi, naftiloksi), C7-16aralkiloksi grupu (npr., benziloksi, fenetiloksi), C1-6alkilkarboniloksi grupu (npr., acetiloksi, propioniloksi, butiriloksi, izobutiriloksi, pivaloiloksi), C6-14aril-karboniloksi grupu (npr., benzoiloksi), C7-16aralkil-karboniloksi grupu (npr., benzilkarboniloksi), aromatičnu heterociklilkarboniloksi grupu sa 5 do 14 članova (npr., nikotinoiloksi), nearomatičnu heterociklilkarboniloksi grupu sa 3 do 14 čalnova (npr., piperidinilkarboniloksi), C1-6alkoksi-karboniloksi grupu (npr., terc-butoksikarboniloksi), aromatičnu heterocikliloksi grupu sa 5 do 14 članova (npr., piridiloksi), karbamoiloksi grupu, C1-6alkil-karbamoiloksi grupu (npr., metilkarbamoiloksi), C7-16aralkil-karbamoiloksi grupu (npr., benzilkarbamoiloksi), C1-6alkilsulfoniloksi grupu (npr., metilsulfoniloksi, etilsulfoniloksi) i C6-14arilsulfoniloksi grupu (npr., fenilsulfoniloksi).
[0082] U predmetnoj specifikaciji, primeri "opciono supstituisane sulfanil grupe" uključuju sulfanil grupu koja opciono ima "supstituent odabran od C1-6alkil grupe, C2-6alkenil grupe, C3-10cikloalkil grupe, C6-14aril grupe, C7 -16aralkil grupe, C1-6alkil-karbonil grupe, C6-14arilkarbonil grupe i aromatične heterociklične grupe sa 5 do 14 članova, od kojih svaka opciono ima 1 do 3 supstituenta odabrana iz "Grupe A supstituenata" i halogenisanu sulfanil grupu.
[0083] Poželjni primeri opciono supstituisane sulfanil grupe uključuju sulfanil (-SH) grupu, C1-6alkiltio grupu, C2-6alkeniltio grupu (npr., aliltio, 2-buteniltio, 2-penteniltio, 3-
2
hekseniltio), C3-10cikloalkiltio grupu (npr., cikloheksiltio), C6-14ariltio grupu (npr., feniltio, naftiltio), C7-16aralkiltio grupu (npr., benziltio, fenetiltio), C1-6alkil-karboniltio grupu (npr., acetiltio, propioniltio, butiriltio, izobutiriltio, pivalotiltio), C6-14aril-karboniltio grupu (npr., benzoiltio), aromatičnu heterocikliltio grupu sa 5 do 14 članova (npr., piridiltio) i halogenisanu tio grupu (npr., pentafluorotio).
[0084] U predmetnoj specifikaciji, primeri "opciono supstituisane silil grupe" uključuju silil grupu koja opciono ima "1 do 3 supstituenta odabrana od C1-6alkil grupe, C2-6alkenil grupe, C3-10cikloalkil grupe, C6-14aril grupe i C7-16aralkil grupe, od kojih svaka opciono ima 1 do 3 supstituenta odabrana iz "Grupe A supstituenata". Primeri opciono supstituisane silil grupe uključuju tri-C1-6alkilsilil grupu (npr., trimetilsilil, terc-butil(dimetil)silil).
[0085] Termin "antitelo-lek konjugat" ili "ADC" kao što se ovde upotrebljava označava jedinjenje koje je vezano za antitelo i definisano je formulom (CD-L)n-A, pri čemu je CD grupa predstavljena bilo kojom od Formula (XX) ili (XXIV), videti ispod, L je linker, A je protein, npr., antitelo, i n je 1-10. U jednom primeru izvođenja, linker je predstavljen pomoću -X<3>-T-Z-Q-, pri čemu je X<3>dvovalentni radikal koji konektuje CD sa ostatkom linkera, ili je odsutan, T je peptid, ili je odsutan, Z je spejser, i Q je heterobifunkcionalna grupa ili heterotrifunkcionalna grupa. Putem ilustracije, sledeća generička formula pokazuje ADC iz objave koji ima konektor zasnovan na para-aminobenzilu, dipeptid zasnovan na alaninalaninu, spejser zasnovan na propanonu, i heterobifunkcionalnu grupu zasnovanu na sukcinimid tioetru:
[0086] U predmetnoj objavi, termin "linker" označava bilo koji hemijski ostatak sposoban da vezuje protein, npr., antitelo, fragment antitela (npr., antigen-vezujuće fragmente) ili funkcionalni ekvivalent za ciklični dinukleotid. Linkeri mogu biti podložni isecanju ("linker koji se može isecati"), olakšavajući tako oslobađanje cikličnog dinukleotida. Na primer, takvi linkeri koji se mogu isecati mogu biti podložni kiselinom-indukovanom isecanju, fotoindukovanom isecanju, peptidazom-indukovanom isecanju, esterazom-indukovanom isecanju i isecanju disulfidnih veza, pod uslovima pod kojima ciklični dinukleotid i/ili antitelo ostaju
2
aktivni. Alternativno, linkeri mogu biti suštinski otporni na isecanje ("linker koji se ne može isecati").
[0087] U predmetnoj objavi, linkeri koji se ne mogu isecati su bilo koji hemijski ostatak sposoban da vezuje ciklični dinukleotid za antitelo na stabilan, kovalentan način i ne spada u gore navedene kategorije za linkere koji se mogu isecati. Stoga, linkeri koji se ne mogu isecati su suštinski otporni na kiselinom-indukovano isecanje, foto-indukovano isecanje, peptidazom-indukovano isecanje, esterazom-indukovano isecanje i isecanje disulfidne veze. Pored toga, koji se na mogu isecati označava sposobnost hemijske veze u linkeru ili susednoj do linkera da izdrži isecanje indukovano kiselinom, fotolabilnim agensom za isecanje, peptidazom, esterazom, ili hemijskim ili fiziološkim jedinjenjem koje iseca disulfidnu vezu, u uslovima pod kojima ciklični dinukleotid i/ili antitelo ne gubi svoju aktivnost.
[0088] Neki linkeri koji se mogu isecati se isecaju peptidazama ("linkeri koji se mogu isecati pepsidazom"). Samo se određeni peptidi lako isecaju unutar ili izvan ćelija, videti npr., Trout et al., 79 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 626-629 (1982) i Umemoto et al.43 Int. J. Cancer, 677-684 (1989). Pored toga, peptidi se sastoje od α-amino-kiselinskih jedinica i peptidnih veza, koje su hemijski amidne veze između karboksilata jedne amino-kiseline i amino grupe druge amino-kiseline. Druge amidne veze, kao što su veze između karboksilata i α-amino-kiselinske grupe lizina, se podrazumeva da nisu peptidne veze i smatra se da se ne mogu isecati.
[0089] Neki linkeri se isecaju esterazama ("linkeri koji se mogu isecati esterazom"). Samo određeni estri se mogu isecati esterazama prisutnim unutar ili izvan ćelija. Estri se formiraju kondenzacijom karboksilne kiseline i alkohola. Jednostavni estri su estri proizvedeni sa jednostavnim alkoholima, kao što su alifatični alkoholi, i mali ciklični i mali aromatični alkoholi.
[0090] U nekim primerima izvođenja, komponenta linkera koji se može isecati sadrži peptid koji sadrži jedan do deset amino-kiselinskih ostataka. U ovim primerima izvođenja, peptid omogućava isecanje linkera proteazom, olakšavajući tako oslobađanje cikličnog dinukleotida nakon izlaganja unutarćelijskim proteazama, kao što su lizozomski enzimi (Doronina et al. (2003) Nat. Biotechnol. 21:778-784). Primeri peptida uključuju, ali nisu ograničeni na, dipeptide, tripeptide, tetrapeptide, i pentapeptide. Primeri dipeptida uključuju, ali nisu ograničeni na, alanin-alanin (ala-ala), valin-citrulin (vc ili val-cit), alanin-fenilalanin (af ili ala-phe); fenilalanin-lizin (fk ili phe-lys); fenilalanin-homolizin (phe-homolys); i N-metilvalin-citrulin (Me-val-cit). Primeri tripeptida uključuju, ali nisu ograničeni na, glicin-valincitrulin (gly-val-cit) i glicin-glicin-glicin (gly-gly-gly).
2
[0091] Peptid može da sadrži amino-kiselinske ostatke koji se javljaju u prirodi i/ili neprirodne. Termin "amino-kiselina koja se javlja u prirodi" označava Ala, Asp, Cys, Glu, Phe, Gly, His, He, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp i Tyr. "Neprirodne amino-kiseline" (tj. amino-kiseline koje se ne javljaju u prirodi) uključuju, putem neograničavajućeg primera, homoserin, homoarginin, citrulin, fenilglicin, taurin, jodotirozin, seleno-cistein, norleucin ("Nle"), norvalin ("Nva"), beta-alanin, L- ili D-naftalanin, ornitin ("Orn"), i slično. Peptidi se mogu dizajnirati i optimizovati za enzimsko isecanje određenim enzimom, na primer, proteazom povezanom sa tumorom, katepsinom B, C i D, ili plazmin proteazom.
[0092] Amino-kiseline takođe uključuju D-oblike prirodnih i neprirodnih amino-kiselina. "D-" označava amino-kiselinu koja ima "D" (dekstrorotatornu) konfiguraciju, za razliku od konfiguracije u amino-kiselinama koje se javljaju u prirodi ("L-"). Prirodne i neprirodne amino-kiseline mogu se kupiti komercijalno (Sigma Chemical Co., Advanced Chemtech) ili sintetisati upotrebom postupaka poznatih u struci.
[0093] U predmetnoj objavi, termin "heterobifunkcionalna grupa" ili termin "heterotrifunkcionalna grupa" označava hemijski ostatak koji konektuje linker i drugi terapijski aktivan molekul, npr., protein, npr., antitelo. Videti, npr., WO 2017/191579. Heterobi- i tri-funkcionalne grupe su okarakterisane kao da imaju različite reaktivne grupe na oba kraja hemijskog ostatka. Neograničavajući primeri heterobifunkcionalnih grupa uključuju:
pri čemu "*" ukazuje na tačku prikačinjanja za bilo koji raspoloživi atom ugljenika, atom azota, atom kiseonika, ili atom sumpora prikačen za antitelo. U primeru izvođenja, heterobifunkcionalna grupa je
i prikačena je za atom sumpora prikačen za antitelo.
[0094] Neograničavajući primer heterotrifunkcionalne grupe je:
[0095] U predmetnoj objavi, termin "spejser" označava hemijski ostatak koji konektuje heterobi- i tri-funkcionalnu grupu za ostatak linkera, npr., peptid, ili, ukoliko je heterobi- ili tri-funkcionalna grupa odsutna, konektuje ostatak linkera ili cikličnog dinukleotida za bilo koji dostupni atom ugljenika, atom azota, atom kiseonika, ili atom sumpora prikačen za antitelo. Neograničavajući primeri spejsera uključuju -NH-, -S-, -O-, -NHC(=O)CH2CH2-, -S(=O)2-CH2CH2-, -C(=O)NHNH-, -C(=O)O-, -C(=O)NH-, -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2=CH2-, -C=C-, -CH=N-O-, polietilen glikol (PEG),
1
[0096] Termin "lek antitelo odnos" ili "DAR" označava broj CD vezanih za A (tj., protein, npr., antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment). Stoga, u ADC koji ima generičku formulu (CD-L)n-A, DAR je definisan varijablom "n".
[0097] Pozivanje na jedinjenje koje ima formulu (CD-L)n-A koje predstavlja pojedinačni ADC, DAR označava broj CD vezanih za pojedinačni A, npr., n je ceo broj od 1 do 10.
[0098] Pozivanje na jedinjenje koje ima formulu (CD-L)n-A koje predstavlja mnoštvo ADC, DAR označava prosečan broj cikličnih dinukleotida vezanih za A, npr., n je ceo broj ili frakcija od 1 do 10). Stoga bi, kao primer, jedinjenje koje ima formulu (CD-L)n-A koje sadrži prvi ADC sa 3 ciklična dinukleotida po A i drugi ADC sa 4 ciklična dinukleotida po A imalo DAR, tj., "n" od 3,5.
[0099] Termini "polipeptid", "peptid", i "protein" ovde se upotrebljavaju naizmenično kako bi označili polimere amino-kiselina bilo koje dužine. Polimer može biti ravan ili razgranat, može sadržati modifikovane amino-kiseline, i može biti prekinut ne-amino-kiselinama. Termini takođe obuhvataju amino-kiselinski polimer koji je modifikovan prirodno ili intervencijom; na primer, formiranje disulfidne veze, glikozilacija, lipidacija, acetilacija, fosforilacija, ili bilo koja druga manipulacija ili modifikacija, kao što je konjugacija sa komponentom za obeležavanje. Takođe su uključeni unutar definicije, na primer, polipeptidi koji sadrže jedan ili više analoga amino-kiseline (uključujući, na primer, neprirodne aminokiseline, itd.), kao i druge modifikacije poznate u struci. Podrazumeva se da se, pošto se polipeptidi iz ove objave zasnivaju na antitelima, u određenim primerima izvođenja, polipeptidi mogu pojaviti kao pojedinačni lanci ili povezani lanci.
[0100] "Monoklonsko" antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment označavaju homogenu populaciju antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta uključenog u visoko specifično prepoznavanje i vezivanje jedne antigene determinante, ili epitopa. Ovo je za razliku od poliklonskih antitela koja tipično uključuju različita antitela usmerena prema različitim antigenim determinantama. Termin "monoklonsko" antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment obuhvata i intaktna monoklonska antitela pune dužine, kao i fragmente antitela (kao što su Fab, Fab', F(ab')2, Fv), jednolančane (scFv) mutante, fuzione proteine koji sadrže deo antitela, i bilo koji drugi modifikovani molekul imunoglobulina koji sadrži mesto za prepoznavanje antigena. Pored toga, "monoklonsko" antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment označavaju takva antitela i njihove antigen-vezujuće fragmente napravljene na bilo koji od brojnih načina, uključujući ali ne ograničavajući se na hibridome, selekciju faga, rekombinantnu ekspresiju, i transgene životinje.
2
[0101] Termin "humanizovano" antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment označavaju oblike ne-humanih (npr., murinskih) antitela ili antigen-vezujućih fragmenata koji su specifični lanci imunoglobulina, himerni imunoglobulini, ili njihovi fragmenti koji sadrže minimalne ne-humane (npr., murinske) sekvence. Tipično, humanizovana antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti su humani imunoglobulini u kojima se ostaci iz regiona koji određuje komplementarnost (CDR) zamenjuju ostacima iz CDR ne-humane vrste (npr., miš, pacov, zec, hrčak) koji imaju željenu specifičnost, afinitet, i sposobnost ("graftovani CDR") (Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239: 1534-1536 (1988)). U nekim slučajevima, ostaci Fv regiona okvira (FR) humanog imunoglobulina zamenjuju se odgovarajućim ostacima u antitelu ili fragmentu ne-humane vrste koja ima željenu specifičnost, afinitet, i sposobnost. Humanizovano antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment mogu se dodatno modifikovati supstitucijom dodatnih ostataka bilo u Fv regionu okvira i/ili unutar zamenjenih ne-humanih ostataka kako bi se rafinisali i optimizovali specifičnost, afinitet, i/ili sposobnost antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta. Generalno, humanizovano antitelo ili njegov antigenvezujući fragment sadržaće suštinski sve od najmanje jednog, i tipično dva ili tri, varijabilna domena koji sadrže sve ili suštinski sve CDR regione koji odgovaraju ne-humanom imunoglobulinu dok su svi ili suštinski svi od FR regiona oni sa konsenzus sekvencom humanog imunoglobulina. Humanizovano antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment mogu takođe da sadrže najmanje deo konstantnog regiona ili domena imunoglobulina (Fc), tipično onog od humanog imunoglobulina. Primeri postupaka upotrebljenih za generisanje humanizovanih antitela opisani su u S.A.D patentu 5,225,539; Roguska et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 91 (3):969-973 (1994), i Roguska et al., Protein Eng. 9 (10):895-904 (1996). U nekim primerima izvođenja, "humanizovano antitelo" je antitelo sa obnovljenom površinom.
[0102] "Varijabilni region" antitela označava varijabilni region lakog lanca antitela ili varijabilni region teškog lanca antitela, bilo samostalno ili u kombinaciji. Varijabilni regioni teškog i lakog lanca se svaki sastoje od četiri regiona okvira (FR) povezana sa tri regiona koja određuju komplementarnost (CDR), takođe poznatim kao hipervarijabilni regioni. CDR u svakom lancu se drže u neposrednoj blizini pomoću FR i, sa CDR iz drugog lanca, doprinose formiranju antigen-vezujućeg mesta antitela. Postoje najmanje dve tehnike za određivanje CDR: (1) pristup zasnovan na varijabilnosti sekvence različitih vrsta (tj., Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda Md.)); i (2) pristup zasnovan na kristalografskim studijama antigen-antitelo kompleksa (Al-Lazikani et al (1997) J. Molec. Biol.273:927-948)). Pored toga, kombinacije ova dva pristupa se ponekad upotrebljavaju u struci za određivanje CDR.
[0103] Kabat sistem numeracije se generalno upotrebljava kada se poziva na ostatak u varijabilnom domenu (približno ostaci 1-107 lakog lanca i ostaci 1-113 teškog lanca) (npr., Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). Ukoliko nije izričito naznačeno drugačije, sistem numeracije koji se ovde upotrebljava je Kabat sistem numeracije.
[0104] Numeracija pozicija amino-kiselina kao u Kabatu, označava sistem numeracije koji se upotrebljava za varijabilne domene teškog lanca ili varijabilne domene lakog lanca kompilacije antitela u Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991). Upotrebom ovog sistema numeracije, stvarna linearna amino-kiselinska sekvenca može sadržati manje ili dodatne amino-kiseline što odgovara skraćivanju, ili inserciji u, FR ili CDR varijabilnog domena. Na primer, varijabilni domen teškog lanca može uključivati jednu amino-kiselinsku inserciju (ostatak 52a u skladu sa Kabatom) posle ostatka 52 H2 i inserirane ostatke (npr., ostaci 82a, 82b, i 82c, itd., u skladu sa Kabatom) posle ostataka 82 FR teškog lanca. Kabat numeracija ostataka može se odrediti za dato antitelo poravnanjem u regionima homologije sekvence antitela sa "standardnom" Kabat numerisanom sekvencom. Chothia umesto toga označava lokaciju strukturnih petlji (Chothia i Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). Kraj Chothia CDR-H1 petlje kada je numerisana upotrebom Kabat konvencije o numeraciji varira između H32 i H34 u zavisnosti od dužine petlje (ovo je zato što Kabat šema numeracije postavlja insercije na H35A i H35B; ukoliko nisu prisutne ni 35A ni 35B, petlja se završava na 32; ukoliko je prisutna samo 35A, petlja se završava na 33; ukoliko su prisutne i 35A i 35B, petlja se završava na 34). AbM hipervarijabilni regioni predstavljaju kompromis između Kabat CDR i Chothia strukturnih petlji, i upotrebljava ih Oxford Molecular softver za modeliranje AbM antitela.
4
[0105] U određenim aspektima, CDR antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta mogu se odrediti prema Chothia šemi numeracije, koja označava lokaciju strukturnih petlji imunoglobulina (videti, npr., Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196:901-917; Al-Lazikani B et al., (1997) J Mol Biol 273:927-948; Chothia C et al., (1992) J Mol Biol 227: 799-817; Tramontano A et al., (1990) J Mol Biol 215(1): 175-82; i S.A.D. patent br.
7,709,226). Tipično, kada se upotrebljava Kabat konvencija numeracije, Chothia CDR-H1 petlja je prisutna na amino-kiselinama 26 do 32, 33 ili 34 teškog lanca, Chothia CDR-H2 petlja je prisutna na amino-kiselinama 52 do 56 teškog lanca, i Chothia CDR-H3 petlja je prisutna na amino-kiselinama 95 do 102 teškog lanca, dok je Chothia CDR-L1 petlja prisutna na amino-kiselinama 24 do 34 lakog lanca, Chothia CDR-L2 petlja je prisutna na aminokiselinama 50 do 56 lakog lanca, i Chothia CDR-L3 petlja je prisutna na amino-kiselinama 89 do 97 lakog lanca. Kraj Chothia CDR-H1 petlje kada je numerisana upotrebom Kabat konvencije numeracije varira između H32 i H34 u zavisnosti od dužine petlje (ovo je zato što Kabat šema numeracije postavlja insercije na H35A i H35B; ukoliko nisu prisutne ni 35A ni 35B, petlja se završava na 32; ukoliko je prisutna samo 35A, petlja se završava na 33; ukoliko su prisutne i 35A i 35B, petlja se završava na 34).
[0106] U određenim aspektima, CDR antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta mogu se odrediti u skladu sa IMGT sistemom numeracije, kao što je opisano u Lefranc M.-P., (1999) The Immunologist 7:132-136 i Lefranc M.-P. et al., (1999) Nucleic Acids Res 27:209-212. U skladu sa IMGT šemom numeracije, VH-CDR1 je na pozicijama 26 do 35, VH-CDR2 je na pozicijama 51 do 57, VH-CDR3 je na pozicijama 93 do 102, VL-CDR1 je na pozicijama 27 do 32, VL-CDR2 je na pozicijama 50 do 52, i VL-CDR3 je na pozicijama 89 do 97.
[0107] U određenim aspektima, CDR antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta mogu se odrediti u skladu sa MacCallum R. M. et al., (1996) J Mol Biol 262:732-745. Videti takođe, npr., Martin A. "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains," u Antibody Engineering, Kontermann i Dübel, eds., poglavlje 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001).
[0108] U određenim aspektima, CDR antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta mogu se odrediti u skladu sa AbM šemom numeracije, koja označava AbM hipervarijabilne regione koji predstavljaju kompromis između Kabat CDR i Chothia strukturnih petlji, i upotrebljava ih Oxford Molecular softver za modeliranje AbM antitela (Oxford Molecular Group, Inc.).
[0109] Termin "humano" antitelo označava antitelo koje proizvodi ljudsko biće ili antitelo koje ima amino-kiselinsku sekvencu koja odgovara antitelu koje proizvodi ljudsko biće napravljeno upotrebom bilo koje tehnike poznate u struci. Ova definicija humanog antitela uključuje intaktna ili antitela pune dužine, njihove fragmente, i/ili antitela koja sadrže najmanje jedan polipeptid humanog teškog i/ili lakog lanca, kao što je, na primer, antitelo koje sadrži polipeptide murinskog lakog lanca i humanog teškog lanca.
[0110] Termin "himerna" antitela označava antitela pri čemu je amino-kiselinska sekvenca molekula imunoglobulina poreklom iz dve ili više vrsta. Tipično, varijabilni regioni i lakih i teških lanaca odgovaraju varijabilnom regionu antitela poreklom od jedne vrste sisara (npr., miš, pacov, zec, itd.) sa željenom specifičnošću, afinitetom, i sposobnošću dok su konstantni regioni homologni sekvencama u antitelima poreklom od druge (uobičajeno humano) kako bi se izbeglo izazivanje imunskog odgovora kod te vrste.
[0111] Termin "epitop" ili "antigena determinanta" ovde se upotrebljavaju naizmenično i označavaju onaj deo antigena koji je sposoban da bude prepoznat i specifično vezan od strane određenog antitela. Kada je antigen polipeptid, epitopi se mogu formirati i od susednih amino-kiselina i od nesusednih amino-kiselina postavljenih jedna uz drugu tercijarnim savijanjem proteina. Epitopi formirani od susednih amino-kiselina tipično se zadržavaju nakon denaturisanja proteina, dok se epitopi formirani tercijarnim savijanjem tipično gube nakon denaturisanja proteina. Epitop tipično uključuje najmanje 3, i češće, najmanje 5 ili 8-10 amino-kiselina u jedinstvenoj prostornoj konformaciji.
[0112] "Afinitet vezivanja" generalno označava jačinu ukupnog zbira nekovalentnih interakcija između jednog vezujućeg mesta molekula (npr., antitelo) i njegovog vezujućeg partnera (npr., antigen). Ukoliko nije drugačije naznačeno, kao što se ovde upotrebljava, "afinitet vezivanja" označava svojstveni afinitet vezivanja koji odražava 1:1 interakciju između članova vezujućeg para (npr., antitelo i antigen). Afinitet molekula X prema njegovom partneru Y generalno se može predstaviti konstantom disocijacije (Kd). Afinitet se može izmeriti uobičajenim postupcima poznatim u struci, uključujući one opisane ovde.
Antitela sa niskim afinitetom se generalno polako vezuju za antigen i imaju tendenciju da lako disociraju, dok se antitela sa visokim afinitetom generalno brže vezuju za antigen i imaju tendenciju da ostanu duže vezana. U struci su poznati različiti postupci za merenje afiniteta vezivanja, od kojih se bilo koji može upotrebljavati u svrhe ove objave. Specifični ilustrativni primeri izvođenja su opisani u nastavku.
[0113] "Ili bolji" kada se ovde upotrebljava za afinitet vezivanja, označava jače vezivanje između molekula i njegovog vezujućeg partnera. "Ili bolji" kada se ovde upotrebljava označava jače vezivanje, predstavljeno manjom numeričkom vrednošću Kd. Na primer, antitelo koje ima afinitet za antigen "0,6 nM ili bolji", afinitet antitela za antigen je <0,6 nM, tj., 0,59 nM, 0,58 nM, 0,57 nM itd., ili bilo koja vrednost manja od 0,6 nM.
[0114] Pod "specifično vezuje" se generalno misli da se antitelo vezuje za epitop putem svog antigen-vezujućeg domena, i da vezivanje podrazumeva određenu komplementarnost između antigen-vezujućeg domena i epitopa. U skladu sa ovom definicijom, za antitelo se kaže da se "specifično vezuje" za epitop kada se vezuje za taj epitop, putem svog antigen-vezujućeg domena, lakše nego što bi se vezalo za nasumični, nesrodni epitop. Termin "specifičnost" ovde se upotrebljava da kvalifikuje relativni afinitet kojim se određeno antitelo vezuje za određeni epitop. Na primer, može se smatrati da antitelo "A" ima veću specifičnost za dati epitop od antitela "B", ili se može reći da se antitelo "A" vezuje za epitop "C" sa većom specifičnošću nego što ga ima za srodni epitop "D".
[0115] Pod "preferencijalno vezuje" se misli da se antitelo specifično vezuje za epitop lakše nego što bi se vezalo za srodni, slični, homologni, ili analogni epitop. Stoga, antitelo koje se "preferencijalno vezuje" za dati epitop verovatnije bi se vezalo za taj epitop nego za srodni epitop, iako takvo antitelo može unakrsno da reaguje sa srodnim epitopom.
[0116] Za antitelo se kaže da "kompetitivno inhibira" vezivanje referentnog antitela za dati epitop ukoliko se antitelo preferencijalno vezuje za taj epitop ili prekrivajući epitop do te mere da blokira, u određenoj meri, vezivanje referentnog antitela za epitop. Kompetitivna inhibicija se može odrediti bilo kojim postupkom poznatim u struci, na primer, testovima kompetitivne ELISA. Može se reći da antitelo kompetitivno inhibira vezivanje referentnog antitela za dati epitop za najmanje 90%, najmanje 80%, najmanje 70%, najmanje 60%, ili najmanje 50%.
[0117] Fraza "suštinski slično", ili "suštinski isto", kao što se ovde upotrebljava, označava dovoljno visok stepen sličnosti između dve numeričke vrednosti (generalno jedne povezane sa antitelom iz objave, i druge povezane sa referentnim/uporednim antitelom) takav da bi onaj iskusan u struci smatrao da je razlika između dve vrednosti od malog ili nikakvog biološkog i/ili statističkog značaja u kontekstu biološke karakteristike merene pomenutim vrednostima (npr., Kd vrednosti). Razlika između navedene dve vrednosti može biti manja od oko 50%, manja od oko 40%, manja od oko 30%, manja od oko 20%, ili manja od oko 10% kao funkcija vrednosti za referentno/uporedno antitelo.
[0118] Polipeptid, antitelo, polinukleotid, vektor, ćelija, ili kompozicija koja je "izolovana" je polipeptid, antitelo, polinukleotid, vektor, ćelija, ili kompozicija koja je u obliku koji se ne nalazi u prirodi. Izolovani polipeptidi, antitela, polinukleotidi, vektori, ćelije ili kompozicije uključuju one koji su prečišćeni do te mere da više nisu u obliku u kom se nalaze u prirodi. U nekim primerima izvođenja, antitelo, polinukleotid, vektor, ćelija, ili kompozicija koja je izolovana je suštinski čista.
[0119] Kao što se ovde upotrebljava, "suštinski čisto" označava materijal koji je najmanje 50% čist (tj., bez kontaminanata), najmanje 90% čist, najmanje 95% čist, najmanje 98% čist, ili najmanje 99% čist.
[0120] Termin "antitelo" označava molekul imunoglobulina koji prepoznaje i specifično se vezuje za cilj, kao što je protein, polipeptid, peptid, ugljeni hidrat, polinukleotid, lipid, ili kombinacije prethodno navedenih preko najmanje jednog mesta prepoznavanja antigena unutar varijabilnog regiona molekula imunoglobulina. Kao što se ovde upotrebljava, termin "antitelo" obuhvata intaktna poliklonska antitela, intaktna monoklonska antitela, himerna antitela, humanizovana antitela, humana antitela, fuzione proteine koji sadrže antitelo, i bilo koji drugi modifikovani molekul imunoglobulina sve dok antitela pokazuju željenu biološku aktivnost. Antitelo može biti iz bilo koje pet glavnih klasa imunoglobulina: IgA, IgD, IgE, IgG, i IgM, ili njihovih potklasa (izotipova) (npr., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 i IgA2), zasnovano na identitetu njihovih konstantnih domena teškog lanca koji se označavaju kao alfa, delta, epsilon, gama, i mu, respektivno. Različite klase imunoglobulina imaju različite i dobro poznate strukture i trodimenzionalne konfiguracije podjedinica. Antitela mogu biti gola ili konjugovana za druge molekule kao što su toksini, radioizotopi, itd. Kao što se ovde upotrebljava, termin "antitelo" obuhvata bispecifična i multispecifična antitela.
[0121] Termin "fragment antitela" označava deo intaktnog antitela. "Antigen-vezujući fragment" označava deo intaktnog antitela koji se vezuje za antigen. Antigen-vezujući fragment može da sadrži antigen determinišuće varijabilne regione intaktnog antitela. Primeri fragmenata antitela uključuju, ali nisu ograničeni na Fab, Fab’, F(ab’)2, i Fv fragmente, linearna antitela, i jednolančana antitela. "Antigen-vezujući fragment" može biti bispecifični ili multispecifični antigen-vezujući fragment.
Termin "agens za isporuku leka", kao što se ovde upotrebljava, označava hemijski ostatak koji menja distribuciju, ciljno delovanje, ili životni vek molekula u koji je inkorporisan. U nekim primerima izvođenja agens za isporuku leka obezbeđuje pojačani afinitet za odabrani cilj, npr., molekul, ćeliju ili tip ćelije, kompartment, receptor, npr., ćelijski kompartment ili kompartment organa, tkivo, organ ili region tela, u poređenju sa vrstom gde je odsutan takav agens za isporuku leka. Agensi za isporuku leka koji obezbeđuju pojačani afinitet za odabrani cilj nazivaju se agensi za isporuku leka sa ciljnim delovanjem. Videti, npr., WO 2013/075035 A1.
[0122] Termin "konjugat za isporuku leka", kao što se ovde upotrebljava, označava jedinjenje koje sadrži bilo koju od Formula (XX) ili (XXIV), agens za isporuku leka i, opciono, kovalentni linker.
[0123] Neki agensi za isporuku leka imaju endozomolitska svojstva. Endozomolitski agensi za isporuku leka pospešuju lizu endozoma i/ili transport bilo koje od Formula (XX) ili (XXIV), od endozoma do citoplazme ćelije. Endozomolitski agens za isporuku leka može biti polianjonski peptid ili peptidomimetik koji pokazuje pH-zavisnu aktivnost membrane i fuzogenost. U jednom primeru izvođenja, endozomolitski agens za isporuku leka preuzima svoju aktivnu konformaciju pri endozomskom pH. "Aktivna" konformacija je ona konformacija u kojoj endozomolitski agens za isporuku leka pospešuje lizu endozoma i/ili transport Formula (XX) ili (XXIV) od endozoma do citoplazme ćelije. Primeri endozomolitskih agenasa za isporuku leka uključuju GALA peptid (Subbarao et al., Biochemistry, 1987, 26:2964-2972), EALA peptid (Vogel et al., J. Am. Chem. Soc, 1996, 118:1581-1586), i njihove derivate (Turk et al., Biochem. Biophis. Acta, 2002, 1559: 56-68). U jednom primeru izvođenja, endozomolitska komponenta može sadržati hemijsku grupu, npr., amino-kiselinu, koja će proći kroz promenu naelektrisanja ili protonaciju kao odgovor na promenu pH. Endozomolitska komponenta može biti linearna ili razgranata.
[0124] Agensi za isporuku leka mogu poboljšati svojstva transporta, hibridizacije, i specifičnosti rezultujućeg konjugata za isporuku leka.
[0125] Agensi za isporuku leka mogu da uključuju terapijske modifikatore, npr., za pojačavanje unosa; dijagnostička jedinjenja ili grupe reportera, npr., za praćenje distribucije; i agense za umrežavanje. Opšti primeri uključuju lipide, steroide, vitamine, ugljene hidrate, proteine, peptide, poliamine, sintetičke polimere ili oligomere (kao što su PEG), peptidomimetike, ili bilo koje njihove kombinacije.
[0126] Agensi za isporuku leka mogu da uključuju supstancu koja se javlja u prirodi, kao što je protein, npr., humani serumski albumin (HSA), lipoprotein niske gustine (LDL), lipoprotein visoke gustine (HDL), ili globulin; ugljeni hidrat, npr., dekstran, pululan, hitin, hitosan, inulin, ciklodekstrin ili hijaluronska kiselina; ili lipid. Agens za isporuku leka takođe može biti rekombinantni ili sintetički molekul, kao što je sintetički polimer ili oligomer, npr., sintetička poliamino-kiselina, oligonukleotid, npr., aptamer. Primeri poliamino-kiselina uključuju polilizin (PLL), poli L-asparaginsku kiselinu, poli L-glutaminsku kiselinu. Drugi primeri sintetičkih polimera ili oligomera uključuju stiren-maleinska kiselina anhidridni kopolimer, poli(L-laktid-ko-glikolizovan) kopolimer, divinil-etar-maleinski anhidridni kopolimer, N-(2-hidroksipropil)metakrilamid kopolimer (HMPA), polietilen glikol (PEG), polivinil alkohol (PVA), poliuretan, poli(2-etilakrilnu kiselinu), N-izopropilakrilamid polimere, ili polifosfazin. Primeri poliamina uključuju: polietilenimin, polilizin (PLL), spermin, spermidin, poliamin, pseudopeptid-poliamin, peptidomimetik poliamin, dendrimer poliamin, arginin, amidin, protamin, katjoni lipid, katjoni porfirin, kvaternu so poliamina, ili alfa heliksni peptid.
[0127] Agensi za isporuku leka mogu takođe da uključuju grupe koje ciljno deluju, npr., agens koji ciljno deluje na ćeliju ili tkivo, npr., lektin, glikoprotein, lipid ili protein, npr., antitelo, koje se vezuje za određeni tip ćelije. Grupa koja ciljno deluje može biti tirotropin, melanotropin, lektin, glikoprotein, surfaktant protein A, mucin ugljeni hidrat, multivalentna laktoza, multivalentna galaktoza, N-acetil-galaktozamin, N-acetil-glukozamin multivalentna manoza, multivalentna fukoza, glikozilovane poliamino-kiseline, multivalentna galaktoza, transferin, bisfosfonat, poliglutamat, poliaspartat, lipid, holesterol, steroid, žučna kiselina, folat, vitamin B 12, biotin, RGD peptid, mimetik RGD peptida ili aptamer.
[0128] Drugi primeri agenasa za isporuku leka uključuju boje, agense za interkaliranje (npr., akridini), linkere za umrežavanje (npr., psoralen, mitomicin C), porfirine (TPPC4, teksafirin, safirin), policiklične aromatične ugljovodonike (npr., fenazin, dihidrofenazin), veštačke endonukleaze ili helator (npr., EDTA), lipofilne molekule, npr., holesterol, holnu kiselinu, adamantan sirćetnu kiselinu, 1-piren buternu kiselinu, dihidrotestosteron, 1,3-bis-0(heksadecil)glicerol, geraniloksiheksil grupu, heksadecilglicerol, borneol, mentol, 1,3-propandiol, heptadecil grupu, palmitinsku kiselinu, miristinsku kiselinu, 03-(oleoil)litoholnu kiselinu, 03-(oleoil)holensku kiselinu, dimetoksitritil, ili fenoksazin) i peptidne konjugate (npr., antenepedija peptid, Tat peptid), alkilirajuće agense, fosfat, amino, merkapto, PEG (npr., PEG-40K), MPEG, [MPEG]2, poliamino, alkil, supstituisani alkil, radioobeležene markere, enzime, haptene (npr., biotin), olakšavače transporta/apsorpcije (npr., aspirin, vitamin E, folna kiselina), sintetičke ribonukleaze (npr., imidazol, bisimidazol, histamin,
4
imidazol klasteri, konjugati akridin-imidazola, Eu3+ kompleksi tetraazamakrociklusa), dinitrofenil, HRP, ili AP.
[0129] Agensi za isporuku leka mogu takođe da uključuju hormone i hormonske receptore. Takođe mogu da uključuju nepeptidne vrste, kao što su lipidi, lektini, ugljeni hidrati, vitamini, kofaktori, multivalentna laktoza, multivalentna galaktoza, N-acetil-galaktozamin, N-acetil-glukozamin multivalentna manoza, multivalentna fukoza, ili aptameri. Agens za isporuku leka može biti, na primer, lipopolisaharid, aktivator p38 MAP kinaze, ili aktivator NF-KB.
[0130] Agens za isporuku leka može biti supstanca koja može povećati unos bilo koje od Formula (XX) ili (XXIV) u ćeliju, na primer, narušavanjem ćelijskog citoskeleta, npr., narušavanjem ćelijskih mikrotubula, mikrofilamenata, i/ili intermedijarnih filamenata.
[0131] Agens za isporuku leka može da poveća unos bilo koje od Formula (XX) ili (XXIV) u ćeliju, na primer, aktiviranjem inflamatornog odgovora. Primeri agenasa za isporuku leka koji bi imali takav efekat uključuju faktor nekroze tumora alfa (TNFalpha), interleukin-1 beta, ili gama interferon.
[0132] U jednom primeru izvođenja, agens za isporuku leka je lipidni ili molekul zasnovan na lipidima. Takav lipidni ili molekul zasnovan na lipidima može da vezuje serumski protein, npr., humani serumski albumin (HSA). Agens za isporuku leka koji vezuje HSA omogućava distribuciju konjugata za isporuku leka u ciljno tkivo, npr., ne-bubrežno ciljno tkivo tela. Drugi molekuli koji mogu da vezuju HSA takođe se mogu upotrebljavati kao agensi za isporuku leka. Na primer, mogu se upotrebljavati naproksen ili aspirin. Lipidni ili agens za isporuku leka zasnovan na lipidu može (a) povećati otpornost na razgradnju konjugata za isporuku leka, (b) povećati ciljno delovanje ili transport u ciljnu ćeliju ili ćelijsku membranu, i/ili (c) se može upotrebljavati za podešavanje vezivanja za serumski protein, npr., HSA. Lipidni ili agens za isporuku leka zasnovan na lipidu takođe može da omogući formiranje nanočestica, kao što su micele, koje mogu uticati na biodistribuciju bilo koje od Formula (XX) ili (XXIV).
[0133] Agens za isporuku leka zasnovan na lipidu može se upotrebljavati za modulaciju, npr., za kontrolu vezivanja konjugata za isporuku leka za ciljno tkivo. Na primer, lipidni ili agens za isporuku leka zasnovan na lipidu koji se jače vezuje za HSA biće manje verovatno da će ciljno delovati na bubreg i prema tome manje verovatno da će se ukloniti iz tela. Lipidni ili agens za isporuku leka zasnovan na lipidu koji se slabije vezuje za HSA može se upotrebljavati za ciljanje konjugata na bubreg.
[0134] U jednom primeru izvođenja, agens za isporuku leka zasnovan na lipidu vezuje HSA sa dovoljnim afinitetom tako da se konjugat za isporuku leka distribuira u ne-bubrežno tkivo. U jednom primeru izvođenja, afinitet nije toliko jak da vezivanje HSA-agens za isporuku lek ne može da se poništi.
[0135] U sledećem primeru izvođenja, agens za isporuku leka zasnovan na lipidu vezuje HSA slabo ili nikako, tako da se konjugat za isporuku leka distribuira u bubreg. Drugi ostaci koji ciljaju ćelije bubrega takođe se mogu upotrebljavati umesto ili pored agensa za isporuku leka zasnovanog na lipidu.
[0136] U sledećem primeru izvođenja, agens za isporuku leka je ostatak, npr., vitamin, koji uzima ciljna ćelija, npr., proliferišuća ćelija. Oni su posebno korisni za lečenje poremećaja koji se karakterišu neželjenom proliferacijom ćelija, npr., malignog ili nemalignog tipa, npr., ćelije kancera. Primeri vitamina uključuju vitamine A, E, i K. Drugi primeri vitamina uključuju vitamine B, npr., folnu kiselinu, B 12, riboflavin, biotin, piridoksal ili druge vitamine ili hranljive materije koje uzimaju ćelije kancera. Takođe su uključeni HAS, lipoprotein niske gustine (LDL) i lipoprotein visoke gustine (HDL).
[0137] U sledećem primeru izvođenja, agens za isporuku leka je agens za ćelijsku permeaciju, npr., helijačni agens za ćelijsku permeaciju. U jednom primeru izvođenja, agens je amfipatičan. Primeri amfipatičnih agenasa uključuju peptid kao što je tat ili antenopedija, i lipid-PEG konjugat. Ukoliko je agens peptid, može se modifikovati, uključujući peptidilmimetik, invertomere, nepeptidne ili pseudo-peptidne veze, i upotrebu D-aminokiselina. U jednom primeru izvođenja, helijačni agens je alfa-helijačni agens koji ima lipofilnu i lipofobnu fazu.
[0138] Agens za isporuku leka može biti peptid ili peptidomimetik. Peptidomimetik (ovde se takođe označava kao oligopeptidomimetik) je molekul sposoban da se savije u definisanu trodimenzionalnu strukturu sličnu prirodnom peptidu. Peptidni ili peptidomimetik ostatak može biti oko 5-50 amino-kiselina dugačak, npr., oko 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ili 50 amino-kiselina dugačak. Peptid ili peptidomimetik može biti, na primer, peptid za ćelijsku permeaciju, katjonski peptid, amfipatični peptid, ili hidrofobni peptid (npr., koji se sastoji prvenstveno od Tyr, Trp ili Phe). Peptidni ostatak može biti dendrimer peptid, ograničeni peptid ili umreženi peptid. U sledećem primeru izvođenja, peptidni ostatak može da uključuje hidrofobnu membransku sekvencu za translokaciju (MTS). Primer hidrofobnog peptida koji sadrži MTS je RFGF. RFGF analog koji sadrži hidrofobni MTS takođe može biti ostatak koji ciljno deluje. Peptidni ostatak može biti peptid za "isporuku", koji može nositi velike polarne molekule uključujući peptide, oligonukleotide, i proteine kroz ćelijske membrane. Na primer, pronađeno je da su određene sekvence HIV Tat proteina i Drosophila Antennapedia sposobne da funkcionišu kao peptidi za isporuku. Peptid ili peptidomimetik mogu biti kodirani nasumičnom sekvencom DNK, kao što je peptid identifikovan iz biblioteke za prikazivanje faga, ili jedna-perla-jedno-jedinjenje (one-bead-one-compound OBOC) kombinatorne biblioteke (Lam et al, Nature, 354:82-84, 1991). U jednom primeru izvođenja, peptid ili peptidomimetik je peptid koji ciljno deluje na ćeliju kao što je arginin-glicin-asparaginska kiselina (RGD)-peptid, ili RGD mimik. Peptidni ostatak može biti u opsegu od oko 5 aminokiselina do oko 40 amino-kiselina. Peptidni ostaci mogu imati strukturnu modifikaciju, takvu da poveća stabilnost ili usmeri konformaciona svojstva. Može se koristiti bilo koja od ispod opisanih strukturnih modifikacija. RGD peptidni ostatak se može upotrebljavati za ciljanje tumorske ćelije, kao što je endotelna tumorska ćelija ili tumorska ćelija kancera dojke (Zitzmann et al, Cancer Res., 62:5139-43, 2002). RGD peptid može olakšati ciljno delovanje bilo koje od Formula (XX) ili (XXIV) na tumore niza drugih tkiva, uključujući pluća, bubreg, slezinu, ili jetru (Aoki et al, Cancer Gene Therapy 8:783-787, 2001).
[0139] U nekim primerima izvođenja, RGD peptid će olakšati ciljno delovanje konjugata za isporuku leka na bubreg. RGD peptid može biti linearan ili cikličan, i može biti modifikovan, npr., glikozilovan ili metilovan da olakša ciljno delovanje na specifična tkiva. Na primer, glikozilovani RGD peptid može da isporuči konjugat za isporuku leka do ćelije tumora koja eksprimira civB3 (Haubner et al., Jour. Nucl. Med., 42:326-336, 2001). Mogu se upotrebljavati peptidi koji ciljaju markere kojima su obogaćene proliferišuće ćelije. Na primer, RGD koji sadrže peptide i peptidomimetike mogu ciljati ćelije kancera, posebno ćelije koje izlažu integrin. Stoga, mogu se upotrebljavati RGD peptidi, ciklični peptidi koji sadrže RGD, RGD peptidi koji uključuju D-amino-kiseline, kao i sintetički RGD mimici. Pored RGD, mogu se upotrebljavati i drugi ostaci koji ciljaju integrin agens za isporuku leka. Generalno, takvi agensi za isporuku leka mogu se upotrebljavati za kontrolu proliferišućih ćelija i angiogeneze. Poželjni konjugati ove vrste agensa za isporuku leka ciljaju PECAM-1, VEGF, ili drugi gen kancera, npr., ovde opisan gen kancera.
[0140] "Peptid za ćelijsku permeaciju" je sposoban da izvrši permeaciju ćelije, npr., ćelije sisara, kao što je humana ćelija. Peptid za ćelijsku permeaciju može da uključuje RALA peptid. (Molecular Therapy: Nucleic Acids, 2017, 6, 249-258; J Control Release. 2014, 189:141-9; i Nanomedicine (Lond).2015, 10(19): 2989-3001). Peptid za ćelijsku permeaciju takođe može da uključuje signal nukleusne lokalizacije (NLS). Na primer, peptid za ćelijsku permeaciju može biti dvodelni amfipatični peptid, kao što je MPG, koji je poreklom od fuzionog peptidnog domena HIV-1 gp41 i NLS velikog T antigena SV40 (Simeoni et al,
4
Nucl. Acids Res.31: 2717-2724, 2003). Peptid za ćelijsku permeaciju može da formira nano česticu.
[0141] U jednom primeru izvođenja, peptid koji ciljno deluje može biti amfipatični ahelijačni peptid. Primeri amfipatičnih a-helijačnih peptida uključuju, ali nisu ograničeni na, cecropine, likotoksine, paradaksine, buforin, CPF, peptid sličan bombininu (BLP), katelicidine, ceratotoksine, S. clava peptide, hagfish crevne antimikrobne peptide (HFIAP), magainine, brevinine-2, dermaseptine, melitine, pleurocidine, H2A peptide, Xenopus peptide, eskulentinis-1, i cerine. Poželjno će se uzeti u obzir brojni faktori koji održavaju integritet stabilnosti heliksa. Na primer, koristiće se maksimalan broj ostataka koji stabilizuju heliks (npr., leu, ala, ili lys), i koristiće se minimalan broj ostataka koji destabilizuju heliks (npr., prolin, ili ciklične monomerne jedinice). Razmotriće se ostatak pokrivanja-kapinga (na primer Gly je primer N-kaping ostatka i/ili se može upotrebiti amidacija C-terminala da obezbedi dodatne H-veze za stabilizaciju heliksa. Formiranje sonih mostova između ostataka sa suprotnim naelektrisanjima, odvojenih sa i 3, ili i 4 pozicija mogu da obezbede stabilnost. Na primer, katjonski ostaci kao što su lizin, arginin, homoarginin, ornitin ili histidin mogu da formiraju sone mostove sa anjonskim ostacima glutamatom ili aspartatom.
[0142] Peptidni i peptidomimetički agensi za isporuku leka uključuju one koji imaju peptide koji je javljaju u prirodi ili modifikovane peptide, npr., D ili L peptide; α, β, ili γ peptide; N-metil peptide; azapeptide; peptide koji imaju jednu ili više amidnih, tj., peptidnih, veza zamenjenih jednom ili više urea, tiourea, karbamat, ili sulfonil urea vezama; ili ciklične peptide.
[0143] Agens za isporuku leka koji ciljno deluje može biti bilo koji agens za isporuku leka koji je sposoban da ciljno deluje na specifični receptor. Primeri su: folat, GalNAc, galaktoza, manoza, manoza-6P, klasteri šećera kao što su GalNAc klaster, klaster manoze, klaster galaktoze, ili aptamer. Klaster je kombinacija dve ili više jedinica šećera. Agensi za isporuku leka koji ciljno deluju takođe uključuju integrin receptor agense za isporuku leka, hemokin receptor agense za isporuku leka, transferin, biotin, serotonin receptor agense za isporuku leka, PSMA, endotelin, GCPII, somatostatin, LDL i HDL agense za isporuku leka. Agensi za isporuku leka takođe mogu biti zasnovani na nukleinskoj kiselini, npr., aptameru. Aptamer može biti nemodifikovan ili imati bilo koju kombinaciju modifikacija ovde objavljenih.
[0144] Agensi za endozomsko oslobađanje uključuju imidazole, poli ili oligoimidazole, PEI, peptide, fuzogene peptide, polikaboksilate, poliakatjone, maskirane oligo ili poli katjone ili anjone, acetale, poliacetale, ketale/poliketiale, ortoestre, polimere sa maskiranim ili nemaskiranim katjonskim ili anjonskim naelektrisanjima, dendrimere sa maskiranim ili nemaskiranim katjonskim ili anjonskim naelektrisanjima.
[0145] Agens za isporuku leka može biti PK modulator (farmakokinetički modulator). PK modulatori uključuju lipofile, žučne kiseline, steroide, analoge fosfolipida, peptide, agense za vezivanje proteina, PEG, vitamine itd. Primeri PK modulatora uključuju, ali nisu ograničeni na, holesterol, masne kiseline, holnu kiselinu, litoholnu kiselinu, dialkilgliceride, diacilgliceride, fosfolipide, sfingolipide, naproksen, ibuprofen, vitamin E, biotin itd.
[0146] Takođe je poznato da se oligonukleotidi koji sadrže brojne fosforotioatne veze vezuju za serumski protein, stoga su kratki oligonukleotidi, npr., oligonukleotidi od oko 5 baza, 10 baza, 15 baza ili 20 baza, koji sadrže višestruke fosforotioatne veze u okosnici, takođe podložni predmetnom pronalasku kao agensi za isporuku leka (npr., kao PK modulirajući agensi za isporuku leka).
[0147] Pored toga, aptameri koji vezuju serumske komponente (npr., serumske proteine) takođe su podložni predmetnoj objavi kao PK modulirajući agensi za isporuku leka.
[0148] Kada agens za isporuku leka sadrži kombinaciju dva ili više ostatka, npr., lipid i ugljeni hidrat, npr., lipid i peptid, dva ili više ostatka mogu svi imati ista svojstva, svi imati različita svojstva, ili neki ostaci imati ista svojstva dok drugi imati različita svojstva. Na primer, agens za isporuku leka može imati svojstva za ciljno delovanje, endozomolitsku aktivnost, i/ili PK modulirajuća svojstva. Na primer, jedan ostatak agensa za isporuku leka može biti hidrofilan, i drugi može biti hidrofoban. U nekim primerima izvođenja, ostaci imaju različita svojstva.
[0149] Agensi za isporuku leka i linkeri su opisani u US 7,745,608; US 7,626,014; US 8,034,921; US 2005/0164235; i WO 2013/075035.
[0150] Ovde je obezbeđeno jedinjenje koje ima Formulu (X):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
4
R<1>i R<2>su svaki nezavisno hidroksi grupa ili atom halogena;
B<1>je:
R<18>je vodonik ili C1-6alkil; i
R<19>atom halogena
B<2>je:
i
Q<2>i Q<4>su svaki nezavisno atom kiseonika ili atom sumpora.
[0151] Specifični primeri jedinjenja (X) uključuju jedinjenja iz primera 1-5, 14, 19-26 i 3a.
[0152] Kada je jedinjenje (X) u obliku soli, so je poželjno farmakološki prihvatljiva so. Primeri uključuju soli sa neorganskom bazom, soli sa organskom bazom, soli sa neorganskom kiselinom, soli sa organskom kiselinom, i soli sa baznom ili kiselom aminokiselinom.
[0153] Poželjni primeri soli sa neorganskom bazom uključuju soli alkalnih metala kao što su natrijumova so, kalijumova so i slično; soli zemnoalkalnih metala kao što su kalcijumova so, magnezijumova so i slično; so aluminijuma i amonijum so.
[0154] Poželjni primeri soli sa organskom bazom uključuju soli sa trimetilaminom, trietilaminom, piridinom, pikolinom, etanolaminom, dietanolaminom, trietanolaminom, trometamin [tris(hidroksimetil)metilaminom], terc-butilaminom, cikloheksilaminom, benzilaminom, dicikloheksilaminom i N,N-dibenzil etilen diaminom.
4
[0155] Poželjni primeri soli sa neorganskom kiselinom uključuju soli sa hlorovodoničnom kiselinom, bromovodoničnom kiselinom, azotnom kiselinom, sumpornom kiselinom i fosfornom kiselinom.
[0156] Poželjni primeri soli sa organskom kiselinom uključuju soli sa mravljom kiselinom, sirćetnom kiselinom, trifluorosirćetnom kiselinom, ftalnom kiselinom, fumarnom kiselinom, oksalnom kiselinom, vinskom kiselinom, maleinskom kiselinom, limunskom kiselinom, jantarnom kiselinom, jabučnom kiselinom, metansulfonskom kiselinom, benzensulfonskom kiselinom i p-toluensulfonskom kiselinom.
[0157] Poželjni primeri soli sa baznom amino-kiselinom uključuju soli sa argininom, lizinom i ornitinom.
[0158] Poželjni primeri soli sa kiselom amino-kiselinom uključuju soli sa asparaginskom kiselinom i glutaminskom kiselinom.
[0159] Kada je jedinjenje (X) u obliku soli, so je poželjno so sa trietilaminom ili natrijumom, poželjnije so sa trietilaminom.
[0160] Proizvodni postupak jedinjenja iz predmetnog pronalaska je objašnjen u nastavku.
[0161] Upotrebljeno sirovinsko jedinjenje i reagens i jedinjenje dobijeno u svakom koraku u sledećem proizvodnom postupku mogu biti svi u obliku soli, i primeri takve soli uključuju one slične solima jedinjenja iz predmetne objave.
[0162] Kada je jedinjenje dobijeno u svakom koraku u slobodnom obliku, može se konvertovati u ciljnu so u skladu sa postupkom poznatim per se. Kada je jedinjenje dobijeno u svakom koraku so, može se konvertovati u ciljni slobodni oblik ili u drugu so u skladu sa postupkom poznatim per se.
[0163] Jedinjenje dobijeno u svakom koraku može se direktno upotrebiti kao reakciona smeša ili kao sirovi proizvod za sledeću reakciju. Alternativno, jedinjenje dobijeno u svakom koraku može se izolovati i prečistiti iz reakcione smeše u skladu sa postupkom poznatim per se, na primer, načinima za razdvajanje kao što su koncentrovanje, kristalizacija, rekristalizacija, destilacija, ekstrakcija rastvarača, frakciona destilacija, hromatografija na koloni i slično.
[0164] Kada su sirovinsko jedinjenje i reagens koji se upotrebljavaju u svakom koraku komercijalno dostupni, komercijalno dostupan proizvod se takođe može upotrebljavati direktno.
[0165] U reakciji u svakom koraku, dok vreme reakcije varira u zavisnosti od vrste reagensa i rastvarača koji se upotrebljava, generalno je 1 min - 48 h, poželjno 10 min - 8 h, ukoliko nije drugačije specificirano.
4
[0166] U reakciji u svakom koraku, dok temperatura reakcije varira u zavisnosti od vrste reagensa i rastvarača koji se upotrebljava, generalno je -78 °C - 300 °C, poželjno -78 °C - 150 °C, ukoliko nije drugačije specificirano.
[0167] U reakciji u svakom koraku, dok pritisak varira u zavisnosti od vrste reagensa i rastvarača koji se upotrebljava, generalno je 1 atm - 20 atm, poželjno 1 atm - 3 atm, ukoliko nije drugačije specificirano.
[0168] Mikrotalasni sintesajzer kao što je Initiator proizveden od strane Biotage i slično mogu se upotrebljavati za reakciju u svakom koraku. Dok temperatura reakcije varira u zavisnosti od vrste reagensa i rastvarača koji se upotrebljava, generalno je sobna temperatura - 300 °C, poželjno 50 °C - 250 °C, ukoliko nije drugačije specificirano. Dok vreme reakcije varira u zavisnosti od vrste reagensa i rastvarača koji se upotrebljava, generalno je 1 min - 48 h, poželjno 1 min - 8 h, ukoliko nije drugačije specificirano.
[0169] U reakciji u svakom koraku, reagens se upotrebljava u količini od 0,5 ekvivalenata -20 ekvivalenata, poželjno 0,8 ekvivalenata - 5 ekvivalenata, u odnosu na supstrat, ukoliko nije drugačije specificirano. Kada se reagens upotrebljava kao katalizator, reagens se upotrebljava u količini od 0,001 ekvivalenata - 1 ekvivalent, poželjno 0,01 ekvivalenata - 0,2 ekvivalenata, u odnosu na supstrat. Kada se reagens upotrebljava kao rastvarač reakcije, reagens se upotrebljava u količini rastvarača.
[0170] Ukoliko nije drugačije specificirano, reakcija se u svakom koraku izvodi bez rastvarača, ili rastvaranjem ili suspendovanjem sirovinskog jedinjenja u pogodnom rastvaraču. Primeri rastvarača uključuju one opisane u primerima i sledeće rastvarače. alkoholi: metanol, etanol, terc-butil alkohol, 2-metoksietanol i slično;
etri: dietil etar, difenil etar, tetrahidrofuran, 1,2-dimetoksietan i slično;
aromatični ugljovodonici: hlorobenzen, toluen, ksilen i slično;
zasićeni ugljovodonici: cikloheksan, heksan i slično;
amidi: N,N-dimetilformamid, N-metilpirolidon i slično;
halogenisani ugljovodonici: dihlorometan, ugljen tetrahlorid i slično;
nitrili: acetonitril i slično;
sulfoksidi: dimetil sulfoksid i slično;
aromatične organske baze: piridin i slično;
anhidridi: sirćetni anhidrid i slično;
organske kiseline: mravlja kiselina, sirćetna kiselina, trifluorosirćetna kiselina i slično; neorganske kiseline: hlorovodonična kiselina, sumporna kiselina i slično;
estri: etil acetat i slično;
4
ketoni: aceton, metil etil keton i slično;
voda.
[0171] Gore pomenuti rastvarač se može upotrebljavati u smeši dve ili više njihovih vrsta u odgovarajućem odnosu.
[0172] Kada se baza upotrebljava za reakciju u svakom koraku, njihovi primeri uključuju one opisane u primerima i sledeće baze.
neorganske baze: natrijum hidroksid, magnezijum hidroksid, natrijum karbonat, kalcijum karbonat, natrijum hidrogenkarbonat i slično;
organske baze: trietilamin, dietilamin, piridin, 4-dimetilaminopiridin, N,N-dimetilanilin, 1,4-diazabiciklo[2.2.2]oktan, 1,8-diazabiciklo[5.4.0]-7-undecen, imidazol, piperidin i slično; metal alkoksidi: natrijum etoksid, kalijum terc-butoksid i slično;
hidridi alkalnih metala: natrijum hidrid i slično;
metal amidi: natrijum amid, litijum diizopropilamid, litijum heksametildisilazid i slično; organski litijumi: n-butillitijum i slično.
[0173] Kada se kiselina ili kiselinski katalizator upotrebljava za reakciju u svakom koraku, njihovi primeri uključuju one opisane u primerima i sledeće kiseline i kiselinske katalizatore. neorganske kiseline: hlorovodonična kiselina, sumporna kiselina, azotna kiselina, bromovodonična kiselina, fosforna kiselina i slično;
organske kiseline: sirćetna kiselina, trifluorosirćetna kiselina, limunska kiselina, ptoluensulfonska kiselina, 10-kamforsulfonska kiselina i slično;
Luisova (Lewis) kiselina: bor trifluorid dietil etar kompleks, cink jodid, anhidrovani aluminijum hlorid, anhidrovani cink hlorid, anhidrovani gvožđe hlorid i slično.
[0174] Ukoliko nije drugačije specificirano, reakcija se u svakom koraku izvodi u skladu sa postupkom poznatim per se, na primer, postupkom opisanim u Jikken Kagaku Kouza, 5th Edition, vol.13-19 (the Chemical Society of Japan ed.); Shin Jikken Kagaku Kouza, vol.14-15 (the Chemical Society of Japan ed.); Fine Organic Chemistry, Revised 2nd Edition (L. F. Tietze, Th. Eicher, Nankodo); Organic Name Reactions, the Reaction Mechanism and Essence, Revised Edition (Hideo Togo, Kodansha); ORGANIC SYNTHESES Collective Volume I-VII (John Wiley & Sons Inc); Modern Organic Synthesis in the Laboratory A Collection of Standard Experimental Procedures (Jie Jack Li, OXFORD UNIVERSITY); Comprehensive Heterocyclic Chemistry III, Vol.1-Vol.14 (Elsevier Japan); Strategic Applications of Named Reactions in Organic Synthesis (translated by Kiyoshi Tomioka, Kagakudojin); Comprehensive Organic Transformations (VCH Publishers Inc.), 1989, ili slično, ili postupkom opisanim u primerima.
4
[0175] U svakom koraku, reakcija zaštite ili uklanjanja zaštite funkcionalne grupe se izvodi u skladu sa postupkom poznatim per se, na primer, postupkom opisanim u "Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Ed", Wiley-Interscience, Inc., 2007 (Theodora W. Greene, Peter G. M. Wuts); "Protecting Groups 3rd Ed." Thieme, 2004 (P.J.Kocienski), ili slično, ili postupkom opisanim u primerima.
[0176] Primeri zaštitne grupe za hidroksi grupu (npr., hidroksi grupa alkohola i slično, fenolna hidroksi grupa) uključuju zaštitne grupe etar tipa kao što su metoksimetil etar, benzil etar, terc-butildimetilsilil etar, tetrahidropiranil etar i slično; zaštitne grupe tipa karboksilatnog estra kao što je acetatni estar i slično; zaštitne grupe tipa sulfonatnog estra kao što je metansulfonatni estar i slično; i zaštitne grupe tipa karbonatnog estra kao što je tercbutilkarbonat i slično.
[0177] Primeri zaštitne grupe za karbonil grupu aldehida uključuju zaštitne grupe acetal tipa kao što je dimetilacetal i slično; i zaštitne grupe cikličnog acetal tipa kao što je 1,3-dioksan i slično.
[0178] Primeri zaštitne grupe za karbonil grupu ketona uključuju zaštitne grupe ketal tipa kao što je dimetilketal i slično; zaštitne grupe cikličnog ketal tipa kao što je 1,3-dioksan i slično; zaštitne grupe oksim tipa kao što je O-metiloksim i slično; i zaštitne grupe hidrazon tipa kao što je N,N-dimetilhidrazon i slično.
[0179] Primeri zaštitne grupe za karboksil grupu uključuju zaštitne grupe estar tipa kao što je metil estar i slično; i zaštitne grupe amid tipa kao što je N,N-dimetilamid i slično.
[0180] Primeri zaštitne grupe za tiol uključuju zaštitne grupe etar tipa kao što je benzil tioetar i slično; i zaštitne grupe estar tipa kao što su tioacetat estar, tiokarbonat, tiokarbamat i slično.
[0181] Primeri zaštitne grupe za amino grupu i aromatični heterocikl kao što su imidazol, pirol, indol i slično uključuju zaštitne grupe karbamat tipa kao što je benzil karbamat i slično; zaštitne grupe amid tipa kao što su acetamid, benzamid, izobutilamid i slično; zaštitne grupe alkil amin tipa kao što je N-trifenilmetilamin i slično; i zaštitne grupe sulfonamid tipa kao što je metansulfonamid i slično.
[0182] Zaštitne grupe se mogu ukloniti u skladu sa postupkom poznatim per se (npr., postupak koji upotrebljava kiselinu, bazu, ultraljubičaste zrake, hidrazin, fenilhidrazin, natrijum N-metilditiokarbamat, tetrabutilamonijum fluorid, paladijum acetat ili trialkilsilil halid (npr., trimetilsilil jodid, trimetilsilil bromid), postupak redukcije).
[0183] Kada se reakcija redukcije izvodi u svakom koraku, primeri redukcionog agensa koji se upotrebljava uključuju metal hidride kao što su litijum aluminijum hidrid, natrijum triacetoksiborohidrid, natrijum cijanoborohidrid, diizobutilaluminijum hidrid (DIBAL-H), natrijum borohidrid, tetrametilamonijum triacetoksiborohidrid i slično; borane kao što je boran tetrahidrofuran kompleks i slično; Raney nikl; Raney kobalt; vodonik; mravlju kiselinu; trietilsilan i slično. Kada se redukuje dvostruka ili trostruka veza ugljenik-ugljenik, može se koristiti postupak koji upotrebljava katalizator kao što je paladijum-ugljenik, Lindlarov (Lindlar’s) katalizator i slično.
[0184] Kada se reakcija oksidacije izvodi u svakom koraku, primeri oksidacionog agensa koji se upotrebljava uključuju perokside kao što su m-hloroperbenzoeva kiselina (mCPBA), vodonik peroksid, terc-butil hidroperoksid i slično; perhlorate kao što je tetrabutilamonijum perhlorat i slično; hlorate kao što je natrijum hlorat i slično; hlorite kao što je natrijum hlorit i slično; perjodne kiseline kao što je natrijum perjodat i slično; hipervalentne jodne reagense kao što je jodosilbenzen i slično; reagense koji sadrže mangan kao što je mangan dioksid, kalijum permanganat i slično; olovo kao što je olovo tetraacetat i slično; reagense koji sadrže hrom kao što su piridinijum hlorohromat (PCC), piridinijum dihromat (PDC), Džonsov (Jones) reagens i slično; halogena jedinjenja kao što je N-bromosukcinimid (NBS) i slično; kiseonik; ozon; sumporni trioksido-piridinski kompleks; osmijum tetroksid; selen dioksid; 2,3-dihloro-5,6-dicijano-1,4-benzokvinon (DDQ) i slično.
[0185] Kada se reakcija ciklizacije radikala izvodi u svakom koraku, primeri inicijatora radikala koji se upotrebljava uključuju azo jedinjenja kao što je azobisizobutironitril (AIBN) i slično; inicijatori radikala rastvorljivi u vodi kao što je 4-4’-azobis-4-cijanopentanska kiselina (ACPA) i slično; trietilboron u prisustvu vazduha ili kiseonika; benzoil peroksid i slično. Primeri reagensa radikala koji se upotrebljava uključuju tributilstanan, tristrimetilsililsilan, 1,1,2,2-tetrafenildisilan, difenilsilan, samarijum jodid i slično.
[0186] Kada se Vitigova (Wittig) reakcija izvodi u svakom koraku, primeri Vitigovog reagensa koji se upotrebljava uključuju alkiliden fosforane i slično. Alkiliden fosforani se mogu pripremiti u skladu sa postupkom poznatim per se, na primer, reakcijom fosfonijum soli sa jakom bazom.
[0187] Kada se Horner-Emonsova (Horner-Emmons) reakcija izvodi u svakom koraku, primeri reagensa koji se upotrebljava uključuju fosfonoacetate kao što su metil dimetilfosfonoacetat, etil dietilfosfonoacetat i slično; i baze kao što su hidridi alkalnih metala, organski litijumi i slično.
[0188] Kada se Fridel-Kraftsova (Friedel-Crafts) reakcija izvodi u svakom koraku, primeri reagensa koji se upotrebljava uključuju kombinaciju Luisove kiseline i kiselog hlorida ili kombinaciju Luisove kiseline i alkilirajućeg agensa (npr., alkil halid, alkohol, olefin). Alternativno, organska kiselina ili neorganska kiselina se takođe mogu upotrebljavati umesto
1
Luisove kiseline, i anhidrid kao što je sirćetni anhidrid i slično takođe se može upotrebljavati umesto kiselog hlorida.
[0189] Kada se reakcija aromatične nukleofilne supstitucije izvodi u svakom koraku, nukleofil (npr., amin, imidazol) i baza (npr., organska baza) upotrebljavaju se kao reagens.
[0190] Kada se reakcija nukleofilne adicije karbo anjonom, nukleofilna 1,4-adiciona reakcija (Majklova (Michael) adiciona reakcija) karbo anjonom ili nukleofilna reakcija supstitucije karbo anjonom izvodi u svakom koraku, primeri baze koja se upotrebljava za generisanje karbo anjona uključuju organske litijume, metal alkokside, neorganske baze, organske baze i slično.
[0191] Kada se Grinjarova (Grignard) reakcija izvodi u svakom koraku, primeri Grinjarovog reagensa koji se upotrebljava uključuju arilmagnezijum halide kao što je fenilmagnezijum bromid i slično; alkilmagnezijum halide kao što je metilmagnezijum bromid i slično, i slično. Grinjarov reagens se može pripremiti u skladu sa postupkom poznatim per se, na primer, reakcijom alkil halida ili aril halida sa metal magnezijumom u etru ili tetrahidrofuranu kao rastvaraču.
[0192] Kada se reakcija Knovenagelove (Knoevenagel) kondenzacije izvodi u svakom koraku, jedinjenje koje ima aktiviranu metilen grupu sa dve grupe za povlačenje elektrona (npr., malonska kiselina, dietil malonat, malononitril itd.) i baza (npr., organska baza, metal alkoksid, neorganska baza) upotrebljavaju se kao reagens.
[0193] Kada se Vilsmajer-Hakova (Vilsmeier-Haack) reakcija izvodi u svakom koraku, fosforil hlorid i amid derivat (npr., N,N-dimetilformamid itd.) upotrebljavaju se kao reagens.
[0194] Kada se reakcija azidacije alkohola, alkil halida ili sulfonata izvodi u svakom koraku, primeri agensa za azidaciju koji se upotrebljava uključuju difenilfosforilazid (DPPA), trimetilsililazid, natrijum azid i slično. Na primer, za reakciju azidacije alkohola, koriste se postupak koji upotrebljava difenilfosforilazid i 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en (DBU), postupak koji upotrebljava trimetilsililazid i Luisovu kiselinu i slično.
[0195] Kada se reakcija reduktivne aminacije izvodi u svakom koraku, primeri redukcionog agensa koji se upotrebljava uključuju natrijum triacetoksiborohidrid, natrijum cijanoborohidrid, vodonik i mravlju kiselinu. Kada je supstrat amino jedinjenje, primeri karbonil jedinjenja koje se upotrebljava uključuju paraformaldehid, aldehide kao što je acetaldehid i slično, i ketone kao što je cikloheksanon i slično. Kada je supstrat karbonil jedinjenje, primeri amina koji se upotrebljava uključuju amonijak, primarne amine kao što je metilamin i slično; sekundarne amine kao što su dimetilamin i slično, i slično.
2
[0196] Kada se Mitsunobuova (Mitsunobu) reakcija izvodi u svakom koraku, azodikarboksilat (npr., dietil azodikarboksilat (DEAD), diizopropil azodikarboksilat (DIAD) itd.) i trifenilfosfin se upotrebljavaju kao reagens.
[0197] Kada se reakcija esterifikacije, reakcija amidacije ili reakcija ureacije izvode u svakom koraku, primeri reagensa koji se upotrebljava uključuju acil halide kao što su kiseli hloridi, kiseli bromidi i slično; aktivirane karboksilne kiseline kao što su anhidridi, aktivirani estri, sulfati i slično. Primeri agensa za aktiviranje karboksilne kiseline uključuju agense za kondenzaciju karbodiimida kao što je 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid hidrohlorid (WSCD) i slično; agense za kondenzaciju triazina kao što je 4-(4,6-dimetoksi-1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolinijum hlorid n-hidrat (DMT-MM) i slično; agense za kondenzaciju karbonata kao što je 1,1-karbonildiimidazol (CDI) i slično; difenilfosforil azid (DPPA); so benzotriazol-1-iloksi-trisdimetilaminofosfonijuma (BOP reagens); 2-hloro-1-metilpiridinijum jodid (Mukaiyama reagens); tionil hlorid; haloformate nižih alkila kao što je etil hloroformat i slično; O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum heksafluorofosforat (HATU); sumpornu kiselinu; njihove kombinacije i slično. Kada se upotrebljava agens za kondenzaciju karbodiimida, u reakcioni sistem se može dodati aditiv kao što su 1-hidroksibenzotriazol (HOBt), N-hidroksisukcinimid (HOSu), dimetilaminopiridin (DMAP) i slično.
[0198] Kada se reakcija kuplovanja izvodi u svakom koraku, primeri metal katalizatora koji se upotrebljava uključuju paladijumova jedinjenja kao što su paladijum(II) acetat, tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0), dihlorobis(trifenilfosfin)paladijum(II), dihlorobis(trietilfosfin)paladijum(II), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen paladijum(II) hlorid i slično; jedinjenja nikla kao što je tetrakis(trifenilfosfin)nikl(0) i slično; jedinjenja rodijuma kao što je tris(trifenilfosfin)rodijum(III) hlorid i slično; jedinjenja kobalta; jedinjenja bakra kao što su bakar oksid, bakar(I) jodid i slično; jedinjenja platine i slično. Pored toga, u reakcioni sistem se može dodati baza, i primeri za to uključuju neorganske baze i slično.
[0199] Kada se reakcija tiokarbonilacije izvodi u svakom koraku, fosfor pentasulfid se tipično upotrebljava kao agens za tiokarbonilaciju. Alternativno, reagens koji ima 1,3,2,4-ditiadifosfetan-2,4-disulfidnu strukturu (npr., 2,4-bis(4-metoksifenil)-1,3,2,4-ditiadifosfetan-2,4-disulfid (Lavesonov (Lawesson) reagens) itd.) takođe se može upotrebljavati umesto fosfornog pentasulfida.
[0200] Kada se Vol-Ciglerova (Wohl-Ziegler) reakcija izvodi u svakom koraku, primeri halogenirajućeg agensa koji se upotrebljava uključuju N-jodosukcinimid, Nbromosukcinimid (NBS), N-hlorosukcinimid (NCS), brom, sulfuril hlorid i slično. Pored toga, reakcija se može ubrzati podvrgavanjem reakcije reakcionog sistema inicijatoru radikala kao što su toplota, svetlost, benzoil peroksid, azobisizobutironitril i slično.
[0201] Kada se reakcija halogenizacije hidroksi grupe izvodi u svakom koraku, primeri halogenirajućeg agensa koji se upotrebljava uključuju halovodonične kiseline i kisele halide neorganskih kiselina, specifično, hlorovodoničnu kiselinu, tionil hlorid, fosforni oksihlorid i slično za hlorinaciju, 48% bromovodičnu kiselinu i slično za brominaciju. Pored toga, može se koristiti postupak proizvodnje alkil halida reakcijom alkohola sa trifenilfosfinom i ugljenik tetrahloridom ili ugljenik tetrabromidom ili slično. Alternativno, takođe se može koristiti postupak proizvodnje alkil halida u dva koraka koji sadrži konvertovanje alkohola u odgovarajući sulfonat, i zatim reakciju sulfonata sa litijum bromidom, litijum hloridom ili natrijum jodidom.
[0202] Kada se Arbuzovljeva (Abruzov) reakcija izvodi u svakom koraku, primeri reagensa koji se upotrebljava uključuju alkil halide kao što je etil bromoacetat i slično; fosfite kao što su trietil fosfit, tri(izopropil)fosfit i slično, i slično.
[0203] Kada se reakcija sulfonatne esterifikacije izvodi u svakom koraku, primeri sulfonirajućeg agensa koji se upotrebljava uključuju metansulfonil hlorid, p-toluensulfonil hlorid, metansulfonski anhidrid, p-toluensulfonski anhidrid i slično.
[0204] Kada se reakcija hidrolize izvodi u svakom koraku, kao reagens se upotrebljava kiselina ili baza. Primeri kiseline uključuju piridin 2,2,2-trifluoroacetat. Za reakciju kisele hidrolize t-butil estra, mravlja kiselina, trietilsilan i slično mogu se dodati reduktivno zarobljenom t-butil katjonu koji je sporedni proizvod.
[0205] Kada se reakcija dehidratacije izvodi u svakom koraku, primeri agensa za dehidrataciju koji se upotrebljava uključuju sumpornu kiselinu, difosfor pentaoksid, fosfor oksihlorid, N,N’-dicikloheksilkarbodiimid, alumina, polifosfornu kiselinu i slično.
[0206] Primeri zaštitne grupe za hidroksi grupu koja se upotrebljava u svakom koraku uključuju zaštitne grupe etar tipa kao što je bis(4-metoksifenil)(fenil)metil etar i slično, pored onih iznetih kao primer iznad.
[0207] Primeri zaštitne grupe za amino grupu koja se upotrebljava u svakom koraku uključuju zaštitne grupe imidamid tipa kao što je N,N-dimetilformimidamid i slično, pored onih iznetih kao primer iznad.
[0208] Reakcija uklanjanja zaštite u svakom koraku takođe se može izvesti upotrebom sirćetne kiseline, 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropan-2-ol, trietilamin trihidrofluorida, metilamina,
4
2-metilpropan-2-amina ili vodonik-fluorid-piridina, trifluorosirćetne kiseline, umesto onih iznetih kao primer iznad.
[0209] Kada se reakcija rearanžiranja izvodi u svakom koraku, primeri reagensa koji se upotrebljava uključuju baze kao što je trietilamin i slično.
[0210] Kada se reakcija fosforamidita izvodi u svakom koraku, fosforamidirajući agens (npr., fosfordiamiditi kao što je 3-((bis(diizopropilamino)fosfino)oksi)propannitril i slično; hlorofosforamiditi kao što je 2-cijanoetil diizopropilhlorofosforamidit i slično, i baza (npr., organske baze) se upotrebljavaju kao reagens.
[0211] Kada se reakcija tiofosforamidita izvodi u svakom koraku, tiofosforamidirajući agens (npr., 2-cijanoetil dipropan-2-ilfosforamidohloridotioit) i baza (npr., organske baze) se upotrebljavaju kao reagens.
[0212] Kada se reakcija H-fosfonacije izvodi u svakom koraku, primeri H-fosfonirajućeg agensa koji se upotrebljava uključuju difenil fosfit i slično.
[0213] Kada se reakcija H-tiofosfonacije izvodi u svakom koraku, primeri H-tiofosfonirajućeg agensa koji se upotrebljava uključuju kombinaciju aktivatora kao što je difenil fosfit i slično i izvor atoma sumpora kao što je litijum sulfid i slično, i slično.
[0214] Kada se reakcija kondenzacije izvodi u svakom koraku, primeri aktivatora koji se upotrebljava uključuju piridin 2,2,2-trifluoroacetat, 1H-tetrazol, 5-(etilsulfanil)-1H-tetrazol (u daljem tekstu ponekad označen kao 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazol) i slično.
[0215] Kada se reakcija oksidacije izvodi u svakom koraku, primeri oksidujućeg agensa koji se upotrebljava uključuju halogene kao što je jod i slično, koji se generalno upotrebljavaju za sintezu nukleinske kiseline, i slično, pored onih iznetih kao primer iznad.
[0216] Kada se reakcija sumporizacije izvodi u svakom koraku, primeri agensa za sumporizaciju koji se upotrebljava uključuju 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-on, 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-on 1,1-dioksid, ((dimetilamino-metiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tion i slično. Pored toga, na primer, sumpor-2,6-lutidinska suspenzija, rastvor sumporugljenik disulfida, tetrametiltiuram disulfid (TETD) (H. Vu et al., Tetrahedron Lett., 32, 3005-3008 (1991)), Bjužeov (Beauge) reagens (R. P. Lyer et al., J. Am. Chem. Soc., 112, 1253-1254 (1990)) i Lavesonov reagens mogu se takođe upotrebljavati za reakciju sumporizacije. Osim toga, kao postupak formiranja strukture fosforoditioata, dokument autora Marshall et al., (Science 259: 1564-1570, 1993) i dokument autora Caruthers i Nielsen et al., (WO 1989/011486) mogu se upotrebljavati kao referenca.
[0217] Kada se reakcija ciklizacije izvodi u svakom koraku, primeri aktivatora koji se upotrebljava uključuju 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid, pivaloil hlorid, 2(benzoiltriazol-1-iloksi)-1,3-dimetil-2-pirolidin-1-il-1,3,2-diazafosfolidinijum heksafluorat (BOMP), N,N-bis(2-oksazolidinil)fosfonski hlorid (BopCl), pirofosforna kiselina i slično. Kada se aktivator ne upotrebljava, reakcija se može izvesti zagrevanjem. Pored toga, baza se može dodati u reakcioni sistem. Primeri baze uključuju organske baze i slično.
[0218] Kada se reakcija formiranja veze između nukleobaze i riboze izvodi u svakom koraku, primeri aktivatora koji se upotrebljava uključuju trimetilsilil N-(trimetilsilil)acetimidat, trimetilsilil trifluorometansulfonat i slično.
[0219] Jedinjenje (IA) se može proizvesti od jedinjenja (1a) ili (1b) i jedinjenja (2a) ili (2b) u skladu sa postupkom ispod.
pri čemu je PG<a>hidroksi-zaštitna grupa, i drugi simboli su kao što je definisano iznad.
[0220] Alternativno, jedinjenje (IA) se takođe može proizvesti od jedinjenja (8a) ili (8b) i jedinjenja (9a) ili (9b) u skladu sa postupkom ispod.
pri čemu je PG<b>hidroksi-zaštitna grupa, i drugi simboli su kao što je definisano iznad.
[0221] Poželjni primeri hidroksi-zaštitne grupe za PG<a>ili PG<b>uključuju zaštitne grupe etar tipa kao što su bis(4-metoksifenil)(fenil)metil etar, 3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil etar i slično.
[0222] Kada su R<1>i R<2>svaki hidroksi grupa, hidroksi grupa može biti zaštićena. Poželjni primeri hidroksi-zaštitne grupe uključuju zaštitne grupe etar tipa kao što su tercbutildimetilsilil etar, 3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil etar i slično.
[0223] Kada je R<1>hidroksilna grupa, hidroksilna grupa i hidroksilna grupa predstavljena sa PG<a>mogu biti zaštićene 1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil grupom:
[0224] U ovom slučaju, jedinjenje u kome je R<1>hidroksilna grupa zaštićena 3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil grupom:
proizvodi se reakcijom uklanjanja zaštite za uklanjanje PG<a>.
[0225] Kada B<1>ima funkcionalnu grupu, funkcionalna grupa može biti zaštićena. Na primer, kada je B<1>grupa predstavljena sa
i
R<14>je -NH2grupa, -NH2grupa može biti zaštićena.
[0226] Kada B<2>ima funkcionalnu grupu, funkcionalna grupa može biti zaštićena. Na primer, kada je B<2>grupa predstavljena sa
i
R<24>je -NH2grupa, -NH2grupa može biti zaštićena. Pored toga, na primer, kada je B<2>grupa predstavljena sa
-NH2grupa može biti zaštićena.
[0227] Poželjni primeri zaštitne grupe za -NH2grupu uključuju zaštitne grupe amid tipa kao što su benzamid, izobutilamid i slično, i zaštitne grupe imidamid tipa kao što je N,N-dimetilformimidamid i slično.
[0228] Gore pomenuta jedinjenja (1a), (1b), (9a) i (9b) mogu se proizvesti od jedinjenja (27) u skladu sa postupkom ispod.
pri čemu je svaki simbol kao što je definisano iznad.
[0229] Gore pomenuta jedinjenja (2a), (2b), (8a) i (8b) mogu se proizvesti od jedinjenja (29) u skladu sa postupkom ispod.
pri čemu je svaki simbol kao što je definisano iznad.
[0230] Supstituent tako dobijenog jedinjenja (I) može se podvrgnuti modifikaciji (tj. introdukovanju supstituenta, transformaciji funkcionalne grupe) u skladu sa načinima poznatim per se da daju drugo jedinjenje ili njegovu so obuhvaćenu jedinjenjem (I). Poznati generalni postupci mogu se koristiti za introdukovanje supstituenta i transformaciju funkcionalne grupe, i njihovi primeri uključuju konverziju atoma halogena (npr., fluor, hlor, brom, jod) ili opciono halogenizovane C1-6alkilsulfonil-oksi grupe [npr., metansulfoniloksi, etansulfoniloksi, trihlorometansulfoniloksi, trifluorometansulfoniloksi (triflat)] u metil grupu, ciklopropil grupu, vinil grupu, cijano grupu, formil grupu, karbonil grupu, karboksil grupu, hidroksi grupu, amino grupu, boril grupu i slično; konverziju formil grupe u etinil grupu reakcijom Sejfert-Gilbertove (Seyferth-Gilbert) homologizacije; konverziju estra u karboksi grupu hidrolizom; konverziju karboksi grupe u karbamoil grupu amidacijom; konverziju karboksi grupe u hidroksimetil grupu redukcijom; konverziju karbonil grupe u alkohol redukcijom ili alkilacijom; reduktivnu aminaciju karbonil grupe; oksimaciju karbonil grupe; acilaciju amino grupe; ureaciju amino grupe; sumporizaciju amino grupe; alkilaciju amino grupe; zamenu ili aminaciju aktiviranog halogena aminom; alkilaciju hidroksi grupe; i zamenu ili aminaciju hidroksi grupe.
[0231] U slučaju introdukovanja supstituenta i transformacije funkcionalne grupe, kada jedinjenje ima reaktivni ostatak u kome se može dogoditi neželjena reakcija, zaštitna grupa može biti unapred introdukovana u reaktivni ostatak u skladu sa postupkom poznatim per se po potrebi. Uklanjanjem zaštitne grupe u skladu sa postupkom poznatim per se posle ciljne reakcije, može se proizvesti jedinjenje obuhvaćeno predmetnom objavom.
[0232] Na primer, kada sirovinsko jedinjenje ili intermedijer ima amino grupu, karboksilnu grupu ili hidroksi grupu, ove grupe mogu biti zaštićene zaštitnom grupom koja se generalno upotrebljava u hemiji peptida i slično. Uklanjanjem zaštitne grupe po potrebi posle reakcije, može se dobiti ciljno jedinjenje.
[0233] Kada jedinjenje (I) sadrži izomer kao što je optički izomer, stereoizomer, regioizomer, rotamer i slično, bilo koji izomer i njihova smeša su takođe obuhvaćeni jedinjenjem (I) u kome su. Na primer, kada jedinjenje (I) sadrži optički izomer, optički izomer izdvojen iz racematnog jedinjenja je takođe obuhvaćen jedinjenjem (I) u kome je. Ovi izomeri se mogu dobiti kao pojedinačni proizvod u skladu sa sintetičkim postupkom poznatim per se i postupkom razdvajanja poznatim per se (npr., koncentrovanje, ekstrakcija rastvarača, hromatografija na koloni i rekristalizacija).
[0234] Jedinjenje (I) može biti kristal, i pojedinačni kristalni oblik i smeša kristalnih oblika obuhvaćeni su jedinjenjem (I) u kome su. Kristal se može proizvesti kristalizacijom u skladu sa postupkom kristalizacije poznatim per se.
[0235] Jedinjenje (I) može biti farmaceutski prihvatljiv kokristal ili njegova so. Kokristal ili njegova so znači kristalnu supstancu koja se sastoji od dve ili više specijalnih čvrstih supstanci na sobnoj temperaturi, od kojih svaka ima različita fizička svojstva (npr., strukturu, tačku topljenja, toplotu topljenja, higroskopnost i stabilnost). Kokristal ili njegova so mogu se proizvesti u skladu sa postupkom kokristalizacije poznatim per se.
[0236] Jedinjenje (I) može biti hidrat, nehidrat, solvat ili nesolvat, i svi su obuhvaćeni jedinjenjem (I).
[0237] Jedinjenje (I) takođe obuhvata jedinjenje obeleženo ili supstituisano izotopom (npr.,<2>H,<3>H,<11>C,<14>C,<18>F,<35>S,<125>I) i slično. Jedinjenje obeleženo ili supstituisano izotopom može se upotrebljavati, na primer, kao trejser (PET trejser) koji se upotrebljava u pozitronskoj emisionoj tomografiji (PET), i korisno je u oblasti medicinske dijagnoze i slično.
[0238] Jedinjenje (I) može biti prolek.
[0239] Prolek jedinjenja (I) označava jedinjenje koje se konvertuje u jedinjenje (I) reakcijom usled enzima, želudačne kiseline i slično pod fiziološkim uslovima u živom telu, odnosno, jedinjenje koje se konvertuje u jedinjenje (I) enzimskom oksidacijom, redukcijom, hidrolizom i slično; jedinjenje koje se konvertuje u jedinjenje (I) hidrolizom i slično usled želudačne kiseline i slično.
[0240] Primeri proleka za jedinjenje (I) uključuju
1
(1) jedinjenje dobijeno podvrgavanjem amino u jedinjenju (I) acilaciji, alkilaciji ili fosforilaciji (npr., jedinjenje dobijeno podvrgavanjem amino u jedinjenju (I) eikozanoilaciji, alanilaciji, pentilaminokarbonilaciji, (5-metil-2-okso-1,3-dioksolen-4-il)metoksikarbonilaciji, tetrahidrofuranilaciji, pirolidilmetilaciji, pivaloiloksimetilaciji, terc-butilaciji, etoksikarbonilaciji, terc-butoksikarbonilaciji, acetilaciji ili ciklopropilkarbonilaciji);
(2) jedinjenje dobijeno podvrgavanjem hidroksi u jedinjenju (I) acilaciji, alkilaciji, fosforilaciji ili boraciji (npr., jedinjenje dobijeno podvrgavanjem hidroksi u jedinjenju (I) acetilaciji, palmitoilaciji, propanoilaciji, pivaloilaciji, sukcinilaciji, fumarilaciji, alanilaciji ili dimetilaminometilkarbonilaciji);
(3) jedinjenje dobijeno podvrgavanjem karboksi u jedinjenju (I) esterifikaciji ili amidaciji (npr., jedinjenje dobijeno podvrgavanjem karboksi u jedinjenju (I) etil esterifikaciji, fenil esterifikaciji, karboksimetil esterifikaciji, dimetilaminometil esterifikaciji, pivaloiloksimetil esterifikaciji, etoksikarboniloksietil esterifikaciji, ftalidil esterifikaciji, (5-metil-2-okso-1,3-dioksolen-4-il)metil esterifikaciji, cikloheksiloksikarboniletil esterifikaciji ili metilamidaciji). Ova jedinjenja se mogu proizvesti od jedinjenja (I) u skladu sa postupkom poznatim per se.
[0241] Prolek jedinjenja (I) takođe može biti onaj koji se konvertuje u jedinjenje (I) pod fiziološkim uslovima kao što je opisano u "IYAKUHIN no KAIHATSU (Development of Pharmaceuticals)", Vol. 7, Design of Molecules, p.163-198, objavio HIROKAWA SHOTEN (1990).
[0242] U predmetnoj specifikaciji, prolek može biti u obliku soli, i primeri takve soli uključuju one slične solima jedinjenja predstavljenog formulom (I).
[0243] Jedinjenje (I) se takođe može upotrebljavati kao korisni teret u antitelo (ili sekvenca prepoznavanja peptidnog antigena)-lek konjugatu (korisni teret je ostatak koji odgovara gore pomenutom leku). Kada se jedinjenje (I) koristi kao korisni teret, jedinjenje (I) se može povezati za antitelo (ili sekvencu prepoznavanja peptidnog antigena) putem linkera.
[0244] Primeri gore pomenutog korisnog tereta uključuju
jedinjenje (I) pri čemu je B<2>grupa predstavljena sa
2
[0245] Kada se jedinjenje (I) upotrebljava kao korisni teret, jedinjenje (I) može biti konvertovani antitelo (ili sekvenca prepoznavanja peptidnog antigena)-lek konjugat, kao što sledi.
[0246] B<2>u formuli (I) se konvertuje u grupu predstavljenu sa
pri čemu
R<a>i R<b>su svaki nezavisno
(i) C1-6alkil grupa,
(ii) acil grupa, ili
(iii) grupa predstavljena formulom:
pri čemu
R je linker koji se vezuje za antitelo ili sekvencu prepoznavanja peptidnog antigena (veza je kovalentna veza između linkera i funkcionalne grupe u bočnom lancu antitela ili sekvence prepoznavanja peptidnog antigena), i svaki R' je atom vodonika ili supstituent.
(2) R<1>i R<2>u formuli (I) se svaki nezavisno konvertuju u grupu predstavljenu formulom: -OR<3>pri čemu je R<3>
(i) C1-6alkil grupa,
(ii) acil grupa (poželjno C1-6alkoksi-karbonil grupa),
(iii) grupa predstavljena formulom:
(iv) grupa predstavljena formulom:
(v) grupa predstavljena formulom:
(vi) grupa predstavljena formulom:
4
(vii) grupa predstavljena formulom:
(viii) grupa predstavljena formulom:
ili
(ix) grupa predstavljena formulom:
pri čemu svaki R i svaki R’ u formulama su svaki kao što je definisano iznad.
(3) Q<2>H i Q<4>H u formuli (I) se svaki nezavisno konvertuju u
(i) grupu predstavljenu formulom: -SR<4>pri čemu je R<4>
(a) C1-6alkil grupa,
(b) acil grupa,
(c) grupa predstavljena formulom: -SR, (d) grupa predstavljena formulom:
(e) grupa predstavljena formulom:
(f) grupa predstavljena formulom:
(g) grupa predstavljena formulom:
(h) grupa predstavljena formulom:
ili
(i) grupa predstavljena formulom:
(ii) grupu predstavljenu formulom: -OR<5>pri čemu je R<5>
(a) C1-6alkil grupa,
(b) acil grupa,
(c) grupa predstavljena formulom:
(d) grupa predstavljena formulom:
(e) grupa predstavljena formulom:
ili
(f) grupa predstavljena formulom:
ili
(iii) grupu predstavljenu formulom: -NHR<6>pri čemu je R<6>
(a) C1-6alkil grupa,
(b) acil grupa,
(c) grupa predstavljena formulom:
(d) grupa predstavljena formulom:
ili
(e) grupa predstavljena formulom:
pri čemu svaki R i svaki R’ u formulama su svaki kao što je definisano iznad.
[0247] Pored toga, kada se jedinjenje (I) koristi kao korisni teret, može se upotrebljavati linker opisan u Chem. Rev., 114, 9154-9218 (2014), Pharma. Res. 32, 3526-3540 (2015), Bioconjugate Chem. 21, 5-13 (2010), The AAPS journal, 17, 339-351 (2015), WO 2011/005761 i slično.
[0248] Objava obezbeđuje sledeće posebne primere izvođenja.
Primer izvođenja 1. Jedinjenje koje ima formulu (X):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
R<1>i R<2>su svaki nezavisno hidroksi grupa ili atom halogena;
B<1>je:
R<18>je vodonik ili C1-6alkil; i
R<19>atom halogena
B<2>je:
i
Q<2>i Q<4>su svaki nezavisno atom kiseonika ili atom sumpora.
Primer izvođenja 2. Jedinjenje iz primera izvođenja 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<1>hidroksi grupa.
Primer izvođenja 3. Jedinjenje iz primera izvođenja 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<1>atom fluora.
Primer izvođenja 4. Jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 1-3, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<2>hidroksilna grupa.
Primer izvođenja 5. Jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 1-3, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<2>atom fluora.
Primer izvođenja 6. Jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 1-5, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je Q<4>atom sumpora.
Primer izvođenja 7. Jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 1-6, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je Q<2>atom kiseonika.
Primer izvođenja 8. Jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 1-6, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je Q<2>atom sumpora.
Primer izvođenja 9. Jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 1-8, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje ima formulu (XII):
Primer izvođenja 10. Jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 1-9, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<19>atom fluora.
Primer izvođenja 11. Jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 1-10, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<18>vodonik.
Primer izvođenja 12. Jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 1-10, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<18>metil.
Primer izvođenja 13. Jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 10-12, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je B<1>odabrano iz grupe koja se sastoji od:
Primer izvođenja 14. Jedinjenje iz primera izvođenja 13, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je B<1>odabrano iz grupe koja se sastoji od:
Primer izvođenja 15. Jedinjenje iz primera izvođenja 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, odabrano iz grupe koja se sastoji od:
1
�
Primer izvođenja 16. Jedinjenje iz primera izvođenja 15, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, odabrano iz grupe koja se sastoji od:
4
Primer izvođenja 17. Jedinjenje iz primera izvođenja 15, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, odabrano iz grupe koja se sastoji od:
Primer izvođenja 18. Jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 1-17, pri čemu je farmaceutski prihvatljiva so trietilamin so ili natrijumova so npr., di-trietilamin so ili dinatrijum so.
Primer izvođenja 19. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 1-18, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.
Primer izvođenja 20. Farmaceutska kompozicija iz primera izvođenja 19 za upotrebu u lečenju kancera.
Primer izvođenja 21. Farmaceutska kompozicija iz primera izvođenja 20, pri čemu je kancer bilo koji jedan ili više od kancera iz Tabele 7.
Primer izvođenja 22. Farmaceutska kompozicija iz primera izvođenja 20, pri čemu je kancer odabran iz grupe koja se sastoji od čvrstog tumora i limfoma.
Primer izvođenja 23. Jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 1-18, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera.
Primer izvođenja 24. Jedinjenje iz primera izvođenja 23, pri čemu je kancer bilo koji jedan ili više od kancera iz Tabele 7.
Primer izvođenja 25. Jedinjenje iz primera izvođenja 23, pri čemu je kancer odabran iz grupe koja se sastoji od čvrstog tumora i limfoma.
[0249] Takođe se ovde objavljuju sledeći primeri.
Primer 1. Jedinjenje koje ima Formulu (XIV):
(CD-L)n-A (XIV)
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
CD je grupa predstavljena bilo kojom od Formula (XX) ili (XXIV):
R<1>i R<2>su svaki nezavisno hidroksi grupa, vodonik, amino grupa, ili atom halogena;
B<3>i B<4>su nezavisno opciono supstituisana aromatična heterociklična grupa sa 5 do 14 članova;
X<1>i X<2>su svaki nezavisno atom kiseonika, CH2, ili atom sumpora;
Q<1>, Q<2>, Q<3>i Q<4>su svaki nezavisno atom kiseonika ili atom sumpora;
L je linker;
A je antitelo, fragment antitela, ili antigen-vezujući fragment; i
n je 1-10.
Primer 2. Jedinjenje iz primera 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su R<1>i R<2>svaki nezavisno hidroksi grupa ili atom halogena.
Primer 3. Jedinjenje iz primera 1 ili 2, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su X<1>i X<2>svaki nezavisno atom kiseonika ili atom sumpora.
Primer 4. Jedinjenje iz bilo kog od primera 1-3, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su Q<1>i Q<3>atom kiseonika.
Primer 5. Jedinjenje iz primera 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je CD grupa predstavljena Formulom (XX-A):
Primer 6. Jedinjenje iz primera 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je CD grupa predstavljena Formulom (XXIV-A):
Primer 7. Jedinjenje iz bilo kog od primera 1-6, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
L je -X<3>-T-Z-Q-;
X<3>je -(CH2)o-,
o je 1, 2, ili 3; ili
X<3>je odsutno;
T je peptid, ili je odsutno;
Z je spejser;
Q je heterobifunkcionalna grupa ili heterotrifunkcionalna grupa, ili je odsutno.
Primer 8. Jedinjenje iz primera 7, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje ima formulu (XXX):
Primer 9. Jedinjenje iz primera 7 ili 8, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
X<3>je
T je
R<10a>i R<10b>su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od vodonika i opciono supstituisanog C1-6alkila.
Primer 10. Jedinjenje iz primera 9, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
X<3>je
Primer 11. Jedinjenje iz bilo kog od primera 7-10, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
Z je
ili -(CH2CH2O)s-;
m je 1, 2, 3, 4, 5, ili 6; i
s je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili 10.
Primer 12. Jedinjenje iz primera 7 ili 8, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
X<3>je -CH2-;
Z je
1
p je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili 10.
Primer 13. Jedinjenje iz primera 7 ili 8, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
X<3>je -CH2CH2-;
Z je
q je 1, 2, 3, 4, 5, ili 6; i
r je 1, 2, 3, 4, 5, ili 6.
Primer 14. Jedinjenje iz bilo kog od primera 7-13, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
Q je heterobifunkcionalna grupa odabrana iz grupe koja se sastoji od:
2
R<29>je vodonik ili C1-6alkil;
R<30a>i R<30b>su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od vodonika, C1-6alkila, halo, -C(=O)OR<29>, -NH2, C1-6alkoksi, -CN, -NO2, i -OH;
R<31a>i R<31b>su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od vodonika, C1-6alkila, halo, -C(=O)OR<29>, -NH2, -N(CH3)2, C1-6alkoksi, -CN, -NO2, i -OH; i
* ukazuje na tačku prikačinjanja za bilo koji raspoloživi atom ugljenika, atom azota, atom kiseonika, ili atom sumpora prikačen za antitelo, fragment antitela, ili antigen-vezujući fragment.
Primer 15. Jedinjenje iz primera 11, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje ima formulu (XXXII):
pri čemu:
R<10a>i R<10b>su nezavisno C1-3alkil; i
m je 2, 3, 4, ili 5.
Primer 16. Jedinjenje iz primera 15, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje ima formulu (XXXIII):
pri čemu p je 4, 5, ili 6.
Primer 17. Jedinjenje iz primera 16, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje ima formulu (XXXIV):
pri čemu:
q je 1, 2, ili 3; i
r je 1, 2, ili 3.
Primer 18. Jedinjenje iz primera 1-17, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu B<3>je:
4
R<18>je vodonik ili C1-6alkil; i
R<19>je atom halogena.
Primer 19. Jedinjenje iz primera 18, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<19>atom fluora.
Primer 20. Jedinjenje iz primera 18 ili 19, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<18>vodonik.
Primer 21. Jedinjenje iz primera 18 ili 19, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<18>metil.
Primer 22. Jedinjenje iz bilo kog od primera 18-21, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je B<4>odabrano iz grupe koja se sastoji od:
Primer 23. Jedinjenje iz bilo kog od primera 1-5 ili 7-22, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je Q<2>atom kiseonika.
Primer 24. Jedinjenje iz bilo kog od primera 1-5 ili 7-22, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je Q<2>atom sumpora.
Primer 25. Jedinjenje iz bilo kog od primera 1-4, 6-7, 9-14, ili 18-22, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je Q<4>atom kiseonika.
Primer 26. Jedinjenje iz bilo kog od primera 1-4, 6-7, 9-14, ili 18-22, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je Q<4>atom sumpora.
Primer 27. Jedinjenje iz bilo kog od primera 1-26, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su X<1>i X<2>atom kiseonika i R<1>i R<2>su nezavisno hidroksi grupa, atom fluora, ili atom hlora.
Primer 28. Jedinjenje iz bilo kog od primera 1-27, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je antitelo anti-GCC antitelo. Antitela koja se vezuju za humanu guanilil ciklazu C (GCC) objavljena su, npr., u US 20130315923 i WO 2011050242.
Primer 29. Jedinjenje iz primera 28, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je antitelo anti-GCC antitelo koje sadrži region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1.
Primer 30. Jedinjenje iz primera 28 ili 29, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je antitelo anti-GCC antitelo koje sadrži region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 2.
Primer 31. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje iz bilo kog od primera 1-30, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.
Primer 32. Farmaceutska kompozicija iz primera 31 za upotrebu u lečenju kancera. Primer 33. Farmaceutska kompozicija iz primera 32, pri čemu je kancer bilo koji ili više od kancera iz Tabele 7.
Primer 34. Farmaceutska kompozicija iz primera 32, pri čemu je kancer odabran iz grupe koja se sastoji od čvrstog tumora i limfoma.
Primer 35. Jedinjenje iz bilo kog od primera 1-30, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera.
Primer 36. Jedinjenje iz primera 35, pri čemu je kancer bilo koji ili više od kancera iz Tabele 7.
Primer 37. Jedinjenje iz primera 36, pri čemu je kancer odabran iz grupe koja se sastoji od čvrstog tumora i limfoma.
Primer 38. Komplet koji sadrži jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 1-18 ili primera 1-30, ili farmaceutski prihvatljivu so, i uputstva za primenu jedinjenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu koji ima kancer.
Primer 39. Komplet iz primera 38, pri čemu je kancer bilo koji ili više od kancera iz Tabele 7.
Primer 40. Komplet iz primera 38, pri čemu je kancer odabran iz grupe koja se sastoji od čvrstog tumora i limfoma.
Primer 41. Komplet iz bilo kog od primera 38-40 koji dodatno sadrži jedan ili više dopunskih terapijskih agenasa.
Primer 42. Jedinjenje koje ima Formulu (XL):
CD-L<1>-R<28>(XL)
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
CD je grupa predstavljena bilo kojom od Formula (XX) ili (XXIV):
R<1>i R<2>su svaki nezavisno hidroksi grupa, vodonik, amino grupa, ili atom halogena;
B<3>i B<4>su nezavisno opciono supstituisana aromatična heterociklična grupa sa 5 do 14 članova;
X<1>i X<2>su svaki nezavisno atom kiseonika, CH2, ili atom sumpora;
Q<1>, Q<2>, Q<3>i Q<4>su svaki nezavisno atom kiseonika ili atom sumpora;
L<1>je linker;
R<28>je odabran iz grupe koja se sastoji od -N3, -ONH2, -OH, -CN, -NO2, -CHO, -NR<29>C(=O)CH=CH2, -SH, -S(=O)2(CH=CH2), -NR<29>C(=O)CH2Br, -NR<29>C(=O)CH2I, -C(=O)NHNH2, -CO2H, -NH2, -C=CH,
R<29>je vodonik ili C1-6alkil;
R<30a>i R<30b>su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od vodonika, C1-6alkila, halo, -C(=O)OR<29>, -NH2, C1-6alkoksi, -CN, -NO2, i -OH;
R<31a>i R<31b>su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od vodonika, C1-6alkila, halo, -C(=O)OR<29>, -NH2, -N(CH3)2, C1-6alkoksi, -CN, -NO2, i -OH; i
linker je prikačen za ciklični dinukleotid preko bilo kog raspoloživog atoma ugljenika, azota, kiseonika, ili sumpora.
Primer 43. Jedinjenje iz primera 42, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su R<1>i R<2>svaki nezavisno hidroksi grupa ili atom halogena.
Primer 44. Jedinjenje iz primera 42 ili 43, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su X<1>i X<2>svaki nezavisno atom kiseonika ili atom sumpora.
Primer 45. Jedinjenje iz bilo kog od primera 42-44, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su Q<1>i Q<3>atom kiseonika.
Primer 46. Jedinjenje iz primera 42, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je CD grupa predstavljena Formulom (XX-A):
Primer 47. Jedinjenje iz primera 42, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je CD grupa predstavljena Formulom (XXIV-A):
Primer 48. Jedinjenje iz bilo kog od primera 42-47, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
L<1>je -X<3>-T-Z-;
X<3>je -(CH2)o-,
o je 1, 2, ili 3; ili
X<3>je odsutno;
T je peptid, ili je odsutno; i
Z je spejser.
Primer 49. Jedinjenje iz primera 48, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
X<3>je
T je
R<10a>i R<10b>su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od vodonika i opciono supstituisanog C1-6alkila.
Primer 50. Jedinjenje iz primera 49, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
X<3>je
Primer 51. Jedinjenje iz bilo kog od primera 48-50, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
Z je
ili -(CH2CH2O)s-;
m je 1, 2, 3, 4, 5, ili 6; i
s je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili 10.
Primer 52. Jedinjenje iz primera 48, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
X<3>je -CH2-;
Z je
i
p je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili 10.
Primer 53. Jedinjenje iz primera 48, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
X<3>je -CH2CH2-;
Z je
q je 1, 2, 3, 4, 5, ili 6; i
r je 1, 2, 3, 4, 5, ili 6.
Primer 54. Jedinjenje iz primera 42-53, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je B<3>:
R<18>je vodonik ili C1-6alkil; i
R<19>je atom halogena.
Primer 55. Jedinjenje iz primera 54, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<19>atom fluora.
Primer 56. Jedinjenje iz primera 54 ili 55, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<18>vodonik.
Primer 57. Jedinjenje iz primera 54 ili 55, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<18>metil.
Primer 58. Jedinjenje iz bilo kog od primera izvođenja 54-57, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je B<4>odabrano iz grupe koja se sastoji od:
1
Primer 59. Jedinjenje iz bilo kog od primera 42-46 ili 48-58, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je Q<2>atom kiseonika.
Primer 60. Jedinjenje iz bilo kog od primera 42-46 ili 48-58, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je Q<2>atom sumpora.
Primer 61. Jedinjenje iz bilo kog od primera 42-45 ili 47-58, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je Q<4>atom kiseonika.
Primer 62. Jedinjenje iz bilo kog od primera 42-45 ili 47-58, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je Q<4>atom sumpora.
Primer 63. Jedinjenje iz bilo kog od primera 42-62, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su X<1>i X<2>atom kiseonika i R<1>i R<2>su nezavisno hidroksi grupa ili atom halogena.
Primer 64. Jedinjenje iz bilo kog od primera 42-63, pri čemu je R<28>
Primer 65. Jedinjenje iz primera 64, koje ima formulu:
2
Primer 66. Jedinjenje koje ima Formulu (XLI):
(CD-L<2>)u-DA (XLI)
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
CD je grupa predstavljena bilo kojom od Formula (XX) ili (XXIV):
R<1>i R<2>su svaki nezavisno hidroksi grupa, vodonik, amino grupa, ili atom halogena;
B<3>i B<4>su nezavisno opciono supstituisana aromatična heterociklična grupa sa 5 do 14 članova;
X<1>i X<2>su svaki nezavisno atom kiseonika, CH2, ili atom sumpora;
Q<1>, Q<2>, Q<3>, i Q<4>su svaki nezavisno atom kiseonika ili atom sumpora;
L<2>je linker; ili
L<2>je odsutno;
DA je agens za isporuku leka; i
u je 1-1000.
Primer 67. Jedinjenje iz primera 66, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su R<1>i R<2>svaki nezavisno hidroksi grupa ili atom halogena.
Primer 68. Jedinjenje iz primera 66 ili 67, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su X<1>i X<2>svaki nezavisno atom kiseonika ili atom sumpora.
Primer 69. Jedinjenje iz bilo kog od primera 66-68, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su Q<1>i Q<3>atom kiseonika.
Primer 70. Jedinjenje iz primera 66, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je CD grupa predstavljena Formulom (XX-A):
Primer 71. Jedinjenje iz primera 66, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je CD grupa predstavljena Formulom (XXIV-A):
Primer 72. Jedinjenje iz bilo kog od primera 66-71, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je B<3>:
R<18>je vodonik ili C1-6alkil; i
R<19>je atom halogena.
Primer 73. Jedinjenje iz primera 72, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<19>atom fluora.
Primer 74. Jedinjenje iz primera 72 ili 73, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<18>vodonik.
4
Primer 75. Jedinjenje iz primera 72 ili 73, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<18>metil.
Primer 76. Jedinjenje iz bilo kog od primera 72-75, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je B<4>odabrano iz grupe koja se sastoji od:
Primer 77. Jedinjenje iz bilo kog od primera 66-70 ili 72-76, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je Q<2>atom kiseonika.
Primer 78. Jedinjenje iz bilo kog od primera 66-70 ili 72-76, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je Q<2>atom sumpora.
Primer 79. Jedinjenje iz bilo kog od primera 66-69, ili 71-76, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je Q<4>atom kiseonika.
Primer 80. Jedinjenje iz bilo kog od primera 66-69, ili 71-76, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je Q<4>atom sumpora.
Primer 81. Jedinjenje iz bilo kog od primera 66-80, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su X<1>i X<2>atom kiseonika i R<1>i R<2>su nezavisno hidroksi grupa, atom fluora, ili atom hlora.
Primer 82. Jedinjenje iz bilo kog od primera 66-81, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je u 1-100.
Primer 83. Jedinjenje iz primera 82, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je u 1-10.
Primer 84. Jedinjenje iz primera 83, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je u 1-5.
Primer 85. Jedinjenje iz primera 84, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je u 1.
Primer 86. Jedinjenje iz bilo kog od primera 66-85, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
L<2>je -X<4>-T<1>-Z<1>-Q<A>-;
X<4>je -(CH2)v-,
v je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10; ili
X<4>je odsutno;
T<1>je peptid, ili je odsutno;
Z<1>je spejser;
Q<A>je heterobifunkcionalna grupa ili heterotrifunkcionalna grupa, ili je odsutno.
Primer 87. Jedinjenje iz primera 86, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
X<4>je
T<1>je
i
R<10c>i R<10d>su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od vodonika i opciono supstituisanog C1-6alkila.
Primer 88. Jedinjenje iz primera 87, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
X<4>je
Primer 89. Jedinjenje iz bilo kog od primera 86-88, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
Z<1>je
ili -(CH2CH2O)s1;
m1je 1, 2, 3, 4, 5, ili 6; i
s1je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili 10.
Primer 90. Jedinjenje iz primera 86, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
X<4>je -CH2-;
Z<1>je
i
p1je 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili 10.
Primer 91. Jedinjenje iz primera 86, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:
X<4>je -CH2CH2-;
Z<1>je
q1je 1, 2, 3, 4, 5, ili 6; i
r1je 1, 2, 3, 4, 5, ili 6.
Primer 92. Jedinjenje iz bilo kog od primera 86, 90, ili 91, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je T<1>odsutno.
Primer 93. Jedinjenje iz bilo kog od primera 86-92, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je Q<A>heterobifunkcionalna grupa odabrana iz grupe koja se sastoji od:
R<29>je vodonik ili C1-6alkil;
R<30a>i R<30b>su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od vodonika, C1-6alkila, halo, -C(=O)OR<29>, -NH2, C1-6alkoksi, -CN, -NO2, i -OH;
R<31a>i R<31b>su nezavisno odabrani iz grupe koja se sastoji od vodonika, C1-6alkila, halo, -C(=O)OR<29>, -NH2, -N(CH3)2, C1-6alkoksi, -CN, -NO2, i -OH; i
* ukazuje na tačku prikačinjanja za bilo koji raspoloživi atom ugljenika, atom azota, atom kiseonika, ili atom sumpora prikačen za agens za isporuku leka.
Primer 94. Jedinjenje iz primera 86, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu su X<4>, T<1>, i Q<A>odsutni.
Primer 95. Jedinjenje iz bilo kog od primera 66-94, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu agens za isporuku leka sadrži lipide, steroide, vitamine, ugljene hidrate, proteine, peptide, poliamine, polietilen glikole, ili peptidomimetike, ili bilo koje njihove kombinacije.
Primer 96. Jedinjenje iz primera 95, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu agens za isporuku leka sadrži lipide.
Primer 97. Jedinjenje iz primera 95, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu agens za isporuku leka sadrži steroide.
Primer 98. Jedinjenje iz primera 95, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu agens za isporuku leka sadrži vitamine.
Primer 99. Jedinjenje iz primera 95, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu agens za isporuku leka sadrži ugljene hidrate.
Primer 100. Jedinjenje iz primera 95, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu agens za isporuku leka sadrži proteine.
Primer 101. Jedinjenje iz primera 95, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu agens za isporuku leka sadrži peptide.
Primer 102. Jedinjenje iz primera 95, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu agens za isporuku leka sadrži poliamine.
Primer 103. Jedinjenje iz primera 95, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu agens za isporuku leka sadrži polietilen glikole.
Primer 104. Jedinjenje iz primera 95, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu agens za isporuku leka sadrži peptidomimetike.
[0250] Pošto jedinjenje (I) ili njegov prolek (u predmetnoj specifikaciji, ponekad zajedno skraćeno kao "jedinjenje iz predmetne objave") ima STING agonističku aktivnost, može biti korisno kao agens za profilaksu ili lečenje kancera, inhibitor rasta kancera ili inhibitor metastaza kancera.
[0251] Pošto jedinjenje iz predmetne objave pokazuje STING agonističku aktivnost, i superiorno je u pogledu efikasnosti ekspresije, farmakokinetike (npr., apsorpcija, distribucija, metabolizam, izlučivanje), rastvorljivosti (npr., rastvorljivost u vodi), interakcije sa drugim lekovima (npr., inhibitorno delovanje enzima koji metabolišu lek), bezbednosti (npr., akutna toksičnost, hronična toksičnost, genetička toksičnost, reproduktivna toksičnost, kardiotoksičnost, kancerogenost, centralna toksičnost) i stabilnosti (npr., hemijska stabilnost, stabilnost na enzim), može biti korisno kao medikament.
[0252] Prema tome, jedinjenje iz predmetne objave može se upotrebljavati za pojačanu STING aktivnost kod sisara (npr., miša, pacova, hrčka, zeca, mačke, psa, krave, ovce, majmuna, čoveka).
[0253] Jedinjenje iz predmetne objave može se upotrebljavati kao medikament kao što je agens za profilaksu ili lečenje bolesti koje su moguće pod uticajem STING (u predmetnoj specifikaciji, ponekad skraćeno kao "bolesti povezane sa STING"), na primer, kanceri [npr., kolorektalni kanceri (npr., kolorektalni kancer, rektalni kancer, kancer anusa, porodični kolorektalni kancer, nasledni nepolipozni kolorektalni kancer, gastrointestinalni stromalni tumor), kanceri pluća (npr., nesitnoćelijski kancer pluća, sitnoćelijski kancer pluća, maligni mezoteliom), mezoteliom, kanceri pankreasa (npr., duktalni karcinom pankreasa, endokrini tumor pankreasa), kancer farinksa, kancer larinksa, kancer jednjaka, kancer želuca (npr., papilarni adenokarcinom, mucinozni adenokarcinom, adenoskvamozni karcinom), kancer duodenuma, kancer tankog creva, kanceri dojke (npr., invazivni duktalni karcinom, neinvazivni duktalni karcinom, inflamatorni kancer dojke), kanceri jajnika (npr., kancer epitela jajnika, ekstragonadni tumor germinativnih ćelija, tumor germinativnih ćelija jajnika, tumor jajnika sa niskim malignim potencijalom), tumor testisa, kanceri prostate (npr., kancer prostate zavisan od hormona, kancer prostate nezavisan od hormona, kancer prostate otporan na kastraciju), kanceri jetre (npr., hepatocelularni kancer, primarni kancer jetre, kancer ekstrahepatičnog žučnog kanala), kanceri štitne žlezde (npr., medularni karcinom štitne žlezde), kanceri bubrega (npr., kanceri bubrežnih ćelija (npr., svetloćelijski kancer bubrežnih ćelija), kancer prelaznih ćelija bubrežne karlice i uretera), kanceri materice (npr., kancer grlića materice, kancer tela materice, sarkom materice), gestacijski horiokarcinom, tumori mozga (npr., meduloblastom, gliom, epifizni astrocitni tumori, pilocistični astrocitom, difuzni astrocitom, anaplastični astrocitom, hipofizni adenom), retinoblastom, kanceri kože (npr., bazaliom, maligni melanom), sarkomi (npr., rabdomiosarkom, leiomiosarkom, sarkom mekog tkiva, sarkom vretenastih ćelija), maligni tumor kostiju, kancer bešike, kanceri krvi (npr., multipli mijelom, leukemije (npr., akutna mijelogena leukemija), maligni limfom, Hočkinova bolest, hronična mijeloproliferativna bolest), kancer nepoznatog primarnog], inhibitor rasta kancera, inhibitor metastaza kancera, promotor apoptoze, agens za lečenje prekancerskih lezija (npr., mijelodisplastični sindromi), i slično.
1
[0254] U sledećem primeru izvođenja, kancer je odabran od jednog ili više od kancera iz Tabele 7.
Tabela 7
1 1
12
1
14
[0255] U sledećem primeru izvođenja, kancer je čvrsti tumor ili limfom.
[0256] Posebno, jedinjenje iz predmetne objave može se upotrebljavati kao medikament za kolorektalni kancer, kancer dojke, kancer kože, maligni limfom ili kancer pluća.
[0257] Jedinjenje iz predmetne objave može se primenjivati oralno ili parenteralno kao što je ili u smeši sa farmakološki prihvatljivim nosačem kao medikament, sisarima (poželjno ljudima).
[0258] Medikament koji sadrži jedinjenje iz predmetne objave (u daljem tekstu ponekad skraćeno kao "medikament iz predmetne objave") detaljno je objašnjen ispod. Primeri doznog oblika medikamenta iz predmetne objave uključuju oralne preparate kao što su tablete (npr., tableta obložena šećerom, tableta obložena filmom, sublingvalna tableta, bukalna, oralno dezintegrišuća tableta), pilula, granula, prašak, kapsula (npr., meka kapsula, mikrokapsula), sirup, emulzija, suspenzija, filmovi (npr., oralno dezintegrišući filmovi, oralna mukoza-
1
adhezivni film) i slično. Pored toga, primeri doznog oblika medikamenta iz predmetne objave uključuju parenteralne preparate kao što su injekcije, infuzija kap po kap, preparat tipa transdermalne apsorpcije (npr., preparat tipa transdermalne apsorpcije jontoforezom), supozitorija, mast, nazalni preparat, pulmonarni preparat, kapi za oči i slično. Osim toga, medikament iz predmetne objave može biti preparat sa kontrolisanim oslobađanjem kao što je preparat sa trenutnim oslobađanjem, preparat sa produženim oslobađanjem (npr., mikrokapsula sa produženim oslobađanjem) i slično.
[0259] Kao dozni oblik medikamenta iz predmetne objave, takođe se mogu upotrebljavati preparat od nanočestica i preparat koji upotrebljava membranu poreklom od bakterija.
[0260] Medikament iz predmetne objave može se pripremiti u skladu sa postupkom poznatim per se (npr., postupak opisan u Japanskoj farmakopeji itd.) koji se generalno upotrebljava u oblasti pripreme. Pored toga, medikament iz predmetne objave može sadržati odgovarajuću količinu aditiva kao što su ekscipijent, vezivo, dezintegrant, lubrikant, agens za zaslađivanje, surfaktant, agens za suspenziju, emulgator, boja, konzervans, aroma, korigens, stabilizator, agens za zgušnjavanje i slično, koji se generalno upotrebljavaju u oblasti pripreme po potrebi. Primeri farmakološki prihvatljivog nosača uključuju ove aditive.
[0261] Na primer, tableta se može pripremiti upotrebom ekscipijenta, veziva, dezintegranta, lubrikanta i slično, i pilula ili granula se mogu pripremiti upotrebom ekscipijenta, veziva i dezintegranta. Prašak ili kapsula se mogu pripremiti upotrebom ekscipijenta i slično, sirup se može pripremiti upotrebom agensa za zaslađivanje i slično, i emulzija ili suspenzija se mogu pripremiti upotrebom agensa za suspenziju, surfaktanta, emulgatora i slično.
[0262] Primeri ekscipijenta uključuju laktozu, saharozu, glukozu, skrob, saharozu, kristalnu celulozu, glicirizu u prašku, manitol, natrijum hidrogenkarbonat, kalcijum fosfat i kalcijum sulfat.
[0263] Primeri veziva uključuju 5 do 10 tež. % skrobne tečne paste, 10 do 20 tež. % gumarabika rastvora ili rastvora želatina, 1 do 5 tež. % tragakant rastvora, rastvora karboksimetil celuloze, rastvora natrijum alginata i glicerina.
[0264] Primeri dezintegranta uključuju skrob i kalcijum karbonat.
[0265] Primeri lubrikanta uključuju magnezijum stearat, stearinsku kiselinu, kalcijum stearat i prečišćeni talk.
[0266] Primeri zaslađivača uključuju glukozu, fruktozu, invertni šećer, sorbitol, ksilitol, glicerin i jednostavni sirup.
[0267] Primeri surfaktanta uključuju natrijum lauril sulfat, polisorbat 80, estar sorbitan monomasne kiseline i polioksil 40 stearat.
1
[0268] Primeri agensa za suspenziju uključuju gumarabiku, natrijum alginat, natrijum karboksimetil celulozu, metil celulozu i bentonit.
[0269] Primeri emulgatora uključuju gumarabiku, tragakant, želatin i polisorbat 80.
[0270] Na primer, kada je medikament iz predmetne objave tableta, na primer, ekscipijent (npr., laktoza, saharoza, skrob), dezintegrant (npr., skrob, kalcijum karbonat), vezivo (npr., skrob, gumarabika, karboksimetil celuloza, polivinil pirolidon, hidroksipropil celuloza) ili lubrikant (npr., talk, magnezijum stearat, polietilen glikol 6000) se dodaju jedinjenju iz predmetne objave, i smeša se oblikuje presovanjem, u skladu sa postupkom poznatim per se, i onda se gde je potrebno, oblikovani proizvod oblaže u skladu sa postupkom poznatim per se u svrhu maskiranja ukusa, enteričkih svojstava ili trajnosti, da da tabletu. Kao agens za oblaganje za oblaganje, na primer, može se upotrebljavati hidroksipropilmetil celuloza, etil celuloza, hidroksimetil celuloza, hidroksipropil celuloza, polioksietilen glikol, Tween 80, Pluronic F68, celulozni acetat ftalat, hidroksipropilmetil celuloza ftalat, hidroksimetil celuloza acetat sukcinat, eudragrit (kopolimer metakrilna kiselina-akrilna kiseline, proizvođača Rohm, DE) i pigment (npr., crveni gvožđe oksid, titanijum dioksid).
[0271] Primeri injekcija uključuju intravensku injekciju kao i subkutanu injekciju, intrakutanu injekciju, intramuskularnu injekciju, intraperitonealnu injekciju, injekciju kap po kap i slično.
[0272] Takve injekcije se pripremaju u skladu sa postupkom poznatim per se, ili rastvaranjem, suspendovanjem ili emulgovanjem jedinjenja iz predmetne objave u sterilisanoj vodenoj ili uljastoj tečnosti. Primeri vodene tečnosti uključuju fiziološki rastvor, izotonične rastvore koji sadrže glukozu ili druge pomoćne lekove (npr., D-sorbitol, D-manitol, natrijum hlorid) i slično. Vodena tečnost može da sadrži pogodan agens za solubilizaciju, kao što je alkohol (npr., etanol), polialkohol (npr., propilen glikol, polietilen glikol), nejonski sufaktant (npr., polisorbat 80, HCO-50) i slično. Primeri uljaste tečnosti uključuju susamovo ulje, sojino ulje i slično. Uljasta tečnost može da sadrži agens za solubilizaciju. Primeri agensa za solubilizaciju uključuju benzil benzoat, benzil alkohol i slično. Pored toga, injekcija se može pomešati sa puferom (npr., fosfatni pufer, natrijum acetatni pufer), umirujućim agensom (npr., benzalkonijum hlorid, prokain hidrohlorid), stabilizatorom (npr., humani serumski albumin, polietilen glikol), konzervansom (npr., benzil alkohol, fenol) i slično. Pripremljena injekcija može generalno biti napunjena u ampulu.
[0273] Dok sadržaj jedinjenja iz predmetne objave u medikamentu iz predmetne objave varira u zavisnosti od oblika farmaceutskog preparata, on je generalno oko 0,01 do oko 100
1
tež. %, poželjno oko 2 do oko 85 tež. %, poželjnije oko 5 do oko 70 tež. %, u odnosu na ceo preparat.
[0274] Dok sadržaj aditiva u medikamentu iz predmetne objave varira u zavisnosti od oblika farmaceutskog preparata, on je generalno oko 1 do oko 99,9 tež. %, poželjno oko 10 do oko 90 tež. %, u odnosu na ceo preparat.
[0275] Jedinjenje iz predmetne objave je stabilno i nisko toksično, i može se bezbedno upotrebljavati. Dok dnevna doza jedinjenja iz predmetne objave varira u zavisnosti od stanja i telesne težine pacijenata, vrste jedinjenja, puta primene i slično, u slučaju, na primer, oralne primene pacijentima za lečenje kancera, dnevna doza za odraslu osobu (telesna težina oko 60 kg) je oko 1 do oko 1000 mg, poželjno oko 3 do oko 300 mg, poželjnije oko 10 do oko 200 mg, kao jedinjenje iz predmetne objave, koje se može dati u jednoj primeni ili se primenjuje u 2 ili 3 obroka dnevno.
[0276] Kada se jedinjenje iz predmetne objave primenjuje parenteralno, ono se generalno primenjuje u obliku tečnosti (npr., injekcija). Dok doza jedinjenja iz predmetne objave varira u zavisnosti od subjekta primene, ciljnog organa, simptoma, postupka primene i slično, ona je, na primer, oko 0,01 mg do oko 100 mg, poželjno oko 0,01 do oko 50 mg, poželjnije oko 0,01 do oko 20 mg, u odnosu na 1 kg telesne težine, koja se poželjno daje intravenskom injekcijom.
[0277] Jedinjenje iz predmetne objave može se upotrebljavati istovremeno sa drugim lekovima. Da budemo specifični, jedinjenje iz predmetne objave se može upotrebljavati zajedno sa medikamentima kao što su hormonski terapijski agensi, hemioterapijski agensi, imunoterapijski agensi, medikamenti koji inhibiraju delovanje faktora rasta ćelije ili receptora faktora rasta ćelije i slično. U daljem tekstu, lekovi koji se mogu upotrebljavati u kombinaciji sa jedinjenjem iz predmetne objave su skraćeni kao prateći lekovi.
[0278] Primeri "hormonskih terapijskih agenasa" uključuju fosfestrol, dietilstilbestrol, hlorotrijanizen, medroksiprogesteron acetat, megestrol acetat, hlormadinon acetat, ciproteron acetat, danazol, alilestrenol, gestrinon, mepartricin, raloksifen, ormeloksifesen, levormeloksifen, anti-estrogene (npr., tamoksifen citrat, toremifen citrat), preparate pilula, mepitiostan, testrolakton, aminoglutetimid, LH-RH agoniste (npr., goserelin acetat, buserelin, leuprorelin, leuprorelin acetat), droloksifen, epitiostanol, etinilestradiol sulfonat, inhibitore aromataze (npr., fadrozol hidrohlorid, anastrozol, retrozol, eksemestan, vorozol, formestan), anti-androgene (npr., flutamid, bikartamid, nilutamid, enzalutamid), inhibitore 5α-reduktaze (npr., finasterid, epristerid, dutasterid), hormonske lekove korteksa nadbubrežne žlezde (npr., deksametazon, prednizolon, betametazon, triamcinolon), inhibitore sinteze androgena (npr.,
1
abirateron), retinoid i lekove koji usporavaju metabolizam retinoida (npr., liarozol), tiroidni hormon, i njihove DDS (Sistem za isporuku leka) preparate.
[0279] Primeri "hemioterapijskih agenasa" uključuju alkilirajuće agense, antimetabolite, antikancerske antibiotike i antikancerske agense biljnog porekla.
[0280] Primeri "alkilujućih agenasa" uključuju azot slačicu, azot slačica-N-oksid hidrohlorid, hlorambutil, ciklofosfamid, ifosfamid, tiotepu, karbokuon, improsulfan tozilat, busulfan, nimustin hidrohlorid, mitobronitol, melfalan, dakarbazin, ranimustin, natrijum estramustin fosfat, trietilenmelamin, karmustin, lomustin, streptozocin, pipobroman, etoglucid, karboplatin, cisplatin, miboplatin, nedaplatin, oksaliplatin, altretamin, ambamustin, dibrospidijum hidrohlorid, fotemustin, prednimustin, pumitepu, ribomustin, temozolomid, treosulfan, trofosfamid, zinostatin stimalamer, adozelesin, cistemustin, bizelesin, i njihove DDS preparate.
[0281] Primeri "antimetabolita" uključuju merkaptopurin, 6-merkaptopurin ribozid, tioinozin, metotreksat, pemetreksed, enocitabin, citarabin, citarabin okfosfat, ancitabin hidrohlorid, 5-FU lekove (npr., fluorouracil, tegafur, UFT, doksifluridin, karmofur, galocitabin, emitefur, kapecitabin), aminopterin, nelzarabin, leukovorin kalcijum, tabloid, butocin, kalcijum folinat, levofolinat kalcijum, kladribin, emitefur, fludarabin, gemcitabin, hidroksikarbamid pentostatin, piritrekim, idoksuridin, mitoguazon, tiazofrin, ambamustin, bendamustin, i njihove DDS preparate.
[0282] Primeri "antikancerskih antibiotika" uključuju aktinomicin-D, aktinomicin-C, mitomicin-C, hromomicin-A3, bleomicin hidrohlorid, bleomicin sulfat, peplomicin sulfat, daunorubicin hidrohlorid, doksorubicin hidrohlorid, aklarubicin hidrohlorid, pirarubicin hidrohlorid, epirubicin hidrohlorid, neokarzinostatin, mitramicin, sarkomicin, karzinofilin, mitotan, zorubicin hidrohlorid, mitoksantron hidrohlorid, idarubicin hidrohlorid, i njihove DDS preparate (npr., PEG lipozom koji uključuje doksorubicin).
[0283] Primeri "antikancerskih agenasa biljnog porekla" uključuju etopozid, etopozid fosfat, vinblastin sulfat, vinkristin sulfat, vindesin sulfat, tenipozid, paklitaksel, docetaksel, kabazitaksel, vinorelbin, i njihove DDS preparate.
[0284] Primeri "imunoterapijskih agenasa (BRM)" uključuju picibanil, krestin, sizofiran, lentinan, ubenimeks, interferone, interleukine, faktor stimulacije kolonije makrofaga, faktor stimulacije kolonije granulocita, eritropoetin, limfotoksin, BCG vakcinu, Corynebacterium parvum, levamisol, polisaharid K, prokodazol, anti-CTLA4 antitela (npr., ipilimumab, tremelimumab), anti-PD-1 antitela (npr., nivolumab, pembrolizumab), i anti-PD-LI antitela.
1
[0285] Primer "faktora rasta ćelija" u "medikamentima koji inhibiraju dejstvo faktora rasta ćelija ili receptora faktora rasta ćelija" uključuju bilo koje supstance koje promovišu ćelijsku proliferaciju, koje su normalno peptidi koji imaju ne više od 20000 molekulsku težinu i koji su sposobni da izlože svoju aktivnost u niskim koncentracijama vezivanjem za receptor, uključujući (1) EGF (epidermalni faktor rasta) ili supstance koje poseduju suštinski istu aktivnost kao EGF [npr., TGFα], (2) insulin ili supstance koje poseduju suštinski istu aktivnost kao insulin [npr., insulin, IGF (insulinu-sličan faktor rasta)-1, IGF-2], (3) FGF (faktor rasta fibroblasta) ili supstance koje poseduju suštinski istu aktivnost kao FGF [npr., kiseli FGF, bazni FGF, KGF (faktor rasta keratinocita), FGF-10], i (4) drugi faktori rasta ćelija [npr., CSF (faktor stimulacije kolonija), EPO (eritropoetin), IL-2 (interleukin-2), NGF (faktor rasta nerva), PDGF (faktor rasta poreklom od krvnih pločica), TGFβ (transformišući faktor rasta β), HGF (faktor rasta hepatocita), VEGF (faktor rasta vaskularnog endotela), heregulin, angiopoietin].
[0286] Primeri "receptora faktora rasta ćelija" uključuju bilo koje receptore koji su sposobni da se vezuju za prethodno pomenute faktore rasta ćelija, uključujući EGF receptor, heregulin receptor (npr., HER3), insulin receptor, IGF receptor-1, IGF receptor-2, FGF receptor-1 ili FGF receptor-2, VEGF receptor, angiopoietin receptor (npr., Tie2), PDGF receptor i slično.
[0287] Primeri "medikamenata koji inhibiraju dejstvo faktora rasta ćelija ili receptora faktora rasta ćelija" uključuju EGF inhibitor, TGFα inhibitor, heregulin inhibitor, insulin inhibitor, IGF inhibitor, FGF inhibitor, KGF inhibitor, CSF inhibitor, EPO inhibitor, IL-2 inhibitor, NGF inhibitor, PDGF inhibitor, TGFβ inhibitor, HGF inhibitor, VEGF inhibitor, angiopoietin inhibitor, inhibitor EGF receptora, HER2 inhibitor, HER4 inhibitor, insulin receptor, inhibitor IGF-1 receptora, inhibitor IGF-2 receptora, inhibitor FGF receptora-1, inhibitor FGF receptora-2, inhibitor FGF receptora-3, inhibitor FGF receptora-4, inhibitor VEGF receptora, Tie-2 inhibitor, inhibitor PDGF receptora, Abl inhibitor, Raf inhibitor, FLT3 inhibitor, c-Kit inhibitor, Src inhibitor, PKC inhibitor, Smo inhibitor, ALK inhibitor, ROR1 inhibitor, Trk inhibitor, Ret inhibitor, mTOR inhibitor, Aurora inhibitor, PLK inhibitor, MEK (MEK1/2) inhibitor, MET inhibitor, CDK inhibitor, Akt inhibitor, ERK inhibitor, PI3K inhibitor i slično. Specifičnije, anti-VEGF antitelo (npr., bevacizumab, ramucurumab), anti-HER2 antitelo (npr., trastuzumab, pertuzumab), anti-EGFR antitelo (npr., cetuksimab, panitumumab, matuzumab, nimotuzumab), anti-HGF antitelo, imatinib, erlotinib, gefitinib, sorafenib, sunitinib, dasatinib, lapatinib, vatalanib, ibrutinib, bosutinib, kabozantinib, krizotinib, alektinib, vismodegib, aksitinib, motesanib, nilotinib, 6-[4-(4-etilpiperazin-1-ilmetil)fenil]-N-[1(R)-feniletil]-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-amin (AEE-788), vandetanib,
11
temsirolimus, everolimus, enzastaurin, tozasertib, 2-[N-[3-[4-[5-[N-(3-fluorofenil)karbamoilmetil]-1H-pirazol-3-ilamino]kvinazolin-7-iloksi]propil]-N-etilamino]etil fosfat (AZD-1152), 4-[9-hloro-7-(2,6-difluorofenil)-5H-pirimido[5,4-d][2]benzazepin-2-ilamino]benzoeva kiselina, N-[2-metoksi-5-[(E)-2-(2,4,6-trimetoksifenil)vinilsulfonilmetil]fenil]glicin natrijumova so (ON-1910Na), volasertib, selumetinib, trametinib, N-[2(R),3-dihidroksipropoksi]-3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-jodofenilamino)benzamid (PD-0325901), bosutinib, regorafenib, afatinib, idelalisib, ceritinib, dabrafenib i slično mogu se upotrebljavati.
[0288] Pored prethodno pomenutih lekova, L-asparaginaza, L-arginaza, arginin deiminaza, aceglaton, prokarbazin hidrohlorid, so protoporfirin-kobalt kompleksa, živa hematoporfirinnatrijum, inhibitori topoizomeraze I (npr., irinotekan, topotekan, indotekan, indimitekan), inhibitori topoizomeraze II (npr., sobuzoksan), induceri diferencijacije (npr., retinoid, vitamin D), drugi inhibitori angiogeneze (npr., humagilin, ekstrakt ajkule, COX-2 inhibitor), αblokatori (npr., tamsulozin hidrohlorid), bisfosfonske kiseline (npr., pamidronat, zoledronat), talidomid, lenalidomid, pomalidomid, azacitidin, decitabin, inhibitori proteazoma (npr., bortezomib, karfilzomib, iksazomib), NEDD8 inhibitori (npr., pevonedistat), UAE inhibitori, PARP inhibitori, (npr., olaparib, niraparib, veliparib), antitumorska antitela kao što su anti-CD20 antitela (npr., rituksimab, obinutuzumab), anti-CCR4 antitela (npr., mogamulizumab) i slično, antitelo-lek konjugati (npr., trastuzumab emtanzin, brentuksimab vedotin) i slično mogu se takođe upotrebljavati kao prateći lek.
[0289] Kombinovanjem jedinjenja iz predmetne objave i pratećeg leka, mogu se postići superiorni efekti kao što su (1) doza se može smanjiti u poređenju sa pojedinačnom primenom jedinjenja iz predmetne objave ili pratećeg leka, (2) lek koji se kombinuje sa jedinjenjem iz predmetne objave može se odabrati u skladu sa stanjem pacijenta (blagi slučaj, ozbiljan slučaj i slično), (3) period lečenja se može postaviti da bude duži, (4) može se dizajnirati produženi efekat lečenja, (5) sinergistički efekat može se pružiti kombinovanom upotrebom jedinjenja iz predmetne objave i pratećeg leka, i slično.
[0290] U predmetnoj specifikaciji, jedinjenje iz predmetne objave i prateći lek koji se upotrebljavaju u kombinaciji označavaju se kao "kombinovani agens iz predmetne objave".
[0291] Za upotrebu kombinovanog agensa iz predmetne objave, vreme primene jedinjenja iz predmetne objave i pratećeg leka nije ograničeno, i jedinjenje iz predmetne objave i prateći lek mogu se primeniti subjektu primene istovremeno, ili se mogu primenjivati u različito vreme. Kada se primenjuju u vremenskom intervalu, interval se razlikuje u zavisnosti od efikasnog sastojka koji se primenjuje, oblika doziranja i postupka primene, i na primer, kada se prvo primenjuje prateći lek, jedinjenje iz predmetne objave može se primenjivati u vremenskom rasponu od 1 min do 3 dana, poželjno od 10 min do 1 dana, poželjnije od 15 min do 1 h posle primene pratećeg leka. Kada se prvo primenjuje jedinjenje iz predmetne objave, prateći lek se primenjuje u vremenskom rasponu od 1 min do 1 dana, poželjno od 10 min do 6 h, poželjnije od 15 min do 1 h posle primene jedinjenja iz predmetne objave. Doziranje pratećeg leka može se odrediti u skladu sa klinički podešenom dozom, i može se na odgovarajući način odabrati u zavisnosti od subjekta primene, puta primene, bolesti, kombinacije i slično.
[0292] Primeri načina primene kombinovane upotrebe jedinjenja iz predmetne objave i pratećeg leka uključuju sledeće postupke: (1) Jedinjenje iz predmetne objave i prateći lek proizvode se istovremeno da daju jedan preparat, koji se zatim primenjuje. (2) Jedinjenje iz predmetne objave i prateći lek proizvode se odvojeno da daju dve vrste preparata koji se istovremeno primenjuju istim putem primene. (3) Jedinjenje iz predmetne objave i prateći lek proizvode se odvojeno da daju dve vrste preparata koji se primenjuju istim putem primene u različito vreme. (4) Jedinjenje iz predmetne objave i prateći lek proizvode se odvojeno da daju dve vrste preparata koji se istovremeno primenjuju različitim putevima primene. (5) Jedinjenje iz predmetne objave i prateći lek proizvode se odvojeno da daju dve vrste preparata koji se primenjuju različitim putevima primene u različito vreme (npr., jedinjenje iz predmetne objave i prateći lek primenjuju se ovim redosledom, ili obrnutim redosledom).
[0293] Doza pratećeg leka može se na odgovarajući način odrediti u skladu sa njegovom kliničkom dozom, i odnos jedinjenja iz predmetne objave i pratećeg leka može se na odgovarajući način odrediti u zavisnosti od subjekta primene, puta primene, ciljne bolesti, simptoma, kombinacije, i slično. Na primer, kada je subjekt primene čovek, prateći lek se upotrebljava u 0,01 do 100 (delova po težini), u odnosu na 1 deo po težini jedinjenja iz predmetne objave.
[0294] Osim toga, jedinjenje iz predmetne objave ili kombinovani agens iz predmetne objave mogu se upotrebljavati istovremeno sa terapijom koja nije lek. Preciznije, jedinjenje iz predmetne objave ili kombinovani agens iz predmetne objave mogu se kombinovati sa terapijom koja nije lek, kao što je (1) operacija, (2) hipertenzivna hemioterapija koja upotrebljava angiotenzin II itd., (3) genska terapija, (4) termoterapija, (5) krioterapija, (6) laserska kauterizacija i (7) radioterapija.
[0295] Na primer, upotrebom jedinjenja iz predmetne objave ili kombinovanog agensa iz predmetne objave pre ili posle prethodno pomenute operacije i slično, ili pre ili posle njihovog kombinovanog tretmana od dve ili tri vrste, mogu se pružiti efekti kao što su prevencija pojave rezistencije, produžavanje preživljavanja bez bolesti, supresija metastaza ili recidiva kancera, produžavanje života i slično.
[0296] Pored toga, moguće je kombinovati lečenje sa jedinjenjem iz predmetne objave ili kombinovanim agensom iz predmetne objave sa podržavajućom terapijom [(i) primena antibiotika (npr., β-laktam tipa kao što je pansporin i slično, makrolid tipa kao što je klaritromicin i slično) za komplikaciju sa različitim infektivnim bolestima, (ii) primena visokokalorične transfuzije, preparata amino-kiselina ili opšteg vitaminskog preparata za poboljšanje neuhranjenosti, (iii) primena morfijuma za ublažavanje bola, (iv) primena farmaceutskog agensa za ublažavanje sporednih efekata kao što su mučnina, povraćanje, anoreksija, dijareja, leukopenija, trombocitopenija, smanjena koncentracija hemoglobina, gubitak kose, hepatopatija, renopatija, DIC, groznica i slično i (v) primena farmaceutskog agensa za supresiju multiple rezistencije kancera na lekove i slično].
PRIMERI
[0297] Predmetna objava je detaljno objašnjena pozivanjem na sledeće primere, eksperimentalne primere i primere formulacija, koji ne treba smatrati ograničavajućim, i objava se može promeniti unutar obima predmetne objave.
[0298] U sledećim primerima, "sobna temperatura" generalno znači oko 10 °C do oko 35 °C. Odnosi naznačeni za mešane rastvarače su zapreminski odnosi mešanja, ukoliko nije drugačije specificirano. % znači tež. %, ukoliko nije drugačije specificirano.
[0299] U hromatografiji na silika gel koloni, "Diol" znači upotrebu silika gela vezanog za 3-(2,3-dihidroksipropoksi)propilsilan. U hromatografiji na silika gel koloni i HPLC (tečna hromatografija visokih performansi), "C18" znači upotrebu silika gela vezanog za oktadecil. Odnosi rastvarača za eluiranje su zapreminski odnosi mešanja, ukoliko nije drugačije specificirano.
[0300] Merenje pomoću LC/MS je izvedeno pod sledećim uslovima [kolona: L-kolona2 ODS, 3,0 mml.D.x50 mm, mobilna faza: acetonitril/5 mM puferisani rastvor amonijum acetata = 900/100)].
[0301] U primerima se upotrebljavaju sledeće skraćenice.
mp: tačka topljenja
MS: maseni spektar
[M+H]<+>, [M-H]-: molekulski jonski pik
11
M: molska koncentracija
N: normalno
CDCl3: deuterisani hloroform
DMSO-d6: deuterisani dimetil sulfoksid
D2O: deuterisana voda
<1>H NMR: proton nuklearna magnetna rezonanca
<31>P NMR: fosfor nuklearna magnetna rezonanca
LC/MS: tečna hromatografija/masena spektrometrija
ESI: elektrosprej jonizacija
APCI: hemijska jonizacija pod atmosferskim pritiskom
THF: tetrahidrofuran
DMF: N,N-dimetilformamid
DCM: dihlorometan
[0302]<1>H NMR i<31>P NMR su izmereni pomoću NMR tipa sa Furijeovom (Fourier) transformacijom. Za analizu su upotrebljeni ACD/SpecManager (trgovačko ime) i slično. Pikovi sa vrlo blagim protonima kao što su hidroksi grupa, amino grupa i slično nisu opisani.
[0303] MS je izmeren pomoću LC/MS. Kao postupak jonizacije upotrebljen je ESI postupak ili APCI postupak. Podaci ukazuju na stvarnu izmerenu vrednost (pronađeno). Generalno se uočava molekulski jonski pik. U slučaju jedinjenja koje ima terc-butoksikarbonil grupu, pik posle eliminacije terc-butoksikarbonil grupe ili terc-butil grupe može se uočiti kao fragmentni jon. U slučaju jedinjenja koje ima hidroksi grupu, pik posle eliminacije H2O može se uočiti kao fragmentni jon. U slučaju soli, generalno se uočava molekulski jonski pik ili pik fragmentnog jona slobodnog oblika.
PRIMER 1
Sinteza 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10,16-trihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d] pirimidin-4-on di-trietilamin soli
[0304]
A) 7-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3,4-dihidroksitetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4(7H)-on
[0305] Rastvoru 7-((2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4(7H)-ona (6,26 g) u piridinu (100 ml) dodat je 4,4’-dimetoksitritil hlorid (8,92 g) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana preko noći pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi. Reakcionoj smeši je dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum hidrogenkarbonata, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je ispran uzastopno zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogenkarbonata i zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (8,65 g). MS: [M-H]<->586,0.
B) 7-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on
[0306] Rastvoru 7-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)fenil)metoksi)metil)-3,4-dihidroksitetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4(7H)-ona (2,65 g) u DMF (20 ml) dodati su imidazol (0,614 g) i terc-butildimetilhlorosilan (0,816 g), i smeša je mešana
11
preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je razblažena vodom, i ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran zasićenim slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan) da da naslovno jedinjenje (1,1 g). MS: [M-H]-700,2.
C) 7-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2-O-((2-cijanoetoksi)diizopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo [2,3-d]pirimidin-4-on
[0307] 7-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (5,43 g) je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji tri puta sa anhidrovanim toluenom, i rastvoren u anhidrovanom DMF (15 ml). U rastvor su dodati 3-((bis (diizopropilamino)fosfino)oksi)propannitril (3,19 ml), 1H-tetrazol (0,542 g) i 1-metil-1H-imidazol (0,306 ml), i smeša je mešana preko noći pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi, sipana u zasićeni vodeni rastvor natrijum hidrogenkarbonata, i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je ispran uzastopno zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogenkarbonata i zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (DIOL, etil acetat/heksan). Dobijeni sirovi proizvod je ponovo prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan, koji sadrži 0,5% trietilamina) da da naslovno jedinjenje (4,22 g) kao smešu dva dijastereomera. MS: [M-H]<->901,2.
D) (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforil)oksi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0308] N-benzoil-2'-dezoksi-2'-fluoro-3'-O-(hidroksi(oksido)fosforanil)adenozin (1,2 g) i 7-(5-O-([bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)]-3-O-([terc-butil(dimetil)silil)]-2-O-({(2-cijanoetoksi)([diizopropilamino)]fosfino)}-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (3,4 g) su podvrgnuti azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom, i u to su dodati anhidrovani acetonitril (15 ml) i anhidrovani THF (5 ml).
11
Smeši je dodata smeša 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazola (1,07 g) (koja je podvrgnuta azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom) i anhidrovanog acetonitrila (10 ml), i smeša je mešana pod atmosferom argona na 55 °C tokom 2 h. Tome je dodat 70% vodeni rastvor tercbutil hidroperoksida (1,12 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Reakcionoj smeši je dodata smeša natrijum tiosulfata (5920 mg) i vode (3 ml), i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodata 80% sirćetna kiselina (30 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (1,1 g). MS: [M+H]<+>952,2
E) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,10-dihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamid
[0309] (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforil)oksi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (350 mg) je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom i anhidrovanim piridinom, i tome je dodat anhidrovani piridin (15 ml). Smeši je dodat 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid (238 mg), i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Tome su dodati voda (232 μl) i jod (121 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 20 min. Reakcionoj smeši je dodata smeša natrijum tiosulfat pentahidrata (91 mg) i vode (1 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 min. U to je dodat toluen, i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku su dodati anhidrovani acetonitril (15 ml) i 2-metilpropan-2-amin (5,26 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (332 mg). MS: [M+H]<+>897,1
F) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-16-((tercbutil(dimetil)silil))oksi)-15-fluoro-2,10-dihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on
11
[0310] U N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,10-dihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamid (332 mg) je dodat 40% rastvor metilamin etanola (7,6 ml), i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat), i dobijeni ostatak je prečišćen pomoću HPLC (L-kolona2 ODS, 50x150 mm, mobilna faza: 5 mM vodeni rastvor amonijum acetata/acetonitril) da da naslovno jedinjenje (106,4 mg). MS: [M+H]<+>793,1
G) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10,16-trihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so
[0311] U 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-16-((tercbutil(dimetil)silil))oksi)-15-fluoro-2,10-dihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (106,4 mg) je dodat trietilamin trihidrofluorid (1094 μl). Reakciona smeša je mešana na 50 °C tokom 1 h, i ohlađena na sobnu temperaturu, u nju je dodat etoksi(trimetil)silan (6266 μl), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatku su dodati etoksi(trimetil)silan (6266 μl) i metanol (1 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 koloni (acetonitril/10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata) da da naslovno jedinjenje (82 mg).<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1,18 (18H, t, J = 7,3 Hz), 3,11 (12H, q, J = 7,4 Hz), 4,01-4,14 (2H, m), 4,17-4,26 (1H, m), 4,34 (2H, d, J = 3,4 Hz), 4,42-4,50 (1H, m), 4,54 (1H, d, J = 4,2 Hz), 4,86-4,99 (2H, m), 5,38-5,60 (1H, m), 6,30-6,45 (2H, m), 7,24 (1H, d, J = 2,0 Hz), 7,91 (1H, s), 8,05 (1H, s), 8,17 (1H, s).<31>P NMR (162 MHz, D2O) δ-2,16, -1,66.
PRIMER 1a
11
Sinteza 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10,16-trihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on dinatrijum soli
[0312]
[0313] Dejonizovana voda (480 mL) je propuštena kroz kolonu pripremljenu pakovanjem AG (trgovačko ime) 50W-X8 katjonske izmenjivačke smole (100-200 otvori, 30 g) u praznu kolonu. Potom, kroz smolu je propušten 1 M vodeni rastvor natrijum hidroksida (288 ml) i dejonizovana voda (540 ml). Dejonizovana voda (54 ml) koja sadrži 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10,16-trihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (1,53 g) je propuštena kroz smolu posle prethodno pomenutog predtretmana, i dejonizovana voda (72 ml) je propuštena kroz smolu, i dobijeni vodeni rastvor je osušen zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (1,28 g).<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ 4,05-4,17 (2H, m), 4,20-4,28 (1H, m), 4,33-4,40 (2H, m), 4,44-4,51 (1H, m), 4,55 (1H, d, J = 4,2 Hz), 4,84-5,01 (2H, m), 5,39-5,61 (1H, m), 6,31-6,40 (2H, m), 7,25 (1H, d, J = 2,0 Hz), 7,91 (1H, s), 8,07 (1H, s), 8,18 (1H, s).<31>P NMR (121 MHz, D2O) δ -2,2, -1,6.
PRIMER 2
Sinteza 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin soli (optički izomer)
11
A) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-16-((tercbutil(dimetil)silil))oksi)-15-fluoro-10-hidroksi-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer)
[0315] (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforil)oksi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (700 mg) je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom i anhidrovanim piridinom, i tome je dodat anhidrovani piridin (50 ml). Smeši je dodat 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid (475 mg) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Tome su dodati voda (464 μl) i 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-on (186 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 30 min. Reakcionoj smeši je dodata smeša natrijum tiosulfata (913 mg) i vode (3 ml), i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku su dodati anhidrivani acetonitril (30 ml) i 2-metilpropan-2-amin (10 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat), i dobijenom ostatku je dodat 40% rastvor metilamin etanola (7,3 ml). Smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 30 min, i reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat). Dobijeni ostatak je rastavljen u dva dijastereomera (tR1 i tR2, čija su vremena zadržavanja pomoću LC/MS od kraćih do dužih u ovom redosledu) pomoću HPLC (L-kolona2 ODS, 50x150 mm, mobilna faza: 5 mM vodeni rastvor amonijum acetata/acetonitril) da da naslovno jedinjenje (70 mg, tR1) i naslovno jedinjenje (150 mg, tR2). MS (tR1): [M+H]<+>809,1. MS (tR2): [M+H]<+>809,1
12
B) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (optički izomer)
[0316] U 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-16-((tercbutil(dimetil)silil))oksi)-15-fluoro-10-hidroksi-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer) (70 mg, poreklom od tR1) su dodati metanol (3,0 ml) i trietilamin trihidrofluorid (1,41 ml). Reakciona smeša je koncentrovana da se ukloni metanol, i ostatak je mešan na 55 °C tokom 1 h. Ostatak je ohlađen na sobnu temperaturu, tome je dodat etoksi(trimetil)silan (7,8 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 koloni (acetonitril/10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata) da da naslovno jedinjenje (56 mg).<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1,23 (18H, t, J = 7,3 Hz), 3,15 (12H, q, J = 7,3 Hz), 4,15-4,23 (3H, m), 4,37-4,50 (2H, m), 4,54 (1H, d, J = 10,3 Hz), 4,61 (1H, d, J = 3,9 Hz), 4,96 (2H, dt, J = 7,9, 3,9 Hz), 5,77-5,95 (1H, m), 6,36 (1H, d, J = 8,1 Hz), 6,40 (1H, d, J = 15,4 Hz), 7,51 (1H, d, J = 1,7 Hz), 7,99 (2H, d, J = 13,7 Hz), 8,23 (1H, s).<31>P NMR (162 MHz, D2O) δ-2,43, 54,03.
PRIMER 3
Sinteza 7-((2R,5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on 1,7 trietilamin soli
[0317]
[0318] U 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-16-((tercbutil(dimetil)silil))oksi)-15-fluoro-10-hidroksi-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer) (150 mg, poreklom od tR2) su dodati metanol (3,0 ml) i trietilamin trihidrofluorid (3,02 ml). Reakciona smeša je koncentrovana da se ukloni metanol, i ostatak je mešan na 55 °C tokom 1 h. Ostatak je ohlađen na sobnu temperaturu, tome je dodat etoksi(trimetil)silan (16,4 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 koloni (acetonitril/10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata) da da naslovno jedinjenje (155 mg).<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1,23 (15H, t, J = 7,3 Hz), 3,15 (10H, q, J = 7,3 Hz), 4,06 (1H, dd, J = 11,7, 4,9 Hz), 4,18 (1H, dd, J = 11,6, 2,8 Hz), 4,29-4,47 (3H, m), 4,51 (1H, d, J = 8,8 Hz), 4,58 (1H, d, J = 3,9 Hz), 4,93-5,14 (2H, m), 5,44-5,64 (1H, m), 6,33-6,45 (2H, m), 7,32 (1H, d, J = 1,5 Hz), 7,95 (1H, s), 8,06 (1H, s), 8,24 (1H, s).<31>P NMR (162 MHz, D2O) δ-2,41, 55,33.
PRIMER 3a
Sinteza 7-((2R,5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on dinatrijum soli
[0319]
[0320] Dejonizovana voda (400 ml) je propuštena kroz kolonu pripremljenu pakovanjem AG (trgovačko ime) 50W-X8 katjonske izmenjivačke smole (100-200 otvori, 25,3 g) u praznu kolonu. Potom, kroz smolu su propušteni 1 M vodeni rastvor natrijum hidroksida (240 ml) i dejonizovana voda (450 ml). Dejonizovana voda (45 ml) koja sadrži 7-((2R,5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (1,30 g) je propuštena kroz smolu posle prethodno pomenutog predtretmana, i dejonizovana voda (60 ml) je propuštena kroz smolu da da vodeni rastvor koji sadrži naslovno jedinjenje.
[0321] Dejonizovana voda (400 ml) je propuštena kroz kolonu pripremljenu pakovanjem AG (trgovačko ime) 50W-X8 katjonske izmenjivačke smole (100-200 otvori, 26,3 g) u praznu kolonu. Potom, kroz smolu su propušteni 1 M vodeni rastvor natrijum hidroksida (270 ml) i dejonizovana voda (540 ml). Dejonizovana voda (54 ml) koja sadrži 7-((2R,5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (1,18 g) je propuštena kroz smolu posle prethodno pomenutog predtretmana, i dejonizovana voda (63 ml) je propuštena kroz smolu da da vodeni rastvor koji sadrži naslovno jedinjenje. Dva vodena rastvora koja sadrže naslovno jedinjenje su kombinovana, i osušena zamrzavanjem da daju naslovno jedinjenje (2,0 g).<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ 3,97-4,07 (1H, m), 4,11-4,20 (1H, m), 4,27-4,42 (3H, m), 4,43-4,51 (1H, m), 4,55 (1H, d, J = 3,8 Hz), 4,88-5,12 (2H, m), 5,34-5,59 (1H, m), 6,30-6,40 (2H, m), 7,28 (1H, d, J = 1,9 Hz), 7,91 (1H, s), 8,01 (1H, s), 8,18 (1H, s).<31>P NMR (121 MHz, D2O) δ -2,38, 55,3.
PRIMER 4
Sinteza 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,15,16-tetrahidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin soli
[0322]
12
A) (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforil)oksi)metil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0323] N-benzoil-2’-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3’-O-(hidroksi(oksido)fosforanil)adenozin (369mg) i 7-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2-O-((2-cijanoetoksi)(diizopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (817 mg) su podvrgnuti azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom (tri puta), i suspendovani u anhidrovanom acetonitrilu (3,6 ml) i anhidrovanom THF (1,2 ml). U suspenziju je dodata smeša 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazola (262 mg) (koja je podvrgnuta azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom) i anhidrovanog acetonitrila (2,4 ml), i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1,5 h. Reakcionom rastvoru je dodat 70% vodeni rastvor terc-butil hidroperoksida (0,276 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 40 min. Reakciona smeša je ugašena natrijum tiosulfatom (636 mg) i vodom (2 ml), i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u 80% sirćetnoj kiselini (5 ml), i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2,5 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom i toluenom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (538 mg). MS: [M+H]<+>1064,3.
B) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-10-(2-cijanoetoksi)-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroksi-2,10dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamid
[0324] (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforil)oksi)metil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (538 mg) je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom i anhidrovanim piridinom, i suspendovan u anhidrovanom piridinu (12 ml). Tome je dodat 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid (327 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Tome su dodati voda (0,319 ml) i jod (167 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 30 min. Reakciona smeša je ugašena natrijum tiosulfatom (208 mg) i vodom (2 ml), i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (509 mg). MS: [M+H]<+>1062,3.
C) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((tercbutil(dimetil)silil)oksi)-2,10-dihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on
[0325] N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-10-(2-cijanoetoksi)-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamid (509 mg) je rastvoren u 33% rastvoru metilamin etanola (10 ml), rastvor je mešan pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat). Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću HPLC (L-kolona2 ODS, 50x150 mm, mobilna faza: 5 mM vodeni rastvor amonijum acetata/acetonitril) da da naslovno jedinjenje (227 mg). MS: [M+H]<+>905,2.
D) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,15,16-tetrahidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-
12
l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so
[0326] U 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil))silil)oksi)-2,10-dihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (227 mg) je dodat trietilamin trihidrofluorid (0,818 ml), i smeša je mešana na 50 °C tokom 5 h. Rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom, ostatak je neutralisan sa 1 M vodenim rastvorom trietilamonijum bikarbonata, i rastvarač je ponovo isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 silika gel koloni (10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata/acetonitril), i dobijena čvrsta supstanca je osušena zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (103 mg).<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ 1,26 (18H, t, J = 7,4 Hz), 3,18 (12H, q, J = 7,4 Hz), 4,06-4,29 (3H, m), 4,34-4,52 (3H, m), 4,62 (1H, d, J = 3,8 Hz), 4,69-4,83 (1H, m), 4,84-4,95 (1H, m), 4,98-5,09 (1H, m), 6,14 (1H, d, J = 1,5 Hz), 6,41 (1H, dd, J = 8,3, 1,5 Hz), 7,33 (1H, d, J = 1,9 Hz), 7,99 (1H, s), 8,16 (1H, s), 8,25 (1H, s).<31>P NMR (121 MHz, D2O) δ-1,96,-1,21.
PRIMER 5
7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4Hpirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (optički izomer)
[0327]
12
A) 7-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2-O-(hidroksi(oksido)fosforanil)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on
[0328] 7-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (835 mg) je rastvoren u piridinu (4 ml), i tome je dodat difenil fosfit (0,456 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Tome su dodati voda (1 ml) i hidroksid amonijum (2 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, i reakciona smeša je razblažena vodom, i ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je osušen preko anhidrovanog magnezijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (611 mg). MS: [M-H]<->764,1.
B) 7-(3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2-O-(hidroksi(oksido)fosforanil)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on
12
[0329] Smeša 7-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2-O-(hidroksi(oksido)fosforanil)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (611 mg) i 80% sirćetne kiseline (4 ml) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je razblažena metanolom, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (358 mg). MS: [M+H]<+>464,1.
C) (2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforotioil)oksi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0330] Smeša 7-(3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2-O-(hidroksi(oksido)fosforanil)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (358 mg) i N-benzoil-5'-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-2'-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3'-O-((2-cijanoetoksi)(diizopropilamino)fosfino)adenozina (1,02 g) je podvrgnuta azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom, i suspendovana u anhidrovanom acetonitrilu (10 ml). Tome je dodat piridin 2,2,2-trifluoroacetat (386 mg), i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Tome je dodat ((dimetilamino-metiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tion (199 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 30 min. Reakciona smeša je ugašena vodenim rastvorom (2,5 ml) natrijum tiosulfata (250 mg), i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropan-2-olu (10 ml), rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (328 mg). MS: [M+H]<+>1080,3.
D) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-2-(2-cijanoetoksi)-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10-oksido-10-sulfanil-2-sulfidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamid (optički izomer)
12
[0331] U smešu (2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforotioil)oksi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonata (328 mg) i anhidrovanog piridina (10 ml) dodat je 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid (196 mg). Smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 30 min, tome su dodati voda (0,5 ml) i 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-on (61 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperatura tokom 1 h. Reakciona smeša je razblažena zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, i ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat), i zatim prečišćen hromatografijom na C18 silika gela koloni (10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata/acetonitril) da da naslovno jedinjenje (optički izomer) (92 mg, tR4). MS: [M+H]<+>1094,3.
E) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((tercbutil(dimetil)silil)oksi)-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer)
[0332] N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-2-(2-cijanoetoksi)-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10-oksido-10-sulfanil-2-sulfidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamid (optički izomer) (90 mg) je rastvoren u 40% rastvoru metilamin-metanola (3,0 ml), rastvor je mešan pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (32 mg). MS: [M+H]<+>937,1.
F) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (optički izomer)
12
[0333] Smeša 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (optički izomer) (32 mg) i trietilamin trihidrofluorida (0,12 ml) je mešana na 50 °C tokom 3 h. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, neutralisana sa 1 M vodenim rastvorom trietilamonijum bikarbonata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 silika gel koloni (10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata/acetonitril). Dobijena čvrsta supstanca je osušena zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (21 mg).<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ1,23 (18H, t, J = 7,3 Hz), 3,15 (12H, q, J = 7,4 Hz), 3,99-4,09 (1H, m), 4,23-4,30 (2H, m), 4,30-4,41 (2H, m), 4,41-4,45 (1H, m), 4,47-4,54 (1H, m), 4,83-4,88 (2H, m), 4,96-5,13 (3H, m), 6,11 (1H, d, J = 1,1 Hz), 6,36 (1H, d, J = 7,4 Hz), 7,31 (1H, d, J = 1,9 Hz), 7,95 (1H, s), 8,11 (1H, s), 8,22 (1H, s).<31>P NMR (121 MHz, D2O) δ52,25, 54,88.
PRIMER 6 (za referencu)
Sinteza 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin soli (optički izomer)
[0334]
1
A) 7-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on
[0335] Rastvoru 7-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3,4-dihidroksitetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4(7H)-ona (2,65 g) u DMF (20 ml) su dodati imidazol (0,614 g) i terc-butildimetilhlorosilan (0,816 g), i smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je razblažena vodom, i ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran zasićenim slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan) da da naslovno jedinjenje (1,2 g). MS: [M-H]<->700,3.
B) 7-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-((2-cijanoetoksi)(diizopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on
[0336] 7-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (2,37 g) je rastvoren u DMF (6,75 ml), i rastvoru su dodati 3-((bis(diizopropilamino)fosfino)oksi)propannitril (2,15 ml), 1H-tetrazol (0,237 g) i 1-metil-1H-imidazol (0,134 ml), i smeša je mešana pod
1 1
atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 20,5 h. Reakcionom rastvoru je dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran zasićenim slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog magnezijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan, koji sadrži 0,5% trietilamina) da da naslovno jedinjenje (2,67 g). MS: [M-H]<->900,2.
C) 7-(2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-(hidroksi(oksido)fosforanil)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on
[0337] 7-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-((2-cijanoetoksi)(diizopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (1,54 g) je rastvoren u acetonitrilu (15 ml), tome su dodati piridin 2,2,2-trifluoroacetat (0,396 g) i voda (0,062 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 50 min. Reakcionom rastvoru je dodat 2-metilpropan-2-amin (8,07 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, ostatku je dodata 80% sirćetna kiselina (8,54 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h.
[0338] Slično tome, 7-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-((2-cijanoetoksi)(diizopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (1,13 g) je rastvoren u acetonitrilu (10 ml), i tome su dodati piridin 2,2,2-trifluoroacetat (0,290 g) i voda (0,045 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 50 min. Reakcionom rastvoru je dodat 2-metilpropan-2-amin (5,92 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, ostatku je dodata 80% sirćetna kiselina (6,27 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h.
[0339] Reakcione smeše su kombinovane, i koncentrovane pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (961 mg). MS: [M+H]<+>464,0.
D) (2R,3R,4R,5R)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-2-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforotioil)oksi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(5-fluoro-4-okso)-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
1 2
[0340] 7-(2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-(hidroksi(oksido)fosforanil)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (400 mg) i N-benzoil-5'-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-3'-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2'-O-((2-cijanoetoksi)(diizopropilamino)fosfino)adenozin (1,02 g) su podvrgnuti azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom (tri puta), i suspendovani su u anhidrovanom acetonitrilu (6 ml). Tome je dodat piridin 2,2,2-trifluoroacetat (333 mg), i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Tome je dodat (dimetilaminometiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tion (195 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 30 min. Reakciona smeša je ugašena natrijum tiosulfatom (316 mg) i vodom (0,5 ml), i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropan-2-olu (5 ml), i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom i toluenom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (556 mg). MS: [M+H]<+>1080,3.
E) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-10-(2-cijanoetoksi)-14-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroksi-2,10-disulfidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-9H-purin-6-il)benzamid (optički izomer)
[0341] ((2R,3R,4R,5R)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-2-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforotioil)oksi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (556 mg) je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom i anhidrovanim piridinom, i rastvoren u anhidrovanom piridinu (15 ml). Rastvoru je dodat 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan-2-oksid (332 mg) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Tome su dodati voda (1 ml) i 3H-1,2-benzoditiol-3-on (108 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 1 h. Reakcionoj smeši je dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko
1
anhidrovanog natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/metanol). Dobijeni ostatak je rastavljen u četiri dijastereomera (tR1, tR2, tR3 i tR4, čija su vremena zadržavanja pomoću LC/MS od kraćih do dužih u ovom redosledu) pomoću HPLC (L-kolona2 ODS, 50x150 mm, mobilna faza: 5 mM vodeni rastvor amonijum acetata/acetonitril) da da naslovno jedinjenje (120 mg, tR2) i naslovno jedinjenje (183 mg, tR4). tR2 MS: [M+H]<+>1094,3. tR4 MS:
[M+H]<+>1094,3.
F) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((tercbutil(dimetil)silil)oksi)-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer)
[0342] N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-10-(2-cijanoetoksi)-14-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-oksido-2-sulfanil-10-sulfidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-9H-purin-6-il)benzamid (optički izomer, poreklom od tR2) (120 mg) je rastvoren u 33% rastvoru metilamin etanola (5,0 ml), rastvor je mešan pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1,5 h, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (84,4 mg). MS: [M+H]<+>937,2.
G) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (optički izomer)
[0343] U 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil))silil)oksi)-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer, poreklom od tR2) (84,4 mg) je dodat trietilamin trihidrofluorid (0,294 ml), i smeša je mešana na 50 °C tokom 2 h. Reakcioni rastvor je ohlađen na sobnu temperaturu, i neutralisan sa 1 M vodenim rastvorom trietilamonijum bikarbonata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je
1 4
prečišćen hromatografijom na C18 silika gel koloni (10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata/acetonitril), i dobijena čvrsta supstanca je osušena zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (58,4 mg).<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ 1,26 (18H, t, J = 7,4 Hz), 3,18 (12H, q, J = 7,3 Hz), 3,94-4,05 (1H, m), 4,10-4,20 (1H, m), 4,28-4,45 (2H, m), 4,50 (2H, brs), 4,59 (1H, d, J = 4,2 Hz), 4,71-4,81 (1H, m), 5,32 (2H, d, J = 10,6 Hz), 6,23-6,32 (2H, m), 7,17 (1H, d, J = 2,3 Hz), 8,05 (1H, s), 8,20 (1H, s), 8,66 (1H, s).<31>P NMR (121 MHz, D2O) δ55,8, 59,2.
PRIMER 7 (za referencu)
Sinteza 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin soli (optički izomer)
[0344]
A) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((tercbutil(dimetil)silil)oksi)-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer)
[0345] N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-10-(2-cijanoetoksi)-14-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-oksido-2-sulfanil-10-sulfidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-9H-purin-6-il)benzamid (optički izomer, poreklom od tR4) (183 mg) je rastvoren u 33% rastvoru metilamin etanola (5,0 ml), rastvor je mešan pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (107 mg). MS: [M+H]<+>937,1.
1
B) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (optički izomer)
[0346] U 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil))silil)oksi)-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer, poreklom od tR4) (107 mg) dodat je trietilamin trihidrofluorid (0,372 ml), i smeša je mešana na 50 °C tokom 2,5 h. Reakcioni rastvor je ohlađen na sobnu temperaturu, neutralisan sa 1 M vodenim rastvorom trietilamonijum bikarbonata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 silika gel koloni (10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata/acetonitril), i dobijena čvrsta supstanca je osušena zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (78 mg).<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ 1,26 (18H, t, J = 7,4 Hz), 3,18 (12H, q, J = 7,2 Hz), 4,09-4,18 (1H, m), 4,21-4,29 (2H, m), 4,33-4,43 (1H, m), 4,51 (2H, brs), 4,65-4,71 (1H, m), 4,89 (1H, d, J = 4,2 Hz), 4,99-5,11 (1H, m), 5,29-5,42 (1H, m), 6,23-6,31 (2H, m), 7,00 (1H, d, J = 1,9 Hz), 8,03 (1H, s), 8,17 (1H, s), 8,56 (1H, s).<31>P NMR (121 MHz, D2O) δ 52,8, 55,1.
PRIMER 8 (za referencu)
Sinteza 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(4-amino-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,10,15,16-tetrahidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-on di-trietilamin soli
[0347]
1
A) N-(7-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3,4-dihidroksitetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)benzamid
[0348] (2R,3R,4R,5R)-2-((benzoiloksi)metil)-5-(4-hloro-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)tetrahidrofuran-3,4-diil dibenzoat (14,09 g) je napunjen u 17 cevastih kontejnera sa zaptivkom u 17 delova, i tome je dodat 2 M rastvor amonijum izopropanola (20 ml), respektivno. Svaka smeša je mešana sa mikrotalasnim zračenjem na 130 °C tokom 5 h. Dobijene smeše su kombinovane, i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je dva puta podvrgnut azeotropnom isparavanju sa toluenom da se ukloni rastvarač, tome je dodat piridin (100 ml), i smeša je ohlađena na 0 °C. Tome je dodat benzoil hlorid (26,6 ml) na 0 °C, i smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcionoj smeši je dodata voda, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan). Dobijenom jedinjenju su dodati piridin (350 ml) i etanol (100 ml), i smeša je ohlađena na 0 °C. Tome je dodat 1 M vodeni rastvor natrijum hidroksida (103 ml), i smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h. Tome je ponovo dodat 1 M vodeni rastvor natrijum hidroksida (45,7 ml), i smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h. Reakcionoj smeši je dodata jaka kisela katjonska izmenjivačka smola DOWEX™ 50Wx4 100-200 (95 g) na sobnoj temperaturi, čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak
1
je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat). Dobijenom proizvodu (5,71 g) su dodati piridin (60 ml) i 4,4’-dimetoksitritil hlorid (5,98 g), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Tome je ponovo dodat 4,4’-dimetoksitritil hlorid (5,98 g), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, tome je dodata voda, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran vodom i zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan) da da naslovno jedinjenje (8,50 g). MS: [M+H]<+>691,2.
B) N-(7-((2R,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)benzamid
[0349] Smeši N-(7-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3,4-dihidroksitetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)benzamida (7,51 g) i DMF (30 ml) dodati su imidazol (1,924 g) i terc-butildimetilhlorosilan (2,13 g), i smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcionoj smeši je dodata voda, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran vodom i zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan) da da naslovno jedinjenje (2,94 g). MS, pronađeno: 501,2.
C) N-benzoil-7-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-((2-cijanoetoksi)diizopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-amin
[0350] N-(7-((2R,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)benzamid (1,03 g) je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim toluenom, i tome je dodat anhidrovani DMF (5 ml) pod atmosferom argona. Tome su dodati 3-((bis (diizopropilamino)fosfino)oksi)propannitril (0,771 g), 1H-tetrazol (0,090 g) i 1-metil-1H-imidazol (0,051 ml), i smeša je mešana tokom 6 h. Reakcionoj smeši je dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum hidrogenkarbonata, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogenkarbonata i zasićenim slanim
1
rastvorom, i osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat koji sadrži 0,5% trietilamin/heksan) da da naslovno jedinjenje (1,12 g).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ-0,17 (3H, d, J = 2,6 Hz), -0,04-0,00 (3H, m), 0,78 (9H, s), 1,04 (3H, d, J = 6,8 Hz), 1,13-1,23 (9H, m), 2,32 (1H, t, J = 6,6 Hz), 2,68 (1H, td, J = 6,4, 1,9 Hz), 3,21-3,36 (1H, m), 3,42-3,71 (4H, m), 3,79 (6H, d, J = 1,1 Hz), 3,85-4,05 (1H, m), 4,25-4,45 (2H, m), 4,64-4,82 (1H, m), 6,39 (1H, dd, J = 14,2, 5,9 Hz), 6,74-6,89 (4H, m), 7,19-7,41 (8H, m), 7,43-7,67 (5H, m), 7,98 (2H, d, J = 7,6 Hz), 8,50 (1H, s), 8,64 (1H, d, J = 5,3 Hz).
D) (2R,3R,4R,5R)-5-(4-benzamido-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0351] U N-benzoil-7-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-((2-cijanoetoksi)(diizopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-amin (1,12 g) su dodati acetonitril (5 ml), voda (40 μl) i piridin 2,2,2-trifluoroacetat (258 mg). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min, tome je dodat terc-butilamin (5,43 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, tome je dodata 80% sirćetna kiselina (5,5 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 1 h. Rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (527 mg). MS: [M+H]<+>567,2.
E) (2R,3R,4R,5R)-5-(4-benzamido-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(hidroksimetil)-2-(2-izobutilamido-6-okso-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforil)oksi)metil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0352] (2R,3R,4F,5R)-5-(4-benzamido-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (527 mg) i 3'-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2'-O-((2-cijanoetoksi)(diizopropilamino)fosfino)-N-izobutirilguanozin (1,083 g) su tri puta podvrgnuti azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom, i tome je dodat anhidrovani acetonitril (10 ml). Tome je dodat piridin 2,2,2-trifluoroacetat (359 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Tome je dodat 70% vodeni rastvor terc-butil hidroperoksida (382 μl), i smeša je mešana na sobnoj
1
temperaturi tokom dopunskih 20 min. Reakcionoj smeši su dodati natrijum tiosulfat (693 mg) i voda (1 ml), i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodata 80% sirćetna kiselina (5 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je tri puta podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa toluenom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (175 mg). MS: [M+H]<+>1149,4.
F) N-(7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-10-(2-cijanoetoksi)-2-hidroksi-7-(2-((2-metilpropanoil)amino)-6-okso-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)benzamid
[0353] (2R,3R,4F,5R)-5-(4-benzamido-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(hidroksimetil)-2-(2-izobutilamido-6-okso-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforil)oksi)metil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (175 mg) je tri puta podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhirdovanim acetonitrilom, i tome su dodati anhidrovani piridin (3 ml) i 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid (98 mg). Smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 10 min, tome su dodati voda (96 μl) i jod (50 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 20 min. Reakciona smeša je dodata smeši natrijum tiosulfata (98 mg) i vode (0,4 ml), i smeša je mešana tokom 5 min, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen dva puta hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (48 mg). MS: [M+H]<+>1147,6.
G) 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(4-amino-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-2,10-dihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-on
[0354] N-(7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-10-(2-cijanoetoksi)-2-hidroksi-7-(2-((2-metilpropanoil)amino)-6-okso-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-
14
l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)benzamid (48 mg) je dva puta podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom, tome je dodat 33% rastvor metilamin etanola (2 ml), i smeša je mešana preko noći pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat). Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću HPLC (L-kolona2 ODS, 50x150 mm, mobilna faza: 5 mM vodeni rastvor amonijum acetata/acetonitril), dobijena frakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni proizvod je osušen zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (5 mg). MS: [M+H]<+>920,3.
H) 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(4-amino-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,10,15,16-tetrahidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-on ditrietilamin so
[0355] Smeša 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(4-amino-5-fluoro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-2,10-dihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (5 mg) i trietilamin trihidrofluorida (200 μl) je mešana na 50 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i neutralisana sa 1 M vodenim rastvorom trietilamonijum hidrogen karbonata. Reakciona smeša je prečišćena hromatografijom na C18 koloni (acetonitril/10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata), ciljna frakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni proizvod je osušen zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (3,2 mg).<1>H NMR (600 MHz, D2O) δ 1,23 (18H, t, J = 7,3 Hz), 3,15 (12H, q, J = 7,3 Hz), 4,06-4,11 (1H, m), 4,14-4,19 (1H, m), 4,21-4,26 (1H, m), 4,31-4,37 (2H, m), 4,40 (1H, d, J = 1,5 Hz), 4,56 (1H, dd, J = 15,2, 4,3 Hz), 4,61-4,68 (1H, m), 5,00 (1H, ddd, J = 8,5, 6,6, 4,5 Hz), 5,60 (1H, td, J = 7,9, 4,1 Hz), 5,93 (1H, d, J = 8,5 Hz), 6,26 (1H, s), 7,14 (1H, d, J = 1,6 Hz), 7,87 (1H, s), 8,10 (1H, s).
PRIMER 10 (za referencu)
Sinteza 1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,15,16-tetrahidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2
l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-1,5-dihidro-4H-imidazo[4,5-c]piridin-4-ona
[0356]
A) (2R,3R,4R,5R)-2-((benzoiloksi)metil)-5-(4-okso-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)tetrahidrofuran-3,4-diil dibenzoat
[0357] U 4-hloro-1H-imidazo[4,5-c]piridin (20 g) dodati su mravlja kiselina (123 ml) i voda (30 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana na 100 °C tokom 2 h. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodata konc. hlorovodonična kiselina (100 ml), i smeša je mešana na 100 °C tokom 1 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, ostatak je suspendovan u MeOH (100 ml) i diizopropil etru (100 ml), i tome je dodat trietilamin (50 ml). Rezultujuća čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, i rastvorena u acetonitrilu (600 ml). Tome je dodat trimetilsilil N-(trimetilsilil)acetimidat (38,2 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana tokom 10 min. Reakcionoj smeši je dodat (2S,3R,4R,5R)-2-acetoksi-5-((benzoiloksi)metil)tetrahidrofuran-3,4-diil dibenzoat (79,0 g) na sobnoj temperaturi, i smeša je zagrevana do 80 °C. Reakcionom rastvoru je dodat trimetilsilil trifluorometansulfonat (28,2 ml), i smeša je mešana pod atmosferom argona preko noći na 80 °C. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, tome je dodata voda (500 ml), i rezultujuća čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom. Čvrsta supstanca je prečišćena hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (25,9 g).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,65-4,96 (3H, m), 5,91 (2H, brs), 6,23-6,42 (1H, m), 6,64 (1H, brs), 7,15 (1H, brs), 7,32-7,56 (9H, m), 7,92-8,15 (7H, m), 12,11-12,50 (1H, m). MS: [M+H]<+>580,1
B) 1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4(5H)-on
[0358] U (2R,3R,4R,5R)-2-((benzoiloksi)metil)-5-(4-okso-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)tetrahidrofuran-3,4-diil dibenzoat (30,0 g) je dodat 40% rastvor metilamin metanola (200 ml), i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je rekristalisan iz heksan-etil acetata da da naslovno jedinjenje (11,2 g). MS: [M+H]<+>268,1
C) 1-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3,4-dihidroksitetrahidrofuran-2-il)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4(5H)-on
[0359] Rastvoru 1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4(5H)-ona (18,0 g) u piridinu (140 ml) dodat je 4,4’-dimetoksitritil hlorid (18,46 g) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, ostatku je dodata voda, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Dobijeni ekstrakt je ispran zasićenim slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (18,2 g). MS: [M+H]<+>570,2
14
D) 1-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-3-hidroksitetrahidrofuran-2-il)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4(5H)-on
[0360] Rastvoru 1-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3,4-dihidroksitetrahidrofuran-2-il)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4(5H)-ona (18,02 g) u DMF (158 ml) dodati su imidazol (4,30 g) i terc-butildimetilhlorosilan (5,72 g), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Tome je ponovno dodat terc-butildimetilhlorosilan (2,38 g), i smeša je mešana tokom 3 h. Reakciona smeša je razblažena vodom, i ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran zasićenim slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan). Izolovani regioizomer naslovnog jedinjenja je rastvoren u MeOH i trietilaminu, i rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcioni rastvor je koncentrovan, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan) da da naslovno jedinjenje (11,5 g). MS: [M+H]<+>684,2
E) (2R,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(4-okso-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0361] Smeši 1-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-3-hidroksitetrahidrofuran-2-il)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4(5H)-ona (8,0 g) i piridina (117 ml) dodat je difenil fosfit (4,5 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Voda (20 ml) je dodata reakcionoj smeši. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, i reakciona smeša je razblažena vodom, i ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko anhidrovanog magnezijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (8,5 g). MS: [M+H]<+>748,3.
F) (2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(hidroksimetil)-2-(4-okso-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0362] Smeša (2R,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(4-okso-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)tetrahidrofuran-3il hidrogen fosfonata (8,2 g) i 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropan-2-ola (30 ml) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Tome je dodat metanol (10 ml), smeša je mešana na 60 °C tokom 1 h, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je rekristalisan iz etil acetata i diizopropil etra da da naslovno jedinjenje (4,3 g). MS: [M+H]<+>446,1
G) (2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((tercbutildimetilsilil))oksi)-2-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforil)oksi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(4-okso-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0363] (2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(hidroksimetil)-2-(4-okso-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (250 mg) i N-benzoil-5'-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-2'-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3'-O-((2-cijanoetoksi)(diizopropilamino)fosfino)adenozin (776 mg) su podvrgnuti azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom, i tome je dodat anhidrovani acetonitril (5,61 ml). Smeši je dodat piridin 2,2,2-trifluoroacetat (271 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 40 min. Tome je dodat 70% vodeni rastvor terc-butil hidroperoksida (231 μl), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Reakcionoj smeši je dodata smeša natrijum tiosulfata (1,3 g) i vode (3 ml), i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodat 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropan-2-ol (15 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan i metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (170 mg). MS: [M+H]<+>1046,3
H) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-2-(2-cijanoetoksi)-10-hidroksi-2,10-dioksido-7-(4-okso-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)oktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamid
[0364] (2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi))-2-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforil)oksi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(4-okso-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (160 mg) je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim piridinom, i tome je dodat anhidrovani piridin (3,0
14
ml). Smeši je dodat 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid (99 mg) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Tome su dodati voda (96 μl) i jod (50,5 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 20 min. Reakcionoj smeši je dodata smeša natrijum tiosulfata (190 mg) i vode (0,4 ml), i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovlno jedinjenje (10,6 mg). MS: [M+H]<+>1044,3
I) 1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((tercbutil(dimetil)silil)oksi)-2,10-dihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-1,5-dihidro-4H-imidazo[4,5-c]piridin-4-on
[0365] U N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((tercbutil(dimetil)silil)oksi)-2-(2-cijanoetoksi)-10-hidroksi-2,10-dioksido-7-(4-okso-4,5-dihidro-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)oktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamid (10,6 mg) je dodat 40% rastvor metilamin etanola (5,0 ml), i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (9,0 mg). MS: [M+H]<+>887,2
J) 1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,15,16-tetrahidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-1,5-dihidro-4H-imidazo[4,5-c]piridin-4-on
[0366] U 1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil))silil)oksi)-2,10-dihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-1,5-dihidro-4H-imidazo[4,5-c]piridin-4-on (9,0 mg) su dodati metanol (1,0 ml) i trietilamin trihidrofluorid (165 μl). Reakciona smeša je koncentrovana da se ukloni metanol, i ostatak je mešan na 55 °C tokom 1 h. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, tome je dodat etoksi(trimetil)silan (0,90 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 koloni
14
(acetonitril/10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata) da da naslovno jedinjenje (0,3 mg).<1>H NMR (400 MHz, D2O) a 4,15 (2H, d, J = 11,5 Hz), 4,46 (4H, brs), 4,56-4,62 (1H, m), 4,98-4,99 (2H, m), 6,05-6,20 (2H, m), 6,79-6,87 (1H, m), 7,06-7,12 (1H, m), 8,00 (1H, s), 7,96-8,10 (1H, m), 8,23 (2H, s).<31>P NMR (162 MHz, D2O) δ -2,36,-1,94.
PRIMER 11 (za referencu)
Sinteza 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(4-amino-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)-2,10,15,16-tetrahidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-on ditrietilamin soli
[0367]
14
A) N-benzoil-1-(2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3,5-O-(di-terc-butilsililen)-beta-D-ribofuranozil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amin
[0368] N-benzoil-1-(beta-D-ribofuranozil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amin (2,41 g) je rastvoren u DMF (25 ml), tome je dodat di-terc-butilsilandiil bis(trifluorometansulfonatu) (2,32 ml) na 0 °C, i smeša je mešana na 0 °C tokom 75 min. Tome je dodat di-tercbutilsilandiil bis(trifluorometansulfonat) (0,63 ml) na 0 °C, i smeša je mešana na 0 °C tokom dopunskih 30 min. Tome je dodat di-terc-butilsilandiil bis(trifluorometansulfonat) (0,63 ml) na 0 °C, i smeša je mešana na 0 °C tokom dopunskih 35 min. Reakcionoj smeši je dodat 1H-imidazol (2,22 g), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Tome je dodat terc-butildimetilhlorosilan (1,18 g), i smeša je mešana na 60 °C tokom 1,5 h. Tome je dodat terc-butildimetilhlorosilan (0,294 g), i smeša je mešana na 60 °C tokom 14,5 h. Reakciona smeša je razblažena vodom, i ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan) da da naslovno jedinjenje (3,28 g). MS: [M+H]<+>625,2.
B) N-benzoil-1-(2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranozil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amin
[0369] Piridinijum poli(hidrogen fluorid) (1,86 ml) je rastvoren u piridinu (10 ml) na 0 °C, rastvor je dodat rastvoru N-benzoil-1-(2-O-(terc-butil(dimetil)silil))-3,5-O-(di-tercbutilsililen)-beta-D-ribofuranozil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amina (1,64 g) u THF (13 ml) na 0 °C, i smeša je mešana na 0 °C tokom 8 min. Ova reakcija je ponovljena dva puta. Reakcioni rastvori su kombinovani, razblaženi vodom, i ekstrahovani etil acetatom. Ekstrakt je ispran zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan i metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (2,24 g). MS:
[M+H]<+>485,1.
C) N-benzoil-1-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranozil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amin
14
[0370] N-benzoil-1-(2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranozil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amin (2,24 g) je rastvoren u piridinu (25 ml), i tome je dodat 4,4’-dimetoksitritil hlorid (2,04 g) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4,5 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, ostatku je dodata voda, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan) da da naslovno jedinjenje (3,29 g). MS: [M+H]<+>787,3.
D) N-benzoil-1-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-((2-cijanoetoksi)diizopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranozil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amin
[0371] N-benzoil-1-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-beta-D-ribofuranozil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amin (3,29 g) je rastvoren u anhidrovanom DMF (9,5 ml), rastvoru su dodati 3-((bis(diizopropilamino)fosfino)oksi)propannitril (2,98 ml), 1H-tetrazol (0,328 g) i 1-metil-1H-imidazol (0,185 ml), i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 2,5 h. Reakcionom rastvoru je dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan, koji sadrži 0,5% trietilamin) da da naslovno jedinjenje (3,85 g). MS: [M+H]<+>987,4.
E) N-benzoil-1-(2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-(hidroksi(oksido)fosforanil)-beta-D-ribofuranozil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amin
[0372] N-benzoil-1-(5-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-((2-cijanoetoksi)(diizopropilamino)fosfino)-beta-D-ribofuranozil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amin (3,85 g) je rastvoren u acetonitrilu (30 ml), tome su dodati piridin 2,2,2-trifluoroacetat (0,904 g) i voda (0,141 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakcionom rastvoru je dodat 2-metilpropan-2-amin (9 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 40 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatku je dodat 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropan-2-ol
14
(25 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3,5 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, tome su dodati sirćetna kiselina (20 ml) i voda (5 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (1,85 g). MS: [M+H]<+>549,1.
F) (2R,3R,4R,5R)-5-(4-benzamido-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(hidroksimetil)-2-(2-izobutilamido-6-okso-1H-purin-9(6H)-il))tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforil)oksi)metil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0373] N-benzoil-1-(2-O-(terc-butil(dimetil)silil)-3-O-(hidroksi(oksido)fosforanil)-beta-D-ribofuranozil)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-amin (300 mg) i 5'-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-3'-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2'-O-((2-cijanoetoksi)(diizopropilamino)fosfino)-N-izobutirilguanozin (637 mg) su podvrgnuti azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom (tri puta), i suspendovani u anhidrovanom acetonitrilu (6 ml). Tome je dodat piridin 2,2,2-trifluoroacetat (264 mg), i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Tome je dodat 70% vodeni rastvor terc-butil hidroperoksida (0,225 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 1 h. Reakciona smeša je ugašena natrijum tiosulfatom (400 mg) i vodom (1,5 ml), i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u 80% sirćetnoj kiselini (5 ml), i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 45 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom i toluenom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (469 mg). MS: [M+H]<+>1131,4.
G) N-(1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-10-(2-cijanoetoksi))-2-hidroksi-7-(2-(izobutirilamino)-6-okso-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)benzamid
1
[0374] (2R,3R,4R,5R)-5-(4-benzamido-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(hidroksimetil)-2-(2-izobutilamido-6-okso-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforil)oksi)metil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (469 mg) je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom i anhidrovanim piridinom, i suspendovan u anhidrovanom piridinu (10 ml). Tome je dodat 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid (268 mg), i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Tome su dodati voda (1 ml) i jod (158 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 13 min. Reakciona smeša je ugašena natrijum tiosulfatom (170 mg) i vodom (0,5 ml), rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom, i ostatak je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa toluenom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (419 mg). MS: [M+H]<+>1129,3.
H) 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(4-amino-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-2,10-dihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-on
[0375] N-(1-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-10-(2-cijanoetoksi)-2-hidroksi-7-(2-(izobutirilamino)-6-okso-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-il)benzamid (419 mg) je rastvoren u 33% rastvoru metilamin etanola (10,0 ml), i rastvor je mešan pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 18,5 h. Tome je dodat 33% rastvor metilamin etanola (5 ml), smeša je mešana tokom dopunskih 3 h, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u 33% rastvoru metilamin etanola (10,0 ml), rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (173 mg). MS: [M+H]<+>902,3.
I) 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(4-amino-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)-2,10,15,16-tetrahidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-
1 1
l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-on ditrietilamin so
[0376] U 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(4-amino-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-2,10-dihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-on (173 mg) je dodat trietilamin trihidrofluorid (0,625 ml), i smeša je mešana na 50 °C tokom 3 h. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i neutralisana sa 1 M vodenim rastvorom trietilamonijum bikarbonata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 silika gel koloni (10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata/acetonitril), i dobijena čvrsta supstanca je osušena zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (123 mg).<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ 1,25 (18H, t, J = 7,4 Hz), 3,17 (12H, q, J = 7,2 Hz), 3,87-4,10 (1H, m), 4,11-4,30 (3H, m), 4,32-4,45 (2H, m), 4,52 (1H, d, J = 3,8 Hz), 4,65 (1H, d, J = 4,2 Hz), 4,97-5,10 (1H, m), 5,79 (1H, brs), 5,94 (2H, d, J = 8,3 Hz), 7,10 (1H, d, J = 6,8 Hz), 7,68-7,78 (1H, m), 7,83 (1H, s), 7,94-8,26 (1H, m).<31>P NMR (121 MHz, D2O) δ-1,36.
PRIMER 12 (za referencu)
Sinteza 8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aS,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-on di-trietilamin soli (optički izomer)
[0377]
1 2
A) 8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloksi)-5-((benziloksi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-on
[0378] Rastvoru 4-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloksi)-5-((benziloksi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-1H-pirazol-5-amina (17,3 g) i kalijum karbonata (24,6 g) u DMF (200 ml) dodat je etil formimidat hidrohlorid (19,5 g) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcionoj smeši je dodat dietil karbonat (126 g) na sobnoj temperaturi, i reakciona smeša je mešana na 100 °C tokom 1 h. Reakcionoj smeši je dodat 20% rastvor natrijum etoksid etanola (60,6 g) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na 100 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je neutralisana sirćetnom kiselinom na sobnoj temperaturi, i ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan) da da naslovno jedinjenje (5,79 g). MS: [M+H]<+>539,1.
B) 8-((2S,3R,4S,5R)-3,4-dihidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-on
1
[0379] Rastvor 8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloksi)-5-((benziloksi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona (3,49 g) i paladijum hidroksida (1,37 g, 10% Pd) u metanolu (30 ml) je mešan pod atmosferom vodonika preko noći na sobnoj temperaturi. Katalizator je uklonjen filtracijom, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da da naslovno jedinjenje (1,72 g). MS: [M+H]<+>269,0.
C) 8-((2S,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3,4-dihidroksitetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-on
[0380] Rastvoru 8-((2S,3R,4S,5R)-3,4-dihidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona (1,72 g) u dehidriranom piridinu (30 ml) dodat je 4,4’-dimetoksitritil hlorid (2,39 g) uz hlađenje ledom. Reakciona smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakcionoj smeši je dodat 4,4’-dimetoksitritil hlorid (0,217 g) uz hlađenje ledom. Reakciona smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakcionoj smeši je dodat 4,4’-dimetoksitrtil hlorid (0,217 g) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakcionoj smeši je dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum hidrogenkarbonata na sobnoj temperaturi, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (1,62 g). MS: [M-H]<->569,1.
D) 8-((2S,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-on
[0381] Terc-butildimetilhlorosilan (536 mg) i srebro(I) nitrat (604 mg) dodati su rastvoru 8-((2S,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3,4-dihidroksitetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona (1,69 g) i dehidriranog piridina (1,20 ml) u dehidriranom THF (20 ml) na sobnoj temperaturi pod atmosferom argona. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 8 h, i reakcionoj smeši su dodati tercbutildimetilhlorosilan (89 mg) i srebro(I) nitrat (101 mg) na sobnoj temperaturi. Reakciona
1 4
smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Nerastvorljiva supstanca je uklonjena filtracijom, i isprana etil acetatom. Filtratu je dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum hidrogenkarbonata, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran zasićenim slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (740 mg). MS: [M-H]<->683,1.
E) (2R,3R,4S,5S)-2-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-5-(4-okso-3,4-dihidropirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0382] Difenil fosfit (0,41 ml) je dodat rastvoru 8-((2S,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona (740 mg) u piridinu (10 ml) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakcionoj smeši je dodata voda (20 ml), i smeša je mešana tokom 1 h. Reakciona smeša je sipana u vodu na sobnoj temperaturi, i ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (300 mg). MS: [M-H]<->747,1.
F) (2R,3R,4S,5S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(hidroksimetil)-5-(4-okso-3,4-dihidropirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0383] U (2R,3R,4S,5S)-2-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-5-(4-okso-3,4-dihidropirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (300 mg) dodat je 80% vodeni rastvor sirćetne kiseline (10 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (170 mg). MS: [M+H]<+>447,0.
G) (2R,3R,4S,5S)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-2-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforotioil)oksi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(4-okso-3,4-dihidropirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
1
[0384] (2R,3R,4S,5S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-(hidroksimetil)-5-(4-okso-3,4-dihidropirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (190 mg) i N-benzoil-5'-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-3'-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2'-O-((2-cijanoetil)(diizopropilamino)fosfino)adenozin (505 mg) su tri puta podvrgnuti azeotropnom postupku sa dehidriranim acetonitrilom. Ostatku su dodati dehidrirani acetonitril (5 ml) i piridin 2,2,2-trifluoroacetat (164 mg). Reakciona smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 10 min, reakcionoj smeši je dodat ((dimetilaminometiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tion (96 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Reakcionoj smeši je dodat vodeni rastvor (0,2 ml) natrijum tiosulfata (0,2 g), i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodat 80% vodeni rastvor sirćetne kiseline (5 ml), smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i reakciona smeša je dva puta podvrgnuta azeotropnom postupku sa acetonitrilom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (260 mg). MS: [M+H]<+>1063,2.
H) 8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aR,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((tercbutil(dimetil)silil)oksi)-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-on (optički izomer)
[0385] (2R,3R,4S,5S)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-2-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((tercbutildimetilsilil))oksi)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforotioil)oksi)metil)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(4-okso-3,4-dihidropirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (260 mg) je dva puta podvrgnut azeotropnom postupku sa dehidriranim acetonitrilom. Ostatak je jednom podvrgnut azeotropnom postupku sa dehidriranim piridinom. Rastvoru ostatka u dehidriranom piridinu (5 ml) dodat je 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid (158 mg), i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Reakcionoj smeši su dodati voda (0,15 ml) i 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-on (49,4 mg) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakcionoj smeši je dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum hidrogenkarbonata na sobnoj temperaturi, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum tiosulfata i zasićenim slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i
1
koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat), i zatim prečišćen pomoću HPLC (L-kolona2 ODS, 50x150 mm, mobilna faza: 5 mM vodeni rastvor amonijum acetata/acetonitril) da da frakcije, i frakcija koja je imala najduže vreme zadržavanja je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodat 33% rastvor metilamin etanola (5 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (25 mg). MS: [M+H]<+>920,2.
I) 8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aS,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-on di-trietilamin so (optički izomer)
[0386] Rastvoru 8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aR,16R)-7-(6-amino-9H-purin-9-il)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-on (optički izomer) (25 mg) u metanolu (2 ml) dodat je trietilamin trihidrofluorid (0,177 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana na 50 °C tokom 2 h. Reakcionoj smeši je dodat etoksitrimetilsilan (5 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana tokom 10 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 silika gel koloni (10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata/acetonitril), i dobijeni proizvod je osušen zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (13 mg).<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ 4,02-4,19 (3H, m), 4,32-4,42 (2H, m), 4,44-4,49 (1H, m), 4,59-4,64 (1H, m), 4,76-4,80 (1H, m), 4,95-5,04 (1H, m), 5,16 (1H, d, J = 4,9 Hz), 5,31 (1H, ddd, J = 9,8, 8,7, 4,2 Hz), 6,22 (1H, d, J = 8,3 Hz), 7,99 (1H, s), 8,00 (1H, s), 8,14 (1H, s), 8,49 (1H, s).
PRIMER 13 (za referencu)
Sinteza 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aS,16R)-14-(4-aminopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2,10,15,16-tetrahidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-on di-trietilamin soli
1
A) (2S,3S,4R,5R)-2-(4-(N-benzoilbenzamido)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-5-((benzoiloksi)metil)tetrahidrofuran-3,4-diil dibenzoat
[0388] Rastvoru (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3,4-diola (2,98 g) i N,N-dimetil-4-aminopiridina (1,36 g) u dehidriranom piridinu (50 ml) dodat je benzoil hlorid (12,5 g) uz hlađenje ledom. Reakciona smeša je mešana pod atmosferom argona tokom 1 h. Reakcionoj smeši je dodat benzoil hlorid (3,13 g) uz hlađenje ledom. Reakciona smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakcionoj smeši je dodata voda, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan) da da naslovno jedinjenje (6,51 g). MS: [M+H]<+>788,2.
B) N-(8-((2S,3R,4S,5R)-3,4-dihidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)benzamid
[0389] Rastvoru (2S,3S,4R,5R)-2-(4-(N-benzoilbenzamido)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-5-((benzoiloksi)metil)tetrahidrofuran-3,4-diil dibenzoata (6,51 g) u mešanom rastvaraču
1
piridina (50 ml) i etanola (25 ml) dodat je 1M vodeni rastvor natrijum hidroksida (49,6 ml) uz hlađenje ledom, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakcionoj smeši je dodata jaka kisela katjonska izmenjivačka smola DOWEX TM 50Wx4 100-200 (40 g) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodat metanol, i dobijena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom da da naslovno jedinjenje (1,82 g). MS: [M+H]<+>372,1.
C) N-(8-((2S,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3,4-dihidroksitetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)benzamid
[0390] Rastvoru N-(8-((2S,3R,4S,5R)-3,4-dihidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)benzamida (1,89 g) u dehidriranom piridinu (30 ml) dodat je 4,4’-dimetoksitritil hlorid (517 mg) uz hlađenje ledom. Reakciona smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakcionoj smeši je dodat 4,4’-dimetoksitritil hlorid (517 mg) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana preko noći pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi. Reakcionoj smeši je dodat 4,4’-dimetoksitritil hlorid (1035 mg) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakcionoj smeši je dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum hidrogenkarbonata na sobnoj temperaturi, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran zasićenim slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (2160 mg). MS: [M-H]<->672,1.
D) N-(8-((2S,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)benzamid
[0391] Rastvoru N-(8-((2S,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3,4-dihidroksitetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)benzamida (2,16 g) u dehidriranom THF (30 ml) dodati su srebro(I) nitrat (708 mg) i dehidrirani piridin (1,22 g). Reakciona smeša je mešana pod atmosferom argona tokom 15 min, i tome je dodat tercbutildimetilhlorosilan (628 mg). Reakciona smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakcionoj smeši su dodati srebro(I) nitrat (163 mg), terc-
1
butildimetilhlorosilan (145 mg) i dehidrirani piridin (507 mg) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana preko noći pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi. Reakcionoj smeši su dodati srebro(I) nitrat (436 mg), terc-butildimetilhlorosilan (387 mg) i dehidrirani piridin (761 mg) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakcionoj smeši je dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum hidrogenkarbonata na sobnoj temperaturi, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran zasićenim slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan) da da naslovno jedinjenje (980 mg). MS: [M-H]<->786,2.
E) (2R,3R,4S,5S)-5-(4-benzamidopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0392] N-(8-((2S,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi)metil)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)benzamid (980 mg) je dva puta podvrgnut azeotropnom postupku sa dehidriranim toluenom, i rastvoren u dehidriranom DMF (10 ml). Reakcionoj smeši su dodati 3-((bis(diizopropilamino)fosfino)oksi)propannitril (487 mg), 1H-tetrazol (87 mg) i 1-metil-1H-imidazol (51 mg). Reakciona smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Reakcionoj smeši je dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum hidrogenkarbonata na sobnoj temperaturi, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Ekstrakt je ispran zasićenim slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat koji sadrži 0,5% trietilamina/heksan). Rastvoru dobijene smeše u acetonitrilu (10 ml) dodati su voda (0,04 ml) i piridin 2,2,2-trifluoroacetat (256 mg) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, tome je dodat terc-butilamin (5,38 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 45 min. Rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodat 80% vodeni rastvor sirćetne kiseline (5,4 ml), smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (530 mg). MS: [M+H]<+>550,2.
1
F) (2R,3R,4S,5S)-5-(4-benzamidopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5-(hidroksimetil)-2-(2-izobutilamido-6-okso-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforil)oksi)metil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0393] Smeša (2R,3R,4S,5S)-5-(4-benzamidopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonata (240 mg) i 5'-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-3'-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2'-O-((2-cijanoetil)(diizopropilamino)fosfino)-N-izobutirilguanozina (635 mg) je tri puta podvrgnuta azeotropnom postupku sa dehidriranim acetonitrilom. Ostatku je dodat rastvor dehidriranog acetonitrila (5 ml), dehidriranog THF (2,5 ml) i 5-(etiltio)-2H-tetrazola (171 mg) (koji je unapred podvrgnut azeotropnom postupku sa dehidriranim acetonitrilom) u dehidriranom acetonitrilu (2,5 ml). Reakciona smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Tome je dodat 70% vodeni rastvor terc-butil hidroperoksida (0,179 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Reakcionoj smeši je dodat vodeni rastvor (0,12 ml), natrijum tiosulfat pentahidrata (0,12 g) i reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodat 80% vodeni rastvor sirćetne kiseline (3 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Ostatak je dva puta podvrgnut azeotropnom postupku sa acetonitrilom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da sirovi proizvod (420 mg) koji sadrži naslovno jedinjenje. MS: [M+H]<+>1132,3.
G) N-(8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aR,16R)-15,16-bis((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-10-(2-cijanoetoksi)-2-hidroksi-7-(2-((2-metilpropanoil)amino)-6-okso-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)benzamid
[0394] Sirovi proizvod (430 mg) koji sadrži (2R,3R,4S,5S)-5-(4-benzamidopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-5-(hidroksimetil)-2-(2-izobutilamido-6-okso-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforil)oksi)metil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat je dva puta podvrgnut azeotropnom postupku sa dehidriranim acetonitrilom. Dobijeni ostatak je jednom podvrgnut azeotropnom postupku sa dehidriranim piridinom.
1 1
Rastvoru dobijenog ostatka u dehidriranom piridinu (3 ml) dodat je 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid (245 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod atmosferom argona tokom 10 min. Reakcionoj smeši su dodati voda (0,239 ml) i jod (125 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Reakcionoj smeši je dodat vodeni rastvor (0,4 ml) natrijum tiosulfat pentahidrata (245 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 min. Tome je dodat toluen, i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da sirovi proizvod (553 mg) koji sadrži naslovno jedinjenje. MS: [M+H]<+>1130,4.
H) 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aS,16R)-14-(4-aminopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2,10,15,16-tetrahidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-on di-trietilamin so
[0395] Smeša N-(8-((5R,7R,8R,12aR,14S,15S,15aR,16R)-15,16-bis((tercbutil(dimetil)silil)oksi)-10-(2-cijanoetoksi)-2-hidroksi-7-(2-((2-metilpropanoil)amino)-6-okso-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-il)benzamida (553 mg) i 33% rastvora metilamin etanola (20 ml) mešana je preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat), i zatim prečišćen pomoću HPLC (ODS, mobilna faza: voda/acetonitril (sadrži 5 mM amonijum acetat)) da da frakciju, i dobijena frakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Rastvoru dobijenog ostatka u metanolu (3 ml) je dodat trietilamin trihidrofluorid (0,072 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana na 50 °C tokom 4 h. Reakcionoj smeši je dodat trietilamin trihidrofluorid (0,181 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana preko noći na 50 °C. Reakcionoj smeši je dodat trietilamin trihidrofluorid (0,181 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana na 50 °C tokom 5 h. Reakcionoj smeši je dodat etoksitrimetilsilan (1,034 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana tokom 5 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 silika gel koloni (10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata/acetonitril), i dobijeni proizvod je osušen zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (10 mg).<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ 3,99-4,08 (1H, m), 4,11-4,31 (4H, m), 4,34-4,42 (1H, m), 4,52-4,60 (2H, m), 4,94-5,05 (1H, m),
1 2
5,27-5,35 (1H, m), 5,51-5,62 (1H, m), 5,94 (1H, d, J = 8,3 Hz), 7,89 (1H, s), 8,07 (1H, s), 8,08 (1H, s).
PRIMER 14
7-((2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-hidroksi-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on dinatrijumova so
[0396]
A) (2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforotioil)oksi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0397] 7-(3-O-(terc-butil(dimetil)silil)-2-O-(hidroksi(oksido)fosforanil)-beta-D-ribofuranozil)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (8,89 g) i N-benzoil-5'-O-(bis(4-metoksifenil)(fenil)metil)-3'-O-((2-cijanoetoksi)(diizopropilamino]fosfino)-2'-dezoksi-
1
2'-fluoroadenozin (18,5 g) tri puta su podvrgnuti azeotropnom postupku sa dehidriranim acetonitrilom. Ostatku su dodati anhidrovani acetonitril (40 ml), anhidrovani THF (20 ml) i rastvor anhidrovanog acetonitrila (40 ml) 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazola (7,49 g). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min pod atmosferom argona, ((dimetilaminometiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tion (4,33 g) je dodat u reakcionu smešu, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakcionoj smeši je dodat vodeni rastvor (5 ml) koji sadrži natrijum tiosulfat (5,24 g), i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodat 80% vodeni rastvor sirćetne kiseline (100 ml), smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i reakciona smeša je podvrgnuta azeotropnom postupku sa toluenom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (14,3 g). MS: [M+H]<+>968,3.
B) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-2-(2-cijanoetoksi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10-oksido-10-sulfanil-2-sulfidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamid (optički izomer)
[0398] (2R,3R,4R,5R)-5-((((((2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforotioil)oksi)metil)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (1,07 g) je podvrgnut azeotropnom postupku tri puta sa dehidratacionim piridinom. Rastvoru ostatka u anhidrovanom piridinu (150 ml) dodat je 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid (4,66 g), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min pod atmosferom argona. Reakcionoj smeši su dodati 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-on (1,46 g) i voda (4,55 ml) na sobnoj temperaturi, i reakciona smeša je mešana tokom 30 min. LCMS analiza reakcione smeše pokazala je četiri pika sa istom masom ([M+H]<+>971,1), što ukazuje na formiranje četiri dijastereomera. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat), i zatim prečišćen pomoću HPLC (L-kolona2 ODS, 50x150 mm, mobilna faza: 5 mM vodeni rastvor amonijum acetata/acetonitril). Frakcija koja ima najduže vreme zadržavanja koncentrovana je pod sniženim pritiskom da da naslovno jedinjenje (379 mg). MS: [M+H]<+>982,1.
1 4
C)7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-16-((tercbutil(dimetil)silil)oksi)-15-fluoro-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer)
[0399] 40% rastvor metilamin metanola (10 ml) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-16-((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-2-(2-cijanoetoksi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10-oksido-10-sulfanil-2-sulfidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamida (optički izomer) (379 mg) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h pod atmosferom argona. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (319 mg). MS: [M+H]<+>825,1.
D) 7-((2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-hidroksi-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so
[0400] Rastvoru 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-16-((terc-butil(dimetil))silil)oksi)-15-fluoro-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (optički izomer) (319 mg) u metanolu (1 ml) dodat je trietilamin trihidrofluorid (2,52 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana na 50 °C tokom 3 h, i razblažena metanolom (10 ml). Reakcionoj smeši je dodat etoksitrimetilsilan (12 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana tokom 10 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, ostatak je razblažen metanolom, i smeša je ponovo koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodat rastvor pufera trietilamonijum acetata, i čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, i isprana acetonitrilom da da belu čvrstu supstancu. Dobijena bela čvrsta supstanca je prečišćena hromatografijom na silika gel koloni (ODS, 10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata/acetonitril). S druge strane, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) i hromatografijom na silika gel koloni (ODS, 10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata/acetonitril). Frakcija koja sadrži naslovno jedinjenje dobijeno
1
hromatografijom na silika gel koloni (ODS, 10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata/acetonitril) je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je osušen zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (195 mg). MS: [M+H]<+>711,0.
E) 7-((2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-hidroksi-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on dinatrijumova so
[0401] Dejonizovana voda (60 ml) je propuštena kroz kolonu pripremljenu pakovanjem AG (trgovačko ime) 50W-X8 katjonske izmenjivačke smole (100-200 otvori, 3,9 g) u praznu kolonu. Zatim su kroz smolu propušteni 1 M vodeni rastvor natrijum hidroksida (36 ml) i dejonizovana voda (68 ml). Dejonizovana voda (15 ml) koja sadrži 7-((2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-hidroksi-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (195 mg) je propuštena kroz smolu posle prethodno pomenutog predtretmana, i dejonizovana voda (19 ml) je propuštena kroz smolu, i dobijeni vodeni rastvor je osušen zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (165 mg).<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ 4,00-4,08 (1H, m), 4,22-4,45 (4H, m), 4,50-4,57 (1H, m), 4,81-4,84 (1H, m), 4,98-5,14 (2H, m), 5,40-5,61 (1H, m), 6,33-6,43 (2H, m), 7,28 (1H, d, J = 1,9 Hz), 7,94 (1H, s), 8,05 (1H, s), 8,21 (1H, s).<31>P NMR (121 MHz, D2O) δ 52,1, 55,3.
PRIMER 15
Sinteza 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,16-dihidroksi-2,10-dioksido-10-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l]
[1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin soli (optički izomer)
[0402]
1
A) 5-fluoro-7-((6aR,8R,9R,9aS)-9-hidroksi-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-8-il)-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on
[0403] Rastvoru 7-((2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4(7H)-ona (37,9 g) u piridinu (760 ml) dodat je 1,3-dihloro-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksan (44,4 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h pod atmosferom argona. Rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom, i ostatku su dodati etil acetat i voda. Organski sloj je ispran vodom i zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen izopropil etrom (IPE), i smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom da da naslovno jedinjenje (32,3 g). Matična tečnost je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (heksan/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (13,3 g). MS: [M+H]<+>528,2.
B) 2-cijanoetil (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il
diizopropilfosforamidit
[0404] 5-fluoro-7-((6aR,8R,9R,9aS)-9-hidroksi-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-8-il)-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (20 g) je tri puta podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom, i rastvoren u anhidrovanom DMF (100 ml). Ovom rastvoru su dodati 1H-tetrazol (2,79 g), 1-metil-1H-
1
imidazol (1,65 ml), i 3-((bis(diizopropilamino)fosfino)oksi)propannitril (24,1 ml), i smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi pod atmosferom argona, sipana u zasićeni vodeni rastvor natrijum hidrogenkarbonata, i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je uzastopno ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogenkarbonata i zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (etil acetat/heksan, koji sadrži 0,5% trietilamina) da da naslovno jedinjenje (20,8 g) kao smešu dva dijastereomera.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 0,91-1,19 (40H, m), 2,69-2,82 (2H, m), 3,46-3,73 (2H, m), 3,78-4,12 (5H, m), 4,47-4,61 (2H, m), 6,02-6,12 (1H, m), 7,14-7,23 (1H, m), 7,84-7,91 (1H, m), 12,00-12,40 (1H, br).
C) (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((((2-cijanoetoksi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il)oksi)fosforotioil)oksi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0405] Smeša (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonata (3,48g) i 2-cijanoetil (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il diizopropilfosforamidita (7,82 g) je podvrgnuta azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom, i suspendovana u anhidrovanom acetonitrilu (25 ml) i anhidrovanom THF (15 ml).5-(etilsulfanil)-2H-tetrazol (3,11 g), koji je unapred podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom, rastvoren je u anhidrovanom acetonitrilu (6 ml), rastvor je dodat prethodno pomenutoj suspenziji, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h pod atmosferom argona. Tome je dodat ((dimetilaminometiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tion (3,27 g), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 30 min. Rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (6,73 g). MS: [M+H]<+>1096,2.
D) (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((((2-cijanoetoksi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)fosforotioil)oksi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
1
[0406] (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((((2-cijanoetoksi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il)oksi)fosforotioil)oksi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (6,73 g) je rastvoren u mešanom rastvaraču THF (74,8 ml) i vode (16,6 ml), i rastvor je ohlađen ledom. Tome je dodata trifluorosirćetna kiselina (16,6 ml), i smeša je mešana na 0 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je ugašena vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (25,8 g), i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je ispran zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko anhidrovanog magnezijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (6,43 g). MS: [M+H]<+>1114,2.
E) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-cijanoetoksi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroksi-16-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloksanil)oksi)-2-oksido-10-sulfidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamid
[0407] (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((((2-cijanoetoksi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)fosforotioil)oksi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (6,43 g) je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom i anhidrovanim piridinom, i suspendovan u anhidrovanom piridinu (130 ml). Tome je dodat 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan-2-oksid (3,73 g), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h pod atmosferom argona. Tome su dodati voda (5,17 ml) i jod (1,90 g), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 1 h. Reakciona smeša je ugašena natrijum tiosulfatom (7,16 g) i vodom (3,6 ml), i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je ispran vodom i zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko anhidrovanog magnezijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (4,60 g). MS: [M+H]<+>1112,2.
F) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2-hidroksi-16-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-2,10-dioksido-10-
1
sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer)
[0408] U N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-cijanoetoksi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroksi-16-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloksanil)oksi)-2-oksido-10-sulfidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamid (6,42 g) je dodat 40% rastvor metilamin metanola (30 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h pod atmosferom argona. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat). Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću HPLC (L-kolona2 ODS, 50x150 mm, mobilna faza: 5 mM vodeni rastvor amonijum acetata/acetonitril), dobijena frakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je osušen zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (420 mg). MS: [M+H]<+>955,2.
G) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,16-dihidroksi-2,10-dioksido-10-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trimetilamin so (optički izomer)
[0409] U 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2-hidroksi-16-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-2,10-dioksido-10-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer, poreklom od tR2) (420 mg) dodat je trietilamin trihidrofluorid (9,68 ml), i smeša je mešana na 50 °C tokom 7,5 h. Reakcionoj smeši je dodat etoksitrimetilsilan (36,3 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana tokom 30 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 silika gel koloni (10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata/acetonitril), i osušen zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (298 mg).<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ1,13-1,29 (16H, m), 3,12 (11H, q, J = 7,2 Hz), 3,99-4,29 (4H, m), 4,31-4,43 (2H, m), 4,50 (1H, d, J = 9,1 Hz), 4,81-5,08 (3H, m), 5,39-5,61 (1H, m), 6,30-6,42 (2H,
1
m), 7,24 (1H, d, J = 1,9 Hz), 7,92 (1H, s), 8,09 (1H, s), 8,19 (1H, s).<31>P NMR (121 MHz, D2O) δ52,2,1,63.
PRIMER 16 (za referencu)
Sinteza 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,18-trihidroksi-2,10-dioksidoheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin soli (optički izomer)
[0410]
A) (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cijanoetoksi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il)oksi)fosforil)oksi)metil)-2,5-dioksabiciklo[2.2.1]heptan-7-il hidrogen fosfonat
[0411] (1S,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-(hidroksimetil)-2,5-dioksabiciklo[2.2.1]heptan-7-il hidrogen fosfonat (2,00 g) i 2-cijanoetil (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il diizopropilfosforamidit (4,23 g) su podvrgnuti azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom (oko 50 ml, tri puta), i suspendovani u anhidrovanom THF (16 ml). 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazol (1,75 g), koji je unapred podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom (oko 30 ml, tri puta), rastvoren je u
1 1
anhidrovanom acetonitrilu (16 ml), rastvor je dodat gore pomenutoj suspenziji, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 h pod tokom argona. Tome je dodat 70% vodeni rastvor terc-butil hidroperoksida (1,86 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 30 min. Reakciona smeša je ugašena sa 10% vodenim rastvorom natrijum tiosulfata (13 ml), i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je uzastopno podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa acetonitrilom (oko 80 ml) i toluenom (oko 80 ml), ostatak je podvrgnut hromatografiji na silika gel koloni (metanol/etil acetat), i ciljna frakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom da da naslovno jedinjenje (5,36 g) kao belu amorfnu čvrstu supstancu (smeša dva dijastereomera). MS: [M+H]<+>1090,2.
B) (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cijanoetoksi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)fosforil)oksi)metil)-2,5-dioksabiciklo[2.2.1]heptan-7-il hidrogen fosfonat
[0412] (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cijanoetoksi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il)oksi)fosforil)oksi)metil)-2,5-dioksabiciklo[2.2.1]heptan-7-il hidrogen fosfonat (5,36 g) je rastvoren u mešanom rastvaraču THF (60 ml) i vode (13 ml), i rastvor je ohlađen ledom. Tome je dodata trifluorosirćetna kiselina (13,18 ml), i smeša je mešana na 0 °C tokom 4 h. Reakciona smeša je malo po malo ugašena rastvorom natrijum bikarbonata (20,65 g) u vodi (250 ml), zasićena sa NaCl, i ekstrahovana etil acetatom-THF (3:1). Organski sloj je ispran zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko anhidrovanog magnezijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na silika gel koloni (metanol/etil acetat), i ciljna frakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom da da naslovno jedinjenje (3,06 g) kao belu amorfnu čvrstu supstancu (smeša dva dijastereomera). MS: [M+H]<+>1108,3.
C) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-cijanoetoksi)-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroksi-18-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloksanil)oksi)-2,10-dioksidoheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14(12H)-il)-9H-purin-6-il)benzamid
1 2
[0413] (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cijanoetoksi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)fosforil)oksi)metil)-2,5-dioksabiciklo[2.2.1]heptan-7-il hidrogen fosfonat (3,06 g) je uzastopno podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom (oko 100 ml) i anhidrovanim piridinom (oko 100 ml), i rastvoren u anhidrovanom piridinu (75 ml). Tome je dodat 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan-2-oksid (1,78 g), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h pod tokom argona. Tome su dodati voda (1,74 ml) i jod (911 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 15 min. Reakciona smeša je ugašena sa 10% vodenim rastvorom natrijum tiosulfata (7,5 ml), i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (100 ml), i smeša je ekstrahovana etil acetatom-THF (3:1). Organski sloj je ispran zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko anhidrovanog magnezijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Tome je dodat toluen (oko 100 ml), i smeša je ponovo koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na silika gel koloni (metanol/etil acetat), i ciljna frakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom da da naslovno jedinjenje (2,38 g) kao belu amorfnu čvrstu supstancu (smeša dva dijastereomera). MS: [M+H]<+>1106,3.
D) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10-dihidroksi-18-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloksanil)oksi)-2,10-dioksidoheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on
[0414] N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-cijanoetoksi)-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroksi-18-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloksanil)oksi)-2,10-dioksidoheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14(12H)-il)-9H-purin-6-il)benzamid (2,38 g) je rastvoren u 40% rastvoru metilamin metanola (40 ml), rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Tome je dodat toluen (oko 80 ml), i smeša je ponovo koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podvrgnut hromatografiji na silika gel koloni (metanol/etil
1
acetat), i ciljna frakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom da da naslovno jedinjenje (756 mg) kao belu čvrstu supstancu. MS: [M+H]<+>949,2.
E) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,18-trihidroksi-2,10-dioksidoheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (optički izomer)
[0415] 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10-dihidroksi-18-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloksanil)oksi)-2,10-dioksidoheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (756 mg) je rastvoren u metanolu (2 ml) i trietilaminu (0,8 ml), u to je dodat trietilamin trihidrofluorid (3,90 ml), i smeša je mešana na 50 °C tokom 2 h. Reakcionoj smeši je omogućeno da se ohladi na sobnu temperaturu, neutralisana je sa 1 M vodenim rastvorom trietilamonijum hidrogenkarbonata (110 ml), i mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je podvrgnut hromatografiji na ODS koloni (acetonitril/10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata). Ciljna frakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je osušen zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (504 mg) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ 1,20 (18H, t, J = 7,4 Hz), 3,12 (12H, q, J = 7,2 Hz), 4,02-4,16 (4H, m), 4,23-4,37 (3H, m), 4,55 (1H, d, J = 4,5 Hz), 4,82-4,93 (3H, m), 6,12 (1H, s), 6,39 (1H, dd, J = 8,3, 1,5 Hz), 7,19 (1H, d, J = 1,9 Hz), 7,96 (1H, s), 8,11 (1H, s), 8,17 (1H, s).<31>P NMR (121 MHz, D2O) δ -1,91, -1,80.
PRIMER 17 (za referencu)
Sinteza 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,18-dihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfanilheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trimetilamin soli (optički izomer)
[0416]
1 4
A) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-cijanoetoksi)-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-18-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-2,10-dioksido-2-sulfanilheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14(12H)-il)-9H-purin-6-il)benzamid
[0417] (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cijanoetoksi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)fosforil)oksi)metil)-2,5-dioksabiciklo[2.2.1]heptan-7-il hidrogen fosfonat (3,71 g) je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom i anhidrovanim piridinom, i suspendovan u anhidrovanom piridinu (70 ml). Tome je dodat 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid (2,15 g), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h pod atmosferom argona. Tome je dodat 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-on (674 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 1 h. Reakcionoj smeši je dodat zasićeni vodeni rastvor natrijum hidrogenkarbonata, i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je ispran zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (2,78 g). MS: [M+H]<+>1122,2
1
B) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10-hidroksi-18-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-2,10-dioksido-2-sulfanilheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer)
[0418] N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-cijanoetoksi)-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-18-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-2,10-dioksido-2-sulfanilheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14(12H)-il)-9H-purin-6-il)benzamid (2,78 g) je rastvoren u 40% rastvoru metilamin metanola (50 ml), rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 h pod atmosferom argona, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat). Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću HPLC (L-kolona2 ODS, 50x150 mm, mobilna faza: 5 mM vodeni rastvor amonijum acetata/acetonitril) da da naslovno jedinjenje (30 mg). MS: [M+H]<+>965,3.
C) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,18-dihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfanilheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (optički izomer)
[0419] U 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10-hidroksi-18-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-2,10-dioksido-2-sulfanilheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer) (30 mg) dodati su trietilamin trihidrofluorid (0,70 ml) i metanol (1 ml), i smeša je mešana na 50 °C tokom 3 h. Reakcionom rastvoru je dodat etoksi(trimetil)silan (2,5 ml), smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 silika gel koloni (10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata/acetonitril), i dobijena čvrsta supstanca je osušena zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (25 mg).<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ1,19 (18H, t, J = 7,4 Hz), 3,11 (12H, q, J = 7,2 Hz), 3,99-4,09 (3H, m), 4,09-4,17 (2H, m), 4,22-4,29 (1H, m), 4,34-4,38 (1H, m), 4,50-4,54 (2H, m), 4,90-4,96 (1H, m), 5,06 (1H,
1
s), 6,11 (1H, s), 6,35 (1H, dd, J = 8,3, 1,1 Hz), 7,19 (1H, d, J = 2,3 Hz), 7,94 (1H, s), 8,08 (1H, s), 8,16 (1H, s).<31>P NMR (121 MHz, D2O) δ 55,76, -1,56.
PRIMER 18 (za referencu)
Sinteza 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,18-dihidroksi-2,10-dioksido-10-sulfanilheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin soli (optički izomer)
[0420]
A) (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cijanoetoksi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il)oksi)fosforotioil)oksi)metil)-2,5-dioksabiciklo[2.2.1]heptan-7-il hidrogen fosfonat
1
[0421] Smeša (1S,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-(hidroksimetil)-2,5-dioksabiciklo[2.2.1]heptan-7-il hidrogen fosfonata (3,0 g) i 2-cijanoetil (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il diizopropilfosforamidita (5,86 g) je podvrgnuta azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom, i suspendovana u anhidrovanom THF (25 ml). 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazol (2,62 g), koji je unapred podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom, rastvoren je u anhidrovanom acetonitrilu (25 ml), rastvor je dodat prethodno pomenutoj suspenziji, i smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi pod atmosferom argona. Tome je dodat ((dimetilaminometiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tion (2,75 g), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 30 min. Rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (4,96 g). MS: [M+H]<+>1106,3.
B) (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cijanoetoksi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)fosforotioil)oksi)metil)-2,5-dioksabiciklo[2.2.1]heptan-7-il hidrogen fosfonat
[0422] (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cijanoetoksi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il)oksi)fosforotioil)oksi)metil)-2,5-dioksabiciklo[2.2.1]heptan-7-il hidrogen fosfonat (4,96 g) je rastvoren u mešanom rastvaraču THF (60 ml) i vode (12 ml), i rastvor je ohlađen ledom. Tome je dodata trifluorosirćetna kiselina (12,1 ml), i smeša je mešana na 0 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je ugašena rastvorom natrijum bikarbonata (18,8 g) u vodi (100 ml), i ekstrahovana etil acetatom-THF (3:1). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (3,77 g). MS: [M+H]<+>1124,2.
C) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-cijanoetoksi)-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroksi-18-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-2-oksido-10-sulfidoheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14(12H)-il)-9H-purin-6-il)benzamid
1
[0423] (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((2-cijanoetoksi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)fosforotioil)oksi)metil)-2,5-dioksabiciklo[2.2.1]heptan-7-il hidrogen fosfonat (3,77 g) je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom i anhidrovanim piridinom, i suspendovan u anhidrovanom piridinu (70 ml). Tome je dodat 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid (2,17 g), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h pod atmosferom argona. Tome su dodati voda (2,12 ml) i jod (1,11 g), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 1 h. Reakciona smeša je ugašena sa 10% vodenim rastvorom natrijum tiosulfata (15 ml), i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (100 ml), i smeša je ekstrahovana etil acetatom-THF (3:1). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (2,21 g). MS: [M+H]<+>1122,2.
D) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2-hidroksi-18-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloksanil)oksi)-2,10-dioksido-10-sulfanil-heksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer)
[0424] U N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-10-(2-cijanoetoksi)-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroksi-18-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-2-oksido-10-sulfidoheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14(12H)-il)-9H-purin-6-il)benzamid (2,38 g) je dodat 40% rastvor metilamin metanola (40 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h pod atmosferom argona. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat). Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću HPLC (L-kolona2 ODS, 50x150 mm, mobilna faza: 5 mM vodeni rastvor amonijum acetata/acetonitril), dobijena frakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je osušen zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (710 mg). MS: [M+H]<+>965,2.
1
E) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,18-dihidroksi-2,10-dioksido-10-sulfanilheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (optički izomer)
[0425] Rastvoru 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2-hidroksi-18-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloksanil)oksi)-2,10-dioksido-10-sulfanilheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (optički izomer, poreklom od tR2) (710 mg) u metanolu (20 ml) dodat je trietilamin trihidrofluorid (4,80 ml), i smeša je mešana na 50 °C tokom 3 h. Reakcionoj smeši je dodat etoksitrimetilsilan (2,29 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana tokom 30 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 silika gela koloni (10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata/acetonitril), i osušena zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (530 mg).<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ1,22 (18H, t, J = 7,2 Hz), 3,14 (12H, q, J = 7,6 Hz), 4,03-4,19 (4H, m), 4,25-4,41 (3H, m), 4,65 (1H, d, J = 4,5 Hz), 4,84 (1H, d, J= 4,5 Hz), 4,91 (1H, s), 4,99 (1H, ddd, J = 10,1, 8,2, 4,3 Hz), 6,14 (1H, s), 6,39 (1H, d, J = 7,9 Hz), 7,17 (1H, d, J = 2,3 Hz), 7,97 (1H, s), 8,11 (1H, s), 8,19 (1H, s).<31>P NMR (121 MHz, D2O) δ52,5,1,74.
PRIMER 19
Sinteza 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,10,16-trihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-on di-trietilamin soli (optički izomer)
[0426]
1
A) (2R,3R,4R,5R)-2-((((2-cijanoetoksi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il)oksi)fosforil)oksi)metil)-4-fluoro-5-(2-izobutilamido-6-okso-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0427] 2'-dezoksi-2'-fluoro-3'-O-(hidroksi(oksido)fosforanil)-N-izobutirilguanozin (680 mg) i 2-cijanoetil (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il diizopropilfosforamidit (1535 mg) su podvrgnuti azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom (tri puta), i suspendovani u anhidrovanom THF (10,00 ml). Suspenziji je dodata smeša 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazola (633 mg) (koji je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom) i anhidrovanog acetonitrila (10 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 7 h pod atmosferom argona. Smeši je dodata smeša 2-cijanoetil (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il diizopropilfosforamidita (1181 mg, 1,62 mmol) (koji je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom) i anhidrovanog acetonitrila (3 ml), i smeša 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazola (633 mg) (koji je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom) i anhidrovanog acetonitrila (3 ml), i smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi pod atmosferom argona. Reakcionoj smeši je dodat 70% vodeni rastvor terc-butil hidroperoksida
1 1
(0,674 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 30 min. Reakcionoj smeši je dodata smeša natrijum tiosulfat pentahidrata (2817 mg) i vode (4 ml), i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (1260 mg). MS: [M+H]<+>1062,3.
B) (2R,3R,4R,5R)-2-((((2-cijanoetoksi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)fosforil)oksi)metil)-4-fluoro-5-(2-izobutilamido-6-okso-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0428] Smeši (2R,3R,4R,5R)-2-((((2-cijanoetoksi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo)[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-fl[1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il)oksi)fosforil)oksi)metil)-4-fluoro-5-(2-izobutilamido-6-okso-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonata (1,26 g), THF (16 ml) i vode (4 ml) dodata je trifluorosirćetna kiselina (3,18 ml) na 0 °C, i smeša je mešana tokom 4 h. Smeši je dodat vodeni rastvor natrijum hidrogenkarbonata (4,98 g), i smeša je zasićena natrijum hloridom. Smeša je ekstrahovana etil acetatom/THF, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (1000 mg). MS: [M+H]<+>1080,3.
C) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-cijanoetoksi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroksi-16-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-6-okso-6,9-dihidro-1H-purin-2-il)-2-metilpropanamid
[0429] (2R,3R,4F,5R)-2-((((2-cijanoetoksi)(((2R,3F,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)fosforil)oksi)metil)-4-fluoro-5-(2-izobutilamido-6-okso-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (1 g) je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom i anhidrovanim piridinom, i suspendovan u anhidrovanom piridinu (24 ml). Tome je dodat 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid (598 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min pod atmosferom argona. Tome su dodati voda (0,584 ml) i jod (305 mg), i smeša je mešana na sobnoj
1 2
temperaturi tokom dopunskih 25 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (800 mg). MS: [M+H]<+>1078,2
D) 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,10-dihidroksi-16-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-on (optički izomer)
[0430] U N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-cijanoetoksi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroksi-16-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-6-okso-6,9-dihidro-1H-purin-2-il)-2-metilpropanamid (800 mg, 0,74 mmol) je dodat 33% rastvor metilamin etanola (30 ml), smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi pod atmosferom argona, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat). Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću HPLC (L-kolona2 ODS, 50x150 mm, mobilna faza: 5 mM vodeni rastvor amonijum acetata/acetonitril) da da naslovno jedinjenje (163,4 mg). MS: [M+H]<+>955,3.
E) 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,10,16-trihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-on di-trietilamin so (optički izomer)
[0431] Smeša 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,10-dihidroksi-16-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (optički izomer) (21,4 mg), trietilamin trihidrofluorida (0,183 ml) i metanola (0,07 ml) je mešana na 50 °C tokom 1 h pod atmosferom argona. Reakcionoj smeši je dodat etoksi(trimetil)silan (1,046 ml), smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 1 h, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 silika gel
1
koloni (10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata/acetonitril), i osušen zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (4,6 mg).<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ 1,20 (18H, t, J = 7,3 Hz), 3,13 (12H, q, J = 7,3 Hz), 4,07 (2H, d, J = 11,1 Hz), 4,25 (2H, d, J = 7,6 Hz), 4,33-4,99 (4H, m), 5,04-5,25 (1H, m), 5,41-5,70 (1H, m), 6,17 (1H, d, J = 19,0 Hz), 6,38 (1H, d, J = 9,2 Hz), 7,32 (1H, s), 7,79 (1H, brs), 7,95 (1H, s).<31>P NMR (121 MHz, D2O) δ -1,61, -1,52.
PRIMER 20
Sinteza 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,15,16-tetrahidroksi-2-oksido-10-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin soli (optički izomer)
[0432]
A) (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-((((2-cijanoetoksi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il)oksi)fosforotioil)oksi)metil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
1 4
[0433] Smeša (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonata (3,0 g) i 2-cijanoetil (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il diizopropilfosforamidita (5,36 g) je podvrgnuta azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom, i suspendovana u anhidrovanom acetonitrilu (25 ml) i anhidrovanom THF (15 ml). 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazol (2,13 g), koji je unapred podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom, rastvoren je u anhidrovanom acetonitrilu (15 ml), rastvor je dodat prethodno pomenutoj suspenziji, i smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi pod atmosferom argona. Tome je dodat ((dimetilaminometiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tion (2,24 g), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 1 h. Rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (5,15 g). MS: [M+H]<+>1208,3.
B) (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-((((2-cijanoetoksi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)fosforotioil)oksi)metil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0434] (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-((((2-cijanoetoksi)(((6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il)oksi)fosforotioil)oksi)metil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (5,15 g) je rastvoren u mešanom rastvaraču THF (48 ml) i vode (10 ml), i rastvor je ohlađen ledom. Tome je dodata trifluorosirćetna kiselina (11,5 ml), i smeša je mešana na 0 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je ugašena rastvorom natrijum bikarbonata (12,5 g) u vodi (100 ml), i ekstrahovana etil acetatom-THF. Organski sloj je ispran zasićenim slanim rastvorom, i osušen preko natrijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (5,13 g). MS: [M+H]<+>1226,4.
C) N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-10-(2-cijanoetoksi)-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroksi-16-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloksanil)oksi)-2-oksido-10-sulfidooktahidro-12H-
1
5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamid
[0435] (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2-((((2-cijanoetoksi)(((2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-4-okso-3H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7(4H)-il)-4-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il)oksi)fosforotioil)oksi)metil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (5,13 g) je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom i anhidrovanim piridinom, i suspendovan u anhidrovanom piridinu (100 ml). Tome je dodat 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid (2,70 g), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h pod atmosferom argona. Tome su dodati voda (2,64 g) i jod (1,38 g), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 1 h. Reakciona smeša je ugašena natrijum tiosulfatom (5,19 g) i vodom (2,64 g), i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je ispran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog magnezijum sulfata, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (3,53 g). MS: [M+H]<+>1224,4.
D) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-(((1,1-dimetiletil)dimetilsilil)oksi)oktahidro-2,10-dihidroksi-16-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetrakis(1-metiletil)disiloksanil)oksi)-2-oksido-10-sulfanil-5,8-metano-12H-furo[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer)
[0436] U N-(9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-((terc-butil(dimetil)silil)oksi)-10-(2-cijanoetoksi)-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroksi-16-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetra(propan-2-il)disiloksanil)oksi)-2-oksido-10-sulfidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il)-9H-purin-6-il)benzamid (3,5 g) dodat je 40% rastvor metilamin metanola (50 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h pod atmosferom argona. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat). Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću HPLC (L-kolona2 ODS, 50x150 mm, mobilna faza: 5 mM vodeni rastvor amonijum acetata/acetonitril), dobijena frakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je osušen zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (210 mg). MS: [M+H]<+>1067,4.
1
E) 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,15,16-tetrahidroksi-2-oksido-10-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (optički izomer)
[0437] Rastvoru 7-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-(((1,1-dimetiletil)dimetilsilil)oksi)oktahidro-2,10-dihidroksi-16-((3-hidroksi-1,1,3,3-tetrakis(1-metiletil)disiloksanil)oksi)-2-oksido-10-sulfanil-5,8-metano-12H-furo[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il)-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-ona (optički izomer, poreklom od tR2) (210 mg) u metanolu (1,0 ml)-trietilaminu (0,4 ml) dodat je trietilamin trihidrofluorid (0,962 ml), i smeša je mešana na 50 °C tokom 2,5 h. Reakcionoj smeši je dodat etoksitrimetilsilan (4,59 ml) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana tokom 30 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 silika gel koloni (10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata/acetonitril), i osušen zamrzavanjem da da naslovno jedinjenje (125 mg).
<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ1,13-1,28 (18H, m), 3,12 (12H, q, J = 7,2 Hz), 4,02-4,11 (1H, m), 4,13-4,25 (2H, m), 4,27-4,40 (2H, m), 4,46 (1H, d, J = 6,4 Hz), 4,73-4,79 (2H, m), 4,80-4,91 (1H, m), 5,02 (1H, td, J = 8,8, 4,2 Hz), 6,08 (1H, d, J = 1,7 Hz), 6,35 (1H, d, J = 8,1 Hz), 7,27 (1H, d, J = 1,7 Hz), 7,93 (1H, s), 8,14 (1H, s), 8,18 (1H, s).<31>P NMR (121 MHz, D2O) δ52,4, 1,21.
PRIMER 23
Sinteza 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,15,16-trihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il]-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin soli (optički izomer 1 i 2)
[0438]
1
A) (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}-2-({[(2-cijanoetoksi){[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il]oksi}fosforil]oksi}metil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0439] (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}-2-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (250 mg) i 2-cijanoetil (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il diizopropilfosforamidoit (359 mg) (Primer 24 korak C) su podvrgnuti azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom, i tome su dodati anhidrovani acetonitril (1,1 ml) i anhidrovani tetrahidrofuran (0,7 ml). Smeši je dodat rastvor 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazola (175 mg) (koji je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom) u anhidrovanom acetonitrilu (0,75 ml), i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Tome je dodat terc-butil hidroperoksid (5,5 mol/l) u nonanu (0,25 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 40 min. Reakciona smeša je ohlađena u ledenoj kupki i dodat je rastvor natrijum tiosulfata (345 mg) u vodi (0,275 ml). Smeši je omogućeno da se meša na sobnoj temperaturi tokom 15 min i koncentrovana je pod sniženim
1
pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/dihlorometan) da da naslovno jedinjenje (318 mg) kao smešu dijastereomera. MS:
[M+H]<+>1206,3
B) (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}-2-({[(2-cijanoetoksi)({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroksimetil)-4-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]tetrahidrofuran-3-il}oksi)fosforil]oksi}metil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0440] (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}-2-({[(2-cijanoetoksi){[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il]oksi}fosforil]oksi}metil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (315 mg) je rastvoren u smeši tetrahidrofurana (2,8 ml) i vode (0,71 ml) i rastvoru je omogućeno da se meša i ohladi u ledenoj kupki. Kap po kap je dodata trifluorosirćetna kiselina (0,71 ml) i smeši je omogućeno da se meša na 0-5 °C tokom 2 h i 15 min. Natrijum bikarbonat (1,14 g) je postepeno dodat reakcionoj smeši, uz održavanje dobrog mešanja, praćeno dodavanjem vode (3 ml) i etil acetata (10 ml). Odvojeni vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (10 ml). Kombinovane organske materije su isprane slanim rastvorom (3 ml), osušene preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirane, i rastvarač je isparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/metilen hlorid) da da naslovno jedinjenje (145 mg). MS: [M+H]<+>1224,3
C) N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}-10-(2-cijanoetoksi)-7-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il}-9H-purin-6-il)benzamid
[0441] (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}-2-({[(2-cijanoetoksi)({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroksimetil)-4-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]tetrahidrofuran-3-il}oksi)fosforil]oksi}metil)tetrahidrofuran-3-
1
il hidrogen fosfonat (143 mg) je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom i u to je dodat anhidrovani piridin (2,3 ml). Smeši je dodat 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid (75 mg), i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 45 min. Tome su dodati voda (75 μl) i 3H-1,2-benzoditiol-3-on 1,1-dioksid (29 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 40 min. Reakcionoj smeši je dodat rastvor natrijum tiosulfat pentahidrata (150 mg) u vodi (0,35 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 min. Smeša je koncentrovana, u to je dodat toluen, i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom (ponoviti 4X). Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/dihlorometan) da da naslovno jedinjenje (84 mg) kao smešu dijastereomera. MS: [M+H]<+>1238,3
D) 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-{[tercbutil(dimetil)silil]oksi}-10-hidroksi-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il}-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on
[0442] U N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}-10-(2-cijanoetoksi)-7-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il}-9H-purin-6-il)benzamid (83 mg) je dodat 33% rastvor metilamin etanola (2,0 ml), i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom reverznih faza (ISCO RediSepRf Gold HP C18 15,5 g kolona) eluiran sa 0 do 70% ACN u 10 mM aq NH4OAc da da dva izolovana pojedinačna izomera naslovnih jedinjenja: pik 1 (rana frakcija, 11 mg) i pik 2 (kasna frakcija, 44,5 mg). MS: [M+H]<+>1081,3
E) 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,15,16-trihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il]-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (optički izomer 1)
1
[0443] U 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-{[tercbutil(dimetil)silil]oksi}-10-hidroksi-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il}-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (324 mg, pik 2/kasna frakcija iz koraka D) dodati su piridin (6,0 ml) i trietilamin trihidrofluorid (0,303 ml). Reakciona smeša je mešana na 55 °C tokom 16 h. LCMS analiza je pokazala neke od monozaštićenih intermedijera. Dodat je metanol (2,0 ml) i reakciona smeša je mešana na 55 °C tokom 3 h. LCMS je zatim pokazala završenu reakciju. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i dodati su voda (6,7 ml) i kalcijum hlorid (700 mg). Rezultujuća suspenzija je mešana tokom 1 h i filtrirana na Celite® jastučetu. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom reverznih faza (ISCO RediSepRf Gold HP C18Aq kolona) eluiran sa 0 do 15% ACN u 10 mM aq trietilamonijum acetatu da da naslovno jedinjenje (195 mg). MS:
[M+H]<+>707,1<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1,27 (18H, t, J = 7,3 Hz), 3,19 (12H, q, J = 7,3 Hz), 3,35 (3H, s), 4,06-4,10 (1H, m), 4,18-4,26 (1H, m), 4,32-4,37 (1H, m), 4,39-4,54 (3H, m), 4,63 (1H, d, J = 4,0 Hz), 4,80-4,82 (1H, m), 5,03-5,12 (2H, m), 6,15-6,17 (1H, m), 6,35-6,39 (1H, m), 7,33-7,37 (1H, m), 8,13 (1H, s), 8,15 (1H, s), 8,27 (1H, s).<31>P NMR (162 MHz, D2O) δ - 2,22, 54,80.<19>F NMR (376 MHz, D2O) δ -164,6.
F) 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,15,16-trihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il]-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (optički izomer 2)
[0444] Optički izomer 2 je pripremljen upotrebom istr procerure kao i za optički izomer 1. 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-{[tercbutil(dimetil)silil]oksi}-10-hidroksi-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il}-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (24,5 mg, pik 1/rana frakcija iz koraka D) daje naslovno jedinjenje (11,8 mg). MS: [M+H]<+>707,1.<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm 1,25 (18 H, t, J=7,22 Hz), 3,17 (q, J=7,24 Hz, 12 H), 3,35 (3H, s), 4,12 - 4,22 (3H, m), 4,40 - 4,53 (3H, m), 4,62 (1H, m), 4,83 - 4,90 (1H, m), 4,93 - 4,98 (1H, m), 5,09 - 5,15 (1H, m), 6,16 (1H, s), 6,28
1 1
- 6,36 (1H, m), 7,50 (1H, s), 8,12 (1H, s), 8,15 (1H, s), 8,31 (1H, s).<31>P NMR (162 MHz, D2O) δ -2,42, 54,11.<19>F NMR (376 MHz, D2O) δ -165,54
PRIMER 24
Sinteza 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il]-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin soli (optički izomer 1 i 2)
[0445]
A) 7-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]-5-fluoro-3-metilpirolo[2,3-d]pirimidin-4-on.
1 2
[0446] 7-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]-5-fluoro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (300 mg) je rastvoren u N,N-dimetilformamidu (3,30 ml) i dodat je kalijum karbonat (192 mg). Suspenzija je ohlađena u ledenoj kupki. Dodat je jodometan (0,080 ml). Smeša je mešana sa hlađenjem tokom 5 min i zatim je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je koncentrovana i dodata je voda, neutralisana sa 1M HCl do pH ~ 6. Rezultujuća čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i osušena pod vakuumom preko noći da da naslovno jedinjenje (266 mg). MS: [M+H]<+>300,1.
B) 5-fluoro-7-[(6aR,8R,9R,9aS)-9-hidroksi-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-8-il]-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on.
[0447] 7-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]-5-fluoro-3-metil-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (985 mg) (pre-azeotropiran sa acetonitrilom 3 puta i osušen u vakuumu tokom 5 sati) rastvoren je u piridinu (9,75 ml) i N,N-dimetilformamidu (4,80 ml). Posle 15 min mešanja, kap po kap je dodat 1,3-dihloro-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksan (1,02 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i azeotropirana sa toluenom. Ostatak je podeljen između EtOAc (120 ml) i vode (50 ml). Odvojeni organski sloj je ispran vodom (2 X 50 ml) i slanim rastvorom (50 ml), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom upotrebom EtOAc/heksana da da naslovno jedinjenje (1,41 g). MS: [M+H]<+>542,3.
C) 2-cijanoetil(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il diizopropilfosforamidoit
[0448] U flasku sa zaobljenim dnom od 15 ml 5-fluoro-7-[(6aR,8R,9R,9aS)-9-hidroksi-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-8-il]-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (1,41 g) je azeotropiran sa suvim acetonitrilom (3 X 5 ml), rastvoren u suvom N,N-dimetilformamidu (6,17 ml) pod argonom. Dodati su 1H-tetrazol 0,45 M u acetonitrilu (7,05 ml), 1-metil-1H-imidazol (123 μl) i 2-cijanoetil N,N,N’,N’-tetraizopropilfosforodiamidit (1,86 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Smeša je razblažena sa 70 ml EtOAc, isprana zasićenim NaHCO3(X 2) i slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je
1
prečišćen hromatografijom na silika gelu upotrebom EtOAc/heksana (0,5% Et3N) da da naslovno jedinjenje (1,87 g). MS: [M+H]<+>742,4.
D) (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[(2-cijanoetoksi){[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il]oksi}fosforil]oksi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
[0449] U flasku sa zaobljenim dnom od 100 ml 2-cijanoetil (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il diizopropilfosforamidoit (937 mg) i (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-4-fluoro-2-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (425 mg) su azeotropirani sa suvim CH3CN (3 X 5 ml), suspendovani u suvom tetrahidrofuranu (1,80 ml) i acetonitrilu (2,95 ml) pod argonom. Dodat je rastvor 5-(etiltio)-1 H-tetrazola (380 mg) (pre-azeotropiran sa acetonitrilom 3 x 5 ml) u suvom acetonitrilu (1,80 ml). Smeši je omogućeno da se meša na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Dodat je terc-butil hidroperoksid (5,5 mol/l) u nonanu (425 μl). Smeša je mešana tokom 40 min na sobnoj temperaturi zatim je ohlađena u ledenoj kupki. Rastvor natrijum tiosulfata (500,0 mg) u vodi (700 μl) je dodat i smeša je mešana tokom 10 min. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/DCM). Dobijeno je naslovno jedinjenje (1,10 g) kao smeša dva optička izomera MS: [M+H]<+>1094,3.
E) (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[(2-cijanoetoksi)({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroksimetil)-4-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]tetrahidrofuran-3-il}oksi)fosforil]oksi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat.
[0450] Rastvoru (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[(2-cijanoetoksi){[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il]oksi}fosforil]oksi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonata (1,10 g) u tetrahidrofuranu (11,0 ml) i vodi (2,50 ml) ohlađenom ledenom kupkom polako je dodata trifluorosirćetna kiselina (2,50 ml). Smeša je mešana sa hlađenjem tokom 4 sata. Dodat je
1 4
natrijum bikarbonat (3800 mg), praćeno sa 8 ml vode. Smeša je mešana tokom 5 min, dovedena na sobnu temperaturu i dva puta ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4, filtriran i filtrat je isparen pod sniženim pritiskom da da sirovi proizvod. Hromatografijom upotrebom silika gel kolone (metanol/DCM) dobijeno je naslovno jedinjenje (1,14 g). MS: [M+H]<+>1112,3.
F) N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-cijanoetoksi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il}-9H-purin-6-il)benzamid.
[0451] U flasku sa zaobljenim dnom od 100 ml (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[(2-cijanoetoksi)({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroksimetil)-4-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]tetrahidrofuran-3-il}oksi)fosforil]oksi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (149 mg) je azeotropiran sa acetonitrilom (3 X 4 ml) i osušen pod vakuumom, rastvoren u suvom piridinu (2,35 ml) i ohlađen u ledenoj kupki. Dodat je 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosforinan 2-oksid (180 mg) u piridinu (0,120 ml). Smeši je omogućeno da se meša na sobnoj temperaturi tokom 1,5 sata. Dodata je voda (70,3 μl), praćeno 3H-1,2-benzoditiol-3-onom (56,2 mg). Smeši je omogućeno da se meša na sobnoj temperaturi tokom 40 min. Dodat je natrijum tiosulfat (135 mg) u 1 ml vode. Smeša je mešana tokom 10 min, koncentrovana pod sniženim pritiskom, azeotropirana sa toluenom da se ukloni piridin. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/DCM) da da naslovno jedinjenje kao smešu dva optička izomera (63,6 mg). MS: [M+H]<+>1126,3.
G) 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10-hidroksi-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il}-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on
[0452] Smeša dva izomera N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-cijanoetoksi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil))oksi]-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-
1
metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il}-9H-purin-6-il)benzamida (60,7 mg) je mešana u metilaminu (33 tež. %) u etanolu (3,00 ml) na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Isparljiva supstanca je isparena pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom reverznih faza (ISCO RediSepRf Gold HP C18 kolona) eluiran sa 0 do 50% ACN u 10 mM aq NH4OAc da da dva izolovana pojedinačna izomera naslovnih jedinjenja: pik 1 (rana frakcija, 12 mg) i pik 2 (kasna frakcija, 35,6 mg). MS: [M+H]<+>969,3.
H) 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il]-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (optički izomer 1)
[0453] Polipropilenska konusna tuba od 15 ml je napunjena sa 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10-hidroksi-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il}-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-onom (35,6 mg, pik 2/kasna frakcija iz koraka G). Dodat je piridin (273 μl), praćeno trietilamin trihidrofluoridom (27,3 μl) i trietilaminom (414 μl). Smeši je omogućeno da se meša na sobnoj temperaturi preko noći i na 50 °C tokom 2 sata. Reakciona smeša je ohlađena u ledenoj kupki i razblažena vodom (1,3 ml). Polako je dodat rastvor kalcijum hlorida (146,0 mg) u vodi (1,0 ml). Smeša je mešana tokom 30 min zatim je filtrirana kroz Celite® čep. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom reverznih faza (ISCO RediSepRf Gold HP C18Aq kolona) eluiran sa 0 do 10% ACN u 10 mM aq trietilamonijum acetatu da da naslovno jedinjenje (23,9 mg). MS: [M+H]<+>709,2.<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ 8,29 - 8,24 (m, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,08 - 8,04 (m, 1H), 7,46 - 7,40 (m, 1H), 6,48 (d, 1H, J=12 Hz), 6,37 (d, 1H, J=16 Hz), 5,80 - 5,57 (m, 1H), 5,33 - 5,12 (m, 1H), 5,05 - 4,95 (m, 1H), 4,50 - 4,42 (m, 2H), 4,41 - 4,34 (m, 1H), 4,34 - 4,24 (m, 2H), 4,08 - 3,96 (m, 1H), 3,57 (s, 3H), 3,52 - 3,48 (m, 1H), 3,25 - 3,11 (m, 12H), 1,39 - 1,24 (m, 18H).<31>P NMR (162 MHz, D2O) δ-2,45, 55,32.<19>F NMR (376,5 MHz, D2O) δ-164,60, -200,71.
I) 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10,16-dihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-
1
l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il]-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (optički izomer 2)
[0454] Polipropilenska konusna tuba od 15 ml je napunjena sa 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-10-hidroksi-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2,10-dioksido-2-sulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il}-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-onom (12,0 mg, pik 1/rana frakcija iz koraka G). Dodat je piridin (92 μl), praćeno trietilamin trihidrofluoridom (9,2 μl) i trietilaminom (140 μl). Smeši je omogućeno da se meša na 50 °C tokom 2 sata. Reakciona smeša je ohlađena ledenom kupkom i razblažena vodom (1,0 ml). Polako je dodat rastvor kalcijum hlorida (6,98 mg) u vodi (1,0 ml). Smeša je mešana tokom 30 min zatim je filtrirana kroz Celite® čep. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom reverznih faza (ISCO RediSepRf Gold HP C18Aq kolona) eluiran sa 0 do 10% ACN u 10 mM aq trietilamonijum acetatu da da naslovno jedinjenje (1,94 mg). MS:
[M+H]<+>709,3.<1>H NMR (400 MHz, DEUTERIJUM OKSID) δ 8,20 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,46 - 7,40 (m, 1H), 6,37 (d, 1H, J=16 Hz), 6,27 (d, 1H, J=8 Hz), 5,83 (dd, 1H, J1=52 Hz, J2=4 Hz), 4,98 - 4,84 (m, 2H), 4,57 (br d, J = 3,9 Hz, 2H), 4,54 - 4,48 (m, 2H), 4,46 - 4,36 (m, 3H), 4,20 - 4,11 (m, 3H), 3,55 - 3,47 (m, 3H), 3,20 - 3,06 (dd, 12H), 1,28 -1,12 (t, 18H).<31>P NMR (162 MHz, D2O) δ-2,52, 53,94.<19>F NMR (376,5 MHz, D2O) δ-165,55, - 202,45.
PRIMER 25
Sinteza 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10,16-trihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il]-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin soli
[0455]
1
A) N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-cijanoetoksi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroksi-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il}-9H-purin-6-il)benzamid
[0456] U flasku sa zaobljenim dnom od 100 ml (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[(2-cijanoetoksi)({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroksimetil)-4-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]tetrahidrofuran-3-il}oksi)fosforil]oksi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (1,14 g) je azeotropiran sa acetonitrilom (3 X 4 ml) i osušen pod vakuumom, rastvoren u piridinu (18,0 ml) i ohlađen u ledenoj kupki. U 2 porcije je dodat 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosforinan 2-oksid (586 mg). Smeši je omogućeno da se meša na sobnoj temperaturi tokom 40 min. Dodata je voda (0,554 ml), praćeno 3H-1,2-benzoditiol-3-on 1,1-dioksidom (251 mg). Smeši je omogućeno da se meša na sobnoj temperaturi tokom 40 min. Dodat je rastvor natrijum tiosulfata (810 mg) u 2 ml vode. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i azeotropirana sa toluenom da se ukloni piridin. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/DCM) da da naslovno jedinjenje (650 mg). MS: [M+H]<+>1111,3
B) 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10-dihidroksi-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il}-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on
1
[0457] U flask sa zaobljenim dnom od 25 ml dodati su N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-10-(2-cijanoetoksi)-15-fluoro-7-(5-fluoro-3-metil-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-hidroksi-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il}-9H-purin-6-il)benzamid (650 mg) i metilamin (33 tež. %) u apsolutnom etanolu (22,7 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom reverznih faza (ISCO RediSepRf Gold HP C18 kolona) eluiran sa 0 do 60% ACN u 10 mM aq NH4OAc da da naslovno jedinjenje (32,0 mg). MS:
[M+H]<+>953,3.
C) 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10,16-trihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il]-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so.
[0458] Polipropilenska konusna tuba od 15 ml je napunjena sa 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-2,10-dihidroksi-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il}-5-fluoro-3-metil-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-onom (32,0 mg) i dodat je piridin (246 μl). Suspenziji je dodat trietilamin trihidrofluorid (24,6 μl), praćeno trietilaminom (372 μl). Smeši je omogućeno da se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je ohlađena u ledenoj kupki i razblažena vodom (1 ml). Polako je dodat rastvor kalcijum hlorida (18,6 mg) u vodi (1 ml). Smeša je mešana tokom 30 min zatim je filtrirana kroz Celite® čep. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom reverznih faza (ISCO RediSepRf Gold HP C18Aq kolona) eluiran sa 0 do 5% ACN u 10 mM aq trietilamonijum acetatu da da naslovno jedinjenje (8,3 mg). MS: [M+H]<+>693,2.<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ 8,36 (br, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,38 (d, 1H, j=2), 6,48 (d, 1H, j=8), 6,37 (d, 1H, J=16 Hz), 5,70 (dd, 1H, J1=52 Hz, J2=4 Hz), 5,20 - 5,07 (m, 1H), 4,98 - 4,92 (m, 1H), 4,53 (d, 1H, J=4 Hz), 4,45 - 4,33 (m, 2H), 4,33 - 4,19 (m, 3H), 4,09 -4,03 (m, 1H), 3,45 (s, 3H), 3,17 (qt, 12H), 1,28 (t, 18H).<31>P NMR (162 MHz, D2O) δ-1,66, -2,26.<19>F NMR (376,5 MHz, D2O) δ-164,5, -201,7.
1
PRIMER 26
Sinteza 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-hidroksi-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il]-5-hloro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin soli (optički izomer 1 i optički izomer 2):
[0459]
2
A) (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-hloro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il 2-cijanoetil diizopropilfosforamidoit
[0460] U flasku sa zaobljenim dnom od 100 ml 5-hloro-7-[(6aR,8R,9R,9aS)-9-hidroksi-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-8-il]-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (1,469 g) (sintetisan na isti način kao u postupku Primera15 A) je azeotropiran sa toluenom (3 x) i osušen u vakuumu. Flask sa zaobljenom dnom je evakuisan i ponovo napunjen argonom (3 x). Dodat je anhidrovani N,N-dimetilformamid (5,00 ml) da bi se rastvorio početni materijal sa sonifikacijom tokom minuta, praćeno 2-cijanoetil N,N,N',N'-tetraizopropilfosforodiamiditom (2,50 ml), 1-metilimidazolom (0,13 ml) i zatim 1H-tetrazolom (0,45 M u acetonitrilu, 6,70 ml). Smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Smeša je razblažena sa EtOAc (200 ml). Dodat je zasićeni rastvor NaHCO3. Vodeni sloj je dva puta ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani EtOAc sloj je ispran vodom zatim slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da da sirovi uljasti proizvod. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni (ISCO RediSepRf DIOL HP Gold 100 g kolona) eluiran
2 1
sa EtOAc:heksani (1:9 do 1:1) da da naslovno jedinjenje (1,77 g). MS: [M+H]<+>661,3 za hidrolizovani fragment proizvoda.
B) (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-4-fluoro-2-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat.
[0461] N-{9-[(2R,3R,4R,5R)-5-{[bis(4-metoksifenil)(fenil)metoksi]metil}-3-fluoro-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il]-9H-purin-6-il}benzamid (2,64 g) je rastvoren u anhidrovanom piridinu (18,0 ml) pod argonom, ohlađen ledenom kupkom. Difenil fosfit (1,60 ml) je dodat polako tokom 1 min. Reakcionom rastvoru je omogućeno da se zagreje na sobnu temperaturu i mešan je tokom 1 sata. Polako je dodat drugi obrok difenil fosfita (0,35 ml) i smeša je mešana tokom još 30 min. Smeša je ohlađena ledenom kupkom. Dodata je voda (2,0 ml) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i azeotropirana sa toluenom da bi se dodatno uklonili piridin i voda. Ostatak je osušen na vakuum pumpi. Ostatku su dodati sirćetna kiselina (10,0 ml) i voda (2,0 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i azeotropirana sa toluenom, zatim osušena na vakuum pumpi da da sirovo ulje, koje je podvrgnuto hromatografiji na silika koloni upotrebom MeOH/DCM (0/100 do 50/50) da bi se dobilo 1,33 g naslovnog proizvoda kao bele čvrste supstance. MS: [M+H]<+>438,1.
C) (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[{[ (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-hloro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il]oksi}(2-cijanoetoksi)fosforotioil]oksi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat.
[0462] U flasku sa zaobljenim dnom od 250 ml smeša (6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-hloro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il 2-cijanoetil diizopropilfosforamidoita (2,23 g) i (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-4-fluoro-2-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonata (1,17 g) je azeotropirana sa suvim acetonitrilom (25 ml x 3), osušena na vakuum pumpi tokom 1 sata. Smeši je dodat anhidrovani acetonitril (20,0 ml) pod argonom, praćeno rastvorom 5-(etiltio)-1H-tetrazola (1,00 g) (pre-azeotropiran sa suvim acetonitrilom, 10 ml x 3 i osušen na vakuum pumpi) u anhidrovanom acetonitrilu (10,0 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sat i 20
2 2
min. Dodat je ((dimetilamino-metiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tion (655 mg) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 40 min. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Hromatografijom na silika koloni upotrebom MeOH/DCM (0/100 do 40/60) dobijeno je naslovno jedinjenje (1,78 g) kao smeša 2 optička izomera. MS: [M+H]<+>1112,4.
E) (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-hloro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroksimetil)-4-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]tetrahidrofuran-3-il}oksi)(2-cijanoetoksi)fosforotioil]oksi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat.
[0463] U flasku sa zaobljenim dnom (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[{[(6aR,8R,9R,9aR)-8-(5-hloro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioksadisilocin-9-il]oksi}(2-cijanoetoksi)fosforotioil]oksi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat (1,73 g) je rastvoren u tetrahidrofuranu (16 ml) i vodi (4,0 ml). Rastvor je ohlađen ledenom kupkom. Ukapavanjem je dodata trifluorosirćetna kiselina (4,0 ml). Smeša je mešana sa hlađenjem tokom 4 sata. Na 0 °C natrijum bikarbonat (7,00 g) je dodat u obrocima, praćeno vodom i EtOAc. Smeša je mešana tokom 3 min zatim je dovedena na sobnu temperaturu. Slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 x). Kombinovani rastvor EtOAc je ispran slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i osušen na vakuum pumpi da da sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen na silika koloni upotrebom MeOH/DCM (0/100 do 40/60) da bi se dobio naslovni proizvod (1,43 g) kao smeša 2 optička izomera. MS: [M+H]<+>1130,3.
F) N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(5-hloro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10-(2-cijanoetoksi)-15-fluoro-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2-oksido-2-sulfanil-10-sulfidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il}-9H-purin-6-il)benzamid (smeša dva glavna optička izomera).
[0464] U flasku sa zaobljenim dnom (2R,3R,4R,5R)-5-[6-(benzoilamino)-9H-purin-9-il]-2-({[({(2R,3R,4R,5R)-2-(5-hloro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroksimetil)-4-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]tetrahidrofuran-3-il}oksi)(2-cijanoetoksi)fosforotioil]oksi}metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il hidrogen fosfonat
2
(1,20 g) je azeotropiran sa suvim piridinom (sveža boca)/acetonitrilom (x 2) zatim suvim acetonitrilom. Rezultujuća bela čvrsta supstanca je osušena pod vakuumom. Pod atmosferom argona dodat je anhidrovani piridin (20,0 ml) (sveža boca), praćeno 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksidom (0,700 g). Bistrom rastvoru je omogućeno da se meša na sobnoj temperaturi tokom 1 sata i 10 min. Dodata je voda (0,70 ml), praćeno 3H-1,2-benzoditiol-3-on 1,1-dioksidom (0,300 g). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, azeotropirana sa toluenom (x 2), osušena na vakuum pumpi da da sirovi ostatak. Sirovi ostatak je podvrgnut hromatografiji na silika koloni upotrebom MeOH/DCM (0/100 do 20/80). Naslovni proizvodi (590 mg) iz rane frakcije su dobijeni i identifikovani kao smeša glavnih izomera pikova 2 i 4 iz LCMS; dok je drugi prinos proizvoda (389 mg) iz kasne frakcije bio smeša sva 4 izomera. MS: [M+H]<+>1144,2.
G) 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il}-5-hloro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (pojedinačni optički izomeri 1 i 2)
[0465] Pod N2atmosferom N-(9-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-7-(5-hloro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10-(2-cijanoetoksi)-15-fluoro-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2-oksido-2-sulfanil-10-sulfidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-14-il}-9H-purin-6-il)benzamid (0,584 g, smeša 2 glavna izomera, rana frakcija iz hromatografije na koloni) je mešan u metilaminu (33 tež. %) u apsolutnom etanolu (15,0 ml) na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i osušena na vakuum pumpi da da sirovu čvrstu supstancu. Dva uzastopna prečišćavanja na silika gel kolonama, upotrebom MeOH/EtOAc (0/100 do 40/60) donela su 2 pojedinačna optička izomera naslovnih jedinjenja: izomer 1 (rana frakcija/pik 1, 73 mg) i izomer 2 (kasna frakcija/pik 2, 304 mg), i smešu frakcija pika 1 i 2 (0,30 g). MS (optički izomer 1): [M+H]<+>987,2. MS (optički izomer 2): [M+H]<+>987,2.
H) 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-hidroksi-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-
2 4
l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il]-5-hloro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (optički izomer 1).
[0466] U polipropilensku tubu su dodati 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il}-5-hloro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer 1, 69,2 mg, rana frakcija iz hromatografije na koloni), piridin (0,40 ml), praćeno trietilamin trihidrofluoridom (0,060 ml), zatim trietilaminom (0,90 ml). Reakciona smeša u zaptivenoj propilenskoj tubi je mešana na 50 °C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, razblažena vodom (1,30 ml). Dodat je rastvor kalcijum hlorida (92,5 mg) u vodi (1,30 ml). Mutna bela smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, i zatim je filtrirana kroz Celite® upotrebom plastičnog filter levka, isprana vodom (1 ml x 4). Bistar vodeni filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, više puta azeotropiran sa toluenom, osušen u vakuumu tokom 10 min da da sirovi ostatak. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 koloni (voda-acetonitril/ 10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata). Frakcija proizvoda je koncentrovana pod sniženim pritiskom, azeotropirana sa toluenom (x 4), zatim sa vodom bez endotoksina (x 5). Krajnji ostatak je rastvoren u vodi bez endotoksina i liofilizovan da bi se dobio naslovni proizvod (optički izomer 1, 29,0 mg). MS [M+H]<+>727,0.<1>HNMR (400 MHz, deuterijum oksid) δ = 8,19 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 6,39 (br d, J = 15,7 Hz, 1H), 6,34 (br d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,60 - 5,41 (m, 1H), 5,22 - 5,14 (m, 1H), 5,14 - 5,02 (m, 1H), 4,55 (br d, J = 3,8 Hz, 1H), 4,51 (br d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,42 (br s, 1H), 4,40 (br s, 1H), 4,35 - 4,28 (m, 1H), 4,16 -4,10 (m, 1H), 4,06 (br dd, J = 4,3, 11,5 Hz, 1H), 3,13 (q, J = 7,3 Hz, 12H), 1,21 (t, J = 7,3 Hz, 18H).<31>P NMR (162 MHz, deuterijum oksid) δ 55,29, 54,54.<19>F NMR (376 MHz, deuterijum oksid) δ -200,90.
I) 7-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-hidroksi-2,10-dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il]-5-hloro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on di-trietilamin so (optički izomer 2).
[0467] U polipropilensku tubu je dodat 7-{(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-16-[(3-hidroksi-1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil)oksi]-2,10-
2
dioksido-2,10-disulfaniloktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7-il}-5-hloro-3,7-dihidro-4H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-on (optički izomer 2, 186 mg, kasna frakcija iz hromatografije). Dodat je piridin (1,1 ml), praćeno trietilamin trihidrofluoridom (0,161 ml), zatim trietilaminom (2,4 ml). Reakciona smeša u zaptivenoj propilenskoj tubi je mešana na 50 °C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, razblažena vodom (3,50 ml). Dodat je rastvor kalcijum hlorida (250 mg) u vodi (3,50 ml). Mutna bela smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Smeša je filtrirana kroz Celite® upotrebom plastičnog filter levka, isprana vodom (3 ml x 4). Bistar vodeni filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, više puta azeotropiran sa toluenom, osušen u vakuumu tokom 10 min da da sirovi ostatak. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 koloni (voda-acetonitril/10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata). Frakcija proizvoda je koncentrovana pod sniženim pritiskom, azeotropirana sa toluenom (x 4), zatim sa vodom bez endotoksina (x 5). Krajnji ostatak je rastvoren u vodi bez endotoksina i liofilizovan da bi se dobio naslovni proizvod (optički izomer 2, 109 mg). MS [M+H]<+>727,0.
[0468]<1>H NMR (400 MHz, deuterijum oksid) δ 8,10 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 6,30 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 6,24 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,49 - 5,27 (m, 1H), 5,07 - 4,86 (m, 2H), 4,85 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 4,44 (br d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,33 (br d, J = 14,7 Hz, 2H), 4,28 - 4,16 (m, 2H), 3,98 (br dd, J = 5,0, 11,8 Hz, 1H), 3,04 (q, J = 7,4 Hz, 12H), 1,12 (t, J = 7,3 Hz, 18H).<31>P NMR (162 MHz, deuterijum oksid) δ 55,12, 52,04.<19>F NMR (376 MHz, deuterijum oksid) δ -200,43.
PRIMER 27 (za referencu)
Linker-korisni teret 1
[0469]
2
[0470] Smeši 6-(2,5-dioksopirol-1-il)-N-[(1S)-1-[[(1S)-2-[4-(hidroksimetil)anilino]-1-metil-2-okso-etil]karbamoil]-2-metil-propil]heksanamida (mc-Val-Ala-PAB-OH, Synchem, Elk Grove Village, IL, 0,0822 mmol, 40,0 mg) u anhidrovanom acetonitrilu (19,1 mmol, 1,00 ml, 783 mg) dodati su cezijum jodid (0,0986 mmol, 25,6 mg) i bor trifluorid dietil eterat (0,0986 mmol, 0,0125 ml, 14,0 mg). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Posle 18 h mešanja smeša je razblažena sa ~ 10 ml DCM i filtrirana preko Celite® jastučeta. Čvrsta supstanca je isprana sa DCM. Filtrat je koncentrovan da obezbedi narandžastu čvrstu supstancu. Sirovi proizvod (mc-Val-Ala-PAB-I) je upotrebljen bez dodatnog prečišćavanja.
[0471] Bočica napunjena sa rastvorom dinatrijum (5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-16-hidroksi-2-sulfidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-10-olat 2,10-dioksida (korisni teret 1, takođe "jedinjenje Pr. 3a", 0,0106 mmol, 7,80 mg) i 6-(2,5-dioksopirol-1-il)-N-[(1S)-1-[[(1S)-2-[4-(jodometil)anilino]-1-metil-2-okso-etil]karbamoil]-2-metil-propil]heksanamida (mc-Val-Ala-PAB-I, 0,0208 mmol, 12,4 mg, sirovo) u N,N-dimetilformamidu (5,17 mmol, 0,400 ml, 378 mg) je zaptivena i zagrejana na 60 °C. Za 2 h reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu i prečišćena hromatografijom na C18 koloni (kontinuirani gradijent od 20-60% CH3CN/voda sa 0,1% mravljom kiselinom) da se obezbedi N-[(2S)-1-{[(2S)-1-{[4-({[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10,16-dihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-2-il]sulfanil}metil)fenil]amino}-1-oksopropan-2-il]amino}-3-metil-1-oksobutan-2-il]-6-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)heksanamid (5,5 mg, prinos 45%) kao bela čvrsta supstanca.
<1>HNMR (400 MHz, METANOL-d4) δ 8,23-8,35 (m, 2H), 8,10 (s, 1H), 7,89-8,02 (m, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,52-7,64 (m, 2H), 7,41 (br d, J=8,53 Hz, 2H), 7,22-7,38 (m, 2H), 6,75-6,83 (m,
2
2H), 6,32-6,43 (m, 2H), 5,71-5,90 (m, 2H), 4,54-4,59 (m, 2H), 4,42-4,51 (m, 2H), 4,07-4,35 (m, 8H), 3,46 (br t, J=7,03 Hz, 2H), 2,27 (br t, J=7,34 Hz, 2H), 2,03-2,15 (m, 2H), 1,53-1,70 (m, 4H), 1,39-1,47 (m, 3H), 1,23-1,37 (m, 2H), 0,92-1,02 (m, 6H). LCMS: m/z 1163, 1164 [M+H].
PRIMER 28 (za referencu)
Linker-korisni teret 2
[0472]
[0473] Linker-korisni teret 2 je generisan u skladu sa procedurom u Primeru 27, upotrebom 2-amino-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,18-dihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfanilheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il]-1,9-dihidro-6H-purin-6-on seskui-trietilamin soli (korisni teret 2) umesto korisnog tereta 1.
[0474] Korisni teret 2 je pripremljen u skladu sa postupkom ispod.
[0475] 2-amino-9-((5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,18-dihidroksi-2,10-oksido-2-sulfanilheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-on seskui-trietilamin so (optički izomer)
A) (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-5-(hidroksimetil)-2-(2-izobutilamido-6-okso-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforil)oksi)metil)-2,5-dioksabiciklo[2.2.1]heptan-7-il hidrogen fosfonat
2
[0476] (1S,3F,4F,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-(hidroksimetil)-2,5-dioksabiciklo[2.2.1]heptan-7-il hidrogen fosfonat (700 mg) i 5'-O-[bis(4-metoksifenil)(fenil)metil]-3'-O-[terc-butil(dimetil)silil]-2'-O-{(2-cijanoetoksi)[diizopropilamino]fosfanil}-N-(2-metilpropanoil)guanozin (2280 mg) su podvrgnuti azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom, i tome su dodati anhidrovani acetonitril (15 ml) i anhidrovani tetrahidrofuran (5 ml). Smeši je dodata smeša 5-(etilsulfanil)-2H-tetrazola (611 mg) (koji je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom) i anhidrovanog acetonitrila (10 ml), i smeša je mešana preko noći pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi. Tome je dodat 70% terc-butil hidroperoksid (643 μl), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Reakcionoj smeši je dodata smeša natrijum tiosulfata (5920 mg) i vode (3 ml), i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodata 80% sirćetna kiselina (30 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat) da da naslovno jedinjenje (980 mg). MS: [M+H]<+>1030,2
B) 2-amino-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-{[tercbutil(dimetil)silil]oksi}-2,10-dihidroksi-10-oksido-2-sulfidoheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il]-1,9-dihidro-6H-purin-6-on (optički izomer)
[0477] (1R,3R,4R,7S)-3-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-1-((((((2R,3R,4R,5R)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-5-(hidroksimetil)-2-(2-izobutilamido-6-okso-1H-purin-9(6H)-il)tetrahidrofuran-3-il)oksi)(2-cijanoetoksi)fosforil)oksi)metil)-2,5-dioksabiciklo[2.2.1]heptan-7-il hidrogen fosfonat (980 mg) je podvrgnut azeotropnoj dehidrataciji sa anhidrovanim acetonitrilom i anhidrovanim piridinom, i tome je dodat anhidrovani piridin (50 ml). Smeši je dodat 2-hloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioksafosfinan 2-oksid (615 mg) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Tome su dodati voda (600 μl) i 3H-benzo[c][1,2]ditiol-3-on (240 mg), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dopunskih 30 min. Reakcionoj smeši je dodata smeša natrijum tiosulfata (1180 mg) i vode (3 ml), i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku su dodati anhidrovani acetonitril (15 ml) i 2-metilpropan-2-amin (5,0 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1,5 h, i koncentrovana pod sniženim
2
pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat), i dobijenom ostatku je dodat 40% rastvor metilamin etanola (30 ml). Smeša je mešana preko noći pod atmosferom argona na sobnoj temperaturi, i reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (metanol/etil acetat). Dobijeni ostatak je rastavljen u dva dijastereomera (tR1 i tR2, čija su vremena zadržavanja pomoću LC/MS od kraćih ka dužim u ovom redosledu) pomoću HPLC (L-kolona2 ODS, 50x150 mm, mobilna faza: 5 mM vodeni rastvor amonijum acetata/acetonitril) da da naslovno jedinjenje (38 mg, tR1) i naslovno jedinjenje (322 mg, tR2). MS (tR1):
[M+H]<+>817,1. MS (tR2): [M+H]<+>817,1
C) 2-amino-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-2,10,18-trihidroksi-10-oksido-2-sulfidoheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il]-1,9-dihidro-6H-purin-6-on seskui-trietilamin so (optički izomer)
[0478] U 2-amino-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}-2,10-dihidroksi-10-oksido-2-sulfidoheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il]-1,9-dihidro-6H-purin-6-on (optički izomer) (38 mg, tR1) dodati su metanol (3,0 ml) i trietilamin trihidrofluorid (0,76 ml). Reakciona smeša je koncentrovana da se ukloni metanol, i ostatak je mešan na 55 °C tokom 1 h. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, tome je dodat etoksi(trimetil)silan (4,2 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 koloni (acetonitril/10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata) da da naslovno jedinjenje (27 mg).<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1,23 (13H, t, J = 7,3 Hz), 3,15 (9H, q, J = 7,3 Hz), 4,04 (1H, d, J = 8,3 Hz), 4,08-4,19 (3H, m), 4,28 (1H, d, J = 12,2 Hz), 4,37-4,52 (2H, m), 4,65 (1H, d, J = 4,2 Hz), 4,90 (1H, d, J = 4,6 Hz), 5,36 (1H, s), 5,55 (1H, td, J = 8,5, 4,0 Hz), 5,98 (1H, d, J = 8,3 Hz), 6,16 (1H, s), 7,94 (1H, s), 8,21 (1H, s), 8,25 (1H, s).<31>P NMR (162 MHz, D2O) δ-1,45, 53,78.
Sinteza 2-amino-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,18-dihidroksi-2,10-dioksido-2-sulfanilheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il]-1,9-dihidro-6H-purin-6-on seskui-trietilamin soli (optički izomer; korisni teret 2)
21
[0479] U 2-amino-9-[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-{[terc-butil(dimetil)silil]oksi}-2,10-dihidroksi-10-oksido-2-sulfidoheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-7(12H)-il]-1,9-dihidro-6H-purin-6-on (optički izomer) (322 mg, tR2) dodati su metanol (3,0 ml) i trietilamin trihidrofluorid (3,2 ml). Reakciona smeša je koncentrovana da se ukloni metanol, i ostatak je mešan na 55 °C tokom 1 h. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, tome je dodat etoksi(trimetil)silan (14 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na C18 koloni (acetonitril/10 mM rastvor pufera trietilamonijum acetata) da da naslovno jedinjenje (266 mg).<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1,23 (14H, t, J = 7,3 Hz), 3,15 (10H, q, J = 7,3 Hz), 4,02 (1H, d, J = 8,1 Hz), 4,13-4,24 (2H, m),4,27-4,42 (4H, m), 4,59 (1H, d, J = 4,4 Hz), 5,01 (1H, s), 5,11 (1H, d, J = 4,2 Hz), 5,61-5,73 (1H, m), 5,95 (1H, d, J =8,3 Hz), 6,15 (1H, s), 7,87 (1H, s), 8,00 (1H, s), 8,25 (1H, s).<31>P NMR (162 MHz, D2O) δ-1,93, 55,44.
PRIMER 29 (za referencu)
Opšta procedura konjugacije ADC
[0480] Rastvor antitela je razblažen do željene reakcione koncentracije sa odgovarajućim puferom. pH je podešen na 7 dodavanjem 0,5 M trisa, 25 mM EDTA rastvora u vodi (pH 8,0). Uz mešanje je dodat TCEP (2,2 ekviv, 5 mM u vodi). Posle 1 sata inkubacije na sobnoj temperaturi, dodato je 5 ekviv linker-korisni teret (5 mM u DMA). Posle 2 dopunska sata nežnog mešanja na sobnoj temperaturi smeša je prečišćena dva puta preko 3 ml spinOUT kolona za desalinizaciju (G-Bioscience, pre-ekvilibrisana puferom koji sadrži 10 mM histidin, 7,5% saharozu (tež./zapr.) i 0,08% polisorbat 20 (tež./zapr.) na pH 5,2), i zatim je pufer zamenjen Dulbekovim (Dulbecco’s) PBS i koncentrovan na 1~3 mg/ml (kao što je određeno UV apsorpcijom upotrebom standardnog koeficijenta ekstinkcije IgG1) upotrebom Vivaspin6 kolone (GE Healthcare). Uzorak je zatim okarakterisan za lek-antitelo-odnos (DAR) pomoću QTOF masene spektrometrije. Monomerna kompozicija ADC je određena ekskluzionom hromatografijom (SEC).
Protokol ekskluzione hromatografije (SEC)
Priprema uzorka
[0481] Pripremiti praznu probu sa vodom dodavanjem HPLC vode u HPLC bočicu. Kontrole golih antitela i uzorci ADC dobijeni su od hemičara. Kontrole i uzorci su razblaženi sa 1XPBS ukoliko je koncentracija iznad 5 mg/ml, ili su injektirani čisti ukoliko je koncentracija 5 mg/ml ili ispod.
Podešavanje HPLC sistema
[0482] Za analizu je upotrebljen Agilent 1100 HPLC sistem. Sistem je podešen sa sistemskim ispiranjem (5% acetonitril u HPLC vodi) na jednom kanalu pumpe, i mobilnom fazom (kao što je opisano iznad) na drugom kanalu pumpe. Upotrebljena kolona je Tosoh Biosep TSK Gel, G3000SWxl; P/N 8541; 250A; 5μm; 7,8 mm x 300 mm. Stopa protoka je podešena na 1 ml/min, i svaki postupak je izokratan sa 100% mobilnom fazom [100 mM natrijum fosfat, 300 mM natrijum hlorid, pH 6,8, 10% acetonitril (zapr./zapr.)] tokom 20 minuta. DAD je podešen na 280 nm. Zapremina injektiranja za svaku kontrolu, uzorak, i praznu probu je tipično 10 μl, ali se može podesiti u zavisnosti od UV apsorbance. Analiza podataka: Svi pikovi na 280 nm u odgovarajućem vremenskom prozoru (tipično 2-10 minuta) su integrisani.
PRIMER 30 (za refernecu)
Priprema ADC 1
[0483] Sinteza je izvedena u skladu sa opštom procedurom konjugacije ADC.
Antitelo: Antitelo 1, anti-GCC antitelo (5F9), 100 μl od 60 mg/ml rastvora u puferu od 50 mM histidina i 100 mM arginina na pH 6,0, receptor cilj guanilil ciklaza C (GCC) Antitelo 1 teški lanac:
Pufer: 50 mM histidin i 100 mM arginin na pH 6,0, 200 μl, krajnja koncentracija 20 mg/ml
Linker-korisni teret: N-[(2S)-1-{[(2S)-1-{[4-({[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10,16-dihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-2-il]sulfanil}metil)fenil]amino}-1-oksopropan-2-il]amino}-3-metil-1-oksobutan-2-il]-6-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)heksanamid (Linker-korisni teret 1)
Proizvod ADC: ADC1, prinos = 1,9 ml pri 2,5 mg/ml (79%), DAR 3,5, 99% monomera (tj., nije agregiran)
[0484] PRIMER 31 (za referencu)
Priprema ADC 2
[0485] Sinteza je izvedena u skladu sa opštom procedurom konjugacije ADC.
21
Antitelo: Antitelo 2, antitelo koje ciljno deluje na ne-GCC usmereno na membranski usidreni protein koji se prekomerno eksprimira u određenim čvrstim tumorima uključujući pluća i dojku, 100 μl pri 11,8 mg/ml u 25 mM natrijum acetatu, pH 5,5. Pufer: Dulbekov PBS, pH 7,4, 200 μl, krajnja koncentracija 4 mg/ml
Linker-korisni teret: N-[(2S)-1-{[(2S)-1-{[4-({[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-15-fluoro-7-(5-fluoro-4-okso-3,4-dihidro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-10,16-dihidroksi-2,10-dioksidooktahidro-12H-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-2-il]sulfanil}metil)fenil]amino}-1-oksopropan-2-il]amino}-3-metil-1-oksobutan-2-il]-6-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)heksanamid (Linker-korisni teret 1)
Proizvod ADC: ADC2, prinos = 0,6 ml pri 1,4 mg/ml (70%), DAR 2,6, 99% monomera
PRIMER 32 (za referencu)
Priprema ADC 3
[0486] Sinteza je izvedena u skladu sa opštom procedurom konjugacije ADC.
Antitelo: Antitelo 1, 33 μl pri 60 mg/ml u puferu od 50 mM histidina i 100 mM arginina na pH 6,0
Pufer: 50 mM histidin i 100 mM arginin na pH 6,0, 66 μl, krajnja koncentracija rastvora antitela 20 mg/ml
Linker-korisni teret: N-[(2S)-1-{[(2S)-1-{[4-({[(5R,7R,8R,12aR,14R,15R,15aS,18R)-7-(2-amino-6-okso-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)-14-(6-amino-9H-purin-9-il)-10,18-dihidroksi-2,10-dioksidoheksahidro-14H-15,12a-(epoksimetano)-5,8-metanofuro[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]pentaoksadifosfaciklotetradecin-2(12H)-il]sulfanil}metil)fenil]amino}-1-oksopropan-2-il]amino}-3-metil-1-oksobutan-2-il]-6-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)heksanamid (Linker-korisni teret 2) Proizvod ADC: ADC3, prinos = 1,9 ml pri 1,0 mg/ml (95%), DAR 4,3, 98% monomera
PRIMER 33 (za referencu)
Tritozomski test oslobađanja korisnog tereta - merenje oslobađanja korisnog tereta iz linkerkorisni teret sistema ili ADC u in vitro modelu lizozoma
Materijali:
[0487] Pufer: 47,9 mg/ml monobaznog kalijum fosfata (Sigma-Aldrich broj proizvoda P5379); 6,8 mg/ml dvobaznog natrijum fosfata (Sigma-Aldrich broj proizvoda S0876), 1,7 mg/ml etilendiamintetrasirćetne kiseline (Sigma-Aldrich broj proizvoda ED4SS) u prečišćenoj vodi. pH je podešen na 6,0 upotrebom 1N HCl ili 1N KOH.
Tritozomi jetre pacova kupljeni od XenoTech
Linker-korisni teret (10 mM DMSO)
ADC (1-40 μM u puferu za skladištenje koji se upotrebljava za proizvodnju).
Procedura:
[0488] Za procenu oslobađanja korisnog tereta iz jedinjenja linker-korisni teret, 120,95 μM DMSO radni rastvor je pripremljen od 10 mM štok rastvora jedinjenja linker-korisni teret. Zatim, 120,95 μM DMSO radni rastvor je razblažen do 1 μM u 225 μl tritozom rastvoru pufera koji sadrži 22,4% tritozoma jetre pacova.
[0489] Za procenu ADC molekula, 1,86 μl ADC rastvora je razblaženo sa 223,1 μl smeše tritozoma jetre pacova u tritozom puferu.
[0490] Tako pripremljeni rastvori su inkubirani tokom 24 sata na 37 °C. Alikvoti od 40 μl su uklonjeni na 0,5, 1, 3, 5, i 24 sata i razblaženi sa 160 μl 0,1% mravlje kiseline u rastvoru metanola u ploči sa 96 bunarića, koja je čuvana u zamrzivaču na -80 °C do završetka eksperimenta. Posle sakupljanja poslednje vremenske tačke, u uzorke je dodato svežih 200 μl 0,1% mravlje kiseline u rastvoru metanola i obogaćeno je sa 150 nM karbutamida koji je interni standardni rastvor. Uzorci su dobro izmešani i centrifugirani na 4000 g tokom 10 minuta, i ploča sa 96 bunarića je predata na analizu koncentracije korisnog tereta pomoću LC/MS/MS.
LC/MS/MS sistem:
[0491] 5 μl uzoraka je injektirano u LC/MS/MS sa Waters Xselect C18 CSH 3,5u 2,1mmID x 30mm dužine kolonom. Vodeni rastvarač u mobilnoj fazi sadržao je 0,1% mravlju kiselinu u vodi, i organski rastvarač u mobilnoj fazi sadržao je 0,1% mravlju kiselinu u 5% vode i 95% acetonitrila. Uzorci su išli u gradijentu od 3 minuta pri stopi protoka od 1,5 ml/min.
21
Inicijalno, instrument je radio sa 100% vodenim rastvaračem mobilne faze tokom 0,5 minuta, i zatim se povećavao na 100% organskog rastvarača u sledećih 1,5 minuta. Sistem će držati na 100% organskom rastvaraču tokom sledećih 0,5 minuta, i zatim će promeniti na 100% vodeni rastvarač faze u sledećih 0,5 minuta.
Analiza:
[0492] Da bi se pratilo i izračunalo oslobađanje linker-korisni teret i korisnog tereta iz ADC, površina pika ili kriva koncentracije u odnosu na vreme je prikazana u grafičkom formatu. Podaci bi se analizirali upotrebom Excel-Fit programa za izračunavanje linearnog opsega stope i t1/2 formiranja korisnog tereta iz testiranih molekula.
[0493] Podaci o tritozomskom oslobađanju korisnog tereta:
[0494] Kao što je pokazano na Sl. 1, Sl. 2, i Sl. 3, kada su podvrgnuti gornjem protokolu ADC1, ADC2, i ADC3 oslobađaju očekivane korisne terete.
Protokol za fosfo-IRF3 test
[0495] HEK293 ćelije projektovane da eksprimiraju ciljeve ćelijske površine povezane sa tumorom za mAb Antitelo 1 (ADC1 i ADC3) i Antitelo 2 (ADC2), kao i HEK293 ćelije koje ne eksprimiraju cilj (HEK293-Vect), su zasejane u 1,5 x 10E5 ćelija/bunariću (500 μl/bunariću) u pločama sa 24 bunarića obloženim poli-D-lizinom (Corning) i kultivisane su preko noći. Posle uskraćivanja seruma preko noći, ćelije su tretirane sa različitim koncentracijama ADC tokom 6 sati i zatim lizirane u RIPA puferu (ThermoFisher Scientific) sa inhibitorima proteaze i fosfataze (ThermoFisher Scientific). Ćelijski lizati su podvrgnuti Western blot analizi za fosfo-IRF3 (CST) i IRF3 (BD Biosciences). Nivo fosfo-IRF3 je normalizovan na njegov ukupan IRF3.
Rezultati fosfo-IRF3 testa
[0496] Kao što je pokazano na Sl. 4, Sl. 5, i Sl, 6, HEK293 ćelije koje eksprimiraju površinske receptor ciljeve za ADC1, ADC2, i ADC3 pokazuju očekivano povećanje markera STING puta fosfo-IRF3 (pIRF3) kada se tretiraju sa ADC1, ADC2, i ADC3, respektivno. Suprotno tome, pIRF3 odgovor nije povećan nakon ADC tretmana u vektorskim HEK293 ćelijama koje ne eksprimiraju odgovarajuće površinske receptor ciljeve.
21
PRIMER 34
Farmakološki profili odabranih cikličnih dinukleotida
[0497] Farmakološki profili odabranih cikličnih dinukleotida su pokazani u Tabeli 6.
Protokol THP-1 Dual Lucia reporter gen testa
[0498] THP1-Dual™ ćelije (InvivoGen # thpd-nfis) su izvedene iz humane THP-1 monocitne ćelijske linije stabilnom integracijom Lucia gena luciferaze, sekretovanog reporter gena luciferaze, pod kontrolom ISG54 (interferonom-stimulisani gen) minimalnog promotora zajedno sa pet elemenata odgovora stimulisanih interferonom (IFN). Na dan eksperimenta, ćelije su zasejane na crnu ploču sa 384 bunarića (Corning 356697) sa gustinom 7500 ćelija/25 μl po bunariću u medijumu za rast (RPMI 1640, 2 mM L-glutamin, 25 mM HEPES, 10% fetalni goveđi serum inaktiviran toplotom, 100 μg/ml Normocin™, 100 U/ml-100 μg/ml Pen-Strep, 10 μg/ml blasticidina, i 100 μg/ml zeocina). Ćelijske ploče su dozirane sa 62,5 nl testnih jedinjenja, i zatim su inkubirane na 37 °C tokom 20 sati. Na kraju inkubacije dodato je 15 μl/bunariću QUANTI-Luc™ (InvivoGen # rep-qlc1), i odmah je izmerena luminescencija upotrebom LeadSeeker.
Protokol Western blot analiza aktivacije nizvodnog signalnog puta (TBK1 i IRF3)
21
[0499] 1,5x10<6>THP-1-Dual ćelija (Invivogen kataloški # thpd-nfis) tretirane su sa DMSO ili naznačenim koncentracijama Pr14 tokom 3 sata. Posle stimulacije, ćelije su sakupljene na ledu, centrifugirane na 800 RCF tokom 5 minuta, i isprane jednom u ledeno hladnom PBS.
[0500] Ćelijski peleti su lizirani u 1% Triton X-100 puferu za lizu celih ćelija (10% glicerol, 20 mM Tris-HCl pH 7,5, 150 mM NaCl, 1 μM EDTA, i 1 μM DTT) koji sadrži koktele inhibitora proteaze i fosfataze (Sigma # P8340 i CalBiochem # 524629, respektivno). Ćelijski lizati su očišćeni od nerastvorljivog debrisa centrifugiranjem na 16.000 RCF tokom 10 minuta. Koncentracije proteina u lizatima su određene Bradfordovim testom upotrebom BSA standarda.
[0501] Lizati su denaturisani u NuPAGE™ LDS puferu za uzorke (4X, kataloški # NP0008) koji sadrži DTT kao redukcioni agens. Denaturisani lizati su rastavljeni na NuPAGE™ 4-12% Bis-Tris gelovima u MES/SDS tečnom puferu i premešteni u PVDF membrane upotrebom postupka polusuvog blotovanja. Membrane su ispitane preko noći na 4 °C za fosfo-TBK1 S172, fosfo-IRF3 S396, i GAPDH upotrebom antitela iz Cell Signaling Technology (# 5483, # 4947, i # 5174, respektivno).
[0502] Posle primarne probe preko noći, membrane su opsežno isprane, zatim ispitane sa sekundarnim antitelom (Alexa Fluor® 680 kozji anti-zečji IgG, Life Technologies # A21109) u Odyssey® Blocking Buffer (kataloški # 927-400000) na sobnoj temperaturi. Posle opsežnog ispiranja, membrane su razvijene upotrebom LI-COR ODYSSEY CLx.
[0503] Relativni intenziteti fosfo-TBK1 i fosfo-IRF3 traka su kvantifikovani i normalizovani na nivoe GAPDH. Vrednosti fosfo-TBK1 i fosfo-IRF3 normalizovane za GAPDH su grafički prikazane kao struki intenzitet u odnosu na nestimulisanu (DMSO) kontrolu. Videti Sl.7.
Protokol testa stabilnosti humane plazme
[0504] Jedinjenje je inkubirano u heparinizovanoj humanoj plazmi na 37 °C tokom 0, 1, 2, 4, 8 i 24 sata, i promena koncentracije jedinjenja je merena LC/MS/MS postupkom. Konstanta stope eliminacije (=k(/h)) izračunata je na osnovu prilagođene krive pretpostavljajući eksponencijalni pad koncentracije kao što sledi; koncentracija u vremenu x = inicijalna koncentracija∗exp(-k∗x).
Testiranje modela singenog tumora
21
[0505] Pr14 i Pr3a su testirani na modelima singenog tumora kod miševa. Kada su Pr14 i Pr3a primenjeni intravenski (svaka 3 dana, 3 puta), uočeni su antitumorski efekti. Videti Sl.8 i Sl.9 za antitumorski efekat u karcinomu kolona CT-26 singenom mišjem modelu, i Sl. 10 i Sl. 11 za antitumorski efekat u karcinomu kolona B16F10 singenom mišjem modelu.
Protokol za procenu antitumorskog efekta
[0506] 8x10<4>B16F10 i 2x10<5>CT-26 mišjih tumorskih ćelija subkutano je implantirano u bok ženki C57BL/6 (B16F10) i Balb/C (CT-26) miševa (n=7 po grupi). Nosač (1xPBS), jedinjenje Pr3a (30 mg/kg) ili Pr14 (1,0 mg/kg) primenjeno je intravenski (krajnja zapremina od 100 μl) miševima koji nose tumore nakon što je zapremina tumora dostigla 100 mm<3>(dan 0). Nosač, Pr3a ili Pr14 su davani svaka 3 dana za ukupno 3 doze (q3dx3). Merenja tumora i telesne težine vršena su tri puta nedeljno upotrebom vernier kalipera i metlerove skale, respektivno. Zapremine tumora određene su množenjem kvadrata širine ('W'), izmerene duž kratke ose tumora, sa polovinom dužine ('L') izmerene duž kratke ose tumora (V = W<2>x 0,5L)
[0507] Jedinjenja iz primera pokazana su u sledećim tabelama. MS u tabelama znači stvarnu izmerenu vrednost. Jedinjenje primera 9 sintetisano je na isti način kao u postupku iz primera 5.
Tabela 1-1
21
22
Tabela 1-2 (jedinjenja primera 6-10 obezbeđena za referencu)
Tabela 1-3 (jedinjenja primera 11-13 obezbeđena za referencu)
22
Tabela 1-4 (jedinjenja primera 16-18 obezbeđena za referencu)
22
22
Tabela 1-5
22
22
22
2
PRIMER 35
Test STING-vezivanja
[0508] Testno jedinjenje (2 μl), streptavidin-terbijum (4 μl, Cisbio), fluoresceinom obeležen 2’,3’-cGAMP (c[G(2’,5’)p-2'-fluo-AHC-A(3’,5’)p]) (Biolog, Germany) i biotinilisani STING protein (2 μl, divlji tip, WT) pomešani su upotrebom test pufera (Dulbekov fiziološki rastvor puferisan fosfatom (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) koji sadrži 0,01% goveđeg serumskog albumina bez masnih kiselina (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)), i smeša je ostavljena da stoji na sobnoj temperaturi tokom 3 h (krajnja koncentracija: streptavidinterbium; razblaženo 1/1000, FITC-cGAMP; 1 μM, biotinilisani STING protein; 100 nM). Vremenski razrešen fluorescentni rezonantni transfer energije (TR-FRET) izmeren je na talasnoj dužini od 520 nm i 486 nm pomoću EnVision (PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Stopa inhibicije vezivanja STING proteina divljeg tipa i 2’,3’-cGAMP testnog jedinjenja izračunata je upotrebom odnosa iznosa na 520 nm podeljenog iznosom na 486 nm. Rezultati su pokazani u Tabelama 2 i 2A.
[0509] Gore pomenuti biotinilisani STING protein (divljeg tipa (WT)) pripremljen je sledećim postupkom.
2 1
Postupak pripreme biotinilisanog STING proteina divljeg tipa
[0510] ECOS (trgovačko ime) kompetentna E.coli BL21 (DE3) je kupljena od Nippon Gene Co., Ltd. Ampicilin, kanamicin, NaCl, glicerol, izopropiltiogalaktozid, (+)-biotin, imidazol, SEM nukleaza rekombinantna i BCA komplet za analizu proteina kupljeni su od Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Tripton, Bacto, i ekstrakt kvasca, Bacto kupljeni su od Difco Laboratories, tablete tris-om puferisanog fiziološkog rastvora (TBS), pH 7,6 kupljene su od Takara Bio Inc., lizozim (belance jajeta), 6x Cryst kupljen je od Seikagaku Corporation, i cOmplet (trgovačko ime) i koktel inhibitora proteaze bez EDTA kupljeni su od Roche. Upotrebljavan je Ni-NTA Superflow kertridž proizvođača QIAGEN, i upotrebljavan je HiLoad 26/60 Superdex 200 pg proizvođača GE Healthcare.
[0511] U pRSF1b (Novagen) koji ima izmenjeno mesto višestrukog kloniranja insertovana je Escherichia coli BirA, i transfektovana u ECOS JM109, pri čemu je konstruisan pRH8/FLAG-BirA. pET21HH/His-Avi-SUMO-FLAG-hTMEM173(139-379)(H232R) (koji je konstruisan postupkom pomenutim u PRIMERU 36) i pRH8/FLAG-BirA za Avi oznaka biotinilaciju istovremeno su transformisani u ECOS (trgovačko ime) kompetentnu E. coli BL21 (DE3) kako bi se pripremila ćelijska linija koja eksprimira His-Avi-SUMO-FLAG-hSTING (139-379, H232R). Eksprimirajuća ćelijska linija je dodata u LB medijum (10 g/l triptona, 5 g/l ekstrakta kvasca, 5 g/l NaCl) koji sadrži ampicilin (100 μg/l) i kanamicin (50 μg/l), i smeša je pre-kultivisana na 30 °C, i ekspandirana na TB medijumu (12 g/l triptona, 24 g/l ekstrakta kvasca, 4 ml/l glicerola, 2,3 g/l KH2PO4, 12,5 g/l K2HPO4) koji sadrži iste antibiotike, i smeša je kultivisana na 37 °C. Kada je turbidnost rastvora za kulturu dostigla 500 KU, temperatura kulture je smanjena na 16 °C, tome su dodati 0,1 mM izopropiltiogalaktozid i 50 μM (+)-biotin, i smeša je kultivisana tokom dopunskih 16 h.
[0512] Rastvor kulture je centrifugiran, dobijena tela gljivica su suspendovana u puferu za lizu (50 mM TrisHCl, 150 mM NaCl, 20 mM imidazol, 1 mg/ml lizozim, 5 U/ml SEM nukleaza, rekombinantna, kompleto bez EDTA, pH 7,6), i protein je ekstrahovan ultrazvučnom fragmentacijom. Tome je dodat reagens tako da je koncentracija soli ekstrakta podešena na 300 mM NaCl, i supernatant je sakupljen centrifugiranjem. Dobijeni supernatant je propušten kroz NiNTA superflow kertridž ekvilibrisan puferom za ispiranje (50 mM TrisHCl, 300 mM NaCl, 20 mM imidazol, pH 7,6), i kertridž je ispran puferom za ispiranje, i eluiran puferom za eluiranje (50 mM TrisHCl, 300 mM NaCl, 250 mM imidazol, pH 7,6). Eluat je propušten kroz HiLoad 26/60 Superdex 200 pg kolonu ekvilibrisanu puferom za skladištenje (50 mM TrisHCl, 150 mM NaCl, pH 7,6), i eluirana frakcija je sakupljena kao
2 2
biotinilisani His-Avi-SUMO-FLAG-hSTING (139-379, H232R). Koncentracija proteina je izmerena upotrebom BCA kompleta za analizu proteina, i frakcija je krio konzervirana na -80 °C dok nije upotrebljena.
Tabela 2: Test STING-vezivanja
Tabela 2A: Test STING-vezivanja
2
[0513] Kao što je jasno iz gore pomenutih rezultata, jedinjenje iz predmetne objave inhibira vezivanje STING proteina divljeg tipa i prirodnog liganda 2',3'-cGAMP, to jest, jedinjenje iz predmetne objave se vezuje za STING protein divljeg tipa.
PRIMER 36
Test reporter gena
Priprema različitih plazmida
(i) Konstrukcija ekspresionog plazmida humanog TMEM173 i slično
[0514] Ekspresioni plazmid humanog STING (u predmetnoj specifikaciji, ponekad se označava kao humani TMEM173) u E. coli dobijen je preklapanjem ekstenzije PCR za introdukciju mutacije upotrebom humanog TMEM173 cDNK klona (GeneCopoeia) kao templata. Prvo, PCR su izvedeni upotrebom dve vrste prajmera (5’-CCTGGCCCCAGCTGAGATCTCTG-3’ (C-hTMEM(139aa)-F) (SEQ. ID No. 3) i 5’-GTAAACCCGATCCTTGATGCCAGCACGGTCACCGGTC-3’ (hTMEM173(H232R)-R)) (SEQ. ID No. 4) i dve vrste prajmera (5’-CTGCCCCAGCAGACCGGTGACCGTGCTGGCATCAAG-3’ (hTMEM173(H232R)-F) (SEQ. ID No. 5) i 5’-ATAATAGCGGCCGCTCAAGAGAAATCCGTGCGGAGAGG-3’ (hTMEM173-st-Not-R) (SEQ. ID No. 6). Svaki PCR je izveden upotrebom PrimeStar MAX DNK polimeraze (Takara Bio Inc.) sukcesivno (1) na 98 °C tokom 1 min, (2) 25-puta ponavljanja na 98 °C tokom 10 sek i na 72 °C tokom 10 sek, i (3) na 72 °C tokom 1 min. Zatim je izveden PCR upotrebom dobijenog segmenta kao templata, i upotrebom dve vrste prajmera (C-hTMEM(139aa)-F i hTMEM173-st-Not-R). PCR je izveden upotrebom PrimeStar GXL DNK polimeraze (Takara Bio Inc.) sukcesivno (1) na 98 °C tokom 1 min, (2) 35-puta ponavljanja na 98 °C tokom 10 sek i na 72 °C tokom 1,5 min, i (3) na 72 °C tokom 1 min. Dobijeni segment je isečen sa Not I (Takara Bio Inc.), insertovan u Stu I/Not I mesto
2 4
vektora pri čemu je His-Avi-SUMO oznaka prikačena na pET21a (Novagen), upotrebom Ligation High (Toyobo Co., Ltd), i transfektovan u ECOS JM109 (Nippon Gene Co., Ltd.), prilikom čega je konstruisan pET21HH/His-Avi-SUMO-hTMEM173(139-379)(H232R).
[0515] Drugo, PCR je izveden upotrebom ovog plazmida kao templata, i upotrebom dve vrste prajmera (5’-CGACTACAAGGACGACGATGACAAGGGATCCCTGGCCCCAGCTGAGATCTCTG-3’ (C-FLAG-Bam-hTMEM173(139aa)-F) (SEQ. ID No. 7) i hTMEM173-st-Not-R). PCR je izveden upotrebom PrimeStar MAX DNK polimeraze sukcesivno (1) na 98 °C tokom 1 min, (2) 25-puta ponavljanja na 98 °C tokom 10 sek i na 72 °C tokom 10 sek, i (3) na 72 °C tokom 1 min. Dobijeni segment je isečen sa Not I, insertovan u Stu I/Not I mesto pET21a na koje je His-Avi-SUMO oznaka prikačena, upotrebom Ligation High, kao što je pomenuto iznad, i transfektovan u ECOS JM109, prilikom čega je konstruisan pET21HH/His-Avi-SUMO-FLAG-hTMEM173(139-379)(H232R).
[0516] Ekspresioni plazmid za reporter test dobijen je preklapanjem ekstenzije PCR za introdukciju mutacije upotrebom humanog TMEM173 cDNK klona kao templata, kao što je pomenuto iznad. Prvo, PCR su izvedeni upotrebom dve vrste prajmera (5’-GTACCCATACGATGTTCCAGATTACGCTGGATCCGCCACCATGCCCCACTCCAGC CTGCATC-3’ (HA-Bam-ko-hTMEM173-F) (SEQ. ID No. 8) i hTMEM173(H232R)-R) i dve vrste prajmera (hTMEM173(H232R)-F i hTMEM173-st-Not-R). Svaki PCR je izveden upotrebom PrimeStar MAX DNK polimeraze sukcesivno (1) na 98 °C tokom 1 min, (2) 25-puta ponavljanja na 98 °C tokom 10 sek i na 72 °C tokom 10 sek, i (3) na 72 °C tokom 1 min. Zatim je izveden PCR upotrebom dobijenog segmenta kao templata, i upotrebom dve vrste prajmera (5’-ATAATATCTAGAATTCGCCACCATGTACCCATACGATGTTCCAGATTACGC-3’ (Xba-Eco-ko-HA-F) (SEQ. ID No. 9) i hTMEM173-st-Not-R). PCR je izveden upotrebom PrimeStar GXL DNK polimeraze sukcesivno (1) na 98 °C tokom 1 min, (2) 35-puta ponavljanja na 98 °C tokom 10 sek, na 65 °C tokom 5 sek i na 72 °C tokom 1,5 min, i (3) na 72 °C tokom 1 min. Dobijeni segment je isečen sa Xba I (Takara Bio Inc.) i Not I, insertovan u Nhe I/Not I mesto zeocin-rezistencije vektora, pri čemu je mesto višestrukog kloniranja insertovano u pcDNA3.3 (Invitrogen), upotrebom Ligation High, i transfektovano u ECOS JM109, prilikom čega je konstruisan pcDNA3.3zeo/HA-hTMEM173(H232R).
[0517] Plazmid koji eksprimira humani TMEM173 (R232H) mutantnog tipa konstruisan je pomoću PCR upotrebom humanog TMEM173 cDNK klona (GeneCopoeia) kao templata, i upotrebom dve vrste prajmera (5’-
2
TTCCAGATTACGCTGGATCCGCCACCATGCCCCACTCCAGCCTGCATC-3’ (Bamko-hTMEM173v1-F) (SEQ. ID No. 10) i 5’-CCTCTAGACTCGAGCGGCCGCTCAAGAGAAATCCGTGCGGAGAGG-3’
(hTMEM173-st-Not-R2) (SEQ. ID No. 11). PCR je izveden upotrebom PrimeStar MAX DNK polimeraze (Takara Bio Inc.) sukcesivno (1) na 98 °C tokom 1 min, (2) 30-puta ponavljanja na 98 °C tokom 10 sek i na 68 °C tokom 10 sek, i (3) na 72 °C tokom 1 min. Dobijeni segment je insertovan na Bam HI/Not I mesto vektora, pri čemu je HA-oznaka prikačena na pcDNA3.1(+) (ThermoFischer), upotrebom Gibson Assembly (NEB), i transfektovan u ECOS JM109 (Nippon Gene Co., Ltd.), prilikom čega je konstruisan pcDNA3.1HA/HA-hTMEM173v1.
[0518] Plazmid koji eksprimira humani TMEM173 (H232R) divljeg tipa konstruisan je pomoću PCR upotrebom pcDNA3.3zeo/HA-hTMEM173(H232R) plazmida kao templata, i upotrebom dve vrste prajmera (5’-GGAGACCCAAGCTGGCTAGCGCCACCATGTACCCATACGATG-3’ (Nhe-ko-HA-F) (SEQ. ID No. 12) i 5’-CCTCTAGACTCGAGCGGCCGCTCAAGAGAAATCCGTGCGGAGAGG-3’
(hTMEM173-st-Not-R2) (SEQ. ID No. 11). PCR je izveden upotrebom PrimeStar MAX DNK polimeraze sukcesivno (1) na 98 °C tokom 1 min, (2) 30-puta ponavljanja na 98 °C tokom 10 sek i na 72 °C tokom 35 sek, i (3) na 72 °C tokom 1 min. Dobijeni segment je insertovan u Nhe I/Not I mesto pcDNA3.1zeo (ThermoFischer) upotrebom Gibson Assembly, i transfektovan u ECOS JM109, prilikom čega je konstruisan pcDNA3.1zeo/HA-hTMEM173(H232R).
(ii) Konstrukcija ekspresionog plazmida luciferaze svica
[0519] Ekspresioni plazmid luciferaze svica je konstruisan insercijom CMV promotora u reporterski vektor. PCR je izveden upotrebom pcDNA3.1(+) vektora (Invitrogen) kao templata, i upotrebom dve vrste prajmera (5’-ATAATAAGATCTGTTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAG-3’ (CMVPro-BglII-F) (SEQ. ID No. 13) i 5’-ATAATAAAGCTTGAGCTCTGCTTATATAGACCTCCC-3’ (CMVPro-HindIII-R) (SEQ. ID No. 14). PCR je izveden upotrebom PrimeStar MAX DNK polimeraze sukcesivno (1) na 98 °C tokom 1 min, (2) 25-puta ponavljanja na 98 °C tokom 10 sek i na 68 °C tokom 3 sek, i (3) na 72 °C tokom 1 min. Dobijeni segment je isečen sa Bgl II i Hind III (Takara Bio Inc.), insertovan u Bgl II/Hind III mesto pGL4.17 (Promega
2
Corporation) upotrebom Ligation High (Toyobo Co., Ltd), i transfektovan u ECOS JM109, prilikom čega je konstruisan pGL4.17/CMV Pro.
Test reporter gena (1)
[0520] Konstruisana je stabilna eksprimirajuća 293T ćelijska linija transfektovana sa pNL[NLucP/ISRE/Higro] vektorom (Promega, Fitchburg, WI, USA). pcDNA3.3zeo/HA-hTMEM173(H232R) je transfektovan u ćelije upotrebom FugeneHD (Promega, Fitchburg, WI, USA), i ćelije su kultivisane tokom jednog dana upotrebom Dulbekovog modifikovanog Eagle medijuma (DMEM) (Wako Pure Chemical Industries, Ltd) koji sadrži 10% fetalnog goveđeg seruma. Ćelije su sakupljene i kriokonzervirane pomoću CELLBANKER 1 (Nippon Zenyaku Kogyo Co., Ltd.).
[0521] Na dan testa, testno jedinjenje razblaženo test puferom (DMEM koji sadrži 0,1% goveđeg serumskog albumina bez masnih kiselina) je dodato u belu ploču sa 384 bunarića (Corning, NY, USA) sa 10 μl/bunariću. Kriokonzervirane ćelije su odmrznute, i ćelije suspendovane u test puferu su u njih zasejane sa 10 μl/bunariću (10000 ćelija/bunariću). Ćelije su kultivisane na 37 °C pod 5% CO2uslovima tokom 20 h, i u to je dodat rastvor NanoGlo reagensa (Promega, Fitchburg, WI, USA) (20 μl). Posle inkubacije tokom 5 min, nivo luminescencije je izmeren upotrebom EnVision (PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Nivo aktivnosti svakog testnog jedinjenja je izračunat kada se broj ćelija tretiranih sa 2’,3’-cGAMP (30 μM) smatrao kao 100%, i broj ćelija tretiranih rastvaračem smatrao kao 0%. Rezultati su pokazani u Tabeli 3.
Tabela 3: Test STING agonističke aktivnosti
2
[0522] Kao što je jasno iz gore pomenutih rezultata, jedinjenje iz predmetne objave ima agonističku aktivnost prema STING divljeg tipa.
Test reporter gena (2)
[0523] Konstruisana je stabilna eksprimirajuća 293T ćelijska linija transfektovana sa pNL[NLucP/ISRE/Hygro] vektorom (Promega, Fitchburg, WI, USA). Suspenzija koja je pripremljena transfekcijom pcDNA3.1zeo/HA-hTMEM173(H232R) ili pcDNA3.1HA/HA-hTMEM173v1 zajedno sa ekspresionim plazmidom luciferaze svica u ćelije upotrebom FugeneHD (Promega, Fitchburg, WI, USA), dodata je ploču sa 384 bunarića (Corning, NY, USA), i ćelije su kultivisane tokom dva dana. Rastvor za kulturu je uklonjen, i testno jedinjenje razblaženo test puferom (50 mM HEPES pH 7,0, 100 mM KCl, 3 mM MgCl2, 85 mM saharoza, 0,1 mM DTT, 0,2% BSA, 1 mM ATP, 0,1 mM GTP, 10 μg/ml digitonina) je dodato u to sa 15 μl/bunariću. Ćelije su kultivisane na 37 °C pod 5% CO2uslovima tokom 30 min, i uklonjen je test pufer. U to je dodat Dulbekov modifikovani Eagle medijum (DMEM) (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) koji sadrži 10% fetalnog goveđeg seruma sa 20 μl/bunariću, i ćelije su kultivisane na 37 °C pod 5% CO2uslovima tokom 4 h. Signali luminescenije poreklom od luciferaze svica i NanoLuc luciferaze izmereni su upotrebom EnVision (PerkinElmer, Waltham, MA, USA) u skladu sa Nano-Glo Dual-Luciferase Reporter Assay System (Promega, Fitchburg, WI, USA) protokolom. Odnos broja NanoLuc luciferaze podeljen sa brojem luciferaze svica je upotrebljen za izračunavanje. Nivo aktivnosti svakog testnog jedinjenja je izračunat kada se odnos ćelija tretiranih sa 2’,3’-cGAMP (30 μM) smatrao kao 100%, i odnos ćelija tretiranih rastvaračem smatrao kao 0%. Rezultati su pokazani u Tabeli 4.
2
Tabela 4: Test STING agonističke aktivnosti
[0524] Kao što je jasno iz gore pomenutih rezultata, jedinjenje iz predmetne objave ima agonističku aktivnost prema STING divljeg tipa i STING (R232H) mutiranog tipa.
PRIMER 37
Detekcija fosforilisanog IRF3 proteina u FaDu ćeliji
[0525] Humana ćelijska linija kancera larinksa FaDu ćelija (ATCC) je zasejana, medijum je zamenjen medijumom bez seruma jedan dan posle zasejavanja. Posle zamene, ćelija je kultivisana tokom jednog dana, i ćeliji je dodat prirodni ligand 2',3'-cGAMP (krajnja koncentracija; 30 μM) i testno jedinjenje (krajnja koncentracija; 15 μM ili 30 μM).6 h posle dodavanja, ćelija je isprana sa PBS, pripremljen je ekstrakt ćelije, i fosforilisani IRF3 protein
2
je detektovan ELISA postupkom ili Western blot postupkom. Aktivnost fosforilacije IRF3 proteina testnog jedinjenja je izračunata kada se vrednost u uzorku sa dodatim prirodnim ligandom 2’,3’-cGAMP u krajnjoj koncentraciji od 30 μM smatrala kao 100%. Rezultati su pokazani u Tabeli 5.
Tabela 5: Test fosforilacije IRF3 proteina
[0526] Kao što je jasno iz gore pomenutih rezultata, jedinjenje iz predmetne objave promoviše fosforilaciju IRF3, koji je nizvodni signal STING, kao kod prirodnog liganda 2’,3’-cGAMP. To će reći, jedinjenje iz predmetne objave aktivira nizvodni signal STING, kao STING agonist.
PRIMER 38
Primer formulacije
[0527] Medikament koji sadrži jedinjenje iz predmetne objave kao aktivni sastojak može se proizvesti, na primer, na osnovu sledeće kompozicije.
1. kapsula
(1) jedinjenje dobijeno iz Primera 1 10 mg
(2) laktoza 90 mg
(3) kristalna celuloza 70 mg
(4) magnezijum stearat 10 mg
1 kapsula 180 mg
24
[0528] (1), (2), (3) i 5 mg od (4) su pomešani i granulisani. Tome je dodato preostalih 5 mg od (4), i ukupna količina je napunjena u želatinsku kapsulu.
2. tableta
(1) jedinjenje dobijeno iz Primera 1 10 mg
(2) laktoza 35 mg
(3) kukuruzni skrob 150 mg
(4) kristalna celuloza 30 mg
(5) magnezijum stearat 5 mg
1 tableta 230 mg
[0529] (1), (2), (3), 20 mg od (4) i 2,5 mg od (5) su pomešani i granulisani. Tome su dodati preostalih 10 mg od (4) i preostalih 2,5 mg od (5), i smeša je formirana kompresijom kako bi se dobila tableta.
Industrijska primenljivost
[0530] Jedinjenje iz predmetne objave može imati STING agonističku aktivnost. Prema tome, jedinjenje iz predmetne objave može se upotrebljavati kao STING agonist, i može biti korisno kao agens za profilaksu ili lečenje bolesti povezanih sa STING uključujući kancer i slično.
[0531] Podrazumeva se da prethodno opisani primeri izvođenja i primeri nisu namenjeni da budu ograničavajući u bilo kom pogledu obima objave, i da su ovde predstavljeni patentni zahtevi namenjeni da obuhvate sve primere izvođenja i primere, bilo da su ovde eksplicitno predstavljeni ili ne.
24
24
24
24
24
24
2

Claims (16)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje koje ima Formulu (X):
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što: R<1>i R<2>su svaki nezavisno hidroksi grupa ili atom halogena; B<1>je:
    R<18>je vodonik ili C1-6alkil; i R<19>atom halogena B<2>je:
    i Q<2>i Q<4>su svaki nezavisno atom kiseonika ili atom sumpora.
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je R<19>fluoro ili hloro.
  3. 3. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 ili 2, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je R<1>hidroksi grupa.
  4. 4. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je R<2>hidroksilna grupa ili atom fluora.
  5. 5. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je Q<4>atom sumpora.
  6. 6. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je Q<2>atom kiseonika.
  7. 7. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je Q<2>atom sumpora.
  8. 8. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-7, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje ima formulu (XII):
  9. 9. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je R<18>vodonik ili metil.
  10. 10. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je R<18>vodonik i R<19>je atom fluora.
  11. 11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, odabrana iz grupe koja se sastoji od:
    2
    ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
  12. 12. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 odabrano iz grupe koja se sastoji od:
    ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
  13. 13. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-12, naznačeno time što je farmaceutski prihvatljiva so trietilamin so.
  14. 14. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-12, naznačeno time što je farmaceutski prihvatljiva so natrijumova so.
  15. 15. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-14, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.
  16. 16. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-14, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju kancera. 2
RS20210562A 2016-12-01 2017-12-01 Ciklični dinukleotidi kao sting (stimulator gena za interferon) agonisti RS61818B1 (sr)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2016234553 2016-12-01
JP2017107216A JP2018090562A (ja) 2016-12-01 2017-05-30 環状ジヌクレオチド
US201762589300P 2017-11-21 2017-11-21
PCT/IB2017/057588 WO2018100558A2 (en) 2016-12-01 2017-12-01 Cyclic dinucleotide
EP17817176.5A EP3512861B1 (en) 2016-12-01 2017-12-01 Cyclic dinucleotides as sting (stimulator of interferon genes) agonists

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS61818B1 true RS61818B1 (sr) 2021-06-30

Family

ID=66179467

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20210562A RS61818B1 (sr) 2016-12-01 2017-12-01 Ciklični dinukleotidi kao sting (stimulator gena za interferon) agonisti

Country Status (30)

Country Link
US (4) US10980825B2 (sr)
EP (2) EP3512861B1 (sr)
JP (2) JP6633255B1 (sr)
KR (1) KR102640802B1 (sr)
CN (1) CN110325543B (sr)
AU (1) AU2017370004B2 (sr)
CA (1) CA3045762A1 (sr)
CL (1) CL2019001485A1 (sr)
CO (1) CO2019007032A2 (sr)
CY (1) CY1124196T1 (sr)
DK (1) DK3512861T3 (sr)
EC (1) ECSP19046507A (sr)
ES (1) ES2866948T3 (sr)
HR (1) HRP20210726T1 (sr)
HU (1) HUE054450T2 (sr)
IL (1) IL267020B (sr)
JO (1) JOP20170192A1 (sr)
LT (1) LT3512861T (sr)
MA (1) MA46245A (sr)
MX (1) MX2019006397A (sr)
MY (1) MY190460A (sr)
PE (1) PE20210255A1 (sr)
PH (1) PH12019501222A1 (sr)
PL (1) PL3512861T3 (sr)
PT (1) PT3512861T (sr)
RS (1) RS61818B1 (sr)
SI (1) SI3512861T1 (sr)
UA (1) UA126390C2 (sr)
WO (1) WO2018100558A2 (sr)
ZA (1) ZA201904311B (sr)

Families Citing this family (104)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11453697B1 (en) 2015-08-13 2022-09-27 Merck Sharp & Dohme Llc Cyclic di-nucleotide compounds as sting agonists
EP3429596B1 (en) 2016-03-18 2022-08-31 Immune Sensor, LLC Cyclic di-nucleotide compounds and methods of use
KR102569881B1 (ko) 2016-07-06 2023-08-22 에프-스타 테라퓨틱스 인코포레이티드 질병 치료용 화합물, 조성물 및 방법
MA46535A (fr) 2016-10-14 2019-08-21 Prec Biosciences Inc Méganucléases modifiées spécifiques de séquences de reconnaissance dans le génome du virus de l'hépatite b
JOP20170192A1 (ar) 2016-12-01 2019-01-30 Takeda Pharmaceuticals Co داي نوكليوتيد حلقي
US20200113924A1 (en) * 2016-12-20 2020-04-16 Merck Sharp & Dohme Corp. Cyclic dinucleotide sting agonists for cancer treatment
EP3573718B1 (en) * 2017-01-27 2022-06-01 Janssen Biotech, Inc. Cyclic dinucleotides as sting agonists
WO2018156625A1 (en) 2017-02-21 2018-08-30 Board Of Regents,The University Of Texas System Cyclic dinucleotides as agonists of stimulator of interferon gene dependent signalling
WO2019043634A2 (en) 2017-08-30 2019-03-07 Beijing Xuanyi Pharmasciences Co., Ltd. CYCLIC DI-NUCLEOTIDES AS STIMULATORS OF INTERFERON GENE MODULATORS
WO2019046511A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Sperovie Biosciences, Inc. COMPOUNDS, COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF DISEASE
WO2019051489A1 (en) 2017-09-11 2019-03-14 Sperovie Biosciences, Inc. COMPOUNDS, COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATING DISEASE
US11584774B2 (en) 2017-09-11 2023-02-21 F-star Therapeutics, Inc. Compounds, compositions, and methods for the treatment of disease
WO2019084060A1 (en) 2017-10-24 2019-05-02 Silverback Therapeutics, Inc. CONJUGATES AND METHODS OF USE FOR THE SELECTIVE DELIVERY OF IMMUNOMODULATORY AGENTS
MX2020004858A (es) 2017-11-10 2020-10-01 Takeda Pharmaceuticals Co Compuestos moduladores de sting y metodos de elaboracion y uso.
EP3728283B1 (en) 2017-12-20 2023-11-22 Institute of Organic Chemistry and Biochemistry ASCR, V.V.I. 3'3' cyclic dinucleotides with phosphonate bond activating the sting adaptor protein
CN111511754B (zh) 2017-12-20 2023-09-12 捷克共和国有机化学与生物化学研究所 活化sting转接蛋白的具有膦酸酯键的2’3’环状二核苷酸
WO2019125974A1 (en) * 2017-12-20 2019-06-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Cyclic di-nucleotide compounds as sting agonists
EP3505188A1 (en) 2017-12-29 2019-07-03 Invivogen Pro-cyclic dinucleotide conjugates for cytokine induction
KR102526964B1 (ko) 2018-02-26 2023-04-28 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Hbv 복제 억제제로서의 치환된 피롤리진 화합물
TW202003032A (zh) 2018-03-23 2020-01-16 美商科迪亞克生物科學公司 包含ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ 促效劑之胞外囊泡
WO2019195181A1 (en) 2018-04-05 2019-10-10 Gilead Sciences, Inc. Antibodies and fragments thereof that bind hepatitis b virus protein x
TW202005654A (zh) 2018-04-06 2020-02-01 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 ２，２，─環二核苷酸
TWI818007B (zh) 2018-04-06 2023-10-11 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 2'3'-環二核苷酸
TWI833744B (zh) 2018-04-06 2024-03-01 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 3'3'-環二核苷酸
TW201945388A (zh) 2018-04-12 2019-12-01 美商精密生物科學公司 對b型肝炎病毒基因體中之識別序列具有特異性之最佳化之經工程化巨核酸酶
US20190359645A1 (en) 2018-05-03 2019-11-28 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 2'3'-cyclic dinucleotides comprising carbocyclic nucleotide
US12291548B2 (en) 2018-07-10 2025-05-06 Sperovie Biosciences, Inc. Compounds, compositions, and methods for the treatment of disease
WO2020028097A1 (en) 2018-08-01 2020-02-06 Gilead Sciences, Inc. Solid forms of (r)-11-(methoxymethyl)-12-(3-methoxypropoxy)-3,3-dimethyl-8-0x0-2,3,8,13b-tetrahydro-1h-pyrido[2,1-a]pyrrolo[1,2-c] phthalazine-7-c arboxylic acid
MA53438A (fr) 2018-08-24 2021-09-15 Codiak Biosciences Inc Vésicules extracellulaires ciblant des cellules dendritiques et utilisations associées
CN118878620A (zh) * 2018-09-06 2024-11-01 第一三共株式会社 环状二核苷酸衍生物及抗体药物偶联物的制造方法
SG11202101980VA (en) 2018-09-12 2021-03-30 Silverback Therapeutics Inc Methods and composition for the treatment of disease with immune stimulatory conjugates
WO2020057546A1 (zh) 2018-09-21 2020-03-26 上海迪诺医药科技有限公司 环状二核苷酸类似物、其药物组合物及应用
KR102858995B1 (ko) 2018-09-27 2025-09-11 피에르 파브르 메디카먼트 설포말레이미드계 링커 및 상응하는 컨쥬게이트
US11110106B2 (en) 2018-10-29 2021-09-07 Venenum Biodesign, LLC Sting agonists for treating bladder cancer and solid tumors
US11161864B2 (en) 2018-10-29 2021-11-02 Venenum Biodesign, LLC Sting agonists
FI3873903T3 (fi) 2018-10-31 2024-03-26 Gilead Sciences Inc Substituoituja 6-azabentsiimidatsoliyhdisteitä HPK1-inhibiittoreina
KR102658602B1 (ko) 2018-10-31 2024-04-19 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Hpk1 억제 활성을 갖는 치환된 6-아자벤즈이미다졸 화합물
CA3129011C (en) 2019-03-07 2023-12-19 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3'3'-cyclic dinucleotides and prodrugs thereof
EP3935065A1 (en) 2019-03-07 2022-01-12 Institute of Organic Chemistry and Biochemistry ASCR, V.V.I. 3'3'-cyclic dinucleotide analogue comprising a cyclopentanyl modified nucleotide as sting modulator
EP3934757B1 (en) 2019-03-07 2023-02-22 Institute of Organic Chemistry and Biochemistry ASCR, V.V.I. 2'3'-cyclic dinucleotides and prodrugs thereof
US12233356B2 (en) 2019-03-21 2025-02-25 Lonza Sales Ag Process for preparing extracellular vesicles
BR112021018694A2 (pt) 2019-03-21 2021-11-30 Codiak Biosciences Inc Vesículas extracelulares para distribuição de vacina
US20240108747A1 (en) 2019-03-21 2024-04-04 Lonza Sales Ag Extracellular vesicle conjugates and uses thereof
TWI751517B (zh) 2019-04-17 2022-01-01 美商基利科學股份有限公司 類鐸受體調節劑之固體形式
TW202210480A (zh) 2019-04-17 2022-03-16 美商基利科學股份有限公司 類鐸受體調節劑之固體形式
EP3962493A2 (en) 2019-05-03 2022-03-09 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Methods of modulating immune activity/level of irf or sting or of treating cancer, comprising the administration of a sting modulator and/or purinergic receptor modulator or postcellular signaling factor
US11787833B2 (en) 2019-05-09 2023-10-17 Aligos Therapeutics, Inc. Modified cyclic dinucleoside compounds as sting modulators
CA3139809A1 (en) 2019-05-10 2020-11-19 Takeda Pharmaceutical Company Limited Antibody drug conjugates
TWI826690B (zh) 2019-05-23 2023-12-21 美商基利科學股份有限公司 經取代之烯吲哚酮化物及其用途
MX2021015452A (es) 2019-06-25 2022-02-11 Gilead Sciences Inc Proteinas de fusion flt3l-fc y metodos de uso.
WO2021003445A1 (en) 2019-07-03 2021-01-07 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicles targeting t cells and uses thereof
CA3145889A1 (en) 2019-07-05 2021-01-14 Tambo, Inc. Trans-cyclooctene bioorthogonal agents and uses in cancer and immunotherapy
AU2020309837A1 (en) * 2019-07-09 2022-02-24 Takeda Pharmaceutical Company Limited Administration of sting agonist and checkpoint inhibitors
JP7576779B2 (ja) * 2019-07-19 2024-11-01 イミューンセンサー セラピューティクス、インコーポレイテッド 抗体－ｓｔｉｎｇアゴニスト複合体および免疫療法におけるそれらの使用
WO2021034804A1 (en) 2019-08-19 2021-02-25 Gilead Sciences, Inc. Pharmaceutical formulations of tenofovir alafenamide
WO2021046426A1 (en) * 2019-09-06 2021-03-11 Sperovie Biosciences, Inc. Cyclic dinucleotide sting agonists tethered to a pd-1 or ctla-4 antibodies
EP4034276A1 (en) 2019-09-25 2022-08-03 Codiak BioSciences, Inc. Methods of producing extracellular vesicles
US20230241089A1 (en) 2019-09-25 2023-08-03 Codiak Biosciences, Inc. Sting agonist comprising exosomes for treating neuroimmunological disorders
EP4034081A1 (en) 2019-09-25 2022-08-03 Codiak BioSciences, Inc. Extracellular vesicle compositions
JP2022551420A (ja) 2019-09-25 2022-12-09 コディアック バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド 腫瘍を治療するためのｉｌ－１２提示エクソソームとｓｔｉｎｇアゴニスト含有エクソソームとの併用
KR20220074917A (ko) 2019-09-30 2022-06-03 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Hbv 백신 및 hbv를 치료하는 방법
CA3151322A1 (en) 2019-10-01 2021-04-08 Silverback Therapeutics, Inc. Combination therapy with immune stimulatory conjugates
DK4069729T3 (da) 2019-12-06 2025-04-07 Prec Biosciences Inc Optimerede, modificerede meganukleaser med specificitet for en genkendelsessekvens i hepatitis b-virusgenomet
EP4106819A1 (en) 2020-02-21 2022-12-28 Silverback Therapeutics, Inc. Nectin-4 antibody conjugates and uses thereof
PH12022551961A1 (en) 2020-03-06 2023-10-09 Daiichi Sankyo Co Ltd Antibody-drug conjugate including novel cyclic dinucleotide derivative
US20230114434A1 (en) 2020-03-13 2023-04-13 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicles for treating neurological disorders
AR121620A1 (es) 2020-03-20 2022-06-22 Gilead Sciences Inc Profármacos de nucleósidos 4’-c-sustituidos-2-halo-2’-deoxiadenosina y métodos de preparación y uso de los mismos
AU2021236763A1 (en) 2020-03-20 2022-10-06 Lonza Sales Ag Extracellular vesicles for therapy
EP4134098A4 (en) 2020-04-10 2024-05-15 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Method of cancer therapy
US20230149560A1 (en) 2020-04-20 2023-05-18 Massachusetts Institute Of Technology Lipid compositions for delivery of sting agonist compounds and uses thereof
WO2021237100A1 (en) 2020-05-21 2021-11-25 Codiak Biosciences, Inc. Methods of targeting extracellular vesicles to lung
EP4171644A2 (en) * 2020-06-24 2023-05-03 Sapreme Technologies B.V. Saponin derivatives for use in medicine
KR20230043115A (ko) * 2020-06-24 2023-03-30 사프렘 테크놀로지스 비.브이. 히드라존에 기반한 사포닌 유도체
IL299508A (en) 2020-07-01 2023-02-01 Ars Pharmaceuticals Inc Anti-asgr1 antibody conjugates and uses thereof
CN116056765A (zh) 2020-08-07 2023-05-02 坦伯公司 反式环辛烯生物正交剂及在癌症和免疫疗法中的用途
JP7712352B2 (ja) 2020-08-07 2025-07-23 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド ホスホンアミドヌクレオチド類似体のプロドラッグ及びその薬学的使用
AU2021338014A1 (en) 2020-09-02 2023-03-09 Daiichi Sankyo Company, Limited Novel endo-β-N-acetylglucosaminidase
BR112023004271A2 (pt) * 2020-09-08 2023-04-04 Univ Texas Composições de ativação de sting polivalentes e usos das mesmas
EP4216993A2 (en) 2020-09-23 2023-08-02 Codiak BioSciences, Inc. Methods of producing extracellular vesicles
EP4217087A2 (en) 2020-09-23 2023-08-02 Codiak BioSciences, Inc. Process for preparing extracellular vesicles
WO2022066928A2 (en) 2020-09-23 2022-03-31 Codiak Biosciences, Inc. Process for preparing extracellular vesicles
WO2022066883A1 (en) 2020-09-23 2022-03-31 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicles comprising kras antigens and uses thereof
KR102558127B1 (ko) * 2020-10-23 2023-07-24 아주대학교산학협력단 아릴피페라진 유도체를 유효성분으로 포함하는 인터페론 유전자 자극제 조성물
EP4240488A1 (en) 2020-11-09 2023-09-13 Takeda Pharmaceutical Company Limited Antibody drug conjugates
CN116490244A (zh) * 2020-11-18 2023-07-25 武田药品工业株式会社 Sting激动剂、检查点抑制剂和辐射的施用
TW202233206A (zh) * 2020-11-18 2022-09-01 日商武田藥品工業股份有限公司 Ｓｔｉｎｇ促效劑、檢查點抑制劑及輻射之投與
EP4337223A1 (en) 2021-05-13 2024-03-20 Gilead Sciences, Inc. Combination of a tlr8 modulating compound and anti-hbv sirna therapeutics
TW202313094A (zh) 2021-05-18 2023-04-01 美商基利科學股份有限公司 使用ＦＬＴ３Ｌ—Ｆｃ融合蛋白之方法
AU2022298639C1 (en) 2021-06-23 2025-07-17 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
AU2022299051B2 (en) 2021-06-23 2025-03-13 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
KR20240005901A (ko) 2021-06-23 2024-01-12 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 디아실글리세롤 키나제 조절 화합물
KR20240025616A (ko) 2021-06-23 2024-02-27 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 다이아실글리세롤 키나제 조절 화합물
EP4137499A1 (en) 2021-08-17 2023-02-22 Ustav organicke chemie a biochemie AV CR, v.v.i. 7-substituted 7-deazaadenine-containing 2,3 -cyclic dinucleotides
WO2023056468A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicle comprising cholesterol tagged sting-agonist
JPWO2023167238A1 (sr) 2022-03-02 2023-09-07
CN120239705A (zh) 2022-07-21 2025-07-01 萤火虫生物股份有限公司 糖皮质激素受体激动剂和其缀合物
KR20250054799A (ko) 2022-08-29 2025-04-23 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 변이 Fc 영역을 포함하는 항체 약물 콘쥬게이트
TW202434307A (zh) * 2023-01-18 2024-09-01 大陸商泰勵生物科技（上海）有限公司 抗體偶聯藥物及其用途
US20250345389A1 (en) 2024-05-13 2025-11-13 Gilead Sciences, Inc. Combination therapies
WO2025240246A1 (en) 2024-05-13 2025-11-20 Gilead Sciences, Inc. Combination therapies with ribavirin
WO2025240244A1 (en) 2024-05-13 2025-11-20 Gilead Sciences, Inc. Combination therapies comprising bulevirtide and lonafarnib for use in the treatment of hepatitis d virus infection
WO2025240242A1 (en) 2024-05-13 2025-11-20 Gilead Sciences, Inc. Combination therapies with ribavirin
WO2026053158A1 (en) 2024-09-06 2026-03-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Dazostinag or conjugates thereof for treatment of neuroendocrine neoplasms
WO2026053159A1 (en) 2024-09-06 2026-03-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Dazostinag or conjugates thereof for treatment of adenoid cystic carcinomas

Family Cites Families (88)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
IL90359A0 (en) 1988-05-26 1989-12-15 University Patents Inc Nucleoside and polynucleotide thiophosphoramidite and phosphorodithioate compounds and their production
GB2257704B (en) 1991-07-18 1995-03-01 Erba Carlo Spa Cyclic oligonucleotides phosphorothioates
IL166244A0 (en) 2001-07-12 2006-01-15 Jefferson Foote Super humanized antibodies
EP2669377A3 (en) 2003-04-17 2015-10-14 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Modified iRNA agents
WO2005005450A1 (ja) 2003-07-15 2005-01-20 Mitsui Chemicals, Inc. 環状ビスジヌクレオシドの合成方法
CA2533873A1 (en) 2003-07-28 2005-04-07 David K.R. Karaolis Method for attenuating virulence of microbial pathogens and for inhibiting microbial biofilm formation
US7592326B2 (en) 2004-03-15 2009-09-22 Karaolis David K R Method for stimulating the immune, inflammatory or neuroprotective response
JP4887284B2 (ja) 2004-03-15 2012-02-29 デイビッド・ケイ・アール・カラオリス 癌細胞の増殖を阻害するための、または癌細胞のアポトーシスを増大させるための方法
EP1768998A2 (en) 2004-04-27 2007-04-04 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Single-stranded and double-stranded oligonucleotides comprising a 2-arylpropyl moiety
US20090012038A1 (en) 2004-10-18 2009-01-08 Spormann Alfred M Methods for microbial biofilm destruction and interference with microbial cellular physiology
EP1782826A1 (en) 2005-11-08 2007-05-09 GBF Gesellschaft für Biotechnologische Forschung mbH PQS and c-diGMP and its conjugates as adjuvants and their uses in pharmaceutical compositions
US8076303B2 (en) * 2005-12-13 2011-12-13 Spring Bank Pharmaceuticals, Inc. Nucleotide and oligonucleotide prodrugs
US8034921B2 (en) 2006-11-21 2011-10-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. IRNA agents targeting CCR5 expressing cells and uses thereof
WO2009133560A1 (en) 2008-04-29 2009-11-05 Smart Assays Non-hydrolyzable and permeable cyclic bis-[nucleotide monophosphate] derivatives and uses thereof
WO2011003025A1 (en) 2009-07-01 2011-01-06 Rutgers, The State University Of New Jersey Synthesis of cyclic diguanosine monophosphate and thiophosphate analogs thereof
MX342945B (es) 2009-07-06 2016-10-18 Ontorii Inc * Profármacos de ácido nucleico novedosos y métodos de uso de los mismos.
CA2774032C (en) 2009-10-23 2019-03-26 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Anti-gcc antibody molecules and related compositions and methods
US8450293B2 (en) 2010-08-10 2013-05-28 Rutgers, The State University Of New Jersey Synthesis and characterization of C8 analogs of c-di-GMP
WO2013075035A1 (en) 2011-11-18 2013-05-23 Alnylam Pharmaceuticals Rnai agents, compositions and methods of use thereof for treating transthyretin (ttr) associated diseases
US9156915B2 (en) 2012-04-26 2015-10-13 Thomas Jefferson University Anti-GCC antibody molecules
JP6257607B2 (ja) 2012-06-08 2018-01-10 アデュロ バイオテック，インコーポレイテッド 癌免疫療法のための組成物および方法
US9090646B2 (en) 2012-12-05 2015-07-28 Rutgers, The State University Of New Jersey Biotinylated compounds
MX361680B (es) 2012-12-13 2018-12-13 Aduro Biotech Inc Composiciones que comprenden dinucleótidos de purina cíclicos que tienen estereoquímicas definidas y métodos para su preparación y uso.
EP3398616A3 (en) 2012-12-19 2019-01-30 Board of Regents, The University of Texas System Pharmaceutical targeting of a mammalian cyclic di-nucleotide signaling pathway
WO2014109256A1 (ja) 2013-01-09 2014-07-17 国立大学法人東北大学 トリアゾール連結型環状ジヌクレオチド類縁体
SG10201708821RA (en) * 2013-04-29 2017-12-28 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Compositions and methods for altering second messenger signaling
JP2016518140A (ja) * 2013-05-03 2016-06-23 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア Ｉ型インターフェロンの環状ジヌクレオチド誘導法
ES2754269T3 (es) * 2013-05-18 2020-04-16 Aduro Biotech Inc Composiciones y métodos de activación de la señalización dependiente del "estimulador de los genes de interferón
JP6400082B2 (ja) * 2013-05-18 2018-10-03 アデュロ バイオテック，インコーポレイテッド 「インターフェロン遺伝子の刺激因子」依存性シグナル伝達を抑制するための組成物および方法
US9549944B2 (en) * 2013-05-18 2017-01-24 Aduro Biotech, Inc. Compositions and methods for inhibiting “stimulator of interferon gene”—dependent signalling
US10176292B2 (en) 2013-07-31 2019-01-08 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center STING crystals and modulators
US20160287623A1 (en) 2013-11-19 2016-10-06 The University Of Chicago Use of sting agonist as cancer treatment
US10092644B2 (en) 2013-11-22 2018-10-09 Brock University Use of fluorinated cyclic dinucleotides as oral vaccine adjuvants
CR20160564A (es) * 2014-06-04 2017-01-20 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Dinucleótidos cíclicos como moduladores de sting
CN107148424B (zh) 2014-12-16 2021-01-08 凯拉治疗股份公司 用于诱导细胞因子的环状二核苷酸
EP3233191A1 (en) 2014-12-16 2017-10-25 Invivogen Combined use of a chemotherapeutic agent and a cyclic dinucleotide for cancer treatment
KR102586317B1 (ko) * 2014-12-22 2023-10-06 바스프 에스이 코발트 및/또는 코발트 합금을 포함하는 기판의 폴리싱을 위한 화학 기계적 폴리싱 (cmp) 조성물의 사용
GB201501462D0 (en) * 2015-01-29 2015-03-18 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Novel compounds
CA2979215A1 (en) 2015-03-10 2016-09-15 Aduro Biotech, Inc. Compositions and methods for activating "stimulator of interferon gene"-dependent signalling
FR3037784B1 (fr) * 2015-06-29 2017-12-15 Gexfix Sa Dispositif de fixation externe dynamique d'osteosynthese
WO2017011444A1 (en) 2015-07-13 2017-01-19 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Methods and compositions for treating b cell cancers
WO2017011622A1 (en) 2015-07-14 2017-01-19 Spring Bank Pharmaceuticals, Inc. Compounds and compositions that induce rig-i-and other pattern recongnition receptors
CN108025051B (zh) 2015-07-29 2021-12-24 诺华股份有限公司 包含抗pd-1抗体分子的联合疗法
MA42608A (fr) 2015-08-13 2018-06-20 Merck Sharp & Dohme Composés de di-nucléotide cyclique en tant qu'agonistes sting (stimulateur de gène interféron)
CN108430503A (zh) 2015-10-28 2018-08-21 艾杜罗生物科技公司 用于激活“干扰素基因刺激物”依赖性信号传导的组合物和方法
US20170146519A1 (en) 2015-11-20 2017-05-25 Oregon Health & Science University Sting agonists and methods of selecting sting agonists
CA3006930A1 (en) 2015-12-03 2017-06-08 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Cyclic purine dinucleotides as modulators of sting
DE212016000029U1 (de) 2015-12-07 2017-07-30 Opi Vi - Ip Holdco Llc Zusammensetzungen von Antikörperkonstrukt-Agonist-Konjugaten
WO2017106740A1 (en) 2015-12-16 2017-06-22 Aduro Biotech, Inc. Methods for identifying inhibitors of "stimulator of interferon gene"-dependent interferon production
WO2017123657A1 (en) 2016-01-11 2017-07-20 Gary Glick Cyclic dinucleotides for treating conditions associated with sting activity such as cancer
KR20250049441A (ko) 2016-01-11 2025-04-11 인네이트 튜머 이뮤니티, 인코포레이티드 Sting 활성과 연관된 상태 예컨대 암의 치료를 위한 시클릭 디뉴클레오티드
EP3429596B1 (en) 2016-03-18 2022-08-31 Immune Sensor, LLC Cyclic di-nucleotide compounds and methods of use
TWI663991B (zh) 2016-03-23 2019-07-01 中央研究院 薄殼聚合物奈米粒子及其用途
PE20181884A1 (es) 2016-04-07 2018-12-07 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Amidas heterociclicas utiles como moduladores de proteinas
ES2781474T3 (es) 2016-04-07 2020-09-02 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Amidas heterocíclicas útiles como moduladores de proteínas
WO2017186711A1 (en) 2016-04-25 2017-11-02 Invivogen Novel complexes of immunostimulatory compounds, and uses thereof
US10464969B2 (en) 2016-05-05 2019-11-05 Novartis Ag Amatoxin derivatives and conjugates thereof as inhibitors of RNA polymerase
WO2018009466A1 (en) 2016-07-05 2018-01-11 Aduro Biotech, Inc. Locked nucleic acid cyclic dinucleotide compounds and uses thereof
KR102569881B1 (ko) 2016-07-06 2023-08-22 에프-스타 테라퓨틱스 인코포레이티드 질병 치료용 화합물, 조성물 및 방법
TW201803886A (zh) 2016-07-06 2018-02-01 史貝羅威生物科學有限公司 化合物、組合物及用於治療疾病之方法
JP2019521138A (ja) 2016-07-15 2019-07-25 スペロビー・バイオサイエンシズ・インコーポレイテッド 疾患の治療のための化合物、組成物、および方法
WO2018013887A1 (en) 2016-07-15 2018-01-18 Sperovie Biosciences, Inc. Compounds, compositions, and methods for the treatment of disease
WO2018045204A1 (en) 2016-08-31 2018-03-08 Ifm Therapeutics, Inc Cyclic dinucleotide analogs for treating conditions associated with sting (stimulator of interferon genes) activity
US10537590B2 (en) 2016-09-30 2020-01-21 Boehringer Ingelheim International Gmbh Cyclic dinucleotide compounds
RS62410B1 (sr) 2016-10-04 2021-10-29 Merck Sharp & Dohme Benzo[b]tiofenska jedinjenja kao agonisti sting
WO2018065360A1 (de) 2016-10-07 2018-04-12 Biolog Life Science Institute Forschungslabor Und Biochemica-Vertrieb Gmbh Benzimidazolhaltige cyclische dinukleotide, verfahren zu deren herstellung und ihre verwendung zur aktivierung von stimulator von interferongenen (sting)-abhängigen signalwegen
JOP20170188A1 (ar) 2016-11-25 2019-01-30 Janssen Biotech Inc ثنائي النوكليوتيدات الحلقية كمنبهات ستينغ (sting)
JP2018090562A (ja) * 2016-12-01 2018-06-14 武田薬品工業株式会社 環状ジヌクレオチド
JOP20170192A1 (ar) 2016-12-01 2019-01-30 Takeda Pharmaceuticals Co داي نوكليوتيد حلقي
US20200113924A1 (en) 2016-12-20 2020-04-16 Merck Sharp & Dohme Corp. Cyclic dinucleotide sting agonists for cancer treatment
AU2017378782A1 (en) 2016-12-20 2019-07-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Combinations of PD-1 antagonists and cyclic dinucleotide sting agonists for cancer treatment
WO2018119117A1 (en) 2016-12-22 2018-06-28 The Regents Of The University Of California Methods of producing cyclic dinucleotides
US11021511B2 (en) 2017-01-27 2021-06-01 Janssen Biotech, Inc. Cyclic dinucleotides as sting agonists
EP3573718B1 (en) 2017-01-27 2022-06-01 Janssen Biotech, Inc. Cyclic dinucleotides as sting agonists
US20190336615A1 (en) 2017-01-27 2019-11-07 Silverback Therapeutics, Inc. Tumor targeting conjugates and methods of use thereof
US20200055883A1 (en) 2017-02-17 2020-02-20 Eisai R&D Management Co., Ltd. Cyclic di-nucleotides derivative for the treatment of cancer
WO2018156625A1 (en) 2017-02-21 2018-08-30 Board Of Regents,The University Of Texas System Cyclic dinucleotides as agonists of stimulator of interferon gene dependent signalling
CN106667914B (zh) 2017-03-13 2022-02-01 杭州星鳌生物科技有限公司 靶向脂质体-环二核苷酸的组成、制备方法及其在抗肿瘤中的应用
JOP20190218A1 (ar) 2017-03-22 2019-09-22 Boehringer Ingelheim Int مركبات ثنائية النيوكليوتيدات حلقية معدلة
WO2018198084A1 (en) 2017-04-27 2018-11-01 Lupin Limited Cyclic di-nucleotide compounds with tricyclic nucleobases
UY37695A (es) 2017-04-28 2018-11-30 Novartis Ag Compuesto dinucleótido cíclico bis 2’-5’-rr-(3’f-a)(3’f-a) y usos del mismo
AR113224A1 (es) 2017-04-28 2020-02-19 Novartis Ag Conjugados de anticuerpo que comprenden un agonista de sting
WO2019043634A2 (en) 2017-08-30 2019-03-07 Beijing Xuanyi Pharmasciences Co., Ltd. CYCLIC DI-NUCLEOTIDES AS STIMULATORS OF INTERFERON GENE MODULATORS
JP7208225B2 (ja) 2017-08-31 2023-01-18 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗癌剤としての環状ジヌクレオチド
WO2019046496A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Bristol-Myers Squibb Company CYCLIC DINUCLEOTIDES AS ANTICANCER AGENTS
MX2020002869A (es) 2017-09-15 2020-07-24 Aduro Biotech Inc Compuestos de pirazolopirimidinona y usos de los mismos.
EP4240488A1 (en) 2020-11-09 2023-09-13 Takeda Pharmaceutical Company Limited Antibody drug conjugates

Also Published As

Publication number Publication date
ECSP19046507A (es) 2019-09-30
ES2866948T3 (es) 2021-10-20
US20240066047A1 (en) 2024-02-29
CY1124196T1 (el) 2022-05-27
WO2018100558A9 (en) 2019-05-09
WO2018100558A8 (en) 2019-06-20
US20210106607A1 (en) 2021-04-15
NZ754737A (en) 2025-08-29
LT3512861T (lt) 2021-05-25
PH12019501222A1 (en) 2019-12-02
SI3512861T1 (sl) 2021-08-31
CN110325543B (zh) 2023-03-31
JP2020504085A (ja) 2020-02-06
JOP20170192A1 (ar) 2019-01-30
AU2017370004A1 (en) 2019-07-11
EP3868384A1 (en) 2021-08-25
CL2019001485A1 (es) 2020-01-10
WO2018100558A2 (en) 2018-06-07
PL3512861T3 (pl) 2021-09-20
BR112019011120A2 (pt) 2019-10-01
HUE054450T2 (hu) 2021-09-28
KR20190113768A (ko) 2019-10-08
CO2019007032A2 (es) 2019-10-21
HRP20210726T1 (hr) 2021-10-01
EP3512861B1 (en) 2021-02-17
IL267020A (en) 2019-07-31
MX2019006397A (es) 2019-08-14
US20190192549A1 (en) 2019-06-27
KR102640802B1 (ko) 2024-02-26
CN110325543A (zh) 2019-10-11
DK3512861T3 (da) 2021-05-03
US12171777B2 (en) 2024-12-24
JP6633255B1 (ja) 2020-01-22
JP2020055860A (ja) 2020-04-09
IL267020B (en) 2022-01-01
MY190460A (en) 2022-04-21
PT3512861T (pt) 2021-04-29
UA126390C2 (uk) 2022-09-28
MA46245A (fr) 2019-07-24
US11666594B2 (en) 2023-06-06
AU2017370004B2 (en) 2022-03-10
US10980825B2 (en) 2021-04-20
CA3045762A1 (en) 2018-06-07
ZA201904311B (en) 2022-04-28
EP3512861A2 (en) 2019-07-24
JP7229907B2 (ja) 2023-02-28
US20250205270A1 (en) 2025-06-26
US20210137962A9 (en) 2021-05-13
PE20210255A1 (es) 2021-02-10
EP3868384B1 (en) 2026-02-25
WO2018100558A3 (en) 2018-07-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7229907B2 (ja) ＳＴＩＮＧ （ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇｅｎｅｓ）アゴニストとしての環状ジヌクレオチド
TWI825170B (zh) 抗體藥物結合物及其應用及用途
TWI769195B (zh) 環狀二核苷酸
TW202140044A (zh) 含有新穎環狀雙核苷酸衍生物之抗體藥物共軛物
BR112019011120B1 (pt) Compostos dinucleotídeos cíclicos, composição e uso relacionados
HK40008780A (en) Cyclic dinucleotides as sting (stimulator of interferon genes) agonists
HK40008780B (en) Cyclic dinucleotides as sting (stimulator of interferon genes) agonists
RU2809547C2 (ru) Новое производное циклического динуклеотида и его конъюгат антитело-лекарственное средство