FI104254B - Menetelmä trombiinia sitovan aineen tuottamiseksi ja siinä käyttökelpoiset DNA-fragmentit, rekombinanttivektorit ja näillä transformoidut solut - Google Patents
Menetelmä trombiinia sitovan aineen tuottamiseksi ja siinä käyttökelpoiset DNA-fragmentit, rekombinanttivektorit ja näillä transformoidut solut Download PDFInfo
- Publication number
- FI104254B FI104254B FI915571A FI915571A FI104254B FI 104254 B FI104254 B FI 104254B FI 915571 A FI915571 A FI 915571A FI 915571 A FI915571 A FI 915571A FI 104254 B FI104254 B FI 104254B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- ala
- gly
- cys
- asp
- pro
- Prior art date
Links
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 title claims description 47
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title claims description 46
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims description 28
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 3
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 claims abstract description 61
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 claims abstract description 61
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 57
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 30
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 27
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 27
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 26
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 6
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 5
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 3
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 claims description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 6
- LIWMQSWFLXEGMA-WDSKDSINSA-N Ala-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N LIWMQSWFLXEGMA-WDSKDSINSA-N 0.000 claims 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 claims 1
- 241001061127 Thione Species 0.000 claims 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 16
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 abstract description 9
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 abstract description 9
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 abstract description 7
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 abstract description 7
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 abstract description 4
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 abstract description 4
- 229940127090 anticoagulant agent Drugs 0.000 abstract description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 20
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 19
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 19
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 19
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 10
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 8
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 7
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101000763314 Homo sapiens Thrombomodulin Proteins 0.000 description 6
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 6
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 6
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 5
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 5
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 5
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 4
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DKJPOZOEBONHFS-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O DKJPOZOEBONHFS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 4
- KIUYPHAMDKDICO-WHFBIAKZSA-N Ala-Asp-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O KIUYPHAMDKDICO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- ADSGHMXEAZJJNF-DCAQKATOSA-N Ala-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C)N ADSGHMXEAZJJNF-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- AUFACLFHBAGZEN-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ser-Cys Chemical compound N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O AUFACLFHBAGZEN-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 4
- OSASDIVHOSJVII-WDSKDSINSA-N Arg-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N OSASDIVHOSJVII-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- OGSQONVYSTZIJB-WDSOQIARSA-N Arg-Leu-Trp Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(O)=O OGSQONVYSTZIJB-WDSOQIARSA-N 0.000 description 4
- AUIJUTGLPVHIRT-FXQIFTODSA-N Arg-Ser-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)CN=C(N)N AUIJUTGLPVHIRT-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- FRBAHXABMQXSJQ-FXQIFTODSA-N Arg-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FRBAHXABMQXSJQ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- DRDWXKWUSIKKOB-PJODQICGSA-N Arg-Trp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DRDWXKWUSIKKOB-PJODQICGSA-N 0.000 description 4
- XWGJDUSDTRPQRK-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O XWGJDUSDTRPQRK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 4
- VKCOHFFSTKCXEQ-OLHMAJIHSA-N Asn-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VKCOHFFSTKCXEQ-OLHMAJIHSA-N 0.000 description 4
- KHGPWGKPYHPOIK-QWRGUYRKSA-N Asp-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O KHGPWGKPYHPOIK-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 4
- DWOSGXZMLQNDBN-FXQIFTODSA-N Asp-Pro-Cys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O DWOSGXZMLQNDBN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- GRNOCLDFUNCIDW-ACZMJKKPSA-N Cys-Ala-Glu Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N GRNOCLDFUNCIDW-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 4
- QLCPDGRAEJSYQM-LPEHRKFASA-N Cys-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CS)N)C(=O)O QLCPDGRAEJSYQM-LPEHRKFASA-N 0.000 description 4
- SKSJPIBFNFPTJB-NKWVEPMBSA-N Cys-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CS)N)C(=O)O SKSJPIBFNFPTJB-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 4
- UIKLEGZPIOXFHJ-DLOVCJGASA-N Cys-Phe-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O UIKLEGZPIOXFHJ-DLOVCJGASA-N 0.000 description 4
- SMEYEQDCCBHTEF-FXQIFTODSA-N Cys-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SMEYEQDCCBHTEF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- CLEFUAZULXANBU-MELADBBJSA-N Cys-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CS)N)C(=O)O CLEFUAZULXANBU-MELADBBJSA-N 0.000 description 4
- CKRUHITYRFNUKW-WDSKDSINSA-N Glu-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O CKRUHITYRFNUKW-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- PNAOVYHADQRJQU-GUBZILKMSA-N Glu-Cys-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N PNAOVYHADQRJQU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- OWVURWCRZZMAOZ-XHNCKOQMSA-N Glu-Cys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O OWVURWCRZZMAOZ-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 4
- CEXINUGNTZFNRY-BYPYZUCNSA-N Gly-Cys-Gly Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC([O-])=O CEXINUGNTZFNRY-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- KAJAOGBVWCYGHZ-JTQLQIEISA-N Gly-Gly-Phe Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 KAJAOGBVWCYGHZ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 4
- FSPVILZGHUJOHS-QWRGUYRKSA-N Gly-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CNC=N1 FSPVILZGHUJOHS-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 4
- SIYTVHWNKGIGMD-HOTGVXAUSA-N Gly-His-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)NC(=O)CN SIYTVHWNKGIGMD-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 4
- NSTUFLGQJCOCDL-UWVGGRQHSA-N Gly-Leu-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N NSTUFLGQJCOCDL-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 4
- WMGHDYWNHNLGBV-ONGXEEELSA-N Gly-Phe-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 WMGHDYWNHNLGBV-ONGXEEELSA-N 0.000 description 4
- GGLIDLCEPDHEJO-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN GGLIDLCEPDHEJO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 4
- JHVCZQFWRLHUQR-DCAQKATOSA-N His-Arg-Cys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N JHVCZQFWRLHUQR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- CTHAJJYOHOBUDY-GHCJXIJMSA-N Ile-Cys-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N CTHAJJYOHOBUDY-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 4
- NYEYYMLUABXDMC-NHCYSSNCSA-N Ile-Gly-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N NYEYYMLUABXDMC-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 4
- PELCGFMHLZXWBQ-BJDJZHNGSA-N Ile-Ser-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N PELCGFMHLZXWBQ-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 4
- OIARJGNVARWKFP-YUMQZZPRSA-N Leu-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O OIARJGNVARWKFP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- KWURTLAFFDOTEQ-GUBZILKMSA-N Leu-Cys-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N KWURTLAFFDOTEQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- WCTCIIAGNMFYAO-DCAQKATOSA-N Leu-Cys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O WCTCIIAGNMFYAO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- DPURXCQCHSQPAN-AVGNSLFASA-N Leu-Pro-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DPURXCQCHSQPAN-AVGNSLFASA-N 0.000 description 4
- AXVIGSRGTMNSJU-YESZJQIVSA-N Leu-Tyr-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N AXVIGSRGTMNSJU-YESZJQIVSA-N 0.000 description 4
- FBNPMTNBFFAMMH-UHFFFAOYSA-N Leu-Val-Arg Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N FBNPMTNBFFAMMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GFDBWMDLBKCLQH-IHRRRGAJSA-N Met-Phe-Cys Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N GFDBWMDLBKCLQH-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 4
- DXTOOBDIIAJZBJ-BQBZGAKWSA-N Pro-Gly-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DXTOOBDIIAJZBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 4
- ZTMLZUNPFDGPKY-VKOGCVSHSA-N Pro-Ile-Trp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]3CCCN3 ZTMLZUNPFDGPKY-VKOGCVSHSA-N 0.000 description 4
- RUDOLGWDSKQQFF-DCAQKATOSA-N Pro-Leu-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RUDOLGWDSKQQFF-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- FNGOXVQBBCMFKV-CIUDSAMLSA-N Pro-Ser-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FNGOXVQBBCMFKV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- ZHYMUFQVKGJNRM-ZLUOBGJFSA-N Ser-Cys-Asn Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O ZHYMUFQVKGJNRM-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 4
- VVKVHAOOUGNDPJ-SRVKXCTJSA-N Ser-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VVKVHAOOUGNDPJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N Thr-Ala-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 4
- DWYAUVCQDTZIJI-VZFHVOOUSA-N Thr-Ala-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWYAUVCQDTZIJI-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 4
- NIEWSKWFURSECR-FOHZUACHSA-N Thr-Gly-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NIEWSKWFURSECR-FOHZUACHSA-N 0.000 description 4
- WNQJTLATMXYSEL-OEAJRASXSA-N Thr-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O WNQJTLATMXYSEL-OEAJRASXSA-N 0.000 description 4
- HUPLKEHTTQBXSC-YJRXYDGGSA-N Thr-Ser-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 HUPLKEHTTQBXSC-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 4
- 102000012607 Thrombomodulin Human genes 0.000 description 4
- 108010079274 Thrombomodulin Proteins 0.000 description 4
- 102100023038 WD and tetratricopeptide repeats protein 1 Human genes 0.000 description 4
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 4
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000702 anti-platelet effect Effects 0.000 description 4
- 108010043240 arginyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 description 4
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 4
- 108010084264 glycyl-glycyl-cysteine Proteins 0.000 description 4
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 4
- 108010073472 leucyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 108010024654 phenylalanyl-prolyl-alanine Proteins 0.000 description 4
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 4
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SVBXIUDNTRTKHE-CIUDSAMLSA-N Ala-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SVBXIUDNTRTKHE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- RATOMFTUDRYMKX-ACZMJKKPSA-N Asp-Glu-Cys Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N RATOMFTUDRYMKX-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 3
- ZLFRUAFDAIFNHN-LKXGYXEUSA-N Cys-Thr-Asp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O ZLFRUAFDAIFNHN-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZJFNRQHUIHKZJF-GUBZILKMSA-N Glu-His-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZJFNRQHUIHKZJF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- CQAHWYDHKUWYIX-YUMQZZPRSA-N Glu-Pro-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O CQAHWYDHKUWYIX-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- UGTHTQWIQKEDEH-BQBZGAKWSA-N L-alanyl-L-prolylglycine zwitterion Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UGTHTQWIQKEDEH-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- CLNJSLSHKJECME-BQBZGAKWSA-N Pro-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 CLNJSLSHKJECME-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- HAAQQNHQZBOWFO-LURJTMIESA-N Pro-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 HAAQQNHQZBOWFO-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- HZYOWMGWKKRMBZ-BYULHYEWSA-N Val-Asp-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N HZYOWMGWKKRMBZ-BYULHYEWSA-N 0.000 description 3
- 108010069020 alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 3
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 3
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 3
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 108010020755 prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 108010025826 prolyl-leucyl-arginine Proteins 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- HHGYNJRJIINWAK-FXQIFTODSA-N Ala-Ala-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N HHGYNJRJIINWAK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- WQVYAWIMAWTGMW-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asp-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N WQVYAWIMAWTGMW-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- HFBFSOAKPUZCCO-ZLUOBGJFSA-N Ala-Cys-Asn Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N HFBFSOAKPUZCCO-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- FUSPCLTUKXQREV-ACZMJKKPSA-N Ala-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FUSPCLTUKXQREV-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- VBRDBGCROKWTPV-XHNCKOQMSA-N Ala-Glu-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N VBRDBGCROKWTPV-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 2
- OKIKVSXTXVVFDV-MMWGEVLESA-N Ala-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N OKIKVSXTXVVFDV-MMWGEVLESA-N 0.000 description 2
- OYJCVIGKMXUVKB-GARJFASQSA-N Ala-Leu-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N OYJCVIGKMXUVKB-GARJFASQSA-N 0.000 description 2
- IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- OLVCTPPSXNRGKV-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 OLVCTPPSXNRGKV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- FSXDWQGEWZQBPJ-HERUPUMHSA-N Ala-Trp-Asp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N FSXDWQGEWZQBPJ-HERUPUMHSA-N 0.000 description 2
- 102100022977 Antithrombin-III Human genes 0.000 description 2
- DFCIPNHFKOQAME-FXQIFTODSA-N Arg-Ala-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O DFCIPNHFKOQAME-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- RWDVGVPHEWOZMO-GUBZILKMSA-N Arg-Cys-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(O)=O RWDVGVPHEWOZMO-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- AQPVUEJJARLJHB-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N AQPVUEJJARLJHB-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- YKZJPIPFKGYHKY-DCAQKATOSA-N Arg-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YKZJPIPFKGYHKY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- YBZMTKUDWXZLIX-UWVGGRQHSA-N Arg-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YBZMTKUDWXZLIX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- LUVODTFFSXVOAG-ACZMJKKPSA-N Asn-Cys-Glu Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N LUVODTFFSXVOAG-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N Asn-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- JLNFZLNDHONLND-GARJFASQSA-N Asn-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N JLNFZLNDHONLND-GARJFASQSA-N 0.000 description 2
- VBKIFHUVGLOJKT-FKZODXBYSA-N Asn-Thr Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O VBKIFHUVGLOJKT-FKZODXBYSA-N 0.000 description 2
- SKQTXVZTCGSRJS-SRVKXCTJSA-N Asn-Tyr-Asp Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O SKQTXVZTCGSRJS-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- AKPLMZMNJGNUKT-ZLUOBGJFSA-N Asp-Asp-Cys Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O AKPLMZMNJGNUKT-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- MJKBOVWWADWLHV-ZLUOBGJFSA-N Asp-Cys-Asp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N)C(=O)O MJKBOVWWADWLHV-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- VIRHEUMYXXLCBF-WDSKDSINSA-N Asp-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VIRHEUMYXXLCBF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- OMMIEVATLAGRCK-BYPYZUCNSA-N Asp-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O OMMIEVATLAGRCK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- AITKTFCQOBRJTG-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N AITKTFCQOBRJTG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- BWJZSLQJNBSUPM-FXQIFTODSA-N Asp-Pro-Asn Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BWJZSLQJNBSUPM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- UAXIKORUDGGIGA-DCAQKATOSA-N Asp-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O UAXIKORUDGGIGA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- WMLFFCRUSPNENW-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WMLFFCRUSPNENW-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical class N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 2
- HRJLVSQKBLZHSR-ZLUOBGJFSA-N Cys-Asn-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HRJLVSQKBLZHSR-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- YZFCGHIBLBDZDA-ZLUOBGJFSA-N Cys-Asp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YZFCGHIBLBDZDA-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- BUXAPSQPMALTOY-WHFBIAKZSA-N Cys-Glu Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O BUXAPSQPMALTOY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- VBPGTULCFGKGTF-ACZMJKKPSA-N Cys-Glu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O VBPGTULCFGKGTF-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- UYYZZJXUVIZTMH-AVGNSLFASA-N Cys-Glu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O UYYZZJXUVIZTMH-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- BDWIZLQVVWQMTB-XKBZYTNZSA-N Cys-Glu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O BDWIZLQVVWQMTB-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 2
- AOZBJZBKFHOYHL-AVGNSLFASA-N Cys-Glu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O AOZBJZBKFHOYHL-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- VNXXMHTZQGGDSG-CIUDSAMLSA-N Cys-His-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O VNXXMHTZQGGDSG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- NXQCSPVUPLUTJH-WHFBIAKZSA-N Cys-Ser-Gly Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O NXQCSPVUPLUTJH-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241001288713 Escherichia coli MC1061 Species 0.000 description 2
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 2
- PABVKUJVLNMOJP-WHFBIAKZSA-N Glu-Cys Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PABVKUJVLNMOJP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- FKGNJUCQKXQNRA-NRPADANISA-N Glu-Cys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O FKGNJUCQKXQNRA-NRPADANISA-N 0.000 description 2
- XMPAXPSENRSOSV-RYUDHWBXSA-N Glu-Gly-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O XMPAXPSENRSOSV-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- VXQOONWNIWFOCS-HGNGGELXSA-N Glu-His-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N VXQOONWNIWFOCS-HGNGGELXSA-N 0.000 description 2
- BIHMNDPWRUROFZ-JYJNAYRXSA-N Glu-His-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O BIHMNDPWRUROFZ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- NNQDRRUXFJYCCJ-NHCYSSNCSA-N Glu-Pro-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NNQDRRUXFJYCCJ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- PYTZFYUXZZHOAD-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN PYTZFYUXZZHOAD-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- RLFSBAPJTYKSLG-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O RLFSBAPJTYKSLG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- QXPRJQPCFXMCIY-NKWVEPMBSA-N Gly-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)CN QXPRJQPCFXMCIY-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 2
- UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N Gly-Arg-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- XXGQRGQPGFYECI-WDSKDSINSA-N Gly-Cys-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O XXGQRGQPGFYECI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- IDOGEHIWMJMAHT-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Cys Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O IDOGEHIWMJMAHT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- OQQKUTVULYLCDG-ONGXEEELSA-N Gly-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CN)C(O)=O OQQKUTVULYLCDG-ONGXEEELSA-N 0.000 description 2
- QVDGHDFFYHKJPN-QWRGUYRKSA-N Gly-Phe-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O QVDGHDFFYHKJPN-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- JPVGHHQGKPQYIL-KBPBESRZSA-N Gly-Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 JPVGHHQGKPQYIL-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- WDXLKVQATNEAJQ-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Asp Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WDXLKVQATNEAJQ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- HFPVRZWORNJRRC-UWVGGRQHSA-N Gly-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN HFPVRZWORNJRRC-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N Gly-Ser-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- WCORRBXVISTKQL-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WCORRBXVISTKQL-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 2
- NVTPVQLIZCOJFK-FOHZUACHSA-N Gly-Thr-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NVTPVQLIZCOJFK-FOHZUACHSA-N 0.000 description 2
- LLWQVJNHMYBLLK-CDMKHQONSA-N Gly-Thr-Phe Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O LLWQVJNHMYBLLK-CDMKHQONSA-N 0.000 description 2
- MYXNLWDWWOTERK-BHNWBGBOSA-N Gly-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)CN)O MYXNLWDWWOTERK-BHNWBGBOSA-N 0.000 description 2
- GWNIGUKSRJBIHX-STQMWFEESA-N Gly-Tyr-Arg Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)CN)O GWNIGUKSRJBIHX-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- NIKBMHGRNAPJFW-IUCAKERBSA-N His-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 NIKBMHGRNAPJFW-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- OSZUPUINVNPCOE-SDDRHHMPSA-N His-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)C(=O)O OSZUPUINVNPCOE-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 2
- WPUAVVXYEJAWIV-KKUMJFAQSA-N His-Phe-Cys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N WPUAVVXYEJAWIV-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- ULRFSEJGSHYLQI-YESZJQIVSA-N His-Phe-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)N)C(=O)O ULRFSEJGSHYLQI-YESZJQIVSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HUORUFRRJHELPD-MNXVOIDGSA-N Ile-Leu-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N HUORUFRRJHELPD-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 2
- DGTOKVBDZXJHNZ-WZLNRYEVSA-N Ile-Thr-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N DGTOKVBDZXJHNZ-WZLNRYEVSA-N 0.000 description 2
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N L-lysyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N Leu-Ala-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- KSZCCRIGNVSHFH-UWVGGRQHSA-N Leu-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O KSZCCRIGNVSHFH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- DLFAACQHIRSQGG-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O DLFAACQHIRSQGG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- OGUUKPXUTHOIAV-SDDRHHMPSA-N Leu-Glu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N OGUUKPXUTHOIAV-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 2
- OXRLYTYUXAQTHP-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OXRLYTYUXAQTHP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- HYIFFZAQXPUEAU-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C HYIFFZAQXPUEAU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- KEVYYIMVELOXCT-KBPBESRZSA-N Leu-Gly-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 KEVYYIMVELOXCT-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- YFBBUHJJUXXZOF-UWVGGRQHSA-N Leu-Gly-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O YFBBUHJJUXXZOF-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- NHRINZSPIUXYQZ-DCAQKATOSA-N Leu-Met-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N NHRINZSPIUXYQZ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N Leu-Pro-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- FBNPMTNBFFAMMH-AVGNSLFASA-N Leu-Val-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N FBNPMTNBFFAMMH-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- MPGHETGWWWUHPY-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN MPGHETGWWWUHPY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CNUPMMXDISGXMU-CIUDSAMLSA-N Met-Cys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CNUPMMXDISGXMU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- CEGVMWAVGBRVFS-XGEHTFHBSA-N Met-Cys-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CEGVMWAVGBRVFS-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 2
- HZVXPUHLTZRQEL-UWVGGRQHSA-N Met-Leu-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O HZVXPUHLTZRQEL-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- BJEYSVHMGIJORT-NHCYSSNCSA-N Phe-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 BJEYSVHMGIJORT-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- DPUOLKQSMYLRDR-UBHSHLNASA-N Phe-Arg-Ala Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 DPUOLKQSMYLRDR-UBHSHLNASA-N 0.000 description 2
- FINLZXKJWTYYLC-ACRUOGEOSA-N Phe-His-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FINLZXKJWTYYLC-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- APKRGYLBSCWJJP-FXQIFTODSA-N Pro-Ala-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O APKRGYLBSCWJJP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N Pro-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N 0.000 description 2
- HFZNNDWPHBRNPV-KZVJFYERSA-N Pro-Ala-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HFZNNDWPHBRNPV-KZVJFYERSA-N 0.000 description 2
- OLHDPZMYUSBGDE-GUBZILKMSA-N Pro-Arg-Cys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O OLHDPZMYUSBGDE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- TXPUNZXZDVJUJQ-LPEHRKFASA-N Pro-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O TXPUNZXZDVJUJQ-LPEHRKFASA-N 0.000 description 2
- SWXSLPHTJVAWDF-VEVYYDQMSA-N Pro-Asn-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SWXSLPHTJVAWDF-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 2
- TUYWCHPXKQTISF-LPEHRKFASA-N Pro-Cys-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O TUYWCHPXKQTISF-LPEHRKFASA-N 0.000 description 2
- AJCRQOHDLCBHFA-SRVKXCTJSA-N Pro-His-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AJCRQOHDLCBHFA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- NFLNBHLMLYALOO-DCAQKATOSA-N Pro-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 NFLNBHLMLYALOO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- JUJCUYWRJMFJJF-AVGNSLFASA-N Pro-Lys-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 JUJCUYWRJMFJJF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- LEIKGVHQTKHOLM-IUCAKERBSA-N Pro-Pro-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 LEIKGVHQTKHOLM-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CO SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- HRNQLKCLPVKZNE-CIUDSAMLSA-N Ser-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HRNQLKCLPVKZNE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- UCOYFSCEIWQYNL-FXQIFTODSA-N Ser-Cys-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O UCOYFSCEIWQYNL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- WSTIOCFMWXNOCX-YUMQZZPRSA-N Ser-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N WSTIOCFMWXNOCX-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- XXXAXOWMBOKTRN-XPUUQOCRSA-N Ser-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O XXXAXOWMBOKTRN-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 2
- ZOPISOXXPQNOCO-SVSWQMSJSA-N Ser-Ile-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N ZOPISOXXPQNOCO-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 2
- XQAPEISNMXNKGE-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Cys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O XQAPEISNMXNKGE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- BEBVVQPDSHHWQL-NRPADANISA-N Ser-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BEBVVQPDSHHWQL-NRPADANISA-N 0.000 description 2
- JQAWYCUUFIMTHE-WLTAIBSBSA-N Thr-Gly-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O JQAWYCUUFIMTHE-WLTAIBSBSA-N 0.000 description 2
- OLFOOYQTTQSSRK-UNQGMJICSA-N Thr-Pro-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OLFOOYQTTQSSRK-UNQGMJICSA-N 0.000 description 2
- NBHGNEJMBNQQKZ-UBHSHLNASA-N Trp-Asp-Cys Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N NBHGNEJMBNQQKZ-UBHSHLNASA-N 0.000 description 2
- BEWOXKJJMBKRQL-AAEUAGOBSA-N Trp-Gly-Asp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N BEWOXKJJMBKRQL-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 2
- RCLOWEZASFJFEX-KKUMJFAQSA-N Tyr-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 RCLOWEZASFJFEX-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- KWKJGBHDYJOVCR-SRVKXCTJSA-N Tyr-Ser-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O KWKJGBHDYJOVCR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- HNWQUBBOBKSFQV-AVGNSLFASA-N Val-Arg-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N HNWQUBBOBKSFQV-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- QHDXUYOYTPWCSK-RCOVLWMOSA-N Val-Asp-Gly Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)NCC(=O)O)N QHDXUYOYTPWCSK-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 2
- YLHLNFUXDBOAGX-DCAQKATOSA-N Val-Cys-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N YLHLNFUXDBOAGX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- LGXUZJIQCGXKGZ-QXEWZRGKSA-N Val-Pro-Asn Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N LGXUZJIQCGXKGZ-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 2
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010072405 glycyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 2
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 2
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 description 2
- 108010051673 leucyl-glycyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 description 2
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 2
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 2
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 108010087846 prolyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N (S)-chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(N[C@@H](C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 9-ethyl-3-carbazolamine Chemical compound NC1=CC=C2N(CC)C3=CC=CC=C3C2=C1 OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BYXHQQCXAJARLQ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BYXHQQCXAJARLQ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N Ala-Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- WCFCYFDBMNFSPA-ACZMJKKPSA-N Asp-Asp-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O WCFCYFDBMNFSPA-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- XAJRHVUUVUPFQL-ACZMJKKPSA-N Asp-Glu-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O XAJRHVUUVUPFQL-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- CZIVKMOEXPILDK-SRVKXCTJSA-N Asp-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CZIVKMOEXPILDK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- VIOQRFNAZDMVLO-NRPADANISA-N Cys-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VIOQRFNAZDMVLO-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- MXOODARRORARSU-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Ser Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N MXOODARRORARSU-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- FYBSCGZLICNOBA-XQXXSGGOSA-N Glu-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O FYBSCGZLICNOBA-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 1
- PKYAVRMYTBBRLS-FXQIFTODSA-N Glu-Cys-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PKYAVRMYTBBRLS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HKTRDWYCAUTRRL-YUMQZZPRSA-N Glu-His Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 HKTRDWYCAUTRRL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- YBTCBQBIJKGSJP-BQBZGAKWSA-N Glu-Pro Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O YBTCBQBIJKGSJP-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- IBYOLNARKHMLBG-WHOFXGATSA-N Gly-Phe-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 IBYOLNARKHMLBG-WHOFXGATSA-N 0.000 description 1
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000757319 Homo sapiens Antithrombin-III Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N Hygromycin-B Natural products OC1C(NC)CC(N)C(O)C1OC1C2OC3(C(C(O)C(O)C(C(N)CO)O3)O)OC2C(O)C(CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VQUCKIAECLVLAD-SVSWQMSJSA-N Ile-Cys-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N VQUCKIAECLVLAD-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 1
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 108010086093 Mung Bean Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 101100342977 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 240000007711 Peperomia pellucida Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- YXHYJEPDKSYPSQ-AVGNSLFASA-N Pro-Leu-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 YXHYJEPDKSYPSQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 1
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 101100221606 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) COS7 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100036546 Salivary acidic proline-rich phosphoprotein 1/2 Human genes 0.000 description 1
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N Ser-Gly-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- ZPFLBLFITJCBTP-QWRGUYRKSA-N Tyr-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O ZPFLBLFITJCBTP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- ZLFHAAGHGQBQQN-AEJSXWLSSA-N Val-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N ZLFHAAGHGQBQQN-AEJSXWLSSA-N 0.000 description 1
- ZLFHAAGHGQBQQN-GUBZILKMSA-N Val-Ala-Pro Natural products CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZLFHAAGHGQBQQN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- VLOYGOZDPGYWFO-LAEOZQHASA-N Val-Asp-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VLOYGOZDPGYWFO-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- 108010027570 Xanthine phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 229920001284 acidic polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000004805 acidic polysaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000003373 anti-fouling effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 description 1
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Natural products ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N clopidogrel Chemical compound C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000004070 electrodeposition Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 108010052305 exodeoxyribonuclease III Proteins 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 102000052834 human SERPINC1 Human genes 0.000 description 1
- 102000051206 human THBD Human genes 0.000 description 1
- 229960004336 human antithrombin iii Drugs 0.000 description 1
- 229940106780 human fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N hygromycin B Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC)C[C@@H](N)[C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@H]2O[C@@]3([C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(N)CO)O3)O)O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N 0.000 description 1
- 229940097277 hygromycin b Drugs 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000019837 monoammonium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000020964 regulation of blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M sodium thiocyanate Chemical compound [Na+].[S-]C#N VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229960003766 thrombin (human) Drugs 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/7455—Thrombomodulin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Reinforced Plastic Materials (AREA)
- Liquid Developers In Electrophotography (AREA)
- Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
- Manufacture Of Macromolecular Shaped Articles (AREA)
- Portable Nailing Machines And Staplers (AREA)
- Adhesives Or Adhesive Processes (AREA)
Description
1 104254
Menetelmä trombiinia sitovan aineen tuottamiseksi ja siinä käyttökelpoiset DNA-fragmentit, rekombinanttivektorit ja näillä transformoidut solut 5 Keksinnön tausta
Keksinnön ala Tämä keksintö koskee DNA-fragmenttia, joka koodit-taa trombiinia sitovan aineen aminohapposekvenssiä, rekom-binanttivektoria joka sisältää mainitun DNA-fragmentin, 10 transformoitua solua, joka sisältää mainitun rekom-binanttivektorin, ja menetelmää trombiinia sitovan aineen tuottamiseksi. Uudella trombiinia sitovalla aineella on verihiutaleiden kerääntymistä estävää aktiivisuutta, ja se on käyttökelpoinen veren hyytymisen estämisessä.
15 Tekniikan tason kuvaus
On tehty paljon työtä koskien sitä roolia, joka trombiinilla on proteolyyttisenä entsyyminä veren hyytymisen säätelyssä, ja veren hyytymisen mekanismi on selvitetty suurimmalta osaltaan.
20 Julkaistun raportin mukaan trombiini aktivoi pro teiini C:n, jonka sanotaan vaikuttavan fibrinolyyttisissä ja hyytymistä estävissä järjestelmissä, ja kanin keuhko-kudosuutteissa on tietty aine, joka toimii koentsyyminä aktivaatiomekanismille. Aineelle on annettu nimi trombomo-; 25 duliini [N.L. Esmon ym., J. Biological Chemistry. 257.
(2) , 859 - 864 (1982)] .
N. Aoki ym. raportoivat, että ihmisen istukasta eristetyllä ihmisen trombomoduliinilla, jonka molekyyli-paino on noin 71 000 ei-pelkistävissä olosuhteissa, on 30 ominaisuuksia, jotka ovat samanlaisia kuin Esmonin ym. raportoimalla trombomoduliinilla rThromb. Res.. 37. 353 -364 (1985)].
I. Maruyama ym. vertasivat ihmisen istukasta eristetyn trombomoduliinin, jonka molekyylipaino on noin 35 75 000, aktiivisuuksia yllä mainitun kanin trombomodulii- 104254 nin aktiivisuuksien kanssa. He raportoivat, että näitten kahden trombomoduliinin aktiivisuudet olivat identtiset rj. Clin. Invest.. 75, 987 - 991 (1985)].
H. Ishii ym. raportoivat, että ihmisen plasma ja 5 ihmisen virtsa sisälsivät aineita, joilla oli samoja aktiivisuuksia kuin trombomoduliinilla ja että näiden plasmassa olevien aineiden molekyylipainot olivat 63 000 ja 54 000 fJ. Clin. Invest.. 76, 2178 - 2181 (1985)].
Esillä olevan keksinnön keksijät löysivät aikaisem-10 min kahdentyyppistä trombiinia sitovaa aktiivisuutta ihmisen virtsasta. Ne ovat erilaisia kuin yllä mainitut aineet; niillä on pienemmät molekyylipainot, se on: noin 39 000 ja 31 000 ei-pelkistävissä olosuhteissa. Keksijät jättivät aineita koskevan patenttihakemuksen (julkiseksi 15 tullut JP-patenttijulkaisu (Kokai) 146 898/1988).
Lisäksi keksijät erottivat kahdentyyppistä trombiinia sitovaa ainetta (A) ja (B) ihmisen virtsasta ja ihmisen kudoksista peräisin olevien solujen elatusaineesta, ja kehittivät menetelmän, jolla voidaan tuottaa suuria määriä 20 näitä trombiinia sitovia aineita stabiililla tavalla. Keksijät jättivät aikaisemmin trombiinia sitovia aineita ja menetelmää koskevat patenttihakemukset (EP-patenttijulkaisu 455 681).
Keksijät hankkivat ihmisen virtsasta peräisin ole-; 25 vaa trombiinia sitovaa ainetta rekombinantti-DNA-tekniik kaa käyttäen (r-UTM) ja jättivät tätä menetelmää koskevan patenttihakemuksen (JP-patenttihakemus 54 446/1991).
Kanin keuhkoista peräisin olevan trombomoduliinin tiedetään lisäävän antitrombiini III:n aktiivisuutta [K.
30 T. Preissner ym. J. Biological Chemistry. 265. 4915 - 4922 ! (1990)] . Sellaista aktiivisuutta ei kuitenkaan ole naudas- ta saatavalla trombomoduliinilla [H. V. Jakubowski ym., J. Biological Chemistry. 261. 3876 (1986)], ja ihmisen istukasta peräisin oleva trombomoduliini estää antitrombiini 3 1C4254 III:n toimintaa [K. Hirahara ym. Thrombo. Res., 57. 117 -126 (1990)].
Alalla tunnetaan myös kaksi liukoista trombomodu-liinia, jotka on tuotettu geeniteknisesti. Toisen tiede-5 tään lisäävän antitrombiini III:n aktiivisuutta ja toisen tiedetään olevan sellaista kykyä vailla [K. Nawa ym., Biochem. Biophvs. Res.. 171. 729 - 737 (1990)]. Näiden trombomoduliinien tiedetään kuitenkin estävän trombiinin koaguloitumista verihiutaleessa, millä on tärkeä rooli 10 veren hyytymisjärjestelmässä, mutta niillä ei öle ADP-koa-gulaatiovaikutusta [N. L. Esmon, J. Biological Chemistry. 258. 12238 - 12242 (1983)].
On näin ollen suotavaa edistää antitrombiini III:n aktiivisuutta ja verihiutaleiden kasaantumista estävää 15 aktiivisuutta ihmisen trombomoduliineissa ja muissa trom-biinia sitovissa aineissa.
Keksinnön yhteenveto Tämän tilanteen takia esillä olevan keksinnön keksijät ovat suorittaneet laajoja tutkimuksia ja havainneet, 20 että sellainen transformantti, joka on valmistettu transformoimalla isäntäsolu rekombinanttivektorilla, johon on yhdistetty DNA-fragmentti, joka on saatu yhdistämällä ihmisen virtsasta peräisin olevaa trombiinia sitovaa ainetta koodattavan DNA-fragmentin 3-päähän spesifinen DNA-frag-25 mentti, voi tuottaa trombiinia sitovaa ainetta, joka on peräisin ihmisen virtsasta ja joka kykenee lisäämään antitrombiini III:n aktiivisuutta ja estämään verihiutaleiden kasaantumista.
Keksintö koskee siten menetelmää trombiinia sitovan 30 aineen tuottamiseksi, jolla on seuraava aminohapposekvens-’ si A1aProA1aG1uProG1nProGlyGlySerG1nCysVa1G1uHisAs pCysPheA1aLeu TyrProGlyProAlalhrPheleuAsnAlaSerGlnlleCysAspGlyLeuArgGlyHis 35 LeuMetThrValArgSerSerValAlaAlaAspValIleSerleuLeuLeuAsnGlyAsp
GlyGlyValGlyArgArgArgLeuTrpIleGIyLeuGlnLeuProProGlyCysGlyAsp 4 104254
PrcLysArgleuGlyProLeuArgGlyPheGlnTrpValThrGlyAspAsnAsnThrSer
TyrSerArgT rpA1aArgleuAspLeuAsnGlyAlaProLeuCysGlyProLeuCysVa1
AlaValSerAlaAlaGluAlaThrValProSerGluProIleTrpGluGluGlnGlnCys 5 GluVallysAlaAspGlyPheleuCysGluPheHisPheProAlaThrCysArgProLeu
AlaValGluProGlyAlaAlaAlaAlaAlaValSerI1eThrTyrG1yThrProPheAla
AlaArgGlyAlaAspPheGlnAlaLeuProValGlySerSerAlaAlaValAlaProLeu
GlyLeuGlnLeuMetCysThrAlaProProGlyAlaValGlnGlyHisTrpAlaArgGlu 10 AlaProGlyAlaTrpAspCysSerValGluAsnGlyGlyCysGluHisAlaCysAsnAla
IleProGlyAlaProArgCysGInCysProAlaGlyAlaAlaLeuGInAlaAspGlyArg
SerCysThrAlaSerAlaThrGlnSerCysAsnAspLeuCysGluHisPheCysValPro
AsnProAspGlnProGlySerTyrSerCysMetCysGluThrGlyTyrArgLeuAlaAla 15
AspGlnHisArgCysGluAspValAspAspCysIleLeuGluProSerProCysProGIn ArgCysValAsnThrGlnGlyGlyPheGluCysHisCysTyrProAsnTyrAspLeuVal AspGlyGluCysValGluProValAspProCysPheArgAlaAsnCysGluTyrGlnCys GlnProleuAsnGlnThrSerTyrleuCysValCysAlaGluGlyPheAlaProIlePro HisGluProHisArgCysGlnMetPheCysAsnGlnThrAlaCysProAlaAspCysAsp ProAsnThrGInAlaSerCysGluCysProGluGlyTyrIleleuAspAspGlyPhelle CysThrAspIleAspGluCysGluAsnGlyGlyPheCysSerGlyValCysHi sAsnLeu : 25 ProGlyThrPheGluCysIleCysGlyProAspSerAlaLeuVa1ArgHisIleGlyThr
AspCysAspSerGlyLysValAspXl X2 Y1 SerGlySerGlyY2, jossa Xl ja X2 edustavat happamia aminohappoja ja Y1 ja Y2 edustavat mitä tahansa aminohappoja, jolle menetelmälle on 30 tunnusomaista, että viljellään transformoitu solu, joka sisältää rekom- « binanttivektorin, joka sisältää replikoitavissa olevan vektorin ja DNA-fragmentin, jolla on nukleotidisekvenssi, joka koodittaa mainittua aminohapposekvenssiä, ja 104254 kerätään viljeltyjen solujen tuottamat polypep-tidit. Aminohapposekvenssiin viitataan tästä lähtien nimellä "sekvenssi A". Keksintö koskee myös DNA-fragmenttia, jolla on nukleotidisekvenssi, joka kykenee koodittamaan 5 sekvenssiä A, rekombinanttivektoria, joka sisältää mainitun DNA-fragmentin ja replikoitavissa olevan vektorin, ja transformoitua solua, joka sisältää mainitun rekombinant-tivektorin.
Trombiinia sitova aine osoittaa verihiutaleiden 10 kerääntymistä estävää aktiivisuutta, ja on käyttökelpoinen hyytymisen estämiseksi.
Muut tämän keksinnön tavoitteet, piirteet ja edut käyvät alempana helpommin ilmi seuraavasta kuvauksesta.
Lyhyt piirroksen kuvaus 15 Kuvio 1 on kaavio, joka havainnollistaa keksinnön mukaisen ekspressiovektorin, pCDM-GAG-UTMl ja pCDM-GAG-UTM2, rakennetta.
Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus ja edulliset suoritusmuodot 20 Tämän keksinnön mukaisesti trombiinia sitova aine voidaan valmistaa esimerkiksi seuraavasti. Ensin valmistetaan templaatti-DNA katkaisemalla ihmisen istukan genomin DNA sopivalla restriktioendonukleaasilla. Templaatti-DNA:-ta seulotaan käyttäen koettimena DNA-aluketta, joka on : 25 syntetisoitu tunnetun ihmisen trombomoduliinigeenin nukle- otidisekvenssin mukaisesti [Shirai, T. ym. J. Biochem., 103. 281 - 285 (1988)] . Täten tuotettu DNA pilkotaan sopivalla restriktioendonukleaasilla, ja näin saadut DNA-fragmentit ligatoidaan kloonausvektorin kanssa mikro-organis-3 0 min transformaatiota varten. Plasmidi-DNA uutetaan trans-·. formantista ja käsitellään restriktioendonukleaasilla, jolloin syntyy 1 404 emästä sisältävä DNA-fragmentti, joka koodittaa ihmisen virtsasta peräisin olevaa trombiinia sitovaa ainetta. Oligonukleotidi, jolla on nukleotidisek-3 5 venssi joka koodittaa aminohapposekvenssiä X^YjSerGlySer- • 104254
GlyY2, insertoidaan DNA-fragmenttiin ja täten saadaan DNA-fragmentti, joka sisältää tämän keksinnön mukaisen DNA-fragmentin. Tyypillisiä esimerkkejä tämän keksinnön mukaisista DNA-fragmenteista ovat ne, joilla on SEQ ID nro 3:n 5 ja SEQ ID nro 4:n mukainen nukleotidisekvenssi. Tämän keksinnön mukaiset DNA-fragmentit eivät kuitenkaan ole rajoittuneet niihin. Mitkä tahansa DNA-fragmentit, jotka kykenevät koodittamaan aminohapposekvenssiä, joka muodostaa trombiinia sitovan aineen tämän keksinnön mukaisesti, 10 se on: sekvenssi A, edullisesti SEQ ID nro 1 ja SEQ ID nro 2, kuuluvat tämän keksinnön suoja-alaan.
Keksinnön mukaisen DNA-fragmentin sisältävän rekom-binanttivektorin muodostaminen voidaan suorittaa kytkemällä keksinnön mukainen DNA-fragmentti replikoitavissa 15 olevaan ekspressiovektoriin.
Ekspressiovektorina voidaan käyttää mistä tahansa lähteistä, esim. prokaryooteista (tyypillisesti E^_ colis-ta), hiivoista, hyönteisviruksista, selkärankaisten viruksista ym. peräisin olevia ekspressiovektoreita, niin kauan 20 kuin ne ovat replikoitavissa.
Jotta saataisiin varmistettua trombiinia sitovan aineen tehokas tuotanto, on suotavaa että rekombinant-tiekspressiovektori muodostetaan seuraavista nukleotidi-sekvensseistä (1) - (7) tässä järjestyksessä transkription : 25 alavirtasuuntaa kohden: (1) promoottorina toimiva nukleotidisekvenssi, (2) ribosomia sitovana kohtana toimiva nukleotidisekvenssi , (3) initiaatiokodonina toimiva nukleotidisekvenssi, 30 (4) signaalipeptidiä koodittava nukleotidisekvens- si, (5) sekvenssin (A) mukaista aminohapposekvenssiä koodittava nukleotidisekvenssi, (6) lopetuskodonina toimiva nukleotidisekvenssi, ja • « 104254 (7) Poly-A:n lisäyssignaalina toimiva nukleotidi-sekvenssi .
Vektorina käytetään edullisesti plasmidi-DNA:ta, esimerkiksi plasmidia joka voi monistaa itseään, esim. Eh_ 5 coli -isäntä-mikro-organismissa, ja joka voi ekspressoida insertoidun geenin transformoimalla nisäkässoluja. Sellainen plasmidi-DNA sisältää nukleotidisekvenssejä, jotka plasmidilta vaaditaan, jotta se kykenisi monistamaan itsensä Eh. colissa. kuten nukleotidisekvenssin, joka toimii 10 replikaattorina ColEI-plasmidisarjassa, nukleotidisekvens sin, joka toimii promoottorina nisäkässoluissa, geenin, joka toimii valikointimerkkinä transformoidussa EL. colissa . ja geenin, joka toimii valikointimerkkinä transformoiduissa nisäkässoluissa. Edullisessa suoritusmuodossa se 15 sisältää lisäksi replikaattori-nukleotidisekvenssin, kuten SV40 ori:n, polyooma-ori:n tai HSV-ori:n, joka toimii nisäkässoluissa. Edullisia esimerkkejä promoottoreista ovat esimerkiksi seuraavat promoottorit: sytomegaloviruksen, SV40:n, polyoomaviruksen, naudan papilloomaviruksen, ade-20 noviruksen jne.; retroviruksen LTR, esim. MMTV; metallo-tioneiinigeenin promoottori, ja vastaavat. Esimerkkejä E. coli -valikointimerkeistä ovat ampisilliiniresistenssi-geenit, kanamysiiniresistenssigeenit, tetrasykliiniresis-tenssigeenit, kloramfenikoliresistenssigeenit ja vastaa-; 25 vat. Esimerkkejä nisäkässolun valikointimerkeistä ovat neomysiiniresistenssigeenit, hygromysiini B -resistenssi-geenit, tymidiinikinaasigeenit, dihydrofolaattireduktaasi-geenit, ksantiini-guaniinifosforibosyylitransferaasigeenit ja vastaavat. Näitä geenejä voidaan käyttää joko yksinään 30 tai kahden tai useamman geenin yhdistelmänä.
Keksinnön mukaisen DNA-fragmentin inkorporaatio edellä mainittuihin vektoreihin voidaan suorittaa katkaisemalla DNA-fragmentin sisältävä DNA sopivalla restrik-tioendonukleaasilla, haluttaessa lisäämällä sopiva linkke-35 ri, ja yhdistämällä se vektorin kanssa, joka on katkaistu 104254 sopivalla restriktioendonukleaasilla. Tässä käytettäviksi sopivia restriktioendonukleaaseja ovat esimerkiksi Eco Rl,
Sph I, Pst I, Hind III, Bam HI, Xho I, Xba I, Ban III, Sma I, Neo I ja vastaavat. Voidaan käyttää myös nukleotideja 5 muokkaavia entsyymejä, kuten eksonukleaasi III, Bal31, SI nukleaasi, eksonukleaasi VII, mung bean -nukleaasi, DNA-polymeraasi ja vastaavia. Linkkerinä voidaan käyttää Eco Rl -linkkeriä, Sma I -linkkeriä, Neo I -linkkeriä, Bam HI -linkkeriä, Xho I -linkkeriä, Hind III -linkkeriä, Pst I 10 -linkkeriä, Sph I -linkkeriä, Xba I -linkkeriä tai vastaavia .
Transformoituja soluja, jotka voivat tuottaa tehokkaasti rekombinanttivektoria ja/tai trombiinia sitovaa ainetta, voidaan saada introdusoimalla edellä mainitulla 15 menetelmällä saatu rekombinanttiekspressiovektori isän- täsoluihin kompetenttia solua käyttävällä menetelmällä, protoplastimenetelmällä, kalsiumfosfaattia käyttävällä sekasaostusmenetelmällä, elektroporaatiomenetelmällä, DEAE-dekstraanimenetelmällä, lipofektiinimenetelmällä tai 20 vastaavalla. Transformanttia hankittaessa isäntäsoluina käytetään edullisesti yksisoluisia organismeja, kuten bakteereja ja hiivoja, viljeltyjä hyönteissoluja, viljeltyjä selkärankaissoluja ja vastaavia. E. coli -isäntäsoluina käytetään edullisesti E. coli K12-kannan eri mutantteja, : 25 esim. HB 101, C600K, JM101, JM103, JM105, JM109, MV1034, MB1184, MC1061/P3 ja vastaavia. Edullisia annettuja esimerkkejä nisäkässoluista ovat COS-solut, CHO-solut, L-so-lut, C127-solut, NIH3T3-solut, HeLa-solut ja vastaavat.
Trombiinia sitova aine voidaan saada viljelemällä 30 näin saatua transformanttia, uuttamalla ja eristämällä se viljellyistä soluista tai viljelmän elatusaineesta. Erilaisia luonnollisia tai keinotekoisia elatusaineita voidaan käyttää transformoitujen solujen viljelyssä. Elatus-aineet sisältävät edullisesti hiililähteitä, kuten soke-35 reita, alkoholeja, ja orgaanisten happojen suoloja; typpi- • 1C4254 lähteitä kuten proteiiniseoksia, aminohappoja ja ammonium-suoloja; ja epäorgaanisia suoloja. Lisäksi mukana voi edullisesti olla vitamiineja ja antibiootteja, jotka vastaavat valikointimerkkigeenejä. Jos vektori on sellaista 5 tyyppiä jonka ekspressiota voidaan säädellä, on välttämätöntä lisätä menetelmä, jolla indusoidaan ekspressio viljelyn aikana. Viljelyn jälkeen viljelmäliemi sentrifugoi-daan viljelynesteen erottamiseksi soluista. Jos trombiinia sitova aine kerääntyy viljeltyihin soluihin, solut tuhota-10 an jäädytys-sulatus -menetelmällä, ultraäänikäsittelyllä, "French press" -laitteella, entsyymikäsittelyllä, homogenisoimalla tai vastaavasti, ja trombiinia sitova aine liuotetaan käyttämällä EDTA:ta, pinta-aktiivisia aineita, karbamidia, guanidiinihydrokloridia tai vastaavia.
15 Puhdistettu trombiinia sitova aine voidaan saada käsittelemällä viljelyneste tai solu-uute, joka sisältää näin valmistetun trombiinia sitovan aineen, pylväskromato-grafisesti. Ioninvaihtokromatografiaa, affiniteettikroma-tografiaa, esim. sitä joka käyttää monoklonaalista vasta-20 ainetta, joka on kuvattu julkiseksi tulleessa, JP-patent-tijulkaisussa (Kokai) 45 398/1989, geelisuodatuskromato-grafiaa, tai vastaavaa voidaan käyttää joko itsenäisesti tai yhdistelmänä. Näin saaduista trombiinia sitovista aineista niillä, joilla on aminohapposekvenssi SEQ ID nro 1 : 25 tai SEQ ID nro 2, on seuraavat ominaisuudet.
(1) Aminohapposekvenssi:
Perustuen DNA-fragmenttien nukleotidisekvenssiin, aminohapposekvenssin katsotaan olevan se joka on esitetty SEQ IDrssä nrot 1 ja 2.
30 (2) Molekyylipaino: . ·. 55 000 - 100 000 määritettynä SDS-polyakryyliamidi- geelielektroforeesilla ei-pelkistävissä olosuhteissa.
(3) Isoelektrinen piste: pH 3 - 4 määritettynä isoelektrisellä elektroforee-35 simenetelmällä amfolyyttiä käyttäen.
• 104254 (4) Sokerianalyysi:
Molekyylipainon perusteella ajatellaan, että trom-biinia sitoviin aineisiin on sitoutunut kaksi sokeria tai enemmän. Aminohapposekvenssin perusteella toisen sokereis-5 ta ajatellaan olevan hapan polysakkaridi, joka on kiinnittynyt aminohappoon Ser(474).
(5) Toiminnot:
Omaa antitrombiini-aktiivisuutta.
Lisää antitrombiini III:n aktiivisuutta.
10 Pystyy estämään verihiutaleiden kerääntymistä.
Injektiovalmisteet ovat tyypillisiä esimerkkejä koostumuksesta, joka sisältää tämän keksinnön mukaisesti saatua trombiinia sitovaa ainetta hyytymistä estävänä aineena. Sellaisten injektiovalmisteiden edullinen muoto on 15 kylmäkuivattu jauhe, joka voidaan liuottaa tislattuun veteen tai fysiologiseen suolaliuokseen joka kerta kun se annetaan. Laskimonsisäinen injektio on edullinen valmisteen antotapa.
Vaikkakin annos riippuu potilaan oireista, ruumiin-20 painosta ja vastaavista, edullinen annos on 10 Mg/kg -10 mg/kg. Keksinnön mukaisesti saatu trombiinia sitova aine ei aiheuta epänormaaliutta edellä mainitulla annos-alueella. Se on täysin turvallinen aine.
Muut tämän keksinnön piirteet käyvät ilmi kuvat- : 25 taessa seuraavia suoritusmuotoesimerkkejä, jotka annetaan keksinnön havainnollistamiseksi ja jotka eivät ole tarkoitettuja sitä rajoittaviksi.
Esimerkkejä
Esimerkki 1 30 Trombiinia sitovan aineen geenin kloonaus :. Aluke #1, jolla on SEQ ID nro 5:n mukainen sekvens- si, ja aluke #2, jolla on SEQ ID nro 6:n mukainen sekvenssi, syntetisoitiin käyttäen DNA-syntetisaattoria (ABI Model 381A) , viitaten ihmisen trombomoduliinigeenin nukle-35 otidisekvenssiin [Shirai, T. ym. J. Biochem.. 103. 281 - • 104254 285 (1988)]. Templaatti-DNA valmistettiin digestoimalla ihmisen istukan genomista DNA:ta (Clonetech-yhtiön tuote) Bam HI -entsyymillä. Geenin monistus suoritettiin seuraav-an formulaation mukaisessa reaktioliuoksessa käyttäen Qui-5 ck Thermo System -laitetta (Model QTS-10M; tavaramerkki, valmistaja Japan Genetic -yhtiö), toistamalla 30 inkubaa-tiosykliä; yksi sykli sisälsi inkubaation 94 °C:ssa 2 minuutin ajan, 50 °C:ssa 3 minuutin ajan ja 72 °C:ssa 4 minuutin ajan. Reaktion jälkeen osa reaktiotuotetta kerättiin, 10 jotta saatiin vahvistettua kohde-DNA-juovan monistuminen agaroosigeelielektrofeesilla.
Reaktioliuos Tislattu vesi71 μΐ Puskuriliuos *10 μΐ 15 dNTP-seosliuos (2,5 mM) 8 μΐ
Aluke #1 (20 μΜ) 5 μΐ Aluke #2 (20 μΜ) 5 μΐ Templaatti-DNA (1 μg/μl) 1 μΐ AmpliTaq (5 yksikköä/μΐ) 0,5 μΐ 20 * Puskuriliuos: 0,1 M kaliumkloridi 0,1 M Tris-HCl -puskuri (pH 8,3) 0,1 % gelatiini 15 mM magnesiumkloridi DNA kerättiin reaktioliuoksesta etanolisaostuksel-: 25 la, digestoitiin Xho I:lla ja Kpn I:lla ja alistettiin agaroosigeelielektroforeesiin, jotta saatiin 1,57 kilo-emäksen Xho Ι-Κρη I -fragmentit. Erikseen digestoitiin kloonausta varten vektori pUC118 [Vieira, J. ja Messing, J-, Methods Enzvmol.. 153. 3 - 11 (1987)] Hind II:lla, 30 liitettiin Xho I -linkkeriin, ja digestoitiin edelleen Xho *· I:lla ja Kpn I:lla, jolloin saatiin vektorifragmentit aga roosigeelielektrof oreesin avulla. Vektorifragmentit ja 1,57 kiloemäksen Xho Ι-Κρη I -fragmentit ligatoitiin ja E. coli MV1034 [Vieira, J. ja Messing, J., Methods Enzvmol., 35 153, 3-11 (1987)] transformoitiin ligatoidulla DNA:11a.
« 12 104254
Plasmidi-DNA uutettiin näin saadusta transforman-tista ja digestoitiin restriktioendonukleaasilla. Tällä tavalla valittiin 6 kloonia, jotka sisälsivät plasmidin, johon oli insertoitu ihmisen trombomoduliinigeenista saatu 5 1,57 kiloemäksen Xho I-Kpn I -fragmentti.
Näin saaduissa klooneissa olevien insertoitujen fragmenttien nukleotidisekvenssien määritys paljasti 1-3 mutatoitua kohtaa kussakin fragmentissa. Sitten yhdistettiin yllä mainitun vektorifragmentin kanssa 0,31 kiloemäk-10 sen Xho I-Sma I -fragmentti kloonista 2, 0,65' kiloemäksen Sma I-Miu I -fragmentti kloonista 1 ja 0,62 kiloemäksen Miu I-Kpn I -fragmentti kloonista 4, joilla yhdelläkään ei ollut mutatoituneita kohtia, jolloin saatiin plasmidi pUCTM/XHO-KPN, joka sisälsi ihmisen trombomoduliinigeenin 15 insertoidun fragmentin, jolla oli oikea sekvenssi.
Esimerkki 2
Vektorin muodostus trombiinia sitovan aineen eks- pressoimiseksi
Jotta saataisiin yhdistettyä ihmisen virtsasta 20 peräisin olevan trombiinia sitovan aineen aminohapposekvenssin C-pään Asp:iin glykosaminoglykaanin additiokohta, linkkerit $1 - $6, joilla oli vastaavasti nukleotidisek-venssit SEQ ID nrot 7 - 12, syntetisoitiin ja kukin 5'-pää fosforyloitiin.
: 25 pUCTM/XHO-KPN digestoitiin Xho I:lla ja Kpn I:lla, jotta saataisiin valmistettua ihmisen trombomoduliini-geenistä peräisin oleva 1,57 kiloemäksen Xho I-Kpn I -fragmentti. Tämä 1,57 kiloemäksen fragmentti ligatoitiin nisäkässoluekspressiovektoriin CDM8 (Invitrogen-yhtiön 30 tuote), joka oli digestoitu Xho I:lla ja defosforyloitu \ yhdessä linkkereiden $1, $2, $3 ja $4 kanssa 1,57 kilo- « emäksen fragmentti ligatoitiin myös Xho I -digestoidun ja defosforyloidun CDM8:n kanssa linkkereillä $1, $2, $5 ja $6. EL. coli MC1061/P3 [Seed, B. ja Aruffo, A., Proc. Natl. 35 Acad. Sei., USA, 84, 3365 - 3369 (1987)] transformoitiin 104254 ligatoiduilla DNA-molekyyleillä. Plasmidi-DNA:t uutettiin näin valmistetuista transformanteista ja digestoitiin restriktioendonukleaaseilla, jotta saataisiin vahvistettua insertiosuunta ja koko. Keksinnön mukaisen DNA-fragmentin 5 sisältävät 1,68 kiloemäksen fragmentit leikattiin Xho I:lla irti 8 kloonista, joissa osoittautui olevan oikea insertiosuunta ja oikea restriktioendonukleaasikartta. Kaikkien kloonien nukleotidisekvensseissä havaittiin SEQ ID 13:n tai 14:n sekvenssi, mikä vahvisti että eks-10 pressiovektorit oli muodostettu oikein.
Näin saaduille keksinnön mukaisille ekspressiovek-toreille annettiin nimiksi pCDM-GAG-UTMl ja pCDM-GAG-UTM2 (Kuvio 1) ja vektorit sisältävälle transformantille annettiin nimeksi E. coli MC1061/P3 (pCDM-GAG-UTMl) ja E. coli 15 MC1061/P3 (pCDM-GAG-UTM2).
Esimerkki 3
Trombiinia sitovan aineen ekspressio viljellyissä nisäkässoluissa COS7-solut transfektoitiin pCDM-GAG-UTMl:llä tai 20 pCDM-GAG-UTM2:11a DEAE-dekstraanimenetelmällä [Seed, B. ja Aruffo, A., Proc. Natl. Acad. Sei., USA, 84, 3365 - 3369 (1987)] . 5 x 10s solua siirrostettiin 60 mm viljelymaljalle ja seuraavana päivänä viljelmäelatusaine imettiin pois ja korvattiin 2 ml :11a Dulbeccon muokattua minimielatus-: 25 ainetta (DMEM), joka sisälsi 10 % Nu-seerumia. 10 μg (1 Mg/μΙ) pCDM-GAG-UTMl:ta tai pCDM-GAG-UTM2:ta lisättiin 100 μ1:33η10 mg/ml DEAE-dekstraaniliuosta (keskimääräinen molekyylipaino 5 x 10s, Pharmacian tuote) PBS:ssä, ja tuloksena oleva liuos sekä 10 μΐ 20 mM klorokiinia lisättiin 30 soluviljelyliemeen. 4 tunnin viljelyn jälkeen 37 °C:n läm-• Potilassa, viljelyelatusaine imettiin pois ja 2 ml 10 % DMS0:ta (PBS:een liuotettuna) lisättiin. Seoksen annettiin seistä hiljaa huoneenlämpötilassa 2 minuutin ajan. Sen jälkeen kun DMSO-liuos oli imetty pois, lisättiin 3 ml 35 DMEM:ia, joka sisälsi 10 % FCS:ia, ja seosta viljeltiin t 104254 37 °C:n lämpötilassa 24 tuntia. Viljelyelatusaine korvattiin DMEM:11a joka ei sisältänyt FCS:ia, jonka jälkeen viljelyä jatkettiin vielä toiset 48 tuntia. Viljelyn jälkeen supernatantti kerättiin.
5 Yllä mainitulla menetelmällä saatu viljelyelatus aine pantiin kulkemaan 1 ml Sepharose 4B-pylvään läpi (2 mg IgG/ml hartsia) , johon oli kytketty monoklonaalinen vasta-aine A - 73 (julkiseksi tullut JP-patenttijulkaisu (Kokai) 45 398/1989; 2 mg IgG/ml hartsia). Pylväs pestiin 10 (1) 2 ml :11a 0,02 M Tris-HCl-puskuria (pH 7,4), joka oli 0,1 M NaCl:n suhteen, (2) 20 ml :11a 0,02 M Tris-HCl-puskuria (pH 7,4), joka oli 1 M NaClm ja 0,05 % Tween 20:n suhteen, ja (3) 5 ml 0,02 M Tris-HCl-puskuria (pH 7,4), joka oli 1 M NaCl:n suhteen, jota seurasi eluutio 5 ml :11a 15 0,02 M Tris-HCl- puskuria (pH 7,4), joka oli 2 M natrium- tiosyanaatin, 5 mM EDTA:n ja 1 M NaCl:n suhteen. Eluaatti dialysoitiin 50 mM asetaattipuskuria vastaan, joka oli 0,1 M NaClm suhteen (pH 4,5) ja puhdistettiin pylväässä Mono-Q-sepharosella. Pylväs pestiin samalla puskurilla ja 20 eluoitiin lineaarisella gradientilla 0,1 - 2 M NaCl 50 mM asetaattipuskurissa (pH 4,5), jolloin saatiin puhdistetut trombiinia sitovat aineet (r-GAG-UTMl ja r-GAG-UTM2).
Esimerkki 4
Viljeltyjen nisäkässolujen trombiinia sitovan ain-: 25 een ekspressio CHO *K1-solut transfektoitiin pCDM-GAG-UTMl:11a kal-siumfosfaattimenetelmällä [Gorman, C., "DNA Cloning" IRL Press, Englanti, voi. 2, 143 - 190 (1985)] . 5 x 10s CHO-K1 -solua siirrostettiin 10 cm petrimaljalle ja seuraavana 30 päivänä viljelyelatusaine (Ham F12 -elatusaine, joka si-sälsi 10 % FCS:ia, ja johon tästä lähtien viitataan nimellä Elatusaine) vaihdettiin. Neljä (4) tuntia sen jälkeen lisättiin DNA:n ja kalsiumfosfaatin yhdessä saostunut sakka. Tässä käytetty yhdessä saostunut sakka valmistettiin 35 seuraavalla tavalla. 20 μg pCDM-GAG-UTMl:ia ja 100 ng neo- • is 104254 mysiiniresistenssigeeniä liuotettiin 450 μΐ-.aan 1 mM Tris-HCl-puskuria (pH 8,0) - 0,1 mM EDTA ja sekoitettiin 50 /xl:aan 2,5 M kalsiumkloridia. Seos lisättiin tipoittain 500 μ1:33η liuosta: 50 mM HEPES (pH 7,12) - 280 mM NaCl-5 1,5 mM natriumvetyfosfaatti, ja sen jälkeen kun sen oli annettu seistä hiljaa, liuos lisättiin soluviljelyelatus-aineeseen 24 tunnin viljelyn ajaksi. Elatusaine vaihdettiin tuoreeseen ja viljeltiin toiset 24 tuntia, jonka jälkeen elatusaine korvattiin selektiivisellä elatusaineella, 10 joka sisälsi 400 μ9/πι1 G418:aa. 2 viikon jälkeen tuotetut pesäkkeet siirrettiin 24-kuoppaiselle levylle ja viljeltiin jatkuvasti niin kauan, että viljelmä oli konfluentti. Supernatantti kerättiin viljelmän elatusaineesta. Eritetty trombiinia sitova aine (r-GAG-UTMl) analysoitiin kvantita-15 tiivisesti hyvin tuottavien kloonien valikoimiseksi. Kloonausta jatkettiin edelleen valitulle kloonille laimennos-sarjamenetelmää käyttäen. Näin saaduille transformoiduille soluille annettiin nimi CHO-GUTM 1 - 8 ja ne talletettiin Fermentation Research Institute -laitokseen. Agency of 20 Industrial Science and Technology (FERM P-3260). Transformoitua solua CHO-GUTM 1-8 viljeltiin UC202-elatusainees-sa (Nissui Pharmaceutial -yhtiön tuote), jossa oli 1 % FCS, 225 cm2 pullossa, niin että se tuli täyteen, jonka jälkeen elatusaine korvattiin 50 ml:11a UC202-elatusainet- : 25 ta joka ei sisältänyt FCS:ia. 1 viikon jälkeen viljelmän supernatantti kerättiin ja lisättiin sama määrä tuoretta elatusainetta, joka ei sisältänyt FCS:ia. Kun oli vielä viljelty 1 viikko, viljelmän supernatantti kerättiin ja sen vahvistettiin sisältävän siihen eritettynä 3 -4 μ^/ναΐ 30 trombiinia sitovaa ainetta.
·. Puhdistettu trombiinia sitova aine saatiin saman menetelmän mukaan kuin esimerkin 3 jälkiosassa.
« · 16 104254
Esimerkki 5
Trombiinia sitovan aineen piirteitä
Suoritettiin SDS-PAGE Laemmlin menetelmän mukaisesti (Nature, 227. 680-685) puhdistetuille trombiinia sito-5 ville aineille. Proteiini siirrettiin PVDF-membraanille Matsudairan menetelmän mukaisesti f J. Biol. Chem.. 262 (21) , 10035 - 10038] . PVDF-membraani saatettiin sitten reagoimaan 0,05 M Tris-HCl-puskurissa (TBS), joka oli 0,1 % naudan seerumin albumiinin ja 0,1 M NaCl:n suhteen, 10 huoneenlämmössä 2 tunnin ajan. Sen jälkeen kun liuos oli poistettu, jäännös pestiin perusteellisesti TBS-0,05 % Tween 20 -liuoksella ja saatettiin reagoimaan piparjuuri-peroksidaasiin konjugoidun monoklonaalisen vasta-aineen A-60 kanssa TBS-0,05 % Tween 20 -liuoksessa huoneenlämmössä 15 1 tunnin ajan. Liuos poistettiin ja jäännös pestiin perus teellisesti 0,05 % Tween 20-TBS -liuoksella ja pantiin värjäytymään 50 ml:aan etikkahappopuskuria (pH 5,0), joka sisälsi 5 mg 3-amino-9-etyylikarbatsolia ja 25 μΐ 30 % vetyperoksidia, jolloin saatiin vahvistettua leveä juova, 20 joka on luonteenomainen glykosaminoglykaani-additiotuot-teille.
Esimerkki 6 r-UTM:ia ja r-GAG-UTMl:tä ja 2:ta, jotka ovat keksinnön mukaisesti saatuja trombiinia sitovia aineita, kä-: 25 siteltiin kutakin 0,1 μg/ml pitoisuuksina 5 μΐιΐΐθ kon- droitinaasia (10 mU, Seikagaku Kogyo K.K.:n tuote) 37 °C:n lämpötilassa 40 minuutin ajan. Immunoblottaus suoritettiin samalla tavalla kuin esimerkissä 5, jotta saatiin vahvistettua kondroiittisulfaattityyppisten kovalenttisten gly-30 kosaminoglykaanisidosten läsnäolo trombiinia sitovissa ai-·. neissa.
Esimerkki 7
Anti-koagulantti-aktiivisuus
Keksinnön mukaisesti saadut trombiinia sitova ai-35 neet rUTM ja r-GAG-UTMl ja 2, 2,5 μg/ml kukin, sekoitet- « 104254 tiin ihmisen fibrinogeenin (2,5 mg/ml) ja ihmisen antit-rombiini III :n kanssa (0 tai 250 /zg/ml) , ja liuotettiin 5 mM CaCl2-liuokseen. Naudan trombiinia (0,5 U/ml) lisättiin liuoksiin hyytymisajan mittaamiseksi. Tulokset esite-5 tään taulukossa 1.
Taulukko 1
Kontrolli (sek.) r-UTM (sek.) r-GAG-UTMl (sek.) r-GAG-UTM2 (sek.) 10 ATIII (-) 43,3 61,8 77,2 80,1 ATIII (+) 49,5 80,8 >400 >400
Taulukko 1 osoittaa, että trombiinia sitovat aineet 15 hidastavat veren hyytymistä yhdistymällä trombiiniin. An- titrombiini III:n läsnäolon aiheuttama trombiinia sitovien aineiden anti-koagulantti-aktiivisuuden huomattava nousu näkyy myös.
Esimerkki 8 20 Anti-koagulantti-aktxi. visuus rUTM (9-90 nM), tai keksinnön mukaisesti saadun trombiinia sitovan aineen r-GAG-UTMl tai r-GAG-UTM2 (9 -90 nM) , jotka oli liuotettu liuokseen, joka sisälsi naudan fibrinogeeniä (1 mg/ml) 20 mM Tris-HCl-puskurissa 25 (pH 7,4), joka oli 0,15 M NaCl:n suhteen, sekoitettiin . naudan trombiinin kanssa (18 nM), jotta saataisiin mitat- tua koaguloitumiseen vaadittava aika. Kalibrointikäyrän perusteella, joka oli tehty käyttämällä eri konsentraati-oissa naudan trombiinia, määritettiin 50-%:isen eston ai-30 heuttavat konsentraatiot (IC50). Tulokset näytetään taulukossa 2.
18 104254
Taulukko 2 IC50 (nM) 5 r-UTM 80 r-GAG-UTMl 16 r-GAG-UTM2 15 10 Esimerkki 9
Anti-koagulantti-aktiivisuus
Keksinnön mukaisesti saatuja (17 nM) aineita tai r-UTM:ia (17 nM), jotka oli liuotettu liuokseen, joka sisälsi naudan fibrinogeeniä (1 mg/ml) 20 mM Tris-HCl-puskuris- 15 sa (pH 7,4), joka oli 0,15 mM NaCl:n suhteen, sekoitettiin naudan trombiinin kanssa (18 nM), jotta saataisiin mitattua hyytymiseen vaadittava aika. Tulokset esitetään taulukossa 3 .
Taulukko 3 20 _
Koagulaatioaika (s)
Kontrolli 28,1 r-UTM 29,6 : 25 r-GAG-UTMl 300,0 r-GAG-UTM2 295,3
Esimerkki 10 30 Verihiutaleiden kasaantumista estävä aktiivisuus * 8 μΐ:aan keksinnön mukaisesti saadun aineen liuosta (10‘6 - 10~8) ja verihiutalepitoiseen plasmaan (PRP) (200 μΐ) , joka oli valmistettu kanin korvalaskimosta otetusta verestä, lisättiin 2 μΜ adenosiinidifosfaattia (ADP) veri- 35 hiutaleiden kasaantumisen mittaamista varten. 50 % estymi- 104254 sen aiheuttava konsentraatio, se on: keksinnön mukaisesti saatujen yhdisteiden se konsentraatio, joka estää ADP:n aiheuttaman kasaantumisen, ja joka määritettiin sen kalib-rointikäyrän perusteella, joka valmistettiin käyttäen 5 ADP:tä eri konsentraatioissa, oli 2 x 10'7 M r-GAG-UTMl:lie ja 2,1 x 10"7 M r-GAG-UTM2:lie. r-UTM ei osoittanut kasaantumista estävää aktiivisuutta testatulla konsentraatioalu-eella (10'6 - 10'8 M) .
Esimerkki 11 10 Muutokset veren konsentraatiossa
Katetri työnnettiin nukutetun Wistar-rotan (koiras-puolinen) oikeaan reisilaskimoon ja katetrin läpi annettiin nopeasti 1 mg/ml/kg testattuja yhdisteitä, r-GAG-UTMl ja r-UTM2. Verinäytteet, 0,1 ml kukin, jotka oli otettu 15 ennen antoa ja 1, 3, 6, 10, 20, 30, 60 ja 120 minuuttia annon jälkeen, sekoitettiin hepariinin kanssa ja ne palvelivat plasmanäytteinä, joista määritettiin konsentraatio veressä. Veressä olevan konsentraation mittaus tehtiin kaksikerros-ELISA-menetelmän avulla käyttäen ihmisen 20 trombiinia sitovan proteiinin vastaista monoklonaalista vasta-ainetta. Molempien testattujen yhdisteiden havaittiin olevan analysoitavissa yksitilamenetelmällä. Tulokset esitetään seuraavassa taulukossa.
: 25 Taulukko 4 r-GAG-UTMl r-UTM (n=5) T1/2 (min) 75,2 ± 10,8 45,4 ± 2,6 30 AUC (min -/zg/ml 1380 ± 64 872 ± 64
Kuten yllä havainnollisesti esitetään, keksinnön mukaisesti saadut trombiinia sitovat aineet edistävät an-35 titrombiini III:n aktiivisuutta ja estävät verihiutaleiden kasaantumista, ja omaavat itsessään antitrombiini-aktiivi- 104254 suutta. Täten ne ovat hyödyllisiä anti-koagulantti-aineiden vaikuttavana komponenttina. Lisäksi keksinnön mukaisesti saatua trombiinia sitovaa ainetta voidaan tuottaa halvalla suuressa mittakaavassa.
5 On ilmeistä, että yllä olevien oppien valossa monet tämän keksinnön muokkaukset ja variaatiot ovat mahdollisia. On näin ollen ymmärrettävä, että mukana olevien patenttivaatimusten suoja-alan sisällä keksintöä voidaan soveltaa muutenkin kuin tässä erityisesti kuvataan.
10 Sekvenssilistaukset 1. SEQ ID nro 1 2. Sekvenssin pituus: 476 3. Sekvenssin tyyppi: aminohappo 4. Sekvenssin topologia: lineaarinen 15 5. Laatu: proteiini 6. Sekvenssi
Ala Pro Ala Glu Pro Gin Pro G1y Gly Ser Gin Cys Vai Glu His Asp 5 10 15
Cys Phe Ala Leu Tyr Pro Gly Pro Ala Thr Phe Leu Asn Ala Ser Gin 20 20 25 30
Ile Cys Asp Gly Leu Arg Gly His Leu Met Thr Vai Arg Ser Ser Vai 35 40 45
Ala Ala Asp Vai Ile Ser Leu Leu Leu Asn Gly Asp Gly Gly Vai Gly 50 55 60
Arg Arg Arg Leu Trp Ile Gly Leu Gin Leu Pro Pro Gly Cys Gly Asp ·· 25 55 70 75 80
Pro Lys Arg Leu Gly Pro Leu Arg Gly Phe Gin Trp Vai Thr Gly Asp 85 90 95
Asn Asn Thr Ser Tyr Ser Arg Trp Ala Arg Leu Asp Leu Asn Gly Ala 100 105 110
Pro Leu Cys Gly Pro Leu Cvs Vai Ala Vai Ser Ala Ala Glu Ala Thr 30 115 " 120 125
Vai Pro Ser Glu Pro Ile Trp Glu Glu Gin Gin Cys Glu Vai Lys Ala 130 135 140
Asp Gly Phe Leu Cys Glu Phe His Phe Pro Ala Thr Cys Arg Pro Leu 145 150 155 160
Ala Vai Glu Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Vai Ser Ile Thr Tyr Gly 35 165 170 175
Thr Pro Phe Ala Ala Arg Gly Ala Asp Phe Gin Ala Leu Pro Vai Gly 180 185 190 2i 104254
Ser Ser Ala Ala Val Ala Pro Leu Gly Leu Gin Leu Met Cys Thr Ala 195 200 205
Pro Pro Gly Ala Val Gin Gly His Trp Ala Arg Glu Ala Pro Gly Ala 210 215 220 c Trp Asp Cys Ser Val Glu Asn Gly Gly Cys Glu His Ala Cys Asn Ala 225 230 235 240 lie Pro Gly Ala Pro Arg Cys Gin Cys Pro Ala Gly Ala Ala Leu Gin 245 250 255
Ala Asp Gly Arg Ser Cys Thr Ala Ser Ala Thr Gin Ser Cys Asn Asp 260 265 270 10
Leu Cys Glu His Phe Cys Val Pro Asn Pro Asp Gin Pro Gly Ser Tyr 275 280 285
Ser Cys Met Cys Glu Thr Gly Tyr Arg Leu Ala Ala Asp Gin His Arg 290 295 300 ic Cys Glu Asp Val Asp Asp Cys lie Leu Glu Pro Ser Pro Cys Pro Gin 305 310 315 320
Arg Cys Val Asn Thr Gin Gly Gly Phe Glu Cys His Cys Tyr Pro Asn 325 330 335
Tyr Asp Leu Val Asp Gly Glu Cys Val Glu Pro Val Asp Pro Cys Phe 340 345 350 20
Arg Ala Asn Cys Glu Tyr Gin Cys Gin Pro Leu Asn Gin Thr Ser Tyr 355 360 365
Leu Cys Val Cys Ala Glu Gly Phe Ala Pro He Pro His Glu Pro His 370 375 380 25 Arg Cys Gin Met Phe Cys Asn Gin Thr Ala Cys Pro Ala Asp Cys Asp I 385 390 395 400
Pro Asn Thr Gin Ala Ser Cys Glu Cys Pro Glu Gly Tyr lie Leu Asp 405 410 415
Asp Gly Phe He Cys Thr Asp lie Asp Glu Cys Glu Asn Gly Gly Phe 420 425 430 30
Cys Ser Gly Val Cys His Asn Leu Pro Gly Thr Phe Glu Cys He Cys 435 440 445
Gly Pro Asp Ser Ala Leu Val Arg His He Gly Thr Asp Cys Asp Ser 450 455 460 1
Gly Lys Val Asp Glu Asp Tyr Ser Gly Ser Gly Glu 465 470 475 22 1 0 4 2 5 4 1. SEQ ID nro 2 2. Sekvenssin pituus: 476 3. Sekvenssin tyyppi: aminohappo 4. Sekvenssin topologia: lineaarinen 5 5. Laatu: proteiini 6. Sekvenssi
Ala Pro Ala Glu Pro Gin Pro Gly Gly Ser Gin Cys Vai Glu His Asd 10 5 10 15
Cys Phe Ala Leu Tyr Pro Gly Pro Ala Thr Phe Leu Asn Ala Ser Gin 20 25 30
Ile Cys Asp Gly Leu Arg Gly His Leu Met Thr Vai Arg Ser Ser Vai 35 40 45 15
Ala Ala Asp Vai Ile Ser Leu Leu Leu Asn Gly Asp Gly Gly Vai Glv 50 55 60
Arg Arg Arg Leu Trp Ile Gly Leu Gin Leu Pro Pro Gly Cys Gly Asd 65 70 75 80
Pro Lys Arg Leu Gly Pro Leu Arg Gly Phe Gin Trp Vai Thr Gly Asp 20 85 90 95
Asn Asn Thr Ser Tyr Ser Arg Trp Ala Arg Leu Asp Leu Asn Gly Ala 100 105 110
Pro Leu Cys Gly Pro Leu Cys Vai Ala Vai Ser Ala Ala Glu Ala Thr 115 120 125 25
Vai Pro Ser Glu Pro Ile Trp Glu Glu Gin Gin Cys Glu Vai Lys Ala 130 135 140
Asp Gly Phe Leu Cys Glu Phe His Phe Pro Ala Thr Cys Arg Pro Leu 1^5 150 155 160 or. Ala Val 01u Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Vai Ser Ile Thr Tyr Gly 30 165 170 175 *·] Thr Pro Phe Ala Ala Arg Gly Ala Asp Phe Gin Ala Leu Pro Vai Gly 180 185 190
Ser Ser Ala Ala Vai Ala Pro Leu Gly Leu Gin Leu Met Cys Thr Ala 195 200 205 35 104254
Pro Pro Gly Ala Vai Gin Gly His Trp Ala Arg Glu Ala Pro Gly Ala 210 215 220
Trp Asp Cys Ser Val Glu Asn Gly Gly Cys Glu His Ala Cys Asn Ala 225 230 235 240 5 lie Pro Gly Ala Pro Arg Cys Gin Cys Pro Ala Gly Ala Ala Leu Gin 245 250 255
Ala Asp Gly Arg Ser Cys Thr Ala Ser Ala Thr Gin Ser Cys Asn Asp 260 265 270
Leu Cys Glu His Phe Cys Val Pro Asn Pro Asp Gin Pro Gly Ser Tyr 10 275 280 285
Ser Cys Met Cys Glu Thr Gly Tyr Arg Leu Ala Ala Asp Gin His Arg 290 295 300
Cys Glu Asp Val Asp Asp Cys lie Leu Glu Pro Ser Pro Cys Pro Gin 305 310 315 320 15
Arg Cys Val Asn Thr Gin Gly Gly Phe Glu Cys His Cys Tyr Pro Asn 325 330 335
Tyr Asp Leu Val Asp Gly Glu Cys Val Glu Pro Val Asp Pro Cys Phe 340 345 350
Arg Ala Asn Cys Glu Tyr Gin Cys Gin Pro Leu Asn Gin Thr Ser Tyr 20 355 360 365
Leu Cys Val Cys Ala Glu Gly Phe Ala Pro lie Pro His Glu Pro His 370 375 380
Arg Cys Gin Met Phe Cys Asn Gin Thr Ala Cys Pro Ala Asp Cys Asp 385 390 395 400 25 I Pro Asn Thr Gin Ala Ser Cys Glu Cys Pro Glu Gly Tyr He Leu Asp 405 410 415
Asp Gly Phe Ile Cys Thr Asp He Asp Glu Cys Glu Asn Gly Gly Phe 420 425 430
Cys Ser Gly Val Cys His Asn Leu Pro Gly Thr Phe Glu Cys lie Cys 30 435 440 445 : Gly Pro Asp Ser Ala Leu Val Arg His He Gly Thr Asp Cys Asp Ser 450 455 460
Gly Lys Val Asp Asp Glu Ala Ser Gly Ser Gly Asp 465 470 475 35 24 1C4254 1. SEQ ID nro 3 2. Sekvenssin pituus: 1428 3. Sekvenssin tyyppi: nukleiinihappo 4. Juosteisuus: kaksijuosteinen 5 5. Sekvenssin topologia: lineaarinen 6. Laatu: cDNA mRNA:ksi 7. Sekvenssi 10 GCACCCGCAG AGCCGCAGCC GGGTGGCAGC CAGTGCGTCG AGCACGACTG CTTCGCGCTC 60 TACCCGGGCC CCGCGACCTT CCTCAATGCC AGTCAGATCT GCGACGGACT GCGGGGCCAC 120 CTAATGACAG TGCGCTCCTC GGTGGCTGCC GATGTCATTT CCTTGCTACT GAACGGCGAC 180 GGCGGCGTTG GCCGCCGGCG CCTCTGGATC GGCCTGCAGC TGCCACCCGG CTGCGGCGAC 240 15 CCCAAGCGCC TCGGGCCCCT GCGCGGCTTC CAGTGGGTTA CGGGAGACAA CAACACCAGC 300 TATAGCAGGT GGGCACGGCT CGACCTCAAT GGGGCTCCCC TCTGCGGCCC GTTGTGCGTC 360 GCTGTCTCCG CTGCTGAGGC CACTGTGCCC AGCGAGCCGA TCTGGGAGGA GCAGCAGTGC 420 GAAGTGAAGG CCGATGGCTT CCTCTGCGAG TTCCACTTCC CAGCCACCTG CAGGCCACTG 480 20 GCTGTGGAGC CCGGCGCCGC GGCTGCCGCC GTCTCGATCA CCTACGGCAC CCCGTTCGCG 540
GCCCGCGGAG CGGACTTCCA GGCGCTGCCG GTGGGCAGCT CCGCCGCGGT GGCTCCCCTC 6PU
GGCTTACAGC TAATGTGCAC CGCGCCGCCC GGAGCGGTCC AGGGGCACTG GGCCAGGGAG 660 25 GCGCCGGGCG CTTGGGACTG CAGCGTGGAG AACGGCGGCT GCGAGCACGC GTGCAATGCG 720 ATCCCTGGGG CTCCCCGCTG CCAGTGCCCA GCCGGCGCCG CCCTGCAGGC AGACGGGCGC 780 TCCTGCACCG CATCCGCGAC GCAGTCCTGC AACGACCTCT GCGAGCACTT CTGCGTTCCC 840 AACCCCGACC AGCCGGGCTC CTACTCGTGC ATGTGCGAGA CCGGCTACCG GCTGGCGGCC 900 30 GACCAACACC GGTGCGAGGA CGTGGATGAC TGCATACTGG AGCCCAGTCC GTGTCCGCAG 960 CGCTGTGTCA ACACACAGGG TGGCTTCGAG TGCCACTGCT ACCCTAACTA CGACCTGGTG 1020 GACGGCGAGT GTGTGGAGCC CGTGGACCCG TGCTTCAGAG CCAACTGCGA GTACCAGTGC 1080 CAGCCCCTGA ACCAAACTAG CTACCTCTGC GTCTGCGCCG AGGGCTTCGC GCCCATTCCC 1140 35 25 104254 CACGAGCC6C ACAGGTGCCA GATGTTTTGC AACCAGACTG CCTGTCCAGC CGACTGCGAC 1200 CCCAACACCC AGGCTAGCTG TGAGTGCCCT GAAGGCTACA TCCTGGACGA CGGTTTCATC 1260 TGCACGGACA TCGACGAGTG CGAAAACGGC GGCTTCTGCT CCGGGGTGTG CCACAACCTC 1320 5 CCCGGTACCT TCGAGTGCAT CTGCGGGCCC GACTCGGCCC TTGTCCGCCA CATTGGCACC 1380 GACTGTGACT CCGGCAAGGT GGACGAGGAC TATAGCGGCT CTGGCGAG 1428 1. SEQ ID nro 4 10 2. Sekvenssin pituus: 1428 3. Sekvenssin tyyppi: nukleiinihappo 4. Juosteisuus: kaksijuosteinen 5. Sekvenssin topologia: lineaarinen 6. Laatu: cDNA mRNA:ksi 15 7. Sekvenssi GCACCCGCAG AGCCGCAGCC GGGTGGCAGC CAGTGCGTCG AGCACGACTG CTTCGCGCTC 60 20 TACCCGGGCC CCGCGACCTT CCTCAATGCC AGTCAGATCT GCGACGGACT GCGGGGCCAC 120 CTAATGACAG TGCGCTCCTC GGTGGCTGCC GATGTCATTT CCTTGCTACT GAACGGCGAC 180 GGCGGCGTTG GCCGCCGGCG CCTCTGGATC GGCCTGCAGC TGCCACCCGG CTGCGGCGAC 240 CCCAAGCGCC TCGGGCCCCT GCGCGGCTTC CAGTGGGTTA CGGGAGACAA CAACACCAGC 300 25 TATAGCAGGT GGGCACGGCT CGACCTCAAT GGGGCTCCCC TCTGCGGCCC GTTGTGCGTC 360 GCTGTCTCCG CTGCTGAGGC CACTGTGCCC AGCGAGCCGA TCTGGGAGGA GCAGCAGTGC 420 GAAGTGAAGG CCGATGGCTT CCTCTGCGAG TTCCACTTCC CAGCCACCTG CAGGCCACTG 480 GCTGTGGAGC CCGGCGCCGC GGCTGCCGCC GTCTCGATCA CCTACGGCAC CCCGTTCGCG 540 30 GCCCGCGGAG CGGACTTCCA GGCGCTGCCG GTGGGCAGCT CCGCCGCGGT GGCTCCCCTC 600 GGCTTACAGC TAATGTGCAC CGCGCCGCCC GGAGCGGTCC AGGGGCACTG GGCCAGGGAG 660 GCGCCGGGCG CTTGGGACTG CAGCGTGGAG AACGGCGGCT GCGAGCACGC GTGCAATGCG 720 ATCCCTGGGG CTCCCCGCTG CCAGTGCCCA GCCGGCGCCG CCCTGCAGGC AGACGGGCGC 780 35 26 104254 TCCTGCACCG CATCCGCGAC GCAGTCCTGC AACGACCTCT GCGAGCACTT CTGCGTTCCC 810
AACCCCGACC AGCCGGGCTC CTACTCGTGC ATGTGCGAGA CCGGCTACCG GCTGGCGGCC 90U
GACCAACACC GGTGCGAGGA CGTGGATGAC TGCATACTGG AGCCCAGTCC GTGTCCGCAG 960 5 CGCTGTGTCA ACACACAGGG TGGCTTCGAG TGCCACTGCT ACCCTAACTA CGACCTGGTG 1020 GACGGCGAGT GTGTGGAGCC CGTGGACCCG TGCTTCAGAG CCAACTGCGA GTACCAGTGC 1000 CAGCCCCTGA ACCAAACTAG CTACCTCTGC GTCTGCGCCG AGGGCTTCGC GCCCATTCCC 1140 CACGAGCCGC ACAGGTGCCA GATGTTTTGC AACCAGACTG CCTGTCCAGC CGACTGCGAC 1200 10 CCCAACACCC AGGCTAGCTG TGAGTGCCCT GAAGGCTACA TCCTGGACGA CGGTTTCATC 1260 TGCACGGACA TCGACGAGTG CGAAAACGGC GGCTTCTGCT CCGGGGTGTG CCACAACCTC 1320 CCCGGTACCT TCGAGTGCAT CTGCGGGCCC GACTCGGCCC TTGTCCGCCA CATTGGCACC 1300 GACTGTGACT CCGGCAAGGT CGACGACGAG GCCAGCGGCT CTGGCGAC 1420 15 1. SEQ ID nro 5 2. Sekvenssin pituus: 21 3. Sekvenssin tyyppi: nukleiinihappo 4. Juosteisuus: yksijuosteinen 20 5. Sekvenssin topologia: lineaarinen
6. Laatu: muu nukleiinihappo, syntetisoitu DNA
7. Sekvenssi
AGGGCCGGGC ACTTATAAAC T
;· 25 1. SEQ ID nro 6 2. Sekvenssin pituus: 21 3. Sekvenssin tyyppi: nukleiinihappo 4. Juosteisuus: yksijuosteinen 30 5. Sekvenssin topologia: lineaarinen
.* 6. Laatu: muu nukleiinihappo, syntetisoitu DNA
7. Sekvenssi 1
CCCAGTGGTC CAGTGACGTC A
1Q4254 1. SEQ ID nro 7 2. Sekvenssin pituus: 39 3. Sekvenssin tyyppi: nukleiinihappo 4. Juosteisuus: yksijuosteinen 5 5. Sekvenssin topologia: lineaarinen
6. Laatu: muu nukleiinihappo, syntetisoitu DNA
7. Sekvenssi
CTTCGAGTGC ATCTGCGGGC CCGACTCGGC CCTTGTCCG
10 1. SEQ ID nro 8 2. Sekvenssin pituus: 49 3. Sekvenssin tyyppi: nukleiinihappo 4. Juosteisuus: yksijuosteinen 15 5. Sekvenssin topologia: lineaarinen
6. Laatu: muu nukleiinihappo, syntetisoitu DNA
7. Sekvenssi
ATGTGGCGGA CAAGGGCCGA GTCGGGCCCG CAGATGCACT CGAAGGTAC
20 1. SEQ ID nro 9 2. Sekvenssin pituus: 65 3. Sekvenssin tyyppi: nukleiinihappo 4. Juosteisuus: yksijuosteinen ; 25 5. Sekvenssin topologia: lineaarinen
6. Laatu: muu nukleiinihappo, syntetisoitu DNA
7. Sekvenssi CCACATTGGC ACCGACTGTG ACTCCGGCAA GGTGGACGAG GACTATAGCG GCTCTGGCGA 60 30 GTGAC 65 1. SEQ ID nro 10 2. Sekvenssin pituus: 63 3. Sekvenssin tyyppi: nukleiinihappo 4. Juosteisuus: yksijuosteinen 35 5. Sekvenssin topologia: lineaarinen 28 104254
6. Laatu: muu nukleiinihappo, syntetisoitu DNA
7. Sekvenssi TCGAGTCACT CGCCAGAGCC GCTATAGTCC TCGTCCACCT TGCCGGAGTC ACAGTCGGTG 60 5 CCA 63 1. SEQ ID nro 11 2. Sekvenssin pituus: 65 3. Sekvenssin tyyppi: nukleiinihappo 4. Juosteisuus: yksijuosteinen 10 5. Sekvenssin topologia: lineaarinen
6. Laatu: muu nukleiinihappo, syntetisoitu DNA
7. Sekvenssi CCACATTGGC ACCGACTGTG ACTCCGGCAA GGtcGACGAC GAGGCCAGCG GCTCTGGCGA 60 15 CTGAC 65 1. SEQ ID nro 12 2. Sekvenssin pituus: 63 3. Sekvenssin tyyppi: nukleiinihappo 4. Juosteisuus: yksijuosteinen 20 5. Sekvenssin topologia: lineaarinen
6. Laatu: muu nukleiinihappo, syntetisoitu DNA
7. Sekvenssi TCGAGTCAGT CGCCAGAGCC GCTGGCCTCG TCGTCGACCT TGCCGGAGTC ACAGTCGGTG 60 ; 25 CCA 63 1. SEQ ID nro 13 2. Sekvenssin pituus: 1680 3. Sekvenssin tyyppi: nukleiinihappo 4. Juosteisuus: kaksijuosteinen 30 5. Sekvenssin topologia: lineaarinen 6. Laatu: cDNA mRNA:ksi 7. Sekvenssin piirteet:
Ominaispiirteen määrittävä symboli: signaalipeptidi Kohdat: 190 - 243
35 Ominaispiirteen määritysmenetelmä: S
29 104254
Ominaispiirteen määrittävä symboli: kypsä peptidi Kohdat: 244 - 1671 Piirteen määritysmenetelmä: S
8. Sekvenssi 5 CTCGAGCCCT GGCCGATCCG CATGTCAGAG GCTGCCTCGC AGGGGCTGCG CGCAGCGGCA 60 AGAAGTGTCT GGGCTGGGAC GGACAGGAGA GGCTGTCGCC ATCGGCGTCC TGTGCCCCTC 120 TGCTCCGGCA CGGCCCTGTC GCAGTGCCCG CGCTTTCCCC GGCGCCTGCA CGCGGCGCGC 180 10 CTGGGTAAC ATG CTT GGG GTC CTG GTC CTT GGC GCG CTG GCC CTG GCC GGC 231
Met Leu Gly Vai Leu Vai Leu Gly Ala Leu Ala Leu Ala Gly -18 -15 -10 -5 CTG GGG TTC CCC GCA CCC GCA GAG CCG CAG CCG GGT GGC AGC CAG TGC 279
Leu Gly Phe Pro Ala Pro Ala Glu Pro Gin Pro Gly Gly Ser Gin Cys 1 5 10 15 GTC GAG CAC GAC TGC TTC GCG CTC TAC CCG GGC CCC GCG ACC TTC CTC 327
Vai Glu His Asp Cys Phe Ala Leu Tyr Pro Gly Pro Ala Thr Phe Leu 15 20 25 AAT GCC AGT CAG ATC TGC GAC GGA CTG CGG GGC CAC CTA ATG ACA GTG 375
Asn Ala Ser Gin Ile Cys Asp Gly Leu Arg Gly His Leu Met Thr Vai 30 35 40 20 CGC TCC TCG GTG GCT GCC GAT GTC ATT TCC TTG CTA CTG AAC GGC GAC 423
Arg Ser Ser Vai Ala Ala Asp Vai Ile Ser Leu Leu Leu Asn Gly Asp 45 50 55 60 GGC GGC GTT GGC CGC CGG CGC CTC TGG ATC GGC CTG CAG CTG CCA CCC 471
Gly Gly Vai Gly Arg Arg Arg Leu Trp Ile Gly Leu Gin Leu Pro Pro 25 65 70 75 : GGC TGC GGC GAC CCC AAG CGC CTC GGG CCC CTG CGC GGC TTC CAG TGG 519
Gly Cys Gly Asp Pro Lys Arg Leu Gly Pro Leu Arg Gly Phe Gin Trp 80 85 90 GTT ACG GGA GAC AAC AAC ACC AGC TAT AGC AGG TGG GCA CGG CTC GAC 567 30 Vai Thr Gly Asp Asn Asn Thr Ser Tyr Ser Arg Trp Ala Arg Leu Asp 95 100 105 CTC AAT GGG GCT CCC CTC TGC GGC CCG TTG TGC GTC GCT GTC TCC GCT 615
Leu Asn Gly Ala Pro Leu Cys Gly Pro Leu Cys Vai Ala Vai Ser Ala 110 115 120 GCT GAG GCC ACT GTG CCC AGC GAG CCG ATC TGG GAG GAG CAG CAG TGC 663 ^ Ala Glu Ala Thr Vai Pro Ser Glu Pro Ile Trp Glu Glu Gin Gin Cys 125 130 135 140 30 104254 GAA GTG AAG GCC GAT GGC TTC CTC TGC GAG TTC CAC TTC CCA GCC ACC 711
Glu Vai Lys Ala Asp Gly Phe Leu Cys Glu Phe His Phe Pro Ala Thr 145 150 155 TGC AGG CCA CTG GCT GTG GAG CCC GGC GCC GCG GCT GCC GCC GTC TCG 759 c Cys Arg Pro Leu Ala Vai Glu Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Vai Ser 160 165 170 ATC ACC TAC GGC ACC CCG TTC GCG GCC CGC GGA GCG GAC TTC CAG GCG 807
Ile Thr Tyr Gly Thr Pro Phe Ala Ala Arg Gly Ala Asp Phe Gin Ala 175 180 185 CTG CCG GTG GGC AGC TCC GCC GCG GTG GCT CCC CTC GGC TTA CAG CTA 855 10 Leu Pro Vai Gly Ser Ser Ala Ala Vai Ala Pro Leu Gly Leu Gin Leu 190 195 200 ATG TGC ACC GCG CCG CCC GGA GCG GTC CAG GGG CAC TGG GCC AGG GAG 903
Met Cys Thr Ala Pro Pro Gly Ala Vai Gin Gly His Trp Ala Arg Glu 205 210 215 220 15 GCG CCG GGC GCT TGG GAC TGC AGC GTG GAG AAC GGC GGC TGC GAG CAC 951 Ala Pro Gly Ala Trp Asp Cys Ser Vai Glu Asn Gly Gly Cys Glu His 225 230 235 GCG TGC AAT GCG ATC CCT GGG GCT CCC CGC TGC CAG TGC CCA GCC GGC 999
Ala Cys Asn Ala Ile Pro Gly Ala Pro Arg Cys Gin Cys Pro Ala Gly 240 245 250 20 GCC GCC CTG CAG GCA GAC GGG CGC TCC TGC ACC GCA TCC GCG ACG CAG 1047 Ala Ala Leu Gin Ala Asp Gly Arg Ser Cys Thr Ala Ser Ala Thr Gin 255 260 265 TCC TGC AAC GAC CTC TGC GAG CAC TTC TGC GTT CCC AAC CCC GAC CAG 1095
Ser Cys Asn Asp Leu Cys Glu His Phe Cys Vai Pro Asn Pro Asp Gin 270 275 280 . 25 CCG GGC TCC TAC TCG TGC ATG TGC GAG ACC GGC TAC CGG CTG GCG GCC 1143
Pro Gly Ser Tyr Ser Cys Met Cys Glu Thr Gly Tyr Arg Leu Ala Ala 285 290 295 300 GAC CAA CAC CGG TGC GAG GAC GTG GAT GAC TGC ATA CTG GAG CCC AGT 1191
Asp Gin His Arg Cys Glu Asp Vai Asp Asp Cys Ile Leu Glu Pro Ser 30 305 310 315 : CCG TGT CCG CAG CGC TGT GTC AAC ACA CAG GGT GGC TTC GAG TGC CAC 1239
Pro Cys Pro Gin Arg Cys Vai Asn Thr Gin Gly Gly Phe Glu Cys His 320 325 330 TGC TAC CCT AAC TAC GAC CTG GTG GAC GGC GAG TGT GTG GAG CCC GTG 1287 ok Cys Tyr Pro Asn Tyr Asp Leu Vai Asp Gly Glu Cys Vai Glu Pro Vai 335 340 345 3i 104254 GAC CCG TGC TTC AGA GCC AAC TGC GAG TAC CAG TGC CAG CCC CTG AAC 1335
Asp Pro Cys Phe Arg Ala Asn Cys Glu Tyr Gin Cys Gin Pro Leu Asn 350 355 360 CAA ACT AGC TAC CTC TGC GTC TGC GCC GAG GGC TTC GCG CCC ATT CCC 1383
Gin Thr Ser Tyr Leu Cys Val Cys Ala Glu Gly Phe Ala Pro lie Pro 5 365 370 375 380 CAC GAG CCG CAC AGG TGC CAG ATG TTT TGC AAC CAG ACT GCC TGT CCA 1431
His Glu Pro His Arg Cys Gin Met Phe Cys Asn Gin Thr Ala Cys Pro 385 390 395 GCC GAC TGC GAC CCC AAC ACC CAG GCT AGC TGT GAG TGC CCT GAA GGC 1479 10 Ala Asp Cys Asp Pro Asn Thr Gin Ala Ser Cys Glu Cys Pro Glu Gly 400 405 410 TAC ATC CTG GAC GAC GGT TTC ATC TGC ACG GAC ATC GAC GAG TGC GAA 1527
Tyr lie Leu Asp Asp Gly Phe He Cys Thr Asp He Asp Glu Cys Glu 415 420 425 AAC GGC GGC TTC TGC TCC GGG GTG TGC CAC AAC CTC CCC GGT ACC TTC 1575 15 Asn Gly Gly Phe Cys Ser Gly Val Cys His Asn Leu Pro Gly Thr Phe 430 435 440 GAG TGC ATC TGC GGG CCC GAC TCG GCC CTT GTC CGC CAC ATT GGC ACC 1623
Glu Cys He Cys Gly Pro Asp Ser Ala Leu Val Arg His lie Gly Thr 445 450 455 460 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 GAC TGT GAC TCC GGC AAG GTG GAC GAG GAC TAT AGC GGC TCT GGC GAG 1671 2
Asp Cys Asp Ser Gly Lys Val Asp Glu Asp Tyr Ser Gly Ser Gly Glu 3 465 470 475 4 TGACTCGAG 1680 5 1. SEQ ID nro 14 6 2. Sekvenssin pituus: 1680 7 ’ 3. Sekvenssin tyyppi: nukleiinihappo 8 4. Juosteisuus: kaksijuosteinen 9 5. Sekvenssin topologia: lineaarinen 10 6. Laatu: cDNA mRNA:ksi 11 7. Sekvenssin piirteet: 12
Ominaispiirteen määrittävä symboli: signaalipeptidi 13
Kohdat: 190 - 243 14
Piirteen määritysmenetelmä: S
15
Ominaispiirteen määrittävä symboli: kypsä peptidi 16
Kohdat: 244 - 1671
Piirteen määritysmenetelmä: S
8. Sekvenssi 32 104254 CTCGA6CCCT GGCCGATCCG CATGTCAGAG GCTGCCTCGC AGGGGCTGCG CGCAGCGGCA 60 5 AGAAGTGTCT GGGCTGGGAC GGACAGGAGA GGCTGTCGCC ATCGGCGTCC TGTGCCCCTC 120 TGCTCCGGCA CGGCCCTGTC GCAGTGCCCG CGCTTTCCCC GGCGCCTGCA CGCGGCGCGC 180 CTGGGTAAC ATG CTT GGG GTC CTG GTC CTT GGC GCG CTG GCC CTG GCC GGC 231
Met Leu Gly Vai Leu Vai Leu Gly Ala Leu Ala Leu Ala Gly -18 -15 -10 -5 10 CTG GGG TTC CCC GCA CCC GCA GAG CCG CAG CCG GGT GGC AGC CAG TGC 279
Leu Gly Phe Pro Ala Pro Ala Glu Pro Gin Pro Gly Gly Ser Gin Cys 1 5 10 GTC GAG CAC GAC TGC TTC GCG CTC TAC CCG GGC CCC GCG ACC TTC CTC 327
Vai Glu His Asp Cys Phe Ala Leu Tyr Pro Gly Pro Ala Thr Phe Leu 15 20 25 15 AAT GCC AGT CAG ATC TGC GAC GGA CTG CGG GGC CAC CTA ATG ACA GTG 375
Asn Ala Ser Gin Ile Cys Asp Gly Leu Arg Gly His Leu Met Thr Vai 30 35 40 CGC TCC TCG GTG GCT GCC GAT GTC ATT TCC TTG CTA CTG AAC GGC GAC 423
Arg Ser Ser Vai Ala Ala Asp Vai Ile Ser Leu Leu Leu Asn Gly Asp 20 45 50 55 60 GGC GGC GTT GGC CGC CGG CGC CTC TGG ATC GGC CTG CAG CTG CCA CCC 471
Gly Gly Vai Gly Arg Arg Arg Leu Trp Ile Gly Leu Gin Leu Pro Pro 65 70 75 GGC TGC GGC GAC CCC AAG CGC CTC GGG CCC CTG CGC GGC TTC CAG TGG 519 25 Gly Cys Gly Asp Pro Lys Arg Leu Gly Pro Leu Arg Gly Phe Gin Trp : 80 85 90 GTT ACG GGA GAC AAC AAC ACC AGC TAT AGC AGG TGG GCA CGG CTC GAC 567
Vai Thr Gly Asp Asn Asn Thr Ser Tyr Ser Arg Trp Ala Arg Leu Asp 95 100 105 CTC AAT GGG GCT CCC CTC TGC GGC CCG TTG TGC GTC GCT GTC TCC GCT 615
Leu Asn Gly Ala Pro Leu Cys Gly Pro Leu Cys Vai Ala Vai Ser Ala 110 115 120 GCT GAG GCC ACT GTG CCC AGC GAG CCG ATC TGG GAG GAG CAG CAG TGC 663
Ala Glu Ala Thr Vai Pro Ser Glu Pro Ile Trp Glu Glu Gin Gin Cys 35 125 130 135 140 33 104254 GAA GTG AAG GCC GAT GGC TTC CTC TGC GAG TTC CAC TTC CCA GCC ACC 711
Glu Vai Lys Ala Asp Gly Phe Leu Cys Glu Phe His Phe Pro Ala Thr 145 150 155 5 TGC AGG CCA CTG GCT GTG GAG CCC GGC GCC GCG GCT GCC GCC GTC TCG 759
Cys Arg Pro Leu Ala Vai Glu Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Vai Ser 160 165 170 ATC ACC TAC GGC ACC CCG TTC GCG GCC CGC GGA GCG GAC TTC CAG GCG 807
Ile Thr Tyr Gly Thr Pro Phe Ala Ala Arg Gly Ala Asp Phe Gin Ala 175 180 185 10 CTG CCG GTG GGC AGC TCC GCC GCG GTG GCT CCC CTC GGC TTA CAG CTA 855
Leu Pro Vai Gly Ser Ser Ala Ala Vai Ala Pro Leu Gly Leu Gin Leu 190 195 200 ATG TGC ACC GCG CCG CCC GGA GCG GTC CAG GGG CAC TGG GCC AGG GAG 903
Met Cys Thr Ala Pro Pro Gly Ala Vai Gin Gly His Trp Ala Arg Glu 205 210 215 220 15 GCG CCG GGC GCT TGG GAC TGC AGC GTG GAG AAC GGC GGC TGC GAG CAC 951
Ala Pro Gly Ala Trp Asp Cys Ser Vai Glu Asn Gly Gly Cys Glu His 225 230 235 GCG TGC AAT GCG ATC CCT GGG GCT CCC CGC TGC CAG TGC CCA GCC GGC 999
Ala Cys Asn Ala Ile Pro Gly Ala Pro Arg Cys Gin Cys Pro Ala Gly 20 240 245 250 GCC GCC CTG CAG GCA GAC GGG CGC TCC TGC ACC GCA TCC GCG ACG CAG 1047
Ala Ala Leu Gin Ala Asp Gly Arg Ser Cys Thr Ala Ser Ala Thr Gin 255 260 265 TCC TGC AAC GAC CTC TGC GAG CAC TTC TGC GTT CCC AAC CCC GAC CAG 1095
Ser Cys Asn Asp Leu Cys Glu His Phe Cys Vai Pro Asn Pro Asp Gin 270 275 280 CCG GGC TCC TAC TCG TGC ATG TGC GAG ACC GGC TAC CGG CTG GCG GCC 1143
Pro Gly Ser Tyr Ser Cys Met Cys Glu Thr Gly Tyr Arg Leu Ala Ala 285 290 295 300 30 GAC CAA CAC CGG TGC GAG GAC GTG GAT GAC TGC ATA CTG GAG CCC AGT 1191
Asp Gin His Arg Cys Glu Asp Vai Asp Asp Cys Ile Leu Glu Pro Ser 305 310 315 « CCG TGT CCG CAG CGC TGT GTC AAC ACA CAG GGT GGC TTC GAG TGC CAC 1239
Pro Cys Pro Gin Arg Cys Vai Asn Thr Gin Gly Gly Phe Glu Cys His 320 325 330 35 34 104254 TGC TAC CCT AAC TAC GAC CTG GTG GAC GGC GAG TGT GTG GAG CCC GTG 1287
Cys Tyr Pro Asn Tyr Asp Leu Vai Asp Gly Glu Cys Val Glu Pro Val 335 340 345 5 GAC CCG TGC TTC AGA GCC AAC TGC GAG TAC CAG TGC CAG CCC CTG AAC 1335
Asp Pro Cys Phe Arg Ala Asn Cys Glu Tyr Gin Cys Gin Pro Leu Asn 350 355 360 CAA ACT AGC TAC CTC TGC GTC TGC GCC GAG GGC TTC GCG CCC ATT CCC 1383 •Gin Thr Ser Tyr Leu Cys Val Cys Ala Glu Gly Phe Ala Pro lie Pro 365 370 375 380 10 CAC GAG CCG CAC AGG TGC CAG ATG TTT TGC AAC CAG ACT GCC TGT CCA 1431
His Glu Pro His Arg Cys Gin Met Phe Cys Asn Gin Thr Ala Cys Pro 385 390 395 GCC GAC TGC GAC CCC AAC ACC CAG GCT AGC TGT GAG TGC CCT GAA GGC 1479
Ala Asp Cys Asp Pro Asn Thr Gin Ala Ser Cys Glu Cys Pro Glu Gly 400 405 410 15 TAC ATC CTG GAC GAC GGT TTC ATC TGC ACG GAC ATC GAC GAG TGC GAA 1527 Tyr lie Leu Asp Asp Gly Phe Ile Cys Thr Asp He Asp Glu Cys Glu 415 420 425 AAC GGC GGC TTC TGC TCC GGG GTG TGC CAC AAC CTC CCC GGT ACC TTC 1575
Asn Gly Gly Phe Cys Ser Gly Val Cys His Asn Leu Pro Gly Thr Phe 430 435 440 20 GAG TGC ATC TGC GGG CCC GAC TCG GCC CTT GTC CGC CAC ATT GGC ACC 1623
Glu Cys He Cys Gly Pro Asp Ser Ala Leu Val Arg His He Gly Thr 445 450 455 460 GAC TGT GAC TCC GGC AAG GTC GAC GAC GAG GCC AGC GGC TCT GGC GAC 1671
Asp Cys Asp Ser Gly Lys Val Asp Asp Glu Ala Ser Gly Ser Gly Asp 25 465 470 475 TGACTCGAG 1680
Claims (25)
1. Menetelmä trombiinia sitovan aineen tuottamiseksi, jolla on seuraava aminohapposekvenssi 5 AlaProAlaGluProGlnProGlyGlySerGlnCysValGluHisAspCysPheAlaLeu TyrProGlyProAlaThrPheLeuAsnAlaSerGlnlleCysAspGlyLeuArgGlyHis LeuMetThrValArgSerSerValAlaAlaAspValIleSerLeuLeuLeuAsnGlyAsp 10 GlyGIyValGIyArgArgArgLeuTrpIleGlyLeuGlnLeuProProGlyCysGlyAsp PrcLysArgLeuGlyProLeuArgGlyPheGInTrpValThrGlyAspAsnAsnThrSer TyrSerArgTrpAlaArgLeuAspLeuAsnGlyAlaProLeuCysGlyProLeuCysVal AlaValSerAlaAlaGluAlaThrVaIProSerGluProIleTrpGluGluGlnGInCys GluValLysAlaAspGlyPheLeuCysGluPheHisPheProAlaThrCysArgProLeu AlaValGluProGlyAlaAlaAlaAlaAlaValSerIleThrTyrGlyThrProPheAla AlaArgGlyAlaAspPheGlnAlaLeuProValGlySerSerAlaAlaValAlaProLeu
20 GlyLeuGlnLeuMetCysThrAlaProProGlyAlaValGlnGlyHisTrpAlaArgGlu AlaProGlyAlaTrpAspCysSerValGluAsnGlyGlyCysGluHisAlaCysAsnAla IleProGlyAlaProArgCysGlnCysProAlaGlyAlaAlaLeuGlnAlaAspGlyArg SerCysThrAlaSerAlaThrGlnSerCysAsnAspLeuCysGluHisPheCysValPro
25 AsnProAspGlnProGlySerTyrSerCysMetCysGluThrGlyTyrArgLeuAlaA]a AspGInH isArgCysGluAspValAspAspCysIleLeuGluProSerProCysProGIn ArgCysValAsnThrG1nG1yGlyPheGluCysHisCysTyrProAsnTyrAspLeuVal AspGlyGluCysValGluProValAspProCysPheArgAlaAsnCysGluTyrGlnCys
30 GlnProLeuAsnGlnThrSerTyrLeuCysValCysAlaGluGlyPheAlaProI lePro HisGluProHisArgCysGlnMetPheCysAsnGInThrAlaCysProAlaAspCysAsp ProAsnThrGlnAlaSerCysGluCysProGluGlyTyrlleLeuAspAspGlyPhelle CysThrAspIleAspGluCysGluAsnGlyGIyPheCysSerGlyValCysHi sAsnLeu ProGlyThrPheGluCysIleCysGlyProAspSerAlaleuValArgHisIleGIyThr AspCysAspSerGlyLysValAspXl X2 Y1 SerGlySerG1yY2, 36 1 0 4 2 5 4 jossa Xl ja X2 edustavat happamia aminohappoja ja Y1 ja Y2 edustavat mitä tahansa aminohappoja, tunnettu siitä, että viljellään transformoitu solu, joka sisältää rekom-5 binanttivektorin, joka sisältää replikoitavissa olevan vektorin ja DNA-fragmentin, jolla on nukleotidisekvenssi, joka koodittaa mainittua aminohapposekvenssiä, ja kerätään viljeltyjen solujen tuottamat polypep- tidit.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan trombiinia sitova aine, jossa Xl on Glu, X2 on Asp, Y1 on Tyr ja Y2 on Glu.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 15 tunnettu siitä, että valmistetaan trombiinia sitova aine, jossa Xl on Asp, X2 on Glu, Y1 on Ala ja Y2 on Asp.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan trombiinia sito- 20 va aine, joka on glykosyloitu polypeptidi.
5. DNA-fragmentti, tunnettu siitä, että sillä on nukleotidisekvenssi, joka kykenee koodittamaan seuraavaa aminohapposekvenssiä, AlaProAlaGluProGlnProGlyGlySerGlnCysValGluHisAspCysPheAlaLeu ^ TyrProGlyProAlaThrPheLeuAsnAlaSerGInlleCysAspGlyLeuArgGlyHis LeuMetThrValArgSerSerValAlaAlaAspValIleSerleuLeuleuAsnGlyAsp GlyGlyValGlyArgArgArgleuTrpIleGlyLeuGlnleuProProGlyCysGlyAsp ProLysArgLeuGlyProLeuArgGlyPheGlnTrpValThrGlyAspAsnAsnThrSer 30 TyrSerArgTrpAlaArgleuAspLeuAsnGlyAlaProleuCysGlyProLeuCysVal AlaValSerAlaAlaGluAlaThrValProSerGluProIleTrpGluGluGlnGlnCys GluVallysAlaAspGlyPheleuCysGluPheHisPheProAlaThrCysArgProLeu 35 AlaValGluProGlyAlaAlaAlaAlaAlaValSerIleThrTyrGlyThrProPheAla AlaArgGlyAlaAspPheGlnAlaLeuProValGlySerSerAlaAlaValAlaProLeu 37 1 0 4 2 5 4 G1yLeuG1nleuMetCysThrA1aProProG1yA1aVa1G1nG1yH i sTrpA1aArgG1u AlaProGlyAlaTrpAspCysSerValGluAsnGlyGIyCysGluHisAlaCysAsnAla IleProGlyAlaProArgCysGlnCysProAlaGlyAlaAlaleuGInAlaAspGlyArg 5 SerCysThrAlaSerAlaThrGInSerCysAsnAspleuCysGluHisPheCysValPro AsnProAspGlnProGlySerTyrSerCysMetCysGluThrGlyTyrArgLeuAlaAla AspGlnHisArgCysGluAspValAspAspCysIleLeuGluProSerProCysProGln ArgCysValAsnThrGlnGlyGlyPheGluCysHisCysTyrProAsnTyrAspLeuVal 10 AspGlyGluCysValGluProValAspProCysPheArgAlaAsnCysGluTyrGlnCys GlnProLeuAsnGlnThrSerTyrLeuCysValCysAlaGluGlyPheAlaProIlePro HisGluProHisArgCysGlnMetPheCysAsnGlnThrAlaCysProAlaAspCysAsp ProAsnThrGlnAlaSerCysGluCysProGluGlyTyrlleLeuAspAspGlyPhelle 15 CysThrAspIleAspGluCysGluAsnGlyGlyPheCysSerGlyValCysHisAsnLeu ProGlyThrPheGluCysIleCysGlyProAspSerAlaleuValArgHisIleGlyThr AspCysAspSerGlyLysValAspXl X2 Y1 SerGlySerGlyY2, jossa Xl ja X2 edustavat happamia aminohappoja ja Y1 ja Y2 20 edustavat mitä tahansa aminohappoja.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen DNA-fragmentti, tunnettu siitä, että Xl on Glu, X2 on Asp, Yl on Tyr ja Y2 on Glu.
7. Patenttivaatimuksen 5 mukainen DNA-fragmentti, : 25 tunnettu siitä, että Xl on Asp, X2 on Glu, Yl on Ala ja Y2 on Asp.
8. Patenttivaatimuksen 5 mukainen DNA-fragmentti, tunnettu siitä, että sillä on seuraava nukleotidi-sekvenssi
30 GCACCCGCAG AGCCGCAGCC GGGTGGCAGC CAGTGCGTCG AGCACGACTG CTTCGCGCTC 60 TACCCGGGCC CCGCGACCTT CCTCAATGCC AGTCAGATCT GCGACGGACT GCGGGGCCAC 120 CTAATGACAG TGCGCICCTC GGTGGCTGCC GATGTCATTT CCTTGCTACT GAACGGCGAC 180 GGCGGCGTTG GCCGCCGGCG CCTCTGGATC GGCCTGCAGC TGCCACCCGG CTGCGGCGAC 240
35 CCCAAGCGCC TCGGGCCCCT GCGCGGCTTC CAGTGGGTTA CGGGAGACAA CAACACCAGC 300 TATAGCAGGT GGGCACGGCT CGACCTCAAT GGGGCTCCCC TCTGCGGCCC GTTGTGCGTC 360 104254 GCTGTCTCCG CTGCTGAGGC CACTGTGCCC AGCGAGCCGA TCTGGGAGGA GCAGCAGTGC 420 GAAGTGAAGG CCGATGGCTT CCTCTGCGAG TTCCACTTCC CAGCCACCTG CAGGCCACTG 480 GCTGTGGAGC CCGGCGCCGC GGCTGCCGCC GTCTCGATCA CCTACGGCAC CCCGTTCGCG 540 5 GCCCGCGGAG CGGACTTCCA GGCGCTGCCG GTGGGCAGCT CCGCCGCGGT GGCTCCCCTC 600 GGCTTACAGC TAATGTGCAC CGCGCCGCCC GGAGCGGTCC AGGGGCACTG GGCCAGGGAG 660 GCGCCGGGCG CTTGGGACTG CAGCGTGGAG AACGGCGGCT GCGAGCACGC GTGCAATGCG 720 ATCCCTGGGG CTCCCCGCTG CCAGTGCCCA GCCGGCGCCG CCCTGCAGGC AGACGGGCGC 780 10 TCCTGCACCG CATCCGCGAC GCAGTCCTGC AACGACCTCT GCGAGCACTT CTGCGTTCCC 840 AACCCCGACC AGCCGGGCTC CTACTCGTGC ATGTGCGAGA CCGGCTACCG GCTGGCGGCC 900 GACCAACACC GGTGCGAGGA CGTGGATGAC TGCATACTGG AGCCCAGTCC GTGTCCGCAG 960
15 CGCTGTGTCA ACACACAGGG TGGCTTCGAG TGCCACTGCT ACCCTAACTA CGACCTGGTG 1020 GACGGCGAGT GTGTGGAGCC CGTGGACCCG TGCTTCAGAG CCAACTGCGA GTACCAGTGC 1080 CAGCCCCTGA ACCAAACTAG CTACCTCTGC GTCTGCGCCG AGGGCTTCGC GCCCATTCCC 1140 CACGAGCCGC ACAGGTGCCA GATGTTTTGC AACCAGACTG CCTGTCCAGC CGACTGCGAC 1200
20 CCCAACACCC AGGCTAGCTG TGAGTGCCCT GAAGGCTACA TCCTGGACGA CGGTTTCATC 1260 TGCACGGACA TCGACGAGTG CGAAAACGGC GGCTTCTGCT CCGGGGTGTG CCACAACCTC 1320 CCCGGTACCT TCGAGTGCAT CTGCGGGCCC GACTCGGCCC TTGTCCGCCA CATTGGCACC 1380 GACTGTGACT CCGGCAAGGT GGACGAGGAC TATAGCGGCT CTGGCGAG 1428
9. Patenttivaatimuksen 5 mukainen DNA-fragmentti, : tunnettu siitä, että sillä on seuraava nukleotidi- sekvenssi GCACCCGCAG AGCCGCAGCC GGGTGGCAGC CAGTGCGTCG AGCACGACTG CTTCGCGCTC 60 TACCCGGGCC CCGCGACCTT CCTCAATGCC AGTCAGATCT GCGACGGACT GCGGGGCCAC 120 30 CTAATGACAG TGCGCTCCTC GGTGGCTGCC GATGTCATTT CCTTGCTACT GAACGGCGAC 180 GGCGGCGTTG GCCGCCGGCG CCTCTGGATC GGCCTGCAGC TGCCACCCGG CTGCGGCGAC 240 CCCAAGCGCC TCGGGCCCCT GCGCGGCTTC CAGTGGGTTA CGGGAGACAA CAACACCAGC 300 TATAGCAGGT GGGCACGGCT CGACCTCAAT GGGGCTCCCC TCTGCGGCCC GTTGTGCGTC 360 35 GCTGTCTCCG CTGCTGAGGC CACTGTGCCC AGCGAGCCGA TCTGGGAGGA GCAGCAGTGC 420 GAAGTGAAGG CCGATGGCTT CCTCTGCGAG TTCCACTTCC CAGCCACCTG CAGGCCACTG 480 39 1 0 4 2 5 4 GCTGTGGAGC CCGGCGCCGC GGCTGCCGCC GTCTCGATCA CCTACGGCAC CCCGTTCGCG 540 GCCCGCGGAG CGGACTTCCA GGCGCTGCCG GTGGGCAGCT CCGCCGCGGT GGCTCCCCTC 600 GGCTTACAGC TAATGTGCAC CGCGCCGCCC GGAGCGGTCC AGGGGCACTG GGCCAGGGAG 660 5 GCGCCGGGCG CTTGGGACTG CAGCGTGGAG AACGGCGGCT GCGAGCACGC GTGCAATGCG 720 ATCCCTGGGG CTCCCCGCTG CCAGTGCCCA GCCGGCGCCG CCCTGCAGGC AGACGGGCGC 780 TCCTGCACCG CATCCGCGAC GCAGTCCTGC AACGACCTCT GCGAGCACTT CTGCGTTCCC 840 1Q AACCCCGACC AGCCGGGCTC CTACTCGTGC ATGTGCGAGA CCGGCTACCG GCTGGCGGCC 900 GACCAACACC GGTGCGAGGA CGTGGATGAC TGCATACTGG AGCCCAGTCC GTGTCCGCAG 960 CGCTGTGTCA ACACACAGGG TGGCTTCGAG TGCCACTGCT ACCCTAACTA CGACCTGGTG 1020 GACGGCGAGT GTGTGGAGCC CGTGGACCCG TGCTTCAGAG CCAACTGCGA GTACCAGTGC 1080
15 CAGCCCCTGA ACCAAACTAG CTACCTCTGC GTCTGCGCCG AGGGCTTCGC GCCCATTCCC 1140 CACGAGCCGC ACAGGTGCCA GATGTTTTGC AACCAGACTG CCTGTCCAGC CGACTGCGAC 1200 CCCAACACCC AGGCTAGCTG TGAGTGCCCT GAAGGCTACA TCCTGGACGA CGGTTTCATC 1260 TGCACGGACA TCGACGAGTG CGAAAACGGC GGCTTCTGCT CCGGGGTGTG CCACAACCTC 1320 20 CCCGGTACCT TCGAGTGCAT CTGCGGGCCC GACTCGGCCC TTGTCCGCCA CATTGGCACC 1380 GACTGTGACT CCGGCAAGGT CGACGACGAG GCCAGCGGCT CTGGCGAC 1428
10. Rekombinanttivektori, tunnettu siitä, että se sisältää replikoitavissa olevan vektorin ja DNA-25 fragmentin, jolla on nukleotidisekvenssi, joka koodittaa : seuraavaa aminohapposekvenssiä AlaProAlaGluProGlnProGlyGlySerGlnCysValGluHisAspCysPheAlaLeu TyrProGlyProAlalhrPheLeuAsnAlaSerGlnlleCysAspGlyLeuArgGlyHis
30 LeuMetThrValArgSerSerValAlaAlaAspValIleSerLeuLeuLeuAsnGlyAsp GlyGlyValGlyArgArgArgLeuTrpIleGIyLeuGlnLeuProProGlyCysGlyAsp ProlysArgleuGlyProLeuArgGlyPheGlnTrpValThrGlyAspAsnAsnThrSer TyrSerArgTrpAlaArgleuAspLeuAsnGlyAlaProleuCysGlyProLeuCysVaI
35 AlaValSerAlaAlaGluAlaThrValProSerGluProIleTrpGluGluGlnGlnCys GluValLysAlaAspGlyPheLeuCysGluPheHisPheProAlaThrCysArgProLeu AlaValGluProGlyAlaAlaAlaAlaAlaValSerIleThrTyrGlyThrProPheAla « 104254 AlaArgGlyAlaAspPheGlnAlaLeuProValGlySerSerAlaAlaValAlaProLeu GlyLeuGlnLeuMetCysThrAlaProProGlyAlaValGlnGlyHisTrpAlaArgGlu AlaProGlyAlaTrpAspCysSerValGluAsnGlyGlyCysGluHisAlaCysAsnAla 5 neProGlyAlaProArgCysGlnCysProAlaGlyAlaAlaLeuGlnAlaAspGlyArg SerCysThrAlaSerAlaThrGlnSerCysAsnAspLeuCysGluHisPheCysValPro AsnProAspGlnProGlySerTyrSerCysMetCysGluThrGlyTyrArgLeuAlaAla 10 AspGlnHisArgCysGluAspValAspAspCysneLeuGluProSerProCysProGln ArgCysValAsnThrGlnGlyGlyPheGluCysHisCysTyrProAsnTyrAspL-euVal AspGlyGluCysValGluProValAspProCysPheArgAlaAsnCysGluTyrGlnCys GlnProLeuAsnGlnThrSerTyrleuCysValCysAlaGluGlyPheAlaProIlePro ^-5 HisGluProHisArgCysGlnMetPheCysAsnGlnThrAlaCysProAlaAspCysAsp ProAsnThrGlnAlaSerCysGluCysProGluGlyTyrlleLeuAspAspGlyPhel1e CysThrAspIleAspGluCysGluAsnGlyGlyPheCysSerGlyValCysHisAsnLeu ProGlyThrPheGluCysITeCysGlyProAspSerAlaLeuValArgHisIleGlyThr 20 AspCysAspSerGlyLysValAspXl X2 Y1 SerGlySerGlyYZ, jossa Xl ja X2 edustavat happamia aminohappoja ja Y1 ja Y2 edustavat mitä tahansa aminohappoja.
11. Patenttivaatimuksen 10 mukainen rekombinantti-25 vektori, tunnettu siitä, että se sisältää seuraa- vat nukleotidi-sekvenssit (1) - (7) , tässä järjestyksessä transkription alavirtasuuntaa kohden, (1) promoottorina toimiva nukleotidisekvenssi, (2) ribosomia sitovana kohtana toimiva nukleotidi-sekvenssi, (3) initiaatiokodonina toimiva nukleotidisekvenssi. (4) signaalipeptidiä koodittava nukleotidisekvenssi, (5) alempana esitettyä aminohapposekvenssiä koodit- 35 tava nukleotidisekvenssi, (6) lopetuskodonina toimiva nukleotidisekvenssi, ja 4i 104254 (7) Poly-A:n lisäyssignaalina toimiva nukleotidi-sekvenssi / AlaProAlaGluProGlnProGlyGlySerGlnCysValGluHisAspCysPheAlaLeu 5 TyrProGlyProAlaThrPheLeuAsnAlaSerGlnlleCysAspGlyLeuArgGlyHis LeuMetThrValArgSerSerValAlaAlaAspVallleSerLeuLeuLeuAsnGlyAsp GlyGlyValGlyArgArgArgLeuTrpIleGlyLeuGlnLeuProProGlyCysGlyAsp 10 ProLysArgLeuGlyProLeuArgGlyPheGlnTrpValThrGlyAspAsnAsnThrSer TyrSerArgTrpAlaArgLeuAspLeuAsnGlyAlaProleuCysGlyProLeuCysVal AlaValSerAlaAlaGluAlaThrValProSerGluProITeTrpGluGluGlnGlnCys GluValLysAlaAspGlyPheLeuCysGluPheHisPheProAlaThrCysArgProLeu 15 AlaValGluProGlyAlaAlaAlaAlaAlaValSerIleThrTyrGlyThrProPheAla AlaArgGlyAlaAspPheGlnAlaLeuProValGlySerSerAlaAlaValAlaProLeu GlyleuGlnLeuMetCysThrAlaProProGlyAlaValGlnGlyHisTrpAlaArgGlu AlaProGlyAlaTrpAspCysSerValGIuAsnGlyGlyCysGluHisAlaCysAsnAla 20 IleProGlyAlaProArgCysGlnCysProAlaGlyAlaAlaLeuGlnAlaAspGlyArg SerCysThrAlaSerAlaThrGlnSerCysAsnAspLeuCysGluHisPheCysValPro AsnProAspGlnProGlySerTyrSerCysMetCysGluThrGlyTyrArgLeuAlaAla 25 AspGlnHisArgCysGluAspValAspAspCysIleLeuGluProSerProCysProGln • ArgCysValAsnThrGlnGlyGlyPheGluCysH i sCysTyrProAsnTyrAspLeuVa1 AspGlyGluCysValGluProValAspProCysPheArgAlaAsnCysGluTyrGInCys GlnProLeuAsnGliiThrSerTyrleuCysValCysAlaGluGlyPlieAlaProI lePro 30 H isGluProH i sArgCysGlnMetPheCysAsnGlnThrAlaCysProAlaAspCysAsp ProAsnThrGlnAlaSerCysGluCysProGluGlyTyrlleLeuAspAspGlyPhelle CysThrAspIleAspGluCysGluAsnGlyGlyPheCysSerGlyValCysHi sAsnLeu 104254 ProGlyThrPheGluCysIleCysGlyProAspSerAlaleuValArgHisIleGlyThr AspCysAspSerGlyLysValAspXl X2 Y1 SerGlySerGlyY2, 5 jossa Xl ja X2 edustavat happamia aminohappoja ja Yi ja Y2 edustavat mitä tahansa happamia aminohappoja.
12. Transformoitu solu, tunnettu siitä, että se sisältää rekombinanttivektorin, joka sisältää replikoi -10 tavissa olevan vektorin ja DNA-fragmentin, jolla on nuk-leotidisekvenssi, joka koodittaa seuraavaa aminohappo-sekvenssiä AlaProAlaGluProGlnProGlyGlySerGlnCysValGluHisAspCysPheAlaLeu
15 TyrProGlyProAlaThrPheLeuAsnAlaSerGInlleCysAspGlyLeuArgGlyHis LeuMetThrValArgSerSerValAlaAlaAspValIleSerLeuLeuleuAsnGlyAsp GlyGlyValGlyArgArgArgLeuTrpIleGlyLeuGlnLeuProProGlyCysGlyAsp ProlysArgLeuGlyProLeuArgGlyPheGlnTrpValThrGlyAspAsnAsnThrSer
20 TyrSerArgTrpAlaArgLeuAspLeuAsnGlyAlaProLeuCysGlyProLeuCysVal AlaValSerAlaAlaGluAlaThrValProSerGluProIleTrpGluGluGlnGlnCys GluVallysAlaAspGlyPheleuCysGluPheHi sPheProAlaThrCysArgProleu AlaVa lGluProGlyAlaAlaAlaAlaAlaValSerlleThrTyrGlyThrProPheAla ^ AlaArgGlyAlaAspPheGInAlaLeuProValGlySerSerAlaAlaValAlaProLeu • GlyLeuGlnleuMetCysThrAlaProProGlyAlaValGlnGlyH isTrpAlaArgGlu AlaProGlyAlaTrpAspCysSerValGluAsnGlyGlyCysGluHisAlaCysAsnAla IleProGlyAlaProArgCysGlnCysProAlaGlyAlaAlaLeuGlnAlaAspGlyArg 30 SerCysThrAlaSerAlaThrGlnSerCysAsnAspleuCysGluHi sPheCysValPro AsnProAspGlnProGlySerTyrSerCysMetCysGluThrGlyTyrArgleuAlaAla AspGlnHisArgCysGluAspValAspAspCysIleLeuGluProSerProCysProGln ArgCysValAsnThrGlnGlyGlyPheGluCysHisCysTyrProAsnTyrAspLeuVal O ^ AspGlyGluCysValGluProValAspProCysPheArgAlaAsnCysGluTyrGlnCys « 104254 GlnProLeuAsnGInThrSerTyrLeuCysValCysAlaGluGlyPheAlaProIlePro 5 HisGluProHisArgCysGlnHetPheCysAsnGlnThrAlaCysProAlaAspCysAsp ProAsnThrGInAlaSerCysGluCysProGluGlyTyrIleLeuAspAspGlyPhelle CysThrAspIleAspGluCysGluAsnGlyGlyPheCysSerGlyValCysHisAsnLeu ProGlyThrPheGluCysIleCysGlyProAspSerAlaLeuValArgHisIleGlyThr
10 AspCysAspSerGlyLysValAspXl X2 Y1 SerGlySerGlyY2, jossa Xl ja X2 edustavat happamia aminohappoja ja Y1 ja Y2 edustavat mitä tahansa aminohappoja. 104254
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33572090 | 1990-11-30 | ||
| JP33572090 | 1990-11-30 | ||
| JP3027191 | 1991-02-25 | ||
| JP3027191 | 1991-02-25 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI915571A0 FI915571A0 (fi) | 1991-11-26 |
| FI915571L FI915571L (fi) | 1992-05-31 |
| FI104254B1 FI104254B1 (fi) | 1999-12-15 |
| FI104254B true FI104254B (fi) | 1999-12-15 |
Family
ID=26368600
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI915571A FI104254B (fi) | 1990-11-30 | 1991-11-26 | Menetelmä trombiinia sitovan aineen tuottamiseksi ja siinä käyttökelpoiset DNA-fragmentit, rekombinanttivektorit ja näillä transformoidut solut |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0488317B1 (fi) |
| KR (1) | KR970001684B1 (fi) |
| AT (1) | ATE123811T1 (fi) |
| AU (2) | AU8803891A (fi) |
| CA (1) | CA2056005C (fi) |
| DE (1) | DE69110419T2 (fi) |
| ES (1) | ES2075927T3 (fi) |
| FI (1) | FI104254B (fi) |
| HU (1) | HU215532B (fi) |
| IE (1) | IE68876B1 (fi) |
| IL (2) | IL100093A0 (fi) |
| MX (1) | MX9102273A (fi) |
| NO (1) | NO180306C (fi) |
| NZ (1) | NZ240782A (fi) |
| PT (1) | PT99632B (fi) |
| TW (1) | TW200491B (fi) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19749197A1 (de) * | 1997-11-07 | 1999-05-12 | Dade Behring Marburg Gmbh | Verfahren zur Bestimmung des antikoagulatorischen Potentials einer Probe |
-
1990
- 1990-11-20 IL IL100093A patent/IL100093A0/xx unknown
-
1991
- 1991-11-20 IL IL100093A patent/IL100093A/xx active IP Right Grant
- 1991-11-21 AU AU88038/91A patent/AU8803891A/en not_active Abandoned
- 1991-11-22 IE IE406691A patent/IE68876B1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-11-22 CA CA002056005A patent/CA2056005C/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-11-22 KR KR1019910020865A patent/KR970001684B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1991-11-26 FI FI915571A patent/FI104254B/fi not_active IP Right Cessation
- 1991-11-27 TW TW080109350A patent/TW200491B/zh active
- 1991-11-28 AT AT91120438T patent/ATE123811T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-11-28 NZ NZ240782A patent/NZ240782A/xx unknown
- 1991-11-28 EP EP91120438A patent/EP0488317B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-11-28 PT PT99632A patent/PT99632B/pt not_active IP Right Cessation
- 1991-11-28 DE DE69110419T patent/DE69110419T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-11-28 MX MX9102273A patent/MX9102273A/es not_active IP Right Cessation
- 1991-11-28 ES ES91120438T patent/ES2075927T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-11-29 NO NO914719A patent/NO180306C/no not_active IP Right Cessation
- 1991-11-29 HU HU913737A patent/HU215532B/hu not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-02-09 AU AU32888/93A patent/AU656453B2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2056005C (en) | 2001-09-11 |
| KR970001684B1 (ko) | 1997-02-13 |
| EP0488317A3 (en) | 1993-03-17 |
| NO914719D0 (no) | 1991-11-29 |
| ES2075927T3 (es) | 1995-10-16 |
| KR920009847A (ko) | 1992-06-25 |
| EP0488317A2 (en) | 1992-06-03 |
| NZ240782A (en) | 1993-05-26 |
| ATE123811T1 (de) | 1995-06-15 |
| IL100093A0 (en) | 1992-08-18 |
| PT99632B (pt) | 1999-05-31 |
| FI915571A0 (fi) | 1991-11-26 |
| MX9102273A (es) | 1992-06-01 |
| CA2056005A1 (en) | 1992-05-31 |
| FI104254B1 (fi) | 1999-12-15 |
| DE69110419D1 (de) | 1995-07-20 |
| AU3288893A (en) | 1993-04-22 |
| AU8803891A (en) | 1992-06-04 |
| HU913737D0 (en) | 1992-02-28 |
| HU215532B (hu) | 1999-01-28 |
| AU656453B2 (en) | 1995-02-02 |
| NO180306B (no) | 1996-12-16 |
| PT99632A (pt) | 1992-10-30 |
| TW200491B (fi) | 1993-02-21 |
| IL100093A (en) | 1997-07-13 |
| IE914066A1 (en) | 1992-06-03 |
| HUT62329A (en) | 1993-04-28 |
| NO914719L (no) | 1992-06-01 |
| NO180306C (no) | 1997-03-26 |
| IE68876B1 (en) | 1996-07-24 |
| DE69110419T2 (de) | 1996-03-21 |
| EP0488317B1 (en) | 1995-06-14 |
| FI915571L (fi) | 1992-05-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5486599A (en) | Construction and use of synthetic constructs encoding syndecan | |
| AU650893B2 (en) | O-glycosylated alpha-2 interferon | |
| FI104260B (fi) | Biologisesti aktiivista yhdistelmä-DNA-ihmisentekij-VIII-johdannaista koodittava DNA, tämän sisältävä yhdistelmä-DNA-ilmentämisvektori ja isäntäsolu sekä menetelmä biologisesti aktiivisen yhdistelmä-DNA-ihmisentekijä-VIII-johdannaisen valmistamiseksi | |
| KR920010225B1 (ko) | 인간암괴사인자 및 그를 코우드하는 dna의 제법 | |
| JP2655752B2 (ja) | 組換えヒト第▲ｖｉｉｉ▼因子誘導体 | |
| US5516659A (en) | Truncated thrombomodulin, recombinant production thereof, and therapeutic agent | |
| CZ288890B6 (cs) | MGDF polypeptid pro stimulaci růstu a diferenciaci megakaryocytů | |
| IE870535L (en) | Human endothelial cell growth factor | |
| US5238919A (en) | Peptides that inhibit von Willebrand Factor binding to the platelet SPIB receptor | |
| WO1995021919A2 (en) | Protein having tpo activity | |
| US6130203A (en) | Hybrid proteins with modified activity | |
| FI104254B (fi) | Menetelmä trombiinia sitovan aineen tuottamiseksi ja siinä käyttökelpoiset DNA-fragmentit, rekombinanttivektorit ja näillä transformoidut solut | |
| WO1993000357A1 (en) | Therapeutic polypeptides based on von willebrand factor | |
| US5273962A (en) | Human urinary thrombomodulin with a modified glycosaminoglycan (GAG) binding site | |
| US7183393B2 (en) | Construction and use of synthetic constructs encoding syndecan | |
| AU702669B2 (en) | Protein having TPO activity | |
| WO1992017192A1 (en) | Therapeutic fragments of von willebrand factor | |
| JP2553425B2 (ja) | トロンビン結合性物質及びその製造法 | |
| US5463025A (en) | Protein having human plasmin inhibiting activity | |
| JP2824418B2 (ja) | トロンビンによるプロテインｃの活性化を促進する作用を有するペプチドを含有する医薬組成物 | |
| WO2000029439A9 (en) | The cxc chemokine h174 and methods for preventing damage to the nervous system | |
| JPH10113180A (ja) | トロンビンによるプロテインｃの活性化を促進する作用を有するペプチドをコードするｄｎａ及びペプチドの製造法 | |
| MXPA98001120A (en) | Sequences of dna and secreted proteins and that are codified through | |
| WO2001002434A1 (en) | Methods for modulating angiogenesis by using the anti-angiogenic angiotensin-7 and polynucleotides encoding therefor |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired |