JP2000504932A

JP2000504932A - 治療用組成物

Info

Publication number: JP2000504932A
Application number: JP9523157A
Authority: JP
Inventors: ボークス，デイビッド・ローレンス
Original assignee: Amrad Operations Pty Ltd
Current assignee: CSL IP Investments Pty Ltd
Priority date: 1995-12-22
Filing date: 1996-12-20
Publication date: 2000-04-25
Also published as: WO1997023501A1; CA2241129A1; EP0868430A4; AU1089197A; EP0868430A1; AU710221B2; AUPN727595A0

Abstract

(57)【要約】本発明は、一般に、動物細胞のアポトーシスを調節しうる分子に関する。さらに詳しくは、本発明は、動物細胞のアポトーシスを調節するのに有用な、ウイルス由来のアポトーシス抑制分子の細胞ホモログを提供する。本発明による分子は、治療状況の緊急性に応じて細胞アポトーシスを促進または抑制するのに用いることができる。

Description

【発明の詳細な説明】治療用組成物本発明は動物細胞のアポトーシスを一般的に変調することのできる分子に関する。特に本発明は動物細胞のアポトーシスを変調するために有用なウイルス由来アポトーシス阻害分子の細胞同族体を提供する。本発明が意図する分子は治療的な状況の必要性に応じて細胞のアポトーシスを促進または阻害するために使用できるであろう。この明細書に著者が参照する文献の文献学的な詳細は記載の末尾に集約する。本明細書に参照するヌクレオチド配列およびアミノ酸配列についての配列確認番号（配列番号）は後記の実施例中に記載する。この明細書を通じて、別段の文脈の必要がなければ、用語「含む」またはその変形「を含む」または「含むものである」は記載する要素または数または要素または数の群を包含するが、その他の要素または数または要素または数の群を含まないことを意味するものと理解することとする。アポトーシスは種々の刺激で開始され、典型的には細胞に特有の変化を導き、しばしばクロマチンの断片化と凝縮を触媒するエンドヌクレアーゼの活性化、膜のブレッビングおよび核の崩壊を起こす細胞死プログラムである。アポトーシスの機構は進化の間に強固に保存される(Ｖａｕｘほか、１９９４年)。例えばＢｃｌ−２に類似の蛋白質は線虫、昆虫および脊椎動物細胞をアポトーシスから保護でき(Ｖａｕｘほか、１９９２年、Ａｌｎｅｍｒｉほか、１９９２年)、およびインターロイキン−１β変換酵素（ＩＣＥ）に類似のシステインプロテアーゼはＣ．ｅｌｅｇａｎｓおよび哺乳類のアポトーシスに必要である (ＥｌｌｉｓとＨｏｒｖｉｔｚ，１９８６年；Ｍｉｕｒａほか、１９９３年；Ｋｕｉｄａほか、１９９５年)。これらのアポトーシスエフェクタープロテアーゼは多数の細胞中に前駆体として存在するが、活性化される前に切断されて四量体に会合しなければならない(Ｔｈｏｒｎｂｅｒｒｙほか、１９９２年；Ｗｉｌｓｏｎほか、１９９４年；Ｗａｌｋｅｒほか、１９９４年；Ｍｕｎｄａｙほか、１９９５年) 。アポトーシスエフェクタープロテアーゼが多数発見され、アポトーシスを誘導する刺激が多数発見されているが、細胞死刺激とアポトーシスエフェクター機構とを結合するシグナル伝達および活性化経路に関しては殆ど知られていない。例えば、細胞表面受容体ＣＤ９５（Ｆａｓ／Ａｐｏ−１）のリゲーションは多数の細胞型でのアポトーシスを誘導でき(ＮａｇａｔａとＧｏｌｄｓｔｅｉｎ、１９９５年；Ｋｒａｍｍｅｒほか、１９９４年)、またＴ−リネアージ細胞ではＣＤ９５誘導細胞死にはＩＣＥが必要である（Ｋｕｉｄａほか、１９９５年）が、ＣＤ９５からＩＣＥ活性化に導く分子的経路は殆ど未決定である。ＣＤ９５の「デスドメイン」と呼ばれるモチーフを有するＣＤ９５の細胞質ドメインはたとえばＣＤ９５からの信号伝達に寄与すると信じられているＦＡＤＤ／ＭＯＲＴＩ（Ｂｏｌｄｉｎほか、１９９５年；Ｃｈｉｎｎａｉｙａｎほか、１９９５年）およびＲＩＰ（Ｓｔａｇｅｒほか、１９９５年）のようなその他のデスドメイン含有蛋白質と会合することが知られている。ＦＡＤＤおよびＲＩＰの下流標的は未確認である。腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）もアポトーシスを開始でき、その受容体はＣＤ９５に類似している(Ｂｅｕｔｌｅｒとｖａｎ−Ｈｕｆｆｅｌ、１９９４年)。ＴＮＦ− レセプター１（ｐ５５）はＴＲＡＤＤに結合することが知られており(Ｈｓｕほか、１９９５年)、ＴＮＦ−レセプター２（ｐ７５）はＴＮＦ受容体関連因子１および２（ＴＲＡＦ類）に結合することが知られている（Ｒｏｔｈｅほか、１９９４年）が、これらの蛋白質が作用する様式は未確認である。本発明に到る研究で本発明者はウイルスの抗アポトーシス蛋白質およびアポトーシス信号伝達の中間段階を研究した。アポトーシスはウイルスに対する防衛に使用できるが、おそらくウイルスが複製する間に宿主細胞を生かしておくために多数のウイルスが抗アポトーシス蛋白質の遺伝子を有している。ウイルスの抗アポトーシス蛋白質のあるものはたとえばＢｃｌ−２のような既知の細胞蛋白質に類似している(Ｖａｕｘ、１９９３年の綜説参照)。たとえばバキュロウイルスｐ３５蛋白質のような他の蛋白質には細胞内対応物が知られていないが、ＩＣＥ様システインプロテアーゼの競合的阻害剤として作用すると思われるたとえば線虫および哺乳類のような異種系内で機能することができる(Ｃｌｅｍほか、１９９１年；Ｈａｙほか、１９９４年；Ｒａｂｉｚａｄｅｈほか、１９９３年；ＸｕｅとＨｏｒｖｉｔｚ、１９９５年；Ｂｕｍｐほか、１９９５年)。Ｍｉｌｌｅｒおよび協力者はバキュロウイルスに一群の蛋白質を確認し、ウイルス感染による昆虫細胞のアボトーシス反応を阻害できるので「ＩＡＰ」と命名した(Ｂｉｒｎｂａｕｍほか、１９９４年；Ｃｒｏｏｋほか、１９９３年)。ウイルスのＩＡＰ蛋白質は典型的にはバキュロウイルスＩＡＰ反復（ＢＩＲ）と命名された末端反復を２個およびカルボキシ末端ＲＩＮＧフィンガードメインを有する。Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ・ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａの核ポリヘドロシスウイルス（ＡｃＮＰＷ）はアポトーシスを阻害しないＩＡＰ蛋白質をコードするのでＩＡＰ蛋白質には例えばサイトカイン調節機能のような別の機能を果たしている可能性がある。本発明者は新規ＩＡＰ蛋白質をコードする可能性のある遺伝子断片をスクリーニングして細胞死経路で機能する細胞内ＩＡＰ同族体および化学的類似体および誘導体を探索した。全長のｃＤＮＡクローンを得て、これがＩＣＥによるおよびＦＡＤＤによるアポトーシスに介入する性能を試験した。従って、本発明の一側面はウイルス由来ペプチド、ポリペプチドまたは蛋白質またはこれらの誘導体の同族体または化学的類似体を指向し、このウイルス由来分子はウイルス感染に対する細胞のアポトーシス反応を阻害できるものである。さらに特定的には、本発明はウイルス感染に対する細胞のアポトーシス反応を阻害できる分離された蛋白質性分子またはその化学的類似体の誘導体を提供するが、その蛋白質性分子はウイルス性アポトーシス阻害（ＩＡＰ）の細胞由来同族体を含む。ウイルス由来ＩＡＰはポリペプチドまたは蛋白質である。このＩＡＰはウイルス感染に対する細胞のアポトーシス反応を阻害する蛋白質一群の性分子を代表する。より特定的にはＩＡＰはバキュロウイルスによる感染に対する昆虫細胞のアポトーシス反応を阻害する。本発明はそれ故動物細胞のアポトーシスを変調するために有用なバキュロウイルスＩＡＰの同族体または化学的類似体を提供する。好ましくはこのアポトーシスはＩＣＥがおよびＦＡＤＤが介入するものである。従って本発明の別の側面はバキュロウイルスのＩＡＰペプチド、ポリペプチドまたは蛋白質またはそれらの誘導体の同族体または化学的類似体を意図する。好ましくはこの同族体は動物の細胞由来分子である。特定的に好適な動物細胞の例はヒト、家畜動物(たとえばヒツジ、ブタ、ウマ、ロバ、ウシ)、愛玩動物( たとえばイヌ、ネコ)、実験動物(たとえばウサギ、マウス、ラット、モルモット )、捕獲野生動物(たとえばキツネ、シカ、カンガルー)、昆虫（たとえば蚊）および線虫からのものである。同族体は酵母または糸状菌からのものでもよい。特定的に好適な同族体はヒト、マウス、昆虫、酵母または線虫細胞へのものである。線虫の一例はＣａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ・ｅｌｅｇａｎｓである。最も好適な態様において、この哺乳類同族体はマウス細胞に由来するもので、本明細書でＭＩＨＡ、ＭＩＨＢ、ＭＩＨＣおよびＭＩＨＥと命名する。これとは別の態様では同族体はＤＩＨＡと命名するＤｒｏｓｏｐｈｉｌａからの昆虫同族体である。さらに別の態様では同族体は本明細書でＣＩＡ−１およびＣＩＡ−２と命名するＣ．ｅｌｅｇａｎｓの同族体である。さらに別の態様では同族体は本明細書ではＹＩＡ−１と命名する酵母の同族体である。しかしながら、本発明はバキュロウイルスＩＡＰまたはＭＩＨＡ、ＭＩＨＢ、ＭＩＨＣおよび／またはＤＩＨＡの同族体または化学的類似体のヒトその他哺乳類の同族体に及ぶ。本発明の他の側面によれば、ＧｌｕＸａａＸａａＡｒｇＸａａＸａａＴｈｒＰｈｅＸａａＸａａＴｒｐＰｒｏ [Ｘａａ]m [Ｘａａ]n ＡｌａＸａａＡｌａＧｌｙＰｈｅ [Ｘａａ]o ＡｓｐＸａａ [Ｘａａ]p ＸａａＣｙｓＰｈｅＸａａＣｙｓＸａａＸａａＸａａＬｅｕＸａａＸａａＴｒｐＸａａＸａａＸａａＡｓｐＸａａＰｒｏＸａａＸａａＸａａＨｉｓＸａａＸａａＸａａＸａａＰｒｏＸａａＣｙｓＸａａ [Ｘａａ]q [Ｘａａ]r[式中、Ｘａａはアミノ酸残基である。 [Ｘａａ]mはアミノ酸少なくとも５個、好ましくは少なくとも９個の系である。 [Ｘａａ]nはＭｅｔまたはＬｅｕである。 [Ｘａａ]oはアミノ酸少なくとも３個、好ましくは少なくとも５個の系である。 [Ｘａａ]pはＶａｌまたはＡｌａである。 [Ｘａａ]qはＰｈｅまたはＴｙｒである。 [Ｘａａ]rはＬｅｕまたはＶａｌである]を含むアミノ酸配列を有する分離された分子またはその同族体、化学的類似体または誘導体が提供される。より特定的には実質的に配列番号２に示すアミノ酸配列を持つＭＩＨＡと命名された分離された分子、またはその全体または一部またはその同族体、化学的類似体または誘導体に少なくとも４０％の類似性を有するものを提供する。本発明が関連する側面の一つは実質的に配列番号４に示すアミノ酸配列を持つＭＩＨＢと命名された分離された分子またはその全体または一部またはその同族体、化学的類似体または誘導体に少なくとも４０％の類似性を有するものを指向する。さらに別の本発明が関連する側面の一つは実質的に配列番号６に示すアミノ酸配列を持つＭＩＨＣと命名された分離された分子またはその全体または一部またはその同族体、化学的類似体または誘導体に少なくとも４０％の類似性を有するものに関する。さらに別の本発明が関連する側面の一つは実質的に配列番号８に示すアミノ酸配列を持つＤＩＨＡと命名された分離された分子またはその全体または一部またはその同族体、化学的類似体または誘導体に少なくとも４０％の類似性を有するものを提供する。さらに別の本発明が関連する側面の一つは実質的に配列番号１１に示すアミノ酸配列を持つＤＩＨＡと命名された分離された分子またはその全体または一部またはその同族体、化学的類似体または誘導体に少なくとも４０％の類似性を有するものを提供する。さらに別の本発明が関連する側面の一つは実質的に配列番号１３に示すアミノ酸配列を持つＤＩＨＡと命名された分離された分子またはその全体または一部またはその同族体、化学的類似体または誘導体に少なくとも４０％の類似性を有するものを提供する。さらに別の本発明が関連する側面の一つは実質的に配列番号１５に示すアミノ酸配列を持つＤＩＨＡと命名された分離された分子またはその全体または一部またはその同族体、化学的類似体または誘導体に少なくとも４０％の類似性を有するものを提供する。さらに別の本発明が関連する側面の一つは実質的に配列番号１７に示すアミノ酸配列を持つＤＩＨＡと命名された分離された分子またはその全体または一部またはその同族体、化学的類似体または誘導体に少なくとも４０％の類似性を有するものを提供する。本発明にはたとえばＭＩＨＡ、ＭＩＨＢ、ＭＩＨＣ、ＭＩＨＥ、ＣＩＡ−１、ＣＩＡ−２、ＹＩＡ−１およびＤＩＨＡのようなＩＡＰ同族体をコードする核酸分子を包含する。このＩＡＰ同族体はＲＩＮＧフィンガードメインを有していても有していなくてもよい。たとえばＭＩＨＡ、ＭＩＨＢおよびＭＩＨＣはこのドメインを有するが、ＭＩＨＥ、ＣＩＡ−１、ＣＩＡ−２またはＹＩＡＹはこのドメインを有していない。本発明はさらに：ＧｌｕＸａａＸａａＡｒｇＸａａＸａａＴｈｒＰｈｅＸａａＸａａＴｒｐＰｒｏ [Ｘａａ]m [Ｘａａ]n ＡｌａＸａａＡｌａＧｌｙＰｈｅ [Ｘａａ]o ＡｓｐＸａａ [Ｘａａ]p ＸａａＣｙｓＰｈｅＸａａＣｙｓＸａａＸａａＸａａＬｅｕＸａａＸａａＴｒｐＸａａＸａａＸａａＡｓｐＸａａＰｒｏＸａａＸａａＸａａＨｉｓＸａａＸａａＸａａＸａａＰｒｏＸａａＣｙｓＸａａ [Ｘａａ]q [Ｘａａ]r[式中、Ｘａａはアミノ酸残基である。 [Ｘａａ]mはアミノ酸少なくとも５個、好ましくは少なくとも９個の系である。 [Ｘａａ]nはＭｅｔまたはＬｅｕである。 [Ｘａａ]oはアミノ酸少なくとも３個、好ましくは少なくとも５個の系である。 [Ｘａａ]pはＶａｌまたはＡｌａである。 [Ｘａａ]qはＰｈｅまたはＴｙｒである。 [Ｘａａ]rはＬｅｕまたはＶａｌである]を含むアミノ酸配列をコードするかまたはアミノ酸配列をコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子または前記アミノ酸配列をコードするヌレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有するものを意図する。特に本発明は実質的に配列番号２に示すアミノ酸配列をコードする配列または実質的にこのアミノ酸配列をコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子または実質的に配列番号２に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有する核酸分子を意図する。関連する態様では実質的に配列番号４に示すアミノ酸配列をコードする配列または実質的にこのアミノ酸配列をコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子または実質的に配列番号４に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有する核酸分子を提供する。別の関連する一態様では実質的に配列番号６に示すアミノ酸配列をコードする配列または実質的にこのアミノ酸配列をコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子または実質的に配列番号６に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有する核酸分子を意図する。さらに別の態様では実質的に配列番号８に示すアミノ酸配列をコードする配列または実質的にこのアミノ酸配列をコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子または実質的に配列番号８に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有する核酸分子を指向する。別の関連する側面は実質的に配列番号１１に示すアミノ酸配列をコードする配列または実質的にこのアミノ酸配列をコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子または実質的に配列番号１１に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有する核酸分子を指向する。さらに別の関連する側面は実質的に配列番号１３に示すアミノ酸配列をコードする配列または実質的にこのアミノ酸配列をコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子または実質的に配列番号１３に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有する核酸分子を指向する。さらに関連ある側面は実質的に配列番号１５に示すアミノ酸配列をコードする配列または実質的にこのアミノ酸配列をコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子または実質的に配列番号１５に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有する核酸分子を指向する。他の関連する側面は実質的に配列番号１７に示すアミノ酸配列をコードする配列または実質的にこのアミノ酸配列をコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子または実質的に配列番号１７に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有する核酸分子を指向する。さらに別の関連する側面は実質的に配列番号１に示すヌクレオチド配列を含む核酸分子または実質的に配列番号１に示すヌクレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有するかまたは低ストリンジェンシー条件下にこれにハイブリッド化することのできる核酸分子を提供する。本発明に関連する一態様では実質的に配列番号３に示すヌクレオチド配列を含む核酸分子または実質的に配列番号３に示すヌクレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有するかまたは低ストリンジェンシー条件下にこれにハイブリッド化することのできる核酸分子を提供する。本発明に関連するさらに別の一態様では実質的に配列番号５に示すヌクレオチド配列を含む核酸分子または実質的に配列番号５に示すヌクレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有するかまたは低ストリンジェンシー条件下にこれにハイブリッド化することのできる核酸分子を提供する。本発明に関連する他の一態様では実質的に配列番号７に示すヌクレオチド配列を含む核酸分子または実質的に配列番号７に示すヌクレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有するかまたは低ストリンジェンシー条件下にこれにハイブリッド化することのできる核酸分子を提供する。本発明に関連する別の一態様では実質的に配列番号１０に示すヌクレオチド配列を含む核酸分子または実質的に配列番号１０に示すヌクレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有するかまたは低ストリンジェンシー条件下にこれにハイブリッド化することのできる核酸分子を提供する。本発明に関連するさらに別の一態様では実質的に配列番号１２に示すヌクレオチド配列を含む核酸分子または実質的に配列番号１２に示すヌクレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有するかまたは低ストリンジェンシー条件下にこれにハイブリッド化することのできる核酸分子を提供する。本発明に関連するなおさらに別の一態様では実質的に配列番号１４に示すヌクレオチド配列を含む核酸分子または実質的に配列番号１４に示すヌクレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有するかまたは低ストリンジェンシー条件下にこれにハイブリッド化することのできる核酸分子を提供する。本発明に関連するなお別の一態様では実質的に配列番号１６に示すヌクレオチド配列を含む核酸分子または実質的に配列番号１６に示すヌクレオチド配列に少なくとも４０％の類似性を有するかまたは低ストリンジェンシー条件下にこれにハイブリッド化することのできる核酸分子を提供する。本明細書での４２℃における低ストリンジェンシー条件には少なくとも約１％ｖ／ｖから少なくとも約１５％ｖ／ｖまでのホルムアミドおよび少なくとも約１Ｍから少なくとも約２Ｍのハイブリッド化用塩および少なくとも約１Ｍから少なくとも約２Ｍの洗浄用塩を含み、また包含する。必要ならばたとえば少なくとも約１６％ｖ／ｖから少なくとも約３０％ｖ／ｖまでのホルムアミドおよび少なくとも約０．５Ｍから少なくとも約０．９Ｍのハイブリッド化用塩および少なくとも約０．５Ｍから少なくとも約０．９Ｍの洗浄用塩を含み、また包含する中程度のストリンジェンシー条件、または少なくとも約３１％ｖ／ｖから少なくとも約５０％ｖ／ｖまでのホルムアミドおよび少なくとも約０．０１Ｍから少なくとも約０．１５Ｍのハイブリッド化用塩および少なくとも約０．０１Ｍから少なくとも約０．１５Ｍの洗浄用塩を含み、また包含する高ストリンジェンシー条件のような別のストリンジェンシー条件を適用してもよい。この核酸分子は分離された型であるものおよび／または発現ベクターのようなベクター分子が有するものが好ましい。本発明のＩＡＰ同族体およびその誘導体および化学的類似体はアポトーシスを阻害するために有用であり、またこれに限定するものではないがたとえばアルツハイマー病、運動ニューロン病、神経障害を含む消耗性疾患；発作および心筋梗塞を含む虚血性血管疾患；ＨＩＶが起こす後天性免疫不全症候群を含む感染症のようなアポトーシスによって特徴付けられる疾患の処置に有用である。本明細書の意図する本同族体の誘導体のあるものではアポトーシスを促進するかまたは抗アポトーシス過程を阻害し、これに限定するものではないが癌または自己免疫疾患、アルツハイマー病および運動ニューロン病を含むある種の細胞におけるアポトーシス不全によって特徴付けられる病気の処置に有用である可能性がある。本明細書の意図する本同族体の誘導体はアポトーシスを促進するかまたは抗アポトーシス過程を阻害してたとえばある種の癌または悪性腫瘍細胞の死の促進などに有用である。本発明のホモログの誘導体は、ホモログ分子の変異体、一部および断片、並びにホモログ分子の単一または複数のアミノ酸置換、欠失および／または付加を含む。核酸誘導体は、配列番号：１または配列番号：３または配列番号：５または配列番号：７または配列番号：１０または配列番号：１２または配列番号：１２または配列番号：１４または配列番号：１６に記載の核酸分子への単一または複数のヌクレオチド置換、欠失および／または付加を含む。バキュロウイルスＩＡＰの類似化合物またはそのホモログとしては、これに限られないが、側鎖の修飾、非天然アミノ酸および／またはその誘導体のペプチド合成の間の導入および架橋剤やペプチドまたはその類似体に立体的な障害を付与する他の方法の使用が挙げられる。本発明による側鎖の修飾の例としては、アルデヒドと反応させた後にαＢＨ₄ で還元する還元的アルキル化などによるアミノ基の修飾；メチルアセトイミデートによるアミジン化（amidination）；無水酢酸によるアシル化；シアネートによるアミノ基のカルバモイル化；２,４,６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＢＳ）によるアミノ基のトリニトロベンジル化；無水コハク酸および無水テトラヒドロフタル酸によるアミノ基のアシル化；およびピリドキサール−５’−リン酸で処理した後にαＢＨ₄で還元するリジンのピリドキシル化が挙げられる。アルギニンのグアニジン基は、２,３−ブタンジオン、フェニルグリオキサールおよびグリオキサールなどの試薬を用いてヘテロ環縮合生成物を生成することにより修飾することができる。カルボキシル基は、Ｏ−アシルイソ尿素の形成によりカルボジイミド活性化し、ついでたとえば対応のアミドへのその後の誘導体化（derivitisation）により修飾することができる。スルフヒドリル基は、ヨード酢酸またはヨードアセトアミドによるカルボキシメチル化；ギ酸のシステイン酸への酸化；他のチオール化合物による混合ジスルフィドの形成；マレイミド、無水マレイン酸または他の置換マレイミドとの反応；４−クロロメルキュリベンゾエート、４−クロロメルキュリフェニルスルホン酸、フェニルメルキュリクロライド、２−クロロメルキュリ−４−ニトロフェノールおよび他の水銀化合物を用いた水銀誘導体の形成；アルカリｐＨでのシアネートによるカルバモイル化などの方法により修飾することができる。トリプトファンは、たとえば、ブロモスクシンイミドによる酸化または２−ヒドロキシ−５−ニトロベンジルブロマイドまたはスルフェニルハライドによるインドール環のアルキル化により修飾することができる。他方のチロシン残基は、テトラニトロメタンによるニトロ化により３−ニトロチロシン誘導体を形成することにより変えることができる。ヒスチジン残基のイミダゾール環の修飾は、ヨード酢酸誘導体によるアルキル化またはジエチルピロカーボネートによるＮ−カルブエトキシ化により行うことができる。ペプチド合成の間の非天然アミノ酸および誘導体の導入の例としては、これに限られないが、ノルロイシン、４−アミノ酪酸、４−アミノ−３−ヒドロキシ− ５−フェニルペンタン酸、６−アミノヘキサン酸、ｔ−ブチルグリシン、ノルバリン、フェニルグリシン、ノリチン（norithine）、サルコシン、４−アミノ− ３−ヒドロキシ−６−メチルヘプタン酸、２−チエニルアラニンおよび／またはアミノ酸のＤ−異性体が挙げられる。非天然アミノ酸の一覧表を表１に示す。表１非通常アミノ酸コード非通常アミノ酸コード α-アミノ酪酸 Abu Ｌ−Ｎ−メチルアラニン Nmala α-アミノ-α-メチル酪酸 Mgabu Ｌ−Ｎ−メチルアルギニン Nmarg アミノシクロプロパン- Cpro Ｌ−Ｎ−メチルアスパラギン Nmasn カルボキシレートＬ−Ｎ−メチルアスパラギン酸 Nmasp アミノイソ酪酸 Aib Ｌ−Ｎ−メチルシステイン Nmcys アミノノルボルニル Norb Ｌ−Ｎ−メチルグルタミン Nmgln カルボキシレートＬ−Ｎ−メチルグルタミン酸 Nmglu シクロヘキシルアラニン Chexa Ｌ−Ｎ−メチルヒスチジン Nmhis シクロペンチルアラニン Cpen Ｌ−Ｎ−メチルイソロイシン Nmile D-アラニン Dal Ｌ−Ｎ−メチルロイシン Nmleu D-アルギニン Darg Ｌ−Ｎ−メチルリジン Nmlys D-アスパラギン酸 Dasp Ｌ−Ｎ−メチルメチオニン Nmmet D-システイン Dcys Ｌ−Ｎ−メチルノルロイシン Nmnle D-グルタミン Dgln Ｌ−Ｎ−メチルノルバリン Nmnva D-グルタミン酸 Dglu Ｌ−Ｎ−メチルオルニチン Nmorn D-ヒスチジン Dhis Ｌ−Ｎ−メチルフェニルアラニン Nmphe D-イソロイシン Dile Ｌ−Ｎ−メチルプロリン Nmpro D-ロイシン Dleu Ｌ−Ｎ−メチルセリン Nmser D-リジン Dlys Ｌ−Ｎ−メチルトレオニン Nmthr D-メチオニン Dmet Ｌ−Ｎ−メチルトリプトファン Nmtrp D-オルニチン Dorn Ｌ−Ｎ−メチルチロシン Nmtyr D-フェニルアラニン Dphe Ｌ−Ｎ−メチルバリン Nmval D-プロリン Dpro Ｌ−Ｎ−メチルエチルグリシン Nmetg D-セリン Dser L-N-メチル-t-ブチルグリシン Nmtbug D-トレオニン Dthr Ｌ−ノルロイシン Nle D-トリプトファン Dtrp L-ノルバリン Nva D-チロシン Dtyr α-メチル-アミノ-イソブチレート Maib D-バリン Dval α-メチル-γ-アミノブチレート Mgabu D-γ-メチルアラニン Dmala α-メチルシクロヘキシルアラニン Mchexa D-α-メチルアルギニン Dmarg α-メチルシクロペンチルアラニン Mcpen D-α-メチルアスパラギン Dmasn α-メチル-γ-ナフチルアラニン Manap D-α-メチルアスパルテート Dmasp α-メチルペニシラミン Mpen D-α-メチルシステイン Dmcys N-(4-アミノブチル)グリシン Nglu D-α-メチルグルタミン Dmgln N-(2-アミノエチル)グリシン Naeg D-α-メチルヒスチジン Dmhis N-(3-アミノプロピル)グリシン Norn D-α-メチルイソロイシン Dmile N-アミノ-γ-メチルブチレート Nmaabu D-α-メチルロイシン Dmleu α-ナフチルアラニン Anap D-α-メチルリジン Dmlys N-ベンジルグリシン Nphe D-α-メチルメチオニン Dmmet N-(2-カルバミルエチル)グリシン Ngln D-α-メチルオルニチン Dmorn N-(カルバミルメチル)グリシン Nasl D-α-メチルフェニルアラニン Dmphe N-(2-カルボキシエチル)グリシン Nglu D-α-メチルプロリン Dmpro N-(カルボキシメチル)グリシン Nasp D-α-メチルセリン Dmser N-シクロブチルグリシン Ncbut D-α-メチルスレオニン Dmthr N-シクロヘプチルグリシン Nchep D-α-メチルトリプトファンDmtrp N-シクロヘキシルグリシン Nchex D-α-メチルチロシン Dmty N-シクロデシルグリシン Ncdec D-α-メチルバリン Dmval N-シクロドデシルグリシン Nedod D-N-メチルアラニン Dnmala N-シクロオクチルグリシン Ncoct D-N-メチルアルギニン Dnmarg N-シクロプロピルグリシン Ncpro D-N-メチルアスパラギン Dnmasn N-シクロウンデシルグリシン Ncund D-N-メチルアスパルテート Dnmasp N-(2,2-ジフェニルエチル)グリシン Nbhm D-N-メチルシステイン Dnmcys N-(3,3-ジフェニルプロピル)グリシン Nbhe D-N-メチルグルタミン Dnmgln N-(3-グアニジノプロピル)グリシン Narg D-N-メチルグルタメート Dnmglu N-(1-ヒドロキシエチル)グリシン Nthr D-N-メチルヒスチジン Dnmhis N-(ヒドロキシエチル)グリシン Nser D-N-メチルイソロイシン Dnmile N-(イミダゾリルエチル)グリシン Nhis D-N-メチルロイシン Dnmleu N-(3-インドリルエチル)グリシン Nhtrp D-N-メチルリジン Dnmlys N-メチル-γ-アミノブチレート Nmgabu N-メチルシクロヘキシルアラニン Nmchexa D-N-メチルメチオニン Dnmmet D-N-メチルオルニチン Dnmorn N-メチルシクロペンチルアラニン Nmcpen N-メチルグリシン Nala D-N-メチルフェニルアラニン Dnmphe N-メチルアミノイソブチレート Nmaib D-N-メチルプロリン Dnmpro N-(1-メチルプロピル)グリシン Nile D-N-メチルセリン Dnmser N-(2-メチルプロピル)グリシン Nleu D-N-メチルスレオニン Dnmthr D-N-メチルトリプトファン Dnmtrp N-(1-メチルエチル)グリシン Nval D-N-メチルチロシン Dnmtyr N-メチラ-ナフチルアラニン Nmanap D-N-メチルバリン Dnmval N-メチルペニシラミン Nmpen γ-アミノブタン酸 Gabu N-(p-ヒドロキシフェニル)グリシン Nhtyr L-t-ブチルグリシン Tbug N-(チオメチル)グリシン Ncys L-エチルグリシン Etg ペニシラミン Pen L-ホモフェニルアラニン Hphe L-α-メチルアラニン Mala L-α-メチルアルギニン Marg L-α-メチルアスパラギン Masn L-α-メチルアスパルテートMasp L-α-メチル-t-ブチルグリシン Mtbug L-α-メチルシステイン Mcys L-メチルエチルグリシン Metg L-α-メチルグルタミン Mgln L-α-メチルグルタメート Mglu L-α-メチルヒスチジン Mhis L-α-メチルホモフェニルアラニン Mhphe L-α-メチルイソロイシン Mile N-(2-メチルチオエチル)グリシン Nmet L-α-メチルロイシン Mleu L-α-メチルリジン Mlys L-α-メチルメチオニン Mmet L-α-メチルノルロイシン Mnle L-α-メチルノルバリン Mnva L-α-メチルオルニチン Morn L-α-メチルフェニルアラニン Mphe L-α-メチルプロリン Mpro L-α-メチルセリン Mser L-α-メチルスレオニン Mthr L-α-メチルトリプトファンMtrp L-α-メチルチロシン Mtyr L-α-メチルバリン Mval L-N-メチルホモフェニルアラニン Nmhphe N-(N-(2,2-ジフェニルエチル) Nnbhm N-(N-(3,3-ジフェニルプロピル) Nnbhe カルバミルメチル)グリシンカルバミルメチル)グリシン 1-カルボキシ-1-(2,2-ジフェニル Nmbc エチルアミノ)シクロプロパン３Ｄコンホメーションを安定化するには例えば、ｎ＝１からｎ＝６の（ＣＨ₂ ）スペーサー基を有する二機能性イミドエステル、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルなどのホモ−二機能性架橋リンカー、およびＮ −ヒドロキシスクシンイミド、およびマレイミドまたはジチオ部分（ＳＨ）またはカルボジイミド（ＣＯＯＨ）などの他の特異的反応部分などのアミノ反応部分を通常含有するヘテロ−二機能性試薬、などの架橋リンカーを使用できる。さらに、ペプチドは例えば、Ｃ_αおよびＮ_α−メチルアミン酸を組込む、アミノ酸のＣ_αおよびＣ_β原子間に二重結合を導入、および共有結合を導入、例えばＮ端とＣ端と間、２つの側鎖間または側鎖とＮもしくはＣ端との間にアミド結合を形成させて環状ペプチドを形成させる、ことによって立体的に圧縮することができる。本発明はさらに、動物における細胞アポトーシスを調節する方法であって、該動物に細胞アポトーシス調節有効量のバキュロウイルスＩＡＰまたはその誘導体の同族体または化学的類縁体を該細胞アポトーシスの調節に充分な時間と条件で投与することを特徴とする方法に関する。「調節性」または「調節」なる用語は、細胞アポトーシスの促進または増大、または細胞アポトーシスの減少、阻害または減退を意味する。細胞アポトーシスの増大は、特定の癌および細胞悪性腫瘍を処置するうえで重要であり得る；細胞アポトーシスの減退はニューロパシーおよびアルツハイマー病および運動ニューロン疾患を処置するうえで重要であり得る。従って、本発明はさらに、動物における細胞アポトーシスの調節に有用である治療学的および医薬組成物を目的とする。医薬組成物の形態は一般に当業者に知られており、便宜的にはRemington's Ph armaceutical Sciences，17th end，Mack Publising Co.,イーストン、ペンシルバニア、米国を参考とすることができる。本発明は従って、前述のＩＡＰ同族体またはその化学的類縁体もしくは誘導体のアポトーシス調節有効量、および要すれば１つまたはそれ以上の他の活性分子および１つまたはそれ以上の製薬的に許容される担体および／または希釈剤を含有する医薬組成物を提供することを目的とする。ＩＡＰ同族体またはその誘導体を含有する医薬組成物における活性成分は本発明では、個々の場合に応じて変動する量を投与した場合、例えば動物細胞におけるアポトーシスの調節において優れた治療活性を示す。例えば、約０．５μｇから約２０ｍｇ／ｋｇ体重／日を投与することができる。投与計画は、最適の治療応答を得るよう調整できる。例えば、幾つかを分割して毎日、毎週または毎月投与できるし、または治療状況の緊急性に対応して投与量を定率に減ずることもできる。活性化合物は、経口、静脈内（水溶性の場合）、筋肉内、皮内、鼻腔内、皮下または坐剤経路、あるいは移植（例えば徐放性分子を使用）、局所投与または術後もしくは術中または他の観血的手法などのいずれの簡便な方法によっても投与できる。投与経路に応じては、ＩＡＰ同族体またはその化学的類縁体もしくは誘導体からなる活性成分は酵素作用、酸および該成分を失活しかねない他の天然状況から該成分を保護するための物質でコーティングすることが必要な場合がある。腸管外投与以外の投与法によってＩＡＰ同族体を投与するには、該成分の失活を防止する物質によってコーティングあるいは該物質とともに投与する。例えば、同族体はアジュバント中で投与でき、または酵素インヒビターと同時投与でき、またはリポソーム中で投与できる。本発明が意図するアジュバントには、サイトカイン類（例えばインターフェロン）、およびレソルシノール類、非イオン性界面活性剤、例えばポリオキシエチレンオレイルエステル、およびｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテルがあるが、これらに限定されない。本発明活性化合物は腸管外または腹腔内投与することもできる。分散剤もグリセロール、液体ポリエチレングリコールおよびそれらの混合物および油中にて調製できる。普通の条件の保存および使用では、これらの調製物は微生物の増殖を抑える保存剤を含有する。注射用に適した医薬形態には滅菌水溶液剤（水溶性の場合）、または分散剤および滅菌注射用溶液または分散剤の即席調製用の滅菌粉末剤などがある。これらすべての場合において、製剤は滅菌でなければならず、また容易にシリンジ通過できる程度の液体でなければならない。製剤時および保存時の条件では安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の作用汚染から守られていなければならない。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）、これらの適当な混合物、および植物油を含有する溶媒または分散液であることができる。適当な流動性は例えば、レシチンなどのコーティングを使用、分散剤の場合には、要求される粒子サイズの維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物作用の予防は、種々の抗細菌薬および抗真菌薬、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、サーメロサールなどによって行うことができる。多くの場合、等張化剤、例えば糖または塩化ナトリウムを含ませるのが好ましい。注射用組成物の長期吸着は、吸着を遅延させる物質、例えば一ステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの組成物中に使用することによって行うことができる。滅菌注射用溶液剤は、要すれば種々の他の上記成分を含む適当な溶媒に活性化合物の必要量を入れ、次いで滅菌濾過することによって調製される。一般には、分散剤は、基本分散媒質および上記の必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルに種々の滅菌活性成分を入れることによって調製される。滅菌注射用溶液剤を調製するための滅菌粉末剤の場合、好ましい調製方法は、減圧乾燥および凍結乾燥法であり、これにより前もって滅菌濾過しておいた溶液から活性成分と他の所望の成分の粉末を得る。ＩＡＰ同族体または化学類似体もしくは誘導体を適切に上記のように保護した場合、活性化合物を、例えば不活性希釈剤または消化可能食用担体と共に経口投与してもよいし、あるいはゼラチン硬または軟カプセルに充填することもでき、あるいは錠剤に圧縮してもよいし、あるいは直接常食に包含することもできる。経口治療投与に関し、活性化合物を賦形剤と共に包含し、摂取可能錠剤、バッカル錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウェーハー剤などの剤型で用いることができる。そのような組成物および調製物は少なくとも１％重量の活性化合物を含有するべきである。その組成物および調製物のパーセントはもちろん、変化させることができ、都合に合わせて単位重量の約５〜約８０％の間とすることができる。そのような治療的に有用な組成物中の活性化合物量は適切な投与量が得られるようなものである。本発明にしたがい、好ましい組成物または調製物は、経口投与単位剤型が約０．１μｇ〜２０００ｍｇの間の活性化合物を含有するように調製する。錠剤、トローチ剤、ピル剤、カプセル剤などはまた以下のものを含有することもある：トラガカントゴム、アカシア、コーンスターチまたはゼラチンのような結合剤；リン酸二カルシウムのような賦形剤；コーンスターチ、ポテトスターチ、アルギニン酸のような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤；およびシュクロース、ラクトース、サッカリンのような甘味料またはペパーミント、ヒメコウジ油もしくはサクランボ香料のような香料を加えることもできる。投与単位剤型がカプセル剤である場合、上記タイプの物質に加え液状担体を含むことができる。種々の他の物質がコーティング剤として存在することもあり、あるいは投与単位の物理的剤型にまた別の修飾をほどこすために存在することもある。例えば、錠剤、ピル剤またはカプセル剤をセラック、砂糖または両者でコーティングすることができる。シロップ剤またはエリキシル剤は活性化合物、甘味料としてシュクロース、防腐剤としてメチルまたはプロピルパラベン、着色料ならびにサクランボおよびオレンジ香料のような香料を含有することがある。もちろん、いかなる投与剤型の調製に用いたいかなる物質も製薬的に純粋で、用いた量においては実質的に無毒であるべきである。さらに、活性化合物を維持放出（su stai ned-release）調製物および製剤に包含することができる。製薬的に許容される担体および／または希釈剤はいかなるおよびすべての溶媒剤、拡散媒体剤、コーティング剤、抗バクテリア剤、抗真菌剤、等張性および吸収遅延剤などを含む。医薬的活性物質に対するそのような媒体の用途は当分野に周知のことである。そのような簡便な媒体または物質が活性成分と不適合である場合を除き、その治療組成物中における用途を考察する。また補足活性成分を組成物中に包含することもできる。投与を簡単にし、投与量を均一にするために、非経口的組成物を投与単位剤型に製剤することは特に有利である。本明細書中に用いる投与単位剤型とは処置に付される哺乳動物に対する単一投与に適した物理的に個々の単位を意味し；それぞれの単位は所望の治療効果を生み出すように計算し、決定された量の活性物質を必要とされる製薬的担体と共にコーティングしている。本発明の新規投与単位剤型の明細書は（ａ）活性物質の独特な性質および達成される特定の治療効果、および（ｂ）本明細書中に詳細に開示されるような肉体的に健康を害するような疾患状態の生命における疾患の処置のためのそのような活性物質を化合する当分野に本来備わっている制限に直接依存死、それによって記載する。主要な活性成分は簡便および効果的投与のために有効量を適当な製薬的に許容される担体と共に前に開示したような投与単位剤型にする。単位投与剤型は例えば、主要活性化合物を約０．５μｇ〜約２０００ｍｇの範囲の量で含有することができる。割合でいえば、活性化合物は一般に約０．５μｇ〜約２０００ｍｇ／担体１ｍｌで存在する。補足活性成分をコーティングした組成物の場合では、その投与量は同成分の通常投与量および投与方法を参考することによって決められる。医薬組成物はまた、標的細胞にトランスフェクションでき、そこへＩＡＰ同族体の発現およびＩＡＰ同族体活性を調節することが可能な核酸分子を運搬するベクターのような遺伝子分子を含むこともできる。そのベクターは例えばウイルス性ベクターである。本発明のもうひとつの態様はバキュロウイルスＩＡＰ動物細胞同族体の退化疾患、感染疾患、がんまたは自己免疫性疾患をわずらった動物におけるアポトーシスを調節する用途に関する。好ましくは、細胞同族体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７のいずれかによって定義されるか、あるいはその誘導体または化学的類似体である。本発明はさらに本発明のＩＡＰ同族体およびその誘導体に対する抗体を考察する。抗体は同族体の診断性アッセイおよび生物学的液体もしくは培養媒体から同族体を精製または単離するのに有用である。そのような抗体はモノクローナルまたはポリクローナルがあり、自然に生成したＩＡＰ同族体の抗体から選別するか、あるいはＩＡＰ同族体またはその誘導体に対して特異的に作成することができる。後者の場合には、ＩＡＰ同族体またはその誘導体はまずはじめに担体分子と接触することが必要である。この本発明の抗体および／または組み換えＩＡＰ同族体もしくはその誘導体は治療または診断物質として特に有用である。例えば、ＩＡＰ同族体およびその誘導体は自然発生のこの同族体に対する抗体をスクリーニングするのに用いることができる。これらは例えば、自己免疫性疾患のいくつかに発生する。反対に、特異的抗体はＩＡＰ同族体をスクリーニングするのに用いることができる。そのようなアッセイの技術は当分野に周知であり、例えばサンドイッチアッセイおよびＥＬＩＳＡを含む。ＩＡＰ同族体量を知ることはあるがんまたはがんへのなりやすさの診断に対し、またはある治療プロトコールをモニターすることに対して重要である。本発明のＩＡＰ同族体に対する抗体はモノクローナルまたはポリクローナルである。一方、抗体の断片はＦａｂ断片のように用いることができる。さらに、本発明は組み換えおよび合成抗体ならびにハイブリッド抗体にまでおよぶ。本明細書では「合成抗体」は抗体の断片およびハイブリッドを含むと考える。本発明のこの態様の抗体は免疫治療に対して特に有用であり、またアポトーシスの評価または治療法プログラムのモニター用診断ツールとして用いることもできる。例えば、特異的抗体はＩＡＰ同族体のスクリーニングに用いることができる。後者は例えば、細胞抽出物または他の生物学的液体中のＩＡＰ同族体量をスクリーニングし、あるいは培養上清液から組み換え手法によって作成したＩＡＰ同族体を精製するための方法として重要である。本明細書で考察したアッセイの技術は当分野に既知であり、例えばサンドイッチアッセイおよびＥＬＩＳＡを含む。上記一次抗体に対するいかなる二次抗体（モノクローナル、ポリクローナルまたは抗体の断片もしくは合成抗体）をも本発明の範囲内に含む。一次および二次抗体の両者を検出アッセイに用いることができるし、あるいは一次抗体を商業的に入手可能な抗一免疫グロブリン抗体と共に用いることができる。ここに考察する抗体はＩＡＰ同族体のいかなる領域に特異的ないかなる抗体をも含む。抗体はまた、ＳＥＱＩＤＮＯ：９に述べたようなアミノ酸配列に対するものであることもある。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の両者は酵素またはタンパク質の免疫反応によって得られ、どちらかのタイプを免疫アッセイに利用できる。両者のタイプの抗体血清（sera）を得る方法は当分野に周知である。ポリクローナル抗体血清のほうが好ましくないが、適当な実験室動物に有効量のＩＡＰ同族体またはその抗原部分を注射し、その動物から血清を採取し、既知の免疫吸着剤技術のいずれかによって単離することによって比較的容易に調製することができる。この方法によって作成した抗体は仮想的にいずれにタイプの免疫アッセイにも利用できるけれども、潜在的不均質性の産物であるために一般的により好ましくない。モノクローナル抗体を免疫アッセイに用いることは、大量に生産することができることおよびその産物の均質性ゆえにとくに好ましい。モノクローナル抗体生産用ハイブリドーマ細胞株の調製は不死細胞株および免疫原性の調製にたいし過敏なリンパ球の融合によって誘導するが、これは当業者に周知の技術によってなされる。本発明のもうひとつの態様は対象からの生物学的サンプル中のＩＡＰ同族体の検出方法であって、一定時間、抗体−ＩＡＰ同族体複合体の形成に充分な状態下、同生物学的サンプルをＩＡＰ同族体およびその誘導体もしくは同族体に特異的な抗体と接触させ、次いでその複合体を検出することを特徴とする方法に関する。ＩＡＰ同族体の存在はたくさんの方法、例えばウエスタンブロッティング法やＥＬＩＳＡ手法によって確認することができる。米国特許第４，０１６，０４３、４，４２４，２７９および４，０１８，６５３号を参照することによってわかるように広範囲の免疫アッセイ技術が入手可能である。これらはもちろん１カ所および２カ所の両者または非拮抗タイプの「サンドイッチ」アッセイ、および伝統的拮抗結合アッセイにおけるものを含む。これらのアッセイはラベルした抗体の標的への直接結合を含む。サンドイッチアッセイは最も有用かつ一般的に用いられるアッセイの１つで、本発明に用いるのに好ましい。たくさんのバリエーションのサンドイッチアッセイが存在し、そのすべてが本発明に包含されることを意図する。端的に、典型的な前記アッセイはラベルしていない抗体を固体物質上に固定し、試験サンプルを結合分子と接触させる。適切な時間、すなわち抗体−抗原複合体形成に充分な時間インキュベーションした後、次いで検出可能シグナルを産生できるレポーター分子でラベルした、この抗原に特異的な二次抗体を加え、もうひとつの抗体−抗原−ラベルした抗体複合体の形成に充分な時間インキュベーションした。反応しなかったすべての物質を洗浄して取り除き、抗原の存在をレポーター分子が産生するシグナルを観察することによって決定する。この結果は目に見えるシグナルを単に観察することによって定性的であるか、あるいは既知量のハプテンを含有するコントロールサンプルと比較することによって定量的であるかのどちらかである。前記アッセイのバリエーションには同時アッセイがあり、このアッセイではサンプルおよびラベルした抗体の両者を結合した抗体に同時に加える。これらの技術は当業者に周知であり、容易にあらわれるようないかなるマイナーなバリエーションも含む。本発明によれば、サンプルはＩＡＰ同族体を含有する細胞抽出物、生体組織検査または可能性があるものとして血清、唾液、粘膜分泌物、リンパ液、組織液および呼吸液を含めたサンプルである。それゆえこのサンプルは一般的に生物学的液体を含めた生物学的サンプルであるが、また細胞培養物から得られるような発酵液および上清液にもおよぶ。典型的な前方サンドイッチアッセイでは、ＩＡＰホモローグまたはその抗体部分に特異性を有する第１抗体を、固体表面に共有結合的に、または受動的に固体表面に結合させる。固体表面は典型的にはガラスまたはポリマーであり、最も一般的に用いるポリマーは、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、またはポリプロピレンである。固体担体は、チューブ、ビーズ、マイクロプレートのディスク、またイムノアッセイを行うためのいずれかの他の固体である。結合方法は当業界でよく知られており、一般に架橋共有結合または物理的吸着よりなり、ポリマー抗体コンプレックスは、試験サンプルの調製において洗浄する。試験すべき試料のアリコートをその固相コンプレックスに次に加え、十分な時間(例えば２〜４０分)および適当な条件下(例えば２５ ℃)インキュベートし、抗体中に存在するサブユニットの結合を可能にする。インキュベーション後、抗体サブユニット固相を洗浄し、乾燥し、ハプテンの部分に特異的な第２抗体と共にインキュベートする。該第２抗体は、ハプテンに対する第２抗体の結合を示すのに用いられるリポーター分子に結合している。別の方法は、生物学的試料中の標的分子を固定化し、その固定した標的を、リポーター分子で標識していてもよく、標識していなくてもよい特異抗体にさらすことを含む。標的の量およびリポーター分子シグナルの強さに応じて、結合した標的は、抗体の直接標識により検出可能である。或いは、第１抗体に特異的な第２の標識した抗体を、標的−第１抗体コンプレックスにさらし、標的−第１抗体 −第２抗体の３成分コンプレックスを形成させる。そのコンプレックスは、リポーター分子により出されるシグナルにより検出される。本明細書で用いる「リポーター分子」の語は、その化学的性質によって、抗原− 結合抗体の検出を可能にする分析的に同定可能なシグナルを与える分子を意味する。検出は定性的であってもよく、定量的であってもよい。このタイプのアッセイで最も一般的に用いるリポーター分子は、酵素、発蛍光団、放射性核種を含む分子(例えばラジオアイソトープ)および化学ルミネセンス分子である。酵素イムのアッセイの場合には、酵素を第２抗体に、一般にはグルタルアルデヒドまたは過ヨウ素塩により結合させる。しかしながら、容易に理解されるように、様々な異なる結合技術が存在し、それらは当業者に容易に利用可能である。一般的に用いられる酵素は西洋ワサビパーオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、アルカリホスファターゼ等である。特異的な酵素について用いられる基質は、対応する酵素の加水分解により、検出可能な色の変化を生成のために一般的には選択される。適した酵素の例にはアルカリホスファターゼおよびパーオキシダーゼがある。上記した色原性基質ではなく蛍光性の生成物を生じる蛍光原性の基質を用いることも可能である。すべての場合に、酵素で標識した抗体を第１抗体ハプテンコンプレックスに加え、結合させ、過剰の試薬を洗滌して除く。適当な基質を含む溶液を、次に抗体−抗原−抗体のコンプレックスに加える。基質は第２抗体に結合した酵素と反応し、定性的な可視的なシグナルを生じ、そのシグナルは、通常は分光学的に、更に定量し、試料中に存在したハプテン量の指標を与える。「リポーター分子」は、ラテックスビーズ上への赤血球細胞等の細胞の凝集または凝集の抑制の使用にも拡張する。或いは、フルオレセインおよびローダミン等の蛍光性化合物を、抗体に、その結合能を変化させることなしに化学的に結合させる。特定波長の光の照射により活性化された場合、そのフルオロクローム標識した抗体は、光エネルギーを吸収し、分子中で励起状態を誘導し、光顕微鏡で可視的に検出可能な特徴的な色で光を放射する。ＥＩＡにおけるように、蛍光標識抗体は第１抗体−ハプテンコンプレックスに結合させることができる。結合しなかった試薬を洗浄して除去した後に、残った３成分コンプレックスを適当な波長の光にあて、観察される蛍光は問題のハプテンの存在を示す。免疫蛍光法およびＥＩＡ技術は両方とも当業界で非常によく確立されており、本発明の方法に特に好ましい。しかしながら、ラジオアイソトープ、化学ルミネセントまたはバイオルミネセント分子等の他のリポーター分子を用いてもよい。本発明は、ＩＡＰホモローグまたはその誘導体を検出するための、ＰＣＲ分析などの遺伝子アッセイをも意図する。結合に用いる別の方法は、直接的なヌクレオチド配列決定または特異的なオリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション、直接的なタンパク質トランケーション試験のような一本鎖コンフォメーション多型解析(ＳＳＣＰ)等の変異スキャニングを含む。本発明を、次の非限定的な図面および／または実施例により更に詳細に記述する。図において：図１は、ＩＡＰタンパク質の推定アミノ酸配列の比較である。 (Ａ)ＭＩＨＡ(配列番号２)、ＭＩＨＢ(配列番号４)、ＭＩＨＣ(配列番号６)およびＤＩＨＡ(配列番号８)の比較。タンパク質の３以上により共有されるアミノ酸にハイライトを付けた。ＲＩＮＧフィンガードメインは破線の矢印で示した。 (Ｂ)ＩＡＰタンパク質のＢＩＲの比較。強く保存された残基にハイライトを付けた。ＣＰＩはCydia pomonella granulosis virusに由来し；ＯｐＬＡＰはO rgyia pseudotsugata ＰＶに由来し；ＣｉＩＡＰはChilo iridescent virus に由来し；ＡＩＰはＳＭＡについての候補遺伝子であり；ＡｃＩＡＰはAutograp ha Californica ＰＶに由来し；ＡＳＶはAfrican swine fever virusからのＩＡＰ様配列に由来する。 (Ｃ)ＩＡＰと他のタンパク質のＲＩＮＧフィンガーモチーフの比較。強く保存された残基にハイライトを付けた。ＣＲＡＦ（ＴＲＡＦ３）およびＴＲＡＦ２は、ＴＲＡＦファミリーのメンバーであり；ＢＣＲＡ１およびＲＡＧ１は、ＲＩＮＧフィンガーモチーフを有する２つの哺乳動物タンパク質であり；ｃ−ＣＢＬは細胞性のオンコジーンでＳＬＩ−１はそのC．elgansホモローグであり；cpiはCy dia pomonella granulosis virusに由来し；ＯｐＩＡＰはOrgyia pseudotsu gata ＰＶに由来し；ＣｉＩＡＰはChilo irrdesent virusに由来し；ＡｃＩＡＰはAutographa california ＰＶに由来し；ＵＫＭＴはDrosophila Unkemp t遺伝子に由来し；EctＶはEctromelia virusのｐ２８タンパク質に由来する。図２は、哺乳動物のＩＡＰホモローグが様々な組織中で発現されることを示す写真による表示である。 (Ａ)成熟したマウス組織全ＲＮＡノーザンブロットを、高ストリンジェンシーでmＭＩＨＡcＤＮＡコード領域でプローブした。このノーザンを、各レーンのローディングの指標としてＧＡＰＤＨでもプローブした。 (Ｂ−Ｄ)成熟したマウス組織ポリ(Ａ)＋ＲＮＡノーザンブロット(ＣＬＯＮＴＥＣＨ)を、低ストリンジェンシィーで、hＭＩＨＢＣＤＮＡコード鎖(Ｂ)およびhＭＩＨＣＣＤＮＡコード鎖(Ｃ)でプローブした。図３は、ＭＩＨＡおよびＭＩＨＢが、ＩＣＥの過発現(ＦＡＤＤではない)により誘導される死に対して保護することを示すグラフ的な表示である。 (Ａ)ＩＣＥでトランスフェクションによるアポトーシスの誘導。１−６欄(黒) は、ｐ３２ＩＣＥ−lacＺ融合プラスミド、およびＩＡＰホモローグまたは対照のいずれかを有するプラスミドで共トランスフェクトされた細胞の死を７−１２欄(白)に示し、トランフェクション過程自体による細胞死の量を示す。 (Ｂ)ＦＡＤＤでのトランフェクションによるアポトーシスの誘導。ＭＩＨタンパク質をコードするプラスミドを、lacＺベクターおよびＦＡＤＤコード領域を有する構築物と共にコトランスフェクトした(１−６欄)。ＩＣＥ実験についてと同様に、バックグランドの死を培養の平行的なセットでモニターした(７−１２欄)。図４は、ＩＡＰタンパク質の提案された作用部位を示す、仮説の、非限定的な細胞死モデルを示す模式的な表示である。直接的な相互作用を実線で示し、間接的な作用を破線で示す。不確かな相互作用をクエッションマークで示す。ＴＲＡＦおよび死領域を有するタンパク質等の自発的な自己会合分子は、通常の環境では細胞死プロテアーゼを十分活性化し、アポトーシスを起するには不十分である。固有の活性化シグナルを生じるかも知れない。トランフェクションによるＩＣＥ前駆体量の増加は、アポトーシスを誘導するのに十分な酵素の活性化を可能にする。ＩＡＰタンパク質は、それらの標的に対するそれらの親和性に応じて様々な程度で、自発的な活性化シグナルを減少させるよう作用するのかも知れない。このモデルによれば、ＯｐＩＡＰは、その標的に対する大きい親和性のため、哺乳動物ＩＡＰホモローグよりもＦＡＤＤに対してより大きい保護を提供することができるかも知れない。しかしＦＡＤＤでトランフェクトされた細胞においては大きい固有の活性化シグナルをブロックする必要があるので、pro−ＩＣＥに対するほどには、ＦＡＤＤに対し有効ではない。活性なＩＣＥを直接阻害するCrm Ａおよびｐ３５は、ＩＣＥをいかに活性化するかという事柄について、ＩＣＥ媒介アポトーシスの有効な阻害剤である。図５は、ＭＩＨＡのヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列の表示である。図６は、ＭＩＨＢのヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列の表示である。図７は、ＭＩＨＣのヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列の表示である。図８は、ＤＩＨＡのヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列の表示である。図９Ａおよび９Ｂは、ＩＣＨ−１プロテアーゼの過発現により誘導される死に対するＭＩＨＡ,ＭＩＨＢおよびＭＩＨＣによる保護を示す。図１０は、ＭＩＨＡ構築物でトランフェクトされた２９３Ｔ細胞のウエスタンブロットの写真的な表示である。次の１文字および３文字略号をアミノ酸残基について用いる。配列番号の要約は次のとおりである。実施例１ｃＤＮＡのクローニングＧＣＧ配列分析のソフトウエアパッケージ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いて、ＯｐＩＡＰＢＩＲ及びＲＩＮＧフィンガーアミノ酸モチーフに類似した翻訳配列を求めて遺伝子バンクデータベースを調べた。すでに同定されているヒトのＸクロモソームゲノムＳＴＳ（遺伝子バンク：Ｌ２４５７９）は推定上のＲＩＮＧフィンガーモチーフをかこむＰＣＲプライマーを設計するのに用いた。この領域を増幅し、ヒトゲノムＤＮＡライブラリー（ストラタジェーン）を選抜するのに用いた。このライブラリーより単離したフラグメントは低又トリンジェンシーでマウスの肝臓ｃＤＮＡライブラリーをプローブするのに用い、ほ乳類のＩＡＰ同族体Ａ（ＭＩＨＡ）と命名したマウスのｃＤＮＡクローンを三種生成した。ヒトのＥＳＴ配列遺伝子バンク：Ｒ１９６２８と遺伝子バンク：Ｔ９６２８４を翻訳する事により、ＯｐＩＡＰ内のＢＩＲの繰り返しが類似していることが分かった。ヒトの胎児の肝臓のｃＤＮＡライブラリー（ストラタジェーン）を選抜するのに用いるプローブを生み出すのに用いる推定上のＢＩＲドメインの範囲内で、これらの配列をＰＣＲプライマーを設計するのに用いた。ハイブリッドさせたｃＤＮＡクローンをそれぞれＭＩＨＢ及びＭＩＨＣと命名した。ショジョウバエのゲノム配列（遺伝子バンク：ＤＲＯＣＣＡＡＴ）をショウジョウバエのＣＤＮＡからの９００ｂｐの生成物を増幅するためのプライマーを設計するのに用いた。このフラグメントをサブクローニングし、ラムダＺＡＰで構成されたオリゴ（ｄＴ）−プライムしたショジョウバエの幼虫のｃＤＮＡライブラリー（ストラタジェーン）を選抜するのに用いた。８−末端アミノ酸以外の全てをエンコードした２ｋｂのｃＤＮＡ（ＤＩＨＡ）を単離した。ペプチド配列の比較のため（図１）、ゲノム配列遺伝子バンク：ＤＲＯＣＣＡＡＴより推論したこれらの残基を付記した。実施例２ＲＮＡの分析放射性同位体標識化ｍＨＩＨＡとＧＡＰＤＨを高ストリンジェンシーで、総ＲＮＡとして５μｇ／レーンを有するマウスの組織の遺伝子のノーザンブロットにハイブリッドした。２μｇポリ（Ａ）＋ＲＮＡを有するマウスの多重組織のノーザンブロット（ＣＬＯＮＴＥＣＨ）を低ストリンジェンシーで、放射性同位体標識化ｈＭＩＨＣでプローブし、ストッリプし、低ストリンジェンシーでプローブし、再びストリップし、製造業者の使用法に従い、β−アクチンプローブに高ストリンジェンシーでプローブした。実施例３酵母の２ハイブリッドシステムＭＩＨＡ、ＭＩＨＢ及びＭＩＨＣのコード領域を５’末端にＥｃｏＲＩ部位るプライマーを用いてＰＣＲにより増幅し、その蛋白質がＧＡＬ４ＤＮＡ結合ドメインとのフレーム融合として発現するようにした。そのＰＣＲ生成物をｐＧＢＴ９ベクター（ＣＬＯＮＴＥＣＨ）に結合した。開始ＡＴＧから１７コドンの上ｐＧＢＴ９ベクター内にクローンした。Ｔａｑポリメラーゼにより誤って取り込まれていないかを調べるために、ＰＣＲ由来の挿入断片を配列決定した。ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２及びＴＲＡＦ３発現ベクターは既に（１９９４年、Ｒｏｔｈｅら；１９９４年ｂ、Ｈｕらにより）記載されている。ＧＴＢ９内のｃ−ｊｕｎ及びｆｏｓといったコード領域を持つベクターを、蛋白質の相互作用を検出する対照として用いた。酵母株ＨＦ７ｃを酢酸リチウムプロトコールを用いてこれらのプラスミドにより形質転換した（１９９２年、Ｇｉｅｔｚら）。実施例４一過性のトランスフェクションアッセイｐＢＩｕｅｓｃｒｉｐｔ（ストラタジェーン）のＭＩＨＡｃＤＮＡクローン由来の１．８ｋｂのＳａｃＩ−ＥｃｏＲＩを、ｐＳＰＭＩＨＡを生み出すためにｐＳＰ７２（プロメガ）内でサブクローン化し、ＰＥＦすなわちｐＥＦＧＯＳベクターの誘導体（１９９０年ＭｉｚｕｓｈｉｍａとＮａｇａｔａ）内に１．８ｋｂＢａｍＨＩ−ＥｃｏＲＶフラグメントとして再クローン化した。ＤＩＨＡｃＤＮＡ由来の１．６４ｋｂＢａｍＨＩ−ＳｃａＩフラグメントを、ｐＥＦ中でクローン化した。Ｐｆｕポリメラーゼ（ストラタジェーン）をＭＩＨＢ及びＭＩＨＣのコード領域を増幅するのに用いた。これらの生成物をｐＥＦ内でクローン化するプライマーの末端には特異な制限部位が存在していた。ｐ３２−ｌａｃＺ融合プラスミドｐβａｃｔＭ１ｌＺはＭｉｕｒａらにより、記載されている（１９９３年）。ＦＡＤＤ発現構築物ＦＡＤＤ−ＡＵ１はＣｈｉｎｎａｉｙａｎらにより、記載されている（１９９５年）。ＡｃＰＶ由来のｂｃｌ−２、ｃｒｍＡ及びｐ３５やＯｐＰＶ由来のＩＡＰといったコード領域をｐＥＦベクター内に挿入した。端を切り取ったＯｐＩＡＰプラスミドは全鎖ＩＡＰをコートするＰＥＦベクターをｒｕＩ及びＳｍａＩで消化し、再結合することにより構成した。これによりＲＩＮＧフィンガードメインをエンコードしたＯｐＩＡＰ内のｒｕＩ部位の３’側配列が削除された。実施例５ＤＩＨＡ、ＭＩＨＡ、ＭＩＨＢ及びＭＩＨＣのクローニング遺伝子バンクの調査により、ショジョウバエの遺伝子配列（遺伝子バンク：ＤＲＯＣＣＡＡＴ）がバキュロウイルスＩＡＰ遺伝子と類似していることが分かった。ここでのショジョウバエのＬＡＰ同族体Ａ（ＤＩＨＡ）を設計し、この蛋白質をエンコードしたＰＣＲ生成プローブ及び単離クローンを用いて、ショウジョウバエのｃＤＮＡライブラリーをスクリーンした。遺伝子バンクの調査により、多くのほ乳類の配列がＢＩＲｓ或いはウイルス性のＩＡＰｓのＲＩＮＧフィンガードメインに類似していることもまた明らかになった。形質転換の際、バキュロウイルスＩＡＰＲＩＮＧフィンガーモチーフ類似のペプチドをエンコードした、Ｘクロモソーム上のＳＴＳ配列に相当するＰＣＲ生成プローブ、ＨＵＭＳＷＸ５９５を用いて、すでに同定されている最初のほ乳類のＬＡＰ同族体（ＭＩＨＡ）をクローン化した。研究者等は完全なコード領域を理解するために、ヒトゲノムクローンの部分鎖及びＭＩＨＡｃＤＮＡクローンを単離した。更に密接に関連したヒトＩＡＰ同族体の対（ＭＩＨＢとＭＩＨＣ）をＢＩＲ等のモチーフをエンコードした遺伝子バンクＥＳＴ配列Ｒ１９６２８及びＴ９６２８４に相当するＰＣＲ生成プローブを用いて単離した。図１において、ＤＩＨＡの予想アミノ酸配列（予想分子量５５ｋＤ）、ＭＩＨＡ（５６ｋＤ）、ＭＩＨＢ（７０ｋＤ）及びＭＩＨＣ（６８ｋＤ）を比較する。出発コドンはフレーム停止コドン内の上流にあるほとんどの５’メチオニンに近接している。四個のアミノ酸の全てはアミノ酸の末端の半数に三個のＢＩＲ繰り返しを有し、カルボキシ末端に近接した一個のＲＩＮＧフィンガードメインを有する。ＭＩＨＢ及びＭＩＨＣはほとんど近接しており、７３％のアミノ酸が独立しており、ＭＩＨＡでは４３％が独立、６２％がＭＩＨＢとＭＩＨＣと同一であった。ＤＩＨＡでは３６％が独立、５７％がＭＩＨＣと同一であった。これらの蛋白質のＢＩＲ繰り返しは互いにＡＩＰのＢＩＲの繰り返しと図１Ｂのウイルス性ＩＡＰｓに匹敵する。ほ乳類のＩＡＰｓではいくつかのＢＩＲｓは同一蛋白質内の残りのＢＩＲｓとよりも別のＩＡＰ由来のＢＩＲアナローグとより密接に類似しており、このことは始原のＢＩＲの複製が最初の起こったことを示している。ＢＩＲｓ内で最もよく保存された四個のアミノ酸残基はＣＸ₂ＣＸ₁₆ＨＸ₆Ｃパターンであるシステイン三個とヒスチジン一個であった。これらは金属イオンと結合している可能性がある（１９９４年、Ｂｉｒｎｂａｕｍら）。図１においては、ＩＡＰ分子のＣ３Ｈ４ＲＩＮＧフィンガードメインと他の選択蛋白質由来のＲＩＮＧフィンガーとの比較を示す。ＩＡＰ蛋白質由来のＲＩＮＧフィンガーはＢＩＲｓを有しないＴＲＡＦ２（１９９４年、Ｒｏｔｈｅら）及びＣＲＡＦ（１９９４年ｂ、Ｈｕら；１９９５年、Ｃｈｅｎｇら；１９９５年、Ｓａｔｏら）といった他の蛋白質由来のＲＩＮＧフィンガーよりも互いに類似している。ｏ −ＢＩＲを有する蛋白質内のほとんど同一のＲＩＮＧフィンガーはほ乳類のガン遺伝子、ｃ−Ｃｂｌ（１９９１年、Ｂｌａｋｅら）及びそのＣ．エルガンス同族体、Ｓｌｉ−１（１９９５年、Ｙｏｏｎら）の中に存在する。バキュロウイルスＩＡＰ蛋白質と同様に、Ｅｃｔｏｍｅｌｉａウイルスの蛋白質ｐ２８を有するＲＩＮＧフィンガーは成長には関係なく、毒には不可欠である（１９９４年、Ｓｅｎｋｅｖｉｃｈら）。しかしながら、ｐ２８はＢＩＲｓを有しないので、その機能は未だ知られていない。実施例６ほ乳類同族体の発現マウスのＭＩＨＡのメッセージは約７．５ｋｂであり、骨格や心臓の筋肉以外のほとんどのマウスの組織中で発現する。最高のレベルで肺において検出され、中間のレベルで脳及び腎臓において、より低いレベルで胸腺、肝臓、骨の骨髄、肌及びこう丸で検出された（図２Ａ）。ヒトＭＩＨＢのコード領域に及ぶｃＤＮＡを低ストリンジェンシーでマウスの多重組織ノーザンブロット上の〜４．０ｋｂ及び〜５．５ｋｂの二つのメッセージにハイブリッドした（図２Ｂ）。上部の多くない転写物は脾臓や骨格筋肉内では発現せず、他の多くの組織内ではより高いレベルで分析された。より多くの〜４．０ｋｂ転写物は最も低いレベルで脾臓において発現し、中間のレベルで胸、脳、肺、肝臓、骨格の筋肉及び腎臓で発現し、最高のレベルでこう丸で発現した。更に〜９．５転写物がこう丸中で検出され、他の組織では見られなかった。ヒトＭＩＨＣｃＤＮＡプローブの全鎖を〜３．０及び〜４．０ｋｂの二つのメッセージに低ストリンジェンシーでハイブリッドした（図２Ｃ）。４．０ｋｂのメッセージが脾臓内で検出でき、高レベルがこう丸で、中間レベルが他の全ての組織で検出された。〜３．０ｋｂ転写物が肺及び骨格の筋肉内で、脾臓、肝臓、腎臓及びこう丸内で見られた。ｈＭＩＨＢ及びｈＭＩＨＣプローブを低ストリンジェンシーでマウスのＲＮＡにハイブリッドすると、上部の（４．０ｋｂ）転写物がＭＩＨＢプローブ二より検出されたものと全く同一となることが可能である。いくつかの転写物はまた他の密接に関連したほ乳類のＩＡＰ同族体を具現しうる。実施例７ＩＣＥまたはＦＡＤＤにより誘発されるアポプトシスの防止哺乳動物のＩＡＰホモログを、２つの剌激、つまりｐ３２ＩＣＥの過剰発現およびＦＡＤＤの過剰発現により、アポプトシスを防止するそれらの能力に関して試験した。Ced-３様システインプロテアーゼＩＣＥを発現する構築物を用いてのトランスフェクションは、アポプトシスを引き起こすことが以前に示された（Mi uraら、１９９３）。バキュロウイルスのＩＡＰは、bcl−２、crmＡ、およびp３５といったような他の抗アポプトシス遺伝子ができるように、この壊死を防止することができる（Miuraら、１９９３；Xueら、１９９５）。発明者らはＭＩＨＡ、ＭＩＨＢ、およびＭＩＨＣを試験し、それらがＩＣＥ過剰発現により引き起こされるアポプトシスを本当に阻止することができるかどうかを測定した。HeLa細胞を、ＩＡＰホモログまたは対照をコードするプラスミドと一緒に、ＩＣＥ−la cＺ融合構築物を有するプラスミドで同時トランスフェクトした。その細胞をＸ −galで染色して、トランスフェクトされた細胞を同定し、そしてこれらを生存率に関して視覚により評価した。第３Ａ図に示すように、ＭＩＨＡ、ＭＩＨＢ、およびＯｐＩＡＰは、ＩＣＥにより引き起こされる壊死の量を著しく減少させたが、ＭＩＨＣは、検出可能な保護を与えなかった。 Cd９５と関連のあるタンパク質ＦＡＤＤの強制発現はまた、細胞壊死をも引き起こす（Chinnaiyanら、１９９５、Boldinら、１９９５）。HeLa細胞を３つのプラスミドで同時トランスフェクトした：ＦＡＤＤ発現構築物、lacＺ遺伝子を有するプラスミド、および哺乳動物のＩＡＰホモログまたはＯｐＩＡＰをコードするベクター。ＯｐＩＡＰはＦＡＤＤに対する部分的保護を与えたが、それはＩＣＥに対するほど有効ではなかった(第３Ａ図、レーン２と第３Ｂ図、レーン２とを比較のこと)。発明者らは、ＭＩＨＡ、ＭＩＨＢ）またはＭＩＨＣによりＦＡＤＤが誘発する細胞壊死の量の減少を全く検出することができなかった。実施例８ＴＲＡＦファミリーのメンバーとの相互作用２つの哺乳動物のＩＡＰホモログ、つまりＭＩＨＢおよびＭＩＨＣを、ＴＮＦ −Ｒ２と関連のある分子ＴＲＡＦ１およびＴＲＡＦ２と一緒に、ＴＮＦ−Ｒ２( ｐ７５)の細胞質ドメインに結合するタンパク質複合体の一部として単離した（R otheら、１９９４）。酵母のツーハイブリッドシステム（FieldsおよびSong、１９８９）を使用して、３つの哺乳動物のＩＡＰホモログおよびウイルスのＯｐＩＡＰを、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、およびＴＲＡＦ３、つまりＣＤ４０ＢＰ／ＣＲＡＦ−１／ＣＡＰとしてもまた知られている関連タンパク質を結合する、それらの能力に関して試験した（Huら、１９９４ｂ；Chengら、１９９５；Satoら、１９９５）。表２に示すように、ＭＩＨＢまたはＭＩＨＣ、およびＴＲＡＦ３ではなくＴＲＡＦ１またはＴＲＡＦ２で同時トランスフェクトした酵母は、his＋およびlacＺ＋を与え、酵母内のこれらのタンパク質の間で相互作用が起こり得ることを示した。対照的に、このシステムでは、試験したＴＲＡＦおよびＯｐＩＡＰまたはＭＩＨＡのいずれかの間での相互作用が検出されなかった。これらの結果は、ＭＩＨＢおよびＭＩＨＣはＴＲＡＦ１およびＴＲＡＦ２に結合することを示すが、ＯｐＩＡＰまたはＭＩＨＡは他のタンパク質と相互作用すること示唆する。実施例９ＭＩＨＥ、ＣＩＡ−１、ＣＩＡ−２、およびＹＩＡ−１の同定バキュロウイルスのＩＡＰ反復（ＢＩＲ）の共通配列は、次のように推定された：［配列中、 Xaaは、アミノ酸残基であり； [Xaa]_mは、一連の、少なくとも５個、好ましくは少なくとも９個のアミノ酸であり； [Xaa]_nは、MetまたはLeuであり； [Xaa]_oは、一連の、少なくとも３個、好ましくは少なくとも５個のアミノ酸であり； [Xaa]_pは、ValまたはAlaであり； [Xaa]_qは、PheまたはTyrであり； [Xaa]_rは、LeuまたはValである］またはそのホモログ、化学アナログ、もしくは誘導体。この共通配列を使用してのデータベース調査は、マウス(ＭＩＨＥ)、酵母(ＹＩＡ−１)、およびＣ．elegans(ＣＩＡ−１、ＣＩＡ−２)に由来するＩＡＰホモログの同定をもたらした。これらのＩＡＰホモログに由来するヌクレオチドおよび対応するアミノ酸配列を配列番号１０〜１７に記す。興味深いことには、ＭＩＨＥ、ＹＩＡ−１ＣＩＡ−１、およびＣＩＡ−２は、ＲＩＮＧフィンガードメインを有していない。実施例１０ＭＩＨＡ、ＭＩＨＢおよびＭＩＨＣによる保護図９ＡおよびＢはＩＣＨ−１プロテアーゼの過剰発現によって誘発される死に対するＭＩＨＡ、ＭＩＨＢおよびＭＩＨＣからの保護を示している。実施例１１ウェスタンブロットポリクローナルウサギ抗体を調製し、ＭＩＨＡペプチド（配列番号：１８）に対してアフィニティー精製した。この抗体をinter alia ＭＩＨＡトランスフェクションした２９３Ｔ細胞のウェスタンブロットにおいて使用した。その結果を図１０に示す。当業者は本明細書に記載された発明が、具体的に記載されたもの以外の変化または変更を受けやすいことを認識するであろう。本発明には、そのような変化および変更がすべて含まれることを理解すべきである。本発明はまた、本明細書に引用されているかまたは指示されている工程、特徴、組成および化合物のすべてを個別または集合的に含み、および該工程または特徴の任意の２以上のすべての組合せをも含む。表２ＴＲＡＦ１、ＴＲＦＡ２、ＴＲＦＡ３および哺乳動物ＬＡＰホモログ間の結合のための酵母トゥー・ハイブリッド・アッセイ（Yeast Two Hybrid Assay）酵母株ＨＦ７ｃをＧＡＬ４ＤＮＡ−結合ドメインとＩＡＰファミリーメンバーまたはコントロール間の融合タンパク質を発現する構築物とＴＲＡＦタンパク質またコントロールとＧＡＬ４活性化ドメインの間の融合をコードするベクターで同時形質転換する。hisおよびlacＺリポーター遺伝子（相互作用を示す）からの発現をヒスチジン欠乏培地（カラム３）上でダブルトラスフォーマントの増殖によって分析し、Ｘ-gal(カラム４)でコロニーを青色染色し、c-junおよびc-fos をそれぞれＤＮＡ結合ベクターおよび活性化ベクター中での相互作用タンパク質をコードするコントロール遺伝子として使用した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 38/00 Ｃ０７Ｋ 14/39 Ｃ０７Ｋ 14/39 14/435 14/435 14/47 14/47 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．ウイルス感染に対する細胞のアポトーシス応答を抑制することができ、アポトーシスのウイルスインヒビター（ＩＡＰ）の細胞由来ホモログを含む、単離タンパク質分子またはその類似化合物の誘導体。２．該分子がバキュロウイルスＩＡＰのホモログである請求項１に記載の単離タンパク質分子。３．該バキュロウイルスＩＡＰがインターロイキン１β変換酵素（ＩＣＥ）プロテアーゼまたは細胞死誘導領域含有タンパク質ＦＡＤＤにより媒体されるアポトーシスを抑制する、請求項２に記載の単離タンパク質分子。４．該ホモログが動物細胞からのものである請求項１に記載の単離タンパク質分子。５．該細胞が哺乳動物、線虫、酵母または昆虫からのものである請求項４に記載の単離タンパク質分子。６．アミノ酸配列：（式中、Ｘａａはアミノ酸残基；［Ｘａａ］_mは少なくとも５アミノ酸、好ましくは９アミノ酸の連なり；［Ｘａａ］_nはＭｅｔまたはＬｅｕ；［Ｘａａ］_oは少なくとも３アミノ酸、好ましくは５アミノ酸の連なり；［Ｘａａ］_pはＶａｌまたはＡｌａ；［Ｘａａ］_qはＰｈｅまたはＴｙｒ；［Ｘａａ］_rはＬｅｕまたはＶａｌ；またはそのホモログ、類似化合物または誘導体である）を有する、請求項５に記載の単離タンパク質分子。７．実質的に配列番号：２に示すアミノ酸配列を有するかまたは少なくともその４０％の類似性を有する、請求項６に記載の単離タンパク質分子。８．実質的に配列番号：４に示すアミノ酸配列を有するかまたは少なくともその４０％の類似性を有する、請求項６に記載の単離タンパク質分子。９．実質的に配列番号：６に示すアミノ酸配列を有するかまたは少なくともその４０％の類似性を有する、請求項６に記載の単離タンパク質分子。１０．実質的に配列番号：８に示すアミノ酸配列を有するかまたは少なくともその４０％の類似性を有する、請求項６に記載の単離タンパク質分子。１１．実質的に配列番号：１１に示すアミノ酸配列を有するかまたは少なくともその４０％の類似性を有する、請求項６に記載の単離タンパク質分子。１２．実質的に配列番号：１３に示すアミノ酸配列を有するかまたは少なくともその４０％の類似性を有する、請求項６に記載の単離タンパク質分子。１３．実質的に配列番号：１５に示すアミノ酸配列を有するかまたは少なくともその４０％の類似性を有する、請求項６に記載の単離タンパク質分子。１４．実質的に配列番号：１７に示すアミノ酸配列を有するかまたは少なくともその４０％の類似性を有する、請求項６に記載の単離タンパク質分子。１５．請求項１〜１４のいずれかに記載のタンパク質分子をコードする単離核酸分子。１６．配列番号：２に示すアミノ酸配列をコードするかまたは該配列をコードする配列に相補的なヌクレオチドの配列を含むか、または実質的に配列番号：２に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の少なくとも４０％の類似性を有する、請求項１５に記載の単離核酸分子。１７．配列番号：４に示すアミノ酸配列をコードするかまたは該配列をコードする配列に相補的なヌクレオチドの配列を含むか、または実質的に配列番号：４に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の少なくとも４０％の類似性を有する、請求項１５に記載の単離核酸分子。１８．配列番号：６に示すアミノ酸配列をコードするかまたは該配列をコードする配列に相補的なヌクレオチドの配列を含むか、または実質的に配列番号：６に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の少なくとも４０％の類似性を有する、請求項１５に記載の単離核酸分子。１９．配列番号：８に示すアミノ酸配列をコードするかまたは該配列をコードする配列に相補的なヌクレオチドの配列を含むか、または実質的に配列番号：８に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の少なくとも４０％の類似性を有する、請求項１５に記載の単離核酸分子。２０．配列番号：１１に示すアミノ酸配列をコードするかまたは該配列をコードする配列に相補的なヌクレオチドの配列を含むか、または実質的に配列番号：１１に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の少なくとも４０％の類似性を有する、請求項１５に記載の単離核酸分子。２１．配列番号：１３に示すアミノ酸配列をコードするかまたは該配列をコードする配列に相補的なヌクレオチドの配列を含むか、または実質的に配列番号：１３に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の少なくとも４０％の類似性を有する、請求項１５に記載の単離核酸分子。２２．配列番号：１５に示すアミノ酸配列をコードするかまたは該配列をコードする配列に相補的なヌクレオチドの配列を含むか、または実質的に配列番号：１５に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の少なくとも４０％の類似性を有する、請求項１５に記載の単離核酸分子。２３．配列番号：１７に示すアミノ酸配列をコードするかまたは該配列をコードする配列に相補的なヌクレオチドの配列を含むか、または実質的に配列番号：１７に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の少なくとも４０％の類似性を有する、請求項１５に記載の単離核酸分子。２４．実質的に配列番号：１に示すヌクレオチド配列を含むか、またはその少なくとも４０％の類似性を有するか、または低ストリンジェンシー条件下で配列番号：１にハイブリダイズしうる核酸分子である、請求項１５に記載の単離核酸分子。２５．実質的に配列番号：３に示すヌクレオチド配列を含むか、またはその少なくとも４０％の類似性を有するか、または低ストリンジェンシー条件下で配列番号：３にハイブリダイズしうる核酸分子である、請求項１５に記載の単離核酸分子。２６．実質的に配列番号：５に示すヌクレオチド配列を含むか、またはその少なくとも４０％の類似性を有するか、または低ストリンジェンシー条件下で配列番号：５にハイブリダイズしうる核酸分子である、請求項１５に記載の単離核酸分子。２７．実質的に配列番号：７に示すヌクレオチド配列を含むか、またはその少なくとも４０％の類似性を有するか、または低ストリンジェンシー条件下で配列番号：７にハイブリダイズしうる核酸分子である、請求項１５に記載の単離核酸分子。２８．実質的に配列番号：１０に示すヌクレオチド配列を含むか、またはその少なくとも４０％の類似性を有するか、または低ストリンジェンシー条件下で配列番号：１０にハイブリダイズしうる核酸分子である、請求項１５に記載の単離核酸分子。２９．実質的に配列番号：１２に示すヌクレオチド配列を含むか、またはその少なくとも４０％の類似性を有するか、または低ストリンジェンシー条件下で配列番号：１２にハイブリダイズしうる核酸分子である、請求項１５に記載の単離核酸分子。３０．実質的に配列番号：１４に示すヌクレオチド配列を含むか、またはその少なくとも４０％の類似性を有するか、または低ストリンジェンシー条件下で配列番号：１４にハイブリダイズしうる核酸分子である、請求項１５に記載の単離核酸分子。３１．実質的に配列番号：１６に示すヌクレオチド配列を含むか、またはその少なくとも４０％の類似性を有するか、または低ストリンジェンシー条件下で配列番号：１６にハイブリダイズしうる核酸分子である、請求項１５に記載の単離核酸分子。３２．請求項１〜１４のいずれかに記載のタンパク質分子またはその誘導体または類似化合物の細胞アポトーシス調節有効量を該アポトーシスを調節するに充分な時間および条件下で動物に投与することを含む、動物における細胞アポトーシスを調節する方法。３３．変性疾患、感染性疾患、癌または自己免疫疾患の治療に用いる、請求項３２に記載の方法。３４．請求項１〜１４のいずれかに記載のタンパク質分子またはその誘導体または類似化合物および１またはそれ以上の医薬担体および／または希釈剤を含む、医薬組成物。３５．変性疾患、感染性疾患、癌または自己免疫疾患を患う動物におけるアポトーシスを調節するためのバキュロウイルスＩＡＰの動物細胞ホモログの使用。３６．該細胞ホモログが実質的に配列番号：２に示すアミノ酸配列または少なくともその４０％の類似性を有する、請求項３５に記載の使用。３７．該細胞ホモログが実質的に配列番号：４に示すアミノ酸配列または少なくともその４０％の類似性を有する、請求項３５に記載の使用。３８．該細胞ホモログが実質的に配列番号：６に示すアミノ酸配列または少なくともその４０％の類似性を有する、請求項３５に記載の使用。３９．該細胞ホモログが実質的に配列番号：８に示すアミノ酸配列または少なくともその４０％の類似性を有する、請求項３５に記載の使用。４０．該細胞ホモログが実質的に配列番号：１１に示すアミノ酸配列または少なくともその４０％の類似性を有する、請求項３５に記載の使用。４１．該細胞ホモログが実質的に配列番号：１３に示すアミノ酸配列または少なくともその４０％の類似性を有する、請求項３５に記載の使用。４２．該細胞ホモログが実質的に配列番号：１５に示すアミノ酸配列または少なくともその４０％の類似性を有する、請求項３５に記載の使用。４３．該細胞ホモログが実質的に配列番号：１７に示すアミノ酸配列または少なくともその４０％の類似性を有する、請求項３５に記載の使用。