IT8224380A1 - Amminoacidi fosfinilalcanoici utili come agenti ipotensivi - Google Patents

Description

DESCRIZIONE del brevetto per i nvenzi one industriale da] titolo:

"Amminoacidi fosfinilalcanoici utili come agenti ipotensivi"

RIASSUNTO

L'attivit? dell'enzima che converte l'angiotensina viene inibita da composti aventi la formula:

e dai suoi sali in cui ? alchile, arile, arilalchile, cicloalchile o cicloalchil(alchile);

rappresentano ciascuno indipendentemente:

idrogeno , alchile , arilalchile o dove X ? : idrogeno, alchile o fenile e Y ?: idrogeno, alchile, fenile o alcossi, oppure X ed Y sono congiuntamente:

o o alchile;

? un residuo di un amminoacido scelto nel gruppo consistente di glieina, alanina, vaiina, norvalina, leucina, N-metilleucina, norleucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, serina, treonina, cisteina, iiietionina, acido aspartico, acido glutammico, arginina, lisina, asparagina, glutammina, istidina o triptofano;

n ? 0 oppure 1.

DESCRIZIONE

Composti aventi la formula (I)

e sali relativi, presentano attivit? ipotensiva. Nella formula I e nella descrizione che segue, i simboli sono come di seguito definiti.

R ? alchile, arile, arilachile, cicloalchile

o cicloalchil(alchile);

R ono ciascuno indipendentemente idrogeno, 0

alchile, arilalchile o - dove X ? . idrogeno , alchile o fenile e Y ? idrogeno, alchile, fenile o alcossi, oppure X ed Y presi congiuntamente sono

-(

R^ ? idrogeno o alchile;

e un residuo di un amminoacido scelto

nel gruppo consistente di glieina, alanina, vaiina, norvalina, leucina, N-metilleucina, norleucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, serina, treonina, cisteina, metionina, acido aspartico, acido glutammico, arginina, lisina, asparagina, glutammina, istidina o triptofano; e

n ? 0 oppure 1.

Il termine "arile", come utilizzato nella'descrizione sia da solo che come parte di un gruppo maggiore, riguarda il fenile o il fenile sostituito con gruppi alogeno, alchile, alcossi, alchiltio, idrossi, alcanoile, nitro, ammino, dialchilammino o trifluorometile

II fenile ed il feni? monosostituito sono preferiti ed il fenile ? il maggiormente preferito

II termine "alchile", come utilizzato nella descrizione sia da solo che come parte di un gruppo maggiore, riguarda gruppi aventi da 1 a 10 atomi di carbonio. Sono preferiti i gruppi alchile contenenti da 1 a 4 atomi di carbonio.

Il termine "cicloalchile", come utilizzato nella descrizione sia da solo che come parte di un gruppo maggiore, riguarda gruppi aventi da 3 a 7 atomi di carbonio.

Il termine "alcossi", come utilizzato nella descrizione sia da solo che come parte di un gruppo maggiore, riguarda gruppi contenenti da 1 a 8 atomi di carbonio.

Sono preferiti i gruppi alcossi contenenti da 1 a 3 atomi di carbonio.

Il termine "alogeno", come utilizzato nella descrizione sia da solo che come parte di un gruppo maggiore, riguarda fluoro, cloro, bromo ed iodio. I gruppi alogeno preferiti sono fluoro e cloro.

Il termine "alcanoile", come stilizzato nella descrizione sia da solo che come parte di un gruppo maggiore, riguarda i gruppi aventi da 2 a 9 atomi di carbonio.

I composti con formula I, ed i sali relativi, sono agenti ipotensivi. Essi inibiscono la conversione del decapeptide angiotensina I in angiotensina II e pertanto sono utili nel ridurre o nell'alleviare l'ipertensione collegata all'angiotensina. L'azione dell'enzima renina sull'angiotensinogeno, una pseudoglobulina nel plasma sanguigno, produce angiotensina I. L'angiotensina I viene convertita mediante l'enzima che converte l'angiotensina {ACE) in angiotensina II. Quest'ultima costituisce una sostanza attiva di pressione che ? stata coinvolta quale agente causativo in varie forme di ipertensione in varie specie di mammiferi, ad esempio soggettijjmani. I composti della presente invenzione intervengono nella sequenza angiotensina-* (renina) angiotensina ; inibendo l'enzima che converte l'angiotensina e riducendo o eliminando la formazione della sostanza di pressione angiotensina II. Cos? mediante somministrazione di una composizione contenente uno (o una combinazione) dei composti della presente invenzione, viene alleviata l'ipertensione dipendente da angiotensina nelle specie mammifere (ad esempio soggetti umani) che ne soffrono. Per ridurre la pressione sanguigna ? adatta una dose singola, o preferibilmente da 2 a 4 dosi suddivise giornalmente, purch? sulla base da circa 0,1 a 100 mg per chilogrammo di peso corporeo e per giorno, preferibilmente da circa 1 a 15 mg per chilogrammo di peso corporeo e per giorno. La sostanza viene preferibilmente somministrata per via orale, ma possono anche essere utilizzate le somministrazioni per via parenterale, come sottocutanea, intramuscolare, intravenosa o intraperitoneale. ;I composti della presente invenzione possono anche essere formulati in combinazione con un diuretico per il trattamento dell'ipertensione. Un prodotto di combinazione comprendente un composto della presente invenzione ed un diuretico, pu? essere somministrato in quantit? efficace che comprende un dosaggio giornaliero totale da circa 30 a 600 mg, preferibilmente da circa 30 a 330 mg di un composto della presente invenzione e da circa 15 a 300 mg, preferibilmente da circa 15 a 200 mg del diuretico, ad una specie mammifera che ne abbia necessit?. Esempi di diuretici utili per l'uso in combinazione con un peptide della presente invenzione, sono diuretici triazide, ad esempio clortiazide, idroclortiazide, flumetiazide, idroflumetiazide, bendroflumetiazide meticlortiazide, triclormetiazide, politiazide o benztiazide, come pure acido etacrinico, ticrinafen, clortalidone, furosemide, musolimina, bumetanide, triamterene, amiloride e spironolattone, nonch? i sali di tali composti. ? ;I composti con formula I possono essere formulati per l'uso nella riduzione della pressione sanguigna in composizioni come compresse, capsule o sciroppi per la somministrazione orale, oppure in forma di soluzioni o sospensioni sterili per la somministrazione parenterale. Da circa 10 a 500 mg di un composto con formula I vengono posti in combinazione con un veicolo, supporto, eccipiente, legante, preservante, stabilizzante, aroma, ecc., fisiologicamente accettabili, secondo una forma di dosaggio unitario quale richiesta nella pratica farmaceutica accettata. La quantit? di sostanza attiva in queste composizioni o preparazioni ? tale da ottenere un dosaggio adatto nell'ambito sopra indicato. ;I fosfinilalcanoil ammino acidi con formula I possono essere preparati mediante reazione di un composto avente la formula II ;;; ; con acido fosfinil-acetico o propionico avente la formula Ili ;;; ; Nella formula II e nella descrizione, ? alchi- ;le, arilalchile . La reaziohe pu? essere condotta utilizzando procedure note di formazione del legame ammide. Ad esempio la reazione pu? essere condotta in presenza di un agente di accoppiamento come dicicloesilcarbodiimmide, oppure l'acido con formula III pu? essere attivato mediante formazione della sua anidride mista, dell'anidride simmetrica, dell1alogenuro dell'acido (preferibilmente cloruro dell'acido) o dell'estere acido, oppure mediante l'uso del reagente K di Woodward, N-etossicarbonil-2-etossi-l,2-diidrochinolina, N,N'-carboniIdiimmidazolo o simili. Una elencazione di questi metodi pu? essere trovata in Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl), volume XV, parte II, pagina 1 e seguenti (1974). ;Il prodotto della reazione presenta la formula IV ;;; ; I composti con formula 1 nei quali ? idrogeno ;possono essere alternativamente ottenuti mediante (i) trattamento del composto corrispondente con formula IV in cui R ? alchile con un alogenosilano come bromotrimetilsilano e con acqua, oppure (ii) idrogenazione catalitica del composto corrispondente con formula IV nel quale ; ? arilalchile, ad esempio utilizzando carbone palladiato. ;Questi prodotti presentano la formula V ;;; ;; I composti con formula I nei quali R^ ? idrogeno, cio? i composti aventi la formula VI ;;; ;; possono essere ottenuti mediante idrolisi basica di un composto con formula IV o V. Alternativamente un composto con formula IV o V, in cui ? un gruppo estere facilm?nte allontanatile (come t-butile), pu? essere trattato con acido trifluoroacetico ed anisolo per ottenere l'acido carbossilico con formula I. ;I fosfinilalcanoil ammino acidi con formula I nei quale n ? 1, possono alternativamente essere preparati mediante reazione di un composto con formula II con un fosfolano avente la formula VII ;;; ;; La reazione procede molto facilmente quando condotta in presenza di una base organica, ad esempio trietil? ammina, piridina, N,N-dimetilammina o simiAi, in un solvente organico inerte come acetonitrile, diclorometario, etere, tetraidrofurano o simili. ;I derivati dell'acido fosfinil-acetico o propionico con formula III possono essere preparati utilizzando procedure note, si veda ad esempio il brevetto U.S. ;4.168.267, rilasciato il 18 settembre 1979. I fosfolani con formula VII possono essere preparati seguendo la procedura descritta in Zh. Obsh. Kim., 37:411 (1967) ed in Zh. Obsh. Kim., 38:288 (1968). ;Gli esteri dell'ammino acido con formula II sono noti oppure sono facilmente ottenibili utilizzando tecniche note di esterificazione che vengono illustrate negli esempi. ;Procedimenti ulteriori per preparare i composti della presente invenzione diverranno evidenti all'esperto nel settore dall'invenzione stessa. Per esempio il gruppo carbossile dell'ammino acido avente la formula VIII ; ;;; pu? essere protetto, ad esempio mediante conversione in sale amminico, oppure in estere 2-idrossietilico o difenilmetilico, pu? essere fatto reagire con un acido fosfinil-acetico o propionico con formula III ,e -pu? "?quindi essere privato?'del gruppo protettivo per dare un prodotto con formula VI. ;L'esterificazione di un prodotto con formula VI utilizzando procedure note nella tecnica, produce il corrispondente prodotto con formula IV. ;Una procedura alternativa per preparare i composti della presente invenzione nei quali ? alchile, arilal? chile o e R ? idrogeno, comprende l'alchilazione iniziale del corrispondente composto con formula V in cui R? ? benzidrile o t-butile e quindi il sottoporre 4 ;il composto corrispondente a scissione dell'estere con acido trifluoroacetico e anisolo o con altri reagenti noti nella tecnica. ;;I composti con formula I (nei quali ? ;un residuo di un animino acido diverso dalla glieina) esistono nelle forme di?stereoisomere oppure in miscele race? miche; tutte rientrano nella portata della presente inven? zione. Sono preferiti gli isomeri L. ;I composti della presente invenzione in cui almeno uno tra ? idrogeno.formano sali basici con varie basi inorganiche ed organiche, che rientrano nell'ambito dell'invenzione. Tali sali comprendono sali di ammonio, sali di metallo alcalino come sali di litio, sodio e potassio (che sono i preferiti), sali di metalli alcalino terrosi come sali di calcio e di magnesio, sali?con basi organiche, ad esempio sale con dicicloesilammina, berizatina, N-metil-D-glucammina, sali di idrabammina, sali con animino acidi come arginine, lisina e simili. Sono preferiti i sali non tossici e fisiologicamente accettabili, sebbene altri sali possono essere utili, ad esempio nell'isolamento o purificazione del prodotto. I sali vengono formati utilizzando tecniche convenzionali. ;Quelli che seguono sono esempi di attuazioni specifiche della presente invenzione. ;Esempio 1 ;; ;; 1,1'-carbonildiimidazolo ? (0,56 g) fu aggiunto a porzioni ad una soluzione raffreddata (0?C) di acido (0,98 g) in 70 mi di acetonitrile. Questa miscela di reazione fu agitata sotto argon a 0?C per 1,5 ore. Il sale HC1 di L-tirosina metil estere (0,8 g) fu disciolto in metanolo e neutralizzato con trietilammina (0,35 g). La soluzione fu concentrata sotto vuoto, d?sciolta in 10 mi di acetonitrile caldo ed aggiunta goccia a goccia alla soluzione sopra indicata dell'estere dell'acido fosfinico attivato nella catena laterale. La miscela di reazione fu agitata per una notte sotto argon e quindi concentrata sotto vuoto. Una soluzione del residuo di fondo in diclorometancf fu lavata ; acquoso, soluzione salina), essiccata ) e filtrata per dare 1,4 g dell'estere metilico di ;; ;; Esempio 2 ;; ;; Trimetilsililbromuro (0,5 mi) fu aggiunto ad una soluzione raffreddata di estere metilico di ; (1,4 g; si veda l'esempio 1) in 50 mi di diclorometano. Si agit? sotto argon per 2 giorni e si concentr? quindi sotto vuoto. Il residuo fu disciolto in 150 mi di acetato di etile, fu lavato acquoso al 10%, soluzione salina) ed essiccato . Il prodotto fu separato dal materiale di partenza mediante estrazione con soluzione di acetato di etile con tre porzioni di acquoso al 25%. La soluzione del bicarbonato fu acidificata con HC1 acquoso al 10% ed estratta con due porzioni da 100 mi di acetato di etile contenenti 5 mi di isopropanolo. Si essicc? quindi con si filtr? e si concentr? sotto vuoto per dare 0,94 g del prodotto analitico. ;Calcolato per ;y ; ;; per ;; ;;;; ;; Esempio 3 ;; ;; L'estere metilico di ; (0,86 g; si veda l'esempio 2) fu disciolta in 10 mi di metanolo. Fu aggiunto idrossido di sodio (0,24 g) in 7 mi di acqua e la soluzione fu agitata alla temperatura ambiente per 4 ore. Alla fine di questo periodo di tempo il pH era a pari a 10. Fu evaporato il metanolo e la miscela di reazione fu diluita con 20 mi di acqua, filtrata su filtro Millipore ed il filtrato fu acidificato con al 10%. ;La soluzione acquosa fu saturata con sale, estratta con acetato di etile, essiccata filtrata e concentrata sotto vuoto per dare 0,5 g di materiale anali? tico ;; ; ;; < Esempio 4 ;; ;;; Ad una soluzione di 5 g di acido ; in 132 mi di dimetilformammide (DMF) anidra, alla temperatura ambiente e sotto azoto, furono aggiunti 2,9 g di 1,11-carbonildiimidazolo (CDI). Dopo 1 ora alla temperatura ambiente, la miscela di reazione fu trattata con 3,1 g di L-arginina aggiunta come solido in una porzione unica. Dopo agitazione della miscela di reazione per una notte sotto azoto, la DMF fu allontanata sotto vuoto e la miscela greggia di reazione fu disciolta in acqua, acidificata a pH 2 con HC1 concentrato ed estratta con etere. La lavorazione dello strato etereo produsse 1,7 g dell'acido di partenza. Il prodotto desiderato fu isolato mediante applicazione dell'estratto acquoso acidificato ad una colonna a scambio ionico (AG50W-X2) preparata in acqua. L'eluizione iniziale con acqua allontan? il materiale acidico. Quando il pH ritorn? ad un valore prossimo a quello neutro, fu applicato un gradiente da acqua a tampone piridina?acido acetico 0,07 M pH 6,5. Le frazioni positive al Sakaguchi furono raggruppate e liofilizzate per ottenere 2,1 g del prodotto. Questo materiale fu infine purificato su circa 500 mi di resina Sephadex LH-20 in acqua per ottenere 1,9 g del composto nel titolo, con punto di fusione ; trascurabile. ;; ; Esempio 5 ;; ;;; Una soluzione di ; (652 mg; si veda l'esempio 4) in 15 mi di 4N acido bromidrico/acido acetico, fu mantenuta alla temperatura ambiente in un pallone chiuso per una notte. La miscela di reazione fu quindi bonificata .con un flusso di azoto e trattata ripetutamente con acqua e concentrata in un evaporatore rotante. La liofilizzazione produsse 1,04 g di prodotto greggio. La cromatografia su resina carbossimetil cellulosa leggermente acidica CM-52 (H+) produsse un materiale che presentava ancora 0,75 equivalenti di HBr come indicato dalla microanalisi. Il composto nel titolo fu ottenuto alla fine puro per passaggio attraverso una resina a scambio ionico (AG50W? -X2 (H+)) eluita dapprima con acqua per allontanare HBr, quindi alla fine con piridina acquosa al 5% per dare un totale di 178 mg di prodotto solido e bianco dopo liofiliz? zazione. Il prodotto era solvatato con 0,7 H^O. ;Esempio 6 ;; ; ;; (3,2 g) e 1,1'-carbonildiimidazolo (1,6 g) furono agitati in 50 mi di acetonitrile anidro in un fcagno a ghiaccio per 1 ora. La base libera di L-triptofano benzil estere, derivata da 4,8 g del sale cloridrato (da ) fu aggiunta a poco aceto-nitrile. Dopo agitazione a 0?C per 1 ora, la miscela fu lasciata a riposo alla temperatura ambiente per una notte, ripresa in etere, lavata con al 5%, con soluzione salina, con a saturazione, con soluzione salina (2 volte), essiccata ; ed evaporata a secchezza per dare 5,7 g del prodotto. ;Questo materiale fu cromatografato a flash su gel di silice LP-1 (400 mi) eluito con acetato di etile e produsse 3,6 g di prodotto sotto forma di olio leggermente colorato. ;; ;; Esempio 7 ;; ;; ; (3,3 g; si veda l'esempio 6) fu disciolto in metanolo e fu aggiunto idrossido di litio monoidrato (0,466 g) disciolto in poca acqua. La miscela fu agitata alla temperatura ambiente per 2 ore; fu aggiunto carbone palladiato al 10% (1 g) e la miscela fu idrogenata ad una atmosfera per 2 ore. Il catalizzatore fu filtrato attraverso Celite ed il filtrato fu evaporato a secchezza. Il residuo fu disciolto in acqua, fatto passare attraverso il filtro Millipore e liofilizzato per dare 2,1 g di prodotto, con punto di fusione superiore a 350?C, ;; ;; Analisi: calcolato per ;- ;; ; 3, 1. ;L'elettroforesi mostrava che questo materiale presentava due componenti,E sso (300 mg) fu cromatografato su DEAE sephadex (60 mi) (forma OH, pH 7,4), eluito con gradiente di (da 0,005 a 0,5 M). Le frazioni pure (contenenti un solo componente per elettroforesi) furono combinate ed evaporate. Il residuo fu disciolto in acqua, filtrato su Millipore e liofilizzato due volte per da re 0,29 g del prodotto, ;; ; ;; Esempi 8-24 ;Seguendo la procedura degli esempi 4 e 5, ma partendo con il composto elencato in colonna I in luogo di L-arginina, si ottiene il composto elencato nella colonna II. Nell'esempio 21 risulta necessario utilizzare un dericato protetto della lisina. ;; ; ;; Esempio 27 ; ; ;; A) ;; ;; Ad una soluzione di cloroformiato di benzile (1,8 mi, 12,6 mmoli) in 5 mi di tetraidrofurano anidro fu aggiunta goccia a goccia una soluzione dell'acido - (2,55 g, 10 mmoli) e trietil? ammina (2,0 mi, 14, 5 mmoli) in 30 mi di tetraidrofurano anidro a 0?C. Dopo completamento dell'aggiunta, la miscela fu agitata a 0?C per 30 minuti ed alla temperatura ambiente per 1 ora. La miscela fu posta tra acetato di etile e KHSO^ al 5% e lo strato di acetato di etile fu evaporato fino ad ottenere un residuo. Il residuo fu ripreso con NaHCO^ acquoso, lavato con acetato di etile e la soluzione acquosa fu acidificata a pH 1 ed estratta con acetato di etile. Gli estratti furono anidrificati ; ed evaporati per dare un prodotto greggio che fu triturato con pentano per dare un solido con punto di fusione 64-67?C (3,30 g). ;B) ;; ; (3,30 g, 9,5 mmoli) fu ripreso in 10 mi di dimetilformammide anidra e trattato con tr?etilammina (2,7 mi, 9,5 mmoli) e con clorometil pivalato (2,8 mi, 19,4 mmoli) e si agit? alla temperatura ambiente sotto argon per 16 ore. La miscela fu diluita con acetato di etile e lavata con acqua, con al 5% e con NaHCO 3 a saturazione, quindi fu essiccata ed evaporata fino ad un residuo che fu purificato mediante cromatografia per flash su gel di silice utilizzando l'eluente etil acetato-esano per dare il diestere nel 'titolo (3,65 g, 83%) sotto forma di ?lio incoloro. (acetato di etile/esano, 1:1) = 0,39. ;C) ;; ;;; L'estere fenilmetilico dell ;; ; (2,95 g, 6,4 mmoli) in 75 mi di acetato di etile fu idrogenato a 48 psi su catalizzatore carbone palladiato al 10% (0,4 g) per 1 ora. La miscela fu filtrata attraverso Celite ed evaporata a secchezza per dare l'acido nel titolo sotto forma di olio incoloro che solidificava in un solido con punto di fusione 48?50?C. ;D) ;; ;;; ? ; (2,22 g, 6 mmoli), N-idrossisuccinimmide (0,69 g, 6 mmoli) e dicicloesilcarbodiimmide (1,24 g, 6 mmoli) furono disciolti in tetraidrofurano anidro a 0*?. La miscela fu agitata per una notte alla temperatura ambiente, filtrata ed il filtrato fu concentrato sotto vuoto fino a dare un residuo oleoso che fu triturato con etere diisopropilico, dando un solido con punto di fusione 102-105?C (2,1 g).

E)

L-fenilalanina (1,65 g, 10 mmoli), trietilammina (2,8 mi) 20 mmoli) ed estere N-idrossisuccinimmidico del-11acido

(4,67 g, 10 mmoli) vengono disciolti in 50 mi di dimetilformammide anidra e si agita per una notte sotto argon alla temperatura ambiente. La miscela di reazione viene suddivisa tra diclorometano e

al 5% e lo strato organico viene lavato con acqua e con soluzione salina e quindi essiccato ed evaporato per dare il prodotto desiderato.

Esempio 28-34

Seguendo la procedura dell'esempio 27, ma sostituendo il composto nella colonna I in luogo dell'acido il composto nella colonna II in luogo del clorometil pivalato ed il composto nella colonna III in luogo di L-fenilalanina, si ottiene il composto elencato nella colonna IV.

Claims (1)

1. RIVENDICAZIONI

   Composto avente la formula

   o sale relativo, in cui R ? alchile, arile, arilalchile, cicloalchile o cicloalchil (alchile); ?

   sono ciascuno indipendentemente idrogeno,

   alchile , arilalchile o dove X ? idrogeno, alchile o fenile e Y ? idrogeno, alchile, fenile o alcossi, oppure X e Y sono assieme

   ?

   ? un residuo di un animino acido scelto

   nel gruppo consistente di glieina, alanina, vaiina, norva? lina, leucina, N-metilleucina, norleucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, serina, treonina, cisteina, metionina, acido aspartico, acido glutammico, arginina, lisina, asparagina, glutammina, istidina, o triptofano; e

   n ? 0 oppure 1.

   Composto secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che n ? 1.

   3. Composto secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che sono entrambi idrogeno.

   4. Composto secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che uno tra ? idrogeno e l'alto ?

   5. Composto secondo la rivendicazione 1, estere metilico di

   6. Composto secondo la rivendicazione'1, estere metilico di

   7. Composto secondo la rivendicazione 1 , i

   8. Composto secondo la rivendicazione 1 ,

   9. Composto secondo la rivendicazione 1,

   10. Composto secondo la rivendicazione 1, estere fenilmetilico di

   11. Composto secondo la rivendicazione 1 , sale di ammoniaca di