ES2912569T3 - Métodos para tratar el dolor visceral administrando anticuerpos antagonistas dirigidos contra el péptido relacionado con el gen de la calcitonina - Google Patents

Métodos para tratar el dolor visceral administrando anticuerpos antagonistas dirigidos contra el péptido relacionado con el gen de la calcitonina Download PDF

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Abstract

Un anticuerpo antagonista anti-CGRP para su uso en la prevención y/o tratamiento del dolor visceral y/o los síntomas del dolor visceral en un individuo, en donde el anticuerpo antagonista anti-CGRP no se administra por vía intratecal, y en donde el dolor visceral está asociado con la cistitis intersticial (IC).

Description

DESCRIPCIÓN
Métodos para tratar el dolor visceral administrando anticuerpos antagonistas dirigidos contra el péptido relacionado con el gen de la calcitonina
Campo
La invención se refiere a un método para tratar y/o prevenir el dolor visceral y/o los síntomas del dolor visceral usando un anticuerpo anti-CGRP, y a un anticuerpo anti-CGRP para su uso en la prevención y/o el tratamiento del dolor visceral y/o síntomas de dolor visceral.
Antecedentes
El dolor visceral es una de las principales causas de las visitas de los pacientes a la clínica, pero los tratamientos efectivos para el dolor visceral son limitados. El dolor visceral es difícil de manejar clínicamente y, a menudo, requiere el uso de opiáceos. Aunque se usan ampliamente, los efectos adversos graves limitantes de la dosis de los opiáceos a menudo dan como resultado una disminución de la eficacia. Además, los opiáceos conllevan el riesgo de abuso y dependencia física e inducen estreñimiento y otros efectos adversos no deseados, que en muchos casos están contraindicados y disminuyen la calidad de vida.
El dolor visceral es el dolor asociado con las vísceras, que abarcan los órganos internos del cuerpo. Estos órganos incluyen, por ejemplo, el corazón, los pulmones, los órganos reproductores, la vejiga, los uréteres, los órganos digestivos, el hígado, el páncreas, el bazo y los riñones. Hay una variedad de afecciones en las que puede haber dolor visceral como, por ejemplo, pancreatitis, parto, cirugía abdominal asociada con el íleo, cistitis, período menstrual o dismenorrea. De igual manera, el dolor renal, el dolor epigástrico, el dolor pleural y el cólico biliar doloroso, el dolor de apendicitis pueden considerarse todos dolor visceral. El dolor o la presión retroesternal por un infarto de miocardio temprano también es visceral. Las enfermedades del estómago, el duodeno o el colon pueden provocar dolor visceral. Los trastornos gastrointestinales (GI) comúnmente encontrados que provocan dolor visceral incluyen el trastorno intestinal funcional (FBD) y la enfermedad inflamatoria intestinal (IBD). Estos trastornos GI incluyen una amplia variedad de estados patológicos que actualmente están solo moderadamente controlados, incluyendo, con respecto al FBD, reflujo gastroesofágico, dispepsia, síndrome del intestino irritable (IBS) y síndrome de dolor abdominal funcional (FAPS) y, con respecto a la IBD, la enfermedad de Crohn, la ileítis y la colitis ulcerosa, todas las cuales producen regularmente dolor visceral.
El IBS afecta al 10-20% de los adultos y adolescentes de todo el mundo (Longstreth et al., 2006, Gastroenterology 130(5):1480-91). La razón principal por la que estos pacientes buscan atención médica es el dolor visceral crónico que se cree que se debe a una mayor sensibilidad visceral (Aziz, 2006, Gastroenterology 131 (2):661 -4). Se ha demostrado que los pacientes con IBS tienen un umbral sensorial visceral más bajo para la distensión colorrectal y que esto está altamente correlacionado con los síntomas de dolor visceral (Delafoy et al, 2006, Gut 55(7):940-5). La distensión colorrectal después de la colitis inducida por ácido trinitrobenceno sulfónico (TNBS) en ratas es un modelo animal que ha sido usado por muchos investigadores para explorar los mecanismos de la hipersensibilidad visceral (Gay et al, 2006, Neuroimmunomodulation 23;13(2):114-121; Delafoy et al, 2006; Adam et al., 2006, Pain 123(1 -2):179-86).
La cistitis intersticial (IC) es un síndrome de vejiga dolorosa caracterizado en la clínica por urgencia urinaria, frecuencia y dolor pélvico crónico. Los estudios clínicos indican que esto implica hipersensibilidad del nervio aferente sensorial visceral donde la sensación de plenitud de la vejiga se produce a un nivel más bajo que los pacientes indica un aumento en la densidad nerviosa en la submucosa de la vejiga y evidencia de inflamación neurogénica además de volúmenes normales y la plenitud de la vejiga se percibe como dolorosa. La histopatología de la IC sugiere la participación de aferentes viscerales.
El dolor visceral puede producirse en respuesta a, por ejemplo, inflamación, distensión o aumento de la presión. No siempre está provocado por una lesión visceral. Además, el dolor visceral es difuso, puede estar referido a otras localizaciones; y puede estar asociado con otros reflejos autonómicos y motores (por ejemplo, náuseas, tensión muscular lumbar por cólico renal) (Lancet 1999, 353, 2145-48).
El CGRP (péptido relacionado con el gen de la calcitonina) es un neuropéptido de 37 aminoácidos, que pertenece a una familia de péptidos que incluye la calcitonina, la adrenomedulina y la amilina. En humanos, hay dos formas de CGRP (a-CGRP y p-CGRP) y tienen actividades similares. Varían en tres aminoácidos y presentan una distribución diferencial. Por lo menos dos subtipos de receptores de CGRP también pueden tener en cuenta las actividades diferenciales. El CGRP es un neurotransmisor en el sistema nervioso central y se ha demostrado que es un potente vasodilatador en la periferia, donde los procesos neuronales que contienen CGRP están estrechamente asociados con los vasos sanguíneos. La vasodilatación mediada por CGRP también se asocia con inflamación neurogénica, como parte de una cascada de eventos que resulta en la extravasación del plasma y la vasodilatación de la microvasculatura y está presente en la migraña.
Se ha demostrado que los antagonistas de CGRP selectivos de moléculas pequeñas administrados por vía espinal son útiles en el tratamiento de afecciones de dolor neuropático y nociceptivo (Adwanikar et al, Pain, 2007, 132(1-2):53-66) lo que sugiere que la eliminación de la señalización endógena de CGRP en la médula espinal tiene un efecto antinociceptivo. Los informes han establecido que el bloqueo de la señalización de CGRP es eficaz para revertir la hipersensibilidad visceral (VH) mediante la inyección sistémica de CGRP 8-37, un antagonista del receptor de CGRP (Delafoy et al., 2006; Plourde et al., 1997, Am J Physiol. 273(1) Pt 1):G191-6; Julia y Bueno, 1997, Am J Physiol. 272(1 Pt 1 ):G141 -6). Sin embargo, CGRP 8-37 tiene una vida media in vivo muy corta y, por lo tanto, no sería un agente terapéutico útil. Por tanto, hay una necesidad médica crítica de identificar nuevos agentes terapéuticos para el tratamiento y la prevención del dolor visceral.
Margaret Vizzard considera el papel del CGRP en la sensación visceral alterada asociada con la cistitis intersticial (Journal of Chemical Neuroanatomy, 2001; 21 (2):123-138).
Sumario de la invención
La presente invención proporciona un anticuerpo antagonista anti-CGRP para su uso en un método para prevenir y/o tratar el dolor visceral y/o los síntomas del dolor visceral en un individuo, en donde el anticuerpo antagonista anti-CGRP no se administra por vía intratecal, y en donde el dolor visceral está asociado con la cistitis intersticial (IC).
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se administra por vía periférica. En otras realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se administra por vía oral, sublingual, por inhalación, por vía transdérmica, subcutánea, intravenosa, intraarterial, intraarticular, periarticular, local y/o intramuscular.
El dolor visceral está asociado con la cistitis intersticial (IC).
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se une a CGRP; bloquea la unión de CGRP a su receptor; bloquea o disminuye la activación del receptor de CGRP; inhibe bloquea, suprime o reduce la actividad biológica de CGRP; aumenta la depuración de CGRP; y/o inhibe la síntesis, producción o liberación de CGRP.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP es un anticuerpo humano o un anticuerpo humanizado. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP es un anticuerpo monoclonal. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP puede unirse a CGRP con una KD de 50 nM o menos (medida por resonancia de plasmones de superficie a 37° C y/o tiene una vida media in vivo de por lo menos 7 días).
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se une específicamente a la región C-terminal de CGRP. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP reconoce específicamente el epítopo definido por la secuencia GSKAF (SEQ ID NO: 39). En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende un dominio VH que es por lo menos un 90% idéntico en la secuencia de aminoácidos a la SEQ ID NO: 1 o 19.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende un dominio VL que es por lo menos un 90% idéntico en la secuencia de aminoácidos a la SEQ ID NO: 2 o 20. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende además un dominio VH que es por lo menos un 90% idéntico en la secuencia de aminoácidos a la SEQ ID NO: 1 o 19. En otras realizaciones, el anticuerpo anti-CGRP comprende por lo menos una CDR seleccionada del grupo que consiste de: (a) CDR H1 como se expone en la SEQ ID NO: 3, 21, 33, 34, 36 o 37; (b) CDR H2 como se expone en la SEQ ID NO: 4, 22, 35 o 38; (c) CDR H3 como se expone en la SEQ iD NO: 5 o 23; (d) CDR L1 como se expone en la SEQ ID NO: 6 o 24; (e) CDR L2 como se expone en la SEQ ID NO: 7 o 25; (f) CDR L3 como se expone en la SEQ ID NO: 8 o 26; y (g) variantes de L1, L2 y H2.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CGRP comprende la secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de la cadena pesada del anticuerpo G1 que se muestra en la SEQ ID NO: 11, con o sin la lisina C-terminal. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CGRP comprende la secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de cadena ligera del anticuerpo G1 que se muestra en la SEQ ID NO: 12. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CGRP comprende la secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de cadena pesada del anticuerpo G1 que se muestra en la SEQ ID NO: 11, con o sin la lisina C-terminal; y la secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de la cadena ligera del anticuerpo G1 que se muestra en la SEQ ID NO: 12.
En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CGRP comprende la secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de cadena pesada del anticuerpo G2 que se muestra en la SEQ ID NO: 29, con o sin la lisina C-terminal. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CGRP comprende la secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de cadena ligera del anticuerpo G2 que se muestra en la SEQ ID NO: 30. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CGRP comprende la secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de cadena pesada del anticuerpo G2 que se muestra en SEQ ID NO: 29; y la secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de cadena ligera del anticuerpo G2 que se muestra en la SEQ ID NO: 30.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende un dominio VH que es por lo menos un 90% idéntico en la secuencia de aminoácidos a la SEQ ID NO: 1 y un dominio VL que es por lo menos un 90% idéntico en la secuencia de aminoácidos a la SEQ ID NO: 2. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende una cadena pesada producida por el vector de expresión con el Número de Registro de la ATCC PTA-6867. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende una cadena ligera producida por el vector de expresión con el Número de Registro de la ATCC PTA-6866. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se produce mediante los vectores de expresión con los Números de Registro de la ATCC PTA-6867 y PTA-6866.
En algunas realizaciones, el anti-CGRP se administra por inyección subcutánea o intravenosa entre una, dos, tres o cuatro veces al mes. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se administra a una concentración de entre 5 y 100 mg/ml. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se administra a una concentración de entre 1 y 100 mg/kg de peso corporal.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP no produce deterioro de la atención o la coordinación motora en el SNC. El anticuerpo antagonista anti-CGRP no se administra por vía intratecal. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP no es una molécula de penetración central, espinal o intratecal.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se administra por separado, secuencialmente o simultáneamente en combinación con uno o más compuestos farmacológicamente activos adicionales. En algunas realizaciones, uno o más compuestos farmacológicamente activos adicionales se seleccionan de: un analgésico opioide, por ejemplo, morfina, heroína, hidromorfona, oximorfona, levorfanol, levallorfano, metadona, meperidina, fentanilo, cocaína, codeína, dihidrocodeína, oxicodona, hidrocodona, propoxifeno, nalmefeno, nalorfina, naloxona, naltrexona, buprenorfina, butorfanol, nalbufina o pentazocina; un fármaco antiinflamatorio no esteroideo (AINE), por ejemplo, aspirina, diclofenaco, diflusinal, etodolaco, fenbufeno, fenoprofeno, flufenisal, flurbiprofeno, ibuprofeno, indometacina, ketoprofeno, ketorolaco, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, nabumetona, naproxeno, oxaprozina, fenilbutazona, piroxicam, sulindac, tolmetin o zomepirac, o una de sal farmacéuticamente aceptable de los mismos; un sedante barbitúrico, por ejemplo, amobarbital, aprobarbital, butabarbital, butabital, mefobarbital, metarbital, metohexital, pentobarbital, fenobarbital, secobarbital, talbutal, theamilal o tiopental o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos; una benzodiazepina que tiene una acción sedante, por ejemplo, clordiazepóxido, clorazepato, diazepam, flurazepam, lorazepam, oxazepam, temazepam o triazolam o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos; un antagonista de H1 que tiene una acción sedante, por ejemplo, difenhidramina, pirilamina, prometazina, clorfeniramina o clorciclizina o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos; un sedante como glutetimida, meprobamato, metacualona o dicloralfenazona o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos; un relajante del músculo esquelético, por ejemplo, baclofeno, carisoprodol, clorzoxazona, ciclobenzaprina, metocarbamol u orfrenadina o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos; un antagonista del receptor NMDA, por ejemplo, dextrometorfano ((+)-3-hidroxi-N-metilmorfinano) o su metabolito dextrorfano ((+)-3-hidroxi-N-metilmorfinano), ketamina, memantina, pirroloquinolina quinona o ácido cis-4-(fosfonometil)-2-piperidinacarboxílico o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos; un alfa-adrenérgico, por ejemplo, doxazosina, tamsulosina, clonidina o 4-amino-6,7-dimetoxi-2-(5-metanosulfonamido-1,2,3,4-tetrahidroisoquinol-2-il)-5-(2-piridilo)quinazolina; un antidepresivo tricíclico, por ejemplo, desipramina, imipramina, amitriptilina o nortriptilina; un anticonvulsivo, por ejemplo, carbamazepina o valproato; un antagonista de taquiquinina (NK), particularmente un antagonista de NK-3, n K-2 o NK-1, por ejemplo (aR,9R)-7-[3,5-bis(trifluorometil)bencil]-8,9,10,11 -tetrahidro-9-metil-5-(4-metilfenil)-7H-[1,4]diazocino[2,1-g][1,7]naftridina-6-13-diona (TAK-637), 5-[[(2R,3S)-2-[(1 R)-1 -[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etoxi-3-(4-fluorofenil)-4-morfolinil]metil]-1,2-dihidro-3H-1,2,4-triazol-3-ona (MK-869), lanepitant, dapitant o 3-[[2-metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]metilamino]-2-fenil-piperidina (2S,3S); un antagonista muscarínico, por ejemplo, oxibutina, tolterodina, propiverina, cloruro de tropsio o darifenacina; un inhibidor de COX-2, por ejemplo, celecoxib, rofecoxib o valdecoxib; un inhibidor de COX no selectivo (preferiblemente con protección GI), por ejemplo, nitroflurbiprofeno (HCT-1026); un analgésico de alquitrán de hulla, en particular paracetamol; neurolépticos como droperidol; un agonista del receptor vaniloide (por ejemplo, resinferatoxina) o antagonista (por ejemplo, capsazepina); un beta-adrenérgico como propranolol; un anestésico local como mexiletina; un corticoesteroide, como la dexametasona; un agonista o antagonista del receptor de serotonina; un analgésico colinérgico (nicotínico); Tramado®; un inhibidor de PDEV, como sildenafilo, vardenafilo o taladafilo; un ligando alfa-2-delta como gabapentina o pregabalina; y un canabinoide.
La presente invención proporciona además el uso de un anticuerpo antagonista anti-CGRP para la fabricación de un medicamento para la prevención y/o el tratamiento del dolor visceral y/o los síntomas del dolor visceral, en donde el anticuerpo antagonista anti-CGRP no se administra por vía intratecal, y en donde el dolor visceral está asociado con la cistitis intersticial (IC). En algunas realizaciones, el medicamento se prepara para administrarse por vía periférica. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP actúa periféricamente durante la administración.
La presente invención proporciona además una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento y/o la prevención del dolor visceral y/o los síntomas del dolor visceral en un individuo, que comprende un anticuerpo antagonista anti-CGRP y un portador farmacéuticamente aceptable, en donde la composición no se administra por vía intratecal, y en donde el dolor visceral está asociado con la cistitis intersticial (IC). En algunas realizaciones, la composición se prepara para administrarse por vía periférica.
Breve descripción de los dibujos
Las Figuras 1A y 1B representan un modelo de dolor visceral. (A) El anticuerpo 4901 ("4901") o el control de PBS ("Vehículo") se administró por vía intravenosa a animales a los que había inyectado ácido trinitrobenceno sulfónico (TNBS) después de una laparotomía abdominal. El umbral de dolor visceral en los animales se probó usando distensión con globo. El umbral del dolor se indica en mm Hg (eje y). La simulacion representa animales a los que se les ha inyectado una solución de control (etanol al 30%) en lugar de TNBS después de la laparotomía. (B) El antagonista del receptor de CGRP, CGRP 8-37 o control de PBS ("Vehículo") se administró por vía intravenosa a animales tratados con TNBS después de una laparotomía abdominal. Como en (A), el umbral de dolor visceral en los animales se probó usando distensión con globo, y el umbral de dolor se indica en mm Hg (eje y).
La Figura 2 representa un modelo de dolor visceral. A los animales se les administró el anticuerpo 4901 ("4901") o el control de PBS ("Vehículo") por vía intravenosa. La motilidad de la vejiga, medida como número de contracciones (eje y), se probó 1 h, 3 h y 5 h después de la inflamación de la vejiga inducida por trementina. Descripción detallada de la invención
En la presente se divulgan métodos para tratar y/o prevenir el dolor visceral en un individuo mediante la administración al individuo de una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo antagonista anti-CGRP.
La invención puede usar anticuerpos y polipéptidos antagonistas anti-CGRP derivados de G1 o sus variantes mostradas en la Tabla 6 de la WO2007/054809. En la presente se divulgan métodos para elaborar y usar estos anticuerpos y polipéptidos.
Técnicas Generales
La puesta práctica de la presente invención empleará, a menos que se indique lo contrario, técnicas convencionales de biología molecular (incluyendo técnicas recombinantes), microbiología, biología celular, bioquímica e inmunología, que se encuentran dentro de los conocimientos de la técnica. Tales técnicas se explican completamente en la bibliografía, como Molecular Cloning: A Laboratory Manual, segunda edición (Sambrook et al., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather y P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, y D.G. Newell, eds., 1993-1998) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir y C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller y M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway y P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995).
Definiciones
Un "anticuerpo" es una molécula de inmunoglobulina capaz de unirse específicamente a un objetivo, como un carbohidrato, polinucleótido, lípido, polipéptido, etc., a través de por lo menos un sitio de reconocimiento de antígenos, localizado en la región variable de la molécula de inmunoglobulina. Como se usa en la presente, el término abarca no solo anticuerpos policlonales o monoclonales intactos, sino también fragmentos de los mismos (como Fab, Fab', F(ab')2, Fv), de cadena sencilla (ScFv), mutantes de los mismos, proteínas de fusión que comprenden una porción de anticuerpo (como anticuerpos de dominio), y cualquier otra configuración modificada de la molécula de inmunoglobulina que comprende un sitio de reconocimiento de antígeno. Un anticuerpo incluye un anticuerpo de cualquier clase, como IgG, IgA o IgM (o una subclase de los mismos), y no es necesario que el anticuerpo sea de ninguna clase en particular. Dependiendo de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo del dominio constante de sus cadenas pesadas, las inmunoglobulinas pueden asignarse a diferentes clases. Hay cinco clases principales de inmunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, y varias de estas pueden dividirse en subclases (isotipos), por ejemplo, IgG 1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2. Los dominios constantes de cadena pesada que corresponden a las diferentes clases de inmunoglobulinas se denominan alfa, delta, épsilon, gamma, y mu, respectivamente. Las estructuras de subunidades y las configuraciones tridimensionales de diferentes clases de inmunoglobulinas son bien conocidas.
Como se usa en la presente, "anticuerpo monoclonal" se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que componen la población son idénticos excepto por posibles mutaciones de origen natural que pueden estar presentes en cantidades menores. Los anticuerpos monoclonales son altamente específicos y se dirigen contra un solo sitio antigénico. Además, al contrario que las preparaciones de anticuerpos policlonales, que típicamente incluyen diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticuerpo monoclonal se dirige contra un solo determinante en el antígeno. El modificador "monoclonal" indica el carácter del anticuerpo como obtenido de una población sustancialmente homogénea de anticuerpos, y no debe interpretarse que requiere la producción del anticuerpo mediante ningún método en particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales para su uso de acuerdo con la presente invención pueden elaborarse mediante el método de hibridoma descrito por primera vez porKohler y Milstein, 1975, Nature, 256:495, o pueden elaborarse mediante métodos de ADN recombinante como se describe en la Patente de Estados Unidos N° 4.816.567. Los anticuerpos monoclonales también pueden aislarse de bibliotecas de fagos generadas usando las técnicas descritas en McCafferty et al., 1990, Nature, 348:552-554, por ejemplo.
Como se usa en la presente, los anticuerpos "humanizados" se refieren a formas de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murinos) que son inmunoglobulinas quiméricas específicas, cadenas de inmunoglobulinas o fragmentos de las mismas (como Fv, Fab, Fab', F(ab')2 u otras subsecuencias de anticuerpos de unión a antígenos) que contienen una secuencia mínima derivada de inmunoglobulina no humana. En su mayor parte, los anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpo receptor) en las que los residuos de una región determinante de la complementariedad (CDR) del receptor se reemplazan por residuos de una CDR de una especie no humana (anticuerpo donante) como ratón, rata, o conejo que tiene la especificidad, afinidad y actividad biológica deseadas. En algunos casos, los residuos de la región marco (FR) de Fv de la inmunoglobulina humana se reemplazan por residuos no humanos correspondientes. Además, el anticuerpo humanizado puede comprender residuos que no se encuentran ni en el anticuerpo receptor ni en las secuencias marco o CDR importadas, pero que se incluyen para refinar y optimizar adicionalmente el rendimiento del anticuerpo. En general, el anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente la totalidad de por lo menos uno, y típicamente dos, dominios variables (por ejemplo, un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera), en el que todas o sustancialmente todas las regiones CDR corresponden a las de una inmunoglobulina no humana y todas o sustancialmente todas las regiones FR son las de una secuencia consenso de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado también comprenderá óptimamente por lo menos una porción de una región o dominio constante de inmunoglobulina (Fc), típicamente la de una inmunoglobulina humana. Los anticuerpos pueden tener regiones Fc modificadas como se describe en la WO 99/58572. Otras formas de anticuerpos humanizados tienen una o más CDR (una, dos, tres, cuatro, cinco, seis) que están alteradas con respecto al anticuerpo original, que también se denominan una o más CDR "derivadas de" una o más CDR del anticuerpo original.
Como se usa en la presente, "anticuerpo humano" significa un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos correspondiente a la de un anticuerpo producido por un humano y/o que se ha elaborado usando cualquiera de las técnicas para elaborar anticuerpos humanos conocidas en la técnica o divulgadas en la presente. Esta definición de un anticuerpo humano incluye anticuerpos que comprenden por lo menos un polipéptido de cadena pesada humana o por lo menos un polipéptido de cadena ligera humana. Uno de tales ejemplos es un anticuerpo que comprende polipéptidos de cadena ligera murina y cadena pesada humana. Los anticuerpos humanos pueden producirse usando varias técnicas conocidas en la técnica. En una realización, el anticuerpo humano se selecciona de una biblioteca de fagos, donde esa biblioteca de fagos expresa anticuerpos humanos (Vaughan et al., 1996, Nature Biotechnology, 14:309-314; Sheets et al., 1998, PNAS, (USA) 95:6157-6162; Hoogenboom y Winter, 1991, J. Mol. Biol., 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol., 222:581). Los anticuerpos humanos también pueden elaborarse introduciendo loci de inmunoglobulina humana en animales transgénicos, por ejemplo, ratones en los que los genes de inmunoglobulina endógenos se han inactivado parcial o completamente. Este enfoque se describe en las Patentes de Estados Unidos N° 5.545.807; 5.545.806; 5.569.825; 5.625.126; 5.633.425; y 5.661.016. Alternativamente, el anticuerpo humano puede prepararse inmortalizando linfocitos B humanos que producen un anticuerpo dirigido contra un antígeno objetivo (tales linfocitos B pueden recuperarse de un individuo o pueden haber sido inmunizados in vitro). Ver, por ejemplo, Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77, 1985; Boerner et al., 1991, J. Immunol., 147 (1): 86-95; y Patente de Estados Unidos N25.750.373.
Como se usa en la presente, el término "péptido relacionado con el gen de la calcitonina" y "CGRP" se refiere a cualquier forma de péptido relacionado con el gen de la calcitonina y variantes del mismo que conservan por lo menos parte de la actividad de CGRP. Por ejemplo, CGRP puede ser a-CGRP o p-CGRP. Como se usa en la presente, CGRP incluye todos los CGRP de secuencia nativa de especies de mamíferos, por ejemplo, humanos, caninos, felinos, equinos y bovinos.
Como se usa en la presente, un "anticuerpo antagonista anti-CGRP" (denominado indistintamente "anticuerpo anti-CGRP") se refiere a un anticuerpo que es capaz de unirse a CGRP e inhibir la actividad biológica de CGRP y/o las vías en sentido descendente mediadas por la señalización de CGRP. Un anticuerpo antagonista anti-CGRP abarca anticuerpos que bloquean, antagonizan, suprimen o reducen (incluso significativamente) la actividad biológica de CGRP, incluyendo las vías en sentido descendente mediadas por la señalización de CGRP, como la unión al receptor y/o la provocación de una respuesta celular a CGRP. Para los propósitos de la presente invención, se entenderá explícitamente que el término "anticuerpo antagonista anti-CGRP" abarca todos los términos, títulos y estados funcionales y características previamente identificados en los que el propio CGRP, una actividad biológica de CGRP (que incluye, pero no se limita a, su capacidad para mediar en cualquier aspecto del dolor visceral), o las consecuencias de la actividad biológica, se anulan, reducen o neutralizan sustancialmente en cualquier grado significativo. En alguna realización, un anticuerpo antagonista anti-CGRP se une a CGRP y evita la unión de CGRP a un receptor de CGRP. En otras realizaciones, un anticuerpo anti-CGRP se une a CGRP y previene la activación de un receptor de CGRP. En la presente se proporcionan ejemplos de anticuerpos antagonistas anti-CGRP.
Como se usa en la presente, los términos "G1" y "anticuerpo G1" se usan indistintamente para referirse a un anticuerpo producido por los vectores de expresión que tienen los números de registro ATCC-PTA-6867 y ATCC-PTA-6866. La secuencia de aminoácidos de las regiones variables de cadena pesada y cadena ligera se muestra en las SEQ ID NO: 1 y 2. Las porciones de las CDR del anticuerpo G1 (incluyendo las CDR de Chothia y Kabat) se representan esquemáticamente en la Figura 5 de la WO2007/054809. Los polinucleótidos que codifican las regiones variables de cadena ligera y pesada se muestran en las SEQ ID NO: 9 y 10. La caracterización del anticuerpo G1 se describe en los Ejemplos de la WO2007/054809.
Como se usa en la presente, los términos "G2" y "anticuerpo G2" se usan indistintamente para referirse a un anticuerpo monoclonal de ratón anti-CGRP de rata como se describe en Wong HC et al. Hibridoma 12:93-106, 1993. La secuencia de aminoácidos de las regiones variables de la cadena pesada y la cadena ligera se muestra en las SEQ ID NO: 19 y 20. Los polinucleótidos que codifican las regiones variables de la cadena pesada y ligera se muestran en las SEQ ID NO: 27 y 28. Las porciones de CDR del anticuerpo G2 se proporcionan en las s Eq ID NO: 21 a 26.
Los términos "polipéptido", "oligopéptido", "péptido" y "proteína" se usan indistintamente en la presente para referirse a cadenas de aminoácidos de cualquier longitud, preferiblemente relativamente cortas (por ejemplo, 10-100 aminoácidos). La cadena puede ser lineal o ramificada, puede comprender aminoácidos modificados y/o puede estar interrumpida por no aminoácidos. Los términos también abarcan una cadena de aminoácidos que ha sido modificada de manera natural o por intervención; por ejemplo, formación de enlaces de disulfuro, glicosilación, lipidación, acetilación, fosforilación o cualquier otra manipulación o modificación, como la conjugación con un componente de marcado. También se incluyen dentro de la definición, por ejemplo, polipéptidos que contienen uno o más análogos de un aminoácido (incluyendo, por ejemplo, aminoácidos no naturales, etc.), así como otras modificaciones conocidas en la técnica. Se entiende que los polipéptidos pueden encontrarse como cadenas sencillas o cadenas asociadas.
Como se sabe en la técnica, "polinucleótido" o "ácido nucleico", como se usa indistintamente en la presente, se refieren a cadenas de nucleótidos de cualquier longitud e incluyen ADN y ARN. Los nucleótidos pueden ser desoxirribonucleótidos, ribonucleótidos, bases o nucleótidos modificados y/o sus análogos, o cualquier sustrato que pueda ser incorporado en una cadena por la ADN o la ARN polimerasa. Un polinucleótido puede comprender nucleótidos modificados, como nucleótidos metilados y sus análogos. Si la hay, la modificación de la estructura de nucleótidos puede impartirse antes o después del ensamblaje de la cadena. La secuencia de nucleótidos puede ser interrumpida por componentes no nucleotídicos. Un polinucleótido puede modificarse adicionalmente después de la polimerización, como por conjugación con un componente marcador. Otros tipos de modificaciones incluyen, por ejemplo, "caperuzas", sustitución de uno o más de los nucleótidos de origen natural con un análogo, modificaciones internucleotídicas como, por ejemplo, aquellos con enlaces no cargados (por ejemplo, fosfonatos de metilo, fosfotriésteres, fosfoamidatos, carbamatos, etc.) y con enlaces cargados (por ejemplo, fosforotioatos, fosforoditioatos, etc.), los que contienen fracciones colgantes, como, por ejemplo, proteínas (por ejemplo, nucleasas, toxinas, anticuerpos, péptidos señal, poli-L-lisina, etc.), los que tienen intercaladores (por ejemplo, acridina, psoraleno, etc.), los que contienen quelantes (por ejemplo, metales, metales radiactivos, boro, metales oxidativos, etc.), los que contienen alquilantes, los que tienen enlaces modificados (por ejemplo, ácidos nucleicos alfa anoméricos, etc.), así como formas no modificadas del o de los polinucleótidos. Además, cualquiera de los grupos hidroxilo normalmente presentes en los azúcares puede reemplazarse, por ejemplo, por grupos fosfonato, grupos fosfato, protegerse con grupos protectores estándar o activarse para preparar enlaces adicionales a nucleótidos adicionales, o pueden conjugarse con soportes sólidos. El OH 5' y 3' terminal puede fosforilarse o sustituirse con aminas o fracciones de grupos de protección orgánicos de 1 a 20 átomos de carbono. También pueden derivatizarse otros hidroxilos a grupos protectores estándar. Los polinucleótidos también pueden contener formas análogas de azúcares de ribosa o desoxirribosa que generalmente se conocen en la técnica incluyendo, por ejemplo, 2'-O-metil-, 2'-O-alilo, 2'-fluoro- o 2'-azido- ribosa, análogos de azúcares carbocíclicos, azúcares alfa- o beta-anoméricos, azúcares epiméricos como arabinosa, xilosas o lixosas, azúcares de piranosa, azúcares de furanosa, sedoheptulosas, análogos acíclicos y análogos de nucleósidos abásicos como metil ribósido. Uno o más enlaces fosfodiéster pueden reemplazarse por grupos de enlace alternativos. Estos grupos de enlace alternativos incluyen, pero no se limitan a, realizaciones en las que el fosfato se reemplaza por P(O)S ("tioato"), P(S)S ("ditioato"), (O)NR2 ("amidato"), P(O)R, P(O)OR', CO o CH 2 ("formacetal"), en los que cada R o R' es independientemente H o alquilo sustituido o no sustituido (1-20 C) que contiene opcionalmente un enlace éter (-O-), arilo, alquenilo, cicloalquilo, cicloalquenilo o araldilo. No todos los enlaces en un polinucleótido necesitan ser idénticos. La descripción anterior se aplica a todos los polinucleótidos a los que se hace referencia en la presente, incluyendo el ARN y el ADN.
Una "región variable" de un anticuerpo se refiere a la región variable de la cadena ligera del anticuerpo o a la región variable de la cadena pesada del anticuerpo, ya sea sola o en combinación. Las regiones variables de la cadena pesada y ligera consisten cada una de cuatro regiones marco (FR) conectadas por tres regiones determinantes de la complementariedad (CDR), también conocidas como regiones hipervariables. Las CDR en cada cadena se mantienen unidas en estrecha proximidad por las FR y, con las CDR de la otra cadena, contribuyen a la formación del sitio de unión al antígeno de los anticuerpos. Hay por lo menos dos técnicas para determinar las CDR: (1) un enfoque basado en la variabilidad de secuencia entre especies (es decir, Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5a ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda MD)); y (2) un enfoque basado en estudios cristalográficos de complejos antígeno-anticuerpo (Al-lazikani et al (1997) J. Molec. Biol. 273:927-948)). Como se usa en la presente, una CDR puede referirse a las CDR definidas por cualquier enfoque o por una combinación de ambos enfoques.
Una "región constante" de un anticuerpo se refiere a la región constante de la cadena ligera del anticuerpo o a la región constante de la cadena pesada del anticuerpo, ya sea sola o en combinación.
Como se usa en la presente, la unión "inmunoespecífica" de anticuerpos se refiere a la interacción de unión específica de antígeno que se produce entre el sitio de combinación de antígeno de un anticuerpo y el antígeno específico reconocido por ese anticuerpo (es decir, el anticuerpo reacciona con la proteína en un ELISA u otro inmunoensayo, y no reacciona detectablemente con proteínas no relacionadas).
Un epítopo que "se une preferentemente" o "se une específicamente" (usados indistintamente en la presente) a un anticuerpo o un polipéptido es un término bien conocido en la técnica, y los métodos para determinar tal unión específica o preferencial también son bien conocidos en la técnica. Se dice que una molécula muestra "unión específica" o "unión preferencial" si reacciona o se asocia más frecuentemente, más rápidamente, con mayor duración y/o con mayor afinidad con una célula o sustancia en particular que lo que lo hace con células o sustancias alternativas. Un anticuerpo "se une específicamente" o "se une preferentemente" a un objetivo si se une con mayor afinidad, avidez, más fácilmente y/o con mayor duración que lo que lo hace a otras sustancias. Por ejemplo, un anticuerpo que se une específica o preferentemente a un epítopo de CGRP es un anticuerpo que se une a este epítopo con mayor afinidad, avidez, más fácilmente y/o con mayor duración que a otros epítopos de CGRP o no CGRP. También se entiende al leer esta definición que, por ejemplo, un anticuerpo (o fracción o epítopo) que se une específica o preferencialmente a un primer objetivo puede o no unirse específica o preferencialmente a un segundo objetivo. Como tal, "unión específica" o "unión preferencial" no requiere necesariamente (aunque puede incluir) unión exclusiva. En general, pero no necesariamente, la referencia a la unión significa unión preferencial.
Como se usa en la presente, "sustancialmente puro" se refiere a material que es por lo menos un 50% puro (es decir, libre de contaminantes), más preferiblemente por lo menos un 90% puro, más preferiblemente por lo menos un 95% puro, más preferiblemente por lo menos un 98% puro, más preferiblemente por lo menos un 99% puro.
Una "célula huésped" incluye una célula individual o un cultivo celular que puede ser o ha sido un receptor de vector o vectores para la incorporación de insertos de polinucleótidos. Las células huésped incluyen la progenie de una sola célula huésped, y la progenie puede no ser necesariamente completamente idéntica (en morfología o en el complemento de ADN genómico) a la célula madre original debido a una mutación natural, accidental o deliberada. Una célula huésped incluye células transfectadas con uno o más polinucleótidos de esta invención.
El término "región Fc" se usa para definir una región C-terminal de una cadena pesada de inmunoglobulina. La "región Fc" puede ser una región Fc de secuencia nativa o una región Fc variante. Aunque los límites de la región Fc de una cadena pesada de inmunoglobulina pueden variar, la región Fc de la cadena pesada de IgG humana se define habitualmente para que se extienda desde un residuo de aminoácido en la posición Cys226, o desde Pro230, hasta el extremo terminal carboxilo de la cadena pesada. La numeración de los residuos en la región Fc es la del índice EU como en Kabat. Kabat et al., Sequences of Proteins of Imunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991. La región Fc de una inmunoglobulina comprende generalmente dos dominios constantes, CH2 y CH3.
Como se usa en la presente, "receptor de Fc" y "FcR" describen un receptor que se une a la región Fc de un anticuerpo. El FcR preferido es un FcR humano de secuencia nativa. Además, un FcR preferido es uno que se une a un anticuerpo IgG (un receptor gamma) e incluye receptores de las subclases FcyRI, FcyRII y FcyRIII, incluyendo variantes alélicas y formas alternativamente cortadas y empalmadas de estos receptores. Los receptores FcyRII incluyen FcyRIIA (un “receptor activador”) y FcyRIIB (un “receptor inhibidor”), que tienen secuencias de aminoácidos similares que difieren principalmente en los dominios citoplasmáticos de los mismos. Los FcR se revisan en Ravetch y Kinet, 1991, Ann. Rev. Immunol., 9:457-92; Capel et al., 1994, Immunomethods, 4:25-34; y de Haas et al., 1995, J. Lab. clin. Med., 126:330-41. "FcR" también incluye el receptor neonatal, FcRn, que es responsable de la transferencia de IgG maternas al feto (Guyer et al., 1976, J. Immunol., 117:587; y Kim et al., 1994, J. Immunol., 24:249).
"Citotoxicidad dependiente del complemento" y "CDC" se refieren a la lisis de un objetivo en presencia de complemento. La vía de activación del complemento se inicia mediante la unión del primer componente del sistema del complemento (C1q) a una molécula (por ejemplo, un anticuerpo) formando complejo con un antígeno afín. Para evaluar la activación del complemento, puede realizarse un ensayo de la CDC, por ejemplo, como se describe en Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods, 202:163 (1996).
Una "región Fc funcional" posee por lo menos una función efectora de una región Fc de secuencia nativa. Las "funciones efectoras" ejemplares incluyen la unión a C1q; citotoxicidad dependiente del complemento (CDC); unión al receptor Fc; citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC); fagocitosis; regulación por disminución de los receptores de la superficie celular (por ejemplo, receptor de células B; BCR), etc. Tales funciones efectoras requieren generalmente que la región Fc se combine con un dominio de unión (por ejemplo, un dominio variable de anticuerpo) y puede evaluarse usando varios ensayos conocidos en la técnica para evaluar tales funciones efectoras de anticuerpos.
Una "región Fc de secuencia nativa" comprende una secuencia de aminoácidos idéntica a la secuencia de aminoácidos de una región Fc que se encuentra en la naturaleza. Una "región Fc variante" comprende una secuencia de aminoácidos que difiere de la de una región Fc de secuencia nativa en virtud de por lo menos una modificación de aminoácidos, pero conserva por lo menos una función efectora de la región Fc de secuencia nativa. Preferiblemente, la región Fc variante tiene por lo menos una sustitución de aminoácidos en comparación con una región Fc de secuencia nativa o con la región Fc de un polipéptido original, por ejemplo, de aproximadamente una a aproximadamente diez sustituciones de aminoácidos, y preferiblemente de aproximadamente una a aproximadamente cinco sustituciones de aminoácidos en una región Fc de secuencia nativa o en la región Fc del polipéptido original. La región Fc variante en la presente poseerá preferiblemente por lo menos aproximadamente un 80% de identidad de secuencia con una región Fc de secuencia nativa y/o con una región Fc de un polipéptido original, y lo más preferible por lo menos aproximadamente un 90% de identidad de secuencia con la misma, más preferiblemente por lo menos aproximadamente un 95%, por lo menos aproximadamente un 96%, por lo menos aproximadamente un 97%, por lo menos aproximadamente un 98%, por lo menos aproximadamente un 99% de identidad de secuencia con la misma.
Como se usa en la presente, "citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos" y "ADCC" se refieren a una reacción mediada por células en la que las células citotóxicas no específicas que expresan receptores Fc (FcR) (por ejemplo, células asesinas naturales (NK), neutrófilos y macrófagos) reconocen anticuerpo unido en una célula objetivo y posteriormente provocan la lisis de la célula objetivo. La actividad de ADCC de una molécula de interés puede evaluarse usando un ensayo de ADCC in vitro, como el descrito en la Patente de Estados Unidos N° 5.500.362 o 5.821.337. Las células efectoras útiles para tales ensayos incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y células NK. Alternativa, o adicionalmente, la actividad de ADCC de la molécula de interés puede evaluarse in vivo, por ejemplo, en un modelo animal como el divulgado en Clynes et al., 1998, PNAS (USA), 95:652-656.
Como se usa en la presente, "tratamiento" es un enfoque para obtener resultados clínicos beneficiosos o deseados. Para los propósitos de esta invención, los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen, pero no se limitan a, uno o más de los siguientes: mejora en cualquier aspecto del dolor visceral, incluyendo la disminución de la gravedad, alivio de la intensidad del dolor y otros síntomas asociados, reducción de la frecuencia de recurrencia, aumentando la calidad de vida de quienes padecen dolor visceral y disminución de la dosis de otros medicamentos requeridos para tratar el dolor visceral. Otros síntomas asociados incluyen, pero no se limitan a, calambres, dolores, dolor difuso, presión, plenitud, opresión, náuseas, vómitos y sensibilidad a la luz, el sonido y/o el movimiento.
"Reducción de la incidencia" del dolor visceral significa cualquier reducción de la gravedad (que puede incluir la reducción de la necesidad y/o la cantidad de (por ejemplo, la exposición a) otros fármacos y/o terapias usadas generalmente para esta afección incluyendo, por ejemplo, opiáceos (por ejemplo, oxicodona, morfina, butorfanol, nalbufina, etc.), duración y/o frecuencia. Como entienden los expertos en la técnica, los individuos pueden variar en cuanto a su respuesta al tratamiento y como tal, por ejemplo, un "método para reducir la incidencia de dolor visceral en un individuo" refleja la administración del anticuerpo antagonista anti-CGRP en base a una expectativa razonable de que tal administración pueda provocar probablemente tal reducción en la incidencia en ese individuo en particular.
"Mejorar" el dolor visceral y/o un síntoma asociado con dolor visceral significa una disminución o mejora de uno o más síntomas de dolor visceral y/o síntomas asociados con dolor visceral en comparación con no administrar un anticuerpo antagonista anti-CGRP. “Mejorar” también incluye acortar o reducir la duración de un síntoma.
"Paliar" el dolor visceral y/o un síntoma asociado con el dolor visceral significa disminuir la extensión de una o más manifestaciones clínicas indeseables de dolor visceral en un individuo o población de individuos tratados con un anticuerpo antagonista anti-CGRP de acuerdo con la invención.
Como se usa en la presente, "controlar el dolor visceral" se refiere a mantener o reducir la gravedad o duración de uno o más síntomas de dolor visceral o la frecuencia de dolor visceral en comparación con el nivel antes del tratamiento. Por ejemplo, la duración o la gravedad del dolor visceral, o la frecuencia del dolor visceral, pueden reducirse en por lo menos aproximadamente cualquiera de un 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60% o 70% en el individuo. en comparación con el nivel antes del tratamiento.
Como se usa en la presente, "retrasar" el desarrollo del dolor visceral significa diferir, dificultar, ralentizar, retrasar, estabilizar y/o posponer la progresión del dolor visceral. Este retraso puede variar en la duración del tiempo, dependiendo del historial de la enfermedad y/o de los individuos que están siendo tratados. Como es evidente para un experto en la técnica, un retraso suficiente o significativo puede, en efecto, abarcar la prevención, en el sentido de que el individuo no desarrolle dolor visceral. Un método que "retrasa" el desarrollo del síntoma es un método que reduce la probabilidad de desarrollar el síntoma en un período de tiempo determinado y/o reduce la extensión de los síntomas en un período de tiempo determinado, en comparación con no usar el método. Tales comparaciones se basan típicamente en estudios clínicos, usando una serie de sujetos suficiente para mostrar una diferencia estadísticamente significativa entre los sujetos tratados y los no tratados.
"Desarrollo" o "progresión" del dolor visceral significa manifestaciones iniciales y/o progresión subsiguiente del trastorno. El desarrollo de dolor visceral puede detectarse y evaluarse usando técnicas clínicas estándar como es bien conocido en la técnica. Sin embargo, el desarrollo también se refiere a la progresión que puede ser indetectable. Para los propósitos de esta invención, desarrollo o progresión se refiere al curso biológico de los síntomas. "Desarrollo" incluye ocurrencia, recurrencia y aparición. Como se usa en la presente, "aparición" u "ocurrencia" de dolor visceral incluye la aparición inicial y/o la recurrencia.
Una "muestra biológica" abarca una variedad de tipos de muestras obtenidas de un individuo y puede usarse en un ensayo de diagnóstico o monitorización. La definición abarca sangre y otras muestras líquidas de origen biológico, muestras de tejido sólido, como un espécimen de biopsia o cultivos de tejidos o células derivadas de los mismos, y la progenie de los mismos. La definición también incluye muestras que han sido manipuladas de alguna manera después de su obtención, como por tratamiento con reactivos, solubilización o enriquecimiento de ciertos componentes, como proteínas o polinucleótidos, o incrustación en una matriz semisólida o sólida para propósitos de división. El término "muestra biológica" abarca una muestra clínica y también incluye células en cultivo, sobrenadantes celulares, lisados celulares, suero, plasma, fluido biológico y muestras de tejido.
Como se usa en la presente, una "dosificación eficaz" o "cantidad eficaz" de fármaco, compuesto o composición farmacéutica es una cantidad suficiente para lograr resultados beneficiosos o deseados. Para uso profiláctico, los resultados beneficiosos o deseados incluyen resultados como eliminar o reducir el riesgo, disminuir la gravedad o retrasar el inicio de la enfermedad incluyendo los síntomas bioquímicos, histológicos y/o conductuales de la enfermedad, sus complicaciones y los fenotipos patológicos intermedios que se presentan durante el desarrollo de la enfermedad. Para uso terapéutico, los resultados beneficiosos o deseados incluyen resultados clínicos como la reducción de la intensidad del dolor, la duración o la frecuencia del ataque de dolor visceral y la disminución de uno o más síntomas resultantes del dolor visceral (bioquímicos, histológicos y/o conductuales), incluyendo sus complicaciones y fenotipos patológicos intermedios que se presentan durante el desarrollo del dolor, aumentar la calidad de vida de quienes padecen el dolor, disminuir la dosis de otros medicamentos requeridos para tratar el dolor, potenciar el efecto de otro medicamento y/o retrasar la progresión del dolor de los pacientes. Una dosificación eficaz puede administrarse en una o más administraciones. Para los propósitos de esta invención, una dosificación eficaz de fármaco, compuesto o composición farmacéutica es una cantidad suficiente para lograr un tratamiento profiláctico o terapéutico, ya sea directa o indirectamente. Como se entiende en el contexto clínico, una dosificación eficaz de un fármaco, compuesto o composición farmacéutica puede lograrse o no junto con otro fármaco, compuesto o composición farmacéutica. Por tanto, una “dosificación eficaz” puede considerarse en el contexto de administrar uno o más agentes terapéuticos, y un único agente puede considerarse dado en una cantidad eficaz si, junto con uno o más de otros agentes, se logra o puede lograrse un resultado deseable.
Un "individuo" o un "sujeto" es un mamífero, más preferiblemente un humano. Los mamíferos también incluyen, pero no se limitan a, animales de granja, animales deportivos, mascotas, primates, caballos, perros, gatos, ratones y ratas.
Como se usa en la presente, "vector" significa un constructo que es capaz de administrar, y preferiblemente expresar, uno o más genes o secuencias de interés en una célula huésped. Los ejemplos de vectores incluyen, pero no se limitan a, vectores virales, vectores de expresión de ADN o ARN desnudos, vectores de plásmidos, cósmidos o fagos, vectores de expresión de ADN o ARN asociados con agentes de condensación catiónicos, vectores de expresión de ADN o ARN encapsulados en liposomas y ciertas células eucariotas, como células productoras.
Como se usa en la presente, "secuencia de control de la expresión" significa una secuencia de ácidos nucleicos que dirige la transcripción de un ácido nucleico. Una secuencia de control de la expresión puede ser un promotor, como un promotor constitutivo o inducible, o un potenciador. La secuencia de control de la expresión se enlaza operativamente a la secuencia de ácidos nucleicos que se va a transcribir.
Como se usa en la presente, "portador farmacéuticamente aceptable" o "excipiente farmacéuticamente aceptable" incluye cualquier material que, cuando se combina con un ingrediente activo, permite que el ingrediente retenga la actividad biológica y no reaccione con el sistema inmunitario del sujeto. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, cualquiera de los portadores farmacéuticos estándar como una solución salina tamponada con fosfato, agua, emulsiones como una emulsión de aceite/agua y varios tipos de agentes humectantes. Los diluyentes preferidos para administración en aerosol o parenteral son solución salina tamponada con fosfato o normal (0,9%). Las composiciones que comprenden tales portadores se formulan mediante métodos convencionales bien conocidos (véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a edición, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990; y Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20a Ed. Mack Publishing, 2000).
El término "kon", como se usa en la presente, se pretende que se refiera a la constante de velocidad para la asociación de un anticuerpo a un antígeno.
El término "koff”, como se usa en la presente, se pretende que se refiera a la constante de velocidad para la disociación de un anticuerpo del complejo anticuerpo/antígeno.
El término "Kd", como se usa en la presente, se pretende que se refiera a la constante de disociación de equilibrio de una interacción anticuerpo-antígeno.
Métodos para prevenir o tratar el dolor visceral
En la presente se divulgan métodos para la prevención y/o el tratamiento del dolor visceral y/o los síntomas del dolor visceral y un medicamento para la prevención y/o el tratamiento del dolor visceral y/o uno o más síntomas del dolor visceral en un individuo.
En algunas realizaciones, la invención proporciona un anticuerpo antagonista anti-CGRP para su uso en método para prevenir y/o tratar el dolor visceral y/o uno o más síntomas de dolor visceral en un individuo, que comprende la administración periférica al individuo de una cantidad eficaz de un anticuerpo antagonista anti-CGRP, en donde el dolor visceral está asociado con la cistitis intersticial (IC).
En algunas realizaciones, la invención proporciona el uso de un anticuerpo antagonista anti-CGRP para la fabricación de un medicamento para la prevención y/o el tratamiento del dolor visceral y/o uno o más síntomas del dolor visceral, en donde el medicamento se prepara para la administración periférica o en donde el medicamento se administra periféricamente, en donde el dolor visceral está asociado con la cistitis intersticial (IC).
En otras realizaciones, la invención proporciona un anticuerpo antagonista anti-CGRP para uso en la prevención y/o tratamiento del dolor visceral y/o los síntomas de dolor visceral en donde el anticuerpo se prepara para la administración periférica o en donde el anticuerpo se administra periféricamente, en donde el dolor visceral está asociado con la cistitis intersticial (IC).
En algunas realizaciones, el individuo es preferiblemente un mamífero, por ejemplo, un animal de compañía como un caballo, un gato o un perro o un animal de granja como una oveja, una vaca o un cerdo. Lo más preferible, el mamífero es un humano.
En algunas realizaciones, el medicamento y/o el anticuerpo antagonista anti-CGRP se prepara para administración oral, sublingual, bucal, tópica, rectal, por inhalación, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intraarterial, intramuscular, intracardiaca, intraósea, intradérmica, intraperitoneal, transmucosal, vaginal, intravítrea, intraarticular, periarticular, central, local o epicutánea.
En algunas realizaciones, el medicamento se prepara para la administración periférica antes y/o durante y/o después del desarrollo del dolor visceral.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP actúa periféricamente durante la administración. El anticuerpo antagonista anti-CGRP no se administra por vía intratecal.
El diagnóstico o evaluación del dolor visceral está bien establecido en la técnica. La evaluación puede realizarse en base a medidas conocidas en la técnica, como la caracterización del dolor del paciente usando varias escalas de dolor. Ver, por ejemplo, Katz et al., Surg Clin North Am., 1999, 79 (2):231 -52; Caraceni et al. J Pain Symptom Manage, 2002, 23(3):239-55. Por ejemplo, pueden emplearse la escala de descripción verbal (VDS), la escala analógica visual (VAS), la escala de dolor del Hospital Prince Henry (PHHPS), la escala de calificación numérica (NRS) y la escala de dolor facial, y variaciones de las mismas para evaluar el dolor y evaluar la respuesta al tratamiento. También existen escalas de uso común para medir el estado de la enfermedad, como el Índice de gravedad del trastorno intestinal funcional (FBDSI) (Drossman et al., 1995, Digestive Diseases and Sciences 40(5):986-995) y el Sistema de puntuación de la gravedad de IBS (Francis et al., 1997, Aliment Pharmacol Ther., 11 (2):395-402). Tales escalas pueden emplearse para evaluar la respuesta al tratamiento.
La mejora, el control, la reducción de la incidencia o el retraso del desarrollo o la progresión del dolor IC y/o los síntomas del dolor IC se miden mediante una o más escalas de dolor VDS, VAS, PHHPS, NRS y de caras. Anticuerpos antagonistas anti-CGRP
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se une a CGRP. Preferiblemente, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se une a CGRP e inhibe la capacidad de CGRP para unirse al receptor de CGRP. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se une al CGRP tanto humano como de roedor, preferiblemente al CGRP humano y de rata. Más preferiblemente, el anticuerpo se une al CGRP humano. En realizaciones preferidas, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se une a a-CGRP humano o a a-CGRP y/o p-CGRP humano. Lo más preferible, el anticuerpo antagonista anti-CGRP es un anticuerpo que muestra una cualquiera o más de las siguientes características funcionales: (a) se une a CGRP; (b) bloquea la unión de CGRP a su o sus receptores; (c) bloquea o disminuye la activación del receptor CGRP, incluyendo la activación de cAMP; (d) inhibe, bloquea, suprime o reduce la actividad biológica de CGRP, incluyendo las vías en sentido descendente mediadas por la señalización de CGRP, como la unión al receptor y/o la provocación de una respuesta celular a CGRP; (e) previene, mejora o trata cualquier aspecto del dolor visceral; (f) aumenta la depuración de CGRP; y (g) inhibe (reduce) la síntesis, producción o liberación de CGRP.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se une a un fragmento de CGRP, más preferiblemente a un fragmento de CGRP así como al CGRP de longitud completa. Preferiblemente, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se une a la región o fragmento C-terminal de CGRP. La región o fragmento C-terminal de CGRP comprende preferiblemente los aminoácidos 19-37 o 25-37 o 29-37 o, alternativamente, los aminoácidos 30­ 37 o, alternativamente, los aminoácidos 31-37 de CGRP. En una realización adicional, la región o fragmento C-terminal de CGRP comprende preferiblemente los aminoácidos 32-37, lo más preferible los aminoácidos 33-37 de CGRP. Preferiblemente, el CGRP es a-CGRP o p-CGRP, más preferiblemente humano o de roedor, más preferiblemente humano o de rata, más preferiblemente humano, más preferiblemente a-CGRP o p-CGRP humano, lo más preferible a-CGRP humano.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se une específicamente a la secuencia de aminoácidos GSKAF (SEQ ID nO: 39). Preferiblemente, la secuencia GSKAF (SEQ ID NO: 39) de CGRP es el epítopo al que se une el anticuerpo antagonista anti-CGRP.
En algunas realizaciones, se proporciona un anticuerpo antagonista anti-CGRP que se une específicamente a un epítopo definido por los aminoácidos G33 a F37 de CGRP. El anticuerpo antagonista anti-CGRP puede unirse específicamente al epítopo definido por la secuencia de aminoácidos GSKAF (SEQ ID NO: 39).
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP inhibe o previene la activación del receptor de CGRP. Preferiblemente, el anticuerpo anti-CGRP tiene una IC50 de entre aproximadamente 0,0001 (0,1 nM) y aproximadamente 500 pM. En algunas realizaciones preferidas, la IC50 está entre aproximadamente 0,0001 pM y cualquiera de aproximadamente 250 pM, 100 pM, 50 pM, 10 pM, 1 pM, 500 nM, 250 nM, 100 nM, 50 nM, 20 nM, 15 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM o 0,5 nM medido en un ensayo de unión in vitro. En algunas realizaciones preferidas adicionales, la IC50 es menor de cualquiera de aproximadamente 500 pM, o aproximadamente 100 pM o aproximadamente 50 pM, medido en un ensayo de unión in vitro. En una realización adicional más preferida, la IC50 es de aproximadamente 1,2 nM o 31 nM.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP usado es capaz de competir con un anticuerpo descrito anteriormente en la presente para la unión de CGRP o a un fragmento de CGRP, o a un fragmento de CGRP, así como al CGRP de longitud completa, preferiblemente a la región o fragmento C-terminal de CGRP. En realizaciones preferidas, la región C-terminal o fragmento de CGRP comprende los aminoácidos 19-37, 25-37, 29-37, 30-37 o 31-37 de CGRP. En una realización adicional, la región o fragmento C-terminal de CGRP comprende preferiblemente los aminoácidos 32-37, lo más preferible 33-37, de CGRP.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se une a CGRP, una región de CGRP o un fragmento de CGRP con una afinidad de unión (Kd) de entre aproximadamente 0,00001 pM (0,01 nM) y aproximadamente 500 pM. En algunas realizaciones, la afinidad de unión (Kd) está entre aproximadamente 0,00001 pM y cualquiera de aproximadamente 250 pM, 100 pM, 50 pM, 10 pM, 1 pM, 500 nM, 250 nM, 100 nM, 50 nM, 20 nM, 15 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0,5 nM, 1 nM, 0,05 nM o 0,01 nM medido en un ensayo de unión in vitro. En algunas realizaciones, la afinidad de unión (Kd) es menor que cualquiera de aproximadamente 500 pM o 100 pM, 50 pM o 10 pM, medida en un ensayo de unión in vitro. En realizaciones adicionales más preferidas, la afinidad de unión (Kd) es de aproximadamente 0,04 nM o 16 nM.
El anticuerpo antagonista anti-CGRP como se usa en la presente invención puede seleccionarse del grupo de: anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, fragmentos de anticuerpos (por ejemplo, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc, ScFv, etc.), anticuerpos quiméricos, anticuerpos biespecíficos, anticuerpos heteroconjugados, anticuerpos de cadena sencilla (ScFv), mutantes de los mismos, proteínas de fusión que comprenden una porción de anticuerpo (por ejemplo, un dominio de anticuerpo), anticuerpos humanizados y cualquier otra configuración modificada de la molécula de inmunoglobulina que comprende un sitio de reconocimiento de antígeno de la especificidad requerida, incluyendo variantes de glicosilación de anticuerpos, variantes de secuencias de aminoácidos de anticuerpos y anticuerpos modificados covalentemente. El anticuerpo antagonista anti-CGRP puede ser de origen murino, de rata, humano o de cualquier otro origen (incluyendo anticuerpos quiméricos o humanizados). En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP puede humanizarse pero más preferiblemente es humano. En algunas realizaciones, se aísla el anticuerpo antagonista anti-CGRP. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP es sustancialmente puro. Cuando el anticuerpo antagonista anti-CGRP es un fragmento de anticuerpo, el fragmento preferiblemente retiene las características funcionales del anticuerpo original, es decir, la actividad antagonista y/o de unión a CGRP como se describe en las características funcionales anteriores.
En la técnica se conocen ejemplos de anticuerpos antagonistas anti-CGRP. Por lo tanto, de acuerdo con una realización preferida de la presente invención, el anticuerpo antagonista anti-CGRP como se usa en la presente invención es preferiblemente un anticuerpo anti-CGRP como se divulga de manera general o específica en cualquiera de (i) WO2007/054809, (ii) WO2007/076336, (iii) Tan et al., Clin. Sci. (Lond). 89:565-73, 1995, (iv) Sigma (Missouri, US), número de producto C7113 (clon N°4901), (v) Plourde et al., Peptides 14:1225-1229, 1993, o que comprende o consiste de:
(a) un fragmento de dicho anticuerpo (por ejemplo, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc, ScFv, etc.),
(b) una cadena ligera de dicho anticuerpo,
(c) una cadena pesada de dicho anticuerpo,
(d) una o más regiones variables de una cadena ligera y/o una cadena pesada de dicho anticuerpo,
(e) una o más CDR (una, dos, tres, cuatro, cinco o seis CDR) de dicho anticuerpo,
(f) CDR H3 de la cadena pesada de dicho anticuerpo,
(g) CDR L3 de la cadena ligera de dicho anticuerpo,
(h) tres CDR de la cadena ligera de dicho anticuerpo,
(i) tres CDR de la cadena pesada de dicho anticuerpo,
(j) tres CDR de la cadena ligera y tres CDR de la cadena pesada de dicho anticuerpo,
(k) una cualquiera o más de (a) a (j).
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP es el anticuerpo G2 o el anticuerpo G1. De acuerdo con una realización más preferida de la presente, el anticuerpo antagonista anti-CGRP usado es el anticuerpo G1 anti-CGRP como se divulga específicamente en la Publicación de Solicitud de Patente PCT N° WO2007/054809, o que comprende sus variantes mostradas en la Tabla 6 de la WO2007/054809, incluyendo también anticuerpos funcionalmente equivalentes a G1, es decir, que comprenden sustituciones conservadoras de residuos de aminoácidos o una o más deleciones o adiciones de aminoácidos que no afectan significativamente a sus características funcionales, por ejemplo, actividad de unión o antagonista de CGRP y variantes que tienen actividad y/o unión mejorada o disminuida. Como se usa en la presente, los términos "G1" y "anticuerpo G1" se usan indistintamente para referirse a un anticuerpo producido por vectores de expresión que tienen los números de registro de ATc C PTA-6867 y ATCC PTA-6866 como se divulga en la solicitud WO2007/054809. Las características funcionales del anticuerpo G1 se describen en las Solicitudes de Patente PCT N° PCT/IB2009/050849 y PCT/IB2009/050852, ambas presentadas el 3 de marzo de 2009.
De acuerdo con una realización adicional de la presente invención, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende o consiste de un polipéptido seleccionado de: (a) anticuerpo G1 o sus variantes mostradas en la Tabla 6 de la WO2007/054809; (b) un fragmento o una región del anticuerpo G1 o sus variantes mostradas en la Tabla 6 de la WO2007/054809; (c) una cadena ligera del anticuerpo G1 o sus variantes mostradas en la Tabla 6 de la WO2007/054809; (d) una cadena pesada del anticuerpo G1 o sus variantes mostradas en la Tabla 6 de la WO2007/054809 (e) una o más regiones variables de una cadena ligera y/o una cadena pesada del anticuerpo G1 o sus variantes mostradas en la Tabla 6 de la WO2007/054809; (f) una o más CDR (una, dos, tres, cuatro, cinco o seis CDR) del anticuerpo G1 o sus variantes mostradas en la Tabla 6 de la WO2007/054809; (g) CDR H3 de la cadena pesada del anticuerpo G1 o sus variantes mostradas en la Tabla 6 de la WO2007/054809; (h) CDR L3 de la cadena ligera del anticuerpo G1 o sus variantes mostradas en la Tabla 6 de la WO2007/054809; (i) tres CDR de la cadena ligera del anticuerpo G1 o sus variantes mostradas en la Tabla 6 de la WO2007/054809; (j) tres CDR de la cadena pesada del anticuerpo G1 o sus variantes mostradas en la Tabla 6 de la WO2007/054809; (k) tres CDR de la cadena ligera y/o tres CDR de la cadena pesada, del anticuerpo G1 o sus variantes mostradas en la Tabla 6 de la WO2007/054809; y (i) un anticuerpo que comprende cualquiera de (b) a (k). La invención puede usar polipéptidos que comprenden uno cualquiera o más de los anteriores. En algunas realizaciones, la por lo menos una, dos, tres, cuatro, cinco o seis CDR son por lo menos aproximadamente un 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idénticas a la por lo menos una, dos, tres, cuatro, cinco o seis CDR de G1 o sus variantes mostradas en la Tabla 6 de la WO2007/054809. La determinación de las regiones CDR está dentro de la capacidad del experto en la técnica. Se entiende que en algunas realizaciones, las CDR pueden ser una combinación de las CDR de Kabat y Chothia. En algunas realizaciones, las CDR son las CDR de Kabat. En otras realizaciones, las CDR son las CDR de Chothia.
El anticuerpo antagonista anti-CGRP preferiblemente comprende o consiste de un fragmento o una región del anticuerpo G1 (por ejemplo, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc, ScFv, etc.) o sus variantes mostradas en la Tabla 6 de la WO2007/054809. Preferiblemente, dicho fragmento o región tiene las características funcionales de un anticuerpo antagonista anti-CGRP como, por ejemplo, actividad de unión y/o actividad antagonista a CGRP, y comprende o consiste de uno o más de: (i) una cadena ligera, (ii) una cadena pesada, (iii) un fragmento que contiene una o más regiones variables de una cadena ligera y/o una cadena pesada, y (iv) una o más CDR de una cadena ligera y/o una cadena pesada del anticuerpo G1.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) que comprende un péptido con una secuencia seleccionada del grupo que consiste de las SEQ ID NO: 28-32 y/o una región variable de cadena pesada (HCVR) que comprende un péptido con una secuencia seleccionada del grupo que consiste de las SEQ ID NO: 34-38 de la solicitud de patente WO2007/076336.
Además preferiblemente, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende un polipéptido de LCVR de la SEQ ID NO como se muestra en la Tabla 1 de la solicitud de patente WO2007/076336 y comprende además un polipéptido de HCVR de una SED ID NO como se muestra en la Tabla 1 de la solicitud de patente WO2007/076336.
De acuerdo con una realización adicional de la invención, el anticuerpo antagonista anti-CGRP usado comprende una CDR de cadena ligera (CDRL) seleccionada del grupo que consiste de las SEQ ID NO: 8-13 y/o una CDR de cadena pesada (CDRH) seleccionada del grupo que consiste de la SEQ ID NO: 14-22 de la solicitud de patente WO2007/076336.
Los métodos para la elaboración y aislamiento de los anticuerpos antagonistas anti-CGRP de la solicitud WO2007/076336 y los datos que demuestran la unión de CGRP y la caracterización del antagonista del mismo se describen en la solicitud WO2007/076336.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP para su uso en la presente invención comprende un dominio VH que es por lo menos aproximadamente un 85%, por lo menos aproximadamente un 86%, por lo menos aproximadamente un 87%, por lo menos aproximadamente un 88%, por lo menos aproximadamente un 89%, por lo menos aproximadamente un 90%, por lo menos aproximadamente un 91%, por lo menos aproximadamente un 92%, por lo menos aproximadamente un 93%, por lo menos aproximadamente un 94%, por lo menos aproximadamente un 95%, por lo menos aproximadamente un 96%, por lo menos aproximadamente un 97%, por lo menos aproximadamente un 98%, por lo menos aproximadamente un 99% o un 100% idénticos en la secuencia de aminoácidos a la SEQ ID NO: 1 o la SEQ ID NO: 19 presentada en la presente.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende un dominio VL que es por lo menos aproximadamente un 85%, por lo menos aproximadamente un 86%, por lo menos aproximadamente un 87%, por lo menos aproximadamente un 88%, por lo menos aproximadamente un 89%, por lo menos aproximadamente un 90%%, por lo menos aproximadamente un 91%, por lo menos aproximadamente un 92%, por lo menos aproximadamente un 93%, por lo menos aproximadamente un 94%, por lo menos aproximadamente un 95%, por lo menos aproximadamente un 96%, por lo menos aproximadamente un 97%, por lo menos aproximadamente un 98%, por lo menos aproximadamente un 99% o un 100% idéntico en la secuencia de aminoácidos a la SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 20 presentada en la presente.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende un dominio VH y un dominio VL que son por lo menos aproximadamente un 85%, por lo menos aproximadamente un 86%, por lo menos aproximadamente un 87%, por lo menos aproximadamente un 88%, por lo menos aproximadamente un 89%, por lo menos aproximadamente un 90%, por lo menos aproximadamente un 91%, por lo menos aproximadamente un 92%, por lo menos aproximadamente un 93%, por lo menos aproximadamente un 94%, por lo menos aproximadamente un 95%, por lo menos aproximadamente un 96%, por lo menos aproximadamente un 97% por lo menos aproximadamente un 98%, por lo menos aproximadamente un 99% o un 100% idénticos en la secuencia de aminoácidos a la SEQ ID NO: 1 y 2 respectivamente o la SEQ ID NO: 19 y 20 presentadas en la presente, respectivamente.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende un dominio VH que es por lo menos un 90% idéntico en la secuencia de aminoácidos a la SEQ ID NO: 1 y un dominio VL que es por lo menos un 90% idéntico en la secuencia de aminoácidos a la SEQ ID NO: 2 presentada en la presente.
Alternativamente, el anticuerpo antagonista anti-CGRP puede comprender un dominio VH que es por lo menos un 90% idéntico en la secuencia de aminoácidos a la SEQ ID NO: 19 y un dominio VL que es por lo menos un 90% idéntico en la secuencia de aminoácidos a la SEQ ID NO: 20 presentadas en la presente.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende por lo menos una CDR seleccionada del grupo que consiste de: (a). CDR H1 como se expone en la SEQ ID NO: 3, 21,33, 34, 36 o 37; (B). CDR H2 como se expone en la SEQ ID NO: 4, 22, 35 o 38; (c). CDR H3 como se expone en la SEQ ID NO: 5 o 23; (d). CDR L1 como se expone en la SEQ ID NO: 6 o 24; (e) CDR L2 como se expone en la SEQ ID NO: 7 o 25; (f). CDr L3 como se expone en la SEQ ID NO: 8 o 26; y (g). variantes de CDR L1, CDR L2 y CDR H2 como se muestra en la Tabla 6 de la WO2007/054809.
En algunas realizaciones, la región constante de la cadena pesada del anticuerpo antagonista anti-CGRP puede ser de cualquier tipo de región constante, como IgG, IgM, IgD, IgA e IgE; y cualquier isotipo, como IgG 1, IgG2, IgG3 e IgG4.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende una cadena pesada producida por el vector de expresión con el Número de Registro de la ATCC PTA-6867. Más preferiblemente, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende una cadena ligera producida por el vector de expresión con el Número de Registro de la ATCC PTA-6866. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende la secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de la cadena pesada del anticuerpo G1 (incluyendo la IgG2 modificada como se describe en la presente) que se muestra en la SEQ ID NO: 11, con o sin la lisina C-terminal. El anticuerpo antagonista anti-CGRP también incluye un anticuerpo que carece de una lisina terminal en la cadena pesada, ya que esta normalmente se pierde en una proporción de anticuerpos durante la fabricación. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende la secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de cadena ligera del anticuerpo G1 que se muestra en la SEQ ID NO: 12. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende la secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de cadena pesada del anticuerpo G2 que se muestra en la SEQ ID NO: 29. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende la secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de cadena ligera del anticuerpo G2 que se muestra en la SEQ ID NO: 30. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se produce mediante vectores de expresión con los Números de Registro de la ARCC PTA-6867 y PTA-6866.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP para su uso en la presente invención es el anticuerpo G1 o el anticuerpo G2 definido en la presente. En realizaciones preferidas, el anticuerpo antagonista anti-CGRP para su uso en la presente invención es el anticuerpo G1, o un fragmento de unión a antígeno del mismo.
De acuerdo con realizaciones adicionales de la invención, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende una región constante modificada como se describe, por ejemplo, en la WO2007/054809. Preferiblemente, la región constante modificada es inmunológicamente inerte, incluso parcialmente inmunológicamente inerte, de tal manera que no desencadena la lisis mediada por el complemento, no estimula la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC), no activa la microglía. Preferiblemente, la región constante modificada se reduce en una o más de estas actividades. Lo más preferible, la región constante se modifica como se describe en Eur. J. Immunol., 1999, 29:2613-2624; Número de solicitud de PCT PCT/GB99/01441; y/o la Solicitud de Patente del Reino Unido N° 9809951.8. En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende una región constante de IgG2 de cadena pesada humana que comprende las siguientes mutaciones: A330, P331 a S330, S331 (numeración de aminoácidos con referencia a la secuencia de IgG2 de tipo salvaje). Eur. J. Immunol., 1999, 29:2613-2624.
Los métodos de elaboración y aislamiento de los anticuerpos antagonistas anti-CGRP de la solicitud WO2007/054809 y los datos que demuestran la unión de CGRP y la caracterización del antagonista del mismo se describen en la solicitud WO2007/054809. Las secuencias de las SEQ ID NO: 1 a 14 de dicha solicitud se proporcionan en la presente como las SEQ ID NO: 1 a 14, respectivamente.
Dosificación y administración
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se administra periféricamente entre, por ejemplo, aproximadamente una a aproximadamente 7 veces a la semana, más preferiblemente entre aproximadamente una y aproximadamente cuatro veces al mes, más preferiblemente entre aproximadamente una y aproximadamente seis veces por periodo de 6 meses, más preferiblemente de aproximadamente una a aproximadamente doce veces al año. Preferiblemente, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se administra periféricamente en un período seleccionado de: aproximadamente una vez al día, una vez cada dos, tres, cuatro, cinco o seis días, semanalmente, una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas, mensualmente, una vez cada dos meses, una vez cada tres meses, una vez cada cuatro meses, una vez cada cinco meses, una vez cada seis meses, una vez cada siete meses, una vez cada ocho meses, una vez cada nueve meses, una vez cada diez meses, una vez cada once meses o anualmente. De acuerdo con realizaciones preferidas, el anticuerpo antagonista anti-CGRP se administra por una vía seleccionada de una o más de: vía oral, sublingual, bucal, tópica, rectal, por inhalación, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intraarterial o intramuscular, por administración intracardiaca, intraósea, intradérmica, intraperitoneal, transmucosal, vaginal, intravítrea, epicutánea, intraarticular, periarticular o localmente.
De acuerdo con una realización adicional de la presente invención, el medicamento se prepara para administración periférica entre aproximadamente una y aproximadamente 7 veces a la semana, más preferiblemente entre aproximadamente una y aproximadamente cuatro veces al mes, más preferiblemente entre aproximadamente una y aproximadamente seis veces por un periodo de 6 meses, más preferiblemente de una a doce veces al año. Preferiblemente, el medicamento se prepara para ser administrado por vía periférica en un período seleccionado de: aproximadamente una vez al día, una vez cada dos, tres, cuatro, cinco o seis días, semanalmente, una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas, mensualmente, una vez cada dos meses, una vez cada tres meses, una vez cada cuatro meses, una vez cada cinco meses, una vez cada seis meses, una vez cada siete meses, una vez cada ocho meses, una vez cada nueve meses, una vez cada diez meses, una vez cada once meses o anualmente. De acuerdo con realizaciones preferidas, el medicamente se prepara para ser administrado por una vía seleccionada de una o más de: vía oral, sublingual, bucal, tópica, rectal, por inhalación, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intraarterial o intramuscular, por administración intracardiaca, intraósea, intradérmica, intraperitoneal, transmucosal, vaginal, intravítrea, epicutánea, intraarticular, periarticular o localmente.
De acuerdo con una realización adicional de la presente invención, una concentración de anticuerpo de entre aproximadamente 0,1 y aproximadamente 200 mg/ml; preferiblemente a cualquiera de aproximadamente 0,5, 1, 5, 10, 1520, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 o 200 mg/ml /- 10% de error, lo más preferible a aproximadamente 50 mg/ml.
De acuerdo con una realización adicional de la presente invención, el medicamento se prepara para administración periférica con una concentración de anticuerpos de entre 0,1 y 200 mg/kg de peso corporal; preferiblemente a cualquiera de aproximadamente 0,5, 1, 5, 10, 1520, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 o 200 mg/kg de peso corporal /- 10% de error, lo más preferible a aproximadamente 10 mg/kg.
De acuerdo con una realización preferida de la presente invención, el anticuerpo antagonista anti-CGRP tiene una vida media in vivo de más de cualquiera de aproximadamente 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152,154, 156, 158, 160, 62, 164, 166, 168, 170, 1742, 1742, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208 o 210 días /- 1 día, más preferiblemente más que cualquiera de unos 7, 8, 9, 10, 11 o 12 meses.
Preferiblemente, el anticuerpo antagonista anti-CGRP tiene una vida media in vivo de más de 6 días.
De acuerdo con una realización preferida adicional de la presente invención, el medicamento y/o el anticuerpo antagonista anti-CGRP no produce efectos de deterioro del sistema nervioso central y/o cognitivo. Preferiblemente, el medicamento y/o el anticuerpo antagonista anti-CGRP no inducen uno o más de los siguientes: amnesia, confusión, despersonalización, hipoestesia, pensamiento anormal, trismo, vértigo, acatisia, apatía, ataxia, parestesia peribucal, estimulación del SNC, labilidad emocional, euforia, alucinaciones, hostilidad, hiperestesia, hipercinesia, hipotonía, falta de coordinación, aumento de la libido, reacción maníaca, mioclonía, neuralgia, neuropatía, psicosis, convulsiones, habla anormal, estupor, ideación suicida; mareos, somnolencia, insomnio, ansiedad, temblor, depresión o parestesia. Lo más preferible el medicamento y/o el anticuerpo antagonista anti-CGRP no induce el deterioro de la coordinación motora o la atención.
De acuerdo con una realización adicional de la presente invención, el medicamento y/o el anticuerpo antagonista anti-CGRP no produce deterioro respiratorio, hepático, renal o gastrointestinal.
De acuerdo con otra realización de la presente invención, el medicamento y/o el anticuerpo antagonista anti-CGRP no produce efectos de dependencia física y/o psicológica. Preferiblemente, el medicamento y/o el anticuerpo antagonista anti-CGRP no demuestran afinidad por los receptores de opiáceos, benzodiacepinas, fenciclidina (PCP) o ácido N-metil-D-aspártico (NMDA), o estimulantes del SNC, ni producen ningún efecto sedante o eufórico.
En algunas realizaciones, el anticuerpo antagonista anti-CGRP, en la administración, mejora, controla, reduce la incidencia o retrasa el desarrollo o la progresión de la sensación de dolor central.
En otras realizaciones, el efecto del anticuerpo antagonista anti-CGRP es igual y/o superior a los efectos de los AINE y/o los opiáceos en los mismos modelos de dolor visceral. En una realización, el anticuerpo antagonista anti-CGRP es eficaz en el tratamiento de poblaciones con dolor refractario.
De acuerdo con realizaciones adicionales de la presente invención, se proporciona el uso o método de acuerdo con cualquier otro aspecto de la invención en donde el anticuerpo antagonista anti-CGRP se administra por separado, secuencialmente o simultáneamente en combinación con uno o más compuestos o agentes farmacológicamente activos adicionales., preferiblemente compuestos o agentes útiles para tratar el dolor visceral. Preferiblemente, los agentes adicionales se seleccionan de uno o más de:
(i) un analgésico opioide, por ejemplo, morfina, heroína, hidromorfona, oximorfona, levorfanol, levallorfano, metadona, meperidina, fentanilo, cocaína, codeína, dihidrocodeína, oxicodona, hidrocodona, propoxifeno, nalmefeno, nalorfina, naloxona, naltrexona, buprenorfina, butorfanol, nalbufina o pentazocina;
(ii) un fármaco antiinflamatorio no esteroideo (AINE), por ejemplo, aspirina, diclofenaco, diflusinal, etodolaco, fenbufeno, fenoprofeno, flufenisal, flurbiprofeno, ibuprofeno, indometacina, ketoprofeno, ketorolaco, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, nabumetona, naproxeno, oxaprozina, fenilbutazona, piroxicam, sulindac, tolmetin o zomepirac, inhibidores de la ciclooxigenasa-2 (COX-2), celecoxib; rofecoxib; meloxicam; JTE-522; L-745.337; NS398; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos;
(iii) un sedante barbitúrico, por ejemplo, amobarbital, aprobarbital, butabarbital, butabital, mefobarbital, metarbital, metohexital, pentobarbital, fenobarbital, secobarbital, talbutal, teamilal o tiopental o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos;
(iv) una benzodiazepina que tenga una acción sedante, por ejemplo, clordiazepóxido, clorazepato, diazepam, flurazepam, lorazepam, oxazepam, temazepam o triazolam o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos;
(v) un antagonista de H1 que tenga acción sedante, por ejemplo, difenhidramina, pirilamina, prometazina, clorfeniramina o clorciclizina o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos;
(vi) un sedante como glutetimida, meprobamato, metacualona o dicloralfenazona o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos;
(vii) un relajante del músculo esquelético, por ejemplo, baclofeno, carisoprodol, clorzoxazona, ciclobenzaprina, metocarbamol u orfrenadina o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos;
(viii) un antagonista del receptor de NMDA, por ejemplo, dextrometorfano ((+)-3-hidroxi-N-metilmorfinano) o su metabolito dextrorfano ((+)-3-hidroxi-N-metilmorfinano), ketamina, memantina, pirroloquinolina quinona o ácido cis-4-(fosfonometil)-2-piperidinacarboxílico o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos;
(ix) un alfa-adrenérgico, por ejemplo, doxazosina, tamsulosina, clonidina o 4-amino-6,7-dimetoxi-2-(5-metanosulfonamido-1,2,3,4-tetrahidroisoquinol-2-il)-5-(2-piridil)quinazolina;
(x) un antidepresivo tricíclico, por ejemplo, desipramina, imipramina, amitriptilina o nortriptilina;
(xi) un anticonvulsivo, por ejemplo, carbamazepina o valproato;
(xii) un antagonista de la taquiquinina (NK), particularmente un antagonista de NK-3, NK-2 o NK-1, por ejemplo (aR,9R)-7-[3,5-bis(trifluorometil)bencil]-8,9,10,11 -tetrahidro-9-metil-5-(4-metilfenil)-7H-[1,4]diazocino[2,1-g][1,7] naftridina-6-13-diona (TAK-637), 5-[[(2R,3S)-2-[(1 R)-1 -[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etoxi-3-(4-fluorofenil)-4-morfolinil]metil]-1,2-dihidro-3H-1,2,4-triazol-3-ona (MK-869), lanepitant, dapitant o 3-[[2-metoxi-5-(trifluorometoxi) fenil]metilamino]-2-fenil- piperidina (2S,3S);
(xiii) un antagonista muscarínico, por ejemplo, oxibutina, tolterodina, propiverina, cloruro de tropsio o darifenacina;
(xiv) un inhibidor de COX-2, por ejemplo, celecoxib, rofecoxib o valdecoxib;
(xv) un inhibidor de COX no selectivo (preferiblemente con protección GI), por ejemplo, nitroflurbiprofeno (HCT-1026);
(xvi) un analgésico de alquitrán de hulla, en particular paracetamol;
(xvii) un neuroléptico como droperidol;
(xviii) un agonista (por ejemplo, resinferatoxina) o antagonista (por ejemplo, capsazepina) del receptor vainlloide; (xix) un beta-adrenérgico como propranolol;
(xx) un anestésico local, como mexiletina;
(xxi) un corticoesteroide, como dexametasona;
(xxii) un agonista o antagonista del receptor de serotonina;
(xxiii) un analgésico colinérgico (nicotínico);
(xxiv) tramadol;
(xxv) un inhibidor de PDEV, como sildenafilo, vardenafilo o taladafilo;
(xxvi) un ligando alfa-2-delta como gabapentina o pregabalina;
(xxvii) un canabinoide; y
(xxviii) un antidepresivo, como amitriptilina (Elavil®), trazodona (Desyrel®) e imipramina (Tofranil®) o anticonvulsivos como fenitoína (Dilantin®) o carbamazepina (Tegretol®).
Ejemplos
Ejemplo 1: modelo de dolor visceral
Este ejemplo ilustra el efecto del tratamiento con anticuerpos antagonistas anti-CGRP en un modelo de dolor visceral.
Se ha demostrado que los pacientes con IBS tienen un umbral sensorial visceral más bajo para la distensión colorrectal y que esto está altamente relacionado con los síntomas de dolor visceral (Delafoy et al, 2006). La distensión colorrectal después de la colitis inducida por TNBS en ratas es un modelo animal que han usado muchos investigadores para explorar los mecanismos de hipersensibilidad visceral (Gay et al, 2006, Delafoy et al, 2006, Adam et al., 2006). En este Ejemplo, se usó el modelo de colitis de TNBS de rata para probar el efecto de un anticuerpo bloqueador de función para CGRP. En el modelo, al igual que en los estudios de IBS en humanos, el umbral del dolor visceral se mide por la respuesta a la distensión del colon con globo.
Después de ayunar durante la noche, las ratas se anestesiaron con ketamina (80 mg/ml)/xilazina (12 mg/ml) a una dosis de 1 ml/kg. Se realizó una laparotomía abdominal y se inyectó una solución de TNBS (50 mg a 1,5 ml/kg en etanol al 30%, "grupo de tratamiento con TNBS") o una solución de etanol al 30% ("grupo simulado") en el colon proximal a 1 cm distal del ciego. El grupo simulado se usó como control sin colitis. El quinto día después de la cirugía, el grupo de tratamiento con TNBS se subdividió en dos grupos. Un grupo recibió el anticuerpo monoclonal antagonista anti-CGRP 4901 (disponible comercialmente de Sigma (Missouri, US), número de producto C7113, clon N° 4901) a 10 mg/kg por vía intravenosa. El otro grupo recibió vehículo (PBS, tween 20 al 0,01%) como control negativo.
El séptimo día después de la cirugía, después de un segundo ayuno durante la noche, las ratas tratadas con TNBS que mantuvieron una pérdida de peso de no más del 11% se sometieron a prueba para determinar el umbral del dolor visceral con distensión del globo. Se insertó un globo de látex de 5 cm unido a un catéter en el colon distal con la base del globo a 5 cm del ano. El catéter se fijó a la cola con cinta para evitar el movimiento del globo. Después de un período de aclimatación de 30 minutos, el globo se infló secuencialmente desde 5 mmHg hasta 80 mmHg en intervalos de 30 segundos. La distensión del globo se detuvo en el umbral de presión requerido para provocar una postura estereotipada de dolor visceral de roedor conocida como posición alfa (ondas repetidas de contracción de la musculatura oblicua con giro hacia adentro de la pata trasera) y esto se registró como el umbral de dolor visceral.
Las ratas que se sometieron a un procedimiento simulado tenían un umbral de 36,8+/-2,6 (N=5, media+/-se) el día 7 después de la cirugía (Figura 1A). Las ratas tratadas con TNBS que recibieron el anticuerpo 4901 (10 mg/kg) el día 5 tenían un umbral de 32,3+/-4,1 (N=9) el día 7 y eran estadísticamente significativamente diferentes (ANOVA unidireccional más prueba posterior de comparación múltiple de Dunnet) desde el umbral del día 7 de ratas tratadas con TNBS que recibieron vehículo el día 5 (21,0+/-3,0, N=10) (Figura 1A). El efecto de 4901 fue comparable al antagonista del receptor de CGRP CGRP 8-37 (Figura 1B). Este resultado demostró que un anticuerpo antagonista anti-CGRP era eficaz para cambiar significativamente el umbral del dolor visceral hacia el umbral simulado, es decir, revertir el dolor, en un modelo de dolor visceral.
Ejemplo 2: Análisis de interacción y ensayo de unión
El análisis de interacción se realizó a 25° C y a 37° C en un sistema Biacore 3000™ equipado con chips sensores recubiertos con estreptavidina (SA) (Biacore AB, Uppsala, Suecia) usando tampones de ejecución estándar de Biacore (HBS-P o HBS-EP). Se capturaron CGRP a y p biotinilados humanos y de rata N-LC en celdas de flujo individuales a niveles bajos (típicamente 100 unidades de respuesta) para proporcionar las superficies de reacción, mientras que una celda de flujo no modificada sirvió como canal de referencia. Se generaron fragmentos Fab purificados de anticuerpos G1 y G2. Típicamente, los Fab se prepararon como una dilución en serie doble usando 0,5 pM como la concentración máxima y se inyectaron durante 1 minuto a 100 pl/min, permitiendo un tiempo de disociación de hasta dos horas. Las superficies se regeneraron con una mezcla de etanol al 50% v/v NaOH 25 mM para Fab de G1 y tampón de elución suave Pierce 2:1 v/v/NaCl 4 M para Fab de G2. Las inyecciones de Fab se duplicaron para demostrar que el ensayo era reproducible. Las respuestas de unión fueron doblemente referenciadas y se ajustaron globalmente a un modelo simple usando el software BiaEvaluation v. 4.0. Las afinidades se dedujeron del cociente de las constantes de velocidad cinética (Kd =koff/kon).
Los resultados para el anticuerpo G1 se expresan en la Tabla 1 a continuación. El anticuerpo G1 se une a a- y p-CGRP humanos con afinidades similares y estrechas (Kd = 163 y 155 pM, respectivamente cuando se analizan uno al lado del otro en el mismo chip a 37° C, permitiendo un tiempo de disociación de 20 minutos). El humano y el mono cynomolgus tienen secuencias idénticas; por lo tanto, los datos en humanos también se aplican a cynomolgus. G1 también se une a CGRP de rata pero discrimina entre las isoformas a y p (Kd = 2,57 nM y <150 pM, respectivamente, a 37° C).
Tabla 1
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La disociación del Fab de G1 de CGRP a-humano, p-humano y p-humano se produce muy lentamente. Como tal, la constante de disociación (koff) no puede medirse con precisión a menos que la fase de disociación se controle durante mucho tiempo. Como regla general, la respuesta de unión decae por lo menos un 5% durante el tiempo de disociación permitido para el informe de una constante de disociación precisa. Sin embargo, la monitorización de tiempos de disociación prolongados en el Biacore se ve obstaculizado por la desviación del valor de referencia, que es particularmente desafiante cuando se trabaja con las capacidades superficiales bajas requeridas para los análisis cinéticos. En este estudio, la fase de disociación se siguió durante dos horas con los a-CGRP, pero solo durante 20 minutos con los p-CGRP. Como resultado, las constantes de disociación de los p-CGRP no pueden resolverse con tanta precisión como las de los a-CGRP. Sin embargo, cuando se analizó uno al lado del otro en el mismo chip en condiciones idénticas y con un tiempo de disociación de 20 minutos, G1 tuvo virtualmente la misma cinética de unión para los CGRP a-humano/cyno, p-humano/cyno y p-rata. (Kd = 150 pM a 37° C).
Los resultados para el anticuerpo G2 se expresan en la Tabla 2. El anticuerpo G2 se une al CGRP de rata a con mayor afinidad (Kd = 0,9 nM a 25° C) que los CGRP humanos a y p (Kd = 19 nM y 20 nM respectivamente a 25° C). El CGRP de rata p que se une a G2 no se examinó en este formato de ensayo, pero mostró características de unión comparables a los CGRP humanos a y p en un formato de ensayo de orientación inversa (datos no mostrados).
Tabla 2
Figure imgf000019_0002
Se realizó un ensayo de unión para medir la IC50 del anticuerpo G1 anti-CGRP en el bloqueo de la unión del a-CGRP humano al receptor CGRP1. Se incubaron membranas (25 pg) de células SK-N-MC durante 90 minutos a 25° C en tampón de incubación (Tris-HCl 50 mM, pH 7,4, MgCl25 mM, BSA al 0,1%) que contenía 125I-humano a-CGRP 10 pM y concentraciones variables de anticuerpo anti-CGRP (0,015 nM-33 nM) en un volumen total de 1 ml. La incubación se terminó por filtración a través de un filtro de microfibras de vidrio (GF/B, 1 pm) que se había bloqueado con polietilenimina al 0,5%. La radiactividad unida a la proteína se determinó en un contador gamma. Se trazaron las curvas de respuesta a la dosis y se determinaron los valores de Ki usando la ecuación: Ki = IC5ü/(1+([ligando]/KD); donde la constante de disociación de equilibrio Kd = 8 pM para el receptor a-CGRP a CGRP1 humano como está presente en las células SK-N-MC. El valor de IC50 informado (en términos de moléculas de IgG) se convirtió en sitios de unión (multiplicándolo por 2 para tener en cuenta el hecho de que Biacore era un análisis de fragmentos Fab) para que pudiera compararse con las afinidades (Kd) determinadas por Biacore. La IC50 observada (1,8 nM) fue 23 veces mayor que la Kd observada por Biacore (42 pM) a temperatura equivalente. Este desajuste refleja una posible falta de sensibilidad del ensayo de unión.
Ejemplo 3: Modelo de dolor visceral
Este ejemplo ilustra el efecto del tratamiento con anticuerpos antagonistas anti-CGRP en un modelo de dolor visceral.
En este Ejemplo, se usó el modelo de cistitis intersticial de rata para probar el efecto de un anticuerpo bloqueador de función para CGRP. En el modelo, la hipersensibilidad visceral se midió por la motilidad de la vejiga en respuesta a la irritación de la vejiga con trementina.
Se mantuvieron ratas hembra bajo anestesia con uretano durante la cistometría y no se les permitió recuperarse. La temperatura corporal se mantuvo a 37° C mediante el uso de una sonda rectal, conectada termostáticamente a una almohadilla de calentamiento de temperatura controlada. Un grupo de ratas (n = 7) recibió el anticuerpo monoclonal antagonista anti-CGRP 4901 (disponible comercialmente de Sigma (Missouri, US), número de producto C7113, clon N° 4901) a 10 mg/kg por vía intravenosa. Otro grupo (n = 7) recibió vehículo (PBS, tween 20 al 0,01%) como control negativo.
Veinticuatro horas después de la dosificación con 4901 o vehículo, las ratas se anestesiaron y la vejiga se cateterizó transuretralmente con un tubo PE50 (1 mm OD) para permitir un llenado de 0,06 ml/min (usando una bomba de jeringuilla) de la vejiga con solución salina normal. El tubo tiene una junta en T proximal a la vejiga para permitir la monitorización de la presión de la vejiga con un transductor de presión. Se monitorizaron la presión y las contracciones durante un intervalo de 14 minutos (0,84 ml de volumen total) para determinar la motilidad de la vejiga. Después de establecer un cistometrograma de referencia, se creó irritación de la vejiga infundiendo 0,5 ml de aceite de trementina al 50% durante 1 hora. Luego, se drenó la vejiga y se realizaron pruebas posteriores de motilidad de la vejiga inmediatamente después (1 h), 3 h y 5 h después de la trementina.
Las ratas que recibieron el anticuerpo 4901 (10 mg/kg) 24 horas antes del procedimiento de cistometrograma tuvieron menos contracciones de la vejiga en todos los puntos temporales medidos en comparación con las ratas que recibieron el vehículo (Figura 2). Este resultado demostró que un anticuerpo antagonista anti-CGRP era eficaz para reducir la motilidad de la vejiga en respuesta a la irritación por trementina, es decir, revertir el dolor, en un modelo de dolor visceral.
Depósito de Material Biológico
Los siguientes materiales han sido depositados en la American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110-2209, USA (ATCC):
Material Anticuerpo N° Número de registro de la ATCC Fecha de depósito
pDb.CGRP.hFcGl cadena pesada G1 PTA-6867 15 de julio de 2005
pEb.CGRP.hKGI Cadena ligera G1 PTA-6866 15 de julio de 2005
El vector pEb.CGRP.hKGI es un polinucleótido que codifica la región variable de la cadena ligera G1 y la región constante kappa de la cadena ligera; y el vector pDb.CGRP.hFcGl es un polinucleótido que codifica la región variable de cadena pesada G1 y la región constante de IgG2 de cadena pesada que contiene las siguientes mutaciones: A330P331 a S330S331 (numeración de aminoácidos con referencia a la secuencia de IgG2 de tipo salvaje; ver Eur. J. Immunol., 1999, 29:2613-2624).
Estos depósitos se realizaron en virtud de las disposiciones del Tratado de Budapest sobre el Reconocimiento Internacional del Depósito de Microorganismos a efectos de Procedimientos de Patentes y el Reglamento correspondiente (Tratado de Budapest). Esto asegura el mantenimiento de un cultivo viable del depósito durante 30 años a partir de la fecha del depósito. La ATCC pondrá a disposición el depósito según los términos del Tratado de Budapest, y sujeto a un acuerdo entre Rinat Neuroscience Corp. y la ATCC, que asegura la disponibilidad permanente y sin restricciones de la progenie del cultivo del depósito al público tras la emisión de la Patente de Estados Unidos pertinente o al abrirse al público cualquier solicitud de Patente de Estados Unidos o extranjera, lo que suceda primero, y asegura la disponibilidad de la progenie a una determinada por el Comisionado de Estados Unidos de Patentes y Marcas que tenga derecho a ello de acuerdo con 35 USC Sección 122 y las reglas del Comisionado de conformidad con la misma (incluyendo 37 CFR Sección 1.14 con referencia particular a 886 OG 638).
El cesionario de la presente solicitud ha acordado que si un cultivo de los materiales en depósito muere o se pierde o destruye cuando se cultiva en condiciones adecuadas, los materiales serán reemplazados inmediatamente después de la notificación con otro de los mismos. La disponibilidad del material depositado no debe interpretarse como una licencia para poner en práctica la invención en contravención de los derechos otorgados bajo la autoridad de cualquier gobierno de acuerdo con sus leyes de patentes.
A continuación se proporcionan secuencias de anticuerpos útiles para varias realizaciones divulgadas en la presente.
Secuencias de anticuerpos
Secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo G1 (SEQ ID NO: 1) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWISWVRQAPGKGLEVWAEIRSESDA SATHYAEAVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCLAYFDYGLAIQNYWGQG TLVTVSS
Secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo G1 (SEQ ID NO: 2) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKASKRVTTYVSWYQQKPGQAPRLLIYGASNRYLGIP ARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCSQSYNYPYTFGQGTKLEIK
Anticuerpo G1 CDR H1 (CDR extendida) (SEQ ID NO: 3)
GFTFSNYWIS
Anticuerpo G1 CDR H2 (CDR extendida, igual que Kabat CDR) (SEQ ID NO: 4) EIRSESDASATHYAEAVKG
Anticuerpo G1 CDR H3 (SEQ ID NO: 5)
YFDYGLAIQNY
Anticuerpo G1 CDR L1 (SEQ ID NO: 6)
KASKRVTTYVS
Anticuerpo G1 CDR L2 (SEQ ID NO: 7)
GASNRYL
Anticuerpo G1 CDR L3 (SEQ ID NO: 8)
SQSYNYPYT
Secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo G1 (SEQ ID NO: 9)
G AAGTT C AGCT GGTT G AAT CCGGT GGTGGT CT GGTT CAGCCAGGTGGTT CC
CT GCGT CT GT CCT GCGCT GCTTCCGGTTT CACCTTCT CCAACTACTGGAT CT
CCTGGGTTCGTCAGGCTCCTGGTAAAGGTCTGGAATGGGTTGCTGAAATCC
GTT CCGAAT CCG ACGCGT CCGCT ACCCATT ACGCT GAAGCT GTT AAAGGT C
GTTT CACCAT CT CCCGT GACAACGCTAAGAACT CCCT GT ACCT GCAGAT GAA
CTCCCT GCGTGCT GAAGACACCGCT GTTT ACT ACT GCCTGGCTT ACTTT GAC
TACGGTCTGGCTATCCAGAACTACTGGGGTCAGGGTACCCTGGTTACCGTT
TCCTCC
Secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo G1 (SEQ ID NO: 10)
GAAAT CGTT CT GACCCAGT CCCCGGCTACCCT GT CCCT GTCCCCAGGT GAA
CGTGCTACCCTGTCCTGCAAAGCTTCCAAACGGGTTACCACCTACGTTTCCT
GGTACCAGCAGAAACCCGGTCAGGCT CCT CGT CT GCT GAT CTACGGTGCTT
CCAACCGTTACCTCGGTATCCCAGCTCGTTTCTCCGGTTCCGGTTCCGGTA
CCGACTT CACCCT GACCAT CT CCT CCCTGGAACCCGAAGACTT CGCT GTTT A
CT ACT GCAGT CAGTCCTAC AACT ACCCCT ACACCTT CG GT CAG G GT ACCAAA
CTG GAAAT CAA A
Secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de la cadena pesada del anticuerpo G1 (incluyendo la IgG2 modificada como se describe en la presente) (SEQ ID NO: 11) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWISWVRQAPGKGLEWVAEIR SESDASATHYAEAVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCLAYFDYGL AIQNYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSN TKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDV SHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKE YKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
Secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de la cadena ligera del anticuerpo G1 (SEQ ID NO: 12) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKASKRVTTYVSWYQQKPGQAPRLLIYGASNR YLGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCSQSYNYPYTFGQGTKLEIKRT VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQES VTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Secuencia de nucleótidos del anticuerpo completo de la cadena pesada del anticuerpo G1 (incluyendo la IgG2 modificada como se describe en la presente) (SEQ ID NO: 13)
GAAGTTCAGCTGGTT GAATCCGGTGGTGGTCTGGTT CAGCCAGGT GGTT CC CT GCGT CT GT CCT GCGCT GCTT CCGGTTT CACCTT CT CCAACTACT GGAT CT CCTGGGTTCGTCAGGCTCCTGGTAAAGGTCTGGAATGGGTTGCTGAAATCC GTT CCGAAT CCGACGCGT CCGCT ACCCATT ACGCT GAAGCT GTT AAAGGT C GTTT CACCAT CTCCC GT G ACAACG CTAAG AACT CCCTGTACCT GCAG AT G AA CTCCCT GCGTGCT GAAGACACCGCT GTTT ACT ACTGCCTGGCTT ACTTT GAC TACGGTCTGGCTATCCAGAACTACTGGGGTCAGGGTACCCTGGTTACCGTT TCCTCCGCCTCCACCAAGGGCCCATCT GT CTT CCCACTGGCCCCAT GCT CC CGCAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTA CTT CCCAGAACCT GT GACCGT GT CCTGGAACT CTGGCGCT CT GACCAGCGG CGT GCACACCTT CCCAGCT GTCCT GCAGT CCT CAGGT CT CT ACT CCCT CAG CAGCGTGGT GACCGT GCCAT CCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCT GCAACGTAGATCACAAGCCAAGCAACACCAAGGTCGACAAGACCGTGGAG AGAAAGT GTT GT GTGGAGT GT CCACCTT GTCCAGCCCCT CCAGTGGCCGGA CCAT CCGT GTT CCT GTT CCCT CCAAAGCCAAAGGACACCCT GAT GAT CT CCA GAACCCCAGAGGT GACCT GT GT GGTGGTGGACGT GT CCCACGAGGACCCA GAGGTGCAGTTCAACTGGTATGTGGACGGAGTGGAGGTGCACAACGCCAA GACCAAGCCAAGAGAGGAGCAGTTCAACTCCACCTTCAGAGTGGTGAGCGT GCT GACCGTGGT GCACCAGGACTGGCT GAACGGAAAGGAGTATAAGT GTA AGGT GT CCAACAAGGGACT GCCAT CCAGCATCGAGAAGACCATCT CCAAGA CCAAGGGACAGCCAAGAGAGCCACAGGTGTATACCCTGCCCCCATCCAGA GAGGAGAT GACCAAGAACCAGGT GT CCCT GACCT GT CT GGT GAAGGGATTC TATCCATCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCCAACGGACAGCCAGAGAA CAACTATAAGACCACCCCTCCAAT GCT G GACT CCGACGGAT CCTT CTT CCT G TATT CCAAGCT GACCGT G G ACAAGT CCAG AT G GCAGCAG G GAAAC GTGTTC TCTTGTTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTATACCCAGAAGAGC CTGTCCCTGTCTCCAGGAAAGTAA
Secuencia de nucleótidos del anticuerpo completo de la cadena ligera del anticuerpo G1 (SEQ ID NO: 14) GAAATCGTT CT GACCCAGT CCCCGGCT ACCCT GT CCCT GT CCCCAGGT GAA CGTGCTACCCTGTCCTGCAAAGCTTCCAAACGGGTTACCACCTACGTTTCCT GGTACCAGCAGAAACCCGGTCAGGCTCCTCGTCTGCTGATCTACGGTGCTT CCAACCGTTACCTCGGTATCCCAGCTCGTTTCTCCGGTTCCGGTTCCGGTA CCGACTT CACCCT G ACCAT CT CCT CCCTGGAACCCGAAGACTT CGCT GTTT A CT ACT GCAGTCAGTCCT ACAACT ACCCCT ACACCTT CGGTCAGGGT ACCAA ACTGGAAAT CAAACGCACT GTGGCT GCACCAT CT GT CTT CAT CTT CCCT CCA T CT GAT GAGCAGTT G AAAT CCGGAACT GCCT CT GTT GT GT GCCT GCT GAAT A ACTTCTATCCGCGCGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCC AATCCGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGC ACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAA CACAAAGTCT ACGCCT GCG AAGT CACCCAT CAGGGCCT GAGTT CT CCAGT C ACAAAGAGCTTCAACCGCGGTGAGTGCTAA
Comparación de secuencias de aminoácidos de CGRP humano y de rata (a-CGRP humano (SEQ ID NO: 15); p-CGRP humano (SEQ ID NO: 16); a-CGRP de rata (SEQ ID NO: 17); y p- CGRP (SEQ ID NO: 18)):
NH2-ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF-CONH2 (SEQ ID NO: 15)
NH2-ACNTATCVTHRLAGLLSRSGGMVKSNFVPTNVGSKAF-CONH2 (SEQ ID NO: 16)
NH2-SCNTACVTHRLAGLLSRSGGVVKDNFVPTNVGSEAF-CONH2 (SEQ ID NO: 17)
NH2-SCNTACVTHRLAGLLSRSGGVVKDNFVPTNVGSKAF-CONH2 (SEQ ID NO: 18)
Secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo G2 (SEQ ID NO: 19) EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSSVMHVWKQKPGQGLEWIGYIN PYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCAKGGNDGY WGQGTTLTVSS
Secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo G2 (SEQ ID NO: 20) EIVLTQSPTTMAASPGEKITITCSASSSISSIYLHWYQQKPGFSPKVLIYRASNLA SGVPARFSGSGSGTSYSLTIGTMEAEDVATYYCQQGSTIPFTFGSGTKLEIK
Anticuerpo G2 CDR H1 (Kabat CDR) (SEQ ID NO: 21)
SSVMH
Anticuerpo G2 CDR H2 (CDR extendida) (SEQ ID NO: 22)
YINPYNDGTKYNEKFKG
Anticuerpo G2 CDR H3 (SEQ ID NO: 23)
GGNDGY
Anticuerpo G2 CDR L1 (SEQ ID NO: 24)
SASSSISSIYLH
Anticuerpo G2 CDR L2 (SEQ ID NO: 25)
RASNLAS
Anticuerpo G2 CDR L3 (SEQ ID NO: 26)
QQGSTIPFT
Secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo G2 (SEQ ID NO: 27) GAGGTCCAGCTGCAGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTAAAGCCTGGGGCTTC AGT GAAGAT GT CCT GCAAGGCTT CTGGATACACATT CACT AGCT CT GTTAT G CACT G G GT G AAGCAG AAGCCT G G GC AG G GCCTT G AGT G G ATT G G AT ATATT AAT CCTT ACAAT G AT G GTACTAAGTACAAT GAG AAGTT CAAAG G CAAG GCCA CACTGACTTCAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGGAACTCAGCAGCC TGACCTCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAAAGGGGGTAACGATG GCT ACT G GGGCCAAGGCACT ACT CT CACAGT CT CCT CA
Secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo G2 (SEQ ID NO: 28) GAAATT GT GCT CACCCAGT CT CCAACCACCATGGCT GCAT CT CCCGGGGAG AAG AT CACT AT CACCT GT AGT GCC AGCT CAAGT ATAAGTT CCATTTACTT GC ATT G GTAT CAGCAG AAGCCAG G ATT CTCCCCT AAAGT CTT G ATTTATAG GGC ATCCAATCTGGCTTCTGGAGTCCCAGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGG G ACCT CTTACT CT CT CACAATT G GCACCAT G G AG GCT G AAG AT GTT GCCACT TACTACTGCCAGCAGGGTAGTACTATACCATTCACGTTCGGCTCGGGGACA AAGTTGGAAATAAAA
Secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de la cadena pesada del anticuerpo G2 (sin incluir el dominio Fc) (SEQ ID NO: 29) EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSSVMHWVKQKPGQGLEWIGYIN PYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCAKGGNDGY WGQGTTLTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWN SGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDK KIVPRD
Secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de la cadena ligera del anticuerpo G2 (SEQ ID NO: 30) EIVLTQSPTTMAASPGEKITITCSASSSISSIYLHWYQQKPGFSPKVLIYRASNLA SGVPARFSGSGSGTSYSLTIGTMEAEDVATYYCQQGSTIPFTFGSGTKLEIKRA DAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPRDINVKWKIDGSERQNGVLNS WTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
Secuencia de nucleótidos del anticuerpo completo de la cadena pesada del anticuerpo G2 (sin incluir el dominio Fc) (SEQ ID NO: 31)
GAGGTCCAGCTGCAGCAGTCTGGACCTGAGCTGGTAAAGCCTGGGGCTTC AGT GAAGAT GTCCT GCAAGGCTTCT GGATACACATTCACTAGCTCT GTTAT G CACTGGGT GAAGCAGAAGCCTGGGCAGGGCCTT GAGT GGATTGGATATATT AAT CCTTACAAT G AT G GT ACT AAGT ACAAT G AGAAGTT CAAAG GCAAG GCCA CACTGACTTCAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGGAACTCAGCAGCC T GACCTCT GAGGACT CT GCGGT CTATTACT GT GCAAAAGGGGGTAACGAT G GCTACTGGGGCCAAGGCACTACTCTCACAGTCTCCTCAGCCAAAACGACAC CCCCAT CT GT CT AT CCACTGGCCCCTGGAT CT GCT GCCCAAACT AACT CCAT GGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGT GACCTGGAACT CT G GAT CCCT GT CCAGCGGT GTGCACACCTT CCCAGCT GT CCT GCAGT CT GACCT CT ACACT CT GAGCAGCT CAGT GACT GT CCCCT CCAG CACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCA GCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGAT
Secuencia de nucleótidos del anticuerpo completo de la cadena ligera del anticuerpo G2 (SEQ ID NO: 32) GAAATT GT GCT CACCCAGT CT CCAACCACCATGGCT GCAT CT CCCGGGGAG AAGAT CACTAT CACCT GT AGT GCC AGCT CAAGTATAAGTT CCATTT ACTT GC ATT G GTAT CAGCAG AAGCCAG G ATT CTCCCCT AAAGT CTT G ATTT AT AG G GC AT CCAAT CT GGCTT CT GGAGT CCCAGCT CGCTT CAGTGGCAGT GGGTCTGG GACCT CTTACT CT CTCACAATT GGCACCATGGAGGCT GAAGAT GTT GCCACT TACTACTGCCAGCAGGGTAGTACTATACCATTCACGTTCGGCTCGGGGACA AAGTT GGAAAT AAAACGGGCT GAT GCT GCACCAACT GT AT CCAT CTT CCCAC CAT CCAGT GAGCAGTTAACAT CT GGAGGT GCCT CAGTCGT GT GCTT CTT GA ACAACTT CT ACCCCAGAG ACAT CAAT GT CAAGT G G AAG ATT G ATGGCAGTG AACGACAAAATGGT GT CCT GAACAGTTGGACT GAT CAGGACAGCAAAGACA GCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACATTGACCAAGGACGAGTATGAAC G ACAT AACAGCTATACCTGT GAG GCCACT CACAAG ACAT CAACTT C ACCCAT CGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAA
Anticuerpo G1 CDR H1 (Chothia CDR) (SEQ ID NO: 33)
GFTFSNY
Anticuerpo G1 CDR H1 (Kabat CDR) (SEQ ID NO: 34)
NYWIS
Anticuerpo G1 CDR H2 (Chothia CDR) (SEQ ID NO: 35)
RSESDASA

Claims (11)

REIVINDICACIONES
1. Un anticuerpo antagonista anti-CGRP para su uso en la prevención y/o tratamiento del dolor visceral y/o los síntomas del dolor visceral en un individuo, en donde el anticuerpo antagonista anti-CGRP no se administra por vía intratecal, y en donde el dolor visceral está asociado con la cistitis intersticial (IC).
2. El anticuerpo antagonista anti-CGRP para el uso de acuerdo con la Reivindicación 1, en donde el anticuerpo antagonista anti-CGRP se une a CGRP con una Kd de 50 nM o menos (medido por resonancia de plasmones de superficie a 37° C); y/o tiene una vida media in vivo de por lo menos 7 días.
3. El anticuerpo antagonista anti-CGRP para el uso de acuerdo con la Reivindicación 1 o 2, en donde el anticuerpo antagonista anti-CGRP se une específicamente a la región C-terminal de CGRP.
4. El anticuerpo antagonista anti-CGRP para el uso de acuerdo con cualquier Reivindicación anterior, en donde el anticuerpo antagonista anti-CGRP reconoce específicamente el epítopo definido por la secuencia GSKAF (SEQ ID NO: 39).
5. El anticuerpo antagonista anti-CGRP para el uso de acuerdo con cualquier Reivindicación anterior, en donde el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende un dominio VH que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 1.
6. El anticuerpo antagonista anti-CGRP para el uso de acuerdo con cualquier Reivindicación anterior, en donde el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende un dominio VL que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 2.
7. El anticuerpo antagonista anti-CGRP para el uso de acuerdo con cualquier Reivindicación anterior, en donde el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende por lo menos una CDR seleccionada del grupo que consiste de: (a) CDR H1 como se expone en la SEQ ID NO: 3;
(b) CDR H2 como se expone en la SEQ ID NO: 4;
(c) CDR H3 como se expone en la SEQ ID NO: 5;
(d) CDR L1 como se expone en la SEQ ID NO: 6;
(e) CDR L2 como se expone en la SEQ ID NO: 7; y
(f) CDR L3 como se expone en la SEQ ID NO: 8.
8. El anticuerpo antagonista anti-CGRP para el uso de acuerdo con cualquier Reivindicación anterior, en donde el anticuerpo antagonista anti-CGRP se produce mediante vectores de expresión con los N° de Registro de la ARCC PTA-6867 y/o PTA-6866.
9. El anticuerpo antagonista anti-CGRP para el uso de acuerdo con cualquier Reivindicación anterior, en donde el anticuerpo antagonista anti-CGRP comprende:
la secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de la cadena pesada del anticuerpo G1 que se muestra en la SEQ ID NO: 11, con o sin la lisina C-terminal; y
la secuencia de aminoácidos del anticuerpo completo de la cadena ligera del anticuerpo G1 que se muestra en la SEQ ID NO: 12.
10. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento y/o prevención del dolor visceral y/o los síntomas del dolor visceral en un individuo, que comprende un anticuerpo antagonista anti-CGRP y un portador farmacéuticamente aceptable en donde la composición no se administra por vía intratecal, y en donde el dolor visceral está asociado con la cistitis intersticial (IC).
11. El uso de un anticuerpo antagonista anti-CGRP para la fabricación de un medicamento para la prevención y/o tratamiento del dolor visceral y/o los síntomas del dolor visceral, en donde el anticuerpo antagonista anti-CGRP no se administra por vía intratecal, y en donde el dolor visceral está asociado con la cistitis intersticial (IC).
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