JP2000510872A - 硫化オリゴヌクレオチド類似体の合成に有用な試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、リン（III）連結を含有するオリゴヌクレオチド類似体を式（Ｉ）を有するチオジ炭酸ジエステルポリスルフィドと反応させて、硫化オリゴヌクレオチド類似体を生成させることにより、硫化オリゴヌクレオチド類似体を合成する方法に向けられている。このジエステルポリスルフィド試薬は、液相及び固相オリゴヌクレオチド類似体合成に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】 硫化オリゴヌクレオチド類似体の合成に有用な試薬 発明の背景 発明の分野 本発明は、三価のリン連結を含有するオリゴヌクレオチド類似体をジチオ炭酸 ジエステルポリスルフィドと反応させることにより、硫化オリゴヌクレオチド類 似体を合成する方法に向けられている。背景の説明 大部分の疾患状態を含む哺乳動物の身体状態のほとんどがタンパク質によって もたらされることは周知である。直接に又はそれらの酵素機能を介して作用する ことにより、タンパク質は動物及びヒトにおける多くの疾患に大きな割合で関与 する。 古典的な治療では、一般に、これらタンパク質の疾患惹起又は疾患増強機能を 緩和しようと、それらとの相互作用に焦点が当てられている。しかしながら、近 年、疾患に関与するタンパク質の産生を、それらの合成を指令する伝令ＲＮＡ( ｍＲＮＡ)分子との相互作用により、直接阻害しようとする試みがなされている 。これらの相互作用には、ｍＲＮＡに対して相補的な、又はアンチセンスのオリ ゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド類似体のハイブリダイゼーションが包含 される。ハイブリダイゼーションは、ワトソン・クリック水素結合形成による、 ｍＲＮＡ配列へのオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド類似体の配列特異 的水素結合である。疾患に関与するタンパク質の産生を妨害することで、最小の 副作用で最大の治療結果がもたらされる。 アンチセンスオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド類似体の薬理学的活 性は、これら物質の特定の細胞内標的部位での有効濃度に影響を及ぼす幾つかの 因子に依存する。オリゴヌクレオチド及びそれらの類似体にとって重要な因子の １つは、ヌクレアーゼに対するそれらの安定性である。ホスホジエステル連結を 含有する未修飾オリゴヌクレオチドは、それらがヌクレアーゼによって急速に分 解されるため、有用な治療薬ではないものと思われる。したがって、ヌクレアー ゼ耐性である修飾オリゴヌクレオチドが非常に望ましい。 天然ホスホジエステル連結の非架橋酸素の一方もしくは両方がそれぞれ硫黄で 置換されているホスホロチオエート及びホスホロジチオエートオリゴヌクレオチ ド類似体は、特に有望なアンチセンス治療薬である。これらオリゴヌクレオチド 類似体はヌクレアーゼに対して非常に耐性が高く、天然のホスホジエステル含有 オリゴヌクレオチドと同じ電荷を有し、かつ治療上有効な量で細胞により取り込 まれる。例えば、Baracchiniら、米国特許第５，５１０，２３９号;Ecker、米国 特許第５，５１２,４３８号;Bennettら、米国特許第５,５１４，７８８号；及び Eckerら、米国特許第５，５２３，３８９号を参照。 ホスホロチオエート及びホスホロジチオエートオリゴヌクレオチド類似体は、 自動ＤＮＡ合成装置で、ホスホネート主鎖を自動合成後に一工程で硫化すること を可能にする水素ホスホネート化学を用いて楽に合成することができる。このア プローチの欠点の１つは、鎖合成の間のカップリング収率が、典型的には、ホス ホロアミダイト化学を用いて得られるものよりも低いことである。したがって、 所望のオリゴヌクレオチド類似体の最終的な収率は、個々のカップリング収率が 低いために非常に低い。 ホスホロアミダイト化学を用いる自動合成は、これら硫化オリゴヌクレオチド 類似体の合成への非常に望ましいアプローチであり、そのカップリング収率は典 型的には９９％を上回る。しかしながら、リン（ＩＩＩ）含有亜リン酸中間体は 、この合成サイクルの脱トリチル化工程の条件下で不安定である。したがって、 これらリン（ＩＩＩ）連結は、各カップリングエ程後に硫化されなければならな い。 オリゴヌクレオチド類似体を合成するためのより最近の方法は“ブロックマー （blockmer）”アプローチである。ブロックマー合成においては、オリゴヌクレ オチド類似体は、固体支持体上での短い保護オリゴマー又はブロック、例えば、 ジヌクレオチドの連続カップリングにより作製される。この方策は、単量体ヌク レオシドホスホロアミダイトの連続カップリングを包含する従来の合成アプロー チを上回る幾つかの利点をもたらす。オリゴヌクレオチド類似体の調製に要する 合成サイクルの数が減少し、それにより時間が節約され、試薬の消費が最小とな る。それらブロックは、安価な液相合成技術を用いて大規模に調製することがで きる。このブロックマー法により硫化オリゴヌクレオチド類似体を調製するため には、それらブロックのリン（ＩＩＩ）連結を大規模に硫化するための試薬が必 要である。ブロックマーアプローチは、次の文献に記載されている：Ravikumar ら、ＷＯ９５／３２９８０号;ＷＯ９４／１５９４７号;Journa1 of Organic Che mistry 1984，49，4905-4912;Helevetica Chimica Acta 1985，68,1907-1913；C hem．Pharm．Bu11．1987，35，833-836。 自動オリゴヌクレオチド合成の間に亜リン酸中間体を硫化するのに利用するこ とができる幾つかの試薬が存在する。これら試薬は全て欠点を有しており、それ が硫化オリゴヌクレオチド類似体の合成へのそれらの使用を制限している。 例えば、元素状態の硫黄が固相オリゴヌクレオチド合成において、リン（III ）連結の硫化に用いられている。しかしながら、元素状態の硫黄は、標準的溶媒 中での溶解性に劣りかつ硫化速度が遅いため、自動合成で用いるのには不適切で ある。加えて、元素状態の硫黄にとって好ましい溶媒である二硫化炭素は非常に 揮発性が高くかつ低い引火点を有する。米国特許第５，２５２，７２３号及び米 国特許第５,４４９，７６９号を参照。 Beaucage試薬、つまり３Ｈ−１，２−べンゾジチオール−３−オンは、効率の 面で大幅に上回る硫化剤である。しかしながら、この試薬は、溶液から沈殿し、 自動ＤＮＡ合成装置の溶媒及び試薬移送ラインを詰まらせる。また、硫化反応の 間に形成される副生物は、強力な酸化剤となる。この副生物は副産物、例えば、 ホスホジエステルをもたらし、これは所望の硫化オリゴヌクレオチドから分離す ることが困難である。加えて、この試薬の調製には、高価で毒性の物質が関与し 、したがって、硫化オリゴヌクレオチド類似体の大規模合成に容易に馴染むもの ではない。米国特許第５，００３，０９７号を参照。 テトラエチルチウラムジスルフィド（tetraethylthiuram disulfide）は安価 で化学的に安定な硫化剤である。しかしながら、その硫化速度は遅いので、かな り過剰モルのこの試薬が必要である。この試薬を過剰に用いたとしても、硫化収 率は許容できないほど低い。米国特許第５，１６６，３８７号を参照。 フェニルアセチルジスルフィドは、自動オリゴヌクレオチド合成の間の亜リン 酸中間体の硫化に用いることができる。しかしながら、この試薬は、硫化オリゴ ヌクレオチド類似体の大規模合成に有用であると報告されたことがない。 Recherches Travaux Chimiques des Pays-Bas 1991，110，325-331；Tetrahedro nLetters1989，30，6757-6760;Synthesis 1981，637-638。 したがって、これらの問題を克服する、硫化オリゴヌクレオチド類似体を合成 するための方法及び試薬に対する要求が当該技術分野に残っている。 発明の要旨 本発明の目的は、オリゴヌクレオチド類似体中のリン（ＩＩＩ）連結を効率的 に硫化する試薬を用いる、硫化オリゴヌクレオチドの合成方法を提供することに ある。 本発明の別の目的は、高い揮発性及び引火点を有する溶媒を用いる必要のない 試薬を用いる、硫化オリゴヌクレオチドの合成方法を提供することにある。 本発明の別の目的は、有機溶媒中で高度に溶解性でかつ溶液から沈殿しない試 薬を用いる、硫化オリゴヌクレオチドの合成方法を提供することにある。 本発明の別の目的は、オリゴヌクレオチド類似体の自動固相合成において有用 である試薬を用いる、硫化オリゴヌクレオチドの合成方法を提供することにある 。 本発明の別の目的は、液相法を用いる大規模及び小規模合成に適合する試薬を 用いる、硫化オリゴヌクレオチドの合成方法を提供することにある。 本発明の別の目的は、オリゴヌクレオチド類似体のリン（ＩＩＩ）連結を硫化 するのに用いることができる硫化剤組成物を提供することにある。 これら及び他の目的は、硫化オリゴヌクレオチド類似体の合成方法であって、 硫化可能なリン（ＩＩＩ）連結を含有するオリゴヌクレオチド類似体を下記式： （式中、各々のＲは不活性側鎖であり、そしてｎは２、３又は４である。） を有するチオジ炭酸ジエステルポリスルフィドと反応させることによる方法で達 成することができる。 また、上記目的は、硫化オリゴヌクレオチド類似体の合成方法であって： （ａ）ブロックされたヒドロキシル基を有するヌクレオシド類似体を提供し； （ｂ）該ブロックされたヒドロキシル基を脱ブロックしてフリーのヒドロキシ ル基を得； （ｃ）該フリーのヒドロキシル基を、ブロックされたヒドロキシル基を有する 保護されたヌクレオシド類似体ホスホロアミダイト又は保護されたヌクレオシド 類似体ホスホロチオアミダイトと反応させて、リン（III）連結とブロックされ たヒドロキシル基とを含有するオリゴヌクレオチド類似体を生成させ； （ｄ）該リン（III）連結を、酸化剤及びジチオ炭酸ジエステルポリスルフィ ドからなる群から選択される試薬と反応させて、酸化又は硫化されたリン（Ｖ） 連結を生成させ； （ｅ）工程（ｂ）から（ｄ）までを少なくとも１回繰り返して、硫化オリゴヌ クレオチド類似体を生成させる ことによる方法であり、該方法における少なくとも１の工程（ｄ）が、該リン（ III）連結を本発明のジチオ炭酸ジエステルポリスルフィドと反応させるもので ある方法で達成することもできる。 また、上記目的は、オリゴヌクレオチド類似体のリン（III）連結を硫化する のに有効な量のチオジ炭酸ジエステルポリスルフィド及び少なくとも１種の溶媒 を含有する硫化剤組成物で達成することもできる。 発明の詳細な説明 本発明及びそれらに付随する多くの利点のより完全な評価は、以下の詳細な説 明を参照することによってそれらがより深く理解されるに従い、容易に得られる であろう。 本発明において用いられる場合、“オリゴヌクレオチド類似体”という用語に は、サイズが２つの単量体単位から数百の単量体単位までの範囲の、ホスホジエ ステル結合又はそれらの類似物によって連結する天然又は修飾ヌクレオシドの線 状オリゴマーが含まれる。オリゴヌクレオチド類似体は、成分ヌクレオチドのヘ テロ環塩基部分及び／又は糖部分の修飾を含む。特には、この用語には、硫化を 受け易いリン（III）連結を含有する非天然オリゴマーが含まれる。好ましくは 、これらの修飾は、オリゴヌクレオチド類似体の標的核酸に結合する能力を阻害 しない。“硫化オリゴヌクレオチド類似体”という用語は、非架橋酸素原子の一 方又は両方が硫黄で置換されているホスホジエステル連結の類似物を少なくとも １つ含有するオリゴヌクレオチド類似体である。“ヌクレオシド類似体”という 用語は、天然又は修飾されたヌクレオシドを指す。特に、この用語には、標的核 酸へのハイブリダイゼーションを増強するためにヘテロ環塩基及び／又は糖の部 位で修飾されているヌクレオシドが含まれる。ここに開示されるヌクレオシド及 びオリゴヌクレオチド類似体における糖置換基の間の立体化学的な関係は、好ま しくは、天然のＤＮＡ及びＲＮＡのものと同じであることが理解されるべきであ る。G．M．Blackburn and M．J．Gait(eds.)，Nucleic Acids in Chemistry and Biology(ILR Press，1990)，Chapter 2，pp.19-70を参照。 本発明のチオジ炭酸ジエステルポリスルフィドは、好ましくは、式： （式中、各々のＲは好ましくは不活性基である。）これら基は、好ましくは、硫 化反応における副反応又は乏しい収率につながり得るいかなる反応性部分も含有 しない。好ましくは、各々のＲは、独立に、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈ア ルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個 までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄ア リール、置換Ｃ₅〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘ トアリール（hetaryl）、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトア リール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原 子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、又は３個までのヘテロ原子を 含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキルである。“Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル” という用語には、線状、分枝状及び環状アルキル基が含まれる。“置換”という 用語は、その基の中の３個までの水素原子が３個までのハロゲン、ニトロ、シア ノ、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｎ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｓ−Ｃ₁ 〜Ｃ₈アルキル基又はそれらの組み合わせで置換されていることを意味する。よ り好ましくは、各々のＲは、独立に、Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール又 は置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリールである。最も好ましくは、各々のＲは、独立に、エチ ル又はｐ−クロロフェニルである。このジチオ炭酸ジエステルポリスルフィドは ジスルフィド、トリスルフィド又はテトラスルフィドであってもよい。すなわち 、それぞれ、ｎは２、３又は４であってもよい。好ましくは、ｎは２又は３であ り、より好ましくは、ｎは２である。 このチオジ炭酸ジエステルポリスルフィドは、対応するチオジ炭酸又は酸塩を ヨウ素又は臭素のような酸化剤で酸化することにより調製することができる。こ れらポリスルフィドの合成方法及び特性は以下の文献に記載されている：Barany ら，Journal of Organic Chemistry，1983，48，4750-4761；W．F．Zeise，J．P rakt．Chem．1845，36，352-362；Losseら，J．Prakt．Chem．1961，13，260；S ．R．Rao，Xanthates and Related Compounds，(M．Decker，NewYork，1971)；B ulmerら，J．Chem．Soc．1945，674-677。 本発明のチオジ炭酸ジエステルポリスルフィドは、オリゴヌクレオチド類似体 中のリン（III）連結を硫化するのに効率的な試薬である。この試薬は、長期保 存しても溶液から沈殿することがない。この試薬は、液相合成において用いるこ とができ、そして自動ＤＮＡ合成装置でのオリゴヌクレオチド類似体の固相合成 において特に有用である。この試薬は、液相又は固相技術のいずれを用いても、 大規模合成において特に有用である。 オリゴヌクレオチド類似体中のリン（III）連結の硫化に用いる場合、このチ オジ炭酸ジエステルポリスルフィドは、好ましくは、アセトニトリル、ピリジン 、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、ジクロロエタン及びコリジンのような 適切な有機溶媒中でオリゴヌクレオチド類似体に送り込まれる。これらの溶媒は 単独で、又はあらゆる割合の混合液として用いることができる。好ましい溶媒は 、ピリジン、ジクロロメタン及びそれらの混合液である。ピリジンが最も好まし い。この試薬は、リン（III）連結を硫化するのに有効なあらゆる濃度、好まし くは０.０１Ｍ〜１.５Ｍ、より好ましくは０.２〜１.２Ｍ；最も好ましくは０. ５〜１.０Ｍで用いることができる。 硫化反応は、あらゆる好都合な温度、好ましくは０〜７０℃；より好ましくは １０〜４０℃；最も好ましくはほぼ室温、すなわち、１８〜２５℃で行うことが できる。硫化反応は、好ましくは３０秒〜１５分、より好ましくは１〜１５分； 最も好ましくは３〜１０分間行う。好ましくは、硫化は、無水条件下で空気を排 除して行う。 硫化オリゴヌクレオチド類似体を合成するための本発明の方法は、硫化を受け 易いリン（III）連結を少なくとも１つ含有するあらゆるオリゴヌクレオチド類 似体に適用することができる。特に、本発明の方法は、亜リン酸トリエステル、 チオ亜リン酸トリエステル、及び水素ホスホネートの硫化に有用である。より好 ましくは、リン（III）連結は、亜リン酸トリエステル又はチオ亜リン酸トリエ ステルである。最も好ましくは、リン（III）連結は亜リン酸トリエステルであ る。 少なくとも１つのリン（III）連結を含有するオリゴヌクレオチド類似体を合 成するための詳細な手順は当該技術分野において周知であり、以下の文献に記載 されている：M．J．Gait(ed.)，Oligonucleotide Synthesis，A Practical Appr oach(ILR Press，1984)；J．S．Cohen(ed.)，Oligonucleotides：Antisense Inh ibitors of Gene Expression，(CRC Press，Inc.，Boca Raton，Fla.，1989)。 好ましくは、本発明のジチオ炭酸ジエステルポリスルフィドは、ホスホロアミ ダイト又はホスホロチオアミダイト合成アプローチと共に用いる。合成は液相中 で、又は固相技術を用いて行うことができる。より好ましくは、この合成は固体 支持体を用いて行う。最も好ましくは、この合成は、APPLIED BIO SYSTEMSモデ ル３８０Ｂ又は類似の機械を用いて、固体支持体上で自動ＤＮＡ合成装置で行な われる。 好ましくは、この合成アプローチは以下の工程を含む：（１）成長しているオ リゴヌクレオチド類似体鎖又は第１ヌクレオチド類似体単量体上のブロックされ た反応性官能基を脱保護して脱ブロックされた反応性官能基を生成させ、（２） 適切にブロック及び保護されたヌクレオシド類似体ホスホロアミダイト又はホス ホロチオアミダイト単量体をこの成長しているヌクレオチド類似体鎖の脱ブロッ クされた反応性官能基と、好ましくは活性化物質の存在下において反応させて、 リン（III）連結を含有するオリゴヌクレオチド類似体を形成し、（３）未反応 官能基をキャッピングし、そして（４）新たに形成されたリン（III）連結をチ オジ炭酸ジエステルポリスルフィドで硫化して、五配位状態の硫化されたリン原 子を得る。 “ブロック”という用語は、通常は親核体である反応性官能基、例えば、５’ ヒドロキシルを、選択的に切り離され得る基で保護することを意味する。好まし くは、このようなブロック基は、希酸、例えば、ジクロロメタン中のジクロロ酢 酸に対して不安定でありかつ塩基に対して安定である。好ましいブロック基には 、４,４'−ジメトキシトリチル（ＤｍＴｒ）、モノメトキシトリチル、ジフェニ ルメチル、フェニルキサンテン−９−イル（ピキシル(pixyl)）又は９−（ｐ− メトキシフェニル）キサンテン−９−イル（Ｍｏｘ）が含まれる。４,４'−ジメ トキシトリチル基が最も好ましい。本開示の全体を通して、この不安定な５'ブ ロック基は“Ｒ⁶”で表される。 アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、２−アミノプリン、イノ シン、置換ピリミジン、例えば、５−メチルシトシン及び５−ニトロピロールの ような、あらゆる天然又は非天然のヘテロ環塩基を本発明において用いることが できる。他の適切なヘテロ環塩基は、Meriganら、米国特許第３,６８７,８０８ 号に記載されている。好ましくは、このヘテロ環塩基は、ヌクレオシド類似体ホ スホロアミダイトの糖部分のＣ−１（１）にその塩基の窒素を介して結合してい る。本開示の全体を通して、ヘテロ環塩基は“Ｂ”で表わされる。 合成の間、これらヘテロ環基は、好ましくは、あらゆる反応性基、例えば、環 外アミノ基を阻止するため、つまり望ましくない副反応を妨げるために保護され る。“保護された”という用語は、環外アミノ基、２'−ヒドロキシル基、リン 原子に結合する酸素又は硫黄等のような反応性部分が、オリゴヌクレオチド類似 体の合成が完了した後に概して除去される保護基を有していることを意味する。 好ましくは、これら保護基は塩基及び／又は親核体に対して不安定である。また 、この用語には、そのような保護を必要としない基、例えば、チミン又は非塩基 性（abasic）ヌクレオシドのようなヘテロ環塩基を有するオリゴヌクレオチド及 びヌクレオシド類似体も含まれる。 ヘテロ環塩基にとって好ましい保護基には塩基不安定性基が含まれる。ヘテロ 環基の環外アミノ基は、好ましくはアシル基で保護され、これは硫化オリゴヌク レオチド類似体の合成の後の塩基処理により除去される。好ましくは、これら保 護基はＣ₂〜Ｃ₁₀アシル基である。Ｎ−ベンゾイル及びＮ−イソブチリル保護基 が特に好ましい。アデニンは、好ましくは、Ｎ²−イソブチリル誘導体として保 護される。グアニンは、好ましくは、Ｎ⁶−イソブチリル誘導体として保護され る。シチジンは、好ましくは、Ｎ⁴−ベンゾイル誘導体として保護される。 本発明の硫化ヌクレオチド類似体は、２'位で置換されていてもよい。好まし い２'置換基は、オリゴヌクレオチド類似体とその標的核酸とのハイブリダイゼ ーションを増強する基、オリゴヌクレオチド類似体のイン・ビボ安定性を向上さ せる基、又はオリゴヌクレオチド類似体の薬物動態学的及び／又は薬力学的特性 を増強する基である。２'置換基の例には、水素、ヒドロキシル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂ ｒ、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有す るＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜 Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個 までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を 含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈ア ラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル 、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、Ｏ −Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル（例えば、ＣＦ₃）、３個まで のヘテロ原子を含有するＯ−Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ 原子を含有する置換Ｏ−Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｏ−Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリー ル（例えば、フェニル）、置換Ｏ−Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子 を含有するＯ−Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置換 Ｏ−Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｏ−Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル（例えば、ベンジル）、 置換Ｏ−Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＯ−Ｃ₄〜Ｃ₁₅ ヘテロシクロアラルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｏ−Ｃ₄〜Ｃ₁₅ ヘテロシクロアラルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｏ− Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルコキシアミノ、Ｏ−トリ−Ｃ₁〜Ｃ₈アル キルシリル（例えば、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）、置換Ｏ−トリ−Ｃ₁ 〜Ｃ₈アルキルシリル、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｎ−(Ｃ₁−Ｃ₈)₂，ＮＨ−Ｃ₁ 〜Ｃ₈アルケニル、Ｎ−(Ｃ₁〜Ｃ₈)₂アルケニル、Ｓ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｓ−Ｃ₁ 〜Ｃ₈アルケニル、ＮＨ₂、Ｎ₃、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−ＮＨ₂、ポリアルキ ルアミノ及びＲＮＡ開裂性基が含まれる。好ましいＲＮＡ開裂性基には、Ｏ−｛ ３−プロポキシー［２−ナフチル−７−（１−（ジメチルアミノスルホニル）− イミダゾール−４−イル）］｝基及びＯ−｛３−プロポキシ−［２−ナフチル− ７−（１−（ジメチルアミノスルホニル−２−メトキシ−５−アセチルアミノメ チル）−イミダゾール−４−イル）］｝基が含まれる。これらの基はCookら、米 国特許第５,３５９,０５１号で考察されている。 好ましくは、これら２'置換基は、水素、ヒドロキシル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキ ル、Ｆ、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルコキシアミノ及びＯ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−Ｏ−Ｃ₁〜 Ｃ₈アルキルである。より好ましくは、これら２'置換基は、水素、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈ アルキル、Ｆ及びＯ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキルである。最も好 ましくは、これら２'置換基は、水素又はメトキシエトキシ基である。本開示の 全体を通して、これら２'置換基は“Ｘ”で表される。 ヌクレオシド類似体ホスホロアミダイト及びホスホロチオアミダイトそれぞれ におけるリン原子に結合する酸素及び硫黄原子についての種々の保護基を用いる ことができる。これら保護基は、好ましくは、合成が完了した後に除去される。 好ましくは、これら保護基は、塩基及び／又は親核体に対して不安定である。最 も好ましくは、これら保護基は水酸化アンモニウム水溶液により除去される。好 ましい保護基は、２−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２−ジフェニ ルメチルシリルエチル（ＤＰＳＥ）又は式Ｒ¹ＣＯＮＲ²ＣＨＲ³ＣＨＲ⁴−を有す る２−Ｎ−アミドエチル基である。好ましくは、これらの保護基は、合成の後に 好ましくはアンモニア水溶液で、室温〜７５℃の温度で除去される。本発明にお いて、“ホスホジエステル連結”、“ホスホロチオエート連結”及び“ホスホロ ジチオエート連結”という用語は、保護又は未保護形態にあるこれらヌクレオシ ド間連結を示す。本開示の全体を通して、これらリン保護基は“Ｐｇ”と表され る。ヌクレオシド類似体ホスホロアミダイトもしくはチオホスホロアミダイト又 はオリゴヌクレオチド類似体中のリン原子に結合している酸素原子又は硫黄原子 は“Ｙ”と表される。好ましくは、Ｙは酸素原子である。 ４−シアノ−２−ブテニル保護基は、α−脱離により、好ましくは当該技術分 野において公知の標準ＮＨ₃／Ｈ₂Ｏ脱保護条件を用いて除去される。４−シアノ −２−ブテニル保護ヌクレオシド類似体ホスホロアミダイトは、４−シアノ−２ −ブテン−１−オール及び適切に保護されたヌクレオシド類似体で、公知の合成 法を用いて調製されることができる。４−シアノ−２−ブテン−１−オールの合 成は、Ravikumarら，Synthetic Communications 1996，26(9)，1815-1819により 開示されている。 ２−ジフェニルメチルシリルエチル（ＤＰＳＥ）保護基は、Ravikumarら、Ｗ Ｏ９５／０４０６５に記載されている。この保護基は、塩基、好ましくは水酸化 アンモニウム水溶液で処理することにより除去することができる。また、このＤ ＰＳＥ基は、フッ化物イオンで除去することもできる。好ましくは、このフッ化 物イオンは、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、ジメトキシエタン又は水の ような溶媒中で、フッ化テトラアルキルアンモニウム、例えば、フッ化テトラブ チルアンモニウム（ＴＢＡＦ）、又は無機フッ化物塩、例えば、フッ化カリウム もしくはフッ化セシウムのような塩から提供される。 ２−Ｎ−アミドエチル基は、共通に譲渡されている米国特許出願第０８／８１ １,２３２号に記載されている。２−Ｎ−アミドエチル基は、式Ｒ¹ＣＯＮＲ²Ｃ ＨＲ³ＣＨＲ⁴−を有する。ここで、Ｒ¹はＣ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アル キル、３個までのヘテロ原子を含有する₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個まで のヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリー ル、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトア リール、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈ アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄ 〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、又は３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄ 〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキルである。より好ましくは、Ｒ¹は、Ｃ₁〜Ｃ₈アル キル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロ シクロアルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロ アルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子 を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、又は３個までのヘテロ原子を含有する置換 Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリールである。さらにより好ましくは、Ｒ¹は、メチル、フルオ ロメチル、ジフルオロメチル、又はトリフルオロメチルである。最も好ましくは 、Ｒ¹は、メチル、トリフルオロメチル又はフェニルである。 ２−Ｎ−アミドエチル基の窒素原子は未置換であってもよい、すなわちＲ²が 水素であってもよく、置換されていてもよい。好ましくは、Ｒ²は、水素、Ｃ₁〜 Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロ シクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテ ロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置 換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、 ３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、又は３個 までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキルである。よ り好ましくは、Ｒ²水素又はＣ₁〜Ｃ₈アルキルである。最も好ましくは、Ｒ²は水 素又はメチルである。 ２−Ｎ−アミドエチル基のエチル部分は未置換であってもよく、例えば、Ｒ³ 及びＲ⁴の両者が水素であってもよい。あるいは、このエチル部分は、好ましく はオリゴヌクレオチド類似体合成の間の２−Ｎ−アミドエチル基の安定性を損な うことなく、かつオリゴヌクレオチド類似体の段階的組み立ての後に塩基及び／ 又は親核体で処理することによりこの保護基を除去することが可能となる基で置 換されていてもよい。好ましいＲ³及びＲ⁴基は、水素、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換 Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアル キル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆ 〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃ 〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリ ール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子 を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、又は３個までのヘテロ原子を含 有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキルである。より好ましくは、Ｒ³は、 水素又は線状Ｃ₁〜Ｃ₈アルキルである。最も好ましくは、Ｒ³は水素又はメチル である。より好ましくは、Ｒ⁴は、水素、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄ア リール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、又は３個ま でのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリールである。最も好ましくは 、Ｒ⁴は水素又はフェニルである。Ｒ³及びＲ⁴基は独立に選択される。すなわち 、これらは同じであっても異なっていてもよい。 一方、Ｒ³及びＲ⁴は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、Ｃ₃〜Ｃ₈シ クロアルキル基、置換Ｃ₃〜Ｃ₈シクロアルキル基、３個までのヘテロ原子を含有 するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル基、又は３個までのヘテロ原子を含有する置 換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル基を形成してもよい。この態様においては、Ｒ³ 及びＲ⁴は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、好ましくはＣ₃〜Ｃ₈シ クロアルキル基又は置換Ｃ₃〜Ｃ₈シクロアルキル基を形成する。より好ましいシ クロアルキル基は、Ｃ₄〜Ｃ₇又は置換Ｃ₄〜Ｃ₇基であり、Ｃ₅〜Ｃ₆又は置換Ｃ₅ 〜Ｃ₆基が最も好ましい。未置換シクロアルキル基が特に好ましい。未置換Ｃ₆シ クロアルキル基がとりわけ最も好ましい。Ｎ−アミド基とＹとの立体化学的な関 係はシスであってもトランスであってもよい。トランスの関係が好ましい。 アリル基も、オリゴヌクレオチド類似体中のリン原子に結合する酸素又は硫黄 原子にとって好ましい保護基である。アリル保護基は、米国特許第５,０２６,８ ３８号に記載されている。“アリル”という用語には、アリル、メタリル、クロ チル、プレニル、ゲラニル、シンナミル及びｐ−クロロシンナミル基が含まれる 。これら基の炭素原子数は、好ましくは３〜１０である。好ましくは、アリル基 は未置換アリル基である。アリル基は、パラジウム（０）化合物と、アミン又は ギ酸塩のような親核体を用いて、中性条件下、室温で除去することができる。好 ましい試薬は、テトラヒドロフラン中のテトラキス（トリフェニルホスフィン） パラジウム（０）及びｎ−ブチルアミンである。 オリゴヌクレオチド又はヌクレオシド類似体上の脱ブロックされた反応性官能 基とホスホロアミダイト又はホスホロチオアミダイト単量体とのカップリングに は、一般に活性化物質が用いられる。1Ｈ−テトラゾール、５−（４−ニトロフ ェニル）−1−テトラゾール及びジイソプロピルアミノテトラゾリドのような 好ましい活性化物質が当該技術分野において周知である。１Ｈ−テトラゾールが 最も好ましい。 このカップリング反応の後、全てのカップリングしていない反応性官能基を恒 久的にブロックするため、好ましくはキャッピング工程が用いられる。適切なキ ャッピング試薬は当該技術分野において周知である。好ましいキャッピング試薬 は、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを含む無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１： １：８）である。 合成を液相法で行う場合、好ましくは、オリゴヌクレオチド類似体の３'末端 ヒドロキシル基を保護して３'ヒドロキシル基が望ましくない副反応に関与する のを防ぐ。好ましくは、末端３'ヒドロキシル基を、他の保護基を除去すること なく選択的に除去することができる基で保護する。Ｃ₂〜Ｃ₁₀アシル基が好まし い。アセチル又はレブリニル基がより好ましい。レブリニル基が最も好ましい。 本開示の全体を通して、この３'保護基は“Ｒ⁷”と表される。 ヌクレオシド類似体ホスホロアミダイト又はホスホロチオアミダイトの連続的 な添加を、所望の配列の長さを有するオリゴヌクレオチド類似体が得られるまで 繰り返すことができる。硫化オリゴヌクレオチド類似体の長さは、好ましくは２ 〜２００単量体単位；より好ましくは２〜１００単量体単位；さらにより好まし くは２〜５０単量体単位；最も好ましくは２〜２５単量体単位である。これら範 囲にはそれらの間の全ての下位の範囲が含まれる。 本発明の好ましい態様においては、硫化オリゴヌクレオチド類似体は固体支持 体上で合成される。適切な固体支持体には、制御多孔質ガラス（controlled por e glass，ＣＰＧ）；オキザリル−制御多孔質ガラス、例えば、Alulら，Nucleic Acids Research 1991，19，1527を参照；TENTAGEL Support，Wrightら，Tetrah edron Letters 1993，34，3373を参照；PERCEPTIVE BIOSYSTEMSから入手可能な ポリスチレン樹脂であるPOROS；及びポリスチレン／ジビニルベンゼン共重合体 が含まれる。制御多孔質ガラスが最も好ましい支持体である。本開示の全体を通 して、固体支持体は“Ｓ^P”と表される。 オリゴヌクレオチド類似体は、好ましくは、合成が完了したときに容易に開裂 させてそのオリゴヌクレオチド類似体を固体支持体から解放させることができる 基によって固体支持体に結合させられている。好ましくは、この基は、塩基及び ／又は親核体に曝すことで開裂させることができる。より好ましくは、この基は アシルである。最も好ましくは、この基は、オリゴヌクレオチド類似体の末端３ 'ヒドロキシル基でエステル化されたカルボキシル基である。オリゴヌクレオチ ド類似体を固体支持体に連結させる基は、本開示においては“Ｌ”と表される。 本発明は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、及びホスホジエステ ル連結をあらゆる組み合わせで含有する硫化オリゴヌクレオチド類似体を含む。 本発明の硫化オリゴヌクレオチド類似体は、硫化された連結、例えば、ホスホロ チオエート及び／又はホスホロジチオエートのみを含有していてもよい。また、 これらオリゴヌクレオチド類似体は、硫化された連結に加えて、１つ以上のホス ホジエステル連結を含有していてもよい。好ましい態様においては、これら硫化 オリゴヌクレオチド類似体は、ホスホロチオエート及びホスホジエステル連結の 両者を含む。別の好ましい態様においては、このオリゴヌクレオチドは、ホスホ ロジチオエート及びホスホジエステル連結の両者を含む。ホスホジエステル連結 は、リン（III）連結を当該技術分野において公知の何らかの適切な酸化試薬、 例えば、Ｉ₂／ＴＨＦ／Ｈ₂Ｏ、Ｈ₂Ｏ₂／Ｈ₂Ｏ、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオ キシド、又はｍ−クロロ過安息香酸のような過酸で酸化することにより形成され る。Ｉ₂／ＴＨＦ／Ｈ₂Ｏが好ましい酸化剤である。 好ましい態様においては、少なくとも１のリン（III）連結を含有するオリゴ ヌクレオチド類似体は、式： （式中、 各々のＰｇは、独立に、塩基及び／又は親核体に対して不安定な基又はアリル 基であり； Ｒ⁶は、不安定なブロッキング基であり； 各々のＢは、独立に、保護されていないか又は保護されたヘテロ環塩基であり ； 各々のＸは、水素、ヒドロキシル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換 Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアル キル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆ 〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃ 〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリ ール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子 を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、３個までのヘテロ原子を含有す る置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｏ−Ｃ₁ 〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＯ−Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロア ルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｏ−Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキ ル、Ｏ−Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｏ−Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原 子を含有するＯ−Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置 換Ｏ−Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｏ−Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｏ−Ｃ₇〜Ｃ₁₈ アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＯ−Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラ ルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｏ−Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラ ルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニ ル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルコキシアミノ、Ｏ−トリ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキルシリル、置換 Ｏ−トリ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキルシリル、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｎ−(Ｃ₁〜Ｃ₈)₂ 、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニル、Ｎ−(Ｃ₁〜Ｃ₈)。アルケニル、Ｓ−Ｃ₁〜Ｃ₈ア ルキル、Ｓ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニル、ＮＨ₂、Ｎ₃、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−ＮＨ₂ 、ポリアルキルアミノ及びＲＮＡ開裂性基からなる群から独立に選択され； 各々のＹは、独立にＯ又はＳであり； 各々のＺは、独立にＯ又はＳであり； Ｌは、親核体及び／又は塩基に対して不安定な基であり； Ｓ^pは、固体支持体であり；そして ｍは、０又は正の整数である。） を有する。 好ましい保護基Ｐｇには、２−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２ −ジフェニルメチルシリルエチル（ＤＰＳＥ）及び２−Ｎ−アミドエチル基が含 まれる。 好ましい態様においては、リン（III）連結を含有するオリゴヌクレオチド類 似体は、２〜１００の単量体単位（即ち、ｍが０〜９８）；より好ましくは２〜 ５０の単量体単位（即ち、ｍが０〜４８）；そして、最も好ましくは２〜２５の 単量体単位（即ち、ｍが０〜２３）を含有する。 上記のオリゴヌクレオチド類似体をジチオ炭酸ジエステルポリスルフィドで処 理すると、式： （式中、Ｐｇ、Ｒ⁶、Ｂ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｌ、Ｓ^p及びｍは、上で定義した通りであ る。）を有する対応する硫化オリゴヌクレオチド類似体ができる。Ｚは、酸素原 子又は硫黄原子である。Ｚを適切に選択すると、Ｚを含有するヌクレオシド間連 結は、Ｙの選択に依存して、ホスホジエステル、ホスホロチオエート又はホスホ ロジチオエートとなることができる。例えば、ＹとＺが両方とも酸素である場合 には、その連結はホスホジエステルになる。Ｙが酸素でＺが硫黄であるか又はそ の逆の場合には、その連結はホスホロチオエートになる。ＹとＺが両方とも硫黄 である場合には、その連結はホスホロジチオエートになる。好ましくは、Ｙは酸 素原子であり、そしてＺは上記のジチオ炭酸ジエステルポリスルフィドを用いて 導入された硫黄原子である。ホスホジエステル、ホスホロチオエート及びホスホ ロジチオエートという用語は、Ｐｇ基を除去した後のヌクレオチド間連結を意味 することが理解されるべきである。 硫化後に、その硫化オリゴヌクレオチド類似体の配列を更に長くしてもよい。 また、その硫化オリゴヌクレオチド類似体を脱保護しかつ固体支持体から切り離 して、対応する脱保護された硫化類似体にしてもよい。その脱保護された硫化類 似体は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート及びホスホジエステル連結 をあらゆる組合せで含有することができる。 本発明の他の好ましい態様においては、少なくとも１のリン（III）連結を含 有するオリゴヌクレオチド類似体は、式： （式中、Ｒ⁷は、塩基及び／又は親核体に対して不安定な基である。）を有する ジヌクレオチドである。このジヌクレオチドをジチオ炭酸ジエステルポリスルフ ィドで硫化すると、式： を有する対応する硫化ジヌクレオチド類似体ができる。 本発明は、硫化オリゴヌクレオチド類似体の合成方法であって： （ａ）ブロックされたヒドロキシル基を有するヌクレオシド類似体を提供し； （ｂ）該ブロックされたヒドロキシル基を脱ブロックしてフリーのヒドロキシ ル基を得； （ｃ）該フリーのヒドロキシル基を、ブロックされたヒドロキシル基を有する 保護されたヌクレオシド類似体ホスホロアミダイトと反応させて、リン（III） 連結とブロックされたヒドロキシル基とを含有するオリゴヌクレオチド類似体を 生成させ； （ｄ）該リン（III）連結を、酸化剤及び式： を有するジチオ炭酸ジエステルポリスルフィドからなる群から選択される試薬と 反応させて、酸化又は硫化されたリン（Ｖ）連結を生成させ； （ｅ）工程（ｂ）から（ｄ）までを少なくとも１回繰り返して、硫化オリゴヌ クレオチド類似体を生成させる ことによる方法であり、該オリゴヌクレオチド類似体が少なくとも１の硫化され たリン（Ｖ）連結を含有する方法も提供する。好ましくは、各々のリン（Ｖ）連 結が硫化される。 工程（ｃ）で使用されるブロックされたヒドロキシル基を有する好ましいヌク レオシド類似体ホスホロアミダイトは、式： を有する。 このＲ⁵基は、ヌクレオシド類似体ホスホロアミダイトが、好ましくは、成長 しているオリゴヌクレオチド類似体鎖上の反応性基、例えば、５'ヒドロキシル 基と効率的にカップリングして、リン（III）ヌクレオチド間連結を形成するよ うに選択される。このＲ⁵基は、独立に選択される。即ち、それらは同じであっ ても異なっていてもよい。好ましいＲ⁵基は、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈ アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３ 個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄ アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、 Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有 するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、又は３個までのヘテロ原子を含有する 置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキルであるか；又は両方のＲ⁵基が、それらが 結合している窒素原子と一緒になって、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜 Ｃ₈ヘテロシクロアルキル基、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘ テロシクロアルキル基、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリー ル基、又は３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール基を形 成する。より好ましくは、両方のＲ⁵基は、各々がＣ₁〜Ｃ₈アルキル基であるか 、又はそれらが結合している窒素原子と一緒に、３個までのヘテロ原子を含有す るＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル基を形成する。なおより好ましくは、各々のＲ⁵ 基は、分枝状Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル基である。最も好ましくは、両方のＲ⁵基はイソ プロピルである。 好ましい態様においては、工程（ａ）におけるヌクレオシド類似体は、固体支 持体に結合している。固体支持体に結合した好ましいヌクレオシド類似体は、式 ：を有する。 他の態様においては、リン（III）連結及びブロックされたヒドロキシル基を 含 有するオリゴヌクレオチド類似体は、固体支持体に結合していて、式： を有し、そして得られる硫化オリゴヌクレオチド類似体は、式：を有する。 固体支持体上で合成された硫化オリゴヌクレオチド類似体は、好ましくは塩基 処理によって、その支持体から切り離すことができる。好ましくは、固体支持体 からの開裂の間に全ての保護基が外される。固体支持体から硫化オリゴヌクレオ チド類似体を切断させるための好ましい試薬は、水酸化アンモニウム水溶液及び アンモニア／メタノール溶液である。同時に行われる硫化オリゴヌクレオチド類 似体の脱保護と切り離しは、好ましくは、水酸化アンモニウム水溶液中で、室温 （１８〜２５℃）と７５℃の間、より好ましくは室温と６５℃の間、そして最も 好ましくは室温と６０℃の間の温度で行われる。５５℃の温度が特に好ましい。 脱保護反応時間は、好ましくは１〜３０時間、より好ましくは１〜２４時間、そ して最も好ましくは１２〜２４時間である。脱保護に使用される溶液中の水酸化 アンモニウムの濃度は、好ましくは２０〜３０重量％、より好ましくは２５〜３ ０重量％、そして最も好ましくは２８〜３０重量％である。 好ましい態様においては、固体支持体から放された硫化オリゴヌクレオチド類 似体は、式：（式中、各々のＢは、好ましくは、保護されていないヘテロ環塩基である。） を有する。 固体支持体から放された硫化オリゴヌクレオチド類似体の各々のヌクレオチド 間連結は、ｐＨ、温度及び塩条件に依存して、イオン化してもよい。各々のヌク レオチド間連結は、生理学的ｐＨ、温度及び塩条件で、即ち、ｐＨ７.２、３７ ℃及び約１５０ｍＭの一価塩で、水溶液中でイオン化するであろう。 この発明を一般的に説明してきたが、一定の具体的実施例を参照することによ って、更なる理解が得られるであろう。それらは、説明のためにのみ本明細書中 に示されるに過ぎず、特に断らない限り、本発明を限定することを意図したもの ではない。 実施例 実施例１ ジチオ炭酸ジエチルジスルフィド エチルキサントゲン酸カリウム（１２０ｇ）を最小量の水に溶かした。この溶 液に１０℃で、暗褐色が消えなくなるまでヨウ素を少しずつ加えた。少量のＮａ₂ Ｓ₂Ｏ₃飽和水溶液を加えて反応を停止させ、この溶液から暗褐色を消した。得 られた溶液をエーテルで抽出した。合わせたエーテル層を水で３回洗浄し、乾燥 し、そして濃縮して、ジチオ炭酸ジエチルジスルフィドを淡黄色固体として得た 。実施例２ Ｔ−Ｔホスホロチオエート２量体の合成 制御多孔質ガラス（ＣＰＧ）支持体にエステル連結により結合させた１００ｍ ｇの５'−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン（４ミリモル）をガラス反応器に入 れ、そしてジクロロメタン中の２％ジクロロ酢酸の溶液（容量／容量）を加えて 、５'−ヒドロキシル基を脱保護した。その生成物をまずジクロロメタンで洗浄 してからアセトニトリルで洗浄した。 アセトニトリル中の５'−Ｏ−(４,４'−ジメトキシトリチル)チミジン−３'− Ｏ−(２−シアノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト)の０.２Ｍ溶 液及びアセトニトリル中の１Ｈ−テトラゾールの０.４Ｍ溶液を加えて、室温で ５分間反応させた。その生成物をまずアセトニトリルで洗浄してから、ピリジ ン中のジチオ炭酸ジエチルジスルフィドの１Ｍ溶液を加えて、室温で１００秒間 反応させた。この硫化工程を１００秒間繰り返した。そのＣＰＧをアセトニトリ ルで洗浄してから、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）及びＮ−メチル イミダゾール／ＴＨＦの溶液を加えて、未反応５'−ヒドロキシル基をキャップ した。次いで、このＣＰＧをアセトニトリルで洗浄した。このＣＰＧを３０％水 酸化アンモニウム水溶液で９０分間処理した。その水溶液を濾過し、減圧濃縮し て、所望のＴ−Ｔホスホロチオエート２量体を得た。実施例３ Ｃ−Ｔホスホロチオエート２量体の合成 ＣＰＧ支持体にエステル連結により結合させた１００ｍｇの５'−Ｏ−ジメト キシトリチルチミジン（４ミリモル）をガラス反応器に入れ、そしてジクロロメ タン中の２％ジクロロ酢酸の溶液（容量／容量）を加えて、５'−ヒドロキシル 基を脱保護した。次いで、そのＣＰＧをアセトニトリルで洗浄した。アセトニト リル中のＮ⁴−ベンゾイル−５'−Ｏ−(４,４'−ジメトキシトリチル)−２'−デ オキシシチジン−３'−Ｏ−(２−シアノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピルホスホロ アミダイト)の０.２Ｍ溶液及びアセトニトリル中の１Ｈ−テトラゾールの０.４ Ｍ溶液を加えて、室温で５分間放置した。次いで、そのＣＰＧをアセトニトリル で洗浄してから、ピリジン中のジチオ炭酸ジエチルジスルフィドの１Ｍ溶液を加 えた。硫化反応を室温で１００秒間進行させた。この硫化工程を更に１００秒間 繰り返した。次いで、その支持体をアセトニトリルで洗浄してから、無水酢酸／ ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）及びＮ−メチルイミダゾール／ＴＨＦの溶液を 加えて、未反応５'−ヒドロキシル基をキャップした。キャップ後、このＣＰＧ をアセトニトリルで洗浄した。このＣＰＧを３０％水酸化アンモニウム水溶液で ９０分間処理してから、５５℃で１２時間インキュベートした。その水溶液を濾 過し、減圧濃縮して、所望のＣ−Ｔホスホロチオエート２量体を得た。実施例４ Ｇ−Ｔホスホロチオエート２量体の合成 ＣＰＧ支持体にエステル連結により結合させた１００ｍｇの５'−Ｏ−ジメト キシトリチルチミジン（４ミリモル）をガラス反応器に入れ、そしてジクロロメ タン中の２％ジクロロ酢酸の溶液（容量／容量）を加えて、５'−ヒドロキシル 基を脱保護した。そのＣＰＧをジクロロメタンで洗浄してからアセトニトリルで 洗浄した。アセトニトリル中のＮ²−イソブチリル−５'−Ｏ−(４,４'−ジメト キシトリチル)−２'−デオキシグアノシン−３'−Ｏ−(２−シアノエチルＮ,Ｎ −ジイソプロピルホスホロアミダイト)の０.２Ｍ溶液及びアセトニトリル中の１ Ｈ−テトラゾールの０.４Ｍ溶液を加えて、室温で５分間反応させた。生成物を アセトニトリルで洗浄してから、ピリジン中のジチオ炭酸ジエチルジスルフィド の１Ｍ溶液を加えた。硫化反応を室温で１００秒間進行させた。この硫化工程を 更に１００秒間繰り返した。その支持体をアセトニトリルで洗浄してから、無水 酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）及びＮ−メチルイミダゾール／ＴＨＦの 溶液を加えて、あらゆる未反応５'−ヒドロキシル基をキャップした。次いで、 このＣＰＧをアセトニトリルで洗浄した。このＣＰＧを３０％水酸化アンモニウ ム水溶液で室温で９０分間処理してから、５５℃で１時間インキュベートした。 その水溶液を濾過し、減圧濃縮して、所望のＧ−Ｔホスホロチオエート２量体を 得た。実施例５ ５'−ＴＴＴＴＴＴＴ−３'ホスホロチオエート７量体の合成 ＣＰＧ支持体にエステル連結により結合させた５０ｍｇの５'−Ｏ−ジメトキ シトリチルチミジン（２ミリモル）をガラス反応器に入れ、そしてジクロロメタ ン中の２％ジクロロ酢酸の溶液（容量／容量）を加えて、５'−ヒドロキシル基 を脱保護した。次いで、そのＣＰＧをアセトニトリルで洗浄した。アセトニトリ ル中の５'−Ｏ−(４,４'−ジメトキシトリチル)チミジン−３'−Ｏ−(２−シア ノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト)の０.２Ｍ溶液及びアセト ニトリル中の１Ｈ−テトラゾールの０.４Ｍ溶液を加えて、室温で５分間反応さ せた。そのＣＰＧをアセトニトリルで洗浄してから、ピリジン中のジチオ炭酸ジ エチルジスルフィドの１Ｍ溶液を加えて、室温で１００秒間反応させた。この硫 化工程を１００秒間繰り返した。その支持体をアセトニトリルで洗浄してから、 無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）及びＮ−メチルイミダゾール／ＴＨ Ｆの溶液を加えて、あらゆる未反応５'−ヒドロキシル基をキャップした。キャ ップ後、この固体支持体をアセトニトリルで洗浄した。この全サイクルを５回繰 り返して、保護されたチミジン７量体を得た。この化合物を含有する支持体を３ ０％水酸化アンモニウム水溶液で室温で９０分間処理した。その水溶液を濾過し 、減圧濃縮して、所望のホスホロチオエート７量体である５'−ＴＴＴＴＴＴＴ −３'を得た。実施例６ ５'−ｄ(ＧＡＣＴＴ)−３'ホスホロチオエート５量体の合成 ＣＰＧ支持体にエステル連結を介して結合した５０ｍｇの５'−Ｏ−ジメトキ シトリチルチミジン（２ミリモル）をガラス反応器に入れ、そしてジクロロメタ ン中の２％ジクロロ酢酸の溶液（容量／容量）を加えて、５'−ヒドロキシル基 を脱保護した。次いで、そのＣＰＧをアセトニトリルで洗浄した。アセトニトリ ル中の５'−Ｏ−(４,４'−ジメトキシトリチル)チミジン−３'−Ｏ−(２−シア ノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト)の０.２Ｍ溶液及びアセト ニトリル中の１Ｈ−テトラゾールの０.４Ｍ溶液を加えて、室温で５分間反応さ せた。そのＣＰＧをアセトニトリルで洗浄してから、ピリジン中のジチオ炭酸ジ エチルジスルフィドの１Ｍ溶液を加えて、室温で１００秒間反応させた。この硫 化工程を１００秒間繰り返した。その支持体をアセトニトリルで洗浄してから、 無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）及びＮ−メチルイミダゾール／ＴＨ Ｆの溶液を加えて、未反応５'−ヒドロキシル基をキャップした。キャップ後、 その支持体をアセトニトリルで洗浄した。 ジクロロメタン中の２％ジクロロ酢酸の溶液（容量／容量）を加えて、５'− ヒドロキシル基を脱保護してから、アセトニトリルで洗浄した。アセトニトリル 中のＮ⁴−ベンゾイル−５'−Ｏ−(４，４'−ジメトキシトリチル)−２'−デオキ シシチジン−３'−Ｏ−(２−シアノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミ ダイト)の０.２Ｍ溶液及びアセトニトリル中の１Ｈ−テトラゾールの０.４Ｍ溶 液を加えて、室温で５分間反応させた。その固体支持体をアセトニトリルで洗浄 した後、ピリジン中のジチオ炭酸ジエチルジスルフィドの１Ｍ溶液を加えて、室 温で１００秒間反応させた。この硫化工程を１００秒間繰り返した。その支持体 をアセトニトリルで洗浄してから、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８） 及びＮ−メチルイミダゾール／ＴＨＦの溶液を加えて、あらゆる未反応５'−ヒ ドロキシル基をキャップした。その支持体をアセトニトリルで洗浄した。 ジクロロメタン中の２％ジクロロ酢酸の溶液（容量／容量）を加えて、５'− ヒドロキシル基を脱保護した。そのＣＰＧをアセトニトリルで洗浄した。無水ア セトニトリル中のＮ⁶−ベンゾイル−５'−Ｏ−(４,４'−ジメトキシトリチル)− ２'−デオキシアデノシン−３'−Ｏ−(２−シアノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピル ホスホロアミダイト)の０.２Ｍ溶液及びアセトニトリル中の１Ｈ−テトラゾール の０.４Ｍ溶液を加えて、室温で５分間反応させた。その生成物をアセトニトリ ルで洗浄してから、ピリジン中のジチオ炭酸ジエチルジスルフィドの１Ｍ溶液を 加えて、室温で５分間反応させた。この硫化工程を５分間繰り返した。その支持 体をアセトニトリルで洗浄してから、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８ ）及びＮ−メチルイミダゾール／ＴＨＦの溶液を加えて、未反応５'−ヒドロキ シル基をキャップした。その生成物をアセトニトリルで洗浄した。 ジクロロメタン中の２％ジクロロ酢酸の溶液（容量／容量）を加えて、５'− ヒドロキシル基を脱保護した。その生成物をアセトニトリルで洗浄した。次いで 、アセトニトリル中のＮ²−イソブチリル−５'−Ｏ−(４,４'−ジメトキシトリ チル)−２'−デオキシグアノシン−３'−Ｏ−(２−シアノエチルＮ,Ｎ−ジイソ プロピルホスホロアミダイト)の０.２Ｍ溶液及びアセトニトリル中の１Ｈ−テト ラゾールの０.４Ｍ溶液を加えて、室温で５分間反応させた。生成物をアセトニ トリルで洗浄してから、ピリジン中のジチオ炭酸ジエチルジスルフィドの１Ｍ溶 液を加えて、室温で１００秒間反応させた。この硫化工程を１００秒間繰り返し た。その支持体をアセトニトリルで洗浄してから、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ （１：１：８）及びＮ−メチルイミダゾール／ＴＨＦの溶液を加えて、あらゆる 未反応５'−ヒドロキシル基をキャップした。その生成物をアセトニトリルで洗 浄した。 このＣＰＧを３０％水酸化アンモニウム水溶液で室温で９０分間処理してから 、５５℃で２４時間インキュベートした。その水溶液を濾過し、減圧濃縮して、 所望の５'−ｄ（ＧＡＣＴＴ）−３'ホスホロチオエート５量体を得た。実施例７ ホモ−チミジンホスホロチオエート１９量体の合成 １９塩基ホモ−チミジンホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを自動合成装 置（ABI model 390Z，Foster City，California）でホスホロアミダイト法によ り合成した。酸化工程を硫化工程で置き換えたこと、及びこの工程をキャッピン グ工程に先行させたことを除いて、標準的合成プロトコルに従った。換言すると 、合成は、脱トリチル化、カップリング、硫化、及びキャッピングのサイクルを 繰り返すことからなるものであった。合成カラムからの最終生成物の分離及び精 製は周知の方法を用いて行った。硫化工程は、成長している鎖をピリジン中のジ チオ炭酸ジエチルジスルフィドの１Ｍ溶液に室温で１００秒間曝すことを包含す るものであった。 脱トリチル化工程の間に放出されたトリチルカチオンの収率は平均で９９％で あった。このトリチル収率は、カップリング効率の指標でありかつ硫化の程度の 指標である。というのは、オリゴヌクレオチド中の未硫化三価リン連結は、脱ト リチル化の間に開裂を受け易いからである。１９量体を支持体から切り離し、標 準的条件下で濃水酸化アンモニウムで脱保護し、そして当該技術分野で周知の方 法を用いて単離した。実施例８ ２０量体ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド類似体の大規模合成 配列５'−ＴＣＣＣＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＴＧＣＡＴＴ−３'の２０塩基ホスホ ロチオエートオリゴヌクレオチド類似体をOligoPilot自動ＤＮＡ合成装置（Phar macia，Swedenから入手可能）でホスホロアミダイト法により合成した。標準的 合成プロトコルを用いたが、酸化工程をジチオ炭酸ジエチルジスルフィドでの硫 化工程で置き換えた。各々のリン（III）連結の硫化は、オリゴヌクレオチド類 似体をピリジン／ジクロロメタン（１：１ｖ／ｖ）中のジチオ炭酸ジエチルジス ルフィドの０.２M溶液に室温で１００秒間曝すことにより行った。得られた２０ 量体ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド類似体を水酸化アンモニウム水溶液 で脱保護して支持体から切り離し、周知の方法により精製した。 本願において引用された全ての文献は、参照によりそっくりそのまま本明細書 中に組み入れられるものとする。 明らかに、これまでの教示から本発明の多数の修飾及び変法が可能である。従 って、添付の請求の範囲内で、本明細書に具体的に記載した以外のやり方で本発 明を実施することができるということが理解されるべきである。

【手続補正書】 【提出日】平成１１年１０月２７日（１９９９．１０．２７） 【補正内容】 請求の範囲 １．少なくとも１のリン（III）連結を含むオリゴヌクレオチド類似体を式 ： （式中、 各々のＲは、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原 子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ原子を含有する 置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリー ル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテ ロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇ 〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキルからなる群から独立に選択され；そして ｎは、２、３又は４である。） を有するチオジ炭酸ジエステルポリスルフィドと反応させて、硫化オリゴヌクレ オチド類似体を生成させることを含む方法。 ２．リン（III）連結が、亜リン酸トリエステル又はチオ亜リン酸トリエス テルである、請求項１記載の方法。 ３．各々のＲが、Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄ア リール、及び置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリールからなる群から独立に選択され；そして ｎが２である、 請求項１記載の方法。 ４．少なくとも１のリン（III）連結を含むオリゴヌクレオチド類似体が、 式：（式中、 各々のＰｇは、独立に、塩基及び／又は親核体に対して不安定な基又はアリル 基であり； Ｒ⁶は、不安定なブロック基であり； 各々のＢは、独立に、保護されていないか又は保護されたヘテロ環塩基であり ； 各々のＸは、水素、ヒドロキシル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１〜Ｃ₈アルキル、置 換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロア ルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、 Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有する Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトア リール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原 子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、３個までのヘテロ原子を含有 する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｏ− Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＯ−Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロ ア ルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｏ−Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキ ル、Ｏ−Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｏ−Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原 子を含有するＯ−Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置 換Ｏ−Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｏ−Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｏ−Ｃ₇〜Ｃ₁₈ アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＯ−Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラ ルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｏ−Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラ ルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニ ル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルコキシアミノ、Ｏ−トリ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキルシリル、置換 Ｏ−トリ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキルシリル、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｎ−(Ｃ₁〜Ｃ₈)₂ 、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニル、Ｎ−(Ｃ₁〜Ｃ₈)₂アルケニル、Ｓ−Ｃ₁〜Ｃ₈アル キル、Ｓ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニル、ＮＨ₂、Ｎ₃、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−ＮＨ₂ 、ポリアルキルアミノ及びＲＮＡ開裂性基からなる群から独立に選択され； 各々のＹは、独立にＯ又はＳであり； 各々のＺは、独立にＯ又はＳであり； Ｌは、親核体及び／又は塩基に対して不安定な基であり； Ｓ^pは、固体支持体であり；そして ｍは、０又は正の整数である。） を有する、請求項１記載の方法。 ５．各々のＲが、Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄ア リール、及び置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリールからなる群から独立に選択され； ｎが２であり；そして ｍが０〜１９８の整数である、 請求項４記載の方法。 ６．各々のＰｇが、２−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２−ジ フェニルメチルシリル、及び式Ｒ¹ＣＯＮＲ²ＣＨＲ³ＣＨＲ⁴−を有する２−Ｎ− アミドエチル基からなる群から独立に選択され； 各々のＲ¹は、Ｃ₁〜Ｃ₈。アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテ ロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ原子を含有 する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄ア リ ール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘ テロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇ 〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキルからなる群から独立に選択され； 各々のＲ²、Ｒ³及びＲ⁴は、水素、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル 、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までの ヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール 、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリ ール、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈ アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜 Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜 Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキルからなる群から独立に選択されるか、又は Ｒ³とＲ⁴は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｃ₃〜Ｃ₈シクロ アルキル基、置換Ｃ₃〜Ｃ₈シクロアルキル基、３個までのヘテロ原子を含有する Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル基、又は３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂ 〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル基を形成し； Ｒ⁶が、４,４'−ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、ジフェニルメ チル、フェニルキサンテン−９−イル、及び９−(ｐ−メトキシフェニル)キサン テン−９−イルからなる群から選択され；そして 各々のＢが、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、２−アミノ プリン、イノシン、及び５−メチルシトシンであって、各々の塩基の環外アミノ 基がアシル基で保護されているものからなる群から独立に選択される、 請求項５記載の方法。 ７．少なくとも１のリン（III）連結を含むオリゴヌクレオチド類似体が、 式： （式中、 Ｐｇは、塩基及び／又は親核体に対して不安定な基であり； Ｒ⁷は、塩基及び／又は親核体に対して不安定な基であり； Ｒ⁶は、不安定なブロック基であり； 各々のＢは、独立に、保護されていないか又は保護されたヘテロ環塩基であり ； 各々のＸは、水素、ヒドロキシル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換 Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアル キル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆ 〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃ 〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリ ール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子 を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、３個までのヘテロ原子を含有す る置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｏ−Ｃ₁ 〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＯ−Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロア ルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｏ−Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキ ル、Ｏ−Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｏ−Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原 子を含有するＯ−Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置 換Ｏ−Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｏ−Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｏ−Ｃ₇〜Ｃ₁₈ アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＯ−Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラ ルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｏ−Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラ ルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニ ル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルコキシアミノ、Ｏ−トリ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキルシリル、置換 Ｏ−トリ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキルシリル、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｎ−(Ｃ₁〜Ｃ₈)₂ 、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニル、Ｎ−(Ｃ₁〜Ｃ₈)₂アルケニル、Ｓ−Ｃ₁〜Ｃ₈アル キル、Ｓ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニル、ＮＨ₂、Ｎ₃、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−ＮＨ₂ 、ポリアルキルアミノ、及びＲＮＡ開裂性基からなる群から独立に選択され；そ して ＹはＯ又はＳである。） を有するジヌクレオチド類似体である、請求項１記載の方法。 ８．各々のＲが、Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄ア リール、及び置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリールからなる群から独立に選択され； そしてｎが２である、 請求項７記載の方法。 ９．Ｐｇが、２−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２−ジフェニ ルメチルシリル、及び式Ｒ¹ＣＯＮＲ²ＣＨＲ³ＣＨＲ⁴−を有する２−Ｎ−アミド エチル基からなる群から選択され； Ｒ¹は、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を 含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換 Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、 ３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原 子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ_{1 8} アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキ ル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキ ルからなる群から選択され； Ｒ²、Ｒ³及びＲ⁴は、水素、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個 までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ 原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換 Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、 ３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラル キル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘ テロシクロアラルキル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘ テロシクロアラルキルからなる群から独立に選択されるか、又は Ｒ³とＲ⁴は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｃ₃〜Ｃ₈シクロ アルキル基、置換Ｃ₃〜Ｃ₈シクロアルキル基、３個までのヘテロ原子を含有する Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル基、又は３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂ 〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル基を形成し； Ｒ⁶が、４,４'−ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、ジフェニルメ チル、フェニルキサンテン−９−イル、及び９−(ｐ−メトキシフェニル)キサン テン−９−イルからなる群から選択され； 各々のＢが、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、２−アミノ プリン、イノシン、及び５−メチルシトシンであって、各々の塩基の環外アミノ 基がアシル基で保護されているものからなる群から独立に選択され；そして Ｒ⁷が、Ｃ₂〜Ｃ₁₀アシル基である、 請求項８記載の方法。 １０．（ａ）ブロックされたヒドロキシル基を有するヌクレオシド類似体を提 供し； （ｂ）前記ブロックされたヒドロキシル基を脱ブロックしてフリーのヒドロキ シル基を得； （ｃ）前記フリーのヒドロキシル基を、ブロックされたヒドロキシル基を有す る保護されたヌクレオシド類似体ホスホロアミダイトと反応させて、リン（III ）連結とブロックされたヒドロキシル基とを含むオリゴヌクレオチド類似体を生 成させ； （ｄ）前記リン（III）連結を、酸化剤及び式：（式中、 各々のＲは、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原 子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ原子を含有する 置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリー ル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテ ロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇ 〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキルからなる群から独立に選択され；そして ｎは、２、３又は４である。） を有するジチオ炭酸ジエステルポリスルフィドからなる群から選択される試薬と 反応させて、酸化又は硫化されたリン（Ｖ）連結であって、少なくとも１の連結 が硫化されたリン（Ｖ）連結である連結を生成させ；そして （ｅ）工程（ｂ）から（ｄ）までを少なくとも１回繰り返して、硫化オリゴヌ クレオチド類似体を生成させる ことを含む方法。 １１．各々のＲが、Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄ア リール、及び置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリールからなる群から独立に選択され；そして ｎが２である、 請求項１０記載の方法。 １２．ヌクレオシド類似体が固体支持体に結合している、請求項１０記載の方 法。 １３．リン（III）連結とブロックされたヒドロキシル基とを含むオリゴヌク レオチド類似体が、式：（式中、 各々のＰｇは、独立に、塩基及び／又は親核体に対して不安定な基又はアリル 基であり； Ｒ⁶は、不安定なブロック基であり； 各々のＢは、独立に、保護されていないか又は保護されたヘテロ環塩基であり ； 各々のＸは、水素、ヒドロキシル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換 Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアル キル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆ 〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃ 〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリ ール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子 を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、３個までのヘテロ原子を含有す る置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｏ−Ｃ₁ 〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＯ−Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロア ルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｏ−Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキ ル、Ｏ−Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｏ−Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原 子を含有するＯ−Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置 換Ｏ−Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｏ−Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｏ−Ｃ₇〜Ｃ₁₈ アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＯ−Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラ ルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｏ−Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラ ルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニ ル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルコキシアミノ、Ｏ−トリ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキルシリル、置換 Ｏ−トリ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキルシリル、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｎ−(Ｃ₁〜Ｃ₈)₂ 、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニル、Ｎ−(Ｃ₁〜Ｃ₈)₂アルケニル、Ｓ−Ｃ₁〜Ｃ₈アル キル、Ｓ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニル、ＮＨ₂、Ｎ₃、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−ＮＨ₂ 、ポリアルキルアミノ及びＲＮＡ開裂性基からなる群から選択され； 各々のＹは、独立にＯ又はＳであり； 各々のＺは、独立にＯ又はＳであり； Ｌは、親核体及び／又は塩基に対して不安定な基であり； Ｓ^pは、固体支持体であり；そして ｍは、０又は正の整数である。） を有する、請求項１０記載の方法。 １４．各々の工程（ｄ）が、リン（III）連結をジチオ炭酸ジエステルポリス ルフィドと反応させるものであり； 各々のＲが、Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール 、及び置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリールからなる群から独立に選択され； ｎが２であり；そして ｍが０〜１９８の整数である、 請求項１３記載の方法。 １５．各々のＰｇが、２−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２−ジ フェニルメチルシリル、及び式Ｒ¹ＣＯＮＲ²ＣＨＲ³ＣＨＲ⁴−を有する２−Ｎ− アミドエチル基からなる群から独立に選択され； 各々のＲ¹は、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ 原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ原子を含有す る置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリ ール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘ テロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇ 〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキルからなる群から独立に選択され； 各々のＲ²、Ｒ³及びＲ⁴は、水素、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル 、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までの ヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール 、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリ ール、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈ アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜 Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜 Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキルからなる群から独立に選択されるか、又は Ｒ³とＲ⁴は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｃ₃〜Ｃ₈シクロ アルキル基、置換Ｃ₃〜Ｃ₈シクロアルキル基、３個までのヘテロ原子を含有する Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル基、又は３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂ 〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル基を形成し； Ｒ⁶が、４,４'−ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、ジフェニルメ チル、フェニルキサンテン−９−イル、及び９−(ｐ−メトキシフェニル)キサン テン−９−イルからなる群から選択され；そして 各々のＢが、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、２−アミノ プリン、イノシン、及び５−メチルシトシンであって、各々の塩基の環外アミノ 基がアシル基で保護されているものからなる群から独立に選択される、 請求項１４記載の方法。 １６．更に、（ｆ）硫化オリゴヌクレオチド類似体を固体支持体から切り離す ことを含む、請求項１２記載の方法。 １７．更に、（ｆ）硫化オリゴヌクレオチド類似体を固体支持体から切り離す ことを含み、前記固体支持体から切り離された硫化オリゴヌクレオチド類似体が 、式： を有する、請求項１３記載の方法。 １８．更に（ｆ）硫化オリゴヌクレオチド類似体を固体支持体から切り離すこ とを含み、前記固体支持体から切り離された硫化オリゴヌクレオチド類似体が、 式：を有する、請求項１４記載の方法。 １９．（ａ）オリゴヌクレオチド類似体のリン（III）連結を硫化するのに十 分な量の、式： （式中、 各々のＲは、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原 子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ原子を含有する 置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリー ル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテ ロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇ 〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキルからなる群から独立に選択され；そして ｎは、２、３又は４である。） を有するチオジ炭酸ジエステルポリスルフィド；及び （ｂ）アセトニトリル、テトラヒドロフラン、コリジン、ジクロロメタン、ジ クロロエタン、ピリジン、及びそれらの混合物からなる群から選択される溶媒を 含んでなる組成物。 ２０．各々のＲが、独立に、Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、Ｃ₆ 〜Ｃ₁₄アリール、又は置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリールであり； ｎが２である、 請求項１９記載の組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，Ｍ Ｗ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，Ｅ Ｓ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ， ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，Ｍ Ｇ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ， ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，Ｖ Ｎ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ラヴィクマー，ヴァスリンガ・ティー アメリカ合衆国カリフォルニア州92009, カールズバッド，ヴィレオ・コート 6606 (72)発明者 コール，ダグラス・エル アメリカ合衆国カリフォルニア州92130, サンディエゴ，スミス・キャニオン・コー ト 4992

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．少なくとも１のリン（III）連結を含むオリゴヌクレオチド類似体を式 ： （式中、 各々のＲは、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原 子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ原子を含有する 置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリー ル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテ ロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇ 〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキルからなる群から独立に選択され；そして ｎは、２、３又は４である。） を有するチオジ炭酸ジエステルポリスルフィドと反応させて、硫化オリゴヌクレ オチド類似体を生成させることを含む方法。 ２．リン（III）連結が、亜リン酸トリエステル又はチオ亜リン酸トリエス テルである、請求項１記載の方法。 ３．各々のＲが、Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄ア リール、及び置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリールからなる群から独立に選択され；そして ｎが２である、 請求項１記載の方法。 ４．少なくとも１のリン(III)連結を含むオリゴヌクレオチド類似体が、式 ：（式中、 各々のＰｇは、独立に、塩基及び／又は親核体に対して不安定な基又はアリル 基であり； Ｒ⁶は、不安定なブロック基であり； 各々のＢは、独立に、保護されていないか又は保護されたヘテロ環塩基であり ； 各々のＸは、水素、ヒドロキシル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換 Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアル キル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆ 〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃ 〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリ ール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子 を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、３個までのヘテロ原子を含有す る置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｏ−Ｃ₁ 〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＯ−Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロア ルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｏ−Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキ ル、Ｏ−Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｏ−Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原 子を含有するＯ−Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置 換Ｏ−Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｏ−Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｏ−Ｃ₇〜Ｃ₁₈ アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＯ−Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラ ルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｏ−Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラ ルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニ ル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルコキシアミノ、Ｏ−トリ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキルシリル、置換 Ｏ−トリ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキルシリル、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｎ−(Ｃ₁〜Ｃ₈)₂ 、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニル、Ｎ−(Ｃ₁〜Ｃ₈)₂アルケニル、Ｓ−Ｃ₁〜Ｃ₈アル キル、Ｓ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニル、ＮＨ₂、Ｎ₃、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−ＮＨ₂ 、ポリアルキルアミノ及びＲＮＡ開裂性基からなる群から独立に選択され； 各々のＹは、独立にＯ又はＳであり； 各々のＺは、独立にＯ又はＳであり； Ｌは、親核体及び／又は塩基に対して不安定な基であり； Ｓ^pは、固体支持体であり；そして ｍは、０又は正の整数である。） を有する、請求項１記載の方法。 ５．各々のＲが、Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄ア リール、及び置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリールからなる群から独立に選択され； ｎが２であり；そして ｍが０〜１９８の整数である、 請求項４記載の方法。 ６．各々のＰｇが、i−シアノエチル、４−シアノ−２−ブテニル、２−ジ フェニルメチルシリル、及び式Ｒ¹ＣＯＮＲ²ＣＨＲ³ＣＨＲ⁴−を有する２−Ｎ− アミドエチル基からなる群から独立に選択され； 各々のＲ¹は、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ 原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ原子を含有す る置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリ ール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘ テロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇ 〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキルからなる群から独立に選択され； 各々のＲ²、Ｒ³及びＲ⁴は、水素、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル 、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までの ヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール 、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリ ール、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈ アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜 Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜 Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキルからなる群から独立に選択されるか、又は Ｒ³とＲ⁴は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｃ₃〜Ｃ₈シクロ アルキル基、置換Ｃ₃〜Ｃ₈シクロアルキル基、３個までのヘテロ原子を含有する Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル基、又は３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂ 〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル基を形成し； Ｒ⁶が、４,４'−ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、ジフェニルメ チル、フェニルキサンテン−９−イル、及び９−(ｐ−メトキシフェニル)キサン テン−９−イルからなる群から選択され；そして 各々のＢが、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、２−アミノ プリン、イノシン、及び５−メチルシトシンであって、各々の塩基の環外アミノ 基がアシル基で保護されているものからなる群から独立に選択される、 請求項５記載の方法。 ７．少なくとも１のリン(III)連結を含むオリゴヌクレオチド類似体が、式 ：（式中、 Ｐｇは、塩基及び／又は親核体に対して不安定な基であり； Ｒ⁷は、塩基及び／又は親核体に対して不安定な基であり； Ｒ⁶は、不安定なブロック基であり； 各々のＢは、独立に、保護されていないか又は保護されたヘテロ環塩基であり ； 各々のＸは、水素、ヒドロキシル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換 Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアル キル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆ 〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃ 〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリ ール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子 を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、３個までのヘテロ原子を含有す る置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｏ−Ｃ₁ 〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＯ−Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロア ルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｏ−Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキ ル、Ｏ−Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｏ−Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原 子を含有するＯ−Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置 換Ｏ−Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｏ−Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｏ−Ｃ₇〜Ｃ₁₈ アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＯ−Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラ ルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｏ−Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラ ルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニ ル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルコキシアミノ、Ｏ−トリ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキルシリル、置換 Ｏ−トリ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキルシリル、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｎ−(Ｃ₁〜Ｃ₈)₂ 、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニル、Ｎ−(Ｃ₁〜Ｃ₈)₂アルケニル、Ｓ−Ｃ₁〜Ｃ₈アル キル、Ｓ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニル、ＮＨ₂、Ｎ₃、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−ＮＨ₂ 、ポリアルキルアミノ、及びＲＮＡ開裂性基からなる群から独立に選択され；そ して ＹはＯ又はＳである。） を有するジヌクレオチド類似体である、請求項１記載の方法。 ８．各々のＲが、Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄ア リール、及び置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリールからなる群から独立に選択され； そしてｎが２である、 請求項７記載の方法。 ルメチルシリル、及び式Ｒ¹ＣＯＮＲ²ＣＨＲ³ＣＨＲ⁴−を有する２−Ｎ−アミド エチル基からなる群から選択され； Ｒ¹は、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を 含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換 Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、 ３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原 子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ_{1 8} アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキ ル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキ ルからなる群から選択され； Ｒ²、Ｒ³及びＲ⁴は、水素、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個 までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ 原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換 Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、 ３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラル キル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘ テロシクロアラルキル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘ テロシクロアラルキルからなる群から独立に選択されるか、又は Ｒ³とＲ⁴は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｃ₃〜Ｃ₈シクロ アルキル基、置換Ｃ₃〜Ｃ₈シクロアルキル基、３個までのヘテロ原子を含有する Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル基、又は３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂ 〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル基を形成し； Ｒ⁶が、４,４'−ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、ジフェニルメ チル、フェニルキサンテン−９−イル、及び９−(ｐ−メトキシフェニル)キサン テン−９−イルからなる群から選択され； 各々のＢが、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、２−アミノ プリン、イノシン、及び５−メチルシトシンであって、各々の塩基の環外アミノ 基がアシル基で保護されているものからなる群から独立に選択され；そして Ｒ⁷が、Ｃ₂〜Ｃ₁₀アシル基である、 請求項８記載の方法。 １０．（ａ）ブロックされたヒドロキシル基を有するヌクレオシド類似体を提 供し； （ｂ）前記ブロックされたヒドロキシル基を脱ブロックしてフリーのヒドロキ シル基を得； （ｃ）前記フリーのヒドロキシル基を、ブロックされたヒドロキシル基を有す る保護されたヌクレオシド類似体ホスホロアミダイトと反応させて、リン（III ）連結とブロックされたヒドロキシル基とを含むオリゴヌクレオチド類似体を生 成させ； （ｄ）前記リン（III）連結を、酸化剤及び式：（式中、 各々のＲは、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原 子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ原子を含有する 置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリー ル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテ ロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇ 〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキルからなる群から独立に選択され；そして ｎは、２、３又は４である。） を有するジチオ炭酸ジエステルポリスルフィドからなる群から選択される試薬と 反応させて、酸化又は硫化されたリン（Ｖ）連結であって、少なくとも１の連結 が硫化されたリン（Ｖ）連結である連結を生成させ；そして （ｅ）工程（ｂ）から（ｄ）までを少なくとも１回繰り返して、硫化オリゴヌ クレオチド類似体を生成させる ことを含む方法。 １１．各々のＲが、Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄ア リール、及び置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリールからなる群から独立に選択され；そして ｎが２である、 請求項１０記載の方法。 １２．ヌクレオシド類似体が固体支持体に結合している、請求項１０記載の方 法。 １３．リン（III）連結とブロックされたヒドロキシル基とを含むオリゴヌク レオチド類似体が、式：（式中、 各々のＰｇは、独立に、塩基及び／又は親核体に対して不安定な基又はアリル 基であり； Ｒ⁶は、不安定なブロック基であり； 各々のＢは、独立に、保護されていないか又は保護されたヘテロ環塩基であり ； 各々のＸは、水素、ヒドロキシル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換 Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアル キル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆ 〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃ 〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリ ール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子 を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、３個までのヘテロ原子を含有す る置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｏ−Ｃ₁ 〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＯ−Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロア ルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｏ−Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキ ル、Ｏ−Ｃ₅〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｏ−Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原 子を含有するＯ−Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテロ原子を含有する置 換Ｏ−Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｏ−Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｏ−Ｃ₇〜Ｃ₁₈ アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＯ−Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラ ルキル、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｏ−Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロアラ ルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニ ル、Ｏ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルコキシアミノ、Ｏ−トリ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキルシリル、置換 Ｏ−トリ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキルシリル、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、Ｎ−(Ｃ₁〜Ｃ₈)₂ 、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニル、Ｎ−(Ｃ₁〜Ｃ₈)₂アルケニル、Ｓ−Ｃ₁〜Ｃ₈アル キル、Ｓ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルケニル、ＮＨ₂、Ｎ₃、ＮＨ−Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル−ＮＨ₂ 、ポリアルキルアミノ及びＲＮＡ開裂性基からなる群から選択され； 各々のＹは、独立にＯ又はＳであり； 各々のＺは、独立にＯ又はＳであり； Ｌは、親核体及び／又は塩基に対して不安定な基であり； Ｓ^Pは、固体支持体であり；そして ｍは、０又は正の整数である。） を有する、請求項１０記載の方法。 １４．各々の工程（ｄ）が、リン（III）連結をジチオ炭酸ジエステルポリス ルフィドと反応させるものであり； 各々のＲが、Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、Ｃ₆〜Ｃ₄アリール、 及び置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリールからなる群から独立に選択され； ｎが２であり；そして ｍが０〜１９８の整数である、 請求項１３記載の方法。 フェニルメチルシリル、及び式Ｒ¹ＣＯＮＲ²ＣＨＲ³ＣＨＲ⁴−を有する２−Ｎ− アミドエチル基からなる群から独立に選択され； 各々のＲ¹は、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ 原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ原子を含有す る置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリ ール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘ テロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇ 〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキルからなる群から独立に選択され； 各々のＲ²、Ｒ³及びＲ⁴は、水素、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル 、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までの ヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ₁₄アリール 、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリ ール、３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈ アラルキル、置換Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜 Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜 Ｃ₁₅ヘテロシクロアラルキルからなる群から独立に選択されるか、又は Ｒ³とＲ⁴は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｃ₃〜Ｃ₈シクロ アルキル基、置換Ｃ₃〜Ｃ₈シクロアルキル基、３個までのヘテロ原子を含有する Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル基、又は３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₂ 〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル基を形成し； Ｒ⁶が、４,４'−ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、ジフェニルメ チル、フェニルキサンテン−９−イル、及び９−(ｐ−メトキシフェニル)キサン テン−９−イルからなる群から選択され；そして 各々のＢが、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、２−アミノ プリン、イノシン、及び５−メチルシトシンであって、各々の塩基の環外アミノ 基がアシル基で保護されているものからなる群から独立に選択される、 請求項１４記載の方法。 １６．更に、（ｆ）硫化オリゴヌクレオチド類似体を固体支持体から切り離す ことを含む、請求項１２記載の方法。 １７．更に、（ｆ）硫化オリゴヌクレオチド類似体を固体支持体から切り離す ことを含み、前記固体支持体から切り離された硫化オリゴヌクレオチド類似体が 、式： を有する、請求項１３記載の方法。 １８．更に（ｆ）硫化オリゴヌクレオチド類似体を固体支持体から切り離すこ とを含み、前記固体支持体から切り離された硫化オリゴヌクレオチド類似体が、 式：を有する、請求項１４記載の方法。 １９．（ａ）オリゴヌクレオチド類似体のリン（ＩＩＩ）連結を硫化するのに 十分な量の、式： （式中、 各々のＲは、Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₁〜Ｃ₈アルキル、３個までのヘテロ原 子を含有するＣ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、３個までのヘテロ原子を含有する 置換Ｃ₂〜Ｃ₈ヘテロシクロアルキル、Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリール、置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリー ル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、３個までのヘテ ロ原子を含有する置換Ｃ₃〜Ｃ₁₁ヘトアリール、Ｃ₇〜Ｃ₁₈アラルキル、置換Ｃ₇ 〜Ｃ₁₈アラルキル、３個までのヘテロ原子を含有するＣ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキル、及び３個までのヘテロ原子を含有する置換Ｃ₄〜Ｃ₁₅ヘテロシクロア ラルキルからなる群から独立に選択され；そして ｎは、２、３又は４である。） を有するチオジ炭酸ジエステルポリスルフィド；及び （ｂ）アセトニトリル、テトラヒドロフラン、コリジン、ジクロロメタン、ジ クロロエタン、ピリジン、及びそれらの混合物からなる群から選択される溶媒を 含んでなる組成物。 ２０．各々のＲが、独立に、Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、置換Ｃ₂〜Ｃ₈アルキル、Ｃ₆ 〜Ｃ₁₄アリール、又は置換Ｃ₆〜Ｃ₁₄アリールであり； ｎが２である、 請求項１９記載の組成物。