ITPD20010032A1

ITPD20010032A1 - Innesti ingegnerizzati per la riparazione di difetti osteocondrali

Info

Publication number: ITPD20010032A1
Application number: IT2001PD000032A
Authority: IT
Inventors: Lanfranco Callegaro; Alessandra Pavesio
Original assignee: Fidia Advanced Biopolymers Srl
Priority date: 2001-02-09
Filing date: 2001-02-09
Publication date: 2002-08-09
Also published as: DE60207198T2; ATE309007T1; DE60207198D1; WO2002070030A1; AU2002256617B2; ES2250642T3; WO2002070030A8; CA2437440A1; AU2002256617B8; JP2004524904A; US20040076656A1; EP1357953A1; DK1357953T3; US7968111B2; EP1357953B1; CA2437440C

Description

Descrizione di una domanda di brevetto per invenzione industriale dal titolo “Innesti ingegnerizzati per la riparazione di difetti osteocondrali”

OGGETTO DELL’INVENZIONE

La presente invenzione descrive la preparazione e l’uso di un materiale biocompatibile bicomponente costituito da:

A. una matrice tridimensionale di derivati dell’acido ialuronico, con una struttura che ingloba all’interno spazi vuoti creati da pori comunicanti e/o sottili fibre o microfibre aggrovigliate e; B. una matrice tridimensionale porosa, costituita da un materiale ceramico o da un materiale composito contenente almeno un materiale ceramico;

C. ed eventualmente comprendenti sostanze farmacologicamente o biologicamente attive,

per la preparazione di innesti osteocondrali ingegnerizzati comprendenti una parte cartilaginea e una parte ossea, separate ma strutturalmente integrate, utilizzando cellule osteocondrogeniche e per la riparazione /rigenerazione in vivo di tessuto osteocondrale strutturalmente integrato.

CAMPO DELL’INVENZIONE

La perdita di tessuto osteocondrale articolare a seguito di una artrite estesa, di una necrosi o ancora a causa di un trauma oppure della rimozione di un tumore rende necessario l’intervento di ricostruzione del difetto osteo-cartilagineo.

Il trattamento di tali difetti mediante l’impiego di protesi articolari è limitato dall’usura dei materiali non biologici utilizzati e dalla mobilizzazione dell’impianto.

Alternativamente, si può ricorrere all’autotrapianto, all’allotrapianto o allo xenotrapianto d’osso. La sostituzione ideale dell’osso è rappresentata dal trapianto di tessuto autologo, il quale esibisce rispetto sia agli allo-trapianti che agli xeno-trapianti maggiori capacità osteogeniche, evidenziate dalla presenza, durante il suo riassorbimento, di cellule mesenchimali che differenziano in linee cellulari osteogeniche e condrogeniche (K. L. B. Brown et R. L. Cruess, J. Bone Jt. Surg. 1982, 64A, 270-279). Inoltre gli allo-trapianti e gli xeno-trapianti portano antigeni di istocompatibilità, per cui si rende necessaria una cura immunosoppressiva del ricevente, mentre nel caso di autotrapianto vi è assenza di risposta immunologica. Oltre a ciò vi è la possibilità che allo-trapianti e xeno-trapianti possano trasmettere virus al ricevente, come HIV o epatite o BSE.

Poiché l’auto-trapianto d’osso causa un secondo trauma al paziente, dovuto al prelievo, e dal momento che vi è una scarsa disponibilità di tessuto, l’uso di questa procedura risulta piuttosto limitato.

La ricerca ortopedica si è da lungo tempo indirizzata verso la studio di nuovi materiali artificiali che siano idonei per un impianto osteocondrale e che, se disponibili, riducano o eliminino la necessità di ricorre al trapianto di tessuto.

Un materiale adatto deve sicuramente essere biocompatibile, bioriassorbibile in tempi paragonabili alla ricrescita ossea, in grado di sopportare i carichi, facilmente sterilizzabile, processabile ed osteoattivo, ovvero possedere caratteristiche osteoinduttive, per indurre il differenziamento delle cellule mesenchimali in cellule progenitrici dell’osso, e osteoconduttive, per consentire la ricrescita ossea all’intemo dell’impianto.

Le tecniche riportate in letteratura per la rigenerazione ossea fanno riferimento all’uso di ceramiche, polimeri, compositi, molecole bioattive.

Il fatto che i fosfati di calcio siano, dal punto di vista chimico e strutturale, simili alla parte minerale dell’osso, costituita, per lo più, da idrossiapatite biologica, ha incoraggiato l’impiego di ceramiche come biomateriali per indurre l’osteogenesi.

Le ceramiche maggiormente impiegate sono il β-tricalcio fosfato (TCP) e l’idrossiapatite sintetica. Esse si sono dimostrate osteoconduttive, grazie anche alla loro porosità che favorisce la colonizzazione cellulare e la crescita ossea.

Studi condotti mediante impianto sottocutaneo in ratti singenici documentano che la combinazione di cellule del midollo osseo q ceramiche porose promuove l’osteogenesi, con formazione di nuovo osso all’intemo dei pori. Inoltre si sono osservate isolate e poco estese zone cartilaginee, senza una apprezzabile ossificazione endocondrale (H. Ohgushi, V. Goldberg et A. Caplan, J. Orthop. Res., 1989, 4, 568-578).

La possibilità di ottenere diverse composizioni e strutture in grado di soddisfare le esigenze dettate dalle specifiche applicazioni, nonché la proprietà di biodegradazione, rende l’utilizzo dei polimeri estremamente diffuso. Noto è l’impiego di acido polilattico, acido poliglicolico o copolimeri degli stessi o loro derivati, in differenti forme, come biomateriali per la crescita di osteociti. Il principale svantaggio nell’utilizzare le suddette matrici è rappresentato dalla risposta immunitaria diretta contro il materiale impiantato.

Al fine di creare un biomateriale soddisfacente sia dal punto di vista meccanico che biologico sono stati indagati diversi compositi formati da miscele di polimeri e fosfati di calcio.

E’ noto anche l’uso di matrici comprendenti almeno un derivato dell’acido ialuronico come biomateriali per la ricrescita tissutale. L’acido ialuronico è un etere polisaccaride composto da residui alternati di acido D-glucuronico e N-acetil-glucosamina. E’ una catena polimerica lineare con un peso molecolare variabile tra 50.000 e 13.000.000 Da, che dipende dalla fonte dalla quale è ottenuto e dal metodo di preparazione e determinazione usati. E’ presente in natura in gel pericellulari, nella sostanza fondamentale del tessuto connettivo degli organismi vertebrati, di cui è il principale componente, nel liquido sinoviale delle articolazioni, nellhumor vitreo, nel cordone ombelicale umano e nelle creste di gallo.

L’acido ialuronico gioca un ruolo vitale in molti processi biologici come l’idratazione, l’organizzazione dei proteoglicani, la differenziazione cellulare, la proliferazione e la angiogenesi (J. Aiger et al., L. Biomed Mater. Res. 1998, 42, 172-181).

E’ altresì noto che frazioni di acido ialuronico possono essere impiegate per facilitare la riparazione tissutale, come sostituto del fluido intraoculare, o somministrate per via intra- articolare per trattare patologie articolari, come descritto nei brevetti europei No.

0138572 e 0535200.

L’acido ialuronico gioca un ruolo fondamentale nel processo di riparazione tissutale, specialmente nella prima fase di granulazione, stabilizzando la matrice di coagulo e controllando la sua degradazione, favorendo il reclutamento di cellule coinvolte nel processo infiammatorio, come fibroblasti e cellule endoteliali e, infine, orientando la susseguente migrazione delle cellule epiteliali. E’ noto che l’applicazione di soluzioni di acido ialuronico può accelerare il processo di riparazione tissutale in pazienti affetti da ferite e bruciature. Il ruolo dell’acido ialuronico nelle varie fasi del processo di riparazione tissutale è stato descritto mediante la costruzione di un modello teorico da parte di P.H. Weigel et al. “A model for thè role of hyaluronic acid and fìbrin in thè early events during thè inflammatory response and wound healing”, J. Theor, Biol., 119:219, 1986. , E’ inoltre noto l’uso di frazioni di acido ialuronico a basso peso molecolare per preparare composti farmaceutici con proprietà osteoinduttive (WO 93/20827).

Gli esteri totali o parziali dell’acido ialuronico e i suoi derivati autoreticolati sono conosciuti così come il loro uso in campo farmaceutico e cosmetico e in quello dei materiali biodegradabili (Brevetti US 4,851,521; US 4,965,353; US 5,676,964).

In particolare, la domanda di brevetto WO 93/20858 descrive soluzioni leganti e paste contenenti acido ialuronico e/o i suoi derivati esteri usati come riempitivi dell’osso in chirurgia.

Infine, gli esteri di acido ialuronico sono stati processati nella forma di strutture non-tessuto in accordo con il processo descritto dal brevetto US 5,520,916.

I derivati dell’acido ialuronico in una forma tridimensionale e, in particolare, gli esteri parziali e totali dell’acido ialuronico processati nella forma di non-tessuti sono stati utilizzati come supporto nella preparazione di materiale biologico contenente cellule e/o prodotti generati dalle suddette cellule. Per esempio, possiamo menzionare la domanda di brevetto WO 97/ 18842 che descrive un materiale comprendente:

a. una efficiente coltura di cellule staminali autologhe oppure omologhe del midollo osseo, parzialmente o completamente differenziate in cellule di uno specifico tessuto connettivo, comprendente inoltre la matrice secreta dalle suddette cellula o, alternativamente,

a’, la matrice extra cellulare secreta da cellule staminali del midollo osseo completamente o parzialmente differenziate o, alternativamente, da cellule mature del tessuto;

b. una matrice tridimensionale che consiste in derivati dell’acido ialuronico e, in particolare, in esteri parziali o totali.

Derivati dell’acido ialuronico in forma di spugne, usati in combinazione con cellule mesenchimali, impiantati nel sottocutaneo di topi nudi, hanno mostrato capacità osteogeniche e condrogeniche superiori, in termini di quantità di tessuto formato, rispetto alle ceramiche porose (L.A. Solchaga, J.E. Dennis, V. M. Goldberg et A. Caplan, J. Orthop. Res., 17, 1999, 205-213).

Nella riparazione dei difetti osteocondrali risulta estremamente importante garantire lo sviluppo di un’interfaccia stabile tra la cartilagine articolare e la struttura ossea sottostante.

Compositi costituiti da cartilagine ingegnerizzata sovrapposta e suturata ad un biomateriale di supporto osteoconduttivo, per la rigenerazione del tessuto osteocondrale sono stati impiantati in difetti creati in articolazioni di coniglio. Dopo sei mesi si è potuto osservare il rimodellamento del composito in un tessuto osteocondrale strutturalmente simile a quello naturale, con una chiara linea di separazione tra cartilagine e osso subcondrale (D.

Schaefer et al., 46<th >Annual Meeting of thè Orthopaedic Research Society, 2000).

Pertanto, sebbene fosse noto l’uso di derivati dell’acido ialuronico e di materiali ceramici sia per la rigenerazione /riparazione della cartilagine e dell’osso sia come matrici di supporto per la coltura di cellule differenziate o non differenziate e, di conseguenza, fosse desumibile per l’esperto del ramo di poter impiegare entrambi questi materiali per la realizzazione di impianti osteocondrali, non era prevedibile, come dimostrato nella presente invenzione, di poter ottenere, una volta accoppiati i due materiali, la formazione separata di cartilagine ed osso, comunque strutturalmente integrati, senza compenetrazione tra i due tessuti, analogamente al tessuto osteocondrale naturale.

DESCRIZIONE DETTAGLIATA DELL’INVENZIONE

La presente invenzione si riferisce alla preparazione e all’uso di un materiale biocompatibile bicomponente, costituito da:

A. una matrice tridimensionale di derivati dell’acido ialuronico, con una struttura che ingloba all’interno spazi vuoti creati da pori comunicanti e/o sottili fibre o microfibre aggrovigliate; B. una matrice tridimensionale porosa, costituita da un materiale ceramico o da un materiale composito contenente almeno un materiale ceramico;

per la preparazione di innesti osteocondrali ingegnerizzati strutturalmente integrati utilizzando cellule osteo-condrogeniche e per la rigenerazione/riparazione in vivo di tessuto osteocondrale.

Un ulteriore oggetto della presente invenzione è l’uso del biomateriale composito come sopra descritto per la riparazione/rigenerazione di difetti osteocondrali, ottenuto mettendo insieme un derivato dell’acido ialuronico e un altro materiale, che può essere un ceramico o un suo derivato od un altro componente aventi proprietà osteoattive. E’ possibile utilizzare tale composito in associazione con cellule osteogeniche per la preparazione di tessuto osteocondrale ingegnerizzato.

I derivati dell’acido ialuronico utilizzati nella matrice tridimensionale (A) sono scelti dal seguente gruppo:

esteri dell’acido ialuronico in cui una parte o tutte le funzioni carbossiliche sono esterificate con alcoli della serie alifatica, aromatica, arilalifatica, cicloalifatica, eterociclica (EP 0216453 Bl);

esteri autoreticolati dell’acido ialuronico in cui una parte o la totalità dei gruppi carbossilici sono esterificate con funzioni alcoliche della stessa catena polisaccaridica o di altre catene (EP 0341745 Bl);

composti reticolati dell’acido ialuronico in cui una parte o la totalità dei gruppi carbossilici sono esterificate con polialcoli della serie alifatica, aromatica, arilalifatica, eterociclica, generando delle reticolazioni mediante catene spaziatrici (EP 0265116 Bl);

emiesteri dell’acido succinico o sali di metalli pesanti dell’emiestere dell’acido succinico con acido ialuronico o con, esteri parziali o totali dell’acido ialuronico (WO 96/357207); * i derivati O-solfatati (WO 95/25751) o N-solfatati (WO 98/45335);

ammidi dell’acido ialuronico o dei suoi derivati (WO 00/01733). I derivati dell’acido ialuronico possono avere forma di non-tessuto, membrane, spugne, tubicini e garze. Detti derivati dell’acido ialuronico possono a loro volta comprendere sostanze farmacologicamente o biologicamente attive.

La matrice tridimensionale porosa, di cui al punto B, può essere costituita da:

- idrossiapatite o altri calcio fosfati, compreso il tricalcio fosfato; - calcio solfati;

- un composito costituito da idrossiapatite e tricalcio fosfato;

- un composito costituito da:

a) idrossiapatite o altri calcio fosfati o calcio solfati;

b) altre ceramiche, particelle metalliche o polimeri biocompatibili;

- un materiale ceramico rivestito di idrossiapatite o altri calcio fosfati, compreso il tricalcio fosfato;

- vetri bioattivi.

Detti materiali possono a loro volta comprendere sostanze farmacologicamente o biologicamente attive.

Tra le sostanze farmacologicamente attive sono da preferire gli antibiotici, disinfettanti, antisettici, antivirali, antimicrobici, antifungini, antiinfiammatori non steroidei e steroidei, citostatici) citotossici, anestetici, antitumorali.

Tra le sostanze biologicamente attive sono da menzionare le sostanze che favoriscono l’adesione delle cellule al biomateriale quali, ad esempio, la fibronectina, sequenze “RGD” o integrine, i fattori di crescita, quali ad esempio, “trasforming growth factor β” (TGF-β), fattore di crescita insulina simile (IGF), fattore di crescita derivato dalle piastrine (PDGF), fattore di crescita dell’epidermide (EGF), fattore di crescita dei fibroblasti acido o basico (aFBF o bFBF), fattore di crescita epatocitico (HGF), fattore di crescita dei cheratinociti (KGF), proteine morfogeniche dell’osso (BMPs) quali, ad esempio, BMP-1, BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6, proteine osteogeniche (OPs) quali, ad esempio, OP-1, OP-2, OP-3, ormoni della crescita, vitamine quali la vitamina C, D, E ed altre sostanze naturali come la glucosamina solfato.

Le differenti matrici tridimensionali che costituiscono i componenti del biomateriale composito per innesti osteocondrali vengono assemblate utilizzando un materiale collante naturale, sintetico o semi- sintetico, biocompatibile, preferibilmente riassorbibile, che possieda sufficiente forza adesiva. Ad esempio, è possibile impiegare una colla di fibrina, la quale ha un’origine biologica, è ampiamente utilizzata nella pratica clinica e ha dimostrato di essere un collante adatto e efficace a questo scopo.

Alternativamente, qualora i materiali delle differenti matrici tridimensionali che costituiscono i componenti del biomaterialq composito lo consentano, è possibile accoppiarle suturandole con filo o fissandole con articoli sanitari-chirurgici quali, ad esempio, viti e chiodi.

Una volta realizzato il composito bicomponente, esso può essere impiantato nella sede del difetto come tale, senza componenti cellulari o prodotti da essi derivati, per fungere da struttura di supporto alla rigenerazione /riparazione in vivo di tessuto osteocondrale.

Alternativamente, detto composito può contenere cellule differenziate o non differenziate opportunamente inoculate ed essere impiegato come supporto in cui coltivare dette cellule prima dell’impianto.

Inoltre è possibile assemblare le suddette due componenti dopo aver inoculato in esse le cellule osteo-condrogeniche. In particolare, la matrice tridimensionale costituita da un derivato dell’acido ialuronico può essere caricata con cellule progenitrici ovvero con condrociti maturi al fine di riparare /rigenerare il tessuto cartilagineo. La matrice tridimensionale porosa può essere impiegata come struttura per la coltura di cellule mesenchimali ovvero cellule ossee mature al fine di riparare/rigenerare l’osso.

Esempio di preparazione dell’innesto osteocondrale

Coltura cellulare

E’ noto in letteratura che le cellule osteocondrali progenitrici, conosciute come cellule mesenchimali staminali (MSCs), si differenziano anche in condrociti ed osteociti.

Nel caso della presente invenzione, le cellule mesenchimali staminali sono state isolate da midollo osseo di ratto e sono state coltivate ed espanse secondo protocollo noto in letteratura (Lennon et al., In Vitro CeU Devel. Bioio., 1996, 32, 602-611).

Quando queste cellule primarie hanno raggiunto la confluenza, vengono distaccate dalla piastra mediante trattamento enzimatico ed espanse per ottenere diverse preparazioni da utilizzare in diverse condizioni.

Per favorire la differenziazione delle cellule mesenchimali staminali lungo la linea condrocitaria, queste vengono coltivate in presenza di TGF-β a 10 ng/ml. Per favorire la differenziazione delle cellule mesenchimali staminali in osteociti, queste vengono coltivate con supplementi, come 100 nM dexametasone, 10 mM β-glicerofosfato e 0.05 mM di acido ascorbico-2-fosfato.

Il mezzo di coltura è stato cambiato ogni 3-4 giorni.

Costruzione in vitro dell’innesto composito

Prima che raggiungano la confluenza, le cellule vengono staccate dalle piastre mediante trattamento enzimatico, contate, sospese in un mezzo privo di siero ad una concentrazione di 5xl0<6>/ml, e caricate nei materiali, ad esempio attraverso la tecnica del vuoto blando.

Il materiale usato per la ricostruzione della cartilagine e il materiale usato per la ricostruzione dell’osso, caricati con le cellule, sono assemblati e uniti insieme attraverso colla di fibrina per formare un innesto osteocondrale composito. Il suddetto innesto viene incubato a 37°C per 30 minuti e poi impiantato nel sottocutaneo del dorso di ratti singenici in tasche ad hoc mediante l’impiego di strumenti a punta smussa.

Gli animali vengono sacrificati a tre e sei settimane ed il materiale processato per l’istologia.

Risultati

Il composito rimane integro dopo rimpianto in vivo e viene incapsulato da un sottile strato di tessuto fibroso facilmente distaccato dall’impianto. Non si osserva separazione tra la parte cartilaginea e la parte ossea.

Dopo tre settimane si osserva tessuto fibrocartilagineo negli spazi vuoti della matrice a base di derivati dell’acido ialuronico, specialmente nella parte periferica del suddetto materiale. A sei settimane (fig. 1), fibrocartilagine ben organizzata è distribuita nel materiale, che è parzialmente riassorbito. I condrociti sono localizzati in lacunae circondate da matrice extracellulare. Nella matrice extracellulare del tessuto cartilagineo si rileva solamente collagene di tipo II.

A tre settimane dall’impianto, tessuto osseo è rilevabile nei pori del materiale ceramico e l’ammontare di tale tessuto aumenta nel tempo.

La colla di fibrina è completamente riassorbita dopo sei settimane. Si osserva dunque la formazione di cartilagine ed osso separatamente nei due materiali: né il tessuto osseo né la cartilagine attraversano l’interfaccia tra i due materiali. Al tempo stesso i due materiali formano un composito strutturalmente integrato grazie al legame dato dalla presenza di tessuto fibroso e di fibre di collagene che attraversano l’interfaccia.

Questo suggerisce che è possibile costruire un impianto composito di tessuto osteocondrale ingegnerizzato mediante l’uso di differenti materiali, che fungono da supporto per il differenziamento condrogenico e osteogenico di cellule mesenchimali, grazie alle loro specifiche capacità condro-induttive e osteo-induttive.

Essendo l’invenzione così descritta, è chiaro che questo esperimento può essere modificato nelle condizioni operative e metodologiche in vari modi. Tali modificazioni non sono da considerarsi come divergenze dallo spirito e dalle prospettive dell’invenzione e tutte le modifiche che apparirebbero evidenti ad un esperto del ramo sono comprese nell’ambito delle seguenti rivendicazioni:

Claims

RIVENDICAZIONI 1. Materiale biocompatibile bicomponente, costituito da: A. una matrice tridimensionale di derivati dell’acido ialuronico, con una struttura che ingloba all’interno spazi vuoti creati da pori comunicanti e/o sottili fibre o microfibre aggrovigliate con o senza cellule e; B. una matrice tridimensionale porosa, costituita da un materiale ceramico o da un materiale composito contenente almeno un materiale ceramico con o senza cellule; C. ed eventualmente comprendenti sostanze farmacologicamente o biologicamente attive, per la preparazione di innesti osteocondrali ingegnerizzati, comprendenti una parte cartilaginea e una parte ossea, separate ma strutturalmente integrate, mediante cellule osteocondrogeniche e per la riparazione /rigenerazione in vivo di tessuto osteocondrale strutturalmente integrato.
2. Materiale biocompatibile biocomponente di cui alla rivendicazione 1, in cui la matrice tridimensionale (A) è costituita da esteri dell’acido ialuronico in cui una parte o tutte le funzioni carbossiliche sono esterificate con alcoli della serie alifatica, aromatica, arilalifatica, cicloalifatica, eterociclica.
3. Materiale biocompatibile biocomponente di cui alla rivendicazione 1, in cui la matrice tridimensionale (A) è costituita da esteri autoreticolati dell’acido ialuronico in cui una parte o tutti i gruppi carbossilici sono esterificati con le funzioni alcoliche della stessa catena polisaccaridica o di altre catene.
4. Materiale biocompatibile biocomponente di cui alla rivendicazione 1 , in cui la matrice tridimensionale (A) è costituita da composti reticolati dell’acido ialuronico in cui una parte o tutti i gruppi carbossilici sono esterificati con polialcoli della serie alifatica, aromatica, arilalifatica, eterociclica, generando delle reticolazioni mediante catene spaziatrici.
5. Materiale biocompatibile biocomponente di cui alla rivendicazione 1, in cui la matrice tridimensionale (A) è costituita da emiesteri dell’acido succinico o sali di metalli pesanti dell’emiestere dell’acido succinico con acido ialuronico o con esteri parziali o totali dell’acido ialuronico.
6. Materiale biocompatibile biocomponente di cui alla rivendicazione 1, in cui la matrice tridimensionale (A) è costituita da derivati solfatati dell’acido ialuronico.
7. Materiale biocompatibile biocomponente di cui alla rivendicazione 1, in cui la matrice tridimensionale (A) è costituita da ammidi dell’acido ialuronico o dai suoi derivati.
8. Materiale biocompatibile biocomponente di cui alla rivendicazione 1, in cui la matrice tridimensionale porosa (B) è costituita da idrossiapatite o altri calcio fosfati, compreso il tricalcio fosfato, calcio solfati, un composito costituito da idrossiapatite e tricalcio fosfato, un composito costituito da idrossiapatite o altri calcio fosfati o calcio solfati ed altre ceramiche, particelle metalliche o polimeri biocompatibili, un materiale ceramico rivestito di idrossiapatite o altri calcio fosfati, compreso il tricalcio fosfato, vetri bioattivi.
9. Materiale biocompatibile biocomponente di cui alla rivendicazione 1, in cui le sostanze farmacologicamente attive sono scelte dal gruppo formato da antibiotici, disinfettanti, antisettici, antivirali, antimicrobici, antifungini, antiinfìammatori non steroidei e steroidei, citostatici, citotossici, anestetici, antitumorali.
10. Materiale biocompatibile biocomponente di cui alla rivendicazione 1, in cui le sostanze biologicamente attive sono scelte dal gruppo formato da sostanze che favoriscono la adesione delle cellule al biomateriale, fattori di crescita, proteine morfogeniche dell’osso, proteine osteogeniche, ormoni della crescita, vitamine ed altre sostanze naturali come la glucosamina solfato.
11. Materiale biocompatibile biocomponente di cui alla rivendicazione 1, in cui le componenti (A) e (B) sono processate in forma di non-tessuto, membrane, spugne, tubicini e garze.
12. Materiale biocompatibile biocomponente di cui alla rivendicazione 1, in cui le cellule osteo-condrogeniche sono scelte dal gruppo formato da osteociti, condrociti, midollo osseo, cellule mesenchimani staminali.
13. Materiale biocompatibile biocomponente di cui alla rivendicazione 12, in cui le cellule sono autologhe, allologhe, xenologhe.
14. Processo per la preparazione di innesti osteocondrali ingegnerizzati di cui alla rivendicazione 1 secondo le seguenti fasi: la preparazione della matrice tridimensionale a base di derivati dell’acido ialuronico (A); la preparazione della matrice tridimensionale porosa a base di materiali ceramici (B), l’accoppiamento delle matrici (A) e (B) mediante materiale collante e/o intervento di sutura con filo o fissaggio con articoli sanitari-chirurgici ; la coltura di cellule osteo-condrogeniche sul materiale biocompatibile bicomponente in vitro; rimpianto del materiale biocompatibile bicomponente con cellule, ed eventualmente una o più sostanze farmacologicamente o biologicamente attive, nel difetto osteocondrale.
15. Processo per la preparazione di innesti osteocondrali ingegnerizzati di cui alla rivendicazione 1 secondo le seguenti fasi: la preparazione della matrice tridimensionale costituita da derivati dell’acido ialuronico (A) ; la preparazione della matrice tridimensionale porosa costituita da materiali ceramici (B), l’accoppiamento delle matrici (A) e (B) mediante materiale collante e/o intervento di sutura con filo o fissaggio con articoli sanitari-chirurgici ; la semina ed eventuale coltura di cellule osteo-condrogeniche sul materiale biocompatibile bicomponente in vitro; rimpianto del biomateriale biocompatibile bicomponente con cellule in un sito diverso dal difetto osteocondrale da trattare capace di generare tessuto osteocondrale; il trapianto dello stesso, eventualmente in associazione con una o più sostanze farmacologicamente o biologicamente attive, nel difetto osteocondrale.
16. Processo per la preparazione di innesti osteocondrali di cui alla rivendicazione 1 secondo le seguenti fasi: la preparazione della matrice tridimensionale a base di derivati dell’acido ialuronico (A); la preparazione della matrice tridimensionale porosa a base di materiali ceramici (B), - l’accoppiamento delle matrici (A) e (B) mediante materiale collante e/o intervento di sutura con filo o fissaggio con articoli sanitari-chirurgici ; 1’impianto del biomateriale biocompatibile bicomponente senza cellule, eventualmente caricato con una o più sostanze farmacologicamente o biologicamente attive, nel difetto osteocondrale.
17. Processo per la preparazione di innesti osteocondrali ingegnerizzati di cui alla rivendicazione 1 secondo le seguenti fasi: la preparazione della matrice tridimensionale a base di derivati dell’acido ialuronico (A) e la semina di cellule mesenchimali staminali differenziate o non differenziate o del midollo osseo; la preparazione della matrice tridimensionale porosa a base di materiali ceramici (B) e la semina di cellule mesenchimali staminali differenziate o non differenziate o del midollo osseo, l’accoppiamento delle matrici (A) e (B) mediante materiale collante e/o intervento di sutura con filo o fissaggio con articoli sanitari-chirurgici e coltura; rimpianto del biomateriale biocompatibile bicomponente con cellule, eventualmente in associazione con una o più sostanze farmacologicamente o biologicamente attive, nel difetto osteocondrale.
18. Uso di innesti osteocondrali ingegnerizzati di cui alle rivendicazioni precedenti per la riparazione /rigenerazione di difetti osteocondrali.
19. Uso di innesti osteocondrali ingegnerizzati di cui alle rivendicazioni precedenti in forma di non-tessuto, membrane, spugne, tubicini, garze.