FR2575902A1 - Procede de traitement de maladies virales chez des plantes par le 1-b-d-ribofurannosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide et ses derives 2,3,5-triacetylique ou 5'-butyrylique - Google Patents
Procede de traitement de maladies virales chez des plantes par le 1-b-d-ribofurannosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide et ses derives 2,3,5-triacetylique ou 5'-butyrylique Download PDFInfo
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Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
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Abstract
L'INVENTION CONCERNE UN PROCEDE DE TRAITEMENT DE MALADIES VIRALES CHEZ DES PLANTES. LE 1-B-D-RIBOFURANNOSYL-1,2,4-TRIAZOLE-3-CARBOXAMIDE ET SES DERIVES 2,3,5-TRIACETYLIQUE OU 5-BUTYRYLIQUE SONT UTILISES SEULS OU EN ASSOCIATION AVEC D'AUTRES AGENTS ANTIVIRAUX OU AGENTS DE PENETRATION DANS LE TRAITEMENT CURATIF OU PREVENTIF DE MALADIES INDUITES PAR DES VIRUS OU DES VIROIDES CHEZ LES PLANTES. DES VIRUS PARTICULIERS CONTRE LESQUELS L'INVENTION EST EFFICACE COMPRENNENT LES POTEXVIRUS, POTYVIRUS, CLOSTEROVIRUS, TYMOVIRUS, CARLAVIRUS, CUCUMOVIRUS, ILARVIRUS, TOMBUSVIRUS, TOBAMOVIRUS, BROMOVIRUS, LES VIRUS DE LA MALADIE DES TACHES BRONZEES DE LA TOMATE ET LES VIRUS DE LA MOSAIQUE DE LA LUZERNE.
Description
?5902 La présente demande est apparentée au brevet des Etats-Unis
d'Amérique N 4 211 771 délivré Je 8 Juillet 1980, au brevet des EtatsUnis d'Amérique N 3 984 396 délivré le 5 Octobre 1976, au brevet des Etats-Unis d'Amérique N 3 897 415 délivré le 29 Juillet
1975 et Re. N 29 835 redélivré (reissued) le 14 Novembre 1978.
Tous ces documents sont incorporés ici à titre de réfé-
rence. La présente invention a pour objet des agents antiviraux destinés à combattre des maladies virales
des plantes.
Les virus et les viroïdes sont responsables
d'une grande variété de maladies des plantes qui provo-
quent annuellement des pertes importantes et coûteuses
de plantes cultivées. Pour les plantes annuelles culti-
vées à partir de la graine, les pertes varient souvent d'une année à l'autre en fonction des conditions de l'environnement. Les virus provoquent souvent chez des végétaux vivaces tels que les arbres destinés à une coupe de rapport des pertes progressivement croissantes
(appelées baisses) à mesure que les végétaux vieillissent.
Ces maladies chroniques peuvent avoir de très graves
conséquences économiques en raison du temps, de la main-
d'oeuvre, du capital et du terrain investis dans la culture. Les frais liés aux maladies virales de plantes comprennent non seulement les frais de remplacement, mais aussi la perte de production en attendant que la
culture remplacée parvienne à la production totale.
- Dans le cas des arbres à agrumes, par exemple, le pro-
cessus de croissance avant que les arbres ne deviennent
entièrement productifs peut être de plusieurs années.
Des virus provoquent aussi des pertes considérables dans les cultures de plein champ et dans les plantes d'ornement qui se propagent presque exclusivement de façon végétative, notamment les pommes de terre, les fraisiers, la vigne, les arbres à agrumes, les pommiers, les cerisiers, les orchidées, les lys, les iris, les roses et les oeillets. Le virus se maintient dans les
piantes-mères à propagation végétative et toute la des-
cendance est infectée en l'absence d'un programme de traitement et de certification. Il en résulte une perte
chronique de production. En outre, le coût de la surveil-
lance d'aires géographiques pour détecter les tendances à la maladie et les symptômes de la maladie dans des plantes existantes est lié à l'éventualité d'un début
de manifestation de la maladie virale de la plante.
La réduction des rendements en plantes vivrières et en plantes d'ornement qui en résulte fait planer une menace économique importante sur les cultivateurs et
sur les consommateurs.
A l'heure actuelle, le mode de limitation des maladies à virus que l'onadopte le plus fréquemment
est une série de méthodes culturales qui empêchent l'in-
fection des plantes. Les graines certifiées exemptes de virus sont semées dans de la terre qui est traitée par fumigation pour détruire des vecteurs tels que les nématodes. Les lieux ou les heures de semailles sont choisis de manière à éviter les vecteurs aériens naturels tels que pucerons et cicadelles. En vue de minimiser les centres initiaux d'infection, on choisit les aires
de semailles de manière qu'elles ne soient pas forte-
ment envahies par des plantes adventices ou naturelles qui abritent les virus en question. Si ces réservoirs d'hôtes alternés existent, il peut être nécessaire de prévoir une période d'inculture pour rompre les cycles naturels qui permettent aux virus de passer de la plante cultivée au réservoir et vice versa. Un autre type de
lutte consiste à sélectionner des plantes pour la résis-
tance aux virus. Cela est efficace lorsqu'il existe des sources de résistance qui peuvent être inculquées sélectivement à des plantes intéressantes, du moment qu'il n'apparaît pas de souches nouvelles du virus qui puissent vaincre la résistance. Toutefois, ce procédé n'est pas efficace contre des variétés résistantes dans certaines plantes cultivées. Souvent, la sélection n'est pas une mesure de limitation possible à cause de la
pénurie de sources de gènes convenables de résistance.
Le problème majeur lié aux méthodes de limi-
tation mentionnées ci-dessus réside dans le fait que ni les techniques d'aménagement ni la sélection pour la résistance ne sont efficaces dans le cas de nombreuses maladies virales. En contraste avec d'autres parasites et maladies des plantes, les cultivateurs ne disposent pas de moyens efficaces de lutte chimique. En conséquence, de nombreuses maladies échappent à la lutte. Les plantes sensibles n'ont pas de mécanismes de défense pour se débarrasser de virus une fois qu'elles sont infectées, contrairement aux animaux qui ont un système immunitaire bien développé. Une fois qu'une plante est infectée,
elle l'est pour la vie.
Le but de la présente invention est de trou-
ver un agent antiviral qui soit actif dans le traitement curatif et préventif d'une grande variété de maladies des plantes dues à des virus ou des viroldes, qui soit actif à de faibles concentrations permettant des effets réglables et qui puisse être délivré efficacement à la plante atteinte, par divers procédés et à divers
stades du développement de la plante.
La présente invention est orientée sur l'uti-
lisation du composé appelé 1-p-D-ribofurannosyl-1,2,4-
triazole-3-carboxamide et sur ses dérivés 2,3,5-triacé-
tyliques et 5'-butyryliques dans le traitement de mala-
dies causées aux plantes par divers virus. Il a été
montré que le 1-j-D-ribofurannosyl-1,2,4-triazole-3-
carboxamide et ses dérivés présentaient une activité antivirale à large spectre. Les composés peuvent être
administrés à des plantes par arrosage du sol, topique-
ment, par injection ou en pulvérisation foliaire. En outre, les composés peuvent être administrés seuls ou conjointement avec d'autres agents de pénétration tels que, par exemple, le diméthylsulfoxyde (DMSO) et le diméthylformamide (DMF) ou des agents antiviraux tels
que, par exemple, l'adénine-arabinoside, selon l'environ-
nement et l'entité virale particulière qui est traitée.
Le brevet des Etats-Unis d'Amérique N 3 798 209 précité, redélivré le 14 Novembre 1978 sous
le numéro Re. 29 835 précité, a fait connaître le 1-
0-D-ribofurannosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide come acent antiviral présentant une activité antivirale à large
spectre tant in vitro qu'in vivo. Les dérivés 2,3,5-
triacétyliques et 5'-butyryliques du 1-p-D-ribofurannosyl-
1,2,4-triazole-3-carboxamide qui montrent également une activité antivirale ont été révélés, respectivement, dans les brevets des EtatsUnis d'Amérique N 3 897 415
et N 3 984 396 précités.
On donne ci-dessous une description détaillée
de l'utilisation du 1-p-D-ribofurannosyl-1,2,4-triazole-
3-carboxamide (ou de ses dérivés) seul ou en association avec d'autres agents antiviraux dans le traitement de
diverses maladies virales des plantes. Pour l'illustra-
tion de l'invention donnée ci-après, le 1-0-D-ribofuran-
nosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide et ses dérivés seront appelés indifféremment (a) le composé, (b) la Ribavirine (dénomination sans droit de propriété admise par l'Adopted Names Council des Etats-Unis d'Amérique) ou
(c) par leur nom chimique indiqué ci-dessus.
Une utilisation potentielle de la Ribavirine
est son application comme traitement préventif ou théra-
peutique de plantes infectées par des virus. Pour des plantes cultivées en plein champ, tout traitement capable de retarder la date à laquelle la plupart des plantes montrent les effets d'une infection virale peut être efficace comme procédé de lutte. Une approche consiste à combiner une couverture réfléchissante du sol pour repousser les vecteurs aériens avec un virocide tel que la Ribavirine. Une seconde approche pour des maladies se développant en plein champ consisterait à traiter par pulvérisation avec la Ribavirine des mauvaises herbes cibles, mieux connues comme étant des réservoirs à virus des plantes cultivées. L'avantage de l'utilisation de Ribavirine au lieu d'un herbicide sous ce rapport, est d'empêcher la destruction de toutes les mauvaises herbes et des plantes sauvages traitées par pulvérisation,
et pas seulement des plantes cibles.
La Ribavirine est également utile pour les plantes d'ornement. Dans le cas de plantes d'ornement, le caractère moins attrayant qui résulte des symptômes de l'infection virale est peut-être plus important que les pertes de produit dues au virus. Des plantes qui sont dépourvues d'entités virales seraient également exemptes de symptômes de maladie qui se manifestent souvent par des mouchetures et des cicatrices, réduisant ainsi l'aptitude à la vente de plantes d'ornement qui
sont vendues pour l'attrait visuel qu'elles produisent.
La Ribavirine pourrait être très utile en tant qu'outil pour faciliter la production de plantes dépourvues de virus et pour accroître la production et améliorer la qualité de la génération de plantes suivante. Cela pourrait être accompli dans la production de souches exemptes de virus de plantes à multiplication végétative telles que les arbres fruitiers et les noyers, les fraisiers ou les pommes de terre. A titre de variante, la Ribavirine pourrait être incorporée aux méthodes normales de multiplication par culture de tissus que l'on utilise de façon classique pour la multiplication de nombreuses plantes d'ornement. La Ribavirine présente également un intérêt comme moyen de traitement des graines
pour empêcher la transmission de virus par les semences.
Une autre utilisation potentielle de la Riba-
virine réside dans l'élimination de virus ou le maintien de tissus végétaux dans un état dépourvu de virus pendant des techniques classiques de multiplication qui sont actuellement en cours de développement. Un exemple en est l'utilisation d'embryons somatiques encapsulés pour multiplier des tissus somatiques afin d'empêcher une variation sexuelle ou la nécessité d'une sélection plus poussée des plantes. La Ribavirine peut être utile en particulier pour entretenir des plantes dépourvues de
virus, par son application à des embryons somatiques.
Certaines plantes peuvent être multipliées de façon asexuée, interdisant des modifications génétiques dans leur descendance, qui pourraient autrement apparaître par multiplication sexuée à partir de la graine. Le traitement d'embryons somatiques à la Ribavirine avant l'encapsulation protège la descendance des plantes dans un état dépourvu de virus. Le composé pourrait aussi être utilisé en association avec des méthodes de génie génétique de mise au point récente concernant les plantes, dans lesquelles la Ribavirine pourrait être incorporée
à des méthodes normales de multiplication. Le 1-5-D-
ribofurannosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide et ses esters (ester de 2,.3, 5-triacétyle et ester de 5'-butyryle) sont solubles dans l'eau et peuvent être administrés à des plantes, à des semences, à des porte-greffes et au sol conformément à la présente invention sous la forme d'une solution aqueuse. Les composés sont également solubles dans des solutions d'alcool (5 à 15 % en volume) et d'eau, de diméthylformamide (DMF) (5-25 %) et d'eau, de diméthylsulfoxyde (DMSO) (5-25 %) et d'eau, et de
diméthylsulfoxyde seul.
Les modes d'application de la Ribavirine peuvent être groupés en trois catégories: (1) traitements thérapeutiques de plantes entières; (2) production de plantes dépourvues de virus par culture de tissus; et
(3) traitement des semences.
Le composé peut être appliqué en pulvérisa-
tion foliaire à des plantes entières en association avec des additifs qui devraient faciliter la pénétration et la couverture. La Ribavirine à des concentrations comprises dans l'intervalle d'environ 100 à environ 2000 millionièmes est efficace pour des applications
foliaires et pour l'arrosage du sol.
Dans le traitement d'arbres, lorsque la taille et les conditions de l'environnement interdisent l'utilisation d'une application foliaire, le composé pourrait être injecté dans le tronc par écoulement par
gravité ou par injection sous pression comme on le prati-
que à l'heure actuelle avec des fongicides systémiques et des antibiotiques. Plusieurs approches par lesquelles la Ribavirine pourrait être utilisée pour produire des plantes dépourvues de virus sont possibles. L'une de ces approches consisterait à traiter des plantes entières
comme décrit ci-dessus pour obtenir des zones plus gran-
des dépourvues de virus près des parties apicales de croissance. Une autre approche consisterait à régénérer de grandes pousses apicales sur des milieux contenant
de la Ribavirine pour éliminer le virus.
La Ribavirine pourrait aussi être incorporée
comme composant aux milieux utilisés pour la multipli-
cation normale de cultures de tissus végétaux. Un traite-
ment pourrait être accompli à différents stades de déve-
loppement du protoplaste végétal, du bourrelet cicatri-
ciel, d'embryons ou de plantules. La Ribavirine se révèle
être plus efficace pendant certains stades de dévelop-
pement de certaines plantes. Des concentrations d'environ
à environ 400 pm sont efficaces.
Au moins deux procédés qui pourraient être utilisés pour le traitement de graines infectées par des virus comprennent le traitement de plantes entières comme décrit ci-dessus pour assurer que les semences produites n'abritent pas de virus et le traitement de semences produites sur des plantes infectées par le virus avec le potentiel de transmission, pour empêcher
que les plantes résultantes ne deviennent infectées.
La Ribavirine pourrait aussi former un revêtement sur la graine, imbiber des semences ou être appliquée par
arrosage abondant du Sol.
En outre, la Ribavirine peut être utilisée
comme l'un des composants d'un traitement chimique mul-
tiple de tissus infectés par un virus.
Il est évident d'après les commentaires qui précèdent que la Ribavirine serait utile pour le traitement préventif et curatif de maladies virales des plantes dans des applications tant en serre qu'en
plein champ.
Il a été démontré que la Ribavirine était active contre des virus appartenant aux groupes de virus attaquant les plantes indiqués ci-après: potexvirus,
potyvirus, clostérovirus, tymovirus, carlavirus, cucumo-
virus, ilarvirus, tombusvirus, virus de la maladie des taches bronzées de la tomate et virus de la mosaliquede
la luzerne. Les virus des groupes tobamovirus et bromo-
virus ne sont que légèrement sensibles à la Ribavirine.
Le tableau suivant illustre les types de
maladie virale contre lesquels la Ribavirine s'est révé-
lée efficace.
TABLEAU
Maladies virales des plantes contre lesquelles la Ribavirine est efficace Type de culture Plante cul- Virus Groupe de virus _ _ _ _ _ _ _ tivée céréales sorgho virus de la mosaique potyvirus du nanisme du mais céréales blé virus de la mosa que tobamovirus du blé transmise par le sol, virus de la mosalque du brome brcovirus champ et luzerne virus de la mosaique virus de la fourrage de la luzerne mosaïque de la virus latent de luzerne la luzerne carlavirus champ et virus de la jaunisse clostérovirus fourrage betterave de la betterave virus de la mosaîque de la betterave potyvirus champ et mais virus de la mosaique fourrage du nanisme du mais potyvirus champ et soja virus de la mosaique fourrage du soja potyvirus légumes crucifères virus de la mosaique du navet potyvirus légumes cucurbitacées virus 1 et 2 de la
mosaique de la pas-
tèque potyvirus virus de la mosaique du concombre cucumovirus légumes laitue virus de la mosaique de la laitue potyvirus agent de la maladie virus non des grosses nervures groupé de la laitue légumes piments virus de la gravure du tabac potyvirus -virus Y de la pomme de terre potyvirus virus de la marbrure des nervures du piment potyvirus virus de la marbrure du piment potyvirus virus-de la mosaique du concombre cucumovirus virus de la mosaique du tabac tobamovirus 1 0 TABLEAU (Suite) Type de Plante culture cultivée Virus Groupe de virus légumes tomate virus de la mosaique de la tomate tobamovirus virus de l'aspermie de la tomate cucumovirus
virus de-la maladie des virus de la mala-
taches bronzées de la die des taches tomate bronzées de la tomate virus de la gravure du tabac potyvirus plantes oeillet virus des taches nécroclostérovirus ornemen- tiques de l'oeillet tales virus de la marbrure de l'oeillet tombusvirus plantes iris virus de la mosalque de ornemen- l'iris barbu potyvirus tales virus de la mosaique jaune du haricot potyvirus plantes liliacées virus asymptomatique du ornemen- lys carlavirus tales virus de la mosaique du concombre cucumovirus
plantes orchidées virus des taches annu-
ornemen- laires de l'Odontoglossum tobamovirus tales virus de la mosalque du Cymbidium potexvirus plantes rosacées virus de la mosaique du ornemenpommier ilarvirus
tales virus des taches annu-
laires nécrotiques du prunus ilarvirus
arbres pommier virus des taches chloro-
fruitiers tiques des feuilles du pommier clostérovirus virus des rainures de la tige du pommier clostérovirus virus de la mosaCque du pommier Tulare ilarvirus virus de la mosaique du pommier ilarvirus
arbres cerisier virus des taches annu-
fruitiers - laires nécrotiques du prunus ilarvirus virus du nanisme du prunier ilarvirus 1 1 TABLEAU (Suite) Type de Plante culture cultivée Virus Groupe de virus arbres agrumes virus du tristeza des -fruitiers agrumes - clostérovirus légumes pomme de virus X de la pomme de terre terre potexvirus virus Y de la pomme de terre potyvirus virus S de la pomme de terre carlavirus Dans une étude, l'efficacité antivirale de la Ribavirine a été testée contre le virus de la
mosaïque du tabac (TMV) et le virus de la marbrure chloro-
tique du pois de Chine (CCMV). Une souche U1 de virus de la mosafque du tabac a été entretenue dans des plants
de tabac (Nicotiana Tabacum L. "Xanthi") et l'infec-
tiosité a été titrée sur tampon au phosphate de potas-
sium 0,01 M à pH 7,0 avec 1 % de "Celite", par la méthode de la demifeuille sur Nicotiana Tabacum L. "Xanthi Nc" avec 6 à 12 répliques de chaque inoculum selon
une répartition statistique. Le virus de la mar-
brure chlorotique du pois de Chine a été maintenu dans des plants de pois de Chine (Vigna Unguiculata L. Walp, "California Blackeye") et l'infectiosité de la sève diluée avec le tampon ci-dessus a été analysée par la
méthode des demi-feuilles sur soja (Glycine Max L.).
Quatre heures après l'inoculation mécanique, des disques
de 7 mm de diamètre ont été détachés des feuilles inocu-
lées. Dix disques par traitement ont été traités par infiltration sous vide avec la solution appropriée d'agent chimique, puis on les a laissés sécher sur des serviettes de papier pendant 10 à 15 minutes. On a- fait flotter les disques sur la solution d'agent chimique dans des
boites de Pétri de 3,5 cm dans une chambre de développe-
ment des plantes à 25 C avec une période d'éclairement d'environ 15 000 lm/m2 de 14 heures. Des disques témoins
ont été traités de la même façon avec de l'eau distillée.
Après incubation pendant 96 heures, tous les disques ont été retirés des substances chimiques et congelés
à -20 C jusqu'au moment de l'analyse de l'infectiosité.
L'infectiosité des disques traités avec les substances chimiques a été comparée à celle de disques traités
à l'eau. Chaque substance chimique a été testée à deux-
quatre concentrations différant d'un facteur cinq et chaque essai a été répété au moins deux fois. Le milieu
normal pour activer la croissance du cal du tabac consis-
tait en sels de Murashige et Skoog additionnés d'un supplément de 3 mg/1 d'acide indole-acétique, 0,3 mg/l de kinétine et 40 g/1 de saccharose en gélose à 0,8 Z. Le milieu de régénération était le même, à la
différence qu'il contenait 0,3 mg/l d'acide indole-
acétique avec addition de 10 mg/l de N6-isopentényl-
adénine. Le tissu du cal a été engendré à partir de tissus médullaires de plants de tabac infectés avec le TMV. Les substances chimiques ont été stérilisées
par filtration et ajoutées au milieu après autoclavage.
Les zones périphériques des cals qui se développaient en présence des substances chimiques ont été retirées de manière à éviter de prendre une partie quelconque
du cal initial de la semence sur lequel on analyse l'in-
fectiosité du TMV. Des pousses nouvelles qui se sont développées sur des milieux contenant les substances chimiques ont été prélevées et analysées de la même façon. Il a été démontré que la Ribavirine inhibait
la multiplication du TMV et du CCMV dans ces systèmes.
La multiplication du CCMV a été plus sensible à la Riba-
virine que ne l'a été celle du TMV. Le cal du tabac
s'est développé et s'est différencié sur une concentra-
tion en Ribavirine double de celle qui était nécessaire pour inhiber la multiplication du TMV dans des disques de feuilles. Toutefois, les cals ou les pousses de tabac nouvellement développés contenaient encore le TMV. La 1 3 concentration en Ribavirine nécessaire pour inhiber à 90 % la multiplication virale dans des disques de feuilles a été de 0,2 mM pour l'inhibition du TMV et
de 0,1 mM pour l'inhibition du CCMV.
D'autres expériences ont été effectuées avec Lilium longiflorum "Arai" qui a été décrit comme difficile à obtenir sous une forme dépourvue de virus, et avec Lilium "Enchantment", tous deux contenant le virus asymptomatique du lys (LSV) et le virus de la panachure de la tulipe (TBV) . Des méristèmes dont la formation avait été provoquée sur des milieux contenant ou non de la Ribavirine ont été isolés, puis cultivés sur un milieu sans Ribavirine. Le nombre de méristèmes formés de façon adventice et le poids moyen des bulbes n'ont pas été influencés notablement par la Ribavirine
dans l'intervalle de concentrations de 0,0 à 40,0 vM.
A 400,0 VM, la croissance des bulbes a été sévèrement réduite. Des échantillons de feuilles des plantes ont été expérimentés pour détecter la présence de LSV et de TBV au moyen du test ELISA, du test de réduction
de l'immuno-diffusion et de la microscopie électronique.
Le pourcentage de plants de L. longiflorum "Arai" infecté
par les virus LSV et/ou TBV a été réduit par la Riba-
virine à 40,0 pM, tandis que pour L. "Enchantment", l'effet est moins évident. Ces expériences permettent de conclure que la Ribavirine peut être un instrument utile pour améliorer le rendement en plantes sans virus lorsque la culture du méristème est appliquée à des
bulbes à fleurs.
Une autre étude a expérimenté l'efficacité de la Ribavirine en association avec l'adénine-arabinoside sur le virus de la mosaïque du tabac dans des cultures
de tissus de tabac. Des cultures de cal de tabac infec-
tées par le virus TMV ont été exposées à différentes associations de Ribavirine et d'adénine-arabinoside 255902t dans un milieu solide favorisant la production de pousses
pendant un mois, et des pousses nouvelles ont été analy-
sées pour la détection du virus. La présence des substances chimiques dans le milieu a réduit la fréquence de production de pousses. Toutefois, dans plusieurs
associations, les pousses régénérées qui ont été ana-
lysées étaient dépourvues de TMV détectable. Lorsqu'elles ont été transférées dans un milieu ne contenant pas les substances chimiques, les pousses restantes ont continué de cro:tre et n'ont pas développé les symptômes du TMV une fois que les plantes ont eu quatre à cinq feuilles d'une longueur supérieure à 1 cm. Certaines des plantes ont été entièrement développées en serre
et étaient dépourvues de TMV lorsqu'elles ont été sou-
mises au test d'infectiosité. La Ribavirine et l'adénine-
arabinoside ont tous deux inhibé efficacement la multipli-
cation du TMV d'après les tests d'infectiosité. La Riba-
virine et l'adénine-arabinoside ont tous deux inhibé efficacement la multiplication de TMV dans des cellules de feuilles lorsque le traitement a débuté immédiatement après l'inoculation. Lorsque des cellules de cal non organisées ont été inoculées avec le virus TMV et traitées à la Ribavirine ou à l'adénine-arabinoside, aucune de
ces substances n'a inhibé la multiplication du TMV.
Toutefois, lorsque la Ribavirine à une concentration de 0,5 à 1,0 mM a été utilisée en association avec l'adénine-arabinoside à une concentration de 0,1 à 1,0 mM dans des cultures de tissus de tabac, la présence
de TMV a été inhibée.
D'autres études portant sur des plantes ornementales telles que des orchidées ont démontré que la Ribavirine était efficace dans l'élimination du virus
habituel pathogène pour les Cymbidiums, souche d'orchi-
dée du virus de la mosaLque du tabac (TMV-0). Des concen-
trations de Ribavirine de 30 à 1000 millionièmes ont été incluses dans des milieux de culture de tissus dans lesquels des orchidées étaient en cours de clonage, et elles ont été utilisées pour traiter -par arrosage et par pulvérisation des plants entiers d'orchidées, d'une manière réglée. Les titres en virus ont été déter- minés par micrographie électronique à transmission et par des tests sérologiques ELISA. En vue de favoriser
la pénétration de la Ribavirine, on a inclus 200 millio-
nièmes de diméthylsulfoxyde (DMSO) dans tous les traite-
ments y compris les témoins. Les études démontrent que des cultures de tissus d'orchidées du genre Cymbidium
peuvent être débarrassées à volonté de la souche déve-
loppée sur orchidée du virus de la mosaïque du tabac.
Des cultures effectuées aux quatre concentrations en Ribavirine utilisées dans cette étude (30, 100, 300 et 1000 millionièmes) ont donné lieu à une croissance nouvelle sans virus. Tous les tissus développés dans ces conditions étaient dépourvus de virus: pousses, racines et corps "non différenciés" ressemblant à des
tiges primaires souterraines bulbeuses.
Des plantes-mères du genre Cymbidium infec-
tées par le virus des taches annulaires de l'Odonto-
glossum (ORSV) ont été régénérées en présence de Riba-
virine. Des méristèmes ou des tiges primaires bulbeuses souterraines de Cymbidium ont été cultivés sur milieu liquide ou solide (à 0,7 % de gélose) KNUDSON C tel
que modifié par MOREL pour des orchidées. Des expé-
riences ont montré que des tiges primaires bulbeuses souterraines saines de Cymbidium issues de graine se sont développées correctement sur des milieux contenant 0, 10 ou 25 millionièmes de Ribavirine, mais se sont nécrosées après culture pendant quatre semaines sur milieu contenant 50 millionièmes de Ribavirine. A partir du sixième repiquage, le virus n'a plus éteé dêtectable par
le test ELISA.
Une autre étude a montré que des variétés cultivées de pomme de terre infectées avec le virus Y de la pomme de terre peuvent être régénérées par cul-
ture de cellules apicales de méristème. Bien que la proportion de plantes saines obtenue par cette technique soit habituellement grande, elle nécessite des milieux complexes et la vitesse de reprise de croissance des explants méristématiques est faible. Des méristèmes
ont été cultivés sur milieu MURASHIGE et SKOOG addi-
tionné de vitamine B5 et de substances de croissance.
D'autres explants (pousses, fragment de pousses, fragments de tige) ont été cultivés sur le milieu de
MURAShIGE et SKOOG sans addition de substances de crois-
sance. La présence du virus Y de la pomme de terre dans
la matière végétale a été contrôlée avant et après cul-
ture in vitro par indexation biologique sur des plants de tabac d'essai et par sérologie (ELISA). Les résultats ainsi obtenus ont confirmé l'élimination du virus Y de la pomme de terre de plants infectés, par culture de méristème. L'addition de Ribavirine (10, 25 et millionièmes) a amélioré la vitesse de régénération, mais la phytotoxicité aux concentrations d'inhibition du virus rend cette substance chimique inadaptée comme inhibiteur de virus avec la culture de méristème venant de pomme de terre infectée par le virus Y de la pomme de terre. Toutefois, pour d'autres types d'explants (pousses, morceaux de pousses et fragments de tige),
la Ribavirine à la dose de 25 ou 50 millionièmes a nota-
blement amélioré le nombre de plantes sans virus obtenues
après culture in vitro pendant trois à quatre semaines.
Des tiges bulbeuses souterraines primaires de Cymbidium
infectées avec le virus des taches annulaires de l'Odonto-
glossum ont été placées en vue de la prolifération sur
milieu liquide KNUDSON C contenant 0, 10, 25 ou 40 millio-
nièmes de Ribavirine. Après cultures de repiquage de trois mois sur le même milieu, la Ribavirine à la dose de 10 millionièmes n'a pas inhibé la multiplication de l'ORSV, tandis que la concentration du virus diminuait progressivement dans les tiges souterraines bulbeuses primaires obtenues sur 25 millionièmes de Ribavirine. L'invention révèle par conséquent un agent antiviral qui est efficace contre certaines maladies
virales ou induites par des viroides chez les plantes.
Il va de soi que sa description n'a été faite qu'à
titre illustratif, mais nullement limitatif, et que de nombreuses modifications peuvent y être apportées
sans sortir de son cadre.
Claims (18)
1. Procédé de traitement de plantes pour prévenir ou arrêter des maladies induites par des virus ou des viroldes, caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer une quantité efficace de 1-e-D-ribofurannosyl-
1,2,4-triazole-3-carboxamide ou de son dérivé 2,3,5-
triacétylique ou 5'-butyrylique.
2. Procédé suivant la revendication 1, carac-
térisé en ce que la maladie induite par des virus ou par des viroïdes est causée par un virus choisi dans
le groupe formé de tobamovirus, clostérovirus, tombus-
virus, carlavirus, cucumovirus, potexvirus, ilarvirus, potyvirus, bromovirus, tymovirus, virus de la mosaïque de la luzerne et virus des taches bronzées de la
tomate.
3. Procédé suivant la revendication 1, carac-
térisé en ce qu'une quantité efficace du 1-3-D-ribo-
furannosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide ou de son dérivé 2,3,5triacétylique ou 5'-butyrylique est appliquée
par arrosage abondant du sol.
4. Procédé suivant la revendication 1, carac-
térisé en ce qu'une quantité efficace du 1-0-D-ribo-
furannosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide ou de son dérivé 2,3,5triacétylique ou 5'-butyrylique est appliquée
par injection sous pression ou par gravité.
5. Procédé suivant la revendication 1, carac-
térisé en ce qu'une quantité efficace du 1-5-D-ribo-
furannosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide ou de son dérivé 2,3,5triacétylique ou 5'-butyrylique est appliquée
en pulvérisation foliaire.
6. Procédé suivant la revendication 1, carac-
térisé en ce que le 1-5-D-ribofurannosyl-1,2,4-triazole-
3-carboxamide ou son dérivé 2,3,5-triacétylique ou 5'-, butyrylique est utilisé en association avec une quantité efficace de diméthylsulfoxyde (DMSO) comme agent de pénétration ou d'autres agents de pénétration et de surfactants.
7. Procédé suivant la revendication 1, carac-
térisé en ce qu'une quantité efficace du 1-p-D-ribo-
furannosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide ou de son dérivé 2,3,5triacétylique ou 5'-butyrylique est incorporée à des cultures de tissus utilisées pour la multiplication
de plantes.
8. Procédé de traitement de plantes pour prévenir ou arrêter des maladies induites par des virus ou des viroides, caractérisé en ce qu'il consiste à
appliquer une quantité efficace de 1-5-D-ribofurannosyl-
1,2,4-triazole-3-carboxamide ou de ses dérivés 2,3,5-
triacétylique ou 5'-butyrylique en association avec une couverture réfléchissante pour repousser des vecteurs aériens qui transmettent des maladies virales à des plantes.
9. Procédé pour prévenir une maladie virale ou induite par des viroldes chez des plantes, caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer une quantité efficace de 1-1-D-ribofurannosyl1,2,4-triazole-3-carboxamide ou de son dérivé 2,3,5-triacétylique ou 5'butyrylique à des mauvaises herbes-cibles connues comme étant des
réservoirs à virus des plantes cultivées.
10. Procédé suivant la revendication 3,
caractérisé en ce que le 1-5-D-ribofurannosyl-1,2,4-
triazole-3-carboxamide ou son dérivé 2,3,5-triacétylique
ou 5'-butyrylique est appliqué à une concentration d'en-
viron 100 à environ 2000 millionièmes.
11. Procédé suivant la revendication 5,
caractérisé en ce que le 1-g-D-ribofurannosyl-1,2,4-
triazole-3-carboxamide ou son dérivé 2,3,5-triacétylique
ou 5'-butyrylique est appliqué à une concentration d'envi-
ron 100 à environ 2000 millionièmes.
12. Procédé suivant la revendication 7,
caractérisé en ce que le 1-3-D-ribofurannosyl-1,2,4-
triazole-3-carboxamide ou son dérivé 2,3,5-triacétylique ou 5'butyrylique est incorporé auxdites cultures de tissus à une concentration d'environ 10 à environ 400 VM.
13. Procédé de traitement de plantes pour prévenir ou interrompre la maladie virale induite par le virus de la mosalque du tabac dans des cultures de
tissu cicatriciel de tabac, caractérisé en ce que du-
1-t-D-ribofurannosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide ou son dérivé 2,3,5triacétylique ou 5'-butyrylique à une concentration comprise dans l'intervalle d'environ 0,5
à environ 1,0 mM et de l'adénine-arabinoside à une concen-
tration dans l'intervalle d'environ 0,1 à 1,0 mM sont
incorporés au milieu solide induisant la pousse.
14. Procédé pour prévenir des maladies indui-
tes par des virus ou des viro des chez des plantes, caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer à la semence
végétative-une quantité efficace de 1-e-D-ribofurannosyl-
1,2,4-triazole-3-carboxamide ou de son dérivé 2,3,5-
triacétylique ou 5'-butyrylique.
15. Procédé pour prévenir des maladies indui-
tes par des virus ou des viroides chez les plantes,
caractérisé en ce qu'il consiste à incorporer une quan-
tité efficace de 1-D-D-ribofurannosyl-1,2,4-triazole-
3-carboxamide ou de son dérivé 2,3,5-triacétylique ou.
'-butyrylique à la terre de culture en pots destinée à être utilisée en serre ou dans des parcelles de culture
expérimentale, à titre prophylactique.
16. Procédé suivant la revendication 1,
caractérisé en ce que le 1-5-D-ribofurannosyl-1,2,4-
triazole-3-carboxamide ou ses dérivés 2,3,5-triacétylique
ou 5'-butyrylique sont appliqués en solution aqueuse.
17. Procédé suivant la revendication 1,
carctérisé en ce que le 1-0-D-ribofurannosyl-1,2,4-
triazole-3-carboxamide ou ses dérivés 2,3,5-triacétylique ou 5'butyrylique sont appliqués dans une solution d'eau
et d'alcool (environ 5 % à environ 15 % en volume).
18. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le 1-5-Dribofurannosyl-1,2,4- triazole-3-carboxamide ou ses dérivés 2,3,5triacétylique ou 5'-butyrylique sont appliqués dans une solution d'eau
et de diméthylformamide (environ 5-25 % en volume).
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