LU86244A1 - Compositions et methode de traitement des maladies virales chez les plantes - Google Patents

Compositions et methode de traitement des maladies virales chez les plantes Download PDF

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Richard Monroe Fallis
Roberts Angus Smith
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Vira Tek Inc
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    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/64Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/647Triazoles; Hydrogenated triazoles
    • A01N43/6531,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles

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Description

-t 1 % "Compositions et méthode de traitement des maladies virales chez les plantes”.
La présente invention est relative à des agents antiviraux pour combattre les maladies virales chez les plantes.
5 Les virus et les viroïdes sont responsables d’un grand nombre de maladies chez les plantes, qui provoquent chaque année des pertes importantes et coûteuses aux cultures. Pour ce qui est des cultures annuelles se développant à partir de graines, les pertes varient souvent d'une année à l'autre suivant les conditions ambiantes. 10 Les virus dans les cultures d'arbres (vivaces) entraînent souvent ' des pertes croissant progressivement (appelées dépérissements) au fur et à mesure du vieillissement des plantations. Ces maladies chroni-; ques peuvent entraîner des conséquences économiques très graves compte tenu du temps, du travail, du capital et du terrain investis 1-5 dans la culture. Les coûts associés aux maladies virales dans les plantations comprennent non seulement les frais de remplacement mais également la perte de récolte pendant que l'on attend que la culture remplacée atteigne sa pleine production. Par exemple, dans le cas des citrus , le processus de croissance avant que les arbres 20 ne soient totalement productifs peut prendre plusieurs années. Les virus provoquent également des pertes considérables dans les cultures de champ et les plantes ornementales, qui ne se reproduisent pour la plupart qu'exclusivement par voie végétative, en particulier les pommes de terre, les framboises, les raisins, les agrumes, les pommes, 2^ les cerises, les orchidées, les lilas, les iris, les roses et les oeillets.
Le virus est maintenu dans les plantations se propageant végétative ment et tous les descendants sont infectés en l'absence d'une thérapie et d'un programme de développement. Le résultat est une perte de récolte chronique. De plus, les coûts de surveillance des zones géogra-50 phiques en ce qui concerne l'évolution de la maladie et les symptômes 4 1 2 de celle-ci dans les plantations existantes sont associés à l'éventualité d'un développement de la maladie virale dans les plantations. La diminution de rendement des récoltes et des plantes ornementales qui en résulte pose un problème économique important aux cultivateurs 5 et au public.
A présent, la lutte la plus fréquemment utilisée contre les maladies virales consiste en une série de méthodes de culture, qui empêchent les plantations de s'infecter. On plante une semence exempte de virus, certifiée dans le sol, qui est fumigé pour 10 détruire des vecteurs, tels que les nématodes. Les emplacements de plantation ou les périodes de plantation sont choisis de manière à éviter les vecteurs aériens naturels, tels que les pucerons et les cicadelies. Afin de minimiser les centres d'infection initiaux, on choisit des aires de plantation qui ne soient pas trop fortement enva-15 hies par des mauvaises herbes ou des plantes indigènes qui servent de nourriture aux virus en question. Si de tels réservoirs d'hôtes existent, il peut s'avérer nécessaire d'avoir une période sans culture de manière à rompre les cycles naturels qui permettent aux virus de se déplacer continuellement de la culture au réservoir et dans 20 le sens inverse. Un autre type de lutte est la sélection de plantes permettant de résister aux virus. Ceci s'avère efficace lorsque l'on est en présence de sources de résistance qui peuvent être reproduites dans des plantes intéressantes, pour autant que n'apparaissent pas de nouvelles souches de virus, qui peuvent surmonter la résistance. 25 Ce procédé n'est, toutefois, pas efficace contre les variétés résistantes dans certaines cultures. Souvent, la sélection de résistance n'est pas un moyen de lutte possible du fait de l'insuffisance de sources de gènes de résistance appropriés.
Le problème majeur associé aux méthodes de lutte 30 susmentionnées est qu'aucune technique de développement ou sélection de résistance n'est efficace pour un grand nombre de maladies virales.
Contrairement aux autres parasites et maladies des plantes, il n'y a aucun moyen de lutte chimique efficace utilisable par les cultivateurs. Par conséquent, un grand nombre de maladies restent incontrôlées. 35 X i . 3
Les plantes sensibles n'ont pas de mécanismes de défense pour se débarrasser elles-mêmes des virus une fois qu'elles sont infectées, à l'instar des animaux qui ont un système immunitaire bien développé.
Une fois qu'une plante est infectée, elle est infectée pour la vie. 5 Les buts de la présente invention consistent à prévoir un agent antiviral, qui est actif dans le traitement et la prévention d'une gamme étendue de maladies de plantes induites par un virus ou un viroîde, qui se révèle actif à de faibles concentrations en procurant des effets contrôlables , et qui peut être distribué de façon 10 efficace à la plante malade par une série de méthodes et à divers stades de développement de la plante.
La présente invention concerne l'utilisation du composé l-P-D-ribofurannosyl-l,2,4-triazole-3-carboxamide et de ses dérivés 2,3,5-triacétylique et 5'-butyrylique dans le traitement des maladies 15 provoquées par divers virus chez les plantes, ainsi que les compositions " contenant de tels composés. Le l-|3-D-ribofurannosyi-l,2,4-triazole-3- carboxamide et ses dérivés ont montré une activité antivirale à large spectre. Les composés peuvent être administrés aux plantes par arrosage du sol, topiquement, par injection ou sous la forme de pulvéri-20 sation foliaire. De plus, les composés peuvent être administrés seuls ou en combinaison avec d'autres agents de pénétration, tels que, par exemple, le diméthylsulfoxyde (DMSO) et le diméthylformamide (DMF), ou d'autres agents antiviraux, tels que, par exemple, l'adénine arabinoside suivant l'environnement et l'entité virale particulière 25 à traiter.
Le brevet des Etats-Unis d'Amérique n° 3.798.209, qui a été redélivré le 14· novembre 1978, sous le n° Re 29.835, décrit le composé l-ß-D-ribofurannosyl-l,2,4-triazole-3-carboxamide comme agent antiviral montrant une activité antivirale à large spectre à 30 la fois in vitro et in vivo. Les dérivés 2,3,5-triacétylique et 5'-butyryli-que du l-{4 D-ribofurannosyl-l,2,4-triazole-3-carboxamide, qui montrent également une activité antivirale, sont décrits respectivement dans les brevets des Etats-Unis d'Amérique nos. 3.897.415 et 3.984.396.
Ce qui suit est une description détaillée de l'utilisation 35 du composé 1- ^-D-ribofurannosyl-l,2,4-triazole-3-carboxamide (ou < 1 * k de ses dérivés) seul ou en combinaison avec d'autres agents antiviraux dans le traitement de diverses maladies virales chez les plantes, ainsi que des compositions contenant de tels composés. Dans le but d'illustrer davantage l'invention, le l-5-D-ribofurannosyl-l,2,4-triazole-3-car-5 boxamide et ses dérivés seront appelés de façon interchangeable (a) le composé, (b) la ribavirine (dénomination non commerciale adoptée par le U.S. Adopted Names Council) ou (c) sous sa dénomination chimique susmentionnée.
Une utilisation possible de la ribavirine réside dans le traitement préventif ou thérapeutique des plantes infectées par un virus. Pour ce qui est des plantes de culture, tout traitement qui peut retarder la date à laquelle la plupart des plantes montrent les effets provoqués par" l'infection virale, peut s'avérer efficace comme méthode de lutte. Une solution consiste à combiner un humus 15 réfléchissant pour chasser les vecteurs aériens au moyen d'un virucide, tel que la ribavirine. Une seconde solution pour les maladies des cultures consisterait à vaporiser les mauvaises herbes visées mieux connues comme étant des réservoirs à virus pour cultures, avec de la ribavirine. A ce sujet, l'avantage d'utiliser la ribavirine à la place 20 d'un herbicide est d'empêcher de tuer la totalité des mauvaises herbes et plantes sauvages vaporisées et non seulement les plantes visées.
La ribavirine s'avère également intéressante sur les plantes ornementales. Dans le cas des plantes ornementales, le caractère désirable amoindri résultant des symptômes de l'infection 25 virale est peut-être plus important que les pertes de produit provoquées par le virus. Les plantes qui sont exemptes d'entités virales seraient également exemptes de symptômes de maladie, qui souvent se manifestent d'eux-mêmes par un mouchetage et des marques, en réduisant ainsi le caractère commercial des plantes ornementales, qui sont 50 vendues pour leur attrait visuel.
La ribavirine pourrait être extrêmement efficace comme moyen permettant de faciliter la production de plantes exemptes de virus et d'augmenter la production et la qualité de la génération de plantes suivante. Ceci pourrait être réalisé dans la production 55 ,je souches exemptes de virus pour plantes se propageant par voie ν· a » 5 végétative, comme les arbres fruitiers et noyers, les plants de fraisiers ou les plants de pommes de terre. Ou bien, la ribavirine pourrait être incorporée dans les processus de propagation de culture de tissu normaux utilisés habituellement pour la propagation d'un grand ^ nombre de plantes ornementales. La ribavirine s'avère également intéressante pour traiter les semences de manière à empêcher la transmission des virus par les semences.
Une autre utilisation possible de la ribavirine est d'éliminer les virus ou de maintenir les tissus de plantes dans un état ^ exempt de virus au cours des techniques de propagation habituelles, que l'on utilise actuellement. Un exemple consiste en l'utilisation d'embryons somatiques encapsulés pour la propagation de tissus somatiques de manière à empêcher toute modification sexuelle ou la nécessité d'une sélection de plantes plus poussée. La ribavirine peut s'avérer ^ particulièrement intéressante pour conserver des plantes exemptes : de virus par son application sur des embryons somatiques. On peut faire propager certaines plantes asexuellement, ce qui exclut toute modification génétique chez leurs descendants qui, sans quoi, pourrait se produire par propagation sexuelle à partir de la semence. Le traite- τη ment des embryons somatiques par de la ribavirine avant l'encapsulation permettra de conserver les descendants de la plante dans un état exempt de virus. On pourrait également utiliser le composé en combinaison avec des processus de mécanisme phytogénétique nouvellement mis au point, dans lesquels la ribavirine pourrait être ^ incorporée dans des processus de propagation normaux. Le 1-p-D-ribofu-rannosyl-l^j^-triazole-S-carboxamide et ses esters (2,3,5-triacétylique et 5'-butyrylique) sont solubles dans l'eau et peuvent être administrés aux plantes, aux semences, aux souches et au sol suivant la présente invention sous la forme d'une solution aqueuse. Les composés sont également solubles dans des solutions d'alcool (5-15% en volume) et d'eau, de diméthylformamide (DMF) (5-25%) et d'eau, de diméthylsul-foxyde (DMSO) (5-25%) et d'eau et de diméthylsulfoxyde seul.
Les procédés d'application de la ribavirine peuvent être groupés en trois catégories : 35 I Α
*V
6 (1) les traitements thérapeutiques de plantes entières; (2) la production de plantes exemptes de virus via la culture de tissu; et (3) le traitement de semences.
5 Le composé peut être appliqué sous la forme d'une vaporisation foliaire sur les plantes entières en même temps que les additifs qui pourraient faciliter la pénétration et le recouvrement.
La ribavirine en des concentrations de l'ordre d'environ 100 ppm à environ 2000 ppm est efficace pour les applications foliaires et comme arrosage du sol.
Pour le traitement des arbres, où la dimension ou les conditions ambiantes empêchent l'utilisation d'une application foliaire, le composé pourrait être injecté dans le tronc par écoulement par gravité ou par injection sous pression, comme on le fait actuelle-^ ment avec des fongicides et des antibiotiques à action générale.
Un certain nombre de méthodes, au moyen desquelles on pourrait utiliser la ribavirine pour produire des plantes exemptes de virus, sont possibles. L'une de ces méthodes consisterait à traiter les plantes entières, comme décrit ci-dessus, de manière à obtenir de plus grandes ^ zones exemptes de virus à proximité des extrémités en cours de croissance. Une autre méthode consisterait à régénérer de grandes extrémités de pousses sur des milieux contenant de la ribavirine de manière à éliminer le virus.
La ribavirine pourrait également être incorporée 25 comme composant dans les milieux utilisés pour la propagation de culture de tissu de plante normale. Le traitement pourrait être réalisé à différents stades de développement du protoplaste, du calus, des embryons ou des plantules de la plante. La ribavirine apparaît comme étant plus efficace au cours de certains stades de développement chez certaines plantes. Des concentrations d'environ 10 à environ W0 μΜ s'avèrent efficaces.
Au moins deux méthodes que l'on pourrait utiliser pour le traitement des semences infectées par un virus sont le traitement des plantes entières, comme décrit ci-dessus, pour s'assurer que les 35 I * ν,- 7 semences produites n'abritent pas de virus, et le traitement des semences produites sur des plantes infectées par le virus avec le moyen de transmission approprié pour empêcher les plantes résultantes d'être infectées. On pourrait également appliquer la ribavirine sur la se-5 mence, la faire pénétrer dans des semences ou l'appliquer sous la forme d'un arrosage du sol.
De plus, on peut utiliser la ribavirine comme composant d'un traitement chimique multiple de tissus infectés viralement.
Il est clair compte tenu de ce qui précède que la 10 ribavirine serait intéressante dans la prévention et le traitement des maladies virales des plantes aussi bien en serre qu'à l'extérieur.
La ribavirine s'est montrée active vis-à-vis de virus dans les groupes de virus~ de plantes suivants : potexvirus, potyvirus, clostérovirus, tymovirus, carlavirus, cucumovirus, ilarvirus, tombusvirus, 15 virus de la maladie bronzée de la tomate et virus de la mosaïque de la luzerne.Les virus des groupes du tobamovirus et du bromovirus ne sont que légèrement sensibles à la ribavirine.
Le Tableau suivant illustre les types de maladies virales contre lesquelles la ribavirine s'est révélée efficace.
20 TABLEAU.
Maladies virales de plantes contre lesquelles la ribavirine est efficace. Type de cultue Récolte Virus Croupe de virus céréales sorgho virus de larrosaiique et du nanisme du mais potyvirus céréales blé virus de la rnosaïque di tobamovirus blé et virus de la mosaïque bromovirus
Produit des champs ^ et plantes fourragères luzerne virus de la mosaiqje de la Virus de la mosaïque luzerne de la luzerne virus latent de la luzerne carlavirus 30 Produit des champs et virus ^ jaunissement de la ii r ' i ^ betterave clostérovirus plantes fourragères betterave , , , , virus de la mosaïque de la betterave potyvirus " mais virus de la mosaïque et du nanisme du meus potyvirus " soja virus de la mosaïque du soja potyvirus Légumes crucifères virus de la mosaïque du navet potyvirus 35 1 ι 8 TABLEAU (suite).
Typs de culture Récolte "Virus ' Croupe de virus
Legumes courges virus de la mosaïque de la pastèque potyvirus 1 et 2 virus de la mosaïque du con- 5 ccmbre cucumovirus Légumes; laitue virus de la mosaïque de la laitue potyvirus..
agent de la grande nervure de la laitue virus non groupé Légumes poivre virus de la gravure de la jq tomate potyvirus virus Y de la tomate potyvirus virus de la marbrure des nervures du poivre potyvirus virus de la marbrure du poivre potyvirus virus de la mosaïque du concombre cucumovirus 15 virus de la mosaïque du tabac tobamovirus Légumes tomate virus de la mosaïque de la tomate tobamovirus virus d'aspermie de la tomate cucumovirus virus de la maladie bronzée virus de la maladie de la tomate bronzée de la tomate 20 virus de la gravure du tabac potyvirus
Plantes d'ornement oeillet virus entraînant des tachetures nécrotiques chez l'oeillet clostérovirus virus de la marbrure de l'oeillet tcmbusvirus ^ Plantes d'ornement iris virus de la mosaïque de l'iris aristé potyvirus virus de la mosaïque et du . jaunissement de la fève potyvirus
Platnes ,n d’ornement lilas virus sans symptômes du JU jüag carlavirus virus de la mosaïque du concombre cucumovirus
Plantes d'ornement orchidées virus entraînant des taches •annulaires'chez l'ondontoglossum tobamovirus 3-5 virus de la mosaïque du cymbidium potexvirus 1 * 9 TABLEAU (suite).
Type de culture Récolte Virus Croupe de virus
Plantes d'ornement roses virus de la mosaïque de la pomme ilarvirus virus entraînant des taches 5 annulaires nécrotiques chez les fruits à noyaux ilarvirus
Arbres fruitiers pomme virus entraînant des taches chlorotiques chez la pomme clostérovirus virus provoquant des canne- 10 lires dans la queue de la pomme clostérovirus virus de la mosaïque de la pomme "Tulare" ilarvirus virus de la mosaïque de la pomme ilarvirus
Arbres 15 fruitiers cerise virus entraînant des taches nécrotiques chez les fruits à noyaux ilarvirus virus de la dégénérescence du . prunier ilarvirus
Arbres fruitiers agrumes virus de la tristeza des 20 agrumes clostérovirus Légumes pomme de virus X de la terre pcnmre de terre potexvirus virus Y de la pomme de terre potyvirus virus S de la pomme de terne carlavirus ΛΡ ^ Lors d'une étude, on a testé l'activité antivirale de la ribavirine contre le virus de la mosaïque du tabac (TMV) et le virus de la marbrure chlorotique du pois de vache (CCMV). On maintient une souche U1 de virus de la mosaïque du tabac dans des plantations de tabac (Nicotiana Tabacum L. "Xanthi") et on examine l'infectivité 30 sur du tampon phosphate de potassium 0,01 M de pH 7,0 et de la célite (1%) par la méthode à la demi-feuille sur Nicotiana Tabacum L. "Xanthi Ne", 6 à 12 reproductions de chaque produit d'inoculation étant réalisées suivant un modèle du type désordonné. On maintient
/L
35 I ( 10 le virus de la marbrure chlorotique du pois de vache dans des plantations de pois de vache (Vigna Unguiculata L. Walp "California Black-eye") et on examine l’infectivité de la sève diluée par le tampon précité par la méthode à la demi-feuille sur du soja ( Glycine Max L.). Après 5 quatre heures d'inoculation mécanique, on découpe des disques de 7 mm de diamètre des feuilles inoculées. Dix disques par traitement sont infiltrés sous vide au moyen de la solution chimique appropriée et on les laisse ensuite sécher sur des tissus en papier pendant 10 à 15 minutes. Les disques sont mis à flotter sur la solution chimique 10 dans des boîtes de Petri de 3,5 cm dans une chambre de croissance pour plantes à 25°C avec une photopériode de 14 heures d'approximati-vement 15.000 ix. On traite des disques témoins de façon similaire par de l'eau distillée. Après 96 heures d'incubation, on enlève tous les disques des solutions chimiques et on les congèle à -20°C jusqu'au 15 moment d'examiner leur infectivité. L'infectivité des disques traités s chimiquement est comparée à celle des disques traités à l'eau. Chaque solution chimique est testée à 2-4 concentrations différentes différant de 5 fois et chaque expérience est répétée au moins deux fois. Le milieu standard pour favoriser la croissance du calus de tabac est 20 formé de sels de Murashige et Skoog additionné de 3 mg/litre d'acide indole acétique, de 0,3 mg/litre de kinétine et de 40 g/litre de sucrose dans de l'agar (0,8%). Le milieu de régénération est le même excepté qu'il contient 0,3 mg/litre d'acide indole acétique avec l'addition de 10 mg/litre de N6-isopentényl-adénine. Le tissu de calus est produit 25 au départ de tissus médulleux de tabac infectés par le TMV. Les produits chimiques sont stérilisés par filtration et ajoutés au milieu après mise en autoclave. Les aires périphériques de calus qui croissent en présence des produits chimiques sont séparées de manière à éviter la prise des calus de semences de départ examinés pour l'infectivité 30 de TMV. Les nouvelles pousses qui se développent sur les milieux contenant les produits chimiques sont enlevées et examinées de façon similaire. Il se révèle que la ribavirine inhibe la multiplication de TMV et de CCMV dans ces systèmes. La multiplication de CCMV est plus .sensible à la ribavirine que ne l'est le TMV. Les calus de 35 tabac croissent et se différencient lorsque l'on utilise une concentration *0 I &
H
de ribavirine du double de celle requise pour inhiber la multiplication de TMV dans les disques de feuille. Toutefois, les calus ou pousses de tabac nouvellement développés contiennent encore du TMV. La concentration en ribavirine requise pour inhiber 90% de la multiplica-5 tion virale dans les disques de feuille est de 0,2 mM pour l'inhibition du TMV et de 0,1 mM pour l'inhibition du CCMV.
On a réalisé d'autres expériences avec le Lilium Longi-florum "Arai", qui a été décrit comme étant difficile d'obtenir sans virus, et avec le Lilium "Enchantment", contenant tous deux un virus 10 sans symptôme du lilas (LSV) et un virus de la panachure de la tulipe (TBV). Les méristèmes, induits sur des milieux avec ou sans ribavirine, sont isolés et cultivés ensuite sur un milieu sans ribavirine. Le nombre de méristèmes formés de façon adventive et le poids de bulbe moyen ne sont pas sensiblement influencés par la ribavirine aux concentrations 15 de 0,0-40,0 μΜ. A la concentration de 400,0 μΜ, la croissance des bulbes est sensiblement réduite. Des échantillons de feuilles des plantes sont examinés pour ce qui est de la présence de LSV et de TBV au moyen de l'essai ELISA, de l'essai de chute d'immuno-diffusion et de la microscopie électronique. Le pourcentage de plantes de 20 L. Longiflorum "Arai" infecté par le LSV et/ou le TBV est réduit par la ribavirine à 40,0 μΜ, tandis que pour le L. "Enchantment", l'effet est moins clair. Ces expériences permettent de conclure que la ribavirine peut être un instrument intéressant pour augmenter le rendement de plantes sans virus lorsque l'on applique une culture 25 de méristèmes à des bulbes de fleurs.
Une autre étude a permis d'examiner l'efficacité de la ribavirine en combinaison avec de l'adénine arabinoside sur le virus de la mosaïque du tabac dans des cultures de tissus du tabac.
Les cultures de calus du tabac infectées par le TMV sont exposées 30 à différentes combinaisons de ribavirine et d'adénine arabinoside dans un milieu solide induisant des pousses pendant 1 mois, les nouvelles pousses étant examinées pour le virus. La présence des produits chimiques dans le milieu réduit la fréquence de la production de pousses. Toutefois, dans plusieurs combinaisons, les pousses régénérées 35 qUj sont examinées, sont exemptes de TMV décelable. Lorsqu'on // // 12 les transfère dans un milieu sans produits chimiques, les pousses restantes continuent à croître et ne développent les symptômes du TMV qu'après que les plantes aient quatre à cinq feuilles plus longues que 1 cm. On fait pousser certaines des plantes jusqu'à leur dimension 5 totale en serre, ces plantes se révélant sans TMV lorsqu'elles sont examinées à des fins d'infectivité. La ribivarine et l'adénine arabino-side inhibent d'une manière efficace la multiplication de TMV lorsque l'on examine l'infectivité. La ribavirine et l'adénine arabinoside inhibent d'une manière efficace la multiplication de TMV dans les cellules 10 des feuilles lorsque l'on commence le traitement aussitôt après l'inoculation. Lorsque des cellules de calus non organisées sont inoculées avec le TMV et traitées par la ribavirine ou l'adénine arabinoside, la multiplication de TMV n'est jamais inhibée. Toutefois, lorsque l'on utilise de la ribavirine en une concentration de 0,5 à 1,0 mM 15 en combinaison avec de l'adénine arabinoside en une concentration de 0,1 à 1,0 mM dans des cultures de tissus du tabac, la présence de TMV est contrôlée.
D'autres études effectuées sur des plantes d'ornement, telles que les orchidées montrent que la ribavirine élimine d'une ma-20 nière efficace le virus pathogène usuel des cymbidiums, la souche d'orchidée du virus de la mosaïque du tabac (TMV-0). Des concentrations de ribavirine allant de 30 à 1000 ppm ont été incorporées dans des milieux de culture de tissus dans lesquels les orchidées sont clonées, et utilisées pour arroser et vaporiser des plants d'orchidées entiers 25 d'une manière contrôlée. Les titres de virus sont déterminés par des essais de micrographie électronique de transmission et de sérologie d'ELISA. Afin d'accroître la pénétration de la ribavirine, on incorpore 200 ppm de diméthylsulfoxyde (DMSO) dans tout le traitement, y compris les témoins. Les études montrent que les cultures de tissus 30 d'orchidées du type :çymbidium peuvent être dépourvues à volonté de la souche d'orchidées du virus de la mosaïque du tabac . Les cultures se développant sur les quatre concentrations de ribavirine utilisées dans l'étude (30, 100, 300 et 1000 ppm) donnèrent lieu à une nouvelle croissance sans virus. Tous les tissus développés sous 35 ces conditions sont exempts de virus : les pousses, les racines et les corps du type protocormes"non différenciés".
, J
13
Des plantations mères de cymbidium infectées par le virus entraînant des taches annulaires chez l'odontoglossum (OR5V) sont régénérées en présence de ribavirine. Les méristèmes ou protocormes des cymbidiums sont cultivés sur un milieu de Knudson C
5 liquide ou solide (0,7% d'agar), tels que modifiés pour les orchidées par Morel. Des expériences ont montré que les protocormes de cymbidium en bonne santé provenant de semences poussent bien sur des milieux contenant 0,10 ou 25 ppm de ribavirine, mais deviennent nécrotiques après quatre semaines de culture sur un milieu contenant 10 50 ppm de ribavirine. A partir de la sixième sous-culture, le virus n'est plus décelable par l'essai d'Elisa.
Un autre essai montre que des plants de pommes de terre infectés par le virus Y de la pomme de terre peuvent être régénérées par la culture de bouts de méristèmes. Bien que la proportion 15 de plantes en bonne santé obtenues par cette technique soit habituelle-„ ment élevée, elle requiert des milieux complexes et la vitesse de recroissance de fragments de plantes méristématiques est lente.
Les méristèmes sont cultivés sur un milieu de Murashige et Skoog additionné de vitamine B5 et de substances de croissance. D'autres 20 fragments de plantes (pousses, fragments de pousses et fragments de tige) sont mis à croître sur un milieu de Murashige et Skoog sans addition de substances de croissance. La présence du virus de la pomme de terre Y dans les fragments de plantes est contrôlée avant et après la culture in vitro, au moyen d'une classification biologique 25 sur des plants d'essai de tabac, ou par sérologie (Elisa). Les résultats ainsi obtenus confirment l'élimination du virus Y de la pomme de terre des plantes infectées par la culture de méristèmes. L'addition de ribavirine (10, 25 et 50 ppm) accroît la vitesse de régénération, mais la phytotoxicité aux concentrations d’inhibition du virus rend 50 ce produit chimique inapproprié comme inhibiteur de virus avec la culture de méristèmes à partir de pommes de terre infectées par le virus Y de la pomme de terre. Toutefois, pour d'autres types de fragments de plantes (pousses, morceaux de pousses et fragments de tige), la ribavirine à une concentration de 25 ou de 50 ppm 35 // 1 1 14 accroît sensiblement le nombre de plantes sans virus obtenues apres une culture in vitro pendant 3 à 4 semaines. Des protocormes de cymbidium infectés par le virus entraînant des taches annulaires chez l'odontoglossum sont placés à des fins de prolifération sur un milieu 5 de Knudson C liquide contenant 0, 10, 25 ou 40 ppm de ribavirine.
Après des sous-cultures trimensuelles effectuées sur le même milieu, la ribavirine à une concentration de 10 ppm ne laissait plus l'ORSV se multiplier, tandis que la concentration virale diminuait progressivement dans les protocormes obtenus avec 25 ppm de ribavirine.
10 C'est ainsi que l'invention traite d'un agent antiviral qui s'avère efficace contre certaines maladies virales ou induites par un viroïde chez les plantes. Il doit être entendu que la présente invention n'est en aucune- façon limitée aux formes de réalisation ci-dessus et que bien des modifications peuvent y être apportées 15 sans sortir du cadre du présent brevet.
20 25 30 l·! 35

Claims (25)

1. Composition de traitement des plantes pour empêcher ou arrêter les maladies virales ou induites par un viroïde, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité efficace de l-{i-
5 D-ribofurannosyl-l^^-triazole^-carboxamide ou du dérivé 2,3,5-triacé- tylique ou 5'-butyrylique de celui-ci.
2. Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle contient le l-P-D-ribofurannosyl-l,2,4-triazoIe-3-carboxa-mide ou le dérivé 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyrylique de celui-ci 10 en combinaison avec une quantité efficace d'un agent pénétrant, tel que le diméthylsuifoxyde (DMSO) ou d'autres agents pénétrants et tensio-actifs.
3. Composrtion suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend le l-ß-D-ribofurannosyl-1,2,4- 15 triazole-3-carboxamide ou son dérivé 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyrylique en une concentration d'environ 100 à environ 2000 ppm. k. Composition suivant la revendication 2, caractérisée en ce qu'elle contient le l-|8-D-ribofurannosyl-l,2,if-triazole-3-carboxa-mide ou son dérivé 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyrylique en une concen- 20 tration d'environ 100 à environ 2000 ppm.
5. Composition suivant l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce quête l-(}-D-ribofurannosyl-l,2,4-tria-zole-3-carboxamide ou son dérivé 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyrylique est sous la forme d'une solution aqueuse.
6. Composition suivant l'une quelconque des revendica tions 1 à 4, caractérisée en ce que le l-ß-D-ribofurannosyl-l,2,4-tria-zole-3-carboxamide ou son dérivé 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyrylique est sous la forme d'une solution d'eau et d'alcool (environ 5% à environ 15% en volume).
7. Composition suivant l'une quelconque des revendica tions 1 à 4, caractérisée en ce que le l-ß-D-ribofurannosyl-l,2,4-tria-zole-3-carboxamide ou son dérivé 2,3,5- triacétylique ou 5'-butyrylique est sous la forme d'une solution d'eau et de diméthylformamide (environ 5-25% en volume). 35 r fi » - 16 Ί.
8. Procédé de traitement des plantes pour empêcher ou arrêter les maladies virales ou induites par un viroi'de, caractérisé en ce qu'il comprend l'application d'une quantité efficace de 1-β-D-ribofurannosyl-l,2,4-triazole-3-carboxamide ou de son dérivé 2,3,5- 5 triacétylique ou 5-butyrylique.
9. Procédé suivant la revendication 8, caractérisé en ce que la maladie virale ou induite par un viroi'de est provoquée par un virus choisi dans le groupe comprenant les tobamovirus, clostéro-virus, tombusvirus, carlavirus, cucumovirus, potexvirus, ilarvirus, 10 potyvirus, bromovirus, tymovirus, virus de la mosaïque de la luzerne et virus de la maladie bronzée de la tomate.
10. Procédé suivant l'une ou l'autre des revendications 8 et 9, caractérisé en ce que l'on applique une quantité efficace de ce 1-ß- D-ribofurannosyl-l,2,4-triazole-3-carboxamide ou de son dérivé 15 2,3,5-triacétylique ou 5-butyrylique sous la forme d'un arrosage du sol .
11. Procédé suivant l'une ou l'autre des revendications 8 à 9, caractérisé en ce que l'on applique une quantité efficace de ce l-ß -D-ribofurannosyl-l,2,4-triazole-3-carboxamide ou de son dérivé 20 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyrylique par pression ou injection par gravité.
12. Procédé suivant l'une ou l'autre des revendications 8 et 9, caractérisé en ce que l'on applique une quantité efficace de ce l-ß-D-ribofurannosyl-l,2,4-triazole-3-carboxamide ou de son dérivé 25 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyrylique sous la forme d'une vaporisation foliaire.
13. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 8 à 12, caractérisé en ce qu'on utilise le l-^-D-ribofurannosyl-l,2,4-tria-zole-3-carboxamide ou son dérivé 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyrylique 30 en combinaison avec une quantité efficace de diméthylsulfoxyde (DMSO) comme agent pénétrant ou d'autres agents pénétrants et agents tensio-actifs.
14. Procédé suivant l'une ou l'autre des revendications 8 et 9, caractérisé en ce que l'on incorpore une quantité efficace Al 35 T. ^ 4 17 de l-ß-D-ribofurannosyl-l,2,4-triazole-3-carboxamide ou de son dérivé 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyrylique dans des cultures de tissu utilisées pour la propagation de plantes.
15. Procédé de traitement de plantes pour empêcher 5 ou arrêter les maladies virales ou induites par un viroïde, caractérisé en ce qu'il comprend l'application d'une quantité efficace de 1-ß-D-ribo-furannosyl-l,2,4-triazole-3-carboxamide ou de ses dérivés 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyrylique, combinée avec un humus réfléchissant pour repousser les vecteurs aériens qui transmettent les maladies virales ^ aux plantes.
16. Procédé pour empêcher les maladies virales ou induites par un viroïde chez les plantes, caractérisé en ce qu'il comprend l'application d'une quantité"efficace de l-ß-D-ribofurannosyl-l,2,4-tria-zole-3-carboxamide ou de son dérivé 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyryli- ^ que à des mauvaises herbes cibles connues comme étant des réservoirs * de virus pour culture.
17. Procédé suivant la revendication 10, caractérisé en ce que l'on applique le l-ß-D-ribofurannosyl-l,2,4-triazole-3-carboxa-mide ou son dérivé 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyrylique en une concen- 20 tration d'environ 100 à environ 2000 ppm.
18. Procédé suivant la revendication 12, caractérisé en ce que l'on applique le l-|î-D-ribofurannosyl-l,2,4-triazole-3-carboxa-mide ou son dérivé 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyrylique en une concentration d'environ 100 à environ 2000 ppm.
19. Procédé suivant la revendication 14, caractérisé en ce que l'on incorpore le l-ß-D-ribofurannosyl-l,2,4-triazole-3-carbo-xamide ou son dérivé 2,3, 5-triacétylique ou 5'-butyrylique dans les cultures de tissu précitées en une concentration d'environ 10 à environ 400 pM.
20. Procédé de traitement de plantes pour empêcher 50 ou arrêter la maladie virale induite par le virus de la mosaïque du tabac dans des cultures de calus de tabac, caractérisé en ce que du l-(i-D-ribofurannosyl-l,2,4-triazole-3-carboxamide ou son dérivé 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyrylique en une concentration de l'ordre d'environ 0,5 à environ 1,0 mM et de l'adénine arabinoside en une concentration 55 d'environ 0,1 à 1,0 mM sont incorporés dans un milieu d'induction // » ' t ft 18 w de pousses solide .
21. Procédé pour empêcher les maladies virales ou induites par un viroïde chez les plantes, caractérisé en ce qu'il comprend l'application à une souche de semences végétatives d'une quantité 5 efficace de 1- ß-D-ribofurannosyl-l,2,4-triazole-3-carboxamide ou de son dérivé 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyryliquë.
22. Procédé pour empêcher les maladies virales ou induites par un viroïde chez les plantes, caractérisé en ce qu'il comprend l'incorporation d'une quantité efficace de l-ß-D-ribofurannosyl-1,2,^- 10 triazole-3-carboxamide ou de son dérivé 2,3,5-triacétylique ou 5'-buty-rylique dans de la terre en pot destinée à être utilisée en serre ou dans des parcelles de terrain pour plantes expérimentales comme agent prophylactique.
23. Procédé suivant l'une ou l'autre des revendications 15. et 9, caractérisé en ce que l'on applique le 1-P-D-ribofurannosyl- l,2,4-triazole-3-carboxamide ou ses dérivés 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyrylique sous la forme d'une solution aqueuse. 2k. Procédé suivant l'une ou l'autre des revendications 8 et 9, caractérisé en ce que l'on applique le l-ß-D-ribofurannosyl-1,2,4- 20 triazole-3-carboxamide ou ses dérivés 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyrylique sous la forme d'une solution d'eau et d'alcool (environ 5% à environ 15% en volume).
25. Procédé suivant l'une ou l'autre des revendications 8 et 9, caractérisé en ce que l'on applique le 1-ß-D-ribofurannosyl- 25 l,2,4-triazole-3-carboxamide ou ses dérivés 2,3,5-triacétylique ou 5'-butyrylique sous la forme d'une solution d'eau et de diméthylforma-mide (environ 5-25% en volume).
26. Compositions et méthodes de traitement des maladies virales chez les plantes, telles que décrites ci-dessus, notamment 30 dans les exemples donnés. Dessins : planches -Æ-pages do"*........4.....pag* da 0,,de .....;n d® description 35 .................'f; 's ''* revendication Luxsmfccsm. .» ,,ΐ dsscriP» L* mandataire^
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