ITMI950702A1 - Test diagnostico per il rilevamento rapido e sicuro di un marcatore clinico per la diagnosi di menopausa nella donna - Google Patents

Test diagnostico per il rilevamento rapido e sicuro di un marcatore clinico per la diagnosi di menopausa nella donna Download PDF

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Abstract

Il presente trovato ha come oggetto un test diagnostico per il rilevamento rapido e sicuro di un marcatore clinico per la diagnosi di menopausa nella donna, caratterizzato dal fatto di comprendere, sulla striscia di supporto, una prima zona, su cui è posto un anticorpo monoclonale anti-FSH, una seconda zona affiancata alla prima, su cui è posto un anti-corpo policlonale ed una terza zona affiancata alla seconda, su cui è posto un anti-anticorpo FSH, in grado di legarsi con l'anticorpo monoclonale, essendo inoltre previsto uno strato di imbibizione presentante almeno una sua porzione sovrapposta alla prima zona.

Description

"TEST DIAGNOSTICO PER IL RILEVAMENTO RAPIDO E SICURO DI UN MARCATORE CLINICO PER LA DIAGNOSI DI MENOPAUSA NELLA DONNA".
DESCRIZIONE
Il presente trovato ha come oggetto un test diagnostico per il rilevamento rapido e sicuro di un marcatore clinico per la diagnosi di menopausa della donna .
Come e’ noto, con il termine menopausa si indica la cessazione delle mestruazioni, con cui si accompagna la mancanza di fertilità’, in quanto si e’ esaurita la funzione ovarica e non avviene piu’ la ovulazione, e talora una serie di segni e di sintomi che possono disturbare la donna.
La menopausa e’ preceduta da un periodo di durata variabile da alcuni mesi a due o tre anni, in cui possono essere presenti irregolarità’ mestruali spesso marcate.
Nella pre-menopausa, l’attività’ ovarica, cioè’ l’ovulazione, la produzione di estrogeni e progesterone e simili, declina e progressivamente si esaurisce.
Il declino e l’esaurimento della attività’ ovarica va diagnosticato con precocità’.
Anche la progressiva riduzione della produzione di estrogeni si accompagna ad alterazione del metabolismo lipidico ed osseo, che pongono la donna a rischio di osteroporosi e patologie cardiovascolari. Trattamenti medici possono, tuttavia, prevenire queste patologie e vanno iniziati appena e’ stata fatta una diagnosi di menopausa ed esaurimento della funzione ovarica.
La diagnosi di menopausa si basa sulla constatazione della avvenuta cessazione delle mestruazioni, per esaurimento dell’attività’ ovarica.
La diagnosi si pone sulla base della comparsa di alcuni segni e sintomi, come manifestazioni vasomotorie, cioè’ vampate di calore che compaiono in moltissime donne, manifestazioni neurovegetative, come tachicardia, parestesia, capogiri, insonnia e simili e manifestazioni psicosomatiche, come affaticabi1ita’, irritabilità’, ansia e simili, e manifestazioni genitali locali, come secchezza vaginale, dispareunia e simili.
La piu’ evidente modificazione endocrina consiste in un aumento persistente dell’ormone follicolo stimolante, individuato come FSH.
Parallelamente calano gli estrogeni e sale l’ormone LH, cioè’ l’ormone luteinizzante.
Nel complesso, il principale marcatore diagnostico e’ l’FSH, che risulta elevato anche nella fase della menopausa e consente quindi di individuare precocemente la riduzione e l’esaurimento della funzione ovarica.
Per eseguire attualmente la rilevazione dell’FSH, quest’ultimo viene dosato nel sangue con tecniche immunoenz imatiche o radioimmunologiche su siero, impiegando strumentazione dedicata. Il dosaggio, effettuabile solo da personale medico specializzato, comporta un prelievo di sangue e la determinazione ormonale presso un laboratorio di analisi.
Questo modo di procedere implica dei costi relativamente elevati e soprattutto un notevole disagio per il paziente.
Il compito che si propone il trovato e’ quello di risolvere il problema sopra esposto, realizzando un test diagnostico per il rilevamento rapido e sicuro di un marcatore clinico per la diagnosi di menopausa nella donna, che dia la possibilità’ di essere effettuato domiciliarmente, senza dovere ricorrere a tecniche invasive di prelievo e quindi, eventualmente, con la conseguente possibilità’ di ripetizione frequente del test,'senza alcun disagio.
Meli "ambito del compito sopra esposto, uno scopo particolare del trovato e’ quello di realizzare un test diagnostico, che sia in grado di dare una risposta attendibile in pochi minuti, avendo sempre la certezza del risultato associabile allo stato di menopausa o meno.
Il presente test diagnostico, per le sue peculiari caratteristiche rea1izzative , e’ in grado di offrire le piu’ ampie garanzie di affidabi1ita’ e di sicurezza nell’uso.
Il presente trovato consente di realizzare un test diagnostico, che comporta una notevole riduzione dei costi.
Il compito sopra esposto, nonché’ gli scopi accennati ed altri, che meglio appariranno evidenziati in seguito, vengono raggiunti da un test diagnostico, per il rilevamento rapido e sicuro di un marcatore clinico per la diagnosi di menopausa nella donna, secondo il trovato, caratterizzato dal fatto di comprendere, su una striscia di supporto, una prima zona, su cui è posto un anticorpo monoclonale anti-FSH (4), una seconda zona, affiancata alla prima, su cui è posto un anticorpo anti-FSH policlonale (2), ed una terza zona affiancata alla seconda, su cui è posto un anti-anticorpo (anti-immunogiobuline IGG) (3) in grado di legarsi con 1'anticerpo anti-FSH monoclonale.
Ulteriori caratteristiche e vantaggi risulteranno maggiormente evidenziati attraverso un esame della descrizione di una forma di esecuzione preferita, ma non esclusiva, di un test diagnostico per il rilevamento rapido e sicuro di un marcatore clinico per la diagnosi di menopausa nella donna, illustrato a titolo indicativo, ma non limitativo, con l’ausilio dei disegni allegati, in cui:
la figura 1 rappresenta schematicamente la striscia su cui vengono posti i reagenti chimici;
la figura 2 rappresenta la striscia introdotta in un involucro di utilizzazione;
la figura 3 evidenzia schematicamente la fase iniziale di un test con esito positivo;
la figura 4 rappresenta la fase finale di un test con esito positivo;
la figura 5 rappresenta la fase iniziale di ur test con esito negativo;
la figura 6 rappresenta la fase finale di un test con esito negativo;
la figura 7 rappresenta schematicamente l’andamento dell’ormone FSH nel ciclo mestruale.
Con particolare riferimento ai simboli numerici delle suddette figure, il test diagnostico per il rilevamento rapido e sicuro di un marcatore clinico per la diagnosi di menopausa della donna, secondo il trovato, comprende una striscia di supporto 1, sulla quale e’ prevista una prima zona 2, su cui e’ stato depositato ed adeso in forma secca un anticorpo policlonale anti-FSH, ottenuto da topo e reperibile in commercio .
La deposizione può’ avvenire manualmente o automaticamente e viene normalmente effettuata a circa 2,5 cm. dall’estremità’ di sinistra della striscia.
L’anticorpo anti-FSH, incolore, viene lasciato asciugare a temperatura ambiente e ha una concentrazione di utilizzo, che corrisponde agli scopi del rilevamento e alla sensibilità’ richiesta per il test.
La scelta de11’anticorpo specifico policlonale anti-FSH e’ dovuta al fatto che si deve realizzare una reazione immunologica naturale in condizioni controllate fra esso e l’antigene FSH, cioè’ ormone follicolo stimolante, che si vuole evidenziare e che si presume presente nell’urina di donne in menopausa a concentrazioni rilevabili, indicative dello stato di menopausa.
Con la medesima tecnica di deposizione, a fianco della prima zona 2 viene realizzata una seconda zona 3, posta a circa 3,5 cm dall’estremità’ sinistra della striscia, facendo aderire in forma secca un antianticorpo antiimmunoglobu1ine, che e’ di tipo normalmente reperibile in commercio.
A fianco della zona 2, dalla parte opposta rispetto alla zona 3, viene realizzata una prima zona 4, con un anticorpo monoclonale anti-FSH, che e’ ottenuto per immunizzazione di animale cavia, anch’esso disponibile in commercio.
Sulla estremità’ di sinistra della striscia di supporto 1 viene applicato uno strato di imbibizione 10, che e’ vantaggiosamente costituito da carta bibula, che viene adesa sulla striscia di acetato di cellulosa con collanti organici naturali; inoltre, lo strato di applicazione 10 si sovrappone alla prima zona, ove e’ previsto l’anticorpo monoclonale anti-FSH.
L’anticorpo monoclonate anti-FSH viene legato chimicamente per affinità’ con oro colloidale, per gli usi specifici richiesti ed e’ in grado di legarsi con 1’anti-anticorpo anti-immoglobu1ine, come meglio verrà’ chiarito in seguito.
A completamento risulta previsto uno strato di assorbimento 11 previsto sull’estremità* di destra della striscia di supporto 1, che non ha una attività’ di funzione, ma realizza in pratica un fermo di assorbimento dell’eccesso di liquido di reazione. ;Vantaggiosamente, la striscia 1, cosi’ preparata, viene posta all’interno di un involucro 20, che presenta un foro circolare 21 sovrapposto allo strato di imbibizione 10 ed una finestra doppia 22, che risulta posizionata in corrispondenza della seconda e della terza zona, ed e’ dotato, in corrispondenza delle due zone, di indicazioni S e C, che corrispondono rispettivamente alla risposta positiva ed al controllo. ;Con il test sopra descritto e’ possibile, partendo da urina di donna, depositare 5-7 gocce in corrispondenza della finestra 21, per potere cosi’ rilevare la presenza o meno dell’ormone nel campione esaminato ad una concentrazione uguale o superiore a 20 m I.U/ml. ;Il tempo di reazione, migrazione e fissazione del colore, indicativo della ta, e’ di circa 8 minut i . ;L’urina bagna lo strato 10 e mette in movimento per capillarità’ il complesso anti-FSH/oro colloidale e 1’antigene FSH. ;Quando il complesso migrante si trova in corrispondenza della zona 2, ove e’ posto l’anticorpo policlonale anti-FSH, si avra’ una seconda reazione antigene-anticorpo specifica per la disponibilità’ di siti antigenici liberi. ;L’anticorpo "ancorato" fermerà’ il complesso e il deposito sara’ reso visibile da una banda rosa, che individua il risultato positivo. ;Il migrante, cioè’ l’urina complessata, in eccesso, continua comunque il suo cammino per capillarità’ verso l’estremità’ destra della striscia 1, andando a reagire sicuramente anche con l’antianticorpo, che e’ posto nella terza zona. ;Questa ultima reazione avverrà’ sempre essendo indipendente dalla presenza dell’ormone FSH nelle urine. ;Proprio per tale caratteristica e semplice reazione fra anticorpo e anti-anticorpo, mediata naturalmente, questo ulteriore secondo "ancoraggio" creerà* una seconda banda rosa che, in pratica, costituisce un elemento di controllo del test.
Nel caso in cui nella urina non sia presente l’ormone FSH, l’urina, che ha bagnato per capillarità’ la prima zona mette in movimento il complesso anticorpo anti-FSH/oro colloidale non legato al alcun antigene.
Quando il complesso migrante si trova nella seconda zona non si avra’ alcuna cattura, per cui non avviene nessuna reazione e la seconda zona non presenterà’ la striscia colorata, individuando cosi’ un risultato negativo.
La sequenza residua della reazione avviene come in precedenza descritto, formando una banda rosa in corrispondenza della terza zona.
Il test deve essere ripetuto dopo circa 15 giorni, in quanto una positività’ al test indica solamente che al momento e’ presente una concentrazione dell’ormone FSH diversa dal solito.
Poiché’, tuttavia, nel ciclo mestruale vi sono alcuni giorni, generalmente corrispondenti al periodo della ovulazione, in cui l’ormone FSH sale a valori di circa 25 ml.U./ml, e’ necessario verificare che l’ormone FSH sia costantemente presente a concentrazioni superiori, per cui solo la persistenza di livelli elevati indica l’esaurimento della funzione riproduttiva dell’ovaio e l’entrata in menopausa.
Attraverso prove sperimentali si e’ riscontrato che un doppio risultato positivo, su prove effettuate a distanza di circa 15 giorni una dall’altra, da’ una assoluta garanzia della presenza dell’ormone FSH, per cui si ha una certezza della situazione fisiologica tipica di menopausa.
Inoltre, nel caso in cui uno dei due test sia risultato negativo non ci si trova in condizioni di menopausa.
Da quanto sopra illustrato, si vede quindi come il trovato raggiunga gli scopi proposti.
In particolare, si vuole sottolineare l’estrema semplicità’ di realizzazione del test, oggetto del trovato, che può’ essere agevolmente effettuato domiciliarmente, senza alcun disagio, e con costi molto contenuti.
Il trovato cosi’ concepito e’ suscettibile di numerose modifiche e varianti, tutte rientranti nell’ambito del concetto inventivo.
Inoltre, tutti i dettagli potranno essere sostituiti da altri elementi, tecnicamente equivalenti.
In pratica, i materiali impiegati, purché’ compatibili con l’uso specifico, nonché’ le dimensioni e le forme contingenti potranno essere qualsiasi, a seconda delle esigenze.

Claims (7)

  1. R IV E N D IC A Z IO N I 1. Test diagnostico per il rilevamento rapido e sicuro di un marcatore clinico per la diagnosi di menopausa della donna, caratterizzato dal fatto di comprendere, sulla striscia di supporto, una prima zona, su cui e’ posto un anticorpo monoclonale anti-FSH, una seconda zona affiancata alla prima, su cui e’ posto un anti-corpo policlonale ed una terza zona affiancata alla seconda, su cui e’ posto un antianticorpo FSH, in grado di legarsi con l’anticorpo monoclonaie, essendo inoltre previsto uno strato di imbibizione presentante almeno una sua porzione sovrapposta alla prima zona.
  2. 2. Test diagnostico, secondo la rivendicazione precedente, caratterizzata dal fatto che il suddetto anticorpo policlonale anti-FSH e’ depositato ed adeso in forma secca, nella striscia di supporto.
  3. 3. Test, secondo le rivendicazioni precedenti, caratterizzato dal fatto che il suddetto anticorpo monoclonale anti-FSH e’ previsto su uno strato di carta bibula, impregnata a secco e sottoposta al suddetto strato di imbibizione.
  4. 4. Test, secondo una o piu’ rivendicazioni precedenti, caratterizzato dal fatto che il suddetto strato di imbibizione e’ costituito da carta bibula, adesa alla suddetta striscia di supporto.
  5. 5. Test, secondo una o piu’ rivendicazioni precedenti, caratterizzato dal fatto di comprendere, sulla suddetta striscia di supporto, all’estremità’ opposta, rispetto al suddetto strato di impregnazione, uno strato di assorbimento, costituito da carta bibula non avente attività’ di funzione, ma realizzante un elemento di assorbimento dell’eccesso di liquido di reazione.
  6. 6. Test, secondo una o piu’ rivendicazioni precedenti, caratterizzato dal fatto che la suddetta striscia e* introdotta in un involucro, presentante una finestra circolare in corrispondenza dello strato di imbibizione ed una finestra rettangolare, in corrispondenza della seconda e della terza zona.
  7. 7. Test diagnostico per il rilevamento rapido e sicuro di un marcatore clinico per la diagnosi di menopausa di una donna, seconda una o piu’ rivendicazioni precedenti, il tutto come piu’ ampiamente descritto ed illustrato e per gli scopi specificati.
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