FR2928548A1 - Substances augmentant le seuil d'activation des cellules immunes - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne l'utilisation de substances actives augmentant le seuil d'activation des cellules immunes comme principe actif pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique, notamment dermatologique.L'invention concerne également une méthode de criblage de telles substances actives.

Description

L'invention concerne l'utilisation de principes actifs pour la préparation de compositions cosmétiques ou pharmaceutiques destinées à augmenter le seuil d'activation des cellules immunes de la peau et/ou des muqueuses. La présente invention concerne en particulier le soin et/ou le traitement des peaux sensibles, rendues momentanément sensibles, réactives ou hyperréactives. ETAT DE L'ART Les réactions d'irritation et d'allergies cutanées (hypersensibilité retardée de contact ou allergie de contact ou encore eczéma de contact) sont devenues un problème de santé dans les pays industrialisés.

Les causes sont aussi variées que le nombre d'irritants et d'allergènes de contact que l'on retrouve, par exemple, dans les sels de métaux, les produits cosmétiques et d'hygiène, les parfums, les médicaments, les conservateurs, les désinfectants, les vêtements, les plantes, etc. Dans ce même contexte, le nombre de personnes qui disent avoir la peau sensible ou hyper-réactive a fortement augmenté ces dernières années. Ce nombre est passé de 30% de la population dans les années 1980 à environ 60% aujourd'hui.

Une des causes les plus importantes de la sensibilité de la peau tient à l'affaiblissement de la fonction barrière, provoquée entre autres par une déficience héréditaire/acquise des lipides intercellulaires du stratum corneum. Une activité neuro-sensorielle accrue, qui est caractérisée par des changements dans les terminaisons nerveuses de l'épiderme, une accumulation de neurotransmetteurs ou une perturbation dans la transmission des informations au niveau du système nerveux central, est également un facteur provoquant l'accroissement de la sensibilité de la peau. Une troisième cause supplémentaire de sensibilité de la peau est une sensibilité immunitaire accrue comportant notamment un accroissement mesurable de la densité des cellules de Langerhans (CL) épidermiques, et pouvant, dans les cas les plus extrêmes entrainer des pathologies telles que l'urticaire de contact, la dermatite irritative ou allergique de contact, ou la dermatite atopique.

Le polymorphisme des peaux sensibles se traduit par des sensations subjectives telles que picotement, sensation de brûlure, sensation de démangeaison, tiraillement et des réactions objectives de la peau telles que rougeur, squame visible, épaississement de la peau. Ces manifestations inesthétiques et/ou inconfortables notamment de l'irritation sont caractéristiques des peaux sensibles. Dans les cas les plus extrêmes, des irritations, voire des réactions allergiques sont aussi décrites.

Tant en cosmétique qu'en pharmacie, il est connu de diminuer la sensibilité de tous les types de peaux, notamment en prévenant et/ou traitant la réaction inflammatoire ou irritante. En effet chez les sujets pour lesquels la peau est dite sensible , une exposition même mineure à des agents agressifs ou conditions irritantes peut se traduire par des manifestations inesthétiques et/ou inconfortables cutanées et/ou mucosales pouvant entrainer une réaction d'inflammation ou d'irritation importante qu'il convient d'éviter. Les traitements actuels pour les peaux sensibles ont pour objectif de rendre la peau plus tolérante, c'est-à-dire d'élever le seuil de réactivité des peaux sensibles qui sont caractérisées par un seuil d'irritabilité plus bas aux réactions irritantes. Ces traitements sont basés sur l'utilisation de produits qui reposent la peau. Les formulations cosmétiques spéciales peaux sensibles dans lesquels les composants sont souvent réduits au minimum et les substances a priori non adaptées aux épidermes sensibles ou allergiques en sont exclues. On peut citer l'utilisation de produits hydratants contenant ni parfum, ni alcool, ni colorant, ni pigment, ni conservateurs, ni actifs et avec un pH neutre. Les produits apaisants ou calmants à base d'eaux thermales, lesquelles sont riches en oligo-éléments et sels minéraux présentent des propriétés proches du sérum physiologique telles que l'isotonicité. Ces produits peuvent être enrichis avec des extraits végétaux apaisants et anti-inflammatoires tels que la mauve, l'avoine et le bleuet. Les produits protecteurs qui ont la capacité de renforcer la barrière cutanée avec des molécules naturelles qui vont reconstruire le film hydrolipidique de l'épiderme afin que ce dernier retrouve toutes ses fonctions protectrices. Les céramides, précurseurs des lipides de la peau, sont typiquement utilisées pour ce type d'application. Des produits à base de saccharides ayant un effet filmogène sont également décrits pour le soin des peaux hyper-réactives. Les produits déstressants qui présentent une activité neuro-cosmétique, telles que des p endorphines-like, en agissant sur les récepteurs des fibres nerveuses sensitives de la peau. Ces produits sont généralement couplés à des effets anti-inflammatoires, soit par la libération d'un neuromédiateur anti-inflammatoire tel que l'a-MSH (melanocyte stimulating hormone), soit par l'inhibition des facteurs anti-inflammatoires endogènes tels que TNFa (tumor necrosis factor alpha), IL-1[3 (interleukine 1 beta) ou PGE2 (prostaglandine E2).

La composante immunologique cutanée, qui implique fondamentalement toutes les cellules de la peau, est principalement constituée par : - Les cellules dendritiques (CD) cutanées : les cellules de Langerhans et les CD dermiques (CDD), qui de par leur fonction de cellules présentatrices d'antigènes (CPAg), sont à l'origine des réponses immunitaires de la peau ; - Les kératinocvtes, qui de par le micro-environnement cutané fondamental qu'ils constituent (sueur, sébum, peptides anti-microbiens, facteurs de croissance, cytokines, chimiokines, etc.) sont le partenaire cellulaire clé des CD de la peau. Lors d'une stimulation par un antigène, par exemple des allergènes, pathogènes et/ou corps étrangers, les CD de la peau ont pour fonctions : - de prendre en charge ou capturer l'antigène ; - de migrer hors de la peau et en direction des ganglions lymphatiques ; -de présenter l'information antigénique aux lymphocytes afin d'initier une immunité adaptative spécifique. Les CD de la peau doivent également intégrer tous les signaux endogènes délivrés par les kératinocytes avoisinants. En effet, sous une stimulation quelconque et selon sa nature, les kératinocytes produisent une très large panoplie de médiateurs solubles (telles que des cytokines, etc.) qui vont influencer les fonctions immunologiques des CL et des CDD. Suite à la capture de l'antigène, les CD de la peau vont subir successivement des modifications phénotypiques et fonctionnelles : - La capture de l'antigène induit l'activation des CL et des CDD qui acquièrent alors un phénotype activé . Ce phénotype activé se traduit par une forte expression des molécules de co-stimulation CD80 et CD86 qui sont directement impliquées dans le seuil d'activation des lymphocytes T par les CD. L'expression membranaire des molécules du CMH (complexe majeur d'histocompatibilité) de classe Il, et notamment HLA-DR, est également fortement augmentée de par la présentation des peptides antigéniques à la surface des CD. - L'activation des CL et des CDD est également corrélée à l'acquisition de l'expression du récepteur CCR7 qui est indispensable à la migration des CD hors de la peau et en direction des ganglions lymphatiques. - Au cours de leur migration, les CL et les CDD subissent un processus dit de maturation et acquièrent un phénotype de CD matures . Cet état mature, indispensable pour la sensibilisation des lymphocytes et l'établissement d'une immunité, se traduit par l'expression des marqueurs CD83 et DC-LAMP et par la capacité à sécréter des cytokines. BUT DE L'INVENTION L'invention a pour but principal de fournir des principes actifs capables d'augmenter le seuil d'activation des cellules immunes d'un sujet en particulier des cellules immunes cutanées et/ou mucosales. Il en résulte une diminution de la sensibilité et/ou réactivité cutanée et/ou mucosale et/ou une augmentation de la tolérance de la peau et/ou des muqueuses. Ceci présente donc un intérêt indéniable dans le cadre de traitement et/ou soin cosmétique, pharmaceutique en particulier dermatologique. La présente invention a également pour but de fournir un modèle de criblage qui tient compte de la réponse des deux populations de CD cutanées (CL et CDD) pour cribler des substances ayant l'activité mentionnée ci-dessus. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION La présente invention concerne l'utilisation d'au moins un principe actif choisi parmi un extrait végétal de Phoradendron piperoides, un extrait végétal de Cestrum /atifo/ium, un extrait végétal de Spi/anches o/eracea, un extrait végétal de Maprounea guyanensis, la sécurinine, la foliosidine acétonide, la 8-oxopseudopalmatine, ou l'une quelconque de leurs combinaisons, comme agent actif pour augmenter le seuil d'activation des cellules immunes d'un sujet, dans une composition cosmétique, ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique, et en particulier d'une composition dermatologique, de préférence destinée à augmenter le seuil d'activation de la réponse immune d'un sujet. Un tel principe actif permet avantageusement de diminuer la sensibilité et/ou la réactivité d'au moins une partie de la peau et/ou muqueuse d'un sujet. Par diminuer, les inventeurs entendent réduire et/ou limiter au moins partiellement la réactivité d'au moins une partie de la peau et/ou muqueuse d'un sujet.

Avantageusement, le principe actif diminue et/ou prévient la réaction immunitaire cutanée et/ou mucosale. Avantageusement, le principe actif diminue et/ou inhibe l'activité d'au moins un type de cellules immunes, en particulier des cellules dendritiques. Avantageusement, le principe actif diminue l'activité d'au moins des cellules de Langerhans épidermiques (CL) et/ou des cellules dendritiques dermiques (CDD). Avantageusement, le principe actif est en combinaison avec un agent calmant. Les principes actifs selon l'invention présentent la capacité de diminuer la réponse immune en augmentant le seuil d'activation des cellules immunes, et notamment des CD. En effet, les principes actifs selon l'invention sont avantageusement immuno-répressifs des capacités immunes de la peau ce qui est fondamentalement différent de la voie inflammatoire de la peau. Les produits anti-inflammatoires actuels diminuent essentiellement les capacités de synthèse des facteurs solubles pro-inflammatoires (cytokines, interleukines, etc.) sécrétés par les kératinocytes de la peau. Les substances selon l'invention ciblent une toute autre voie de régulation qui est celle de la réponse immune de la peau. Ces modes d'action peuvent être complémentaires.

Le seuil d'activation des cellules immunes d'un sujet, en particulier des CD est défini par l'expression des marqueurs d'activation et notamment le marqueur d'activation CD86. Dans la peau normale, les CD qui sont immatures et non activées présentent un niveau d'expression basale de CD86 que nous avons défini comme étant le seuil d'activation de ces cellules. Ainsi, la diminution d'expression des marqueurs d'activation, en particulier de CD86 sur les CD immatures et non activées se traduit par une augmentation du seuil d'activation des cellules immunes. L'invention présente l'avantage de cibler les CD de la peau, c'est-à-dire cibler la réponse immune, contrairement aux produits anti-inflammatoires classiques qui agissent uniquement sur des voies indirectes de la réponse immune cutanée et notamment sur la sécrétion de médiateurs solubles de l'immunité (cytokines) par l'environnement cutané, et notamment par les kératinocytes.

Avantageusement, le principe actif selon l'invention diminue au niveau de la peau l'expression d'au moins un type de marqueurs choisis parmi (i) CD86, exprimé de façon basale par les cellules dendritiques immature ; (ii) CD40, CD54, CD80, HLA-DR, CCR7 ou CD86 exprimés par des cellules dendritiques activées; et (iii) CD40, CD54, CD80, HLA-DR, CCR7,CD86, CD83 ou DCLAMP exprimés par des cellules dendritiques activées et matures, notamment pour diminuer la réactivité de la peau sensible. L'invention présente l'avantage d'augmenter le seuil de déclenchement de la réponse immune tout en affectant le moins possible une réponse immune ultérieure lorsque le sujet en aura besoin, comme lors d'une agression bactérienne de la peau, ou de manière générale en présence d'un agent pathogène, chimique fortement agressif et/ou corps étranger. En revanche, les produits anti-inflammatoires qui diminuent la synthèse des médiateurs solubles pro-inflammatoires dans la peau ne prennent pas en compte la réponse ultérieure des CD de la peau. Ainsi dans les traitements classiques avec des produits anti-inflammatoires, la réponse immune est bloquée ou tout au moins entravée. Cela présente évidemment l'inconvénient d'une mauvaise protection de la peau du sujet subissant une agression par un agent activateur de la réponse immune. Ainsi avantageusement, les principes actifs selon l'invention n'inhibent sensiblement pas la réponse immune, et notamment les fonctionnalités immunologiques des cellules dendritiques. D'autre part, les principes actifs selon l'invention permettent la récupération en partie de l'activité immune basale, et notamment celle des cellules dendritiques, lorsque le principe actif n'est plus en contact avec la peau après une application topique. Les principes actifs selon la présente invention conviennent pour tout type de peaux et particulièrement pour le soin et/ou traitement cosmétique chez des sujets ayant une peau sensible, réactive et/ou hyperréactive et/ou rendue momentanément sensible notamment par des traitements dermatologiques agressifs comme les traitements à la vitamine A acide et/ou par les agents agressifs et/ou conditions agressives.. D'une manière générale, les peaux sensibles peuvent être définies comme des peaux qui ne tolèrent plus ou très peu les agents agressifs notamment les agents de l'environnement tels que les agents polluants, les facteurs climatiques (vent, froid, chaleur), les expositions aux UV, les facteurs émotionnels notamment le stress et/ou les agents chimiques (métaux lourds, détergents, composés contenus dans les traitements cosmétiques tels que les parfums, les conservateurs, alcools pH, AHA ou dermatologiques tels que vitamine A acide) et/ou les conditions agressives notamment la transpiration et les agressions mécaniques telles que épilation, rasage, frottement. Les peaux sensibles ou rendues sensibles momentanément ne sont pas des peaux à caractères pathologiques. Elles peuvent néanmoins réagir aux agents et/ou conditions agressives par des manifestations inesthétiques et/ou inconfortables cutanées et/ou mucosales telles que picotement, sensation de brûlure, sensation de démangeaison, tiraillement, rougeur, squame visible, épaississement de la peau. Ainsi, le caractère peau sensible peut être estimé par le sujet lui-même avec des sensations cutanées subjectives ou par le dermatologue avec des réactions cutanées objectives.

La présente invention permet ainsi le contrôle du niveau d'activation et/ou de maturation des CD de la peau pour prévenir et/ou diminuer la réponse accrue et/ou excessive des peaux sensibles, ou des peaux rendues momentanément sensibles, réactives ou hyper-réactives. Selon une variante de réalisation, l'invention couvre, l'utilisation cosmétique des principes actifs pour prévenir et/ou traiter les manifestations inesthétiques et/ou inconfortables cutanées et/ou mucosales.

Les principes actifs selon l'invention sont ainsi particulièrement appropriés pour le soin et/ou traitement cosmétique. Ils permettent notamment la réalisation de compositions cosmétiques à effet apaisant et/ou anti-irritant et/ou protecteur en particulier contre les agents agressifs et/ou conditions agressives.

Ainsi, l'invention concerne deux types de soins et/ou traitements différents selon l'état sain (soin ou traitement cosmétique) ou pathologique (soin ou traitement dermatologique ou pharmaceutique) de la peau et/ou muqueuse du sujet concerné. Selon une autre variante de réalisation, l'invention couvre des principes actifs pour la préparation de composition pharmaceutique, en particulier dermatologique pour prévenir et/ou traiter les pathologies dûes à l'activation de la réponse immune. L'invention a également pour objet une composition cosmétique comprenant un principe actif choisi parmi un extrait végétal de Phoradendron piperoides, un extrait végétal de Cestrum latifolium, un extrait végétal Spilanthes oleracea à une concentration comprise entre 0.001 et 10% en poids, la sécurinine à la concentration de 1.10-7% et 1%, la foliosidine acétonide, la 8-oxopseudopalmatine et l'une quelconque de leurs combinaisons dans un véhicule cosmétique approprié à l'application topique. L'invention concerne également une composition pharmaceutique et/ou dermatologique destinée à augmenter le seuil d'activation de la réponse immune, notamment des cellules dendritiques, notamment pour prévenir et/ou traiter la réactivité de la peau et/ou des muqueuses, comprenant un principe actif choisi parmi un extrait végétal de Phoradendron piperoides, un extrait végétal de Cestrum latifolium, un extrait végétal Spilanthes oleracea, la sécurinine, la foliosidine acétonide, la 8-oxopseudopalmatine, et l'une quelconque de leurs combinaisons, dans un véhicule pharmaceutique et/ou dermatologique approprié à l'application topique.

L'invention concerne aussi l'utilisation d'au moins un principe actif pour la préparation d'une composition pharmaceutique, et notamment d'une composition dermatologique, destinée à prévenir et/ou à traiter destinée au traitement d'une réaction d'irritation, d'allergie cutanée et/ou mucosale, notamment de contact, d'une hypersensibilité retardée de contact, d'un eczéma de contact, d'un urticaire notamment urticaire de contact, d'une dermatite irritative ou allergique de contact, et/ou d'une dermatite atopique.

Avantageusement, on utilise au moins un principe actif de l'invention pour la préparation d'une composition pharmaceutique comprenant en outre un agent anti-inflammatoire. Selon un mode préférentiel, les pathologies sont la réaction d'irritation, d'allergie cutanée et/ou mucosale, notamment de contact, d'une hypersensibilité retardée de contact, d'un eczéma de contact, d'un urticaire notamment urticaire de contact, d'une dermatite irritative ou allergique de contact, et/ou d'une dermatite atopique. L'urticaire est notamment un urticaire de contact et/ou un urticaire alimentaire provoquant des manifestations cutanées et/ou mucosales. De préférence, la composition pharmaceutique et/ou dermatologique est destinée à prévenir et/ou traiter une réaction d'irritation, d'allergie cutanée et/ou mucosale, notamment de contact, d'une hypersensibilité retardée de contact, d'un eczéma de contact, d'un urticaire notamment de contact, d'une dermatite irritative ou allergique de contact, et/ou d'une dermatite atopique.

L'activation de la réponse immune de la peau et/ou des muqueuses est caractérisée par l'activation d'au moins un type de cellules immunes, et notamment les cellules dendritiques (CD), comme les cellules de Langerhans épidermiques (CL) et/ou les cellules dendritiques dermiques (CCD). Les CD de la peau sont caractérisés par leurs marqueurs spécifiques, les CL et les CDD exprimant spécifiquement Langerine et DC-SIGN, respectivement. Les cellules dendritiques immatures sont définies par un état phénotypique basal avant activation par des agents d'activation et/ou de maturation, et notamment de type TNFa et/ou LPS (lipopolysaccharide). Les cellules dendritiques dites activées sont définies par un état phénotypique activé comparable à celui induit par des agents d'activation et/ou de maturation, notamment du type TNFa et/ou LPS. Un agent d'activation et/ou de maturation, c'est-à-dire augmentant l'expression d'au moins un marqueur des CD, est un signal de danger pour les CD, ce qui déclenche une réponse immunitaire. Cet agent n'est pas limité. Ces agents sont en particulier des agents chimiques ou biologiques, comme le LPS ou TNFa, un paramètre irritant la peau comme un flux gazeux, un agent pollution, une température inférieure à 15°C ou supérieure à 40°C, utilisé ou appliqué de manière à augmenter l'expression d'au moins un marqueur des CD. L'invention concerne en particulier les mammifères, et en particulier l'être humain. Les principes actifs selon l'invention sont des extraits végétaux ou des molécules caractérisées. Les extraits sont avantageusement issus d'un végétal choisi parmi le groupe consistant en : Phoradendron piperoides, Cestrum latifolium, Spilanthes oleracea, Maprounea guyanensis et l'un quelconque de leurs mélanges. Les molécules caractérisées préférées sont choisies parmi le groupe consistant en : sécurinine, foliosidine acétonide et 8-oxo-pseudopalmatine. Un mélange de deux ou plus des principes actifs précités est également couvert par la présente invention, dans toutes leurs proportions. Selon un mode particulièrement avantageux, le principe actif est un extrait végétal de Cestrum latifolium et/ou la sécurinine. Les extraits végétaux utiles selon l'invention sont obtenus selon les méthodes classiques dans le domaine. Selon les végétaux, il est avantageux d'extraire, par exemple par macération, au moins une partie du végétal choisie parmi une racine, un rhyzome, une tige, une écorce, une fleur, un fruit, une graine, un germe et une feuille, de préférence entre 1 et 10% (p/p) dans un solvant ou un mélange de solvants, de préférence un solvant polaire protique, et avantageusement dans l'eau, un alcool, un glycol, un polyol, un mélange eau/alcool, eau/glycol ou eau/polyol (tels que l'eau en mélange avec éthanol, glycérol, butylène glycol ou autres glycols, tel que xylitol etc.) de 100/0 à 0/100 (v/v). Les extraits obtenus sont ensuite de préférence centrifugés et/ou filtrés et/ou distillés afin de récupérer la fraction soluble active (extrait brut). L'extrait végétal est préférentiellement dissous dans un solvant, tel que l'eau, un alcool, un polyol, un glycol, ou un de leurs mélanges. Selon l'invention, l'extrait végétal est préférentiellement utilisé à une concentration comprise entre 0,001 et 10% en poids, et avantageusement entre 0,01 et 5% et plus particulièrement à 1% en poids par rapport au poids de la composition.

La substance active peut être concentrée par évaporation du solvant, par exemple par lyophilisation ou par atomisation. Les molécules caractérisées (principes actifs) sont avantageusement préparées par dissolution dans un solvant polaire, tel que par exemple l'eau, l'éthanol, le glycol ou le DMSO.

Selon l'invention, les molécules caractérisées sont utilisées de préférence à une concentration comprise entre 1.10-7% et 1% en poids, et avantageusement entre 1.10-5% et 1.10-1%, et en particulier à 1.10-1% en poids par rapport au poids total de la composition. De préférence, la composition est une composition cosmétique ou pharmaceutique, notamment dermatologique de préférence appliquée par voie topique.

Par exemple, à raison de 0,5 à 10% de principe actif dans la formulation cosmétique finale et à raison d'une application de 1 mg de produit cosmétique fini par cm2 de peau, les quantités de principes actifs appliquées par cm2 de peau sont comprises avantageusement entre 10-13g et 10-12g pour les molécules caractérisées et entre 10-5g et 10-4g pour les principes actifs d'origine végétale (extrait végétal entre 0,001 et 10% en poids dans un solvant).

Les composés selon la présente invention sont préférentiellement utilisés sous forme de compositions cosmétiques, ou pharmaceutiques, et préférentiellement dermatologiques. La composition peut contenir tout solvant approprié et/ou tout véhicule approprié et/ou tout excipient approprié, éventuellement en combinaison avec d'autres composés d'intérêts. De ce fait, pour ces compositions, l'excipient contient par exemple au moins un composé choisi parmi le groupe consistant en les conservateurs, les émollients, les émulsifiants, les tensioactifs, les hydratants, les épaississants, les conditionneurs, les agents matifiants, les stabilisants, les antioxydants, les agents de texture, les agents de brillance, les agents filmogènes, les solubilisants, les pigments, les colorants, les parfums et les filtres solaires. Ces excipients sont de préférence choisis parmi le groupe consistant en les acides aminés et leurs dérivés, les polyglycérols, les esters, les polymères et dérivés de cellulose, les dérivés de Lanoline, les phospholipides, les lactoferrines, les lactoperoxidases, les stabilisants à base de sucrose, les vitamines E et ses dérivés, les cires naturelles et synthétiques, les huiles végétales, les triglycérides, les insaponifiables, les phytosterols, les esters végétaux, les silicones et ses dérivés, les hydrolysats de protéines, l'huile de Jojoba et ses dérivés, les esters lipo/hydrosolubles, les betaines, les aminoxides, les extraits de plantes les esters de Saccharose, les dioxydes de Titane, les glycines, et les parabens, et encore de préférence parmi le groupe consistant en le butylène glycol, le stéareth-2, le stéareth-21, le glycol-15 stéaryl éther, le cétéaryl alcool, le phénoxyéthanol, le méthylparaben, l'éthylparaben, le propylparaben, le butylparaben, le butylène glycol, les tocopherols naturels, la glycérine, le dihydroxycetyl sodium phosphate, l'isopropyl hydroxycétyl éther, le glycol stéarate, le triisononanoin, l'octyl cocoate, le polyacrylamide, l'isoparaffine, le laureth-7, un carbomer, le propylène glycol, le glycérol, le bisabolol, une diméthicone, l'hydroxyde de sodium, le PEG 30-dipolyhydroxystérate, les caprique/caprylique triglycérides, le cétéaryl octanoate, le dibutyl adipate, l'huile de pépin de raisin, l'huile de jojoba, le sulfate de magnésium, l'EDTA, une cyclométhicone, la gomme de xanthane, l'acide citrique, le lauryl sulfate de sodium, les cires et les huiles minérales, l'isostéaryl isostéarate, le dipélargonate de propylène glycol, l'isostéarate de propylène glycol, le PEG 8, Beeswax, les glycérides d'huile de coeur de palme hydrogénée, les glycérides d'huile de palme hydrogénée, l'huile de lanoline, l'huile de sésame, le cétyl lactate, le lanoline alcool, l'huile de ricin, le dioxyde de titane, le lactose, le saccharose, le polyéthylène basse densité, une solution isotonique salée.

Avantageusement, les compositions précitées sont formulées sous une forme choisie parmi le groupe consistant en une solution, aqueuse ou huileuse, une crème ou un gel aqueux ou un gel huileux, notamment en pot ou en tube, notamment un gel douche, un shampoing ; un lait ; une émulsion, une microémulsion ou une nanoémulsion, notamment huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple ou siliconée ; une lotion, notamment en flacon de verre, de plastique ou en flacon doseur ou en aérosol ; une ampoule ; un savon liquide ; un pain dermatologique ; une pommade ; une mousse ; un produit anhydre, de préférence liquide, pâteux ou solide, par exemple sous forme de bâtonnet notamment sous forme de rouge à lèvre ou de comprimés ; des gélules ; des sirops ; des granulés ; des poudres. Les termes "application topique", utilisés ici, signifient appliquer la composition selon la présente invention sur la surface de la peau et/ou les muqueuses, notamment par application directe ou par vaporisation. L'invention couvre également une administration orale, et notamment des applications nutraceutiques. Les termes "véhicule cosmétique ou dermatologique approprié", utilisés ici, signifient que la composition ou les composants de celle-ci sont adaptés à l'utilisation en contact avec la peau humaine sans toxicité, incompatibilité, instabilité, réponse allergique, ou leurs équivalents, indue. De nombreux ingrédients cosmétiquement actifs sont connus par l'homme du métier pour améliorer la santé et/ou l'apparence physique de la peau. L'homme du métier sait formuler les compositions cosmétiques ou dermatologiques pour obtenir les meilleurs effets. D'autre part les composés décrits dans la présente invention peuvent avoir un effet de synergie lorsqu'ils sont combinés les uns aux autres. Ces combinaisons sont également couvertes par la présente invention. Le CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Second Edition (1992) décrit différents ingrédients cosmétiques et pharmaceutiques utilisés couramment dans l'industrie cosmétique et pharmaceutique, qui sont en particulier adaptés à une utilisation topique. Des exemples de ces classes d'ingrédients comprennent, sans en être limité les composés suivants: abrasif, absorbants, composé à but esthétique tel que les parfums, les pigments, les colorants, les huiles essentielles, les astringents, etc. (par exemple: l'huile de clou de girofle, menthol, camphre, l'huile d'eucalyptus, eugénol, menthyl lactate, distillat d'hamélis), les agents anti-acné, les agents anti-floculants, les agents antimousse, les agents antimicrobiens (par exemple: iodopropyl butylcarbamate), les antioxydants, les liants, les additives biologiques, les agents tampon, les agents gonflants, les agents chélatants, les additifs, les agents biocides, les dénaturants, les épaississants, et les vitamines, et les dérivés ou équivalents de ceux-ci, les matériaux formant des films, les polymères, les agents opacifiants, les ajusteurs de pH, les agents réducteurs, les agents dépigmentants ou éclaircissants (par exemple : hydroquinone, acide kojique, acide ascorbique, magnésium ascorbyl phosphate, ascorbyl glucosamine), les agents de conditionnement (par exemple : les humectants). En particulier, pour améliorer l'état de sensibilité de la peau de manières plus complète, il est particulièrement intéressant selon l'invention de combiner les principes actifs selon l'invention avec un ou plusieurs autres actifs choisis parmi les molécules caractérisées ou les extraits végétaux connus pour leurs propriétés : - neurocosmétiques -analgésiques externes - calmantes pour la peau, notamment les inhibiteurs PLA2, les exopolysaccharides d'origine bactérienne, notamment les agents calmants cosmétiques tels que l'extrait d'Aesculus hippocastanum (CAS 8053-39-2), l'extrait d'Alteromonas ferment décrit dans le brevet EP0987010 - cicatrisantes tels que le panthénol et ses dérivés, par exemple l'ethyl panthenol, l'aloe vera, l'acide pantothenique et ses dérivés, l'allantoine, le bisabolol, et le dipotassium de glycyrrhizinate, - anti-inflammatoires tels que les anti-inflammatoires stéoridiens et non stéoridiens, en particulier les inhibiteurs de production de cytokines et chemokines, de cycloxygénase, de Nitrique Oxide (NO) et NOS Nitrique Oxide Synthase. A titre d'exemple de produits anti-inflammatoires, on peut citer les extraits de Gingko biloba, les terpènes trilactone tels que les gingkolides, notamment gingkolide B et Bilobalide connus pour leurs propriétés antagonistes du facteur d'activation plaquettaire (PAF). L'invention concerne également une composition cosmétique comprenant un principe actif selon l'invention en association avec d'autres principes actifs connus pour le soin et/ou le traitement cosmétique des peaux sensibles, rendues momentanément sensibles, réactives et/ou hyperactives.

L'invention couvre une méthode de traitement thérapeutique comprenant l'administration d'un agent actif pour les différents traitements énumérés ci-dessus à un sujet en ayant besoin, notamment par application topique. La présente invention concerne également une méthode de criblage de ces principes actifs. Selon une variante l'invention concerne une méthode de criblage de principes actifs susceptibles d'augmenter le seuil d'activation de la réponse immune des cellules dendritiques au niveau cutané et/ou mucosale, ladite méthode comprenant : (i) la préparation d'un milieu de culture comprenant des cellules dendritiques (CD) immatures ou activées ; (ii) la mise en contact du milieu comprenant les CD avec au moins une substance à cribler quant à sa capacité à augmenter le seuil d'activation de la réponse immune des cellules dendritiques au niveau cutané; (iii) la récupération des CD pour quantifier l'expression des marqueurs de l'activation des CD ; (iv) la comparaison de la valeur de l'expression des marqueurs de l'activation des CD qui ont été mises en contact avec des substances à cribler par rapport à la valeur de l'expression des marqueurs de l'activation des CD obtenue avec un témoin positif comme un agent anti-inflammatoire stéroidien, préférentiellement la déxaméthasone, pour sélectionner des principes actifs augmentant le seuil d'activation de la réponse immune des cellules dendritiques au niveau cutané et/ou mucosale .

Selon une autre variante l'invention concerne une méthode de criblage de principes actifs Méthode de criblage de principes actifs susceptibles d'augmenter le seuil d'activation de la réponse immune des cellules dendritiques au niveau cutané et/ou mucosale, ladite méthode comprenant : (i) la préparation d'un milieu de culture comprenant des cellules dendritiques (CD) immatures ou activées ; (ii) la mise en contact du milieu comprenant les CD avec au moins une substance à cribler quant à sa capacité à augmenter le seuil d'activation de la réponse immune des cellules dendritiques au niveau cutané et avec au moins un agent connu pour activer la réponse immunitaire en augmentant l'expression d'au moins un marqueur des CD ; (iii) la récupération des CD pour quantifier l'expression des marqueurs de l'activation des CD après traitement par une substance à cribler ou un principe actif et stimulation par ledit agent; (iv) la comparaison de la valeur de l'expression des marqueurs de l'activation des CD qui ont été mises en contact avec la substance à cribler et ledit agent par rapport à la valeur de l'expression des marqueurs de l'activation des CD obtenue avec un témoin positif comme un agent anti-inflammatoire stéroidien, préférentiellement la déxaméthasone,pour sélectionner des principes actifs augmentant le seuil d'activation de la réponse immune des cellules dendritiques au niveau cutané et/ou mucosale en présence dudit agent. L'agent augmentant l'expression d'au moins un marqueur des CD peut être un agent connu pour stimuler la réponse des cellules immunes comme un mélange LPS et TNFa,. Avantageusement, la méthode comprend en outre: (iiib) la remise en culture d'une partie des CD récupérées à l'étape (iii), ledit milieu de culture ne comprenant pas de principe actif ni de substance à cribler, pendant un temps suffisant pour que celles-ci récupèrent leur niveau basal d'activation ; (ivb) la quantification de l'expression des marqueurs de l'activation des CD suite à l'étape (iiib) pour sélectionner les principes actifs augmentant le seuil d'activation de la réponse immune des cellules dendritiques au niveau cutané et permettant l'activation de la réponse immune suite à l'étape (iiib).Une substance à cribler quant à sa capacité de augmenter le seuil d'activation de la réponse immune des cellules dendritiques au niveau cutané est une substance comme par exemple une substance d'origine végétale ou une molécule caractérisée dont on souhaite quantifier la capacité à réprimer l'expression d'un marqueur de l'activation des CD. Une molécule caractérisée est une molécule dont on connaît la structure chimique.

Les marqueurs de l'activation des CD, sont de préférence choisis parmi : CD40, CD54, CD80, CD86, HLA-DR, CCR7 qui est le récepteur de la chimiokine MIP-3(3 (macrophage inflammatory protein-3 beta). Les marqueurs de maturation des CD, sont de préférence choisis parmi : CD83 et DC-LAMP. 35 Pour quantifier l'expression des marqueurs de l'activation des CD, toute méthode peut être utilisée. On peut avantageusement utiliser une méthode de RT-PCR, notamment quantitative, ou de cytométrie de flux ou d'ELISA. L'expression des marqueurs de l'activation des CD vise donc à la fois l'expression protéique des marqueurs de l'activation des CD et l'expression génique (ARNm) des marqueurs de l'activation des CD. La comparaison de la valeur de l'expression des marqueurs de l'activation des CD pour sélectionner les principes actifs par rapport au témoin s'effectue avec des témoins positifs et négatifs, qui sont de préférence des agents d'activation et/ou de maturation, par exemple un mélange LPS/TNFa, et des agents immunosuppresseurs, par exemple le Dexamethasone.

Avantageusement, la substance criblée est considérée comme étant un principe actif ou substance active quand elle permet d'obtenir selon la méthode de criblage une expression protéique de CD86 exprimée par des CL ou CDD inférieure ou égale à 95%, de préférence inférieure à 70%, de l'expression protéique de CD86 exprimée par des CL ou CDD en présence ou non d'un agent d'activation constitué de LPS 50 g/mL et TNFa 10ng/mL, et/ou une expression génique de CD86 exprimée par des CL ou CDD inférieure ou égale à 95%, de préférence inférieure à 75%, de l'expression génique de CD86 exprimée par des CL ou CDD en présence ou non d'un agent d'activation constitué de LPS 50 g/mL et TNFa 10ng/m L. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à l'homme de l'art suite à la lecture de la description explicative qui fait référence à des exemples qui sont donnés seulement à titre d'illustration et qui ne sauraient en aucune façon limiter la portée de l'invention. Les exemples font partie intégrante de la présente invention et toute caractéristique apparaissant nouvelle par rapport à un état de la technique antérieure quelconque à partir de la description prise dans son ensemble, incluant les exemples, fait partie intégrante de l'invention dans sa fonction et dans sa généralité.

Ainsi, chaque exemple a une portée générale. D'autre part, dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en poids, sauf indication contraire, la température est exprimée en degré Celsius sauf indication contraire, et la pression est la pression atmosphérique, sauf indication contraire.

EXEMPLES Exemple 1 : Préparation des cellules dendritiques de la peau, les CL et les CDD Le procédé de préparation des CL et des CDD à partir des monocytes sanguins s'effectue en deux étapes successives. Etape 1 : Procédé de séparation des monocytes à partir du sang circulant périphérique Le sang circulant veineux périphérique d'un ou plusieurs donneurs humains est récolté en présence d'anti-coagulants, de préférence le lithium héparine.

La séparation des monocytes à partir du sang circulant peut être réalisée avantageusement selon les protocoles suivants : 1/ Après centrifugation du sang sur un milieu de séparation lymphocytaire, les cellules mononucléées sont récupérées, puis : - Soit marquées avec un cocktail d'anticorps, tel que par exemple des anticorps anti-CD3, anti-CD7, anti-CD16, anti-CD19, anti-CD56, anti-CD123, anti-Glycophorin A couplés à des billes magnétiques. Après passage sur une colonne aimantée, seuls les monocytes non marqués sont élués et récupérés. - Soit marquées avec un anticorps spécifique des monocytes, tel qu'un anticorps anti-CD14 couplé à des billes magnétiques. Après passage sur colonne magnétique, seuls les monocytes marqués sont retenus dans la colonne. Après élution de la colonne, les monocytes marqués sont récupérés. - Soit marquées avec un anticorps spécifique des monocytes, tel qu'un anticorps anti-CD16 couplé à un fluorochrome, tel que la phycoérythrine. Après un tri cellulaire en cytométrie en flux, seuls les monocytes marqués sont récupérés. 2/ Les monocytes sont récupérés en procédant par tout procédé physique de séparation bien connu de l'homme de l'art et notamment par sédimentation ou centrifugation et sont élués tels quels pour les cultures ultérieures. 3/ Pour 100 mL de sang prélevé, le rendement d'extraction est environ de 150 millions ( 20 millions) de cellules mononucléées sur lesquelles sont obtenus jusqu'à 40 millions de monocytes.

Etape 2 : Procédé de congélation des monocytes à partir du sang circulant périphérique Les monocytes, tels qu'obtenus à l'étape n°1, peuvent être avantageusement congelés de -80°C à -196°C, et de préférence cryo-congelés à -196°C dans de l'azote liquide, à raison d'environ 10 millions par mL, dans un milieu de congélation adapté, comme par exemple un milieu composé de 90% de sérum de veau foetal et 10% de DMSO (Dimethyl sulfoxide). Cette étape de congélation permet avantageusement la réalisation de pool de donneurs, tel que par exemple le mélange cellulaire de 3 donneurs de monocytes. Etape 3: Procédé de culture des monocytes isolés pour obtenir des CL et des CDD immatures Les monocytes, tels qu'obtenus aux étapes n°1 et/ou n°2, sont mis en culture (37°C, 5% CO2) à raison d'environ 1 million par mL, dans un milieu de culture défini ou non, de préférence dans le milieu RPMI 1640 supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal, et contenant les trois cytokines suivantes : GM-CSF (granulocyte-macrophage colony-stimulating factor à raison de 200 ng/mL, TGF61 (transforming growth factor 61 à raison de 10 ng/mL et IL-13 (interleukine 13 à raison de 10 ng/mL.

Au 6ème jour de culture, des CL et des CDD immatures sont simultanément générées et sont phénotypiquement et fonctionnellement très proches de leurs homologues in vivo : - Jusqu'à 40% des cellules dendritiques générées in vitro expriment la Langerine au niveau intracellulaire et jusqu'à 60% expriment DC-SIGN, - Les CL et CDD générées in vitro sont immatures car elles expriment de façon basale les molécules de co-stimulation CD80 et CD86, et n'expriment pas les molécules de maturation CD83 et DC-LAMP - Après stimulation par TNFa (avantageusement 10 ng/mL) et LPS (avantageusement 50 pg/mL) pendant 48h, les CL et CDD acquièrent un phénotype de CD activées et matures comme démontré par une augmentation de l'expression des molécules CD80 et CD86 et par l'acquisition de l'expression des marqueurs de maturation CD83 et DC-LAMP.

Etape 4 : Procédé de culture des monocytes isolés pour obtenir des CL et des CDD activées Les cellules sont mises en culture tel que décrit dans l'exemple 1 et l'étape 3 mais en présence des trois cytokines suivantes: GM-CSF à raison de 200 ng/mL, TGF(31 à raison de 10 ng/mL et TNFa à raison de 10 ng/mL. Après 24h d'incubation, des CL et des CDD activées sont générées simultanément et sont phénotypiquement et fonctionnellement très proche de leurs homologues in vivo : - Les CL et CDD présentent une forte expression des molécules suivantes : HLA-DR qui est une molécule du CMH de classe Il, CD80 et CD86 qui sont les molécules de co-stimulation, CCR7 qui est le récepteur de migration. - Les CL et CDD présentent également une forte capacité de migration en réponse à la chimiokine MIF-3(3.

Exemple 2 : Préparation des principes actifs cosmétiques Les principes actifs sont de différentes origines (végétale ou molécules caractérisées par exemple). Selon les végétaux, il est avantageux d'extraire, par exemple par macération, au moins une partie du végétal choisie parmi une racine, un rhyzome, une tige, une écorce, une fleur, un fruit, une graine, un germe et une feuille, de préférence entre 1 et 10% (p/p) dans un solvant ou un mélange de solvants, de préférence un solvant polaire protique, et avantageusement dans l'eau, un alcool, un glycol, un polyol, un mélange eau/alcool, eau/glycol ou eau/polyol (tels que l'eau en mélange avec éthanol, glycérol, butylène glycol ou autres glycols, tel que xylitol etc.) de 100/0 à 0/100 (v/v). Les extraits obtenus sont ensuite de préférence centrifugés et/ou filtrés et/ou distillés afin de récupérer la fraction soluble active (extrait brut). La substance active est avantageusement l'extrait végétal dans un solvant, tel que l'eau, un alcool, un polyol, un glycol, ou un de leurs mélanges, et de préférence dans l'eau. L'extrait brut solubilisé dans le solvant (principe actif) est utilisé pour les tests de préférence à une concentration comprise entre 0,001 et 10% (v/v), et avantageusement entre 0,01 et 5% et plus particulièrement à 1% en poids de l'extrait brut par rapport au poids total du principe actif. La substance active peut être concentrée par évaporation du solvant, par exemple par lyophilisation ou par atomisation. Les molécules caractérisées sont préparées par dissolution dans un solvant, tel que par exemple l'eau, l'éthanol, le glycol, et de préférence dans le DMSO, et sont testées de préférence à une 35 concentration comprise entre 1.10-7% et 1%, et avantageusement entre 1.10-5% et 1.10-1%, et en particulier à 1.10-'% en poids du principe actif.

Exemple 3 : Modèle de criblage des principes actifs cosmétiques Les actifs sont testés sur les CL/CDD obtenues selon l'exemple 1. Lorsque les principes actifs sont testés sur les CL/CDD immatures obtenues à l'étape 3 de l'exemple 1, on parle de soin préventif. Lorsque les actifs sont testés sur les CL/CDD activées obtenues à l'étape 4 de l'exemple 1, on parle de soin curatif. Les cellules sont ensemencées en plaques 24 puits, par exemple à raison de 400.000 cellules par cm2, dans un milieu de culture défini ou non, de préférence dans le milieu RPMI 1640 supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal, et contenant les deux cytokines suivantes : GM-CSF à raison de 200 ng/mL et TGFI31 à raison de 10 ng/mL. Les principes actifs sont ensuite ajoutés dans le dit milieu de culture et testés aux concentrations finales suivantes : - Pour les extraits végétaux, entre 0,001 et 10% (v/v), et avantageusement entre 0,01 et 5% et en particulier à 1% en poids du principe actif par rapport au poids total du milieu de culture; - Pour les molécules caractérisées, entre 1.10-7% et 1% (v/v), et avantageusement entre 1.10-5% et 1.10-1%, et en particulier à 1.10-'% en poids de molécule caractérisée (ou chimique) par rapport au poids total du milieu de culture. L'incubation des principes actifs est réalisée jusqu'à 48h, et avantageusement pendant 24h dans le dit milieu de culture à 37°C sous 5% de CO2. Les témoins négatifs sont soit le milieu de culture seul, soit le milieu de culture contenant le solvant utilisé lors du procédé d'extraction des extraits testés à la concentration équivalente de celle de l'actif testé, soit le milieu de culture contenant du Dexaméthasone (10-$ M) qui est un glucocorticoïde anti-inflammatoire principalement. Le témoin positif de référence utilisé afin d'induire une activation des CL/CDD est un mélange de LPS (à 50 pg/mL avantageusement) et de TNFa (10 ng/mL avantageusement).

Exemple 4 : Principes actifs sélectionnés présentant des capacités d'immunorépression Nous avons sélectionné 3 molécules caractérisées (Securinine, Foliosidine acetonide et 8-oxo- pseudopalmatine) ainsi que 4 extraits végétaux (Cestrum latifolium, Phoradendron piperoïdes, Maprounea guyanensis et Spilanthes oleraceae), lesquels sont présentés dans les tableaux 1 et 2, respectivement. Securinine 5610-40-2 C13H15NO2 217,27 g.mol-' 8-oxo-pseudopalmatine 10211-78-6 C19H25N05 347,41 g.mol-' Tableau 1 : Molécules caractérisées sélectionnées dans cette invention. Cestrum latifolium Partie aérienne Maprounea guyanensis Feuille Tableau 2 : Extraits végétaux sélectionnés dans cette invention. Exemple 5 : Test de cvtotoxicité des principes actifs cosmétiques Pour chaque actif testé, un test de viabilité cellulaire est réalisé sur les cellules afin de montrer que les actifs ne présentent pas d'effet cytotoxique sur les cellules et que l'effet de l'actif n'est pas le résultat d'un stress cellulaire lié à une mortalité induite par les principes actifs. Les principes actifs présentent un effet cytotoxique lorsque la viabilité cellulaire est inférieure à 75% après traitement par les dits actifs.

Les CL/CDD, tels que décrits dans l'exemple 1 et l'étape 3, sont ensemencées en plaques P96 puits, à raison de 200.000 cellules/puits, et dans le milieu de culture décrit dans l'exemple 3. Le traitement des cellules par les principes actifs est décrit dans l'exemple 3. Après le traitement par les dits principes actifs, les cellules sont incubées avec 5 pl de colorant 7-AAD (7-amino-actinomycine D) par puits. Après 5 min d'incubation, les cellules sont analysées en 20 cytométrie de flux. La viabilité cellulaire est exprimée en % de cellules viables ou 7-AAD négatif, le colorant ne pénétrant pas les membranes qui sont imperméables. Cette technique d'analyse permet également de visualiser les cellules marquées positivement au 7-AAD, c'est-à-dire les cellules qui ont subi un effet cytotoxique via l'actif. 25 Les témoins négatifs sont soit le milieu de culture seul, soit le milieu de culture contenant le solvant utilisé lors du procédé d'extraction des extraits testés à la concentration équivalente de celle des actifs testés. Le témoin positif de référence utilisé afin d'induire une mortalité des CL/CDD est la camptothécine à la concentration de 4 pM final. Dans le tableau 3, sont représentés les résultats de l'étude de viabilité cellulaire des principes 30 actifs sélectionnés dans cette invention. Securinine

........................... ...............................DTD: ........................... ...............................DTD: ........................... ...............................DTD: ........................... ............................. 35 8-oxo-pseudopalmatine..DTD: ...................................................................... DTD: .....................................................................DTD: .....................................................................DTD: ...................................................................... DTD: ................................................................... Phoradendron piperoides..DTD: ..............................................................DTD: ............................................................ Spilanthes oleracea Camptothécine 10-7M 0,05% NON NON NON NON OUI 94% 94% 93% 91% 35% Tableau 3 : Etude de la viabilité cellulaire des CL/CDD immatures après traitement par les principes actifs sélectionnés...DTD: Conclusion : Les principes actifs cosmétiques décrits dans le tableau 3 ne présentent pas d'effet cytotoxique sur les CL/CDD. La viabilité cellulaire des CL/CDD après traitement par les dits principes actifs est proche de 100%.

Exemple 6 : Analyses des propriétés immmuno-répressives des principes actifs cosmétiques û Etude de l'expression protéique de la molécule CD86 L'évaluation du potentiel immuno-répressif des principes actifs nécessite une étude de l'expression des molécules d'activation sur les CL/CDD traitées par les dits principes actifs, comme par exemple la molécule de co-stimulation CD86. La cytométrie en flux permet de quantifier l'expression protéique de CD86 sur la membrane cellulaire des CL/CDD traitées ou non par les dits actifs.

L'étude des propriétés immuno-répressives des principes actifs cosmétiques par cytométrie de flux se déroule de la manière suivante : 1/ Les CL/CDD immatures sont générées tel que décrit dans l'exemple 1 et l'étape 3. 2/ Les cellules sont ensemencées en plaques P24 puits, à raison de 400.000 cellules par cm2, et dans le milieu de culture décrit dans l'exemple 3. Le traitement des cellules par les principes actifs est décrit dans l'exemple 3. En parallèle, les cellules sont traitées par des doses décroissantes de principes actifs afin d'établir une corrélation dose/effet : de 10-6M à 5.10-8M pour les molécules caractérisés et de 0,1 à 0,005% pour les extraits végétaux. 3/ Après le traitement par les actifs, les cellules sont récupérées puis ensemencées en plaques de P96 puits, à raison de 200.000 cellules/50 pl/puits, dans un milieu de marquage (30% RPMI, 68% PBS et 2% SVF). 4/ Les cellules sont ensuite incubées pendant 30 minutes avec un anticorps monoclonal anti-CD86 couplé à un fluorochrome, tel que la phycoérythrine (avantageusement 10 pl d'anticorps anti-CD86/puits). Le témoin négatif du marquage correspond à l'isotype contrôle IgG1. Après cette étape de marquage, les cellules sont rincées avec le dit tampon de marquage, puis analysées au cytomètre de flux. 5/ Dans le tableau 4 sont présentés les résultats de l'analyse des propriétés immuno-répressives des principes actifs sélectionnés. Les résultats sont exprimés de la manière suivante : le témoin non traité par l'actif est rapporté à 100% d'expression de la molécule CD86, et les essais sont exprimés comme l'expression résiduelle (en %) de la molécule CD86 après traitement par les principes actifs. Le témoin négatif correspond aux cellules traitées par du Dexaméthasone qui a la propriété de diminuer l'expression de CD86. Il a également été calculé le taux d'immuno-répression qui est inversement proportionnel à l'expression résiduelle de CD86. Tableau 4 : Propriétés immuno-répressives des principes actifs testées sur les CL/CDD immatures. 15 Conclusion : Les principes actifs décrits dans le tableau 4 ont la capacité de diminuer l'expression protéique de la molécule de co-stimulation CD86. Les dits principes actifs présentent donc la capacité d'augmenter le seuil d'activation des CL/CDD. Autrement dit, plus le taux d'immuno-répression est élevé et proche de 1, 20 plus le pouvoir immuno-répresseur de l'actif est fort. 8-oxo-p 85% 92% 81% 100%

.................................................................DTD: ............................................................... .Foliosidine acetonide 83% 80% 85% 85% Tableau 5 : Etude dose/effet des principes actifs testés sur les CL/CDD immatures. Tableau 6 : Etude dose/effet des principes actifs testés sur les CL/CDD immatures. 8-oxo-pseudopalmatine..DTD: .................................................................DTD: ................................................................DTD: .................................................................DTD: ................................................................DTD: .................................................................DTD: .............................................................. Foliosidine acetonide..DTD: ................................................................DTD: .................................................................DTD: .............................................................. Cestrum latifolium..DTD: .............................................................. Maprounea guyanensis 10-7M 0,14 81%..DTD: ...................................................................... Dexaméthasone 51% 0,49 0,05%..DTD: ............................................................ 10 M 0,5 80% 50% 10 25 30 35 Conclusion : Les principes actifs décrits dans les tableaux 5 et 6 présentent des propriétés immuno-répressives dépendantes de leurs concentrations finales...DTD: Exemple 7 : Analyses des propriétés immmuno-répressives des principes actifs cosmétiques û Etude de l'expression des ARN messagers codant la molécule CD86 La RT-PCR quantitative permet de quantifier l'expression des ARN messagers codant la protéine CD86 dans les CL/CDD traitées ou non par les dits actifs. L'étude des propriétés immuno-répressives des principes actifs cosmétiques par RT-PCR quantitative se déroule de la manière suivante : 1/ Les CL/CDD immatures sont générées tel que décrit dans l'exemple 1 et l'étape 3. 2/ Les cellules sont ensemencées en plaques P24 puits, à raison de 400.000 cellules par cm2, et dans le milieu de culture décrit dans l'exemple 3. Le traitement des cellules par les principes actifs est décrit dans l'exemple 3. 3/ Après le traitement par les principes actifs, les cellules sont récupérées et conservées, par exemple par congélation à sec à -80°C après un rinçage en tampon phosphate pH 7,4. 4/ Les ARN totaux des cellules sont extraits, par exemple à l'aide d'un kit d'extraction en 96 puits sur colonnes de silice, et dosés sur un spectrophotomètre 96 puits à 260nm (indicateur de pureté : dosage des protéines à 280nm). Les ARN sont dilués par exemple à 5 ng/ l. 5/ La RT-PCR qualitative en 1 étape est réalisée par exemple sur 50 ng d'ARN initial sur plaque 96 puits, sur les gènes de l'actine et de la molécule CD86. Les amorces spécifiques de chaque gène sont spécifiées dans le tableau 7 ci-dessous et sont utilisées par exemple à 0,5 M.

Amorces spécifiques des gènes étudiés.

Actine sens (SEQ ID NO 1) GTGGGGCGCCCCAGGCACCA Actine antisens (SEQ ID NO2) CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC CD86 sens (SEQ ID NO3) CTCTTTGTGATGGCCTTCCTGC CD86 antisens (SEQ ID NO4) CCTGTGGGCTTTTTGTGATGGA Les paramètres d'amplification ont été avantageusement les suivants : la technique de RT-PCR en temps réel est réalisée avec le kit Quanti Tect SYBR Green RT-PCR (Qiagen, France) sur les puits contenant l'ARN messager, dans un thermocycleur OPTICON, qui réalise les cycles d'amplification. La rétrotranscription (RT) s'effectue 30 minutes à 50°C, suivie de 15 minutes à 95°C pour inhiber la réverse transcriptase, activer la polymérase et dénaturer l'ADN complémentaire (ADNc) obtenu. 50 cycles de polymérisation en chaîne (PCR) sont effectués (15 secondes à 95°C, 30 secondes à 60°C, 30 secondes à 72°C). A chaque fin de cycle, la fluorescence, qui est proportionnelle au nombre de fragments amplifiés est lue. Le niveau d'expression est défini par le rapport d'expression de chaque gène par rapport à l'actine. 6/ Dans le tableau 8 sont présentés les résultats de l'analyse des propriétés immuno-répressives des principes actifs sélectionnés. Les résultats sont exprimés de la manière suivante : le témoin non traité est rapporté à 100% d'expression des ARN messagers codant la molécule CD86, et les essais sont exprimés comme le niveau d'expression des ARN messagers codant CD86 en pourcentage de variation par rapport à ceux obtenus pour le témoin négatif. 15 Tableau 7 : Propriétés immuno-répressives des principes actifs testées sur les CL/CDD immatures.

Conclusion : Les principes actifs décrits dans le tableau 8 ont la capacité de diminuer l'expression des ARN messagers codant la molécule de co-stimulation CD86. Les dits principes actifs présentent donc la 20 capacité d'augmenter le seuil d'activation des CL/CDD. Autrement dit, plus le taux d'immuno-répression est élevé et proche de 1, plus le pouvoir immuno-répresseur de l'actif est fort.

Exemple 8 : Etude des capacités de réponse à un signal de danger des CL/CDD traitées par les principes actifs immuno-répresseurs 25 L'évaluation du potentiel immuno-répresseur des principes actifs nécessite également une étude sur la capacité des CL/CDD à répondre à un signal de danger, par exemple une infection bactérienne, lorsque celles-ci sont traitées par les dits principes actifs. En effet, nous avons vérifier que les CL/CDD qui sont simultanément traitées par les principes actifs et activées par un signal de danger sont toujours compétentes dans leur fonction de reconnaissance des signaux de danger. Pour cela, nous avons vérifié 30 que les CL/CDD simultanément traitées par les principes actifs et stimulées par LPS et TNFa sont capables de sur-exprimer la molécule de co-stimulation CD86 après cette stimulation. L'étude par cytométrie en flux se déroule de la manière suivante : 1/ Les CL/CDD immatures sont générées tel que décrit dans l'exemple 1 et l'étape 3. 2/ Les cellules sont ensemencées en plaques P24 puits, à raison de 400.000 cellules par cm2, et dans le 35 milieu de culture décrit dans l'exemple 3. Un mélange de LPS (à 50 pg/mL avantageusement) et de TNFa (à 10 pg/mL avantageusement) est ajouté dans le dit milieu de culture. Simultanément, les cellules sont traitées par les principes actifs comme décrit dans l'exemple 3. Securinine

...................................................................... DTD: ...................................................................... DTD: ...................................................................... DTD: .................................................................... 8-oxo-pseudopalmatine..DTD: ...................................................................... DTD: ...................................................................... DTD: .................................................................... Phoradendron piperoides Spilanthes oleracea 74% 59% 0,18 0,45 82% 55%10 3/ Les cellules qui ont été simultanément traitées par les principes actifs et stimulées par LPS et TNFa sont analysées par cytométrie en flux, tel que décrit dans l'exemple 6, pour quantifier l'expression résiduelle de la molécule CD86 après traitement + stimulation . 4/ Dans le tableau 9 sont présentés les résultats de l'analyse des capacités de réponse à un signal de danger des CL/CDD simultanément traitées par les principes actifs sélectionnés. Les résultats sont exprimés de la manière suivante : le témoin non traité par l'actif et non stimulé par LPS + TNFa est rapporté à 100% d'expression de la molécule CD86, et les essais sont exprimés comme l'expression résiduelle de la molécule CD86 après traitement , après traitement + stimulation et stimulation . Nous avons également calculé le taux de capacité de réponse à un signal de danger qui est proportionnel à l'expression résiduelle de CD86 après traitement + stimulation. 5 10 Tableau 8 8-oxo-pseudopalmatine Foliosidine acetonide . ener.0reptparOfaee Cestrum latifolium . . . Maprounea guyenensis D ex a m ét h as o n e 51 % 86% 143% 81% 85% 121% 116% 80% I 115% 50% I 75% Tableau 8: Etude des capacités de réponse à un signal de danger des CL/CDD simultanément stimulées LPS + TNFa et traitées par les principes actifs sélectionnées...DTD: Conclusion : Les CL/CDD simultanément traitées par les principes actifs et stimulées par TNFa/LPS ont la capacité de répondre à ce signal de danger comme démontré par l'expression résiduelle de la molécule de costimulation CD86 après traitement + stimulation. Les cellules présentent donc une capacité de réponse à un signal de danger proche de leur état basal.

Exemple 9 : Etude des capacités de réponse à un signal de danger des CL/CDD après traitement par les principes actifs immuno-répresseurs Comme dans l'exemple 8, nous avons vérifié que les CL/CDD sont capables de répondre à un signal de danger, par exemple une infection bactérienne, lorsque celles-ci ont été préalablement traitées par les principes actifs et lorsque celles-ci ne le sont plus. Pour cela, nous avons vérifié que les CL/CDD traitées par les dits principes actifs, puis ensuite stimulées par LPS et TNFa (en absence des principes actifs) sont capables de sur-exprimer la molécule de co-stimulation CD86 après cette stimulation. L'étude par cytométrie en flux se déroule de la manière suivante : 1/ Les CL/CDD immatures sont générées tel que décrit dans l'exemple 1 et l'étape 3. 2/ Les cellules sont ensemencées en plaques P24 puits, à raison de 400.000 cellules par cm2, et dans le milieu de culture décrit dans l'exemple 3. Le traitement des cellules par les principes actifs est décrit dans l'exemple 3. 3/ Les cellules traitées par les principes actifs sont ensuite remises en culture, sans les principes actifs et dans le milieu de culture décrit dans l'exemple 3, pendant 48h supplémentaires. Un mélange de LPS (à 50 pg/mL avantageusement) et de TNFa (à 10 pg/mL avantageusement) est ajouté dans le dit milieu de culture. Les cellules sont ensuite analysées en cytométrie en flux, tel que décrit dans l'exemple 6, pour quantifier l'expression résiduelle de la molécule CD86 après prétraitement + stimulation . 4/ Dans le tableau 10 sont présentés les résultats de l'analyse des capacités de réponse à un signal de danger des CL/CDD préalablement traitées par les principes actifs sélectionnés et qui ne le sont plus.

Les résultats sont exprimés de la manière suivante : le témoin non traité par l'actif et non stimulé par LPS et TNFa est rapporté à 100% d'expression de la molécule CD86, et les essais sont exprimés comme l'expression résiduelle de la molécule CD86 après stimulation et après prétraitement + stimulation . Nous avons également calculé le taux de capacité de réponse à un signal de danger, lequel est proportionnel à l'expression résiduelle de CD86 après prétraitement + stimulation. 8-oxo-pseudopalmatine ....................................................

...................................................DTD: .................................................. 127% Cestrum latifolium 143% 90% ..........................................DTD: ...................................... Maprounea 140% guyenensis..DTD: ................................................DTD: ........................................................ Dexaméthasone 130% 120% .................................... 0,84 0,98 0,91 Tableau 9: Etude des capacités de réponse à un signal de danger des CL/CDD pré-traitées par les principes actifs sélectionnées puis stimulées par LPS + TNFa...DTD: Conclusion : Les CL/CDD prétraitées par les principes actifs puis ensuite stimulées par TNFa/LPS ont la capacité de répondre à ce signal de danger comme démontré par l'expression résiduelle de la molécule de costimulation CD86 après prétraitement + stimulation. Les cellules présentent donc une capacité de réponse à un signal de danger proche de leur état basal.

Exemple 10 : Utilisation des produits de l'invention dans des formulations cosmétiques ou 20 pharmaceutiques de type émulsion huile dans eau

Formulation 10a : A Eau gsp100 Butylene Glycol 2 Glycerine 3 Sodium Dihydroxycetyl Phosphate, 2 Isopropyl Hydroxycetyl Ether B Glycol Stearate SE 14 Triisononaoin 5 Octyl Cocoate 6 25 C Butylene Glycol, Methylparaben, 2 D Ethylparaben, Propylparaben, pH ajusté à 5,5 Produits de l'invention d'origine végétale 0,001% û 10% Produits de l'invention d'origine caractérisée 107M -1 M Formulation 10b :

A Eau gsp100 Butylene Glycol 2 Glycerine 3 25 Polyacrylamide, Isoparafin, Laureth-7 2,8 B Butylene Glycol, Methylparaben, 2 Ethylparaben, Propylparaben ; Phenoxyethanol, Methylparaben, 2 Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben Butylene Glycol 0,5 Produits de l'invention d'origine végétale 0,001% ù 10% Produits de l'invention d'origine caractérisée 107M -1 M Formulation 10c : A Carbomer 0,50 Propylene Glycol 3 Glycerol 5 Eau gsp100 B Octyl Cocoate 5 Bisabolol 0,30 Dimethicone 0,30 C 1 Sodium Hydroxide 1,60 D Phenoxyethanol, Methylparaben, 0,50 Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben E Parfum 0,30 F Produits de l'invention d'origine végétale 0,001% ù 10% Produits de l'invention d'origine caractérisée 10-7M -1 M Exemple 11 : Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de type eau dans huile PEG 30 ù dipolyhydroxystearate 3 Capric Triglycerides 3 Cetearyl Octanoate 4 Dibutyl Adipate 3 Grape Seed Oil 1,5 Jojoba Oil 1,5 Phenoxyethanol, Methylparaben, 0,5 Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben

Glycerine 3 Butylene Glycol 3 Magnesium Sulfate 0,5 EDTA 0,05 Eau gsp100

Cyclomethicone 1 Dimethicone 1 D A B C D 1 Parfum 0,3 0,001% ù 10% E Produits de l'invention d'origine végétale Produits de l'invention d'origine caractérisée 10-7M -1 M Exemple 12 : Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de type shampoing ou gel douche A Xantham Gum 0,8 Eau qsp 100 B Butylene Glycol, Methylparaben, 0,5 Ethylparaben, Propylparaben Phenoxyethanol, Methylparaben, 0,5 Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben C Citric acid 0,8 D 1 Sodium Laureth Sulfate 40,0 E Produits de l'invention d'origine végétale 0,001% ù 10% Produits de l'invention d'origine caractérisée 10-7M -1 M Exemple 13 : Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de type rouge à lèvres et autres produits anhydres Minerai Wax 17,0 Isostearyl Isostearate 31,5 Propylene Glycol Dipelargonate 2,6 Propylene Glycol Isostearate 1,7 PEG 8 Beewax 3,0 Hydrogenated Faim Kernel Oil Glycerides, 3,4 Hydrogenated Faim Glycerides Lanoline Oil 3,4 Sesame Oil 1,7 Cetyl Lactate 1,7 Minerai Oil, Lanolin Alcohol 3,0 A Castor Oil Titanium Dioxide Cl 15850 :1 Cl 45410 :1 Cl 19140 :1 Cl 77491 qsp 100 3,9 0,616 0,256 0,048 2,048 B C Produits de l'invention d'origine végétale 0,001% ù 10% Produits de l'invention d'origine caractérisée 107 M ù 1M Exemple 14 : Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de gels aqueux (contours de l'oeil, amincissants, etc...) Eau qsp 100 Carbomer 0,5 Butylene Glycol 15 Phenoxyethanol, Methylparaben, 0,5 Propylparaben, Butylparaben, Ethylparabe

Produits de l'invention d'origine végétale 0,001% ù 10% Produits de l'invention d'origine caractérisée 10-7M -1 M Exemple 15 : Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de type émulsion triple Emulsion primaire W1/O : A PEG 30 ù dipolyhydroxystearate 4 Capric Triglycerides 7.5 Isohexadecane 15 PPG-15 Stéarul ether 7.5 B 1 Eau 65.3 C Phenoxyethanol, Methylparaben, 0,7 Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben Emulsion secondaire W1/O/W2 : A Emulsion primaire 60 B Poloxamer 407 2 Phenoxyethanol, Methylparaben, 0.3 Propylparaben,2-bromo-2nitropropan( 1,3 diol eau qsp 100 C Carbomer 15 D Triethanolamine PH 6.0-6.5 E Produits de l'invention d'origine végétale 0,001% ù 10% Produits de l'invention d'origine caractérisée 10-7M -1 M Exemple 16 : Préparation de formulations pharmaceutiques contenant le produit de l'invention Formulation 16 a : préparation de comprimés A Excipients En g par comprimé Lactose 0,359 Saccharose 0,240 B Produits de l'invention d'origine végétale 0,001% ù 10% Produits de l'invention d'origine caractérisée 10-7M -1 M A B 28 Formulation 16 b : préparation d'une pommade A Excipients 5,5 Polyéthylène basse densité Paraffine liquide qsp 100 B Produits de l'invention d'origine végétale 0,001% ù 10% Produits de l'invention d'origine caractérisée 10-7M -1 M Formulation 16 c : préparation d'une formule injectable A Excipient 0,001% ù 10% B Solution isotonique salée 5 ml Produits de l'invention d'origine végétale Produits de l'invention d'origine caractérisée 10-7M -1 M 25

Claims (17)

REVENDICATIONS

1. Utilisation d'au moins un principe actif choisi parmi un extrait végétal de Cestrum /atifol/um, un extrait végétal de Phoradendron piperoides, un extrait végétal de Spi/anthes oleracea, un extrait végétal de Maprounea guyanensis, la sécurinine, la foliosidine acétonide, la 8-oxopseudopalmatine, ou l'une quelconque de leurs combinaisons, comme agent actif pour augmenter le seuil d'activation des cellules immunes d'un sujet pour la préparation d'une composition cosmétique.

2. Utilisation d'au moins un principe actif choisi parmi un extrait végétal de Cestrum /atifolium, un extrait végétal de Phoradendron piperoides, un extrait végétal de Spi/anthes oleracea, un extrait végétal de Maprounea guyanensis, la sécurinine, la foliosidine acétonide, la 8-oxopseudopalmatine, ou l'une quelconque de leurs combinaisons, comme agent actif, pour augmenter le seuil d'activation des cellules immunes d'un sujet, pour la préparation d'une composition pharmaceutique, et en particulier dermatologique, de préférence destinée à augmenter le seuil d'activation de la réponse immune d'un sujet.

3. Utilisation d'au moins un principe actif, selon la revendication 1 ou 2, pour diminuer et/ou prévenir la réaction immunitaire cutanée et/ou mucosale.

4. Utilisation d'au moins un principe actif, selon la revendication 1 ou 2, pour diminuer et/ou inhiber l'activité d'au moins un type de cellules immunes, en particulier des cellules dendritiques.

5. Utilisation d'au moins un principe actif, selon la revendication 1 ou 2, pour diminuer l'activité d'au moins des cellules de Langerhans épidermiques (CL) et/ou des cellules dendritiques dermiques (CDD). 30

6. Utilisation d'au moins un principe actif, selon l'une des revendications précédentes, en combinaison avec un agent calmant.FR 0851694 du 2-12-08

7. Utilisation d'au moins un principe actif, selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que la quantité de l'extrait végétal est comprise entre pour 0,001 et 10% en poids, préférentiellement entre 0,01 et 5% en poids de la composition.

8. Utilisation d'au moins un principe actif, selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que quantité de sécurinine, de foliosidine acétonide, et/ou de 8-oxopseudopalmatine, est comprise entre 1.10-'% et 1% en poids, et avantageusement entre 1.10"5% et 1.10-1%, en poids par rapport au poids total de la composition.

9. Utilisation d'au moins un principe actif, selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que le principe actif est un extrait végétal de Cestrum lot/fatum et/ou la securinine.

10. Utilisation d'au moins un principe actif, selon l'une des revendications précédentes, pour diminuer au niveau de la peau l'expression d'au moins un type de marqueurs choisis parmi (i) CD86, exprimé de façon basale par les cellules dendritiques immature ; (ii) CD40, CD54, CD80, HLA-DR, CCR7 ou CD86 exprimés par des cellules dendritiques activées; et (iii) CD40, CD54, CD80, HLA-DR, CCR7,CD86, CD83 ou DC-LAMP exprimés par des cellules dendritiques activées et matures.

11. Utilisation d'au moins un principe actif, selon l'une des revendications 1, ou 3 à 10, dans une méthode de soin et/ou traitement cosmétique des peaux sensibles, réactives et/ou hyperréactives.

12. Utilisation d'au moins un principe actif choisi parmi un extrait végétal de Cestrum /atifo/ium, un extrait végétal de Phoradendron piperoides, un extrait végétal de Spilanthes o/eracea, un extrait végétal de Maprounea guyanensis, la sécurinine, la foliosidine acétonide, la 8-oxopseudopalmatine, ou l'une quelconque de leurs combinaisons, dans une méthode de soin et/ou traitement cosmétique pour diminuer et/ou prévenir les manifestations inesthétiques et/ou inconfortables notamment les picotements, sensations de brûlure, sensations de démangeaison, tiraillements, squames visibles, épaississements de la peau.

13. Utilisation d'au moins un principe actif tel que défini àl'une des revendications 2 à 10 pour la préparation d'une composition pharmaceutique, et notamment d'une composition• 31 FR 0851694 du 2-12-08 dermatologique, destinée à prévenir et/ou à traiter destinée au traitement d'une réaction d'irritation, d'allergie cutanée et/ou mucosale, notamment de contact, d'une hypersensibilité retardée de contact, d'un eczéma de contact, d'un urticaire notamment urticaire de contact, d'une dermatite irritative ou allergique de contact, et/ou d'une dermatite atopique.

14. Utilisation d'au moins un principe actif, selon la revendication 13 pour la préparation d'une composition pharmaceutique comprenant en outre un agent anti-inflammatoire.

15. Composition cosmétique comprenant un principe actif choisi parmi un extrait végétal de 10 Cestrum /atifolium, un extrait végétal de Phoradendron piperoides, un extrait végétal Spi/anthes oleracea à une concentration comprise entre 0,001 et 10% en poids, la sécurinine à la concentration de 1.10-7% et 1%, la foliosidine acétonide, la 8-oxopseudopalmatine et l'une quelconque de leurs combinaisons dans un véhicule cosmétique approprié à l'application topique. 15

16. Composition pharmaceutique et/ou dermatologique destinée à augmenter le seuil d'activation de la réponse immune des cellules dendritiques, notamment pour prévenir et/ou traiter les pathologies dues à une réponse immune de la peau et/ou des muqueuses comprenant un principe actif choisi parmi un extrait végétal de Cestrum latifo/ium, un extrait 20 végétal de Phoradendron piperoides, un extrait végétal Spi/anthes oleracea, la sécurinine, la foliosidine acétonide, la 8-oxopseudopalmatine, et l'une quelconque de leurs combinaisons, dans un véhicule pharmaceutique et/ou dermatologique approprié à l'application topique.

17. Composition pharmaceutique et/ou dermatologique selon fa revendication 16, caractérisée 25 en ce qu'elle est destinée au traitement d'une réaction d'irritation, d'allergie cutanée et/ou mucosale, notamment de contact, d'une hypersensibilité retardée de contact, d'un eczéma de contact, d'un urticaire notamment urticaire de contact, d'une dermatite irritative ou allergique de contact, et/ou d'une dermatite atopique. 30