ITMI20121316A1 - Complessi di condroitina ad assorbimento transcutaneo - Google Patents
Complessi di condroitina ad assorbimento transcutaneo Download PDFInfo
- Publication number
- ITMI20121316A1 ITMI20121316A1 IT001316A ITMI20121316A ITMI20121316A1 IT MI20121316 A1 ITMI20121316 A1 IT MI20121316A1 IT 001316 A IT001316 A IT 001316A IT MI20121316 A ITMI20121316 A IT MI20121316A IT MI20121316 A1 ITMI20121316 A1 IT MI20121316A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- chondroitin
- diclofenac
- skin
- gel
- complexes
- Prior art date
Links
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 title description 22
- DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N chondroitin Chemical class CC(O)=N[C@@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1OC1[C@H](O)[C@H](O)C=C(C(O)=O)O1 DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N 0.000 claims description 84
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 40
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 16
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 15
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000037374 absorbed through the skin Effects 0.000 claims description 4
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 3
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 3
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 claims description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001153 anti-wrinkle effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 claims description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 2
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 claims description 2
- 229940124630 bronchodilator Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003433 contraceptive agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 claims description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 2
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 claims description 2
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 claims description 2
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 claims description 2
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 claims description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 2
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 claims description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 claims description 2
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 claims description 2
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 230000002254 contraceptive effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001882 diuretic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 claims 1
- 229920002567 Chondroitin Polymers 0.000 description 97
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 47
- DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N diclofenac Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1NC1=C(Cl)C=CC=C1Cl DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 41
- 229960001259 diclofenac Drugs 0.000 description 39
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 31
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 15
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 15
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 14
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 11
- OZWKMVRBQXNZKK-UHFFFAOYSA-N ketorolac Chemical compound OC(=O)C1CCN2C1=CC=C2C(=O)C1=CC=CC=C1 OZWKMVRBQXNZKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 10
- 229960004752 ketorolac Drugs 0.000 description 10
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 10
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 9
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 8
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 8
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 8
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 8
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 8
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 description 7
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 description 7
- JGMJQSFLQWGYMQ-UHFFFAOYSA-M sodium;2,6-dichloro-n-phenylaniline;acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O.ClC1=CC=CC(Cl)=C1NC1=CC=CC=C1 JGMJQSFLQWGYMQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 6
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 6
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 229960001193 diclofenac sodium Drugs 0.000 description 6
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 6
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 6
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 6
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- -1 chondroitin sulphated chondroitin Chemical class 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 4
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 150000002016 disaccharides Chemical group 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- BWHLPLXXIDYSNW-UHFFFAOYSA-N ketorolac tromethamine Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)C1CCN2C1=CC=C2C(=O)C1=CC=CC=C1 BWHLPLXXIDYSNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 238000001374 small-angle light scattering Methods 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 description 2
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 2
- CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N Naproxen Natural products C1=C(C(C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 208000009621 actinic keratosis Diseases 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 238000002316 cosmetic surgery Methods 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 229960002009 naproxen Drugs 0.000 description 2
- CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N naproxen Chemical compound C1=C([C@H](C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000013374 right angle light scattering Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000036325 urinary excretion Effects 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 description 1
- 241000606856 Pasteurella multocida Species 0.000 description 1
- 229910021607 Silver chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 101100082060 Xenopus laevis pou5f1.1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 239000002152 aqueous-organic solution Substances 0.000 description 1
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactopyranuronic acid Natural products OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O AEMOLEFTQBMNLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000168 bronchodilator agent Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013626 chemical specie Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 229940124558 contraceptive agent Drugs 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229940030606 diuretics Drugs 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N fructose group Chemical group OCC(=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 229940051027 pasteurella multocida Drugs 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000004730 pulsed amperometry Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M silver monochloride Chemical compound [Cl-].[Ag+] HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940113048 solaraze Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000004003 subcutaneous fat Anatomy 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 229940019127 toradol Drugs 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005526 vasoconstrictor agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/407—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with other heterocyclic ring systems, e.g. ketorolac, physostigmine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
- A61K31/196—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino group being directly attached to a ring, e.g. anthranilic acid, mefenamic acid, diclofenac, chlorambucil
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
- A61K8/73—Polysaccharides
- A61K8/735—Mucopolysaccharides, e.g. hyaluronic acid; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
- A61K2800/54—Polymers characterized by specific structures/properties
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Birds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
Descrizione del brevetto per invenzione industriale avente per titolo:
“COMPLESSI DI CONDROITINA AD ASSORBIMENTO TRANSCUTANEOâ€
La presente invenzione ha per oggetto l’uso di condroitina come carrier transdermico e sistema a lento rilascio di principi attivi in composizioni farmaceutiche e cosmeceutiche.
Definizioni
Spesso con il termine condroitina si indica impropriamente anche la condroitina solfatata; pertanto, per chiarezza, i due termini condroitina e condroitina solfato sono mantenuti di seguito distinti. Con il termine condroitina si intende il polisaccaride non solfatato e i suoi sali, mentre con il termine condroitina solfato si intende il polisaccaride differentemente solfatato e i suoi sali.
Stato della tecnica
La condroitina, precursore metabolico della condroitina solfato, à ̈ un polisaccaride naturale lineare formato dall’alternanza di residui di N-acetil-D-galattosammina β 1:4 e D-glucuronato β 1:3. Nei vertebrati la condroitina à ̈ solfatata in maniera regio-selettiva a livello degli ossidrili 4 o 6 della N-acetil-D-galattosammina e in alcuni casi quelli 2 o 3 dell’acido glucuronico (Sugahara et al., J. Biol. Chem., 1996, 271:26745-54). Il peso molecolare della condroitina e l’entità e i siti della solfatazione dipendono dalla specie, dall’età e dalla tipologia del tessuto (Kuettner et al., Eds., in Articular cartilage and osteoarthritis, NY, Raven Press, 1992; Volpi Ed., in Chondroitin sulfate: structure, role and pharmacological activity, S. Diego, California Academic Press - Elsevier Inc, 2006).
La condroitina, essendo nei vertebrati un intermedio metabolico (Sugumaran e Silbert, J. Biol. Chem. 1990, Oct 25, 265(30):18284-8), non à ̈ isolabile in quantità significative da fonti animali. Solo recentemente sono stati messi a punto processi per la produzione di condroitina da microrganismi o mediante sintesi enzimatica.
Di particolare interesse à ̈ la produzione di condroitina descritta in WO 2010136435, per mezzo di un ceppo ingegnerizzato di E. coli K4, che produce il polisaccaride K4, un derivato della condroitina che a livello del C3 dell’acido glucuronico presenta residui di β-fruttofuranosio. Questi residui possono essere facilmente rimossi mediante idrolisi acida controllata, per la bassa stabilità del legame glicosidico con cui il fruttosio à ̈ legato alla catena della condroitina. Utilizzando questo microrganismo e una strategia integrata basata sull’ottimizzazione di un processo fermentativo trifasico (batch - fed batch - in regime di microfiltrazione) si ottengono rese in condroitina anche > 8g/L. Le alte rese produttive, la semplicità del downstream di purificazione, i bassi costi complessivi del processo, il suo ridotto impatto ambientale rendono il processo di WO 2010136435 superiore rispetto a tutte le strategie fermentative in precedenza descritte (Rodriguez et al., Eur. J. Biochem., 1988, 177:117-124; Manzoni et al., Biotechnology Letters, 1996, 18:383-386; WO 01/02597 A1; US 6,288,044; US 6,777,398; US 2005266460; WO 0180810; EP 1282684; EP 1832662; US 20030104601; US 20050164984; US 20070015249; US 20030109693; EP 1950308; WO 2007145197; WO 2007069693; WO 2007058252; WO 2007058252; WO 2007023867; US 7,273,729; JP 2004024208; US 20060052335; US 20060057697; US 7,232,676; US 20070059805).
Più recentemente, US 2011244520A1 descrive una serie di microrganismi ingegnerizzati che producono condroitina in concentrazioni confrontabili con quelle di WO 2010136435.
Per quanto concerne la sintesi enzimatica della condroitina, US 2005266460, WO 0180810, EP 1282684, EP 1832662, US 20030104601 e US 20050164984 descrivono l’uso della condroitina sintetasi da Pasteurella multocida, un enzima che catalizza la sintesi di condroitina a partire dai corrispondenti UDP zuccheri. US 20070015249 e US 20030109693 descrivono la produzione di una condroitina sintetasi da E. coli K4 e il suo impiego per la produzione in vitro di condroitina.
EP 1950308, WO 2007145197, WO 2007069693, WO 2007058252, WO 2007058252 e WO 2007023867 descrivono metodi di sintesi in vitro di condroitina e derivati che utilizzano la condroitina sintetasi da E. coli K4 e suoi mutanti, che presentano una sola delle due attività trasferasiche.
US 7,273,729, JP 2004024208, US 20060052335, US 20060057697 e US 7,232,676 descrivono l’uso della condroitina sintetasi umana, un enzima che catalizza la sintesi di condroitina a partire dai corrispondenti UDP zuccheri. I documenti descrivono la struttura della condroitina sintetasi umana, un vettore di espressione che comprende la sequenza dell’enzima, l’espressione di tale vettore in cellule eucariotiche e un metodo per sintetizzare la catena polisaccaridica della condroitina.
US 20070059805 descrive la struttura della condroitina sintetasi umana, un vettore di espressione che comprende la sequenza dell’enzima, l’espressione di tale vettore in cellule eucariote e un metodo per sintetizzare la catena polisaccaridica della condroitina.
Tutti i documenti in precedenza citati considerano la condroitina un intermedio per la sintesi di condroitina solfato, solo genericamente in alcuni di essi si cita la possibilità di un utilizzo della condroitina in composizioni non meglio definite come nel caso di US 20110244520 (claim 63) e di WO 0180810 (claim 73); in quest’ultimo documento va sottolineato che a pag 4-5, la condroitina à ̈ definita come un “polymer more inert, loosely speaking, than analogous HA molecule†.
L’acido ialuronico à ̈ il solo glicosamminoglicano per il quale à ̈ stato proposto l’uso come veicolatore di principi attivi. Esiste in proposito un’ampia letteratura scientifica e brevettuale che documenta, in maniera non sempre concordante, la capacità dell’acido ialuronico di permeare la pelle e le pareti delle mucose, con alcune criticità in relazione al peso molecolare.
Il trasporto transcutaneo del diclofenac ad opera dell’acido ialuronico à ̈ stato ampiamente studiato in vitro, in vivo e in studi clinici (Brown et al.
2002, in Hyaluronan: Biomedical, Medical and Clinical Aspects, eds. J. Kennedy, G.O. Phillips, P. A. Williams, and V. Hascall, 249-256. Cambridge: Woodhead Publishers; Brown et al. 1995, in Hyaluronan in Drug Delivery, ed. D.A. Willoughby, 48-52. London: Royal Society of Medicine Press; Brown et al. 1995, in Hyaluronan in Drug Delivery, ed. D.A. Willoughby, 53-71, London: Royal Society of Medicine Press; Brown et al., 1995, Int. J. Tissue Reactions- Exp. Clin. Aspects 17:133-140; Brown and Moore, 1996, in Hyaluronan in Drug Delivery, ed. D. A. Willoughby, 121-131. London: Royal Society of Medicine Press; McEwan, and Smith, 1997, Aust. J. Derm. 38:187-189; Nazir et al., 2001, Pharm. Sci.
3(suppl.):1429).
Nel loro complesso questi studi hanno dimostrato che in vitro l’acido ialuronico migliora in modo significativo l’assorbimento nella pelle umana del diclofenac, che però rimane localizzato nell’epidermide (McEwan and Smith, 1997, Aust. J. Derm. 38:187-189; Wolf et al., 2001, Int. J. Dermatol.
40:709-713; Brown et al., 1995, In Hyaluronan in Drug Delivery, ed. D.A. Willoughby, 53-71, London: Royal Society of Medicine Press; Brown, et al., 1995, in Hyaluronan in Drug Delivery, ed. D.A. Willoughby, 48-52. London: Royal Society of Medicine Press; Lin and Maibach, 1996, In Hyaluronan in Drug Delivery, ed. D. Willoughby, 167-174. London: R.S. M. Press.; Brown, et al;. 1999, J. Invest. Dermatol. 113:740-746).
Un comportamento analogo dell’acido ialuronico, con localizzazione del farmaco a livello dell’epidermide à ̈ riportato per altri principi attivi come ibuprofene (Brown et al., in Hyaluronan: Biomedical, Medical and Clinical Aspects, eds. J. Kennedy, G.O. Phillips, P.A. Williams, and V. Hascall, 249-256. Cambridge: Woodhead Publishers; Brown and Martin, 2001, Int. J. Pharm. 225:113-121), clindamicina fosfato (Amr, 2000, Proc. Millen. Cong. Pharma. Sci. A80) e ciclosporina (Brown and Moore, 1996, in Hyaluronan in Drug Delivery, ed. D.A. Willoughby, 121-131. London: Royal Society of Medicine Press; Nazir et al., 2001, Pharm. Sci. 3(suppl.):1429).
Su questi razionali US 5639738 e US5792753 rivendicano l’associazione di acido ialuronico con peso molecolare compreso tra 150 e 750 KDa e NSAID per il trattamento di cheratosi attiniche e US 5852002 rivendica l’associazione di acido ialuronico con peso molecolare ancora compreso tra 150 e 750 KDa con antibiotici, antibatterici, antimicrobici e loro combinazioni per il trattamento di infezioni.
Studi comparativi basati sull’impiego della cella di Franz equipaggiata con pelle umana dimostrano che solo l’acido ialuronico e non altri glicosaminoglicani come la condroitina solfato e l’eparina (Brown et al., 2001, International J. of Pharmaceutics, 225, 113-121), presenta capacità di trasporto nella pelle di diclofenac e ibuprofene.
Il gel Solaraze®, a base di acido ialuronico e diclofenac, ha ottenuto negli USA, in Canada e in Europa l’approvazione regolatoria per il trattamento di cheratosi attiniche.
Descrizione dell’invenzione
Sorprendentemente à ̈ stato trovato che la condroitina con peso molecolare compreso tra 5 e 100 KDa, a differenza di quanto riportato per la condroitina solfato, quando applicata sulla pelle in formulazioni idonee, attraversa lo stato corneo, penetra nell’epidermide ed à ̈ trasportata nell’organismo dal flusso ematico.
L’invenzione riguarda pertanto l’uso di condroitina come carrier transdermico e sistema a lento rilascio di principi attivi in composizioni farmaceutiche e cosmeceutiche.
L’invenzione ha inoltre per oggetto complessi non covalenti di condroitina non solfatata con principi attivi che sono assorbiti attraverso la pelle e le mucose. Detti complessi si comportano come sistemi a lento rilascio del principio attivo.
Esempi di principi attivi utilizzabili secondo l'invenzione sono anti-infiammatori non steroidei o steroidei, anti-tumorali, anti-virali, antimicrobici, diuretici, contraccettivi, analgesici, broncodilatatori, anticorpi monoclonali, immunosoppressori, vasocostrittori o vasodilatatori, antiossidanti, lenitivi, idratanti, drenanti, biostimolanti, radical scavengers, antirughe, composti per la crescita dei capelli, peptidi bioattivi, impiegati singolarmente o in combinazioni tra di loro.
In generale i complessi non covalenti della condroitina con principi attivi sono preparati aggiungendo l'attivo a soluzioni acquose o acquoso-organiche di condroitina. Per ottenere il complesso in forma solida il solvente à ̈ allontanato per evaporazione sotto vuoto o per liofilizzazione. I rapporti molari fra attivo e unità monomerica della condroitina possono variare entro limiti molto ampi, ad esempio da 0.05 a 1 mole di principio attivo per unità monometrica a seconda dei dosaggi previsti per gli attivi considerati.
I complessi così ottenuti sono quindi formulati utilizzando tecniche ed eccipienti convenzionali, in adatte composizioni, in particolare per la somministrazione topica, nasale, rettale o vaginale. Tali composizioni, che costituiscono un ulteriore oggetto dell'invenzione, possono eventualmente contenere anche altri ingredienti. Le composizioni dell'invenzione possono essere in forma di soluzioni, emulsioni, gel, creme, spray, supposte, colliri, maschere, patch, medicazioni o cerotti.
Le formulazioni dell'invenzione possono anche essere ottenute direttamente dalla soluzione del complesso per aggiunta di emulsionanti, stabilizzanti, tensioattivi, conservanti, profumanti, in funzione della tipologia di prodotto che si vuole ottenere (creme, gel, emulsioni W/O o O/W, latti, maschere, etc).
L'assorbimento transcutaneo della condroitina à ̈ stato valutato impiegando condroitina marcata con trizio ottenuta per via biosintetica e topi nudi Charles River. La sperimentazione dimostra che la condroitina somministrata per via topica, indipendentemente dal suo peso molecolare, à ̈ assorbita attraverso la cute in maniera efficace, per poi essere distribuita dal flusso ematico nell’intero organismo. Dopo 1 h dall’applicazione circa il 50% della dose applicata si localizza nella pelle e solo in minima parte si distribuisce nell’organismo. A tempi più lunghi l’assorbimento a livello cutaneo cresce ulteriormente, così come il processo di distribuzione sistemico mediato dal flusso ematico. A 20 h l’escrezione urinaria della radioattività interessa circa il 25% della radioattività somministrata.
Si à ̈ inoltre trovato che la condroitina si comporta come un sistema a lento rilascio di principi attivi. Infatti, le sue caratteristiche strutturali rendono possibile l'interazione con molecole a basso peso molecolare per mezzo di forze attrattive di natura diversa, che possono agire singolarmente o in sinergia tra di loro, quali interazioni ioniche complementari, interazioni idrofobiche e idrofile, legami a ponti di idrogeno. Queste interazioni si rompono in soluzioni acquose, ma si riformano continuamente a causa della presenza a distanza utile di nuove possibilità di interazione con differenti siti della stessa catena polimerica. Un tale comportamento di fatto riduce la mobilità del composto legato, che rimane a lungo intrappolato in una gabbia di forze attrattive generate dalla catena polimerica. Ovviamente il complesso non covalente gradualmente si risolve nel tempo, in un sistema aperto, con una cinetica che dipende dallo stato di diluizione e dalla presenza di altre specie chimiche.
Uno studio di equilibrio di dialisi, in cui la soluzione del complesso à ̈ racchiusa all’interno di un tubo da dialisi con cut off 2KDa, mentre all’esterno vi à ̈ un volume di acqua 20 volte maggiore, dimostra che in questo sistema sperimentale complessi diclofenac-condroitina di differente stechiometria si comportano come sistemi a rilascio controllato del principio attivo, con il raggiungimento dell’equilibrio di dialisi in tempi superiori alle 10 h, che si allungano con il diminuire del rapporto diclofenac-condroitina nel complesso. Nel sistema in cui à ̈ presente solo diclofenac l’equilibrio di dialisi à ̈ già raggiunto a 2 h.
La contestuale capacità della condroitina di attraversare lo strato corneo della pelle e la superficie delle mucose, coniugata con la capacità di formare complessi non covalenti, rendono pertanto questo polisaccaride un ottimo carrier per veicolare nell’uomo principi attivi di differente natura.
Studi in vitro su pelle umana in cella di Franz dimostrano l’effetto carrier e il meccanismo di rilascio della condroitina quando forma complessi non covalenti con differenti principi attivi come il diclofenac e il ketorolac. Le stesse evidenze si ottengono con sperimentazioni con applicazioni topiche di questi complessi su topi nudi.
Di seguito, si riportano esempi che meglio descrivono l’invenzione. ESEMPIO 1 - Preparazione di [<3>H]condroitina a differente peso molecolare
La [<3>H]condroitina à ̈ ottenuta per via biosintetica utilizzando, come descritto in WO 2010136435, un ceppo ingegnerizzato di E. coli K4 che produce il polisaccaride K4, un derivato della condroitina che a livello del C3 dell’acido glucuronico presenta residui di β-fruttofuranosio eliminato quantitativamente con una idrolisi blanda con acido acetico. Per radio-marcare la condroitina si addiziona [<3>H]galattosio al terreno di coltura. La [<3>H]condroitina, purificata come descritto in WO 2010136435, ha un peso molecolare di 62 KDa. Per essere utilizzata nella successiva sperimentazione à ̈ diluita con condroitina non marcata dello stesso peso molecolare per avere un prodotto con una radioattività specifica di 1,5x10<7>dpm/mg. Per ottenere condroitina di peso molecolare 35 e 10 KDa, la [<3>H]condroitina MW 62 KDa, con una radioattività specifica di 1,5x10<7>dpm/mg à ̈ sottoposta a idrolisi acida controllata in fase eterogenea. In una procedura standard 100 mg di [<3>H]condroitina sono sospesi in 1 mL di etanolo (93% v/v) contenente 33 µL di HCl, si incuba sotto agitazione in un Vortemp a 55°C e 900 rpm. L’idrolisi dura rispettivamente 40’ per ottenere un MW di 35 KDa e 90’ per ottenere un MW di 10 KDa. Raggiunto il MW desiderato, la reazione à ̈ bloccata in ghiaccio, neutralizzando con 21 µL di NaOH 50% p/v, si lascia poi ad agitare ancora per 30’e si centrifuga a 5.000 g per 15’. Si rimuove il surnatante e si lava con 1 mL di etanolo (93% v/v). L’operazione di lavaggio à ̈ ripetuta una seconda volta utilizzando etanolo anidro. Dopo centrifugazione il pellet à ̈ essiccato per 16 h in stufa a 40°C sotto vuoto. L’analisi del peso molecolare della condroitina à ̈ realizzata con un sistema cromatografico a esclusione molecolare equipaggiato con un multy detector, costituito da un viscosimetro a quattro ponti, un rifrattometro, un right angle light scattering detector (RALS) e un low angle light scattering detector (LALS), brevettato dal gruppo americano Viscotek (www.viscotek.com). Il segnale misurato col LALS à ̈ proporzionale al peso molecolare e alla concentrazione, quello misurato col rivelatore viscosimetrico à ̈ proporzionale alla concentrazione del campione e alla viscosità intrinseca, mentre il rifrattometro consente la misura della concentrazione. L’apparecchiatura Viscotek non solo consente di determinare il peso molecolare, ma anche di valutare il grado di eterogeneità del peso molecolare nella popolazione di molecole presenti, descritto dall’indice di polidispersione Mw/Mn, automaticamente calcolato dall’apparecchiatura Viscotek, e definito come rapporto tra peso molecolare medio (Mw = ∑imiMi/ ∑imidove mià ̈ la massa di polimero con peso molecolare Mie ∑imià ̈ la massa totale del polimero, espressione che, posto mi= niMisi può anche presentare come Mw = ∑<2>
iniMi/ ∑iniMi)e peso molecolare ponderale (Mn = ∑iniMi/ ∑inidove niMià ̈ la massa di polimero con peso molecolare Mi e ∑i ni à ̈ il numero totale di moli di polimero presenti). Il valore della polidispersione nei campioni di [<3>H]condroitina a differente peso molecolare (62, 35 e 10) non supera 1,2.
Per verificare la specificità del sito di marcatura un campione di [<3>H]condroitina à ̈ sottoposto a idrolisi acida spinta in soluzione acquosa a 100°C per causare la totale rottura dei legami glicosidici. Un campione della miscela di idrolisi à ̈ analizzato mediante HPLC. Per la quantificazione di GlcA e GalNAc e GalNH à ̈ stata utilizzata una colonna analitica Carbopac PA1 4x250 mm munita di precolonna Carbopac PA1 4 x 50 mm (Dionex Srl, San Donato Milanese, Italia) operanti ad un flusso di 1 mL/min. Sia gli standard che i campioni sono stati analizzati secondo un metodo di separazione in gradiente con i seguenti eluenti: Eluente A NaOH 150 mM, Eluente B NaOH 150 mM Na Acetato 1M. Il gradiente utilizzato à ̈ (Tempo in min, % eluente A, % eluente B): T0, A90, B10; T20, A80, B20; T30, A50, B50; T35, A90, B10; T40, A100, B0). La rivelazione à ̈ stata ottenuta mediante Detector ad amperometria pulsata (elettrodo di riferimento AgCl) con Waveform Carbohydrates. La miscela di idrolisi si risolve in tre picchi, corrispondenti rispettivamente ai tempi di ritenzione dell’acido glucuronico, della galattosammina e in tracce della N-acetil-D-galattosammina. Gli eluati in corrispondenza dei picchi sono raccolti e letti per radioattività in liquido di scintillazione. La radioattività per il 75% si ritrova associata ai picchi della galattosammina e della N-acetil-D-galattosammina.
Per la successiva sperimentazione sul modello animale si preparano tre gel di [<3>H]condroitina che contengono ciascuno per grammo 100 mg di glicole polietilenico, 1 mg di alcol benzilico 879 mg di acqua e 20 mg di [<3>H]condroitina (3x10<8>dpm) rispettivamente di MW 62, 35 e 10 KDa.
ESEMPIO 2 - Assorbimento topico di condroitina a differente peso molecolare
Come modello sperimentale per valutare l’assorbimento transcutaneo della condroitina si utilizzano 60 topi nudi Charles River di entrambe i sessi di 5 mesi di età . Gli animali in maniera casuale sono divisi in 12 gruppi di 5 che, come riportato nel disegno sperimentale di tabella 1, sono trattati con 50 mg di gel di [<3>H]condroitina con differente MW, preparata come descritto nell’esempio 1. Durante la sperimentazione gli animali sono mantenuti in gabbie singole, con libero accesso al cibo e all’acqua.
Dopo 1, 5, 10 e 20 h dall’applicazione, come riportato nel disegno sperimentale di tabella 1, gli animali sono sacrificati. Immediatamente dopo il sacrificio si procede a un accurato lavaggio della zona di applicazione del gel, fino a non ritrovare tracce apprezzabili di radioattività nelle acque di lavaggio, per potere discriminare tra radioattività applicata e radioattivitÃ
assorbita a livello cutaneo. Dagli animali sacrificati si procede al recupero
della zona di pelle trattata, del fegato e del sangue, immediatamente dopo il
prelevamento i campioni sono pesati e congelati. Dalle gabbie si recuperano
le urine degli animali mediante lavaggio.
animali trattamento tempo del sacrificio (h) 1-5 1
6-10 5
[<3>H]condroitina MW 62 KDa
11-15 10
16-20 20
21-25 1
26-30 5
[<3>H]condroitina MW 35 KDa
31-35 10
36-40 20
41-45 1
46-50 5
[<3>H]condroitina MW 10 KDa
51-55 10
56-60 20
Tabella 1 - Disegno sperimentale, 60 topi nudi Charles River di
entrambi i sessi di 5 mesi di età sono divisi in maniera casuale in 12 gruppi di
5 animali. Sul dorso di ciascun animale viene contrassegnata un’area di circa
5-6 cm<2>, localizzata in una zona in cui risulta difficile agli animali leccarsi o
grattarsi. Su questa area si applicano con una spatola 50 mg di gel di
[<3>H]condroitina, per gli animali da 1 a 20 di MW 62 KDa, per gli animali da
21 a 40 di MW 35 KDa e per gli animali da 41 a 60 di MW 10 KDa.
Campioni (150-200 mg) di pelle, fegato e sangue sono solubilizzati in
Soluene per 24 h a temperatura ambiente. Sui campioni solubilizzati e sulle
urine à ̈ misurata la radioattività mediante scintillazione in fase liquida. Nelle tabelle 2-4 sono riportati i dati sperimentali.
1h 5h 10h 20h
Campione
% della dose applicata
pelle 52±10 73±14 50±12 5±2
fegato 0,1±0,04 2,2±0,5 3,1±0,3 1,1±0,2
sangue 0,5±0,1 8,2±1,3 6,9±2,1 3,1±1,6
urine - 2,3±1,2 5,9±4,3 24,8±10,2
Tabella 2 - Distribuzione della radioattività in topi nudi trattati per via
topica con un gel di [<3>H]condroitina (3x10<8>dpm) MW 62 KDa. Ciascun dato
rappresenta la media di 5 animali.
1h 5h 10h 20h
Campione
% della dose applicata
pelle 49±8 74±10 53±13 8±3
fegato 0,1±0,02 2,0±0,7 3,4±0,5 1,3 ±0,4
sangue 0,7±0,2 8,8 ±1,9 6,6±2,4 3,8±1,5
urine - 2,6±1,3 7,1±4,0 26,3±11,4
Tabella 3 - Distribuzione della radioattività in topi nudi trattati per via
topica con un gel di [<3>H]condroitina (3x10<8>dpm) MW 35 KDa. Ciascun dato
rappresenta la media di 5 animali.
1h 5h 10h 20h
Campione
% della dose applicata
Pelle 58±0,9 78±15 51±9 6,2±1,9
Fegato 0,1±0,04 2,2±0,6 3,8±0,5 1,4±0,3
Sangue 0,9±0,2 8,2±1,4 6,9±3,4 3,3±1,3
Urine - 2,5±1,9 6,1±3,3 24,9±13,2
Tabella 4 - Distribuzione della radioattività in topi nudi trattati per via
topica con un gel di [<3>H]condroitina (3x10<8>dpm) MW 10 KDa. Ciascun dato
rappresenta la media di 5 animali.
I dati ottenuti dimostrano che la condroitina per via topica à ̈ assorbita attraverso la cute in maniera efficace, per poi essere distribuita dal flusso ematico nell’intero organismo, indipendentemente dal suo peso molecolare. Dopo 1 h dall’applicazione circa il 50% della dose applicata si localizza nella pelle e solo in minima parte si distribuisce nell’organismo. A tempi più lunghi l’assorbimento a livello cutaneo cresce ulteriormente, così come il processo di distribuzione sistemico mediato dal flusso ematico. A 20 h l’escrezione urinaria della radioattività interessa circa il 25% della radioattività somministrata.
ESEMPIO 3 - Preparazione di complessi non covalenti diclofenaccondroitina con differente composizione stechiometrica
Preparazione del complesso della condroitina con l’acido 2-(2-[2,6-diclorofenilammino] fenil) etanoico, detto anche diclofenac.
Si preparano complessi diclofenac-condroitina con rapporti molare diclofenac unità monomerica della condroitina di 0,630, 0,315 e 0,063.
Preparazione del complesso diclofenac-condroitina con un rapporto molare di 0,630. 5 g di diclofenac sodico sono sciolti a 50°C sotto energica agitazione in 100mL di una soluzione acquosa di condroitina sodica al 10% p/v MW 62 KDa.
Preparazione del complesso diclofenac-condroitina con un rapporto molare di 0,315. 2,5 g diclofenac sodico sono sciolti a 50°C sotto energica agitazione in 100mL di una soluzione acquosa di condroitina sodica al 10% p/v MW 35 KDa.
Preparazione del complesso diclofenac-condroitina con un rapporto molare di 0,063. 0,5 g diclofenac sodico sono sciolti a 50°C sotto energica agitazione in 100mL di una soluzione acquosa di condroitina sodica al 10% p/v MW 10 KDa.
Le forme solide di questi complessi sono ottenute per allontanamento del solvente sotto vuoto a 50°C o in alternativa per liofilizzazione delle soluzioni. I complessi solidi si solubilizzano rapidamente in acqua.
ESEMPIO 4 - Studi in vitro di rilascio graduale di diclofenac da complessi non covalenti diclofenac-condroitina di differente stechiometria Per valutare in maniera differenziale il meccanismo di rilascio del diclofenac da complessi non covalenti con la condroitina di differente stechiometria si à ̈ messo a punto uno studio di equilibrio di dialisi, in cui la soluzione del complesso e racchiusa all’interno di un tubo da dialisi con cut off 2 KDa, mentre all’esterno vi à ̈ un volume di acqua 20 volte maggiore. Il sistema à ̈ mantenuto sotto continua agitazione a 25°C e nel tempo si legge l’assorbimento a 275 nm a cui il diclofenac presenta il massimo di assorbimento. In questo modo poiché solo il diclofenac può attraversare la membrana dialitica, considerato la notevole differenza di volume tra soluzione dializzata e mezzo di dialisi, l’aumento di assorbimento a 275 nm può essere ricondotto alla quantità di diclofenac che si allontana dal complesso con la condroitina. In tabella 5 sono riportati i dati della sperimentazione.
Stechiometria del % OD275* presente a differenti tempi (h) nel complesso mezzo di dialisi
(moli Diclofenac/moli
condroitina)<1 2 4 8 16>0,630 30 48 71 82 95 0,315 21 33 56 68 91 0,063 13 20 45 59 79 Solo diclofenac** 85 94 96 95 96 *Date uguali a 100 le OD275presenti nel complesso diclofenac-condroitina nel tubo di dialisi si riporta la percentuale di OD275complessivamente recuperate nella soluzione di dialisi ai differenti tempi; **Nel tubo da dialisi sono introdotti 100 mL di soluzione acquosa contenente 5% p/v di diclofenac sale sodico.
Tabella 5 - Studio di equilibrio di dialisi, in cui 100 mL di soluzione acquosa del complesso sono presenti all’interno di un tubo da dialisi con cut off 2 KDa, mentre all’esterno vi à ̈ un volume di acqua di 2L. Il sistema à ̈ mantenuto sotto continua agitazione a 25°C e nel tempo si legge l’assorbimento a 275 nm a cui il diclofenac presenta il massimo di assorbimento.
Lo studio dimostra che in questo sistema sperimentale i complessi diclofenac-condroitina di differente stechiometria si comportano come sistemi a rilascio controllato del principio attivo, con il raggiungimento dell’equilibrio di dialisi in tempi superiori alle 10 h, che si allungano con il diminuire del rapporto diclofenac-condroitina nel complesso. Nel sistema in cui à ̈ presente solo diclofenac l’equilibrio di dialisi é già raggiunto a 2 h.
ESEMPIO 5 - Studi in vitro di assorbimento transcutaneo di complessi non covalenti diclofenac-condroitina
Lo studio à ̈ condotto utilizzando la cella di Franz equipaggiata con un campione di pelle umana proveniente da un intervento di chirurgia plastica per riduzione del seno di una donna di 45 anni sana. La pelle appena prelevata à ̈ immediatamente congelata a -20°C fino al momento dell’uso. Prima della collocazione nelle celle di Franz la pelle ancora congelata à ̈ ripulita del grasso sottocutaneo, in modo da utilizzare solo lo strato corneo, l’epidermide e il derma, e tagliata alle dimensioni idonee per la collocazione nella cella di Franz, con lo strato corneo rivolto verso l’alto. Prima di partire con la sperimentazione la cella à ̈ mantenuta per 10 h a 30°C con una continua agitazione della soluzione ricevente costituita da 10 mL di HBSS (Hank’s Buffered Saline Solutions). La superficie su cui si depone il formulato à ̈ di circa 3 cm<2>. Prima di partire con l’applicazione del gel nelle celle si sostituisce la soluzione ricevente, avendo cura di eliminare ogni bolla d’aria tra pelle e soluzione. Sulla superficie della pelle si applicano 10 mg dei seguenti gel: a) diclofenac gel (per grammo di gel 100 mg di glicole polietilenico, 1 mg di alcol benzilico, 200 mg di diclofenac sodico e acqua a 1 g, si scioglie a 50°C sotto energica agitazione); b) diclofenac-condroitina gel (0,630 moli diclofenac/moli unità disaccaridiche condroitina; per grammo di gel 100 mg di glicole polietilenico, 1 mg di alcol benzilico, 200 mg di condroitina MW 35 KDa, 100 mg di diclofenac sodico e acqua a 1 g, si scioglie a 50°C sotto energica agitazione); c) diclofenac-condroitina solfato gel (0,630 moli diclofenac/moli unità disaccaridiche condroitina solfato; per grammo di gel 100 mg di glicole polietilenico, 1 mg di alcol benzilico, 279,6 mg di condroitina solfato MW 35,4 KDa, 100 mg di diclofenac sodico e acqua a 1 g, si scioglie a 50°C sotto energica agitazione).
Ai tempi indicati si recupera la fase ricevente e si lava accuratamente la superficie della pelle in modo da allontanare tutto il gel rimasto non assorbito. Si recupera la pelle, si omogeneizza e si fa digerire per 10 h sotto agitazione a 30°C con collagenasi (5.200 IU/g di pelle) in tampone fosfato 10 mM pH 7,4. Al termine dell’incubazione si aggiungono 0,4 volumi di etanolo e si centrifuga a 10.000 rpm per 20’. In queste condizioni la quasi totalità del diclofenac presente nel tessuto à ̈ estratto nella soluzione. La quantità di diclofenac presente nella soluzione di lavaggio della pelle (parte non assorbita), nel digerito enzimatico del tessuto (parte assorbita a livello
cutaneo) e nel fluido recettore (parte che ha attraversato la struttura cutanea)
sono determinati in maniera quantitativa mediante HPLC. Le analisi sono
eseguite su un HPLC Waters modello 746 (USA), equipaggiato con una
colonna µ-bondapack C18 (150 x 4,6 millimetri). Come fase mobile si utilizza
una soluzione acetonitrile, acqua deionizzata, acido ortofosforico (45:54.5:0.5
in vol.) con pH finale di 3,5, operando con un flusso di 1 mL/min. L’eluato à ̈
monitorato a 276 nm. La quantificazione à ̈ ottenuta mediante misurazione dei
rapporti tra l’area del picco del diclofenac e quella dello standard interno
costituito da una soluzione di naprossene a titolo noto.
In tabella 6 sono riportati i risultati dello studio.
Campione ditempo % della dose di diclofenac applicata gel contenente<(h)>sulla pelle* nella pelle<nel fluido>recettore1 96 2 0 Diclofenac5 91 3,5 0,9
10 89 3,1 1,8
Diclofenac- 1 82 11,4 3,8 Condroitina 5 75 18,2 7,5
10 69 16,5 11,9Diclofenac - 1 98 nd Nd Condroitina 5 95 2.7 1,1<solfato>10 91 2,9 1,6
*quantità di diclofenac presente alla fine della sperimentazione nella
soluzione di lavaggio della superficie della pelle montata nella cella di Franz.
Tabella 6 - Studio sull’assorbimento del diclofenac su pelle umana
utilizzando la cella di Franz.
Come si rileva dall’analisi dei dati di tabella 6 l’assorbimento del diclofenac
in presenza di condroitina aumenta significativamente rispetto a quanto si osserva
in assenza del polisaccaride o in presenza di condroitina solfato.
ESEMPIO 6 - Studi in vivo di assorbimento transcutaneo di
complessi condroitina-diclofenac
Come modello sperimentale per valutare l’assorbimento transcutaneo
del complesso diclofenac-condroitina si utilizzano 45 topi nudi Charles River
di entrambe i sessi di 5 mesi di età . Gli animali in maniera casuale sono divisi
in 9 gruppi di 5 che, come riportato nel disegno sperimentale di tabella 7 sono
trattati con 50 mg dei tre gel a) diclofenac gel, b) diclofenac-condroitina gel,
c) diclofenac condroitina solfato gel, preparati come riportato nell’esempio 5.
Durante la sperimentazione gli animali sono mantenuti in gabbie singole, con
libero accesso al cibo e all’acqua.
animali Trattamento tempo del sacrificio (h) 1-5 1
6-10 Diclofenac gel 5
11-15 10
16-20 1
21-25 Diclofenac-condroitina gel 5
26-30 10
31-35 1
36-40 Diclofenac-condroitina solfato gel 5
41-55 10
Tabella 7 - Disegno sperimentale, 45 topi nudi Charles River di
entrambe i sessi di 5 mesi di età sono divisi in maniera casuale in 9 gruppi di
5 animali. Sul dorso di ciascun animale viene contrassegnata un’area di circa
5-6 cm<2>, localizzata in una zona in cui risulta difficile agli animali leccarsi o
grattarsi. Su questa area si applicano con una spatola 50 mg di diclofenac gel,
per gli animali da 1 a 15, di diclofenac-condroitina gel per gli animali da 16 a
30 e di diclofenac condroitina solfato gel per gli animali da 31 a 45.
Dopo 1, 5, 10 h dall’applicazione, come riportato nel disegno sperimentale di tabella 7, gli animali sono sacrificati. Immediatamente dopo il
sacrificio si procede a un accurato lavaggio della zona di applicazione del gel
per potere discriminare tra radioattività applicata e radioattività assorbita a
livello cutaneo. Dagli animali sacrificati si procede al recupero della zona di
pelle trattata, del fegato e del sangue; immediatamente dopo il prelevamento i
campioni sono pesati e congelati. Dalle gabbie si recuperano le urine degli
animali mediante lavaggio. I campioni di pelle e di fegato sono solubilizzati
per trattamento enzimatico con collagenasi e la quantità di diclofenac presente
à ̈ determinata mediante HPLC come riportato nell’esempio 5. Il contenuto di
diclofenac nel siero e nelle urine à ̈ determinato analogamente mediante
HPLC.
Nelle tabelle 8-10 sono riportati i dati sperimentali.
Tempo del sacrificio (h)
Campione1 5 10
% della dose applicata
pelle 0,8±0,3 1,2±0,5 3±0,4 fegato Nd nd 0,1±0,03 siero Nd nd 0,5±0,12 urine Nd nd 0,9±0,3
Tabella 8 - Distribuzione della radioattività in topi nudi trattati per via
topica con diclofenac gel. Ciascun dato rappresenta la media di 5 animali.
Tempo del sacrificio (h)
Campione1 5 10
% della dose applicata
pelle 49±13 69±15 45±10 fegato Nd 1,2±0,3 3,1±0,7 siero 0,9±0,3 6,1±1,4 3,1±1,1 urine Nd 1,9±1,5 7,9±5,1
Tabella 9 - Distribuzione della radioattività in topi nudi trattati per via topica con diclofenac-condroitina gel. Ciascun dato rappresenta la media di 5
animali.
Tempo del sacrificio (h)
Campione1 5 10
% della dose applicata
pelle 2±1 3±1,5 7±2,3 fegato nd nd 1,1±0,4 siero nd 1,0±0,3 0,9±0,3 urine nd 0,3±0,1 2,1±1,3
Tabella 10 - Distribuzione della radioattività in topi nudi trattati per via
topica con diclofenac-condroitina solfato gel. Ciascun dato rappresenta la
media di 5 animali.
I dati delle tabelle 8-10 dimostrano che la condroitina e non la
condroitina solfato funziona da efficiente carrier transdermico del diclofenac
che si ritrova non solo localizzato nella pelle ma anche distribuito a livello
sistemico. Il diclofenac da solo ha un assorbimento transcutaneo decisamente
inferiore a quello che si riscontra nel caso del complesso non covalente con
condroitina.
ESEMPIO 7 - Studi in vitro di assorbimento transcutaneo di
complessi non covalenti ketorolac-condroitina
L’acido (±)-5-benzoil-2,3-diidro-1H-pirrolizin-1-carbossilico o
ketorolac sale di trometamina, meglio conosciuto con il nome commerciale di
toradol à ̈ un FANS di largo impiego come antiinfiammatorio, nonostante gli
importanti effetti collaterali connessi con un suo uso prolungato. Lo studio
sull’assorbimento topico di questo principio attivo, come complesso non
covalente con la condroitina, à ̈ condotto secondo le modalità descritte
nell’esempio 5 utilizzando la cella di Franz equipaggiata con un campione di pelle umana proveniente da un intervento di chirurgia plastica per riduzione del seno di una donna di 33 anni sana. Sulla superficie della pelle si applicano 10 mg dei seguenti gel: a) ketorolac sale di trometamina gel (per grammo di gel 100 mg di glicole polietilenico, 1 mg di alcol benzilico, 200 mg di ketorolac sale di trometamina e acqua a 1 g, si scioglie a 50°C sotto energica agitazione); b) ketorolac sale di trometamina-condroitina gel (0,535 moli ketorolac sale di trometamina /moli unità disaccaridiche condroitina; per grammo di gel 100 mg di glicole polietilenico, 1 mg di alcol benzilico, 200 mg di condroitina MW 62 KDa, 100 mg di ketorolac sale di trometamina e acqua a 1 g, si scioglie a 50°C sotto energica agitazione).
Le procedure di trattamento dei campioni sono quelle riportate nell’esempio 5. La quantità di ketorolac presente nella soluzione di lavaggio della pelle (parte non assorbita), nel digerito enzimatico del tessuto (parte assorbita a livello cutaneo) e nel fluido recettore (parte che ha attraversato la struttura cutanea) sono determinati in maniera quantitativa mediante HPLC. Le analisi sono eseguite su un HPLC Waters modello 746 (USA), equipaggiato con una colonna µ-bondapack C18 (150 x 4,6 millimetri). Come fase mobile si utilizza una soluzione acetonitrile, acqua deionizzata, acido ortofosforico (45:54.5:0.5 in vol.) con pH finale di 3,5, operando con un flusso di 1 mL/min. L’eluato à ̈ monitorato a 280 nm. La quantificazione à ̈ ottenuta mediante misurazione dei rapporti tra l’area del picco del ketorolac e quella dello standard interno costituito da una soluzione di naprossene a titolo noto.
In tabella 11 sono riportati i risultati dello studio.
Campione di geltempo % della dose di diclofenac applicata contenente<(h)>sulla pelle* nella pelle<nel fluido>recettore1 98 1 nd Ketorolac5 93 2,6 0,7
10 87 4,2 2,8 1 85 9,4 4,8<Ketorolac->Condroitina 5 79 11,6 8,2
10 70 14,2 10,8
*quantità di ketorolac presente alla fine della sperimentazione nella
soluzione di lavaggio della superficie della pelle montata nella cella di Franz.
Tabella 11 - Studio sull’assorbimento del ketorolac su pelle umana
utilizzando la cella di Franz.
Come si rileva dall’analisi dei dati di tabella 11 l’assorbimento del
ketorolac in presenza di condroitina aumenta significativamente rispetto a
quanto si osserva in assenza del polisaccaride.
Claims (7)
- RIVENDICAZIONI 1. Composizioni farmaceutiche e cosmeceutiche contenenti complessi non covalenti tra condroitina non solfatata e principi attivi.
- 2. Composizioni secondo la rivendicazione 1 per la somministrazione topica, nasale, rettale e vaginale.
- 3. Composizioni secondo le rivendicazioni da 1 a 2 comprendenti inoltre altri ingredienti.
- 4. Composizioni secondo le rivendicazioni da 1 a 3 in forma di soluzioni, emulsioni, gel, creme, spray, supposte, colliri, maschere, patch, medicazioni e cerotti.
- 5. Complessi non covalenti di condroitina non solfatata e principi attivi che sono assorbiti attraverso la pelle e le mucose e si comportano come carrier transdermico e sistemi a lento rilascio di principio attivo.
- 6. Complessi non covalenti secondo la rivendicazione 5, in cui il principio attivo à ̈ un anti-infiammatorio non steroideo o steroideo, un anti-tumorale, un anti-virale, un antimicrobico, un diuretico, un contraccettivo, un analgesico, un broncodilatatore, un anticorpo monoclonale, un immunosoppressore, un vaso costrittore o un vasodilatatore, un antiossidante, un lenitivo, un idratante, un drenante, un biostimolante, un radical scavenger, un antirughe, un composto per la crescita dei capelli, un peptide bioattivo, impiegati singolarmente o in combinazioni tra di loro.
- 7. Condroitina non solfatata come carrier transdermico e sistema a lento rilascio di principi attivi.
Priority Applications (14)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT001316A ITMI20121316A1 (it) | 2012-07-27 | 2012-07-27 | Complessi di condroitina ad assorbimento transcutaneo |
| PCT/EP2013/065733 WO2014016380A1 (en) | 2012-07-27 | 2013-07-25 | Chondroitin complexes for transcutaneous absorption |
| RU2015102000A RU2642612C2 (ru) | 2012-07-27 | 2013-07-25 | Комплексы на основе хондроитина для чрескожного всасывания |
| DK13747807.9T DK2877156T3 (da) | 2012-07-27 | 2013-07-25 | Chondroitinkomplekser til transkutan absorption |
| CA2880012A CA2880012C (en) | 2012-07-27 | 2013-07-25 | Chondroitin complexes for transcutaneous absorption |
| US14/416,669 US20150174258A1 (en) | 2012-07-27 | 2013-07-25 | Chondroitin complexes for transcutaneous absorption |
| HUE13747807A HUE048502T2 (hu) | 2012-07-27 | 2013-07-25 | Kondroitin komplexek transzkután abszorpcióra |
| PL13747807T PL2877156T3 (pl) | 2012-07-27 | 2013-07-25 | Kompleksy chondroitynowe do wchłaniania przezskórnego |
| ES13747807T ES2765199T3 (es) | 2012-07-27 | 2013-07-25 | Complejos de condroitina para absorción transcutánea |
| HK15110058.1A HK1209334A1 (en) | 2012-07-27 | 2013-07-25 | Chondroitin complexes for transcutaneous absorption |
| CN201380039164.9A CN104684542A (zh) | 2012-07-27 | 2013-07-25 | 用于经皮吸收的软骨素复合物 |
| EP13747807.9A EP2877156B1 (en) | 2012-07-27 | 2013-07-25 | Chondroitin complexes for transcutaneous absorption |
| US16/124,269 US10675270B2 (en) | 2012-07-27 | 2018-09-07 | Chondroitin complexes for transcutaneous absorption |
| CY20201100079T CY1122538T1 (el) | 2012-07-27 | 2020-01-30 | Συμπλεγματα χονδροϊτινης για διαδερμικη απορροφηση |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT001316A ITMI20121316A1 (it) | 2012-07-27 | 2012-07-27 | Complessi di condroitina ad assorbimento transcutaneo |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ITMI20121316A1 true ITMI20121316A1 (it) | 2014-01-28 |
Family
ID=46939794
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| IT001316A ITMI20121316A1 (it) | 2012-07-27 | 2012-07-27 | Complessi di condroitina ad assorbimento transcutaneo |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20150174258A1 (it) |
| EP (1) | EP2877156B1 (it) |
| CN (1) | CN104684542A (it) |
| CA (1) | CA2880012C (it) |
| CY (1) | CY1122538T1 (it) |
| DK (1) | DK2877156T3 (it) |
| ES (1) | ES2765199T3 (it) |
| HK (1) | HK1209334A1 (it) |
| HU (1) | HUE048502T2 (it) |
| IT (1) | ITMI20121316A1 (it) |
| PL (1) | PL2877156T3 (it) |
| RU (1) | RU2642612C2 (it) |
| WO (1) | WO2014016380A1 (it) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6011734B2 (ja) * | 2014-01-07 | 2016-10-19 | 株式会社村田製作所 | 構造材接合方法および接合構造 |
| CN108904449A (zh) * | 2018-08-20 | 2018-11-30 | 广州云雾雾化应用技术研究院（普通合伙） | 一种雾态软骨素在制备修复角膜的药物中的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1582214A2 (fr) * | 2004-03-24 | 2005-10-05 | Laboratoire Genevrier | Utilisation des chondroitine mono- et disulfates en thérapeutique |
| EP2106798A1 (en) * | 2008-04-02 | 2009-10-07 | Nestec S.A. | Sulfated unsaturated disaccharidic chondroitin sulfate in connective tissue protection and repair |
Family Cites Families (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0083367A1 (en) * | 1981-07-02 | 1983-07-13 | WALTON, Alan G. | Glycosaminoglycan drug complexes |
| CA1340994C (en) | 1989-09-21 | 2000-05-16 | Rudolf Edgar Dr. Falk | Treatment of conditions and disease |
| US5639738A (en) | 1992-02-20 | 1997-06-17 | Hyal Pharmaceutical Corporation | Treatment of basal cell carcinoma and actinic keratosis employing hyaluronic acid and NSAIDs |
| US5792753A (en) | 1991-07-03 | 1998-08-11 | Hyal Pharmaceutical Corporation | Compositions comprising hyaluronic acid and prostaglandin-synthesis-inhibiting drugs |
| BR9611523A (pt) * | 1995-11-13 | 1999-12-28 | Pitmy Int Nv | Meios de administração para drogas analgésicas, antiinflamatórias e antipiréticas contendo óxido nitroso e composições farmacêuticas contendo tais meios e drogas. |
| IT1289613B1 (it) | 1997-02-07 | 1998-10-15 | Inalco Spa | Polisaccaridi batterici o-solfatati |
| EP1073460A4 (en) | 1998-04-02 | 2001-05-23 | Univ Oklahoma | NUCLEIC ACID CODING FOR HYALURONAN SYNTHASE AND METHODS FOR USE |
| US6987023B2 (en) | 1998-04-02 | 2006-01-17 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | DNA encoding hyaluronan synthase from Pasteurella multocida and methods of use |
| US20030104601A1 (en) | 1999-04-01 | 2003-06-05 | Deangelis Paul L. | Chondroitin synthase gene and methods of making and using same |
| US6051587A (en) * | 1998-04-16 | 2000-04-18 | Medicure, Inc. | Treatment of iatrogenic and age-related hypertension and pharmaceutical compositions useful therein |
| US6482401B1 (en) * | 1998-12-23 | 2002-11-19 | Naturopathic Laboratories International, Inc. | Composition for the relief of joint pain and myofascial pain and method of preparing same |
| ITMI991465A1 (it) | 1999-07-02 | 2001-01-02 | Inalco Spa | Processo per la preparazione dei polisaccaridi k4 e k5 da escherichiacoli |
| ATE443756T1 (de) | 2000-04-25 | 2009-10-15 | Univ Oklahoma | Chondroitin synthasegen und verfahren zur dessen herstellung und anwendung |
| EP1270015A3 (en) * | 2001-06-29 | 2004-02-25 | Sankyo Company Limited | A complex comprising OCIF and Polysaccharide |
| JP4702819B2 (ja) | 2001-08-01 | 2011-06-15 | 生化学工業株式会社 | コンドロイチン合成酵素 |
| JP4101548B2 (ja) | 2001-08-10 | 2008-06-18 | 生化学工業株式会社 | コンドロイチン合成酵素及びそれをコードするｄｎａ |
| ITMI20012200A1 (it) | 2001-10-22 | 2003-04-22 | Ibsa Inst Biochimique Sa | Processo per la preparazione di condroitin solfati dal polisaccaride k4 e prodotti ottenuti |
| JP4171791B2 (ja) | 2002-04-30 | 2008-10-29 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 糖転移作用剤 |
| ATE414774T1 (de) | 2002-05-31 | 2008-12-15 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Chondroitinsynthetase und das enzym codierende dna |
| US7232676B2 (en) | 2002-05-31 | 2007-06-19 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Chondroitin synthase and nucleic acid encoding the enzyme |
| US7442682B2 (en) * | 2004-10-19 | 2008-10-28 | Nitto Denko Corporation | Transepithelial delivery of peptides with incretin hormone activities |
| US8129148B2 (en) | 2005-08-24 | 2012-03-06 | Seikagaku Corporation | Process for preparation of chondroitin fraction |
| JPWO2007058252A1 (ja) | 2005-11-17 | 2009-05-07 | 生化学工業株式会社 | コンドロイチンの製造方法 |
| US8067204B2 (en) | 2005-12-15 | 2011-11-29 | Seikagaku Corporation | Long-chain chondroitin sugar chain and method for producing the same and method for promoting synthesis of chondroitin |
| US7927837B2 (en) | 2006-06-12 | 2011-04-19 | Seikagaku Corporation | Modified chondroitin synthase polypeptide and crystal thereof |
| JP2010173990A (ja) * | 2009-01-30 | 2010-08-12 | Alpha-Nano-Medica Co Ltd | 遺伝子治療剤 |
| IT1394311B1 (it) | 2009-05-25 | 2012-06-06 | Altergon Sa | Produzione biotecnologica di condroitina |
| BR112012021995A8 (pt) * | 2010-03-01 | 2018-01-02 | Dsm Ip Assets Bv | Composição,célula hospedeira bacteriana não patogênica, método para a produção de um sulfato de condroitina,condroitina, composição e anticorpo ou fragmento de anticorpo |
| AU2011236044A1 (en) * | 2010-10-15 | 2012-05-03 | Mark Robinson | Compositions |
-
2012
- 2012-07-27 IT IT001316A patent/ITMI20121316A1/it unknown
-
2013
- 2013-07-25 ES ES13747807T patent/ES2765199T3/es active Active
- 2013-07-25 DK DK13747807.9T patent/DK2877156T3/da active
- 2013-07-25 CN CN201380039164.9A patent/CN104684542A/zh active Pending
- 2013-07-25 WO PCT/EP2013/065733 patent/WO2014016380A1/en not_active Ceased
- 2013-07-25 HU HUE13747807A patent/HUE048502T2/hu unknown
- 2013-07-25 EP EP13747807.9A patent/EP2877156B1/en active Active
- 2013-07-25 RU RU2015102000A patent/RU2642612C2/ru active
- 2013-07-25 HK HK15110058.1A patent/HK1209334A1/xx unknown
- 2013-07-25 PL PL13747807T patent/PL2877156T3/pl unknown
- 2013-07-25 CA CA2880012A patent/CA2880012C/en active Active
- 2013-07-25 US US14/416,669 patent/US20150174258A1/en not_active Abandoned
-
2018
- 2018-09-07 US US16/124,269 patent/US10675270B2/en active Active
-
2020
- 2020-01-30 CY CY20201100079T patent/CY1122538T1/el unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1582214A2 (fr) * | 2004-03-24 | 2005-10-05 | Laboratoire Genevrier | Utilisation des chondroitine mono- et disulfates en thérapeutique |
| EP2106798A1 (en) * | 2008-04-02 | 2009-10-07 | Nestec S.A. | Sulfated unsaturated disaccharidic chondroitin sulfate in connective tissue protection and repair |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2642612C2 (ru) | 2018-01-25 |
| ES2765199T3 (es) | 2020-06-08 |
| US20150174258A1 (en) | 2015-06-25 |
| WO2014016380A1 (en) | 2014-01-30 |
| EP2877156A1 (en) | 2015-06-03 |
| EP2877156B1 (en) | 2020-01-01 |
| CA2880012C (en) | 2021-05-04 |
| DK2877156T3 (da) | 2020-03-02 |
| CN104684542A (zh) | 2015-06-03 |
| HUE048502T2 (hu) | 2020-07-28 |
| CY1122538T1 (el) | 2021-01-27 |
| US20190000803A1 (en) | 2019-01-03 |
| RU2015102000A (ru) | 2016-09-20 |
| US10675270B2 (en) | 2020-06-09 |
| PL2877156T3 (pl) | 2020-07-27 |
| CA2880012A1 (en) | 2014-01-30 |
| HK1209334A1 (en) | 2016-04-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | Hyaluronic acid, an efficient biomacromolecule for treatment of inflammatory skin and joint diseases: A review of recent developments and critical appraisal of preclinical and clinical investigations | |
| FI107050B (fi) | Menetelmä silloitetun happaman karboksipolysakkaridin valmistamiseksi | |
| DK175661B1 (da) | Polysaccharidestere | |
| EP2569364B1 (en) | Topically administered, skin-penetrating glycosaminoglycan formulations suitable for use in cosmetic and pharmaceutical applications | |
| ES2600358T3 (es) | Procedimiento para la síntesis de conjugados de glicosaminoglicanos (GAG) con moléculas biológicamente activas, conjugados poliméricos y sus usos relativos | |
| EP3222269B1 (en) | Hair papilla cell activator | |
| Montanari et al. | Halting hyaluronidase activity with hyaluronan-based nanohydrogels: Development of versatile injectable formulations | |
| EP0466315A2 (en) | Compositions containing xylan sulphates for affecting growth factor function and for inhibiting fibroblast proliferation | |
| ITMI20072237A1 (it) | Esteri misti butirrico-formico di polisaccaridi acidi, loro preparazione ed uso come dermocosmetici | |
| BR112013027389B1 (pt) | Processo para o preparo de sal sódico de sulfato de condroitina | |
| JP2013512938A (ja) | ショ糖オクタ硫酸エステル亜鉛塩、それらの製造、ならびにその医薬品および化粧品用途 | |
| EP3574022B1 (en) | Hyaluronic acid cross-linked with natural or semi-synthetic crosslinking agents | |
| US10675270B2 (en) | Chondroitin complexes for transcutaneous absorption | |
| Jiang et al. | Design and properties of cyclodextrin grafted chitosan/sodium alginate dual-network hydrogel based on physical cross-linking | |
| EP4737486A1 (en) | Hyaluronic acid derivative, and preparation method therefor and use thereof | |
| WO2016080915A1 (en) | Cosmetic use of heparan sulphate | |
| EP3323429B1 (en) | Drug sustained-release carrier and method for producing same | |
| CN115337283B (zh) | 用分子马达囊泡包裹腺苷的纳米包封物及其制备方法、组合物及组合物的应用 | |
| RU2775654C1 (ru) | Твердофазный способ получения фосфорилированной гиалуроновой кислоты для косметических целей | |
| JP7396585B2 (ja) | Ｔｓｌｐ遺伝子発現抑制用、ｉｌ－３３遺伝子発現抑制用、又はフィラグリン産生促進用組成物 | |
| ITMI20110829A1 (it) | Condroitin solfato biotecnologico solfatato in posizione 4 o 6 sulla stessa catena polisaccaridica e procedimento per la sua preparazione | |
| CN106467612A (zh) | 糖簇化合物及其药学上可接受的盐、它们的用途和一种药物组合物 | |
| CN120887950A (zh) | 一种具良好透皮吸收性能的多肽衍生物的制备及应用 | |
| CN121843912A (zh) | 油酸槐糖脂臭氧氧化产物的制备和应用 | |
| ITPD970085A1 (it) | Nuovi composti di glicosaminoglicani con sostanze biologicamente attiv e per uso topico |