HUP0400541A2 - Hosszú pentraxin PTX3 alkalmazása FGF-2 növekedési faktor megváltozott aktiválásával előidézett betegségek kezelésére - Google Patents
Hosszú pentraxin PTX3 alkalmazása FGF-2 növekedési faktor megváltozott aktiválásával előidézett betegségek kezelésére Download PDFInfo
- Publication number
- HUP0400541A2 HUP0400541A2 HU0400541A HUP0400541A HUP0400541A2 HU P0400541 A2 HUP0400541 A2 HU P0400541A2 HU 0400541 A HU0400541 A HU 0400541A HU P0400541 A HUP0400541 A HU P0400541A HU P0400541 A2 HUP0400541 A2 HU P0400541A2
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- ptx3
- fgf
- long pentraxin
- tumor
- use according
- Prior art date
Links
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims description 26
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims description 26
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 title claims description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 16
- 230000004913 activation Effects 0.000 title claims description 13
- 101150019331 FGF2 gene Proteins 0.000 title 1
- 101001082142 Homo sapiens Pentraxin-related protein PTX3 Proteins 0.000 claims description 92
- BFHAYPLBUQVNNJ-UHFFFAOYSA-N Pectenotoxin 3 Natural products OC1C(C)CCOC1(O)C1OC2C=CC(C)=CC(C)CC(C)(O3)CCC3C(O3)(O4)CCC3(C=O)CC4C(O3)C(=O)CC3(C)C(O)C(O3)CCC3(O3)CCCC3C(C)C(=O)OC2C1 BFHAYPLBUQVNNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 92
- 102100027351 Pentraxin-related protein PTX3 Human genes 0.000 claims description 92
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 claims description 80
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 claims description 80
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 34
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 15
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 claims description 13
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 13
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 12
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 12
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 12
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims description 11
- 101100352284 Homo sapiens PITX3 gene Proteins 0.000 claims description 10
- 101100031710 Homo sapiens PTX3 gene Proteins 0.000 claims description 10
- 108700025763 PTX3 Proteins 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 claims description 10
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 8
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 claims description 8
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 claims description 7
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 claims description 7
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 claims description 6
- 230000037390 scarring Effects 0.000 claims description 6
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 claims description 5
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 5
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims description 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 5
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 4
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims description 4
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 claims description 3
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 claims description 3
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010052399 Neuroendocrine tumour Diseases 0.000 claims description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002458 carcinoid tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 208000016065 neuroendocrine neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011519 neuroendocrine tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 claims 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 31
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 11
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 101100192405 Mus musculus Ptx3 gene Proteins 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 4
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 4
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 3
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 3
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 3
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 3
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 3
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 230000006427 angiogenic response Effects 0.000 description 3
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 description 3
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 3
- 210000003711 chorioallantoic membrane Anatomy 0.000 description 3
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- FIAFUQMPZJWCLV-UHFFFAOYSA-N suramin Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC(S(O)(=O)=O)=C2C(NC(=O)C3=CC=C(C(=C3)NC(=O)C=3C=C(NC(=O)NC=4C=C(C=CC=4)C(=O)NC=4C(=CC=C(C=4)C(=O)NC=4C5=C(C=C(C=C5C(=CC=4)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)C)C=CC=3)C)=CC=C(S(O)(=O)=O)C2=C1 FIAFUQMPZJWCLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960005314 suramin Drugs 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 2
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000011122 anti-angiogenic therapy Methods 0.000 description 2
- 210000002403 aortic endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 210000001608 connective tissue cell Anatomy 0.000 description 2
- WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N cyclandelate Chemical compound C1C(C)(C)CC(C)CC1OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001982 diacylglycerols Chemical class 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 210000001365 lymphatic vessel Anatomy 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 230000007998 vessel formation Effects 0.000 description 2
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000008055 Heparan Sulfate Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 101000817629 Homo sapiens Dymeclin Proteins 0.000 description 1
- 101000974343 Homo sapiens Nuclear receptor coactivator 4 Proteins 0.000 description 1
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 102100022927 Nuclear receptor coactivator 4 Human genes 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 208000012868 Overgrowth Diseases 0.000 description 1
- 241001111421 Pannus Species 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 108090000054 Syndecan-2 Proteins 0.000 description 1
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 206010053648 Vascular occlusion Diseases 0.000 description 1
- 229940122803 Vinca alkaloid Drugs 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 201000001531 bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 230000002492 cytodifferentiating effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000003534 dna topoisomerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000003278 egg shell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000008393 encapsulating agent Substances 0.000 description 1
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000002864 mononuclear phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007514 neuronal growth Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 102000041715 pentraxin family Human genes 0.000 description 1
- 108091075331 pentraxin family Proteins 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 1
- 239000002644 phorbol ester Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000036647 reaction Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000009919 sequestration Effects 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 231100000057 systemic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 229940044693 topoisomerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 208000010570 urinary bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 230000004218 vascular function Effects 0.000 description 1
- 208000021331 vascular occlusion disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Obesity (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
Description
Hosszú pentraxin PTX3 alkalmazása FGF-2 növekedési faktor megváltozott aktiválásával előidézett betegségek kezelésére
A találmány tárgya hosszú pentraxin PTX3 vagy reakcióképes származékai alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel az FGF-2 növekedési faktor biológiai hatása gátolható, és amely gyógyszer olyan betegségek kezelésére vagy megelőzésére alkalmas, amelyeket az FGF-2 növekedési faktor megváltozott aktiválása idéz elő.
Az FGF-2 növekedési faktor megváltozott aktiválásával előidézett betegségek közé tartoznak a megváltozott angiogenézissel és a fibroblasztok vagy a simaizomsejtek nem szabályzott burjánzásával előidézett betegségek.
Az első antiangiogén hatású vegyületet a porcban Henry Brem és Judath Folkman fedezték fel 1975-ben (J. Exp. Med. 1975. február 1.; 141(2):427-39). A szerzők azt gondolták, hogy ez a felfedezés patológiai folyamatok szabályozására, pl. tumornövekedés, áttét, az ízületek krónikus és akut gyulladása, diabéteszes retinopátia szabályzására használható, a patológiai neoangiogenézis szelektív inhibitorainak felhasználásával.
Az angiogenézis a felnőttben rendszerint nyugalmas, de normális működést képvisel, pl. sebgyógyulás vagy a nőknél a reproduktív ciklus alatt a méhbelhám újraképződése.
Az angiogén reakció fiziológiailag stimulálódik, ha csökkennek az érmüködések és nem megfelelő a szövet perfúzió.
Még általánosabban azt lehet mondani, hogy fiziológiai kö rülmények között az angiogenézis pozitív visszajelzés a nem
Aktaszám: 98809-8932 KY/hzs
-2megfelelő perfúzióra adott reakcióban, vagy a csökkent oxigénellátás és tápanyagellátás reakciójában, mint ahogy az előfordul pl. érelzáródás esetében, vagy szövet tömegnövekedési helyzetben, pl. az izomszövet képződését kísérő neovaszkularizációban; és megnövekedett oxigén- és tápanyagigénnyel járó megnövekedett munkaterhelés esetében.
Jól ismert, hogy a primer tumor növekedését kedvezően befolyásolja a tumorszövet jó vaszkularizációja, azaz érképződése. Megfelelő oxigén- és tápanyagellátás segíti magának a tumornak a gyors növekedését.
Kimutatták, hogy az angiogenézis mértéke rendkívül negatív tényező lehet a neoplazmák prognózisában (van Hinsbergh VW, Collen A, Koolwijk P; Ann. Oncol., 10 Suppl., 4:60-3, 1999; Buolamwini JK; Curr., Opin., Chem., Biol., 3(4):500-9, 1999. aug.).
Az is ismert, hogy a tumor területén a tumorsejt biológiájának alapvető foka az áttét-képződés képességének megszerzése.
Az áttétben résztvevő tumorsejtek képesek elveszíteni a körülöttük levő szerkezetekhez való tapadást, behatolnak a vérés nyirokedényekbe, és a többi szövetet kolonizálják olyan távolságban, ahol folytatni képesek önmaguk reprodukálását.
Az áttét-képződés a betegség klinikai történetének is kritikus eseménye, mert ez a fő halálok a rák következtében. Szorosan összefügg az érszövet jelenlétével a tumor helyén vagy szomszédos területeken, és elősegíti az áttétet.
A tumorsejtek mozgása a környező szerkezetekbe lehetővé teszi, hogy ezek a sejtek elérjék a tumoron belüli véredényeket,
-3- .· ··:
·· · · · · « ·· «· függetlenül attól, hogy már korábban léteztek vagy neoangiogenézissel képződnek, és így elérik a véráramot (Ray JM., Stetler-Stevenson WG; Eur. Respir. J., 7(11):2062-72, 1994; Stetler-Stevenson WG, Liotta LA, Kleiner DE Jr.; FASEB J.; 7(15):1434-41, 1993. dec.).
A nyirok- és véredények közötti kommunikáció jelenléte a tumor érterületén lehetővé teszi a neoplasztikus sejtek számára, hogy mindkét érrendszerben mozogjanak.
Nemrégiben végzett vizsgálatok kimutattak egy közvetlen összefüggést az angiogenezis és az artritiszes betegség között (Koch AE; Arthritis and Rheumatism 41:951-962, 1998). Különösen kimutatták, hogy az ízületi porc neovaszkularizációja döntő szerepet játszik a pannus (értartalmú kötőszövet ráterjedése a szaruhártyára) képződésben és az ízületi gyulladás előrehaladásában. Egy normális porc nem rendelkezik véredényekkel, míg az artritiszes páciensek ízületi nedve angiogenézist stimuláló faktort tartalmaz, amelyet az endoteliális sejtek termelnek (EASF).
Ennek a faktornak a jelenléte összefügg a porc vaszkularizációjával és lebomlásával.
Más betegségek is kapcsolatosak az abnormális angiogenézissel.
Azt találták, hogy diabéteszes retinopátia (Histol Histopathol. 1999 október; 14(4):1287-94), pikkelysömör (Br J. Dermatol. 1999 dec., 141(6):1054-60), krónikus gyulladás és érelmeszesedés (Planta Med 1998 dec; 64(8):686-95), és az érintett szövetek neovaszkularizációja egy elősegítő tényező.
-4Az FGF-2 növekedési faktor egy 18kDA kationos polipeptid, amely alkalmas mind az in vivo neoangiogenézis kiváltására, mind pedig tenyészetben, endoteliális sejtekben levő sejtek burjánzásának, kemotaxisának és proteáz termelésének kiváltására (Basilico és Moscatelli, 1992, Adv. Cancer Res. 59:11565).
Az FGF-2 szerepe a tumor angiogenézisben már ismert (Pathol. Bioi., Párizs, 1999. április; 47(4):364-7).
A J. Pathol. 1999. szept.; 189(1):72-8 irodalomban beszámolnak arról, hogy az FGF-2 fokozottan expresszálódik mezoteliómában szenvedő páciensek esetében, és ez a nagyobb agresszivitással és az ilyen tumorbetegség által sújtott páciensek nagyobb mortalitásával kapcsolatos.
Az Oncogene 1999. november 18-i számában (18(48):671924) beszámolnak arról, hogy az FGF-2 metasztázis-képző tulajdonságot ad a patkány hólyagkarcinóma sejteknek.
Az Int. J. Cancer, 1999. május 5; 81(3):451-8 beszámol arról, hogy az FGF-2 erős mitogén hatással rendelkezik, és szerepet játszik a humán tumorok kifejlődésében és a rosszindulatú voltának fokozásában.
A tumorbetegségek gyógyítására az antiangiogén terápia a következő előnyökkel jár a standard, tradicionális kemoterápiával szemben (Cancer Research 1998, 58, 1408-16):
1. nagyobb specifikusság: a célja a tumor neovaszkularizációs folyamat;
2. nagyobb biodiszponibilitás: célja az endoteliális sejtek, könnyen elérhető a tradicionális kemoterápiás megközelítéssel
-5kapcsolatos problémák nélkül, amelyek közvetlenül hatnak a tumorsejtekre;
3. kisebb kémiai rezisztencia: ez lehet a legfontosabb előnye a terápiának; valójában az endoteliális sejtek a tumorsejtekhez képest genetikailag stabilak, és a gyógyszerrezisztencia jelensége valószínűtlen;
4. kevesebb áttét: a neovaszkularizáció gátlása korlátozza a test más részében a tumorsejtek szaporodását a véráramon keresztül;
5. kedvezően hat a sejthalálra: a tumorban az érhálózat gátlása csökkenti a tumorsejtek számára az oxigén és tápanyag hozzáférhetőséget, ily módon fokozódik a sejthalál;
6. szisztemikus toxicitás csökkenése: az antiangiogén terápiában nem figyelhetők meg a tradicionális kemoterápiában jelenlevő toxikus hatás, pl. gerincvelő elállítás, gyomorbélrendszeri hatások és múló kopaszság.
Az ilyen hatások meghatározására az FGF-2 két különböző, célsejtek felületén jelenlevő receptorcsoporttal reagál: a nagy affinitású receptorokkal, amelyek tirozin kináz hatásúak (FGFRek), és az alacsony affinitású receptorokkal, azaz a proteoglikán eparán-szulfáttal (HSOG-k) (Johnson és Williams, 1993, Adv. Cancer Res. 60:1-41; Moscatelli, 1987, J. Cell. Physiol. 131:123-30).
Az FGF-2 hatásos mitogén mediális simaizomsejtekre, és szükséges a ballon katéterezés utáni burjánzásokhoz (J. Bioi. Chem. 2000. április 14; 275 (15): 11270-7).
Ezért az FGF-2 növekedési faktor megváltozott aktiválásával előidézett betegségekhez tartozik az artériák izomfalának
-6hiperpláziája, amely érplasztikai vagy koszorúér stent utáni resztenózis során fordul elő (J. Vasc. Surg. 1997. február; 25(2):320-5).
Az FGF-2-től függő neovaszkularizáció szabályzása a megváltozott angiogenézissel kapcsolatos betegségek szabályzásának és gyógyításának egyik alapvető eleme, valamint az FGF-2től függő fibroblaszt szabályzatién burjánzás szabályzása vagy az SMC-k szabályzatlan burjánzásának szabályzása döntő a túlzott fibroblaszt reakcióval és az angioplasztika utáni resztenózissal kapcsolatos hegesedés kezeléséhez.
Az új gyógyszer hozzáférhetősége, amely speciálisan gátolja az FGF-2 biológiai hatását, elsődleges fontosságú cél ennek a növekedési faktornak a megváltozott aktiválásával kiváltott betegség kezelésére és megelőzésére. Ilyen betegségek az artritiszes betegség, tumor, tumor áttét, diabéteszes retinopátia, pikkelysömör, krónikus gyulladás, érelmeszesedés, hegesedés, amely a túlzott fibroblaszt reakcióval és az angioplasztika utáni resztenózissal kapcsolatos.
A PTX3-at különböző sejttípusok formájában fejezzük ki (Bottazzi és tsai, J. Bioi. Chem. 1997, 272: 32817-32823), különösen mononukleáris fagocitákban és endoteliális sejtekben, gyulladásos citokinek hatásának kitéve, ilyenek az interleukin 1β (IL-1 β) és a tumor nekrózis faktor alfa (TNF-α).
Mind a mai napig a PTX3 biológiai működését nem értették meg teljesen.
A PTX3 két szerkezeti doménből, egy ismert molekulával nem kapcsolatos N-terminális doménből és egy C-terminális doménből áll, amely hasonló olyan rövid pentraxinokhoz, mint a
-7C-reakcióképes protein (CRP) (Breviario F. és tsai, J. Bioi. Chem. 267:22190, 1992).
Nagyfokú hasonlatosságot találtunk a humán PTX3 (hPTX3) és az állati PTX3-ak között. Különösen az egér PTX3 (mPTX3) nagyon hasonlatos a hPTX3-hoz DNS szekvencia, génszerveződés és elhelyezkedés szempontjából. A humán és egér PTX3 gén közötti azonossági fok 82 %-os, és konzervatív helyettesítéseket figyelembe véve eléri a 90 %-ot (Introna M. és tsai: Blood 87 (1996) 1862-1872). Az egér PTX3 gén az egér 3-as kromoszómáján helyezkedik el a humán 3q régióhoz hasonló régióban (q24-28), a hPTX3 dokumentált elhelyezkedésével megegyezően, a 3q 25 régióban (Introna M. és tsai: Blood 87 (1996) 1862-1872).
A hPTX3 és mPTX3 szekvenciák közötti nagyfokú hasonlóság az evolúció folyamán a pentraxinok nagyfokú megőrzésének jele (Pepys M B:, Baltz M.L.: Adv. Immunol. 34:141, 1983).
A pentraxinok áttekintése megtalálható a H. Gewurz és tsai, Current Opinion in Immunology, 1995, 7:54-64 irodalomban.
A WO 99/32516 sz. nemzetközi szabadalmi bejelentésben a bejelentő leírja a hosszú pentraxin PTX3 alkalmazását fertőző betegségek, gyulladásos vagy tumorbetegségek kezelésére. A PTX3 WO 99/32516 sz. iratban leírt tumorellenes hatását a fehérvérsejt megerősödés közvetíti, azaz immunológiai alapon. A WO 99/32516 sz. irat nem írja le vagy javasolja a PTX3 alkalmazását FGF-2 növekedési faktor megváltozott aktiválásával kapcsolatos betegségek kezelésére szolgáló szerként.
-8Az 5767252 sz. USA szabadalmi leírás leírja a neuronális növekedési faktort, amely a pentraxin családhoz tartozik. Ez a szabadalom a neurobiológiai szektorra vonatkozik.
Azt találtuk, hogy a hosszú pentraxin PTX3 nagy affinitással és specifikussággal képes megkötni az FGF-2-t. A PTX3 és FGF-2 kapcsolódása (Kd = 8-16 nM) megelőzi utóbbi kötődését nagy affinitású tirozin-kináz receptoraihoz, valamint a kötődést kis affinitású receptorok helyén, amelyeket az eparán-szulfát proteoglikánok testesítenek meg a sejt felületén. A kötődés gátlása az FGF-2 biológiai reakció gátlását okozza.
Az FGF-2 és PTX3 közötti kölcsönhatás függ a növekedési faktor helyes szerkezeti képletétől, nem csak bázikus természetétől, minthogy a PTX3 nem köti meg a citokrom C-t (azaz egy proteint, amely ugyanolyan molekulatömegű, mint az FGF-2, azaz 18 kDa, és izoelektromos pontja pH 9,6).
Ezenkívül a C-reakcióképes protein a PTX3-mal homológ és nem köti meg az FGF-2-t.
A találmány célja tehát hosszú pentraxin PTX3 vagy származékai vagy doménje alkalmazása olyan betegségek megelőzésére vagy gyógyítására szolgáló gyógyszer előállítására, amelyek gátolják az FGF-2 növekedési faktor biológiai hatását.
A találmány további célja a hosszú pentraxin PTX3 vagy származékai vagy doménje alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel az FGF-2 növekedési faktor megváltozott aktiválásával létrejött betegségek kezelhetők vagy előzhetők meg.
A találmány további tárgya a hosszú pentraxin PTX3 vagy származéka vagy doménje alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel a megváltozott angiogenézis gyógyítható vagy meg
-9elözhetö, ahol a megváltozott angiogenézist az FGF-2 növekedési faktor megváltozott aktiválása idézi elő, ilyen betegség pl. az ízületi gyulladás, tumor áttét, diabéteszes retinopátia, pikkelysömör, krónikus gyulladás, érelmeszesedés vagy tumor, ahol a tumor pl. szarkóma, karcinóma, karcinoid, csonttumor vagy neuroendokrin tumor lehet.
A találmány további célja hosszú pentraxin PTX3 vagy származékai vagy doménje alkalmazása gyógyszer előállítására olyan betegségek kezelésére, amelyek nem szabályzott, FGF-2függő fibroblaszt burjánzással vagy simaizomsejt burjánzással kapcsolatosak, pl. a túlzott fibroblaszt (kötőszöveti sejt) reakcióhoz kapcsolódó hegesedés és az angioplasztika utáni resztenózis.
A találmány szerinti vegyület alkalmas FGF-2 hatás gátlására célsejtekben, nemcsak akkor, ha rekombináns proteinként adagoljuk, hanem akkor is, ha endogén adagoljuk cDNS-ének gén transzferje következményeképpen.
Ezért a találmány további tárgya humán PTX3 vagy származéka vagy doménje teljes hosszúságú cDNS-ének alkalmazása plazmid vagy vírus expressziós vektorok előállítására, amelyek a cDNS-ből állnak, olyan betegségek génterápiájára, amelyeket az FGF-2 növekedési faktor megváltozott aktiválása idéz elő, és ahol a betegség pl. tumor, tumor áttét, túlzott kötőszöveti sejt reakcióval kapcsolatos hegesedés, vagy érplasztika utáni resztenózis.
A hosszú pentraxin PTX3 bármilyen hosszú pentraxin PTX3, függetlenül természetes (állati vagy emberi) vagy mesterséges eredetétől.
- 10A származékok magukba foglalják a hosszú pentraxin PTX3 bármilyen funkciós analógját, amely legalább egy mutációt hordoz, és amely fenntartja azt a funkciós képességét, hogy szelektíven gátolja az FGF-2-t.
Előnyös hosszú pentraxin PTX3 a humán PTX3, amely szekvencia megtalálható a WO 99/32516 sz. nemzetközi közzétételi iratban.
Az itt leírt hosszú pentraxin PTX3-at alkalmazhatjuk kombinációban is egy vagy több rákellenes gyógyszerrel tumorbetegség kezelésére, amelyben a megnövekedett FGF-2 expresszió a tumorbetegség nagyobb agresszivitását vagy nagyobb áttétképző képességét idézi elő.
Valójában jól ismert, hogy annak érdekében, hogy a nem kívánatos mellékhatásokat elkerüljük, és megőrizzük a terápiás hatékonyságot, a legtöbb onkológiai pácienst nem csak egy rákellenes gyógyszerrel kezelünk, hanem több rákellenes gyógyszer kombinációjával vagy egy rákellenes gyógyszerkombinációt más antiangiogén vegyülettel együtt alkalmazunk.
A szokásosabb rákellenes gyógyszerek hatásmechanizmusa teljesen más, mint a találmány szerinti vegyület mechanizmusa, valójában a szokásos rákellenes gyógyszerek citotoxikusak a tumorsejtekkel szemben.
A találmány szerinti vegyület, amely más hatásmechanizmussal hat, gyógyhatást fejt ki (adjuváns hatást) az egyidejűleg alkalmazott tumorellenes gyógyszer hatásán túlmenően.
Ezért a találmány további tárgya hosszú pentraxin PTX3 kombinációja egy vagy több ismert rákellenes gyógyszerrel.
-11 A találmány további tárgya gyógyszerkészítmény, amely hosszú pentraxin PTX3-at tartalmaz egy vagy több ismert rákellenes gyógyszerrel kombinálva, ilyenek pl. az alkilező szerek, topoizomeráz inhibitorok, antitubulin szerek, beágyazó szerek, antimetabolitok, természetes termékek, pl. vinka alkaloidák, epipodofillotoxinok, antibiotikumok, enzimek, taxánok és citodifferenciáló vegyületek, és egy vagy több oldószer vagy segédanyag, amelyek gyógyászatilag elfogadhatóak.
A találmány további tárgya a hosszú pentraxin PTX3 alkalmazása egy vagy több ismert tumorellenes vegyülettel kombinálva gyógyszer előállítására tumor kezelésére, amelyben az FGF-2 megnövekedett expressziója nagyobb tumor agresszivitást idéz elő.
A találmány további tárgya a hosszú pentraxin PTX3 alkalmazása egy vagy több ismert tumorellenes vegyülettel kombinálva gyógyszer előállítására, a tumor áttét bekövetkezésének megelőzésére, ahol az FGF-2 megnövekedett expressziója nagyobb áttét-képző képességet idéz elő.
A találmány tárgya továbbá a hosszú pentraxin PTX3 alkalmazása rákellenes gyógyszerrel kombinálva gyógyszer előállítására tumor kezelésére, oly módon, hogy a hosszú pentraxin PTX3 a rákellenes vegyület segédanyagaként van jelen.
A találmány további részleteit a következő példákkal illusztráljuk.
1. példa
PTX3 képessége FGF megkötésére oldatban
Ezt a kísérletet azért végezzük, hogy kiértékeljük a PTX3 kötődését FGF-2-höz. A PTX3-at az alábbi irodalom szerint ál
-12lítjuk elő: Bottazzi és tsai, 1997, J. Bioi. Chem. 272:3281732823. Humán rekombináns FGF-2-t az alábbi irodalom szerint állítjuk elő: Isacchi A. és tsai, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (1991), 88:2628-32. Szükség esetén az FGF-2-t 125jóddal jelezzük Isacchi és tsai alább leírt módszere szerint.
Kísérleti eljárás:
pg FGF-2-t vagy 1 pg PTX3-at tartalmazó 100 pl PBS-t kromatografálunk egy méretkizárásos gyors protein folyadékkromatográfiás Superose 12 oszlopon (Pharmacia): ez az oszlop képes a molekulatömeg alapján elválasztani a proteineket. Az oszlopot 1 ml/perc áramlási sebességgel PBS-sel eluáljuk, és 1 ml-es frakciókat gyűjtünk és dot blot módszerrel analizáljuk két proteinre, speciális antitestekkel. A PTX3 FGF-2-höz való kötődésének kiértékelésére az 5 g-os és 1 pg-os két proteint összekeverjük 100 pl PBS-ben, és 4 °C-on 10 percig inkubáljuk, mielőtt az oszlopra feltöltjük. A frakciókat összegyűjtjük és dot-blot módszerrel analizáljuk anti FGF-2 specifikus antitestekkel. Az eredményeket az 1. ábra mutatja. Az 1. ábra szerint az FGF-2 18.000 D-nél eluál az oszlopról, kb. 22 ml retenciós térfogattal. Ugyanilyen körülmények között a PTX3 450.000 D-nél eluál üres oszloptérfogattal (7 ml). Amikor az FGF-2-t 10 percig 4 °C-on PTX3-mal előinkubáljuk, akkor az oszlopra visszük és megfigyeljük a kromatográfiás viselkedésben bekövetkező változást: a kísérleti körülmények között az FGF-2 az oszlopról ugyanolyan retenciós térfogattal eluál, mint a PTX3 önmagában.
2. példa
Biotinilezett PTX3 képessége műanyag, rögzített FGF-2 megkötésére
-13- Ιζ Η* <? I?
500 ng FGF-2-t vagy a kiegészítő C1q komponenst tartalmazó, 9,6 pH-jú 100 μΙ nátrium-hidrogén-karbonátot 18 óra hosszat 4 °C-on 96-üregű műanyag lemezekben inkubálunk. Az inkubáció végén az üregeket PBS-sel háromszor mossuk, majd 2 órát szobahőmérsékleten inkubáljuk 200 μΙ PBS-sel, amely 1 mg/ml marhaszérum albumint (BSA) tartalmaz. Az inkubálás végén az üregeket újra mossuk háromszor PBS-sel, és 30 ng/ml 125l-FGF-2-vel inkubáljuk növekvő mennyiségű biotinilezett PTX3 jelenlétében, 100 μΙ PBS-ben szobahőmérsékleten 2 órán keresztül. Egy másik változat szerint az üregeket növekvő adagú FGF2-vel vagy C1q-val adszorbeáljuk és 100 ng/ml biotinilezett PTX3-mal 100 μΙ PBS-ben inkubáljuk. Az inkubáció után az üregeket háromszor mossuk PBS-sel, és 1 órát szobahőmérsékleten inkubáljuk 100 μΙ sztreptavidin HRP konjugátummal (1/2000). A reakciót kromogén mikrohullámú peroxidáz szubsztrát ABTS rendszer hozzáadásával hívjuk elő (Kirkegaard & Perry Laboratories). A lemezeket automata ELISA leolvasóval 405 nm-nél olvassuk. A 2. ábrán közölt eredmények azt mutatják, hogy a műanyag üregekben rögzített FGF-2 képes megkötni a biotinilezett PTX3-at hasonlóan a fiziológiás PTX3 ligandum C1q-hoz (Bottazzi B. és tsai, 1997, J. Biol. Chem. 272:32817-32823).
3. példa
PTX3 - FGF-2 kölcsönhatások jellemzése
96-üregű lemezeket bevonunk 4 °C-on PTX3-at vagy Creakcióképes proteint (200 nmól) tartalmazó 100 μΙ nátriumhidrogén-karbonáttal pH 9,6 értéken, vagy 2 pg/ml alábbi proteinekkel, amelyeket negatív kontrollként használunk: marha
-14szérum albumin, fibronektin, zselatin vagy laminin. Inkubálás után az üregeket háromszor mossuk PBS-sel, és 2 órát szobahőmérsékleten blokkoljuk 200 μΙ, 1 mg/ml BSA-val PBS-ben. Az inkubálás után az üregeket háromszor mossuk PBS-sel, majd 30 ng 125l-FGF-2 faktorral 2 óra hosszat szobahőmérsékleten inkubáljuk. Az üregeket ezt követően háromszor mossuk PBSsel, és a megkötött 125l-FGF-2-t úgy nyerjük vissza, hogy minden üreget kétszer mosunk 200 μΙ 2 %-os SDS vizes oldattal. A 125l-FGF-2 szinteket gamma számlálón mérjük. A 3. ábrán bemutatott eredmények mutatják, hogy az FGF-2 megköti a műanyag rögzített PTX3-at, és ez a kötődés specifikus, mert az FGF-2 gyengén reagál CRP-vel és nem reagál egyéb rögzített proteinekkel.
4. példa 125l-FGF-2 kötődése műanyag rögzített PTX3-hoz hideg FGF-2 feleslegének jelenlétében
Egy második kísérletsorozatban a 125l-FGF-2 műanyag rögzített PTX3-hoz való kötődését vizsgáljuk természetes és hővel denaturált hideg FGF-2 (100 nmól) feleslegében, hasonló citokrom C koncentrációk vagy 300 nmól oldódó PTX3 feleslegének jelenlétében. A kísérletet a fent leírt módon végezzük. Az eredményeket a 4. ábrán mutatjuk be. A 4. ábra azt illusztrálja, hogy a hideg FGF-2 és az oldódó PTX3 gátolják a 125l-FGF-2 és műanyag rögzített PTX3 közötti kölcsönhatást. A megfigyelés, hogy a hővel inaktivált FGF-2 és a citokrom C, melynek az FGF2-vel azonos molekulatömege és izoelektromos pontja van, nem képesek megkötni a PTX3-at, arra vall, hogy a növekedési kor
-15 korrekt alakulása vesz inkább részt abban a kapacitásban, hogy megköti a PTX3-at, mint a bázikus természete.
5. példa
Az FGF-2/PTX3 kölcsönhatás disszociációs állandója (Kd)
Ezzel a kísérlettel az FGF-2/PTX3 kölcsönhatás disszociációs állandóját (Kd) határozzuk meg. Ebből a célból 125l-FGF-2 növekvő dózisait inkubáljuk műanyag rögzített PTX3-mal, és a kötődési eredményeket Scatchard görbével analizáljuk. Az eredményeket az 5. ábrán mutatjuk be. Ezek azt mutatják, hogy az FGF-2 megköti a PTX3-at egy telíthető módon és emelt affinitással (Kd = 8-16 nmól). Ez az affinitás a PTX3 és fiziológiai C1q liganduma közötti kölcsönhatásra előzetesen kiszámított affinitáshoz hasonlít.
6. példa
PTX3 és FGF-2 kötődés hatása az endoteliális sejtekre
Transzformált marha magzati aortás endoteliális GM7373 sejteket 80.000 sejt/cm2 mellett 24-üregű edényekbe oltunk, 10 % FCS-t tartalmazó, Eagle-féle minimális esszenciális közegbe (Eagle-féle MEM-be). 24 óra múlva 37 °C-on a tapadó sejteket kétszer mossuk FCS nélkül Eagle-féle MEM-mel, majd inkubáljuk 2 órát 4 °C-on 125l-FGF-2-vel (10 ng/ml), 0,15 % zselatint és 20 mmól HEPES-t 7,5 pH-η tartalmazó Eagle-féle MEM-ben, adott esetben növekvő koncentrációjú PTX3 jelenlétében. Az inkubálás végén kiértékeljük a 125l-FGF-2 mennyiségét, amely az alacsony HSPG-khez és a nagy affinitású receptorokhoz (FGFR) kötődik, Moscatelli, 1987, J. Cell. Physiol. 131:123-30 módszere szerint. Röviden a sejteket kétszer öblítjük 20 mmól HEPES pufferban 2 mólos nátrium-kloriddal (pH
-167,5), hogy eltávolítsuk az alacsony affinitású kötődési helyekhez kötött 125l-FGF-2-t, és kétszer öblítjük 2 mólos nátriumkloriddal 20 mmól nátrium-acetátban (pH 4,0), hogy eltávolítsuk a nagy affinitású kötődési helyekhez kötődött 125l-FGF-2-t. A nem specifikus kötődést nem jelzett FGF-2 százszoros moláris feleslegének jelenlétében mérjük, és az összes értékből kivonjuk. A 6. ábrán bemutatott eredmények azt mutatják, hogy a PTX3 dózisfüggő módon képes gátolni az FGF-2 nagy és alacsony affinitású receptorokhoz való kötődését endoteliális sejteken.
7. példa
PTX3 hatása endoteliális sejteken FGF-2-vel kiváltott mitogén hatásra
A GM 7373 sejteket beoltjuk 75.000 sejt/cm2 mellett 48üregű lemezekben levő Eagle-féle MEM-be, amely 10 % FCS-t tartalmaz. 24 óra múlva 37 °C-on a tapadó sejteket kétszer mossuk FCS nélkül Eagle-féle MEM-mel, majd 24 órát 37 °C-on inkubáljuk 0,4 % FCS-t tartalmazó Eagle-féle MEM-ben, adott esetben FGF-2 (10 ng/ml) jelenlétében és növekvő koncentrációjú PTX3 mellett. Az inkubálás végén a sejteket tripszinezzük és megszámláljuk. Egy másik kísérletsorozatban GM 7373 sejteket a fent leírt módon kezelünk különböző mitogén ingerek jelenlétében: 10 % FCS; 5 pg/ml diacil-glicerin (DAG); 10 ng/ml forbolészter (TPA), 30 ng/ml epidermális növekedési faktor (EGF) vagy 30 ng/ml vaszkuláris endoteliális növekedési faktor (VEGF). Az eredmények azt mutatják, hogy a 7. ábrán látható, hogy a PTX3 gátolja a mitogén hatást, amelyet FGF-2 vált ki endoteliális sejteken dózisfüggő módon, és az ID50 30 nmól-nak
-17felel meg. Ez az érték hasonló az FGF-2 - PTC3 kölcsönhatásra számított Kd-hez. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy az FGF-2 biológiai hatásának gátlása PTX3-mal az extracelluláris helyek szekvesztrálásának tulajdonítható. A PTX3 FGF-2-re mutatott gátló hatása speciális, mert nem mutatható ki, ha a sejtburjánzás előidézésére más mitogéneket használunk.
8. példa
PTX3 hatása transzformált marha magzati aortás endoteliális sejtek burjánzására
Ebben a kísérletben azt kutattuk, hogy milyen hatása van a PTX3-nak az egér aorta endoteliális sejtvonal MAE3F2T burjánzására, amelyet stabilan transzfektáltunk FGF-2-t kódoló expressziós vektorral (Gualandris és tsai, 1996, Cell Growth Diff. 7:147-60). Ezek a sejtek képesek burjánzani az endogén FGF-2-vel kiváltott ingerlés autokrin kacsára (Gualandris és tsai, 1996, Cell Growth Diff. 7:147-60). MAE3F2T sejteket 10.000/cm2 arányban beoltunk 48-üregű lemezekre Dulbecco táptalajban (DMEM), amelyhez 10 % FCS-t adunk. 24 óra múlva 37 °C-on a tapadó sejteket kétszer mossuk DMEM-mel FCS nélkül, és 72 órát 37 °C-on inkubáljuk 0,4 % FCS-t tartalmazó DMEM-ben, adott esetben 70 nmól PTX3, anti FGF-2 specifikus antitestek vagy 50 pg/ml szuramin jelenlétében. A szuraminról ismeretes, hogy extracelluláris FGF-2-t képes szekvesztrálni, és gátolja biológiai hatását (Rusnati és tsai, 1996, Mól. Bioi. Cell. 7:369-381). Az inkubálás végén a sejteket tripszinnel kezeljük és Burker kamrában számláljuk. A 8. ábrán bemutatott eredmények azt mutatják, hogy a PTX3 képes blokkolni az FGF2-vel MAE3F2T sejtekben előidézett autokrin kacs stimulálást,
-18és gátolja ennek FGF-2-függő burjánzását az anti FGF-2 antitestekkel és szuraminnal kiváltott hatáshoz hasonlóan.
9. példa
PTX3 hatása az in vivo FGF-2-vel kiváltott neovaszkularizációra, azaz érképződésre
A PTX3 antiangiogén potenciálját in vivo értékeljük ki csirke embrió korioallantoin membrán kísérletben (CAM). Röviden, egy 3-napos, megtermékenyített tyúktojásban a tojáshéjon ablakot nyitunk. A 8. napon zselatin szivacsokat implantálunk CAMre, és önmagában 10 μΙ PBS-sel vagy FGF-2-t tartalmazó PBSsel (szivacsonként 500 ng) abszorbeáljuk, adott esetben 5 μg/szivacs PTX3 jelenlétében (csoportonként 5-6 embrió). 4 nap múlva a CAM-eket in ovo figyeljük meg Zeiss SR sztereomikroszkóp alatt, és kiértékeljük az angiogén reakciót két kutató által, a tesztelt minták ismerete nélkül, és egy 0-4+es skálán beosztjuk, ahol a 0 azt jelenti, hogy nincs angiogén reakció, és a 4+ jelentése a legerősebb hatás. A 9. ábrán az eredmények azt mutatják, hogy a PTX3 az FGF-2-vet in vivo kiváltott neovaszkularizációt képes blokkolni.
10. példa
PTX3-mal végzett génterápia
FGF-2-t túlexpresszáló egér endoteliális sejteket, amelyeknek a neve FGF2MAE3F2T (Gualandris és tsai, 1996, Cell Growth Diff. 7:147-60) teljes hosszúságú eDNS humán PTX3mal transzfektálunk, melynek teljes hosszúságú cDNS-e előzőleg szubklónozva lett kereskedelmi expresszió pLXSH vektorral (Clontech).
-19A kapott transzfektált sejtvonalakon in vitro tanulmányokat végeztünk, hogy tanulmányozzuk a PTX3 túlexpresszálódásának hatását az FGF2MAE3F2T sejtek FGF-2-függö burjánzására, és a három dimenziós fibrin gélek invazív viselkedését is vizsgáltuk.
Részletekben, különböző PTX3 szinteket, és szülő FGF2MA3F2T sejteket expresszáló több FGF2MAE3F2T kiónt (amelyek nem termelnek PTX3-at), beoltunk 10.000/cm2 mennyiségben 48-üregű lemezeken, 10 % FCS-t tartalmazó Dulbecco táptalajon (DMEM). 24 óra múlva 37 °C-on a tapadó sejteket DMEM-vel FCS nélkül kétszer mossuk, és különböző ideig inkubáljuk 37 °C-on, 0,4 % FCS-t tartalmazó DMEM-ben. Az inkubáció végén a sejteket tripszinnel kezeljük és Burker kamrában számláljuk. Az eredmények a 10. ábrán találhatók, és azt mutatják, hogy a PTX3 túltermelés gátolja az FGF2MAE3F2T sejtburjánzást, és ennek a gátlásnak a mértéke összefügg a különböző tesztelt kiónok által termelt PTX3 mennyiségével.
Hogy kiértékeljük a PTX3-at túltermelö FGF2MAE3F2T kiónok invazív viselkedését 3-dimenziós fibrin géleken, sejtaggregátumokat készítünk agarózzal bevont lemezeken a leírt módszerrel (Gualandris és tsai, 1996, Cell Growth Diff. 7:147-60). Ezeket az aggregátumokat fibrinnel bevont, 48-üregű lemezekre oltjuk. Az oltás után azonnal 2,5 mg/ml fibrinogént tartalmazó, kalciummentes közeget és 250 mll/ml trombint adunk minden üreghez, és hagyjuk gélesedni 5 percig 37 °C-on. Ezután hozzáadunk 500 I táptalajt a gél tetejére, és az összes kísérletben a gélhez fibrinolitikus inhibitor trazilolt adagolunk, és 200 KIU/ml mellett a táptalajhoz adjuk az anyag feloldásának
-20- megelőzésére. A radiálisán növő sejtcsírák képződését 2 nappal később komputerizált képanalízissel értékeljük ki.
A 11. ábrán levő eredmények azt mutatják, hogy az FGF2MAE3F2T kiónokat túltermelő PTX3 invazív kapacitása lényegesen alacsonyabb, mint a parenterális FGF2MAE3F2T sejteké.
A kapott eredmények azt mutatják, hogy a PTX3 az FGF-2 hatást az endoteliális sejtekben gátolja, ha cDNS-ének gén transzferje után endogén termelődik.
így a találmány szerinti vegyület alkalmazható génterápiás protokoloknál a jól ismert módszerekkel egyezően (In Vivo. 1998. jan-febr.; 12(1):59-67; In Vivo. 1998. jan-febr.; 12(1):3541; In Vivo. 1994. nov-dec.; 8(5):771-80), olyan betegségek kezelésére, amelyeket az FGF-2 növekedési faktor megváltozott aktivitása idéz elő.
Claims (12)
- -21 SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Hosszú pentraxin PTX3 vagy származéka vagy doménje alkalmazása gyógyszer előállítására olyan betegségek kezelésére és megelőzésére, amelyeket az FGF-2 növekedési faktor megváltozott aktiválása idéz elő, és amely betegség lehet szabályzatlan fibroblaszt burjánzás vagy simaizomsejt burjánzás vagy megváltozott angiogenézis.
- 2. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a fibroblaszt vagy simaizomsejt szabályzatlan burjánzása által előidézett betegség vagy a megváltozott angiogenézis által előidézett betegség lehet túlzott fibroblaszt reakcióhoz kapcsolódó hegesedés, érplasztika utáni resztenózis, artritisz, diabéteszes retinopátia, pikkelysömör és ateroszklerózis.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a hosszú pentraxin PTX3 a természetben előforduló PTX3.
- 4. A 3. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a hosszú pentraxin PTX3 humán PTX3.
- 5. Az 1-2. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a hosszú pentraxin PTX3 szintetikus eredetű PTX3.
- 6. cDNS alkalmazása, amely a hosszú pentraxin PTX3-at, származékát vagy doménjét kódolja, cDNS-ből álló expressziós vektorok előállítására betegségek génterápiájára, amelyeket az FGF-2 növekedési faktor megváltozott aktiválása idéz elő, és ahol a betegség a fibroblasztok vagy simaizomsejtek szabályzatlan burjánzása vagy megváltozott angiogenézis.
- 7. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a PTX3-at vagy származékát kódoló gént tartalmazó cDNS-t egy plazmid vagy vírusos vektor hordoz.
- 8. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a fibroblasztok vagy simaizomsejtek nem szabályzott burjánzása által okozott betegség vagy megváltozott angiogenézis által okozott betegség lehet túlzott fibroblaszt reakcióval kapcsolatos hegesedés, angioplasztika utáni resztenózis, artritisz, diabéteszes retinopátia, pikkelysömör vagy ateroszklerózis.
- 9. Hosszú pentraxin PTX3 alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel a tumor agresszivitása blokkolható vagy csökkenthető, ahol az agresszivitást az FGF-2 megnövekedett expressziója idézi elő.
- 10. Hosszú pentraxin PTX3 alkalmazása gyógyszer előállítására tumor áttét bekövetkeztének megelőzésére, ahol az FGF-2 megnövekedett expressziója nagyobb áttét-képző képességet idéz elő.
- 11. A 9. vagy 10. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a tumor lehet szarkóma, karcinóma, karcinoid, csonttumor vagy neuroendokrín tumor.
- 12. A 9-11. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a hosszú pentraxin PTX3 egy vagy több ismert rákellenes gyógyszerrel van kombinálva, ahol a hosszú pentraxin PTX3 egy rákellenes gyógyszer adjuvánsaként van jelen.A meghatalmazott:DANUBIASzabadalmi és Védjegy Iroda Kft.Kerérw/íudit szabadalmi ügyvivő
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT2000RM000578A IT1317930B1 (it) | 2000-11-08 | 2000-11-08 | Uso della pentraxina lunga ptx3 per la preparazione di un medicamentoper il trattamento di patalogie associate ad una alterata attivazione |
| PCT/IT2001/000563 WO2002038169A1 (en) | 2000-11-08 | 2001-11-08 | Use of the long pentraxin ptx3 for the treatment of diseases caused by an altered activation of the growth factor fgf-2 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0400541A2 true HUP0400541A2 (hu) | 2004-05-28 |
| HUP0400541A3 HUP0400541A3 (en) | 2006-01-30 |
| HU229100B1 HU229100B1 (en) | 2013-07-29 |
Family
ID=11454983
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0400541A HU229100B1 (en) | 2000-11-08 | 2001-11-08 | Use of the long pentraxin ptx3 for the treatment of diseases caused by an altered activation of the growth factor fgf-2 |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7858577B2 (hu) |
| EP (1) | EP1331940B1 (hu) |
| JP (1) | JP4167061B2 (hu) |
| KR (1) | KR100822357B1 (hu) |
| CN (1) | CN1304047C (hu) |
| AT (1) | ATE322906T1 (hu) |
| AU (2) | AU2251302A (hu) |
| BR (1) | BR0115190A (hu) |
| CA (1) | CA2428176C (hu) |
| CY (1) | CY1106092T1 (hu) |
| CZ (1) | CZ299673B6 (hu) |
| DE (1) | DE60118769T2 (hu) |
| DK (1) | DK1331940T3 (hu) |
| ES (1) | ES2261515T3 (hu) |
| HU (1) | HU229100B1 (hu) |
| IT (1) | IT1317930B1 (hu) |
| MX (1) | MXPA03004005A (hu) |
| PL (1) | PL205925B1 (hu) |
| PT (1) | PT1331940E (hu) |
| SK (1) | SK287791B6 (hu) |
| WO (1) | WO2002038169A1 (hu) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1298487B1 (it) * | 1997-12-19 | 2000-01-10 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Composizioni farmaceutiche comprendenti pentraxina lunga ptx3 per la terapia di patologie di tipo infettivo, infiammatorio o tumorale, |
| ITRM20020109A1 (it) * | 2002-02-28 | 2003-08-28 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Derivati funzionali della pentraxina lunga ptx3 per preparare un vaccino autologo per la cura dei tumori. |
| ITRM20020191A1 (it) * | 2002-04-08 | 2003-10-08 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Uso della pentraxina lunga ptx3 per la preparazione di un medicamentoper il trattamento di patologie tumorali associate ad una alterata att |
| ITRM20030596A1 (it) * | 2003-12-23 | 2005-06-24 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Uso di inibitori della pentraxina lunga ptx3, per la preparazione di un medicamento per la prevenzione e cura di patologie che rispondono all'inibizione dell'attivita' biologica di detta ptx3. |
| WO2005080981A1 (ja) * | 2004-02-25 | 2005-09-01 | Perseus Proteomics Inc. | 血管障害の程度の判定方法 |
| ITRM20040489A1 (it) | 2004-10-08 | 2005-01-08 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Pentraxina lunga ptx3 deglicosilata o desialidata. |
| JP5427415B2 (ja) * | 2006-01-24 | 2014-02-26 | シグマ−タウ・インドゥストリエ・ファルマチェウチケ・リウニテ・ソシエタ・ペル・アチオニ | Ｆｇｆ２結合性ペプチドおよびそれらの使用 |
| EP1832295A1 (en) * | 2006-03-10 | 2007-09-12 | Tecnogen S.P.A. | Use of PTX3 for the treatment of viral diseases |
| PT2012816E (pt) | 2006-05-02 | 2012-08-17 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Uso de timosina 1, isolada ou em combinação com ptx3 ou ganciclovir, para o tratamento da infeção por citomegalovírus |
| WO2013191280A1 (ja) * | 2012-06-22 | 2013-12-27 | 国立大学法人 東京大学 | 全身性炎症反応症候群の治療又は予防剤 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06506195A (ja) * | 1991-01-14 | 1994-07-14 | ニューヨーク ユニバシテイ | サイトカイン誘導タンパク質、ｔｓｇ−１４、そのためのｄｎａコード化およびその使用 |
| IT1298487B1 (it) * | 1997-12-19 | 2000-01-10 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Composizioni farmaceutiche comprendenti pentraxina lunga ptx3 per la terapia di patologie di tipo infettivo, infiammatorio o tumorale, |
-
2000
- 2000-11-08 IT IT2000RM000578A patent/IT1317930B1/it active
-
2001
- 2001-11-08 ES ES01993471T patent/ES2261515T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-08 HU HU0400541A patent/HU229100B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2001-11-08 AU AU2251302A patent/AU2251302A/xx active Pending
- 2001-11-08 KR KR1020037006278A patent/KR100822357B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2001-11-08 MX MXPA03004005A patent/MXPA03004005A/es active IP Right Grant
- 2001-11-08 DE DE60118769T patent/DE60118769T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-08 JP JP2002540751A patent/JP4167061B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-11-08 CZ CZ20031179A patent/CZ299673B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-11-08 CN CNB018185630A patent/CN1304047C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-11-08 PT PT01993471T patent/PT1331940E/pt unknown
- 2001-11-08 SK SK562-2003A patent/SK287791B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-11-08 DK DK01993471T patent/DK1331940T3/da active
- 2001-11-08 EP EP01993471A patent/EP1331940B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-08 WO PCT/IT2001/000563 patent/WO2002038169A1/en not_active Ceased
- 2001-11-08 BR BR0115190-8A patent/BR0115190A/pt active Search and Examination
- 2001-11-08 US US10/416,225 patent/US7858577B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-11-08 AT AT01993471T patent/ATE322906T1/de active
- 2001-11-08 CA CA2428176A patent/CA2428176C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-11-08 PL PL365292A patent/PL205925B1/pl unknown
- 2001-11-08 AU AU2002222513A patent/AU2002222513B8/en not_active Ceased
-
2006
- 2006-06-05 CY CY20061100719T patent/CY1106092T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lambert et al. | TIMPs as multifacial proteins | |
| Rusnati et al. | Fibroblast growth factors/fibroblast growth factor receptors as targets for the development of anti-angiogenesis strategies | |
| Xie et al. | Syndecan-4 over-expression preserves cardiac function in a rat model of myocardial infarction | |
| JP2005520480A (ja) | 細胞増殖および血管形成の調節物質、その使用方法および特定方法 | |
| HUP0400541A2 (hu) | Hosszú pentraxin PTX3 alkalmazása FGF-2 növekedési faktor megváltozott aktiválásával előidézett betegségek kezelésére | |
| Mikelis et al. | Pleiotrophin as a possible new target for angiogenesis-related diseases and cancer | |
| Gong et al. | Gemcitabine resistance induced by interaction between alternatively spliced segment of tenascin-C and annexin A2 in pancreatic cancer cells | |
| AU2002222513A1 (en) | Use of the long pentraxin PTX3 for the treatment of diseases caused by an altered activation of the growth factor FGF-2 | |
| Yee et al. | Halofuginone inhibits tumor growth in the polyoma middle T antigen mouse via a thrombospondin-1 independent mechanism | |
| Shi et al. | Apixaban attenuates ischemia-induced myocardial fibrosis by inhibition of Gq/PKC signaling | |
| PT1638591E (pt) | Agonistas de slrp de classe iii para a redução da formação de vasos sanguíneos | |
| Gupta et al. | Fibulin-7 and its bioactive fragments: emerging immunomodulatory roles in disease | |
| US20050043230A1 (en) | Use of long pentraxin ptx3 for the treatment of fgf-8 mediated tumour diseases | |
| WO1999055361A1 (en) | Neovascularization inhibitors | |
| KR101055319B1 (ko) | 세포부착을 촉진하는 인간 라미닌 α２사슬의 ＬＧ１ 도메인 및 활성 펩티드 | |
| Segev et al. | A perlecan-inducing compound significantly inhibits smooth muscle cell function and in-stent intimal hyperplasia: novel insights into the diverse biological effects of perlecan | |
| WO2006128179A2 (en) | Use of matrilin-1 for the treatment of angiogenesis related diseases | |
| HK1061209B (en) | Use of the long pentraxin ptx3 for the treatment of diseases caused by an altered activation of the growth factor fgf-2 | |
| Srinivasan | Regulatory Role and Significance of Class III SLRPs: Osteoglycin, Epiphycan, and Opticin | |
| Guo | CD105 expression and its effects on TGF-β signalling, angiogenesis and cell behaviour |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |