JP2000351790A - フコース含有オリゴ糖又はその組成物の製造法及びフコース含有オリゴ糖又はその組成物 - Google Patents
フコース含有オリゴ糖又はその組成物の製造法及びフコース含有オリゴ糖又はその組成物Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 食品、試薬類や医薬品原料として用いること
のできるフコース含有オリゴ糖又はその組成物を効率よ
く製造する方法を提供する。 【解決手段】 ナガマツモ科（Chordariaceae）又はモ
ズク科（Spermatochnaceae）の海藻から抽出して得られ
るフコイダンを酸加水分解後、例えば脱色、脱塩し、陰
イオン交換樹脂、活性炭、ＮＨ２カラム等のクロマトグ
ラフィーなどの手段で分離精製することにより、特定の
フコース含有オリゴ糖、又はそれを含有するオリゴ糖組
成物を得る。原料の海藻としては、モズク科に属するモ
ズク（Nemacystis decipiens (Suringar) Kuckuck）が
最も好ましく用いられる。
のできるフコース含有オリゴ糖又はその組成物を効率よ
く製造する方法を提供する。 【解決手段】 ナガマツモ科（Chordariaceae）又はモ
ズク科（Spermatochnaceae）の海藻から抽出して得られ
るフコイダンを酸加水分解後、例えば脱色、脱塩し、陰
イオン交換樹脂、活性炭、ＮＨ２カラム等のクロマトグ
ラフィーなどの手段で分離精製することにより、特定の
フコース含有オリゴ糖、又はそれを含有するオリゴ糖組
成物を得る。原料の海藻としては、モズク科に属するモ
ズク（Nemacystis decipiens (Suringar) Kuckuck）が
最も好ましく用いられる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、フコースを構成糖
とするフコース含有オリゴ糖又はその組成物の製造法、
及び上記方法によって得られる特定のフコース含有オリ
ゴ糖又はそれを含有するオリゴ糖組成物に関する。
とするフコース含有オリゴ糖又はその組成物の製造法、
及び上記方法によって得られる特定のフコース含有オリ
ゴ糖又はそれを含有するオリゴ糖組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】天然において、フコースは海藻細胞壁の
構成成分としてフコイダンの型で含まれているほか、動
物においてはナマコなどの口腔類の体表、高等動物では
細胞間認識などに関与している細胞表層糖鎖の構成糖と
して存在している。
構成成分としてフコイダンの型で含まれているほか、動
物においてはナマコなどの口腔類の体表、高等動物では
細胞間認識などに関与している細胞表層糖鎖の構成糖と
して存在している。
【０００３】近年、糖鎖の生理機能が解明されるにつれ
て、フコースを含有するオリゴ糖の生理機能が注目され
はじめている。
て、フコースを含有するオリゴ糖の生理機能が注目され
はじめている。
【０００４】褐藻類から得られるフコイダンは、分岐が
多い高分子であり、構成糖の種類も海藻の種類によって
フコースの他にガラクトースやキシロース、アラビノー
ス、マンノース、グルクロン酸など様々であり、また、
多くのフコイダンでエステル硫酸の結合が様々な位置に
見られるなど、非常に複雑な構造を有するため未だ構造
が確認されていないフコイダンがほとんどである。更
に、フコイダンは海藻の種類だけでなく生育段階、産地
などの環境によっても構成物質が異なると考えられてい
る。
多い高分子であり、構成糖の種類も海藻の種類によって
フコースの他にガラクトースやキシロース、アラビノー
ス、マンノース、グルクロン酸など様々であり、また、
多くのフコイダンでエステル硫酸の結合が様々な位置に
見られるなど、非常に複雑な構造を有するため未だ構造
が確認されていないフコイダンがほとんどである。更
に、フコイダンは海藻の種類だけでなく生育段階、産地
などの環境によっても構成物質が異なると考えられてい
る。
【０００５】これまでに、海藻から抽出・精製されたフ
コイダンのメチル化分析による構造解析の結果から、フ
コシルフコースの二糖単位が存在していることが知られ
ている（Journal of Chemical Society 2248−2254 (19
59)）。
コイダンのメチル化分析による構造解析の結果から、フ
コシルフコースの二糖単位が存在していることが知られ
ている（Journal of Chemical Society 2248−2254 (19
59)）。
【０００６】しかしながら、海藻類から構造の明確なフ
コース含有オリゴ糖を抽出分離精製した報告はなされて
おらず、単糖のフコースを原料とした化学合成によるフ
コース含有オリゴ糖の調製方法が報告されている（Carb
ohydrate Research 4, 189−195 (1967)、Carbohydrate
Research 37, 75−79 (1974)、Carbohydrate Research
41, 308−312 (1975)）だけであった。
コース含有オリゴ糖を抽出分離精製した報告はなされて
おらず、単糖のフコースを原料とした化学合成によるフ
コース含有オリゴ糖の調製方法が報告されている（Carb
ohydrate Research 4, 189−195 (1967)、Carbohydrate
Research 37, 75−79 (1974)、Carbohydrate Research
41, 308−312 (1975)）だけであった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記化
学合成による調製方法は、原料に用いる単糖のフコース
をフコイダンの完全加水分解により調製しなければなら
ず、また有機合成反応による多段階の修飾、保護、脱保
護反応、各ステップ毎のクロマトカラムによる分離精製
が必要になるなど工程が非常に煩雑であり収率も低かっ
た。更に、これらのフコース含有オリゴ糖類は、有機合
成反応により調製されている為、食品に使用することが
できなかった。
学合成による調製方法は、原料に用いる単糖のフコース
をフコイダンの完全加水分解により調製しなければなら
ず、また有機合成反応による多段階の修飾、保護、脱保
護反応、各ステップ毎のクロマトカラムによる分離精製
が必要になるなど工程が非常に煩雑であり収率も低かっ
た。更に、これらのフコース含有オリゴ糖類は、有機合
成反応により調製されている為、食品に使用することが
できなかった。
【０００８】このため、食品にも利用できるフコース含
有オリゴ糖類の効率的調製方法の開発が嘱望されていた
が、海藻を原料として構造の明確なフコースを含有する
オリゴ糖類を安定して生産することは困難であった。
有オリゴ糖類の効率的調製方法の開発が嘱望されていた
が、海藻を原料として構造の明確なフコースを含有する
オリゴ糖類を安定して生産することは困難であった。
【０００９】したがって、本発明の目的は、養殖生産に
より安定して入手が容易な褐藻類から得られるフコイダ
ンを原料として、構造が明確で、食品、試薬、医薬品等
の幅広い用途に利用可能なフコース含有オリゴ糖又はそ
れを含有するオリゴ糖組成物を効率的に製造する方法、
及び該方法によって得られる特定のフコース含有オリゴ
糖又はそれを含有するオリゴ糖組成物を提供することに
ある。
より安定して入手が容易な褐藻類から得られるフコイダ
ンを原料として、構造が明確で、食品、試薬、医薬品等
の幅広い用途に利用可能なフコース含有オリゴ糖又はそ
れを含有するオリゴ糖組成物を効率的に製造する方法、
及び該方法によって得られる特定のフコース含有オリゴ
糖又はそれを含有するオリゴ糖組成物を提供することに
ある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に本発明者らは、安価で大量にかつ容易に入手できる海
藻のなかで、それに含まれるフコイダンの構成糖組成が
比較的単純であるものを検索した。そして、ナガマツモ
科（Chordariaceae）又はモズク科（Spermatochnacea
e）の海藻から抽出分離精製して得られた精製フコイダ
ンを適当な酸分解条件で加水分解することにより、特定
のフコース含有オリゴ糖又はそれを含有するオリゴ糖組
成物が効率よく生成することを見出し、本発明を完成す
るに至った。
に本発明者らは、安価で大量にかつ容易に入手できる海
藻のなかで、それに含まれるフコイダンの構成糖組成が
比較的単純であるものを検索した。そして、ナガマツモ
科（Chordariaceae）又はモズク科（Spermatochnacea
e）の海藻から抽出分離精製して得られた精製フコイダ
ンを適当な酸分解条件で加水分解することにより、特定
のフコース含有オリゴ糖又はそれを含有するオリゴ糖組
成物が効率よく生成することを見出し、本発明を完成す
るに至った。
【００１１】すなわち、本発明のフコース含有オリゴ糖
又はその組成物の製造法は、ナガマツモ科（Chordariac
eae）又はモズク科（Spermatochnaceae）の海藻から抽
出して得られるフコイダンを酸加水分解後、フコース含
有オリゴ糖又はその組成物を分離精製することを特徴と
する。
又はその組成物の製造法は、ナガマツモ科（Chordariac
eae）又はモズク科（Spermatochnaceae）の海藻から抽
出して得られるフコイダンを酸加水分解後、フコース含
有オリゴ糖又はその組成物を分離精製することを特徴と
する。
【００１２】この場合、前記海藻として、モズク科のモ
ズク（Nemacystis decipiens (Suringar) Kuckuck）を
使用することが好ましい。
ズク（Nemacystis decipiens (Suringar) Kuckuck）を
使用することが好ましい。
【００１３】また、前記フコース含有オリゴ糖又はその
組成物が、下記化学式４で表されるフコシル−α１，３
−フコース又はそれを含有するオリゴ糖組成物であるこ
とが好ましい。
組成物が、下記化学式４で表されるフコシル−α１，３
−フコース又はそれを含有するオリゴ糖組成物であるこ
とが好ましい。
【００１４】
【化４】
【００１５】更に、前記フコース含有オリゴ糖又はその
組成物が、下記化学式５で表されるキシロシル−β１，
２−フコース又はそれを含有するオリゴ糖組成物である
ことが好ましい。
組成物が、下記化学式５で表されるキシロシル−β１，
２−フコース又はそれを含有するオリゴ糖組成物である
ことが好ましい。
【００１６】
【化５】
【００１７】また、本発明のフコース含有オリゴ糖又は
その組成物は、前記化学式５で示されるキシロシル−β
１，２−フコース又はそれを含有するオリゴ糖組成物で
あることを特徴とする。
その組成物は、前記化学式５で示されるキシロシル−β
１，２−フコース又はそれを含有するオリゴ糖組成物で
あることを特徴とする。
【００１８】本発明によれば、構造の明確なフコース含
有オリゴ糖又はそれを含有するオリゴ糖組成物を、天然
物であるフコイダンの部分加水分解物として得ることが
できるため、これらを食品素材として利用することがで
きる。また、フコース含有オリゴ糖として、構造の明確
な単一のオリゴ糖を得ることができるため、フコイダン
関連化合物分解酵素の活性測定用基質や、糖鎖工学分野
における合成原料としても用いることができる。
有オリゴ糖又はそれを含有するオリゴ糖組成物を、天然
物であるフコイダンの部分加水分解物として得ることが
できるため、これらを食品素材として利用することがで
きる。また、フコース含有オリゴ糖として、構造の明確
な単一のオリゴ糖を得ることができるため、フコイダン
関連化合物分解酵素の活性測定用基質や、糖鎖工学分野
における合成原料としても用いることができる。
【００１９】
【発明の実施の形態】本発明に用いられる原料の海藻と
しては、それに含まれるフコイダンの構成糖組成が比較
的単純で、かつ大量に安定して入手可能なものが好まし
い。例えば、ウロン酸を多く含むフコイダンを加水分解
した場合、生成したオリゴ糖がウロン酸残基を含むもの
である確率が高く、目的とするオリゴ糖類の収率を極め
て悪くするため好ましくない。
しては、それに含まれるフコイダンの構成糖組成が比較
的単純で、かつ大量に安定して入手可能なものが好まし
い。例えば、ウロン酸を多く含むフコイダンを加水分解
した場合、生成したオリゴ糖がウロン酸残基を含むもの
である確率が高く、目的とするオリゴ糖類の収率を極め
て悪くするため好ましくない。
【００２０】具体的には、ウロン酸残基をほとんど含ん
でいないフコイダンを含む褐藻類が好ましく、特にモズ
ク、オキナワモズクが好ましく用いられる。該モズク
は、天然物でも養殖物でも良いが、安定供給と構成糖組
成の安定の為には養殖モズクの使用が望ましい。本発明
に用いる場合、採取したこれらの海藻を軽く水洗してそ
のまま使用することが好ましい。
でいないフコイダンを含む褐藻類が好ましく、特にモズ
ク、オキナワモズクが好ましく用いられる。該モズク
は、天然物でも養殖物でも良いが、安定供給と構成糖組
成の安定の為には養殖モズクの使用が望ましい。本発明
に用いる場合、採取したこれらの海藻を軽く水洗してそ
のまま使用することが好ましい。
【００２１】・フコイダンの抽出方法 本発明において、上記原料の海藻からフコイダンを抽出
する方法としては、上記原料に、塩酸、硫酸、硝酸、リ
ン酸等の無機酸、又は、酢酸、クエン酸、シュウ酸、コ
ハク酸、ギ酸、プロピオン酸等の有機酸の水溶液を、ｐ
Ｈ１〜５、原料濃度が乾燥物として０．１〜３重量％と
なるように加え、１０〜１００℃にて０〜２４時間撹拌
して抽出する方法が挙げられる。好ましくは、上記原料
に、塩酸を、ｐＨ２〜３、原料濃度が乾燥物として２〜
３重量％となるように加え、２０〜３０℃にて１５〜２
０時間抽出する。更に好ましくは、ミキサーなどで原料
を粉砕してから抽出を行う。
する方法としては、上記原料に、塩酸、硫酸、硝酸、リ
ン酸等の無機酸、又は、酢酸、クエン酸、シュウ酸、コ
ハク酸、ギ酸、プロピオン酸等の有機酸の水溶液を、ｐ
Ｈ１〜５、原料濃度が乾燥物として０．１〜３重量％と
なるように加え、１０〜１００℃にて０〜２４時間撹拌
して抽出する方法が挙げられる。好ましくは、上記原料
に、塩酸を、ｐＨ２〜３、原料濃度が乾燥物として２〜
３重量％となるように加え、２０〜３０℃にて１５〜２
０時間抽出する。更に好ましくは、ミキサーなどで原料
を粉砕してから抽出を行う。
【００２２】このようにして得られた抽出液を濾過し
て、アルカリ剤によりｐＨ７〜８に中和後、固形分濃度
が１〜３０重量％になるまで減圧濃縮する。該濃縮液に
２〜４重量倍のエタノールを添加して０〜２４時間冷蔵
・静置した後、遠心して沈殿物を回収・乾燥することに
より粗フコイダンを得ることができる。
て、アルカリ剤によりｐＨ７〜８に中和後、固形分濃度
が１〜３０重量％になるまで減圧濃縮する。該濃縮液に
２〜４重量倍のエタノールを添加して０〜２４時間冷蔵
・静置した後、遠心して沈殿物を回収・乾燥することに
より粗フコイダンを得ることができる。
【００２３】本発明において酸加水分解に用いるフコイ
ダンの純度は必ずしも高い必要はなく、フコース含有オ
リゴ糖の分離精製に支障がなければ上記粗抽出物でも使
用できるが、精製工程の簡易化のためには以下のように
して調製される精製フコイダンを使用することが好まし
い。
ダンの純度は必ずしも高い必要はなく、フコース含有オ
リゴ糖の分離精製に支障がなければ上記粗抽出物でも使
用できるが、精製工程の簡易化のためには以下のように
して調製される精製フコイダンを使用することが好まし
い。
【００２４】上記粗フコイダンを３０〜１００重量倍の
脱塩水に溶解後、塩化セチルピリジニウム（以下、ＣＰ
Ｃという）を１〜６重量％、好ましくは２〜５重量％に
なるように添加して、室温で１０〜２０時間撹拌した
後、遠心して沈殿物を回収する。この沈殿物を２〜６０
重量倍の４Ｍ塩化カルシウム液に溶解させ、不溶物を濾
過により除去した後、２〜３重量倍のエタノールを加え
て撹拌した後、４〜２５℃で２〜８時間静置し、遠心し
て沈殿物を回収・乾燥することにより精製フコイダンを
得ることができる（Agricultural and Biological Chem
istry Vol.30, No.5, p.495−499, 1966参照）。
脱塩水に溶解後、塩化セチルピリジニウム（以下、ＣＰ
Ｃという）を１〜６重量％、好ましくは２〜５重量％に
なるように添加して、室温で１０〜２０時間撹拌した
後、遠心して沈殿物を回収する。この沈殿物を２〜６０
重量倍の４Ｍ塩化カルシウム液に溶解させ、不溶物を濾
過により除去した後、２〜３重量倍のエタノールを加え
て撹拌した後、４〜２５℃で２〜８時間静置し、遠心し
て沈殿物を回収・乾燥することにより精製フコイダンを
得ることができる（Agricultural and Biological Chem
istry Vol.30, No.5, p.495−499, 1966参照）。
【００２５】・フコイダンの加水分解 上記のようにして得られたフコイダン、好ましくは精製
フコイダンを原料として、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸等
の無機酸や、酢酸、クエン酸、シュウ酸、コハク酸、ギ
酸、プロピオン酸等の有機酸の存在下で加水分解を行
う。加水分解条件の好ましい例としては、０．０１〜１
２Ｎ、好ましくは０．２〜１．０Ｎの塩酸を、フコイダ
ンの濃度が０．０１〜１０重量％、好ましくは０．２〜
１．０重量％で、ｐＨが０．１〜１．０、好ましくは
０．１〜０．５となるように加え、２０℃〜１００℃、
好ましくは７５〜８５℃で、０〜２４時間、好ましくは
０．５〜２時間加水分解反応させる。
フコイダンを原料として、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸等
の無機酸や、酢酸、クエン酸、シュウ酸、コハク酸、ギ
酸、プロピオン酸等の有機酸の存在下で加水分解を行
う。加水分解条件の好ましい例としては、０．０１〜１
２Ｎ、好ましくは０．２〜１．０Ｎの塩酸を、フコイダ
ンの濃度が０．０１〜１０重量％、好ましくは０．２〜
１．０重量％で、ｐＨが０．１〜１．０、好ましくは
０．１〜０．５となるように加え、２０℃〜１００℃、
好ましくは７５〜８５℃で、０〜２４時間、好ましくは
０．５〜２時間加水分解反応させる。
【００２６】反応終了後、速やかに反応液を冷却し、水
酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム等のアルカリ剤により
ｐＨ７〜８に中和する。この中和液を活性炭脱色、濾
過、電気透析装置による脱塩することにより、フコース
含有オリゴ糖組成物を得ることができる。
酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム等のアルカリ剤により
ｐＨ７〜８に中和する。この中和液を活性炭脱色、濾
過、電気透析装置による脱塩することにより、フコース
含有オリゴ糖組成物を得ることができる。
【００２７】・フコース含有オリゴ糖の精製 上記組成物を「Ｄｏｗｅｘ１×４」（商品名、ザ・ダウ
・ケミカル・カンパニー社製）、「ＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ Ａ−２５」（商品名、アマシャムファルマシ
アバイオテク製）等の陰イオン交換樹脂カラムに通し、
素通り画分を回収する。該素通り画分を更に活性炭カラ
ムに通して単糖類を除去し、オリゴ糖画分を得る。
・ケミカル・カンパニー社製）、「ＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ Ａ−２５」（商品名、アマシャムファルマシ
アバイオテク製）等の陰イオン交換樹脂カラムに通し、
素通り画分を回収する。該素通り画分を更に活性炭カラ
ムに通して単糖類を除去し、オリゴ糖画分を得る。
【００２８】このオリゴ糖画分を、例えば、ＮＨ２カラ
ムを用いたＨＰＬＣ分取クロマトグラフィーに供し、分
画・精製することによりフコース含有オリゴ糖を得るこ
とができる。
ムを用いたＨＰＬＣ分取クロマトグラフィーに供し、分
画・精製することによりフコース含有オリゴ糖を得るこ
とができる。
【００２９】このような方法で得られるフコース含有オ
リゴ糖の一つは、前記化学式４で示されるフコシル−α
１，３−フコースであり、別の一つは、前記化学式５で
示されるキシロシル−β１，２−フコースであることが
確認された。
リゴ糖の一つは、前記化学式４で示されるフコシル−α
１，３−フコースであり、別の一つは、前記化学式５で
示されるキシロシル−β１，２−フコースであることが
確認された。
【００３０】こうして得られるフコイダン含有オリゴ糖
又はその組成物は、例えばフコイダン関連化合物分解酵
素の活性測定用基質、α−フコシダーゼの活性測定用基
質、β−キシロシダーゼの活性測定用基質、又は阻害剤
などの試薬類、診断薬、スチレンなどの合成高分子に組
み込むことによる医療材料への用途、医薬品の組成物又
は合成原料として、また、乳酸菌の増殖促進を目的とし
た腸内環境改善物質としての健康食品、病原菌の感染防
止を目的とした衛生食品などに添加、配合する目的で、
又は食品添加物、化粧品素材、入浴剤用素材などのトイ
レタリー製品へ使用することができる。
又はその組成物は、例えばフコイダン関連化合物分解酵
素の活性測定用基質、α−フコシダーゼの活性測定用基
質、β−キシロシダーゼの活性測定用基質、又は阻害剤
などの試薬類、診断薬、スチレンなどの合成高分子に組
み込むことによる医療材料への用途、医薬品の組成物又
は合成原料として、また、乳酸菌の増殖促進を目的とし
た腸内環境改善物質としての健康食品、病原菌の感染防
止を目的とした衛生食品などに添加、配合する目的で、
又は食品添加物、化粧品素材、入浴剤用素材などのトイ
レタリー製品へ使用することができる。
【００３１】
【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれらによって制限されるものではな
い。
するが、本発明はこれらによって制限されるものではな
い。
【００３２】試験例 海藻類の分析調査は、日本沿岸などで入手できる海藻類
（褐藻類）について行った。試料として、市販品（生）
のワカメ、ヒジキ、コンブ、モズク、オキナワモズクと
近海で採取されたホンダワラ、ヨレモク、カジメ、アラ
メを使用した。
（褐藻類）について行った。試料として、市販品（生）
のワカメ、ヒジキ、コンブ、モズク、オキナワモズクと
近海で採取されたホンダワラ、ヨレモク、カジメ、アラ
メを使用した。
【００３３】各海藻から常法によりフコイダンを抽出分
離精製し、各フコイダンを塩酸加水分解、脱塩した後、
ＨＰＬＣ分析を行い、それぞれのフコイダンの構成糖分
析（フコース含量、中性糖組成）を行った。その結果、
モズクとオキナワモズクの２つがフコースの含量が比較
的高く、キシロースやマンノース、グルコースなどの他
の中性糖の含量が低いことが分かった。更に、モズクと
オキナワモズクについてウロン酸含量、硫酸基含量など
を測定し、その結果を表１に示した。
離精製し、各フコイダンを塩酸加水分解、脱塩した後、
ＨＰＬＣ分析を行い、それぞれのフコイダンの構成糖分
析（フコース含量、中性糖組成）を行った。その結果、
モズクとオキナワモズクの２つがフコースの含量が比較
的高く、キシロースやマンノース、グルコースなどの他
の中性糖の含量が低いことが分かった。更に、モズクと
オキナワモズクについてウロン酸含量、硫酸基含量など
を測定し、その結果を表１に示した。
【００３４】表１から、モズク（Nemacystis decipiens
(Suringar) Kuckuck）由来のフコイダンはウロン酸含
量が低く、中性糖組成に占めるフコース含量が高いこと
からフコース含有オリゴ糖を調製する際の原料として最
適であることが分かった。
(Suringar) Kuckuck）由来のフコイダンはウロン酸含
量が低く、中性糖組成に占めるフコース含量が高いこと
からフコース含有オリゴ糖を調製する際の原料として最
適であることが分かった。
【００３５】
【表１】
【００３６】実施例１ （１）フコイダンの抽出 生モズク１０ｋｇに０．２Ｎ塩酸３０Ｌを加え、クッキ
ングミキサー破砕した後、撹拌しながら２５℃で１８時
間抽出を行った。この溶液を濾過して抽出残渣を除いた
後、２Ｎ水酸化ナトリウム溶液でｐＨ７．５に中和し、
不溶物を濾過して除去した後、液量が４Ｌになるまで真
空加熱濃縮を行った。この濃縮液にエタノール８Ｌを添
加撹拌し、１８時間冷蔵・静置した後、遠心分離（１
０，０００×ｇ、１５分）して沈殿物を回収し、真空乾
燥して粗フコイダン１５３ｇを得た。
ングミキサー破砕した後、撹拌しながら２５℃で１８時
間抽出を行った。この溶液を濾過して抽出残渣を除いた
後、２Ｎ水酸化ナトリウム溶液でｐＨ７．５に中和し、
不溶物を濾過して除去した後、液量が４Ｌになるまで真
空加熱濃縮を行った。この濃縮液にエタノール８Ｌを添
加撹拌し、１８時間冷蔵・静置した後、遠心分離（１
０，０００×ｇ、１５分）して沈殿物を回収し、真空乾
燥して粗フコイダン１５３ｇを得た。
【００３７】（２）フコイダンの分離精製 得られた粗フコイダン１５３ｇを脱塩水５Ｌに溶解し、
ＣＰＣ ２１５ｇを添加して室温で１８時間撹拌した
後、遠心分離（１０、０００×ｇ、１５分）して沈殿物
を回収した。該沈殿物を４Ｍ塩化カルシウム溶液８Ｌに
溶解させて１８時間撹拌した後、セライトを用いて濾過
して不溶物を除去した。得られた溶液にエタノール２４
Ｌを添加撹拌し、６時間冷却した後、上記と同様に遠心
分離して沈殿物を回収した。この沈殿物を脱塩水１．５
Ｌに溶解させ、透析チューブを用いて脱塩した。透析液
を０．５Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ７．１〜７．５に調
整後、凍結乾燥して精製フコイダン３６．５ｇを得た。
ＣＰＣ ２１５ｇを添加して室温で１８時間撹拌した
後、遠心分離（１０、０００×ｇ、１５分）して沈殿物
を回収した。該沈殿物を４Ｍ塩化カルシウム溶液８Ｌに
溶解させて１８時間撹拌した後、セライトを用いて濾過
して不溶物を除去した。得られた溶液にエタノール２４
Ｌを添加撹拌し、６時間冷却した後、上記と同様に遠心
分離して沈殿物を回収した。この沈殿物を脱塩水１．５
Ｌに溶解させ、透析チューブを用いて脱塩した。透析液
を０．５Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ７．１〜７．５に調
整後、凍結乾燥して精製フコイダン３６．５ｇを得た。
【００３８】（３）フコイダンの加水分解 上記精製フコイダン８ｇを０．５Ｎ塩酸１．６Ｌに溶解
し、撹拌しながら８０℃で１時間加水分解を行った。こ
の反応液を冷却後、１〜４Ｎの水酸化ナトリウムでｐＨ
７．５に中和し、活性炭（和光純薬製）５ｇを添加して
１時間撹拌して脱色した。０．４５μｍメンブランフィ
ルターを用いて濾過して活性炭を除去した後、マイクロ
アシライザー（旭化成工業製）で脱塩し、凍結乾燥して
フコイダン加水分解物１１．６ｇを得た。
し、撹拌しながら８０℃で１時間加水分解を行った。こ
の反応液を冷却後、１〜４Ｎの水酸化ナトリウムでｐＨ
７．５に中和し、活性炭（和光純薬製）５ｇを添加して
１時間撹拌して脱色した。０．４５μｍメンブランフィ
ルターを用いて濾過して活性炭を除去した後、マイクロ
アシライザー（旭化成工業製）で脱塩し、凍結乾燥して
フコイダン加水分解物１１．６ｇを得た。
【００３９】（４）フコース含有オリゴ糖類の分離精製 上記フコイダン加水分解物２．９ｇを蒸留水０．１Ｌに
溶解後、「Ｄｏｗｅｘ１×４（２００−４００ｍｅｓ
ｈ）」（商品名、ザ・ダウ・ケミカル・カンパニー社
製）カラムクロマトグラフィーに供し、素通り画分を回
収した。この回収画分をそのまま、以下の条件で活性炭
−セライトカラムクロマトグラフィーに供してオリゴ糖
画分を分画した。
溶解後、「Ｄｏｗｅｘ１×４（２００−４００ｍｅｓ
ｈ）」（商品名、ザ・ダウ・ケミカル・カンパニー社
製）カラムクロマトグラフィーに供し、素通り画分を回
収した。この回収画分をそのまま、以下の条件で活性炭
−セライトカラムクロマトグラフィーに供してオリゴ糖
画分を分画した。
【００４０】 カラム：活性炭（和光純薬製）：セライト（和光純薬
製）＝２０ｇ：２０ｇ 流速：１．６ｍｌ／分 温度：２５℃ 検出波長：４９０ｎｍ（フェノール硫酸法） 溶媒Ａ：蒸留水 溶媒Ｂ：エタノール 濃度勾配：０〜３０％Ｂ／８４０分 その結果を図１に示す。図１中、Ｆ−１に示す画分（２
糖画分）を回収、濃縮して、更に以下の条件で分取ＨＰ
ＬＣクロマトグラフィーを行った。
製）＝２０ｇ：２０ｇ 流速：１．６ｍｌ／分 温度：２５℃ 検出波長：４９０ｎｍ（フェノール硫酸法） 溶媒Ａ：蒸留水 溶媒Ｂ：エタノール 濃度勾配：０〜３０％Ｂ／８４０分 その結果を図１に示す。図１中、Ｆ−１に示す画分（２
糖画分）を回収、濃縮して、更に以下の条件で分取ＨＰ
ＬＣクロマトグラフィーを行った。
【００４１】 カラム：「Ａｓａｈｉｐａｋ ＮＨ２Ｐ−９０（２１．
５φ×３００Ｌ）」（商品名、昭和電工製） 流速：４ｍｌ／分 温度：２５℃ 検出器：示差屈折計 溶媒：水：アセトニトリル＝１：４ その結果を図２に示す。図２中、Ｆ−１ａ及びＦ−１ｂ
に示す画分をそれぞれ回収して凍結乾燥してＦ−１ａ画
分３ｍｇ、Ｆ−１ｂ画分２．７ｍｇを得た。
５φ×３００Ｌ）」（商品名、昭和電工製） 流速：４ｍｌ／分 温度：２５℃ 検出器：示差屈折計 溶媒：水：アセトニトリル＝１：４ その結果を図２に示す。図２中、Ｆ−１ａ及びＦ−１ｂ
に示す画分をそれぞれ回収して凍結乾燥してＦ−１ａ画
分３ｍｇ、Ｆ−１ｂ画分２．７ｍｇを得た。
【００４２】（５）核磁気共鳴分析 上記Ｆ−１ａ画分、Ｆ−１ｂ画分について核磁気共鳴分
析を行った。その結果を図３及び４に示す。
析を行った。その結果を図３及び４に示す。
【００４３】図３は、Ｆ−１ａ画分（フコシル−α１，
３−フコース）のC-H COSY Spectrum を示す図である。
重水中、３０℃で測定した結果について、縦軸にC13のD
ownfield shiftを、横軸にH1のDownfield shiftを各々T
PS(sodium 3-(trimethylsilyl)-propionate)を基準とし
て測定した値で示した。C13のケミカルシフト値で77.08
ppm及び80.58ppmのシグナルからC-3位の炭素に結合があ
ること、また97.97ppm及び98.32ppmのケミカルシフト値
からC'-1位の炭素にα結合があることが分かる。炭素数
及び配列からフコシルフコースの2糖類であることが分
かり、よって前記化学式４に示されるフコシル−α１，
３−フコースであることが確認された。
３−フコース）のC-H COSY Spectrum を示す図である。
重水中、３０℃で測定した結果について、縦軸にC13のD
ownfield shiftを、横軸にH1のDownfield shiftを各々T
PS(sodium 3-(trimethylsilyl)-propionate)を基準とし
て測定した値で示した。C13のケミカルシフト値で77.08
ppm及び80.58ppmのシグナルからC-3位の炭素に結合があ
ること、また97.97ppm及び98.32ppmのケミカルシフト値
からC'-1位の炭素にα結合があることが分かる。炭素数
及び配列からフコシルフコースの2糖類であることが分
かり、よって前記化学式４に示されるフコシル−α１，
３−フコースであることが確認された。
【００４４】図４は、Ｆ−１ｂ画分（キシロシル−β
１，２−フコース）のC-H COSY Spectrum を示す図であ
る。重水中、３０℃で測定した結果について、縦軸にC1
3のDownfield shiftを、横軸にH1のDownfield shiftを
各々TPS(sodium 3-(trimethylsilyl)-propionate)を基
準として測定した値で示した。C13のケミカルシフト値
で82.55ppm及び83.44ppmのシグナルからC-2位の炭素に
結合があること、また106.71ppm及び106.76ppmのケミカ
ルシフト値からC'-1位の炭素にβ結合があることが分か
る。炭素数及び配列からキシロシルフコースの2糖類で
あることが分かり、よって前記化学式５に示されるキシ
ロシル−β１，２−フコースであることが確認された。
１，２−フコース）のC-H COSY Spectrum を示す図であ
る。重水中、３０℃で測定した結果について、縦軸にC1
3のDownfield shiftを、横軸にH1のDownfield shiftを
各々TPS(sodium 3-(trimethylsilyl)-propionate)を基
準として測定した値で示した。C13のケミカルシフト値
で82.55ppm及び83.44ppmのシグナルからC-2位の炭素に
結合があること、また106.71ppm及び106.76ppmのケミカ
ルシフト値からC'-1位の炭素にβ結合があることが分か
る。炭素数及び配列からキシロシルフコースの2糖類で
あることが分かり、よって前記化学式５に示されるキシ
ロシル−β１，２−フコースであることが確認された。
【００４５】
【発明の効果】以上説明したように、本発明によれば、
化学合成では調製が困難である前記化学式３及び化学式
４に示されるようなフコース含有オリゴ糖、又はそれを
含有するオリゴ糖組成物を、天然物であるフコイダンを
加水分解することによって容易にかつ効率よく製造する
ことができる。
化学合成では調製が困難である前記化学式３及び化学式
４に示されるようなフコース含有オリゴ糖、又はそれを
含有するオリゴ糖組成物を、天然物であるフコイダンを
加水分解することによって容易にかつ効率よく製造する
ことができる。
【００４６】また、本発明により得られるフコース含有
オリゴ糖又はそれを含有するオリゴ糖組成物は、上記の
ように天然物を加水分解して得られ、しかも構造が明確
であるため、食品素材として利用することができると共
に、フコイダン関連化合物分解酵素の活性測定用基質
や、糖鎖工学分野における合成原料等としても用いるこ
とができる。
オリゴ糖又はそれを含有するオリゴ糖組成物は、上記の
ように天然物を加水分解して得られ、しかも構造が明確
であるため、食品素材として利用することができると共
に、フコイダン関連化合物分解酵素の活性測定用基質
や、糖鎖工学分野における合成原料等としても用いるこ
とができる。
【図１】 Ｄｏｗｅｘ１×４カラム素通り画分を活性炭
−セライトカラムクロマトグラフィーにより分離したク
ロマトグラムを示す図である。
−セライトカラムクロマトグラフィーにより分離したク
ロマトグラムを示す図である。
【図２】 Ｆ−１画分（２糖画分）を分取ＨＰＬＣクロ
マトグラフィーにより分離したクロマトグラムを示す図
である。
マトグラフィーにより分離したクロマトグラムを示す図
である。
【図３】 Ｆ−１ａ画分（フコシル−α１，３−フコー
ス）のＨ１，Ｃ１３−ＮＭＲスペクトルを示す図であ
る。
ス）のＨ１，Ｃ１３−ＮＭＲスペクトルを示す図であ
る。
【図４】 Ｆ−１ｂ画分（キシロシル−β１，２−フコ
ース）のＨ１，Ｃ１３−ＮＭＲスペクトルを示す図であ
る。
ース）のＨ１，Ｃ１３−ＮＭＲスペクトルを示す図であ
る。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｈ 3/06 Ｃ０７Ｈ 3/06 // Ａ６１Ｋ 35/80 Ａ６１Ｋ 35/80 Ｚ Ｆターム(参考） 4B018 MD31 MD67 ME14 MF01 MF10 4C057 AA05 BB03 BB04 CC01 4C086 AA03 AA04 EA01 MA04 MA52 MA63 NA14 ZA66 ZB35 ZC20 4C088 AA13 BA12 CA14 CA22 ZA66 ZB35 ZC20
Claims (5)
- 【請求項１】 ナガマツモ科（Chordariaceae）又はモ
ズク科（Spermatochnaceae）の海藻から抽出して得られ
るフコイダンを酸加水分解後、フコース含有オリゴ糖又
はその組成物を分離精製することを特徴とするフコース
含有オリゴ糖又はその組成物の製造法。 - 【請求項２】 前記海藻として、モズク科のモズク（Ne
macystis decipiens (Suringar) Kuckuck）を使用する
請求項１に記載のフコース含有オリゴ糖又はその組成物
の製造法。 - 【請求項３】 前記フコース含有オリゴ糖又はその組成
物が、下記化学式１で表されるフコシル−α１，３−フ
コース又はそれを含有するオリゴ糖組成物である請求項
１又は２に記載のフコース含有オリゴ糖又はその組成物
の製造法。 【化１】 - 【請求項４】 前記フコース含有オリゴ糖又はその組成
物が、下記化学式２で表されるキシロシル−β１，２−
フコース又はそれを含有するオリゴ糖組成物である請求
項１〜３のいずれか１つに記載のフコース含有オリゴ糖
又はその組成物の製造法。 【化２】 - 【請求項５】 下記化学式３で示されるキシロシル−β
１，２−フコース又はそれを含有するオリゴ糖組成物で
あることを特徴とするフコース含有オリゴ糖又はその組
成物。 【化３】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11159715A JP2000351790A (ja) | 1999-06-07 | 1999-06-07 | フコース含有オリゴ糖又はその組成物の製造法及びフコース含有オリゴ糖又はその組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11159715A JP2000351790A (ja) | 1999-06-07 | 1999-06-07 | フコース含有オリゴ糖又はその組成物の製造法及びフコース含有オリゴ糖又はその組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000351790A true JP2000351790A (ja) | 2000-12-19 |
Family
ID=15699711
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11159715A Pending JP2000351790A (ja) | 1999-06-07 | 1999-06-07 | フコース含有オリゴ糖又はその組成物の製造法及びフコース含有オリゴ糖又はその組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000351790A (ja) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001039731A1 (en) * | 1999-11-30 | 2001-06-07 | Takara Bio Inc. | Cosmetics |
| WO2007013609A1 (ja) * | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Suntory Limited | フコイダン由来オリゴ糖 |
| WO2006102108A3 (en) * | 2005-03-18 | 2007-03-08 | Supranaturals Llc | Fucoidan compositions and methods for dietary and nutritional supplements |
| CN1305885C (zh) * | 2004-12-31 | 2007-03-21 | 中国科学院海洋研究所 | 海带中l－褐藻糖的制备方法 |
| WO2008090631A1 (ja) * | 2007-01-26 | 2008-07-31 | Suntory Holdings Limited | フコイダン由来オリゴ糖 |
| EP2728009A1 (en) | 2012-10-31 | 2014-05-07 | Jennewein Biotechnologie GmbH | Process for producing monosaccharides |
| JP2016088859A (ja) * | 2014-10-31 | 2016-05-23 | 第一産業株式会社 | 外用クリーム |
| EP3050973A1 (en) | 2015-01-30 | 2016-08-03 | Jennewein Biotechnologie GmbH | Fermentation process for producing monosaccharides in free form from nucleotide-activated sugars |
| WO2019101629A1 (en) | 2017-11-21 | 2019-05-31 | Jennewein Biotechnologie Gmbh | Process for the purification of l-fucose from a fermentation broth |
| CN110128202A (zh) * | 2019-05-31 | 2019-08-16 | 襄阳农博源农业有限公司 | 一种生物有机肥及其制备方法 |
-
1999
- 1999-06-07 JP JP11159715A patent/JP2000351790A/ja active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| JPN6009063494, 生体認識機能を持つ新糖鎖素材の創製に関する地域基盤研究, 1998, ｐｐ．１３０−１３８，１２９ * |
Cited By (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3831252B2 (ja) * | 1999-11-30 | 2006-10-11 | タカラバイオ株式会社 | 化粧料 |
| US7678368B2 (en) | 1999-11-30 | 2010-03-16 | Takara Bio Inc. | Fucoidan-containing cosmetics |
| WO2001039731A1 (en) * | 1999-11-30 | 2001-06-07 | Takara Bio Inc. | Cosmetics |
| CN1305885C (zh) * | 2004-12-31 | 2007-03-21 | 中国科学院海洋研究所 | 海带中l－褐藻糖的制备方法 |
| US7749545B2 (en) | 2005-03-18 | 2010-07-06 | Sakura Properties, Llc | Fucoidan compositions and methods for dietary and nutritional supplements |
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| EA014421B1 (ru) * | 2005-03-18 | 2010-12-30 | СУПРАНЭЧУРАЛС, Эл-Эл-Си | Диетическая добавка, содержащая гидролизованный фукоидан |
| JP2008532555A (ja) * | 2005-03-18 | 2008-08-21 | スープラナチュラルズ・エルエルシー | 健康補助食品及び栄養補助食品のためのフコイダン組成物及び方法 |
| WO2007013609A1 (ja) * | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Suntory Limited | フコイダン由来オリゴ糖 |
| JPWO2008090631A1 (ja) * | 2007-01-26 | 2010-05-13 | サントリーホールディングス株式会社 | フコイダン由来オリゴ糖 |
| WO2008090631A1 (ja) * | 2007-01-26 | 2008-07-31 | Suntory Holdings Limited | フコイダン由来オリゴ糖 |
| EP2728009A1 (en) | 2012-10-31 | 2014-05-07 | Jennewein Biotechnologie GmbH | Process for producing monosaccharides |
| WO2014067696A1 (en) | 2012-10-31 | 2014-05-08 | Jennewein Biotechnologie Gmbh | Process for producing monosacchcarides |
| JP2016088859A (ja) * | 2014-10-31 | 2016-05-23 | 第一産業株式会社 | 外用クリーム |
| EP3050973A1 (en) | 2015-01-30 | 2016-08-03 | Jennewein Biotechnologie GmbH | Fermentation process for producing monosaccharides in free form from nucleotide-activated sugars |
| WO2016120448A1 (en) | 2015-01-30 | 2016-08-04 | Jennewein Biotechnologie Gmbh | Fermentation process for producing monosaccharides in free form from nucleotide-activated sugars |
| WO2019101629A1 (en) | 2017-11-21 | 2019-05-31 | Jennewein Biotechnologie Gmbh | Process for the purification of l-fucose from a fermentation broth |
| US11732282B2 (en) | 2017-11-21 | 2023-08-22 | Chr. Hansen HMO GmbH | Process for the purification of L-fucose from a fermentation broth |
| CN110128202A (zh) * | 2019-05-31 | 2019-08-16 | 襄阳农博源农业有限公司 | 一种生物有机肥及其制备方法 |
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