FR2510577A1

FR2510577A1 - Composes organiques azotes extraits de plantes et leurs derives, leur preparation et leurs utilisations therapeutiques, notamment en tant qu'agents antineoplastiques

Info

Publication number: FR2510577A1
Application number: FR8213172A
Authority: FR
Inventors: Hideji Itakawa
Original assignee: Tobishi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Tobishi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1981-07-28
Filing date: 1982-07-28
Publication date: 1983-02-04
Also published as: US4476299A; JPS5821655A; FR2510577B1; DE3228006C2; GB2141718A; CH656883A5; CA1240668A; GB8417307D0; GB2141718B; GB2102812A; JPH0329800B2; DE3228006A1; GB2102812B

Abstract

COMPOSES ORGANIQUES AZOTES EXTRAITS DE VEGETAUX ET LEURS DERIVES, LEUR PREPARATION ET LEURS UTILISATIONS THERAPEUTIQUES. CES COMPOSES REPONDENT A LA FORMULE GENERALE (CF DESSIN DANS BOPI) DANS LAQUELLE R REPRESENTE UN ATOME D'HYDROGENE, UN GROUPE ACYLE, UN GROUPE ALKYLE, CYCLOALKYLE, CARBOXYALKYLE EVENTUELLEMENT A L'ETAT D'ESTER, UN GROUPE HETEROCYCLIQUE OU UN RESTE DE SACCHARIDE, R REPRESENTE UN ATOME D'HYDROGENE OU UN GROUPE ALKYLE INFERIEUR ET R REPRESENTE UN ATOME D'HYDROGENE OU UN GROUPE AZOTE. CES COMPOSES ONT UNE ACTIVITE ANTINEOPLASTIQUE EXPLOITABLE EN THERAPEUTIQUE.

Description

La présente invention se rapporte à de nouveaux composés extrait de

plantes, à des dérivés de ces composés, à leur préparation et à leurs utilisations thérapeutiques, notamment en

tant qu'agents antinéoplastiques.

Les composés selon l'invention ont des effets thé-

rapeutiques extrêmement intéressants -Certains des nouveaux compo-

sés sont des constituants de végétaux appartenant au genre Rubia

et les autres sont des dérivés de ces composants.

On a déjà tenté à de nombreuses reprises d'obtenir des extraits antinéoplastiques à partir de végétaux Parmi ces extraits, on citera une matière contenant des alcaloïdes extraite de la plante Colchicum autumnal (J Chem Soc 1940, 194) ou Vinca rosea (J Ain Chem Soc, 1964, 86, 1440); un type de lignane extrait de Podophyllum peltatum (J Am Chem Soc, 1953, 75,235); et une substance anthamacrolidique dont la structure moléculaire est semblable à celle de la rifamycine, qu'on extrait d'une plante

de la famille des celastracées On citera encore, parmi les subs-

tances extraites d'un végétal inférieur, un champignon, un corps de protéine-polysaccharide extrait de Coriolus versicolor, qui se

trouve déjà sur le marché (GAN TO KAGAKURYOKO, 1974, 1, 251).

Néanmoins, un petit nombre seulement de ces extraits ont trouvé

une utilisation pratique en médecine.

En outre, un certain nombre de chercheurs ont tenté d'obtenir un produit défini possédant une excellente action pharmacologique à partir de végétaux; un pezit nombre de chercheurs

sont parvenus à des résultats.

Naturellement, on a aussi effectué des études appro-

fondies visant à obtenir de tels médicaments par la synthèse chi-

mique; presque toutes ces études ont été interrompues, sans connaître de succès notable La raison en est que de tels médicaments de

synthèse ont des effets secondaires sérieux.

La demanderesse a alors porté son intérêt vers les plantes médicinales et a procédé à des études approfondies visant

à obtenir des composants utiles à partir de plantes médicinales.

Celles-ci ont été utilisées depuis longtemps dans la médecine popu-

laire, et même encore à présent en raison de leur faible toxicité et d'une action pharmacologique modérée; de sorte que, même dans le domaine médical moderne, on a été amené à reconsidérer les effets

auxquels on peut parvenir au moyen de plantes médicinales.

Ainsi, la demanderesse a trouvé que l'extrait brut de garance (Rubia spp) avait d'excellents effets thérapeutiques et qu'on pouvait obtenir un produit défini possédant une forte action antinéoplastique en purifiant cet extrait brut Ces découvertes sont

à la base de l'invention.

L'invention concerne donc en premier lieu de nouveaux

composés dont les effets thérapeutiques sont précieux.

L'invention comprend également des procédés de prépa-

ration de ces composés, et les utilisations thérapeutiques de ces

composés, notamment en tant qu'agents antinéoplastiques.

D'autres buts et avantages de l'invention apparaîtront

à la lecture de la description ci-après.

Les composés selon l'invention répondent à la formule générale (I): R

O R CH 3 O R

Il,2 g3 Ig

R O 2 CH-C-N CH C N CH -CH 3

CH -N C O

< o = 7 N -CH 3

CH -CH N C -CH N C CH 2 CH 3

2,, i ,y 1 I

CH 3 0 CH 3 R 2 O

dans laquelle R 1 représente un groupe acyle -COA (A représentant un groupe alkyle en C 1-C 20 substitué ou linéaire, saturé ou insaturé; un groupe phényle éventuellement substitué par un atome d'halogène, un groupe alkyle inférieur, nitro ou amino; un groupe benzyle ou styryle éventuellement substitué par un atome d'halogène, un groupe alkyle inférieur, nitro ou amino); un groupe alkyle linéaire ou ramifié en C 1-C 20; un groupe cycloalkyle en C 3-C 6 éventuellement substitué par un groupe alkyle inférieur, amino, nitro ou un atome d'halogène; un groupe carboxyalkyle en C 1-C 5 ou un ester d'un tel groupe et d'un alcool en C 1-C 5; un groupe hétérocyclique; un reste

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de saccharide; un groupe -SO 2 CH 3 ou un atome d'hydrogène, R 2 repré-

sente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur et R 3 repré-

sente un atome d'hydrogène ou un groupe azoté tel qu'un groupe amino

ou nitro.

On a trouvé que les composés selon l'invention avaient une activité antinéoplastique et des effets thérapeutiques, en particulier des effets émétiques, anorexigènes, psychotropes,

vasoconstricteurs, papavériniques, antiparkinsoniens et/ou anti-

diurétiques.

D'autres caractéristiques et avantages de l'inven-

tion ressortiront plus clairement de la description détaillée

donnée ci-après en référence aux figures des dessins annexés, sur lesquels

les figures 1 à 3 représentent les spectres infra-

rouges des composés de l'exemple 1, à savoir le composé TPC-A et son ester méthylique, et le composé obtenu dans l'exemple 22, le

dérivé acétylé du TPC-A.

La plante Rubia akane utilisée comme matière pre-

mière à partir de laquelle on a isolé les composés TPC-A et son ester méthylique est une plante vivace poussant spontanément dans les champs et les montagnes du monde entier Sa racine de couleur

rouge orangé a été utilisée en tant que dépuratif du sang, emména-

gogue et hémostatique dans la Médecine Orthodoxe Chinoise et en médecine populaire dans le traitement des refroidissements, de la

cardiopahie et des contusions, sous la forme de décoction.

On sait que les Rubia spp contiennent des anthra-

quinones, des népétalactones, des triterpénoides, des saponines, des alcaloïdes, mais, jusqu'à maintenant, on n'avait jamais extrait

ou isolé de composants actifs individuels à partir de ces plantes.

Le composé TPC-A qui porte un groupe hydroxyle et qui peut être extrait et isolé de Rubia akane et R cordiforia a lui-même un effet antinéoplastique et on pense qu'il a d'autres utilisations en tant que composant actif pharmacologique En outre, il est utile en tant que produit intermédiaire de la préparation de dérivés qu'on peut obtenir par modification chimique de son groupe

hydroxy libre et/ou de son groupe imino.

Le composé TPC-A peut être extrait de la racine de Rubia akane et R cordiforia en soumettant la racine sèche de ces végétaux à extraction par un solvant tel que le méthanol, l'éthanol, le chloroforme ou l'acétate d'éthyle, en concentrant l'extrait et en soumettant l'extrait concentré brut

à des opérations chromatographiques d'isolement et de purifica-

tion.

L'éther méthylique du composé TPC-A peut égale-

ment être extrait de la racine de Rubia akane et R cordiforia dans une fraction différente de celle contenant le TPC-A, par les mêmes modes opératoires En outre, ce composé peut également être préparé par méthylation du composé TPC-A sur le groupe

hydroxy libre de ce dernier, dans un solvant approprié Ce com-

posé peut également être utilisé en tant que produit de départ de

la préparation d'autres dérivés.

Pour la réaction de méthylation, on peut uti-

liser comme solvant, selon l'agent méthylant mis en oeuvre, un alcool, un éther ou un solvant aqueux On peut également utiliser un agent méthylant connu, tel qu'un halogénure de méthyle, le diazométhane ou du sulfate d 2 diméthyle et la méthylation du composé TPC-A peut être réalisée comme une réaction classique de méthylation.

Au cours de l'opération d'extraction, si celle-

ci est effectuée par chromatographie sur une colonne de charbon actif, il peut être avantageux d'utiliser comme éluant un solvant moins polaire que l'extrait, et par exemple le benzène, le chloroforme, l'acétate d'éthyle, le méthanol, ou un mélange de

ces solvants Bien que la séparation soit effectuée par chro-

matographie de liquide, on préfère les colonnes chromatogra-

phiques en phase inversée comme les colonnes C-18 (de la firme Waters Associates Inc), RP-8 ou RP-18 (de la firme Merck E Co, Inc), ou encore une colonne de gel de silice traitée par

l'octadécylsilane (ODS).

On peut préparer d'autres dérivés du TPC-A ou de son ester méthylique par les modes opératoires suivants: Parmi les nouveaux composés de l'invention, les

composés dans lesquels R 1 représente un groupe alkyle, cyclo-

alkyle, carboxyalkyle éventuellement estérifié peuvent être pré-

parés facilement en faisant réagir le composés TPC-A isolé de la garance avec un agent alkylant, tel qu'un halogénure d'alkyle, un agent méthylant, un halogénure de cycloalkyle ou un halogénure

ou ester de carboxyalkyle Parmi les agents alkylants, on men-

tionnera les halogénures d'alkyle en C 1-C 20, par exemple les bromures, les halogénures de cycloalkyle en C 3-C 6: par exemple les bromures, les halogénures de carboxyalkyle en C 1-C 5, par

exemple les bromures, et leurs esters alkyliques inférieurs.

L'alkylation d'un groupe OH fixé sur un noyau phényle est une opération bien connue et, dans l'invention,

l'alkylation du composé TPC-A est effectuée selon un mode opéra-

toire classique.

Les composés dans lesquels R 1 représente un groupe acyle peuvent être préparés en faisant réagir le composé TPC-A avec un agent acylant selon une technique d'acylation classique Parmi les agents acylant, on citera les halogénures ou anhydrides d'acidescomme l'anhydride acétique, l'anhydride propionique, l'anhydride butyrique ou isobutyrique, l'anhydride crotonique, l'anhydrique valérique, l'anhydride caprorque, l'anhydride oenanthique, l'anhydride caprylique, l'anhydrique caprique, l'anhydride stéarique, l'anhydride benzotque, l'anhydride o-, m ou pchlorobenzoïque, l'anhydride m ou p-nitrobenzoïque,

l'anhydride cinnamique, l'anhydride phénylacétique, et les chlo-

rures ou bromures des acides correspondants.

Lorsqu'on utilise à la place de l'agent acy-

lant un halogénure de l'acide méthanesulfonique, on peut prépa-

rer de la même manière l'ester méthanesulfonique du composé

TPC-A.

Les composés dans lesquels R représente un groupe azoté peuvent être préparés par exemple par nitration du composé TPC-A et, lorsque c'est nécessaire, réduction du groupe

nitro selon des techniques classiques de nitration et de réduc-

tion. t O 577 Les composés dans lesquels un au moins des symboles R 2 représente un groupe méthyle peuvent être préparés par méthylation de l'éther méthylique du TPC-A à l'aide d'un agent méthylant connu, comme le diazométhane, un halogénure de méthyle, en particulier l'iodure, le sulfate de diméthyle, en présence d'un

hydroxyde alcalin, d'un carbonate alcalin ou de fluorure de potas-

sium. Les composés dans lesquels R 1 représente un reste de sucre peuvent être préparés par réaction entre le composé

TPC-A et un saccharide activé et protégé en présence d'un cata-

lyseur tel que l'hydrure de sodium, l'oxyde d'argent, le perchlorure d'argent, un sel d'argent L'activation du saccharide peut être réalisée selon les techniques connues et le groupe protecteur peut consister par exemple en un groupe acétyle, benzoylé, benzyle ou en un autre groupe acyle qui peut être éliminé dans des conditions ménagées.

Les restes de sucre qu'on utilise dans l'inven-

tion peuvent consister en restesde glucose, de galactose, de

rhamnose, de fructose ou de xylose.

Les exemples qui suivent illustre l'invention

sans toutefois en limiter la portée; dans ces exemples, les indica-

tions de parties et de pourcentages s'entendent en poids sauf

mention contraire.

EXEMPLE 1

(i) Extraction.

A 500 g de la matière première sèche (racine de Rubia cordiforia), on ajoute 1 litre de méthanol et on extrait au bain d'eau chaude pendant 3 h en poursuivant le chauffage; on sépare ensuite l'extrait du résidu par filtration On répète

l'extraction du résidu à l'aide de 1 litre de méthanol frais.

Après avoir répété cette opération d'extraction, on combine les extraits entre eux et on concentre sous vide; on obtient 27 g d'extrait brut On en dissout 25 g dans 200 ml de méthanol et on jette la solution sur une colonne garnie de 250 g de charbon actif pour chromatographie (de la firme Wako Inc) Après lavage

de la colonne par le méthanol, on élue par le mélange chloroforme-

méthanol et par le chloroforme, on combine les fractions éluées et on concentre sous vide; on obtient 10 g d'une matière huileuse

de couleur brun rougeâtre.

On dissout 9 g de cette substance huileuse dans une petite quantité de chloroforme et on adsorbe sur une colonne garnie de 400 g de gel de silice On lave ensuite la colonne par le chloroforme, un mélange chloroforme/acétate d'éthyle et l'acétate d'éthyle dans cet ordre avant d'éluer par un mélange chloroforme/méthanol On recueille l'éluat et on concentre sous

vide; on obtient 1,4 g d'une substance huileuse.

On en dissout 1,3 g dans une petite quantité de chloroforme, on adsorbe la solution sur une colonne garnie

de 150 g de gel de silice, on lave la colonne par le chloro-

forme, puis un mélange chloroforme/méthanol, 100:1, et on élue par lt mélange chloroforme/méthanol, 100:3 On recueille les' éluats et on les combine, on concentre sous vide; on

obtient 250 mg d'une substance solide.

On redissout cette substance dans une petite quantité de mélange chloroforme/méthanol et on développe la solution sur une plaque de chromatographie sur couche mince, (type 7544 de la firme Merck & Co, Inc), à l'aide d'un mélange chloroforme/méthanol, 100:15; on jette les bandes qui présentent une coloration bleu sombre sous irradiation par la lumière ultraviolette (à 254 nm), correspondant à des valeurs de Rf de 0,60 à 0, 71 et 0,50 à 0,59 respectivement dans des colonnes séparées; on élue chaque colonne par un mélange chloroforme/

méthanol et, après évaporation à sec sous vide, on obtient res-

pectivement 56 mg et 24 mg de substance solide couleur brun clair à partir des fractions présentant respectivement la

basse valeur de R et la forte valeur de Rf.

f f On soumet une solution de 40 mg de la substance solide à basse valeur de Rf dans l'acétonitrile aqueux à 24 % à chromatographie de liquide sous haute pression sur une colonne de Micro Bondapack C-18 de la firme Waters Associates Inc, avec, comme solvant de développement, une solution aqueuse

d'acétonitrile à 45 % en utilisant comme indication l'absor-

bance à 254 nm; on évapore l'éluat à sec sous vide; on obtient 24 mg d'une poudre blanche (TPC-A) Si on le désire, on peut répéter l'opération de chromatographie de liquide sous haute pression pour purifier plus complètement le produit. On répète la même opération sur la solution de mg de l'autre substance solide (à forte valeur de Rf) dans l'acétonitrile aqueux à 45 %; on obtient 12 mg d'une poudre blanche (éther méthylique du TPC-A) On recristallise cette poudre deans

le méthanol; on obtient 10 mg d'aiguilles cristallines incolores.

(ii) On répète les opérations décrites ci-dessus sous (i) en utilisant comme matière première 100 g de Rubia

akane sec; on obtient 7,3 mg de TPC-A et de son éther méthylique.

(iii) Préparation de l'éther méthylique du composé TPC-A.

On dissout 10 mg du composé TPC-A dans une petite quantité de méthanol et on ajoute 5 ml d'une solution de diazométhane dans l'éther Après avoir abandonné au repos dans l'eau glacée pendant 1 h, on évapore la solution à sec sous vide; on recristallise la poudre blanche dans le méthanol; on

obtient 8 mg d'aiguilles cristallines incolores.

Les spectres de RMN et I R confirment que

le produit obtenu est l'éther méthylique du TPC-A.

Les propriétés physiques et chimiques de ces composés, TPC-A et son éther méthylique, extraitsde la garance,

sont rapportées dans le tableau 1 ci-après Les spectres infra-

rouges sont représentés dans les figures 1 et 2 des dessins annexés.

TABLEAU 1

TPC-A Poids moléculaire * Aspect Point de fusion

Pouvoir rotatoire spéci-

fique, lalD U v, Et OH max

R.M N, (P) **

ppm

I.R ***

poudre blanche

environ 235 C, produit brunis-

sant peu à peu (pas de point de décomposition défini) -220 (CHC 13 e C= 0,1) 276 nm; & = 3800 282 nm; _ = 3300 2,70 ( 3 H,s), 2,86 ( 3 H,s) 3,10 ( 3 H,s), 3,77 ( 3 H,s) figure 1 Ether méthylique de TPC-A aiguilles incolores 280 C (pas de point de décomposition défini)

-224 (CHC 13, C= 0,25)

276 nm; t = 3800 282 nm; = 3300 2,70 ( 3 H,s), 2,86 ( 3 H,s) 3,12 ( 3 H,s) , 3,78 ( 3 H,s) 3,92 ( 3 H,s) figure 2

* Le poids moléculaire a été déterminé par spectroscopie de masse à désorption de champ (FD-MS).

** Le spectre de RMN protonique a été réalisé avec CDC 13 comme solvant et Si(CH 3)4 comme étalon interne,

à 100 M Hz.

*** Le spectre I R a été mesuré par la méthode à K Br -h o -" % O

EXEMPLES 2 à 17

A un mélange solvant de 4 ml de tétrahydrofuranne, 8 ml de méthanol et 2 ml d'eau, on ajoute 100 mg de TPC-A puis mg de bromure de n-hexyle et un excès de carbonate de potassium anhydre; on fait ensuite bouillir le mélange au reflux sur bain d'huile chauffé à 100 C Lorsque la réaction est terminée, on coupe le chauffage, on ajoute de l'eau à la solution de réaction, on extrait par l'acétate d'éthyle et on lave l'extrait par une saumure saturée On sèche l'extrait sur sulfate de magnésium anhydre, on distille le solvant sous vide, on lave le résidu par le n-hexane et on purifie par chromatographie sur couche mince On recristallise le produit dans le méthanol; on obtient 63 mg de l'éther n-hexylique

du composé TPC-A à l'état de cristaux incolores.

Par le même mode opératoire, mais en utilisant à la place du bromure de nhexyle, le bromure de n-alkyle indiqué

dans le tableau 2 ci-après, on obtient l'éther n-alkylique corres-

pondant.

Les propriétés physiques de ces composés sont éga-

lement rapportées dans le tableau 2.

Exemple

n R 1

2 (CH 2) 5 CH 3

3 CH 2 CH 3

4 (CH 2) 2 CH 3

5 CH(CH 3)2-

6 (C 2)3 CH 3

7 (CH 2) 4 CH 3

8 (CH 2)6 CH 3

9 (CH 2)7 CH 3

10 (CH 2) 8 CH 3

il (CH 2) 9 CH 3

TABLEAU 2

F ( C) (décomposition)

261 268

219 225

212 217

213 220

210 216

214 221

245 250

243 249

245 248

lclD(CHC 13) -178 -194 -193 -194 -192 -191 -189 -178 -169

-198 26

T( C)

242 247

TABLEAU 2 (suite) Exemple R F ( C) (décomposition) lalD(CHC 13) T(C)

12 (CH 2) 10 C 3 228 235 -179 26

i 3 (CH 2) 11 CH 3 240 242 -189 26

14 (CH 2)12 CH 3 238 242 -186 26

(CH 2) 17 CH 3 228 235 -153 26

16 215 222 -171 25

-17 _È 229 233 -155 26

EXEMPLE 18

i) On répète les opérations de l'exemple 2, mais on remplace le bromure de n-hexyle par le bromacétate de méthyle; on obtient alors l'éther hydroxycarbonyméthylique ( 1) du composé

TPC-A à l'état de cristaux incolores.

ii) On traite le produit ( 1) obtenu en i) ci-dessus par le diazométhane et on recristallise dans le méthanol; on obtient

l'ester méthylique ( 2) du composé ( 1) à l'état de cristaux incolores.

Les propriétés physiques de ce composé sont indiquées dans le

tableau 3.

EXEMPLE 19

i) On répète l'opération i) de l'exemple 18 en rempla-

çant le bromacétate de méthyle par le bromobutyrate d'éthyle; on

prépare l'éther hydroxycarbonylpropylique ( 1) et l'éther éthoxycar-

bonylpropylique ( 2) du composé TPC-A.

ii) On traite le composé ( 1) par le diazométhane et

on recristallise dans le méthanol; on obtient l'éther méthoxycarbo-

nylpropylique du composé TPC-A à l'état de cristaux incolores.

Les propriétés physiques de ces composés sont rap-

portés dans le tableau 3 ci-après.

TABLEAU 3

Exemple R F, C (décomposition) lalD(C Hc 13) T ( C) n D 3

18 ( 1) CH 2 COOH 211 215 -141 25

18 ( 2) CH 2 COOCH 3 201 207 -161 24

19 ( 1) (CH 2)3 COOH 223 228 -140 24

19 ( 2) (CH 2)3 COOCH 2 CH 3 181 186 -188 24

19 ( 3) (CH 2)3 COOC 3 178 184 -171 25

EXEMPLE 20

Dans 4 ml d'un mélange solvant consistant en acétate d'éthyle anhydre ( 19 ml) et acétate d'éthyle contenant 5 % d'H Cl anhydre ( 1 ml), on dissout 100 mg du composé TPC-A, on ajoute 0,4 ml

de 2,3-dihydropyranne et, après avoir fermé hermétiquement le réci-

pient de réaction, on abandonne le mélange pendant une nuit à 5 C.

Lorsque la réaction est terminée, on ajoute de l'acétate d'éthyle, on lave la solution par une saumure saturée et on sèche sur sulfate de magnésium anhydre On distille le solvant sous vide et on lave le résidu par le n-hexane puis on purifie par chromatographie sur couche mince On recristallise le produit cristallisé dans le méthanol; on obtient 55 mg de l'éther tétrahydropyrannylique du TPC-A à l'état de cristaux incolores fondant à 286-289 C (décomposition), lal 26 =-157

(CH Ci 3).

EXEMPLES 21 à 39

On dissout 50 mg de TPC-A dans 5 ml de pyridine anhydre et on ajoute goutte à goutte sous agitation 15 ml d'anhydride caproïque Après repos d'une nuit à température ambiante, on ajoute

du toluène anhydre à la solution et on distille le solvant sous vide.

On lave le résidu par le n-hexane et on recristallise le précipité dans le méthanol; on obtient 38 mg de caproate de TPC-A à l'état

de cristaux incolores.

On a répété la même opération avec d'autres acides

(y compris des anhydrides ou le chlorure de méthanesulfonyle) cor-

respondant aux restes énumérés dans le tableau 4 ci-après, en rem-

placement de l'anhydride caproique; on a obtenu les composés corres-

pondants du tableau 4 à l'état de cristaux incolores Les propriétés

physiques de ces produits sont également rapportés dans le tableau 4.

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*Exemple R

21 Co (CH 2) 4 CH 3

22 COCH 3

23 COC 2 H 5

24 Co (CH 2) 2 CH 3

COCH(CH 3) 2

26 COCH=CHCH 3

27 CO(CH) CH 3

28 CO(CH 2)5 CE 3

29 CO<C 112)6 CH 13

CO(CH 2)8 CH 3

31 CO(CH 2)16 C 113

TABLEAU 4

F., 'C (décomposition)

205 210

228 241

222 228

196 201

225 232

215 223

203 208

200 195

174 180

110 lal D (CH 103) -178 -190 -171 -165 -140 -88 -178 -182 -173 -174 -131

32 Co -

33 Co Q Q

34 CO O

NO 2 36 Co 37 Co N

38 COCH=CE 5 '

240 245

219 224

221 226

225 231

224 230

197 -202-

330 335

39 SO 2 CH 321 2 5 722

T( O C)

-188 -171 -160 -155 -140 -150

218 225

-172 26

EXEMPLES 40, A 45

Dans un ballon de forme ovoïde, on introduit 40 mg d'éthylate de thallium et on ajoute 2 mg d'éthanol anhydre, puis on agite la solution On ajoute ensuite 110 mg de TPC-A et 1 ml de tétrahydrofuranne anhydre et on agite à température ambiante pendant 3 h; on distille ensuite le solvant sous vide; on obtient le sel de thallium du TPC-A qu'on met en suspension dans 2 ml de

tétrahydrofuranneanhydre; on ajoute goutte à goutte sous agita-

tion une solution de 20 mg de chlorure de 4-méthylvaléryle dans

1 ml de tétrahydrofuranne anhydre On poursuit l'agitation pen-

dant 2 h, on filtre la substance solide, son soumet le filtrat à distillation sous vide, on lave le résidu par le n-hexane et on

purifie par chromatographie sur couche mince La recristallisa-

tion dans le méthanol donne 75 mg du 4-méthylvalérate du TPC-A

à l'état de cristaux incolores.

On répète la même opération avec d'autres chlo-

rures d'acide correspondant aux restes énumérés dans le tableau 5, à la place du chlorure de 4-méthylvaléryle;-on obtient ainsi les composés correspondants portant le substituant indiqué dans le

tableau 5, avec les propriétés physiques des composés.

TABLEAU 5

Exemple R 1 F, C (décomposition) lalD(CHC 13) T( C) no

CO(CH 2)2 CH(CH 3)2 285 292 -181 19

41 CO(CH 2)-< 205 212 -179 19

42 COCH 2 CH(CH 3)CE 2 CH 3 193 198 -164 19

43 COCH(CH 3) (CH 2)2 CH 3 195 201 -178 19

44 COCH=CH(CH 2)2 CH 3 268 274 -164 20

COCH 2 CH=CHC 2 H 5 198 203 -183 20

2 -8 205

EXEMPLE 46

i) On dissout 100 mg de TPC-A dans 3 ml d'acide acétique et on ajoute sous agitation une solution de 40 mg de

nitrate de cuivre dans 3 ml d'acide acétique On poursuite l'agi-

tation et, lorsque la coloration de la solution de réaction

vire du bleu au vert, on ajoute de l'eau pour arrêter là réac-

tion et on extrait le produit par l'acétate d'éthyle On lave l'extrait par la saumure saturée et on le sèche sur sulfate de magnésium anhydre, puis on distille le solvant sous vide; on recristallise le produit dans le méthanol; on obtient le dérivé nitré du TPC-A en position a du phénol de ce composé ( 108 mg) à l'état d'aiguilles cristallines jaunes fondant à 244-250 'C (décomposition); lali = -232 (CHC 1)

D 3.

ii) On traite le produit obtenu en i) ci-dessus par le diazométhane et on recristallise le produit obtenu dans le méthanol; on obtient le dérivé nitré de l'éther méthylique du TPC-A à l'état de cristaux incolores fondant à 225-232 ÈC

(décomposition); lalD = 187 (CHC 13).

EXEMPLE 47

i) On ajoute sous agitation 90 mg de borohydrure de sodium à 7,5 ml d'eau, on ajoute encore une petite quantité de palladium à 5 % sur charbon, puis, goutte à goutte, 130 mg du produit de l'exemple 46 (i) dans 15 ml de méthanol Lorsque la réaction est terminée, on ajoute de l'eau et on extrait le produit par l'acétate d'éthyle On lave l'extrait à la saumure

saturée, on sèche sur sulfate de magnésium anhydre, puis on dis-

tille le solvant sous vide; on purifie par chromatographie sur couche mince; on obtient 64 mg du dérivé aminé du composé TPC-A en position a du phénol de celui-ci; ce dérivé fond à 238-2430 C (décomposition); lal 5 = 199 (CHC 1 la D (C 03) ii) On traite le produit obtenu dans l'exemple 46 (ii) comme décrit ci-dessus sous (i) et on recristallise le produit obtenu dans le méthanol; on obtient le dérivé aminé de l'éther méthylique de TPC-A fondant à 225-231 C (décomposition); lalD = 198 o (CH 013)

EXEMPLE 48

On dissout 100 mg de l'éther méthylique de TPC-A dans 10 ml de 1,2diméthoxyéthane anhydre et on ajoute 240 mg de fluoaluminate de potassium et un excès d'iodure de méthyle; on place le mélange à l'obscurité et on poursuit l'agi- tation à température ambiante pendant une nuit Lorsque la réaction est terminée, on filtre la solution et on distille le

solvant du filtrat sous vide; on purifie le résidu par chromato-

graphie sur couche mince et recristallisation dans le méthanol; on obtient le dérivé N-méthylé de l'éther méthylique de TPC-A ( 98 mg) à l'état de cristaux incolores fondant à 285-2920 C

(décomposition; lal = -166 (CHC 1 l).

D 3

EXEMPLE 49

On dissout 225 mg de TPC-A dans 5 ml de DMF anhydre et on ajoute sous agitation et en refroidissent à la glace 11 mg d'hydrure de sodium On ajoute à la solution par le

mode opératoire habituel 187 mg du bromure de l'acétyl-D-

glucose obtenu à partir de l'acétyl-D-glucose et on poursuit l'agitation pendant 20 h à la température ambiante Lorsque la réaction est terminée,on ajoute 50 ml d'acétate d'éthyle et on lave la solution à deux reprises par l'eau glacée ( 20 ml à chaque fois) et à deux reprises par la saumure saturée ( 20 ml à chaque fois); on sèche sur sulfate de magnésium anhydre et on distille le solvant sous vide; on obtient environ 300 mg de produit huileux épaix blanc ou jaune clair A la substance huileuse, on ajoute 10 ml d'une solution aqueuse de carbonate de potassium à 5 % et 10 ml de méthanol, on porte au reflux à chaud pendant l h sous agitations on ajoute 30 ml d'eau glacée et on extrait à trois reprises par 30 ml d'acétate d'éthyle à chaque fois On combine les extraits, on lave par ml de saumure, on sèche sur sulfate de magnésium anhydre et on distille le solvant sous vide; on obtient environ 200 mg d'une substance solide blanche qu'on soumet à chromatographie

sur une colonne de gel de silice en éluant par un mélange chloro-

forme/méthanol, 10:0,5, qui élimine la partie soluble puis par un

mélange chloroforme/méthanol, 10:2, et on recueille les éluats.

On obtient ainsi 53 mg de dérivé de glucoside du TPC-A fondant à

210-216 C (décomposition); lal 5 = _ 203 (Et O Hl).

Essais sur animaux d'expérience: On a étudié dans des essais sur animaux l'action antinéoplastique in vivo sur tumeur implantée des composés selon l'invention; on a utilisé comme animaux d'expérience des souris

CDF 1.

Dans la cavité péritonéale de chaque groupe de souris consistant en six souris CDF 1 par groupe, on a implanté

110 /0,1 ml de cellules P-388 ou 105/0,1 ml de cellules L-1210 o Pen-

dant une durée de 24 h à 5 jours après l'implantation des cellules on a administré la quantité voulue des composés de l'invention par

voie intrapéritonéale à des doses de 0,05, 0,5, 2, 4 ou 10 mg/kg.

On a implanté de la même manière les cellules P-388 et L-1210 au groupe de souris CDF 1 témoin et on les a nourris mais on n'a pas administré les composés On a observé la différence dans les taux d'apothanasie entre les groupes d'animaux; les résultats obtenus

scnt rapportés dans le tableau 6 ci-après.

TABLEAU 6

P 388

Composé Rapport essai/témoin, % dose, mg/kg

0 _ 05 05 2 4 10

Témoins 100 100 100 100 100

TPC-A 187,4

Ether méthylique de TPC-A 130 1 156 7 164,2 173,6 (dose, 0,01) Ex 2 110,3 137,3 153,5 173,0 Ex 3 137,3 165,4 162,2 Ex 5 142,4 175,1 105,4 Ex 7 122, 2 142,7 165,4 Ex 8 115,8 144,7 150,1 164,0 TABLEAU 6 (suite) P 388 Composé Témoins Ex 9 Ex 10 Ex 16 o 10 Ex 19 ( 2) Ex 20

EX 21

Ex 22

EX 23

EX 24

Ex 25 Ex 26

EX 27

Ex 28 Ex 29 Ex 30 Ex 32 Ex 40

EX 41

Ex 42 Ex 43

EX 44

EX 45

0, 05 136,1 112,5 126,5 113,8 138,4 133,6 133,3 129,0 ,1 124,1 124,1 117, 9 113,6 126,7 122,0 127,8 111,6 117,9 114,6 116,6 116,6 121,7 Rapport essai/témoin, % Dose, mg/kg

0,O 5 2 4

100 1 (

146,8 162,9 L

141,5 150,1 1

162,2 164,3

139,6 141,7 11

164,3 121,1

143,2 151,6

,6 168,9

,3 164,4

144,2 155,9

,7 155,9

148,5 162,3

149,5 157,9

144,0 150,1

146,7 166,7

146 3 151,6

,6 175,6

133,9 152,1

147,4 158,9

,0 159,2

142,0 154,2

,1 165,3

,0 162,3

)0 o 100 52,2 ,4 53,1 197,2 194,7 ,0 ,0 183,5 186,6 171,6 168,9 ,6 183,3 Parmi les tests d'orientation servant à confirmer les propriétés antinéoplastiques de certains composés, on utilise deux types d'essais: dans l'un de ces types, il

s'agit d'essais "in vitro" dans lesquels on utilise des cel-

Iules de carcinome en propagation dans un tube à essai; dans l'autre type, il s'agit d'essais "in vivo" dans lesquels on utilise des animaux sur lesquels on a implanté des cellules de carcinome Au Japon, lessai'In vivo" est habituellement réalisé avec la tumeur d'Ehrlich, des cellules L- 1210, des cellules de sarcome 180, le sarcome d'Yoshida ou la tumeur

ascitique du foie, en tant que tumeur ascitique, et le carci-

nome immobilisé mentionné ci-dessus en tant que carcinome

fixé Récemment, on a mis au point une nouvelle méthode per-

mettant de confirmer les propriétés antinéoplastiques dans

laquelle on utilise des cellules P-388 de leucémie lympho-

cytique Il est connu que les cellules P-388 ont une sensibi-

lité plus forte que les cellules L-1210 Parmi les carcinomes fixés, on peut citer par exemple le cancer du poumon de Lewis, le mélanome B-16, les carcinomes MM 2, MOPC 104 E,

Colon 26, MH 134, C-1498 et analogues.

Dans les essais d'orientation tels que décrits

ci-dessus, les composés selon l'invention se sont avérés effi-

caces à l'égard des cellules P-388 On a en outre constaté que les éthers et esters dérivés de TPC-A étaient efficaces sur les tumeurs ascitiques autres que la tumeur P-388; en particulier, l'ester acétique, l'ester caprique et l'éther n-hexylique du TPC-A se sont également avérés efficace contre le mélanome B-16 et le carcinome MM 2 (cf tableau 7) _

___________ TABLEAU 7 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _

P 388 L 1210 B 16 b M 12 Composé Dose (jrp j p> (i ? j p> (i P i ?) (j p j p> mg/kg Essai/ témoin, % Essai Itémroin, % Essai/témoin, %Essai/témoin, Ether 0,01 130,1 105,6 méthylique 0,5 156,7 118 e 6 13358 ( 0125 M/kg) 10311 ( 0,2 ng/kg du 1 159 9 ( 1 T= 400) 12097 135,3 103,1

TPC-A 2 16492 129,3 139,1 118,4

4 173,6 137,3 < 5 itg/kg) 143,0 9018 ( 5 n-g/kg) de 0,05 133,3 100,9 l'exemple 0,> 5 1, 116,9 102,5 22 2 168,99 <IT= 278) 114 4 128 e 5 109,2 175,8 120,0 147,8 < 4 ng/kg) 117,8 194,7 128,9 141,1 <( 8 nrg/kg) 120,9 de 0, 05 130,4 l'exemple 0,5 14355 115,6 1301,5 110,3 2 2 150 e O (IT =* 100) 126,6 158,2 129,3 <( 3/6 60 <)

4 130, 9 136,2 161,8 ( 1/7 60 <)

176,1

de 0,01 133,j 7 l'exemple 0,1 135,99

21 0,5 (-LT-200) 115,6 143,5 112,1

2 152,2 12696 152,0 127,3 < 2/6 60 <)

_____________ 5 67,3 ( 1 Oni/kg,) 165,5 93, 9 ( 1 O rng/kg)

IT indice théiài Peutique.

t' ru> u L o> Ln -.4 -'I

10577

Essai de toxicité On a déterminé la dose létale des composés de l'invention de la manière suivante: On a utilisé comme animaux d'expérience des souris mâles CD-1 (ICR) de 4 semaines, à raison de 5 à 10 animaux par

groupe; on a mis la quantité voulue de chaque composé de l'inven-

tion en suspension dans une solution de carboxyméthylcellulose à 0,5 % et on a administré la suspension à chaque souris par voie

intrapéritonéale ou intraveineuse En comptant les animaux survi-

vants et morts et en observant les symptômes généraux durant 7 jours après l'administration des composés, on a estimé la valeur de DL 50 pour chaque composé à partir de la population létale observée sur la base de la méthode de Litchfield-Wilcoxon Les résultats

obtenus sont rapportés dans le tableau 8.

TABLEAU 8 -

DL 50 et limite de confiance 95 % (mg/kg) Mode d'adminis TPC-A Ether méthy Ester acétique tration lique de TPC-A de TPC-A Intrapéritonéal 16,0 ( 13,3-19,3) 10,0 ( 7,0-14,3) 18,4 ( 16,9-20,0) Intraveineuse 34,0 ( 28,141,2) 16,5 ( 12,6-21,5) 20,0 ( 15,2-28,3) Les résultats rapportés dans le tableau 8 montrent que les valeurs de DL 50 pour les composés énumérés sont plus basses

par administration intrapéritonéale que par administration intra-

veineuse Il s'agit d'une tendance tout à fait différente de celle

observée avec les médicaments usuels.

Etude d'autres effets pharmacologiques.

Les essais sur animaux décrits ci-dessus montrent

que chaque composé de l'invention possède une activité antinéo-

plastique. On a procédé à d'autres essais dans lesquels on a mis en évidence d'autres effets pharmacologiques des composés

de l'invention.

On a administré chaque composé de l'invention par voir intrapéritonéale à des souris CD-1 (IRC) de 4 semaines (Nippon Charles Liver K K) à la dose de 1 à 20 mg/kg, en utilisant des groupes consistant en trois souris chacun Toutes les 30 min après administration du composé et pendant 180 min au total, on a observé les symptômes ressentis par les souris L'observation a été faite selon la méthode d'Arwin modifiée et la méthode de

Smith, c'est-à-dire une méthode d'observation neuropharmacologique.

multidimensionnelle. En établissant une comparaison entre le symptôme

observé et le modèle de l'action pharmacologique due à des médi-

caments connus, on a trouvé que chaque composé de l'invention pré-

sentait l'effet pharmacolotique suivant

TABLEAU 9

Composé Effet pharmacologique estimé TPC-A Action émétique, action anorexigène,

action psychotrope, action vasoconstric-

trice, action papavérinique, action antiparkinsonienne Ether méthylique de TPC-A Action émétique, action anorexigène Ester acétique de TPC-A Action émétique, action psychotrope,

action antidiurétique.

Claims

R E V E N D I C A T I O N S

1 Composés, caractérisés en formule générale (I): ce qu'ils répondent à la

0 CH 3O R

* f 2 t3 "i, 2 CH C N CH C N CH Ci 3

1 1 I

N C%=O

C i

= C N CH

1 1 3

CH N C C Hl N C Ctl Cill-

CH 3 O CI 3 t R 2 CH 3 O Clt 3 Rz Z (I)

@$C H 3

dans laquelle R 1 représente un atome d'hydrogène, un groupe acyle, un groupe alkyle, cycloalkyle, carboxyalkyle éventuellement à l'état d'ester, un groupe hétérocyclique ou un reste de sucre, R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur et

R 3 représente un atome d'hydrogène ou un groupe azoté.

2 Composés selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale (Ia)

0 CH

II 3 il Cil C NH C 1 IC -NH CH C 113 I I 13 N C = O (Ia) I

0 ='C N CH

H 2 il CHN C CH -NHCH 3 Cil CH

CH 3 CH 3 O

dans laquelle R 4 représente un atome d'hydrogène ou un groupe

méthyle.

Rl 3 Procédé de préparation des composés de formule générale (la) selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'on extrait une plante -Rubia spp par un solvant, on concentre l'extrait et on soumet l'extrait brut à chromatographie afin d'isoler et de purifier les composants extraits de la plante. 4 Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que le solvant servant à l'extraction est le méthanol, l'éthanol,

le chloroforme ou l'acétate d'éthyle.

Procédé de préparation des composés selon la revendication 1, répondant à la formule générale: O Cil O If, 3 O I

CH N CH C -N C CH 3

1 1 3

-N C= O

I 1 1

= C N CH 3

CH N C CH -NH C C-CH 2 CH 3

3 et *,.

Cl 3 0 C 113 0

dans laquelle R 5 représente un groupe alkyle, cycloalkyle, carboxy-

alkyle éventuellement à l'état d'ester ou un groupe hétérocyclique et R 3 représente l'hydrogène ou un groupe azoté, ce procédé se caractérisant en ce que l'on fait réagir un composé répondant à la formule R O o CH O Il y 3i HO i CH C -NH CH CH

CH 3 N C = O

o If = N CH 3

CH 2 CI N C CH NH C CU-CH 2 Q CH

21,O C 12, 3

CH 3 O CI 3

3 3 dans laquelle RO 10 représente un atome d'hydrogène ou un groupe nitro, avec un agent alkylant et, lorsque RO 10 représente un groupe

nitro, on réduit le produit alkylé.

6 Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'agent alkylant est le diazométhane, le dihydropyranne ou

un halogénure d'alkyle ou sulfate de diméthyle.

7 Procédé de préparation des composés selon la revendication 1, répondant à la formule générale: o cl O 3 le

C -NH Cil C -NH-

N C Ci -NNHC -

t tg t,

CH 3 O CH 3 O

CH Ci 3

C = O O

N CH 3

CI 2-CH 3

cil-II Qi CH

1 -2 _ 3

dans laquelle R 6 représente un groupe acyle, ce procédé se caracté-

risant en ce que l'on fait réagir un composé répondant à la formule: I Cil Cil C NB Cil N

O = *C

i 2 i si CH 3 H 30

I 3 O

la Cil C NH C Il Ci 13 C = O I

N CH 3

CH NH C CH CH CH,

CH 3 O

avec un agent acylant.

8 Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'agent acylant est un chlorure d'acyle ou un anhydride d'acide.

-CII 2

CH - I N I C 1

C Ht -

9 Procédé de préparation des composés selon la revendication 1, répondant à la formule générale O Cl O O t 1 3 N 1

CH 2 CH C NH CH C -NH-

Cil N 3 1 oi

CH CH N C CH N C -

2, "l o c 3 i O C 113 O Cll CH 3 I C = O

N CH 3

CHC C 3

dans laquelle R représente un groupe azoté, ce procédé se caracté-

risant en ce que l'on soumet un composé répondant à la formule:

0 CH 3 O

H O OH 2 CH C -NI CH C -NH-

g -CH 3 N

0 = C

C O 6 I

Ci 12 Cil N C Ci NH C -

CH 3 O C 113 O

à la nitration, après quoi, si on le désire, on

nitré.

CH CH 3

1 3 C= O

N C 13

i 3 cp Cil Ci 12-k\O ( CH 3 réduit le composé Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que l'on utilise un agent nitrant modéré comme le nitrate de cuivre. 11 Procédé de préparation des composés selon la revendication 1 répondant à la formule générale R 7

0 R 8 O R 8

R 50 __ CH C N Ch CN CI CH 3

2 Il ? -

NCH-N C O

Q O = O N-CHI 3

CI CCH N C CH N -C -CII Q CH 3

2, Il y N12 \

CH 3 O C 13 R 8 O

dans laquelle R 5 représente un groupe alkyle, carboxyalkyle éven-

tuellement à l'état d'ester ou un groupe hétérocyclique et l'un au moins des symboles R 8 représente le groupe méthyle et les autres 1 'hydrogène, ce procédé se caractérisant en ce que l'on fait réagir un composé de formule 0 Ci 13 O 91 ?'3 oil

R 5 1 2 CH C -NH CH C -NH C C 113

* 1 f c CI 3 CC O

Q 00 C N CH

CII CH CH NH C C -CH O -OCH 3

2 Il,, 2 3

CH 3 O CH 3 O

dans laquelle R 5 a la signification indiquée ci-dessus, avec un

agent méthylant.

12 Procédé selon la revendication 11, carac-

térisé en ce que l'agent méthylant est le diazométhane, le sulfate

de diméthyle ou un halogénure de méthyle.

13 Procédé de préparation des composés selon la revendication 1 répondant à la formule générale o

CH C -

i C 1 O t 3 I, Ni CH C NH Cil CH 3

CH -N C = O

7 ___ 3,,,

= CH 3 CHC

C-CH N -C CH NH C C -C 2 X C

CH 3 O CH 3 O

dans laquelle R 9 représente un reste de sucre, ce procédé se caracté-

risant en ce que l'on fait réagir un composé répondant à la formule:

HO 2 CH C -NH -

0 CH N

go 3 1

HO CR 1 CH N C -

U 112 i 1 a C Hl O C 30 Cil O t 3 tl Cl C NH Cll NH C

C 13 O

CH CH 3

I C = O N Cil 3 Cil Ci 12 CH 3 avec un reste de suere activé et protégé, après quoi on élimine

le groupe protecteur.

14 Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que le reste de sucre est un reste de glucose, de galactose,

de rhamnose, de fructose ou de xylose.

15 A titre de médicaments nouveaux, utiles notam-

ment en tant qu'agents antinéoplastiques, les composés selon la

revendication 1.

16 Compositions thérapeutiques contenant en tant

que composant actif au moins un composé selon la revendication 1 -

17 Formes d'administration des compositions théra-

peutiques selon la revendication 16.