ES3054920T3 - Method for obtaining oleocanthal type secoiridoids and for producing respective pharmaceutical preparations - Google Patents

Method for obtaining oleocanthal type secoiridoids and for producing respective pharmaceutical preparations

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ES3054920T3 ES20712402T ES20712402T ES3054920T3 ES 3054920 T3 ES3054920 T3 ES 3054920T3 ES 20712402 T ES20712402 T ES 20712402T ES 20712402 T ES20712402 T ES 20712402T ES 3054920 T3 ES3054920 T3 ES 3054920T3
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Abstract

La presente invención se refiere al método para la obtención, en forma pura o como mezcla, de las formas diólicas bioactivas de los principales fenoles secoiridoides presentes en el aceite de oliva y ciertas formas isoméricas o derivados de los mismos. En concreto, se refiere al proceso de producción de S-(E)-oleocantadiol, S-(E)-oleaceínadiol, 5S-(E)-oleomisionadiol, 5S-(E)-oleokoronadiol, oleuropeínadiol y listrodiol, y sus correspondientes hemiacetales de polietilenglicol mediante la extracción de aceite de oliva específicamente seleccionado con polietilenglicol y su posterior tratamiento con agua. También se refiere a las preparaciones farmacéuticas que contienen las sustancias mencionadas en diversas combinaciones y a las propiedades terapéuticas de estas preparaciones para el tratamiento del cáncer, enfermedades degenerativas del sistema nervioso central, diabetes, hiperlipidemia, enfermedades inflamatorias y la prevención de la formación de placas ateroscleróticas y trombos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN
[0002] Métodos de obtención de secoiridoides de tipo oleocantal y de elaboración de preparados farmacéuticos respectivos
[0003] CAMPO DE LA TÉCNICA
[0004] La solicitud se refiere a un método para obtener en forma pura o como mezcla las formas diólicas bioactivas de los principales fenoles secoiridoides presentes en el aceite de oliva y determinadas formas isoméricas o derivados de los mismos, a preparados farmacéuticos que los contienen y a sus usos terapéuticos.
[0005] La solicitud se refiere al campo de la medicina, la farmacia y las ciencias de la alimentación.
[0006] ESTADO DE LA TÉCNICA
[0007] El aceite de oliva derivado de la especieOlea europaeaL y todas sus subespecies y cultivares contiene secoiridoides del tipo I y/o II
[0010]
[0012] En donde R1 = H u OH, R2 = H o COOCH<3>, R3 = CHO y los tautómeros del mismo.
[0013] De manera más específica, los secoiridoides de tipo I, S-(E)-oleocantal (1) (R1 = R2 = H, R3 = CHO), S-(E)-oleaceína (2) (R1 = OH, R2 = H, R3 = CHO), R/S-(E)-oleuropeinodial(3a,b)(R1 = OH, R2 = COOCH<3>, R3 = CHO) y R/S-(E)-ligstrodial(4a,b)(R1 = H, R2 = COOCH<3>, R3 = CHO) son las principales sustancias fenólicas que se encuentran en la mayoría de las variedades de aceite de oliva en concentraciones que van de 0 a 3000 mg/kg (Journal of Agricultural and Food Chemistry 2014, 62(3), 600-607,OLIVAE 2015, 122, 22-35). Las sustancias(3a,b)y(4a,b)están presentes en equilibrio con las formas dialdehídicas tautoméricas de S-(E)-oleomissional(3)y S-(E)-oleokoronal (4) y en función de las condiciones pueden transformarse a las formas monoaldehídicas (5a,by6a,b)de tipo general II, que están presentes en el aceite de oliva normalmente en menor concentración.
[0014] Para todas las sustancias(1-6)existen métodos publicados de aislamiento a partir de fuentes naturales o métodos de síntesis química, así como una serie de propiedades biológicas y farmacéuticas publicadas (antiinflamatorias, anticancerosas, antidiabéticas, neuroprotectoras, antioxidantes).
[0015] Sin embargo, los inventores, basándose en los experimentos que han llevado a cabo, conocen que estas sustancias no son las verdaderas formas activas biodisponibles. De hecho, sustancias(1-6)cuando entran en contacto con fluidos biológicos humanos, reaccionan químicamente con el agua a un ritmo relativamente lento, diferentes para cada sustancia y se convierten gradualmente en las formas activas de S-(E)-oleocantadiol(7),S-(E)-oleaceinediol(8),5S-(E)-oleomissionadiol(9),5S-(E)-oleokoronadiol(10)oleuropeinediol(11)y ligstrodiol(12)que presentan una mayor actividad y una solubilidad en agua muy aumentada con respecto a las sustancias(1-6).
[0016] Por lo tanto, es muy importante desarrollar métodos que permitan la producción de sustancias(7-12)en forma pura o mezclada y preparados farmacéuticos o suplementos nutricionales o cosméticos que contengan las formas biodisponibles(7-12)individualmente o en mezclas, por lo que no es necesario que se activen al entrar en el cuerpo humano. Al mismo tiempo, es muy importante encontrar nuevos métodos que conduzcan a la producción de sustancias(1-6)o mezclas de las mismas con un rendimiento superior al de los métodos existentes y sin utilizar cromatografía líquida para purificarlas.
[0017] Hasta ahora, las estructuras de las sustancias(7, 8, 10, 11, 12)nunca han sido total y correctamente dilucidadas espectroscópicamente ni se ha descrito un método industrialmente utilizable de producción selectiva o en forma de mezcla. Se han descrito los datos espectroscópicos de la sustancia (9) (J. Chem. Soc., Perkin trans.1995, 1, 1519-1523) tras hidrólisis enzimática de oleuropeína pura, mientras que la sustancia(9)se ha producido en rendimientos muy bajos, en mezclas con otras sustancias que no pueden utilizarse, a partir de extractos del fruto del olivo (Food Res. Intl.2000, 33: 475-485).
[0018] Cabe mencionar que existen referencias en la literatura sobre el uso de plantas de la especie Phillyrea, que se han utilizado para producir los isómeros de S-(Z)-oleaceinediol y S-(Z)-oleocantadiol en mezcla con otras sustancias no utilizables en muy bajo rendimiento (Phytochemistry Letters 8 (2014) 163-170). Además, las sustancias isoméricas S-(Z)-oleaceinediol, S-(Z)-oleocantadiol, 5S-(Z)-oleomissionadiol y el 5S-(Z)-oleokoronadiol parecen producirse en rendimientos muy bajos, en mezclas con otras sustancias que no pueden utilizarse, al extraer aceite de oliva con una mezcla de agua y metanol. (J. Agric. Food Chem.2015, 66, 6053-6063).
[0019] Es muy importante señalar que las sustancias(1-6)tienen diferentes grupos funcionales y, en particular, dos grupos aldehído que cada uno de ellos puede reaccionar con el agua de manera diferente y en condiciones diferentes (pH, temperatura, tiempo), por tanto, no siendo obvia la asociación de las estructuras específicas (7-12) con acciones terapéuticas específicas y teniendo una naturaleza inventiva.
[0020] Cabe destacar también que existe un método conocido para producir la sustancia(1)descrito en la solicitud de patente WO2018017967 que utiliza la extracción de aceite de oliva con agua. Este método se refiere a la producción de una nanoemulsión acuosa de la sustancia(1)y no una verdadera solución acuosa de la sustancia(7)como se describe en la presente invención. Así lo demuestra el espectro de RMN correspondiente en agua deuterada (Figura 1), donde puede observarse la eliminación casi completa del grupo aldehído de la posición 3. Este punto es una diferencia muy significativa desde la solicitud de patente internacional WO2018017967 que utiliza un procedimiento similar al mencionado en la presente solicitud pero que finalmente da lugar a una emulsión de la forma oleocantal aldehído(1)y no a la forma diol(7).
[0021] Existe también una patente FR2904312 (A1) 2008-02-01 en la que el aceite de oliva se extrae con una mezcla de agua y alcohol, pero de nuevo no se hace referencia a las sustancias(7-12),su actividad y el posible uso farmacéutico de la solución acuosa que las contiene.
[0022] Otro importante elemento de innovación de la presente invención es el uso de alcoholes poliméricos hidrófilos inmiscibles con aceite de oliva como agente de extracción. Los alcoholes propuestos (polietilenglicol de un tamaño desde PEG200 hasta PEG400) son biocompatibles y pueden extraer totalmente las sustancias objetivo en una proporción de hasta 1: 100 (disolvente: aceite de oliva) a diferencia de, por ejemplo, el agua que requiere una proporción de 1:1. El presente método tiene la ventaja de que las sustancias se extraen con una cantidad mínima de un disolvente biocompatible y no tóxico que puede mezclarse a continuación con agua y liberar las formas diólicas(7-12)en forma de una verdadera solución y puede incorporarse simultáneamente como tal en preparaciones farmacéuticas. El documento JP6351124 (B2) divulga la extracción del fruto del olivo (residuo) con polietilenglicol potencialmente como disolvente. Asimismo, EVAGELOS KATSOYANNOS ET AL: "Evaluation of the suitability of low hazard surfactants for the separation of phenols and carotenoids from redflesh orange juice and olive mill wastewater using cloud point extraction",JOURNAL OF SEPARATION SCIENCE, vol. 35, n.º 19, 9 de agosto de 2012, divulgan la extracción de aguas residuales de almazara utilizando PEG-400.
[0023] Las soluciones de sustancias(13-18)en polietilenglicol, de un tamaño de PEG200 a PEG400, a diferencia de las soluciones acuosas o de soluciones de alcoholes simples (por ejemplo, metanol) utilizadas en el pasado para la extracción de aceite de oliva, presentan una estabilidad muy elevada y permiten su utilización en la producción de preparados farmacéuticos. Esta etapa es particularmente innovadora en comparación con los métodos de extracción más antiguos, ya que las soluciones resultantes permanecen estables sin riesgo de hidrólisis, oxidación y polimerización durante al menos 12 meses. Cabe señalar también que el uso anteriormente mencionado de metanol en la extracción de aceite de oliva (J. Agric. Food Chem.2015, 66, 6053-6063) hace imposible usar la solución resultante para la producción de preparados farmacéuticos de uso humano debido a la toxicidad del metanol.
[0024] Como alternativa, en lugar de polietilenglicol, pueden usarse etanol o isopropanol que dan lugar respectivamente a hemiacetales etílicos o isopropílicos de las sustancias(1-6), que también liberan formas diólicas (7-12) con el contacto con el agua.
[0025] Las estructuras químicas de las sustancias descritas en la presente divulgación son las siguientes:
[0026]
[0029] DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS REALIZACIONES PREFERIDAS
[0031] Principio del método de obtención de las sustancias S-(E)-oleocantadiol (7), S-(E)-oleaceinediol (8), 5S-(E)-oleomissionadiol (9), 5S-(E)-oleokoronadiol (10), oleuropeinediol (11) y ligstrodiol (12) o una mezcla de cualesquiera de ellas.
[0033] Los inventores, basándose en experimentos que han realizado, han descubierto que las sustancias(1-6)que están presentes en el aceite de oliva en forma aldehídica lipofílica en concentraciones variables, pueden reaccionar con alcoholes poliméricos hidrófilos de tamaño medio, inmiscibles con aceite de oliva y transformarse en hemiacetales de polietilenglicol(13-18)que pueden extraerse y separarse selectivamente de la capa de aceite de oliva. En la siguiente etapa, los hemiacetales de polietilenglicol, después de mezclarse con agua, pueden producir los dioles(7-12).
[0034] De acuerdo con una realización preferida ilustrativa de la invención, el método de obtención comprende las siguientes etapas:
[0035] 1a. Aceite de oliva derivado deOlea europaeaL y todas las subespecies y cultivares de la misma, que contiene las sustancias (1-6), se mezcla con polietilenglicol (PEG 200 o PEG400) y se agita enérgicamente durante un periodo de tiempo que va de 5 minutos a 24 horas en una proporción de volumen de 1 PEG: 1 a 100 de aceite de oliva.
[0036] Se deja reposar la mezcla y se separan las dos fases por gravedad o por centrifugación.
[0037] 1b. Se obtiene la capa más pesada que contiene las sustancias disueltas en forma de hemiacetal de polietilenglicol(13-18)y, en caso necesario, se clarificó por filtración para obtener la solución A1.
[0038] 1c. La solución A1 se diluye con agua desionizada y destilada que tiene un pH = <7 en una proporción de volumen PEG: agua = 1:1 o 1:10 o 1:20 o 1: 100 etc. y las sustancias después de al menos 1 hora y durante un máximo de 24 horas se convierten totalmente en oleocantadiol, oleaceinediol, oleomissionadiol, oleokoronadiol, oleuropeinediol y ligstrodiol. Los componentes insolubles se eliminan por filtración para dar la solución B.
[0039] La solución A1 (comprendida en el ámbito de las reivindicaciones adjuntas) o B puede usarse para la administración directa al ser humano como ingrediente de medicamentos o complementos alimenticios o cosméticos con un vehículo acuoso: jarabes, soluciones, suspensiones o como ingrediente de soluciones inyectables o como un ingrediente de productos de administración transdérmica (incorporados a cremas o geles), o como ingrediente de productos de inhalación.
[0040] 1e. La solución A1 (comprendida en el ámbito de las reivindicaciones adjuntas), o B, puede usarse a una concentración adecuada, para preparar comprimidos tras la mezcla con excipientes (por ejemplo, lactosa), secado en lecho fluido y compresión o supositorios previa mezcla con una base adecuada. Cabe señalar que durante la preparación de los comprimidos, el uso de un excipiente adecuado y el ajuste de los niveles de humedad durante el secado permiten que la sustancia permanezca en forma de diol. Esto se confirma por la disolución instantánea del comprimido en agua, lo que no habría ocurrido si la sustancia estuviera en la forma aldehídica lipofílica.
[0041] 1f. La solución B pasa a través de una columna que contiene una resina de adsorción (por ejemplo, XAD4 o XAD16), la resina se lava con un disolvente orgánico de bajo punto de ebullición (<100 °C) miscible con agua (por ejemplo, metanol, etanol o acetona) y la solución obtenida se concentra a presión reducida proporcionando las sustancias(1-6)(producto C).
[0042] Caso específico:en el caso de que el aceite de oliva de partida de la etapa 1a se seleccione específicamente para que contenga sólo una de las sustancias(1)o(2)o(3)o(4)o(5)o(6)y ninguno de los demás derivados fenólicos, el proceso 1a conduce a la etapa 1b en el que la solución A1 contiene la sustancia disuelta en la forma correspondiente de hemiacetal de polietilenglicol(13)o(14)o(15)o(16)o(17)o(18)y, respectivamente, en la etapa 1c la solución B contiene la sustancia en forma de diol(7)o(8)o(9)o(10)o(11)o(12). Por consiguiente, la etapa 1f proporciona la sustancia(1)o(2)o(3)o(4)o(5)o(6)en forma pura.
[0043] Propiedades farmacéuticas del oleocantadiol (7), oleaceinediol (8), oleomissionadiol (9), oleokoronadiol (10), oleuropeinediol (11) y ligstrodiol (12) o una mezcla de los mismos.
[0044] 1g. Las soluciones A1 o B a una concentración equimolar de 0,5 µM mostraron una potente actividad antioxidante al inhibir la peroxidación lipídica en un 50 %.
[0045] 1h. La investigación de la actividad citotóxica de la solución A1 o B mostró que la mezcla de oleocantadiol(7),oleaceinediol(8),oleomissionadiol(9),oleokoronadiol(10),oleuropeinediol(11)y ligstrodiol(12)a una concentración equimolar de 2,5 µM podrían inducir la muerte celular del 50 % de las células cancerosas HeLa y MCF-7 y, por lo tanto, la solución A1 o B y cualquier preparado farmacéutico resultante de ellas pueden utilizarse para tratar el cáncer.
[0046] 1i. La solución A1 o B a una concentración equimolar de 25 µM mostró una inhibición del 60 % de la enzima COX-2 y, por tanto, la solución A1 o B y cualquiera de sus preparados farmacéuticos pueden usarse para tratar enfermedades inflamatorias.
[0047] 1j. Por extensión de los casos 1g-1i, las soluciones A1 o B tienen las mismas propiedades terapéuticas (neuroprotectoras, antidiabéticos, antitrombóticos) que se conocen para las sustancias (1-6) ya que en todos los casos al menos parcialmente se convierten en oleocantadiol (7), oleaceinediol (8), oleomissionadiol (9), oleokoronadiol (10) oleuropeinediol (11) y ligstrodiol (12) en el medio acuoso en el que se realizan los experimentos para medir sus actividades biológicas.
[0048] 1k. La solución A1 o B que contiene las sustancias(13-18)o(7-12)desde el 10 % hasta el 40 % p/v demostró que podía matar todos los microorganismos de la superficie de un material sólido actuando como esterilizador. Todos los preparados farmacéuticos mencionados pueden usarse con propiedades anticancerosas, cardioprotectoras, antiinflamatorias, antidiabéticas y neuroprotectoras.
[0049] Ejemplo 1
[0050] Aceite de oliva (100 l) que contiene oleocanthal, oleaceína, oleomissional, oleokoronal, oleuropeína aglicona y ligtrósido aglicona en una concentración total de 1 g/kg, se mezcla con PEG200 (1 l) y se agita enérgicamente durante 10 minutos. La mezcla se deja reposar durante 1 hora y las dos capas se separan por gravedad. Se obtiene la capa más pesada y se filtra para eliminar las sustancias insolubles. La solución clara se diluye con agua desionizada y destilada que tiene un pH = <7 en una proporción de PEG200: agua = 1:20 y las sustancias después de 24 horas se convierten en oleocantadiol, oleaceinediol, oleomissionadiol, oleokoronadiol, oleuropeinediol y ligstrodiol. Los componentes insolubles se filtran. La solución final tiene un contenido total de oleocantadiol, oleaceinediol, oleomissionadiol, oleokoronadiol, oleuropeinediol y ligstrodiolina que ascienden a 5 g/kg.
[0051] Ejemplo 2
[0052] Aceite de oliva (100 l) que contiene 1 g/kg de oleocanthal, que no contiene los otros fenoles2-6, se mezcla con PEG200 (1 l) y se agita enérgicamente durante 10 minutos. La mezcla se deja reposar durante 1 hora y las dos capas se separan por gravedad. La capa más pesada se retira y se filtra para eliminar las sustancias insolubles. La solución clara se diluye con agua destilada en una proporción de PEG200: agua = 1:10 y la sustancia se transforma en oleocantadiol al cabo de 24 horas. Los componentes insolubles se eliminan por filtración. La solución final tiene un contenido de oleocantadiol de 10 g/l.
[0053] Ejemplo 3
[0054] La solución final del ejemplo 2 (5 ml) se mezcla con una solución azucarada saturada (95 ml) dando lugar a un jarabe que contiene oleocantadiol 50 mg/100 ml con actividad antiinflamatoria.
[0055] Ejemplo 4
[0056] La solución de polietilenglicol del ejemplo 1 (5 ml) se mezcla con agua (95 ml) y se añade hidroxipropilcelulosa (2 g). El gel resultante tiene un contenido total de oleocantadiol, oleaceinediol, oleomissionadiol, oleokoronadiol, oleuropeinediol y ligstrodiolina de 500 mg/100 ml y puede usarse para aplicación tópica en enfermedades inflamatorias.
[0057] 2. Principio del método de obtención de S-(E)-oleocantadiol (7), S-(E)-oleaceinediol (8), 5S-(E)-oleomissionadiol (9), 5S-(E)-oleokoronadiol (10), oleuropeinediol (11) y ligstrodiol (12) o una mezcla de los mismos en solución acuosa
[0058] De acuerdo con otra realización ilustrativade la divulgación (no comprendida en las reivindicaciones adjuntas),el método de obtención comprende las siguientes etapas:
[0059] 2a. El aceite de oliva que contiene las sustancias(1-6)se mezcla con agua desionizada y destilada que tiene un pH = <7 y se agita enérgicamente durante un periodo de tiempo que va desde 5 minutos hasta 24 horas en una proporción de 1 de agua: 1 a 100 de aceite de oliva. Se deja reposar la mezcla y se separan las dos fases por gravedad o por centrifugación.
[0060] 2b. La capa más pesada se obtiene y contiene las sustancias oleocantadiol(7), oleaceinediol(8),oleomissionadiol(9),oleokoronadiol(10),oleuropeinediol(11)y ligstrodiol(12)disueltos en agua. Los componentes insolubles se eliminan por filtración con un filtro de celulosa y se obtiene la solución A2. 2c. La solución A2 se concentra por evaporación al vacío hasta el punto de saturación en el que la solución empieza a adquirir una forma lechosa.
[0061] 2d. Si la evaporación de la etapa 2c se continúa hasta que el agua se evapora completamente o se liofiliza, se obtendrá una mezcla de oleocanthal, oleaceína, oleomissional, oleokoronal, oleuropeína aglicona y ligstrosideaglicona (y sus formas isoméricas) (producto D).
[0062] 2e. La solución A2 o la solución resultante de la etapa 2c puede usarse para administración directa al ser humano como ingrediente de preparados farmacéuticos o suplementos nutricionales o cosméticos en un vehículo acuoso: jarabes, soluciones, suspensiones o como ingrediente de soluciones inyectables o como un ingrediente de productos de administración transdérmica (incorporados a cremas o geles) o como ingrediente de productos de inhalación
[0063] 2f. La solución de la etapa 2c puede usarse a una concentración adecuada para preparar comprimidos tras mezclarla con excipientes (por ejemplo, lactosa), secado en lecho fluido y compresión o supositorios tras mezclarlos con una base adecuada.
[0064] Por consiguiente, todos los preparados farmacéuticos mencionados pueden usarse con propiedades anticancerosas, cardioprotectoras, antiinflamatorias, antidiabéticas y neuroprotectoras.
[0065] Caso concreto:En el caso de que el aceite de oliva de partida de la etapa 2a se seleccione específicamente para que contenga sólo una de las sustancias(1)o(2)o(3)o(4)o(5)o(6)y ninguno de los demás derivados fenólicos, a continuación, el proceso 2a conduce a la etapa 2b, en la que la solución acuosa contiene cada sustancia disuelta en la forma de diol correspondiente(7)o(8)o bien(9)o(10)o(11)o(12)y respectivamente en la etapa 2d la evaporación de la solución da lugar a las sustancias(1-6)con una pureza >95 %.
[0066] Explicación especial:
[0067] Cabe señalar que las soluciones obtenidas en las etapas 2b y 2c anteriores son verdaderas soluciones de las sustancias(7-12)en agua y no emulsiones de las formas aldehídicas(1-6)en medio acuoso.Esto se pone de manifiesto en el espectro de RMN correspondiente en agua deuterada, donde puede observarse la eliminación casi completa del grupo aldehído desde la posición 3 de las sustancias(1-4). Este punto constituye una diferencia muy significativa con respecto a la solicitud de patente internacional WO2018017967 que utiliza un procedimiento similar al mencionado en el Ejemplo 5 de la presente solicitud pero que conduce finalmente a una emulsión de la forma dialdehído del oleocanthal(1)y no de la forma diol(7).
[0068] En referencia a la Figura 1 que muestra el espectro de RMN<1>H del oleocantadiol(7)en agua deuterada, se demuestra que es una verdadera solución de la forma diol con un solo grupo aldehído (que no ha reaccionado con el agua) y no es una emulsión de la forma dialdehído en agua, que está presente en un porcentaje muy pequeño.
[0069] Ejemplo 5
[0070] Aceite de oliva (100 l) que tiene una concentración total de oleocanthal, oleaceína, oleomissional, oleokoronal, oleuropeína aglicona y ligstrósido aglicona de 1 g/kg se mezclan con agua destilada y desionizada (100 l) que tiene un pH = <7, y se agita durante 24 horas. La mezcla se deja reposar durante 1 hora y las dos capas se separan por gravedad. Se obtiene la capa más pesada y se filtra para eliminar las sustancias insolubles. La solución final tiene un contenido total de 500 mg/l de oleocantadiol, oleaceinediol, oleomissionadiol, oleokoronadiol, oleuropeinediol y ligstrodiol.
[0071] Ejemplo 6
[0072] Aceite de oliva (100 l) que contiene 1 g/kg de oleocanthal, que no contiene los otros fenoles2-6,se mezcla con agua destilada y desionizada (100 l) y se agita mecánicamente durante 24 horas. La mezcla se deja reposar durante 24 horas y las dos capas se separan por gravedad. La capa más pesada se recoge y se filtra para eliminar las sustancias insolubles. La solución final tiene un contenido de oleocanthal de 500 mg/l.
[0073] 3. Principio de método para la obtención de la forma monoaldehídica de la aglicona cíclica de oleuropeína (5) y ligstrósido (6)
[0074] De acuerdo con una realización preferida de la invención, el método consiste en las siguientes etapas:
[0075] 3a. Si el pH de la solución acuosa A2 o B (comprendida en el ámbito de las reivindicaciones adjuntas) que contiene oleomissionadiol(9)se ajusta a ligeramente alcalino (7,5-8), se obtiene al evaporarse la forma monoaldehído de la aglicona cíclica de oleuropeína presente en dos formas isoméricas(5a,b). Para eliminar cualquier residuo inorgánico, el producto final de la evaporación se disuelve en un disolvente orgánico (por ejemplo, diclorometano o acetato de etilo), se filtra y se evapora para dar el producto E.
[0076] 3b. Si la solución inicial A2 o B contiene oleokoronadiol(10)en lugar de oleomissionadiol(9), a continuación el procedimiento anterior da como resultado una forma monoaldehído pura de la aglicona cíclica de ligstrósido en dos formas isoméricas(6a, b).
[0077] Ejemplo 7
[0078] El aceite de oliva (10 l) que contiene 1 g/kg de oleokoronal y ninguna de las sustancias(1-3,5,6)se mezcla con agua destilada (100 l) y se agita mecánicamente durante 24 horas. La mezcla se deja reposar durante 24 horas y las dos capas se separan por gravedad. La capa más pesada se recoge y se filtra para eliminar las sustancias insolubles. El pH de la capa acuosa se ajusta a 7,6 y la solución se agita durante 24 horas, se filtra y se obtiene una solución de monoaldehído de aglicona cíclica de ligstrósido. La solución se evapora, el residuo se redisuelve en diclorometano (500 ml), se filtra y la solución se evapora para producir la forma monoaldehídica de la aglicona cíclica ligstrósido(6a, b)(7 g) con una pureza de >95 %.

Claims (9)

1. REIVINDICACIONES
1. Un método para obtener secoiridoides de tipo I y/o II
en donde
R1 = H u OH, R2 = H o COOCH<3>, R3 = X1
individualmente o en cualquier combinación de los mismos
en el que:
el aceite de oliva de la especieOlea europaeaL y todas sus subespecies y cultivares, que contienen secoiridoides del tipo I y/o II en donde R1 = H u OH, R2 = H o COOCH<3>, R3 = CHO y sus tautómeros, ya sea en forma individual o en cualquier combinación de los mismos, entra en contacto con un disolvente hidrófilo, inmiscible con aceite de oliva, se selecciona entre un grupo de disolventes que consiste en polietilenglicol con un peso molecular promedio de 200 a 400 (PEG 200 a PEG400), en una relación en volumen disolvente:aceite de oliva que varía de 1:1 a 1:100 y se agita enérgicamente durante un periodo de tiempo que varía de 5 minutos a 24 horas. La mezcla se deja reposar, las dos fases se separan por gravedad o por centrifugación, se recoge la capa más pesada, la solución se clarifica por filtración y se obtiene la solución (A1), que contiene las sustancias de fórmula I y/o II con R1 = H u OH, R2 = H o COOCH<3>, R3 = X1, individualmente o en cualquier combinación de los mismos.
2. El método para obtener secoiridoides de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende, además, las siguientes etapas:
Mezcla de la solución (A1) con agua desionizada y destilada que tiene un pH = <7 a una relación en volumen de disolvente: agua que varía de 1:1 a 1:100, agitando durante un periodo de tiempo que varía de 1 a 24 horas, eliminando los componentes insolubles por filtración y recogida de la solución (B), que contiene las sustancias de fórmula I y/o II con R1 = H u OH, R2 = H o COOCH<3>, R3 = CH(OH)<2>, individualmente o en cualquier combinación de los mismos.
3. El método para obtener secoiridoides de acuerdo con la reivindicación 2, que comprende, además, las siguientes etapas:
Hacer pasar la solución (B) por una columna que contiene resina de adsorción, lavar la resina con un disolvente orgánico de bajo punto de ebullición (<100 °C) miscible con agua, seleccionado entre un grupo de disolventes que comprende metanol, etanol, acetonitrilo o acetona, recoger la solución y concentrarla por evaporación a presión reducida para obtener el producto (C) que contiene las sustancias de fórmula I y/o II con R1 = H u OH, R2 = H o COOCH<3>, R3 = CHO y sus tautómeros, ya sea individualmente cualquier sustancia o cualquier combinación de los mismos.
4. El método para obtener secoiridoides de acuerdo con la reivindicación 2, que comprende, además, las siguientes etapas:
En la solución (B) que contiene selectivamente los compuestos de fórmula I con R1 = H u OH, R2 = COOCH<3>, R3 = CH(OH)<2>, individualmente o en cualquier combinación de los mismos, el pH se ajusta a 7,5-8 utilizando NaHCO<3>seguido de la evaporación de la porción acuosa de la solución, redisolución del residuo en un
disolvente orgánico no polar, filtración, evaporación y extracción del producto (E) que contiene las sustancias de fórmula II con R1 = H u OH, R3 = CHO y sus tautómeros, individualmente o en combinación de los mismos.
5. Secoiridoides de tipo I y/o II
en donde
I: R1 = H, R2 = H o COOCH<3>, R3 = X1
II: R1 = H u OH, R3 = X1.
6. Uso de secoiridoides de tipo I y/o II
en donde
I: R1 = H, R2 = H o COOCH<3>, R3 = X1
II: R1 = H u OH, R3 = X1
individualmente o en cualquier combinación de los mismos, mezclados con excipientes adecuados para la elaboración de preparados farmacéuticos, siendo dichos preparados farmacéuticos i) preparados para administración oral o transdérmica, ii) soluciones inyectables, iii) supositorios o iv) comprimidos producidos tras
secado y compresión.
7. Uso de secoiridoides de tipo I y/o II
en donde
I: R1 = H, R2 = H o COOCH<3>, R3 = X1
II: R1 = H u OH, R3 = X1
mezclados con excipientes adecuados para la fabricación de complementos nutricionales.
8. Los preparados farmacéuticos producidos en la reivindicación 6, para su uso en el tratamiento de cáncer, diabetes, hiperlipidemia, enfermedades inflamatorias, como neuroprotectores y para su uso en la prevención de la creación de placas ateroscleróticas y trombos.
9. Uso de secoiridoides de tipo I y/o II
en donde
R1= H u OH, R2 = H o COOCH<3>, R3 = X1 para la preparación de soluciones para esterilizar materiales sólidos.
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