ES3055314T3

ES3055314T3 - Expansion of tumor infiltrating lymphocytes with potassium channel agonists and therapeutic uses thereof

Info

Publication number: ES3055314T3
Application number: ES18704639T
Authority: ES
Inventors: Krit Ritthipichai; Michael Lotze
Original assignee: Iovance Biotherapeutics Inc
Current assignee: Iovance Biotherapeutics Inc
Priority date: 2017-01-06
Filing date: 2018-01-05
Publication date: 2026-02-11
Anticipated expiration: 2038-01-05
Also published as: JP7664020B2; JP2020503351A; EP3565586C0; JP2023016831A; WO2018129336A1; EP3565586A1; US20230210966A1; EP3565586B1; CA3049165A1; US11357841B2; US20190374577A1; JP7682840B2

Abstract

En este documento se describen métodos para expandir linfocitos infiltrantes de tumores (TIL) utilizando un agonista del canal de potasio, tal como un agonista de KCa3.1 (canal IK), y usos de dichos TIL expandidos en el tratamiento de enfermedades tales como el cáncer. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Expansión de linfocitos infiltrantes en tumores con agonistas de los canales de potasio y usos terapéuticos de los mismos

[0003] Campo de la invención

[0004] Se divulgan en el presente documento métodos de expansión de linfocitos infiltrantes en tumores (TILs) utilizando agonistas de los canales de potasio, incluido K<Ca>3.1, y las composiciones de poblaciones de TILs obtenidas a partir de ellas. Además, en este documento se divulgan usos terapéuticos de los TIL expandidos utilizando agonistas de los canales de potasio, incluido en el tratamiento de enfermedades tales como el cáncer. Antecedentes de la invención

[0005] El tratamiento de cánceres voluminosos, refractarios que utiliza transferencia autóloga adoptiva de linfocitos infiltrantes en tumores (TILs) representa un enfoque terapéutico poderoso para pacientes con mal pronóstico. Gattinoni, et al., Nat. Rev. Immunol.2006, 6, 383-393. Los TIL están dominados por células T, y la expansión de TIL basada en IL-2 seguida de un "proceso de expansión rápida" (REP) se ha convertido en un método preferido para la expansión de TIL debido a su velocidad y eficiencia. Dudley, et al., Science 2002, 298, 850-54; Dudley, et al., J. Clin. Oncol.2005, 23, 2346-57; Dudley, et al., J. Clin. Oncol.2008, 26, 5233-39; Riddell, et al., Science 1992, 257, 238-41; Dudley, et al., J. Immunother.2003, 26, 332-42; Jia He, et al., Chinese Journal of Cancer 2012, 32(6), 287-294. Se han explorado varios enfoques para mejorar las respuestas a la terapia TIL en el melanoma y ampliar la terapia TIL a otros tipos de tumores, con un éxito limitado, y el campo sigue siendo desafiante. Goff, et al., J. Clin. Oncol. 2016, 34, 2389-97; Dudley, et al., J. Clin. Oncol. 2008, 26, 5233-39; Rosenberg, et al., Clin. Cancer Res.2011, 17, 4550-57.

[0006] Los canales de potasio (canales de K<+>) son una clase de canales de conductancia iónica que atraviesan la membrana y que se encuentran comúnmente en las células. Los canales de K<+>se dividen en cuatro clases principales: (1) canales de potasio controlados por voltaje (K<v>), que se abren o en respuesta a variaciones en el voltaje transmembrana; (2) canales de potasio activados por calcio (K<Ca>), que se abren en respuesta a la presencia de iones de calcio u otras moléculas de señalización; (3) canales de potasio rectificadores hacia el interior (K<IR>), que permiten que la carga positiva pase más fácilmente a la célula; y (4) canales de potasio de dominio de poro en tándem (K<2P>), que están constitutivamente abiertos o poseen una alta activación basal. Dentro de estas cuatro clases, se ha reconocido un número muy grande de suptipos de canales de K<+>. Sin embargo, solo se sabe que las células T expresan dos subtipos de canales de K<+>. Las células T efectoras activadas expresan altos niveles de K<v>1.3 (canal de potasio controlado por voltaje, miembro 3 de la subfamilia relacionada con el agitador, codificado porKCNA3), mientras que los subconjuntos de células T de memoria central e ingenuas activadas expresan altos niveles de K<Ca>3.1 (canal de K<+>activado por Ca2<+>de conductancia intermedia, también conocido como canal IK o el canal SK4, codificado porKCNN4).Feske, et al., Annu. Rev. Immunol.2015, 33, 291-353; Di, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 2010, 107, 1541-46. La inhibición de K<Ca>3.1 suprime la proliferación de células T murinas y la producción de citoquinas. Di, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 2010, 107, 1541-46. Los tejidos necróticos liberan grandes reservas intracelulares de K<+>al espacio extracelular, las altas concentraciones intracelulares de K<+>suprimen la producción de interferón-γ (IFN-γ) en las células T, y la sobreexpresión de K<v>1.3 en las células T murinas mejora la inmunidad antitumoral y la supervivencia del huésped. Eil, et al., Nature 2016, 537, 539-543. Sin embargo, no se ha explorado la influencia de la manipulación de los canales de K<+>en la expansión y el rendimiento de los TIL como terapia para enfermedades como el cáncer.

[0007] La presente invención proporciona el sorprendente hallazgo de que los agonistas, abridores o activadores de canales de K<+>, incluido los agonistas, abridores o activadores del canal de K<Ca>3.1, cuando se emplean en un proceso de expansión de TIL, dan como resultado características fenotípicas de TIL mejoradas y una menor diferenciación de TIL.

[0008] Resumen de la invención

[0009] En una realización, la invención proporciona una población de linfocitos infiltrantes en tumores (TILs) para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde el método comprende los pasos de:

[0010] (a) resecar un tumor de un paciente, comprendiendo el tumor una primera población de TILs;

[0011] (b) fragmentar el tumor en fragmentos de tumor;

[0012] (c) poner en contacto los fragmentos de tumor con un primer medio de cultivo celular;

[0013] (d) realizar una expansión inicial de la primera población de TILs en el primer medio de cultivo celular para obtener una segunda población de TILs, en donde la segunda población de TILs es al menos 5 veces mayor en número que la primera población de TILs, en donde el primer medio de cultivo celular comprende IL-2; (e) realizar una expansión rápida de la segunda población de TILs en un segundo medio de cultivo celular para obtener una tercera población de TILs, en donde la tercera población de TILs es al menos 50 veces mayor en número que la segunda población de TILs después de 7 días desde el inicio de la expansión rápida; en donde el segundo medio de cultivo celular comprende IL-2, OKT-3 (anticuerpo anti-CD3) y células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) alogénicas irradiadas; y en donde la expansión rápida se realiza durante un período de 14 días o menos;

[0014] (f) recolectar la tercera población de TILs; y

[0015] (g) administrar una porción terapéuticamente eficaz de la tercera población de TILs a un paciente con cáncer; en donde el primer medio de cultivo celular o el segundo medio de cultivo celular o tanto el primer medio de cultivo celular como el segundo medio de cultivo celular comprenden además un agonista del canal de potasio, en donde el agonista del canal de potasio es un agonista de K<Ca>3.1 (canal IK) y

[0016] en donde el agonista de K<Ca>3.1 es un compuesto de acuerdo con la Fórmula (1):

[0019]

[0021] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde

[0022] R<a>se selecciona de halo, ciano, hidroxi, tiol, (C<1-6>)alquilo, -NH<2>, y -NR<1>R<2>;

[0023] R<1>y R<2>son independientemente H o (C<1-6>)alquilo;

[0024] X se selecciona del grupo que consiste en S, O y NH;

[0025] Ry R<c>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (C<1-6>)alquilo, (C<1-6>)alcoxilo, halo, nitro, arilo, heteroarilo, (C<1-6>)alquilo y (C<3-7>)cicloalquilo o Ry R<c>junto con los átomos de carbono a los que están unidos forman un anillo seleccionado del grupo que consiste en un anillo arilo, naftilo, antrilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo; y

[0026] R<d>y R<e>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (C<1-6>)alquilo, (C<1-6>)alcoxilo, halo, nitro, arilo, heteroarilo, (C<1-6>)alquilo y (C<3-7>)cicloalquilo o R<d>y R<e>junto con los átomos de carbono a los que están unidos forman un anillo seleccionado del grupo que consiste en un anillo arilo, naftilo, antrilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo;

[0027] con la condición de que si Ry R<c>forman un anillo, entonces R<d>y R<e>no forman un anillo, y si R<d>y R<e>forman un anillo, entonces Ry R<c>no forman un anillo.

[0028] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde la segunda población de TILs comprende una población aumentada de células T con un fenotipo seleccionado del grupo que consiste en CD8<+>CD28<+>, CD8<+>CD27<+>, CD8<+>CD27<+>CD28<+>, CCR7<+>, y combinaciones de los mismos, en relación con una población de referencia de TILs obtenida sin el agonista del canal de potasio, en donde el fenotipo en la segunda población de TILs aumenta en al menos un 5 % en relación con la población de referencia de TILs. En algunos casos, el aumento es de aproximadamente el 10%, aproximadamente el 15%, aproximadamente el 20%, aproximadamente el 25%, aproximadamente el 30%, aproximadamente el 35%, aproximadamente el 40%, aproximadamente el 45%, aproximadamente el 50%, aproximadamente el 55%, aproximadamente el 60%, aproximadamente el 65%, aproximadamente el 70%, aproximadamente el 75%, aproximadamente el 80%, aproximadamente el 85%, aproximadamente el 90%, aproximadamente el 95%, aproximadamente el 100%, aproximadamente el 200%, aproximadamente el 300%, aproximadamente el 400%, aproximadamente el 500%, aproximadamente el 600%, aproximadamente el 700%, aproximadamente el 800%, aproximadamente el 900% o aproximadamente el 1000%.

[0029] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde la tercera población de TILs comprende una población aumentada de células T con un fenotipo seleccionado del grupo que consiste en CD8<+>CD28<+>, CD8<+>CD27<+>, CD8<+>CD27<+>CD28<+>, CCR7<+>, y combinaciones de los mismos, en relación con una población de referencia de TILs obtenida sin el agonista del canal de potasio, en donde el fenotipo en la tercera población de TILs aumenta en al menos un 5 % en relación con la población de referencia de TILs. En algunos casos, el aumento es de aproximadamente el 10%, aproximadamente el 15%, aproximadamente el 20%, aproximadamente el 25%, aproximadamente el 30%, aproximadamente el 35%, aproximadamente el 40%, aproximadamente el 45%, aproximadamente el 50%, aproximadamente el 55%, aproximadamente el 60%, aproximadamente el 65%, aproximadamente el 70%, aproximadamente el 75%, aproximadamente el 80%, aproximadamente el 85%, aproximadamente el 90%, aproximadamente el 95%, aproximadamente el 100%, aproximadamente el 200%, aproximadamente el 300%, aproximadamente el 400%, aproximadamente el 500%, aproximadamente el 600%, aproximadamente el 700%, aproximadamente el 800%, aproximadamente el 900% o aproximadamente el 1000%.

[0030] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde tanto el primer medio de cultivo celular comprende además el agonista de K<Ca>3.1 y el segundo medio de cultivo celular comprende además el agonista de K<Ca>3.1.

[0031] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde la concentración del agonista de K<Ca>3.1 en el primer medio de cultivo celular está entre 1 y 1000 nM.

[0032] En una realización, la invención proporciona una población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde la concentración del agonista de K<Ca>3.1 en el primer medio de cultivo celular es de aproximadamente 100 nM. En una realización, la invención proporciona una población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde la concentración del agonista de K<Ca>3.1 en el segundo medio de cultivo celular está entre 0.1 y 100 mM.

[0033] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde la concentración del agonista de K<Ca>3.1 en el segundo medio de cultivo celular es de aproximadamente 50 mM.

[0034] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde la expansión inicial se realiza durante un período de 21 días o menos.

[0035] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde la expansión inicial se realiza durante un período de 11 días o menos. En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde la expansión rápida se realiza durante un período de 7 días o menos.

[0036] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde el agonista de K<Ca>3.1 es nafto[1,2-d]tiazol-2-ilamina (SKA-31):

[0039]

[0041] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0042] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde el agonista de K<Ca>3.1 es antra[2,1-d]tiazol-2-ilamina (SKA-20):

[0045]

[0046] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0047] También se divulga en este documento el agonista de K<Ca>3.16,7-dicloro-1H-indol-2,3-diona 3-oxima (NS309):

[0050]

[0052] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0053] En una realización, la invención proporciona una población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde el agonista de K<Ca>3.1 es riluzol:

[0056]

[0058] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0059] En una realización, la invención proporciona una población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde el agonista de K<Ca>3.1 se selecciona del grupo que consiste en:

[0060] 5-metilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0061] 5-etilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0062] 5-propilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0063] 5-ciclopropilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0064] 5-(terc-butil)nafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0065] 5-fluoronafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0066] 5-cloronafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0067] 5-bromonafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0068] 5-yodonafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0069] 2-aminonafto[1,2-d]oxazol-5-carbonitrilo;

[0070] nafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

[0071] N<5>-metilnafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

[0072] N<5>,N<5>-dimetilnafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

[0073] N<5>-etilnafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

[0074] 5-(pirrolidin-1-il)nafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0075] 5-metoxinafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0076] 5-trifluorometilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0077] 5-metilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0078] 5-etilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0079] 5-propilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0080] 5-ciclopropilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0081] 5-(terc-butil)nafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0082] 5-fluoronafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0083] 5-cloronafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0084] 5-bromonafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0085] 5-yodonafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0086] 2-aminonafto[2,1-d]oxazol-5-carbonitrilo;

[0087] nafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

[0088] N5-metilnafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

[0089] N5,N5-dimetilnafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

[0090] N5-etilnafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

[0091] 5-(pirrolidin-1-il)nafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0092] 5-metoxinafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0093] 5-trifluorometilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0094] y sales, cocristales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

[0095] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde la IL-2 está presente en una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL en el primer medio de cultivo celular.

[0096] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde la IL-2 está presente en una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL y el anticuerpo OKT-3 está presente en una concentración inicial de aproximadamente 30 ng/mL en el segundo medio de cultivo celular.

[0097] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde la expansión inicial se realiza utilizando un recipiente permeable al gas.

[0098] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde la expansión rápida se realiza utilizando un recipiente permeable al gas.

[0099] En una realización, la invención proporciona una población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde el primer medio de cultivo celular comprende además una citoquina seleccionada del grupo que consiste en IL-4, IL-7, IL-15, IL-21 y combinaciones de las mismas.

[0100] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde el segundo medio de cultivo celular comprende además una citoquina seleccionada del grupo que consiste en IL-4, IL-7, IL-15, IL-21 y combinaciones de las mismas.

[0101] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, que comprende además el paso de tratar al paciente con el agonista del canal de potasio comenzando el día después de la administración de la tercera población de TILs al paciente.

[0102] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, que comprende además el paso de tratar al paciente con el agonista del canal de potasio antes del paso de resecar un tumor del paciente.

[0103] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, que comprende además el paso de tratar al paciente con un régimen de linfodepleción no mieloablativo antes de administrar la tercera población de TILs al paciente.

[0104] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, que comprende además el paso de tratar al paciente con un régimen de linfodepleción no mieloablativo antes de administrar la tercera población de TILs al paciente, en donde el régimen de linfodepleción no mieloablativo comprende los pasos de administración de ciclofosfamida a una dosis de 60 mg/m<2>/día durante dos días seguido de la administración de fludarabina a una dosis de 25 mg/m<2>/día durante cinco días.

[0105] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, que comprende además el paso de tratar al paciente con un régimen de IL-2 de dosis alta que comienza el día después de la administración de la tercera población de TILs al paciente.

[0106] En una realización, la invención proporciona una población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, que comprende además el paso de tratar al paciente con un régimen de IL-2 de dosis alta que comienza el día después de la administración de la tercera población de TILs al paciente, en donde el régimen de IL-2 de dosis alta comprende 600,000 o 720,000 IU/kg de aldesleucina, o un biosimilar o variante del mismo, administrado como una infusión intravenosa en bolo de 15 minutos cada ocho horas hasta la tolerancia. En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en melanoma, cáncer de ovario, cáncer de cuello uterino, cáncer de pulmón, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de cabeza y cuello, carcinoma de células renales, leucemia mieloide aguda, cáncer colorrectal y sarcoma.

[0107] En una realización, la invención proporciona la población de TILs para uso en un método de tratamiento de un cáncer, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de mama con receptor de estrógeno positivo (ER<+>), cáncer de mama con receptor de progesterona positivo (PR<+>), cáncer de mama con receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2<+>), cáncer de mama triple positivo (ER<+>/PR<+>/HER2<+>),cáncer de mama triple negativo (ER-/PR-/HER2-), melanoma doblemente refractario y melanoma uveal (ocular).

[0108] En una realización, la invención proporciona un procesoex vivopara la preparación de una población de linfocitos infiltrantes en tumores (TILs) a partir de un tumor, comprendiendo el proceso los pasos de:

[0109] (a) fragmentar el tumor;

[0110] (b) realizar una expansión inicial de la primera población de TILs en un primer medio de cultivo celular para obtener una segunda población de TILs, en donde la segunda población de TILs es al menos 5 veces mayor en número que la primera población de TILs, en donde el primer medio de cultivo celular comprende IL-2; (b) realizar una expansión rápida de la segunda población de TILs en un segundo medio de cultivo celular para obtener una tercera población de TILs, en donde la tercera población de TILs es al menos 50 veces mayor en número que la segunda población de TILs después de 7 días desde el inicio de la expansión rápida; en donde el segundo medio de cultivo celular comprende IL-2, OKT-3 (anticuerpo anti-CD3), células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) alogénicas irradiadas; y en donde la expansión rápida se realiza durante un período de 14 días o menos;

[0111] (c) recolectar la tercera población de TILs; y

[0112] en donde el primer medio de cultivo celular o el segundo medio de cultivo celular o tanto el primer medio de cultivo celular como el segundo medio de cultivo celular comprenden además un agonista del canal de potasio, en donde el agonista del canal de potasio es un agonista de K<Ca>3.1 (canal IK), y en donde el agonista de K<Ca>3.1 es un compuesto de acuerdo con la Fórmula (1):

[0115]

[0117] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde

[0118] R<a>se selecciona de halo, ciano, hidroxi, tiol, (C<1-6>)alquilo, -NH<2>, y -NR<1>R<2>;

[0119] R<1>y R<2>son independientemente H o (C<1-6>)alquilo;

[0120] X se selecciona del grupo que consiste en S, O y NH;

[0121] Ry R<c>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (C<1-6>)alquilo, (C<1-6>)alcoxilo, halo, nitro, arilo, heteroarilo, (C<1-6>)alquilo y (C<3-7>)cicloalquilo o Ry R<c>junto con los átomos de carbono a los que están unidos forman un anillo seleccionado del grupo que consiste en un anillo arilo, naftilo, antrilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo; y

[0122] R<d>y R<e>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (C<1-6>)alquilo, (C<1-6>)alcoxilo, halo, nitro, arilo, heteroarilo, (C<1-6>)alquilo y (C<3-7>)cicloalquilo o R<d>y R<e>junto con los átomos de carbono a los que están unidos forman un anillo seleccionado del grupo que consiste en un anillo arilo, naftilo, antrilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo;

[0123] con la condición de que si Ry R<c>forman un anillo, entonces R<d>y R<e>no forman un anillo, y si R<d>y R<e>forman un anillo, entonces Ry R<c>no forman un anillo.

[0124] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde la primera población de TILs se obtiene de un tumor o una porción del mismo.

[0125] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde el tumor o porción del mismo ha sido resecado de un paciente.

[0126] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde la segunda población de TILs comprende una población aumentada de células T con un fenotipo seleccionado del grupo que consiste en CD8<+>CD28<+>, CD8<+>CD27<+>, CD8<+>CD27<+>CD28<+>, CCR7<+>, y combinaciones de los mismos, en relación con una población de referencia de TILs obtenida sin el agonista del canal de potasio, en donde el fenotipo en la segunda población de TILs aumenta en al menos un 5 % en relación con la población de referencia de TILs. En algunos casos, el aumento es de aproximadamente el 10%, aproximadamente el 15%, aproximadamente el 20%, aproximadamente el 25%, aproximadamente el 30%, aproximadamente el 35%, aproximadamente el 40%, aproximadamente el 45%, aproximadamente el 50%, aproximadamente el 55%, aproximadamente el 60%, aproximadamente el 65%, aproximadamente el 70%, aproximadamente el 75%, aproximadamente el 80%, aproximadamente el 85%, aproximadamente el 90%, aproximadamente el 95%, aproximadamente el 100%, aproximadamente el 200%, aproximadamente el 300%, aproximadamente el 400%, aproximadamente el 500%, aproximadamente el 600%, aproximadamente el 700%, aproximadamente el 800%, aproximadamente el 900% o aproximadamente el 1000%.

[0127] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde la tercera población de TILs comprende una población aumentada de células T con un fenotipo seleccionado del grupo que consiste en CD8<+>CD28<+>, CD8<+>CD27<+>, CD8<+>CD27<+>CD28<+>, CCR7<+>, y combinaciones de los mismos, en relación con una población de referencia de TILs obtenida sin el agonista del canal de potasio, en donde el fenotipo en la tercera población de TILs aumenta en al menos un 5 % en relación con la población de referencia de TILs. En algunos casos, el aumento es de aproximadamente el 10%, aproximadamente el 15%, aproximadamente el 20%, aproximadamente el 25%, aproximadamente el 30%, aproximadamente el 35%, aproximadamente el 40%, aproximadamente el 45%, aproximadamente el 50%, aproximadamente el 55%, aproximadamente el 60%, aproximadamente el 65%, aproximadamente el 70%, aproximadamente el 75%, aproximadamente el 80%, aproximadamente el 85%, aproximadamente el 90%, aproximadamente el 95%, aproximadamente el 100%, aproximadamente el 200%, aproximadamente el 300%, aproximadamente el 400%, aproximadamente el 500%, aproximadamente el 600%, aproximadamente el 700%, aproximadamente el 800%, aproximadamente el 900% o aproximadamente el 1000%.

[0128] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde tanto el primer medio de cultivo celular comprende además el agonista de K<Ca>3.1 y el segundo medio de cultivo celular comprende además el agonista de K<Ca>3.1.

[0129] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde la concentración del agonista de K<Ca>3.1 en el primer medio de cultivo celular está entre 1 y 1000 nM.

[0130] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde la concentración del agonista de K<Ca>3.1 en el primer medio de cultivo celular es de aproximadamente 100 nM.

[0131] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde la concentración del agonista de K<Ca>3.1 en el segundo medio de cultivo celular está entre 0.1 y 100 mM.

[0132] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde la concentración del agonista de K<Ca>3.1 en el primer medio de cultivo celular es de aproximadamente 50 mM.

[0133] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde la expansión inicial se realiza durante un período de 21 días o menos.

[0134] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor en donde la expansión inicial se realiza durante un período de 11 días o menos.

[0135] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde la expansión rápida se realiza durante un período de 7 días o menos.

[0136] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde el agonista de K<Ca>3.1 es nafto[1,2-d]tiazol-2-ilamina (SKA-31):

[0139]

[0141] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0142] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde el agonista de K<Ca>3.1 es antra[2,1-d]tiazol-2-ilamina (SKA-20):

[0145]

[0147] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0148] También se divulga en este documento que el agonista de K<Ca>3.1 es 6,7-dicloro-1H-indol-2,3-diona 3-oxima (NS309):

[0151]

[0153] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0154] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde el agonista de K<Ca>3.1 es riluzol:

[0157]

[0158] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0159] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde el agonista de K<Ca>3.1 se selecciona del grupo que consiste en:

[0160] 5-metilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0161] 5-etilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0162] 5-propilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0163] 5-ciclopropilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0164] 5-(terc-butil)nafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0165] 5-fluoronafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0166] 5-cloronafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0167] 5-bromonafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0168] 5-yodonafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0169] 2-aminonafto[1,2-d]oxazol-5-carbonitrilo;

[0170] nafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

[0171] N<5>-metilnafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

[0172] N<5>,N<5>-dimetilnafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

[0173] N<5>-etilnafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

[0174] 5-(pirrolidin-1-il)nafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0175] 5-metoxinafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0176] 5-trifluorometilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0177] 5-metilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0178] 5-etilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0179] 5-propilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0180] 5-ciclopropilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0181] 5-(terc-butil)nafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0182] 5-fluoronafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0183] 5-cloronafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0184] 5-bromonafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0185] 5-yodonafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0186] 2-aminonafto[2,1-d]oxazol-5-carbonitrilo;

[0187] nafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

[0188] N5-metilnafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

[0189] N5,N5-dimetilnafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

[0190] N5-etilnafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

[0191] 5-(pirrolidin-1-il)nafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0192] 5-metoxinafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0193] 5-trifluorometilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0194] y sales, cocristales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

[0195] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde la IL-2 está presente en una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL en el primer medio de cultivo celular.

[0196] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde la IL-2 está presente en una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL y el anticuerpo OKT-3 está presente en una concentración inicial de aproximadamente 30 ng/mL en el segundo medio de cultivo celular.

[0197] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde la expansión inicial se realiza utilizando un recipiente permeable al gas.

[0198] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde la expansión rápida se realiza utilizando un recipiente permeable al gas.

[0199] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde el primer medio de cultivo celular comprende además una citoquina seleccionada del grupo que consiste en IL-4, IL-7, IL-15, IL-21 y combinaciones de las mismas.

[0200] En una realización, la invención proporciona el proceso para la preparación de una población de TILs a partir de un tumor, en donde el segundo medio de cultivo celular comprende además una citoquina seleccionada del grupo que consiste en IL-4, IL-7, IL-15, IL-21 y combinaciones de las mismas.

[0201] También se divulga en este documento una población de TILs para el tratamiento del cáncer en un paciente, la población de TILs que se puede obtener mediante un proceso de acuerdo con cualquiera de los procesos anteriores.

[0202] También se divulga en este documento una población de TILs para el tratamiento del cáncer en un paciente, la población de TILs obtenible mediante un proceso de acuerdo con cualquiera de los procesos anteriores, en donde el cáncer se selecciona de melanoma, cáncer de ovario, cáncer de cuello uterino, cáncer de pulmón, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de cabeza y cuello, carcinoma de células renales, leucemia mieloide aguda, cáncer colorrectal, sarcoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) o cáncer de mama triple negativo, melanoma doblemente refractario y melanoma uveal (ocular).

[0203] También se divulga en este documento una población de TILs para el tratamiento del cáncer en un paciente mediante inyección intratumoral o infusión intravenosa, pudiéndose obtener la población de TILs mediante un proceso de acuerdo con cualquiera de los procesos anteriores, en donde el cáncer se selecciona de melanoma, cáncer de ovario, cáncer de cuello uterino, cáncer de pulmón, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de cabeza y cuello, carcinoma de células renales, leucemia mieloide aguda, cáncer colorrectal, sarcoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) o cáncer de mama triple negativo, melanoma doblemente refractario y melanoma uveal (ocular). La población de TILs puede administrarse en combinación con un agente quimioterapéutico.

[0204] En una realización, la invención proporciona un medio de cultivo celular que comprende IL-2 y un agonista del canal de potasio, en donde el agonista del canal de potasio es un agonista de K<Ca>3.1, y en donde el agonista de K<Ca>3.1 es un compuesto de acuerdo con la Fórmula (1):

[0207]

[0209] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde

[0210] R<a>se selecciona de halo, ciano, hidroxi, tiol, (C<1-6>) alquilo, -NH<2>, y -NR<1>R<2>;

[0211] R<1>y R<2>son independientemente H o (C<1-6>) alquilo;

[0212] X se selecciona del grupo que consiste en S, O y NH;

[0213] Ry R<c>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (C<1-6>) alquilo, (C<1-6>) alcoxilo, halo, nitro, arilo, heteroarilo, (C<1-6>) alquilo, y (C<3-7>) cicloalquilo o Ry R<c>junto con los átomos de carbono a los que están unidos forman un anillo seleccionado del grupo que consiste en un anillo arilo, naftilo, antrilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo; y

[0214] R<d>y R<e>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (C<1-6>) alquilo, (C<1-6>) alcoxilo, halo, nitro, arilo, heteroarilo, (C<1-6>) alquilo y (C<3-7>) cicloalquilo o R<d>y R<e>junto con los átomos de carbono a los que están unidos forman un anillo seleccionado del grupo que consiste en un anillo arilo, naftilo, antrilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo;

[0215] con la condición de que si Ry R<c>forman un anillo, entonces R<d>y R<e>no forman un anillo, y si R<d>y R<e>forman un anillo, entonces Ry R<c>no forman un anillo.

[0216] En una realización, la invención proporciona un medio de cultivo celular que comprende IL-2, un anticuerpo anti-CD3 o un fragmento, variante o biosimilar del mismo, células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) y el agonista del canal de potasio.

[0217] En una realización, la invención proporciona un medio de cultivo celular que comprende IL-2 y el agonista del canal de potasio, en donde el agonista de K<Ca>3.1 es nafto[1,2-d]tiazol-2-ilamina (SKA-31):

[0220]

[0222] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0223] En una realización, la invención proporciona un medio de cultivo celular que comprende IL-2 y el agonista del canal de potasio, en donde el agonista de K<Ca>3.1 es antra[2,1-d]tiazol-2-ilamina (SKA-20):

[0226]

[0228] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0229] También se divulga en este documento que el agonista de K<Ca>3.1 es 6,7-dicloro-1H-indol-2,3-diona 3-oxima (NS309):

[0232]

[0233] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0234] En una realización, la invención proporciona un medio de cultivo celular que comprende IL-2 y el agonista del canal de potasio, en donde el agonista de K<Ca>3.1 es riluzol:

[0237]

[0239] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0240] En una realización, la invención proporciona un medio de cultivo celular que comprende IL-2 y el agonista del canal de potasio, en donde el agonista de K<Ca>3.1 se selecciona del grupo que consiste en:

[0241] 5-metilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0242] 5-etilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0243] 5-propilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0244] 5-ciclopropilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0245] 5-(terc-butil)nafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0246] 5-fluoronafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0247] 5-cloronafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0248] 5-bromonafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0249] 5-yodonafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0250] 2-aminonafto[1,2-d]oxazol-5-carbonitrilo;

[0251] nafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

[0252] N<5>-metilnafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

[0253] N<5>,N<5>-dimetilnafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

[0254] N<5>-etilnafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

[0255] 5-(pirrolidin-1-il)nafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0256] 5-metoxinafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0257] 5-trifluorometilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0258] 5-metilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0259] 5-etilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0260] 5-propilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0261] 5-ciclopropilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0262] 5-(terc-butil)nafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0263] 5-fluoronafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0264] 5-cloronafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0265] 5-bromonafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0266] 5-yodonafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0267] 2-aminonafto[2,1-d]oxazol-5-carbonitrilo;

[0268] nafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

[0269] N<5>-metilnafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

[0270] N<5>,N<5>-dimetilnafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

[0271] N<5>-etilnafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

[0272] 5-(pirrolidin-1-il)nafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0273] 5-metoxinafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0274] 5-trifluorometilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0275] y sales, cocristales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

[0276] En una realización, la invención proporciona un kit que comprende el medio de cultivo celular descrito en este documento.

[0277] En una realización, la invención proporciona un kit que comprende el medio de cultivo celular como se describe en este documento y un tumor.

[0278] También se divulga en este documento el uso de un agonista del canal de potasio en la fabricación de una población de TILs para el tratamiento del cáncer. Acertadamente, el agonista del canal de potasio es un agonista de K<Ca>3.1 (canal IK).

[0279] También se divulga en este documento el uso de un agonista del canal de potasio en la fabricación de una población de TILs para el tratamiento del cáncer, en donde el agonista del canal de potasio es un agonista de K<Ca>3.1. También se divulga en este documento el uso de un agonista del canal de potasio en la fabricación de una población de TILs para el tratamiento del cáncer, en donde el agonista del canal de potasio es un agonista de K<Ca>3.1 descrito en este documento. Apropiadamente, el agonista del canal de potasio es SKA-31, SKA-20, NS309, riluzol o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0280] Breve descripción de los dibujos

[0281] El resumen anterior, así como la siguiente descripción detallada de la invención, se comprenderán mejor cuando se lean junto con los dibujos adjuntos.

[0282] La FIG.1 ilustra la estrategia de clasificación utilizada en experimentos de citometría de flujo para el análisis de la expresión de K<Ca>3.1 en subconjuntos de células T.

[0283] La FIG 2 ilustra los resultados de los experimentos de citometría de flujo realizados utilizando la estrategia representada en la FIG.1. El panel superior muestra el subconjunto CD3<+>CD4<+>y el panel inferior muestra el subconjunto CD3<+>CD8<+>. Se muestran ambos subconjuntos K<Ca>3.1<+>y K<Ca>3.1-<.>

[0284] La FIG.3 ilustra la expresión de cuatro subconjuntos de células T: células ingenuas, de memoria central (TCM), de memoria efectora (TEF) y de memoria efectora RA<+>(TEMRA). El panel superior muestra el subconjunto CD3<+>CD4<+>y el panel inferior muestra el subconjunto CD3<+>CD8<+>. Se muestran ambos subconjuntos K<Ca>3.1<+>y K<Ca>3.1-<.>

[0285] La FIG.4 ilustra la expresión cinética de K<Ca>3.1 en dos líneas de células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) de donantes normales y en tres líneas TIL de melanoma. Las células fueron recolectadas y teñidas con anti-CD3, anti-CD8, anti-K<Ca>3.1 y Amcyan los días 1, 3 y 7 después de la activación para determinar la expresión cinética de K<Ca>3.1.

[0286] La FIG.5 ilustra datos de citometría de flujo que muestran el porcentaje de K<Ca>3.1 en subconjunto CD3<+>CD4<+>(arriba) y subconjunto CD3<+>CD8<+>(abajo) el día 0 y el día 3 después de la activación del TCR.

[0287] La FIG.6 ilustra la expresión cinética de K<Ca>3.1 en un curso de 3 días en los subconjuntos CD3<+>CD4<+>(arriba) y CD3<+>CD8<+>(abajo).

[0288] La FIG.7 ilustra datos de citometría de flujo que muestran expresión de K<Ca>3.1 en los subconjuntos CD3<+>CD4<+>(arriba) y CD3<+>CD8<+>(abajo) de PBMC de donantes normales comparados con TIL.

[0289] La FIG. 8 ilustra el porcentaje de expresión de K<Ca>3.1 observada en subconjuntos CD3<+>CD4<+>(arriba) y CD3<+>CD8<+>(abajo) de PBMC de donantes normales comparados con TIL (los valores p representan la diferencia entre PBMC normales y pre REP-TIL utilizando la prueba T de Student no pareada, y los valores p < 0.05 se consideran estadísticamente significativos).

[0290] La FIG.9 ilustra las veces de expansión de TIL de diferentes líneas en presencia del agonista de K<Ca>3.1 SKA-31 ("SKA-31") en relación con un experimento de control realizado sin SKA-31 ("Sin tratamiento").

[0291] La FIG.10 ilustra el porcentaje del subconjunto de células T CD8<+>CD27<+>CD28<+>observado en TILs tratados con agonista de K<Ca>3.1 SKA-31 ("agonista de K+") en comparación con TILs tratados sin SKA-31 ("sin tratamiento") durante REP.

[0292] La FIG. 11 ilustra el porcentaje del subconjunto de células T CD8<+>CD28<+>observado en TILs tratados con agonista de K<Ca>3.1 SKA-31 ("agonista de K+") en comparación con TILs tratados sin SKA-31 ("sin tratamiento") durante REP.

[0293] La FIG. 12 ilustra el porcentaje del subconjunto de células T CD8<+>CD27<+>observado en TILs tratados con agonista de K<Ca>3.1 SKA-31 ("agonista de K+") en comparación con TILs tratados sin SKA-31 ("sin tratamiento") durante REP.

[0294] La FIG.13 ilustra el aumento de la expresión de CCR7<+>en TILs CD4<+>y CD8<+>obtenidos de tres fragmentos de tumor (riñón, mama con receptor de estrógeno positivo (ER<+>) y melanoma) tratados con agonista de K<Ca>3.1 SKA-31 ("agonista de K+") en comparación con TILs tratados sin SKA-31 ("sin tratamiento") durante el pre-REP.

[0295] La FIG.14 ilustra los resultados de experimentos representativos de citometría de flujo realizados para medir la expresión de CCR7<+>.

[0296] La FIG.15 ilustra un aumento estadísticamente significativo de la expresión de CCR7<+>en TILs CD4<+>y CD8<+>obtenidos a partir de catorce fragmentos de tumor.

[0297] La FIG.16 ilustra los resultados de experimentos representativos de citometría de flujo realizados para medir la expresión de CCR7<+>.

[0298] La FIG.17 ilustra un aumento estadísticamente significativo de la expresión de CD25<+>en TILs CD4<+>y CD8<+>obtenidos a partir de dieciséis fragmentos de tumor.

[0299] La FIG.18 ilustra los resultados de experimentos representativos de citometría de flujo realizados para medir la expresión de CD25<+>.

[0300] La FIG. 19 ilustra los recuentos absolutos de células obtenidos para un tumor ovárico durante el pre-REP tratado con agonista de K<Ca>3.1 SKA-31 ("SKA-31") en comparación con TILs tratados sin SKA-31 ("Sin tratamiento").

[0301] La FIG. 20 ilustra los recuentos absolutos de células obtenidos para un tumor de mama durante el pre-REP tratado con agonista de K<Ca>3.1 SKA-31 ("SKA-31") en comparación con TILs tratados sin SKA-31 ("Sin tratamiento").

[0302] La FIG.21 ilustra los resultados de la secreción de IFN-γ de los TIL después del cocultivo de células tumorales de melanoma y TIL juntos durante 24 horas en una relación de efector:objetivo (E:T) de 3:1, utilizando TILs preparados con y sin SKA-31. NT se refiere a ningún tratamiento(es decir,TIL preparados sin SKA-31). La FIG.22 ilustra la potencia letal (medida por la caspasa-3) para la línea celular TIL M1032 con bloqueo de MHC-I (usando anticuerpos) y sin bloqueo de MHC-I ("desbloqueado") en diferentes relaciones E:T.

[0303] La FIG. 23 ilustra la potencia letal (medida por la caspasa-3) de la línea celular TIL M1041 con bloqueo de MHC-I (usando anticuerpos) y sin bloqueo de MHC-I ("desbloqueado") en diferentes relaciones E:T.

[0304] La FIG. 24 ilustra un proceso de expansión y tratamiento de TIL. Agonistas de los canales de potasio de la presente divulgación, incluidos uno o más agonistas de K<Ca>3.1 de la presente divulgación, se pueden utilizar tanto en la etapa pre-REP (mitad superior de la figura) y/o en la etapa REP (mitad inferior de la figura) y se pueden agregar cuando se agrega IL-2 a cada cultivo celular. El paso 1 se refiere a la adición de 4 fragmentos de tumor en 10 matraces G-Rex 10. En el paso 2, se obtienen aproximadamente 40 × 10<6>TILs o más. En el paso 3, se produce una división en 36 matraces G-Rex 100 para REP. Los TIL se recolectan mediante centrifugación en el paso 4. El producto TIL fresco se obtiene en el paso 5 después de un tiempo de proceso total de aproximadamente 43 días, momento en el cual los TIL pueden infundirse en un paciente.

[0305] La FIG. La 25 ilustra un protocolo de tratamiento para uso con TIL expandidos con agonistas del canal de potasio de la presente divulgación. La cirugía (y la resección del tumor) se realiza al comienzo, y la quimioterapia de linfodepleción se refiere a la linfodepleción no mieloablativa con quimioterapia como se describe en otra parte de este documento. Los agonistas de los canales de potasio de la presente divulgación también pueden usarse durante la terapia como se describe en este documento después de la administración de los TIL.

[0306] Breve descripción del listado de secuencias

[0307] SEQ ID NO:1 es la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada de muromonab.

[0308] SEQ ID NO:2 es la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera de muromonab.

[0309] SEQ ID NO:3 es la secuencia de aminoácidos de una proteína IL-2 humana recombinante.

[0310] SEQ ID NO:4 es la secuencia de aminoácidos de la aldesleucina.

[0311] SEQ ID NO:5 es la secuencia de aminoácidos de una proteína IL-4 humana recombinante.

[0312] SEQ ID NO:6 es la secuencia de aminoácidos de una proteína IL-7 humana recombinante.

[0313] SEQ ID NO:7 es la secuencia de aminoácidos de una proteína IL-15 humana recombinante.

[0314] SEQ ID NO:8 es la secuencia de aminoácidos de una proteína IL-21 humana recombinante.

[0315] Descripción detallada de la invención

[0316] A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos utilizados en este documento tienen el mismo significado que comúnmente entiende una persona experta en la técnica a la que pertenece esta invención.

[0317] Definiciones

[0318] Los términos "coadministración", "coadministrar", "administrado en combinación con", "administrar en combinación con", "simultáneo" y "concurrente", como se usan en este documento, abarcan la administración de dos o más ingredientes farmacéuticos activos (en una realización preferida de la presente invención, por ejemplo, al menos un agonista del canal de potasio en combinación con una pluralidad de los TIL) a un sujeto de modo que ambos ingredientes farmacéuticos activos y/o sus metabolitos estén presentes en el sujeto al mismo tiempo. La coadministración incluye la administración simultánea en composiciones separadas, la administración en diferentes momentos en composiciones separadas o la administración en una composición en la que están presentes dos o más ingredientes farmacéuticos activos. Se prefiere la administración simultánea en composiciones separadas y la administración en una composición en la que ambos agentes están presentes.

[0319] El término"in vivo"se refiere a un evento que tiene lugar en el cuerpo de un sujeto mamífero.

[0320] El término"ex vivo"se refiere a un evento que tiene lugar fuera del cuerpo de un sujeto mamífero, en un entorno artificial.

[0321] El término"in vitro"se refiere a un evento que tiene lugar en un sistema de prueba. Los ensayosin vitroabarcan ensayos basados en células en los que se pueden emplear células vivas o muertas y también pueden abarcar un ensayo sin células en el que no se emplean células intactas.

[0322] El término "expansión rápida" significa un aumento en el número de TILs específicos de antígeno de al menos aproximadamente 3 veces (o 4, 5, 6, 7, 8 o 9 veces) durante un período de una semana, más preferiblemente al menos aproximadamente 10 veces (o 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 o 90 veces) durante un período de una semana, o más preferiblemente al menos aproximadamente 100 veces durante un período de una semana. Se describen varios protocolos de expansión rápida.

[0323] Los términos "fragmentar", "fragmento" y "fragmentado", tal como se utilizan en este documento para describir procesos para interrumpir un tumor, incluyen métodos de fragmentación mecánica tales como trituración, corte, división y morcelación de tejido tumoral, así como cualquier otro método para interrumpir la estructura física del tejido tumoral.

[0324] En el presente documento, por "linfocitos infiltrantes en tumores" o "TILs" se entiende una población de células obtenidas originalmente como glóbulos blancos que han dejado el torrente sanguíneo de un sujeto y han migrado a un tumor. Los TIL incluyen, pero no se limitan a, células T citotóxicas CD8<+>(linfocitos), células T CD4<+>Th1 y Th17, células asesinas naturales, células dendríticas y macrófagos M1. Los TIL incluyen tanto TIL primarios como secundarios. Los "TIL primarios" son aquellos que se obtienen de muestras de tejido del paciente como se describe en este documento (a veces denominados "recién recolectados"), y los "TIL secundarios" son cualquier población de células TIL que se haya expandido o proliferado como se analiza en este documento, incluidos, pero no limitados a, los TIL a granel y los TIL expandidos ("TILs REP" o "TILs post-REP"). Las poblaciones de células TIL pueden incluir TIL modificados genéticamente.

[0325] Por "población de células" (incluidos los TIL) se entiende en este documento un número de células que comparten rasgos comunes. En general, las poblaciones suelen varían de 1 X 10<6>hasta 1 X 10<10>en número, con diferentes poblaciones de TIL que comprenden diferentes números. Por ejemplo, el crecimiento inicial de TILs primarios en presencia de IL-2 da como resultado una población de TILs a granel de aproximadamente 1 × 10<8>células. La expansión de REP generalmente se realiza para proporcionar poblaciones de 1.5 × 10<9>hasta 1.5 × 10<10>células para infusión.

[0326] En este documento, por "TIL criopreservados" se entiende que los TIL, ya sean primarios, a granel o expandidos (TIL REP), se tratan y almacenan en un rango de aproximadamente -150 °C a -60 °C. Los métodos generales de criopreservación también se describen en otras secciones del presente documento, incluidos los Ejemplos. Para mayor claridad, los "TIL criopreservados" se pueden distinguir de las muestras de tejido congelado que pueden usarse como fuente de TIL primarios.

[0327] En este documento, por "TIL criopreservados descongelados" se entiende una población de TILs que previamente se criopreservaron y luego se trataron para volver a la temperatura ambiente o superior, incluidas, pero no limitadas a, las temperaturas de cultivo celular o las temperaturas en las que se pueden administrar los TIL a un paciente.

[0328] En general, los TIL se pueden definir bioquímicamente, utilizando marcadores de superficie celular, o funcionalmente, por su capacidad de infiltrarse en tumores y efectuar el tratamiento. Los TIL se pueden clasificar generalmente según la expresión de uno o más de los siguientes biomarcadores: CD4, CD8, TCR αβ, CD27, CD28, CD56, CCR7, CD45Ra, CD95, PD-1, y CD25. Además y como alternativa, los TIL pueden definirse funcionalmente por su capacidad de infiltrarse en tumores sólidos tras su reintroducción en un paciente. El término "célula T de memoria central" se refiere a un subconjunto de células T que en el ser humano son CD45R0+ y expresan constitutivamente CCR7 (CCR7<hi>) y CD62L (CD62<hi>). El fenotipo de superficie de las células T de memoria central también incluye TCR, CD3, CD127 (IL-7R) e IL-15R. Los factores de transcripción de las células T de memoria central incluyen BCL-6, BCL-6B, MBD2 y BMI1. Las células T de memoria central secretan principalmente IL-2 y CD40L como moléculas efectoras después de la activación del TCR. Las células T de memoria central predominan en el compartimento CD4 en la sangre y, en el ser humano, están proporcionalmente enriquecidas en los ganglios linfáticos y las amígdalas.

[0329] El término "célula T de memoria efectora" se refiere a un subconjunto de células T humanas o de mamíferos que, al igual que las células T de memoria central, son CD45R0+, pero han perdido la expresión constitutiva de CCR7 (CCR7<lo>) y son heterogéneos o bajos para la expresión de CD62L (CD62L<lo>). El fenotipo de superficie de las células T de memoria central también incluye TCR, CD3, CD127 (IL-7R) e IL-15R. Los factores de transcripción de las células T de memoria central incluyen BLIMP1. Las células T de memoria efectoras secretan rápidamente altos niveles de citoquinas inflamatorias después de la estimulación antigénica, incluidos interferón-γ, IL-4 e IL-5. Las células T de memoria efectoras predominan en el compartimento CD8 en la sangre y, en el ser humano, se enriquecen proporcionalmente en el pulmón, el hígado y el intestino. Las células T CD8<+>de memoria efectora transportan grandes cantidades de perforina.

[0330] El término "sistema cerrado" se refiere a un sistema que está cerrado al entorno exterior. Cualquier sistema cerrado apropiado para métodos de cultivo celular puede emplearse con los métodos de la presente invención. Los sistemas cerrados incluyen, por ejemplo, pero no se limitan a, recipientes G cerrados. Una vez que se agrega un segmento de tumor al sistema cerrado, el sistema no se abre al ambiente exterior hasta que los TIL estén listos para ser administrados al paciente.

[0331] Los términos "células mononucleares de sangre periférica" y "PBMCs" se refieren a una célula de sangre periférica que tiene un núcleo redondo, que incluye linfocitos (células T, células B, células NK) y monocitos. Preferiblemente, las células mononucleares de sangre periférica son células mononucleares de sangre periférica alogénicas irradiadas.

[0332] El término "anticuerpo anti-CD3" se refiere a un anticuerpo o variante del mismo, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal que incluye anticuerpos humanos, humanizados, quiméricos o murinos que se dirigen contra el receptor CD3 en el receptor de antígeno de células T maduras. Los anticuerpos anti-CD3 incluyen OKT-3, también conocido como muromonab. Otros anticuerpos anti-CD3 incluyen, por ejemplo, otelixizumab, teplizumab y visilizumab.

[0333] El término "OKT-3" (también denominado en este documento como "OKT3") se refiere a un anticuerpo monoclonal o biosimilar o variante del mismo, incluidos anticuerpos humanos, humanizados, quiméricos o murinos, dirigidos contra el receptor CD3 en el receptor de antígeno de células T de células T maduras, e incluye formas disponibles comercialmente como OKT-3 (30 ng/mL, MACS GMP CD3 puro, Miltenyi Biotech, Inc., San Diego, CA, USA) y muromonab o variantes, sustituciones conservadoras de aminoácidos, glicoformas o biosimilares de los mismos. Las secuencias de aminoácidos de las cadenas pesada y ligera de muromonab se dan en la Tabla 1 (SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2). Un hibridoma capaz de producir OKT-3 se deposita en la American Type Culture Collection y se le asigna el número de acceso ATCC CRL 8001. Un hibridoma capaz de producir OKT-3 también está depositado en la European Collection of Authenticated Cell Cultures (ECACC) y tiene asignado el número de catálogo 86022706.

[0334] TABLA 1. Secuencias de aminoácidos de muromonab.

[0335]

[0338] El término "IL-2" (también denominado en este documento como "IL2") se refiere al factor de crecimiento de células T conocido como interleucina-2, e incluye todas las formas de IL-2, incluidas las formas humanas y de mamíferos, sustituciones de aminoácidos conservadoras, glicoformas, biosimilares y variantes de las mismas. Se describe la IL-2, por ejemplo, en Nelson, J. Immunol.2004, 172, 3983-88 and Malek, Annu. Rev. Immunol.

[0339] 2008, 26, 453-79. La secuencia de aminoácidos de IL-2 humana recombinante adecuada para uso en la invención se da en la Tabla 2 (SEQ ID NO: 3). Por ejemplo, el término IL-2 abarca formas humanas recombinantes de IL-2 tales como aldesleucina (PROLEUKIN, disponible comercialmente de múltiples proveedores en viales de 22 millones de IU por uso único), así como la forma de IL-2 recombinante suministrada comercialmente por CellGenix, Inc., Portsmouth, NH, EE. UU. (CELLGRO GMP) o ProSpec-Tany TechnoGene Ltd., East Brunswick, NJ, EE. UU. (Cat. No. CYT-209-b) y otros equivalentes comerciales de otros proveedores. La aldesleucina (des-alanil-1, serina-125 IL-2 humana) es una forma recombinante humana no glicosilada de IL-2 con un peso molecular de aproximadamente 15 kDa. La secuencia de aminoácidos de la aldesleucina adecuada para uso en la invención se da en la Tabla 2 (SEQ ID NO: 4). El término IL-2 también abarca las formas pegiladas de IL-2, como se describe en este documento, incluido el profármaco IL2 pegilado NKTR-214, disponible en Nektar Therapeutics, South San Francisco, CA, EE. UU. NKTR-214 y la IL-2 pegilada adecuados para uso en la invención se describen en la publicación de solicitud de patente U.S. No. U.S.

[0340] 2014/0328791 A1 y la publicación de solicitud de patente internacional No. WO 2012/065086 A1. Se describen formas alternativas de IL-2 conjugada adecuadas para uso en la invención en Patentes U.S. Nos.4,766,106, 5,206,344, 5,089,261 y 4902,502. Las formulaciones de IL-2 adecuadas para uso en la invención se describen en la Patente U.S. No.6,706,289.

[0342] TABLA 2. Secuencias de aminoácidos de las interleucinas.

[0344]

[0345]

[0348] El término "IL-4" (también denominado en este documento como "IL4") se refiere a la citoquina conocida como interleucina 4, que es producida por las células T Th2 y por los eosinófilos, basófilos y mastocitos. IL-4 regula la diferenciación de células T auxiliares ingenuas (células Th0) a células T Th2. Steinke and Borish, Respir. Res.2001, 2, 66-70. Tras la activación por IL-4, las células T Th2 posteriormente producen IL-4 adicional en un bucle de retroalimentación positiva. La IL-4 también estimula la proliferación de células B y la expresión del MHC de clase II, e induce el cambio de clase a la expresión de IgE e IgG<1>de células B. La IL-4 humana recombinante adecuada para uso en la invención está disponible comercialmente de múltiples proveedores, incluidos ProSpec-Tany TechnoGene Ltd., East Brunswick, NJ, USA (Cat. No. CYT-211) y ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA (proteína recombinante IL-4 humana, Cat. No. Gibco CTP0043). La secuencia de aminoácidos de IL-4 humana recombinante adecuada para uso en la invención se proporciona en la Tabla 2 (SEQ ID NO: 5).

[0350] El término "IL-7" (también denominado en este documento como "IL7") se refiere a una citoquina derivada de tejido glicosilada conocida como interleucina 7, que puede obtenerse de células estromales y epiteliales, así como de células dendríticas. Fry and Mackall, Blood 2002, 99, 3892-904. IL-7 puede estimular el desarrollo de células T. La IL-7 se une al receptor de IL-7, un heterodímero que consiste en el receptor alfa de IL-7 y el receptor de cadena gamma común, que emite una serie de señales importantes para el desarrollo de las células T dentro del timo y la supervivencia dentro de la periferia. La IL-7 humana recombinante adecuada para uso en la invención está disponible comercialmente de múltiples proveedores, incluidos ProSpec-Tany TechnoGene Ltd., East Brunswick, NJ, USA (Cat. No. CYT-254) y ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA (proteína recombinante IL-7 humana, Cat. No. Gibco PHC0071). La secuencia de aminoácidos de la IL-7 humana recombinante adecuada para uso en la invención se proporciona en la Tabla 2 (SEQ ID NO: 6).

[0352] El término "IL-15" (también denominado en este documento como "IL15") se refiere al factor de crecimiento de células T conocido como interleucina-15, e incluye todas las formas de IL-15, incluidas las formas humanas y de mamíferos, sustituciones de aminoácidos conservadoras, glicoformas, biosimilares y variantes de las mismas. Se ha descrito la IL-15, por ejemplo, en Fehniger and Caligiuri, Blood 2001, 97, 14-32. IL-15 comparte subunidades del receptor de señalización β y γ con IL-2. La IL-15 humana recombinante es una cadena polipeptídica única, no glicosilada, que contiene 114 aminoácidos (y una metionina N-terminal) con una masa molecular de 12.8 kDa. La IL-15 humana recombinante está disponible comercialmente a través de múltiples proveedores, incluidos ProSpec-Tany TechnoGene Ltd., East Brunswick, NJ, USA (Cat. No. CYT-230-b) y ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA (proteína recombinante IL-15 humana, Cat. No.34-8159-82). La secuencia de aminoácidos de la IL-15 humana recombinante adecuada para uso en la invención se proporciona en la Tabla 2 (SEQ ID NO: 7).

[0354] El término "IL-21" (también denominado en este documento como "IL21") se refiere a la proteína citoquina pleiotrópica conocida como interleucina-21, e incluye todas las formas de IL-21, incluidas las formas humanas y de mamíferos, sustituciones de aminoácidos conservadoras, glicoformas, biosimilares y variantes de las mismas. Se describe la IL-21, por ejemplo, en Spolski and Leonard, Nat. Rev. Drug. Disc.2014, 13, 379-95. La IL-21 es producida principalmente por células T asesinas naturales y células T CD4<+>humanas activadas. La IL-21 humana recombinante es una cadena polipeptídica única, no glicosilada, que contiene 132 aminoácidos con una masa molecular de 15.4 kDa. La IL-21 humana recombinante está disponible comercialmente a través de múltiples proveedores, incluidos ProSpec-Tany TechnoGene Ltd., East Brunswick, NJ, USA (Cat. No. CYT-408-b) y ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA (proteína recombinante IL-21 humana, Cat. No.14-8219-80). La secuencia de aminoácidos de IL-21 humana recombinante adecuada para uso en la invención se da en la Tabla 2 (SEQ ID NO: 8).

[0356] Cuando se indica "una cantidad eficaz antitumoral", "una cantidad eficaz inhibidora de tumores" o "cantidad terapéutica", la cantidad precisa de las composiciones de la presente invención que se va a administrar puede ser determinada por un médico teniendo en cuenta las diferencias individuales en edad, peso, tamaño del tumor, extensión de la infección o metástasis y condición del paciente (sujeto). En general, se puede afirmar que una composición farmacéutica que comprende los linfocitos infiltrantes en tumores (por ejemplo, TIL secundarios o linfocitos citotóxicos modificados genéticamente) descritos en este documento se puede administrar en una dosis de 10<4>a 10<11>células/kg de peso corporal (por ejemplo, 10<5>a 10<6>, 10<5>a 10<10>, 10<5>a 10<11>, 10<6>a 10<10>, 10<6>a 10<11>.10<7>a 10<11>, 10<7>a 10<10>, 10<8>a 10<11>, 10<8>a 10<10>, 10<9>a 10<11>, o 10<9>a 10<10>células/kg de peso corporal), incluidos todos los valores enteros dentro de esos rangos. Las composiciones de linfocitos infiltrantes en tumores (incluidos en algunos casos, linfocitos citotóxicos modificados genéticamente) también pueden administrarse varias veces en estas dosificaciones. Los linfocitos infiltrados en el tumor (incluso, en algunos casos, genéticamente) se pueden administrar mediante técnicas de infusión que se conocen comúnmente en inmunoterapia (véase, por ejemplo, Rosenberg et al., New Eng. J. of Med.319: 1676, 1988).

[0357] La dosificación óptima y el régimen de tratamiento para un paciente en particular pueden ser fácilmente determinados por un experto en el arte de la medicina monitorizando al paciente para detectar signos de enfermedad y ajustando el tratamiento en consecuencia.

[0359] El término "tumor líquido" se refiere a una masa anormal de células que es de naturaleza fluida. Los cánceres de tumores líquidos incluyen, pero no se limitan a, leucemias, mielomas y linfomas, así como otras malignidades hematológicas. Los TIL obtenidos a partir de tumores líquidos también pueden denominarse en este documento linfocitos infiltrantes de médula ósea (MILs).

[0361] El término "malignidad hematológica" se refiere a cánceres y tumores de mamíferos de los tejidos hematopoyéticos y linfoides, incluidos, pero no limitados a, los tejidos de la sangre, la médula ósea, los ganglios linfáticos y el sistema linfático. Las malignidades hematológicas también se denominan "tumores líquidos". Las malignidades hematológicas incluyen, pero no se limitan a, leucemia linfoblástica aguda (ALL), linfoma linfocítico crónico (CLL), linfoma linfocítico pequeño (SLL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia mieloide crónica (CML), leucemia monocítica aguda (AMoL), linfoma de Hodgkin y linfomas no Hodgkin. El término "malignidad hematológica de células B" se refiere a las malignidades hematológicas que afectan a las células B.

[0363] El término "tumor sólido" se refiere a una masa anormal de tejido que generalmente no contiene quistes o áreas líquidas. Los tumores sólidos pueden ser benignos o malignos. El término "cáncer de tumor sólido" se refiere a tumores sólidos malignos, neoplásicos o cancerosos. Los cánceres de tumores sólidos incluyen, pero no se limitan a, sarcomas, carcinomas y linfomas, como cánceres de pulmón, mama, próstata, colon, recto y vejiga. La estructura tisular de los tumores sólidos incluye compartimentos tisulares interdependientes que incluyen el parénquima (células cancerosas) y las células del estroma de soporte en las que se dispersan las células cancerosas y que pueden proporcionar un microambiente de soporte.

[0365] El término "microambiente", tal como se utiliza en este documento, puede referirse al microambiente del tumor sólido o hematológico en su totalidad o a un subconjunto individual de células dentro del microambiente. El microambiente tumoral, como se utiliza en este documento, se refiere a una mezcla compleja de "células, factores solubles, moléculas de señalización, matrices extracelulares y señales mecánicas que promueven la transformación neoplásica, apoyan el crecimiento y la invasión del tumor, protegen al tumor de la inmunidad del huésped, fomentan la resistencia terapéutica y proporcionan nichos para que prosperen las metástasis dominantes", como se describe en Swartz, et al., Cancer Res., 2012, 72, 2473. Aunque los tumores expresan antígenos que deberían ser reconocidos por las células T, la eliminación del tumor por parte del sistema inmunológico es rara debido a la supresión inmunitaria por parte del microambiente.

[0367] El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales derivadas de una variedad de contraiones orgánicos e inorgánicos conocidos en la técnica. Se pueden formar sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables con ácidos inorgánicos y ácidos orgánicos. Los ácidos inorgánicos preferidos de los cuales se pueden derivar sales incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico y ácido fosfórico. Los ácidos orgánicos preferidos de los cuales se pueden derivar sales incluyen, por ejemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico y ácido salicílico. Se pueden formar sales de adición de bases farmacéuticamente aceptables con bases inorgánicas y orgánicas. Las bases inorgánicas de las que se pueden derivar sales incluyen, por ejemplo, sodio, potasio, litio, amonio, calcio, magnesio, hierro, zinc, cobre, manganeso y aluminio. Las bases orgánicas de las que se pueden derivar sales incluyen, por ejemplo, aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas incluidas las aminas sustituidas naturales, aminas cíclicas y resinas de intercambio iónico básicas. Ejemplos específicos incluyen isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina y etanolamina. En algunas realizaciones, la sal de adición de base farmacéuticamente aceptable se elige entre sales de amonio, potasio, sodio, calcio y magnesio. El término "cocristal" se refiere a un complejo molecular derivado de varios formadores de cocristales conocidos en la técnica. A diferencia de una sal, un cocristal típicamente no implica transferencia de hidrógeno entre el cocristal y el fármaco, y en cambio implica interacciones intermoleculares, como enlaces de hidrógeno, apilamiento de anillos aromáticos o fuerzas dispersivas, entre el formador de cocristal y el fármaco en la estructura cristalina.

[0369] Los términos "vehículo farmacéuticamente aceptable" o "excipiente farmacéuticamente aceptable" pretenden incluir todos y cada uno de los disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardantes de la absorción e ingredientes inertes. El uso de dichos vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables para ingredientes farmacéuticos activos es bien conocido en la técnica. Salvo que cualquier vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable convencional sea incompatible con el ingrediente farmacéutico activo, se contempla su uso en las composiciones terapéuticas de la invención. También se pueden incorporar a las composiciones y métodos descritos ingredientes farmacéuticos activos adicionales, tales como otros fármacos.

[0370] El término "solvato" se refiere a un compuesto en asociación física con una o más moléculas de un disolvente farmacéuticamente aceptable. El término solvato incluye hidratos, en los que el agua está físicamente asociada con un compuesto en estado sólido, así como solvatos orgánicos.

[0372] El término "profármaco" pretende describir un compuesto que puede convertirse en condiciones fisiológicas o por solvólisis en un compuesto biológicamente activo descrito en este documento. Así, el término "profármaco" se refiere a un precursor de un compuesto biológicamente activo que es farmacéuticamente aceptable. Un profármaco puede ser inactivo cuando se administra a un sujeto, pero se conviertein vivoa un compuesto activo, por ejemplo, por hidrólisis. El compuesto profármaco a menudo ofrece las ventajas de solubilidad, compatibilidad tisular o liberación retardada en un organismo mamífero (véase, por ejemplo, Bundgaard, H., Design of Prodrugs (1985) (Elsevier, Amsterdam). El término "profármaco" también pretende incluir cualquier portador unido covalentemente, que libera el compuesto activoin vivocuando se administra a un sujeto. Los profármacos de un compuesto activo, como se describe en este documento, se pueden preparar modificando grupos funcionales presentes en el compuesto activo de tal manera que las modificaciones se escindan, ya sea en una manipulación de rutina oin vivo,para producir el compuesto original activo. Los profármacos incluyen, por ejemplo, compuestos en los que un grupo hidroxi, amino o mercapto está unido a cualquier grupo que, cuando el profármaco del compuesto activo se administra a un sujeto mamífero, se escinde para formar un grupo hidroxi libre, amino libre o mercapto libre, respectivamente. Ejemplos de profármacos incluyen, pero no se limitan a, acetatos, formiatos y derivados de benzoato de un alcohol, varios derivados de éster de un ácido carboxílico o derivados de acetamida, formamida y benzamida de un grupo funcional amina en el compuesto activo.

[0374] "Alquilo" se refiere a un radical de hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que consiste únicamente en átomos de carbono e hidrógeno, que no contiene insaturación y que tiene de uno a diez átomos de carbono.(por ejemplo, (C<1-10>)alquilo o C<1-10>alquilo). Siempre que aparece aquí, un rango numérico tal como "1 a 10" se refiere a cada número entero en el rango dado - por ejemplo, "de 1 a 10 átomos de carbono" significa que el grupo alquilo puede consistir en 1 átomo de carbono, 2 átomos de carbono, 3 átomos de carbono,etc.,hasta 10 átomos de carbono inclusive, aunque la definición también pretende cubrir la aparición del término "alquilo" cuando no se designa específicamente ningún rango numérico. Los grupos alquilo típicos incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, isobutilo, butilo terciario, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, septilo, octilo, nonilo y decilo. La fracción alquilo puede estar unida al resto de la molécula mediante un enlace sencillo, tal como por ejemplo, metilo (Me), etilo (Et),n-propilo (Pr), 1-metiletilo (isopropilo),n-butilo, n-pentilo, 1,1-dimetiletilo (t-butilo) y 3-metilhexilo. A menos que se indique específicamente lo contrario en la memoria descriptiva, un grupo alquilo está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes que son independientemente heteroalquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, hidroxi, halo, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, trimetilsilanilo, - OR<a>, -SR<a>, -OC(O)-R<a>, -N(R<a>)<2>, -C(O)R<a>, -C(O)OR<a>, -OC(O)N(R<a>)<2>, -C(O)N(R<a>)<2>, -N(R<a>)C(O)OR<a>, -N(R<a>)C(O)R<a>, -N(R<a>)C(O)N(R<a>)<2>, N(R<a>)C(NR<a>)N(R<a>)<2>, -N(R<a>)S(O)<t>R<a>(donde t es 1 o 2), -S(O)<t>OR<a>(donde t es 1 o 2), -S(O)<t>N(R<a>)<2>(donde t es 1 o 2), o PO<3>(R<a>)<2>donde cada R<a>es independientemente hidrógeno, fluoroalquilo, carbociclilo, carbociclilalquilo, arilo, aralquilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo.

[0376] "Alcoxi" se refiere al grupo -O-alquilo, que incluye de 1 a 8 átomos de carbono de configuración lineal, ramificada, cíclica y combinaciones de los mismos unidos a la estructura original a través de un oxígeno. Ejemplos incluyen, pero no se limitan a, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, ciclopropiloxi y ciclohexiloxi. "Alcoxi inferior" se refiere a grupos alcoxi que contienen de uno a seis carbonos. El término "alcoxi sustituido" se refiere a alcoxi en el que el constituyente alquilo está sustituido (es decir,-O-(alquilo sustituido)). A menos que se indique específicamente lo contrario en la memoria descriptiva, la fracción alquilo de un grupo alcoxi está opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes que son independientemente: alquilo, heteroalquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, hidroxi, halo, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, trimetilsilanilo, -OR<a>, -SR<a>, -OC(O)-R<a>, - N(R<a>)<2>, -C(O)R<a>, -C(O)OR<a>, -OC(O)N(R<a>)<2>, -C(O)N(R<a>)<2>, -N(R<a>)C(O)OR<a>, - N(R<a>)C(O)R<a>, -N(R<a>)C(O)N(R<a>)<2>, N(R<a>)C(NR<a>)N(R<a>)<2>, -N(R<a>)S(O)<t>R<a>(donde t es 1 o 2), - S(O)<t>OR<a>(donde t es 1 o 2), -S(O)<t>N(R<a>)<2>(donde t es 1 o 2), o PO<3>(R<a>)<2>, donde cada R<a>es independientemente hidrógeno, alquilo, fluoroalquilo, carbociclilo, carbociclilalquilo, arilo, aralquilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo.

[0378] "Amino" o "amina" se refiere a un grupo radical -N(R<a>)<2>, donde cada R<a>es independientemente hidrógeno, alquilo, fluoroalquilo, carbociclilo, carbociclilalquilo, arilo, aralquilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo, a menos que se indique específicamente lo contrario en la memoria descriptiva. Cuando un grupo -N(R<a>)<2>tiene dos sustituyentes R<a>distintos del hidrógeno, pueden combinarse con el átomo de nitrógeno para formar un anillo de 4, 5, 6 o 7 miembros. Por ejemplo, -N(R<a>)<2>se pretende incluir, pero no se limita a, 1-pirrolidinilo y 4-morfolinilo. A menos que se indique específicamente lo contrario en la memoria descriptiva, un grupo amino está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes que son independientemente: alquilo, heteroalquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, hidroxi, halo, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, trimetilsilanilo, -OR<a>, -SR<a>, -OC(O)-R<a>, - N(R<a>)<2>, -C(O)R<a>, -C(O)OR<a>, -OC(O)N(R<a>)<2>, -C(O)N(R<a>)<2>, -N(R<a>)C(O)OR<a>, - N(R<a>)C(O)R<a>, -N(R<a>)C(O)N(R<a>)<2>, N(R<a>)C(NR<a>)N(R<a>)<2>, -N(R<a>)S(O)<t>R<a>(donde t es 1 o 2), - S(O)<t>OR<a>(donde t es 1 o 2), S(O)<t>N(R<a>)<2>(donde t es 1 o 2), o PO<3>(R<a>)<2>, donde cada R<a>es independientemente hidrógeno, alquilo, fluoroalquilo, carbociclilo, carbociclilalquilo, arilo, aralquilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo. El término "amino sustituido" también se refiere a los N-óxidos de los grupos -NHR<d>, y NR<d>R<d>cada uno como se describe arriba. Los N-óxidos se pueden preparar mediante el tratamiento del grupo amino correspondiente con, por ejemplo, peróxido de hidrógeno o ácido m-cloroperoxibenzoico. "Aromático" o "arilo" o "Ar" se refiere a un radical aromático con seis a catorce átomos en el anillo (por ejemplo, C<6>-C<14>aromático o C<6>-C<14>arilo) que tiene al menos un anillo que tiene un sistema de electrones pi conjugados que es carbocíclico (por ejemplo, fenilo, fluorenilo y naftilo). Los radicales bivalentes formados a partir de derivados de benceno sustituidos y que tienen las valencias libres en los átomos del anillo se denominan radicales fenileno sustituidos. Los radicales bivalentes derivados de radicales de hidrocarburos policíclicos univalentes cuyos nombres terminan en "-ilo" por la eliminación de un átomo de hidrógeno del átomo de carbono con la valencia libre se nombran añadiendo "-ideno" al nombre del radical univalente correspondiente, por ejemplo, un grupo naftilo con dos puntos de unión se denomina naftilideno. Siempre que aparece aquí, un rango numérico tal como "6 a 10" se refiere a cada número entero en el rango dado; por ejemplo, “de 6 a 10 átomos en el anillo" significa que el grupo arilo puede consistir en 6 átomos en el anillo, 7 átomos en el anillo,etc.,hasta 10 átomos en el anillo inclusive. El término incluye monocíclicos o policíclicos con anillos fusionados (es decir,anillos que comparten pares adyacentes de átomos en el anillo). A menos que se indique específicamente lo contrario en la memoria descriptiva, una fracción arilo está opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes que son independientemente alquilo, heteroalquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, hidroxi, halo, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, trimetilsilanilo, -OR<a>, -SR<a>, -OC(O)-R<a>, - N(R<a>)<2>, -C(O)R<a>, -C(O)OR<a>, -OC(O)N(R<a>)<2>, -C(O)N(R<a>)<2>, -N(R<a>)C(O)OR<a>, - N(R<a>)C(O)R<a>, -N(R<a>)C(O)N(R<a>)<2>, N(R<a>)C(NR<a>)N(R<a>)<2>, -N(R<a>)S(O)<t>R<a>(donde t es 1 o 2), - S(O)<t>OR<a>(donde t es 1 o 2), -S(O)<t>N(R<a>)<2>(donde t es 1 o 2), o PO<3>(R<a>)<2>, donde cada R<a>es independientemente hidrógeno, alquilo, fluoroalquilo, carbociclilo, carbociclilalquilo, arilo, aralquilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo.

[0379] "Cicloalquilo" se refiere a un radical monocíclico o policíclico que contiene sólo carbono e hidrógeno, y puede estar saturado o parcialmente insaturado. Los grupos cicloalquilo incluyen grupos que tienen de 3 a 10 átomos en el anillo (es decir(C<3-10>)cicloalquilo o C<3-10>cicloalquilo). Siempre que aparece aquí, un rango numérico tal como "3 a 10" se refiere a cada número entero en el rango dado - por ejemplo, “de 3 a 10 átomos de carbono" significa que el grupo cicloalquilo puede estar formado por 3 átomos de carbono,etc.,hasta 10 átomos de carbono inclusive. Los ejemplos ilustrativos de grupos cicloalquilo incluyen, pero no se limitan a, los siguientes grupos: ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, cicloheptilo, ciclooctilo, ciclononilo, ciclodecilo, norbornilo y similares. A menos que se indique específicamente lo contrario en la memoria descriptiva, un grupo cicloalquilo está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes que son independientemente: alquilo, heteroalquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, hidroxi, halo, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, trimetilsilanilo, -OR<a>, -SR<a>, -OC(O)-R<a>, - N(R<a>)<2>, -C(O)R<a>, -C(O)OR<a>, -OC(O)N(R<a>)<2>, -C(O)N(R<a>)<2>, -N(R<a>)C(O)OR<a>, - N(R<a>)C(O)R<a>, -N(R<a>)C(O)N(R<a>)<2>, N(R<a>)C(NR<a>)N(R<a>)<2>, -N(R<a>)S(O)<t>R<a>(donde t es 1 o 2), - S(O)<t>OR<a>(donde t es 1 o 2), -S(O)<t>N(R<a>)<2>(donde t es 1 o 2), o PO<3>(R<a>)<2>, donde cada R<a>es independientemente hidrógeno, alquilo, fluoroalquilo, carbociclilo, carbociclilalquilo, arilo, aralquilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo.

[0380] "Cicloalcoxi" se refiere a un grupo cicloalquilo unido a la estructura original a través de oxígeno. Ejemplos incluyen, pero no se limitan a, ciclopropiloxilo y ciclohexiloxilo.

[0381] "Ciano" se refiere a un radical -CN.

[0382] "Fluoroalquilo" se refiere a un radical alquilo, como se definió anteriormente, que está sustituido por uno o más radicales flúor, como se definió anteriormente, por ejemplo, trifluorometilo, difluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 1-fluorometil-2-fluoroetilo y similares. La parte alquilo del radical fluoroalquilo puede estar opcionalmente sustituida como se definió anteriormente por un grupo alquilo.

[0383] "Halo", "haluro" o, alternativamente, "halógeno" se refieren a flúor, cloro, bromo o yodo. El término "haloC<nm>alquilo" incluye estructuras de C<n-m>alquilo que están sustituidas con uno o más grupos halo o con combinaciones de los mismos. Por ejemplo, los términos "fluoroalquilo" y "trifluoroalquilo" incluyen haloalquilo en el que el halo es flúor.

[0384] "Heteroarilo" o "heteroaromático" o "HetAr" se refiere a un radical aromático de 5 a 18 miembros (por ejemplo, C<5>-C<13>heteroarilo) que incluye uno o más heteroátomos de anillo seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre, y que puede ser un sistema de anillo monocíclico, bicíclico, tricíclico o tetracíclico. Siempre que aparece aquí, un rango numérico tal como "5 a 18" se refiere a cada número entero en el rango dado - por ejemplo, “de 5 a 18 átomos en el anillo" significa que el grupo heteroarilo puede consistir en 5 átomos en el anillo, 6 átomos en el anillo, etc., hasta 18 átomos en el anillo inclusive. Los radicales bivalentes derivados de radicales heteroarilo univalentes cuyos nombres terminan en "-ilo" por la eliminación de un átomo de hidrógeno del átomo con la valencia libre se nombran añadiendo "-ideno" al nombre del radical univalente correspondiente - por ejemplo, un grupo piridilo con dos puntos de unión es un piridilideno. Una fracción "heteroaromática" o "heteroarilo" que contiene N se refiere a un grupo aromático en el que al menos uno de los átomos esqueléticos del anillo es un átomo de nitrógeno. El grupo heteroarilo policíclico puede estar fusionado o no fusionado. Los heteroátomos en el radical heteroarilo están opcionalmente oxidados. Uno o más átomos de nitrógeno, si están presentes, están opcionalmente cuaternizados. El heteroarilo puede unirse al resto de la molécula a través de cualquier átomo de los anillos. Ejemplos de heteroarilos incluyen, pero no se limitan a, azepinilo, acridinilo, benzimidazolilo, benzindolilo, 1,3-benzodioxolilo, benzofuranilo, benzooxazolilo, benzo[d]tiazolilo, benzotiadiazolilo, benzo[b][1,4]dioxepinilo, benzo[b][1,4]oxazinilo, 1,4-benzodioxanilo, benzonaftofuranilo, benzoxazolilo, benzodioxolilo, benzodioxinilo, benzoxazolilo, benzopiranilo, benzopiranonilo, benzofuranilo, benzofuranonilo, benzofurazanilo, benzotiazolilo, benzotienil(benzotiofenilo), benzotieno[3,2-d]pirimidinilo, benzotriazolilo, benzo[4,6]imidazo[1,2-a]piridinilo, carbazolilo, cinnolinilo, ciclopenta[d]pirimidinilo, 6,7-dihidro-5H-ciclopenta[4,5]tieno[2,3-d]pirimidinilo, 5,6-dihidrobenzo[h]quinazolinil, 5,6-dihidrobenzo[h]cinnolinilo, 6,7-dihidro-5H-benzo[6,7]ciclohepta[1,2-c]piridazinilo, dibenzofuranilo, dibenzotiofenilo, furanilo, furazanilo, furanonilo, furo[3,2-c]piridinilo, 5,6,7,8,9,10-hexahidrocicloocta[d]pirimidinilo, 5,6,7,8,9,10-hexahidrocicloocta[d]piridazinilo, 5,6,7,8,9,10-hexahidrocicloocta[d]piridinilo, isotiazolilo, imidazolilo, indazolilo, indolilo, indazolilo, isoindolilo, indolinilo, isoindolinilo, isoquinolilo, indolizinilo, isoxazolilo, 5,8-metano-5,6,7,8-tetrahidroquinazolinilo, naftiridinilo, 1,6-naftiridinonilo, oxadiazolilo, 2-oxoazepinilo, oxazolilo, oxiranilo, 5,6,6a,7,8,9,10,10a-octahidrobenzo[h]quinazolinilo, 1-fenil-1H-pirrolilo, fenazinilo, fenotiazinilo, fenoxazinilo, ftalazinilo, pteridinilo, purinilo, piranilo, pirrolilo, pirazolilo, pirazolo[3,4-d]pirimidinilo, piridinilo, pirido[3,2-d]pirimidinilo, pirido[3,4-d]pirimidinilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, tetrahidroquinolinilo, 5,6,7,8-tetrahidroquinazolinilo, 5,6,7,8-tetrahidrobenzo[4,5]tieno[2,3-d]pirimidinilo, 6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciclohepta[4,5]tieno[2,3-d]pirimidinilo, 5,6,7,8-tetrahidropirido[4,5-c]piridazinilo, tiazolilo, tiadiazolilo, tiapiranilo, triazolilo, tetrazolilo, triazinilo, tieno[2,3-d]pirimidinilo, tieno[3,2-d]pirimidinilo, tieno[2,3-c]piridinilo y tiofenilo (es decir,tienilo). A menos que se indique específicamente lo contrario en la memoria descriptiva, una fracción heteroarilo está opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes que son independientemente: alquilo, heteroalquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, hidroxi, halo, ciano, nitro, oxo, tioxo, trimetilsilanilo, -OR<a>, -SR<a>, -OC(O)-R<a>, -N(R<a>)<2>, -C(O)R<a>, -C(O)OR<a>, -OC(O)N(R<a>)<2>, -C(O)N(R<a>)<2>, -N(R<a>)C(O)OR<a>, - N(R<a>)C(O)R<a>, -N(R<a>)C(O)N(R<a>)<2>, N(R<a>)C(NR<a>)N(R<a>)<2>, -N(R<a>)S(O)<t>R<a>(donde t es 1 o 2), -S(O)<t>OR<a>(donde t es 1 o 2), -S(O)<t>N(R<a>)<2>(donde t es 1 o 2), o PO<3>(R<a>)<2>, donde cada R<a>es independientemente hidrógeno, alquilo, fluoroalquilo, carbociclilo, carbociclilalquilo, arilo, aralquilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo. El heteroarilo sustituido también incluye sistemas de anillo sustituidos con uno o más sustituyentes de óxido (-O-), tales como, por ejemplo, N-óxidos de piridinilo. Otros ejemplos no limitantes de anillos heterocíclicos incluyen azetidina, pirrolidina, imidazolidina, piperidina y piperazina.

[0386] "Hidroxi" se refiere a un radical -OH.

[0388] "Nitro" se refiere al radical -NO<2>.

[0390] Los términos "anticuerpo" y su forma plural "anticuerpos" se refieren a inmunoglobulinas completas y cualquier fragmento de unión al antígeno ("porción de unión al antígeno") o cadenas individuales de los mismos. Un "anticuerpo" se refiere además a una glicoproteína que comprende al menos dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro, o una porción de unión al antígeno de las mismas. Cada cadena pesada se compone de una región variable de cadena pesada (abreviada en este documento como V<H>) y una región constante de cadena pesada. La región constante de la cadena pesada se compone de tres dominios, CH1, CH2 y CH3. Cada cadena ligera se compone de una región variable de cadena ligera (abreviada aquí como V<L>) y una región constante de cadena ligera. La región constante de la cadena ligera se compone de un dominio, C<L>. Las regiones V<H>y V<L>de un anticuerpo pueden subdividirse además en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones determinantes de complementariedad (CDR) o regiones hipervariables (HVR), y que pueden intercalarse con regiones más conservadas, denominadas regiones marco (FR). Cada V<H>y V<L>se compone de tres CDR y cuatro FR, dispuestos desde el aminioterminal hasta el carboxiterminal en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras contienen un dominio de unión que interactúa con un epítopo o epítopos de antígeno. Las regiones constantes de los anticuerpos pueden mediar la unión de la inmunoglobulina a los tejidos o factores del huésped, incluidas varias células del sistema inmunológico (por ejemplo, células efectoras) y el primer componente (Clq) del sistema del complemento clásico.

[0392] El término "antígeno" se refiere a una sustancia que induce una respuesta inmune. En algunas realizaciones, un antígeno es una molécula capaz de ser unida por un anticuerpo o un TCR si es presentada por moléculas del complejo principal de histocompatibilidad (MHC). El término "antígeno", tal como se utiliza en este documento, también abarca los epítopos de células T. Un antígeno además es capaz de ser reconocido por el sistema inmunológico. En algunas realizaciones, un antígeno es capaz de inducir una respuesta inmune humoral o una respuesta inmune celular que conduce a la activación de linfocitos B y/o linfocitos T. En algunos casos, esto puede requerir que el antígeno contenga o esté vinculado a un epítopo de células Th. Un antígeno también puede tener uno o más epítopos (por ejemplo, epítopos B y T). En algunas realizaciones, un antígeno reaccionará preferiblemente, típicamente de una manera altamente específica y selectiva, con su anticuerpo o TCR correspondiente y no con la multitud de otros anticuerpos o TCR que pueden ser inducidos por otros antígenos.

[0394] Los términos "anticuerpo monoclonal", "mAb", "composición de anticuerpo monoclonal" o sus formas plurales se refieren a una preparación de moléculas de anticuerpos de composición molecular única. Una composición de anticuerpo monoclonal muestra una única especificidad de unión y afinidad por un epítopo particular. Se pueden fabricar anticuerpos monoclonales específicos para ciertos receptores utilizando el conocimiento y la habilidad en la técnica de inyectar a sujetos de prueba el antígeno adecuado y luego aislar hibridomas que expresan anticuerpos que tienen la secuencia o las características funcionales deseadas. El ADN que codifica los anticuerpos monoclonales se aísla y secuencia fácilmente mediante procedimientos convencionales (por ejemplo, mediante el uso de sondas de oligonucleótidos capaces de unirse específicamente a los genes que codifican las cadenas pesadas y ligeras de los anticuerpos monoclonales). Las células de hibridoma sirven como fuente preferida de dicho ADN. Una vez aislado, el ADN puede colocarse en vectores de expresión, que luego se transfectan en células huésped tales como células deE. coli, células COS de simio, células de ovario de hámster chino (CHO) o células de mieloma que de otro modo no producen proteína de inmunoglobulina, para obtener la síntesis de anticuerpos monoclonales en las células huésped recombinantes. La producción recombinante de anticuerpos se describirá con más detalle a continuación.

[0396] Los términos "porción de unión al antígeno" o "fragmento de unión al antígeno" de un anticuerpo (o simplemente "porción de anticuerpo" o "fragmento"), como se utilizan en este documento, se refieren a uno o más fragmentos de un anticuerpo que conservan la capacidad de unirse específicamente a un antígeno. Se ha demostrado que la función de unión al antígeno de un anticuerpo puede ser realizada por fragmentos de un anticuerpo de longitud completa. Ejemplos de fragmentos de unión incluidos en el término "porción de unión al antígeno" de un anticuerpo incluyen (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste en los dominios V<L>, V<H>, C<L>y CH1; (ii) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab unidos por un puente disulfuro en la región bisagra; (iii) un fragmento Fd que consiste en los dominios V<H>y CH1; (iv) un fragmento Fv que consiste en los dominios V<L>y V<H>de un solo brazo de un anticuerpo, (v) un fragmento de anticuerpo de dominio (Ward, et al., Nature, 1989, 341, 544-546), que puede consistir en un dominio V<H>o V<L>; y (vi) una región determinante de complementariedad (CDR) aislada. Además, aunque los dos dominios del fragmento Fv, V<L>y V<H>, están codificados por genes separados, se pueden unir, mediante métodos recombinantes, mediante un enlazador sintético que permite fabricarlos como una única cadena proteica en la que las regiones V<L>y V<H>se aparean para formar moléculas monovalentes conocidas como Fv de cadena simple (scFv); véase, por ejemplo, Bird, et al., Science 1988, 242, 423-426; y Huston, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988, 85, 5879-5883). También se pretende que dichos anticuerpos scFv queden comprendidos dentro de los términos "porción de unión al antígeno" o "fragmento de unión al antígeno" de un anticuerpo. Estos fragmentos de anticuerpos se obtienen utilizando técnicas convencionales conocidas por aquellos con experiencia en la materia, y los fragmentos se examinan para determinar su utilidad de la misma manera que los anticuerpos intactos.

[0398] El término "anticuerpo humano", tal como se utiliza en el presente documento, pretende incluir anticuerpos que tienen regiones variables en las que tanto la región marco como la región CDR se derivan de secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana. Además, si el anticuerpo contiene una región constante, dicha región constante también se deriva de secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana. Los anticuerpos humanos de la invención pueden incluir residuos de aminoácidos no codificados por secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana (por ejemplo, mutaciones introducidas por mutagénesis aleatoria o específica del sitioin vitroo por mutación somáticain vivo). El término "anticuerpo humano", tal como se utiliza en el presente documento, no pretende incluir anticuerpos en los que las secuencias CDR derivadas de la línea germinal de otra especie de mamífero, tal como un ratón, se han injertado en secuencias marco humanas.

[0400] El término "anticuerpo monoclonal humano" se refiere a anticuerpos que despliegan una única especificidad de unión que tienen regiones variables en las que tanto la región marco como la región CDR se derivan de secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana. En una realización, los anticuerpos monoclonales humanos son producidos por un hibridoma que incluye una célula B obtenida de un animal no humano transgénico, por ejemplo, un ratón transgénico, que tiene un genoma que comprende un transgén de cadena pesada humana y un transgén de cadena ligera fusionado a una célula inmortalizada.

[0402] El término "anticuerpo humano recombinante", como se utiliza en este documento, incluye todos los anticuerpos humanos que se preparan, expresan, crean o aíslan por medios recombinantes, tales como (a) anticuerpos aislados de un animal (tal como un ratón) que es transgénico o transcromosómico para genes de inmunoglobulina humana o un hibridoma preparado a partir del mismo (descrito más adelante), (b) anticuerpos aislados de una célula huésped transformada para expresar el anticuerpo humano, por ejemplo, de un transfectoma, (c) anticuerpos aislados de una biblioteca de anticuerpos humanos combinatorios y recombinantes, y (d) anticuerpos preparados, expresados, creados o aislados por cualquier otro medio que involucre el empalme de secuencias de genes de inmunoglobulina humana a otras secuencias de ADN. Estos anticuerpos humanos recombinantes tienen regiones variables en las que las regiones marco y CDR se derivan de secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana. En ciertas realizaciones, sin embargo, dichos anticuerpos humanos recombinantes pueden someterse a mutagénesisin vitro(o, cuando se utiliza un animal transgénico para secuencias de Ig humanas, mutagénesis somáticain vivo) y, por tanto, las secuencias de aminoácidos de las regiones V<H>y V<L>de los anticuerpos recombinantes son secuencias que, aunque derivadas de las secuencias V<H>y V<L>de la línea germinal humana y relacionadas con ellas, pueden no existir de forma natural dentro del repertorio de la línea germinal de anticuerpos humanosin vivo.

[0403] Como se utiliza en este documento, "isotipo" se refiere a la clase de anticuerpo (por ejemplo, IgM o IgG1) que está codificada por los genes de la región constante de la cadena pesada.

[0404] Las expresiones "un anticuerpo que reconoce un antígeno" y "un anticuerpo específico para un antígeno" se utilizan indistintamente en este documento con el término "un anticuerpo que se une específicamente a un antígeno".

[0405] El término "derivados de anticuerpos humanos" se refiere a cualquier forma modificada del anticuerpo humano, incluido un conjugado del anticuerpo y otro ingrediente farmacéutico activo o anticuerpo. Los términos "conjugado", "conjugado de anticuerpo-fármaco", "ADC" o "inmunoconjugado" se refieren a un anticuerpo, o un fragmento del mismo, conjugado con otra fracción terapéutica, que puede conjugarse con los anticuerpos descritos en este documento utilizando métodos disponibles en la técnica.

[0406] Los términos "anticuerpo humanizado", "anticuerpos humanizados" y "humanizado" se refieren a anticuerpos en los que las secuencias CDR derivadas de la línea germinal de otra especie de mamífero, tal como un ratón, se han injertado en secuencias marco humanas. Se pueden realizar modificaciones adicionales de la región marco dentro de las secuencias marco humanas. Las formas humanizadas de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murinos) son anticuerpos quiméricos que contienen una secuencia mínima derivada de inmunoglobulina no humana. En su mayor parte, los anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpo receptor) en las que los residuos de una región hipervariable del receptor se reemplazan por residuos de una región 15 hipervariable de una especie no humana (anticuerpo donante) como ratón, rata, conejo o primate no humano que tiene la especificidad, afinidad y capacidad deseadas. En algunos casos, los residuos de la región marco (FR) Fv de la inmunoglobulina humana se reemplazan por residuos no humanos correspondientes. Además, los anticuerpos humanizados pueden comprender residuos que no se encuentran en el anticuerpo receptor ni en el anticuerpo donante. Estas modificaciones se realizan para refinar aún más el rendimiento de los anticuerpos. En general, el anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente todos al menos uno, y típicamente dos, dominios variables, en los que todos o sustancialmente todos los bucles hipervariables corresponden a los de una inmunoglobulina no humana y todas o sustancialmente todas las regiones FR son las de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado opcionalmente también comprenderá al menos una porción de una región constante de inmunoglobulina (Fc), típicamente la de una inmunoglobulina humana. Para más detalles, véase Jones, et al., Nature 1986, 321, 522-525; Riechmann, et al., Nature 1988, 332, 323-329; y Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 1992, 2, 593-596. Los anticuerpos descritos en este documento también pueden modificarse para emplear cualquier variante de Fc que se sepa que imparte una mejora (por ejemplo, reducción) en la función efectora y/o unión de FcR. Las variantes de Fc pueden incluir, por ejemplo, cualquiera de las sustituciones de aminoácidos descritas en las Publicaciones de Solicitudes de Patente Internacionales Nos. WO 1988/07089 A1, WO 1996/14339 A1, WO 1998/05787 A1, WO 1998/23289 A1, WO 1999/51642 A1, WO 99/58572 A1, WO 2000/09560 A2, WO 2000/32767 A1, WO 2000/42072 A2, WO 2002/44215 A2, WO 2002/060919 A2, WO 2003/074569 A2, WO 2004/016750 A2, WO 2004/029207 A2, WO 2004/035752 A2, WO 2004/063351 A2, WO 2004/074455 A2, WO 2004/099249 A2, WO 2005/040217 A2, WO 2005/070963 A1, WO 2005/077981 A2, WO 2005/092925 A2, WO 2005/123780 A2, WO 2006/019447 A1, WO 2006/047350 A2, y WO 2006/085967 A2; y Patentes U.S. Nos.

[0407] 5,648,260; 5,739,277; 5,834,250; 5,869,046; 6,096,871; 6,121,022; 6,194,551; 6,242,195; 6,277,375; 6,528,624; 6,538,124; 6,737,056; 6,821,505; 6,998,253; y 7,083,784.

[0408] El término "anticuerpo quimérico" se refiere a anticuerpos en los que las secuencias de la región variable se derivan de una especie y las secuencias de la región constante se derivan de otra especie, como un anticuerpo en el que las secuencias de la región variable se derivan de un anticuerpo de ratón y las secuencias de la región constante se derivan de un anticuerpo humano.

[0409] Un "diacuerpo" es un pequeño fragmento de anticuerpo con dos sitios de unión al antígeno. Los fragmentos comprenden un dominio variable de cadena pesada (V<H>) conectado a un dominio variable de cadena ligera (V<L>) en la misma cadena polipeptídica (V<H>-V<L>o V<L>-V<H>). Al utilizar un enlazador demasiado corto para permitir el emparejamiento entre los dos dominios de la misma cadena, los dominios se ven obligados a emparejarse con los dominios complementarios de otra cadena y crear dos sitios de unión al antígeno. Los diacuerpos se describen con más detalle en, por ejemplo, Patente Europea No. EP 404,097, Publicación de Patente Internacional No. WO 93/11161; y Bolliger, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993, 90, 6444-6448.

[0410] El término "glicosilación" se refiere a un derivado modificado de un anticuerpo. Un anticuerpo aglicosilado carece de glicosilación. La glicosilación se puede alterar para, por ejemplo, aumentar la afinidad del anticuerpo por el antígeno. Estas modificaciones de carbohidratos se pueden lograr, por ejemplo, alterando uno o más sitios de glicosilación dentro de la secuencia del anticuerpo. Por ejemplo, se pueden realizar una o más sustituciones de aminoácidos que den como resultado la eliminación de uno o más sitios de glicosilación del marco de la región variable para eliminar así la glicosilación en ese sitio. La aglicosilación puede aumentar la afinidad del anticuerpo por el antígeno, como se describe en las Patentes U.S. Nos.5,714,350 y 6,350,861. Adicionalmente o alternativamente, se puede fabricar un anticuerpo que tenga un tipo alterado de glicosilación, tal como un anticuerpo hipofucosilado que tenga cantidades reducidas de residuos de fucosilo o un anticuerpo que tenga estructuras de GlcNac bisectantes aumentadas. Se ha demostrado que estos patrones de glicosilación alterados aumentan la capacidad de los anticuerpos. Estas modificaciones de carbohidratos se pueden lograr, por ejemplo, expresando el anticuerpo en una célula huésped con maquinaria de glicosilación alterada. Se han descrito en la técnica células con maquinaria de glicosilación alterada y pueden usarse como células huésped en las que expresar anticuerpos recombinantes de la invención para producir así un anticuerpo con glicosilación alterada. Por ejemplo, las líneas celulares Ms704, Ms705 y Ms709 carecen del gen de fucosiltransferasa, FUT8 (alfa (1,6) fucosiltransferasa), de modo que los anticuerpos expresados en las líneas celulares Ms704, Ms705 y Ms709 carecen de fucosa en sus carbohidratos. Las líneas celulares FUT8-/- Ms704, Ms705 y Ms709 se crearon mediante la interrupción dirigida del gen FUT8 en células CHO/DG44 utilizando dos vectores de reemplazo (véase por ejemplo la Publicación de patente U.S. No.2004/0110704 o Yamane-Ohnuki, et al., Biotechnol. Bioeng., 2004, 87, 614-622). Como otro ejemplo, la patente europea No. EP 1,176,195 describe una línea celular con un gen FUT8 funcionalmente interrumpido, que codifica una fucosil transferasa, de modo que los anticuerpos expresados en dicha línea celular exhiben hipofucosilación al reducir o eliminar la enzima relacionada con el enlace alfa 1,6, y también describe líneas celulares que tienen una baja actividad enzimática para agregar fucosa a la N-acetilglucosamina que se une a la región Fc del anticuerpo o no tienen la actividad enzimática, por ejemplo, la línea celular de mieloma de rata YB2/0 (ATCC CRL 1662). La Publicación internacional de patente WO 03/035835 describe una línea celular CHO variante, las células Lec 13, con capacidad reducida para unir fucosa a carbohidratos unidos a Asn(297), lo que también resulta en hipofucosilación de anticuerpos expresados en esa célula huésped (véase también Shields, et al., J. Biol. Chem. 2002, 277, 26733-26740. La Publicación internacional de patente WO 99/54342 describe líneas celulares diseñadas para expresar glicosil transferasas modificadoras de glicoproteínas (por ejemplo, beta(1,4)-N-acetilglucosaminiltransferasa III (GnTIII)) de modo que los anticuerpos expresados en las líneas celulares diseñadas exhiben estructuras GlcNac bisectantes aumentadas, lo que resulta en una mayor actividad ADCC de los anticuerpos (véase también Umana, et al., Nat. Biotech. 1999, 17, 176-180). Alternativamente, los residuos de fucosa del anticuerpo pueden eliminarse utilizando una enzima fucosidasa. Por ejemplo, la fucosidasa alfa-L-fucosidasa elimina los residuos de fucosilo de los anticuerpos como se describe en Tarentino, et al., Biochem.1975, 14, 5516-5523.

[0412] "Pegilación" se refiere a un anticuerpo modificado, o un fragmento del mismo, que típicamente reacciona con polietilenglicol (PEG), tal como un éster reactivo o un derivado de aldehído de PEG, en condiciones en las que uno o más grupos PEG se unen al anticuerpo o fragmento de anticuerpo. La pegilación puede, por ejemplo, aumentar la vida media biológica (por ejemplo, sérica) del anticuerpo. Preferiblemente, la pegilación se lleva a cabo a través de una reacción de acilación o una reacción de alquilación con una molécula de PEG reactiva (o un polímero soluble en agua reactivo análogo). Tal como se utiliza en el presente documento, el término "polietilenglicol" pretende abarcar cualquiera de las formas de PEG que se han utilizado para derivar otras proteínas, tales como mono (C<1>-C<10>)alcoxi- o ariloxi-polietilenglicol o polietilenglicol-maleimida. El anticuerpo a pegilar puede ser un anticuerpo aglicosilado. Los métodos de pegilación son conocidos en la técnica y pueden aplicarse a los anticuerpos de la invención, como se describe, por ejemplo, en las patentes europeas Nos. EP 0154316 y EP 0401384 y Patente U.S. No.5,824,778.

[0414] Los términos "proteína de fusión" o "polipéptido de fusión" se refieren a proteínas que combinan las propiedades de dos o más proteínas individuales. Estas proteínas tienen al menos dos polipéptidos heterólogos unidos covalentemente, ya sea directamente o a través de un enlace de aminoácidos. Los polipéptidos que forman la proteína de fusión típicamente están unidos del C-terminal al N-terminal, aunque también pueden estar unidos del C-terminal al C-terminal, del N-terminal al N-terminal o del N-terminal al C-terminal. Los polipéptidos de la proteína de fusión pueden estar en cualquier orden y pueden incluir más de uno de los polipéptidos constituyentes o de ambos. El término abarca variantes modificadas de forma conservadora, variantes polimórficas, alelos, mutantes, subsecuencias, homólogos interespecies y fragmentos inmunogénicos de los antígenos que componen la proteína de fusión. Las proteínas de fusión de la divulgación también pueden comprender copias adicionales de un antígeno componente o un fragmento inmunogénico del mismo. La proteína de fusión puede contener uno o más dominios de unión unidos entre sí y además unidos a un dominio Fc, tal como un dominio Fc de IgG. Las proteínas de fusión pueden unirse aún más para imitar un anticuerpo monoclonal y proporcionar seis o más dominios de unión. Las proteínas de fusión pueden producirse mediante métodos recombinantes como se conoce en la técnica. La preparación de proteínas de fusión es conocida en la técnica y se describe, por ejemplo, en las publicaciones de solicitudes de patente internacionales Nos. WO 1995/027735 A1, WO 2005/103077 A1, WO 2008/025516 A1, WO 2009/007120 A1, WO 2010/003766 A1, WO 2010/010051 A1, WO 2010/078966 A1, publicaciones de solicitudes de patente Nos. US 2015/0125419 A1 y US 2016/0272695 A1, y Patente U.S. No.8,921,519.

[0416] El término "heterólogo" cuando se utiliza con referencia a porciones de un ácido nucleico o proteína indica que el ácido nucleico o proteína comprende dos o más subsecuencias que no se encuentran en la misma relación entre sí en la naturaleza. Por ejemplo, el ácido nucleico típicamente se produce de forma recombinante, con dos o más secuencias de genes no relacionados dispuestas para formar un nuevo ácido nucleico funcional, por ejemplo, un promotor de una fuente y una región codificante de otra fuente, o regiones codificantes de diferentes fuentes. De manera similar, una proteína heteróloga indica que la proteína comprende dos o más subsecuencias que no se encuentran en la misma relación entre sí en la naturaleza (por ejemplo, una proteína de fusión).

[0418] El término "sustituciones conservadoras de aminoácidos" significa modificaciones de la secuencia de aminoácidos que no anulan la unión de un anticuerpo o proteína de fusión al antígeno. Las sustituciones conservadoras de aminoácidos incluyen la sustitución de un aminoácido de una clase por un aminoácido de la misma clase, donde una clase se define por propiedades fisicoquímicas comunes de la cadena lateral del aminoácido y altas frecuencias de sustitución en proteínas homólogas que se encuentran en la naturaleza, como se determina, por ejemplo, mediante una matriz de intercambio de frecuencia de Dayhoff estándar o una matriz BLOSUM. Se han categorizado seis clases generales de cadenas laterales de aminoácidos, que incluyen: Clase I (Cys); Clase II (Ser, Thr, Pro, Ala, Gly); Clase III (Asn, Asp, Gln, Glu); Clase IV (His, Arg, Lys); Clase V (Ile, Leu, Val, Met); y Clase VI (Phe, Tyr, Trp). Por ejemplo, la sustitución de un Asp por otro residuo de clase III tal como Asn, Gln o Glu, es una sustitución conservadora. Por lo tanto, un residuo de aminoácido no esencial previsto en un anticuerpo se reemplaza preferiblemente con otro residuo de aminoácido de la misma clase. Los métodos para identificar sustituciones conservadoras de aminoácidos que no eliminan la unión del antígeno son bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Brummell, et al., Biochemistry 1993, 32, 1180-1187; Kobayashi, et al., Protein Eng.1999, 12, 879-884 (1999); y Burks, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1997, 94, 412-417.

[0420] Los términos "identidad de secuencia", "identidad porcentual" y "identidad porcentual de secuencia" (o sinónimos de los mismos, por ejemplo, "99% idénticos") en el contexto de dos o más ácidos nucleicos o polipéptidos, se refieren a dos o más secuencias o subsecuencias que son iguales o tienen un porcentaje específico de nucleótidos o residuos de aminoácidos que son iguales, cuando se comparan y alinean (introduciendo brechas, si es necesario) para lograr la máxima correspondencia, sin considerar ninguna sustitución de aminoácidos conservadora como parte de la identidad de secuencia. El porcentaje de identidad se puede medir utilizando software o algoritmos de comparación de secuencias o mediante inspección visual. Se conocen en la técnica varios algoritmos y software que pueden utilizarse para obtener alineaciones de secuencias de aminoácidos o nucleótidos. Los programas adecuados para determinar el porcentaje de identidad de secuencia incluyen, por ejemplo, el conjunto de programas BLAST disponible en el sitio web U.S. Government's National Center for Biotechnology Information BLAST. Las comparaciones entre dos secuencias se pueden realizar utilizando el algoritmo BLASTN o BLASTP. BLASTN se utiliza para comparar secuencias de ácidos nucleicos, mientras que BLASTP se utiliza para comparar secuencias de aminoácidos. ALIGN, ALIGN-2 (Genentech, South San Francisco, California) o MegAlign, disponibles en DNASTAR, son programas de software adicionales disponibles públicamente que se pueden utilizar para alinear secuencias. Un experto en la materia puede determinar los parámetros apropiados para la alineación máxima mediante un software de alineación particular. En ciertas realizaciones, se utilizan los parámetros predeterminados del software de alineación.

[0422] Tal como se utiliza en el presente documento, el término "variante" abarca, pero no se limita a, anticuerpos o proteínas de fusión que comprenden una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un anticuerpo de referencia mediante una o más sustituciones, deleciones y/o adiciones en ciertas posiciones dentro o adyacentes a la secuencia de aminoácidos del anticuerpo de referencia. La variante puede comprender una o más sustituciones conservadoras en su secuencia de aminoácidos en comparación con la secuencia de aminoácidos de un anticuerpo de referencia. Las sustituciones conservadoras pueden implicar, por ejemplo, la sustitución de aminoácidos con carga o sin carga similar. La variante conserva la capacidad de unirse específicamente al antígeno del anticuerpo de referencia. El término variante también incluye anticuerpos o proteínas pegiladas.

[0424] Las secuencias de ácidos nucleicos abarcan implícitamente variantes modificadas de forma conservadora de las mismas (por ejemplo, sustituciones de codones degenerados) y secuencias complementarias, así como la secuencia indicada explícitamente. Específicamente, las sustituciones de codones degenerados se pueden lograr generando secuencias en las que la tercera posición de uno o más codones seleccionados (o todos) se sustituye con residuos de bases mixtas y/o desoxiinosina. Batzer, et al., Nucleic Acid Res. 1991, 19, 5081; Ohtsuka, et al., J. Biol. Chem. 1985, 260, 2605-2608; Rossolini, et al., Mol. Cell. Probes 1994, 8, 91-98. El término ácido nucleico se utiliza indistintamente con ADNc, ARNm, oligonucleótido y polinucleótido.

[0426] El término "biosimilar" significa un producto biológico, incluido un anticuerpo monoclonal o proteína, que es muy similar a un producto biológico de referencia autorizado en EE. UU. a pesar de diferencias menores en los componentes clínicamente inactivos, y para el cual no existen diferencias clínicamente significativas entre el producto biológico y el producto de referencia en términos de seguridad, pureza y potencia del producto. Además, un medicamento biológico similar o «biosimilar» es un medicamento biológico que es similar a otro medicamento biológico que ya ha sido autorizado para uso por la Agencia Europea de Medicamentos. El término "biosimilar" también se utiliza como sinónimo por otras agencias reguladoras nacionales y regionales.

[0427] Los productos biológicos o medicamentos biológicos son medicamentos elaborados o derivados de una fuente biológica, como una bacteria o una levadura. Pueden consistir en moléculas relativamente pequeñas, como la insulina humana o la eritropoyetina, o en moléculas complejas, como los anticuerpos monoclonales. Por ejemplo, si la proteína IL-2 de referencia es aldesleucina (PROLEUKIN), una proteína aprobada por las autoridades reguladoras de medicamentos con referencia a la aldesleucina es un "biosimilar de" la aldesleucina o es un "biosimilar de la misma" de la aldesleucina. En Europa, un medicamento biológico similar o "biosimilar" es un medicamento biológico que es similar a otro medicamento biológico que ya ha sido autorizado para uso por la Agencia Europea de Medicamentos (EMA). La base jurídica pertinente para aplicaciones biológicas similares en Europa es el artículo 6 del Reglamento (EC) No 726/2004 y el artículo 10(4) de la Directiva 2001/83/EC, en su versión modificada y, por tanto, en Europa, el biosimilar puede ser autorizado, aprobado para autorización o ser objeto de una solicitud de autorización de conformidad con el artículo 6 del Reglamento (EC) No. 726/2004 y el artículo 10(4) de la Directiva 2001/83/EC. El producto medicinal biológico original ya autorizado podrá denominarse como un "producto medicinal de referencia" en Europa. Algunos de los requisitos para que un producto sea considerado biosimilar se delinean en la Directriz del CHMP sobre productos medicinales biológicos similares. Además, la EMA proporciona directrices específicas para cada producto, incluidas las relacionadas con los biosimilares de anticuerpos monoclonales, y las publica en su sitio web. Un biosimilar como se describe en este documento puede ser similar al producto medicinal de referencia en términos de características de calidad, actividad biológica, mecanismo de acción, perfiles de seguridad y/o eficacia. Además, el biosimilar puede utilizarse o estar destinado a utilizarse para tratar las mismas afecciones que el producto medicinal de referencia. Por tanto, se puede considerar que un biosimilar como el descrito en este documento tiene características de calidad similares o muy similares a un producto medicinal de referencia. Alternativamente, o además, se puede considerar que un biosimilar como se describe en este documento tiene una actividad biológica similar o muy similar a un producto medicinal de referencia. Alternativamente, o además, se puede considerar que un biosimilar como se describe en este documento tiene un perfil de seguridad similar o muy similar a un producto medicinal de referencia. Alternativamente, o además, se puede considerar que un biosimilar como se describe en este documento tiene una eficacia similar o muy similar a un producto medicinal de referencia. Como se describe en este documento, un biosimilar en Europa se compara con un producto medicinal de referencia que ha sido autorizado por la EMA. Sin embargo, en algunos casos, el biosimilar puede compararse con un producto medicinal biológico que ha sido autorizado fuera del Espacio Económico Europeo (un "comparador" no autorizado dentro del EEA) en ciertos estudios. Estos estudios incluyen, por ejemplo, ciertos estudios clínicos y no clínicosin vivo. Tal como se utiliza en el presente documento, el término "biosimilar" también se refiere a un producto medicinal biológico que ha sido o puede ser comparado con un comparador no autorizado por el EEA. Ciertos biosimilares son proteínas como anticuerpos, fragmentos de anticuerpos (por ejemplo, porciones de unión a antígeno) y proteínas de fusión. Un biosimilar de proteína puede tener una secuencia de aminoácidos que presenta modificaciones menores en la estructura del aminoácido (incluyendo, por ejemplo, deleciones, adiciones y/o sustituciones de aminoácidos) que no afectan significativamente la función del polipéptido. El biosimilar puede comprender una secuencia de aminoácidos que tenga una identidad de secuencia del 97% o más con la secuencia de aminoácidos de su producto medicinal de referencia, por ejemplo, 97%, 98%, 99% o 100%. El biosimilar puede comprender una o más modificaciones postraduccionales, por ejemplo, aunque no se limita a, glicosilación, oxidación, desamidación y/o truncamiento que sean diferentes a las modificaciones postraduccionales del producto medicinal de referencia, siempre que las diferencias no resulten en un cambio en la seguridad y/o eficacia del producto medicinal. El biosimilar puede tener un patrón de glicosilación idéntico o diferente al del producto medicinal de referencia. En particular, aunque no exclusivamente, el biosimilar puede tener un patrón de glicosilación diferente si las diferencias abordan o pretenden abordar preocupaciones de seguridad asociadas con el producto medicinal de referencia. Además, el biosimilar puede diferir del producto medicinal de referencia en, por ejemplo, su potencia, forma farmacéutica, formulación, excipientes y/o presentación, siempre que no se comprometa la seguridad y eficacia del producto medicinal. El biosimilar puede presentar diferencias, por ejemplo, en los perfiles farmacocinéticos (PK) y/o farmacodinámicos (PD) en comparación con el producto medicinal de referencia, pero aún así se considera suficientemente similar al producto medicinal de referencia como para ser autorizado o considerado adecuado para su autorización. En determinadas circunstancias, el biosimilar presenta características de unión diferentes en comparación con el producto medicinal de referencia, y una Autoridad Reguladora tal como la EMA considera que estas diferentes características de unión no constituyen una barrera para la autorización como producto biológico similar. El término "biosimilar" también se utiliza como sinónimo por otras agencias reguladoras nacionales y regionales.

[0429] El término "cantidad efectiva" o "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a aquella cantidad de un compuesto o combinación de compuestos como se describe en este documento que es suficiente para efectuar la aplicación prevista, incluido, pero no limitado a, el tratamiento de enfermedades. Una cantidad terapéuticamente eficaz puede variar dependiendo de la aplicación prevista (in vitrooin vivo), o el sujeto y la condición de la enfermedad que se está tratando(por ejemplo, el peso, la edad y el sexo del sujeto), la gravedad de la enfermedad o la forma de administración. El término también se aplica a una dosis que inducirá una respuesta particular en las células objetivo.(por ejemplo, la reducción de la adhesión plaquetaria y/o migración celular). La dosis específica variará dependiendo de los compuestos particulares elegidos, el régimen de dosificación a seguir, si el compuesto se administra en combinación con otros compuestos, el momento de administración, el tejido al que se administra y el sistema de administración físico en el que se transporta el compuesto.

[0430] Un "efecto terapéutico", tal como se utiliza dicho término en este documento, abarca un beneficio terapéutico y/o un beneficio profiláctico. Un efecto profiláctico incluye retrasar o eliminar la aparición de una enfermedad o afección, retrasar o eliminar la aparición de los síntomas de una enfermedad o afección, retardar, detener o revertir la progresión de una enfermedad o afección, o cualquier combinación de estos.

[0431] Los términos "QD", "qd" o "q.d." significanquaque die,una vez al día, o una vez diariamente. Los términos "BID", "bid" o "b.i.d." significanbis in die,dos veces al día, o dos veces diariamente. Los términos "TID," "tid," o "t.i.d." significanter in die,tres veces al día, o tres veces diariamente. Los términos "QID", "qid" o "q.i.d." significanquater in die,cuatro veces al día, o cuatro veces diariamente.

[0432] Para evitar dudas, se pretende en el presente documento que las características particulares (por ejemplo, números enteros, características, valores, usos, enfermedades, fórmulas, compuestos o grupos) descritas junto con un aspecto, realización o ejemplo particular de la invención se entiendan como aplicables a cualquier otro aspecto, realización o ejemplo descrito en el presente documento a menos que sean incompatibles con ellos. Por lo tanto, dichas características pueden usarse cuando sea apropiado junto con cualquiera de las definiciones, reivindicaciones o realizaciones definidas en este documento. Todas las características divulgadas en esta memoria descriptiva (incluyendo cualquier reivindicación, resumen y dibujos adjuntos), y/o todos los pasos de cualquier método o proceso así divulgado, pueden combinarse en cualquier combinación, excepto combinaciones en las que al menos algunas de las características y/o pasos sean mutuamente excluyentes. La invención no está restringida a ningún detalle de ninguna de las realizaciones divulgadas. La invención se extiende a cualquier característica novedosa o combinación novedosa de las características divulgadas en esta memoria descriptiva (incluyendo cualesquier reivindicaciones, resumen y dibujos adjuntos), o a cualquier característica novedosa o combinación novedosa de los pasos de cualquier método o proceso así divulgado. Los términos "alrededor de" y "aproximadamente" significan dentro de un rango estadísticamente significativo de un valor. Tal rango puede estar dentro de un orden de magnitud, preferiblemente dentro del 50%, más preferiblemente dentro del 20%, más preferiblemente aún dentro del 10%, e incluso más preferiblemente dentro del 5% de un valor o rango dado. La variación permisible comprendida entre los términos "alrededor de" o "aproximadamente" depende del sistema particular en estudio y puede ser fácilmente apreciada por una persona con conocimientos normales en la técnica. Además, tal como se utilizan en este documento, los términos "alrededor de" y "aproximadamente" significan que las dimensiones, tamaños, formulaciones, parámetros, formas y otras cantidades y características no son ni necesitan ser exactas, pero pueden ser aproximadas y/o más grandes o más pequeñas, según se desee, reflejando tolerancias, factores de conversión, redondeo, error de medición y similares, y otros factores conocidos por los expertos en la técnica. En general, una dimensión, tamaño, formulación, parámetro, forma u otra cantidad o característica es "alrededor de" o "aproximada", independientemente de que se indique expresamente que lo es o no. Se observa que realizaciones de tamaños, formas y dimensiones muy diferentes pueden emplear las disposiciones descritas. Los términos transitorios "que comprende", "que consiste esencialmente en" y "que consiste en", cuando se utilizan en las reivindicaciones adjuntas, en forma original y enmendada, definen el alcance de la reivindicación con respecto a qué elementos o pasos de reivindicación adicionales no citados, si los hubiera, están excluidos del alcance de la(s) reivindicación(es). El término "que comprende" pretende ser incluyente o abierto y no excluye ningún elemento, método, paso o material adicional no mencionado. El término "que consiste en" excluye cualquier elemento, paso o material distinto de los especificados en la reivindicación y, en este último caso, las impurezas ordinarias asociadas con el material o materiales especificados. El término "que consiste esencialmente en" limita el alcance de una reivindicación a los elementos, pasos o materiales especificados y aquellos que no afectan materialmente las características básicas y novedosas de la invención reivindicada. Todas las composiciones, métodos y kits descritos en este documento que incorporan la presente invención pueden, en realizaciones alternativas, definirse más específicamente mediante cualquiera de los términos transicionales "que comprende", "que consiste esencialmente en" y "que consiste en".

[0433] Agonistas de los canales de potasio

[0434] El agonista del canal de potasio de la invención es un agonista de K<Ca>3.1, activador o abridor, también conocido como agonista, activador o abridor del canal IK y un agonista, activador o abridor del canal de K<Ca>3.1. K<Ca>3.1 también se conoce como hIKCa, hKCa4, hSK4, canal de potasio activado por calcio de conductancia intermedia y canal de potasio activado por calcio de conductancia pequeña 4.

[0435] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es un derivado de benzotiazol, o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es un derivado de benzimidazol, o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Se describen derivados de benzotiazol y benzimidazol adecuados en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.

[0436] 2009, 75, 281-95.

[0437] El agonista de K<Ca>3.1 de la invención es un compuesto de acuerdo con la Fórmula (1):

[0440]

[0442] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde

[0443] R<a>se selecciona del grupo que consiste en halo, ciano, hidroxi, tiol, (C<1-6>)alquilo, -NH<2>, y -NR<1>R<2>;

[0444] R<1>y R<2>son independientemente H o (C<1-6>)alquilo;

[0445] X se selecciona del grupo que consiste en S, O y NH;

[0446] Ry R<c>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (C<1-6>)alquilo, (C<1-6>)alcoxilo, halo, nitro, arilo, heteroarilo, (C<1-6>)alquilo y (C<3-7>)cicloalquilo o Ry R<c>junto con los átomos de carbono a los que están unidos forman un anillo seleccionado del grupo que consiste en un anillo arilo, naftilo, antrilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo; y

[0447] R<d>y R<e>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (C<1-6>)alquilo, (C<1-6>)alcoxilo, halo, nitro, arilo, heteroarilo, (C<1-6>)alquilo y (C<3-7>)cicloalquilo o R<d>y R<e>junto con los átomos de carbono a los que están unidos forman un anillo seleccionado del grupo que consiste en un anillo arilo, naftilo, antrilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo;

[0448] con la condición de que si Ry R<c>forman un anillo, entonces R<d>y R<e>no forman un anillo, y si R<d>y R<e>forman un anillo, entonces Ry R<c>no forman un anillo.

[0449] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es un compuesto de acuerdo con la Fórmula (1), o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde

[0450] R<a>se selecciona de tiol y -NH<2>;

[0451] R<d>y R<c>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (C<1-3>)alquilo, (C<1-3>)alcoxilo, halo, nitro, arilo no sustituido, (C<1-3>)alquilo y o Ry R<c>junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo de 5 o 6 miembros seleccionado del grupo que consiste en un anillo arilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo; y

[0452] R<d>y R<e>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (C<1-3>)alquilo, (C<1-3>)alcoxilo, halo, nitro, arilo no sustituido, (C<1-3>)alquilo y o R<d>y R<e>junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un anillo de 5 o 6 miembros seleccionado del grupo que consiste en un anillo arilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo,

[0453] con la condición de que si Ry R<c>forman un anillo, entonces R<d>y R<e>no forman un anillo, y si R<d>y R<e>forman un anillo, entonces Ry R<c>no forman un anillo.

[0454] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es SKA-31, también conocido como nafto[1,2-d]tiazol-2-ilamina (Fórmula (2)):

[0455]

[0457] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. El SKA-31 está disponible comercialmente en múltiples fuentes (Chemical Abstracts Service (Número CAS 40172-65-4), incluidos Tocris Bioscience, Avonmouth, Bristol, UK, and Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA. Las propiedades y la síntesis de SKA-31 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0458] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es SKA-20, también conocido como antra[2,1-d]tiazol-2-ilamina (Fórmula (3)):

[0461]

[0463] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-20 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0464] También se divulga en este documento el agonista de K<Ca>3.1 NS309, también conocido como 6,7-dicloro-1H-indol-2,3-diona 3-oxima (Fórmula (4)):

[0467]

[0470] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. NS309 está disponible comercialmente en múltiples fuentes (CAS No.18711-16-5), incluida Tocris Bioscience. Las propiedades y la síntesis de NS309 se describen en la Patente U.S. No. 6,969,729 y Strøbaek, et al., Biochim. Biophys. Acta 2004, 1665, 1-5.

[0471] También se divulga en este documento el compuesto agonista de K<Ca>3.1 de acuerdo con la Fórmula (5):

[0472]

[0474] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo; en donde

[0475] R<1>representa hidrógeno; un grupo alquilo; un grupo cicloalquilo; un grupo acilo; un grupo fenilo o bencilo, cuyos grupos fenilo y bencilo no están sustituidos o están sustituidos una o más veces con sustituyentes seleccionados entre halógeno, -NO<2>, -CN, -CF<3>, alquilo, cicloalquilo, hidroxi y alcoxi; un grupo de fórmula -CH<2>CN; un grupo de fórmula -CH<2>CO<2>R', en donde R' representa hidrógeno o alquilo; un grupo de fórmula -CH<2>CONR<IV>R<V>, donde R<IV>y R<V>representa independientemente hidrógeno, alquilo, fenilo o bencilo, cuyos grupos fenilo y bencilo no están sustituidos o están sustituidos una o más veces con halógeno y/o alquilo, o R<IV>y R<V>junto con el átomo de N al que están unidos forman un grupo monocíclico heterocíclico de 4 a 7 miembros, cuyo grupo heterocíclico no está sustituido o está sustituido una o más veces con sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, alquilo, cicloalquilo, alquiloxi, cicloalquiloxi, fenilo o bencilo; o un grupo de la fórmula -CH<2>C(=NOH)NH<2>;

[0476] R<2>representa hidrógeno; un grupo alquilo; un grupo cicloalquilo; un grupo de fórmula - CH<2>CO<2>R', en donde R' representa hidrógeno o un grupo alquilo; un grupo fenilo o bencilo, cuyos grupos fenilo y bencilo no están sustituidos o están sustituidos una o más veces con sustituyentes seleccionados entre halógeno, -NO<2>, -CN, -CF<3>, alquilo, cicloalquilo, hidroxi y alcoxi; y

[0477] R<3>, R<4>, R<5>, y R<6>independientemente uno del otro representa hidrógeno; halógeno; -NO<2>; -CN; -CF<3>; un grupo alquilo; un grupo alcoxi; un grupo fenilo o bencilo, cuyos grupos fenilo y bencilo no están sustituidos o están sustituidos una o más veces con sustituyentes seleccionados entre halógeno, -NO<2>, -CN, -CF<3>, alquilo, cicloalquilo, hidroxi y alcoxi; o un grupo de fórmula -SO<2>NR"R‴, donde R" y R‴ independientemente entre sí representan hidrógeno o un grupo alquilo;

[0478] o R<5>y R<6>son como se definen anteriormente, y R<3>y R<4>juntos forman un anillo fusionado adicional de 4 a 7 miembros, cuyo anillo fusionado puede ser aromático, saturado o parcialmente saturado, y cuyo anillo fusionado no está sustituido o está sustituido una o más veces con sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, -NO<2>, -CN, -CF<3>, y un grupo de fórmula -SO<2>NR"R‴, donde R" y R‴ independientemente entre sí representan hidrógeno o un grupo alquilo.

[0479] Las propiedades y síntesis de compuestos de acuerdo con la Fórmula (5) se describen en la Patente U.S. No.

[0480] 6,969,729.

[0481] También se divulga en este documento el agonista de K<Ca>3.11-EBIO, también conocido como 1-etil-1,3-dihidro-2H-benzimidazol-2-ona y 1-etil-2-benzimidazolinona (Fórmula (6)):

[0484]

[0486] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. 1-EBIO está disponible comercialmente en múltiples fuentes (CAS No.10045-45-1), incluidos Tocris Bioscience y Sigma-Aldrich. Las propiedades y síntesis de 1-EBIO se describen en Adeagbo, Eur. J. Pharmacol.1999, 379, 151-59 y Devor, et al., Am. J. Physiol.1996, 271, L775-L784.

[0487] También se divulga en este documento el agonista de K<Ca>3.1 DCEBIO, también conocido como 5,6-dicloro-1-etil-1,3-dihidro-2H-benzimidazol-2-ona y DC-EBIO (Fórmula (7)):

[0490]

[0493] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. DCEBIO está disponible comercialmente en múltiples fuentes (CAS No.60563-36-2), incluidos Tocris Bioscience y Sigma-Aldrich. Las propiedades y síntesis de DCEBIO se describen en Singh, et al., J. Pharmacol. Exp. Ther.2001, 296, 600-611.

[0494] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es el riluzol, también conocido como 2-amino-6-trifluorometoxibenzotiazol o 6-(trifluorometoxi)benzo[d]tiazol-2-amina (Fórmula (8)):

[0497]

[0500] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. El riluzol está disponible comercialmente de múltiples fuentes bajo los nombres comerciales RILUTEK y TEGLUTIK, y también puede obtenerse de Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA (CAS No.1744-22-5). Las propiedades y la síntesis del riluzol se describen en la Patente U.S. No.4,370,338 y Grunnet, et al., Neuropharmacology 2001, 40, 879-887.

[0501] También se divulga en este documento el compuesto agonista de K<Ca>3.1 de Fórmula (9a) o un compuesto de Fórmula (9b):

[0504]

[0507] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo; en donde

[0508] R se selecciona de halo, ciano, hidroxi, (C<1-6>)alquilo, (C<3-7>)cicloalquilo, (C<1-6>)alcoxi, (C<3-7>)cicloalcoxi, halo(C<1-6>)alquilo y -NR<1>R<2>; y

[0509] R<1>y R<2>se seleccionan independientemente entre hidrógeno, (C<1-6>)alquilo y (C<3-7>)cicloalquilo o R<1>y R<2>junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo heterocíclico de 4 a 7 miembros.

[0510] Las propiedades y síntesis de compuestos de Fórmula (9a) y (9b) se describen en la Publicación de Solicitud de Patente Internacional No. WO 2015/164816 A2.

[0511] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 5-metilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina (Fórmula (10a)) o 5-metilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina (Fórmula (10b), también conocido como SKA-121):

[0514]

[0516] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0517] Las propiedades y síntesis de compuestos de Fórmula (10a) y Fórmula (10b) (SKA-121) se describen en la Publicación de Solicitud de Patente Internacional No. WO 2015/164816 A2 y Coleman, et al., Mol. Pharmacol.

[0518] 2014, 86, 342-57.

[0519] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6-(trifluorometoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina, también conocido como SKA-12 (Fórmula (11)):

[0522]

[0524] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-12 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0525] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6-metoxibenzo[d]tiazol-2-tiol, también conocido como SKA-5 (Fórmula (12)):

[0526]

[0528] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-5 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0529] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6-nitrobenzo[d]tiazol-2-tiol, también conocido como SKA-6 (Fórmula (13)):

[0532]

[0534] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-6 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0535] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6-(trifluorometoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-tiol, también conocido como SKA-46 (Fórmula (14)):

[0538]

[0540] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-46 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0541] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6-(difluorometoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-tiol, también conocido como SKA-47 (Fórmula (15)):

[0544]

[0546] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-47 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0547] También se divulga en este documento el agonista de K<Ca>3.14-(4-(trifluorometoxi)fenil)tiazol-2-amina, también conocido como SKA-41 (Fórmula (17)):

[0548]

[0550] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-41 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0551] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es benzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-1 (Fórmula (18)):

[0554]

[0556] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-1 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0557] También se divulga en este documento el agonista de K<Ca>3.1 benzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-36 (Fórmula (19)):

[0560]

[0562] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-36 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0563] También se divulga en este documento el agonista de K<Ca>3.16-nitrobenzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-4 (Fórmula (20)):

[0566]

[0568] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-4 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0569] También se divulga en este documento el agonista de K<Ca>3.16-(metilsulfonil)benzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-16 (Fórmula (21)):

[0570]

[0572] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-16 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0573] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 1-(2-aminobenzo[d]tiazol-6-il)etan-1-ona, también conocido como SKA-24 (Fórmula (22)):

[0576]

[0578] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-24 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0579] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6-metoxibenzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-2 (Fórmula (23)):

[0582]

[0584] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-2 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0585] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6-metoxibenzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-17 (Fórmula (24)):

[0588]

[0590] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-17 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0591] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 5-cloro-6-metoxibenzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-13 (Fórmula (25)):

[0592]

[0594] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-13 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0595] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6-bencilbenzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-7 (Fórmula (26)):

[0598]

[0600] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-7 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0601] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6-fenoxibenzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-32 (Fórmula (27)):

[0604]

[0607] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-32 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0608] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es (2-aminobenzo[d]tiazol-6-il)(fenil)metanona, también conocido como SKA-22 (Fórmula (28)):

[0611]

[0613] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-22 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0614] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es (2-aminobenzo[d]tiazol-6-il)(fenil)metanona, también conocido como SKA-48 (Fórmula (29)):

[0615]

[0617] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-48 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0618] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6-fluorobenzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-18 (Fórmula (29)):

[0621]

[0623] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-18 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0624] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 5,6-difluorobenzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-42 (Fórmula (30)):

[0627]

[0629] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-42 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0630] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6-clorobenzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-3 (Fórmula (31)):

[0633]

[0635] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-3 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0636] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 5-(trifluorometoxi)benzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-8 (Fórmula (32)):

[0637]

[0640] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-8 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0641] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 4-(trifluorometoxi)benzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-35 (Fórmula (33)):

[0644]

[0646] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-35 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0647] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6-(trifluorometil)benzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-51 (Fórmula (34)):

[0650]

[0653] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-51 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0654] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 5-(trifluorometil)benzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-34 (Fórmula (35)):

[0657]

[0659] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-34 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0660] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6-((trifluorometil)tio)benzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-19 (Fórmula (36)):

[0661]

[0663] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-19 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0664] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6-(clorodifluorometoxi)benzo[d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-11 (Fórmula (37)):

[0667]

[0669] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-11 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0670] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es [2,4'-bibenzo[d]tiazol]-2'-amina, también conocido como SKA-53 (Fórmula (38)):

[0673]

[0675] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-53 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0676] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6,7-dihidro-5H-indeno[5,6-d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-29 (Fórmula (39)):

[0679]

[0681] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-29 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0682] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6,7,8,9-tetrahidronafto[2,1-d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-44 (Fórmula (40)):

[0685]

[0687] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-44 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0688] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6,7,8,9-tetrahidronafto[1,2-d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-49 (Fórmula (41)):

[0691]

[0693] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-49 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0694] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es nafto[2,1-d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-45 (Fórmula (42)):

[0697]

[0699] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-45 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0700] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 2-amino-6a,10a-dihidroantra[2,1-d]tiazol-6,11-diona, también conocido como SKA-21 (Fórmula (43)):

[0701]

[0703] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-21 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0704] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 2-amino-7H-cromeno[6,5-d]tiazol-7-ona, también conocido como SKA-26 (Fórmula (44)):

[0707]

[0709] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-26 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0710] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es benzo[1,2-d:4,5-d']bis(tiazol)-2,6-diamina, también conocido como SKA-50 (Fórmula (45)):

[0713]

[0715] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-50 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0716] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es benzo[1,2-d:4,3-d']bis(tiazol)-2-amina, también conocido como SKA-25 (Fórmula (46)):

[0719]

[0721] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-25 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0722] También se divulga en este documento el agonista de K<Ca>3.1 tiazolo[4,5-c]quinolin-2-amina, también conocido como SKA-56 (Fórmula (47)):

[0725]

[0727] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-56 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0728] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 6,7-dihidro-[1,4]dioxino[2',3':4,5]benzo[1,2-d]tiazol-2-amina, también conocido como SKA-30 (Fórmula (48)):

[0731]

[0733] o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. Las propiedades y la síntesis de SKA-30 se describen en Sankaranarayanan, et al., Mol. Pharmacol.2009, 75, 281-95.

[0734] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es un derivado de benzotiazol seleccionado de cualquiera de los compuestos de benzotiazol anteriores, o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es un derivado de benzoimidazol seleccionado de cualquiera de los compuestos de benzoimidazol anteriores, o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0735] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 se selecciona del grupo que consiste en:

[0736] 5-etilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0737] 5-propilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0738] 5-ciclopropilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0739] 5-(terc-butil)nafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0740] 5-fluoronafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0741] 5-cloronafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0742] 5-bromonafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0743] 5-yodonafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0744] 2-aminonafto[1,2-d]oxazol-5-carbonitrilo;

[0745] nafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

[0746] N<5>-metilnafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

[0747] N<5>,N<5>-dimetilnafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

[0748] N<5>-etilnafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

[0749] 5-(pirrolidin-1-il)nafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0750] 5-metoxinafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0751] 5-trifluorometilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

[0752] y sales, cocristales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos. Las propiedades y síntesis de estos compuestos se describen en la Publicación de Solicitud de Patente Internacional No. WO 2015/164816 A2.

[0753] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 se selecciona del grupo que consiste en:

[0754] 5-etilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0755] 5-propilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0756] 5-ciclopropilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0757] 5-(terc-butil)nafto[2,1-id]oxazol-2-amina;

[0758] 5-fluoronafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0759] 5-cloronafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0760] 5-bromonafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0761] 5-yodonafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0762] 2-aminonafto[2,1-d]oxazol-5-carbonitrilo;

[0763] nafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

[0764] N<5>-metilnafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

[0765] N<5>,N<5>-dimetilnafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

[0766] N<5>-etilnafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

[0767] 5-(pirrolidin-1-il)nafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0768] 5-metoxinafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0769] 5-trifluorometilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

[0770] y sales, cocristales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos. Las propiedades y síntesis de estos compuestos se describen en la Publicación de Solicitud de Patente Internacional No. WO 2015/164816 A2.

[0771] También se divulgan en este documento los agonistas de K<Ca>3.1 seleccionados del grupo que consiste en: 2,3,3-trimetil-3H-benzo[g]indol (también conocido como SKA-92 y CAS No.74470-85-2);

[0772] 2-metilnafto[2,3-d]oxazol (también conocido como SKA-104 y CAS No.20686-66-2);

[0773] 2-metilnafto[1,2-d]oxazol (también conocido como SKA-103 y CAS No.85-15-4);

[0774] nafto[1,2-d]oxazol-2-amina (también conocido como SKA-102 y CAS No.858432-45-8);

[0775] 2-metilnafto[1,2-d]tiazol (también conocido como SKA-74 y CAS No.2682-45-3);

[0776] 2-amino-4-(1-naftil)tiazol (también conocido como SKA-75, CAS No.56503-96-9);

[0777] 2-amino-4-(2-naftil)tiazol (también conocido como SKA-76, CAS No.21331-43-1);

[0778] y sales, cocristales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos. Las propiedades y síntesis de estos compuestos se describen en la Publicación de Solicitud de Patente Internacional No. WO 2015/164816 A2.

[0779] En una realización, el agonista de K<Ca>3.1 es 5-metilnafto[1,2-d]tiazol-2-amina (también conocido como SKA-111) y sus sales, cocristales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables. Las propiedades y la síntesis de SKA-111 se describen en la Publicación de Solicitud de Patente Internacional No. WO 2015/164816 A2 y Coleman, et al., Mol. Pharmacol.2014, 86, 342-57.

[0780] Métodos de expansión de linfocitos infiltrantes en tumores

[0781] En una realización, la invención proporciona un método para expandir TILs, comprendiendo el método poner en contacto una población de TILs que comprende al menos un TIL con un agonista del canal de potasio descrito en este documento. En una realización, la invención proporciona un método para expandir TILs, comprendiendo el método los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular de la invención.

[0782] En una realización, la invención proporciona un procesoex vivopara la preparación de una población de linfocitos infiltrantes en tumores (TILs) a partir de un tumor, comprendiendo el proceso los pasos de:

[0783] (a) poner en contacto un tumor fragmentado con un primer medio de cultivo celular;

[0784] (b) realizar una expansión inicial (pre-REP) de la primera población de TILs en el primer medio de cultivo celular para obtener una segunda población de TILs, en donde la segunda población de TILs es al menos 5 veces mayor en número que la primera población de TILs, en donde el primer medio de cultivo celular comprende IL-2;

[0785] (c) realizar una expansión rápida (REP) de la segunda población de TILs en un segundo medio de cultivo celular para obtener una tercera población de TILs, en donde la tercera población de TILs es al menos 50 veces mayor en número que la segunda población de TILs después de 7 días desde el inicio de la expansión rápida; en donde el segundo medio de cultivo celular comprende IL-2, OKT-3 (anticuerpo anti-CD3), células mononucleares de sangre periférica alogénicas irradiadas (PBMCs); y en donde la expansión rápida se realiza durante un período de 14 días o menos;

[0786] (d) recolectar la tercera población de TILs; y

[0787] en donde el primer medio de cultivo celular o el segundo medio de cultivo celular o tanto el primer medio de cultivo celular como el segundo medio de cultivo celular comprenden además un agonista del canal de potasio descrito en este documento.

[0788] En una realización, el agonista del canal de potasio puede diferir en el paso pre-REP y en el paso REP. En una realización, la invención proporciona un proceso para expandir una población de TILs que incluye un proceso de preexpansión rápida (pre-REP) y un proceso de expansión rápida (REP), en donde el medio de cultivo celular utilizado para la expansión comprende IL-2 a una concentración seleccionada del grupo que consiste en entre 100 IU/mL y 10,000 IU/mL, entre 200 IU/mL y 5,000 IU/mL, entre 300 IU/mL y 4,800 IU/mL, entre 400 IU/mL y 4,600 IU/mL, entre 500 IU/mL y 4,400 IU/mL, entre 600 IU/mL y 4,200 IU/mL, entre 700 IU/mL y 4,000 IU/mL, entre 800 IU/mL y 3,800 IU/mL, entre 900 IU/mL y 3,600 IU/mL, entre 1,000 IU/mL y 3,400 IU/mL, entre 1,100 IU/mL y 3,200 IU/mL, entre 1,200 IU/mL y 3,000 IU/mL, entre 1,300 IU/mL y 2,800 IU/mL, entre 1,400 IU/mL y 2,600 IU/mL, entre 1,500 IU/mL y 2,400 IU/mL, entre 1,600 IU/mL y 2,200 IU/mL, entre 1,700 IU/mL y 2,000 IU/mL, entre 5,500 IU/mL y 9,500 IU/mL, entre 6,000 IU/mL y 9,000 IU/mL, entre 6500 IU/mL y 8,500 IU/mL, entre 7,000 IU/mL y 8,000 IU/mL, y entre 7,500 IU/mL y 8,000 IU/mL.

[0789] En una realización, la invención proporciona un proceso para expandir una población de TILs que incluye un proceso de expansión pre-rápida (pre-REP) y un proceso de expansión rápida (REP), en donde el medio de cultivo celular utilizado para la expansión comprende IL-2 a una concentración seleccionada del grupo que consiste en aproximadamente 100 IU/mL, aproximadamente 200 IU/mL, aproximadamente 300 IU/mL, aproximadamente 400 IU/mL, aproximadamente 100 IU/mL, aproximadamente 100 IU/mL, aproximadamente 100 IU/mL, aproximadamente 100 IU/mL, aproximadamente 100 IU/mL, aproximadamente 500 IU/mL, aproximadamente 600 IU/mL, aproximadamente 700 IU/mL, aproximadamente 800 IU/mL, aproximadamente 900 IU/mL, aproximadamente 1,000 IU/mL, aproximadamente 1,100 IU/mL, aproximadamente 1,200 IU/mL, aproximadamente 1,300 IU/mL, aproximadamente 1,400 IU/mL, aproximadamente 1,500 IU/mL, aproximadamente 1,600 IU/mL, aproximadamente 1,700 IU/mL, aproximadamente 1,800 IU/mL, aproximadamente 1,900 IU/mL, aproximadamente 2,000 IU/mL, aproximadamente 2,100 IU/mL, aproximadamente 2,200 IU/mL, aproximadamente 2,300 IU/mL, aproximadamente 2,400 IU/mL, aproximadamente 2,500 IU/mL, aproximadamente 2,600 IU/mL, aproximadamente 2,700 IU/mL, aproximadamente 2,800 IU/mL, aproximadamente 2,900 IU/mL, aproximadamente 3,000 IU/mL, aproximadamente 3,100 IU/mL, aproximadamente 3,200 IU/mL, aproximadamente 3,300 IU/mL, aproximadamente 3,400 IU/mL, aproximadamente 3,500 IU/mL, aproximadamente 3,600 IU/mL, aproximadamente 3,700 IU/mL, aproximadamente 3,800 IU/mL, aproximadamente 3,900 IU/mL, aproximadamente 4,000 IU/mL, aproximadamente 4,100 IU/mL, aproximadamente 4,200 IU/mL, aproximadamente 4,300 IU/mL, aproximadamente 4,400 IU/mL, aproximadamente 4,500 IU/mL, aproximadamente 4,600 IU/mL, aproximadamente 4,700 IU/mL, aproximadamente 4,800 IU/mL, aproximadamente 4,900 IU/mL, aproximadamente 5,000 IU/mL, aproximadamente 5,100 IU/mL, aproximadamente 5,200 IU/mL, aproximadamente 5,300 IU/mL, aproximadamente 5,400 IU/mL, aproximadamente 5,500 IU/mL, aproximadamente 5,600 IU/mL, aproximadamente 5,700 IU/mL, aproximadamente 5,800 IU/mL, aproximadamente 5,900 IU/mL, aproximadamente 6,000 IU/mL, aproximadamente 6,500 IU/mL, aproximadamente 7,000 IU/mL, aproximadamente 7,500 IU/mL, aproximadamente 8,000 IU/mL, aproximadamente 8,500 IU/mL, aproximadamente 9,000 IU/mL, aproximadamente 9,500 IU/mL, y aproximadamente 10,000 IU/mL.

[0791] En una realización, la invención proporciona un proceso para expandir una población de TILs que incluye un proceso de expansión pre-rápida (pre-REP). En una realización, la invención proporciona un proceso pre-REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso pre-REP los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL.

[0792] En una realización, la invención proporciona un proceso pre-REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de aproximadamente 6000 IU/mL.

[0794] En una realización, la invención proporciona un proceso pre-REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL, y en donde el uno o más agonistas del canal de potasio comprenden un agonista de K<Ca>3.1 (canal IK).

[0796] En una realización, la invención proporciona un proceso pre-REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL, y en donde el uno o más agonistas del canal de potasio comprenden un agonista de K<Ca>3.1 (canal IK) a una concentración seleccionada del grupo que consiste en entre 1 picomolar (pM) y 1000 pM, entre 1 pM y 500 pM, entre 50 pM y 450 pM, entre 100 pM y 400 pM, entre 150 pM y 350 pM, entre 200 pM y 300 pM, entre 550 pM y 950 pM, entre 600 pM y 900 pM, entre 650 pM y 850 pM, entre 700 pM y 800 pM, entre 1 nanomolar (nM) y 1000 nM, entre 1 nM y 500 nM, entre 50 nM y 450 nM, entre 100 nM y 400 nM, entre 150 nM y 350 nM, entre 200 nM y 300 nM, entre 550 nM y 950 nM, entre 600 nM y 900 nM, entre 650 nM y 850 nM, entre 700 nM y 800 nM, entre 100 nM y 500 nM, entre 200 nM y 500 nM, entre 300 nM y 500 nM, entre 400 nM y 500 nM, entre 500 nM y 600 nM, entre 600 nM y 700 nM, entre 700 nM y 800 nM, entre 250 nM y 500 nM, entre 10 nM y 200 nM, entre 50 nM y 200 nM, entre 1 micromolar (µM) y 1000 µM, entre 1 µM y 500 µM, entre 50 µM y 450 µM, entre 100 µM y 400 µM, entre 150 µM y 350 µM, entre 200 µM y 300 µM, entre 550 µM y 950 µM, entre 600 µM y 900 µM, entre 650 µM y 850 µM, entre 700 µM y 800 µM, entre 100 µM y 500 µM, entre 200 µM y 500 µM, entre 300 µM y 500 µM, entre 400 µM y 500 µM, entre 500 µM y 600 µM, entre 600 µM y 700 µM, entre 700 µM y 800 µM, entre 250 µM y 500 µM, entre 10 µM y 200 µM, entre 50 µM y 200 µM, entre 1 milimol (mM) y 1000 mM, entre 1 mM y 500 mM, entre 50 mM y 450 mM, entre 100 mM y 400 mM, entre 150 mM y 350 mM, entre 200 mM y 300 mM, entre 550 mM y 950 mM, entre 600 mM y 900 mM, entre 650 mM y 850 mM, entre 700 mM y 800 mM, entre 100 mM y 500 mM, entre 200 mM y 500 mM, entre 300 mM y 500 mM, entre 400 mM y 500 mM, entre 500 mM y 600 mM, entre 600 mM y 700 mM, entre 700 mM y 800 mM, entre 250 mM y 500 mM, entre 10 mM y 200 mM, y entre 50 mM y 200 mM.

[0798] En una realización, la invención proporciona un proceso pre-REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL, y en donde el uno o más agonistas del canal de potasio pueden incluir un agonista de K<Ca>3.1 (canal IK), a una concentración seleccionada del grupo que consiste en entre 1 nanomolar (nM) y 100 nM, entre 100 nM y 200 nM, entre 200 nM y 300 nM, entre 300 nM y 400 nM, entre 400 nM y 500 nM, entre 500 nM y 600 nM, entre 600 nM y 700 nM, entre 700 nM y 800 nM, entre 800 nM y 900 nM, entre 900 nM y 1 micromolar (µM), entre 1 µM y 2 µM, entre 2 µM y 5 µM, entre 5 µM y 10 µM, y entre 10 µM y 100 µM.

[0800] En una realización, la invención proporciona un proceso pre-REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL, y en donde el uno o más agonistas del canal de potasio comprenden un agonista de K<Ca>3.1 (canal IK) a una concentración seleccionada del grupo que consiste en aproximadamente 1 pM, aproximadamente 50 pM, aproximadamente 100 pM, aproximadamente 150 pM, aproximadamente 200 pM, aproximadamente 250 pM, aproximadamente 300 pM, aproximadamente 350 pM, aproximadamente 400 pM, aproximadamente 450 pM, aproximadamente 500 pM, aproximadamente 550 pM, aproximadamente 600 pM, aproximadamente 650 pM, aproximadamente 700 pM, aproximadamente 750 pM, aproximadamente 800 pM, aproximadamente 850 pM, aproximadamente 900 pM, aproximadamente 950 pM, aproximadamente 1 nM, aproximadamente 25 nM, aproximadamente 50 nM, aproximadamente 75 nM, aproximadamente 100 nM, aproximadamente 125 nM, aproximadamente 150 nM, aproximadamente 175 nM, aproximadamente 200 nM, aproximadamente 225 nM, aproximadamente 250 nM, aproximadamente 275 nM, aproximadamente 300 nM, aproximadamente 325 nM, aproximadamente 350 nM, aproximadamente 375 nM, aproximadamente 400 nM, aproximadamente 425 nM, aproximadamente 450 nM, aproximadamente 475 nM, aproximadamente 500 nM, aproximadamente 525 nM, aproximadamente 550 nM, aproximadamente 575 nM, aproximadamente 600 nM, aproximadamente 625 nM, aproximadamente 650 nM, aproximadamente 675 nM, aproximadamente 700 nM, aproximadamente 750 nM, aproximadamente 800 nM, aproximadamente 850 nM, aproximadamente 900 nM, aproximadamente 950 nM, aproximadamente 1 µM, aproximadamente 2 µM, aproximadamente 5 µM, aproximadamente 10 µM, aproximadamente 20 µM, aproximadamente 30 µM, aproximadamente 40 µM, aproximadamente 50 µM, aproximadamente 60 µM, aproximadamente 70 µM, aproximadamente 80 µM, aproximadamente 90 µM, aproximadamente 100 µM, aproximadamente 125 µM, aproximadamente 150 µM, aproximadamente 175 µM, aproximadamente 200 µM, aproximadamente 225 µM, aproximadamente 250 µM, aproximadamente 275 µM, aproximadamente 300 µM, aproximadamente 325 µM, aproximadamente 350 µM, aproximadamente 375 µM, aproximadamente 400 µM, aproximadamente 425 µM, aproximadamente 450 µM, aproximadamente 500 µM, aproximadamente 550 µM, aproximadamente 600 µM, aproximadamente 650 µM, aproximadamente 700 µM, aproximadamente 750 µM, aproximadamente 800 µM, aproximadamente 850 µM, aproximadamente 900 µM, aproximadamente 950 µM, aproximadamente 1 milimolar (mM), aproximadamente 2 mM, aproximadamente 5 mM, aproximadamente 10 mM, aproximadamente 25 mM, aproximadamente 30 mM, aproximadamente 35 mM, aproximadamente 40 mM, aproximadamente 45 mM, aproximadamente 50 mM, aproximadamente 55 mM, aproximadamente 60 mM, aproximadamente 65 mM, aproximadamente 70 mM, aproximadamente 75 mM, aproximadamente 80 mM, aproximadamente 85 mM, aproximadamente 90 mM, aproximadamente 95 mM y aproximadamente 100 mm.

[0801] En una realización, la invención proporciona un proceso pre-REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL, y en donde el uno o más agonistas del canal de potasio comprenden un agonista de K<Ca>3.1 del canal (IK) a una concentración seleccionada del grupo que consiste en por encima de 1 pM, por encima de 50 pM, por encima de 100 pM, por encima de 150 pM, por encima de 200 pM, por encima de 250 pM, por encima de 300 pM, por encima de 350 pM, por encima de 400 pM, por encima de 450 pM, por encima de 500 pM, por encima de 550 pM, por encima de 600 pM, por encima de 650 pM, por encima de 700 pM, por encima de 750 pM, por encima de 800 pM, por encima de 850 pM, por encima de 900 pM, por encima de 950 pM, por encima de 1 nM, por encima de 25 nM, por encima de 50 nM, por encima de 75 nM, por encima de 100 nM, por encima de 125 nM, por encima de 150 nM, por encima de 175 nM, por encima de 200 nM, por encima de 225 nM, por encima de 250 nM, por encima de 275 nM, por encima de 300 nM, por encima de 325 nM, por encima de 350 nM, por encima de 375 nM, por encima de 400 nM, por encima de 425 nM, por encima de 450 nM, por encima de 475 nM, por encima de 500 nM, por encima de 525 nM, por encima de 550 nM, por encima de 575 nM, por encima de 600 nM, por encima de 625 nM, por encima de 650 nM, por encima de 675 nM, por encima de 700 nM, por encima de 750 nM, por encima de 800 nM, por encima de 850 nM, por encima de 900 nM, por encima de 950 nM, por encima de 1 µM, por encima de 2 µM, por encima de 5 µM, por encima de 10 µM, por encima de 20 µM, por encima de 30 µM, por encima de 40 µM, por encima de 50 µM, por encima de 60 µM, por encima de 70 µM, por encima de 80 µM, por encima de 90 µM, por encima de 100 µM, por encima de 125 µM, por encima de 150 µM, por encima de 175 µM, por encima de 200 µM, por encima de 225 µM, por encima de 250 µM, por encima de 275 µM, por encima de 300 µM, por encima de 325 µM, por encima de 350 µM, por encima de 375 µM, por encima de 400 µM, por encima de 425 µM, por encima de 450 µM, por encima de 500 µM, por encima de 550 µM, por encima de 600 µM, por encima de 650 µM, por encima de 700 µM, por encima de 750 µM, por encima de 800 µM, por encima de 850 µM, por encima de 900 µM, por encima de 950 µM, por encima de 1 milimolar (mM), por encima de 2 mM, por encima de 5 mM, por encima de 10 mM, por encima de 25 mM, por encima de 30 mM, por encima de 35 mM, por encima de 40 mM, por encima de 45 mM, por encima de 50 mM, por encima de 55 mM, por encima de 60 mM, por encima de 65 mM, por encima de 70 mM, por encima de 75 mM, por encima de 80 mM, por encima de 85 mM, por encima de 90 mM, por encima de 95 mM y por encima de 100 mm.

[0803] En una realización, la invención proporciona un proceso pre-REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL, y en donde el uno o más agonistas del canal de potasio comprenden un agonista de K<Ca>3.1 del canal (IK) a una concentración seleccionada del grupo que consiste en por debajo de 1 pM, por debajo de 50 pM, por debajo de 100 pM, por debajo de 150 pM, por debajo de 200 pM, por debajo de 250 pM, por debajo de 300 pM, por debajo de 350 pM, por debajo de 400 pM, por debajo de 450 pM, por debajo de 500 pM, por debajo de 550 pM, por debajo de 600 pM, por debajo de 650 pM, por debajo de 700 pM, por debajo de 750 pM, por debajo de 800 pM, por debajo de 850 pM, por debajo de 900 pM, por debajo de 950 pM, por debajo de 1 nM, por debajo de 25 nM, por debajo de 50 nM, por debajo de 75 nM, por debajo de 100 nM, por debajo de 125 nM, por debajo de 150 nM, por debajo de 175 nM, por debajo de 200 nM, por debajo de 225 nM, por debajo de 250 nM, por debajo de 275 nM, por debajo de 300 nM, por debajo de 325 nM, por debajo de 350 nM, por debajo de 375 nM, por debajo de 400 nM, por debajo de 425 nM, por debajo de 450 nM, por debajo de 475 nM, por debajo de 500 nM, por debajo de 525 nM, por debajo de 550 nM, por debajo de 575 nM, por debajo de 600 nM, por debajo de 625 nM, por debajo de 650 nM, por debajo de 675 nM, por debajo de 700 nM, por debajo de 750 nM, por debajo de 800 nM, por debajo de 850 nM, por debajo de 900 nM, por debajo de 950 nM, por debajo de 1 µM, por debajo de 2 µM, por debajo de 5 µM, por debajo de 10 µM, por debajo de 20 µM, por debajo de 30 µM, por debajo de 40 µM, por debajo de 50 µM, por debajo de 60 µM, por debajo de 70 µM, por debajo de 80 µM, por debajo de 90 µM, por debajo de 100 µM, por debajo de 125 µM, por debajo de 150 µM, por debajo de 175 µM, por debajo de 200 µM, por debajo de 225 µM, por debajo de 250 µM, por debajo de 275 µM, por debajo de 300 µM, por debajo de 325 µM, por debajo de 350 µM, por debajo de 375 µM, por debajo de 400 µM, por debajo de 425 µM, por debajo de 450 µM, por debajo de 500 µM, por debajo de 550 µM, por debajo de 600 µM, por debajo de 650 µM, por debajo de 700 µM, por debajo de 750 µM, por debajo de 800 µM, por debajo de 850 µM, por debajo de 900 µM, por debajo de 950 µM, por debajo de 1 milimolar (mM), por debajo de 2 mM, por debajo de 5 mM, por debajo de 10 mM, por debajo de 25 mM, por debajo de 30 mM, por debajo de 35 mM, por debajo de 40 mM, por debajo de 45 mM, por debajo de 50 mM, por debajo de 55 mM, por debajo de 60 mM, por debajo de 65 mM, por debajo de 70 mM, por debajo de 75 mM, por debajo de 80 mM, por debajo de 85 mM, por debajo de 90 mM, por debajo de 95 mM y por debajo de 100 mm.

[0805] En una realización, la invención proporciona un proceso pre-REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL, en donde el uno o más agonistas del canal de potasio comprenden un agonista de K<Ca>3.1 (canal IK), en donde la población de TILs que comprende células T con un fenotipo seleccionado del grupo que consiste en CD8<+>CD28<+>, CD8<+>CD27<+>, CD8<+>CD27<+>CD28<+>, CCR7<+>, y combinaciones de los mismos, aumenta en relación con una población de referencia de TILs obtenida sin el agonista del canal de potasio, en donde el fenotipo en la segunda población de TILs aumenta en al menos un 1%, al menos un 2%, al menos un 3%, al menos un 4%, al menos un 5%, al menos un 10%, al menos un 15%, al menos un 20%, al menos un 25%, al menos un 30%, al menos un 35%, al menos un 40%, al menos un 50%, al menos un 55%, al menos un 60%, al menos un 65%, al menos un 70%, al menos un 75%, al menos un 80%, al menos un 85%, al menos un 90%, al menos un 95%, al menos un 100%, al menos un 125%, al menos un 150%, al menos un 200%, al menos un 250%, al menos un 300%, al menos 400%, o al menos 500% con respecto a la población de referencia de TILs.

[0807] En una realización, la invención proporciona un proceso pre-REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL, en donde el uno o más agonistas del canal de potasio comprenden un agonista de K<Ca>3.1 del canal (IK), en donde la población de TILs se expande durante un período de tiempo seleccionado del grupo que consiste en 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días, 8 días, 9 días, 10 días, 11 días, 12 días, 13 días, 14 días, 15 días, 16 días, 17 días, 18 días, 19 días, 20 días, 21 días, 25 días, 30 días, 35 días y 40 días.

[0809] En una realización, la invención proporciona un proceso pre-REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL, en donde el uno o más agonistas del canal de potasio comprenden un agonista de K<Ca>3.1 del canal (IK), en donde la población de TILs se expande durante un período de tiempo seleccionado del grupo que consiste en menos de 1 día, menos de 2 días, menos de 3 días, menos de 4 días, menos de 5 días, menos de 6 días, menos de 7 días, menos de 8 días, menos de 9 días, menos de 10 días, menos de 11 días, menos de 12 días, menos de 13 días, menos de 14 días, menos de 15 días, menos de 16 días, menos de 17 días, menos de 18 días, menos de 19 días, menos de 20 días, menos de 21 días, menos de 25 días, menos de 30 días, menos de 35 días y menos de 40 días.

[0811] En una realización, la invención proporciona un método para expandir una población de TILs, comprendiendo el método los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL y anticuerpo OKT-3 a una concentración inicial de aproximadamente 30 ng/mL.

[0813] En una realización, la invención proporciona un proceso REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de aproximadamente 6000 IU/mL y anticuerpo OKT-3 a una concentración inicial de aproximadamente 30 ng/mL.

[0815] En una realización, la invención proporciona un proceso REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de aproximadamente 6000 IU/mL y anticuerpo OKT-3 a una concentración inicial de aproximadamente 30 ng/mL, y en donde el uno o más agonistas del canal de potasio comprenden un agonista de K<Ca>3.1 (canal IK).

[0816] En una realización, la invención proporciona un proceso REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL y anticuerpo OKT-3 a una concentración inicial de aproximadamente 30 ng/mL, y en donde el uno o más agonistas del canal de potasio comprende un agonista de K<Ca>3.1 (canal IK) a una concentración seleccionada del grupo que consiste en entre 1 picomolar (pM) y 1000 pM, entre 1 pM y 500 pM, entre 50 pM y 450 pM, entre 100 pM y 400 pM, entre 150 pM y 350 pM, entre 200 pM y 300 pM, entre 550 pM y 950 pM, entre 600 pM y 900 pM, entre 650 pM y 850 pM, entre 700 pM y 800 pM, entre 1 nanomolar (nM) y 1000 nM, entre 1 nM y 500 nM, entre 50 nM y 450 nM, entre 100 nM y 400 nM, entre 150 nM y 350 nM, entre 200 nM y 300 nM, entre 550 nM y 950 nM, entre 600 nM y 900 nM, entre 650 nM y 850 nM, entre 700 nM y 800 nM, entre 100 nM y 500 nM, entre 200 nM y 500 nM, entre 300 nM y 500 nM, entre 400 nM y 500 nM, entre 500 nM y 600 nM, entre 600 nM y 700 nM, entre 700 nM y 800 nM, entre 250 nM y 500 nM, entre 10 nM y 200 nM, entre 50 nM y 200 nM, entre 1 micromolar (µM) y 1000 µM, entre 1 µM y 500 µM, entre 50 µM y 450 µM, entre 100 µM y 400 µM, entre 150 µM y 350 µM, entre 200 µM y 300 µM, entre 550 µM y 950 µM, entre 600 µM y 900 µM, entre 650 µM y 850 µM, entre 700 µM y 800 µM, entre 100 µM y 500 µM, entre 200 µM y 500 µM, entre 300 µM y 500 µM, entre 400 µM y 500 µM, entre 500 µM y 600 µM, entre 600 µM y 700 µM, entre 700 µM y 800 µM, entre 250 µM y 500 µM, entre 10 µM y 200 µM, entre 50 µM y 200 µM, entre 1 milimolar (mM) y 1000 mM, entre 1 mM y 500 mM, entre 50 mM y 450 mM, entre 100 mM y 400 mM, entre 150 mM y 350 mM, entre 200 mM y 300 mM, entre 550 mM y 950 mM, entre 600 mM y 900 mM, entre 650 mM y 850 mM, entre 700 mM y 800 mM, entre 100 mM y 500 mM, entre 200 mM y 500 mM, entre 300 mM y 500 mM, entre 400 mM y 500 mM, entre 500 mM y 600 mM, entre 600 mM y 700 mM, entre 700 mM y 800 mM, entre 250 mM y 500 mM, entre 10 mM y 200 mM, y entre 50 mM y 200 mM.

[0818] En una realización, la invención proporciona un proceso REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL y anticuerpo OKT-3 a una concentración inicial de aproximadamente 30 ng/mL, y en donde el uno o más agonistas del canal de potasio comprende un agonista de K<Ca>3.1 (canal IK) a una concentración seleccionada del grupo que consiste en entre 1 nanomolar (nM) y 100 nM, entre 100 nM y 200 nM, entre 200 nM y 300 nM, entre 300 nM y 400 nM, entre 400 nM y 500 nM, entre 500 nM y 600 nM, entre 600 nM y 700 nM, entre 700 nM y 800 nM, entre 800 nM y 900 nM, entre 900 nM y 1 micromolar (µM), entre 1 µM y 2 µM, entre 2 µM y 5 µM, entre 5 µM y 10 µM, entre 10 µM y 100 µM, entre 100 µM y 200 µM, entre 200 µM y 300 µM, entre 300 µM y 400 µM, entre 400 µM y 500 µM, entre 500 µM y 600 µM, entre 600 µM y 700 µM, entre 700 µM y 800 µM, entre 800 µM y 900 µM, entre 900 µM y 1 mM, entre 1 mM y 10 mM, entre 10 mM y 100 mM, entre 100 mM y 200 mM, entre 200 mM y 300 mM, entre 300 mM y 400 mM, y entre 400 mM y 500 mM.

[0820] En una realización, la invención proporciona un proceso REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL y anticuerpo OKT-3 a una concentración inicial de aproximadamente 30 ng/mL, y en donde el uno o más agonistas del canal de potasio comprende un agonista de K<Ca>3.1 (canal IK) a una concentración seleccionada del grupo que consiste en aproximadamente 1 pM, aproximadamente 50 pM, aproximadamente 100 pM, aproximadamente 150 pM, aproximadamente 200 pM, aproximadamente 250 pM, aproximadamente 300 pM, aproximadamente 350 pM, aproximadamente 400 pM, aproximadamente 450 pM, aproximadamente 500 pM, aproximadamente 550 pM, aproximadamente 600 pM, aproximadamente 650 pM, aproximadamente 700 pM, aproximadamente 750 pM, aproximadamente 800 pM, aproximadamente 850 pM, aproximadamente 900 pM, aproximadamente 950 pM, aproximadamente 1 nM, aproximadamente 25 nM, aproximadamente 50 nM, aproximadamente 75 nM, aproximadamente 100 nM, aproximadamente 125 nM, aproximadamente 150 nM, aproximadamente 175 nM, aproximadamente 200 nM, aproximadamente 225 nM, aproximadamente 250 nM, aproximadamente 275 nM, aproximadamente 300 nM, aproximadamente 325 nM, aproximadamente 350 nM, aproximadamente 375 nM, aproximadamente 400 nM, aproximadamente 425 nM, aproximadamente 450 nM, aproximadamente 475 nM, aproximadamente 500 nM, aproximadamente 525 nM, aproximadamente 550 nM, aproximadamente 575 nM, aproximadamente 600 nM, aproximadamente 625 nM, aproximadamente 650 nM, aproximadamente 675 nM, aproximadamente 700 nM, aproximadamente 750 nM, aproximadamente 800 nM, aproximadamente 850 nM, aproximadamente 900 nM, aproximadamente 950 nM, aproximadamente 1 µM, aproximadamente 2 µM, aproximadamente 5 µM, aproximadamente 10 µM, aproximadamente 20 µM, aproximadamente 30 µM, aproximadamente 40 µM, aproximadamente 50 µM, aproximadamente 60 µM, aproximadamente 70 µM, aproximadamente 80 µM, aproximadamente 90 µM, aproximadamente 100 µM, aproximadamente 125 µM, aproximadamente 150 µM, aproximadamente 175 µM, aproximadamente 200 µM, aproximadamente 225 µM, aproximadamente 250 µM, aproximadamente 275 µM, aproximadamente 300 µM, aproximadamente 325 µM, aproximadamente 350 µM, aproximadamente 375 µM, aproximadamente 400 µM, aproximadamente 425 µM, aproximadamente 450 µM, aproximadamente 500 µM, aproximadamente 550 µM, aproximadamente 600 µM, aproximadamente 650 µM, aproximadamente 700 µM, aproximadamente 750 µM, aproximadamente 800 µM, aproximadamente 850 µM, aproximadamente 900 µM, aproximadamente 950 µM, aproximadamente 1 milimolar (mM), aproximadamente 2 mM, aproximadamente 5 mM, aproximadamente 10 mM, aproximadamente 25 mM, aproximadamente 30 mM, aproximadamente 35 mM, aproximadamente 40 mM, aproximadamente 45 mM, aproximadamente 50 mM, aproximadamente 55 mM, aproximadamente 60 mM, aproximadamente 65 mM, aproximadamente 70 mM, aproximadamente 75 mM, aproximadamente 80 mM, aproximadamente 85 mM, aproximadamente 90 mM, aproximadamente 95 mM, aproximadamente 100 mM, aproximadamente 125 mM, aproximadamente 150 mM, aproximadamente 175 mM, aproximadamente 200 mM, aproximadamente 300 mM, aproximadamente 400 mM y aproximadamente 500 mM.

[0822] En una realización, la invención proporciona un proceso REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL y anticuerpo OKT-3 a una concentración inicial de aproximadamente 30 ng/mL, y en donde el uno o más agonistas del canal de potasio comprende un agonista de K<Ca>3.1 del canal (IK) a una concentración seleccionada del grupo que consiste en por encima de 1 pM, por encima de 50 pM, por encima de 100 pM, por encima de 150 pM, por encima de 200 pM, por encima de 250 pM, por encima de 300 pM, por encima de 350 pM, por encima de 400 pM, por encima de 450 pM, por encima de 500 pM, por encima de 550 pM, por encima de 600 pM, por encima de 650 pM, por encima de 700 pM, por encima de 750 pM, por encima de 800 pM, por encima de 850 pM, por encima de 900 pM, por encima de 950 pM, por encima de 1 nM, por encima de 25 nM, por encima de 50 nM, por encima de 75 nM, por encima de 100 nM, por encima de 125 nM, por encima de 150 nM, por encima de 175 nM, por encima de 200 nM, por encima de 225 nM, por encima de 250 nM, por encima de 275 nM, por encima de 300 nM, por encima de 325 nM, por encima de 350 nM, por encima de 375 nM, por encima de 400 nM, por encima de 425 nM, por encima de 450 nM, por encima de 475 nM, por encima de 500 nM, por encima de 525 nM, por encima de 550 nM, por encima de 575 nM, por encima de 600 nM, por encima de 625 nM, por encima de 650 nM, por encima de 675 nM, por encima de 700 nM, por encima de 750 nM, por encima de 800 nM, por encima de 850 nM, por encima de 900 nM, por encima de 950 nM, por encima de 1 µM, por encima de 2 µM, por encima de 5 µM, por encima de 10 µM, por encima de 20 µM, por encima de 30 µM, por encima de 40 µM, por encima de 50 µM, por encima de 60 µM, por encima de 70 µM, por encima de 80 µM, por encima de 90 µM, por encima de 100 µM, por encima de 125 µM, por encima de 150 µM, por encima de 175 µM, por encima de 200 µM, por encima de 225 µM, por encima de 250 µM, por encima de 275 µM, por encima de 300 µM, por encima de 325 µM, por encima de 350 µM, por encima de 375 µM, por encima de 400 µM, por encima de 425 µM, por encima de 450 µM, por encima de 500 µM, por encima de 550 µM, por encima de 600 µM, por encima de 650 µM, por encima de 700 µM, por encima de 750 µM, por encima de 800 µM, por encima de 850 µM, por encima de 900 µM, por encima de 950 µM, por encima de 1 milimolar (mM), por encima de 2 mM, por encima de 5 mM, por encima de 10 mM, por encima de 25 mM, por encima de 30 mM, por encima de 35 mM, por encima de 40 mM, por encima de 45 mM, por encima de 50 mM, por encima de 55 mM, por encima de 60 mM, por encima de 65 mM, por encima de 70 mM, por encima de 75 mM, por encima de 80 mM, por encima de 85 mM, por encima de 90 mM, por encima de 95 mM, por encima de 100 mM, por encima de 125 mM, por encima de 150 mM, por encima de 175 mM, por encima de 200 mM, por encima de 300 mM, por encima de 400 mM y por encima de 500 mM.

[0824] En una realización, la invención proporciona un proceso REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL y anticuerpo OKT-3 a una concentración inicial de aproximadamente 30 ng/mL, y en donde el uno o más agonistas del canal de potasio comprende un agonista de K<Ca>3.1 del canal (IK) a una concentración seleccionada del grupo que consiste en por debajo de 1 pM, por debajo de 50 pM, por debajo de 100 pM, por debajo de 150 pM, por debajo de 200 pM, por debajo de 250 pM, por debajo de 300 pM, por debajo de 350 pM, por debajo de 400 pM, por debajo de 450 pM, por debajo de 500 pM, por debajo de 550 pM, por debajo de 600 pM, por debajo de 650 pM, por debajo de 700 pM, por debajo de 750 pM, por debajo de 800 pM, por debajo de 850 pM, por debajo de 900 pM, por debajo de 950 pM, por debajo de 1 nM, por debajo de 25 nM, por debajo de 50 nM, por debajo de 75 nM, por debajo de 100 nM, por debajo de 125 nM, por debajo de 150 nM, por debajo de 175 nM, por debajo de 200 nM, por debajo de 225 nM, por debajo de 250 nM, por debajo de 275 nM, por debajo de 300 nM, por debajo de 325 nM, por debajo de 350 nM, por debajo de 375 nM, por debajo de 400 nM, por debajo de 425 nM, por debajo de 450 nM, por debajo de 475 nM, por debajo de 500 nM, por debajo de 525 nM, por debajo de 550 nM, por debajo de 575 nM, por debajo de 600 nM, por debajo de 625 nM, por debajo de 650 nM, por debajo de 675 nM, por debajo de 700 nM, por debajo de 750 nM, por debajo de 800 nM, por debajo de 850 nM, por debajo de 900 nM, por debajo de 950 nM, por debajo de 1 µM, por debajo de 2 µM, por debajo de 5 µM, por debajo de 10 µM, por debajo de 20 µM, por debajo de 30 µM, por debajo de 40 µM, por debajo de 50 µM, por debajo de 60 µM, por debajo de 70 µM, por debajo de 80 µM, por debajo de 90 µM, por debajo de 100 µM, por debajo de 125 µM, por debajo de 150 µM, por debajo de 175 µM, por debajo de 200 µM, por debajo de 225 µM, por debajo de 250 µM, por debajo de 275 µM, por debajo de 300 µM, por debajo de 325 µM, por debajo de 350 µM, por debajo de 375 µM, por debajo de 400 µM, por debajo de 425 µM, por debajo de 450 µM, por debajo de 500 µM, por debajo de 550 µM, por debajo de 600 µM, por debajo de 650 µM, por debajo de 700 µM, por debajo de 750 µM, por debajo de 800 µM, por debajo de 850 µM, por debajo de 900 µM, por debajo de 950 µM, por debajo de 1 milimolar (mM), por debajo de 2 mM, por debajo de 5 mM, por debajo de 10 mM, por debajo de 25 mM, por debajo de 30 mM, por debajo de 35 mM, por debajo de 40 mM, por debajo de 45 mM, por debajo de 50 mM, por debajo de 55 mM, por debajo de 60 mM, por debajo de 65 mM, por debajo de 70 mM, por debajo de 75 mM, por debajo de 80 mM, por debajo de 85 mM, por debajo de 90 mM, por debajo de 95 mM, por debajo de 100 mM, por debajo de 125 mM, por debajo de 150 mM, por debajo de 175 mM, por debajo de 200 mM, por debajo de 300 mM, por debajo de 400 mM y por debajo de 500 mM.

[0825] En una realización, la invención proporciona un proceso REP para expandir una población de linfocitos infiltrantes en tumores (TILs), comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde la población de TILs se expande al menos 50 veces durante un período de 7 días en el medio de cultivo celular.

[0826] En una realización, la invención proporciona un proceso REP para expandir una población de linfocitos infiltrantes en tumores (TILs), comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde la población de TILs se expande al menos 50 veces durante un período de 7 días en el medio de cultivo celular, y en donde la expansión se realiza utilizando un recipiente permeable al gas.

[0827] En una realización, la invención proporciona un proceso REP para expandir una población de linfocitos infiltrantes en tumores (TILs), comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde la población de TILs se expande al menos 50 veces durante un período de 7 días en el medio de cultivo celular, y en donde la expansión se realiza utilizando un recipiente permeable al gas, en donde el recipiente permeable al gas es una bolsa permeables al gas o un matraz permeables al gas.

[0828] En una realización, la invención proporciona un proceso REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL y anticuerpo OKT-3 a una concentración inicial de aproximadamente 30 ng/mL, en donde el uno o más agonistas del canal de potasio comprenden un agonista de K<Ca>3.1 del canal (IK), en donde la población de TILs se expande rápidamente durante un período de tiempo seleccionado del grupo que consiste en 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días, 8 días, 9 días, 10 días, 11 días, 12 días, 13 días, 14 días, 15 días, 16 días, 17 días, 18 días, 19 días, 20 días, 21 días, 25 días, 30 días, 35 días y 40 días.

[0829] En una realización, la invención proporciona un proceso REP para expandir una población de TILs, comprendiendo el proceso los pasos de poner en contacto la población de TILs con uno o más agonistas del canal de potasio en un medio de cultivo celular, en donde el medio de cultivo celular comprende además IL-2 a una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL y anticuerpo OKT-3 a una concentración inicial de aproximadamente 30 ng/mL, en donde el uno o más agonistas del canal de potasio comprenden un agonista de K<Ca>3.1 del canal (IK), en donde la población de TILs se expande rápidamente durante un período de tiempo seleccionado del grupo que consiste en menos de 1 día, menos de 2 días, menos de 3 días, menos de 4 días, menos de 5 días, menos de 6 días, menos de 7 días, menos de 8 días, menos de 9 días, menos de 10 días, menos de 11 días, menos de 12 días, menos de 13 días, menos de 14 días, menos de 15 días, menos de 16 días, menos de 17 días, menos de 18 días, menos de 19 días, menos de 20 días, menos de 21 días, menos de 25 días, menos de 30 días, menos de 35 días y menos de 40 días.

[0830] En una realización, REP se puede realizar en un recipiente permeable al gas utilizando los agonistas del canal de potasio de la presente divulgación mediante cualquier método adecuado. Por ejemplo, los TIL se pueden expandir rápidamente utilizando la estimulación del receptor de células T no específico en presencia de interleucina-2 (IL-2) o interleucina-15 (IL-15). El estímulo del receptor de células T no específico puede incluir, por ejemplo, aproximadamente 30 ng/mL de OKT-3, un anticuerpo monoclonal anti-CD3 (disponible comercialmente en Ortho-McNeil, Raritan, NJ o Miltenyi Biotech, Auburn, CA). Los TIL se pueden expandir rápidamente mediante una mayor estimulación de los TILin vitrocon uno o más antígenos, incluidas porciones antigénicas de los mismos, tales como epítopos, del cáncer, que pueden expresarse opcionalmente a partir de un vector, tal como un péptido de unión al antígeno leucocitario humano A2 (HLA-A2), por ejemplo, 0.3 µM MART-1:26-35 (27 L) o gpl 00:209-217 (210 M), opcionalmente en presencia de un factor de crecimiento de células T, tal como 300 IU/mL IL-2 o IL-15. Otros antígenos adecuados pueden incluir, por ejemplo, NY-ESO-1, TRP-1, TRP-2, antígeno de cáncer de tirosinasa, MAGE-A3, SSX-2 y VEGFR2, o porciones antigénicas de los mismos. TIL también puede expandirse rápidamente mediante la reestimulación con los mismos antígenos del cáncer pulsados sobre células presentadoras de antígenos que expresan HLA-A2. Alternativamente, los TIL pueden reestimularse aún más con, por ejemplo, por ejemplo, linfocitos autólogos irradiados o con linfocitos alogénicos HLA-A2+ irradiados e IL-2.

[0831] En una realización, un método para expandir TILs puede incluir el uso de aproximadamente 5000 mL a aproximadamente 25000 mL de medio de cultivo celular, aproximadamente 5000 mL a aproximadamente 10000 mL de medio de cultivo celular, o aproximadamente 5800 mL a aproximadamente 8700 mL de medio de cultivo celular. En una realización, un método para expandir TIL puede incluir el uso de aproximadamente 1000 mL a aproximadamente 2000 mL de medio celular, aproximadamente 2000 mL a aproximadamente 3000 mL de medio de cultivo celular, aproximadamente 3000 mL a aproximadamente 4000 mL de medio de cultivo celular, aproximadamente 4000 mL a aproximadamente 5000 mL de medio de cultivo celular, aproximadamente 5000 mL a aproximadamente 6000 mL de medio de cultivo celular, aproximadamente 6000 mL a aproximadamente 7000 mL de medio de cultivo celular, aproximadamente 7000 mL a aproximadamente 8000 mL de medio de cultivo celular, aproximadamente 8000 mL a aproximadamente 9000 mL de medio de cultivo celular, aproximadamente 9000 mL a aproximadamente 10000 mL de medio de cultivo celular, aproximadamente 10000 mL a aproximadamente 15000 mL de medio de cultivo celular, aproximadamente 15000 mL a aproximadamente 20000 mL de medio de cultivo celular, o aproximadamente 20000 mL a aproximadamente 25000 mL de medio de cultivo celular. En una realización, la expansión del número de TILs no utiliza más de un tipo de medio de cultivo celular. Se puede utilizar cualquier medio de cultivo celular adecuado, por ejemplo, medio celular AIM-V (L-glutamina, 50 µM de sulfato de estreptomicina y 10 µM de sulfato de gentamicina) (Invitrogen, Carlsbad CA). En este sentido, los métodos inventivos reducen ventajosamente la cantidad de medio y el número de tipos de medio necesarios para ampliar el número de TIL. En una realización, ampliar el número de TIL puede comprender alimentar las células con una frecuencia no mayor a cada tercer o cuarto día. Ampliar el número de células en un recipiente permeable al gas simplifica los procedimientos necesarios para ampliar el número de células al reducir la frecuencia de alimentación necesaria para expandir las células.

[0833] En una realización, la expansión rápida se realiza utilizando un recipiente permeable al gas. Estas realizaciones permiten que las poblaciones de células se expandan desde aproximadamente 5 × 10<5>células/cm<2>entre 10 x 10<6>y 30 × 10<6>células/cm<2>. En una realización, esta expansión se produce sin alimentación. En una realización, esta expansión se produce sin alimentación siempre que el medio se encuentre a una altura de aproximadamente 10 cm en un matraz permeables al gas. En una realización, esto es sin alimentación pero con la adición de una o más citoquinas. En una realización, la citoquina se puede agregar como un bolo sin necesidad de mezclar la citoquina con el medio. Dichos recipientes, dispositivos y métodos son conocidos en la técnica y se han utilizado para expandir TIL, e incluyen aquellos descritos en la Publicación de Solicitud de Patente U.S. No. US 2014/0377739 A1, Publicación de solicitud de patente internacional No. WO 2014/210036 A1, Publicación de solicitud de patente U.S. No. U.S. 2013/0115617 A1, Publicación Internacional No. WO 2013/188427 A1, Publicación de solicitud de patente U.S. No. U:S: 2011/0136228 A1, Patente U.S. No.

[0834] 8,809,050, Publicación de solicitud de patente internacional No. WO 2011/072088 A2, Publicación de solicitud de patente de U.S. No. U.S.2016/0208216 A1, Publicación de solicitud de patente U.S. No. U.S.2012/0244133 A1, Publicación de solicitud de patente internacional No. WO 2012/129201 A1, Publicación de solicitud de patente U.S. No. U.S. 2013/0102075 A1, Patente U.S. No. 8,956,860, Publicación de solicitud de patente internacional No. WO 2013/173835 A1, y la publicación de solicitud de patente U.S. No. U.S. 2015/0175966 A1. Estos procesos también se describen en Jin, et al., J. Immunotherapy 2012, 35, 283-292.

[0836] En una realización, el recipiente permeable al gas es un matraz G-Rex 10 (Wilson Wolf Manufacturing Corporation, New Brighton, MN, USA). En una realización, el recipiente permeable al gas incluye una superficie de cultivo permeable al gas de 10 cm<2>. En una realización, el recipiente permeable al gas incluye una capacidad de medio de cultivo celular de 40 mL. En una realización, el recipiente permeable al gas proporciona 100 a 300 millones de TIL después de 2 intercambios de medio.

[0838] En una realización, el recipiente permeable al gas es un matraz G-Rex 100 (Wilson Wolf Manufacturing Corporation, New Brighton, MN, USA). En una realización, el recipiente permeable al gas incluye una superficie de cultivo permeable al gas de 100 cm<2>. En una realización, el recipiente permeable al gas incluye una capacidad de medio de cultivo celular de 450 mL. En una realización, el recipiente permeable al gas proporciona 1 a 3 mil millones de TIL después de 2 intercambios de medio.

[0840] En una realización, el recipiente permeable al gas es un matraz G-Rex 100M (Wilson Wolf Manufacturing Corporation, New Brighton, MN, USA). En una realización, el recipiente permeable al gas incluye una superficie de cultivo permeable al gas de 100 cm<2>. En una realización, el recipiente permeable al gas incluye una capacidad de medio de cultivo celular de 1000 mL. En una realización, el recipiente permeable al gas proporciona 1 a 3 mil millones de TIL sin intercambio de medio.

[0842] En una realización, el recipiente permeable al gas es un matraz G-Rex de 100 L (Wilson Wolf Manufacturing Corporation, New Brighton, MN, USA). En una realización, el recipiente permeable al gas incluye una superficie de cultivo permeable al gas de 100 cm<2>. En una realización, el recipiente permeable al gas incluye una capacidad de medio de cultivo celular de 2000 mL. En una realización, el recipiente permeable al gas proporciona 1 a 3 mil millones de TIL sin intercambio de medio.

[0844] En una realización, el recipiente permeable al gas es una placa G-Rex de 24 pocillos (Wilson Wolf Manufacturing Corporation, New Brighton, MN, USA). En una realización, el recipiente permeable al gas incluye una placa con pocillos, en donde cada pocillo incluye una superficie de cultivo permeable al gas de 2 cm<2>. En una realización, el recipiente permeable al gas incluye una placa con pocillos, en donde cada pocillo incluye una capacidad de 8 mL de medio de cultivo celular. En una realización, el recipiente permeable al gas proporciona 20 a 60 millones de células por pocillo después de 2 intercambios de medio.

[0845] En una realización, el recipiente permeable al gas es una placa G-Rex de 6 pocillos (Wilson Wolf Manufacturing Corporation, New Brighton, MN, USA). En una realización, el recipiente permeable al gas incluye una placa con pocillos, donde cada pocillo incluye una superficie de cultivo permeable al gas de 10 cm<2>. En una realización, el recipiente permeable al gas incluye una placa con pocillos, donde cada pocillo incluye una capacidad de 40 mL de medio de cultivo celular. En una realización, el recipiente permeable al gas proporciona 100 a 300 millones de células por pocillo después de 2 intercambios de medio.

[0846] En una realización, el medio celular en el primer y/o segundo recipiente permeable al gas no está filtrado. El uso de medio celular sin filtrar puede simplificar los procedimientos necesarios para ampliar el número de células. En una realización, el medio celular en el primer y/o segundo recipiente permeable al gas carece de beta-mercaptoetanol (BME).

[0847] En una realización, la duración del método comprende obtener una muestra de tejido tumoral del mamífero; cultivar la muestra de tejido tumoral en un primer recipiente permeable al gas que contiene medio celular en su interior; obtener los TIL de la muestra de tejido tumoral; expandir el número de TIL en un segundo recipiente permeable al gas que contiene medio celular en su interior usando agonistas del canal de potasio durante una duración de aproximadamente 14 a aproximadamente 42 días, por ejemplo, aproximadamente 28 días. En una realización, la relación de TIL a agonistas del canal de potasio (células a moles) en la expansión rápida es de aproximadamente 1 a 0.00000001, aproximadamente 1 a 0.0000001, aproximadamente 1 a 0.000001, aproximadamente 1 a 0.00001, aproximadamente 1 a 0.0001, aproximadamente 1 a 0.001, aproximadamente 1 a 0.01, aproximadamente 1 a 0.01, aproximadamente 1 a 0.1, o aproximadamente 1 a 1. En una realización, la relación de TIL a moles de agonistas del canal de potasio en la expansión rápida está entre 1 a 0.00000001 y 1 a 0.0001. En una realización, la relación de TIL a agonistas del canal de potasio en la expansión rápida está entre 1 a 0.00000001 y 1 a 0.000001.

[0848] En una realización, la relación de TIL a agonistas del canal de potasio (TIL:agonista del canal de potasio, células a moléculas) se selecciona del grupo que consiste en aproximadamente 1:1 a aproximadamente 1:10, aproximadamente 1:10 a aproximadamente 1:100, aproximadamente 1:100 a aproximadamente 1:1000, aproximadamente 1:1000 a aproximadamente 1:10<4>, aproximadamente 1:10<4>hasta aproximadamente 1:10<5>, aproximadamente 1:10<5>hasta aproximadamente 1:10<6>, aproximadamente 1:10<6>hasta aproximadamente 1:10<7>, alrededor de la 1:10<7>hasta aproximadamente 1:10<8>, y aproximadamente 1:10<8>hasta aproximadamente 1:10<9>. En una realización, el medio de cultivo celular comprende IL-2. En una realización preferida, el medio de cultivo celular comprende aproximadamente 3000 IU/mL de IL-2. En una realización, el medio de cultivo celular comprende aproximadamente 1000 IU/mL, aproximadamente 1500 IU/mL, aproximadamente 2000 IU/mL, aproximadamente 2500 IU/mL, aproximadamente 3000 IU/mL, aproximadamente 3500 IU/mL, aproximadamente 4000 IU/mL, aproximadamente 4500 IU/mL, aproximadamente 5000 IU/mL, aproximadamente 5500 IU/mL, aproximadamente 6000 IU/mL, aproximadamente 6500 IU/mL, aproximadamente 7000 IU/mL, aproximadamente 7500 IU/mL o aproximadamente 8000 IU/mL de IL-2. En una realización, el medio de cultivo celular comprende entre 1000 y 2000 IU/mL, entre 2000 y 3000 IU/mL, entre 3000 y 4000 IU/mL, entre 4000 y 5000 IU/mL, entre 5000 y 6000 IU/mL, entre 6000 y 7000 IU/mL, entre 7000 y 8000 IU/mL, o entre 8000 IU/mL de IL-2.

[0849] En una realización, el medio de cultivo celular comprende el anticuerpo OKT-3. En una realización preferida, el medio de cultivo celular comprende aproximadamente 30 ng/mL de anticuerpo OKT-3. En una realización, el medio de cultivo celular comprende aproximadamente 0.1 ng/mL, aproximadamente 0.5 ng/mL, aproximadamente 1 ng/mL, aproximadamente 2.5 ng/mL, aproximadamente 5 ng/mL, aproximadamente 7.5 ng/mL, aproximadamente 10 ng/mL, aproximadamente 15 ng/mL, aproximadamente 20 ng/mL, aproximadamente 25 ng/mL, aproximadamente 30 ng/mL, aproximadamente 35 ng/mL, aproximadamente 40 ng/mL, aproximadamente 50 ng/mL, aproximadamente 60 ng/mL, aproximadamente 70 ng/mL, aproximadamente 80 ng/mL, aproximadamente 90 ng/mL, aproximadamente 100 ng/mL, aproximadamente 200 ng/mL, aproximadamente 500 ng/mL y aproximadamente 1 µg/mL del anticuerpo OKT-3. En una realización, el medio de cultivo celular comprende entre 0.1 ng/mL y 1 ng/mL, entre 1 ng/mL y 5 ng/mL, entre 5 ng/mL y 10 ng/mL, entre 10 ng/mL y 20 ng/mL, entre 20 ng/mL y 30 ng/mL, entre 30 ng/mL y 40 ng/mL. ng/mL, entre 40 ng/mL y 50 ng/mL, y entre 50 ng/mL y 100 ng/mL de anticuerpo OKT-3.

[0850] En una realización, los TIL se expanden en recipientes permeables al gas. Se han utilizado recipientes permeables al gas para expandir los TIL mediante PBMC utilizando métodos, composiciones y dispositivos conocidos en la técnica, incluidos los descritos en la Publicación de Solicitud de Patente U.S. No. Publicación de solicitud de patente U.S. No. 2005/0106717 A1. En una realización, los TIL se expanden en bolsas permeables al gas. En una realización, los TIL se expanden utilizando un sistema de expansión celular que expande los TIL en bolsas permeables al gas, como el sistema de expansión celular Xuri W25 (GE Healthcare). En una realización, los TIL se expanden utilizando un sistema de expansión celular que expande los TIL en bolsas permeables al gas, como el sistema de biorreactor WAVE, también conocido como sistema de expansión celular Xuri W5 (GE Healthcare). En una realización, el sistema de expansión celular incluye una bolsa celular permeables al gas con un volumen seleccionado del grupo que consiste en aproximadamente 100 mL, aproximadamente 200 mL, aproximadamente 300 mL, aproximadamente 400 mL, aproximadamente 500 mL, aproximadamente 600 mL, aproximadamente 700 mL, aproximadamente 800 mL, aproximadamente 900 mL, aproximadamente 1 L, aproximadamente 2 L, aproximadamente 3 L, aproximadamente 4 L, aproximadamente 5 L, aproximadamente 6 L, aproximadamente 7 L, aproximadamente 8 L, aproximadamente 9 L, aproximadamente 10 L, aproximadamente 11 L, aproximadamente 12 L, aproximadamente 13 L, aproximadamente 14 L, aproximadamente 15 L, aproximadamente 16 L, aproximadamente 17 L, aproximadamente 18 L, aproximadamente 19 L, aproximadamente 20 L, aproximadamente 25 L y aproximadamente 30 L. En una realización, el sistema de expansión celular incluye una bolsa celular permeables al gas con un rango de volumen seleccionado del grupo que consiste en entre 50 y 150 mL, entre 150 y 250 mL, entre 250 y 350 mL, entre 350 y 450 mL, entre 450 y 550 mL, entre 550 y 650 mL, entre 650 y 750 mL, entre 750 y 850 mL, entre 850 y 950 mL, y entre 950 y 1050 mL. En una realización, el sistema de expansión celular incluye una bolsa celular permeables al gas con un rango de volumen seleccionado del grupo que consiste en entre 1 L y 2 L, entre 2 L y 3 L, entre 3 L y 4 L, entre 4 L y 5 L, entre 5 L y 6 L, entre 6 L y 7 L, entre 7 L y 8 L, entre 8 L y 9 L, entre 9 L y 10 L, entre 10 L y 11 L, entre 11 L y 12 L, entre 12 L y 13 L, entre 13 L y 14 L, entre 14 L y 15 L, entre 15 L y 16 L, entre 16 L y 17 L, entre 17 L y 18 L, entre 18 L y 19 L, y entre 19 L y 20 L. En una realización, el sistema de expansión celular incluye una bolsa celular permeables al gas con un rango de volumen seleccionado del grupo que consiste en entre 0.5 L y 5 L, entre 5 L y 10 L, entre 10 L y 15 L, entre 15 L y 20 L, entre 20 L y 25 L, y entre 25 L y 30 L. En una realización, el sistema de expansión celular utiliza un tiempo de balanceo de aproximadamente 30 minutos, aproximadamente 1 hora, aproximadamente 2 horas, aproximadamente 3 horas, aproximadamente 4 horas, aproximadamente 5 horas, aproximadamente 6 horas, aproximadamente 7 horas, aproximadamente 8 horas, aproximadamente 9 horas, aproximadamente 10 horas, aproximadamente 11 horas, aproximadamente 12 horas, aproximadamente 24 horas, aproximadamente 2 días, aproximadamente 3 días, aproximadamente 4 días, aproximadamente 5 días, aproximadamente 6 días, aproximadamente 7 días, aproximadamente 8 días, aproximadamente 9 días, aproximadamente 10 días, aproximadamente 11 días, aproximadamente 12 días, aproximadamente 13 días, aproximadamente 14 días, aproximadamente 15 días, aproximadamente 16 días, aproximadamente 17 días, aproximadamente 18 días, unos 19 días, unos 20 días, unos 21 días, unos 22 días, unos 23 días, unos 24 días, unos 25 días, unos 26 días, unos 27 días y unos 28 días. En una realización, el sistema de expansión celular utiliza un tiempo de balanceo de entre 30 minutos y 1 hora, entre 1 hora y 12 horas, entre 12 horas y 1 día, entre 1 día y 7 días, entre 7 días y 14 días, entre 14 días y 21 días, y entre 21 días y 28 días. En una realización, el sistema de expansión celular utiliza una velocidad de balanceo de aproximadamente 2 balanceos/minuto, aproximadamente 5 balanceos/minuto, aproximadamente 10 balanceos/minuto, aproximadamente 20 balanceos/minuto, aproximadamente 30 balanceos/minuto y aproximadamente 40 balanceos/minuto. En una realización, el sistema de expansión celular utiliza una velocidad de balanceo de entre 2 balanceos/minuto y 5 balanceos/minuto, 5 balanceos/minuto y 10 balanceos/minuto, 10 balanceos/minuto y 20 balanceos/minuto, 20 balanceos/minuto y 30 balanceos/minuto, y 30 balanceos/minuto y 40 balanceos/minuto. En una realización, el sistema de expansión celular utiliza un ángulo de balanceo de aproximadamente 2°, aproximadamente 3°, aproximadamente 4°, aproximadamente 5°, aproximadamente 6°, aproximadamente 7°, aproximadamente 8°, aproximadamente 9°, aproximadamente 10°, aproximadamente 11° y aproximadamente 12°. En una realización, el sistema de expansión celular utiliza un ángulo de balanceo de entre 2° y 3°, entre 3° y 4°, entre 4° y 5°, entre 5° y 6°, entre 6° y 7°, entre 7° y 8°, entre 8° y 9°, entre 9° y 10°, entre 10° y 11°, y entre 11° y 12°.

[0851] En una realización, un método para expandir TILs usando agonistas del canal de potasio comprende además un paso en donde los TIL se seleccionan por su reactividad tumoral superior. Se puede utilizar cualquier método de selección conocido en la técnica. Por ejemplo, los métodos descritos en Publicación de solicitud de patente U.S. No.2016/0010058 A1 Puede utilizarse para la selección de TILs para una reactividad tumoral superior.

[0852] En una realización, la invención proporciona un método para expandir una población de TILs utilizando cualquiera de los agonistas del canal de potasio de la presente divulgación, comprendiendo el método los pasos descritos en Jin, et al., J. Immunotherapy 2012, 35, 283-292. Por ejemplo, el tumor o una porción del mismo puede colocarse en un medio enzimático y disociarse mecánicamente durante aproximadamente 1 minuto. La mezcla puede luego incubarse durante 30 minutos a 37 °C en 5% de CO<2>y luego se vuelve a interrumpir mecánicamente durante aproximadamente 1 minuto. Después de la incubación durante 30 minutos a 37 °C en 5% de CO<2>, el tumor o parte del mismo puede ser interrumpido mecánicamente una tercera vez durante aproximadamente 1 minuto. Si después de la tercera interrupción mecánica quedan grandes trozos de tejido, se pueden aplicar 1 o 2 disociaciones mecánicas adicionales a la muestra, con o sin 30 minutos adicionales de incubación a 37 °C en 5 % de CO<2>. Al final de la incubación final, si la suspensión celular contiene una gran cantidad de glóbulos rojos o células muertas, se puede realizar una separación por gradiente de densidad utilizando Ficoll para eliminar estas células. Los cultivos de TIL se iniciaron en placas de 24 pocillos (grupo de cultivo celular Costar de 24 pocillos, fondo plano; Corning Incorporated, Corning, NY), cada pocillo se puede sembrar con 1×10<6>células digeridas por el tumor o un fragmento de tumor de aproximadamente 1 a 8 mm<3>en tamaño en 2 mL de medio completo (CM) con IL-2 (6000 IU/mL; Chiron Corp., Emeryville, CA). El CM comprende el tampón 1640 del Roswell Park Memorial Institute (RPMI) con GlutaMAX, suplementado con 10 % de suero AB humano, 25 mM de Hepes y 10 mg/mL de gentamicina. Los cultivos pueden iniciarse en matraces permeables al gas con una capacidad de 40 mL y un fondo de silicona permeable al gas de 10 cm<2>(G-Rex 10; Wilson Wolf Manufacturing, New Brighton, cada matraz puede cargarse con 10-40×10<6>células digeridas tumorales viables o 5-30 fragmentos de tumor en 10-40 mL de CM con IL-2. Las placas G-Rex de 10 y 24 pocillos se pueden incubar en una incubadora humidificada a 37 °C en 5 % de CO<2>y 5 días después de iniciar el cultivo, se puede retirar la mitad del medio y reemplazarlo con CM e IL-2 frescos y, después del día 5, se puede cambiar la mitad del medio cada 2-3 días. El protocolo de expansión rápida (REP) de los TIL se puede realizar utilizando matraces T-175 y bolsas permeables al gas o matraces G-Rex permeables al gas, como se describe en otra parte del presente documento, utilizando los agonistas del canal de potasio de la presente divulgación. Para REP en matraces T-175, 1×10<6>TILs se pueden suspender en 150 mL de medio en cada matraz. El TIL se puede cultivar con agonistas del canal de potasio de la presente divulgación en una relación descrita en este documento, en una mezcla 1 a 1 de medio CM y AIM-V (medio 50/50), suplementado con 3000 IU/mL de IL-2 y 30 ng/mL de anticuerpo anti-CD3 (OKT-3). Los matraces T-175 pueden incubarse a 37 °C en CO<2>al 5 %. La mitad del medio se puede cambiar el día 5 utilizando medio 50/50 con 3000 IU/mL de IL-2. El día 7, las células de 2 matraces T-175 se pueden combinar en una bolsa de 3 L y se pueden agregar 300 mL de AIM-V con suero AB humano al 5 % y 3000 IU/mL de IL-2 a los 300 mL de suspensión de TIL. El número de células en cada bolsa se puede contar cada día o cada dos días, y se puede agregar medio fresco para mantener el recuento de células entre 0.5 y 2.0 × 10<6>células/mL. Para REP en matraces de 500 mL de capacidad con fondos de silicona permeables al gas de 100 cm<2>(por ejemplo, G-Rex 100, Wilson Wolf Manufacturing, como se describe en otra parte del presente documento), 5×10<6>o 10×10<6>TILs se pueden cultivar con agonistas de los canales de potasio en una relación descrita en este documento.(por ejemplo, 1 a 100) en 400 mL de medio 50/50, suplementado con 3000 IU/mL de IL-2 y 30 ng/mL de anticuerpo anti-CD3 (OKT-3). Los matraces G-Rex100 se pueden incubar a 37 °C en 5 % de CO<2>. El quinto día, se pueden extraer 250 mL de sobrenadante y colocarlos en frascos para centrífuga y centrifugarlos a 1500 rpm (491 g) durante 10 minutos. Las pellas de TIL obtenidas pueden resuspenderse con 150 mL de medio fresco 50/50 con 3000 IU/mL de IL-2 y agregarse nuevamente a los matraces G-Rex 100. Cuando los TIL se expanden en serie en matraces G-Rex 100, el día siete los TIL de cada G-Rex100 se suspenden en los 300 mL de medio presente en cada matraz y la suspensión celular se puede dividir en tres alícuotas de 100 mL que se pueden usar para sembrar 3 matraces G-Rex100. Luego se pueden agregar aproximadamente 150 mL de AIM-V con 5 % de suero AB humano y 3000 IU/mL de IL-2 a cada matraz. Los matraces G-Rex 100 pueden luego incubarse a 37 °C en CO<2>al 5 %, y después de cuatro días, se pueden agregar 150 mL de AIM-V con 3000 IU/mL de IL-2 a cada matraz G-Rex 100. Después de esto, el REP puede completarse recolectando células el día 14 de cultivo.

[0853] En una realización, un método para expandir o tratar un cáncer incluye un paso en el que los TIL se obtienen de una muestra de tumor del paciente. Se puede obtener una muestra de tumor del paciente utilizando métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los TIL se pueden cultivar a partir de digestos tumorales enzimáticos y fragmentos de tumor (de aproximadamente 1 a 8 mm<3>en tamaño) a partir de una disección aguda. Estos digestos tumorales pueden producirse mediante incubación en medios enzimáticos (por ejemplo, Roswell Park Memorial Institute (RPMI) tampón 1640, 2 mM de glutamato, 10 mcg/mL de gentamicina, 30 unidades/mL de DNasa y 1.0 mg/mL de colagenasa) seguido de disociación mecánica (por ejemplo, utilizando un disociador de tejidos). Los digestos tumorales se pueden producir colocando el tumor en un medio enzimático y disociándolo mecánicamente durante aproximadamente 1 minuto, seguido de una incubación durante 30 minutos a 37 °C en CO<2>al 5 %, seguido de ciclos repetidos de disociación mecánica e incubación en las condiciones anteriores hasta que solo queden pequeños trozos de tejido. Al final de este proceso, si la suspensión celular contiene una gran cantidad de glóbulos rojos o células muertas, se puede realizar una separación por gradiente de densidad utilizando polisacárido hidrófilo ramificado FICOLL para eliminar estas células. Se pueden utilizar métodos alternativos conocidos en la técnica, como los descritos en Publicación de solicitud de patente U.S. No.2012/0244133 A1. Cualquiera de los métodos anteriores se puede utilizar en cualquiera de las realizaciones descritas en este documento para métodos de expansión de TIL o métodos de tratamiento de un cáncer.

[0854] En una realización, se puede realizar un proceso de expansión rápida para TILs utilizando matraces T-175 y bolsas permeables al gas como se describió anteriormente (Tran, et al., J. Immunother. 2008, 31, 742-51; Dudley, et al., J. Immunother.2003, 26, 332-42) o recipientes de cultivo permeables al gas (matraces G-Rex, disponibles comercialmente en Wilson Wolf Manufacturing Corporation, New Brighton, MN, USA). Para expansión rápida de TIL en matraces T-175, se pueden agregar 1 x 10<6>TILs suspendidos en 150 mL de medio a cada matraz T-175. Los TIL se pueden cultivar con agonistas del canal de potasio en una relación de 1 TIL por 100 moléculas de agonista del canal de potasio y las células se cultivaron en una mezcla 1 a 1 de medio CM y AIM-V, suplementado con 3000 IU (unidades internacionales) por mL de IL-2 y 30 ng por mL de anticuerpo anti-CD3 (por ejemplo, OKT-3). Los matraces T-175 pueden incubarse a 37 °C en CO<2>al 5 %. La mitad del medio se puede intercambiar el día 5 utilizando medio 50/50 con 3000 IU por mL de IL-2. El día 7, las células de dos matraces T-175 se pueden combinar en una bolsa de 3 L y se agregan 300 mL de AIM V con 5 % de suero AB humano y 3000 IU por mL de IL-2 a los 300 mL de suspensión de TIL. El número de células en cada bolsa se contó cada uno o dos días y se agregó medio fresco para mantener el recuento de células entre 0.5 y 2.0 x 10<6>células/mL.

[0856] En una realización, para expansiones rápidas de TIL en matraces permeables al gas con capacidad de 500 mL con fondos de silicona permeables al gas de 100<2>cm (G-Rex 100, disponible comercialmente en Wilson Wolf Manufacturing Corporation, New Brighton, MN, USA), Los TIL 5 × 10<6>o 10 × 10<6>se pueden cultivar con agonistas de los canales de potasio en 400 mL de medio 50/50, suplementado con 5% de suero AB humano, 3000 IU por mL de IL-2 y 30 ng por mL de anti-CD3 (OKT-3). Los matraces G-Rex 100 se pueden incubar a 37 °C en CO<2>al 5 %. El día 5, se pueden extraer 250 mL de sobrenadante y colocarlos en frascos para centrífuga y centrifugarlos a 1500 rpm (revoluciones por minuto; 491 × g) durante 10 minutos. Las pellas de TIL pueden resuspenderse con 150 mL de medio fresco con 5 % de suero AB humano, 3000 IU por mL de IL-2 y agregarse nuevamente a los matraces G-Rex 100 originales. Cuando los TIL se expanden en serie en matraces G-Rex 100, el día 7 los TIL de cada matraz G-Rex 100 se pueden suspender en los 300 mL de medio presente en cada matraz y la suspensión celular se puede dividir en 3 alícuotas de 100 mL que se pueden usar para sembrar 3 matraces G-Rex 100. Luego se pueden agregar a cada matraz 150 mL de AIM-V con 5% de suero AB humano y 3000 IU por mL de IL-2. Los matraces G-Rex 100 pueden incubarse a 37 °C en CO<2>al 5 % y después de 4 días se pueden añadir 150 mL de AIM-V con 3000 IU por mL de IL-2 a cada matraz G-Rex 100. Las células pueden recolectarse el día 14 de cultivo.

[0858] En una realización, los TIL se pueden preparar de la siguiente manera. Los fragmentos de tumor de 2 mm<3>se cultivan en un medio completo (CM) compuesto por medio AIM-V (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA) suplementado con 2 mM de glutamina (Mediatech, Inc. Manassas, VA), 100 U/mL de penicilina (Invitrogen Life Technologies), 100 µg/mL de estreptomicina (Invitrogen Life Technologies), 5% de suero AB humano inactivado por calor (Valley Biomedical, Inc. Winchester, VA) y 600 IU/mL de rhIL-2 (Chiron, Emeryville, CA). Para la digestión enzimática de tumores sólidos, las muestras de tumores se cortan en RPMI-1640, se lavan y se centrifugan a 800 rpm durante 5 minutos a 15-22 °C y se resuspenden en un tampón de digestión enzimática (0.2 mg/mL de colagenasa y 30 unidades/mL de DNasa en RPMI-1640), seguido de rotación durante la noche a temperatura ambiente. Los TIL establecidos a partir de fragmentos pueden cultivarse durante 3 a 4 semanas en CM y expandirse frescos o criopreservarse en suero HAB inactivado por calor con 10 % de dimetilsulfóxido (DMSO) y almacenarse a -180 °C hasta el momento del estudio. Los linfocitos asociados a tumores (TAL) obtenidos de recolecciones de ascitis se sembraron a 3 × 10<6>células/pocillo de una placa de 24 pocillos en CM. El crecimiento de TIL se inspeccionó cada dos días aproximadamente utilizando un microscopio invertido de baja potencia.

[0860] En una realización, los agonistas del canal de potasio de la presente invención pueden usarse para expandir las células T. Cualquiera de las realizaciones anteriores de la presente invención descritas para la expansión de TIL también puede aplicarse a la expansión de células T. En una realización, los agonistas del canal de potasio de la presente invención se pueden utilizar para expandir células T CD8<+>. En una realización, los agonistas del canal de potasio de la presente invención se pueden utilizar para expandir células T CD4<+>. En una realización, los agonistas del canal de potasio de la presente invención pueden usarse para expandir células T transducidas con un receptor de antígeno quimérico (CAR-T). En una realización, los agonistas del canal de potasio de la presente invención pueden usarse para expandir células T que comprenden un receptor de células T modificado (TCR). Las células CAR-T pueden dirigirse contra cualquier antígeno adecuado, incluido el CD19, como se describe en la técnica, por ejemplo, en Patentes U.S. No. 7,070,995; 7,446,190; 8,399,645; 8,916,381; y 9,328,156. Las células TCR modificadas pueden dirigirse contra cualquier antígeno adecuado, incluidos NY-ESO-1, TRP-1, TRP-2, antígeno de cáncer de tirosinasa, MAGE-A3, SSX-2 y VEGFR2, o porciones antigénicas de los mismos, como se describe en la técnica, por ejemplo, en las Patentes U.S. Nos.

[0861] 8,367,804 y 7,569,664.

[0863] Criopreservación opcional de los TIL

[0865] En algunas realizaciones, se puede criopreservar opcionalmente una población de TIL en masa o una población ampliada de TIL. En algunas realizaciones, la criopreservación ocurre en una población de TIL terapéutica. En algunas realizaciones, la criopreservación ocurre en los TIL recolectados después de una expansión. En algunas realizaciones, los TIL se criopreservan en una bolsa de infusión. En algunas realizaciones, los TIL se criopreservan antes de colocarlos en una bolsa de infusión. En algunas realizaciones, los TIL se criopreservan y no se colocan en una bolsa de infusión. En algunas realizaciones, la criopreservación se realiza utilizando un medio de criopreservación. En algunas realizaciones, el medio de criopreservación contiene dimetilsulfóxido (DMSO). Esto generalmente se logra colocando la población de TIL en una solución congelada, por ejemplo, suero AB inactivado con complemento al 85 % y dimetilsulfóxido (DMSO) al 15 %. Las células en solución se colocan en viales criogénicos y se almacenan durante 24 horas a -80 °C, con transferencia opcional a congeladores de nitrógeno gaseoso para su criopreservación. Véase, Sadeghi, et al., Acta Oncologica 2013, 52, 978-986.

[0867] Cuando sea apropiado, las células se retiran del congelador y se descongelan en un baño de agua a 37 °C hasta que aproximadamente 4/5 de la solución se haya descongelado. Las células generalmente se resuspenden en medios completos y opcionalmente se lavan una o más veces. En algunas realizaciones, los TIL descongelados se pueden contar y e valuar para determinar su viabilidad como se conoce en la técnica.

[0868] En una realización preferida, una población de TILs se criopreserva utilizando medio de criopreservación CS10 (CryoStor 10, BioLife Solutions). En una realización preferida, una población de TILs se criopreserva utilizando un medio de criopreservación que contiene dimetilsulfóxido (DMSO). En una realización preferida, una población de TILs se criopreserva utilizando una relación 1:1 (vol:vol) de CS10 y medio de cultivo celular. En una realización preferida, una población de TILs se criopreserva utilizando una relación de aproximadamente 1:1 (vol:vol) de CS10 y medio de cultivo celular, que comprende además IL-2 adicional.

[0869] Como se describe aquí, la criopreservación puede ocurrir en numerosos puntos a lo largo del proceso de expansión de TIL. En algunas realizaciones, la población de TILs a granel después de una primera expansión o una población expandida de TIL después de una o más segundas expansiones se puede criopreservar. La criopreservación generalmente se puede lograr colocando la población de TIL en una solución de congelación, por ejemplo, suero AB inactivado con complemento al 85% y 15% de dimetilsulfóxido (DMSO). Las células en solución se colocan en viales criogénicos y se almacenan durante 24 horas a -80 °C, con transferencia opcional a congeladores de nitrógeno gaseoso para su criopreservación. Véase Sadeghi, et al., Acta Oncologica 2013, 52, 978-986.

[0870] Cuando sea apropiado, las células se retiran del congelador y se descongelan en un baño de agua a 37 °C hasta que aproximadamente 4/5 de la solución se haya descongelado. Las células generalmente se resuspenden en medios completos y opcionalmente se lavan una o más veces. En algunas realizaciones, los TIL descongelados se pueden contar y evaluar para determinar su viabilidad como se conoce en la técnica. En algunos casos, una población de TIL puede criopreservarse inmediatamente, utilizando los protocolos descritos en este documento.

[0871] Composiciones farmacéuticas, dosificaciones y regímenes de dosificación para los TIL

[0872] En una realización, los TIL expandidos utilizando métodos de la presente divulgación se administran a un paciente como una composición farmacéutica. En una realización, la composición farmacéutica es una suspensión de TIL en un tampón estéril. Los TIL expandidos utilizando métodos de la presente divulgación se pueden administrar por cualquier vía adecuada como se conoce en la técnica. Preferiblemente, los TIL se administran como una única infusión intraarterial o intravenosa, que preferiblemente dura aproximadamente entre 30 y 60 minutos. Otras vías de administración adecuadas incluyen la administración intraperitoneal, intratecal e intralinfática.

[0873] Se puede administrar cualquier dosis adecuada de TIL. Preferiblemente, se administran TIL de aproximadamente 2.3×10<10>hasta aproximadamente 13.7×10<10>, con un promedio de alrededor de 7.8×10<10>TILs, particularmente si el cáncer es melanoma. En una realización, se administran aproximadamente 1.2×10<10>hasta aproximadamente 4.3×10<10>de TIL.

[0874] En algunas realizaciones, el número de TILs proporcionados en las composiciones farmacéuticas de la invención es de aproximadamente 1×10<6>, 2×10<6>, 3×10<6>, 4x10<6>, 5×10<6>, 6×10<6>, 7×10<6>, 8×10<6>, 9×10<6>, 1×10<7>, 2×10<7>, 3×10<7>, 4×10<7>5×10<7>, 6×10<7>, 7×10<7>, 8×10<7>, 9×10<7>, 1×10<8>, 2×10<8>, 3×10<8>, 4×10<8>, 5×10<8>, 6×10<8>, 7×10<8>, 8×10<8>, 9×10<8>, 1×10<9>, 2×10<9>, 3×10<9>, 4×10<9>, 5×10<9>, 6×10<9>, 7×10<9>, 8×10<9>, 9×10<9>, 1×10<10>, 2×10<10>, 3×10<10>, 4×10<10>, 5×10<10>, 6×10<10>, 7×10<10>, 8×10<10>, 9×10<10>, 1×10<11>, 2×10<11>, 3×10<11>, 4×10<11>, 5×10<11>, 6×10<11>, 7×10<11>, 8×10<11>, 9×10<11>, 1×10<12>, 2×10<12>, 3×10<12>, 4×10<12>, 5×10<12>, 6×10<12>, 7×10<12>, 8×10<12>, 9×10<12>, 1×10<13>, 2×10<13>, 3×10<13>, 4x10<13>, 5×10<13>, 6×10<13>, 7×10<13>, 8×10<13>, y 9×10<13>. En una realización, el número de TILs proporcionados en las composiciones farmacéuticas de la invención está en el rango de 1×10<6>hasta 5×10<6>, 5×10<6>hasta 1×10<7>, 1×10<7>hasta 5×10<7>, 5×10<7>hasta 1×10<8>, 1×10<8>hasta 5×10<8>, 5×10<8>hasta 1×10<9>, 1×10<9>hasta 5×10<9>, 5×10<9>hasta 1×10<10>, 1×10<10>hasta 5×10<10>, 5×10<10>hasta 1×10<11>, 5×10<11>hasta 1×10<12>, 1×10<12>hasta 5×10<12>, y 5×10<12>hasta 1×10<13>.

[0875] En algunas realizaciones, la concentración de los TIL proporcionados en las composiciones farmacéuticas de la invención es menor que, por ejemplo, 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 0.1%, 0.09%, 0.08%, 0.07%, 0.06%, 0.05%, 0.04%, 0.03%, 0.02%, 0.01%, 0.009%, 0.008%, 0.007%, 0.006%, 0.005%, 0.004%, 0.003%, 0.002%, 0.001%, 0.0009%, 0.0008%, 0.0007%, 0.0006%, 0.0005%, 0.0004%, 0.0003%, 0.0002% o 0.0001% p/p, p/v o v/v de la composición farmacéutica.

[0876] En algunas realizaciones, la concentración de los TIL proporcionados en las composiciones farmacéuticas de la invención es mayor que 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19.75%, 19.50%, 19.25% 19%, 18.75%, 18.50%, 18.25% 18%, 17.75%, 17.50%, 17.25% 17%, 16.75%, 16.50%, 16.25% 16%, 15.75%, 15.50%, 15.25% 15%, 14.75%, 14.50%, 14.25% 14%, 13.75%, 13.50%, 13.25% 13%, 12.75%, 12.50%, 12.25% 12%, 11.75%, 11.50%, 11.25% 11%, 10.75%, 10.50%, 10.25% 10%, 9.75%, 9.50%, 9.25% 9%, 8.75%, 8.50%, 8.25% 8%, 7.75%, 7.50%, 7.25% 7%, 6.75%, 6.50%, 6.25% 6%, 5.75%, 5.50%, 5.25% 5%, 4.75%, 4.50%, 4.25%, 4%, 3.75%, 3.50%, 3.25%, 3%, 2.75%, 2.50%, 2.25%, 2%, 1.75%, 1.50%, 125%, 1%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 0.1%, 0.09%, 0.08%, 0.07%, 0.06%, 0.05%, 0.04%, 0.03%, 0.02%, 0.01%, 0.009%, 0.008%, 0.007%, 0.006%, 0.005%, 0.004%, 0.003%, 0.002%, 0.001%, 0.0009%, 0.0008%, 0.0007%, 0.0006%, 0.0005%, 0.0004%, 0.0003%, 0.0002% o 0.0001% p/p, p/v o v/v de la composición farmacéutica.

[0877] En algunas realizaciones, la concentración de los TIL proporcionados en las composiciones farmacéuticas de la invención está en el rango de aproximadamente 0.0001% a aproximadamente 50%, aproximadamente 0.001% a aproximadamente 40%, aproximadamente 0.01% a aproximadamente 30%, aproximadamente 0.02% a aproximadamente 29%, aproximadamente 0.03% a aproximadamente 28%, aproximadamente 0.04% a aproximadamente 27%, aproximadamente 0.05% a aproximadamente 26%, aproximadamente 0.06% a aproximadamente 25%, aproximadamente 0.07% a aproximadamente 24%, aproximadamente 0.08% a aproximadamente 23%, aproximadamente 0.09% a aproximadamente 22%, aproximadamente 0.1% a aproximadamente 21%, aproximadamente 0.2% a aproximadamente 20%, aproximadamente 0.3% a aproximadamente 19%, aproximadamente 0.4% a aproximadamente 18%, aproximadamente 0.5% a aproximadamente 17%, aproximadamente 0.6% a aproximadamente 16%, aproximadamente 0.7% a aproximadamente 15%, aproximadamente 0.8% a aproximadamente 14%, aproximadamente 0.9% a aproximadamente 12% o aproximadamente 1% a aproximadamente 10% p/p, p/v o v/v de la composición farmacéutica.

[0878] En algunas realizaciones, la concentración de los TIL proporcionados en las composiciones farmacéuticas de la invención está en el rango de aproximadamente 0.001% a aproximadamente 10%, aproximadamente 0.01% a aproximadamente 5%, aproximadamente 0.02% a aproximadamente 4.5%, aproximadamente 0.03% a aproximadamente 4%, aproximadamente 0.04% a aproximadamente 3.5%, aproximadamente 0.05% a aproximadamente 3%, aproximadamente 0.06% a aproximadamente 2.5%, aproximadamente 0.07% a aproximadamente 2%, aproximadamente 0.08% a aproximadamente 1.5%, aproximadamente 0.09% a aproximadamente 1%, aproximadamente 0.1% a aproximadamente 0.9% p/p, p/v o v/v de la composición farmacéutica.

[0879] En algunas realizaciones, la cantidad de TIL proporcionada en las composiciones farmacéuticas de la invención es igual o menor a 10 g, 9.5 g, 9.0 g, 8.5 g, 8.0 g, 7.5 g, 7.0 g, 6.5 g, 6.0 g, 5.5 g, 5.0 g, 4.5 g, 4.0 g, 3.5 g, 3.0 g, 2.5 g, 2.0 g, 1.5 g, 1.0 g, 0.95 g, 0.9 g, 0.85 g, 0.8 g, 0.75 g, 0.7 g, 0.65 g, 0.6 g, 0.55 g, 0.5 g, 0.45 g, 0.4 g, 0.35 g, 0.3 g, 0.25 g, 0.2 g, 0.15 g, 0.1 g, 0.09 g, 0.08 g, 0.07 g, 0.06 g, 0.05 g, 0.04 g, 0.03 g, 0.02 g, 0.01 g, 0.009 g, 0.008 g, 0.007 g, 0.006 g, 0.005 g, 0.004 g, 0.003 g, 0.002 g, 0.001 g, 0.0009 g, 0.0008 g, 0.0007 g, 0.0006 g, 0.0005 g, 0.0004 g, 0.0003 g, 0.0002 g o 0.0001 g.

[0880] En algunas realizaciones, la cantidad de TIL proporcionada en las composiciones farmacéuticas de la invención es más de 0.0001 g, 0.0002 g, 0.0003 g, 0.0004 g, 0.0005 g, 0.0006 g, 0.0007 g, 0.0008 g, 0.0009 g, 0.001 g, 0.0015 g, 0.002 g, 0.0025 g, 0.003 g, 0.0035 g, 0.004 g, 0.0045 g, 0.005 g, 0.0055 g, 0.006 g, 0.0065 g, 0.007 g, 0.0075 g, 0.008 g, 0.0085 g, 0.009 g, 0.0095 g, 0.01 g, 0.015 g, 0.02 g, 0.025 g, 0.03 g, 0.035 g, 0.04 g, 0.045 g, 0.05 g, 0.055 g, 0.06 g, 0.065 g, 0.07 g, 0.075 g, 0.08 g, 0.085 g, 0.09 g, 0.095 g, 0.1 g, 0.15 g, 0.2 g, 0.25 g, 0.3 g, 0.35 g, 0.4 g, 0.45 g, 0.5 g, 0.55 g, 0.6 g, 0.65 g, 0.7 g, 0.75 g, 0.8 g, 0.85 g, 0.9 g, 0.95 g, 1 g, 1.5 g, 2 g, 2.5, 3 g, 3.5, 4 g, 4.5 g, 5 g, 5.5 g, 6 g, 6.5 g, 7 g, 7.5 g, 8 g, 8.5 g, 9 g, 9.5 g o 10 g.

[0881] Los TIL proporcionados en las composiciones farmacéuticas de la invención son eficaces en un amplio rango de dosificación. La dosificación exacta dependerá de la vía de administración, la forma en que se administra el compuesto, el género y la edad del sujeto a tratar, el peso corporal del sujeto a tratar y la preferencia y experiencia del médico tratante. También se pueden utilizar las dosificaciones clínicamente establecidas de los TIL, si es apropiado. Las cantidades de las composiciones farmacéuticas administradas utilizando los métodos aquí descritos, tales como las dosificaciones de TILs, dependerán del ser humano o mamífero que se esté tratando, la gravedad del trastorno o afección, la tasa de administración, la disposición de los ingredientes farmacéuticos activos y la discreción del médico prescriptor.

[0882] En algunas realizaciones, los TIL pueden administrarse en una sola dosis. Dicha administración puede realizarse mediante inyección, por ejemplo, inyección intravenosa. En algunas realizaciones, los TIL pueden administrarse en múltiples dosis. La dosificación puede ser una vez, dos veces, tres veces, cuatro veces, cinco veces, seis veces o más de seis veces al año. La dosificación puede ser una vez al mes, una vez cada dos semanas, una vez a la semana o una vez cada dos días. La administración de los TIL podrá continuar durante el tiempo que sea necesario.

[0883] En algunas realizaciones, una dosificación efectiva de TILs es de aproximadamente 1×10<6>, 2×10<6>, 3×10<6>, 4×10<6>, 5×10<6>, 6×10<6>, 7×10<6>, 8×10<6>, 9×10<6>, 1×10<7>, 2×10<7>, 3×10<7>, 4×10<7>, 5×10<7>, 6×10<7>, 7×10<7>, 8×10<7>, 9×10<7>, 1×10<8>, 2×10<8>, 3×10<8>, 4×10<8>, 5×10<8>, 6×10<8>, 7×10<8>, 8×10<8>, 9×10<8>, 1×10<9>, 2×10<9>, 3×10<9>, 4×10<9>, 5×10<9>, 6×10<9>, 7×10<9>, 8×10<9>, 9×10<9>, 1×10<10>, 2×10<10>, 3×10<10>, 4×10<10>, 5×10<10>, 6×10<10>, 7×10<10>, 8×10<10>, 9×10<10>, 1×10<11>, 2×10<11>, 3×10<11>, 4×10<11>, 5×10<11>, 6×10<11>, 7×10<11>, 8×10<11>, 9×10<11>, 1×10<12>, 2×10<12>, 3×10<12>.4×10<12>, 5×10<12>, 6×10<12>, 7×10<12>, 8×10<12>, 9×10<12>, 1×10<13>, 2×10<13>, 3×10<13>, 4×10<13>, 5×10<13>, 6×10<13>, 7×10<13>, 8×10<13>, y 9×10<13>. En algunas realizaciones, una dosificación efectiva de TILs está en el rango de 1×10<6>hasta 5×10<6>, 5×10<6>hasta 1×10<7>, 1×10<7>hasta 5×10<7>, 5×10<7>hasta 1×10<8>, 1×10<8>hasta 5×10<8>, 5×10<8>hasta 1×10<9>, 1×10<9>hasta 5×10<9>, 5×10<9>hasta 1×10<10>, 1×10<10>hasta 5×10<10>, 5×10<10>hasta 1×10<11>, 5×10<11>hasta 1×10<12>, 1×10<12>hasta 5×10<12>, y 5×10<12>hasta 1×10<13>.

[0884] En algunas realizaciones, una dosificación eficaz de TILs está en el rango de aproximadamente 0.01 mg/kg a aproximadamente 4.3 mg/kg, aproximadamente 0.15 mg/kg a aproximadamente 3.6 mg/kg, aproximadamente 0.3 mg/kg a aproximadamente 3.2 mg/kg, aproximadamente 0.35 mg/kg a aproximadamente 2.85 mg/kg, aproximadamente 0.15 mg/kg a aproximadamente 2.85 mg/kg, aproximadamente 0.3 mg a aproximadamente 2.15 mg/kg, aproximadamente 0.45 mg/kg a aproximadamente 1.7 mg/kg, aproximadamente 0.15 mg/kg a aproximadamente 1.3 mg/kg, aproximadamente 0.3 mg/kg a aproximadamente 1.15 mg/kg, aproximadamente 0.45 mg/kg a aproximadamente 1 mg/kg, aproximadamente 0.55 mg/kg a aproximadamente 0.85 mg/kg, aproximadamente 0.65 mg/kg a aproximadamente 0.8 mg/kg, aproximadamente 0.7 mg/kg a aproximadamente 0.75 mg/kg, aproximadamente 0.7 mg/kg a aproximadamente 2.15 mg/kg, aproximadamente 0.85 mg/kg a aproximadamente 2 mg/kg, aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 1.85 mg/kg, aproximadamente 1.15 mg/kg a aproximadamente 1.7 mg/kg, aproximadamente 1.3 mg/kg a aproximadamente 1.6 mg/kg, aproximadamente 1.35 mg/kg a aproximadamente 1.5 mg/kg, aproximadamente 2.15 mg/kg a aproximadamente 3.6 mg/kg, aproximadamente 2.3 mg/kg a aproximadamente 3.4 mg/kg, aproximadamente 2.4 mg/kg a aproximadamente 3.3 mg/kg, aproximadamente 2.6 mg/kg a aproximadamente 3.15 mg/kg, aproximadamente 2.7 mg/kg a aproximadamente 3 mg/kg, aproximadamente 2.8 mg/kg a aproximadamente 3 mg/kg, o aproximadamente 2.85 mg/kg a aproximadamente 2.95 mg/kg.

[0885] En algunas realizaciones, una dosificación efectiva de TILs está en el rango de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 500 mg, aproximadamente 10 mg a aproximadamente 300 mg, aproximadamente 20 mg a aproximadamente 250 mg, aproximadamente 25 mg a aproximadamente 200 mg, aproximadamente 1 mg a aproximadamente 50 mg, aproximadamente 5 mg a aproximadamente 45 mg, aproximadamente 10 mg a aproximadamente 40 mg, aproximadamente 15 mg a aproximadamente 35 mg, aproximadamente 20 mg a aproximadamente 30 mg, aproximadamente 23 mg a aproximadamente 28 mg, aproximadamente 50 mg a aproximadamente 150 mg, aproximadamente 60 mg a aproximadamente 140 mg, aproximadamente 70 mg a aproximadamente 130 mg, aproximadamente 80 mg a aproximadamente 120 mg, aproximadamente 90 mg a aproximadamente 110 mg, o aproximadamente 95 mg a aproximadamente 105 mg, aproximadamente 98 mg a aproximadamente 102 mg, aproximadamente 150 mg a aproximadamente 250 mg, aproximadamente 160 mg a aproximadamente 240 mg, aproximadamente 170 mg a aproximadamente 230 mg, aproximadamente 180 mg a aproximadamente 220 mg, aproximadamente 190 mg a aproximadamente 210 mg, aproximadamente 195 mg a aproximadamente 205 mg, o aproximadamente 198 a aproximadamente 207 mg.

[0886] Se puede administrar una cantidad efectiva de TILs en dosis únicas o múltiples mediante cualquiera de los modos de administración aceptados de agentes que tienen utilidades similares, incluidas las vías intranasal y transdérmica, por inyección intraarterial, por vía intravenosa, intraperitoneal, parenteral, intramuscular, subcutánea, tópica, por trasplante o inyección directa en el tumor, o por inhalación.

[0887] Composiciones farmacéuticas, dosificaciones y regímenes de dosificación para agonistas de los canales de potasio

[0888] En algunas realizaciones, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un agonista del canal de potasio, que incluye un agonista de K<Ca>3.1, para uso en el tratamiento de las enfermedades y afecciones descritas en este documento en combinación con el tratamiento utilizando TILs de la presente invención. En una realización preferida, la invención proporciona composiciones farmacéuticas, incluidas las descritas a continuación, para uso en el tratamiento del cáncer.

[0889] En algunas realizaciones, una formulación de agonista del canal de potasio comprende uno o más excipientes seleccionados entre tris-clorhidrato, cloruro de sodio, manitol, ácido pentético, polisorbato 80, hidróxido de sodio y ácido clorhídrico.

[0890] En algunas realizaciones, la composición farmacéutica que comprende un agonista del canal de potasio puede ser una composición farmacéutica líquida adecuada para el consumo oral.

[0891] Las composiciones farmacéuticas de la invención adecuadas para administración oral se pueden presentar como formas de dosificación discretas, tales como cápsulas, saquitos, tabletas, líquidos o aspersiones en aerosol, cada uno de los cuales contiene una cantidad predeterminada de un ingrediente activo como un polvo o en gránulos, una solución o una suspensión en un líquido acuoso o no acuoso, una emulsión de aceite en agua, una emulsión líquida de agua en aceite, polvos para reconstitución, polvos para consumo oral, botellas (incluidos polvos o líquidos en una botella), películas de disolución oral, pastillas, pastas, tubos, gomas y paquetes. Estas formas de dosificación se pueden preparar mediante cualquiera de los métodos de farmacia, pero todos los métodos incluyen el paso de asociar el o los ingredientes activos con el vehículo, que constituye uno o más ingredientes necesarios. En general, las composiciones se preparan mezclando de manera uniforme e íntima el/los ingrediente(s) activo(s) con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos o ambos, y luego, si es necesario, dándole al producto la presentación deseada. Por ejemplo, una tableta se puede preparar por compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Las tabletas comprimidas se pueden preparar comprimiendo en una máquina adecuada el ingrediente activo en una forma de flujo libre tal como polvo o gránulos, opcionalmente mezclado con un excipiente tal como, pero no limitado a, un aglutinante, un lubricante, un diluyente inerte y/o un agente tensioactivo o dispersante. Las tabletas moldeadas se pueden fabricar moldeando en una máquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte.

[0892] Los aglutinantes adecuados para uso en composiciones farmacéuticas y formas de dosificación incluyen, pero no se limitan a, almidón de maíz, almidón de patata u otros almidones, gelatina, gomas naturales y sintéticas como acacia, alginato de sodio, ácido algínico, otros alginatos, tragacanto en polvo, goma guar, celulosa y sus derivados (por ejemplo, etilcelulosa, acetato de celulosa, carboximetilcelulosa cálcica, carboximetilcelulosa sódica), polivinilpirrolidona, metilcelulosa, almidón pregelatinizado, hidroxipropilmetilcelulosa, celulosa microcristalina y mezclas de los mismos.

[0893] Ejemplos de agentes de relleno adecuados para uso en las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación divulgadas en este documento incluyen, pero no se limitan a, talco, carbonato de calcio (por ejemplo, gránulos o polvo), celulosa microcristalina, celulosa en polvo, dextratos, caolín, manitol, ácido silícico, sorbitol, almidón, almidón pregelatinizado y mezclas de los mismos.

[0894] Se pueden utilizar desintegrantes en las composiciones de la invención para proporcionar tabletas que se desintegran cuando se exponen a un entorno acuoso. Demasiada cantidad de desintegrante puede producir tabletas que se desintegren en el frasco. Es posible que una cantidad demasiado pequeña no sea suficiente para que se produzca la desintegración, alterando así la tasa y el grado de liberación de los ingredientes activos de la forma farmacéutica. Por lo tanto, se puede utilizar una cantidad suficiente de desintegrante que no sea ni muy poca ni demasiada como para alterar de forma perjudicial la liberación del o los ingredientes activos para formar las formas de dosificación de los compuestos descritos en este documento. La cantidad de desintegrante utilizada puede variar según el tipo de formulación y el modo de administración, y puede ser fácilmente discernible para aquellos con conocimientos normales en la técnica. Se puede utilizar en la composición farmacéutica entre un 0.5 y un 15 por ciento en peso de desintegrante, o entre un 1 y un 5 por ciento en peso de desintegrante. Los desintegrantes que pueden usarse para formar composiciones farmacéuticas y formas de dosificación de la invención incluyen, pero no se limitan a, agar-agar, ácido algínico, carbonato de calcio, celulosa microcristalina, croscarmelosa sódica, crospovidona, polacrilina potásica, glicolato de almidón sódico, almidón de patata o tapioca, otros almidones, almidón pregelatinizado, otros almidones, arcillas, otras alginas, otras celulosas, gomas o mezclas de los mismos.

[0895] Los lubricantes que se pueden usar para formar composiciones farmacéuticas y formas de dosificación de la invención incluyen, pero no se limitan a, estearato de calcio, estearato de magnesio, estearil fumarato de sodio, aceite mineral, aceite mineral ligero, glicerina, sorbitol, manitol, polietilenglicol, otros glicoles, ácido esteárico, lauril sulfato de sodio, talco, aceite vegetal hidrogenado (por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de girasol, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja), estearato de zinc, oleato de etilo, laureato de etilo, agar o mezclas de los mismos. Los lubricantes adicionales incluyen, por ejemplo, un gel de sílice siloide, un aerosol coagulado de sílice sintética, celulosa microcristalina silicificada o mezclas de los mismos. Se puede añadir opcionalmente un lubricante en una cantidad de menos de aproximadamente 0.5% o menos de aproximadamente 1% (en peso) de la composición farmacéutica.

[0896] Cuando se desean suspensiones acuosas y/o elixires para administración oral, los ingredientes farmacéuticos activos pueden combinarse con diversos agentes edulcorantes o saborizantes, colorantes o tintes y, si así se desea, agentes emulsionantes y/o suspensores, junto con diluyentes tales como agua, etanol, propilenglicol, glicerina y diversas combinaciones de los mismos.

[0897] Las tabletas pueden estar sin recubrimiento o recubiertas mediante técnicas conocidas para retrasar la desintegración y la absorción en el tracto gastrointestinal y proporcionar así una acción sostenida durante un período más prolongado. Por ejemplo, se puede emplear un material de retardo de tiempo tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. Las formulaciones para uso oral también pueden presentarse como cápsulas de gelatina dura en donde el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda en donde el ingrediente activo se mezcla con agua o un medio oleoso, por ejemplo, aceite de cacahuete, parafina líquida o aceite de oliva.

[0898] Los tensioactivos que pueden usarse para formar composiciones farmacéuticas y formas de dosificación de la invención incluyen, pero no se limitan a, tensioactivos hidrofílicos, tensioactivos lipofílicos y mezclas de los mismos. Es decir, se puede emplear una mezcla de tensioactivos hidrofílicos, se puede emplear una mezcla de tensioactivos lipofílicos o se puede emplear una mezcla de al menos un tensioactivo hidrofílico y al menos un tensioactivo lipofílico.

[0899] En una realización, un agonista del canal de potasio, que incluye un agonista de K<Ca>3.1, se administra a un sujeto por vía oral o mediante infusión de una dosis seleccionada del grupo que consiste en aproximadamente 0.25 mg, aproximadamente 0.5 mg, aproximadamente 1 mg, aproximadamente 2 mg, aproximadamente 2.5 mg, aproximadamente 5 mg, aproximadamente 7.5 mg, aproximadamente 8 mg, aproximadamente 10 mg, aproximadamente 20 mg, aproximadamente 25 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 75 mg, 100 mg, aproximadamente 200 mg, aproximadamente 300 mg, aproximadamente 400 mg, aproximadamente 500 mg, aproximadamente 600 mg, aproximadamente 700 mg, aproximadamente 800 mg, aproximadamente 900 mg, aproximadamente 1000 mg, aproximadamente 1100 mg, aproximadamente 1200 mg, aproximadamente 1300 mg, aproximadamente 1400 mg, aproximadamente 1500 mg, aproximadamente 1600 mg, aproximadamente 1700 mg, aproximadamente 1800 mg, aproximadamente 1900 mg y aproximadamente 2000 mg. En una realización, un agonista del canal de potasio, que incluye un agonista de K<Ca>3.1, se administra semanalmente. En una realización, un agonista del canal de potasio, que incluye un agonista de K<Ca>3.1, se administra cada dos semanas. En una realización, un agonista del canal de potasio, que incluye un agonista de K<Ca>3.1, se administra cada tres semanas. En una realización, se administra un agonista del canal de potasio mensualmente. En una realización, un agonista del canal de potasio, que incluye un agonista de K<Ca>3.1 se administra en una dosis inicial más baja, que se incrementa cuando se administra en intervalos posteriores administrados mensualmente.

[0901] Las cantidades de agonistas de los canales de potasio, incluidos los agonistas de K<Ca>3.1 administrados dependerán del ser humano o mamífero que se esté tratando, la gravedad del trastorno o afección, la tasa de administración, la disposición de los compuestos y la discreción del médico prescriptor. Sin embargo, una dosificación efectiva de cada uno está en el rango de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 100 mg por kg de peso corporal por día, como aproximadamente 1 a aproximadamente 35 mg/kg/día, en dosis únicas o divididas. Para un ser humano de 70 kg, esto equivaldría a aproximadamente entre 0.05 y 7 g/día, es decir, entre 0.05 y 2.5 g/día. En algunos casos, los niveles de dosificación por debajo del límite inferior del rango mencionado anteriormente pueden ser más que adecuados, mientras que en otros casos se pueden emplear dosis aún mayores sin causar ningún efecto secundario perjudicial - por ejemplo, dividiendo esas dosis más grandes en varias dosis más pequeñas para administrarlas a lo largo del día. La dosificación de los agonistas del canal de potasio puede proporcionarse en unidades de mg/kg de masa corporal o en mg/m<2>de área superficial corporal.

[0903] En algunas realizaciones, los agonistas del canal de potasio, incluidos los agonistas de K<Ca>3.1, se administran durante más de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14, 28 días, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 12 meses o 24 meses. En algunos casos se consigue una dosificación continua y se mantiene durante el tiempo que sea necesario.

[0905] En algunas realizaciones, una dosificación efectiva de un agonista del canal de potasio divulgado en este documento, que incluye un agonista de K<Ca>3.1, está en el rango de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 500 mg, aproximadamente 10 mg a aproximadamente 300 mg, aproximadamente 20 mg a aproximadamente 250 mg, aproximadamente 25 mg a aproximadamente 200 mg, aproximadamente 10 mg a aproximadamente 200 mg, aproximadamente 20 mg a aproximadamente 150 mg, aproximadamente 30 mg a aproximadamente 120 mg, aproximadamente 10 mg a aproximadamente 90 mg, aproximadamente 20 mg a aproximadamente 80 mg, aproximadamente 30 mg a aproximadamente 70 mg, aproximadamente 40 mg a aproximadamente 60 mg, aproximadamente 45 mg a aproximadamente 55 mg, aproximadamente 48 mg a aproximadamente 52 mg, aproximadamente 50 mg a aproximadamente 150 mg, aproximadamente 60 mg a aproximadamente 140 mg, aproximadamente 70 mg a aproximadamente 130 mg, aproximadamente 80 mg a aproximadamente 120 mg, aproximadamente 90 mg a aproximadamente 110 mg, aproximadamente De 95 mg a aproximadamente 105 mg, de 150 mg a aproximadamente 250 mg, de 160 mg a aproximadamente 240 mg, de 170 mg a aproximadamente 230 mg, de 180 mg a aproximadamente 220 mg, de 190 mg a aproximadamente 210 mg, de 195 mg a aproximadamente 205 mg o de 198 a aproximadamente 202 mg. En algunas realizaciones, una dosis eficaz de un agonista de los canales de potasio descrito en el presente documento es de aproximadamente 25 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 75 mg, aproximadamente 100 mg, aproximadamente 125 mg, aproximadamente 150 mg, aproximadamente 175 mg, aproximadamente 200 mg, aproximadamente 225 mg o aproximadamente 250 mg.

[0907] En algunas realizaciones, una dosificación efectiva de un agonista del canal de potasio divulgado en este documento, que incluye un agonista de K<Ca>3.1, está en el rango de aproximadamente 0.01 mg/kg a aproximadamente 4.3 mg/kg, aproximadamente 0.15 mg/kg a aproximadamente 3.6 mg/kg, aproximadamente 0.3 mg/kg a aproximadamente 3.2 mg/kg, aproximadamente 0.35 mg/kg a aproximadamente 2.85 mg/kg, aproximadamente 0.15 mg/kg a aproximadamente 2.85 mg/kg, aproximadamente 0.3 mg a aproximadamente 2.15 mg/kg, aproximadamente 0.45 mg/kg a aproximadamente 1.7 mg/kg, aproximadamente 0.15 mg/kg a aproximadamente 1.3 mg/kg, aproximadamente 0.3 mg/kg a aproximadamente 1.15 mg/kg, aproximadamente 0.45 mg/kg a aproximadamente 1 mg/kg, aproximadamente 0.55 mg/kg a aproximadamente 0.85 mg/kg, aproximadamente 0.65 mg/kg a aproximadamente 0.8 mg/kg, aproximadamente 0.7 mg/kg a aproximadamente 0.75 mg/kg, aproximadamente 0.7 mg/kg a aproximadamente 2.15 mg/kg, aproximadamente 0.85 mg/kg a aproximadamente 2 mg/kg, aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 1.85 mg/kg, aproximadamente 1.15 mg/kg a aproximadamente 1.7 mg/kg, aproximadamente 1.3 mg/kg a aproximadamente 1.6 mg/kg, aproximadamente 1.35 mg/kg a aproximadamente 1.5 mg/kg, aproximadamente 2.15 mg/kg a aproximadamente 3.6 mg/kg, aproximadamente 2.3 mg/kg a aproximadamente 3.4 mg/kg, aproximadamente 2.4 mg/kg a aproximadamente 3.3 mg/kg, aproximadamente 2.6 mg/kg a aproximadamente 3.15 mg/kg, aproximadamente 2.7 mg/kg a aproximadamente 3 mg/kg, aproximadamente 2.8 mg/kg a aproximadamente 3 mg/kg, o aproximadamente 2.85 mg/kg a aproximadamente 2.95 mg/kg. En algunas realizaciones, una dosificación efectiva de un agonista del canal de potasio divulgado en este documento es de aproximadamente 0.35 mg/kg, aproximadamente 0.7 mg/kg, aproximadamente 1 mg/kg, aproximadamente 1.4 mg/kg, aproximadamente 1.8 mg/kg, aproximadamente 2.1 mg/kg, aproximadamente 2.5 mg/kg, aproximadamente 2.85 mg/kg, aproximadamente 3.2 mg/kg o aproximadamente 3.6 mg/kg.

[0909] En algunas realizaciones, una dosificación efectiva de un agonista del canal de potasio divulgado en este documento, que incluye un agonista de K<Ca>3.1, está en el rango de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 500 mg, aproximadamente 10 mg a aproximadamente 300 mg, aproximadamente 20 mg a aproximadamente 250 mg, aproximadamente 25 mg a aproximadamente 200 mg, aproximadamente 1 mg a aproximadamente 50 mg, aproximadamente 5 mg a aproximadamente 45 mg, aproximadamente 10 mg a aproximadamente 40 mg, aproximadamente 15 mg a aproximadamente 35 mg, aproximadamente 20 mg a aproximadamente 30 mg, aproximadamente 23 mg a aproximadamente 28 mg, aproximadamente 50 mg a aproximadamente 150 mg, aproximadamente 60 mg a aproximadamente 140 mg, aproximadamente 70 mg a aproximadamente 130 mg, aproximadamente 80 mg a aproximadamente 120 mg, aproximadamente 90 mg a aproximadamente 110 mg, o aproximadamente 95 mg a aproximadamente 105 mg, aproximadamente 98 mg a aproximadamente 102 mg, aproximadamente 150 mg a aproximadamente 250 mg, aproximadamente De 160 mg a aproximadamente 240 mg, de 170 mg a aproximadamente 230 mg, de 180 mg a aproximadamente 220 mg, de 190 mg a aproximadamente 210 mg, de 195 mg a aproximadamente 205 mg o de 198 mg a aproximadamente 207 mg. En algunas realizaciones, una dosis eficaz de un agonista de los canales de potasio descrito en el presente documento es de aproximadamente 25 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 75 mg, aproximadamente 100 mg, aproximadamente 125 mg, aproximadamente 150 mg, aproximadamente 175 mg, aproximadamente 200 mg, aproximadamente 225 mg o aproximadamente 250 mg.

[0911] En algunas realizaciones, una dosificación efectiva de un agonista del canal de potasio divulgado en este documento, que incluye un agonista de K<Ca>3.1, está en el rango de aproximadamente 0.01 mg/kg a aproximadamente 4.3 mg/kg, aproximadamente 0.15 mg/kg a aproximadamente 3.6 mg/kg, aproximadamente 0.3 mg/kg a aproximadamente 3.2 mg/kg, aproximadamente 0.35 mg/kg a aproximadamente 2.85 mg/kg, aproximadamente 0.01 mg/kg a aproximadamente 0.7 mg/kg, aproximadamente 0.07 mg/kg a aproximadamente 0.65 mg/kg, aproximadamente 0.15 mg/kg a aproximadamente 0.6 mg/kg, aproximadamente 0.2 mg/kg a aproximadamente 0.5 mg/kg, aproximadamente 0.3 mg/kg a aproximadamente 0.45 mg/kg, aproximadamente 0.3 mg/kg a aproximadamente 0.4 mg/kg, aproximadamente 0.7 mg/kg a aproximadamente 2.15 mg/kg, aproximadamente 0.85 mg/kg a aproximadamente 2 mg/kg, aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 1.85 mg/kg, aproximadamente 1.15 mg/kg a aproximadamente 1.7 mg/kg, aproximadamente 1.3 mg/kg a aproximadamente 1.6 mg/kg, aproximadamente 1.35 mg/kg a aproximadamente 1.5 mg/kg, aproximadamente 1.4 mg/kg a aproximadamente 1.45 mg/kg, aproximadamente 2.15 mg/kg a aproximadamente 3.6 mg/kg, aproximadamente 2.3 mg/kg a aproximadamente 3.4 mg/kg, aproximadamente 2.4 mg/kg a aproximadamente 3.3 mg/kg, aproximadamente 2.6 mg/kg a aproximadamente 3.15 mg/kg, aproximadamente 2.7 mg/kg a aproximadamente 3 mg/kg, aproximadamente 2.8 mg/kg a aproximadamente 3 mg/kg, o aproximadamente 2.85 mg/kg a aproximadamente 2.95 mg/kg. En algunas realizaciones, un agonista del canal de potasio divulgado en este documento es de aproximadamente 0.4 mg/kg, aproximadamente 0.7 mg/kg, aproximadamente 1 mg/kg, aproximadamente 1.4 mg/kg, aproximadamente 1.8 mg/kg, aproximadamente 2.1 mg/kg, aproximadamente 2.5 mg/kg, aproximadamente 2.85 mg/kg, aproximadamente 3.2 mg/kg o aproximadamente 3.6 mg/kg.

[0913] En algunas realizaciones, un agonista del canal de potasio, incluido un agonista de K<Ca>3.1, se administra en una dosis de 1 a 1000 mg BID, incluyendo 1 mg, 2 mg, 5 mg, 10 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 150 mg o 200 mg BID.

[0915] En algunas realizaciones, la concentración de los agonistas del canal de potasio, incluido agonistas de K<Ca>3.1 y combinaciones de los mismos proporcionados en las composiciones farmacéuticas de la invención es independientemente menor que, por ejemplo, 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 0.1%, 0.09%, 0.08%, 0.07%, 0.06%, 0.05%, 0.04%, 0.03%, 0.02%, 0.01%, 0.009%, 0.008%, 0.007%, 0.006%, 0.005%, 0.004%, 0.003%, 0.002%, 0.001%, 0.0009%, 0.0008%, 0.0007%, 0.0006%, 0.0005%, 0.0004%, 0.0003%, 0.0002% o 0.0001% p/p, p/v o v/v de la composición farmacéutica.

[0917] En algunas realizaciones, la concentración de los agonistas del canal de potasio, incluido agonistas de K<Ca>3.1 y combinaciones de los mismos proporcionados en las composiciones farmacéuticas de la invención es independientemente mayor que 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19.75%, 19.50%, 19.25% 19%, 18.75%, 18.50%, 18.25% 18%, 17.75%, 17.50%, 17.25% 17%, 16.75%, 16.50%, 16.25% 16%, 15.75%, 15.50%, 15.25% 15%, 14.75%, 14.50%, 14.25% 14%, 13.75%, 13.50%, 13.25% 13%, 12.75%, 12.50%, 12.25% 12%, 11.75%, 11.50%, 11.25% 11%, 10.75%, 10.50%, 10.25% 10%, 9.75%, 9.50%, 9.25% 9%, 8.75%, 8.50%, 8.25% 8%, 7.75%, 7.50%, 7.25% 7%, 6.75%, 6.50%, 6.25% 6%, 5.75%, 5.50%, 5.25% 5%, 4.75%, 4.50%, 4.25%, 4%, 3.75%, 3.50%, 3.25%, 3%, 2.75%, 2.50%, 2.25%, 2%, 1.75%, 1.50%, 125%, 1%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 0.1%, 0.09%, 0.08%, 0.07%, 0.06%, 0.05%, 0.04%, 0.03%, 0.02%, 0.01%, 0.009%, 0.008%, 0.007%, 0.006%, 0.005%, 0.004%, 0.003%, 0.002%, 0.001%, 0.0009%, 0.0008%, 0.0007%, 0.0006%, 0.0005%, 0.0004%, 0.0003%, 0.0002% o 0.0001% p/p, p/v o v/v de la composición farmacéutica.

[0919] En algunas realizaciones, la concentración de los agonistas del canal de potasio, incluido agonistas de K<Ca>3.1, en las composiciones farmacéuticas está independientemente en el rango de aproximadamente 0.0001% a aproximadamente 50%, aproximadamente 0.001% a aproximadamente 40%, aproximadamente 0.01% a aproximadamente 30%, aproximadamente 0.02% a aproximadamente 29%, aproximadamente 0.03% a aproximadamente 28%, aproximadamente 0.04% a aproximadamente 27%, aproximadamente 0.05% a aproximadamente 26%, aproximadamente 0.06% a aproximadamente 25%, aproximadamente 0.07% a aproximadamente 24%, aproximadamente 0.08% a aproximadamente 23%, aproximadamente 0.09% a aproximadamente 22%, aproximadamente 0.1% a aproximadamente 21%, aproximadamente 0.2% a aproximadamente 20%, aproximadamente 0.3% a aproximadamente 19%, aproximadamente 0.4% a aproximadamente 18%, aproximadamente 0.5% a aproximadamente 17%, aproximadamente 0.6% a aproximadamente 16%, aproximadamente 0.7% a aproximadamente 15%, aproximadamente 0.8% a aproximadamente 14%, aproximadamente 0.9% a aproximadamente 12% o aproximadamente 1% a aproximadamente 10% p/p, p/v o v/v de la composición farmacéutica.

[0920] En algunas realizaciones, la concentración de los agonistas del canal de potasio, incluido agonistas de K<Ca>3.1, en las composiciones farmacéuticas está independientemente en el rango de aproximadamente 0.001% a aproximadamente 10%, aproximadamente 0.01% a aproximadamente 5%, aproximadamente 0.02% a aproximadamente 4.5%, aproximadamente 0.03% a aproximadamente 4%, aproximadamente 0.04% a aproximadamente 3.5%, aproximadamente 0.05% a aproximadamente 3%, aproximadamente 0.06% a aproximadamente 2.5%, aproximadamente 0.07% a aproximadamente 2%, aproximadamente 0.08% a aproximadamente 1.5%, aproximadamente 0.09% a aproximadamente 1%, aproximadamente 0.1% a aproximadamente 0.9% p/p, p/v o v/v de la composición farmacéutica.

[0921] En algunas realizaciones, la cantidad de agonistas de los canales de potasio, incluido agonistas de K<Ca>3.1, en las composiciones farmacéuticas es independientemente igual o menor a 10 g, 9.5 g, 9.0 g, 8.5 g, 8.0 g, 7.5 g, 7.0 g, 6.5 g, 6.0 g, 5.5 g, 5.0 g, 4.5 g, 4.0 g, 3.5 g, 3.0 g, 2.5 g, 2.0 g, 1.5 g, 1.0 g, 0.95 g, 0.9 g, 0.85 g, 0.8 g, 0.75 g, 0.7 g, 0.65 g, 0.6 g, 0.55 g, 0.5 g, 0.45 g, 0.4 g, 0.35 g, 0.3 g, 0.25 g, 0.2 g, 0.15 g, 0.1 g, 0.09 g, 0.08 g, 0.07 g, 0.06 g, 0.05 g, 0.04 g, 0.03 g, 0.02 g, 0.01 g, 0.009 g, 0.008 g, 0.007 g, 0.006 g, 0.005 g, 0.004 g, 0.003 g, 0.002 g, 0.001 g, 0.0009 g, 0.0008 g, 0.0007 g, 0.0006 g, 0.0005 g, 0.0004 g, 0.0003 g, 0.0002 g o 0.0001 g.

[0922] En algunas realizaciones, la cantidad de agonistas de los canales de potasio, incluido agonistas de K<Ca>3.1, en las composiciones farmacéuticas es independientemente más de 0.0001 g, 0.0002 g, 0.0003 g, 0.0004 g, 0.0005 g, 0.0006 g, 0.0007 g, 0.0008 g, 0.0009 g, 0.001 g, 0.0015 g, 0.002 g, 0.0025 g, 0.003 g, 0.0035 g, 0.004 g, 0.0045 g, 0.005 g, 0.0055 g, 0.006 g, 0.0065 g, 0.007 g, 0.0075 g, 0.008 g, 0.0085 g, 0.009 g, 0.0095 g, 0.01 g, 0.015 g, 0.02 g, 0.025 g, 0.03 g, 0.035 g, 0.04 g, 0.045 g, 0.05 g, 0.055 g, 0.06 g, 0.065 g, 0.07 g, 0.075 g, 0.08 g, 0.085 g, 0.09 g, 0.095 g, 0.1 g, 0.15 g, 0.2 g, 0.25 g, 0.3 g, 0.35 g, 0.4 g, 0.45 g, 0.5 g, 0.55 g, 0.6 g, 0.65 g, 0.7 g, 0.75 g, 0.8 g, 0.85 g, 0.9 g, 0.95 g, 1 g, 1.5 g, 2 g, 2.5, 3 g, 3.5, 4 g, 4.5 g, 5 g, 5.5 g, 6 g, 6.5 g, 7 g, 7.5 g, 8 g, 8.5 g, 9 g, 9.5 g, o 10 g.

[0923] En algunas realizaciones, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un agonista del canal de potasio, que incluye un agonista de K<Ca>3.1, para uso en el tratamiento de las enfermedades y afecciones descritas en este documento en combinación con el tratamiento que utiliza TIL de la presente invención, en donde el agonista del canal de potasio se administra dos veces al día a una dosis de 50 mg después del tratamiento con TIL, en donde la composición farmacéutica comprende además fosfato de calcio dibásico anhidro, dióxido de silicio coloidal, croscarmelosa sódica, hipromelosa, estearato de magnesio, celulosa microcristalina, polietilenglicol, dióxido de titanio o combinaciones de los mismos. En algunas de las realizaciones anteriores, el agonista del canal de potasio o agonista de K<Ca>3.1 es riluzol.

[0924] Composiciones farmacéuticas para combinaciones de TILs y agonistas de los canales de potasio

[0925] En realizaciones preferidas, la invención proporciona una composición farmacéutica para inyección que contiene la combinación de un TIL y al menos un agonista del canal de potasio, y combinaciones de los mismos, y un excipiente farmacéutico adecuado para inyección, incluida la inyección intratumoral o la infusión intravenosa. Los componentes y las cantidades de agentes en las composiciones son los descritos aquí. En algunas realizaciones, la combinación de TIL y un agonista del canal de potasio se administra en una sola dosis. Dicha administración podrá ser mediante inyección, por ejemplo, inyección intravenosa, con el fin de introducir el agonista del canal de potasio.

[0926] En algunas realizaciones, la combinación de TIL y agonistas de los canales de potasio se administra en múltiples dosis. En una realización preferida, la combinación de TIL y agonistas de los canales de potasio se administra en múltiples dosis. La dosificación de los agonistas de los canales de potasio puede ser de una, dos, tres, cuatro, cinco, seis o más de seis veces al día. La dosificación de TIL y agonistas de los canales de potasio puede ser una vez al mes, una vez cada dos semanas, una vez a la semana o una vez cada dos días. Las formas en que las composiciones de la presente invención pueden incorporarse para su administración por inyección incluyen suspensiones acuosas o oleosas, o emulsiones, con aceite de sésamo, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón o aceite de maní, así como elixires, manitol, dextrosa o una solución acuosa estéril y vehículos farmacéuticos similares.

[0927] Las soluciones acuosas en solución salina también se utilizan convencionalmente para inyección. También se pueden emplear etanol, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido (y mezclas adecuadas de los mismos), derivados de ciclodextrina y aceites vegetales. La fluidez adecuada se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento, como lecitina, para el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersión y mediante el uso de tensioactivos. La prevención de la acción de los microorganismos puede lograrse mediante diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico y timerosal.

[0928] Las soluciones inyectables estériles se preparan incorporando la combinación de agonistas del canal de potasio y TIL en las cantidades requeridas en el medio apropiado con varios otros ingredientes enumerados anteriormente, según sea necesario, seguido de esterilización filtrada. Generalmente, las dispersiones se preparan incorporando los diversos ingredientes activos esterilizados en un vehículo estéril que contiene el medio de dispersión básico y los demás ingredientes requeridos de los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, ciertos métodos deseables de preparación son las técnicas de secado al vacío y liofilización que producen un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente adicional deseado a partir de una solución previamente filtrada y estéril del mismo. Otras composiciones farmacéuticas

[0929] También se pueden preparar composiciones farmacéuticas a partir de las composiciones descritas en este documento y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados para administración sublingual, bucal, rectal, intraósea, intraocular, intranasal, epidural o intraespinal. Las preparaciones para tales composiciones farmacéuticas son bien conocidas en la técnica. Véase, por ejemplo, Anderson, et al., eds., Handbook of Clinical Drug Data, Tenth Edition, McGraw-Hill, 2002; y Pratt and Taylor, eds., Principles of Drug Action, Third Edition, Churchill Livingston, N.Y., 1990.

[0930] La administración de una combinación de un TIL y un agonista del canal de potasio se puede efectuar mediante cualquier método que permita la administración de los compuestos al sitio de acción. Estos métodos incluyen las vías orales, las vías intraduodenales, la inyección parenteral (incluida la intravenosa, intraarterial, subcutánea, intramuscular, intravascular, intraperitoneal o infusión), la tópica (por ejemplo, aplicación transdérmica), administración rectal, mediante administración local mediante catéter o stent o mediante inhalación. La combinación de compuestos también puede administrarse por vía intraadiposa o intratecal. La invención también proporciona kits. Los kits incluyen una combinación de TIL listos para administrar y un agonista del canal de potasio, ya sea solos o en combinación en un embalaje adecuado, y material escrito que puede incluir instrucciones de uso, análisis de estudios clínicos y una lista de efectos secundarios. Dichos kits también pueden incluir información, como referencias de literatura científica, materiales de prospecto, resultados de ensayos clínicos y/o resúmenes de estos y similares, que indican o establecen las actividades y/o ventajas de la composición, y/o que describen la dosificación, administración, efectos secundarios, interacciones farmacológicas u otra información útil para el proveedor de atención médica. Esta información puede basarse en los resultados de diversos estudios, por ejemplo, estudios que utilizan animales experimentales que involucran modelos in vivo y estudios basados en ensayos clínicos en humanos. El kit puede contener además otro ingrediente farmacéutico activo. En realizaciones seleccionadas, los agonistas del canal de potasio y los TIL y otro ingrediente farmacéutico activo se proporcionan como composiciones separadas en recipientes separados dentro del kit. En realizaciones seleccionadas, la molécula seleccionada del grupo que consiste en un agonista del canal de potasio y los TIL se proporcionan como una única composición dentro de un recipiente en el kit. Embalaje adecuado y artículos adicionales para uso (por ejemplo, Se conocen en la técnica dispositivos como vasos medidores para preparaciones líquidas, envolturas de aluminio para minimizar la exposición al aire y similares, y pueden incluirse en el kit. Los kits descritos en este documento se pueden proporcionar, comercializar y/o promocionar a proveedores de salud, incluidos médicos, enfermeras, farmacéuticos, funcionarios de formularios y similares. Los kits también podrán, en realizaciones seleccionadas, comercializarse directamente al consumidor.

[0931] Los kits descritos anteriormente se utilizan preferentemente en el tratamiento de las enfermedades y afecciones descritas en este documento. En una realización preferida, los kits están destinados a ser utilizados en el tratamiento del cáncer. En realizaciones preferidas, los kits están destinados a ser utilizados en el tratamiento de cánceres de tumores sólidos. En una realización preferida, los kits de la presente invención son para uso en el tratamiento del cáncer, incluido cualquiera de los cánceres descritos en este documento.

[0932] Métodos de tratamiento del cáncer

[0933] Las composiciones y combinaciones de TIL (y poblaciones de los mismos) y agonistas de los canales de potasio descritas anteriormente se pueden utilizar en un método para tratar trastornos hiperproliferativos. En una realización preferida, se utilizan para tratar cánceres. En una realización preferida, la invención proporciona un método para tratar un cáncer, en donde el cáncer es una neoplasia maligna hematológica o un tumor sólido. En una realización preferida, la invención proporciona un método para tratar un cáncer, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en melanoma, cáncer de ovario, cáncer de cuello uterino, cáncer de pulmón, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de cabeza y cuello, carcinoma de células renales, leucemia mieloide aguda, cáncer colorrectal y sarcoma. En una realización preferida, la invención proporciona un método para tratar un cáncer, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) o cáncer de mama triple negativo, melanoma doblemente refractario y melanoma uveal (ocular). En una realización preferida, la invención proporciona un método para tratar un cáncer, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en melanoma, cáncer de ovario, cáncer de cuello uterino, cáncer de pulmón, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de cabeza y cuello, carcinoma de células renales, leucemia mieloide aguda, cáncer colorrectal y sarcoma con una combinación de TIL y un agonista del canal de potasio. En una realización preferida, la invención proporciona un método para tratar un cáncer, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de mama con receptor de estrógeno positivo (ER<+>), cáncer de mama con receptor de progesterona positivo (PR<+>), cáncer de mama con receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2<+>), cáncer de mama triple positivo (ER<+>/PR<+>/HER2<+>),cáncer de mama triple negativo (ER-/PR-/HER2-), melanoma doblemente refractario y melanoma uveal (ocular) con una combinación de TIL y un agonista del canal de potasio.

[0934] En algunas realizaciones, la invención proporciona un método para tratar un cáncer con una población de linfocitos infiltrantes en tumores (TILs) que comprende los pasos de:

[0935] (a) resecar un tumor de un paciente, comprendiendo el tumor una primera población de TILs;

[0936] (b) fragmentar el tumor para obtener fragmentos de tumor;

[0937] (c) poner en contacto los fragmentos de tumor con un primer medio de cultivo celular;

[0938] (d) realizar una expansión inicial de la primera población de TILs en el primer medio de cultivo celular para obtener una segunda población de TILs, en donde la segunda población de TILs es al menos 5 veces mayor en número que la primera población de TILs, en donde el primer medio de cultivo celular comprende IL-2; (e) realizar una expansión rápida de la segunda población de TILs en un segundo medio de cultivo celular para obtener una tercera población de TILs, en donde la tercera población de TILs es al menos 50 veces mayor en número que la segunda población de TILs después de 7 días desde el inicio de la expansión rápida; en donde el segundo medio de cultivo celular comprende IL-2, OKT-3 (anticuerpo anti-CD3) y células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) alogénicas irradiadas; y en donde la expansión rápida se realiza durante un período de 14 días o menos;

[0939] (f) recolectar la tercera población de TILs; y

[0940] (g) administrar una porción terapéuticamente eficaz de la tercera población de TILs a un paciente con cáncer; en donde el primer medio de cultivo celular o el segundo medio de cultivo celular o tanto el primer medio de cultivo celular como el segundo medio de cultivo celular comprenden además un agonista del canal de potasio; en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en melanoma, cáncer de ovario, cáncer de cuello uterino, cáncer de pulmón, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de cabeza y cuello, carcinoma de células renales, leucemia mieloide aguda, cáncer colorrectal y sarcoma.

[0941] En algunas realizaciones, la invención proporciona un método para tratar un cáncer con una población de linfocitos infiltrantes en tumores (TILs) que comprende los pasos de:

[0942] (a) resecar un tumor de un paciente, comprendiendo el tumor una primera población de TILs;

[0943] (b) fragmentar el tumor para obtener fragmentos de tumor;

[0944] (c) poner en contacto los fragmentos de tumor con un primer medio de cultivo celular;

[0945] (d) realizar una expansión inicial de la primera población de TILs en el primer medio de cultivo celular para obtener una segunda población de TILs, en donde la segunda población de TILs es al menos 5 veces mayor en número que la primera población de TILs, en donde el primer medio de cultivo celular comprende IL-2; (e) realizar una expansión rápida de la segunda población de TILs en un segundo medio de cultivo celular para obtener una tercera población de TILs, en donde la tercera población de TILs es al menos 50 veces mayor en número que la segunda población de TILs después de 7 días desde el inicio de la expansión rápida; en donde el segundo medio de cultivo celular comprende IL-2, OKT-3 (anticuerpo anti-CD3) y células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) alogénicas irradiadas; y en donde la expansión rápida se realiza durante un período de 14 días o menos;

[0946] (f) recolectar la tercera población de TILs; y

[0947] (g) administrar una porción terapéuticamente eficaz de la tercera población de TILs a un paciente con cáncer; en donde el primer medio de cultivo celular o el segundo medio de cultivo celular o tanto el primer medio de cultivo celular como el segundo medio de cultivo celular comprenden además un agonista del canal de potasio; en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de mama con receptor de estrógeno positivo (ER<+>), cáncer de mama con receptor de progesterona positivo (PR<+>), cáncer de mama con receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2<+>), cáncer de mama triple positivo (ER<+>/PR<+>/HER2<+>),cáncer de mama triple negativo (ER-/PR-/HER2-), melanoma doblemente refractario y melanoma uveal (ocular).

[0948] La eficacia de los métodos, compuestos y combinaciones de compuestos descritos en este documento para tratar, prevenir y/o controlar las enfermedades o trastornos indicados se puede probar utilizando varios modelos animales conocidos en la técnica. Los modelos para determinar la eficacia de los tratamientos para el cáncer de páncreas se describen en Herreros-Villanueva, et al., World J. Gastroenterol. 2012, 18, 1286-1294. Se describen modelos para determinar la eficacia de los tratamientos para el cáncer de mama, por ejemplo, en Fantozzi, Breast Cancer Res. 2006, 8, 212. Se describen modelos para determinar la eficacia de los tratamientos para el cáncer de ovario, por ejemplo, en Mullany, et al., Endocrinology 2012, 153, 1585-92; y Fong, et al., J. Ovarian Res.2009, 2, 12. Se describen modelos para determinar la eficacia de los tratamientos para el melanoma, por ejemplo, en Damsky, et al., Pigment Cell & Melanoma Res. 2010, 23, 853-859. Se describen modelos para determinar la eficacia de los tratamientos para el cáncer de pulmón, por ejemplo, en Meuwissen, et al., Genes & Development, 2005, 19, 643-664. Se describen modelos para determinar la eficacia de los tratamientos para el cáncer de pulmón, por ejemplo, en Kim, Clin. Exp. Otorhinolaryngol.2009, 2, 55-60; y Sano, Head Neck Oncol. 2009, 1, 32. Los modelos para determinar la eficacia de los tratamientos para el cáncer colorrectal, incluido el modelo CT26, se describen en Castle, et al., BMC Genomics, 2013, 15, 190; Endo, et al., Cancer Gene Therapy, 2002, 9, 142-148; Roth, et al., Adv. Immunol.1994, 57, 281-351; Fearon, et al., Cancer Res.1988, 48, 2975-2980.

[0949] Linfodepleción no mieloablativa con quimioterapia

[0950] En una realización, la invención proporciona un método para tratar un cáncer con una población de TILs, en donde un paciente recibe un tratamiento previo con quimioterapia no mieloablativa antes de una infusión de TIL y un tratamiento con un agonista del canal de potasio de acuerdo con la presente divulgación. En una realización, la quimioterapia no mieloablativa es uno o más agentes quimioterapéuticos. En una realización, la quimioterapia no mieloablativa es ciclofosfamida 60 mg/kg/día durante 2 días (días 27 y 26 antes de la infusión de TIL) y fludarabina 25 mg/m<2>/d durante 5 días (días 27 a 23 antes de la infusión de TIL). En una realización, después de la quimioterapia no mieloablativa y la infusión de TIL (en el día 0) de acuerdo con la presente divulgación, el paciente recibe una infusión intravenosa de IL-2 por vía intravenosa a 720,000 IU/kg cada 8 horas hasta la tolerancia fisiológica.

[0951] Los hallazgos experimentales indican que la linfodepleción previa a la transferencia adoptiva de linfocitos T específicos del tumor desempeña un papel clave en la mejora de la eficacia del tratamiento al eliminar las células T reguladoras y los elementos competidores del sistema inmunológico ("sumideros de citoquinas"). En consecuencia, algunas realizaciones de la invención utilizan un paso de linfodepleción (a veces también denominada "acondicionamiento inmunosupresor") en el paciente antes de la introducción de los TIL de la invención.

[0952] En general, la linfodepleción se logra mediante la administración de fludarabina o ciclofosfamida (la forma activa se denomina mafosfamida) y combinaciones de las mismas. Estos métodos se describen en Gassner, et al., Cancer Immunol. Immunother. 2011, 60, 75-85, Muranski, et al., Nat. Clin. Pract. Oncol., 2006, 3, 668-681, Dudley, et al., J. Clin. Oncol.2008, 26, 5233-5239, y Dudley, et al., J. Clin. Oncol.2005, 23, 2346-2357. En algunas realizaciones, la fludarabina se administra a una concentración de 0.5 µg/mL - 10 µg/mL de fludarabina. En algunas realizaciones, la fludarabina se administra a una concentración de 1 µg/mL de fludarabina. En algunas realizaciones, el tratamiento con fludarabina se administra durante 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días o 7 días o más. En algunas realizaciones, la fludarabina se administra en una dosis de 10 mg/kg/día, 15 mg/kg/día, 20 mg/kg/día, 25 mg/kg/día, 30 mg/kg/día, 35 mg/kg/día, 40 mg/kg/día o 45 mg/kg/día. En algunas realizaciones, el tratamiento con fludarabina se administra durante 2-7 días a 35 mg/kg/día. En algunas realizaciones, el tratamiento con fludarabina se administra durante 4-5 días a 35 mg/kg/día. En algunas realizaciones, el tratamiento con fludarabina se administra durante 4-5 días a 25 mg/kg/día.

[0953] En algunas realizaciones, la mafosfamida, la forma activa de ciclofosfamida, se obtiene a una concentración de 0.5 µg/mL -10 µg/mL mediante la administración de ciclofosfamida. En algunas realizaciones, la mafosfamida, la forma activa de ciclofosfamida, se obtiene a una concentración de 1 µg/mL mediante la administración de ciclofosfamida. En algunas realizaciones, el tratamiento con ciclofosfamida se administra durante 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días o 7 días o más. En algunas realizaciones, la ciclofosfamida se administra en una dosis de 100 mg/m<2>/día, 150 mg/m<2>/día, 175 mg/m<2>/día, 200 mg/m<2>/día, 225 mg/m<2>/día, 250 mg/m<2>/día, 275 mg/m<2>/día, o 300 mg/m<2>/día. En algunas realizaciones, la ciclofosfamida se administra por vía intravenosa (es decir,i.v.) En algunas realizaciones, el tratamiento con ciclofosfamida se administra durante 2 a 7 días a 35 mg/kg/día. En algunas realizaciones, el tratamiento con ciclofosfamida se administra durante 45 días a 250 mg/m<2>/día i.v. En algunas realizaciones, el tratamiento con ciclofosfamida se administra durante 4 días a 250 mg/m<2>/día iv

[0954] En algunas realizaciones, la linfodepleción se realiza administrando fludarabina y ciclofosfamida juntas a un paciente. En algunas realizaciones, la fludarabina se administra a 25 mg/m<2>/día i.v. y se administra ciclofosfamida a 250 mg/m<2>/día i.v. durante 4 días.

[0955] En una realización, la linfodepleción se realiza mediante la administración de ciclofosfamida a una dosis de 60 mg/m<2>/día durante dos días seguido de la administración de fludarabina a una dosis de 25 mg/m<2>/día durante cinco días.

[0956] Ejemplos

[0957] Las realizaciones aquí comprendidas se describen ahora con referencia a los siguientes ejemplos. Estos ejemplos se proporcionan solo con fines ilustrativos y la divulgación aquí comprendida no debe interpretarse de ninguna manera como limitada a estos ejemplos, sino que debe interpretarse como que abarca todas y cada una de las variaciones que se hagan evidentes como resultado de las enseñanzas aquí proporcionadas.Ejemplo 1 - Expresión de KCa3.1

[0958] K<Ca>3.1 se expresa ampliamente en todos los subconjuntos de células T en PBMC de donantes normales. El subconjunto de células T se define utilizando CD45RA y CCR7, a saber, células ingenuas, de memoria central (TCM), de memoria efectora (TEF) y RA<+>memoria efectora (TEMRA), y la estrategia de clasificación celular que se muestra en la FIG.1 se realizó utilizando un sistema de citometría de flujo FACS CANTO II de Becton, Dickinson & Co. (BD). Los PBMC de donantes normales se tiñeron con anti-CD3, anti-CD4, anti-CD8, anti-K<Ca>3.1, anti-CD45RA y anti-CCR7 y se analizaron mediante citometría de flujo (n = 6). El porcentaje de expresión de K<Ca>3.1 se demuestra en cada subconjunto de células T, es decir, los subconjuntos CD3<+>CD4<+>(FIG.2A y FIG. 3A) y CD3<+>CD8<+>(FIG.2B y FIG.3B). No se encuentra diferencia estadística en la expresión K<Ca>3.1 en cada subconjunto de células T utilizando la prueba T de Student no pareada (los valores p < 0.05 se consideran estadísticamente significativos).

[0959] Para estudiar la expresión cinética de K<Ca>3.1, dos líneas PBMC de donantes normales y tres líneas TIL de tumores de melanoma se activaron con anti-CD3 y anti-CD28 con el agonista de K<Ca>3.1 SKA-31 (Fórmula (2)). Los PBMC y los TIL en el día 0 (línea de base) se utilizaron como controles para expresión de K<Ca>3.1. Los PBMC de donantes normales y tres líneas TIL (M004, M1011 y M1023) se descongelaron y cultivaron en medios de cultivo TIL (TIL CM) que contenían RPMI 1640 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA), 1 mM de Glutamax (Thermo Fisher Scientific), 1 mM de piruvato (Thermo Fisher Scientific), 50 µM de 2-mercaptoetanol (Thermo Fisher Scientific) y 1X Pen-Strep (Thermo Fisher Scientific), y 10 % de suero AB humano (Gemini Bio-Products, West Sacramento, CA, USA) con IL-2 (6000 IU/mL) (CellGenix Inc., Portsmouth, NH, USA). Al día siguiente, las PBMC se activaron con anti-CD3 (clon CLB-T3/4.E, Cell Sciences) (1 µg/mL) y anti-CD28 (clon 28.2, BioLegend, San Diego, CA, USA) (500 ng/mL) con o sin 50 nM de SKA-31 (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA). Los TIL se estimularon con anti-CD3 (clon CLB-T3/4.E, 1XE mAB, Cell Sciences) (100 ng/mL) y anti-CD28 (500 ng/mL) con o sin 50 nM de SKA-31. Las células se recolectaron los días 1, 3 y 7 después de la activación y se tiñeron con anti-CD3 (clon SP34-2, BD Biosciences), anti-CD8 (clon RPA-T8, BioLegend), anti-K<Ca>3.1 (Policlonal, Alomone Lab) y AmCyan (Thermo Fisher Scientific), y analizados mediante citometría de flujo utilizando un sistema BD FACS CANTO II.

[0960] Los resultados se muestran en la FIG.4. Tras la activación de las células T con anti-CD3 (OKT3), la expresión K<Ca>3.1 se observó por primera vez el día 1. La expresión más alta se encontró el día 3. La expresión disminuyó gradualmente el día 7. En PBMC y TIL humanos, la expresión K<Ca>3.1 fue relativamente baja y se observó una regulación positiva dentro de las 24 horas posteriores a la estimulación con anti-CD3 y anti-CD28. Los resultados muestran que la adición del agonista de K<Ca>3.1 SKA-31 no alteró expresión de K<Ca>3.1. Se encontró que los resultados también demuestran el sorprendente resultado que la expresión del canal de K<Ca>3.1 comenzó a subregularse hasta el día 7 del REP, independientemente de la presencia o ausencia del agonista de K<Ca>3.1, por lo que el uso de un agonista de K<Ca>3.1 se puede emplear de manera efectiva entre el día 0 y aproximadamente el día 7 al día 11 (o un período apropiado determinado por subregulación) durante el REP (o pre-REP) de los TIL.

[0961] Se exploró adicionalmente la sobrerregulación de la expresión K<Ca>3.1 después de la activación de las células T. Las PBMC de donantes normales se activaron con anti-CD3 (1000 ng/mL) y anti-CD28 (500 ng/mL) (n = 6). Los gráficos de pseudocolor demuestran el porcentaje de K<Ca>3.1 en subconjunto CD3<+>CD4<+>(FIG.5, arriba) y subconjunto CD3<+>CD8<+>(FIG. 5, abajo) el día 0 y el día 3 después de la activación del TCR. La expresión cinética de K<Ca>3.1 en un plazo de 3 días se demuestra en los subconjuntos CD3<+>CD4<+>(FIG. 6, arriba) y CD3<+>CD8<+>(FIG.6, abajo).

[0962] La expresión aumentada de K<Ca>3.1 en TIL pre-REP (es decir, después del cultivo en IL-2) también se observó. La expresión K<Ca>3.1 se evaluó mediante citometría de flujo en PBMC de donantes normales (n = 6) y TIL pre-REP (n = 8). Los gráficos de pseudocolor y los gráficos de puntos representan el porcentaje de la expresión K<Ca>3.1 demostrada en subconjuntos CD3<+>CD4<+>y CD3<+>CD8<+>de PBMC y TIL de donantes normales (FIG.7 y FIG.8) (los valores p representan la diferencia entre las PBMC normales y los pre REP-TIL utilizando la prueba T de Student no pareada, donde los valores p < 0.05 se consideran estadísticamente significativos).

[0963] Ejemplo 2 - Un agonista del canal de potasio potencia la expansión de TIL durante REP

[0964] Las líneas TIL de melanoma se propagaron utilizando un protocolo REP durante 14 días con o sin agonista de K<Ca>3.1 SKA-31 (Fórmula (2)). Se propagaron diez líneas TIL (M004, M1011, M1017, M1020, M1021, M1025, M1030, M1034, M1036 y M1045) con REP con anticuerpo anti-CD3 OKT-3 (Miltenyi Biotech) (30 ng/mL) utilizando células alimentadoras PBMC irradiadas en una relación de TILs a células alimentadoras de 1 a 100 en placas G-REX de 24 pocillos (Wilson Wolf Manufacturing). Aproximadamente se utilizaron 1 × 10<6>TILs por G-REX de 24 pocillos el día 0 en 8 mL de medio TIL REP (medio TIL CM y Aim V (Thermo Fisher Scientific) en una relación de 1 a 1) con o sin 50 mM de SKA-31. El día 2, los cultivos se suplementaron con IL-2 (6000 IU/mL). La mitad del medio se reemplazó con medio AIMV fresco el día 5 con o sin 50 mM de SKA-31. Los cultivos de REP se suplementaron con IL-2 (3000 IU/mL) el día 9 y 12 respectivamente. El día 14, se contaron los TIL y se calcularon para las veces de expansión.

[0965] Los resultados se ilustran en la FIG.9. Las veces de expansión observada es significativamente mayor con la adición del agonista de K<Ca>3.1 en comparación con el control realizado sin agonista de K<Ca>3.1. Sorprendentemente, los TIL propagados en el REP tuvieron una expansión 1.42 veces mayor (p = 0.002) en presencia de SKA-31.

[0966] Ejemplo 3 - Los TIL tratados con un agonista del canal de potasio presentan un fenotipo menos diferenciado

[0967] Se expandieron diez líneas TIL de melanoma con el protocolo REP durante 14 días con o sin agonista de K<Ca>3.1 SKA-31 (Fórmula (2)) como en el Ejemplo 2. Al final de cada REP, se recolectaron los TIL y se fenotipificaron con anticuerpos anti-CD3 (clon SP34-2, BD Biosciences), anti-CD28 (clon CD28.2, BD Biosciences) y anti-CD27 (M-T271, BD Biosciences).

[0968] Los resultados se presentan en la FIG.10, figura. 11, y FIG.12, e indican que los TIL de melanoma tratados con un agonista de K<Ca>3.1 SKA-31 exhibe una mayor expansión de los subconjuntos de células T CD8<+>CD28<+>(p = 0.04), CD8<+>CD27<+>(p = 0.04), y CD8<+>CD27<+>CD28<+>(p = 0.002). En general, los resultados muestran que los TIL tratados con un agonista de K<Ca>3.1 muestran un fenotipo sorprendentemente menos diferenciado, con mayores subconjuntos de células T CD8<+>CD27<+>, CD8<+>CD28<+>, y CD8<+>CD27<+>CD28<+>.

[0969] Ejemplo 4 - Un agonista del canal de potasio potencia la expresión CCR7+ y CD25+ en TILs pre-REPSe cultivaron tres tumores (riñón, mama con receptor de estrógeno positivo (ER<+>), con IL-2 sola o IL-2 con SKA-31 a una para evaluar el rendimiento de un agonista de K<Ca>3.1 en la etapa pre-REP. Las muestras de tumor resecadas se cortaron en fragmentos de 3-5 mm<2>. Se colocaron de cuatro a ocho fragmentos de tumor en un matraz GREX-10 que contenía CM de TIL (previamente descrito) con IL-2 (6000 IU/mL) con o sin 100 nM de SKA-31. El cultivo se complementó con IL-2 cada 5 días hasta su recolección. Después de tres semanas, se recogió el TIL, se contó y se tiñó con anti-CD8 (clon RPA-T8, BioLegend), anti-CD4 (OKT-4, BioLegend), anti-CCR7 (BioLegend G043H7) o AmCyan (Thermo Fisher Scientific), y se analizó mediante citometría de flujo utilizando un sistema BD FACS CANTO II. Los resultados de la expresión de CCR7 en los tres fragmentos de tumor se presentan en la FIG.13, con resultados representativos de citometría de flujo para uno de los tumores presentados en la FIG.14.

[0970] CCR7 está asociado con las células T de memoria, y promueve la expansión de TIL y atenúa la diferenciación de las células T. Campbell, et al., J. Immunol.2001, 166, 877-84; Gattinoni, et al., Nature Med.2011, 17, 1290-97; Zhou, et al., J. Immunol.2005, 175, 7046-52. Los resultados en la FIG.6 y FIG.7 muestra que una agonista de K<Ca>3.1 potencia sorprendentemente la expresión de CCR7 en los TIL, lo que puede proporcionar un mejor rendimiento clínico de los TIL expandidos utilizando un agonista de K<Ca>3.1.

[0971] También se obtuvo evidencia adicional de que SKA-31 potencia la expresión de CD25 y CCR7. Los TIL pre-REP se cultivaron con IL-2 (6000 IU/mL) solo o con SKA-31 y se analizaron después de 21 días (n = 14; tipos de tumores: cáncer de mama (8), melanoma (3), riñón (2), ovario (1)). La expresión CCR7<+>se evaluó mediante citometría de flujo en CD4<+>(FIG.15, arriba) y subconjuntos CD8<+>(FIG.15, abajo). En la FIG.16 se muestra un experimento representativo de citometría de flujo. La expresión CD25<+>se evaluó mediante citometría de flujo en CD4<+>(FIG.17, arriba) y subconjuntos CD8<+>(FIG.17, abajo) (n = 16, cáncer de mama (8), melanoma (3), riñón (3), ovario (2)). En la FIG. 18 se muestra un experimento representativo de citometría de flujo. En ambos casos, los valores p representan la diferencia entre ningún tratamiento y SKA-31 utilizando la prueba T de Student no pareada, y los valores p < 0.05 se consideran estadísticamente significativos.

[0972] Ejemplo 5: Un agonista del canal de potasio potencia la expansión de TILs pre-REP CD3+CD8+Se cultivaron fragmentos de tumores de cáncer de ovario y de mama (triple positivo, ER<+>/PR<+>/HER2<+>) en una etapa pre-REP con IL-2 sola o IL-2 con SKA-31 (Fórmula (2)) a una concentración de 50 nM. Las muestras de tumor resecadas se cortaron en fragmentos de 3-5 mm<2>. Se colocaron de cuatro a ocho fragmentos de tumor en matraces GREX-10 que contenían CM de TIL (previamente descrito) con IL-2 (6000 IU/mL). El cultivo se complementó con IL-2 cada 5 días hasta su recolección. Después de tres semanas, se recolectaron los TIL, se contaron y se tiñeron con anticuerpo anti-CD8 (clon RPA-T8, BioLegend), anticuerpo anti-CD4 (OKT-4, BioLegend), anticuerpo anti-CD3 (clon SP34-2, BD Biosciences) y AmCyan (Thermo Fisher Scientific), y se analizaron mediante citometría de flujo utilizando un sistema BD FACS CANTO II.

[0973] Los resultados se presentan en la FIG. 19, y muestran un aumento en el recuento absoluto de células en presencia del agonista de K<Ca>3.1 para TILs obtenidos a partir de fragmentos de tumores ováricos para TILs CD3<+>CD8<+>. En la FIG.20, los resultados de los fragmentos de tumores de mama muestran un aumento en el recuento absoluto de células tanto para TILs CD3<+>CD4<+>como TILs CD3<+>CD8<+>. Sorprendentemente, se encontró que un agonista de K<Ca>3.1 potencia la expansión y los recuentos absolutos de células de TILs pre-REP terapéuticamente útiles. Una alta proporción de células T CD3<+>CD8<+>en los TIL pre-REP conducen a un producto TIL final superior después de REP que ha demostrado estar fuertemente asociado con las respuestas clínicas en pacientes tratados con TIL.

[0974] Ejemplo 6 - Efectos de un agonista de KCa3.1 sobre la secreción de interferón-γ y la destrucción de tumores

[0975] Se realizaron experimentos para demostrar que un agonista de K<Ca>3.1 potencia y mantiene la secreción de IFN-γ de los TIL sin efectos adversos sobre la destrucción del tumor. La FIG. 21 ilustra los resultados de la liberación de IFN-γ medidos mediante ensayo inmunoabsorbente enlazado a enzimas (ELISA). Los TIL preparados con y sin SKA-31 se cocultivaron con células tumorales de melanoma durante 24 horas en una relación de TIL:células de melanoma de 3:1 (es decir,una relación efector:objetivo o E:T de 3:1). El bloqueo del TCR MHC-I se realizó utilizando 80 µg/mL del anticuerpo clon W6/32 (BioLegend). Los resultados se muestran en la FIG.21. Se observa un aumento estadísticamente significativo en la liberación de IFN-γ para una línea de células TIL y ningún efecto adverso en la liberación de IFN-γ de una segunda línea de células TIL. Los resultados del bloqueo de MHC-I demuestran que la muerte es causada por la muerte lítica de las células T, y no por citoquinas, células NK u otros mecanismos. La FIG.22 muestra los resultados de la muerte celular para la línea M1032, en diferentes relaciones E:T, a través del marcador caspasa-3 para células de melanoma apotóticas. La FIG.23 muestra los resultados de la muerte celular para la línea M1041, en diferentes relaciones E:T, a través del marcador caspasa-3 para células de melanoma apotóticas. En ambos casos no se observan efectos adversos sobre la destrucción del tumor por el uso del agonista de K<Ca>3.1 SKA-31.

[0976] Ejemplo 7: Métodos de expansión de TILs y tratamiento del cáncer con TILs expandidos

[0977] El direccionamiento del canal de K<Ca>3.1 es una nueva estrategia para expandir y mantener TILs menos diferenciados para aplicaciones clínicas de terapia de células T adoptivas. K<Ca>3.1 se expresa en todos los subconjuntos de células T, incluidas las células ingenuas, de memoria central (TCM), de memoria efectora (TEF) y de memoria efectora CD45RA+ (TEMRA). La sobrerregulación significativa de K<Ca>3.1 se encuentra dentro de las 24 horas posteriores a la activación de las células T. Los TIL tienen un nivel significativamente más alto de K<Ca>3.1 en comparación con las células T normales en sangre periférica (PBMCs), lo que sugiere que los TIL son linfocitos T activados. La activación de los canales de K<Ca>3.1 con un agonista de K<Ca>3.1 de ejemplo (SKA-31) promueve la expansión de TIL y SKA-31 ayuda a sostener la expresión de CD27<+>y CD28<+>durante la expansión de TIL. Se encontró una mayor expresión de CD25 y de CCR7 en TIL pre-REP cultivados con IL-2 y SKA-31. La activación del canal de K<+>es una novedosa estrategia para promover la expansión de TIL y mantener un fenotipo menos diferenciado, promoviendo el injerto a largo plazo.

[0978] Los TIL se pueden expandir utilizando métodos conocidos en la técnica y cualquier método descrito en este documento. Por ejemplo, en la FIG.24 se representa un método de ejemplo para expandir los TIL. Se puede añadir un agonista del canal de potasio al método de la FIG. 24 como se describe en este documento. El agonista del canal de potasio puede ser, por ejemplo, un agonista del canal de K<Ca>3.1 descrito en este documento, tal como SKA-31 o SKA-20, y puede agregarse durante las fases pre-REP o REP, o durante ambas fases, en concentraciones suficientes para potenciar el crecimiento de TIL como se describe en este documento. La expansión de TILs puede combinarse además con cualquier método de tratamiento del cáncer en combinación con un agonista del canal de potasio en un paciente descrito en este documento. En la FIG.

[0979] 25 se muestra un método de ejemplo para expandir los TIL utilizando un agonista del canal de potasio, tal como un agonista del canal de K<Ca>3.1 descrito en este documento y el tratamiento de un paciente con cáncer con los TIL expandidos.

Claims

1. REIVINDICACIONES

1. Una población de linfocitos infiltrantes en tumores (TILs) para uso en un método de tratamiento del cáncer, en un paciente, en donde el método comprende los pasos de:

(a) resecar un tumor del paciente, comprendiendo el tumor una primera población de TILs;

(b) fragmentar el tumor en fragmentos de tumor;

(c) poner en contacto los fragmentos de tumor con un primer medio de cultivo celular;

(d) realizar una expansión inicial de la primera población de TILs en el primer medio de cultivo celular para obtener una segunda población de TILs, en donde la segunda población de TILs es al menos 5 veces mayor en número que la primera población de TILs, en donde el primer medio de cultivo celular comprende IL-2; (e) realizar una expansión rápida de la segunda población de TILs en un segundo medio de cultivo celular para obtener una tercera población de TILs, en donde la tercera población de TILs es al menos 50 veces mayor en número que la segunda población de TILs después de 7 días desde el inicio de la expansión rápida; en donde el segundo medio de cultivo celular comprende IL-2, OKT-3 (anticuerpo anti-CD3) y células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) alogénicas irradiadas; y en donde la expansión rápida se realiza durante un período de 14 días o menos;

(f) recolectar la tercera población de TILs; y

(g) administrar una porción terapéuticamente eficaz de la tercera población de TILs al paciente con el cáncer; en donde el primer medio de cultivo celular o el segundo medio de cultivo celular o tanto el primer medio de cultivo celular como el segundo medio de cultivo celular comprenden además un agonista del canal de potasio; en donde el agonista del canal de potasio es un agonista de K<Ca>3.1 (canal IK), y en donde el agonista de K<Ca>3.1 es un compuesto de acuerdo con la Fórmula (1):

o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde

R<a>se selecciona de halo, ciano, hidroxi, tiol, (C<1-6>) alquilo, -NH<2>, y -NR<1>R<2>;

R<1>y R<2>son independientemente H o (C<1-6>) alquilo;

X se selecciona del grupo que consiste en S, O y NH;

Ry R<c>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (C<1-6>) alquilo, (C<1-6>) alcoxilo, halo, nitro, arilo, heteroarilo, (C<1-6>) alquilo, y (C<3-7>) cicloalquilo o Ry R<c>junto con los átomos de carbono a los que están unidos forman un anillo seleccionado del grupo que consiste en un anillo arilo, naftilo, antrilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo; y

R<d>y R<e>se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, (C<1-6>) alquilo, (C<1-6>) alcoxilo, halo, nitro, arilo, heteroarilo, (C<1-6>) alquilo y (C<3-7>) cicloalquilo o R<d>y R<e>junto con los átomos de carbono a los que están unidos forman un anillo seleccionado del grupo que consiste en un anillo arilo, naftilo, antrilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo;

con la condición de que si Ry R<c>forman un anillo, entonces R<d>y R<e>no forman un anillo, y si R<d>y R<e>forman un anillo, entonces Ry R<c>no forman un anillo.

2. Unproceso ex vivopara la preparación de una población de linfocitos infiltrantes en tumores (TILs) a partir de un tumor, comprendiendo el proceso los pasos de:

(a) fragmentar el tumor;

(b) realizar una expansión inicial de la primera población de TILs en un primer medio de cultivo celular para obtener una segunda población de TILs, en donde la segunda población de TILs es al menos 5 veces mayor en número que la primera población de TILs, en donde el primer medio de cultivo celular comprende IL-2; (c) realizar una expansión rápida de la segunda población de TILs en un segundo medio de cultivo celular para obtener una tercera población de TILs, en donde la tercera población de TILs es al menos 50 veces mayor en número que la segunda población de TILs después de 7 días desde el inicio de la expansión rápida; en donde el segundo medio de cultivo celular comprende IL-2, OKT-3 (anticuerpo anti-CD3), células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) alogénicas irradiadas; y en donde la expansión rápida se realiza durante un período de 14 días o menos; y

(d) recolectar la tercera población de TILs;

en donde cualquiera del primer medio de cultivo celular o el segundo medio de cultivo celular o tanto el primer medio de cultivo celular como el segundo medio de cultivo celular comprenden además un agonista del canal de potasio;

en donde el agonista del canal de potasio es un agonista de K<Ca>3.1 (canal IK), y en donde el agonista de K<Ca>3.1 es un compuesto de acuerdo con la Fórmula (1):

R<1>y R<2>son independientemente H o (C<1-6>) alquilo;

X se selecciona del grupo que consiste en S, O y NH;

3. La población de TILs para uso en un método de la reivindicación 1 o el proceso de la reivindicación 2, en donde tanto el primer medio de cultivo celular como el segundo medio de cultivo celular comprenden el agonista de K<Ca>3.1.

4. La población de TILs para uso en un método de la reivindicación 1 o 3 o en el proceso de la reivindicación 2 o 3, en donde:

(i) la concentración del agonista de K<Ca>3.1 en el primer medio de cultivo celular está entre 1 y 1000 nM, opcionalmente aproximadamente 100 nM;

(ii) la concentración del agonista de K<Ca>3.1 en el segundo medio de cultivo celular está entre 0.1 y 100 mM, opcionalmente aproximadamente 50 mM;

(iii) la expansión inicial se realiza durante un período de 21 días o menos, opcionalmente 11 días o menos; y/o (iv) la expansión rápida se realiza durante un período de 7 días o menos.

5. La población de TILs para uso en un método de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 3 o 4 o el proceso de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en donde:

(i) la IL-2 está presente en una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL en el primer medio de cultivo celular;

(ii) la IL-2 está presente en una concentración inicial de entre 1000 IU/mL y 6000 IU/mL y el anticuerpo OKT-3 está presente en una concentración inicial de aproximadamente 30 ng/mL en el segundo medio de cultivo celular;

(iii) la expansión inicial se realiza utilizando un recipiente permeable al gas;

(iv) la expansión rápida se realiza utilizando un recipiente permeable al gas;

(v) el primer medio de cultivo celular comprende además una citoquina seleccionada del grupo que consiste en IL-4, IL-7, IL-15, IL-21 y combinaciones de las mismas; y/o

(vi) el segundo medio de cultivo celular comprende además una citoquina seleccionada del grupo que consiste en IL-4, IL-7, IL-15, IL-21 y combinaciones de las mismas.

6. La población de TILs para uso en un método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3 a 5 o el proceso de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en donde:

(i) la segunda población de TILs comprende una población aumentada de células T con un fenotipo seleccionado del grupo que consiste en CD8<+>CD28<+>, CD8<+>CD27<+>, CD8<+>CD27<+>CD28<+>, CCR7<+>, CD25<+>, y combinaciones de los mismos, en relación con una población de referencia de TILs obtenida sin el agonista del canal de potasio, en donde el fenotipo en la segunda población de TILs aumenta en al menos un 5 % en relación con la población de referencia de TILs;

(ii) la tercera población de TILs comprende una población aumentada de células T con un fenotipo seleccionado del grupo que consiste en CD8<+>CD28<+>, CD8<+>CD27<+>, CD8<+>CD27<+>CD28<+>, CCR7<+>, CD25<+>, y combinaciones de los mismos, en relación con una población de referencia de TILs obtenida sin el agonista del canal de potasio, en donde el fenotipo en la tercera población de TILs aumenta en al menos un 5 % en relación con la población de referencia de TILs;

(iii) la segunda población de TILs comprende una población de células T con un fenotipo menos diferenciado en relación con una población de referencia de TILs obtenida sin el agonista del canal de potasio; o

(iv) la tercera población de TILs comprende una población de células T con un fenotipo menos diferenciado en relación con una población de referencia de TILs obtenida sin el agonista del canal de potasio.

7. La población de TILs para uso en un método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3 a 6, en donde el cáncer se selecciona de:

(i) melanoma, cáncer de ovario, cáncer de cuello uterino, cáncer de pulmón, cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de cabeza y cuello, carcinoma de células renales, leucemia mieloide aguda, cáncer colorrectal, sarcoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) o cáncer de mama triple negativo, melanoma doblemente refractario y melanoma uveal (ocular); o

(ii) cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de mama con receptor de estrógeno positivo (ER<+>), cáncer de mama con receptor de progesterona positivo (PR<+>), cáncer de mama con receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2<+>), cáncer de mama triple positivo (ER<+>/PR<+>/HER2<+>),cáncer de mama triple negativo (ER-/PR-/HER2-), melanoma doblemente refractario y melanoma uveal (ocular).

8. La población de TILs para uso en un método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3 a 6, que comprende además el paso de tratar al paciente con:

(i) el agonista del canal de potasio comenzando el día después de la administración de la tercera población de TILs al paciente;

(ii) el agonista del canal de potasio antes del paso de resecar un tumor del paciente;

(iii) un régimen de linfodepleción no mieloablativo antes de administrar la tercera población de TILs al paciente, opcionalmente en donde el régimen de linfodepleción no mieloablativo comprende los pasos de administración de ciclofosfamida a una dosis de 60 mg/m<2>/día durante dos días seguido de la administración de fludarabina a una dosis de 25 mg/m<2>/día durante cinco días;

(iv) un régimen de IL-2 en dosis alta que comienza el día después de la administración de la tercera población de TILs al paciente, opcionalmente en donde el régimen de IL-2 en dosis alta comprende 600,000 o 720,000

IU/kg de aldesleucina, o un biosimilar o variante del mismo, administrado como una infusión intravenosa en bolo de 15 minutos cada ocho horas hasta la tolerancia.

9. Un medio de cultivo celular que comprende IL-2 y un agonista del canal de potasio, en donde el agonista del canal de potasio es un agonista de K<Ca>3.1, y en donde el agonista de K<Ca>3.1 es un compuesto de acuerdo con la Fórmula (1):

R<1>y R<2>son independientemente H o (C<1-6>) alquilo;

X se selecciona del grupo que consiste en S, O y NH;

10. El medio de cultivo celular de la reivindicación 9, que comprende además un anticuerpo anti-CD3 o un fragmento, variante o biosimilar del mismo y células mononucleares de sangre periférica (PBMCs).

11. La población de TILs para uso de acuerdo con la reivindicación 1, el proceso de acuerdo con la reivindicación 2 o el medio de cultivo celular de la reivindicación 9, en donde el agonista de K<Ca>3.1 es:

(i) nafto[1,2-d]tiazol-2-ilamina (SKA-31):

o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo;

(ii) antra[2, 1-d]tiazol-2-ilamina (SKA-20):

o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo; o

(iii) riluzol:

o una sal, cocristal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

12. La población de TILs para uso de acuerdo con la reivindicación 1, el proceso de acuerdo con la reivindicación 2 o el medio de cultivo celular de la reivindicación 9, en donde el agonista de K<Ca>3.1 se selecciona del grupo que consiste en:

5-metilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

5-etilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

5-propilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

5-ciclopropilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

5-(terc-butil)nafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

5-fluoronafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

5-cloronafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

5-bromonafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

5-yodonafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

2-aminonafto[1,2-d]oxazol-5-carbonitrilo;

nafto[1,2-d]oxazol-2, 5-diamina;

N<5>-metilnafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

N<5>, N<5>-dimetilnafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

N<5>-etilnafto[1,2-d]oxazol-2,5-diamina;

5-(pirrolidin-1-il)nafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

5-metoxinafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

5-trifluorometilnafto[1,2-d]oxazol-2-amina;

5-metilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

5-etilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

5-propilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

5-ciclopropilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

5-(terc-butil)nafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

5-fluoronafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

5-cloronafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

5-bromonafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

5-yodonafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

2-aminonafto[2,1-d]oxazol-5-carbonitrilo;

nafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

N5-metilnafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

N5,N5-dimetilnafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

N5-etilnafto[2,1-d]oxazol-2,5-diamina;

5-(pirrolidin-1-il)nafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

5-metoxinafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

5-trifluorometilnafto[2,1-d]oxazol-2-amina;

y sales, cocristales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

13. Un kit que comprende el medio de cultivo celular de una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12.

14. El kit de la reivindicación 13, que comprende además un tumor.