ES3016382T3 - Dosing regimen of anti-alpha4beta7-antibody - Google Patents

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Abstract

Se describen formulaciones de anticuerpos que comprenden una mezcla de un azúcar no reductor, un anticuerpo anti-± 4-6 y al menos un aminoácido. Las formulaciones descritas presentan una estabilidad mejorada, una menor formación de agregados y pueden retardar la degradación del anticuerpo anti-±4-6 o presentar cualquier combinación de estos. La presente invención proporciona además una pauta de dosificación segura y fácil de seguir para estas formulaciones de anticuerpos, que resulta en una cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti-±4-6 in vivo. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Régimen de dosificación del anticuerpo anti-a4p7
Solicitudes relacionadas
Esta solicitud reivindica el beneficio de la solicitud provisional de EE. UU. 61/585,859 presentada el 12 de enero de 2012, la solicitud provisional de EE. UU. 61/550,545 presentada el 24 de octubre de 2011 y la solicitud provisional de EE. UU. 61/481,533 presentada el 2 de mayo de 2011.
Antecedentes de la invención
Los avances en biotecnología han hecho posible producir una variedad de proteínas para aplicaciones farmacéuticas usando técnicas de ADN recombinante. Debido a que las proteínas son más grandes y más complejas que los medicamentos orgánicos e inorgánicos tradicionales (es decir, poseen múltiples grupos funcionales además de estructuras tridimensionales complejas), la formulación de dichas proteínas plantea problemas especiales. Para que una proteína permanezca biológicamente activa, una formulación debe preservar la integridad conformacional de al menos una secuencia central de los aminoácidos de la proteína, mientras que al mismo tiempo protege los múltiples grupos funcionales de la proteína de la degradación. Las proteínas pueden sufrir una falta de estabilidad, y los anticuerpos monoclonales y policlonales en particular pueden ser relativamente inestables (véase, p. ej., Wang et al.,J. Pharm Sci.96:1-26 (2007)). Están disponibles una gran cantidad de opciones de formulación y ningún enfoque o sistema es adecuado para todas las proteínas. Se han descrito varios factores que hay que tener en cuenta (véase, p. ej., Wang et al.).
Numerosas características pueden afectar a la estabilidad de una proteína. De hecho, incluso en el caso de anticuerpos purificados, las estructuras de los anticuerpos pueden ser heterogéneas, lo que complica aún más la formulación de dichos sistemas. Además, los excipientes incluidos en las formulaciones de anticuerpos preferiblemente minimizan cualquier potencial respuesta inmunitaria.
En el caso de los anticuerpos, la preservación de la integridad conformacional es incluso más importante. Las rutas de degradación para las proteínas pueden implicar inestabilidad química (es decir, cualquier proceso que implique la modificación de la proteína mediante formación o escisión de enlaces dando como resultado una nueva entidad química) o inestabilidad física (es decir, cambios en la estructura de orden superior de la proteína). La inestabilidad química se pone de manifiesto, por ejemplo, en la desamidación, isomerización, hidrólisis, oxidación, fragmentación, eliminación de beta-glicano o intercambio de disulfuro. La inestabilidad física puede resultar de la desnaturalización, agregación, precipitación o adsorción, por ejemplo. Las cuatro rutas de degradación de proteínas más comunes son la fragmentación, agregación, desamidación y oxidación de proteínas. Las consecuencias de la inestabilidad química o física de la proteína terapéutica incluyen una reducción de la dosis efectiva administrada, menor seguridad de la terapia debido, por ejemplo, a la irritación o la reactividad inmunológica, y fabricación más frecuente debido a una vida útil más corta.
La liofilización es una técnica comúnmente empleada para conservar proteínas; la liofilización sirve para eliminar el agua de la preparación de la proteína de interés. La liofilización o secado por congelación es un procedimiento mediante el cual el material que se va a secar primero se congela y luego se elimina el hielo o disolvente congelado mediante sublimación al vacío. Se pueden incluir excipientes en la formulación preliofilizada para estabilizar las proteínas durante el procedimiento de liofilización y/o para mejorar la estabilidad de la formulación de proteína liofilizada (Pikal M.,Biopharm.3(9)26-30 (1990) y Arakawa et al.Pharm. Res.8(3):285-291 (1991)).
Varias publicaciones han descrito en general diversos métodos para tratar enfermedades inflamatorias del intestino y han proporcionado esquemas de dosificación para la administración de agentes diseñados para tratar la enfermedad inflamatoria del intestino. Por ejemplo, la publicación internacional WO 96/24673 describe adresinas vasculares de mucosas y el tratamiento de enfermedades asociadas con el reclutamiento de leucocitos al tracto gastrointestinal como resultado de la unión de leucocitos a células que expresan MAdCAM. El documento U.S. 2005/0095238 describe métodos para tratar una enfermedad asociada con la infiltración de leucocitos del tejido mucoso y la administración a un ser humano de una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humana o humanizada o un fragmento de unión al antígeno que tiene especificidad de unión para la integrina a4p7. El documento U.S. 2005/0095238 describe además varias dosis (p. ej., 0,15, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1,0, aproximadamente 1,5 o aproximadamente 2,0 mg de inmunoglobulina o fragmento por kg de peso corporal) y varios intervalos entre dosis (7, 14, 21, 28 o 30 días). Sin embargo, las patentes y publicaciones mencionadas anteriormente no describen formulaciones específicas del anticuerpo anti-a4p7 o las dosis y pautas posológicas específicas descritas y reivindicadas en el presente documento. Es importante destacar que las patentes mencionadas anteriormente no describen formulaciones, dosis y pautas posológicas que proporcionen los métodos de tratamiento (respaldados por datos de ensayos clínicos) descritos y reivindicados en el presente documento.
La publicación internacional WO 2001/078779 A2 se refiere a un método para tratar a un ser humano que tiene una enfermedad asociada con la infiltración de leucocitos de tejidos mucosos, que comprende administrar a dicho ser humano una cantidad eficaz de una inmunoglobulina humana o humanizada o fragmento de unión al antígeno de la misma que tiene especificidad de unión para la integrina a4p7.
La publicación internacional WO 2006/026759 A2 se refiere a antagonistas anti-beta7 humanizados y a sus usos.
Loftus EV: “New Data on the Use of Biologic Agents for Crohn's Disease and Ulcerative Colitis: Highlights from the 2009 CCFA Advances in IBD Meeting A Review of Selected Presentations from the 2009 Advances in Inflammatory Bowel Diseases/Crohn's & Colitis Foundation's With commentary by: A CME Activity Approved" (2009) se refiere al uso de agentes biológicos para la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa.
Feagan BG et al.(N Engl J Med.16 de junio de 2005;352(24):2499-507) se refiere a un tratamiento de la colitis ulcerosa con un anticuerpo humanizado contra la integrina a4p7.
Reichert JM(MAbs.ene-feb 2010; 2(1): 84-100) se refiere a anticuerpos para vigilar 2010.
Parikh A et al.(Gastroenterology138(5) (mayo de 2010)) se refiere a “No increase in JC Viremia, Lymphocyte Count, or Circulating CD34+ Hematopoietic Progenitor Cells After Treatment With Vedolizumab, a Humanized Monoclonal Antibody to a4p7 Integrin” (título).
Las formulaciones de anticuerpos para el uso de la presente invención pueden ser útiles para inhibir la unión de leucocitos a células que expresan MAdCAM y, por lo tanto, ayudar en el tratamiento de enfermedades inflamatorias intestinales en pacientes. Por consiguiente, existe una necesidad urgente de descubrir dosis y pautas posológicas adecuados de estos compuestos, y de desarrollar formulaciones, preferiblemente formulaciones intravenosas, que den lugar a niveles sanguíneos constantes y terapéuticamente eficaces de las formulaciones de anticuerpos durante un período de tiempo prolongado en una forma estable y conveniente. Sumario de la invención
La invención se define por las reivindicaciones adjuntas, y cualquier otro aspecto o realización que no esté de acuerdo con las reivindicaciones es sólo para información. Por consiguiente, la invención se define de la siguiente manera:
[1] Un anticuerpo humanizado anti-a4p7 para su uso en un método para el tratamiento terapéutico de la enfermedad inflamatoria intestinal, en donde el anticuerpo humanizado anti-a4p7 se va a administrar a un paciente que padece enfermedad inflamatoria intestinal, en donde el anticuerpo humanizado anti-a4p7 se administra al paciente de acuerdo con la siguiente pauta posológica:
a. una dosis inicial de 300 mg del anticuerpo humanizado anti-a4p7 como una infusión intravenosa;
b. seguido de una segunda dosis posterior de 300 mg del anticuerpo humanizado anti-a4p7 como una infusión intravenosa a las dos semanas después de la dosis inicial;
c. seguido de una tercera dosis posterior de 300 mg del anticuerpo humanizado anti-a4p7 como una infusión intravenosa a las seis semanas después de la dosis inicial;
d. seguido de una cuarta dosis y posteriores de 300 mg del anticuerpo humanizado anti-a4p7 como una infusión intravenosa cada cuatro semanas o cada ocho semanas después de la tercera dosis posterior del anticuerpo humanizado, según sea necesario;
en donde la pauta posológica induce una respuesta clínica y remisión clínica en la enfermedad inflamatoria intestinal del paciente;
en donde el anticuerpo humanizado anti-a4p7 es vedolizumab, y
además en donde la enfermedad inflamatoria intestinal es colitis ulcerosa de moderada a gravemente activa o enfermedad de Crohn de moderada a gravemente activa.
[2] El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de [1], en donde el paciente tenía una falta de respuesta adecuada, pérdida de respuesta o era intolerante al tratamiento con al menos uno de un inmunomodulador, un antagonista del factor de necrosis tumoral alfa o combinaciones de los mismos.
[3] El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de [2], en donde el inmunomodulador se selecciona del grupo que consiste en: azatioprina oral, 6-mercaptopurina y metotrexato.
[4] El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de [1], en donde la enfermedad inflamatoria intestinal es colitis ulcerosa de moderada a gravemente activa.
[5] El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de [4], en donde la pauta posológica da como resultado la curación de la mucosa en pacientes que padecen colitis ulcerosa de moderada a gravemente activa.
[6] El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de [1], en donde la enfermedad inflamatoria es la enfermedad de Crohn de moderada a gravemente activa.
[7] El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de [6], en donde la pauta posológica da como resultado la inducción y el mantenimiento de la respuesta y la remisión en pacientes con enfermedad de Crohn de moderada a gravemente activa.
[8] El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de cualquiera de [1] a [7], en donde (i) la pauta posológica da como resultado una reducción, eliminación o reducción y eliminación del uso de corticosteroides por el paciente y/o (ii) el paciente recibió previamente tratamiento con al menos un corticosteroide para la enfermedad inflamatoria intestinal.
[9] El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de [8], en donde el paciente tenía una respuesta inadecuada a los corticosteroides, una pérdida de respuesta a los corticosteroides o intolerancia a los corticosteroides.
[10] El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de cualquiera de [1] a [9], en donde la inmunoglobulina humanizada o su fragmento de unión al antígeno se administra al paciente en 3o minutos.
[11] El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de cualquiera de [1] a [10], en donde la pauta posológica no altera la relación de CD4 a CD8 en el líquido cefalorraquídeo de los pacientes que reciben dicho tratamiento.
[12] El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de cualquiera de [1] a [11], en donde el paciente es una persona de 65 años de edad o mayor y además en donde el paciente no requiere ningún ajuste de la pauta posológica.
[13] El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de cualquiera de [1] a [12], en donde el paciente está recibiendo una dosis terapéutica de terapia convencional para la enfermedad inflamatoria intestinal.
[14] El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de cualquiera de [1] a [13], en donde se administra una dosis de 300 mg al paciente humano cada cuatro semanas si el paciente humano experimenta un retorno de uno o más síntomas asociados con la colitis ulcerosa o la enfermedad de Crohn después de la administración del anticuerpo humanizado anti-a4p7 cada ocho semanas.
[15] Una formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo humanizado anti-a4p7 como se define en [1] para el uso según [1].
También se describe en el presente documento la identificación de un azúcar no reductor y al menos un aminoácido, como excipientes útiles para formular formulaciones de anticuerpos anti-a4p7 cuya inestabilidad los hace susceptibles a la desamidación, oxidación, isomerización y/o agregación. La formulación mejora la estabilidad, reduce la formación de agregados y retarda la degradación del anticuerpo en esta.
Así, en un primer aspecto, se usa una formulación estable que comprende una mezcla de un azúcar no reductor, un anticuerpo anti-a4p7 y al menos un aminoácido libre, y la relación molar de azúcar no reductor a anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) es mayor de 600:1. La formulación puede ser una formulación líquida o una formulación seca (p. ej., liofilizada). La formulación también puede contener un agente de tamponamiento. En algunas realizaciones, el azúcar no reductor es manitol, sorbitol, sacarosa, trehalosa o cualquier combinación de los mismos.
En algunas realizaciones, el aminoácido libre de la formulación es histidina, alanina, arginina, glicina, ácido glutámico o cualquier combinación de los mismos. La formulación puede comprender de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 175 mM de aminoácido libre. La formulación puede comprender entre aproximadamente 100 mM y aproximadamente 175 mM de aminoácido libre. La relación del aminoácido libre al anticuerpo relación molar puede ser de al menos 250:1.
La formulación también puede contener un tensioactivo. El tensioactivo puede ser polisorbato 20, polisorbato 80, un poloxámero o cualquier combinación de los mismos.
En algunos aspectos, la formulación puede minimizar la inmunogenicidad del anticuerpo anti-a4p7.
La formulación, p. ej., en estado seco, puede ser estable durante al menos tres meses a 40° C y 75% de humedad relativa (HR).
En otro aspecto, la formulación está liofilizada y comprende al menos de aproximadamente 5% a aproximadamente 10% de anticuerpo anti-a4p7 antes de la liofilización. La formulación puede contener al menos aproximadamente 6% de anticuerpo anti-a4p7 antes de la liofilización. La formulación se puede reconstituir a partir de una formulación liofilizada (p. ej., reconstituida para comprender una formulación líquida estable).
En otro aspecto, se usa una formulación estable que comprende una mezcla de un azúcar no reductor, un anticuerpo anti-a4p7 y al menos un aminoácido libre, y la relación molar de azúcar no reductor a anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) es mayor que 600:1 y la relación de aminoácido libre a anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) es mayor que 250:1.
En otro aspecto, se usa una formulación líquida estable que comprende en solución acuosa con un azúcar no reductor, un anticuerpo anti-a4p7 y al menos un aminoácido libre, en donde la relación molar de azúcar no reductor a anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) es mayor que 600:1. En otro aspecto más, se usa una formulación líquida que comprende al menos de aproximadamente 40 mg/ml a aproximadamente 80 mg/ml de anticuerpo anti-a4p7, al menos aproximadamente 50-175 mM de uno o más aminoácidos, y de al menos aproximadamente 6% a al menos aproximadamente 10% (p/v) de azúcar. La formulación líquida también puede contener un agente tampón. En algunas realizaciones, la formulación líquida también comprende un quelante de metales. En algunas realizaciones, la formulación líquida también comprende un antioxidante.
En otro aspecto, se usa una formulación líquida que comprende al menos aproximadamente 60 mg/ml de anticuerpo anti-a4p7, al menos aproximadamente 10% (p/v) de azúcar no reductor y al menos aproximadamente 125 mM de uno o más aminoácidos libres.
En otro aspecto, se usa una formulación líquida que comprende al menos aproximadamente 60 mg/ml de anticuerpo anti-a4p7, al menos aproximadamente 10% (p/v) de azúcar no reductor y al menos aproximadamente 175 mM de uno o más aminoácidos libres.
En otro aspecto más, se usa una formulación seca, p. ej., liofilizada, que comprende una mezcla de un azúcar no reductor, un anticuerpo anti-a4p7, histidina, arginina y polisorbato 80, en donde la formulación está en forma sólida y la relación molar de azúcar no reductor a anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) es mayor que 600:1.
En otro aspecto adicional más, se usa una formulación liofilizada que comprende una mezcla de un azúcar no reductor, un anticuerpo anti-a4p7, histidina, arginina y polisorbato 80. En este aspecto, la relación molar del azúcar no reductor al anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) es mayor que 600:1. Además, la relación molar de arginina al anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) en la formulación es mayor que 250:1.
En otro aspecto, se describe en el presente documento un método para elaborar una formulación, que comprende mantener la temperatura del producto por debajo de la temperatura de colapso durante el secado primario. El método también puede contener una etapa de tratamiento térmico(annealing).
En un aspecto, la invención se refiere a un anticuerpo humanizado anti-a4p7 para su uso en un método para el tratamiento terapéutico de la enfermedad inflamatoria intestinal como se define en las reivindicaciones, en donde el anticuerpo humanizado anti-a4p7 se administra al paciente de acuerdo con una pauta posológica como se define en las reivindicaciones.
En algunos aspectos, el uso en el método de tratamiento con la formulación de anticuerpo anti-a4p7, la dosis o la pauta posológica pueden minimizar la inmunogenicidad del anticuerpo anti-a4p7.
El paciente puede haber tenido una falta de respuesta adecuada, pérdida de respuesta o intolerancia al tratamiento con al menos uno de un inmunomodulador, un antagonista del factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a) o combinaciones de los mismos.
La enfermedad inflamatoria intestinal puede ser enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa. La enfermedad inflamatoria intestinal puede ser colitis ulcerosa de moderada a gravemente activa.
La pauta posológica puede dar como resultado la curación de la mucosa en pacientes que padecen colitis ulcerosa de moderada a gravemente activa.
El paciente puede haber recibido previamente tratamiento con al menos un corticosteroide para la enfermedad inflamatoria intestinal. La pauta posológica puede dar como resultado una reducción, eliminación o reducción y eliminación del uso de corticosteroides por el paciente.
En algunos aspectos, la inmunoglobulina humanizada o su fragmento de unión al antígeno se administra en una forma farmacéutica final en una concentración de entre aproximadamente 1,0 mg/ml a aproximadamente 1,4 mg/ml. La inmunoglobulina humanizada o su fragmento de unión al antígeno se puede administrar en una forma farmacéutica final de aproximadamente 1,2 mg/ml. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión al antígeno se puede administrar al paciente en aproximadamente 30 minutos.
La inmunoglobulina humanizada o su fragmento de unión al antígeno se puede reconstituir a partir de una formulación liofilizada.
La inmunoglobulina humanizada o su fragmento de unión al antígeno se puede reconstituir para formar una formulación líquida estable.
En algunos aspectos, la pauta posológica no altera la relación de CD4 a CD8 en el líquido cefalorraquídeo de los pacientes que reciben dicho tratamiento.
El paciente puede ser una persona de 65 años o mayor y no requiere ningún ajuste de la pauta posológica.
Breve descripción de los dibujos
La FIG. 1 es una ilustración de una secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO: 1) que codifica la cadena pesada de una inmunoglobulina anti-a4p7 humanizada, y la secuencia de aminoácidos deducida de la cadena pesada (SEQ ID NO: 2). La secuencia de nucleótidos contiene sitios de clonación (minúsculas), secuencia Kozak (mayúsculas, nucleótidos 18-23 de SEQ ID NO: 1) y secuencia líder (minúsculas, nucleótidos 24-86 de SEQ ID NO: 1) en el extremo 5' de la cadena pesada. El marco de lectura abierto de la secuencia de nucleótidos son los nucleótidos 24-1433 de la SEQ ID NO: 1.
La FIG. 2 es una ilustración de una secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO: 3) que codifica la cadena ligera de una inmunoglobulina humanizada denominada en el presente documento vedolizumab, y la secuencia de aminoácidos deducida (SEQ ID NO: 4) de la cadena ligera. La secuencia de nucleótidos contiene sitios de clonación (minúsculas), secuencia Kozak (mayúsculas, nucleótidos 18-23 de SEQ ID NO: 3) y secuencia líder (minúsculas, nucleótidos 24-80 de SEQ ID NO: 3) en el extremo 5' de la cadena pesada. El marco de lectura abierto de la secuencia de nucleótidos son los nucleótidos 24-737 de la SEQ ID NO: 3.
La FIG. 3 es un alineamiento de las secuencias de aminoácidos de (A) la cadena ligera humanizada madura (aminoácidos 20-238 de SEQ ID NO: 4) de la inmunoglobulina humanizada denominada en el presente documento vedolizumab y (B) la cadena ligera humanizada madura de la inmunoglobulina humanizada denominada en el presente documento LDP-02 (SEQ ID NO: 5). (Con respecto a LDP-02, véase la publicación internacional WO 98/06248 y Feagan et al.,N. Eng. J. Med.352:2499-2507 (2005). Feagan et al. describen un estudio clínico de LDP-02, pero en el artículo se refieren a LDP-02 como MLN02.) El alineamiento ilustra que las secuencias de aminoácidos de las cadenas ligeras de vedolizumab y LDP-02 difieren en las posiciones 114 y 115 de las cadenas ligeras maduras.
La FIG. 4 es un alineamiento de secuencias de aminoácidos de (A) una región constante de cadena ligera kappa humana genérica (SEQ ID NO: 6) y (B) una región constante de cadena ligera kappa murina genérica (SEQ ID NO: 7). Los restos de aminoácidos Thr y Val (que están presentes en las posiciones 114 y 115 de la cadena ligera madura de vedolizumab (aminoácidos 133 y 134 de SEQ ID NO: 4)) están presentes en la región constante de la cadena ligera kappa humana, mientras que los restos de aminoácidos Ala y Asp (que están presentes en las posiciones 114 y 115 de la cadena ligera madura LDP-02 (SEQ ID NO: 5)) están presentes en la región constante de la cadena ligera kappa de ratón.
La FIG. 5 es un mapa del vector pLKTOK38D (también denominado pTOK38MLN02-TV), que codifica la cadena pesada humanizada y la cadena ligera humanizada de MLN02, y es adecuado para producir vedolizumab en células CHO. (Véase la publicación de solicitud de patente de EE. UU. N.° 2004/0033561 A1 que describe pLKTOK38. pLKTOK38D es una variante de pLKTOK38 en la que los sitios de restricción indicados en el mapa flanquean la secuencia que codifica la región variable de la cadena ligera).
La FIG. 6A muestra los modelos predichos para el cambio en el porcentaje de monómero, cambio en el porcentaje de agregados y cambio en el porcentaje de isoforma principal de la formulación liofilizada anti-a4p7. Los modelos se basan en el análisis estadístico de los datos presentados en el Ejemplo 1. La línea central muestra los resultados de los modelos predictivos y las líneas externas muestran el límite de confianza del 95% para los modelos predictivos. La FIG. 6B muestra modelos alternativos basados en el análisis estadístico de datos de 40°C de las Tablas 1-3 cuando los factores de entrada son pH, relación molar azúcar:proteína y relación molar arginina:proteína. La línea central muestra los resultados de los modelos predictivos y las líneas externas muestran el límite de confianza del 95% para los modelos predictivos.
La FIG. 7 muestra las secuencias de aminoácidos de (A) la región variable de la cadena ligera kappa del anticuerpo GM607'CL humano maduro y (B) la región variable de la cadena pesada de 21/28'CL humano. La FIG. 8 es un gráfico que muestra que los sólidos y la carga afectan al tiempo de secado (los números en las líneas representan el número de minutos de tiempo de secado).
La FIG. 9 es un gráfico que muestra que vedolizumab no retrasó la aparición de los síntomas clínicos de la encefalomielitis autoinmunitaria experimental (EAE) en comparación con el control con placebo. El natalizumab retrasó significativamente (p<0,05) la aparición de los síntomas clínicos de EAE en comparación con el control con placebo.
Descripción detallada de la invención
La invención se define por las reivindicaciones adjuntas, y cualquier otro aspecto o realización que no esté de acuerdo con las reivindicaciones es sólo para información.
La invención se refiere a formulaciones para su uso que comprenden anticuerpos anti-a4p7. Las formulaciones pueden ser mezclas que comprenden azúcar no reductor, anticuerpo anti-a4p7 y uno o más aminoácidos libres, y la relación molar del azúcar no reductor al anticuerpo anti-a4p7 es mayor que 600 moles de azúcar no reductor:1 mol de anticuerpo anti-a4p7. Las formulaciones pueden estar en forma sólida o líquida.
Definiciones
La expresión “formulación farmacéutica” se refiere a una preparación que contiene un anticuerpo anti-a4p7 en una forma que permite que la actividad biológica del anticuerpo sea efectiva y que no contiene componentes adicionales que sean inaceptablemente tóxicos para un sujeto al que se administraría la formulación.
Una formulación "estable" es aquella en la que el anticuerpo en la misma conserva sustancialmente su estabilidad física y/o estabilidad química y/o su actividad biológica durante el almacenamiento. En un aspecto, la formulación conserva sustancialmente su estabilidad física y química, así como su actividad biológica durante el almacenamiento. El período de almacenamiento generalmente se selecciona basado en la vida útil prevista de la formulación. Varias técnicas analíticas para medir la estabilidad de proteínas están disponibles en la técnica y se revisan enPeptide and Protein Drug Delivery,247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., Nueva York, N.Y., Pubs. (1991) y Jones, A.Adv. Drug Delivery Rev.10: 29-90 (1993), por ejemplo.
Un anticuerpo monoclonal “desamidado” es uno en el que uno o más de sus restos de asparagina o glutamina han sido derivatizados, p. ej., a un ácido aspártico o un ácido isoaspártico.
Un anticuerpo que es “susceptible a la desamidación” es uno que comprende uno o más restos que se ha descubierto que son propensos a la desamidación.
Un anticuerpo que es “susceptible a la oxidación” es un anticuerpo que comprende uno o más restos que se ha descubierto que son propensos a la oxidación.
Un anticuerpo que es “susceptible a la agregación” es uno que se ha descubierto que se agrega con otra(s) molécula(s) de anticuerpo, especialmente tras la congelación, calentamiento, secado, reconstitución y/o agitación.
Un anticuerpo que es “susceptible a la fragmentación” es uno que se ha descubierto que es escindido en dos o más fragmentos, por ejemplo en una región bisagra del mismo.
Por “reducir la desamidación, oxidación, agregación o fragmentación” se entiende prevenir o disminuir (p. ej., al 80%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20% o 10%) la cantidad de desamidación, agregación o fragmentación en relación con el anticuerpo monoclonal formulado a un pH diferente o en un tampón diferente.
Un “agregado”, “agregado SEC” o “agregado soluble” es más de una y menos o igual a diez proteínas de anticuerpos y/o fragmentos asociados entre sí a través de interacciones covalentes, iónicas o hidrofóbicas para formar un cuerpo proteico más grande.
Un "agregado insoluble" o "partícula" es mayor de diez proteínas de anticuerpos y/o fragmentos asociados entre sí a través de interacciones covalentes, iónicas o hidrófobas para formar un cuerpo proteico más grande. Como se usa en el presente documento, “actividad biológica” de un anticuerpo monoclonal se refiere a la capacidad del anticuerpo para unirse al antígeno y dar como resultado una respuesta biológica medible que puede medirsein vitrooin vivo.Dicha actividad puede ser antagonista o agonista.
La molécula de superficie celular, “integrina a4p7” o “a4p7” es un heterodímero de una cadena a4 (CD49D, ITGA4) y una cadena p<7>(ITGB7). Cada cadena puede formar un heterodímero con una cadena de integrina alternativa, para formar a<4>p<1>o a<E>p<7>. Los genes a<4>y p<7>humanos (GenBank (National Center for Biotechnology Information, Bethesda, MD) números de acceso RefSeq NM_000885 y NM_000889, respectivamente) son expresados por linfocitos B y T, particularmente linfocitos CD4+ de memoria. Típico de muchas integrinas, a4p7 pueden existir en un estado de reposo o activo.
Los ligandos para a4p7 incluyen la molécula de adhesión celular vascular (VCAM), fibronectina, y adresina mucosa (MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1)).
Como se usa en el presente documento, una inmunoglobulina humana o su fragmento de unión al antígeno que tiene “especificidad de unión para el complejo a4p7” se une a a4p7, pero no a a4p1 o aEB7.
Como se usa en el presente documento, una formulación “ isotónica” tiene sustancialmente la misma presión osmótica que la sangre humana. Las fórmulas isotónicas tendrán generalmente una presión osmótica de aproximadamente 250 a 350 mOsm. La isotonicidad puede medirse usando una presión de vapor u osmómetro de tipo congelación de hielo, por ejemplo.
Como se usa en el presente documento, un "agente tampón" se refiere a un tampón que resiste los cambios de pH mediante la acción de sus componentes conjugados ácido-base. El agente tampón puede estar presente en una formulación líquida o sólida para el uso de la invención. El agente tampón ajusta el pH de la formulación de aproximadamente 5,0 a aproximadamente 7,5, de aproximadamente 5,5 a aproximadamente 7,5, de aproximadamente 6,0 a aproximadamente 6,5, o a un pH de aproximadamente 6,3. En un aspecto, los ejemplos de agentes tampón que controlarán el pH en el intervalo de 5,0 a 7,5 incluyen acetato, succinato, gluconato, histidina, citrato, fosfato, maleato, cacodilato, ácido 2-[N-morfolino]etanosulfónico (MES), bis(2-hidroxietil)iminotris[hidroximetil]metano (Bis-Tris), ácido N-[2-acetamido]-2-iminodiacético (ADA), glicilglicina y otros tampones de ácidos orgánicos. En otro aspecto, el agente tampón en el presente documento es histidina o citrato.
Un “tampón de histidina” es un tampón que comprende iones de histidina. Los ejemplos de tampones de histidina incluyen soluciones de cloruro de histidina, acetato de histidina, fosfato de histidina y sulfato de histidina. El tampón de histidina o tampón de histidina-HCl tiene un pH entre aproximadamente pH 5,5 a 6,5, aproximadamente pH 6,1 a 6,5, o aproximadamente pH 6,3.
Un “sacárido” en el presente documento es un compuesto que tiene una fórmula general (CH<2>O)<n>y derivados del mismo, incluidos monosacáridos, disacáridos, trisacáridos, polisacáridos, alcoholes de azúcar, azúcares reductores, azúcares no reductores y similares. En un aspecto, los ejemplos de sacáridos en el presente documento incluyen glucosa, sacarosa, trehalosa, lactosa, fructosa, maltosa, dextrano, eritritol, glicerol, arabitol, silitol, sorbitol, manitol, melibiosa, melecitosa, rafinosa, manotriosa, estaquiosa, maltosa, lactulosa, maltulosa, glucitol, maltitol, lactitol, iso-maltulosa y similares. Un sacárido puede ser un lioprotector. En otro aspecto, el sacárido en el presente documento es un disacárido no reductor, tal como sacarosa.
Un “tensioactivo” en el presente documento se refiere a un agente que reduce la tensión superficial de un líquido. El tensioactivo puede ser un tensioactivo no iónico. En un aspecto, los ejemplos de tensioactivos en el presente documento incluyen polisorbato (monolaurato de polioxietilensorbitán, por ejemplo, polisorbato 20 y polisorbato 80); TRITON (t-octilfenoxipolietoxietanol, detergente no iónico, subsidiaria de Union Carbide de Dow Chemical Co., Midland MI); dodecil sulfato de sodio (SDS); lauril sulfato de sodio; octil glucósido de sodio; lauril, miristil, linoleil o estearil-sulfobetaína; lauril, miristil, linoleil o estearil-sarcosina; linoleil, miristil o cetilbetaína; lauroamidopropil, cocamidopropil, linoleamidopropil, miristamidopropil, palmidopropil o isoestearamidopropil-betaína (p. ej., lauroamidopropil); miristamidopropil, palmidopropil o isoestearamidopropil-dimetilamina; metil cocoil-taurato de sodio o metil oleil-taurato de disodio; monopalmitato de sorbitán; y la serie MONAQUAT (Mona Industries, Inc., Paterson, N.J.); polietilenglicol (PEG), polipropilenglicol (PPG) y copolímeros de poloxietileno y poloxipropilenglicol (p. ej. Pluronics/Poloxámero, PF68, etc.); etc. En otro aspecto, el tensioactivo es polisorbato 80.
El término "anticuerpo" en el presente documento se usa en el sentido más amplio y cubre específicamente anticuerpos monoclonales de longitud completa, inmunoglobulinas, anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespecíficos (p. ej., anticuerpos biespecíficos) formados a partir de al menos dos anticuerpos de longitud completa, p. ej., cada uno para un antígeno o epítopo diferente, y fragmentos de unión al antígeno individuales, incluidos dAb, scFv, Fab, F(ab)'<2>, Fab', incluidos anticuerpos humanos, humanizados y de especies no humanas y formas de unión al antígeno recombinantes tales como monocuerpos y diacuerpos.
Las cantidades molares y las relaciones del anticuerpo anti-a4p7 a otros excipientes descritos en el presente documento se calculan asumiendo un peso molecular aproximado de aproximadamente 150,000 daltons para el anticuerpo. El peso molecular real del anticuerpo puede diferir de 150,000 daltons, dependiendo de la composición de aminoácidos o de la modificación postraduccional, p. ej., dependiendo de la línea celular usada para expresar el anticuerpo. El peso molecular real del anticuerpo puede ser /- 5% de 150,000 daltons.
La expresión “anticuerpo humano” incluye un anticuerpo que posee una secuencia derivada de una secuencia de inmunoglobulina de línea germinal humana, tal como un anticuerpo derivado de ratones transgénicos que tienen genes de inmunoglobulina humana (p. ej., ratones modificados genéticamente XENOMOUSE (Abgenix, Fremont, CA), ratones transcromosómicos HUMABMOUSE®, KIRIN TC MOUSE™, KMMOUSE® (MEDAREX, Princeton, NJ)), bibliotecas de presentación en fagos humanas, células de mieloma humano o células B humanas.
La expresión “anticuerpo monoclonal”, como se usa en el presente documento se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que componen la población son idénticos y/o se unen al mismo epítopo, excepto por posibles variantes que puedan surgir durante la producción del anticuerpo monoclonal, estando dichas variantes generalmente presentes en cantidades menores. En contraste con las preparaciones de anticuerpos policlonales, que típicamente pueden incluir diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticuerpo monoclonal se dirige contra un determinante único en el antígeno. El modificador "monoclonal" indica el carácter del anticuerpo como obtenido a partir de una población de anticuerpos sustancialmente homogénea y no se debe interpretar que requiere la producción del anticuerpo por ningún método particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales para usar según la presente invención se pueden elaborar mediante el método de hibridoma, descrito por primera vez por Kohler et al.Nature,256:495 (1975), o se pueden elaborar mediante métodos de ADN recombinante (véase, p. ej., patente de EE. UU. N.° 4,816,567). Los "anticuerpos monoclonales" también pueden aislarse de bibliotecas de anticuerpos de fagos usando las técnicas descritas en Clacksonet al., Nature,352:624-628 (1991) y Markset al., J. Mol. Biol.,222:581-597 (1991), por ejemplo.
Los anticuerpos monoclonales en el presente documento incluyen específicamente anticuerpos "quiméricos" en los que una parte de la cadena pesada y/o ligera es idéntica u homóloga a las secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de una especie particular o pertenecientes a una clase o subclase de anticuerpo particular, mientras que el resto de la(s) cadena(s) es idéntica u homóloga a las secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de otra especie o pertenecientes a otra clase o subclase de anticuerpo, así como fragmentos de dichos anticuerpos, siempre que presenten la actividad biológica deseada (Patente de EE. UU. N.° 4,816,567; y Morrisonet al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA,81:6851-6855 (1984)). Los anticuerpos quiméricos de interés en el presente documento incluyen anticuerpos "primatizados" que comprenden secuencias de unión al antígeno de domino variable derivadas de un primate no humano (p. ej., mono del viejo mundo, simio, etc.) y secuencias de región constante humanas.
Los “fragmentos de unión al antígeno” de la inmunoglobulina humanizada preparada en la formulación para el uso de la invención comprenden al menos las regiones variables de las cadenas pesadas y/o ligeras de un anticuerpo anti-a4p7. Por ejemplo, un fragmento de unión al antígeno de vedolizumab comprende los restos de aminoácidos 20-131 de la secuencia de cadena ligera humanizada de SEQ ID NO: 4. Los ejemplos de dichos fragmentos de unión al antígeno incluyen fragmentos Fab, fragmentos Fab', fragmentos scFv y F(ab')<2>de una inmunoglobulina humanizada conocida en la técnica. Los fragmentos de unión al antígeno de la inmunoglobulina humanizada para el uso de la invención se pueden producir mediante escisión enzimática o mediante técnicas recombinantes. Por ejemplo, se puede usar la escisión con papaína o pepsina para generar fragmentos Fab o F(ab')<2>, respectivamente. Los anticuerpos también se pueden producir en una variedad de formas truncadas usando genes de anticuerpos en los que se han introducido uno o más codones de parada secuencia arriba del sitio de parada natural. Por ejemplo, una construcción recombinante que codifica la cadena pesada de un fragmento F(ab')<2>puede diseñarse para incluir secuencias de ADN que codifican el dominio CHi y la región bisagra de la cadena pesada. En un aspecto, los fragmentos de unión al antígeno inhiben la unión de la integrina a4p7 a uno o más de sus ligandos (p. ej., la adresina mucosa MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1), fibronectina).
La digestión con papaína de los anticuerpos produce dos fragmentos idénticos de unión al antígeno, llamados fragmentos "Fab", cada uno con un único sitio de unión al antígeno, y un fragmento "Fc" residual cuyo nombre refleja su capacidad de cristalizar fácilmente. El tratamiento con pepsina proporciona un fragmento F(ab')<2>que tiene dos sitios de unión al antígeno y todavía es capaz de unión cruzada con el antígeno.
“Fv” es un fragmento de anticuerpo que consiste en un dímero de un dominio variable de cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera en asociación no covalente.
El fragmento Fab también contiene el dominio constante de la cadena ligera y el primer dominio constante (CH1) de la cadena pesada. Los fragmentos Fab' difieren de los fragmentos Fab por la adición de unos pocos restos en el extremo carboxi del dominio CH1 de cadena pesada que incluye una o más cisteínas de la región bisagra del anticuerpo. Fab'-SH es la designación en el presente documento para Fab' en el que uno o más restos de cisteína de los dominios constantes llevan un grupo tiol libre. Los fragmentos de anticuerpo F(ab')<2>se produjeron originalmente como pares de fragmentos Fab' que tienen cisteínas bisagra entre ellos. También se conocen otros acoplamientos químicos de fragmentos de anticuerpos.
Los fragmentos de anticuerpo “Fv monocatenario” o “scFv" comprenden los dominios V h y Vl del anticuerpo, en donde estos dominios están presentes en una cadena simple de polipéptido. En un aspecto, el polipéptido Fv comprende adicionalmente un enlazador polipeptídico entre los dominios V h y Vl que permite que el scFv forme la estructura deseada para la unión al antígeno. Para una revisión de scFv, véase Pluckthun enThe Pharmacology of Monoclonal Antibodies,vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, Nueva York, págs. 269-315 (1994).
El término "diacuerpos" se refiere a pequeños fragmentos de anticuerpos con dos sitios de unión al antígeno, cuyos fragmentos comprenden un dominio pesado variable (V<h>) conectado a un dominio ligero variable (V<l>) en la misma cadena polipeptídica (Vh-Vl). Usando un enlazador que es demasiado corto como para permitir el apareamiento entre dos dominios en la misma cadena, los dominios son forzados a aparearse con los dominios complementarios de otra cadena y a crear dos sitios de unión a antígenos. Los diacuerpos se describen con más detalle en, por ejemplo, los documentos EP 404,097; WO 93/11161; y Hollinger et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,90:6444-6448 (1993).
Un “anticuerpo de longitud completa” es uno que comprende una región variable de unión al antígeno, así como un dominio constante de cadena ligera (Cl) y dominios constantes de cadena pesada, Ch1 , Ch2 y Ch3. Los dominios constantes pueden ser dominios constantes de una secuencia nativa (p. ej., dominios constantes de secuencia nativa humana) o variantes de secuencia de aminoácidos de los mismos. En un aspecto, el anticuerpo de longitud completa tiene una o más funciones efectoras.
En el presente documento, un anticuerpo de “variante de secuencia de aminoácidos” es un anticuerpo con una secuencia de aminoácidos que difiere de un anticuerpo de la especie principal. Normalmente, las variantes de secuencia de aminoácidos tendrán al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 85%, al menos aproximadamente 90% o al menos aproximadamente 95% de homología con el anticuerpo de la especie principal. Las variantes de secuencia de aminoácidos tienen sustituciones, eliminaciones y/o adiciones en ciertas posiciones dentro o adyacentes a la secuencia de aminoácidos del anticuerpo de la especie principal, pero conservan la actividad de unión al antígeno. Las variaciones en la secuencia de las regiones constantes del anticuerpo tendrán menos efecto en la actividad de unión del antígeno que las variaciones en las regiones variables. En las regiones variables, las variantes de secuencia de aminoácidos serán al menos aproximadamente 90% homólogas, al menos aproximadamente 95% homólogas, al menos aproximadamente 97% homólogas, al menos aproximadamente 98% homólogas o al menos aproximadamente 99% homólogas con el anticuerpo de la especie principal.
La "homología" se define como el porcentaje de restos en la variante de secuencia de aminoácidos que son idénticos después de alinear las secuencias e introducir huecos, si es necesario, para lograr el máximo porcentaje de homología. Son conocidos en la técnica métodos y programas informáticos para el alineamiento.
Un “anticuerpo monoclonal terapéutico” es un anticuerpo usado para la terapia de un sujeto humano. Los anticuerpos monoclonales terapéuticos descritos en el presente documento incluyen anticuerpos anti-a4p7.
Un anticuerpo de “variante de glicosilación” en el presente documento es un anticuerpo con uno o más grupos de carbohidratos unidos al mismo que difieren de uno o más grupos de carbohidratos unidos a un anticuerpo de especie principal. Los ejemplos de variantes de glicosilación en el presente documento incluyen anticuerpo con una estructura de oligosacárido G1 o G2, en lugar de una estructura de oligosacárido<g>0, unida a una región Fc del mismo, anticuerpo con uno o dos grupos de carbohidratos unidos a una o dos cadenas ligeras del mismo, anticuerpo sin carbohidratos unidos a una o dos cadenas pesadas del anticuerpo, etc., y combinaciones de alteraciones de glicosilación.
Las "funciones efectoras" de los anticuerpos se refieren a aquellas actividades biológicas atribuibles a la región Fc (una región Fc de secuencia nativa o una región Fc de variante de secuencia de aminoácidos) de un anticuerpo. Los ejemplos de funciones efectoras de anticuerpos incluyen la unión de C1q; citotoxicidad dependiente del complemento; unión al receptor Fc; citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC); fagocitosis; regulación por disminución de receptores de superficie celular (p. ej. receptor de células B; BCR), y similares.
Dependiendo de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de sus cadenas pesadas, los anticuerpos de longitud completa se pueden asignar a diferentes "clases". Hay cinco clases principales de anticuerpos de longitud completa: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, y varios de ellos pueden dividirse en "subclases" (isotipos), p. ej., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA e IgA2. Los dominios constantes de cadena pesada que corresponden a las diferentes clases de inmunoglobulinas se denominan a, 8, £, y, y M, respectivamente. Las estructuras de las subunidades y las configuraciones tridimensionales de diferentes clases de inmunoglobulinas son muy conocidas.
Las "cadenas ligeras" de anticuerpos de cualquier especie de vertebrado pueden asignarse a uno de dos tipos claramente distintos, llamados kappa (<k>) y lambda (A), basado en las secuencias de aminoácidos de sus dominios constantes.
La “citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos” y "ADCC" se refiere a una reacción mediada por células en la cual células citotóxicas no específicas que expresan receptores Fc (FcR) (p. ej., linfocitos citolíticos (NK), neutrófilos y macrófagos) reconocen el anticuerpo unido sobre una célula diana y, posteriormente producen la lisis de la célula diana. Las principales células para mediar la ADCC, las células NK, solamente expresan F<cy>RIII, mientras que los monocitos expresan F<cy>RI, F<cy>RII y F<cy>RIII. La expresión de FcR en células hematopoyéticas se resume en la Tabla 3 en la página 464 de Ravetch y Kinet,Annu. Rev. Immunol9:457-92 (1991). Para evaluar la actividad ADCC de una molécula de interés, se puede realizar un ensayo de ADCCin vitro,tal como el descrito en las patentes de EE. UU. N.° 5,500,362 o 5,821,337. Las células efectoras útiles para dichos ensayos incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y linfocitos citolíticos (NK). De manera alternativa, o adicionalmente, la actividad ADCC de la molécula de interés puede evaluarsein vivo,p. ej., en un modelo animal tal como el descrito en Clyneset al. PNAS (USA)95:652-656 (1998).
La expresión "receptor Fc" o "FcR" se usa para describir un receptor que se une a la región Fc de un anticuerpo. En un aspecto, el FcR es un FcR humano de secuencia nativa. En otro aspecto, el FcR es uno que se une a un anticuerpo IgG (un receptor gamma) e incluye receptores de las subclases FcyRI, FcyRII y FcyRIII en seres humanos, incluyendo variantes alélicas y formas empalmadas de forma alternativa de estos receptores. Los receptores de FcyRII incluyen FcyRIIA (un “receptor de activación”) y FcyRIIB (un “receptor de inhibición”), que tienen secuencias de aminoácidos similares que difieren principalmente en los dominios citoplasmáticos de las mismas. El receptor de activación F<cy>RIIA contiene un motivo de activación del inmunorreceptor basado en tirosina (ITAM) en su dominio citoplasmático. El receptor de inhibición F<cy>RIIB contiene un motivo de inhibición del inmunorreceptor basado en tirosina (ITIM) en su dominio citoplasmático. (Véase la revisión en M. Daeron,Annu. Rev. Immunol.15:203-234 (1997)). Se revisan los FcR en Ravetch y Kinet,Annu. Rev. Immunol9:457-92 (1991); Capelet al., Immunomethods4:25-34 (1994); y de Haas et al.,J. Lab. Clin. Med.126:33-41 (1995). Otros FcR, incluyendo los que se identifiquen en el futuro, se encuentran comprendidos por el término "FcR" en el presente documento. El término también incluye el receptor neonatal, FcRn, que es responsable de la transferencia de IgG maternas al feto (Guyer et al.,J. Immunol.117:587 (1976) y Kim et al.,J. Immunol.24:249 (1994)).
La expresión "región hipervariable" cuando se usa en el presente documento se refiere a los restos de aminoácidos de un anticuerpo que son responsables de la unión al antígeno. La región hipervariable generalmente comprende restos de aminoácidos de una “región determinante de complementariedad” o “CDR” (p. ej., restos 24-34 (L1), 50-56 (L2) y 89-97 (L3) en el dominio variable de la cadena ligera y 31-35 (H1), 50 65 (H2) y 95-102 (H3) en el dominio variable de la cadena pesada; Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)) y/o los restos de un “bucle hipervariable” (p. ej., restos 26-32 (L1), 50-52 (L2) y 91-96 (L3) en el dominio variable de la cadena ligera y 26-32 (H1), 53-55 (H2) y 96-101 (H3) en el dominio variable de la cadena pesada; Chothia y LeskJ. Mol. Biol.196:901-917 (1987)). Los restos de la "región armazón" o "FR" son los restos del dominio variable distintos de los restos de la región hipervariable como se define en el presente documento. La región hipervariable o sus CDR pueden ser transferidas de una cadena de anticuerpos a otra o a otra proteína para conferir especificidad de unión al antígeno al anticuerpo (compuesto) o proteína de unión resultante.
Las formas "humanizadas" de anticuerpos no humanos (p. ej., de roedores) son anticuerpos quiméricos que contienen una secuencia mínima derivada de inmunoglobulina no humana. En su mayor parte, los anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpo receptor) en las que los restos de una región hipervariable del receptor son reemplazados por restos de una región hipervariable de una especie no humana (anticuerpo donador) como ratón, rata, conejo o primate no humano que tiene la especificidad, afinidad y capacidad deseadas. En algunos casos, los restos de la región armazón (FR) de la inmunoglobulina humana son reemplazados por restos no humanos correspondientes. Además, los anticuerpos humanizados pueden comprender restos que no se encuentran en el anticuerpo receptor ni en el anticuerpo donador. Estas modificaciones se hacen para refinar adicionalmente el rendimiento del anticuerpo. En general, el anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente todos de al menos uno, y normalmente dos, dominios variables, donde todos o básicamente todos los bucles hipervariables corresponden a aquellos de una inmunoglobulina no humana y todas o sustancialmente todas las FR son aquellas de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado también comprenderá opcionalmente al menos una parte de una región constante de inmunoglobulina (Fc), típicamente de una inmunoglobulina humana. Para más detalles, véase Jones et al.,Nature321:522-525 (1986); Riechmann et al.,Nature332:323-329 (1988); y Presta,Curr. Op. Struct. Biol.2:593-596 (1992).
Un anticuerpo "madurado por afinidad" es uno con una o más alteraciones en una o más regiones hipervariables del mismo que dan como resultado una mejora en la afinidad del anticuerpo por el antígeno, en comparación con un anticuerpo original que no posee esa(s) alteración(es). En un aspecto, los anticuerpos madurados por afinidad tendrán afinidades nanomolares o incluso picomolares para el antígeno objetivo. Los anticuerpos madurados por afinidad se producen mediante procedimientos conocidos en la técnica. Marks et al.Bio/Technology10:779-783 (1992) describe la maduración por afinidad mediante barajado de dominios VH y VL. La mutagénesis aleatoria de restos de la CDR y/o región armazón se describe en: Barbas et al.Proc Nat. Acad. Sci, USA91:3809-3813 (1994); Schier et al.Gene169:147-155 (1995); Yelton et al.J. Immunol.
155:1994-2004 (1995); Jackson et al.,J. Immunol.154(7):3310-9 (1995); y Hawkins et al.,J. Mol. Biol.226:889-896 (1992).
Un anticuerpo "aislado" es uno que ha sido identificado y separado y/o recuperado de un componente de su entorno natural. En ciertas realizaciones, el anticuerpo se purificará (1) a más de 95% en peso de proteína determinado por el método de Lowry y, alternativamente, más de 99% en peso, (2) a un grado suficiente para obtener al menos 15 restos de secuencia de aminoácidos interna o N-terminal mediante el uso de un secuenciador de copa giratoria, o (3) hasta homogeneidad por SDS-PAGE en condiciones reductoras o no reductoras usando tinción de plata o azul de Coomassie. El anticuerpo aislado incluye el anticuerpo in situ dentro de células recombinantes ya que al menos un componente del entorno natural del anticuerpo no estará presente. Normalmente, sin embargo, el anticuerpo aislado se preparará mediante al menos una etapa de purificación.
“Tratamiento” se refiere tanto al tratamiento terapéutico como a las medidas profilácticas o preventivas. Los que necesitan tratamiento incluyen los que ya padecen la enfermedad, así como aquellos en las que se desea prevenir la enfermedad o su recurrencia. Por lo tanto, el paciente que se va a tratar en el presente documento puede haber sido diagnosticado con la enfermedad o puede estar predispuesto o ser susceptible a la enfermedad. Los términos "paciente" y "sujeto" se usan de manera indistinta en el presente documento.
El anticuerpo que se formula es sustancialmente puro y deseablemente sustancialmente homogéneo (es decir, exento de proteínas contaminantes, etc.).
Anticuerpo “sustancialmente puro” significa una composición que comprende al menos aproximadamente 90% en peso de anticuerpo, basado en el peso total de la proteína en la composición, al menos aproximadamente 95% o 97% en peso. Anticuerpo “sustancialmente homogéneo” significa una composición que comprende proteína en donde al menos aproximadamente 99% en peso de la proteína es anticuerpo específico, p. ej., anticuerpo anti-a4p7, basado en el peso total de la proteína.
“Remisión clínica”, como se usa en el presente documento con referencia a sujetos con colitis ulcerosa, se refiere a una puntuación de Mayo completa de 2 puntos o menos y a ninguna subpuntuación individual mayor que 1 punto. La “remisión clínica” de la enfermedad de Crohn se refiere a una puntuación de CDAI de 150 puntos o menos.
Una “respuesta clínica”, como se usa en el presente documento con referencia a sujetos con colitis ulcerosa, se refiere a una reducción en la puntuación de Mayo completa de 3 o más puntos y de 30% desde el inicio (o una puntuación de Mayo parcial de 2 o más puntos y de 25% o mayor desde el inicio, si la puntuación Mayo completa no se realizó en la visita) acompañado de una disminución en la subpuntuación de sangrado rectal de 1 o más puntos o una puntuación de sangrado rectal absoluta de 1 o menos puntos. Una “respuesta clínica”, como se usa en el presente documento con referencia a sujetos con enfermedad de Crohn, se refiere a una disminución de 70 puntos o más en la puntuación de CDAI desde el inicio (semana 0).
“Curación de la mucosa”, como se usa en el presente documento con referencia a sujetos con colitis ulcerosa, se refiere a una subpuntuación endoscópica de 1 punto o menos.
Como se usa en el presente documento, “fracaso del tratamiento” se refiere al empeoramiento de la enfermedad, la necesidad de medicamentos de rescate o intervención quirúrgica para el tratamiento de la colitis ulcerosa o la enfermedad de Crohn. Un medicamento de rescate es cualquier medicamento nuevo o cualquier aumento en la dosis de un medicamento de base necesario para tratar síntomas nuevos o no resueltos de la colitis ulcerosa o enfermedad de Crohn (distintos de los antidiarreicos para el control de la diarrea crónica).
Formulaciones
Como se describe en el presente documento, se ha descubierto que los anticuerpos anti-a4p7 son altamente estables cuando están en una formulación seca, p. ej., liofilizada, con exceso (en moles) de azúcar no reductor. En particular, se muestra en el presente documento que las formulaciones liofilizadas en las que la relación de azúcar no reductor a anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) es mayor que 600:1 son estables durante al menos 2 años.
La presente invención usa, en un primer aspecto, una formulación estable de anticuerpos anti-a4p7. En un aspecto, la formulación comprende un tampón, al menos un estabilizante y un anticuerpo anti-a4p7. En un aspecto, una formulación seca comprende uno o más azúcares no reductores y un anticuerpo anti-a4p7, en donde la relación de azúcar no reductor al anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) es mayor que 600:1. La formulación también comprende uno o más aminoácidos libres. Uno o más de los aminoácidos también pueden actuar como un tampón. En un aspecto, uno o más de los aminoácidos pueden actuar como un estabilizante. La formulación puede comprender además opcionalmente al menos un tensioactivo. En una realización, la formulación es seca, p. ej., liofilizada. El anticuerpo en la formulación puede ser un anticuerpo de longitud completa o un fragmento de unión al antígeno del mismo, tal como un fragmento Fab, Fv, scFv, Fab' o F(ab')<2>.
La formulación puede contener cualquier azúcar no reductor deseado. En un aspecto, los azúcares no reductores que pueden incluirse en la formulación incluyen, por ejemplo, manitol, sorbital, sacarosa, trehalosa, rafinosa, estaquiosa, melecitosa, dextrano, maltitol, lactitol, isomaltulosa, palatinit y combinaciones de los mismos. En otro aspecto, azúcares no reductores son la sacarosa, trehalosa, manitol y sorbitol. La cantidad absoluta de azúcar no reductor en la formulación no es crítica, pero la relación de azúcar no reductor a anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) es mayor que 400:1. En otro aspecto, la relación de azúcar no reductor a anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) es al menos aproximadamente 600:1; al menos aproximadamente 625:1; al menos aproximadamente 650:1; al menos aproximadamente 675:1, al menos aproximadamente 700:1; al menos aproximadamente 750:1, al menos aproximadamente 800:1, al menos aproximadamente 1000:1, al menos aproximadamente 1200:1, al menos aproximadamente 1400:1, al menos aproximadamente 1500:1, al menos aproximadamente 1600:1, al menos aproximadamente 1700:1, al menos aproximadamente 1800:1, al menos aproximadamente 1900:1, o al menos aproximadamente 2000:1. Generalmente, es deseable que el azúcar no reductor esté presente en una cantidad que reduzca la formación de agregados solubles en una formulación líquida, tal como la formación de agregados que se produce tras la congelación y descongelación y/o el secado y la reconstitución. Una relación de azúcar no reductor a anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) mayor que aproximadamente 730:1 puede dar lugar a una formación de agregados solubles ligeramente reducida en el estado liofilizado. La relación en peso de azúcar:proteína puede ser mayor que 1,5:1 (p/p). En otro aspecto, las concentraciones de azúcar no reductor para formulaciones líquidas (p. ej., antes del secado o después de la reconstitución) están en el intervalo de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 1 M, por ejemplo, de aproximadamente 60 mM a aproximadamente 600 mM, de aproximadamente 100 mM a aproximadamente 450 mM, de aproximadamente 200 mM a aproximadamente 350 mM, de aproximadamente 250 mM a aproximadamente 325 mM, y de aproximadamente 275 mM a aproximadamente 300 mM. En otro aspecto, las cantidades de azúcar no reductor en una formulación seca (p. ej., liofilizada) están en el intervalo de aproximadamente 40% a aproximadamente 70% (p/p de formulación seca). En otro aspecto, las cantidades de azúcar no reductor en una formulación seca (p. ej., liofilizada) están en el intervalo de aproximadamente 40% a aproximadamente 60%, de aproximadamente 45% a aproximadamente 55% o aproximadamente 51% (p/p). En otros aspectos, la cantidad de azúcar no reductor en una formulación seca (p. ej., liofilizada) es mayor que aproximadamente 51% (p/p de formulación seca) cuando la cantidad de proteína es de aproximadamente 31% (p/p de formulación seca) o mayor que aproximadamente una relación en masa de aproximadamente 1,6:1 de azúcar no reductor a proteína en la formulación seca. En otro aspecto más, la sacarosa es el azúcar no reductor para usar en la formulación.
La formulación puede contener cualquier aminoácido libre deseado, que puede estar en forma L, forma D o cualquier mezcla deseada de estas formas. En un aspecto, los aminoácidos libres que pueden incluirse en la formulación incluyen, por ejemplo, histidina, alanina, arginina, glicina, ácido glutámico, serina, lisina, triptófano, valina, cisteína y combinaciones de los mismos. Algunos aminoácidos pueden estabilizar las proteínas frente a la degradación durante la fabricación, secado, liofilización y/o almacenamiento, p. ej., mediante enlaces de hidrógeno, puentes salinos, propiedades antioxidantes o interacciones hidrofóbicas o por exclusión de la superficie de la proteína. Los aminoácidos pueden actuar como modificadores de tonicidad o pueden actuar para disminuir la viscosidad de la formulación. En otro aspecto, los aminoácidos libres, tales como la histidina y la arginina, pueden actuar como crioprotectores y lioprotectores, y no cristalizan cuando se liofilizan como componentes de la formulación. Los aminoácidos libres, tales como el ácido glutámico y la histidina, solos o en combinación, pueden actuar como agentes tampones en solución acuosa en el intervalo de pH de 5 a 7,5. En otro aspecto más, la formulación contiene histidina, o histidina y arginina. En otro aspecto adicional más, las concentraciones de aminoácidos libres para formulaciones líquidas están en el intervalo de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 0,5 M, por ejemplo, de aproximadamente 15 mM a aproximadamente 300 mM, de aproximadamente 20 mM a aproximadamente 200 mM, o de aproximadamente 25 mM a aproximadamente 150 mM, aproximadamente 50 mM o aproximadamente 125 mM. En otro aspecto adicional más, las cantidades de histidina en una formulación seca (p. ej., liofilizada) están en el intervalo de aproximadamente 1% a aproximadamente 10% (p/p de formulación seca), o de aproximadamente 3% a aproximadamente 6% (p/p). En algunas realizaciones, la cantidad de histidina en una formulación seca (p. ej., liofilizada) es mayor que aproximadamente 4% (p/p de la formulación seca) cuando la cantidad de proteína es de aproximadamente 31% (p/p de la formulación seca) o mayor que una relación en masa de aproximadamente 0,15:1 de histidina a proteína en la formulación seca. En otro aspecto más, las cantidades de arginina en una formulación seca (p. ej., liofilizada) están en el intervalo de aproximadamente 4% a aproximadamente 20% (p/p de formulación seca), o de aproximadamente 10% a aproximadamente 15% (p/p). En algunas realizaciones, la cantidad de arginina en una formulación seca (p. ej., liofilizada) es mayor que aproximadamente 13% (p/p de la formulación seca) cuando la cantidad de proteína es de aproximadamente 31% (p/p de la formulación seca) o mayor que una relación en masa de aproximadamente 0,4:1 de arginina a proteína en la formulación seca. En realizaciones de combinaciones de aminoácidos, tales como histidina y arginina, la relación molar del aminoácido total al anticuerpo puede ser al menos 200:1, de aproximadamente 200:1 a aproximadamente 500:1, o al menos 400:1.
La formulación puede contener opcionalmente además al menos un tensioactivo. En un aspecto, los tensioactivos que pueden incluirse en la formulación incluyen, por ejemplo, polisorbato 20, polisorbato 80, un poloxámero (Pluronic®) y combinaciones de los mismos. Cuando está presente, el tensioactivo generalmente está incluido en una cantidad que reduce la formación de agregados insolubles de anticuerpos, p. ej., durante el envasado, congelación, secado, liofilización y/o la reconstitución. La concentración de tensioactivo, p. ej., en una formulación antes de secado (p. ej., liofilizada) o después de reconstitución, es generalmente de aproximadamente 0,0001% a aproximadamente 1,0%, de aproximadamente 0,01% a aproximadamente 0,1%, por ejemplo aproximadamente 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08% o 0,09% (p/v), de 0,05% a 0,07% o 0,06% (p/v). La cantidad de tensioactivo, p. ej., en una formulación seca (p. ej., liofilizada), generalmente es de aproximadamente 0,01% a aproximadamente 3,0% (p/p), de aproximadamente 0,10% a aproximadamente 1,0%, por ejemplo aproximadamente 0,15%, 0,20%, 0,25%, 0,30%, 0,35%, 0,40% o 0,50% (p/p). En otro aspecto, la relación molar de tensioactivo:anticuerpo es de aproximadamente 1:1. El anticuerpo anti-a4p7 puede estar presente en cualquier cantidad deseada en la formulación, con la condición de que la relación de azúcar no reductor a anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) sea mayor que aproximadamente 600:1. Sin embargo, la formulación puede contener una concentración alta de anticuerpo anti-a4p7. Por ejemplo, las formulaciones líquidas pueden comprender al menos aproximadamente 10 mg/ml, al menos aproximadamente 20 mg/ml, al menos aproximadamente 30 mg/ml, al menos aproximadamente 40 mg/ml, al menos aproximadamente 50 mg/ml, al menos aproximadamente 60 ml/ml, al menos aproximadamente 70 mg/ml, al menos aproximadamente 80 mg/ml, al menos aproximadamente 90 mg/ml, al menos aproximadamente 100 mg/ml, de aproximadamente 40 mg/ml a aproximadamente 80 mg/ml de anticuerpo anti-a4p7, aproximadamente 60 mg/ml de anticuerpo anti-a4p7. Las formulaciones secas (p. ej., liofilizadas) pueden contener al menos aproximadamente 5%, al menos aproximadamente 10%, al menos aproximadamente 15%, al menos aproximadamente 20%, al menos aproximadamente 25%, al menos aproximadamente 30%, o aproximadamente 31% o aproximadamente 32% en peso de anticuerpo anti-a4p7.
Si se desea, la formulación puede comprender además un quelante de metales y/o un antioxidante, así como otros excipientes farmacéuticamente aceptables. Los quelantes metálicos adecuados incluyen, por ejemplo, metilamina, etilendiamina, desferoxamina, trientina, histidina, malato, compuestos de fosfonato, p. ej., ácido etidrónico, ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), ácido etilenglicoltetraacético (EGTA) y similares. Los antioxidantes adecuados incluyen, por ejemplo, ácido cítrico, ácido úrico, ácido ascórbico, ácido lipoico, glutatión, tocoferol, caroteno, licopeno, cisteína y similares.
La formulación puede ser un líquido o un sólido. Las formulaciones líquidas pueden ser soluciones o suspensiones acuosas, preparadas en un disolvente acuoso adecuado, tal como agua o una mezcla acuosa/orgánica, tal como mezclas de agua y alcohol. Las formulaciones líquidas pueden tener un pH entre aproximadamente 5,5 y aproximadamente 7,5, entre aproximadamente 6,0 y aproximadamente 7,0, o entre aproximadamente 6,0 y aproximadamente 6,5, tal como aproximadamente 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4 o 6,5. Las formulaciones líquidas se pueden refrigerar (p. ej., a 2-8°C) o congelar (p. ej., a -20°C o -80°C) para el almacenamiento. Las formulaciones sólidas se pueden preparar de cualquier forma adecuada y pueden presentarse en forma de torta o polvo, por ejemplo. La formulación sólida se prepara secando una formulación líquida como se describe en el presente documento, por ejemplo, por liofilización, secado por atomización, secado al aire en una película (p. ej., para administración transdérmica), mezclando en una emulsión lipídica y secando como esferas para administración oral o película para administración transdérmica. Cuando la formulación es una formulación sólida, la formulación puede tener un contenido de humedad de no más de aproximadamente 5%, no más de aproximadamente 4,5%, no más de aproximadamente 4%, no más de aproximadamente 3,5%, no más de aproximadamente 3%, no más de aproximadamente 2,5%, no más de aproximadamente 2%, no más de aproximadamente 1,5%, no más de aproximadamente 1%, o es sustancialmente anhidra. Las formulaciones sólidas pueden disolverse, es decir, reconstituirse, en un medio o disolvente adecuado para convertirse en un líquido adecuado para su administración. Los disolventes adecuados para reconstituir la formulación sólida incluyen agua, solución salina isotónica, tampón, p. ej., solución salina tamponada con fosfato, solución de Ringer (lactato o dextrosa), medio esencial mínimo, soluciones de alcohol/acuosas, solución de dextrosa, etc. La cantidad de disolvente puede dar como resultado una concentración de proteína terapéutica mayor, igual o menor que la concentración antes del secado. En un aspecto, la concentración del anticuerpo anti-a4p7 reconstituido es la misma concentración que en la formulación líquida antes de secado.
La formulación puede ser estéril, y esto puede lograrse de acuerdo con los procedimientos conocidos por el experto en la técnica para generar formulaciones farmacéuticas estériles adecuadas para la administración a sujetos humanos, antes o después de la preparación de la formulación. La formulación se puede esterilizar como líquido, p. ej., antes del secado y/o después de la reconstitución por medio de filtración a través de poros pequeños, por medio de procesamiento aséptico o por exposición a radiación ultravioleta. Los tamaños de poro del filtro pueden ser de 0,1 pm o 0,2 pm para filtrar microorganismos o de 10 a 20 nm para filtrar partículas de virus. Alternativamente, o adicionalmente, la formulación seca se puede esterilizar, p. ej., por exposición a radiación gamma. En un aspecto, la formulación líquida de anticuerpo anti-a4p7 se esteriliza por filtración antes de secado.
En un aspecto, la formulación es estable durante el almacenamiento. En otro aspecto, la formulación es estable durante el almacenamiento en estado seco. La estabilidad se puede ensayar evaluando la estabilidad física, estabilidad química y/o actividad biológica del anticuerpo en la formulación alrededor del momento de la formulación, así como también después del almacenamiento a las temperaturas indicadas. La estabilidad física y/o química de una formulación líquida o un polvo seco reconstituido se puede evaluar cualitativa y/o cuantitativamente de diferentes maneras (véase, p. ej.,Analytical Techniques for Biopharmaceutical Development,Rodriguez-Diaz et al. eds. Informa Healthcare (2005)), que incluyen la evaluación de la formación de agregados (por ejemplo, usando cromatografía de exclusión por tamaños (o filtración en gel) (SEC), espectrometría de masas con ionización por desorción láser asistida por matriz en tiempo de vuelo (MALDI-TOF MS), ultracentrifugación analítica, dispersión de luz (espectroscopia de correlación de fotones, dispersión de luz dinámica (DLS), dispersión de luz láser multiángulo (MALLS)), generación de imágenes microscópicas basadas en flujo, contador de impedancia electrónica (Coulter), oscurecimiento de luz u otro sistema de recuento de partículas líquidas, midiendo la turbidez, por centrifugación en gradiente de densidad y/o por inspección visual); por evaluación de la heterogeneidad de carga usando cromatografía de intercambio catiónico (véase también Vlasak e Ionescu,Curr. Pharm. Biotechnol.9:468-481 (2008) y Harris et al.J. Chromatogr. B Biomed. Sci.Appl.752:233-245 (2001)), enfoque isoeléctrico (IEF), p. ej., técnica capilar (cIEF) o electroforesis capilar en zona; análisis de secuencia amino-terminal o carboxi-terminal; análisis espectrométrico de masas; análisis de SDS-PAGE o SEC para comparar anticuerpos fragmentados, intactos y multiméricos (es decir, diméricos, triméricos, etc.); mapa de péptidos (por ejemplo, tríptico o LYS y similares); evaluación de la actividad biológica o la función de unión al antígeno del anticuerpo; y similares. La actividad biológica o la función de unión al antígeno, p. ej., la unión del anticuerpo anti-a4p7 a MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1) o la inhibición de la unión de una célula que expresa la integrina a4p7 a MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1), p. ej., MAdCAM inmovilizada (p. ej., MAdCAM-1), se pueden evaluar usando varias técnicas disponibles para el médico experto (véase, p. ej., Soler et al.,J. Pharmacol. Exper. Ther.330:864-875 (2009)).
La estabilidad de una formulación en estado sólido también se puede evaluar cualitativa y/o cuantitativamente en una variedad de maneras diferentes, incluidos ensayos directos, tales como la identificación de la estructura cristalina mediante difracción de rayos X de polvo (XRPD); evaluación de la estructura del anticuerpo en estado sólido usando espectroscopia infrarroja por transformada de Fourier (FTIR); y medición de las transiciones térmicas en el sólido liofilizado (fusión, transición vítrea, etc.) usando calorimetría diferencial de barrido (DSC, p. ej., para evaluar la desnaturalización) y ensayos indirectos tales como la medición del contenido de humedad mediante el ensayo de Karl Fisher, p. ej., para extrapolar la probabilidad de inestabilidad química por medio de la hidrólisis. La medición del contenido de humedad de una formulación seca puede indicar la probabilidad de que una formulación sufra una degradación química o física, conduciendo una mayor humedad a una mayor degradación.
La estabilidad puede medirse a una temperatura seleccionada durante un período de tiempo seleccionado. En un aspecto, una formulación seca (p. ej., liofilizada) es estable a aproximadamente 40°C, 75% de HR durante al menos aproximadamente 2-4 semanas, al menos aproximadamente 2 meses, al menos aproximadamente 3 meses, al menos aproximadamente 6 meses, al menos aproximadamente 9 meses, al menos aproximadamente 12 meses o al menos aproximadamente 18 meses. En otro aspecto, la formulación (líquida o seca (p. ej., liofilizada)) es estable a aproximadamente 5°C y/o 25°C y 60% de HR durante al menos aproximadamente 3 meses, al menos aproximadamente 6 meses, al menos aproximadamente 9 meses, al menos aproximadamente 12 meses, al menos aproximadamente 18 meses, al menos aproximadamente 24 meses, al menos aproximadamente 30 meses, al menos aproximadamente 36 meses o al menos aproximadamente 48 meses. En otro aspecto, la formulación (líquida o seca (p. ej., liofilizada)) es estable a aproximadamente -20°C durante al menos aproximadamente 3 meses, al menos aproximadamente 6 meses, al menos aproximadamente 9 meses, al menos aproximadamente 12 meses, al menos aproximadamente 18 meses, al menos aproximadamente 24 meses, al menos aproximadamente 30 meses, al menos aproximadamente 36 meses, al menos aproximadamente 42 meses o al menos aproximadamente 48 meses. Además, la formulación líquida puede, en algunas realizaciones, ser estable después de la congelación (hasta, p. ej., -80°C) y la descongelación, tal como, por ejemplo, después de 1, 2 o 3 ciclos de congelación y descongelación.
La inestabilidad puede implicar uno o más de: agregación (p. ej., agregación soluble no covalente (causada por interacciones hidrófobas o de carga), agregación soluble covalente (p. ej., reordenamiento/barajado de enlaces disulfuro), agregación insoluble (causada por desnaturalización de la proteína en las interfases líquido/aire y líquido/sólido)), desamidación (p. ej., desamidación de Asn), oxidación (p. ej., oxidación de Met), isomerización (p. ej., isomerización de Asp), desnaturalización, recorte/hidrólisis/fragmentación (p. ej., fragmentación de la región bisagra), formación de succinimida, extensión N-terminal, procesamiento C-terminal, diferencias de glicosilación, y similares.
Una formulación estable puede contribuir a una baja inmunogenicidad de un anticuerpo anti-a4p7. Un anticuerpo anti-a4p7 inmunogénico puede conducir a una respuesta de anticuerpos humanos antihumanos (HAHA) en sujetos o pacientes humanos. Los pacientes que desarrollan una respuesta de HAHA contra un anticuerpo anti-a4p7 pueden tener acontecimientos adversos (p. ej., reacción en el sitio de infusión) durante el tratamiento o pueden eliminar el anticuerpo anti-a4p7 rápidamente, dando como resultado una dosis menor a la planificada por el tratamiento. Un informe (Feagen et al. (2005)N. Engl. J. Med.352:2499-2507) del estudio preliminar de un tratamiento con anticuerpos anti-a4p7 indicó que los anticuerpos humanos antihumanos se desarrollaron en la semana 8 en el 44% de los pacientes tratados. El anticuerpo en este estudio se almacenó como un líquido y no contenía ningún polisorbato.
En algunas realizaciones, la formulación puede aumentar la proporción de pacientes HAHA negativos a al menos 40%, al menos 50%, al menos 60%, al menos 70%, al menos 80% o al menos 90% de los pacientes en comparación con los resultados de HAHA de una formulación menos estable.
En algunas realizaciones, una formulación de anticuerpo anti-a4p7 tiene > 50% de isoforma principal con carga, > 55% de isoforma principal con carga o de 65 a 70% de isoforma principal con carga. En otros aspectos, una formulación de anticuerpo anti-a4p7 estable tiene < 45% de isoformas con carga ácidas, < 40% de isoformas con carga ácidas, < 30% de isoformas con carga ácidas o de 22 a 28% de isoformas ácidas. En otros aspectos más, una formulación de anticuerpo anti-a4p7 estable tiene < 25% de isoformas básicas, < 20% de isoformas básicas, < 15% de isoformas básicas, aproximadamente 5% de isoformas básicas o aproximadamente 10% de isoformas básicas. En un aspecto, una formulación de anticuerpo anti-a4p7 estable tiene > 55% de isoforma principal, < 30% de isoformas ácidas y/o < 20% de isoformas básicas, p. ej., determinado por CEX. En otro aspecto, una formulación de anticuerpo anti-a4p7 estable tiene > 50% de isoforma principal, < 45% de isoformas ácidas y/o < 10% de isoformas básicas, p. ej., determinado por clEF.
En algunos aspectos, una formulación sólida, seca de anticuerpo anti-a4p7 tiene un contenido de humedad <10%, contenido de humedad <5% o contenido de humedad <2,5%. El tiempo necesario para la reconstitución es < 60 minutos, < 50 minutos o < 40 minutos o < 30 minutos o < 20 minutos.
El contenido monomérico y/o el contenido de agregados (p. ej., como dímeros, trímeros, tetrámeros, pentámeros, oligómeros y agregados de orden superior), es decir, en la formulación líquida o en una formulación seca después de la reconstitución, se puede medir mediante SEC, MALDI-TOF MS, ultracentrifugación analítica, dispersión de luz (DLS o MALlS) o medición a nanoescala, como el análisis de seguimiento de nanopartículas NTA, NanoSight Ltd, Wiltshire, Reino Unido). La resolución, caracterización y cuantificación de agregados se puede lograr de varias maneras, que incluyen aumentar la longitud de la separación en columna SEC, p. ej., mediante una columna más larga o mediante la conexión en serie de una segunda o más columnas SEC en línea con la columna SEC analítica inicial, complementar la cuantificación por SEC de monómeros con dispersión de luz, o usando NTA.
En una realización, una formulación de anticuerpo anti-a4p7 tiene > 90% de anticuerpo monomérico, > 95% de anticuerpo monomérico o de 97 a 99% de anticuerpo monomérico. En otra realización, la mayoría del material en una formulación de anticuerpo anti-a4p7 tiene un radio promedio de < 20 nm, < 15 nm, < 10 nm o de aproximadamente 5 a aproximadamente 7 nm. En un aspecto, una formulación de anticuerpo anti-a4p7 tiene > 80% de cantidad de cadena pesada más ligera por análisis de proteínas. En un aspecto, hay > 90% de cadena pesada más ligera. En otro aspecto, una formulación de anticuerpo anti-a4p7 tiene < 10% de agregados, < 5% de agregados, < 2,5% de agregados, < 1,5% de agregados, < 1,0% de agregados o < 0,5% de agregados. En otro aspecto, una formulación de anticuerpo anti-a4p7 estable tiene > 96% de monómeros y/o < 2,5% de agregados. En otro aspecto más, una formulación de anticuerpo anti-a4p7 estable tiene aproximadamente 99% de monómeros y/o aproximadamente < 1% de agregados.
Los tamaños de partículas, p. ej., de agregados o excipientes no disueltos, es decir, en la formulación reconstituida, se pueden medir mediante oscurecimiento de la luz (p. ej., sistema de recuento de partículas en líquidos (HIAC) de Hach Ultra Analytics (Grants Pass, OR)), microscopía, contador Coulter o sistema basado en imágenes microscópicas digitales (p. ej., basado en flujo) tal como generación de imágenes de microfluidos (MFI) de Brightwell (Ottawa, CA) o el analizador de partículas FLOWCAM® Image de Fluid Imaging Technologies (Yarmouth, ME). En un aspecto, el tamaño de partículas en una preparación de anticuerpo antia4p7 es de aproximadamente 30 pm, aproximadamente 25 pm, aproximadamente 10 pm, aproximadamente 5 pm, aproximadamente 2 pm o 1 pm o menos. La cantidad de partículas debe minimizarse en las formulaciones de anticuerpos. En un aspecto, la formulación de anticuerpo anti-a4p7 tiene menos de 6000 partículas > 10 pm y menos de 600 partículas > 25 pm de diámetro en una dosis (Farmacopea de EE. UU. Cap. 788, método de recuento de oscurecimiento de la luz; la mitad de esas cantidades por el método de cuantificación microscópica). En otro aspecto más, una cantidad de partículas por mililitro, p. ej., por medición de MFI, en una dosis de una formulación de anticuerpo anti-a4p7, p. ej., una formulación reconstituida, es de aproximadamente 500 a aproximadamente 2000, o de aproximadamente 1000 a aproximadamente 3000 partículas de 2-10 pm por ml, de aproximadamente 50 a aproximadamente 350 partículas >10 pm por ml y de aproximadamente 0 a aproximadamente 50 partículas >25 pm por ml.
En una realización, una formulación de anticuerpo anti-a4p7 tiene una afinidad de unión de aproximadamente 60% a aproximadamente 140% del anticuerpo anti-a4p7 patrón de referencia. En un aspecto, un anticuerpo anti-a4p7 en una formulación descrita en el presente documento se une a a4p7, p. ej., en una célula (publicación internacional WO98/06248 o patente de EE. UU. N.° 7,147,851), en un valor de aproximadamente 80% a aproximadamente 120% del patrón de referencia. En otra realización, una formulación de anticuerpo anti-a4p7 tiene la capacidad de inhibir al menos 50% o al menos 60% de la unión de una célula que expresa la integrina a4p7 a MAdCAM, p. ej., MAdCAM-1, una quimera MAdCAM-Ig (véase la publicación de solicitud de patente de EE. UU. N.° 20070122404, también para ejemplos de patrón de referencia).
Como se indicó anteriormente, en el presente documento se contempla específicamente la congelación de la formulación. De este modo, se puede ensayar la estabilidad de la formulación en la congelación y descongelación. Por consiguiente, el anticuerpo en una formulación líquida puede ser estable en la congelación y descongelación de la formulación, por ejemplo, el anticuerpo puede ser estable después de uno, dos, tres, cuatro, cinco o más ciclos de congelación/descongelación.
En algunas realizaciones, la formulación es una formulación líquida que comprende al menos de aproximadamente 50 mg/ml a aproximadamente 100 mg/ml de anticuerpo anti-a4p7, un agente tampón (p. ej., histidina) y al menos aproximadamente 9% (p/p) de azúcar no reductor (p. ej., sacarosa, trehalosa o manitol). En una realización, la formulación comprende al menos de aproximadamente 50 a aproximadamente 80 mg/ml, aproximadamente 60 mg/ml de anticuerpo anti-a4p7, un agente tampón (p. ej., histidina), un aminoácido libre (p. ej., arginina) y al menos aproximadamente 9% o 10% (p/p) de azúcar no reductor (p. ej., sacarosa, trehalosa o manitol).
En otra realización, la formulación comprende al menos aproximadamente 60 mg/ml de anticuerpo anti-a4p7, un agente tampón (p. ej., histidina), un aminoácido libre (p. ej., arginina) y al menos aproximadamente 10% (p/p) de azúcar no reductor (p. ej., sacarosa, trehalosa o manitol). En dichas realizaciones, la concentración de tampón es de aproximadamente 15 a aproximadamente 75 mM, de aproximadamente 25 a aproximadamente 65 mM, o de aproximadamente 50 mM. La concentración de aminoácidos libres es de aproximadamente 50 a aproximadamente 250 mM, de aproximadamente 75 a aproximadamente 200 mM, de aproximadamente 100 a aproximadamente 150 mM o de aproximadamente 125 mM.
En una realización, la formulación es una formulación sólida, seca (p. ej., una formulación liofilizada), que comprende una mezcla de un azúcar no reductor, un anticuerpo anti-a4p7, histidina, arginina y polisorbato 80, y la relación molar de azúcar no reductor a anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) es mayor que 600:1.
En otra realización, la formulación es una formulación amorfa, sólida, seca (p. ej., una formulación liofilizada), que comprende una mezcla de un azúcar no reductor, un anticuerpo anti-a4p7, histidina, arginina y polisorbato 80, y la relación molar de azúcar no reductor a anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) es mayor que 600:1.
En una realización, la formulación es una formulación liofilizada que comprende un azúcar no reductor, un anticuerpo anti-a4p7, histidina, arginina y polisorbato 80, y la relación molar de azúcar no reductor a anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) en la formulación es mayor que 600:1.
En una realización, la formulación es una formulación liofilizada que comprende un azúcar no reductor, un anticuerpo anti-a4p7, histidina, arginina y polisorbato 80, en donde la relación molar de azúcar no reductor a anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) en la formulación es mayor que 600:1 y la relación molar de arginina a anticuerpo anti-a4p7 (mol:mol) en la formulación es mayor que 250:1.
En una realización, la formulación es una formulación líquida y comprende al menos aproximadamente 60 mg/ml de anticuerpo anti-a4p7, al menos aproximadamente 10% (p/v) de azúcar no reductor y al menos aproximadamente 125 mM de uno o más aminoácidos libres.
En una realización, la formulación es una formulación líquida y comprende al menos aproximadamente 60 mg/ml de anticuerpo anti-a4p7, al menos aproximadamente 10% (p/v) de azúcar no reductor y al menos aproximadamente 175 mM de uno o más aminoácidos libres.
En una realización, la formulación es una formulación líquida y comprende entre aproximadamente 60 mg/ml a aproximadamente 80 mg/ml de anticuerpo anti-a4p7, un agente tampón y al menos aproximadamente 10% (p/p) de azúcar.
En una realización, la formulación es una formulación líquida y comprende entre aproximadamente 60 mg/ml a aproximadamente 80 mg/ml de anticuerpo anti-a4p7, histidina y al menos aproximadamente 10% (p/p) de sacarosa.
En una realización, la formulación se liofiliza y se almacena como una dosis individual en un vial. El vial se almacena convenientemente a aproximadamente 2-8°C hasta que se administra a un sujeto que lo necesite. El vial puede ser, por ejemplo, un vial de 20 o 50 cc (por ejemplo, para una dosis de 60 mg/ml). El vial puede contener al menos aproximadamente 120 mg, al menos aproximadamente 180 mg, al menos aproximadamente 240 mg, al menos aproximadamente 300 mg, al menos aproximadamente 360 mg, al menos aproximadamente 540 mg o al menos aproximadamente 900 mg de anticuerpo anti-a4p7. En un aspecto, el vial contiene aproximadamente 300 mg de anticuerpo anti-a4p7.
Se pueden incluir en la formulación uno o más vehículos, excipientes o estabilizantes farmacéuticamente aceptables adicionales, tales como los descritos enRemington: The Science and Practice of Pharmacy,21.a edición, Hendrickson, R. Ed. (2005), con la condición de que no afecten negativamente a las características deseadas de la formulación. Los vehículos, excipientes o estabilizantes aceptables no son tóxicos para los receptores en las dosificaciones y concentraciones empleadas e incluyen agentes tampón adicionales; codisolventes; antioxidantes incluyendo ácido ascórbico y metionina; agentes quelantes tales como EDTA; complejos metálicos (p.ej., complejos de Zn-proteína); polímeros biodegradables tales como poliésteres; conservantes y/o contraiones formadores de sales tales como sodio.
Anticuerpos a4p7
El anticuerpo anti-a4p7 usado por la presente invención es vedolizumab.
Los anticuerpos anti-a4p7 adecuados para usar en las formulaciones incluyen anticuerpos de cualquier fuente deseada, tales como anticuerpos completamente humanos, anticuerpos murinos, anticuerpos de conejo y similares, y cualquier anticuerpo modificado deseado, tal como anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados y similares. Los fragmentos de unión al antígeno de cualquiera de estos tipos de anticuerpos, tales como los fragmentos Fab, Fv, scFv, Fab' y F(ab')<2>, también son adecuados para usar en las formulaciones.
El anticuerpo anti-a4p7 puede unirse a un epítopo en la cadena a4 (p. ej., MAb humanizado 21.6 (Bendig et al., patente de EE. UU. N.° 5,840,299), en la cadena p7 (p. ej., FIB504 o un derivado humanizado (p. ej., Fong et al., patente de EE. UU. N.° 7,528,236)), o a un epítopo combinatorio formado por la asociación de la cadena a4 con la cadena p7. En un aspecto, el anticuerpo se une a un epítopo combinatorio en el complejo a4p7, pero no se une a un epítopo en la cadena a4 o la cadena p7 salvo que las cadenas estén asociadas entre sí. La asociación de la integrina a4 con la integrina p7 puede crear un epítopo combinatorio, por ejemplo, acercando restos presentes en ambas cadenas que juntos comprenden el epítopo o exponiendo conformacionalmente en una cadena, p. ej., la cadena de integrina a4 o la cadena de integrina p7, un sitio de unión epitópico que es inaccesible a la unión del anticuerpo en ausencia de la pareja de integrina adecuada o en ausencia de activación de la integrina. En otro aspecto, el anticuerpo anti-a4p7 se une tanto a la cadena de integrina a4 como a la cadena de integrina p7 y, por lo tanto, es específico para el complejo de integrina a4p7. Dichos anticuerpos pueden unirse a a4p7 pero no unirse a a4p1, y/o no unirse a a<E>p7, por ejemplo. En otro aspecto, el anticuerpo anti-a4p7 se une al mismo o sustancialmente el mismo epítopo que el anticuerpo Act-1 (Lazarovits, A. I. et al.,J. Immunol., 133(4):1857-1862 (1984), Schweighoffer et al.,J. Immunol.,151(2): 717 729, 1993; Bednarczyk et al.,J. Biol. Chem.,269(11): 8348-8354, 1994). La línea celular de hibridoma ACT-1 murina, que produce el anticuerpo monoclonal Act-1 murino, se depositó según las disposiciones del Tratado de Budapest el 22 de agosto de 2001, en nombre de Millennium Pharmaceuticals, Inc., 40 Landsdowne Street, Cambridge, Mass. 02139, EE. UU., en la American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Va. 20110-2209, EE. UU., con el N.° de acceso PTA-3663. En otro aspecto, el anticuerpo anti-a4p7 es un anticuerpo humano o una proteína de unión a a4p7 que usa las CDR proporcionadas en la publicación de solicitud de patente de EE. UU. N.° 2010/0254975.
En un aspecto, el anticuerpo anti-a4p7 inhibe la unión de a4p7 a uno o más de sus ligandos (p. ej., la adresina de la mucosa, p. ej., MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1), fibronectina, y/o adresina vascular (VC<a>M)). Las MAdCAM de primates se describen en la publicación PCT WO 96/24673. En otro aspecto, el anticuerpo anti-a4p7 inhibe la unión de a4p7 a MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1) y/o fibronectina sin inhibir la unión de Vc A m .
En un aspecto, los anticuerpos anti-a4p7 para usar en las formulaciones son versiones humanizadas del anticuerpo Act-1 de ratón. Los métodos adecuados para preparar anticuerpos humanizados son bien conocidos en la técnica. En general, el anticuerpo anti-a4p7 humanizado contendrá una cadena pesada que contiene las 3 regiones determinantes de la complementariedad de cadena pesada (CDR, CDR1, SEQ ID NO: 8, CDR2, SEQ ID NO: 9 y CDR3, SEQ ID NO: 10) del anticuerpo Act-1 de ratón y regiones armazón de cadena pesada humana adecuadas; y también contiene una cadena ligera que contiene las 3 CDR de cadena ligera (CDR1, SEQ ID NO: 11, CDR2, SEQ ID NO: 12 y CDR3, SEQ ID NO: 13) del anticuerpo Act-1 de ratón y regiones armazón de cadena ligera humana adecuadas. El anticuerpo Act-1 humanizado puede contener cualesquiera regiones armazón humanas adecuadas, que incluyen regiones armazón consenso, con o sin sustituciones de aminoácidos. Por ejemplo, uno o más de los aminoácidos de la región armazón se pueden remplazar con otro aminoácido, tal como el aminoácido en la posición correspondiente en el anticuerpo Act-1 de ratón. La región constante humana o parte de la misma, si está presente, puede derivar de las cadenas ligeras<k>o A, y/o las cadenas pesadas y (p. ej., y1, y2, y3, y4), M, a (p. ej. a1, a2), 8 o £ de anticuerpos humanos, que incluyen variantes alélicas. Una región constante particular (p. ej., IgG1), variante o partes de la misma, se pueden seleccionar con el fin de adaptar la función efectora. Por ejemplo, una región constante mutada (variante) se puede incorporar en una proteína de fusión para minimizar la unión a receptores Fc y/o la capacidad de fijar complemento (véase p. ej., Winter et al., GB 2,209,757 B; Morrison et al., WO 89/07142; Morgan et al., W<o>94/29351, 22 de diciembre, 1994). Las versiones humanizadas del anticuerpo Act-1 se describen en las publicaciones PCT N.° WO98/06248 y WO07/61679.
El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para usar en la formulación para el uso según la invención es vedolizumab. La figura 4 muestra un alineamiento que compara las cadenas ligeras genéricas de anticuerpos humanos con anticuerpos murinos. El alineamiento ilustra que la cadena ligera humanizada de vedolizumab (p. ej., número de registro del Chemical Abstract Service (CAS, American Chemical Society) 943609-66-3), con dos restos de ratón cambiados por restos humanos, es más humana que la cadena ligera de LDP-02 (Figura 3). Además, LDP-02 tiene la alanina 114 flexible, algo hidrófoba y un sitio hidrófilo (Aspartato 115) que se remplazan en el vedolizumab por la treonina 114 que contiene hidroxilo ligeramente hidrófila y el resto de valina 115 hidrófobo que mira potencialmente hacia adentro.
Otras sustituciones en la secuencia del anticuerpo pueden ser, por ejemplo, mutaciones en las regiones armazón de la cadena pesada y ligera, tales como una mutación de isoleucina a valina en el resto 2 de SEQ ID NO: 14; una mutación de metionina a valina en el resto 4 de SEQ ID NO: 14; una mutación de alanina a glicina en el resto 24 de SEQ ID NO: 15; una mutación de arginina a lisina en el resto 38 de SEQ ID NO: 15; una mutación de alanina a arginina en el resto 40 de SEQ ID NO: 15; una mutación de metionina a isoleucina en el resto 48 de SEQ ID NO: 15; una mutación de isoleucina a leucina en el resto 69 de SEQ ID NO: 15; una mutación de arginina a valina en el resto 71 de SEQ ID NO: 15; una mutación de treonina a isoleucina en el resto 73 de SEQ ID NO: 15; o cualquier combinación de las mismas; y reemplazo de las CDR de cadena pesada por las CDR (CDR1, SEQ ID NO: 8, CDR2, SEQ ID NO: 9 y CDR3, SEQ ID NO: 10) del anticuerpo Act-1 de ratón; y reemplazo de las CDR de cadena ligera por las CDR de cadena ligera (CDR1, SEQ ID NO: 11, CDR2, SEQ ID NO: 12 y CDR3, SEQ ID NO: 13) del anticuerpo Act-1 de ratón.
Los anticuerpos anti-a4p7 humanizados para usar en la formulación pueden comprender una región variable de cadena pesada que tiene aproximadamente 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de identidad de secuencia con los aminoácidos 20 a 140 de SEQ ID NO: 2, y una región variable de cadena ligera que tiene aproximadamente 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de identidad de secuencia con los aminoácidos 20 a 131 de SEQ ID NO: 4 o los aminoácidos 21 a 132 de SEQ ID NO: 5. La identidad de secuencia de aminoácidos se puede determinar usando un algoritmo de alineamiento de secuencias adecuado, tal como el sistema Lasergene (DNASTAR, Inc., Madison, Wis.), usando los parámetros predeterminados. El anticuerpo anti-a4p7 para usar en la formulación es vedolizumab (CAS, American Chemical Society, número de registro 943609-66-3).
También se pueden usar otros anticuerpos a4p7 en las formulaciones y pautas posológicas descritas en el presente documento. Por ejemplo, los anticuerpos a4p7 descritos en el documento US 2010/0254975 (Amgen, Inc.) son adecuados para usar en las formulaciones y métodos de tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal en un individuo.
El anticuerpo anti-a4p7 se puede producir mediante la expresión de secuencias de ácidos nucleicos que codifican cada cadena en células vivas, p. ej., células en cultivo. Se puede usar una variedad de sistemas de hospedantes-vectores de expresión para expresar las moléculas de anticuerpo de la invención. Dichos sistemas de hospedante-expresión representan vehículos mediante los cuales las secuencias codificantes de interés se pueden producir y posteriormente purificar, pero también representan células que cuando se transforman o transfectan con las secuencias codificantes de nucleótidos adecuadas, pueden expresar un anticuerpo anti-a4p7 in situ. Estos incluyen, pero no se limitan a, microorganismos tales como bacterias (p. ej.,E. coli, B. subtilis)transformadas con ADN de bacteriófago recombinante, ADN plasmídico o vectores de expresión de ADN cósmido que contienen secuencias codificantes de anticuerpos; levaduras (p. ej.,Saccharomyces, Pichia)transformadas con vectores de expresión de levaduras recombinantes que contienen secuencias codificantes de anticuerpos; sistemas de células de insectos infectados con vectores de expresión de virus recombinantes (p. ej., baculovirus) que contienen secuencias codificantes de anticuerpos; sistemas de células de plantas infectados con vectores de expresión de virus recombinantes (p. ej., virus del mosaico de la coliflor, CaMV; virus del mosaico del tabaco, TMV) o transformados con vectores de expresión de plásmidos recombinantes (p. ej., plásmido Ti) que contienen secuencias codificantes de anticuerpos; o sistemas de células de mamíferos (p. ej., células<c>O<s>, CHO, BHK, 293, 3T3, NS0) que albergan construcciones de expresión recombinantes que contienen promotores derivados del genoma de células de mamíferos (p. ej., promotor de metalotioneína) o de virus de mamíferos (p. ej., el promotor tardío de adenovirus; el promotor 7,5K del virus vaccinia). Por ejemplo, las células de mamífero tales como células de ovario de hámster chino (CHO) junto con un vector tal como el elemento promotor del gen temprano intermedio del citomegalovirus humano es un sistema de expresión efectivo para los anticuerpos (Foecking et al.,Gene45:101 (1986); Cockett et al.,Bio/Technology8:2 (1990)).
En los sistemas bacterianos, una serie de vectores de expresión se pueden seleccionar ventajosamente dependiendo del uso pretendido para la molécula de anticuerpo que se está expresando. Por ejemplo, cuando se va a producir una gran cantidad de dicha proteína, para la generación de composiciones farmacéuticas de una molécula de anticuerpo, pueden ser deseables vectores que dirigen la expresión de altos niveles de productos de proteína de fusión que son fácilmente purificados. Dichos vectores incluyen, pero no se limitan a, el vector de expresión de E. coli pUR278 (Ruther et al.,EMBO J.2:1791 (1983)), en el que la secuencia codificante del anticuerpo se puede ligar individualmente en el vector en el marco con la región codificante lac Z de modo que se produce una proteína de fusión; vectores pIN (Inouye & Inouye,Nucleic Acids R es. 13:3101-3109 (1985); Van Heeke y Schuster, J. Biol.24:5503-5509 (1989)); y similares. Los vectores pGEX también pueden usarse para expresar polipéptidos extraños como proteínas de fusión con glutatión S-transferasa (GST). En general, dichas proteínas de fusión son solubles y se pueden purificar fácilmente a partir de células lisadas por absorción y unión a una matriz de perlas de glutatión-agarosa seguido por elución en presencia del glutatión libre. Los vectores pGEX se diseñan para incluir trombina o sitios de escisión de proteasa del factor Xa de forma tal que el producto del gen objetivo clonado se pueda liberar del resto GST.
En un sistema de insecto, se usa el virus de la poliedrosis nuclearAutographa californica(AcNPV) como un vector para expresar genes extraños. El virus crece en células de Spodoptera frugiperda. La secuencia codificante de anticuerpo se puede clonar de forma individual en regiones no esenciales (por ejemplo, el gen de poliedrina) del virus y poner bajo el control de un promotor de AcNPV (por ejemplo, el promotor de poliedrina).
En células hospedantes de mamífero, se pueden usar varios sistemas de expresión basados en virus. En los casos donde se usa un adenovirus como vector de expresión, la secuencia codificante del anticuerpo de interés se puede ligar a un complejo de control de transcripción/traducción del adenovirus, p. ej., la secuencia de promotor tardío y líder tripartita. Este gen quimérico luego se puede insertar en el genoma del adenovirus mediante recombinaciónin vitrooin vivo.La inserción en una región no esencial del genoma viral (p. ej., la región E1 o E3) dará como resultado un virus recombinante que es viable y capaz de expresar la molécula de anticuerpo en hospedantes infectados (p. ej., véase Logan y Shenk,Proc. Natl. Acad. Sci. USA81:355-359 (1984)). También pueden requerirse señales de inicio específicas para una traducción eficiente de las secuencias codificantes de anticuerpos insertadas. Estas señales incluyen el codón de inicio ATG y secuencias adyacentes. Además, el codón de inicio debe estar en fase con el marco de lectura de la secuencia codificante deseada para garantizar la traducción de todo el inserto. Estas señales de control de traducción exógenas y codones de inicio pueden tener diversos orígenes, tanto naturales como sintéticos. La eficiencia de la expresión se puede mejorar mediante la inclusión de elementos potenciadores de la transcripción apropiados, terminadores de la transcripción, etc. (véase Bittner et al.,Methods in Enzymol.153:51-544 (1987)).
Además, se puede elegir una cepa de células hospedantes que module la expresión de las secuencias insertadas o modifique y procese el producto génico de la manera específica deseada. Dichas modificaciones (p. ej., glicosilación) y procesamientos (p. ej., escisión) de productos de proteína pueden ser importantes para la función de la proteína. Las células hospedantes diferentes tienen características y mecanismos específicos para el procesamiento y modificación postraduccionales de proteínas y productos génicos. Las líneas celulares o sistemas hospedantes adecuados se pueden elegir para asegurar la modificación y procesamiento correctos de la proteína extraña expresada. Para este fin, se pueden usar células hospedantes eucariotas que tienen la maquinaria celular para el correcto procesamiento de la transcripción primaria, glicosilación y fosforilación del producto génico. Dichas células hospedantes de mamífero incluyen, pero no se limitan a, células de ovario de hámster chino (CHO), NS0, HeLa, V<e>RY, riñón de hámster bebé (BHK), riñón de mono (COS), MDCK, 293, 3T3, WI38, células de carcinoma hepatocelular humano (p. ej., Hep G2), líneas celulares de cáncer de mama tales como, por ejemplo, BT483, Hs578T, HTB2, BT20 y T47D, y línea celular de glándula mamaria normal tal como, por ejemplo, CRL7030 y Hs578Bst.
La maquinaria de glicosilación de diferentes tipos de células puede producir anticuerpos con una composición de glicosilación diferente que en otro tipo de célula, o ninguna glicosilación, como con las células bacterianas. En un aspecto, los tipos de células para la producción del anticuerpo anti-a4p7 son células de mamífero, tales como las células NS0 o CHO. En un aspecto, las células de mamíferos pueden comprender la eliminación de una enzima implicada en el metabolismo celular y el gen exógeno de interés puede estar unido operativamente a una enzima de reemplazo, p. ej., en una construcción o vector para su introducción en las células, p. ej., mediante transformación o transfección. La construcción o vector con el gen exógeno confiere a las células que albergan la construcción o vector una ventaja de selección para estimular la producción del polipéptido codificado por el gen exógeno. En una realización, las células CHO son células DG44 (Chasin y Urlaub (1980)PNAS USA77:4216), que comprenden la eliminación o inactivación del gen de la dihidrofolato reductasa. En otra realización, las células CHO son células CHO K1 que comprenden la eliminación o inactivación del gen de la glutamina sintasa (véase, p. ej., las patentes de<e>E. UU. N.° 5,122,464 o 5,827,739).
Formulaciones sólidas
Las formulaciones sólidas usadas por la invención se preparan generalmente secando una formulación líquida. Se puede usar cualquier método de secado adecuado, tal como la liofilización o el secado por atomización. La liofilización implica congelar una formulación líquida, normalmente en el envase que se usará para el almacenamiento, envío y distribución de la formulación (p. ej., un vial). (Véase, p. ej., Gatlin y Nail enProteinPurification Process Engineering,ed. Roger G. Harrison, Marcel Dekker Inc., 317-367 (1994)). Una vez congelada la formulación, se reduce la presión atmosférica y se ajusta la temperatura para permitir la eliminación del disolvente congelado, p. ej., mediante sublimación. Esta etapa del procedimiento de liofilización a veces se denomina secado primario. Si se desea, luego se puede aumentar la temperatura para eliminar cualquier disolvente que todavía esté unido a la formulación seca por evaporación. Esta etapa del procedimiento de liofilización a veces se denomina secado secundario. Cuando la formulación ha alcanzado el grado de secado deseado, se concluye el procedimiento de secado y se sellan los envases. La formulación sólida final a veces se denomina “formulación liofilizada” o “torta”. El procedimiento de liofilización se puede realizar usando cualquier equipo adecuado. Hay equipos de liofilización adecuados disponibles en varias fuentes comerciales (p. ej., SP Scientific, Stone Ridge, NY).
Se puede usar una variedad de aparatos adecuados para secar formulaciones líquidas para producir una formulación sólida (p. ej., liofilizada). Generalmente, las formulaciones liofilizadas son preparadas por los expertos en la técnica usando una cámara sellada que contiene estantes, sobre los cuales se colocan viales de la formulación líquida que se va a secar. Se puede controlar la temperatura de los estantes, así como la velocidad de enfriamiento y calentamiento, así como la presión dentro de la cámara. Se entenderá que los diversos parámetros del procedimiento comentados en el presente documento se refieren a procedimientos realizados usando este tipo de aparato. Los expertos en la técnica pueden adaptar fácilmente los parámetros descritos en el presente documento a otros tipos de aparatos de secado si lo desean.
Las temperaturas adecuadas y la cantidad de vacío para el secado primario y secundario pueden ser determinadas fácilmente por un experto en la técnica. En general, la formulación se congela a una temperatura de aproximadamente -30°C o menos, tal como -40°C o -50°C. La velocidad de enfriamiento puede afectar a la cantidad y tamaño de los cristales de hielo en la matriz. El secado primario generalmente se lleva a cabo a una temperatura que es aproximadamente 10°C, aproximadamente 20°C, aproximadamente 30°C, aproximadamente 40°C o aproximadamente 50°C más alta que la temperatura de congelación. En un aspecto, las condiciones de secado primario se pueden configurar para mantener el anticuerpo anti-a4p7 por debajo de la temperatura de transición vítrea o la temperatura de colapso de la formulación. Por encima de la temperatura de colapso, la matriz amorfa congelada puede fluir (colapsar), con el resultado de que las moléculas de proteína pueden no estar rodeadas por una matriz sólida, rígida, y las moléculas de proteína pueden no ser estables en la matriz colapsada. Además, puede resultar difícil secar completamente la fórmula si se produce el colapso. Las mayores cantidades de humedad resultantes en la formulación pueden conducir a mayores tasas de degradación de las proteínas y una disminución de la cantidad de tiempo que el producto liofilizado puede almacenarse antes de que su calidad disminuya a niveles inaceptables. En un aspecto, la temperatura del estante y la presión de la cámara se seleccionan para mantener la temperatura del producto por debajo de la temperatura de colapso durante el secado primario. La temperatura de transición vítrea de una formulación congelada se puede medir mediante métodos conocidos en la técnica, p. ej., mediante calorimetría diferencial de barrido (DSC). La temperatura de colapso se puede medir mediante métodos conocidos en la técnica, p. ej., microscopía de liofilización. La relación de azúcar no reductor a proteína (mol:mol) y las cantidades de otros componentes de la formulación afectarán a la temperatura de transición vítrea y la temperatura de colapso. En algunas realizaciones, una temperatura de transición vítrea para una formulación de anticuerpo a4p7 es de aproximadamente -35°C a aproximadamente -10°C, de aproximadamente -35°C a aproximadamente -25°C, o de aproximadamente -35°C a aproximadamente -29°C. En otra realización, la temperatura de transición vítrea de una formulación de anticuerpo a4p7 es de aproximadamente -29°C. En algunas realizaciones, la temperatura de transición vítrea de una formulación de anticuerpo a4p7 es de aproximadamente -30°C, aproximadamente -31°C, aproximadamente -32°C, aproximadamente -33°C, aproximadamente -34°C, aproximadamente -35°C o aproximadamente -36°C. En algunas realizaciones, una temperatura de colapso de una formulación de anticuerpo a4p7 es de aproximadamente -30°C a aproximadamente 0°C, de aproximadamente -28°C a aproximadamente -25°C, o de aproximadamente -20°C a aproximadamente -10°C. En otra realización, la temperatura de colapso de una formulación de anticuerpo a4p7 es de aproximadamente -26°C. Sin querer estar limitados por ninguna teoría en particular, cuanto más rápida sea la velocidad de aumento, mayor será la temperatura de colapso del producto. La etapa de secado primario puede eliminar al menos 50%, al menos 60%, al menos 70% o más del disolvente. En un aspecto, la etapa de secado primario elimina más de 80% del disolvente de la formulación del anticuerpo anti-a4p7.
El secado primario depende de la temperatura y la presión del estante. Las condiciones para el secado primario se pueden determinar empíricamente con liofilización bajo diferentes parámetros de procedimiento. El secado primario también se puede modelizar matemáticamente en función de la temperatura del producto. Las ecuaciones de transferencia de masa y calor (Milton, et al. (1997)PDA J of Pharm Sci & Tech,51: 7-16), junto con el conocimiento de Rp y Kv, permiten comprender la combinación e interacción de las variables de entrada, incluidas las variables de entrada del procedimiento, como la temperatura y presión del estante, y las variables de formulación que se capturan en el valor de Rp. Estos modelos pueden ayudar a determinar los parámetros para usar para un procedimiento eficiente basado en las limitaciones de la temperatura del producto por la temperatura de colapso y la capacidad del equipo.
dm _ Ap(P0 - P c)
dt Rp
Ecuación 1
InP<o>= -6144,96/T<p>+ 24,0185
Ecuación 2
- d £Q = a vk v( rts - tp \)
Ecuación 3
dQ dm
- ^ = AHS
dt s dt
Ecuación 4
La ecuación 1 relaciona la velocidad de sublimación (dm/dt) durante el secado primario con el área del perfil transversal interno del envase (A<p>), la presión de vapor del hielo (P<o>), la presión de la cámara (P<c>) y una resistencia de transferencia de masa normalizada respecto al área para la torta y el tapón (R<p>). La P<o>en la interfase de sublimación se puede determinar a partir de la Ecuación 2, donde P<o>está relacionada con la temperatura del hielo del producto en la interfase de sublimación, que es una aproximación de la temperatura del producto (T<p>), que se puede medir con un termopar en el fondo del vial o se puede derivar de las ecuaciones anteriores cuando se determinan las otras variables. La ecuación 3 relaciona la tasa de transferencia de calor desde el estante a los viales, donde A<v>es el área del vial, K<v>es el coeficiente de transferencia de calor del vial, T<s>es la temperatura del estante y T<p>es la temperatura del producto. La ecuación 4 acopla las ecuaciones de transferencia de calor y masa, donde AH<s>es el calor de sublimación.
Como se puede ver en las ecuaciones para el secado primario, la temperatura del estante (T<s>), la temperatura del producto (T<p>), la presión de la cámara (P<c>), la resistencia de transferencia de masa de la torta (R<p>) y el coeficiente de transferencia de calor (K<v>) pueden afectar a la velocidad de sublimación.
Una etapa opcional después de la congelación y antes del secado primario es el tratamiento térmico. En esta etapa, la temperatura del estante del liofilizador se eleva por encima de la temperatura de transición vitrea de la formulación durante un corto período de tiempo, p. ej., aproximadamente de 2 a 6 horas, aproximadamente de 3 a 5 horas, o aproximadamente 4 horas, luego la temperatura del estante se reduce nuevamente por debajo de la temperatura de transición vitrea de la formulación. El tratamiento térmico se puede usar para cristalizar agentes de carga y formar cristales de hielo más grandes, más uniformes. El procedimiento de tratamiento térmico puede afectar al tiempo de reconstitución porque la torta seca, tratada térmicamente tiene una mayor superficie específica que la torta seca, no tratada térmicamente. Una etapa de tratamiento térmico de una formulación de anticuerpo a4p7 puede ser de aproximadamente -30°C a aproximadamente -10°C o de aproximadamente -25°C a aproximadamente -15°C. En un aspecto, una temperatura de tratamiento térmico para una formulación de anticuerpo a4p7 es de aproximadamente -20°C.
El secado secundario generalmente se lleva a cabo a una temperatura que está por encima de la temperatura de congelación de la formulación líquida. Por ejemplo, el secado secundario se puede llevar a cabo a aproximadamente 10°C, aproximadamente 20°C, aproximadamente 30°C, aproximadamente 40°C o aproximadamente 50°C. En un aspecto, la temperatura para el secado secundario es la temperatura ambiente, p. ej., 20-30°C. El tiempo para el secado secundario debe ser suficiente para reducir la cantidad de humedad a <5%.
En otro aspecto, el ciclo de liofilización incluye congelación a aproximadamente -45°C, tratamiento térmico a aproximadamente -20°C, recongelación a aproximadamente -45°C, secado primario a aproximadamente -24°C y 150 mTorr, y secado secundario a aproximadamente 27°C y 150 mTorr.
R<p>se ve afectado por el contenido de sólidos del DP congelado y por la historia térmica del DP (etapas de congelación, tratamiento térmico y recongelación), lo que afecta a la estructura de poros de la torta. La historia térmica también puede afectar a la etapa de secado secundario, donde una superficie específica más grande puede ayudar en la desorción de agua (Pikal, et al. (1990)Int. J. Pharm.,60:203-217). Los parámetros del procedimiento útiles para controlar durante las etapas de liofilización primaria y secundaria pueden ser la temperatura del estante y la presión de la cámara durante cada etapa del ciclo de secado.
Para el aumento de escala, la carga del liofilizador y el contenido de sólidos pueden afectar al ciclo de secado. El tiempo de secado primario puede verse afectado por el contenido de sólidos en la formulación. Con mayor contenido de sólidos, p. ej., cuando las concentraciones totales de sólidos (excipientes y/o proteínas) varían más de 10% p/v o más de 15% p/v, p. ej., variación de 50 a 100% respecto a las formulaciones cuyo tiempo de secado está determinado, el tiempo de secado puede verse afectado. Por ejemplo, una formulación con alto contenido de sólidos puede tener un tiempo de secado más largo que una formulación con bajo contenido de sólidos. En algunas realizaciones, el porcentaje de uso de la capacidad del liofilizador puede variar de aproximadamente 25 a aproximadamente 100%. Con un % de capacidad de carga mayor, el tiempo de secado primario puede aumentar hasta 2 veces en comparación con un%de capacidad de carga menor. Las diferencias entre los tiempos de secado primario con diferentes % de carga aumentan a medida que aumenta el contenido de sólidos. En una realización, el contenido de sólidos es menor de 20-25% y la carga es de 25-100%.
El tamaño del vial se puede seleccionar basado en la superficie específica que quedará expuesta al estante y al vacío durante la liofilización. El tiempo de secado es directamente proporcional a la altura de la torta, por lo que el tamaño del vial puede elegirse basado en lo que se determine que es una altura de torta razonable. Un vial con un diámetro grande respecto al volumen puede proporcionar una gran cantidad de contacto con el estante para una transferencia de calor eficiente durante el ciclo de liofilización. Una solución de anticuerpo diluida en un gran volumen de líquido requerirá más tiempo para secarse. Es necesario lograr un equilibrio del tamaño del vial frente al volumen de la formulación, ya que los viales más grandes pueden ser más costosos de almacenar y enviar y tienen una mayor relación de espacio de cabeza a formulación y pueden exponer una alta proporción de la formulación a los efectos degradativos de la humedad durante el almacenamiento a largo plazo. Para una dosis de 300 mg, la formulación de anticuerpo anti-a4p7 puede tener un volumen de 3 ml, 5 ml, 6 ml, 10 ml, 20 ml, 50 ml o 100 ml antes de la liofilización. En un aspecto, el tamaño del vial es de 20 ml para una solución de 60 mg/ml en una dosis de 300 mg.
Después de la liofilización, el vial se puede sellar, p. ej., tapar, al vacío. Alternativamente, puede estar permitido un gas, p. ej. aire seco o nitrógeno, en el vial antes de sellarlo. Cuando la oxidación es un problema, el gas permitido en la cámara de liofilización puede comprender un gas que retarda o previene la oxidación del producto liofilizado. En un aspecto, el gas es un gas no oxigenado, p. ej., nitrógeno, o un gas inerte, p. ej., helio, neón, argón, criptón o xenón. En otro aspecto, el gas es nitrógeno o argón.
En algunas realizaciones, el volumen de la formulación de anticuerpo anti-a4p7 antes de la liofilización es el mismo que el volumen de la solución reconstituida antes de la administración. Por ejemplo, una formulación que son aproximadamente 5,5 ml antes de la liofilización se puede reconstituir a un volumen de aproximadamente 5,5 ml, añadiendo una cantidad de líquido, p. ej. agua o solución salina, que tenga en cuenta el volumen de los sólidos secos. En otras realizaciones, puede ser deseable liofilizar la formulación de anticuerpo anti-a4p7 en un volumen diferente al volumen de la solución reconstituida. Por ejemplo, la formulación de anticuerpo anti-a4p7 se puede liofilizar como una solución diluida, p. ej., 0,25x, 0,5x o 0,75x y reconstituir a 1x añadiendo menos líquido, p. ej., 75% menos, la mitad o 25% menos que el volumen antes de liofilización. En una realización, una dosis de 300 mg se puede liofilizar como una solución de anticuerpo de 30 mg/ml en sacarosa al 5% y reconstituir en una solución de anticuerpo de 60 mg/ml en sacarosa al 10%. Alternativamente, la formulación de anticuerpo anti-a4p7 liofilizada se puede reconstituir en una solución más diluida que la formulación pre-liofilizada.
Tratamiento con la formulación de anticuerpo
En un aspecto, la invención proporciona una formulación farmacéutica para su uso en un método para el tratamiento terapéutico de la enfermedad inflamatoria intestinal, como se define en la reivindicación 15. El sujeto humano puede ser un adulto (p. ej., 18 años o mayor), un adolescente o un niño. El sujeto humano puede ser una persona de 65 años o mayor. A diferencia de las pautas posológicas terapéuticas alternativas, un sujeto humano de 65 años o mayor no requiere ninguna modificación de la pauta posológica descrita en el presente documento y se le puede administrar la formulación de anticuerpo anti-a4p7 convencional descrita en el presente documento.
El sujeto puede haber tenido una falta de respuesta adecuada, pérdida de respuesta o intolerancia al tratamiento con un inmunomodulador, un antagonista del TNF-a o combinaciones de los mismos. El paciente puede haber recibido previamente tratamiento con al menos un corticosteroide (p. ej., prednisona) para la enfermedad inflamatoria intestinal. Una respuesta inadecuada a los corticosteroides se refiere a signos y síntomas de la enfermedad activa de forma persistente a pesar de un historial de al menos una pauta de inducción de 4 semanas que incluyó una dosis equivalente a 30 mg de prednisona al día por vía oral durante 2 semanas o por vía intravenosa durante 1 semana. Una pérdida de respuesta a los corticosteroides se refiere a dos intentos fallidos de reducir gradualmente los corticosteroides por debajo de una dosis equivalente a 10 mg de prednisona al día por vía oral. La intolerancia a los corticosteroides incluye antecedentes de síndrome de Cushing, osteopenia/osteoporosis, hiperglucemia, insomnio y/o infección.
Un inmunomodulador puede ser, por ejemplo, azatioprina oral, 6-mercaptopurina o metotrexato. Una respuesta inadecuada a un inmunomodulador se refiere a signos y síntomas de una enfermedad activa de forma persistente a pesar de un historial de al menos una pauta de 8 semanas de azatioprina oral (£1,5 mg/kg), 6-mercaptopurina (£0,75 mg/kg) o metotrexato (£12,5 mg/semana). La intolerancia a un inmunomodulador incluye, pero no se limita a, náuseas/vómitos, dolor abdominal, pancreatitis, anomalías en LFT, linfopenia, mutación genética de TPMT y/o infección.
En un aspecto, el sujeto puede haber tenido una falta de respuesta adecuada, pérdida de respuesta o intolerancia al tratamiento con un antagonista del TNF-a. Un antagonista del TNF-a es, por ejemplo, un agente que inhibe la actividad biológica del TNF-a, y preferiblemente se une al TNF-a, tal como un anticuerpo monoclonal, p. ej., REMICADE (infliximab), HUMIRA (adalimumab), CIMZIA (certolizumab pegol), SIMPONI (golimumab) o una proteína de fusión del receptor circulante tal como ENBREL (etanercept). Una respuesta inadecuada a un antagonista del TNF-a se refiere a signos y síntomas de enfermedad activa de forma persistente a pesar de un historial de al menos una pauta de inducción de 4 semanas de infliximab 5 mg/kg IV, 2 dosis con al menos 2 semanas de diferencia; una dosis subcutánea de 80 mg de adalimumab, seguida de una dosis de 40 mg con al menos dos semanas de diferencia; o 400 mg por vía subcutánea de certolizumab pegol, 2 dosis con al menos 2 semanas de diferencia. Una pérdida de respuesta a un antagonista del TNF-a se refiere a la recurrencia de los síntomas durante la dosis de mantenimiento después de un beneficio clínico previo. La intolerancia a un antagonista del TNF-a incluye, pero no se limita a, reacción relacionadas con la infusión, desmielinización, insuficiencia cardíaca congestiva y/o infección.
Una pérdida de mantenimiento de la remisión, como se usa en el presente documento para sujetos con colitis ulcerosa, se refiere a un aumento en la puntuación de Mayo de al menos 3 puntos y una puntuación de Baron modificada de al menos 2.
En otro aspecto, se usan formulaciones de anticuerpo anti-a4p7 que (1) pueden unirse a la integrina a4p7in vitroy/oin vivo;y (2) pueden modular una actividad o función de una integrina a4p7, tal como (a) función de unión (p. ej., la capacidad de la integrina a4p7 para unirse a MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1), fibronectina y/o VCAM-1) y/o (b) función de infiltración de leucocitos, incluido el reclutamiento y/o la acumulación de leucocitos en los tejidos (p. ej., la capacidad de inhibir la migración de linfocitos al tejido mucoso intestinal). En una realización, un anticuerpo en la formulación puede unirse a una integrina a4p7 y puede inhibir la unión de la integrina a4p7 a uno o más de sus ligandos (p. ej., MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1), VCAM-1, fibronectina), inhibiendo así la infiltración de leucocitos de los tejidos (incluido el reclutamiento y/o la acumulación de leucocitos en los tejidos). En otra realización, un anticuerpo en la formulación puede unirse a una integrina a4p7 y puede inhibir selectivamente la unión de la integrina a4p7 a uno o más de sus ligandos (p. ej., MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1), VCAM-1, fibronectina), inhibiendo así la infiltración de leucocitos de los tejidos (incluido el reclutamiento y/o la acumulación de leucocitos en los tejidos). Dichas formulaciones de anticuerpo anti-a4p7 pueden inhibir la adhesión celular de células que llevan una integrina a4p7 a células endoteliales vasculares en tejidos mucosos, incluidos tejidos asociados con el intestino, órganos linfoides o leucocitos (especialmente linfocitos tales como células T o B)in vitroy/oin vivo.En otra realización más, la formulación de anticuerpo anti-a4p7 usada por la presente invención puede inhibir la interacción de a4p7 con MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1) y/o fibronectina. En otra realización más, la formulación de anticuerpo anti-a4p7 usada por la presente invención puede inhibir la interacción de a4p7 con MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1) y/o fibronectina de manera selectiva, p. ej., sin inhibir la interacción de a4p7 con VCAM.
Las formulaciones de anticuerpo anti-a4p7 usadas por la presente invención se pueden usar para modular (p. ej., inhibir (reducir o prevenir)) la función de unión y/o la función de infiltración de leucocitos (p. ej., linfocitos, monocitos) de la integrina a4p7. Por ejemplo, las inmunoglobulinas humanizadas que inhiben la unión de la integrina a4p7 a un ligando (es decir, uno o más ligandos) se pueden administrar de acuerdo con el método en el tratamiento de enfermedades asociadas con la infiltración de leucocitos (p. ej., linfocitos, monocitos) en tejidos (incluido el reclutamiento y/o la acumulación de leucocitos en tejidos), particularmente de tejidos que expresan la molécula MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1).
Se administra una cantidad eficaz de una formulación de anticuerpo anti-a4p7 usada por la presente invención (es decir, una o más) a un individuo (p. ej., un mamífero, tal como un ser humano u otro primate) con el fin de tratar dicha enfermedad. Por ejemplo, las enfermedades inflamatorias, incluidas las enfermedades que están asociadas con la infiltración de leucocitos del tracto gastrointestinal (incluido el endotelio asociado con el intestino), otros tejidos mucosos o tejidos que expresan la molécula MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1) (p. ej., tejidos asociados con el intestino, tales como las vénulas de la lámina propia del intestino delgado y grueso; y la glándula mamaria (p. ej., glándula mamaria lactante)), se pueden tratar de acuerdo con el presente método. De manera similar, se puede tratar a un individuo que padece una enfermedad asociada con la infiltración de leucocitos de los tejidos como resultado de la unión de los leucocitos a las células (p. ej., células endoteliales) que expresan MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1).
En una realización, las enfermedades que pueden tratarse en consecuencia incluyen enfermedad inflamatoria intestinal (EII), tal como colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, ileítis, enfermedad celíaca, esprúe no tropical, enteropatía asociada con artropatías seronegativas, colitis microscópica o colagenosa, gastroenteritis eosinofílica o reservoritis resultante de proctocolectomía y anastomosis ileoanal. Preferiblemente, la enfermedad inflamatoria intestinal es la enfermedad de Crohn o la colitis ulcerosa. La colitis ulcerosa puede ser de moderada a gravemente activa. El tratamiento puede dar como resultado la curación de la mucosa en pacientes que padecen colitis ulcerosa de moderada a gravemente activa. El tratamiento también puede dar como resultado una reducción, eliminación o reducción y eliminación del uso de corticosteroides por el paciente.
La pancreatitis y la diabetes mellitus insulinodependiente son otras enfermedades que pueden tratarse usando las formulaciones descritas en el presente documento. Se ha descrito que MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1) se expresa en algunos vasos en el páncreas exocrino de ratones NOD (diabéticos no obesos), así como de ratones BALB/c y SJL. Se describió que la expresión de MAdCAM-1 era inducida en el endotelio de los islotes inflamados del páncreas del ratón NOD, y MAdCAM-1 era la adresina predominante expresada por el endotelio de los islotes NOD en las primeras etapas de la insulitis (Hanninen, A., et al.,J. Clin. Invest., 92: 2509-2515 (1993)). El tratamiento de ratones NOD con anticuerpos anti-MAdCAM (p. ej., anti-MAdCAM-1) o anti-p7 prevenía el desarrollo de diabetes (Yang et al.,Diabetes,46:1542-1547 (1997)). Además, se observó acumulación de linfocitos que expresaban a4p7 dentro de los islotes, y MAdCAM-1 estaba implicada en la unión de células de linfoma a través de a4p7 a vasos de islotes inflamados (Hanninen, A., et al.,J. Clin. Invest., 92:2509-2515 (1993)) o al tracto gastrointestinal en el linfoma de células del manto (Geissmann et al.,Am. J. Pathol.,153:1701-1705 (1998)).
Los ejemplos de enfermedades inflamatorias asociadas con los tejidos mucosos que se pueden tratar usando una formulación descrita en el presente documento incluyen colecistitis, colangitis (Adams y EksteenNature Reviews6:244-251 (2006) Grant et al.,Hepatology33:1065-1072 (2001)), p. ej., colangitis esclerosante primaria, enfermedad de Behcet, p. ej., del intestino, o pericolangitis (conducto biliar y tejido circundante del hígado), y enfermedad de injerto contra huésped (p. ej., en el tracto gastrointestinal (p. ej., después de un trasplante de médula ósea) (Petrovic et al.Blood103:1542-1547 (2004)). Como se observa en la enfermedad de Crohn, la inflamación a menudo se extiende más allá de la superficie de la mucosa, por lo que las enfermedades inflamatorias crónicas, tales como la sarcoidosis, gastritis crónica, p. ej., la gastritis autoinmunitaria (Katakai et al.,Int. Immunol.,14:167-175 (2002)) y otras afecciones idiopáticas pueden ser susceptibles de tratamiento.
También se describe en el presente documento un método para inhibir la infiltración de leucocitos del tejido mucoso. También se describe en el presente documento un método para tratar el cáncer (p. ej., un tumor a4p7 positivo, tal como un linfoma). Otros ejemplos de enfermedades inflamatorias asociadas con tejidos mucosos que pueden tratarse usando una formulación descrita en el presente documento incluyen mastitis (glándula mamaria) y síndrome del intestino irritable.
Las enfermedades o patógenos cuyas etiologías explotan la interacción de MADCAM (p. ej., MAdCAM-1) con a4p7 pueden tratarse con un anticuerpo anti-a4p7 en una formulación descrita en el presente documento. Los ejemplos de dichas enfermedades incluyen trastornos de inmunodeficiencia, tales como los causados por el virus de inmunodeficiencia humana (véase, p. ej., publicación internacional WO2008140602).
Una formulación usada por la invención se administra en una cantidad eficaz que inhibe la unión de la integrina a4p7 a un ligando de la misma. Para la terapia, una cantidad eficaz será suficiente para lograr el efecto terapéutico (incluido el profiláctico) deseado (tal como una cantidad suficiente para reducir o prevenir la unión y/o señalización mediada por la integrina a4p7, inhibiendo así la adhesión e infiltración de leucocitos y/o las respuestas celulares asociadas). Una cantidad eficaz de un anticuerpo anti-a4p7, p. ej., un título eficaz suficiente para mantener la saturación, p. ej., neutralización, de la integrina a4p7, puede inducir la respuesta clínica o remisión en la enfermedad inflamatoria intestinal. Una formulación usada por la invención puede administrarse en una dosis unitaria o en dosis múltiples. La dosis se puede determinar mediante métodos conocidos en la técnica y puede depender, por ejemplo, de la edad, sensibilidad, tolerancia y bienestar general del individuo. Los ejemplos de modos de administración descritos en el presente documento incluyen vías tópicas, tales como administración nasal, inhalatoria o transdérmica, vías enterales, tales como a través de una sonda de alimentación o supositorio, y vías parenterales, tales como administración intravenosa, intramuscular, subcutánea, intraarterial, intraperitoneal o intravítrea. Las dosis adecuadas para los anticuerpos descritos en el presente documento pueden ser de aproximadamente 0,1 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 10,0 mg/kg de peso corporal por tratamiento, por ejemplo, de aproximadamente 2 mg/kg a aproximadamente 7 mg/kg, de aproximadamente 3 mg/kg a aproximadamente 6 mg/kg, o de aproximadamente 3,5 a aproximadamente 5 mg/kg. Como se describe en el presente documento, la dosis administrada puede ser de aproximadamente 0,3 mg/kg, aproximadamente 0,5 mg/kg, aproximadamente 1 mg/kg, aproximadamente 2 mg/kg, aproximadamente 3 mg/kg, aproximadamente 4 mg/kg, aproximadamente 5 mg/kg, aproximadamente 6 mg/kg, aproximadamente 7 mg/kg, aproximadamente 8 mg/kg, aproximadamente 9 mg/kg o aproximadamente 10 mg/kg.
La forma farmacéutica final, p. ej., después de dilución del anticuerpo reconstituido (p. ej., en un sistema de infusión de solución salina o dextrosa al 5%), del anticuerpo anti-a4p7 puede ser de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 5 mg/ml para su administración. La forma farmacéutica final puede ser en una concentración de entre aproximadamente 1,0 mg/ml a aproximadamente 1,4 mg/ml, de aproximadamente 1,0 mg/ml a aproximadamente 1,3 mg/ml, de aproximadamente 1,0 mg/ml a aproximadamente 1,2 mg/ml, de aproximadamente 1,0 a aproximadamente 1,1 mg/ml, de aproximadamente 1,1 mg/ml a aproximadamente 1,4 mg/ml, de aproximadamente 1,1 mg/ml a aproximadamente 1,3 mg/ml, de aproximadamente 1,1 mg/ml a aproximadamente 1,2 mg/ml, de aproximadamente 1,2 mg/ml a aproximadamente 1,4 mg/ml, de aproximadamente 1,2 mg/ml a aproximadamente 1,3 mg/ml, o de aproximadamente 1,3 mg/ml a aproximadamente 1,4 mg/ml. La forma farmacéutica final puede ser en una concentración de aproximadamente 0,6 mg/ml, 0,8 mg/ml, 1,0 mg/ml, 1,1 mg/ml, aproximadamente 1,2 mg/ml, aproximadamente 1,3 mg/ml, aproximadamente 1,4 mg/ml, aproximadamente 1,5 mg/ml, aproximadamente 1,6 mg/ml, aproximadamente 1,8 mg/ml o aproximadamente 2,0 mg/ml. En una realización, la dosis total es de 180 mg. En otra realización, la dosis total es de 300 mg. Una dosis de 300 mg de anticuerpo anti-a4p7 se puede diluir en 250 ml de solución salina o dextrosa al 5% para su administración.
En algunos aspectos, la pauta posológica tiene dos fases, una fase de inducción y una fase de mantenimiento. En la fase de inducción, el anticuerpo o su fragmento de unión al antígeno se administra de una manera que proporciona rápidamente una cantidad eficaz del anticuerpo o su fragmento de unión al antígeno adecuada para ciertos fines, tales como inducir inmunotolerancia al anticuerpo o su fragmento de unión al antígeno o para inducir una respuesta clínica y mejorar los síntomas de la enfermedad inflamatoria intestinal. A un paciente se le puede administrar un tratamiento de fase de inducción cuando se está tratando por primera vez con un anticuerpo anti-a4p7, cuando se está tratando después de una larga ausencia de la terapia, p. ej., más de tres meses, más de cuatro meses, más de seis meses, más de nueve meses, más de un año, más de dieciocho meses o más de dos años desde la terapia con anticuerpos anti-a4p7 o durante la fase de mantenimiento de la terapia con anticuerpos anti-a4p7 si ha habido un regreso de los síntomas de la enfermedad inflamatoria intestinal, p. ej., una recaída desde la remisión de la enfermedad. En algunas realizaciones, la pauta de fase de inducción da como resultado una concentración sérica valle media más alta, p. ej., la concentración justo antes de la siguiente dosis, que la concentración sérica valle en estado estacionario media mantenida durante la pauta de mantenimiento.
En la fase de mantenimiento, el anticuerpo o su fragmento de unión al antígeno se administra de una manera que continúa la respuesta lograda por la terapia de inducción con un nivel estable de anticuerpo o su fragmento de unión al antígeno. Una pauta de mantenimiento puede prevenir la reaparición de los síntomas o la recaída de la enfermedad inflamatoria intestinal. Una pauta de mantenimiento puede proporcionar comodidad al paciente, p. ej., puede ser una pauta posológica simple o requerir viajes poco frecuentes para recibir el tratamiento. En algunas realizaciones, la pauta de mantenimiento puede incluir la administración del anticuerpo anti-a4p7 o su fragmento de unión al antígeno, p. ej., en una formulación descrita en el presente documento, mediante una estrategia seleccionada del grupo que consiste en dosis baja, administración poco frecuente, autoadministración y una combinación de cualquiera de las anteriores.
En una realización, p. ej., durante una fase de inducción de la terapia, la pauta posológica proporciona una cantidad eficaz de un anticuerpo anti-a4p7 o fragmento de unión al antígeno en una formulación descrita en el presente documento para inducir la remisión de una enfermedad inflamatoria intestinal en un paciente humano. En algunas realizaciones, la cantidad efectiva del anticuerpo anti-a4p7 es suficiente para alcanzar una concentración sérica valle media de aproximadamente 5 pg/ml a aproximadamente 60 pg/ml, de aproximadamente 15 pg/ml a aproximadamente 45 pg/ml, de aproximadamente 20 pg/ml a aproximadamente 30 pg/ml, o de aproximadamente 25 pg/ml a aproximadamente 35 pg/ml del anticuerpo anti-a4p7 al final de la fase de inducción. La duración de la fase de inducción puede ser de aproximadamente cuatro semanas, aproximadamente cinco semanas, aproximadamente seis semanas, aproximadamente siete semanas o aproximadamente ocho semanas de tratamiento. En algunas realizaciones, la pauta de inducción puede usar una estrategia seleccionada del grupo que consiste en dosis alta, administración frecuente y una combinación de dosis alta y administración frecuente del anticuerpo anti-a4p7 o su fragmento de unión al antígeno, p. ej., en una formulación descrita en el presente documento. La dosificación de inducción puede ser una vez o una pluralidad de más de una dosis, p. ej., al menos dos dosis. Durante la fase de inducción, se puede administrar una dosis una vez al día, cada dos días, dos veces por semana, una vez por semana, una vez cada diez días, una vez cada dos semanas o una vez cada tres semanas. En algunas realizaciones, las dosis de inducción se administran dentro de las primeras dos semanas de terapia con el anticuerpo anti-a4p7. En una realización, la dosis de inducción puede ser una vez al inicio del tratamiento (día 0) y una vez aproximadamente dos semanas después del inicio del tratamiento. En otra realización, la duración de la fase de inducción es de seis semanas. En otra realización, la duración de la fase de inducción es de seis semanas y se administran una pluralidad de dosis de inducción durante las dos primeras semanas.
En algunas realizaciones, p. ej., cuando se inicia el tratamiento de un paciente con enfermedad inflamatoria intestinal grave (p. ej., en pacientes que han tenido resultado insatisfactorio con terapia anti-TNFa), la fase de inducción debe tener una duración más larga que para los pacientes con enfermedad leve o moderada. En algunas realizaciones, la fase de inducción para un paciente con una enfermedad grave puede tener una duración de al menos 6 semanas, al menos 8 semanas, al menos 10 semanas, al menos 12 semanas o al menos 14 semanas. En una realización, una pauta posológica de inducción para un paciente con una enfermedad grave puede incluir una dosis la semana 0 (inicio del tratamiento), una dosis la semana 2 y una dosis la semana 6. En otra realización, una pauta posológica de inducción para un paciente con una enfermedad grave puede comprender una dosis la semana 0 (inicio del tratamiento), una dosis la semana 2, una dosis la semana 6 y una dosis la semana 10.
En una realización, p. ej., durante una fase de mantenimiento de la terapia, la pauta posológica mantiene una concentración sérica valle en estado estacionario media, p. ej., la concentración meseta justo antes de la siguiente dosis, de aproximadamente 5 a aproximadamente 25 |jg/ml, de aproximadamente 7 a aproximadamente 20 jg/ml, de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 jg/ml, de aproximadamente 10 a aproximadamente 20 jg/ml, de aproximadamente 15 a aproximadamente 25 jg/m l o de aproximadamente 9 a aproximadamente 13 jg/m l de anticuerpo anti-a4p7. En otra realización, la pauta posológica, p. ej., durante una fase de mantenimiento de la terapia, mantiene una concentración sérica valle en estado estable media de aproximadamente 20 a aproximadamente 30 jg/ml, de aproximadamente 20 a aproximadamente 55 jg/ml, de aproximadamente 30 a aproximadamente 45 jg/ml, de aproximadamente 45 a aproximadamente 55 jg/m l o de aproximadamente 35 a aproximadamente 40 jg/m l de anticuerpo anti-a4p7.
Como se describe en el presente documento, se puede administrar una dosis una vez por semana, una vez cada 2 semanas, una vez cada 3 semanas, una vez cada 4 semanas, una vez cada 6 semanas, una vez cada 8 semanas o una vez cada 10 semanas. Una dosis más alta o más frecuente, p. ej., una vez por semana, una vez cada 2 semanas, una vez cada 3 semanas o una vez cada 4 semanas, puede ser útil para inducir la remisión de la enfermedad activa o para tratar a un paciente nuevo, p. ej., para inducir tolerancia al anticuerpo anti-a4p7. Una dosis menos frecuente, p. ej., una vez cada 4 semanas, una vez cada 5 semanas, una vez cada 6 semanas, una vez cada 8 semanas o una vez cada 10 semanas, puede ser útil para la terapia preventiva, p. ej., para mantener la remisión de un paciente con una enfermedad crónica. En un aspecto, la pauta de tratamiento es el tratamiento el día 0, aproximadamente la semana 2, aproximadamente la semana 6 y cada 4 u 8 semanas a partir de entonces. En una realización, la pauta de mantenimiento incluye una dosis cada 8 semanas. En una realización, en donde un paciente con una pauta de mantenimiento de una dosis cada ocho semanas experimenta un regreso de uno o más síntomas de la enfermedad, p. ej., tiene una recaída, la frecuencia de dosificación se puede aumentar, p. ej., a una vez cada 4 semanas.
La dosis puede administrarse al paciente en aproximadamente 20 minutos, aproximadamente 25 minutos, aproximadamente 30 minutos, aproximadamente 35 minutos o aproximadamente 40 minutos.
La pauta posológica se puede optimizar para inducir una respuesta clínica y una remisión clínica en la enfermedad inflamatoria intestinal del paciente. En algunas realizaciones, la pauta posológica no altera la relación de CD4 a CD8 en el líquido cefalorraquídeo de pacientes que reciben tratamiento.
En algunos aspectos, una remisión clínica duradera, por ejemplo, una remisión clínica que se mantiene a lo largo de al menos dos, al menos tres, al menos cuatro visitas con un médico a cargo dentro de un período de seis meses o un año después de comenzar el tratamiento, puede lograrse con una pauta posológica optimizada.
En algunos aspectos, se puede lograr una respuesta clínica duradera, por ejemplo, una respuesta clínica que se mantiene durante al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos un año, después del inicio del tratamiento, con una pauta posológica optimizada.
En una realización, la pauta posológica comprende una dosis inicial de 300 mg, una segunda dosis posterior de 300 mg aproximadamente dos semanas después de la dosis inicial, una tercera dosis posterior de 300 mg aproximadamente seis semanas después de la dosis inicial, seguida de una cuarta dosis y posteriores de 300 mg cada cuatro semanas o cada ocho semanas después de la tercera dosis posterior.
En algunas realizaciones, el método de tratamiento, la dosis o la pauta posológica reducen la probabilidad de que un paciente desarrolle una respuesta de HAHA contra el anticuerpo anti-a4p7. El desarrollo de HAHA, p. ej., medido por anticuerpos reactivos contra el anticuerpo anti-a4p7, puede aumentar el aclaramiento del anticuerpo anti-a4p7, p. ej., reducir la concentración sérica del anticuerpo anti-a4p7, p. ej., disminuyendo la cantidad de anticuerpo anti-a4p7 unido a la integrina a4p7, haciendo así que el tratamiento sea menos efectivo. En algunas realizaciones, para prevenir los HAHA, se puede tratar al paciente con una pauta de inducción seguido de una pauta de mantenimiento. En algunas realizaciones, no hay interrupción entre la pauta de inducción y la pauta de mantenimiento. En algunas realizaciones, la pauta de inducción comprende administrar una pluralidad de dosis de anticuerpo anti-a4p7 al paciente. Para prevenir los HAHA, se puede tratar al paciente con una dosis inicial alta descrita en el presente documento, p. ej., al menos 1,5 mg/kg, al menos 2 mg/kg, al menos 2,5 mg/kg, al menos 3 mg/kg, al menos 5 mg/kg, al menos 8 mg/kg, al menos 10 mg/kg o de aproximadamente 2 a aproximadamente 6 mg/kg, o administraciones iniciales frecuentes, p. ej., aproximadamente una vez por semana, aproximadamente una vez cada dos semanas o aproximadamente una vez cada tres semanas, de la dosis de referencia al comenzar la terapia con un anticuerpo anti-a4p7. En algunas realizaciones, el método de tratamiento mantiene al menos 30%, al menos 40%, al menos 50%, al menos 60%, al menos 70%, al menos 80%, al menos 90% o al menos 95% de los pacientes como HAHA negativos. En otras realizaciones, el método de tratamiento mantiene a los pacientes como HAHA negativos durante al menos 6 semanas, al menos 10 semanas, al menos 15 semanas, al menos seis meses, al menos 1 año, al menos 2 años o durante la duración de la terapia. En algunas realizaciones, los pacientes, o al menos 30%, al menos 40%, al menos 50% o al menos 60% de los pacientes que desarrollan HAHA mantienen un título bajo, p. ej., <125, de anticuerpo anti-a4p7. En una realización, el método de tratamiento mantiene al menos 70% de los pacientes como HAHA negativos durante al menos 12 semanas después de comenzar la terapia con un anticuerpo anti-a4p7.
La formulación puede administrarse a un individuo (p. ej., un ser humano) sola o junto con otro agente. Una formulación usada por la invención puede administrarse antes, junto con o después de la administración del agente adicional. En una realización, se administra más de una formulación que inhibe la unión de la integrina a4p7 a sus ligandos. En dicha realización, se puede administrar un agente, p. ej., un anticuerpo monoclonal, tal como un anti-MAdCAM (p. ej., anti-MAdCAM-1) o un anticuerpo monoclonal anti-VCAM-1. En otra realización, el agente adicional inhibe la unión de leucocitos a un ligando endotelial en una ruta diferente de la ruta a4p7. Dicho agente puede inhibir la unión, p. ej., de los linfocitos que expresan el receptor de quimiocina (motivo C-C) 9 (CCR9) a la quimiocina expresada en el timo (TECK o CCL25) o un agente que previene la unión de LFA-1 a la molécula de adhesión intercelular (ICAM). Por ejemplo, se administra un anticuerpo anti-TECK o anti-CCR9 o un inhibidor de CCR9 de molécula pequeña, tales como los inhibidores descritos en la publicación PCT WO03/099773 o WO04/046092, o anticuerpo anti-ICAM-1 o un oligonucleótido que previene la expresión de ICAM, además de una formulación para el uso de la presente invención. En otra realización más, se puede administrar un principio activo adicional (p. ej., un compuesto antiinflamatorio, tal como sulfasalazina, azatioprina, 6-mercaptopurina, antiinflamatorios que contienen ácido 5-aminosalicílico, otro compuesto antiinflamatorio no esteroideo, un compuesto antiinflamatorio esteroideo o antibióticos administrados habitualmente para el control de la EII (p. ej., ciprofloxacino, metronidazol), u otro agente biológico (p. ej., antagonistas del TNF alfa) junto con una formulación para el uso de la presente invención.
En una realización, la dosis del medicamento coadministrado se puede reducir a lo largo del tiempo durante el período de tratamiento mediante la formulación que comprende el anticuerpo anti-a4p7. Por ejemplo, un paciente que recibe tratamiento con un esteroide (p. ej., prednisona, prednisolona) al comienzo o antes del tratamiento con la formulación de anticuerpo anti-a4p7 se sometería a una pauta de dosis decrecientes de esteroide empezando tan pronto como a las 6 semanas de tratamiento con la formulación de anticuerpo antia4p7. La dosis de esteroide se reducirá en aproximadamente 25% dentro de las 4-8 semanas de inicio de la disminución progresiva, en 50% aproximadamente a las 8-12 semanas y en 75% aproximadamente a las 12 16 semanas de disminución progresiva durante el tratamiento con la formulación de anticuerpo anti-a4p7. En un aspecto, en aproximadamente 16-24 semanas de tratamiento con la formulación de anticuerpo anti-a4p7, se puede eliminar la dosis de esteroide. En otro ejemplo, un paciente que recibe tratamiento con un compuesto antiinflamatorio, tal como 6-mercaptopurina al comienzo o antes del tratamiento con la formulación de anticuerpo anti-a4p7, se sometería a una pauta de dosis decrecientes del compuesto antiinflamatorio similar a la pauta de disminución progresiva para la dosificación de esteroides como se indicó anteriormente.
En una realización, el uso en el método puede comprender administrar una cantidad efectiva de una formulación para el uso de la invención a un paciente. Si la formulación está en un estado sólido, p. ej., seco, el procedimiento de administración puede comprender una etapa de conversión de la formulación a un estado líquido. En un aspecto, una formulación seca puede reconstituirse, p. ej., con un líquido como se describió anteriormente, para usar en inyección, p. ej., inyección intravenosa, intramuscular o subcutánea. En otro aspecto, una formulación sólida o seca se puede administrar por vía tópica, p. ej., en un parche, crema, aerosol o supositorio.
También se describe en el presente documento un método para tratar una enfermedad asociada con la infiltración de leucocitos de tejidos que expresan la molécula MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1). El método comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad eficaz de una formulación de anticuerpo anti-a4p7 de la invención. En una realización, la enfermedad es una enfermedad de injerto contra huésped. En algunas realizaciones, la enfermedad es una enfermedad asociada con la infiltración de leucocitos de tejidos como resultado de la unión de leucocitos que expresan la integrina a4p7 al endotelio asociado al intestino que expresa la molécula MAdCAM (p. ej., MAdCAM-1). En otras realizaciones, la enfermedad es gastritis (p. ej., gastritis eosinofílica o gastritis autoinmunitaria), pancreatitis o diabetes mellitus insulinodependiente. En otras realizaciones más, la enfermedad es colecistitis, colangitis o pericolangitis.
La invención también se refiere a un anticuerpo humanizado anti-a4p7 para usar en un método para tratar la enfermedad inflamatoria intestinal en un paciente, como se define en las reivindicaciones. En una realización, el método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de una formulación de anticuerpo anti-a4p7 de la invención. En algunas realizaciones, la enfermedad inflamatoria intestinal es colitis ulcerosa o enfermedad de Crohn. En otras realizaciones, la enfermedad inflamatoria intestinal es enfermedad celíaca, enteropatía asociada con artropatías seronegativas, colitis microscópica o colagenosa, gastroenteritis (p. ej., gastroenteritis eosinofílica) o reservoritis.
En algunas realizaciones, el tratamiento con un anticuerpo anti-a4p7 no altera la relación de linfocitos CD4:CD8. Las relaciones CD4:CD8 se pueden medir en sangre, aspirado de ganglios linfáticos y líquido cefalorraquídeo (LCR). Las relaciones de linfocitos CD4+:CD8+ en el LCR en individuos sanos son típicamente mayores o igual a aproximadamente 1. (Svenningsson et al.,J. Neuroimmunol.1995;63:39-46; Svenningsson et al.,Ann Neurol.1993; 34:155-161). Un inmunomodulador puede alterar la relación CD4:CD8 a menos de 1.
Artículos de fabricación
En otro aspecto, se describe en el presente documento un artículo de fabricación que contiene la formulación farmacéutica descrita en el presente documento y proporciona instrucciones para su uso. El artículo fabricado comprende un envase. Los envases adecuados incluyen, por ejemplo, frascos, viales (p. ej., viales de doble cámara, un vial de formulación líquida con o sin aguja, un vial de formulación sólida con o sin un vial de líquido de reconstitución con o sin aguja), jeringas (tales como jeringas de doble cámara, jeringas precargadas) y tubos de ensayo. El envase puede estar formado de una variedad de materiales, tales como vidrio, metal o plástico. El envase contiene la formulación y una etiqueta en, o asociada con, el recipiente puede indicar instrucciones de uso. En otra realización, la formulación se puede preparar para la autoadministración y/o contener instrucciones para la autoadministración. En un aspecto, el envase que contiene la formulación puede ser un vial de un solo uso. En otro aspecto, el envase que contiene la formulación puede ser un vial multiuso, que permite la administración repetida (p. ej., de 2 a 6 administraciones) de la formulación, p. ej., usando más de una porción de una formulación reconstituida. El artículo de fabricación puede incluir además otros materiales deseables desde un punto de vista comercial y de usuario, incluidos otros tampones, diluyentes, filtros, agujas, jeringas y prospectos con instrucciones de uso como se indica en la sección anterior.
Análisis clínico y de calidad
En otro aspecto, se describe en el presente documento un método para determinar que una formulación farmacéutica cumple con los estándares de calidad del producto. El método puede comprender la evaluación de una formulación farmacéutica liofilizada (p. ej., anticuerpo anti-a4p7 humanizado) que comprende inspeccionar la formulación para evaluar el aspecto, determinar el tiempo de reconstitución, determinar el contenido de humedad de la formulación liofilizada, medir agregados en la formulación liofilizada, medir la fragmentación, medir la oxidación/desamidación y, opcionalmente, evaluar la actividad y potencia biológicas, en donde alcanzar estándares predeterminados demuestra que el producto está indicado para uso clínico.
Los niveles de calidad aceptables incluyen <5,0% de humedad, <40 minutos de tiempo de reconstitución, pH 6,3 ±0,3 del líquido reconstituido, concentración de anticuerpos de 54,0 a 66,0 mg/ml, >55,0% de isoforma principal por CEX, >96,0% de monómero por SEC, <2,5% de peso molecular alto (agregados), >90% de cadenas H+L por SDS-PAGE, 60 - 140% de la adhesión del patrón de referencia.
La invención se comprenderá con más detalle con referencia a los siguientes ejemplos. Sin embargo, no debería considerarse que limiten el alcance de la invención.
Protocolo de desarrollo para la elaboración de formulaciones
A. Solución de anticuerpo anti-a4p7
Los frascos de preparación de anticuerpo anti-a4p7 de alta concentración congelados (vedolizumab, histidina 50 mM, arginina 125 mM, polisorbato 80 al 0,06%, pH 6,3) se descongelan a temperatura ambiente durante 16-24 horas. Los frascos descongelados se agrupan en un recipiente de mezcla de acero inoxidable y se mezclan. Luego, la preparación se diluye con tampón de dilución A (histidina 50 mM, arginina 125 mM, polisorbato 80 al 0,06%, pH 6,3) hasta 80 mg/ml de vedolizumab y se mezcla. Luego se añade sacarosa diluyendo la preparación con el tampón de dilución B que contiene sacarosa (histidina 50 mM, arginina 125 mM, sacarosa al 40%, polisorbato 80 al 0,06%, pH 6,3). Esta etapa diluye la preparación de anticuerpo antia4p7 a una formulación líquida de vedolizumab 60 mg/ml, histidina 50 mM, arginina 125 mM, sacarosa al 10%, polisorbato 80 al 0,06%, pH 6,3.
B. Liofilización
La formulación líquida del anticuerpo anti-a4p7 con 60 mg/ml en histidina 50 mM, arginina 125 mM, polisorbato 80 al 0,06%, sacarosa al 10%, a pH 6,3 se envasa en viales de vidrio de 20 ml con 5,52 ml por vial y los tapones se ponen en la posición de liofilización. Los viales se cargan en estantes ajustados a aproximadamente 20°C en un liofilizador. Después de cargar todos los viales y cerrar la puerta, se baja la temperatura de los estantes para congelar la solución, aproximadamente -45°C. Después de 3 horas a esta temperatura, la temperatura de los estantes se eleva a -20°C para el tratamiento térmico. Después de tratamiento térmico durante cuatro horas, se baja la temperatura de los estantes para volver a congelar la solución, aproximadamente -45°C. Después de equilibrar los viales a esta temperatura, se extrae el aire de la cámara. Cuando la presión es de 150 mTorr, la temperatura de los estantes se aumenta a la temperatura de secado primario, aproximadamente -24°C. El secado primario continúa hasta que todo el hielo cristalino ha sublimado de los viales. Luego, la temperatura de los estantes se eleva a 27°C para el secado secundario durante 16 horas, hasta que la humedad es aproximadamente menos de 2,5% de la formulación liofilizada. Una vez finalizado el secado secundario, se vuelve a introducir gas nitrógeno en la cámara hasta que se alcanza la presión ambiente. Los viales se tapan y se retiran del liofilizador.
C. Almacenamiento y uso del anticuerpo anti-a4p7 liofilizado
Los viales liofilizados de anticuerpo anti-a4p7 se almacenan a -70°C, -20°C, 2-8°C o 25°C durante los períodos de tiempo deseados. Cuando está listo para su uso, el vial se equilibra a temperatura ambiente. Luego, el contenido del vial se reconstituye con una jeringa que contiene agua para inyección (“WFI”) usando una aguja de 21 G. La cantidad de WFI se determina de modo que el volumen final de la solución de anticuerpo reconstituida sea el mismo volumen de la solución preliofilizada. Para un volumen de preliofilización de 5,52 ml, se añaden 4,8 ml de WFI. El vial se agita suavemente y luego se mantiene durante 10-30 minutos para permitir que la formulación se reconstituya, luego, se retira la solución de anticuerpo con una jeringa y se añade y se añade a una bolsa IV para infusión IV a un paciente.
Ejemplos
Ejemplo 1
Datos comparativos para variar el % de azúcar y aminoácidos en formulaciones liofilizadas
Se realizó un diseño de experimentos para observar el efecto de variar la relación molar de azúcar (sacarosa y manitol) a proteína, la relación molar de arginina a proteína y la cantidad molar de tampón de histidina. Se sabe que la histidina y la arginina no cristalizan durante el procedimiento de liofilización, lo que las convierte en potenciales crio y lioprotectores. Se cargaron 1,5 ml de formulación en viales de 5 ml liofilizada con secado primario a -30°C, 150 mT y secado secundario a 20°C, 150 mT. La estabilidad de las formulaciones liofilizadas reconstituidas a 1,5 ml después de diferentes condiciones de almacenamiento se muestra en las Tablas 1-3 (que reúnen resultados de 60 mg/ml de dos experimentos). La Figura 6A muestra los modelos predictivos para los cambios en el porcentaje de monómero, porcentaje de agregados y porcentaje de isoforma principal cuando se almacena a 40°C cuando se varía el pH y la relación molar de azúcar y arginina. La mejor estabilidad de la formulación era a pH bajo y una relación molar alta de (azúcar arginina) a proteína. En las cantidades molares de histidina examinadas, la histidina no afectaba a la estabilidad de la formulación. Todas las formulaciones tenían 1-2% de humedad durante el almacenamiento.
Tabla 1: Cambio en el porcentaje de monómero cuando se almacena a 5°C, 25°C/60% HR y 40°C/75% HR durante 3 meses. El porcentaje de monómero se midió usando cromatografía de exclusión por tamaño (SEC).
Tabla 2: Cambio en el porcentaje de agregados cuando se almacenan a 5°C, 25°C/60% HR y 40°C/75% HR durante 3 meses. El porcentaje de monómero se midió usando cromatografía de exclusión por tamaño (SEC).
Tabla 3: Cambio en el porcentaje de isoterma principal cuando se almacena a 5°C, 25°C/60% HR y 40°C/75% HR durante 3 meses. La isoterma principal se midió usando cromatografía de intercambio catiónico (CEX).
La FIG. 6A muestra los modelos predichos basados en el análisis estadístico de los datos de 40°C de las Tablas 1-3. El modelo para el cambio en el porcentaje de monómero por mes a 40°C por análisis SEC es -3,10 (0,386)*pH 0,000516*((moles de azúcar moles de arginina)/moles de proteína)). El modelo para el cambio en el porcentaje de agregados por mes a 40°C por análisis SEC es 2,43 - (0,263)*pH - 0,000787*((moles de azúcar moles de arginina)/moles de proteína)). El modelo para el cambio en el porcentaje de isoforma principal por mes a 40°C por análisis CEX es -2,54 (0,109)*pH - 0,00130*((moles de azúcar moles de arginina)/moles de proteína)). La línea central muestra los resultados de los modelos predictivos y las líneas externas muestran el límite de confianza del 95% para los modelos predictivos.
La FIG. 6B muestra modelos alternativos basados en el análisis estadístico de datos de 40°C de las Tablas 1 3 cuando los factores de entrada son pH, relación molar azúcar:proteína y relación molar arginina:proteína. El modelo para el cambio en el porcentaje de monómero por mes a 40°C por análisis SEC es -3,02 (0,370)*pH 0,000482*((moles de azúcar)/(moles de proteína) 0,000657*((moles de arginina/moles de proteína). El modelo para el cambio en el porcentaje de agregados por mes a 40°C por análisis SEC es 2,35 - (0,244)*pH -0,000727*((moles de azúcar)/(moles de proteína) - 0,00102*((moles de arginina)/(moles de proteína)). El modelo para el cambio en el porcentaje de isoterma principal por mes a 40°C por análisis CEX es -2,92 (0,210)*pH 0,00164*((moles de azúcar)/)/(moles de proteína) - 0,000220*((moles de arginina)/(moles de proteína)). La línea central muestra los resultados de los modelos predictivos y las líneas externas muestran el límite de confianza del 95% para los modelos predictivos.
Ejemplo 2
Datos de estabilidad
Se ensayó en tres lotes de estabilidad primaria de la formulación (lotes A, B y C) la estabilidad después de almacenamiento en las condiciones de almacenamiento prescritas (5 y 25°C/60% HR durante hasta 24 meses). Los tres lotes contienen la misma formulación líquida que se liofilizó: anticuerpo anti-a4p760 mg/ml, histidina 50 mM, arginina 125 mM, sacarosa al 10%, polisorbato 80 al 0,06%, pH 6,3. Para el lote A, se llenaron viales de 20 ml con 3,5 ml de solución y se liofilizaron, para los lotes B y C, se llenaron viales de 20 ml con 5,52 ml de solución y se liofilizaron.
En un estudio separado, una formulación de un solo fármaco de anticuerpo anti-a4p7 60 mg/ml, histidina 50 mM, arginina 125 mM, sacarosa al 10%, polisorbato 80 al 0,06%, pH 6,3 se liofilizó en dos volúmenes, 3,5 ml y 9,5 ml, respectivamente, para producir los lotes R y S para las muestras de estabilidad, que se analizaron a lo largo de 38 meses. Los espacios en blanco son NE (no ensayados).
Los datos (Tablas 4-19) mostraron que las formulaciones de anticuerpos se mantenían estables cuando se almacenaron hasta 38 meses a 5°C y hasta 30 meses a 25°C/60% HR. Todos los atributos del producto se mantuvieron dentro de las especificaciones durante el período de tiempo de 38 meses.
Tabla 4: Cambio en el porcentaje de monómero por SEC cuando se almacenaba a 5°C.
Tabla 5: Cambio en el porcentaje de agregados por SEC cuando se almacenaba a 5°C.
Tabla 6: Cambio en el porcentaje de isoforma principal por CEX cuando se almacenaba a 5°C.
Tabla 7: Cambio en el porcentaje de isoformas ácidas por CEX cuando se almacenaba a 5°C.
Tabla 8: Cambio en el porcentaje de isoformas básicas por CEX cuando se almacenaba a 5°C.
Tabla 9: Cambio en el % de (H+L) por SDS-PAGE reducida cuando se almacena a 5°C.
Tabla 10: Cambio en la eficacia de unión cuando se almacenaba a 5°C.
Tabla 11: Cambio en el%de humedad por KF cuando se almacenaba a 5°C
Tabla 12: Cambio en el porcentaje de monómero por SEC cuando se almacenaba a 25°C/60% HR
Tabla 13: Cambio en el porcentaje de agregados por SEC cuando se almacenaba a 25°C/60% HR
Tabla 14: Cambio en el porcentaje de isoforma principal por CEX cuando se almacenaba a 25°C/60% HR
Tabla 15: Cambio en el porcentaje de isoformas ácidas por CEX cuando se almacenaba a 25°C/60% HR
Tabla 16: Cambio en el porcentaje de isoformas básicas por CEX cuando se almacenaba a 25°C/60% HR
Tabla 17: Cambio en el % de (H+L) por SDS-PAGE reducida cuando se almacenaba a 25°C/60% HR
Tabla 18: Cambio en la eficacia de unión cuando se almacenaba a 25°C/60% HR
Tabla 19: Cambio en el%de humedad por KF cuando se almacenaba a 25°C/60% HR
Cromatografía de intercambio catiónico (CEX)
Se usa un gradiente de fosfato/cloruro de sodio en una columna de intercambio catiónico débil en un sistema de cromatografía líquida de alto rendimiento para separar especies cargadas en formulaciones de anticuerpo anti-a4p7 y determinar la composición de carga de las especies de anticuerpos. Las isoformas ácidas eluyen antes que la isoforma principal y las isoformas básicas eluyen después de la isoforma principal.
Los datos de estabilidad para todos los lotes de vedolizumab generados usando un ensayo de CEX se presentan en las Tablas 3, 6-8 y 14-16. Las tablas muestran que en estas condiciones de almacenamiento no había tendencia de reducción del % de isoforma principal por debajo de 55,0%.
Cromatografía de exclusión por tamaño (SEC)
La SEC se realiza usando una columna SEC analítica (Tosoh Bioscience, LLC, King of Prussia, PA). La fase móvil es una solución salina tamponada con fosfato y la absorbancia se sigue a 280 nm.
Los datos de estabilidad generados usando un ensayo de SEC se presentan en las Tablas 1, 2, 4, 5, 12 y 13. Las tablas muestran que ninguna de las condiciones de almacenamiento indicadas daba como resultado una reducción del % de monómero por debajo de 96,0%. De manera similar, el % de agregados se mantenía <2,5% para todos los lotes en todas las condiciones de almacenamiento indicadas.
Ensayo de SDS-PAGE
La SDS-PAGE se realiza usando un gel de Tris-glicina de Invitrogen (Carlsbad, CA), al 4-20% para condiciones reductoras y 4-12% para condiciones no reductoras. La muestra de formulación de anticuerpo reconstituida se diluye en tampón de formulación líquido y luego se diluye de uno a dos con tampón de muestra de Tris-glicina SDS (2X, Invitrogen), ya sea con 2-mercaptoetanol al 10% (tampón de muestra reductor) o sin 2-mercaptoetanol (tampón de muestra no reductor). Las muestras se calientan brevemente y se cargan para comparación con un marcador de peso molecular (Invitrogen). Los geles se tiñen con azul de Coomassie coloidal (Invitrogen) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las bandas de proteínas se analizan por densitometría para identificar el % de cadena pesada y ligera para geles reducidos y el % de IgG para geles no reducidos.
Los datos de estabilidad generados usando un ensayo SDS-PAGE reducido se presentan en las Tablas 9 y 17. No se observaron cambios notables para los % de cadenas pesadas ligeras (H+L) en todas las condiciones de almacenamiento indicadas para todos los lotes de estabilidad. El patrón de bandas era similar al del patrón de referencia y el % de (H+L) se mantuvo en un nivel >90%.
Eficacia de unión
Las células HuT78 (células de linfoma de células T humanas, American Type Culture Collection, Manassas, VA) suspendidas en BSA al 1 % en PBS y azida de sodio al 0,01% se ponen en contacto con diluciones seriadas del anticuerpo de ensayo primario. Después de incubación en hielo, las células se lavan y se tratan con un anticuerpo secundario marcado con fluorescencia. Después de un lavado adicional, las células se fijan y se suspenden en reactivo FACS para análisis por citometría de flujo (Becton Dickinson Franklin Lakes, NJ); véase también la patente de EE. UU. N.° 7,147,851.
La eficacia de unión de vedolizumab se midió en relación con el patrón de referencia y se dio como % del patrón de referencia y CE50. Los datos de estabilidad se presentan en las Tablas 10 y 18. Los datos para el % del patrón de referencia mostraban variabilidad pero se mantenían dentro de los límites de especificación en todas las condiciones de almacenamiento. Ningún lote evaluado de vedolizumab presentó una tendencia a una eficacia de unión disminuida en las condiciones de almacenamiento indicadas.
Humedad por Karl Fischer
La formulación se valora con metanol para una determinación de humedad Karl Fischer culombimétrica. Los datos de humedad se presentan en las Tablas 11 y 19. Todos los lotes de vedolizumab evaluados tenían menos de 5% de humedad en todas las condiciones de almacenamiento indicadas.
Enfoque isoeléctrico capilar (cIEF)
El cIEF se realiza usando un sistema de detección de cIEF de columna completa iCE280 (Convergent Biosciences, Toronto, Ontario). La elección del anfolito puede ser la recomendada por el fabricante o puede ser una combinación de anfolitos disponibles comercialmente. Una combinación útil es una mezcla de 3-10 y 5-8 PHARMALYTE™ (GE Healthcare, Piscataway, NJ).
Ejemplo 3: Modelización del aumento de escala del procedimiento de liofilización
Se utilizó la calidad de diseño a la vez que se manipulaba la carga en el liofilizador y el contenido de sólidos de la formulación. La carga se varió de 33 a 100%. El contenido de sólidos de la formulación se varió de 9 a 27% incluyendo en las cargas una formulación que era 0,5x, 1,0x y 1,5x de la formulación objetivo. Estas formulaciones tenían Tg' similares. Con % de sólidos mayores, el tiempo de secado primario aumentaba. Además, con mayor contenido de sólidos, la temperatura del producto aumentaba debido al mayor Rp. La carga también tiene efecto en ambas etapas del secado (FIG. 8).
Ejemplo 4 (Referencia): Estudio de seguridad no clínico
Se diseñó un estudio para comparar el efecto de natalizumab y vedolizumab en la vigilancia inmunológica del SNC en la EAE en Rhesus. A ocho animales se les administró un control con placebo, una vez por semana. A siete animales se les administraron 30 mg/kg de natalizumab, una vez por semana. A siete animales se les administraron 30 mg/kg de vedolizumab, una vez por semana. Se observaron los síntomas clínicos de EAE; se midieron la frecuencia y la relación de los subconjuntos de leucocitos en el LCR por citometría de flujo; se midió la carga total de lesiones T2 en el cerebro usando MRI; y la carga de lesiones y la desmielinización del cerebro se midieron usando histopatología.
Vedolizumab no retrasó la aparición de los síntomas clínicos de EAE en comparación con el control con placebo. No inhibió la incidencia de EAE ni la magnitud de las puntuaciones clínicas. El natalizumab retrasó significativamente (p<0,05) la aparición de los síntomas clínicos de EAE en comparación con el control con placebo. Inhibió la incidencia de EAE y la magnitud de las puntuaciones clínicas. (FIG. 9)
Vedolizumab no prevenía la infiltración del LCR por leucocitos, linfocitos T (linfocitos T cooperadores, linfocitos T citotóxicos), linfocitos B, células citolíticas naturales o monocitos. Por el contrario, el natalizumab inhibía la infiltración del LCR.
Vedolizumab no inhibía la acumulación de lesiones cerebrales, como se detectó por el aumento de T2 y la disminución de los valores de MTR mediante MRI. El natalizumab previno la formación de lesiones en todos los animales excepto en uno. Se midió una inhibición significativa (p<0,05) de los infiltrados cerebrales y la desmielinización mediante histología.
La integrina a4p7 era saturada por vedolizumab durante la investigación, como lo mostraba un ensayo de unión competitiva entre vedolizumab administrado in vivo y un anticuerpo monoclonal analítico anti-a4p7 añadido ex vivo. El mAb anti-a4p7 analítico no se une a los linfocitos T cooperadores de memoria en animales a los que se administró vedolizumab. La falta de efecto de vedolizumab en el SNC se debe por lo tanto a la biología gastrointestinal-trópica de la integrina a4p7.
En resumen, vedolizumab (un antagonista de a4p7) no inhibe la EAE. Por el contrario, el natalizumab (antagonista de a4p1 y a4p7) inhibe la EAE. La integrina a4p1 media la infiltración del SNC en la EAE. Por lo tanto, vedolizumab puede tener un riesgo menor de predisponer a los pacientes a la PML que natalizumab porque no antagoniza la integrina a4p1 ni perjudica la vigilancia inmunitaria del SNC en la EAE en Rhesus.
Ejemplo 5 (Referencia): Estudio clínico de fase I con vedolizumab
Se asignaron aleatoriamente cuarenta y nueve sujetos sanos y recibieron una dosis única de la medicación del estudio: 39 sujetos recibieron vedolizumab (anticuerpo 5 mg/ml, citrato/ácido cítrico 20 mM, cloruro de sodio 125 mM, polisorbato 80 al 0,05%, pH 6,0 (almacenado a largo plazo a -70°C y hasta 3 meses a -20°C)) y 10 sujetos recibieron placebo. De los 39 sujetos que recibieron vedolizumab, 8 sujetos recibieron cada uno una dosis de 0,2, 2,0, 6,0 y 10,0 mg/kg y 7 sujetos recibieron vedolizumab 0,5 mg/kg. Los 49 sujetos completaron el estudio.
No hubo diferencias notables entre las cohortes de vedolizumab para ninguna característica demográfica o inicial. La edad media variaba de 35,4 a 51,0 años; las edades individuales de los sujetos variaban de 21 a 63 años.
Resultados de PK
Vedolizumab se administró como una infusión intravenosa de 0,2 a 10,0 mg/kg de 30 minutos. Los valores de Cmáx y del área bajo la curva de concentración sérica del fármaco en el tiempo (AUC) aumentaron con el aumento de la dosis. La Cmáx corregida por dosis fue aproximadamente la misma en todas las cohortes, lo que indica proporcionalidad de la dosis para este parámetro. El área normalizada de la dosis bajo el valor de la concentración sérica del fármaco desde el tiempo cero hasta el infinito (AUCü-inf) aumentó con el aumento de la dosis hasta 2,0 mg/kg, lo que indica que había un aumento no lineal en el AUC0-inf con el aumento de la dosis en el intervalo inferior de dosis administradas en este estudio. Posteriormente, el AUC0-inf aumentaba proporcionalmente con la dosis, lo que indica linealidad del AUC0-inf en el intervalo de dosis de 2,0 a 10,0 mg/kg. El aumento del AUC0-inf era aproximadamente 2,4 veces mayor de lo esperado con la dosis de 10,0 mg/kg en comparación con la dosis de 0,2 mg/kg.
De manera similar, las estimaciones de aclaramiento, volumen de distribución y semivida terminal dependían de la dosis en el intervalo de dosis de 0,2 a 2,0 mg/kg. A medida que aumentaba la dosis, se reducía el aclaramiento, aumentaba el volumen de distribución y, en consecuencia, se prolongaba la semivida de eliminación terminal. Sin embargo, de 2 a 10,0 mg/kg, no hubo cambio aparente en estos parámetros, lo que sugiere una saturación de un proceso de eliminación rápida de vedolizumab a concentraciones bajas. Es probable que los procesos de eliminación lineal más lentos expliquen una gran fracción del aclaramiento de vedolizumab en dosis más altas.
En algunos sujetos que desarrollaron HAHA contra vedolizumab, se observó un aclaramiento más rápido de vedolizumab en comparación con los sujetos HAHA negativos dentro del nivel de dosis respectivo.
Tabla 20: Visión general de la PK de vedolizumab por cohorte de dosis tras la administración IV de 0,2 a 10,0 mg/kg de vedolizumab en sujetos sanos (conjunto de análisis PK)
Después de alcanzar la Cmáx, las concentraciones séricas de vedolizumab disminuyeron de manera generalmente monoexponencial hasta que las concentraciones alcanzaron aproximadamente de 1 a 10 mg/l. A partir de entonces, las concentraciones parecieron disminuir de manera no lineal.
Los valores de Cmáx y AUC aumentaron con el aumento de la dosis. Para los datos disponibles, la Cmáx corregida por dosis era aproximadamente la misma en todas las cohortes, lo que indica proporcionalidad de la dosis para este parámetro. El AUC0-inf normalizado por dosis aumentó con el aumento de la dosis hasta 2,0 mg/kg, lo que indica que había un aumento no lineal en el AUC0-inf con el aumento de la dosis en el intervalo inferior de dosis administradas en este estudio. Posteriormente, el AUC0-inf aumentaba proporcionalmente con la dosis, lo que indica linealidad del AUC0-inf en el intervalo de dosis de 2,0 a 10,0 mg/kg. El aumento del AUC0-inf era aproximadamente 2,4 veces mayor de lo esperado con la dosis de 10,0 mg/kg en comparación con la dosis de 0,2 mg/kg.
Resultados de PD
Los parámetros de PD de vedolizumab después de una infusión intravenosa de 30 minutos de 0,2 a 10,0 mg/kg de vedolizumab por cohorte se resumen en la Tabla 21 y la Tabla 22 para Act-1 y MAdCAM respectivamente.
Tabla 21: Visión general de la farmacodinamia de vedolizumab, porcentaje de inhibición de %Act-1+ [CD4+ CD45ROalto], por cohorte de dosis después de la administración IV de 0,2-10,0 mg/kg de vedolizumab en sujetos sanos (conjunto de análisis de PD)
Tabla 22: Visión general de la farmacodinamia de vedolizumab, porcentaje de inhibición de %MADCAM+ [CD4+ CD45ROalto], por cohorte de dosis después de la administración IV de 0,2-10,0 mg/kg de vedolizumab en sujetos sanos (conjunto de análisis de PD)
Vedolizumab inhibía los parámetros PD, Act-1 y MAdCAM-1-Fc, casi de forma máxima en todos los puntos temporales en los que vedolizumab era medible en el suero. Una vez que las concentraciones de vedolizumab disminuyeron por debajo del límite de detección del ensayo, la inhibición de Act-1 y MAdCAM-1-Fc volvió aproximadamente al nivel inicial.
En algunos sujetos que desarrollaron HAHA contra vedolizumab, se observó una pérdida más rápida de la saturación del receptor a4p7 en comparación con los sujetos HAHA negativos en el nivel de dosis respectivo. Resultados de seguridad
Vedolizumab era generalmente seguro y bien tolerado en dosis IV únicas de hasta 10,0 mg/kg. Durante el estudio no se produjeron muertes, acontecimientos adversos graves (AAG) ni AA que llevaran a la interrupción del estudio.
Inmunogenicidad/Formación de anticuerpos humanos antihumanos (HAHA)
Un sujeto (10%) en el grupo placebo y 21 sujetos (54%) en los grupos de dosis combinadas de vedolizumab tuvieron HAHA positivos en algún momento durante el estudio. Aunque se observaron muestras de HAHA positivas en todas las cohortes de dosis, se encontraron títulos de HAHA >125 solo en los 2 grupos de dosis más bajas de vedolizumab. Se ha observado previamente una supresión dependiente de la dosis de la formación de HAHA con vedolizumab. Diecinueve de los 22 sujetos tratados con vedolizumab que eran HAHA positivos tenían HAHA neutralizantes presentes.
Tabla 23: Visión general de los hallazgos de anticuerpos humanos antihumanos: Población de seguridad
_______
Un sujeto en el grupo de placebo y 11 sujetos en el grupo de vedolizumab fueron HAHA positivos de forma persistente.
Tabla 24: Estado general de anticuerpos humanos antihumanos (población segura)
Conclusiones
Este estudio de fase 1 caracterizó la PK/PD y los perfiles de seguridad iniciales de vedolizumab derivados de células CHO. Los resultados de este estudio se usaron para respaldar la selección de dosis para ensayos fundamentales de fase 3 en enfermedad inflamatoria intestinal.
Vedolizumab demostró proporcionalidad a la dosis en el intervalo de dosis ensayado para el parámetro Cmáx; sin embargo, se observaron cambios dependientes de la dosis en AUC0-inf, CL, Vz y t1/2 de 0,2 a 2,0 mg/kg, lo que sugiere un comportamiento PK no lineal de vedolizumab. A niveles de dosis mayores que 2,0 mg/kg, no se observaron cambios adicionales en estos parámetros, lo que sugiere una saturación de un proceso de eliminación rápida de vedolizumab a concentraciones bajas. Es probable que los procesos de eliminación lineal más lentos expliquen una gran fracción del aclaramiento de vedolizumab en dosis más altas.
Vedolizumab inhibía los parámetros PD, Act-1 y MAdCAM-1-Fc, en niveles máximos o casi máximos, en todos los puntos temporales cuando vedolizumab era medible en el suero. Una vez que las concentraciones de vedolizumab disminuyeron por debajo del límite de detección del ensayo, la inhibición de Act-1 y MAdCAM-1-Fc volvió aproximadamente al nivel inicial.
En algunos sujetos que desarrollaron HAHA contra vedolizumab, se observó un aclaramiento más rápido de vedolizumab y pérdida de la saturación del receptor a4p7 en comparación con los sujetos HAHA negativos en el nivel de dosis respectivo.
Vedolizumab era bien tolerado. Durante el estudio no se produjeron muertes, AAG o AA que condujeran a la interrupción de la administración del fármaco del estudio, ni se observó ninguna relación dosis-toxicidad. No se notificaron infecciones oportunistas sistémicas (incluida PML) o neoplasias.
A diferencia de los antagonistas de a4 no específicos, vedolizumab no se asoció con linfocitosis o aumentos medios en los eosinófilos, basófilos o monocitos circulantes, ni hubo evidencia de agotamiento de linfocitos.
Vedolizumab provocó la formación de HAHA, pero los títulos más altos (>125) se observaron solo en los 2 grupos de dosis más bajas, un hallazgo que respalda observaciones previas de una reducción dependiente de la dosis en la inmunogenicidad. Estos datos muestran que la administración de dosis más altas de vedolizumab puede minimizar la formación de HAHA clínicamente significativa.
En conclusión, vedolizumab era generalmente seguro y bien tolerado cuando se administraba en dosis únicas de 0,2 a 10,0 mg/kg a sujetos sanos.
Ejemplo 6 (Referencia): Determinación del efecto de vedolizumab en la relación CD4:CD8
Sujetos sanos de 18-45 años se trataron con una dosis única de 450 mg de vedolizumab reconstituido a partir de una formulación liofilizada de sacarosa al 10% y diluida en un sistema de infusión de solución salina al 0,9%. Se recogió líquido cefalorraquídeo (LCR) mediante punción lumbar antes (inicial) y 5 semanas después de la dosis única de 450 mg de vedolizumab. Cada sujeto sirvió como su propio control.
Se seleccionó un punto temporal de 5 semanas basándose en un estudio previo que mostró que los pacientes con EM tratados con natalizumab demostraron efectos en la relación de linfocitos CD4+:CD8+ en el LCR y una reducción en el número de lesiones cerebrales después de una sola dosis (Stuve et al.Arch Neurol.
2006;63:1383-1387; Stuve et al.Ann Neurol.2006;59:743-747. Miller et al.N Engl J Med.2003;348(1):15-23); y también porque a las 5 semanas, una dosis de 450 mg de vedolizumab es suficiente para saturar el objetivo y proporciona concentraciones séricas que superan los niveles valle en estado estacionario estimados asociados con la pauta de dosis de fase 3 de 300 mg cada 4 semanas.
Se obtuvieron aproximadamente 15 ml de LCR de cada sujeto para la inmunofenotipado. Se incluyeron muestras de LCR para análisis si cumplían los siguientes criterios: <10 RBC/pl por muestra (para minimizar la contaminación de la sangre periférica); resultado negativo del cultivo de LCR; número adecuado de linfocitos T en cada muestra de citometría de flujo; y sin detección de anticuerpos séricos contra vedolizumab.
La mediana de la semana 5 (34,80 pg/ml) y las concentraciones séricas de vedolizumab en sujetos individuales (intervalo 24,9-47,9 pg/ml) fueron más altas que la concentración valle en estado estacionario proyectada (~24 pg/ml) para la pauta de dosis de fase 3. Se observó un alto grado (>90%) de saturación del receptor a4p7 en la semana 5, medido por MAdCAM-1-Fc, lo que indica la saturación de vedolizumab de su objetivo en el momento de la evaluación del criterio de valoración.
No se detectó vedolizumab en ninguna muestra de LCR (límite de detección = 0,125 pg/ml).
Efecto en el número y la relación de linfocitos T CD4+ y CD8+
Vedolizumab no redujo significativamente la relación CD4+:CD8+ (Tabla 25).
Ninguno de los sujetos tenía una relación CD4+:CD8+ posterior a la dosis <1 (p < 0,0001 (prueba t unilateral)). Vedolizumab no redujo significativamente el número de linfocitos T CD4+ o CD8+ en el LCR. Además, no hubo cambios significativos en el % de linfocitos T CD4+ y CD8+ en el LCR (Tabla 26). Además, no se observaron cambios significativos en los leucocitos de sangre periférica ni en los linfocitos T de memoria CD4+ y CD8+ (Tabla 27).
Tabla 25: Efecto del tratamiento en la relación CD4+:CD8+ en el LCR (población evaluable, n=13)
Tabla 26: Efecto del tratamiento en el recuento de linfocitos CD4+ y CD8+ en el LCR (población evaluable, n = 13)
Tabla 27: Recuentos de linfocitos T de memoria en sangre periférica (RO+) (población evaluable, n = 13)
Resumen
Vedolizumab no afectaba a los recuentos de células CD4+ y CD8+ en LCR ni a la relación CD4+:CD8+ en voluntarios sanos después de una dosis única de 450 mg. Ninguno de los sujetos presentó una reducción en la relación CD4+:CD8+ en el LCR posterior a la dosis a menos de 1. No se detectó vedolizumab en el LCR. Además, no se observaron cambios en los leucocitos totales o en los subconjuntos de linfocitos T de memoria CD4+ y CD8+ en la sangre periférica. La saturación del objetivo (a4p7) en sangre se produjo en todos los sujetos en el momento de la evaluación del criterio de valoración. Los niveles y la relación de linfocitos CD4+ y CD8+ en el LCR fueron similares a los descritos previamente en la bibliografía.
Estos resultados son consistentes con la falta de efecto de vedolizumab tanto en la vigilancia inmunitaria fisiológica del SNC como en la inflamación patológica del SNC de los monos (véase Ejemplo 4).
Ejemplo 7 (Referencia): Experiencia clínica a largo plazo con vedolizumab para el tratamiento de la EII Se completó un estudio de extensión de seguridad sin ocultación de fase 2 para evaluar la farmacocinética (PK), farmacodinamia (PD), seguridad y eficacia a largo plazo de vedolizumab. Los pacientes tenían de 18 a 75 años de edad y habían participado previamente en un estudio de PK/PD/seguridad en pacientes con colitis ulcerosa o habían presentado síntomas de EII durante al menos 2 meses, confirmados por vía endoscópica y/o histopatológica y/o radiológica dentro de los 36 meses desde la selección.
Todos los pacientes recibieron una pauta posológica intravenosa de 2 mg/kg o 6 mg/kg de vedolizumab (anticuerpo 5 mg/ml, citrato/ácido cítrico 20 mM, cloruro de sodio 125 mM, polisorbato 80 al 0,05%, pH 6,0 (almacenado a largo plazo a -70°C y hasta 3 meses a -20°C)) los días 1, 15 y 43, seguido de una dosis cada 8 semanas hasta un total de 78 semanas. Los pacientes eran pacientes con colitis ulcerosa o enfermedad de Crohn sin tratamiento previo o pacientes con colitis ulcerosa que habían participado en un ensayo clínico anterior.
Se usaron la eficacia/calidad de vida (CdV); puntuación parcial de Mayo (PMS), índice de actividad de la enfermedad de Crohn (CDAI) y cuestionario de enfermedad inflamatoria intestinal (IBDQ) para evaluar los resultados del estudio.
Resultados de PK
Las concentraciones medias de vedolizumab antes de la infusión eran proporcionales a la dosis y se mantuvieron estables y detectables durante todo el estudio.
Resultados de PD
Los receptores (%ACT-1 [CD4+CD45RO ALTO] y % MADCAM+[CD4+CD45RO ALTO] se inhibieron casi por completo durante todo el período de estudio en todos los niveles de dosis.
Puntuación parcial de Mayo
La PMS media inicial era mayor para los pacientes con colitis ulcerosa sin tratamiento previo (5,4) que en los pacientes de continuación con colitis ulcerosa (2,3). El día 43, la PMS media mostró una disminución pronunciada tanto para los pacientes con colitis ulcerosa de continuación como aquellos sin tratamiento previo. El día 155, las puntuaciones medias de los dos grupos eran similares. La PMS media continuó disminuyendo hasta el día 267 y se estabilizó a partir de entonces.
Índice de Actividad de la Enfermedad de Crohn
El CDAI medio de los pacientes con EC disminuyó de 294,6 al inicio a 237,7 el día 43, y continuó disminuyendo hasta el día 155 (156,1).
IBDQ
Los pacientes de continuación con colitis ulcerosa tuvieron las puntuaciones medias más altas del IBDQ al inicio. El día 43, las puntuaciones medias del IBDQ habían aumentado en los tres grupos de enfermedades. Las puntuaciones medias del IBDQ continuaron aumentando con el tiempo en los tres grupos de enfermedades, alcanzando un máximo el día 155 para los pacientes con enfermedad de Crohn y el día 491 para los pacientes con colitis ulcerosa sin tratamiento previo y los pacientes de continuación con colitis ulcerosa.
Proteína C reactiva
Tanto los pacientes de continuación con colitis ulcerosa como los de enfermedad de Crohn mostraron niveles medios de CRP menores hasta el día 155 y luego se estabilizaron. Los pacientes con colitis ulcerosa sin tratamiento previo tenían un nivel medio de<c>R<p>más bajo al inicio que los pacientes de continuación con colitis ulcerosa (2,28 frente a 7,09). Los niveles medios de CRP de los pacientes con colitis ulcerosa sin tratamiento previo se mantuvieron relativamente constantes en todos los puntos temporales evaluados.
Otros resultados de seguridad
No se comunicaron infecciones oportunistas sistemáticas (incluida PML) durante el estudio. Un paciente dio positivo para viremia por JC en un solo punto temporal, aunque dio negativo para JCV en todos los demás puntos temporales. Tres de 72 pacientes (4%) tuvieron resultados HAHA positivos (dos de ellos fueron positivos de forma transitoria). El estudio no mostró evidencia de toxicidad hepática, linfocitosis o linfopenia, o de cualquier otro cambio de laboratorio asociado al medicamento.
Conclusiones
Vedolizumab administrado en 2,0 o 6,0 mg/kg una vez cada 8 semanas durante hasta 78 semanas logró saturaciones de los receptores objetivo, se asoció con disminuciones medias duraderas en la actividad de la enfermedad y mejores puntuaciones en el IBDQ, fue generalmente seguro y bien tolerado, y demostró una inmunogenicidad aceptable.
Ejemplo 8: Inducción de respuesta y remisión en pacientes con enfermedad de Crohn de moderada a gravemente activa
Se completó un estudio multicéntrico, aleatorizado, con doble ocultación y controlado con placebo para evaluar el efecto de inducción de vedolizumab en dosis de 300 mg (reconstituido a partir de una formulación de anticuerpo 60 mg/ml en histidina 50 mM, arginina 125 mM, polisorbato 80 al 0,06%, sacarosa al 10%, a pH 6,3 que estaba liofilizada), en pacientes con resultado insatisfactorio al antagonista del TNFa la semana 6 (después de 2 dosis-- semanas 0 y 2) y la semana 10 (después de 3 dosis). El estudio consistía en 416 pacientes, 75% de los cuales tuvieron resultado insatisfactorio con antagonistas del TNFa y 25% de los cuales no habían recibido tratamiento previo con TNFa. Los datos demográficos y la medicación concomitante para la EII estaban equilibradas entre los grupos de tratamiento. Las características iniciales de la enfermedad también estaban equilibradas entre los grupos de tratamiento, excepto la actividad de la enfermedad al inicio.
El criterio de valoración principal designado para el estudio fue la remisión en la semana 6 (%) en la población con resultado insatisfactorio al antagonista anti-TNF-a. Los criterios de valoración secundarios clave que se evaluaron (procedimiento de ensayo secuencial) fueron: remisión la semana 6 (%) en la población general, remisión la semana 10 (%) en la población con resultado insatisfactorio al antagonista anti-TNF-a y la general (usando el procedimiento de Hochberg), remisión sostenida las semanas 6 y 10 (%) en la población con resultado insatisfactorio al antagonista anti-TNF-a y la general (usando el procedimiento de Hochberg), y respuesta mejorada la semana 6 (%) en la población con resultado insatisfactorio al antagonista anti-TNF-a.
Tabla 28: CDAI al inicio
Tabla 29: Resultados del estudio de inducción: criterios de valoración principales y secundarios clave
Tabla 30: Resultados en pacientes sin tratamiento previo con antagonistas anti-TNF-a (n=101,24% del total)
Tabla 31: Resultados del estudio: remisión clínica las semanas 6 y 10, subgrupo clave - Con resultados insatisfactorios al tratamiento previo, ITT general
__________
El estudio mostró que los pacientes con resultado insatisfactorio al antagonista del TNF-a necesitaron 3 dosis para la inducción de la remisión. Las tasas de remisión en pacientes con resultado insatisfactorio al antagonistas del TNF-a aumentaron entre la semana 6 y la semana 10, pero solo para el grupo de vedolizumab (no placebo). Las tasas de remisión de los pacientes sin tratamiento previo con antagonistas del TNF-a no aumentaron sustancialmente entre la semana 6 y 10. De la población con resultado insatisfactorio al antagonista del TNF-a con un alto grado de gravedad de la enfermedad, el 43% nunca respondió a un antagonista del TNF-a y el 45% perdió la respuesta.
Ejemplo 9: Inducción y mantenimiento de la respuesta y remisión en pacientes con colitis ulcerosa de moderada a gravemente activa
Un ensayo único que comprende dos estudios aleatorizados, con doble ocultación y multicéntricos diseñados para evaluar la inducción y el mantenimiento de la respuesta y la remisión en pacientes con colitis ulcerosa de moderada a gravemente activa. Las características demográficas y de la enfermedad al inicio eran comparables en todos los grupos de tratamiento.
El estudio de inducción, usando administración intravenosa, comparó placebo frente a vedolizumab, en una dosis de 300 mg reconstituida a partir de una formulación liofilizada de anticuerpo 60 mg/ml en histidina 50 mM, arginina 125 mM, polisorbato 80 al 0,06%, sacarosa al 10%, a pH 6,3, con un punto final a las 6 semanas después de 2 dosis de vedolizumab.
El estudio de mantenimiento, usando la misma formulación y vía de administración que el estudio de inducción, comparó placebo frente a vedolizumab administrado cada cuatro semanas, y placebo frente a vedolizumab administrado cada ocho semanas. Cada paciente tenía 18-80 años de edad, había sido diagnosticado con colitis ulcerosa de moderada a gravemente activa, había demostrado durante los 5 años anteriores una respuesta inadecuada, pérdida de respuesta o intolerancia a al menos una terapia convencional (p. ej., corticosteroides); y podía estar recibiendo una dosis terapéutica de terapias convencionales para la EII. El punto final de este estudio fue a las 52 semanas, analizando la población que responde a la inducción. Ambas fases del ensayo cumplieron sus criterios principales de valoración, es decir, la respuesta clínica en la inducción y la remisión clínica en el mantenimiento.
Se recogieron muestras de sangre para medir las concentraciones de vedolizumab durante el estudio. La concentración sérica media de vedolizumab al final de la fase de inducción era de 20 a 30 pg/ml. Las concentraciones séricas valle medias de vedolizimab en estado estacionario después de infusión IV de una dosis de 300 mg de 30 minutos estaban entre 9 a 13 pg/ml para la pauta de cada 8 semanas y de entre 35 a 40 pg/ml para la pauta de cada 4 semanas. Al final de la infusión, las concentraciones plasmáticas medianas de vedolizimab estaban entre 98 y 101 pg/ml para la pauta de cada 8 sem. (8 semanas) y aproximadamente 129 y 137 pg/ml para la pauta de cada 4 sem. (4 semanas).
En las Tablas 32-35 se presentan resúmenes de las respuestas de los estudios de inducción y mantenimiento. Una proporción significativamente mayor de pacientes tratados con vedolizumab lograron respuesta clínica, remisión y curación de la mucosa a las 6 semanas, en comparación con el placebo (Tabla 32). El 39% de la población con intención de tratar en la fase de inducción tenía resultado insatisfactorio previo al anti-TNFa. Las tasas de respuesta clínica y de remisión fueron más altas en los pacientes que recibieron vedolizumab que en los que recibieron placebo, tanto entre aquellos con resultado insatisfactorio previo al anti-TNF como entre aquellos sin exposición previa a anti-TNF. En los análisis preliminares hasta la semana 6, las tasas de acontecimientos adversos (AA), AA graves y acontecimientos adversos que llevaron a la interrupción del estudio fueron más altas en el grupo de placebo que en el grupo de vedolizumab. Una proporción significativamente mayor de pacientes que recibieron vedolizumab que de pacientes que recibieron placebo lograron remisión clínica, curación de la mucosa y remisión sin corticosteroides a las 52 semanas y respuesta y remisión duraderas (Tabla 33). El 32% de la población del estudio de mantenimiento tenía resultado insatisfactorio previo al anti-TNFa. Las tasas de remisión clínica y respuesta clínica duradera fueron mayores con vedolizumab que con placebo tanto en pacientes con resultado insatisfactorio al TNF como en pacientes sin tratamiento previo con TNF. En la población de seguridad (N = 895) durante las semanas 0-52, las tasas de acontecimientos adversos (AA), Aa graves e infecciones graves fueron similares entre los grupos de vedolizumab y placebo. No se observó aumento en las tasas de infecciones oportunistas o entéricas en el grupo de vedolizumab.
Tabla 32: Resultados del estudio de inducción-Criterios de valoración principales y secundarios clave
Tabla 33: Resultados del estudio de mantenimiento - Criterios de valoración principales y secundarios clave
Tabla 34: Estudio de inducción: Respuesta clínica y remisión a las 6 semanas en pacientes con resultado insatisfactorio previo al antagonista anti-TNF-a y sin exposición al anti-TNF, población ITT
Tabla 35: Remisión clínica y respuesta clínica duradera a las 52 semanas: pacientes con resultado insatisfactorio previo al antagonista anti-TNF-a o sin exposición al antagonista anti-TNF-a Población ITT
Ejemplo 10: Inducción y mantenimiento de la respuesta y la remisión en pacientes con enfermedad de Crohn de moderada a gravemente activa
Un ensayo único que comprende dos estudios aleatorizados, con doble ocultación y multicéntricos diseñados para evaluar la inducción y el mantenimiento de la respuesta y la remisión en pacientes con enfermedad de Crohn de moderada a gravemente activa. Las características demográficas y de la enfermedad al inicio eran comparables en todos los grupos de tratamiento.
El estudio de inducción, usando administración intravenosa, comparó placebo frente a vedolizumab, en una dosis de 300 mg reconstituida a partir de una formulación liofilizada de anticuerpo 60 mg/ml en histidina 50 mM, arginina 125 mM, polisorbato 80 al 0,06%, sacarosa al 10%, a pH 6,3, con un punto final a las 6 semanas después de 2 dosis de vedolizumab.
El estudio de mantenimiento, usando la misma formulación y vía de administración que el estudio de inducción, comparó placebo frente a vedolizumab administrado cada cuatro semanas, y placebo frente a vedolizumab administrado cada ocho semanas. El punto final de este estudio fue a las 52 semanas, analizando la población que responde a la inducción.
Sorprendentemente, este estudio mostró que los grupos de cada 4 y cada 8 semanas daban resultados muy similares. En las Tablas 36-39 se presentan resúmenes de las respuestas de los estudios de inducción y mantenimiento. Una proporción significativamente mayor de pacientes tratados con vedolizumab lograron remisión clínica y una mejor respuesta, en comparación con el placebo (Tabla 36). Las tasas de remisión y respuesta clínica mejorada fueron más altas en los pacientes que recibieron vedolizumab que en los que recibieron placebo, tanto entre aquellos con resultado insatisfactorio previo al anti-TNF como entre aquellos sin exposición previa al anti-TNF. Las tasas de acontecimientos adversos (AA), AA graves e infecciones graves eran similares entre los grupos de vedolizumab y placebo. No se observó aumento en las tasas de infecciones oportunistas o entéricas en el grupo de vedolizumab.
Tabla 36: Resultados del estudio de inducción -- Criterios de valoración principales y secundarios
Tabla 37: Resultados del estudio de mantenimiento - Criterios de valoración principales y secundarios clave
Tabla 38: Remisión clínica y respuesta mejorada a las 6 semanas en pacientes con resultado insatisfactorio previo al antagonista anti-TNF-a y sin exposición al anti-TNF, población ITT
Respuesta mejorada (%) 30,3 42,2 11,9 (-1,9, 25,8)
Tabla 39: Remisión clínica y respuesta mejorada a las 52 semanas: pacientes con resultado insatisfactorio previo al antagonista anti-TNF-a o sin exposición al antagonista anti-TNF-a Población ITT
________________
Tabla 40. Resumen de secuencias
Aunque esta invención se ha mostrado y descrito particularmente con referencias a realizaciones preferidas de la misma, los expertos en la técnica entenderán que se pueden realizar en la misma diversos cambios en la forma y los detalles, con la condición de que estén abarcados por las reivindicaciones adjuntas.

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Un anticuerpo humanizado anti-a4p7 para su uso en un método para el tratamiento terapéutico de la enfermedad inflamatoria intestinal, en donde el anticuerpo humanizado anti-a4p7 se va a administrar a un paciente que padece enfermedad inflamatoria intestinal, en donde el anticuerpo humanizado anti-a4p7 se administra al paciente de acuerdo con la siguiente pauta posológica:
a. una dosis inicial de 300 mg del anticuerpo humanizado anti-a4p7 como una infusión intravenosa;
b. seguido de una segunda dosis posterior de 300 mg del anticuerpo humanizado anti-a4p7 como una infusión intravenosa a las dos semanas después de la dosis inicial;
c. seguido de una tercera dosis posterior de 300 mg del anticuerpo humanizado anti-a4p7 como una infusión intravenosa a las seis semanas después de la dosis inicial;
d. seguido de una cuarta dosis y posteriores de 300 mg del anticuerpo humanizado anti-a4p7 como una infusión intravenosa cada cuatro semanas o cada ocho semanas después de la tercera dosis posterior del anticuerpo humanizado según sea necesario;
en donde la pauta posológica induce una respuesta clínica y remisión clínica en la enfermedad inflamatoria intestinal del paciente;
en donde el anticuerpo humanizado anti-a4p7 es vedolizumab, y
además en donde la enfermedad inflamatoria intestinal es colitis ulcerosa de moderada a gravemente activa o enfermedad de Crohn de moderada a gravemente activa.
2. El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de la reivindicación 1, en donde el paciente tenía una falta de respuesta adecuada, pérdida de respuesta o era intolerante al tratamiento con al menos uno de un inmunomodulador, un antagonista del factor de necrosis tumoral alfa o combinaciones de los mismos.
3. El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de la reivindicación 2, en donde el inmunomodulador se selecciona del grupo que consiste en: azatioprina oral, 6-mercaptopurina y metotrexato.
4. El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de la reivindicación 1, en donde la enfermedad inflamatoria intestinal es colitis ulcerosa de moderada a gravemente activa.
5. El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de la reivindicación 4, en donde la pauta posológica da como resultado la curación de la mucosa en pacientes que padecen colitis ulcerosa de moderada a gravemente activa.
6. El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de la reivindicación 1, en donde la enfermedad inflamatoria es la enfermedad de Crohn de moderada a gravemente activa.
7. El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de la reivindicación 6, en donde la pauta posológica da como resultado la inducción y el mantenimiento de la respuesta y la remisión en pacientes con enfermedad de Crohn de moderada a gravemente activa.
8. El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de cualquier reivindicación precedente, en donde (i) la pauta posológica da como resultado una reducción, eliminación o reducción y eliminación del uso de corticosteroides por el paciente y/o (ii) el paciente recibió previamente tratamiento con al menos un corticosteroide para la enfermedad inflamatoria intestinal.
9. El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de la reivindicación 8, en donde el paciente tenía una respuesta inadecuada a los corticosteroides, una pérdida de respuesta a los corticosteroides o intolerancia a los corticosteroides.
10. El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de cualquier reivindicación precedente, en donde la inmunoglobulina humanizada o su fragmento de unión al antígeno se administra al paciente en 30 minutos.
11. El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de cualquier reivindicación precedente, en donde la pauta posológica no altera la relación de CD4 a CD8 en el líquido cefalorraquídeo de los pacientes que reciben dicho tratamiento.
12. El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de cualquier reivindicación precedente, en donde el paciente es una persona de 65 años de edad o mayor y además en donde el paciente no requiere ningún ajuste de la pauta posológica.
13. El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de cualquier reivindicación precedente, en donde el paciente está recibiendo una dosis terapéutica de terapia convencional para la enfermedad inflamatoria intestinal.
14. El anticuerpo humanizado anti-a4p7 para el uso de cualquier reivindicación precedente, en donde se administra una dosis de 300 mg al paciente humano cada cuatro semanas si el paciente humano experimenta un retorno de uno o más síntomas asociados con la colitis ulcerosa o la enfermedad de Crohn después de la administración del anticuerpo humanizado anti-a4p7 cada ocho semanas.
15. Una formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo humanizado anti-a4p7 como se define en la reivindicación 1 para el uso según la reivindicación 1.
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