FR2838341A1 - Extrait d'algue marine du genre cystoseira et utilisation dans les produits de soins - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne le procédé d'obtention et l'utilisation d'un extrait de l'algue brune Cystoseira stricta (= Cystoseira amentacea variété stricta), seul ou en association avec au moins un autre principe actif, en quantité efficace et dans un milieu physiologiquement acceptable pour un usage topique dans les produits de soins cosmétiques et/ ou dermatologiques pour la peau, les muqueuses et/ ou les phanères.Ces compositions s'avèrent particulièrement utiles pour assurer une protection du matériel génétique et des cellules vis-à-vis des radicaux libres d'origines diverses et des rayonnements ultraviolets.Ces compositions permettent aussi de prévenir ou lutter contre le vieillissement intrinsèque et/ ou extrinsèque de la peau, contre les phénomènes d'inflammation, les manifestations allergiques et les érythèmes.Cet extrait est particulièrement indiqué pour traiter les peaux dites sensibles.

Description

niveau de la peau, des muqueuses et/ou des phanères.

- 1

EXTRAIT D'ALGUE MARINE DU GENRE CYSTOSEIRA ET

UTILISATION DANS LES PRODUITS DE SOIN

La présente invention concerne l'utilisation d'un extrait d'une algue marine du genre Cystoseira notamment Cystoseira stricta Sauvageau (= Cystoseira amentacea Bory variété stricta Montagne), en quantité efficace et dans un milieu physiologiquement acceptable pour un usage topique, dans les produits de soin co smétiques et/ou dermatologiques, plus particulièrement dans le s applications o l'on cherche une protection contre les agressions radicalaires d'origines diverses et o un rôle apaisant et protecteur vis-à-vis des processus inflammatoires, des

irritations, des manifestations allergiques et des érythèmes.

I1 est bien connu que les effets des radicaux libres sont néLastes et nombreux car leurs réactions s'inscrivent presque toujours dans un processus de réactions en chaîne: le radical rencontre une molécule non radicalaire ce qui lui permet de se stabiliser aux dépends de la création d'un nouveau radical capable de poursuivre la réaction. Les radicaux libres provoquent en particulier tout un ensemble d'altérations au niveau des constituants cellulaires notamrnent de 1' ADN et ses lipides. Mais leurs cibles privilégiées sont les acides gras polyinsaturés présents dans les phospholipides des membranes cellulaires. Cette attaque radicalaire des dérivés lipidiques est appelée peroxydation lipidique ou encore lipo-peroxvdation. C'est une réaction en châîne qui va étre à l'origine de la dégradation de la structure moléculaire et architecturale des membranes cellulaires avec notamment inactivation des récepteurs et modification des échanges de la cellule avec le milieu

extérieur (Belleville, 1988 - Angéiologie, 41: 79-86).

La peroxydation lipidique peut se faire selon deux mécanismes différents (Emerit & Galli, 1987 - Cah. Nutr. Diét., 22: 35-39): un mécanisme non

enzymatique et un mécanisme enzymatique.

- 2 Dans le mécanisme non enzymatique, toutes les membranes sont susceptibles d' être attaquées en particulier les membranes mitochondriales avec modification du flux énergétique et les membranes lysosomiales avec libération des hydrolases. La spécificité du substrat est très faible QU nulle. La susceptibilité des acides gras à ce mécanisme de la peroxydation dépend de leur degré d'insaturation. Dans le mécanisme enzymatique, il existe une spécificité du substrat et l'arrachement radicalaire va être sélectif et stéréospécifique. L'acide arachidonique qui est un constituant normal des membranes cellulaires est libéré sous l' influence lo des phospholipases A2 et C. I1 se produit ensuite une oxydation progressive réalisée selon deux voies: - par la cyclo-oxygénase qui enlève l'hydrogène en C13 de l'acide arachidonique et forme les pro staglandines et le s thromboxanes et - par la 5- lipoxvgénase qui enlève l' hydrogène en C7 de l' acide

arachidonique et forme les leucotriènes.

Au cours de cette oxydation euzymatique, il apparaît des radicaux libres oxygénés, en particulier des radicaux hydroxyles et alkoxyles ainsi que de

l'oxygène singulet.

Les conséquences de la peroxydation lipidique sont multiples à court terme comme à long terme: - à court terme, elle provoque des troubles ioniques avec en particulier une altération de la pompe à sodium et une homéostasie du calcium intracellulaire, ce qui aboutit à un stress énergétique avec _dème cellulaire,

diminution du taux d'ATP et mort cellulaire.

- à long terme, les modifications des lipides membranaires sont responsables de l'accumulation de pigments lipofusciniques observables au cours du vieillissement (Therond, 1989 - J. Med. Esth. et Chir. Derm., 26:

273-280).

- 3 Les radicaux librps libérés amplifient aussi les phénomènes inflammatoires avec notamment la stimulation de la synthèse des médiateurs lipidiques (prostaglandines et leucotriènes), l' activation de certains facteurs de transcription, l'induction de la synthèse d'interleukine IL-1 et des protéines de choc thermique s (hsp). Plus particulièrement, l' anion superoxyde intervient au niveau de l' inflammation d'une part en activant un facteur plasmatique chimiotactique latent qui augmente l' accumulation des polynucléaires neutrophiles et, d'autre part, en permettant la formation d'autres espèces radicalaires oxygénées elles-mêmes très actives. On comprend donc l' importance qui existe à disposer de produits qui aident à contrôler les réactions radicalaires et à maintenir une bonne régulation des processus de peroxydation lipidique compte tenu de leurs rôles majeurs dans

l'altération des membranes des cellules et des phénomènes inflammatoires.

A cet égard, la demanderesse a de manière surprenante et inattendue découvert que l'extrait préparé à partir de l'algue brune Cystoseira stricta possède outre des propriétés protectrices de 1'ADN, également des propriétés protectrices vis-à-vis des dégâts nocifs occasionnés par les deux mécanismes de la lipoperoxydation, à savoir altérations des membranes des cellules et

développement des processus inflammatoires.

Du fait de ses activités multiples, ledit extrait trouve avantageusement son utilisation seul ou en association avec au moins un autre principe actif, dans un milieu physiologiquement acceptable, dans les produits de soins destinés en particulier à lutter contre le vieillissement cutané, à diminuer voire inLiber les irritations, le s inflammations, le s érythème s cutanés, particulièrement les érythèmes induits par les rayonnements ultraviolets, les éruptions érythémateuses localisées

ou diffuses sur la peau et donc à traiter les peaux dites sensibles.

Par milieu physiologiquement acceptable, on entend un milieu compatible

avec la peau, les muqueuses et les phanères.

Préférentiellement selon l' invention, l'extrait ou les applications le comprenant sont employés de manière topique. Selon l'invention, les produits comprenant l'extrait peuvent être des compositions cosmétiques ou dermatologiques. Plus particulièrement selon

l'invention, il s'agit de compositions cosmétiques.

Le genre Cystose ira appartient au phylum de s HeteroLontophyta, à la c las se des Phacophyta (algues brunes) et à l'ordre des Fucales. I1 regroupe en Méditerrance une trentaine d'espèces. L'espèce stricta, encore appelée Cystoseira amentacea variété stricta s'y développe en ceinture dense sur des substrats rocheux. Ses exigences écologiques en font une algue très caractéristique de nos rivages rocheux de par son adaptation au choc des vagues, sa résistance aux fortes variations du rayonnement solaire et son reffis de vivre dans les stations atteintes

par la pollution.

A la connaissance de la demanderesse, des applications industrielles pour cette espèce, notamment dans le domaine des soins n'ont jamais été décrites à ce jour. Dans un mode de réalisation avantageux, 1' extrait de l'algue Cystoseira stricta selon la présente invention est un extrait qui peut êke obtenu à partir de thalles ou de quelque partie isolée de thalles sous forme frâîche, congelée, sèche,

entière, fragmentée ou broyée.

Toute méthode d'extraction connue de l'homme du métier peut être

employée pour préparer l'extrait contenu dans les compositions selon l'invention.

- 5 Plus particulièrement, l'extrait est avantageusement obtenu par macération des thalles dans un solvant ou un mélange de solvants suivie d'une filtration et

d'une centrifugation pour éliminer les particules.

Dans un mode préPéré de réalisation de la présente invention, l'extrait ainsi

obtenu est calibré par des ultrafiltrations et concentrations successives.

A titre de solvants avantageusement employés, on citera l'eau, les solvants chlorés tel que le chloroforme, les éthers tels que l'éther éthylique, l'acétone, les lo esters en C2 à C8 tels que l'acétate d'éthyle et l'acétate de butyle, des alcools en C1 à C6 tels que le méthanol, l'éthanol, l'isopropanol et le butanol, des polyols en C2 à C6 tels que le propylène glycol et le butylène glycol, sans que cette liste soit

limitative. Ces solvants peuvent étre utilisés seuls ou en mélange.

L'extraction peut être renouvelée plusieurs fois jusqu'à épuisement des

thalles conformément aux procédés bien connus de l'homme du métier.

La proportion en masse entre le solvant et le matériau frais à extraire peut varier dans de larges limites. Plus précisément elle peut étre comprise entre 15: 1

et 1: 1 de préférence 8: 1.

I1 est possible d'apporter des améliorations, optimisations et modifications du procédé de préparation des extraits. Ainsi à la place de la macération simple, on peut employer les techniques à contre courant, la décoction, la lixiviation, l'extraction sous reflux, l'extraction à l'aide d'ultrasons ou de micro-ondes associée ou non aux solvants, l' extraction au moyen de fluides supercritiques,

notamment de CO2 supercritique avec ou sans co-solvant.

Quelque so it le mode de préparation utilisé se lon l ' invent ion, des étape s subséquentes visant à favoriser la conservation et/ou la stabilisation peuvent 8tre ajoutées sans pour cela modifier la nature même de l'extrait. Ainsi, pour certaines - 6 applications cosmétiques, il peut s'avérer judicieux de concentrer et de purifier l'extrait liquide ou encore de préparer un extrait sec à partir d'extrait liquide par exemple par des techniques classiques de séchage, précipitation, évaporation,

atomisation ou lyophilisation.

D ' autres caractéristiques et avantages de l' invention appara^tront à la lecture des exemples qui suivent, qui sont donnés à titre purement illustratifs et ne sont pas limitatifs de l' invention, quant aux autres activités cosmétiques et dermato lo giques qui ont été mise s en évidence au co urs du déve loppement de ce

o principe actif cosmétique.

Exemple n l: Préparation d'un extrait selon l'invention La préparation de l'extrait de Cystoseira stricta (: C. amentacea variété stricta) selon l'invention comprend la succession des étapes suivantes: - 200 g de thalles préulablement séchés et réduits en poudre sont dispersés dans 1700 ml d'eau sous agitation modérée et à la température ambiante, - la suspension est filtrée et centrifugée pour éliminer les particules, - le surnageant est ensuite soumis à des ultrafiltrations successives et enfin

concentré jusqu'à la calibration de ses activités.

L'extrait obtenu est limpide et de couleur ambre foncé.

Exemple n 2: Mise en évidence de l'effet orotecteur de 1'ADN vis-à-vis de l'oxrène sinaulet Cet exemple démontre l'effet protecteur de l'extrait de Cystoseira stricta

préparé selon l'invention sur 1'ADN vis-à-vis de l'oxygène singulet.

L'oxygène singulet est formé par l'action directe de la lumière sur la molécule d'oxygène. La réaction photobiologique est déclenchée par les radiations

W et celles du spectre visible.

L'oxygène singulet diffuse très facilement. I1 devient alors très agressif et fait subir des dégats à 1'ADN. Ces dégâts correspondent à plusieurs catégories de lésions par exemple des altérations des bases, des pontages ADN-protéines, des ruptures de brins d'ADN. Ils interviennent aussi bien sur 1'ADN du noyau cellulaire que sur 1'ADN des mitochondries. En cas de déLaut ou d'inadéquation des systèmes réparateurs de 1'ADN, ces dommages entrainent des mutations et la

mort cellulaire.

Conditions expérimentales: Le protocole utilisé est le test in vitro 3D (SFRI) sur ADN plasmidique. I1 s'agit d'un système de détection des dommages sur de 1'ADN capté sur

microplaque (Salles et al., 1995 - Anal. Biochem. 232: 37-42).

L'oxygène singulet est généré par éclairement du bleu de méthylène. Une solution stock de bleu de méthylène à lO,ug/ml a été diluée à la

concentration de 4 ng/ml dans de l'eau ultrapure (qualité MilliQ de Millipore).

Cette solution est mélangée à volume égal avec différentes dilutions de l'extrait de Cystoseira stricta (0,1% - 1% et 10%). 501 du mélange sont ajoutés dans les puits d'une microplaque contenant de l' ADN plasmidique adsorbé. L ' ensemble est ensuite éclairé pendant 20 minutes sous deux lampes de 100 Watts, distantes de 30 cm. Les autres étapes du test sont les suivantes:

2s - une étape de réparation des lésions par les complexes spécifiques de réparation.

Au cours de la phase de resynthèse du brin d'ADN excisé, un nucléotide marqué à la biotine est incorporé dans 1'ADN, - une étape de reconnaissance de la biotine par une molécule d'avidine eouplée à une molécule de peroxydase, - une étape de révélation de la réaction par addition d'un substrat chimiluminescent

de la peroxydase.

Résultats: Pour une meilleure visualisation des résultats, ceux-ci sont exprimés comme le pourcentage d'inllibition de la formation de dommages oxydatifs sur 1'ADN ou pourcentage de protection. La valeur 0% correspond au signal de réparation de

1'ADN lésé par l'oxydant seul.

Le pourcentage d'inhibition ou de protection (P) en présence d'espèces réactives de l'oxygène est calculé comme la baisse relative de l'effet lésionnel due à l'oxygène singulet soit: 0 [RLU oxydant] - [RLU (oxydant + échantillon)] () x 100 [RLU oxydant]

avec RLU: Relative Light Units (unités arbitraires de quantité de lumière) .

La protection spécifique est le reilet de l'activité antiradicalaire due à l'extrait testé.

Les résultats obtenus montrent qu'en présence de l'extrait de Cystoseira stricta préparé selon l'invention à la concentration de 0,1% - 2,5% et 10% la protection spécifique de 1'ADN vis-à-vis de l'oxygène singulet est respectivement

de 41% - 77% et 86%.

Cette protection est en eet très active puisque 50% de la protection

spécifique sont atteints avec seulement une concentration dudit extrait de 0,2%.

Cette propriété permet des applications destinées à protéger le matériel génétique et à lutter contre les mutations induites par exemple par divers radicaux

libres et agents chimiques ou encore par les différents rayonnements ultraviolets.

Exemple n 3: Mise en évidence de l'eet protecteur des cvtomembranes vis avis de la perordation lipidique La peroxydation lipidique attaque les dérivés lipidiques des membranes et entrane des altérations pouvant aboutir à la lyse cellulaire. Elle comprend quatre

étapes successives: l'initiation, la propagation, la réactivation et la terminaison.

Dans l' étape d' initiation, le radical hydroxyle généré au niveau cellulaire par les radiations ionisantes, les rayonnements ultraviolets A et B. les oxydases ou les ions ferryles arrache un atome d'hydrogène d'un carbone situé entre deux double-liaison d'un enchainement malonique d'un acide gras polyinsaturé membranaire [e.g. acide linoléique C18:2 (n-6), acide linolénique C18:3 (n-3), acide arachidonique C20:4 (n-6)] qui après activation et réarrangement forme un

radical alkyle.

Dans l' étape de propagation, l' oxygène mo léculaire se fixe au radical alkyle 0 pour former un peroxyalkyle. Ce dernier arrache un atome d'hydrogène à une autre molécule d'acide gras polyinsaturé proche de la première. I1 se forme un

hydroperoxyde et une deuxième radical aLEyle.

La réaction s'intensifie d'autant plus que les châînes d'acides gras présentent un grand nombre de double liaison. Plusieurs centaines d'acides gras peuvent étre atteints et conduire à une accumulation d'hydroperoxydes qui

représentent, en fait, une source de radicaux alkyles.

Dans l'étape de réactivation' en présence d' ions ferreux, l' hydroperoxyde constitue un radical alkoxyle très agressif, des ions ferriques et des ions hydroxyles. C'est la réaction de Fenton. Les anions superoxydes relancent la réaction de Fenton en réduisant les ions ferriques en ions ferreux: c'est le cycle de Haber-Weiss. Comme les ions hydroxyles, les radicaux alkoxyles arrachent un proton à un acide gras polysinsaturé pour former un alcool gras et un radical alkyle

et, par là, relancent une nouvelle châîne de réactions: c'est la phase de réactivation.

Dans l'étape de terminaison, le blocage de la chaîne d'auto-oxydation peut se produire spontanément au niveau des radicaux alkyles et peroxyalkyles par interaction avec des radicaux libres de même nature ou d'autres formés sur des

chaînes peptidiques ou nucléiques. C'est la terminaison bimoléculaire de Russel.

Ce mécanisme est toutefois peu actif.

Toutes les cytomembranes sont susceptibles d'être attaquées dès la phase d'initiation. En effet, la peroxydation des lipides insaturés membranaires altère leur structure, leur perméabilité et leur fonctionnalité avec perturbation des potentiels transmembranaires, des flux ioniques et des transports membranaires, inactivation des récepteurs membranaires et dérégulation des signaux de transduction. Ces

altérations sont irréversibles et peuvent aboutir à la lyse des cellules.

Comme la peroxydation lipidique est une réaction en chaîne, les effets intramembranaires des radicaux libres se prolongent méme lorsque l'attaque

radicalaire s'estompe.

Dans le cadre de la présente invention, il a été démontré que l'extrait de

Cystoseira stricta possèdent des effets protecteurs des cytomembranes.

Ces résultats sont prouvés à l' aide de tests in vitro sur kératinocytes et fibroblastes soumis à trois systèmes peroxydatifs différents: - le système enzymatique hypoxanthine-xanthine oxydase qui génère des anions superoxydes et du peroxyde d'hydrogène, - 1' action du t-butyl hydroperoxyde en présence d'ions ferreux qui génère des radicaux alkoxyles et - 1' irradiation des rayonnements WA qui libère de l'oxygène singulet et

des radicaux hydroxyles.

Ces effets ont été appréciés selon une approche biochimique d'évaluation d'une activité enzymatique: la lactate déshydrogénase cytoplasmique. Le dosage classique de la lactate déshydrogénase présente dans le cytoplasme cellulaire

permet de quantifier les altérations membranaires occasionnées par une agression.

En effet, la libération de l'enzyme dans le milieu de culture traduit l'altération de la

membrane plasmique.

Selon le type d' agression, l' extrait objet du présent brevet est incorporé à raison de 2 ou 4% soit dans le milieu de culture complet soit dans le PBS d'après plusieurs modalités: avant l'agression pendant 48 heures (P1), pendant l'agression 3 0 (P2) ainsi qu' avant et pendant l' agression (P3). Le standard choisi est l' alpha tocophérol incorporé à la dose de 5.10 M après avoir été dilué au préalable dans - 11 de l'éthanol à 5% (10-2M). Les détails des protocoles expérimentaux sont fournis

pour chaque exemple.

Tous les résultats sont exprimés en % d'activité protectrice par rapport aux cellules témoins à partir de la formule suivante: C (%) = [ (A-B)A] x 100] pour laquelle A = [ DOCT - DOCA)/ DOCT] x 100 B [ DO CTB-DOCAB) / DOCTB]x 100 avec DO: densités optiques CT: cellules témoins non agressées, cultivées sans extrait CA: cellules agressées, non protégées par l'extrait CTB: cellules témoins non agressés, cultivées en présence d'extrait

CAB: cellules agressées, protégées par l'extrait.

Ils représentent la moyenne de trois expérimentations avec 3 points pour

chaque traitement. Les moyennes sont exprimées avec un risque d'erreur a = 0,05.

3 -1 Protection des cytomembranes vis-à-vis des anions superoxydes et du peroxyde d'hydrogène Cet exemple démontre les effets protecteurs de l'extrait selon l'invention sur des kératinocytes et des fibroblastes en culture soumis à une agression du système hypoxanthine-xanthine oxydase qui génère des anions superoxydes et du

peroxyde d'hydrogène.

Conditions expérimentales et résultats: Le protocole utilisé dans cet exemple est adapté des travaux de Noël

Hudson et al., (1990 - Int. J. Cosmetic Sc., 12: 105-114).

Des suspensions de kératinocytes et de fibroblastes sont ensemencées dans leur milieu de culture respectif dans des microplaques 96 puits. Après 24 h d' incubation, à 3 7 C dans une atmosphère à 5% de CO2, le milieu est éliminé et remplacé par du milieu neuf. L,ajout de l'extrait objet du présent brevet est réalisé -12 aux concentrations de 2% et 4% avant l'agression (P1) ainsi qu'avant et pendant

l'agression (P3) pour les deux types cellulaires.

L'agression est réalisée dans du PBS pendant 150 minutes avec les concentrations en hypoxanthine de 160 g.ml et en xanthine-oxydase de 20 mU.mli pour les kératinocytes et de 5 mU.mli pour les fibroblastes. L'évaluation du relargage de la lactate deshydrogenase est effectuée sur le surnageant après l'agression. Pour une dose de 2% d'extrait selon l' invention et avec les conditions 0 expérimentales définies dans le présent brevet, l'activité protectrice antiradicalaire (en %) est pour - les kératinocytes de 74 + 4 pour P1 et 111 + 5 pour P3

- les fibroblastes de 50 + 2 pour P 1 et 103 + 4 pour P3.

Pour une dose de 4% dudit extrait, cette activité protectrice antiradicalaire est pour - les kératinocytes de 85 + 4 pour P1 et 128 + 6 pour P3 - les fibroblastes de 79 i 4 pour P1 et 126 + 6 pour P3. On constate que l'alpha-tocophérol, qui est la référence, conduit à un résultat pour - les kératinocytes de 94 + 4 pour P1 et 150 + 7 pour P3

- les fibroblastes de 67 + 3 pour P1 et 79 + 4 pour P3.

Les analyses réalisées par les inventeurs démontrent bien que l'extrait de Cystoseira selon l'invention possède un effet protecteur des cytomembranes des kératinocytes et des fibroblastes vis-à-vis des radicaux libres générés par l'agression du système hypoxanthine-xanthine oxydase. Au niveau de la lipoperoxydation, cet effet traduit un blocage de la phase d' initiation et du cycle de

2 5 Haber- We is s.

3 - 2 Protection des cytomembranes vis-à-vis des radicaux alkoxyles Cet exemple démontre les effets protecteurs de l'extrait selon l'invention sur des kératinocytes et des fibroblastes en culture soumis à une agression du t

butyl hydroperoxyde qui en présence de fer ferreux génère des radicaux alkoxyles.

- 13 Conditions expérimentales et résultats: L'agression est réalisée dans le milieu de culture complet pendant 7h pour les kératinocytes et pendant 6h pour les fibroblastes à 37 C dans une atmosphère avec 5% de CO2. L'ajout de l'extrait objet du présent brevet est réalisé aux concentrations de 2% et 4% pendant l'agression (P2) ainsi qu' avant et pendant

l'agression (P3) pour les deux types cellulaires.

Pour une dose de 2% d'extrait selon l' invention et avec les conditions 0 expérimentales définies dans le présent brevet, l'activité protectrice antiradicalaire est (en %) pour - les kératinocytes de 47 + 2 pour P2 et 116 + 5 pour P3

- les fibroblastes de 37 + 2 pour P2 et 58 + 3 pour P3.

Pour une dose de 4% dudit extrait, cette activité protectrice antiradicalaire est pour - les kératinocytes de 53 * 3 pour P2 et 12X + 6 pour P3

1S - les fibroblastes de 61 + 4 pour P2 et 74 + 4 pour P3.

On constate que la réLérence à savoir l'alpha-tocophérol conduit à un résultat de: - les kératinocytes de 40 + 2 pour P1 et 107 + 5 pour P3

- les fibroblastes de 49 + 3 pour P1 et 78 + 4 pour P3.

Les analyses réalisées par les inventeurs démontrent bien que l'extrait de Cystoseira stricta selon l'invention possède un efiSet protecteur des cytomembranes des kératinocytes et des fibroblastes vis-à-vis des radicaux alkoxyles générés par l'agression du t-butyl hydroperoxyde. Au niveau de la lipoperoxydation, cet effet

traduit donc un blocage de la phase de réactivation.

2s 3 - 3 Protection des cytomembranes vis-à-vis des rayonnements UVA Cet exemple démontre les eets protecteurs de l'extrait selon l'invention sur des fibroblastes en culture soumis à des rayonnements WA. Les ultraviolets

libèrent à l'intérieur des cellules des radicaux hydroxyles et de l'oxygène singulet.

Conditions expérimentales et résultats: L'agression est réalisée dans du PBS pendant 6h. L'ajout de l'extrait objet du présent brevet est réalisé aux concentrations de 2% et 4% avant l'agression (P1) et avant et pendant l'agression (P3). L'évaluation du relargage de la lactate

déshydrogénase est effectuée sur le surnageant à la fin de l'essai.

Pour une dose de 2% d'extrait selon l' invention et avec les conditions expérimentales définies dans le présent brevet, l'activité protectrice antiradicalaire

o est (en %) de 52 + 3 pour P1 et 140 + 6 pour P3.

Pour une dose de 4% dudit extrait, cette activité protectrice antiradicalaire

passe à 68 i 4 pour P1 et 148 + 6 pour P3.

Les analyses réalisces par les inventeurs démontrent bien que l'extrait de Cystoseira stricta selon l'invention possède un effet protecteur des cytomembranes des kératinocytes et des fibroblastes vis-à-vis des rayonnements ultraviolets A. Les résultats obtenus par les inventeurs et présentés dans l'exemple 3 prouvent bien que l'extrait de Cystoseira stricta selon l'invention protège les

cytomembranes des dogâts nocifs occasionnés par la peroxydation lipidique.

L' inhibition des anions superoxydes, des radicaux alkoxyles et de l'oxygène singulet révèle un triple blocage de la châîne d'auto-oxydation des acides gras polyinsaturés au niveau de la phase d'initiation, du cycle de Haber-Weiss et de la phase de réactivat ion. Les résultats obtenus par le s inventeurs démontrent bien que ledit extrait permet l'arrêt de la synthèse des radicaux les plus agressifs à savoir les

radicaux hydroxyles et les radicaux alkoxyles.

Le fait d'introduire le principe actif à divers stades de la culture cellulaire (avant et/ou pendant l' agression) permet de plus de préciser le mode d'action de

cet actif.

- Dans l'administration Pl, l'extrait est éliminé du milieu de culture avant

- 15-.

l'agression. L'activité enregistrée révèle que l'extrait de Cystoseira préparé selon l' invention est capable de pénétrer aussi bien dans les kératinocytes que dans les

fibroblastes pour les protéger contre les radicaux libres intracellulaires.

- Dans l' administration P2, l'extrait est présent seulement pendant l'agression.

L'activité enregistrée révèle donc que ledit extrait est capable d'intercepter les radicaux libres à l'intérieur des cellules pour protéger cellesci des agressions radicalaires. - Dans l' administration P3, l'extrait est présent avant et au moment o l' agression enzymatique se déroule. L'activité enregistrée confrme bien que l'extrait possède

o une activité anti-radicalaire.

Exemple n 4: Mise en évidence de l'effet protecteur anti-inflammatoire L'inflammation est un processus réversible résultant d'une atteinte des structures cellulaires. Les radicaux libres oxygénés amplifient ce processus, en particulier en stimulant la synthè se des médiateurs lipidique s (pro staglandines et leucotriènes). Ces substances néformées sont libérées à partir d'un constituant

normal des membranes cellulaires: l'acide arachidonique.

L'acide arachidonique est libéré à partir des phospholipides membranaires sous l' action des phospholipases A2 (et C). I1 se produit alors une oxydation ,.,; progressve realsee - par la cyclo-oxygénase qui enlève l'hydrogène en C13 de l'acide arachidonique et forme les prostaglandines et les thromboxanes et - par la 5 -lipoxygénase qui enlève l' hydrogène en C7 de l' acide arachidonique et forme les lencotriènes.

Les médiateurs néoformés: lencotriènes, prostaglandines et thromboxanes

agissent sur la perméabilité des vaisseaux et occasionnent des effets douloureux.

Les deux exemples insérés ci-après illustrent l'action inhibitrice que présente l'extrait selon l'invention à deux niveaux du processus inflammatoire, à savoir une

activité anti-phospholipase A2 et une activité anti-lipoxygénase.

- 16 4 - 1 Inhibition de la phospholipase A Cet exemple démontre l'activité inhibitrice de l'extrait de Cystoseira stricta

préparé selon l' invention, vis-à-vis de la phospholipase A2.

Conditions expérimentales et résultats:

Le protocole utilisé est adapté des travaux de Uthe & Magge (1971 - Can.

J. 13iochem., 49: 776) et de ceux de Dennis (1973 - J. Lipids Res., 14: 152}.

lo Le milieu réactionnel renferme le substrat (un phospholipide: L phosphatidylcholine dimyristoyl) et l'extrait à tester en concentrations croissantes: 2% - 3% - 4% et 5%. En présence de l'enzyme phospholipase A2, le phospholipide se transforme en lysolécithine avec libération d'un acide gras insoluble dans le milieu. La réaction est suivie par turbimétrie au moyen d'un spectrophotomètre à la longueur d'onde de 360 nm. Le s valeurs rapportées correspondent à la moyenne arithmétique de tro is

essais effectués pour chaque concentration d'extrait algal.

Avec les concentrations croissantes de l'extrait de Cystoseira stricta selon l'invention, à savoir 1% - 2,5% - 5% et 7,5%, on observe une inhibition de

l'activité enzymatique de 34% - 70% - 86% et 88% respectivement.

4 - 2 Inhibition de la 5-lipowénase Cet exemple démontre l'activité inhibitrice de l'extrait de Cystoseira stricta

préparé selon l' invention vis-à-vis de la 5-lipoxygénase.

La S-lipoxygénase est l'enzyme-clé de la synthèse des lencotriènes à partir

de l'acide arachidonique.

Les lencotriènes sont impliqués dans le développement de tumeurs de la peau et dans plusieurs autres maladies (asthme, psoriasis...}. Le leucotriène B4 - 17 induit la chimiotaxie et l'aggrégation des lencocytes. Les leucotriènes C, D et E sont impliqués dans l'anaphylaxie (choc allergique généralisé) en tant qu'inducteurs de la bronchoconstriction et des changements de perméabilité

vasculaire des poumons.

Les lencotriènes sont présents dans les polynucléaires neutrophiles. En se fixant sur des récepteurs de nombreuses cellules, ils occasionnent des effets bio logiques néLastes et conduisent aux phénomènes d' irritation, de douleur et de rougeurs. lo Conditions expérimentales et résultats: Le protocole utilisé est celui exposé dans les revues Methods of Enzymatic

Analysis (411, 1965) et Brit. Med. Bull., (30: 219, 1989).

Le milieu réactionnel renferme le substrat (un acide gras insaturé: l'acide linoléique) et l'extrait à tester en concentrations croissantes: 1% - 1,5% - 2% et 2,5%. En présence de l'enzyme, l'acide linoléique se transforme en acide 5 hydroperoxy-6,8,11,14-eicosatétraénoique (5 HÉETE3 dont la formation est suivie

à 234 nm.

Les valeurs rapportées correspondent à la moyenne arithmétique de trois

essais effectués pour chaque concentration d'extrait algal.

Avec le s concentrations cro is santes de l extrait de Cystose ira stricta selo n l'invention, à savoir 1,5% - 2% - 2,5% - 3% et 4%, on observe une inhibition de

l'activité enzymatique de 38% - 6Q% - 90% - 97% et 100% respectivement.

Les résultats de ces deux derniers exemples démontrent que l'extrait objet du présent brevet présente d' importantes capacités d' inhibition au niveau de deux des enzymes fortement impliquces dans les processus inflammatoires à savoir la

phospholipase A2 et la 5-lipoxygénase.

- 18 Ces propriétés permettent des applications o l'on recherche à limiter ou à bloquer les processus de formation des médiateurs de l' inflammation et de l'allergie cutanée. Elles sont aussi utiles dans les traitements visant à atténuer ou à supprimer les irritations, les picoternents, les manifestations allergiques, les érythèmes et les rougeurs. Conclusion Les exemples ci-dessus démontrent que l'extrait préparé à partir de la o macroalgue Cystoseira stricta (= Cystoseira amentacea variété stricta) selon l'invention présente de bonnes capacités réparatrices des lésions de 1'ADN mais aussi des capacités élevées à inhiber les conséquences néLastes de la lipoperoxydation membranaire et cela au niveau des deux mécanismes de cette peroxydation à savoir le mécanisme non enzymatique qui attaque toutes les cytomembranes et le mécanisme enzymatique qui déclenche les processus inflammatoires. Ainsi, ledit extrait peut être avantageusement utilisé dans diverses applications impliquant en particulier: - la protection du matériel génétique vis-à-vis par exemple des radicaux libres et des rayonnements ultraviolets, l'inhibition de la dégradation et/ ou de la destruction des cellules, - la lutte contre les effets du vieillissement intrinsèque et/ou extrinsèque des cellules, particulièrement des cellules de la peau, - l' inhibition voire la suppression des processus inDarnmatoires comme par exemple les manifestations allergiques au niveau de la peau, - le traitement des peaux dites sensibles, - le traitement des érythèmes cutanés, particulièrement les érythèmes induits par les rayonnements ultraviolets ou encore les éruptions érythémateuses localisées ou diffuses sur la peau et causées par divers agents infectieux ou non. - 19 Lesdites compositions utilisant la présente invention renferment ledit extrait à titre de principe actif, seul ou en association avec au moins un autre principe

actif, mais en quantité efficace pour une application topique.

De manière avantageuse, la composition finale desdits produits renferme entre 0,1% et 40% (p/p), préLérentiellement entre 1% et 5% en poids de l'extrait

préparé selon l'invention.

L' extrait objet de la présente invention peut être employé dans les o compositions cosmétiques ou dermatotologiques pour l'exploitation soit d'une des activités ou propriétés démontrées et prise isolément, soit d'au moins deux de ces

activités soit encore de toutes ces activités considérces ensemble.

Ledit extrait peut être incorporé sous toutes les formes galéniques normalement employées dans les domaines cosmétique et dermatologique pour une application topique sur la peau, notamment les solutions aqueuses ou huileuses ou le s dispersions du type lotion ou sérum, les émuls ions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait obtenues par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/EI), les suspensions ou émulsions de o consistance molle du type crème ou gel aqueux ou anhydre, les dispersions

vésiculaires de type ionique et/ou non ionique.

En application sur les phanères, ledit extrait peut être incorporé aussi sous diverses formes galéniques, notamment sous la forme de solutions aqueuses, alcooliques ou hydroalcooliques ou encore de crèmes, de gels, d'émulsions, de

mousses et même d'aérosols avec un agent propulseur sous pression.

Ces compositions cosmétiques et dermatologiques selon l' invention peuvent constituer des crèmes de nettoyage, de protection, de traitement ou de soin pour le visage ou encore le corps (par exemple crèmes de jour ou de nuit, crèmes démaquillantes, crèmes de fond de teint, crème anti- so laires), des fonds de teint, -20 des laits de démaquillage, des laits corporels de soin ou de protection ou encore anti-solaires, des lotions pour la peau et les phanères, des mousses pour le soin

cutané, des compositions pour le bain ou pour les cheveux, des compositions anti-

solaires ou après-rasage ou encore épilatoires sans que ces listes soient exhaustives. Toutes ces compositions sont préparées selon les méthodes habituelles

de l'homme du métier.

L' extrait de Cystoseira stricla selon l'invention peut être combiné dans lesdites compositions cosmétiques et dermatologiques avec tout autre ingrédient lO habituellement utilisé dans les formulations en application topique: les lipides d'extraction et/ou de synthèse, les polymères gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les tensioactifs, les émulsionnants, les conservateurs, les antioxydants, les parfums, les vitamines, les émollients, les séquestrants, les dépigmentants, les filtres solaires, les agents amincissants, les céramides, les matières colorantes, les bactéricides, les antipelliculaires, les principes actifs hydro- ou liposolubles, les extraits de plantes,

les extraits marins, les extraits tissulaires sans que cette liste soit limitative.

Bien entendu, on veillera à sélectionner le ou les éventuels ingrédients à ajouter aux dites compositions de manière à ne pas altérer ou substantiellement altérer les propriétés avantageusement attachées à ces compositions et à les ajouter

selon des quantités classiquement employées dans le domaine cosmétique.

Il est également possible d' incorporer l'extrait algal selon l' invention dans tout vecteur cosmétique adéquat comme par exemple des agents filmogènes, des

liposomes, des chylomicrons, des cyclodextrines, des micelles, des macro-, micro-

et nanoparticules des macro-, micro- et nanocapsules, ou encore de les absorber sur

des polymères organiques, des supports textiles et minéraux.

- 21

Claims (10)

REVENDICATIONS

1 - Compositions cosmétiques et dermatologiques caractérisées en ce qu'elles contiennent un extrait de l' algue brane Cystoseira stricta Sauvageau (= Cystoseira amentacea Bory variété stricta Montagne). 2 Compositions cosmétiques et dermatologiques selon la revendication 1 caractérisées en ce que l'on réalise l'extraction à partir de thalles ou toute partie de thalles de ladite algue sous forme fra^che, congelée, sèche, entière, fragmentée ou broyée. 3 - Compositions cosmétiques et dermatologiques selon l'une quelconque

des revendications 1 et 2 caractérisées en ce que ledit extrait est obtenu par

macération des thalles de ladite algue, suivie de filtrations, centrifugation,

ultrafiltrations et concentration.

4 - Compositions cosmétiques et dermatologiques selon l'une quelconque

des revendications 2 et 3 caractérisées en ce que la macération peut étre remplacée

par des techniques à contre courant, la décoction, l' extraction sous reflux, 1' extraction à l' aide d'ultrasons, de micro -ondes associée ou non aux so lvants, l'extraction par des fluides supercritiques, notamment le CO2 supercritique avec ou

sans co-solvant.

5 - Compositions cosmétiques et dermatologiques selon l'une quelconque

des revendications 2 à 4 caractérisées en ce que le solvant d'extraction est choisi

parmi le groupe constitué par l'eau, les solvants chlorés tel que le chloroforme, les éthers tels que l'éther éthylique, l'acétone, les esters en C2 à C8 tels que l'acétate d'éthyle et l'acétate de butyle, des alcools en C1 à C6 tels que le méthanol, l' éthanol, l' isopropanol et le butanol, des polyols en C2 à C6 tels que le propylène

glycol et le butylène glycol et leurs mélanges.

6 - Compositions cosmétiques et dermatologiques selon l'une quelconque

des revendications 1 à 5 caractérisces en ce que ledit extrait est utilisé soit sous

forme liquide soit sous forme sèche obtenue par séchage, précipitation,

atomisation, évaporation ou lyophilisation.

- 22 7 - Compositions cosmétiques et dermatologiques selon l'une quelcouque

des revendications 1 à 6 caractérisées en ce que ledit extrait est incorporé ou

associé à un vecteur cosmétique adéquat tel que par exemple des agents filmogènes, des liposomes, des chylomicrons, des micelles, des cyclodextrines, des macro-, micro- et nanoparticules, des macro-, microet nanocapsules ou absorbé

sur des polymères organiques, des supports textiles et minéraux.

8 - Compositions cosmétiques et dermatologiques selon l'une quelcouque

des revendications 1 à 7 caractérisées en ce que qu'elles comprennent de 0,1% à

% en poids, en particulier de 1% à 5% en poids d'extrait de ladite algue.

o 9 - Compositions cosmétiques et dermatologiques selon l'une quelconque

des revendications 1 à 8 caractérisées en ce que lesdites compositions se présentent

sous toute forme galénique appropriée pour une application topique sur la peau, les

muqueuses et/ou les phanères dans un milieu physiologiquement acceptable.

- Utilisation d'un extrait de Cysfoseira stricta Sauvageau (= Cystoseira amenfacea Bory variété stricta Montagne) en tant que principe actif, ledit principe actif étant incorporé seul ou en association avec au moins un autre principe actif, pour des compositions cosmétiques et dermatologiques en application topique

telles que définies dans l'une des revendications 1 à 9.

11 - Utilisation d'un extrait de ladite algue selon la revendication 10 caractérisée en ce que ledit extrait présente une activité protectrice vis-à-vis de

radicaux libres d'origines diverses.

12 - Utilisation d'un extrait de ladite algue selon les revendications 10 et 11

caractérisée en ce que ledit extrait présente une activité protectrice des molécules d'ADN.

2s 13 - Utilisation selon l'une des revendications 10 à 12 caractérisée en ce

que lesdites compositions sont destinées à protéger le matériel génétique et à lutter contre les mutations induites notamment par les radicaux libres et les différents

rayonnements ultraviolets.

14 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 10 à 13

caractérisée en ce que lesdites compositions sont destinées à inhiber la dégradation

et/ou la destruction des cellules.

- 23 - Utilisation d'un extrait de ladite algue selon l'une quelconque des

revendications 10 à 14 caractérisée en ce que ledit extrait est destiné à traiter le

vieillissement intrinsèque et/ou extrinsèque.

16 - Utilisation d'un extrait de ladite algue selon l'une quelconque des

s revendications 10 à 15 caractérisée en ce que ledit extrait présente une activité

inhibitrice de la phospholipase A2 et/ou de la 5-lipoxygénase.

17 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 10 à 16

caractérisée en ce que lesdites compositions sont destinées à traiter des peaux dites