JP2000507617A - ヘプタペプチドオキシトシン類似体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ヘプタペプチド類似体またはその薬学的許容塩は、ヘキサペプチド部分Ｓと、アミド結合により該部分Ｓに結合されているＣ−末端βーアミノアルコール残基Ｚとから成り、該βーアミノアルコールＺはーＮＲ−ＣＨ（Ｑ）−ＣＨ₂ＯＨであり、Ｑはー（ＣＨ₂）_n−ＮＨ−Ａであり、ｎは１ないし６であり、そしてＡはＨまたはーＣ（＝ＮＨ）ＮＨ₂であり、そしてＲはＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅であり；そして該部分Ｓにおいて、ＸはＤ−芳香族α−アミノ酸であり、そしてＹは脂肪族αーアミノ酸であり、そしてオキシトシンアンタゴニスト活性を有する。それらの合成法；これらの類似体を含む組成物；かかる組成物の合成法；子宮収縮の抑制法もまた開示される。

Description

【発明の詳細な説明】 ヘプタペプチドオキシトシン類似体 発明の技術分野 本発明は、特に陣痛（ｐｒｅ−ｔｅｒｍ ｌａｂｏｕｒ）および月経痛に関連 する子宮筋肉収縮を軽減または阻止するのに有用な、オキシトシンアンタゴニス ト（拮抗薬）活性を示す新規なヘプタペプチド類似体（即ち、Ｎ−末端残基が脱 アミノ化されそしてＣ−末端がアルコールに還元されたヘプタペプチド）に関す る。本発明はまた、これらのペプチド類似体を含む薬学的組成物およびそれらの 使用に関する。 発明の背景 オキシトシンはペプチドホルモンである。それは子宮の筋肉の収縮を刺激する 。このため、陣痛および月経痛の原因に関連すると思われる。更に、オキシトシ ンアンタゴニストがこれらの症状の抑制に有用であろうと思われている。治療用 に適度な効力と選択性を有するオキシトシンアンタゴニストペプチドは知られて いる。それらはしばしば水溶液で投与するように意図される。かかるアンタゴニ ストのすぐに使用可能な服用量の製造には、該溶液が長期間安定であることが必 要であるが、常に安定であるわけではない。そのような場合、医薬は、例えば冷 凍乾燥したペプチドまたはその薬学的許容塩から、使用直前に調製しなければな らない。この種の操作は不便であり、汚染の危険性を伴う。 発明の目的 本発明の目的は、水性媒体中で改良された安定性を有し、一方治療効能に適度 な効力と選択性とを保持するヘプタペプチド類似体である新規なオキシトシンア ンタゴニストを提供することである。 本発明の第２の目的は、上記の新規なヘプタペプチド類似体オキシトシンアン タゴニストを含み、そして改良された安定性を有し、従って保存期間を有する薬 学的組成物を提供することである。 本発明の別の目的は、過剰なまたは不適当な子宮収縮に関連する医学的症状の 処置方法を提供することであり、その方法は、該ヘプタペプチド類似体を含む薬 学的組成物を投与することである。 発明の概要 本発明は、ヘプタペプチド類似体である一群の化合物、かかる類似体を含む薬 学的組成物、およびこれらの組成物の使用を包含し、該使用は子宮収縮、特に陣 痛および月経痛における子宮収縮、の治療である。 本発明のヘプタペプチド類似体はＮ−末端ヘキサペプチド部分Ｓと、Ｃ−末端 βーアミノアルコールＺとを有し、該アミノアルコールＺは以後、ヘプタペプチ ドの７番目のアミノ酸の外形上の等価物（ｆｏｒｍａｌ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ ）と考えられる。部分Ｓは下記の構造を有する： ここで、Ｍｐａ、Ｉｌｅ、ＡｓｎおよびＡｂｕは下記の意味を有する： Ｍｐａ ３−メルカプトプロピオン酸残基（或いはデスアミノシステインと呼 ばれる） Ｉｌｅ イソロイシン残基 Ａｓｎ アスパラギン残基 Ａｂｕ α−アミノ酪酸残基； そしてＸは芳香族Ｄ−αーアミノ酸であり、そしてＹは脂肪族αーアミノ酸であ る。 アミノアルコールＺは下記の構造を有する： ここで、 Ｒはメチルまたはエチルであり、そして Ｑはー（ＣＨ₂）_n−ＮＨ−Ａであり、ｎは１ないし６、そしてＡはＨまたはー Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ₂である。 本発明の化合物は酸付加塩を形成することができ、これらの塩が薬学的に許容 できる限り、本発明の範囲内に含まれる。 該化合物は固体または液体の製剤中に添加することができる。かかる製剤の例 には錠剤、カプセル、溶液および懸濁液が含まれる。かかる製剤の成分は、例え ば希釈剤、分散剤、保存料、緩衝剤、風味料および浸透圧調整剤を含むことがで きる。固体製剤は経口投与に特に適しており、一方溶液は注射（例えば静脈内注 射、筋肉内注射または皮下内注射）または鼻孔内投与に最も有用である。該化合 物の特別の利点は、それらの溶液が匹敵する効力を有する以前から知られた化合 物の溶液よりも長期間の貯蔵に安定であるということである。 調合された薬剤は子宮収縮の抑制に有用である。かかる抑制が必要と思われる 二つの症候は、陣痛および月経痛である。陣痛の管理に使用する場合、薬剤は陣 痛の始まり後の急性産科用薬剤（ｔｏｃｏｌｙｔｉｃ ａｇｅｎｔ）としておよ びかかる出来事の再発を防止するための保全療法として使用できる。 発明の詳細な記述 本発明によると、治療上有用なオキシトシンアンタゴニスト活性を示しそして 水性媒体中で改良された安定性を有するヘプタペプチド類似体が開示される。 本発明のヘプタペプチド類似体は、Ｎ−末端ヘキサペプチド類似基Ｓと、Ｃ− 末端βーアミノアルコールＺとを含む構造を特徴とする。βーアミノアルコール Ｚの構造は： であり、ここで、Ｑはー（ＣＨ₂）_n−ＮＨ−Ａ、ｎは１ないし６、そしてＡはＨ またはーＣ（＝ＮＨ）ＮＨ₂であり；ＲはＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅であり； そして部分Ｓは： であり、ここで、Ｍｐａ、Ｉｌｅ、ＡｓｎおよびＡｂｕは下記の意味を有する： Ｍｐａ ３−メルカプトプロピオン酸残基（或いはデスアミノシステインと呼 ばれる） Ｉｌｅ イソロイシン残基 Ａｓｎ アスパラギン残基 Ａｂｕ α−アミノ酪酸残基； そして ＸはＤ−芳香族αーアミノ酸であり、そして Ｙは脂肪族αーアミノ酸である。 上記の芳香族−αーアミノ酸とは、側鎖が芳香環系を含むαーアミノ酸を意味 する。かかる系は炭素環またはヘテロ環式でもよく、単環または融合していても よい。芳香族−αーアミノ酸の例にはフェニルアラニン、チロシン、（Ｏ−エチ ル）チロシン、トリプトファン、βー（２−ナフチル）アラニンおよびフェニル グリシンが含まれる（しかしこれらに限定されない）。残基Ｘは本発明の化合物 中で自然にないＤ−構造であることに気づくであろう。 脂肪族αーアミノ酸とは、側鎖が炭素および水素原子のみを有するαーアミノ 酸である。かかる側鎖にはアルキル基およびシクロアルキル基が含まれるであろ う。それらは不飽和であってもよいが、芳香族残基を含まない。１ないし１２個 の炭素原子の側鎖が含まれるが、好ましい範囲は３−７個の炭素原子である。脂 肪族αーアミノ酸の例には、アラニン、バリン、ロイシン、シクロヘキシルグリ シンおよびアダマンチルアラニンが含まれる（しかしこれらに限定されない）。 残基Ｙは天然のＬ−構造を有する。 ヘキサペプチド類似体部分Ｓの構造において、Ｍｐａ残基とＡｂｕ残基とを結 ぶ線は慣用の意味をもつ。それは、これらの二つの残基の側鎖の端部を結合する 共有結合があることを意味する。この場合、Ｍｐａ残基のイオウ原子が共有結合 によってＡｂｕ残基のγー（または４−）炭素原子に結合される。 アミノアルコール基Ｚは立体中心を含み、従って、関係するアミノ酸のＤおよ びＬ異性体に対応して、二つのエピマー形、ＲおよびＳ、で存在することができ る。これらの異性体のいずれかを有するヘプタペプチド類似体は、エピマーの混 合物として本発明の範囲に含まれる。好ましくは、アミノアルコール基は単一エ ピマーとして存在し、そして好ましくはＳ構造を有する。 本発明で、Ｍｐａ残基およびアミノアルコールＺはαーアミノ酸の外形上の等 価物と考えられ、従って本発明の化合物はヘプタペプチド類似体と名付けられる 。 本発明の好ましい態様において、ＸはＤ−トリプトファン残基またはβー（２ −ナフチル）−Ｄ−アラニン残基のいずれかである。 本発明の別の好ましい態様において、Ｙはバリン、ロイシン、イソロイシン、 アロイソロイシン、シクロヘキシルアラニンおよび（β，β−ジエチル）アラニ ンの一つの残基である。 本発明の別の好ましい態様において、ｎは２−４の範囲である。 本発明の更に好ましい態様において、ＸはＤ−トリプトファン残基またはβー （２−ナフチル）−Ｄ−アラニン残基のいずれかであり、そしてＹはバリン、ロ イシン、イソロイシン、アロイソロイシン、シクロヘキシルアラニンおよび（β ，β−ジエチル）アラニンの一つの残基である。 本発明の特に好ましい態様は、下記から選ばれたペプチド類似体である： ここで、下記の更なる略語を使用した： Ｄ−Ｔｒｐ：Ｄ−トリプトファン残基 ａｌｌｏＩｌｅ：アロイソロイシン残基 Ａｌａ（３，３−ｄｉｅｔｈｙｌ）：（β，β−ジエチル）アラニン残基 Ｄ−Ｎａｌ：βー（２−ナフチル）−Ｄ−アラニン残基 Ｌｅｕ：ロイシン残基 Ｖａｌ：バリン残基 Ｃｈａ：βーシクロヘキシルアラニン残基。 本発明の最も好ましい態様は、下記のペプチド類似体である： 本発明の化合物は塩基性部位（アミンまたはグアニジン）を含み、従って酸と 塩を形成することができ、該塩は遊離塩基の薬学的性質を保持する。従って、か かる塩は本発明の範囲に含まれる。かかる塩の例には塩酸塩、臭化水素酸塩、硫 酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、トリフルオロ酢酸塩およびメタンスル ホン酸塩が含まれる（しかしこれらに限定されない）。 本発明によって、上記のオキシトシンアンタゴニストヘプタペプチド類似体の 少なくとも１種を薬理学的有効量で含む薬学的組成物もまた提供される。該組成 物は、保存料、希釈剤、分散剤、粘膜吸収促進剤（その例はＭｅｒｋｕｓ，Ｆ． Ｗ．Ｈ．Ｍ．外、Ｊ．Ｃｏｎｔｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ２４、２０１−２ ０８頁、１９９３年、に開示され、表面活性剤、胆汁酸、フシデート（ｆｕｓｉ ｄａｔｅｓ）、リン脂質およびシクロデキストリンを含む）、緩衝剤および風味 料のような薬学的に許容される添加剤を含んでもよい。かかる組成物は固体とし て（例えば錠剤、カプセルまたは粉剤として）または液体として（例えば溶液ま たは懸濁液として）製剤化してもよく、それは本願では経口または非経口投与用 に、クリームおよび軟膏を含む。経口（舌下および頬を含む）、鼻孔内、肺動脈 、経皮、肛門、膣、皮下、筋肉内および静脈内投与の全ては投与に適した経路で あろう。 本発明の好ましい組成物は上記のヘプタペプチド類似体の殺菌水溶液であり、 特に鼻孔内投与または静脈内注入に適する等張塩溶液である。該溶液は、溶液の ｐＨを３．０−７．０の範囲、好ましくは３．５−５．５の範囲に維持するため に、緩衝剤を含み得る。該緩衝剤は例えばリン酸塩／クエン酸塩緩衝剤（バッフ ァ）である。 本発明による別の好ましい組成物は、経口投与用の錠剤である。特に好ましい のは、胃の中に存在する低ｐＨで実質的に不溶性であるが、小腸におけるもっと 中性のｐＨでは溶解して吸収用にペプチド類似体を放出するような物質で被覆さ れた錠剤である。かかる被覆剤の例はＰＣＴ／ＳＥ９４／００２４４及びＰＣＴ ／ＳＥ９５／００２４９に開示され、これらは本願明細書に参考用に含める。 本発明は更に、子宮の筋肉の望ましくない収縮を軽減または停止する方法を開 示する。この方法は、対象体に本発明のオキシトシンアンタゴニストヘプタペプ チド類似体の一つの有効量を、好ましくは上記の組成物として配合して投与する ことである。本発明のこの開示は、本発明の化合物及び製剤の使用の開示に等し いことは明らかであろう。 本発明の特に好ましい態様は、陣痛における子宮の収縮を停止する方法である 。１−３日の期間を含むであろう初期の介入に続き、担当医が適当と診察する時 まで陣痛の再発を阻止するために処置が継続されるであろう。このように、この 態様には二つの側面、即ち急性産科的使用および保全治療的使用、がある。 本発明の別の好ましい態様は、月経に伴う子宮の痛い収縮を軽減する方法であ る。 治療的有効投与量を構成するヘプタペプチド類似体の量は多くの要因に依存す るであろう。投与経路は重要な考察事項であろう。静脈内注入は伝達に最も効率 的な経路であるようであるが、一方で鼻孔内投与は経口投与よりも一層効率的で あると期待できる。従って、一回の静脈内投与は一回の鼻孔内投与よりも化合物 が少量しか必要とせず、そして一回の経口投与はより多量の化合物を必要とする であろう。担当医は患者の年齢、体重および健康状態のような要因を考慮する必 要があるであろう。月経痛の管理は陣痛よりも少ししか化合物を必要としないよ うである。陣痛にある平均的婦人の静脈内処置用の一回の有効投与量を構成する 化合物の量は、２４時間の期間で約０．１ｍｇから５００ｍｇ、好ましくは約１ ｍｇから約２００ｍｇである。 本発明のヘプタペプチド類似体は選択的に子宮筋肉収縮を阻止し、一方望まし くないオキシトシンアゴニスト性（作動性）がない。該類似体はまた、オキシト シン類似体および関連するホルモンバソプレッシンの潜在的副作用であり得る抗 利尿、低血圧または高血圧作用が少ししかないか、またはない。それらは、ほと んど構造的に類似した当業界で公知の化合物と効力が匹敵する。それらは、ＷＯ ９５／０２６０９に開示された化合物と、Ｃ−末端残基の性質において異なる。 公知の化合物はカルボキサミド官能基（−ＣＯＮＨ₂）を有するが、本発明の化 合物は第一級アルコール（−ＣＨ₂ＯＨ）を有する。本発明の化合物はＷＯ９５ ／０２６０９の化合物よりも安定性、特に水性媒体中での安定性、について優れ ている。これは該化合物を水溶液として処方する場合に明らかに有利であり、そ の結果長い保存寿命を有しそして冷蔵に対する要求がより厳格でなくなるだけで なく、製造および処方工程においても有利であり、該処方工程は、該化合物が溶 液である場合には、最終組成物が固体であっても、期間を要するであろう。 本発明の化合物は子宮筋肉収縮の抑制に特に有用であることを前に強調したが 、当技術に精通した者は、オキシトシンアンタゴニストについての他の治療的用 途が可能であることを理解するであろう。例えば、オキシトシン作用の別の標的 は乳の出るのを促進する乳腺である。従って、本発明の化合物は不適当な乳汁分 泌を制御するのに使用し得るであろう。それらはまたある種の腫瘍、特に乳腫瘍 および第１の乳腫瘍から誘導された第２の転移、の抑制にも有用であろう。前立 腺の肥大は更に治療標的であろう。オキシトシンは黄体の増殖および性交後の精 子移動の促進に関連することも示唆された。このことから、本発明の化合物は避 妊剤または受精抑制剤として有用であろうと推論できる。オキシトシンの別の周 辺の標的は免疫系である。従って、オキシトシンアンタゴニストは免疫変調剤お よび抗炎症剤として潜在的に有用である。オキシトシンは脳にも存在し、精神作 用誘発性機能障害、精神分裂病およびアルコール誘発神経心理学的欠陥のような いろいろな症状の病因に役割を果たすことが示唆された。いくつかの種類で、複 雑な社会的行動に作用することが示された。従って、本発明の化合物は、例えば 抗精神剤または認識力高揚剤として使用しえるであろう。これらの治療的状況で の本発明の化合物の使用は本願開示の範囲内にある。 以下に、本発明を一般的にそして特定の例により記述する。この記載は本発明 の範囲を限定するためではなく、当業界で知られそして実施者が同等と考えるで あろう変更は同様に本発明の範囲内にある。合成の一般的方法 本発明の化合物の合成を行うのに必要な化学的変換は当業界でよく知られてい る。溶液支持体および固体支持体の両者中のペプチド化学の技術が特に関連があ る。溶液相法は下記の参考文献に記載されている： Ｌａｗ，Ｈ．Ｂ．およびＤｕ Ｖｉｇｎｅａｕｄ，Ｖ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．８２，４５７９−４５８１頁，１９６０年； ＺｈｕＺｅ，Ａ．Ｌ．外．，Ｃｏｌｌ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．２９ ，２６４８−２６６２頁，１９６４年；および Ｌａｒｓｓｏｎ，Ｌ．−Ｅ．外．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２１，３５２−３５ ６頁，１９７８年。 固体相法は下記に論じられている： Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｂ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４ ９頁，１９６３年； Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、Ｒ．Ｂ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３、１３８５頁 、１９６４年；および Ｋｏｎｉｇ，Ｗ．およびＧｅｉｇｅｒ，Ｒ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．１０３，７８ ８頁，１９７０年。 本発明者に使用される経路は以下に概略が論じられ、そして次に詳細に例示さ れる。ペプチド化学の実施に精通した人には、いくつかの変換を行なう順序を変 更できることが明らかであろう。かかる自明な変更は本発明の範囲から除外する ことは本発明者の意図することでない。 極めてしばしば出発材料は、一般式１の保護されたＮ−アルキルアミノ酸であ ろう。 Ｒおよびｎは前に概略を記載したものから選ばれる。Ｐ¹は窒素保護基である。 Ｐ¹の特に好ましい選択は９−フルオレニルメチル−オキシカルボニル（Ｆｍｏ ｃ）である。 目標化合物中のＡがＨの場合、Ｐ²はＰ¹から区別できる窒素保護基であり（例 えばベンジルオキシカルボニル）、そしてＰ³はＨまたはＰ²と同じであるか、或 いはＰ²とＰ³とは一緒になって二価の窒素保護基（例えばフサロイル）である。 Ａが−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ₂である場合、Ｐ²はＨであるかまたは上記のような保 護基であり、そしてＰ³は−Ｃ（＝ＮＰ⁴）ＮＨ₂であり、ここでＰ⁴は保護基であ り、好ましくはＰ²と同じである。これらの保護されたグアニジンは互変異体お よび位置異性体として存在できることは実施者に明らかであろう。−（ＣＨ₂）_n −Ｎ（Ｐ²）Ｐ³は２^Aとして定義したが、異性体２^B、２^Cおよび２^Dは全て、この 記述の目的にはこの構造と同等であると考えることができる。 一般式１の保護されたＮ−アルキルアミノ酸が市販されていない場合、それら は文献に記載された方法、または該方法と類似の方法で調製できる。 固体相法を使用すると仮定すると、アミノ酸１を適当な樹脂に結合させて、最 初の中間体として３を得る。 ここでＲｅｓはポリマー樹脂を表す。 Ｐ¹は切断されそしてＦｍｏｃＡｂｕ（ＳＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯ₂ｔ−Ｂｕ）ＯＨが結 合して４が得られる。 ペプチドはＦｍｏｃＡｓｎ、ＦｍｏｃＹ、ＦｍｏｃＩｌｅおよび次にＢｏｃＸ と連続して結合して拡張する。ＸがＤ−Ｔｒｐの場合、インドールの窒素をその ホルミル誘導体として保護するのが有利である。このアミノ酸にＢｏｃ−保護を 用いると、ｔ−ブチルエステルとＮ−末端保護基との同時の切断が可能となる。 この段階で、中間体５が存在する。 ペプチドを適当な標準的条件を用いて樹脂から切断し、次に例えば臭化ベンジ ルを用いる処理によりエステル化して、ベンジルエステル６を得る。 ｛これは下記の６と書くことができる： Ｂｏｃ基およびｔ−ブチルエステルは酸処理によって切断され、そして得られ たアミンおよび酸基は縮合して巨大環を形成する。ベンジルエステルは次に、例 えば水性イソプロパノール中のホウ水素化ナトリウムとの反応により、還元され て目標化合物の第１級アルコールが得られる。便利なことには、残った保護基の 除去はこの変換中に達成することができる。そうでない場合は、最終の脱保護ス テップが必要である。生成物を、標準的技術を用いて単離しそして精製する。 下記の特定の例はこの一般的概略に従って調製した。それらは本発明の化合物 の代表例である。下記の略語を用いる： ＴＢＴＵ ２−（１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３− テトラメチルーウロニウムーテトラフルオロボレート Ｂｏｃ ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル Ｆｍｏｃ ９−フルオレニルメチルオキシカルボニル ＴＦＡ トリフルオロ酢酸 ＤＭＦ ジメチルホルムアミド ＤＢＵ １，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン Ｂｎ ベンジル Ｏｒｎ オルニチン ｐｈｔ フタロイル 保護アミノ酸は次のようにして得た： ＦｍｏｃＡｂｕ（ＳＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯ₂ｔ−Ｂｕ）は、Ｐｒｏｃｈａｚｋａ，Ｅ． 外、Ｃｏｌｌ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．５７，１３３５頁，１９９２ 年、に従って調製した； ＦｍｏｃＮ^αＭｅＯｒｎ（Ｐｈｔ）は、Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ，Ｒ．Ｍ．外、Ｊ ． Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４８，７７頁，１９８３年によるリシン誘導体に用いられる 経路と同様に調製した； Ｆｍｏｃ−ａｌｌｏＩｌｅは、Ｔｅｎ Ｋｏｒｔｅｎａａｒ，Ｐ．Ｂ．Ｗ．外、 Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．２７，３９８頁，１９ ８６年に従って調製した； ＦｍｏｃＡｌａ（３，３−ジエチル）は、Ｅｉｓｌｅｒ，Ｋ．外、Ｃｏｌｌ．Ｃ ｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．３１，４５６３頁，１９６６年に従って調製し た； Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（ＣＨＯ）；Ｂｏｃ−Ｄ−Ｎａｌ；ＦｍｏｃＡｓｎ；Ｆｍｏ ｃＩｌｅ；ＦｍｏｃＶａｌ；ＦｍｏｃＬｅｕ；ＦｍｏｃＣｈａは全てＢａｃｈｅ ｍ（スイスおよび米国）から調製した。 例Ｉ ペプチドＩａは、ｏ−クロロトリチル樹脂上で固体相方法を用いてＦｍｏｃ手 法で合成した。 最初のアミノ酸、ＦｍｏｃＮ^αＭｅＯｒｎ（Ｐｈｔ）ＯＨ、を樹脂に結合させ た。Ｆｍｏｃ基の切断は、ＤＭＦ中の２％ＤＢＵを用いて達成した。その他の残 基は連続的に結合させて、最後にＢｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（ＣＨＯ）ＯＨを結合させ た。樹脂結合されたペプチドを酢酸／トリフルオロエタノール／ジクロロメタン （１：２：７）の混合物を用いて処理し、次に該混合物を濾過し、そして濾液を 蒸発させそして冷凍乾燥した。得られたペプチド酸を、ＤＭＦ中の臭化ベンジル （２当量）およびジイソプロピルエチルーアミン（２．５当量）との反応により エステル化した。溶媒を蒸発させ、そして残留物を酢酸から冷凍乾燥した。 ＩａのＮ−末端Ｂｏｃ基およびｔ−ブチルエステルを９５％ＴＦＡ／２．５％ アニソール／２．５％水を用いて１．５時間、室温で処理することにより切断し た。ＴＦＡを蒸発させ、生成物をジエチルエーテルの添加により沈殿させた。ペ プチドをＤＭＦ中のＴＢＴＵ（１当量）およびＮ−メチルモルホリン（１７当量 ）を用いて室温で処理することにより環化した。溶媒を蒸発させ、そしてペプチ ドＩｂを逆相クロマトグラフィーにより精製した。 精製したベンジルエステルＩｂを、イソプロパノール／水（６：１）の混合物 中のＮａＢＨ₄（７当量）の溶液を用いて室温で２２時間、不活性気体雰囲気中 で処理した。酢酸（１８当量）を添加し、そして混合物を８０℃で６時間加熱し た。溶媒を蒸発させ、生成物ペプチドＩｃ（≡“ペプチドＩ”）を逆相液相クロ マトグラフィーにより精製した：固定相；Ｋｒｏｍａｓｉｌ（商標）１３μまた は５μ、１００Å、Ｃ₁₈またはＣ₈（ＥＫＡ Ｎｏｂｅｌ，スエーデン）：移動 相；アセトニトリル／水中の０．１％ＴＦＡ。収量１４ｍｇ。質量分光測定（電 子スプレーイオン化、イオン捕獲分析、正モード）は、提案した構造と一致する 分子質量を示した（実測値ｍ／ｚ＝８３０．５［ＭＨ⁺］；［Ｃ₄₀Ｈ₆₃Ｎ₉Ｏ₈Ｓ ＋Ｈ⁺］の計算値ｍ／ｚ＝８３０．５）。 例ＩＩ−ＶＩＩ 例Ｉと同じ方法を用いそしてＢｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（ＣＨＯ）ＯＨおよびＦｍｏ ｃ−ａｌｌｏＩｌｅＯＨを適当な保護アミノ酸で置き換えて、表１に示すペプチ ドを調製した。 表１．質量分光分析データ 本発明のペプチドの性質を当業犀で公知のものの性質と比較するために、多く の参考用ペプチドアミドをＷＯ９５／０２６０９に開示された方法に従って調製 した。これらの参考用ペプチドを表２に掲げる。例ＶＩＩＩ 例Ｉの方法を使用して、Ｎ^α−メチルアミノ酸をＮ^α−エチル−オルニチンに 置き換えて、下記のペプチド（ＶＩＩＩ）を調製した（実測値ｍ／ｚ＝８５５． １［ＭＨ⁺］；［Ｃ₄₁Ｈ₆₅Ｎ₉Ｏ₈Ｓ＋Ｈ⁺］の計算値ｍ／ｘ＝８５５．５］。 ペプチドＶＩＩＩ 例ＩＸ 化合物の生物学的評価 本発明の化合物を、多くのインビトロおよびインビボの生物学的系で評価する ことができる。これらのテスト系は、目的とするヒトの患者にできるだけ関連す るように選ばれる。 ｉ）オキシトシンリセプター結合検定 組換えヒトオキシトシンリセプターを、標準的分子生物学的技術を用いてＣＨ ＯまたはＨＥＫ２９３細胞に発現させた。膜フラクションを調製しそして ［¹²⁵Ｉ］−オキシトシンおよびいろいろな濃度のヘプタペプチド類似体の存在 下で培養した。次に膜を濾過により分離しそして放射能を計数してオキシトシン 結合性を決定した。阻止定数Ｋ_iを該類似体について決定した。得られた結果を 表３に表す。 表３ オキシトシンリセプター検定；阻止定数Ｋ_i ｉｉ）ヒト子宮モデルにおけるインビトロのアンタゴニスト効果 帝王切開を受けた妊娠後期の婦人からの子宮筋肉組織部分を細長い片に切断し 、それをクレブスーリンガーバッファを満たした組織浴に載せ、そしてカルボゲ ン（９５％Ｏ₂＋５％ＣＯ₂）ガスを用いて酸素処理した。張力変換器で検出した 等角（アイソメトリック）筋肉張力における変化をガラスポリグラフに記録した 。 オキシトシンの濃度−効果曲線を記録した。この場合に測定した効果は、アゴ ニスト（即ち、オキシトシン）投与後の１０分の期間中の積分収縮曲線の正味の 値に対応する。少なくとも最大反応の半分を生じるオキシトシン濃度を選んだ。 このアゴニストの濃度を、いろいろな濃度のアンタゴニストヘプタペプチド類似 体の存在下で組織に投与し、そして反応を記録した。反応をその対照値の５０％ に減少させるのに必要なアンタゴニストの濃度を、回帰（ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ）分析により決定し、ここにＩＣ₅₀値として示す。［ＩＣ₅₀値＝所定のアゴニス ト投与の効果を５０％だけ減少させるのに必要なアンタゴニストの濃度］。結果 を表４に示す。 表４．アゴニスト効果の阻止（子宮モデル） ｉｉｉ）インビボラットモデル 自然発情期のスプラジー ダウレー ラット（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔｓ）（約２５０ｇ）をイナクチン（Ｉｎａｃｔｉｎ）(０．５ｍｇ．／ １００ｇ体重、ｉ．ｐ．）を用いて麻酔した。子宮筋層の活性を子宮腔に取り付 けそして変性ロック溶液を満たしたカテーテルを用いて測定した。カテーテルを スタットハム（Ｓｔａｔｈａｍ）Ｐ２３ｄ力変換器に連結しそして収縮をガラス ポリグラフ（モデル７ｄ）上に記録した。 オキシトシン（２×１０^-4−５×１０^-3マイクロモル／ｋｇ）についての投与 量−反応曲線を記録した。この場合、反応を、アゴニスト注入後の１５分間中の 曲線の積分により定量した。１０−３０ｍｍＨｇの腔内収縮圧に相当する効果を 与えそして曲線の直線状部分内にあるオキシトシン投与量を選んだ。このオキシ トシン投与量を少なくとも２つの異なるアンタゴニスト投与量と組み合わせて動 物に投与し、効果を記録した。アゴニストの効果をその対照値の５０％に減少さ せるアンタゴニスト投与量を補間法により決定し、ここにＩＤ₅₀値として示す。 ［ＩＤ₅₀値＝所定のアゴニスト投与量の効果を５０％だけ減少させるのに必要な アンタゴニスト濃度］。結果を表５に示す。 アンタゴニストの作用の持続期間もまたこのモデルで決定した。オキシトシン 投与量は、最大効果の半分に対応する効果を与えるように選んだ（２×１０^-4− ５×１０^-3マイクロモル／ｋｇ）（この投与量はＥＤ₅₀である）。ここで決定し た効果は、前に定義したＩＤ₅₀決定の場合と同じである。アンタゴニスト投与量 は、アゴニストに対する反応を少なくとも５０％阻止するように選んだ（８×１ ０^-4−４×１０^-3マイクロモル／ｋｇ）。実験の初めに、アゴニストの一回投与 量とアンタゴニストの一回投与量とを同時に投与した。その後２０分の間隔で、 アゴニスト単独の投与量を投与し、反応を測定した。アゴニスト効果の阻止が出 発値の２５％に下がるのに要する時間を、補間法により決定し、ここにｔ₇₅値と して示す。［ｔ₇₅値＝一回投与量の効果が７５％下がるのに要する時間］。結果 を表５に示す。 表５．アゴニスト効果の阻止（インビボ ラットモデル） 表３−５に示した結果から、本発明の化合物はラットモデルで、効能および作 用の持続時間の両方に関して、少なくとも以前の化合物と同じように良好である こと、およびさらに関連するヒトモデルでは以前の化合物よりも優れていること が明らかである。 例Ｘ 薬学的製剤 静脈内投与用の等張緩衝塩水の溶液 下記の溶液を調製した： 溶液Ａ（０．０２Ｍクエン酸） クエン酸一水和物 ０．４２ｇ 蒸留水 １００ｍｌにする量 溶液Ｂ（０．０４Ｍリン酸水素二ナトリウム） Ｎａ₂ＨＰＯ₄・２Ｈ₂Ｏ ０．７１２ｇ 蒸留水 １００ｍｌにする量 ２７ｍｌの溶液Ａに２３ｍ１の溶液Ｂ、０．８１ｇのＮａＣｌおよび０．３２ ２ｇのペプチドＩ酢酸塩を加える。溶液Ａを用いてｐＨを４．５に調整し、次に 蒸留水を加えて全容量を１００ｍ１にする。最後に、混合物をＳｔｅｒｉｖｅｘ −ＧＶ ０．２２μｍを通過させて濾過する。これは、静脈内注入に適したペプ チドＩを０．３ｍｇ／ｍｌ（遊離塩基として計算）含む等張溶液を与える。 経口投与用の錠剤 下記の成分を合わせた： ペプチドＩ酢酸塩 １０８ｍｇ マンニトール ７．７ｇ ラクトース ６．０ｇ 微結晶性セルロース ６．０ｇ 架橋カルボキシメチルセルロース ２００ｍｇ タルク ８００ｍｇ ステアリン酸マグネシウム ２００ｍｇ ポリビニルピロリドン／エタノール 結合用 ブレンド混合物を、標準的方法を用いて錠剤に成形した。該混合物は、それぞ れがペプチドＩを１ｍｇ（遊離塩基として計算）含む１００個の錠剤を製造する のに充分である。 経口投与用の腸用錠剤 前記の錠剤２５個を酢酸フタル酸セルロース１００ｍｇ（錠剤１個当たり４ｍ ｇ）を用いてエアースプレー被覆した。 本発明で同じく有用なものはＷＯ９５／２５５３４に開示された組成物であり 、ここで有効薬剤（例えばデスモプレッシン）は、本発明による化合物で置き換 え ることができる。該組成物を、錠剤に添加するのに必要な高量の有効薬剤を取扱 うように適合させるのは、当業者が容易に到達する範囲内にある。 例ＸＩ 安定性の評価 本発明のヘプタペプチド類似体の溶液を、水性製剤の代表的な組成物を用いて 調製した。該組成物を５０℃で数週間貯蔵し、アリコートをＨＰＬＣによる分析 のために定期的に取り出した。参考用ペプチドを平行して調べた。分解を、ペプ チドの損失（１週間当たりの重量％）として、分解生成物の性質とはかかわりな く決定した。結果を表６に示す。 表６．安定性テスト 上に示した結果は、本発明の化合物が前に記載した化合物よりも溶液中で一層 安定であることを明確に示す。実際には、この増加した安定性は、水性製剤がよ り長い保存期間を有しそして冷凍貯蔵の必要性が少ないであろうことを意味する 。その結果の財政的節約の外に、投与直前に個々の服量を調製する必要性が減少 するので、便利さと安全性の両方で有利であろう。 該化合物は精製中および精製後に一層耐分解性であるので、製造工程もまた有 利であろう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 25/00 Ａ６１Ｐ 25/18 25/18 25/28 25/28 29/00 29/00 35/00 35/00 37/02 37/02 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ， ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，Ｆ Ｉ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ， ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，Ｍ Ｘ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ， ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 トロイナー，ジャージー アメリカ合衆国 カリフオルニア州 92075 ソラナ ビーチ ノース シーラ アベニユー 132 (72)発明者 オーレル，カール―ヨハン スウエーデン国 エス―151 73 サーデ ルテルエ カールホフスフェーゲン 13 (72)発明者 リビエラ，ピエール アメリカ合衆国 カリフオルニア州 92122 サン ディエゴ フィオレ テラ ス 5225 アパートメント ディー―107 (72)発明者 ハイ，ロバート イギリス国 ハンツ エスオー53 １エス エイ イーストレイ チャンドラース フ ォード アシユブリッジ ライズ 18

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．オキシトシンアンタゴニスト活性を有しそしてヘキサペプチド部分Ｓと、ア ミド結合により該部分Ｓに結合されているＣ−末端βーアミノアルコール残基Ｚ とから成るヘプタペプチド類似体またはその薬学的許容塩であって、該βーアミ ノアルコールＺは： （ここで、Ｑはー（ＣＨ₂）_n−ＮＨ−Ａであり、ｎは１ないし６、そしてＡはＨ またはーＣ（＝ＮＨ）ＮＨ₂であり、そしてＲはＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅である）であ り； そして部分Ｓは： （ここで、Ｍｐａ、Ｉｌｅ、ＡｓｎおよびＡｂｕは下記の意味を有する： Ｍｐａ ３−メルカプトプロピオン酸残基 Ｉｌｅ イソロイシン残基 Ａｓｎ アスパラギン残基 Ａｂｕ α−アミノ酪酸残基； そしてＸはＤ−芳香族α−アミノ酸であり；そしてＹは脂肪族αーアミノ酸であ る）である、ヘプタペプチド類似体またはその薬学的許容塩。 ２．ＸがＤ−トリプトファンまたはβー（２−ナフチル）−Ｄ−アラニンのアミ ノアシル残基である、請求項１に記載のヘプタペプチド類似体。 ３．Ｙがロイシン、バリン、イソロイシン、アロイソロイシン、β，β−ジエチ ルアラニン、シクロヘキシルアラニンまたはシクロヘキシルグリシンのアミノア シル残基である、請求項２に記載のヘプタペプチド類似体。 ４．Ｙがロイシン、バリン、イソロイシン、アロイソロイシン、β，β−ジエチ ルアラニン、シクロヘキシルアラニンまたはシクロヘキシルグリシンのアミノア シル残基である、請求項１に記載のヘプタペプチド類似体。 ５．ｎが２、３または４である、請求項４に記載のヘプタペプチド類似体。 ６．ｎが２、３または４である、請求項１に記載のヘプタペプチド類似体。 ７．ＸがＤ−トリプトファンまたはβー（２−ナフチル）−Ｄ−アラニンのアミ ノアシル残基である、請求項６に記載のヘプタペプチド類似体。 ８．ＸがＤ−トリプトファンまたはβー（２−ナフチル）−Ｄ−アラニンのアミ ノアシル残基であり、Ｙがロイシン、バリン、イソロイシン、アロイソロイシン 、β，β−ジエチルアラニン、シクロヘキシルアラニンまたはシクロヘキシルグ リシンであり、そしてｎが２、３または４である、請求項１に記載のヘプタペプ チド類似体。 ９．下記から選ばれた請求項８に記載のヘプタペプチド類似体： １０．下記の構造を有する請求項１に記載のヘプタペプチド類似体： １１．下記の構造を有する請求項１に記載のヘプタペプチド類似体： １２．下記の構造を有する請求項１に記載のヘプタペプチド類似体：１３．下記の構造を有する請求項１に記載のヘプタペプチド類似体： １４．下記の構造を有する請求項１に記載のヘプタペプチド類似体： １５．請求項１に記載のヘプタペプチド類似体の薬理学的有効量と薬学的に許容 される担体とを含む薬学的組成物。 １６．鼻孔内、皮下または静脈内投与用の水溶液である、請求項１５に記載の組 成物。 １７．上記の担体が緩衝剤を含む、請求項１５に記載の組成物。 １８．経口投与用に錠剤、カプセル、顆粒または同等物の形体にある、請求項１ ５に記載の組成物。 １９．子宮筋肉の収縮を軽減または阻止するための請求項１に記載のヘプタペプ チド類似体の使用。 ２０．子宮筋肉の収縮を軽減または阻市するための請求項１５に記載の組成物の 使用。 ２１．子宮筋肉の収縮が陣痛に関連する、請求項２０に記載の使用。 ２２．子宮筋肉の収縮が月経痛に関連する、請求項２０に記載の使用。 ２３．治療を必要とする婦人に請求項１５に記載の組成物を投与する、陣痛の治 療方法。 ２４．腫瘍および組織異常生長、精神分裂病、行動障害、勃起機能障害、炎症、 および不適当な乳放出の治療用、または認識向上、免疫変調剤または受精調節剤 としての請求項１に記載のヘプタペプチド類似体の使用。 ２５．オキシトシンアンタゴニスト活性を有しそしてヘキサペプチド部分Ｓと、 アミド結合により該部分Ｓに結合されているＣ−末端βーアミノアルコール残基 Ｚとから成り、該βーアミノアルコールＺは： （ここで、Ｑはー（ＣＨ₂）_n−ＮＨ−Ａであり、ｎは１ないし６、そしてＡはＨ またはーＣ（＝ＮＨ）ＮＨ₂であり、そしてＲはＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅である）であ り； そして部分Ｓは： （ここで、Ｍｐａ、Ｉｌｅ、ＡｓｎおよびＡｂｕは下記の意味を有する： Ｍｐａ ３−メルカプトプロピオン酸残基 Ｉｌｅ イソロイシン残基 Ａｓｎ アスパラギン残基 Ａｂｕ α−アミノ酪酸残基； そして ＸはＤ−芳香族αーアミノ酸であり；そして Ｙは脂肪族αーアミノ酸である） であるヘプタペプチド類似体またはその薬学的許容塩の製造法であって、Ｚが下 記のＹ： （ここで、Ｍはー（ＣＨ₂）_n−Ｎ（フタロイル）またはー（ＣＨ₂）_n−Ｎ（Ｐ） −Ｃ（＝ＮＰ）ＮＰ₂であり、基Ｐの一つまたは二つは窒素保護基でありそして 残りは水素であり、ｎは１ないし６であり、そしてＲ¹はＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅であ る）である対応する化合物を、ホウ水素化物塩または置換されたホウ水素化物ま たはボランを用いて還元する、ヘプタペプチド類似体またはその薬学的許容塩の 製造法。 ２６．上記のホウ水素化物がＮａＢＨ₄である、請求項２５に記載の製造法。 ２７．陣痛、月経痛、腫瘍および組織異常生長、精神分裂病、行動障害、勃起機 能障害、炎症、および不適当な乳放出の治療用、または認識向上、免疫変調また は受精調節剤としての薬学的組成物の製造法であって、該方法は、オキシトシン アンタゴニスト活性を有しそしてヘキサペプチド部分Ｓと、アミド結合により該 部分Ｓに結合されているＣ−末端βーアミノアルコール残基Ｚとから成り、該β アミノアルコールＺが： （ここで、Ｑはー（ＣＨ₂）_n−ＮＨ−Ａであり、ｎは１ないし６、そしてＡはＨ またはーＣ（＝ＮＨ）ＮＨ₂であり、そしてＲはＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅である）であ り； そして部分Ｓが： （ここで、Ｍｐａ、Ｉｌｅ、ＡｓｎおよびＡｂｕは下記の意味を有する： Ｍｐａ ３−メルカプトプロピオン酸残基 Ｉｌｅ イソロイシン残基 Ａｓｎ アスパラギン残基 Ａｂｕ α−アミノ酪酸残基； そして ＸはＤ−芳香族αーアミノ酸であり；そして Ｙは脂肪族αーアミノ酸である） であるヘプタペプチド類似体またはその薬学的許容塩を、薬学的に許容される担 体と合わせることを特徴とする、上記の薬学的組成物の製造法。 ２８．上記の組成物がヘプタペプチド類似体またはその薬学的許容塩と担体との 均質混合物である、請求項２７に記載の方法。 ２９．上記の混合物を腸用被覆剤、特にｐＨ５．０以下で容易に溶解しない腸用 被覆剤で覆うことを特徴とする、請求項２８に記載の方法。 ３０．上記の混合物を錠剤化または顆粒化し、そして／またはそれをカプセルに 充填することを特徴とする、請求項２８または２９に記載の方法。