JPH0466536A - 抗ウィルス物質とその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は担子菌の菌糸体培養物から得られる抗ウィルス
物質およびその製造方法に関する。

（従来の技術） 近年、医療分野および農業分野においてウィルス感染病
か重大な問題となっている。

例えはＢ型肝炎およびＣ型肝炎は、Ｂ型肝炎ウィルスお
よびＣＣ型肝炎ウィルスによって感染質に肝障害を起こ
し、急性または慢性肝炎から肝硬変、さらには肝癌へ進
行させ＠者を死に至らせる。

またヒトエイスウィルスは、ヒトのＴ４陽性Ｔ細胞に親
和性をもち、これを感染死滅させるため患者は免疫不全
を来たし、後天性免疫不全症候群を引き起こし、発症後
はぼは１００％の患者が数年から１０年以内で死に至っ
ている。

さらに、ヒトヘルペスウィルス（Ｉｆｆｉｆｆ、　　２
ｆｆＲ）は、広札な病中例えは「１内炎、陰部ヘルペス
、角膜炎、髄ｌｌり炎、ト、上気道値、染などを引き起
こす。

一方、農業面においてはタバコ、トマト、ビマン、キュ
ウリ、なとはタバコモザイク病、キコウリモザイク病、
キュウリ緑斑モザイク病なとに罹病し、著しい被害を受
けることか多く、また、蘭などの花吉類においてもウィ
ルスによるモザイク病に罹病し、商品価（１ｊ１に大き
な影響を′ｊえる場合か多い。

現在、このようなウィルス病に対する適切な治療剤は極
めて少なく、例えはインターフェロン。

デュンアラビノシッド、アジドチミジン、アシクロビル
なとの治療剤か知られているが、副作用か強いな吉の問
題かあった。また、植物に関しては治療効果のある毒性
の低い大量散布可能な物質はない。

従−）で、このようなウィルス病の防疫においては未然
にウィルスの感染を防］ｌする点か重要であるか、ウィ
ルスの傅染を１″−知することは困芹であるので、安全
て効ｊＶ的な、しかもスペクトルの広いウィルス感染防
市剤か望まれる。

ところで、オ発明者らは長年に←（って＋（］茸等の担
子菌類の菌糸体培養物から抽出しまた物質について研究
を続けてきた。そして上記培養物から抽出された物質が
免疫賦活作用を有すること（特公昭５３−２３３９２号
）、］−記培養物から抽出された分子量６００万〜］５
０万（Ａ画分）および１５０万〜８０万（Ｂ画分）の物
質がＢ型慢性旧炎に有効であること（特開昭６２−７０
５３２号）、上記培養物から抽出された多糖およびセア
チン関連物質を主体とするザイトカイニン系活性物質の
複合体が抗ウィルス剤として第４−効であること（特公
昭６２−３６００９号）なとを既に見いＵ１シている。

（発明が解決しようとする課題） ＋１１茸等の担子菌の菌糸体培養物から抽出された物質
は、優れた抗ウィルス活性を示し、かつ毒性かほとん吉
ないので副作用の心配はない。

しかし２、Ｌ記菌糸体培養物から抽出さイまた物質の８
効成分を取り７−１すノｊ法は複雑であり、かつ収佃か
少ないので、その効果を高めることができなかった。

本発明の目的は、椎茸等の担子菌の菌糸体培養物から抗
ウィルス作用を示ずｆ−ｒ′ＪＪ成分を効率的に取り出
［７、より効果の高い抗ウィルス物質およびその製造ノ
ブ法を提供することにある。

（課題を解決側るための手段） 本発明前らは、−１樋記Ｌ１的を達成するために、棺茸
等の菌糸体培養物から熱水抽出、限夕）濾過なとの１段
によって、抗ウィルス作用を示ずＣｆ効成分を簡単にか
つ効率的に分離し、この物質４訂細に分析した結果、水
溶性リグニンを主成分とｊ７、糖質、蛋白質が結合した
物質であることをＶ具１出し、本発明を完成するにｔっ
た。

すなわち、本発明の抗ウィルス物質は、リグニンをａｈ
する植物から調整された原料を主成分とする培地を用い
て担子菌を培養し、この菌糸体培養物から抽出さ第１た
水溶性リグニンをｈ−成上成分とするものである。

また、本発明による抗ウィルス物質の製造り法は、リグ
ニンをａ’ｆｉする植物から調整された原料を主成分と
する培地を用いて担子菌を培養し、この菌糸体培養物か
ら水溶性リグニンに富む成分を抽出することを特徴古す
る。

以下、本発明についてその好ましい態様を挙げながらさ
らに汀線に説明する。

本発明で使用する担子菌としては、例えは祐茸。

カワラ茸、ヒラ道、エノキ茸、マンネン茸、マイ茸等食
用茸、薬用茸なと各種のものか挙げられるか、この中で
も特に柑茸菌か好ましい。

本発明では、こ才ｌらの担子菌の菌糸体を培養し７てそ
の培養物からｆｆ効酸成分抽出する。この場合、培地と
しては固体培地、液体培地のいずれも使用できるか、培
地成分中にリグニンを含ａする植物から調整された原料
を含（ｉさせることか必要である。リグニンをＡ有する
植物と（、では、特に禾本科植物が好ま（７く用いられ
、このような原料としては、例えはバカス、麦わら、稲
わら、とうもろこしの草葉、米糠、小麦ふすまなどが挙
げられる。

特にバガスを主成分とし、必要に応し他の栄養成分とし
て、米糠、鋸屑、ペプトン、イースト、甘蔗廃糖蜜など
を添加混合した培地が好ましく用いられる。

担子菌の菌糸体の培養は、例えば担子菌の胞子を液体培
養して得られる菌糸体ベレットを上記のような培地に接
種して行なう。菌糸体を接種した後、固体培地の場合は
、例えば温度］８〜２５℃。

湿度５０〜９０％程度に空調された培養室で３か月〜６
か月程度培養する。最も理想的には、温度２０〜２５℃
、湿度６０％に空調した培養室で４〜６か月程度培養す
る。こうして菌糸体が蔓延した培地は、温度処理室に移
して変温処理を行なうことが好ましい。変温処理は、例
えば３２〜３４℃で２４〜４８時間加温し、次に低温処
理室に移して４〜８°Ｃ２〜度８５９６にて５〜７日間
低温処理を行なう。この変温処理は、製品の品質の安定
上好ましく採用されるが、必ずしも必要なものではない
。その後、培地を栽培室に移して放置すると、子実体の
発生か始まるが、この時点て培養を終了し、後述するよ
うに培養物を粉砕機により粉砕する。一方、液体培地の
場合は、通気培養もしくは振とう培養により、１５〜３
０℃の温度条件で１週間〜１か月程度培養を行なう。培
養は、培地中に菌糸体が蔓延した状態で終了する。

培養終了後、菌糸体に内在する酵素を利用して菌糸体を
自己消化させるとともに、培養物を抽出する。その好ま
しい方法として、固体培地の場合は、まず、培養か終了
した培養物を粉砕し、粉砕物を４０〜９０℃で３〜６時
間時間部理して菌糸体の酵素によって自己消化させる。

次に、この粉砕物に４０℃以上の温水または熱水を注い
で有効成分を抽出する。こうして得られた懸濁液を例え
はネル布地の濾過袋に充填しこれを加圧、濾過し、この
濾液をさらにメンブランフィルタで濾過して除菌し、有
効成分が含有された抽出液を得る。

一方、液体培地の場合は、必要に応じて菌糸体を粉砕し
た後、４０℃〜６０℃に加熱して自己消化を行なわせ、
菌糸体が溶解した液状の懸濁培養物を得る。この培養物
を上記と同様に濾過、除菌して抽出液を得ることができ
る。

本発明の抗ウィルス物質の製造に際しては、こうして得
られた抽出液をさらに水溶性リグニンに富む成分を精製
することが望ましい。この精製方法としては、例えば限
外濾過法を採用して分画した。抽出液を分子量１０，０
００および２００゜０００の濾過膜で限外濾過を行なっ
た場合、２０ｏ、ｏｏｏ以１−の両分に動物ヘルペス属
ウィルスに対する強い活性が得られた。本画分の収率は
、抽出液から平均１０％が得られた。

こうして得られた抗ウィルス物質はリグニン含有多糖蛋
白複合体であることか判明した。

この製造方法によれは、抽出液の有効成分中には比較的
高濃度の無機物か含まれているが、これらの物質は分子
Ｋ１１ｏ、０００以下の両分にほとんど移行するので、
簡単に両分することができた。

これらの結果から、抗ウィルスを示す有効成分は次のよ
うな組成を有するものであることが確認された。

糖　　　：フェノール硫酸法（ｇｌｕｃｏｓｅｓ　ｔ　
ａｎｄ、４８０ｎｍ） 蛋　　白：セミミクロケルダール法 すグニン：アセチルブロマイド法（吸光係数２０で算出
） 灰　　分：直接灰化法 に、　　Ｎａ、　　Ｃａ　：原子吸光法（作用） 本発明において、椎茸菌糸体の培養抽出物あるいはその
分画を含む物質が後述する実施例から明らかなように、
各種ウィルスに対して標的細胞との結合を阻害し、その
結果ウィルスの感染を阻止しているものと考えられる。

本発明の抗ウィルス物質の製造方法によれは、抗ウィル
ス作用を有する有効成分を効果的に抽出、分離すること
ができ、かつ、天然物から得られたものであるため合成
化学品などにおける副作用の心配はない。

（実施例） 実施例１ （１）椎茸菌糸体の培養 バガス９０％、米糠５％、ふすま等の栄養源５％を配合
した固体培地を常法により殺菌し、これに椎茸の種菌を
接種する。その後、培地を温度２０〜２５°Ｃ２湿度６
０％に空調した培養室内に移して３〜６か月培養する。

培地中に菌糸体が蔓延した後、温度処理室に移して３２
〜３４℃で２４〜４８時間加温し、次に低温処理室に移
して５〜８°Ｃ１湿度８５％にて５〜７目間低温処理を
行なう。その後、培地を栽培室に移して放置し、培地表
面から子実体が発生し始めたら、培地を取り出して粉砕
機で破砕する。

（２）培養物からの有効成分の抽出 」−記破砕物を８０℃前後で３〜４時間通気加熱し酵素
反応を促進させ、菌糸体の自己消化を行なうとともに、
水分３〜５％まで乾燥する。この破砕物６００ｇに対し
て約５１の水を加え、約１−時間煮沸するとともに攪拌
する。この攪拌によって菌糸体の代謝産物および菌糸体
細胞液中に含有されている有効成分が水に溶脱される。

こうして得られた懸濁液をネル布地の濾過袋に充填し、
これを加圧、濾過して濾液を得る。この濾液をさらにメ
ンブランフィルタで濾過して除菌し抽出液を得る。この
抽出液を濃縮し、凍結乾燥等にて褐色の粉末とした。

上記粉末の成分を分析した結果、糖：３４．０％、蛋白
質：１０．８％、水溶性リグニン：４３゜０％、その他
：１２．２％であった。なお、糖はフェノール／硫酸法
で定量し、蛋白質はセミミクロゲルタールで定量し、リ
グニンはアセチルブロマイド法で定量した。

（３）有効成分の分画 抽出液をそのまま、または濃縮し２、分Ｊ″−量２０ｏ
、ｏｏｏの限外濾過膜で限外濾過を行ない、分画分子量
２００，０００以七の両分を得た（以下Ｆｒ、１とする
）。

次に、上記限／Ａａ過により通過した液をさらに分子量
１０，０００の限外濾過膜て限外濾過を行ない、分子量
２００，０００通過、１０，０００不通過画分（１カ〜
２０万以下Ｆｒ、２とする）。

および１０、ＯＯＯ通過画分（１万以下、以下Ｆｒ、　
　３とする）を得た。Ｆｒ、１〜Ｆｒ、３をｌ層線し、
凍結乾燥して褐色の粉末を得た。これらの成分分析につ
いては前述に示した通りである。

実施例２ 抽出液および分画品の、ウィルス吸着に対する阻害の強
さを測定した。

牛腎由来ＭＤＢＫ細胞を２４穴ｇ織培養用プ１／トに生
育させた。ＩＢＲ（Ｉｎｆｅｃｔ　１ｏｎｓ　　Ｂｏｖ
ｉｎｅ　　Ｒｈ１ｎｏｔｒａｃｈｉｅｉｔｉｓ）ウィル
ス（ＤＮＡ型、ヘルペスウィルス群）を０．　２ｍｌ中
に５０ないし１００プラーク形成単位含むように、２％
の血清を含むイーグルＭＥＭからなる培地で希釈した。

抽出７１１あるいはその分画を段階希釈したもの、およ
び比較したい薬剤を段階希釈したものをウィルス希釈液
吉等量混合し７１℃で１時間反応させた。タルベツコー
処方のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で、プレート中
の細胞を６しった後、反応液０　、　２　ｒｎ　ｌずつ
を各人に加え、３７℃で１時間細胞と接触させた。細胞
をＰＢＳて洗った後、０．２％の寒天を含む前述し７た
培地を重層し固定（７た上で、３目間炭酸ガス卵ｒ卵器
中で培養した。ブラーりの５１数は、各人の細胞を１ｍ
ｌずつの１０％ポルマリンで固定し２．０゜５ｍｌずつ
の０．０３％メチレンブルーで染色して行なった。抽出
液および分画の段階希釈した各濃度におけるプラーり阻
止率を謂算し、試料のＥＤ５０　（μｓ／ｍｌ）を算出
した結果を示す。

手続補正書 これらの結果から、Ｉ　ＢＲＶの感染阻止が最も強い部
分は限外濾過膜で２０万以上に分画される部分であるこ
とか判明した。

（発明の効果） 本物質は優れた抗ウィルス活性を示し、かつ毒性がない
ので副作用の心配がなく、安全性に優れる。

また、本製造方法によれは、ウィルスを感染阻止する物
質を簡単に効率よく分画、回収することができ、動物お
よび植物ウィルスの感染阻止剤として広く応用すること
が期待できる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、リグニンを含有する植物から調整された原料を主成
   分とする培地を用いて担子菌を培養し、この菌糸体培養
   物から抽出された糖・蛋白含有水溶性変性リグニンを主
   成分とする抗ウィルス物質。 ２、担子菌の菌糸体として用い得られた請求項１記載の
   抗ウィルス物質。 ３、菌糸体を自己消化させた菌糸体培養物の熱水抽出物
   またはその精製画分を含有する請求項１または請求項２
   記載の抗ウィルス物質。 ４、リグニンを含有する植物から調整された原料を主成
   分とする培地を用いて担子菌を培養し、この菌糸体培養
   物から糖・蛋白含有水溶性変性リグニンに富む成分を抽
   出することを特徴とする抗ウィルス物質の製造方法。 ５、担子菌の菌糸体を用いる請求項４記載の抗ウィルス
   物質の製造方法。 ６、菌糸体を自己消化させた菌糸体培養物の熱水抽出物
   またはその精製画分を含有する請求項４または請求項５
   記載の抗ウィルス物質の製造方法。