ES3027943T3 - Isocyclosporin a for topical treatment of ocular diseases - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a isociclosporina A, sales y composiciones oftálmicas de la misma para uso tópico oftálmico en la prevención o tratamiento en un individuo de una enfermedad inflamatoria y/o autoinmune oftálmica, preferiblemente seleccionada entre enfermedades inflamatorias y/o autoinmunes de la córnea y de la superficie ocular y enfermedades inflamatorias del margen del párpado. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Isociclosporina A para el tratamiento tópico de enfermedades oculares

Campo de la invención

La presente invención se refiere a isociclosporina A, sales y composiciones farmacéuticas de la misma para la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune.

Estado de la técnica

La ciclosporina A es un undecapéptido cíclico, lipofílico y neutro obtenido del hongoTolypocladium Inflatum,que contiene siete residuos N-metil-aminoácido y el aminoácido inusual (4R)-4-([E]-2-butenil)-4-N-metil-(L)-treonina (MeBmt) en la posición 1.

La ciclosporina fue aprobada por primera vez para su uso como agente inmunosupresor en la prevención del rechazo de órganos trasplantados.

En oftalmología, la ciclosporina A se investigó inicialmente para su administración después del trasplante de injerto corneal, aunque posteriormente se demostró que también resultaba eficaz en una serie de enfermedades inflamatorias del ojo, tales como la uveítis, la queratoconjuntivitis vernal (QCV), la queratoconjuntivitis alérgica (QCA) y la enfermedad del ojo seco (EOS) (Feroze et al., J Ophthalmol 2019, 31: 182-190; Prabhu et al., British Journal of Ophthalmology 2016, 100: 345-347).

Debido a su hidrofobicidad, la molécula se administraba inicialmente también para indicaciones oftálmicas por vías sistémicas, tales como por inyección intravenosa o administración oral. Estas vías de administración permitían alcanzar una concentración terapéutica del principio activo en los líquidos intraoculares (humor acuoso o vítreo) y en los órganos o anexos extraoculares (córnea, conjuntiva y glándulas lagrimales). Sin embargo, la aparición de efectos secundarios sistémicos graves, tales como la nefrotoxicidad y la hipertensión, llevó al estudio de formulaciones adecuadas para la administración tópica de la molécula (Lallemand et al., European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 2003, 56: 307-318; documento n.° GB2224205A).

El desarrollo de formulaciones de gotas oftálmicas de ciclosporina A para la utilización oftálmica tópica se ha visto dificultado por la hidrofobicidad y la extremadamente baja solubilidad acuosa (6,6 mg/ml) de la molécula, las cuales no permiten la preparación de formulaciones basadas en los vehículos oftálmicos acuosos utilizados habitualmente.

La ciclosporina A se ha formulado inicialmente en forma de soluciones en solventes a base de aceite, tales como el aceite de ricino o el aceite de maíz, aunque estos han sido sustituidos posteriormente por emulsiones de aceite en agua y soluciones a base de micelas (de Oliveira et al, Clinical Ophthalmology 2019:13 1115-1122).

Sin embargo, se ha encontrado que la presencia necesaria de surfactante en estas últimas formulaciones presenta efectos perjudiciales en la córnea y resulta en visión borrosa. Además, aunque las emulsiones presentan la ventaja de una rápida dispersión ocular al aplicarse, la baja biodisponibilidad de los fármacos lipofílicos a partir de emulsiones sigue limitando la cantidad de principio activo disponible en un entorno ocular acuoso que de por sí ya resulta complicado (Jerkins et al., Clinical Ophthalmology 2020:14481-489).

La baja solubilidad de la ciclosporina y la presencia en la mayoría de las formulaciones oftálmicas actualmente disponibles de surfactantes que presentan efectos perjudiciales sobre la córnea, son limitaciones clave para la utilización de la ciclosporina en el contexto de tratamientos oftalmológicos, lo que posiblemente también explicaría la baja tolerancia y elevada variabilidad en la respuesta informada en ensayos clínicos.

La isociclosporina A es un isómero de la ciclosporina A que se diferencia de esta última en que el residuo (N-metil-(4R)-4-butil-2E-en-1-il-4-metil-(L)treonilo) en la posición 1 está unido al residuo en la posición 11 a través del átomo 3'-O en lugar del átomo de nitrógeno. La isociclosporina A se ha identificado originalmente como un producto de degradación reordenado formado por el tratamiento con ácido de la ciclosporina A. Se ha descrito que la isociclosporina A carece de cualquier actividad biológicaper sey, cuando se administra sistémicamente, se convierte muy lentamentein vivoen la forma activa correspondiente de la ciclosporina (documento n.° WO1993/017039A1, páginas 5 y 15). En particular, se ha mostrado que la molécula experimenta una conversión cuantitativa en ciclosporina A a un pH superior a 5. En detalle, la tasa de isomerización de la isociclosporina es máxima a un pH entre 8 y 10 (Oliyai R, Stella VJ, Pharm Res, 1992, May;9(5):617-22), mientras que la tasa de conversión más baja se observa en el intervalo de pH de entre 6 y 8. En particular, a un pH de 7.4, la conversión es mínima, con una semivida de conversión de 21,7 horas (ver Bundgaard et al, International Journal of Pharmaceutics, 82 (1992):85-90). Bundgaard et al. ni dan a conocer una composición que contenga isociclosporina A adecuada para la administración oftálmica tópica ni que la isociclosporina A resulte adecuada para la utilización en el tratamiento de enfermedades oftálmicas inflamatorias y/o autoinmunitarias.

En vista de la capacidad de conversión lenta en ciclosporina A y de la mayor solubilidad en agua, se ha propuesto la isociclosporina A para la utilización como profármaco de la ciclosporina A para la administración oral, con el fin de mejorar la estabilidad y evitar los efectos secundarios asociados a las concentraciones pico de sangre de la ciclosporina.

A este respecto, el documento n.° WO 1993017039A1 describe sales de adición de ácido de isociclosporinas, incluyendo la isociclosporina A, que proporcionan características galénicas mejoradas, tales como mayores solubilidad y estabilidad. El documento da a conocer que estas sales resultan particularmente útiles como profármacos para la administración oral de la ciclosporina, ya que, cuando se administran por vía oral, liberan la molécula activa a una tasa lenta, manteniendo niveles constantes de ciclosporina en la sangre. Dicho documento ni da a conocer ni sugiere un uso oftálmico tópico de la isociclosporina A.

El documento n.° US2019/194258A1 se refiere a un método para controlar las impurezas en un gel ocular de ciclosporina A. La isociclosporina A se menciona solo como una de las seis impurezas conocidas, pero no se da a conocer ni se sugiere la utilización de la misma para el tratamiento de enfermedades oftálmicas inflamatorias y/o autoinmunitarias. Hasta ahora, el uso oftálmico local de isociclosporina A se ha considerado no viable debido a la lenta tasa de conversión de la molécula en ese entorno.

De hecho, la tasa de interconversión de isociclosporina A en ciclosporina A es tan baja que durante el tiempo de residencia de la molécula en la superficie ocular, prácticamente no se forma nada de ciclosporina A. Tal como se ha discutido anteriormente, se ha descrito que con valores de pH entre 6 y 8 se produce una conversión muy lenta y, en particular, a un pH de 7,4, el tiempo para el 50 % de conversión de la isociclosporina A en ciclosporina A es de 21,7 horas (Bundgaard et al., International Journal of Pharmaceutics, 82 (1992): 85-90).

En vista de lo anterior, de acuerdo con los conocimientos del solicitante, la isociclosporina A nunca ha sido considerada una alternativa viable a la ciclosporina A para aplicaciones oftálmicas locales, ya que no se esperaba que ejerciera ninguna actividad farmacológica.

Descripción resumida de la invención

El solicitante ahora ha encontrado inesperadamente que la isociclosporina A, cuando se administra por vía tópica en el ojo, muestra inesperadamente una actividad biológica que es independiente de su conversión a ciclosporina A. Tal como se ha discutido anteriormente, este hallazgo es completamente impredecible a partir de la literatura previa.

Incluso más inesperadamente, tal como se muestra en la sección experimental mediante ensayosin vivollevados a cabo en un modelo animal relevante de enfermedad inflamatoria de la superficie ocular, el solicitante ha observado que el tratamiento con isociclosporina A muestra una mayor eficacia sobre varios parámetros farmacológicamente relevantes que la ciclosporina A.

Los presentes inventores han encontrado, además, que la isociclosporina A es capaz de inhibir la actividad de los canales iónicos TRPV3 y TRPML2 que han sido descritos en la literatura como implicados en la sintomatología de las enfermedades inflamatorias y alérgicas (Takahiro Yamada et al., Exp Eye Res. 2010 Jan;90(1):121-129; MP Cuajungco et al, Pflugers Arch. 2016 Feb;468(2):177-92 y Eva Plesch et al, eLife. 2018; 7: e39720). Además, a diferencia de la ciclosporina A, la isociclosporina A no estimula la hiperproliferación de células epiteliales inducida por la activación del canal TRPC4, lo cual no resulta deseable en las enfermedades oculares inflamatorias y alérgicas. De acuerdo con lo anterior, un primer objetivo de la invención es la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma para el uso oftálmico tópico en la prevención o tratamiento de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune.

Preferentemente, dicha enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune se selecciona de enfermedades inflamatorias y/o autoinmunes de la córnea y de la superficie ocular, así como enfermedades inflamatorias del borde palpebral.

Un segundo objetivo de la invención es una formulación oftálmica que comprende isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma y por lo menos un excipiente o diluyente oftálmicamente aceptable para uso tópico oftálmico en la prevención o tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune.

Descripción de las figuras

La figura 1 muestra el porcentaje de fluorescencia expresado como una media de los valores medidos para cada grupo los días 0, 9, 11, 17, 22 y 25 después del tratamiento con escopolamina, tal como se describe en el Ejemplo 1.

La figura 2 muestra los mm de secreción lagrimal medidos en los tres grupos experimentales 22 días (panel superior) y 25 días (panel inferior) después del tratamiento con escopolamina, tal como se describe en el Ejemplo 1.

Descripción detallada de la invención

Un primer objetivo de la invención es la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma para el uso oftálmico tópico en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune.

Preferentemente, dicha enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune se selecciona de enfermedades inflamatorias y/o autoinmunes de la córnea y de la superficie ocular, así como enfermedades inflamatorias del borde palpebral.

Las enfermedades inflamatorias y/o autoinmunitarias de la córnea y de la superficie ocular son enfermedades caracterizadas por el daño al epitelio que recubre la córnea y la conjuntiva, inducido por el estado inflamatorio local. Las enfermedades inflamatorias del borden palpebral son enfermedades caracterizadas por una inflamación común y persistente de los párpados.

En particular, según la invención, dicha enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune se selecciona de la queratoconjuntivitis vernal (QCV), la queratoconjuntivitis atópica (QCA), la conjuntivitis alérgica, la rosácea ocular, la uveítis, la enfermedad del ojo seco (EOS), el pénfigo cicatricial ocular (POC), la enfermedad del injerto contra huésped (EICH) ocular, las úlceras corneales inmunes, el pterigión inflamado y la blefaritis crónica.

Según la presente invención, dicha isociclosporina A o sal de la misma es para la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune, en la que la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma se administra tópicamente al ojo de dicho individuo. Según la presente invención, el término "prevención" se refiere a la prevención parcial o completa de un trastorno o acontecimiento patológico, antes de que se establezca u ocurra. Según una realización de la invención, la prevención es una prevención completa, en la que el trastorno o acontecimiento patológico resulta completamente bloqueado. Según una realización alternativa de la invención, la prevención es una prevención parcial, en la que se retrasa el desarrollo del trastorno o acontecimiento patológico y/o se reduce su gravedad.

Según la presente invención, el término "tratamiento" se refiere a la reversión completa o a la reducción de la gravedad o progresión de un trastorno o acontecimiento patológico, después de que este ya se haya establecido u ocurrido. Según la presente invención, el término "individuo" se refiere a un ser humano o a un animal, preferentemente a un ser humano.

Preferentemente, la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma está destinada a la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune, en la que dicha enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune que puede tratarse utilizando la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma es una enfermedad oftálmica que muestra mejoría o recuperación tras el tratamiento con cortisona y corticoesteroides similares.

Las enfermedades inflamatorias y/o autoinmunes de la superficie ocular y corneal que pueden tratarse con isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma se seleccionan preferentemente de queratoconjuntivitis vernal (QCV), queratoconjuntivitis atópica (QCA), conjuntivitis alérgica, rosácea ocular, uveítis, enfermedad del ojo seco (EOS), penfigoide ocular cicatricial (POC), enfermedad del injerto contra el huésped (EICH) ocular y úlceras corneales inmunes. Preferentemente, dicha conjuntivitis alérgica es una conjuntivitis alérgica estacional o perenne.

Las enfermedades inflamatorias del borde palpebral que pueden tratarse con isociclospina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma son, por ejemplo, el pterigión inflamado y la blefaritis crónica.

Según la invención, preferentemente, dicha isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma está destinada a la utilización oftálmica tópica en la prevención y el tratamiento de una, dos o más de las enfermedades oftálmicas inflamatorias y/o autoinmunes anteriormente indicadas.

Según la presente invención, dicha isociclosporina A o dicha sal está destinada a la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune, en la que la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma se administra tópicamente a la superficie ocular del ojo de dicho individuo o en el borde palpebral.

Según una realización preferente, dicha isociclosporina A o dicha sal de la misma está destinada a la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune, en la que la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma se aplica tópicamente sobre la superficie ocular del ojo de dicho individuo mediante una formulación oftálmica líquida o semilíquida, tal como se describirá posteriormente.

Preferentemente, dicha isociclosporina A o dicha sal de la misma está destinada a la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune, en la que la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma se administra una, dos, tres, cuatro veces o más al día, dependiendo de las circunstancias médicas y la gravedad de la enfermedad a tratar.

Según una realización preferente de la invención, dicha sal oftálmicamente aceptable es una sal de adición de ácido de la isociclosporina A.

Preferentemente, dicha sal oftálmicamente aceptable de isociclosporina A se selecciona de las sales acetato, adipato, ascorbato, benzoato, bencenosulfonato, bicarbonato, bisulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, ciclohexilsulfamato, etanosulfonato, fumarato, glutamato, glicolato, hemisulfato, 2-hidroxietilsulfonato, heptanoato, hexanoato, cloruro, hidrobromuro, hidroyoduro, hidroximaleato, lactato, malato, maleato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nitrato, oxalato, pamoato, persulfato, fenilacetato, fosfato, difosfato, picrato, pivalato, propionato, quinato, salicilato, estearato, succinato, sulfamato, sulfanilato, sulfato, tartrato, tosilato (p-toluenosulfonato), trifluoroacetato y undecanoato de sales de isociclosporina A.

Más preferentemente, dicha sal es una sal hidrocloruro o trifluoroacetato de isociclosporina A.

Las sales de adición de ácido de la invención se forman preferentemente en el átomo de nitrógeno alfa del residuo en la posición 1 de la isociclosporina A.

Los métodos de preparación de las sales según la invención son bien conocidos y se describen, por ejemplo, en la solicitud de patente n.° WO1993/017039A1.

Un segundo objetivo de la invención es una formulación oftálmica que comprende isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma, tal como se ha definido anteriormente, como ingrediente activo y por lo menos un excipiente o diluyente oftálmicamente aceptable para la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune.

Según una realización preferente, dicha formulación oftálmica es una formulación oftálmica líquida, preferentemente una formulación líquida de gotas oculares.

La formulación oftálmica líquida anteriormente indicada puede ser una formulación líquida monofásica, preferentemente una solución, más preferentemente una solución acuosa o una formulación líquida bifásica, preferentemente una emulsión, más preferentemente una microemulsión.

La formulación oftálmica líquida anteriormente indicada contiene preferentemente una solución salina fisiológica como vehículo.

Según otra realización preferente, dicha formulación oftálmica es una formulación oftálmica semisólida, preferentemente una crema, pomada o gel.

Según todavía otra realización preferente, dicha formulación oftálmica es una formulación oftálmica sólida adecuada para la preparación extemporánea de una formulación oftálmica líquida o semisólida, tal como se ha descrito anteriormente, mediante la adición de un diluyente oftalmológicamente aceptable antes de la administración.

Preferentemente, dicha formulación oftálmica sólida se encuentra en forma de unos polvos, más preferentemente en forma de unos polvos liofilizados.

Preferentemente, dicha formulación oftálmica líquida o semisólida presenta un pH comprendido entre 6 y 8, más preferentemente entre 6,4 y 7,8, todavía más preferentemente entre 6,5 y 7,5. De hecho, es conocido que bajo dichas condiciones, la tasa de interconversión de isociclosporina A en ciclosporina A es mínima, garantizando de esta manera la estabilidad del producto final (a pH 7,4, 37 °C, la conversión al 50 % requiere 21,7 horas, Bundgaard et al., International Journal of Pharmaceutics, 82 (1992):85-90). Preferentemente, dicha formulación oftálmica líquida o semisólida contiene un tampón capaz de mantener la formulación al pH deseado.

Preferentemente, el tampón se selecciona de entre, aunque sin limitación, tampones de acetato, tampones de carbonato, tampones de citrato, tampones de fosfato y tampones de borato. Se pueden utilizar ácidos o bases para ajustar el pH de estas formulaciones según resulte necesario.

Preferentemente, la formulación oftálmica según la invención contiene, además, uno o más excipientes seleccionados de surfactantes, conservantes, estabilizadores, ajustadores de tonicidad, modificadores de viscosidad, antioxidantes y agentes quelantes oftálmicamente aceptables.

El surfactante o surfactantes pueden utilizarse para ayudar a disolver un excipiente o el agente activo, dispersar un sólido o líquido en una composición, mejorar la humectación, modificar el tamaño de las gotas, o para una serie de otros propósitos.

Preferentemente, los surfactantes contenidos en la formulación oftálmica según la invención se seleccionan de alcoholes, óxidos de amina, polímeros en bloque, etoxilatos de alcoholes carboxilados o de alquilfenol, ácidos carboxílicos/ácidos grasos, alcoholes etoxilados, alquilfenoles etoxilados, arilfenoles etoxilados, ácidos grasos etoxilados, ésteres grasos etoxilados o aceites (animales y vegetales), ésteres grasos, etoxilatos de ésteres metílicos de ácidos grasos, ésteres de glicerol, ésteres de glicol, derivados basados en la lanolina, lecitina y derivados de lecitina, lignina y derivados de lignina, ésteres de metilo, monoglicéridos y derivados, surfactantes poliméricos, ácidos grasos propoxilados y etoxilados, alquilfenoles, surfactantes basados en proteínas, derivados de sarcosina, derivados de sorbitán, y ésteres y derivados de sacarosa y glucosa. Preferentemente, los conservantes contenidos en la formulación oftálmica según la invención se seleccionan de conservantes catiónicos, preferentemente compuestos de amonio cuaternario, más preferentemente cloruro de benzalconio o poliquad; conservantes basados en guanidina, preferentemente PHMB o clorhexidina; clorobutanol; conservantes basados en mercurio, preferentemente seleccionados de timerosal, acetato de fenilmercurio y nitrato de fenilmercurio; conservantes oxidantes, preferentemente complejos de oxicloro estabilizados, más preferentemente dióxidos de cloro estabilizados, tales como, por ejemplo, el producto comercial Purite®; parabenos, tales como el metilparabeno y el polipropilparabeno.

Según una realización, la formulación oftálmica según la invención no contiene conservantes.

Preferentemente, los ajustadores de tonicidad contenidos en la formulación oftálmica según la invención se seleccionan de sales, preferentemente cloruro sódico, cloruro potásico, cloruro de magnesio, cloruro cálcico, sorbitol, trehalosa, manitol y glicerina.

Preferentemente, la viscosidad a temperatura ambiente de la formulación oftálmica según la invención está comprendida entre 25 y 50 cps. Se pueden añadir modificadores de viscosidad a la formulación para alcanzar la viscosidad deseada.

Preferentemente, los modificadores de viscosidad contenidos en la formulación oftálmica líquida según la invención se seleccionan de alcohol polivinílico, poloxámeros, ácido hialurónico, carbómeros, acrilatos, derivados de celulosa, dextranos, ácidos poliacrílicos, povidona, polietilenglicoles, propilenglicol, quitosanos, goma gelano y goma xantana. Preferentemente, dichos derivados de celulosa se seleccionan de hidroxipropil-metilcelulosa, carboximetilcelulosa e hidroxietilcelulosa.

Preferentemente, los antioxidantes contenidos en la formulación oftálmica según la invención se seleccionan de citrato, L-metionina, cisteína, metabisulfito sódico, tiosulfato sódico, acetilcisteína, hidroxianisol butilado e hidroxitolueno butilado.

Preferentemente, el agente quelante contenido en la formulación oftálmica según la invención es edetato disódico.

Preferentemente, en el caso de que dicha formulación oftálmica líquida sea una emulsión, contiene además uno o más aceites.

Preferentemente, dichos aceites se seleccionan de aceite de anís, aceite de ricino, aceite de clavo, aceite de canela, aceite de almendra, aceite de maíz, aceite de cacahuete, aceite de semillas de algodón, aceite de cártamo, aceite de maíz, aceite de linaza, aceite de colza, aceite de soja, aceite de oliva, aceite de alcaravea, aceite de romero, aceite de cacahuete, aceite de menta piperita, aceite de girasol, aceite de eucalipto y aceite de sésamo.

Según una realización preferente, la formulación según la invención no contiene etanol.

La formulación oftálmica según la invención puede comprender, además, uno o más fármacos utilizados para la prevención o el tratamiento de enfermedades oftálmicas inflamatorias y/o autoinmunitarias y/o una ciclosporina.

Una realización preferente de la invención es la formulación anteriormente indicada para la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune seleccionada de enfermedades inflamatorias y/o autoinmunes de la córnea y la superficie ocular, así como enfermedades inflamatorias del borde palpebral, según se ha definido anteriormente.

Las enfermedades inflamatorias y/o autoinmunes de la superficie ocular y corneal que pueden tratarse utilizando la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma se seleccionan preferentemente de queratoconjuntivitis vernal (QCV), queratoconjuntivitis atópica (QCA), conjuntivitis alérgica, rosácea ocular, uveítis, enfermedad del ojo seco (EOS), penfigoide ocular cicatricial (POC), enfermedad del injerto contra el huésped (EICH) ocular y úlceras corneales inmunes.

Preferentemente, dicha conjuntivitis alérgica es una conjuntivitis alérgica estacional o perenne.

Las enfermedades inflamatorias del borde palpebral que pueden tratarse utilizando la isociclospina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma son el pterigión inflamado y la blefaritis crónica.

Según la invención, la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma y/o la formulación oftálmica tal como se ha indicado anteriormente están destinadas a la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune, en la que se pueden administrar tópicamente al ojo para la prevención y el tratamiento de una, dos o más enfermedades oftálmicas inflamatorias y/o autoinmunes indicadas anteriormente.

Preferentemente, dicha isociclosporina A o dicha sal de la misma, o la formulación oftálmica está destinada a la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune, en la que se aplica de forma tópica sobre la superficie ocular del ojo de dicho individuo o en el borde palpebral. Según una realización preferente, dicha isociclosporina A o dicha sal de la misma está destinada a la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune, en la que la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma se aplica tópicamente sobre la superficie ocular del ojo de dicho individuo mediante una formulación oftálmica líquida o semilíquida.

Preferentemente, dicha isociclosporina A o dicha sal de la misma está destinada a la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune, en la que la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma se administra una, dos, tres, cuatro veces o más al día, dependiendo de las circunstancias médicas y la gravedad de la enfermedad a tratar. Según una realización, la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma y/o una formulación oftálmica tal como se ha indicado anteriormente están/está destinada/s a la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune, en la que se pueden administrar tópicamente al ojo junto con uno o más fármacos utilizados para la prevención o el tratamiento de enfermedades oftálmicas inflamatorias y/o autoinmunes.

Los fármacos habitualmente utilizados para el tratamiento de enfermedades oculares inflamatorias y/o autoinmunitarias son corticoesteroides y otros fármacos antiinflamatorios, inmunosupresores y/o inmunomoduladores conocidos de la técnica.

En una realización, la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma y/o una formulación oftálmica tal como se ha indicado anteriormente están/está destinada/s a la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune, en la que pueden administrarse junto con una ciclosporina.

La administración oftálmica tópica de isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma o una formulación oftálmica puede ser antes, al mismo tiempo o después de la administración de uno o más fármacos comúnmente utilizados para el tratamiento de enfermedades oftálmicas inflamatorias y/o autoinmunitarias.

Según una realización particularmente preferente, la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma está destinada a la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune, en la que dicha enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune que puede tratarse utilizando la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma y/o una formulación oftálmica de la misma es una enfermedad oftálmica que muestra mejoría o recuperación con el tratamiento con cortisona y corticoesteroides similares.

Por lo tanto, según dicha realización preferente, la isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma o una formulación oftálmica que comprende isociclosporina A y por lo menos un excipiente o diluyente oftálmicamente aceptable son para la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune, en la que se administran antes, al mismo tiempo o después del tratamiento con cortisona y corticoesteroides similares.

Sección experimental

Ejemplo 1. Tinción corneal con fluoresceína

Se evaluó la eficacia de una formulación de colirio de isociclosporina A en un modelo de ratón de daño epitelial corneal inducido con escopolamina.

En detalle, se asignaron aleatoriamente 15 ratones (N=5 por grupo) en el momento inicial a 3 grupos y se indujo ojo seco mediante tratamiento con un protocolo de inyección subcutánea de 0,5 mg/0,2 ml de hidrobromuro de escopolamina, tal como ha sido descrito anteriormente (Yeh S et al., Invest Ophthalmol Vis Sci, 2003, 44(1): 124-9).

Los grupos experimentales consistieron en un grupo de control, que no recibió ningún tratamiento con gotas oftálmicas (grupo "CTRL") y dos grupos de tratamiento: uno tratado con una suspensión oftálmica tradicional de trifluoroacetato de ciclosporina A, que contiene 0,05 % de trifluoroacetato de ciclosporina A en un tampón de fosfato con Tween 80 al 2 % (grupo "Antiguo") y el otro grupo, tratado con una solución oftálmica correspondiente de trifluoroacetato de isociclosporina A (grupo "Nuevo") que contenía 0,05 % de trifluoroacetato de isociclosporina A en un tampón de fosfato con Tween 80 al 2 %.

En los grupos de tratamiento, se instilaron diez microlitros de las formulaciones de ensayo en cada ratón tres veces al día en ambos ojos comenzando el día 1 después de la primera inyección de escopolamina, durante 25 días. Se codificaron los tratamientos y se enmascaró la asignación de grupos para el técnico que administraba el tratamiento y para el investigador que evaluaba el resultado del experimento. La identificación del grupo se descubrió al final de los análisis.

Se llevó a cabo una tinción con fluoresceínain vivoen cada grupo los días 0, 9, 11, 17, 22 y 25 después del tratamiento con escopolamina para determinar cualquier defecto epitelial corneal. La tinción con fluoresceína corneal es una herramienta clínica valiosa para evaluar la viabilidad del epitelio.

Se obtuvieron imágenes digitales bajo lámpara de hendidura con luz azul cobalto a un aumento de 10X, analizadas de manera semiautomática para la tinción con fluoresceína utilizando el software ImageJ.

Tal como se muestra en la figura 1, se observó un menor daño epitelial (según indicaba la tinción con fluoresceína de las córneas) en el grupo tratado con solución oftálmica de isociclosporina A (Nuevo) en comparación con los grupos tratados con ciclosporina A (Antiguo) o sin tratamiento.

Curiosamente, dicho efecto fue mayor en los primeros 17 días del estudio, alcanzando significación estadística el día 9, lo que sugiere un efecto directo de la formulación de isociclosporina sobre la curación del epitelio corneal que no está relacionado con la lubricación prolongada.

También se midió la secreción lagrimal en todos los animales mediante ensayo de Schirmer modificado, los días 22 y 25, tal como se describe en Rossi S. et al. Arch Ital Biol. 2012 Mar;150(1):15-21.

Tal como se puede observar en la figura 2, también se observó una diferencia significativa entre los diferentes grupos tratados en la secreción de lágrimas en ambos puntos temporales, con niveles significativamente más altos en el grupo tratado con isociclosporina.

En los animales de muestra, también se evaluaron los niveles de ciclosporina e isociclosporina absorbidos en los tejidos oculares. Se obtuvieron biopsias de los tejidos relevantes en tres puntos temporales diferentes: el día 1 (5 minutos después del primer tratamiento), el día 2 (5 minutos después del primer tratamiento) y el día 7 (5 minutos después del primer tratamiento) en un subgrupo de 3 ratones/grupo. Los tejidos fueron centrifugados, homogeneizados y liofilizados. Se extrajo 1 mg de tejido liofilizado con EtOAc (0,5 ml) a temperatura ambiente y la solución orgánica se analizó mediante HPLC para evaluar la concentración en el tejido y la cantidad relativa de ciclosporina A e isociclosporina A.

Las condiciones cromatográficas del análisis de HPLC se presentan en las Tabla A y B, a continuación:

Tabla A

Tabla B: Composición de la fase móvil (gradiente):

Los datos obtenidos muestran una mayor biodistribución en la superficie ocular y en los tejidos intraoculares para la isociclosporina A que la ciclosporina A (>10 veces más) y una variabilidad significativamente inferior en diferentes animales bajo el mismo tratamiento.

Los niveles medios (ng/mg) detectados de isociclosporina A y ciclosporina A en la córnea, conjuntiva y tejidos intraoculares (esclerótica y úvea) se presentan en la Tabla C, a continuación:

Tabla C. Biodistribución de isociclosporina A y ciclosporina A en córnea, conjuntiva y tejidos intraoculares

Se evaluó la biodistribución de la isociclosporina A y la ciclosporina A en los tejidos intraoculares, específicamente en la esclerótica y la úvea, que no se separaron durante la disección. Por lo tanto, el término "agrupado" en la Tabla C, anteriormente, se refiere a la evaluación de los niveles de biodistribución en la esclerótica y la úvea que no se separaron durante la disección.

La conversión de isociclosporina A en ciclosporina A en los tejidos oculares a lo largo del tiempo también se midió y fue mínima, tal como se esperaba, tanto después de dosis únicas como de dosis repetidas. Los datos obtenidos demuestran que el efecto directo de la isociclosporina A explica claramente la eficacia observada, sugiriendo de esta manera un nuevo mecanismo de acción independiente.

Ejemplo 2. Propiedades antiinflamatorias de las gotas oftálmicas de isociclospomina A aplicadas tópicamente en un modelo de ratas de quemadura ocular con álcali

La formulación de trifluoroacetato de isociclosporina A del Ejemplo 1 también se sometió a ensayo en un modelo de rata agudo de quemadura ocular con álcali. Ésta se indujo mediante la aplicación sobre la córnea durante diez segundos de un disco de papel de filtro empapado en NaOH 1 N.

Los grupos experimentales (n=6 cada uno) consistieron en un grupo de control, que no recibió ningún tratamiento con gotas oculares (grupo "CTRL") y un grupo tratado con la solución oftálmica de isociclosporina descrita anteriormente (grupo "Nuevo"), mediante instilación de diez microlitros de la formulación de ensayo en cada animal tres veces durante 24 horas.

A continuación, se midió el infiltrado inflamatorio de la conjuntiva al final del tratamiento.

Se observó una reducción significativa del infiltrado inflamatorio en el grupo tratado en comparación con el grupo no tratado, lo que confirma adicionalmente las propiedades antiinflamatorias activas de las gotas oculares de isociclosporina aplicadas tópicamente. Además, también en estos animales se evaluó la conversión de isociclosporina A en ciclosporina A, tal como se ha indicado anteriormente, y no se observó una interconversión significativa en la superficie ocular y/o en los tejidos intraoculares.

Ejemplo 3. Ensayo de irritación ocular de Draize

Se llevó a cabo un ensayo típico de irritación ocular de Draize en el ojo derecho de 6 conejos sanos (3 por grupo) con el fin de comparar la tolerabilidad de la isociclosporina A frente a las formulaciones oftálmicas tópicas de ciclosporina A (Draize, J. H., et al., Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics (1944), 82: 377-390).

No se observaron reacciones de comportamiento tales como frotarse los ojos ni signos de irritación ocular (es decir, reacciones conjuntivales, hinchazón y/o secreciones) en ninguno de los grupos.

Sin embargo, debido a que se observó una mayor tasa de parpadeo en los animales tratados con ciclosporina A, también se llevó a cabo el método del parpadeo inducido en conejos descrito por Li et al. ( 177-182): diez segundos después de la administración de las gotas oculares, se registró la frecuencia del parpadeo de los conejos durante 2 minutos.

La frecuencia fue mayor en el grupo de ciclosporina A (9±1) que en el grupo de isociclosporina A (5±1), p<0,05.

Ejemplo 4. Ensayo FLIPR

La capacidad de la isociclosporina A y la ciclosporina A para regular la activación de canales iónicos involucrados en varias enfermedades oculares inflamatorias y/o alérgicas se sometió a ensayo con lector de placas por imagen de fluorescencia (FLIPR, por sus siglas en inglés).

El ensayo FLIPR se utiliza para examinar las dianas de los canales iónicos utilizando pigmentos fluorescentes que atraviesan la membrana. En particular, las dianas de los canales iónicos con una permeabilidad significativa al Ca producen un incremento del calcio intracelular que se puede medir utilizando pigmentos sensibles al calcio (Michelle R. Arkin et al. FLIPR™ Assays for GPCR and Ion Channel Targets. Assay Guidance Manual [Internet]. Bethesda (MD): Eli Lilly & Company and the National Center for Advancing Translational Sciences; 2004).

En detalle, las formulaciones descritas anteriormente que contienen isociclosporina A o ciclosporina A a una concentración de 30 pM se sometieron a ensayo mediante FLIPR para evaluar su capacidad de activar o inhibir los canales iónicos TRPV3, TRPML2 y TRPC4. TRPV3 es un canal iónico que desempeña un papel importante en el prurito y la inflamación, que son dos aspectos característicos de las enfermedades de la superficie ocular, tales como la QCV y la QCA. TRPML2 es un canal iónico con un papel importante en el contexto de la respuesta inmune e inflamatoria.

TRPC4 es un canal iónico expresado por el epitelio corneal y que desempeña un papel en la proliferación y migración de las células epiteliales.

En detalle, se tripsinizaron células TRP humanas, se contaron y se sembraron en placas negras de 96 pocillos de fondo transparente, a una densidad de 50.000 células por pocillo y se incubaron durante la noche. Al día siguiente, se eliminó el medio de las placas celulares y se añadieron 25 pl de tampón de ensayo. Se añadió solución de colorante rojo de potencial de membrana o de calcio-5 (10 pl) a los pocillos y se incubaron a 37 °C durante 1 hora. Se sometieron a ensayo TRPV3, TRPML2 y TRPC4 utilizando el colorante de potencial de membrana.

Se preparó la solución de colorante en el tampón de ensayo. Se realizan diluciones compuestas en DMSO al 100 % o dH<2>O y después se transfirieron a diluciones intermedias (DMSO al 5 %/tampón de ensayo o dH<2>O al 5 %/tampón de ensayo) durante un corto período de tiempo (<10 minutos) justo antes de añadirlas a la placa celular.

Para el ensayo de agonistas: Las placas se introdujeron en el FLIPR, después de la incubación con el colorante, y se realizó un seguimiento de la fluorescencia cada 1,52 segundos. Después de 20 segundos, se añadió IsoCsA, CsA o un agonista estándar a los pocillos y se realizó un seguimiento de la fluorescencia durante 5 minutos a exc. /em. (longitudes de excitación/emisión): 488 nm/510 a 570 nm.

Para el ensayo de antagonistas: se añadió isociclosporina A o ciclosporina A, después de la incubación con el colorante, utilizando un multicanal manual y se incubó durante 10 minutos a temperatura ambiente. Las placas se introdujeron en el FLIPR y se llevó a cabo un seguimiento de la fluorescencia cada 1,52 segundos. Después de 20 segundos, se añadieron 10 pl del agonista estándar apropiado y se realizó un seguimiento de la fluorescencia durante 5 minutos a exc./em.: 488 nm/510 a 570 nm. Se han sometido a ensayo agonistas y antagonistas de referencia frente a cada canal con el fin de verificar que el valor estaba comprendido dentro del intervalo aceptable a fin de validar los ensayos. Se evaluaron los valores en porcentaje de activación e inhibición del compuesto de ensayo y de los compuestos de referencia.

No se detectó actividad agonista significativa, mientras que se observó un marcado efecto inhibitorio de la isociclosporina A en comparación con la ciclosporina A. Los resultados del ensayo de inhibición se presentan en las Tablas 1 a 3, a continuación.

La Tabla 1 informa sobre el porcentaje de inhibición de TRPV3 por isociclosporina A, ciclosporina A y compuestos de referencia.

Tal como se puede observar en los datos a continuación, la isociclosporina A (IsoCsA en la tabla) presenta una capacidad de antagonizar este canal más de 4 veces mayor que la ciclosporina A (CsA en la tabla).

Tabla 1. Porcentaje de inhibición de TRPV3

en la que 2-APB es 2-aminoetoxidifenilborato (agonista) y RR es rojo de rutenio (antagonista). Debido a que 2-APB es un agonista estándar de referencia, es decir, causa la activación de un receptor para producir una respuesta biológica, su % de inhibición de TRPV3 se considera igual a 0 %.

La Tabla 2 presenta sobre el porcentaje de inhibición de TRPML2 por isociclosporina A, ciclosporina A y compuestos de referencia.

Tal como se puede observar a partir de los datos a continuación, la isociclosporina A (Iso-CsA en la tabla) presenta una capacidad de antagonizar este canal más de 2 veces mayor que la ciclosporina A (CsA en la tabla).

Tabla 2. Porcentaje de inhibición de TRPML2

en el que CaCh es el agonista y el gadolinio Gd3 es el antagonista.

Debido a que CaCh es un agonista, es decir, causa la activación de un receptor, produciendo una respuesta biológica, su % de inhibición de TRPML2 se considera igual a 0 %.

TRPC4 es un canal iónico expresado por el epitelio corneal y que desempeña un papel en la proliferación y migración de las células epiteliales (Hua Yang et al, J Biol Chem. 2005 Sep 16;280(37):32230-7). La queratoconjuntivitis vernal (QCV) y la queratoconjuntivitis atópica (QCA) se caracterizan por fenómenos hiperproliferativos de la superficie ocular. Por lo tanto, una molécula que pueda promover el crecimiento y la migración epitelial en estas patologías podría resultar perjudicial.

La Tabla 3 presenta el porcentaje de activación de TRPC4 por la isociclosporina A, la ciclosporina A y compuestos de referencia.

A partir de los datos a continuación, se puede observar que mientras la isociclosporina A (Iso-CsA en la tabla) no presenta ningún efecto sobre la activación de este canal, la ciclosporina A (CsA en la tabla) actúa como un agonista y, por lo tanto, presenta efectos secundarios no deseados debido a su activación.

Tabla 3. Porcentaje de activación de TRPC4

en el que la englerina A es el agonista y el gadolinio GD3 es el antagonista.

Debido a que GD3 actúa como antagonista, es decir, causa la inhibición de un receptor para producir una respuesta biológica, su porcentaje de activación de TRPC4 se considera igual a 0 %.

Claims (13)

REIVINDICACIONES

1. Isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma para la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune.

2. Isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma para la utilización oftálmica tópica según la reivindicación 1, en la que dicha enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune se selecciona de enfermedades inflamatorias y/o autoinmunes de la córnea y la superficie ocular, así como enfermedades inflamatorias del borde palpebral.

3. Isociclosporina A o una sal aceptable oftálmicamente de la misma para la utilización oftálmica tópica según la reivindicación 1 o 2, en la que dichas enfermedades inflamatorias y/o autoinmunes corneales y de la superficie ocular se seleccionan de queratoconjuntivitis vernal (QCV), queratoconjuntivitis atópica (QCA), conjuntivitis alérgica, rosácea ocular, uveítis, enfermedad del ojo seco (EOS), penfigoide ocular cicatricial (POC), enfermedad del injerto contra el huésped (EICH) ocular y úlceras corneales inmunes.

4. Isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma para la utilización oftálmica tópica según la reivindicación 1 o 2, en la que dichas enfermedades inflamatorias del borde palpebral se seleccionan de pterigión inflamado y blefaritis crónica.

5. Sal oftálmicamente aceptable de isociclosporina A para la utilización oftálmica tópica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que dicha sal se selecciona de las sales acetato, adipato, ascorbato, benzoato, bencenosulfonato, bicarbonato, bisulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, ciclohexilsulfamato, etanosulfonato, fumarato, glutamato, glicolato, hemisulfato, 2-hidroxietilsulfonato, heptanoato, hexanoato, hidrocloruro, hidrobromuro, hidroyoduro, hidroximaleato, lactato, malato, maleato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nitrato, oxalato, pamoato, persulfato, fenilacetato, fosfato, difosfato, picrato, pivalato, propionato, quinato, salicilato, estearato, succinato, sulfamato, sulfanilato, sulfato, tartrato, tosilato (ptoluenosulfonato), trifluoroacetato y undecanoato de isociclosporina A.

6. Formulación oftálmica que comprende isociclosporina A o una sal oftálmicamente aceptable de la misma y por lo menos un excipiente o diluyente oftálmicamente aceptable para la utilización oftálmica tópica en la prevención o el tratamiento en un individuo de una enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune.

7. Formulación oftálmica para la utilización oftálmica tópica según la reivindicación 6, que es una formulación oftálmica líquida, preferentemente una formulación líquida de gotas oculares.

8. Formulación oftálmica para la utilización oftálmica tópica según la reivindicación 6, que es una formulación oftálmica semisólida, preferentemente una crema, pomada o gel.

9. Formulación oftálmica para la utilización oftálmica tópica según la reivindicación 6, que es una formulación oftálmica sólida adecuada para la preparación extemporánea de una formulación oftálmica líquida o semisólida según la reivindicación 7 u 8, mediante la adición de un diluyente oftálmicamente aceptable antes de la administración.

10. Formulación oftálmica para la utilización oftálmica tópica según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, que presenta un pH comprendido entre 6 y 8, preferentemente entre 6,4 y 7,8, más preferentemente entre 6,5 y 7,5.

11. Formulación oftálmica para la utilización oftálmica tópica según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10, en la que dicha enfermedad oftálmica inflamatoria y/o autoinmune se selecciona de enfermedades inflamatorias y/o autoinmunes de la córnea y de la superficie ocular y enfermedades inflamatorias del borde palpebral.

12. Formulación oftálmica para la utilización oftálmica tópica según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10, que comprende, además, por lo menos un fármaco adecuado para el tratamiento de enfermedades oftálmicas inflamatorias y/o autoinmunes, preferentemente que comprende adicionalmente un corticoesteroide.

13. Formulación oftálmica para la utilización oftálmica tópica según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10 que comprende, además, una ciclosporina.