ES2924933T3 - Derivados de piridina y usos terapéuticos de los mismos como inhibidores de TRPC6 - Google Patents

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Hidenori Takahashi
Michael Robert Turner
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Abstract

La invención se refiere a nuevos compuestos que tienen actividad inhibidora de TRPC6 y sus sales farmacéuticamente aceptables. La invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos, usando estos compuestos en el tratamiento de varias enfermedades y trastornos, procesos para preparar estos compuestos e intermedios útiles en estos procesos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Derivados de piridina y usos terapéuticos de los mismos como inhibidores de TRPC6
Campo de la invención
La presente invención se refiere a compuestos y composiciones farmacéuticos, y a su uso en métodos para el tratamiento de estados cardiacos y respiratorios, enfermedad renal, enfermedad hepática, distrofia muscular, trastornos fibróticos, dolor, isquemia o lesión por reperfusión isquémica, y cáncer, así como para la inhibición del canal iónico receptor de potencial transitorio C6 (TRPC6).
Antecedentes
Existen una variedad de proteínas de canales iónicos para mediar en el flujo de iones a través de las membranas celulares. La expresión y la función apropiadas de las proteínas de canales iónicos son esenciales para el mantenimiento de la función celular, la comunicación intracelular, y similares. Un aspecto importante para lograr la homeostasis celular es el mantenimiento de concentraciones de iones apropiadas en diversos tipos de células durante el desarrollo y en respuesta a numerosos estímulos. Un gran número de diversos tipos de canales iónicos actúan para mantener la homeostasis celular moviendo los iones al interior y fuera de las células a través de la membrana plasmática, y moviendo, dentro de las células, los iones a través de las membranas de orgánulos intracelulares incluyendo, por ejemplo, el retículo endoplásmico, el retículo sarcoplásmico, las mitocondrias y los orgánulos endocíticos incluyendo los endosomas y los lisosomas. Numerosas enfermedades son el resultado de la desregulación del potencial de membrana o de la manipulación aberrante del calcio. Dada la importancia central de los canales iónicos en la modulación del potencial de membrana y del flujo de iones en las células, la identificación de agentes que puedan fomentar o inhibir canales iónicos particulares es de gran interés como herramientas de investigación y como posibles agentes terapéuticos.
Uno de tales canales es el canal receptor de potencial transitorio C6 (TRPC6). El TRPC6 pertenece a la familia más grande de canales iónicos TRP (véase, Desai et al., 2005 Eur J Physiol 451:11-18; Clapham et al., 2001 Nat Neurosci 2:387-396; Clapham, 2003 Nature 426: 517-524; Clapham et al., 2002 IUPHAR Compendium). El TRPC6 es un canal permeable al calcio, específicamente un canal catiónico permeable al calcio no selectivo. Además de los iones de calcio, los canales TRPC6 son permeables a otros cationes, por ejemplo, al sodio. Por tanto, los canales TRPC6 modulan no sólo la concentración de calcio intracelular, sino también el potencial de membrana, modulando el flujo de cationes incluyendo los iones de calcio y sodio. Aunque los canales catiónicos no selectivos tales como TRPC6 modulan, entre otras cosas, el flujo de iones de calcio, son mecanísticamente distintos de los canales de calcio dependientes del voltaje. Generalmente, los canales de calcio dependientes del voltaje responden a la despolarización de la diferencia de potencial a través de la membrana y pueden abrirse para permitir un flujo de entrada de calcio desde el medio extracelular y un rápido aumento en los niveles o las concentraciones de calcio intracelular. En cambio, los canales catiónicos no selectivos tales como TRPC6 dependen generalmente de la transducción de señales, son de larga duración y producen cambios menos rápidos en la concentración de iones. Muestran una actividad aumentada en respuesta a la producción del segundo mensajero, el diacilglicerol (Hofmann et al., 1999). Además, el TRPC6 puede responder a cambios en la presión. Estas diferencias mecanísticas están acompañadas por diferencias estructurales entre los canales dependientes del voltaje y los canales permeables a cationes. Por tanto, aunque muchos canales diversos actúan para regular el flujo de iones y el potencial de membrana en diversos tipos de células y en respuesta a numerosos estímulos, es importante reconocer las diferencias estructurales, funcionales y mecanísticas significativas entre las diferentes clases de canales iónicos.
La función de TRPC6 se ha implicado en, entre otras cosas, la modulación del tono miogénico. El TRPC6 presenta una alta expresión en células de músculo liso, células de músculo liso vascular, miocardiocitos, arterias pulmonares, la aorta, el corazón, el hígado, el cerebro y el riñón. La expresión de TRPC6, junto con experimentos llevados a cabo en ratones con genes inactivados y células en cultivo, sugieren que el TRPC6 puede proporcionar una diana útil para el tratamiento de hipertensión y otros estados cardiacos y vasculares, preeclampsia.
La mutación en el canal TRPC6 humano puede provocar glomeruloesclerosis focal y segmentaria (GEFS) (Winn et al., 2005, Reiser et al., 2005). Estas mutaciones, que se notifica que son de ganancia de función (Reiser et al., 2005), son suficientes para inducir la enfermedad. Además, la expresión elevada de TRPC6 se ha asociado con el síndrome nefrótico, la enfermedad de cambios mínimos y la nefropatía diabética (Moller et al., 2006, Ilatovskaya et al., 2013, Thilo et al., 2011)., u otros estados renales.
Basándose en su expresión y en el trabajo que lo implica en la señalización de TGF-B, también se piensa que el TRPC6 es importante en estados respiratorios, reestenosis, enfermedad hepática, distrofia muscular, trastornos fibróticos, dolor, isquemia y lesión por reperfusión isquémica, y determinadas formas de cáncer.
Yue et al. estudiaron los canales TRPC6 por su papel en la mediación de la proliferación de células de músculo liso de la arteria pulmonar, lo que puede conducir a hipertensión arterial pulmonar idiopática (HAPI). La hipertrofia medial vascular pulmonar provocada por un exceso de proliferación de células de músculo liso de la arteria pulmonar (PASMC) es una causa principal de la resistencia vascular pulmonar elevada en pacientes con HAPI. Los autores hallaron que la expresión del TRPC6 era alta y que la expresión del TRPC3 era mínima en PASMC de tejido pulmonar sano. Sin embargo, en tejido pulmonar de pacientes con HAPI, la expresión de ARNm y proteínas de TRPC3 y TRPC6 se elevó significativamente en comparación con la de pacientes normotensos. Además, la proliferación de células PASMC derivadas de pacientes con HAPI se redujo notablemente tras la incubación con ARNip de TRPC6. Basándose en estos resultados, los autores concluyeron que el TRPC6 puede ser importante en la mediación de la proliferación de PASMC apropiada, y que la desregulación de TRPC6 puede conducir a una proliferación de PASMC aumentada y a hipertrofia medial vascular pulmonar observada en pacientes con HAPI (Yu et al., 2004 Proc Natl Acad Sci 101(38):13861-6). Se proporciona un respaldo adicional mediante la observación de que, en pacientes con HAPI, la frecuencia de un polimorfismo de un solo nucleótido en el promotor de TRPC6 que aumenta la expresión era significativamente mayor en comparación con sujetos normales (Yue, et al., 2009 Circulation 119: 2313-22).
Evidencias adicionales que implican la desregulación TRPC6 en HAPI provienen de estudios del bosentán, un bloqueador del receptor de endotelina dual que se ha usado clínicamente para tratar la HAPI. Este inhibidor disminuye la proliferación de PASMC, pero el mecanismo por el cual se produce no está claro. Curiosamente, el bosentán disminuye tanto la proliferación de PASMC como la expresión de TRPC6 en tejido pulmonar de pacientes con HAPI (Kunichika et al., 2004 Am J Respir Crit Care Med 170(10):1101-7).
La exposición prolongada al humo de cigarrillos (CS) en ratas dio como resultado un aumento en la expresión de ARNm y proteínas de TRPC6 en arterias pulmonares distales y se observaron efectos similares usando PASMC in vitro. El tratamiento con nicotina de PASMC de rata cultivadas reguló por incremento la expresión de TRPC6 y aumentó los niveles de calcio intracelular, ambos de los cuales se redujeron por el silenciamiento del ARNip de TRPC6 (Wang et al., 2014 Am J Physiol Cell Physiol 306:C364-73). Estos resultados sugieren un papel para el TRPC6 en la lesión pulmonar inducida por CS.
Las evidencias respaldan el papel del TRPC6 en trastornos pulmonares adicionales. En macrófagos alveolares de pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), se halló que la expresión de TRPC6 se elevaba en comparación con controles (Finney-Hayward et al., 2010 Am J Respir Cell Mol Biol 43:296-304). En células epiteliales con fibrosis quística humanas, el flujo de entrada de calcio mediado por TRPC6 aumenta de manera anómala y puede contribuir a la hipersecreción de moco. El ARNip-TRPC6 pudo reducir este flujo de entrada de calcio anómalo (Antigny et al. 2011 Am J Resp Cell Mol Biol, 44:83-90). En fibroblastos pulmonares de ratón, la actividad profibrótica de PDg F depende de la activación de TRPC6, lo que sugiere que la inhibición de TRPC6 reduciría la fibrosis pulmonar (Lei et al., 2014 Biomaterials 35:2868-77). Se demostró un papel del TRPC6 en la función de células endoteliales pulmonares en modelos de pulmón de ratón de edema inducido por isquemia-reperfusión e inflamación inducida por lipopolisacáridos en los que la deficiencia en TRPC6 pudo reducir la lesión pulmonar aguda conservando la función de barrera endotelial (Weissmann et al., 2011 Nat Comm, 3:649-58 y Tauseef et al., 2012 J Exp Med 209:1953-68).
Estudios recientes también implican el papel del TRPC6 en otros estados cardiacos, incluyendo hipertrofia cardiaca. Los corazones de pacientes con miocardiopatía dilatada tienen una expresión de ARNm de TRPC6 elevada en comparación con corazones normales (Kuwahara et al., 2006 J Clin Invest 116:3114-26). En modelos de ratón de hipertrofia cardiaca, los niveles de ARNm cardiaco de TRPC6 se elevan por sobrecarga de presión (Kuwahara et al., 2006 J Clin Invest 116:3114-26), tratamiento prolongado con isoproterenol (Xie et al., 2012 Nat Commun 3:1238) y miocardiopatía urémica inducida por nefrectomía parcial (Xie et al., 2015 J Am Soc Nephrol 26:1150-60). Además, la sobreexpresión específica del corazón de TRPC6 en los miocardiocitos de ratones transgénicos indujo hipertrofia cardiaca y muerte prematura (Kuwahara et al., 2006 J Clin Invest 116:3114-26).
Wu y colaboradores hallaron que los ratones transgénicos que expresan TRPC6 negativo dominante de manera específica del corazón tenían una respuesta hipertrófica cardiaca atenuada o bien tras una infusión de agonista neuroendocrino o bien tras una simulación de sobrecarga de presión, lo que indica que el TRPC6 es un componente de los complejos de canales que son mediadores esenciales de la hipertrofia (Wu et al., 2010 Proc Natl Acad Sci.
107:7000-05). Recientemente también han comenzado a mostrarse que los fármacos de molécula pequeña que seleccionan como diana TRPC6 son prometedores en el tratamiento de estados cardiacos. Por ejemplo, Seo y colaboradores demostraron que los antagonistas de TRPC6 y TRPC3 (GSK2332255B y GSK833503A) presentaban una inhibición dependiente de la dosis de la señalización de hipertrofia celular en miocardiocitos de neonatales y adultos (Seo et al., 2014 Proc Natl Acad Sci 111:1551-1556). De manera similar, los ratones deficientes en TRPC6 estaban protegidos frente a hipertrofia cardiaca inducida por isoproterenol (Xie et al., 2012 Nat Commun 3:1238).
La reducción de la actividad de TRPC6 puede ser beneficiosa para el tratamiento de enfermedad cardiovascular. In vitro, la tensión de cizalladura de la ateroprona induce niveles de ARNm de TRPC6 aumentados en células endoteliales (EC) vasculares humanas en comparación con condiciones de flujo ateroprotectoras (Thilo, et al., 2012 Hypertension 59:1232-40). La migración de EC es importante para la curación después de una lesión arterial, y se previno in vitro la inhibición mediada por lisofosfatidilcolina de la migración de EC en células de ratones deficientes en TRPC6. Además, una dieta de alto contenido en colesterol combinada con una lesión de la carótida no afectó a la curación en ratones deficientes en TRPC6 en comparación con controles de tipo natural (Rosembaum et al., 2015 J Vasc Surg 62:1040-47 y Chaudhuri et al., 2008 Mol Biol Cell 19: 3203-11). De manera similar, la lesión inducida por dilatación con globo de arterias mamarias internas humanas ex vivo dio como resultado niveles de ARNm de TRPC6 aumentados en comparación con arterias no dilatadas (Bergdahl et al., 2005 Am J Physiol Cell Physiol 288:C872-80). La apoptosis de células endoteliales está implicada en el inicio y la progresión de lesiones ateroescleróticas, y se demostró que la apoptosis inducida por lipoproteínas de baja densidad oxidadas de EC aórticas humanas dependía de TRPC6 (Zhang et al., 2015 Sci Rep 5:9401-10). En un modelo de rata de isquemia prosencefálica, los niveles de ARNm de TRPC6 se aumentaron en SMC vasculares y se correlacionaron con un flujo sanguíneo cerebral reducido (Johannson et al., 2015 Acta Physiol 214:376-89).
Los estudios de Reiser, Winn y Schlondorff identificaron que las mutaciones en TRPC6 en pacientes son las causantes de la GEFS (Reiser et al., 2005 Nature Genet 37:739-744; Winn et al., 2005 Science 308:1801-1804; Schlondorff et al., 2009 Am J Physiol Cell Physiol 296:C558-69). Estudios posteriores identificaron mutaciones de TRPC6 adicionales asociadas con el síndrome nefrótico resistente a los esteroides (C. Sadowski et al., 2014 J Am Soc Nephrol 26:1279-89). Estudios adicionales demostraron que el TRPC6 es importante en la función normal de podocitos controlando el flujo de entrada de calcio y el factor nuclear de activación de células T activadas en el que la corriente elevada a través del canal está asociada con la lesión renal y la inducción de proteinuria (Moller et al., 2007 J Am Soc Nephrol 18:29-36 y Schlondorff et al., 2009 Am J Physiol Cell Physiol 296:C558-69). Además de las mutaciones de ganancia de función, se ha demostrado que la expresión de TRPC6 es elevada en enfermedades renales crónicas humanas incluyendo GEFS, enfermedad de cambios mínimos, glomerulonefritis membranosa y nefropatía diabética (Moller et al., 2007 J Am Soc Nephrol 18:29-36 y Thilo et al., 2011 Nephrol. Dial. Transplant 27:921-9), así como en modelos de ratón de lesión de podocitos (Moller et al., 2007 J Am Soc Nephrol 18:29-36). Se ha demostrado que los ratones deficientes en TRPC6 tienen albuminuria inducida por angiotensina II (Ang II) reducida (Eckel et al., 2011 J Am Soc Nephrol 22:526-35), mientras que la expresión específica de podocitos transgénicos de mutaciones de ganancia de función (GoF) humanas en ratones induce albuminuria y lesiones glomerulares (Krall et al., 2010 PLoS ONE e12859 y Canales et al., 2015 Brit J Medicine Med Res 5:1198-1212). En consecuencia, la inhibición de TRPC6 puede ser útil en el tratamiento de enfermedades renales crónicas. Estos hallazgos no sólo sugieren que el TRPC6 funciona normalmente para mantener una función renal apropiada, sino que también implica al TRPC6 como causa específica de al menos determinados casos de GEFS. Basándose en el posible papel del TRPC6 en la función renal, pueden usarse compuestos inhibidores de TRPC6 en el tratamiento o la mejora de enfermedades o estados renales crónicos provocados (en su totalidad o en parte) por la disfunción de TRPC6. Además, pueden usarse compuestos inhibidores de TRPC6 en el tratamiento o la mejora de los síntomas de enfermedades renales (por ejemplo, hipertensión, proteinuria, etc.), independientemente de la causa de la enfermedad.
El TRPC6 se expresa en el miometrio y en la placenta durante el embarazo (Ku et al., 2006 J Soc Gynecol Investig 13:217-225; Clarson et al., 2003 J Physiol 550:515-528). Como tal, el TRPc 6 puede contribuir al mantenimiento del tono miogénico apropiado en la placenta y/o al mantenimiento de la tensión arterial fetal y materna apropiada durante el embarazo.
Han surgido evidencias recientes que implican al TRPC6 en determinadas formas de cáncer. Varios grupos han establecido que la expresión de TRPC6 es elevada en células tomadas de pacientes con glioblastoma multiforme, el tipo más frecuente e incurable del cáncer de cerebro (Chigurupati, et al., 2010 Cancer Res, 70:418-427; Ding et al., 2010 J Natl Cancer Inst. 102:1052-1068). De manera similar, Ding et al. hallaron niveles elevados de TRPC6 en células de glioma humano, y la inhibición de TRPC6, farmacológicamente o con un mutante negativo dominante, suprimió el crecimiento celular in vitro. En dos modelos de xenoinjerto de gliomas humanos, la expresión mediada por lentivirus de TRPC6 negativo dominante en las células tumorales antes de la implantación subcutánea o intracraneal redujo el volumen tumoral en comparación con controles (Ding et al., J. Natl. Cancer Inst. 2010, 102, 1052-1068). También se halló que los niveles aumentados de TRPC6 estaban asociados con el cáncer de cuello uterino (Wan et al., 2012 Onco Targets Ther 5:171-176), el cáncer de mama (Dhennin-Duthille et al., 2011 Cell Physiol Biochem 28:813-822), el carcinoma de células renales (Song et al., 2013 Mol Biol Rep 40:5115-5122), el carcinoma epidermoide de cabeza y cuello (de Quiros, et al. 2013 BMC Cancer 13:116-127) y el carcinoma epidermoide de esófago (Zhang et al., 2013 Med Oncol 30:607), entre otros. En células de carcinoma hepatocelular, se demostró que la doxorrubicina, la hipoxia y la radiación ionizante aumentaron la expresión de ARNm de TRPC6, y que el TRPC6 se encuentra a niveles más altos en tejidos tumorales que en los tejidos no implicados. El TRPC6 elevado estaba asociado con la farmacorresistencia, que se disminuyó por el silenciamiento del ARN de TRPC6 in vitro. La administración mediante lentivirus de ARN de horquilla corta específico de TRPC6 a células tumorales Huh7 antes de la implantación en un modelo de xenoinjerto subcutáneo de ratón redujo el crecimiento tumoral y sensibilizó los tumores a la doxorrubicina (Wen et al., 2016 Sci Rep 6:23269). Estos hallazgos sugieren que el TRPC6 puede ser una diana terapéutica prometedora para el tratamiento del cáncer.
Las enfermedades hepáticas, incluyendo la esteatohepatitis no alcohólica, pueden tratarse reduciendo la actividad de TRPC6. La hipoxia aumentó la expresión de TRPC6 en una línea de células estrelladas hepáticas humanas en comparación con condiciones normóxicas. Usando estas células, el silenciamiento del ARN de TRPC6 reguló por disminución los transcritos para actina de músculo liso alfa y colágeno 1A1, ambos de los cuales están asociados con la fibrosis, en respuesta a la hipoxia (Iyer et al., 2015 Exp Cell Res 336:66-75).
La inhibición de TRPC6 puede proporcionar un beneficio a los pacientes con distrofia muscular de Duchenne (DMD). En el modelo mdx/utrn+/' de DMD usando miocardiocitos aislados, la deficiencia en TRPC6 restableció a la normalidad la fuerza de contractilidad estimulada por tensión y la respuesta transitoria al calcio en comparación con ratones que poseen el gen TRPC6 de tipo natural, lo que sugiere que la inhibición de TRPC6 conservará la función cardiaca en pacientes con DMD (Seo et al., 2014 Circ Res 114:823-32).
Los trastornos fibróticos pueden tratarse con inhibidores de TRPC6. La sobreexpresión de TRPC6 indujo la activación de miofibroblastos, mientras que la deleción de TRPC6 redujo la transformación de miofibroblastos inducida por el factor de crecimiento transformante beta. Además, los ratones deficientes en TRPC6 demostraron una cicatrización dérmica y cardiaca reducida (Davis et al., 2012 Dev Cell 23:705-15).
Los inhibidores de TRPC6 pueden ser útiles para el tratamiento del dolor. La administración espinal de oligonucleótidos antisentido de TRPC6 redujo la hiperalgesia inducida por estímulos mecánicos, hipotónicos y térmicos en modelos de dolor preclínicos (Alessandri-Haber et al., 2009 J Neurosci 29:6217-28).
Modular una función de TRPC6 proporciona un medio para modular la homeostasis del calcio, la homeostasis del sodio, los niveles de calcio intracelular, la polarización de membrana (potencial de membrana en reposo) y/o los niveles catiónicos en una célula. Los compuestos que pueden modular una o más de las funciones de TRPC6 son útiles en muchos aspectos, incluyendo, pero sin limitarse a, el mantenimiento de la homeostasis del calcio; el mantenimiento de la homeostasis del sodio; la modulación de los niveles de calcio intracelular; la modulación de la polarización de membrana (potencial de membrana); la modulación de los niveles catiónicos; y/o el tratamiento o la prevención de enfermedades, trastornos o estados asociados con la homeostasis del calcio, la homeostasis del sodio, la dishomeostasis del calcio o del sodio, o la polarización/hiperpolarización de membrana (incluyendo hipoexcitabilidad e hiperexcitabilidad), y/o el tratamiento o la prevención de enfermedades, trastornos o estados asociados con la regulación o desregulación de la expresión o función de TRPC6.
El documento EP 1396487 A1 divulga derivados de fenilpiridincarbonilpiperazina como inhibidores de fosfodiesterasa de tipo 4 (PDE4) para su uso en el tratamiento de asma y EPOC.
El documento WO 2016/138114 divulga derivados de piperazina como inhibidores de BRG1 (gen 1 relacionado con Brahma), BRM (modificadores de la respuesta biológica) y/o PB1 (proteína polibromo-1) para su uso en el tratamiento del cáncer.
El documento WO 2014/191336 divulga derivados de 3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona y 2,3-dihidro-2H-isoindol-1-ona como inhibidores de aldosterona sintasa para su uso en el tratamiento de enfermedad renal crónica, insuficiencia cardiaca congestiva, hipertensión, aldosteronismo primario y síndrome de Cushing.
Existe la necesidad de antagonistas de TRPC6 altamente selectivos para tratar enfermedades o trastornos que pueden aliviarse mediante la modulación de TRPC6.
Breve sumario de la invención
La presente invención proporciona nuevos compuestos que modulan TRPC6 y, por tanto, son útiles para tratar una variedad de enfermedades y trastornos que pueden aliviarse mediante la modulación de TRPC6, incluyendo hipertensión, preeclampsia, reestenosis, un estado cardiaco o respiratorio, enfermedad renal, enfermedad hepática, distrofia muscular, trastornos fibróticos, dolor, isquemia o lesión por reperfusión isquémica, y cáncer. Esta invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos, al uso de estos compuestos para el tratamiento de diversas enfermedades y trastornos, a procedimientos para preparar estos compuestos y a productos intermedios útiles en estos procedimientos.
La invención se refiere a las siguientes realizaciones:
Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:
[4-(6-amino-4-metil-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-il]-metanona,
[4-(6-amino-4-metil-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-(4-metoxi-5-fenoxi-piridin-2-il)-metanona,
[4-(6-amino-4-metoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-il]-metanona,
[4-(6-amino-4-metoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[4-metoxi-5-(4-trifluorometil-fenoxi)-piridin-2-il]-metanona,
[4-(6-amino-4-metoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[4-metoxi-5-(4-metoxi-fenoxi)-piridin-2-il]-metanona,
[4-(6-amino-4-etoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[4-metoxi-5-(fenoxi)-piridin-2-il]-metanona,
5- etoxi-6-(1-{4-metoxi-5-[4-(trifluorometil)fenoxi]piridin-2-carbonil}piperidin-4-il)piridazin-3-amina, y
6- (1-{4-metoxi-5-[4-(trifluorometil)fenoxi]piridin-2-carbonil}piperidin-4-il)-5-metilpiridazin-3-amina.
Un compuesto, que es [4-(6-amino-4-metil-piridazin-3-il)-piperidin-1-ilH5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-il]-metanona.
Un compuesto, que es [4-(6-amino-4-metil-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-(4-metoxi-5-fenoxi-piridin-2-il)-metanona. Un compuesto, que es [4-(6-amino-4-metoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-il]-metanona.
Un compuesto, que es [4-(6-amino-4-metoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[4-metoxi-5-(4-trifluorometil-fenoxi)-piridin-2-il]-metanona.
Un compuesto, que es [[4-(6-amino-4-metoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[4-metoxi-5-(4-metoxi-fenoxi)-piridin-2-il]-metanona.
Un compuesto, que es [4-(6-amino-4-etoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[4-metoxi-5-(fenoxi)-piridin-2-il]-metanona. Un compuesto, que es 5-etoxi-6-(1-{4-metoxi-5-[4-(trifluorometil)fenoxi]piridin-2-carbonil}piperidin-4-il)piridazin-3-amina.
Un compuesto, que es 6-(1-{4-metoxi-5-[4-(trifluorometil)fenoxi]piridin-2-carbonil}piperidin-4-il)-5-metilpiridazin-3-amina.
Una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los compuestos anteriores.
Una composición farmacéutica que comprende uno cualquiera de los compuestos anteriores, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, y opcionalmente un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Cualquiera de los compuestos anteriores, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o un trastorno que puede aliviarse mediante la inhibición de TRPC6, en el que la enfermedad o el trastorno se selecciona del grupo que consiste en hipertrofia cardiaca, isquemia, lesión por reperfusión isquémica, hipertensión, hipertensión arterial pulmonar, hipertensión arterial pulmonar idiopática, reestenosis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, fibrosis quística, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica (ELA), trastornos encefálicos inducidos por traumatismo, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, artrosis, enfermedad intestinal inflamatoria, esclerosis múltiple, distrofia muscular, distrofia muscular de Duchenne, preeclampsia e hipertensión inducida por el embarazo, esteatohepatitis no alcohólica, enfermedad de cambios mínimos, glomeruloesclerosis focal y segmentaria (GEFS), síndrome nefrótico, nefropatía diabética o enfermedad renal diabética (ERD), enfermedad renal crónica, insuficiencia renal, enfermedad renal de fase terminal, isquemia o una lesión por reperfusión isquémica, cáncer, FPI (fibrosis pulmonar idiopática), SDRA (síndrome de dificultad respiratoria aguda), enfisema y diabetes.
Descripción detallada de la invención
La tabla 1 muestra los compuestos de la invención que pueden prepararse mediante los esquemas de síntesis y los ejemplos mostrados en la sección de ejemplos de síntesis a continuación, y métodos conocidos en la técnica.
Tabla 1.
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En una realización, la invención se refiere a cualquiera de los compuestos representados en la tabla 1 anterior, y a las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
DEFINICIONES GENERALES
A los términos no definidos específicamente en el presente documento deben dárseles los significados que les daría un experto en la técnica a la luz de la divulgación y del contexto. Sin embargo, tal como se usa en la memoria descriptiva, a menos que se especifique lo contrario, los siguientes términos tienen el significado indicado y se cumplen las siguientes convenciones.
En caso de que un compuesto de la presente invención se represente en forma de un nombre químico y como fórmula, en caso de cualquier discrepancia prevalecerá la fórmula.
A menos que se indique específicamente, a lo largo de la memoria descriptiva y de las reivindicaciones adjuntas, un nombre o una fórmula química dada debe abarcar los tautómeros y todos los esteroisómeros, isómeros ópticos e isómeros geométricos (por ejemplo, enantiómeros, diastereómeros, isómeros E/Z etc.) y racematos de los mismos, así como mezclas en diferentes proporciones de los enantiómeros independientes, mezclas de diastereómeros o mezclas de cualquiera de las formas anteriores en las que existen tales isómeros y enantiómeros, así como sales, incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y solvatos de los mismos tales como, por ejemplo, hidratos incluyendo solvatos de los compuestos libres o solvatos de una sal del compuesto.
Pueden prepararse compuestos enantioméricamente puros de esta invención o productos intermedios a través de síntesis asimétrica, por ejemplo, mediante la preparación y la posterior separación de compuestos o productos intermedios diastereoméricos apropiados que pueden separarse mediante métodos conocidos (por ejemplo, mediante separación cromatográfica o cristalización) y/o mediante el uso de reactivos quirales, tales como materiales de partida quirales, catalizadores quirales o compuestos auxiliares quirales.
Además, el experto en la técnica sabe cómo preparar compuestos enantioméricamente puros a partir de las mezclas racémicas correspondientes, tales como mediante separación cromatográfica de las mezclas racémicas correspondientes sobre fases estacionarias quirales; o mediante resolución de una mezcla racémica usando un agente de resolución apropiado, por ejemplo, por medio de la formación de sales diastereoméricas del compuesto racémico con ácidos o bases ópticamente activos, la posterior resolución de las sales y la liberación del compuesto deseado a partir de la sal; o mediante la derivatización de los compuestos racémicos correspondientes con reactivos auxiliares quirales ópticamente activos, la posterior separación de diastereómeros y la retirada del grupo auxiliar quiral; o mediante la resolución cinética de un racemato (por ejemplo, mediante resolución enzimática); mediante la cristalización enantioselectiva a partir de un conglomerado de cristales enantiomorfos en condiciones adecuadas; o mediante la cristalización (fraccionada) a partir de un disolvente adecuado en presencia de un compuesto auxiliar quiral ópticamente activo.
La expresión “farmacéuticamente aceptable” se emplea en el presente documento para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que, dentro del alcance del juicio médico razonable, son adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación excesivos, y compatibles con una relación beneficio/riesgo razonable. Tal como se usa en el presente documento, “sal farmacéuticamente aceptable” se refiere a derivados de los compuestos divulgados en los que el compuesto original se modifica preparando sales de ácido o de base del mismo. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sales de ácidos orgánicos o minerales de residuos básicos tales como aminas; sales alcalinas u orgánicas de residuos ácidos tales como ácidos carboxílicos; y similares.
Por ejemplo, tales sales incluyen sales de ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido cítrico, ácido etanosulfónico, ácido fórmico, ácido fumárico, ácido gentísico, ácido bromhídrico, ácido clorhídrico, ácido maleico, ácido málico, ácido malónico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido 4-metilbencenosulfónico, ácido fosfórico, ácido salicílico, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido tartárico y ácido trifluoroacético.
Pueden formarse sales farmacéuticamente aceptables adicionales con cationes de amoniaco, L-arginina, calcio, 2,2'-iminobisetanol, L-lisina, magnesio, A/-metil-D-glucamina, potasio, sodio y tris(hidroximetil)-aminometano.
Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden sintetizarse a partir del compuesto original que contiene un resto básico o ácido mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, tales sales pueden prepararse haciendo reaccionar las formas de ácido o de base libre de estos compuestos con una cantidad suficiente de la base o el ácido apropiado en agua o en un diluyente orgánico tal como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo, o una mezcla de los mismos.
Sales de otros ácidos distintos de los mencionados anteriormente que, por ejemplo, son útiles para purificar o aislar los compuestos de la presente invención (por ejemplo, sales de trifluoroacetato, formiatos) también forman parte de la invención.
Muchos de los términos proporcionados anteriormente pueden usarse repetidamente en la definición de una fórmula o un grupo y, en cada caso, tienen uno de los significados proporcionados anteriormente, independientemente unos de otros.
La presente solicitud proporciona compuestos que pueden modular la función de TRPC6. También se proporcionan métodos que emplean estos compuestos. Determinadas realizaciones proporcionan una cantidad eficaz de un compuesto que inhibe una función de TRPC6 para su uso en la modulación de una función de TRPC6 en una célula o un animal, en la que el compuesto inhibe un flujo de iones mediado por TRPC6. Determinadas realizaciones proporcionan una cantidad eficaz de un compuesto que inhibe una función de TRPC6 para su uso en la modulación de una función de TRPC6 en una célula o un animal, en la que el compuesto inhibe un flujo de entrada de calcio mediado por TRPC6. Determinadas realizaciones proporcionan una cantidad eficaz de un compuesto que inhibe una función de TRPC6 para su uso en la modulación de una función de TRPC6 en una célula o un animal, en la que el compuesto inhibe una reorganización citoesquelética mediada por TRPC6 o una alteración en la morfología celular. Determinadas realizaciones proporcionan una cantidad eficaz de un compuesto que inhibe una función de TRPC6 para su uso en un método de modulación de una función de TRPC6 en una célula, en la que el compuesto inhibe la corriente saliente mediada por TRPC6. Determinadas realizaciones proporcionan una cantidad eficaz de un compuesto que inhibe una función de TRPC6 para su uso en un método de modulación de una función de TRPC6 en una célula, en la que el compuesto inhibe la corriente entrante mediada por TRPC6. Determinadas realizaciones proporcionan una cantidad eficaz de un compuesto que inhibe una función de TRPC6 para su uso en un método de modulación de una función de TRPC6 en una célula, en la que el compuesto inhibe las corrientes tanto entrante como saliente mediadas por TRPC6. Determinadas realizaciones proporcionan una cantidad eficaz de un compuesto que inhibe una función de TRPC6 para su uso en un método de modulación de una función de TRPC6 en una célula, en la que el compuesto inhibe los aumentos mediados por TRPC6 en la concentración de calcio intracelular. Determinadas realizaciones proporcionan una cantidad eficaz de un compuesto que inhibe una función de TRPC6 para su uso en un método de modulación de una función de TRPC6 en una célula, en la que el compuesto inhibe alteraciones en la morfología celular. Determinadas realizaciones también proporcionan una cantidad eficaz de un compuesto que inhibe una función de TRPC6 para su uso en un método de prevención o tratamiento de una enfermedad o un estado relacionado con la función de TRPC6 en un sujeto, en la que el compuesto inhibe la corriente entrante mediada por TRPC6. Determinadas realizaciones proporcionan una cantidad eficaz de un compuesto que inhibe una función de TRPC6 para su uso en un método de prevención o tratamiento de una enfermedad o un estado relacionado con la función de TRPC6 en un sujeto, en la que el compuesto inhibe la corriente saliente mediada por TRPC6. Determinadas realizaciones también proporcionan una cantidad eficaz de un compuesto que inhibe una función de TRPC6 para su uso en un método de prevención o tratamiento de una enfermedad o un estado relacionado con la función de TRPC6 en un sujeto, en la que el compuesto inhibe las corrientes tanto entrante como saliente mediadas por TRPC6. Determinadas realizaciones proporcionan una cantidad eficaz de un compuesto que inhibe una función de TRPC6 para su uso en un método de prevención o tratamiento de una enfermedad o un estado relacionado con la función de TRPC6 en un sujeto, en la que el compuesto inhibe el flujo de iones mediado por TRPC6. Obsérvese que la inhibición de una corriente particular se refiere a la capacidad de un compuesto para inhibir esa corriente (por ejemplo, entrante y/o saliente) en un ensayo o bien in vitro o bien in vivo. La inhibición de una corriente particular en un ensayo o bien in vivo o bien in vitro sirve como indicador para la actividad funcional particular del compuesto particular.
La presente invención proporciona una cantidad eficaz de un compuesto de la invención para su uso en métodos de tratamiento de un trastorno mediado por TRPC6 en un sujeto, en la que cada una de las variables anteriores se describen en el presente documento, por ejemplo, la descripción detallada a continuación.
La presente invención proporciona además una composición que comprende un compuesto de la invención y un excipiente, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable para su uso en un método para tratar un trastorno mediado por TRPC6 en un sujeto.
La presente invención proporciona además una composición que comprende un compuesto de la invención y un excipiente, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable para su uso en un método para tratar un trastorno mediado por TRPC6 en un sujeto, en la que el trastorno mediado por TRPC6 se selecciona del grupo que consiste en hipertrofia cardiaca, isquemia, lesión por reperfusión isquémica, hipertensión, hipertensión arterial pulmonar, hipertensión arterial pulmonar idiopática, reestenosis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, fibrosis quística, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica (ELA), trastornos encefálicos inducidos por traumatismo, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, artrosis, enfermedad intestinal inflamatoria, esclerosis múltiple, distrofia muscular, preeclampsia e hipertensión inducida por el embarazo, esteatohepatitis no alcohólica, glomeruloesclerosis focal y segmentaria, síndrome nefrótico, nefropatía diabética o enfermedad renal diabética, insuficiencia renal, enfermedad renal de fase terminal, isquemia o una lesión por reperfusión isquémica, cáncer, FPI (fibrosis pulmonar idiopática), SDRA (síndrome de dificultad respiratoria aguda), enfisema y diabetes.
A menos que se indique específicamente, a lo largo de la memoria descriptiva y de las reivindicaciones adjuntas, un nombre o una fórmula química dada debe abarcar los tautómeros y todos los esteroisómeros, isómeros ópticos e isómeros geométricos (por ejemplo, enantiómeros, diastereómeros, isómeros E/Z etc.) y racematos de los mismos, así como mezclas en diferentes proporciones de los enantiómeros independientes, mezclas de diastereómeros o mezclas de cualquiera de las formas anteriores en las que existen tales isómeros y enantiómeros, así como sales, incluyendo sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y solvatos de los mismos tales como, por ejemplo, hidratos incluyendo solvatos de los compuestos libres o solvatos de una sal del compuesto.
Algunos de los compuestos en la tabla 1 pueden existir en más de una forma tautomérica. La invención incluye métodos para usar todos de tales tautómeros.
La invención incluye derivados farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la invención. Un “derivado farmacéuticamente aceptable” se refiere a cualquier éster o sal farmacéuticamente aceptable, o cualquier otro compuesto que, tras la administración a un paciente, es capaz de proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto útil para la invención, o un metabolito farmacológicamente activo o residuo farmacológicamente activo del mismo. Debe entenderse que un metabolito farmacológicamente activo significa cualquier compuesto de la invención que puede ser metabolizado enzimática o químicamente. Este incluye, por ejemplo, compuestos de derivados hidroxilados u oxidados de la invención.
Tal como se usa en el presente documento, “sales farmacéuticamente aceptables” se refieren a derivados de los compuestos divulgados en los que el compuesto original se modifica preparando sales de ácido o de base del mismo. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sales de ácidos orgánicos o minerales de residuos básicos tales como aminas; sales alcalinas u orgánicas de residuos ácidos tales como ácidos carboxílicos; y similares. Por ejemplo, tales sales incluyen acetatos, ascorbatos, bencenosulfonatos, benzoatos, besilatos, bicarbonatos, bitartratos, bromuros/bromhidratos, edetatos, camsilatos, carbonatos, cloruros/clorhidratos, citratos, edisilatos, etanodisulfonatos, estolatos, esilatos, formiatos, fumaratos, gluceptatos, gluconatos, glutamatos, glicolatos, glicolilarsenilatos, hexilresorcinatos, hidrabaminas, hidroximaleatos, hidroxinaftoatos, yoduros, isotionatos, lactatos, lactobionatos, malatos, maleatos, mandelatos, metanosulfonatos, metilbromuros, metilnitratos, metilsulfatos, mucatos, napsilatos, nitratos, oxalatos, pamoatos, pantotenatos, fenilacetatos, fosfatos/difosfatos, poligalacturonatos, propionatos, salicilatos, estearatos, subacetatos, succinatos, sulfamidas, sulfatos, tanatos, tartratos, teoclatos, toluenosulfonatos, trietioduros, trifluoroacetatos, amonio, benzatinas, cloroprocaínas, colinas, dietanolaminas, etilendiaminas, megluminas y procaínas. Pueden formarse sales farmacéuticamente aceptables adicionales con cationes de metales tales como aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio, zinc, y similares. (Véase también Pharmaceutical salts, Birge, S.M. et al., J. Pharm. Sci., (1977), 66, 1-19).
Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden sintetizarse a partir del compuesto original que contiene un resto básico o ácido mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, tales sales pueden prepararse haciendo reaccionar las formas de ácido o de base libre de estos compuestos con una cantidad suficiente de la base o el ácido apropiado en agua o en un diluyente orgánico tal como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo, o una mezcla de los mismos.
Sales de otros ácidos distintos de los mencionados anteriormente que, por ejemplo, son útiles para purificar o aislar los compuestos de la presente invención (por ejemplo, sales de trifluoroacetato) también forman parte de la invención.
Los compuestos de la invención también incluyen sus formas isotópicamente marcadas. Una forma isotópicamente marcada de un agente activo de una combinación de la presente invención es idéntica a dicho agente activo salvo por el hecho de que uno o más átomos de dicho agente activo se ha reemplazado por un átomo o átomos que tienen una masa atómica o un número másico diferente de la masa atómica o el número másico de dicho átomo que habitualmente se encuentra en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que están fácilmente comercialmente disponibles y que pueden incorporarse en un agente activo de una combinación de la presente invención según procedimientos bien establecidos incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, por ejemplo, 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F y 36Cl, respectivamente. Se contempla activo de una combinación de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que contiene uno o más de los isótopos anteriormente mencionados y/u otros isótopos de otros átomos, está dentro del alcance de la presente invención.
Los compuestos de la invención son sólo aquellos que se contempla que son “químicamente estables” tal como apreciarán los expertos en la técnica. Por ejemplo, un compuesto que tendría una “valencia colgante”, o un “carbanión”, no son compuestos contemplados por los métodos inventivos divulgados en el presente documento.
Para todos los compuestos divulgados anteriormente en el presente documento en esta solicitud, en el caso de que la nomenclatura entre en conflicto con la estructura, debe entenderse que el compuesto se define por la estructura.
Lista de abreviaturas
AA ácido acético
ACN/MeCN acetonitrilo
ac. acuoso
BEH columna híbrida con puentes de etileno
BOC terc-butiloxicarbonilo
°C grados centígrados
CDI di(imidazol-1-il)metanona
metanosulfonato de CPhos-3G-paladaciclo metanosulfonato de (2-diciclohexilfosfino-2',6'-bis(dimetilamino)-1,1'-bifenil)(2'-amino-1,1'-bifenil-2-il)paladio(II)
DCM diclorometano
DIPEA W,W-diisopropiletilamina
DMF N,N-dimetilformamida
DMA N,N-dimetilacetamida
DMSO dimetilsulfóxido
DTAD azodicarboxilato de di-terc-butilo
EE dietil éter
eq equivalente
ESI-EM espectrometría de masas de ionización por electropulverización EtOH etanol
EtOAc/ EE acetato de etilo
h hora
H2 hidrógeno
H3PO4 ácido fosfórico
HATU hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uranio
HCI ácido clorhídrico
HPLC cromatografía de líquidos de alta resolución
MeOH metanol
min minuto
Mel yodometano
ml mililitro
EM espectro de masas
NaH hidruro de sodio
NaOH hidróxido de sodio
NMP N-metil-2-pirrolidinona
Pd2(dba)3 tris(dibencilidenoacetona)dipaladio(0)
Pd/C paladio sobre carbono
PdCl2(dppf)CH2Cl2 [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(N)diclorometano Pd(OH)2 hidróxido de paladio
PE éter de petróleo
RP fase inversa
ta oTA temperatura ambiente (aproximadamente 25°C)
CFS cromatografía de fluidos supercríticos
TBTU tetrafluoroborato de benzotriazoliltetrametiuronio
TFA ácido trifluoroacético
THF tetrahidrofurano
CCF cromatografía en capa fina sobre SiO2
Xantphos 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno
Xphos de 2a gen. cloro(2-diciclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropiM,1 '-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladio(II)
TPP trifenilfosfina
Métodos generales: a menos que se indique lo contrario, todas las reacciones tienen lugar a temperatura ambiente (aproximadamente 25°C), bajo una atmósfera inerte (por ejemplo, argón, N2) y en condiciones anhidras. Todos los compuestos se caracterizan mediante al menos uno de los siguientes métodos: 1H-RMN, HPLC, EM, HPLC-EM o punto de fusión.
Normalmente, el avance de la reacción se monitoriza mediante cromatografía en capa fina (CCF) o HPLC-EM. Los productos intermedios y los productos se purifican usando al menos uno de los siguientes métodos:
Cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice, recristalización, HPLC quiral de fluidos supercríticos (CFS) usando una columna RegisPack de 3,0 x 25,0 cm, eluyendo con una mezcla isocrática de MeOH, isopropilamina (IPA) y dióxido de carbono supercrítico a 125 bar; 80 ml/min, y/o HPLC de fase inversa usando una columna semipreparativa C18 eluyendo con un gradiente de:
• MeCN el 0,1% de TFA y H2O el 0,1% de TFA,
• MeCN el 0,1% de ácido fórmico y H2O el 0,1% de ácido fórmico, o
• MeCN y H2O que contiene NH4HCO32,5 mM
• MeCN y H2O el 0,1% de TFA,
• MeCN y H2O el 0,1% de NH3,
• MeCN y H2O y el 0,1% de TFA
• MeCN y H2O y el 0,1% de NH3
DATOS ANALÍTICOS
Los datos de espectrometría de masas (EM) notificados corresponden a la masa observada (por ejemplo, [M+H]+). El método de HPLC usado para caracterizar los compuestos de la invención y los compuestos de referencia adicionalmente divulgados en el presente documento se describe en la tabla 2.
Tabla 2. Métodos de HPLC
Figure imgf000012_0001
Este método se utiliza en todas las demás tablas en esta sección para los datos de ESI-EM y de tiempo de retención. Si se usa una HPLC-EM diferente, se indica en el texto.
Método 1
Modo de ionización ESI+/-. Columna: CSH C182,1x50 mm, 1,7 |im de diámetro de partícula. Gradiente: del 90% de A al 100% de B en 1,19 minutos, mantener al 100% de B hasta 1,70 minutos. Velocidad de flujo de 0,8 ml/min. A=(el 95% de agua el 5% de acetonitrilo el 0,05% de ácido fórmico), B=(acetonitrilo el 0,05% de ácido fórmico).
Método 2
Modo de ionización ESI+/-. Columna: BEH C182,1x50 mm, 1,7 |im de diámetro de partícula. Gradiente: del 90% de A al 100% de B en 4,45 minutos, mantener al 100% de B hasta 4,58 minutos. Velocidad de flujo de 0,8 ml/min. A=(el 95% de agua el 5% de acetonitrilo bicarbonato de amonio 2,5 mM), B=(acetonitrilo).
Método 3
Modo de ionización ESI+/-. Columna: BEH C182,1x50 mm, 1,7 |im de diámetro de partícula. Gradiente: del 90% de A al 95% de B en 1,19 minutos, mantener al 95% de B hasta 1,70 minutos. Velocidad de flujo de 0,8 ml/min. A=(el 95% de agua el 5% de acetonitrilo bicarbonato de amonio 2,5 mM), B=(acetonitrilo).
Método 4
Modo de ionización ESI+/-. Columna: HSS T32,1x100 mm, 1,8 |im de diámetro de partícula. Gradiente: el 100% de A, mantener durante 1,00 minuto, del 100% de A al 95% de B en 4,50 minutos, mantener al 100% de B hasta 4,91 minutos. Velocidad de flujo de 0,6 ml/min. A=(el 95% de agua el 5% de acetonitrilo el 0,05% de ácido fórmico) B=(acetonitrilo el 0,05% de ácido fórmico).
Método 5
Modo de ionización ESI+/-. Columna: CSH C182,1x50 mm, 1,7 |im de diámetro de partícula: Gradiente: del 90% de A al 100% de B en 4,45 minutos, mantener al 100% de B hasta 4,58 minutos. Velocidad de flujo de 0,8 ml/min A=(el 95% de agua el 5% de acetonitrilo el 0,05% de ácido fórmico), B=(acetonitrilo el 0,05% de ácido fórmico).
Método 6
Modo de ionización ESI+/-. Columna: HSS T32,1x100 mm, 1,8 |im de diámetro de partícula. Gradiente: del 95% de A al 100% de B en 3,65 minutos, mantener al 100% de B hasta 4,95 minutos. Velocidad de flujo de 0,6 ml/min. Temperatura de columna: 60°C. A=(el 95% de agua el 5% de acetonitrilo el 0,05% de ácido fórmico) B=(acetonitrilo el 0,05% de ácido fórmico).
Método 7 (temperatura de columna: 60°C)
Figure imgf000013_0002
Método 8 (temperatura de columna: 40°C)
Figure imgf000013_0003
Método 9
Figure imgf000013_0001
Figure imgf000014_0002
Método 10 (temperatura de columna: 60°C)
Figure imgf000014_0001
Método 11
Figure imgf000014_0003
Método 12
Figure imgf000014_0004
Método 13
Figure imgf000014_0005
Método 14
Figure imgf000015_0002
Ejemplos de síntesis
Los ejemplos a continuación son ilustrativos y, tal como reconoce un experto en la técnica, podrían modificarse los reactivos o las condiciones particulares según fuese necesario para los compuestos individuales sin experimentación indebida.
Los compuestos de la invención pueden prepararse mediante los métodos generales y los ejemplos presentados a continuación y métodos conocidos por los expertos habituales en la técnica. Las condiciones de reacción y los tiempos de reacción óptimos pueden variar dependiendo de los reactantes particulares usados. A menos que se especifique lo contrario, los disolventes, las temperaturas, las presiones y otras condiciones de reacción pueden seleccionarse fácilmente por un experto habitual en la técnica. Se proporcionan procedimientos específicos en la sección de ejemplos de síntesis. Los productos intermedios usados en las síntesis a continuación o bien están comercialmente disponibles o bien se preparan fácilmente mediante métodos conocidos por los expertos en la técnica. El avance de la reacción puede monitorizarse mediante métodos convencionales tales como cromatografía en capa fina (CCF) o cromatografía de líquidos de alta presión-espectrometría de masas (HPLC-EM). Los productos intermedios y los productos pueden purificarse mediante métodos conocidos en la técnica, incluyendo cromatografía en columna, Hp LC, CCF preparativa o recristalización.
Procedimiento de síntesis general
Los compuestos de la invención y los compuestos de referencia divulgados en el presente documento se preparan generalmente haciendo reaccionar un producto intermedio de ácido carboxílico con un producto intermedio de amina en condiciones apropiadas.
Figure imgf000015_0001
A éster terc-butílico del ácido piperazin-1-carboxílico (1,0 g, 5,37 mmol) y 5-bromo-2-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxipiridina (1,5 g, 5,37 mmol) en 1,4-dioxano (15 ml) se les añaden metanosulfonato de CPhos-G3-paladaciclo y terc-butóxido de sodio (216 mg, 16,1 mmol) y se desgasifica con nitrógeno durante 5 min Se agita la mezcla resultante a 100°C durante 10 h. Se filtra la mezcla de reacción a través de un lecho de sílice eluyendo con EtOAc y se concentra. Se purifica el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar el compuesto del título.
Rendimiento: 2,1 g (88%) Tr (HPLC): 1,15 min (método 1)
Figure imgf000016_0001
A éster terc-butílico del ácido 4-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridin-3-il]-piperazin-1-carboxílico (2,1 g, 4,73 mmol) en EtOH (10 ml) y agua (5 ml) se le añaden clorhidrato de hidroxilamina (1,64 g, 23,6 mmol) y trimetilamina (659 ^l, 4,73 mmol) y se agita a 80°C durante 18 h. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida. Se suspende el residuo en DCM y se filtra para retirar las sales. Se purifica el filtrado mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar el compuesto del título.
Rendimiento: 1,07 g (73%)
Diclorhidrato de 4-metoxi-5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamina
Figure imgf000016_0002
A éster ferc-butílico del ácido 4-(6-amino-4-metoxi-piridin-3-il)-piperazin-1-carboxílico (1,07 g, 3,47 mmol) en DCM (12 ml) se le añade HCI 4 M en 1,4-dioxano (4,34 ml, 17,35 mmol) y se agita a TA durante 2 h. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida.
Rendimiento: 976 mg (cuantitativo)
Éster terc-butílico del ácido 6-amino-4-metil-3’,6’-dihidro-2’H-[3,4’1bipiridinil-1’-carboxílico
Figure imgf000016_0003
A éster terc-butílico del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (1,24 g, 4,01 mmol) y 5-bromo-4-metil-piridin-2-ilamina (750 mg, 4,01 mmol) en 1,4-dioxano se les añaden disolución de Na2CO32 M (4,01 ml, 8,02 mmol) y PdCl2(dppf) (328 mg, 0,40 mmol). Se desgasifica la mezcla de reacción con nitrógeno durante 5 min y se agita en el microondas a 150°C durante 30 min Se diluye la reacción con EtOAc y agua y se separan las fases. Se extrae la fase ac. de nuevo con EtOAc. Se lavan las fases orgánicas combinadas con salmuera, se secan sobre MgSO4 y se concentran a vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 1,1 g (95%) ESI-EM: m/z = 290 (M+H)+ Tr (HPLC): 1,82 min (método 2)
Figure imgf000017_0001
A éster terc-butílico del ácido 6-amino-4-metil-3’,6’-dihidro-2’H-[3,4’]bipiridinil-1’-carboxílico (1,10 g, 3,80 mmol) en MeOH (10 ml) se le añade Pd/C (405 mg, 0,38 mmol) bajo nitrógeno. Se desgasifica la mezcla de reacción y se somete a un globo de H2. Se filtra la reacción y se concentra a presión reducida. Se purifica el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 511 mg (46%) ESI-EM: m/z = 292 (M+H)+ Tr (HPLC): 1,80 min (método 2)
Diclorhidrato de 4-metil-1’,2’,3’,4’,5’,6’-hexahidro-[3,4’1bipiridinil-6-ilamina
Figure imgf000017_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 6-amino-4-metil-3’,4’,5’,6’-tetrahidro-2’H-[3,4’]bipiridinil-1’-carboxílico (511 mg, 1,75 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio diclorhidrato de 4-metoxi-5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamina.
Rendimiento: 347 mg (75%) ESI-EM: m/z = 192 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,36 min (método 2)
Éster terc-butílico del ácido 6-amino-3’,6’-dihidro-2’H-[3,4’1bipiridinil-1’-carboxílico
Figure imgf000017_0003
A éster terc-butílico del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (1,70 g, 5,50 mmol) y 5-bromo-piridin-2-ilamina (1,00 mg, 5,78 mmol) en 1,4-dioxano se les añaden disolución de Na2CO32 M (2 ml, 4,00 mmol) y PdCl2(dppf)CH2Cl2 (449 mg, 0,55 mmol). Se desgasifica la mezcla de reacción con nitrógeno durante 5 min y se agita a 120°C durante 16 h. Se evaporan todas las sustancias volátiles a presión reducida. Se purifica el material en bruto mediante cromatografía de fase normal para proporcionar el compuesto del título.
Rendimiento: 1,2 g (79%)
Éster terc-butílico del ácido 6-amino-3’,4’,5’,6’-tetrahidro-2’H-[3,4’1bipiridinil-1’-carboxílico
Figure imgf000017_0004
A éster terc-butílico del ácido 6-amino-3’,6’-dihidro-2’H-[3,4’]bipiridinil-1’-carboxílico (45,0 g, 163,4 mmol) en EtOH (1000 ml) se le añade Pd(OH)2 sobre carbono (4,5 g, 32,4 mmol) bajo nitrógeno. Se agita la mezcla de reacción a 30 PSI en un agitador de PARR durante 16 h. Se filtra la reacción a través de Celite®. Se evapora el filtrado a presión reducida y se purifica el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice para obtener el compuesto del título.
Rendimiento: 23,7 g (79%)
Diclorhidrato de 1’,2’,3’,4’,5’,6’-hexahidro-[3,4’1bipiridinil-6-ilamina
Figure imgf000018_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 6-amino-3’,4’,5’,6’-tetrahidro-2’H-[3,4’]bipiridinil-1’-carboxílico (800 mg, 2,88 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio diclorhidrato de 4-metoxi-5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamina.
Figure imgf000018_0002
A éster terc-butílico del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (10,0 g, 49,3 mmol) y 5-bromo-4-metoxi-piridin-2-ilamina (15,2 g, 49,3 mmol) en 1,4-dioxano (100 ml) se les añaden disolución de Na2CO32 M (2 ml, 148 mmol) y PdCl2(dppf)CH2Cl2 (3,93 g, 4,93 mmol). Se desgasifica la mezcla de reacción con nitrógeno durante 5 min y se agita a 120°C durante 16 h. Se evaporan todas las sustancias volátiles a presión reducida. Se diluye el residuo con agua y se extrae tres veces con EtOAc. Se lavan las fases orgánicas combinadas con salmuera, se secan sobre Na2SO4 y se concentran a presión reducida. Se purifica el material en bruto mediante cromatografía de fase normal para proporcionar el compuesto del título.
Figure imgf000018_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 6-amino-4-metoxi-3’,6’-dihidro-2’H-[3,4’]bipiridinil-1’-carboxílico (750 mg, 2,46 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster terc-butílico del ácido 6-amino-4-metil-3’,4’,5’,6’-tetrahidro-2’H-[3,4’]bipiridinil-1’-carboxílico.
Rendimiento: 715 mg (95%) ESI-EM: m/z = 308 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,88 min (método 5)
Diclorhidrato de 4-metoxi-1’,2’,3’,4’,5’,6’-hexahidro-[3,4’1bipiridinil-6-ilamina
Figure imgf000019_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 6-amino-4-metoxi-3’,4’,5’,6’-tetrahidro-2’H-[3,4’]bipiridinil-1’-carboxílico (715 mg, 2,33 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio diclorhidrato de 4-metoxi-5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamina.
Rendimiento: 745 mg (cuantitativo) ESI-EM: m/z = 208 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,56 min (método 6)
Éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-piridazin-3-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico
Figure imgf000019_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (977 mg, 3,16 mmol) y 6-cloro-piridazin-3-ilamina (500 mg, 2,87 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster terc-butílico del ácido 6-amino-4-metoxi-3’,6’-dihidro-2’H-[3,4’]bipiridinil-1’-carboxílico.
Rendimiento: 590 mg (74,3%) ESI-EM: m/z = 276 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,44 min (método 1)
Éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-piridazin-3-il)-piperidin-1-carboxílico
Figure imgf000019_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-piridazin-3-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (5,40 g, 19,5 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster terc-butílico del ácido 6-amino-4-metil-3’,4’,5’,6’-tetrahidro-2’H-[3,4’]bipiridinil-1’-carboxílico.
Rendimiento: 3,93 g (72%) ESI-EM: m/z = 279 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,38 min (método 1)
Diclorhidrato de 6-piperidin-4-il-piridazin-3-ilamina
Figure imgf000019_0004
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-piridazin-3-il)-piperidin-1-carboxílico (3,60 g, 12,9 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio diclorhidrato de 4-metoxi-5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamina.
Rendimiento: 2,30 g (cuantitativo) ESI-EM: m/z = 179 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,32 min (método 1)
Figure imgf000020_0001
A éster terc-butílico del ácido (R)-2-hidrox¡met¡l-p¡perazin-1-carboxíl¡co (1,00 g, 4,62 mmol) en DMA (10 ml) se le añaden terc-butil-cloro-dimetil-silano (1,05 g, 6,94 mmol) e ¡midazol (944 mg, 13,9 mmol), y se agita la mezcla de reacción durante 14 h a ta. Se diluye la mezcla de reacción con EtOAc y se lava con agua y salmuera, se seca sobre Na2SO4, se filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 1,45 g (95%)
5-Bromo-2-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metil-piridina
Figure imgf000020_0002
A 5-bromo-4-metil-p¡r¡din-2-¡lam¡na (2,00 g, 10,7 mmol) y hexano-2,5-diona (1,47 g, 12,8 mmol) en tolueno (50 ml) se les añade ácido para-toluenosulfónico (61,0 mg, 0,32 mmol), y se agita la mezcla de reacción durante 18 h a 140°C. Se vierte la mezcla de reacción en agua y se diluye en EtOAc. Se lava la fase orgánica separada con salmuera y se seca sobre MgSO4, se filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 2,68 g (95%)
Éster terc-butílico del ácido (R)-2-(terc-but¡l-d¡met¡l-s¡lan¡lox¡metN)-4-[6-(2,5-d¡met¡l-p¡rrol-1-¡l)-4-met¡l-p¡r¡d¡n-3-¡l1-piperazin-1 -carboxílico
Figure imgf000020_0003
A 5-bromo-2-(2,5-dimet¡l-p¡rrol-1-¡l)-4-met¡l-p¡r¡dina (1,00 g, 3,77 mmol) y éster terc-butílico del ácido (R)-2-(terc-butildimet¡l-s¡lan¡lox¡met¡l)-p¡peraz¡n-1-carboxíl¡co (1,25 g, 3,77 mmol) en 1,4-dioxano (13 ml) se les añaden terc-butóxido de sodio (1,09 g, 11,3 mmol) y metanosulfonato de CPhos-G3-paladaciclo (152 mg, 0,19 mmol). Se desgasifica la mezcla con nitrógeno durante 5 min, y se agita durante 18 h a 100°C. Se filtra la mezcla de reacción a través de un lecho de gel de sílice y se eluye con EtOAc. Se concentra el filtrado a presión reducida para proporcionar el compuesto del título.
Rendimiento: 1,67 g (86%) ESI-EM: m/z = 515 (M+H)+ Tr (HPLC): 1,56 min (método 1)
Éster terc-butílico del ácido (ft)-4-(6-amino-4-metil-piridin-3-il)-2-hidroximetil-piperazin-1-carboxílico r
Figure imgf000021_0001
Se agita una mezcla de éster terc-butílico del ácido (R)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metil-piridin-3-il]-piperazin-1-carboxílico (1,67 g, 3,24 mmol), clorhidrato de hidroxilamina (1,13 g, 16,2 mmol) y trimetilamina (452 |al, 3,24 mmol) en etanol (10 ml) y agua (5 ml) durante 18 h a 80°C. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida y se purifica el residuo mediante cromatografía de fase inversa para proporcionar el compuesto del título.
Rendimiento: 1,67 g (86%) Tr (HPLC): 0,66 min (método 3)
Diclorhidrato de [(ft)-4-(6-amino-4-metil-piridin-3-il)-piperazin-2-il1-metanol
Figure imgf000021_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido (R)-4-(6-amino-4-metil-piridin-3-il)-2-hidroximetil-piperazin-1-carboxílico (450 mg, 1,40 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio diclorhidrato de 4-metoxi-5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamina.
Rendimiento: 412 mg (cuantitativo)
5-Bromo-2-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridina
Figure imgf000021_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 5-bromo-4-metoxi-piridin-2-ilamina (2,00 g, 9,85 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio 5-bromo-2-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metil-piridina. Rendimiento: 2,48 g, (90%) ESI-EM: m/z = 283 (M+H)+ Tr (HPLC): 2,13 min (método 5)
Éster terc-butílico del ácido 7-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-N)-4-metoxi-piridin-3-il1-4,7-diaza-espiro[2,51octano-4-carboxílico
Figure imgf000022_0001
A 5-bromo-2-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridina (1,25 g, 4,45 mmol) y éster terc-butílico del ácido 4,7-diazaespiro[2,5]octano-4-carboxílico (1,13 g, 5,34 mmol) en 1,4-dioxano (13 ml) se les añaden Cs2CO3(4,35 g, 13,3 mmol) y metanosulfonato de CPhos-G3-paladaciclo (359 mg, 0,45 mmol). Se desgasifica la mezcla con nitrógeno durante 5 min, y se agita durante 18 h a 100°C. Se extrae la mezcla de reacción con EtOAc, se lava con salmuera, se seca sobre MgsO4, se filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar el compuesto del título.
Figure imgf000022_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 7-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridin-3-¡l]-4,7-diaza-espiro[2,5]octano-4-carboxíl¡co (1,51 g, 3,66 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster terc-butílico del ácido (R)-4-(6-amino-4-metil-piridin-3-il)-2-hidroximetil-piperazin-1-carboxílico.
Rendimiento: 1,07 g (87%) ESI-EM: m/z = 335 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,74 min (método 5)
Figure imgf000022_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 7-(6-amino-4-metoxi-piridin-3-il)-4,7-diazaespiro[2,5]octano-4-carboxílico (1,07 g, 3,19 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio diclorhidrato de 4-metoxi-5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamina.
Rendimiento: 1,10 g (cuantitativo) ESI-EM: m/z = 235 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,17 min (método 5)
Figure imgf000023_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (1,74 g, 5,64 mmol) y 6-doro-4-metoxi-piridazin-3-ilamina (900 mg, 5,64 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster terc-butílico del ácido 6-amino-4-metoxi-3’,6’-dihidro-2’H-[3,4’]bipiridinil-1’-carboxílico.
Rendimiento: 787 mg (46%) ESI-EM: m/z = 307 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,59 min (método 5)
Éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-5-metoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-carboxílico
Figure imgf000023_0002
A éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-5-metoxi-piridazin-3-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (785 mg, 2,56 mmol) en MeOH (10 ml) y ácido acético (1 ml) se le añade Pd/C (273 mg, 0,26 mmol) bajo nitrógeno. Se desgasifica la mezcla de reacción y se somete a un globo de H2. Se filtra la reacción y se concentra a presión reducida. Se purifica el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 513 mg (65%) ESI-EM: m/z = 309 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,54 min (método 5)
Diclorhidrato de 4-metoxi-6-piperidin-4-il-piridazin-3-ilamina
Figure imgf000023_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-5-metoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-carboxílico (510 mg, 1,65 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio diclorhidrato de 4-metoxi-5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamina.
Rendimiento: 514 mg (cuantitativo) ESI-EM: m/z = 209 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,14 min (método 5)
4-(6-{[(7erc-butoxi)carbonil1aminoM-metoxipiridazin-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000023_0004
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-carboxilato de terc-butilo (4,76 g, 20 mmol) y N-(6-cloro-5-metoxipiridazin-3-il)carbamato de terc-butilo (4,00 g, 20 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster terc-butílico del ácido 6-amino-4-metoxi-3’,6’-dihidro-2’H-[3,4’]bipiridinil-1’-carboxílico.
Rendimiento: 4,56 g (59%)
Figure imgf000024_0001
A 4-(6-{[(terc-butoxi)carbonil]amino}-4-metoxipiridazin-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-carboxilato de tere-butilo (1,50 g, 3,69 mmol) en MeOH (15 ml) se le añade Pd/C (1,18 g, 1,11 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno. Se desgasifica la mezcla de reacción y se somete a 30°C durante la noche a un globo de H2. Se trata la mezcla con Pd/C (0,3 g) y se agita a 30°C durante 3h. Se filtra la reacción y se concentra a presión reducida.
Rendimiento: 1,42 g (94%)
Diclorhidrato de 5-metoxi-6-(piperidin-4-il)piridazin-3-amina
Figure imgf000024_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 4-(6-{[(tere-butoxi)carbonil]amino}-4-metoxipiridazin-3-il)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo (1,42 g, 3,48 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis de diclorhidrato de 4-metoxi-5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamina.
Rendimiento: 0,99 g (cuantitativo)
Éster tere-butílico del ácido 4-(6-nitro-piridin-3-il)-piperazin-1-carboxílico
Figure imgf000024_0003
Se agitan 5-bromo-2-nitro-piridina (5,00 g, 24,63 mmol) y éster tere-butílico del ácido piperazin-1-carboxílico (13,7 g, 73,9 mmol) en NMP (50 ml) durante 3 h a 120°C. Se vierte la mezcla de reacción en agua. Se filtra el precipitado, se lava con agua y se seca para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 6,80 g (90%)
Éster tere-butílico del ácido 4-(6-amino-piridin-3-il)-piperazin-1-carboxílico
Figure imgf000024_0004
Se agitan éster tere-butílico del ácido 4-(6-nitro-piridin-3-il)-piperazin-1-carboxílico (2,00 g, 65,9 mmol) y Pd/C (200 mg) en etanol con un globo de H2 durante 3 h. Se filtra la mezcla de reacción y se concentra el filtrado a presión reducida. Rendimiento: 1,90 g (cuantitativo)
Diclorhidrato de 5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamina
Figure imgf000025_0001
Se agitan éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-piridin-3-il)-piperazin-1-carboxílico (2,50 g, 8,98 mmol) en DCM (30 ml) y HCI 4 M en 1,4-dioxano (11,2 ml, 44,9 mmol) durante 16 h a ta. Se filtra la mezcla de reacción y se lava con éter para dar el compuesto del título.
Figure imgf000025_0002
A éster terc-butílico del ácido (R)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-piperazin-1-carboxílico (1,50 g, 4,54 mmol) y 5­ bromo-2-nitropiridina (1,00 g, 4,93 mmol) en 1,4-dioxano (12 ml) se les añaden Cs2CO3 (4,44 g, 13,6 mmol), Pd2(dba)3 (208 mg, 0,23 mmol) y Xantphos (263 mg, 0,45 mmol). Se agita la mezcla de reacción a 100°C durante 24 h, se filtra a través de Celite® y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar el compuesto del título.
Rendimiento: 1,35 g (66%) ESI-EM: m/z = 453 (M+H)+ Tr (HPLC): 1,31 min (método 1)
Éster terc-butílico del ácido (ft)-4-(6-amino-piridin-3-il)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-piperazin-1-carboxílico
Figure imgf000025_0003
Se agitan éster terc-butílico del ácido (R)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-(6-nitro-piridin-3-il)-piperazin-1-carboxílico (1,35 g, 2,98 mmol) y Pd/C (317 mg, 0,15 mmol) en metanol (20 ml) con un globo de H2 durante 24 h. Se filtra la mezcla de reacción a través de Celite®, se lava con metanol y se concentra el filtrado a presión reducida. Rendimiento: 1,26 g (cuantitativo)
Diclorhidrato de [(ft)-4-(6-amino-piridin-3-il)-piperazin-2-il1-metanol
Figure imgf000026_0001
Se agitan éster terc-butílico del ácido (R)-4-(6-amino-piridin-3-il)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-piperazin-1-carboxílico (1,26 g, 2,98 mmol) en DCM (10 ml) y HCI 4 M en 1,4-dioxano (7,5 ml, 30,0 mmol) durante 1 h a ta. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida, se suspende en éter, se filtra y se lava con éter para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 838 mg (cuantitativo)
Éster terc-butílico del ácido (ft)-4-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-N)-4-metil-piridin-3-il1-2-hidroximetil-piperazin-1-carboxílico
Figure imgf000026_0002
A éster terc-butílico del ácido (R)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metil-piridin-3-il]-piperazin-1-carboxílico (8,56 g, 16,1 mmol) en THF (100 ml) se le añade fluoruro de tetrabutilamonio (16,1 ml, 16,1 mmol), y se agita la mezcla de reacción a TA durante 1,5 h. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida y se purifica el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar el compuesto del título. Rendimiento: 6,10 g (91%) ESI-EM: m/z = 417 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,98 min (método 1)
Éster terc-butílico del ácido (ft)-4-[6-(2,5-dimetilo 4-pirrol-1-il)-4-metil-piridin-3-il1-2-metoximetil-piperazin-1-carboxílico
Figure imgf000026_0003
A éster terc-butílico del ácido (R)-4-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metil-piridin-3-il]-2-hidroximetil-piperazin-1-carboxílico (2,00 g, 4,80 mmol) y yoduro de metilo (915 mg, 7,20 mmol) en d Ma (15 ml) se les añade NaH al 60% (230 mg, 5,76 mmol). Se agita la mezcla de reacción durante 2 h a TA y se extingue con agua. Se extrae la mezcla tres veces con EtOAc, se lavan las fases orgánicas combinadas con salmuera, se secan sobre MgSO4, se filtran y se concentran a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 1,80 g (87%) ESI-EM: m/z = 431 (M+H)+ Tr (HPLC): 1,12 min (método 1)
Figure imgf000027_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido (R)-4-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metilpiridin-3-il]-2-metoximetil-piperazin-1-carboxílico (1,80 g, 4,18 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster terc-butílico del ácido (R)-4-(6-amino-4-metil-piridin-3-il)-2-hidroximetil-piperazin-1-carboxílico.
Rendimiento: 1,07 g (87%) ESI-EM: m/z = 353 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,44 min (método 1)
Diclorhidrato de 5-((ft)-3-metoximetil-piperazin-1-il)-4-metil-piridin-2-ilamina
Figure imgf000027_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido (R)-4-(6-amino-4-metil-piridin-3-il)-2-metoximetil-piperazin-1-carboxílico (440 mg, 1,25 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio diclorhidrato de 4-metoxi-5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamina.
Rendimiento: 406 mg (cuantitativo)
Éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-4-metil-piridazin-3-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-1 -carboxílico
Figure imgf000027_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-1 -carboxílico (538 mg, 1,74 mmol) y 6-cloro-5-metil-piridazin-3-ilamina (250 mg, 1,74 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster terc-butílico del ácido 6-amino-4-metil-3’,6’-dihidro-2’H-[3,4’]bipiridinil-1’-carboxílico.
Rendimiento: 326 mg (65%) ESI-EM: m/z = 292 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,51 min (método 5)
Éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-4-metil-piridazin-3-il)-piperidin-1-carboxílico
Figure imgf000028_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-4-metil-piridazin-3-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (326 mg, 1,12 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster terc-butílico del ácido 6-amino-4-metil-3’,4’,5’,6’-tetrahidro-2’H-[3,4’]bipiridinil-1’-carboxílico.
Rendimiento: 289 mg (88%) ESI-EM: m/z = 293 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,60 min (método 5)
Diclorhidrato de 5-metil-6-piperidin-4-il-piridazin-3-ilamina
Figure imgf000028_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-4-metil-piridazin-3-il)-piperidin-1-carboxílico (175 mg, 0,60 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio diclorhidrato de 5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamina.
Rendimiento: 154 mg (97%) ESI-EM: m/z = 193 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,46 min (método 2)
5-Bromo-2-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridina
Figure imgf000028_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 5-bromo-4-metoxi-piridin-2-ilamina (10,6 g, 52,1 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio 5-bromo-2-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metil-piridina. Rendimiento: 14,0 g (96%) ESI-EM: m/z = 283 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,93 min (método 3)
Éster terc-butílico del ácido (R)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridin-3-il1-piperazin-1 -carboxílico
Figure imgf000028_0004
A 5-bromo-2-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridina (1,24 g, 4,41 mmol) y éster terc-butílico del ácido (R)-2-(terc-butildimetil-silaniloximetil)-piperazin-1-carboxílico (1,46 g, 4,41 mmol) en 1,4-dioxano (13 ml) se les añaden terc-butóxido de sodio (1,27 g, 13,2 mmol) y metanosulfonato de CPhos-G3-paladaciclo (178 mg, 0,22 mmol). Se desgasifica la mezcla con nitrógeno durante 5 min, y se agita durante 4 h a 100°C. Se filtra la mezcla de reacción a través de un lecho de gel de sílice y se eluye con EtOAc. Se concentra el filtrado a presión reducida y se purifica el residuo mediante cromatografía en columna de fase inversa para dar el compuesto del título.
Figure imgf000029_0001
Se agitan éster terc-butílico del ácido (R)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxipiridin-3-il]-piperazin-1-carboxílico (1,68 g, 3,17 mmol), clorhidrato de hidroxilamina (l,10 g, 15,8 mmol) y trimetilamina (320 |al, 3,24 mmol) en etanol (6 ml) y agua (3 ml) durante 18 h a 80°C. Se añade clorhidrato de hidroxilamina (440 mg, 6,33 mmol) de nuevo y se agita a 80°C. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida y se purifica el residuo mediante cromatografía en columna de fase inversa (para proporcionar el compuesto del título.
Rendimiento: 620 mg (58%)
Clorhidrato de [(ft)-4-(6-amino-4-metoxi-piridin-3-il)-piperazin-2-il1-metanol
Figure imgf000029_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido (R)-4-(6-amino-4-metoxi-piridin-3-il)-2-hidroximetil-piperazin-1-carboxílico (620 mg, 1,83 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio diclorhidrato de 4-metoxi-5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamina.
Rendimiento: 503 mg (cuantitativo)
Éster terc-butílico del ácido 3-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridin-3-il1-3,8-diaza-biciclo[3.2.11octano-8-carboxílico
Figure imgf000029_0003
A 5-bromo-2-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridina (1,00 g, 3,56 mmol) y éster terc-butílico del ácido 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxíl¡co (830 mg, 3,91 mmol) en 1,4-dioxano (13 ml) se les añaden terc-butóxido de sodio (3,48 g, 10,7 mmol) y metanosulfonato de CPhos-G3-paladaciclo (287 mg, 0,36 mmol). Se desgasifica la mezcla con nitrógeno durante 5 min, y se agita durante 18 h a 80°C. Se extrae la mezcla de reacción con EtOAc, se lava con salmuera, se seca sobre MgSO4, se filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 760 mg (52%) ESI-EM: m/z = 412 (M+H)+ Tr (HPLC): 1,23 min (método 1)
Éster terc-butílico del ácido 3-(6-amino-4-metoxi-piridin-3-il)-3,8-diaza-biciclo[3.2.11octano-8-carboxílico
Figure imgf000030_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 3-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridin-3-¡l]-3,8-diaza-b¡c¡clo[3.2.1]octano-8-carboxíl¡co (760 mg, 1,84 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-4-metoxi-piridin-3-il)-piperazin-1-carboxílico.
Rendimiento: 330 mg (54%) ESI-EM: m/z = 335 (M+H)+ Tr (HPLC): 1,75 min (método 6)
Diclorhidrato de 5-(3,8-diaza-biciclo[3.2.11oct-3-il)-4-metoxi-piridin-2-ilamina
Figure imgf000030_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 3-(6-amino-4-metoxi-piridin-3-il)-3,8-diazabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxílico (330 mg, 0,99 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio diclorhidrato de 4-metoxi-5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamina.
Rendimiento: 330 mg (cuantitativo) ESI-EM: m/z = 235 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,15 min (método 5)
(2^)-2-[Metoxi(metil)carbamoil1piperazin-1,4-dicarboxilato de 4-bencilo y 1-terc-butilo
Figure imgf000030_0003
Se agitan ácido (2R)-4-[(benciloxi)carbonil]-1-[(terc-butoxi)carbonil1piperazin-2-carboxílico (4,00 g, 11,0 mmol), DIPEA (5,1 ml, 27,4 mmol), Ha Tu (5,01 g, 13,2 mmol) y clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (1,29 g, 13,2 mmol) en DMA (40 ml) a TA durante 3 días. Se diluye la mezcla de reacción con EtOAc, se lava con agua y salmuera. Se seca la fase orgánica sobre MgSO4, se filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 4,44 g (99%) ESI-EM: m/z = 408 (M+H)+
(2ft)-2-Acetilpiperazin-1,4-dicarboxilato de 4-bencilo y 1-tere-butilo
Figure imgf000031_0001
A una mezcla enfriada hasta -20°C de (2R)-2-[metoxi(metil)carbamoil]-piperazin-1,4-dicarboxilato de 4-bencilo y 1­ tere-butilo (4,40 g, 10,80 mmol) en THF (25 ml) se le añade gota a gota bromuro de metilmagnesio (5,40 ml, 16,20 mmol) y se agita a -20°C durante 30 min Se extingue la mezcla de reacción con disolución acuosa saturada de NH4Cl, se diluye con EtOAc y se lava con agua HCI 1 N y salmuera. Se seca la fase orgánica sobre MgSO4, se filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía para dar el producto deseado. Se realiza purificación adicional mediante separación por cromatografía quiral para dar el enantiómero R puro.
Rendimiento: 2,38 g (61%)
(2ft)-2-(1-hidroxietil)piperazin-1,4-dicarboxilato de 4-bencilo y 1-tere-butilo
Figure imgf000031_0002
Se añade borohidruro de sodio (0,36 g, 9,52 mmol) a (2R)-2-acetilpiperazin-1,4-dicarboxilato de 4-bencilo y 1-terebutilo (2,30 g, 6,35 mmol) en metanol (100 ml). Después de agitar la mezcla de reacción durante 30 min, se elimina el disolvente a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en sílice.
Rendimiento: 2,10 g (91%)
Figure imgf000032_0001
Se añade ferc-butil(cloro)dimetilsilano (1,30 g, 8,64 mmol) a (2R)-2-(1-hidroxietil)piperazin-1,4-dicarboxilato de 4-bencilo y 1-ferc-butilo (2,10 g, 5,76 mmol) e imidazol (1,18 g, 17,29 mmol) en diclorometano (15 ml). Se agita la mezcla de reacción durante la noche. Después de añadir agua (10 ml), se extrae la fase acuosa con diclorometano (2 x 25 ml). Se lavan las fases orgánicas combinadas con salmuera. Se seca la fase orgánica, se filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en sílice.
Rendimiento: 2,75 g (99,7%)
(2R)-2-{1 -f(ferc-butildimetilsiliDoxi1etil}piperazin-1 -carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000033_0001
Bajo una atmósfera (globo) de hidrógeno, se agitan (2R)-2-{1 -[(íerc-butildimetilsilil)-oxi]etil}piperazin-1,4-dicarboxilato de 4-bencilo y 1-ferc-butilo (2,75 g, 5,75 mmol) y Pd/C (0,20 g) a temperatura ambiente en etanol (50 ml) durante 2 h. Después de retirar el catalizador filtrando a través de Celite®, se elimina el disolvente a presión reducida. Se filtra el residuo a través de sílice eluyendo con MeOH al 10%/diclorometano.
Rendimiento: 1,89 g (96%)
(2R)-2-{1-[(ferc-butildimetilsili r )oxi1etil}-4-[6-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-4-metoxipiridin-3-illpiperazin-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000033_0002
A (2R)-2-{1-[(tere-butildimetilsilil)oxi]etil]piperazin-1-carboxilato de tere-butilo (1,89 g, 5,49 mmol) y 5-bromo-2-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridina (1,54 g, 5,49 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) se les añaden metanosulfonato de CPhos-G3-paladaciclo (0,22 g) y tere-butóxido de sodio (1,58 g, 16,5 mmol), y se rocía la mezcla de reacción con nitrógeno. Se agita la mezcla de reacción a 100°C durante 10 h. Se filtra la mezcla de reacción a través de un lecho de sílice eluyendo con EtOAc y se concentra. Se purifica el residuo dos veces mediante cromatografía en sílice para proporcionar los compuestos del título.
Rendimiento: (2R)-2-[(7S)-1-[(tere-butildimetilsilil)oxi]etil]-4-[6-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-4-metoxipiridin-3-il]piperazin-1-carboxilato de tere-butilo: 0,57 g (19%) y (2R)-2-[(7R)-1-[(tere-butildimetilsilil)oxi]etil]-4-[6-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-4-metoxipiridin-3-il]piperazin-1-carboxilato de tere-butilo: 0,78 g (26%)
Figure imgf000034_0001
Se calientan (2R)-2-[(7R)-1-[(tere-butildimetilsilil)oxi]etil]-4-[6-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-4-metoxipiridin-3-il]piperazin-1-carboxilato de tere-butilo (0,87 g, 1,60 mmol), clorhidrato de hidroxilamina (0,56 g, 7,99 mmol) y trimetilamina (0,22 ml, 1,60 mmol) en 8 ml de etanol y 4 ml de agua a 80°C durante 42 h. Se añade una cantidad adicional de clorhidrato de hidroxilamina (0,22 g, 3,19 mmol) y se agita la mezcla de reacción a 80°C durante la noche. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida, se lleva a diclorometano y se filtra. Se purifica el compuesto deseado mediante cromatografía en sílice.
Rendimiento: 0,20 g (36%)
Diclorhidrato de (7ft)-7-[(2ft)-4-(6-amino-4-metoxipiridin-3-il)piperazin-2-il]etan-1-ol
Figure imgf000034_0002
Se añade HCI 4 N en dioxano (0,71 ml, 2,84 mmol) a (2R)-4-(6-amino-4-metoxipiridin-3-il)-2-[(7R)-1-hidroxietil]piperazin-1-carboxilato de tere-butilo (0,20 g, 0,57 mmol) en 5 ml de diclorometano y se agita a TA durante 2 h. Se añade 1 ml adicional de HCI 4 N en dioxano y se agita durante 1 h a TA. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida. Se usa el residuo sin purificación adicional.
Rendimiento: 0,18 g (cuantitativo)
(2ft)-4-(6-amino-4-metoxipiridin-3-il)-2-[(7S)-1-hidroxietil]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000035_0001
Se calientan (2R)-2-[(7S)-1-[(ferc-butildimetilsilil)oxi]etil]-4-[6-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-4-metoxipiridin-3-il]piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (0,57 g, 1,04 mmol), clorhidrato de hidroxilamina (0,36 g, 5,21 mmol) y trimetilamina (0,15 ml, 1,04 mmol) en 4 ml de etanol y 2 ml de agua a 80°C durante 42 h. Se añade una cantidad adicional de clorhidrato de hidroxilamina (0,15 g, 2,09 mmol) y se agita la mezcla de reacción a 80°C durante la noche. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida, se lleva a diclorometano y se filtra. Se purifica el compuesto deseado mediante cromatografía en sílice y vuelve a purificarse mediante HPLC
Rendimiento: 0,12 g (33%),
Diclorhidrato de (7S)-1-[(2ft)-4-(6-amino-4-metoxipiridin-3-il)piperazin-2-il]etan-1-ol
Figure imgf000035_0002
Se añade HCl 4 N en dioxano (0,50 ml, 2,00 mmol) a (2R)-4-(6-amino-4-metoxipiridin-3-il)-2-[(7S)-1-hidroxietil]piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,12 g, 0,34 mmol) en 1 ml de diclorometano y se agita a TA durante 1 h. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida. Se usa el residuo sin purificación adicional.
Figure imgf000035_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 5-bromo-4-metoxi-piridin-2-ilamina (202 mg, 1,00 mmol) y éster terc-butílico del ácido 7-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-3-oxa-9-aza-biciclo[3.3.1]non-6-eno-9-carboxílico (350 mg, 1,00 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster terc-butílico del ácido 6-amino-4-metil-3’,6’-dihidro-2’H-[3,4’]bipiridinil-1’-carboxílico.
Rendimiento: 220 mg (64%) ESI-EM: m/z = 348 (M+H)+ Tr (HPLC): 1,52 min (método 2)
Figure imgf000036_0001
A éster terc-butílico del ácido 7-(6-amino-4-metoxi-piridin-3-il)-3-oxa-9-aza-bicido[3.3.1]non-6-eno-9-carboxílico (220 mg, 0,63 mmol) en EtOAc (10 ml) se le añade Pd/C (67,0 mg, 0,06 mmol) bajo nitrógeno. Se desgasifica la mezcla de reacción, se coloca bajo un globo de H2 y se agita durante 18 h a 50°C. Se filtra la reacción a través de Celite®, se concentra a presión reducida y se purifica mediante cromatografía en columna de gel de sílice para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 145 mg (66%) ESI-EM: m/z = 350 (M+H)+ Tr (HPLC): 1,60 min (método 2)
Diclorhidrato de 4-metoxi-5-(3-oxa-9-aza-biciclo[3.3.11non-7-il)-piridin-2-ilamina
Figure imgf000036_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido 7-(6-amino-4-metoxi-piridin-3-il)-3-oxa-9-aza-biciclo[3.3.1]nonano-9-carboxílico (145 mg, 0,41 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio diclorhidrato de 4-metoxi-5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamina.
Rendimiento: 133 mg (cuantitativo) ESI-EM: m/z = 250 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,15 min (método 5)
Éster terc-butílico del ácido (S)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-piperazin-1-carboxílico
Figure imgf000036_0003
A éster terc-butílico del ácido (S)-2-hidroximetil-piperazin-1-carboxílico (2,00 g, 9,25 mmol) en DMA (10 ml) se le añaden terc-butil-cloro-dimetil-silano (2,09 g, 13,9 mmol) e imidazol (1,89 g, 27,7 mmol), y se agita la mezcla de reacción durante 24 h a ta. Se diluye la mezcla de reacción con disolución de NH4Cl y se extrae con EtOAc. Se lava la fase orgánica con agua y salmuera, se seca sobre Na2SO4, se filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 2,80 g (92%)
Éster ferc-butílico del ácido (S)-2-(ferc-butil-dimetil-silaniloximetN)-4-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridin-3-ilpiperazin-1-carboxílico
Figure imgf000037_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 5-bromo-2-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridina (3,25 g, 11,6 mmol) y éster ferc-butílico del ácido (S)-2-(ferc-butil-dimetil-silaniloximetil)-piperazin-1-carboxílico (3,82 g, 11,6 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster ferc-butílico del ácido 3-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridin-3-il]-3,8-diaza-biciclo[3.2.1]octano-8-carboxílico.
Figure imgf000037_0002
Se agitan éster ferc-butílico del ácido (S)-2-(ferc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxipiridin-3-il]-piperazin-1-carboxílico (11,9 g, 22,4 mmol), clorhidrato de hidroxilamina (3,89 g, 56,0 mmol) y trimetilamina (7,8 ml, 56,0 mmol) en etanol (30 ml) y agua (15 ml) durante 18 h a 80°C. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida y se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice para dar el compuesto del título.
Figure imgf000037_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido (S)-4-(6-amino-4-metoxi-piridin-3-il)-2-hidroximetil-piperazin-1-carboxílico (264 mg, 0,58 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio diclorhidrato de 4-metoxi-5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamina.
Rendimiento: 160 mg (cuantitativo)
Éster terc-butílico del ácido (ft)-4-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridin-3-il]-2-hidroximetil-piperazin-1-carboxílico
Figure imgf000038_0001
A éster terc-butílico del ácido (R)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridin-3-il]-piperazin-1-carboxílico (8,56 g, 16,1 mmol) en THF (100 ml) se le añade TbA f (1 M en THF, 16,1 ml, 16,1 mmol). Se agita la mezcla de reacción durante 2,5 h a ta. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida y se purifica el residuo mediante cromatografía para obtener el producto del título.
Rendimiento: 180 mg (87%)
Éster terc-butílico del ácido (ft)-4-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-N)-4-metoxi-piridin-3-il]-2-metoximetil-piperazin-1-carboxílico
Figure imgf000038_0002
Se añade NaH (60%, 230 mg, 9,58 mmol) a éster terc-butílico del ácido (R)-4-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridin-3-il]-2-hidroximetil-piperazin-1-carboxílico (2,0 g, 4,80 mmol) y Mel (401 ^l, 7,20 mmol) en DMA (20 ml). Se agita la mezcla de reacción durante 2 h a ta. Se añade agua y se extrae la mezcla de reacción con EtOAc (3 veces). Se lavan las fases orgánicas combinadas con salmuera, se secan sobre MgSO4, se filtran y se concentran a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía de fase normal.
Rendimiento: 1,8 g (87%) ESI-EM: m/z = 431 (M+H)+ Tr (HPLC): 1,11 min (método 1)
Éster terc-butílico del ácido (ft)-4-(6-amino-4-metoxi-piridin-3-il)-2-metoximetil-piperazin-1-carboxílico
Figure imgf000038_0003
Se agitan éster terc-butílico del ácido (R)-4-[6-(2,5-dimetil-pirrol-1-il)-4-metoxi-piridin-3-il]-2-metoximetil-piperazin-1-carboxílico (1,8 g, 4,18 mmol), clorhidrato de hidroxilamina (1,45 g, 20,9 mmol) y trimetilamina (0,58 ml, 4,18 mmol) en etanol (10 ml) y agua (5 ml) a 80°C durante 18 h. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida, se suspende en DCM, se filtra para retirar las sales y se concentra de nuevo a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna de fase normal para dar el producto del título.
Rendimiento: 440 mg (30%) ESI-EM: m/z = 353 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,44 min (método 1)
Diclorhidrato de 4-metoxi-5-((ft)-3-metoximetil-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamina
Figure imgf000039_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster terc-butílico del ácido (R)-4-(6-amino-4-metoxi-piridin-3-il)-2-metoximetil-piperazin-1-carboxílico (440 mg, 1,25 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio clorhidrato de [(R)-4-(6-amino-4-metoxipiridin-3-il)-piperazin-2-il]-metanol.
Rendimiento: 406 mg (cuantitativo)
5-Fluoro-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo
Figure imgf000039_0002
Se lleva 2-cloro-5-fluoro-4-metoxi-piridina (1,00 g, 6,19 mmol) a un tubo sellado. Se añaden cianuro de zinc (799 mg, 6,81 mmol) y zinc (40,5 mg, 0,31 mmol) y se purga con argón. Luego se añaden PdCl2(dppf)CH2Cl2 (253 mg, 0,62 mmol) y NMP y se calienta la mezcla durante 45 min a 150°C en el microondas. Se añaden agua y EtOAc a la mezcla de reacción y se filtra a través de Celite®. Se lava la fase orgánica con disolución de bicarbonato de sodio, agua, salmuera y se seca sobre MgSO4, se filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar el compuesto del título.
Rendimiento: 689 mg (73%) ESI-EM: m/z = 153 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,61 min (método 1)
5-(4-Fluoro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo
Figure imgf000039_0003
Se calientan 5-fluoro-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (6,00 g, 39,4 mmol), 4-fluorofenol (5,31 g, 47,3 mmol) y K2CO3 (12,0 g, 86,8 mmol) en NMP (12 ml) a 100°C durante 3 h en un tubo sellado. Se diluye la mezcla de reacción con agua y se extrae con EtOAc. Se lava la fase orgánica con salmuera y se seca sobre MgSO4, se filtra y se concentra a presión reducida. Se tritura el residuo mediante éter y heptano para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 8,99 g (93%) ESI-EM: m/z = 245 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,91 min (método 1)
Ácido 5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000039_0004
Se agita 5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (8,50 g, 34,8 mmol) en disolución acuosa de NaOH 2 N (90 ml) a 100°C durante 6 h. Se enfría la mezcla de reacción hasta Ta y se ajusta el pH de la disolución a pH 4,5 con HCI 4 N. Se recoge el precipitado y se seca en un horno de secado para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 8,80 g (96%) ESI-EM: m/z = 264 (M+H)+ Tr (HPLC): 1,58 min (método 4)
4-Metoxi-5-fenoxi-piridin-2-carbonitrilo
Figure imgf000040_0001
Se calientan 5-fluoro-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (8,00 g, 52,6 mmol), fenol (5,94 g, 63,1 mmol) y K2CO3 (16,0 g, 115 mmol) en NMP (3 ml) a 100°C durante 3 h en un tubo sellado. Se diluye la mezcla de reacción con agua y se extrae con EtOAc. Se lava la fase orgánica con salmuera y se seca sobre MgSO4, se filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 11,5 g (93%) ESI-EM: m/z = 227 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,92 min (método 1)
Ácido 4-metoxi-5-fenoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000040_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 4-metoxi-5-fenoxi-piridin-2-carbonitrilo (11,5 g, 50,8 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico. Rendimiento: 9,57 g (77%) ESI-EM: m/z = 246 (M+H)+ Tr (HPLC): 2,64 min (método 4)
5-(4-Isopropoxi-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo
Figure imgf000040_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 5-fluoro-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (500 mg, 3,29 mmol) y 4­ isopropoxi-fenol (600 mg, 3,94 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio 4-metoxi-5-fenoxi-piridin-2-carbonitrilo.
Rendimiento: 850 mg (91%) ESI-EM: m/z = 285 (M+H)+ Tr (HPLC): 1,02 min (método 1)
Ácido 5-(4-Isopropoxi-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000040_0004
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 5-(4-isopropoxi-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (200 mg, 0,70 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 190 mg (77%) Tr (HPLC): 0,73 min (método 1)
4-Metoxi-5-(4-metoxi-fenoxi)-piridin-2-carbonitrilo
Figure imgf000040_0005
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 5-fluoro-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (500 mg, 3,29 mmol) y 4­ metoxifenol (490 mg, 3,94 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio 4-metoxi-5 fenoxi-piridin-2-carbonitrilo.
Rendimiento: 740 mg (88%)
Ácido 4-metoxi-5-(4-metoxi-fenoxi)-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000041_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 4-metoxi-5-(4-metoxi-fenoxi)-piridin-2-carbonitrilo (740 mg, 2,89 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 610 mg (77%)
4-Metoxi-5-(4-trifluorometil-fenoxi)-piridin-2-carbonitrilo
Figure imgf000041_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 5-fluoro-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (500 mg, 3,29 mmol) y 4­ trifluorometil-fenol (639 mg, 3,94 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio 4-metoxi-5-fenoxi-piridin-2-carbonitrilo.
Rendimiento: 320 mg (33%) ESI-EM: m/z = 294 (M+H)+ Tr (HPLC): 1,06 min (método 1)
Ácido 4-metoxi-5-(4-trifluorometil-fenoxi)-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000041_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 4-metoxi-5-(4-trifluorometil-fenoxi)-piridin-2-carbonitrilo (151 mg, 0,51 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 150 mg (93%)
5-(4-Cloro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo
Figure imgf000041_0004
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 5-fluoro-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (500 mg, 3,29 mmol) y 4-clorofenol (507 mg, 3,94 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio 4-metoxi-5-fenoxi-piridin-2-carbonitrilo.
Rendimiento: 695 mg (81%)
Ácido 5-(4-cloro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000041_0005
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 5-(4-doro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (645 mg, 2,47 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 622 mg (90%) ESI-EM: m/z = 280 (M+H)+
5-(4-Difluorometoxi-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo
Figure imgf000042_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 5-fluoro-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (75,0 mg, 0,49 mmol) y 4-difluorometoxi-fenol (101 mg, 0,63 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio 4-metoxi-5-fenoxi-piridin-2-carbonitrilo.
Rendimiento: 98,0 mg (68%) Tr (HPLC): 0,93 min (método 1)
Ácido 5-(4-difluorometoxi-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000042_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 5-(4-difluorometoxi-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (98,0 mg, 0,34 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 94,0 mg (90%) Tr (HPLC): 0,60 min (método 1)
4-Ciclopropoxi-fenol
Figure imgf000042_0003
Se agitan 2-(4-ciclopropoxi-fenil)-4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolano (800 mg, 3,08 mmol) y 4-óxido de 4-metilmorfolina (1,03 g, 8,83 mmol) en THF (100 ml) a 75°C durante 1,5 h y luego durante 18 h a ta. Se concentra la mezcla de reacción a vacío y se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice para proporcionar el compuesto del título.
Rendimiento: 389 mg (84%)
5-(4-Ciclopropoxi-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo
Figure imgf000042_0004
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 5-fluoro-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (350 mg, 2,30 mmol) y 4-ciclopropoxi-fenol (389 mg, 2,59 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio 4-metoxi-5-fenoxi-piridin-2-carbonitrilo.
Rendimiento: 342 mg (53%) Tr (HPLC): 1,00 min (método 1)
Ácido 5-(4-ciclopropoxi-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000043_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 5-(4-ciclopropoxi-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (100 mg, 0,35 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 622 mg (90%) Tr (HPLC): 0,63 min (método 1)
4-Metoxi-5-(4-trifluorometoxi-fenoxi)-piridin-2-carbonitrilo
Figure imgf000043_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 5-fluoro-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (115 mg, 0,76 mmol) y 4-trifluorometoxi-fenol (162 mg, 0,91 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio 4-metoxi-5-fenoxi-piridin-2-carbonitrilo.
Rendimiento: 140 mg (60%)
Ácido 4-metoxi-5-(4-trifluorometoxi-fenoxi)-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000043_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 4-metoxi-5-(4-trifluorometoxi-fenoxi)-piridin-2-carbonitrilo (150 mg, 0,48 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 120 mg (75%)
Éster metílico del ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000043_0004
A éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (130 mg, 0,71 mmol), trifenilfosfina (372 mg, 1,42 mmol) y alcohol 2-fluorobencílico (114 |al, 1,065 mmol) en THF (2 ml) se les añade azodicarboxilato de dietilo (646 |al, 1,42 mmol) a 0°C. Se permite que la mezcla de reacción se caliente hasta TA y se agita durante 16 h. Se concentra la mezcla resultante a vacío y se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 66,0 mg (32%) Tr (HPLC): 0,77 min (método 1)
Ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000044_0001
A éster metílico del ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (66,0 mg, 0,23 mmol) en THF/agua/MeOH (3 ml/1 ml/1 ml) se le añade LiOH (38,0 mg, 0,91 mmol), y se agita la mezcla de reacción a ta. Se acidifica la mezcla de reacción hasta pH 4,5 con HCI 4 N y se concentra a vacío. Se disuelve el residuo en DCM y tolueno y se concentra de nuevo a presión reducida. Se usó el producto sin purificación adicional.
Rendimiento: 62,0 mg (99%) Tr (HPLC): 0,48 min (método 1)
Éster metílico del ácido 5-ciclobutilmetoxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000044_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (130 mg, 0,71 mmol) y ciclobutil-metanol (91,7 mg, 1,07 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 132 mg (74%) Tr (HPLC): 0,80 min (método 1)
Ácido 5-ciclobutilmetoxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000044_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-ciclobutilmetoxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (132 mg, 0,53 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio del ácido 5-(2-fluorobenciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 124 mg (cuantitativo) Tr (HPLC): 0,53 min (método 1)
Éster metílico del ácido 4-metoxi-5-(1-metil-ciclopropilmetoxi)-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000044_0004
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (130 mg, 0,71 mmol) y (1-metil-ciclopropil)-metanol (103 mg, 1,07 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 115 mg (65%) Tr (HPLC): 0,81 min (método 1)
Figure imgf000045_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-cidobutilmetoxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (115 mg, 0,46 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluorobenciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 108 mg (cuantitativo) Tr (HPLC): 0,52 min (método 1)
Éster metílico del ácido 5-ciclohexiloxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000045_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (130 mg, 0,71 mmol) y ciclohexanol (111 |l, 1,07 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 171 mg (91%) Tr (HPLC): 0,87 min (método 1)
Ácido 5-ciclohexiloxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000045_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-ciclohexiloxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (131 mg, 0,49 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 124 mg (cuantitativo) Tr (HPLC): 0,57 min (método 1)
Éster metílico del ácido 5-(4-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000045_0004
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (130 mg, 0,71 mmol) y (4-fluoro-fenil)-metanol (115 |l, 1,07 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluorobenciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 150 mg (62%) Tr (HPLC): 0,82 min (método 1)
Ácido 5-(4-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000046_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-(4-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (150 mg, 0,44 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 177 mg (cuantitativo) Tr (HPLC): 0,82 min (método 1)
Éster metílico del ácido 5-ciclopentiloxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000046_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (130 mg, 0,71 mmol) y ciclopentanol (96,7 |al, 1,07 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 170 mg (95%) Tr (HPLC): 0,87 min (método 1)
Ácido 5-ciclopentiloxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000046_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-ciclopentiloxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (130 mg, 0,52 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluorobenciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 122 mg (99%) Tr (HPLC): 0,49 min (método 1)
Éster metílico del ácido 5-isobutoxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000046_0004
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (118 mg, 0,64 mmol) y alcohol isobutílico (71,6 mg, 0,97 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 141 mg (92%) Tr (HPLC): 0,78 min (método 1)
Ácido 5-isobutoxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000047_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-isobutoxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (141 mg, 0,59 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 133 mg (cuantitativo) Tr (HPLC): 0,51 min (método 1)
Éster metílico del ácido 5-ciclopropilmetoxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000047_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (130 mg, 0,71 mmol) y ciclopropilmetanol (84,2 |al, 1,07 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 146 mg (87%) Tr (HPLC): 0,74 min (método 1)
Ácido 5-ciclopropilmetoxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000047_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-ciclopropilmetoxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (325 mg, 1,37 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluorobenciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 358 mg (cuantitativo) ESI-EM: m/z = 224 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,40 min (método 5)
Éster metílico del ácido 5-benciloxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000047_0004
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (118 mg, 0,64 mmol) y alcohol bencílico (100 |al, 0,97 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 140 mg (80%) Tr (HPLC): 0,79 min (método 1)
Ácido 5-benciloxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000048_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-benciloxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (140 mg, 0,51 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 358 mg (99%) Tr (HPLC): 0,54 min (método 1)
Éster metílico del ácido 5-(3,3-difluoro-ciclobutilmetoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000048_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (118 mg, 0,64 mmol) y (3,3-difluoro-ciclobutil)-metanol (150 mg, 0,82 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluorobenciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 111 mg (47%) ESI-EM: m/z = 288 (M+H)+ Tr (HPLC): 1,20 min (método 5)
Ácido 5-(3,3-difluoro-ciclobutilmetoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000048_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-(3,3-difluoro-ciclobutilmetoxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico (110 mg, 0,38 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 73,4 mg (70%) ESI-EM: m/z = 274 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,56 min (método 5)
Éster metílico del ácido 4-metoxi-5-propoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000048_0004
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (130 mg, 0,71 mmol) y 1-propanol (80,0 |al, 1,07 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 114 mg (71%) Tr (HPLC): 0,69 min (método 1)
Ácido 4-metoxi-5-propoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000049_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 4-metoxi-5-propoxi-piridin-2-carboxílico (114 mg, 0,51 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Figure imgf000049_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (130 mg, 0,71 mmol) y 2-ciclopropiletanol (91,7 mg, 1,07 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 130 mg (73%) Tr (HPLC): 0,82 min (método 1)
Ácido 5-(2-ciclopropil-etoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000049_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-(2-ciclopropil-etoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (130 mg, 0,52 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 122 mg (99%) Tr (HPLC): 0,53 min (método 1)
Éster metílico del ácido 4-metoxi-5-fenetiloxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000049_0004
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (130 mg, 0,71 mmol) y 2-feniletanol (128 |l, 1,07 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 177 mg (87%) Tr (HPLC): 0,90 min (método 1)
Ácido 4-metoxi-5-fenetiloxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000050_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 4-metoxi-5-fenetiloxi-piridin-2-carboxílico (177 mg, 0,62 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluorobenciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 168 mg (cuantitativo) Tr (HPLC): 0,63 min (método 1)
Éster metílico del ácido 5-(2,2-dimetil-propoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000050_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (130 mg, 0,71 mmol) y 2,2-dimetil-propan-1-ol (93,8 mg, 1,07 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluorobenciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 160 mg (89%) Tr (HPLC): 0,92 min (método 1)
Ácido 5-(2,2-dimetil-propoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000050_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-(2,2-dimetil-propoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (160 mg, 0,63 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 150 mg (99%) Tr (HPLC): 0,61 min (método 1)
Éster metílico del ácido 5-(1-fluorometil-ciclopropilmetoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000050_0004
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (118 mg, 0,64 mmol) y (1-fluorometil-ciclopropil)-metanol (101 mg, 0,97 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluorobenciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 159 mg (92%) Tr (HPLC): 0,69 min (método 1)
Ácido 5-(1-fluorometil-ciclopropilmetoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000051_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-(1-fluorometil-ciclopropilmetoxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico (159 mg, 0,59 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 150 mg (cuantitativo) Tr (HPLC): 0,43 min (método 1)
Éster metílico del ácido 5-etoxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000051_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (130 mg, 0,71 mmol) y etanol (62,1 ^l, 1,07 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 151 mg (100%) Tr (HPLC): 0,92 min (método 1)
Ácido 5-etoxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000051_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-etoxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (151 mg, 0,71 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 140 mg (99%) Tr (HPLC): 0,83 min (método 1)
Éster metílico del ácido 5-((S)-1-ciclopropil-etoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000051_0004
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (118 mg, 0,64 mmol) y (R)-1-ciclopropil-etanol (83,2 mg, 0,97 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluorobenciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 102 mg (63%)
Ácido 5-((S)-1-ciclopropil-etoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000052_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-((S)-1-ciclopropil-etoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (102 mg, 0,41 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 96,0 mg (100%) Tr (HPLC): 0,51 min (método 1)
Éster metílico del ácido 5-isopropoxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000052_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (130 mg, 0,71 mmol) y propan-2-ol (81,5 |l, 0,97 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 154 mg (96%) Tr (HPLC): 0,62 min (método 1)
Ácido 5-isopropoxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000052_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-isopropoxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (154 mg, 0,68 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluorobenciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 144 mg (cuantitativo)
Éster metílico del ácido 5-((ft)-1-ciclopropil-etoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000052_0004
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-hidroxi-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (118 mg, 0,64 mmol) y (S)-1-ciclopropil-etanol (83,2 mg, 0,97 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluorobenciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 101 mg (63%)
Ácido 5-((ft)-1-ciclopropil-etoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico
Figure imgf000053_0001
Se sintetiza el compuesto del título a partir de éster metílico del ácido 5-((R)-1-ciclopropil-etoxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico (101 mg, 0,40 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio ácido 5-(2-fluoro-benciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 94,0 mg (99%) Tr (HPLC): 0,51 min (método 1)
3-(Trifluorometil)ciclobutil1metanol
Figure imgf000053_0002
A ácido 3-(trifluorometil)ciclobutano-1-carboxílico (50 mg, 0,29 mmol) en THF (2 ml) se le añade CDI (57 mg, 0,36 mmol) y se agita a Ta durante 2 h. Se añade borohidruro de sodio (12 mg, 0,31 mmol) en agua (0,5 ml) y se agita la mezcla de reacción a TA durante 30 min Se acidifica la mezcla de reacción con HCI 1 M y se extrae con DCM. Se separan las fases orgánicas combinadas y se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran.
Rendimiento: 45 mg (cuantitativo)
4-Metoxi-5-{[3-(trifluorometil)ciclobutil1metoxi}piridin-2-carboxilato de metilo
Figure imgf000053_0003
Se sintetiza el compuesto del título a partir de 5-hidroxi-4-metoxipiridin-2-carboxilato de metilo (53 mg, 0,29 mmol) y [3-(trifluorometil)ciclobutil]metanol (45 mg, 0,29 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio éster metílico del ácido 5-(2-fluorobenciloxi)-4-metoxi-piridin-2-carboxílico.
Rendimiento: 90 mg (97%)
Ácido 4-metoxi-5-{[3-(trifluorometil)ciclobutil1metoxi}piridin-2-carboxílico
Figure imgf000053_0004
Se añade disolución acuosa de NaOH 4 M (0,55 ml, 2,2 mmol) a 4-metoxi-5-{[3-(trifluorometil)-ciclobutil]metoxi}-piridin-2-carboxilato de metilo (350 mg, 1,10 mmol) en 5 ml de metanol. Se agita la mezcla de reacción durante la noche a TA. Se añade disolución acuosa de HCl 4 M (0,5 ml) y se agita la mezcla de reacción durante 30 min Se evapora la mezcla de reacción a presión reducida. Se añade DMF al residuo y se purifica el compuesto deseado mediante HPLC. Rendimiento: 150 mg (45%)
4-Metoxi-5-(3,3,3-trifluoro-2-metilpropoxi)piridin-2-carboxilato de metilo
Figure imgf000054_0001
A 5-hidroxi-4-metoxipiridin-2-carboxilato de metilo (100 mg, 0,55 mmol) en THF se le añaden 3,3,3-trifluoro-2-metilpropan-1-ol (105 mg, 0,82 mmol) y trifenilfosfina (286 mg, 1,10 mmol) y seguido de azodicarboxilato de diisopropilo (221 mg, 1,10 mmol). Se agita la mezcla de reacción a TA durante 3 h, se evapora la mezcla de reacción a presión reducida y se purifica el residuo mediante HPLC. Se combinan las fracciones que contienen producto y se liofilizan.
Rendimiento: 160 mg (cuantitativo)
Ácido 4-metoxi-5-(3,3,3-trifluoro-2-metilpropoxi)piridin-2-carboxílico
Figure imgf000054_0002
Se añade disolución acuosa de NaOH 4 M (0,52 ml, 2,08 mmol) a 4-metoxi-5-(3,3,3-trifluoro-2-metilpropoxi)piridin-2-carboxilato de metilo (160 mg, 0,55 mmol) en metanol. Se agita la mezcla de reacción durante 2 h a Ta . Se neutraliza la mezcla de reacción con disolución acuosa de HCI 4 M y se evapora a presión reducida. Se usa el residuo sin purificación adicional.
Rendimiento: 150 mg (98%)
Procedimiento general:
En la tabla 3A se resumen los procedimientos para preparar los compuestos 29, 31,49, 56 y 66 de la invención, así como los compuestos de referencia 1-28, 30, 32-48, 50-55, 57-65 y 67-80. En la tabla 3B se resumen los análisis de los compuestos respectivos.
I: A ácido carboxílico (1 eq.) en DMA se le añade HATU (1,2 eq.) y se agita. Se añaden amina (1 eq.) y DIPEA (4,0 eq.) y se agitan durante 18 h a ta. Purificación mediante cromatografía en columna RP (ACN/agua, condiciones ácidas o básicas) o mediante cromatografía en gel de sílice.
II: Se agitan ácido carboxílico (1 eq.) y CDI (1,5 eq.) en DMA durante 30 min a ta. Se añaden amina (1 eq.) y DIPEA (2,0 eq.) y se agitan durante 3 h a ta. Purificación mediante cromatografía en columna RP (ACN/agua, condiciones ácidas o básicas) o mediante cromatografía en gel de sílice.
III: Se agitan amina (1,0 eq.), ácido carboxílico (0,9 eq.), TBTU (1,0 eq.) y DIPEA (4,0 eq.) en NMP durante 18 h a ta. Se purifica la mezcla de reacción filtrada mediante cromatografía en columna r P (ACN/agua, condiciones ácidas o básicas) o mediante cromatografía en gel de sílice.
Tabla 3A. Procedimientos generales para preparar los compuestos 29, 31,49, 56 y 66 de la invención, así como los compuestos de referencia 1-28, 30, 32-48, 50-55, 57-65 y 67-80.
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Figure imgf000065_0001
Tabla 3B. Datos analíticos para los compuestos 29, 31, 49, 56 y 66 de la invención, así como los compuestos de referencia 1-28, 30, 32-48, 50-55, 57-65 y 67-80.
Figure imgf000065_0002
Figure imgf000066_0002
Figure imgf000066_0003
Síntesis de productos intermedios nitrogenados
Clorhidrato de [(ft)-4-(6-nitro-piridin-3-il)-piperazin-2-il1-metanol
Figure imgf000066_0001
Se agita éster terc-butílico del ácido (R)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-(6-nitro-piridin-3-il)-piperazin-1-carboxílico (1,73 g, 3,82 mmol) en DCM (10 ml) y HCI 4 M (9,55 ml, 38,2 mmol) a TA durante 2 h. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida.
Figure imgf000067_0001
Se agitan clorhidrato de [(R)-4-(6-nitro-piridin-3-il)-piperazin-2-il]-metanol (60,0 mg, 0,21 mmol) y ácido 4-metoxi-5-fenoxi-piridin-2-carboxílico (42,8 mg, 0,18 mmol) en NMP (500 |al) con TBTU (70,1 mg, 0,22 mmol) y DIPEA (151 |al, 0,87 mmol) durante 18 h a ta. Se purifica la mezcla de reacción mediante cromatografía en columna RP (ACN/agua/NH4HCO3). Se purifica el residuo de nuevo mediante cromatografía en columna de fase normal (MeOH/DCM) para dar el compuesto del título.
Rendimiento: 95 mg (93%)
Figure imgf000067_0002
Se sintetiza el compuesto del título a partir de clorhidrato de [(R)-4-(6-nitro-piridin-3-il)-piperazin-2-il]-metanol (60,0 mg, 0,22 mmol) y ácido 4-metoxi-5-(4-metoxi-fenoxi)-piridin-2-carboxílico (48,1 mg, 0,18 mmol) según el procedimiento descrito para la síntesis del producto intermedio [(R)-2-hidroximetil-4-(6-nitro-piridin-3-il)-piperazin-1-il]-(4-metoxi-5-fenoxi-piridin-2-il)-metanona.
Rendimiento: 102 mg (cuantitativo) ESI-EM: m/z = 496 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,78 min (método 1) Procedimiento:
IV: Se agita producto intermedio nitrogenado (1 eq.) y Pd/C (10%) en MeOH durante 20 h a TA bajo una atmósfera de hidrógeno. Se concentra la mezcla de reacción a vacío y se purga con argón. Se filtra el residuo a través de Celite® y se lava con MeOH. Se concentra el filtrado a presión reducida y se purifica el producto en bruto mediante cromatografía en columna RP (ACN/agua, condiciones básicas o ácidas).
Tabla 4. Procedimientos para preparar los compuestos de referencia 81 y 82.
Figure imgf000067_0003
Los compuestos 85 y 87 de la invención, así como los compuestos de referencia 83, 84, 86, 88 y 89 se preparan generalmente haciendo reaccionar un producto intermedio de ácido carboxílico con un producto intermedio de amina en condiciones similares a las descritas para el procedimiento general (I) en la tabla 3A. En la tabla 5B se resumen los análisis de los compuestos respectivos.
Síntesis de productos intermedios
4-Etoxi-5-fenoxipicolinonitrilo
Figure imgf000068_0001
A una disolución de 5-fluoro-4-isopropoxipicolinonitrilo (500 mg, 3,01 mmol) en DMF (10 ml) agitada a TA bajo una atmósfera de N2 se le añaden fenol (339,85 mg, 3,61 mmol) y K2CO3 (1,25 g, 9,03 mmol), se calienta la mezcla resultante hasta 100°C durante 3 h. Luego se diluye la mezcla de reacción con acetato de etilo (50 ml), se lava con agua y salmuera, se seca sobre Na2SO4 anhidro, se filtra y se concentra. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice.
Rendimiento: 530 mg (73%) m/z = 241 (M+H)+.
Ácido 4-etoxi-5-fenoxipicolínico
Figure imgf000068_0002
Se agita una mezcla de 4-etoxi-5-fenoxipicolinonitrilo (530 mg, 2,21 mmol) en disolución de hidróxido de sodio 2 N (10 ml) a 100°C durante la noche. Luego se acidifica la mezcla de reacción mediante HCI 1 N para ajustar a pH = 4 y se extrae con DCM (20 ml x 2). Se separan las fases orgánicas combinadas y se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran para dar el producto deseado que puede usarse sin purificación adicional.
Figure imgf000068_0003
A una mezcla agitada de 5-bromo-4-ciclopropoxipiridin-2-amina (2,1 g, 9,17 mmol), éster terc-butílico del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (4,25 g, 13,75 mmol) y Cs2CO3 (9,0 g, 27,50 mmol) en dioxano (60 ml) y agua (12 ml) a ta bajo una atmósfera de nitrógeno se le añade Pd(dppf)Ch (200 mg, 0,27 mmol). Se agita la mezcla resultante a 90°C durante 4 h. Luego se vierte la mezcla de reacción en agua helada y se extrae con DCM (50 ml x 3). Se lavan las fases orgánicas combinadas con salmuera, se secan sobre Na2SO4 anhidro, se filtran y se concentran. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el producto deseado.
Rendimiento: 3 g (98%) m/z = 332 (M+H)+.
4-(6-Amino-4-ciclopropoxipiridin-3-il)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo
Figure imgf000069_0001
A una disolución de 6-amino-4-ciclopropoxi-1’,2’,3’,6’-tetrahidro-[3,4’-bipiridina]-1’-carboxilato de tere-butilo (3 g, 9,05 mmol) en EtOH (40 ml) se le añade Pd(OH)2/C (2 g). Se agita la mezcla de reacción resultante a 25°C bajo una atmósfera de hidrógeno durante 16 h. Se retira el catalizador por filtración a través de Celite®, y se evapora el filtrado hasta sequedad a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el producto deseado.
Rendimiento: 1,8 g (60%) m/z = 334 (M+H)+.
Diclorhidrato de 4-ciclopropoxi-5-(piperidin-4-il)piridin-2-amina
Figure imgf000069_0002
Se disuelve 4-(6-amino-4-ciclopropoxipiridin-3-il)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo (1,6 g, 4,8 mmol) en una disolución de HCl (g) en EtOH (10 ml). Se agita la mezcla de reacción a TA durante 2 h. Después de completarse la reacción, se elimina el disolvente a presión reducida. Luego se tritura el producto en bruto con Et2O para dar el producto deseado que puede usarse sin purificación adicional.
Rendimiento: 1 g (90%) m/z = 234 (M+H)+.
(4-Propoxipiridin-2-il)carbamato de tere-butilo
Figure imgf000069_0003
A una disolución agitada de 2-aminopiridin-4-ol (1,25 g, 11,4 mmol) en N,N-dimetilacetamida (15 ml) se le añaden carbonato de cesio (7,42 g, 22,8 mmol), bromuro de propilo (1,24 ml, 13,6 mmol) y yoduro de cesio (2,95 g, 11,4 mmol). Se agita la mezcla resultante a 100°C durante 1 día. Se añade dicarbonato de di-tere-butilo (2,74 g, 12,6 mmol) a la mezcla de reacción y se agita a 100°C durante 16 h. Se diluye la mezcla de reacción con agua (20 ml) y se extrae con EtOAc (50 ml). Se separan las fases y se concentra la fase orgánica. Se purifica la mezcla en bruto mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice para proporcionar el producto deseado.
Rendimiento: 787 mg (27%) m/z = 253 (M+H)+.
(5-Bromo-4-propoxipiridin-2-iDcarbamato de ferc-butilo
Figure imgf000070_0001
A una disolución agitada de (4-propoxipiridin-2-il)carbamato de ferc-butilo (0,79 g, 3,11 mmol) en ácido acético (5 ml) se le añade bromo (0,40 g, 2,49 mmol, en 1 ml de ácido acético) gota a gota a 0°C. Después de 0,5 h, se añade una cantidad adicional de ácido acético (8 ml) y se permite que la mezcla de reacción se caliente hasta temperatura ambiente. Después de 1 h, se concentra la mezcla y se purifica mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el producto deseado.
Figure imgf000070_0002
A una disolución de (5-bromo-4-propoxipiridin-2-il)carbamato de ferc-butilo (254 mg, 0,77 mmol) en dioxano (4 ml) se le añaden éster ferc-butílico del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico (596 mg, 1,93 mmol), carbonato de sodio (disolución acuosa 2 M, 0,77 ml) y [1,1’-bis(difenilfosfino)ferroceno]-dicloropaladio(II) (56 mg, 0,077 mmol). Se agita la mezcla de reacción a 100°C durante 24 h. Se diluye la mezcla de reacción con EtoAc (10 ml) y se filtra a través de un lecho de agente de filtración SuperCell. Se concentra el filtrado y se purifica mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice para proporcionar el producto deseado.
Rendimiento: 333 mg (cuantitativo) m/z = 434 (M+H)+.
4-(6-((7erc-butoxicarbonil)amino)-4-propoxipiridin-3-il)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000070_0003
A 6-{[(ferc-butoxi)carbonil]amino}-4-propoxi-1’,2’,3’,6’-tetrahidro-[3,4’-bipiridina]-1’-carboxilato de ferc-butilo (333 mg, 0,77 mmol) en EtOH (18 ml) y EtoAc (3 ml) se le añade hidróxido de paladio sobre carbono (20% húmedo, 27 mg). Se agita la mezcla de reacción bajo una atmósfera de hidrógeno (43 psi) durante 3 días y se filtra a través de agente de filtración SuperCell. Se concentra el filtrado a presión reducida para proporcionar el producto deseado.
Rendimiento: 330 mg (98%) m/z = 436 (M+H)+.
Diclorhidrato de 5-(piperidin-4-il)-4-propoxipiridin-2-amina
Figure imgf000071_0001
A 4-(6-((tere-butoxicarbonil)amino)-4-propoxipiridin-3-il)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo (330 mg, 0,76 mmol) en diclorometano (2 ml) se le añade una disolución de HCl en dioxano (2,00 ml, 4 M, 8,0 mmol). Se agita la mezcla de reacción durante 16 h y se concentra. Se tritura el residuo con DCM y se seca a vacío para proporcionar el producto deseado.
Rendimiento: 233 mg cuantitativo.
Diclorhidrato de 4-etoxi-5-(piperidin-4-il)piridin-2-amina
Figure imgf000071_0002
Puede sintetizarse diclorhidrato de 4-etoxi-5-(piperidin-4-il)piridin-2-amina de manera análoga al protocolo para la síntesis de diclorhidrato de 5-(piperidin-4-il)-4-propoxipiridin-2-amina. La alquilación de 2-aminopiridin-4-ol con bromuro de etilo y la posterior protección con Boc conduce a la formación de N-(4-etoxipiridin-2-il)carbamato de terebutilo. La bromación de N-(4-etoxipiridin-2-il)carbamato de tere-butilo conduce a la síntesis de (5-bromo-4-etoxipiridin-2- il)carbamato de tere-butilo. La posterior reacción con éster tere-butílico del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-1-carboxílico conduce a la formación de 6-{[(tercbutoxi)carbonil]amino}-4-etoxi-1’,2’,3’,6’-tetrahidro-[3,4’-bipiridina]-1’-carboxilato de tere-butilo. En la siguiente etapa, se obtiene 4-(6-((tere-butoxicarbonil)amino)-4-etoxipiridin-3-il)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo a través de hidrogenación. La escisión del grupo protector Boc conduce a la síntesis de diclorhidrato de 4-etoxi-5-(piperidin-4-il)piridin-2-amina.
3- (6-Aminopiridazin-3-il)-8-azabiciclo[3.2.11oct-2-eno-8-carboxilato de tere-butilo
Figure imgf000071_0003
A 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-8-azabiciclo[3.2.1]-oct-2-eno-8-carboxilato de tere-butilo (1,93 g, 5,75 mmol) y 6-bromopiridazin-3-amina (1,00 g, 5,75 mmol) en 1,4-dioxano (25 ml) se le añaden disolución ac. de Na2CO32 M (11,5 ml, 23,0 mmol) y catalizador Xphos de 2a generación (136 mg, 0,17 mmol). Se desgasifica la mezcla de reacción con argón y se agita a 100°C durante 2 h. Se evaporan todas las sustancias volátiles a presión reducida. Se purifica el material en bruto mediante cromatografía de fase normal para obtener el compuesto del título.
Rendimiento: 0,80 g (46%) ESI-EM: m/z = 303 (M+H)+
3-(6-Aminopiridazin-3-il)-8-azabiciclo[3.2.11octano-8-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000072_0001
A 3-(6-aminopiridazin-3-il)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-eno-8-carboxilato de ferc-butilo (0,80 g, 2,65 mmol) en MeOH (30 ml) se le añade Pd/C (250 mg) bajo nitrógeno. Se desgasifica la mezcla de reacción y se hidrogena a una atmósfera de hidrógeno de 3 bar a TA durante la noche. Se filtra la mezcla de reacción y se concentra a presión reducida. Rendimiento: 800 mg (cuantitativo) ESI-EM: m/z = 305 (M+H)+
Diclorhidrato de 6-{8-azabiciclo[3.2.11octan-3-il)piridazin-3-amina
Figure imgf000072_0002
A 3-(6-aminopiridazin-3-il)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxilato de ferc-butilo (800 mg, 2,63 mmol) en un volumen apropiado de DCM se le añade HCl 4 M en 1,4 dioxano y se agita a TA hasta que se completa la reacción. Se evaporan todas las sustancias volátiles a presión reducida.
Rendimiento: 700 mg (96%) ESI-EM: m/z = 205 (M+H)+
2-Cloro-5-fluoro-4-metoxipiridina
Figure imgf000072_0003
A 2-cloro-5-fluoropiridin-4-ol (1 g, 7,05 mmol) y K2CO3 (1,27 g, 9,16 mmol) en DMF (10 ml) se les añade yodometano (1,15 g, 8,13 mmol) a temperatura ambiente. Se agita la mezcla de reacción resultante a Ta durante 2 h. Se diluye la mezcla de reacción con agua (20 ml) y se extrae con EtOAc (30 ml x 2). Se lavan las fases orgánicas combinadas con agua y salmuera, se secan sobre Na2SO4 anhidro, se filtran y se concentran a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el producto deseado.
Rendimiento^ g (91%) m/z = 162 (M+H)+
5-Fluoro-4-metoxipicolinonitrilo
Figure imgf000072_0004
A 2-cloro-5-fluoro-4-metoxipiridina (1,0 g, 6,2 mmol), cianuro de zinc (800 mg, 6,8 mmol) y dppf (34 mg, 0,62 mmol) en DMF (10 ml) agitados a TA bajo nitrógeno atmósfera, se les añade Pd2(dba)3 (56 mg, 0,62 mmol). Se agita la mezcla de reacción a 150°C bajo una atmósfera de nitrógeno durante 3 h. Luego se diluye la mezcla de reacción con agua (30 ml) y se extrae con EtOAc (30 ml x 2). Se lavan las fases orgánicas combinadas con agua y salmuera, se secan sobre Na2SO4 anhidro, se filtran y se concentran a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el producto deseado.
Rendimiento: 700 mg (74 %) m/z = 153 (M+H)+.
4-Metoxi-5-(4-(trifluorometil)fenoxi)picolinonitrilo
Figure imgf000073_0001
A 5-fluoro-4-metoxipicolinonitrilo (700 mg, 4,6 mmol) en DMF (10 ml) se le añaden 4-(trifluorometil)fenol (746 mg, 4,6 mmol) y K2CO3 (636 mg, 4,6 mmol). Se agita la mezcla de reacción a 100°C durante 16 h. Se diluye la mezcla de reacción con agua (20 ml) y se extrae con EtOAc (20 ml x 2). Se combinan las fases orgánicas combinadas, se lavan con agua y salmuera, se secan sobre Na2SO4 anhidro, se filtran y se concentran a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el producto deseado.
Rendimiento: 1 g (80 %) m/z = 295 (M+H)+.
Ácido 4-metoxi-5-(4-(trifluorometil)fenoxi)picolínico
Figure imgf000073_0002
A una disolución de NaOH (1,6 g, 40 mmol) en agua (20 ml) se le añade 4-metoxi-5-(4-(trifluorometil)fenoxi)picolinonitrilo (700 mg, 2,4 mmol). Se agita la mezcla de reacción a 100°C durante la noche. Se acidifica la mezcla de reacción mediante HCl 6 M para ajustar a pH = 2, se extrae con EtOAc (30 ml x 2). Se lavan las fases orgánicas combinadas con agua y salmuera, se secan sobre Na2SO4 anhidro, se filtran y se concentran a presión reducida para dar el producto en bruto que puede usarse directamente sin purificación adicional.
Rendimiento: 700 mg (94%) m/z = 314 (M+H)+.
2-Cloro-5-fluoropiridin-4-ol
Figure imgf000073_0003
Bajo una atmósfera de nitrógeno a -78°C, a una disolución agitada de 2-cloro-5-fluoropiridina (5,0 g, 38 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml), se le añade diisopropilamiduro de litio (24,7 ml, 49,4 mmol, 2 M en tetrahidrofurano) gota a gota a lo largo de 30 min. Se agita la mezcla de reacción a -78°C durante 2 h. Después de eso, se añade una disolución de borato de trimetilo (7,9 g, 76,03 mmol) en tetrahidrofurano (10 ml) gota a gota a lo largo de 20 min. Después de la adición, se agita la mezcla de reacción a TA durante otras 2 h. Se enfría la mezcla de reacción hasta 0°C y se añade ácido acético (6,5 ml). Se agita la mezcla de reacción a 0°C durante 30 min. Se añade peróxido de hidrógeno (11,5 ml, disolución al 30%) gota a gota a 0°C. Se agita la mezcla de reacción a TA durante la noche. Se extingue la mezcla de reacción con NaS2O4 acuoso saturado. Se añade HCl 5 N a la mezcla de reacción. Después de la extracción con EtOAc (50 ml x 3), se lavan las fases orgánicas combinadas con agua y salmuera, se secan sobre Na2SO4 anhidro, se filtran y se concentran a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice para dar el producto deseado.
Rendimiento: 3,8 g (68%). m/z = 149 (M+H)+.
2-Cloro-4-etoxi-5-fluoropiridina
Figure imgf000073_0004
A 2-cloro-5-fluoropiridin-4-ol (2, 3,0 g, 20,33 mmol) y carbonato de plata(I) (8,4 g, 30,50 mmol) en DMF (50 ml) se les añade yodoetano (9,51 g, 61,00 mmol) a 0°C bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 3 h. Luego se diluye la mezcla de reacción con acetato de etilo (100 ml) y se lava con agua y salmuera, se seca sobre Na2SO4 anhidro, se filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el producto deseado.
Rendimiento: 3,0 g (84%) m/z = 177 (M+H)+.
4-Etoxi-5-fluoropicolinonitrilo
Figure imgf000074_0001
A 2-cloro-4-etoxi-5-fluoropiridina (300 mg, 1,71 mmol) en DMF (10 ml) se le añaden dicianozinc (141 mg, 1,2 mmol), zinc (22,3 mg, 0,34 mmol) y Pd(dppf)Ch (50 mg) bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agita la mezcla de reacción a 150°C durante 3 h. Se diluye la mezcla de reacción con acetato de etilo (50 ml), se lava con agua y salmuera, se seca sobre Na2SO4 anhidro, se filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el producto deseado.
Rendimiento: 220 mg (78%) CL-EM: m/z 167 [M+H]+.
4-Etoxi-5-(4-fluorofenoxi)picolinonitrilo
Figure imgf000074_0002
A 4-fluorofenol (202 mg, 1,81 mmol) y K2CO3 (249 mg, 1,81 mmol) en DMF (5 ml) se les añade 4-etoxi-5-fluoropicolinonitrilo (200 mg, 1,2 mmol) en una porción. Se agita la mezcla de reacción a 100°C durante 3 h. Después de enfriar, se diluye la mezcla de reacción con acetato de etilo (20 ml), se lava con agua y salmuera, se seca sobre Na2SO4 anhidro, se filtra y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el producto deseado.
Rendimiento: 220 mg (71%) m/z = 259 (M+H)+.
Ácido 4-etoxi-5-(4-fluorofenoxi)picolínico
Figure imgf000074_0003
Se agita una mezcla de 4-etoxi-5-(4-fluorofenoxi)picolinonitrilo (500 mg, 1,94 mmol) en una disolución acuosa de hidróxido de sodio 2 N (10 ml) a 100°C durante la noche. Después de enfriar, se acidifica la mezcla de reacción mediante HCl acuoso 1 N para ajustar a pH = 4 y se extrae con DCM (20 ml x 2). Se lavan las fases orgánicas combinadas con agua y salmuera, se secan sobre Na2SO4 anhidro, se filtran y se concentran a presión reducida para dar el producto deseado en bruto.
Rendimiento: 490 mg (91%) m/z = 278 (M+H)+.
Tabla 5A. Procedimientos para preparar los compuestos 85 y 87 de la invención, así como los compuestos de referencia 83, 84, 86, 88 y 89.
Figure imgf000074_0004
Figure imgf000075_0001
Tabla 5B. Datos analíticos para los compuestos 85 y 87 de la invención, así como los compuestos de referencia 83, 84, 86, 88 y 89.
Figure imgf000075_0002
Procedimientos generales:
En la tabla 6A se resumen los procedimientos para preparar el compuesto 90 de la invención, así como el compuesto de referencia 91. En la tabla 6B se resumen los análisis de los compuestos respectivos.
V: A ácido carboxílico (1,0 eq.) (producto intermedio 2 en la siguiente tabla 6A) en DMF se le añaden DIPEA (3,0 eq.) y HATU (1,0 eq.) y se agita la mezcla de reacción durante 30 min a ta. Se añade amina (1,0 eq) (producto intermedio 1 en la siguiente tabla 6A) y se agita la mezcla de reacción durante la noche. Se purifica la mezcla de reacción filtrada mediante cromatografía en columna RP (ACN/agua TFA o condiciones básicas).
Tabla 6A. Procedimientos generales para preparar el compuesto 90 de la invención, así como el compuesto de referencia 91.
Figure imgf000076_0002
Tabla 6B. Datos analíticos para el compuesto 90 de la invención, así como el compuesto de referencia 91.
Figure imgf000076_0003
Compuestos de referencia 92 y 93:
Sal de TFA de 4-metoxi-5-[1-(4-metoxi-5-{[3-(trifluorometN)-ciclobutil1metoxi}-piridin-2-carbonil)piperidin-4-il1piridin-2-amina
Figure imgf000076_0001
Se agitan ácido 4-metoxi-5-(3-trifluorometil-ciclobutilmetoxi)-piridin-2-carboxílico (40 mg, 0,13 mmol), DIPEA (113 |al, 0,66 mmol), HATU (54 mg, 0,144 mmol) y diclorhidrato de 4-metoxi-5-(piperidin-4-il)piridin-2-amina (37 mg, 0,13 mmol) en DMF (2 ml) durante la noche a ta. Se purifica la mezcla de reacción mediante cromatografía en columna Rp (ACN/agua TFA) para obtener ambos estereoisómeros.
Rendimiento: compuesto 92 (isómero trans): 5 mg (6%) Tr en HPLC: 0,50 min (método 12) y compuesto 93 (isómero cis): 8 mg (10%) Tr en HPLC: 0,48 min (método 12), ESI-EM: m/z = 495 (M+H)+
Compuesto de referencia 94:
4-Metoxi-5-{1-[4-metoxi-5-(3,3,3-trifluoro-2-metilpropoxi)piridin-2-carbonil1piperidin-4-il}piridin-2-amina
Figure imgf000077_0001
Se agitan ácido 4-metoxi-5-(3,3,3-trifluoro-2-metilpropoxi)piridin-2-carboxílico (110 mg, 0,39 mmol), DIPEA (271 ^l, 1,58 mmol), HATU (150 mg, 0,39 mmol) y diclorhidrato de 4-metoxi-5-(piperidin-4-il)piridin-2-amina (121 mg, 0,43 mmol) en DMF (2 ml) durante 2 h a ta. Se purifica la mezcla de reacción mediante cromatografía en columna RP. Rendimiento: 110 mg (60%) ESI-EM: m/z = 469 (M+H)+Tr en HPLC: 0,71 min (método 13)
Enantiómeros de 4-metoxi-5-(1-{4-metoxi-5-[3,3,3-trifluoro-2-metilpropoxi1piridin-2-carbonil}piperidin-4-il)-piridin-2-amina (94):
4-Metoxi-5-(1-{4-metoxi-5-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2-metilpropoxi1piridin-2-carbonil}piperidin-4-il)-piridin-2-amina y 4-metoxi-5-(1-{4-metoxi-5-[(2ft)-3,3,3-trifluoro-2-metilpropoxi1piridin-2-carboniDpiperidin-4-N)piridin-2-amina
Figure imgf000077_0002
Se separa adicionalmente 4-metoxi-5-{1-[4-metoxi-5-(3,3,3-trifluoro-2-metilpropoxi)piridin-2-carbonil1piperidin-4-il}piridin-2-amina (292 mg, 0,62 mmol) mediante cromatografía de fluidos supercríticos quiral (CFS, dióxido de carbono supercrítico/NH320 mM en EtOH, Chiral ART®, Amylose-SC 20x250 mm, 5 p,M) para obtener ambos enantiómeros 94a (primera fracción de elución) y 94b (segunda fracción de elución). La estereoquímica se asigna al azar.
Rendimiento: 70 mg (48%, compuesto 94a; Tr: 5,69 min) y 74 mg (50%, compuesto 94b; Tr: 6,23 min)
Ácido 5-hidroxi-4-metoxipiridin-2-carboxílico
Figure imgf000077_0003
Se añade hidróxido de potasio (6,28 g, 111,98 mmol) en 50 ml de agua a 5-bromo-4-metoxipiridin-2-carboxilato de metilo (5,00 g, 20,32 mmol) en 1,4-dioxano (50 ml). Se añaden di-ferc-butil-(2’,4’,6’-triisopropil-3,4,5,6-tetrametil-bifenil-2-il)-fosfano (1,57 g, 3,27 mmol) y tris(dibencilidenoacetona)dipaladio(0) (949 mg, 1,04 mmol) bajo argón. Se agita la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h. Se filtra la mezcla de reacción y se concentra a presión reducida. Se acidifica el residuo con HCl 4 M y se filtra el sólido. Se concentra la fase líquida y se recoge el precipitado, se lava y se seca. Rendimiento: 2,61g (76%) ESI-EM: m/z = 170 (M+H)+
6-[4-(6-Amino-4-metoxipiridin-3-il)piperidin-1-carbonil]-4-metoxipiridin-3-ol
Figure imgf000078_0001
A ácido 5-hidroxi-4-metoxipiridin-2-carboxílico (100 mg, 0,59 mmol) en DMF (5 ml) se le añaden DIPEA (407 ^l, 2,36 mmol) y diclorhidrato de 4-metoxi-5-(piperidin-4-il)piridin-2-amina (331 mg, 1,18 mmol). Luego se añade HATU (225 mg, 0,59 mmol). Se agita la mezcla de reacción durante la noche a TA y se purifica mediante cromatografía en columna de fase inversa para proporcionar el compuesto del título.
Rendimiento: 140 mg (66%) ESI-EM: m/z = 359 (M+H)+ Tr (HPLC): 0,61 min (método 10)
Procedimientos generales:
En la tabla 7A se resumen un procedimiento para preparar el compuesto de referencia 95. En la tabla 7B se resume el análisis del compuesto de referencia 95 de la invención.
V[: A 6-[4-(6-amino-4-metoxipiridin-3-il)piperidin-1-carbonil]-4-metoxipiridin-3-ol (1,0 eq.) (producto intermedio 2 en la siguiente tabla 7A) en dioxano se le añaden alcohol (2,4 eq.) (producto intermedio 1 en la siguiente tabla 7A), TPP (2,7 eq.) y DTAD (2,5 eq.). Se agita la mezcla de reacción a 60°C durante 1 h. Si la reacción muestra una conversión completa, se purifica la mezcla de reacción mediante cromatografía en columna RP (ACN/agua TFA). Si la reacción no muestra completitud, se añaden TPP (2,7 eq.) y DTAD (2,5 eq.) adicionales hasta que se produzca la conversión. Después de cada adición, se agita la mezcla de reacción a 60°C durante 1 h. Se purifica la mezcla de reacción mediante cromatografía en columna RP (ACN/agua TFA).
Tabla 7A. Procedimientos generales para preparar el compuesto de referencia 95.
Figure imgf000078_0003
Tabla 7B. Datos analíticos para el compuesto de referencia 95.
Figure imgf000078_0004
Preparación alternativa del compuesto de referencia 15-{4-[5-(4-fluorofenoxi)-4-metoxipiridin-2-carbonil]piperazin-1-ilM-metoxipiridin-2-amina
5-Bromo-2-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-4-metoxipiridina
Figure imgf000078_0002
Se agitan 5-bromo-4-metoxi-piridin-2-ilamina (9,50 g, 46,79 mmol), hexano-2,5-diona (7,08 ml, 60,83 mmol) y ácido ptoluenosulfónico (0,81 g, 4,68 mmol) en tolueno (80 ml) durante la noche a 120°C usando un aparato de Dean-Stark. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida, se lleva a DCM y se purifica mediante cromatografía en gel de sílice (DCM).
Rendimiento: 7,60 g (58%) ESI-EM: m/z = 281 [M+H]+ Tr (HPLC): 1,13 min (método 7)
Figure imgf000079_0001
Se realiza la reacción bajo una atmósfera de argón. Se agitan 5-bromo-2-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-4-metoxipiridina (1,00 g, 3,56 mmol), piperazin-1-carboxilato de tere-butilo (0,73 g, 3,92 mmol), metanosulfonato de CPhos-3G (0,30 g, 0,36 mmol) y carbonato de cesio (3,48 g, 10,67 mmol) en 1,4-dioxano (15 ml) durante la noche a 80°C. Se filtra la mezcla de reacción y se concentra a presión reducida. Se lleva el residuo a DCM (20 ml) y se añade TFA (1,37 ml, 17,76 mmol). Se agita la mezcla de reacción durante 3 días a TA y, después de la adición de la misma cantidad de TFA, se agita la mezcla de reacción durante la noche a 40°C. Se evapora la mezcla de reacción hasta sequedad y se usa sin purificación adicional.
Rendimiento: 1,80 g (98%) ESI-EM: m/z = 287 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,67 min (método 7)
4-Metoxi-5-(piperazin-1-il)piridin-2-amina
Figure imgf000079_0002
Se agitan bis(ácido trifluoroacético) de 1-[6-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-4-metoxipiridin-3-il]piperazina (1,20 g, 2,33 mmol), clorhidrato de hidroxilamina (0,70 g, 10,03 mmol) y trietilamina (1,00 ml, 7,11 mmol) en EtOH/agua (1/1; 16 ml) durante la noche a 80°C. Se elimina el disolvente orgánico a presión reducida. Se purifica el residuo mediante RP-HPLC (ACN/agua NHs).
Rendimiento: 290 mg (60%) ESI-EM: m/z = 209 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,35 min (método 11)
5-(4-Fluorofenoxi)-4-metoxipiridin-2-carbonitrilo
Figure imgf000079_0003
Se agitan 5-fluoro-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (1,00 g; 6,57 mmol), 4-fluorofenol (0,88 g; 7,89 mmol) y carbonato de potasio (2,00 g; 14,46 mmol) en NMP a 105°C durante 1,5 horas. Se permite que la mezcla de reacción se enfríe hasta TA y se extrae con EtOAc. Se lava la fase orgánica con agua y salmuera, se separa, se seca sobre Na2SO4, se filtra y se concentra a presión reducida. Se somete a levigación el residuo con PE, se filtra y se seca en un horno de secado a 60°C.
Rendimiento: 1,54 g (96%) ESI-EM: m/z = 245 [M+H]+ Tr (HPLC): 1,03 min (método 7)
Ácido 5-(4-fluorofenoxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico
Figure imgf000079_0004
Se agitan 5-(4-fluorofenoxi)-4-metoxipiridin-2-carbonitrilo (1,54 g; 6,31 mmol) y NaOH (2 mol/l, disolución ac.; 15,40 ml, 30,80 mmol) a 105°C durante 10 horas. Se permite que la mezcla de reacción se enfríe hasta TA y se deja durante 3 días. Se filtra el precipitado resultante y se somete a levigación en agua. Se calienta la mezcla de reacción hasta 50°C y se ajuste el pH a pH 7 usando HCl (4 mol/l, disolución ac.). Se filtra el precipitado resultante, se lava con EE y se seca en un horno de secado a 60°C.
Rendimiento: 0,84 g (51%) ESI-EM: m/z = 264 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,77 min (método 7)
5-{4-5-(4-Fluorofenoxi)-4-metoxipiridin-2-carbonil]piperazin-1-ilM-metoxipiridin-2-amina
Figure imgf000080_0001
Se agitan ácido 5-(4-fluorofenoxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico (0,40 g; 1,92 mmol), HATU (0,75 g; 1,97 mmol) y DIPEA (1,16 ml; 6,72 mmol) en DMF (10 ml) durante 30 minutos a TA. Se añade 4-metoxi-5-(piperazin-1-il)piridin-2-amina (0,52 g; 1,98 mmol) y se permite que la mezcla de reacción se agite a TA durante la noche. Se purifica la mezcla mediante RP-HPLC (ACN/agua NH3).
Rendimiento: 0,31 g (36%) ESI-EM: m/z = 454 [M+H]+Tr (HPLC): 0,88 min (método 11)
Preparación alternativa del compuesto de referencia 39 ácido trifluoroacético de 4-metoxi-5-{1-[4-metoxi-5-(2-metilpropoxi)piridin-2-carbonil]piperidin-4-il)-piridin-2-amina
4-Metoxi-5-(2-metilpropoxi)piridin-2-carboxilato de metilo
Figure imgf000080_0002
Se agitan 5-hidroxi-4-metoxipiridin-2-carboxilato de metilo (0,40 g, 2,18 mmol), 2-metilpropan-1-ol (0,40 ml, 4,37 mmol) y TPP (1,72 g, 6,55 mmol) en THF durante 10 minutos a TA. Se enfría la mezcla de reacción en un baño de hielo y se añade DTAD (1,51 g; 6,55 mmol). Después de 30 minutos, se purifica la mezcla de reacción mediante RP-HPLC (ACN/agua TFA).
Rendimiento: 0,30 g (57%) ESI-EM: m/z = 240 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,85 min (método 7)
Ácido 4-metoxi-5-(2-metilpropoxi)piridin-2-carboxílico
Figure imgf000080_0003
Se agitan 4-metoxi-5-(2-metilpropoxi)piridin-2-carboxilato de metilo (0,30 g; 1,25 mmol) y NaOH (4 mol/l, disolución ac.; 0,47 ml; 1,88 mmol) en MeOH (8 ml) a TA durante 3 días. Se neutraliza el pH de la mezcla de reacción usando HCl (4 mol/l; disolución ac.) y se eliminan los disolventes a presión reducida. Se añaden DCM y una pequeña cantidad de MeOH al residuo. Se elimina el material insoluble por filtración y se eliminan las aguas madres a presión reducida. Se usa el residuo sin purificación adicional.
Rendimiento: 0,20 g (71%) ESI-EM: m/z = 226 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,76 min (método 7)
6-Amino-4-metoxi-1’,2’,3’,6’-tetrahidro-[3,4’-bipiridina]-1’-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000080_0004
Se realiza la reacción bajo una atmósfera de argón. Se purgan 5-bromo-4-metoxipiridin-2-amina (7,40 g; 32,80 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-carboxilato de ferc-butilo (11,16 g; 36,08 mmol) y carbonato de sodio (2 mol/l, disolución ac.; 65,60 ml; 131,21 mmol) en 1,4-dioxano (300 ml) con argón. Después de 5 minutos, se añade Xphos de 2a gen. (0,77 g; 0,98 mmol) y se agita la mezcla de reacción durante la noche en un vial sellado a 100°C. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida. Se lleva el residuo a agua y se extrae varias veces con EtOAc. Se secan las fases orgánicas combinadas sobre Na2SO4, se filtran y se concentran a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice (DCM/MeOH).
Rendimiento: 9,69 g (97%) ESI-EM: m/z = 306 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,83 min (método 10)
4-(6-Amino-4-metoxipiridin-3-il)-piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000081_0001
Bajo una atmósfera de hidrógeno (aparato de Parr; 50 psi), se agitan 6-amino-4-metoxi-1’,2’,3’,6’-tetrahidro-[3,4’-bipiridina]-1 ’-carboxilato de ferc-butilo (5,11 g; 16,73 mmol) y Pd/C (10%; 0,60 g) en MeOH (100 ml) a TA durante 41,5 horas. Se añade catalizador adicional dos veces y se hidrogena adicionalmente la mezcla de reacción. Después de retirar el catalizador por filtración, se concentran las aguas madres a presión reducida. Se usa el producto sin purificación adicional.
Rendimiento: 4,71 g (92%) ESI-EM: m/z = 308 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,82 min (método 10)
Diclorhidrato de 4-metoxi-5-(piperidin-4-il)piridin-2-amina
Figure imgf000081_0002
Se agitan 4-(6-amino-4-metoxipiridin-3-il)-piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (6,90 g; 22,45 mmol) y HCl (4 mol/l; disolución en 1,4-dioxano; 69,00 ml; 224,47 mmol) en DCM (89,70 ml) a TA durante la noche. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida. Se somete a levigación el residuo en EE y se filtra. Se usa el producto sin purificación adicional.
Rendimiento: 5,30 g (84%) ESI-EM: m/z = 208 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,66 min (método 11)
Ácido trifluoroacético de 4-metoxi-5-{1-[4-metoxi-5-(2-metilpropoxi)piridin-2-carbonil]piperidin-4-il}-piridin-2-amina
Figure imgf000081_0003
Se agitan ácido 4-metoxi-5-(2-metilpropoxi)piridin-2-carboxílico (80 mg; 0,36 mmol), diclorhidrato de 4-metoxi-5-(piperidin-4-il)piridin-2-amina (96 mg; 0,36 mmol), DIPEA (0,24 ml; 1,42 mmol) y HATU (149 mg; 0,39 mmol) en DMF (3 ml) a TA durante la noche. Se purifica la mezcla de reacción mediante RP-HPLC (ACN/agua TFA).
Rendimiento: 0,11 g (72%) ESI-EM: m/z = 415 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,80 min (método 7)
Preparación alternativa del compuesto de referencia 176-{1-[5-(4-fluorofenoxi)-4-metoxipiridin-2-carbonil1piperidin-4-il)piridazin-3-amina
4-(6-Aminopiridazin-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000081_0004
Se realiza la reacción bajo una atmósfera de argón. Se purgan 6-cloropiridazin-3-amina (5,20 g; 40,14 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-carboxilato de ferc-butilo (13,65 g; 44,15 mmol) y carbonato de sodio (2 mol/l, disolución ac.; 80,28 ml; 160,56 mmol) en 1,4-dioxano (350 ml) con argón. Después de 5 minutos, se añade Xphos de 2a gen. (0,95 g; 1,20 mmol) y se agita la mezcla durante la noche en un vial sellado a 100°C. Se filtra la mezcla de reacción y se concentra a presión reducida. Se lleva el residuo a MeOH, se precipita con agua y se filtra. Se seca el precipitado resultante en un horno de secado a 50°C. Se usa el producto sin purificación adicional.
Rendimiento: cuantitativo ESI-EM: m/z = 277 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,78 min (método 10)
4-(6-Aminopiridazin-3-il)-piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000082_0001
Bajo una atmósfera de hidrógeno (aparato de Parr; 4 bar), se agitan 4-(6-aminopiridazin-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-carboxilato de ferc-butilo (4,85 g; 17,55 mmol) y Pd/C (10%; 0,50 g) en MeOH (100 ml) a t A durante 3 horas. Después de retirar el catalizador por filtración, se concentran las aguas madres a presión reducida. Se usa el producto sin purificación adicional.
Rendimiento: cuantitativo ESI-EM: m/z = 279 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,86 (método 11)
6-(Piperidin-4-il)piridazin-3-amina
Figure imgf000082_0002
Se agita 4-(6-aminopiridazin-3-il)-piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (4,89 g; 17,55 mmol) durante 1 hora en TFA (20 ml; 259,25 mmol). Se evapora el disolvente y se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice (DCM/MeOH NH3).
Rendimiento: cuantitativo ESI-EM: m/z = 179 [M+H]+ Tr (HPLC): pico de inyección (método 11) Alternativamente, se usa amina:
Diclorhidrato de 6-(piperidin-4-il)piridazin-3-amina
Figure imgf000082_0003
Se realiza la reacción usando una atmósfera de nitrógeno. Se agitan 4-(6-aminopiridazin-3-il)-piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (1,00 g; 3,59 mmol) y HCl (4 mol/l, disolución en 1,4-dioxano; 2,96 ml; 11,84 mmol) en ACN (6 ml) a 35-40°C durante 2 horas. Se enfría la mezcla de reacción hasta TA y se diluye con acetato de isopropilo. Después de 10 minutos de agitación, se elimina el precipitado resultante por filtración y se seca en un horno de secado a 45°C. Rendimiento: cuantitativo ESI-EM: m/z = 179 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,94 min (método 14)
6-{1-[5-(4-Fluorofenoxi)-4-metoxipiridin-2-carbonil1piperidin-4-il)piridazin-3-amina
Figure imgf000082_0004
Se agitan ácido 5-(4-fluorofenoxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico (0,70 g; 2,66 mmol), HATU (1,52 g; 3,99 mmol) y DIPEA (1,83 ml; 10,64 mmol) en DMF (20 ml) durante 30 minutos. Se añade 6-(piperidin-4-il)piridazin-3-amina (0,71 g; 3,98 mmol) y se permite que la mezcla de reacción se agite a TA durante la noche. Se purifica la mezcla mediante RPHPLC (ACN/agua TFA). Para retirar la sal de trifluoroacetato, se lleva el producto a agua/EtOH (1,5/1) y se somete a levigación con bicarbonato unido a polímero. Después de 30 minutos de agitación, se filtra la mezcla y se concentra a presión reducida.
Rendimiento: 180 mg (16%) ESI-EM: m/z = 424 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,77 min (método 7)
Alternativamente, puede obtenerse el compuesto del título de la siguiente manera:
6-{1-[5-(4-Fluorofenoxi)-4-metoxipiridin-2-carbonil]piperidin-4-il)piridazin-3-amina
Figure imgf000083_0001
Se agitan ácido 5-(4-fluorofenoxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico (0,50 g; 1,90 mmol) y CDI (0,46 g; 2,85 mmol) en NMP (1 ml) a TA durante 1 hora. Se añaden diclorhidrato de 6-(piperidin-4-il)piridazin-3-amina (0,52 g; 2,09 mmol) y DIPEA (0,99 ml; 5,70 mmol). Después de agitar durante 3 horas, se diluye la mezcla de reacción con agua y se extrae con EtOAc. Se separa la fase orgánica, se lava con agua y salmuera, se seca sobre MgSO4 y se filtra. Se concentran las aguas madres a presión reducida y se purifican mediante cromatografía en gel de sílice (DcM/MeOH). Se concentran las fracciones deseadas a presión reducida y se tratan con ACN/etil éter para proporcionar el producto del título en forma sólida.
Rendimiento: 0,27 g (34%) ESI-EM: m/z = 424 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,49 min (método 1)
Preparación alternativa del compuesto de referencia 375-{1-[5-(ciclopropilmetoxi)-4-metoxipiridin-2-carbonil]piperidin-4-il)-4-metoxipiridin-2-amina
5-(Ciclopropilmetoxi)-4-metoxipiridin-2-carboxilato de metilo
Figure imgf000083_0002
Se enfrían 5-hidroxi-4-metoxipiridin-2-carboxilato de metilo (0,20 g; 1,09 mmol) y ciclopropilmetanol (88 |al; 1,09 mmol) en THF (3 ml) en un baño de hielo. Se añaden TPP (0,32 g; 1,20 mmol) y DtA d (0,28 g; 1,20 mmol). Se permite que la mezcla de reacción se caliente hasta TA durante la noche. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida y se purifica mediante RP-HPLC (ACN/agua TFA).
Rendimiento: 0,18 g (70%) ESI-EM: m/z = 238 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,41 min (método 12)
Ácido 5-(ciclopropilmetoxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico
Figure imgf000083_0003
Se agitan 5-(ciclopropilmetoxi)-4-metoxipiridin-2-carboxilato de metilo (0,18 g; 0,76 mmol) y NaOH (4 mol/l, disolución ac.; 0,50 ml; 2,00 mmol) en MeOH (3 ml) a TA durante 1 hora. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida. Se lleva el residuo a agua y se lava con EtOAc. A la fase acuosa se le añade HCl (4 mol/l, disolución ac.; 0,5 ml) y se concentra a presión reducida. Se usa el producto sin purificación adicional.
Rendimiento: 0,13 g (74%) ESI-EM: m/z = 224 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,30 min (método 12) 5-{1-[5-(Ciclopropilmetoxi)-4-metoxipiridin-2-carbonil]piperidin-4-ilM-metoxipiridin-2-amina
Figure imgf000084_0001
Se agitan ácido 5-(ciclopropilmetoxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico (50 mg; 0,22 mmol), diclorhidrato de 4-metoxi-5-(piperidin-4-il)piridin-2-amina (63 mg; 0,22 mmol), DIPEA (193 |l; 1,12 mmol) y HATU (94 mg; 0,25 mmol) en DMF (2 ml) a TA durante la noche. Se purifica la mezcla resultante mediante RP-h PLc (ACN/agua NH3).
Rendimiento: 45 mg (49%) ESI-EM: m/z = 413 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,87 min (método 11)
Preparación alternativa del compuesto 90 ácido trifluoroacético de 6-(1-{4-metoxi-5-[4-(trifluorometil)fenoxi]piridin-2-carbonil}piperidin-4-il)-5-metilpiridazin-3-amina
4-Metoxi-5-[4-(trifluorometil)fenoxi]piridin-2-carbonitrilo
Figure imgf000084_0002
Se agitan 5-fluoro-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (4,69 g; 30,84 mmol), 4-trifluorometilfenol (5,00 g; 30,84 mmol) y carbonato de potasio (6,39 g; 46,27 mmol) en DMSO a 110°C durante 1 hora. Se permite que la mezcla de reacción se enfríe hasta TA y se diluye con agua. Se filtra el precipitado resultante, se lava con agua y se seca en un horno de secado a 50°C.
Rendimiento: 7,40 g (82%) ESI-EM: m/z = 295 [M+H]+ Tr (HPLC): 1,08 min (método 10)
Ácido 4-metoxi-5-[4-(trifluorometil)fenoxi]piridin-2-carboxílico
Figure imgf000084_0003
Se agitan 4-metoxi-5-[4-(trifluorometil)fenoxi]piridin-2-carbonitrilo (7,40 g; 25,51 mmol) y NaOH (4 mol/l, disolución ac.; 31,44 ml, 125,75 mmol) en MeOH (100 ml) a 70°C durante la noche. Se permite que la mezcla de reacción se enfríe hasta TAy se evapora el disolvente orgánico. Se diluye el disolvente restante con agua y se ajusta a pH 3 usando HCl (4 mol/l, disolución ac.). Se filtra el precipitado resultante y se seca en un horno de secado a 50°C.
Rendimiento: 6,80 g (51%) ESI-EM: m/z = 314 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,87 min (método 10)
4-(6-Amino-4-metilpiridazin-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000084_0004
Se realiza la reacción bajo una atmósfera de argón. Se purgan 6-cloro-5-metilpiridazin-3-amina (3,00 g; 20,90 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-carboxilato de ferc-butilo (7,11 g; 22,98 mmol) y carbonato de sodio (2 mol/l, disolución ac.; 41,79 ml; 83,58 mmol) en 1,4-dioxano (150 ml) con argón. Después de 5 minutos, se añade Xphos de 2a gen. (0,49 g; 0,63 mmol) y se agita la mezcla durante la noche en un vial sellado a 100°C. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida. Se lleva el residuo a agua y se extrae varias veces con EtOAc. Se lavan las fases orgánicas combinadas con salmuera, se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice (DCM/MeOH).
Rendimiento: 5,20 g (86%) ESI-EM: m/z = 291 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,79 min (método 10)
4-(6-Amino-4-metilpiridazin-3-il)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000085_0001
Bajo una atmósfera de hidrógeno (aparato de Parr; 50 psi), se agitan 4-(6-amino-4-metilpiridazin-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-carboxilato de ferc-butilo (5,20 g; 17,91 mmol) y Pd/C (10%; 0,75 g) en MeOH (100 ml) a t A durante 17 horas. Después de retirar el catalizador por filtración, se concentran las aguas madres a presión reducida.
Rendimiento: 5,00 g (96%) ESI-EM: m/z = 293 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,79 min (método 10)
Diclorhidrato de 5-metil-6-(piperidin-4-il)piridazin-3-amina
Figure imgf000085_0002
Se agitan 4-(6-amino-4-metilpiridazin-3-il)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (4,91 g; 16,79 mmol) y HCl (4 mol/l; disolución en 1,4-dioxano; 73,65 ml; 251,90 mmol) en 1,4-dioxano (34,37 ml) a TA durante la noche. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida. Se somete a levigación el residuo en EtOAc y se filtra. Se usa el producto sin purificación adicional.
Rendimiento: cuantitativo ESI-EM: m/z = 193 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,59 min (método 11)
Ácido trifluoroacético de 6-(1-{4-metoxi-5-[4-(trifluorometil)fenoxi1piridin-2-carbonil}piperidin-4-il)-5-metilpiridazin-3-amina
Figure imgf000085_0003
Se agitan ácido 4-metoxi-5-[4-(trifluorometil)fenoxi]piridin-2-carboxílico (0,12 g; 0,37 mmol), HATU (0,15 g; 0,39 mmol) y DIPEA (0,19 ml; 1,11 mmol) en DMF (3 ml) durante 30 minutos. Se añade diclorhidrato de 5-metil-6-(piperidin-4-il)piridazin-3-amina (0,10 g; 0,38 mmol) y se permite que la mezcla de reacción se agite a TA durante la noche. Se purifica la mezcla de reacción mediante Rp-HPLC (ACN/agua TFA).
Rendimiento: 0,12 g (55%) ESI-EM: m/z = 488 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,86 min (método 7)
Preparación alternativa del compuesto de referencia 475-metoxi-6-[1-(4-metoxi-5-fenoxipiridin-2-carbonil)piperidin-4-il1piridazin-3-amina
4-Metoxi-5-fenoxipiridin-2-carbonitrilo
Figure imgf000085_0004
Se agitan 5-fluoro-4-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (0,40 g; 2,63 mmol), fenol (0,25 g; 2,66 mmol) y carbonato de potasio (0,54 g; 3,91 mmol) en DMSO (10 ml) a 110°C durante 2 horas. Se permite que la mezcla de reacción se enfríe hasta TA y se diluye con agua. Se extrae la fase acuosa varias veces con EtOAc. Se secan las fases orgánicas combinadas sobre Na2SO4, se filtran y se concentran a presión reducida.
Rendimiento: 0,55 g (92%) %) ESI-EM: m/z = 227 [M+H]+ Tr (HPLC): 1,01 min (método 7)
Ácido 4-metoxi-5-fenoxipiridin-2-carboxílico
Figure imgf000086_0001
Se agitan 4-metoxi-5-fenoxipiridin-2-carbonitrilo (0,54 g; 2,39 mmol) y NaOH (4 mol/l, disolución ac.; 3,00 ml, 12,00 mmol) en MeOH (10 ml) a 70°C durante la noche. Se permite que la mezcla de reacción se enfríe hasta TAy se evapora el disolvente orgánico. Se diluye el disolvente restante con agua y se acidifica hasta pH 3 usando HCl (4 mol/l, disolución ac.). Se filtra el precipitado resultante y se seca en un desecador.
Rendimiento: 0,30 g (51%) ESI-EM: m/z = 246 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,72 min (método 10)
Figure imgf000086_0002
Se realiza la reacción bajo una atmósfera de argón. Se purgan éster terc-butílico del ácido (6-cloro-5-metoxi-piridazin-3-il)-carbámico (4,00 g; 15,40 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-carboxilato de terc-butilo (4,76 g; 15,40 mmol) y carbonato de sodio (2 mol/l, disolución ac.; 15,40 ml; 30,81 mmol) en 1,4-dioxano (80 ml) con argón. Después de 5 minutos, se añade Xphos de 2a gen. (1,26 g; 1,54 mmol) y se agita la mezcla durante la noche en un vial sellado a 90°C. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida. Se lleva el residuo a EtOAc y se lava con agua y salmuera. Se separa la fase orgánica y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice (DCM/MeOH).
Rendimiento: 4,56 g (59%)
4-(6-{f(7erc-butoxi)carboni n amino M -metoxipiridazin-3-il)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000086_0003
Bajo una atmósfera de hidrógeno (aparato de Parr; 50 psi), se agitan 4-(6-{[(terc-butoxi)carbonil]amino}-4-metoxipiridazin-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-carboxilato de terc-butilo (4,55 g; 11,19 mmol) y Pd/C (10%; 3,57 g) en MeOH (45,5 ml) a 30°C durante la noche. Después de retirar el catalizador por filtración, se concentran las aguas madres a presión reducida.
Rendimiento: 3,67 g (80%)
Diclorhidrato de 5-metoxi-6-(piperidin-4-il)piridazin-3-amina
Figure imgf000087_0001
Se agitan 4-(6-{[(tere-butoxi)carbonil]amino}-4-metoxipiridazin-3-il)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo (3,67 g; 8,98 mmol) y HCl (4 mol/l; disolución en 1,4-dioxano; 55,05 ml; 134,76 mmol) en 1,4-dioxano (26,69 ml) a TA durante la noche. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida. Se somete a levigación el residuo en EtOAc y se filtra. Se usa el producto sin purificación adicional.
Rendimiento: 2,07 g (82%) ESI-EM: m/z = 209 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,60 min (método 11)
5-Metoxi-6-[1-(4-metoxi-5-fenoxipiridin-2-carbonil)piperidin-4-il1piridazin-3-amina
Figure imgf000087_0002
Se agitan ácido 4-metoxi-5-fenoxipiridin-2-carboxílico (0,10 g; 0,41 mmol), HATU (0,16 g; 0,419 mmol) y DIPEA (0,18 ml; 1,05 mmol) en DMF (3 ml) durante 30 minutos. Se añade diclorhidrato de 5-metoxi-6-(piperidin-4-il)piridazin-3-amina (0,12 g; 0,41 mmol) y se permite que la mezcla de reacción se agite a TA durante la noche. Se purifica la mezcla mediante RP-HPLC (ACN/agua n H3).
Rendimiento: 0,09 g (53%) ESI-EM: m/z = 436 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,63 min (método 13)
Preparación alternativa del compuesto 29 ácido trifluoroacético de 6-{1-[5-(4-Fluorofenoxi)-4-metoxipiridin-2-carbonil1piperidin-4-il}-5-metilpiridazin-3-amina
Figure imgf000087_0003
Se agitan ácido 5-(4-fluorofenoxi)-4-metoxipiridin-2-carboxílico (60 mg; 0,23 mmol), diclorhidrato de 5-metil-6-(piperidin-4-il)piridazin-3-amina (60 mg; 0,23 mmol), HATU (95 mg; 0,25 mmol) y DIPEA (0,12 ml; 0,68 mmol) en DMF (3 ml) a TA durante 1 hora. Se purifica la mezcla mediante RP-HPLC (ACN/agua TFA).
Rendimiento: 73 mg (59%) ESI-EM: m/z = 438 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,82 min (método 7)
Preparación alternativa del compuesto de referencia 91 ácido trifluoroacético de 5-metoxi-6-(1-{5-[4-(trifluorometil)fenoxi1piridin-2-carbonil}piperidin-4-il)piridazin-3-amina
5-[4-(Trifluorometil)fenoxi1piridin-2-carbonitrilo
Figure imgf000087_0004
Se agitan 2-ciano-5-fluoropiridina (3,54 g; 28,99 mmol), 4-trifluorometil-fenol (4,70 g; 28,99 mmol) y carbonato de potasio (6,01 g; 43,49 mmol) en d Ms O (150 ml) a 110°C durante 1 hora. Se diluye la mezcla de reacción con agua y se extrae con EtOAc. Se lava la fase orgánica con agua, se separa, se seca sobre Na2SO4, se filtra y se concentra a presión reducida.
Rendimiento: cuantitativo ESI-EM: m/z = 265 [M+H]+ Tr (HPLC): 1,03 min (método 10)
Ácido 5-[4-(trifluorometil)fenoxi]piridin-2-carboxílico
Figure imgf000088_0001
Se agitan 5-[4-(trifluorometil)fenoxi]piridin-2-carbonitrilo (3,87 g; 14,65 mmol) y NaOH (4 mol/l, disolución ac.; 18,31 ml, 73,24 mmol) en MeOH (50 ml) a 70°C durante la noche. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida. Se lleva el residuo a agua y se acidifica hasta pH 3 usando HCl (4 mol/l, disolución ac.). Se evapora por completo el disolvente orgánico y se filtra el precipitado resultante. Se lleva el residuo a DCM, se filtra y se seca en un horno de secado a 50°C.
Rendimiento: cuantitativo ESI-EM: m/z = 284 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,68 min (método 11)
Ácido trifluoroacético de 5-metoxi-6-(1-{5-[4-(trifluorometiDfenoxi]piridin-2-carbonil}piperidin-4-il)piridazin-3-amina
Figure imgf000088_0002
Se agitan ácido 5-[4-(trifluorometil)fenoxi]piridin-2-carboxílico (0,10 g; 0,35 mmol), HATU (0,15 g; 0,39 mmol) y DIPEA (0,19 ml; 1,11 mmol) en DMF (3 ml) durante 30 minutos a TA. Se añade diclorhidrato de 5-metoxi-6-(piperidin-4-il)piridazin-3-amina (0,11 g; 0,37 mmol) y se permite que la mezcla de reacción se agite a TA durante la noche. Se purifica la mezcla mediante RP-HPLC (ACN/agua TFA).
Rendimiento: 0,06 g (31%) ESI-EM: m/z = 474 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,87 min (método 7)
Preparación alternativa del compuesto 31 ácido trifluoroacético de 6-[1-(4-metoxi-5-fenoxipiridin-2-carbonil)piperidin-4-il]5-metilpiridazin-3-amina
Figure imgf000088_0003
Se agitan ácido 4-metoxi-5-fenoxipiridin-2-carboxílico (60 mg; 0,23 mmol), diclorhidrato de 5-metil-6-(piperidin-4-il)piridazin-3-amina (55 mg; 0,23 mmol), HATU (95 mg; 0,25 mmol) y DIp Ea (0,12 ml; 0,68 mmol) en DMf (3 ml) durante 1 hora a TA. Se purifica la mezcla mediante RP-HPLC (ACN/agua TFA).
Rendimiento: 69 mg (57%) ESI-EM: m/z = 420 [M+H]+ Tr (HPLC): 0,81 min (método 7)
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD BIOLÓGICA
Ensayo de cribado de alto rendimiento
Este ensayo de cribado mide la activación del canal iónico TRPC6 (canal catiónico receptor de potencial transitorio, subfamilia C, miembro 6) a través de la adición o bien del análogo del ligando DAG comercialmente disponible OAG (1 -oleoil-2-acetil-sn-glicerol) o bien del agonista de TRPC6 1-[1-(4,5,6,7,8-pentahidrociclohepta[2,1-d]tiofen-2-ilcarbonil)-4-piperidil]-3-hidrobencimidazol-2-ona (GSK1702934A). El ensayo utiliza un colorante de potencial de membrana (FMP) de éstertetrakis(acetoximetílico) del ácido 4-(6-acetoximetoxi-2,7-difluoro-3-oxo-9-xantenil)-4’-metil-2,2’-(etilendioxi)dianilina-N,N,N’,N’-tetraacético (Fluo4/AM) de sensor de calcio fluorescente FLIPR de Molecular Devices, que es un indicador sensible al voltaje con un extinguidor de fluorescencia. Los cambios (aumentos) en el potencial de concentración de calcio de membrana intracelular tal como se miden mediante el aumento en la señal de fluorescencia durante la despolarización de membrana proporcionan una medición de la actividad del canal.
Se transfectó de manera estable la línea HEK293/TREx comercialmente disponible (Invitrogen) con un constructo de TRPC6 y se cribó mediante obtención de imágenes de calcio convencional para hallar clones con expresión de TRPC6 tras la estimulación con tetraciclina 1 ^g/ml. Se mantuvieron estas células en el medio de crecimiento recomendado por el fabricante complementado con higromicina 100 ^g/ml para fomentar la retención del constructo de TRPC6. Después de crecer hasta casi confluencia, se sembraron en placas CellBind de 384 pocillos (Corning) las células a una densidad de ~35.000 células/pocillo en presencia de tetraciclina 1 ^g/ml, y se permitió que crecieran durante 20 30 h. Resultó una monocapa prácticamente confluente. Se retiró el medio de crecimiento de los pocilios y luego se cargaron 25 ml de Fluo4/AM diluido en solución de Ringer (6,5 g de NaCl, 0,42 g de KCI, 0,25 g de CaCh y 0,2 g de bicarbonato de sodio; pH 7,4) complementada con Pluronic F-127 al 1% en las células hasta una concentración final de 0,5 |iM y se incubaron durante 60 min, a temperatura ambiente. Luego se retiró la disolución de colorante de las células invirtiendo las placas con un movimiento brusco, y se reemplazó con 25 |il de solución de Ringer. Tras ~0,5 horas para la recuperación a partir de la carga, se sometieron a ensayo las células usando el sistema Hamamatsu
FDSS 6000, que permitía la iluminación a 485 nm. Se adquirieron fotogramas a una tasa de 0,2 Hz. Durante el ensayo, se agitaron continuamente con vórtex las placas, con mezclado con pipeta de los pocillos tras la adición de cada reactivo. Para el ensayo de cribado, se añadieron 26 |il de una reserva de compuesto diluida (a 50 |iM) a cada pocillo durante 2 minutos tras la recogida de un fondo pequeño (4 fotogramas). Luego se añadieron 13 |il de disolución de agonista que consistía en GSK1702934A 125 nM diluido en solución de Ringer con alto contenido en Ca2+ (que contenía Ca2+ 90 mM) a cada pocillo, logrando una concentración final de Ca2+ de 20 mM y compuesto de prueba de
10 |iM. Se recogieron datos durante ~3 minutos tras la adición de solución de Ringer con alto contenido en Ca2+. Se dividió la razón de fluorescencia para cada pocillo entre la intensidad de fluorescencia inicial para ese pocillo y se determinó la respuesta global promediando la razón de fluorescencia de los últimos 4 fotogramas adquiridos durante el experimento exceptuando el fotograma final. Se incluyeron controles negativos y positivos en cada placa. Los pocillos de control negativo consistían en células HEK293/TREx TRPC6 expuestas a tampón de ensayo y disolución de agonista, pero sin compuesto de prueba. Los pocillos de control positivo consistían en pocillos que consistían en células HEK293/TREx TRPC6 expuestas a 3-[(2-clorofenoxi)metil]fenil piperidil cetona 25 |iM (Chembridge) diluida en solución de Ringer y disolución de agonista. Estos controles definieron el 0% y el 100% de bloqueo, respectivamente, y se normalizó la intensidad de cada pocillo a estos valores.
Se determinaron las CI50 usando el método de fluorescencia anterior con la excepción de que, en lugar de someter a prueba los compuestos a 10 |iM, los compuestos se sometieron a prueba a concentraciones finales de 20 |iM, 6,667
|iM, 2,222 |iM, 0,741 |iM, 0,247 |iM, 0,082 |iM y 0,027 |iM. Los compuestos se sometieron a prueba todas las concentraciones. Se usó un software convencional para ajustar las curvas de CI50.
Tabla 8. Efectos antagonistas de los compuestos 29, 31, 49, 56, 66, 85, 87 y 90 de la invención y de los compuestos de referencia 1-28, 30, 32-48, 50-55, 57-65, 67-84, 86, 88, 89 y 91-95 contra TRPC6 (CI50)
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La actividad biológica de los compuestos reivindicados también puede mostrarse usando un ensayo de pinzamiento zonal de TRPC6.
USO EN MÉTODOS DE TRATAMIENTO
La inhibición de TRPC6 es un medio atractivo para prevenir y tratar una variedad de enfermedades o estados que se agravan por la actividad de TRPC6. Los compuestos divulgados en el presente documento inhiben eficazmente la actividad de TRPC6. En particular, los compuestos de la invención son inhibidores de canales iónicos selectivos y tienen buena estabilidad metabólica en microsomas humanos. Más particularmente, los compuestos de la invención tienen una potencia y una selectividad muy buenas sobre el canal TRPC6 en comparación con otros canales TRP incluyendo TRPC3, TRPC5 y TRPC7. Por tanto, los compuestos de la invención son para su uso en métodos para el tratamiento de las enfermedades y los estados que se describen en las secciones de antecedentes y descripción detallada, incluyendo los siguientes estados y enfermedades:
estados cardiacos (por ejemplo, hipertrofia cardiaca), hipertensión (por ejemplo, primaria o secundaria), hipertensión arterial pulmonar (por ejemplo, HAPI), una enfermedad o un trastorno neurodegenerativo (por ejemplo, enfermedad de Alzheimer (EA), enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica (ELA) y otros trastornos encefálicos provocados por traumatismo u otras agresiones incluyendo el envejecimiento), enfermedades inflamatorias (por ejemplo, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, artrosis, enfermedad intestinal inflamatoria, esclerosis múltiple y trastornos del sistema inmunitario), preeclampsia e hipertensión inducida por el embarazo, enfermedades renales (glomeruloesclerosis focal y segmentaria, síndrome nefrótico, nefropatía diabética, insuficiencia renal, enfermedad renal de fase terminal, enfermedad de cambios mínimos), isquemia o una lesión por reperfusión isquémica, cáncer, FPI (fibrosis pulmonar idiopática), SDRA (síndrome de dificultad respiratoria aguda) y trastornos metabólicos diabéticos tales como diabetes. Los métodos para prevenir o tratar cualquiera de las enfermedades y los estados anteriores o siguientes incluyen tratar cualquiera de los síntomas asociados con estas enfermedades o estados. Por ejemplo, los métodos para tratar una enfermedad renal contemplan tratar los síntomas incluyendo, pero sin limitarse a, hipertensión secundaria, proteinuria, lipiduria, hipercolesterolemia, hiperlipidemia y anomalías de la coagulación.
Debido al papel importante que desempeña la regulación del calcio en muchos procesos celulares incluyendo la activación celular, la reorganización citoesquelética, la expresión génica, el tráfico celular y la muerte celular apoptótica, la dishomeostasis del calcio está implicada en muchas enfermedades y trastornos. Estas enfermedades y trastornos incluyen enfermedades y trastornos neurológicos y neurodegenerativos; enfermedades y trastornos inflamatorios tales como enfermedad intestinal inflamatoria y enfermedad de Crohn; enfermedad renal tal como hipercalcemia, cálculos renales y enfermedad renal poliquística; enfermedades y trastornos metabólicos incluyendo obesidad y diabetes; enfermedades y trastornos hepáticos y renales; enfermedad renal crónica, enfermedades y trastornos cardiovasculares incluyendo hipertensión; enfermedades respiratorias incluyendo EPOC, HAPI, asma y enfisema; y cánceres incluyendo cánceres de cerebro, mama, riñón, cuello uterino, próstata, tracto gastrointestinal, (por ejemplo, cáncer gástrico o cáncer de estómago), piel y epitelios.
Estos trastornos se han caracterizado bien en seres humanos, pero también existen con una etiología similar en otros mamíferos, y pueden tratarse mediante las composiciones farmacéuticas de la presente invención.
Por consiguiente, un compuesto de la invención, tal como se describe en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, puede usarse para la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad o un trastorno mediado por TRPC6, incluyendo los mencionados anteriormente y en las secciones de antecedentes y descripción detallada.
Para uso terapéutico, los compuestos de la invención pueden administrarse a través de una composición farmacéutica en cualquier forma de dosificación farmacéutica convencional de cualquier manera convencional. Las formas de dosificación convencionales incluyen normalmente un portador farmacéuticamente aceptable adecuado para la forma de dosificación particular seleccionada. Las vías de administración incluyen, pero no se limitan a, intravenosa, intramuscular, subcutánea, intrasinovial, mediante infusión, sublingual, transdérmica, oral, tópica o mediante inhalación. Los modos de administración preferidos son por vía oral e intravenosa.
Los compuestos de esta invención pueden administrarse solos o en combinación con adyuvantes que potencian la estabilidad de los inhibidores, facilitan la administración de las composiciones farmacéuticas que los contienen en determinadas realizaciones, proporcionan una disolución o dispersión aumentada, aumentan la actividad inhibidora, proporcionan una terapia complementaria, y similares, incluyendo otros principios activos. En una realización, por ejemplo, pueden administrarse múltiples compuestos de la presente invención. Ventajosamente, tales terapias de combinación utilizan dosificaciones más bajas de los productos terapéuticos convencionales, evitando de ese modo la posible toxicidad y los efectos secundarios adversos que se producen cuando se usan esos agentes como monoterapias. Los compuestos de la invención pueden combinarse físicamente con los productos terapéuticos convencionales u otros adyuvantes para dar una única composición farmacéutica. Ventajosamente, los compuestos pueden administrarse entonces juntos en una única forma de dosificación. En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas que comprenden tales combinaciones de compuestos contienen al menos aproximadamente el 5%, pero más preferiblemente al menos aproximadamente el 20%, de un compuesto de la invención (p/p) o una combinación de los mismos. El porcentaje óptimo (p/p) de un compuesto de la invención puede variar y se encuentra dentro del ámbito de los expertos en la técnica. Alternativamente, los compuestos de la presente invención y los productos terapéuticos convencionales u otros adyuvantes pueden administrarse por separado (ya sea en serie o en paralelo). La dosificación por separado permite una mayor flexibilidad en la pauta posológica.
Tal como se mencionó anteriormente, las formas de dosificación de los compuestos de esta invención pueden incluir portadores y adyuvantes farmacéuticamente aceptables conocidos por los expertos habituales en la técnica y adecuados para la forma de dosificación. Estos portadores y adyuvantes incluyen, por ejemplo, intercambiadores iónicos, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas séricas, sustancias tamponantes, agua, sales o electrolitos y sustancias a base de celulosa. Las formas de dosificación preferidas incluyen comprimido, cápsula, comprimido oblongo, líquido, disolución, suspensión, emulsión, pastillas para chupar, jarabe, polvo reconstituible, gránulo, supositorio y parche transdérmico. Se conocen métodos para preparar tales formas de dosificación (véase, por ejemplo, H.C. Ansel y N.G. Popovish, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 5a ed., Lea y Febiger (1990)). Los niveles de dosificación y los requisitos para los compuestos de la presente invención pueden seleccionarlos los expertos habituales en la técnica a partir de métodos y técnicas disponibles adecuados para un paciente particular. En algunas realizaciones, los niveles de dosificación oscilan desde aproximadamente 1 hasta 1000 mg/dosis para un paciente de 70 kg. Aunque una dosis al día puede ser suficiente, pueden administrarse hasta 5 dosis al día. Para las dosis orales, pueden requerirse hasta 2000 mg/día. Tal como apreciará el experto en la técnica, pueden requerirse dosis más bajas o más altas dependiendo de factores particulares. Por ejemplo, las pautas posológicas y los regímenes de tratamiento específicos dependerán de factores tales como el perfil de salud general del paciente, la gravedad y el avance del trastorno o de la disposición al mismo del paciente, y el criterio del médico responsable.
Los compuestos de la invención pueden usarse solos o en combinación de uno o más agentes terapéuticos adicionales. Los ejemplos no limitativos de agentes terapéuticos adicionales pueden incluir:
antagonistas del receptor de angiotensina II (bloqueadores del receptor de angiotensina (ARB)) tales como candesartán, eprosartán, candesartán, irbesartán, losartán, olmesartán, telmisartán, valsartán, azilsartán ymedoxomil;
inhibidores de enzimas convertidoras de angiotensina (por ejemplo, benazepril, captopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, moexipril y perindopril);
antidiabéticos tales como inhibidores de alfa-glucosidasa (por ejemplo, miglitol y acarbosa), análogos de amilina (por ejemplo, pramlintida), inhibidores de dipeptidil peptidasa 4 (por ejemplo, alogliptina, sitagliptina, saxagliptina y linagliptina), miméticos de la incretina (por ejemplo, liraglutida, exenatida, liraglutida, exenatida, dulaglutida, albiglutida y lixisenatida), insulina, meglitinidas (por ejemplo, repaglinida y nateglinida), biguanidas (por ejemplo, metformina); inhibidores de SGLT-2 (por ejemplo, canagliflozina, empagliflozina y dapagliflozina), sulfonilureas (por ejemplo, clorpropamida, glimepirida, gliburida, glipizida, gliburida, tolazamida y tolbutamida) y tiazolidindionas (por ejemplo, rosiglitazona y pioglitazona);
broncodilatadores incluyendo beta-agonistas de acción corta y larga (por ejemplo, albuterol, levalbuterol, salmeterol, formoterol y arformoterol) y anticolinérgicos de acción corta y larga (ipratropio, tiotropio, umeclidino, glicopirrolato y aclidinio).
esteroides tales como fluticasona y budesonida.
Cuando se usan como tratamiento de combinación de una combinación farmacéutica, los compuestos de la invención y el uno o más agentes adicionales pueden administrarse en la misma forma de dosificación o en formas de dosificación diferentes. Los compuestos de la invención y el uno o más agentes adicionales pueden administrarse simultáneamente o por separado, como parte de una pauta.

Claims (12)

  1. REIVINDICACIONES
    i. Compuesto seleccionado del grupo que consiste en:
    [4-(6-amino-4-metil-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-il]-metanona,
    [4-(6-amino-4-metil-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-(4-metoxi-5-fenoxi-piridin-2-il)-metanona,
    [4-(6-amino-4-metoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-il]-metanona,
    [4-(6-amino-4-metoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[4-metoxi-5-(4-trifluorometil-fenoxi)-piridin-2-il]-metanona, [4-(6-amino-4-metoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[4-metoxi-5-(4-metoxi-fenoxi)-piridin-2-il]-metanona,
    [4-(6-amino-4-etoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[4-metoxi-5-(fenoxi)-piridin-2-il]-metanona,
    5- etoxi-6-(1-{4-metoxi-5-[4-(trifluorometil)fenoxi]piridin-2-carbonil}piperidin-4-il)piridazin-3-amina, y 6- (1-{4-metoxi-5-[4-(trifluorometil)fenoxi]piridin-2-carbonil}piperidin-4-il)-5-metilpiridazin-3-amina.
  2. 2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es [4-(6-amino-4-metil-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-il]-metanona.
  3. 3. Compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es [4-(6-amino-4-metil-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-(4-metoxi-5-fenoxi-piridin-2-il)-metanona.
  4. 4. Compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es [4-(6-amino-4-metoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[5-(4-fluoro-fenoxi)-4-metoxi-piridin-2-il]-metanona.
  5. 5. Compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es [4-(6-amino-4-metoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[4-metoxi-5-(4-trifluorometil-fenoxi)-piridin-2-il]-metanona.
  6. 6. Compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es [[4-(6-amino-4-metoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[4-metoxi-5-(4-metoxi-fenoxi)-piridin-2-il]-metanona.
  7. 7. Compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es [4-(6-amino-4-etoxi-piridazin-3-il)-piperidin-1-il]-[4-metoxi-5-(fenoxi)-piridin-2-il]-metanona.
  8. 8. Compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es 5-etoxi-6-(1-{4-metoxi-5-[4-(trifluorometil)fenoxi]piridin-2-carbonil}piperidin-4-il)piridazin-3-amina.
  9. 9. Compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es 6-(1-{4-metoxi-5-[4-(trifluorometil)fenoxi]piridin-2-carbonil}piperidin-4-il)-5-metilpiridazin-3-amina.
  10. 10. Sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.
  11. 11. Composición farmacéutica que comprende uno cualquiera de los compuestos según las reivindicaciones 1 a 9, o sal farmacéuticamente aceptable de los mismos según la reivindicación 10, y opcionalmente un excipiente farmacéuticamente aceptable.
  12. 12. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o sal farmacéuticamente aceptable de los mismos según la reivindicación 10, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o un trastorno que puede aliviarse mediante la inhibición de TRPC6, en el que la enfermedad o el trastorno se selecciona del grupo que consiste en hipertrofia cardiaca, isquemia, lesión por reperfusión isquémica, hipertensión, hipertensión arterial pulmonar, hipertensión arterial pulmonar idiopática, reestenosis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, fibrosis quística, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica (ELA), trastornos encefálicos inducidos por traumatismo, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, artrosis, enfermedad intestinal inflamatoria, esclerosis múltiple, distrofia muscular, distrofia muscular de Duchenne, preeclampsia e hipertensión inducida por el embarazo, esteatohepatitis no alcohólica, enfermedad de cambios mínimos, glomeruloesclerosis focal y segmentaria (GEFS), síndrome nefrótico, nefropatía diabética o enfermedad renal diabética (ERD), enfermedad renal crónica, insuficiencia renal, enfermedad renal de fase terminal, isquemia o una lesión por reperfusión isquémica, cáncer, FPI (fibrosis pulmonar idiopática), SDRA (síndrome de dificultad respiratoria aguda), enfisema y diabetes.
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