IT8248162A1 - Nuovo ceppo di fusarium utilizzabile per la produzione di antibiotici - Google Patents
Nuovo ceppo di fusarium utilizzabile per la produzione di antibioticiInfo
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Description
DOCUMENTAZIONE
RILEGATA
48162 A/82 SIB 83257
K <1 >F7/N3 FUSA "S11
DESCRIZIONE dell'invenzione industriale dal titolo:
ceppo ?i Fusarium utilizzabile per la produ
zione di antibiotici"
della ditta francese BIQFARMA Descrizione modificata <(>art. 49 D.P.R. n. 338/1979) con sede in NEUILLY-SUR-SEINE (FRANGIA) istanza dep. il ?4.?.4?82?
(??? R?3?I? -ASSU ?N ...T -O
L'invenzione riguarda un nuovo ceppo di
Fusarium. Questo ceppo ? caratterizzato da crite?
ri morfologici, genetici e biochimici particolari.
Esso trova la sua applicazione nella pr?
dazione industriale di.antibiotici-DEgCRIZIOHE
La presente invenzione riguarda un nuovo microrganismo utilizzabile per la produzione di
antibiotici, e pi? specialmente della fusaiungine, antibiotico per uso esterno per il trattamento
di affezioni della gola.
La fusafungina e la sua preparazione a p?rtjl re da Fusarium lateritium sono state descritte in particolare nel brevetto francese n. 1.I64-.181, e
questo microrganismo ? stato depositato presso il Centraalbureau Voor Schimmelcultures a Baara con
il n. CBS 119.63? Inoltre il brevetto francese
lo392-717 descr?ve perfezionamenti apportati al
procedimento di preparazione industriale della
fusafungina, a partire dal medesimo ceppo eoa.rese migliori che vanno da 0,5 a 0,8 g/litro. Sono stati tentati altri procedimenti ma essi non hanno permes? so di migliorare la resa poich? la fusafungina, co. statuente del corpo di Fusarium, ? presente in ciascun ceppo con una concentrazione caratteristica.
Sono stati saggiati altri ceppi con una re. sa che non era pi? vantaggiosa ed in condizioni di coltura pi? difficili.
L?invenzione si propone di mettere a disposi^ zione un ceppo che produca una quantit? pi? importan te di fusafungina di eguale qualit? e mediante il me desimo procedimento di preparazione. La richiedente ? riuscita ad ottenere un nuovo ceppo corrispondente a Questo criterio.
Lo scopo ? stato raggiunto nella misura in cui i vecchi ceppi forniscono, nello stadio di laboratorio, rese dell'ordine di 0,1 fino a 0,? g/li tro di fusafungina, ed il nuovo ceppo fornisce 0,6 fino a 0,9 g/litro ovvero una resa fino a 6 volte superiore. Nello stadio industriale si sono potuti ottenere 1,8 fino a 3,6 kg/m^ ovvero almeno 5 fino a 4 volte pi? che secondo il brevetto francese 1.392.717.
Il nuovo ceppo secondo l'invenzione ? stato ottenuto a partire dal ceppo CBS 119-63 mediante dis sociazione , isolamento di colonie e semina, dif. ferenti supporti.
A partire da spore prelevate da differenti supporti suscettibili di contenere agenti mutageni, sono state realizzate semine su terreno di agar. Di queste colture sono state effettuate dissociazioni mediante diluizioni successive su terreno di agar per ottenere colonie isolate. Queste sono state s?? giate su terreno di produzione. Sono state determina te resa e composizione della fusangina elaborata.
E.? stato conservato il ceppo oggetto della invenzione. Questo ? ora stabilizzato mediante lio filizzazione su latte Scremato.
Secondo le sue caratteristiche, il detto nu? vo ceppo appartiene al genere Fusarium. Esso ? sta to depositato il
ed identificato presso il Centraalbureau Voor Schimmelcultures a Baarn con il n. CBS 675*80?
Il presente cepp? non pu? essere identico ad alcuna delle specie note e si tratta di un nuovo ceppo che la Richiedente ha chiamato Fusarium lateritium Servier.
Studio morfologico:
Il nuovo ceppo Fusarium lateritium Servier CBS 675?*80 -?.di.cplo.rs scuro, la sporulazione ha 1*aspettodi sporodoco con ciuffi di micelio aer^e, mentre il ceppo di origine depositato presso il Centraalbureau Voor Schiramelcultures a Baam con il n, CBS 119*65 ? chiaro? la sua coltura ? liscia e la sporulazione ? del.tipo pi.onnoto.
Studio _?$nejbioo^
La caratteristica biochimica d? produzione importante di fuaafungina viene trasmessa genetica mente. Essa caratterizza quindi un genoma differente.
La trasmissione di questi caratteri attraver so tre generazioni successive, confrontandole con due altri ceppi noti, coltivati simultaneamente e trapiantati su tre generazioni in condizioni identi_ che,? stata verificata mediante il seguente protocol, lo:
Si isola la specie selvatica CBS 119.63, conservante su terriccio di cotogno o terriccio di acacia., dal suo ambiente di conservazione mediante passaggio- sul.terreno liquido di Scheffer, prima di seminare,un tubo di agar arricchito con farina di avena, per servire come,riferimento.
Dopo aver seminato direttamente la specie Eusarium lateritiraiServier nell<?>agar con avena, ? protocolli seguiti per le tre specie sono stati identici ; isolamento di un cimento* semina; alla fine del ciclo, prelievo della maggior parte per fermentazione ed analisi; isolamento di un elemento e risemina in un nuovo agar.
Il procedimento ? identico alla fine della seconda generazione per l?ottenimento di una terza generazione.
Le procedure di fermentazione sono state identiche per le tre generazioni dei tre ceppi ed ? stato utilizzato il medesimo terreno.
La tabella che segue raggruppa i risultati:
Produzione di fusafungina per Ceppo litro di terreno (in g)
1-
genera genera^ gen?eri* zione zi Qne~ zione"<*? >
F.lateritium CBS 119.65
(terriccio di cotogno) 0,1 0,12 0,09 F.lateritium CBS 119.63
(terriccio di acacia) 0,14 0,17 0,15 ?.lateritium Seryier
3BS 675-SO 0,710 0,605 0,826
Studio biochimico;
La ouantit? molto forte di fusafungina presen te,superiore a tutte le concentrazioni note in altri ceppi,costituisce una caratteristica bioch?mica del_ la Sua originalit?.
?' stato stabilito che la fusafuugina prodotta tramite questo ceppo ? identica a quella prodotta tramite le differenti altre specie utilizzate per la produzione di fusafunginavsia per la sua colorazi? ne, il suo punto di fusione, sia anche per il suo potere antibiotico ed i suoi spettri di assorbimento di onde elettromagnetiche: infrarosso ed ultravioletto (vedasiin appresso).
Preparazione della fusaTungina:
Il ceppo di Fusarium lateritium Servier pu? venire conservato sotto forma liofilizzata in ampolle sigillate. "
Il contenuto dell<?>ampolla liofilizzata pu? servire a seminare direttamente un tubo di agar arricchito, come lo.si trova in commercio oppure secondo le tecniche classiche.
Il micelio si sviluppa progressivamente
e, dopo un ciclo totale di 15 fino a 20 giorni, ejs
So pu? servire a riseminare un altro tubo per otte nere la fermantazione. Si utilizza un terreno della seguente composizione:
saccarosio 25 g/litro
glucosio pestato 25 g/litro
nitrato di ammonio 10 g/litro
fosfato monopotassico 5 g/litro
a solfato di magnesio 2,5 g/litro.
Il pH spontaneo ? alloca di 5>^ fino a 5??? Il terreno viene allora sterilizzalo per 50 minuti a 120?C e il suo pH passa allora a 4,8-5.
Il terreno viene seminato, poi si fissa la sua temperatura a 28?C.
Si assicura una aerazione di 1 litro di aria/ minuto per litro di terreno e si lascia fermenta re per 95 , 5 ore fino ad esaurimento degli idrati di carbonio.
Dopo fermentazione, il micelio viene estratto mediante un solvente clorurato. Il solvente d? estra zione viene eliminato mediante evaporazione sotto pressione ridotta ed il residuo viene sciolto in un idrocarburo dal quale esso viene riestratto tramite un alcool acquoso.
La concentrazione dell?estratto idroalcolico provoca la precipitazione del prodotto grezzo.
La purificazione viene realizzata mediante trattamento di una soluzione alcolica con nero atti^ vato , trattato in modo speciale per il detto uso. Il prodotto purificato viene ricristallizzato in una miscela costituita da alcool etilico e da acqua.
Caratterizzazione :
punto di fusione = 128?-151?C
PO
potere rotatorio 03^ * 94 fino a 104** (2% in CUCI
. Spettro IS (?) : 3,4 5,6 6,0 6,8 7,3 7,7
8,0 8,5 9 9,2 10 11,6 L?invenzione comprende anche una coltura bio logicamente pura di Fusarium lateritium Servier le cui caratterietiche corrispondono a quelle del ceppo identificato con il numero CBS 675*80 e che pu? anche produrre la sostanza antibiotica mediante fermentazione in un terreno nutritivo.
Il ceppo oggetto dell?invenzione pu? venire usato per la preparazione di composti di origine biologica, in particolare della fusafungine , I qua li possono venire impiegati nell?industria Tarma ceutica, cosmetica od alimentare e costituire un medicamento, un alimento, un adiuvante ecc.
Si pu? far mutare il ceppo impiegato secon do la presente invenzione per mezz di agenti di mutazione artificiale noti: l?ultravioletto ed i raggi X e diverse sostanze chimiche, come nitroso? guanidine, mitomicina ecc, e tutti i mutanti ottje nut?, che sono capaci d? produrre la sostanza antjL biotica fusafungina, possono venire impiegati nella esecuzione della presente invenzione.
Claims (3)
1. Nuovo ceppo di Fusarium lateritima, le cui caratteristiche sono quelle del ceppo identifi_ cato con il numero CBS 675*80.
2. Impiego del ceppo secondo la rivendicazi? ne 1 , per la produzione di composti di origine hio logica.
3. Impiego del ceppo secondo la rivendica zinne 1, per la produzione di fusafupgina.
J
SXB 83257
ALLEGATO A
Rettifiche alla descrizione della domanda di brevetto n; 48/62 A/82, a nome di BIOFARMA contenute in n. 1 postille, richieste con istanza depositata il ^ 1982
Postilla 1: pagina 3, riga 17; dopo <u>il" aggiungere ?9 Luglio 1980*'
SIB 85257
ALLEGATO A
Rettifiche alla descrizione della dopanda di brevetto n; 48/62 A/82, a nome di B10PARMA contenute in n. 1 postille, richieste con istanza depositata il jJ mg
Postilla 1; pagina 5, riga 17: dopo "il" aggiungere "9 Luglio 1980"
p.p. BIOPARMA
SOCIET? ITAL <1>1 MAS.
IANA Bjf?EVi .p.A. /?P<">
\e
<- G &
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