HK38196A - Water-insoluble reagent, nucleic acid probe, test kit and diagnostic and purification methods - Google Patents

Water-insoluble reagent, nucleic acid probe, test kit and diagnostic and purification methods

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Claims (11)

  1. Sonde d'acide nucléique insoluble dans l'eau, comprenant un oligonucléotide qui est fixé à une particule insoluble dans l'eau comportant des groupes réactifs en surface,    la sonde étant caractérisée par le fait que la fixation est réalisée par un groupe de liaison, qui est une protéine chimiquement modifiée ou un hydrate de carbone chimiquement modifié, tel qu'une protéine ou un hydrate de carbone ayant un pI de 6 ou moins,    la protéine chimiquement modifiée ayant été obtenue à partir d'une protéine comportant des groupes amino pendants qui ont été modifiés avec un agent d'acylation, d'alkylation ou de sulfonylation après fixation à la particule insoluble dans l'eau, pour donner des groupes acide carboxylique permettant une réaction covalente avec l'oligonucléotide,    l'hydrate de carbone chimiquement modifié comportant des groupes acide carboxylique pendants pour une réaction covalente avec l'oligonucléotide, et    la protéine ou l'hydrate de carbone chimiquement modifié étant fixé par liaison covalente aux groupes réactifs en surface de la particule, cette surface de la particule ayant moins de 5 % de son aire couverte par d'autres protéines ou hydrates de carbone.
  2. Sonde selon la revendication 1, dans laquelle l'oligonucléotide est une séquence d'acides nucléiques qui est complémentaire d'un brin de l'ADN de l'HIV-I.
  3. Sonde selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, à laquelle est associé un marqueur détectable.
  4. Sonde selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle la particule insoluble dans l'eau est une particule polymère de synthèse ayant un diamètre moyen de 0,1 à 10 µm.
  5. Sonde selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans laquelle les particules polymères sont préparées à partir de monomères comportant des groupes réactifs choisis parmi l'ensemble comprenant le groupe carboxy, les atomes d'halogène actif, les groupes éthylsulfonyle activé substitué en position 2, vinylsulfonyle, et vinylsulfonylalkylène.
  6. Sonde selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans laquelle la protéine ou l'hydrate de carbone chimiquement modifié est une caséine succinylée, une caséine glutarylée, un collagène succinylé, la sérumalbumine de boeuf succinylée, la carboxyméthylcellulose ou la carboxyéthylcellulose.
  7. Procédé pour capturer et isoler un acide nucléique cible, qui consiste :
    A. à mettre en contact un échantillon d'essai, que l'on soupçonne de contenir un acide nucléique cible, avec la sonde à acide nucléique insoluble dans l'eau selon l'une des revendications 1 à 6.    l'oligonucléotide de la sonde étant essentiellement complémentaire de l'acide nucléique cible,    la mise en contact étant effectuée dans des conditions d'hybridation, de façon que l'hybridation de l'acide nucléique cible et de l'oligonucléotide soit réalisée pour former un produit d'hybridation insoluble dans l'eau, et
    B. à isoler du reste de l'échantillon d'essai le produit hybridé.
  8. Procédé pour détecter un acide nucléique cible, qui consiste :
    A. à mettre en contact un échantillon d'essai soupçonné de contenir un acide nucléique cible avec la sonde nucléique insoluble dans l'eau selon l'une des revendications 1 à 6.    l'oligonucléotide de la sonde étant essentiellement complémentaire de l'acide nucléique cible,    la mise en contact étant effectuée dans des conditions d'hybridation telles que l'hybridation de l'acide nucléique cible et de l'oligonucléotide soit réalisée pour former un produit d'hybridation insoluble dans l'eau, et
    B. à détecter le produit hybridé, pour servir d'indication de la présence de l'acide nucléique cible dans l'échantillon d'essai.
  9. Procédé selon la revendication 8, mis en oeuvre sous forme d'une analyse par hybridation sandwich, où la sonde nucléique insoluble dans l'eau est une sonde de capture non marquée, et l'acide nucléique cible est lui aussi hybridé avec une sonde marquée soluble dans l'eau.
  10. Procédé selon l'une ou l'autre des revendications 8 ou 9, dans lequel l'acide nucléique cible est amplifié par une amplification en chaîne par polymérase avant la mise en contact de l'étape A.
  11. Kit ou trousse d'essai diagnostique, comprenant :
    (a) la sonde nucléique insoluble dans l'eau décrite ci-dessus, et
    (b) une ou plusieurs amorces ou sondes solubles dans l'eau, qui sont essentiellement complémentaires d'un acide nucléique cible, l'acide nucléique cible étant lui aussi essentiellement complémentaire de l'oligonucléotide de la sonde du constituant (a).
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