ES2932192T3

ES2932192T3 - Composiciones para el lavado de vajilla que comprenden polipéptidos que tienen actividad beta-glucanasa y sus usos

Info

Publication number: ES2932192T3
Application number: ES16809006T
Authority: ES
Inventors: Thomas Weber; Inga Kerstin Vockenroth; Clarissa Maisey; Astrid Spitz; Lisa-Marie Schütz; Claudia Ottow; Daniela Herbst; Iben Damager; Morten Gjermansen; Carsten Andersen; Claudia Lindner
Original assignee: Henkel AG and Co KGaA
Current assignee: Henkel AG and Co KGaA
Priority date: 2015-12-07
Filing date: 2016-12-07
Publication date: 2023-01-16
Anticipated expiration: 2036-12-07
Also published as: US11441140B2; PL3387125T3; WO2017097866A1; CN108431220B; EP3387126A1; EP3387125A1; MX2018006471A; US20200165590A1; CA3003536A1; CN108431220A; WO2017097861A1; US20190382691A1; JP2018537099A; EP3387125B1; US11549104B2; EP3387126B1

Abstract

La presente invención se refiere a composiciones para lavavajillas que comprenden polipéptidos que tienen actividad beta-glucanasa, dominios catalíticos, dominios de unión a beta-glucano y polinucleótidos que codifican los polipéptidos, dominios catalíticos o dominios de unión a beta-glucano. La invención se refiere además a composiciones para lavavajillas que comprenden polipéptidos que exhiben actividad beta-glucanasa y una o más amilasas y/o una o más proteasas y usos de las mismas en aplicaciones y procesos de lavado de vajilla. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones para el lavado de vajilla que comprenden polipéptidos que tienen actividad beta-glucanasa y sus usos

Referencia a un listado de secuencias

Esta solicitud contiene un listado de secuencias en formato legible por computadora, que se incorpora a la presente como referencia.

Antecedentes de la invención

Campo de la invención

La presente invención se refiere a una composición para el lavado de vajilla que comprende polipéptido(s) que tienen actividad beta-glucanasa, dominios catalíticos, dominios de unión a beta-glucano. La invención se refiere además a composiciones para el lavado de vajilla que comprenden polipéptidos que presentan actividad beta-glucanasa y una o más amilasas y/o una o más proteasas y sus usos en aplicaciones y procesos de lavado de vajilla.

Descripción de la Técnica Relacionada

Los beta-glucanos son polisacáridos que consisten en unidades de glucosa unidas por enlaces beta-glucosídicos. La celulosa es un tipo de beta-glucano, en el que todas las unidades de glucosa están unidas por enlaces beta-1,4-glucosídicos. Esta característica da lugar a la formación de microfibrillas de celulosa insolubles. La hidrólisis enzimática de celulosa a glucosa requiere el uso de endo betaglucanasas (por ejemplo EC 3.2.1.4), celobiohidrolasas (por ejemplo EC 3.2.1.91) y beta-glucosidasas (por ejemplo EC 3.2.1.21).

Los beta-glucanos también pueden estar unidos por enlaces beta-1,3-glucosídicos (por ejemplo, como se encuentra en las paredes celulares de la levadura de panadero, Saccharomyces cerevisiae), enlaces beta-1,6-glucosídicos, así como combinaciones de enlaces beta-1,3-, beta-1,4- y beta-1,6- glucosídicos. La combinación de enlaces beta-1,3 y beta-1,4-glucosídicos puede encontrarse, por ejemplo, en la fibra soluble de cereales como la avena y la cebada. Se puede utilizar un subgrupo de beta-glucanasas, también conocido como liqueninasas (o liquenasas) (EC 3.2.1.73) para catalizar la hidrólisis de los enlaces beta-1,4-glucosídicos para dar beta-glucanos. Las liqueninasas (o las liquenasas) (por ejemplo CE 3.2.1.73) hidrolizan los enlaces (1,4)-beta-D-glucosídicos en beta-D-glucanos que contienen enlaces (1,3) y (1,4) y pueden actuar sobre la liquenina y los beta-D-glucanos de cereales, pero no sobre los beta-D-glucanos que contienen sólo enlaces 1,3 o 1,4. Otras beta-glucanasas (por ejemplo EC 3.2.1.4) pueden, por ejemplo, realizar endohidrólisis de enlaces (1,4)-beta-D-glucosídicos en celulosa, liquenina y beta-D-glucanos de cereales y también hidrolizarán enlaces 1,4 en beta-D-glucanos que contengan enlaces 1,3.

La eliminación de manchas de cereales como manchas que contienen avena y cebada en el lavado de vajilla es un problema reconocido, y hay un interés considerable por encontrar enzimas que puedan degradar los beta-glucanos que se encuentran en las mismas. Diversas especies de Bacillus como por ejemplo B. amyloliquefaciens expresan una beta-glucanasa, pero estas enzimas generalmente no son muy adecuadas para aplicaciones alcalinas, por ejemplo a pH 7,5 o superior.

La presente invención proporciona polipéptidos de la familia 16 de glucósido hidroliasa 16 (GH16) con actividad betaglucanasa (por ejemplo, que comprenden o consisten en actividad liqueninasa (EC 3.2.1.73)) y polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, que son muy activos en la degradación de diferentes tipos de beta-glucanos (por ejemplo, beta-D-glucanos, beta-1,3-1,4 glucanos, beta-glucanos de enlace mezclado, beta-glucanos de cebada y betaglucanos de avena), por ejemplo, en condiciones alcalinas (por ejemplo, con un pH 7,5 o superior), y por lo tanto, se pueden utilizar en las aplicaciones mencionadas anteriormente, por ejemplo, en aplicaciones de limpieza o detergentes y procesos como el lavado de vajilla. Los productos existentes que comprenden beta-glucanasas tienen un efecto muy bajo sobre este tipo de beta-glucano, ya que su principal sustrato enzimático es la celulosa. Por lo tanto, la presente invención proporciona betaglucanasas novedosas con propiedades mejoradas (por ejemplo, con una mejora significativa del rendimiento y/o la estabilidad en condiciones alcalinas; beta-glucanasas sin actividad celulasa (por ejemplo, sin actividad endo-celulasa en enlaces p-1,4 entre unidades de D-glucosa) (por ejemplo, EC 3.2.1.73). Una diferencia entre el uso de celulasas y de liquenasas en textiles en el lavado de ropa es que las liquenasas no degradan las fibras del textil.

Además, algunos detergentes sólidos en particular tienen un pH superior a 10. Las beta-glucanasas conocidas no son adecuadas para estos detergentes de pH muy alto. Por lo tanto, por ejemplo, las beta-glucanasas conocidas de Bacillus amyloliquefaciens y Bacillus subtilis pierden rápidamente su actividad en condiciones alcalinas como se ha demostrado en el ejemplo 8 de la presente invención. La presente invención proporciona beta-glucanasas novedosas con propiedades mejoradas (por ejemplo, con una mejora significativa del rendimiento y/o de la estabilidad en condiciones alcalinas).

Una proteína no caracterizada de Bacillus halodurans (uniprot:Q9K7X6) es 88,4% idéntica a la beta-glucanasa mostrada en SEQ ID NO: 7.

Una proteína no caracterizada de Bacillus cellulosilyticus (uniprot:E6TRB0) es 80,7% idéntica a la beta-glucanasa mostrada en SEQ ID NO: 3.

Una proteína no caracterizada de Bacillus akibai (uniprot:W4QVK7) es 98,2% idéntica a la beta-glucanasa mostrada en SEQ ID NO: 5.

Una proteína no caracterizada de Bacillus subtilis subesp. niger. (uniprot:A0A080UVP7) es 97,9% idéntica a la betaglucanasa mostrada en SEQ ID NO: 9.

Otras beta-glucanasas se describen en, por ejemplo, US 6541233 B1, WO 2014/083096 A2, Yang Shaoqing et al. (2014) Purification and characterization of a novel alkaline [beta]-1,3-1,4-glucanase (lichenase) from thermophilic fungus Malbranchea cinnam, Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology, 41 (1): 1487-1495, y Sameh Maktouf et al. (2013) A laundry detergent compatible lichenase: Statistical optimization for production under solid state fermentation on crude millet, Industrial crops and products, 43: 349-354.

Síntesis de la invención

En un aspecto, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición polipéptido(s) con actividad beta-glucanasa, que se selecciona(n) del grupo que consiste en:

(a) un polipéptido que tiene al menos 89% de identidad de secuencia con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7; y

(b) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene al menos 89% de identidad de secuencia con respecto a la secuencia que codifica el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 6; en donde dicha composición de limpieza o detergente comprende además:

(i) una o más amilasas; y/o

(ii) una o más proteasas,

preferentemente dicho polipéptido que tiene actividad beta-glucanasa y dicha una o más amilasas (por ejemplo, SEQ ID NO: 12) (y/o dicha una o más proteasas) tienen un efecto sinérgico; además, preferentemente dicho efecto sinérgico es un efecto sinérgico REM, más preferentemente dicho efecto sinérgico REM es de más de 6,5 a aproximadamente 40°C durante aproximadamente 30 minutos a un pH de aproximadamente 7,5, más preferentemente aún dicho efecto sinérgico REM es de más de 6,1 a aproximadamente 40°C durante aproximadamente 30 minutos a pH de aproximadamente 10, más preferentemente aún dicho efecto sinérgico REM es de más de 6,2 a aproximadamente 40°C durante aproximadamente 30 minutos a pH de aproximadamente 10, más preferentemente aún dicha actividad beta-glucanasa no es una actividad endo-celulasa en los enlaces (3-1,4 entre las unidades D-glucosa de la celulosa.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición polipéptido(s) con actividad beta-glucanasa, seleccionado(s) del grupo que consiste en:

(a) un polipéptido que tiene al menos 98% de identidad de secuencia con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7; y

(b) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene al menos 98% de identidad de secuencia con respecto a la secuencia que codifica el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 6; en donde dicha composición de limpieza o detergente comprende además:

(i) una o más amilasas; y/o

(ii) una o más proteasas,

preferentemente dicho polipéptido que tiene actividad beta-glucanasa y dicha una o más amilasas (por ejemplo, SEQ ID NO: 12) (y/o dicha una o más proteasas) tienen un efecto sinérgico; además, preferentemente dicho efecto sinérgico es un efecto sinérgico REM, más preferentemente dicho efecto sinérgico REM es de más de 6,5 a aproximadamente 40°C durante aproximadamente 30 minutos a un pH de aproximadamente 7,5, más preferentemente aún dicho efecto sinérgico REM es de más de 6,1 a aproximadamente 40°C durante aproximadamente 30 minutos a pH de aproximadamente 10, más preferentemente aún dicho efecto sinérgico REM es de más de 6,2 a aproximadamente 40°C durante aproximadamente 30 minutos a pH de aproximadamente 10, más preferentemente aún dicha actividad beta-glucanasa no es una actividad endo-celulasa en los enlaces p-1,4 entre las unidades D-glucosa de la celulosa.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición polipéptido(s) con actividad beta-glucanasa, que se selecciona(n) del grupo que consiste en:

(a) un polipéptido que tiene 100% de identidad de secuencia con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7; y

(b) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene 100% de identidad de secuencia con respecto a la secuencia que codifica el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 6; en donde dicha composición de limpieza o detergente comprende además:

(i) una o más amilasas; y/o

(ii) una o más proteasas,

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición una beta-glucanasa de la invención junto con una o más alfa-amilasas (y/o dicha una o más proteasas). En otro aspecto, la presente invención se refiere además a una composición de limpieza o detergente que comprende una beta-glucanasa junto con una o más amilasas y una o más enzimas adicionales seleccionadas del grupo que comprende proteasas, lipasas, cutinasas, celulasas, endoglucanasas, xiloglucanasas, pectinasas, pectina liasas, xantanasas, peroxidasas, haloperoxigenasas, catalasas, mananasas, o cualquier mezcla de las mismas. En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente de la invención que tiene un beneficio de detergencia enzimática o rendimiento de lavado mejorado en aplicaciones de limpieza o detergentes.

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de una beta-glucanasa de la invención junto con una o más proteasas, y opcionalmente uno o más enzimas adicionales tales como proteasas, lipasas, cutinasas, celulasas, endoglucanasas, xiloglucanasas, pectinasas, pectina liasas, xantanasas, peroxidasas, haloperoxigenasas, catalasas, mananasas, o cualquier mezcla de las mismas, para el lavado de vajilla.

La presente invención se refiere además a una composición para el lavado de vajilla, especialmente una composición de limpieza o detergente para el lavado de vajilla, que comprende uno o más polipéptido(s) que tienen actividad betaglucanasa que se selecciona del grupo que consiste en:

(b) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene al menos 89% de identidad de secuencia con respecto a la secuencia que codifica el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 6.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición para el lavado de vajilla, especialmente una composición de limpieza o detergente para el lavado de vajilla, que comprende uno o más polipéptido(s) que tienen actividad beta-glucanasa seleccionados del grupo que consiste en:

(b) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene al menos 98% de identidad de secuencia con respecto a la secuencia que codifica el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 6.

(a) un polipéptido que tiene al menos 100% de identidad de secuencia con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7; y

(b) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene al menos 100% de identidad de secuencia con respecto a la secuencia que codifica el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: s Eq ID NO: 6.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición el polipéptido de la presente invención y el uso de polipéptidos de la presente invención en la degradación de un betaglucano (por ejemplo, beta-D-glucano, beta-1,3-1,4 glucano, un beta-glucano de enlaces mixtos, beta-glucano de cebada, beta-glucano de avena), para el lavado de vajilla; métodos para degradar beta-glucano que comprenden la aplicación de una composición que comprende el polipéptido de la presente invención al betaglucano.

En otro aspecto, la presente descripción se refiere a una diferencia entre el uso de celulasas y liquenasas de la presente invención en textil en el lavado de ropa es que las liquenasas de la presente descripción no degradan las fibras del textil.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a métodos para el lavado de vajilla que incluyen lavado de vajilla automático (ADW, por sus siglas en inglés) y lavado de vajilla a mano (HDW, por sus siglas en inglés) utilizando un polipéptido o una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) de la invención. En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición el(los) polipéptido(s) de la invención. En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición dicho polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o dicha una o más proteasas).

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de polipéptido(s) de la presente invención en el lavado de vajilla para prevenir, reducir o eliminar una biopelícula de un artículo.

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso del(los) polipéptido(s) o de la composición detergente de la invención para reducir o prevenir la redeposición de suciedad en el lavado de vajilla.

Descripción general del listado de secuencias

SEQ ID NO: 1 es la secuencia de ADN de la beta-glucanasa aislada de una cepa de una especie de Bacillus.

SEQ ID NO: 2 es la secuencia de aminoácidos de la beta-glucanasa según se deduce automáticamente de SEQ ID NO: 1.

SEQ ID NO: 3 es la secuencia de aminoácidos de la beta-glucanasa según se deduce de SEQ ID NO: 1 teniendo en cuenta que el primer aminoácido (posición -28) en el polipéptido mostrado en SEQ ID NO: 2 y codificado por el polinucleótido mostrado en SEQ ID NO:1 debe ser Met, no Val. Cuando el primer codón es gtg, se inserta un Met aunque gtg normalmente codifica para V.

SEQ ID NO: 4 es la secuencia de ADN de la beta-glucanasa aislada de una cepa de un Bacillus akibai.

SEQ ID NO: 5 es la secuencia de aminoácidos de la beta-glucanasa según se deduce de SEQ ID NO: 4.

SEQ ID NO: 6 es la secuencia de ADN de la beta-glucanasa aislada de una cepa de un Bacillus agaradhaerens. SEQ ID NO: 7 es la secuencia de aminoácidos de la beta-glucanasa según se deduce de SEQ ID NO: 6.

SEQ ID NO: 8 es la secuencia de ADN de la beta-glucanasa aislada de una cepa de un Bacillus mojavensis.

SEQ ID NO: 9 es la secuencia de aminoácidos de la beta-glucanasa según se deduce de SEQ ID NO: 8.

SEQ ID NO: 10 es una señal de secreción de polipéptido Bacillus clausii.

SEQ ID NO: 11 es una secuencia artificial de etiqueta de purificación por afinidad de poli-histidina N-terminal.

SEQ ID NO: 12 es la secuencia de proteína alfa-amilasa de Bacillus sp. (Stainzyme).

SEQ ID NO: 13 es un polipéptido correspondiente a SEQ ID NO: 2 de WO 95/10603.

SEQ ID NO: 14 es un polipéptido correspondiente a SEQ ID NO: 6 en WO 02/010355.

SEQ ID NO: 15 es un polipéptido que corresponde a un polipéptido híbrido que comprende los residuos 1-33 de SEQ ID NO: 6 de WO 2006/066594 y los residuos 36-483 de SEQ ID NO: 4 de WO 2006/066594.

SEQ ID NO: 16 es un polipéptido correspondiente a SEQ ID NO: 6 de WO 02/019467.

SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 y SEQ ID NO: 19 son polipéptidos correspondientes respectivamente a SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 7 de WO 96/023873.

SEQ ID NO: 20 es un polipéptido correspondiente a SEQ ID NO: 2 de WO 08/153815

SEQ ID NO: 21 es un polipéptido correspondiente a SEQ ID NO: 10 de WO 01/66712.

SEQ ID NO: 22 es un polipéptido correspondiente a SEQ ID NO: 2 de WO 09/061380.

SEQ ID NO: 23 es una secuencia de proteína amilasa de Bacillus sp.

SEQ ID NO: 24 es una secuencia de proteína amilasa de Bacillus sp.

SEQ ID NO: 25 es una secuencia de proteína amilasa de Bacillus sp.

SEQ ID NO: 26 es una secuencia de proteína amilasa de Cytophaga sp.

SEQ ID NO: 27 es una secuencia de proteína amilasa de Bacillus sp.

SEQ ID NO: 28 es una secuencia de proteína amilasa de Bacillus sp.

SEQ ID NO: 29 es una secuencia de proteína amilasa de Bacillus halmapalus.

SEQ ID NO: 30 es una secuencia de proteína amilasa artificial.

SEQ ID NO: 31 es una secuencia de proteína amilasa de Bacillus sp.

SEQ ID NO: 32 es una secuencia de proteína beta-glucanasa de Bacillus amyloliquefaciens.

SEQ ID NO: 33 es una secuencia de proteína beta-glucanasa de Bacillus subtilis.

SEQ ID NO: 34 es una secuencia de proteína proteasa de Bacillus Lentus.

SEQ ID NO: 35 es una secuencia de proteína proteasa artificial.

SEQ ID NO: 36 es una secuencia de proteína proteasa artificial.

SEQ ID NO: 37 es la proteína beta-glucanasa madura recombinante marcada con His de Bacillus sp-62449. SEQ ID NO: 38 es la proteína beta-glucanasa madura recombinante marcada con His de Bacillus akibai.

SEQ ID NO: 39 es la proteína beta-glucanasa madura recombinante marcada con His de Bacillus agaradhaerens. SEQ ID NO: 40 es la proteína beta-glucanasa madura recombinante marcada con His de Bacillus mojavensis. Aunque forma parte de la presente descripción, las formas de realización relacionadas con composiciones de limpieza o detergentes que comprenden beta-glucanasa con la secuencia de SEQ ID NO: 2, 3, 5 o 9 (respectivamente, las enzimas que tienen similitud relevante) así como las formas de realización relacionadas (por ejemplo, secuencias de ADN, métodos, usos, etc.) no forman parte de la invención actualmente reivindicada. La presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente que comprende beta-glucanasas con SEQ ID NO: 7 (respectivamente enzimas que tienen similitud relevante con SEQ ID NO: 7) y formas de realización relacionadas (por ejemplo, secuencias de ADN, métodos, usos etc.).

Definiciones

Antirredeposición: La expresión "antirredeposición" o "efecto antirredeposición" significa reducir o prevenir que la suciedad se vuelva a depositar en la superficie dura tal como la vajilla. El efecto antirredeposición se puede determinar utilizando el ensayo de lavado Mini-LOM o Mini-TOM, como se describe en los ejemplos de la presente (por ejemplo, como en el ejemplo 14).

Efecto sinérgico: La expresión "efecto sinérgico" significa una acción cooperativa de polipéptidos de tal manera que un efecto combinado total de dichos polipéptidos es mayor que la suma de los efectos enzimáticos individuales de dichos polipéptidos. Algunos ejemplos no limitantes del efecto sinérgico incluyen el efecto sinérgico REM de un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más alfa-amilasa (y/o una o más proteasas).

Efecto sinérgico REM: El efecto sinérgico REM de los polipéptidos, como se utiliza en la presente invención, se puede medir en función del análisis de eliminación de manchas realizado mediante cualquier metodología de rendimiento de lavado adecuada (por ejemplo, el método de lavado de botellas en la lavadora Wascator). Un método preferido para determinar el efecto sinérgico REM se describe en los ejemplos descritos en la presente invención, por ejemplo en el Ejemplo 7.

Beta-glucanasa: El término "beta-glucanasa" como se utiliza en la presente invención significa una actividad endo beta-1,4-glucanasa (por ejemplo endo-1,4-p-D-glucanasa) que cataliza las hidrólisis de enlaces beta-1,4 que conectan dos residuos de glucosilo en un betaglucano. Algunos ejemplos no limitantes de beta-glucanasas según lo definido en la presente invención incluyen celulasas (por ejemplo EC 3.2.1.4, por ejemplo con actividad endo-celulasa en enlaces p-1,4 entre unidades de D-glucosa y liqueninasas (o liquenasas) (por ejemplo EC 3.2.1.73) que hidrolizan enlaces (1,4)-beta-D-glucosídicos en beta-D-glucanos que contienen enlaces (1,3)- y (1,4). Las beta-glucanasas (por ejemplo EC 3.2.1.4) pueden, por ejemplo, realizar endohidrólisis de enlaces (1,4)-beta-D-glucosídicos en celulosa, liquenina y beta-D-glucanos de cereales y también hidrolizarán enlaces 1,4 en beta-D-glucanos que contengan enlaces 1,3. A efectos de la presente descripción, la actividad beta-glucanasa se determina de acuerdo con el procedimiento descrito en los Ejemplos. En un aspecto, los polipéptidos de la presente descripción tienen al menos 20%, por ejemplo, al menos 40%, al menos 50%, al menos 60%, al menos 70%, al menos 80%, al menos 90%, al menos 95% o al menos 100% de la actividad beta-glucanasa del polipéptido que tiene la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 9. La actividad beta-glucanasa puede medirse adecuadamente utilizando el beta-glucano de cebada como sustrato. Un ensayo preferido para determinar la actividad beta-glucanasa se describe en el Ejemplo 1 (ensayo de beta-glucano de cebada-AZCL). Se puede utilizar también un subgrupo adicional de beta-glucanasas según lo definido en la presente invención, también conocido como liqueninasas (o liquenasas) (por ejemplo EC 3.2.1.73) para catalizar la hidrólisis de los enlaces beta-1,4-glucosídicos para dar beta-glucanos. Las liqueninasas (o las liquenasas) (por ejemplo EC 3.2.1.73) hidrolizan los enlaces (1,4)-beta-D-glucosídicos en beta-D-glucanos que contienen enlaces (1,3) y (1,4) y pueden actuar sobre la liquenina y los beta-D-glucanos de cereales, pero no sobre los beta-D-glucanos que contienen sólo enlaces 1,3 o 1,4. Como se utiliza en la presente invención, la expresión "Actividad beta-glucanasa" comprende la actividad liqueninasa (o liquenasas) (por ejemplo EC 3.2.1.73).

Beta-glucano: El término "beta-glucano", como se utiliza en la presente invención, significa un polisacárido que sólo contiene glucosa como componentes estructurales, y en el que las unidades de glucosa están unidas por enlaces beta-glucosídicos. Algunos ejemplos no limitantes de beta-glucanos incluyen beta-D-glucanos, beta-1,3-1,4 glucanos, beta-glucanos de enlaces mixtos, beta-glucanos de cebada, beta-glucanos de avena.

Variante alélica: La expresión "variante alélica" significa cualquiera de dos o más formas alternativas de un gen que ocupa el mismo locus cromosómico. La variación alélica surge naturalmente a través de la mutación, y puede dar como resultado un polimorfismo dentro de las poblaciones. Las mutaciones genéticas pueden ser silenciosas (sin cambios en el polipéptido codificado) o pueden codificar polipéptidos que tienen secuencias de aminoácidos alteradas. Una variante alélica de un polipéptido es un polipéptido codificado por una variante alélica de un gen.

Biopelícula: El término "biopelícula" significa cualquier grupo de microorganismos en los que las células se pegan entre sí en una superficie, como la vajilla. Estas células adherentes se incrustan con frecuencia en una matriz autoproducida de sustancia polimérica extracelular (SPE). La SPE de la biopelícula es una conglomeración polimérica generalmente compuesta por ADN extracelular, proteínas y polisacáridos. Se pueden formar biopelículas en superficies vivas o no vivas. Las células microbianas que crecen en una biopelícula son fisiológicamente distintas de las células planctónicas del mismo organismo, que, por el contrario, son células únicas que pueden flotar o nadar en un medio líquido.

Las bacterias que viven en una biopelícula suelen tener propiedades significativamente diferentes de las bacterias que flotan libremente de la misma especie, ya que el denso y protegido entorno de la película les permite cooperar e interactuar de varias maneras. Un efecto de este entorno es el aumento de la resistencia a los detergentes y antibióticos, ya que la densa matriz extracelular y la capa exterior de las células protegen el interior de la comunidad.

Módulo de unión a carbohidratos: La expresión "módulo de unión a carbohidratos" significa la región dentro de una enzima activa de carbohidratos que proporciona actividad de unión a carbohidratos. La mayoría de los módulos de unión a carbohidratos (MUC) conocidos son secuencias contiguas de aminoácidos con un pliegue discreto. El módulo de unión a carbohidratos (MUC) se encuentra normalmente en el extremo N-terminal o en el extremo C-terminal de una enzima. Se sabe que algunos MUC tienen especificidad para la celulosa.

Dominio catalítico: La expresión "dominio catalítico" significa la región de una enzima que contiene la maquinaria catalítica de la enzima.

ADNc: El término "ADNc" significa una molécula de ADN que puede ser preparada por transcripción inversa de una molécula de ARNm madura y cortada y empalmada obtenida de una célula eucariota o procariota. El ADNc carece de secuencias intrónicas que pueden estar presentes en el ADN genómico correspondiente. La transcripción de ARN primaria inicial es un precursor del ARNm que se procesa a través de una serie de pasos, incluyendo el corte y empalme, antes de aparecer como ARNm cortado y empalmado maduro.

Enzima celulolítica o celulasa: La expresión "enzima celulolítica" o "celulasa" significa una o más (por ejemplo, varias) enzimas que hidrolizan un material celulósico. Tales enzimas incluyen endoglucanasa(s) (por ejemplo, EC 3.2.1.4), celobiohidrolasa(s), beta-glucosidasa(s) o combinaciones de las mismas. Los dos métodos básicos para medir la actividad de la enzima celulolítica incluyen: (1) medición de la actividad total de la enzima celulolítica, y (2) medición de las actividades individuales de la enzima celulolítica (endoglucanasas, celobiohidrolasas y beta-glucosidasas). La actividad de la enzima celulolítica total se puede medir utilizando sustratos insolubles, incluidos papel de filtro Whatman N°1, celulosa microcristalina, celulosa bacteriana, celulosa de algas, algodón, lignocelulosa pretratada, etc. El ensayo de actividad celulolítica total más común es el ensayo de papel de filtro utilizando papel de filtro Whatman N°1 como sustrato.

La actividad de la enzima celulolítica puede determinarse midiendo el aumento de la producción/liberación de azúcares durante la hidrólisis de un material celulósico por la enzima o enzimas celulolíticas en las siguientes condiciones: 1-50 mg de proteína enzimática celulolítica/g de celulosa en rastrojo de maíz pretratado (PCS, por sus siglas en inglés) (u otro material celulósico pretratado) durante 3-7 días a una temperatura adecuada tal como 40°C-80°C, por ejemplo, 50°C, 55°C, 60°C, 65°C o 70°C, y un pH adecuado tal como 4-9, por ejemplo, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, o 7,0, comparado con una hidrólisis de control sin adición de proteína enzimática celulolítica. Las condiciones típicas son reacciones de 1 ml, PCS lavado o sin lavar, sólidos insolubles al 5% (peso en seco), acetato de sodio 50 mM pH 5, MnSO4 1 mM, 50°C, 55°C o 60°C, 72 horas, análisis de azúcar por columna ^aM ⁱNEX® HPX-87H (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, EE. UU.).

Material celulósico: La expresión "material celulósico" significa cualquier material que contenga celulosa. El polisacárido predominante en la pared celular primaria de la biomasa es la celulosa, el segundo más abundante es la hemicelulosa y el tercero es la pectina. La pared celular secundaria, producida después de que la célula ha dejado de crecer, también contiene polisacáridos y es reforzada por lignina polimérica covalentemente entrecruzada con la hemicelulosa. La celulosa es un homopolímero de anhidrocelobiosa y, por lo tanto, un beta-(1-4)-D-glucano lineal, mientras que las hemicelulosas incluyen una variedad de compuestos, tales como xilanos, xiloglucanos, arabinoxilanos y mananos en estructuras ramificadas complejas con un espectro de sustituyentes. Aunque generalmente polimórfica, la celulosa se encuentra en el tejido vegetal principalmente como una matriz cristalina insoluble de cadenas de glucano paralelas. Las hemicelulosas se enlazan normalmente con hidrógeno a la celulosa, así como a otras hemicelulosas, que ayudan a estabilizar la matriz de la pared celular.

La celulosa generalmente se encuentra, por ejemplo, en los tallos, hojas, vainas, cáscaras, y mazorcas de plantas u hojas, ramas, y madera de árboles. El material celulósico puede ser, pero no se limita a, residuos agrícolas, material herbáceo (incluyendo cultivos energéticos), residuos sólidos municipales, residuos de fábricas de pulpa y papel, papel de desecho y madera (incluyendo residuos forestales). Se entiende en la presente que la celulosa puede estar en forma de lignocelulosa, un material de pared celular vegetal que contiene lignina, celulosa y hemicelulosa en una matriz mixta. En un aspecto, el material celulósico es cualquier material de biomasa. En otro aspecto, el material celulósico es la lignocelulosa, que comprende celulosa, hemicelulosas y lignina.

En una forma de realización, el material celulósico es residuo agrícola, material herbáceo (incluyendo cultivos energéticos), residuo sólido municipal, residuo de fábricas de pulpa y papel, papel de desecho o madera (incluyendo residuo forestal).

En otra forma de realización, el material celulósico es arundo, bagazo, bambú, mazorca de maíz, fibra de maíz, rastrojo de maíz, miscanto, paja de arroz, pasto varilla o paja de trigo.

En otra forma de realización, el material celulósico es álamo temblón, eucalipto, abeto, pino, álamo, pícea o sauce.

En otra forma de realización, el material celulósico es celulosa de alga, celulosa bacteriana, línter de algodón, papel de filtro, celulosa microcristalina (por ejemplo, AVICEL ®), o celulosa tratada con ácido fosfórico.

En otra forma de realización, el material celulósico es una biomasa acuática. Como se utiliza en la presente invención, la expresión "biomasa acuática" significa biomasa producida en un medio acuático por un proceso de fotosíntesis. La biomasa acuática puede ser algas, plantas emergentes, plantas de hojas flotantes o plantas sumergidas.

El material celulósico puede utilizarse tal como se encuentra o puede ser sometido a pretratamiento, utilizando métodos convencionales conocidos en la técnica, según lo descrito en la presente invención. En un aspecto preferido, el material celulósico es pretratado.

Secuencia codificante: La expresión "secuencia codificante" significa un polinucleótido, que especifica directamente la secuencia de aminoácidos de un polipéptido. Los límites de la secuencia codificante están generalmente determinados por un marco de lectura abierto, que comienza con un codón de inicio tal como ATG, GTG o TTG y termina con un codón de parada tal como TAA, TAG o TGA. La secuencia codificante puede ser un ADN genómico, ADNc, ADN sintético o una combinación de los mismos.

Componente detergente: la expresión "componente detergente" se define en la presente invención para referirse a los tipos de productos químicos que pueden utilizarse en las composiciones detergentes. Los ejemplos de componentes detergentes son tensioactivos, hidrótropos, mejoradores, co-mejoradores, quelantes o agentes quelantes, sistema de blanqueo o componentes blanqueadores, polímeros, reforzadores de espuma, supresores de espuma, dispersantes, perfumes, bactericidas, fungicidas, agentes de suspensión de la suciedad, polímeros de liberación de la suciedad, agentes antirredeposición, inhibidores o estabilizadores enzimáticos, activadores enzimáticos, antioxidantes y solubilizadores. La composición detergente puede comprender uno o más de cualquier tipo de componente detergente.

Composición detergente: la expresión "composición detergente" se refiere a composiciones que resultan útiles para eliminar compuestos no deseados de elementos que se van a limpiar, tales como textiles, platos y superficies duras. La composición detergente puede utilizarse, por ejemplo, para limpiar textiles, platos y superficies duras, tanto para la limpieza doméstica como para la industrial. Los términos abarcan cualquier material o compuesto seleccionado para el tipo particular de composición de limpieza deseada y la forma del producto (por ejemplo, composiciones líquidas, en gel, polvo, granuladas, en pasta o pulverización) e incluye, pero no se limita a, composiciones detergentes (por ejemplo, detergentes líquidos y/o sólidos para lavar la ropa y detergentes para tejidos finos; formulaciones de limpieza de superficies duras, tales como encimeras y ventanas de vidrio, madera, plástico, cerámica y metal; limpiadores de alfombras; limpiadores de hornos; ambientadores de tejidos; suavizantes de tejidos; y prelavado de textiles y de lavandería, así como detergentes para el lavado de vajilla). Además de contener una GH16 beta-glucanasa de la invención, la formulación detergente puede contener una o más enzimas adicionales (tales como amilasas, proteasas, peroxidasas, celulasas, betaglucanasas, xiloglucanasas, hemicelulasas, xantanasas, xantan-liasas, acil-transferasas, fosfolipasas, esterasas, lacasas, catalasas, aril-esterasas, amilasas, alfa-amilasas, glucoamilasas, cutinasas, pectinasas, pectato-liasas, queratinasas, reductasas, oxidasas, fenoloxidasas, lipoxigenasas, ligninasas, carragenasas, pululanasas, tanasas, arabinosidasas, hialuronidasas, condroitinasas, xiloglucanasas, xilanasas, pectina acetil-esterasas, poligalacturonasas, ramnogalacturonasas, otras endo-beta-mananasas, exo-betamananasas, pectina metilesterasas, celobiohidrolasas, transglutaminasas y combinaciones de las mismas, o cualquier mezcla de las mismas), y/o componentes tales como tensioactivos, mejoradores, quelantes o agentes quelantes, sistemas de blanqueo o componentes blanqueadores, polímeros, acondicionadores de tejidos, reforzadores de espuma, supresores de espuma, tintes, perfume, inhibidores del curtido, abrillantadores ópticos, bactericidas, fungicidas, agentes de suspensión de la suciedad, agentes anticorrosión, inhibidores o estabilizadores enzimáticos, activadores enzimáticos, transferasa(s), enzimas hidrolíticas, oxido reductasas, agentes azulantes y colorantes fluorescentes, antioxidantes y solubilizadores.

Lavar la vajilla/lavado de vajilla: La expresión "lavar la vajilla"/"lavado de vajilla" se refiere a todas las formas de lavar la vajilla, por ejemplo, mediante el lavado de vajilla a mano (HDW, por sus siglas en inglés) o el lavado de vajilla automático (ADW, por sus siglas en inglés), especialmente el lavado de vajilla automático doméstico, o la limpieza de vajilla industrial. El lavado de vajilla incluye, pero no se limita a, la limpieza de todas las formas de vajilla tales como platos, tazas, vasos, tazones, todos los tipos de cubiertos tales como cucharas, cuchillos, tenedores y utensilios de servir, así como cerámica, plásticos, metales, porcelana, vidrio y acrílicos.

Composición para el lavado de vajilla: La expresión "composición para el lavado de vajilla" se refiere a todas las formas de composiciones para limpiar superficies duras. La presente invención no está restringida a cualquier tipo particular de composición de lavado de vajilla o cualquier detergente particular.

Fragmento: El término "fragmento" significa un polipéptido o un módulo catalítico o de unión a carbohidratos que tiene uno o más (por ejemplo, varios) aminoácidos ausentes del extremo terminal amino y/o carboxilo de un polipéptido o dominio maduro; en donde el fragmento tiene actividad betaglucanasa o de unión a carbohidratos. En un aspecto, un fragmento contiene al menos 340 residuos de aminoácidos, o al menos 230 residuos de aminoácidos, o al menos 210 residuos de aminoácidos o al menos 200 residuos de aminoácidos, o al menos 180 residuos de aminoácidos, en donde el fragmento tiene actividad beta-glucanasa.

Limpieza de superficies duras: La expresión "limpieza de superficies duras" se define en la presente invención como la limpieza de superficies duras en donde las superficies duras pueden incluir pisos, mesas, paredes, techos, etc., así como superficies de objetos duros tales como coches (lavado de coches) y platos (lavado de platos). El lavado de vajilla incluye, pero no se limita a, la limpieza de platos, tazas, vasos, tazones, y cubiertos tales como cucharas, cuchillos, tenedores y utensilios de servir, cerámica, plásticos, metales, porcelana, vidrio y acrílicos.

Enzima hemicelulolítica o hemicelulasa: La expresión "enzima hemicelulolítica" o "hemicelulasa" significa una o más (por ejemplo, varias) enzimas que hidrolizan un material hemicelulósico. Las hemicelulasas son componentes clave en la degradación de la biomasa vegetal. Los ejemplos de hemicelulasas incluyen, pero no se limitan a, una acetilmanan esterasa, una acetilxilano esterasa, una arabinanasa, una arabinofuranosidasa, una esterasa de ácido cumárico, una feruloil esterasa, una galactosidasa, una glucuronidasa, una glucuronoil esterasa, una mananasa, una manosidasa, una xilanasa y una xilosidasa. Los sustratos de estas enzimas, hemicelulosas, son un grupo heterogéneo de polisacáridos ramificados y lineales que se unen mediante enlaces de hidrógeno a las microfibrillas de celulosa de la pared celular de la planta, entrecruzándolas en una red robusta. Las hemicelulosas también están unidas covalentemente a la lignina, formando junto con la celulosa una estructura altamente compleja. La estructura variable y la organización de las hemicelulosas requieren la acción concertada de muchas enzimas para su completa degradación. Los módulos catalíticos de las hemicelulasas son glucósido hidrolasas (GH) que hidrolizan enlaces glucosídicos, o esterasas de carbohidratos (EC), que hidrolizan enlaces de éster de grupos laterales acetato o ácido ferúlico. Estos módulos catalíticos, basados en la homología de su secuencia primaria, pueden ser asignados a las familias GH y CE. Algunas familias, con un pliegue similar en general, pueden ser agrupadas en clanes, marcadas alfabéticamente (por ejemplo, GH-A). Una clasificación más informativa y actualizada de estas y otras enzimas activas de carbohidratos está disponible en la base de datos CarbohydrateActive Enzymes (CAZy). Las actividades de las enzimas hemicelulolíticas se pueden medir de acuerdo con Ghose y Bisaria, 1987, Pure & Appl. Chem. 59: 1739-1752, a una temperatura adecuada, tal como 40°C-80°C, por ejemplo, 50°C, 55°C, 60°C, 65°C o 70°C, y un pH adecuado tal como 4-9, por ejemplo, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5 o 7,0.

Aislado: El término "aislado" significa una sustancia en una forma o entorno que no se presenta en la naturaleza. Algunos ejemplos no limitantes de sustancias aisladas incluyen (1) cualquier sustancia no natural, (2) cualquier sustancia incluyendo, pero no limitado a, cualquier enzima, variante, ácido nucleico, proteína, péptido o cofactor, que se haya eliminado al menos parcialmente de uno o más de los componentes naturales con los que está asociada en la naturaleza; (3) cualquier sustancia modificada por la mano del hombre en relación con la sustancia encontrada en la naturaleza; o (4) cualquier sustancia modificada aumentando la cantidad de la sustancia en relación con otros componentes con los que está asociada naturalmente (por ejemplo, producción recombinante en una célula huésped; copias múltiples de un gen que codifica la sustancia; y el uso de un promotor más fuerte que el promotor naturalmente asociado con el gen que codifica la sustancia). Un caldo de fermentación producido cultivando una célula huésped recombinante que expresa el polinucleótido de la invención comprenderá el polipéptido de la invención en una forma aislada.

Actividad liquenasa: La expresión "actividad liquenasa" significa enzimas que hidrolizan beta-1,3, beta-1,4-glucanos (por ejemplo, EC 3.2.1.73).

Polipéptido maduro: La expresión "polipéptido maduro" significa un polipéptido en su forma final después de la traducción y cualquier modificación pos-traduccional, tal como el procesamiento N-terminal, truncamiento C-terminal, glucosilación, fosforilación, etc. En un aspecto, el polipéptido maduro se selecciona del grupo que consiste en: aminoácidos 1 a 222 de SEQ ID NO: 7, aminoácidos 1 a 351 de SEQ ID NO: 2, aminoácidos 1 a 351 de SEQ ID NO: 3, aminoácidos 1 a 245 de SEQ ID NO: 5, aminoácidos 1 a 214 de SEQ ID NO: 9. Los aminoácidos -28 a -1 de SEQ ID NO: 2 son un péptido de señal. Los aminoácidos -28 a -1 de SEQ ID NO: 3 son un péptido de señal. Los aminoácidos -31 a -1 de SEQ ⁱD NO: 5 son un péptido de señal. Los aminoácidos -15 a -1 de ^sE^qID NO: 7 son un péptido de señal. Los aminoácidos -29 a -1 de SEQ ID NO: 9 son un péptido de señal.

Se sabe en la técnica que una célula huésped puede producir una mezcla de dos o más polipéptidos maduros diferentes (es decir, con un aminoácido C-terminal y/o N-terminal diferente) expresado por el mismo polinucleótido. También se sabe en la técnica que diferentes células huésped procesan polipéptidos de manera diferente, y por lo tanto, una célula huésped que expresa un polinucleótido puede producir un polipéptido maduro diferente (por ejemplo, con un aminoácido C-terminal y/o N-terminal diferente) en comparación con otra célula huésped que expresa el mismo polinucleótido.

Secuencia codificante de polipéptido maduro: La expresión "secuencia codificante de polipéptido maduro" significa un polinucleótido que codifica un polipéptido maduro que tiene actividad beta-glucanasa. En un aspecto, la secuencia codificante del polipéptido maduro se selecciona del grupo que consiste en: nucleótidos 85 a 1137 de SEQ ID NO: 1, nucleótidos 94 a 828 de SEQ ID NO: 4, nucleótidos 46 a 711 de SEQ ID NO: 6, nucleótidos 88 a 729 de SEQ ID NO: 8. Los nucleótidos 1 a 84 de SEQ

ID NO: 1 codifican un péptido de señal. Los nucleótidos 1 a 93 de SEQ ID NO: 4 codifican un péptido de señal. Los nucleótidos 1 a 45 de SEQ ID NO: 6 codifican un péptido de señal. Los nucleótidos 1 a 87 de s Eq ID NO: 8 codifican un péptido de señal.

Mal olor: La expresión "mal olor" significa un olor que no se desea en los artículos limpios. El artículo limpio debe oler fresco y limpio sin los malos olores adheridos al artículo. Un ejemplo de mal olor son los compuestos con un olor desagradable, que pueden ser producidos por microorganismos. Otro ejemplo de mal olor puede ser el olor de especias, por ejemplo curry u otras especias exóticas adheridas a un artículo como un trozo de tela. Una forma de medir la capacidad de un artículo para adherirse a mal olor es mediante el ensayo de mal olor.

Rastrojo de maíz pretratado: La expresión "rastrojo de maíz pretratado" o "PCS" significa un material celulósico derivado de rastrojo de maíz mediante tratamiento con calor y ácido sulfúrico diluido, pretratamiento alcalino, pretratamiento neutro o cualquier pretratamiento conocido en la técnica.

Identidad de secuencia: La relación entre dos secuencias de aminoácidos se describe mediante el parámetro "identidad de secuencia". A efectos de la presente descripción, la identidad de secuencia entre dos secuencias de aminoácidos se determina mediante el algoritmo Needleman-Wunsch (Needleman y Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443-453) tal como se implementa en el programa Needle del paquete EMBOSS, preferentemente la versión 5.0.0 o posterior. Los parámetros utilizados son la penalización por espacios abiertos de 10, penalización por extensión de espacios de 0,5 y la matriz de sustitución EBLOSUM62 (versión EMBOSS de BLOSUM62). La salida de Needle denominada “ identidad más larga” (obtenida mediante la opción -nobrief) se utiliza como porcentaje de identidad y se calcula de la siguiente manera:

(Residuos idénticos x 100)/(Longitud de Alineamiento - Cantidad Total de Espacios en el Alineamiento)

A efectos de la presente descripción, la identidad de secuencia entre dos secuencias de desoxirribonucleótido se determina utilizando el algoritmo Needleman-Wunsch tal como se implementa en el programa Needle del paquete EMBOSS, preferentemente la versión 5.0.0 o posterior. Los parámetros utilizados son la penalización por espacios abiertos de 10, penalización por extensión de espacios de 0,5 y la matriz de sustitución EDNAFULL (versión EMBOSS de NCBI NUC4.4) La salida de Needle denominada “ identidad más larga” (obtenida mediante la opción -nobrief) se utiliza como porcentaje de identidad y se calcula de la siguiente manera:

(Desoxirribonucleótidos idénticos x 100)/(Longitud de Alineamiento - Cantidad Total de Espacios en el Alineamiento)

Condiciones de severidad: Las diferentes condiciones de severidad son definidas de la siguiente manera.

La expresión "condiciones de muy baja severidad" significa para las sondas de al menos 100 nucleótidos de longitud, prehibridación e hibridación a 42°C en 5X SSPE, SDS al 0,3%, 200 microgramos/ml de ADN de esperma de salmón cortado y desnaturalizado, y 25% de formamida, siguiendo los procedimientos estándar de transferencia Southern durante 12 a 24 horas. Finalmente, el material portador se lava tres veces cada una durante 15 minutos con 1,6x SSC, SDS al 0,2% a 60°C.

La expresión "condiciones de baja severidad" significa para las sondas de al menos 100 nucleótidos de longitud, prehibridación e hibridación a 42°C en 5X SSPE, SDS al 0,3%, 200 microgramos/ml de ADN de esperma de salmón cortado y desnaturalizado, y 25% de formamida, siguiendo los procedimientos estándar de transferencia Southern durante 12 a 24 horas. Finalmente, el material portador se lava tres veces cada una durante 15 minutos con 0,8X SSC, SDS al 0,2% a 60°C.

La expresión "condiciones de severidad media" significa para las sondas de al menos 100 nucleótidos de longitud, prehibridación e hibridación a 42°C en 5X SSPE, SDS al 0,3%, 200 microgramos/ml de ADN de esperma de salmón cortado y desnaturalizado, y 35% de formamida, siguiendo los procedimientos estándar de transferencia Southern durante 12 a 24 horas. Finalmente, el material portador se lava tres veces cada una durante 15 minutos con 0,8X SSC, SDS al 0,2% a 65°C.

La expresión "condiciones de severidad media-alta" significa para las sondas de al menos 100 nucleótidos de longitud, prehibridación e hibridación a 42°C en 5X SSPE, SDS al 0,3%, 200 microgramos/ml de ADN de esperma de salmón cortado y desnaturalizado, y 35% de formamida, siguiendo los procedimientos estándar de transferencia Southern durante 12 a 24 horas. Finalmente, el material portador se lava tres veces cada una durante 15 minutos con 0,4X SSC, SDS al 0,2% a 65°C.

La expresión "condiciones de severidad alta" significa para las sondas de al menos 100 nucleótidos de longitud, prehibridación e hibridación a 42°C en 5X SSPE, SDS al 0,3%, 200 microgramos/ml de ADN de esperma de salmón cortado y desnaturalizado, y 50% de formamida, siguiendo los procedimientos estándar de transferencia Southern durante 12 a 24 horas. Finalmente, el material portador se lava tres veces cada una durante 15 minutos con 0,2X SSC, SDS al 0,2% a 65°C.

La expresión "condiciones de severidad muy alta" significa para las sondas de al menos 100 nucleótidos de longitud, prehibridación e hibridación a 42°C en 5X SSPE, SDS al 0,3%, 200 microgramos/ml de ADN de esperma de salmón cortado y desnaturalizado, y 50% de formamida, siguiendo los procedimientos estándar de transferencia Southern durante 12 a 24 horas. Finalmente, el material portador se lava tres veces cada una durante 15 minutos con 0,2X SSC, SDS al 0,2% a 70°C.

Subsecuencia: El término "subsecuencia" significa un polinucleótido que tiene uno o más (por ejemplo, varios) nucleótidos ausentes del extremo 5' y/o 3' de una secuencia codificante del polipéptido maduro; en donde la subsecuencia codifica un fragmento que tiene actividad beta-glucanasa. En un aspecto, una subsecuencia contiene al menos 1052 nucleótidos de SEQ iD NO: 1 o su secuencia de ADNc, al menos 1037 nucleótidos de SEQ ID NO: 1 o su secuencia de ADNc, o 1022 nucleótidos de SEQ ID NO: 1 o su secuencia de ADNc).

Variante: El término "variante" significa un polipéptido con actividad beta-glucanasa que comprende una alteración, es decir, una sustitución, inserción y/o deleción de uno o más (varios) residuos de aminoácidos en una o más (varias) posiciones. Una sustitución significa un reemplazo de un aminoácido que ocupa una posición con un aminoácido diferente; una deleción significa la remoción de un aminoácido que ocupa una posición; y una inserción significa agregar 1-3 aminoácidos adyacentes a un aminoácido que ocupa una posición. Las variantes de la presente descripción tienen al menos 20%, por ejemplo, al menos 40%, al menos 50%, al menos 60%, al menos 70%, al menos 80%, al menos 90%, al menos 95% o al menos 100% de la actividad beta-glucanasa del polipéptido de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, s Eq ID NO: 5, SEQ ID NO: 9 o el polipéptido maduro de secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 9.

Beta-glucanasa de tipo salvaje: La expresión beta-glucanasa "de tipo salvaje" significa una beta-glucanasa expresada por un microorganismo natural, como una bacteria, levadura u hongo filamentoso que se encuentra en la naturaleza.

Rendimiento de lavado: La expresión "rendimiento de lavado" se define en la presente como la capacidad de una enzima o una mezcla de enzimas para eliminar las manchas presentes en un objeto que se va a limpiar, por ejemplo, durante el lavado o la limpieza de superficies duras, como el lavado de vajilla, en relación con el rendimiento de lavado sin una o más enzimas presentes.

Descripción detallada de la invención

Composiciones para el lavado de vajilla que comprenden uno o más polipéptidos con actividad beta-glucanasa

Esta invención proporciona el uso de beta-glucanasas novedosas y una o más amilasas (y/o una o más proteasas) para composiciones de limpieza o detergentes que tienen un beneficio en quitar manchas y que pueden utilizarse en aplicaciones de limpieza o detergentes, como en el lavado de vajilla o para procesos como el lavado de vajilla. La invención también proporciona el uso de beta-glucanasas que son estables al lavado en formulaciones detergentes en presencia de amilasas. Las betaglucanasas de la invención pueden mostrar un efecto sinérgico con una o más amilasas (y/o una o más proteasas) (por ejemplo en donde un método preferido para determinar el efecto sinérgico REM es descrito en los ejemplos descritos en la presente invención, por ejemplo en el Ejemplo 7).

En una forma de realización, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo la composición polipéptido(s) con actividad beta-glucanasa, en donde dichos polipéptidos tienen una identidad de secuencia con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7; al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%, que tienen actividad beta-glucanasa; y una o más amilasas (y/o una o más proteasas), preferentemente dicho polipéptido tiene actividad beta-glucanasa y dicha una o más amilasas (y/o una o más proteasas) tienen un efecto sinérgico; más preferentemente dicho efecto sinérgico es un efecto sinérgico REM, aún más preferentemente dicho efecto sinérgico REM es de más de 6,5 a aproximadamente 40°C durante aproximadamente 30 minutos a pH de aproximadamente 7,5, aún más preferentemente dicho efecto sinérgico REM es de más de 6,1 a aproximadamente 40°C durante aproximadamente 30 minutos a pH de aproximadamente 10, aún más preferentemente dicho efecto sinérgico REM es de más de 6,2 a aproximadamente 40°C durante aproximadamente 30 minutos a pH de aproximadamente 10, aún más preferentemente dicha actividad beta-glucanasa no es una actividad endo-celulasa en enlaces (3-1,4 entre unidades de D-glucosa de celulosa.

En una forma de realización, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende polipéptido(s) que tienen una identidad de secuencia con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7; al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%, que tienen actividad beta-glucanasa. Una forma de realización de la presente invención es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En un aspecto, el o los polipéptidos difieren en hasta 10 aminoácidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10, del polipéptido maduro de secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. Una forma de realización de la presente invención es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición dicho polipéptido de betaglucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende una beta-glucanasa que tiene al menos 89% de identidad con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7 y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende una beta-glucanasa que tiene al menos 90% de identidad con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7 y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende una beta-glucanasa que tiene al menos 91% de identidad con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7 y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende una beta-glucanasa que tiene al menos 92% de identidad con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7 y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende una beta-glucanasa que tiene al menos 93% de identidad con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7 y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende una beta-glucanasa que tiene al menos 94% de identidad con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7 y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende una beta-glucanasa que tiene al menos 95% de identidad con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7 y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende una beta-glucanasa que tiene al menos 96% de identidad con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7 y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende una beta-glucanasa que tiene al menos 97% de identidad con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7 y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende una beta-glucanasa que tiene al menos 98% de identidad con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7 y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende una beta-glucanasa que tiene al menos 99% de identidad con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7 y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, la presente invención se refiere a una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende una beta-glucanasa que tiene 100% de identidad con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7 y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En otra forma de realización de la invención, el polipéptido que tiene actividad beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas) tienen un efecto sinérgico; preferentemente dicho efecto sinérgico es un efecto sinérgico REM, más preferentemente dicho efecto sinérgico REM es de más de 6,5 a aproximadamente 40°C durante aproximadamente 30 minutos a un pH de aproximadamente 7,5, más preferentemente dicho efecto sinérgico REM es de más de 6,1 a aproximadamente 40°C durante aproximadamente 30 minutos a pH de aproximadamente 10, más preferentemente dicho efecto sinérgico REM es de más de 6,2 a aproximadamente 40°C durante aproximadamente 30 minutos a pH de aproximadamente 10, más preferentemente dicha actividad beta-glucanasa no es una actividad endo-celulasa en los enlaces p-1,4 entre las unidades D-glucosa de la celulosa.

En otra forma de realización, el efecto sinérgico REM es de más de 1,4 (tal como 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1,4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1,6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9, 8,0, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6, 8,7, 8,8, 8,9, o 9,0) a aproximadamente 40°C (o 35°C, 45°C, 50°C, 55°C, 60°C) durante aproximadamente 30 minutos (o 15 min, 20 min, 25 min, 35 min, 40 min) a pH de aproximadamente 7,0 (o 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5, 10,0, 10,5, 11,0, 11,5, 12,0, 12,5, 13,0, 13,5), por ejemplo en un lavado de botellas de Wascator en el detergente modelo A1 a 40°C, 30 min (pH 7,7), o en un lavador de botellas de Wascator en el detergente modelo X1 a 40°C, 30 min (pH 10,1), o en el lavador de botellas de Wascator en el detergente modelo de ADW A1 a 40°C, 30 min (pH 10,2) (por ejemplo, véase el Ejemplo 7).

En otra forma de realización, un pH óptimo de un polipéptido de la presente invención se selecciona en el rango de aproximadamente 6 a aproximadamente 9. En otra forma de realización, un pH óptimo de un polipéptido de la presente invención se selecciona del grupo que consiste en: 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9. En otra forma de realización, un pH óptimo de un polipéptido de la presente invención es al menos 6 (o al menos 6,5, o al menos 7, o al menos 7,5, o al menos 8, o al menos 8,5, o al menos 9). En otra forma de realización, un pH óptimo de un polipéptido de la presente invención es más de 6 (o más de 6,5, o más de 7, o más de 7,5, o más de 8, o más de 8,5, o más de 9).

En otra forma de realización, un pH óptimo de un polipéptido de la presente invención selecciona en el rango de aproximadamente 6 a aproximadamente 9, en donde dicho polipéptido tiene una actividad relativa significativamente superior a pH 10 que oscila entre 23-90% en comparación con una beta-glucanasa de Bacillus subtilis o Bacillus amyloliquefaciens. En otra forma de realización, un pH óptimo de un polipéptido de la presente invención se selecciona del grupo que consiste en: 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, en donde dicho polipéptido tiene una actividad relativa significativamente superior a pH 10 que oscila entre 23-90% en comparación con una beta-glucanasa de Bacillus subtilis o Bacillus amyloliquefaciens. En otra forma de realización, un pH óptimo de un polipéptido de la presente invención es al menos 6 (o al menos 6,5, o al menos 7, o al menos 7,5, o al menos 8, o al menos 8,5, o al menos 9), en donde dicho polipéptido tiene una actividad relativa significativamente superior a pH 10 que oscila entre 23-90% en comparación con una beta-glucanasa de Bacillus subtilis o Bacillus amyloliquefaciens. En otra forma de realización, un pH óptimo de un polipéptido de la presente invención es más de 6 (o más de 6,5, o más de 7, o más de 7,5, o más de 8, o más de 8,5, o más de 9), en donde dicho polipéptido tiene una actividad relativa significativamente superior a pH 10 que oscila entre 23-90% en comparación con una beta-glucanasa de Bacillus subtilis o Bacillus amyloliquefaciens.

En un aspecto, los polipéptidos no difieren en más de treinta aminoácidos, por ejemplo, en veinticinco aminoácidos, en veinte aminoácidos, en quince aminoácidos, en doce aminoácidos, en diez aminoácidos, en nueve aminoácidos, en ocho aminoácidos, en siete aminoácidos, en seis aminoácidos, en cinco aminoácidos, en cuatro aminoácidos, en tres aminoácidos, en dos aminoácidos, y en un aminoácido del polipéptido de secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. Una forma de realización es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) que comprende dicho polipéptido de betaglucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, el polipéptido ha sido aislado. Un polipéptido de la presente invención preferentemente comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7 En otro aspecto, el polipéptido comprende o consiste en el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en:

SEQ ID NO: 7. Una forma de realización de la presente invención es una composición de limpieza o detergente en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En otro aspecto, el polipéptido comprende o consiste en aminoácidos 1 a 222 de SEQ ID NO: 7. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) que comprende en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En otra forma de realización, la beta-glucanasa de la presente invención no es una endo-celulasa que tiene actividad en enlaces (3-1,4 entre unidades de D-glucosa de celulosa. En otra forma de realización, la beta-glucanasa de la presente invención tiene actividad enzimática de liqueninasa (EC 3.2.1.73) que tiene actividad en p-1,3 p-1,4 glucanos. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En otra forma de realización, la beta-glucanasa de la presente invención comprende actividad beta-glucanasa alcalina (por ejemplo actividad beta-glucanasa en una solución acuosa a pH 7,5 o superior, por ejemplo, actividad betaglucanasa a pH seleccionado del grupo que consiste en 7,5, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 13,5, por ejemplo actividad betaglucanasa a pH en el rango de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 13,5, en donde dicha solución acuosa comprende opcionalmente un agente blanqueador, preferentemente dicho pH se selecciona en el rango de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 12,5, más preferentemente dicho pH se selecciona en el rango de aproximadamente 8,5 a aproximadamente 11,5, aún más preferentemente dicho pH se selecciona en el rango de aproximadamente 9,5 a aproximadamente 10,5). Una forma de realización de la presente invención es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En otra forma de realización, una beta-glucanasa de la presente invención es capaz de:

i) tener actividad beta-glucanasa durante al menos 15 minutos en una solución acuosa con un pH seleccionado en el rango de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 13,5, en donde dicha solución acuosa comprende opcionalmente un agente blanqueador, preferentemente dicho pH se selecciona en el rango de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 12,5, más preferentemente dicho pH se selecciona en el rango de aproximadamente 8,5 a aproximadamente 11,5, aún más preferentemente dicho pH se selecciona en el rango de aproximadamente 9,5 a aproximadamente 10,5; y/o

ii) tener actividad beta-glucanasa durante al menos 15 minutos en una solución acuosa a una temperatura seleccionada en el rango de aproximadamente 20°C a aproximadamente 75°C, en donde dicha solución acuosa comprende opcionalmente un agente blanqueador.

Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En otra forma de realización, un beta-glucanasa de la presente invención es capaz de tener actividad beta-glucanasa en una solución acuosa a una temperatura seleccionada en el rango de aproximadamente 20°C a aproximadamente 75°C, en donde dicha solución acuosa comprende opcionalmente un agente blanqueador, preferentemente dicha temperatura se selecciona en el rango de aproximadamente 40°C a aproximadamente 60°C. En otra forma de realización, una beta-glucanasa de la presente invención es capaz de tener actividad beta-glucanasa en una solución acuosa a una temperatura seleccionada del grupo que consiste en: 20°C, 21°C, 22°C, 23°C, 24°C, 25°C, 26°C, 27°C, 28°C, 29°C, 30°C, 31°C, 32°C, 33°C, 34°C, 35°C, 36°C, 37°C, 38°C, 39°C, 40°C, 41°C, 42°C, 43°C, 44°C, 45°C, 46°C,

C, 65°C, C, 84°C, 85°C, 86°C, 87°C, 88°C, 89°C, 90°C, 90°C. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) que comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En otra forma de realización, una beta-glucanasa de la presente invención es capaz de tener actividad beta-glucanasa durante al menos 15 minutos, preferentemente al menos 30 minutos. En otra forma de realización, una beta-glucanasa de la presente invención es capaz de tener actividad beta-glucanasa durante un período de tiempo seleccionado del grupo que consiste en: al menos 1, al menos 2, al menos 3, al menos 4, al menos 5, al menos 6, al menos 7, al menos 8, al menos 9, al menos 10, al menos 11, al menos 12, al menos 13, al menos 14, al menos 15, al menos 16, al menos 17, al menos 18, al menos 19, al menos 20, al menos 21, al menos 22, al menos 23, al menos 24, al menos 25, al menos 26, al menos 27, al menos 28, al menos 29, al menos 30 minutos, por ejemplo en combinación con cualquiera de las formas de realización únicas o múltiples según lo descrito en la presente invención. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) que comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En otra forma de realización, una composición de limpieza o detergente en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende un polipéptido de betaglucanasa y una o más amilasas, en donde dicha amilasa es una alfa-amilasa.

En otra forma de realización, una composición de limpieza o detergente de la invención en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas, en donde dicho alfa-amilasa se selecciona del grupo que consiste en:

(a) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 13 (correspondiente a SEQ ID NO: 2 de WO 95/10603);

(b) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 13 (correspondiente a SEQ ID NO: 2 en WO 95/10603) en donde el polipéptido comprende una sustitución en una o más de las posiciones: 15, 23, 105, 106, 124, 128, 133, 154, 156, 178, 179, 181, 188, 190, 197, 201, 202, 207, 208, 209, 211, 243, 264, 304, 305, 391, 408, y/o 444;

(c) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 14 (correspondiente a SEQ ID NO: 6 en WO 02/010355);

(d) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con el polipéptido híbrido de SEQ ID NO: 15 (que comprende los residuos 1-33 de SEQ ID NO: 6 de WO 2006/066594 y los residuos 36-483 de SEQ ID NO: 4 de WO 2006/066594);

(e) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con el polipéptido híbrido de SEQ ID NO: 15 (que comprende los residuos 1-33 de SEQ ID NO: 6 de WO 2006/066594 y los residuos 36-483 de SEQ ID NO: 4 en WO 2006/066594) en donde el polipéptido híbrido comprende una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las posiciones: 48, 49, 107, 156, 181, 190, 197, 201, 209 y/o 264;

(f) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 16 (correspondiente a SEQ ID NO: 6 de WO 02/019467);

(g) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 16 (correspondiente a SEQ ID NO: 6 de WO 02/019467) en donde el polipéptido comprende una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las posiciones: 181, 182, 183, 184, 195, 206, 212, 216 y/o 269;

(h) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 o SEQ ID NO: 19 (correspondiente a SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 7 de WO 96/023873)

(i) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 o SEQ ID NO: 19 (correspondiente a SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 7 de WO 96/023873) en donde el polipéptido comprende una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las posiciones: 140, 183, 184 195, 206, 243, 260, 304 y/o 476;

(j) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 20 (correspondiente a SEQ ID NO: 2 de WO 08/153815);

(k) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 21 (correspondiente a SEQ ID NO: 10 de WO 01/66712);

(l) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 21 (correspondiente a SEQ ID NO: 10 de Wo 01/66712) en donde el polipéptido comprende una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las posiciones: 176, 177, 178, 179, 190, 201, 207, 211 y/o 264;

(m) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 22 (correspondiente a SEQ ID NO: 2 de WO 09/061380);

(n) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 22 (correspondiente a SEQ ID NO: 2 de WO 09/061380) en donde el polipéptido comprende una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las posiciones: 87, 98, 125, 128, 131, 165, 178, 180, 181, 182, 183, 201, 202, 225, 243, 272, 282, 305, 309, 319, 320, 359, 444 y/o 475;

(o) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 21, en donde el polipéptido comprende una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las posiciones: 28, 118, 174; 181, 182, 183, 184, 186, 189, 195, 202, 298, 299, 302, 303, 306, 310, 314; 320, 324, 345, 396, 400, 439, 444, 445, 446, 449, 458, 471 y/o 484;

(p) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 12;

(q) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia (por ejemplo, al menos 95% o 100% de identidad de secuencia) con una variante de SEQ ID NO:23 que tiene alteraciones G182* D183*;

(r) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia (por ejemplo, al menos 95% o 100% de identidad de secuencia) con una variante de SEQ ID NO:24 que tiene alteraciones H183* G184* I405L A421H A422P A428T;

(s) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia (por ejemplo, al menos 95% o 100% de identidad de secuencia) con una variante de SEQ ID NO:24 que tiene alteraciones M9L R118K G149A G182T G186A D183* G184* N195F M202L T257I Y295F N299Y R320K M323T A339S E345R R458K;

(t) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia (por ejemplo, al menos 95% o 100% de identidad de secuencia) con una variante de SEQ ID NO: 24 que tiene alteraciones R178* G179* E187P I203Y R458N T459S D460T G476K (u) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia (por ejemplo, al menos 95% o 100% de identidad de secuencia) con una variante de SEQ ID NO: 27 que tiene la alteración M202L; (v) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia (por ejemplo, al menos 95% o 100% de identidad de secuencia) con una variante de SEQ ID NO: 28 que tiene las alteraciones R180* S181* S243Q G475K; (w) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia (por ejemplo, al menos 95% o 100% de identidad de secuencia) con una variante de SEQ ID NO: 29 que tiene las alteraciones D183* G184* W140Y N195F I206Y Y243F E260G G304R G476K;

(x) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia (por ejemplo, al menos 95% o 100% de identidad de secuencia) con una variante de SEQ ID NO: 30 que tiene las alteraciones H1* N54S V56T K72R G109A F113Q R116Q W167F Q172G A174S G184T N195F V206L K391A P473R G476K;

(y) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia (por ejemplo, al menos 95% o 100% de identidad de secuencia) con una variante de SEQ ID NO: 31 que tiene las alteraciones M9L R118K G149A G182T G186A D183* G184* N195F T246V T257I Y295F N299Y R320K M323T A339S E345R R458K.

En otra forma de realización, una composición de limpieza o detergente de la invención en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende un polipéptido de beta-glucanasa y una o más proteasas, en donde dicha proteasa se selecciona del grupo que consiste en:

a) un polipéptido que tiene actividad proteasa, que tiene al menos 60% de identidad de secuencia (por ejemplo, al menos 61%, al menos 62%, al menos 63%, al menos 64%, al menos 65%, al menos 66%, al menos 67%, al menos 68%, al menos 69%, al menos 70%, al menos 71%, al menos 72%, al menos 73%, al menos 74%, al menos 75%, al menos 76%, al menos 77%, al menos 78%, al menos 79%, al menos 80%, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia) con SEQ ID NO: 34;

b) un polipéptido que tiene actividad proteasa, que tiene al menos 60% de identidad de secuencia (por ejemplo, al menos 61%, al menos 62%, al menos 63%, al menos 64%, al menos 65%, al menos 66%, al menos 67%, al menos 68%, al menos 69%, al menos 70%, al menos 71%, al menos 72%, al menos 73%, al menos 74%, al menos 75%, al menos 76%, al menos 77%, al menos 78%, al menos 79%, al menos 80%, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia) con SEQ ID NO: 35;

c) un polipéptido que tiene actividad proteasa, que tiene al menos 60% de identidad de secuencia (por ejemplo, al menos 61%, al menos 62%, al menos 63%, al menos 64%, al menos 65%, al menos 66%, al menos 67%, al menos 68%, al menos 69%, al menos 70%, al menos 71%, al menos 72%, al menos 73%, al menos 74%, al menos 75%, al menos 76%, al menos 77%, al menos 78%, al menos 79%, al menos 80%, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia) con SEQ ID NO: 36.

En otra forma de realización, la presente invención se refiere a polipéptido(s) que tienen actividad beta-glucanasa codificada por un polinucleótido que se hibrida en condiciones de muy baja severidad, condiciones de baja severidad, condiciones de severidad media, condiciones de severidad media-alta, condiciones de severidad alta, o condiciones de severidad muy alta con (i) la secuencia codificante del polipéptido maduro seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 6, (ii) su secuencia de ADNc, o (iii) el complemento de longitud completa de (i) o (ii) (. En una forma de realización, el polipéptido ha sido aislado. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

El polinucleótido de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 6 o su subsecuencia así como el polipéptido de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7 o su fragmento puede utilizarse para diseñar sondas de ácidos nucleicos para identificar y clonar polipéptidos codificantes de ADN que tienen actividad beta-glucanasa de cepas de diferentes géneros o especies, de acuerdo con los métodos bien conocidos en la técnica. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) que comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas). En particular, dichas sondas pueden utilizarse para hibridación con el ADN genómico o ADNc de una célula de interés, siguiendo los procedimientos estándar de transferencia Southern, con el fin de identificar y aislar el gen correspondiente en las mismas. Tales sondas pueden ser considerablemente más cortas que toda la secuencia, pero deben ser de al menos 15, por ejemplo, al menos 25, al menos 35, o al menos 70 nucleótidos de longitud. Preferentemente, la sonda de ácido nucleico tiene al menos 100 nucleótidos de longitud, por ejemplo, al menos 200 nucleótidos, al menos 300 nucleótidos, al menos 400 nucleótidos, al menos 500 nucleótidos, al menos 600 nucleótidos, al menos 700 nucleótidos, al menos 800 nucleótidos o al menos 900 nucleótidos de longitud. Se pueden utilizar sondas de ADN y ARN. Las sondas suelen estar marcadas para detectar el gen correspondiente (por ejemplo, con 32P, 3H, 35S, biotina, o avidina). La presente invención abarca dichas sondas. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende dicho polipéptido de betaglucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

Una biblioteca de ADN genómico o ADNc preparada a partir de estas otras cepas puede ser examinada para detectar ADN que se hibride con las sondas descritas anteriormente y codifica un polipéptido que tiene actividad betaglucanasa. El ADN genómico o de otro tipo de estas otras cepas puede separarse mediante electroforesis en gel de agarosa o poliacrilamida u otras técnicas de separación. El ADN de las bibliotecas o el ADN separado puede ser transferido a la nitrocelulosa u otro material portador adecuado e inmovilizado en la misma. Para identificar un clon o ADN que se hibrida con una secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 6 o una subsecuencia de la misma, el material portador se utiliza en una transferencia Southern. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

A efectos de la presente invención, hibridación indica que el polinucleótido se hibrida a una sonda de ácido nucleico marcado correspondiente a (i) secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 6; (ii) la secuencia codificante de polipéptido maduro seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 6; (iii) su secuencia de ADNc; (iv) su complemento de longitud completa; o (v) su subsecuencia; en condiciones de severidad muy baja a muy alta. Las moléculas a las que la sonda de ácido nucleico se hibrida en estas condiciones pueden detectarse utilizando, por ejemplo, una película de rayos X o cualquier otro medio de detección conocido en la técnica. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En un aspecto, la sonda de ácido nucleico es los nucleótidos 1 a 711 o los nucleótidos 46 a 711 de SEQ ID NO: 6. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En otro aspecto, la sonda de ácido nucleico es un polinucleótido que codifica el polipéptido de secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7; el polipéptido maduro de la misma; o un fragmento de la misma. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En otro aspecto, la sonda de ácido nucleico es una secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 6. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En otra forma de realización, la presente invención se refiere a un polipéptido que tiene actividad beta-glucanasa codificado por un polinucleótido que tiene una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7; de al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas). En una forma de realización adicional, el polipéptido ha sido aislado.

En otra forma de realización, la presente invención se refiere a variantes del polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7 que comprende una sustitución, deleción y/o inserción en una o más (por ejemplo, varias) posiciones. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) que comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas). En una forma de realización, el número de sustituciones de aminoácidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipéptido maduro de secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7 es hasta 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) que comprende dicho polipéptido de betaglucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas). Los cambios de aminoácidos pueden ser de naturaleza menor, es decir, sustituciones conservadoras de aminoácidos o inserciones que no afectan significativamente el plegado y/o la actividad de la proteína; pequeñas deleciones, típicamente de 1-30 aminoácidos; pequeñas extensiones de terminal amino o carboxilo, tal como un residuo de metionina aminoterminal; un péptido enlazador pequeño de hasta 20-25 residuos; o una extensión pequeña que facilita la purificación cambiando la carga neta u otra función, tal como un tracto de poli-histidina, un epítopo antigénico o un dominio de unión. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende dicho polipéptido de betaglucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

Algunos ejemplos de sustituciones conservadoras son los grupos de aminoácidos básicos (arginina, lisina e histidina), aminoácidos ácidos (ácido glutámico y ácido aspártico), aminoácidos polares (glutamina y asparagina), aminoácidos hidrófobos (leucina, isoleucina y valina), aminoácidos aromáticos (fenilalanina, triptófano y tirosina), y aminoácidos pequeños (glicina, alanina, serina, treonina y metionina). Las sustituciones de aminoácidos que generalmente no alteran la actividad específica son conocidas en la técnica y son descritas, por ejemplo, por H. Neurath y R.L. Hill, 1979, In, The Proteins, Academic Press, Nueva York. Las sustituciones comunes son Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Tyr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, y Asp/Gly.

Alternativamente, los cambios de aminoácidos son de tal naturaleza que se alteran las propiedades fisicoquímicas de los polipéptidos. Por ejemplo, los cambios de aminoácidos pueden mejorar la estabilidad térmica del polipéptido, alterar la especificidad del sustrato, cambiar el pH óptimo, etc.

Los aminoácidos esenciales en un polipéptido pueden ser identificados de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica, tales como mutagénesis dirigida al sitio o mutagénesis por barrido de alanina. En esta última técnica, se introducen mutaciones de alanina única en cada residuo de la molécula, y se analizan las moléculas resultantes para determinar la actividad beta-glucanasa para identificar los residuos de aminoácidos que son fundamentales para la actividad de la molécula. Se puede determinar además el sitio activo de la enzima u otra interacción biológica mediante el análisis físico de la estructura, determinado por técnicas tales como resonancia magnética nuclear, cristalografía, difracción de electrones o etiquetado de fotoafinidad, junto con la mutación de aminoácidos putativos en el sitio de contacto. La identidad de los aminoácidos esenciales también puede inferirse de una alineación con un polipéptido relacionado.

Las sustituciones, deleciones y/o inserciones de aminoácidos simples o múltiples pueden realizarse y analizarse utilizando métodos conocidos de mutagénesis, recombinación y/o barajamiento, seguidos de un procedimiento de selección relevante, tales como los descritos en WO 95/17413; o WO 95/22625. Otros métodos que se pueden utilizar incluyen PCR propensa a errores, presentación en fagos (por ejemplo, Patente U.S. No. 5.223.409; WO 92/06204), y mutagénesis dirigida a la región.

Los métodos de mutagénesis/barajamiento pueden combinarse con métodos de cribado automatizados de alto rendimiento para detectar la actividad de polipéptidos clonados y mutagenizados expresados por las células huésped (). Las moléculas de ADN mutagenizado que codifican polipéptidos activos se pueden recuperar de las células huésped y secuenciar rápidamente utilizando métodos estándar en la técnica. Estos métodos permiten la rápida determinación de la importancia de los residuos de aminoácidos individuales en un polipéptido.

El polipéptido puede ser un polipéptido híbrido en el cual una región de un polipéptido se fusiona en el extremo N-terminal o en el extremo C-terminal de una región de otro polipéptido.

El polipéptido puede ser un polipéptido de fusión o polipéptido de fusión escindible en el que se fusiona otro polipéptido en el extremo N-terminal o en el extremo C-terminal del polipéptido de la presente invención. Un polipéptido de fusión es producido por la fusión de un polinucleótido que codifica otro polipéptido a un polinucleótido de la presente invención. Las técnicas para producir polipéptidos de fusión son conocidas en la técnica, e incluyen la ligación de las secuencias codificantes que codifican los polipéptidos para que estén en marco y para que la expresión del polipéptido de fusión esté bajo control del mismo promotor o promotores y terminador. Los polipéptidos de fusión también pueden construirse utilizando la tecnología de inteínas, en la que los polipéptidos de fusión se crean de forma postraduccional.

Un polipéptido de fusión puede comprender además un sitio de escisión entre los dos polipéptidos. Tras la secreción de la proteína de fusión, se escinde el sitio liberando los dos polipéptidos.

Fuentes de polipéptidos con actividad beta-glucanasa

Se puede obtener un polipéptido con actividad beta-glucanasa de la presente descripción a partir de microorganismos de cualquier género (por ejemplo, del género Bacillus). A efectos de la presente descripción, la expresión "obtenido de", como se utiliza en la presente invención en relación con una fuente determinada, significará que el polipéptido codificado por un polinucleótido es producido por la fuente o por una cepa en la que se ha insertado el polinucleótido de la fuente. En un aspecto, el polipéptido obtenido de una fuente dada es secretado extracelularmente.

El polipéptido puede ser un polipéptido bacteriano. Por ejemplo, el polipéptido puede ser un polipéptido bacteriano Gram-positivo tal como un polipéptido de Bacillus, Clostridium, Enterococcus, Geobacillus, Lactobacillus, Lactococcus, Oceanobacillus, Staphylococcus, Streptococcus, o Streptomyces que tiene actividad beta-glucanasa, o un polipéptido bacteriano Gram-negativo tal como un polipéptido de Campylobacter, E. coli, Flavobacterium, Fusobacterium, Helicobacter, Ilyobacter, Neisseria, Pseudomonas, Salmonella, o Ureaplasma.

En un aspecto, el polipéptido es un polipéptido de Bacillus alkalophilus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus brevis, Bacillus circulans, Bacillus clausii, Bacillus coagulans, Bacillus firmus, Bacillus lautus, Bacillus lentus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus pumilus, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis, Bacillus sp., Bacillus akibai, Bacillus agaradhaerens, Bacillus mojavensis o Bacillus thuringiensis.

En otro aspecto, el polipéptido no es un polipéptido fúngico (por ejemplo, un polipéptido de la presente invención excluye polipéptidos fúngicos). Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) que comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

Se entenderá que para las especies mencionadas, la invención abarca tanto los estados perfectos como imperfectos, y otros equivalentes taxonómicos, por ejemplo, anamorfos, sin importar el nombre de la especie por el cual se conocen. Los expertos en la técnica reconocerán fácilmente la identidad de equivalentes apropiados.

El público puede acceder fácilmente a cepas de estas especies en diversas recolecciones de cultivos, como la American Type Culture Collection (ATCC) (Recolección Americana de Cultivos Tipificados), Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ), Centraalbureau Voor Schimmelcultures (CBS) y Agricultural Research Service Patent Culture Collection, Northern Regional Research Center (NRRL) (Recolección de cultivos de patentes del Servicio de Investigación Agrícola, Centro Regional de Investigación del Norte).

El polipéptido puede ser identificado y obtenido de otras fuentes incluyendo microorganismos aislados de la naturaleza (por ejemplo, tierra, abonos, agua, etc.) o muestras de ADN obtenidas directamente de materiales naturales (por ejemplo, tierra, abonos, agua, etc.) utilizando las sondas mencionadas anteriormente. Las técnicas para aislar microorganismos y ADN directamente de hábitats naturales son bien conocidas en la técnica. Un polinucleótido que codifica el polipéptido puede entonces ser obtenido mediante el cribado similar de una biblioteca de ADN genómico o ADNc de otro microorganismo o una muestra de ADN mixta. Una vez que se ha detectado un polinucleótido que codifica un polipéptido con la(s) sonda(s), el polinucleótido puede ser aislado o clonado utilizando técnicas que son conocidas por las personas con conocimiento común de la técnica.

En las formas de realización preferidas, un polipéptido de la presente invención es un polipéptido bacteriano (preferentemente aislado de una bacteria/bacterias del género Bacillus). En formas de realización preferidas adicionales, un polipéptido de la presente invención pertenece a la Familia 16 de Glucósido Hidrolasas (GH16) (por ejemplo, tiene actividad Glucósido hidrolasas (EC 3.2.1.-). Por ejemplo, el polipéptido puede ser un polipéptido que tiene actividad beta-glucanasa de un género Bacillus, por ejemplo, de Bacillus sp- 62449, Bacillus akibai, Bacillus agaradhaerens, Bacillus mojavensis. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) que comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

Dominios catalíticos

La presente descripción se refiere a composiciones de limpieza o detergentes, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende dominios catalíticos que tienen una identidad de secuencia con los aminoácidos 33 a 249 de SEQ ID NO: 2 de al menos 60%, por ejemplo, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%. En un aspecto, los dominios catalíticos comprenden secuencias de aminoácidos que difieren hasta en 10 aminoácidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10, de los aminoácidos 33 a 249 de SEQ ID NO: 2. El dominio catalítico comprende preferentemente o consiste en aminoácidos 33 a 249 de SEQ ID NO: 2 o una variante alélica de la misma; o es un fragmento de la misma que tiene actividad beta-glucanasa.

La presente descripción se refiere a dominios catalíticos que tienen una identidad de secuencia con los aminoácidos 62 a 245 de SEQ ID NO: 2 de al menos 60%, por ejemplo, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%. En un aspecto, los dominios catalíticos comprenden secuencias de aminoácidos que difieren hasta en 10 aminoácidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10, de los aminoácidos 62 a 245 de SEQ ID NO: 2. El dominio catalítico comprende preferentemente o consiste en aminoácidos 62 a 245 de SEQ ID NO: 2 o una variante alélica de la misma; o es un fragmento de la misma que tiene actividad betaglucanasa.

La presente descripción se refiere a dominios catalíticos que tienen una identidad de secuencia con los aminoácidos 33 a 249 de SEQ ID NO: 3 de al menos 60%, por ejemplo, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%. En un aspecto, los dominios catalíticos comprenden secuencias de aminoácidos que difieren hasta en 10 aminoácidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10, de los aminoácidos 33 a 249 de SEQ ID NO: 3. El dominio catalítico comprende preferentemente o consiste en aminoácidos 33 a 249 de SEQ ID NO: 3 o una variante alélica de la misma; o es un fragmento de la misma que tiene actividad betaglucanasa.

La presente descripción se refiere a dominios catalíticos que tienen una identidad de secuencia con los aminoácidos 62 a 245 de SEQ ID NO: 3 de al menos 60%, por ejemplo, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%. En un aspecto, los dominios catalíticos comprenden secuencias de aminoácidos que difieren hasta en 10 aminoácidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10, de los aminoácidos 62 a 245 de SEQ ID NO: 3. El dominio catalítico comprende preferentemente o consiste en aminoácidos 62 a 245 de SEQ ID NO: 3 o una variante alélica de la misma; o es un fragmento de la misma que tiene actividad betaglucanasa.

La presente descripción se refiere a dominios catalíticos que tienen una identidad de secuencia con los aminoácidos 32 a 254 de SEQ ID NO: 5 de al menos 60%, por ejemplo, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%. En un aspecto, los dominios catalíticos comprenden secuencias de aminoácidos que difieren hasta en 10 aminoácidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10, de los aminoácidos 32 a 254 de SEQ ID NO: 5. El dominio catalítico comprende preferentemente o consiste en aminoácidos 32 a 254 de SEQ ID NO: 5 o una variante alélica de la misma; o es un fragmento de la misma que tiene actividad betaglucanasa.

La presente descripción se refiere a dominios catalíticos que tienen una identidad de secuencia con los aminoácidos 60 a 249 de SEQ ID NO: 5 de al menos 60%, por ejemplo, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%. En un aspecto, los dominios catalíticos comprenden secuencias de aminoácidos que difieren hasta en 10 aminoácidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10, de los aminoácidos 60 a 249 de SEQ ID NO: 5. El dominio catalítico comprende preferentemente o consiste en aminoácidos 60 a 249 de SEQ ID NO: 5 o una variante alélica de la misma; o es un fragmento de la misma que tiene actividad betaglucanasa.

En una forma de realización, la presente invención se refiere además a dominios catalíticos que tienen una identidad de secuencia con los aminoácidos 20 a 236 de SEQ ID NO: 7 de al menos 60%, por ejemplo, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) que comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas). En un aspecto, los dominios catalíticos comprenden secuencias de aminoácidos que difieren hasta en 10 aminoácidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10, de los aminoácidos 20 a 236 de SEQ ID NO: 7. El dominio catalítico comprende preferentemente o consiste en aminoácidos 20 a 236 de SEQ ID NO: 7 o una variante alélica de la misma; o es un fragmento de la misma que tiene actividad beta-glucanasa. Una forma de realización de la presente invención es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, la presente invención se refiere además a dominios catalíticos que tienen una identidad de secuencia con los aminoácidos 49 a 230 de SEQ ID NO: 7 de al menos 60%, por ejemplo, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%. Una forma de realización de la presente invención es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas). En un aspecto, los dominios catalíticos comprenden secuencias de aminoácidos que difieren hasta en 10 aminoácidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10, de los aminoácidos 49 a 230 de SEQ ID NO: 7. El dominio catalítico comprende preferentemente o consiste en aminoácidos 49 a 230 de SEQ ID NO: 7 o una variante alélica de la misma; o es un fragmento de la misma que tiene actividad beta-glucanasa. Una forma de realización de la presente invención es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

La presente descripción se refiere a dominios catalíticos que tienen una identidad de secuencia con los aminoácidos 30 a 243 de SEQ ID NO: 9 de al menos 60%, por ejemplo, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%. Una forma de realización de la presente invención es una composición (por ejemplo, una composición de limpieza o detergente) que comprende dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas). En un aspecto, los dominios catalíticos comprenden secuencias de aminoácidos que difieren hasta en 10 aminoácidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10, de los aminoácidos 30 a 243 de SEQ ID NO: 9. El dominio catalítico comprende preferentemente o consiste en aminoácidos 30 a 243 de SEQ ID NO: 9 o una variante alélica de la misma; o es un fragmento de la misma que tiene actividad beta-glucanasa.

La presente descripción se refiere a dominios catalíticos que tienen una identidad de secuencia con los aminoácidos 55 a 239 de SEQ ID NO: 9 de al menos 60%, por ejemplo, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%. En un aspecto, los dominios catalíticos comprenden secuencias de aminoácidos que difieren hasta en 10 aminoácidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10, de los aminoácidos 55 a 239 de SEQ ID NO: 9. El dominio catalítico comprende preferentemente o consiste en aminoácidos 55 a 239 de SEQ ID NO: 9 o una variante alélica de la misma; o es un fragmento de la misma que tiene actividad beta-glucanasa.

Dominios de unión

La GH16 beta-glucanasa de la invención puede comprender un módulo de unión a carbohidratos (o MUC). En una forma de realización un MUC está en los aminoácidos 264-377 de SEQ ID NO: 2. En otra forma de realización un MUC está en los aminoácidos 264-377 de SEQ ID NO: 3.

La presente descripción se refiere a un módulo de unión a carbohidratos que tiene una identidad de secuencia con los aminoácidos 264 a 377 de SEQ ID NO: 2 de al menos 60%, por ejemplo, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%. En un aspecto, el módulo de unión a carbohidratos comprende secuencias de aminoácidos que difieren hasta en 10 aminoácidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10, de los aminoácidos 264 a 377 de SEQ ID NO: 2.

La presente descripción se refiere a un módulo de unión a carbohidratos: que tiene una identidad de secuencia con los aminoácidos 264 a 377 de SEQ ID NO: 3 de al menos 60%, por ejemplo, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%. En un aspecto, el módulo de unión a carbohidratos comprende secuencias de aminoácidos que difieren hasta en 10 aminoácidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10, de los aminoácidos 264 a 377 de SEQ ID NO: 3.

El módulo de unión a carbohidratos comprende preferentemente o consiste en aminoácidos 264 a 377 de SEQ ID NO: 2 o una variante alélica de la misma; o es un fragmento de la misma que tiene actividad de unión a carbohidratos. El módulo de unión a carbohidratos comprende preferentemente o consiste en aminoácidos 264 a 377 de SEQ ID NO: 3 o una variante alélica de la misma; o es un fragmento de la misma que tiene actividad de unión a carbohidratos.

La presente descripción se refiere a variantes del módulo de unión a carbohidratos de aminoácidos 264 a 377 de SEQ ID NO: 2 (o SEQ ID NO: 3) que comprenden una sustitución, deleción y/o inserción en una o más (por ejemplo, varias) posiciones. En un aspecto, el número de sustituciones, deleciones y/o inserciones de aminoácidos introducidos en la secuencia de aminoácidos 264 a 377 de SEQ ID NO: 2 (o SEQ ID No : 3) es hasta 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10.

Un módulo de unión a carbohidratos de la presente invención puede ser aplicado en una proteína de fusión que comprende al menos un módulo de unión a carbohidratos ligado operativamente a un dominio catalítico. El dominio catalítico puede ser de una hidrolasa, isomerasa, ligasa, liasa, oxidorreductasa, o transferasa, aminopeptidasa, amilasa, carbohidrasa, carboxipeptidasa, catalasa, celobiohidrolasa, celulasa, quitinasa, cutinasa, ciclodextrina glicosiltransferasa, desoxirribonucleasa, endoglucanasa, esterasa, alfa-galactosidasa, beta-galactosidasa, glucoamilasa, alfa-glucosidasa, beta-glucosidasa, invertasa, lacasa, lipasa, manosidasa, mutanasa, oxidasa, enzima pectinolítica, peroxidasa, fitasa, polifenoloxidasa, enzima proteolítica, ribonucleasa, transglutaminasa, xilanasa o betaxilosidasa. El polinucleótido que codifica el dominio catalítico se puede obtener de cualquier fuente procariota, eucariota u otra fuente.

Polinucleótidos

La presente invención se refiere además a polinucleótidos que codifican un polipéptido, un dominio catalítico o módulo de unión a carbohidratos de la presente invención, según lo descrito en la presente invención. En una forma de realización, el polinucleótido que codifica el polipéptido, dominio catalítico, o módulo de unión a carbohidratos de la presente invención ha sido aislado.

Las técnicas utilizadas para aislar o clonar un polinucleótido son conocidas en la técnica e incluyen el aislamiento del ADN genómico o ADNc, o una combinación de dichas técnicas. Se puede realizar la clonación de los polinucleótidos del ADN genómico, por ejemplo, mediante el uso de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés) bien conocida o cribado de anticuerpos de bibliotecas de expresión para detectar fragmentos de ADN clonado con características estructurales compartidas. Se pueden utilizar otros procedimientos de amplificación de ácidos nucleicos tal como la reacción en cadena de ligasa (LCR, por sus siglas en inglés), la transcripción activada por ligación (LAT, por sus siglas en inglés) y la amplificación basada en polinucleótidos (NASBA, por sus siglas en inglés). Los polinucleótidos pueden ser clonados a partir de una cepa de Bacillus, o de un organismo relacionado y por ende, por ejemplo, pueden ser una variante alélica o de especie de la región codificadora del polipéptido del polinucleótido.

Puede ser necesaria la modificación de un polinucleótido que codifica un polipéptido de la presente invención para sintetizar polipéptidos sustancialmente similares al polipéptido. La expresión "sustancialmente similar" al polipéptido se refiere a formas no naturales del polipéptido. Estos polipéptidos pueden diferir en alguna forma de ingeniería del polipéptido aislado de su fuente nativa, por ejemplo, variantes que difieren en la actividad específica, termoestabilidad, pH óptimo, o similares. Pueden construirse las variantes sobre la base del polinucleótido presentado como la secuencia codificante del polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 6 o la secuencia de ADNc de la misma, por ejemplo, una subsecuencia de la misma, y/o mediante la introducción de sustituciones de nucleótidos que no den como resultado un cambio en la secuencia de aminoácidos del polipéptido, pero que corresponden al uso del codón del organismo huésped destinado a la producción de la enzima, o mediante la introducción de sustituciones de nucleótidos que pueden dar lugar a una secuencia diferente de aminoácidos.

Composiciones

La presente invención se refiere además a composiciones de limpieza o detergentes, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición polipéptido(s) de la presente invención. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de betaglucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas). Preferentemente, las composiciones son enriquecidas en tal polipéptido. El término "enriquecidas" indica que se ha incrementado la actividad betaglucanasa de la composición, por ejemplo, al menos 1,1 de enriquecimiento.

Las composiciones pueden comprender polipéptido(s) de la presente invención como el componente enzimático principal, por ejemplo, una composición monocomponente. Alternativamente, las composiciones pueden comprender múltiples actividades enzimáticas, tal como una o más (por ejemplo, varias) enzimas seleccionadas del grupo que consiste en hidrolasa, isomerasa, ligasa, liasa, oxidorreductasa, o transferasa, por ejemplo, una alfa-galactosidasa, alfa-glucosidasa, aminopeptidasa, amilasa, beta-galactosidasa, beta-glucosidasa, beta-xilosidasa, carbohidrasa, carboxipeptidasa, catalasa, celobiohidrolasa, celulasa, quitinasa, cutinasa, ciclodextrina glicosiltransferasa, desoxirribonucleasa, endoglucanasa, esterasa, glucoamilasa, invertasa, lacasa, lipasa, manosidasa, mutanasa, oxidasa, enzima pectinolítica, peroxidasa, fitasa, polifenoloxidasa, enzima proteolítica, ribonucleasa, transglutaminasa o xilanasa. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

Se pueden preparar las composiciones de acuerdo con métodos conocidos en la técnica y pueden estar en forma de una composición líquida o seca. Las composiciones pueden ser estabilizadas de acuerdo con los métodos conocidos en la técnica. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

Más adelante se brindan algunos ejemplos de usos preferidos de las composiciones de la presente invención. La dosis de la composición y otras condiciones en las que se utilice la composición pueden determinarse sobre la base de los métodos conocidos en la técnica.

Usos

Las beta-glucanasas de la invención pueden ser utilizadas en aplicaciones en las que beta-glucano (por ejemplo, beta-D-glucano, beta- 1,3-1,4 glucano, beta-glucano de enlace mixto, beta-glucano de cebada, beta-glucano de avena) debe ser degradado (por ejemplo, en condiciones alcalinas). Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente que comprende un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas). Algunos ejemplos en los que podrían utilizarse beta-glucanasas incluyen aplicaciones de detergentes y la producción de papel y pulpa. En un aspecto, las beta-glucanasas de la invención pueden utilizarse para la limpieza de la vajilla, el lavado de la vajilla incluyendo el lavado automático de la vajilla (ADW), especialmente el lavado automático de la vajilla doméstica, el lavado de la vajilla a mano (HDW), y/o en un proceso de limpieza tal como el lavado de la vajilla incluyendo el lavado automático de la vajilla (ADW), especialmente el lavado automático de la vajilla doméstica, y la limpieza de la vajilla industrial, el lavado de la vajilla incluyendo el lavado automático de la vajilla (ADW), y/o para al menos uno de los siguientes: prevenir, reducir o eliminar una biopelícula y/o el mal olor de un artículo, y/o para la antirredeposición. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

Tales beta-glucanasas tienen preferentemente al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. Una forma de realización de la presente invención es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición dicho polipéptido de beta-glucanasa y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

La biopelícula se puede desarrollar cuando hay microorganismos presentes en un artículo y se pegan en el mismo. Algunos microorganismos tienden a adherirse a la superficie de artículos como textiles. Algunos microorganismos se adhieren a tales superficies y forman una biopelícula en la superficie. La biopelícula puede ser pegajosa y los microorganismos adheridos y/o la biopelícula pueden ser difíciles de eliminar. Además, la biopelícula se adhiere a la suciedad debido a la naturaleza pegajosa de la biopelícula.

La presente invención se refiere al uso de polipéptido(s) que tiene(n) actividad beta-glucanasa para prevenir, reducir o eliminar una biopelícula de un artículo, en donde el polipéptido es obtenido de una fuente bacteriana y en donde el artículo es vajilla. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas). En una forma de realización de la invención, el polipéptido que tiene actividad betaglucanasa es utilizado para prevenir, reducir o eliminar la pegajosidad de un artículo. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

La presente invención se refiere además a composiciones de limpieza o detergentes, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición una betaglucanasa de la invención (por ejemplo, polipéptido(s) de la presente invención). La presente invención se refiere además a dichas composiciones que comprenden una beta-glucanasa de la invención (por ejemplo, polipéptido(s) de la presente invención) y una o más enzimas adicionales. La presente invención se refiere además a composiciones de limpieza o detergentes, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición una beta-glucanasa de la invención (por ejemplo, polipéptido(s) de la presente invención) y una o más amilasas (y/o una o más proteasas), preferentemente dicha una o más amilasas es una o más alfaamilasas. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente en donde dicha composición es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de betaglucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, la presente invención se refiere a composiciones de limpieza o detergentes, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición una beta-glucanasa de la invención y un tensioactivo adecuado. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

La presente invención se refiere además a composiciones de limpieza o detergentes, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido aislado que tiene actividad beta-glucanasa seleccionado del grupo que consiste en: a) un polipéptido que tiene al menos 89% de identidad de secuencia, al menos 90% de identidad de secuencia, al menos 91% de identidad de secuencia, al menos 92% de identidad de secuencia, al menos 93% de identidad de secuencia, al menos 94% de identidad de secuencia, al menos 95% de identidad de secuencia, al menos 96% de identidad de secuencia, al menos 97% de identidad de secuencia, al menos 98% de identidad de secuencia, al menos 99% de identidad de secuencia o incluso 100% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7; b) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene al menos 89% de identidad de secuencia, al menos 90% de identidad de secuencia, al menos 91% de identidad de secuencia, al menos 92% de identidad de secuencia, al menos 93% de identidad de secuencia, al menos 94% de identidad de secuencia, al menos 95% de identidad de secuencia, al menos 96% de identidad de secuencia, al menos 97% de identidad de secuencia, al menos 98% de identidad de secuencia, al menos 99% de identidad de secuencia o incluso 100% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 6. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización la composición de la invención comprende un polipéptido aislado que tiene actividad betaglucanasa y que tiene al menos 89% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización la composición de la invención comprende un polipéptido aislado que tiene actividad betaglucanasa y que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización la composición de la invención comprende un polipéptido aislado que tiene actividad betaglucanasa y que tiene al menos 91% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización la composición de la invención comprende un polipéptido aislado que tiene actividad betaglucanasa y que tiene al menos 92% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización la composición de la invención comprende un polipéptido aislado que tiene actividad betaglucanasa y que tiene al menos 93% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización la composición de la invención comprende un polipéptido aislado que tiene actividad betaglucanasa y que tiene al menos 94% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización la composición de la invención comprende un polipéptido aislado que tiene actividad betaglucanasa y que tiene al menos 95% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización la composición de la invención comprende un polipéptido aislado que tiene actividad betaglucanasa y que tiene al menos 96% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización la composición de la invención comprende un polipéptido aislado que tiene actividad betaglucanasa y que tiene al menos 97% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización la composición de la invención comprende un polipéptido aislado que tiene actividad betaglucanasa y que tiene al menos 98% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización la composición de la invención comprende un polipéptido aislado que tiene actividad betaglucanasa y que tiene al menos 99% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización la composición de la invención comprende un polipéptido aislado que tiene actividad betaglucanasa y que tiene al menos 100% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, la composición detergente puede ser adaptada para usos específicos tales como el lavado de vajilla.

En otra forma de realización, una composición de la presente invención es una composición de limpieza o detergente. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de betaglucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

Los detergentes líquidos alcalinos con un pH elevado son utilizados ampliamente en la limpieza, tal como en el lavado de vajilla. Los detergentes líquidos con pH elevado son especialmente utilizados comúnmente por los consumidores de América del Norte. Las composiciones de limpieza con pH elevado también son utilizadas en procesos de limpieza industriales. Los detergentes alcalinos incluyen líquidos con propiedades detergentes. El pH de tales detergentes es generalmente un pH comprendido entre 9 y 12,6. Típicamente, los detergentes con pH elevado comprenden componentes tales como tensioactivos, mejoradores y componentes blanqueadores y además pueden contener una cantidad significativa de agua y álcalis tales como NaOH, TSP (fosfato trisódico), amoníaco, carbonato de sodio, hidróxido de potasio (KOH), estos álcalis normalmente son agregados en una cantidad correspondiente a 0,1 a 30 por ciento en peso (p). Añadir enzimas a los detergentes es muy ventajoso, ya que las actividades específicas de estas enzimas eliminan eficazmente manchas específicas de superficies como platos y cubiertos. Sin embargo, la dificultad de mantener una estabilidad enzimática aceptable en los detergentes líquidos de pH elevado ha prohibido durante muchos años la inclusión de enzimas en estos detergentes. En otra forma de realización, la presente invención se refiere a composiciones de limpieza líquidas con pH elevado que comprenden una beta-glucanasa estable alcalina de la presente invención adecuada para utilizar en tales composiciones.

En otra forma de realización, una composición de la presente invención contiene preferentemente un sistema amortiguador alcalino para proporcionar un pH de al menos aproximadamente 7,5, al menos aproximadamente 8, al menos aproximadamente 9, preferentemente un pH de 10 o superior. Preferentemente el pH es de aproximadamente 9 a aproximadamente 13. Para lograr el pH elevado es necesario tener presente un hidróxido de metal alcalino especialmente hidróxido de sodio o potasio, normalmente en una cantidad de 0,1 a aproximadamente 30% en peso (porcentaje en peso, abreviado % en peso) de la composición, y preferentemente de 1,0 a 2,5%, o cantidades más elevadas de un silicato de metal alcalino adecuado tal como silicato de metal, según el pH deseado para el producto.

En otra forma de realización, una composición de la presente invención tiene un pH 6,5 o superior, preferentemente pH de 7,0 o superior, más preferentemente pH 7,5 o superior, y opcionalmente comprende un agente blanqueador; preferentemente dicho pH se selecciona en el rango de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 13,5, más preferentemente dicho pH se selecciona en el rango de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 12,5, aún más preferentemente dicho pH se selecciona en el rango de aproximadamente 8,5 a aproximadamente 11,5. En una forma de realización preferida, las composiciones para el lavado de vajilla con tales rangos de pH preferidos son sólidas.

En otra forma de realización, una composición para el lavado de vajilla de la presente invención, más preferentemente una composición para el lavado de vajilla automático o para el lavado de vajilla a mano en forma de un líquido o un gel, tiene un pH de 6,5 o superior; preferentemente dicho pH se selecciona en el rango de aproximadamente 6,5 a 9,5, más preferentemente de 7,0 a aproximadamente 9,0, más preferentemente de 7,5 a 8,5.

En otra forma de realización, la presente invención se refiere a una composición de limpieza líquida que tiene un pH de 6,5 o superior, pH de 6,5 o superior, preferentemente un pH de 7,5 o superior, que comprende al menos 0,001 % en peso de beta-glucanasa (por ejemplo al menos 0,01 % en peso de beta-glucanasa), en donde dicha beta-glucanasa tiene una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 89% de identidad de secuencia con respecto al polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. En otras formas de realización relacionadas, la beta-glucanasa tiene una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 90% (o al menos 91%, o 92%, o 93%, o 94%, o 95%, o 96%, o 97%, o 98% o 99% o 100%) de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

Las composiciones de limpieza o detergentes de la invención, especialmente las composiciones para el lavado de vajilla son formuladas para operaciones de lavado de vajilla a mano o a máquina, especialmente en máquinas lavavajillas domésticas, preferentemente para propósitos de limpieza agregadas en el lavado principal o con el abrillantador. También se puede utilizar para limpiar las piezas del interior del lavavajillas durante el proceso de lavado de vajilla, especialmente las piezas ocultas, como las tuberías de agua del interior de la máquina, especialmente las de los brazos giratorios, y el colador/filtro. Las composiciones detergentes de la invención pueden ser útiles en aplicaciones de lavado de vajilla automático. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

La composición detergente de la invención puede estar en cualquier forma conveniente, por ejemplo, una barra, una tableta, un polvo, un gránulo, una pasta o un líquido. Un detergente líquido puede ser acuoso, normalmente contiene hasta un 70% de agua y un 0-30% de disolvente orgánico, o no acuoso. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente en donde dicha composición es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

A menos que se indique lo contrario, todos los niveles de componentes o composiciones que se proporcionan en la presente se refieren al nivel activo de dicho componente o composición y no incluyen impurezas, por ejemplo, disolventes residuales o subproductos, que pueden estar presentes en fuentes disponibles en el mercado. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

La beta-glucanasa de la invención es normalmente incorporada en las composiciones de limpieza o detergentes, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, a un nivel del 0,000001% al 2% de proteína enzimática en peso de la composición, preferentemente a un nivel del 0,00001% al 1 % de proteína enzimática en peso de la composición, más preferentemente a un nivel del 0,0001% al 0,75% de proteína enzimática en peso de la composición, aún más preferentemente a un nivel del 0,001% al 0,5% de proteína enzimática en peso de la composición. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

Adicionalmente, la beta-glucanasa de la invención es normalmente incorporada en las composiciones de limpieza o detergentes, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, en tales cantidades que su concentración en el agua de lavado está a un nivel del 0,0000001% al 1% de proteína enzimática, preferentemente a un nivel del 0,000005% al 0,01% de proteína enzimática, más preferentemente a un nivel del 0,000001% al 0,005% de proteína enzimática, aún más preferentemente a un nivel del 0,00001% al 0,001% de proteína enzimática en el agua del lavado. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente que comprende un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

Como es bien sabido, la cantidad de enzima también variará según la aplicación particular y/o como resultado de los otros componentes incluidos en las composiciones.

Una composición para utiliza en el lavado automático de vajilla (ADW), por ejemplo, puede incluir 0,0001%-50%, 0,001%-50%, tal como 0,01%-25%, tal como 0,02%-20%, tal como 0,1-15% de proteína enzimática en peso de la composición. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

Una composición preferida para el lavado de vajilla, preferentemente una composición para el lavado de vajilla automático comprende el polipéptido de la invención en concentraciones de 0,00001 mg de proteína enzimática/g de composición a 100 mg de proteína enzimática/g de composición, preferentemente 0,0001 mg de proteína enzimática/g de composición a 50 mg de proteína enzimática/g de composición, más preferentemente 0,001 mg de proteína enzimática/g de composición a 20 mg de proteína enzimática/g de composición, se prefiere especialmente 0,01 mg de proteína enzimática/g de composición a 10 mg de proteína enzimática/g de composición.

Una composición preferida para el lavado de vajilla, preferentemente una composición para el lavado de vajilla automático, especialmente una composición formulada como producto de dosis unitaria, comprende el polipéptido de la invención en cantidades de 0,01 mg/tarea a 100 mg de proteína enzimática/tarea, preferentemente 0,1 mg proteína enzimática/tarea a 20 mg/tarea, más preferentemente de 0,2 a 10 mg de proteína enzimática/tarea, especialmente se prefiere de 0,3 a 5 mg de proteína enzimática/tarea. Por ejemplo, se pueden utilizar cantidades de 0,5 mg 1 mg, 1,5 mg, 2 mg o 2,5 mg de proteína enzimática/tarea. La expresión mg por tarea (mg/tarea) o mg/aplicación se refiere a la cantidad de sustancia activa utilizada en relación con el peso total de la composición utilizada para un ciclo de limpieza completo (es decir, en el caso de los agentes para lavavajillas automáticos), la cantidad total del agente de limpieza utilizado en un ciclo de limpieza completo de un lavavajillas). En el caso de los agentes de limpieza prefraccionados (preferentemente agentes de lavado de vajilla automático), esta información es la cantidad de la sustancia activa en mg basada en el peso total de la composición de limpieza prefraccionada.

Dichas cantidades son también aplicables para cada una de las otras proteínas enzimática individuales (por ejemplo, amilasa o proteasa) utilizadas en la composición para el lavado de vajilla de la invención. En algunas formas de realización preferidas, las composiciones detergentes proporcionadas en la presente son típicamente formuladas de modo que, durante el uso en operaciones de limpieza acuosas, el agua de lavado tenga un pH de aproximadamente 5,0 a aproximadamente 13,5, o en formas de realización alternativas, incluso de aproximadamente 6,0 a aproximadamente 10,5, tal como de aproximadamente 5 a aproximadamente 11, de aproximadamente 5 a aproximadamente 10, de aproximadamente 5 a aproximadamente 9, de aproximadamente 5 a aproximadamente 8, de aproximadamente 5 a aproximadamente 7, de aproximadamente 6 a aproximadamente 11, de aproximadamente 6 a aproximadamente 10, de aproximadamente 6 a aproximadamente 9, de aproximadamente 6 a aproximadamente 8, de aproximadamente 6 a aproximadamente 7, de aproximadamente 7 a aproximadamente 11, de aproximadamente 7 a aproximadamente 10, de aproximadamente 7 a aproximadamente 9, o de aproximadamente 7 a aproximadamente 8. Preferentemente, las composiciones detergentes proporcionadas en la presente son típicamente formuladas de modo que, durante el uso en operaciones de limpieza acuosas, el agua de lavado tenga un pH seleccionado en el rango de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 13,5, más preferentemente dicho pH se selecciona en el rango de aproximadamente 8,5 a aproximadamente 11,5, aún más preferentemente dicho pH se selecciona en el rango de aproximadamente 9,5 a aproximadamente 10,5; adicionalmente con máxima preferencia pH 7,5 o superior. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente que comprende un polipéptido de betaglucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

En una forma de realización, la beta-glucanasa en las composiciones de la invención tiene estabilidad mejorada, en particular estabilidad mejorada durante el almacenamiento en una composición de limpieza líquida de pH elevado, en comparación con las beta-glucanasas conocidas. En una forma de realización preferida, la beta-glucanasa de la invención tiene estabilidad mejorada, en particular estabilidad mejorada durante el almacenamiento, y a la par o con un mejor rendimiento de lavado en comparación con las beta-glucanasas conocidas. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

Las técnicas para controlar el pH a los niveles de uso recomendados incluyen el uso de amortiguadores, álcalis, ácidos, etc., y son bien conocidas por los expertos en la técnica. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente que comprende un polipéptido de betaglucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

Los pesos de los componentes enzimáticos se basan en la proteína total. Todos los porcentajes y relaciones se calculan en peso, a menos que se indique lo contrario. Todos los porcentajes y relaciones se calculan sobre la base de la composición total a menos que se indique lo contrario. En la composición detergente ejemplificada, los niveles de enzimas se expresan mediante enzima pura en peso de la composición total y, salvo que se especifique lo contrario, los ingredientes detergentes se expresan en peso de la composición total.

Las enzimas de la presente invención también encuentran uso productos aditivos de detergentes para el lavado de vajilla. Un producto aditivo detergente que comprende una beta-glucanasa de la invención es adecuado para la inclusión en un proceso de lavado cuando, por ejemplo, la temperatura es baja, tal como a temperaturas de aproximadamente 40°C o inferiores, el pH es entre 6 y 8 y el tiempo de lavado corto, por ejemplo, inferior a 30 min. Un producto aditivo detergente que comprende una beta-glucanasa de la invención es adicionalmente idealmente adecuado para la inclusión en un proceso de lavado alcalino cuando, por ejemplo, un pH seleccionado en el rango de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 13,5, una temperatura seleccionada en el rango de aproximadamente 20°C a aproximadamente 75°C, y el tiempo de lavado es corto, por ejemplo, inferior a 30 minutos, por ejemplo, al menos 15 minutos. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente que comprende un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas). Alternativamente, un producto aditivo detergente que comprende una beta-glucanasa de la invención es adecuado para la limpieza de un lavavajillas doméstico, por ejemplo, de residuos acumulados en el filtro y en el sumidero de las máquinas, preferentemente de residuos que contienen fibras que contienen beta-glucano. Este producto aditivo de limpieza a máquina puede ser adecuado para limpiar la máquina al mismo tiempo de otros residuos, como grasa o cal.

El producto aditivo detergente para el lavado de vajilla puede ser una beta-glucanasa de la invención y preferentemente una enzima adicional. En una forma de realización, el aditivo se envasa en forma de dosificación para la adición a un proceso de limpieza. La dosis única puede comprender una píldora, tableta, cápsula de gel u otra unidad de dosificación única, incluidos polvos y/o líquidos. En algunas formas de realización, se incluyen material(es) de relleno y/o portadores, materiales de relleno o portadores incluyen, entre otros, diversas sales de sulfato, carbonato y silicato así como talco, arcilla y materiales similares. En algunas formas de realización, los materiales de relleno y/o portadores para las composiciones líquidas incluyen agua y/o alcoholes primarios y secundarios de bajo peso molecular incluyendo polioles y dioles. Los ejemplos de tales alcoholes incluyen, entre otros, metanol, etanol, propanol e isopropanol.

En una forma de realización particularmente preferida de la composición para el lavado de vajilla o de los aditivos detergentes para el lavado de vajilla, la beta-glucanasa de acuerdo con la invención se emplea en una composición granulada o líquida, la beta-glucanasa puede estar en forma de una partícula encapsulada. En una forma de realización, el material encapsulante es seleccionado del grupo que consiste en carbohidratos, gomas naturales o sintéticas, quitina y chitosán, celulosa y derivados de celulosa, silicatos, fosfatos, boratos, alcohol polivinílico, polietilenglicol, ceras parafínicas y combinaciones de los mismos.

Las composiciones de acuerdo con la invención comprenden típicamente uno o más ingredientes detergentes. La expresión composiciones detergentes incluye artículos y composiciones de limpieza y tratamiento. La expresión composición de limpieza incluye, a menos que se indique lo contrario, tableta, forma en gránulos o polvo; líquida, forma de gel o pasta. Son posibles los agentes para el lavado de vajilla a mano o agentes para el lavado de vajilla de tareas livianas, especialmente aquellos del tipo de espumación elevada; agentes para lavavajillas (o composiciones para lavavajillas), incluyendo las diversos tipos en forma de tableta, gránulos gel, líquida y abrillantadores para el uso doméstico e institucional. La composición se encuentra preferentemente en envases de dosis unitaria, incluyendo aquellos conocidos en la técnica y aquellos que son solubles en agua, insolubles en agua y/o permeables al agua. Estos pueden abarcar bolsas monocamerales y multicamerales.

En las formas de realización en las que los componentes de limpieza y/o detergentes pueden no ser compatibles con la beta-glucanasa de la presente invención, pueden utilizarse métodos adecuados para mantener los componentes de limpieza y/o detergentes y la beta-glucanasa separados (es decir, no en contacto entre sí) hasta que sea apropiada la combinación de los dos componentes. Tales métodos de separación incluyen cualquier método adecuado conocido en la técnica (por ejemplo, cápsulas de gel, encapsulación, tabletas, y separación física por ejemplo, mediante el uso de una bolsa que se disuelve en agua que tiene uno o más compartimentos).

Según lo mencionado cuando se emplea la beta-glucanasa de la invención como un componente de una composición detergente (por ejemplo, una composición detergente para el lavado de vajilla), puede incluirse, por ejemplo, en la composición detergente en forma de un granulado no polvoriento, un líquido estabilizado o una enzima protegida. Los granulados no polvorientos pueden ser producidos, por ejemplo, como se describe en US 4.106.991 y 4.661.452 (ambas a Novo Industri A/S) y pueden ser recubiertos opcionalmente por métodos conocidos en la técnica. Los ejemplos de materiales de recubrimiento ceroso son los productos de polietilenglicol (PEG) con pesos moleculares medios de 1000 a 20000; nonilfenoles etoxilados que tienen de 16 a 50 unidades de óxido de etileno; alcoholes grasos etoxilados en los que el alcohol contiene de 12 a 20 átomos de carbono y en los que hay de 15 a 80 unidades de óxido de etileno; alcoholes grasos; ácidos grasos; y mono- y di- y triglicéridos de ácidos grasos. En GB 1483591 se dan ejemplos de materiales de recubrimiento para formación de película adecuados para su aplicación mediante técnicas de lecho fluido.

En algunas formas de realización, las enzimas empleadas en la presente se estabilizan por la presencia de fuentes hidrosolubles de iones de zinc (II), calcio (II) y/o magnesio (II) en las composiciones terminadas que proporcionan tales iones a las enzimas, así como otros iones metálicos (por ejemplo, bario (II), escandio (II), hierro (II), manganeso (II), aluminio (III), estaño (II), cobalto (II), cobre (II), níquel (II), y oxovanadio (IV)). Las enzimas de las composiciones detergentes de la invención también pueden ser estabilizadas utilizando agentes estabilizadores convencionales tal como poliol, por ejemplo, propilenglicol o glicerol, un azúcar o alcohol de azúcar, ácido láctico, y la composición puede ser formulada según lo descrito en, por ejemplo, WO 92/19709 y WO 92/19708. Las enzimas de la invención también pueden ser estabilizadas agregando inhibidores de enzima reversibles, por ejemplo, del tipo de proteína (según lo descrito en EP 544 777) o el tipo de ácido borónico. En una forma de realización preferida, los estabilizadores enzimáticos son del tipo ácido borónico, más preferentemente ácido 4-formilfenilborónico. La composición para el lavado de vajilla de la invención está preferentemente libre de ácido bórico y/o borato, que, es decir, en particular, comprende ácido bórico y borato en cantidades de menos del 0,1 % en peso, preferentemente menos del 0,01 % en peso, sobre la base de la composición total.

Otros estabilizadores enzimáticos son bien conocidos en la técnica, tales como los aldehídos peptídicos e hidrolizado proteico, por ejemplo, la beta-glucanasa de acuerdo con la invención puede ser estabilizada utilizando aldehídos peptídicos o cetonas según lo descrito en WO2005/105826 y WO2009/118375.

Las enzimas protegidas para la inclusión en una composición detergente de la invención pueden ser preparadas, según lo mencionado anteriormente, de acuerdo con el método descrito en EP 238216.

La composición puede ser aumentada con uno o más agentes para prevenir o eliminar la formación de la biopelícula. Estos agentes pueden incluir, entre otros, dispersantes, tensioactivos, detergentes, otras enzimas, antimicrobianos, y biocidas.

Las composiciones de la invención pueden ser aplicadas en elementos dosificadores que se utilizarán en un dispositivo de autodosificación. Los elementos dosificadores que comprenden la composición de la presente invención pueden ser colocados en un cartucho de administración como aquel descrito en WO 2007/052004 y WO 2007/0833141 o WO 2011/051420, WO 2011/051415, WO 2011/051416, WO 2011/051417, WO 2011/051418, WO 2011/120546 y WO 2011/131260. Los elementos dosificadores pueden tener una forma alargada y colocarse en una matriz formando un cartucho de administración que es la recarga para un dispositivo dispensador de autodosificación, como se describe en el caso WO 2007/051989. El cartucho de administración se debe colocar en un dispositivo de administración de autodosificación, como el descrito en WO 2008/053191.

Se puede encontrar una descripción adecuada de dispositivos de autodosificación en WO 2007/083139, WO 2007/051989, WO 2007/083141, WO 2007/083142 y EP2361964.

Otras enzimas

En una forma de realización de la composición para el lavado de vajilla, se combina una beta-glucanasa de la invención con una o más enzimas, por ejemplo al menos dos enzimas, más preferentemente al menos tres, cuatro o cinco enzimas. Preferentemente, las enzimas tienen especificidad diferente de sustrato, por ejemplo, actividad proteolítica, actividad amilolítica, actividad lipolítica, actividad hemicelulítica o actividad pectolítica. Una forma de realización es una composición de limpieza o detergente que comprende un polipéptido de beta-glucanasa de la invención y una o más amilasas (y/o una o más proteasas).

El aditivo detergente así como la composición detergente de acuerdo con la invención puede comprender una o más enzimas tal como una proteasa, lipasa, cutinasa, una amilasa, carbohidrasa, celulasa, pectinasa, mananasa, arabinasa, galactanasa, xilanasa, oxidasa, por ejemplo, una lacasa y/o peroxidasa.

En general, las propiedades de la(s) enzima(s) seleccionada(s) deben ser compatibles con el detergente seleccionado (es decir, pH óptimo, compatibilidad con otros ingredientes enzimáticos y no enzimáticos, etc.), y la(s) enzima(s) debe(n) estar presente(s) en cantidades eficaces.

Celulasas: Las celulasas adecuadas incluyen aquellas de origen animal, vegetal o microbiano. Las celulasas particularmente adecuadas incluyen las de origen bacteriano o fúngico. Se incluyen variantes modificadas químicamente o modificadas con proteínas. Las celulasas adecuadas incluyen celulasas de los géneros Bacillus, Pseudomonas, Humicola, Fusarium, Thielavia, Acremonium, por ejemplo, las celulasas fúngicas producidas a partir de Humicola insolens, Myceliophthora thermophila y Fusarium oxysporum descritas en US 4.435.307, US 5.648.263, US 5.691.178, US 5.776.757 y WO 89/09259.

Las celulasas especialmente adecuadas son las celulasas alcalinas o neutras que tienen beneficios de cuidado del color. Los ejemplos de tales celulasas son las celulasas descritas en EP 0495257, EP 0531 372, WO 96/11262, WO 96/29397, Wo 98/08940. Otros ejemplos son las variantes de celulasa tales como aquellas descritas en WO 94/07998, EP 0531 315, US 5.457.046, US 5.686.593, US 5.763.254, WO 95/24471, WO 98/12307 y WO 1999/001544.

Las celulasas disponibles en el mercado incluyen Celluzyme®, y Carezyme® (Novozymes A/S), Clazinase®, y Puradax HA® (Genencor International Inc.), y KAC-500(B) ® (Kao Corporation).

Proteasas: Las proteasas adecuadas incluyen las de origen bacteriano, fúngico, vegetal, viral o animal, por ejemplo, de origen microbiano o vegetal. Se prefiere el origen microbiano. Se incluyen variantes modificadas químicamente o modificadas con proteínas. Puede ser una proteasa alcalina, tal como una serina proteasa o una metaloproteasa. Una serina proteasa puede ser, por ejemplo, de la familia S1, tal como tripsina, o de la familia S8, tal como subtilisina. Una metaloproteasa puede ser, por ejemplo, una termolisina de, por ejemplo, la familia M4 u otra metaloproteasa tal como aquellas de las familias M5, M7 o M8.

El término "subtilasas" se refiere a un subgrupo de serina proteasa. Las serina proteasas son un subgrupo de proteasas caracterizado por tener una serina en el sitio activo, que forma un aducto covalente con el sustrato. Las subtilasas pueden dividirse en 6 subdivisiones, es decir, la familia de las subtilisinas, la familia de las termitasas, la familia de las proteinasas K, la familia de las peptidasas lantibióticas, la familia de las quexinas y la familia de las pirolisinas.

Los ejemplos de subtilasas son las derivadas de Bacillus tales como Bacillus lentus, B. alkalophilus, B. subtilis, B. amyloliquefaciens, Bacillus pumilus y Bacillus gibsonii descritas en; US7262042 y WO09/021867, y subtilisina lentus, subtilisina Novo, subtilisina Carlsberg, Bacillus licheniformis, subtilisina BPN', subtilisina 309, subtilisina 147 y subtilisina 168 descritas en WO89/06279 y proteasa PD138 descrita en (WO93/18140). Otras proteasas útiles pueden ser las descritas en WO92/175177, WO01/016285, WO02/026024 y WO02/016547. Los ejemplos de proteasas similares a la tripsina son tripsina (por ejemplo de origen porcino o bovino) y la proteasa Fusarium descrita en WO89/06270, WO94/25583 y WO05/040372, y las proteasas quimotripsinas derivadas de Celulomonas descritas en WO05/052161 y WO05/052146.

Una proteasa preferida adicional es la proteasa alcalina de Bacillus lentus DSM 5483, según lo descrito, por ejemplo, en WO95/23221, y las variantes de las mismas que se describen en WO92/21760, WO95/23221, EP1921147 y EP1921148.

Los ejemplos de metaloproteasas son las metaloproteasas neutras según lo descrito en WO07/044993 (Genencor Int.) tales como aquellas derivadas de Bacillus amyloliquefaciens.

Los ejemplos de proteasas útiles son las variantes descritas en: WO92/19729, WO96/034946, WO98/20115, WO98/20116, WO99/011768, WO01/44452, WO03/006602, WO04/03186, WO04/041979, WO07/006305, WO11/036263, WO11/036264, especialmente las variantes con sustituciones en una o más de las siguientes posiciones: 3, 4, 9, 15, 27, 36, 57, 68, 76, 87, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 106, 118, 120, 123, 128, 129, 130, 160, 167, 170, 194, 195, 199, 205, 206, 217, 218, 222, 224, 232, 235, 236, 245, 248, 252 y 274 utilizando la numeración BPN. Las variantes de proteasa más preferidas pueden comprender las mutaciones: S3T, V4I, S9R, A15T, K27R, *36D, V68A, N76D, N87S,R, *97E, A98S, S99G,D,A, S99AD, S101G,M,R S103A, V104I,Y,N, S106A, G118V,R, H120D,N, N123S, S128L, P129Q, S130A, G160D, Y167A, R170S, A194P, G195E, V199M, V205I, L217D, N218D, M222S, A232V, K235L, Q236H, Q245R, N252K, T274A (utilizando la numeración BPN).

Las enzimas proteasa adecuadas disponibles en el mercado incluyen aquellas con las denominaciones comerciales Alcalase®, DuralaseTM, DurazymTM, Relase®, Relase® Ultra, Savinase®, Savinase® Ultra, Primase®, Polarzyme®, Kannase®, Liquanase®, Liquanase® Ultra, Ovozyme®, Coronase®, Coronase® Ultra, Neutrase®, Everlase® y Esperase® (Novozymes A/S), aquellas vendidas con la denominación comercial Maxatase®, Maxacal®, Maxapem®, Purafect®, Purafect Prime@, PreferenzTM, Purafect MA®, Purafect Ox®, Purafect OxP®, Puramax®, Properase®, EffectenzTM, FN2®, FN3® , FN4®, Excellase®, Opticlean® y Optimase® (Danisco/DuPont), AxapemTM (Gist-Brocases N.V.), BLAP (secuencia mostrada en la Figura 29 de US5352604) y sus variantes (Henkel AG) y KAP (subtilisina de Bacillus alkalophilus) de Kao.

Lipasas: Las lipasas adecuadas incluyen aquellas de origen animal, vegetal o microbiano. Las lipasas particularmente adecuadas incluyen las de origen bacteriano o fúngico. Se incluyen variantes modificadas químicamente o modificadas con proteínas. Los ejemplos de lipasas útiles incluyen lipasas de Humicola (sinónimo Thermomyces), por ejemplo, de H. lanuginosa (T. lanuginosus) según lo descrito en EP 258 068 y EP 305216 o de H. insolens según lo descrito en WO 96/13580, una lipasa de Pseudomonas, por ejemplo, de P. alcaligenes o P. pseudoalcaligenes (EP 218272), P. cepacia (EP 331 376), P. stutzeri (GB 1,372,034), P. fluorescens, Pseudomonas sp. cepa SD 705 (WO 95/06720 y WO 96/27002), P. wisconsinensis (WO 96/12012), una lipasa de Bacillus, por ejemplo, de B. subtilis, B. stearothermophilus (JP 64/744992) o B. pumilus (WO 91/16422).

Otros ejemplos son las variantes de lipasa tales como aquellas descritas en WO 92/05249, WO 94/01541, EP 407 225, EP 260 105, WO 95/35381, WO 96/00292, WO 95/30744, WO 94/25578, WO 95/14783, WO 95/22615, WO 97/04079 y WO 97/07202.

Las enzimas lipasas disponibles en el mercado incluyen LipolaseTM, Lipolase UltraTM y Lipex™ (Novozymes A/S).

Amilasas: Las amilasas adecuadas que pueden ser utilizadas junto con beta-glucanasa de la invención pueden ser una alfa-amilasa o una glucoamilasa y pueden ser de origen bacteriano o fúngico. Se incluyen variantes modificadas químicamente o modificadas con proteínas. Las amilasas incluyen, por ejemplo, alfa-amilasas obtenidas de Bacillus, por ejemplo, una cepa especial de Bacillus licheniformis, descrita con más detalle en GB 1.296.839. Las amilasas adecuadas incluyen amilasas que tienen SEQ ID NO: 3 en WO 95/10603 o variantes que tienen 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 2 de las mismas. Las variantes preferidas se describen en WO 94/02597, WO 94/18314, WO 97/43424 y SEQ ID NO: 4 de WO 99/019467, tales como las variantes con sustituciones en una o más de las siguientes posiciones: 15, 23, 105, 106, 124, 128, 133, 154, 156, 178, 179, 181, 188, 190, 197, 201, 202, 207, 208, 209, 211, 243, 264, 304, 305, 391, 408, y 444. Las diferentes amilasas adecuadas incluyen amilasas que tienen SEQ ID NO: 6 en WO 02/010355 o variantes de las mismas que tienen 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 6. Las variantes preferidas de SEQ ID NO: 6, son aquellas que tienen una deleción en las posiciones 181 y 182 y una sustitución en la posición 193. Otras amilasas adecuadas son la alfa-amilasa híbrida que comprende los residuos 1 33 de la alfa-amilasa derivada de B. amyloliquefaciens mostrada en SEQ ID NO: 6 de Wo 2006/066594 y los residuos 36-483 de la alfa-amilasa de B. licheniformis mostrada en SEQ ID NO: 4 de WO 2006/066594 o sus variantes que tienen 90% de identidad de secuencia. Las variantes preferidas de esta alfa-amilasa híbrida son aquellas que tienen una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las siguientes posiciones: G48, T49, G107, H156, A181, N190, M197, 1201, A209 y Q264. Las variantes más preferidas de la alfa-amilasa híbrida que comprende los residuos 1-33 de la alfa-amilasa derivada de B. amyloliquefaciens mostrada en SEQ ID NO: 6 de WO 2006/066594 y los residuos 36-483 de SEQ ID NO: 4 son aquellas que tienen las sustituciones:

M197T:

H156Y+A181T+N1&0F+A209V+Q264S; o

G48A+T49Í+G107A+H156Y+A181T+N19ÜF+Í201F+A209V+G264S

Otras amilasas adecuadas son amilasas que tienen SEQ ID NO: 6 en WO 99/019467 o variantes de las mismas que tienen 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 6. Las variantes preferidas de SEQ ID NO: 6 son aquellas que tienen una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las siguientes posiciones: R181, G182, H183, G184, N195, I206, E212, E216 y K269. Las amilasas particularmente preferidas son aquellas que tienen una deleción en las posiciones R181 y G182, o en las posiciones H183 y G184. Las amilasas adicionales que pueden utilizarse son aquellas que tienen SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 7 de WO 96/023873 o sus variantes que tienen 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 7. Las variantes preferidas de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 7 son aquellas que tienen una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las siguientes posiciones: 140, 181, 182, 183, 184, 195, 206, 212, 243, 260, 269, 304 y 476. Las variantes más preferidas son aquellas que tienen una deleción en las posiciones 181 y 182 o en las posiciones 183 y 184. Las variantes de amilasas más preferidas de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 7 son aquellas que tienen una deleción en las posiciones 183 y 184 y una sustitución en una o más de las posiciones 140, 195, 206, 243, 260, 304 y 476. Otras amilasas que pueden utilizarse son aquellas que tienen SEQ ID NO: 2 de WO 08/153815, SEQ ID NO: 10 en WO 01/66712 o sus variantes que tienen 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 2 de WO 08/153815 o 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 10 en WO 01/66712. Las variantes preferidas de SEQ ID NO: 10 en WO 01/66712 son aquellas que tienen una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las siguientes posiciones: 176, 177, 178, 179, 190, 201, 207, 211 y 264. Otras amilasas adecuadas son amilasas que tienen SEQ ID NO: 2 de WO 09/061380 o sus variantes que tienen 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 2. Las variantes preferidas de SEQ ID NO: 2 son aquellas que tienen un truncamiento del extremo C-terminal y/o una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las siguientes posiciones: Q87, Q98, S125, N128, T131, T165, K178, R180, S181, T182, G183, M201, F202, N225, S243, N272, N282, Y305, R309, D319, Q320, Q359, K444 y G475. Las variantes más preferidas de SEQ ID NO: 2 son aquellas que tienen la sustitución en una o más de las siguientes posiciones: Q87E,R, Q98R, S125A, N128C, T131I, T165I, K178L, T182G, M201L, F202Y, N225E,R, N272E,R, S243Q,A,E,D, Y305R, R309A, Q320R, Q359E, K444E y G475K y/o deleción en la posición R180 y/o S181 o de T182 y/o G183. Las variantes de amilasas más preferidas de SEQ ID NO: 2 son aquellas que tienen las sustituciones:

N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K;

N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K;

S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K; o S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K en donde las variantes son truncadas en el extremo C-terminal y opcionalmente comprenden además una sustitución en la posición 243 y/o una deleción en la posición 180 y/o en la posición 181. Otras amilasas adecuadas son la alfa-amilasa que tiene SEQ ID NO: 12 en WO01/66712 o una variante que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 12. Las variantes de amilasas preferidas son aquellas que tienen una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las siguientes posiciones de SEQ ID NO: 12 en WO01/66712: R28, R118, N174; R181, G182, D183, G184, G186, W189, N195, M202, Y298, N299, K302, S303, N306, R310, N314; R320, H324, E345, Y396, R400, W439, R444, N445, K446, Q449, R458, N471, N484. Las amilasas particularmente preferidas incluyen variantes que tienen una deleción de D183 y G184 y que tienen las sustituciones R118K, N195F, R320K y R458K, y una variante que además tiene sustituciones en una o más posiciones seleccionadas del grupo: M9, G149, G182, G186, M202, ^t257, Y295, N299, M323, E345 y A339, más preferentemente una variante que además tiene sustituciones en todas estas posiciones. Otros ejemplos son variantes de amilasa tales como las descritas en WO2011/098531, WO2013/001078 y WO2013/001087. Las amilasas disponibles en el mercado son DuramylTM, TermamylTM, FungamylTM, Stainzyme TM, Stainzyme PlusTM, NatalaseTM, Liquozyme X y BANTM (de Novozymes A/S), y RapidaseTM , PurastarTM/EffectenzTM, Powerase y Preferenz S100 (de Genencor International Inc./DuPont).

Peroxidasas/oxidasas: Las peroxidasas/oxidasas adecuadas incluyen las de origen vegetal, bacteriano o fúngico. Se incluyen variantes modificadas químicamente o modificadas con proteínas. Los ejemplos de peroxidasas útiles incluyen peroxidasas de Coprinus, por ejemplo, de C. cinereus, y las variantes de las mismas como aquellas descritas en WO 93/24618, WO 95/10602, y WO 98/15257.

Las peroxidasas disponibles en el mercado incluyen Guardzyme® (Novozymes A/S).

La(s) enzima(s) detergente(s) puede(n) incluirse en una composición detergente añadiendo aditivos separados que contienen una o más enzimas, o añadiendo un aditivo combinado que comprende todas estas enzimas. Un aditivo detergente de la invención, es decir, un aditivo separado o un aditivo combinado, puede formularse, por ejemplo, como un granulado, líquido, suspensión, etc. Las formulaciones preferidas de aditivos de detergentes son los granulados, en particular los granulados no polvorientos, como se ha descrito anteriormente, los líquidos, en particular los líquidos estabilizados, o las suspensiones.

Tensioactivos

Típicamente, las composiciones de limpieza o detergentes, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende (en peso de la composición, cantidad total de tensioactivo en peso de la composición) uno o más tensioactivos en el rango del 0% al 50%, preferentemente del 2% al 40%, más preferentemente del 5% al 35%, más preferentemente del 7% al 30%, con máxima preferencia del 10% al 25%, incluso con máxima preferencia del 15% al 20%. En una forma de realización preferida, el detergente es un detergente líquido o en polvo que comprende menos del 40%, preferentemente menos del 30%, más preferentemente menos del 25%, incluso más preferentemente menos del 20% en peso de tensioactivo. La composición puede comprender del 0,1% al 15%, preferentemente del 0,2% al 12%, del 0,5% al 10%, con máxima preferencia del 1,0 % al 8,0 %, de uno o más tensioactivos (cantidad total de tensioactivo en peso de la composición). Los tensioactivos preferidos son tensioactivos aniónicos, tensioactivos no iónicos, tensioactivos catiónicos, tensioactivos zwitteriónicos, tensioactivos anfóteros, y sus mezclas.

Pueden utilizarse todos los tensioactivos no iónicos conocidos por un experto en la técnica como tensioactivos no iónicos. Los tensioactivos no iónicos adecuados son, por ejemplo, alquil-glucósidos de la fórmula general RO(G)x, donde R corresponde a un grupo alifático de cadena recta primaria o ramificado con metilo, en particular ramificado con metilo en la posición 2, que tiene de 8 a 22, preferentemente de 12 a 18 átomos de carbono, y G es el símbolo que denota una unidad de glucosa que tiene 5 o 6 átomos de carbono, preferentemente glucosa. El grado de oligomerización x, que indica la distribución de monoglucósidos y oligoglucósidos, es cualquier número entre 1 y 10; 3 es preferentemente de 1,2 a 1,4.

Otra clase de tensioactivos no iónicos que pueden utilizarse preferentemente, que se pueden utilizar ya sea como el tensioactivo no iónico único o en combinación con otros tensioactivos no iónicos, son los ésteres alquílicos de ácidos grasos alcoxilados, preferentemente etoxilados o etoxilados y propoxilados, que preferentemente tienen de 1 a 4 átomos de carbono en la cadena alquílica.

Los tensioactivos no iónicos del tipo óxido de amina, por ejemplo, óxido de N-cocoalquil-N,N-dimetilamina y óxido de N-seboalquil-N,N-dihidroxietilamina, y del tipo de alcanolamida de ácidos grasos pueden ser también adecuados. La cantidad de estos tensioactivos no iónicos preferentemente no es superior a la de los alcoholes grasos etoxilados, en particular no es superior a la mitad de los mismos. Otros tensioactivos adecuados son las amidas de ácido polihidroxigraso, también conocidas como PHFA.

Los tensioactivos no iónicos de baja espumación pueden ser utilizados como tensioactivos preferidos. Con especial preferencia, los agentes de limpieza, preferentemente los agentes para el lavado de vajilla, en particular agentes para el lavado de vajilla a máquina, contienen tensioactivos no iónicos del grupo de alcoholes alcoxilados. Los alcoholes alcoxilados, ventajosamente etoxilados, en particular primarios que tienen preferentemente de 8 a 18 átomos de carbono y en promedio de 1 a 12 mol de óxido de etileno (EO) por mol de alcohol, en donde el residuo de alcohol puede ser lineal o preferentemente ramificado con metilo en la posición 2, o puede contener residuos lineales y ramificados con metilo en la mezcla, tales como aquellos generalmente presentes en grupos oxo alcohol, son utilizados preferentemente como tensioactivos no iónicos. Sin embargo, los etoxilatos de alcohol que tienen grupos lineales de alcoholes de origen natural que tienen de 12 a 18 átomos de carbono, por ejemplo, de coco, palma, alcohol oleílico o graso de sebo, y un promedio de 2 a 8 mol de EO por mol de alcohol son particularmente preferidos. Los alcoholes etoxilados preferidos incluyen, por ejemplo, alcoholes C12-14 que tienen 3 Eo o 4 EO, alcohol C9-11 que tiene 7 EO, alcoholes C13-15 que tienen 3 EO, 5 EO, 7 EO, o 8 EO, alcoholes C12-18 que tienen 3 EO, 5 EO, o 7 EO, y sus mezclas, tales como las mezclas de alcohol C12-14 con 3 EO y alcohol C12-18 con 5 EO. Los grados de etoxilación indicados representan promedios estadísticos que pueden corresponder a un número entero o a un número fraccional para un producto específico. Los etoxilatos de alcohol preferidos presentan una distribución restringida de homólogos (etoxilatos de rango estrecho, NRE (por sus siglas en inglés). Además de estos tensioactivos no iónicos, también se pueden utilizar alcoholes grasos que tienen más de 12 EO. Los ejemplos de los mismos son alcohol graso de sebo que tiene 14 EO, 25 EO, 30 EO o 40 EO.

Los tensioactivos no iónicos que tienen un punto de fusión por encima de la temperatura ambiente son especialmente preferidos. Se prefiere(n) tensioactivo(s) no iónico(s) con un punto de fusión superior a 20°C, preferentemente superior a 25°C, particularmente preferentemente entre 25 y 60°C, y en particular entre 26,6 y 43,3°C.

Los tensioactivos que se utilizarán preferentemente provienen de los grupos de tensioactivos no iónicos alcoxilados, en particular alcoholes primarios etoxilados. Se ha descubierto que las composiciones para el lavado de vajilla que comprenden polipéptido(s) de acuerdo con la invención en combinación con tensioactivos no iónicos son sorprendentemente capaces de reducir la acumulación de suciedad en el interior del lavavajillas, especialmente en el colador/filtro.

Mejoradores y co-mejoradores

El papel principal del mejorador es secuestrar iones metálicos divalentes (tales como iones de calcio y magnesio) de la solución de lavado que de otro modo interactuarían negativamente con el sistema de tensioactivos. Los mejoradores son también eficaces para eliminar iones metálicos y suciedades inorgánicas de la superficie del tejido, lo que conduce a una eliminación mejorada de manchas de bebidas y en partículas. Los mejoradores son también una fuente de alcalinidad y pueden amortiguar el pH del agua de lavado hasta un nivel superior a 7,5, por ejemplo, de 9,5 a 11. La capacidad de amortiguación también se denomina alcalinidad de reserva, y debe ser preferentemente mayor que 4 (por ejemplo, para composiciones sólidas de lavavajillas automático).

Las composiciones detergentes de la presente invención pueden comprender uno o más mejoradores detergentes o sistemas mejoradores. Muchos sistemas mejoradores adecuados son descritos en la literatura. La composición detergente puede contener aproximadamente 0-65% en peso, tal como aproximadamente 5% a aproximadamente 50% de un mejorador o co-mejorador detergente, o una mezcla de los mismos. En un detergente para el lavado de vajilla, el nivel de mejorador es típicamente del 40-65%, particularmente 50-65%. El mejorador y/o co-mejorador puede ser particularmente un agente quelante que forma complejos solubles en agua con Ca y Mg.

Los mejoradores incluyen en particular silicatos, carbonatos y comejoradores orgánicos, especialmente policarboxilato(s) y/o aminocarboxilato(s).

Pueden utilizarse silicatos en capas cristalinos en los agentes descritos en presente invención. Tales agentes de limpieza, preferentemente agentes para el lavado de vajilla, en particular agentes para el lavado de vajilla a máquina, contienen preferentemente una fracción de peso de silicato en capas cristalino del 0,1 al 20% en peso, preferentemente del 0,2 al 15% en peso, y en particular del 0,4 al 10% en peso, en cada caso sobre la base del peso total de estos agentes.

Otros mejoradores son los portadores alcalinos. Los ejemplos válidos de portadores alcalinos incluyen hidróxidos de metales alcalinos, carbonatos de metales alcalinos, hidrógeno-carbonatos de metales alcalinos, sesquicarbonatos de metales alcalinos, los silicatos alcalinos descritos, silicatos de metales alcalinos y mezclas de las sustancias mencionadas anteriormente, en donde dentro del significado de la presente invención pueden utilizarse, preferentemente, los carbonatos alcalinos, en particular carbonato de sodio o carbonato de potasio, hidrógenocarbonato de sodio o sesquicarbonato de sodio. Sin embargo, también los análogos de potasio correspondientes pueden ser útiles además de o en completa sustitución de las sales de sodio. Debido a la baja compatibilidad química de los hidróxidos de metales alcalinos opcionales con los ingredientes restantes de los agentes de limpieza, en particular agentes para el lavado de vajilla, preferentemente agentes para el lavado de vajilla a máquina, en comparación con otras sustancias mejoradoras, se utilizan preferentemente sólo en pequeñas cantidades o no se utilizan en absoluto.

Los mejoradores incluyen, entre otros, silicatos de metales alcalinos, carbonatos de metales alcalinos y alcalinotérreos, mejoradores de aluminosilicato (por ejemplo, zeolita) y compuestos de policarboxilato, éter hidroxipolicarboxilatos, copolímeros de anhídrido maleico con etileno o vinil metil éter, ácido 1,3, 5-trihidroxibencen-2, 4, 6-trisulfónico, y ácido carboximetiloxisuccínico, las diversas sales de metales alcalinos, amonio y amonio sustituido de ácidos poliacéticos tales como ácido etilendiamina-tetraacético y ácido nitrilotriacético, así como policarboxilatos tales como ácido melítico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido oxidisuccínico, ácido polimaleico, ácido bencen-1,3,5-tricarboxílico, ácido carboximetiloxisuccínico, y las sales solubles de los mismos. Las etanolaminas (MEA, DEA, y TEA) también pueden contribuir con la capacidad de amortiguación en los detergentes líquidos.

Puede utilizarse cualquier mejorador y/o co-mejorador conocido en la técnica para utilizar en las composiciones para el lavado de vajilla, especialmente detergentes de limpieza ADW o HDW. Los ejemplos no limitantes de mejoradores incluyen zeolitas, carbonatos tales como carbonato de sodio, silicatos solubles tales como metasilicato de sodio, silicatos en capas (por ejemplo, SKS-6 de Hoechst), etanolaminas tales como 2-aminoetan-1-ol (MEA), dietanolamina (DEA, también se conoce como 2,2'-iminodietan-1-ol), trietanolamina (TEA, también se conoce como 2,2',2"-nitrilotrietan-1-ol), y (carboximetil)inulina (CMI), y las combinaciones de los mismos.

Las composiciones preferidas para el lavado de vajilla de la invención están "libres de fosfato". "Libres de fosfato", como se utiliza en la presente invención, significa que la composición en cuestión está esencialmente libre de fosfatos, es decir, comprende en particular, fosfatos en cantidades inferiores al 0,1% en peso, preferentemente inferiores a 0,01% en peso, sobre la base de la composición total. La expresión "fosfatos", como se utiliza en este contexto, no incluye los fosfonatos que se describen a continuación.

Se prefiere particularmente el uso de carbonato(s) y/o hidrógeno-carbonato(s), preferentemente carbonato(s) alcalino(s), particularmente preferentemente carbonato de sodio, en cantidades del 2 al 50 % en peso, preferentemente del 5 al 40% en peso, y en particular del 7,5 al 30% en peso, en cada caso, sobre la base del peso del agente, preferentemente el agente para el lavado de vajilla a máquina. Se prefieren particularmente los agentes que, sobre la base del peso del agente para el lavado de vajilla a máquina, contienen menos del 20 % en peso, especialmente menos del 17 % en peso, preferentemente menos del 13 % en peso, y en particular menos del 9 % en peso de carbonato(s) y/o hidrógeno-carbonato(s), preferentemente carbonato(s) alcalino(s), particularmente preferentemente carbonato de sodio o potasio.

En particular, deben mencionarse como comejoradores orgánicos los policarboxilatos/ácidos policarboxílicos, policarboxilatos poliméricos, ácido aspártico, poliacetales, dextrinas, comejoradores orgánicos adicionales, y fosfonatos. A continuación se describen estas clases de sustancias.

Las sustancias mejoradoras orgánicas utilizables son, por ejemplo, los ácidos policarboxílicos que pueden utilizarse en forma del ácido libre y/o de sus sales de sodio, en donde debe entenderse que ácidos policarboxílicos son aquellos ácidos carboxílicos que tienen más de una función ácida. Estos incluyen, por ejemplo, ácido cítrico, ácido adípico, ácido succínico, ácido glutárico, ácido málico, ácido tartárico, ácido maleico, ácido fumárico, ácidos sacáricos, ácido nitrilotriacético (NTA), siempre y cuando dicho uso no sea objetable por razones ecológicas y mezclas de los mismos. Además del efecto mejorador, los ácidos libres típicamente también tienen la característica de ser un componente acidificante y así también se utilizan como agentes para fijar un valor de pH más bajo y más suave. En particular, deben mencionarse ácido cítrico, ácido succínico, ácido glutárico, ácido adípico, ácido glucónico y mezclas arbitrarias de éstos.

El uso de ácido cítrico y/o citratos en estos agentes ha demostrado ser particularmente ventajoso para la capacidad de limpieza y enjuague de los agentes descritos en la presente invención. Por lo tanto, se prefieren los agentes de limpieza, preferentemente los agentes de lavado de vajilla, particularmente los agentes de lavado de vajilla a máquina, caracterizados porque el agente contiene ácido cítrico o una sal de ácido cítrico, y la fracción de peso del ácido cítrico o de la sal del ácido cítrico es especialmente superior al 10 % en peso, preferentemente superior al 15 % en peso, y en particular entre 20 y 40 % en peso.

Otros ejemplos preferidos incluyen quelantes tales como aminocarboxilatos, aminopolicarboxilatos y ácido alquil o alquenilsuccínico. Los ejemplos específicos adicionales incluyen ácido 2,2',2"-nitnlotriacético (NTA), ácido etilendiaminatetraacético (EDTA), ácido dietilentriaminapentaacético (DTPA), ácido iminodisuccínico (IDS), ácido etilendiamina-N,N'-disuccínico (EDDS), ácido metilglicinadiacético (MGDA), ácido glutámico-ácido N,N-diacético (GLDA), ácido N-(2-hidroxietil)iminodiacético (EDG), ácido aspártico-ácido N-monoacético (ASMA), ácido aspárticoácido N,N-diacético (ASDA), ácido aspártico-ácido N-monopropiónico (ASMP), ácido iminodisuccínico (IDA), ácido N-(2-sulfometil)-aspártico (^sM^aS), ácido N-(2-sulfoetil)-aspártico (SEAS), ácido N-(2-sulfometil)-glutámico (SMGL), ácido N-(2-sulfoetil)-glutámico (SEGL), ácido N-metiliminodiacético (MIDA), a-alanina-ácido N,N-diacético (a-ALDA), serina-ácido N,N-diacético (SEDA), isoserina-ácido N,N-diacético (ISDA), fenilalanina-ácido N,N-diacético (PHDA), ácido antranílico- ácido N,N-diacético (ANDA), ácido sulfanílico-ácido N,N-diacético (SLDA) , taurina-ácido N,N-diacético (TUDA) y sulfometil-ácido N,N-diacético (SMDA), ácido N-(2-hidroxietil)etilendiamina-N,N',N,,-triacético (HEDTA), dietanolglicina (DEG), y las combinaciones y sales de los mismos. Otros mejoradores y/o co-mejoradores de ejemplo son descritos en, por ejemplo, WO 09/102854, US 5977053.

Los ácidos aminocarboxílicos y/o las sales de los mismos son otra clase significativa de mejoradores libres de fosfato. Los representantes particularmente preferidos de esta clase son ácido metilglicina diacético (MGDA) o las sales de los mismos, y ácido glutamina diacético (GLDA) o las sales de los mismos, o ácido etilendiamina diacético (EDDS) o las sales de los mismos. El contenido de estos ácidos aminocarboxílicos o de las sales de los mismos puede ser, por ejemplo, del 0,1 al 15 % en peso, preferentemente del 0,5 al 10 % en peso, y en particular del 0,5 al 6 % en peso. Los ácidos aminocarboxílicos y las sales de los mismos pueden ser utilizados junto con los mejoradores mencionados anteriormente, en particular también con los mejoradores libres de fosfato.

La composición detergente también puede contener 0-50% en peso, tal como aproximadamente 5% a aproximadamente 30% de un co-mejorador detergente. La composición detergente puede incluir un co-mejorador solo, o en combinación con un mejorador, por ejemplo un mejorador de zeolita. Los ejemplos no limitantes de comejoradores incluyen homopolímeros de poliacrilatos o los copolímeros de los mismos, tal como ácido poliacrílico (PAA) o copoli(ácido acrílico/ácido maleico) (PAA/PMA).

Además, los mejoradores adecuados incluyen policarboxilatos poliméricos; por ejemplo, estos son las sales de metales alcalinos de ácido poliacrílico o de ácido polimetacrílico, por ejemplo las que tienen una masa molar relativa de 500 a 70.000 g/mol. Los polímeros adecuados son, en particular, poliacrilatos, que tienen preferentemente una masa molar de 2000 a 20.000 g/mol. Debido a su solubilidad superior, los poliacrilatos de cadena corta que tienen masas molares de 2000 a 10.000 g/mol, y particularmente preferentemente de 3000 a 5000 g/mol, pueden a su vez ser preferidos de este grupo.

En una forma de realización preferida, la composición para el lavado de vajilla de la invención puede comprender, si está permitido de acuerdo con la jurisdicción del país donde se utiliza la composición para el lavado de vajilla, fosfonatos, preferentemente ácido 1-hidroxietan- 1,1-difosfónico (HEDP), ácido etilendiaminatetrametilenfosfónico (EDTMPA), ácido dietilentriaminapentakismetilenfosfóonico) (DTMPA o DTPMPA), ácido dietilentriaminapentametilenfosfónico (DTPMP), ácido aminotris(metilenfosfónico (ATMP).

En una forma de realización alternativa, la composición para el lavado de vajilla de la invención está libre de fosfato según lo definido anteriormente y no comprende mineral alguno y solamente cantidades pequeñas de fosfonatos. En una forma de realización preferida, la composición para el lavado de vajilla contiene menos de 15 mg/tarea de fósforo, más preferentemente menos de 10 mg/tarea de fósforo, con máxima preferencia menos de 1 mg/tarea de fósforo.

Blanqueadores

Las composiciones detergentes de la presente invención pueden comprender uno o más agentes blanqueadores. En particular, los detergentes en polvo pueden comprender uno o más agentes blanqueadores. Los agentes blanqueadores adecuados incluyen otros fotoblanqueadores, perácidos preformados, fuentes de peróxido de hidrógeno, activadores del blanqueo, peróxido de hidrógeno, catalizadores del blanqueo y las mezclas de los mismos. En general, cuando se utiliza un agente blanqueador, las composiciones de la presente invención pueden comprender de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 50% o incluso de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 25% de agente blanqueador en peso de la composición de limpieza en cuestión. Los ejemplos de agentes blanqueadores adecuados incluyen:

(1) otros fotoblanqueadores, por ejemplo Vitamina K3;

(2) perácidos preformados: Los perácidos preformados adecuados incluyen, entre otros, compuestos seleccionados del grupo que consiste en ácidos percarboxílicos y sales, ácidos percarbónicos y sales, ácidos perimídicos y sales, ácidos peroximonosulfúricos y sales, por ejemplo, Oxona, y mezclas de los mismos. Los ácidos percarboxílicos adecuados incluyen perácidos hidrófobos e hidrófilos que tienen la fórmula R-(C=O)O-O-M en donde R es un grupo alquilo, opcionalmente ramificado, que tiene, cuando el perácido es hidrófobo, de 6 a 14 átomos de carbono, o de 8 a 12 átomos de carbono y, cuando el perácido es hidrófilo, menos de 6 átomos de carbono o incluso menos de 4 átomos de carbono; y M es un contraión, por ejemplo, sodio, potasio o hidrógeno;

(3) fuentes de peróxido de hidrógeno, por ejemplo, sales inorgánicas de perhidrato, incluidas las sales de metales alcalinos tales como las sales de sodio de perborato (generalmente monohidrato o tetrahidrato), percarbonato, persulfato, perfosfato, sales de persilicato y mezclas de estas sales. En un aspecto de la invención, las sales de perhidrato inorgánicas se seleccionan del grupo que consiste en sales de sodio de perborato, percarbonato y mezclas de los mismos. Cuando se emplean, las sales inorgánicas de perhidrato están típicamente presentes en cantidades del 0,05 al 40 % en peso, o del 1 al 30 % en peso de la composición total y son típicamente incorporadas en tales composiciones como un sólido cristalino que puede ser recubierto. Los recubrimientos adecuados incluyen sales inorgánicas tales como silicato de metales alcalinos, sales de carbonato o borato o mezclas de los mismos, o materiales orgánicos tales como polímeros solubles en agua o dispersables, ceras, aceites o jabones grasos. Las composiciones blanqueadoras útiles son descritas en las patentes de los Estados Unidos Nros. 5.576.282, y 6.306.812;

(4) activadores del blanqueo que tienen R-(C=O)-L en donde R es un grupo alquilo, opcionalmente ramificado, que tiene, cuando el activador del blanqueo es hidrófobo, de 6 a 14 átomos de carbono, o de 8 a 12 átomos de carbono y, cuando el activador de blanqueo es hidrófilo, menos de 6 átomos de carbono o incluso menos de 4 átomos de carbono; y L es un grupo saliente. Los ejemplos de grupos salientes adecuados son ácido benzoico y sus derivados -especialmente sulfonato de benceno. Los activadores del blanqueo adecuados incluyen dodecanoiloxibencensulfonato, decanoil-oxibencensulfonato, ácido decanoil-oxibenzoico o sus sales, 3,5,5-trimetil hexanoiloxibencensulfonato, tetraacetiletilendiamina (TAED) y nonanoiloxibencensulfonato (NOBS). Los activadores del blanqueo adecuados son también descritos en WO 98/17767. Si bien puede emplearse cualquier activador del blanqueo adecuado, en un aspecto de la invención, la composición de limpieza en cuestión puede comprender NOBS, TAED o mezclas de los mismos; y

(5) los catalizadores del blanqueo que son capaces de aceptar un átomo de oxígeno del peroxiácido y transferir el átomo de oxígeno a un sustrato oxidable son descritos en WO 2008/007319. Los catalizadores del blanqueo adecuados incluyen, entre otros: cationes de iminio y poliiones; zwitteriones de iminio; aminas modificadas; óxidos de aminas modificadas; N-sulfoniliminas; N-fosfoniliminas; N-aciliminas; dióxidos de tiadiazol; perfluoroiminas; cetonas cíclicas de azúcar y las mezclas de los mismos... El catalizador del blanqueo típicamente estará comprendido en la composición detergente a un nivel del 0,0005% al 0,2%, del 0,001% al 0,1%, o incluso del 0,005% al 0,05% en peso.

Cuando está presente, el perácido y/o activador del blanqueo está generalmente presente en la composición en una cantidad de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 60 % en peso, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 40 % en peso o incluso de aproximadamente 0,6 a aproximadamente 10 % en peso sobre la base de la composición. Puede utilizarse uno o más perácidos hidrófobos o precursores de los mismos en combinación con uno o más perácidos hidrófilos o precursores de los mismos.

Las cantidades de fuente de peróxido de hidrógeno y perácido o activador del blanqueo pueden seleccionarse de tal manera que la relación molar de oxígeno disponible (de la fuente de peróxido) con respecto al perácido es de 1:1 a 35:1, o incluso de 2:1 a 10:1.

Materiales auxiliares

Dispersantes - Las composiciones detergentes de la presente invención pueden también contener dispersantes. En particular, los detergentes en polvo pueden comprender dispersantes. Los materiales orgánicos solubles en agua adecuados incluyen los ácidos homo- o copoliméricos o sus sales, en los cuales el ácido policarboxílico comprende al menos dos radicales carboxilo separados entre sí por no más de dos átomos de carbono.

Polímeros de liberación de suciedad - Las composiciones para el lavado de vajilla de la presente invención también puede incluir uno o más polímeros de liberación de suciedad que ayudar a eliminar la suciedad de los tejidos tales como los tejidos de algodón y poliéster, en particular la eliminación de suciedad hidrófoba de los tejidos de poliéster. Los polímeros de liberación de suciedad pueden ser, por ejemplo, polímeros no iónicos o aniónicos con base de tereftalato, polvinilcaprolactama y copolímeros relacionados, copolímeros de injerto de vinilo, poliamidas de poliéster. Otro tipo de polímeros de liberación de suciedad son polímeros anfífilos de limpieza de grasa alcoxilados que comprenden una estructura central y una pluralidad de grupos alcoxilato unidos a esa estructura central. La estructura central puede comprender una estructura de polialquilenimina o una estructura de polialcanolamina, como se describe detalladamente en WO 2009/087523. Además, los copolímeros de injerto al azar son polímeros adecuados para la liberación de suciedad. Los copolímeros de injerto adecuados son descritos con más detalle en WO 2007/138054, WO 2006/108856 y WO 2006/113314. Otros polímeros de liberación de suciedad son estructuras de polisacáridos sustituidas, especialmente estructuras celulósicas sustituidas, tales como los derivados de celulosa modificados, tales como los descritos en EP 1867 808 o WO 2003/040279. Los polímeros celulósicos adecuados incluyen celulosa, éteres de celulosa, ésteres de celulosa, amidas de celulosa y sus mezclas. Los polímeros celulósicos adecuados incluyen celulosa modificada aniónicamente, celulosa modificada no iónicamente, celulosa modificada catiónicamente, celulosa modificada zwitteriónicamente, y las mezclas de las mismas. Los polímeros celulósicos adecuados incluyen la metilcelulosa, carboxi-metilcelulosa, celulosa etílica, hidroxil-etilcelulosa, hidroxil-propil-metilcelulosa, éster carboximetilcelulosa, y sus mezclas.

Agentes antirredeposición - Las composiciones para el lavado de vajilla de la presente invención pueden incluir además uno o más agentes antirredeposición tales como carboximetilcelulosa (CMC), alcohol de polivinilo (PVA), polivinilpirrolidona (PVP), polioxietileno y/o polietilenglicol (PEG), homopolímeros de ácido acrílico, copolímeros de ácido acrílico y ácido maleico, y polietileniminas etoxiladas. Los polímeros a base de celulosa descritos en la sección polímeros de liberación de suciedad anterior también pueden funcionar como agentes antirredeposición.

Otros materiales auxiliares adecuados incluyen, entre otros, bactericidas, aglutinantes, portadores, tintes, estabilizadores de enzimas, rellenos, reguladores de espuma, hidrótropos, perfumes, pigmentos, supresores de espuma, disolventes, estructurantes para detergentes líquidos y/o agentes elastizadores de estructuras.

Una formulación básica típica para una composición para el lavado de vajilla a máquina, que se puede utilizar preferentemente, por ejemplo, para polvos sólidos o preferentemente en forma de tableta, comprende los siguientes materiales: Uno o más polipéptido(s) de acuerdo con la invención 0,001 a 5 % en peso (proteína enzimática) y

Citrato de sodio 10 a 50 % en peso

MGDA o GLDA, sal sódica 0-40 % en peso

carbonato de sodio 10 a 30 % en peso

Disilicato sódico 0 a 40 % en peso

percarbonato de sodio 5 a 20 % en peso

Activador del blanqueo 1 a 4 % en peso

Catalizador del blanqueo 0,001 a 1 % en peso

sulfopolímero 2.5 a 15 % en peso

policarboxilato 0,5 a 15 % en peso

tensioactivo(s) no iónico(s) 1.5 a 15 % en peso

fosfonato 0 a 10 % en peso

proteasas (proteína enzimática) 0,0001 a 5 % en peso

amilasa (proteína enzimática) 0,0001 a 5 % en peso

Inhibidor de corrosión del cristal 0 a 1 % en peso

en donde la información en % en peso en cada caso se basa en la composición total.

Además, la composición puede contener aditivos como desintegrantes, agentes protectores de la cubertería de plata, agentes de llenado, auxiliares de procesamiento, agentes de ajuste de pH, perfumes, tintes, etc.

Una formulación básica típica para una composición para el lavado de vajilla automático, especialmente útil en lavavajillas domésticos, que se puede utilizar preferentemente, por ejemplo, en forma de gel o preferentemente en forma líquida, comprende los siguientes materiales: Uno o más polipéptidos de acuerdo con la invención (proteína enzimática) de 0,001 a 5 % en peso y

Citrato de sodio 5-50 % en peso

MGDA o GLDA, sal tetrasódica 0-20 % en peso

Sulfopolímero 2,5-15 % en peso

policarboxilato 0-10 % en peso

tensioactivo(s) no iónico(s) 0,5-10 % en peso

Fosfonato 0-10 % en peso

proteasas (proteína enzimática) 0,0001 a 5 % en peso

amilasa (proteína enzimática) 0,0001 a 5 % en peso

Además, la composición puede contener aditivos como modificadores de la reología, agentes de llenado, auxiliares del procesamiento, agentes de ajuste de pH, perfumes, tintes, etc.

Las suciedades y las manchas que son importantes para los formuladores de detergentes están compuestas por muchas sustancias diferentes y se han desarrollado diversas enzimas diferentes, todas con diferentes especificidades de sustrato, para utilizar en detergentes tanto en relación con el lavado de ropa sucia como con la limpieza de superficies duras, tal como el lavado de vajilla. Se considera que estas enzimas proporcionan un beneficio de detergencia enzimática, ya que mejoran específicamente la eliminación de manchas en el proceso de limpieza en el que se aplican en comparación con el mismo proceso sin enzimas. Las enzimas que eliminan manchas que se conocen en la técnica incluyen enzimas tales como carbohidrasas, amilasas, proteasas, lipasas, celulasas, hemicelulasas, xilanasas, cutinasas y pectinasa.

En un aspecto preferido de la presente invención, la beta-glucanasa de la invención puede ser combinada con al menos dos enzimas. Estas enzimas adicionales se describen en detalle en la sección "otras enzimas", más preferido al menos tres, cuatro o cinco enzimas. Preferentemente, las enzimas tienen especificidad diferente de sustrato, por ejemplo, actividad carbolítica, actividad proteolítica, actividad amilolítica, actividad lipolítica, actividad hemicelulítica o actividad pectolítica. La combinación de enzimas puede por ejemplo ser una beta-glucanasa de la invención con otra enzima de eliminación de manchas, por ejemplo, una beta-glucanasa de la invención y una proteasa, una betaglucanasa de la invención y una serina proteasa, una beta-glucanasa de la invención y una amilasa, una betaglucanasa de la invención y una celulasa, una beta-glucanasa de la invención y una lipasa, una betaglucanasa de la invención y una cutinasa, una beta-glucanasa de la invención y una pectinasa o una beta-glucanasa de la invención y una enzima antirredeposición. Más preferentemente, la beta-glucanasa de la invención es combinada con al menos dos otras enzimas de eliminación de manchas, por ejemplo, una beta-glucanasa de la invención, un lipasa y una amilasa; o una betaglucanasa de la invención, una proteasa y un amilasa; o una beta-glucanasa de la invención, una proteasa y una lipasa; o una beta-glucanasa de la invención, una proteasa y una pectinasa; o una beta-glucanasa de la invención, una proteasa y una celulasa; o una beta-glucanasa de la invención, una proteasa y una hemicelulasa; o una beta-glucanasa de la invención, una proteasa y una cutinasa; o una beta-glucanasa de la invención, una amilasa y una pectinasa; o una beta-glucanasa de la invención, una amilasa y una cutinasa; o una beta-glucanasa de la invención, una amilasa y una celulasa; o una betaglucanasa de la invención, una amilasa y una hemicelulasa; o una beta-glucanasa de la invención, una lipasa y una pectinasa; o una beta-glucanasa de la invención, una lipasa y una cutinasa; o una beta-glucanasa de la invención, una lipasa y una celulasa; o una beta-glucanasa de la invención, una lipasa y una hemicelulasa. Aún más preferentemente, una betaglucanasa de la invención puede ser combinada con al menos tres otras enzimas de eliminación de manchas, por ejemplo, una beta-glucanasa de la invención, una proteasa, una lipasa y una amilasa; o una beta-glucanasa de la invención, una proteasa, una amilasa y una pectinasa; o una beta-glucanasa de la invención, una proteasa, una amilasa y una cutinasa; o una beta-glucanasa de la invención, una proteasa, una amilasa y una celulasa; o una beta-glucanasa de la invención, una proteasa, una amilasa y una hemicelulasa; o una beta-glucanasa de la invención, una amilasa, una lipasa y una pectinasa; o una beta-glucanasa de la invención, una amilasa, una lipasa y una cutinasa; o una beta-glucanasa de la invención, una amilasa, una lipasa y una celulasa; o una beta-glucanasa de la invención, una amilasa, una lipasa y una hemicelulasa; o una beta glucanasa de la invención, una proteasa, una lipasa y una pectinasa; o una beta-glucanasa de la invención, una proteasa, una lipasa y una cutinasa; o una betaglucanasa de la invención, una proteasa, una lipasa y una celulasa; o una beta-glucanasa de la invención, una proteasa, una lipasa y una hemicelulasa. Una beta-glucanasa de acuerdo con la presente invención puede ser combinada con cualquiera de las enzimas seleccionadas de la lista no exhaustiva que comprende: carbohidrasas, tal como una amilasa, una hemicelulasa, una pectinasa, una celulasa, una xantanasa o una pululanasa, una peptidasa, una proteasa o una lipasa.

En una forma de realización preferida, una beta-glucanasa de la invención es combinada con una serina proteasa, por ejemplo, una proteasa de la familia S8 tal como Savinase®.

En otra forma de realización de la presente invención, una beta-glucanasa de la invención puede ser combinada con una o más metaloproteasas, tal como una metaloproteasa M4, incluyendo Neutrase® o Thermolysin. Estas combinaciones pueden comprender además combinaciones de las otras enzimas detergentes como se ha descrito anteriormente.

El proceso de limpieza es un proceso de lavado de vajilla. El proceso de limpieza puede realizarse, por ejemplo, en un proceso de lavado a máquina o en un proceso de lavado manual. La solución de lavado puede ser, por ejemplo, una solución de lavado acuosa que contenga una composición detergente.

En los últimos años ha aumentado el interés por sustituir los componentes de los detergentes, derivados de petroquímicos por componentes biológicos renovables tales como enzimas y polipéptidos, sin comprometer el rendimiento de lavado. Cuando los componentes de las composiciones detergentes cambian, se necesitan nuevas actividades enzimáticas o nuevas enzimas con propiedades alternativas y/o mejoradas en comparación con las enzimas detergentes comunes utilizadas, tales como proteasas, lipasas y amilasas, para lograr un rendimiento de lavado similar o mejorado en comparación con las composiciones detergentes tradicionales.

Las composiciones detergentes típicas incluyen diversos componentes además de las enzimas, estos componentes tienen diferentes efectos, algunos componentes como los tensioactivos reducen la tensión superficial del detergente, lo que permite levantar y dispersar la mancha que se está limpiando y, a continuación, lavarla, otros componentes, como los sistemas de blanqueo, eliminan la decoloración a menudo por oxidación y muchos blanqueadores también tienen propiedades bactericidas fuertes, y se utilizan para desinfectar y esterilizar. Aún otros componentes como el mejorador y el quelante suavizan, por ejemplo, el agua de lavado eliminando los iones metálicos del líquido.

En una forma de realización particular, la invención se refiere al uso de una composición que comprende una betaglucanasa de la invención, en donde dicha composición comprende además al menos uno o más de los siguientes: un tensioactivo, un mejorador, un quelante o agente quelante, sistema blanqueador o componente blanqueador en el lavado de vajilla.

En una forma de realización preferida de la invención, se reduce la cantidad de tensioactivo, mejorador, quelante o agente quelante, sistema blanqueador y/o componente blanqueador utilizada en comparación con la cantidad de tensioactivo, mejorador, quelante o agente quelante, sistema blanqueador y/o componente blanqueador utilizada sin la beta-glucanasa añadida de la invención. Preferentemente el al menos un componente que es un tensioactivo, un mejorador, un quelante o agente quelante, sistema blanqueador y/o componente blanqueador está presente en una cantidad que es 1% menos, tal como 2% menos, tal como 3% menos, tal como 4% menos, tal como 5% menos, tal como 6% menos, tal como 7% menos, tal como 8% menos, tal como 9% menos, tal como 10% menos, tal como 15% menos, tal como 20% menos, tal como 25% menos, tal como 30% menos, tal como 35% menos, tal como 40% menos, tal como 45% menos, tal como 50% menos que la cantidad del componente en el sistema sin la adición de betaglucanasa de la invención, tal como una cantidad convencional de tal componente. En un aspecto, la beta-glucanasa de la invención se utiliza en composiciones detergentes en donde dicha composición está libre de al menos un componente que es un tensioactivo, un mejorador, un quelante o agente quelante, sistema blanqueador o componente blanqueador y/o polímero.

Composiciones detergentes

En una forma de realización, la invención se refiere a composiciones detergentes que comprenden una enzima de la presente invención en combinación con uno o más componentes de limpieza adicionales. La elección de los componentes adicionales depende de la experiencia del experto e incluye ingredientes convencionales, incluidos los componentes no limitantes de ejemplo que se exponen a continuación.

En una forma de realización, la invención se refiere a una composición de ADW (Automatic Dish Wash, lavado de vajilla automático) que comprende una enzima de la presente invención en combinación con uno o más componentes de la composición de ADW adicionales. La elección de los componentes adicionales depende de la experiencia del experto e incluye ingredientes convencionales, incluidos los componentes no limitantes de ejemplo que se exponen a continuación.

Tensioactivos

La composición detergente puede comprender uno o más tensioactivos, que pueden ser aniónicos y/o catiónicos y/o no iónicos y/o semipolares y/o zwitteriónicos, o una mezcla de los mismos. En una forma de realización particular, la composición detergente incluye una mezcla de uno o más tensioactivos no iónicos y uno o más tensioactivos aniónicos. El(los) tensioactivo(s) está(n) típicamente presente(s) a un nivel de aproximadamente 0,1% a 60% en peso, tal como aproximadamente 1% a aproximadamente 40%, o aproximadamente 3% a aproximadamente 20%, o aproximadamente 3% a aproximadamente 10%. El(los) tensioactivo(s) se selecciona(n) en función de la aplicación de limpieza deseada, y puede(n) incluir cualquier tensioactivo convencional conocido en la técnica.

Cuando se incluye, el detergente suele contener de aproximadamente 1% a aproximadamente 40% en peso de un tensioactivo aniónico, tal como de aproximadamente 5% a aproximadamente 30%, incluyendo de aproximadamente 5% a aproximadamente 15%, o de aproximadamente 15% a aproximadamente 20%, o de aproximadamente 20% a aproximadamente 25% de un tensioactivo aniónico. Los ejemplos no limitantes de tensioactivos aniónicos incluyen sulfatos y sulfonatos, en particular, alquilbencensulfonatos lineales (LAS), isómeros de LAS, alquilbencensulfonatos ramificados (BABS), fenilalcanosulfonatos, alfa-olefinsulfonatos (AOS), olefinsulfonatos, alquensulfonatos, alcano-2,3-diilbis(sulfatos), hidroxialcanosulfonatos y disulfonatos, alquilsulfatos (AS) tales como dodecilsulfato sódico (SDS), sulfatos de alcoholes grasos (FAS), sulfatos de alcoholes primarios (PAS), etersulfatos de alcohol (AES o AEOS o FES, también conocidos como etoxisulfatos de alcohol o etersulfatos de alcoholes grasos), alcanosulfonatos secundarios (SAS), sulfonatos de parafina (PS), éster-sulfonatos, ésteres de glicerol de ácido graso sulfonados, ésteres metílicos de ácido graso alfa-sulfonados (alfa-SFMe o SES) incluyendo sulfonato de éster metílico (MES), ácido alquil- o alquenilsuccínico, ácido dodecenil/tetradecenilsuccínico (DTSA), derivados de ácido graso de aminoácidos, diésteres y monoésteres de ácido sulfo-succínico o sal de ácidos grasos (jabón), y las combinaciones de los mismos.

Cuando se incluye, el detergente suele contener de aproximadamente 1% a aproximadamente 40% en peso de un tensioactivo catiónico, por ejemplo de aproximadamente 0,5% a aproximadamente 30%, en particular de aproximadamente 1% a aproximadamente 20%, de aproximadamente 3% a aproximadamente 10%, tal como de aproximadamente 3% a aproximadamente 5%, de aproximadamente 8% a aproximadamente 12% o de aproximadamente 10% a aproximadamente 12%. Los ejemplos no limitantes de tensioactivos catiónicos incluyen compuesto de amonio cuaternario de alquildimetiletanolamina (ADMEAQ), bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAb ), cloruro de dimetildiestearilamonio (DSDMA^c), y alquilbencildimetilamonio, compuestos de alquilo-amonio cuaternario, compuestos de amonio cuaternario alcoxilados (AQA), compuestos de amonio cuaternario de éster, y las combinaciones de los mismos.

Cuando se incluye, el detergente suele contener de aproximadamente 0,2% a aproximadamente 40% en peso de un tensioactivo no iónico, por ejemplo de aproximadamente 0,5% a aproximadamente 30%, en particular de aproximadamente 1% a aproximadamente 20%, de aproximadamente 3% a aproximadamente 10%, tal como de aproximadamente 3% a aproximadamente 5%, de aproximadamente 8% a aproximadamente 12% o de aproximadamente 10% a aproximadamente 12%. Los ejemplos no limitantes de tensioactivos no iónicos incluyen etoxilatos de alcohol (AE o AEO), propoxilatos de alcohol, alcoholes grasos propoxilados (PFA), ésteres alquílicos de ácidos grasos alcoxilados, tales como ésteres alquílicos de ácidos grasos etoxilados y/o propoxilados, etoxilatos de alquilfenol (APE), etoxilatos de nonilfenol (NPE), alquilpoliglucósidos (APG), aminas alcoxiladas, monoetanolamidas de ácidos grasos (FAM), dietanolamidas de ácidos grasos (FADA), monoetanolamidas de ácidos grasos etoxilados (EFAM), monoetanolamidas de ácidos grasos propoxilados (PFAM), amidas de ácidos grasos de polihidroxialquilo, o derivados de N-acilo N-alquilo de glucosamina (glucamidas, GA, o glucamidas de ácidos grasos, FAGA), así como productos disponibles con las denominaciones comerciales SPAN y TWEEN, y las combinaciones de los mismos.

Cuando se incluye, el detergente suele contener de aproximadamente 0 % a aproximadamente 40% en peso de un tensioactivo semipolar. Los ejemplos no limitantes de tensioactivos semipolares incluyen óxidos de amina (AO) tales como óxido de alquildimetilamina, óxido de N-(coco alquil)-W,W-dimetilamina y óxido de N-(sebo-alquil)-W,W-bis(2-hidroxietil)amina, y las combinaciones de los mismos.

Cuando se incluye, el detergente suele contener de aproximadamente 0 % a aproximadamente 40% en peso de un tensioactivo zwitteriónico. Los ejemplos no limitantes de tensioactivos zwitteriónicos incluyen betaínas tales como alquildimetilbetaínas, sulfobetaínas y las combinaciones de las mismas.

Hidrótropos

Un hidrótropo es un compuesto que solubiliza compuestos hidrófobos en soluciones acuosas (o, en forma opuesta, sustancias polares en un entorno no polar). Típicamente, los hidrótropos son de naturaleza tanto hidrófila como hidrófoba (las llamadas propiedades anfífilas conocidas de los tensioactivos); sin embargo, la estructura molecular de los hidrótropos generalmente no favorece la autoagregación espontánea. Los hidrótropos no muestran una concentración crítica por encima de la cual se produce la autoagregación, como ocurre con los tensioactivos y los lípidos que forman fases micelares, lamelares u otras meso-fases bien definidas. En cambio, muchos hidrótropos muestran un proceso de agregación de tipo continuo en el que los tamaños de los agregados crecen a medida que aumenta la concentración. Sin embargo, muchos hidrótropos alteran el comportamiento de fase, la estabilidad y las propiedades coloidales de los sistemas que contienen sustancias de naturaleza polar y no polar, incluidas mezclas de agua, aceite, tensioactivos y polímeros. Los hidrótropos se utilizan clásicamente en todos los sectores, desde la industria farmacéutica, el cuidado personal y la alimentación hasta las aplicaciones técnicas. El uso de hidrótropos en las composiciones detergentes permite, por ejemplo, formulaciones más concentradas de tensioactivos (como en el proceso de compactar detergentes líquidos eliminando agua) sin inducir fenómenos no deseados como la separación de fases o la alta viscosidad.

El detergente puede contener 0-10% en peso, por ejemplo 0-5% en peso, tal como aproximadamente 0,5 a aproximadamente 5%, o aproximadamente 3 a aproximadamente 5%, de un hidrótropo. Puede utilizarse cualquier hidrótropo conocido en la técnica para el uso en detergentes. Los ejemplos no limitantes de hidrótropos incluyen bencensulfonato sódico, p-toluensulfonato sódico (STS), xilensulfonato sódico (SXS), cumensulfonato sódico (SCS), cimensulfonato sódico, óxidos de amina, alcoholes y poliglicoléteres, hidroxinaftoato sódico, hidroxinaftalensulfonato sódico, etilhexilsulfato sódico, y las combinaciones de los mismos.

Sistemas de blanqueo

El detergente puede contener 0-30% en peso, tal como aproximadamente 1% a aproximadamente 20% de un sistema de blanqueo. Puede utilizarse cualquier sistema blanqueador conocido en la técnica para utilizar en el lavado de vajilla, especialmente en los detergentes de limpieza para el lavado de vajilla automático (ADW). Los componentes adecuados del sistema de blanqueo incluyen catalizadores de blanqueo, fotoblanqueadores, activadores del blanqueo, fuentes de peróxido de hidrógeno tales como percarbonato de sodio, perboratos de sodio y peróxido de hidrógenourea (1:1), perácidos preformados y las mezclas de los mismos. Los perácidos preformados adecuados incluyen, entre otros, ácidos peroxicarboxílicos y sales, ácidos diperoxidicarboxílicos, ácidos perimídicos y sales, ácidos peroximonosulfúricos y sales, por ejemplo, Oxona (R), y las mezclas de los mismos. Los ejemplos no limitantes de sistemas de blanqueo incluyen sistemas de blanqueo basados en peróxido, que pueden comprender, por ejemplo, una sal inorgánica, incluyendo sales de metales alcalinos tales como sales de sodio de perborato (normalmente monohidrato o tetrahidrato), percarbonato, persulfato, perfosfato, sales de persilicato, en combinación con un activador del blanqueo que forma perácido. El término activador del blanqueo quiere decir en la presente invención un compuesto que reacciona con el peróxido de hidrógeno para formar un perácido vía perhidrólisis. El perácido así formado constituye el blanqueador activado. Los activadores del blanqueo adecuados que se utilizarán en la presente invención incluyen aquellos pertenecientes a la clase de ésteres, amidas, imidas o anhídridos. Los ejemplos adecuados son tetraacetiletilendiamina (TAED), 4-[(3,5,5-trimetilhexanoil)oxi]bencen-1-sulfonato de sodio (ISONOBS), 4-(dodecanoiloxi)bencen-1-sulfonato (LOBS), 4-(decanoiloxi)bencen-1-sulfonato, 4-(decanoiloxi)benzoato (DOBS o DOBA), 4-(nonanoiloxi)bencen-1-sulfonato (NOBS), y/o aquellos descritos en WO98/17767.

También es posible utilizar combinaciones de activadores del blanqueo convencionales. Estos activadores del blanqueo se utilizan preferentemente en cantidades de hasta 10% en peso, en particular 0,1% en peso a 8% en peso, particularmente de 2 a 8% en peso, y particularmente preferentemente de 2 a 6% en peso, basado en cada caso en el peso total del agente que contiene activador de blanqueo.

En EP624154 se describió una familia particular de activadores del blanqueo y se prefiere particularmente que la familia sea acetil trietil citrato (ATC). El ATC o un triglicérido de cadena corta como triacetina tiene la ventaja de que es respetuoso con el medio ambiente. Además, el acetil trietil citrato y la triacetina tienen una buena estabilidad hidrolítica en el producto al almacenarlo y son eficaces activadores del blanqueo. Por último, el ATC es multifuncional, ya que el citrato liberado en la reacción de perhidrólisis puede funcionar como mejorador. Alternativamente, el sistema de blanqueo puede comprender peroxiácidos de, por ejemplo, el tipo amida, imida o sulfona. El sistema de blanqueo también puede comprender perácidos tales como ácido 6-(ftalimido)peroxihexanoico (PAP). El sistema de blanqueo también puede incluir un catalizador de blanqueo. En algunas formas de realización, el componente blanqueador puede ser un catalizador orgánico seleccionado del grupo que consiste en catalizadores orgánicos que tienen las siguientes fórmulas:

( ¡ )

(ii)

(iii) y sus mezclas;

en donde cada R1 es independientemente un grupo alquilo ramificado que contiene de 9 a 24 carbonos o un grupo alquilo lineal que contiene de 11 a 24 carbonos, preferentemente cada R1 es independientemente un grupo alquilo ramificado que contiene de 9 a 18 carbonos o un grupo alquilo lineal que contiene de 11 a 18 carbonos, más preferentemente cada R1 es independientemente seleccionado del grupo que consiste en 2-propilheptilo, 2-butiloctilo, 2-pentilnonilo, 2-hexildecilo, dodecilo, tetradecilo, hexadecilo, octadecilo, isononilo, isodecilo, isotridecilo e isopentadecilo. Otros sistemas blanqueadores de ejemplo son descritos, por ejemplo, en WO2007/087258, WO2007/087244, WO2007/087259, EP1867708 (Vitamina K) y WO2007/087242. Los fotoblanqueadores adecuados pueden ser, por ejemplo, zinc sulfonado o ftalocianinas de aluminio.

Preferentemente el componente blanqueador comprende una fuente de perácido además del catalizador del blanqueo, particularmente el catalizador orgánico del blanqueo.

En una forma de realización preferida, las composiciones para el lavado de vajilla, en particular las composiciones para el lavado de vajilla a máquina, especialmente las composiciones sólidas para el lavado de vajilla automático pueden contener además catalizadores del blanqueo. Los catalizadores del blanqueo utilizables incluyen, entre otros, el grupo de las sales de metales de transición que potencian el blanqueo y los complejos de metales de transición, preferentemente los complejos de Mn, Fe, Co, Ru o Mo, particularmente preferentemente del grupo de las sales de manganeso y/o cobalto y/o complejos, en particular los complejos de cobalto (amina), los complejos de cobalto (acetato), los complejos de cobalto (carbonilo), los cloruros de cobalto o manganeso, sulfato de manganeso y los complejos de manganeso con 1,4,7- trimetil-1,4,7-triazaciclonano (Mn3-TACN) o 1,2,4,7-tetrametil-1,4,7-triazaciclononano (Mn4-TACN).

Se prefieren las composiciones de limpieza, preferentemente las composiciones para el lavado de vajilla, en particular las composiciones para el lavado de vajilla a máquina que contienen del 0,001 al 1 % en peso, preferentemente del 0,01 al 0,1 % en peso de catalizador del blanqueo, preferentemente un complejo de Mn, en particular un complejo de manganeso con 1,4,7-trimetil-1,4,7-triazaciclononano (Mn3-TACN) o 1,2,4,7-tetrametil-1,4,7-triazaciclononano (Mn4-TACN).

La fuente de perácido puede seleccionarse entre (a) perácido preformado; (b) sal percarbonato, perborato o persulfato (fuente de peróxido de hidrógeno) preferentemente en combinación con un activador del blanqueo; y (c) enzima perhidrolasa y un éster para formar perácido in situ en presencia de agua en una etapa de tratamiento de lavado de vajilla.

Polímeros

El detergente puede contener 0-10% en peso, tal como 0,5-5%, 2-5%, 0,5-2% o 0,2-1% de un polímero. Puede utilizarse cualquier polímero conocido en la técnica para el uso en detergentes. El polímero puede funcionar como comejorador según lo mencionado anteriormente, o puede proporcionar antirredeposición, protección de fibras, liberación de suciedad, inhibición de transferencia de tintes, limpieza de grasa y/o propiedades antiespumantes. Algunos polímeros pueden tener más de una de las propiedades mencionadas anteriormente y/o más de uno de los motivos mencionados a continuación. Los polímeros de ejemplo incluyen (carboximetil)celulosa (CMC), alcohol de polivinilo (PVA), poli(vinilpirrolidona) (PVP), poli(etilenglicol) u óxido de polietileno (PEG), poli(etilenimina) etoxilada carboximetilinulina (CMI), y policarboxilatos tales como PAA, PAA/^pM^a, ácido poli-aspártico, y copolímeros de laurilmetacrilato/ácido acrílico, CMC hidrófobamente modificada (HM-CMC) y siliconas, copolímeros de ácido tereftálico y glicoles oligoméricos, copolímeros de tereftalato de polietileno y tereftalato de polioxieteno (PET-POET), PVP, poli(vinilimidazol) (PVI), N-óxido de polivinilpiridina (PVPO o PVPNO) y polivinilpirrolidona-vinilimidazol (PVPVI). Otros polímeros de ejemplo incluyen policarboxilatos sulfonados, óxido de polietileno y óxido de polipropileno (PEOPPO) y etoxisulfato dicuaternio. Otros polímeros de ejemplo son descritos en, por ejemplo, WO 2006/130575. También se contemplan las sales de los polímeros mencionados anteriormente.

En una forma de realización preferida, la composición de la invención comprende además uno o más policarboxilatos copoliméricos, en particular aquellos de ácido acrílico con ácido metacrílico, y de ácido acrílico o ácido metacrílico con ácido maleico.

Los policarboxilatos (co)poliméricos pueden utilizarse como un polvo o como solución acuosa. El contenido de policarboxilatos (co)poliméricos en los agentes de limpieza, preferentemente en los agentes de lavado de vajilla, en particular los agentes de lavado de vajilla a máquina, es preferentemente del 0,5 al 20% en peso, y en particular del 3 al 10% en peso.

Para mejorar la solubilidad en agua, los polímeros también pueden contener ácidos alilsulfónicos, tales como ácido aliloxibencensulfónico y ácido metalilsulfónico, como monómero. Otros copolímeros preferidos son aquellos que contienen acroleína y ácido acrílico/sales de ácido acrílico o acroleína y vinilacetato como monómeros.

Además, pueden utilizarse todos los compuestos que son capaces de formar complejos con iones alcalinotérreos como mejoradores.

En una forma de realización de la invención más preferida, la composición de limpieza y detergente para el lavado de vajilla de la invención comprende además un copolímero que contiene al menos un monómero que contiene ácido sulfónico, un llamado sulfo polímero.

La cantidad en peso del sulfo polímero en el peso total del detergente o agente de limpieza producido de acuerdo con la invención es preferentemente del 0,1 al 20% en peso, en particular del 0,5 al 18% en peso, particularmente preferentemente del 1,0 al 15% en peso, en particular del 4 al 14% en peso, particularmente del 6 al 12% en peso.

Las soluciones acuosas del al menos un sulfo polímero típicamente contienen del 20 al 70% en peso, en particular del 30 al 50% en peso, preferentemente aproximadamente del 35 al 40% en peso de sulfo polímero(s).

Un copolímero de polisulfonato, opcionalmente un copolímero de polisulfonato hidrófobamente modificado, se utiliza preferentemente como el sulfo polímero. Los copolímeros pueden contener dos, tres, cuatro o más unidades monoméricas diferentes.

Los copolímeros de polisulfonato preferidos contienen al menos un monómero del grupo de ácidos carboxílicos insaturados, además de los monómero(s) que contiene(n) grupos ácido sulfónico. Los ácidos carboxílicos insaturados de la fórmula R1(R2)C=C(R3)COOH, en la que R1 a R3 independientemente entre sí representan -H, -CH3, un radical alquilo saturado lineal o ramificado con 2 a 12 átomos de carbono, un radical alquenilo mono- o poliinsaturado lineal o ramificado con 2 a 12 átomos de carbono, radicales alquilo o alquenilo sustituido con -NH2, -OH o -COOH según lo definido anteriormente, o que representan -COOH o -COOR4, donde R4 es un radical hidrocarburo lineal o ramificado, saturado o insaturado con 1 a 12 átomos de carbono son utilizados particularmente preferentemente como ácido(s) carboxílico(s) insaturado(s).

Los ácidos carboxílicos insaturados particularmente preferidos incluyen ácido acrílico, ácido metacrílico, ácido etacrílico, ácido a-cloroacrílico, ácido a-cianoacrílico, ácido crotónico, ácido a-fenilacrílico, ácido maleico, anhídrido maleico, ácido fumárico, ácido itacónico, ácido citracónico, ácido metilenmalónico, ácido sórbico, ácido cinámico o mezclas de los mismos. Por supuesto pueden utilizarse también los ácidos dicarboxílicos insaturados.

Los monómeros preferidos que contienen grupos ácido sulfónico son aquellos de la fórmula R5(R6)C=C(R7)-X-SO3H, donde R5 a R7 independientemente entre sí representan -H, -CH3, un radical alquilo saturado, lineal o ramificado con 2 a 12 átomos de carbono, un radical alquenilo mono- o poliinsaturado, lineal o ramificado con 2 a 12 átomos de carbono, radicales alquilo o alquenilo sustituido con -NH2, -OH o -COOH o -COOH o -COOR4, donde R4 es un radical hidrocarburo lineal o ramificado, saturado o insaturado con 1 a 12 átomos de carbono, y X representa un grupo espaciador, que está opcionalmente presente y se selecciona de -(CH2)n- donde n = 0 a 4, -COO-(CH2)k- donde k = 1 a 6, -C(O)-NH-C(CH3)2-, -C(O)-NHC(CH3)2-CH2- y -C(O)-NH-CH(CH3)-CH2-.

Entre estos monómeros, los preferidos son los de las fórmulas

H2C=CH-X-SO3H

H2C=C(CH3)-X-SO3H

HO3S-X-(R6)C=C(R7)-X-SO3H,

donde R6 y R7, independientemente entre sí, se seleccionan de -H, -CH3, -CH2CH3, - CH2CH2CH3 y -CH(CH3)2, y X representa un grupo espaciador, el cual está opcionalmente presente y se selecciona de -(CH2)n- donde n = 0 a 4, -COO-(CH2)k-donde k = 1 a 6, -C(O)-NH-C(CH3)2-, - C(O)-NH-C(CH3)2-CH2- y -C(O)-NH-CH(CH3)-CH2-.

Los monómeros particularmente preferidos que contienen grupos ácido sulfónico incluyen ácido 1-acrilamido-1-propansulfónico, ácido 2-acrilamido-2-propansulfónico, ácido 2-acrilamido-2-metil-1-propansulfónico, ácido 2-metacrilamido-2-metil-1- propansulfónico, ácido 3-metacrilamido-2-hidroxipropansulfónico, ácido alilsulfónico, ácido metalilsulfónico, ácido aliloxibencensulfónico, ácido metaliloxibencensulfónico, ácido 2-hidroxi-3-(2-propeniloxi)propansulfónico, ácido 2-metil-2-propen-1-sulfónico, ácido estirensulfónico, ácido vinilsulfónico, 3-sulfopropilacrilato, 3-sulfopropilmetacrilato, sulfometacrilamida, sulfometilmetacrilamida así como las mezclas de los ácidos mencionados anteriormente o sus sales solubles en agua.

Los grupos ácido sulfónico en los polímeros pueden estar presentes total o parcialmente en forma neutralizada, es decir, en algunos o todos los grupos ácido sulfónico, el átomo de hidrógeno ácido en el grupo ácido sulfónico puede ser reemplazado por iones metálicos, preferentemente iones de metales alcalinos y en particular iones de sodio. El uso de copolímeros que contienen grupos ácido sulfónico parcial o totalmente neutralizados es preferido de acuerdo con la invención.

La distribución monomérica en los copolímeros preferidos para utilizar de acuerdo con la invención es preferentemente del 5% al 95% en peso en copolímeros que contienen solamente monómeros que contienen grupos ácido carboxílico y monómeros que contienen grupos ácido sulfónico, particularmente preferentemente la cantidad del monómero que contiene grupos ácido sulfónico es del 50% al 90% en peso y la cantidad del monómero que contiene grupos ácidos carboxílico es del 10% al 50% en peso y los monómeros de la presente se seleccionan preferentemente de aquellos enumerados anteriormente.

El peso molecular de los sulfo copolímeros preferidos para utilizar de acuerdo con la invención puede variar para ajustar las propiedades de los polímeros al propósito deseado pretendido. Las composiciones preferidas para la limpieza se caracterizan porque los copolímeros tienen pesos moleculares de 2000 a 200,000 gmol-1, preferentemente de 4000 a 25.000 gmoM y en particular de 5000 a 15,000 gmoM.

En otra forma de realización preferida, los copolímeros comprenden además al menos un monómero no iónico, preferentemente hidrófobo, además del monómero que contiene grupos carboxilo y el monómero que contiene grupos ácido sulfónico. El rendimiento de enjuague de los detergentes de lavavajillas automático de acuerdo con la invención ha sido mejorado mediante el uso de estos polímeros en particular.

Los copolímeros aniónicos que comprenden monómeros que contienen grupos ácido carboxílico, monómeros que contienen grupos ácido sulfónico y monómeros no iónicos, en particular monómeros hidrófobos, son por lo tanto preferidos de acuerdo con la invención.

Preferentemente, los monómeros de la fórmula general R1(R2)C=C(R3)-X-R4, en la que R1 a R3 independientemente entre sí representan -H, -CH3 o -C2H5, X representan grupo espaciador que está opcionalmente presente y se selecciona de -CH2-, -C(O)O- y -C(O)-NH-, y R4 representa un radical alquilo saturado, lineal o ramificado, con 2 a 22 átomos de carbono o un radical insaturado, preferentemente aromático con 6 a 22 átomos de carbono, se utilizan preferentemente como monómeros no iónicos.

Los monómeros no iónicos particularmente preferidos incluyen buteno, isobuteno, penteno, 3-metilbuteno, 2-metilbuteno, ciclopenteno, hexeno, 1-hexeno, 2-metil-1-penteno, 3-metil-1-penteno, ciclohexeno, metilciclopenteno, ciclohepteno, metilciclohexeno, 2,4,4-trimetil-1-penteno, 2,4,4-trimetil-2-penteno, 2,3-dimetil-1-hexeno, 2,4- dimetil-1-hexeno, 2,5-dimetil-1-hexeno, 3,5-dimetil-1-hexeno, 4,4-dimetil-1-hexano, etilciclohexino, 1-octeno, a-olefinas con 10 o más átomos de carbono como, por ejemplo, 1-deceno, 1-dodeceno, 1-hexadeceno, 1-octadeceno y a-olefina C22, 2-estireno, a-metilestireno, 3-metilestireno, 4-propilestireno, 4-ciclohexilestireno, 4-dodecilestireno, 2-etil-4-bencilestireno, 1-vinilnaftaleno, 2-vinilnaftaleno, éster metílico de ácido acrílico, éster etílico de ácido acrílico, éster propílico de ácido acrílico, éster butílico de ácido acrílico, éster pentílico de ácido acrílico, éster hexílico de ácido acrílico, éster metílico de ácido metacrílico, N-(metil)acrilamida, éster 2-etilhexílico de ácido acrílico, éster 2-etilhexílico de ácido metacrílico, N-(2-etilhexil)acrilamida, éster octílico de ácido acrílico, éster octílico de ácido metacrílico, N-(octil)acrilamida, éster laurílico de ácido acrílico, éster laurílico de ácido metacrílico, N-(lauril)acrilamida, éster estearílico de ácido acrílico, éster estearílico de ácido metacrílico, N-(estearil)acrilamida, éster behenílico de ácido acrílico, éster behenílico de ácido metacrílico y N-(behenil)acrilamida o las mezclas de los mismos.

La distribución monomérica de los copolímeros hidrófobamente modificados preferidos para utilizar de acuerdo con la invención preferentemente asciende al 5% al 80% en peso, con respecto a los monómeros que contienen grupos ácido sulfónico, el monómero hidrófobo y el monómero que contiene grupos ácido carboxílico; la cantidad del monómero que contiene grupos ácido sulfónico y del monómero hidrófobo es particularmente preferentemente del 5% al 30% en peso cada uno, y la cantidad del monómero que contiene grupos ácido carboxílico es del 60% al 80% en peso; los monómeros aquí se seleccionan preferentemente de aquellos enumerados anteriormente.

Sorprendentemente, se ha descubierto que el o los polipéptidos de la invención en combinación con un copolímero que comprende monómeros que contienen grupos ácido sulfónico (Sulfopolímero) en una composición de lavado de vajilla, preferentemente una composición para el lavado de vajilla automático tiene diversas ventajas.

En primer lugar, las composiciones no sólo limpian la vajilla sorprendentemente mejor, sino que muestran menos formación de película en los vasos, muestran menos acumulación de cal, exhiben un excelente brillo después del enjuague y muestran menos depósitos en la vajilla. Estas composiciones también reducen la acumulación de suciedad mezclada en el interior del lavavajillas, especialmente en el colador.

Además, las composiciones contienen agentes estabilizadores de enzimas específicos. Se ha descubierto que estas combinaciones que comprenden polipéptido(s) de la invención en combinación con un copolímero que comprende monómeros que contienen grupos ácido sulfónico (Sulfopolímero) muestran un mejor rendimiento de limpieza en suciedad relacionada con enzimas. Esto se debe, sin estar limitados por la teoría, a una mejor estabilización de las enzimas en la composición. Esto se puede observar especialmente en la composición para el lavado de vajilla que está en forma de líquido o gel.

Materiales auxiliares

Puede utilizarse además cualquier componente detergente conocido en la técnica para utilizar en el lavado de vajilla, especialmente en los detergentes de limpieza ADW. Otros componentes de detergente opcionales incluyen agentes anticorrosión, agentes antirredeposición de suciedad, bactericidas, aglutinantes, inhibidores de corrosión e inhibidores de la corrosión del vidrio, desintegrantes/agentes de desintegración, tintes, estabilizadores enzimáticos (incluido ácido bórico, boratos, CMC y/o polioles tal como propilenglicol), rellenos/auxiliares del procesamiento, potenciadores de espuma, reguladores de espuma (espuma), perfumes, agentes de suspensión de suciedad, supresores de espuma, inhibidores de la decoloración, ya sea solos o en combinación. Puede utilizarse cualquier ingrediente conocido en la técnica para el uso en detergentes de limpieza de superficies duras/ADW/lavado de ropa sucia. La elección de tales ingredientes está dentro de la experiencia del experto.

Polímeros de liberación de suciedad

Las composiciones detergentes de la presente invención también pueden incluir uno o más polímeros de liberación de suciedad que ayudar a eliminar la suciedad de los tejidos tales como los tejidos de algodón y poliéster, en particular la eliminación de suciedad hidrófoba de los tejidos de poliéster. Los polímeros de liberación de suciedad pueden ser, por ejemplo, polímeros no iónicos o aniónicos con base de tereftalato, polvinilcaprolactama y copolímeros relacionados, copolímeros de injerto de vinilo, poliamidas de poliéster. Otro tipo de polímeros de liberación de suciedad son polímeros anfífilos de limpieza de grasa alcoxilados que comprenden una estructura central y una pluralidad de grupos alcoxilato unidos a esa estructura central. La estructura central puede comprender una estructura de polialquilenimina o una estructura de polialcanolamina, como se describe detalladamente en WO 2009/087523 (incorporada a la presente como referencia). Además, los copolímeros de injerto aleatorios son polímeros adecuados para la liberación de suciedad. Los copolímeros de injerto adecuados se describen con más detalle en WO 2007/138054, WO 2006/108856 y WO 2006/113314 (que se incorporan a la presente como referencia). Otros polímeros de liberación de suciedad son estructuras de polisacáridos sustituidas, especialmente estructuras celulósicas sustituidas, tales como los derivados de celulosa modificada, tales como los descritos en EP 1867808 o WO 2003/040279 (ambos documentos son incorporados a la presente como referencia). Los polímeros celulósicos adecuados incluyen celulosa, éteres de celulosa, ésteres de celulosa, amidas de celulosa y sus mezclas. Los polímeros celulósicos adecuados incluyen celulosa modificada aniónicamente, celulosa modificada no iónicamente, celulosa modificada catiónicamente, celulosa modificada zwitteriónicamente, y las mezclas de las mismas. Los polímeros celulósicos adecuados incluyen la metilcelulosa, carboxi-metilcelulosa, celulosa etílica, hidroxil-etilcelulosa, hidroxil-propil-metilcelulosa, éster carboxi-metilcelulosa, y sus mezclas.

Agentes antirredeposición

Las composiciones detergentes de la presente invención pueden incluir además uno o más agentes antirredeposición tales como carboximetilcelulosa (CMC), alcohol de polivinilo (PVA), polivinilpirrolidona (PVP), polioxietileno y/o polietilenglicol (PEG), homopolímeros de ácido acrílico, copolímeros de ácido acrílico y ácido maleico, y polietileniminas etoxiladas. Los polímeros a base de celulosa descritos en la sección polímeros de liberación de suciedad anterior también pueden funcionar como agentes antirredeposición.

Modificadores de reología

Las composiciones detergentes de la presente invención también pueden incluir uno o más modificadores de reología, estructurantes o espesantes, diferentes de los agentes reductores de la viscosidad. Los modificadores de reología se seleccionan del grupo que consiste en materiales hidroxifuncionales, cristalinos no poliméricos, modificadores de reología poliméricos que imparten características de adelgazamiento por cizallamiento a la matriz líquida acuosa de una composición detergente líquida. La reología y la viscosidad del detergente se pueden modificar y ajustar mediante métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, como se muestra en EP 2169040.

Otros materiales auxiliares adecuados incluyen, entre otros, bactericidas, aglutinantes, portadores, tintes, estabilizadores de enzimas, rellenos, reguladores de espuma, hidrótropos, perfumes, pigmentos, supresores de espuma, disolventes, y estructurantes para detergentes líquidos y/o agentes elastizadores de estructuras.

Método de lavado

Las composiciones detergentes de la presente invención son idealmente adecuadas para procesos de lavado de vajilla. La solución tiene preferentemente un pH de aproximadamente 5,5 a aproximadamente 8, más preferentemente un pH seleccionado en el rango de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 13,5, o en el rango de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 12,5, o en el rango de aproximadamente 8,5 a aproximadamente 11,5, o en el rango de aproximadamente 9,5 a aproximadamente 10,5, o un pH de 7,5 o superior.

Una forma de realización preferida se refiere a un método de limpieza, comprendiendo el método las etapas de: poner en contacto un objeto con una composición de limpieza de pH elevado (por ejemplo pH 7,5 o superior) que comprende una beta-glucanasa de la invención en condiciones adecuadas para limpiar el objeto. En una forma de realización preferida, la composición de limpieza se utiliza en un proceso de lavado de vajilla.

Aún otra forma de realización se refiere a un método para quitar manchas de tejido o vajilla que comprende poner en contacto la vajilla con una composición de limpieza (por ejemplo pH 6,0 o superior), preferentemente una composición de limpieza de pH elevado (por ejemplo pH 7,5 o superior) que comprende una beta-glucanasa de la invención en condiciones adecuadas para limpiar el objeto.

En otra forma de realización, la composición de limpieza, preferentemente la composición de limpieza a pH elevado de la presente invención es adecuada para utilizar en aplicaciones de lavado de vajilla líquidas. Por consiguiente, la presente invención incluye un método para lavar una superficie dura tal como vajilla. El método comprende las etapas de poner en contacto la vajilla que se va a limpiar con una solución que comprende la composición para lavar vajilla, preferentemente una composición de limpieza con pH elevado de acuerdo con la invención. La superficie dura puede comprender cualquier vajilla tal como vajilla, cubertería, cerámica, plásticos tales como melamina, metales, porcelana, vidrio, acrílicos. La solución tiene preferentemente un pH de 6,5, por ejemplo 7,5 o superior, por ejemplo, de aproximadamente 9 a aproximadamente 13,5.

Las composiciones pueden ser empleadas en concentraciones de aproximadamente 100 ppm, preferentemente 500 ppm a aproximadamente 15.000 ppm en solución. Las temperaturas del agua típicamente oscilan entre aproximadamente 5°C y aproximadamente 90°C, incluyendo aproximadamente 10°C, aproximadamente 15°C, aproximadamente 20°C, aproximadamente 25°C, aproximadamente 30°C, aproximadamente 35°C, aproximadamente 40°C, aproximadamente 45°C, aproximadamente 50°C, aproximadamente 55°C, aproximadamente 60°C, aproximadamente 65°C, aproximadamente 70°C y aproximadamente 75°C,

En formas de realización particulares, el método de lavado se lleva a cabo a un pH de aproximadamente 5,0 a aproximadamente 11,5, o en formas de realización alternativas, incluso de aproximadamente 6 a aproximadamente 10,5, tal como aproximadamente 5 a aproximadamente 11, aproximadamente 5 a aproximadamente 10, aproximadamente 5 a aproximadamente 9, aproximadamente 5 a aproximadamente 8, aproximadamente 5 a aproximadamente 7, aproximadamente 5,5 a aproximadamente 11, aproximadamente 5,5 a aproximadamente 10, aproximadamente 5,5 a aproximadamente 9, aproximadamente 5,5 a aproximadamente 8, aproximadamente 5,5. a aproximadamente 7, aproximadamente 6 a aproximadamente 11, aproximadamente 6 a aproximadamente 10, aproximadamente 6 a aproximadamente 9, aproximadamente 6 a aproximadamente 8, aproximadamente 6 a aproximadamente 7, aproximadamente 6,5 a aproximadamente 11, aproximadamente 6,5 a aproximadamente 10, aproximadamente 6,5 a aproximadamente 9, aproximadamente 6,5 a aproximadamente 8, aproximadamente 6,5 a aproximadamente 7, aproximadamente 7 a aproximadamente 11, aproximadamente 7 a aproximadamente 10, aproximadamente 7 a aproximadamente 9, o aproximadamente 7 a aproximadamente 8, preferentemente aproximadamente 5,5 a aproximadamente 9, y más preferentemente aproximadamente 6 a aproximadamente 8. En formas de realización preferidas, el método de lavado se lleva a cabo a un pH seleccionado en el rango de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 13,5, o en el rango de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 12,5, o en el rango de aproximadamente 8,5 a aproximadamente 11,5, o en el rango de aproximadamente 9,5 a aproximadamente 10,5, o un pH de 7,5 o superior.

En algunas formas de realización preferidas, las composiciones de limpieza de pH elevado proporcionadas en la presente son típicamente formuladas del tal modo que, durante el uso en operaciones acuosas de limpieza, el agua de lavado tiene un pH de aproximadamente 9 a aproximadamente 13,5, o en formas de realización alternativas, o de aproximadamente 10 a aproximadamente 13,5 incluso de aproximadamente 11 a aproximadamente 13,5. En algunas formas de realización preferidas, los productos líquidos para lavar la ropa sucia son formulados para tener un pH de aproximadamente 12 a aproximadamente 13,5. Las técnicas para controlar el pH a los niveles de uso recomendados incluyen el uso de amortiguadores, ácidos, álcalis, etc., y son bien conocidas por los expertos en la técnica. En el contexto de la presente invención, se utilizan álcalis para ajustar el pH a aproximadamente 9 a 13,5 preferentemente aproximadamente 10 a 13,5.

En formas de realización particulares, el método de lavado se lleva a cabo a un grado de dureza de aproximadamente 0°dH a aproximadamente 30°dH, tal como aproximadamente 1°dH, aproximadamente 2°dH, aproximadamente 3°dH, aproximadamente 4°dH, aproximadamente 5°dH, aproximadamente 6°dH, aproximadamente 7°dH, aproximadamente 8°dH, aproximadamente 9°dH, aproximadamente 10°dH, aproximadamente 11°dH, aproximadamente 12°dH, aproximadamente 13°dH, aproximadamente 14°dH, aproximadamente 15°dH, aproximadamente 16°dH, aproximadamente 17°dH, aproximadamente 18°dH, aproximadamente 19°dH, aproximadamente 20°dH, aproximadamente 21°dH, aproximadamente 22°dH, aproximadamente 23°dH, aproximadamente 24°dH, aproximadamente 25°dH, aproximadamente 26°dH, aproximadamente 27°dH, aproximadamente 28°dH, aproximadamente 29°dH,aproximadamente 30°dH. En condiciones de lavado europeas típicas, el grado de dureza es de aproximadamente 15°dH, en condiciones de lavado estadounidenses típicas de aproximadamente 6°dH y en condiciones de lavado asiáticas típicas de aproximadamente 3°dH.

La presente invención se refiere a un método para limpiar una vajilla o se refiere a una composición detergente que comprende una beta-glucanasa de la invención.

Una forma de realización preferida se refiere a un método de limpieza, comprendiendo dicho método las etapas de: poner en contacto un objeto con una composición de limpieza que comprende una beta-glucanasa de la invención en condiciones adecuadas para limpiar dicho objeto. En una forma de realización preferida, la composición de limpieza es una composición detergente y el proceso es un proceso de lavado de vajilla.

Usos a bajas temperaturas

Una forma de realización de la invención se refiere a un método para lavar la vajilla o para la limpieza de vajilla industrial que comprende poner en contacto una superficie que se va a limpiar con una beta-glucanasa de la invención, y en donde dicho lavado de vajilla, limpieza de vajilla industrial o institucional se lleva a cabo a una temperatura de aproximadamente 40°C o inferior. Una forma de realización de la invención se refiere al uso de un beta-glucanasa en un proceso de lavado o limpieza de vajilla en donde la temperatura en, el lavado de vajilla, limpieza de vajilla industrial es de aproximadamente 40°C o inferior.

En otra forma de realización, la invención se refiere al uso de una beta-glucanasa de acuerdo con la invención en un proceso de eliminación de beta-glucano, en donde la temperatura en el proceso de eliminación de beta-glucano es de aproximadamente 40°C o inferior.

En cada uno de los métodos y usos identificados anteriormente, la temperatura de lavado es de aproximadamente 40°C o inferior, tal como aproximadamente 39°C o inferior, tal como aproximadamente 38°C o inferior, tal como aproximadamente 37°C o inferior, tal como aproximadamente 36°C o inferior, tal como aproximadamente 35°C o inferior, tal como aproximadamente 34°C o inferior, tal como aproximadamente 33°C o inferior, tal como aproximadamente 32°C o inferior, tal como aproximadamente 31°C o inferior, tal como aproximadamente 30°C o inferior, tal como aproximadamente 29°C o inferior, tal como aproximadamente 28°C o inferior, tal como aproximadamente 27°C o inferior, tal como aproximadamente 26°C o inferior, tal como aproximadamente 25°C o inferior, tal como aproximadamente 24°C o inferior, tal como aproximadamente 23°C o inferior, tal como aproximadamente 22°C o inferior, tal como aproximadamente 21°C o inferior, tal como aproximadamente 20°C o inferior, tal como aproximadamente 19°C o inferior, tal como aproximadamente 18°C o inferior, tal como aproximadamente 17°C o inferior, tal como aproximadamente 16°C o inferior, tal como aproximadamente 15°C o inferior, tal como aproximadamente 14°C o inferior, tal como aproximadamente 13°C o inferior, tal como aproximadamente 12°C o inferior, tal como aproximadamente 11°C o inferior, tal como aproximadamente 10°C o inferior, tal como aproximadamente 9°C o inferior, tal como aproximadamente 8°C o inferior, tal como aproximadamente 7°C o inferior, tal como aproximadamente 6°C o inferior, tal como aproximadamente 5°C o inferior, tal como aproximadamente 4°C o inferior, tal como aproximadamente 3°C o inferior, tal como aproximadamente 2°C o inferior, tal como aproximadamente 1°C o inferior.

En otra forma de realización preferida, la temperatura de lavado está en el rango de aproximadamente 5-40°C, tal como aproximadamente 5-30°C, aproximadamente 5-20°C, aproximadamente 5-10°C, aproximadamente 10-40°C, aproximadamente 10-30°C, aproximadamente 10-20°C, aproximadamente 15-40°C, aproximadamente 15-30°C, aproximadamente 15-20°C, aproximadamente 20-40°C, aproximadamente 20-30°C, aproximadamente 25-40°C, aproximadamente 25-30°C, o aproximadamente 30-40°C. En formas de realización preferidas particulares, la temperatura de lavado es aproximadamente 20°C, aproximadamente 30°C, o aproximadamente 40°C.

Usos a altas temperaturas

Una forma de realización de la invención se refiere a un método para lavar la vajilla o para la limpieza de vajilla industrial que comprende poner en contacto una superficie que se va a limpiar con una beta-glucanasa de la invención, y en donde dicho lavado de vajilla, limpieza de vajilla industrial o institucional se lleva a cabo a una temperatura de aproximadamente 75°C o inferior. Una forma de realización de la invención se refiere al uso de un beta-glucanasa en el lavado de vajilla o en un proceso de limpieza de vajilla industrial en donde la temperatura en el lavado de vajilla, limpieza de vajilla industrial es de aproximadamente 70°C o inferior.

En otra forma de realización, la invención se refiere al uso de una beta-glucanasa de acuerdo con la invención en un proceso de eliminación de beta-glucano, en donde la temperatura en el proceso de eliminación de beta-glucano es de aproximadamente 65°C o inferior.

En cada uno de los métodos y usos identificados anteriormente, la temperatura de lavado es de aproximadamente 60°C o inferior, tal como aproximadamente 59°C o inferior, tal como aproximadamente 58°C o inferior, tal como aproximadamente 57°C o inferior, tal como aproximadamente 56°C o inferior, tal como aproximadamente 55°C o inferior, tal como aproximadamente 54°C o inferior, tal como aproximadamente 53°C o inferior, tal como aproximadamente 52°C o inferior, tal como aproximadamente 51°C o inferior, tal como aproximadamente 50°C o inferior, tal como aproximadamente 49°C o inferior, tal como aproximadamente 48°C o inferior, tal como aproximadamente 47°C o inferior, tal como aproximadamente 46°C o inferior, tal como aproximadamente 45°C o inferior, tal como aproximadamente 44°C o inferior, tal como aproximadamente 43°C o inferior, tal como aproximadamente 42°C o inferior, tal como aproximadamente 41°C o inferior.

En otra forma de realización preferida, la temperatura del lavado está en el rango de aproximadamente 41-90°C, tal como aproximadamente 41-80°C, aproximadamente 41-85°C, aproximadamente 41-80°C, aproximadamente 41-75°C, aproximadamente 41-70°C, aproximadamente 41-65°C, aproximadamente 41-60°C.

Métodos para reducir o prevenir la redeposición de suciedad utilizando polipéptido(s) o la composición detergente que comprende polipéptido(s) de la presente invención.

Una forma de realización de la invención es un método para reducir o prevenir la redeposición de suciedad utilizando una composición detergente que comprende polipéptido(s) de la invención.

En una forma de realización, la composición detergente comprende además uno o más componentes detergentes seleccionados del grupo que comprende tensioactivos, mejoradores, hidrótropos, sistemas de blanqueo, polímeros, materiales auxiliares, dispersantes, polímeros de liberación de suciedad o cualquier mezcla de los mismos. La composición detergente en donde dicha composición detergente o de limpieza es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición puede estar en forma de una barra, una tableta homogénea, una tableta que tiene dos o más capas, una bolsa que tiene uno o más compartimentos, conteniendo los compartimento(s) una o más fases diferentes, un polvo regular o compacto, un granulado, una pasta, un gel, o un líquido regular, compacto o concentrado, dos más líquidos y/o geles en una botella multicámara y se puede utilizar para el lavado de vajilla.

En otra forma de realización, la composición detergente en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende una o más enzimas adicionales seleccionadas del grupo que comprende proteasas, amilasas, lipasas, cutinasas, celulasas, endoglucanasas, xiloglucanasas, pectinasas, pectina liasas, xantanasas, peroxidasas, haloperoxigenasas, catalasas, mananasas, o cualquier mezcla de las mismas.

En una forma de realización adicional, la composición detergente en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, dicha composición comprende uno o más componentes detergentes seleccionados del grupo que comprende tensioactivos, mejoradores, hidrótropos, sistemas de blanqueo, polímeros, materiales auxiliares, dispersantes y polímeros de liberación de suciedad, o cualquier mezcla de los mismos y una o más enzimas adicionales seleccionadas del grupo que comprende proteasas, amilasas, lipasas, cutinasas, celulasas, endoglucanasas, xiloglucanasas, pectinasas, pectina liasas, xantanasas, peroxidasas, haloperoxigenasas, catalasas y mananasas, o cualquier mezcla de las mismas.

El método puede comprender las siguientes etapas:

(a) proporcionar un líquido de lavado disolviendo/mezclando la composición detergente en agua;

(b) lavar los objetos/ en el líquido de lavado;

(c) drenar el líquido de lavado y, opcionalmente, repetir el ciclo de lavado; y

(d) enjuagar y, opcionalmente, secar los objetos.

En una forma de realización preferida, el método puede comprender las siguientes etapas:

(1) proporcionar agua y enjuagar los objetos

(2) de manera opcional, drenar el agua y proporcionar agua fresca

(3) dosificar la composición detergente en el agua para formar un líquido de lavado

(4) agitar el líquido de lavado, lavando así los objetos, calentando opcionalmente el líquido

(5) drenar el líquido de lavado

(6) opcionalmente proporcionar agua fresca, enjuagar los objetos y drenar el líquido

(7) opcionalmente proporcionar agua fresca, enjuagar los objetos, y durante esta etapa dosificar un agente adicional opcional en el líquido, por ejemplo, un abrillantador, opcionalmente calentar el líquido, y luego drenar el líquido. (8) opcionalmente dejar que el líquido restante se evapore de los objetos.

Una forma de realización preferida de la invención es un método para reducir la redeposición de suciedad que utiliza una composición detergente en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición: un polipéptido con actividad beta-glucanasa, que se selecciona del grupo que consiste en:

Una forma de realización preferida de la invención es un método para reducir la redeposición de suciedad que utiliza un detergente en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición: un polipéptido con actividad beta-glucanasa, que se selecciona del grupo que consiste en:

(b) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene al menos 89% de identidad de secuencia con respecto a la secuencia que codifica el polipéptido maduro de la secuencia seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 6;

en donde dicha composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, que comprende además:

(i) una o más amilasas; y/o

(ii) una o más proteasas.

La presente invención se describe adicionalmente mediante los siguientes ejemplos los cuales no deben ser interpretados como una limitación del alcance de la invención.

EJEMPLOS

Las composiciones detergentes utilizadas en las secciones de ejemplo según lo descrito en la presente incluyeron lo siguiente:

Tabla C: Detergente modelo Z sin blanqueador:

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Ejemplo 1: Determinación de Actividad beta-glucanasa (Liquenasa):

Se utilizó un ensayo de beta-glucano de cebada-AZCL (beta-glucano covalentemente entrecruzado con tinte de azurina) para la detección de la actividad endo-glucanasa (actividad liquenasa).

Se suspendió beta-glucano de cebada-AZCL (75 mg) en 15 mL de detergente (Detergentes modelos A, X, Z con y sin blanqueador y se ajustó el pH, Modelo A ADW). A 1 mL de esta solución en tubos Eppendorf se añadieron 10 mL de enzima (0,33 mg de proteína enzimática/Litro), se incubó durante 15 min a 40°C agitando al mismo tiempo a 1250 rpm en un termomezclador calentado previamente y se centrifugó durante 2 minutos a 13200 rpm, se diluyó 5 veces con un 5% de Triton-X-100 que incluía 10 pM de CaCb y se transfirieron 250 pL de la solución a una placa de microtítulo y se midió la absorbancia de la muestra a 590 nm.

Ejemplo 2: Clonación, expresión y purificación de GH16 endo- p-1,3-1,4-glucanasa del género Bacillus:

Las beta-glucanasas derivaron de cepas bacterianas obtenidas de la recolección alemana de microorganismos y cultivos celulares (DSMZ) o mediante aislamiento de muestras ambientales mediante técnicas microbiológicas clásicas de acuerdo con la Tabla 1.

Se purificó el ADN cromosómico de cultivos puros de las cepas individuales y se sometió a secuenciación completa del genoma utilizando la tecnología Illumina. La secuencia genómica ensamblada y el análisis posterior de las secuencias genéticas de subunidades ribosomales 16S confirmaron la identidad de las cepas.

Se amplificaron los genes individuales que codifican p-1,3-1,4-glucanasas por PCR y se fusionaron con elementos reguladores y regiones de homología para recombinación en el genoma de B. subtilis.

La construcción de integración lineal era un producto de fusión SOE-PCR (Horton, R.M., Hunt, H.D., Ho, S.N., Pullen, J.K. y Pease, L.R. (1989) Engineering hybrid genes without the use of restriction enzymes, gene splicing by overlap extension Gene 77: 61-68) hecho por fusión del gen entre dos regiones cromosómicas de Bacillus subtilis junto con promotores fuertes y un marcador de resistencia al cloranfenicol. El método de SOE PCR también se describe en la solicitud de patente WO 2003095658.

El gen se expresó bajo el control de un sistema promotor triple (según lo descrito en WO 99/43835), que consistía en los promotores del gen de alfa-amilasa de Bacillus licheniformis (amyL), el gen de alfa-amilasa de Bacillus amyloliquefaciens (amyQ), y el promotor crylIIA de Bacillus thuringiensis que incluye la secuencia estabilizadora.

El gen se expresó con una señal de secreción de Bacillus clausii (que codifica la siguiente secuencia de aminoácidos: MKKPLGKlVASTALLISVAFSSSIASA (SEQ ID NO: 10) que reemplaza la señal de secreción natural. Además, la construcción de expresión da como resultado la adición de una etiqueta de purificación por afinidad de poli histidina N-terminal que consiste en la secuencia HHHHHHPR (SEQ ID NO: 11) a la proteína madura expresada.

Se transformó el producto de SOE-PCR en Bacillus subtilis y se integró en el cromosoma por recombinación homóloga en el locus de pectato liasa. Posteriormente, se cultivó un clon recombinante de Bacillus subtilis que contenía la construcción de expresión integrada en un cultivo líquido rico. Se centrifugó el caldo de cultivo (200003 g, 20 min) y se decantó cuidadosamente el sobrenadante del precipitado y se utilizó para la purificación de la enzima.

Purificación de enzimas recombinantes por cromatografía de afinidad de níquel

Se ajustó el pH del sobrenadante aclarado a pH 8, se filtró a través de un filtro de 0,2|^j M, y se aplicó el sobrenadante a una columna de excel HisTrap™ de 5 ml. Antes de la carga, la columna se había equilibrado en 5 volúmenes de columna (VC) de 50 mM de Tris/HCl pH 8. Para eliminar el material no unido, se lavó la columna con 8 VC de 50 mM de Tris/HCl pH 8, y se obtuvo la elución del objetivo con 50 mM de HEPES pH 7 10mM de imidazol. Se desaló la proteína eluida en una columna de desalinización HiPrep™ 26/10, equilibrada con 3 VC de 50 mM de HEPES pH 7 100 mM de NaCl. Este amortiguador también se utilizó para la elución del objetivo y el caudal fue de 10 ml/min. Se seleccionaron y agruparon las fracciones relevantes en función del cromatograma y del análisis SDS-PAGE.

Ejemplo 3: Ensayo AZCL con enzimas beta-glucanasas:

En este ejemplo se midió la actividad enzimática en el sustrato de beta-glucano de cebada-AZCL bajo diferentes pH, temperatura y detergente, modelando así diversas condiciones de lavado de ropa sucia. Las mediciones de la actividad enzimática se realizaron como se describe en el ejemplo 1, pero sin la dilución de 5 veces con Triton-X-100 al 5%, incluyendo 10 j M de CaCl2. Las comparaciones se realizaron con beta-glucanasa de Bacillus amyloliquefaciens y beta-glucanasa de Bacillus subtilis en el detergente modelo A, detergente modelo X, detergente modelo Z con blanqueador, detergente modelo Z sin blanqueador, detergente modelo Z con blanqueador con ajuste de pH y el modelo Z sin composiciones detergentes con ajuste de pH.

Ejemplo 4: Ensayo AZCL de actividad enzimática sobre sustrato AZCL-beta-cebada en detergente modelo de lavado automático de vajilla:

Las mediciones de la actividad enzimática se realizaron según lo descrito en el ejemplo 1. En este ejemplo se compararon las actividades enzimáticas de beta-glucanasas novedosas con las actividades enzimáticas de las betaglucanasas de Bacillus amyloliquefaciens y Bacillus subtilis en el detergente para ADW modelo A para el lavado automático de la vajilla. Los datos obtenidos se muestran en la Tabla 3 siguiente:

Ejemplo 5: Estabilidad de beta-glucanasa medida mediante TSA:

En este ejemplo se comparó la estabilidad de nuevas beta-glucanasas con las estabilidades de las beta-glucanasas de Bacillus amyloliquefaciens y Bacillus subtilis. Se realizaron los ensayos de cambio térmico (TSA) con muestras de enzimas diluidas a 0,3 mg/ml en amortiguadores de ensayo: ácido succínico 0,1 M, HEPES 0,1 M, CHES 0,1 M, CAPS 0,1 M, KCI 0,15 M, CaCl21 mM, Triton X100 al 0,01 %, con ajuste de pH a 5, 7,5 y 10 respectivamente. Tinte naranja SYPRO (Life Technologies S6650) diluido al 1013 en agua mQ. Se mezclaron 10 pl de muestra de enzimas diluidas 10 pl de amortiguador de ensayo 10 pl de tinte en pocillos de placas de ensayo TSA (placa multipocillo 96 LightCycler 480, blanca (Roche) y se cubrió con sello óptico (lámina de sellado LightCycler 480, Roche). El análisis de fusión de proteínas se realizó a 25-99 °C a 200 °C/h en una máquina Roche Lightcycler 480 II que ejecutaba el programa informático de Roche LightCycler 480 (versión 1.5.0 SP4). Todas las muestras se analizaron por duplicado. La lectura indicada es Tm, definida como el valor de punto medio de las curvas de fusión de proteínas. Los datos obtenidos se muestran en la siguiente Tabla 4.

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Ejemplo 6: Especificidad del sustrato de beta-glucanasa:

Se analizaron adicionalmente las especificidades de sustrato de beta-glucanasas utilizando diversos ensayos AZCL de Megazymes (AZCL-beta-glucano de cebada, AZCL-HE-celulosa, AZCL-pachyman y AZCL-curdlan (beta-glucano covalentemente entrecruzado con tinte de azurina). Se suspendió el sustrato-AZCL (75 mg) en 15 mL del detergente modelo X. A 1 mL de esta solución en tubos Eppendorf se añadieron 10 pL de enzima (0,33 mg de proteína enzimática/Litro), se incubó durante 15 min a 40°C agitando al mismo tiempo a 1250 rpm en un termomezclador calentado previamente y se centrifugó durante 2 minutos a 13200 rpm, se diluyó 5 veces con un 5% de Triton-X-100 que incluía CaCl2 10 mM y se transfirieron 250 mL de la solución a una placa de microtítulo y se midió la absorbancia de la muestra a 590 nm.

En este ejemplo se analizó la especificidad del sustrato de las 6 beta-glucanasas (es decir, de Bacillus akibai, Bacillus agaradhaerens, Bacillus mojavensis, Bacillus sp-62449, Bacillus amyloliquefaciens y Bacillus subtilis) en sustratos de AZCL-beta-glucano de cebada, AZCL-HE-Celulosa AZCL-pachyman y AZCL-curdlan. Los resultados obtenidos han confirmado además que las 6 beta-glucanasas ensayadas tienen actividad únicamente en el sustrato de beta-glucano de cebada-AZCL (es decir, reacción positiva en beta-glucano de cebada-AZCL como sustrato y reacciones negativas en AZCL-HE-Celulosa AZCL-pachyman y AZCLcurdlan como sustratos, Tabla 5 infra). Los datos muestran que las beta-glucanasas ensayadas sólo mostraron actividad en los beta-glucanos que contenían enlaces beta-1,3 y beta-1,4 y no en los beta-glucanos que consistían en beta-1,4-glucanos puros o en los beta-1,3 glucanos o en una mezcla de enlaces beta-1,3 y beta-1,6. Basado en los resultados mencionados anteriormente, las beta-glucanasas de la presente invención pueden ser distinguidas adicionalmente de las endo-celulasas dentro de la definición de beta-glucanasa como se utilizó en la presente, teniendo dichas endocelulasas actividad en enlaces p-1,4 entre unidades de D-glucosa de celulosa. Basándose en lo antedicho, se concluye que las beta-glucanasas de la presente invención tienen actividad enzimática de liqueninasa (EC 3.2.1.73).

Ejemplo 7: Efecto sinérgico de beta-glucanasas (liquenasas) de la invención cuando se combinan con una alfaamilasa:

I. Descripción del método de lavado de botella Wascator:

Se utilizó un método de lavado de botella Wascator para detectar el rendimiento de las enzimas. En una lavadora Wascator (FOM 71 Lab) se añadieron botellas (60 ml, DSE PP 70X35 Aseptisk, material Nro.: 216-2620, de VWR) con 25 mL de solución detergente que incluía enzima(s) y cuatro manchas (035KC crema de avena con chocolate de Equest, 2 cm de diámetro). Se incluyeron dos kg de lastre (paños de cocina, algodón) en la lavadora. Se lavaron en 25 l de agua durante 30 minutos a 40°C en detergentes modelos líquidos y en polvo para el lavado de ropa (detergente modelo A1 y detergente modelo X1, respectivamente) y en detergente modelo ADW (detergente modelo ADW A1). Después del lavado, las manchas se enjuagaron con agua del grifo dos veces (3 l) y se secaron durante la noche a temperatura ambiente en la cabina de secado (Electrolux, Intuition, EDD2400). Se midió la remisión con un espectrofotómetro (Macbeth Color-Eye 7000 Remissions) a 460 nm.

II. Resultados:

En este ejemplo, se estudiaron los resultados de la combinación de las liquenasas individuales con una alfa-amilasa (Stainzyme) (SEQ ID NO: 12) para investigar un posible efecto sinérgico entre las dos enzimas en diversos detergentes con diversos pH utilizando el método de lavado de botellas con Wascator. Se realizaron comparaciones con liquenasa de Bacillus amyloliquefaciens y liquenasa de Bacillus subtilis en el detergente modelo A1, el detergente modelo X1 y el detergente modelo ADW A1 utilizando 0,01 mg de proteína enzimática por litro de liquenasa y 0,05 mg de proteína enzimática por litro de Stainzyme a 40°C. Las condiciones detalladas utilizadas en este ejemplo se describen en las Tablas F-K y los resultados se muestran en las Tablas 6-8 a continuación.

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Se ajustó la dureza del agua a 12°dH mediante la adición de CaCl2, MgCl2, y NaHCO3 (Ca2+: Mg2+: HCO3- = 2:1:4,5) al sistema de prueba.

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Abreviaturas utilizadas en la presente invención:

REM = Valor medido

AREM = REM - Blanco

REM combinado = valor medido

AREM combinado = REM combinado - Blanco

AREM teórico = AREM (Amilasa) AREM (Liquenasa)

Efecto sinérgico REM = AREM combinado - AREM teórico

Tabla 6: Lavado de botellas en^ el Wascator en deter ente modelo A1 a 40°C 30 min H 77 :

Tabla 7: Lavado de botellas^ en el Wascator en deter ente modelo X1 a 40°C 30 min H 101:

Tabla 8. Lavado de botellas en el Wascator en deter ente modelo ADW A1 a 40°C 30 min H 102:

Ejemplo 8: Determinación del pH óptimo

Posteriormente, se determinó el pH óptimo de las 6 beta-glucanasas en el sustrato de 0,4% p/v de AZCL-glucano (cebada) en amortiguador Britton Robinson (ácido fosfórico 100mM, ácido acético 100mM, ácido bórico 100mM, Trinton X- 100 al 0,01%, KCI 100 mM, CaCl2 2mM) ajustado a pH 2-12 con NaOH. Se seleccionó una dilución enzimática que se esperaba encontrase en el extremo superior del intervalo de ensayo lineal para todos los valores de pH investigados. Se investigó el pH óptimo en el rango de pH 2-10, y para unas pocas muestras se incluyeron valores de pH más bajos y más altos para identificar positivamente el pH óptimo. Los resultados se muestran en esta Tabla 9.

Sobre la base de lo anterior se hicieron varias observaciones:

Se encontró que la beta-glucanasa de Bacillus amyloliquefaciens y Bacillus subtilis tenía un pH óptimo de 6,0, y en relación con esta actividad sólo entre 1-11% por ciento de actividad a pH 10,0. Se encontró que las nuevas betaglucanasas bacterianas tenían un pH óptimo que oscilaba entre pH 6-9, pero con una actividad relativa significativamente mayor a pH 10 que oscilaba entre 23-90% en comparación con las enzimas de Bacillus subtilis y Bacillus amyloliquefaciens. La beta-glucanasa GH16 de B. akibai tuvo un pH óptimo muy amplio.

Ejemplo 9: Efecto sinérgico de las liquenasas combinadas con alfa-amilasas:

I. Descripción del método de lavado de botellas en la máquina Wascator:

Se utilizó un método de lavado de botellas en la máquina Wascator para detectar el rendimiento de las enzimas. En una lavadora Wascator (FOM 71 Lab) se añadieron botellas (60 ml, DSE PP 70X35 Aseptisk, material Nro.: 216-2620, de VWR) con 25 mL de solución detergente que incluía enzima(s) y cuatro manchas (035KC crema de avena con chocolate de Warwick Equest Ltd, Unidad 55, Consett Business Park, Consett, Condado de Durham,DH86BN, Reino Unido, 2 cm de diámetro). Se incluyeron dos kg de lastre (paños de cocina, algodón) en la lavadora. Se lavaron en 25 l de agua durante 20 o 30 minutos a 40°C en detergentes modelos líquido y en polvo para el lavado de ropa (detergente modelo A y detergente modelo X, respectivamente) y en detergente modelo ADW (detergente modelo ADW A). Después del lavado, las manchas se enjuagaron con agua del grifo dos veces (3 l) y se secaron durante la noche a temperatura ambiente en la cabina de secado (Electrolux, Intuition, EDD2400). Se midió la remisión con un espectrofotómetro (Macbeth Color-Eye 7000 Remissions) a 460 nm.

II. Resultados:

En este ejemplo, se estudiaron los resultados de la combinación de las liquenasas individuales maduras de Liquenasa de Bacillus agaradhaerens (SEQ ID NO: 39, marcada con His, recombinante), Liquenasa de Bacillus akibai (SEQ ID NO: 38, marcada con His, recombinante), Liquenasa de Bacillus mojavensis (SEQ ID NO: 40, marcada con His, recombinante), Liquenasa de Bacillus sp-62449 (SEQ ID NO: 37, marcada con His, recombinante), Liquenasa de Bacillus amyloliquefaciens (SEQ ID NO: 32) y Liquenasa de Bacillus subtilis (SEQ ID NO: 33) con diferentes amilasas según lo expuesto más adelante para investigar un posible efecto sinérgico entre las dos enzimas en diversos detergentes con diversos pH utilizando el método de lavado de botellas con Wascator. Se realizaron comparaciones con liquenasa de Bacillus amyloliquefaciens y liquenasa de Bacillus subtilis en el detergente modelo A, el detergente modelo X y el detergente modelo ADW A utilizando una concentración de liquenasas de 0,01 mg de proteína enzimática por litro y una concentración de amilasa de 0,05 mg de proteína enzimática por litro a 40°C. Las condiciones detalladas se describen en las Tablas 10-15 y los resultados se muestran en las Tablas 16-47 a continuación.

Tabla 10: Condición ex erimental

continuación

Tabla 11: Deter ente modelo^ A

Se ajustó la dureza del agua a 15°dH mediante la adición de CaCl2, MgCl2, y NaHCO3 (Ca2+: Mg2+: HCO3- = 4:1:7,5) al sistema de prueba.

Tabla 12: Condición ex erimental

Tabla 13: Deter ente modelo X

Tabla 14: Condición ex erimental

T l 1: D r n m l A r ADW

Se ajustó la dureza del agua a 21°dH mediante la adición de CaCl2, MgCl2, y NaHCO3 (Ca2+: Mg2+: HCO3- = 4:1:10) al sistema de prueba.

Abreviaturas

REM = Valor medido

^A REM = REM - Blanco

REM combinado = valor medido

^A REM combinado = REM combinado - Blanco

^A REM teórico = ^A REM (Amilasa) ^A REM (Liquenasa)

Efecto sinérgico REM = ^A REM combinado - ^A REM teórico

Tabla 16. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo A a 40°C 30 min H 77

Tabla 17. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo A a 40°C 30 min H 77

Tabla 18. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo A a 40°C 30 min H 77

continuación

Tabla 19. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo A a 40°C 30 min H 77

Tabla 20. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo A a 40°C 20 min H 77

continuación

Tabla 21. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo A a 40°C 30 min H 77

Tabla 22. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo A a 40°C 30 min H 77

Tabla 23. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo A a 40°C 30 min H 77

continuación

Tabla 24. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo A a 40°C 30 min H 77

Tabla 25. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo A a 40°C 30 min H 77

T l 2. L v ll n l lv r W r n r n m l X 4 ° min H 1 1

°

continuación

°

T abla 29. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo X a 40°C 30 min H 101

continuación

Blanco

61,0

0,0

^—

^—T abla 30. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo X a 40°C 30 min H 101

T abla 31. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo X a 40°C 30 min H 101

T abla 32. Lavado de botellas en la lavadora^ Wascator en deter ente modelo X a 40°C 20 min H 101

continuación

T abla 33. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo X a 40°C 30 min H 101

T abla 34. Lavado de botellas en te lavadora Wascator en deter ente modelo X a 40°C 20 min H 101

continuación

T abla 35. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo X a 40°C 30 min H 101

T l . L v ll n l l v r W r n r n m l A r ADW 4 ° min H 1 2

continuación

T l 7. L v ll n l l v r W r n r n m l A r ADW 4 ° min H 1 2

°

continuación

T l . L v ll n l l v r W r n r n m l A r ADW 4 ° min H 1 2

T l 4. L v ll n l l v r W r n r n m l A r ADW 4 ° min H 1 2

T l 41. L v ll n l l v r W r n r n m l A r ADW 4 ° min H 1 2

continuación

°

T l 4. L v ll n l l v r W r n r n m l A r ADW 4 ° min H 1 2

Tabla 44. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en detergente modelo A para ADW a 40°C, 20 min (pH 10,2)

T l 4. L v ll n l l v r W r n r n m l A r ADW 4 ° min H 1 2

T l 4. L v ll n l l v r W r n r n m l A r ADW 4 ° 2 min H 1 2

continuación

T l 47. L v ll n l l v r W r n r n m l A r ADW 4 ° 2 min H 1 2

Ejemplo 10: Efecto sinérgico de las liquenasas combinadas con proteasas:

I. Descripción del método de lavado de botellas en la máquina Wascator:

Se utilizó un método de lavado de botellas en la máquina Wascator para detectar el rendimiento de las enzimas. En una lavadora Wascator (FOM 71 Lab) se añadieron botellas (60 ml, DSE PP 70X35 Aseptisk, material Nro.: 216-2620, de VWR) con 25 mL de solución detergente que incluía enzima(s) y cuatro manchas (C-H097- Cacao/copos de avena, del Center for Testmaterials BV (Centro de Materiales de Prueba), apartado de correos 120, 3133 KT Vlaardingen, Países Bajos, 2 cm de diámetro). Se incluyeron dos kg de lastre (paños de cocina, algodón) en la lavadora. Se lavaron en 25 L durante 15 min a 40°C en el detergente modelo para lavado de ropa (modelo X) y en detergente modelo ADW A para el lavado de vajilla automático. Después del lavado, las manchas se enjuagaron con agua del grifo dos veces (3 l) y se secaron durante la noche a temperatura ambiente en la cabina de secado (Electrolux, Intuition, EDD2400). Se midió la remisión con un espectrofotómetro (Macbeth Color-Eye 7000 Remissions) a 460 nm.

II. Resultados:

En este ejemplo, se estudiaron los resultados de la combinación de las liquenasas individuales maduras de Liquenasa de Bacillus agaradhaerens (SEQ ID NO: 39, marcada con His, recombinante), Liquenasa de Bacillus akibai (SEQ ID NO: 38, marcada con His, recombinante), Liquenasa de Bacillus mojavensis (SEQ ID NO: 40, marcada con His, recombinante), Liquenasa de Bacillus sp-62449 (SEQ ID NO: 37, marcada con His, recombinante), Liquenasa de Bacillus amyloliquefaciens (SEQ ID NO: 32) y Liquenasa de Bacillus subtilis (SEQ ID NO: 33) con una proteasa (Savinase, SEQ ID NO: 34) para investigar un posible efecto sinérgico entre las dos clases de enzimas en diversos detergentes utilizando el método de lavado de botellas con Wascator. Se realizaron comparaciones con liquenasa de Bacillus amyloliquefaciens y liquenasa de Bacillus subtilis en el detergente modelo X y en el detergente modelo ADW A utilizando una concentración de liquenasas de 0,01 mg de proteína enzimática por litro y una concentración de proteasa de 0,23 mg de proteína enzimática por litro a 40°C. Las condiciones detalladas se describen en las Tablas 48 y 49 y los resultados se muestran en las Tablas 50 y 51.

Tabla 48: Condición ex erimental

Tabla 49: Condición ex erimental

T abla 50. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo X a 40°C 15 min H 101

Tabla 51. Lavado de botellas en la lavadora Wascator en deter ente modelo A para ADW a 40°C, 15 min pH 10,2

Ejemplo 11: Lavado automático de vajilla de avena cocida con liquenasas

I. Lavavajillas automático

Se utilizaron lavavajillas automáticos (Miele, G 1223, GSL-2) para mostrar el rendimiento de las liquenasas en avena cocida.

II. Resultados:

Se analizó el rendimiento de lavado de vajilla a escala completa en avena cocida en el detergente modelo ADW A bajo las condiciones experimentales dadas en la Tabla 52.

Tabla 52. Condiciones ex erimentales:

Se preparó la suciedad mezclando avena molida (150g AXA Finvalsede Havregyn en una licuadora de inmersión "chopper), leche (300mL) y azúcar (50g) en un vaso de precipitados. Se calentó la mezcla hasta el punto de ebullición y se cocinó durante 2 minutos. Se añadió la suciedad sobre platos de porcelana (35 g) y se secó durante la noche a 40°C en un horno (Heraeus Instruments, Typ UT6200). Se enfriaron los platos hasta temperatura ambiente, se pesaron, y lavaron en un lavavajillas Miele (G 1223, GSL-2) durante 8 min (lavado principal) a 45°C con 50 g de suspensión de lastre IKW en detergente modelo ADW A, amilasa (que es la variante de SEQ ID NO:24 que tiene las alteraciones M9L R118K G149A G182T G186A D183* G184* N195F M202L T257I Y295F N299Y R320K M323T A339S E345R R458K; 0,5 mg de proteína enzimática/L) y proteasas (SEQ ID NO: 35; 3,7 mg de proteína enzimática/L, SEQ ID NO: 36; 5,9 mg de proteína enzimática/L) o el detergente modelo ADW A, amilasa (que es la variante de SEQ ID NO:24 que tiene las alteraciones M9L R118K G149A G182T G186A D183* G184* N195F M202L T257I Y295F N299Y R320K M323T A339S E345R R458K; 0,5 mg de proteína enzimática/L), proteasas (SEQ ID NO: 35; 3,7 mg de proteína enzimática/L, SEQ ID NO: 36; 5,9 mg de proteína enzimática/L) y liquenasa (Bacillus agaradhaerens (SEQ ID NO: 39, marcada con His, recombinante; 0,3 mg de proteína enzimática/L).

El efecto de la liquenasa sobre la avena cocida es claramente visible y ponderado. Los números medidos se muestran en la Tabla 53, así como el número calculado de suciedad que queda en los platos después del lavado.

Cálculos:

Peso de la suciedad que queda en los platos antes del lavado = Peso del plato y la suciedad antes del lavado - Peso del plato sin suciedad antes del lavado.

Peso de la suciedad que queda en los platos después del lavado = Peso del plato y la suciedad después del lavado • Peso del plato sin suciedad antes del lavado.

Tabla 53. Rendimiento de lavado en avena cocida:

Ejemplo 12: Limpieza en lavavajillas automático de avena cocida y quemada con liquenasas

I. Lavavajillas automático

Se utilizaron lavavajillas automáticos (Miele, G 1223, GSL-2) para mostrar el rendimiento de las liquenasas en avena cocida y quemada.

II. Resultados:

Se analizó el rendimiento de lavado de vajilla a escala completa en avena cocida y quemada en el detergente modelo ADW A bajo las condiciones experimentales dadas en la Tabla 54.

Tabla 54. Condiciones ex erimentales:

continuación

Lastre

50 g de suspensión de lastre IKW

Se preparó la suciedad mezclando avena molida (150g AXA Finvalsede Havregyn en una licuadora de inmersión "chopper), leche (300mL) y azúcar (50g) en un vaso de precipitados. Se calentó la mezcla hasta el punto de ebullición y se cocinó durante 2 minutos. Se añadió la suciedad sobre platos de acero (15 g) y se secó en un horno (Heraeus Instruments, Typ UT6200) durante 40 minutos a 140°C. Se enfriaron los platos, se pesaron, y lavaron en un lavavajillas Miele (G 1223, GSL-2) durante 8 min (lavado principal) a 45°C con 50 g de suspensión de lastre IKW en detergente modelo ADW A, amilasa (que es la variante de SEQ ID NO:24 que tiene las alteraciones M9L R118K G149A G182T G186A D183* G184* N195F M202L T257I Y295F N299Y R320K M323T A339S E345R R458K, 0,5 mg de proteína enzimática/L) y proteasas (SEQ ID NO: 35; 3,7 mg de proteína enzimática/L, SEQ ID NO: 36; 5,9 mg de proteína enzimática/L) o el detergente modelo ADW A, amilasa (que es la variante de SEQ ID NO:24 que tiene las alteraciones M9L R118K G149A G182T G186A D183* G184* N195F M202L T257I Y295F N299Y R320K M323T A339S E345R R458K; 0,5 mg de proteína enzimática/L), proteasas (SEQ ID NO: 35; 3,7 mg de proteína enzimática/L, SEQ ID NO: 36; 5,9 mg de proteína enzimática/L) y liquenasa (Bacillus agaradhaerens, SEQ ID NO: 39, marcada con His, recombinante; 0,3 mg de proteína enzimática/L). Después del lavado, se secaron los platos a temperatura ambiente y se pesaron.

Cálculos:

Peso de la suciedad que queda en los platos después del lavado = Peso del plato y la suciedad después del lavado -Peso del plato sin suciedad antes del lavado.

Se observa un efecto claro de la liquenasa sobre la avena cocida y quemada, y los números medidos se muestran en la Tabla 55, así como el número calculado de suciedad que queda en los platos después del lavado.

Tabla^ 55. Rendimiento de lavado en avena cocida uemada:

Ejemplo 13: Limpieza en lavavajillas automático de avena sin cocer con liquenasas

I. Lavavajillas automático

Se utilizaron lavavajillas automáticos (Miele, G 1223, GSL-2) para mostrar el rendimiento de las liquenasas en avena sin cocer.

II. Resultados:

Se analizó el rendimiento de lavado de vajilla a escala completa en avena sin cocer en el detergente modelo ADW A bajo las condiciones experimentales dadas en la Tabla 56.

Tabla 56. Condiciones ex erimentales:

continuación:

Se preparó la suciedad mezclando avena molida (150g AXA Finvalsede Havregyn en una licuadora de inmersión "chopper), leche (300mL) y azúcar (50g) en un vaso de precipitados. Se añadió la suciedad sobre platos de porcelana (35 g) y se secó durante la noche a 40°C en un horno (Heraeus Instruments, Typ UT6200). Se enfriaron los platos hasta temperatura ambiente, se pesaron, y lavaron en un lavavajillas Miele (G 1223, GSL-2) durante 8 min (lavado principal) a 45°C con 50 g de suspensión de lastre IKW en detergente modelo ADW A, amilasa (que es la variante de SEQ ID NO:24 que tiene las alteraciones M9L R118K G149A G182T G186A D183* G184* N195F M202L T257I Y295F N299Y R320K M323T A339S E345R R458K, 0,5 mg de proteína enzimática/L) y proteasas (SEQ ID NO: 35; 3,7 mg de proteína enzimática/L, SEQ ID NO: 36; 5,9 mg de proteína enzimática/L) o el detergente modelo ADW A, amilasa (que es la variante de SEQ ID NO:24 que tiene las alteraciones M9L R118K G149A G182T G186A D183* G184* N195F M202L T257I Y295F N299Y R320K M323T A339S E345R R458K; 0,5 mg de proteína enzimática/L), proteasas (SEQ ID NO: 35; 3,7 mg de proteína enzimática/L, SEQ ID NO: 36; 5,9 mg de proteína enzimática/L) y liquenasa (Bacillus agaradhaerens; SEQ ID NO: 39, marcada con His, recombinante; 0,3 mg de proteína enzimática/L). Después del lavado, se secaron los platos a temperatura ambiente y se pesaron.

El efecto de la liquenasa sobre la avena sin cocer es claramente visible y ponderado. Los números medidos se muestran en la Tabla 57, así como el número calculado de suciedad que queda en los platos después del lavado.

Cálculos:

Tabla 57. Rendimiento de lavado en avena sin cocer:

Ejemplo 14: Rendimiento de lavado y efecto antirredeposición de las liquenasas

I. Ensayo de lavado en el Mini medidor del grado de limpieza (MiniTOM)

El Mini medidor del grado de limpieza (MiniTOM) es un modelo de sistema de lavado a escala media que se puede aplicar para probar 16 condiciones de lavado diferentes simultáneamente. Un MiniTOM es básicamente un gran baño de agua a temperatura controlada con hasta 16 vasos de precipitados metálicos abiertos (300 ml) sumergidos en el mismo. Cada vaso de precipitados constituye un lavarropas pequeño de tipo carga superior y, durante un experimento, cada uno de ellos contendrá una solución de un sistema específico de detergente/enzima y los tejidos sucios y sin suciedad en los que se comprueba su rendimiento. El esfuerzo mecánico se logra mediante un brazo de agitación giratorio, que agita el líquido dentro de cada vaso de precipitados. Dado que los vasos de precipitados del MiniTOM no tienen tapa, es posible extraer muestras durante un experimento con el MiniTOM y realizar un ensayo para obtener información en línea durante el lavado.

El sistema de lavado modelo MiniTOM se utiliza principalmente en pruebas a escala media de detergentes y enzimas en condiciones de lavado de US o LA/AP. En un experimento con el MiniTOM, pueden variarse factores tales como la relación entre el lastre y la suciedad y la relación entre el tejido y el líquido de lavado. Por lo tanto, el MiniTOM proporciona la conexión entre los experimentos a pequeña escala, como AMSA y mini-lavado, y los experimentos a escala completa que requieren más tiempo en lavarropas de carga superior.

II. Resultados:

Se analizó la antirredeposición en el medidor del grado de limpieza mini (MiniTOM) por la liquenasa, Bacillus agaradhaerens (SEQ ID NO: 7), en el detergente modelo A bajo las condiciones experimentales indicadas en la Tabla 58.

Tabla 58: Condiciones ex erimentales:

Se analizó la antirredeposición (y el rendimiento de lavado) de la liquenasa, Bacillus agaradhaserens (SEQ ID NO: 7), según lo descrito a continuación.

Se prepararon las soluciones de lavado ajustando la dureza del agua a 15°dH (Ca2+:Mg2+:HCO3- = 4:1:7,5) mediante la adición de CaCb, MgCb y NAHCO3, añadiendo la cantidad deseada de detergente (3,33 g/L de detergente modelo A) y ajustando la temperatura a 40°C en los cubos. El detergente se disolvió durante la agitación magnética durante 10 minutos (la solución de lavado se utilizó entre 30 y 60 minutos después de la preparación). La temperatura y la rotación en el baño de agua del MiniTOM se fijaron en 40°C y 120 rpm, respectivamente. Cuando se ajustó la temperatura según los parámetros (la tolerancia es de /- 0,5 °C), se añadieron 100 ml de la solución de lavado a los vasos de precipitados de MiniTOM (300mL). Se añadieron las muestras (1 muestra de algodón de punto (circular, 2 cm de diámetro) y 12 C-H097 (circular, 2 cm de diámetro), liquenasa (Bacillus agaradhaerens (SEQ ID NO: 39, marcada con His, recombinante;), 0 o 0,3 mg de proteína enzimática/L) y amilasa (SEQ ID NO: 12, 0,2 mg de proteína enzimática/L) a los vasos de precipitados y se lavaron durante 20 minutos. Se enjuagaron las muestras en agua fría del grifo durante 5 minutos. Las muestras se clasificaron y secaron entre papel de filtro en un armario de secado sin calor durante la noche.

Se midió la antirredeposición (y rendimiento de lavado) como el brillo del color del tejido lavado expresado en valores de remisión (REM). Las mediciones de remisión se realizaron utilizando un espectrofotómetro Macbeth 7000 Color Eye. Se midió cada una de las muestras secas. Dado que existe el riesgo de interferencia del fondo, las muestras se colocaron sobre 2 capas de tela durante la medición de la remisión. La remisión se midió a 460 nm. El filtro UV no estaba incluido. Se calculó un resultado promedio de remisión para las muestras.

El efecto antirredeposición debido a la presencia de la liquenasa se muestra en la Tabla 59. En los vasos de precipitados sin la liquenasa presente, la suciedad liberada de la muestra sucia (C-H097) se vuelve a depositar en la muestra sin suciedad inicial. Cuando la liquenasa está presente en el líquido de lavado, se observa claramente un efecto antirredeposición.

Tabla 59. Efecto antirrede osición rendimiento de lavado de las li uenasas:

Ejemplo 15:

Rendimiento de limpieza en copos de avena:

Se mezclan intensamente 500 g de copos de avena, 167 g de azúcar y 1 l de leche semidesnatada (1,5 % de grasa). La mezcla se dejó sin agitar durante al menos 2 horas a temperatura ambiente. Posteriormente, 15 g (+/-0,2g) de esta preparación se reparten uniformemente sobre un plato (porcelana) en forma de círculo con un anillo metálico (radio 11 cm) y se deja secar durante la noche a 40°C.

Se analiza el rendimiento de limpieza en un lavavajillas automático Miele GSL, 21 °dH, 45 °C, 8 min de tiempo de espera y 55°C de temperatura de enjuague, con vajilla/cubertería sucia colocada en el interior (según el método IKW, Sofwjournal, 142, (06) 2016, S. 33-48) con 4 platos adicionales como se han preparado anteriormente colocados en el interior. Se midió el rendimiento de limpieza de la mezcla de pasta y almidón de acuerdo con IKW. Los resultados, también para los copos de avena, se documentan como promedios aritméticos, evaluación según IKW. Los valores más altos indicaron un mejor rendimiento de limpieza, las diferencias por encima de 1,0 se consideran significativas. Rendimiento de limpieza:

Se dosificó un producto líquido de dos componentes para lavavajillas (15 ml de cada composición A y B, Tabla 60, 61) al mismo tiempo en la cámara dosificadora del lavavajillas.

Tabla 60:

Tabla 61:

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición de limpieza o detergente, en donde dicha composición de limpieza o detergente es una composición para el lavado de vajilla, comprendiendo dicha composición un polipéptido que tiene actividad betaglucanasa, seleccionado del grupo que consiste en:

(a) un polipéptido que tiene al menos 89% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia SEQ ID NO: 7; y

(b) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene al menos 89% de identidad de secuencia con la secuencia que codifica el polipéptido maduro SEQ ID NO:6.

2. La composición de limpieza o detergente de la reivindicación 1, en donde dicho polipéptido tiene al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia SEQ ID NO:7.

3. La composición de limpieza o detergente de cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde el polipéptido maduro es los aminoácidos 1 a 222 de SEQ ID NO:7.

4. La composición de limpieza o detergente de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde dicha actividad betaglucanasa es actividad liqueninasa EC 3.2.1.73.

5. La composición de limpieza o detergente de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde dicha composición tiene un pH de 6,5 o superior, preferentemente de 7,0 o superior, más preferentemente de 7,5 o superior y opcionalmente comprende un agente blanqueador; preferentemente dicho pH está en el rango de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 13,5, más preferentemente dicho pH está en el rango de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 12,5, con máxima preferencia dicho pH está en el rango de aproximadamente 8,5 a aproximadamente 11,5, adicionalmente con máxima preferencia dicho pH está en el rango de aproximadamente 9,5 a aproximadamente 10,5.

6. La composición de limpieza o detergente de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, que comprende además:

i) uno o más componentes detergentes; y/o

ii) una o más enzimas adicionales.

7. La composición de limpieza o detergente de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, que comprende además un copolímero que contiene al menos un monómero que contiene ácido sulfónico, preferentemente en una cantidad del 0,1 al 20% en peso, en particular del 0,5 al 18% en peso, particularmente preferentemente del 1,0 al 15% en peso, en particular del 4 al 14% en peso, particularmente del 6 al 12% en peso.

8. Una composición de limpieza o detergente de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde dicha composición comprende dicho polipéptido en concentraciones de 0,00001 mg de proteína enzimática/g de composición a 100 mg de proteína enzimática/g de composición, preferentemente 0,0001 mg de proteína enzimática/g de composición a 50 mg de proteína enzimática/g de composición, más preferentemente 0,001 mg de proteína enzimática/g de composición a 20 mg de proteína enzimática/g de composición, se prefiere especialmente 0,01 mg de proteína enzimática/g de composición a 10 mg de proteína enzimática/g de composición.

9. La composición de limpieza o detergente de cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde dicha composición de limpieza o detergente comprende además:

(i) una o más amilasas; y/o

(ii) una o más proteasas.

10. La composición de limpieza o detergente de la reivindicación 9, en donde dicha amilasa es una alfa-amilasa.

11. La composición de limpieza o detergente de cualquiera de las reivindicaciones 9-10, en donde dicha alfa-amilasa se selecciona del grupo que consiste en:

(a) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO:13;

(b) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO:13, en donde el polipéptido comprende una sustitución en una o más de las posiciones: 15, 23, 105, 106, 124, 128, 133, 154, 156, 178, 179, 181, 188, 190, 197, 201, 202, 207, 208, 209, 211, 243, 264, 304, 305, 391, 408, y/o 444;

(c) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO:14;

(d) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con el polipéptido híbrido de SEQ ID NO:15; (e) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con el polipéptido híbrido de SEQ ID NO:15, en donde el polipéptido híbrido comprende una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las posiciones: 48, 49, 107, 156, 181, 190, 197, 201, 209 y/o 264;

(f) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO:16;

(g) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO:16, en donde el polipéptido comprende una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las posiciones: 181, 182, 183, 184, 195, 206, 212, 216 y/o 269;

(h) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO:18 o SEQ ID NO:19;

(i) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO:18 o SEQ ID NO:19,

en donde el polipéptido comprende una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las posiciones: 140, 183, 184195, 206, 243, 260, 304 y/o 476;

(j) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO:20;

(k) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO:21;

(l) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO:21, en donde el polipéptido comprende una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las posiciones: 176, 177, 178, 179, 190, 201, 207, 211 y/o 264;

(m) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO:22;

(n) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO:22, en donde el polipéptido comprende una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las posiciones: 87, 98, 125, 128, 131, 165, 178, 180, 181, 182, 183, 201, 202, 225, 243, 272, 282, 305, 309, 319, 320, 359, 444 y/o 475;

(o) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO:21, en donde el polipéptido comprende una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las posiciones: 28, 118, 174; 181, 182, 183, 184, 186, 189, 195, 202, 298, 299, 302, 303, 306, 310, 314; 320, 324, 345, 396, 400, 439, 444, 445, 446, 449, 458, 471 y/o 484; y

(p) un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO:12

(q) una variante de SEQ ID NO:23 que tiene alteraciones G182* D183*;

(r) una variante de SEQ ID NO:24 que tiene alteraciones H183* G184* I405L A421H A422P A428T;

(s) una variante de SEQ ID NO:24 que tiene alteraciones M9L R118K G149A G182T G186A D183* G184* N195F M202L T257I Y295F N299Y R320K M323T A339S E345R R458K;

(t) una variante de SEQ ID NO:24 que tiene alteraciones R178* G179* E187P 1203Y R458N T459S D460T G476K;

(u) una variante de SEQ ID NO:27 que tiene la alteración M202L;

(v) una variante de SEQ ID NO:28 que tiene alteraciones R180* S181* S243Q G475K;

(w) una variante de SEQ ID NO:29 que tiene alteraciones D183* G184* W140Y N195F I206Y Y243F E260G G304R G476K;

(x) una variante de SEQ ID NO:30 que tiene alteraciones H1* N54S V56T K72R G109A F113Q R116Q W167F Q172G A174S G184T N195F V206L K391A P473R G476K;

(y) una variante de SEQ ID NO:31 que tiene alteraciones M9L R118K G149A G182T G186A D183* G184* N195F T246V T257I Y295F N299Y R320K M323T A339S E345R R458K.

12. La composición de limpieza o detergente de cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en donde dicha proteasa se selecciona del grupo que consiste en:

a) un polipéptido que tiene al menos 60% de identidad de secuencia con SEQ ID NO:34, en donde dicho polipéptido tiene actividad proteasa;

b) un polipéptido que tiene al menos 60% de identidad de secuencia con SEQ ID NO:35, en donde dicho polipéptido tiene actividad proteasa; y

c) un polipéptido que tiene al menos 60% de identidad de secuencia con SEQ ID NO:36, en donde dicho polipéptido tiene actividad proteasa.

13. La composición de cualquiera de las reivindicaciones precedentes 1-12, en donde dicha composición o dicho polipéptido que tiene actividad beta-glucanasa comprendida en dicha composición, tiene estabilidad y/o rendimiento de lavado mejorados en condiciones alcalinas, preferentemente dichas condiciones alcalinas tienen un pH de 7,5 o superior.

14. Uso de una composición de limpieza o detergente de cualquiera de las reivindicaciones 1-13 en un proceso de limpieza, en donde dicho proceso de limpieza es un proceso de limpieza de lavado de vajilla, incluyendo el lavado de vajilla automático (ADW, por "Automatic Dish Wash"), el lavado de vajilla a mano (^hD^w, por hand dish wash) y procesos industriales de limpieza de vajilla; opcionalmente dicho uso se lleva a cabo en condiciones alcalinas con un pH de 7,5 o superior.

15. Un proceso de degradación de un beta-glucano que comprende la aplicación de la composición de limpieza o detergente de cualquiera de las reivindicaciones 1-13 a dicho beta-glucano, en donde dicho proceso es un proceso de lavado de vajilla, preferentemente dicho beta-glucano es un beta-Dglucano, más preferentemente dicho beta-glucano es un beta-1,3-1,4 glucano, con máxima preferencia dicho beta-glucano es un beta-glucano de enlaces mixtos, adicionalmente con máxima preferencia dicho beta-glucano es un beta-glucano de cebada o beta-glucano de avena; opcionalmente, dicho proceso se lleva a cabo en condiciones alcalinas con un pH de 7,5 o superior.

16. Un método para reducir o prevenir la redeposición de suciedad utilizando una composición de limpieza o detergente de cualquiera de las reivindicaciones 1-13 o un polipéptido que tiene actividad beta-glucanasa, seleccionado del grupo que consiste en:

(b) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene al menos 89% de identidad de secuencia con respecto a la secuencia que codifica el polipéptido maduro SEQ ID NO:6;

preferentemente en donde dicho polipéptido tiene al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con el polipéptido maduro de la secuencia SEQ ID NO:7,

más preferentemente en donde el polipéptido maduro es los aminoácidos 1 a 222 de SEQ ID NO:7,

con máxima preferencia, en donde dicha actividad beta-glucanasa es actividad liqueninasa EC 3.2.1.73, en donde dicho método es un método de lavado de vajilla.

17. Uso de una composición de limpieza o detergente de cualquiera de las reivindicaciones 1-13 o de un polipéptido que tiene actividad beta-glucanasa, seleccionado del grupo que consiste en:

(b) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene al menos 89% de identidad de secuencia con respecto a la secuencia que codifica el polipéptido maduro de SEQ ID NO: 6;

más preferentemente en donde el polipéptido maduro es los aminoácidos 1 a 222 de SEQ ID NO: 7,

con máxima preferencia, en donde dicha actividad beta-glucanasa es actividad liqueninasa EC 3.2.1.73, para reducir o prevenir la redeposición de suciedad, en donde dicho uso es el uso en el lavado de vajilla o durante un proceso de lavado de vajilla.

18. Uso de una composición de limpieza o detergente de cualquiera de las reivindicaciones 1-13 o de un polipéptido que tiene actividad beta-glucanasa, seleccionado del grupo que consiste en:

con máxima preferencia, en donde dicha actividad beta-glucanasa es actividad liqueninasa EC 3.2.1.73;

para la eliminación de suciedad que contiene cereales, especialmente suciedad que contiene cereales secada, preferentemente suciedad que contiene copos de avena, especialmente suciedad que contiene copos de avena secada y/o suciedad que contiene avena cocida, y/o suciedad que contiene avena cocida y quemada, y/o suciedad que contiene avena sin cocer, en el lavado de vajilla o durante un proceso de lavado de vajilla.

19. Uso de una composición de limpieza o detergente de cualquiera de las reivindicaciones 1-13 o de un polipéptido que tiene actividad beta-glucanasa, seleccionado del grupo que consiste en:

(b) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene al menos 89% de identidad de secuencia con respecto a la secuencia que codifica el polipéptido maduro SEQ ID NO: 6;

con máxima preferencia, en donde dicha actividad beta-glucanasa es actividad liqueninasa EC 3.2.1.73,

para facilitar la eliminación de suciedad que contiene almidón en presencia de una o más amilasas y/o para mejorar el rendimiento de limpieza relacionado con amilasas, en donde dicho uso es el uso en el lavado de vajilla o durante un proceso de lavado de vajilla.

20. Uso de una composición de limpieza o detergente de cualquiera de las reivindicaciones 1-13 o de un polipéptido que tiene actividad beta-glucanasa, seleccionado del grupo que consiste en:

con máxima preferencia, en donde dicha actividad beta-glucanasa es actividad liqueninasa EC 3.2.1.73, para facilitar la eliminación de suciedad que contiene proteína en presencia de una o más proteasas y/o para mejorar el rendimiento de limpieza relacionado con proteasas, en donde dicho uso es el uso en el lavado de vajilla o durante un proceso de lavado de vajilla.