UA54459C2 - Аналоги гептапептиду окситоцину, спосіб їх отримання, фармацевтична композиція, спосіб її отримання, спосіб запобігання передчасним пологам - Google Patents

Abstract

Аналоги гептапептиду або його фармацевтично прийнятні солі, які складаються з гептапептидної складової S та EMBED Equation.3 -аміноспиртового залишку Ζ з С-кінцем, зв'язаним із складовою S амідним зв'язком, де EMBED Equation.3 -аміноспирт Ζ є -NR-CH-(Q)-СН2ОН, Q є (CH2)n-NH-A, n=1-6 та А є Η або -С(=NH)NН2 та R є СН3 або C2H5, в складовій S, Χ є D-ароматичним EMBED Equation.3 -аміноспиртом та Υ є аліфатичним EMBED Equation.3 -аміноспиртом; аналоги гептапептиду мають активність антагоніста окситоцину. Розкриті також спосіб їх синтезу, фармацевтичні композиції, які містять ці аналоги; синтез таких композицій; спосіб контролю скорочень матки.

Description

Опис винаходу

Цей винахід стосується нових аналогів гептапептидів (тобто, гептапептидів, у яких М-кінцевий залишок деамінований, і С-кінець, відновлений до спирту), які виявляють активність антагоністів окситоцину, придатну, між іншим, для зменшення або блокування скорочень м'язів матки, пов'язане з передчасними родами та менструальною біллю. Винахід також стосується фармацевтичних композицій, що містять ці аналоги пептидів, а також їх використання.

Окситоцин є пептидним гормоном, який стимулює скорочення м'язів матки. Тому вважається, що він 70 пов'язаний з передчасними родами та менструальною біллю. Вважається також, що антагоністи окситоцину можуть бути корисними для контролю цих станів. Пептиди антагоністів окситоцину з відповідними вимогами, ефективністю та селективністю у терапії відомі. Часто вони призначені для застосування у водному розчині.

Виготовлення готових до вживання доз таких антагоністів потребує, щоб розчини були стійкими протягом тривалого часу, що не завжди має місце. У таких випадках ліки треба виготовляти безпосередньо перед 712 вживанням, наприклад, з пептиду, одержаного сушінням заморожуванням, або з їх фармацевтично прийнятної солі. Така процедура є незручною і може викликати забруднення.

Предмет цього винаходу - нові антагоністи окситоцину, які є аналогами гептапептидів, що мають поліпшену стійкість у водному середовищі і при цьому зберігають відповідні вимогам ефективність та селективність.

Інший предмет винаходу - фармацевтичні композиції, які містять згадані нові гептапептидні аналоги антагоністів окситоцину і мають поліпшену стійкість і тому довговічність.

Ще один предмет винаходу - спосіб лікування хворобливого стану, пов'язаного з надлишковим або небажаним скороченням матки, який передбачає введення фармацевтичної композиції, що містить згаданий аналог гептапептиду Винахід включає клас сполук, що є аналогами гептапептиду, фармацевтичними композиціями, які містять такі аналоги, а також їх використання при скороченнях матки, особливо в зв'язку з с передчасними родами і менструальною біллю. Ге)

Аналоги гептапептидів згідно з винаходом мають М-термінальний гексапептид складова 5 та

С-термінальний Д-аміноспирт складова 7, який далі вважатиметься формальним еквівалентом сьомої амінокислоти гептапептиду. Складова 5 має структуру: Ф зо тоттттнняяяхатт ю

Мра-Х-т11е-У-Азп-АВи- 5 « в якій Мра, Пе, Азп та Аби мають такі значення: ч

Мра залишок З-меркаптопропіонової кислоти (що має також назву дезаміноцистеїн) ю

Пе залишок ізолейцину

Авп залишок аспарагіну

Ари залишок о-аміномасляної кислоти; « і де Х є ароматична О-у-амінокислота, і М є аліфатична о-амінокислота. з с Аміноспирт 7 має структуру: ї» Ї -М-сн-СснН;-оН ий г В в якій К метил або етил, і т О є -(СНо)н - МН-А, де п- 1-6, А є Н або

ЧК» -0 (-МНУ МН».

Сполуки згідно з винаходом можуть утворювати солі приєднання кислот, і як фармацевтичне прийнятні, й включені в обсяг винаходу. (Че) Сполуки можуть бути складовою твердих або рідинних форм, приклади яких включають таблетки, капсули, розчини і суспензії. Інші компоненти форм можуть включати, наприклад, розчинники, дисперсанти, консерванти, буферні розчини, ароматизатори та регулятори осмотичного тиску. Тверді форми особливо придатні для перорального вживання, а розчини найбільше підходять для ін'єкцій (внутрішньовенних, внутрішньом'язових або підшкірних), а також для внутріносового введення. Особливою перевагою сполук згідно з винаходом є те, що їх

ІФ) розчини більш стабільні при подовженому зберіганні, ніж відомі сполуки з порівняною ефективністю. ко Фармацевтичний препарат у відповідній формі є корисним для контролю скорочень матки. Імовірно, такий контроль потрібний при передчасних родах, а також при менструальних болях. При час нагляду за бо передчасними родами фармацевтичні препарати можна використати як токолітики на початку переймів, а також як лікувальний засіб для запобігання їх повторення.

Згідно з винаходом розкриті аналоги гептапептидів, які проявляють лікувальну активність як антагоністи окситоцину.

Аналоги гептапептидів згідно з винаходом мають структуру, яка включає М-термінальний гексапептид аналог б5 складової 5 та С-термінальний р-аміноспирт складової 7. Структура р-аміноспирту 7 є такою: -Д-

три (2) (в 95 де О є «(СНо)-МН-А, п -1-61А є Н або -СеЕМНІМН» де К є СНз або СоНв складова 5 є такою: 70 Мра-Х-І1е-ї-Авп-Арио- (5) де Мра, Пе, Авп та Ари мають такі значення:

Мра залишок З-меркаптопропіонової кислоти (має також назву дезаміноцистеїн)

Ме залишок ізолейцину 12 Авп залишок аспарагіну

Ари залишок х-аміномасляної кислоти; і де

Х є ароматична 0- у-амінокислота; і

У є аліфатична о-амінокислота.

Під ароматичною о-амінокислотою мають на увазі о-амінокислоту, в якій боковий ланцюг включає ароматичне кільце. Кільце може бути карбоциклічним або гетероциклічним, моноциклічним або злитим.

Приклади ароматичних о-амінокислот включають без обмеження фенілаланін, тирозин, (О-етил) тирозин, триптофан, р(2-нафтил)аланін та фенілгліцин. У сполуках згідно з винаходом залишок Х має незвичайну см

О-конфігурацію. Під аліфатичною о-амінокислотою мають на увазі х-амінокислоту, у якій боковий ланцюг має (8) тільки атоми карбону та гідрогену. Такі бокові ланцюги включають алкільні та циклоалкільні групи. Вони можуть бути ненасиченими, але можуть не включати ароматичні залишки. Бокові ланцюги мають 1-12 атомів карбону, хоча переважною є кількість 3-7 атомів карбону. Приклади аліфатичних о-амінокислот включають без ду обмеження аланін, валін, лейцин, циклогексилгліцин та адамантилаланін. Залишок У має звичайну

Ї-конфігурацію. о

У структурі аналогів гексапептидів складової 5, лінія, що з'єднує залишки Мра та Ари, має своє звичайне «І значення. Це позначає, що існує ковалентний зв'язок, що поєднує кінці бокових ланцюгів цих двох залишків. У цьому випадку атом сульфуру залишку Мра приєднаний ковалентним зв'язком до у-(або 4-) атому карбону З залишку Аби. юю

Аміноспирт складової 7 включає стереогенний центр і таким чином може існувати у двох епімерних формах,

К та 5, відповідне ізомірам пов'язаних амінокислот. Аналоги гептапептидів із одним із цих ізомірів включені в обсяг винаходу як суміші епімерів. Найкраще, якщо аміноспиртова складова присутня як єдиний епімер і має « з-конфігурацію.

У контексті винаходу залишок Мра і аміноспирт вважаються формальними еквівалентами о-амінокислот, а щей с сполуки згідно з винаходом відповідно називаються аналогами гептапептидів. а У найкращому варіанті втілення винаходу Х є залишком ЮО-триптофану або залишком р-(2-нафтіл)-О-аланіну. -» В іншому найкращому варіанті втілення винаходу У є залишок валіну, лейцину, ізолейцину, аллоізолейцину, циклогексилаланіну та (р-р-діетил)аланіну.

В ще іншому найкращому варіанті втілення винаходу п-2-4. о У самому найкращому варіанті втілення винаходу Хє залишок О-триптофану або ї5» залишок р-(2-нафтіл)-О-аланіну, а У - залишок однієї із сполук валіну, лейцину, ізолейцину, аллоізолейцину, циклогексилаланіну та (д-р-діетил)аланіну. ве Найкращим варіантом втілення винаходу є аналог пептиду, який вибраний з: с 50 іЧе)

Ф) іме) 60 б5 ета опе вит ав в о в ово

СН, СНоСНоСНоМи; іонні ііі МИ КИ НН о о вон сну СВСНІСВІСНоМН. пев іній МИ. НИМ НН

Ки -ИМВЗШШ-- 0 ПП г. ся, СНСНоМН; алкінів вів ПИ В

С

Ся, СЯСНСНаМК- сем

МН» для Мра-О-Тгр-І1е-А1а(3, 3-діекву1) Аваков -он-снюон о у подо вивпопо ово пиво

СНз СНоСНоСНоМАН» (о) зо ЕЛІТ Пити рттся ю 1. «

Єна СВІСНІСНОМН; « «

Мра-0-Ма1-І1е-А1а(3,3-а1есну1) вив ни МИ ю 1,

СНУ СНОСНОСНоМЕ,; «

Мра-0О-Тер-І1е-І1е-А5п-Ару-М- СНО СНІОН - у с "» сну СНоСНОСНоМН,;

Мра-О-Тгр-І1Т1е-Бец-А5зп-Ариц-МА- -СН-СН»ОН ков по оо п |. ін Сся-сНОМн їз сн. СНУСНОСНОМН; г» сл 70 ово ЩИ ПИ ІНН

Вон ооо со Сну снасСНосСНоМ Мра-О-Тер-І1е-Спа-Азп-Ари-КА- -СН-СНІ»ОН

Су о сх СНаСН.СНоМН; ко в якому використані такі абревіатури: бо б-Тгр залишок О-триптофану апопе залишок аллоізолейцину

Аїа(3,3-дієїпу!) залишок (р-Д-діетил)аланіну. р-Ммаї залишок р-(2-нафтіл)-О-аланіну 65 Геи залишок лейцину мУаї залишок валіну

Спа залишок р-циклогексиаланіну.

Найкращим варіантом втілення винаходу також є аналог пептиду:

Мра-0О-Тгр-І1е - апллоїл - Азп-Ари-М-СН-СНООН

СЕ п

Сиз СЕ»СНоСНОМЕ;.

Сполуки згідно з винаходом мають основне місце приєднання (амін або гуанідин) і таким чином можуть утворювати солі з кислотами, і солі зберігають фармакологічні властивості вільних основ. Відповідно, такі 70 солі включені в обсяг винаходу. Приклади солей включають без обмеження гідрохлорид, гідробромід, сульфат, ацетат, цитрат, бензоат, трифлуорацетат та метансульфонат.

Згідно з винаходом також розкриті фармацевтичні композиції, що містять фармакологічно ефективну кількість принаймні одного з описаних вище аналогів антагоністу гептапептиду, який виявляє активність окситоцину.

Композиції можуть також включати фармацевтично прийнятні добавки, такі як консерванти, розчинники, 19 дисперсанти, засоби, що стимулюють абсорбцію слизу (приклади яких розкриті в публікації Мегсив, Е.МУ/.Н.М. еї аІ, У.СопігоПедй Кеїеазе 24, 201-208, 1993, і які включають поверхово-активні речовини, жовчні кислоти, поєднуючі засоби, фосфоліпіди та циклодекстрини), буферні розчини та ароматизатори. Такі композиції можуть бути у твердому стані (наприклад, у вигляді таблеток, капсул або порошків) або рідинному (наприклад, у вигляді розчинів або суспензій), у цьому контексті креми або мазі перорального або парентерального вживання.

Придатними можуть бути такі засоби введення, як пероральний (в тому числі під'язичний та щічний), внутріносовий, легеневий, трансдермальний, ректальний, вагінальний, підшкірний, внутрім'язовий та внутрішньовенний.

Найкращою формою згідно з винаходом є стерильний водний розчин описаного аналогу гептапетиду і особливо ізотонічний фізіологічний розчин, придатний для внутріносового введення або внутрішньовенної с ін'єкції. Розчин може вміщувати буфер для підтримування рнН на рівні 3.0-7.0, і переважно 3.5-5.5. Буфером є, Ге) наприклад, фосфат/цитратний розчин.

Ще однією формою згідно з винаходом є таблетка для перорального вживання. Самою кращою є таблетка, що покрита по суті нерозчинною при низькому рН речовиною, такою, яка присутня у шлунку, але розчиняється при більш нейтральному рН тонкої кишки, при цьому вивільняється пептидний аналог для абсорбції. Приклади б подібних покритів розкриті в РСТ/ЗЕ9А/00244 та РСТ/5Е95//00249, що приведені в цьому описі як посилання. ю

У винаході також розкритий спосіб зменшення або блокування небажаних скорочень матки. Цей спосіб передбачає введення пацієнтці ефективної кількості одного з аналогів гептапептиду, який виявляє активність в антагоністу окситоцину згідно з винаходом, переважно у вигляді описаної вище композиції. З опису винаходу «Її очевидно, що в ньому розкрите використання сполук та їх форм.

Самим найкращим варіантом втілення винаходу є спосіб блокування скорочень матки при передчасних юю родах. Після первісного втручання, яке продовжується 1-3 дня, лікування можна продовжити, щоб запобігти повторення переймів, і зупинити лікування за наказом лікаря. Цей варіант втілення винаходу має два аспекти - використання як токолітика у гострих випадках, а також використання з метою лікувальної підтримки. «

Іншим варіантом втілення винаходу є спосіб зниження хворобливих скорочень матки, пов'язаних з З 70 менструацією. с Кількість аналогу гептапептиду, що вміщує лікувально-ефективну дозу, залежить від ряду факторів. Важливе з» значення має засіб вживання. Можливо, що внутрішньовенні ін'єкції є найбільш ефективні, а внутрішньоносове очікується більш ефективним, ніж пероральне. Відповідно, разова внутрішньовенна доза потребує меншу кількість сполуки, ніж разова внутрішньоносова, і більша кількість сполуки потрібна для разового перорального вживання. Лікар повинен брати до уваги такі фактори, як вік, вагу та стан здоров'я пацієнтки. Можливо також, і-й що для зменшення менструального болю потрібна менша кількість сполуки, ніж при передчасних родах. Кількість «» сполуки, що містить разову ефективну внутрішньовенну дозу для жінки з середньостатистичними даними в разі передчасних родів, складає від приблизно 0.1мг до приблизно 50Омг, і переважно від приблизно мг до е приблизно 20Омг протягом 24 годин. 4! 20 Аналоги гептапептидів згідно з винаходом селективно інгібують скорочення м'язів матки і при цьому не мають небажаних властивостей агоністів окситоцину. Вони також мають незначну антидіуретичну, гіпотенсивну с або гіпертенсивну дію (можуть зовсім її не мати), що потенціальне є побічним ефектом аналогів окситоцину та спорідненого гормону вазопресину. За ефективністю їх можна порівняти з відомими сполуками, що мають таку саму структуру. Від сполук, які розкриті у М/О 95/02609, вони відрізняються природою С-кінцевого залишку.

Відомі сполуки мають карбоксамидну функцію (-СОМН»), а сполуки згідно з винаходом мають первинний спирт

ГФ) (-СНЬОН). Сполуки згідно з винаходом мають кращу стабільність, особливо у водному середовищі, в порівнянні кю із сполуками, що розкриті в МУО95/02609. Безумовно, це є перевага, якщо сполуку можна використати у водному розчині, який більш довговічний і має менш суворі вимоги щодо охолодження; перевага має також місце у процесі виготовлення, коли сполуки використовують у вигляді розчину, навіть якщо кінцевий продукт буде у 60 твердому стані.

Ї хоч вище було підкреслено, що сполуки згідно з винаходом особливо корисні для контролю скорочень м'язів матки, спеціалісти зможуть знайти інше використання антогоністів окситоцину. Наприклад, у результаті дії окситоцину на молочну залозу прискорюється виділення молока. Тому сполуки згідно з винаходом можна використати для контролю небажаної лактації. Їх також можна використати для контролю деяких пухлин, 62 особливо пухлин молочної залози та вторинних метастаз від первинної пухлини молочної залози. Іншим предметом лікування може бути гіперплазія простати. Було також припущено, що окситоцин спричиняє розвиток жовтого тіла і полегшує переміщення сперми після коїтусу. З цього припущено, що сполуки згідно з винаходом можна використати як контрацептиви або засоби, що регулюють плідність. Окситоцин діє також на імунну систему. Тому антагоністи окситоцину потенційно корисні як імуномодулятори та антизапальні засоби.

Окситоцин також присутній у мозку і тому можливо пов'язаний з етіологією таких різних станів, як психогенна ерекційна дисфункція, шизофренія та нейрофізіологічні порушення, спричинені алкоголем. У деяких осіб окситоцин впливає на соціальну поведінку. Відповідно, сполуки згідно з винаходом можна використати, наприклад, як антипсихотичні засоби, а також ті, що підсилюють пізнавальну здатність. Використання сполук 7/0 Згідно з винаходом у будь якому з приведених випадків включено в обсяг цього винаходу.

Нижче на конкретних прикладах приведений опис винаходу у цілому. З цього випливає, що даний опис не обмежує обсяг винаходу. Можливі зміни відомі спеціалістам і не виходять за його рамки.

Хімічні перетворення, які необхідні для проведення синтезу, добре відомі спеціалістам. Способи одержання рідинної і твердої фаз в хімії пептидів в цілому релевантні. Способи одержання твердої фази описані у /5 пУблікаціях:

Ї аж, Н.В. апа би Мідпеаца, М. У.Ат.Спет.5ос. 82,4579-4581,1960; 7/пиге, А ег аї., СоїЇ. Слесп. Спет. Сотт. 29,2648-2662,1964; апа

Ї агезоп, І..-Е. Еї аї., У.Меа.Спет. 21, 352-356,1978.

Способи одержання твердої фази описані в публікаціях:

Мегїтійеїа К.В., У. Ат.Спет.5ос. 85, 2149,1964;

Меттеїа к.В., Віоспетівігу З,1385,1964; апа

Кбпід, МУ. апа Сеїідег, К., Спет.Вег. 103,788,1970.

Схема винаходу обговорена у загальних рисах і більш детально розкрита на прикладах. Для обізнаних з практикою хімії пептидів зрозуміло, що послідовність виконання деяких перетворень можна змінювати. сч

Винахідники не мали намір виключити такі очевидні зміни з обсягу винаходу.

Найчастіше, стартовим матеріалом є захисна М-алкіл амінокислота загальної формули 1. і) р2 (СН) Я Ф | ю в лренсовн 1 «

ВК «

ВЕ та п вибрані з можливостей, що наведені нижче. Р! є азотна захисна група. Найкраще, якщо Р! є ю 9-флуоренілметил оксикарбоніл (ЕГтос).

Якщо А в цільовій сполуці повинно бути Н, то Р? є азотна захисна група, що відрізняється від Р ", (наприклад, бензилоксикарбоніл), і Р? є Н або те ж саме, що Р? або Р? і РЗ разом є двовалентна захисна група « для нітрогену (наприклад, фталоїл).

Якщо А повинно бути -С(-МН)МН», то Р? є Н або вище зазначена захисна група і Р? є -«С(-МР")МН», де Р" є З с захисна група, і найкраще, якщо така ж, як Р 2. Для спеціаліста зрозуміло, що ці захисні гуанідіни можуть :з» існувати як таутоміри та позиційні ізоміри. В описі винаходу -«(СН о)4-М(Р2)РЗ визначено як 27, а ізоміри 29, 22, та 29 можуть вважатися еквівалентними цій структурі. сл 45 , М Р й М-Е й МОР ї» тісні а-М-С-МНІ ОО -(СНіаеМ-СеМЕ-Р 0 - СНІ) а-М-С-МН-Р ве й 27 28 25 1 іЧе) гш -(сно),-МеС-МН-Р

Ф) о 2"

Якщо не можна придбати М-алкіл амінокислоти загальної формули 1, їх можна приготувати описаними у бо літературі способами, або аналогічними.

У разі використання способів одержання твердої фази, амінокислота 1 приєднується до відповідної смоли, даючи проміжну сполуку З б5

ЕЕ" (СНг)а- МР й р'-М-СН-СО,-Кев З 4 в якій Без - полімерна кислота.

Р' розщеплюється, Етосаьц(ЗСНоСНЬСОІ-ВШОН приєднується, даючи сполуку 4. р: ще т-во (СЕН;) 12757 те 2 те МР

Ещшос-МН-СН-СО-М-СН-СО,-Кез 4

К

Пептид розширюється послідовною взаємодією з ЕтосАвп, ЕтосуУ, Етосііє З потім Восх. Якщо Х є О-Тгтр, корисно захистити нітроген індолу як його похідну формулу. Використання Вос-захисту для цієї амінокислоти дозволяє одночасне розщеплення і-бутил складного естеру та М-кінцевої захисної групи. На цій стадії присутня проміжна сполука 5. сч 2 р (о) ще совно (СНІ) 2757 (СНІ 2 (Сн) а-МОР 1 Кг й ри - (є) зо пн вв Пи 5

Іо)

Кк -

Пептид розщеплюється з смоли при відповідних стандартних умовах і потім естеріфікується, наприклад, « обробкою бензилбромідом з наступним отриманням бензил естеру 6. " ІФ) 3

Е-Вибос(СНа)2-5- ре ний МР « 6 вос-Х-І1е-У-Авп-МН-СН-СО-М-СН-СО2 СНР но с хз В " (Ця сполука може мати вигляд 2 в п (СНе) І в" зпраті ї | в) тї0ЇІбЙЖ6ЧТ8ИТТТ ОО О7 Т.З ї- Мра-ОЕ-Би Вос-ХхХ-І1е-УХ-А5п-Ари-М-СН-СО-СНоРА

Фо | ; іЧе) Кк

Група Вос та Їбутил складний естер розщеплюються кислотою, і отримані амінові та кислотні групи конденсуються, утворюючи макроцикл. Потім бензил естер відновлюється, даючи первинний спирт цільової сполуки, наприклад, взаємодією з борогідридом натрію у водному ізопропанолі. Протягом такого перетворення можна видалити інші захисні групи. Якщо це не так, потрібна ще одна остаточна стадія захисту. Продукт

ГФ) ізолюють і очищають, використовуючи стандартну методику. 7 Нижче наведено конкретні приклади згідно з загальною схемою. Вони є сполуками згідно з винаходом.

Використано такі абревіатури: 60 твти 2-(1-Н-бензотріазол-1 -іл)-1,1,3-тетраметил-уроніум тетраметилборат

Вос І-бутилоксикарбоніл

Етос 9-флуоренілметилоксикарбоніл

ТЕА трифлуороцтова кислота

ОМЕ диметилформамід бо ОВ /1,8-діазобіцикло|5.4.Фундец-7-ен

Вп бензил

Огп о орнітин

РИ о фталоїл й й

Захищені амінокислоти виготовляли так:

ЕтосАрц(ЗСНЬСНьЬСОІ-Ви) виготовляли згідно з публікацією Ргоспа?ка, Е. еї а, СоїЇ. Спет. Сотт. 57,1335,1992;

ЕтосМмамеОгт(рн) виготовляли по схемі отримання похідного лізину згідно з Егеідіпдег К.М. еї аї., 70 У.Ога. Спет.48, 77,1983;

Етос-аллоїл виготовляли згідно з Теп Когіепааг, Р.В.МУ, еї а/!., Іпі. 9. Рерііде Ргоїеіп Ке 27,398,1986;

ЕтосаАїа (3,3-діетил) виготовляли згідно з Еівіег К., е( а), СоїЇ. Слтесіи. Спет.Сотт. 31, 4563,1966;

Вос-О-Ттр(СНО); Вос-О-Маї; ЕтісАвп; Етоїе; ЕтосМаї; Етосі еи; ЕтоссСнпа всі з Васпет (Швейцарія та США).

Приклад 1 5 Мра-р-Тгр-І1е- аллоїл -Авп-АБи-М - СН-СН»ОН сСНз СН.СНІСнНоМН.

Іа: Вос-О-Тгр(СНО)-І1е- аллоїл -Авп-Ари-М МеОхп (РПС) ОВп

Зсвсн,Со Ви с

Пептид Іа синтезували, використовуючи способи одержання твердої фази на о-хлоротритиловій смолі, а о також стратегію Етос.

Першу амінокислоту ЕтосМаМеОгп(рпЮ) з'єднували із смолою. Етос-групу розщепили 295. Ори в ОМЕ. Інші залишки приєднували послідовно, завершуючи Вос-О-Ттр(СНО)ОН. З'вязаний смолою пептид обробляли сумішшю оцтової кислоти, трифлуоретанолу, діхлорметану у співвідношенні 1:2:7, потім суміш фільтрували, Ф фільтрат випаровували і сушили заморожуванням. Отриману пептидну кислоту естеріфікували взаємодією з ю 2екв. бензилброміду та 2,5бекв. дізопропілетиламіну в ОМЕ протягом 27 годин. Розчинник випарювали і залишок сушили заморожуванням. «

Ів: Мра-О-Тегр (СНО)-Іїе- аллоїл -Азп-Араи-ММеОгп (РПС) ОВп « | ПОКИ ОО вв юю

М-кінцеву Вос групу та і-бутилестер пептиду Іа розщеплювали сумішшю 9595 ТРА, 2.5965 анізолу та 2.595 води протягом 1.5 години при кімнатній температурі. ТЕА випаровували, і продукт осаджували додаванням діетилетеру. Пептид циклізували взаємодією з Текв. ТВТО та 17екв. М-метилморфоліну у ОМЕ при кімнатній « температурі. Розчинник випаровували, і пептид ІБ очищали хроматографією з оберненою фазою. З е то с Іс: Мра-О-ТЕр-І1е- аплоїл пав НИ ШО пи "шин шннннцишн :з» сСНз СНоСНоСНОМН;

Очищений бензилестер пептиду ІБ обробляли 7 екв. МавнН ; у розчині у суміші ізопропанолу і води у співвідношенні 6:11 при кімнатній температурі протягом 22 годин у атмосфері інертного газу. Додавали 18екв. о оцтової кислоти, і суміш нагрівали до 807"С протягом 6 годин. Розчинник випаровували, і пептид Іс (- "пептид ї5» І") очищали рідинною хроматографією з оберненою фазою: стаціонарна фаза; Кготазії Ф 1З3мкм або 5мкм, 100 А,

Сів або Се (ЕКА Мобреї, Швеція); мобільна фаза; ацетонітрил /0.195 ТРА у воді. Видобуток 14мгГг. ве Мас-спектрометрія (іонізація електророзпилюванням, аналіз з іонною пасткою, позитивний тип) показала г 20 молекулярну масу у згоді з пропонованою структурою (знайдено т/2-830.5 |МН'); розраховано для

ІСлоНезМеОвЗ ан т/2-830.5. со Приклади 1І-МІЇ

Використовуючи той же спосіб, як і у прикладі 17 та замінюючи відповідні захисні амінокислоти на

Вос-О-Ттр(СНО)ОН та ЕГтос-аллоїл ОН, виготовляли перелічені у Табліці 1 пептиди. о ю во Мра-Х-І1 СОУ К-СБОН пншшшшианиннни сну ССС МА» 111 оораковаюмн | отмаю. б5 Ії О-Тгр Гей 830.5 830.4

Апа(3,3-діетил 844.5 844.5

Ряд відомих пептидамідів виготовлено згідно з розкритими в УМО 95/02609 способами, для порівняння властивостей сполук згідно з винаходом та відомих. Вони перелічені у таблиці 2.

Таблиця 2

Мра-Х-І1е-УХ-А5п-АВи-М-А- А СН-СОМН;

ООН они ся, СКС МН;

Е

Приклад МІЇЇ

Використовуючи спосіб прикладу 1, але замінюючи МУ-етилорнітин на МЗ2-метиламінову кислоту, виготовили сч такий пептид (МІІЇ) (знайдено т/2-855.1 |МН/'); розраховано для ІС44Не5МоОв5 АНІ т/2-855.5. о

Мра-0-Ма1-11е- аллоїл -Авп-АвБи-М - СН-СНаОН -- : ;Яу------ 4 ?.-ЬйЬ 1/1 1

СЕз-СНа СНаСНесСНаМН» Ф

Пептид МИ! о «

Приклад ІХ

Біологічна оцінка сполук «

Сполуки згідно з винаходом можна досліджувати в ряді біологічних систем іп мімо та іп міїго. Ці тестові ю системи підібрані так, або бути скільки можливо релевантними до людини. ї) Зв'язування рецептору окситоцину

Рецептори рекомбінантного людського окситоцину виражали в клітинах СНО або НЕК293, використовуючи стандартну молекулярну біотехнологію. Мембранну фракцію виготовляли та інкубували у присутності «

Г25Ц-окситоцину та аналогів гептапептиду з різними концентраціями. Потім мембрани ізолювали за допомогою шщ с фільтрації і підрахували на радіоактивність, щоб визначити зв'язування окситоцину. Була визначена константа К. інгібування для аналогу. Отримані результати показані у Таблиці 3. . и?

Таблиця З сл 45 Дослідження рецептору окситоцину; константи К / інгібування

Ку (пм); середня велнчинаєзЕМ с такое гло ї) Дія антагоністу на моделі матки людини іп мйго

Тканину м'язу матки жінки на пізній стадії вагітності, що переносила операцію кесарева розрізу, різали на (Ф) смужки та поміщали в (зве рай, наповнену буферним розчином Кгерз-Кіпдег і оксигеновану карбогеном

ГІ (9595 05 - 5956 СО»). На Поліграфі Граса записували зміни ізометричного напруження м'язу, виявлені датчиком напруження. во Записували криву співвідношення концентрації та ефекту окситоцину. Ефект, замірений у цьому випадку, відповідає істиному значенню інтегрованої кривої скорочень протягом 10 хвилин після введення агоністу (а саме окситоцину). Вибрали концентрацію окситоцину, яка дає щонайменше напівмаксимальний відгук. В тканину ввели агоніст такої концентрації у присутності аналогу гептапептиду з властивостями антагоністу, і відгук записували. Концентрацію антагоністу, що необхідна для зниження відгуку на 50905 її контрольного значення, де Визначали за допомогою аналізу регресії у цьому описі вона має значення ІС зо (Значення ІС во дорівнює концентрації антагоністу, що необхідна для зниження дії дози даного агоністу на 5095). Результати показані у

Таблиці 4. пиши сх нин

ЕТО НО НО її) Модель пацюка іп мімо

Пацюків Зргадоие Юаміеу (приблизно 250г) у стані нормальної тічки знеболювали інактином (Іпасііп) (0,5мг на 100г ваги тіла інтрапарентерально). За допомогою, катетера, закріпленого у порожнині матки і заповненого модифікованим розчином ІосКез, замірювали активність м'язової оболонки матки. Катетер з'єднували з датчиком сили Зіаїййат Ра2за, і скорочення записували на Поліграфі Граса (модель 70). т5 Записували криву доза-відгук для окситоцину (2 - 107 - 5 - 10733 пмоль/кг). У цьому випадку відгук рахували інтеграцією кривої протягом 15 хвилин після ін'єкції агоністу. Вибрали дозу окситоцину, що діє відповідно тиску 10-30мм На скорочень у порожнині матки у межах лінійного відрізку кривої. Цю дозу окситоцину ввели.тварині спільно з щонайменше двома різними дозами антагоністу, результат записували. Дозу антагоністу, що знижує дію агоністу на 5090 її контрольної величини, визначена інтерполяцієй і подається тут як величина ІО во. (Величина Ібо дорівнює дозі антагоністу, яка необхідна для зниження дії дози даного агоністу на 5095). Результати показані у Таблиці 5.

На цій моделі також визначили тривалість дії антагоністів. Вибрали дозу окситоцину (2 - 107 - 5 - 103 умоль/кг), яка дає ефект, відповідний половині максимального ефекту (ця доза дорвнює ЕЮОв5о). Визначений с тут ефект є таким самим, як і при визначенні Осо, що приведено вище. Вибрали дозу антагоністу (8 - 107 -4- о 103 умоль/кг), що забезпечує щонайменше 5095 інгібування реакції на агоніст. На початку експерименту сумісно вводили разові дози агоністу та антагоністу. Після цього з інтервалами 20 хвилин замірювали відгук. Визначали інтерполяцією час, необхідний для інгібування дії агоністу та зниження стартової величини на 2595 він подається тут як величина і;5. (Величина і75 - це відрізок часу, необхідний для зменшення ефективності разової б дози на 75965). Результати показні у таблиці 5. ю 0000 тити й

Таблиця 5 з з ю нити решти

Результати, представлені у Таблицях 3-5, показують, що з точки зору ефективності та тривалості дії « сполуки згідно з винаходом на моделі пацюка є щонайменше такими самими, як і відомі сполуки, але краще них - с на моделі людини. и Приклад Х ,» Фармацевтичні композиції

Ізотонічний буферний фізіологічний розчин для внутрішньовенних ін'єкцій.

Виготовляли такі розчини: 1

Розчин А (0.02моль лимонна кислота) т- моногідрат лимонної кислоти 0.42г с» дистильована вода 100б0мл с ше

Розчин В (0.04моль адізодіит пудгодеп рпозрпаге) 3е)

МагнРОд2НгО 0,712г дистильована вода ай 100мл

До 27мл розчину А додали 2З3мл розчину В, 0.81г Масі та 0.322г пептид 1 ацетату. Розчином А рН доводили

ГФ) до 4.5, потім додали дистильовану воду, щоб отримати загальний обсяг 100мл. Нарешті, суміш фільтрували з через Зіегімех-М 0.22ут. В результаті отримано ізотонічний розчин, що містить 0.Змг/мл пептиду 1 (розраховано як вільна основа), придатний для внутрішньовенних ін'єкцій. во Таблетки для перорального вживання поєднали такі компоненти:

Пептид 1 ацетат 108мг маннітол 7 лактоза 6.Ог мікрокристалічна целюлоза 6.Ог бо карбоксиметил целюлоза з міжмолекулярним зв'язком 200мг тальк 800мг стеарат магнію 200мг полівінілпірролідон/'етанол достатньо для зв'язування , , Я й с.

Перемішану суміш формували у таблетки, використовуючи стандартну методику. Кількість суміші достатня для виготовлення 100 таблеток по 1мг пептиду 1 у кожній (розраховано як вільна основа).

Біологічно сумісна таблетка для перорального вживання 25 вищеназваних таблеток покрили розпилюванням 100мг фталату ацетатцелюлози (4мг на таблетку). 70 Корисною також у винаході є композиція, що розкрита у УМО 95/25534, у якій активну речовину (десмопресин, наприклад) можна замінити сполуками згідно з винаходом. Проблема пристосування композиції з метою вміщення більшої кількості активних речовин та включення їх у таблетку легко вирішується спеціалістами.

Приклад ХІ

Оцінка стабільності 75 Розчини аналогів гептапептидів згідно з винаходом виготовляли, використовуючи композиції у вигляді водних розчинів. Розчини зберігали кілька тижнів при 50"С, кратні зразки періодично брали для аналізу у ВЕРХ.

Паралельно аналізували відомі пептиди. Деструкцію визначали по втраті пептиду (96 мас на тиждень) незалежно від природи продуктів розкладу. Результати показані в Таблиці 6.

Таблиця 6

Композиція тестового розчину Деструкція при 507С (мас Ф/тиждень)

ШИ Ізотонічний цитрат/фосфатний буферний розчин, рн п У ПИ сч 2» 00 якваювище 11111007 о (о)

Приведені вище результати ясно показують, що сполуки згідно з винаходом більш стабільні у розчині, ніж у ю сполуках, які описані раніше. На практиці підвищена стабільність виражається у тому, що розчини більш довговічні і менш потребують зберігання в охолодженому стані. Крім грошових збережень, будуть мати місце « переваги щодо зручності та безпеки, оскільки буде зменшена необхідність виготовляти індивідуальні дози «г безпосередньо перед введенням.

І в)

Claims (1)

1. Формула винаходу

   1. Аналог гептапептиду окситоцину або його фармацевтично прийнятна сіль, що має активність антагоніста окситоцину і складається з гексапептидної складової З та й -аміноспиртового залишку з С-кінцем 72, зв'язаного т с зі складовою 5 амідним зв'язком, де Й -аміноспиртом 7 є: . т " -мв-сн-сн»он п о де 9 є (СНо)п-МН-А, п дорівнює 1-6, та А є Н або -С(-МН)МН», т- та де К є СНуз або СоНбБ; їз та складовою 5 є: з сі 50 Мра-Х-І1е-у-Азп-АБи- Є) Су Ме, де Мра, Іе, Авп та Ари мають такі значення: Мра-залишок З-меркаптопропіонової кислоти, Пе-залишок ізолейцину, оо Азвп-залишок аспарагіну, о Ари-залишок є: -аміномасляної кислоти; і де Х є ароматичною О- є: -амінокислотою і У є аліфатичною Є -амінокислотою.

   ю 2. Аналог гептапептиду окситоцину згідно з п. 1, де Х є аміноацдциловим залишком Ю-триптофану во або й -(2-нафтил)-О-аланіну.

   З. Аналог гептапептиду окситоцину згідно з п. 2, де М є аміноациловим залишком лейцину, валіну, ізолейцину, алоізолейцину, й, й -діетилаланіну, циклогексилаланіну або циклогексилгліцину.

   4. Аналог гептапептиду окситоцину згідно з п. 1, де М є аміноациловим залишком лейцину, валіну, ізолейцину, алоізолейцину, й, й -діетилаланіну, циклогексилаланіну або циклогексилгліцину. б5 й

   5. Аналог гептапептиду окситоцину згідно з п. 4, в якому п-2, З або 4.

   6. Аналог гептапептиду окситоцину згідно з п. 1, в якому п-2, З або 4.

   7. Аналог гептапептиду окситоцину згідно з п. б, де С) є аміноацдциловим залишком ЮО-триптофану або й -(2-нафтил)-О-аланіну.

   2 8. Аналог гептапептиду окситоцину згідно з п. 1, в якому Х є аміннациловим залишком ЮО-триптофану або й -2-нафтил)-О-аланіну, М є аміноациловим залишком лейцину, валіну, ізолейцину, алоізолейцину, /,/ -діетилаланіну, циклогексилаланіну або циклогексилгліцину, та п-2, З або 4.

   9. Аналог гептапептиду окситоцину згідно з п. 8, вибраний з: СН СН»СНСНМН»

   -т.. СНз СНоСНо.сН,сН,Ми, СН СНоСНоМН, Мра-О-Текр-І1е-а11011е-А5Ззп-АБи-М--СН-СНООН , Га! ПОВ зв ЩО о СН» снасв сю Кит МН; Мра-О-Тгр-І1е-А1а(3,3-діеспу1)-Азп-Ари-М- СН-СН»ОН , Ме) М ПТ ПЕ Ап гптт, ; | | ю сСНз СНСНоСНОоМН; мра-р' ка! т1е-аМот1е-Азп Аро-н НС з І ші « Сну СНО»СНО,СНОМЕ; ю Мра-20-Ма1-І1е-Аіа(3,3-діеєснпу1) пісі ни пи НИ , По Он Сну СН.СН.СНОМН»; « ю Мра-0-Тер-І1е-ТІ1е-А5зп-Ари-М- - -СН-СН»ОоН ' З М- ьхжЙЖНИ-- - Я - - 6 2 БД - СЕз СН»СНоСНоМН» ;» " Мра-0-Тго-ІТ1ае-Брей-А5п-АБи-М- А СН-СРоОН ' пив | | - - сл СНУ СНОСНОСНМИН,; ї» Мра-0-Тутр-т11е-Уа1-А5п-Ари-М--СН-СНООН ; Коон о о о оо в в они що ть Сну СНОСНоСНОМН» с 50 Мра-0-Тер-І1е-Спа-Азп-АБОИШ-МА-А А СН-СНОН ' с ІТ СЕ; СН.СН,СНОМН; 55 10. Аналог гептапептиду окситоцину згідно з п. 1, що має структуру: о Мети пе епопея ' по ов ко СНз СНСНОСНОМН;

   11. Аналог гептапептиду окситоцину згідно з п. 1, що має структуру: ДПЕ ПЕ тет вротеттитск сСНз СН.СНО.СН,СНОМН,; в 12. Аналог гептапептиду окситоцину згідно з п. 1, що має структуру:

   мли плете пе ур . ЕЕ СН сн.снснН.Мн-СеМН МН;

   13. Аналог гептапептиду окситоцину згідно з п. 1, що має структуру: Мра-0-Ма1-І1е-А1а(3,3-д1іеспу1) вів ни ПИ ' аа в о оо вв СНУ СНСН,СНОМН;

   14. Аналог гептапептиду окситоцину згідно з п. 1, що має структуру: Мра-0-Ма1- онов м ВИД ПИ ЗОНИ Ор ОО во иввин то Сну СюпСВоСНоМи,

   15. Аналог гептапептиду окситоцину за п. 1, який використовують для зниження або блокування скорочень м'язів матки.

   16. Аналог гептапептиду окситоцину за п. 1, який використовують для лікування неоплазії та гіперплазії, шизофренії, розладів поведінки, ерекційної дисфункції, запалення та небажаного виділення молока або як речовину, що підвищує пізнавальну здатність, регулює плідність або є імуномодулятором.

   17. Фармацевтична композиція, що містить фармакологічно ефективну кількість аналога гептапептиду окситоцину згідно з п. 1 та фармацевтично прийнятний носій.

   18. Композиція за п. 17, якою є водний розчин для назального, підшкірного або внутрішньовенного введення. сч

   19. Композиція за п. 17, в якій носій включає буферну речовину.

   20. Композиція за п. 17 у формі таблетки, капсули, гранул та ін., для перорального введення. (о)

   21. Композиція за п. 17 для зниження або блокування скорочень м'язів матки.

   22. Композиція за п. 21, де скорочення м'язів матки пов'язано з передчасними родами.

   23. Композиція за п. 21, де скорочення м'язів матки пов'язано з менструальною біллю. Фо

   24. Спосіб запобігання передчасним пологам, згідно з яким жінці, що потребує такого запобігання, уводять композицію згідно з п. 1. ів)

   25. Спосіб отримання аналога гептапептиду окситоцину або його фармацевтично прийнятної солі, що має « активність антагоніста окситоцину та складається з гексапептидної складової 5 та й -аміноспиртового залишку з С-кінцем 2, зв'язаного зі складовою 5 амідним зв''язком, де В -аміноспиртом 7 є: т (2) Іс) -мв-сн-сн»он о « де 9 є (СНо)п-МН-А, п дорівнює 1-6, та А є Н або -С(-МН)МН», та де В є СНуз або СоНбБ; З с та складовою 5 є: з» Мра-Х-І1їе-У-А5п-АБи- (8) С де Мра, Іе, Авп та Ари мають такі значення: с Мра-залишок З-меркаптопропіонової кислоти, Пе-залишок ізолейцину, - Азп-залишок аспарагіну, їз Ари-залишок є: -аміномасляної кислоти; і де 1 Х є ароматичною О- є: -амінокислотою; і Ге) У є аліфатичною є: -амінокислотою -мві-сн-со-ова С М ГФ) в якому відтворюють відповідну сполуку, де 7 є У: де М є (СНІ) п -М(РІЮ або -(СН»о) п- М(Р)-С(-М(Р)МР», де одна або дві групи Р є нітрогенні захисні групи, ГІ 2 2 а решта є водень, п - 1-6, тав! є СН» або СоНб, використовуючи борогідрид, або заміщений борогідрид, або во боран.

   26. Спосіб за п. 25, в якому борогідридом є МУВН,.

   27. Спосіб отримання фармацевтичної композиції, яка призначена для запобігання за передчасним родам, зменшення менструального болю, лікування неоплазії та гіперплазії, шизофренії, розладів поведінки, ерекційної дисфункції та небажаного виділення молока або як речовину, що підвищує пізнавальну здатність, регулює 65 плідність або є імуномодулятором, в якому поєднують аналог гептапептиду, його фармацевтично прийнятну сіль, що має активність антагоніста окситоцину та складається з гексапептидної складової З та й -аміноспиртового залишку з С-кінцем 2, зв'язаного зі складовою З амідним зв'язком, де й -аміноспиртом 4 є: -мд-сн-сноон 9. о де 9 є (СНо)п-МН-А, п дорівнює 1-6, та А є Н або -С(-МН)МН», та де К є СНуз або СоНбБ; та складовою 5 є: 5), то Мра-Х-т11е-У-А5п-Арц- (в) у де Мра, Іе, Авп та Ари мають такі значення: Мра-залишок З-меркаптопропіонової кислоти, Пе-залишок ізолейцину, Азп-залишок аспарагіну, Ари-залишок є: -аміномасляної кислоти; і де Х є ароматичною О- є: -амінокислотою; і У є аліфатичною є: -амінокислотою, з фармацевтично прийнятним носієм.

   28. Спосіб за п. 27, де композицією є однорідна суміш аналога гептапептиду окситоцину або його солі та носія.

   29. Спосіб за п. 28, в якому покривають суміш покривом, переважно біологічно сумісним, який не швидко сч р» розчиняється при рН 5.0 та нижче.

   30. Спосіб за п. 28 або 29, в якому таблетують або гранулюють суміш та/або заповнюють нею капсули. (о) Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2003, М З, 15.03.2003. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і Фо зо науки України. ІС) « « ІС в) -

   с . и? 1 щ» щ» с 50 іЧе) іме) 60 б5