ES2994097T3 - Pyrimidine jak inhibitors for the treatment of skin diseases - Google Patents

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ES2994097T3 ES20727424T ES20727424T ES2994097T3 ES 2994097 T3 ES2994097 T3 ES 2994097T3 ES 20727424 T ES20727424 T ES 20727424T ES 20727424 T ES20727424 T ES 20727424T ES 2994097 T3 ES2994097 T3 ES 2994097T3
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Philip A Gerken
Jianhua Chao
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Theravance Biopharma R&D IP LLC
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Abstract

La invención proporciona compuestos de fórmula (I): o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, que son inhibidores de las quinasas Janus. La invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos y métodos de uso de dichos compuestos para tratar enfermedades cutáneas inflamatorias y autoinmunes. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidores pirimidina de JAK para el tratamiento de enfermedades de la piel
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Campo de la invención
La invención se refiere a compuestos útiles como inhibidores de JAK. La invención se refiere, además, a composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos, y a la utilización de los mismos en métodos para el tratamiento de enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias.
Estado de la técnica
La inhibición de la familia de enzimas JAK inhibe la señalización de muchas citoquinas proinflamatorias clave. Basándose en su mecanismo de acción, se espera que los inhibidores de JAK resulten útiles en el tratamiento de enfermedades inflamatorias de la piel, tales como la dermatitis atópica. La dermatitis atópica (DA) es una enfermedad inflamatoria crónica de la piel común que se estima afecta a 14 millones de personas solo en los Estados Unidos. Se estima que la DA afecta entre 10 % y 20 % de los niños y entre 1 % y 3 % de los adultos en los países desarrollados (Bao et al., JAK-STAT, 2013, 2, e24137) y su prevalencia se está incrementando. La elevación de las citoquinas proinflamatorias que se basan en la ruta jAk-s Ta T, en particular, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12, IL-13, IFNy y TSLP, se ha asociado a la DA (Bao et al., Leung et al., The Journal of Clinical Investigation, 2004, 113, 651-657). Además, la regulación positiva de IL-31, otra citoquina que señala mediante el emparejamiento a un JAK, se ha mostrado que presenta un papel en el prurito asociado al estado crónico de la DA (Sonkoly et al., Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2006, 117, 411-417).
La solicitud de patente internacional n.° WO 2017/189822 da a conocer compuestos de pirimidina que resultan útiles como inhibidores de la quinasa JAK y la solicitud de patente internacional n.° WO 2016/191524 da a conocer compuestos naftiridina como inhibidores de quinasas JAK.
Debido al efecto modulador de la ruta JAK/STAT sobre el sistema inmunitario, la exposición sistémica a inhibidores de JAK podría presentar un efecto inmunosupresor sistémico adverso. Por lo tanto, sería deseable proporcionar un nuevo inhibidor de JAK que presente su efecto en el sitio de acción sin provocar efectos sistémicos significativos. En particular, para el tratamiento de las enfermedades inflamatorias de la piel, tales como la dermatitis atópica, sería deseable proporcionar un nuevo inhibidor de JAK que pueda administrarse tópicamente y conseguir una exposición terapéuticamente relevante en la piel que sea rápidamente eliminada para minimizar la exposición sistémica. Sigue existiendo una necesidad de compuestos inhibidores de JAK con la solubilidad adecuada en excipientes acuosos y/u orgánicos que permitan el desarrollo de formulaciones para la aplicación tópica.
DESCRIPCIÓN RESUMIDA DE LA INVENCIÓN
En un aspecto, la invención proporciona compuestos que presentan actividad como inhibidores de JAK. Cualesquiera referencias en la descripción a métodos de tratamiento se refieren a los compuestos, a composiciones farmacéuticas y a medicamentos de la presente invención para la utilización en un método para el tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para el diagnóstico).
De acuerdo con lo anteriormente expuesto, la invención proporciona un compuesto de fórmula (I):
en la que R1 es F o H;
L se selecciona del grupo que consiste en un enlace, -CH2O-, -O- y -OCH2;
R2 se selecciona del grupo que consiste en oxetano, tetrahidrofurano, tetrahidropirano y oxepano, cada uno de los cuales se sustituye opcionalmente con 1 a 3 Ra;
cada Ra se selecciona independientemente del grupo que consiste en F, CN, OH, alquil C1-4-OH, alcoxi C1-4 y alquilo C1-4, en el que alquilo C1-4 se sustituye opcionalmente con 1 a 3 grupos fluoro;
R3 se selecciona del grupo que consiste en:
(a) -S(O)2-alquilo C1-4, en el que alquilo C1-4 se sustituye opcionalmente con -CN o 1 a 3 grupos fluoro;
(b) -alquil C1-4-CONRxRy, en el que cada uno de Rx y Ry se selecciona independientemente de H y alquilo C1-4, en el que opcionalmente Rx y Ry pueden unirse para formar un grupo heterocíclico de 4 a 6 elementos; (c) -C(O)Rb, en el que Rb es alquilo C1-4 sustituido opcionalmente con cicloalquilo C3-6, alcoxi C1-4 o 1 a 3 grupos fluoro, y
(d) -CO2Rc, en el que Rc se selecciona de
(i) alquilo C1-4 sustituido opcionalmente con alcoxi C1-4, y
(ii) grupo heterocíclico de 4 a 7 elementos;
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
La invención proporciona, además, una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I9 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
La invención proporciona, además, un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la utilización como un medicamento.
la invención proporciona, además, un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la utilización en el tratamiento de una enfermedad en un mamífero para la que está indicado un inhibidor de JAK. La invención proporciona, además, un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo tal como se describe en la presente memoria en el tratamiento de enfermedades o trastornos inflamatorios y autoinmunitarios.
La invención proporciona, además, un método de tratamiento de una enfermedad en un mamífero para la que está indicada un inhibidor de JAK, comprendiendo el método la administración de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el mamífero.
la invención proporciona, además, un método de tratamiento de enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias de la piel, en particular dermatitis atópica y alopecia areata, en un mamífero, comprendiendo el método la administración de compuesto (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el mamífero.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
Entre otras realizaciones, la invención proporciona inhibidores de JAK de fórmula (I), o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
La invención proporciona un compuesto de fórmula (I):
en la que R1 es F o H;
L se selecciona del grupo que consiste en un enlace, -CH2O-, -O- y -OCH2;
R2 se selecciona del grupo que consiste en oxetano, tetrahidrofurano, tetrahidropirano y oxepano, cada uno de los cuales se sustituye opcionalmente con 1 a 3 Ra;
cada Ra se selecciona independientemente del grupo que consiste en F, CN, OH, alquil C1-4-OH, alcoxi C1-4 y alquilo C1-4, en el que alquilo C1-4 se sustituye opcionalmente con 1 a 3 grupos fluoro;
R3 se selecciona del grupo que consiste en:
(a) -S(O)2-alquilo C1-4, en el que alquilo C1-4 se sustituye opcionalmente con -CN o 1 a 3 grupos fluoro; (b) -alquil Ci-4-CONRxRy, en el que cada uno de Rx y Ry se selecciona independientemente de H y alquilo C1-4, en el que opcionalmente Rx y Ry pueden unirse para formar un grupo heterocíclico de 4 a 6 elementos; (c) -C(O)Rb, en el que Rb es alquilo C1-4 sustituido opcionalmente con cicloalquilo C3-6, alcoxi C1.4 o 1 a 3 grupos fluoro; y
(d) -CO2Rc, en el que Rc se selecciona de
(i) alquilo C1-4 sustituido opcionalmente con alcoxi C1.4, y
(ii) grupo heterocíclico de 4 a 7 elementos;
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En algunas realizaciones, R3 se selecciona del grupo que consiste en:
(a) - S(O)2-alquilo C1-4;
(b) -alquil C1-4-CONRxRy, en el que cada uno de Rx y Ry se selecciona independientemente de H y alquilo C1-4, en el que opcionalmente Rx y Ry pueden unirse para formar un grupo heterocíclico de 4 a 6 elementos; (c) -C(O)Rb, en el que Rb es alquilo C1-4 sustituido opcionalmente con cicloalquilo C3-6 o alcoxi C1.4, y
(d) -CO2Rc, en el que Rc se selecciona de
(i) alquilo C1-4 sustituido opcionalmente con alcoxi C1.4, y
(ii) grupo heterocíclico de 4 a 7 elementos.
En algunas realizaciones, R3 se selecciona del grupo que consiste en:
(a) -S(O)2-alquilo C1.2;
(b) -alquil C1-2-CONRxRy, en el que cada uno de Rx y Ry se selecciona independientemente de H y alquilo C1-3, en el que opcionalmente Rx y Ry pueden unirse para formar un grupo heterocíclico de 4 o 5 elementos; (c) -C(O)Rb, en el que Rb es alquilo C1-2 sustituido opcionalmente con cicloalquilo C3-5 o alcoxi C1.2, y
(d) -CO2Rc, en el que Rc se selecciona de
(i) alquilo C1-2 sustituido opcionalmente con alcoxi C1.2, y
(ii) grupo heterocíclico de 5 a 6 elementos.
En algunas realizaciones, R3 se selecciona del grupo que consiste en:
En algunas realizaciones, R3 se selecciona del grupo que consiste en:
En algunas realizaciones, R3 es
En algunas realizaciones, R1 es F. En algunas realizaciones, R1 es H.
En algunas realizaciones, R2 se selecciona del grupo que consiste en oxetano, tetrahidrofurano y tetrahidropirano, cada uno de los cuales se sustituye opcionalmente con 1 a 3 Ra. En algunas realizaciones, R2 se selecciona del grupo que consiste en:
cada uno de los cuales se sustituye opcionalmente con 1 a 3 Ra.
En algunas realizaciones, L es un enlace. En algunas realizaciones, L es -CH2O-. En algunas realizaciones, L es -O-. En algunas realizaciones, L es -OCH2-.
En algunas realizaciones,
se selecciona del grupo que consiste en:
en el que R2 se sustituye opcionalmente con 1 a 2 Ra, en el que cada Ra se selecciona independientemente del grupo que consiste en F, OH, alquil C1-3-OH, alcoxi C1-3y alquilo C1-3, en el que el alquilo C1-3 se sustituye opcionalmente con 1 a 3 grupos fluoro. En algunas realizaciones,
se selecciona del grupo que consiste en:
se selecciona del grupo que consiste en:
En algunas realizaciones, R1 es F o H, R3 se selecciona del grupo que consiste en
se selecciona del grupo que consiste en:
En algunas realizaciones, el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En algunas realizaciones, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la exposición, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica comprende, además, uno o más agentes terapéuticos adicionales. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica es una pomada o una crema.
Las estructuras químicas se nombran en la presente memoria de acuerdo con convenciones de la IUPAC tal como se implementan en el software ChemDraw (PerkinElmer, Inc., Cambridge, MA). Por ejemplo, el compuesto 1:
se denomina W2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-W2-metil-W4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-(tetrahidro-2H-pirán-4-il)pirimidín-2,4-diamina.
La notación (1R,3s,5S) describe la orientaciónexodel grupo pirimidinilamino con respecto al grupo 9-azabiciclo[3.3.1]nonano.
Además, la fracción pirazolilo de los compuestos de fórmula (I), así como otros compuestos dados a conocer en la presente memoria existen en forma tautomérica. Se entenderá que, aunque se muestran, o nombran, estructuras específicas, en una forma particular, la invención también incluye los tautómeros de las mismas.
Los compuestos de la exposición contienen uno o más centros quirales y, por lo tanto, dichos compuestos (e intermediarios de los mismos) pueden existir en forma de mezclas racémicas, estereoisómeros puros (es decir, enantiómeros o diastereómeros), mezclas enriquecidas en estereoisómeros y similares. Los compuestos quirales mostrados o nombrados en la presente memoria sin una estereoquímica definida en un centro quiral pretenden incluir todas y cada una de las variaciones de estereoisómero en el estereocentro no definido, a menos que se indique lo contrario. La ilustración o nombrado de un estereoisómero particular significa que el estereocentro indicado presenta la estereoquímica designada, en el entendido de que también pueden estar presentes cantidades menores de otros estereoisómeros, a menos que se indique lo contrario, con la condición de que la utilidad del compuesto ilustrado o nombrado no resulte eliminada por la presencia de otro estereoisómero.
Los compuestos de la fórmula (I) pueden existir como una forma libre o en diversas formas de sal, tal como una forma salina monoprotonada, una forma salina diprotonada, una forma salina triprotonada o mezclas de las mismas. La totalidad de dichas formas está incluida dentro del alcance de la presente invención, a menos que se indique lo contrario.
La presente exposición incluye, además, versiones marcadas isotópicamente de los compuestos de la exposición, incluyendo compuestos de fórmula (I), en la que se ha sustituido un átomo o se ha enriquecido con un átomo que presenta el mismo número atómico pero una masa atómica diferente de la masa atómica que predomina en la naturaleza. Entre los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en un compuesto de fórmula (I) se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O y 18F. Resultan de particular interés los compuestos de fórmula (I) enriquecidos en tritio o carbono-14, los cuales pueden utilizarse, por ejemplo, en estudios de distribución en los tejidos. También resultan de particular interés los compuestos de fórmula (I) enriquecidos en deuterio, especialmente en un sitio de metabolismo, los cuales se espera que presenten una estabilidad metabólica superior. Adicionalmente de interés particular son compuestos de fórmula (I) enriquecidos en isótopo emisor de positrones, tal como 11C, 18F, 15O y 13N, los cuales pueden utilizarse, por ejemplo, en estudios de tomografía por emisión de positrones (TEP).
Definiciones
En la descripción de la presente invención, incluyendo sus diversos aspectos y realizaciones, los términos siguientes presentan los significados siguientes, a menos que e indique lo contrario.
El término “alquilo” se refiere a un grupo hidrocarburo saturado monovalente que puede ser lineal o ramificado, o combinaciones de los mismos. A menos que se defina de otro modo, dichos grupos alquilo normalmente contienen entre 1 y 10 átomos de carbono. Entre los grupos alquilo representativos se incluyen, a título de ejemplo, metilo (Me), etilo (Et), n-propilo (n-Pr) o (nPr), isopropilo (i-Pr) o (iPr), n-butilo (n-Bu) o (nBu), sec-butilo, isobutilo, terc-butilo (t-Bu) o (tBu), n-pentilo, n-hexilo, 2,2-dimetilpropilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, 2-etilbutilo, 2,2-dimetilpentilo, 2-propilpentilo y similares.
En el caso de que se pretenda un número específico de átomos de carbono para un término particular, se muestra el número de átomos de carbono precediendo al término. Por ejemplo, el término “alquilo C1-3” se refiere a un grupo alquilo que presenta entre 1 y 3 átomos de carbono, en el que los átomos de carbono están en cualquier configuración químicamente aceptable, incluyendo configuraciones lineales o ramificadas.
El término “alcoxi” se refiere al grupo monovalente -O-alquilo, en el que el alquilo se define tal como anteriormente. Entre los grupos alcoxi representativos se incluyen, a título de ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, butoxi y similares.
El término “cicloalquilo” se refiere a un grupo carbocíclico saturado monovalente que puede ser monocíclico o multicíclico. A menos que se defina de otro modo, dichos grupos cicloalquilo habitualmente contienen entre 3 y 10 átomos de carbono. Entre los grupos cicloalquilo representativos se incluyen, a título de ejemplo, ciclopropilo (cPr), ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, adamantilo y similares.
El término “halógeno” se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo.
El término “heterociclilo”, “heterociclo”, “heterocíclico” o “anillo heterocíclico” se refiere a un grupo no aromático cíclico saturado o parcialmente insaturado monovalente, que presenta entre 3 y 10 átomos anulares en total, en el que el anillo contiene entre 2 y 9 átomos anulares de carbono y entre 1 y 4 heteroátomos anulares seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre. Los grupos heterocíclicos pueden ser monocíclicos o multicíclicos (es decir, fusionados o puenteados). Entre los grupos heterocíclicos representativos se incluyen, a título de ejemplo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, imdazolidinilo, morfolinilo, tiomorfolilo, indolín-3-ilo, 2-imidazolinilo, tetrahidropiranilo, 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolín-2-ilo, quinuclidinilo, 7-azanorbornanilo, nortropanilo, y similares, en donde el punto de unión se encuentra en cualquier átomo anular de carbono o nitrógeno disponible. En donde el contexto haga evidente el punto de unión del grupo heterocíclico, dichos grupos pueden denominarse alternativamente especies no valentes, es decir, pirrolidina, piperidina, piperazina, imidazol, tetrahidropirano, etc.
La expresión “cantidad terapéuticamente eficaz” se refiere a una cantidad suficiente para llevar a cabo el tratamiento al administrarla en un paciente que requiere tratamiento.
El término “tratamiento” tal como se utiliza en la presente memoria se refiere al tratamiento de una enfermedad, trastorno o afección médica (tal como una enfermedad inflamatoria gastrointestinal), en un paciente, tal como un mamífero (particularmente un ser humano) que incluye uno o más de los siguientes:
(a) impedir que se produzca la enfermedad, trastorno o afección médica, es decir, prevenir la reocurrencia de la enfermedad o afección médica, o el tratamiento profiláctico de un paciente que presenta una predisposición a la enfermedad o afección médica;
(b) mejorar la enfermedad, trastorno o afección médica, es decir, eliminar o causar la regresión de la enfermedad, trastorno o afección médica en un paciente, que incluye contrarrestar los efectos de otros agentes terapéuticos;
(c) suprimir la enfermedad, trastorno o afección médica, es decir, ralentizar o detener el desarrollo de la enfermedad, trastorno o afección médica en un paciente, o
(d) aliviar los síntomas de la enfermedad, trastorno o afección médica en un paciente.
La expresión “sal farmacéuticamente aceptable” se refiere a una sal que resulta aceptable para la administración en un paciente o en un mamífero, tal como un ser humano (p. ej., sales que presentan una seguridad aceptable en mamíferos en una pauta posológica dada). Entre las salea farmacéuticamente aceptables representativas se incluyen sales de ácido acético, ascórbico, bencenosulfónico, benzoico, canforsulfónico, cítrico, etanosulfónico, edisílico, fumárico, gentísico, glucónico, glucurónico, glutámico, hipúrico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónico, láctico, lactobiónico, maleico, málico, mandélico, metanosulfónico, múcico, naftalenosulfónico, naftalén-1,5-disulfónico, naftalén-2,6-disulfónico, nicotínico, nítrico, orótico, pamoico, pantoténico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, ptoluenosulfónico y xinafoico, y similares.
La expresión “sal del mismo” se refiere a un compuesto formado cuando el hidrógeno de un ácido se sustituye por un catión, tal como un catión metálico o un catión orgánico y similar. Por ejemplo, el catión puede ser una forma protonada de un compuesto de fórmula (I)), es decir, una forma en que uno o más grupos amino han sido protonados por un ácido. Normalmente, la sal es una sal farmacéuticamente aceptable, aunque ello no resulta necesario para sales de compuestos intermedios que no están destinados a la administración en el paciente.
La expresión “grupo protector de amino” se refiere a un grupo protector adecuado para evitar las reacciones no deseadas en un nitrógeno del amino. Entre los grupos protectores de amino representativos se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, formilo, grupos acilo, por ejemplo grupos alcanoilo, tales como acetilo y trifluoroacetilo; grupos alcoxicarbonilo, tales como terc-butoxicarbonilo (Boc); grupos arilmetoxicarbonilo, tales como benciloxicarbonilo (Cbz) y 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc); grupos arilmetilo, tales como bencilo (Bn), tritilo (Tr) y 1,1-di(4’-metoxifenil)metilo, grupos sililo, tales como trimetilsililo (TMS), triisopropilsililo (TIPS), terc-butildimetilsililo (TBS o TBDMS), [2-(trimetilsilil)-etoxi]metilo (SEM), y similares. Se han descrito numerosos grupos protectores, y su introducción y eliminación, en T.W. Greene y P.G.M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, tercera edición. Wiley, New York.
Procedimientos sintéticos generales
Los compuestos de fórmula (I), e intermediarios de los mismos, pueden prepararse según los métodos generales y procedimientos siguientes utilizando materiales de partida y reactivos disponibles comercialmente o preparados rutinariamente. Los sustituyentes y variables (p. ej., R1, R2, R3, L, etc.) utilizados en los esquemas siguientes presentan los mismos significados que los definidos en otros sitios en la presente memoria, a menos que se indique lo contrario. Además, pueden utilizarse compuestos que presentan un átomo o grupo funcional ácido o básico o pueden producirse en forma de una sal, a menos que se indique lo contrario (en algunos casos, la utilización de una sal en una reacción particular requerirá la conversión de la sal a una forma no salina, p. ej., una base libre, utilizando procedimientos rutinarios antes de llevar a cabo la reacción).
Aunque puede mostrarse o describirse una realización particular de la presente invención en los procedimientos siguientes, el experto en la materia reconocerá que también pueden prepararse otras realizaciones o aspectos de la presente invención utilizando dichos procedimientos o mediante la utilización de otros métodos, reactivos y materiales de partida conocidos por el experto en la materia. En particular, se apreciará que pueden prepararse compuestos de fórmula (I) mediante una diversidad de rutas de procedimiento en las que los reactivos se combinan en diferentes órdenes para proporcionar diferentes intermediarios en el camino a la producción del producto final.
Los métodos generales de preparación de los compuestos de fórmula (I) se ilustran en los esquemas 1,2 y 3.
El Esquema 1 describe una síntesis de compuestos de fórmula (I) en la que L es un enlace. Aunque el Esquema 1 describe la síntesis de compuestos en la que R2 es 4-tetrahidropirano, se entenderá que puede aplicarse una síntesis similar a otros grupos heterocíclicos, tales como oxetano, tetrahidrofurano y oxepano, que pueden estar sustituidos o no, mediante la utilización del ácido o éster borónico correspondiente.
El material de partidaS-1puede hacerse reaccionar con la aminaS-2en la presencia de Zn(OAc)2 para formarS-3. A continuación, se hace reaccionarS-3con un ácido o éster borónico, tal comoS-4, en presencia de un catalizador de paladio, tal como Pd(dppf)Cl2 y una base para formarS-5. En algunas realizaciones, la reacción se lleva a cabo bajo calor. En algunas realizaciones, la base es Na2CO3 o K3PO4. El tetrahidropirano insaturado enS-5seguidamente puede reducirse bajo condiciones adecuadas, por ejemplo mediante hidrogenación en la presencia de Pd/C, proporcionandoS-6.
Esquema 2
El Esquema 2 describe una síntesis de compuestos de fórmula (I) en la que L es -O- o -OCH2-. El material de partidaS-8puede hacerse reaccionar conS-7en la presencia de una base para formarS-9. En esta reacción,S-8puede desprotonarse con una base fuerte, tal como NaH. A continuación, puede acoplarseS-9con la aminaS-10en la presencia de un catalizador de paladio, tal como Pd2(dba)3 en la presencia de Xphos y una base para formarS-11. En algunas realizaciones, la reacción se lleva a cabo bajo calor. En algunas realizaciones, la base es Cs2CO3. El nitrógeno protegido con Boc enS-11seguidamente se desprotege en la presencia de un ácido fuerte, tal como HCl concentrado, proporcionandoS-12. En algunas realizaciones, R1 es H, En algunas realizaciones, R1 es F.
Esquema 3
El Esquema 3 describe una síntesis de compuestos de fórmula (I) en la que L es -CH2O-. El grupo pirazol enS-13puede protegerse con un grupo protector de amino, tal como Boc o tetrahidropirano, proporcionandoS-14. El éster enS-14seguidamente puede reducirse con un reactivo, tal como borohidruro, para proporcionar el alcoholS-16. El alcoholS-16también puede obtenerse mediante protección de la función pirazol del alcoholS-15. Pueden utilizarse grupos protectores de amino, tales como Boc o tetrahidropirano. Puede convertirseS-16enS-17, en el que GS es un grupo saliente, tal como mesilato o cloruro. Por ejemplo, el mesilato puede formarse mediante reacción con cloruro de mesilo en presencia de una base. A continuación, puede hacerse reaccionarS-17con R2-OH en la presencia de una base, tal como NaH o KOtBu. Finalmente, la desprotección deS-18proporcionaS-19. Por ejemplo, en el caso de que PG sea tetrahidropirano, puede llevarse a cabo la desprotección en presencia de ácido p-toluenosulfónico.
Composiciones farmacéuticas
Habitualmente se utilizan compuestos de fórmula (I) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en la forma de una composición o formulación farmacéutica. Tales composiciones farmacéuticas pueden administrarse en el paciente mediante cualquier vía aceptable de administración, incluyendo, aunque sin limitación, los modos de administración oral, tópico (incluyendo transdérmico), rectal, nasal, inhalado y parenteral.
De acuerdo con lo anterior, en uno de sus aspectos de composición, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable y un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Opcionalmente, dichas composiciones farmacéuticas pueden contener otros agentes terapéuticos y/o de formulación, si se desea. Al comentar composiciones y usos de las mismas, el “compuesto de la invención” también puede denominarse en la presente memoria “agente activo”.
Las composiciones farmacéuticas de la presente exposición habitualmente contienen una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Sin embargo, el experto en la materia reconocerá que una composición farmacéutica puede contener una cantidad superior a la terapéuticamente eficaz, es decir, composiciones en masa, o una cantidad inferior a la terapéuticamente eficaz, es decir, dosis unitarias individuales diseñadas para la administración múltiple para alcanzar una cantidad terapéuticamente eficaz.
Habitualmente, dichas composiciones farmacéuticas contendrán entre aproximadamente 0,1 y aproximadamente 95 % en peso del agente activo, incluyendo entre aproximadamente 5 % y aproximadamente 70 % en peso del agente activo.
Puede utilizarse cualquier portador o excipiente convencional en las composiciones farmacéuticas de la invención. La elección de un portador o excipiente particular, o combinaciones de portadores o excipientes, dependerá del modo de administración que se está utilizando para tartar un paciente particular, o del tipo de afección médica o estado de enfermedad. A este respecto, la preparación de una composición farmacéutica adecuada para un modo particular de administración se encuentra perfectamente comprendido dentro del alcance del experto en la técnica farmacéutica. Además, los portadores o excipientes utilizados en las composiciones farmacéuticas de la presente invención se encuentran disponibles comercialmente. A título de ilustración adicional, las técnicas convencionales de formulación se describen en Reminton: The Science and Practice of Pharmacy, 20a edición, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000), y en H.C. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7a edición, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999).
Entre los ejemplos representativos de materiales que pueden servir como portadores farmacéuticamente aceptables se incluyen, aunque sin limitación, los siguientes: azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones, tales como almidón de maíz y almidón de patata; celulosa, tal como celulosa microcristalina y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa sódica, etilcelulosa y acetato de celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes, tales como manteca de cacao y ceras supositorias; aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja; glicoles, tales como propilenglicol; polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes tamponadores, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; ácido algínico; agua libre de pirógenos; solución salina isotónica; solución de Ringer; alcohol etílico; soluciones tampón de fosfato, y otras sustancias compatibles no tóxicas utilizadas en composiciones farmacéuticas.
Las composiciones farmacéuticas se preparan habitualmente mediante la mezcla o combinación intensiva e íntima del agente activo con un portador farmacéuticamente aceptable y uno o más ingredientes opcionales. La mezcla uniformemente combinada resultante seguidamente puede conformarse o cargarse en comprimidos, cápsulas, píldoras y similares utilizando procedimientos y equipos convencionales.
Las composiciones farmacéuticas de la presente exposición pueden envasarse en una forma de dosis unitaria. La expresión “forma de dosis unitaria” se refiere a una unidad físicamente discreta adecuada para la administración en un paciente, es decir, cada unidad contiene una cantidad predeterminada de agente activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado ya sea sola ya sea en combinación con una o más unidades adicionales. Por ejemplo, dichas formas de dosis unitaria pueden ser cápsulas, comprimidos, píldoras y similares, o envases unitarios adecuados para la administración parenteral.
En una realización, las composiciones farmacéuticas de la invención resultan adecuadas para la administración oral. Las composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración oral pueden encontrarse en la forma de cápsulas, comprimidos, píldoras, pastillas, obleas, grageas, polvos o gránulos; o en forma de una solución o una suspensión en un líquido acuoso o no acuoso; o en forma de una emulsión líquida de aceite en agua o de agua en aceite; o en forma de un elixir o jarabe, y similares; cada una contiene una cantidad predeterminada de un compuesto de la presente exposición, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a modo de ingrediente activo.
En el caso de que estén destinadas para la administración oral en una forma de dosis sólida (es decir, como cápsulas, comprimidos, píldoras y similares), las composiciones farmacéuticas de la presente exposición normalmente comprenderán el agente activo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y uno o más portadores farmacéuticamente aceptables. Opcionalmente, dichas formas de dosis sólidas pueden comprender: rellenos o extensores, tales como almidones, celulosa microcristalina, lactosa, fosfato dicálcico, sacarosa, glucosa, manitol y/o ácido silícico; ligantes, tales como carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y/o acacia; humectantes, tales como glicerol; agentes desintegrantes, tales como croscarmelosa sódica, agar-agar, carbonato cálcico, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, determinados silicatos y/o carbonato sódico; agentes de retardo de la solubilización, tales como parafina; aceleradores de la absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario; agentes humectantes, tales como alcohol cetílico y/o monoestearato de glicerol; absorbentes, tales como caolín y/o arcilla bentonita; lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, laurilsulfato sódico, y/o mezclas de los mismos; agentes colorantes, y agentes tamponadores.
También pueden encontrarse presentes en las composiciones farmacéuticas de la presente exposición agentes de liberación, agentes humectantes, agentes de recubrimiento, agentes edulcorantes, saborizantes y perfumantes, conservantes y antioxidantes. Entre los ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables se incluyen: antioxidantes solubles en agua, tales como ácido ascórbico, hidrocloruro de cisteína, bisulfato sódico, metabisulfato sódico, sulfito sódico y similares; antioxidantes solubles en aceite, tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, lecitina, galato de propilo, alfa-tocoferol, y similares; y agentes quelantes de metales, tales como ácido cítrico, ácido etilén-diamina-tetraacético, sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico y similares. Entre los agentes de recubrimiento para comprimidos, cápsulas, píldoras y similares se incluyen los utilizados para recubrimientos entéricos, tales como ftalato de acetato de celulosa, ftalato de acetato de polivinilo, ftalato de hidroxipropil-metilcelulosa, ácido metacrílico, copolímeros de éster de ácido metacrílico, trimelitato de acetato de celulosa, carboximetil-etilcelulosa, succinato de acetato de hidroxipropil-metilcelulosa, y similares.
Las composiciones farmacéuticas de la presente exposición también pueden formularse para proporcionar una liberación lenta o controlada del agente activo utilizando, a título de ejemplo, hidroxipropil-metilcelulosa en proporciones variables; u otras matrices de polímero, liposomas y/o microesferas. Además, las composiciones farmacéuticas de la presente exposición pueden contener opcionalmente agentes opacificadores y pueden formularse de manera que liberen exclusivamente, o preferentemente, el agente activo en una parte determinada del tracto gastrointestinal, opcionalmente de una manera retardada. Entre los ejemplos de composiciones de inclusión que pueden utilizarse se incluyen sustancias poliméricas y ceras. El agente activo también puede encontrarse en forma microencapsulada, en caso apropiado, con uno o más de los excipientes anteriormente indicados.
Entre las formas de dosis líquidas adecuadas para la administración oral se incluyen, a título ilustrativo, emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Las formas de dosis líquidas normalmente comprenden el agente activo y un diluyente inerte, tal como, por ejemplo, agua u otros solventes, agentes solubilizadores y emulsionantes, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, aceites (especialmente, los aceites de semilla de algodón, cacahuete, maíz, germen, oliva, ricino y sésamo), ácido oleico, glicerol, alcohol tetrahidrofurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácido graso de sorbitán, y mezclas de los mismos. Alternativamente, pueden convertirse determinadas formulaciones líquidas, por ejemplo, mediante secado por pulverización, en unos polvos, que se utilizan para preparar formas de dosis sólidas mediante procedimientos convencionales.
Las suspensiones, además del ingrediente activo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, pueden contener agentes de suspensión, tales como, por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, polioxietilén-sorbitol y ésteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto, y mezclas de los mismos.
Un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, también puede administrarse por vía parenteral (p. ej., mediante inyección intravenosa, subcutánea, intramuscular o intraperitoneal). Para la administración parenteral, el agente activo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, normalmente se mezcla con un vehículo adecuado para la administración parenteral, incluyendo, a título de ejemplo, soluciones acuosas estériles, solución salina, alcoholes de bajo peso molecular, tales como propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales, gelatina, ésteres de ácido graso, tales como oleato de etilo, y similares. Las formulaciones parenterales también pueden contener uno o más antioxidantes, solubilizadores, estabilizantes, conservantes, agentes humectantes, emulsionantes, agentes tamponadores o agentes dispersantes. Estas formulaciones pueden esterilizarse mediante la utilización de un medio inyectable estéril, un agente esterilizante, filtración, irradiación o calor.
Alternativamente, las composiciones farmacéuticas de la presente exposición se formulan para la administración mediante inhalación. Las composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración mediante inhalación habitualmente se encontrarán en la forma de un aerosol o de unos polvos. Dichas composiciones se administran generalmente utilizando dispositivos de administración bien conocidos, tales como un inhalador de dosis medida, un inhalador de polvos secos, un nebulizador o un dispositivo de administración similar.
En el caso de que se administren mediante inhalación utilizando un envase presurizado, las composiciones farmacéuticas de la presente exposición normalmente comprenderán el ingrediente activo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un propelente adecuado, tal como diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. Además, la composición farmacéutica puede encontrarse en la forma de una cápsula o cartucho (constituido, por ejemplo, de gelatina) que comprende un compuesto de la exposición, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y unos polvos adecuados para la utilización en un inhalador de polvos. Entre las bases de polvos adecuadas se incluyen, a título de ejemplo, lactosa o almidón.
Formulaciones tópicas
Para tratar las condiciones cutáneas, los compuestos de la exposición, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, se formulan preferentemente para la administración tópica en la piel. Las composiciones tópicas comprenden vehículos líquidos o semisólidos que pueden incluir, aunque sin limitación, polímeros, espesantes, tampones, neutralizadores, agentes quelantes, conservantes, surfactantes o emulsionantes, antioxidantes, ceras o aceites, emolientes, pantallas solares, y un solvente o sistema de solventes mixtos. Las composiciones tópicas útiles en la exposición de la invención pueden prepararse en forma de una amplia variedad de tipos de producto. Entre ellos se incluyen, aunque sin limitación, lociones, cremas, geles, barras, aerosoles, pomadas, pastas, espumas,moussesy limpiadores. Estos tipos de producto pueden comprender varios tipos de sistemas portadores, incluyendo, aunque sin limitación, partículas, nanopartículas y liposomas. Si se desea, pueden añadirse agentes desintegrantes, tales como polivinilpirrolidona entrecruzada, agar o ácido algínico o una sal del mismo, tal como alginato sódico. Las técnicas para la formulación y administración pueden encontrarse en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edición (Easton, Pa: Mack Publishing Co., 1995). La formulación puede seleccionarse para maximizar la administración en un sitio diana deseado en el cuerpo.
Las lociones, que son preparaciones destinadas a la aplicación en la piel, o en la superficie del cabello sin frotar, habitualmente son preparaciones líquidas o semilíquidas en las que están dispersadas en forma finamente dividida sólidos, ceras o líquidos. Las lociones normalmente contienen agentes de suspensión para producir mejores dispersiones, así como compuestos útiles para localizar y mantener el agente activo en contacto con la piel o el cabello, p. ej., metilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, o similares.
Las cremas que contienen el agente activo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la administración según la presente exposición son emulsiones líquidas o semisólidas viscosas, de aceite en agua o de agua en aceite. Las cremas base son lavables en agua, y contienen una fase de aceite, un emulsionante y una fase acuosa. La fase aceite generalmente comprende vaselina o un alcohol graso, tal como alcohol cetílico o estearílico; la fase acuosa habitualmente, aunque no necesariamente, excede en volumen a la fase aceite, y generalmente contiene un humectante. El emulsionante en una formulación de crema, tal como se explica en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, es generalmente un surfactante no iónico, aniónico, catiónico o anfotérico. Entre los componentes de las formulaciones de crema pueden incluirse: bases de aceite, tales como vaselina, aceites minerales, aceites vegetales y animales, y triglicéridos; bases de crema, tales como alcoholes de lanolina, ácido esteárico y alcohol cetoestearílico; una base de gel, tal como alcohol polivinílico; solventes, tales como propilenglicol y polietilenglicol; emulsionantes, tales como polisorbatos, estearatos, tales como estearato de glicerilo, octilhidroxiestearato, estearato de polioxilo, estearil-éteres de PEG, palmitato de isopropilo, y monoestearato de sorbitán; estabilizantes, tales como polisacáridos y sulfito sódico; emolientes (es decir, hidratantes), tales como triglicéridos de cadena intermedia, miristato de isopropilo y dimeticona; agentes rigidificantes, tales como alcohol cetílico y alcohol estearílico; agentes antimicrobianos, tales como metilparabeno, propilparabeno, fenoxietanol, ácido sórbico, diazolidinil-urea e hidroxianisol butilado; potenciadores de la penetración, tales como N-metilpirrolidona, propilenglicol, monolaurato de polietilenglicol, y similares, y agentes quelantes, tales como edetato disódico.
También pueden utilizarse formulaciones de gel en relación con la presente invención. Tal como apreciará el experto en la materia de la formulación de fármacos tópicos, los geles son semisólidos. Los geles de fase única contienen macromoléculas orgánicas distribuidas de manera sustancialmente uniforme en todo el líquido portador, que normalmente es acuoso, aunque también puede ser un solvente o mezcla de solventes.
Las pomadas, que son preparaciones semisólidas, normalmente están basadas en vaselina u otros derivados de vaselina. Tal como apreciará el experto habitual en la materia, la base de poma específica que debe utilizarse es una que proporciona una administración óptima del agente activo seleccionado para una formulación dada y, preferentemente, también proporciona otras características deseadas, p. ej., emoliencia o similares. Al igual que con otros portadores o vehículos, una base de poma debe ser inerte, estable, no irritante y no sensibilizante. Tal como se explica en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edición (Easton, Pa: Mack Publishing Co., 1995) en las páginas 1399 a 1404; las bases de pomada pueden clasificarse en cuatro grupos: bases oleaginosas, bases emulsionables, bases en emulsión y bases solubles en agua. Entre las bases de pomada oleaginosas se incluyen, por ejemplo, aceites vegetales, grasas obtenidas de animales e hidrocarburos semisólidos obtenidos de vaselina. Las bases de pomada emulsionables, también conocidas como bases de pomada absorbentes, contienen poca o ninguna agua y entre ellas se incluyen, por ejemplo, sulfato de hidroxiestearina, lanolina anhidra y vaselina hidrofílica. Las bases de pomada en mulsión son emulsiones de agua en aceite (W/O) o de aceite en agua (O/W), y entre ellas se incluyen, por ejemplo, alcohol cetílico, monoestearato de glicerilo, lanolina y ácido esteárico. Las bases de pomada solubles en agua pueden prepararse a partir de polietilenglicoles de peso molecular variable; nuevamente, puede hacerse referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, anteriormente, para más información. Entre los materiales aceitosos adecuados para la utilización en formulaciones de pomada se incluyen vaselina (gelatina de vaselina), cera de abejas, manteca de cacao, manteca de karité y alcohol cetílico. Entre las pomadas opcionalmente pueden incluirse adicionalmente potenciadores de la penetración, si se desea.
Las formulaciones útiles de la presente exposición también comprenden aerosoles. Los aerosoles generalmente proporcionan el agente activo en una solución acuosa y/o alcohólica que puede nebulizarse sobre la piel o el cabello para la administración. Entre dichos aerosoles se incluyen las formulaciones para proporcionar la concentración de la solución de agente activo en el sitio de administración tras la administración, p. ej., la solución de aerosol pueden estar compuesta principalmente de alcohol u otro líquido volátil similar en el que puede disolverse el fármaco o agente activo. Tras la administración en la piel o cabello, el portador se evapora, dejando el agente activo concentrado en el sitio de administración.
Las composiciones farmacéuticas tópicas pueden comprender, además, portadores de fase sólida o gel. Entre los ejemplos de dichos portadores se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, carbonato cálcico, fosfato cálcico, diversos azúcares, almidones, derivados de celulosa, gelatina y polímeros, tales como polietilenglicoles.
Las composiciones farmacéuticas tópicas pueden comprender, además, un emulsionante adecuado que se refiere a un agente que potencia o facilita la mezcla y suspensión de aceite en agua o de agua en aceite. El agente emulsionante utilizado en la presente memoria puede consistir en un único agente emulsionante o puede ser un surfactante no iónico, aniónico, catiónico o anfotérico o una mezcla de dos o más de dichos surfactantes; resultan preferentes para la utilización en la presente memoria los emulsionantes no iónicos o aniónicos. Dichos agentes activos en superficie se describen en “McCutcheon's Detergent and Emulsifiers”, North American Edition, 1980 Annual, publicado por la McCutcheon Division, MC Publishing Company, 175 Rock Road, Glen Rock, NJ. 07452, EE. UU.
Pueden utilizarse alcoholes de alto peso molecular, tales como alcohol cetearílico, alcohol cetílico, alcohol estearílico, cera emulsionante y monoesterato de glicerilo. Otros ejemplos son diestearato de etilenglicol, triestearato de sorbitán, monoestearato de propilenglicol, monooleato de sorbitán, monoestearato de sorbitán (SPAN 60), monolaurato de dietilenglicol, monopalmitato de sorbitán, dioleato de sucrosa, estearato de sucrosa (CRODESTA F-160), lauril-éter de polioxietileno (BRIJ 30), estearil-éter de polioxietileno (2) (BRIJ 72), estearil-éter de polioxietileno (21) (BRIJ 721), monoestearato de polioxietileno (Myrj 45), monoestearato de sorbitán polioxietilenado (TWEEN-60), monooleato de sorbitán polioxietilenado (TWEEN-80), monolaurato de sorbitán polioxietilenado (TWEEN-20) y oleato sódico. También puede utilizarse colesterol y derivados de colesterol en emulsiones de uso externo.
Los ejemplos de agentes emulsionantes no iónicos adecuados se describen en Paul L. Lindner en “Emulsions and Emulsion”, editado por Kenneth Lissant, publicado por Dekker, New York, N.Y., 1974. Entre los ejemplos de emulsionantes no iónicos que pueden utilizarse se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, productos BRIJ, tales como BRIJ 2 (un estearil-éter de polioxietileno (2)), BRIJ S20 (un estearil-éster de polioxietileno (20)), BRIJ 72 (un esteariléster de polioxietileno (2) que presenta un HLB de 4,9), BRIJ 721 (un estearil-éter de polioxietileno (21) que presenta un HLB de 15,5), Brij 30 (un lauril-éter de polixoetileno que presenta un HLB de 9,7), Polawax (cera emulsionante que presenta un HLB de 8,0), Span-60 (monoestearato de sorbitán que presenta un HLB de 4,7), Crodesta F-160 (estearato de sacarosa que presenta un HLB de 14,5).
Las composiciones farmacéuticas tópicas también pueden comprender emolientes adecuados. Los emolientes son materiales utilizados para la prevención o alivio de la sequedad, así como para la protección de la piel y el cabello. Entre los emolientes útiles se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, alcohol cetílico, miristato de isopropilo, alcohol estearílico y similares. Se conoce una amplia diversidad de emolientes adecuados y pueden utilizarse en la presente memoria. Ver, p. ej., Sagarin, Cosmetics, Science and Technology, 2a edición, vol. 1, páginas 32 a 43 (1972) y la patente US n.° 4.919.934, de Deckner et al., publicada el 24 de abril de 1990.
Las composiciones farmacéuticas tópicas pueden comprender, además, antioxidantes adecuados, sustancias que es conocido que inhiben la oxidación. Entre los antioxidantes adecuados para la utilización de acuerdo con la presente invención se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, hidroxitolueno butilado, ácido ascórbico, ascorbato sódico, ascorbato cálcico, palmitato ascórbico, hidroxianisol butilado, 2,4,5-trihidroxibutirofenona, 4-hidroximetil-2,6-di-tercbutilfenol, ácido eritórbico, goma de guayaco, galato de propilo, ácido tiodipropiónico, tiodipropionato de dilaurilo, tercbutilhidroquinona y tocoferoles, tales como vitamina E y similares, incluyendo sales y ésteres farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos. Preferentemente, el antioxidante es hidroxitolueno butilado, hidroxianisol butilado, galato de propilo, ácido ascórbico, sales o ésteres farmacéuticamente aceptables de los mismos, o mezclas de los mismos. Más preferentemente, el antioxidante es hidroxitolueno butilado.
Las composiciones farmacéuticas tópicas pueden comprender, además, conservantes adecuados. Los conservantes son compuestos añadidos a una formulación farmacéutica para actuar como un agente antimicrobiano. Son conservantes conocidos de la técnica como eficaces y aceptables en las formulaciones parenterales, cloruro de benzalconio, bencetonio, clorhexidina, fenol, m-cresol, alcohol bencílico, metilparabeno, propilparabeno, clorobutanol, o-cresol, p-cresol, clorocresol, nitrato fenilmercúrico, timerosal, ácido benzoico y diversas mezclas de los mismos. Ver, p. ej., Wallhausser, K.-H., Develop. Biol. Standard, 24:9-28 (1974) (S. Krager, Basel).
Las composiciones farmacéuticas tópicas pueden comprender, además, agentes quelantes adecuados para formar complejos con cationes metálicos que no cruzan una bicapa lipídica. Entre los ejemplos de agentes quelantes adecuados se incluyen ácido etilén-diamina-tetraacético (EDTA, por sus siglas en inglés), ácido etilén-glicol-bis(betaaminoetil éter)-N,N,N',N'-tetraacético (EGTA, por sus siglas en inglés) y ácido 8-amino-2-[(2-amino-5-metilfenoxi)metil]-6-metoxiquinolín-N,N,N',N'-tetraacético, sal tetrapotásica (QUIN-2). Preferentemente, los agentes quelantes son EDTA y ácido cítrico.
Las composiciones farmacéuticas tópicas pueden comprender, además, agentes neutralizantes adecuados utilizados para ajustar el pH de la formulación a un pH comprendido en un intervalo farmacéuticamente aceptable. Entre los ejemplos de agentes neutralizantes se incluyen, aunque sin limitación, trolamina, trometamina, hidróxido sódico, ácido clorhídrico, ácido cítrico y ácido acético.
Las composiciones farmacéuticas tópicas pueden comprender, además, agentes de incremento de la viscosidad adecuados. Estos componentes son compuestos difusibles capaces de incrementar la viscosidad de una solución que contiene polímero mediante la interacción del agente con el polímero. Puede utilizarse Carbopol Ultrez 10 como agente de incremento de la viscosidad.
Las formas líquidas, tales como lociones adecuadas para la administración tópica, pueden incluir un vehículo acuoso o no acuoso adecuado con tampones, agentes de suspensión y de dispensación, espesantes, potenciadores de la penetración, y similares. Las formas sólidas, tales como cremas, pastas o similares pueden incluir, por ejemplo, cualquiera de los ingredientes siguientes: agua, aceite, alcohol o grasa como sustrato con surfactante; polímeros, tales como polietilenglicol; espesantes, sólidos y similares. Las formulaciones líquidas o sólidas pueden incluir tecnologías de administración potenciada, tales como liposomas, microsomas, microesponjas y similares. Además, los compuestos pueden administrarse utilizando un sistema de liberación sostenida, tal como matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que contienen el agente terapéutico. Se han establecido diversos materiales de liberación sostenida y son bien conocidos por el experto en la materia.
Al formularse para la aplicación tópica, los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, puede estar presente en una proporción de entre 0,1 % y 50 % en peso. En algunas realizaciones, un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente en una proporción de entre 0,1 % y 25 % en peso. En algunas realizaciones, un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente en una proporción de entre 0,1 % y 10 % en peso. En algunas realizaciones, un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente en una proporción de entre 0,25 % y 5 % en peso. En algunas realizaciones, un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente en una proporción de entre 0,25 % y 2 % en peso. En algunas realizaciones, un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente en una proporción de entre 0,25 % y 1 % en peso. En algunas realizaciones, un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente en una proporción de entre 0,05 % y 0,5 % en peso.
En algunas realizaciones, un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está presente en una proporción de aproximadamente 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3, 3,25, 3,5, 3,75, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 o 10 % en peso.
En algunas realizaciones, la composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, comprende, además, uno o más agentes terapéuticos adicionales. En algunas realizaciones, el agente o agentes terapéuticos adicionales resultan útiles para tratar una enfermedad cutánea autoinmunitaria. En algunas realizaciones, el agente o agentes terapéuticos adicionales resultan útiles para tartar una enfermedad cutánea inflamatoria. En algunas realizaciones, el agente o agentes terapéuticos adicionales resultan útiles para tratar la dermatitis atópica. En algunas realizaciones, el agente o agentes terapéuticos adicionales resulta útil para tratar la alopecia areata. La clase específica de compuestos o compuestos específicos que pueden combinarse con un compuesto de fórmula (I) en una composición farmacéutica se ejemplifican en párrafos posteriores.
Los ejemplos no limitativos siguientes ilustran composiciones farmacéuticas representativas de la presente invención.
Forma de administración de dosis sólida oral en comprimido
Un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se mezcla en seco con celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona y croscarmelosa sódica en una proporción de 4:5:1:1 y se comprime en comprimidos para proporcionar una dosis unitaria de, por ejemplo, 5 mg, 20 mg o 40 mg de agente activo en cada comprimido.Forma de dosis sólida oral en cápsula
Se combina un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo con celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona y croscarmelosa sódica en una proporción de 4:5:1:1 mediante granulación húmeda y se carga en cápsulas de gelatina o hidroxipropil-metilcelulosa para proporcionar una dosis unitaria de, por ejemplo, 5 mg, 20 mg o 40 mg de agente activo en cada cápsula.
Formulación líquida
Se forma una formulación líquida que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo (0,1 %), agua (98,9 %) y ácido ascórbico (1,0 %) mediante la adición de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en una mezcla de agua y ácido ascórbico.
Forma de dosis oral con recubrimiento entérico
Un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se disuelve en una solución acuosa que contiene polivinilpirrolidona y se recubre mediante pulverización sobre mcirocristalina+celulosa o microesferas de azúcar en una proporción de 1:5 p/p de agente activo:microesferas y después se aplica una ganancia de peso de aproximadamente 5 % de un recubrimiento entérico que comprende un copolímero acrílico, por ejemplo una combinación de copolímeros acrílicos disponible bajo los nombres comerciales Eudragit-L® y Eudragit-S®, o succinato de acetato de hidroxipropil-metilcelulosa. Las microesferas con recubrimiento entérico se cargan en cápsulas de gelatina o hidroxipropil-metilcelulosa para proporcionar una dosis unitaria de, por ejemplo, 30 mg de agente activo en cada cápsula.
Forma de dosis oral con recubrimiento entérico
Se aplica un recubrimiento entérico que comprende una combinación de Eudragit-L® y Eudragit-S®, o succinato de acetato de hidroxipropil-metilcelulosa, en una forma de dosis oral en comprimido o una forma de dosis oral en cápsula descrita anteriormente.
Formulación de pomada para la administración tópica
Un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se combina con vaselina, triglicérido C8-C10, octilhidroxiestearato y N-metilpirrolidona en una proporción que proporciona una composición que contiene entre 0,05 % y 5 % de agente activo en peso.
Formulación de pomada para la administración tópica
Se combina un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo con vaselina, triglicérido C8-C10, octilhidroxiestearato, alcohol bencílico y N-metilpirrolidona en una proporción que proporciona una composición que contiene entre 0,05 % y 5 % de agente activo en peso.
Formulación de pomada para la administración tópica
Se combina un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo con vaselina blanca, propilenglicol, mono- y diglicéridos, parafina, hidroxitolueno butilado y edetato cálcico disódico en una proporción que proporciona una composición que contiene entre 0,05 % y 5 % de agente activo en peso.
Formulación de pomada para la administración tópica
Se combina un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo con aceite mineral, parafina, carbonato de propileno, vaselina blanca y cera blanca que proporciona una composición que contiene entre 0,05 % y 5 % de agente activo en peso.
Formulación de crema para la administración tópica
Se combina aceite mineral con un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, propilenglicol, palmitato de isopropilo, polisorbato-60, alcohol cetílico, monoestearato de sorbitán, estearato de polioxilo-40, ácido sórbico, metilparabeno y propilparabeno para formar una fase aceite, que se combina con agua purificada mediante mezcla por cizalla para proporcionar una composición que contiene entre 0,05 % y 5 % de agente activo en peso.
Formulación de crema para la administración tópica
Una formulación de crema que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, alcohol bencílico, alcohol cetílico, ácido cítrico anhidro, mono- y diglicéridos, alcohol oleílico, propilenglicol, cetoestearil-sulfato sódico, hidróxido sódico, alcohol estearílico, triglicéridos y agua que contiene entre 0,05 % y 5 % de agente activo en peso.
Formulación de crema para la administración tópica
Una formulación de crema que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, alcohol cetoestarílico, miristato de isopropilo, propilenglicol, cetomacrogol 1000, dimeticona-360, ácido cítrico, citrato sódico y agua purificada, con imidurea, metilparabeno y propilparabeno, como conservantes, que contiene entre 0,05 % y 5 % de agente activo en peso.
Formulación de crema para la administración tópica
Una formulación de crema que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, ácido esteárico, alcohol cetoestearílico, palmitato de isopropilo, octilhidroxiestearato, BRIJ S2 (éter estearílico de PEG-2), BRIJ S20 (éter estearílico de PEG-20), N-metilpirrolidona, PEG y agua contiene entre 0,05 % y 5 % de agente activo en peso.
Formulación de crema para la administración tópica
Una formulación de crema que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, ácido esteárico, alcohol cetoestearílico, palmitato de isopropilo, octilhidroxiestearato, BRIJ S2 (éter estearílico de PEG-2), BRIJ S20 (éter estearílico de PEG-20), N-metilpirrolidona, PEG-400 y agua contiene entre 0,05 % y 5 % de agente activo en peso.
Utilidad
Se ha mostrado que los compuestos de fórmula (I) son inhibidores potentes de la familia JAK de enzimas: JAK1, JAK2, JAK3 y TYK2. La inhibición de la familia de enzimas JAK inhibe la señalización de muchas citoquinas proinflamatorias clave. De esta manera, se espera que los compuestos de fórmula (I) resulten útiles en el tratamiento de enfermedades inflamatorias, tales como enfermedades cutáneas inflamatorias y pruríticas, enfermedades inflamatorias gastrointestinales, enfermedades oculares inflamatorias y enfermedades respiratorias inflamatorias.
Enfermedad cutánea inflamatoria
La dermatitis atópica se ha asociado a la elevación de las citoquinas proinflamatorias que se basan en la ruta JAK-STAT, en particular, IL-4, IL-5, IL-10, IL-13 e IFNy. Debido a que los compuestos de fórmula (I) muestran una inhibición potente de la totalidad de los cuatro enzimas JAK, se espera que inhiban potentemente las citoquinas proinflamatorias características de la dermatitis atópica y otras enfermedades cutáneas inflamatorias. También se ha mostrado en la presente memoria que los compuestos de fórmula (I) muestran elevados valores de pIC50 de inhibición de la fosforilación de STAT5 inducida por IL-2 en ensayo celular. Se ha observado la recuperación de los compuestos sometidos a ensayo para la expresión de filagrina suprimida por interleuquina-22 (IL-22) a una concentración <1 pM. Las citoquinas IL-12, IL-22 e IL-23 son citoquinas implicadas en la soriasis (Baliwag et al., Cytokine, 2015, 73(2), 342 350, 2015). Estas citoquinas señalizan a través de los enzimas JAK2 y Tyk2 (Ishizaki et al., J. Immunol., 2011, 187, 181-189). Las terapias de anticuerpos con diana en estas citoquinas han demostrado utilidad clínica en la soriasis (Schadler et al., Disease-a-Month, 2018, 1-40). Un inhibidor de JAK tópico que puede bloquear dichas citoquinas se esperaría que resultase eficaz en esta enfermedad. Debido a que dichas citoquinas señalizan a través de Tyk2 y JAK2, se espera que los compuestos de fórmula (I) presenten actividad en esta enfermedad.
Se espera que los niveles dérmicos sostenidos de inhibidores de JAK en ausencia de niveles sistémicos significativos resultará en una actividad antiinflamatoria y antiprurítica local potente en la piel sin efectos adversos manifestados sistémicamente. Se espera que dichos compuestos resulten beneficiosos en varias afecciones inflamatorias o pruríticas dérmicas entre las que se incluyen, aunque sin limitación, dermatitis atópica, vitíligo, vitíligo no segmentaria, linfoma de células T cutáneo y subtipos (síndrome de Sézary, micosis fungoide, reticulosis pagetoide, piel laxa granulomatosa, papulosis linfomatoide, pitiriasis liquenoide crónica, pitiriasis liquenoide y varioliforme aguda, linfoma de células T cutáneo CD30+, linfoma de células grandes CD30+ cutáneo secundario, linfoma de células T grandes cutáneo CD30' no micosis fungoide, linfoma de células T pleomórfico, linfoma de Lennert, linfoma de células T subcutáneo, linfoma angiocéntrico, linfoma de células NK blásticas, prurigo nodular, liquen plano, dermatitis de contacto, eccema dishidrótico, eccema, dermatitis numular, dermatitis seborreica, dermatitis por estasis, amiloidosis cutánea localizada primaria, penfigoide bulloso, manifestaciones cutáneas de la enfermedad del injerto contra el huésped, penfigoide, lupus discoide, granuloma anular, liquen simple crónico, prurito, prurito vulvar/escrotal/perianal, liquen escleroso, picor neurálgico postherpético, liquen plano pilar, soriasis, eccema de las manos crónico, hidradenitis supurativa, síndrome hipereosinofílico, lupus eritematoso sistémico y foliculitis decalvante. En particular, la dermatitis atópica (Bao et al, JAK-STAT, 2013, 2, e24137), alopecia areata (Xing et al., Nat. Med. 2014, 20, 1043-1049), incluyendo subtipos tales como alopecia areata monolocular, alopecia areata multilocular, ofiasis, alopecia areata universal, alopecia areata total y alopecia areata barba, vitíligo (Craiglow et al., JAMA Dermatol. 2015, 151, 1110 1112), linfoma de células T cutáneo (Netchiporouk et al., Cell Cycle. 2014, 13, 3331-3335), prurigo nodular (Sonkoly et al., J. Allergy Clin. Immunol. 2006, 117, 411-417), liquen plano (Welz-Kubiak et al., J. Immunol. Res. 2015, ID :854747), amiloidosis cutánea localizada primaria (Tanaka et al., Br. J. Dermatol. 2009, 161, 1217-1224), penfigoide ampolloso (Feliciani et al., Int. J. Immunopathol. Pharmacol. 1999, 12, 55-61) y manifestaciones dérmicas de la enfermedad del injerto contra el hospedador (Okiyama et al., J. Invest. Dermatol. 2014, 134, 992-1000) se caracterizan por la elevación de determinadas citoquinas que señalización mediante la activación de JAK. De acuerdo con lo anterior, se espera que los compuestos de fórmula (I) alivien la inflamación dérmica o prurito asociado activada por dichas citoquinas. En particular, se espera que los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, resulten útiles para el tratamiento de la dermatitis atópica y otras enfermedades cutáneas inflamatorias.
Se ha mostrado que los compuestos de fórmula (I) presentan una elevada eliminación en los microsomas humanos. De esta manera, presentan la ventaja de ser rápidamente eliminados, que minimiza la exposición sistémica y reduce el riesgo de efectos adversos.
Los compuestos de fórmula (I) poseen, además, elevada permeabilidad, lo que resulta beneficioso para las indicaciones cutáneas, ya que aparentemente permite una mejor penetración en la piel.
los compuestos de fórmula (I) poseen, además, propiedades de solubilidad ventajosas en excipientes acuosos y/u orgánicos que facilitan la formulación en composiciones tópicas.
En algunas realizaciones, por lo tanto, la invención proporciona un método de tratamiento de una enfermedad cutánea inflamatoria o autoinmunitaria en un mamífero (p. ej., un ser humano), que comprende aplicar una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéutico en la piel del mamífero.
En algunas realizaciones, la invención proporciona un método de tratamiento de una enfermedad cutánea inflamatoria o autoinmunitaria en un mamífero (p. ej., un ser humano), que comprende administrar un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el mamífero. En algunas realizaciones, la enfermedad cutánea inflamatoria es la dermatitis atópica. En algunas realizaciones, la dermatitis atópica es leve a moderada. En algunas realizaciones, la dermatitis atópica es moderada a grave. En algunas realizaciones, la enfermedad cutánea autoinmunitaria es la alopecia areata.
También puede utilizarse un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con uno o más compuestos útiles para tratar las enfermedades cutáneas inflamatorias. En algunas realizaciones, el compuesto o compuestos son un esteroide, corticoesteroide, antibiótico, antagonista de receptor de histamina H1, inhibidor de calcineurina, antagonista de IL-13, inhibidor de PDE-4, antagonista de receptor-44 acoplado con proteína G, antagonista de IL-4, antagonista de receptor 5HT 1A, antagonista de receptor 5-HT 2b, agonista de adrenoceptor alfa-2, antagonista de receptor de canabinoide CB1, quimioquina CCR3, antagonista, inhibidor de colagenasa, inhibidor citosólico de fosfolipasa A2, inhibidor de ligando de eotaxina, inhibidor de factor de transcripción GATA3, antagonista de receptor de histamina H4, antagonista de IL-10, antagonista de IL-12, antagonista de IL-17, antagonista de IL-2, antagonista de IL-23, modulador de receptor de IL-4, antagonista de IL-15, antagonista de IL-16, antagonista de IL-8, antagonista de IL-9, antagonista de IL-5, antagonista de la inmunoglobulina E, modulador de la inmunoglobulina E, antagonista de receptor de interferón gamma, ligando de interferón gamma, inhibidor de ligando de interleuquina-33, antagonista de receptor de interleuquina-31, antagonista de leucotrieno, agonista de receptor X hepático, agonista de receptor beta X hepático, inhibidor de factor nuclear kappa B, antagonista de receptor de OX-40, antagonista de PGD2, inhibidor de fosfolipasa A2, estimulante de la fosfatasa de inositol-1 con dominio SH2, inhibidor de ligando de linfoproteína estromal tímico, modulador de TLR, modulador de ligando de TNF alfa, estimulante de gen TLR9, proteína-4 estimuladora asociada a linfocito T citotóxico, agonista de receptor kappa de opioide, inhibidor de galectina-3, inhibidor de histona desacetilasa-1, inhibidor de histona desacetilasa-2, inhibidor de histona desacetilasa-3, inhibidor de histona desacetilasa-6, inhibidor de histona desacetilasa, agonista de glucocorticoide, inhibidor de tirosina quinasa Syk, antagonista de receptor TrkA, antagonista de integrina alfa-4/beta-1, antagonista de receptor de tipo interleuquina-1, inhibidor de enzima conversor de la interleuquina-1, antagonista de receptor de interleuquina-31, inhibidor del canal de potasio KCNA-3 activado por voltaje, inhibidor del gen PDE4B, inhibidor de la calicreína-2, agonista de receptor-1 de esfingosín-1-fosfato, proteína estimuladora del epitelio pigmentario retiniano, inhibidor de CD28 de glucoproteína de superficie de las células T, antagonista de TGF-beta, antagonista del vainilloide VR1, antagonista del receptor de NK1, inhibidor de galectina-3, antagonista de receptor de citoquina, antagonista e receptor de andrógeno, estimulador de fosfatasa-1 de esfingosín-1-fosfato, modulador de receptor-1 de esfingosín-1-fosfato, modulador de receptor-4 de esfingosín-1-fosfato, modulador de receptor-5 de esfingosín-1-fosfato, inhibidor de ligando de interleuquina-1-alfa, inhibidor de ligando de OX40, inhibidor de receptor-2 de tipo interleuquina-1, ligando de hormona estimulante de melanocitos, antagonista de receptor de ligando de CD40, modulador de ligando de osteopontina, modulador de ligando de interleuquina-1-beta, inhibidor-beta de quinasa I-kappa B, inhibidor de 5-alfa-reductasa, inhibidor de 5-alfa-reductasa-1, inhibidor de 5-alfa-reductasa-2, inhibidor del canal del sodio, inhibidor de la proteína-3 del dominio NACHT LRR PYD, modulador de ligando Wnt, ligando de Wnt7A, agonista de receptor de melanocortina MC1, inhibidor de mTOR, modulador de polimerización de la actina, agonista de laminina-5, modulador de metaloproteasa-2, modulador de metaloproteasa-9, inhibidor del factor nuclear kappa-B, ligando de timosina beta-4, agonista de receptor de timosina, ligando de FGF-7, agonista de folistatina, ligando de VEGF, inhibidor de proteína quinasa MEK-1, inhibidor del gen Ras, inhibidor de 5-alfa-reductasa, antagonista de adrenoceptor alfa-1A, inhibidor de calicreína-7, inhibidor de fosfalipasa A2 citosólica, inhibidor del factor de elongación-2, estimulador de la NAD ADP-ribosiltransferasa, ligando de interleuquina-2, inhibidor del factor nuclear kappa-B, antagonista de IL-22, agonista de receptor del factor de crecimiento epidérmico, estimulador de la proteína del epitelio pigmentario retiniano, estimulador de la proteína quinasa activada por AMP, inhibidor de ICE, inhibidor del canal del potasio KCNA-3 activado por voltaje, agonista de receptor-1 de ácido biliar acoplado con proteína G o modulador del canal de potasio.
En algunas realizaciones, un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra en combinación con betametasona, ácido fusídico, GR-MD-02, dupilumab, acetato de rosiptor, AS-101, ciclosporina, IMD-0354, secukinumab, Actimmune, lebrikizumab, CMP-001, mepolizumab, pegcantratinib, tezepelumab, MM-36, crisaborol, ALX-101, bertilimumab, FB-825, AX-1602, BNZ-1, abatacept, tacrolimus, ANB-020, JTE-052, ZPL-389, ustekinumab, GBR-830, GSK-3772847, ASN-002, remetinostat, apremilast, timapiprant, MOR-106, asivatrep, nemolizumab, fevipriprant, doxiciclina, MDPK-67b, desloratadina, tralokinumab, fexofenadina, pimecrolimus, bepotastina, nalfurafina, VPT-38543, Q-301, ligelizumab, RVT-201, DMT-210, KPI-150, AKP-11, E-6005, AMG-0101, AVX-001, PG-102, ZPL-521, MEDI-9314, AM-1030, WOL-071007, MT-0814, valerato de betametasona, SB-011, epinastina, tacrolimus, tranilast, tradipitant, difamilast, LY-3375880, tapinarof, etokimab, clascoterona, etrasimod, bermekimab, KHK-4083, SAR-440340, BI-655130, EDP-1815, EDP-1066, DUR-928, afamelanotide, adriforant, diroleutón, FOL-005, KY-1005, PUR-0110, BTX-1204, ADSTEM, finastéride, BMX-010, BBI-5000, MSB-01, ATI-501, B-244, ASN-008, ácido hipocloroso, difenilciclopropenona, RG-6149, LY-3454738, SB-414, agonista de S1P1, SM-04554, PL-8177, rapamicina, rosa de Bengala sódica, tonabacasa, pentahidrocloruro de omiganan, desónide, terapia de células madre mesenquimales alogénicas, timbetasina, ASLAN-004, HSC-660, fluocinónide, niclosamida, antroquinonol, dutastéride, tamsulosina, UCA-001, dapsona, brilacidina, BPR-277, anapsos, dutastéride, denileuquina diftitox, chanllergen, ARGX-112, PF-06817024, hidrocloruro de epinastina, IDP-124, nepidermina, bioterapia basada enRoseomonas mucosa,ENERGI-F701, HAT-1, lotamilast, HY-209, mometasona, melgaína, doxiciclina, TS-133, icomucret, antagonista de CRTH2, ACH-24, propionato de fluticasona, CD-4802, minoxidilo, finastéride, halometasona, tricomina o viromed, o cualquier combinación de los mismos.
En algunas realizaciones, un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con un esteroide, un antibiótico y un hidratante (Lakhani et al., Pediatric Dermatology, 2017, 34, 3, 322-325). En algunas realizaciones, el compuesto o compuestos son un antibiótico Gram-positivo, tal como mupirocina o ácido fusídico.
Un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, también puede utilizarse en combinación con antibióticos gram-positivos, tales como mupirocina y ácido fusídico, para tratar enfermedades cutáneas inflamatorias. Por lo tanto, en un aspecto, la invención proporciona un método de tratamiento de una enfermedad cutánea inflamatoria en un mamífero, comprendiendo el método la aplicación de un compuesto de la exposición, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un antibiótico gram-positivo en la piel del mamífero. En otro aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la exposición, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, un antibiótico gram-positivo y un portador farmacéuticamente aceptable.
Por lo tanto, en otro aspecto, la invención proporciona una combinación terapéutica para la utilización en el tratamiento de trastornos inflamatorios cutáneos, comprendiendo la combinación un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y otro u otros agentes terapéuticos útiles para tratar trastornos inflamatorios cutáneos. El agente o agentes secundarios, al incluirlos, están presentes en una cantidad terapéuticamente eficaz, es decir, en cualquier cantidad que produzca un efecto terapéuticamente beneficioso al coadministrarlos con un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Por lo tanto, se proporciona, además, una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y otro u otros agentes terapéuticos útiles para el tratamiento de los trastornos inflamatorios cutáneos.
Además, en un aspecto metodológico, la invención proporciona un método de tratamiento de los trastornos inflamatorios cutáneos, comprendiendo el método la administración en el mamífero de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y otro u otros agentes terapéuticos útiles para tratar los trastornos inflamatorios cutáneos.
Enfermedad inflamatorio gastrointestinal
Debido a su inhibición de la familia JAK de enzimas, se espera que los compuestos de fórmula (I) resulten útiles para una diversidad de indicaciones inflamatorios gastrointestinales entre las que se incluyen, aunque sin limitación, colitis ulcerosa (proctosigmoiditis, pancolitis, proctitis ulcerosa y colitis de lado izquierdo), enfermedad de Crohn, colitis colagenosa, colitis linfocítica, enfermedad de Behcet, enfermedad celíaca, colitis inducida por inhibidor de punto de control inmunitario, ileítis, esofagitis eosinofílica, colitis relacionada con la enfermedad del injerto contra el hospedador y colitis infecciosa. La colitis ulcerosa (Reimund et al., J. Clin. Immunology, 1996, 16, 144-150), la enfermedad de Crohn (Woywodt et al., Eur. J. Gastroenterology Hepatology, 1999, 11, 267-276), la colitis colagenosa (Kumawat et al., Mol. Immunology, 2013, 55, 355-364), colitis linfocítica (Kumawat et al., 2013), la esofagitis eosinofílica (Weinbrand-Goichberg et al., Immunol. Res., 2013, 56, 249-260), la colitis relacionada con enfermedad del injerto contra el hospedador (Coghill et al., Blood, 2001, 117, 3268-3276), la colitis infecciosa (Stallmach et al., Int. J. Colorectal Dis., 2004, 19, 308-315), la enfermedad de Behcet (Zhou et al., Autoimmun. Rev., 2012, 11,699-704), la enfermedad celíaca (de Nitto et al., World J. Gastroenterol., 2009, 15, 4609-4614), la colitis inducida por inhibidor de punto de control inmunitario (p. ej., colitis inducida por inhibidor de CTLA-4 (Yano et al., J. Translation Med., 2014, 12, 191), la colitis inducida por inhibidor de PD-1 o de PD-L1) y la ileítis (Yamamoto et al., Dig. Liver Dis., 2008, 40, 253-259) se caracterizan por la elevación de los niveles de determinadas citoquinas proinflamatorias. Debido a que muchas citoquinas proinflamatorias señalizan mediante la activación de JAK, los compuestos descritos en la presente solicitud podrían ser capaces de aliviar la inflamación y proporcionar un alivio de los síntomas.
Por lo tanto, en algunas realizaciones, la exposición proporciona un método de tratamiento de una enfermedad inflamatoria gastrointestinal en un mamífero (p. ej., un ser humano), que comprende administrar en el mamífero una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En algunas realizaciones, la exposición proporciona un método de tratamiento de una enfermedad inflamatoria gastrointestinal en un mamífero (p. ej., un ser humano), que comprende la administración en el mamífero de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La exposición proporciona, además, un método de tratamiento de la colitis ulcerosa en un mamífero, comprendiendo el método la administración en el mamífero de un compuesto de la exposición o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la exposición, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En el caso de que se utilice para tratar la colitis ulcerosa, el compuesto de la exposición normalmente se administrará por vía oral en una única dosis diaria o en múltiples dosis diarias, aunque pueden utilizarse otras formas de administración. La cantidad de agente activo administrada por dosis o la cantidad total administrada diariamente normalmente serán determinadas por un médico, a la luz de las circunstancias relevantes, incluyendo la afección que debe tratarse, la vía de administración seleccionada, el compuesto mismo que se administre y su actividad relativa, la edad, peso y respuesta del paciente individual, la gravedad de los síntomas del paciente, y similares.
Se espera que las dosis adecuadas para tratar la colitis ulcerosa y otros trastornos inflamatorios gastrointestinales se encuentren comprendidas en el intervalo de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 400 mg/día de agente activo, incluyendo entre aproximadamente 5 y aproximadamente 300 mg/día y entre aproximadamente 20 y aproximadamente 70 mg al día de agente activo para un ser humano medio de 70 kg.
Los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, también pueden utilizarse en combinación con uno o más agentes que actúen mediante el mismo mecanismo o mediante mecanismos diferentes para producir el tratamiento de trastornos inflamatorios gastrointestinales. Entre las clases útiles de agentes para la terapia de combinación se incluyen, aunque sin limitación, aminosalicilatos, esteroides, inmunosupresores sistémicos, anticuerpos anti-TNFa, anticuerpos anti-VLA-4, anticuerpos anti-integrina a4p7, agentes antibacterianos y medicamentos antidiarreicos.
Entre los aminosalicilatos que pueden utilizarse en combinación con compuestos de fórmula (I) se incluyen, aunque sin limitación, mesalamina, osalazina y sulfasalazina. Entre los ejemplos de esteroides se incluyen, aunque sin limitación, prednisona, prednisolona, hidrocortisona, budesónide, beclometasona y fluticasona. Entre los inmunosupresores sistémicos útiles para el tratamiento de trastornos inflamatorios se incluyen, aunque sin limitación, ciclosporina, azatioprina, metotrexato, 6-mercaptopurina y tacrolimus. Además, pueden utilizarse anticuerpos anti-TNFa, que incluyen, aunque sin limitación, infliximab, adalimumab, golumumab y certolizumab, en terapia de combinación. Entre los compuestos útiles que actúan mediante otros mecanismos se incluyen anticuerpos anti-VLA-4, tales como natalizumab, anticuerpos anti-integrina a4p7, tales como vdolizumab, agentes antibacterianos, tales como rifaximina y medicamentos antidiarreicos, tales como loperamida (Mozaffari et al., Expert Opin. Biol. Ther. 2014, 14, 583-600; Danese, Gut, 2012, 61, 918-932; Lam et al., Immunotherapy, 2014, 6, 963-971).
Por lo tanto, en otro aspecto, la exposición proporciona una combinación terapéutica para la utilización en el tratamiento de trastornos inflamatorios gastrointestinales, comprendiendo la combinación un compuesto de la exposición, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y otro u otros agentes terapéuticos útiles para tratar trastornos inflamatorios gastrointestinales. Por ejemplo, la exposición proporciona una combinación que comprende un compuesto de la exposición, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y uno o más agentes seleccionados de aminosalicilatos, esteroides, inmunosupresores sistémicos, anticuerpos anti-TNFa, anticuerpos anti-VLA-4, anticuerpos anti-integrina a4p7, agentes antibacterianos y medicamentos antidiarreicos. El agente o agentes secundarios, en caso de incluirse, están presentes en una cantidad terapéuticamente eficaz, es decir, en cualquier cantidad que produzca un efecto terapéuticamente beneficioso al coadministrarse con un compuesto de la exposición, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Por lo tanto, también se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y otro u otros agentes terapéuticos útiles para tratar trastornos inflamatorios gastrointestinales.
Además, en un aspecto metodológico, la exposición proporciona un método de tratamiento de trastornos inflamatorios gastrointestinales, comprendiendo el método la administración en el mamífero de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y otro u otros agentes terapéuticos útiles para tratar trastornos inflamatorios gastrointestinales.
Enfermedades respiratorias
Las citoquinas que señalizan a través de la ruta JAK-STAT, en particular, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-11, IL-13, IL-23, IL-31, IL-27, linfopoyetina estromal tímica (TSLP, por sus siglas en inglés), interferón-Y (IFNy) y factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF, por sus siglas en inglés) se han implicado en la inflamación del asma y en otras enfermedades respiratorias inflamatorias. Tal como se ha indicado anteriormente, se ha mostrado que los compuestos de fórmula (I) son potentes inhibidores de las quinasas Janus y han demostrado una potente inhibición de las citoquinas proinflamatorias IL-13 en ensayo celular.
La actividad antiinflamatoria de los inhibidores de JAK se ha demostrado de forma sólida en modelos preclínicos de asma (Malaviya et al., Int. Immunopharmacol., 2010, 10, 829-836; Matsunaga et al., Biochem. and Biophys. Res. Commun., 2011, 404, 261-267; Kudlacz et al., Eur. J. Pharmacol., 2008, 582, 154-161). De acuerdo con lo anterior, los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los ismos, pueden resultar útiles para el tratamiento de trastornos respiratorios inflamatorios, tales como el asma. La inflamación y la fibrosis del pulmón es característica de otras enfermedades respiratorias además del asma, tal como la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), la fibrosis quística (FQ), la neumonitis, las enfermedades pulmonares intersticiales (incluyendo la fibrosis pulmonar idiopática), la lesión pulmonar aguda, el síndrome de la dificultad respiratoria aguda, la bronquitis, el enfisema y la bronquiolitis obliterante. Por lo tanto, los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, podría resultar útil para el tratamiento de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica, la fibrosis quística, la neumonitis, las enfermedades pulmonares intersticiales (incluyendo la fibrosis pulmonar idiopática), la lesión pulmonar aguda, el síndrome de la dificultad respiratoria aguda, la bronquitis, el enfisema, la bronquiolitis obliterante, la disfunción crónica del aloinjerto pulmonar (DCAP), el rechazo del trasplante pulmonar y la sarcoidosis.
Por lo tanto, en un aspecto, la exposición proporciona un método de tratamiento de una enfermedad respiratoria en un mamífero (p. ej., un ser humano) que comprende administrar en el mamífero un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En un aspecto, la enfermedad respiratoria es asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, fibrosis quística, neumonitis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), fibrosis quística (FQ), neumonitis, enfermedades pulmonares intersticiales (incluyendo la fibrosis pulmonar idiopática), lesión pulmonar aguda, síndrome de la dificultad respiratoria aguda, bronquitis, enfisema, bronquiolitis obliterante, rinitis alérgica o sarcoidosis. En otro aspecto, la enfermedad respiratoria es asma o enfermedad pulmonar obstructiva crónica.
En un aspecto adicional, la enfermedad respiratoria es una infección pulmonar, una infección helmíntica, hipertensión arterial pulmonar, sarcoidosis, linfangioleiomiomatosis, bronquiectasis o una enfermedad pulmonar infiltrante. En todavía otro aspecto, la enfermedad respiratoria es neumonitis inducida farmacológicamente, neumonitis inducida fúngicamente, aspergilosis broncopulmonar alérgica, neumonitis por hipersensibilidad, granulomatosis eosinofílica con poliangitis, neumonía eosinofílica aguda idiopática, neumonía eosinofílica crónica idiopática, síndrome hipereosinofílico, síndrome de Loffler, bronquiolitis obliterante con neumonía organizada o neumonitis inducida por inhibidor de punto de control inmunitario.
La exposición proporciona, además, un método de tratamiento de una enfermedad respiratoria, comprendiendo el método la administración en el mamífero de una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un portador farmacéuticamente aceptable.
También pueden utilizarse compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, con uno o más compuestos útiles para enfermedades respiratorias.
Enfermedades oculares
Se han asociado muchas enfermedades oculares a elevaciones de citoquinas proinflamatorias que se basan en la ruta JAK-STAT.
Por lo tanto, los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, podrían resultar útiles para el tratamiento de varias enfermedades oculares, entre las que se incluyen, aunque sin limitación, uveítis, retinopatía diabética, edema macular diabético, enfermedad del ojo seco, degeneración macular asociada a la edad y queratoconjuntivitis atópica.
En particular, la uveítis (Horai y Caspi, J. Interferon Cytokine Res., 2011, 31, 733-744), la retinopatía diabética (Abcouwer, J. Clin. Cell Immunol., 2013, supl. 1, 1-12), el edema macular diabético (Sohn et al., American Journal of Ophthalmology, 2011, 152, 686-694), la enfermedad del ojo seco (STevenson et al., Arch. Ophthalmol., 2012, 130, 90 100), la oclusión de la vena retiniana (Shchuko et al., Indian Journal of Ophthalmology, 2015, 63(12), 905-911) y la degeneración macular asociada a la edad (Knickelbein et al., Int. Ophthalmol. Clin., 2015, 55(3), 63-78) se caracterizan por la elevación de determinadas citoquinas proinflamatorias que señalizan a través de la ruta JAK-STAT. De acuerdo con ello, los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, podrían ser capaces de aliviar la inflamación ocular asociada y revertir la progresión de la enfermedad o proporcionar alivio de los síntomas.
Por lo tanto, en un aspecto, la exposición proporciona un método de tratamiento de una enfermedad ocular en un mamífero, que comprende administrar un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un portador farmacéutico en el ojo del mamífero. En un aspecto, la enfermedad ocular es uveítis, retinopatía diabética, edema macular diabético, enfermedad del ojo seco, degeneración macular asociada a la edad o queratoconjuntivitis atópica. En un aspecto, el método comprende administrar un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo mediante inyección intravítrea.
También pueden utilizarse compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en combinación con uno o más compuestos útiles para enfermedades oculares.
Otras enfermedades
Los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, también podrían resultar útiles para el tratamiento de otras enfermedades, tales como otras enfermedades inflamatorias, autoinmunitarias o cánceres.
Los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, podrían resultar útiles para tratar cavidades orales, mucositis oral y estomatitis aftosa recurrente.
Los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, también podrían resultar útiles para el tratamiento de una o más de artritis, artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, rechazo del trasplante, xeroftalmia, artritis soriásica, diabetes, diabetes insulino-dependiente, enfermedad de las neuronas motoras, síndrome mielodisplásico, dolor, sarcopenia, caquexia, choque séptico, lupus eritematoso sistémico, leucemia, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielocítica crónica, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielógena aguda, espondilitis anquilosante, mielofibrosis, linfoma de células B, carcinoma hepatocelular, enfermedad de Hodgkin, cáncer de mama, mieloma múltiple, melanoma, carcinoma de células escamosas, linfoma no de Hodgkin, cáncer pulmonar no microcítico, carcinoma de células claras ováricas, tumor ovárico, tumor pancreático, policitemia vera, síndrome de Sjogrens, sarcoma de tejidos blandos, sarcoma, esplenomegalia, linfoma de células T y talasemia mayor.
La exposición proporciona un método de tratamiento de dichas enfermedades en un mamífero, que comprende administrar un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéutico en el mamífero.
En los párrafos anteriores, al utilizarlos en terapia de combinación, los agentes pueden formularse en una única composición farmacéutica, tal como se ha dado a conocer anteriormente, o los agentes pueden proporcionarse en composiciones separadas que se administran simultáneamente o en tiempos separados, mediante la vía de administración o por vías de administración diferentes. Al administrarse por separado, los agentes se administran suficientemente próximos en el tiempo para que proporcionen el efecto terapéutico deseado. Dichas composiciones pueden envasarse por separado o pueden envasarse juntos en forma de un kit. Los dos o más agentes terapéuticos en el kit pueden administrarse mediante la misma vía de administración o por vías de administración diferentes.
EJEMPLOS
Los ejemplos sintéticos y biológicos siguientes se proporcionan con el fin de ilustrar la invención y no deben interpretarse en modo alguno como limitativos del alcance de la invención. En los ejemplos, posteriormente, las abreviaturas siguientes presentan los significados siguientes, a menos que se indique lo contrario. Las abreviaturas no definidas a continuación presentan sus significados generalmente aceptados.
ACN = acetonitrilo
Bn = bencilo
Boc = terc-butiloxicarbonilo
d<=>día(s)
DIPEA = N,N-diisopropiletilamina
DMF = N,N-dimetilformamida
DMSO = dimetilsulfóxido
EtOAc<=>acetato de etilo
EtOH<=>alcohol etílico
h = hora(s)
HATU<=>hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronio
IPA<=>alcohol isopropílico
MeOH = metanol
min<=>minuto(s)
NMP = N-metilpirrolidona
TA<=>temperatura ambiente
TEA = trietilamina
THF = tetrahidrofurano
TFA<=>ácido trifluoroacético
Se adquirieron los reactivos y solventes de proveedores comerciales (Aldrich, Fluka, Sigma, etc.) y se utilizaron sin purificación adicional. Se monitorizó el progreso de las mezclas de reacción mediante cromatografía de capa fina (CCF), cromatografía líquida de alto rendimiento analítica (HPLC anal.) y/o espectrometría de masas. Las mezclas de reacción se trataron tal como se indica específicamente en cada reacción; normalmente se purificaron mediante extracción y otros métodos de purificación, tales como la cristalización dependiente de la temperatura y del solvente, y precipitación. Además, se purificaron rutinariamente las mezclas de reacción mediante cromatografía de columna o mediante HPLC preparativa, habitualmente utilizando rellenos de columna C18 o BDS y eluyentes convencionales. La caracterización de los productos de reacción se llevó a cabo rutinariamente mediante espectrometría de masas y RMN-1H. Para el análisis de RMN, las muestras se disolvieron en solvente deuterado (tal como CD3OD, CDCh o DMSO-d6) y se adquirieron los espectros de RMN-1H.
Preparación 1: ((1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)(metil)carbamato de bencil-terc-butilo (I1)
A una solución helada deI-1a(100 g, 683 mmoles) y glutaraldehído (410 ml, 1,02 moles) en dioxano/H2O (proporción 1:6, 2400 ml) se añadió BnH2 (73,11 g, 686,6 mmoles). La mezcla resultante se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 16 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se enfrió a 0 °C y se acidificó con HCl conc. (pH~2,0). La mezcla de reacción se sometió a agitación a 60 °C durante 1 h antes de enfriarla a 0 °C y basificarla con una solución acuosa de NaOH 12 N hasta pH~10. La solución resultante se extrajo con EtOAc (3x1000 ml) y los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina (3x500 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionando el producto en bruto, que se purificó mediante cromatografía de columna sobre gel de sílice (100-200 M) utilizando los eluyentes EtOAc al 20 % en hexanos y proporcionando el producto deseado en forma del sólido blanquecinoI-1b(90 g, 58 %).
Etapa 2: preparación de oxima de (1R,5S,Z)-9-bencil-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-ona(I-1c)
A una solución helada deI-1b(90,0 g, 393 mmoles) en MeOH (2,0 l) se añadió CHaCOOna (90,12 g, 1099 mmoles) seguido de N^OH-HCl (103,66 g, 1491,5 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 2 h. El progreso de la reacción se monitorizó mediante CCF. Tras completarse la reacción, la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se disolvió en K2CO3 acuoso. La solución resultante se extrajo con DCM (3x500 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionando el producto en bruto, que se trituró con n-pentano, proporcionando el producto deseado en forma del sólido blanquecinoI-1c(83 g, 93 %). CL-EM: m/z [M+H]+=245,0 (calc. m/z [M+H]+=245,17).
Etapa 3: preparación de (1R,3s,5S)-9-bencil-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-amina(I-1d)
A una solución bajo agitación de compuestoI-1c(15,0 g, 61,4 mmoles) en n-propanol (800 ml) se añadió metal Na (56,72 g, 2456 mmoles) a lo largo de un periodo de 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se sometió a agitación bajo reflujo durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente, se vertió en agua helada y se extrajo con EtOAc (3x500 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionando el producto en bruto en forma de líquido gomoso. Se añadió hexano y el residuo insoluble se eliminó mediante filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo marrón oscuro que se purificó adicionalmente utilizando un tratamiento ácido-base, proporcionandoI-1den forma de un líquido marrón (6,5 g, 46 %). CL-EM: m/z [M+H]+=231,29 (calc. m/z [M+H]+=231,19).
Etapa 4: preparación de ((1R,3s,5S)-9-bencil-9-azabiciclo[3.3.1]nonán- 3-il)carbamato de terc-butilo(I-1e)
A una solución helada de compuestoI-1d(5,00 g, 21,7 mmoles) en DCM (50 ml) se añadió Et3N (3,30 ml, 23,9 mnoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación durante 30 min y se añadió gota a gota (Boc)2O (5,00 ml, 23,9 mmoles). La mezcla se dejó que se calentase hasta la temperatura ambiente y se sometió a agitación durante 16 h adicionales. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida. El producto en bruto se trató con n-pentano y se filtró, proporcionandoI-1een forma de un sólido blanquecino (5,0 g, 74 %).
Etapa 5: preparación de ((1R,3s,5S)-9-bencil-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)(metil)carbamato de terc-butilo(I-1f)
A una solución helada de compuestoI-1e(5,00 g, 15,2 mmoles) en DMF (50 ml) se añadió NaH (dispersión al 60 % en aceite mineral, 1,80 g, 45,4 mmoles) en partes seguido de CHel (1,90 ml, 30,4 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 16 h. El avance de la reacción se monitorizó mediante CL-EM. Tras completarse la reacción, la mezcla se enfrió a 0 °C, se desactivó con agua helada y se extrajo con EtOAc (3x250 ml). Los extractos orgánicos agrupados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando el producto deseado en forma del sólido blanquecinoI-1f(4,0 g, 76 %), que se utilizó en la etapa siguiente sin purificación. CL-EM: m/z [M+H]+=345,34 (calc. m/z [M+H]+=345,25).
Etapa 6: preparación de ((1R,3s,5S)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)(metil)carbamato de bencil-terc-butilo(I1)
A una solución bajo agitación de compuestoI-1f(5,0 g, 14,51 mmoles) en IPA/THF (proporción 1:1, 10 ml) se añadió Pd(OH)2/C (0,4 g) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente bajo una atmósfera de hidrógeno durante 16 h. Se monitorizó el avance de la reacción mediante CCF. Tras completarse la reacción, la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite y se eluyó con una solución 1:1 de IPA/THF. El filtrado se concentró bajo presión reducida, proporcionando el producto en bruto en forma de líquido marrónI1(3,69 g, cuantitativo); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6Ó4,86 (br s, 1H), 3,14 (s, 2H), 2,60 (s, 3H), 1,85-1,70 (m, 5H), 1,59-1,45 (m, 6H), 1,40 (s, 9H).
Preparación 2: (1R,3s,5S)-3-(metilamino)-9- azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de terc-butilo (I2)
Etapa 1: preparación de N-((1R,3s,5S)-9-bencil-9-azabicido[3.3.1]nonán-3-il)-2,2,2-trifluoroacetamida(I-2a)
A una solución helada de compuestoI-1d(50,0 g, 217 mimóles) en DCM (500 ml) se añadió TFAA (36,96 ml, 26,46 mimóles) gota a gota. La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 2 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla de reacción se desactivó con agua helada y se extrajo con DCM (3x250 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución acuosa de NaHCO3 (3x250 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionandoI-2a(51 g, 72 %), que se utilizó en la etapa siguiente sin purificación. CL-EM: m/z [M+H]+=327,28 (calc. m/z [M+H]+=327,l7).
Etapa 2: preparación de N-((1R,3s,5S)-9-bencil-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-2,2,2-trifluoro-N-metilacetamida(I-2b)
A una solución helada de NaH (dispersión al 60 % en aceite mineral, 9,2 g, 230 mmoles) en DMF (300 ml) se añadió una solución deI-2a(50,0 g, 153 mmoles) en DMF (200 ml) gota a gota. La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 30 min. Se añadió Mel (11,45 ml, 183,84 mmoles) y la mezcla se sometió a agitación a TA durante 2 h. El avance de la reacción se monitorizó mediante CL-EM. Tras completarse la reacción, la mezcla se enfrió a 0 °C, se desactivó con agua helada y se extrajo con EtOAc (3x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando el producto en bruto en forma del líquido marrónI-2b(43 g, 82 %), que se utilizó en la etapa siguiente sin purificación. CL-EM: m/z [M+H]+=341,28 (calc. m/z [M+H]+=341,18).
Etapa 3: preparación de (1R,3s,5S)-3-(2,2,2-trifluoro-N-metilacetamido)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de terc-butilo(l-2c)
A una solución bajo agitación de compuestoI-2b(40,0 g, 117,5 mmoles) en una mezcla de IPA/THF (proporción 1:1, 400 ml) se añadió (Boc)2O (32,36 ml, 141,0 mmoles) seguido de Pd(OH)2/C (40 g, p/p). La mezcla de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente bajo una atmósfera de hidrógeno durante 16 h. Se monitorizó el avance de la reacción mediante CCF. Tras completar la reacción, la mezcla se filtró a través de una almohadilla de elite y se eluyó con una solución de IPA/THF (proporción 1:1, 50 ml). Se concentró el filtrado bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se purificó mediante cromatografía de columna [gel de sílice (100-200 M)], utilizando los eluyentes EtOAc al 15% en hexanos y proporcionando el producto deseadoI-2cen forma de un líquido marrón (35 g, 85 %).
Etapa 4: preparación de (1R,3s,5S)-3-(metilamino)-9- azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de terc-butilo(I2)
A una solución helada de compuestoI-2c(32,0 g, 91,3 mmoles) en MeOH (500 ml) se añadió solución acuosa de NaOH 3 N (10,96 g, 274 mmoles, disueltos en 921 ml de H2O). La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 3 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida. El residuo restante se disolvió en agua helada y se extrajo con EtOAc (3x250 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionando el producto deseado en forma de un líquido viscoso deI2(24 g, cuantitativo), que se utilizó en la etapa siguiente sin purificación. RMN-1H: 400 MHz DMSO-d66 4,15-4,13 (m, 1H), 3,17- 3,09 (m, 1H), 2,23 (d, J = 7,6 Hz, 3H), 1,91-1,51 (m, 8H), 1,47-1,39 (m, 9H), 1,28-1,14 (m, 2H).
Preparación 3: 1-((1R,3s,5S)-3-(metilamino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)propán-1-ona (I3)
Etapa 1: preparación de metil((1R,3s,5S)-9-propionyl-9- azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)carbamato de terc-butilo(I-3a)
A una solución helada de ácido propiónico (3,61 ml, 35,4 mmoles) en DMF (50 ml) se añadió DIPEA (12,6 ml, 70,8 mmoles) seguido de HATU (8,97 g, 23,6 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 30 minutos y se añadióI1(6,00 g, 23,6 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a TA durante 16 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), se diluyó la mezcla con agua y se extrajo con EtOAc (3x100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionandoI-3a(5,8 g, 73 %), que se utilizó en la etapa siguiente sin purificación. CL-EM: m/z [M+H]+=311,29 (calc. m/z [M+H]+=311,23).
Etapa 2: preparación de 1-((1R,3s,5S)-3-(metilamino)-9-azabicido[3.3.1]nonán- 9-il)propán-1-ona(I3)
A una solución bajo agitación de compuestoI-3a(5,30 g, 15,8 mimóles) en MeOH (53 ml) se añadió una solución de HCl 4 M en dioxano (53 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se diluyó con agua (100 ml) y se basificó con solución aq. de NH4OH hasta pH~10. La solución resultante se extrajo con EtOAc (3x250 ml) y los extractos orgánicos se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionandoI3(3,80 g, cuantitativo), que se utilizó en la etapa siguiente sin purificación. CL-EM: m/z [M+H]+=211,28 (calc. m/z [M+H]+=211,18).
Preparación 4: (1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-N-metil-9- azabiciclo[3.3.1]nonán-3-amina (I4)
Etapa 1: preparación de ((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)(metil)carbamato de terc-butilo(I-4a)
A una solución helada deI1(2,00 g, 7,86 mmoles) en DCM (20 ml) se añadió DIPEA (4,10 ml, 23,5 mmoles) seguido de cloruro de propilsulfonilo (1,5 g, 11,8 mmoles). La mezcla resultante se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 2 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se desactivó con agua helada y se extrajo con DCM (3x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina (3x250 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionandoI-4a(2,0 g, 82 %), que se utilizó en la etapa siguiente sin purificación.
Etapa 2: preparación de (1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-N-metil-9- azabiciclo[3.3.1]nonán-3-amina(I4)
A una solución helada bajo agitación de compuestoI-4a(2,00 g, 5,77 mmoles) en DCM (20 ml) se añadió una solución de HCl 4 M en dioxano (20 ml). La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 16 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se diluyó con agua (50 ml) y se basificó con solución aq. de NH4OH hasta pH~10. La solución resultante se extrajo con EtOAc (3x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionandoI4(1,4 g, cuantitativo), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación. RMN-1H: 400 MHz DMSO-da83,91 (s, 2H), 3,20-3,13 (m, 1H), 3,02 (q, J = 7,2, 14,4 Hz, 2H), 2,25 (s, 3H), 1,96-1,91 (m, 2H), 1,89- 1,79 (m, 2H), 1,63-1,60(m, 4H), 1,45-1,36 (m, 3H), 1,17 (t, J = 7,2, 3H).
Preparación 5: (1R,3s,5S)-3-(metilamino)-9- azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de metilo (I5)
Etapa 1: preparación de (1R,3s,5S)-3-((terc-butoxicarbonil)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de metilo(I-5a)
A una solución bajo agitación de compuestoI1(1,5 g, 5,9 mmoles) en THF (10 ml) se añadió una solución de NaHCO3 (0,594 g, 7,08 mmoles) en H2O (10 ml). La mezcla de reacción resultante se sometió a agitación a TA durante 10 min y se añadió metilcloroformato (0,70 ml, 8,9 mmoles). La mezcla resultante se sometió a agitación a TA durante 16 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), se diluyó la mezcla con agua y se extrajo con EtOAc (3x100 ml). Los extractos orgánicos se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionandoI-5a(1,3 g, 70 %), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación.
Etapa 2: preparación de (1R,3s,5S)-3-(metilamino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de metilo(I5)
A una solución bajo agitación de compuestoI-5a(1,2 g, 5,8 mimóles) en DCM (20 ml) se añadió TFA (1 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionandoI5(0,82 g, cuantitativo), que se utilizó en la etapa siguiente sin purificación. RMN-1H: 400 MHz DMSO-da 84,20-4,16 (m, 2H), 3,58 (s, 3H), 3,16-3,13 (m, 1H), 2,23 (d, J=8 Hz, 3H), 1,94-1,81 (m, 3H), 1,69-1,52 (m, 6H), 1,30-1,22 (m, 2H).
Preparación 6: 2-ddopropiM-((1R,3s,5S)-3-(metNammo)-9-azabiddo[3.3.1]nonán-9-N)etán-1-ona (I6)
Etapa 1: preparación de ((1R,3s,5S)-9-(2-ciclopropilacetil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)(metil)carbamato de terc-butilo(I-6a)
A una solución helada de ácido ciclopropilacético (3,61 ml, 35,4 mmoles) en DMF (50 ml) se añadió DIPEA (12,6 ml, 70,8 miles) seguido de HATU (8,97 g, 23,9 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadióI1(6,0 g, 23,6 mmoles) y la mezcla se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 16 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se diluyó con agua (250 ml) y se extrajo con EtOAc (3x250 ml). Los extractos orgánicos se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionandoI-6a(5,8 g, 73 %), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación.
Etapa 2: preparación de 2-ciclopropil-1-((1R,3s,5S)-3-(metilamino)-9- azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)etán-1-ona(I6)
A una solución bajo agitación de compuestoI-6a(5,30 g, 15,8 mmoles) en MeOH (53 ml) se añadió una solución de HCl 4 M en dioxano (53 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se diluyó con agua (100 ml) y se basificó con solución aq. de NH4OH hasta pH~10. La solución resultante se extrajo con EtOAc (3x100 ml) y los extractos orgánicos agrupados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionandoI6(3,8 g, cuantitativo), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación. CL-EM: m/z [M+H]+=237,34 (calc. m/z [M+H]+=237,20).
Preparación 7: (1R,3s,5S)-3-(metilamino)-9- azabicido[3.3.1]nonán-9-carboxMato de 2-metoxietilo (I7)
Etapa 1: (1R.3s.5S)-3-((terc-butox¡carbon¡l)(met¡l)am¡no)-9-azabic¡clo[3.3.11nonán-9-carbox¡lato de 2-metoxietilo(I-7a)
A una solución helada deI1(3,00 g, 11,8 mmoles) en DCM (30 ml) se añadió DIPEA (4,11 ml, 23,6 mmoles) seguido de la adición de metoxietilcloroformato (1,95 g, 14,2 mmoles). La mezcla resultante se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 2 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se desactivó con agua helada y se extrajo con DCM (3x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina (3x250 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionandoI-7a(2,80 g), que se utilizó en la etapa siguiente sin purificación.
Etapa_2._(1R,3s,5S)-3-(met¡lam¡no)-9-azab¡c¡clo[3.3.1]nonán- 9-carboxilato de 2-metoxietilo(I7)
A una solución helada bajo agitación de compuestoI-7a(1,70 g, 4,77 mmoles) en DCM (20 ml) se añadió TFA (20 ml). La mezcla se sometió a agitación a TA durante 16 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se diluyó con agua (50 ml) y se basificó con solución aq. de NH4OH hasta pH~10. La solución resultante se extrajo con EtOAc (3x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionandoI7(1,60 g), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación. RMN-1H: 400 MHz DMSO-d684,19 (s, 2H), 4,10 (t, J = 4,54 Hz, 2H), 3,50 (t, J = 4,6 Hz, 2H), 3,26 (s, 3H), 3,18-3,12(m, 1H), 2,25(s, 3H), 1,94-1,91(m, 2H), 1,90-1,83(m, 1H), 1,69-1,52(m, 6H), 1,30-1,23(m, 2H).
Preparación 8: N-etil-2-((1R,3s,5S)-3-(metilamino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)acetamida (I8)
Etapa 1: ((1R.3s.5S)-9-(2-(et¡lam¡no)-2-oxoetil)-9-azab¡c¡clor3.3.11nonán-3-¡l)(met¡l)carbamato de terc-butilo(I-8a)
A una solución helada deI1(3,00 g, 11,8 mmoles) en DCM (30 ml) se añadió DIPEA (3,00 ml, 23,6 mmoles) seguido de la adición de cloroacetamida de etilo (1,50 g, 12,3 mmoles). La mezcla resultante se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 2 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se desactivó con agua helada y se extrajo con DCM (3x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina (3x100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionandoI-8a(2,1 g), que se utilizó en la etapa siguiente sin purificación.
Etapa 2: N-et¡l-2-((1R,3s,5S)-3-(metilam¡no)-9-azab¡c¡clo[3.3.1]nonán-9-¡l)acetam¡da(I8)
A una solución helada bajo agitación de compuestoI-8a(2,0 g, 5,9 mmoles) en DCM (10 ml) se añadió TFA (5 ml). La mezcla se sometió a agitación a TA durante 16 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se diluyó con agua (50 ml) y se basificó con solución aq. de NH4OH hasta pH~10. La solución resultante se extrajo con EtOAc (3x25 ml). Los extractos orgánicos agrupados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionandoI8(1,60 g), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación.
Preparación 9: 2-((1R,3s,5S)-3-(metilamino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)-1-(pirrolidín-1-il)etán-1-ona (I9)
Etapa 1: metil((1R,3s,5S)-9-(2-oxo-2-(pirrolidín-1-il)etil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)carbamato de terc-butilo(I-9a)
A una solución helada deI1(5,00 g, 19,6 mmoles) en DCM (50 ml) se añadió DIPEA (6,90 ml, 39,9 mmoles) seguido de pirrolil-cloroacetamida (4,30 g, 29,5 mmoles). La mezcla resultante se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 2 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se desactivó con agua helada y se extrajo con DCM (3x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina (3x250 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionandoI-9a(5,10 g), que se utilizó en la etapa siguiente sin purificación.
Etapa 2: 2-((1R,3s,5S)-3-(metilamino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)-1-(pirrolidín-1-il)etán-1-ona(I9)
A una solución helada bajo agitación de compuestoI-9a(5,00 g, 14,3 mmoles) en DCM (50 ml) se añadió TFA (30 ml). La mezcla se sometió a agitación a TA durante 16 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se diluyó con agua (100 ml) y se basificó con solución aq. de NH4OH hasta pH~10. La solución resultante se extrajo con EtOAc (3x500 ml). Los extractos orgánicos agrupados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionandoI9(1,60 g), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación. CL-EM: m/z [M+H]+=266,36 (calc. m/z [M+H]+=266,22).
Preparación 10: 6-cloro-N2-((1R,3s,5S)-9-(etNsulfoml)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-N)-N2-metN-N4-(5-metiMH-pirazol-3~¡I)pir¡midín-2,4-diamina (110)
Etapa 1: 2,6-didoro-N-(5-metil-1H-pirazol-3-il)pirimidín-4-amina(I-10c)
A una solución bajo agitación deI-10a(20,0 g, 109,28 mmoles) en IPA (200 ml) a temperatura ambiente, se añadióI-10b(10,60 g, 109,3 mmoles) seguido de DIPEA (39,16 ml, 303,6 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante 2 hora a temperatura ambiente. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se diluyó con agua helada (200 ml), resultando en la precipitación de un sólido. El precipitado se separó mediante filtración y se lavó con n-pentano, proporcionandoI-10cen forma de un sólido blanco (19,0 g, 52 %). CL-EM: m/z [M+H]+=243,97, 245,96, 247,92 (calc., m/z [M(35Cl, 37Cl)+H]+=244,02, m/z M(35 Cl,37 Cl)+H]+=246,01, m/z M(37 Cl,37 Cl)+H]+=248,01); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d66 12,23 (s, 1H), 10,67(s, 1H), 7,76 (s, 1H), 5,77 (s, 1H), 2,22(s, 3H).
Etapa 2: 6-cloro-N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)pirimidín-2,4-diamina(I10)
A una solución bajo agitación deI-10c(250 mg, 1,02 mmoles) en IPA (5 ml) se añadióI4(278 mg, 1,13 mmoles) y Zn(OAc)2 (207 mg, 1,13 mmoles) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se sometió a agitación a 90 °C durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se purificó mediante RP-HPLC preparativa, proporcionandoI10en forma de un sólido blanquecino (90 mg, 20 %). CL-EM: m/z [M+H]+=454,21,456,19 (calc., m/z [M(35Cl)+H]+=454,18, m/z [M(37Cl)+H]+=456,18); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d66 11,98 (s, 1H), 9,67 (s, 1H), 6,31(br s, 1H), 6,09 (br s, 1H), 5,71-5,62 (m, 1H), 4,04 (s, 2H), 3,13 (q, J = 7,24 Hz, 14,53 Hz, 2H), 2,83 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 2,04-1,96 (m, 3H), 1,91 1,81 (m, 2H), 1,75-1,66 (m, 5H), 1,22 (t, J= 7,2, 3H).
Preparación 11: (1R,3s,5S)-N-(4-cloro-6-(((R)-tetrahidrofurán-3-N)oxi)pirimidm-2-N)-N-metN-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-amina (I11)
Etapa 1: (1R,3s,5S)-3-((4,6-dicloropirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de terc-butilo(I-11a)
A una solución bajo agitación de compuestoI2(5,00 g, 27,3 mmoles) y DIPEA (4,84 ml, 27,3 mmoles) en DCM (50 ml) se añadió una solución de 2,4,6-tricloropirimidinaI-10a(6,93 g, 27,26 mmoles) en DCM (20 ml) a -78 °C. La mezcla se sometió a agitación a -78 °C durante 2 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se diluyó con DCM (500 ml) y la solución resultante se lavó con agua fría (250 ml) y solución hipersalina (250 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando gel de sílice (100-200 M) y eluyentes EtOAc al 30 % en hexanos proporcionó el producto deseado en forma de un sólido blanquecinoI-11a(3,1 g, 28 %). CL-EM: m/z [M+H]+=401,22, 403,24 (calc. m/z [M(35Cl,35Cl)+H]+=401,15, m/z [M(35Cl,37Cl)+H]+=403,15).
Etapa 2: (1R,3s,5S)-3-((4-cloro-6-(((R)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de terc-butilo(I-11c)
A una solución helada de alcoholI-11b(0,56 g, 6,4 mmoles) en THF (30 ml) se añadió NaH (0,56 g, 12,8 mmoles, dispersión al 60 % en aceite mineral). La mezcla se sometió a agitación sobre hielo durante 1 h y se añadió en partesI l l a(1,7 g, 4,25 mmoles). La mezcla se sometió a agitación sobre hielo durante 2 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante c Cf ), se diluyó la mezcla con agua (25 ml) y se extrajo con EtOAc (3x100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna sobre gel de sílice (12 g snap) utilizando eluyentes EtOAc al 30 % en hexanos proporcionó el producto deseadoI-11cen forma de un sólido blanquecino (1,3 g, 28 %). CL-EM: m/z [M+H]+=453,37 (calc. m/z [M(35Cl)+H]+=453,23).
Etapa 3: (1R.3s.5S)-N-(4-cloro-6-(((R)-tetrah¡drofurán-3-¡l)ox¡)p¡r¡midín-2-¡l)-N-met¡l-9-azab¡c¡clo[3.3.11nonán-3-am¡na(I11)
A una solución helada de compuestoI-11e(1,3 g, 3,7 mmoles) en DCM (30 ml) se añadió TFA (15 ml). La mezcla se sometió a agitación sobre hielo durante 30 minutos. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se disolvió en agua y se basificó con solución aq. de NH4OH hasta pH~10. La solución resultante se extrajo con EtOAc (3x100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionando el compuesto deseadoI11en forma de un sólido blanquecino (1,2 g, cuantitativo). CL-EM: m/z [m H]+=353,29, 355,29 (calc. m/z [M(35Cl)+H]+=353,17, m/z [M(37 Cl)+H]+=355,17); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d65 8,71 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 6,21 (s, 1H), 5,58 (s, 1H), 5,52 (s, 1H), 3,84-3,80 (m, 3H), 3,76 (br s, 3H), 2,91 (s, 3H), 2,22-2,19 (m, 3H), 2,0-1,75 (m, 8H).
Preparación 12: (1R,3s,5S)-N-(4-doro-6-(((S)-tetrahidrofurán-3-M)oxi)pirimidm-2-N)-N-metM-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-amina (I12)
Etapa 1: (1R,3s,5S)-3-((4-cloro-6-(((S)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de terc-butilo(I-12b)
A una solución helada de alcohol12a(0,33 g, 7,4 mmoles) en THF (30 ml) se añadió NaH (0,280 g, 7,36 mmoles, dispersión al 60 % en aceite mineral). La mezcla se sometió a agitación sobre hielo durante 1 h y se añadió en partes el compuestoI-11a(1,7 g, 4,25 mmoles). La mezcla se sometió a agitación sobre hielo durante 2 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), se diluyó la mezcla con agua (25 ml) y se extrajo con EtOAc (3x100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna flash sobre gel de sílice (12 g snap) utilizando como eluyentes EtOAc al 30 % en hexanos proporcionó el producto deseadoI-12ben forma de un sólido blanquecino I (1,10 g). CL-EM: m/z [M+H]+=453,28, 455,26 (calc. m/z [M(35Cl)+H]+=453,23, m/z [M(37Cl)+H]+=455,22).
Etapa 2: (1R,3s,5S)-N-(4-cloro-6-(((S)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidín-2-il)-N-metil-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-amina(I12)
A una solución helada bajo agitación de compuestoI-12a(1,0 g, 2,2 mmoles) en DCM (30 ml) se añadió TFA (15 ml). La mezcla se sometió a agitación sobre hielo durante 30 minutos. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se disolvió en agua y se basificó con solución aq. de NH4OH hasta pH~10. La solución resultante se extrajo con EtOAc (3x100 ml). Los extractos orgánicos se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando el compuesto deseadoI12en forma de un sólido blanquecino (1,0 g, en bruto). CL-EM: m/z [M+H]+=353,23, 355,21 (calc. m/z [M(35 Cl)+H]+=353,17, m/z [M(37 Cl)+H]+=355,17); RMN-1H: 400 MHz DMSO-da 5 8,62-8,53 (m, 2H), 6,21 (s, 1H), 5,59-5,58 (br s, 1H), 5,51 (br s, 1H), 3,85-3,82 (m, 4H), 3,80-3,76 (m, 4H), 2,91 (s, 3H), 2,21-2,14 (m, 4H), 2,01-1,77 (m, 5H).
Preparación 13: (2-(((1R,3s,5S)-9-(etNsulfoml)-9-azabiddo[3.3.1]nonán-3-M)(metN)ammo)-5-fluoro-6-((5-metN-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidín-4-il)metanol (I-13)
Etapa 1
Una solución de ácido 5-fluoro-2,6-dihidroxipirimidín-4-carboxílico (1,00 kg, 5,74 moles, 1,0 eq.) en etanol (15,0 l) con HCl saturado (1,40 kg, 38,4 moles) se sometió a agitación a 90 °C durante 60 h. La HPLC mostró la detección de un pico principal. Se filtró la mezcla de reacción. Se recogió la torta de filtración, proporcionando el compuestoI-13a(1,00 kg, rendimiento de 81,8 %, pureza del 98,8 %) en forma de un sólido blanco. RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6 d 11,82 (br s, 1H), 10,82 (br s, 1H), 4,31 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 1,27 (t, J = 6,8 Hz, 3H).
Etapa 2
Se llevaron a cabo cinco reacciones en paralelo. A una solución de compuestoI-13a(560 g, 2,77 moles, 1,0 eq.) en POCl3 (1,68 l) se añadió N,N-dietilanilina (289 g, 1,94 moles, 0,7 eq.). La mezcla se sometió a agitación a 140 °C durante 12 h. La CCF (éter de petróleo:acetato de etilo=10: 1, Rf de producto=0,50) indicó que el compuestoI-13ase había consumido por completo. Se agruparon las cinco reacciones. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo. El residuo se diluyó con acetato de etilo (25,0 l). La solución se vertió en hielo triturado (25,0 l). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (25,0 l). Las capas orgánicas agrupadas se lavaron con solución saturada de carbonato sódico (10,0 l x2), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etilo=1:0-50:1), proporcionando el compuestoI-13b(2,00 kg) en forma de un líquido marrón. RMN-1H: 400 MHz CDCh d 4,51 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 1,44 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Etapa 3
Se llevaron a cabo cuatro reacciones en paralelo. Una mezcla de compuestoI-13b(480 g, 2,01 moles, 1,0 eq.), 5-metil-1H-pirazol-3-amina (224 g, 2,31 moles, 1,15 eq.) y DIPEA (519 g, 4,02 moles, 2,0 eq.) en etanol (2,60 l) se desgasificó y purgó con N23 veces y después la mezcla se sometió a agitación a 25 °C durante 4 h bajo atmósfera de N2. La CCF (éter de petróleo:acetato de etilo=10:1) indicó que el compuestoI-13bse había consumido por completo. La CCF (éter de petróleo:acetato de etilo=1:1, Rf de producto=0,40) indicó que se había formado una nueva mancha. Se agruparon las cuatro reacciones. La mezcla de reacción se filtró y se recogió la torta de filtración. Se concentró el filtrado bajo presión reducida, proporcionando un residuo. Se trituró el residuo con agua (38,0 l) y se filtró. La torta de filtración (300 g) se trituró con etanol (600 ml) y se filtró. Se agruparon las dos tortas de filtración, proporcionando el compuestoI-13c(1,50 kg, rendimiento de 62,2 %) en forma de un sólido amarillo. RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6512,31 (s, 1H), 10,76 (s, 1H), 6,38 (s, 1H), 4,35 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 2,27 (s, 3H), 1,30 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Etapa 4
Se llevaron a cabo cuatro reacciones en paralelo. Una solución de compuestoI-13c(254 g, 848 mmoles, 1,0 eq.), compuesto1-4(300 g, 1,06 moles, HCl, 1,25 eq.) y DIPEA (548 g, 4,24 moles, 5,0 eq.) en DMSO (600 ml) se sometió a agitación a 130 °C durante 16 h. La CCF (acetato de etilo:éter de petróleo=2:1, Rf=0,30) y la CL-EM mostró que quedaba ~9 % del material de partida. La mezcla se enfrió a 25 °C. Se agruparon las cuatro reacciones y se vertieron en hielo-agua (12,00 l). Se formó un precipitado amarillo. Se recogió el sólido mediante filtración, proporcionando el compuestoI-13d(1,50 kg, pureza de ~76 %) en forma de un sólido amarillo. (m/z): [M+H]+ calc. para C22H32FN7O4S 510.22; observado: 510,2.
Una suspensión de compuestoI-13d(440 g, 656 mimóles, pureza de ~76 %) en etanol (1,10 l) se calentó a 95 °C hasta la disolución del sólido. La solución se enfrió a 25 °C y se sometió a agitación durante 12 h. La HPLC mostró una pureza de ~96,9 %. Se agruparon las tres reacciones. Se filtró la suspensión para obtener la torta de filtración, proporcionando el compuestoI-13d(~570 g, pureza de 96,9 %) en forma de un sólido amarillo pálido. Se utilizó el producto para la etapa siguiente directamente. RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6812,12 (s, 1H), 9,73 (s, 1H), 6,35 (s, 1H), 5,59 (br s, 1H), 4,32 (m, 2H), 4,02 (s , 2H), 3,13 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 2,83 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 1,94 (s, 3H), 1,64-1,73 (m, 5H), 1,76- 1,87 (m, 5H), 1,29 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,21 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Etapa 5
Se llevaron a cabo cinco reacciones en paralelo. A una solución de compuestoI-13d(130 g, 255 mmoles, 1,0 eq.) en tetrohidrofurano (3,25 l) y etanol (3,25 l) se añadió NaBH4 (77,2 g, 2,04 moles, 8,0 eq.) y CaCh (113 g, 1,02 moles, 4,0 eq.) en partes a 0 °C. La mezcla se calentó a 10 °C y se sometió a agitación durante 2 h. La CCF (acetato de etilo:éter de petróleo=31, Rf de producto=0,20) mostró que la reacción se había completado. Se agruparon las cinco reacciones. La mezcla se desactivó con solución saturada de carbonato sódico (6,00 l), se diluyó con acetato de etilo (15,0 l) y se sometió a agitación durante 0,5 h. La suspensión se filtró para obtener un filtrado. Se separó la capa orgánica y se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (5,00 l x2). La capa orgánica agrupada se lavó con solución hipersalina (5,00 l), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró, proporcionando I-13 (500 g, en bruto) en forma de un sólido amarillo pálido.
Purificación: se llevaron a cabo cinco reacciones en paralelo. Se calentó una suspensión deI-13(100 g, 210 mmoles) en etanol (3,00 l) a 95 °C hasta la disolución del sólido. La solución se enfrió a 25 °C y se sometió a agitación durante 12 h; se formó una gran cantidad de precipitado. La HPLC mostró una pureza de 100 %. Se agruparon las cinco reacciones. Se recogió el sólido mediante filtración, proporcionando un total de 330 g de compuestoI-13(pureza del 99,3 %) en forma de un sólido amarillo pálido. (m/z): [M+H]+ calc. para C20H30FN7O3S 468,21; observado: 468,3. RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6 d 12,02 (s, 1H), 9,29 (s, 1H), 6,34 (s, 1H), 5,61 (br s, 1H), 5,02 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 4,33 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 4,02 (s, 2H), 3,12 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 2,84 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,82-2,01 (m, 3H), 1,63-1,74 (m, 5H), 1,21 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplo 1: Preparación de N2-((1R,3s,5S)-9-(etNsulfoml)-9-azabicido[3.3.1]nonán-3-N)-N2-metN-N4-(5-metiMH-pirazol-3-il)-6- (tetrahidro-2H-pirán-4-il)pirimidín-2,4-diamina
Etapa 1: 6-(3,6-dihidro-2H-pirán-4-il)-N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)pirimidín-2,4- diamina(1-b)
A una solución deI10(400 mg, 0,881 mmoles) y éster pinacolborónico1-a(370 mg, 1,76 mmoles) en dioxano (10 ml) y agua (3 ml) se añadió Na2CO3 (231 mg, 2,20 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno, seguido de la adición de Pd(dppf)Ch (160 mg, 0,176 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a 110 °C durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se diluyó con agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando1-b(300 mg, en bruto), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación adicional.
Etapa 2: N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-(tetrahidro-2H-pirán-4-il)pirimidín-2,4- diamina(Ej. 1)
A una solución de1-b(300 mg, 0,598 mmoles) en MeOH (10,0 ml) se añadió Pd/C (300 mg). La mezcla resultante se sometió a agitación a TA durante 16 h bajo una atmósfera de hidrógeno. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se filtró a traves de una almohadilla de Celite y se eluyó con MeOH (10 ml). Se concentró el filtrado bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se purificó mediante RP-HPLC preparativa, proporcionando elEj. 1(65 mg, 21 %). CL-EM: m/z [M+H]+=504,35 (calc. m/z [M+H]+=504,28); RMN-1H: 400 MHz DMSO-da 811,85 (s, 1H), 9,25 (s, 1H), 6,26 (br s, 1H), 6,05 (br s, 1H), 5,77 (br s, 1H), 4,04 (s, 2H), 3,95 (d, J = 10,8 Hz, 2H), 3,43-3,38 (m, 2H), 3,13 (q, J = 7,2 Hz, 14,4 Hz, 2H), 2,86 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,33- 2,13 (m, 1H), 2,0-1,97 (m, 2H), 1,89-1,85 (m, 2H), 1,75-1,65 (m, 10H), 1,22 (t, J = 7,2, 3H).
Ejemplo 2: Preparación de 6-(2,2-dimetNtetrahidro-2H-pirán-4-M)-N2-((1R,3s,5S)-9-(etNsulfoml)-9-azabicido[3.3.1]nonán-3-M)-N2-metM-N4-(5-metiMH-pirazol-3-M)pinmidm-2,4-diamma
A una solución bajo agitación de cetona2-a(3,0 g, 8,6 mmoles) en THF (20,0 ml) a -78 °C, se añadió LDA (4,68 ml, 9,37 mmoles). La mezcla se sometió a agitación durante 1 h a -78 °C, seguido de la adición de PhNTf2 (1,0 g, 7,8 mmoles). La solución resultante se sometió a agitación durante 16 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con NaHCO3 acuoso y se extrajo con éter dietílico. La capa orgánica se lavó con NaOH acuoso al 10 %, se secó sobre sulfato sódico y se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando gel de sílice (100-200 M) y eluyendo con acetato de etilo al 5 % en hexanos proporcionó la mezcla de producto2-bdeseada en forma de un aceite incoloro (1,10 g).
Etapa 2: 2-(6,6-dimetil-3,6-dihidro-2H-pirán-4-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano y 2-(2,2-dimetil-3,6-dihidro-2H-pirán-4-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano(2-c)
A una suspensión bajo agitación de2-b(1,0 g, 3,84 mmoles) y bis(pinacolato)diboro (2,44 g, 9,61 mmoles) en dioxano (20,0 ml) se añadió KOAc (942 mg, 9,61 mmoles). La mezcla se desgasificó con argón durante 15 min, seguido de la adición de PdCh (dppf)DCM (281 mg, 0,38 mmoles). La mezcla de reacción resultante se sometió a agitación a 80 °C durante 16 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo y se lavó con solución hipersalina. A continuación, se concentró la capa orgánica bajo presión reducida, proporcionando2-cen forma de una mezcla inseparable (1,80 g, en bruto).
Etapa 3: 6-(6,6-dimetil-3,6-dihidro-2H-pirán-4-il)-N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)pirimidín-2,4-diamina y 6-(2,2-dimetil-3,6-dihidro-2H-pirán-4-il)-N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)pirimidín-2,4-diamina(2-d)
A una solución de intermediarioI10(600 mg, 1,3 mmoles) y éster pinacolborónico2-c(790 mg, 3,24 mmoles) en dioxano (15,0 ml) y agua (3,0 ml) se añadió Na2CO3 (344 mg, 3,24 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno, seguido de la adición de Pd(dppf)Ch (190 mg, 0,26 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a 110 °C durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2x250 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando gel de sílice (100-200 M) y eluyendo con acetato de etilo al 40%en hexanos proporcionó el producto deseado2-den forma de un sólido de color beige (120 mg, pureza: 72 %). CL-EM: m/z [M+H]+=530,36 (calc. m/z [M+H]+=530,29).
Etapa 4: 6-(2,2-dimetiltetrahidro-2H-pirán-4-il)-N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabicido[3.3.1]nonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)pirimidín-2,4-diamina(Ej. 2)
A una solución de2-d(110 mg, 0,20 mmoles) en MeOH (10,0 ml) se añadió Pd/C (110 mg). La mezcla de reacción resultante se sometió a agitación bajo una atmósfera de hidrógeno (40 psi) a temperatura ambiente durante 6 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CL-EM y CCF), la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite y se eluyó con MeOH (10 ml). El filtrado se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se purificó mediante RP-HPLC preparativa, proporcionando elEj. 2en forma de un sólido blanquecino (65 mg, 67 %). CL-EM: m/z [M+H]+=532,51 (calc. m/z [M+H]+=532,31); RMN-1H: 400 MHz DMSO-da 8 12,38 (s, 1H), 11,11 (s, 1H), 10,92 (s, 1H), 6,36 (s, 1H), 6,21 (s, 1H), 5,67 (br s, 1H), 4,06 (s, 2H), 3,71-3,61 (m, 4H), 3,16 (br d, J = 6,8, 2H), 2,96 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,1-1,95 (m, 2H), 1,95-1,80 (m, 4H), 1,80- 1,70 (m, 6 H), 1,40- 1,18 (m, 9H).
Ejemplo 3: Preparación de (1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-il)ammo)-6-(tetrahidro-2H-pirán-4-il)pinmidm-2-il)ammo)-9- azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de metilo
Etapa 1: (1R,3s,5S)-3-((4-cloro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de metilo(3-a)
A una solución bajo agitación de1-10c(1,50 g, 6,15 mmoles) en n-AmOH (15 ml) se añadióI5(1,43 g, 6,77 mmoles) y Zn(OAc)2 (1,48 g, 6,77 mmoles) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se sometió a agitación a 90 °C durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando gel de sílice (100-200 M) y como eluyentes MeOH al 2 % en DCM proporcionó3-aen forma de un sólido blanquecino (900 mg, 35 %). CL-EM: m/z [M+H]+=420,27, 422,25 (calc. m/z [M(35 Cl)+H]+=420,19, m/z [M(37Cl)+H]+=422,19).
Etapa 2: (1R,3s,5S)-3-((4-(3,6-dihidro-2H-pirán-4-il)-6-((5-metil-1H- pirazol-3-il)amino)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de metilo(3-b)
A una solución de3-a(500 mg, 1,19 mmoles) y pinacol-éster borónico 1-a (501 mg, 2,38 mmoles) en dioxano (15,0 ml) y agua (3,0 ml) se añadió K3PO4 (379 mg, 1,78 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir Pd(dppf)Ch (170 mg, 0,24 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a 110 °C durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2x250 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando gel de sílice (100-200 M) y como eluyentes acetato de etilo al 60 % en hexanos proporcionó el compuesto3-ben forma de un sólido de color beige (300 mg, 54 %). CL-EM: m/z [M+H]+=468,29 (calc. m/z [M+H]+=468,27).
Etapa 3: (1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-6-(tetrahidro-2H-pirán-4-il)pirimidín-2-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9- carboxilato de metilo(Ej. 3)
A una solución de3-b(300 mg, 0,641 mmoles) en MeOH (10,0 ml) se añadió Pd/C (300 mg). La mezcla de reacción resultante se sometió a agitación bajo una atmósfera de hidrógeno (40 psi) a temperatura ambiente durante 6 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CL-EM y CCF), la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite y se eluyó con MeOH (10 ml). Se concentró el filtrado bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante RP-HPLC preparativa proporcionó elEj.3en forma de un sólido blanco (120 mg, 40 %). CL-EM: m/z [M+H]+=470,35 (calc. m/z [M+H]+=470,29); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6811,84 (s, 1H), 9,23 (s, 1H), 6,28 (s, 1H), 6,09 (s, 1H), 5,74 (s, 1H), 4,31 (d, J = 12,8 Hz, 2H), 3,90 (d, J = 11,2 Hz, 2H), 3,63 (s, 3H), 3,43-3,35 (m, 2H), 2,84 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 1,90-1,80 (m, 2 H), 1,80- 1,65(m, 12H).
Ejemplo 4: Preparación de 2-cidopropiM-((1R,3s,5S)-3-(metN(4-((5-metiMH-pirazol-3-N)ammo)-6-(tetrahidro-2H-pirán-4-M)pirimidm-2-M)ammo)-9-azabiddo[3.3.1]nonán-9-M)etán-1-ona
Etapa_________ 1 1-((1R,3s,5S)-3-((4-cloro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidm-2-il)(metil)amino)-9-azabicido[3.3.1]nonán-9-il)-2-cidopropiletán-1-ona(4-a)
A una solución bajo agitación de didoropirimidinaI-10c(1,50 g, 6,15 mmoles) en n-AmOH (15 ml) se añadió intermediarioI6(1,60 g, 6,77 mmoles) y Zn(OAc)2 (1,48 g, 6,77 mmoles) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se sometió a agitación a 90 °C durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando gel de sílice (100-200 M) y como eluyentes MeOH al 3 % en DCM proporcionó4-aen forma de un sólido blanquecino (500 mg, 18%). CL-EM: m/z [M+H]+=444,28, 446,30 (calc. m/z [M(35 Cl)+H]+=444,23, m/z [M(37Cl)+H]+=446,23).
Etapa 2: 2-ciclopropil-1-((1R,3s,5S)-3-((4-(3,6-dihidro-2H-pirán-4-il)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9- azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)etán-1-ona(4-b)
A una solución de4-a(500 mg, 1,12 mmoles) y pinacol-éster borónico1-a(473 mg, 2,25 mmoles) en dioxano (15,0 ml) y agua (3,0 ml) se añadió Na2CO3 (298 mg, 2,80 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir Pd(dppf)Ch (160 mg, 0,224 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a 110 °C durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se diluyó con agua (250 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2x250 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando gel de sílice (100-200 M) y como eluyentes MeOH al 3 % en DCM proporcionó4-ben forma de un sólido de color beige (300 mg, 63 % pureza según CL-EM). CL-EM: m/z [M+H]+=492,34 (calc. m/z [M+H]+=492,31).
Etapa 3: 2-ciclopropil-1-((1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-6-(tetrahidro-2H-pirán-4-il)pirimidín-2-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán- 9-il)etán-1-ona(Ej. 4)
A una solución de4-b(300 mg, 0,61 mmoles) en MeOH (10,0 ml) se añadió Pd/C (300 mg). La mezcla de reacción resultante se sometió a agitación bajo una atmósfera de hidrógeno (40 psi) a temperatura ambiente durante 6 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CL-EM y CCF), la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite y se eluyó con MeOH (10 ml). Se concentró el filtrado bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante RP-HPLC preparativa proporcionó elEj. 4en forma de un sólido blanquecino (81 mg, 27 %). CL-EM: m/z [M+H]+=494,36 (calc. m/z [M+H]+=494,32); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6811,84 (s, 1H), 9,23 (s, 1H), 6,29 (s, 1H), 6,08 (s, 1H), 5,78 (s, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,19 (s, 1H), 3,91 (d, J = 11 Hz, 2H), 3,43-3,36 (m, 2H), 2,84 (s, 3H), 2,27 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 2,18 (s, 4H), 1,95-1,60 (m, 14H), 0,97 (m, 1H), 0,46 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 0,14 (d, J = 4 Hz, 2H).
Ejemplo 5: Preparación de N2-((1R,3s,5S)-9-(etNsulfoml)-9-azabiddo[3.3.1]nonán-3-N)-N2-metN-N4-(5-metiMH-pirazol-3-il)-6-(tetrahidrofurán-3-il)pirimidín-2,4-diamina
Etapa 1: 6-(2.5-dihidrofurán-3-il)-N2-((1R.3s.5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1lnonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)pirimidín-2,4-diamina(5-b)
A una solución de intermediarioI10(300 mg. 0.66 mmoles) y pinacol-éster borónico5-a(259 mg. 1.32 mmoles) en dioxano (8.0 ml) y agua (2.0 ml) se añadió Na2CO3 (175 mg. 1.65 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir Pd(dppf)Ch (94 mg. 0.132 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a 110 °C durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF). la mezcla se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina. se secaron sobre sulfato sódico. se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. proporcionando5-b(280 mg. en bruto). que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación adicional.
Etapa 2: N2-((1R.3s.5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-(tetrahidrofurán-3-il)pirimidín-2.4-diamina(Ej. 5)
A una solución de intermediario alquenilo5-b(200 mg. 0.410 mmoles) en MeOH (10.0 ml) se añadió Pd/C (200 mg). La mezcla resultante se sometió a agitación bajo una atmósfera de hidrógeno (40 psi) a temperatura ambiente durante 6 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CL-EM y CCF). la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite y se eluyó con MeOH (10 ml). Se concentró el filtrado bajo presión reducida. proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante RP-HPLC preparativa proporcionó elEj. 5en forma de un sólido blanquecino (36 mg.
18 %). CL-EM: m/z [M+H]+=490.35 (calc. m/z [M+H]+=490.26); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6811.86 (s. 1H). 9.28 (s.
1H). 6.30(br s. 1H). 6.25 (br s. 1H). 5.77 (br s. 1H). 4.04 (br s. 2H). 3.98 (t. J = 7.6. 1H). 3.86- 3.75 (m. 2H). 3.69 (t. J = 7.6 Hz. 1H). 3.21- 3.10 (m. 3 H). 2.86 (s. 3H). 2.18 (s. 3H). 2.15- 2.05 (m. 3H). 2.05-1.95 (m. 2H). 1.95- 1.83 (m.
2H). 1.78- 1.65 (m. 5H). 1.22 (t. J = 6.8 Hz. 3H).
Ejemplo 6: Preparación de (1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metiMH-pirazol-3-il)ammo)-6-(tetrahidrofurán-3-il)pirimidín-2-il)amino)-9- azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de metilo
Etapa 1: (1R.3s.5S)-3-((4-(2.5-dihidrofurán-3-il)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de metilo(6-a)
A una solución de intermediario cloropirimidina3-a(500 mg. 1.19 mmoles) y éster de ácido pinacol-borónico5-a(466 mg. 2.38 mmoles) en dioxano (10 ml) y agua (2.0 ml) se añadió K3PO4 (544 mg. 2.56 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir PdCh (dppf) (169 mg. 0.238 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a 110 °C durante 45 min bajo radiación de microondas. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CL-EM). la mezcla se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina. se secaron sobre sulfato sódico. se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando 6-a (330 mg, en bruto, 60 %), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación adicional. CL-EM: m/z [M+H]+=454,29 (calc. m/z [M+H]+=454,26).
Etapa 2: (1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-6-(tetrahidrofurán-3-il)pirimidín-2-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de metilo(Ej. 6)
A una solución de6-a(300 mg, 0,661 mmoles) en MeOH (10,0 ml) se añadió Pd/C (300 mg). La mezcla de reacción resultante se sometió a agitación bajo una atmósfera de hidrógeno (40 psi) a temperatura ambiente durante 6 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CL-EM y CCF), la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite y se eluyó con MeOH (10 ml). Se concentró el filtrado bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante RP-HPLC preparativa proporcionó elEj. 6en forma de un sólido blanquecino (30 mg, 10 %). CL-EM: m/z [M+H]+=456,30 (calc. m/z [M+H]+=456,27); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6511,85 (s, 1H), 9,28 (s, 1H), 6,26 (br s, 1H), 6,14 (br s, 1H), 5,74 (br s, 1H), 4,31 (d, J = 13,6 Hz, 2H), 3,98 (t, J = 8 Hz, 1H), 3,84-3,77 (m, 2H), 3,68 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 3,63 (s, 3H), 3,20- 3,10 (m, 1 H), 2,84 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,18-2,09 (m, 3H), 1,87- 1,64 (m, 9H).
Ejemplo 7: Preparación de 2-cidopropiM-((1R,3s,5S)-3-(metN(4-((5-metiMH-pirazol-3-M)ammo)-6-(tetrahidrofurán-3-il)pirimidín-2-il)amino)-9- azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)etán-1-ona
Etapa 1: 2-ciclopropil-1-((1R,3s,5S)-3-((4-(2,5-dihidrofurán-3-il)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)etán-1-ona(7-a)
A una solución de intermediario cloropirimidina4-a(500 mg, 1,12 mmoles) y éster de ácido pinacol-borónico5-a(441 mg, 2,25 mmoles) en dioxano (10 ml) y agua (2,0 ml) se añadió Na2CO3 (298 mg, 2,80 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir PdCh (dppf) (160 mg, 0,224 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a 110 °C durante 45 min bajo radiación de microondas. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CL-EM), la mezcla se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando7-a(330 mg, en bruto, 47%), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación adicional. CL-EM: m/z [M+H]+=478,34 (calc. m/z [M+H]+=478,29).
Etapa 2: 2-ciclopropil-1-((1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-6-(tetrahidrofurán-3-il)pirimidín-2-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)etán-1-ona(Ej. 7)
A una solución de7-a(300 mg, 0,661 mmoles) en MeOH (10,0 ml) se añadió Pd/C (300 mg). La mezcla de reacción resultante se sometió a agitación bajo una atmósfera de hidrógeno (40 psi) a temperatura ambiente durante 6 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CL-EM y CCF), la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite y se eluyó con MeOH (10 ml). Se concentró el filtrado bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante RP-HPLC preparativa proporcionó elEj. 7en forma de un sólido blanquecino (53 mg, 18 %). CL-EM: m/z [M+H]+=480,39 (calc. m/z [M+H]+=480,31); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6511,85 (s, 1H), 9,27 (s, 1H), 6,28 (br s, 1H), 6,10(br s, 1H), 5,74 (br s, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,18 (s, 1H), 3,98 (t, J = 8 Hz, 1H), 3,86-3,75 (m, 2H), 3,69 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 3,21-3,13 (m, 1H), 2,83 (s, 3H), 2,27 (d, J = 6,8, 2H), 2,18 (s, 3H), 2,15 -2,09 (m, 3H), 1,93- 1,85 (m, 1H), 1,81-1,63 (m, 8H).
Ejemplo 8: Preparación de N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-(tetrahidrofurán-2-il)pirimidín-2,4-diamina
Etapa 1: 6-í4.5-d¡h¡drofurán-2-¡l)-N2-íí1R.3s.5S)-9-íet¡lsulfon¡n-9-azab¡c¡clor3.3.1lnonán-3-¡l)-N2-metil-N4-í5-met¡l-1H-pirazol-3-il)pirimidín-2,4- d¡am¡na(8-b)
A una soluc¡ón de ¡ntermed¡ar¡oI10(250 mg. 0.55 mmoles) y éster de ác¡do p¡nacol-borón¡co8-a(270 mg. 1.37 mmoles) en DMA (8.0 ml) y agua (2.0 ml) se añad¡ó K3PO4 (300 mg. 1.37 mmoles). La mezcla resultante se desgas¡f¡có con n¡trógeno antes de añad¡r PdXphos-G4 (24 mg. 0.027 mmoles). La mezcla de reacc¡ón se somet¡ó a ag¡tac¡ón a 110 °C durante 45 m¡n bajo rad¡ac¡ón de m¡croondas. Tras completarse la reacc¡ón (segu¡m¡ento med¡ante CL-EM). la mezcla se d¡luyó con agua (25 ml) y se extrajo con acetato de et¡lo (2x100 ml). Los extractos orgán¡cos agrupados se lavaron con soluc¡ón h¡persal¡na. se secaron sobre sulfato sód¡co. se f¡ltraron y se concentraron bajo pres¡ón reduc¡da. proporc¡onando un res¡duo en bruto. La pur¡f¡cac¡ón med¡ante cromatografía de columna ut¡l¡zando gel de síl¡ce (100 200 M) y eluyendo con MeOH al 2 % en DCM proporc¡onó8-b(160 mg. 60 %). CL-EM: m/z [M+H]+ = 488.26 (calc. m/z [M+H]+=488.24).
Etapa 2: N2-((1R.3s.5S)-9-(et¡lsulfon¡l)-9-azab¡c¡clo[3.3.1]nonán-3-¡l)-N2-met¡l-N4-(5-met¡l-1H-p¡razol-3-¡l)-6-(tetrah¡drofurán-2-¡l)p¡r¡m¡dín-2.4-d¡am¡na(Ej. 8)
A una soluc¡ón de8-b(160 mg. 0.32 mmoles) en MeOH (10.0 ml) se añad¡ó Pd/C (160 mg). La mezcla de reacc¡ón resultante se somet¡ó a ag¡tac¡ón bajo una atmósfera de h¡drógeno (40 ps¡) a temperatura amb¡ente durante 6 h. Tras completar la reacc¡ón (segu¡m¡ento med¡ante CL-EM y CCF). la mezcla se f¡ltró a través de una almohad¡lla de Cel¡te y se eluyó con MeOH (10 ml). Se concentró el f¡ltrado bajo pres¡ón reduc¡da. proporc¡onando un res¡duo en bruto. La pur¡f¡cac¡ón med¡ante RP-HPLC preparat¡va proporc¡onó elEj. 8en forma de un sól¡do blanquec¡no (71 mg. 44 %). CL-EM: m/z [M+H]+=490.39 (calc. m/z [M+H]+=490.26); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6811.87 (s. 1H). 9.31 (s. 1H). 6.27 (br s. 2H). 5.74 (s. 1H). 4.54 (t. J = 6.4. 1H). 4.03 (s. 2H). 3.89 (q. J = 7.2 Hz. 14.4 Hz. 1H). 3.80 (q. J = 6.8 Hz. 14 Hz.
1H). 3.13 (q. J = 7.2 Hz. 14.4 Hz. 2H). 2.84 (s. 3H). 2.23- 2.10 (m. 2H). 2.18 (s. 3H). 2.01-1.98 (m. 2H). 1.98-1.75 (m.
5H). 1.73-1.65 (m. 5H). 1.22 (t. J = 7.2 Hz. 3H).
Ejemplos 9 y 10: Aislamiento de N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9- azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-((S)-tetrahidrofurán-2-il)pirimidín-2,4-diamina y N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-((R)-tetrahidrofuran-2-il)pi<N>midm-2,4-diamina (Ej. 9 y Ej. 10)
Se separaron los ejemplos 9 y 10 ut¡l¡zando CFS qu¡ral (Ch¡ralcel OJ-H [21 x 250 mm. 5m¡c]. 10-30 % MeOH/CO2.100 ml/m¡n). La resoluc¡ón del Ej. 8 (0.356 g. 0.73 mmoles) en 2 lotes proporc¡onó el Ej. 9 (0.134 g. 0.27 mmoles. e.r. >99:1. rend¡m¡ento de 73 %) y Ej.10 (0.111 g. 0.22 mmoles. e.r. 98:2. rend¡m¡ento: 62 %).
Ej. 9: CL-EM: m/z [M+H]+=490.05 (calc. m/z [M+H]+=490.26); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d68 11.75 (s. 1H).
9.33 (s. 1H). 6.27 (app. s. 2H). 5.75 (s. 1H). 4.54 (m. 1H). 4.03 (app. s. 2H). 3.89 (app. q. J = 6.7 Hz. 1H). 3.79 (app. q. J = 7.6 Hz. 1H). 3.13 (q. J = 7.2 Hz. 2H). 2.84 (s. 3H). 2.18 (m. 5H). 1.99 (m. 2H). 1.85 (m. 5H). 1.69 (m. 5H). 1.22 (t. J = 7.2 Hz. 3H); CFS qu¡ral: (Ch¡ralcel OJ-H [4.6x100 mm. 5m¡c]. MeOH al 10-50 %/CO2.4.0 ml/m¡n. A=254 nm. 5 ml de ¡nyecc¡ón. td=4.26 m¡n).
Ej. 10: CL-EM: m/z [M+H]+ = 490,00 (calc. m/z [M+H]+ = 490,26); RMN-1H: 400 MHz DMSO-da 8 11,80 (s, 1H), 9,32 (s, 1H), 6,28 (app, s, 2H), 5,75 (s, 1H), 4,54 (m, 1H), 4,03 (app, s, 2H), 3,89 (app, q, J = 6,8 Hz, 1H), 3,80 (app, q, J = 7,6 Hz, 1H), 3,13 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 2,84 (s, 3H), 2,19 (m, 5H), 1,99 (m, 2H) 1,85 (m, 5H), 1,70 (m, 5H), 1,22 (t, J = 7,3 Hz, 3H); CFS quiral: (Chiralcel OJ-H [4,6 x 100 mm, 5mic], MeOH al 10-50 %/CO2 , 4,0 ml/min, A=254 nm, 5 ml de inyección,<td>=5,01 min).
No se asignaron las configuraciones absolutas del Ej. 9 y el Ej. 10.
Ejemplo 11: Preparación de (1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metiMH-pirazol-3-il)ammo)-6-(tetrahidrofurán-2-il)pirimidm-2-il)ammo)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de metilo
Etapa 1: (1R,3s,5S)-3-((4-(4,5-dihidrofurán-2-il)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de metilo(11-a)
A una solución de intermediario cloropirimidina3-a(400 mg, 0,86 mmoles) y éster de ácido pinacol-borónico8-a(419 mg, 2,14 mmoles) en DMA (10 ml) y agua (2,0 ml) se añadió K3PO4 (544 mg, 2,56 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir PdXphos-G4 (147 mg, 0,171 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a 110 °C durante 45 min bajo radiación de microondas. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CL-EM), la mezcla se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando11-a(450 mg, en bruto), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación adicional. CL-EM: m/z [M+H]+=454,27 (calc. m/z [M+H]+=454,26).
Etapa 2: (1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-6-(tetrahidrofurán-2-il)pirimidín-2-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de metilo(Ej. 11)
A una solución de11-a(400 mg, 0,410 mmoles) en MeOH (15,0 ml) se añadió Pd/C (400 mg). La mezcla de reacción resultante se sometió a agitación bajo una atmósfera de hidrógeno (40 psi) a temperatura ambiente durante 6 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CL-EM y CCF), la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite y se eluyó con MeOH (10 ml). Se concentró el filtrado bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante RP-HPLC preparativa proporcionó elEj. 11en forma de un sólido blanquecino (70 mg, 18 %). CL-EM: m/z [M+H]+=456,33 (calc. m/z [M+H]+=456,27); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6811,86 (s, 1H), 9,30 (s, 1H), 6,30 (br s, 2H), 5,73 (s, 1H), 4,53 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 11,2 Hz, 2H), 3,88 (q, J = 7,2 Hz, 14,4 Hz, 1H), 3,79 (q, J = 6,8 Hz, 14,4 Hz, 1H), 3,63 (s, 3H), 2,82 (s, 3H), 2,20-2,05 (m, 2H), 2,18 (s, 3H), 1,95-1,76 (m, 4H), 1,76- 1,66 (m, 8H).
Ejemplo 12: Preparación de 2-ciclopropil-1-((1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metiMH-pirazol-3-il)ammo)-6-(tetrahidrofurán-2-il)pirimidín-2-il)amino)-9- azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)etán-1-ona
Etapa 1: 2-cidopropil-1-((1R,3s,5S)-3-((4-(4,5-dihidrofurán-2-il)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabicido[3.3.1]nonán-9-il)etán-1-ona (12-a)
A una solución de intermediario cloropirimidinilo4-a(300 mg, 0,675 mimóles) y éster de ácido pinacol-borónico8-a(331 mg, 1,68 mmoles) en DMA (10 ml) y agua (2,0 ml) se añadió K3PO4 (430 mg, 2,03 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir PdXphos-G4 (116 mg, 0,135 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a 110 °C durante 45 min bajo radiación de microondas. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CL-EM), la mezcla se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (2x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando12-a(300 mg, en bruto, 81 %), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación adicional. LC- MS: m/z [M+H]+=478,34 (calc. m/z [M+H]+=478,29).
Etapa 2: 2-ciclopropil-1-((1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-6-(tetrahidrofurán-2-il)pirimidín-2-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)etán-1-ona(Ej. 12)
A una solución de12-a(300 mg, 0,62 mmoles) en MeOH (15,0 ml) se añadió Pd/C (300 mg). La mezcla de reacción resultante se sometió a agitación bajo una atmósfera de hidrógeno (40 psi) a temperatura ambiente durante 6 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CL-EM y CCF), la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite y se eluyó con MeOH (10 ml). Se concentró el filtrado bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante RP-HPLC preparativa proporcionó elEj. 12en forma de un sólido blanquecino (87 mg, 43 %). CL-EM: m/z [M+H]+=480,43 (calc. m/z [M+H]+=480,31); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6511,86 (s, 1H), 9,30 (s, 1H), 6,30 (br s, 2H), 5,76 (br s, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,53 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 4,18 (s, 1H), 3,89 (q, J = 7,2 Hz, 14 Hz, 1H), 3,45 (q, J = 6,8 Hz, 13,6 Hz, 1H), 2,81 (s, 3H), 2,27 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 2,18 (s, 3H), 2,26- 2,05 (m, 2H), 1,95 -1,6 (m, 12 H), 0,98 (m, 1H), 0,467 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 0,14 (d, J = 3,6 Hz, 2H).
Ejemplo 13: Preparación de (1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5- metil-1H-pirazol-3-il)ammo)-6-(tetrahidrofurán-2-il)pirimidín-2-il)amino)-9- azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de 2-metoxietilo
Etapa 1: (1R,3s,5S)-3-((4-cloro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de 2-metoxietilo (13-a)
A una solución bajo agitación de intermediario dicloropirimidinaI-10c(1,0 g, 4,1 mmoles) en n-AmOH (12,50 ml) se añadió intermediarioI7(1,58 g, 6,17 mmoles) y Zn(OAc)2 (1,35 g, 6,17 mmoles) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se sometió a agitación a 90 °C durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando gel de sílice (100-200 M) y eluyendo con EtOAc al 60 % en hexanos proporcionó13-aen forma de un sólido blanquecino (550 mg, 29 %). CL-EM: m/z [M+H]+=464,30 (calc. m/z [M(35Cl)+H]+=464,22).
Etapa 2: (1R,3s,5S)-3-((4-(4,5-dihidrofurán-2-il)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de 2-metoxietilo(13-b)
A una solución de13-a(300 mg, 0,64 mimóles) y éster de ácido pinacol-borónico8-a(317 mg, 1,62 mimóles) en DMA (15,0 ml) y agua (3,0 ml) se añadió K3PO4 (343 mg, 1,62 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir PdXphos-G4 (111 mg, 0,130 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a 110 °C durante 1 h bajo radiación de microondas. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CL-EM), la mezcla se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2x250 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando el producto en bruto13-ben forma de un sólido de color beige (110 mg, 33 %). CL-EM: m/z [M+H]+=498,43 (calc. m/z [M+H]+=498,28).
Etapa____ 3: (1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-6-(tetrahidrofurán-2-il)pirimidín-2-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de 2-metoxietilo(Ej. 13)
A una solución de13-b(100 mg, 0,19 mmoles) en MeOH (10,0 ml) se añadió Pd/C (100 mg). La mezcla de reacción resultante se sometió a agitación bajo una atmósfera de hidrógeno (40 psi) a temperatura ambiente durante 6 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CL-EM y CCF), la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite y se eluyó con MeOH (10 ml). Se concentró el filtrado bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante RP-HPLC preparativa proporcionó elEj. 13en forma de un sólido blanquecino (30 mg, 33 %). CL-EM: m/z [M+H]+=500,51 (calc. m/z [M+H]+=500,30); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6511,86 (s, 1H), 9,30 (s, 1H), 6,29 (br s, 2H), 5,73 (s, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,31 (s, 2H), 4,19-4,14 (m, 2H), 3,88 (q, J = 7,2 Hz, 14,4 Hz, 1H), 3,79 (q, J = 7,2 Hz, 14,4 z, 1H), 3,53 (t, J = 4,6 Hz, 2H), 3,28 (s, 3H), 2,82 (s, 3H), 2,23-2,05 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 1,90- 1,80 (m, 6H), 1,80- 1,67 (m, 6H).
Ejemplo 14: Preparación de (1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metiMH-pirazol-3-il)ammo)-6-(tetrahidrofurán-2-il)pirimidín-2- il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de tetrahidro-2H-pirán-4-ilo
Etapa 1: (1R,3s,5S)-3-((terc-butoxicarbonil)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de tetrahidro-2H-pirán-4-ilo (14-b)
A una solución helada de intermediarioI1(1,0 g, 3,93 mmoles) en DCM (10 ml) se añadió DIPEA (1,75 ml, 7,87 mmoles), seguido de cloroformato de tetrahidropiranilo14-a(0,71 g, 4,3 mmoles). La mezcla resultante se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 2 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se desactivó con agua helada y se extrajo con DCM (3x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina (3x250 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando gel de sílice (100 200 M) y eluyendo con EtOAc al 20 % en hexanos proporcionó14-b(700 mg, 46 %).
Etapa 2: (1R,3s,5S)-3-(metilamino)-9- azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de tetrahidro-2H-pirán-4-ilo(14-c)
A una solución helada bajo agitación de carbamato14-b(700 mg, 1,83 mmoles) en DCM (7,0 ml) se añadió una solución de HCl 4 M en dioxano (7,0 ml). La mezcla se sometió a agitación a TA durante 16 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se diluyó con agua (50 ml) y se basificó con solución aq. de NH4OH hasta pH~10. La solución resultante se extrajo con EtOAc (3x250 ml) y los extractos orgánicos agrupados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando14-c(450 mg), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación adicional.
Etapa 3: (1R,3s,5S)-3-((4-cloro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9- carboxilato de tetrahidro-2H-pirán-4-ilo(14-d)
A una solución bajo agitación de intermediario dicloropirimidinaI-10c(250 mg, 1,02 mmoles) en n-AmOH (12,50 ml) se añadió amina14-c(435 mg, 1,54 mmoles) y Zn(OAc)2 (338 mg, 1,54 mmoles) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se sometió a agitación a 90 °C durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando gel de sílice (100-200 M) y eluyendo con MeOH al 3 % en DCM proporcionó14-den forma de un sólido blanquecino (250 mg, 49 %). CL-EM: m/z [M+H]+=490,40 (calc. m/z [M(35Cl)+H]+=490,23).
Etapa 4: (1R,3s,5S)-3-((4-(4,5-dihidrofurán-2-il)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-carboxilato de tetrahidro-2H-pirán-4-ilo(14-e)
A una solución de14-d(300 mg, 0,61 mmoles) y éster de ácido pinacol-borónico8-a(300 mg, 1,53 mmoles) en DMA (15,0 ml) y agua (3,0 ml) se añadió K3PO4 (324 mg, 1,53 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir PdXphos-G4 (102 mg, 0,120 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a 110 °C durante 1 h bajo radiación de microondas. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CL-EM), la mezcla se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2x250 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando gel de sílice (100 200 M) y eluyendo con MeOH al 2 % en DCM proporcionó14-een forma de un sólido de color beige (90 mg, 76 % pureza según CL-EM). CL-EM: m/z [M+H]+=524,46 (calc. m/z [M+H]+=524,30).
Etapa_____5: (1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-6-(tetrahidrofurán-2-il)pirimidín-2-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9- carboxilato de tetrahidro-2H-pirán-4-ilo(Ej. 14)
A una solución de14-e(90 mg, 0,17 mmoles) en MeOH (10,0 ml) se añadió Pd/C (70 mg). La mezcla resultante se sometió a agitación bajo una atmósfera de hidrógeno (40 psi) a temperatura ambiente durante 6 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CL-EM y CCF), la mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de Celite y se eluyó con MeOH (10 ml). Se concentró el filtrado bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante RP-HPLC preparativa proporcionó elEj. 14en forma de un sólido blanquecino (10 mg, 11 %). CL-EM: m/z [M+H]+=526,56 (calc. m/z [M+H]+=526,31); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6511,86 (s, 1H), 9,30 (s, 1H), 6,30 (br s, 2H), 5,73 (s, 1H), 4,81-4,78 (m, 1H), 4,55-4,52 (m, 1H), 4,33 (d, J = 10,8 Hz, 2H), 3,86 (q, J = 7,2 Hz, 13,6 Hz, 1H), 3,80 -3,77 (m, 3H), 3,48 (t, J = 10 Hz, 2H), 2,82 (s, 3H), 2 ,21-2,0 (m, 2H), 2,18 (s, 3H), 1,90- 1,50 (m, 16H).
Ejemplo 15: Preparación de N-etil-2-((1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-M)ammo)-6-(tetrahidrofurán-2-il)pinmidm-2-il)ammo)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)acetamida
Etapa_________ 1 2-((1R,3s,5S)-3-((4-cloro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidm-2-il)(metil)amino)-9-azabicido[3.3.1]nonán-9-il)-N-etilacetamida de 2-metoxietilo(15-a)
A una solución bajo agitación de dicloropirimidinaI-10c(1,0 g, 4,1 mimóles) en IPA (10 ml) se añadió intermediarioI8(1,5 g, 6,1 mmoles) y Zn(OAc)2-2H2O (1,3 g, 6,1 mmoles) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se sometió a agitación a 100 °C durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando gel de sílice (100-200 M) y eluyendo con EtOAc al 60 % en hexanos proporcionó15-aen forma de un sólido blanquecino (500 mg). CL-EM: m/z [M+H]+=447,37, 449,36 (calc. m/z [M(35Cl)+H]+=447,24, m/z [M(37Cl)+H]+=449,24).
Etapa 2: 2-((1R,3s,5S)-3-((4-(4,5-dihidrofurán-2-il)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)-N-etilacetamida(15-b)
A una solución de intermediario monocloro-pirimidina15-a(300 mg, 1,68 mmoles) y éster de ácido pinacol-borónico8-a(330 mg, 1,68 mmoles) en DME (5,0 ml) se añadió Cs2CO3 (545 mg, 1,62 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir Tetrakis (154 mg, 0,130 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a 110 °C durante 2 h bajo radiación de microondas. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CL-EM), la mezcla se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2x250 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna flash en gel de sílice (malla 100-200) y eluyendo con MeOH al 10 % en DCM proporcionó15-ben forma de un sólido de color beige (180 mg, 33 %). CL-EM: m/z [M+H]+=481,47 (calc. m/z [M+H]+=481,30).
Etapa 3: N-etil-2-((1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-6-(tetrahidrofurán-2-il)pirimidín-2-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)acetamida(Ej. 15)
A una solución de15-b(180 mg, 0,190 mmoles) en MeOH (20,0 ml) se añadió Pd/C (200 mg). La mezcla de reacción resultante se sometió a agitación bajo una atmósfera de hidrógeno (40 psi) a temperatura ambiente durante 6 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CL-EM y CCF), la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite y se eluyó con MeOH (10 ml). Se concentró el filtrado bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante RP-HPLC preparativa proporcionó elEj. 15en forma de un sólido blanquecino (49 mg, 33). CL-EM: m/z [M+H]+=483,46 (calc. m/z [M+H]+=483,32); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d68 11,85 (s, 1H), 9,28 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 6,30 (s, 1H), 6,24 (s,1H), 5,60 (s, 1H), 4,53 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 3,89 (q, J = 7,2 Hz, 14,4 Hz, 1H), 3,79 (q, J = 6,8 Hz, 14 Hz, 1H), 3,21 (s, 2H), 3,17- 3,12 (m, 2H), 2,93 (s, 3H), 2,88 (br s, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,18- 1,84 (m, 9H), 1,55 (br s, 1H), 1,44 (br s, 2H), 1,36 (br s, 2H), 1,03 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplo 16: Preparación de 2-((1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metiMH-pirazol-3-il)ammo)-6-(tetrahidrofurán-2-M)pirímidm-2-il)ammo)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)-1-(pirrolidm-1 -il)etán-1-ona
Etapa 1: (1R,3s,5S)-3-((4-doro-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabicido[3.3.1]nonán-9-carboxilato de 2-metoxietilo(16-a)
A una solución bajo agitación de solución de intermediario didoropirimidinaI-10c(1,0 g, 4,10 mimóles) en n-AmOH (15 ml) se añadió intermediario aminaI9(1,3 g, 4,9 mmoles) y Zn(OAc)2-2H2O (1,07 g, 4,91 mmoles) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se sometió a agitación a 135 °C durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se diluyó con agua y la solución resultante se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando gel de sílice (100-200 M) y eluyendo con MeOH al 3 % en DCM proporcionó16-aen forma de un sólido blanquecino (500 mg).
Etapa 2: 2-((1R,3s,5S)-3-((4-(4,5-dihidrofurán-2-il)-6-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)-1 -(pirrolidín-1 - yl)etán-1-ona(16-b)
A una solución de intermediario monocloro-pirimidina16-a(450 mg, 0,95 mmoles) y éster de ácido pinacol-borónico8-a(373 mg, 1,90 mmoles) en DMA (10,0 ml) y agua (2,0 ml) se añadió K3PO4 (504 mg, 2,37 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir PdXphos-G4 (164 mg, 0,190 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a 110 °C durante 1 h bajo radiación de microondas. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CL-EM), la mezcla se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (3x25 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando el producto en bruto16-ben forma de un sólido de color beige (170 mg). CL-EM: m/z [M+H]+ = 507,37 (calc. m/z [M+H]+=507,32).
Etapa 3: 2-((1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-6-(tetrahidrofurán-2-il)pirimidín-2-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)-1 -(pirrolidín-1 -il)etán-1 -ona(Ej. 16)
A una solución de16-b(167 mg, 0,33 mmoles) en MeOH (10,0 ml) se añadió Pd/C (200 mg). La mezcla de reacción resultante se sometió a agitación bajo una atmósfera de hidrógeno (40 psi) a temperatura ambiente durante 6 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CL-EM y CCF), la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite y se eluyó con MeOH (10 ml). Se concentró el filtrado bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante RP-HPLC preparativa proporcionó elEj. 16en forma de un sólido blanquecino (45 mg, 27 %). CL-EM: m/z [M+H]+=509,55 (calc. m/z [M+H]+=509,34); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6811,84 (s, 1H), 9,27 (s, 1H), 6,32 (br s, 1H), 6,18 (br s, 1H), 5,60 (br s, 1H), 4,53 (t, J = 6,2 Hz, 1H), 3,89 (q, J = 7,2 Hz, 14 Hz, 1H) , 3,79 (q, J = 6,8 Hz, 14 Hz, 1H), 3,58 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,41 (s, 2H), 3,32-3,26 (m, 2H), 2,99 (br s, 2H), 2,90 (s, 3H), 2,21-2,15 (m, 1H), 2,17 (s, 3H), 2,10-1,84 (m, 10H), 1,84-1,74 (m, 2H), 1,70 -1,60 (m, 1H), 1,58 -1,48 (m, 2H), 1,48- 1,36 (m, 2H).
Ejemplo 17: Preparación de 1-((1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-il)ammo)-6-(((R)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidm-2-M)ammo)-9-azabicido[3.3.1]nonán-9-M)propán-1-ona
Etapa 1: 1-((1R,3s,5S)-3-((4-doro-6-(((R)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabicido[3.3.1]nonán-9-il)propán-1-ona(17-a)
A una solución helada de ácido propiónico (0,096 ml, 1,3 mimóles) en DMF (5 ml) se añadió DIPEA (0,44 ml, 2,6 mimóles) y HATU (484 mg, 1,27 mmoles) a 0 °C. La mezcla resultante se sometió a agitación sobre hielo durante 10 minutos y se añadió intermediario I11 (300 mg, 1,27 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 2 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se desactivó con agua helada y se extrajo con EtOAc (3x25 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina (3x25 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna flash en gel de sílice (malla 100-200) y eluyendo con metanol al 2 % en DCM proporcionó amida17-a(300 mg, 85 %). CL-EM: m/z [M+H]+=409,25, 411,25 (calc. m/z [M(35 Cl)+H]+=409,20, m/z [M(37 Cl)+H]+=411,20).
Etapa 2: 5-metil-3-((2-(metil((1R,3s,5S)-9-propionil-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)amino)-6-(((R)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidín-4-il)amino)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo(17-c)
A una solución de intermediario cloropirimidina17-a(300 mg, 0,73 mmoles) y aminopirazol17-b(188 mg, 0,95 mmoles) en DME (8 ml) se añadió Cs2CO3(358 mg, 1,10 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir Pd2(dba)3 (134 mg, 0,14 mmoles) y Xphos (69 mg, 0,14 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a 100 °C durante 1 h bajo radiación de microondas. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CL-EM), la mezcla se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3x25 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando el producto en bruto17-cen forma de un sólido de color beige (200 mg, 47 %). CL-EM: m/z [M+H]+=570,32 (calc. m/z [M+H]+=570,34).
Etapa 3: 1-((1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-6-(((R)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidín-2-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)propán-1-ona(Ej. 17)
A una solución helada bajo agitación de compuesto17-c(200 mg, 0,42 mmoles) en H2O (10 ml) se añadió HCl 12 N (5 ml). La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 3 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante RP-HPLC preparativa proporcionó el Ej. 17 en forma de un sólido blanquecino (50 mg, 30 %). CL-EM: m/z [M+H]+=470,35 (calc. m/z [M+H]+=470,29); RMN-1H: 400 MHz DMSO-da 811,80 (s, 1H), 9,08 (s, 1H), 6,16 (br s, 1H), 5,72- 5,61 (m, 2H), 5,44 (s, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,20 (s, 1H), 3,89-3,73 (m, 4H), 2,83 (s, 3H), 2,39 -2 ,31 (m, 2H), 2,17 2,12 (m, 2H), 2,14 (s, 3H), 2,12- 1,69 (m, 10H), 1,02 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplo 18: Preparación de N2-((1R,3s,5S)-9-(etNsulfoml)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-N)-N2-metN-N4-(5-metN-1H-pirazol-3-il)-6-(((R)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidín-2,4-diamina
Etapa 1: (1R,3s,5S)-N-(4,6-didoropirimidín-2-il)-N-metil-9-azabicido[3.3.1]nonán-3-amina(18-a)
A una solución helada bajo agitación de compuestoI-11a(3,0 g, 7,48 mimóles) en DCM (30 ml) se añadió TFA (10 ml). La mezcla de reacción se sometió a agitación a TA durante 30 min. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se diluyó con agua (100 ml) y se basificó con solución aq. de NH4OH hasta pH~10. Se extrajo la mezcla acuosa con EtOAc (3x300 ml). Los extractos orgánicos agrupados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando18-a(2,50 g), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación adicional.<c>L-EM: m/z [M+H]+=301,17, 303,16 (calc. m/z [M(35Cl,35Cl)+H]+=301,10, m/z [M(35Cl,37Cl)+H]+=303,10).
Etapa 2: (1R,3s,5S)-N-(4,6-dicloropirimidín-2-il)-9-(etilsulfonil)-N-metil-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-amina(18-b)
A una solución helada de amina18-a(600 mg, 2,00 mmoles) en In DCM (10 ml) se añadió DIPEA (1,0 ml, 6,0 mmoles) seguido de cloruro de etilsulfonilo (384 mg, 3,00 mmoles). La mezcla resultante se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 2 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se desactivó con agua helada y se extrajo con DCM (3x25 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina (2x25 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando sulfonamida18-b(550 mg, 70 %), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación adicional. CL-EM: m/z [M+H]+=393,20, 395.18 (calc. m/z [M(35Cl,35Cl)+H]+=393,09, m/z [M(35Cl,37Cl)+H]+=395,09).
Etapa________ 3: (1R,3s,5S)-N-(4-cloro-6-(((S)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidm-2-il)-9-(etilsulfonil)-N-metil-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-amina(18-c)
A una solución helada de (R)-3-hidroxitetrahidrofurano (384 mg, 3,00 mmoles) en THF (10 ml) se añadió NaH (91 mg, 2,3 mmoles) a 0 °C seguido de dicloropirimidina 18-b (450 mg, 1,14 mmoles). La mezcla resultante se sometió a 70 °C durante 2 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se desactivó con agua helada y se extrajo con EtOAc (3x250 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina (2x250 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionando18-cen bruto (310 mg, 70 %), que se utilizó en la etapa siguiente sin purificación. CL-EM: m/z [M+H]+=445,18, 447,20 (calc. m/z [M(35Cl)+H]+=445,17, m/z [M(37 Cl)+H]+=447,17).
Etapa 4: 3-((2-(((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)(metil)amino)-6-(((S)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidín-4-il)amino)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo(18-d)
A una solución de intermediario monocloro-pirimidina18-c(240 mg, 0,54 mmoles) y N-Boc-3-amino-5-metilpirazol(17-b)(117 mg, 0,59 mmoles) en DME (5 ml) se añadió Cs2CO3 (351 mg, 1,08 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir Pd2(dba)3 (98 mg, 0,10 mmoles) y Xphos (51 mg, 0,10 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a 100 °C durante 1 h bajo radiación de microondas. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CL-EM), la mezcla se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (3x25 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando18-den bruto en forma de un sólido de color beige (110 mg). CL-EM: m/z [M+H]+=606,37 (calc. m/z [M+H]+=606,31).
Etapa^ 5: N 2 -((1 R ,3 s ,5 S )-9 -(e tils u lfo n il)-9 -a z a b ic ic lo [3.3.1 ]n o n á n -3 - il) -N 2 -m e til-N 4 -(5 -m e til-1 H -p ira z o l-3 - il) -6 -(((R )-te tra h id ro fu rá n -3 - il)o x i)p ir im id ín -2 ,4 -d ia m in a(Ej. 18)
A una solución helada bajo agitación de intermediario18-d(90 mg, 0,14 mimóles) en H2O (5,0 ml) se añadió HCl 12 N (2,0 ml). La mezcla se sometió a agitación a TA durante 3 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante RP-HPLC preparativa proporcionó elEj. 18en forma de un sólido blanquecino (30 mg, 30 %).<c>L-EM: m/z [M+H]+=506,31 (calc. m/z [M+H]+=506,25); RMN-1H: 400 MHz DMSO-da 8 11,81 (s, 1H), 9,10 (s, 1H), 6,11 (br s, 1H), 5,84-5,52 (m, 2H), 5,43 (s, 1H), 4,04 (s, 2H), 3,89-3,73 (m, 4H), 3,13 (q, J = 7,2 Hz, 14,4 Hz, 2H), 2,85 (s, 3H), 2 ,17-2,12 (m, 1H), 2,14 (s, 3H), 2,12-1,80 (m, 6H), 1,80 -1,60 (m, 5H), 1,22 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplos 19 a 22: Preparación de análogos de 6-((R)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidina
Etapa 1:
Siguiendo los procedimientos expuestos en elEjemplo 18, etapa 2, mediante la reacción de la amina secundaria18-acon electrófilos apropiadosRXen la presencia de DIPEA y diclorometano proporcionó compuestos de fórmulaInt-I(ver la Tabla 1, a continuación).
Etapas 2 a 4:
Siguiendo los procedimientos expuestos en elEjemplo 18, etapas 3 a 5, los compuestos de fórmulaInt-Ise convirtieron en losEjemplos 19 a 22(ver la Tabla 1, a continuación).
Tabla 1.
Ejemplos 23 a 26: preparación de análogos de 6-((R)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidina
Etapa 1:
Siguiendo los procedimientos expuestos en elEjemplo 18, etapa 2 o en elEjemplo 17, etapa 1, se hizo reaccionar la amina secundariaI11con electrófilosRXen la presencia de DIPEA y diclorometano o de DIPEA, HATU y diclorometano, proporcionando compuestos de fórmulaInt-II(ver la Tabla 2).
Etapas 2 a 3:
Siguiendo los procedimientos expuestos en elEjemplo 18, etapas 4 y 5, los compuestos de fórmulaInt-IIse convirtieron en losEjemplos 23 a 26(ver la Tabla 2).
Tabla 2.
Ejemplos 27 a 32: preparación de análogos de 6-((S)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidina
Etapa 1:
Siguiendo los procedimientos expuestos en el Ejemplo 18, etapa 2 o en el Ejemplo 17, etapa 1, se hizo reaccionar la amina secundaria I12 con electrófilos RX en la presencia de DIPEA y diclorometano. Alternativamente, se hizo reaccionar la amina I12 con electrófilos RX en la presencia de HATU/DIPEA/DMF o NaHCO3 en THF/H2O, proporcionando compuestos de fórmula Int-IV (ver la Tabla 3).
Etapas 2 a 3:
Siguiendo los procedimientos expuestos en elEjemplo 18, etapas 4 y 5, los compuestos de fórmulaInt-IVse convirtieron en losEjemplos 27 a 32(ver la Tabla 3).
Tabla 3.
Ejemplo 33: preparación de N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-(((S)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidín-2,4-diamina
Etapa________ 1 (1R,3s,5S)-N-(4-doro-6-(((S)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidín-2-il)-9-(etilsulfonil)-N-metil-9-azabicido[3.3.1]nonán-3-amina(33-a)
A una solución helada de 3-(S)-hidroxitetrahidrofurano (151 mg, 1,72 mimóles) en THF (5 ml) se añadió NaH (91 mg, 2,3 mimóles) a 0 °C seguido de una solución de intermediario didoropirimidina18-b(450 mg, 1,14 mmoles) en THF (5 ml). La mezcla resultante se sometió a agitación a TA durante 2 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se desactivó con agua helada y se extrajo con EtOAc (3x150 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina (2x250 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando33-aen bruto (310 mg, 61 %), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación adicional. CL-EM: m/z [M+H]+=445,18, 447,20 (calc. m/z [M(35Cl)+H]+=445,17, m/z [M(37 Cl)+H]+=447,17).
Etapa 2: 3-((2-(((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)(metil)amino)-6-(((S)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidín-4-il)amino)-5-metil- 1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo(33-b)
A una solución de33-a(240 mg, 0,54 mmoles) y 3-amino-5-metilpirazol protegido con N-Boc17-b(117 mg, 0,59 mmoles) en DME (5 ml) se añadió Cs2CO3(351 mg, 1,08 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir Pd2(dba)3 (98 mg, 0,10 mmoles) y Xphos (51 mg, 0,10 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a 100 °C durante 1 h bajo radiación de microondas. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CL-EM), la mezcla se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3x125 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando33-ben bruto en forma de un sólido de color beige (120 mg, 37 %), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación adicional.
Etapa 3: N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-(((S)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidín-2,4- diamina(Ej. 33)
A una solución helada bajo agitación de compuesto33- b(120 mg, 0,18 mmoles) en agua (5,0 ml) se añadió HCl conc. (2,0 ml). La mezcla se sometió a agitación a TA durante 2 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante RP-HPLC preparativa proporcionó elEj. 33en forma de un sólido blanquecino (45 mg, 45 %). CL-EM: m/z [M+H]+=506,35 (calc. m/z [M+H]+=506,25); RMN-1H: 400 MHz DMSO-da 511,81 (s, 1H), 9,10 (s, 1H), 6,14 (s, 1H), 5,90- 5,69 (m, 2H), 5,43 (s, 1H), 4,04 (s, 2H), 3,88-3,70 (m, 4H), 3,13 (q, J = 7,2 Hz, 14,4 Hz, 2H), 2,85 (s, 3H), 2,21- 2,10 (m, 1H), 2,17 (s, 3H), 2,05-1,80 (m, 6H), 1,80-1,60 (m, 5H), 1,22 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplo 34: preparación de N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-(oxetán-3- iloxi)pirimidín-2,4-diamina
Etapa 1: (1R,3s,5S)-N-(4-doro-6-(oxetán-3-iloxi)pirimidín-2-il)-9-(etilsulfonil)-N-metil-9-azabicido[3.3.1]nonán-3-amina(34-a)
A una solución helada de 3-hidroxietano (65 mg, 0,73 mmoles) en THF (5 ml) se añadió NaH (49 mg, 1,2 mimóles) a 0 °C, seguido de una solución de intermediario didoropiriimidina18-b(120 mg, 0,30 mmoles) en THF (5 ml). La mezcla resultante se sometió a agitación a TA durante 2 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se desactivó con agua helada y se extrajo con EtOAc (3x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina (2x25 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando34-a(170 mg, en bruto), que se utilizaron en la etapa siguiente sin purificación adicional. CL-EM: m/z [M+H]+=431,21,433,25 (calc. m/z [M(35Cl)+H]+=431,15, m/z [M(37Cl)+H]+=433,15).
Etapa 2: 3-((2-(((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)(metil)amino)-6-(oxetán-3-iloxi)pirimidín-4-il)amino)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo(34-b)
A una solución de éter34-a(160 mg, 0,37 mmoles) y 3-amino-5-metilpirazol protegido con N-Boc17-b(95 mg, 0,48 mmoles) en DME (5 ml) se añadió Cs2CO3 (180 mg, 0,56 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir Pd2(dba)3 (68 mg, 0,074 mmoles) y Xphos (35 mg, 0,074 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a 110 °C durante 1 h bajo radiación de microondas. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CL-EM), la mezcla se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (2x125 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando gel de sílice (100-200 M) y eluyendo con EtOAc al 70 % en hexanos proporcionó34-ben forma de un sólido blanquecino (100 mg, 47 %). CL-EM: m/z [M+H]+=592,28 (calc. m/z [M+H]+=592,29).
Etapa 3: N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-(oxetán-3-iloxi)pirimidín-2,4-diamina(Ej. 34)
A una suspensión bajo agitación de34-b(90 mg, 0,15 mmoles) en 1,4-dioxano (4 ml) se añadió agua (2,0 ml). La mezcla se sometió a agitación a 100 °C durante 16 h. Tras completarse la reacción, la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se trató con éter dietílico y n-pentano, proporcionando elEj. 34en forma de un sólido blanquecino (50 mg, 68 %). CL-EM: m/z [M+H]+=492,31 (calc. m/z [M+H]+=492,24); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6811,83 (s, 1H), 9,17 (s, 1H), 6,15 (s, br s), 5,78-5,55 (br s, 1H), 5,51 (s, 1H), 4,81 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 4,54 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 4,03 (s, 2H), 3,13 (q, J = 7,2 Hz, 14,4 Hz, 2H), 2,81 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,17-2,05 (m, 1H), 2,05- 1,80 (m, 4H), 1,80-1,63 (m, 5H), 1,09 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplos 35 a 38: preparación de análogos de 6-(oxetán-3-il)oxipirimidina
Etapa 1:
Siguiendo los procedimientos expuestos en elEjemplo 18, etapa 2, la amina secundaria 18-a se hizo reaccionar con electrófilosRXen la presencia de HATU y DIPEA en DMF o DIPEA en diclorometano, proporcionando compuestos de fórmulaInt-I(ver la Tabla 4).
Etapas 2 a 3:
Siguiendo los procedimientos expuestos en elEjemplo 18, etapas 3 y 4, y utilizando 3-hidroxioxetano en lugar de 3-(R)-hidroxi-tetrahidrofurano, los compuestos de fórmulaInt-1se convirtieron en intermediarios avanzados de fórmulaInt-VII.
Etapa 4:
Siguiendo los procedimientos expuestos en elEjemplo 34, etapas 3, se eliminaron los grupos protectores Boc en los intermediarios avanzados de fórmulaInt-VII, proporcionando losEjemplos 35 a 38(ver la Tabla 4).
Tabla 4.
Ejemplo 39: preparación de N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabicido[3.3.1]nonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-(oxetán-3-ilmetoxi)pirimidín-2,4-diamina
Etapa 1: (1R,3s,5S)-N-(4-doro-6-(oxetán-3-ilmetoxi)pirimidín-2-il)-9-(etilsulfonil)-N-metil-9-azabicido[3.3.1]nonán-3-amina(39-a)
A una solución helada de 3-hidroximetil-oxetano (230 mg, 2,61 mimóles) en THF (15 ml) se añadió NaH (180 mg, 3,91 mimóles) a 0 °C seguido de intermediario dicloropirimidina18-b(500 mg, 1,30 mimóles disueltos en 5,0 ml de THF). La mezcla resultante se sometió a 70 °C durante 1 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se desactivó con agua helada y se extrajo con EtOAc (3x50 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina (2x25 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna flash en gel de sílice (malla 100-200) y eluyendo con acetato de etilo al 30 % en hexanos proporcionó39-aen forma de un sólido de blanquecino (400 mg, 70 %). CL-EM: m/z [M+H]+=445,25, 447,23 (calc. m/z [M(35Cl)+H]+=445,17, m/z [M(37Cl)+H]+=447,17).
Etapa 2: 3-((2-(((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)(metil)amino)-6-(oxetán-3-ilmetoxi)pirimidín-4-il)amino)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo(39-b)
A una solución de39-b(170 mg, 0,39 mmoles) y 3-amino-5-metilpirazol protegido con N-Boc17-b(100 mg, 0,50 mmoles) en DME (5 ml) se añadió Cs2CO3 (190 mg, 0,58 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir Pd2(dba)3 (71 mg, 0,078 mmoles) y Xphos (37 mg, 0,078 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a 100 °C durante 1 h bajo radiación de microondas. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CL-EM), la mezcla se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo la capa acuosa resultante con acetato de etilo (3x75 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna flash en gel de sílice (malla 100-200) y eluyendo con acetato de etilo al 40 % en hexanos proporcionó39-ben forma de un sólido de color beige (110 mg, 47 %). CL-EM: m/z [M+H]+=606,31 (calc. m/z [M+H]+=606,31).
Etapa 3: N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-(oxetán-3-ilmetoxi)pirimidín-2,4-diamina(Ej. 39)
A una solución helada bajo agitación de compuesto39-b(100 mg, 0,17 mmoles) en 1,4-dioxano (10 ml) se añadió agua (5 ml). La mezcla se sometió a agitación a 100 °C durante 3 h. Tras completarse la reacción, la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se trituró con éter dietílico dietílico, proporcionando elEj. 39en forma de un sólido blanquecino (70 mg, 84 %). CL-EM: m/z [M+H]+=506,33 (calc. m/z [M+H]+=506,25); RMN-1H: 400 MHz DMSO-da 8 11,81 (s, 1H), 9,11 (s, 1H), 6,12 (br s, 1H), 5,90- 5,40 (m, 2H), 4,67 (dd, J = 6,4 Hz, 7,6 Hz, 2H), 4,44 (s, 2H), 3,46 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 4,04 (s, 2H), 3,13 (q, J = 7,2 Hz, 14,4 Hz, 2H), 2,86 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,20-2,05 (m, 1H), 2,05-1,95 (m, 2H), 1,95-1,80 (m, 2H), 1,80-1,65 (m, 5H), 1,22 (t, J = 7,2 Hz, 2H).
Ejemplo 40: preparación de 2-cidopropiM-((1R,3s,5S)-3-(metN(4-((5-metiMH-pirazol-3-N)ammo)-6-(oxetán-3-Mmetoxi)pirimidm-2-M)ammo)-9-azabicido[3.3.1]nonán-9-M)etán-1-ona
Etapa 1: 2-cidopropil-1-((1R,3s,5S)-3-((4,6-didoropirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabicido[3.3.1]nonán-9-il)etán-1-ona(40-a)
A una solución helada de ácido cidopropilacético (0,23 ml, 2,3 mimóles) en DMF (5,0 ml) se añadió DIPEA (0,78 ml, 4,5 mmoles) seguido de HATU (570 mg, 1,50 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadió dicloropirimidina18-a(450 mg, 1,50 mmoles) y la mezcla se sometió a agitación a TA durante 16 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se diluyó con agua y la solución acuosa resultante se extrajo con EtOAc (3x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna utilizando gel de sílice (100-200 M) y eluyendo con MeOH al 4 % en DCM proporcionó40-aen forma de un sólido blanquecino (500 mg, 87 %). CL-EM: m/z [M+H]+=383,15, 385,10 (calc. m/z [M(35Cl,35Cl)+H]+=383,14, m/z [M(35Cl,37Cl)+H]+=385,14).
Etapa 2: 1-((1R,3s,5S)-3-((4-cloro-6-(oxetán-3-ilmetoxi)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)-2-ciclopropiletán-1-ona(40-b)
A una solución helada de 3-hidroximetil-oxetano (230 mg, 2,61 mmoles) en THF (15 ml) se añadió NaH (180 mg, 3,91 mmoles) a 0 °C, seguido de una solución de amida40-a(500 mg, 1,30 mmoles) en THF (5,0 ml). La mezcla resultante se sometió a 70 °C durante 1 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se desactivó con agua helada y se extrajo con EtOAc (3x50 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina (2x25 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna flash en gel de sílice (malla 100-200) y eluyendo con acetato de etilo al 30 % en hexanos proporcionó40-ben forma de un sólido de blanquecino (400 mg, 70 %). CL-EM: m/z [M+H]+=435,27, 437,31 (calc. m/z [M(35Cl)+H]+=435,22, m/z [M(37Cl)+H]+=437,21).
Etapa______3: 3-((2-(((1R,3s,5S)-9-(2-ciclopropilacetil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)(metil)amino)-6-(oxetán-3-ilmetoxi)pirimidín-4-il)amino)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo(40-c)
A una solución de40-b(170 mg, 0,39 mmoles) y 3-amino-5-metilpirazol protegido con N-Boc17-b(100 mg, 0,50 mmoles) en DME (5 ml) se añadió Cs2CO3 (190 mg, 0,58 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno antes de añadir Pd2(dba)3 (71 mg, 0,078 mmoles) y Xphos (37 mg, 0,078 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a 100 °C durante 1 h bajo radiación de microondas. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CL-EM), la mezcla se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3x75 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna flash en gel de sílice (malla 100-200) y eluyendo con acetato de etilo al 40 % en hexanos proporcionó40-cen forma de un sólido de color beige (110 mg, 47 %). CL-EM: m/z [M+H]+=596,36 (calc. m/z [M+H]+=596,36).
Etapa 4: 2-ciclopropil-1-((1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-6-(oxetán-3-ilmetoxi)pirimidín-2-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)etán-1-ona(Ej. 40)
A una solución helada bajo agitación de compuesto40-c(100 mg, 0,17 mimóles) en 1,4-dioxano (10 ml) se añadió agua (5 ml). La mezcla se sometió a agitación a 100 °C durante 3 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se trituró con éter dietílico dietílico, proporcionando elEj. 40en forma de un sólido blanquecino (70 mg, 84 %). CL-EM: m/z [M+H]+=496,44 (calc. m/z [M+H]+=496,30); RMN-1H: 400 MHz DMSO-da 811,80 (s, 1H), 9,09 (s, 1H), 6,15 (br s, 1H), 5,90-5,56 (m, 2H), 4,77 (s, 1H), 4,67 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 4,45 (s, 2H), 4,26 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 4,19 (s, 1H), 2,83 (s, 3H), 2,24 (d, J = 16 Hz, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,20-2,05 (m, 1H), 1,92-1,60 (m, 10 H), 1,05-0,92( m, 1H), 0,47 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 0,14 (d, J = 4 Hz, 2H).
Ejemplo 41: preparación de N2-((1R,3s,5S)-9-(etNsulfoml)-9-azabicido[3.3.1]nonán-3-N)-5-fluoro-N2-metN-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6- ((oxetán-3-iloxi)metil)pirimidín-2,4-diamina
Etapa 1
Una solución deI-13(1 equiv., 3,0 g, 6,4 mmoles) y dicarbonato de di-terc-butilo (1,25 equiv., 1,75 g, 8,02 mmoles) en una mezcla 1:1 de THF y DMF (60 ml) se enfrió sobre hielo y se añadió carbonato de cesio (1,1 equiv., 2,3 g, 7,1 mmoles), seguido de 4-dimetilaminopiridina (0,1 equiv., 0,078 g, 0,64 mmoles). Se dejó que la mezcla se calentase hasta la temperatura ambiente y se sometió a agitación durante 5,5 h. La reacción se desactivó mediante la adición de NaHCO3 (solución aq. sat.: aprox. 50 ml) y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. La purificación mediante cromatografía de columna de fase normal (columna flash de gel de sílice, 0-5 % de MeOH/DCM) proporcionó el producto(41-a)en forma de un aceite incoloro (2,90 g, 5,11 mmoles, rendimiento: 80 %). El producto se aisló en forma de una mezcla de regioisómeros. CL-EM: m/z [M+H]+=568,15 (calc. m/z [M+H]+=568,27).
Etapa 2
Una solución de41-a(1 equiv., 2,90 g, 5,11 mmoles) y diisopropiletilamina (1,6 equiv., 1,42 ml, 8,17 mmoles) en DCM (50 ml) se enfrió sobre hielo y se añadió gota a gota cloruro de metanosulfonilo (1,25 equiv., 0,49 ml, 6,4 mmoles). La mezcla se sometió a agitación sobre hielo durante 2,5 h. La reacción se desactivó mediante la adición de agua (aprox.
50 ml) y la mezcla resultante se extrajo con DCM. Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con agua, seguido de solución hipersalina, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo restante (41-b, 3,30 g, sólido marrón) se utilizó sin purificación adicional en las reacciones siguientes. CL-EM: m/z [M+H]+=646,05 (calc. m/z [M+H]+=646,25).
Etapa 3
Una solución de oxetán-3-ol (10 equiv., 1,77 ml, 27,9 mmoles) en DMF (20 ml) se enfrió a -30 °C y se añadió tercbutóxico potásico (5,5 equiv., 1,72 g, 15,3 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a -30 °C durante 20 min y se añadió gota a gota una solución de41-ben DMF (20 ml) mediante embudo de adición durante 15 min. La mezcla se sometió a agitación a -30 °C durante 5 h y se desactivó mediante la adición de NH4Cl (solución aq. sat., aprox. 40 ml). La mezcla se extrajo con EtOAc y los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. Dos rondas de purificación mediante cromatografía de columna de fase normal (columna flash de gel de sílice, 0-10 % de MeOH/DCM) proporcionaron el producto(Ej. 41)en forma de un sólido amorfo blanco (0,92 g, 2,8 mmoles, rendimiento: 58 %). CL-e M: m/z [M+H]+=524,05 (calc. m/z [M+H]+=524,25); RMN-1H: 400 MHz DMSO-da 812,04 (s, 1H), 9,40 (s, 1H), 6,34 (s, 1H), 5,61 (s, 1H), 4,71 (m, 1H), 4,65 (m, 2H), 4,41 (m, 2H), 4,32 (app d, J = 2,1 Hz, 2H), 4,02 (app s, 2H), 3,12 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 2,82 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,98 (m, 3H), 1,87 (m, 2H), 1,68 (m, 5H), 1,21 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
Ejemplos 42 y 43: preparación de N2-((1R,3s,5S)-9-(etNsulfoml)-9-azabicido[3.3.1]nonán-3-M)-5-fluoro-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-((((S)-tetrahidrofurán-3-il)oxi)metil)pirimidín-2,4-diamina (Ej. 42) y N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabicido[3.3.1]nonán-3-il)-5-fluoro-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-((((R)-
Una solución de 3,4-dihidro-2H-pirano (3 equiv., 1,61 ml, 17,7 mmoles) yI-13d(1 equiv., 3,0 g, 5,9 mmoles) en THF (30 ml) se enfrió sobre hielo y se añadió monohidrato de ácido p-toluenosulfónico (0,2 equiv., 0,224 g, 1,18 mmoles). Se dejó que la mezcla se calentase hasta la temperatura ambiente y posteriormente se sometió a agitación a 60 °C durante 16 h. Se dejó que la mezcla se enfriase hasta la temperatura ambiente y se añadió NaHCO3 (solución aq. sat., aprox. 30 ml). La mezcla se extrajo con EtOAc, y los extractos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. La purificación mediante cromatografía de columna de fase normal (columna flash de gel de sílice, 0-5 % de MeOH/DCM) proporcionó el producto(42-a)en forma de un sólido blanco amorfo (3,29 g, 5,54 mimóles, rendimiento: 94 %). El producto se aisló en forma de una mezcla de regioisómeros. CL-EM: m/z [M+H]+=594,10 (calc. m/z [M+H]+=594,29).
Etapa 2
Una solución de42-a(1 equiv., 3,29 g, 5,54 mmoles) en una mezcla de THF (15,1 ml) y etanol (6,1 ml) se enfrió sobre hielo y se añadió gota a gota borohidruro de litio (2,0 M en THF, 3 equiv., 8,31 ml, 16,6 mmoles). La mezcla se sometió a agitación sobre hielo durante 2 h. La reacción se desactivó mediante la adición de NH4Cl (solución aq. sat., aprox.
25 ml). La mezcla se extrajo con EtOAc y los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. La purificación mediante cromatografía de columna de fase normal (columna de gel de sílice, 0-5 % de MeOH/DCM) proporcionó el producto(42-b)en forma de un sólido blanco amorfo (2,51 g, 4,55 mmoles, rendimiento: 82%). CL-EM: m/z [M+H]+ = 552,10 (calc. m/z [M+H]+=552,28).
Etapa 3
Una solución de42-b(1 equiv., 2,5 g, 4,5 mmoles) y diisopropiletilamina (2,6 equiv., 2,05 ml, 11,8 mmoles) en DCM (45 ml) se enfrió sobre hielo y se añadió gota a gota cloruro de metanosulfonilo (1,25 equiv., 0,44 ml, 5,7 mmoles). La mezcla se sometió a agitación sobre hielo 1,5 h y se añadió agua helada (aprox. 50 ml). La mezcla se extrajo con EtOAc y los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. El residuo restante (42-c, 2,83 g, sólido marrón) se utilizó sin purificación adicional en las etapas siguientes. CL-EM: m/z [M+H]+=630,05 (calc. m/z [M+H]+=630,25).
Etapa 4
Una solución de (S)-(+)-3-hidroxitetrahidrofurano (10 equiv., 1,55 ml, 19,9 mmoles) en THF (28 ml) se enfrió sobre hielo y se añadió en partes hidruro sódico (dispersión al 60 % en aceite mineral, 5,5 equiv., 0,437 g, 10,9 mmoles). La mezcla se sometió a agitación sobre hielo durante 30 min, dando lugar a una suspensión viscosa. Una solución de42-c(1 equiv., 1,25 g, 1,99 mmoles) en THF (12 ml) se añadió gota a gota mediante un embudo de adición durante 15 min. Se dejó que la mezcla se calentase hasta la temperatura ambiente y se dejó bajo agitación durante 24 h. Se añadió NH4Cl (solución aq. sat., aprox. 40 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. La purificación mediante cromatografía de columna de fase normal (columna flash de gel de sílice, 0-5 % de MeOH/DCM), seguido de cromatografía de columna de fase inversa en 2 partes (columna flash C18, 15-55 % de H2O/CH3CN) proporcionó el producto (42-d, TFA) en forma de un sólido blanco (0,722 g, 0,981 mmoles, rendimiento: 49 %). CL-EM: m/z [M+H]+=622,25 (calc. m/z [M+H]+=622,32).
Etapa 5
Se añadió monohidrato de ácido p-toluenosulfónico (2 equiv., 0,373 g, 1,96 mmoles) a una solución de42-d, TFA (1 equiv., 0,722 g, 0,981 mmoles) en etanol (9,8 ml) y la mezcla se sometió a agitación a 60 °C durante 4,5 h. Se dejó que la mezcla se enfriase hasta la temperatura ambiente y se añadió NaHCO3 (solución aq. sat., aprox. 15 ml). La mezcla se extrajo con EtOAc, y los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. La purificación mediante cromatografía de columna de fase normal (columna de gel de sílice, 0-10 % de MeOH/DCM) proporcionó el producto(Ej.42)en forma de un sólido blanco amorfo (0,49 g, 0,90 mmoles, rendimiento: 92 %). CL-EM: m/z [M+H]+=538,20 (calc. m/z [M+H]+=538,26); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d6512,02 (s, 1H) 9,37 (s, 1H), 6,33 (s, 1H), 5,60 (s, 1H), 4,33 (m, 2H), 4,29 (m, 1H), 4,02 (app s, 2H), 3,68 (m, 4H), 3,12 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 2,82 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,95 (m, 5H), 1,86 (m, 2H), 1,67 (m, 5H), 1,21 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
Etapa 4'
Una solución de (R)-tetrahidrofurano-3-ol (10 equiv., 2,11 ml, 27,0 mmoles) en THF (36 ml) se enfrió sobre hielo y se añadió en partes hidruro sódico (dispersión al 60 % en aceite mineral, 5,5 equiv., 0,594 g, 14,9 mmoles). La mezcla se sometió a agitación sobre hielo durante 30 min. Se añadió gota a gota una solución de42-cen THF (18 ml) durante 10 min mediante un embudo de adición. Se dejó que la mezcla se calentase hasta la temperatura ambiente y se sometió a agitación durante 24 h. Se añadió NH4Cl (solución aq. sat., aprox. 50 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. La purificación mediante cromatografía de columna de fase normal (columna flash de gel de sílice, 0-5 % de MeOH/DCM), seguido de cromatografía de columna de fase inversa (columna flash C18, 20-55 % de H2O/CH3CN) proporcionó el producto (43-a, TFA) en forma de un sólido blanco (0,954 g, 1,30 mmoles, rendimiento: 48 %). CL-EM: m/z [M+H]+=622,10 (calc. m/z [M+H]+=622,32).
Etapa 5'
Se añadió monohidrato de ácido p-toluenosulfónico (2 equiv., 0,483 g, 2,54 mmoles) a una solución de43-a, TFA (1 equiv., 0,935 g, 1,27 mmoles) en etanol (13 ml) y la mezcla se sometió a agitación a 60 °C durante 4,5 h. Se diluyó la mezcla con EtOAc (aprox. 30 ml) y se lavó con NaHCO3 (solución aq. sat.), seguido de solución hipersalina. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío. La purificación mediante cromatografía de columna de fase normal (columna flash de gel de sílice, 0-10 % de MeOH/DCM) proporcionó el producto(Ej. 43)en forma de un sólido blanco amorfo (0,630 g, 1,16 mmoles, rendimiento: 91 %). CL-EM: m/z [M+H]+=538,10 (calc. m/z [M+H]+=538,26); RMN-1H: 400 MHz DMSO-da 8 12,03 (s, 1H), 9,36 (s, 1H), 6,34 (s, 1H), 5,62 (s, 1H), 4,34 (m, 2H), 4,30 (m, 1H), 4,02 (app s, 2H), 3,69 (m, 4H), 3,12 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 2,82 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,98 (m, 5H), 1,86 (m, 2H), 1,68 (m, 5H), 1,21 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplo 44: preparación de N2-((1R,3s,5S)-9-(etNsulfoml)-9-azabicido[3.3.1]nonán-3-N)-5-fluoro-N2-metN-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6- (tetrahidrofurán-3-il)pirimidín-2,4-diamina
Etapa 1: 2,6-dicloro-5-fluoro-N-(5-metil-1H-pirazol-3-il)pirimidín-4-amina(44-a)
A una solución bajo agitación de 2,4,6-tricloro-5-fluoropirimidina (10 g, 50 mmoles) y 5-metil-1H-pirazol-3-amina (4,8 g, 50 mmoles) en IPA (100 ml) a temperatura ambiente se añadió DIPEA (17,1 ml, 99,5 mmoles). La mezcla de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 2 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se diluyó con agua helada (100 ml) y el precipitado resultante se eliminó mediante filtración y se lavó con n-pentano, proporcionando44-aen forma de un sólido blanco (11,20 g, 86 %).
Etapa 2: 6-cloro-N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-5-fluoro-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)pirimidín-2,4-diamina(44-b):
A una solución bajo agitación44-a(1,50 g, 5,72 mmoles) en IPA (15 ml) se añadióI4(1,55 g, 6,29 mmoles) y Zn(OAc)2 (1,37 g, 6,29 mmoles) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se sometió a agitación a 130 °C durante 16 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos agrupados se secaron sobre sulfato sódico anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna en gel de sílice (malla 100-200) y eluyendo con MeOH al 3 %/DCM proporcionó44-ben forma de un líquido viscoso (300 mg, 12 %). RMN-1H: 400 MHz DMSO-d68 12,11 (s, 1H), 9,71 (s, 1H), 6,30 (s, 1H), 5,53 (s, 1H), 4,01 (app s, 2H), 3,16 3,10 (m, 2H), 2,79 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,98-1,94 (m, 3H), 1,88-1,84 (m, 2H), 1,71-1,64 (m, 5H), 1,21 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Etapa 3: 6-(2,5-dihidrofurán-3-il)-N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-5-fluoro-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)pirimidín-2,4-diamina(44-c)
A una solución de44-b(180 mg, 0,38 mmoles) y 2-(2,5-dihidrofurán-3-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxoborolano (112 mg, 0,57 mmoles) en 1,4-dioxano (6,0 ml) y agua (1,0 ml) se añadió Na2CO3 (101 mg, 0,95 mmoles). La mezcla se desgasificó con nitrógeno antes de añadir Pd(dppf)Ch (55 mg, 0,07 mmoles) y someterse a agitación a 110 °C durante 1 h bajo radiación de microondas. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CL-EM), la mezcla se diluyó con agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna en gel de sílice (malla 100 200) y eluyendo con EtOAc al 50 %/hexanos proporcionó44-cen forma de un sólido blanquecino (140 mg, 72 %). CL-EM: m/z [M+H]+=506,31 (calc. m/z [M+H]+=506,23).
Etapa 4: N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-5-fluoro-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-(tetrahidrofurán-3-il)pirimidín-2,4-diamina(Ej. 44)
A una solución44-c(300 mg, 0,60 mmoles) en MeOH (20,0 ml) se añadió 10 % de Pd/C (600 mg). La suspensión resultante se sometió a agitación bajo una atmósfera de hidrógeno (60 psi) a temperatura ambiente durante 8 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CL-EM y CCF), la mezcla se filtró a través de Celite y se eluyó con MeOH (10 ml). El filtrado se concentró el filtrado bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se purificó mediante RP-HPLC preparativa, proporcionando el producto(Ej. 44)en forma de un sólido blanquecino (55 mg, 18 %). CL-EM: m/z [M+H]+=508,45 (calc. m/z [M+H]+=508,25); RMN-1H: 400 MHz DMSO-da 812,00 (s, 1H), 9,27 (s, 1H), 6,33 (s, 1H), 5,62 (s, 1H), 4,03-3,99 (m, 3H), 3,82 (app, q, J = 7,2 Hz, 2H), 3,72 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 3,58 (app, t, J = 7,6 Hz, 1H), 3,12 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 2,83 (s, 3H), 2,19-2,11 (m, 5H), 2,02-1,82 (m, 5H), 1,71-1,65 (m, 5H), 1,21 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplo 45: preparación de N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfoml)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-5-fluoro-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6- (tetrahidro-2H-pirán-4-il)pirimidín-2,4-diamina
Etapa 1: 6-(3,6-dihidro-2H-pirán-4-il)-N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-5-fluoro-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)pirimidín-2,4-diamina(45-a)
A una solución de44-b(400 mg, 0,849 mmoles) y 2-(3,6-dihidro-2H-pirán-4-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (357 mg, 1,69 mmoles) en 1,4-dioxano (10 ml) y agua (3 ml) se añadió Na2CO3 (223 mg, 2,12 mmoles). La mezcla resultante se desgasificó con nitrógeno y se añadió Pd(dppf)Ch (169 mg, 0,169 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a 110 °C bajo radiación de microondas durante 45 min. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se diluyó con agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2x100 ml). Los extractos orgánicos agrupados se secaron sobre sulfato sódico anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando45-a(300 mg, en bruto). CL-EM: m/z [M+H]+=520,28 (calc. m/z [M+H]+=520,25).
Etapa 2: N2-((1R,3s,5S)-9-(etilsulfonil)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)-5-fluoro-N2-metil-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)-6-(tetrahidro-2H-pirán-4-il)pirimidín-2,4- diamina(Ej. 45)
A una solución de45-a(300 mg, 0,58 mmoles) en MeOH (10,0 ml) se añadió 10 % de Pd/C (600 mg). La mezcla resultante se sometió a agitación a TA durante 16 h bajo una atmósfera de hidrógeno. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite y se eluyó con MeOH (10 ml). El filtrado se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se purificó adicionalmente mediante RP-HPLC preparativa y proporcionando el producto (Ej.45, 51 mg, 16 %). CL-EM: m/z [M+H]+=522,49 (calc. m/z [M+H]+=522,27); RMN-1H: 400 MHz DMSO-d689,39 (s, 1H), 6,32 (s, 1H), 5,62 (s, 1H), 4,25 (br, s, 1H), 4,03 (app, s, 2H), 3,92 (m, 2H), 3,43 (t, J = 11 Hz, 2H), 3,15-3,06 (m, 3H), 2,85 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,10-2,00 (m, 2H), 1,98-1,92 (m, 5H), 1,71-1,65 (m, 5H), 1,61-1,58 (m, 2H), 1,21 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ejemplo 46: preparación de 1-((1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-il)ammo)-6-((tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidm-2-il)ammo)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)propán-1-ona
Etapa 1: (1R,3s,5S)-3-((4-doro-6-((tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabicido[3.3.1]nonán-9-carboxilato de terc-butilo(46-a)
A una solución helada de tetrahidrofurán-3-ol (0,12 g, 1,4 mimóles) en THF seco (10 ml) se añadió NaH (0,10 g, 2,5 mimóles, dispersión al 60 % en aceite mineral) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se enfrió a 0 °C y se añadió en partesI-11a(0,50 g, 1,25 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a 70 °C durante 3 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), se diluyó la mezcla con agua (25 ml) y se extrajo con EtOAc (3x80 ml). Los extractos orgánicos agrupados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna flash en gel de sílice (12 g, SNAP) y eluyendo con EtOAc al 10 %/hexanos proporcionó46-aen forma de un sólido blanquecino (0,30 g, 53 %).
Etapa 2: 1R.3s.5S)-N-(4-cloro-6-((tetrah¡drofurán-3-¡l)ox¡)p¡r¡m¡dín-2-¡l)-N-met¡l-9-azab¡c¡clo[3.3.11nonán-3-am¡na(46-b)
A una solución helada de46-a(0,30 g, 0,66 mmoles) en DCM (10 ml) se añadió TFA (5,0 ml). La mezcla se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 1 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto, que se diluyó con agua y se basificó con solución aq. de NH4OH hasta pH~10. La solución resultante se extrajo con EtOAc (3x25 ml). Los extractos orgánicos se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando46-ben forma de un sólido blanquecino (0,28 g, en bruto, cuantitativo). CL-EM: m/z [M+H]+=353,16 (calc. m/z [M+H]+=353,17).
Etapa 3: preparación de 1-((1R,3s,5S)-3-((4-cloro-6-((tetrahidrofurán-3-il)oxi)piriimidín-2-il)(metil)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)propán-1-ona(46-c)
A una solución helada de46-b(0,12 g, 1,6 mmoles) en In DMF (10 ml) se añadió DIPEA (0,42 ml, 2,4 mmoles) y HATU (0,45 g, 1,2 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 10 min y se añadió ácido propiónico (0,28 g, 0,79 mmoles). La mezcla resultante se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 16 h. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se desactivó con agua helada y se extrajo con EtOAc (3x25 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina (2x25 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante cromatografía de columna flash en gel de sílice (malla 100-200) usando los eluyentes EtOAc al 20 % en hexanos proporcionó46-c(255 mg, 79 %). CL-EM: m/z [M+H]+=409,25 (calc. m/z [M+H]+=409,20).
Etapa 4: 5-metil-3-((2-(metil((1R,3s,5S)-9-propionyl-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-3-il)amino)-6-((tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidín-4-il)amino)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo(46-d)
A una solución de46-c(0,25 g, 0,61 mmoles) y 3-amino-5-metil-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo (0,15 g, 0,73 mmoles) en DME (10 ml) se añadió Cs2CO3 (0,30 g, 0,91 mmoles). La mezcla se desgasificó con nitrógeno antes de añadir Pd2(dba)3 (0,11 mg, 0,12 mmoles) y Xphos (0,060 mg, 0,12 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a 100 °C durante 1 h bajo radiación de microondas. Tras completarse la reacción (seguimiento mediante CL-EM), la mezcla se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3x25 ml). Los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, proporcionando46-den bruto en forma de un sólido amarillo (150 mg, en bruto). CL-EM: m/z [M+H]+=570,37 (calc. m/z [M+H]+=570,34).
Etapa 5: 1-((1R,3s,5S)-3-(metil(4-((5-metil-1H-pirazol-3-il)amino)-6-((tetrahidrofurán-3-il)oxi)pirimidín-2-il)amino)-9-azabiciclo[3.3.1]nonán-9-il)propán-1-ona(Ej. 46)
A una solución helada bajo agitación de compuesto46-d(150 mg, 0,26 mmoles) en agua (5 ml) se añadió HCl concentrado (5 ml). La mezcla se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 6 h. Tras completar la reacción (seguimiento mediante CCF), la mezcla se concentró bajo presión reducida, proporcionando un residuo en bruto. La purificación mediante RP-HPLC preparativa proporcionó elEj. 46en forma de un sólido blanquecino (9 mg, 7 %). CL-EM: m/z [M+H]+=470,35 (calc. m/z [M+H]+=470,29); RMN-1H: 400 MHz DMSO-da 8 11,80 (s, 1H), 9,09 (s, 1H), 6,14 (br s, 1H), 5,71- 5,69 (m, 2H), 5,43 (s, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,20 (s, 1H), 3,89-3,73 (m, 4H), 2,83 (s, 3H), 2,36 -2 ,31 (m, 2H), 2,17-2,14 (m, 2H), 2,14 (s, 3H), 2,12-1,69 (m, 10H), 1,02 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Ensayos biológicos
Ensayo 1: ensayos bioquímicos de las quinasas JAK y Tyk2
Se llevó a cabo un panel de ensayos bioquímicos de JAK LanthaScreen (JAK1,2, 3 y Tyk2) en un tampón de reacción de quinasa habitual (HEPES 50 mM, pH 7,5, Brij-35 al 0,01 %, MgCh 10 mM y Eg Ta 1 mM). Se obtuvieron enzimas JAK etiquetados con GST recombinantes y un sustrato peptídico de STAT1 etiquetado con GFP de Life Technologies.
Los compuestos diluidos en serie o discretamente se preincubaron con cada uno de los cuatro enzimas JAK y el sustrato en microplacas de 384 pocillos blancas (Corning) a temperatura ambiente durante 1 h. Seguidamente se añadió ATP para iniciar las reacciones de quinasa en 10 pl de volumen total, con DMSO al 1 %. Las concentraciones de enzima totales de JAK1, 2, 3 y Tyk2 eran de 4,2 nM, 0,1 nM, 1 nM y 0,25 nM, respectivamente; las concentraciones Km de ATP correspondientes utilizadas eran de 25 pM, 3 pM, 1,6 pM y 10 pM, mientras que la concentración de sustrato era de 200 nM para la totalidad de los cuatro ensayos. Se dejó que transcurriesen las reacciones de quinasa durante 1 hora a temperatura ambiente antes de añadir una preparación de 10 pl de EDTA (concentración final de 10 mM) y anticuerpo Tb-anti-pSTAT1 (pTyr701) (Life Technologies, concentración final: 2 nM) en tampón de dilución TR-FRET (Life Technologies). Las placas se dejaron bajo incubación a temperatura ambiente durante 1 h antes de leerlas en el lector EnVision (Perkin Elmer). Se registraron las señales de proporción de emisiones (520 nm/495 nm) y se utilizaron para calcular los valores de porcentaje de inhibición basados en DMSO y controles de fondo.
Para el análisis de dosis-respuesta, se representaron gráficamente los datos de porcentaje de inhibición frente a las concentraciones de compuesto, y se determinaron los valores de IC50 a partir de un modelo robusto de ajuste de 4 parámetros con el software Prism (GraphPad Software). Los resultados se expresaron como pIC50 (logaritmo negativo de IC50) y seguidamente se convirtieron a pKi (logaritmo negativo de la constante de disociación, Ki) utilizando la ecuación de Cheng-Prusoff.
Ensayo 2: inhibición de pSTATS estimulado por IL-2 en células T Tall-1
Se midió la potencia de los compuestos de ensayo en la inhibición de la fosforilación de STATS estimulada por interleuquina-2 (IL-2) en la línea de células T humanas Tall-1 (DSMZ) utilizando AlphaLlisa. Debido a que IL-2 señaliza a través de JAK1/3, este ensayo proporciona una medida de la potencia celular de JAK1/3.
Se midió STAT5 fosforilado mediante el kit AlphaLISA SureFire Ultra pSTAT5 (Tyr694/699) (PerkinElmer). Se cultivaron células T humanas de la línea celular Tall-1 en un incubador humidificado a 37 °C con 5 % de CO2, en RPMI (Life Technologies) suplementado con suero de feto bovino inactivado por calor al 15 % (FBS, Life Technologies), Glutamax 2 mM (Life Technologies), HEPES 25 mM (Life Technologies) y 1X Pen/Strep (Life Technologies). Los compuestos se diluyeron en serie en DMSO y se dispensaron acústicamente en pocillos vacíos. Se dispensó medio de ensayo (DMEM libre de rojo fenol (Life Technologies) suplementado con FBS al 10 % (ATCC)) (4 pl/pocillo) y las placas se sometieron a agitación a 900 rpm durante 10 min. Se sembraron las células a razón de 45.000 células/pocillo en medio de ensayo (4 pl/pocillo) y se incubaron a 37 °C con 5 % de CO2 durante 1 hora, seguido de la adición de IL-2 (R&D Systems, concentración final: 300 ng/ml) en medio de ensayo precalentado (4 pl) durante 30 minutos. Tras la estimulación con citoquinas, se lisaron las células con 6 pl de 3x tampón de lisis AlphaLisa (Perkin Elmer) que contenía 1x tabletas PhosStop y Complete (Roche). El lisado se sometió a agitación a 900 rpm durante 10 minutos a temperatura ambiente (TA). Se midió STAT5 fosforilado mediante el kit pSTAT5 AlphaLisa (PerkinElmer). La mezcla de microesferas-aceptor recién preparada se dispensó sobre el lisado (5 pl) bajo luz verde filtrada de <100 lux. Las placas se sometieron a agitación a 900 rpm durante 2 min, se centrifugaron brevemente y se incubaron durante 2 h a TA en la oscuridad. Las microesferas donantes se dispensaron (5 pl) bajo luz verde filtrada de <100 lux. Las placas se sometieron a agitación a 900 rpm durante 2 minutos, se centrifugaron brevemente y se incubaron durante la noche a TA en la oscuridad. Se midió la luminiscencia con excitación a 689 nm y emisión a 570 nm utilizando un lector de placas EnVision (Perkin Elmer) bajo luz verde filtrada de <100 lux.
Para determinar la potencia de inhibición de los compuestos de ensayo en respuesta a IL-2, se midió la intensidad de emisión media de las microesferas unidas a pSTAT5 en una línea de células T humanas. Se determinaron los valores de IC50 a partir del análisis de las curvas de inhibición de intensidad de señal frente a concentración de compuesto. Los datos se expresan como valores de pIC50 (logarítmico decádico negativo de IC50) (medias ± desviación estándar).
Ensayo 3: ensayo de permeación en células Caco-2
Se utilizó el ensayo de permeabilidad con Caco2 como evaluación de la permeabilidad cutánea. Este ensayo mide la permeabilidad in vitro a través de una monocapa de células Caco-2, que son morfológica y funcionalmente similares a los enterocitos del intestino delgado.
Se obtuvieron placas de 24 transpocillos CacoReady de ADMEcell (Alameda, CA). Se evaluaron los compuestos a una concentración de 5 pM a partir de soluciones madre de DMSO 10 mM por duplicado (n=2). Se determinó el transporte en la dirección apical a basal (A^-B) en monocapas de células Caco2. A partir de dichos valores se estimó la permeabilidad aparente (Pap). Para informar del potencial del compuesto de ser un sustrato P-gp, también se determinó el transporte del compuesto a través de la monocapa de células Caco-2 en la presencia de 25 pM del inhibidor conocido de P-gp, verapamilo (Yusa y Tsuruo et al., Cancer Research, vol.49, n.°18, 1989, páginas 5002 06).
El medio de cultivo de Caco-2 consistía en DMEM filtrado estándar, FCS al 10 %, L-glutamina al 1 % y PenStrep al 1 %. El experimento se llevó a cabo en un incubador a 37 °C con CO2 (5 %). Se preparó la placa de ensayo basal mediante la adición de 750 pl de tampón de transporte a pocillos A^-B. Se preparó una placa CacoReady™ mediante la eliminación del medio de Caco-2 de los pocillos apicales y la sustitución por medio de transporte fresco (200 pl repetido para un total de 3 lavados). A continuación, se sustituyó el medio de blanco (200 pl) por compuesto diluido. Para iniciar la incubación, la placa basal se extrajo del incubador y se añadió la sección apical sobre ella. Se recogieron muestras de los compartimientos apicales y basales para el tiempo cero (tü). Se recogieron nuevamente muestras tras 120 minutos (t-^) de los compartimientos apical y basal. Se diluyeron todas las muestras y se prepararon para bioanálisis mediante CL-EM/e M. Se estimó el coeficiente de permeación (Pap, media A a B) y (Pap, media A a B verapamilo) en cm/s calculado como dQ (flujo)/(dt x Área x concentración).
En dicho ensayo, un compuesto con un valor de Pap superior a aproximadamente 12x10‘6 cm/s se considera que presenta una permeabilidad elevada.
Ensayo 4: ensayo de microsomas hepáticos humanos
El objetivo de este ensayo era evaluar la estabilidad metabólica de los compuestos de ensayo en una subfracción hepática humana in vitro. Se descongelaron sobre hielo microsomas hepáticos humanos obtenidos de Bioreclamation-IVT (Baltimore, MD) y se diluyeron en tampón de fosfato potásico 0,1 M, pH 7,4, rindiendo concentraciones de proteínas finales de la incubación de 0,1 mg/ml. Los compuestos de ensayo (10 mM) se diluyeron en cofactor NADPH, rindiendo concentraciones de incubación finales de 0,1 pM de compuesto de ensayo y 1 mM de NADPH. Las incubaciones se llevaron a cabo a una temperatura de 37 °C y se extrajeron alícuotas de ensayo en los puntos temporales 0, 5, 8, 15, 30 y 45 minutos. Se introdujo cada alícuota en agua con ácido fórmico al 3 % y patrón interno de 1 pM. Las muestras resultantes se inyectaron en un sistema de CL-EM/EM para el análisis.
Para cada incubación, la superficie de pico de los analitos en cada alícuota de fe se fijó en 100 % y se convirtieron las superficies de pico de las alícuotas de puntos temporales posteriores a porcentaje del compuesto parental que quedaba respecto a ta El porcentaje de compuesto parental restante se convirtió a la escala logarítmica natural y se representó gráficamente frente al tiempo en minutos. Se llevó a cabo un análisis de regresión lineal para el declive inicial del perfil de desaparición del compuesto parental y se determinó una fórmula para la línea de ajuste óptimo. La pendiente de la línea resultante se normalizó respecto a la concentración de proteína, en mg/ml de proteína o número de células/ml, y se calculó CLint del modo siguiente para los microsomas hepáticos:
CLint (pl ■ min'1 ■ mg_1) = (Pendiente x 1000)/[proteína, mg/ml]
Los valores de CLint de 0-8 pl/min/mg representan un aclaramiento reducido (es decir <30 % del flujo sanguíneo hepático en el ser humano). Los valores de CLint de 9-49 pl/min/mg representan un aclaramiento moderado (es decir, 30-70 % del flujo sanguíneo hepático en el ser humano), y los valores >50 pl/min/mg representan un aclaramiento hepático alto (es decir, >70 % del flujo sanguíneo hepático en el ser humano).
Resultados de ensayoin vitro
Los compuestos de la exposición se sometieron a ensayo en uno o más de los ensayos descritos anteriormente.
En la Tabla 5, posteriormente, en los ensayos de enzima JAK1, JAK 2, JAK3 y TYK2, A representa un valor de pKi >10 (Ki<0,1 nM), B representa un valor de pKi de entre 9 y 10 (Ki entre 1 nM y 0,1 nM), C representa un valor de pKi de entre 8 y 9 (Ki entre 10 nM y 1 nM), D representa un valor de pKi de entre 7 y 8 (Ki entre 100 nM y 10 nM), y E representa un valor de pKi de 7 o inferior (Ki de 100 nM o superior). En el ensayo de potencia en Tall-1, A representa un valor de pIC50 ^8,0, y B representa un valor de pIC50 entre 7,5 (incluido) y 8,0. Para el ensayo de Caco, A representa un valor superior a 30x10-6 cm/s; B representa un valor de entre 15x10-6y 30x10-6 cm/s, y C representa un valor inferior a 15x10-6 cm/s. Para el ensayo Cacoverap, A representa un valor superior a 35x10-6 cm/s; B representa un valor de entre 20x10-6 y 35x10-6 cm/s, y C representa un valor entre 12x10-6 y 20x10-6 cm/s. Para el ensayo HLM, A representa un valor de cLint de entre 1250 y 3000; B representa un valor de CLint de entre 500 y 1250, y C representa un valor de CLint de entre 130 y 500.
Tabla 5
Ensayo 5: ensayo de solubilidad acuosa
El objetivo de este ensayo era cuantificar la solubilidad de los compuestos de ensayo en tampones de PBS de pH 4 y pH 7,4. El ensayo requirió 40 j l de solución de compuesto de ensayo en DMSO 10 mM por tampón deseado además de 20 j l requeridos para preparar un patrón de ensayo. Por ejemplo, para someter a ensayo un compuesto en ambos tampones, se requirieron 100 j l (2*40 j l 20 j l ) de solución madre de compuesto DMSO 10 mM.
Se creó el patrón mediante dilución de 20 j l de solución madre de compuesto en DMSO 10 mM en 180 j l de metanol y se sometió a agitación durante cinco minutos para garantizar la uniformidad de la solución. La solución resultante presentaba una concentración de 1 mM, o 1.000 jM , del compuesto de ensayo. Dicha solución 1.000 jM se analizó en un sistema de CL-EM Agilent 1260 mediante la inyección de 2 j l con el fin de obtener la superficie del pico. Para las soluciones de ensayo, se secaron hasta formar polvos 40 j l de solución madre de compuesto en DMSO 10 mM, por cada condición de tampón PBS, durante la noche. Una vez en forma de polvos, se añadieron 400 j l del tampón PBS deseado a los polvos y se dejó bajo agitación vigorosa durante cuatro horas. La concentración teórica máxima para esta solución de muestra era de 1.000 jM . Tras cuatro horas de agitación, las muestras se centrifugaron durante 10 minutos a 3.000 rpm antes de inyectar 2 j l en el mismo sistema de CL-EM Agilent 1260 para obtener la superficie del pico. Una vez se habían determinado las superficies de pico del patrón y de la solución de ensayo, la proporción de superficie de la muestra a superficie del patrón * 1.000 rindió la solubilidad en jM de la solución de compuesto de ensayo, con un límite superior máximo de 1.000 jM . La Tabla 6 resume los resultados obtenidos.
En la Tabla 6, a continuación, A representa un valor superior a 500; B representa un valor entre 250 y 500; C representa un valor entre 50 y 250; D representa un valor entre 10 y 50, y E representa un valor inferior a 10.
Tabla 6: solubilidad acuosa de los compuestos
Ensayo 6: ensayo de solubilidad en excipientes orgánicos
El objetivo de este ensayo era cuantificar la solubilidad de los compuestos de ensayo en diferentes excipientes orgánicos, tales como adipato de diisopropilo, triglicéridos de cadena intermedia (TCI), propilenglicol y polietilenglicol. El ensayo requirió 80 pl de solución de compuesto de ensayo en DMSO 100 mM por excipiente deseado además de 40 pl requeridos para preparar un patrón de ensayo.
Se creó el patrón mediante dilución de 40 pl de solución madre de compuesto en DMSO 100 mM en 160 pl de metanol y se sometió a agitación durante cinco minutos para garantizar la uniformidad de la solución. La solución resultante presentaba una concentración de 20 mM, o 20.000 pM, del compuesto de ensayo. Dicha solución 20.000 pM se analizó en un sistema de CL-EM Agilent 1260 mediante la inyección de 0,2 pl con el fin de obtener la superficie del pico. Para las soluciones de ensayo, se secaron hasta formar polvos 80 pl de solución madre de compuesto en DMSO 100 mM, por cada excipiente, durante la noche. Una vez en forma de polvos, se añadieron 400 pl del excipiente deseado a los polvos y se dejaron bajo agitación vigorosa durante cuatro horas. La concentración teórica máxima para esta solución de muestra era de 20.000 pM. Tras cuatro horas de agitación, las muestras se centrifugaron durante 10 minutos a 3.000 rpm antes de inyectar 0,2 pl en el mismo sistema de CL-EM Agilent 1260 para obtener la superficie del pico. Una vez se habían determinado las superficies de pico del patrón y de la solución de ensayo, la proporción de superficie de la muestra a superficie del patrón * 20.000 rindió la solubilidad en pM de la solución de compuesto de ensayo, con un límite superior máximo de 20.000 pM. La Tabla 7 resume los resultados obtenidos.
En la Tabla 7, a continuación, A representa un valor superior a 10; B representa un valor de entre 5 y 10; C representa un valor inferior a 5.
Tabla 7: solubilidad de compuestos en excipientes orgánicos
Ensayo 7: recuperación de filagrina suprimida por IL-22 en queratinocitos epidérmicos humanos normales
Es conocido que IL-22 inhibe la expresión de los genes de diferenciación terminal, tales como como la filagrina. Se midió el nivel de recuperación del compuesto de ensayo para la expresión de filagrina suprimida por interleuquina-22 (IL-22) en queratinocitos epidérmicos humanos normales (ATCC) usando PCR en tiempo real.
Se cultivaron queratinocitos epidérmicos primarios en un incubador humidificado a 37 °C con 5 % de CO2 en medio de células basales dérmicas (ATCC) suplementado con kit de crecimiento de queratinocitos (ATCC) y 1X Pen/Strep (Life Technologies). Las células se sembraron a razón de 5.000 célula/pocillo en placas de 96 pocillos BioCoat (Corning) con 100 pl y se incubaron a 37 °C con 5 % de CO2 durante 3 a 4 días hasta el 100 % de confluencia. A continuación, se eliminó el medio y se sustituyó por 150 pl de medio que contenía la respuesta a dosis de compuestos de ensayo. Los compuestos se diluyeron en serie en DMSO y después se diluyeron otras 1000 veces en medio para llevar la concentración de DMSO final a 0,1 %. El día 1 del ensayo, las células se incubaron con compuestos de ensayo a 37 °C durante 1 hora, seguido de la adición de IL-22 (R&D Systems, concentración final: 50 ng/ml) en medio precalentado (50 ml) durante 4 días. El medio con compuestos de ensayo e IL-22 se cambió una vez el día 3. El día 5, las células se lavaron con 1X PBS (Gibco) y se lisaron con 50 j l de tampón de lisis que contenía 0,5 j l de ADNasa I del kit TaqMan® Gene Expression Cells-to-CtTM (Life Technologies). Tras la incubación a temperatura ambiente (TA) durante 5 minutos, se añadieron 5 j l de solución de parada del kit y después se incubaron a Ta durante 2 minutos y se mezclaron 11,25 j l de lisado, 12,5 j l de 2X tampón RT y 1,25 j l 20X mezcla de enzima RT del kit. Se llevó a cabo la reacción de transcripción inversa mediante incubación de la mezcla a 37 °C durante 60 minutos, seguido de 95 °C durante 5 minutos, a fin de generar el ADNc. Para reunir el cóctel de PCR, cada reacción contenía 10 j l de 2X mezcla TaqMan® Gene Expression Mater Mix, 1 j l de 2X ensayo de expresión génica de filagrina TaqMan® (Life Technologies), 1 j l de 2X ensayo de expresión génica UBC TaqMan® (Life Technologies), 4 j l de agua libre de nucleasas y 4 j l de ADNc. Las reacciones de PCR se llevaron a cabo en un StepOnePlur™ (Life T4chnologies) bajo las condiciones de ciclado de 50 °C durante 2 minutos, 95 °C durante 10 minutos, seguido de 40 ciclos de 95 °C durante 15 segundos y 60 °C durante 1 minuto. Las señales de fluorescencia se capturaron después de cada ciclo. Se utilizó un método de CT comparativo para cuantificar la expresión génica con células sin IL-22 y compuestos de ensayo como control de línea base.
La recuperación de los compuestos 8, 23, 41, 42 y 43 para la expresión de filagrina suprimida por interleuquina-22 (IL-22) se observó a una concentración <1 jM .

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES Un compuesto de fórmula (I):
    en la que R1 es F o H; L se selecciona del grupo que consiste en un enlace, -CH2O-, -O- y -OCH2; R2 se selecciona del grupo que consiste en oxetano, tetrahidrofurano, tetrahidropirano y oxepano, cada uno de los cuales se sustituye opcionalmente con 1 a 3 Ra; cada Ra se selecciona independientemente del grupo que consiste en F, CN, OH, alquil C1-4-OH, alcoxi C1-4 y alquilo C1-4, en el que alquilo C1-4 se sustituye opcionalmente con 1 a 3 grupos fluoro; R3 se selecciona del grupo que consiste en: (a) -S(O)2-alquilo C1-4, en el que alquilo C1-4 se sustituye opcionalmente con -CN o 1 a 3 grupos fluoro; (b) -alquil C1-4-CONRxRy, en el que cada uno de Rxy Ry se selecciona independientemente de H y alquilo C1-4, en el que opcionalmente Rx y Ry pueden unirse para formar un grupo heterocíclico de 4 a 6 elementos; (c) -C(O)Rb, en el que Rb es alquilo C1-4 sustituido opcionalmente con cicloalquilo C3-6, alcoxi C1-4 o 1 a 3 grupos fluoro; y (d) -CO2Rc, en el que Rc se selecciona de (i) alquilo C1-4 sustituido opcionalmente con alcoxi C1-4, y (ii) grupo heterocíclico de 4 a 7 elementos; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. El compuesto según la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R3 se selecciona del grupo que consiste en: (a) -S(O)2-alquilo C1-4; (b) -alquil C1-4-CONRxRy, en el que cada uno de Rx y Ry se selecciona independientemente de H y alquilo C1-4, en el que opcionalmente Rx y Ry pueden unirse para formar un grupo heterocíclico de 4 a 6 elementos; (c) -C(O)Rb, en el que Rb es alquilo C1-4 sustituido opcionalmente con cicloalquilo C3-6, alcoxi C1-4; y (d) -CO2Rc, en el que Rc se selecciona de (i) alquilo C1-4 sustituido opcionalmente con alcoxi C1-4, y (ii) grupo heterocíclico de 4 a 7 elementos. El compuesto según la reivindicación 1 o 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R3 se selecciona del grupo que consiste en: (a) -S(O)2-alquilo C1-2; (b) -alquil C1-4-CONRxRy, en el que cada uno de Rx y Ry se selecciona independientemente de H y alquilo C1-3, en el que opcionalmente Rx y Ry pueden unirse para formar un grupo heterocíclico de 4 o 5 elementos; (c) -C(O)Rb, en el que Rb es alquilo C1-2 sustituido opcionalmente con cicloalquilo C3-5 o alcoxi C1-2; y (d) -CO2Rc, en el que Rc se selecciona de (i) alquilo C1-2 sustituido opcionalmente con alcoxi C1-2, y (ii) grupo heterocíclico de 5 a 6 elementos. 4. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R3 se selecciona del grupo que consiste en:
    5. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R3 se selecciona del grupo que consiste en:
    por ejemplo, en el que R3 es
    6. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R1 es F. 7. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R1 es H. 8. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R2 se selecciona del grupo que consiste en oxetano, tetrahidrofurano y tetrahidropirano, cada uno de los cuales se sustituye opcionalmente con 1 a 3 Ra. 9. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R2 se selecciona del grupo que consiste en:
    cada uno de los cuales se sustituye opcionalmente con 1 a 3 Ra. 10. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que L es un enlace. 11. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que L es -CH2O-. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que L es -O-. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que L es -OCH2-. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que
    se selecciona del grupo que consiste en:
    en el que R2 se sustituye opcionalmente con 1 a 2 Ra, en el que cada Ra se selecciona independientemente del grupo que consiste en F, OH, alquil C1-3-OH, alcoxi C1-3 y alquilo C1-3, en el que el alquilo C1-3 se sustituye opcionalmente con 1 a 3 grupos fluoro. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que
    se selecciona del grupo que consiste en:
    por ejemplo, en el que
    se selecciona del grupo que consiste en:
    16. El compuesto según la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R1 es F o H; R3 se selecciona del grupo que consiste en:
    se selecciona del grupo que consiste en:
    17. El compuesto según la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que el
    18. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable. 19. La composición farmacéutica según la reivindicación 18, que comprende, además, uno o más agentes terapéuticos adicionales. 20. La composición farmacéutica según la reivindicación 20, en la que el agente o agentes terapéuticos adicionales se seleccionan independientemente de un esteroide, un antibiótico y un hidratante, por ejemplo, un antibiótico gram-positivo, tal como mupirocina o ácido fusídico. 21. La composición farmacéutica según la reivindicación 18 o 19, en la que la composición farmacéutica es una pomada o una crema. 22. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o la composición según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 21, para la utilización en el tratamiento de una enfermedad cutánea inflamatoria o autoinmunitaria en un mamífero. 23. El compuesto, o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o composición para la utilización según la reivindicación 22, en el que la enfermedad es una enfermedad cutánea inflamatoria en un mamífero. 24. El compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o composición, para la utilización según la reivindicación 23, en el que la enfermedad cutánea inflamatoria es la dermatitis atópica. 25. El compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o composición para la utilización según la reivindicación 24, en el que la dermatitis atópica es dermatitis atópica moderada a grave. 26. El compuesto, o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o composición para la utilización según la reivindicación 24, en el que la dermatitis atópica es dermatitis atópica leve a moderada. 27. El compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o composición para la utilización según la reivindicación 22, en el que la enfermedad es una enfermedad cutánea autoinmunitaria en un mamífero. 28. El compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o composición para la utilización según la reivindicación 27, en el que la enfermedad cutánea autoinmunitaria es la alopecia areata. 29. El compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o composición para la utilización según la reivindicación 22, en el que la enfermedad cutánea inflamatoria o autoinmunitaria se selecciona del grupo que consiste en: vitíligo, prurigo nodular, liquen plano, dermatitis por contacto, manifestaciones cutáneas de la enfermedad del injerto contra el hospedador, penfigoide, lupus discoide, liquen escleroso, liquen plano pilar, soriasis y foliculitis decalvante. 30. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 21, para la utilización como un medicamento administrado en la piel del mamífero. 31. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la utilización como un medicamento.
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