HK38196A - Water-insoluble reagent, nucleic acid probe, test kit and diagnostic and purification methods - Google Patents

Water-insoluble reagent, nucleic acid probe, test kit and diagnostic and purification methods

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HK38196A
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Claims (11)

  1. Wasserunlösliche Nucleinsäuresonde, umfassend ein Oligonucleotid, das an ein wasserunlösliches Teilchen gebunden ist, das oberflächenreaktive Gruppen aufweist,    wobei die Sonde dadurch gekennzeichnet ist, daß die Bindung durch eine Linkergruppe stattfindet, die ein chemisch modifiziertes Protein oder ein chemisch modifiziertes Kohlenhydrat ist, wobei ein solches Protein oder Kohlenhydrat einen pI von 6 oder weniger aufweist,    wobei das chemisch modifizierte Protein von einem Protein abgeleitet ist, an dem Aminogruppen hängen, die nach der Bindung an das wasserunlösliche Teilchen mit einem Acylierungs-, Alkylierungs- oder Sulfonylierungsmittel modifiziert worden sind, um Carbonsäuregruppen für eine kovalente Reaktion mit dem Oligonucleotid bereitzustellen,    das chemisch modifizierte Kohlenhydrat daran hängende Carbonsäuregruppen für eine kovalente Reaktion mit dem Oligonucleotid aufweist und    das chemisch modifizierte Protein oder Kohlenhydrat an die oberflächenreaktiven Gruppen des Teilchens kovalent gebunden ist, wobei weniger als 5 % der Fläche der Teilchenoberfläche von anderen Proteinen oder Kohlenhydraten bedeckt sind.
  2. Sonde nach Anspruch 1, wobei das Oligonucleotid eine Nucleinsäuresequenz ist, die mit einem Strang von HIV-I-DNA komplementär ist.
  3. Sonde nach einem der Ansprüche 1 und 2, die einen damit verbundenen nachweisbaren Marker aufweist.
  4. Sonde nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei das wasserunlösliche Teilchen ein synthetisches polymeres Teilchen mit einem durchschnittlichen Durchmesser von 0,1 bis 10 µm ist.
  5. Sonde nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei die polymeren Teilchen aus Monomeren hergestellt sind, die reaktive Gruppen ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus aktiven Halogenatomen, Carboxy-, aktivierten 2-substituierten Ethylsulfonyl-, Vinylsulfonyl- und Vinylsulfonylalkylengruppen aufweisen.
  6. Sonde nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei das chemisch modifizierte Protein oder Kohlenhydrat succinyliertes Casein, glutaryliertes Casein, succinyliertes Collagen, succinyliertes Rinderserumalbumin, Carboxymethylcellulose oder Carboxyethylcellulose ist.
  7. Verfahren zum Einfangen und Isolieren einer Zielnucleinsäure, umfassend:
    A. In-Kontakt-bringen einer Testprobe, von der angenommen wird, daß sie eine Zielnucleinsäure enthält mit der wasserunlöslichen Nucleinsäuresonde nach einem der Ansprüche 1 bis 6,    wobei das Oligonucleotid der Sonde im wesentlichen komplementär zu der Zielnucleinsäure ist,    wobei das In-Kontakt-bringen unter Hybridisierungsbedingungen durchgeführt wird, so daß Hybridisierung der Zielnucleinsäure des Oligonucleotids erreicht wird, wobei ein wasserunlösliches Hybridisierungsprodukt gebildet wird, und
    B. Isolieren des hybridisierten Produktes von dem Rest der Testprobe.
  8. Verfahren zum Nachweis einer Zielnucleinsäure, umfassend:
    A. In-Kontakt-bringen einer Test probe, von der angenommen wird, daß sie eine Zielnucleinsäure enthält, mit der wasserunloslichen Nucleinsäuresonde nach einem der Ansprüche 1 bis 6,    wobei das Oligonucleotid der Sonde im wesentlichen zu der Zielnucleinsäure komplementär ist,    wobei das In-Kontakt-bringen unter Hybridisierungsbedingungen durchgeführt wird, so daß Hybridisierung der Zielnucleinsäure und des Oligonucleotids erreicht wird, wobei ein wasserunlösliches Hybridisierungsprodukt gebildet wird, und
    B. Nachweisen des hybridisierten Produktes als eine Indikation für das Vorliegen der Zielnucleinsäure in der Testprobe.
  9. Verfahren nach Anspruch 8, das als Sandwich- Hybridisierungsassay durchgeführt wird, wobei die wasserunlösliche Nucleinsonde eine unmarkierte Fang-Sonde ist und die Zielnucleinsäure noch mit einer wasserlöslichen, markierten Sonde hybridisiert wird.
  10. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 oder 9, wobei die Zielnucleinsäure unter Verwendung einer Polymerasekettenreaktion vor dem Kontakt in Schritt A amplifiziert wird.
  11. Diagnostischer Testkit, umfassend:
    a) die wasserunlösliche Nucleinsäuresonde nach einem der Ansprüche 1 bis 6 und
    b) einen wasserlöslichen Primer oder Sonde, die im wesentlichen komplementär zu einer Zielnucleinsäure sind, wobei die Zielnucleinsäure ebenfalls im wesentlichen komplementär zu dem Oligonucleotid der wasserunlöslichen Nucleinsäuresonde ist.
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