ES2910027T3

ES2910027T3 - Proteínas de unión a antígeno anti-TIGIT y métodos de uso de las mismas

Info

Publication number: ES2910027T3
Application number: ES16778648T
Authority: ES
Inventors: Daniel Hicklin; William Winston; Cynthia Seidel-Dugan; Nels P Nielson
Original assignee: Potenza Therapeutics Inc
Current assignee: Potenza Therapeutics Inc
Priority date: 2015-10-01
Filing date: 2016-09-29
Publication date: 2022-05-11
Anticipated expiration: 2036-09-29
Also published as: UA125062C2; HUE058755T2; MX391159B; SG10201912736UA; PH12018500714A1; KR20180068990A; CN108368176B; RU2020124191A; RU2729379C1; MY192226A; HK1253235A1; MX2018003898A; US20170340735A1; US20170165366A1; BR112018006531A2; EP3356413B1; US10507244B2; US11590224B2; AU2016331052A1; WO2017059095A1

Abstract

Un anticuerpo aislado, o fragmento de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a TIGIT humana (hTIGIT; SEQ ID NO: 1), que comprende: (a) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 32, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 40, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 54, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71; (b) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 31, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 40, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 54, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71; (c) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 31, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 39, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 51, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71; (d) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 31, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 40, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 52, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71; o (e) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 31, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 41, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 53, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71.

Description

DESCRIPCIÓN

Proteínas de unión a antígeno anti-TIGIT y métodos de uso de las mismas

Campo

En la presente descripción se proporcionan proteínas de unión a antígeno (ABP) con especificidad de unión para el inmunorreceptor de células T con dominios Ig e ITIM (TIGIT) y composiciones que comprenden tales ABP, que incluyen composiciones farmacéuticas, composiciones de diagnóstico y kits. También se proporcionan métodos para fabricar las ABP de TIGIT y métodos para usar las ABP de TIGIT, por ejemplo, con fines terapéuticos, diagnósticos y de investigación.

Antecedentes de la invención

La TIGIT se identificó como un receptor coinhibidor que limita la respuesta de las células T al cáncer y la infección crónica. Véase Grogan y otros, J. Immunol., 2014, 192: (Suplemento 1) 203.15. Se demostró que el bloqueo de TIGIT contribuye a mejorar la función efectora de las células T CD8+ y mejora la eliminación viral y el rechazo del tumor. Véase id.

Por lo tanto, existe la necesidad de tratamientos que puedan antagonizar a TIGIT. En la presente descripción se proporcionan ABP que satisfacen esta necesidad.

Resumen

La invención es como se define en las reivindicaciones. Cualquiera de las referencias en la descripción a los métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método de tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para diagnóstico).

En un primer aspecto de la invención, se proporciona un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que se une a antígeno que se une específicamente a TIGIT humana (hTIGIT; SEQ ID NO:1), que comprende:

(a) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 32, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 40, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 54, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71;

(b) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 31, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 40, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 54, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71;

(c) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 31, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 39, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 51, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71;

(d) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 31, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 40, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 52, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71; o

(e) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 31, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 41, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 53, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71.

En un segundo aspecto de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo o fragmento del mismo que se une al antígeno del primer aspecto y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En un tercer aspecto de la invención, se proporciona el anticuerpo, o fragmento del mismo del primer aspecto que se une al antígeno, o la composición farmacéutica del segundo aspecto, para su uso como medicamento.

En un cuarto aspecto de la invención, se proporciona el anticuerpo, o fragmento del mismo que se une al antígeno del primer aspecto o la composición farmacéutica del segundo aspecto, para usar en el tratamiento de un cáncer o infección viral.

En un quinto aspecto de la invención, se proporciona el anticuerpo, o fragmento del mismo que se une al antígeno del primer aspecto o la composición farmacéutica del segundo aspecto, para usar como medicamento en el tratamiento de una enfermedad o afección que no respondía. a una terapia previa.

En un sexto aspecto de la invención, se proporciona un polinucleótido aislado que codifica un anticuerpo, o fragmento del mismo que se une a antígeno del primer aspecto.

En un séptimo aspecto de la invención, se proporciona un vector que comprende el polinucleótido del sexto aspecto. En un octavo aspecto de la invención, se proporciona una célula huésped que comprende el polinucleótido del sexto aspecto o el vector del séptimo aspecto.

En un noveno aspecto de la invención, se proporciona un método para producir un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo del primer aspecto, que comprende expresar el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo en la célula huésped del octavo aspecto y aislar el anticuerpo expresado, o fragmento de unión a antígeno del mismo.

En un décimo aspecto de la invención, se proporciona un kit que comprende la composición farmacéutica del segundo aspecto e instrucciones para el uso de tal composición farmacéutica.

En la presente descripción se proporcionan ABP que se unen específicamente a TIGIT y métodos para usar tales ABP.

En algunas modalidades, la TIGIT se selecciona de TIGIT humana ("hTIGIT", SEQ ID NO:1), TIGIT de mono cynomolgus ("cTIGIT", SEQ ID NO:2) y TIGIT murina ("mTIGIT", SEQ ID NO:3 o 138).

En algunas modalidades, la ABP comprende un anticuerpo. En algunos aspectos, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. En algunos aspectos, el anticuerpo es un anticuerpo quimérico. En algunos aspectos, el anticuerpo es un anticuerpo humanizado. En algunos aspectos, el anticuerpo es un anticuerpo humano. En algunos aspectos, la ABP comprende un fragmento de anticuerpo. En algunas modalidades, la ABP comprende una estructura alternativa.

En algunas modalidades, la TIGIT se expresa en la superficie de una célula diana. En algunos aspectos, la ABP antagoniza a TIGIT expresada en la superficie de la célula diana.

En algunas modalidades, la célula diana se selecciona de una célula T efectora, una célula T reguladora, una célula asesina natural (NK) y una célula T asesina natural (NKT). En algunos aspectos, la célula diana es una célula T efectora seleccionada de una célula T colaboradora (CD4-positiva, "CD4+"), una célula T citotóxica (CD8-positiva, "CD8+") y sus combinaciones. En algunos aspectos, la célula diana es una célula T reguladora seleccionada de una célula T reguladora CD4+CD25+Foxp3+, una célula T reguladora CD8+CD25+ y sus combinaciones.

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción inducen varios efectos biológicos asociados con la inhibición de TIGIT. En algunos aspectos, una ABP proporcionada en la presente descripción evita la inhibición de una célula T efectora. En algunos aspectos, la ABP coestimula una célula T efectora. En algunos aspectos, la ABP inhibe la supresión de una célula T efectora por una célula T reguladora. En algunos aspectos, la ABP aumenta el número de células T efectoras en un tejido o en la circulación sistémica. En algunos aspectos, el tejido es un tumor. En algunos aspectos, el tejido es un tejido que está infectado con un virus.

También se proporcionan kits que comprenden una o más de las ABP proporcionadas en la presente descripción, e instrucciones para el uso de las ^aB^p. También se proporcionan kits que comprenden una o más de las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente descripción e instrucciones para el uso de la composición farmacéutica.

También se proporcionan polinucleótidos aislados que codifican las ABP proporcionadas en la presente descripción y porciones de los mismos.

También se proporcionan vectores que comprenden tales polinucleótidos.

También se proporcionan células huésped recombinantes que comprenden tales polinucleótidos y células huésped recombinantes que comprenden tales vectores.

También se proporcionan métodos para producir una ABP proporcionada en la presente descripción mediante el uso de los polinucleótidos, vectores o células huésped proporcionados en la presente descripción.

También se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden las ABP proporcionadas en la presente descripción y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona una primera familia de ABP, en donde una ABP de tal familia comprende: (a) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 32, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 40, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 54, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71; (b) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 31, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 40, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 54, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71; (c) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 31, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 39, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 51, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71; (d) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 31, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 40, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 52, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71; o (e) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 31, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 41, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 53, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71.

En algunas modalidades, una ABP de tal primera familia comprende: (a) una secuencia VH de SEQ ID NO: 13 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 26; (b) una secuencia VH de SEQ ID NO: 12 y una secuencia VL de SEQ ID ⁿO: 26; (c) una secuencia VH de SEQ ID NO: 14 y una secuencia VL de SEQ ID n O: 26; (d) una secuencia VH de SEQ ID nO: 15 y una secuencia VL de SEQ ID nO: 26; (e) una secuencia VH de SEQ ID NO: 9 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 26; (f) una secuencia VH de SEQ ID NO: 10 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 26; o (g) una secuencia VH de SEQ ID NO: 11 y una secuencia VL de SEQ ID ⁿO: 26.

En algunas modalidades, una ABP de tal primera familia comprende: (a) (i) una cadena pesada de SEQ ID NO: 99 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 100 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; (b) (i) una cadena pesada de SEQ ID NO: 97 y una cadena ligera de SeQ ID NO: 92; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 98 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; (c) (i) una cadena pesada de SeQ ID NO: 101 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 102 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; (d) (i) una cadena pesada de SEQ ID NO: 103 y una cadena ligera de Se Q ID NO: 92; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 104 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; (e) (i) una cadena pesada de s EQ ID NO: 90 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 91 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; (f) (i) una cadena pesada de ^sEQ ID NO: 93 y una cadena ligera de S^eQ ID NO: 92; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 94 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; o (g) (i) una cadena pesada de SEQ ID NO: 95 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 96 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona una segunda familia de ABP, en donde una ABP de tal familia comprende: (a) una CDR-H3 de SeQ ID NO: 29, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 37, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 49, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 63, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 67, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 70; (b) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 30, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 37, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 50, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 63, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 67, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 70; (c) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 29, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 38, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 50, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 63, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 67, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 70; (d) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 29, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 36, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 48, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 63, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 67, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 70; o (e) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 29, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 37, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 50, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 63, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 67, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 70.

En algunos ejemplos, una ABP de tal segunda familia comprende: (a) una secuencia VH de SEQ ID NO: 5 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 25; (b) una secuencia VH de SEQ ID NO: 7 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 25; (c) una secuencia VH de SEQ ID NO: 8 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 25; (d) una secuencia VH de SEQ ID NO: 4 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 25; o (e) una secuencia VH de SEQ ID NO: 6 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 25.

En algunos ejemplos, una ABP de tal segunda familia comprende: (a) (i) una cadena pesada de SEQ ID NO: 82 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 83 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81; (b) (i)una cadena pesada de ^sEQ ID NO: 86 y una cadena ligera de S^eQ ID NO: 81; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 87 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81; (c) (i) una cadena pesada de ^sEQ ID NO: 88 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 89 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81; (d) (i) una cadena pesada de SEQ ID NO: 79 y una cadena ligera de SeQ ID NO: 81; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 80 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81; o (e) (i) una cadena pesada de ^sEQ ID NO: 84 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 85 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona una tercera familia de ABP, en donde una ABP de tal familia comprende (a) una CDR-H3 de SEQ ID ⁿO: 33, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 43, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 60, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 65, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 69, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 72; (b) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 34, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 43, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 60, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 65, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 69, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 72; (c) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 33, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 44, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 59, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 65, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 69, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 72; (d) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 33, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 42, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 58, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 65, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 69, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 72; (e) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 33, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 42, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 59, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 65, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 69, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 72; o (f) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 34, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 44, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 61, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 65, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 69, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 72.

En algunos ejemplos, una ABP de tal tercera familia comprende: (a) una secuencia VH de SEQ ID NO: 18 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 27; (b) una secuencia VH de SEQ ID No : 19 y una secuencia VL de SEQ ID nO: 27; (c) una secuencia VH de SEQ ID NO: 21 y una secuencia VL de SEQ ID ⁿO: 27; (d) una secuencia VH de SEQ ID n O: 16 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 27; (e) una secuencia VH de SEQ iD NO: 17 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 27; o (f) una secuencia VH de SEQ ID No : 20 y una secuencia VL de SEQ ID nO: 27.

En algunos ejemplos, una ABP de tal tercera familia comprende: (a) (i) una cadena pesada de SEQ ID NO: 110 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 107; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 111 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 107; (b) (i) una cadena pesada de S^eQ ID NO: 112 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 107; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 113 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 107; (c) (i) una cadena pesada de Se Q ID NO: 116 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 107; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 117 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 107; (d) (i) una cadena pesada de SEQ ID NO: 105 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 107; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 106 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 107; (e) (i) una cadena pesada de SEq ID NO: 108 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 107; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 109 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 107; o (f) (i) una cadena pesada de ^sE^qID NO: 114 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 107; o (ii) una cadena pesada de S^eQ ID NO: 115 y una cadena ligera de SEQ ⁱD NO: 107.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona una cuarta familia de ABP, en donde una ABP de tal familia comprende las siguientes seis secuencias de CDR: (a) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 35, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 46, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 62, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 66, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 69, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 72; (b) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 35, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 47, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 62, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 66, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 69, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 72; o (c) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 35, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 45, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 62, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 66, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 69, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 72.

En algunos ejemplos, una ABP de tal cuarta familia comprende: (a) una secuencia VH de SEQ ID NO: 23 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 28; (b) una secuencia VH de SEQ ID NO: 24 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 28; o (c) una secuencia VH de SEQ ID NO: 22 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 28.

En algunos ejemplos, una ABP de tal cuarta familia comprende: (a) (i) una cadena pesada de SEQ ID NO: 121 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 120; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 122 y una cadena ligera de SEQ iD NO: 120; (b) (i) una cadena pesada de SE^qID NO: 123 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 120; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 124 y una cadena ligera de s Eq ID NO: 120; o (c) (i) una cadena pesada de SEQ ID NO: 118 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 120; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 119 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 120.

En algunas modalidades, cualquiera de las ABP anteriores: (a) compite por unirse a TIGIT con un anticuerpo seleccionado de MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17, MAB18, MAB19, MAB20 o MAB21, cada uno como se proporciona en la Tabla 5 de esta descripción; (b) inhibe la unión de CD155 a TIGIT; (c) inhibe la unión de CD112 a TIGIT; (d) inhibe la asociación de CD226 con TIGIT; (e) activa una célula T efectora o una célula asesina natural (NK); (f) disminuye el número de células T reguladoras en un tejido o en circulación; (g) inhibe la supresión de una célula T efectora por una célula T reguladora; (h) no se une específicamente a ninguno de PVRL1, PVRL2, PVRL3 o PVRL4; o (i) es capaz de cualquier combinación de (a)-(h).

En algunas modalidades, cualquiera de las ABP anteriores: (a) se une específicamente a TIGIT de mono cynomolgus (cTIGIT; SEQ ID ⁿO:2); (b) se une a TIGIT murino (mTIGIT; SEQ ID NO:3) con una afinidad menor (como indica una KD más alta) que la afinidad de la ABP por hTIGIT, o no se une a mTIGIT; o (c) es capaz de cualquier combinación de (a)-(b).

En algunas modalidades, cualquiera de las ABP anteriores: (a) se une específicamente a cTIGIT (SEQ ID NO:2); (b) se une a mTIGIT (SEQ ID NO:3) con una afinidad más baja (como lo indica una KD más alta) que la afinidad del ABP por hTIGIT y cTIGIT; e (c) inhibe la unión de CD155 a TlGIT.

En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona una ABP que compite por unirse a TIGIT con cualquiera de las ABP anteriores, en donde la ABP: (a) se une específicamente a cTIGIT (SEQ ID NO:2); (b) se une a mTIGIT (SEQ ID NO:3) con una afinidad más baja (como lo indica una KD más alta) que la afinidad del ABP por hTIGIT y cTIGIT; e (c) inhibe la unión de CD155 a TIGIT.

En algunas modalidades, cualquiera de las ABP anteriores comprende un anticuerpo. En algunas modalidades, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. En algunas modalidades, el anticuerpo se selecciona de un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo quimérico.

En algunas modalidades, cualquiera de las ABP anteriores es multiespecífica. En algunas modalidades, la ABP multiespecífica se une a más de un antígeno (es decir, a TIGIT y un antígeno diferente (no TIGIT)). En algunas modalidades, la ABP multiespecífica se une a más de un epítopo en un único antígeno (es decir, dos o más epítopos en TIGIT).

En algunas modalidades, cualquiera de las ABP anteriores comprende un fragmento de anticuerpo.

En algunas modalidades, cualquiera de las ABP anteriores comprende una estructura alternativa.

En algunas modalidades, cualquiera de las ABP anteriores comprende una región constante de inmunoglobulina. En algunas modalidades, la ABP comprende una región constante de cadena pesada de una clase seleccionada de IgA, IgD, IgE, IgG o IgM. En algunas modalidades, la ABP comprende una región constante de cadena pesada de la clase IgG y una subclase seleccionada de IgG4, IgG1, IgG2 o IgG3.

En algunas modalidades, cualquiera de las ABP anteriores se une a hTIGIT (SEQ ID NO:1) con una KD de menos de aproximadamente 10 nM, medido por interferometría de biocapa. En algunas modalidades, cualquiera de las ABP anteriores se une a hTIGIT (SEQ ID NO:1) con una KD de menos de aproximadamente 5 nM, medido por interferometría de biocapa. En algunas modalidades, cualquiera de las ABP anteriores se une a hTIGIT (SEQ ID NO:1) con una KD de menos de aproximadamente 2 nM, medido por interferometría de biocapa. En algunas modalidades, cualquiera de las ABP anteriores se une a cTIGIT (SEQ ID NO:2) con una KD de menos de aproximadamente 100 nM, medido por interferometría de biocapa. En algunas modalidades, cualquiera de las ABP anteriores se une a cTIGIT (SEQ ID NO:2) con una KD de menos de aproximadamente 10 nM, medido por interferometría de biocapa. En algunas modalidades, cualquiera de las ABP anteriores no muestra una unión significativa a mTIGIT en un ensayo de interferometría de biocapa. En algunas modalidades, cualquiera de las ABP anteriores se une a la superficie celular mTIGIT con una KD de menos de aproximadamente 50 nM. En algunas modalidades, mTIGIT comprende la SEQ ID NO: 3. En algunas modalidades, mTIGIT comprende la SEQ ID NO: 138.

En algunos ejemplos, cualquiera de las ABP anteriores comprende una secuencia polipeptídica que tiene un residuo de piroglutamato (pE) en su extremo N-terminal. En algunos ejemplos, cualquiera de las ABP anteriores comprende una secuencia VH en la que un Q N-terminal se sustituye con pE. En algunos ejemplos, cualquiera de las ABP anteriores comprende una secuencia VL en la que una E N-terminal se sustituye por pE. En algunos ejemplos, cualquiera de las ABP anteriores comprende una secuencia de cadena pesada en la que un Q N-terminal se sustituye con pE. En algunos ejemplos, cualquiera de las ABP anteriores comprende una secuencia de cadena ligera en la que una E N-terminal se sustituye con pE.

En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona cualquiera de las ABP anteriores para su uso como medicamento. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona cualquiera de las ABP anteriores para usar en el tratamiento de un cáncer o una infección viral. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona cualquiera de las ABP anteriores para su uso en el tratamiento de un cáncer, en donde el cáncer se selecciona de un tumor sólido y un tumor hematológico. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona cualquiera de las ABP anteriores para su uso como medicamento en el tratamiento de una enfermedad o afección que no respondía a una terapia anterior. En algunas modalidades, la terapia anterior era una terapia que comprendía un agente que inhibía la interacción entre PD-1 y PD-L1.

En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona un polinucleótido aislado que codifica cualquiera de las ABP anteriores, una VH del mismo, una VL del mismo, una cadena ligera del mismo, una cadena pesada del mismo o una porción de unión a antígeno del mismo. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona un vector que comprende el polinucleótido. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona una célula huésped que comprende el polinucleótido y/o el vector. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona un método para producir cualquiera de las ABP anteriores, que comprende expresar la ABP en la célula huésped y aislar la a Bp expresada.

En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona una composición farmacéutica que comprende cualquiera de las ABP anteriores. En algunas modalidades, la cantidad de a Bp en la composición farmacéutica es suficiente para (a) aumentar la actividad de las células T efectoras; (b) aumentar la actividad de las células T citolíticas; (c) aumentar la actividad de las células NK; (d) inhibir la señalización mediada por TIGIT; (e) inhibir o bloquear la unión de CD155 y/o CD112 a TIGIT; o (f) cualquier combinación de (a) - (e), en un sujeto. En algunas modalidades, cualquiera de las composiciones farmacéuticas anteriores comprende además un anticuerpo que antagoniza PD-1 o bloquea la interacción de PD-L1 con PD-1. En algunas modalidades, cualquiera de las composiciones farmacéuticas anteriores se usa como medicamento. En algunas modalidades, cualquiera de las composiciones farmacéuticas anteriores es para uso en el tratamiento de un cáncer o una infección viral. En algunas modalidades, cualquiera de las composiciones farmacéuticas anteriores se usa en el tratamiento de un cáncer, en donde el cáncer se selecciona de un tumor sólido y un tumor hematológico. En algunas modalidades, cualquiera de las composiciones farmacéuticas anteriores se usa como medicamento en el tratamiento de una enfermedad o afección que no respondía a una terapia anterior. En algunas modalidades, la terapia anterior era una terapia que comprendía un agente que inhibía la interacción entre PD-1 y PD-L1.

En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional para uso en cualquiera de los usos anteriores de una ABP o usos de una composición farmacéutica, es un agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1, y en donde el agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se seleccionan de un anticuerpo, un péptido mimético, una molécula pequeña o un ácido nucleico que codifica tal agente. En algunas modalidades, el agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se selecciona de pembrolizumab, nivolumab, atezolizumab, avelumab, durvalumab, BMS-936559, sulfamonometoxina 1 y sulfametizol 2.

En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional para usar en cualquiera de los usos anteriores de una ABP o usos de una composición farmacéutica es un agente inmunoestimulador seleccionado de (a) un agente que bloquea la señalización de un receptor inhibidor de una célula inmune o un ligando del mismo o un ácido nucleico que codifica tal agente; (b) un agonista de un receptor estimulador de una célula inmunitaria o un ácido nucleico que codifica tal agonista; (c) una citocina o un ácido nucleico que codifica una citocina; (d) un virus oncolítico o un ácido nucleico que codifica un virus oncolítico; (e) una célula T que expresa un receptor de antígeno quimérico; (f) un anticuerpo dirigido contra células T biespecífico o multiespecífico o un ácido nucleico que codifica tal anticuerpo; (g) un anticuerpo anti-TGF-p o un ácido nucleico que codifica tal anticuerpo; (h) una trampa de TGF-p o un ácido nucleico que codifica tal trampa; (i) una vacuna contra un antígeno asociado al cáncer, que incluye tal antígeno o un ácido nucleico que codifica tal antígeno y (j) sus combinaciones. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es un agente que bloquea la señalización de un receptor inhibidor de una célula inmunitaria o un ligando del mismo o un ácido nucleico que codifica tal agente, y el receptor inhibidor o el ligando del mismo se selecciona de CTLA-4, PD- 1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, Tim3, neuritina, BTLA, CECAM-1, CECAM-5, VISTA, LAIR1, CD160, 2B4, TGF-R, KIR y sus combinaciones. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es un agonista de un receptor estimulador de una célula inmunitaria o un ácido nucleico que codifica tal agonista, y el receptor estimulador de una célula inmunitaria se selecciona de OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD28, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LUZ, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, ligando CD83 y sus combinaciones. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es una citocina o un ácido nucleico que codifica una citocina seleccionada de IL-2, IL-5, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21 y sus combinaciones. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es un virus oncolítico o un ácido nucleico que codifica un virus oncolítico seleccionado de virus del herpes simple, virus de la estomatitis vesicular, adenovirus, virus de la enfermedad de Newcastle, virus vaccinia, virus maraba y sus combinaciones.

En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional se formula en la misma composición farmacéutica que la ABP. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional se formula en una composición farmacéutica diferente de la ABP. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional se administra antes de administrar la ABP. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional se administra después de administrar la ABP. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional se administra al mismo tiempo que la ABP.

En algunas modalidades, el sujeto es un sujeto que se trató con un agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 antes de realizar tal método.

En algunas modalidades, la enfermedad o afección que aqueja al sujeto no responde a una terapia anterior. En algunas modalidades, la terapia anterior era una terapia que comprendía un agente que inhibía la interacción entre PD-1 y PD-L1.

En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona un kit que comprende cualquiera de las composiciones farmacéuticas anteriores e instrucciones para el uso de tal composición farmacéutica. En algunas modalidades, el kit comprende además una composición farmacéutica adicional que comprende un agente terapéutico adicional e instrucciones para el uso de tal agente terapéutico adicional. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional se selecciona de un agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1, una quimioterapia, un agente inmunoestimulador, radiación y sus combinaciones. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es un agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1, y en el que el agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se selecciona de un anticuerpo, un peptidomimético, una pequeña molécula o un ácido nucleico que codifica tal agente. En algunas modalidades, el agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se selecciona de pembrolizumab, nivolumab, atezolizumab, avelumab, durvalumab, BMS-936559, sulfamonometoxina 1 y sulfametizol 2. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es un agente inmunoestimulador seleccionado entre (a) un agente que bloquea la señalización de un receptor inhibidor de una célula inmunitaria o un ligando del mismo o un ácido nucleico que codifica tal agente; (b) un agonista de un receptor estimulador de una célula inmunitaria o un ácido nucleico que codifica tal agonista; (c) una citocina o un ácido nucleico que codifica una citocina; (d) un virus oncolítico o un ácido nucleico que codifica un virus oncolítico; (e) una célula T que expresa un receptor de antígeno quimérico; (f) un anticuerpo dirigido contra células T biespecífico o multiespecífico o un ácido nucleico que codifica tal anticuerpo; (g) un anticuerpo anti-TGF-p o un ácido nucleico que codifica tal anticuerpo; (h) una trampa de TGF-p o un ácido nucleico que codifica tal trampa; (i) una vacuna contra un antígeno asociado al cáncer, incluido tal antígeno o un ácido nucleico que codifica tal antígeno y (j) sus combinaciones. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es un agente que bloquea la señalización de un receptor inhibidor de una célula inmunitaria o un ligando del mismo o un ácido nucleico que codifica tal agente, y el receptor inhibidor o el ligando del mismo se selecciona de CTLA-4, PD- 1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, Tim3, neuritina, BTLA, CECAM-1, CECAM-5, VISTA, LAIR1, CD160, 2B4, TGF-R, KIR y sus combinaciones. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es un agonista de un receptor estimulador de una célula inmunitaria o un ácido nucleico que codifica tal agonista, y el receptor estimulador de una célula inmunitaria se selecciona de OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD28, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LUZ, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, ligando CD83 y sus combinaciones. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es una citocina o un ácido nucleico que codifica una citocina seleccionada de IL-2, IL-5, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21 y sus combinaciones. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es un virus oncolítico o un ácido nucleico que codifica un virus oncolítico seleccionado de virus del herpes simple, virus de la estomatitis vesicular, adenovirus, virus de la enfermedad de Newcastle, virus vaccinia, virus maraba y sus combinaciones.

Breve descripción de las figuras

Las Figuras 1A-1B muestran alineamientos de secuencias de varias moléculas descritas más adelante en los Ejemplos. La Figura 1A muestra los alineamientos de secuencias de los dominios extracelulares TIGIT de secuencias de referencia de TIGIT humanas, de mono cynomolgus, de ratón (SEQ ID NO:3) y de rata. La Figura 1B muestra una alineación de los dominios extracelulares de TIGIT y PVRL4 humanos.

La Figura 2 es una ilustración de la similitud entre las vías CD28-CTLA4 y CD226-TIGIT y, por lo tanto, la utilidad de TIGIT como diana de punto de control inmunitario. La biología de coestimulación/coinhibición de CD226/TIGIT es análoga a la de CD28/CTLA4; la TIGIT proporciona una señal inhibitoria a las células T, mientras que CD226 proporciona una señal de coestimulación a las células T. Los ligandos de TIGIT CD155 y CD112 se expresan ampliamente en tumores lo que proporciona un entorno inmunosupresor.

La Figura 3 muestra un diagrama esquemático del ensayo de cocultivo Jurkat con TIGIT/anti-CD3 HT-1080 descrito en el Ejemplo 7.

La Figura 4A muestra las curvas de experimentos ejemplares CE50 que comparan la capacidad de MAB10 y un control de isotipo IgG4 para inducir la producción de IL-2 en células Jurkat modificadas que expresan TIGIT humana. La Figura 4B muestra las curvas de experimentos ejemplares de CE50 que comparan la capacidad de MAB10 y un control de isotipo IgG4 para inducir la producción de IL-2 en células Jurkat modificadas que expresan TIGIT de mono cynomolgus.

La Figura 5A-5C muestran análisis de expresión de TIGIT en células T CD4+ humanas por FACS. La Figura 5A y Figura 5B muestran una serie de gráficos que muestran el análisis de expresión de TIGIT, PVR y CD226 en células T CD4+ no estimuladas (Figura 5A) y estimuladas (Figura 5B). La Figura 5C muestra el análisis de la expresión de TIGIT en células T CD4+ vírgenes (positivas para CD45RA, un marcador de células T vírgenes, panel superior derecho) y de memoria (positivas para CD45RO, un marcador de células T activadas, panel inferior derecho).

Las Figuras 6A-6O muestran el efecto del tratamiento con MAB en PBMC estimuladas de manera subóptima de donantes humanos. Se analizó la capacidad de los MAB para inducir IFN-^yen PBMC de donantes humanos, incluido un anticuerpo IgG4 control. (Figura 6A), MAB2 (Figura 6B), MAB3 (Figura 6C), MAB4 (Figura 6D), MAB5 (Figura 6E), MAB10 (Figura 6F), MAB11 (Figura 6G), MAB12 (Figura 6H), MAB15 (Figura 6I), MAB16 (Figura 6J), y SEC1 (TIGⁱT de hámster anti-ratón, Figura 6K). El tratamiento de las PBMC del Donante 1 con MAB10 induce la regulación positiva de varias citocinas proinflamatorias, que incluye el factor de necrosis tumoral alfa (TNF, Figura 6L), linfotoxina alfa (LT-a, Figura 6M) e interferón gamma (IFN-y, Figura 6N). La Figura 6O muestra un gráfico que ilustra la EC50 de MAB10 en PBMC del Donante 1, medido por la producción de IFN-y.

Las Figuras 7A-7E proporcionar una serie de gráficos que muestran el efecto de MAB10 sobre la secreción de citocinas en PBMC estimuladas de manera subóptima del Donante 2, que incluye IFN-^y(Figura 7A), TNF (Figura 7B), interleucina 6 (IL-6, Figura 7C), factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF, Figura 7D), y LT-a (Figura 7E). Los datos de las células tratadas con MAB10 se muestran como barras negras y los datos de las células tratadas con el control de isotipo IgG4 se muestran como barras de color gris claro. La concentración de anticuerpos para cada barra está en pg/mL.

Las Figuras 8A-8C proporcionan una serie de gráficos que muestran que el anticuerpo antagonista anti-TIGIT MAB10 aumenta el IFN-y en un ensayo de células CD4+ mediante el uso de células obtenidas de tres donantes diferentes. La Figura 8A muestra los resultados obtenidos de las células CD4+ obtenidas del Donante 1. La Figura 8B muestra los resultados obtenidos de las células CD4+ obtenidas del Donante 2. La Figura 8C muestra los resultados obtenidos a partir de células CD4+ obtenidas del Donante 3. La producción de IFN-^yen células tratadas con MAB10 (barras negras) o el control de isotipo IgG4 (barras gris claro) se muestra en el panel izquierdo de cada una de las Figuras 8A-8C. El valor promedio de la EC50 de MAB10 en este ensayo se calculó al determinar la concentración de MAB10 requerida para inducir el 50 % del aumento en la señal de IFN-y (representada en el panel derecho de cada una de las Figuras 8A-8C).

La Figura 9A muestra los resultados del ensayo en el que se usó una relación de MAB10 y pembrolizumab (anticuerpo anti-PD-1) 1:1, en un bioensayo de combinación PD-1/TIGIT basado en el mecanismo de acción. Las concentraciones de cada anticuerpo fueron 25, 10, 4, 1,6, 0,64, 0,256, 0,1024, 0,04096 y 0,016384 pg/ml. Se usó una IgG4 no dirigida como control. Como se muestra en la Figura 9A, solo la combinación de MAB10 y pembrolizumab (EC50 de 5,06 nM) bloqueó la unión lo suficiente como para inducir la actividad de luciferasa en las células Jurkat. La Figura 9B muestra los resultados del ensayo con una dosis fija (1 pg/ml) de pembrolizumab (o el control IgG4) y una dosis variable de MAB10 (50, 20, 8, 3,2, 1,28, 0,512, 0,2048, 0,08192 y 0,032768 pg/ ml). En las Figuras 9A y 9B, ni el control IgG4 solo ni la combinación de IgG4 MAB10 indujeron la actividad luciferasa.

Las Figuras 10A-10D son una serie de gráficos que muestran el efecto de MAB10 en las células T CD4+ estimuladas por CMV de un donante humano mediante el uso de la tinción de citocinas intracelulares. La incubación de células CD4+ con MAB10 (barras negras) aumenta la producción de las citocinas efectoras en forma dependiente de la dosis, incluido el TNF (Figura 10A), IL-2 (Figura 10B), e IFN-y (Figura 10C) en comparación con las células incubadas con el control IgG4 (barras blancas). La Figura 10^dmuestra que la incubación con MAB10 aumenta la proporción de células T CD4+ activadas específicas de antígeno. En la Figura 10D, las células que se trataron con 20 |jg/ml del control IgG4 o MAB10 se analizaron mediante FACS para determinar la expresión de CD3 (un marcador de células T maduras) y la expresión de TNF e IL-2. Las diferencias estadísticas se calcularon entre los grupos de control MAB10 e IgG4 (tratamientos de la misma concentración) mediante el uso de la prueba T de Student (*=p<0,05, **=p<0,01, ***=p<0,005, ****=p<0,001). La Figuras 11A-11D son una serie de gráficos similares a la Figura 10, pero mediante el uso de células CD8+, y muestran la producción de TNF (Figura 11A), perforina (Figura 11B), y granzima B (Figura 11C) por tales células tratadas con MAB10 o el control IgG4. La Figura 11D muestra que la incubación con MAB10 también aumenta la proporción de células T CD8+ activadas específicas de antígeno. Las células que se trataron con 20 jg/ml del control IgG4 o MAB10 se analizaron mediante FACS para determinar la expresión de CD3 y la expresión de perforina y granzima B. Las diferencias estadísticas se calcularon entre los grupos de control MAB10 e IgG4 (tratamientos con la misma concentración) mediante el uso de la prueba T de Student. (*=p<0,05, **=p<0,01, ***=p<0,005, ****=p<0,001).

La Figuras 12A-12D muestran los resultados del tratamiento de células del mismo donante, en donde el bloqueo por MAB10 amplifica las respuestas de células T CD8+ específicas de CMV. Las células se incubaron con un intervalo de concentraciones de MAB10 (barras negras) o el control IgG4 (barras blancas), y se analizó el porcentaje de población doblemente positiva perforina granzima B+ (Figura 12A) o IFN-^y+ ^tN^f+ (Figura 12C). Las diferencias estadísticas se calcularon entre los grupos de control MAB10 e IgG4 (tratamientos de la misma concentración) mediante el uso de la prueba T de Student (*=p<0,05, **=p<0,01, ***=p<0,005, ****=p<0,001). La Figura 12B (análisis de perforina granzima B+) y Figura 12D (análisis de IFN-^y+ TNF+) muestran la proporción de células positivas dobles al comparar las células tratadas con 20 jg/ml del anticuerpo control (paneles de la izquierda) o 20 jg/ml de MAB10 (paneles de la derecha).

La Figura 13 es un gráfico que muestra el efecto combinatorio de MAB10 y el anticuerpo pembrolizumab contra PD-1 en células del mismo donante que se usó para las Figuras 10-12. Las células se estimularon con lisados de CMV y se trataron con 2 jg/ml de pembrolizumab o el IgG4 control y 10, 20 o 40 jg/ml del anticuerpo control o MAB10 y se midió la producción de TNF. Se analizaron cuatro grupos de células y se trataron con el control IgG4 (barras blancas, grupo más a la izquierda), una cantidad constante de control IgG4 y una titulación de MAB10 (barras grises oscuras, segundo grupo desde la izquierda), una cantidad constante de pembrolizumab y un titulación del control IgG4 (barras de color gris claro, segundo grupo desde la derecha), o una cantidad constante de pembrolizumab y una titulación de MAB10 (barras negras, grupo de la derecha). Las Figuras 14A-14C son una serie de gráficos que muestran el efecto del tratamiento con MAB10 pembrolizumab en células de tres donantes diferentes. Las células se estimularon con 0,1 jg/ml de lisado de CMV y se trataron con 20 jg/ml de MAB10 o 20 jg/ml del anticuerpo IgG4 control y una titulación de pembrolizumab, luego se midió la producción de t Nf . La Figura 14A muestra los resultados del ensayo mediante el uso de células del Donante 1; la Figura 14B muestra los resultados del ensayo mediante el uso de células del Donante 2; Figura 14C muestra los resultados del ensayo mediante el uso de células del Donante 3. La adición de MAB10 (barras negras) solo o en combinación con concentraciones crecientes de pembrolizumab da como resultado una mayor producción de TNF en comparación con el grupo del anticuerpo control pembrolizumab (barras blancas). Adicionalmente, el MAB10 (barras negras) en combinación con pembrolizumab también resultó en un aumento en la activación en comparación con MAB10 solo. Las diferencias estadísticas se calcularon entre los grupos MAB10 solo y MAB10+pembro mediante el uso del análisis de la prueba T de Student (*=p<0,05, **=p<0,01, ***=p<0,005, ****=p<0,001)

Descripción detallada

1. Definiciones

A menos que se defina de cualquier otra manera, todos los términos de la técnica, anotaciones y otra terminología científica usada en la presente descripción pretenden tener los significados comúnmente entendidos por los expertos en la técnica a la que pertenece esta invención. En algunos casos, los términos con significados comúnmente entendidos se definen en la presente descripción para mayor claridad y/o para una fácil referencia, y la inclusión de tales definiciones en la presente descripción no debe interpretarse necesariamente como una diferencia con respecto a lo que generalmente se entiende en la técnica. Las técnicas y los procedimientos descritos o a los que se hace referencia en la presente descripción generalmente se entienden bien y se emplean comúnmente mediante el uso de metodologías convencionales por parte de los expertos en la técnica, tales como, por ejemplo, las metodologías de clonaje molecular ampliamente utilizadas descritas en Sambrook y otros, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 4ta ed. (2012) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY. Según corresponda, los procedimientos que involucran el uso de kits y reactivos disponibles comercialmente generalmente se llevan a cabo de acuerdo con los protocolos y condiciones definidos por el fabricante, a menos que se indique de cualquier otra manera.

Como se usa en la presente, las formas singulares "un", "uno/una" y "el/la" incluyen los referentes plurales a menos que el contexto lo indique claramente de cualquier otra manera. Los términos "incluir", "tal como" y similares pretenden transmitir inclusión sin limitación, a menos que se indique específicamente de cualquier otra manera.

Como se usa en la presente, el término "que comprende" también incluye específicamente modalidades "que consisten en" y "que consisten esencialmente en" los elementos enumerados, a menos que se indique específicamente de cualquier otra manera. Por ejemplo, una ABP multiespecífica "que comprende un diacuerpo" incluye una ABP multiespecífica "que consiste en un diacuerpo" y una ABP multiespecífica "que consiste esencialmente en un diacuerpo".

El término "sobre" indica y abarca un valor indicado y un intervalo por encima y por debajo de ese valor. En ciertas modalidades, el término "aproximadamente" indica el valor designado ± 10 %, ± 5 % o ± 1 %. En ciertas modalidades, cuando sea aplicable, el término "aproximadamente" indica el(los) valor(es) designado(s) ± una desviación estándar de ese(esos) valor(es).

Los términos "TIGIT", "proteína TIGIT" y "antígeno TIGIT" se usan indistintamente en la presente descripción para referirse a la TIGIT humana o cualquier variante (por ejemplo, variantes de empalme y variantes alélicas), isoformas y especies homólogas de TIGIT humana que se expresan naturalmente por células, o que se expresan por células transfectadas con un gen tigit En algunos aspectos, la proteína TIGIT es una proteína TIGIT que se expresa naturalmente por un primate (por ejemplo, un mono o un ser humano), un roedor (por ejemplo, un ratón o una rata), un perro, un camello, un gato, una vaca, una cabra, un caballo o una oveja. En algunos aspectos, la proteína TIGIT es la TIGIT humana (hTIGIT; SEQ ID NO:1). Sin pretender imponer ninguna teoría, se cree que las posiciones 1-21 de la SEQ ID NO:1 codifican un péptido señal; las posiciones 22-141 de la SEQ ID NO:1 codifican el dominio extracelular de la proteína TIGIT madura; las posiciones 142-162 de la SEQ ID NO:1 codifican un dominio transmembrana; y las posiciones 163-244 de la SEQ ID NO:1 codifican un dominio citoplasmático. Véase UniProt KB - Q495A1 (TIGIT_HUMAN), en www.uniprot.org/uniprot/Q495A1, consultado el 28 de septiembre de 2015. En algunos aspectos, la proteína TIGIT es una TIGIT de mono cynomolgus (cTIGIT; SEQ ID NO:2). En algunos aspectos, la proteína TIGIT es una TIGIT murina (mTIGIT) que tiene la secuencia proporcionada en la SEQ ID NO:3. En algunos aspectos, la proteína TIGIT es una TIGIT murina (mTIGIT) que tiene la secuencia proporcionada en la SEQ ID NO: 138. Como se usa en la presente, si no se especifica una SEQ ID NO, los términos "mTIGIT", "TIGIT murina" y "TIGIT de ratón" significan la SEQ ID NO: 3 y/o la SEQ ID NO: 138. En algunos aspectos, la proteína TIGIT es una proteína TIGIT de longitud completa o sin procesar. En algunos aspectos, la proteína TIGIT es una proteína TIGIT truncada o procesada producida por modificación postraduccional. La TIGIT también se conoce por una variedad de sinónimos, incluidos WUCAM, VSIG9 y Vstm3.

El término "inmunoglobulina" se refiere a una clase de proteínas estructuralmente relacionadas que generalmente comprenden dos pares de cadenas polipeptídicas: un par de cadenas ligeras (L) y un par de cadenas pesadas (H). En una "inmunoglobulina intacta", las cuatro cadenas están interconectadas por enlaces disulfuro. La estructura de las inmunoglobulinas se ha caracterizado bien. Véase, por ejemplo, Paul, Fundamental Immunology 7ma Edición, Ch. 5 (2013) Lippincott Williams & Wilkins, Filadelfia, PA. Brevemente, cada cadena pesada típicamente comprende una región variable de cadena pesada (VH) y una región constante de cadena pesada (CH). La región constante de cadena pesada típicamente comprende tres dominios, CH1, CH2, and c H3 abreviados. Cada cadena ligera típicamente comprende una región variable de cadena ligera (VL) y una región constante de cadena ligera. La región constante de cadena ligera típicamente comprende un dominio, CL abreviado.

El término "proteína de unión a antígeno" (ABP) se refiere a una proteína que comprende uno o más dominios de unión a antígeno que se unen específicamente a un antígeno o epítopo. En algunas modalidades, el dominio de unión a antígeno se une al antígeno o epítopo con especificidad y afinidad similar a la de los anticuerpos naturales. En algunas modalidades, la ABP comprende un anticuerpo. En algunas modalidades, la ABP consiste en un anticuerpo. En algunas modalidades, la ABP consiste esencialmente en un anticuerpo. En algunas modalidades, la ABP comprende una estructura alternativa. En algunas modalidades, el ABP consiste en una estructura alternativa. En algunas modalidades, el ABP consiste esencialmente en una estructura alternativa. En algunas modalidades, la ABP comprende un fragmento de anticuerpo. En algunas modalidades, la ABP consiste en un fragmento de anticuerpo. En algunas modalidades, la ABP consiste esencialmente en un fragmento de anticuerpo. Una "ABP de TIGIT ", "ABP anti-TIGIT " o "ABP específica de TIGIT" es una ABP, como se proporciona en la presente descripción, que se une específicamente al antígeno TIGIT. En algunas modalidades, la ABP se une al dominio extracelular de TIGIT. En ciertas modalidades, una ABP de TIGIT proporcionada en la presente descripción se une a un epítopo de TIGIT que se conserva entre proteínas TIGIT de diferentes especies.

El término "anticuerpo" se usa en la presente descripción en su sentido más amplio e incluye ciertos tipos de moléculas de inmunoglobulina que comprenden uno o más dominios de unión a antígeno que se unen específicamente a un antígeno o epítopo. Un anticuerpo incluye específicamente anticuerpos intactos (por ejemplo, inmunoglobulinas intactas), fragmentos de anticuerpos y anticuerpos multiespecíficos. Un anticuerpo es un tipo de ABP.

El término "estructura alternativa" se refiere a una molécula en la que pueden diversificarse una o más regiones para producir uno o más dominios de unión a antígeno que se unen específicamente a un antígeno o epítopo. En algunas modalidades, el dominio de unión a antígeno se une al antígeno o epítopo con especificidad y afinidad similares a las de un anticuerpo. Entre las estructuras alternativas ilustrativas se incluyen los derivados de la fibronectina (por ejemplo, Adnectins™), el p-sandwicb (por ejemplo, iMab), lipocalina (por ejemplo, Anticalins®), EETI-II/AGRP, BPTI/LACI-D1/ITI-D2 (por ejemplo, dominios de Kunitz), aptámeros peptídicos de tiorredoxina, proteína A (por ejemplo, Affibody®), repeticiones de anquirina (por ejemplo, DARPins), gamma-B-cristalina/ubiquitina (por ejemplo, Affilins), CTLD3 (por ejemplo, Tetranectinas), Fynomers y (módulo LDLR-A) (por ejemplo, Avimers). Se proporciona información adicional sobre estructuras alternativas en Binz y otros, Nat. Biotechnol., 2005 23:1257-1268; Skerra, Current Opin. in Biotech., 200718:295-304; y Silacci y otros, J. Biol. Chem., 2014, 289:14392-14398. Una estructura alternativa es un tipo de ABP.

El término "dominio de unión a antígeno" significa la porción de una ABP que es capaz de unirse específicamente a un antígeno o epítopo. Un ejemplo de un dominio de unión a antígeno es un dominio de unión a antígeno formado por un dímero VH -V^lde un anticuerpo. Otro ejemplo de un dominio de unión a antígeno es un dominio de unión a antígeno formado por la diversificación de ciertos lazos del décimo dominio de tipo III de fibronectina de una Adnectina.

Los términos “anticuerpo de longitud completa,” “anticuerpo intacto,” y “anticuerpo entero” se usan indistintamente en la presente descripción para referirse a un anticuerpo que tiene una estructura sustancialmente similar a una estructura del anticuerpo nativo o que tiene cadenas pesadas que comprende una región Fc. Por ejemplo, cuando se usa para referirse a una molécula de IgG, un "anticuerpo de longitud completa" es un anticuerpo que comprende dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras.

El término "región Fc" significa la región C-terminal de una cadena pesada de inmunoglobulina que, en los anticuerpos naturales, interactúa con los receptores Fc y ciertas proteínas del sistema del complemento. Las estructuras de las regiones Fc de diversas inmunoglobulinas y los sitios de glicosilación contenidos en ellas se conocen en la técnica. Véase Schroeder y Cavacini, J. Allergy Clin. Immunol., 2010, 125:S41-52. La región Fc puede ser una región Fc natural o una región Fc modificada como se describe en la técnica o en otra parte de esta descripción.

Las regiones VH y VL pueden subdividirse además en regiones de hipervariabilidad ("regiones hipervariables (HVR)"; también llamadas "regiones determinantes de complementariedad" (CDR), intercaladas con regiones más conservadas. Las regiones más conservadas se denominan regiones marco (FR). Cada VH y VL generalmente comprende tres CDR y cuatro FR, dispuestas en el siguiente orden (desde el N-terminal al C-terminal): FR1 - CDR1 -FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4. Las CDR están implicadas en la unión a antígeno e influyen en la especificidad del antígeno y la afinidad de unión del anticuerpo. Véase Kabat y otros, Sequences of Proteins of Immunological Interest 5ta Edición. (1991) Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.

La cadena ligera de cualquier especie vertebrada puede asignarse a uno o dos tipos, llamado kappa (^k) y lambda (A), en base a las secuencias de sus dominios constantes.

La cadena pesada de cualquier especie de vertebrado puede asignarse a una de cinco clases diferentes (o isotipos): IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM. Estas clases también se denominan a, 8, £, ^yy M, respectivamente. Las clases de IgG e IgA se dividen además en subclases sobre la base de las diferencias en secuencia y función. Los humanos expresan las siguientes subclases: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, e IgA2.

Los límites de la secuencia de aminoácidos de una CDR pueden determinarse por un experto en la técnica mediante el uso de cualquiera de varios esquemas de numeración conocidos, que incluyen los descritos por Kabat y otros, supra (esquema de numeración de "Kabat"); Al-Lazikani y otros, 1997, J. Mol. Biol., 273:927-948 (Esquema de numeración de "Chothia"); MacCallum y otros, 1996, J. Mol. Biol. 262:732-745 (Esquema de numeración de "Contacto"); Lefranc y otros, Dev. Comp. Immunol., 2003, 27:55-77 (esquema de numeración de "IMGT"); y Honegge y Pluckthun, J. Mol. Biol., 2001, 309:657-70 (Esquema de numeración de "AHo").

La Tabla 1 proporciona las posiciones de CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 y CDR-H3 identificadas por los esquemas de Kabat y Chothia. Para CDR-H1, la numeración de residuos se proporciona mediante el uso de los esquemas de numeración de Kabat y Chothia.

Las CDR pueden asignarse, por ejemplo, mediante el uso de un software de numeración de anticuerpos, como Abnum, disponible en www.bioinf.org.uk/abs/abnum/, y descrito en Abhinandan y Martin, Immunology, 2008, 45:3832-3839.

Tabla 1. Residuos en las CDR de acuerdo con los esquemas de numeración de Kabat y Chothia.

(Continuación)

El "esquema de numeración de la UE" se usa generalmente cuando se hace referencia a un residuo en una región constante de cadena pesada del anticuerpo (por ejemplo, como se informa en Kabat y otros, supra). A menos que se indique de cualquier otra manera, el esquema de numeración de la UE se usa para hacer referencia a los residuos en las regiones constantes de la cadena pesada del anticuerpo descritas en la presente descripción.

Un "fragmentos de anticuerpo" comprende una porción de un anticuerpo intacto, tal como la región variable o de unión a antígeno o de un anticuerpo intacto. Los fragmentos de anticuerpos incluyen, por ejemplo, fragmentos Fv, fragmentos Fab, fragmentos F(ab')2, fragmentos Fab', fragmentos scFv (sFv) y fragmentos scFv-Fc.

Los fragmentos "Fv" comprenden un dímero no enlazado covalentemente de un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera.

Los fragmentos "Fab" comprenden, además de los dominios variables de cadena ligera y pesada, el dominio constante de la cadena ligera y el primer dominio constante (CH1) de la cadena pesada. Los fragmentos Fab pueden generarse, por ejemplo, mediante métodos recombinantes o por digestión con papaína de un anticuerpo de longitud completa.

Los fragmentos "F (ab')2 contienen dos fragmentos Fab' unidos, cerca de la región bisagra, por enlaces disulfuro. Los fragmentos F(ab')2 pueden generarse, por ejemplo, mediante métodos recombinantes o por digestión con pepsina de un anticuerpo intacto. Los fragmentos F(ab') pueden disociarse, por ejemplo, mediante tratamiento con pmercaptoetanol.

Los fragmentos de anticuerpos “Fv de cadena sencilla” o “sFv” o “scFv” comprenden los dominios VH y VL en una cadena polipeptídica sencilla. La VH y VL generalmente se enlazan por un enlace peptídico. Véase Pluckthun A. (1994). Puede usarse cualquier enlace adecuado. En algunas modalidades, el enlace es un (GGGGS)n (SEC ID NO: 127). En algunas modalidades, n es 1, 2, 3, 4, 5 o 6. Véase Antibodies from Escherichia coli. En Rosenberg M. & Moore G.P. (Eds.), The Pharmacology of Monoclonal Antibodies vol. 113 (pp. 269-315). Springer-Verlag, Nueva York,.

Los fragmentos "scFv-Fc" comprenden un scFv unido a un dominio Fc. Por ejemplo, puede unirse un dominio Fc al C terminal del scFv. El dominio Fc puede seguir al VH o VL, en dependencia de la orientación de los dominios variables en el scFv (es decir, VH -VL o VL -VH). Puede usarse cualquier dominio Fc adecuado conocido en la técnica o descrito en la presente descripción. En algunos casos, el dominio Fc comprende un dominio Fc de IgG4. El término "anticuerpo de dominio único" se refiere a una molécula en la que un dominio variable de un anticuerpo se une específicamente a un antígeno sin la presencia del otro dominio variable. Los anticuerpos de un solo dominio y sus fragmentos se describen en Arabi Ghahroudi y otros, FEBS Letters, 1998, 414:521-526 y Muyldermans y otros, Trends in Biochem. Sci., 2001, 26:230-245. Los anticuerpos de un solo dominio también se conocen como sdAb o nanocuerpos.

Una "ABP multiespecífica" es una ABP que comprende dos o más dominios de unión a antígeno diferentes que se unen colectivamente de forma específica a dos o más epítopos diferentes. Los dos o más epítopos diferentes pueden ser epítopos del mismo antígeno (por ejemplo, una sola molécula TIGIT expresada por una célula) o de antígenos diferentes (por ejemplo, diferentes moléculas TIGIT expresadas por la misma célula, o una molécula TIGIT y otra molécula no TlGlT). En algunos aspectos, una ABP multiespecífica se une a dos epítopos diferentes (es decir, una "ABP biespecífica"). En algunos aspectos, una ABP multiespecífica se une a tres epítopos diferentes (es decir, una "ABP triespecífica"). En algunos aspectos, una ABP multiespecífica se une a cuatro epítopos diferentes (es decir, una "ABP tetraespecífica"). En algunos aspectos, una ABP multiespecífica se une a cinco epítopos diferentes (es decir, una "ABP pentaespecífica"). En algunos aspectos, una ABP multiespecífica se une a 6, 7, 8 o más epítopos diferentes. Cada especificidad de unión puede estar presente en cualquier valencia adecuada. En otra parte de esta descripción se proporcionan ejemplos de ABP multiespecíficas.

Una "ABP monoespecífica" es una ABP que comprende uno o más sitios de unión que se unen específicamente a un solo epítopo. Un ejemplo de una ABP monoespecífica es una molécula de IgG de origen natural que, aunque es divalente (es decir, que tiene dos dominios de unión a antígeno), reconoce el mismo epítopo en cada uno de los dos dominios de unión a antígeno. La especificidad de unión puede estar presente en cualquier valencia adecuada. El término "anticuerpo monoclonal" se refiere a un anticuerpo de una población sustancialmente homogénea de anticuerpos. Una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos comprende anticuerpos que son sustancialmente similares y que se unen al mismo(s) epítopo(s), excepto por las variantes que normalmente pueden surgir durante la producción del anticuerpo monoclonal. Tales variantes generalmente están presentes solo en cantidades menores. Un anticuerpo monoclonal típicamente se obtiene mediante un proceso que incluye la selección de un solo anticuerpo de una pluralidad de anticuerpos. Por ejemplo, el proceso de selección puede ser la selección de un clon único de una pluralidad de clones, tal como un grupo de clones de hibridoma, clones de fagos, clones de levadura, clones de bacterias u otros clones de ADN recombinante. El anticuerpo seleccionado puede modificarse adicionalmente, por ejemplo, para mejorar la afinidad por el objetivo ("maduración de la afinidad"), humanizar el anticuerpo, mejorar su producción en cultivo celular y/o reducir su inmunogenicidad en un sujeto. El término "anticuerpo quimérico" se refiere a un anticuerpo en el que una porción de la cadena pesada y/o ligera se deriva de una fuente o especie en particular, mientras que el resto de la cadena pesada y/o ligera se deriva de una fuente o especie diferente.

Las formas “humanizadas” de anticuerpos no humanos son anticuerpos quiméricos que contienen una secuencia mínima derivada del anticuerpo no humano. Un anticuerpo humanizado es generalmente un anticuerpo humano (anticuerpo receptor) en el que los residuos de una o más CDR se reemplazan por residuos de uno o más CDR de un anticuerpo no humano (anticuerpo donante). El anticuerpo donante puede ser cualquier anticuerpo no humano adecuado, tal como un anticuerpo de ratón, rata, conejo, pollo o primate no humano que tenga una especificidad, afinidad o efecto biológico deseado. En algunos casos, los residuos de la región marco seleccionados del anticuerpo receptor se reemplazan por los residuos de la región marco correspondientes del anticuerpo donante. Los anticuerpos humanizados pueden comprender además residuos que no se encuentran en el anticuerpo receptor ni en el anticuerpo donante. Tales modificaciones pueden realizarse para refinar aún más la función del anticuerpo. Para detalles adicionales, veáse Jones y otros, Nature, 1986, 321:522-525; Riechmann y otros, Nature, 1988, 332:323-329; y Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 1992, 2:593-596.

Un “anticuerpo humano” es uno que posee una secuencia de aminoácidos correspondiente a la de un anticuerpo producido por un humano o una célula humana, o derivado de una fuente no humana que utiliza repertorios de anticuerpos humanos o secuencias que codifican para el anticuerpo humano (por ejemplo, obtenido de fuentes humanas o diseñados de novo). Los anticuerpos humanos excluyen específicamente los anticuerpos humanizados. Un "ABP aislado" o "ácido nucleico aislado" es una ABP o ácido nucleico que se separó y/o recuperó de un componente de su entorno natural. Los componentes del entorno natural pueden incluir enzimas, hormonas y otros materiales proteicos o no proteicos. En algunas modalidades, una ABP aislada se purifica en un grado suficiente para obtener al menos 15 residuos de la secuencia de aminoácidos interna o N-terminal, por ejemplo, mediante el uso de un secuenciador de copa giratoria. En algunas modalidades, una ABP aislada se purifica hasta la homogeneidad mediante electroforesis en gel (por ejemplo, SDS-PAGE) bajo condiciones reductoras o no reductoras, con detección mediante tinción con azul de Coomassie o plata. En algunas modalidades, una ABP aislada puede incluir una ABP in situ dentro de las células recombinantes, ya que al menos un componente del entorno natural de la ABP no está presente. En algunos aspectos, se prepara una ABP aislada o un ácido nucleico aislado mediante al menos una etapa de purificación. En algunas modalidades, una ABP aislada o un ácido nucleico aislado se purifica hasta al menos un 80 %, 85 %, 90 %, 95 % o 99 % en peso. En algunas modalidades, una ABP aislada o un ácido nucleico aislado se purifica hasta al menos un 80 %, 85 %, 90 %, 95 % o 99 % en volumen. En algunas modalidades, una ABP aislada o un ácido nucleico aislado se proporciona como una solución que comprende al menos un 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % a 100 % de ABP o ácido nucleico en peso. En algunas modalidades, una ABP aislada o un ácido nucleico aislado se proporciona como una solución que comprende al menos 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % a 100 % de ABP o ácido nucleico por volumen.

“Afinidad” se refiere a la fortaleza de la suma total de las interacciones no covalentes entre un sitio de enlace único de una molécula (por ejemplo, una ABP) y su pareja de unión (por ejemplo, un antígeno o epítopo). A menos que se indique de cualquier otra manera, como se usa en la presente, "afinidad" se refiere a la afinidad de unión intrínseca que refleja una interacción de 1:1 entre los miembros de un par de unión (por ejemplo, ABP y antígeno o epítopo). La afinidad de una molécula X por su pareja Y puede representarse mediante la constante de equilibrio de disociación (KD). Los componentes cinéticos que contribuyen a la constante de equilibrio de disociación se describen con más detalle más abajo. La afinidad puede medirse mediante métodos comunes conocidos en la técnica, incluidos los descritos en la presente descripción, tal como la tecnología de resonancia de plasmones superficiales (SPR) (por ejemplo, BIACORE®) o interferometría de biocapa (por ejemplo, FORTEBIO®).

Con respecto a la unión de una ABP a una molécula diana, los términos "unión", "unión específica", "se une específicamente a", "específico para", "se une selectivamente" y "selectivo para" un antígeno particular (por ejemplo, una diana polipeptídica) o un epítopo en un antígeno particular significa la unión que se mide diferente de una interacción no específica o no selectiva (por ejemplo, con una molécula no diana). La unión específica puede medirse, por ejemplo, mediante la medición de la unión a una molécula diana y comparándola con la unión a una molécula no diana. La unión específica también puede determinarse por competencia con una molécula control que imita el epítopo reconocido en la molécula diana. En ese caso, la unión específica se indica si la molécula control inhibe competitivamente la unión de la ABP a la molécula diana. En algunos aspectos, la afinidad de una ABP de TIGIT por una molécula no diana es menor que aproximadamente el 50 % de la afinidad por la TIGIT. En algunos aspectos, la afinidad de una ABP de TIGIT por una molécula no diana es menor que aproximadamente el 40 % de la afinidad por la TIGIT. En algunos aspectos, la afinidad de una ABP de TIGIT por una molécula no diana es menor que aproximadamente el 30 % de la afinidad por la TIGIT. En algunos aspectos, la afinidad de una ABP de TIGIT por una molécula no diana es menor que aproximadamente el 20 % de la afinidad por la TIGIT. En algunos aspectos, la afinidad de una ABP de TIGIT por una molécula no diana es menor que aproximadamente el 10 % de la afinidad por la TIGIT. En algunos aspectos, la afinidad de una ABP de TIGIT por una molécula no diana es menor que aproximadamente el 1 % de la afinidad por la TIGIT. En algunos aspectos, la afinidad de una ABP de TIGIT por una molécula no diana es inferior a aproximadamente el 0,1 % de la afinidad por la TIGIT.

El término "kD" (sec-1), como se usa en la presente, se refiere a la constante de velocidad de disociación de una interacción ABP-antígeno particular. Este valor también se conoce como valor koff.

El término "ka"(M-1*sec-1), como se usa en la presente, se refiere a la constante de velocidad de asociación de una interacción ABP-antígeno particular. Este valor también se conoce como valor kon.

El término "KD"(M), como se usa en la presente, se refiere a la constante de equilibrio de disociación de una interacción ABP-antígeno particular. KD = kd/ka. En algunas modalidades, la afinidad de una ABP se describe en términos de la KD para una interacción entre tal ABP y su antígeno. Para mayor claridad, como se sabe en la técnica, un valor de KD menor indica una interacción de mayor afinidad, mientras que un valor de KD mayor indica una interacción de menor afinidad.

El término "KA"(M-1), como se usa en la presente, se refiere a la constante de equilibrio de asociación de una interacción ABP-antígeno particular. KA = ka/kd.

Una ABP "madurada por afinidad" es una ABP con una o más alteraciones (por ejemplo, en una o más CDR o FR) en relación con una ABP principal (es decir, una ABP a partir de la cual se deriva o se diseña la ABP alterada) que dan como resultado una mejora en la afinidad de la ABP por su antígeno, en comparación con la ABP original que no posee la(s) alteración(es). En algunas modalidades, una ABP madurada por afinidad tiene una afinidad nanomolar o picomolar por el antígeno diana. Las ABP maduradas por afinidad pueden producirse mediante el uso de una variedad de métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, Marcas y otros (Bio/Technology, 1992, 10:779-783) describen la maduración de la afinidad mediante el barajado de los dominios VH y VL. La mutagénesis aleatoria de las CDR y/o los residuos del marco se describe en, por ejemplo, Barbas y otros. (Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1994, 91:3809-3813); Schier y otros, Gene, 1995, 169:147-155; Yelton y otros, J. Immunol., 1995, 155:1994-2004; Jackson y otros, J. Immunol., 1995, 154:3310-33199; y Hawkins y otros, J. Mol. Biol., 1992, 226:889-896.

Un "inmunoconjugado" es una ABP conjugada con una o más moléculas heterólogas, tal como un agente terapéutico o de diagnóstico.

“Funciones efectoras” se refieren a aquellas actividades biológicas mediadas por la región Fc de un anticuerpo, que varía en dependencia del isotipo del anticuerpo. Los ejemplos de funciones efectoras de anticuerpos incluyen la unión de C1q para activar la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC), la unión del receptor Fc para activar la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) y la fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP).

Cuando se usa en la presente descripción el contexto de dos o más ABP, el término "compite con" o "competencia cruzada con" indica que las dos o más ABP compiten por unirse a un antígeno (por ejemplo, TIGIT). En un ensayo ilustrativo, se recubre una superficie con TIGIT y se pone en contacto con una primera ABP de TIGIT, después de lo cual se agrega una segunda ABP de TIGIT. En otro ensayo ilustrativo, se recubre una superficie con una primera ABP de TIGIT y se pone en contacto con TIGIT, y luego se agrega una segunda ABP de TIGIT. Si la presencia de la primera ABP de TIGIT reduce la unión de la segunda ABP de TIGIT, en cualquier ensayo, entonces las ABP compiten entre sí. El término "compite con" también incluye combinaciones de ABP en las que una ABP reduce la unión de otra ABP, pero en las que no se observa competencia cuando se añaden las ABP en el orden inverso. Sin embargo, en algunas modalidades, la primera y la segunda ABP inhiben la unión entre sí, independientemente del orden en que se agreguen. En algunas modalidades, una ABP reduce la unión de otra ABP a su antígeno en al menos un 25 %, al menos un 50 %, al menos un 60 %, al menos un 70 %, al menos un 80 %, al menos un 85 %, al menos un 90 %, o al menos el 95%. Un experto en la técnica puede seleccionar las concentraciones de los anticuerpos usados en los ensayos competitivos en base a las afinidades de las ABP por TIGIT y la valencia de las ABP. Los ensayos descritos en esta definición son ilustrativos y un experto en la técnica puede utilizar cualquier ensayo adecuado para determinar si los anticuerpos compiten entre sí. Los ensayos adecuados se describen, por ejemplo, en Cox y otros, "Immunoassay Methods", en Assay Guidance Manual [Internet], actualizado el 24 de diciembre de 2014 (www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92434/; consultado el 29 de septiembre de 2015)); Siman y otros, Cytometry, 2001, 44:30-37; y Finco y otros, J. Pharm. Biomed. Anal., 2011, 54:351-358.

El término "epítopo" significa una porción de un antígeno que se une específicamente a una ABP. Los epítopos frecuentemente consisten en residuos de aminoácidos accesibles en la superficie y/o cadenas laterales de azúcares y pueden tener características específicas de estructura tridimensional, así como también características específicas de carga. Los epítopos conformacionales y no conformacionales se distinguen en que la unión al primero pero no al último puede perderse en presencia de solventes desnaturalizantes. Un epítopo puede comprender residuos de aminoácidos que están directamente implicados en la unión y otros residuos de aminoácidos que no están directamente implicados en la unión. El epítopo al que se une una ABP puede determinarse mediante el uso de técnicas conocidas para la determinación de epítopos tales como, por ejemplo, la prueba de la unión de ABP a variantes de TIGIT con diferentes mutaciones puntuales, o a variantes de TIGIT quiméricas.

Por ciento de "identidad" entre una secuencia polipeptídica y una secuencia de referencia se define como el porcentaje de residuos de aminoácidos en una secuencia candidato que son idénticos con los residuos de aminoácidos en la secuencia polipeptídica de referencia, después de alinear las secuencias e introducir interrupciones, si necesario, para el por ciento máximo de identidad de secuencia, y sin considerar cualquiera de las sustituciones conservadoras como parte de la secuencia de identidad. La alineación para fines de determinar el por ciento de identidad de la secuencia de aminoácidos puede lograrse de varias maneras que están dentro del conocimiento en la técnica, por ejemplo, mediante el uso de programas computarizados públicamente disponibles tales como el programa BLAST, BLAST-2, ALIGN o Megalign (DNASTAR). Los expertos en la técnica pueden determinar los parámetros adecuados para alinear las secuencias, que incluyen cualquiera de los algoritmos necesarios para lograr el alineamiento máximo sobre la longitud completa de las secuencias que se comparan. Una "sustitución conservadora" o una "sustitución conservativa de aminoácidos" se refiere a la sustitución de un aminoácido con un aminoácido química o funcionalmente similar. Las tablas de sustituciones conservadoras que proporcionan aminoácidos similares se conocen bien en la técnica. A manera de ejemplo, los grupos de aminoácidos proporcionados en las Tablas 2-4 se consideran, en algunos ejemplos, sustituciones conservadoras entre sí.

Tabla 2. Grupos seleccionados de aminoácidos que se consideran sustituciones conservadoras entre sí, en ciertos eem los.

Tabla 3. Grupos de aminoácidos adicionales seleccionados que pueden considerarse sustituciones conservadoras entre sí, en ciertos ejemplos:

Tabla 4. Más grupos de aminoácidos seleccionados que pueden considerarse sustituciones conservadoras entre sí, en ciertos eem los:

(Continuación)

Pueden encontrarse sustituciones conservadoras adicionales, por ejemplo, en Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties 2da Edición. (1993) W. H. Freeman & Co., New York, NY. Una ABP generada al hacer una o más sustituciones conservadoras de residuos de aminoácidos en una ABP original se denomina "variante modificada de manera conservadora".

El término "aminoácido" se refiere a los veinte aminoácidos naturales comunes. Los aminoácidos naturales incluyen alanina (Ala A), arginina (Arg; R), asparagina (Asn; N), ácido aspártico (Asp; D), cisteína (Cys; C), ácido glutámico (Glu; E), glutamina (Gln; Q), glicina (Gly; G), histidina (His; H), isoleucina (Ile; I), leucina (Leu; L), lisina (Lys; K), metionina (Met; M), fenilalanina (Phe; F), prolina (Pro; P), serina (Ser; S), treonina (Thr; T), triptófano (Trp; W), tirosina (Tyr; Y), valina (Val; V).

El término “vector,” como se usa en la presente, se refiere a una molécula de ácido nucleico capaz de propagar otro ácido nucleico al que se enlaza. El término incluye el vector como una estructura de autorreplicación de ácido nucleico, así como también el vector incorporado dentro del genoma de una célula huésped dentro de la cual se introdujo. Ciertos vectores son capaces de dirigir la expresión de los ácidos nucleicos a los que están operativamente enlazados. Tales vectores se denominan en la presente descripción como "vectores de expresión." Los términos “célula huésped,” “línea de célula huésped,” y “cultivo de célula huésped” se usan indistintamente y refieren a las células en las que se introdujo el ácido nucleico exógeno, que incluye la progenie de tales células. Las células huésped incluyen "transformantes" (o "células transformadas") y "transfectantes" (o "células transfectadas"), cada uno de los cuales incluye la célula primaria transformada o transfectada y la progenie derivada de la misma. La progenie puede no ser completamente idéntica en el contenido de ácido nucleico a una célula parental, pero puede contener mutaciones.

El término "tratar" (y variaciones del mismo tales como "trato" o "tratamiento") se refiere a una intervención clínica en un intento de alterar el curso natural de una enfermedad o condición en un sujeto que lo necesita. El tratamiento puede realizarse tanto para la profilaxis como durante el curso de la patología clínica. Los efectos convenientes del tratamiento incluyen, prevenir la ocurrencia o recurrencia de la enfermedad, aliviar los síntomas, disminuir cualquiera de las consecuencias patológicas directas o indirectas de la enfermedad, prevenir la metástasis, disminuir la velocidad de progresión de la enfermedad, mejorar o mitigar el estado de la enfermedad, y remisión o pronóstico mejorado.

Como se usa en la presente, el término "cantidad terapéuticamente eficaz" o "cantidad eficaz" se refiere a una cantidad de ABP o composición farmacéutica proporcionada en la presente descripción que, cuando se administra a un sujeto, es eficaz para tratar una enfermedad o trastorno.

Como se usa en la presente, el término "sujeto" significa un sujeto mamífero. Los sujetos ilustrativos incluyen humanos, monos, perros, gatos, ratones, ratas, vacas, caballos, camellos, cabras, conejos y ovejas. En ciertas modalidades, el sujeto es un humano. En algunas modalidades, el sujeto tiene una enfermedad o afección que puede tratarse con una ABP proporcionada en la presente descripción. En algunos aspectos, la enfermedad o condición es un cáncer. En algunos aspectos, la enfermedad o condición es una infección viral.

El término "prospecto" se usa para referirse a las instrucciones incluidas habitualmente en los paquetes comerciales de productos terapéuticos o de diagnóstico (por ejemplo, kits) que contienen información sobre las indicaciones, uso, dosificación, administración, terapia combinada, contraindicaciones y/o advertencias sobre el uso de tales productos terapéuticos o de diagnóstico.

El término “agente citotóxico”, como se usa en la presente, se refiere a una sustancia que inhibe o previene una función celular y/o causa la muerte o destrucción celular.

Un “agente quimioterapéutico” es un compuesto químico útil en el tratamiento del cáncer. Los agentes quimioterapéuticos incluyen "agentes antihormonales" o "terapéuticos endocrinos" que actúan para regular, reducir, bloquear, o inhibir los efectos de las hormonas que pueden promover el crecimiento del cáncer.

El término "agente citostático" se refiere a un compuesto o composición que detiene el crecimiento de una célula in vitro o in vivo. En algunas modalidades, un agente citostático es un agente que reduce el porcentaje de células en fase S. En algunas modalidades, un agente citostático reduce el porcentaje de células en la fase S en al menos un 20 %, al menos un 40 %, al menos un 60 % o al menos un 80 %.

El término "tumor" se refiere a todo crecimiento y proliferación de células neoplásicas, ya sean malignas o benignas, y a todas las células y tejidos precancerosos y cancerosos. Los términos "cáncer", "canceroso", "trastorno proliferativo celular", "trastorno proliferativo" y "tumor" no se excluyen mutuamente en lo que se refiere en la presente descripción. Los términos "trastorno proliferativo celular" y "trastorno proliferativo" se refieren a trastornos que se asocian con algún grado de proliferación celular anormal. En algunas modalidades, el trastorno de proliferación celular es cáncer. En algunos aspectos, el tumor es un tumor sólido. En algunos aspectos, el tumor es una malignidad hematológica.

El término "composición farmacéutica" se refiere a una preparación que está en tal forma que permite que la actividad biológica de un ingrediente activo contenido en ella sea eficaz en el tratamiento de un sujeto, y que no contiene componentes adicionales que sean inaceptablemente tóxicos para el sujeto en las cantidades proporcionadas en la composición farmacéutica.

Los términos "modular" y "modulación" se refieren a reducir o inhibir o, alternativamente, activar o aumentar, una variable citada.

Los términos "aumentar" y "activar" se refieren a un aumento del 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 100%, 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 10 veces, 20 veces, 50 veces, 100 veces o más en una variable citada.

Los términos "reducir" e "inhibir" se refieren a una disminución del 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 50, 100 o más en una variable citada.

El término "agonizar" se refiere a la activación de la señalización del receptor para inducir una respuesta biológica asociada con la activación del receptor. Un "agonista" es una entidad que se une a un receptor y lo agoniza.

El término "antagonizar" se refiere a la inhibición de la señalización del receptor para inhibir una respuesta biológica asociada con la activación del receptor. Un "antagonista" es una entidad que se une y antagoniza un receptor. El término "célula T efectora" incluye células T colaboradoras (es decir, CD4+) y células T citotóxicas (es decir, CD8+). Los linfocitos T CD4+ efectores contribuyen al desarrollo de varios procesos inmunológicos, incluida la maduración de linfocitos B en células plasmáticas y linfocitos B de memoria, y la activación de linfocitos T citotóxicos y macrófagos. Las células T efectoras CD8+ destruyen las células infectadas por virus y las células tumorales. Véase Seder y Ahmed, Nature Immunol., 2003, 4:835-842, para obtener información adicional sobre las células T efectoras.

El término "célula T reguladora" incluye células que regulan la tolerancia inmunológica, por ejemplo, mediante la supresión de las células T efectoras. En algunos aspectos, la célula T reguladora tiene un fenotipo CD4+CD25+Foxp3+. En algunos aspectos, la célula T reguladora tiene un fenotipo CD8+CD25+. Véase Nocentini y otros, Br. J. Pharmacol., 2012, 165:2089-2099, para obtener información adicional sobre las células T reguladoras que expresan TIGIT.

El término "célula dendrítica" se refiere a una célula presentadora de antígeno profesional capaz de activar una célula T virgen y estimular el crecimiento y la diferenciación de una célula B.

2. Proteínas de unión a antígeno TIGIT

2.1. Unión de TIGIT y células diana

En la presente descripción se proporcionan las ABP que se unen específicamente a TIGIT. En algunos aspectos, la TIGIT es hTIGIT (S^eQ ID NO:1). En algunos aspectos, la TIGIT es cTIGIT (SEQ ID NO:2). En algunos aspectos, la TIGIT es mTIGIT con la secuencia proporcionada en la SEQ ID NO:3. En algunos aspectos, la TIGIT es mTIGIT con la secuencia proporcionada en la SEQ ID NO: 138.

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción se unen específicamente a hTIGIT (SEQ ID NO:1), cTIGIT (SEQ ID NO:2) y mTIGIT de SEQ ID NO:3. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción se unen específicamente a hTIGIT (SEQ ID NO:1), cTIGIT (SEQ ID NO:2) y mTIGIT de SEQ ID NO: 138. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción se unen específicamente a hTIGIT (SEQ ID NO:1) y cTIGIT (SEQ ID NO:2). En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción se unen específicamente a hTIGIT (SEQ ID NO:1). En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción no se unen a mTIGIT de SEQ ID NO:3. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción no se unen a mTIGIT de SEQ ID NO:138.

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción se unen específicamente al dominio extracelular de TIGIT.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción es un anticuerpo. En algunas modalidades, un anticuerpo proporcionado en la presente descripción es un fragmento de anticuerpo. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción es una estructura alternativa.

La TIGIT puede expresarse en la superficie de cualquier célula diana adecuada. En algunas modalidades, la célula diana es una célula T. En algunas modalidades, la célula diana es una célula T efectora. En algunas modalidades, la célula diana es una célula T reguladora. En algunas modalidades, la célula diana es una célula T asesina natural (NK). En algunas modalidades, la célula diana es una célula T asesina natural (NKT).

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción comprenden una molécula de inmunoglobulina. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción consisten en una molécula de inmunoglobulina. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción consisten esencialmente en una molécula de inmunoglobulina. En algunos aspectos, la molécula de inmunoglobulina comprende un anticuerpo. En algunos aspectos, la molécula de inmunoglobulina consta de un anticuerpo. En algunos aspectos, la molécula de inmunoglobulina consiste esencialmente en un anticuerpo.

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción comprenden una cadena ligera. En algunos aspectos, la cadena ligera es una cadena ligera kappa. En algunos aspectos, la cadena ligera es una cadena ligera lambda.

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción comprenden una cadena ligera kappa que comprende la SEQ ID NO: 126.

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción comprenden una cadena pesada. En algunos aspectos, la cadena pesada es una IgA. En algunos aspectos, la cadena pesada es una IgD. En algunos aspectos, la cadena pesada es una IgE. En algunos aspectos, la cadena pesada es una IgG. En algunos aspectos, la cadena pesada es una IgM. En algunos aspectos, la cadena pesada es una IgG1. En algunos aspectos, la cadena pesada es una IgG2. En algunos aspectos, la cadena pesada es una IgG3. En algunos aspectos, la cadena pesada es una IgG4. En algunos aspectos, la cadena pesada es una IgA1. En algunos aspectos, la cadena pesada es una IgA2.

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción comprenden una cadena pesada de IgG4 que comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO:55 y SEQ ID NO:56. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción comprenden una cadena pesada de IgG1 que comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID NO:57 y SEQ ID NO: 125.

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción comprenden un fragmento de anticuerpo. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción consisten en un fragmento de anticuerpo. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción consisten esencialmente en un fragmento de anticuerpo. En algunos aspectos, el fragmento de anticuerpo es un fragmento Fv. En algunos aspectos, el fragmento de anticuerpo es un fragmento Fab. En algunos aspectos, el fragmento de anticuerpo es un fragmento F(ab')2. En algunos aspectos, el fragmento de anticuerpo es un fragmento Fab'. En algunos aspectos, el fragmento de anticuerpo es un fragmento scFv (sFv). En algunos aspectos, el fragmento de anticuerpo es un fragmento scFv-Fc. En algunos aspectos, el fragmento de anticuerpo es un fragmento de un anticuerpo de dominio único.

En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción se deriva de un anticuerpo ilustrativo proporcionado en la presente descripción. En algunas modalidades, los fragmentos de anticuerpos proporcionados en la presente descripción no se derivan de un anticuerpo ilustrativo proporcionado en la presente descripción y pueden, por ejemplo, aislarse de novo de acuerdo con los métodos proporcionados en la presente descripción para obtener fragmentos de anticuerpos.

En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado se une específicamente a hTIGIT. En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción se une específicamente a cTIGIT. En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción se une específicamente a mTIGIT. En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción se une específicamente a hTIGIT y cTIGIT. En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción se une específicamente a hTIGIT y mTIGIT. En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción se une específicamente a cTIGIT y mTIGIT. En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción se une específicamente a hTIGIT, cTIGIT y mTIGIT.

En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo derivado de un anticuerpo proporcionado en la presente descripción retiene la afinidad, medida por KD, para hTIGIT que está dentro de aproximadamente 1,5 veces, aproximadamente 2 veces, aproximadamente 3 veces, aproximadamente 4 veces, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 6 veces, aproximadamente 7 veces, aproximadamente 8 veces, aproximadamente 9 veces o aproximadamente 10 veces la afinidad de tal anticuerpo. En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo derivado de un anticuerpo proporcionado en la presente descripción retiene la afinidad, medida por KD, para cTIGIT que está dentro de aproximadamente 1,5 veces, aproximadamente 2 veces, aproximadamente 3 veces, aproximadamente 4 veces, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 6 veces, aproximadamente 7 veces, aproximadamente 8 veces, aproximadamente 9 veces o aproximadamente 10 veces la afinidad de tal anticuerpo. En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo derivado de un anticuerpo proporcionado en la presente descripción retiene la afinidad, medida por KD, para mTIGIT que está dentro de aproximadamente 1,5 veces, aproximadamente 2 veces, aproximadamente 3 veces, aproximadamente 4 veces, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 6 veces, aproximadamente 7 veces, aproximadamente 8 veces, aproximadamente 9 veces o aproximadamente 10 veces la afinidad de tal anticuerpo. En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo derivado de un anticuerpo proporcionado en la presente descripción retiene la afinidad, medida por KD, tanto para hTIGIT como para cTIGIT que está dentro de aproximadamente 1,5 veces, aproximadamente 2 veces, aproximadamente 3 veces, aproximadamente 4 veces, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 6 veces, aproximadamente 7 veces, aproximadamente 8 veces, aproximadamente 9 veces o aproximadamente 10 veces la afinidad de tal anticuerpo. En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo derivado de un anticuerpo proporcionado en la presente descripción retiene la afinidad, medida por KD, tanto para hTIGIT como para mTIGIT que está dentro de aproximadamente 1,5 veces, aproximadamente 2 veces, aproximadamente 3 veces, aproximadamente 4 veces, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 6 veces, aproximadamente 7 veces, aproximadamente 8 veces, aproximadamente 9 veces o aproximadamente 10 veces la afinidad de tal anticuerpo. En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo derivado de un anticuerpo proporcionado en la presente descripción retiene la afinidad, medida por KD, tanto para cTIGIT como para mTIGIT que está dentro de aproximadamente 1,5 veces, aproximadamente 2 veces, aproximadamente 3 veces, aproximadamente 4 veces, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 6 veces, aproximadamente 7 veces, aproximadamente 8 veces, aproximadamente 9 veces o aproximadamente 10 veces la afinidad de tal anticuerpo. En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo derivado de un anticuerpo proporcionado en la presente descripción retiene la afinidad, medida por KD, para los tres hTIGIT, cTIGIT y mTIGIT que está dentro de aproximadamente 1,5 veces, aproximadamente 2 veces, aproximadamente 3 veces, aproximadamente 4 veces, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 6 veces, aproximadamente 7 veces, aproximadamente 8 veces, aproximadamente 9 veces o aproximadamente 10 veces la afinidad de tal anticuerpo.

En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción retiene la capacidad de antagonizar TIGIT, de acuerdo con lo medido por uno o más ensayos o efectos biológicos descritos en la presente descripción. En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción conserva la capacidad de evitar que TIGIT interactúe con uno o más de sus ligandos, como se describe en la presente descripción.

En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción compite por la unión a TIGIT con un anticuerpo seleccionado de MAB1, mAb2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, Ma B8, MAB9, MAB 10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17, MAB18, MAB19, MAB20 o MAB21, cada uno como se proporciona en la Tabla 5 de esta descripción.

En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción inhibe la unión de CD155 a TIGIT. En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción inhibe la unión de CD112 a TIGIT. En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción inhibe la asociación de CD226 con TIGIT.

En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción activa una célula T efectora o una célula asesina natural (NK). En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción disminuye el número de células T reguladoras en un tejido o en circulación. En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción inhibe la supresión de una célula T efectora por una célula T reguladora.

En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción no se une específicamente a ninguno de PVRL1, PVRL2, PVRL3 o PVRL4.

En algunas modalidades, un fragmento de anticuerpo proporcionado en la presente descripción se une a TIGIT murino (mTIGIT; SEQ ID NO:3) con una afinidad menor (como se indica por una mayor KD) que la afinidad del fragmento de anticuerpo por hTIGIT, o no se une a mTIGIT.

En algunas modalidades, un fragmento de un anticuerpo proporcionado en la presente descripción se une al mismo epítopo de TIGIT que tal anticuerpo.

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción son anticuerpos monoclonales. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción son anticuerpos policlonales.

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción comprenden un anticuerpo quimérico. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción consisten en un anticuerpo quimérico. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción consisten esencialmente en un anticuerpo quimérico. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción comprenden un anticuerpo humanizado. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción consisten en un anticuerpo humanizado. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción consisten esencialmente en un anticuerpo humanizado. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción comprenden un anticuerpo humano. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción consisten en un anticuerpo humano. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción consisten esencialmente en un anticuerpo humano.

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción están maduradas por afinidad. En algunos aspectos, las ABP maduradas por afinidad son ABP maduradas por afinidad derivadas de una ABP ilustrativa proporcionada en la presente descripción.

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción comprenden una estructura alternativa. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción consisten en una estructura alternativa. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción consisten esencialmente en una estructura alternativa. Puede usarse cualquier estructura alternativa adecuada. En algunos aspectos, la estructura alternativa se selecciona de un Adnectin™, un iMab, un Anticalin®, un EETI-II/AGRP, un dominio de Kunitz, un aptámero de péptido de tiorredoxina, un Affibody®, un DARPin, un Affilin, un Tetranectin, un Fynomer y un Avimer. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de TIGIT a uno o más ligandos de TIGIT. En algunos aspectos, el ligando de TIGIT se selecciona de uno o más receptores de poliovirus (PVR; CD155) y nectina-2 (CD112, PVRL2). En algunos aspectos, la ABP inhibe la unión de TIGIT a uno o más ligandos de TIGIT en al menos un 50 %. En algunos aspectos, la ABP inhibe la unión de TIGIT a uno o más ligandos de TIGIT en al menos un 75 %. En algunos aspectos, la ABP inhibe la unión de TIGIT a uno o más ligandos de TIGIT en al menos un 90 %. En algunos aspectos, la ABP inhibe la unión de TIGIT a uno o más ligandos de TIGIT en al menos un 95 %.

En algunas modalidades, una ABP de la invención es una ABP que compite con una ABP ilustrativa proporcionada en la presente descripción. En algunos aspectos, la ABP que compite con la ABP ilustrativa proporcionada en la presente descripción se une al mismo epítopo que una ABP ilustrativa proporcionada en la presente descripción. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción no se une a PVRL4.

Se sabe que cuando un anticuerpo se expresa en células, el anticuerpo se modifica después de la traducción. Los ejemplos de la modificación postraduccional incluyen la escisión de la lisina en el terminal C de la cadena pesada por una carboxipeptidasa; modificación de glutamina o ácido glutámico en el terminal N de la cadena pesada y la cadena ligera a ácido piroglutámico por piroglutamilación; glicosilación; oxidación; desamidación; y la glicación, y se sabe que tales modificaciones postraduccionales ocurren en varios anticuerpos (Véase Journal of Pharmaceutical Sciences, 2008, Vol. 97, p. 2426-2447). En algunas modalidades, una ABP de la invención es un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que sufrió una modificación postraduccional. Los ejemplos de un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que sufrió una modificación postraduccional incluyen un anticuerpo o fragmentos de unión a antígeno del mismo que sufrió piroglutamilación en el terminal N de la región variable de la cadena pesada y/o eliminación de lisina en el terminal C de la cadena pesada. Se conoce en la técnica que tal modificación postraduccional debida a la piroglutamilación en el terminal N y la eliminación de lisina en el terminal C no tiene ninguna influencia sobre la actividad del anticuerpo o fragmento del mismo (Analytical Biochemistry, 2006, Vol. 348, p. 24-39).

2.2. Secuencias de proteínas de unión a antígeno TIGIT

2.2.1. Dominios VH

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH seleccionada de las SEQ ID NO: 4-24. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:4. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:5. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:6. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:7. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:8. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:9. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:10.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO: 11. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO: 12. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO: 13. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO: 14. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:15. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO: 16. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:17. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:18. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:19. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:20. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:21. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:22. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:23. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:24.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH que tiene al menos aproximadamente 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % o 99 % de identidad con una secuencia VH ilustrativa proporcionada en las SEQ ID NO: 4-24. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH proporcionada en las s Eq ID NO: 4-24, con hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25 sustituciones de aminoácidos. En algunos ejemplos, las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadores. En algunos ejemplos, las ABP descritas en este párrafo se denominan en la presente descripción como "variantes". En algunos ejemplos, tales variantes se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción, por ejemplo, mediante maduración por afinidad, mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis aleatoria o cualquier otro método conocido en la técnica o descrito en la presente descripción. En algunos ejemplos, tales variantes no se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción y pueden, por ejemplo, aislarse de novo de acuerdo con los métodos proporcionados en la presente descripción para la obtención de las ABP.

2.2.2. Dominios VL

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VL seleccionada de las SEQ ID NO: 25-28. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VL que tiene al menos aproximadamente 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % o 99 % de identidad con una secuencia VL ilustrativa proporcionada en las SEQ ID NO: 25-28. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VL proporcionada en las SeQ ID NO: 25-28, con hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25 sustituciones de aminoácidos. En algunos ejemplos, las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadores. En algunos ejemplos, las ABP descritas en este párrafo se denominan en la presente descripción como "variantes". En algunos ejemplos, tales variantes se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción, por ejemplo, mediante maduración por afinidad, mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis aleatoria o cualquier otro método conocido en la técnica o descrito en la presente descripción. En algunos ejemplos, tales variantes no se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción y pueden, por ejemplo, aislarse de novo de acuerdo con los métodos proporcionados en la presente descripción para la obtención de las ABP.

2.2.3. Combinaciones VH-VL

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH seleccionada de las SEQ ID NO: 4-24 y una secuencia VL seleccionada de las SEQ ID NO: 25-28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:4 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:5 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una a Bp proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:6 y una secuencia VL de Se Q ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:7 y una secuencia VL de ^sE^qID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:8 y una secuencia VL de ^sE^qID NO:25. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:9 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:10 y una secuencia VH de SEQ ID NO:26. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:11 y una secuencia VH de SEQ ID NO:26. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:12 y una secuencia VH de SEQ ID NO:26. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:13 y una secuencia VH de SEQ ID NO:26. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:14 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:15 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:16 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:17 y una secuencia VL de Se Q ID NO:27. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:18 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una a Bp proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:19 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:20 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una a Bp proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:21 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:22 y una secuencia VL de s Eq ID NO:28. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:23 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:24 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:4 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:4 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una a Bp proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:4 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:5 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:5 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una ^aB^pproporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:5 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:6 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:6 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una a Bp proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:6 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:7 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:7 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una a Bp proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:7 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:8 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:8 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:8 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:9 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:9 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una ^aB^pproporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:9 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:10 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:10 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una a Bp proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:10 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:11 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:11 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una a Bp proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:11 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:12 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:12 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una a Bp proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:12 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:13 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:13 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una ^aB^pproporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:13 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:14 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:14 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una ^aB^pproporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:14 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:15 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:15 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27. En algunos ejemplos, una ^aB^pproporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:15 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:16 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:16 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:16 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:17 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:17 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunos ejemplos, una ^aB^pproporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:17 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:18 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:18 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunos ejemplos, una ^aB^pproporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:18 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:19 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:19 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunos ejemplos, una ^aB^pproporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:19 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:20 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:20 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunos ejemplos, una a Bp proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:20 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:21 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:21 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunos ejemplos, una ^aB^pproporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:21 y una secuencia VL de SEQ ID NO:28.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:22 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:22 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunos ejemplos, una a Bp proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:22 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:23 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:23 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunos ejemplos, una a Bp proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:23 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:24 y una secuencia VL de SEQ ID NO:25. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:24 y una secuencia VL de SEQ ID NO:26. En algunos ejemplos, una ^aB^pproporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH de SEQ ID NO:24 y una secuencia VL de SEQ ID NO:27.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH que tiene al menos aproximadamente 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % o 99 % de identidad con una secuencia VH ilustrativa proporcionada en las SEQ ID NO: 4-24, y una secuencia VL que tiene al menos aproximadamente 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % o 99 % de identidad con una secuencia V^lilustrativa proporcionada en las SEQ ID NO: 25-28. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una secuencia VH proporcionada en las SEQ ID NO: 4-24, con hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25 sustituciones de aminoácidos y una secuencia VL proporcionada en las SEQ ID NO: 25-28, con hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25 sustituciones de aminoácidos. En algunos ejemplos, las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadores. En algunos ejemplos, las ABP descritas en este párrafo se denominan en la presente descripción como "variantes". En algunos ejemplos, tales variantes se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción, por ejemplo, mediante maduración por afinidad, mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis aleatoria o cualquier otro método conocido en la técnica o descrito en la presente descripción. En algunos ejemplos, tales variantes no se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción y pueden, por ejemplo, aislarse de novo de acuerdo con los métodos proporcionados en la presente descripción para la obtención de las ABP. 2.2.4. CDR

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende de una a tres CDR de un dominio VH seleccionado de las SEQ ID NO: 4-24. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende de dos a tres CDR de un dominio VH seleccionado de las SEQ ID NO: 4-24. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende tres CDR de un dominio VH seleccionado de las SEQ ID NO: 4-24. En algunos ejemplos, las CDR son CDR de Kabat. En algunos ejemplos, las CDR son CDR de Chothia. En algunos ejemplos, las CDR son CDR de IMGT.

En algunos ejemplos, las CDR son CDR que tienen al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-H1, CDR-H2 o CDR-H3 de las SEQ ID NO: 4-24. En algunos ejemplos, la CDR-H1 es una CDR-H1 de un dominio VH seleccionado de las SEQ ID NO: 4-24, con hasta 1, 2, 3, 4 o 5 sustituciones de aminoácidos. En algunos ejemplos, la CDR-H2 es una CDR-H2 de un dominio VH seleccionado de las SEQ ID NO: 4-24, con hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 sustituciones de aminoácidos. En algunos ejemplos, la CDR-H3 es una CDR-H3 de un dominio VH seleccionado de las SEQ ID NO: 4-24, con hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 sustituciones de aminoácidos. En algunos ejemplos, las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadores. En algunos ejemplos, las ABP descritas en este párrafo se denominan en la presente descripción como "variantes". En algunos ejemplos, tales variantes se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción, por ejemplo, mediante maduración por afinidad, mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis aleatoria o cualquier otro método conocido en la técnica o descrito en la presente descripción. En algunos ejemplos, tales variantes no se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción y pueden, por ejemplo, aislarse de novo de acuerdo con los métodos proporcionados en la presente descripción para la obtención de las ABP. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende de una a tres CDR de un dominio VL seleccionado de las SEQ ID NO: 25-28. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende de dos a tres CDR de un dominio VL seleccionado de las ^sE^qID NO: 25-28. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende tres CDR de un dominio VL seleccionado de las SEQ ID NO: 25-28. En algunos ejemplos, las ^cD^rson ^cD^rde Kabat. En algunos ejemplos, las CDR son CDR de Chothia. En algunos ejemplos, las CDR son CDR de IMGT.

En algunos ejemplos, las CDR son CDR que tienen al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-L1, CDR-L2 o CDR-L3 de las SEQ ID NO: 25-28. En algunos ejemplos, la CDR-L1 es una CDR-L1 de un dominio VL seleccionado de las SEQ ID NO: 25-28, con hasta 1, 2, 3, 4, 5 o 6 sustituciones de

aminoácidos. En algunos ejemplos, la CDR-L2 es una CDR-L2 de un dominio VL seleccionado de las SEQ ID NO:

25-28, con hasta 1, 2, 3 o 4 sustituciones de aminoácidos. En algunos ejemplos, la CDR-L3 es una CDR-L3 de un

dominio VL seleccionado de las SEQ ID NO: 25-28, con hasta 1, 2, 3, 4 o 5 sustituciones de aminoácidos. En

algunos ejemplos, las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadores. En algunos

ejemplos, las ABP descritas en este párrafo se denominan en la presente descripción como "variantes". En algunos

ejemplos, tales variantes se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción, por ejemplo,

mediante maduración por afinidad, mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis aleatoria o cualquier otro método

conocido en la técnica o descrito en la presente descripción. En algunos ejemplos, tales variantes no se derivan de

una secuencia proporcionada en la presente descripción y pueden, por ejemplo, aislarse de novo de acuerdo con los

métodos proporcionados en la presente descripción para la obtención de las ABP.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende de una a tres CDR de un

dominio VH seleccionado de las Se Q ID NO: 4-24 y de uno a tres CDR de un dominio VL seleccionado de las SEQ

ID NO: 25-28. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende de dos a tres

CDR de un dominio VH seleccionado de las SEQ ID NO: 4-24 y de dos a tres CDR de un dominio VL seleccionado

de las SEQ ID NO: 25-28. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende tres

CDR de un dominio VH seleccionado de las SEQ ID NO: 4-24 y tres CDR de un dominio VL seleccionado de las

SEQ ID NO: 25-28. En algunos ejemplos, las CDR son CDR de Kabat. En algunos ejemplos, las CDR son CDR de

Chothia. En algunos ejemplos, las CDR son CDR de IMGT.

En algunos ejemplos, las CDR son CDR que tienen al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o

95 % de identidad con una CDR-H1, CDR-H2 o CDR-H3 de las SEQ ID NO: 4-24 y al menos aproximadamente

50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-L1, CDR-L2 o CDR-L3 de las SEQ ID NO: 25-28.

En algunos ejemplos, la CDR-H1 es una CDR-H1 de un dominio VH seleccionado de las SEQ ID NO: 4-24, con

hasta 1, 2, 3, 4 o 5 sustituciones de aminoácidos; la CDR-H2 es una CDR-H2 de un dominio VH seleccionado de las

SEQ ID NO: 4-24, con hasta 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 sustituciones de aminoácidos; la CDR-H3 es una CDR-H3 de un

dominio VH seleccionado de las SEQ ID NO: 4-24, con hasta 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 sustituciones de aminoácidos; la

CDR-L1 es una CDR-L1 de un dominio VL seleccionado de las SEQ ID NO: 25-28, con hasta 1, 2, 3, 4, 5 o 6

sustituciones de aminoácidos; la CDR-L2 es una CDR-L2 de un dominio VL seleccionado de las SEQ ID NO: 25-28,

con hasta 1, 2, 3 o 4 sustituciones de aminoácidos; y la CDR-L3 es una CDR-L3 de un dominio VL seleccionado de

las SEQ ID NO: 25-28, con hasta 1, 2, 3, 4 o 5 sustituciones de aminoácidos. En algunos ejemplos, las sustituciones

de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadores. En algunos ejemplos, las ABP descritas en este

párrafo se denominan en la presente descripción como "variantes". En algunos ejemplos, tales variantes se derivan

de una secuencia proporcionada en la presente descripción, por ejemplo, mediante maduración por afinidad,

mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis aleatoria o cualquier otro método conocido en la técnica o descrito en la

presente descripción. En algunos ejemplos, tales variantes no se derivan de una secuencia proporcionada en la

presente descripción y pueden, por ejemplo, aislarse de novo de acuerdo con los métodos proporcionados en la

presente descripción para la obtención de las ABP.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 seleccionada de

las SEQ ID NO: 29-35. En algunos ejemplos, la CDR-H3 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %,

85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-H3 de las SEQ ID NO: 29-35. En algunos ejemplos, la CDR-H3 es

una CDR-H3 de acuerdo con el sistema de numeración IMGT. En algunos ejemplos, la CDR-H3 es una CDR-H seleccionada de las SEQ ID NO: 29-35, con hasta 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 sustituciones de aminoácidos. En alg ejemplos, las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadores. En algunos ejemplos,

las ABP descritas en este párrafo se denominan en la presente descripción como "variantes". En algunos ejemplos,

tales variantes se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción, por ejemplo, mediante

maduración por afinidad, mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis aleatoria o cualquier otro método conocido en la

técnica o descrito en la presente descripción. En algunos ejemplos, tales variantes no se derivan de una secuencia

proporcionada en la presente descripción y pueden, por ejemplo, aislarse de novo de acuerdo con los métodos

proporcionados en la presente descripción para la obtención de las ABP.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H2 seleccionada de

las SEQ ID NO: 36-47. En algunos ejemplos, la CDR-H2 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %,

85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-H2 de las SEQ ID NO: 36-47. En algunos ejemplos, la CDR-H2 es

una CDR-H2 de acuerdo con el sistema de numeración de Kabat. En algunos ejemplos, la CDR-H2 es una CDR-H2

seleccionada de las SEQ ID NO: 36-47, con hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 sustituciones de aminoácidos. En alg ejemplos, las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadores. En algunos ejemplos,

proporcionados en la presente descripción para la obtención de las ABP.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H1 seleccionada de las SEQ ID NO: 48-54 o 58-62. En algunos ejemplos, la CDR-H1 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-H1 de las SEQ ID NO: 48-54 o 58-62. En algunos ejemplos, la CDR-H1 es una CDR-H1 que abarca la CDR-H1 de acuerdo con lo definido por los sistemas de numeración de Chothia y Kabat. En algunos ejemplos, la CDR-H1 es una CDR-H1 seleccionada de las SEQ ID NO: 48-54 o 58-62, con hasta 1, 2, 3, 4 o 5 sustituciones de aminoácidos. En algunos ejemplos, las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadores. En algunos ejemplos, las ABP descritas en este párrafo se denominan en la presente descripción como "variantes". En algunos ejemplos, tales variantes se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción, por ejemplo, mediante maduración por afinidad, mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis aleatoria o cualquier otro método conocido en la técnica o descrito en la presente descripción. En algunos ejemplos, tales variantes no se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción y pueden, por ejemplo, aislarse de novo de acuerdo con los métodos proporcionados en la presente descripción para la obtención de las ABP.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 seleccionada de las SEQ ID NO: 29-35 y una Cd R-H2 seleccionada de las SEQ ID NO: 36-47. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 seleccionada de las SEQ ID NO: 29-35, una CDR-H2 seleccionada de las SEQ ID NO: 36-47, y una CDR-H1 seleccionada de las SEQ ID NO: 48-54 o 58-62. En algunos ejemplos, la CDR-H3 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-H3 de las SEQ ID NO: 29-35, la CDR-H2 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-H2 de las SEQ ID NO: 36-47, y la CDR-H1 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-H1 de las SEQ ID NO: 48-54 o 58-62. En algunos ejemplos, la CDR-H3 es una CDR-H3 seleccionada de las SEQ ID NO: 29-35, con hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 sustituciones de aminoácidos; la CDR-H2 es una CDR-H2 seleccionada de las SEQ ID NO: 36-47, con hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 sustituciones de aminoácidos; y la CDR-H1 es una CDR-H1 seleccionada de las SEQ ID NO: 48-54 o 58-62, con hasta 1, 2, 3, 4 o 5 sustituciones de aminoácidos. En algunos ejemplos, las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadores. En algunos ejemplos, las ABP descritas en este párrafo se denominan en la presente descripción como "variantes". En algunos ejemplos, tales variantes se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción, por ejemplo, mediante maduración por afinidad, mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis aleatoria o cualquier otro método conocido en la técnica o descrito en la presente descripción. En algunos ejemplos, tales variantes no se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción y pueden, por ejemplo, aislarse de novo de acuerdo con los métodos proporcionados en la presente descripción para la obtención de las ABP.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-L3 seleccionada de las SEQ ID NO: 63-66. En algunos ejemplos, la CDR-L3 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-L3 de las SEQ ID NO: 63-66. En algunos ejemplos, la CDR-L3 es una CDR-L3 de acuerdo con los sistemas de numeración Kabat, Chothia e IMGT. En algunos ejemplos, la CDR-L3 es una CDR-L3 seleccionada de las SEQ ID NO: 63-66, con hasta 1, 2, 3, 4 o 5 sustituciones de aminoácidos. En algunos ejemplos, las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadores. En algunos ejemplos, las ABP descritas en este párrafo se denominan en la presente descripción como "variantes". En algunos ejemplos, tales variantes se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción, por ejemplo, mediante maduración por afinidad, mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis aleatoria o cualquier otro método conocido en la técnica o descrito en la presente descripción. En algunos ejemplos, tales variantes no se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción y pueden, por ejemplo, aislarse de novo de acuerdo con los métodos proporcionados en la presente descripción para la obtención de las ABP.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-L2 seleccionada de las SEQ ID NO: 67-69. En algunos ejemplos, la CDR-L2 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-L2 de las SEQ ID NO: 67-69. En algunos ejemplos, la CDR-L2 es una CDR-L2 de acuerdo con los sistemas de numeración de Kabat y Chothia. En algunos ejemplos, la CDR-L2 es una CDR-L2 seleccionada de las SEQ ID NO: 67-69, con hasta 1, 2, 3 o 4 sustituciones de aminoácidos. En algunos ejemplos, las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadores. En algunos ejemplos, las ABP descritas en este párrafo se denominan en la presente descripción como "variantes". En algunos ejemplos, tales variantes se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción, por ejemplo, mediante maduración por afinidad, mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis aleatoria o cualquier otro método conocido en la técnica o descrito en la presente descripción. En algunos ejemplos, tales variantes no se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción y pueden, por ejemplo, aislarse de novo de acuerdo con los métodos proporcionados en la presente descripción para la obtención de las ABP.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-L1 seleccionada de las SEQ ID NO: 70-72. En algunos ejemplos, la CDR-L1 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-L1 de las SEQ ID NO: 70-72. En algunos ejemplos, la CDR-L1 es una CDR-L1 de acuerdo con los sistemas de numeración de Kabat y Chothia. En algunos ejemplos, la CDR-L1 es una CDR-L1 seleccionada de las SEQ ID NO: 70-72, con hasta 1, 2, 3, 4, 5 o 6 sustituciones de aminoácidos. En algunos ejemplos, las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadores. En algunos ejemplos, las ABP descritas en este párrafo se denominan en la presente descripción como "variantes". En algunos ejemplos, tales variantes se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción, por ejemplo, mediante maduración por afinidad, mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis aleatoria o cualquier otro método conocido en la técnica o descrito en la presente descripción. En algunos ejemplos, tales variantes no se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción y pueden, por ejemplo, aislarse de novo de acuerdo con los métodos proporcionados en la presente descripción para la obtención de las ABP.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-L3 seleccionada de las SEQ ID NO: 63-66 y una C^dR-L2 seleccionada de las SEQ ID NO: 67-69. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-L3 seleccionada de las SEQ ID NO: 63-66, una CDR-L2 seleccionada de las SEQ ID NO: 67-69, y una CDR-L1 seleccionada de las SEQ ID NO: 70-72. En algunos ejemplos, la CDR-L3 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-L3 de las SEQ ID NO: 63-66, la CDR-L2 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-L2 de las SEQ ID NO: 67-69, y la CDR-L1 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una c Dr-L1 de las SEQ ID NO: 70-72. En algunos ejemplos, la CDR-L3 es una CDR-L3 seleccionada de las SEQ ID NO: 63-66, con hasta 1, 2, 3, 4 o 5 sustituciones de aminoácidos; la CDR-L2 es una CDR-L2 seleccionada de las SEQ ID NO: 67-69, con hasta 1, 2, 3 o 4 sustituciones de aminoácidos; y la CDR-L1 es una CDR-L1 seleccionada de las SEQ ID NO: 70-72, con hasta 1, 2, 3, 4, 5 o 6 sustituciones de aminoácidos. En algunos ejemplos, las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadores. En algunos ejemplos, las ABP descritas en este párrafo se denominan en la presente descripción como "variantes". En algunos ejemplos, tales variantes se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción, por ejemplo, mediante maduración por afinidad, mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis aleatoria o cualquier otro método conocido en la técnica o descrito en la presente descripción. En algunos ejemplos, tales variantes no se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción y pueden, por ejemplo, aislarse de novo de acuerdo con los métodos proporcionados en la presente descripción para la obtención de las ABP.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 seleccionada de las SEQ ID NO: 29-35, una CDR-H2 seleccionada de las SEQ ID ⁿO: 36-47, una CDR-H1 seleccionada de las SEQ ID NO: 48-54 o 58-62, una CDR-L3 seleccionada de las SEQ ID NO: 63-66, una CDR-L2 seleccionada de las SEQ ID NO: 67-69, y una CDR-L1 seleccionada de las SEQ ID NO: 70-72. En algunos ejemplos, la CDR-H3 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-H3 de las SEQ ID NO: 29-35, la CDR-H2 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-H2 de las SEQ ID NO: 36-47, la CDR-H1 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-H1 de las SEQ ID NO: 48-54 o 58-62, la CDR-L3 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-L3 de las SEQ ID NO: 63-66, la CDR-L2 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-L2 de las SEQ ID NO: 67-69, y la CDR-L1 tiene al menos aproximadamente un 50 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % de identidad con una CDR-L1 de las SEQ ID NO: 70-72. En algunos ejemplos, la CDR-H3 es una CDR-H3 seleccionada de las SEQ ID NO: 29-35, con hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 sustituciones de aminoácidos; la CDR-H2 es una CDR-H2 seleccionada de las SEQ ID NO: 36-47, con hasta 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 sustituciones de aminoácidos; la CDR-H1 es una CDR-H1 seleccionada de las SEQ ID NO: 48-54 o 58-62, con hasta 1, 2, 3, 4 o 5 sustituciones de aminoácidos; la CDR-L3 es una CDR-L3 seleccionada de las SEQ ID NO: 63-66, con hasta 1, 2, 3, 4 o 5 sustituciones de aminoácidos; la CDR-L2 es una CDR-L2 seleccionada de las SEQ ID NO: 67-69, con hasta 1, 2, 3 o 4 sustituciones de aminoácidos; y la CDR-L1 es una CDR-L1 seleccionada de las SEQ ID NO: 70-72, con hasta 1, 2, 3, 4, 5 o 6 sustituciones de aminoácidos. En algunos ejemplos, las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadores. En algunos ejemplos, las ABP descritas en este párrafo se denominan en la presente descripción como "variantes". En algunos ejemplos, tales variantes se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción, por ejemplo, mediante maduración por afinidad, mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis aleatoria o cualquier otro método conocido en la técnica o descrito en la presente descripción. En algunos ejemplos, tales variantes no se derivan de una secuencia proporcionada en la presente descripción y pueden, por ejemplo, aislarse de novo de acuerdo con los métodos proporcionados en la presente descripción para la obtención de las ABP.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:29, una CDR-H2 de SEQ ID NO:36, una CDR-H1 de SEQ ID NO:48, una CDR-L3 de SEQ ID NO:63, una CDR-L2 de SEQ ID NO:67 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:70.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:29, una CDR-H2 de SEQ ID NO:37, una CDR-H1 de SEQ ID NO:49, una CDR-L3 de SEQ ID NO:63, una CDR-L2 de SEQ ID NO:67 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:70.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:29, una CDR-H2 de SEQ ID NO:37, una CDR-H1 de SEQ ID NO:50, una CDR-L3 de SEQ ID NO:63, una CDR-L2 de SEQ ID NO:67 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:70.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:30, una CDR-H2 de SEQ ID NO:37, una CDR-H1 de SEQ ID NO:50, una CDR-L3 de SEQ ID NO:63, una CDR-L2 de SEQ ID NO:67 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:70.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:29, una CDR-H2 de SEQ ID NO:38, una CDR-H1 de SEQ ID NO:50, una CDR-L3 de SEQ ID NO:63, una CDR-L2 de SEQ ID NO:67 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:70.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:31, una CDR-H2 de SEQ ID NO:39, una CDR-H1 de SEQ ID NO:51, una CDR-L3 de SEQ ID NO:64, una CDR-L2 de SEQ ID NO:68 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:71.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:31, una CDR-H2 de SEQ ID NO:40, una CDR-H1 de SEQ ID NO:52, una CDR-L3 de SEQ ID NO:64, una CDR-L2 de SEQ ID NO:68 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:71.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:31, una CDR-H2 de SEQ ID NO:41, una CDR-H1 de SEQ ID NO:53, una CDR-L3 de SEQ ID NO:64, una CDR-L2 de SEQ ID NO:68 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:71.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:31, una CDR-H2 de SEQ ID NO:40, una CDR-H1 de SEQ ID NO:54, una CDR-L3 de SEQ ID NO:64, una CDR-L2 de SEQ ID NO:68 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:71.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:32, una CDR-H2 de SEQ ID NO:40, una CDR-H1 de SEQ ID NO:54, una CDR-L3 de SEQ ID NO:64, una CDR-L2 de SEQ ID NO:68 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:71.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:33, una CDR-H2 de SEQ ID NO:42, una CDR-H1 de SEQ ID NO:58, una CDR-L3 de SEQ ID NO:65, una CDR-L2 de SEQ ID NO:69 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:72.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:33, una CDR-H2 de SEQ ID NO:42, una CDR-H1 de SEQ ID NO:59, una CDR-L3 de SEQ ID NO:65, una CDR-L2 de SEQ ID NO:69 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:72.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:33, una CDR-H2 de SEQ ID NO:43, una CDR-H1 de SEQ ID NO:60, una CDR-L3 de SEQ ID NO:65, una CDR-L2 de SEQ ID NO:69 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:72.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:34, una CDR-H2 de SEQ ID NO:43, una CDR-H1 de SEQ ID NO:60, una CDR-L3 de SEQ ID NO:65, una CDR-L2 de SEQ ID NO:69 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:72.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:34, una CDR-H2 de SEQ ID NO:44, una CDR-H1 de SEQ ID NO:61, una CDR-L3 de SEQ ID NO:65, una CDR-L2 de SEQ ID NO:69 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:72.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:33, una CDR-H2 de SEQ ID NO:44, una CDR-H1 de SEQ ID NO:59, una CDR-L3 de SEQ ID NO:65, una CDR-L2 de SEQ ID NO:69 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:72.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:35, una CDR-H2 de SEQ ID NO:45, una CDR-H1 de SEQ ID NO:62, una CDR-L3 de SEQ ID NO:66, una CDR-L2 de SEQ ID NO:69 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:72.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:35, una CDR-H2 de SEQ ID NO:46, una CDR-H1 de SEQ ID NO:62, una CDR-L3 de SEQ ID NO:66, una CDR-L2 de SEQ ID NO:69 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:72.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una CDR-H3 de SEQ ID NO:35, una CDR-H2 de SEQ ID NO:47, una CDR-H1 de SEQ ID NO:62, una CDR-L3 de SEQ ID NO:66, una CDR-L2 de SEQ ID NO:69 y una CDR-L1 de SEQ ID NO:72.

2.2.5. Cadenas pesadas y cadenas ligeras

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una VH seleccionada de una VH de SEQ ID NO:4-24 (o una variante descrita en la presente descripción) y una región constante seleccionada de las SEQ ID NO: 55-57 o 125. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una VL seleccionada de una VL de SEQ ID NO:25-28 (o una variante descrita en la presente descripción) y una región constante de SEQ ID NO:126.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:79. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:80. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena ligera de SEQ ID NO:81. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:79 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:80 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:82. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:83. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:82 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:83 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:84. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:85. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:84 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:85 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:86. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:87. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:86 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:87 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:88. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:89. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:88 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:89 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 81. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:90. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:91. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena ligera de SEQ ID NO:92. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:90 y una cadena ligera de SEQ ID NO:92. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:91 y una cadena ligera de SeQ ID NO:92.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:93. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:94. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:93 y una cadena ligera de SEQ ID NO:92. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:94 y una cadena ligera de SEQ ID NO:92.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:95. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:96. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:95 y una cadena ligera de SEQ ID NO:92. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:96 y una cadena ligera de SEQ ID NO:92.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:97. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:98. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:97 y una cadena ligera de SEQ ID NO:92. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:98 y una cadena ligera de SEQ ID NO:92.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:99. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:100. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:99 y una cadena ligera de SEQ ID NO:92. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:100 y una cadena ligera de SEQ ID NO:92.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:101. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:102. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:101 y una cadena ligera de SEQ ID NO:92. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:102 y una cadena ligera de SEQ ID NO:92.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:103. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:104. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:103 y una cadena ligera de SEQ ID NO:92. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:104 y una cadena ligera de SEQ ID NO:92.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:105. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:106. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena ligera de SEQ ID NO:107. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:105 y una cadena ligera de SEQ ID NO:107. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:106 y una cadena ligera de SEQ ID NO:107.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:108. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:109. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:108 y una cadena ligera de SEQ ID NO:107. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:109 y una cadena ligera de SEQ ID NO:107.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:110. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:111. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:110 y una cadena ligera de SEQ ID NO:107. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:111 y una cadena ligera de SEQ ID NO:107.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:112. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:113. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:112 y una cadena ligera de SEQ ID NO:107. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:113 y una cadena ligera de SEQ ID NO:107.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:114. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:115. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:114 y una cadena ligera de SEQ ID NO:107. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:115 y una cadena ligera de SEQ ID NO:107.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:116. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:117. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:116 y una cadena ligera de SEQ ID NO:107. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:117 y una cadena ligera de SEQ ID NO:107.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:118. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:119. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena ligera de SEQ ID NO:120. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:118 y una cadena ligera de SEQ ID NO:120. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:119 y una cadena ligera de SEQ ID NO:120.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:121. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:122. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:121 y una cadena ligera de SEQ ID NO:120. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:122 y una cadena ligera de SEQ ID NO:120.

En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:123. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:124. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:123 y una cadena ligera de SEQ ID NO:120. En algunos ejemplos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una cadena pesada de SEQ ID NO:124 y una cadena ligera de SEQ ID NO:120.

2.2.6. Secuencias consenso

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona una primera familia de ABP, en donde una ABP de tal familia comprende las siguientes seis secuencias de CDR: (a) una CDR-H3 que tiene la secuencia A-R-D-G-V-L-Xi-L-N-K-R-S-F-D-I, en donde X1 es A o T (SEQ ID NO: 128); (b) una CDR-H2 que tiene la secuencia S-I-Y-Y-S-G-X2-T-Y-Y-N-P-S-L-K-S, en donde X2 es S, Q o G (SEQ ID NO: 129); (c) una CDR-H1 que tiene la secuencia G-S-I-X3-S-G-X4-Y-Y-W-G, en donde X3 es E o A, y X4 es L, V o S (SEQ ID NO: 130); (d) una CDR-L3 que tiene la secuencia QQHTVRPPLT (SEQ ID NO: 64); (e) una CDR-L2 que tiene la secuencia Ga Ss RAT (SEQ ID NO: 68); y (f) una CDR-L1 que tiene la secuencia RAS^qS^vSSSYLA (SEQ ID NO: 71). En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona una ABP dentro de tal primera familia.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona una segunda familia de ABP, en donde una ABP de tal familia comprende las siguientes seis secuencias de CDR: (a) una CDR-H3 que tiene la secuencia A-R-D-A-N-Y-Y-G-X1 -A-W-A-F-D-P, en donde X1 es S o G (SEQ ID NO: 131); (b) una CDR-H2 que tiene la secuencia S-I-Y-Y-S-G-X2-T-F-Y-N-P-S-L-K-X3, en donde X2 es S o A, y X3 es S o G (SEQ ID NO: 132); (c) una CDR-H1 que tiene la secuencia G-S-I-X4-S-X5-X6-X7-Y-W-G, en donde X4 es S o T, X5 es S o T, X6 es S o K, y X7 es H o Y (SEQ ID NO: 133); (d) una CDR-L3 que tiene la secuencia QQHFNLPT (SEQ ID NO: 63); (e) una CDR-L2 que tiene la secuencia DASNRAT (SEQ ID NO: 67); y (f) una CDR-L1 que tiene la secuencia RASQSVSSYLA (SEQ ID NO: 70). En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona una ABP dentro de tal segunda familia.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona una tercera familia de ABP, en donde una ABP de tal familia comprende las siguientes seis secuencias de CDR: (a) una CDR-H3 que tiene la secuencia A-R-G-G-R-T-T-W-I-G-A-X1-D-I, en donde X1 es F o L (SEQ ID NO:134); (b) una CDR-H2 que tiene la secuencia I-I-N-P-S-X2-G-L-T-S-Y-A-X3-K-F-Q-G, en donde X2 es L o I, y X3 es Q o R (SEQ ID NO: 135); (c) una CDR-H1 que tiene la secuencia Y-T-F-X4-X5-Y-Y-X6-H, en donde X4 es G, P o R, X5 es N, A o E, y X6 es M o I (SEQ ID NO: 136); (d) una CDR-L3 que tiene la secuencia QQYVVWPPLT (SEQ ID NO:65); (e) una CDR-L2 que tiene la secuencia GASTRAT (SEQ ID NO:69); y (f) una CDR-L1 que tiene la secuencia RASQSVSSNLA (SEQ ID NO:72). En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona una ABP dentro de tal tercera familia.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona una cuarta familia de ABP, en donde una ABP de tal familia comprende las siguientes seis secuencias de CDR: (a) una CDR-H3 que tiene la secuencia ARLHVSGSYYPAYLDY (SEQ ID NO:35); (b) una CDR-H2 que tiene la secuencia X1-I-N-P-S-M-G-A-T-S-Y-X2-QKFX3-G, en donde X1 es V o I, X2 es A o T, y X3 es Q o R (SEQ ID NO:137); (c) una CDR-H1 que tiene la secuencia YTFTSHYMG (SEQ ID NO:62); (d) una CDR-L3 que tiene la secuencia QQYIVFPWT (SEQ ID NO:66); (e) una CDR-L2 que tiene la secuencia GASTRAT (SEQ ID NO:69); y (f) una CDR-L1 que tiene la secuencia RASQSVSSNLA, (SEQ ID NO:72). En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona una ABP dentro de tal cuarta familia.

2.2.7. Propiedades funcionales de las variantes de ABP

Como se describió anteriormente, y en otra parte de esta descripción, en la presente descripción se proporcionan variantes de ABP definidas en base al por ciento de identidad con una secuencia de ABP ilustrativa proporcionada en la presente descripción, o la sustitución de residuos de aminoácidos en comparación con una secuencia de ABP ilustrativa proporcionada en la presente descripción.

En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción tiene especificidad para hTIGIT. En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción tiene especificidad para cTIGIT. En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción tiene especificidad para mTIGIT. En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción tiene especificidad para hTIGIT y cTIGIT. En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción tiene especificidad para hTIGIT y mTIGIT. En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción tiene especificidad para cTIGIT y mTIGIT. En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción tiene especificidad para hTIGIT, cTIGIT y mTIGIT.

En algunas modalidades, una variante de una ABP que se deriva de una secuencia de ABP ilustrativa proporcionada en la presente descripción retiene la afinidad, medida por KD, para hTIGIT que está dentro de aproximadamente 1,5 veces, aproximadamente 2 veces, aproximadamente 3 veces, aproximadamente 4 veces, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 6 veces, aproximadamente 7 veces, aproximadamente 8 veces, aproximadamente 9 veces o aproximadamente 10 veces la afinidad de tal ABP ilustrativa. En algunas modalidades, una variante de una ABP que se deriva de una secuencia de ABP ilustrativa proporcionada en la presente descripción retiene la afinidad, medida por KD, para cTIGIT que está dentro de aproximadamente 1,5 veces, aproximadamente 2 veces, aproximadamente 3 veces, aproximadamente 4 veces, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 6 veces, aproximadamente 7 veces, aproximadamente 8 veces, aproximadamente 9 veces o aproximadamente 10 veces la afinidad de tal ABP ilustrativa. En algunas modalidades, una variante de una ABP que se deriva de una secuencia de ABP ilustrativa proporcionada en la presente descripción retiene la afinidad, medida por KD, para mTIGIT que está dentro de aproximadamente 1,5 veces, aproximadamente 2 veces, aproximadamente 3 veces, aproximadamente 4 veces, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 6 veces, aproximadamente 7 veces, aproximadamente 8 veces, aproximadamente 9 veces o aproximadamente 10 veces la afinidad de tal ABP ilustrativa. En algunas modalidades, una variante de una ABP que se deriva de una secuencia de ABP ilustrativa proporcionada en la presente descripción retiene la afinidad, medida por KD, tanto para hTIGIT como para cTIGIT que está dentro de aproximadamente 1,5 veces, aproximadamente 2 veces, aproximadamente 3 veces, aproximadamente 4 veces, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 6 veces, aproximadamente 7 veces, aproximadamente 8 veces, aproximadamente 9 veces o aproximadamente 10 veces la afinidad de tal ABP ilustrativa. En algunas modalidades, una variante de una ABP que se deriva de una secuencia de ABP ilustrativa proporcionada en la presente descripción retiene la afinidad, medida por KD, tanto para hTIGIT como para mTIGIT que está dentro de aproximadamente 1,5 veces, aproximadamente 2 veces, aproximadamente 3 veces, aproximadamente 4 veces, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 6 veces, aproximadamente 7 veces, aproximadamente 8 veces, aproximadamente 9 veces o aproximadamente 10 veces la afinidad de tal ABP ilustrativa. En algunas modalidades, una variante de una ABP que se deriva de una secuencia de ABP ilustrativa proporcionada en la presente descripción retiene la afinidad, medida por KD, tanto para cTIGIT como para mTIGIT que está dentro de aproximadamente 1,5 veces, aproximadamente 2 veces, aproximadamente 3 veces, aproximadamente 4 veces, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 6 veces, aproximadamente 7 veces, aproximadamente 8 veces, aproximadamente 9 veces o aproximadamente 10 veces la afinidad de tal ABP ilustrativa. En algunas modalidades, una variante de una ABP que se deriva de una secuencia de ABP ilustrativa proporcionada en la presente descripción retiene la afinidad, medida por KD, para los tres hTIGIT, cTIGIT y mTIGIT que está dentro de aproximadamente 1,5 veces, aproximadamente 2 veces, aproximadamente 3 veces, aproximadamente 4 veces, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 6 veces, aproximadamente 7 veces, aproximadamente 8 veces, aproximadamente 9 veces o aproximadamente 10 veces la afinidad de tal ABP ilustrativa.

En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción retiene la capacidad de antagonizar TIGIT, medida por uno o más ensayos o efectos biológicos descritos en la presente descripción. En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción retiene la capacidad de evitar que TIGIT interactúe con uno o más de sus ligandos, como se describió en la presente descripción.

En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción compite por unirse a TIGIT con un anticuerpo seleccionado de MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, mAb 5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17, MAB18, MAB19, MAB20 o MAB21, cada uno como se proporciona en la Tabla 5 de esta descripción.

En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de CD155 a TIGIT. En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de CD112 a TIGIT. En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la asociación de CD226 con TIGIT.

En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción activa una célula T efectora o una célula asesina natural (NK). En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción disminuye el número de células T reguladoras en un tejido o en circulación. En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la supresión de una célula T efectora por una célula T reguladora.

En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción no se une específicamente a ninguno de PVRL1, PVRL2, PVRL3 o ^pV^rL4.

En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción se une a la TIGIT murina (SEQ ID NO:3) con una afinidad menor (como se indica por una mayor KD) que la afinidad del ABP por hTIGIT, o no se une a mTIGIT. En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción se une a la TIGIT murina (SEQ ID NO:138) con una afinidad menor (como se indica por una mayor KD) que la afinidad del ABP por hTIGIT, o no se une a mTIGIT.

En algunas modalidades, una variante de una ABP proporcionada en la presente descripción se une al mismo epítopo de TIGIT que tal ABP.

2.2.8. Otras propiedades funcionales de las ABP

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una o más de las características enumeradas en los siguientes (a)-(j): (a) compite por unirse a TIGIT con un anticuerpo seleccionado de MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17, MAB18, MAB19, MAB20 o MAB21, cada uno como se proporciona en la Tabla 5 de esta descripción; (b) inhibe la unión de CD155 a TIGIT; (c) inhibe la unión de CD112 a TIGIT; (d) inhibe la asociación de CD226 con TIGIT; (e) activa una célula T efectora o una célula asesina natural (NK); (f) disminuye el número de células T reguladoras en un tejido o en circulación; (g) inhibe la supresión de una célula T efectora por una célula T reguladora; (h) no se une específicamente a ninguno de PVRL1, PVRL2, PVRL3 o PVRL4; (i) se une específicamente a la TIGIT de mono cynomolgus (cTIGIT; SEQ ID NO:2); o (j) se une a la TIGIT murina (mTIGIT; SEQ ID NO:3) con una afinidad menor (como lo indica una mayor KD) que la afinidad del ABP por hTIGIT, o no se une a mTIGIT. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene dos o más de las características enumeradas en los anteriores (a)-(j). En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene tres o más de las características enumeradas en los anteriores (a)-(j). En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene cuatro o más de las características enumeradas en los anteriores (a)-(j). En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene cinco o más de las características enumeradas en los anteriores (a)-(j). En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene seis o más de las características enumeradas en los anteriores (a)-(j). En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene siete o más de las características enumeradas en los anteriores (a)-(j). En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene ocho o más de las características enumeradas en los anteriores (a)-(j). En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene nueve o más de las características enumeradas en los anteriores (a)-(j). En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene las diez características enumeradas en los anteriores (a)-(j).

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción exhibe una combinación de las características enumeradas en los siguientes (a)-(j): (a) compite por unirse a TIGIT con un anticuerpo seleccionado de MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17, MAB18, MAB19, MAB20 o MAB21, cada uno como se proporciona en la Tabla 5 de esta descripción; (b) inhibe la unión de CD155 a TIGIT; (c) inhibe la unión de CD112 a TIGIT; (d) inhibe la asociación de CD226 con TIGIT; (e) activa una célula T efectora o una célula asesina natural (NK); (f) disminuye el número de células T reguladoras en un tejido o en circulación; (g) inhibe la supresión de una célula T efectora por una célula T reguladora; (h) no se une específicamente a ninguno de PVRL1, PVRL2, PVRL3 o PVRL4; (i) se une específicamente a la TIGIT de mono cynomolgus (cTIGIT; SEQ ID NO:2); o (j) se une a la TIGIT murina (mTIGIT; SEQ ID NO:3) con una afinidad menor (como lo indica una mayor KD) que la afinidad del ABP por hTIGIT, o no se une a mTIGIT. En algunas modalidades, tal ABP exhibe una combinación de las características seleccionadas de (a y b), (a y c), (a y d), (a y e), (a y f), (a y g), (a y h), (a e i), (a y j), (b y a), (b y c), (b y d), (b y e), (b y f), (b y g), (b y h), (b y i), (b y j), (c y a), (c y b), (c y d), (c y e), (c y f), (c y g), (c y h), (c e i), (c y j), (d y a), (d y b), (d y c), (d y e), (d y f), (d y g), (d y h), (d e i), (d y j), (e y a), (e y b), (e y c), (e y d), (e y f), (e y g), (e y h), (e e i), (e y j), (f y a), (f y b), (f y c), (f y d), (f y e), (f y g), (f y h), (f y i), (f y j), (g y a), (g y b), (g y c), (g y d), (g y e), (g y f), (g y h), (g e i), (g y j), (h y a), (h y b), (h y c), (h y d), (h y e), (h y f), (h y g), (h y i), (h y j), (i y a), (i y b), (i y c), (i y d), (i y e), (i y f), (i y g), (i y h), (i y j), (j y a), (j y b), (j y c), (j y d), (j y e), (j y f), (j y g), (j y h) y (j e i). En algunas modalidades, tal ABP exhibe una combinación de las características seleccionadas de (a y b y c), (a y b y d), (a y b y e), (a y b y f), (a y b y g), (a y b y h), (a y b y i), (a y b y j), (a y c y b), (a y c y d), (a y c y e), (a y c y f), (a y c y g), (a y c y h), (a y c e i), (a y c y j), (a y d

y b), (a y d y c), (a y d y e), (a y d y f), (a y d y g), (a y d y h), (a y d e i), (a y d y j), (a y e y b), (a ye y c), (a y e y d),

(a y e y f), (a y e y g), (a y e y h), (a y e e i), (a y e y j), (a y f y b), (a y f y c), (a y f y d), (a y f y e), (a y f y g), (a y f y h) , (a y f y i), (a y f y j), (a y g y b), (a y g y c), (a y g y d), (a y g y e), (a y g y f), (a y g y h), (a y g e i), (a y g y j), (a y h y b), (a y h y c), (a y h y d), (a y h y e), (a y h y f), (a y h y g), (a, h e i), (a, h y j), (a, i y b), (a, i y c), (a, i y d), (a, i y e),

(a, i y f), (a, i y g), (a, i y h), (a, i y j), (a, j y b), (a, j y c), (a y j y d), (a y j y e), (a y j y f), (a y j y g), (a y j y h), (a y j y i),

(b y a y j), (b y a y c), (b y a y d), (b y a y e), (b y a y f), (b y a y g), (b y a y h), (b y a y i), (b y c y j), (b y c y a), (b y c y d), (b y c y e), (b y c y f), (b y c y g), (b y c y h), (b y c e i), (b y d y j), (b y d y a), (b y d y c), (b y d y e), (b y d y f), (b y d y g), (b y d y h), (b y d e i), (b y e y j), (b y e y a), (b y e y c), (b y e y d), (b y e y f), (b y e y g), (b y e y h), (b y e e i),

(b y f y j), (b y f y a), (b y f y c), (b y f y d), (b y f y e), (b y f y g), (b y f y h), (b y f e i), (b y g y j), (b y g y a), (b y g y c),

(b y g y d), (b y g y e), (b y g y f), (b y g y h), (b y g e i), (b y h y j), (b y h y a), (b y h y c), (b y h y d), (b y h y e), (b y h y f), (b y h y g), (b y h e i), (b e i y j), (b e i y a), (b e i y c), (b e i y d), (b e i y e), (b e i y f), (b e i y g), (b e i y h), (b y j e

i) , (b y j y a), (b y j y c), (b y j y d), (b y j y e), (b y j y f), (b y j y g), (b y j y h), (c ya y i), (c y a y j), (c y a y b), (c y a y d) , (c y a y e), (c y a y f), (c y a y g), (c y a y h), (c y b y i), (c y b y j), (c y b y a), (c y b y d), (c y b y e), (c y b y f), (c y b y g), (c y b y h), (c y d e i), (c y d y j), (c y d y a), (c y d y b), (c y d y e), (c y d y f), (c y d y g), (c y d y h), (c y e y i),

(c y e y j), (c y e y a), (c y e y b), (c y e y d), (c y e y f), (c y e y g), (c y e y h), (c y f e i), (c y f y j), (c y f ya), (c y f y b),

(c y f y d), (c y f y e), (c y f y g), (c y f y h), (c y g y i), (c y g y j), (c y g y a), (c y g y b), (c y g y d), (c y g y e), (c y g y f) , (c y g y h), (c y h e i), (c y h y j), (c y h y a), (c y h y b), (c y h y d), (c y h y e), (c y h y f), (c y h y g), (c e i y h), (c e i y j), (c e i y a), (c, i y b), (c, i y d), (c, i y e), (c, i y f), (c, i y g), (c, j y h), (c y j y i), (c y j y a), (c y j y b), (c y j y d), (c y j y

e) , (c y j y f), (c y j y g), (d y a y h), (d y a y i), (d y a y j), (d y a y b), (d y a y c), (d y a y e), (d y a y f), (d ya y g), (d y y h), (d y b y i), (d y b y j), (d y b y a), (d y b y c), (d y b y e), (d y b y f), (d y b y g), (d y c y h), (d y c e i), (d y c y j), (d

y c y a), (d y c y b), (d y c y e), (d y c y f), (d y c y g), (d y e y h), (d y e e i), (d y e y j), (d ye y a), (d y e y b), (d y e y

c) , (d y e y f), (d y e y g), (d y f y h), (d y f y i), (d y f y j), (d y f y a), (d y f y b), (d y f y c), (d y f y e), (d y f y g), (d y g y h) , (d y g e i), (d y g y j), (d y g y a), (d y g y b), (d y g y c), (d y g y e), (d y g y f), (d y h y g), (d y h e i), (d y h y j), (d y h y a), (d y h y b), (d y h y c), (d y h y e), (d y h y f), (d y i y g), (d y i y h), (d e i y j), (d e i y a), (d e i y b), (d e i y c), (d

e i y e), (d e i y f), (d y j y g), (d y j y h), (d y j y i), (d y j y a), (d y j y b), (d y j y c), (d y j y e), (d y j y f), (e y a y g), (e y a y h), (e y a y i), (e y a y j), (e y a y b), (e y a y c), (e y a y d), (e y a y f), (e y b y g), (e y b y h), (e y b y i), (e y b y j),

(e y b y a), (e y b y c), (e y b y d), (e y b y f), (e y c y g), (e y c y h), (e y c e i), (e y c y j), (e y c y a d) , (e y c y f), (e y d y g), (e y d y h), (e y d y i), (e y d y j), (e y d y a), (e y d y b), (e y d y c), (e y d y f), (e y f y g), (e y f y h), (e y f y i), (e y f y j), (e y f y a), (e y f y b), (e y f y c), (e y f y d), (e y g y f), (e y g y h), (e y g e i), (e y g y j), (e y g y a), (e y g y b), (e y g y c), (e y g y d), (e y h y f), (e y h y g), (e y h y i), (e y h y j), (e y h y a), (e y h y b), (e y h y c),

(e y h y d), (e y i y f), (e, i y g), (e, i y h), (e, i y y j), (e e i y a), (e e i y b), (e e i y c), (e e i y d), (e y j y f), (e y j y g), (e y j y h), (e y j y i), (e y j y a), (e y j y b), (e y j y c), (e y j y d), (f y a y e), (f y ay g), (f y a y h), (f y a y i), (f y a y j), (f y a y b), (f y a y c), (f y a y d), (f y b y e), (f y b y g), (f y b y h), (f y b y i), (f y b y j), (f y b y a), (f y b y c), (f y b y d), (f y c y e) , (f y c y g), (f y c y h), (f y c y i), (f y c y j), (f y c y a), (f y c y b), (f y c y d), (f y d y e), (f y d y g), (f y d y h), (f y d y i),

(f y d y j), (f y d y a), (f y d y b), (f y d y c), (f y e y d), (f y e y g), (f y e y h), (f y e y i), (f y e y j), (f y e ya), (f y e y b), (f y e y c), (f y g y d), (f y g y e), (f y g y h), (f y g e i), (f y g y j), (f y g y a), (f y g y b), (f y g y c), (f y h y d), (f y h y e), (f y h y g), (f y h e i), (f y h y j), (f y h y a), (f y h y b), (f y h y c), (f e i y d), (f e i y e), (f e i y g), (f e i y h), (f e i y j), (f e i y a), (f e i y b), (f e i y c), (f y j y d), (f y j y e), (f y j y g), (f y j y h), (f y j y i), (f y j y a), (f y j y b), (f y j y c), (g y a y d), (g y

a y e), (g y a y f), (g y a y h), (g y a y i), (g y a y j), (g y a y b), (g y a y c), (g y b y d), (g y b y e), (g y b y f), (g y b y h),

(g y b y i), (g y b y j), (g y b y a), (g y b y c), (g y c y d), (g y c y e), (g y c y f), (g y c y h), (g y c y i), (g y c yj), (g y c y a), (g y c y b), (g y d y c), (g y d y e), (g y d y f), (g y d y h), (g y d y i), (g y d y j), (g y d y a), (g y d y b), (g y e y c), (g

y e y d), (g y e y f), (g y e y h), (g y e y i), (g y e y j), (g y e y a), (g y e y b), (g y f y c), (g y f y d), (g y f y e), (g y f y h),

(g y f y i), (g y f y j), (g y f y a), (g y f y b), (g y h y c), (g y h y d), (g y h y e), (g y h y f), (g y h e i), (g y h y j), (g y h y a), (g y h y b), (g e i y c), (g e i y d), (g y i y e), (g e i y f), (g e i y h), (g e i y j), (g e i y a), (g e i y b), (g y j y c), (g y j y d), (g y j y e), (g y j y f), (g y j y h), (g y j y i), (g y j y a), (g y j y b), (h y a y c), (h y a y d), (h y a y e), (h y a y f), (h y a y

g) , (h y a y i), (h y a y j), (h y a y b), (h y b y c), (h y b y d), (h y b y e), (h y b y f), (h y b y g), (h y b y i), ( b y a), (h y c y b), (h y c y d), (h y c y e), (h y c y f), (h y c y g), (h y c y i), (h y c y j), (h y c y a), (h y d y b), (h y d y c),

(h y d y e), (h y d y f), (h y d y g), (h y d y i), (h y d y j), (h y d y a), (h y e y b), (h y e y c), (h y e y y g), (h y e y i), (h y e y j), (h y e y a), (h y f y b), (h y f y c), (h y f y d), (h y f y e), (h y f y g), (h y f y i), (h y f y j), (h y f y a), (h y g y b), (h y g y c), (h y g y d), (h y g y e), (h, g y f), (h, g e i), (h, g yj), (h, g y a), (h, i y b), (h, i y c), (h e i y d),

(h e i y e), (h e i y f), (h e i y g), (h e i y j), (h e i y a), (h y j y b), (h y j y c), (h y j y d), (h y j y e), (h y j y f), (h y j y g), y j y i), (h y j y a), (i y a y b), (i y a y c), (i y a y d), (i y a y e), (i y a y f), (i y a y g), (i y a y h), (i y a y j), (i y b y a), (i y b y c), (i y b y d), (i y b y e), (i y b y f), (i y b y g), (i y b y h), (i y b y j), (i y c y a), (i y c y b), (i y c y d), (i y c y e), (i, c y f),

(i, c y g), (i, c y h), (i, c y j), (i, d y a), (i, d y b), (i y d y c), (i y d y e), (i y d y f), (i y d y g), (i y d y h), (i y d y j), (i y e y a), (i y e y b), (i y e y c), (i y e y d), (i y e y f), (i y e y g), (i y e y h), (i y e y j), (i y f y a), (i y f y b), (i y fy c), (i y f y d y f y e), (i y f y g), (i y f y h), (i y f y j), (i y g y a), (i y g y b), (i y g y c), (i y g y d), (i y g y e), (i y g y f), (i y g y h), (i y g y j) , (i y h y a), (i y h y b), (i y h y c), (i y h y d), (i y h y e), (i y h y f), (i y h y g), (i y h y j), (i y j y a), (i y j y b), (i y j y y j y d), (i y j y e), (i y j y f), (i y j y g), (i y j y h), (j y a y i), (j y a y b), (j y a y c), (j y a y d), (j y a y e), (j y a y f), (j y a y g), (j y a y h), (j y b y i), (j y b y a), (j y b y c), (j y b y d), (j y b y e), (j y b y f), (j y b y g), (j y b y h), (j y c e i), (j y c y a),

(j y c y b), (j y c y d), (j y c y e), (j y c y f), (j y c y g), (j y c y h), (j y d e i), (j y d y a), (j y d y b), (j y d y c), (j d y f), (j y d y g), (j y d y h), (j y e y i), (j y e y a), (j y e y b), (j y e y c), (j y e y d), (j y e y f), (j y e y g), i) , (j y f y a), (j y f y b), (j y f y c), (j y f y d), (j y f y e), (j y f y g), (j y f y h), (j y g e i), (j y g y a), (j y g y b), (j g y d), (j y g y e), (j y g y f), (j y g y h), (j y h y i), (j y h y a), (j y h y b), (j y h y c), (j y h y d), (j y h y e), (j y h y f), (j y h y g), (j y i y h), (j e i y a), (j e i y b), (j e i y c), (j e i y d), (j e i y e), (j e i y f), y (j, i y g).

2.3. Líneas germinales

Las ABP proporcionadas en la presente descripción pueden comprender cualquier secuencia adecuada de la línea germinal de V H y VL.

En algunos ejemplos, la región VH de una ABP proporcionada en la presente descripción es de la línea germinal VH4. En algunos ejemplos, la región VH de una ABP proporcionada en la presente descripción es de la línea germinal VH1.

En algunas modalidades, la región VH de una ABP proporcionada en la presente descripción es de la línea germinal VH4-39. En algunas modalidades, la región VH de una ABP proporcionada en la presente descripción es de la línea germinal VH4-31. En algunos ejemplos, la región VH de una ABP proporcionada en la presente descripción es de la línea germinal VH1-46.

En algunos ejemplos, la región VL de una ABP proporcionada en la presente descripción es de la línea germinal VK3.

En algunos ejemplos, la región VL de una ABP proporcionada en la presente descripción es de la línea germinal VK3-11. En algunas modalidades, la región VL de una ABP proporcionada en la presente descripción es de la línea germinal VK3-20. En algunos ejemplos, la región VL de una ABP proporcionada en la presente descripción es de la línea germinal VK3-15.

2.4. Proteínas de unión al antígeno TIGIT monoespecíficas y multiespecíficas

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción son ABP monoespecíficas.

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción son ABP multiespecíficas.

En algunas modalidades, una ABP multiespecífica proporcionada en la presente descripción se une a más de un antígeno. En algunas modalidades, un anticuerpo multiespecífico se une a 2 antígenos. En algunas modalidades, un anticuerpo multiespecífico se une a 3 antígenos. En algunas modalidades, un anticuerpo multiespecífico se une a 4 antígenos. En algunas modalidades, un anticuerpo multiespecífico se une a 5 antígenos.

En algunas modalidades, un anticuerpo multiespecífico proporcionado en la presente descripción se une a más de un epítopo en un antígeno TIGIT. En algunas modalidades, un anticuerpo multiespecífico se une a 2 epítopos en un antígeno TIGIT. En algunas modalidades, un anticuerpo multiespecífico se une a 3 epítopos en un antígeno TIGIT. Se conocen en la técnica muchas construcciones de ABP multiespecíficas, y las ABP proporcionadas en la presente descripción pueden proporcionarse en forma de cualquier construcción adecuada multiespecífica adecuada.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende una inmunoglobulina que comprende al menos dos regiones variables de la cadena pesada diferentes, cada una emparejada con una región variable de la cadena ligera común (es decir, un "anticuerpo de la cadena ligera común"). La región variable de la cadena ligera común forma un dominio de unión a antígeno distinto con cada una de las dos regiones variables de la cadena pesada diferentes. Véase Merchant y otros, Nature Biotechnol., 1998, 16:677-681.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende una inmunoglobulina que comprende un anticuerpo o fragmento del mismo unido a uno o más de los extremos N o C de las cadenas pesada o ligera de tal inmunoglobulina. Véase Coloma y Morrison, Nature Biotechnol., 1997, 15:159-163. En algunos aspectos, tal ABP comprende un anticuerpo biespecífico tetravalente.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende una inmunoglobulina híbrida que comprende al menos dos regiones variables de cadena pesada diferentes y al menos dos regiones variables de cadena ligera diferentes. Véase Milstein y Cuello, Nature, 1983, 305:537-540; y Staerz y Bevan, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos, 1986, 83:1453-1457.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende cadenas de inmunoglobulina con alteraciones para reducir la formación de productos secundarios que no tienen multiespecificidad. En algunos aspectos, las ABP comprenden una o más modificaciones de "botón en ojal" como se describe en la patente de Estados Unidos núm.

5,731,168.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende cadenas de inmunoglobulina con una o más modificaciones electrostáticas para promover el ensamblaje de heteromultímeros de Fc. Véase el documento WO 2009/089004.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende una molécula monocatenaria biespecífica. Véase Traunecker y otros, EMBO J., 1991, 10:3655-3659; y Gruber y otros, J. Immunol., 1994, 152:5368-5374.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera conectados por un enlace polipeptídico, donde la longitud del enlace se selecciona para promover el ensamblaje de las ABP multiespecíficas con la multiespecificidad deseada. Por ejemplo, los scFv monoespecíficos generalmente se forman cuando un dominio variable de la cadena pesada y un dominio variable de la cadena ligera se conectan por un enlace polipeptídico de más de 12 residuos de aminoácidos. Véase la patente de Estados Unidos núms. 4,946,778 y 5,132,405. En algunas modalidades, la reducción de la longitud del enlace polipeptídico a menos de 12 residuos de aminoácidos evita el emparejamiento de dominios variables de la cadena pesada y ligera en la misma cadena polipeptídica, y de esta manera permite el emparejamiento de dominios variables de la cadena pesada y ligera de una cadena con los dominios complementarios en otra cadena. Por lo tanto, las ABP resultantes tienen multiespecificidad, con la especificidad de cada sitio de unión aportada por más de una cadena polipeptídica. Las cadenas polipeptídicas que comprenden dominios variables de las cadenas pesadas y ligeras que se unen mediante enlaces entre 3 y 12 residuos de aminoácidos forman predominantemente dímeros (denominados diacuerpos). Con enlaces entre 0 y 2 residuos de aminoácidos, se favorecen los trímeros (denominados triacuerpos) y tetrámeros (denominados tetracuerpos). Sin embargo, el tipo exacto de oligomerización parece depender de la composición de residuos de aminoácidos y el orden del dominio variable en cada cadena polipeptídica (por ejemplo, VH-enlace-VL contra VL-enlace-VH), además de la longitud del enlace. Un experto en la técnica puede seleccionar la longitud apropiada del enlace en base a la multiespecificidad deseada.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende un diacuerpo. Véase Hollinger y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos, 1993, 90:6444-6448. En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende un triacuerpo. Véase Todorovska y otros, J. Immunol. Methods, 2001, 248:47-66. En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende un tetracuerpo. Véase id..

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende un derivado de F(ab')3 triespecífico. Véase Tut y otros J. Immunol., 1991, 147:60-69.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende un anticuerpo entrecruzado. Véase la patente de Estados Unidos núm. 4,676,980; Brennan y otros, Science, 1985, 229:81-83; Staerz, y otros Nature, 1985, 314:628-631; y EP 0453082.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende dominios de unión a antígeno ensamblados por cremalleras de leucina. Véase Kostelny y otros, J. Immunol., 1992, 148:1547-1553.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende dominios de proteínas complementarias. En algunos aspectos, los dominios de proteínas complementarias comprenden un dominio de anclaje (AD) y un dominio de dimerización y acoplamiento (DDD). En algunas modalidades, el AD y el DDD se unen entre sí y, de esta manera, permiten el ensamblaje de estructuras de ABP multiespecíficas a través del enfoque de "acoplar y bloquear" (DNL). Pueden ensamblarse las ABP de muchas especificidades, incluidas las ABP biespecíficas, ABP triespecíficas, ABP tetraespecíficas, ABP quintespecíficas y ABP hexaespecíficas. Las ABP multiespecíficas que comprenden dominios de proteínas complementarias se describen, por ejemplo, en la patente de Estados Unidos Núms. 7 521 056; 7 550143; 7534866; y 7527787.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende un anticuerpo Fab (DAF) de doble acción como se describió en la publicación de patente de Estados Unidos núm. 2008/0069820.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende un anticuerpo formado por la reducción de dos moléculas parentales seguido de la mezcla de las dos moléculas parentales y la reoxidación para ensamblar una estructura híbrida. Véase Carlring y otros, PLoS One, 2011,6:e22533.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende una DVD-Ig™. Una DVD-Ig™ es una inmunoglobulina de dominio variable dual que puede unirse a dos o más antígenos. Las DVD-Ig™ se describen en lapatente de Estados Unidos núm. 7612181.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende un DART™. Los DARTs™ se describen en Moore y otros, Blood, 2011, 117:454-451.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende un DuoBody®. Los DuoBodies® se describen en Labrijn y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos, 2013, 110:5145-5150; Gramer y otros, mAbs, 2013, 5:962-972; y Labrijn y otros, Nature Protocols, 2014, 9:2450-2463.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende un fragmento de anticuerpo unido a otro anticuerpo o fragmento. La unión puede ser covalente o no covalente. Cuando la unión es covalente, puede ser en forma de proteína de fusión o a través de un enlace químico. Los ejemplos ilustrativos de ABP multiespecíficas que comprenden fragmentos de anticuerpos unidos a otros anticuerpos incluyen anticuerpos biespecíficos tetravalentes, donde un scFv se fusiona con el extremo C terminal del CH3 de una IgG. Véase Coloma y Morrison, Nature Biotechnol., 1997, 15:159-163. Otros ejemplos incluyen anticuerpos en los que una molécula Fab se une a la región constante de una inmunoglobulina. Véase Miler y otros, J. Immunol., 2003, 170:4854-4861. Puede usarse cualquier fragmento adecuado, que incluye cualquiera de los fragmentos descritos en la presente descripción o conocidos en la técnica.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende un CovX-Body. Los CovX-Bodies se describen, por ejemplo, en Doppalapudi y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos, 2010, 107:22611-22616.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende un anticuerpo Fcab, donde uno o más dominios de unión a antígeno se introducen en una región Fc. Los anticuerpos Fcab se describen en Wozniak-Knopp y otros, Protein Eng. Des. Sel., 2010, 23:289-297.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende un anticuerpo TandAb®. Los anticuerpos TandAb® se describen en Kipriyanov y otros, J. Mol. Biol., 1999, 293:41-56 y Zhukovsky y otros, Blood, 2013, 122:5116.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende un Fab en tándem. Los Fab en tándem se describen en el documento WO 2015/103072.

En algunas modalidades, la ABP multiespecífica comprende un Zybody™. Los Zybodies™ se describen en LaFleur y otros, mAbs, 2013, 5:208-218.

2.5. Antagonismo de TIGIT

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción antagonizan a TIGIT al unirse.

En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado la dimerización y/o activación de CD226 (también conocido como DNAM-1), un receptor coestimulador cuya dimerización y función se afecta por la interacción directa con TIGIT. Véase Grogan y otros, J. Immunol., 2014, 192 (Suplemento 1) 2013.15. La Figura 2 proporciona una ilustración de la vía CD226-TIGIT en comparación con la vía CD28/CTLA4, que tiene una biología de coestimulación/coinhibición similar.

En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción aumenta la cantidad de CD226 y CD155 que interactúan en comparación con la cantidad que interactúa en ausencia de la ABP.

En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado la activación de una célula T efectora. En algunos aspectos, la célula T efectora es una célula T CD8+. En algunos aspectos, la célula T efectora es una célula T CD4+.

En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado la activación de una célula NK. En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado la activación de una célula NKT.

En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado una reducción de la actividad inhibidora de una célula T reguladora hacia una célula T efectora.

En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado una mayor secreción de IL-2, IL-6, GM-CSF, TNF, LT-a y/o IFN-^ypor una célula diana.

En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción aumenta la proliferación, supervivencia y/o función de una célula T efectora. En algunos aspectos, la célula T efectora es una célula T efectora CD4+. En algunos aspectos, la célula T efectora es una célula T efectora CD8+.

En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción anula la supresión de una célula T efectora por una célula T reguladora. En algunos aspectos, la célula T reguladora es una célula T reguladora CD4+CD25+Foxp3+. En algunos aspectos, la célula T reguladora es una célula T reguladora CD8+CD25+.

En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado una mejora de una respuesta inmunitaria.

En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado la prevención de un tumor. En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado el retraso de la aparición de un tumor. En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado una reducción del tamaño de un tumor. En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado la eliminación de un tumor. En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado una reducción en el número de metástasis. En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado la prevención de una enfermedad viral. En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado el retraso del inicio de una enfermedad viral. En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado una reducción de la carga viral en un sujeto. En algunas modalidades, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado la eliminación de una infección viral.

2.6. Afinidad y cinética de proteínas de unión a antígeno para TIGIT; Potencia

En algunas modalidades, la afinidad de una ABP proporcionada en la presente descripción por TIGIT como se indica por KD, es menor que aproximadamente 10-5 M, menos de unos 10-6 M, menos de unos 10-7 M, menos de unos 10-8 M, menos de unos 10-9 M, menos de unos 10-10 M, menos de unos 10-11 M, o menos de aproximadamente 10-12 M. En algunas modalidades, la afinidad de la ABP está entre aproximadamente 10-7 M y 10-12 M. En algunas modalidades, la afinidad de la ABP está entre aproximadamente 10-7 M y 10-11 M. En algunas modalidades, la afinidad de la ABP está entre aproximadamente 10-7 M y 10-10 M. En algunas modalidades, la afinidad de la ABP está entre aproximadamente 10-7 M y 10-9 M. En algunas modalidades, la afinidad de la ABP está entre aproximadamente 10-7 M y 10-8 M. En algunas modalidades, la afinidad de la ABP está entre aproximadamente 10 8 M y 10-12 M. En algunas modalidades, la afinidad de la ABP está entre aproximadamente 10-8 M y 10-11 M. En algunas modalidades, la afinidad de la ABP está entre aproximadamente 10-9 M y 10-11 M. En algunas modalidades, la afinidad de la ABP está entre aproximadamente 10-10 M y 10-11 METRO.

En algunas modalidades, la afinidad de una ABP proporcionada en la presente descripción por hTIGIT como se indica por la medición de KD mediante ForteBio, como se establece en el Ejemplo 4, se selecciona de aproximadamente 5,24 * 10-10 M, aproximadamente 4,57 * 10-10 M, aproximadamente 3,32 * 10-10 M, aproximadamente 2,46 * 10-10 M, aproximadamente 1,96 * 10-10 M, aproximadamente 3,11 * 10-9 M, aproximadamente 2,54 * 10-9 M, aproximadamente 3,13 * 10-9 M, aproximadamente 2,83 * 10-9 M, aproximadamente 1,71 * 10-9 M, aproximadamente 2,47 * 10-9 M, aproximadamente 2,35 * 10-9 M, aproximadamente 1,44 * 10-9 M, aproximadamente 1,23 * 10-9 M, aproximadamente 5,26 * 10-10 M, aproximadamente 3,78 * 10-10 M, aproximadamente 4,29 * 10-10 M, o aproximadamente 4,48 * 10-10 M. En algunas modalidades, tal afinidad oscila entre aproximadamente 3,13 * 10-9 M a aproximadamente 1,96 * 10-10 M. En algunas modalidades, tal KD es aproximadamente 3.13 * 10-9 M o menos.

En algunas modalidades, la afinidad de una ABP proporcionada en la presente descripción por cTIGIT como se indica por la medición de KD mediante ForteBio, como se establece en el Ejemplo 4, se selecciona de aproximadamente 2,64 * 10-9 M, aproximadamente 6,55 * 10-9 M, aproximadamente 8,14 * 10-9 M, aproximadamente 6,57 * 10-9 M, aproximadamente 7,94 * 10-8 M, aproximadamente 7,04 * 10-8 M, aproximadamente 1,10 * 10-7 M, aproximadamente 7,20 * 10-8 M, aproximadamente 1,57 * 10-9 M, aproximadamente 8,02 * 10-10 M, aproximadamente 3,67 * 10-10 M, aproximadamente 8,98 * 10-10 M, aproximadamente 1,75 * 10-8 M, o aproximadamente 2,58 * 10-8 M, aproximadamente 9,35 * 10-9 M. En algunas modalidades, tal afinidad oscila entre aproximadamente 1,10 * 10-7 M a aproximadamente 3,69 * 10-10 M. En algunas modalidades, tal KD es aproximadamente 1,10 * 10-7 M o menos.

En algunas modalidades, la afinidad de una ABP proporcionada en la presente descripción por hTIGIT como se indica por la medición de KD mediante métodos de equilibrio de solución (MSD-SET), como se establece en el Ejemplo 4, se selecciona de aproximadamente 5,40 * 10-11 M, aproximadamente 1,10 * 10-10 M, aproximadamente 1,50 * 10-10 M, aproximadamente 5,60 * 10-11 M, aproximadamente 4,00 * 10-10 M, aproximadamente 3,80 * 10 10 M, aproximadamente 2,10 * 10-10 M, aproximadamente 7,00 * 10-11 M, aproximadamente 4,10 * 10-11 M, aproximadamente 2,50 * 10-11 M, aproximadamente 3,00 * 10-11 M, aproximadamente 8,00 * 10-11 M, aproximadamente 8,10 * 10-12 M, aproximadamente 5,00 * 10-12 M, o aproximadamente 4,90 * 10-12 M. En algunas modalidades, tal afinidad oscila de aproximadamente 4,00 * 10-10 M a aproximadamente 4,90 * 1012 M. En algunas modalidades, tal KD es aproximadamente 4,00 * 10-10 M o menos.

En algunas modalidades, la afinidad de una ABP proporcionada en la presente descripción por cTIGIT como se indica por la medición de KD mediante MSD-SET, como se establece en el Ejemplo 4, se selecciona de aproximadamente 3,20 * 10-10 M, aproximadamente 2,30 * 10-10 M, aproximadamente 3,50 * 10-11 M, aproximadamente 1,50 * 10-11 M, o aproximadamente 4,60 * 10-11 M. En algunas modalidades, tal afinidad oscila entre aproximadamente 3,20 * 10-10 M a aproximadamente 1,50 * 10-11 M. En algunas modalidades, tal KD es aproximadamente 3,20 * 10-10 M o menos.

En algunas modalidades, la afinidad de una ABP proporcionada en la presente descripción por hTIGIT como se indica por la medición de KD mediante ForteBio, como se establece en el Ejemplo 6, se selecciona de aproximadamente 7.1 * 10-10 M, aproximadamente 8,1 * 10-11 M, aproximadamente 1,9 * 10-10 M aproximadamente 5,6 * 10-10 M, aproximadamente 2,4 * 10-10 M, aproximadamente 2,8 * 10-10 M aproximadamente 1,6 * 10-10 M, aproximadamente 5,8 * 10-10 M, aproximadamente 1,1 * 10-9 M aproximadamente 8,1 * 10-10 M, aproximadamente 4,6 * 10-10 M, o aproximadamente 3,6 * 10-10 M. En algunas modalidades, tal afinidad oscila entre aproximadamente 1,1 * 10-9 M a aproximadamente 8,1 * 10-11 M. En algunas modalidades, tal KD es aproximadamente 1,1 * 10-9 M o menos.

En algunas modalidades, la afinidad de una ABP proporcionada en la presente descripción por hTIGIT como se indica por la medición de KD mediante ForteBio, como se establece en el Ejemplo 6, es de aproximadamente 2,4* 10-10 M. En algunas modalidades, la afinidad de una ABP proporcionada en la presente descripción por cTIGIT como se indica por KD medido por ForteBio, como se establece en el Ejemplo 6, es de aproximadamente 6,2 * 10-9 M. En algunas modalidades, tal KD es aproximadamente 6,2 * 10-9 M o menos.

En algunas modalidades, la afinidad de una ABP proporcionada en la presente descripción por hTIGIT expresada en la superficie de una célula Jurkat, como se indica por KD, descrito en el Ejemplo 6 es aproximadamente 5,1 * 10-10 M. En algunas modalidades, tal KD es aproximadamente 5,1 * 10-10 M o menos.

En algunas modalidades, la afinidad de una ABP proporcionada en la presente descripción por cTIGIT expresada en la superficie de una célula Jurkat, como se indica por KD, descrito en el Ejemplo 6 es aproximadamente 4,0 * 10-10 M. En algunas modalidades, tal KD es aproximadamente 4,0 * 10-10 M o menos.

En algunas modalidades, la afinidad de una ABP proporcionada en la presente descripción por mTIGIT (SEQ ID NO:3) expresada en la superficie de una célula Jurkat, como se indica por KD, descrito en el Ejemplo 6 es aproximadamente 9,8 * 10-9 M. En algunas modalidades, tal KD es aproximadamente 9,8 * 10-9 M o menos. En algunas modalidades, tal KD es aproximadamente 9,8 * 10-9 M o mayor.

En algunas modalidades, la afinidad de una ABP proporcionada en la presente descripción por hTIGIT expresada en la superficie de una célula T CD8+ humana, como se indica por KD, descrito en el Ejemplo 6 es aproximadamente 1,3 * 10-9 M. En algunas modalidades, tal KD es aproximadamente 1,3 * 10-9 M o menos.

En algunas modalidades, la afinidad de una ABP proporcionada en la presente descripción por cTIGIT expresada en la superficie de una célula T CD8+ de mono cynomolgus, como se indica por KD, descrito en el Ejemplo 6 es aproximadamente 2,8 * 10-9 M. En algunas modalidades, tal KD es aproximadamente 2,8 * 10-9 M o menos.

En algunas modalidades, la afinidad de una ABP proporcionada en la presente descripción por mTIGIT expresada en la superficie de una célula reguladora T murina (es decir, mTIGIT como ocurre naturalmente en tales células, sea o no tal mTIGIT de SEQ ID NO:3 o 138, pero incluidos tales SEQ ID NO), como se indica mediante KD, descrito en el Ejemplo 6 es aproximadamente 2,5 * 10-8 M. En algunas modalidades, tal KD es aproximadamente 2,5 * 10-8 M o menos.

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción se unen específicamente a hTIGIT (SEQ ID NO:1) con una KD de X y a cTIGIT (SEQ ID NO:2) o mTIGIT (SEQ ID NO:3 o 138) con una KD de <10X. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción se unen específicamente a hTIGIT (SEQ ID NO:1) con una KD de X y a cTIGIT (SEQ ID NO:2) o mTIGIT (SEQ ID NO:3 o 138) con una KD de <5X. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción se unen específicamente a hTIGIT (SEQ ID NO:1) con una KD de X y a cTIGIT (SEQ ID NO:2) o mTIGIT (SEQ ID NO:3 o 138) con una KD de <2X. En algunos aspectos, X es cualquier KD descrita en esta descripción. En algunos aspectos, X es 0,01 nM, 0,1 nM, 1 nM, 10 nM, 20 nM, 50 nM o 100 nM.

En algunas modalidades, la relación de KD(hTIGIT) : KD(cTIGIT) para una ABP proporcionada en la presente descripción, medido por ForteBio como se establece en el Ejemplo 4, se selecciona de aproximadamente 1,98 * 10 1, aproximadamente 2,61 * 10-1, aproximadamente 3,03 * 10-1, aproximadamente 3,58 * 10-1, aproximadamente 6,62* 10-3, aproximadamente 1,98 * 10-1, aproximadamente 5,37 * 10-3, aproximadamente 3,90 * 10-3, aproximadamente 6,22 * 10-3, aproximadamente 2,91 * 10-1, aproximadamente 4,14 * 10-1, aproximadamente 6,67 * 10-1, aproximadamente 2,18 * 10-1, aproximadamente 1,78 * 10-1, aproximadamente 1,21 * 10-1, o aproximadamente 3,03 * 10-1. En algunas modalidades, tal relación oscila de aproximadamente 3,90 * 10-3 a aproximadamente 6,67 * 10-1.

En algunas modalidades, la relación de KD(hTIGIT) : KD(cTIGIT) para una ABP proporcionada en la presente descripción, medido por ForteBio como se establece en el Ejemplo, es de aproximadamente 3,87 * 10-2.

En algunas modalidades, la relación de KD(hTIGIT) : KD(cTIGIT) para una ABP proporcionada en la presente descripción, medido por MSD-SET como se establece en el Ejemplo 4, se selecciona de aproximadamente 3,33 * 10-1, aproximadamente 2,31 * 10-1, aproximadamente 1,09 * 10-1, aproximadamente 1,07 * 10-1, o aproximadamente 1,69 * 10-1. En algunas modalidades, tal relación oscila de aproximadamente 1,07 * 10-1 M a aproximadamente 3,33 * 10-1 M.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un ka de al menos unos 104 M-1*seg-1. En algunas modalidades, la ABP tiene una ka de al menos unos 105 M-1*seg-1. En algunas modalidades, la ABP tiene una ka de al menos unos 106 M-1*seg-1. En algunas modalidades, la ABP tiene una ka de entre unos 104 M-1*seg-1 y unos 105 M-1*seg-1. En algunas modalidades, la ABP tiene una ka de entre unos 105 M-1*seg-1 y unos 106 M-1*seg-1. En algunas modalidades, tal ka es al menos unos 105 M-1*seg-1.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un ka para hTIGIT, medido por ForteBio como se establece en el Ejemplo 6, seleccionado de aproximadamente 3,2 * 105 M-1*seg-1, aproximadamente 7,0 * 105 M-1*seg-1, aproximadamente 7,7 * 105 M-1*seg-1, aproximadamente 1,6 * 106 M-1*seg-1, aproximadamente 2,0 * 106 M-1*seg-1, aproximadamente 1,3 * 106 M-1*seg-1, aproximadamente 1,5 * 106 M-1*seg-1, aproximadamente 1,1 * 106 M-1*seg-1, aproximadamente 4,5 * 105 M-1*seg-1, aproximadamente 7,5 * 105 M-1*seg-1, aproximadamente 8,9 * 105 M-1*seg-1, o aproximadamente 1,4 * 106 M-1*seg-1. En algunas modalidades, tal ka oscila de aproximadamente 3,2 * 105 M-1*seg-1 a aproximadamente 2,0 * 106 M-1*seg-1. En algunas modalidades, tal kD es aproximadamente 2,0 * 106 M o menos.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un ka para hTIGIT, medido por ForteBio como se establece en el Ejemplo 6, de aproximadamente 2,0 * 106 M-1*seg-1. En algunas modalidades, tal ka es al menos aproximadamente 2,0 * 106 M-1*seg-1.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un ka para cTIGIT, medido por ForteBio como se establece en el Ejemplo 6, de aproximadamente 7,9 * 105 M-1*seg-1. En algunas modalidades, tal ka es al menos aproximadamente 7,9 * 105 M-1*seg-1.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una kd de aproximadamente 10-5 seg-1 o menos. En algunas modalidades, la ABP tiene una kd de aproximadamente 10-4 seg-1 o menos. En algunas modalidades, la ABP tiene una kd de aproximadamente 10-3 seg-1 o menos. En algunas modalidades, la ABP tiene una kd de aproximadamente 10-2 seg-1 y aproximadamente 10-5 seg-1. En algunas modalidades, la ABP tiene una kd de aproximadamente 10-2 seg-1 y aproximadamente 10-4 seg-1. En algunas modalidades, la ABP tiene una kd de aproximadamente 10-3 seg-1 y aproximadamente 10-5 seg-1.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una kd, para hTIGIT, medido por ForteBio como se establece en el Ejemplo 6, seleccionado de aproximadamente 2,3 * 10-4 seg-1, aproximadamente 6,3 * 10-5 seg-1, aproximadamente 1,4 * 10-4 seg-1, aproximadamente 8,5 * 10-4 seg-1, aproximadamente 3,8 * 10-4 seg-1, aproximadamente 3,5 * 10-4 seg-1, aproximadamente 2,4 * 10-4 seg-1, aproximadamente 6,6 * 10-4 seg-1, aproximadamente 5,9 * 10-4 seg-1, o aproximadamente 5,0 * 10-4 seg-1. En algunas modalidades, tal kd oscila de aproximadamente 6,3 * 10-5 seg-1 a aproximadamente 8,5 * 10-4 seg-1. En algunas modalidades, tal kd es menor que aproximadamente 8,5 * 10-4 seg-1.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una kd para hTIGIT, medido por ForteBio como se establece en el Ejemplo 6, de aproximadamente 3,8 * 10-4 seg-1. En algunas modalidades, tal kd es menor que aproximadamente 3,8 * 10-4 seg-1.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una kd para cTIGIT, medido por ForteBio como se establece en el Ejemplo 6, de aproximadamente 4,6 * 10-3 seg-1. En algunas modalidades, tal kD es menor que aproximadamente 4,6 * 10-3 seg-1.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un ka para hTIGIT de aproximadamente 3,2 * 105 M-1*seg-1, un kd para hTIGIT de aproximadamente 2,3 * 10-4 seg-1, y una KD para hTIGIT de aproximadamente 7,1 * 10-10 M. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un ka para hTIGIT de aproximadamente 7,0 * 105 M-1*seg-1, un kd para hTIGIT de aproximadamente 6,3 * 105 seg-1, y una KD para hTIGIT de aproximadamente 8,1 * 10-11 M. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un ka para hTIGIT de aproximadamente 7,7 * 105 M-1*seg-1, un kd para hTIGIT de aproximadamente 1,4 * 10-4 seg-1, y una KD para hTIGIT de aproximadamente 1,9 * 10-10 M. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un ka para hTIGIT de aproximadamente 1,6 * 106 M-1*seg-1, un kd para hTIGIT de aproximadamente 8,5 * 10-4 seg-1, y una KD para hTIGIT de aproximadamente 5,6 * 10-10 M. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un ka para hTIGIT de aproximadamente 2,0 * 106 M-1*seg-1, un kd para hTIGIT de aproximadamente 3,8 * 10-4 seg-1, y una KD para hTIGIT de aproximadamente 2,4 * 10-10 M. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una ka para hTIGIT de aproximadamente 1,3* 106 M-1*seg-1, un kd para hTIGIT de aproximadamente 3,5 * 10-4 seg-1, y una KD para hTIGIT de aproximadamente 2,8 * 10-10 M. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una ka para hTIGIT de aproximadamente 1,5 * 106 M-1*seg-1, un kd para hTIGIT de aproximadamente 2,4 * 10-4 seg 1, y una KD para hTIGIT de aproximadamente 1,6 * 10-10 M. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un ka para hTIGIT de aproximadamente 1,1 * 106 M-1*seg-1, un kd para hTIGIT de aproximadamente 6,6 * 10-4 seg-1, y una KD para hTIGIT de aproximadamente 5,8 * 10-10 M. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un ka para hTIGIT de aproximadamente 4,5 x 105 M-1*seg-1, un kd para hTIGIT de aproximadamente 3,5 * 10-4 seg-1, y una KD para hTIGIT de aproximadamente 1,1 * 10-9 M. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una ka para hTIGIT de aproximadamente 7,5 * 105 M-1*seg-1, un kd para hTIGIT de aproximadamente 5,9 * 10-4 seg 1, y una KD para hTIGIT de aproximadamente 8,1 * 10-10 M. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un ka para hTIGIT de aproximadamente 8,9 * 105 M-1*seg-1, un kd para hTIGIT de aproximadamente 3,8 * 10-4 seg-1, y una KD para hTIGIT de aproximadamente 4,6 * 10-10 M. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una ka para hTIGIT de aproximadamente 1,4* 106 M-1*seg-1, un kd para hTIGIT de aproximadamente 5,0 * 10-4 seg-1, y una KD para hTIGIT de aproximadamente 3,6 * 10-10 M. En algunas modalidades, tales ka, kd y KD se determinan de acuerdo a los métodos proporcionados en el Ejemplo 6.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un ka para hTIGIT de aproximadamente 2,0 * 106 M-1*seg-1, una kd para hTIGIT de aproximadamente 3,8 * 10-4 seg-1, una KD para hTIGIT de aproximadamente 2,4 * 10-10 Ma para cTIGIT de aproximadamente 7,9 * 105 M-1*seg-1, una kD para cTIGIT de aproximadamente 4,6 * 10-3 seg-1, una kD para cTIGIT de aproximadamente 6,2 * 10-9 M y una KD para mTIGIT (SEQ ID NO:3) de más de aproximadamente 7,0 * 10-7 M. En algunas modalidades, tales ka, kD y kD se determinan de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 6.

En algunas modalidades, KD, ka, y kd se determinan mediante el uso de resonancia de plasmones superficiales (SPR). En algunos aspectos, el análisis SPR utiliza un instrumento BIACORE®. En algunos aspectos, el antígeno se inmoviliza en un chip biosensor de dextrano carboximetilado (CM4 o CM5) y se pone en contacto con una ABP proporcionada en la presente descripción. Las constantes de velocidad de asociación y disociación pueden calcularse mediante el uso del software BIAevaluation® y un modelo de enlace de Langmuir uno a uno. En algunos aspectos, el ensayo se realiza a 25 °C. En algunos aspectos, el ensayo se realiza a 37 °C.

En algunas modalidades, KD, ka, y kd se determinan mediante el uso de interferometría de biocapa (BLI). Puede usarse cualquier método BLI adecuado. En algunos aspectos, el análisis BLI utiliza un instrumento FORTEBIO®. En algunos aspectos, se usa un biosensor de captura de Fc de IgG antihumana (AHC) para capturar ABP en la superficie de un sensor. Subsecuentemente, la asociación de la ABP y el antígeno se controla al poner en contacto la ABP inmovilizada con diferentes concentraciones de TIGIT. A continuación, se mide la disociación del antígeno y ABP en un tampón sin TIGIT. Las constantes de velocidad de asociación y disociación se calculan mediante el uso de los módulos cinéticos del software de análisis FORTEBIO®. En algunos aspectos, el ensayo se realiza a 30 °C. En otras modalidades, la KD puede determinarse mediante un ensayo de unión a antígeno radiomarcado, como se describió en Chen y otros J. Mol. Biol., 1999, 293:865-881.

En otras modalidades, la KD puede determinarse mediante el uso de MSD-SET, como se describió en el Ejemplo 4. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una EC50, medida por la producción de IL-2 en un ensayo de cocultivo Jurkat con TIGIT humana como se describió en el Ejemplo 7, de aproximadamente 0,22 nM, aproximadamente 0,31 nM, aproximadamente 0,33 nM, aproximadamente 0,34 nM, aproximadamente 0,25 nM, aproximadamente 0,24 nM, aproximadamente 0,11 nM, aproximadamente 0,06 nM, aproximadamente 0,14 nM, aproximadamente 0,16 nM, aproximadamente 1,40 nM, aproximadamente 0,71 nM, aproximadamente 0,21 nM, aproximadamente 1,11 nM, aproximadamente 0,13 nM, aproximadamente 0,20 nM, aproximadamente 0,68 nM o aproximadamente 0,61 nM. En algunas modalidades, tales EC50 oscila de aproximadamente 0,06 nM a aproximadamente 1,40 nM. En algunas modalidades, tal EC50 es de aproximadamente 1,40 nM o menos.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un EC50, medida por la producción de IL-2 en un ensayo de cocultivo Jurkat con TIGIT de mono cynomolgus como se describió en el Ejemplo 7, de aproximadamente 2,87 nM. En algunas modalidades, tal EC50 es de aproximadamente 2,87 nM o menos. En algunas modalidades, la relación de EC50(cTIGIT): EC50(hTIGIT) en tal ensayo oscila de aproximadamente 2,05 a aproximadamente 47,8.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un EC10, medida por la producción de TNF en PBMC aisladas de un donante humano y tratadas como se describió en el Ejemplo 9, en un intervalo de aproximadamente 5,02 nM a aproximadamente 18,86 nM. En algunas modalidades, tal EC10 es de aproximadamente 18,86 nM o menos.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una EC50, medida por la producción de TNF en PBMC aisladas de un donante humano y tratadas como se describió en el Ejemplo 9, en un intervalo de aproximadamente 12,60 nM a aproximadamente 20,60 nM. En algunas modalidades, tal EC50 es de aproximadamente 20,60 nM o menos.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una EC90, medida por la producción de TNF en PBMC aisladas de un donante humano y tratadas como se describió en el Ejemplo 9, en un intervalo de aproximadamente 22,49 nM a aproximadamente 31,59 nM. En algunas modalidades, tal EC90 es de aproximadamente 31,59 nM o menos.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un EC10 en un intervalo de aproximadamente 5,02 nM a aproximadamente 18,86 nM, un EC50 en un intervalo de aproximadamente 12,60 nM a aproximadamente 20,60 nM, y EC90 en un intervalo de aproximadamente 22,49 nM a aproximadamente 31,59 nM, en cada caso medido por la producción de TNF en PBMC aisladas de un donante humano y tratadas como se describió en el Ejemplo 9.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un EC10 de aproximadamente 11,94 nM o menos, una EC50 de aproximadamente 16,60 nM o menos, y EC90 de aproximadamente 27,04 nM o menos, en cada caso medido por la producción de TNF en PBMC aisladas de un donante humano y tratadas como se describió en el Ejemplo 9.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un EC10 de aproximadamente 18,86 nM o menos, una EC50 de aproximadamente 20,06 nM o menos, y EC90 de aproximadamente 31,59 nM o menos, en cada caso medido por la producción de TNF en PBMC aisladas de un donante humano y tratadas como se describió en el Ejemplo 9.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un EC10 de aproximadamente 5,02 nM o menos, una EC50 de aproximadamente 12,60 nM o menos, y EC90 de aproximadamente 22,49 nM o menos, en cada caso medido por la producción de TNF en PBMC aisladas de un donante humano y tratadas como se describe en el Ejemplo 9.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un EC10, medida por la producción de IFN-^yen células T CD4+ aisladas de un donante humano y tratadas como se describió en el Ejemplo 9, en un intervalo de aproximadamente 0,37 nM a aproximadamente 1,05 nM. En algunas modalidades, tal EC10 es de aproximadamente 1,05 nM o menos.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un EC50, medido por la producción de IFN-y en células T CD4+ aisladas de un donante humano y tratadas como se describió en el Ejemplo 9, en un intervalo de aproximadamente 0,94 nM a aproximadamente 1,12 nM. En algunas modalidades, tal EC50 es de aproximadamente 1,12 nM o menos.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una EC90, medido por la producción de IFN-^yen células T CD4+ aisladas de un donante humano y tratadas como se describió en el Ejemplo 9, en un intervalo de aproximadamente 1,04 nM a aproximadamente 2,72 nM. En algunas modalidades, tal EC90 es de aproximadamente 2,72 nM o menos.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una EC10 en un intervalo de aproximadamente 0,37 nM a aproximadamente 1,05 nM, una EC50 en un intervalo de aproximadamente 0,94 nM a aproximadamente 1,12 nM, y EC90 en un intervalo de aproximadamente 1,04 nM a aproximadamente 2,72 nM, en cada caso medido por la producción de IFN-y en PBMC aisladas de un donante humano y tratadas como se describió en el Ejemplo 9.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una EC10 de aproximadamente 0,37 nM o menos, una EC50 de aproximadamente 1,00 nM o menos, y EC90 de aproximadamente 2,72 nM o menos, en cada caso medido por la producción de IFN-y en PBMC aisladas de un donante humano y tratadas como se describió en el Ejemplo 9.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un EC10 de aproximadamente 0,85 nM o menos, una EC50 de aproximadamente 0,94 nM o menos, y EC90 de aproximadamente 1,04 nM o menos, en cada caso medido por la producción de IFN-y en PBMC aisladas de un donante humano y tratadas como se describió en el Ejemplo 9.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un EC10 de aproximadamente 1,05 nM o menos, una EC50 de aproximadamente 1,12 nM o menos, y EC90 de aproximadamente 1,19 nM o menos, en cada caso medido por la producción de IFN-^yen PBMC aisladas de un donante humano y tratadas como se describió en el Ejemplo 9.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene un EC10 de aproximadamente 0,75 nM o menos, una EC50 de aproximadamente 1,02 nM o menos, y EC90 de aproximadamente 1,65 nM o menos, en cada caso medido por la producción de IFN-y en PBMC aisladas de un donante humano y tratadas como se describió en el Ejemplo 9.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de unos 5,24 x 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), cTIGIT con una KD de aproximadamente 2,64 * 10-9 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), hTIGIT con una KD de unos 5,40 * 10-11 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), y cTlGlT con una KD de unos 3,20 * 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), en cada caso determinado de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de unos 4,57 * 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), cTIGIT con una KD de aproximadamente 1,57 * 10-9 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), hTIGIT con una KD de unos 2,50 * 10-11 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), y cTIGIT con una KD de unos 2,30 * 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), en cada caso determinado de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de unos 3,32 * 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), cTIGIT con una KD de aproximadamente 8,02 * 10 10 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), hTIGIT con una KD de unos 8,10 * 10-12 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), y cTIGIT con una KD de unos 3,50 * 10-1 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), en cada caso determinado de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de unos 2,46 * 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), cTIGIT con una KD de aproximadamente 3,69 * 10 10 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), hTIGIT con una KD de unos 5,00 * 10-12 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), y cTIGIT con una KD de aproximadamente 1,50 * 10-11 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), en cada caso determinado de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de aproximadamente 1,96 * 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), cTIGIT con una KD de unos 8,98 * 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), hTIGIT con una KD de unos 4,90 * 10-12 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), y cTIGIT con una KD de unos 4,60 * 10-11 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), en cada caso determinado de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de aproximadamente 3,11 * 10-9 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio) y cTIGIT con una KD de aproximadamente 1,75 * 10-8 M (determinado por ForteBio), determinado en cada caso de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de aproximadamente 2,54 * 10-9 M, determinado por ForteBio de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de aproximadamente 3,13 * 10-9 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio) y cTIGIT con una KD de aproximadamente 2,58 * 10-8 M (determinado por ForteBio), determinado en cada caso de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de aproximadamente 2,83 * 10-9 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio) y cTIGIT con una KD de aproximadamente 9,35 * 10-9 M (determinado por ForteBio), determinado en cada caso de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de aproximadamente 1,71 * 10-9 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), cTIGIT con una KD de unos 6,55 * 10-9 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), y hTIGIT con una KD de aproximadamente 1,10 * 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), en cada caso determinado de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de aproximadamente 2,47 * 10-9 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), cTIGIT con una KD de aproximadamente 8,14 * 10-9 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), y hTIGIT con una KD de aproximadamente 1,50 * 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), en cada caso determinado de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de unos 2,35 * 10-9 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), cTIGIT con una KD de unos 6,57 * 10-9 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), y hTIGIT con una KD de unos 5,60 * 10-11 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), en cada caso determinado de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de aproximadamente 1,44 * 10-9 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio) y hTIGIT con una KD de unos 4,00 * 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), en cada caso determinado de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de aproximadamente 1,23 * 10-9 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio) y hTIGIT con una KD de unos 3,80 * 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), en cada caso determinado de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de unos 5,26 * 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), cTIGIT con una KD de aproximadamente 7,94 * 10-8 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), y hTIGIT con una KD de aproximadamente 2,10 * 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), en cada caso determinado de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de aproximadamente 3,78 * 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), cTIGIT con una KD de aproximadamente 7,04 * 10-8 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), y hTIGIT con una KD de unos 7,00 * 10-11 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), en cada caso determinado de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de unos 4,29 * 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), cTIGIT con una KD de aproximadamente 1,10 * 10-7 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio), y hTIGIT con una KD de unos 4,10 * 10-11 M (de acuerdo con lo determinado por MSD-SET), en cada caso determinado de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de unos 4,48 * 10-10 M (de acuerdo con lo determinado por ForteBio) y cTIGIT con una KD de unos 7,20 * 10-8 M (determinado por ForteBio), determinado en cada caso de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de aproximadamente 3,00 * 10-11 M, de acuerdo con lo determinado por MSD-SET de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se une a hTIGIT con una KD de unos 8,00 * 10-11 M, de acuerdo con lo determinado por MSD-SET de acuerdo con los métodos proporcionados en el Ejemplo 4.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 2,2 nM, aproximadamente 2,3 nM, aproximadamente 1,6 nM, aproximadamente 1,9 nM, aproximadamente 1,7 nM, aproximadamente 3,2 nM, aproximadamente 2,6 nM, aproximadamente 2,9 nM, aproximadamente 3,3 nM, aproximadamente 2 nM, aproximadamente 2,2 nM, aproximadamente 2,1 nM, aproximadamente 1,8 nM, aproximadamente 6,4 nM o aproximadamente 1 nM. En algunas modalidades, tal IC50 oscila de aproximadamente 1 nM a aproximadamente 6,4 nM. En algunas modalidades, tal IC50 es de aproximadamente 6,4 nM o menos. En algunas modalidades, tal IC50 se determina como se describió en el Ejemplo 5.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,4 nM, aproximadamente 1,3 nM, aproximadamente 1,2 nM, aproximadamente 1,6 nM, aproximadamente 2 nM, aproximadamente 1,2 nM, aproximadamente 1,1 nM, aproximadamente 1 nM, aproximadamente 1,8 nM, aproximadamente 1,9 nM, aproximadamente 2 nM o aproximadamente 0,8 nM. En algunas modalidades, tal IC50 oscila de aproximadamente 0,8 nM a aproximadamente 2 nM. En algunas modalidades, tal IC50 es de aproximadamente 2 nM o menos. En algunas modalidades, tal IC50 se determina como se describió en el Ejemplo 5.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 2,2 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,4 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 2,3 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,3 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,6 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,2 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,9 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,6 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,7 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,4 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 3,2 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,4 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 2,6 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 2 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 2,9 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,2 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,9 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,1 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 3,3 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 2 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,2 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,7 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,2 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 2,1 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,8 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 2,6 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,6 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 2,2 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,1 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 2,1 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,3 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 2,6 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,9 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,8 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,9 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 6,4 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 2 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 2,3 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1,9 nM. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción inhibe la unión de PVR a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 1 nM e inhibe la unión de PVRL2 a TIGIT con un IC50 de aproximadamente 0,8 nM. En algunas modalidades, tal IC50 es de aproximadamente 2 nM o menos. En algunas modalidades, tal IC50 se determina como se describió en el Ejemplo 5.

2.6.1. Variantes de glicosilación

En ciertas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción puede alterarse para aumentar, disminuir o eliminar el intervalo en que está glicosilado. La glicosilación de polipéptidos es típicamente "ligada a N" o "ligada a O".

La glicosilación "ligada a N" se refiere a la unión de una porción del oligosacárido a la cadena lateral de un residuo de asparagina. Las secuencias tripeptídicas asparagina-X-serina y asparagina-X-treonina, donde X es cualquier aminoácido excepto prolina, son las secuencias de reconocimiento para la unión enzimática del resto de carbohidrato a la cadena lateral de asparagina. Por lo tanto, la presencia de cualquiera de estas secuencias tripeptídicas en un polipéptido crea un sitio de glicosilación potencial.

La glicosilación "ligada a O" se refiere a la unión de uno de los azúcares N-acetilgalactosamina, galactosa o xilosa a un hidroxiaminoácido, más comúnmente serina o treonina, aunque también pueden usarse 5-hidroxiprolina o 5-hidroxilisina.

La adición o eliminación de sitios de glicosilación ligados a N a o de una ABP proporcionada en la presente descripción puede lograrse mediante la alteración de la secuencia de aminoácidos de manera que se cree o se elimine una o más de las secuencias tripeptídicas descritas anteriormente. La adición o deleción de sitios de glicosilación unidos a O puede lograrse mediante la adición, deleción o sustitución de uno o más residuos de serina o treonina en o para (de acuerdo con sea el caso) la secuencia de una ABP.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende un motivo de glicosilación que es diferente de una ABP natural. Cualquier motivo de glicosilación natural adecuado puede modificarse en las ABP proporcionadas en la presente descripción. Las propiedades estructurales y de glicosilación de las inmunoglobulinas, por ejemplo, se conocen en la técnica y se resumen, por ejemplo, en Schroeder y Cavacini, J. Allergy Clin. Immunol., 2010, 125:S41-52.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una región Fc de IgG1 con modificación del oligosacárido unido a la asparagina 297 (Asn 297). Los anticuerpos IgG1 nativos producidos por las células de mamífero comprenden típicamente un oligosacárido ramificado, biantenario que generalmente se une por un enlace N a Asn297 del dominio CH2 de la región Fc. VéaseWright y otros, TIBTECH, 1997, 15:26-32. El oligosacárido unido a Asn 297 puede incluir diversos carbohidratos, tal como manosa, N-acetil glucosamina (GlcNAc), galactosa y ácido siálico, así como también una fucosa unida a un GlcNAc en el “tallo” de la estructura de oligosacárido biantenario.

En algunas modalidades, el oligosacárido unido a Asn 297 se modifica para crear las ABP que tienen ADCC alterada. En algunas modalidades, el oligosacárido se altera para mejorar la ADCC. En algunas modalidades, el oligosacárido se altera para reducir la ADCC.

En algunos aspectos, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende un dominio IgG1 con un contenido de fucosa reducido en la posición Asn 297 en comparación con un dominio IgG1 natural. Se sabe que tales dominios Fc tienen ADCC mejorado. Véase Shields y otros, J. Biol. Chem., 2002, 277:26733-26740. En algunos aspectos, tales ABP no comprenden ninguna fucosa en la posición Asn 297. La cantidad de fucosa puede determinarse mediante el uso de cualquier método adecuado, por ejemplo, como se describió en el documento WO 2008/077546.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende un oligosacárido dividido en dos, tal como un oligosacárido biantenario unido a la región Fc de la ABP que se divide en dos por GlcNAc. Tales variantes de anticuerpos pudieron reducir la fucosilación y/o mejorar la función de ADCC. Los ejemplos de tales variantes de ABP se describen, por ejemplo, en el documento WO 2003/011878; la patente de Estados Unidos núm.

6,602,684; y la publicación de patente de Estados Unidos núm. 2005/0123546.

Otras variantes de glicosilación ilustrativas que pueden incorporarse en las ABP proporcionadas en la presente descripción se describen, por ejemplo, en la publicación de patente de Estados Unidos núms. 2003/0157108, 2004/0093621, 2003/0157108, 2003/0115614, 2002/0164328, 2004/0093621, 2004/0132140, 2004/0110704, 2004/0110282, 2004/0109865; la publicación de patente Internacional núms. 2000/61739, 2001/29246, 2003/085119, 2003/084570, 2005/035586, 2005/035778; 2005/053742, 2002/031140; Okazaki y otros, J. Mol. Biol., 2004, 336:1239-1249; y Yamane-Ohnuki y otros, Biotech. Bioeng., 2004, 87: 614-622.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una región Fc con al menos un residuo de galactosa en el oligosacárido unido a la región Fc. Tales variantes de ABP pudieron mejorar la función de CDC. Los ejemplos de tales variantes de ABP se describen, por ejemplo, en los documentos WO 1997/30087; WO 1998/58964; y WO 1999/22764.

Ejemplos de líneas celulares capaces de producir ABP defucosiladas incluyen células Lec13 CHO, que son deficientes en la fucosilación de proteínas. (véase Ripka y otros, Arch. Biochem. Biophys, 1986, 249:533-545; la publicación de patente de Estados Unidos núm. 2003/0157108; el documentoWO 2004/056312), y las líneas celulares con desactivación génica, tal como el gen alfa-1,6-fucosiltransferasa o células CHO con desactivación génica de FUT8 (véase Yamane-Ohnuki y otros, Biotech. Bioeng., 2004, 87: 614-622; Kanda y otros, Biotechnol. Bioing., 2006, 94:680-688; y el documento WO 2003/085107).

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción es una ABP aglicosilada. Puede producirse una ABP aglicosilada mediante el uso de cualquier método conocido en la técnica o descrito en la presente descripción. En algunos aspectos, se produce una ABP aglicosilada mediante la modificación de la ABP para eliminar todos los sitios de glicosilación. En algunos aspectos, los sitios de glicosilación se eliminan solo de la región Fc de la ABP. En algunos aspectos, una ABP aglicosilada se produce la ABP en mediante la expresión de un organismo que no es capaz de la glicosilación, tal como E. coli, o mediante la expresión de la ABP en una mezcla de reacción libre de células.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una región constante con una función efectora reducida en comparación con un anticuerpo IgG1 nativo. En algunas modalidades, la afinidad de una región constante de una región Fc de una ABP proporcionada en la presente descripción por el receptor Fc es menor que la afinidad de una región constante de IgG1 nativa por tal receptor Fc.

2.7. Variantes de la secuencia de aminoácidos de la región Fc

En ciertas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una región Fc con una o más sustituciones, inserciones o eliminaciones de aminoácidos en comparación con una región Fc de origen natural. En algunos aspectos, tales sustituciones, inserciones o eliminaciones producen las ABP con estabilidad, glicosilación u otras características alteradas. En algunos aspectos, tales sustituciones, inserciones o eliminaciones producen ABP aglicosiladas.

En algunos aspectos, la región Fc de una ABP proporcionada en la presente descripción se modifica para producir una ABP con afinidad alterada por un receptor Fc, o una ABP que es inmunológicamente más inerte. En algunas modalidades, las variantes de ABP proporcionadas en la presente descripción poseen algunas funciones efectoras, pero no todas. Tales ABP pueden ser útiles, por ejemplo, cuando la vida media del ABP es importante in vivo, pero cuando ciertas funciones efectoras (por ejemplo, activación del complemento y ADCC) son innecesarias o perjudiciales.

En algunas modalidades, la región Fc de una ABP proporcionada en la presente descripción es una región Fc de IgG4 humana que comprende una o más de las mutaciones estabilizadoras de bisagra S228P y L235E. Véase Aalberse y otros, Immunology, 2002, 105:9-19. En algunas modalidades, la región Fc de IgG4 comprende una o más de las siguientes mutaciones: E233P, F234V y L235A. Véase Armor y otros, Mol. Immunol., 2003, 40:585-593. En algunas modalidades, la región Fc de IgG4 comprende una deleción en la posición G236.

En algunas modalidades, la región Fc de una ABP proporcionada en la presente descripción es una región Fc de IgG1 humana que comprende una o más mutaciones para reducir la unión al receptor Fc. En algunos aspectos, la una o más mutaciones están en residuos seleccionados de S228 (por ejemplo, S228A), L234 (por ejemplo, L234A), L235 (por ejemplo, L235A), D265 (por ejemplo, D265A) y N297 (por ejemplo, N297A). En algunos aspectos, la ABP comprende una mutación PVA236. La PVA236 significa que la secuencia de aminoácidos ELLG, desde la posición de aminoácido 233 a la 236 de IgG1 o EFLG de IgG4, se reemplaza por PVA. Véase la patente de Estados Unidos núm. 9150641.

En algunas modalidades, la región Fc de una ABP proporcionada en la presente descripción se modifica como se describe en Armor y otros, Eur. J. Immunol., 1999, 29:2613-2624; el documento WO 1999/058572; y/o la solicitud de patente del Reino Unido. núm. 98099518.

En algunas modalidades, la región Fc de una ABP proporcionada en la presente descripción es una región Fc de IgG2 humana que comprende una o más mutaciones A330S y P331S.

En algunas modalidades, la región Fc de una ABP proporcionada en la presente descripción tiene una sustitución de aminoácido en una o más posiciones seleccionadas entre 238, 265, 269, 270, 297, 327 y 329. Véase la patente de Estados Unidos Núm. 6737 056. Tales mutantes Fc incluyen mutantes Fc con sustituciones en dos o más de las posiciones de aminoácidos 265, 269, 270, 297 y 327, que incluyen el llamado mutante Fc “DANA” con la sustitución de los residuos 265 y 297 por alanina. Véase la patente de Estados Unidos núm. 7 332 581. En algunas modalidades, la ABP comprende una alanina en la posición de aminoácido 265. En algunas modalidades, la ABP comprende una alanina en la posición de aminoácido 297.

En ciertas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una región Fc con una o más sustituciones de aminoácidos que mejoran ADCC, tal como sustituciones en una o más de las posiciones 298, 333, y/o 334 de la región Fc. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una región Fc con una o más sustituciones de aminoácidos en las posiciones 239, 332 y 330, como se describió en Lazar y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos, 2006,103:4005-4010.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una o más alteraciones que mejoran o disminuyen la unión a C1q y/o CDC. Véase la patente de Estados Unidos núm. 6.194.551; el documentoWO 99/51642; y Idusogie y otros, J. Immunol., 2000, 164:4178-4184.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una o más alteraciones para aumentar la vida media. Las ABP con vidas medias aumentadas y unión mejorada al receptor Fc neonatal (FcRn) se describen, por ejemplo, en Hinton y otros, J. Immunol., 2006, 176:346-356; y la publicación de patente de Estados Unidos núm. 2005/0014934. Tales variantes de Fc incluyen aquellas con sustituciones en uno o más de los residuos de la región Fc: 238, 250, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 314, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424, 428, y 434 de un IgG.

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción comprende una o más variantes de la región Fc como se describió en la patente de Estados Unidos núms 7371 826, 5648260, y 5624821; Duncan y Winter, Nature, 1988, 322:738-740; y el documento WO 94/29351.

2.8. Piroglutamato

Como se conoce en la técnica, tanto el glutamato (E) como la glutamina (Q) en los extremos N de las proteínas recombinantes pueden ciclarse espontáneamente para formar piroglutamato (pE) in vitro e in vivo. Véase Liu y otros, J. Biol. Chem., 2011, 286:11211-11217.

En algunas modalidades, en la presente descripción se proporcionan las ABP que comprenden una secuencia polipeptídica que tiene un residuo pE en la posición N-terminal. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporcionan las ABP que comprenden una secuencia polipeptídica en donde el residuo N-terminal se ha convertido de Q a pE. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporcionan las ABP que comprenden una secuencia polipeptídica en donde el residuo N-terminal se ha convertido de E a pE.

En algunas modalidades, en la presente descripción se proporcionan las ABP que comprenden secuencias VH que tienen un residuo pE en la posición N-terminal. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporcionan las ABP que comprenden una secuencia VH en donde el residuo N-terminal se ha convertido de Q a pE. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona una ABP que comprende una secuencia VH seleccionada de la SEQ ID NO: 4-24, donde el residuo Q N-terminal se ha convertido en pE. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona una composición que comprende una ABP, en donde la ABP comprende una VH seleccionada de la SEQ ID NO: 4-24, en la que al menos aproximadamente 20 %, al menos aproximadamente 40 %, al menos aproximadamente 60 %, al menos aproximadamente 80 %, al menos aproximadamente 90 %, al menos aproximadamente 95 %, o al menos aproximadamente 99 % de los residuos N-terminales de tal VH en tal composición se han convertido de Q a pE.

En algunas modalidades, en la presente descripción se proporcionan las ABP que comprenden secuencias VL que tienen un residuo pE en la posición N-terminal. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporcionan las ABP que comprenden una secuencia VL en la que el residuo N-terminal se ha convertido de E a pE. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona una ABP que comprende una secuencia VL seleccionada de las SEQ ID NO: 25-28, en donde el residuo E N-terminal se ha convertido en pE. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona una composición que comprende una ABP, en donde la ABP comprende una VL seleccionada de las SEQ ID NO: 25-28, en el que al menos aproximadamente el 20 %, al menos aproximadamente el 40 %, al menos aproximadamente el 60 %, al menos aproximadamente el 80 %, al menos aproximadamente el 90 %, al menos aproximadamente el 95 %, o al menos aproximadamente el 99 % de los residuos N-terminal de tal VL en tal composición se han convertido de E a pE.

En algunas modalidades, en la presente descripción se proporcionan las ABP que comprenden secuencias de cadenas pesadas que tienen un residuo pE en la posición N-terminal. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporcionan las ABP que comprenden una secuencia de cadena pesada en la que el residuo N-terminal se ha convertido de Q a pE. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona una ABP que comprende una secuencia de la cadena pesada seleccionada de las SEQ ID NO: 79, 80, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 121, 122, 123 o 124, en donde el residuo Q N-terminal se ha convertido en pE. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona una composición que comprende una ABP, en donde la ABP comprende una cadena pesada seleccionada de las SEQ ID N^o: 79, 80, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 121, 122, 123 o 124, en las que al menos aproximadamente el 20 %, al menos aproximadamente el 40 %, al menos aproximadamente el 60 %, al menos aproximadamente el 80 %, al menos aproximadamente el 90 %, al menos aproximadamente el 95 % o al menos aproximadamente el 99 % de los residuos N-terminales de tal cadena pesada en tal composición se han convertido de Q a pE.

En algunas modalidades, en la presente descripción se proporcionan las ABP que comprenden secuencias de la cadena ligera que tienen un residuo pE en la posición N-terminal. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporcionan las ABP que comprenden una secuencia de cadena ligera en la que el residuo N-terminal se ha convertido de E a pE. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona una ABP que comprende una secuencia de la cadena ligera seleccionada de las SEQ ID NO: 81, 92, 107 o 120, en donde el residuo E N-terminal se ha convertido en pE. En algunas modalidades, en la presente descripción se proporciona una composición que comprende una ABP, en donde la ABP comprende una cadena ligera seleccionada de las SEQ ID NO: 81, 92, 107 o 120, en las que al menos aproximadamente el 20 %, al menos aproximadamente el 40 %, al menos aproximadamente el 60 %, al menos aproximadamente el 80 %, al menos aproximadamente el 90 %, al menos aproximadamente el 95 % o al menos aproximadamente el 99% de los residuos N-terminales de tal cadena ligera en tal composición se han convertido de E a pE.

2.9. Variantes de proteína de unión a antígeno modificadas con cisteína

En ciertas modalidades, en la presente descripción se proporcionan las ABP modificadas con cisteína, también conocidas como "thioMAb", en las que uno o más residuos de ABP se sustituyen con residuos de cisteína. En modalidades particulares, los residuos sustituidos ocurren en sitios accesibles del solvente de la ABP. Al sustituir tales residuos con cisteína, los grupos tiol reactivos se introducen en los sitios accesibles del solvente de la ABP y pueden usarse para conjugar la ABP con otros restos, como restos de fármaco o restos de fármaco enlazador, por ejemplo, para crear un inmunoconjugado.

En ciertas modalidades, uno cualquiera o más de los siguientes residuos pueden sustituirse con cisteína: V205 de la cadena ligera; A118 de la región Fc de la cadena pesada; y S400 de la región Fc de la cadena pesada. Las ABP modificadas con cisteína pueden generarse como se describió, por ejemplo, en la patente de Estados Unidos núm.

7,521,541.

2.9.1. Inmunoconjugados

2.9.11. Conjugados de polímero y proteína de unión a antígeno

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción se derivatiza mediante conjugación con un polímero. Cualquier polímero adecuado puede conjugarse con la ABP.

En algunas modalidades, el polímero es un polímero soluble en agua. Los ejemplos ilustrativos de polímeros solubles en agua incluyen polietilenglicol (PEG), copolímeros de etilenglicol/propilenglicol, carboximetilcelulosa, dextrano, alcohol polivinílico, polivinil pirrolidona, poli-1,3-dioxolano, poli-1,3,6-trioxano, copolímero etileno/anhídrido maleico, poliaminoácidos (homopolímeros o copolímeros aleatorios), y dextrano o poli(n-vinil pirrolidona)polietilenglicol, homopolímeros de propropilenglicol, copolímeros de óxido de prolipropileno/óxido de etileno, polioles polioxietilados (por ejemplo, glicerina), alcohol polivinílico, y mezclas de esto. En algunos aspectos, el propionaldehído de polietilenglicol puede ser útil para fines de fabricación debido a su estabilidad en agua.

El polímero puede ser de cualquier peso molecular, y puede ser ramificado o no ramificado. El número de polímeros unidos a la ABP puede variar, y si se unen más de un polímero, pueden ser moléculas iguales o diferentes. En general, puede determinarse el número y/o tipo de polímeros usados para la derivatización en base a las consideraciones, que incluyen las propiedades particulares o funciones de la ABP a mejorar y el uso previsto de las ABP.

2.9.1.2. Conjugados de proteína de unión a antígeno y fármaco

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción se conjugan con uno o más agentes terapéuticos. Cualquier agente terapéutico adecuado puede conjugarse con la a Bp . Los agentes terapéuticos ilustrativos incluyen citocinas, quimiocinas y otros agentes que inducen una actividad de células T deseada, como OX40L, 4-1BBL, TNF-alfa (como se usa en la presente descripción, "TNF"), IL-2, fusión de IL-15, CXCL9, CXCL10, trampa IL-10, trampa IL-27 y trampa IL-35. Las trampas de citocinas y su uso se conocen en la técnica y se describen, por ejemplo, en Economides y otros, Nature Medicine, 2003, 9:47-52.

3. Métodos para hacer proteínas de unión al antígeno TIGIT

3.1. Preparación del antígeno TIGIT

El antígeno TIGIT usado para el aislamiento de las ABP proporcionadas en la presente descripción puede ser TIGIT intacto o un fragmento de TIGIT. El antígeno TIGIT puede estar, por ejemplo, en forma de una proteína aislada o una proteína expresada en la superficie de una célula.

En algunas modalidades, el antígeno TIGIT es una variante no natural de TIGIT, tal como una proteína TIGIT que tiene una secuencia de aminoácidos o una modificación postraduccional que no ocurre en la naturaleza.

En algunas modalidades, el antígeno TIGIT se trunca mediante la eliminación de, por ejemplo, secuencias intracelulares o transmembrana, o secuencias señal. En algunas modalidades, el antígeno TIGIT se fusiona en su extremo C con un dominio Fc de IgG1 humana o una etiqueta de polihistidina.

3.2. Métodos de fabricación de anticuerpos monoclonales

Los anticuerpos monoclonales pueden obtenerse, por ejemplo, mediante el uso del método de hibridoma descrito por primera vez por Kohler y otros, Nature, 1975, 256:495-497, y/o por métodos de ADN recombinante (ver, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos núm. 4816567). También pueden obtenerse anticuerpos monoclonales, por ejemplo, mediante el uso de bibliotecas basadas en fagos o levaduras. Véase, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos núms. 8258082 y 8691 730.

En el método del hibridoma, un ratón u otro animal huésped adecuado, se inmuniza para obtener linfocitos que producen o son capaces de producir anticuerpos que se unirán específicamente a la proteína usada para la inmunización. Alternativamente, los linfocitos pueden inmunizarse in vitro. Los linfocitos luego se fusionan con las células de mieloma mediante el uso de un agente de fusión adecuado, tal como el polietilenglicol, para formar una célula hibridoma. Véase Goding J.W., Monoclonal Antibodies: Principles and Practice 3ra ed. (1986) Academic Press, San Diego, CA.

Las células de hibridoma así preparadas se siembran y cultivan en un medio de cultivo adecuado que preferentemente contiene una o más sustancias que inhiben el crecimiento o supervivencia de las células de mieloma, parentales, no fusionadas. Por ejemplo, si las células de mieloma parentales carecen de la enzima hipoxantina guanina fosforribosil transferasa (HGPRT o HPRT), el medio de cultivo para los hibridomas típicamente incluirá hipoxantina, aminopterina, y timidina (medio HAT), cuyas sustancias evitan el crecimiento de células deficientes en HGPRT.

Las células de mieloma útiles son aquellas que se fusionan eficazmente, soportan el alto nivel de producción de anticuerpo por las células productoras de anticuerpos seleccionadas, y son sensibles a las condiciones del medio, tales como la presencias o ausencia de medio HAT. Entre estas, las líneas celulares de mieloma preferidas son las líneas de mieloma murino, como las derivadas de tumores de ratón MOP-21 y MC-11 (disponibles en el Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, CA), y células SP-2 o X63-Ag8-653 (disponibles de la Colección Americana de Cultivos Tipo, Rockville, MD). Se han descrito además líneas celulares de mieloma humano y heteromieloma humano ratón para la producción de anticuerpos monoclonales humanos. Véase, por ejemplo, Kozbor, J. Immunol., 1984, 133:3001.

Después de la identificación de células de hibridoma que producen anticuerpos de la especificidad, afinidad y/o actividad biológica deseadas, los clones seleccionados pueden subclonarse mediante procedimientos de dilución limitante y cultivarse mediante métodos estándar. Véase Goding, supra. Los medios de cultivo adecuados para este propósito incluyen, por ejemplo, D-MEM o medio RPMI-1640. Adicionalmente, las células de hibridoma pueden crecer in vivo como tumores de ascitis en un animal.

El ADN que codifica los anticuerpos monoclonales puede aislarse y secuenciarse fácilmente mediante el uso de procedimientos convencionales (por ejemplo, mediante el uso de sondas de oligonucleótidos que son capaces de unirse específicamente a genes que codifican las cadenas ligera y pesada de los anticuerpos monoclonales). Por lo tanto, las células de hibridoma pueden servir como una fuente útil de anticuerpos que codifican ADN con las propiedades deseadas. Una vez aislado, el ADN puede colocarse en vectores de expresión, que luego se transfectan en células huésped como bacterias (por ejemplo, E. coli), levadura (por ejemplo, Saccharomyces o Pichia sp.), células COS, células de ovario de hámster chino (CHO) o células de mieloma que de otro modo no producen anticuerpos, para producir los anticuerpos monoclonales.

3.3. Métodos para producir anticuerpos quiméricos

Se describen métodos ilustrativos para producir anticuerpos quiméricos, por ejemplo, en la Patente de Estados Unidos núm. 4,816,567; y Morrison y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos, 1984, 81:6851-6855. En algunas modalidades, un anticuerpo quimérico se produce mediante el uso de técnicas recombinantes para combinar una región variable no-humana (por ejemplo, una región variable derivada de un ratón, rata, hámster, conejo, o primate no-humano, tal como un mono) con una región constante humana.

3.4. Métodos para producir anticuerpos humanizados

Los anticuerpos humanizados pueden generarse mediante el reemplazo de la mayoría, o todas, las porciones estructurales de un anticuerpo monoclonal no humano con las correspondientes secuencias de anticuerpos humanos. En consecuencia, se genera una molécula híbrida en la que solo la variable específica de antígeno, o CDR, está compuesta por una secuencia no humana. Los métodos para obtener anticuerpos humanizados incluyen los descritos en, por ejemplo, Winter y Milstein, Nature, 1991, 349:293-299; Rader y otros, Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1998, 95:8910-8915; Steinberger y otros, J. Biol. Chem., 2000, 275:36073-36078; Queen y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1989, 86:10029-10033; y las patentes de Estados Unidos núms. 5585089, 5693761, 5693762, y 6180370.

3.5. Métodos de producción de anticuerpos humanos

Los anticuerpos humanos pueden generarse mediante una variedad de técnicas conocidas en la técnica, por ejemplo, mediante el uso de animales transgénicos (por ejemplo, ratones humanizados). Véase, por ejemplo, Jakobovits y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1993, 90:2551; Jakobovits y otros, Nature, 1993, 362:255-258; Bruggermann y otros, Year in Immuno., 1993, 7:33; y las patentes de Estados Unidos núms. 5591 669, 5589369 y 5 545807. Los anticuerpos humanos también pueden derivarse de bibliotecas de presentación de fagos (véase por ejemplo, Hoogenboom y otros, J. Mol. Biol., 1991, 227:381-388; Marks y otros, J. Mol. Biol., 1991, 222:581-597; y la patente de Estados Unidos núm. 5565332 y 5573905). Los anticuerpos humanos también pueden generarse por células B activadas in vitro (véase, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos núms. 5567610 y 5229275). Los anticuerpos humanos también pueden derivarse de bibliotecas basadas en levaduras (véase, por ejemplo, la patente de Estados Unidos núm. 8691 730).

3.6. Métodos para producir fragmentos de anticuerpos

Los fragmentos de anticuerpos proporcionados en la presente descripción pueden prepararse mediante cualquier método adecuado, incluidos los métodos ilustrativos descritos en la presente descripción o los conocidos en la técnica. Los métodos adecuados incluyen técnicas recombinantes y digestión proteolítica de anticuerpos completos. Los métodos ilustrativos para hacer fragmentos de anticuerpos se describen, por ejemplo, en Hudson y otros, Nat. Med., 2003, 9:129-134. Los métodos para producir anticuerpos scFv se describen, por ejemplo, en Plückthun, en The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Eds. Rosenburg y Moore, Springer-Verlag, Nueva York, págs. 269-315 (1994); WO 93/16185; y las patentes de Estados Unidos núms. 5571 894 y 5587458.

3.7. Métodos para producir estructuras alternativas

Las estructuras alternativas proporcionadas en la presente descripción pueden fabricarse mediante cualquier método adecuado, que incluyen los métodos ilustrativos descritos en la presente descripción o los conocidos en la técnica. Por ejemplo, los métodos para preparar Adnectins™ se describen en Emanuel y otros, mAbs, 2011, 3:38-48. Los métodos para preparar iMab se describen en la patente de Estados Unidos Pub. núm. 2003/0215914. Métodos de preparación de Anticalins® se describen en Vogt y Skerra, Chem. Biochem., 2004, 5:191-199. Los métodos para preparar los dominios de Kunitz se describen en Wagner y otros, Biochem. & Biophys. Res. Comm., 1992, 186:118-1145. Los métodos para preparar aptámeros peptídicos de tiorredoxina se proporcionan en Geyer y Brent, Met. Enzymol., 2000, 328:171-208. Los métodos para preparar Affibodies se proporcionan en Fernández, Curr. Opinion in Biotech., 2004, 15:364-373. Los métodos para preparar DARPins se proporcionan en Zahnd y otros, J. Mol. Biol., 2007, 369:1015-1028. Los métodos para preparar Affilins se proporcionan en Ebersbach y otros, J. Mol. Biol., 2007, 372:172-185. Los métodos para preparar Tetranectinas se proporcionan en Gravesen y otros, J. Biol. Chem., 2000, 275:37390-37396. Los métodos para preparar Avimers se proporcionan en Silverman y otros, Nature Biotech., 2005, 23:1556-1561. Los métodos para preparar Fynomers se proporcionan en Silacci y otros, J. Biol. Chem., 2014, 289:14392-14398.

Se proporciona más información sobre estructuras alternativas en Binz y otros, Nat. Biotechnol., 200523:1257-1268; y Skerra, Current Opin. in Biotech., 200718:295-304.

3.8. Métodos para producir ABP multiespecíficas

Las ABP multiespecíficas proporcionadas en la presente descripción pueden prepararse mediante cualquier método adecuado, que incluye los métodos ilustrativos descritos en la presente descripción o los conocidos en la técnica. Los métodos para producir anticuerpos de cadena ligera comunes se describen en Merchant y otros, Nature Biotechnol., 1998, 16:677-681. Los métodos para producir anticuerpos biespecíficos tetravalentes se describen en Coloma y Morrison, Nature Biotechnol., 1997, 15:159-163. Los métodos para producir inmunoglobulinas híbridas se describen en Milstein y Cuello, Nature, 1983, 305:537-540; y Staerz y Bevan, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos, 1986, 83:1453-1457. Los métodos para hacer inmunoglobulinas con modificación de botón en ojal se describen en la patente de Estados Unidos núm. 5,731,168. Los métodos para hacer inmunoglobulinas con modificaciones electrostáticas se proporcionan en el documentoWO 2009/089004. Los métodos para producir anticuerpos monocatenarios biespecíficos se describen en Traunecker y otros, EMBO J., 1991, 10:3655-3659; y Gruber y otros, J. Immunol., 1994, 152:5368-5374. Los métodos para producir anticuerpos de una sola cadena, cuya longitud de unión puede variar, se describen en la patente de Estados Unidos núms. 4,946,778 y 5,132,405. Los métodos para producir diacuerpos se describen en Hollinger y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos, 1993, 90:6444-6448. Los métodos para fabricar triacuerpos y tetracuerpos se describen en Todorovska y otros, J. Immunol. Methods, 2001, 248:47-66. Los métodos para producir derivados de F(ab')3 triespecíficos se describen en Tut y otros J. Immunol., 1991, 147:60-69. Los métodos para producir anticuerpos entrecruzados se describen en la patente de Estados Unidos núm. 4,676,980; Brennan y otros, Science, 1985, 229:81-83; Staerz, y otros Nature, 1985, 314:628-631; y EP 0453082. Los métodos para hacer dominios de unión a antígenos ensamblados por cremalleras de leucina se describen en Kostelny y otros, J. Immunol., 1992, 148:1547-1553. Los métodos para producir ABP a través del enfoque DNL se describen en la Patente de Estados Unidos núms. 7521 056; 7550 143; 7534866; y 7 527 787. Los métodos para producir híbridos de moléculas de anticuerpos y no anticuerpos se describen en WO 93/08829, para ejemplos de tales ABP. Los métodos para producir anticuerpos DAF se describen en la patente de Estados Unidos Pub. núm. 2008/0069820. Los métodos para producir las ABP a través de la reducción y la oxidación se describen en Carlring y otros, PLoS One, 2011, 6:e22533. Los métodos para producir DVD-Igs™ se describen en la patente de Estados Unidos núm. 7612 181. Los métodos para producir DART™ se describen en Moore y otros, Blood, 2011, 117:454-451. Los métodos para producir Duobodies® se describen en Labrijn y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos, 2013, 110:5145-5150; Gramer y otros, mAbs, 2013, 5:962-972; y Labrijn y otros, Nature Protocols, 2014, 9:2450-2463. Los métodos para producir anticuerpos que comprenden scFv fusionados al extremo C-terminal de la CH3 de una IgG se describen en Coloma y Morrison, Nature Biotechnol., 1997, 15:159-163. Los métodos para producir anticuerpos en los que una molécula Fab se une a la región constante de una inmunoglobulina se describen en Miler y otros, J. Immunol., 2003, 170:4854-4861. Los métodos para hacer CovX-Bodies se describen en Doppalapudi y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos, 2010, 107:22611-22616. Los métodos para producir anticuerpos Fcab se describen en Wozniak-Knopp y otros, Protein Eng. Des. Sel., 2010, 23:289-297. Los métodos para producir anticuerpos TandAb® se describen en Kipriyanov y otros, J. Mol. Biol., 1999, 293:41-56 y Zhukovsky y otros, Blood, 2013, 122:5116. Los métodos para producir Fab en tándem se describen en el documento WO 2015/103072. Los métodos para producir Zibodies™ se describen en LaFleur y otros, mAbs, 2013, 5:208-218.

3.9. Métodos para producir variantes

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción es una variante madurada por afinidad de una ABP original, que puede generarse, por ejemplo, mediante el uso de técnicas de maduración por afinidad basadas en la presentación en fagos. Brevemente, pueden mutarse uno o más residuos de CDR y las ABP variantes, o porciones de las mismas, pueden mostrarse en fagos y cribarse en cuanto a afinidad. Tales alteraciones pueden hacerse en “puntos calientes” de CDR, o residuos codificados por codones que se someten a mutación en alta frecuencia durante el proceso de maduración somática (véase Chowdhury, Methods Mol. Biol., 2008, 207:179-196,), y/o residuos que entre en contacto con el antígeno.

Puede usarse cualquier método adecuado para introducir variabilidad en una secuencia o secuencias de polinucleótidos que codifican una ABP, incluido el PCR propenso a errores, la combinación aleatoria de cadenas y la mutagénesis dirigida por oligonucleótidos, tal como la mutagénesis dirigida por trinucleótidos (TRIM). En algunos aspectos, se aleatorizan varios residuos de CDR (por ejemplo, 4-6 residuos a la vez). Los residuos de CDR implicados en la unión a antígeno pueden identificarse específicamente, por ejemplo, mediante el uso de mutagénesis o modelación de barrido de la alanina. La CDR-H3 y CDR-L3, en particular, se dirigen frecuentemente por mutación.

La introducción de diversidad en las regiones variables y/o las CDR puede usarse para producir una biblioteca secundaria. A continuación, se criba la biblioteca secundaria para identificar variantes de ABP con afinidad mejorada. La maduración por afinidad mediante la construcción y la reselección de bibliotecas secundarias se ha descrito, por ejemplo, en Hoogenboom y otros, Methods in Molecular Biology, 2001, 178:1-37.

3.10. Vectores, células huésped y métodos recombinantes

También se proporcionan ácidos nucleicos aislados que codifican las ABP de TIGIT, vectores que comprenden los ácidos nucleicos, y células huésped que comprenden los vectores y ácidos nucleicos, así como también técnicas recombinantes para la producción de las ABP.

Para la producción recombinante de una ABP, el o los ácidos nucleicos que la codifican pueden aislarse e insertarse en un vector replicable para su posterior clonaje (es decir, amplificación del ADN) o expresión. En algunos aspectos, el ácido nucleico puede producirse por recombinación homóloga, por ejemplo, como se describió en la patente de Estados Unidos núm. 5204244.

En la técnica se conocen muchos vectores diferentes. Los componentes del vector generalmente incluyen uno o más de los siguientes: una secuencia señal, un origen de replicación, uno o más genes marcadores, un elemento potenciador, un promotor, y una secuencia de terminación de la transcripción, por ejemplo, como se describió en la patente de Estados Unidos núm.5534615.

Se proporcionan ejemplos ilustrativos de células huésped adecuadas más abajo. Estas células huésped no pretenden ser limitantes, y puede usarse cualquier célula anfitriona adecuada para producir las ABP proporcionadas en la presente descripción.

Las células huésped adecuadas incluyen cualquier célula procariótica (por ejemplo, bacteriana), eucariótica inferior (por ejemplo, levadura) o eucariótica superior (por ejemplo, de mamífero). Los procariotas adecuados incluyen eubacterias, como organismos Gram-negativos o Gram-positivos, por ejemplo, Enterobacteriaceae como Escherichia (E. coli), Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella (S. typhimurium), Serratia (S. marcescans), Shigella, Bacilli (B. subtilis y B. licheniformis), Pseudomonas (P. aeruginosa), y Streptomyces. Un huésped de clonaje de E. coli útil es E. coli 294, aunque otras cepas tal como E. coli B, E. coli X1776, y E. coli W3110 también son adecuados.

En adición a los procariotas, los microbios eucariotas tales como hongos filamentosos o levaduras son huéspedes adecuados del clonaje o expresión de los vectores que codifican anticuerpos. Saccharomyces cerevisiae, o la levadura común de panadería, es la más comúnmente usada entre los microorganismos huésped de eucariotas inferiores. Sin embargo, un número de otros géneros, especies y cepas están disponibles y son útiles, tales como Schizosaccharomyces pombe, Kluyveromyces (K. lactis, K. fragilis, K. bulgaricus, K. wickeramii, K. waltii, K. drosophilarum, K. thermotolerans, y K. marxianus), Milenrama, Pichia pastoris, Candida (C. albicans), Trichoderma reesia, Neurospora crasa, Schwanniomyces (S. occidentalis), y hongos filamentosos como, por ejemplo Penicillium, Tolipocladio, y Aspergilo (A. nidulans y A. níger).

Las células huésped de mamífero útiles incluyen células COS-7, células HEK293; células de riñón de cría de hámster (BHK); ovario de hámster chino (CHO); células de Sertoli de ratón; células de riñón de mono verde africano (VERO-76), y similares.

Las células huésped usadas para producir la ABP de TIGIT de esta invención pueden cultivarse en una variedad de medios. Los medios comercialmente disponibles tal como, por ejemplo, F10 de Ham, medio mínimo esencial (MEM), RPMI-1640 y, edio de Eagle modificado de Dulbecco (^dM^{e m}) son adecuados para cultivar las células huésped. Además, cualquier medio descrito en Ham y otros, Meth. Enz., 1979, 58:44; Barnes y otros, Anal. Biochem., 1980, 102:255; y las patentes de Estados Unidos núms. 4767704, 4657866, 4927762, 4560655, y 5122469; o los documentos WO 90/03430 y WO 87/00195 pueden usarse.

Cualquiera de estos medios puede suplementarse de acuerdo a como sea necesario con hormonas y/u otros factores de crecimiento (tales como insulina, transferrina, o factor de crecimiento epidérmico), sales (tales como sodio cloruro, calcio, magnesio, y fosfato), tampones (tal como HEPES), nucleótidos (tales como adenosina y timidina), antibióticos, elementos traza (definidos como compuestos inorgánicos usualmente presentes a concentraciones finales en el intervalo micromolar), y glucosa o una fuente de energía equivalente. Además, pueden incluirse cualquiera de otros suplementos necesarios, a concentraciones adecuadas que pudieran conocerse por los expertos en la técnica.

Las condiciones de cultivo, tales como temperatura, pH, y similares, son aquellas previamente usadas con la célula huésped seleccionada para la expresión, y resultarán evidentes para el experto en la técnica.

Cuando se usan técnicas recombinantes, la ABP puede producirse intracelularmente, en el espacio periplásmico o directamente secretada en el medio. Si la ABP se produce intracelularmente, como primer paso, los restos de partículas, ya sean células huésped o fragmentos lisados, se eliminan, por ejemplo, mediante centrifugación o ultrafiltración. Por ejemplo, Carter y otros (Bio/Technology, 1992, 10:163-167) describe un procedimiento para aislar las ABP que se secretan al espacio periplásmico de E. coli. Brevemente, la pasta celular se descongela en presencia de acetato de sodio (pH 3,5), EDTA y fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF) durante aproximadamente 30 min. Los restos de células pueden eliminarse mediante centrifugación.

En algunas modalidades, el ABP se produce en un sistema sin células. En algunos aspectos, el sistema libre de células es un sistema de transcripción y traducción in vitro como se describió en Yin y otros, mAbs, 2012, 4:217-225. En algunos aspectos, el sistema sin células utiliza un extracto sin células de una célula eucariota o de una célula procariota. En algunos aspectos, la célula procariótica es E. coli. La expresión libre de células de la ABP puede ser útil, por ejemplo, cuando la ABP se acumula en una célula como un agregado insoluble, o cuando los rendimientos de la expresión periplásmica son bajos.

Cuando la ABP se secreta en el medio, los sobrenadantes de tales sistemas de expresión generalmente se concentran primero mediante el uso de un filtro de concentración de proteína disponible comercialmente, por ejemplo, una unidad de ultrafiltración. Amicon® o Millipore® Pellcon®. Puede incluirse un inhibidor de proteasa tal como PMSF en cualquiera de las etapas anteriores para inhibir la proteólisis y pueden incluirse antibióticos para prevenir el crecimiento de contaminantes accidentales.

La composición de ABP preparada a partir de las células puede purificarse mediante el uso de, por ejemplo, cromatografía de hidroxilapatita, electroforesis en gel, diálisis y cromatografía de afinidad, siendo la cromatografía de afinidad una técnica de purificación particularmente útil. La idoneidad de la proteína A como ligando de afinidad depende de la especie y el isotipo de cualquier dominio Fc de inmunoglobulina que esté presente en la ABP. La proteína A puede usarse para purificar ABP que comprenden cadenas pesadas y1, y2 o y4 humanas (Lindmark y otros, J. Immunol. Met., 1983, 62:1-13). La proteína G es útil para todos los isotipos de ratón y para y3 humana (Guss y otros, EMBO J., 1986, 5:1567-1575).

La matriz al cual el ligando de afinidad se une es frecuentemente agarosa, pero otras matrices están disponibles. Las matrices mecánicamente estables tal como vidrio de poro controlado o poli(estirenodivinil)benceno permiten regímenes de flujo más rápidos y tiempos de procesamiento más cortos que pueden alcanzarse con la agarosa. Cuando el ABP comprende un dominio CH3, la resina BakerBond ABX® es útil para la purificación.

Otras técnicas para la purificación de proteínas, tal como el fraccionamiento en una columna de intercambio iónico, la precipitación con etanol, HPLC de fase inversa, cromatografía en sílice, cromatografía en heparina Sepharose®, cromatoenfoque, SDS-PAGE y precipitación con sulfato de amonio también están disponibles y pueden aplicarse por un experto en la técnica.

Después de cualquier etapa de purificación preliminar, la mezcla que comprende la ABP de interés y los contaminantes puede someterse a una cromatografía de interacción hidrofóbica de bajo pH mediante el uso de un tampón de elución a un pH entre aproximadamente 2,5 y aproximadamente 4,5, generalmente realizado a bajas concentraciones de sal (por ejemplo, de aproximadamente 0 a aproximadamente 0,25 M de sal).

4. Ensayos

Puede usarse una variedad de ensayos conocidos en la técnica para identificar y caracterizar las ABP de TIGIT proporcionadas en la presente descripción.

4.1. Ensayos de unión, competencia y mapeo de epítopos

La actividad de unión a antígeno específica de las ABP proporcionadas en la presente descripción puede evaluarse mediante cualquier método adecuado, incluido el uso de SPR, BLI, RIA y MSD-SET, como se describió en otra parte de esta descripción. Además, la actividad de unión a antígeno puede evaluarse mediante ensayos ELISA y ensayos de transferencia Western.

Los ensayos para medir la competencia entre dos ABP, o una ABP y otra molécula (por ejemplo, uno o más ligandos de TIGIT) se describen en otra parte de esta descripción y, por ejemplo, en Harlow y Lane, Antibodies: A Laboratory Manual ch.14, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.

Los ensayos para mapear los epítopos a los que se unen las ABP proporcionadas en la presente descripción se describen, por ejemplo, en Morris "Epitope Mapping Protocols," en Methods in Molecular Biology vol. 66, 1996, Humana Press, Totowa, N.J. En algunos ejemplos, el epítopo se determina mediante la competencia peptídica. En algunos ejemplos, el epítopo se determina mediante espectrometría de masas. En algunos ejemplos, el epítopo se determina mediante cristalografía.

4.2. Ensayos de antagonismo de TIGIT

En algunos ejemplos, las ABP proporcionadas en la presente descripción se criban para identificar o caracterizar las ABP con actividad antagonista frente a TIGIT. Puede usarse cualquier ensayo adecuado para identificar o caracterizar tales ABP. En algunos ejemplos, el ensayo mide la cantidad de citocina secretada por una célula T efectora después de poner en contacto la célula T efectora con una ABP proporcionada en la presente descripción. En algunos ejemplos, la citocina se selecciona de IL-2, IL-6, LT-a, TNF, ^gM-CSF, IFN^yy sus combinaciones. En algunos ejemplos, la citocina se selecciona de sCD40L, VEGF, TGF-a, RANTES, PDGF-AB/BB, PDGF-AA, MIP-1p, MIP-1a, MDC (CCL22), MCP-3, MCP-1, IP-10, IL-17A, IL-2Ra, IL-15, IL-13, IL-12 (p70), IL-12 (p40), IL-10, IL-9, IL-8, IL-7, IL-5, IL-4, IL-3, IL-2, IL-2Ra, IL-1RA, IL-1p, IL-1a, IFN^y, IFNa2, GRO, GM-CSF, G-CSF, fractalquina, Flt- 3 ligando, FGF-2, eotaxina, EGF y sus combinaciones.

En algunos ejemplos, las células efectoras se coestimulan con un agonista de CD3, para promover la secreción de citocinas por parte de la célula efectora. En algunos ejemplos, el agonista de ^cD3 se proporciona a un nivel submáximo.

En algunos ejemplos, tales ensayos pueden medir la proliferación de una célula T efectora después de poner en contacto la célula T efectora con una ABP proporcionada en la presente descripción. En algunos ejemplos, la proliferación de la célula T efectora se mide mediante la dilución de un colorante (por ejemplo, éster de succinimidilo de diacetato de carboxifluoresceína; CFSE), mediante la captación de timidina tritiada, mediante ensayos de viabilidad de células luminiscentes o mediante otros ensayos conocidos en la técnica.

En algunos ejemplos, tales ensayos pueden medir la diferenciación, la producción de citocinas, la viabilidad (por ejemplo, la supervivencia), la proliferación o la actividad supresora de una célula T reguladora después de poner en contacto la célula T reguladora con una ABP proporcionada en la presente descripción.

En algunos ejemplos, tales ensayos pueden medir la actividad citotóxica de una célula NK después de poner en contacto la célula NK con una ABP proporcionada en la presente descripción. En algunos ejemplos, la actividad citotóxica de la célula NK se mide mediante el uso de un ensayo de citotoxicidad que cuantifica la destrucción de células diana mediada por NK (por ejemplo, una línea celular K562). Véase Jang y otros, Ann. Clin. Lab. Sci., 2012, 42:42-49.

En algunos ejemplos, tales ensayos pueden medir la cantidad de granzima B. En algunos ejemplos, tales ensayos pueden medir la cantidad de perforina.

4.3. Ensayos de funciones efectoras

La función efectora después del tratamiento con los ABP proporcionados en la presente descripción puede evaluarse mediante el uso de una variedad de ensayos in vitro e in vivo conocidos en la técnica, incluidos los descritos en Ravetch y Kinet, Annu. Rev. Immunol., 1991, 9:457-492; patente de Estados Unidos núms. 5500362, 5 821 337; Hellstrom y otros, Proc. Nat'l Acad. Sci. Estados Unidos, 1986, 83:7059-7063; Hellstrom y otros, Proc. Nat'l Acad. Sci. Estados Unidos, 1985, 82:1499-1502; Bruggemann y otros, J. Exp. Med., 1987, 166:1351-1361; Clynes y otros, Proc. Nat'l Acad. Sci. Estados Unidos, 1998, 95:652-656; el documento WO 2006/029879; el documento WO 2005/100402; Gazzano-Santoro y otros, J. Immunol. Methods, 1996, 202:163-171; Cragg y otros, Blood, 2003, 101:1045-1052; Cragg y otros Blood, 2004, 103:2738-2743; y Petkova y otros, Int'l. Immunol., 2006, 18:1759-1769.

5. Composiciones farmacéuticas

Las ABP proporcionadas en la presente descripción pueden formularse en cualquier composición farmacéutica adecuada y administrarse mediante cualquier vía de administración adecuada. Las vías de administración adecuadas incluyen, pero no se limitan a, intraarterial, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, nasal, parenteral, pulmonar, y rutas subcutáneas.

La composición farmacéutica puede comprender uno o más excipientes farmacéuticos. Puede usarse cualquier excipiente farmacéutico adecuado, y un experto normal en la técnica es capaz de seleccionar excipientes farmacéuticos adecuados. Por consiguiente, los excipientes farmacéuticos proporcionados a continuación pretenden ser ilustrativos y no limitativos. Los excipientes farmacéuticos adicionales incluyen, por ejemplo, los descritos en Handbook of Pharmaceutical Excipients, Rowe y otros (Eds.) 6ta Ed. (2009).

En otra modalidad, la composición farmacéutica comprende un segundo agente antiespumante. Puede usarse cualquier agente antiespumante adecuado. En algunos aspectos, el agente antiespumante se selecciona de un alcohol, un éter, un aceite, una cera, una silicona, un tensioactivo y sus combinaciones. En algunos aspectos, el agente antiespumante se selecciona de un aceite mineral, un aceite vegetal, etilen bis estearamida, una cera de parafina, una cera de éster, una cera de alcohol graso, un alcohol graso de cadena larga, un jabón de ácido graso, un éster ácido, un glicol de silicio, una fluorosilicona, un copolímero de polietilenglicol-polipropilenglicol, polidimetilsiloxano-dióxido de silicio, éter, alcohol octílico, alcohol caprílico, trioleato de sorbitán, alcohol etílico, 2-etilhexanol, dimeticona, alcohol oleílico, simeticona, y sus combinaciones.

En algunas modalidades, la composición farmacéutica comprende un cosolvente. Los ejemplos ilustrativos de cosolventes incluyen etanol, poli(etilen)glicol, butilenglicol, dimetilacetamida, glicerina, propilenglicol y sus combinaciones.

En algunas modalidades, la composición farmacéutica comprende un tampón. Los ejemplos ilustrativos de tampones incluyen acetato, borato, carbonato, lactato, malato, fosfato, citrato, hidróxido, dietanolamina, monoetanolamina, glicina, metionina, goma guar, glutamato monosódico y sus combinaciones.

En algunas modalidades, la composición farmacéutica comprende un portador o relleno. Los ejemplos ilustrativos de portadores o rellenos incluyen lactosa, maltodextrina, manitol, sorbitol, quitosano, ácido esteárico, goma xantana, goma guar y sus combinaciones.

En algunas modalidades, la composición farmacéutica comprende un tensioactivo. Los ejemplos ilustrativos de tensioactivos incluyen d-alfa tocoferol, cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, cetrimida, cloruro de cetilpiridinio, docusato de sodio, behenato de glicerilo, monooleato de glicerilo, ácido láurico, hidroxiestearato de macrogol 15, alcohol miristílico, fosfolípidos, éteres de polioxietilenalquilo, ácido graso de polioxietilensorbitán ésteres, estearatos de polioxietileno, polioxiglicéridos, laurilsulfato de sodio, ésteres de sorbitán, succinato de polietilen(glicol) de vitamina E y sus combinaciones.

En algunas modalidades, la composición farmacéutica comprende un segundo agente contra el cáncer. Los ejemplos ilustrativos de agentes antiaglomerantes incluyen fosfato de calcio (tribásico), hidroximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, óxido de magnesio y sus combinaciones.

Otros excipientes que pueden usarse con las composiciones farmacéuticas incluyen, por ejemplo, albúmina, antioxidantes, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos, polímeros bioabsorbibles, agentes quelantes, agentes de liberación controlada, diluyentes, agentes dispersantes, potenciadores de la disolución, agentes emulsionantes, agentes gelificantes, bases de ungüentos, potenciadores de penetración, conservantes, agentes solubilizantes, solventes, agentes estabilizantes, azúcares y sus combinaciones. Se describen ejemplos específicos de cada uno de estos agentes, por ejemplo, en Handbook of Pharmaceutical Excipients, Rowe y otros. (Eds.) 6ta Ed. (2009), The Pharmaceutical Press.

En algunas modalidades, la composición farmacéutica comprende un solvente. En algunos aspectos, el solvente es una solución salina, como una solución salina isotónica estéril o una solución de dextrosa. En algunos aspectos, el solvente es agua para inyección.

En algunas modalidades, las composiciones farmacéuticas están en forma de partículas, como una micropartícula o una nanopartícula. Las micropartículas y las nanopartículas pueden formarse a partir de cualquier material adecuado, como un polímero o un lípido. En algunos aspectos, las micropartículas o nanopartículas son micelas, liposomas o polimerosomas.

En la presente descripción se proporcionan además formas de dosificación y composiciones farmacéuticas anhidras que comprenden una ABP, debido a que el agua puede facilitar la degradación de algunas ABP.

Las composiciones farmacéuticas anhidras y las formas de dosificación descritas en la presente descripción pueden prepararse mediante el uso de ingredientes anhidros o que contienen poca agua y condiciones de bajo contenido de agua o baja humedad. Las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación que comprenden lactosa y al menos un ingrediente activo que comprende una amina primaria o secundaria son preferentemente anhidras si se espera un contacto sustancial con contenido de agua y/o humedad durante la fabricación, el empaque y/o el almacenamiento.

Una composición farmacéutica anhidra puede preparase y almacenarse de manera que se mantenga su naturaleza anhidra. En consecuencia, las composiciones anhidras pueden empaquetarse mediante el uso de materiales conocidos para evitar la exposición al agua de manera que puedan incluirse en los kits de formularios adecuados.

Los ejemplos de empaques adecuados incluyen, pero no se limitan a, láminas herméticamente selladas, plásticos, recipientes de dosis unitarias (por ejemplo, viales), envases tipo burbujas y paquetes de tira.

5.1. Formas farmacéuticas parenterales

En ciertas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción se formulan como formas de dosificación parenteral. Las formas de dosificación parenteral pueden administrarse a pacientes por diversas vías que incluyen, pero no se limitan a, subcutánea, intravenosa (que incluye inyección en bolo e infusiones), intramuscular, e intraarterial. Debido a que su administración típicamente evita las defensas naturales de los pacientes contra los contaminantes, las formas de dosificación parenterales son típicamente estériles o capaces de esterilizarse antes de la administración a un paciente. Ejemplos de formas de dosificación parenteral incluyen, pero no se limitan a, soluciones listas para inyección, productos secos (por ejemplo, liofilizados) listos para ser disueltos o suspendidos en un vehículo farmacéuticamente aceptable para inyección, suspensiones listas para inyección y emulsiones.

Los vehículos adecuados que pueden usarse para proporcionar formas de dosificación parenterales se conocen bien por los expertos en la técnica. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a: Agua para inyección USP; vehículos acuosos, tales como, pero sin limitarse a, inyección de cloruro de sodio, inyección de Ringer, inyección de dextrosa, dextrosa e inyección de cloruro de sodio, e inyección de Ringer lactato; vehículos miscibles en agua tales como, pero sin limitarse a, alcohol etílico, polietilenglicol, y polipropilenglicol; y vehículos no acuosos tales como, pero sin limitarse a, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuete, aceite de sésamo, oleato de etilo, miristato de isopropilo, y benzoato de bencilo.

Los excipientes que aumentan la solubilidad de uno o más de las ABP descritas en la presente descripción también pueden incorporarse en las formas farmacéuticas parenterales de la invención.

En algunas modalidades, la forma de dosificación parenteral se liofiliza. Ejemplos de formulaciones liofilizadas se describen, por ejemplo, en las patentes de Estados Unidos núms. 667 958 y 6 171 586; y el documento WO 2006/044908.

6. Dosificación y formas de dosificación unitarias

En la terapéutica humana, el médico determinará la posología que considere más adecuada de acuerdo con un tratamiento preventivo o curativo y de acuerdo con la edad, el peso, el estado y demás factores propios del sujeto a tratar.

En ciertas modalidades, una composición proporcionada en la presente descripción es una composición farmacéutica o una forma de dosificación unitaria única. Las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación unitaria única proporcionadas en la presente descripción comprenden una cantidad profiláctica o terapéuticamente eficaz de una o más ABP profilácticas o terapéuticas.

La cantidad de ABP o composición que será eficaz en la prevención o tratamiento de un trastorno o uno o más síntomas del mismo variará con la naturaleza y gravedad de la enfermedad o afección, y la vía por la que se administra la ABP. La frecuencia y la dosificación también variarán de acuerdo con factores específicos para cada sujeto en dependencia de la terapia específica (por ejemplo, agentes terapéuticos o profilácticos) administrados, la gravedad del trastorno, enfermedad o afección, la vía de administración, así como la edad, el cuerpo, el peso, la respuesta y el historial médico anterior del sujeto. Las dosis efectivas pueden extrapolarse a partir de las curvas de dosis-respuesta derivadas de los sistemas de prueba del modelo animal o in vitro.

En ciertas modalidades, las dosis ilustrativas de una composición incluyen cantidades de miligramos o microgramos de compuesto de la ABP por kilogramo de peso del sujeto o muestra, (por ejemplo, aproximadamente 10 microgramo por kilogramo a aproximadamente 50 miligramos por kilogramo, aproximadamente 100 microgramos por kilogramo a aproximadamente 25 miligramos por kilogramo, o aproximadamente 100 microgramos por kilogramo a aproximadamente 10 microgramos por kilogramo. En cierta modalidad, la dosificación de la ABP proporcionada en la presente descripción, en base al peso de la ABP, administrada para prevenir, tratar, controlar o mejorar un trastorno, o uno o más síntomas del mismo en un sujeto, es de 0,1 mg/kg, 1 mg/ kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 10 mg/kg o 15 mg/kg o más del peso corporal de un sujeto. Puede ser necesario usar dosis de ABP fuera de los intervalos descritos en la presente descripción en algunos casos, como será evidente para los expertos en la técnica. Además, se observa que el médico clínico o tratante sabrá cómo y cuándo interrumpir, ajustar o terminar la terapia junto con la respuesta del sujeto.

Pueden aplicarse diferentes cantidades terapéuticamente eficaces para diferentes enfermedades y afecciones, como sabrán fácilmente los expertos en la técnica. De manera similar, las cantidades suficientes para prevenir, controlar, tratar o mejorar tales trastornos, pero insuficientes para causar, o suficientes para reducir, los efectos adversos asociados con las ABP proporcionadas en la presente descripción también se incluyen en las cantidades de dosificación y los programas de frecuencia de dosis proporcionados en la presente descripción. Además, cuando a un sujeto se le administran dosis múltiples de una composición proporcionada en la presente descripción, no es necesario que todas las dosis sean iguales. Por ejemplo, la dosis administrada al sujeto puede aumentarse para mejorar el efecto profiláctico o terapéutico de la composición o puede disminuirse para reducir uno o más efectos secundarios que experimenta un sujeto particular.

En ciertos ejemplos, el tratamiento o la prevención pueden iniciarse con una o más dosis de carga de una ABP o una composición proporcionada en la presente descripción, seguidas de una o más dosis de mantenimiento.

En ciertos ejemplos, puede administrarse una dosis de una ABP o una composición proporcionada en la presente descripción para lograr una concentración de estado estacionario del ABP en la sangre o el suero del sujeto. La concentración en estado estacionario puede determinarse mediante la medición de acuerdo con técnicas disponibles para los expertos o puede ser en base a las características físicas del sujeto, como la altura, el peso y la edad. En ciertos ejemplos, la administración de la misma composición puede repetirse y las administraciones pueden separarse por al menos 1 día, 2 días, 3 días, 5 días, 10 días, 15 días, 30 días, 45 días, 2 meses, 75 días, 3 meses o 6 meses.

Como se analiza con más detalle en otra parte de esta descripción, una ABP proporcionada en la presente descripción puede administrarse opcionalmente con uno o más agentes adicionales útiles para prevenir o tratar una enfermedad o trastorno. La cantidad eficaz de tales agentes adicionales puede depender de la cantidad de ABP presente en la formulación, el tipo de trastorno o tratamiento y los otros factores conocidos en la técnica o descritos en la presente descripción.

7. Aplicaciones terapéuticas

Para aplicaciones terapéuticas, las ABP de la descripción se administran a un mamífero, generalmente un ser humano, en una forma de dosificación farmacéuticamente aceptable, como las conocidas en la técnica y las discutidas anteriormente. Por ejemplo, las ABP de la descripción pueden administrarse a un ser humano por vía intravenosa como un bolo o por infusión continua durante un período de tiempo, por vía intramuscular, intraperitoneal, intracerebroespinal, subcutánea, intraarticular, intrasinovial, intratecal o intratumoral. Las ABP también se administran adecuadamente por vías peritumoral, intralesional o perilesional, para ejercer efectos terapéuticos locales, así como también efectos terapéuticos sistémicos. La ruta intraperitoneal puede ser particularmente útil, por ejemplo, en el tratamiento de tumores de ovario.

Las ABP proporcionadas en la presente descripción pueden ser útiles para el tratamiento de cualquier enfermedad o condición que involucre TIGIT. En algunos ejemplos, la enfermedad o afección es una enfermedad o afección que puede beneficiarse del tratamiento con un anti-ABP de TIGIT. En algunos ejemplos, la enfermedad o condición es un tumor. En algunos ejemplos, la enfermedad o condición es un trastorno de proliferación celular. En algunos ejemplos, la enfermedad o condición es un cáncer. En algunos ejemplos, la enfermedad o condición es una infección viral.

En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción se proporcionan para su uso como medicamento. En algunas modalidades, las ABP proporcionadas en la presente descripción se proporcionan para su uso en la fabricación o preparación de un medicamento. En algunas modalidades, el medicamento es para el tratamiento de una enfermedad o afección que puede beneficiarse de un anti-ABP de TIGIT. En algunas modalidades, la enfermedad o condición es un tumor. En algunas modalidades, la enfermedad o condición es trastorno proliferativo celular. En algunas modalidades, la enfermedad o condición es un cáncer. En algunas modalidades, la enfermedad o condición es una infección viral.

Cualquier cáncer adecuado puede tratarse con las ABP proporcionadas en la presente descripción. Los cánceres adecuados ilustrativos incluyen, por ejemplo, leucemia linfoblástica aguda (LLA), leucemia mieloide aguda (AML), carcinoma adrenocortical, cáncer anal, cáncer de apéndice, astrocitoma, carcinoma de células basales, tumor cerebral, cáncer de las vías biliares, cáncer de vejiga, cáncer de huesos, cáncer de mama, tumor bronquial, carcinoma de origen primario desconocido, tumor cardíaco, cáncer de cuello uterino, cordoma, cáncer de colon, cáncer colorrectal, craneofaringioma, carcinoma ductal, tumor embrionario, cáncer de endometrio, ependimoma, cáncer de esófago, estesioneuroblastoma, histiocitoma fibroso, sarcoma de Ewing, cáncer de ojo, tumor de células germinales, cáncer de vesícula biliar, cáncer gástrico, tumor carcinoide gastrointestinal, tumor del estroma gastrointestinal, enfermedad trofoblástica gestacional, glioma, cáncer de cabeza y cuello, cáncer hepatocelular, histiocitosis, linfoma de Hodgkin, cáncer de hipofaringe, melanoma intraocular, tumor de células de los islotes, Sarcoma de Kaposi, cáncer de riñón, histiocitosis de células de Langerhans, cáncer de laringe, cáncer de labio y cavidad oral, cáncer de hígado, carcinoma lobulillar in situ, cáncer de pulmón, macroglobulinemia, histiocitoma fibroso maligno, melanoma, carcinoma de células de Merkel, mesotelioma, cáncer de cuello escamoso metastásico con carcinoma de línea media primario oculto que afecta el genNUT, cáncer de boca, síndrome de neoplasia endocrina múltiple, mieloma múltiple, micosis fungoide, síndrome mielodisplásico, neoplasia mielodisplásica/mieloproliferativa, cáncer de cavidad nasal y seno paranasal, cáncer nasofaríngeo, neuroblastoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer orofaríngeo, osteosarcoma, ovario cáncer, cáncer de páncreas, papilomatosis, paraganglioma, cáncer de paratiroides, cáncer de pene, cáncer de faringe, feocromocitomas, tumor hipofisario, blastema pleuropulmonar, linterna primario del sistema nervioso central, cáncer de próstata, cáncer de recto, cáncer de células renales, cáncer de pelvis renal y de uréter, retinoblastoma, tumor rabdoide, cáncer de glándulas salivales, síndrome de Sezary, cáncer de piel, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de intestino delgado, sarcoma de tejidos blandos, tumor de la médula espinal, cáncer de estómago, linfoma de células T, tumor teratoide, cáncer testicular, cáncer de garganta, timoma y timo carcinoma, cáncer de tiroides, cáncer de uretra, cáncer de útero, cáncer de vagina, cáncer de vulva y tumor de Wilms.

Cualquier virus adecuado puede tratarse con las ABP proporcionadas en la presente descripción. Los virus adecuados ilustrativos incluyen, por ejemplo, virus adenoasociados, virus Aichi, lyssavirus del murciélago australiano, poliomavirus BK, virus Banna, virus del bosque Barmah, virus Bunyamwera, virus Bunyavirus La Crosse, liebre con raquetas de nieve Bunyavirus, herpesvirus Cercopithecine, virus Chandipura, virus Chikungunya, Cosavirus A, virus de la viruela bovina, Coxsackievirus, virus de la fiebre hemorrágica de Crimea-Congo, virus del dengue, virus Dhori, virus Dugbe, virus Duvenhage, virus de la encefalitis equina del este, ébolavirus, echovirus, virus de la encefalomiocarditis, virus de Epstein-Barr, lyssavirus del murciélago europeo, virus GB C/virus de la hepatitis G, virus Hantaan, virus Hendra, virus de la hepatitis A, virus de la hepatitis B, virus de la hepatitis C, virus de la hepatitis E, virus de la hepatitis delta, virus de la viruela equina, adenovirus humano, astrovirus humano, coronavirus humano, citomegalovirus humano, enterovirus humano, virus del herpes humano 1, virus del herpes humano 2, virus del herpes humano 6, virus del herpes humano 7, virus del herpes humano 8, virus de la inmunodeficiencia humana, virus del papiloma humano 1, virus del papiloma humano 2, virus del papiloma humano, parainfluenza humana, parvovirus humano B19, virus sincitial respiratorio humano, rinovirus humano, coronavirus del SARS humano, spumaretrovirus humano, virus linfotrópico T humano, torovirus humano, virus de la influenza A, virus de la influenza B, virus de la influenza C, Virus Isfahan, poliomavirus JC, virus de la encefalitis japonesa, arenavirus Junin, poliomavirus KI, virus Kunjin, virus del murciélago de Lagos, marburgvirus del lago Victoria, virus Langat, virus Lassa, virus Lordsdale, virus Louping ill, virus de la coriomeningitis linfocítica, virus Machupo, virus Mayaro, MERS coronavirus, virus del sarampión, virus de la encefalomiocarditis de Mengo, poliomavirus de células de Merkel, virus de Mokola, virus del molusco contagioso, virus de la viruela del mono, virus de las paperas, virus de la encefalitis del valle de Murray, virus de Nueva York, virus de Nipah, virus de Norwalk, virus de O'nyong-nyong, virus de Orf virus Oropouche, virus Pichinde, poliovirus, flebovirus Punta toro, virus Puumala, virus de la rabia, virus de la fiebre del Valle del Rift, rosavirus A, virus del río Ross, rotavirus A, rotavirus B, rotavirus C, virus de la rubéola, virus de Sagiyama, salivirus A, virus de la fiebre del flebótomo, virus de Sicilia, virus de Sapporo, virus del bosque de Semliki, virus de Seúl, virus de la espuma de los simios, virus de los simios 5, virus de Sindbis, virus de Southampton, virus de la encefalitis de Louis, virus powassan transmitido por garrapatas, virus torque teno, virus Toscana, virus Uukuniemi, virus vaccinia, virus de la varicela zoster, virus variola, virus de la encefalitis equina venezolana, virus de la estomatitis vesicular, virus de la encefalitis equina occidental, poliomavirus WU, virus del Nilo Occidental, virus del tumor del mono Yaba, virus de la enfermedad similar a Yaba, virus de la fiebre amarilla y virus del Zika.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona un método para antagonizar TIGIT en una célula diana de un sujeto que lo necesita mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto. En algunos ejemplos, el antagonismo de TIGIT por una ABP proporcionada en la presente descripción da como resultado una mayor secreción de IL-2, LT-a, IL-6, TNF, GM-CSF, IFN^yo sus combinaciones por parte de una célula diana.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona un método para aumentar la proliferación, supervivencia y/o función de una célula T efectora en un sujeto que lo necesita mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto. En algunos ejemplos, la célula T efectora es una célula T efectora CD4+. En algunos ejemplos, la célula T efectora es una célula T efectora CD8+.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona un método para anular la supresión de un linfocito T efector por un linfocito T regulador en un sujeto que lo necesita mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto. En algunos ejemplos, la célula T reguladora es una célula T reguladora CD4+CD25+Foxp3+. En algunos ejemplos, la célula T reguladora es una célula T reguladora CD8+CD25+.

En algunos ejemplos, se proporciona en la presente descripción un método para aumentar la actividad de una célula asesina natural (NK) o T asesina natural (NKT) en un sujeto que lo necesita mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona un método para potenciar una respuesta inmunitaria en un sujeto que lo necesite mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona un método que retrasa la aparición de un tumor en un sujeto que lo necesita mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona un método para prevenir la aparición de un tumor en un sujeto que lo necesite mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona un método para retrasar la aparición de un cáncer en un sujeto que lo necesite mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona un método para prevenir la aparición de un cáncer en un sujeto que lo necesite mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona un método para reducir el tamaño de un tumor en un sujeto que lo necesite mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona un método para reducir el número de metástasis en un sujeto que lo necesita mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona un método para retrasar la aparición de una infección viral en un sujeto que lo necesite mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona un método para prevenir la aparición de una infección viral en un sujeto que lo necesite mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona un método para reducir el título viral de un sujeto que lo necesita mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona un método para eliminar un virus de un sujeto que lo necesita mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona un método para extender el período de supervivencia global, el tiempo medio de supervivencia o la supervivencia libre de progresión en un sujeto que lo necesita mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto.

En algunos ejemplos, en la presente descripción se proporciona un método para tratar a un sujeto que se ha vuelto resistente a un estándar de tratamiento terapéutico mediante la administración de una cantidad eficaz de una ABP proporcionada en la presente descripción al sujeto. En algunos ejemplos, el tratamiento estándar al que el sujeto se ha vuelto resistente es un inhibidor de PD-1. En otros ejemplos, el tratamiento estándar al que el sujeto se ha vuelto resistente es un inhibidor de PD-L1. En otros ejemplos, el tratamiento estándar al que el sujeto se ha vuelto resistente es un inhibidor de CTLA-4.

8. Terapias de combinación

En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción es para uso con al menos un agente terapéutico adicional. Cualquier agente terapéutico adicional adecuado puede administrarse con una ABP proporcionada en la presente descripción. En algunos aspectos, el agente terapéutico adicional se selecciona de radiación, un agente citotóxico, un agente quimioterapéutico, un agente citostático, un agente antihormonal, un inhibidor de EGFR, un agente inmunoestimulador, un agente antiangiogénico y sus combinaciones.

En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional comprende un agente inmunoestimulador.

En algunas modalidades, el agente inmunoestimulador es un agente que bloquea la señalización de un receptor inhibidor de una célula inmunitaria, o un ligando del mismo. En algunos aspectos, el receptor inhibidor o ligando se selecciona de CTLA-4, PD-1, PD-L1, LAG-3, Tim3, TIGIT, neuritina, BT^lA, KIR y sus combinaciones. En algunos aspectos, el agente se selecciona de un anticuerpo anti-PD-1 (por ejemplo, pembrolizumab o nivolumab) y un anticuerpo anti-PD-L1 (por ejemplo, atezolizumab), un anticuerpo anti-CTLA-4 (por ejemplo, ipilimumab), y sus combinaciones. En algunos aspectos, el agente es pembrolizumab. En algunos aspectos, el agente es nivolumab. En algunos aspectos, el agente es atezolizumab.

En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es un agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1. En algunos aspectos, el agente terapéutico adicional que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se selecciona de un anticuerpo, un peptidomimético y una molécula pequeña. En algunos aspectos, el agente terapéutico adicional que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se selecciona de pembrolizumab, nivolumab, atezolizumab, avelumab, durvalumab, BMS-936559, sulfamonometoxina 1 y sulfametizol 2. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 es cualquier agente terapéutico conocido en la técnica que tenga tal actividad, por ejemplo, como se describió en Weinmann y otros, Chem Med Chem, 2016, 14:1576 (DOI: 10.1002/cmdc.201500566). En algunas modalidades, el agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se formula en la misma composición farmacéutica que una ABP proporcionada en la presente descripción. En algunas modalidades, el agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se formula en una composición farmacéutica diferente de una ABP proporcionada en la presente descripción. En algunas modalidades, el agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se administra antes de la administración de una ABP proporcionada en la presente descripción. En algunas modalidades, el agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se administra después de la administración de una ABP proporcionada en la presente descripción. En algunas modalidades, el agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se administra al mismo tiempo que una ABP proporcionada en la presente descripción, pero el agente y la ABP se administran en composiciones farmacéuticas separadas.

En algunas modalidades, el agente inmunoestimulador es un agonista de un receptor coestimulador de una célula inmunitaria. En algunos aspectos, el receptor coestimulador se selecciona de OX40, ICOS, CD27, CD28, 4-1BB o CD40. En algunas modalidades, el agonista es un anticuerpo.

En algunas modalidades, el agente inmunoestimulador es una citocina. En algunos aspectos, la citocina se selecciona de IL-2, IL-5, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21 y sus combinaciones.

En algunas modalidades, el agente inmunoestimulador es un virus oncolítico. En algunos aspectos, el virus oncolítico se selecciona de un virus del herpes simple, un virus de la estomatitis vesicular, un adenovirus, un virus de la enfermedad de Newcastle, un virus vaccinia y un virus maraba.

En algunas modalidades, el agente inmunoestimulador es una célula T con un receptor de antígeno quimérico (célula CAR-T). En algunas modalidades, el agente inmunoestimulador es un anticuerpo dirigido contra células T biespecífico o multiespecífico. En algunas modalidades, el agente inmunoestimulador es un anticuerpo anti-TGF-p. En algunas modalidades, el agente inmunoestimulador es una trampa de TGF-p.

En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es una vacuna contra un antígeno tumoral. Cualquier antígeno adecuado puede ser la diana de la vacuna, siempre que esté presente en un tumor tratado mediante los métodos proporcionados en la presente descripción. En algunos aspectos, el antígeno tumoral es un antígeno tumoral que se sobreexpresa en comparación con sus niveles de expresión en tejido normal. En algunos aspectos, el antígeno tumoral se selecciona de antígeno testicular de cáncer, antígeno de diferenciación, NY-ESO-1, MAGE-A1, MART y sus combinaciones.

Otros ejemplos de agentes terapéuticos adicionales incluyen un taxano (por ejemplo, paclitaxel o docetaxel); un agente de platino (por ejemplo, carboplatino, oxaliplatino y/o cisplatino); un inhibidor de la topoisomerasa (por ejemplo, irinotecán, topotecán, etopósido y/o mitoxantrona); ácido folínico (por ejemplo, leucovorina); o un inhibidor metabólico de nucleósidos (por ejemplo, fluorouracilo, capecitabina y/o gemcitabina). En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es ácido folínico, 5-fluorouracilo y/u oxaliplatino. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es 5-fluorouracilo e irinotecán. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es un agente de taxano y de platino. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es paclitaxel y carboplatino. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es pemetrexato. En algunas modalidades, el agente terapéutico adicional es un agente terapéutico dirigido tal como un agente dirigido contra EGFR, RAF o MEK.

El agente terapéutico adicional puede administrarse por cualquier medio adecuado. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción y el agente terapéutico adicional se incluyen en la misma composición farmacéutica. En algunas modalidades, una ABP proporcionada en la presente descripción y el agente terapéutico adicional se incluyen en diferentes composiciones farmacéuticas.

En modalidades en las que una ABP proporcionada en la presente descripción y el agente terapéutico adicional se incluyen en diferentes composiciones farmacéuticas, la administración de la ABP puede ocurrir antes, simultáneamente y/o después de la administración del agente terapéutico adicional. En algunos ejemplos, la administración de una ABP proporcionada en la presente descripción y el agente terapéutico adicional se producen con una diferencia de aproximadamente un mes. En algunos ejemplos, la administración de una ABP proporcionada en la presente descripción y el agente terapéutico adicional se producen con una diferencia de aproximadamente una semana. En algunos ejemplos, la administración de una ABP proporcionada en la presente descripción y el agente terapéutico adicional se producen con aproximadamente un día de diferencia. En algunos ejemplos, la administración de una ABP proporcionada en la presente descripción y el agente terapéutico adicional se producen con una diferencia de aproximadamente doce horas. En algunos ejemplos, la administración de una ABP proporcionada en la presente descripción y el agente terapéutico adicional se producen con una diferencia de aproximadamente una hora.

9. Métodos de diagnóstico

También se proporcionan métodos para detectar la presencia de TIGIT en células de un sujeto. Tales métodos pueden usarse, por ejemplo, para predecir y evaluar la respuesta al tratamiento con una ABP proporcionada en la presente descripción.

En algunos ejemplos, se obtiene una muestra de sangre de un sujeto y se determina la fracción de células que expresan TIGIT. En algunos ejemplos, se determina la cantidad relativa de TIGIT expresada por tales células. La fracción de células que expresan TIGIT y la cantidad relativa de TIGIT expresada por tales células pueden determinarse mediante cualquier método adecuado. En algunos ejemplos, se usa la citometría de flujo para realizar tales mediciones. En algunos ejemplos, se usa la clasificación de células asistida por fluorescencia (FACS) para realizar tal medición. Véase Li y otros, J. Autoimmunity, 2003, 21:83-92 para métodos de evaluación de la expresión de TIGIT en sangre periférica.

10. Kits

También se proporcionan kits que comprenden las ABP proporcionadas en la presente descripción. Los kits pueden usarse para el tratamiento, prevención y/o diagnóstico de una enfermedad o trastorno, como se describió en la presente descripción.

En algunas modalidades, el kit comprende un recipiente y una etiqueta o prospecto en o asociado con el recipiente. Los recipientes adecuados incluyen, por ejemplo, botellas, viales, jeringas y bolsas de solución IV. Los recipientes pueden formarse a partir de una variedad de materiales, tales como el vidrio o el plástico. El recipiente contiene una composición que es por sí misma, o cuando se combina con otra composición, eficaz para tratar, prevenir y/o diagnosticar una enfermedad o trastorno. El recipiente puede tener un puerto de acceso estéril. Por ejemplo, si el recipiente es una bolsa de solución intravenosa o un vial, puede tener un puerto que se pueda perforar con una aguja. Al menos un agente activo en la composición es una ABP proporcionada en la presente descripción. La etiqueta o prospecto indica que la composición se usa para tratar la afección de elección.

En algunas modalidades, el kit comprende (a) un primer recipiente con una primera composición contenida en el mismo, en donde la primera composición comprende una ABP proporcionada en la presente descripción; y (b) un segundo recipiente con una segunda composición contenida en él, en donde la segunda composición comprende un agente terapéutico adicional. El kit en esta modalidad de la invención puede comprender además un prospecto que indica que las composiciones pueden usarse para tratar una condición particular.

Alternativa o adicionalmente, el kit puede comprender además un segundo (o tercer) recipiente que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable. En algunos aspectos, el excipiente es un tampón. El kit puede incluir además otros materiales deseables desde un punto de vista comercial y del usuario, que incluyen otros filtros, agujas, y jeringas.

11. Otros ejemplos ilustrativos

Los ejemplos proporcionados más abajo no son limitativos y se proporcionan a modo de ilustración de ciertos ejemplos de la descripción, además de los descritos a lo largo de esta descripción.

Ejemplo 1: Una proteína de unión a antígeno que se une específicamente a un TIGIT humano (hTIGIT) y es capaz de al menos uno de los siguientes: a) inhibir la unión de hTIGIT a CD155 y CD112; b) aumentar la función de las células T efectoras; c) aumentar la función de las células asesinas naturales (NK); d) disminuir el número de células T reguladoras en tejidos o en circulación; e) suprimir una actividad de células T reguladoras o de células T reguladoras; f) inhibir la asociación de TIGIT y CD226; y no se une específicamente a Nectin-4 (también conocido como receptor similar al poliovirus 4, PVRL4).

Ejemplo 2: La proteína de unión a antígeno del Ejemplo 1, en donde la proteína de unión a antígeno tiene una o más de las siguientes características: a) es un anticuerpo monoclonal; b) es un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo quimérico; c) es un anticuerpo biespecífico, un anticuerpo multiespecífico, un diacuerpo o un anticuerpo multivalente; d) es del tipo IgG1, IgG2, IgG3, del tipo IgG4 o del isotipo IgG4 con una sustitución S228P; e) es un fragmento de anticuerpo de unión a antígeno; f) es un fragmento Fab, un fragmento Fab', un fragmento F(ab')2 o un fragmento Fv; g) es un anticuerpo de cadena única, un anticuerpo de dominio único o un nanocuerpo.

Ejemplo 3: Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un anticuerpo que se une a hTIGIT y: (a) aumenta la inmunidad mediada por células; (b) aumenta la actividad de las células T; (c) aumenta la actividad de las células T citolíticas (CTL); (d) aumenta la actividad de las células asesinas naturales (NK); (e) es un antagonista de la señalización mediada por TIGIT; (f) inhibe la señalización TIGIT; (g) inhibe o bloquea la interacción entre PVR y TIGIT; (h) inhibe o bloquea la interacción de TIGIT y el ligando CD155 y/o CD112; pero no inhibe la interacción entre Pv R y CD226.

Ejemplo 4: Una composición farmacéutica que comprende la proteína de unión a antígeno del Ejemplo 1 o el Ejemplo 2.

Ejemplo 5: La composición farmacéutica del Ejemplo 4, que comprende además una cantidad eficaz de un anticuerpo anti-PD-1.

Ejemplo 6: La proteína de unión a antígeno del Ejemplo 1, en donde la proteína de unión a antígeno tiene una o más de las siguientes características: a) se une a un polipéptido TIGIT humano o una variante del mismo, o como se proporciona de cualquier otra manera en la presente descripción con una KD de menos de aproximadamente 20 nM; o b) se une a un polipéptido TIGIT de mono cynomolgus (también "cynomolgus" o "cino") o una variante del mismo, o como se proporciona de cualquier otra manera en la presente descripción, con un KD de menos de aproximadamente 200 nM; c) se une a un polipéptido TIGIT murino o una variante del mismo, o como se proporciona de cualquier otra manera en la presente descripción, con una KD de menos de aproximadamente 200 nM; o d) una combinación de al menos 2 de a), b) y c).

Ejemplo 7: Una proteína de unión a antígeno que compite o es capaz de competir por la unión a TIGIT humana con una proteína de unión a antígeno de referencia, en donde la proteína de unión a antígeno de referencia es la proteína de unión a antígeno del Ejemplo 1.

Ejemplo 8: La proteína de unión a antígeno del Ejemplo 7, en donde la proteína de unión a antígeno y el anticuerpo de referencia compiten de forma cruzada o son capaces de competir de forma cruzada para unirse a una TIGIT humana.

Ejemplo 9: La proteína de unión a antígeno del Ejemplo 1, que comprende una región constante de cadena pesada que comprende una región o fragmento constante de cadena pesada humana o una variante de la misma, en donde la variante de región constante comprende hasta 20 sustituciones de aminoácidos modificadas conservativamente. Ejemplo 10: La proteína de unión a antígeno del Ejemplo 1, que compite o es capaz de competir por la unión a TIGIT humana con una proteína CD155 y/o una proteína CD112.

Ejemplo 11: La proteína de unión a antígeno del Ejemplo 1, que es capaz de antagonizar la señalización de TIGIT de una manera específica de células T.

Ejemplo 12: Una molécula de anticuerpo aislada capaz de unirse a TIGIT humana (hTIGIT), que comprende una región variable de cadena pesada (VH) que comprende una secuencia de aminoácidos de VHCDR1 de SEQ ID NO: 48-62, una secuencia de aminoácidos de VHCDR2 de SEQ ID NO:36-47 y una secuencia de aminoácidos de VHCDR3 de SEQ ID NO:29-35; y una región variable de cadena ligera (VL) que comprende una secuencia de aminoácidos de VLCDR1 de SEQ ID NO:70-72, una secuencia de aminoácidos de VLCDR2 de SEQ ID NO:67-69 y una secuencia de aminoácidos de VLCDR3 de SEQ ID NO:63-66.

Ejemplo 13: Un ácido nucleico aislado que codifica una proteína de unión a antígeno de acuerdo con el Ejemplo 1. Ejemplo 14: Un vector de expresión que comprende el ácido nucleico de acuerdo con el Ejemplo 13.

Ejemplo 15: Una célula huésped procariótica o eucariótica que comprende un vector del Ejemplo 14.

Ejemplo 16: Un método para la producción de una proteína recombinante que comprende las etapas de expresar un ácido nucleico de acuerdo con el Ejemplo 13 en una célula huésped procariota o eucariota y recuperar tal proteína de tal célula o del sobrenadante del cultivo celular.

Ejemplo 17: Un método para el tratamiento de un sujeto que padece cáncer o una enfermedad inflamatoria, que comprende la etapa de administrar al sujeto una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de la proteína de unión a antígeno del Ejemplo 1.

Ejemplo 18: El método del Ejemplo 17, en donde el cáncer es un cáncer sólido.

Ejemplo 19: El método del Ejemplo 17, en donde el cáncer es un cáncer hematológico.

Ejemplo 20: Un método para modular la función del sistema inmunitario en un sujeto humano que lo necesite, que comprende la etapa de poner en contacto una población de células T del sujeto humano con una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de la proteína de unión a antígeno del Ejemplo 1, en condiciones de manera que el sistema inmune es modulado.

Ejemplo 21: Un método para inducir o potenciar una respuesta inmunitaria en un sujeto, que comprende la etapa de administrar al sujeto una composición farmacéutica que comprende una proteína de unión a antígeno o un anticuerpo biespecífico o una proteína de unión a antígeno complejante, de cualquiera de los ejemplos anteriores, en donde la respuesta inmunitaria se genera contra un antígeno tumoral.

Ejemplo 22: El método del Ejemplo 21, en donde la proteína de unión a antígeno, el anticuerpo biespecífico o la proteína de unión a antígeno complejante se administran en una cantidad suficiente para lograr uno o más de los siguientes en el sujeto: a) reducir la supresión de la actividad de las células T reguladoras del efector T células; b) disminuir los niveles de células T reguladoras; c) activar células T efectoras; d) inducir o potenciar la proliferación de células T efectoras; e) inhibir el crecimiento tumoral; y f) inducir la regresión del tumor.

Ejemplo 23: El método del Ejemplo 22, en donde el método comprende además uno o más de los siguientes a) administrar quimioterapia; b) administrar radioterapia; o c) administrar uno o más agentes terapéuticos adicionales. Ejemplo 24: El método del Ejemplo 23, en donde el agente terapéutico adicional comprende un agente inmunoestimulador.

Ejemplo 25: El método del Ejemplo 24, en donde el agente inmunoestimulador comprende un antagonista de un receptor inhibidor de una célula inmunitaria.

Ejemplo 26: El método del Ejemplo 25, en donde el receptor inhibidor es CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, Tim3, neuritina, BTLA, CECAM-1, CECAM-5, VISTA, LAIR1, CD160, 2B4, TGF-R o un KIR.

Ejemplo 27: El método del Ejemplo 24, en donde el agente inmunoestimulador comprende un agonista del receptor coestimulador de una célula inmunitaria.

Ejemplo 28: El método del Ejemplo 27, en donde el receptor coestimulador es el ligando OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD28, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3 o CD83.

Ejemplo 29: El método del Ejemplo 24, en donde el agente inmunoestimulador comprende una citocina. Ejemplo 30: El método del Ejemplo 29, en donde la citocina es IL-2, IL-5, IL-7, IL-12, IL-15 o IL-21.

Ejemplo 31: El método del Ejemplo 24, en donde el agente inmunoestimulador comprende un virus oncolítico. Ejemplo 32: El método del Ejemplo 31, en donde el virus oncolítico es un virus Herpes simplex, un virus de estomatitis vesicular, un adenovirus, un virus de la enfermedad de Newcastle, un virus vaccinia o un virus maraba. Ejemplo 33: El método del Ejemplo 24, en donde el agente inmunoestimulador comprende una célula T modificada con antígeno quimérico.

Ejemplo 34: El método del Ejemplo 24, en donde el agente inmunoestimulador comprende un anticuerpo dirigido contra células T biespecífico o multiespecífico.

Ejemplo 35: El método del Ejemplo 23, en donde el agente terapéutico adicional comprende un anticuerpo anti-TGF-beta o una trampa para el receptor de TGFp.

Ejemplo 36: El método de cualquiera de los Ejemplos 20-35, en donde la administración de la composición farmacéutica da como resultado la inducción o potenciación de la proliferación de una célula T efectora, o la modulación de I-kB y/o NF-kB en la célula T, o la modulación de la actividad TIGIT en la célula T, o la señalización inducida por el receptor de la célula T en una célula T efectora, o sus combinaciones.

Ejemplo 37: Un método de cribado de compuestos de prueba que comprende una proteína de unión a antígeno del Ejemplo 1 que es capaz de inhibir la interacción de un ligando TIGIT con TIGIT, que comprende las etapas de: poner en contacto una muestra que contiene un ligando TIGIT y TIGIT con el compuesto; y determinar si la interacción de un ligando de TIGIT con TIGIT en la muestra disminuye con relación a la interacción de un ligando de TIGIT con TIGIT en una muestra que no ha entrado en contacto con el compuesto, de manera que una disminución en la interacción de un ligando de TIGIT con TIGIT en la muestra en contacto con el compuesto identifica el compuesto como uno que inhibe la interacción de un ligando TIGIT con TIGIT.

Ejemplo 38: La proteína de unión a antígeno del Ejemplo 1, que es capaz de inhibir la fosforilación del dominio ITIM del polipéptido TIGIT.

Ejemplo 1A: Una proteína de unión a antígeno (ABP) aislada que se une específicamente a TIGIT, en donde el anticuerpo: (a) compite por unirse a TIGIT con un anticuerpo seleccionado de MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17, MAB18, MAB19, MAB20 o MAB21, cada uno como se proporciona en la Tabla 5 de esta descripción; (b) inhibe la unión de CD155 a TIGIT; (c) inhibe la unión de CD112 a TIGIT; (d) inhibe la asociación de CD226 con TIGIT; (e) activa una célula T efectora o una célula NK; (f) disminuye el número de células T reguladoras en un tejido o en circulación; (g) inhibe la supresión de una célula T efectora por una célula T reguladora; (h) no se une específicamente a ninguno de PVRL1, PVRL2, PVRL3 o PVRL4; o (i) es capaz de cualquier combinación de (a) -(h).

Ejemplo 2A: La ABP del Ejemplo 1A, en donde la ABP comprende una CDR-H3 de una región VH seleccionada de las SEQ ID NO: 4-24, o una CDR-H3 que tiene al menos aproximadamente un 80 % de identidad con una CDR-H3 de una región VH seleccionada de las SEQ ID NO: 4-24.

Ejemplo 3A: La ABP del Ejemplo 2A, en donde la CDR-H3 se identifica de acuerdo con los esquemas de numeración de Kabat, Chothia o IMGT.

Ejemplo 4A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 2A-3A, en donde la CDR-H3 se selecciona de las SEQ ID NO: 29-35.

Ejemplo 5A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-4A, en donde la ABP comprende una CDR-H2 de una región VH seleccionada de las SEQ ID NO: 4-24, o una CDR-H2 que tiene al menos aproximadamente un 80 % de identidad con una CDR-H2 de una región VH seleccionada de las SEQ ID NO: 4-24

Ejemplo 6A: La ABP del Ejemplo 5A, en donde la CDR-H2 se identifica de acuerdo con los esquemas de numeración de Kabat, Chothia o IMGT.

Ejemplo 7A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 5A-6A, en donde la CDR-H2 se selecciona de las SEQ ID NO: 36-47.

Ejemplo 8A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-7A, en donde la ABP comprende una CDR-H1 de una región VH seleccionada de las SEQ ID NO: 4-24, o una CDR-H1 que tiene al menos aproximadamente un 80 % de identidad con una CDR-H1 de una región VH seleccionada de las SEQ ID NO: 4-24

Ejemplo 9A: La ABP del Ejemplo 8A, en donde la CDR-H1 se identifica de acuerdo con los esquemas de numeración Kabat, Chothia, Kabat más Chothia o IMGT.

Ejemplo 10A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 8A-9A, en donde la CDR-H1 se selecciona de las SEQ ID NO: 48-54 y 58-62.

Ejemplo 11A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-10A, en donde la ABP comprende una CDR-L3 de una región VL seleccionada de las SEQ ID NO: 25-28, o una CDR-L3 que tenga al menos un 80 % de identidad con una CDR-L3 de una región VL seleccionada de las SEQ ID NO: 25-28.

Ejemplo 12A: La ABP del Ejemplo 11A, en donde la CDR-L3 se identifica de acuerdo con los esquemas de numeración de Kabat, Chothia o IMGT.

Ejemplo 13A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 11A-12A, en donde la CDR-L3 se selecciona de las SEQ ID NO: 63-66.

Ejemplo 14A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-13A, en donde la ABP comprende una CDR-L2 de una región VL seleccionada de las SEQ ID NO: 25-28, o una CDR-L2 que tiene al menos un 80 % de identidad con una CDR-L2 de una región VL seleccionada de las SEQ ID NO: 25-28.

Ejemplo 15A: La ABP del ejemplo 14A, en donde la CDR-L2 se identifica de acuerdo con los esquemas de numeración de Kabat, Chothia o IMGT.

Ejemplo 16A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 14A-15A, en donde la CDR-L2 se selecciona de las SEQ ID NO: 67-69.

Ejemplo 17A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-16A, en donde la ABP comprende una CDR-L1 de una región VL seleccionada de las SEQ ID NO: 25-28, o una CDR-L1 que tiene al menos aproximadamente un 80 % de identidad con una CDR-L1 de una región VL seleccionada de las ^sE^qID NO: 25-28.

Ejemplo 18A: La ABP del ejemplo 17A, en donde la CDR-L1 se identifica de acuerdo con los esquemas de numeración de Kabat, Chothia o IMGT.

Ejemplo 19A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 17A-18A, en donde la CDR-L1 se selecciona de las SEQ ID NO: 70-72.

Ejemplo 20A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-19A, en donde el ABP comprende un región VH seleccionada de las SEQ ID NO: 4-24.

Ejemplo 21A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-20A, en donde el ABP comprende un región VL seleccionada de las SEQ ID NO: 25-28.

Ejemplo 22A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-21A, en donde la TIGIT se selecciona de la hTIGIT (SEQ ID NO:1), la cTIGIT (SEQ ID NO:2) y la mTIGIT (SEQ ID NO:3 o 138).

Ejemplo 23A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-22A, en donde el ABP comprende un anticuerpo.

Ejemplo 24A: La ABP del Ejemplo 23A, en donde el anticuerpo comprende una VH y VL emparejado como se proporciona para un anticuerpo seleccionado de MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17, MAB18, MAB19, MAB20 o MAB21, cada uno como se proporciona en la Tabla 5 de esta descripción.

Ejemplo 25A: La ABP del Ejemplo 24A, en donde la ABP es un anticuerpo seleccionado de MAB1, MAB2, MAB3, MAB4, MAB5, MAB6, MAB7, MAB8, MAB9, MAB10, MAB11, MAB12, MAB13, MAB14, MAB15, MAB16, MAB17, MAB18, MAB19, MAB20 o MAB21, cada uno como se proporciona en la Tabla 5 de esta descripción.

Ejemplo 26A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 23A-25A, en donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. Ejemplo 27A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 23A-26A, en donde el anticuerpo es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano.

Ejemplo 28A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-27A, en donde la ABP es multiespecífica.

Ejemplo 29A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-28A, en donde la ABP comprende un fragmento de anticuerpo.

Ejemplo 30A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-29A, en donde la ABP comprende una estructura alternativa.

Ejemplo 31A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-30A, en donde la ABP comprende una región constante de inmunoglobulina.

Ejemplo 32A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-31A, en donde la ABP comprende un anticuerpo seleccionado de una IgA, una IgD, una IgE, una IgG o una IgM.

Ejemplo 33A: La ABP del Ejemplo 32A, en donde la ABP comprende una IgG seleccionada de una IgG4, una IgG1, una IgG2 o una IgG3.

Ejemplo 34A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-33A, en donde la ABP se une a hTIGIT (SEQ ID NO:1) con una afinidad de menos de aproximadamente 20 nM.

Ejemplo 35A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-34A, en donde la ABP se une a cTIGIT (SEQ ID NO:2) con una afinidad de menos de aproximadamente 200 nM.

Ejemplo 36A: La ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-35A, en donde la ABP se une a mTIGIT (SEQ ID NO:3 o 138) con una afinidad de menos de aproximadamente 200 nM.

Ejemplo 37A: Un polinucleótido aislado que codifica una ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-36A, una VH o VL del mismo, o una porción de unión a antígeno del mismo.

Ejemplo 38A: Un vector que comprende el polinucleótido del Ejemplo 37A.

Ejemplo 39A: Una célula huésped que comprende el vector del Ejemplo 38A.

Ejemplo 40A: Un método para producir una ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-36A, que comprende expresar la ABP en la célula huésped del Ejemplo 39A y aislar la ABP expresada.

Ejemplo 41A: Una composición farmacéutica que comprende una ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-36A.

Ejemplo 42A: La composición farmacéutica del Ejemplo 41A, en donde la cantidad de ABP en la composición farmacéutica es suficiente para (a) aumentar la actividad de las células T efectoras; (b) aumentar la actividad de las células T citolíticas; (c) aumentar la actividad de las células NK; (d) inhibir la señalización mediada por TIGIT; (e) inhibir o bloquear la unión de CD155 y/o CD112 a TIGIT; o (f) cualquier combinación de (a) - (e), en un sujeto.

Ejemplo 43A: La composición farmacéutica de cualquiera de los Ejemplos 41A-42A, que comprende además un anticuerpo que antagoniza PD-1.

Ejemplo 44A: Un método para tratar o prevenir una enfermedad o condición en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva de una ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-36A o una composición farmacéutica de cualquiera de los Ejemplos 41A-43A.

Ejemplo 45A: El método del Ejemplo 44A, en donde la enfermedad o afección es un cáncer o una infección viral. Ejemplo 46A: Un método para modular una respuesta inmunitaria en un sujeto, el método comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de una ABP o cualquiera de los Ejemplos 1A-36A o una composición farmacéutica de cualquiera de los Ejemplos 41A-43A.

Ejemplo 47A: El método de cualquiera de los Ejemplos 44A-46A, que comprende además administrar uno o más agentes terapéuticos adicionales al sujeto.

Ejemplo 48A: El método del Ejemplo 47A, en donde el agente terapéutico adicional se selecciona de un anticuerpo antagonista de PD-1, una quimioterapia, un agente inmunoestimulador y radiación.

Ejemplo 49A: El método de los Ejemplos 47A, en donde el agente terapéutico adicional es un agente inmunoestimulador que bloquea la señalización de un receptor inhibidor de una célula inmunitaria o un ligando del mismo.

Ejemplo 50A: El método del Ejemplo 49A, en donde el receptor inhibidor o ligando del mismo se selecciona de CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, Tim3, neuritina, BTLA, CECAM-1, CECAM-5, VISTA, LAIR1, CD160, 2B4, TGF-R, KIR y sus combinaciones.

Ejemplo 51A: El método del Ejemplo 48A, en donde el agente terapéutico adicional es un agente inmunoestimulador que es un agonista de un receptor estimulador de una célula inmunitaria.

Ejemplo 52A: El método del Ejemplo 51A, en donde el receptor estimulante de una célula inmunitaria se selecciona de OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD28, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, ligando CD83 y sus combinaciones. Ejemplo 53A: El método del Ejemplo 48A, en donde el agente terapéutico adicional es un agente inmunoestimulador que es una citocina.

Ejemplo 54A: El método del Ejemplo 53A, en donde la citocina se selecciona de IL-2, IL-5, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21 y sus combinaciones.

Ejemplo 55A: El método del Ejemplo 48A, en donde el agente terapéutico adicional es un agente inmunoestimulador que es un virus oncolítico.

Ejemplo 56A: El método del Ejemplo 55A, en donde el virus oncolítico se selecciona de virus del herpes simple, virus de la estomatitis vesicular, adenovirus, virus de la enfermedad de Newcastle, virus vaccinia, virus maraba y sus combinaciones.

Ejemplo 57A: El método del Ejemplo 48A, en donde el agente inmunoestimulador comprende una célula T que expresa un receptor de antígeno quimérico.

Ejemplo 58A: El método del Ejemplo 48A, en donde el agente inmunoestimulador comprende un anticuerpo dirigido contra células T biespecífico o multiespecífico.

Ejemplo 59A: El método del Ejemplo 48A, en donde el agente inmunoestimulador comprende un anticuerpo anti-TGF-p, una trampa TGF-p o sus combinaciones.

Ejemplo 60A: El método del Ejemplo 48A, en donde el agente inmunoestimulador comprende una vacuna contra un antígeno asociado al cáncer.

Ejemplo 61A: Un método de cribado de ABP capaz de inhibir la interacción de un ligando de TIGIT con TIGIT, que comprende (a) poner en contacto una muestra que comprende un ligando de TIGIT y TIGIT con una ABP de cualquiera de los Ejemplos 1A-36A, y (b) determinar si la unión del ligando de TIGIT a TIGIT disminuye en presencia de ABP, en comparación con la unión del ligando de TIGIT a TIGIT en ausencia de ABP.

EJEMPLOS

Los siguientes son ejemplos de métodos y composiciones de la invención. Se entiende que otras varias modalidades pueden ponerse en práctica, dada la descripción general proporcionada en la presente descripción.

Ejemplo 1: Selección de proteínas de unión a antígeno de TIGIT

Las ABP de TIGIT se seleccionaron de una biblioteca sintética de anticuerpos humanos expresados y mostrados en la superficie de las células de levadura en formato IgG, como se describe generalmente, por ejemplo, en los documentos WO2009036379; WO2010105256; WO2012009568; y en Xu y otros, Protein Eng. Des. Sel., 2013, 26:663-670, y más específicamente como se proporciona más abajo. Las secuencias y características de las ABP aisladas de la biblioteca recombinante se proporcionan en la Tabla 5.

Ocho bibliotecas de levaduras sintéticas humanas vírgenes, cada una de diversidad —109 se propagaron como se describió en los documentos WO2009036379; WO2010105256; WO2012009568; y en Xu y otros, Protein Eng. Des. Sel., 2013, 26:663-670. Para las dos primeras rondas de selección, se realizó una técnica de clasificación de perlas magnéticas que utiliza el sistema Miltenyi MACS®, como se describió en Siegel y otros, J. Immunol. Meth., 2004, 286:141-153. Brevemente, las células de levadura (—1010 células/biblioteca) se incubaron con antígeno TIGIT-Fc biotinilado en tampón de lavado FACS (solución salina tamponada con fosfato (PBS)/albúmina sérica bovina al 0,1 % (BSA)). Después de lavar una vez con 50 ml de tampón de lavado enfriado con hielo, el sedimento celular se resuspendió en 40 ml de tampón de lavado y se añadieron 500 pl de MicroBeads™ (Miltenyi Biotec) de estreptavidina a la levadura y se incubaron durante 15 min a 4°C. A continuación, la levadura se sedimentó, se resuspendió en 5 ml de tampón de lavado y se cargó en una columna Miltenyi LS. Después de cargar los 5 ml, la columna se lavó 3 veces con 3 ml de tampón de lavado FACS. Luego, la columna se retiró del campo magnético y la levadura se eluyó con 5 ml de medio de crecimiento y luego se dejó crecer durante la noche. Las siguientes rondas de clasificación se realizaron mediante el uso de citometría de flujo. Aproximadamente 1*108 levaduras se sedimentaron, se lavó tres veces con tampón de lavado y se incubó con concentraciones decrecientes de antígeno de fusión TIGIT-Fc biotinilado (100 a 1 nM) en condiciones de equilibrio a temperatura ambiente. A continuación, la levadura se lavó dos veces y se tiñó con reactivos secundarios LC-FITC (diluido 1:100) y SA-633 (diluido 1:500) o EA-PE (diluido 1:50) durante 15 min a 4 °C. Después de lavar dos veces con tampón de lavado enfriado con hielo, los sedimentos celulares se resuspendieron en 0,4 ml de tampón de lavado y se transfirieron a tubos de clasificación tapados con filtro. La clasificación se realizó mediante el uso de un clasificador FACS ARIA (BD Biosciences) y se asignaron puertas de clasificación para seleccionar aglutinantes específicos en relación con un control de fondo. Se emplearon rondas de selección posteriores para reducir el número de aglutinantes no específicos mediante la utilización proteínas de membrana solubles de células CHO (véase el documento WO2014179363 y Xu y otros, Protein Eng. Des. Sel., 2013, 26:663-670) e identificar aglutinantes con afinidad mejorada por TIGIT mediante el uso del antígeno TIGIT-Fc. Después de la ronda final de clasificación, la levadura se sembró en placas y las colonias individuales se seleccionaron para su caracterización y para la nominación de clones para la maduración por afinidad.

Ejemplo 2: Maduración de la afinidad

La optimización de los clones vírgenes se llevó a cabo mediante la utilización de tres estrategias de maduración: diversificación de cadenas ligeras; diversificación de CDR-H1 y CDR-H2; y realización de mutagénesis VH.

Diversificación de cadenas ligeras: Los plásmidos de cadenas pesadas se extrajeron de resultados vírgenes (descritos anteriormente) y se transformaron en una biblioteca de cadenas ligeras con una diversidad de 1 x 106. Las selecciones se realizaron como se describió anteriormente con una ronda de clasificación MACS y dos rondas de clasificación FACS mediante el uso de 10 nM o 1 nM del antígeno TIGIT-Fc biotinilado para las rondas respectivas.

Selección de CDR-H1 y CDR-H2: Las CDR-H3 de clones seleccionados del procedimiento de diversificación de cadenas ligeras se recombinaron en una biblioteca prefabricada con variantes de CDR-H1 y CDR-H2 de una diversidad de 1 x 108 y las selecciones se realizaron mediante el uso del antígeno monomérico HIS-TIGIT. Se aplicaron presiones de afinidad mediante el uso de concentraciones decrecientes de antígeno HIS-TIGIT biotinilado (100 a 1 nM) en condiciones de equilibrio a temperatura ambiente.

Selección de VHmut: Los clones obtenidos a partir del procedimiento de selección de CDR-H1 y CDR-H2 se sometieron a rondas adicionales de maduración por afinidad mediante mutagénesis basada en PCR propensa a errores de la cadena pesada. Las selecciones se realizaron mediante el uso de HIS-TIGIT como antígeno generalmente como se describió anteriormente, pero con la adición de emplear la clasificación FACS para todas las rondas de selección.

Ejemplo 3: Producción y purificación de anticuerpos

Con el fin de producir cantidades suficientes de anticuerpos seleccionados para una caracterización adicional, los clones de levadura se cultivaron hasta la saturación y luego se indujeron durante 48 horas a 30 °C con agitación. Después de la inducción, las células de levadura se sedimentaron y los sobrenadantes se recolectaron para su purificación. Las IgG se purificaron mediante el uso de una columna de Proteína A y se eluyeron con ácido acético, pH 2,0. Los fragmentos Fab se generaron mediante digestión con papaína y se purificaron con KappaSelect® (GE Healthcare LifeSciences).

También se produjeron anticuerpos mediante transfección transitoria de células Expi293 de acuerdo con el protocolo del fabricante (Thermo Fisher), transfección transitoria de células CHO o expresión estable de células CHO. Los anticuerpos se purificaron por cromatografía de Proteína A.

Ejemplo 4: Caracterización de anticuerpos

Mediciones de KD de ForteBio: La unión cuantitativa de anticuerpos a TIGIT monomérica recombinante humana, de ratón (SEQ ID NO:3) y de mono cynomolgus se midió mediante el uso de interferometría de biocapa (BLI) con un FORTEBIO®. Las mediciones de afinidad de anticuerpos seleccionados se realizaron generalmente como se describió en Estep y otros, Mabs, 2013, 5:270-278. Las mediciones de afinidad de FORTEBIO se realizaron al cargar IgG en la línea en sensores AHQ. Los sensores se equilibraron fuera de línea en tampón de ensayo durante 30 minutos y luego se monitorearon en línea durante 60 segundos para establecer la línea de base. Los sensores con IgG cargados se expusieron a una única concentración de antígeno (100 nM) durante 3 minutos. Posteriormente, se transfirieron al tampón de ensayo durante 3 minutos para la medición de la velocidad de desviación. La cinética se analizó mediante el uso del modelo de unión 1:1. Un resumen de las mediciones de KD para anticuerpos que se unen a una única concentración de TIGIT humana, de mono cynomolgus y de ratón (SEQ ID NO:3) se muestran en la Tabla 6 más abajo.

Mediciones de KD de MSD-SET: Las mediciones de la afinidad en el equilibrio de la solución de anticuerpos seleccionados que se unen a la TIGIT monomérica recombinante humana y de mono cynomolgus se realizaron generalmente como se describió anteriormente. Véase Estep y otros, supra. Brevemente, las titulaciones del equilibrio de la solución (SET) se realizaron en PBS 0,1 % de IgG libre de BSA (PBSF) con antígeno (monómero de TIGIT) mantenido constante a 10-100 pM e incubado con diluciones en serie de 3 a 5 veces de Fab o mAbs a partir de las 10pm-10 nM. Los anticuerpos (20 nM en PBS) se recubrieron sobre placas MSD-ECL de unión estándar durante la noche a 4 °C o a temperatura ambiente durante 30 min. A continuación, las placas se bloquearon con BSA durante 30 min con agitación a 700 rpm, seguido de tres lavados con tampón de lavado (PBSF Tween 20 al 0,05 %). Las muestras de SET se aplicaron y se incubaron en las placas durante 150 s con agitación a 700 rpm seguido de un lavado. El antígeno capturado en una placa se detectó con 250 ng/ml de estreptavidina marcada con sulfotag en PBSF mediante incubación en la placa durante 3 min. Las placas se lavaron tres veces con tampón de lavado y luego se leyeron en el instrumento MSD Sector Imager 2400 mediante el uso de tampón de lectura T 1x con tensioactivo. El por ciento de antígeno libre se representó en función del anticuerpo titulado en Prism y se ajustó a una ecuación cuadrática para extraer la KD. Para mejorar el rendimiento, se usaron robots de manipulación de líquidos en los experimentos MSD-SET, incluida la preparación de las muestras de SET.

Tabla 6: Mediciones de KD para la TIGIT humana, de cino y de ratón (SEQ ID NO:3)

Ejemplo 5: Evaluación del bloqueo de ligandos TIGIT

Los estudios cuantitativos de bloqueo de ligandos se realizaron mediante el uso de un ensayo de unión TIGIT de superficie celular. La unión de PVR-Fc o PVRL2-Fc marcados con fluorescencia a células Jurkat que expresan TIGIT humana se midió mediante citometría de flujo. Se incubó una serie de diluciones de cada anticuerpo de prueba con las células Jurkat de TIGIT para medir la capacidad de cada anticuerpo para bloquear la unión de PVR-Fc o PVRL2-Fc y determinar los valores de IC50 que se muestran en la Tabla 7.

Tabla 7: Valores de IC50 de bloqueo de ligando para el panel de anticuerpos

Ejemplo 6: Ensayos de unión de TIGIT adicionales para medir la afinidad y la reactividad cruzada de los anticuerpos contra TIGIT

La afinidad de los anticuerpos que se unen a la TIGIT humana se midió con concentraciones múltiples de antígeno para medir con mayor precisión la cinética de unión. Adicionalmente, se midió la unión cuantitativa de MAB10 a la TIGIT humana, de ratón (SEQ ID NO:3), de mono cynomolgus mediante el uso de interferometría de biocapa (BLI) y citometría de flujo. La Figura 1A muestra una alineación de TIGIT de diferentes especies. Los por cientos de identidad en todas la proteínas TIGIT se resumen en la Tabla 8 más abajo.

Tabla 8: Porcentajes de identidad entre proteínas TIGIT de diferentes especies.

Mediciones cinéticas de anticuerpos que se unen a TIGIT humana, de mono Cynomolgus y de ratón.

Las afinidades de unión y la cinética de los anticuerpos que se unen a TIGIT-His humana se midieron mediante el uso de un instrumento QKe Octet® (ForteBio) en un método similar al descrito anteriormente en el Ejemplo 4 pero con múltiples concentraciones de antígeno usadas. Adicionalmente, se midió la unión de MAB10 a TIGIT-His de mono cynomolgus y de ratón (SEQ ID NO:3). Se usó una estrategia de captura de anticuerpos anti-TIGIT en sensores después de la asociación/disociación de proteínas TIGIT monoméricas para evitar efectos de avidez en el ensayo. El análisis de BLI se realizó a 29 °C mediante el uso del tampón de cinética IX (ForteBio) como tampón de ensayo. Los biosensores de captura de Fc anti-IgG humana (AHC) (ForteBio) primero se remojaron previamente en tampón de ensayo durante más de cinco minutos. El anticuerpo anti-TIGIT (5 |jg/ml) se capturó en el sensor durante 300 segundos. A continuación, los sensores se sumergieron en tampón de ensayo durante 120 segundos para establecer una línea de base antes de medir la unión a cada proteína TIGIT. A continuación, los sensores se sumergieron en concentraciones variables de TIGIT-His humana (12,4 a 0,8 nM o 6,2 a 0,8 nM, diluciones dobles en tampón de ensayo), TIGIT-His de mono cynomolgus (24,6 a 1,5 nM o 12,3 a 1,5 nM, diluciones dobles en tampón de ensayo, solo para MAB10) o TIGIT-His de ratón (303 a 4,7 nM, diluciones dobles en tampón de ensayo, solo para MAB10) durante 300 segundos o 600 segundos, en dependencia del experimento, para medir la asociación. La disociación de TIGIT se midió al sumergir los sensores en tampón de ensayo durante 600, 1200 o 1800 segundos, en dependencia del experimento (solo se usaron 600 segundos para TIGIT-His de ratón). La agitación en todas las etapas fue a 1000 rpm.

Los parámetros cinéticos se generaron con el software de análisis de datos Octet®, versión 8.2.0.7, mediante el uso de sustracción de referencia, corrección entre etapas basada en disociación, modelo de enlace 1 a 1 y ajuste global (Rmáximo desvinculado por sensor). Los valores de la constante de velocidad de asociación (ka), la constante de velocidad de disociación (kD) y constante de equilibrio (KD) se promediaron individualmente a lo largo de los experimentos, y en la Tabla 9 se muestra un resumen de los datos de los anticuerpos que se unen a la TIGIT humana. En la Tabla 10 se muestra un resumen de la unión de MAB10 a la TIGIT monomérica humano, de mono cynomolgus y de ratón (SEQ ID NO:3).

Tabla 9: Cinética de multiconcentración de anticuerpos TIGIT para la unión a TIGIT humano

Tabla 10: Parámetros de la cinética de MAB10 para la unión a las especies humano, mono Cynomolgus y ratón

La KD para la unión de MAB10 a la TIGIT de la superficie celular en líneas celulares modificadas se midió mediante el uso de citometría de flujo. Las células Jurkat (leucemia aguda de células T, ATCC® TIB-152™) se modificaron para expresar de manera estable la TIGIT humana o de mono cynomolgus, y las células CHO-K1 se diseñaron para expresar de manera estable la TIGIT de ratón (SEQ ID NO:3). Los valores de KD se muestran en la Tabla 11. Los valores de KD para la unión de MAB10 a la superficie celular de TIGIT humana y de mono cynomolgus son muy similares.

Tabla 11: Medida de KD para la unión de MAB10 a la superficie celular de TIGIT en células modificadas

Medición de KD para la unión a células primarias

La KD para la unión de MAB10 a la superficie celular de TIGIT en células primarias se midió mediante el uso de citometría de flujo. Tanto para las PBMC humanas como para las de mono cynomolgus, las células T CD8+ tenían la mayor expresión detectable de TIGIT y, por lo tanto, se usaron para calcular la unión de MAB10 a las células primarias en estas especies. Para fines de análisis, las células T CD8+ se definieron como células con un tamaño y granularidad de linfocitos que expresaban la siguiente combinación de marcadores moleculares: CD3+CD4-CD8+. De manera similar, las Treg murinas demostraron la unión más alta de MAB10 y, por lo tanto, se usaron para estos cálculos. Las células Treg murinas se definieron como células CD4+CD8-CD25+FoxP3+ de tamaño y granularidad de linfocitos. Los valores de KD se muestran en la Tabla 12. Los valores KD para la unión de MAB10 a la superficie celular de TIGIT humana y de mono cynomolgus en células primarias son muy similares.

Tabla 12: Medida de KD para la unión de MAB10 a la superficie celular de TIGIT en células primarias

Unión de anticuerpos a PVRL4 humano

Para confirmar la especificidad de los anticuerpos anti-TIGIT, se midió mediante BLI la unión a PVRL4 humano, el miembro de la familia de Ig más estrechamente relacionado con TIGIT (29 % de identidad en la región extracelular de homología). La Figura 1B muestra una alineación de los dominios extracelulares de TIGIT y PVRL4 humanos. El análisis BLI se realizó a 30 °C mediante el uso de un tampón de cinética IX como tampón de ensayo. Los sensores AHC primero se empaparon previamente en tampón de ensayo durante más de 5 minutos. El anticuerpo (5 pg/mL) se capturó en el sensor durante 300 segundos. A continuación, los sensores se sumergieron en tampón de ensayo durante 120 segundos para establecer una línea de base antes de medir la unión a la proteína PVRL4-His humana. A continuación, los sensores se sumergieron en la PVRL4-His humana (200 nM en tampón de ensayo) durante 200 segundos para medir la asociación. A continuación, se midió la disociación de PVRL4 al sumergir los sensores en el tampón de ensayo durante 200 segundos. Los resultados se analizaron mediante el uso de Software de Análisis de Datos Octet® Versión 8.2.0.7. Desde MAB1 a MAB21 no se unieron a PVRL4, lo que demuestra que los MAB descritos en la presente descripción son altamente específicos para TIGIT.

Ejemplo 7: Producción de IL-2 en células Jurkat modificadas para responder a la señalización de TIGIT humana después del tratamiento con anticuerpos anti-TIGIT

Se desarrolló un ensayo para probar la capacidad de los anticuerpos para inhibir la función de TIGIT mediante el uso de dos líneas celulares modificadas. Este ensayo de cocultivo se desarrolló para imitar la interacción de una célula T que expresa TIGIT con una segunda célula que expresa el ligando TIGIT (PVR y PVRL2), lo que replica así la capacidad de TIGIT para suprimir la activación de células T. Esta interacción provoca una inhibición de la función de las células T (por ejemplo, liberación de citocinas) en la célula que expresa TIGIT. Las células Jurkat (leucemia aguda de células T) normalmente expresan IL-2 tras la estimulación del receptor de células T (mediante el uso de anticuerpos agonistas anti-CD3 y anti-CD28). La expresión de TIGIT en células Jurkat reduciría la expresión de IL-2 inducida por anticuerpos agonistas anti-CD3/CD28 si PVR y/o PVRL2 estuvieran presentes y unidos a TIGIT, lo que proporciona así una señal supresora a la célula Jurkat. Por lo tanto, se modificó una línea celular Jurkat para expresar la TIGIT humana.

Una segunda línea celular, HT-1080 (línea celular de fibrosarcoma humano, ATCC® CCL121™), se modificó para expresar un anticuerpo Fv monocatenario anti-CD3 anclado a la membrana (scFv) que puede proporcionar una señal de activación a las células Jurkat con TIGIT. La señal de activación también se mejoró al incluir el anticuerpo agonista anti-CD28 soluble. Las células HT-1080 expresan de forma natural altos niveles de PVR y PVRL2, lo que proporciona así un ligando para TIGIT en un ensayo de cocultivo Jurkat con TIGIT /HT-1080 con anti-CD3. En este ensayo de cultivo conjunto, los anticuerpos antagonistas de TIGIT aumentan la producción de IL-2 en comparación con los anticuerpos de control negativo. En la Figura 3 se muestra una descripción general de este sistema de ensayo.

El ensayo de cocultivo se usó para determinar la ECso de anticuerpos anti-TIGIT mediante el tratamiento con un intervalo de dosis del anticuerpo. La ECso se midió para los anticuerpos MAB1-MAB21 anti-TIGIT, así como también el anticuerpo anti-ratón de hámster SEC1 (ver Ejemplo 8) y el anticuerpo comercial anti-TIGIT humano MBSA43 (disponible, por ejemplo, de eBioscience, núm. de catálogo 16-9500). Los sobrenadantes se recogieron como se describió anteriormente 24 horas después del tratamiento y se analizaron mediante ELISA para IL-2. En la Tabla 13 se incluye un resumen de los valores de ECso determinados experimentalmente en células Jurkat con TIGIT humana. Como puede verse en la Tabla 13, todos los MAB, excepto MAB13, MAB 14, MAB 16 y SEC1, funcionan mejor en este ensayo que el anticuerpo comercial MBSA43.

Tabla 13: Valores de EC 50 promedios en el ensayo de cocultivo de Jurkat con TIGIT humana

(continuación)

Adicionalmente, el ensayo de cocultivo de Jurkat se repitió con MAB10 mediante el uso de un aislado subclonado de células HT1080 anti-CD3 scFv. La Figura 4A muestra las curvas de EC50 de un experimento ilustrativo que compara MAB10 y un control de IgG4. Ese experimento se realizó 3 veces, y la EC 50promedio fue 0,11 nM.

Como se describió anteriormente para células Jurkat que expresan TIGIT humana, se estableció un ensayo de estimulación de cocultivo con células HT-1080 anti-CD3 scFv en presencia de células Jurkat que expresan TIGIT de mono cynomolgus y CD28 antihumano soluble. La Figura 4B muestra las curvas de EC50 de un experimento ilustrativo que compara MAB10 y el control de IgG4. Como se muestra en la Figura 4B, el MAB10 induce la producción de IL-2 en células Jurkat que expresan TIGIT de mono cynomolgus, mientras que el control de isotipo de IgG4 no lo hace. La EC50 promedio para MAB10 en el ensayo de cocultivo TIGIT Jurkat/HT-1080 anti-CD3 de mono cynomolgus se determinó que era 2,87 nM.

Ejemplo 8: Caracterización del anticuerpo anti-TIGIT "SEC1"

Se realizaron estudios adicionales para caracterizar el anticuerpo 10A7 anti-TIGIT de hámster (descrito, por ejemplo, en la Publicación de patente de Estados Unidos núm. 20090258013). El anticuerpo 10A7 se reformateó de dos maneras diferentes para su uso en este estudio. El primero fue hacer un anticuerpo quimérico con regiones variables de hámster y IgG4 S228P humana (cadena pesada S228P humana, SEQ ID NO:73) y regiones constantes kappa (regiones constantes usadas para MAB10, SEQ ID NO:75). El segundo fue hacer un anticuerpo quimérico con regiones variables de hámster y IgG2a N297A de ratón y regiones constantes kappa (cadena pesada: SEQ ID NO:77; cadena ligera: SEQ ID NO:79). Las regiones variables de los anticuerpos se proporcionan en SEQ ID NO:74, 76, 78 y 80. Los anticuerpos 10A7 reformateados se denominan en la presente descripción como "SEC1".

Mediciones cinéticas para la unión de SEC1 a TIGIT recombinante de humano, monos Cynomolgus y ratón.

Las afinidades de unión y la cinética de unión de IgG2a N297A de ratón SEC1 a TIGIT-His de humano, TIGIT-His de mono cynomolgus y TIGIT-His de ratón (SEQ ID NO:3) se midieron mediante el uso de BLI con un instrumento Octet QKe. Se usó una estrategia de captura de SEC1 en sensores seguida de asociación/disociación de proteínas TIGIT monoméricas para evitar efectos de avidez en el ensayo. El análisis de BLI se realizó a 29 °C mediante el uso del tampón de cinética IX (ForteBio) como tampón de ensayo. Los biosensores (ForteBio) de captura de Fc de IgG anti ratón (AMC) primero se remojaron previamente en tampón de ensayo durante más de 5 minutos. Se capturó la SEC1 de IgG2a N297A de ratón (5 |jg/mL) en el sensor durante 300 segundos. A continuación, los sensores se sumergieron en tampón de ensayo durante 120 segundos para establecer una línea de base antes de medir la unión a cada proteína TIGIT. A continuación, los sensores se sumergieron en concentraciones variables de TIGIT-His humana (33,8 a 1,25 nM, diluciones de 3 veces en tampón de ensayo), TIGIT-His de mono cynomolgus (302,8 a 0,42 nM, diluciones de 3 veces en tampón de ensayo) o TIGIT-His de ratón (33 a 1,22 nM, diluciones de 3 veces en tampón de ensayo) durante 300 segundos para medir la asociación. A continuación, se midió la disociación de TIGIT mediante la sumersión de sensores en tampón de ensayo durante 600 segundos. La agitación en todas las etapas fue a 1000 rpm. Los parámetros cinéticos y los sensogramas se generaron con el Software de análisis de datos Octet® que usa sustracción de referencia, corrección entre etapas basada en disociación, modelo de enlace 1 a 1 y ajuste global (Rmáx no vinculado por sensor). Los valores de KD se muestran en la Tabla 14.

Tabla 14: Parámetros cinéticos de la SEC1 de IgG2a N297A para la unión de TIGIT

Medición de KD para la unión a células primarias

La KD para la unión de SEC1 (IgG4 S228P) a la superficie celular de TIGIT en células primarias se midió mediante el uso de citometría de flujo como se describió en el Ejemplo 6. Tanto para las PBMC humanas como para las de mono cynomolgus, las células T CD8+ tenían la mayor expresión detectable de TIGIT y, por lo tanto, se usaron para calcular la unión de SEC1 a las células primarias en estas especies. Para fines de análisis, las células T CD8+ se definieron como células con un tamaño y granularidad de linfocitos que expresaban la siguiente combinación de marcadores moleculares: CD3+CD4-CD8+. De manera similar, las Treg murinas demostraron la expresión más alta de TIGIT y, por lo tanto, se usaron para estos cálculos. Las células Treg murinas se definieron como células CD4+CD8-CD25+FoxP3+ de tamaño y granularidad de linfocitos. Los valores de KD se muestran en la Tabla 15.

Tabla 15: Medición de KD para la unión de SEC1 a la superficie celular TIGIT en células primarias

Ensayo de Jurkat con TIGIT modificado/anti-CD3 HT-1080

La SEC1 antagoniza la función de TIGIT en el ensayo de cocultivo Jurkat con TIGIT humano modificado/anti-CD3 HT-1080 descrito en el Ejemplo 7. El experimento se realizó 3 veces, y la EC 50 promedio fue de 8,5 nM. En comparación, la EC 50 promedio para MAB10 en este ensayo es 0,14 nM.

Al igual que MAB10, la SEC1 se ha descrito como un anticuerpo bloqueador de ligandos, y ambos anticuerpos inhiben la función de TIGIT en un ensayo de cocultivo Jurkat con TIGIT modificado/anti-CD3 scFv HT-1080.

Ejemplo 9: Aumento de la producción de citocinas en células T humanas estimuladas de manera subóptima después del tratamiento con MAB10

Se desarrolló un estudio para determinar si MAB10 es eficaz en un sistema celular in vitro mediante el uso de células T primarias humanas obtenidas de donantes sanos. Se usaron dos formas diferentes del ensayo: estimulación de células T dentro de una mezcla de PBMC y estimulación de células T CD4+ después del aislamiento de PBMC. La TIGIT se expresa en células T CD8+ intratumorales agotadas, NK y células T reguladoras. Este estudio se diseñó para identificar y obtener células T primarias humanas que expresen TIGIT más fácilmente disponibles para usarlas como un sistema sustituto para las células diana intratumorales.

En las células T CD4+, la expresión de TIGIT se restringe principalmente a las células de memoria (CD45RO+). La estimulación subóptima de las células T CD4+ permite ensayar la eficacia de MAB10 mediante la medición del aumento de la producción de IFN-^ytras la inhibición de las interacciones TIGIT-ligando.

Las células T primarias humanas se obtuvieron de donantes sanos. Se aislaron células mononucleares de sangre periférica total (PBMC) de preparaciones de leucoaféresis y, a su vez, se aislaron células T CD4+ de PBMC.

Las PBMC se purificaron mediante el uso de gradientes de densidad de Ficoll®. Luego se usaron las PBMC para purificar células CD4+ mediante el uso de selección negativa (kit de aislamiento de células T CD4, Miltenyi) siguiendo el protocolo del fabricante.

Análisis FACS de marcadores claves en células T CD4+humanas.

Los linfocitos T CD4+ se estimularon de forma subóptima con el anticuerpo anti-CD3 unido a la placa (1 pg/ml) y el anticuerpo anti-CD28 soluble (2 pg/ml) durante 60 horas. Para la tinción y el análisis FACS, se usaron células de muestras no estimuladas y estimuladas. Se usaron los siguientes anticuerpos para la tinción: anti-TIGIT-PE-Cy7, anti-PVR-PE, anti-CD4-APC-eFluor780 y anti-CD45RA-APC, anti-CD45RO PerCP-eFluor710 y CD226-FITC. Las células se analizaron por citometría de flujo mediante el uso de un instrumento BD LSRFortessa™.

Se logró una estimulación subóptima de las PBMC mediante la adición de concentraciones bajas del anticuerpo anti-CD3 (0,2 pg/ml). La estimulación subóptima de las células T CD4+ se logró mediante el cultivo de las células en placas de fondo plano de 96 pocillos que se recubrieron previamente con 1 pg/mL del anticuerpo anti-CD3 y 2 pg/mL del anticuerpo anti-CD28 soluble. Después de 60 horas de cultivo, los sobrenadantes se recolectaron y congelaron para la cuantificación de citocinas mediante el uso de tecnología ELISA, AlphaLISA® o múltiplex/Luminex®. El efecto de la adición de MAB10 se comparó con la adición de un anticuerpo IgG4 control no específico.

Los linfocitos T CD4+ purificados se dejaron sin estimular o se estimularon durante 60 horas mediante el uso del anticuerpo anti-CD3 unido a la placa (1 pg/ml) y del anticuerpo anti-CD28 soluble (2 pg/ml). El análisis FACS se realizó tanto en células no estimuladas (Figura 5A) como estimuladas (Figura 5B). Se calcularon los porcentajes de población y la intensidad de fluorescencia media (MFI). El análisis de expresión de los marcadores celulares TIGIT, PVR y CD226 antes y después de la activación mostró que el porcentaje de células positivas tanto para PVR como para CD226 aumenta con la activación. Para TIGIT, el porcentaje de células TIGIT positivas solo aumentó moderadamente con estas condiciones de activación, pero los valores de MFI indicaron una clara regulación al alza de la expresión de TIGIT en la población de células positivas. El análisis FACS también confirmó que la expresión de TIGIT se restringía principalmente a las células de memoria (CD45RO+). Los linfocitos T CD4+ de un donante representativo se tiñeron para los marcadores CD45RA (marcador de linfocitos T vírgenes) y CD45RO (marcador de linfocitos T activados o de memoria) para diferenciar los linfocitos T vírgenes y los de memoria. Los niveles de expresión de TIGIT se analizaron dentro de cada una de estas poblaciones (véase Figura 5C).

Las PBMC purificadas obtenidas de donantes sanos se estimularon durante 60 horas mediante el uso de un anticuerpo anti-CD3 soluble (0,2 pg/ml) en presencia de diferentes concentraciones de un MAB o un anticuerpo IgG4 control. Los sobrenadantes de cultivos celulares se recolectaron y usaron para medir la producción de citocinas proinflamatorias. El análisis de las muestras de dos donantes humanos, ilustrado en las Figuras 6A-6K, muestra que el tratamiento con cada uno de los MAB induce la regulación al alza de IFN-^y. Luego se usó MAB10 para inducir la producción de varias citocinas proinflamatorias en PBMC del Donante 1, incluido el factor de necrosis tumoral alfa (TNF, Figura 6L), linfotoxina alfa (LT-a, Figura 6M) e interferón gamma (IFN-y, Figura 6N). Un análisis gráfico de la EC50 para IFN-y se muestra en la Figura 6O. Las PBMC del Donante 2 se trataron de manera similar con MAB10 y se indujeron citocinas como se muestra en la Figura 7A (IFN-y), Figura 7B (TNF), Figura 7C (IL-6), Figura 7D (GM-CSF) y Figura 7E (LT-a). El valor de CE50 para MAB10 en este ensayo en los dos donantes probados se promedió como ~16nM, mediante la determinación de la concentración de MAB10 necesaria para inducir el 50 % del aumento de la señal de IFN-^y, TNF y LT-a. En la Tabla 16 se muestra un resumen de los datos de TNF para los dos donantes (Figura 6).

Tabla 16: Resumen de datos para dos donantes (TNF analizado)

Los linfocitos T CD4+ purificados obtenidos de 3 donantes sanos diferentes se estimularon durante 60 horas mediante el uso de un anticuerpo anti-CD3 unido a la placa (1 pg/ml) y un anticuerpo anti-CD28 soluble (2 pg/ml) en presencia de diferentes concentraciones de un anticuerpo IgG4 control o MAB10. Los sobrenadantes de cultivos celulares se recolectaron y usaron para medir los niveles de producción de IFN-y.

En estos linfocitos T CD4+ estimulados de manera subóptima, la adición de MAB10 da como resultado una regulación al alza de IFN-y de una manera dependiente de la dosis en los tres donantes, lo que demuestra la función antagónica anti-TIGIT de MAB10 (ver Figura 8A (Donante 1), Figura 8B (Donante 2), y Figura 8C (Donante 3)). La producción de IFN-^yen células tratadas con MAB10 (barras negras) o el control de isotipo IgG4 (barras gris claro) se muestra en el panel izquierdo de cada figura. El valor promedio de ECso para MAB10 en este ensayo se calculó como 1,02 nM mediante la determinación de la concentración de MAB10 requerida para inducir el 50 % del aumento en la señal de IFN-y (representada en el panel derecho de cada una de las Figuras 8A-8C). Los datos se resumen en la Tabla 17.

Tabla 17: Resumen de datos de tres donantes

Como se describió anteriormente, la adición de MAB10 a células T humanas estimuladas de manera subóptima antagoniza la función TIGIT e induce la regulación positiva de citocinas proinflamatorias (por ejemplo, IFN-^yy TNF) en comparación con un anticuerpo IgG4 control no específico. Este efecto es dependiente de la dosis con una CE 50 estimada de 1 nM para el ensayo de células T CD4+ aisladas. Estos datos demuestran la eficacia in vitro de MAB10 en células T humanas primarias normales.

Ejemplo 10: Caracterización de MAB10 en el bioensayo combinado PD-1/TIGIT

El PD-1 es un receptor inmunoinhibidor expresado en células T y células B activadas y desempeña un papel fundamental en la regulación de las respuestas inmunitarias a antígenos y autoantígenos tumorales. El acoplamiento de PD-1 con cualquiera de sus ligandos, PD-L1 o PD-L2, en una célula adyacente inhibe la señalización del receptor de células T (TCR) y la proliferación mediada por TCR, la activación transcripcional y la producción de citocinas. Los anticuerpos terapéuticos y las proteínas de fusión Fc diseñadas para bloquear la interacción PD-1/PD-L1 muestran resultados prometedores en ensayos clínicos para el tratamiento de una variedad de cánceres.

El bioensayo combinado PD-1/TIGIT (Promega) es un mecanismo biológicamente relevante de ensayo basado en la acción que puede usarse para medir la potencia y la estabilidad de anticuerpos y otros productos biológicos diseñados para bloquear las interacciones PD-1/PD-L1 y TIGIT/CD155 en combinación. El ensayo consta de dos líneas celulares modificadas genéticamente: Células efectoras PD-1/TIGIT, que son células T Jurkat que expresan de manera estable PD-1 humano, TIGIT y un indicador de luciferasa, y células PD-L1/CD155 APC/CHO-K1, que son células CHO-K1 que expresan de manera estable PD-L1 humano, CD155 humano y una proteína de superficie celular (en este caso, TIGIT) modificados para activar TCR afines de manera independiente del antígeno.

Cuando los dos tipos de células se cultivan conjuntamente, las interacciones PD-1/PD-L1 y TIGIT/CD155 inhiben la señalización de TCR y la actividad de luciferasa. La adición de un anticuerpo, por ejemplo, una ABP descrita en la presente descripción o conocida en la técnica, que se une a TIGIT y bloquea la unión del ligando (por ejemplo, CD155), en combinación con un segundo anticuerpo que bloquea la interacción de PD-1 con su ligando (por ejemplo, PD-L1), libera la señal inhibidora y da como resultado la señalización de TCR y la actividad de luciferasa mediada por NFAT.

La Figura 9A muestra los resultados del ensayo en donde se usó una relación 1:1 de MAB10 y pembrolizumab (anticuerpo anti-PD-1). Las concentraciones de cada anticuerpo fueron 25, 10, 4, 1,6, 0,64, 0,256, 0,1024, 0,04096 y 0,016384 |jg/ml. Se usó una IgG4 no dirigida como control. Como se muestra en la Figura, solo la combinación de MAB10 y pembrolizumab (EC50 de 5,06 nM) bloqueó la unión lo suficiente como para inducir actividad de luciferasa en las células Jurkat. Ni el control IgG4 solo ni la combinación de IgG4 MAB10 indujeron actividad de luciferasa. Luego se repitió el ensayo con una dosis fija de 1 jg/ml de pembrolizumab (y una dosis fija de 1 jg/ml del control IgG4) y una dosis variable de MAB10 (50, 20, 8, 3,2, 1,28, 0,512, 0,2048, 0,08192 y 0,032768 jg/ml). Como se muestra en la Figura 9B, mientras que la dosis fija de pembrolizumab dio como resultado un nivel bajo de activación de la inducción de luciferasa, la combinación de pembrolizumab y MAB10 fue mucho más eficaz en la inducción de luciferasa, con una EC50 de 0,78 nM. Como en la Figura 9A, ni el control IgG4 solo ni la combinación de IgG4 MAB10 indujeron actividad de luciferasa.

Ejemplo 11: Terapia combinada de células T CMV+ con MAB10 y Pembrolizumab

Se usó un ensayo de linfoproliferación para evaluar las respuestas de células T en células T positivas para citomegalovirus (CMV+). Se adquirieron PBMC de donantes individuales que se cribaron para determinar la reactividad al antígeno CMV de Astarte Biologics (Bothell, WA). Los lisados celulares de células infectadas con CMV también se adquirieron de Astarte Biologics. Las PBMC se colocaron en placas y la estimulación específica del antígeno se realiza mediante la adición del lisado celular, que estimula las células T CMV+ en la muestra. Se añadieron MAB10, un control IgG4 y/o el anticuerpo anti-PD-1 pembrolizumab. Las células se cultivaron durante cinco días y los sobrenadantes se recogieron y analizaron para determinar la producción de la citocina efectora TNF. Se recogieron más datos mediante la tinción de citocinas intracelulares para otras moléculas efectoras, incluidas IL-2, IFN-y, perforina y granzima-B.

Las células de un solo donante (Donante 1) se estimularon y cultivaron como se describió anteriormente. Como se muestra en la Figura 10, al seleccionar las células CD4+, la incubación con MAB10 (barras negras) aumenta la producción de citocinas efectoras en una forma dependiente de la dosis, medida por tinción intracelular, que incluye TNF (Figura 10A), IL-2 (Figura 10B) e IFN-^y(Figura 10C) en mayor medida que las células incubadas con el control IgG4 (barras blancas). La incubación con MAB10 también aumenta la proporción de células T CD4+ activadas específicas de antígeno, como se muestra en la Figura 10D, en la que las células que se trataron con 20 jg/ml del control IgG4 o MAB10 se analizaron mediante FACS mediante la expresión de CD3 (un marcador de células T maduras) y la expresión de TNF e IL-2.

Se obtuvieron resultados similares mediante la selección de las células CD8+. Como se muestra en la Figura 11, en las células CD8+ seleccionadas, la incubación con MAB10 (barras negras) aumenta la producción de citocinas efectoras en una forma dependiente de la dosis, que incluye TNF (Figura 11A), perforina (Figura 11B) y granzima B (Figura 11C) en comparación con las células incubadas con el control IgG4 (barras blancas). La perforina y la granzima B son marcadores de linfocitos T citotóxicos activados. La incubación con MAB10 también aumenta la proporción de células T CD8+ activadas específicas del antígeno, como se muestra en la Figura 11D. Las células que se trataron con 20 jg/ml del control IgG4 o MAB10 se analizaron por FACS por expresión de CD3 y expresión de perforina y granzima B.

Se usaron células del mismo donante en un conjunto similar de experimentos para mostrar que el bloqueo por MAB10 amplifica las respuestas de células T CD8+ específicas de c Mv . Las células se incubaron con un intervalo de concentraciones de MAB10 (barras negras) o el control IgG4 (barras blancas) y se analizó el porcentaje de perforina granzima B+ de la población positiva doble (Figura 12A) o IFN-y TNF+ (Figura 12C). Las Figuras 12B (análisis de perforina granzima B+) y 12D (análisis de IFN-^y+ TNF+) muestran la proporción de células doblemente positivas al comparar las células tratadas con 20 jg/ml del anticuerpo control (paneles de la izquierda) o 20 ^g/ml de MAB10 (paneles derechos). Las células tratadas con MAB10 mostraron una producción mucho mayor de citocinas efectoras en comparación con las células tratadas con control.

El efecto combinatorio de MAB10 y el anticuerpo PD-1 pembrolizumab se probó mediante el uso del mismo donante como se describió anteriormente. Las células se estimularon con lisados de CMV como se describió anteriormente y se trataron con 2 ^g/ml de pembrolizumab o IgG4 control y 10, 20 o 40 ^g/ml del anticuerpo control o MAB10, y se midió la producción de TNF en el sobrenadante. Como se muestra en la Figura 13, se analizaron cuatro grupos de células, tratadas con el control IgG4 (barras blancas, grupo más a la izquierda), una cantidad constante del control IgG4 y una titulación de MAB10 (barras gris oscuro, segundo grupo desde la izquierda), una cantidad constante de pembrolizumab y una titulación del control IgG4 (barras de color gris claro, segundo grupo desde la derecha), o una cantidad constante de pembrolizumab y una titulación de MAB10 (barras negras, grupo de la derecha). La combinación de pembrolizumab y MAB10 aumentó la producción de t Nf por encima del efecto observado con los agentes individuales.

La combinación se probó nuevamente en tres donantes diferentes, mediante el uso del ensayo descrito anteriormente. Las células se estimularon con lisado de CMV y se trataron con 20 ^g/ml de MAB10 o 20 ^g/ml del anticuerpo IgG4 control y una titulación de pembrolizumab, y se midió la producción de TNF. Como se muestra en la Figura 14A (Donante 1), Figura 14B (Donante 2) y Figura 14C (Donante 3), la adición de MAB10 (barras negras), solo o en combinación con concentraciones crecientes de pembrolizumab, da como resultado una mayor producción de TNF en comparación con el grupo control anticuerpo pembrolizumab (barras blancas). Adicionalmente, el MAB10 (barras negras) en combinación con pembrolizumab también resultó en un aumento en la activación en comparación con MAB10 solo. Las diferencias estadísticas se calcularon entre los grupos MAB10 solo y MAB10 pembrolizumab mediante el análisis de la prueba T de Student (*=p<0,05, **=p<0,01, ***=p<0,005, ****=p<0,001)

Tomados en conjunto, los datos presentados en el ejemplo demuestran un claro efecto dependiente de la dosis de MAB10 como agente único en ensayos de recuerdo específicos de antígeno. Además, los datos muestran un aumento en la eficacia cuando se combinan MAB10 y pembrolizumab en donantes múltiples, lo que indica el valor de las ABP descritas en la presente descripción y los inhibidores de PD-1 o los inhibidores de PD-L1 como terapias de combinación.

Anexo A: tabla de referencia de secuencias

Claims

REIVINDICACIONES

Un anticuerpo aislado, o fragmento de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a TIGIT humana (hTIGIT; SEQ ID NO: 1), que comprende:

(a) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 32, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 40, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 54, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71;

(b) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 31, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 40, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 54, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71;

(c) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 31, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 39, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 51, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71;

(d) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 31, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 40, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 52, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71; o

(e) una CDR-H3 de SEQ ID NO: 31, una CDR-H2 de SEQ ID NO: 41, una CDR-H1 de SEQ ID NO: 53, una CDR-L3 de SEQ ID NO: 64, una CDR-L2 de SEQ ID NO: 68, y una CDR-L1 de SEQ ID NO: 71.

El anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1, en donde:

(i) el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1(a) comprende una secuencia VH de SEQ ID NO: 13 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 26;

(ii) el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1(b) comprende una secuencia VH de SEQ ID NO: 12 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 26;

(iii) el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1(a) comprende una secuencia VH de SEQ ID NO: 14 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 26;

(iv) el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1(a) comprende una secuencia VH de SEQ ID NO: 15 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 26;

(v) el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1(c) comprende una secuencia VH de SEQ ID NO: 9 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 26;

(vi) el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1(d) comprende una secuencia VH de SEQ ID NO: 10 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 26; o

(vii) el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1(e) comprende una secuencia VH de SEQ ID NO: 11 y una secuencia VL de SEQ ID NO: 26.

El anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 2, en donde:

(aa) el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de (i) comprende (i) una cadena pesada de S^eQ ID NO: 99 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 100 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92;

(bb) el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de (ii) comprende (i) una cadena pesada de Se Q ID NO: 97 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 98 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92;

(cc) el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de (iii) comprende (i) una cadena pesada de SEQ ID NO: 101 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 102 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92;

(dd) el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo de (iv) comprende (i) una cadena pesada de Se Q ID NO: 103 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 104 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92;

(ee) el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo de (v) comprende (i) una cadena pesada de S^eQ ID NO: 90 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 91 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92;

(ff) el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo de (vi) comprende (i) una cadena pesada de s Eq ID NO: 93 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 94 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; o

(gg) el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo de (vii) comprende (i) una cadena pesada de SeQ ID NO: 95 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92; o (ii) una cadena pesada de SEQ ID NO: 96 y una cadena ligera de SEQ ID NO: 92.

El anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal y, opcionalmente, en donde el anticuerpo se selecciona de un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo quimérico, y/o en donde el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo comprende una región constante de inmunoglobulina, y/o en donde el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo comprende una región constante de cadena pesada de una clase seleccionada de IgA, IgD, IgE, IgG o IgM, opcionalmente en donde el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo comprende una región constante de cadena pesada de la clase IgG y una subclase seleccionada de IgG4, IgG1, IgG2 o IgG3.

5. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

6. El anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, o la composición farmacéutica de la reivindicación 5, para su uso como medicamento.

7. El anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o la composición farmacéutica de la reivindicación 5, para su uso en el tratamiento de un cáncer o infección viral, opcionalmente en donde el cáncer es un tumor sólido o un tumor hematológico.

8. El anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o la composición farmacéutica de la reivindicación 5, para su uso como medicamento en el tratamiento de una enfermedad o afección que no respondió a una terapia anterior, opcionalmente en donde la terapia anterior es una terapia que comprende un agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1.

9. Un polinucleótido aislado que codifica un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4.

10. Un vector que comprende la secuencia de polinucleótido de la reivindicación 9.

11. Una célula huésped que comprende el polinucleótido de la reivindicación 9 o el vector de la reivindicación 10.

12. Un método para producir un anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, que comprende expresar el anticuerpo, o un fragmento de unión a antígeno del mismo en la célula huésped de la reivindicación 11 y aislar el anticuerpo expresado, o el fragmento de unión a antígeno del mismo.

13. El anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5, o el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo o composición farmacéutica para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, que comprende además uno o más agentes terapéuticos adicionales, opcionalmente en donde el agente terapéutico adicional se formula en la misma composición farmacéutica que el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, o en donde el agente terapéutico adicional se formula en una composición farmacéutica diferente de la del anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo.

14. El anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 13, o el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo o la composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el agente terapéutico adicional es un anticuerpo que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1.

15. El anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 13, o el anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo o la composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el agente terapéutico adicional se selecciona de: (a) un agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1, en donde el agente es un anticuerpo que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 y se selecciona de pembrolizumab, nivolumab, atezolizumab, avelumab y durvalumab; o

(b) un anticuerpo que bloquea la señalización de un receptor inhibidor de una célula inmunitaria o un ligando del mismo o un ácido nucleico que codifica tal anticuerpo, y el receptor inhibidor o el ligando del mismo se selecciona de CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, Tim3, neuritina, BTLA, CECAM-1, CECAM-5, VISTA, LAIR1, CD160, 2B4, TGF-R, KIR y sus combinaciones.

16. Un kit que comprende la composición farmacéutica de la reivindicación 5 e instrucciones para el uso de tal composición farmacéutica.