JP2000297046A - 感染予防治療剤、抗エンドトキシン剤、ワクチンワクチンアジュバント剤および成長促進剤 - Google Patents
感染予防治療剤、抗エンドトキシン剤、ワクチンワクチンアジュバント剤および成長促進剤Info
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Abstract
る、感染予防治療剤、抗エンドトキシン剤、ワクチンア
ジュバント剤および成長促進剤を提供する。 【解決手段】 甘蔗由来のエキスを有効成分とする感
染予防治療剤、抗エンドトキシン剤、ワクチンアジュバ
ント剤及び成長促進剤ならびに、これらの剤を含む食品
および飼料。
Description
めの感染予防治療剤、抗エンドトキシン剤、ワクチンア
ジュバント剤及び成長促進剤に関する。本発明はまた、
ヒト又は動物の感染を予防治療する食品又は飼料に関す
る。本発明はまた、ヒト又は動物のエンドトキシンによ
る疾患を予防治療する食品又は飼料に関する。本発明は
また、ヒト又は動物のワクチンに関するアジュバント作
用を有する食品又は飼料に関する。本発明はまた、ヒト
又は動物の成長を促進する食品又は飼料に関する。
物の種々の疾患あるいは感染症の多くは、免疫機能の低
下乃至は免疫機能の不全が原因と考えられるようになっ
ている。
ー疾患、関節リウマチ、自己免疫疾患、栄養障害、外科
手術、高齢化、癌、臓器移植、妊娠等により多くの場合
免疫機能が低下乃至は不全になり、呼吸器感染症、敗血
症、尿路感染症等の感染症を併発する。従来、このよう
な疾患や感染症に関しては各種抗生物質が投与されてい
る。しかしながら、抗生物質は継続的に投与すると、耐
性菌の発生により特定の抗生物質の効力が減弱して、最
近クローズアップされている院内感染の問題も起きてい
る。このようなことから抗生物質のみに依存するのでは
なく、その使用量を減らし、免疫機能そのものを高める
ことにより感染の予防治療を行う薬品もしくは食品の開
発が望まれている。
又は養殖魚を効率よく飼育するために、大規模飼育、過
密飼育が行われているが、このような飼育形態が原因と
なるストレスや、幼若期における免疫不全により各種感
染症が多発するという問題がある。その対策として病気
の治療、予防のための抗生物質の大量投与が採用されて
いる。しかし、抗生物質の大量投与を行うと、今度は抗
生物質の残留や耐性菌の増加、耐性菌による病気の発生
により、より多くのまたは別の種類の抗生物質を投与す
る必要が出てきている。
療剤は、一般に単一成分もしくは類似構造を持つ複数の
成分を有効成分とし、その成分を抽出、濃縮もしくは合
成することにより剤を得る。従って、その長期摂取ある
いは多量摂取による副作用の心配があった。
る物質がいくつか探索されている。納豆菌、ビフィズス
菌、クロストリジウムの一部の細菌についても免疫賦活
作用があることが知られている。また、卵白(特開平3
−251573号公報)、卵白、菌及びニンニクの2種
以上の組み合わせ(特表平8−509211号公報)、
刺梨、ヨモギ及びキャベツより選ばれる1種又は2種以
上の組み合わせ(特開平6−116158号公報)、甘
草成分(特開平9−143085号公報)の免疫賦活作
用または感染防御作用が報告されている。
キダケ、マッシュルーム等のキノコの培地として用いる
ことができることが知られている。また、担子菌の抽出
物を有効成分とした抗ウイルス剤(特開平2−2866
23号公報、特開平4−66536号公報)、バガス及
び米糠を含有する培地に椎茸菌を培養して得られた培養
物の水性抽出物から分画精製した抗ウイルス物質(特開
平5−4929号公報)が報告されている。
菌類が生産した多糖及びサイトカイニン系活性物質を有
効成分とする抗ウイルス剤が知られている(特開昭55
−157517号公報)。ところが後に同じ発明者が、
バガスに酵素を作用させて又はバガスを煮沸して抽出し
た多糖及び水溶性リグニンの両者を必須の有効成分とす
る抗動物ウイルス剤を特許出願した(特開昭57−10
6624号公報)。しかし、酵素を作用させて抽出して
得た分子量10,000〜50,000の多糖及び分子
量50,000〜100,000の水溶性リグニンを有
効成分とする剤についての実施例のデータは、上記特開
昭55−157517号公報のデータと同じである。バ
ガスから煮沸抽出で得た成分についての抗ウイルス実験
のデータは記載されていない(なお、後の無効審判の過
程で、煮沸抽出についての抽象的記述がすべて削除され
た)。従って、特開昭57−106624号公報の内容
は、特開昭55−157517号公報の内容と実質的に
同じであり、それ以上の知見を与えるものではない。こ
のように、従来より椎茸、霊芝などの担子菌類を含むキ
ノコには様々な生理活性があることが知られており、健
康食品素材として一般的に用いられている。バガスを培
地として培養したこれらのキノコの抽出物のうち、抗ウ
イルス効果を有することが知られているものがあるが、
このような抽出のために担子菌の菌糸体あるいはキノ
コ、あるいはそれらが生成する酵素が必須である。
感染症が発生すると、一般的に抗生物質が投与される。
このような場合、特に感染した細菌数が一定数以上に増
加した段階で抗生物質を投与すると、細菌が一気に死滅
することにより、細菌の内部に存在するエンドトキシン
が宿主内に移動し、ショック症状(エンドトキシンショ
ック)を起こす場合がある。また、抗生物質によるエン
ドトキシンの急激な血中への移行以外の場合でも、細菌
又はそのエンドトキシンが血中を循環し敗血症や敗血症
性ショックを引き起こす場合がある。このようなエンド
トキシンによる疾患を予防又は治療するために、これま
でいくつかの抗エンドトキシン剤が報告されている。
よる疾患の治療法として、抗体を使用する方法(特表昭
61−500355号公報、特表平4−506447号
公報、特開平2−104534号公報、特開平2−13
4329号公報、特開平6−62844号公報、特表平
6−501931号公報など)があり、またトロンビン
阻害剤であるヒルジンを利用する方法(特開平6−16
5691号公報)、変性C反応性蛋白を利用する方法
(特表平7−501545号公報)、1,4−チアジン
誘導体を使用する方法(特開昭63−301876号公
報)、ヘテロ環状誘導体を使用する方法(特開平3−2
40779号公報)、タウリンを有効成分とする抗内毒
素剤(特開平10−158158号公報)、新規化合物
を使用する方法(特開平5−194470号公報)など
が報告されている。
バントが、ワクチンの抗原性増強に重要な役割を果たす
ものと注目されている。特に不活化ワクチンの場合に
は、効果の発現が不安定であるため、アジュバントの投
与が不可欠なものとなっている。
いるアジュバントは、ごま油、菜種油などの植物油、フ
ロイントの完全アジュバント、フロイントの不完全アジ
ュバント等の鉱物オイル、水酸化アルミニウム、硫酸ア
ルミニウム等、いずれもワクチンと共に局所で使用され
るものである。
いくつかの研究がなされている。通常、アジュバント剤
はワクチンと混合し、注射または経口により投与される
が、より安全で自然なアジュバント効果を期待するた
め、天然物起源の経口アジュバントに関するいくつかの
報告がなされている。
有効成分とするインフルエンザウイルスワクチンに対す
るアジュバント剤(特開平7−173069号公報)、
NaFを有効成分とする鳥類用経口アジュバント(特開
平10−59869号公報)、突然変異エンテロトキシ
ンを有効成分とする経口アジュバント(特表平10−5
05059号公報)などが報告されている。また、植物
由来のアジュバント剤としては、植物起源の脂肪油を含
む特定の脂質エマルジョン系、精製無毒化エンドトキシ
ンおよびトレハロースジミコレートからなる多糖類ワク
チン用アジュバント剤(特開昭63−22029号公
報)、合成疎水性リポ多糖および植物起源の界面形成成
分を含有するアジュバント組成物(特開平05−255
117号公報)、アロエから抽出したアセマンナンをア
ジュバントとして含有するワクチン(特表平7−506
565号公報)などが報告されている。
ン、変異型易熱性毒素)やサイトカインIL-12)を応用
する研究も進められている(実験医学、17、p19
9、1999)。
およびエビを短期間に成長させ出荷できるようにするこ
と、及び通常は体が小さく虚弱なため出荷できる状態ま
で成長しないと考えられる虚弱な家畜及び魚介類を成長
させ、生産効率を上げることが望まれている。このよう
な生産効率の改善を目的として、飼料効率を上げて成長
させること、飼料の嗜好性を向上させ本来家畜・魚介類
等があまり好まないが安価である飼料を有効な飼料とし
て用いるようにすること、及び通常は育たないであろう
と考えられる体が小さいことから虚弱である家畜・魚介
類等を出荷できるまで成長させること等を目的とした研
究が多数なされている。
て、大豆、トチュウ、ウコギ、動物胆を含有する動物飼
料添加剤(特開平7−313070号公報)、ビール酵
母とエタノールの混合物を用いる方法(特開昭48−6
1266号公報)、抗生物質のマルチオマイシンを用い
る方法(特開昭52−54013号公報)、チタン錯体
を用いる方法(特開昭58−76050号公報)、グロ
ブリン含有物を使用する方法(特開昭61−13214
3号公報)、カルバゼートを用いる方法(特開昭61−
145156号公報)が報告されている。家畜の成長を
促進させる方法として、β−フェネタノールアミン類を
用いる方法(特開昭59−155343号公報)、上皮
細胞成長因子を用いる方法(特開昭62−240625
号公報)、モルホリン誘導体を用いる方法(特開平1−
6262号公報)、ホルスコリンを用いる方法(特開平
1−320956号公報)が報告されている。飼料要求
率を減少させることにより家畜の体重増加効率を向上さ
せる方法として、果実酢を用いる方法(特開昭48−1
03364号公報)、ブタプロラクチンを用いる方法
(特開平1−230531号公報)、溶菌酵素生成物と
プロテアーゼを用いる方法(特開平2−207756号
公報)が報告されている。家畜飼料の嗜好性を向上させ
ることにより体重を増加させる方法として、ヘキサノー
ル又はヘキサナールを用いる方法(特開平7−3130
67号公報)が報告されている。また、下痢などの疾病
を減少させることにより成長及び体重増加を効率化する
方法として、フラクトオリゴ糖を用いる方法(特開昭6
0−34134号公報)、イヌロオリゴ糖を用いる方法
(特開昭61−40754号公報)、ガラクトシル二糖
を使用する方法(特開平4−360652号公報)、特
定のβ−1,3−グルカンを主鎖とする多糖を使用する
方法(特開平7−50999号公報)、また夾膜を除去
した菌体を有効成分とする体重増加及び免疫増強剤(特
開平2−11519号公報)、スベリヒユを含有する飼
料により免疫を増強させかつ体重を増加させる方法(特
開平6−141784号公報)が報告されている。
果、ワクチンアジュバント効果はどれも免疫に関連して
いるが、これらの作用機構は異なり、感染予防治療剤が
必ずしも抗エンドトキシン剤あるいはワクチンアジュバ
ント剤になりうるわけではない。感染予防治療効果は感
染症を引き起こすウイルスや細菌に対する効果であり、
細菌の産生するエンドトキシンに対する効果とは異なる
ものである。また、高い感染予防治療効果を有するもの
は、ワクチンの抗体価を上げる場合もあるが、ワクチン
と共存する場合に弱毒化ワクチンを攻撃し、ワクチンの
効果をなくしてしまう場合もある。また、抗エンドトキ
シン効果とワクチンアジュバント効果は対象も作用機構
も異なる効果である。従って、従来これらの効果を併せ
持つ天然素材は報告されていなかった。
然の感染予防治療剤および抗エンドトキシン剤は、効力
を示すには高濃度の経口投与が必要であったり、効力を
発揮する添加量を食品や飼料に加えるとそれ自体の味、
におい、風味が強く、食品や飼料の味やにおいに影響を
与えたり、価格が上がるなどの理由で使用範囲が限られ
ていた。従って、広範囲の食品や飼料に添加可能な味や
においを有し、わずかな投与量で感染症の予防治療効果
を示す、安価な天然素材が望まれている。従来報告され
てきた天然の感染予防治療剤及び抗エンドトキシン剤
は、ある特定成分を有効成分とするものが多く、その長
期摂取あるいは多量摂取による副作用の心配があった。
このようなことから、わずかな投与量で感染症の予防治
療効果を示す天然素材の中でも、複数の有効成分を含
む、より天然に近いものが望まれている。
ンアジュバント剤としては、化合物アジュバント、無機
アジュバント、生物的アジュバントなどがあり、これら
は、精製された化合物、無機物、あるいは細菌の生産す
るエンテロトキシンやエンドトキシンなどを無毒化した
ものであった。従来用いられているアジュバントは、効
果の発現が不安定であり、IgEを産生すると言う副作用
が発現する場合もあった。しかし最近は、天然のより安
全性の高いアジュバントを望まれるようになり、また経
口投与により効果が発揮されるものが特に望まれてい
る。
化学物質を用いたもの、植物体又はその抽出物を用いた
もの、酵母などの微生物を用いたもの、植物脱脂大豆な
どの廃棄物を用いたもの、酵素その他のタンパク質や細
胞中に含まれる生理活性を持つ物質など様々なものがあ
ったが、安価で簡便に得られる天然素材の成長促進剤は
ほとんど存在しなかった。
有効な、感染予防治療剤、エンドトキシンショックに対
する予防治療剤(抗エンドトキシン剤)、ワクチンアジ
ュバント剤、および成長促進剤を提供することを目的と
する。
剤、抗エンドトキシン剤、ワクチンアジュバント剤ある
いは成長促進剤を含む食品または飼料を提供することを
目的とする。
題点に鑑み、ヒトあるいは動物に安全な、また低コスト
で製造できる感染予防治療効果、抗エンドトキシン効
果、ワクチンアジュバント効果、あるいは成長促進効果
を有する食品について鋭意検討を重ねてきたが、古来食
品として使用されている甘蔗を処理して得られるエキス
が、細菌あるいはウィルス等に対する感染予防治療効
果、抗エンドトキシン効果、ワクチンアジュバント効
果、及び成長促進効果を発揮することを見出し、本発明
を完成した。
効成分とする感染予防治療剤、抗エンドトキシン剤、ワ
クチンアジュバント剤、及び成長促進剤である。
及び甘蔗由来の糖蜜より選ばれる原料を、固定担体を用
いたカラムクロマトグラフィーで処理することにより得
られる画分を有効成分とする感染予防治療剤、抗エンド
トキシン剤、ワクチンアジュバント剤、及び成長促進剤
である。
原料とし、水、親水性溶媒、またはこれらの混合液を用
いて抽出して得られるエキスを有効成分とする感染予防
治療剤、抗エンドトキシン剤、ワクチンアジュバント
剤、及び成長促進剤である。
は、細菌あるいはウイルスなどに対する感染を予防ある
いは治療する効果を有するものである。そのような効果
とは、具体的には、免疫調節効果による感染予防効果、
その他の機構による感染を予防又は治療する効果を包含
する。
ン効果」とは、エンドトキシンによる疾患を予防治療す
る効果を包含し、エンドトキシンショックや敗血症によ
る死亡を減少させる効果、及び歯周病細菌のエンドトキ
シンによる口腔疾患をも包含する。さらに、ラジカルス
カベンジャーとしての効果や炎症性サイトカインの抑制
効果も期待できる。
ト作用」または「ワクチンアジュバント効果」とは、抗
原の作用を高める効果で、免疫応答を増強する免疫促進
効果である。具体的には、ワクチンを投与する前あるい
は後の特定の期間に投与することにより、ワクチンの抗
体価を上昇させ、ワクチンの投与効果を高める効果であ
る。
とは、幼齢期のヒト又は動物の成長を促進する効果、及
びやせたヒト又は動物の体重を増加させる効果を包含す
る。なお、本明細書においては、成長促進効果と体重増
加促進効果とは特に区別せず、同義としている。
動物を意味し、哺乳類、鳥類および魚類を含む。例えば
ウシ、ブタ、ウマ等の家畜、ニワトリ、ウズラ等の家
禽、ハマチ、タイ、ヒラメ、フグ、カンパチ、アユ、ウ
ナギ、マス、コイ、金魚等の魚類、イヌ、ネコ等のコン
パニオン・アニマルが挙げられる。
甘蔗を原料として得られたエキスである。
スは、甘蔗汁、甘蔗の溶媒抽出液および甘蔗由来の糖蜜
より選ばれる原料(以下で、単に原料ということがあ
る)を固定担体を用いたカラムクロマトグラフィーで処
理して得られる画分である。さらに好ましくは、原料
を、固定担体としての合成吸着剤を充填されたカラムに
通液し、該合成吸着剤に吸着された成分を、水、メタノ
ール、エタノールおよびこれらの混合物から選ばれる溶
媒で溶出することによって得られる画分、あるいは原料
を、固定担体としてのイオン交換樹脂が充填されたカラ
ムでの親和力の差を利用したカラムクロマトフラフィー
処理により分離して得られる画分のうち、波長420n
mの光を吸収する画分である。波長420nmの光を吸
収する画分を電気透析処理に付して塩分を低減、好まし
くは塩分を除去することが好ましい。
の色価の評価は、波長420nmの光の吸光度により行
われている。この吸光度は、サンプルのpHにより若干
影響されるので、通常、pHを中性付近に調整してから
吸光度を測定している。本発明において、吸光度は、サ
ンプルのpHを6〜8の範囲に調整した後に測定される
ものとする。実施例にあるように、得られた画分の凍結
乾燥粉末0.25gを0.5mMリン酸バッファー(p
H7.5)で溶解して全量を100mlにし、1cmセ
ルを用いて波長420nmでの吸光度を測定したとき、
吸光度が0.8以上の画分に本発明の高い効果が認めら
れる。しかし、波長420nmの吸光度は甘蔗由来の色
素の量を示す値であって有効成分自体の量を示す値であ
るかどうかは不明であること、また原料となる甘蔗の産
地や種類により甘蔗自体に含まれる色素の絶対量が異な
ることから、異なる甘蔗に由来する種々のエキスの間で
効果と吸光度が必ずしも比例関係にあるわけではない。
1つの原料から得られる複数の画分の吸光度を測定し、
相対的に吸光度が高い画分が本発明の画分である。
してカラムクロマトグラフィーを行う場合は、本発明の
効果の有効成分の合成吸着剤に対する親和性が非常に強
いため、原料をカラムに通液したとき有効成分が合成吸
着剤に吸着される。その後、溶媒で溶出を行うと、合成
吸着剤に吸着された成分が脱着され溶出される。一方、
固定担体としてイオン交換樹脂を用いた場合には、本発
明の効果の有効成分と樹脂との親和性は吸着ほど強いわ
けではない。有効成分とその他の成分のイオン交換樹脂
に対する親和性の強さに差がある。原料をカラムに供給
し、その後溶離液として水を流すことにより、有効成分
とその他の成分の溶出速度の違いに基づいて両者を分離
することができる。
由来のエキスは、甘蔗由来のバガスを水、親水性溶媒、
およびこれらの混合液より選ばれた溶液で抽出すること
により得られるエキスであり、更に好ましくは、甘蔗か
ら糖汁を圧搾した残渣であるバガスを、水、親水性溶
媒、及びこれらの混合物から選ばれる溶媒で抽出するこ
とにより得られるエキスである。
(サトウキビ)を圧搾して得られる圧搾汁、甘蔗を水で
浸出して得られる浸出汁、または原糖製造工場における
石灰処理した清浄汁、濃縮汁を包含する。
蔗を汎用の有機溶媒で抽出した抽出液を濃縮、乾固後、
水に再溶解した抽出液等を意味する。直上の有機溶媒と
しては、例えばメタノールやエタノールなどのアルコー
ル類が挙げられ、これらを単独でも組み合わせて使用し
ても良い。さらに、これらの溶媒と水を組み合わせて使
用しても良い。
化工程で得られた砂糖結晶と母液の混合物を遠心分離に
かけ、砂糖結晶と分離して得られる振蜜を意味し、例え
ば、原糖製造工場における1番蜜、2番蜜、製糖廃蜜、
および精製糖製造工場における洗糖蜜、1〜7番蜜、精
糖廃蜜等が挙げられる。また、これらの糖蜜を原料とし
てアルコール発酵を行った分離液のように、糖蜜を脱糖
処理したものも同様に用いることができる。
は原糖工場における製糖過程で排出されるバガスをい
う。なおここでいう原糖工場における製糖過程で排出さ
れるバガスには、最終圧搾機を出た最終バガスだけでは
なく、第1圧搾機を含む以降の圧搾機に食い込まれた細
裂甘蔗をも含む。好ましくは、原糖工場において圧搾工
程により糖汁を圧搾した後に排出されるバガスを用い
る。圧搾工程より排出されるバガスは、甘蔗の種類、収
穫時期等により、その含まれる水分、糖分、及びその組
成比が異なるが、本発明においては、これらのバガスを
任意に用いうる。また、原糖工場と同様に、例えば、黒
糖工場において排出される甘蔗圧搾後に残るバガスを使
用しても良い。あるいは、実験室レベルの小規模な実施
では、甘蔗から糖液を圧搾した後のバガスを用いてもよ
い。
的にはたとえば次のようにして得ることができる。
り得る方法について述べる。
糖蜜(以下、単に原料ということがある)を、固定担体
を充填したカラムに通液する。上記原料は、そのまま、
又は水で任意の濃度に調整して、用いることができる。
なお異物除去のために、カラムで処理する前に、原料を
ろ過することが望ましい。ろ過の手法は特に限定され
ず、食品工業で広く使用されているスクリーンろ過、ケ
イソウ土ろ過、精密ろ過、限外ろ過等の手段を好ましく
使用できる。
交換樹脂が好ましい。
方法の好ましい態様は、以下の通りである。合成吸着剤
としては、好ましくは有機系樹脂を用いることができ、
例えば、芳香族系樹脂、アクリル酸系メタクリル樹脂、
アクリロニトリル脂肪族系樹脂等が使用できる。さらに
好ましくは芳香族系樹脂であり、特に無置換基型の芳香
族系樹脂が使用できる。合成吸着剤として、例えばスチ
レン−ジビニルベンゼン系樹脂の芳香族系樹脂などが使
用でき、芳香族系樹脂としては、例えば疎水性置換基を
有する芳香族系樹脂、無置換基型の芳香族系樹脂、無置
換基型に特殊処理を施した芳香族系樹脂等の多孔性樹脂
が使用できる。より好ましくは無置換基型に特殊処理を
施した芳香族系樹脂が使用できる。そのような合成吸着
剤は市販されており、例えばダイヤイオン(商標)HP
−10、HP−20、HP−21、HP−30、HP−
40、HP−50(以上、無置換基型の芳香族系樹脂、
いずれも商品名、三菱化学株式会社製);SP−82
5、SP−800、SP−850、SP−875、SP
−70、SP−700(以上、無置換基型に特殊処理を
施した芳香族系樹脂、いずれも商品名、三菱化学株式会
社製);SP−900(芳香族系樹脂、商品名、三菱化
学株式会社製);アンバーライト(商標)として、XA
D−2、XAD−4、XAD−16、XAD−2000
(以上、芳香族系樹脂、いずれも商品名、株式会社オル
ガノ製);ダイヤイオン(商標)SP−205、SP−
206、SP−207(以上、疎水性置換基を有する芳
香族系樹脂、いずれも商品名、三菱化学株式会社製);
HP−2MG、EX−0021(以上、疎水性置換基を
有する芳香族系樹脂、いずれも商品名、三菱化学株式会
社製);アンバーライト(商標)系として、XAD−
7、XAD−8(以上、アクリル酸系エステル樹脂、い
ずれも商品名、株式会社オルガノ製);ダイヤイオン
(商標)HP1MG、HP2MG(以上、アクリル酸系
メタクリル樹脂、いずれも商品名、三菱化学株式会社
製);セファデックス(商標)系としてLH20、LH
60(以上、架橋デキストランの誘導体、いずれも商品
名、アマシャム ファルマシア バイオテク株式会社
製)などが挙げられる。中でも、SP−850が特に好
ましい。
種類、固定担体の種類などによって変化する。原料の固
形分に対して、0.01〜5倍湿潤体積量が好ましい。
中の本発明の効果を有する成分は固定担体に吸着され、
蔗糖、グルコース、フラクトースおよび無機塩類の大部
分がそのまま流出する。
溶出する。ここで、本発明の効果を有する成分を効率よ
く溶出するには、その前に残留する蔗糖、グルコース、
フラクトースおよび無機塩類を水洗により充分に洗い流
すことが好ましい。これにより、吸着されている目的の
効果を有する成分をより効率よく回収することができ
る。溶出溶媒は、水、メタノール、エタノール及びこれ
らの混合物から選ばれる。溶出溶媒は水とアルコールの
混合溶媒、特にエタノール−水混合溶媒が好ましく、更
に、室温において効率よく目的の効果を有する成分を溶
出できるので、50/50〜60/40(体積/体積)
エタノール−水混合溶媒が好ましい。更に、カラム温度
を上げることにより、エタノール−水混合溶媒のエタノ
ール混合比を減らすことができ、目的とする本発明の効
果を有する成分を溶出することができる。この場合、カ
ラム内は常圧もしくは加圧された状態である。このよう
に、本発明の効果を有する成分は、前記溶媒で溶出され
る画分に存在する。溶出速度はカラムの大きさ、溶媒の
種類、固定担体の種類等によって変化するので特に限定
されないが、SV=0.1〜10hr−1が好ましい。
なお、SV(Space Velocity、空間速度)は、1時間あ
たり樹脂容積の何倍量の液体を通液するかという単位で
ある。
くは次のようにして得ることができ、しかし下記に限定
されない。すなわち、原料の固形分に対して0.01〜
5倍湿潤体積量の無置換基型の芳香族系樹脂を充填した
カラムに、カラム温度60〜97℃にて原料を通液した
後、カラム内を水洗し、次いでカラムに吸着されている
成分を、カラム温度20〜40℃にて50/50〜60
/40(体積/体積)エタノール−水混合溶媒で溶出さ
せ、溶出開始時点から集めた溶出液の量が前記樹脂の4
倍湿潤体積量以内に溶出する画分を回収する。
いる方法の好ましい態様は、以下の通りである。
点から、陽イオン交換樹脂と陰イオン交換樹脂とに分類
されるが、本発明では好ましくは陽イオン交換樹脂が使
用できる。さらに好ましくは強酸性型、ナトリウムイオ
ン型またはカリウムイオン型の陽イオン交換樹脂が使用
できる。またイオン交換樹脂は、樹脂の形態の観点から
は、ゲル型樹脂と、ポーラス型、マイクロポーラス型、
ハイポーラス型などの多孔性樹脂とに分類されるが、本
発明では好ましくはゲル型のイオン交換樹脂が使用でき
る。さらに好ましくは、強酸性型、ナトリウムイオン型
またはカリウムイオン型であるゲル型の陽イオン交換樹
脂が使用できる。そのようなイオン交換樹脂は市販され
ており、例えばダイヤイオン(商標)系としてSK1
B、SK104、SK110、SK112、SK116
(いずれも商品名、三菱化学株式会社)、UBK53
0、UBK550(クロマト分離用、いずれも商品名、
三菱化学株式会社)、アンバーライト(商標)系とし
て、アンバーライトIR120B、IR120BN、I
R124、XT1006、IR118、アンバーリスト
31、クロマトグラフ用アンバーライトCG120、C
G6000(いずれも商品名、オルガノ株式会社)、ダ
ウエックス(商標)系として、HCR−S、HCR−W
2、HGR−W2、モノスフィアー650C、マラソン
C600、50W×2、50W×4、50W×8(いず
れも商品名、ダウ・ケミカル日本株式会社)、ムロマッ
ク50WX(商品名、室町化学工業株式会社)、ピュロ
ライト(商標)系として、C−100E、C−100、
C−100×10、C−120E、PCR433、PC
R563K、PCR822、PCR833、PCR86
6、PCR883、PCR892、PCR945(いず
れも商品名、エイエムピー・アイオネクス株式会社)等
が挙げられる。中でも、UBKシリーズが特に好まし
い。
体の種類などによって変化する。原料の固形分に対し
て、好ましくは2〜10,000倍、より好ましくは5
〜500倍湿潤体積量である。
て水を用いてクロマトグラフィ処理し、得た多数の画分
のうち波長420nmの光を吸収する画分を分取して目
的とするエキスを得ることができる。以下において、こ
の方法をイオンクロマト分離と言うことがある。
種類などによって変化する。溶離液として脱気処理した
水を用い、単塔式回分分離法の場合、流速はSV=0.
3〜1.0hr−1、サンプルの供与量は樹脂の1〜2
0%、温度は40〜70℃が好ましい。この分離法によ
り得た画分の夫々について、波光420nmでの吸収、
電気伝導度(塩分の量の尺度)、蔗糖、ブドウ糖及び果
糖の濃度を分析し、時系列的にグラフに表すと、波長4
20nmでの光吸収のピーク、電気伝導度のピーク、蔗
糖および還元糖のピークの順にピークが現れる。後記の
図3における画分3〜14に相当する画分を、波長42
0nmの光を吸収する画分として分取する。特に画分3
〜8が好ましい。画分3〜8を包含する非蔗糖画分全体
(画分1〜9と画分18〜30をあわせたもの)は、有
効成分の濃度はより低いが、同様にこれを本発明のエキ
スとして使用することができる。擬似移動床式連続分離
法の場合、原料液供給量、溶離液流量、各画分抜き出し
流量を原料の組成、固定担体の種類、樹脂量に合わせて
設定するため、一般的な通液条件を示すことができな
い。
移動床式連続分離法により得られる本画分の組成は、原
料の種類およびイオン交換樹脂の分離能により変化する
が、固形分当たりの蔗糖が6%以下、非糖分が90%以
上、見掛純糖率が10%である。見掛純糖率は、固形分
(ブリックス:Bx.)当たりの糖度(検糖計で測定し
た純蔗糖規定量に対する直接旋光度)の百分率である。
画分は、2番蜜を原料として得られた画分の場合、固形
分(凍結乾燥乾燥固形分)当たりのポリフェノール量が
約5%、電気伝導度塩分が約44.7%、糖分は約5%
である。
長420nmの吸収のピーク部分の画分に多く含まれる
ことは明らかであるが、有効成分自体が420nmの吸
収をもつかどうかは現在のところ明らかではない。
画分あるいは非蔗糖画分に電気透析処理を行って、含有
される塩分を減少または除去することができる。イオン
交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィーにより得ら
れる本画分は、塩濃度が高く、乾燥固形分あたりの硫酸
灰分で約40%である。そのため、塩の味が強く、非常
にしょっぱい味がするため、食品の味に影響を及ぼす。
また、ヒトにおいては塩の取り過ぎは健康に害を及ぼす
ため、ヒトが摂取するためには塩類の濃度を低減させる
必要がある。動物においてもヒトと同様に健康に影響を
及ぼすため摂取できる塩類の濃度に限界がある。特に家
畜においては、各種の塩類の摂取量が定められており、
配合飼料などはそれに合わせた塩濃度に調整されてい
る。従って、家畜に甘蔗由来のエキスを摂取させようと
する場合には、低い塩濃度である方が使用しやすい。こ
のようなことから、得られる画分の塩濃度を低減させる
ことが好ましい。
いてはナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウム
イオン、マグネシウムイオンなどが、イオンの種類に関
わらず、ほぼ均等に脱塩される。陰イオンについては塩
素イオンおよび硫酸イオンのうち塩素イオンが選択的に
脱塩され、硫酸イオンはあまり脱塩されないことが知ら
れている。陰イオンの除去率と同等の割合で陽イオンが
除去される。
来のエキスを得る方法について述べる。
物からなる群より選択される溶媒で抽出することによっ
て、バガス抽出物が得られる。親水性溶媒としては、例
えばメタノール、エタノール等の低級アルコール類、ア
セトンなどのケトン類、酢酸メチルや酢酸エチル等の酢
酸エステル類等を用いることができる。親水性溶媒とし
てはエタノールが好ましい。抽出のための好ましい溶媒
は、60/40体積比以下の比で、より好ましくは50
/50体積比以下の比エタノールを含むエタノール−水
混合溶媒である。抽出温度は、効率よく抽出するために
は、50〜100℃が好ましい。また、抽出時間は、バ
ガスの原料、種類、状態などによっても異なってくる
が、通常1〜3時間である。また抽出方法は、一般的な
汎用性のある方法が使用でき、例えばバガスと抽出溶媒
を共に容器に入れて抽出する方法、抽出溶媒を循環させ
て抽出する方法、連続式に抽出する方法、例えば、デス
メット式抽出機、ルルギ式抽出機等を任意に使用するこ
とができる。バガスから抽出したエキスは糖含量が多い
ので、バガスエキスを上記と同様のカラムクロマトグラ
フィー処理に付すことにより糖を除去してもよい。
エキスを、慣用の手段(減圧下での溶媒除去、凍結乾燥
など)により濃縮して、本発明の効果を有する成分を得
ることができる。このようにして得られた本発明の効果
を有する成分は、固形分20%以上に濃縮した液状又は
粉末状で保存することができる。保存は、特に液状の場
合、冷蔵保存が好ましい。
の甘蔗由来のエキスは、単一ではなく複数の本発明にお
ける有効成分を含み、その製造方法によりエキス中に濃
縮される有効成分の組成は異なっている。
療剤は、一般に単一成分もしくは類似の複数成分を有効
成分とするため、その長期摂取あるいは多量摂取による
副作用の心配があった。しかし、本発明の甘蔗由来のエ
キスは分子量的にかなり広範囲の多数成分を含むため、
より自然な感染予防治療剤であると言える。
いた甘蔗由来のエキスの経口投与による動物実験の結
果、細菌、ウイルスに対する感染予防治療効果を示した
(後述の実施例1〜4)。よって本発明における甘蔗由
来のエキスは免疫の機能を調節することにより感染防御
作用を示すことと考えられる。
免疫機能を調節することにより、各種の免疫機能低下乃
至は不全による疾患の予防、治療のために使用できる。
または、各種感染症に対する予防、治療のために使用で
きる。
ないが、例えばヒトの場合、関節リウマチ、糸球体腎
炎、溶血性貧血、気管支喘息、ベーチェット病、橋本
病、多発性筋炎、全身性エリテマトーデス、全身性進行
性硬化症または一部の腫瘍等の自己免疫疾患、全身、呼
吸器、尿路、腸管、腹腔内、粘膜、皮膚、髄腔または循
環器における感染症、栄養障害児、加齢、抗癌剤投与時
または外科的侵襲時等における各種感染症をあげること
ができる。動物の場合、例えば、ブタの下痢、流行性肺
炎、伝染性胃腸炎等、ニワトリの肺炎、マレック病、ウ
シの下痢、肺炎、乳房炎、ネコ免疫不全症候群及び白血
病などを挙げることができる。さらに、本発明の適用さ
れる養殖魚の感染症も特定されないが、例えば、連鎖球
菌、類結節症等の細菌感染症、ウイルス感染症等広範で
ある。
ヒトのサルモネラ症(Sa1mone11a enteritidis、S.dub1i
n等)、腸炎ビブリオ(Vibrio parahaemolyticus)、腸チ
フス(Salmonella typhi)、病原性大腸菌感染症(Escheri
chia coli)、結核(Mycobacterium tuberculosis)、細菌
性赤痢(Shigella dysenteriae、S. flexneri等)、百日
咳(Bordetella pertussis)、ジフテリア(Corynebacteri
um diphtheriae)、ハンセン氏病(Mycobacterium lepra
e)、ペスト(Yersinia pestis)等が、ウシの乳房炎(Stap
hylococcus aureus、Klebsiella pneumoniae、Streptco
ccus agalactiae、Actinomyces pyogenes等)、ブルセラ
病(Brucella abortus)、カンピロバクター症(Campyloba
cter fetus)、炭疸(Bacillus anthracis)、ヨーネ病(My
cobacteriumavium)、ウシ伝染性角結膜炎(Moraxella bo
vis)、輸送熱(Pasteurella multocida および Pasteure
lla haemolytica)、趾間腐燗(Fusobacterium necrophor
um)等が、ウマの鼻疸(Bordetella mallei)、ウマ伝染性
子宮炎(Taylorella equigenitalis)、回帰熱(Borrelia
theileri)等が、ブタの萎縮性鼻炎(Bordetella bronchi
septica)、豚丹毒(Erysipelothrix rhusiopathiae)、グ
レーサー病(Haemophilus parasuis)等が、ニワトリのひ
な白痢(Salmonella pullorum)、家禽コレラ(Pasteurell
a multocida)、伝染性コリーザ(Haemophilus paragalli
narum)、非定型抗酸菌症(Mycobacterium avium)等が、
イヌのレプトスピラ病(Leptospira canicola)、破傷風
(Clostridium tetani)等が、魚類の連鎖球菌症(Enteroc
occus seriolicida)、類結節症(Pasteurella piscicid
a)、ビブリオ病(Vivrio anguillarum)、パラコロ病(Edw
ardsiella tarda)、冷水病(Flavobacterium psychrophi
lus)、レッドマウス病(Yersinia ruckeri)、尾ぐされ病
(Aeromonas hydrophila)、ノカルジア症(Nocardia aste
roides, Nocardia seriolae)等があげられる。ウイルス
性疾患としては、ヒトのインフルエンザ(Human influen
zavirus)、帯状庖疹(Human herpesvirus 3)、免疫不全
症侯群(Human immunodeficiency syndrome virus)、灰
白性随炎(Polio virus)、風疹(Rubella virus)、麻疹(M
easles virus)、痘瘡(Variola virus)、日本脳炎(Japan
ese encephalitis virus)、流行性耳下腺炎(Mumps viru
s)、エボラ出血熱(Ebola virus)、デング熱(Dengue vir
us)、マールブルグ病(Marburg virus)、リンパ球性脈絡
髄膜炎(Lymphocytic choriomeningitis virus)、成人T
細胞白血病(Human T-lymphotrophic virus)、黄熱(Yell
owfever virus)等が、ウシのウシ伝染性鼻気管炎(Bovin
e herpesvirus 1)、ウシ口蹄疫(Foot-and-mouth diseas
e virus)、ウシ流行熱(Bovine ephemeral fever viru
s)、牛痘(Cowpox virus)、アカバネ病(Akabane viru
s)、イバラキ病(Ibarakivirus)、ブルータング(Blueton
gue virus)、輸送熱(Bovine parainfluenza virus)、リ
フトバレー熱(Rift Valley fever virus)等が、ウマの
ウマ伝染性貧血(Equine infectious anemia virus)、ウ
マ動脈炎(Equine arteritis virus)、ボルナ病(Borna v
irus)、ウマ鼻肺炎(Equid herpesvirus 4)、東部ウマ脳
炎(Easternequine encephalitis virus)等が、ブタのブ
タ伝染性胃腸炎(Porcine transmissible gastroenterit
is virus)、生殖器呼吸器症侯群(Porcine reproductive
and respiratory syndrome virus)、オーエスキー病(P
seudorabies virus)、豚コレラ(Hog cholera virus)、
ブタ水胞病(Swine vesicular disease virus)、ブタ封
入体鼻炎(Suid herpesvirus 2)等が、ニワトリの伝染性
ファブリキウス嚢病(Infectious bursal disease viru
s)、ニューカッスル病(Newcastle disease virus)、鶏
痘(Fowlpox virus)、マレック病(Marek's disease viru
s)、伝染性喉頭気管炎(Infectious laryngotracheitis
virus)、ニワトリ伝染性気管支炎(Avian infectious br
onchitis virus)等が、イヌの狂犬病(Rabies virus)、
ジステンパー(Canine distemper virus)、伝染性肝炎(C
anine adenovirus 1)、パルボウイルス感染症(Canine p
arvovirus)等が、ネコのネコ白血病(Feline leukemia v
irus)、ネコ免疫不全症侯群(Feline immnodeficiency v
irus)、ネコ伝染性腹膜炎(Feline infectious peritoni
tis virus)、汎白血球減少症(Feline panleukopeniavir
us)等が、魚類のイリドウイルス感染症(Flouder viru
s)、伝染性造血器壊死症(Infectious haemotopoietic n
ecrosis virus)、伝染性膵臓壌死症(Infectious pancre
atic necrosis virus)、フグ口白症(未同定)等が挙げ
られる。真菌性疾患としては、ヒトのコクシジオイデス
症(Coccidioides immitis)、ヒストプラズマ症(Hist
oplasma capsulatum)等が、ウシの乳房炎(Candida tr
opicalis)、流産(Aspergillus fumigatus)、皮膚糸
状菌症(Trichophyton verrucosum)、ムコール症(Muc
or rasemosus)等が、ウマの喉嚢真菌症(Aspergillus
nidulans)、伝染性リンパ節炎(Histoplasma farcimin
osum)、ウマ白癬菌症(Trichophyton equinum)等が、
ニワトリのそ嚢炎(Candida albicans)、アスペルギル
ス肺炎(Aspergillus fumigatus)等が、イヌのブラス
トミセス症(Blastomyces dermatitidis)、皮膚糸状菌
症(Microsporum canis)、リンパ節炎(Histoplasma c
apsulatum)、マラセチア症(Malassezia pachydermati
s)等が、魚類の水カビ病(Saprolegnia parasitic
a)、内臓真菌症(Saprolegnia diclina)、真菌性肉芽
腫症(Aphanomyces piscicida)、ピチュウム症(Pythi
um gracile)、鼓脹症(Candida sake)等が挙げられ
る。また、マイコプラズマによる感染症として、ウシの
牛肺疫(Mycoplasma mycoides)、マイコプラズマ性乳房
炎(Mycoplasma bovis)等が、羊の伝染性無乳症(Mycopla
sma agalactiae)等が、ブタのブタ流行性肺炎(Mycoplas
ma hyopneumoniae)等が、ニワトリの慢性上部気道炎(My
coplasma gallisepticum)等が挙げられる。リケッチア
による感染症として、ヒトの発疹チフス(Rickettsia pr
owazekii)、Q熱(Coxiella burnetii)、ネコ引っ掻き病
(Bartonella henselae)等が、ウシの出血熱(Ehrlichia
ondiri)等が、ウマのポトマック熱(Ehrlichia ristici
i)等が、イヌのイヌエールリキア病(Ehrlichia canis)
等が挙げられる。クラミジアによる感染症として、ヒト
のオウム病(Chlamidia psittaci)等が、ウシの流行性ウ
シ流産(Chlamydia psittaci)、散発性ウシ脳脊髄炎(Chl
amydia pecorum)等が、羊の伝染性漿膜炎(Chlamydia pe
corum)、クラミジア多発性関節炎(Chlamydia pecorum)
等が、ネコのクラミジア肺炎(Chlamydia psittaci)等が
挙げられる。
与し、その1日前及び6時間後の2回、甘蔗由来のエキ
スを経口投与するというエンドトキシンモデルで、本発
明の甘蔗由来のエキスは、有意な生存率の上昇を示し
た。従って、甘蔗由来のエキスそのものまたはその代謝
産物が、血中に存在するエンドトキシンに直接作用して
分解、凝集、その他の状態の変化を起こさせ中和する、
エンドトキシンによる補体の過剰な活性化を抑制する、
ラジカルスカベンジャーとして作用する、炎症性サイト
カインを抑制する、またはその他の何らかの機構によっ
てエンドトキシンの効力を低減させるなど、何らかの方
法で抗エンドトキシン効果を発現すると考えられる。従
って本発明の甘蔗由来のエキスはエンドトキシンが原因
となる疾患の予防治療のために使用できる。このような
疾患は特に限定されるものではないが、例えば、エンド
トキシンが細菌からヒトの血中に放出され、発熱、悪
寒、嘔吐、意識障害などの重篤な全身症状が見られる敗
血症やエンドトキシンショック、歯周病細菌のエンドト
キシンによる口腔疾患等が挙げられる。また、このよう
なエンドトキシンを有する細菌として、大腸菌、肺炎桿
菌、プロテウス、緑膿菌、エンテロバクターなどのグラ
ム陰性細菌が挙げられる。
例で説明するようにワクチンアジュバント作用及び成長
促進作用を有する。
キシン剤及び成長促進剤の投与時期は、特に限定されな
い。本発明に係るワクチンアジュバント剤の投与時期
は、ワクチンの投与日前、投与と同日、投与日後のいず
れでもよく特に限定されない。通常はワクチン投与日お
よび/または投与日後である。さらに、ワクチン投与日
前に投与することによって、より確実な効果を期待する
ことができる。投与回数は1回以上であればよく、ワク
チン投与日前に1日〜1週間程度、特にワクチン投与後
には1〜2週間程度、連続または間欠投与することが好
ましく、さらに、引き続き1〜6ヵ月連投しても差し支
えない。
ン剤、ワクチンアジュバント剤、および成長促進剤の投
与量は、甘蔗由来のエキスの精製度、形態、対象とする
動物の種類、健康状態、成長の度合い等によって異なる
ので特に限定されないが、例えば後述の製造例1乃至7
で得た甘蔗由来のエキス粉末の場合には、体重1kg当た
り1日に1〜1000mg、好ましくは50〜1000mgである。
は特に限定されないが、例えば経口的、静脈内、筋肉
内、皮下、皮内、腹腔内、直腸内、舌下、経皮、点眼な
どの方法で投与することにより、感染予防治療効果、抗
エンドトキシン効果、ワクチンアジュバント作用、及び
成長促進効果を発揮する。
際のエキスの形状は特に限定されず、液状または粉末形
状のエキスをそのまま投与してもよく、また通常用いら
れる製剤用担体によって、公知の方法により固形剤とす
ることも液剤とすることもでき、また、製剤化の有無に
かかわらず食品、飼料、飲水等に混合することもでき
る。
スに賦形剤、結合剤、粘結剤、崩壊剤、滑沢剤、着色
剤、矯味矯臭剤、抗酸化剤、溶解補助剤などを加えた
後、常法により錠剤、被覆錠剤、穎粒剤、散剤、カプセ
ル剤などとする。
ーンスターチ、デキストリン、小麦粉、小麦ミドリン
グ、ふすま、米ぬか、米ぬか油かす、大豆かす、大豆
粉、大豆油かす、きな粉、ブドウ糖、乳糖、白糖、マル
トース、植物油、動物油、硬化油、高級飽和脂肪酸、そ
の他の脂肪酸、酵母、マンニトール、結晶セルロース、
二酸化珪秦、無水珪素、珪酸カルシウム、珪酸、リン酸
一水素カルシウム、第ニリン酸カルシウム、リン酸三カ
ルシウム、リン酸カルシウム、リン酸第二水素カルシウ
ムなどが用いられる。
ドン、エチルセルロース、メチルセルロース、アラビア
ゴム、トラガント、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒ
ドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリ
ウム、カゼインナトリウム、カルボキシメチルセルロー
スナトリウム、プロピレングリコール、ポリアクリル酸
ナトリウムなどが用いられる。
ネシウム、タルク、ステアリン酸などが用いられる。
料に添加することが許可されているものであればよく、
特に限定されない。
酸、α一トコフェロール、エトキシキン、ジブチルヒド
ロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール等が挙げ
られ、医薬品や食品、飼料に添加することが許可されて
いるものであればよい。また、錠剤、顆粒剤は必要に応
じてコーティングすることは差し支えない。
て主薬にpH調整剤、緩衝剤、懸濁化剤、溶解補助剤、
安定化剤、等張化剤、抗酸化剤、保存剤などを添加し、
常法により製造することができる。この際必要に応じ、
凍結乾燥剤とすることも可能である。この注射剤は静脈
内、皮下、筋肉内等に投与することができる。
ス、ポリソルベート80、ヒドロキシエチルセルロー
ス、アラビアゴム、トラガント末、カルボキシメチルセ
ルロースナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタンモ
ノラウレートなどを挙げることができる。
チレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート80、ニコチン酸
アミド、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート
などが用いられる。
酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、ソルビン酸など
が用いられる。
抗エンドトキシン剤、ワクチンアジュバント剤及び成長
促進剤を含む食品および飼料を提供する。食品および飼
料は固体でも液体でもよい。食品としては、たとえば菓
子類、清涼飲料、機能性調味料、健康食品等が挙げられ
る。飼料としては、たとえばドッグフード、キャットフ
ードなどのペット用飼料、家畜用飼料、養殖魚介類用飼
料等が挙げられる。
解説する。実施例で使用する物質の投与量に関する記
載、例えば「10mg/kg」または「10mg/kg
体重」は、体重1kg当たり10mgを投与したという
意味である。
形分18.8%)650リットルを、ジュースヒーター
で80℃に加温し、管型限外ろ過(MH−25型、有効
膜面積2m2×3本、分画分子量10万、ダイセル化学
工業株式会社製)でろ過処理して、約600リットルの
処理液を得た。
学株式会社)15リットルを、ウォータージャケット付
きのカラム(カラムサイズ:内径17.0cm、高さ1
00cm)に充填し、これに前記の圧搾汁ろ過処理液
を、流速30リットル/時間(SV=2hr−1)の速
度で通液した。なお、圧搾汁ろ過処理液通液中は、ウォ
ータージャケットには、65℃の水を常に循環させた。
次に、45リットルのイオン交換水を、流速30リット
ル/時間(SV=2hr−1)でカラムに通液して洗浄
した。イオン交換水で洗浄後、カラムから溶出した画分
について糖類の検出を行ったところ、ハンドレフブリッ
クス(Bx)計(アタゴ株式会社製、N−1E型)にお
いて、Bxが約0になっているのを確認した。その後、
溶出溶媒として55%エタノール−水混合溶媒(エタノ
ール/水=55/45(体積/体積))を流速30リッ
トル/時間(SV=2hr−1)にてカラムに通液し
て、合成吸着剤に吸着した成分を溶出させた。なお、溶
出溶媒通過中は、ウォータージャケットには、25℃の
水を常に循環させた。カラム溶出液は5リットルずつ分
取した。溶出パターンを図1に示す(:圧搾汁ろ過処
理液の通液開始時点、:イオン交換水での洗浄開始時
点、:55%エタノール−水混合溶媒での溶出開始時
点)。図において黒丸は、各画分の420nmの光の吸
光度を示し、白角は各画分の糖度を示す。55%エタノ
ール−水混合溶媒でカラムから溶出した画分(図1にお
いてAの部分)を、濃縮機にて約20倍程度に減圧濃縮
した後、1晩凍結乾燥して、茶色の粉末(甘蔗由来のエ
キス)460gを得た。
1.7%)600リットルをそのまま限外ろ過処理せず
に使用した以外は製造例1と同様にして、カラム処理を
行った。このときの溶出パターンを図2に示す(:圧
搾汁ろ過処理液の通液開始時点、:イオン交換水での
洗浄開始時点、:55%エタノール−水混合溶媒での
溶出開始時点)。図2において、Bの画分を分取し、減
圧濃縮した後、1晩凍結乾燥して、225gの茶褐色の
粉末(甘蔗由来のエキス)を得た。
ネット製の袋に入れ、袋ごとタンクに入れ、80℃の水
を25リットル添加し、1時間攪拌抽出した。得られた
抽出液をコットンフィルターで濾過し、異物を除去し
た。濾液を遠心式薄膜濃縮機で減圧濃縮した後、1晩凍
結乾燥して、26.31gの茶褐色の粉末(甘蔗由来の
エキス)を得た。
ンネット製の袋に入れ、50/50体積比のエタノール
/水の5250mlを添加し、室温で2時間攪拌抽出し
た。得られた抽出液をアドバンテック東洋株式会社N
o.2濾紙で濾過し、異物を濾過した。濾液をエバポレ
ーターで減圧濃縮した後、一晩凍結乾燥して、6.72
gの茶褐色の粉末(甘蔗由来のエキス)を得た。
移動床式カラムクロマトグラフィーによる分離) 原糖工場において、結晶缶にて2回蔗糖結晶を回収し、
遠心分離により結晶を除いた振蜜である2番蜜を原料と
して、陽イオン交換樹脂を充填した分離塔を用いた擬似
移動床式連続分離法により、イオン交換カラムクロマト
分離を行った。
での工程は連続的に行われるため、各工程の液の固形分
濃度や組成は時間と共に若干変動するが、以下の濃度や
組成は定常運転における測定値である。
あった。この濃度はカラムクロマト処理を行うには高い
ため、ブリックス約50に希釈した。これに、消石灰、
炭酸ソーダを添加し不純物を凝集させ、珪藻土濾過を行
った。得られた濾液は、ブリックス47.3、糖度(P
ol.)23.6、純糖率(Purity)49.9、
還元糖分2.5%であった。濾液をイオン交換クロマト
グラフィーの原料として用いた。
菱化学株式会社)を用いた擬似移動床式連続分離法によ
るイオン交換クロマトグラフィーを行った。樹脂を充填
した分離塔は8分割されており、1塔当たりの樹脂量は
6.5m3である。原料液と溶離液(水)の供給、およ
び蔗糖画分と非蔗糖画分の抜き出し位置を一定時間毎に
切り替えることにより、連続的に供給、抜き出しを行っ
た。定常時の既定値は、供給流量3m3/時間、溶離水
流量13.5m3/時間、非蔗糖画分抜き出し流量1
2.13m3/時間、蔗糖画分抜き出し流量4.37m
3/時間、切り替え時間267秒であった。このクロマ
トグラフィー処理により、蔗糖画分と非蔗糖画分が分離
された。これらは夫々、後述の図3における画分10〜
17、及び画分1〜9と画分18〜30とを合わせたも
のに相当する。蔗糖画分は蔗糖が固形分当たり約87%
(HPLC分析による)でブリックスは約35であり、
この画分は清浄汁と混合して本工程に戻され、再び蔗糖
を回収する操作を行った。また、得られた非糖画分は、
蔗糖分が約0.3%(HPLC分析による)でブリック
スが約8であった。この非糖画分を濃縮缶により濃縮
し、ブリックス40.0、糖度(Pol.)2.3、純
糖率(Purity)5.8、還元糖分5.4%とし
た。この非蔗糖画分を、後の試験に用いるため一晩、凍
結乾燥処理に付した。得られた凍結乾燥粉末0.25g
を0.5mMリン酸バッファー(pH7.5)で100
ml溶液にし、波長420nmでの吸光度を測定した。
吸光度は、1.11であった。
式回分分離による2番蜜の分画) 原糖工場で得られた2番蜜処理液を原料として、単塔式
回分分離法によるイオン交換カラムクロマトグラフィー
処理を行った。
蜜を希釈後、炭酸ソーダによる清浄処理、珪藻土濾過を
行ったものである。この原料液の分析値は、ブリックス
47.4、糖度(Pol.)23.2、純糖率(Pur
ity)48.9、還元糖分3.2%であった。
ァルマシア株式会社製)を用いた単塔式回分分離法によ
るイオン交換クロマトグラフィーによる分画分離を行っ
た。
UBK530、ナトリウムイオン型(商品名、三菱化学
株式会社)500mlを充填した。カラムは内径26m
m、高さ1000mmで、フローアダプター付きであっ
た。通液条件は、溶出液として脱気した蒸留水を用い、
流速SV=0.5hr−1(4.17ml/分)、温度
60℃で行った。
画条件は、原料供与30分後から溶出液の回収を開始
し、試験管1本当たり3.6分間回収し(約15ml/
本)、全部で30本回収した。
mの吸光度、電気伝導度、及び糖濃度を測定し、図3に
示した。ここで、吸光度測定のために、0.5mMリン
酸バッファー(pH7.5)2mlに各画分0.1ml
を加えて試料とした。電気伝導度測定のために、各画分
を蒸留水で0.5%に希釈して試料とした。糖濃度はH
PLCにより測定された。
ため、波長420nmの吸光ピーク部分を4つに、また
蔗糖のピーク部分を3つに、蔗糖のピーク以降を1つに
まとめた。すなわち、画分3および4を合わせてサンプ
ル1に、画分5および6を合わせてサンプル2に、画分
7および8を合わせてサンプル3に、画分9および10
を合わせてサンプル4に、画分11および12を合わせ
てサンプル5に、画分13および14を合わせてサンプ
ル6に、画分15および16を合わせてサンプル7に、
画分17から30を合わせてサンプル8とした。画分1
および2は溶出される成分がほとんどないため、廃棄し
た。各サンプルを1晩凍結乾燥して、粉末とした。得ら
れた凍結乾燥粉末0.25gを0.5mMリン酸バッフ
ァー(pH7.5)に溶解して、100mlとし、波長
420nmでの吸光度を測定し、下記表に示した。サン
プル8の吸光度は0.86と比較的高かったが、これは
テーリングした成分を集めたものだからである。他のサ
ンプルは2画分ずつを一緒にしたものであるのに対し、
サンプル8は14画分を合わせたものである。従って、
420nmの吸光度は高いが、この画分だけを本効果の
画分として回収するのは効率が悪い。表中の伝導度灰分
は、電気伝導度と既知の硫酸灰分の関係の検量線から係
数を求め、算出したものである。
た。表において、凍結乾燥固形分の分配比率は、全サン
プルの固形分重量の合計に対する各サンプルの固形分重
量の比(%)である。伝導度灰分及び各糖の含量は、各
サンプルの固形分重量に対する比である。糖分含量か
ら、サンプル1〜3が非糖分画分に相当し、サンプル4
〜8が糖分画分に相当する事が判る。
キスを電気透析により脱塩した) イオン交換膜としてカチオン交換膜セレミオンCMV
(商品名、旭硝子株式会社製)およびアニオン交換膜セ
レミオンAMV(商品名、旭硝子株式会社製)を備えた
電気透析槽(CH−0型、旭硝子株式会社製)用いて、
製造例5で得た甘蔗由来のエキス(濃縮された液体)を
電気透析に付して、脱塩を行った。
トリウム溶液10リットル、電極液として50g/リッ
トルの硫酸ナトリウム溶液4.0リットルを用いた。原
料として10.7リットルのイオンクロマト分離液を使
用した。
圧を3.0Vの定電圧に設定した。電流ははじめ8.1
5Aであるが、脱塩が進むにつれて下がっていった。運
転開始から5時間経過したときに電流は1.6Aとな
り、このとき濃縮液8リットルを抜き取り、水8リット
ルを添加して希釈した。その後運転を再開し合計7時間
脱塩処理を行い、このときの電流は0.6Aであった。
脱塩の経過を確認するため、脱塩液の塩素イオン濃度、
硫酸イオン濃度を経時的に測定した。電気透析による脱
塩処理では、陰イオンと陽イオンが同じ割合で除去され
る。陽イオンに関しては、カリウムイオン、ナトリウム
イオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオンなど
が、イオンの種類に関わらずほぼ均等に脱塩されるが、
陰イオンについては塩素イオンと硫酸イオンの除去率が
異なっている。そこで、本実施例では代表して陰イオン
である塩素イオンと硫酸イオンの乾燥固形分あたりの含
量をHPLCで測定し、除去率を測定した。開始時の脱
塩されるエキスの塩素イオン含量は5.45重量%、硫
酸イオン含量は7.41重量%、乾燥固形分あたりの硫
酸塩分は43.0重量%であった。脱塩終了時の塩素イ
オン含量は0.03重量%(除去率99.4%)、硫酸
イオン含量は6.61重量%(除去率10.8%)、乾
燥固形分あたりの硫酸塩分は34.7重量%(除去率1
9.3%)であった。
されないが、塩素イオンはほとんど除去された。得たエ
キスを1晩凍結乾燥して、粉末にした。得られた粉末
0.25gを0.5mMリン酸バッファー(pH7.
5)に溶解し100mlとし、波長420nmでの吸光
度を測定した。吸光度は、1.26であった。
験 製造例1で得られたエキス粉末を使用して、ラットを用
いた単回経口投与毒性試験を行った。Sprauge-Dawley系
SPFラット(Crj:CD(SD))の雌雄各16匹を5週令で入
手し、約1週間検疫・馴化飼育した後、健康な動物を選
び、6週令で試験に供した。投与時の体重範囲は雄で15
7〜171g、雌で123〜133gであった。
度50±2%、換気回数1時間10〜15回、照明1日12時間
の飼育室で固形飼料(CRF−1(商品名)、オリエン
タル酵母株式会社)及び飲料水を自由に摂取させて飼育
した。
に、一定の投与容量10ml/kg体重にて、所定濃度の甘蔗
由来のエキス粉末を1回強制経口投与した。対照群の動
物には滅菌蒸留水のみを同様に投与した。なお、絶食後
の再給餌は投与6時間後に実施した。
量とし、これに対照群を加えて計3群を使用した。1群
の動物数は雌雄共に5匹とした。結果を以下の表2に示
す。
量の1000mg/kgでも、ラットの死亡は認められなかった
ので、致死量は1000mg/kgを上回るものと推定される。
められず、さらに各被検液投与群の雌雄の体重は、対照
群とほぼ同等の推移を示し、観察期間中の体重増加も対
照群とほぼ同等であった。また、いずれのラットにおい
ても、解剖学的検査の結果、体外表、頭部、胸部及び腹
部の器官・組織に異常は見られなかった。
ス粉末をラットに単回経口投与毒性試験を行ったときの
毒性は極めて弱いものと考えられる。
する抗菌活性 製造例1〜4で得られたエキス粉末をそれぞれ用いて、
大腸菌(Escherichiacoli)6種に対する最小発育阻止
濃度(MIC μg/ml)を、日本化学療法学会法に準拠して
調べた。エキスを滅菌蒸留水で溶解・希釈し、100μg/m
l、300μg/ml、1000μg/ml、3000μg/ml、10000μg/ml
の5段階で測定した。その結果、大腸菌6種に対するMI
Cはすべて10000μg/mlであり、強い抗菌活性は認められ
なかった。結果を以下の表3に示す。
菌)に関して同様の試験を行った結果、細菌(Pseudomo
nas aureofaciens)、酵母(Saccharomyces cerevisia
e、Hansenula anomala等)、真菌(Chaetomium globsu
m)については、MICが1000μg/mlであり、大腸菌に
対するよりも高い抗菌作用が認められた。
殖抑制試験 製造例1および2で得られた甘蔗由来のエキス粉末をそ
れぞれ用いて、コクサッキーウイルス(Coxsackie viru
s type B6 Schmitt株)及びヘルペスウイルス(Herpes
simplex virus type 1 HF株)の増殖抑制能を調べた。
−R66細胞)に対する細胞毒性を調べた。甘蔗由来の
エキスを滅菌蒸留水に溶解し、最終濃度が125〜2000μg
/mlになるように調製し、培養細胞にかけた。4日間培
養し、細胞変性の有無を検鏡して判断した。その結果、
表4に示すように、1000μg/mlまでの濃度では、細胞に
対する毒性は認められなかった。
ウイルスの吸着後これを除去した。細胞の維持培地に甘
蔗由来のエキスが最終濃度125〜1000μg/mlになるよう
に添加し、ウイルスが吸着した細胞を4日間培養した。
培養後、ウイルス増殖の有無を検鏡して判定した。その
結果、表5及び表6に示すように、甘蔗由来のエキス
は、コクサッキーウイルスに対する増殖抑制効果はもた
ないが、ヘルペスウイルスに対し、500〜1000μg/mlの
作用濃度で増殖抑制能をもつことが明らかになった。
試し、菌攻撃1日前に、前記製造例1〜4で調製したエ
キスをそれぞれ滅菌蒸留水で溶解または懸濁したもの
を、100mg/kg又は500mg/kgになるように強制経口投与し
た。一方、対照区にも、同容量の滅菌蒸留水を経口投与
した。菌攻撃は、ヒト由来大腸菌(E.coli)の希釈菌液
の1MLDの菌量0.2ml(4.0×107CFU/マウス)を、マウ
スの皮下に接種し、4日後の生存率を求めた。判定はχ
2検定により検定し、その結果を表7に示した。
た群では、明らかに生存率が上昇しており、また投与量
依存的に生存数が上昇した。すなわち、甘蔗由来のエキ
スには、感染防御効果が認められた。
以下の処理エキスを調製した。まず、製造例2で調製し
たエキスを滅菌水に懸濁し、分画分子量1000のセルロー
スエステル製の透析チューブ(Spectra/Por(商標) CE
(Cellulose Ester) Membrum MWCO:1000、スペクトラム
社製)に入れ、滅菌水に対して透析を行った。得られた
透析膜の内液を分子量1000以上の画分、外液を分子量10
00以下の画分としてそれぞれ濃縮、乾固し試験に用い
た。 2)抗ウイルス試験 Slc:ICRマウス雄5週令(体重約30g)を一群10匹で
供試し、ウイルス攻撃直後、1日後、2日後の計3回
(又は1日3回×3日間連続投与の計9回)のタイミン
グで、製造例1〜4のエキス、及び製造例2の処理エキ
ス(分子量1000以下の画分及び分子量1000以上の画分)
を、それぞれ滅菌蒸留水で溶解または懸濁したものを、
表7に示す量で強制経口投与または筋肉内投与した。一
方、対照区にも同容量の滅菌蒸留水を経口投与した。ウ
イルス攻撃は、ブタ由来オーエスキーウイルスの希釈ウ
イルス液の1MLD(133PFU/mouse)のウイルス量0.2mlを
マウスの皮下に接種し、7日後の生存率を求めた。判定
はχ2検定により検定し、その結果を表8に示した。
に生存率が上昇しており、また投与量依存的に生存数が
上昇した。すなわち、甘蔗由来のエキスにはウイルス感
染防御効果が認められた。また、製造例2の処理エキス
では、分子量1000以下の画分の方が分子量1000以上の画
分より効果が高かった。また、筋肉内投与により有意な
生存率が認められたことから、本発明の甘蔗由来のエキ
スは筋肉内投与によっても効果を示すことがわかる。
染防御試験) 1)供試したエキス 製造例5で調製したイオンクロマト分離によるエキスの
粉末、および製造例7で調製したイオンクロマト分離に
よるエキスの脱塩物の粉末を用いた。 2)大腸菌感染防御試験 Slc:ICRマウス雄5週令(体重約30g)を一群10匹で供
試し、菌攻撃1日前に、上記エキス粉末をそれぞれ滅菌
蒸留水で溶解または懸濁したものを表9に示す量で強制
経口投与した。一方、対照区にも、同容量の滅菌蒸留水
を経口投与した。菌攻撃のために、ヒト由来大腸菌(E.
coli)の希釈菌液の1MLDの菌量0.2ml(4.0×107CFU/
マウス)を、マウスの皮下に接種し、4日後の生存率を
求めた。判定はχ2検定により検定し、その結果を表9
に示した。その結果、甘蔗由来のエキスを投与した群で
は明らかに生存率が上昇しており、また投与量依存的に
生存数が上昇した。また、脱塩の影響はあらわれなかっ
た。
ス試験) 1)供試したエキス 製造例5で調製したイオンクロマト分離によるエキス粉
末、製造例6で調製したサンプル1〜8の粉末、および
製造例7で調製したイオンクロマト分離によるエキスの
脱塩物の粉末の合計10種類の甘蔗由来のエキスを試験
に用いた。 2)抗ウイルス試験 Slc:ICRマウス雄5週令(体重約30g)を一群10匹で
供試し、ウイルス攻撃直後、1日後、2日後の計3回の
タイミングで、上記エキス粉末をそれぞれ滅菌蒸留水で
溶解または懸濁したものを、表10に示す量で強制経口
投与した。一方、対照区にも同容量の滅菌蒸留水を強制
経口投与した。ウイルス攻撃のために、ブタ由来オーエ
スキーウイルスの希釈ウイルス液の1MLD(133PFU/mous
e)のウイルス量0.2mlをマウスの皮下に接種した。7日
後の生存率を求めた。判定はχ2検定により検定し、そ
の結果を表10に示した。試験の結果、甘蔗由来のエキ
スを投与した群では明らかに生存率が上昇しており、ま
た投与量依存的に生存数が上昇した。非糖分含量が高
い、製造例5のエキス、製造例6のエキスのサンプル1
〜3、製造例7のエキスは、特に高い生存率を示した。
従って、糖は本活性成分ではないと考えられる。
キス液およびバガス抽出エキスのセファデックスG−2
5による分子量による分画および抗ウイルス効果) 製造例3(バガスの熱水抽出エキス)及び製造例5(イ
オンクロマト分離によるエキス液)で得られたエキスを
使用して、分子量による分画のため、ゲル濾過クロマト
グラフィーを行った。ゲル濾過に使用するエキスに沈殿
物などが含まれていると目詰まりの原因となるため、前
処理を行った。製造例3のエキスをブリックス17.5
〜17.8に蒸留水で希釈し、遠心分離(600×g、
15分間)により不溶物を除去した。上清を定性濾紙N
o.2(アドバンテック東洋株式会社)もしくはガラス
繊維濾紙GA55(アドバンテック東洋株式会社)で吸
引ろ過し、濾液をゲル濾過クロマトグラフィー用サンプ
ルとした。製造例5のエキスをブリックス18.7〜2
2.2に蒸留水で希釈し、ガラス繊維濾紙GA55(ア
ドバンテック東洋株式会社)で濾過した濾液をゲル濾過
クロマトグラフィー用サンプルとした。ゲル濾過クロマ
トグラフィー用担体として、Sephadex G−25 Superf
ine(商品名、アマシャム ファルマシア バイオテク
株式会社)315mlを、カラム(カラムサイズ:内径
26mm、高さ630mm)に充填し、クロマト装置と
してFPLCシステム(ファルマシア株式会社)を使用
した。通液条件は、脱気した35%エタノール(エタノ
ール/水=35/65(体積/体積))を通液溶媒と
し、流速SV=0.25hr−1(1.32ml/
分)、室温であった。サンプル供給量は、製造例3のエ
キスを用いた場合、前処理として定量濾紙を用いたサン
プルは6ml、ガラス繊維濾紙を用いた場合は17ml
とした。また、製造例5のエキスを用いたときは6ml
とした。クロマトグラフィー処理は、チャートの再現性
を確認するため、同一条件で5回以上繰り返して行っ
た。分画は、原料供給開始から約80分後から回収を開
始し、15分ごとに1本分取した。製造例3および5の
エキスは、それぞれ20画分に分画された。カラムクロ
マトグラフィーの溶出パターンを図4と図5に示した。
また、同一条件で分子量マーカーをクロマトグラフィー
処理した際の溶出パターンを図6に示した。得られた2
0画分を分子量10000以上のサンプル1(画分1〜
4)、電気伝導度のピークの手前までのサンプル2(画
分5〜11)、塩類を多く含むサンプル3(画分12か
ら20)の3つのサンプルとした。これらのサンプル1
〜3を凍結乾燥粉末とした。分析値を表11に示す。凍
結乾燥固形分の分配比率、及び各糖分の含量の定義は表
1におけると同じである。各粉末を用いて、実施例4と
同様な方法で抗ウイルス試験を行った。結果を表12に
示す。試験の結果、サンプル1〜3の間に有意な差は認
められなかった。このことから、イオンクロマト分離に
よるエキスおよびバガスの熱水抽出エキスには抗ウイル
ス活性を示す物質が複数存在し、分子量の広い範囲に分
布することがわかった。
価試験) 1)供試したエキス 製造例1のエキス粉末(カラムクロマトグラフィー法に
より得られたエキス)、製造例3のエキス粉末(バガス
抽出物)、製造例5のエキス粉末(イオンクロマト分離
によるエキス)、および製造例7のエキス粉末(イオン
クロマト分離によるエキス脱塩処理物)を用いた。 2)ワクチンアジュバント効果評価試験 各群10匹のSlc:ICRマウス(雄、5週令、体重約30
g)を使用し、甘蔗由来の各種エキスの投与によるワク
チンアジュバント効果を検討した。製造例1、3、5ま
たは7のエキス投与区では、市販のブタオーエスキーウ
イルスワクチン(AWV)を生理食塩液で約20倍に希釈
し、0.2mlをマウスに筋肉内投与した。同日(ワクチン
投与後)から各エキス粉末500mg(非糖分)/kgを
0.5mlの滅菌水に溶解し、1日1回、6日間、経口
投与した。ワクチン投与日の14日後に、ブタ由来オー
エスキーウイルス希釈液0.2ml(生理食塩液で希釈、1ML
D相当)を皮下接種して攻撃し、その7日後の生存率を
求めた。また、製造例3のエキスに関しては、100mg
(非糖分)/kgのエキス粉末を0.5mlの滅菌水に溶解し、
ワクチンと混合して筋肉内に単回投与する群も設定し
た。ワクチン無投与区では、ワクチンの代わりに生理食
塩液0.2ml、エキスの代わりに滅菌水0.5mlをそれぞれ投
与した。また、エキス無投与区では、エキスの代わりに
滅菌水0.5mlを投与した。アジュバント効果の有無の判
定は、エキス無投与(ワクチン単独投与)区の生存率と
のχ2検定により行った。結果を表13に示した。ワク
チン無投与区とエキス無投与(ワクチン単独投与)区と
の間には明らかに差が認められなかった。また、甘蔗由
来のエキスとワクチンを混合して筋肉内投与した場合
は、生存率に有意差が認められなかった。これらに対
し、甘蔗由来のエキスを経口投与したエキス投与区で
は、生存率の有意な上昇が認められ、ワクチンのアジュ
バント効果があることが示された。
実施例2と同様な方法で処理した製造例2の処理エキス粉
末(分子量1000以下の画分及び分子量1000以上の画分)
を試験に用いた。 2)抗エンドトキシン効果確認試験 Slc:ICRマウス雄5週令(体重約30g)を一群10匹で
供試し、エンドトキシン(リポポリサッカライド、以下
「LPS」とする)攻撃、1日前および6時間後の計2
回のタイミングで、製造例1〜4のエキス及び製造例2
の処理エキス(分子量1000以下の画分及び分子量1000以
上の画分)を滅菌蒸留水で溶解・懸濁後、100mg/kgの割
合で、強制経口投与した。一方、対照区にも同容量の滅
菌蒸留水を経口投与した。エンドトキシン攻撃は、大腸
菌由来のLPSの最小致死量0.2mlを、マウスの尾静脈
に接種し、4日後の生存率を求めた。判定はχ2検定に
より検定し、その結果を表14に示した。
に生存率が上昇していることから、本発明のエキスは抗
エンドトキシン効果を示すことが考えられる。また、製
造例2の処理エキスでは低分子量画分の方が高分子量画
分より効果が高かった。
験) 1)供試したエキス 製造例5のエキス粉末(イオンクロマト分離によるエキ
ス)および製造例7のエキス粉末(イオンクロマト分離
によるエキスの脱塩物)を用いた。 2)抗エンドトキシン効果評価試験 Slc:ICRマウス雄5週令(体重約30g)を一群10匹で
供試し、エンドトキシン(LPS)攻撃、1日前および
6時間後の計2回のタイミングで、エキスを蒸留水で溶
解・懸濁後、100mg/kgの割合で、強制経口投与した。一
方、対照区にも同容量の滅菌蒸留水を強制経口投与し
た。エンドトキシン攻撃は、大腸菌由来のLPSの最小
致死量0.2mlを、マウスの尾静脈に接種し、4日後の生
存率を求めた。判定はχ2検定により行い、結果を表1
5に示した。
した。一区はMF標準飼料対照区、2〜5区は製造例1〜
4で調製したエキス0.1%添加MF標準飼料区で、28日間
飼育した。終了時に体重測定を行い、併せて採血・血漿
の生化学的検査も実施した。体重増加の結果を表16
に、血漿の生化学的検査の結果を表17に示す。表中の
増体重は、試験期間中に増加した体重の量を示し、増体
率は試験開始時の体重1gに対して増加した体重の量を
示している。増体率比は対照区の増体率を100%とし
たときの増体率を示している。
群では明らかに体重が増加しており、成長促進活性が認
められた。また、生化学的検査の結果、異常は認められ
なかった。
ス粉末を用いた成長促進効果) Slc:ICRマウス雄3週令(体重約12g)を一群5匹で
供試した。糖分は有効成分ではないと考え、非糖分の投
与量を一定とした。対照区にはMF標準飼料を与え、エキ
ス投与区には製造例3のエキス(バガス抽出物)、製造
例5のエキス(イオンクロマト分離によるエキス)、ま
たは製造例7のエキス(イオンクロマト分離によるエキ
スの脱塩物)をそれぞれ非糖分で0.1%添加したMF標
準飼料を自由摂取させ、28日間飼育した。終了時に体
重測定を行い、併せて採血・血漿の生化学的検査も実施
した。体重増加の結果を表18に、血漿の生化学的検査
の結果を表19に示す。表中の増体重は、試験期間中に
増加した体重の量を示し、増体率は試験開始時の体重1
gに対して増加した体重の量を示している。増体率比は
対照区の増体率を100%としたときの増体率を示して
いる。
ト又は動物に例えば経口的に与えることにより、ヒト又
は動物に対する細菌及びウイルス等による感染を予防治
療することができ、またエンドトキシンによる疾患も予
防することができる。また、甘蔗由来のエキスは、ヒト
又は動物に例えば経口的に与えることにより、ワクチン
アジュバントとして作用し、また成長を促進することが
できる。しかも、甘蔗由来のエキスは植物由来であり、
古来より、ヒトが黒糖などの含蜜糖として食してきた天
然物であるため、ヒト及び動物の健康を害することなく
安全で、しかも低コストである。また、天然物であるに
もかかわらずその感染予防治効果、抗エンドトキシン効
果、ワクチンアジュバント効果、および成長促進効果は
高く、少量で作用するため、産業上非常に有用である。
おける溶出パターンを示す図。
おける溶出パターンを示す図。
により得た画分の吸光度、電気伝導度及び糖濃度を示す
グラフ。
の溶出パターンを示すグラフ。
の溶出パターンを示すグラフ。
溶出パターンを示すグラフ。
Claims (60)
- 【請求項1】 甘蔗由来のエキスを有効成分とする感染
予防治療剤。 - 【請求項2】 甘蔗由来のエキスが、甘蔗汁、甘蔗の溶
媒抽出液および甘蔗由来の糖蜜より選ばれる原料を、固
定担体を用いたカラムクロマトグラフィーで処理するこ
とにより得られる画分である請求項1記載の感染予防治
療剤。 - 【請求項3】 甘蔗由来のエキスが、甘蔗汁、甘蔗の溶
媒抽出液および甘蔗由来の糖蜜より選ばれる原料を、固
定担体としての合成吸着剤を充填したカラムに通液し、
該合成吸着剤に吸着された成分を、水、メタノール、エ
タノール及びこれらの混合物から選ばれる溶媒で溶出す
ることにより得られる画分である請求項2記載の感染予
防治療剤。 - 【請求項4】 甘蔗由来のエキスが、甘蔗汁、甘蔗の溶
媒抽出液および甘蔗由来の糖蜜より選ばれる原料を、固
定担体としてのイオン交換樹脂を充填したカラムでの親
和力の差を利用したカラムクロマトグラフィー処理によ
り分離して得られる画分のうち、波長420nmの光を
吸収する画分である請求項2記載の感染予防治療剤。 - 【請求項5】 イオン交換樹脂が陽イオン交換樹脂であ
る請求項4記載の感染予防治療剤。 - 【請求項6】 陽イオン交換樹脂が強酸性陽イオン交換
樹脂である請求項5記載の感染予防治療剤。 - 【請求項7】 強酸性陽イオン交換樹脂がナトリウムイ
オン型もしくはカリウムイオン型である請求項6記載の
感染予防治療剤。 - 【請求項8】 イオン交換樹脂がゲル型である請求項4
〜7のいずれか一項記載の感染予防治療剤。 - 【請求項9】 カラムクロマトグラフィー処理が擬似移
動床式連続分離法で行われる請求項4〜8のいずれか一
項記載の感染予防治療剤。 - 【請求項10】 波長420nmの光を吸収する画分を
更に電気透析処理に付して塩分を低減したところの、請
求項4〜9のいずれか一項記載の感染予防治療剤。 - 【請求項11】 甘蔗由来のエキスが、バガスを水、親
水性溶剤、またはこれらの混合物で抽出して得られるも
のである請求項1記載の感染予防治療剤。 - 【請求項12】 親水性溶媒がエタノールである請求項
11記載の感染予防治療剤。 - 【請求項13】 抽出のための親水性溶媒が、60/4
0体積比以下の比でエタノールを含むエタノール−水混
合溶媒である請求項11記載の感染予防治療剤。 - 【請求項14】 請求項1〜13のいずれか一項記載の
感染予防治療剤を含む食品。 - 【請求項15】 請求項1〜13のいずれか一項記載の
感染予防治療剤を含む飼料。 - 【請求項16】 甘蔗由来のエキスを有効成分とするワ
クチンワクチンアジュバント剤。 - 【請求項17】 甘蔗由来のエキスが、甘蔗汁、甘蔗の
溶媒抽出液および甘蔗由来の糖蜜より選ばれる原料を、
固定担体を用いたカラムクロマトグラフィーで処理する
ことにより得られる画分である請求項16記載のワクチ
ンワクチンアジュバント剤。 - 【請求項18】 甘蔗由来のエキスが、甘蔗汁、甘蔗の
溶媒抽出液および甘蔗由来の糖蜜より選ばれる原料を、
固定担体としての合成吸着剤を充填したカラムに通液
し、該合成吸着剤に吸着された成分を、水、メタノー
ル、エタノール及びこれらの混合物から選ばれる溶媒で
溶出することにより得られる画分である請求項17記載
のワクチンワクチンアジュバント剤。 - 【請求項19】 甘蔗由来のエキスが、甘蔗汁、甘蔗の
溶媒抽出液および甘蔗由来の糖蜜より選ばれる原料を、
固定担体としてのイオン交換樹脂を充填したカラムでの
親和力の差を利用したカラムクロマトグラフィー処理に
より分離して得られる画分のうち、波長420nmの光
を吸収する画分である請求項17記載のワクチンワクチ
ンアジュバント剤。 - 【請求項20】 イオン交換樹脂が陽イオン交換樹脂で
ある請求項19記載のワクチンワクチンアジュバント
剤。 - 【請求項21】 陽イオン交換樹脂が強酸性陽イオン交
換樹脂である請求項20記載のワクチンワクチンアジュ
バント剤。 - 【請求項22】 強酸性陽イオン交換樹脂がナトリウム
イオン型もしくはカリウムイオン型である請求項21記
載のワクチンワクチンアジュバント剤。 - 【請求項23】 イオン交換樹脂がゲル型である請求項
19〜22のいずれか一項記載のワクチンワクチンアジ
ュバント剤。 - 【請求項24】 カラムクロマトグラフィー処理が擬似
移動床式連続分離法で行われる請求項19〜23のいず
れか一項記載のワクチンワクチンアジュバント剤。 - 【請求項25】 波長420nmの光を吸収する画分を
更に電気透析処理に付して塩分を低減したところの、請
求項19〜24のいずれか一項記載のワクチンワクチン
アジュバント剤。 - 【請求項26】 甘蔗由来のエキスが、バガスを水、親
水性溶剤、またはこれらの混合物で抽出して得られるも
のである請求項16記載のワクチンワクチンアジュバン
ト剤。 - 【請求項27】 抽出時の親水性溶剤がエタノールであ
る請求項26記載のワクチンワクチンアジュバント剤。 - 【請求項28】 抽出のための溶媒が、60/40体積
比以下の比でエタノールを含むエタノール−水混合溶媒
である請求項26記載のワクチンワクチンアジュバント
剤。 - 【請求項29】 請求項16〜28のいずれか一項記載
のワクチンワクチンアジュバント剤を含む食品。 - 【請求項30】請求項16〜28のいずれか一項記載の
ワクチンワクチンアジュバント剤を含む飼料。 - 【請求項31】甘蔗由来のエキスを有効成分とする抗エ
ンドトキシン剤。 - 【請求項32】甘蔗由来のエキスが、甘蔗汁、甘蔗の溶
媒抽出液および甘蔗由来の糖蜜より選ばれる原料を、固
定担体を用いたカラムクロマトグラフィーで処理するこ
とにより得られる画分である請求項31記載の抗エンド
トキシン剤。 - 【請求項33】 甘蔗由来のエキスが、甘蔗汁、甘蔗の
溶媒抽出液および甘蔗由来の糖蜜より選ばれる原料を、
固定担体としての合成吸着剤を充填したカラムに通液
し、該合成吸着剤に吸着された成分を、水、メタノー
ル、エタノール及びこれらの混合物から選ばれる溶媒で
溶出することにより得られる画分である請求項32記載
の抗エンドトキシン剤。 - 【請求項34】 甘蔗由来のエキスが、甘蔗汁、甘蔗の
溶媒抽出液および甘蔗由来の糖蜜より選ばれる原料を、
固定担体としてのイオン交換樹脂を充填したカラムでの
親和力の差を利用したカラムクロマトグラフィー処理に
より分離して得られる画分のうち、波長420nmの光
を吸収する画分である請求項32記載の抗エンドトキシ
ン剤。 - 【請求項35】 イオン交換樹脂が陽イオン交換樹脂で
ある請求項34記載の抗エンドトキシン剤。 - 【請求項36】 陽イオン交換樹脂が強酸性陽イオン交
換樹脂である請求項35記載の抗エンドトキシン剤。 - 【請求項37】 強酸性陽イオン交換樹脂がナトリウム
イオン型もしくはカリウムイオン型である請求項36記
載の抗エンドトキシン剤。 - 【請求項38】 イオン交換樹脂がゲル型である請求項
34〜37のいずれか一項記載の抗エンドトキシン剤。 - 【請求項39】 カラムクロマトグラフィー処理が擬似
移動床式連続分離法で行われる請求項34〜38のいず
れか一項記載の抗エンドトキシン剤。 - 【請求項40】 波長420nmの光を強く吸収する画
分を更に電気透析処理に付して塩分を低減したところ
の、請求項34〜39のいずれか一項記載の抗エンドト
キシン剤。 - 【請求項41】 甘蔗由来のエキスが、バガスを水、親
水性溶剤、またはこれらの混合物で抽出して得られるも
のである請求項31記載の抗エンドトキシン剤。 - 【請求項42】 親水性溶剤がエタノールである請求項
41記載の抗エンドトキシン剤。 - 【請求項43】 抽出のための溶媒が、60/40体積
比以下の比でエタノールを含むエタノール−水混溶媒で
ある請求項41記載の抗エンドトキシン剤。 - 【請求項44】 請求項31〜43のいずれか一項記載
の抗エンドトキシン剤を含む食品。 - 【請求項45】 請求項31〜43のいずれか一項記載
の抗エンドトキシン剤を含む飼料。 - 【請求項46】 甘蔗由来のエキスを有効成分とする成
長促進剤。 - 【請求項47】 甘蔗由来のエキスが、甘蔗汁、甘蔗の
溶媒抽出液および甘蔗由来の糖蜜より選ばれる原料を、
固定担体を用いたカラムクロマトグラフィーで処理する
ことにより得られる画分である請求項46記載の成長促
進剤。 - 【請求項48】 甘蔗由来のエキスが、甘蔗汁、甘蔗の
溶媒抽出液および甘蔗由来の糖蜜より選ばれる原料を、
固定担体としての合成吸着剤を充填したカラムに通液
し、該合成吸着剤に吸着された成分を、水、メタノー
ル、エタノール及びこれらの混合物から選ばれる溶媒で
溶出することにより得られる画分である請求項47記載
の成長促進剤。 - 【請求項49】 甘蔗由来のエキスが、甘蔗汁、甘蔗の
溶媒抽出液および甘蔗由来の糖蜜より選ばれる原料を、
固定担体としてのイオン交換樹脂を充填したカラムでの
親和力の差を利用したカラムクロマトグラフィー処理に
より分離して得られる画分のうち、波長420nmの光
を吸収する画分である請求項47記載の成長促進剤。 - 【請求項50】 イオン交換樹脂が陽イオン交換樹脂で
ある請求項49記載の成長促進剤。 - 【請求項51】 陽イオン交換樹脂が強酸性陽イオン交
換樹脂である請求項50記載の成長促進剤。 - 【請求項52】 強酸性陽イオン交換樹脂がナトリウム
イオン型もしくはカリウムイオン型である請求項51記
載の成長促進剤。 - 【請求項53】 イオン交換樹脂がゲル型である請求項
49〜52のいずれか一項記載の成長促進剤。 - 【請求項54】 カラムクロマトグラフィー処理が擬似
移動床式連続分離法で行われる請求項49〜53のいず
れか一項記載の成長促進剤。 - 【請求項55】 波長420nmの光を吸収する画分を
更に電気透析処理に付して塩分を低減したところの、請
求項49〜54のいずれか一項記載の成長促進剤。 - 【請求項56】甘蔗由来のエキスが、バガスを水、親水
性溶剤、またはこれらの混合物で抽出して得られるもの
である請求項46〜55のいずれか一項記載の成長促進
剤。 - 【請求項57】親水性溶剤がエタノールである請求項5
6記載の成長促進剤。 - 【請求項58】抽出のための溶媒が、60/40体積比
以下の比でエタノールを含むエタノール−水混溶媒であ
る請求項56記載の成長促進剤。 - 【請求項59】請求項46〜58のいずれか一項記載の
成長促進剤を含む食品。 - 【請求項60】請求項46〜58のいずれか一項記載の
成長促進剤を含む飼料。
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