ITRM930334A1 - Tassano ad attivita' antitumorale. - Google Patents

Description

"TASSANO AD ATTIVIT?' ANTITUMORALE"

La presente invenzione ha per oggetto un nuovo diterpene a nucleo tassanico dotato di attivit? antitumorale. Sulla base di analisi spettrometriche al. nuovo composto conpete la struttura (1) corrispondente all'estere in posizione 13 del 5B,20-epossi-

esaidro ssitass-ll-en-9-cne 4,10-diacetato 2-benzoato

con la (2R,3S)-N-esanoil-3-fenilisoserina.

00033*

Il composto di struttura (1) viene isolato con rese conprese fra lo 0,02 e lo 0,06% per estrazione della corteccia della radice di piante del genere Taxus.

Il materiale vegetale da cui (1) viene estratto ? costituito preferenzialmente da corteccia della radici di cultivar di tasso, per esenpio corteccia di Taxus inedia cv Hicksii. Questo cultivar ? correntemente impiegato ccn scopi ornamentali per l'allestimento di giardini. Ci? consente di evitare la raccolta indiscriminata delle radici delle piante spontanee di tasso, la cui crescita ? notoriamente lenta, e conseguentemente la loro rapida estinzione.

Per l'estrazione del composto (1) si utilizzano solventi clorurati, per esempio die loromet ano , puri o in miscela ccn alcoli, per esempio alcol metilico ed etilico. L'estrazione del materiale vegetale pu? essere condotta anche con 11 impiego di chetoni, per esempio acetone, puri o in miscela con acqua.

L'estratto della corteccia delle radici contiene, accanto al composto (1) , una serie di altri noti tassani, quali il tasso lo (2) , la cefalomannina (3) e i loro rispettivi 10-<3eacetilderivati (4) e (5) . La separazione di (1) da questi tassani richiede una purificazione per cromatografia su colonna.

A questo scopo viene utilizzato preferenzialmente gel di silice come fase stazionaria. Come eluenti si impiegano miscele di solventi costituite da un idrocarburo alifatico, per esempio n-esano, cicloesano o n-eptano, o aromatico, per esempio toluene, con un solvente di maggiore polarit?, quale ad esempio etile acetato o acetone.

Il ccnposto (1), ricuperato dalla frazioni cromatografiche che lo contengono, viene isolato dopo cristallizzazione da acetone oppure da etere diisopropilico o da loro miscele con n-esano o n-eptano.

Il nuovo ccnposto (1) presenta notevoli affinit? strutturali col farmaco antitumorale tassolo (2), dal quale differisce per la natura della catena laterale legata in posizione 13 del nucleo tassanico. Pertanto, il composto (1) pu? divenire accessibile, oltre ?he per estrazione del materiale vegetale, per semisintesi attraverso processi analoghi a quelli impiegati per la produzione del tassolo (2) (cfr. I. Ojima et al, Tetrahedrcn 48, 6985, 1992).

Poich? il composto (1) presenta affinit? strutturali con il tassolo (2), si poteva prevedere che esso possedesse attivit? antitumorali analoghe.

In effetti, l'attivit? in vitro di (1) nei ccnfronti di diverse linee tumorali, per esempio quella riguardante il tumore del seno, del polmone, del colon e dell'ovaio, ? paragonabile a quella del tassolo, come appare dai risultati riportati in Tab. 1. Tuttavia, il nuovo tassano (1) mostra sorprendentemente una maggiore attivit? rispetto al tassolo in relazione a cellule tumorali resistenti all'adriamicina (ADR) e a cellule leucemiche.

Tab. 1 - Confronto dell'attivit? antiblastica del Tassano (1) e <fel Tas solo (2) su diverse linee tumorali {IC50 , nM) .

In studi in vivo il composto (1) , s curmi nistrato in soluzioni acquose contenenti Cremophor?,; si ? dimostrato efficace verso i tumori impiantati nel topo nudo. Il tassano (1) si propone pertanto come farmaco antitunorale per il trattamento di tumori liquidi e di tumori resistenti a farmaci quali l'adriamicina.

In base ai dosaggi attivi riscontrati nell'animale la dose del composto (1) nell'uomo dovrebbe essere compresa fra 150-250 mg/m a cicli ripetuti a distanza di due o tre settimane fino a scomparsa metastatica.

L'esenpio sotto riportato illustra la preparazione del prodotto oggetto della presente invenzione.

Esempio 1

Estere in posizione 13 del

esaidrossitass-ll-en-9-one 4 ,10-diacetato 2-benzoato con la (2R,3S)-N-esanoil-3-fenilisoserina (formula 1).

50 kg di corteccia polverizzata di Taxus media cv Hickii vengono estratti a temperatura anfaiente con 130 litri e poi per tre volte con 80 litri di cloruro di metilene-metanolo 9:1, ogni estrazione essendo condotta per 24 ore.

Gli estratti riuniti vengono concentrati a secco sotto vuoto ed il residuo (4300 g) viene ripreso con 23 litri di miscela toluene-acetone 9:1. Dopo filtrazione del materiale insolubile la soluzione viene purificata per cromatografia su colonna contenente 27 kg di gel di silice, eluendo ccn la stessa miscela solvente. Le frazione contenenti il prodotto (1) vengono riunite ed evaporate a secco sotto vuoto. Il residuo viene cristallizzato da 80 mi di miscela n-esano/acetone 1:1. Si ottengono 17,5 g di (1), p.f. 209?, [^]D - 42 (c 0,3, MeCH), M a m/z 847.

I dati spettrofotometriei del ccrrposto (1) seno i seguenti:

Claims (7)

1. RIVENDICAZIONI 1. Come nuovo composto, l'estere in posizione 13 del 5S,20-epossil,2dl,4,7fi#10B,13dresaidrossitass-ll-en-9-one 4,10-diacetato 2-benzoato con la (2R,3S)-N-esanoil-3-fenilisoserina, di formula (1)
2. 2. Procedimento per la preparazione del composto (1) secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che si sottopone materiale vegetale di cultivar di tasso a estrazione aon idrocarburi clorurati o loro miscele ccn alcoli inferiori, che si sottopone l?estratto secco, ottenuto per evaporazione del solvente, a frazionamento cromatografico impiegando cane eluenti miscele di idrocarburi alifatici o aromatici con solventi maggiormente polari, e che il composto (1) recuperato dalle frazioni cromatografiche che lo contengono viene purificato per cristallizzazione.
3. 3. Procedimento secondo la rivendicazione 2, caratterizzato dal fatto che il materiale vegetale ? costituito da corteccia di radici di Taxus media cv Hicksii.
4. 4. Procedimento secondo le rivendicazioni 2-3, caratterizzato dal fatto che l'estrazione viene effettuata con miscele di cloruro di metilene e metanolo.
5. 5. Procedimento secondo le rivendicazioni 2-4, caratterizzato dal fatto che per la separazione cromatografica s1impiegano gel di silice cerne fase stazionaria e toluene/acetone cane eluente.
6. 6. Procedimento secondo le rivendicazioni 2-5, caratterizzato dal fatto che per la cristallizzazione s'impiegano acetone, diisoprapiletere o loro miscele con n-esano o n-eptano.
7. 7. Composizioni farmaceutiche ad attivit? antitimorale , contenenti cane principio attivo il composto (1) secondo la rivendicazione 1.