JP2000511765A

JP2000511765A - 精製ＳＲ―ｐ７０タンパク質

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Publication number: JP2000511765A
Application number: JP09527380A
Authority: JP
Inventors: カピュ，ダニエル; フェララ，パスクアル; カガ，アーメ・ムウラ
Original assignee: Sanofi SA
Current assignee: Sanofi SA
Priority date: 1996-02-02
Filing date: 1997-02-03
Publication date: 2000-09-12
Anticipated expiration: 2017-02-03
Also published as: JP3447301B2; NO983537L; FR2744455A1; DE69739346D1; US20090258409A1; US20110020951A1; AU1727597A; ATE427959T1; ZA97835B; EP0877758B1; US7557187B2; FR2744455B1; PT877758E; TW515802B; US20050202016A1; EP0877758A2; DK0877758T3; BR9710919A; ES2322971T3; NO323285B1

Abstract

(57)【要約】本発明は、p53タンパク質のための遺伝子に関連する腫瘍−抑制遺伝子のファミリーの新規な核酸配列、および対応するタンパク質配列に関する。

Description

【発明の詳細な説明】精製SR-p70タンパク質本発明は、p53タンパク質の遺伝子に関連した腫瘍−抑制遺伝子ファミリーの新規な核酸配列、およびその対応するタンパク質配列に関する。本発明はまた、特にアポトーシスまたは細胞形質転換の現象に連関した病理学の分野において、これらの配列の予防、治療および診断上の適用にも関する。腫瘍−抑制遺伝子は、発癌現象に対する保護において鍵となる役割を果たし、これらの遺伝子のうち１つの喪失、その不活性化またはその機能不全を引き起こすことが可能ないずれかの修飾は、腫瘍形成特性を有し、それにより悪性腫瘍の発達に都合のよい条件を創造する。本発明の発明者らは、新規な遺伝子の転写産物、ならびにその対応するタンパク質を同定した。該遺伝子、SR-p70は、その抗腫瘍活性がその転写因子活性に関係するp53腫瘍−抑制遺伝子および、さらにとりわけ細胞死のメカニズムにおける手段となるBaxならびにBc1-2遺伝子の活性上で働く制御に関係する。したがって、本発明は、精製されたSR-p70タンパク質、またはその生物学的に活性なフラグメントに関する。本発明はまた、該タンパク質またはそれらの生物学的に活性なフラグメントをコードする単離された核酸配列、およびこれらの配列から得られた特異的オリゴヌクレオチドにも関する。さらに、それは、前記で定義されたヌクレオチド配列の少なくとも１つを含むクローニングおよび／または発現ベクター、および該ヌクレオチド配列のうち１つの複製および／または発現を可能にする条件下で該クローニングおよび／または発現ベクターによってトランスフェクトされる宿主細胞に関する。トランスフェクトされた宿主細胞による組換えSR-p70タンパク質またはそれらの生物学的に活性なフラグメントの製造方法もまた、本発明の一部を成す。本発明はまた、前記で定義されたタンパク質に特異的な抗体または抗体誘導体も含む。さらに、それは、免疫組織化学的技法によって腫瘍中のSR-p70タンパク質の蓄積を測定すること、または患者の血清中の該タンパク質に向けられた自己抗体を明らかにすることのいずれかによる癌の検出方法に関する。本発明はまた、SR-p70活性、例えばSR-p70を巻き込むタンパク質−タンパク質相互作用のいずれかの阻害剤または活性剤にも関する。また、イン・ビボでSR-p70遺伝子の発現を調節できる、前記の核酸配列に特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチド配列にも関する。最後に、本発明は、アポトーシス現象または形質転換の復帰現象を調節する目的で、例えば本発明によるタンパク質のコーディング配列を運搬することが可能な不活性化されたウイルスベクターのごときベクターを該タンパク質に関して不完全な細胞中へ注入する遺伝子治療の方法を含む。本発明の主題は：ａ）配列番号２の配列；ｂ）配列番号４の配列；ｃ）配列番号６の配列；ｄ）配列番号８の配列；ｅ）配列番号１０の配列；ｆ）配列番号１３の配列；ｇ）配列番号１５の配列；ｈ）配列番号１７の配列；ｉ）配列番号１９の配列；ｊ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７または配列番号１９から導き出される生物学的に活性な配列から選択されるアミノ酸配列を含む精製されたポリペプチドである。本発明の記載において、以下の定義： ‐SR-p70タンパク質：配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７または配列番号１９の配列から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド、あるいは該ポリペプチドのいずれかの生物学的に活性なフラグメントまたは誘導体； ‐誘導体：配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７または配列番号１９の配列のポリペプチドのいずれかの変異ポリペプチド、あるいは配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７または配列番号１９の配列の遺伝学的および／または化学的性質の修飾の結果生じる、すなわち、１個のアミノ酸または限定数のアミノ酸の突然変異、欠失、付加、置換および／または化学的修飾によって得られるいずれかの分子、ならびにＤエナンチオマーの形態において１またはそれ以上のアミノ酸を含有する、いずれかのイソ型配列、すなわち、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７または配列番号１９の配列と、あるいはそのフラグメントまたは修飾された配列のうちの１つと同一の配列、生物学的活性を与える性質のうち少なくとも１つを保持している該変異、修飾またはイソ型配列； ‐生物学的活性：ＤＮＡへの結合および／または転写因子活性を働かせることおよび／または分化およびアポトーシスの細胞サイクルの制御に関係することが可能であり、および／または配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７または配列番号１９の配列のポリペプチドに特異的な抗体による認識が可能であり、および／または該ポリペプチドを認識する抗体を誘発することが可能なことが用いられる。誘導体の製造は異なる目的を有してもよく、特に、ＤＮＡに対するポリペプチドの親和性またはその転写活性因子を増大させること、およびその生産レベルを改善すること、プロテアーゼに対するその耐性を増大させること、その生物学的活性を修飾することまたは、それに新規な薬剤および／または生物学的特性を賦与することを包含する。本発明のポリペプチドのなかでも、配列番号６、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７または配列番号１９の配列を含むヒト起源のポリペプチドが好ましい。配列番号６の配列に相当する６３６アミノ酸のポリペプチドは、配列番号２のポリペプチドに対して９７％より大きく同一である。配列番号２のポリペプチドおよび配列番号４のポリペプチドは、同一遺伝子の２個の発現産物であって、同じことが配列番号８および配列番号１０に、ならびに配列番号６、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７または配列番号１９にあてはまる。実施例に説明するように、配列番号４のポリペプチドは、配列番号２のポリペプチドをコードする、対応する遺伝子のより長い転写産物（メッセンジャーＲＮＡ）の別法でのスプライシングに関連した配列番号２のペプチドのプレ成熟末端に相当する。同様に、ヒトにおいて、配列番号６、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７および配列番号１９に相当するポリペプチドは、Ｎ−および／またはＣ−末端部分に関してそれらの組成物中で異なり、これは、同じ第１転写産物の別法でのスプライシングの結果である。配列番号１０のＮ−末端ペプチド配列は欠失され、これはそのコーディング転写産物の別法でのスプライシングに関係している。有利なことに、本発明は、前記のポリペプチドのうち１個のＤＮＡ結合ドメインに対応するポリペプチドに関する。該ドメインは、配列番号２または６の残基１１０〜残基３１０、および配列番号８の残基６０〜残基２６０に位置する配列に相当する。また本発明の主題は、SR-p70タンパク質をコードする核酸配列またはその生物学的に活性なフラグメントもしくは誘導体にも関する。さらに好ましくは、本発明の主題は：ａ）配列番号１の配列；ｂ）配列番号３の配列；ｃ）配列番号５の配列；ｄ）配列番号７の配列；ｅ）配列番号９の配列；ｆ）配列番号１１の配列；ｇ）配列番号１２の配列；ｈ）配列番号１４の配列；ｉ）配列番号１６の配列；ｊ）配列番号１８の配列；ｋ）配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６または配列番号１８またはそれらに相補的な配列と特異的にハイブリダイズすること、あるいはそれらの隣接する配列と特異的にハイブリダイズすることが可能な核酸配列；ｌ）遺伝コードの縮重の結果として配列ａ)、ｂ)、ｃ)、ｄ)、ｅ)、ｆ)、ｇ) 、ｈ)、ｉ)、Ｊ）またはｋ）から誘導される配列から選択される単離された核酸配列である。好ましい具体例によると、本発明の主題は、各々、配列番号６、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７および配列番号１９のヒトタンパク質のｃＤＮＡに対応する配列番号５、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６および配列番号１８のヌクレオチド配列である。本発明の異なるヌクレオチド配列は、人工のものかまたはそうでないものであってもよい。それらは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１２、１４、１６または１８の配列に基づいて調製されたプローブを用いる、配列のライブラリーのスクリーニングによって得られるＤＮＡまたはＲＮＡ配列であり得る。かかるライブラリーは、当業者に既知の分子生物学の伝統的方法によって調製され得る。また、本発明によるヌクレオチド配列は、化学的合成によってか、または別法でライブラリーのスクリーニングによって得られた配列の化学的もしくは酵素的修飾を包含する混合の方法によっても調製され得る。これらのヌクレオチド配列は、本発明のポリペプチドもしくはその生物学的に活性なフラグメントをコードするゲノムＤＮＡまたはメッセンジャーＲＮＡの核酸配列に強力におよび特異的にハイブリダイズすることが可能なヌクレオチドプローブの製造を可能にする。かかるプローブもまた、本発明の一部を成す。それらは、ハイブリダイゼーション実験により、生物学的試料における本発明のポリペプチドに特異的な転写産物の検出のための、あるいは異常型合成のまたは、ヘテロ接合性の喪失または多形、突然変異もしくは異なるスプライシングの結果生じる遺伝子再配列のごとき遺伝子異常の証明のためのイン・ビトロでの診断道具として使用され得る。本発明のプローブは、少なくとも１０ヌクレオチドを含み、最も多くは、SR-p 70遺伝子のまたは例えばコスミド中に含まれるそのｃＤＮＡの配列全体を含む。最短プローブ、すなわちおよそ１０〜２０ヌクレオチドのプローブのなかでも、適するハイブリダイゼーション条件は、当業者によって通常使用されるストリンジェントな条件に一致する。使用される温度は、好ましくはＴ_m−５℃〜Ｔ_m−３０℃であって、さらに好ましいものとしてＴ_m−５℃〜Ｔ_m−１０℃であり、Ｔ_mは融解温度であり、対になったＤＮＡ鎖の５０％が分離する温度である。ハイブリダイゼーションは、好ましくは、詳細には６ｘＳＳＣ溶液のごとき高イオン強度の溶液中で処する。有利には、使用されるハイブリダイゼーション条件は以下の通りである： ‐温度：４２℃、 ‐ハイブリダイゼーションバッファー：実施例ＩＩＩに記載のように、６ｘＳＳＣ、５ｘデンハーツ、０．１％ＳＤＳ。有利には、これらのプローブは以下のオリゴヌクレオチドまたはそれらに相補的な配列によって表される：好ましくは、本発明のプローブは使用前に標識化する。このために、いくつかの技法は当業者の能力内である(蛍光、放射能、化学発光、酵素等の標識化)。これらのヌクレオチドプローブが使用されるイン・ビトロでの診断方法は、本発明の主題に包含される。これらの方法は、前記で与えられた定義にしたがって、例えば、SR-p70タンパク質をコードする核酸のヌクレオチド配列における、異常な合成(例えば、転写産物の蓄積)、またはヘテロ接合性の喪失および遺伝子再配列のごとき遺伝子異常ならびに点突然変異の検出に関連する。また、本発明のヌクレオチド配列は、配列決定反応またはいわゆるＰＣＲ技法もしくはそのいずれかの変法（リガーゼ鎖反応（ＬＣＲ）等）による特異的増幅反応のためのオリゴヌクレオチドプライマーの製造および使用にも有用である。好ましいプライマー対は、ヌクレオチド配列：配列番号１：２８７４個のヌクレオチドのサル配列、および配列番号５：ヒトSR-p70a ｃＤＮＡ、詳細にはＡＴＧ翻訳開始コドンの上流およびＴＧＡ翻訳終止コドンの下流から選択されるプライマーから成る。有利には、これらのプライマーは以下の対によって表される： ‐対番号１： ‐対番号２： ‐対番号３： ‐対番号４： ‐対番号５： ‐対番号６： ‐対番号７： ‐対番号８： ‐対番号９： ‐対番号１０： ‐対番号１１： ‐対番号１２：これらのプライマーは、各々： ‐配列番号２０の場合、配列番号１のヌクレオチド番号１２４〜ヌクレオチド番号１４０および配列番号５のヌクレオチド番号１〜ヌクレオチド番号１７、 ‐配列番号２１の場合、配列番号１のヌクレオチド番号２２８０〜ヌクレオチド番号２２６２および配列番号５のヌクレオチド番号２１５６〜ヌクレオチド番号２１３８、 ‐配列番号２２の場合、配列番号１のヌクレオチド番号６８４〜ヌクレオチド番号７０１、 ‐配列番号２３の場合、配列番号１のヌクレオチド番号１４４７〜ヌクレオチド番号１４３０および配列番号５のヌクレオチド番号１３２４〜ヌクレオチド番号１３０７、 ‐配列番号２４の場合、配列番号１のヌクレオチド１４３４〜ヌクレオチド１４５４および配列番号５のヌクレオチド１３１１〜ヌクレオチド１３３１、 ‐配列番号２５の場合、配列番号１のヌクレオチド２０６６〜ヌクレオチド２０５１および配列番号５のヌクレオチド１９４０〜ヌクレオチド１９２５、 ‐配列番号２６の場合、配列番号５のヌクレオチド１６〜ヌクレオチド３２、 ‐配列番号２７の場合、配列番号５のヌクレオチド５０３〜ヌクレオチド４８５、 ‐配列番号２８の場合、配列番号１１のヌクレオチド１６０〜ヌクレオチド１７６、 ‐配列番号２９の場合、配列番号５のヌクレオチド１９９３〜ヌクレオチド１９７６、 ‐配列番号３０の場合、配列番号１１のヌクレオチド２６３〜ヌクレオチド２８０、 ‐配列番号３１の場合、配列番号５のヌクレオチド１９４３〜ヌクレオチド１９２６、 ‐配列番号３２の場合、図２２に記載されたヌクレオチド配列のヌクレオチド１２８〜ヌクレオチド１４５、 ‐配列番号３３の場合、配列番号５のヌクレオチド１１６７〜ヌクレオチド１１４９、 ‐配列番号３４の場合、配列番号５のヌクレオチド９２８〜ヌクレオチド９１１、 ‐配列番号３５の場合、配列番号５のヌクレオチド６７７〜ヌクレオチド６５９、 ‐配列番号３６の場合、配列番号５のヌクレオチド１６０５〜ヌクレオチド１５８７、 ‐配列番号３７の場合、図１３に記載のヌクレオチド配列のヌクレオチド１〜ヌクレオチド１８、 ‐配列番号３８の場合、図１３に記載のヌクレオチド配列のヌクレオチド８３３〜ヌクレオチド８１３、 ‐配列番号３９の場合、図１３に記載のヌクレオチド配列のヌクレオチド２５〜ヌクレオチド42、 ‐配列番号４０の場合、図１３に記載のヌクレオチド配列のヌクレオチド５０６〜ヌクレオチド４８８に及ぶ配列に相当する。さらに、本発明によるヌクレオチド配列は、遺伝子治療における用途、詳細にはアポトーシスのおよび形質転換の逆転の現象を制御するための用途を有し得る。さらに、本発明によるヌクレオチド配列は、SR-p70タンパク質なる語に与えられた定義にしたがって、組換えSR-p70タンパク質の製造のために使用してもよい。これらのタンパク質は、当業者に既知の組換え産物製法の技術によって、前記で定義されたヌクレオチドから製造してもよい。この場合、使用されるヌクレオチド配列は、宿主細胞内でのその発現を可能にするシグナルの制御下に置かれる。組換えタンパク質の製造に有効なシステムは、例えばプラスミドまたはウイルス起源のベクターおよび適合性宿主細胞を自由にできる必要がある。細胞宿主は、バクテリアのごとき原核生物系、または例えば酵母、昆虫細胞、ＣＨＯ細胞（チャイニーズハムスター卵巣細胞）のごとき真核細胞系あるいは有利に使用できるいずれかの他の系から選択され得る。本発明のタンパク質の発現のための好ましい細胞宿主は、イー・コリ（E．coli）細菌、詳細にはMC 1061株（Clontec）から成る。ベクターは、プロモーター、翻訳開始および終止シグナルならびに適当な転写調節領域も含まなければならない。それは細胞中に安定に維持されることが可能でなければならず、適当には翻訳されたタンパク質の分泌を規定する特別のシグナルを有する。これらの種々の制御シグナルは、使用される細胞宿主にしたがって選択される。そのために、本発明によるヌクレオチド配列を、選択された宿主内で自主的に複製しているベクターまたは選択された宿主に組み込まれるベクター中に挿入してもよい。かかるベクターは、当業者によって一般的に使用される方法によって調製され、それから得られるクローンは、例えばエレクトロポーレーションのごとき標準的な方法によって適当な宿主中へ導入され得る。少なくとも１個の前記で定義したヌクレオチド配列を含有するクローニングおよび／または発現ベクターもまた、本発明の一部を成す。好ましいクローニングおよび発現ベクターは、イー・コリにおけるクローニングベクター（イー・コリにおける複製起点およびプラスミドpTZ 18Rから生じるアンピシリン耐性遺伝子）としておよび動物細胞における発現ベクター（プロモーター、イントロン、ポリアデニル化部位、SV40ウイルスの複製起点）としての両方の使用に必要なエレメント、ならびに配列決定の目的でそれを一本鎖としてコピーできるエレメント（ファージf1の複製起点）を含有するプラスミドpSE1である。該プラスミドの特徴は、ヨーロッパ特許出願第０５０６５７４号において記載されている。その構造およびまた本発明の核酸配列から生じるｃＤＮＡの組み込みは、さらに、下記の実施例に記載する。好ましい具体例によると、本発明のタンパク質は融合タンパク質の形態、詳細にはグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）と融合したタンパク質の形態である。この場合に指定される発現ベクターは、プラスミドベクターpGEX-4T- 3（Pharmacia ref-27.4583）が代表的である。さらに、本発明は、これら前記のベクターによってトランスフェクトされる宿主細胞に関する。これらの細胞は、前記で定義されたようにベクター中へ挿入されたヌクレオチド配列を宿主細胞中に導入し、次いでトランスフェクトしたヌクレオチド配列の複製および／または発現を可能にする条件下で該細胞を培養することによって得られ得る。これらの細胞は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６または配列番号１８の組換えポリペプチド、あるいはその生物学的に活性なフラグメントまたは誘導体の製造方法において使用できる。組換え形態における本発明のポリペプチドに製造方法は、それ自体が本発明に包含され、トランスフェクトされた細胞を配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６または配列番号１８の組換えポリペプチドあるいはその生物学的に活性なフラグメントまたは誘導体の発現を可能にする条件下で培養すること、および該組換えポリペプチドを回収することを特徴とする。使用される精製方法は、当業者にとって既知である。組換えポリペプチドは、ライゼートおよび細胞抽出物からあるいは培養培地上清から、分画、クロマトグラフィー法、特異的モノ−またはポリクローナル抗体を用いる免疫アフィニティー技法等のごとき、個々でまたは組み合わせて用いられる方法によって精製され得る。好ましい変法は、「担体」タンパク質に融合された組換えポリペプチド（キメラタンパク質）を製造することから成る。該システムの利点は、組換え産物のタンパク質分解における安定化および減少、イン・ビトロでの再中和の間の溶解性における増加および／または融合相手が特異的リガンドに対するアフィニティーを有する場合の精製の簡略化を可能にすることである。有利なことに、本発明のポリペプチドはグルタチオンＳ−トランスフェラーゼとＮ末端位置で融合される(Pharmacia”GST"system)。この場合、融合産物をＧＳＴの酵素活性法によって検出し、定量する。使用される比色試薬は、グルタチオンアクセプター、ＧＳＴの基質である。組換え産物をグルタチオン分子を予め結合させたクロマトグラフィー支持体上で精製する。前記で与えられた定義によりSR-p70タンパク質を特異的に認識可能なモノ−またはポリクローナル抗体もまた、本発明の一部を成す。ポリクローナル抗体は、標準法により、例えば、前記の方法にしたがう遺伝子組換えによって製造されたタンパク質に対して免疫した動物の血清から得てもよい。 497によって記載された伝統的なハイブリドーマ培養法によって得てもよい。有利な抗体は、配列番号２または６の残基１１０〜残基３１０、あるいは配列番号８の残基６０〜残基２６０に位置する中央領域に向けられた抗体である。本発明による抗体は、例えばキメラ抗体、ヒト化抗体またはFabおよび F(ab')₂フラグメントである。また、それらはイムノコンジュゲートまたは標識化抗体の形態をとる。さらに、組換えポリペプチドの精製のためのそれらの使用のほかにも、本発明の抗体、特にモノクローナル抗体は、生物試料においてこれらのポリペプチドを検出するためにも使用し得る。よって、それらは、例えば免疫蛍光法、金標識（gold labelling）または酵素イムノコンジュゲート法によって、特異的組織のセクション上でのSR-p70タンパク質の発現の免疫細胞化学的または免疫組織化学的分析の方法を構成する。詳細には、それらは、特定の組織または生物試料におけるSR-p70タンパク質の異常な蓄積を明らかにすることを可能にし、それらを癌を検出することあるいは存在前の癌の進行または鎮静をモニターするのに有用にする。より一般的には、本発明の抗体は、SR-p70タンパク質の発現が観察されなければならないいずれかの状況において有利に従事され得る。したがって、本発明はまた、生物試料由来のSR-p70タンパク質の発現または異常な蓄積と相関した病状、詳細には発癌現象のイン・ビトロでの診断方法であって、少なくとも１個の本発明の抗体を、SR-p70タンパク質と該抗体または複数の抗体間の特異的免疫学的複合体の可能な形成をさせる条件下で該生物試料に接触させること、およびおそらく形成される特異的免疫学的複合体を検出することを特徴とする方法にも関する。本発明はまた、生物学的試料におけるSR-p70タンパク質の異常な発現または蓄積のイン・ビトロでの診断のための、および／または該試料中の該タンパク質の発現レベルの測定のためのキットであって： ‐支持体に結合されていてもよい、少なくとも１個のSR-p70タンパク質に特異的な抗体、 ‐SR-p70タンパク質および該抗体間の特異的抗原−抗体複合体の形成の視覚化の方法、および／またはこれらの複合体の定量化の方法を含むキットにも関する。本発明はまた、個体の血清中のSR-p70タンパク質に向けられた自己抗体を検出することによる腫瘍形成の初期診断の方法にも関する。初期診断のかかる方法は、個体から得られた血清試料を、本発明のポリペプチドと血清試料中におそらく存在する自己抗体間の特異的免疫学的複合体の形成を可能にする条件下で、支持体に結合されていてもよい該ポリペプチドに接触させること、およびおそらく形成される特異的免疫学的複合体を検出することを特徴とする。本発明の主題はまた、病状に伴われ得る対立遺伝子変異性、突然変異、欠失、挿入、ヘテロ接合性の喪失またはSR-p70遺伝子の遺伝子異常の決定方法であって、少なくとも１個の前記のヌクレオチド配列を利用する方法でもある。対立遺伝子変異性、突然変異、欠失、挿入、ヘテロ接合性の喪失またはSR-p70遺伝子の遺伝子異常の決定方法のなかでも、好ましいものは、前記で定義したヌクレオチド配列の１対のプライマーを用いる、おそらく多形、突然変異、欠失または挿入を示すSR-p70の標的核酸配列のＰＣＲ増幅の少なくとも１工程、増幅産物が適当な制限酵素を用いて処理される工程および少なくとも１個の酵素反応産物を検出またはアッセイする工程を含むことを特徴とする方法である。本発明はまた、活性素因として前記の定義に対応するポリペプチドを、好ましくは可溶形態で、医薬上許容されるビヒクルと組み合わせて含む医薬組成物も含む。かかる組成物は、増殖および細胞分化の制御のレベルで発癌現象を処理することに対する新規なアプローチを提供する。好ましくは、これらの組成物は全身投与、好ましくは静脈、筋内、皮膚内または経口投与できる。それらの最適な投与様式、投与用量および医薬投与形態は、患者に適当な治療的処理を確立するにあたり一般的に憶えられた基準、例えば患者の年齢または体重、症状の重さ、治療に対する許容および観察される副作用等にしたがって決定され得る。最後に、本発明は、不活性化ウイルスベクター法によってSR-p70タンパク質をコードするヌクレオチド配列を標的細胞へトランスフェクトする遺伝子治療の方法を含む。本発明の他の特徴および利点は、説明は下記される実施例および図面とともに残りの記載に見られる。図面の説明図１：サルSR-p70aｃＤＮＡ（配列番号１に相当する）のサルp53ｃＤＮＡの核酸配列との核酸比較。図２：サルSR-p70aのサルp53タンパク質とのタンパク質比較。（sw：p53-cera e）図３：サルSR-p70aおよびｂｃＤＮＡ（各々、配列番号１および配列番号３に相当する）の核酸配列比較。図４：サルSR-p70aの核酸配列および推定タンパク質配列。図５：サルSR-p70bの部分核酸配列および完全な推定タンパク質配列。図６：ヒトSR-p70aの部分核酸配列および推定の完全タンパク質配列（配列番号５に相当する）。図７：マウスSR-p70cの部分核酸配列および完全な推定タンパク質配列（配列番号７に相当する）。図８：マウスSR-p70aの部分核酸配列および部分的な推定タンパク質配列（配列番号９に相当する）。図９：サル(aおよびb)、ヒト（a）およびマウス（aおよびc）SR-p70cＤＮＡから推定したタンパク質の複数の配列。図１０ａ： SR-p70タンパク質のイムノブロット。図１０ｂ：内在性SR-p70タンパク質の検出。図１１：ヒトSR-p70遺伝子の染色体位置。p36領域において、シグナルが染色体１上に現れる。図１２： SR-p70遺伝子のゲノム構造およびp53遺伝子のゲノム構造との比較。S R-p70a（配列の上段）およびp53（下段）のヒトタンパク質配列は、それらがコードされている各々のエキソンに基づくペプチドに分けられる。矢印のそばの数字は、対応するエキソンの番号付に相当する。図１３： SR-p70イントロン１の３’末端からエキソン３の５’末端のヒトゲノム配列。イントロンをボックスで囲む。１２３および１３３位置に、２つの可変核酸位置を配置する(１２３にてＧ→Ａおよび１３３にてＣ→Ｔ)。ＳｔｙＩ酵素の制限部位に下線を付す(１３３位置、５４２位置および６１０位置にてＣの代わりにＴがある場合、１３０位置)。矢印は実施例ＸＩに使用される核酸プライマーを示す。図１４： SR-p70dおよびSR-p70aのヒトｃＤＮＡの５’領域の核酸比較。図１５：ヒトSR-p70a、b、d、eおよびｆに対応する核酸配列の複数の配列。図１６：ヒトSR-p70（a、b、ｄ、ｅおよびｆ）から推定されるタンパク質の複数の配列。図１７：ヒトSR-p70aの部分核酸配列および部分推定タンパク質配列。太字の２個の塩基は、２個の可変位置に対応して特徴付けられる(図６参照)。該配列は、図６に存在するよりも多くの完全非コーディング５’領域を有する。図１８：ＰＣＲ増幅後のSR-p70a転写産物の分析。レーンＭ：１ｋｂはしご状（GIBCO-BRL）分子量マーカーレーン１：HT29系統レーン３：SK-N-AS系統レーン５：UMR-32系統レーン７：U-373MG系統レーン９：SW480系統レーン１１：CHP212系統レーン１３：SK-N-MC系統レーン２、４、６、８、１０） 12、14：各々レーン１、３、５、７、９、１１および１３に対応する負の対照（ＲＴ−ＰＣＲ反応における逆転写の欠如）図１９：Ａ：ＰＣＲによって増幅されたゲノムフラグメントのアガロースゲル電気泳動による分析(イントロン１の３’末端からエキソン３の５’末端まで) 。レーンの番号は、対照の番号に対応する。レーンＭ：分子量マーカー(１kbはしご状)。Ｂ：制限酵素ＳｔｙＩでＡ部分と同じ試料を消化後、Ａ部分と同様の分析。図２０：ヒトSR-p70aを含有するプラスミドpCDNA3の部分制限地図での図式表示。実施例Ｉ COS-3細胞からのSR-p70cＤＮＡのクローニング１．COS-3細胞の培養 COS-3細胞（ＳＶ４０ウイルスＴ抗原で形質転換したアフリカングリーンモンキー腎細胞）を、２ｍＭＬ−グルタミンを含有し、５０ｍｇ／ｌのゲンタマイシンおよび５％の胎児ウシ血清（GIBCO-BRLリファレンス10231-074）で補足されたＤＭＥＭ培地（GIBCO-BRLリファレンス41 965-047）で、やや集密するまで培養する。２．メッセンジャーＲＮＡの調製ａ）メッセンジャーＲＮＡの抽出細胞を以下の方法：付着細胞を２回ＰＢＳバッファー（リン酸緩衝化セーライン、リファレンス04 104040-GIBCO-BRL）で洗浄し、次いでゴムスクレーパーでこすり落とし、遠心分離するにおいて回収する。細胞ペレットを以下の組成：４Ｍチオシアン酸グアニジン；２５ｍＭクエン酸ナトリウムｐＨ７；０．５％サルコシル；０．１Ｍβ−メルカプトエタノールの溶菌バッファー中に懸濁する。懸濁液をUltra-Turrax No.231256ソニケーター（ Janke and Kundel）を用いて最大出力で１分間音波処理する。酢酸ナトリウムｐＨ４を０．２Ｍの濃度まで加える。溶液を１容量のフェノール／クロロホルム（５／１ｖ／ｖ）混合液で抽出する。水層に含まれたＲＮＡを１容量のイソプロパノールを用いて−２０℃で沈殿させる。ペレットを溶菌バッファーに再懸濁する。溶液をフェノール／クロロホルム混合液で再度抽出し、ＲＮＡをイソプロパノールで沈殿させる。ペレットを７０％および次いで１００％エタノールで洗浄後、ＲＮＡを水中に再懸濁する。ｂ）ＲＮＡのポリ（Ａ）⁺フラクションの精製ＲＮＡのポリ（Ａ）⁺フラクションの精製をDYNAL Dynabeads oligo（ｄＴ）₂₅ キット（リファレンス610.05）を用いて製造者推奨のプロトコールにしたがって行う。原理は、オリゴヌクレオチドポリ（ｄＴ）₂₅が結合する超磁性ポリスチレンビーズの使用に基づく。ＲＮＡのポリ（Ａ）⁺フラクションをビーズに結合したオリゴ（ｄＴ）₂₅とハイブリダイズさせ、それを磁性支持体上にトラップする。３．相補的ＤＮＡライブラリーの作成ａ）相補的ＤＮＡの調製工程２の最後に得られたCOS-3細胞山来のポリ（Ａ）⁺ＲＮＡ０．５μｇから、［³²Ｐ］ｄＣＴＰ−標識化１本鎖相補的ＤＮＡを以下の配列（ＢａｍＨＩ部位を含む）：の合成プライマーを用いて、デオキシヌクレオチド三リン酸の各０．５ｍＭ、３０μＣｉの［α−³²Ｐ］ｄＣＴＰおよび３０ＵのＲＮａｓｉｎ（Promega）を含有する組成：５０ｍＭトリス-ＨＣｌｐＨ８．３、６ｍＭＭｇＣｌ₂、１０ｍＭＤＤＴ、４０ｍＭＫＣｌのバッファー３０μｌ容量中で調製する（得られた相補的ＤＮＡは、３０００ｄｐｍ／ｎｇの比活性を有する）。３７℃にて１時間、次いで５０℃にて１０分、次いで再度３７℃にて１０分、２００ニユットの逆転写酵素ＲＮＡａｓｅＨ^-（GIBCO-BRLリファレンス8064A）とともにインキュベーション後、４μｌのＥＤＴＡを加える。ｂ）ＲＮＡ鋳型のアルカリ加水分解６μｌの２ＮＮａＯＨ溶液を加え、次いで混合物を６５℃にて５分インキュベートする。ｃ）Sephacryl S-400カラムでの精製合成プライマーを除去するために、相補的ＤＮＡをＴＥバッファー中で平衡化したSephacryl S-400（Pharmacia）の１ｍｌのカラムに付して精製する。１容量のクロロホルムで抽出後、最初の２個の放射性フラクションをプールし、１／１０容量の１０Ｍ酢酸アンモニウム溶液および２．５容量のエタノールで沈殿させる。ｄ）ｄＧのホモポリマー添加相補的ＤＮＡを２０ユニットのターミナルトランスフェラーゼ酵素（Pharmacia 27073001）を用いてｄＧ尾部を有する３’末端にて伸長させる。混合物を２０μｌの組成：３０ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ７．６、１ｍＭ塩化コバルト、１４０ｍＭカコジル酸、０．１ｍＭＤＴＴ、１ｍＭｄＧＴＰのバッファー中で３７℃にて１５分間インキュベートし、次いで２μlの０．５ＭＥＤＴＡを加える。ｅ）工程ｂ）およびｃ）を再び繰り返す。ｆ）アダプター存在下でのクローニングベクターｐＳＥ１（ＥＰ５０６，５７４）および相補的ＤＮＡの対合混合物を遠心分離し、ペレットを３３μｌのＴＥバッファー中に溶解し、５μ ｌ（１２５ｎｇ）のクローニングベクターｐＳＥ１、１μｌ（１２０ｎｇ）の以下の配列（ＡｐａＩ部位を含む）：のアダプターおよび１０μｌの２００ｍＭＮａＣｌ溶液を加え、反応混合物を６５℃にて５分間インキュベートし、次いで室温まで冷却させる。ｇ）連結反応クローニングベクターおよび１本鎖ｃＤＮＡを３２．５ユニットのファージＴ４ＤＮＡリガーゼ酵素（Pharmaciaリファレンス27087002）とともに１００μｌの容量中で１５℃にて一晩、組成：５０ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ７．５、１０ｍＭＭｇＣｌ₂、１ｍＭＡＴＰのバッファー中で連結反応させる。ｈ）ｃＤＮＡの第２鎖の合成タンパク質をフェノール抽出、次いでクロロホルム抽出によって除去し、１／１０容量の１０ｍＭ酢酸アンモニウム溶液および次いで２．５容量のエタノールを加える。混合物を遠心分離し、ペレットを組成３３ｍＭトリス一酢酸塩ｐＨ７．９、６２．５ｍＭ酢酸カリウム、１ｍＭ酢酸マグネシウムおよび１ｍＭジチオトレイトール（ＤＴＴ）のバッファー中に溶解し、相補的ＤＮＡの第２鎖を３０ユニットのファージＴ４ＤＮＡポリメラーゼ酵素（Pharmaciaリファレンス2707 18）および１ｍＭの４デオキシヌクレオチド三リン酸ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰおよびｄＴＴＰの混合物ならびに２ユニットｐファージＴ４遺伝子３２タンパク質（Pharmaciaリファレンス27-0213）を有する３０μｌの容量中で３７℃にて１時間合成する。混合物をフェノールで抽出し、フェノールの痕跡をポリアクリルアミドP10（Biogel P10-200-400メッシュ−リファレンス15011050−Biorad ）のカラムを用いて除去する。ｉ）エレクトロポーレーションによる形質転換イー・コリMC 1061細胞を前記で得られた組換えＤＮＡで、製造者により明示された条件下２．５ｋＶにてBiorad Gene Pulser装置（Biorad）を用いるエレクトロポーレーションによって形質転換し、次いでバクテリアを１時間、組成：バクトトリプトン１０ｇ／ｌ；酵母抽出物５ｇ／ｌ；ＮａＣ１１０ｇ／ｌのＬＢ培地（Sambrook op．cit.）として知られる培地中で生育させる。独立クローンの数は、１．５％寒天（ｗ／ｖ）および１００μｇ／ｍｌアンピシリンを加えたＬＢ培地（以後ＬＢ寒天培地という）の皿上でのインキュベーションの最初の１時間後、形質転換の１／１０００希釈をプレートに播くことによって測定する。独立クローンの数は百万である。ｊ）ライブラリーのｃＤＮＡの分析ｃＤＮＡの５’領域の核酸配列決定によるライブラリーの個々のクローンの分析の状況において、SR-p70aと称される１クローンは、すでに知られるタンパク質、p53タンパク質（Genbank X 02469および X 16384）のｃＤＮＡと部分的ホモロジーを示すことが明らかとなった(図１)。配列をSangerら、Proc．Natl．Acad ．Sci．USA；1977,14,5463-5467の方法を用いるUnited States Biochemicalキット（リファレンス70770)および／またはApplied Biosystemsキット（リファレンス401434および／または401628）で作製した。プラスミドＤＮＡをWIZARD minipreparationキット（PromegaリファレンスA7510）から調製ずる。使用されるプライマーは、ｃＤＮＡの５’末端に隣接する領域においてベクターｐＳＥ１に対してかまたはｃＤＮＡの配列に対して相補的な１６〜２２ｍｅｒオリゴヌクレオチドである。第２のｃＤＮＡを下記実施例ＩＩＩ．３に記載される技法に類似した方法において、BRL”Random Primers DNA labelling systems ”キット（リファレンス18187-013）を用いて³²Ｐで標識したSR-p70aＤＮＡを用いて、同じライブラリーからスクリーニングによって単離した。ハイブリダイゼーションおよび洗浄バッファーを５０％ホルムアミドの添加によって処理する。最後の洗浄を０．１ｘＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中で６０℃にて行う。該第２配列（SR-p70bｃＤＮＡ）は第１配列と同一であるが、内部フラグメントがそれから欠失されていた(図３)。２８７４ヌクレオチド（SR-p70a）および２７８０ヌクレオチド（SR-p70b）の長さの２個のSR-p70cＤＮＡは、単一遺伝子、ヌクレオチド１６３７および１７３２間の９４塩基の欠失および対応するコードされたタンパク質のプレ成熟末端を引き起こす別法のスプライシングの産物に相当する。２個のｃＤＮＡから推定されたタンパク質は、各々６３７アミノ酸および４９９アミノ酸を有する(図４および５)。実施例ＩＩ HT-29（ヒト結腸腺癌）細胞由来のSR-p70aタンパク質の配列の獲得およびｃＤＮＡのクロ−ニング１）HT-29細胞の培養細胞を１０％の胎児コウシ血清（GIBCO 10081-23）および５０ｍｇ／ｌのゲンタマイシンを加えたMcCoy's５培地（GIBCO 26600-023）中でやや集密するまで培養する。２）相補的ＤＮＡの調製メッセンジャーＲＮＡを実施例Ｉ．２における記載の通りに調製する。ｃＤＮＡを実施例Ｉ．３における記載に類似の方法で、５μｇの全メッセンジャーＲＮＡでポリ（Ｔ）₁₂プライマーを用いて調製する。ＥＤＴＡで反応を中断させない。３）いわゆるＰＣＲ技法によるヒトｃＤＮＡの特異的増幅重合を１０％ＤＭＳＯ、０．５ｍＭｄＮＴＰ、２個の核酸プライマーを各４ μｇ／ｍｌおよび２．５ユニットのTAQ ＤＮＡポリメラーゼ（Boehringer）の存在下で以下の組成：１０ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ８．３、２．５ｍＭＭｇＣｌ₂、５０ｍＭＫＣｌのバッファーで最終容量５０μｌ中４μｌのｃＤＮＡを用いて行う。プライマー対は、COS-3SR-p70クローンの核酸配列、詳細には翻訳開始ＡＴＧの上流および翻訳終止ＴＧＡの下流に基づいて選択し、以下の組成：である。反応は、９４℃／１分、５４−６０℃／１分３０秒および７２℃／１分３０秒の３０サイクル、次いで７２℃／６分の最終サイクルで行う。４）ヒトｃＤＮＡの配列の獲得第１工程において、ＰＣＲ産物をSephacryl S-400カラムに付してオリゴヌクレオチドから除去し、次いでポリアクリルアミドP10（Bioradリファレンス15041 44）カラム上の排除クロマトグラフィーによって脱塩する。配列決定反応は、ｃＤＮＡに特異的なオリゴヌクレオチドとともにApplied Biosystemsキット（リファレンス401628）を用いて行う。得られた配列は、サルSR-p70aの配列に非常に類似し、推定タンパク質は６３６アミノ酸を含む(図６)。同様の方法において、ヒト系統または組織から由来の他の配列をヒトSR-p70のコーディング部分のために、特に肺または膵臓から得た。これらの配列から推定されるタンパク質は、HT-29系統の場合に得たものと同一である。５）プラスミドｐCDNA3（Invitrogen V 790-20）中へのヒトｃＤＮＡのクローニング３）で得られたＰＣＲ産物およびまたプラスミドを２つの制限酵素ＫｐｎＩおよびＸbａＩで消化し、次いでGenecleanキット（Bio 101リファレンス3105 ）を用いる１％アガロースゲル上での移動後に精製する。１００ｎｇの挿入断片および１０ｎｇのベクターで連結反応および形質転換（実施例Ｉ．３．ｇおよびｉに記載された技法）後、組換えクローンを前記のApplied Biosystemsキットを用いる配列決定によって証明する。実施例III AtT-20（下垂体腫瘍）細胞由来のマウスSR-p70ｃＤＮＡのクローニング１）AtT-20系統の細胞培養細胞を１５％のウマ血清（GIBCO 26050-047）、２．５％の胎児コウシ血清（G IBCO 10081-073）および５０ｍｇ／ｌのゲンタマイシンを加えたHam F10培地（G IBCO 31550-023）中で、やや集密するまで培養する。２）相補的ＤＮＡライブラリーの調製ライブラリーを実施例Ｉ．２および３に記載の通りに前記で培養された細胞から作製する。３）ライブラリーのスクリーニングａ）膜の調製ライブラリーのクローンをBiodyne A membranes（PALLリファレンスBNNG 132）で被覆したＬＢ寒天培地（ペトリ皿１５０ｍｍ直径）上に播く。３７℃にて一晩後、クローンを新しい膜上へ接触させることにより転写する。後者を以下の溶液：０．５ＮＮａＯＨ、１．５ＭＮａＣｌで５分間、次いで０．５Ｍトリス−ＨＣｌｐＨ８、１．５ＭＮａＣｌで５分間浸漬させた３ｍｍ Whatmanろ紙上に置くことにより処理する。以下のバッファー：１０ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ８、１０ｍＭＥＤＴＡ、５０ｍＭＮａＣｌ、０．１％ＳＤＳ、１００μｇ／ｍｌプロテイナーゼＫ中においてプロテイナーゼＫで室温にて１時間処理後、膜を２ｘＳＳＣ（クエン酸ナトリウム、ＮａＣｌ）中で十分に洗浄し、乾燥し、次いで真空下オーブン中で８０℃にて２０分間インキュベートする。ｂ）プローブの調製サルおよびヒトSR-p70ｃＤＮＡ配列に基づいて、以下の組成：のオリゴマーを用いて、第１配列を実施例１１．３および４に記載の通りにAtT- 20ｍＲＮＡ系統から増幅したフラグメント上に製造した。該配列に基づいて、マウスに特異的なオリゴマーのプローブを選択し、該プローブは以下の組成： GAG CAT GTG ACC GAC ATT G を有する。１００ｎｇのプローブを３’末端にて１０μｌの以下のバッファー：３０ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ７．６、１４０ｍＭカコジル酸、１ｍＭＣｏＣｌ₂、０．１ｍＭＤＴＴ中における１０ユニットのターミナルトランスフェラーゼ（Pharm acia）および１００μＣｉの［α-³²Ｐ］ｄＣＴＰ３０００Ｃｉ／ミリモル（Ame rshamリファレンスPB10205）で３７℃にて１５分間標識化する。取り込まれない放射能標識化ヌクレオチドをポリアクリルアミドＰ１０（Biorad,リファレンス1 504144）のカラムに付して除去する。得られたプローブは、およそ５ｘ１０⁸ｄｐｍ／μｇの比活性を有する。ｃ）プレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーションａ）で調製された膜を６ｘＳＳＣ、５ｘデンハーツデンハーツ、０．１％ＳＤＳ中４２℃にて３０分間プレハイブリダイズし、次いでｂ）で調製したプローブの１０⁶ｄｐｍ／ｍｌ部分を加えた同じバッファー中で２、３時間ハイブリダイズする。ｄ）膜の洗浄および曝露膜を室温にて２ｘＳＳＣ／０．１％ＳＤＳバッファー中で２度、次いで５６℃ にて６ｘＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中１時間洗浄する。ハイブリダイズしたクローンをKODAK XOMATフィルムで視覚化する。マウスSR-p70を含有する陽性クローンを選択し、以後SR-p70cと称する。４）マウスSR-p70の配列決定および該配列の分析配列をApplied Biosystemキット（リファレンス401628）を用いて得る。マウスSR-p70c ｃＤＮＡから推定されたタンパク質配列（図７）は、非常に異なるＮ −末端部分以外はヒトおよびサル配列と非常に強いホモロジーを示す(図９参照) 。実施例ＩＩ．３および４に記載の方法と類似の方法においていわゆるＰＣＲ技法を用いて、第２の５’配列（同じAtT-20ライブラリーから生じる）を得た(図８)。推定Ｎ−末端タンパク質配列（SR-p70aと称する配列）は、ヒトおよびサル SR-p70 ｃＤＮＡ（SR-p70a）から推定された配列に非常に類似する(図９)。よってAtT-20系統は、少なくとも２個のSR-p70転写産物を提供する。その２つの転写産物は、異なるスプライシングによってＮ−末端部分において異なる。実施例ＩＶ１）イー・コリにおける組換えSR-p70タンパク質の製造ａ）発現プラスミドの構築これは、サルSR-p70aタンパク質のＣＯＯＨ−末端部分、４２７位置のバリン〜６３７位置のＣＯＯＨ−末端のヒスチジンをプラスミドベクターpGEX-4T-3 （Pharmaciaリファレンス27-4583）のグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合に置くことによる。この目的のために、SR-p70aの対応する挿入断片（位置１４３４〜２０６６）をサルSR-p70a cＤＮＡを含有する１０ｎｇのプラスミドを用いるＰＣＲによって増幅した。核酸プライマーは、以下の組成である：得られたフラグメントおよびまたベクターを制限酵素ＢａｍＨＩおよびＳａｌＩで消化し、クローニングを実施例ＩＩ．５の記載の通りに行う。選択されたクローンをpG SR-p70と称する。ｂ）GST-pSR-p70融合タンパク質の発現および精製該工程を”bulk GST purification module”キット（Pharmaciaリファレンス2 7-4570-01）を用いて行った。概略は、組換えクローンを３７℃にて１リットルの２ｘＹＴＡ培地＋１００μ ｇ／ｍｌアンピシリン中で培養した。ＯＤ０．８にて、発現を０．５ｍＭＩＰＴＧで３７℃にて２時間誘導する。遠心分離後、細胞ペレットを冷ＰＢＳ中で拾い上げ、次いで超音波で音波処理する。１％Triton X-100を添加後、調製物を室温にて撹拌しながら３０分間インキュベートする。４℃にて１２，０００ｇで１０分間遠心分離後、上清を回収する。次いで、精製をグルタチオン−セファロース（glutathione−Sepharose）４Ｂアフィニティークロマトグラフィーカラムに付して行う。結合および洗浄をＰＢＳバッファー中で行い、溶出を減少させたグルタチオンとの競合によって行う。最終濃度は、融合タンパク質３００μｇ／ｍｌになる。２）COS-3細胞におけるSR-p70aタンパク質の製造 COS-3細胞を、サルSR-p70a cＤＮＡがクローン化されたp SE1プラスミドＤＮＡを用いて（実施例Ｉ．１）、または対照としてベクターpSE1プラスミドＤＮＡを用いて、ＤＥＡＥ−デキストラン技法によってトランスフェクトする：COS- ３細胞を５ｘ１０⁵細胞／６ｃｍ皿にて５％胎児ウシ血清を含有する培地中で接種する（実施例Ｉ．１）。培養後、細胞をＰＢＳでリンスする。１ｍｌの以下の混合物：６．５μｇのＤＮＡ、２５０μｇ／ｍｌのＤＥＡＥ−デキストランおよび１００μＭクロロキノンを含有する培地を加える。細胞を３７℃にて５％ＣＯ₂ 中、４〜５時間インキュベートする。培地を吸引し、１０％ＤＭＳＯを含有するＰＢＳ２ｍｌを加え、皿を静かに振盪しながら細胞を１分間インキュベートする。培地を再度吸引し、細胞をＰＢＳで二度リンスする。次いで、３７℃にて２％胎児ウシ血清を含む培地を用いて発現が行われる間の期間、一般的には三日間インキュベートする。次いでSR-p70aタンパク質を実施例IVの記載の通りにイムノブロッティングによって分析する。実施例Ｖ特異的抗体の調製実施例ＩＶにしたがって調製した試料のタンパク質１５０μｇを用いて、ウサギ（およそ１．５〜２ｋｇ重量のニュージーランド雄）を免疫した。免疫はVait ukaitis，Methods in Enzymology，1981，73，46によって記載されたプロトコールにしたがって、１５日毎に行われた。最初の注射で、１容量の抗原溶液を１容量のフロイントの完全アジュバント（Sigmaリファレンス4258）でエマルジョン化する。５ブースターをフロイントの不完全アジュバント（Sigmaリファレンス5 506）中で投与した。実施例ＶＩ SR-p70タンパク質の検出：ウェスタンイムノブロッテイング１）イムノブロッティングに使用した材料ａ）イムノブロッティングに使用した細胞系統以下の細胞系統をATCC(American Type Culture Collection)のカタログ”Cata logue of cell lines and hybrjdomas，7th edition，1992”における記載の通りに培養した：COS-3、CV-1(サル腎細胞系統)、HT-29、U-373MG(ヒト膠芽腫)、M CF7(ヒト乳腺癌)、SKNAS(COS-3と同じ条件下で培養したヒト神経芽腫)、SK-N-MC (ヒト神経芽腫)、IMR-32(ヒト神経芽腫)、CHP212(CV-1と同じ条件下で培養したヒト神経芽腫)、Saos-2(骨肉腫)、SK-OV-3（卵巣腺癌）およびSW480(ヒト結腸腺癌)。ｂ）SR-p70aｃＤＮＡによってトランスフェクトされたCOS-3細胞 COS-3細胞を実施例ＩＶ．２に記載の通りにトランスフェクトした。対照として、細胞を組換えSR-p70aｃＤＮＡを含まないpSE1プラスミドＤＮＡでトランスフェクトした。２）真核細胞培養体からまたはトランスフェクト細胞からのタンパク質試料の調製培養後、細胞をＰＢＳで洗浄し、次いで１０μｇ／ｍｌＲＮＡｓｅＡ、２０ μｇ／ｍｌＤＮＡｓｅ１、２μｇ／ｍｌアプロチニン、０．５μｇ／ｍｌロイペプチン、０．７μｇ／ｍｌペプスタチンおよび１７０μｇ／ｍｌＰＭＳＦを補ったＲＩＰＡバッファー（１％ＮＰ４０、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、０．５％ＳＤＳを有するＰＢＳ）中で拾い上げる。細胞を４℃にて超音波によって音波処理し、４℃にて３０分間放置する。１２，０００ｒｐｍにて微量遠心分離後、上清を回収する。タンパク質濃度をブラッドフォード（Bradford）法によって測定する。３）ウェスタンブロッティング５または５０μｇのタンパク質（細胞系統の場合５０μｇおよびトランスフェクト細胞の場合５μｇ、を０．２容量の以下の６ｘ電気泳動バッファー：０．３５ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ６．８、１０．３％ＳＤＳ、３６％グリセロール、０．６ｍＭＤＴＴ、０．０１２％ブロモフェノールブルー中に置く。試料をアプライし、１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（３０：０．８ビス）中で泳動し、次いでニトロセルロース膜上へエレクトロトランスファーする。４）抗体を用いる視覚化膜を室温にて３０分間、５％ミルク（GIBCO−SKIM MILK）を加えたＴＢＳＴブロッキングバッファー（１０ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ８、１５０ｍＭＮａＣｌ、０．２％Tween20）中でインキュベートする。引き続いて、膜を同じバッファー中で抗−SR-p70（αSR-p70）抗体と４℃にて１６時間接触させ、ＴＢＳＴで１０分間三回洗浄し、次いで３７℃にて１時間ペルオキシダーゼに結合した２次抗 -ウサギ免疫グロブリン抗体（SIGMA AO55）とインキュベートする。１５分間三回洗浄後、ECLキット(Amersham RPN2106)を用いて化学ルミネセンスによって視覚化を行う。同時に、同じ試料を抗-p53（αp53）抗体(Sigma BP5312)、次いで２次抗−マウス免疫グロブリン抗体での視覚化に処した。５）図および結果図１０：SR-p70タンパク質のイムノブロット図１０ａ：組換えSR-p70タンパク質の検出 -カラム１および３：ベクターpSE1によってトランスフェクトされたCOS-3。 -カラム２および４：SR-p70a ｃＤＮＡを含有するプラスミドpSE1によってトランスフェクトされたCOS-3. -カラム１および２：抗-SR-p70（αSR-p70）抗体での視覚化。カラム３および４：抗-p53（αp53）抗体での視覚化。図１０ｂ：内在性SR-p70タンパク質の検出 -カラム１:COS-3；２：CV-1；３：HT-29；４：U-373 MG；５：MCF7；６：SKNA S；７：SK-N-MC；８：IMR-32；９：CHP212；１０：Saos-2；１１：SK-OV-3 および１２：SW480。Ａ：αSR-p70抗体での視覚化。Ｂ：αp53抗体での視覚化。 αSR-p70抗体は特異的に組換えタンパク質（図１０ａ）および内在性タンパク質（図１０ｂ）を認識し、p53と交差しない。ヒトまたはサル細胞系統の分析は、SR-p70タンパク質、p53様が一般に弱く検出できることを示す。対照的に、p53 の蓄積が存在する場合、SR-p70は、その一部の場合でも、直ちに検出可能になる (図１０ｂ)。SR-p70転写産物の分布のＲＴ−ＰＣＲによる研究は、遺伝子が試験される全ての細胞型において発現することを示す。実施例ＶＩＩ SR-p70遺伝子のクローニングおよび染色体位置測定１）SR-p70遺伝子のクローニング使用したライブラリーは、ＢＲＬ”Random Primers DNA Labelling Systems” キット（リファレンス18187-013）を用いて³²Ｐで標識したSR-p70ＤＮＡフラグメントを有する、実施例ＩＩＩ．３において調製したコスミドライブラリーである。ハイブリダイゼーションおよび洗浄バッファーを５０％のホルムアルデヒドを加えることによって処理する。最後の洗浄を０．１ｘＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中で６０℃にて行う。同様な方法において、SR-p70遺伝子をC57ブラックマウスゲノムＤＮＡで調製したライブラリーから単離した。クローンの分析および部分配列決定は、p53遺伝子の構造に近い構造を特にエキソンのサイズおよび位置が高く保持された中央部分において有する１４個のェキソンの存在を明らかにする(図１２)。該構造は、部分的にマウスおよびヒトにおいて決定された。例として、イントロン１の、エキソン２の、イントロン３の３’領域およびエキソン３の５’領域のヒトゲノム配列を図１３に示す。２）ヒトにおけるSR-p70遺伝子の染色体位置測定これは、R．Slimら、Hum．Genet.，1991，88，21-26によって記載された技法を用いてヒトSR-p70遺伝子ＤＮＡを用いて行われた。５０有糸分裂を分析し、その８０％以上が両方の染色体上の1p36およびより特には1p36.2-1p36.3に位置したダブルスポットを有した(図１１)。染色体１の同定およびその位置付けは、二次凝縮のヘテロクロマチンに基づく。写真は、Zeiss Axiophot顕微鏡上で作製され、LHESA冷却CCDカメラを用いて撮られ、Optilabで処理した。実施例ＶＩＩＩＡ）短Ｎ−末端および分岐の両方を有する推定ヒトSR-p70タンパク質をコードするｍＲＮＡの証明１）IMR-32（ヒト神経芽腫）細胞の培養細胞をATCC（American Type Culture Collection）のカタログ”catalogue of cell lines and hybridomas，7th edition，1992”に記載の通りに培養した。２）ｃＤＮＡの調製ＲＮＡを実施例Ｉ．２．ａに記載の通りに培養する。ｃＤＮＡを実施例Ｉ．３に記載の方法に類似の方法で、ポリ（Ｔ）₁₂プライマーを用いる２０μｌの最終容量における５μｇ全ＲＮＡを用いておよび冷却ヌクレオチド用いて調製する。反応をＥＤＴＡで中断させない。３）いわゆるＰＣＲ技法によるSR-p70ｃＤＮＡの特異的増幅重合は、以下の組成：５０ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ９．２、１６ｍＭ（ＮＨ₄ ）₂ＳＯ₄、１．７５ｍＭＭｇＣｌ₂のバッファーを用いる最終５０μｌ中２μ ｌのｃＤＮＡを用いて、１０％ＤＭＳＯ、０．４ｍＭＮＴＰ、２個の核酸プライマーを各１００ｎｇおよび３．５ユニットのTAQおよびPWOポリメラーゼの混合物（Boehringer Mannheim，リファレンス1681 842）の存在下で行う。プライマー対は、以下の組成：である。反応は、９５℃／３０秒、５８℃／１分および６８℃／２分３０秒にて３０サイクル、次いで６８℃／１０分の最終サイクルを行う。ＰＣＲ産物を１％アガロースゲル（ＴＡＥバッファー）上の電気泳動に処する。エチジウムブロミド染色後、２個の主要なバンドが示される：およそ４９０ｂｐサイズのバンド（予想サイズ(図６参照)）およびおよそ７００ｂｐサイズのさらなるバンド。後者は、”Geneclean”キット（Bio 101、リファレンス1001400 ）を用いるゲルから予想される。ポリアクリルアミドP10（Biorad，リファレンス15011050）のカラム上で脱塩後、フラグメントを前記のように１０サイクルのさらなるＰＣＲ増幅に処する。４）増幅産物の配列の決定第１の工程において、ＰＣＲ産物をSephacryl S-400（Pharmacia 17-0609-01 ）のカラムに付してオリゴヌクレオチドから除去し、次いでP10のカラムに付して脱塩する。配列決定反応をApplied Biosystemsキット（リファレンス401628）（373DNAシークエンザー）を用いてアンチセンスプライマーで行う。得られた配列は、２１７〜２１８位置に１９８ｂｐの挿入を有するSR-p70ｃＤＮＡ配列（実施例ＩＩ．４）に対して同一である(図１４)。推定Ｎ−末端タンパク質配列（SR-p70dと称される配列）は、４９アミノ酸短く、最初の１３アミノ酸の分岐を有する(配列番号１３)。したがって、マウスAtT-20系統に関してすでに記載したように、少なくとも２個の異なるSR-p70転写産物が同時に存在する。Ｂ）ヒトSR-p70のクローニングならびにSR-p70dと同じＮ−末端およびＣ−末端部分に分岐を有する推定ヒトSR-p70タンパク質をコードするｍＲＮＡの証明１）いわゆるＰＣＲ技法によるSR-p70ｃＤＮＡの特異的増幅増幅は、以下の組成：のプライマー対を用いて、IMR-32細胞の精製ＲＮＡから実施例ＶＩＩＩ．Ａに記載のように行われた。 S400カラム上での過剰なプライマーの除去およびP10カラム上での脱塩後、１ μｇの試料を以下の組成：のプライマー対を用いて再度ＰＣＲに処する。２）プラスミドｐCDNA3への増幅産物のクローニング１）で得られたＰＣＲ産物を実施例ＩＩ．５の記載のように、P10カラム上で脱塩し、制限酵素ＸｈｏＩおよびＸｂａＩで消化し、次いでプラスミドpCDNA3中へクローン化する。２個の組換えクローンをApplied Biosystemsキットを用いて SR-p70ｃＤＮＡに特異的なオリゴヌクレオチドで配列決定する。得られた第１配列は、実施例ＶＩＩＩ．ａに記載のSR-p70をコードするｍＲＮＡの完全配列に相当する。推定タンパク質は、５８７個のアミノ酸を含む(配列番号１３および図１６)。得られた第２配列は、前記のSR-p70dｃＤＮＡ配列と同一であるが、一方では１０４９〜１０５０位置に、他方では１１８８〜１１８９位置に１４９ｂｐおよび９４ｂｐの２個の欠失を有する(配列番号１４および図１５)。該第２配列から推定されたタンパク質配列は、Ｎ−末端部分が４９アミノ酸短く、最初の１３アミノ酸における分岐ならびにアミノ酸３５０〜３９７の間のタンパク質配列の分岐を有するタンパク質を示す（配列番号１５および図１６）(SR-p70eと称される配列)。推定タンパク質は、５０６個のアミノ酸を含む。Ｃ）より短いＮ−末端を有する推定ヒトSR-p70タンパク質をコードするｍＲＮＡの証明１）SK-N-SH（ヒト神経芽腫）細胞の培養細胞をATCC(American Type Culture Collection)のカタログ”Catalogue of c ell lines and hybridomas，7th edition，1992”における記載の通りに培養する。２）ｃＤＮＡの調製およびいわゆるＰＣＲ技法によるSR-p70ｃＤＮＡの増幅これらの工程を以下の組成：のプライマー対を用いて実施例ＶＩＩＩ．Ａに記載のように行う。配列決定は、Applied Biosystemsキットを用いてSR-p70ｃＤＮＡに特異的なプライマーを用いて行い、２個のｃＤＮＡ： -SR-p70aをコードするｍＲＮＡに対応する第１ｃＤＮＡ -２４〜２５位置の間に９８ｂｐの欠失を有する第２ｃＤＮＡを示す(配列番号１６および図１５)。該欠失は、SR-p70aの翻訳開始ＡＴＧを含む。該第２ｃＤＮＡから推定されたタンパク質（SR-p70fと称する）は、SR-p70aの内部ＡＴＧに対応する下流に翻訳開始ＡＴＧを有する。したがって、推定タンパク質は、５８８個のアミノ酸を含み(配列番号１７および図１６)、SR-p70aの４８個のＮ−末端アミノ酸に関して末端切断（truncated）される。Ｄ）ヒトSR-p70bをコードするｍＲＮＡの証明１）K562細胞の培養細胞をATCC(American Type Culture Collection)のカタログ”Catalogue of c ell lines and hybridomas，7th edition，1992”における記載の通りに培養する。２）ｃＤＮＡの調製、いわゆるＰＣＲ技法によるSR-p70ｃＤＮＡの増幅および配列決定これらの工程を実施例ＩＩＩ．Ｃに記載のように行う。配列決定は、２個のｃＤＮＡ： SR-p70aをコードするｍＲＮＡに対応する第１ｃＤＮＡ、および１５１６〜１５１７位置に９４ｂｐの欠失を有する第２ｃＤＮＡを示す(配列番号１８および図１５)。推定タンパク質（SR-p70bと称する）は、１９９個のアミノ酸を含み、SR-p70aに関して１３７個のアミノ酸によって末端切断されたＣ−末端配列を有し、少なくとも４アミノ酸分岐を有する(配列番号１９および図２１)。該ｃＤＮＡは、サルSR-p70bに関連する実施例Ｉにおいて記載されたｃＤＮＡに類似する。該実施例（実施例ＶＩＩＩ．Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ）に記載された分子は、SR-p 70遺伝子によって転写された一次ｍＲＮＡの異なるスプライシングの結果である SR-p70変異体を表す。 SR-p70aは、１４エキソンの構成のｍＲＮＡによってコードされる(実施例ＶＩＩ参照)。これは、対照タンパク質である。SR-p70bは、エキソン３〜４での挿入ならびにエキソン１１および１３の不存在の結果である。SR-p70fは、エキソン２の不存在の結果である。該実施例は、SR-p70変異体の存在を非徹底的に、他の変異体の存在の強い可能性とともに記載する。同様に、該実施例に記載されたこれらの変異体の存在、ならびにSR-p70aは、それらが証明された系統に限定されない。実際、ＲＴ−ＰＣＲによって行われた研究は、これらの変種を研究される種々の系統において発見できることを示した。さらに、SR-p70fの開始メチオニンは、SR-p70aの内部メチオニンに対応し、SR -p70aをコードするｍＲＮＡ上の下流での開始の可能性を示す。実施例ＩＸヒトSR-p70aｍＲＮＡの５’配列の獲得１）ＰＣＲによるSR-p70ｃＤＮＡの５’末端の増幅細胞培養ならびに全ＲＮＡおよびｃＤＮＡの調製は、実施例ＶＩＩＩ．１および２に記載のように行う。ＲＮＡ鋳型を４μｌの５００ｍＭＥＤＴＡおよび４μ ｌの２ＮＮａＯＨの添加後、６５℃にて５分間インキュベートによって加水分解する。次いで試料をP10カラムに付して脱塩する。ｃＤＮＡを実施例Ｉ．３．ｄに記載のように、ｄＧ尾部を用いて３’末端にて最終容量４０μｌ中で伸長する。４μｌの５００ｍＭＥＤＴＡおよび４μｌの２ＮＮａＯＨの添加後、ｃＤＮＡを６５℃にて３分間インキュベートし、次いでP10カラムに付して脱塩する。ＰＣＲ増幅を実施例ＶＩＩＩ．３のように、８μｌのｃＤＮΛを用いて、および以下の組成：のプライマー対で３０サイクル行う。 S-400カラム上で過剰なプライマーの除去およびP10カラム上での脱塩後、１μ ｌの試料を再度、以下の組成：のプライマー対を用いるＰＣＲに処する。 S-400カラムおよびP10カラムに再度付した試料を以下の対：を用いる２０サイクルで３回目の増幅に処する。２）SR-p70ｃＤＮＡ５’配列の決定配列を実施例ＶＩＩＩ．４のように製造する。該配列は、SR-p70aの開始ＡＴＧの上流の少なくとも２３７塩基の非−コーディング５’領域を示す(図１７)。特に、該配列（IMR-32系統から得られた）とHT-29系統から得られた配列を比較することによって(図６)、２点の相違（図１７：太字を参照）が示され(Ｇ→ＡおよびＣ→Ｔ)、各々、SR-p70aの開始ＡＴＧから−２０および−３０に位置する (図６および１７)。該変異性は、エキソン２中に位置する(図１３)。また、該変異性がマウスにおける実施例ＩＩＩおよびヒトにおける実施例ＶＩＩＩに記載のように別法のスプライシングの結果として、または別法で、ＣＴＧでの翻訳開始での結果として（ＦＧＦｂのために証明したように(Proc．Natl．Acad．Sci．US A，1989，86，1836−1840)、コーディングフレーム内で見られることも除外できない。同様に、該変異性がSR-p70の翻訳にまたは一次ＲＮＡのスプライシングに影響を有することも、除外できない。全ての事象にて、おそらく対立遺伝子起源の該変異性は、マーカーとして、ゲノムレベル（実施例ＸＩ参照）かまたはｍＲＮＡレベル（実施例Ｘ参照）にて役立ち得る。実施例Ｘ１）細胞試料におけるSR-p70aの転写発現のＰＣＲによる分析（ＲＴ−ＰＣＲ）細胞培養（SK-N-AS，SK-N-MC，HT-29，U-373MG，SW480，IMR-32，CHP212）を実施例ＶＩ．１．ａのように行う(ATCCのカタログ”Catalogue of cell lines a nd hybridomas，7th edition，1992”に言及される)。ｃＤＮＡの調製およびＰＣＲ増幅を実施例ＶＩＩＩ．２および３のように行う。使用されるプライマー対は、以下の組成：である。試料を１％アガロースゲル上で電気泳動によって分析し、エチジウムブロミドで視覚化する(図１８)。試料において得られたバンドのサイズは、予想サイズに一致する(およそ２ｋｂ、図６および１７)。得られたバンドの強度は、再現される。同じ条件下で２０サイクルの試料１μｌの再増幅は、各試料においてバンドを示す。２）増幅産物の配列の決定 S-400およびP10カラムに試料を通過させた後、配列決定をリファレンスキット 401 628を用いるApplied Biosystems sequencer 373で行う。使用されるプライマーは、とりわけ、以下：である。 SR-p70aにおけるタンパク質相違は、検出されなかった。しかしながら、得られた配列は、SR-p70aの開始ＡＴＧの上流−２０および−３０位置にて２重の変異性を示す(図６および１７)。おそらく対立遺伝子起源の該変異性は、転写産物の２クラスを定義付させる：−３０位置にＧおよび−２０位置にＣを有する第１クラス（クラスＧ^-30／Ｃ^-20）ならびに２個の位置で変異：−３０位置でＡおよび−２０位置でＴを有する第２クラス(クラスＡ^-30／Ｔ^-20)。第１クラス:SK-N-AS，SK-N-MC，HT-29，U-373MG，SW480 第２クラス：IMR-32，CHP212 実施例ＸＩ１０人の集団におけるSR-p70遺伝子の対立遺伝子分布の決定の分析的方法該対立遺伝子分布は、実施例ＩＸおよびＸで証明された対立遺伝子変異性：・各々、SR-p70aの開始ＡＴＧの上流の−３０および−２０位置にＧおよびＣを有するＧ^-30／Ｃ^-20対立遺伝子・各々、同じ位置にＡおよびＴを有するＡ^-30／Ｔ^-20対立遺伝子に基づく。該変異性は、２個の対立遺伝子を区別する制限酵素の使用によって証明され得る(図１３)。例として：・関連する領域におけるＧ^-30／Ｃ^-20対立遺伝子にのみ切断部位を有するＢｐｌＩ酵素（該部位は両方の可変位置を含む）・関連する領域におけるＡ^-30／Ｔ^-20対立遺伝子にのみ切断部位を有するＳｔｙＩ酵素１）ＰＣＲによるエキソン２のゲノム増幅重合反応は、実施例ＶＩＩＩ．３に記載の条件で最終５０μｌ中、精製されたゲノムＤＮＡの５００ｎｇを用いて行う。プライマー対は、以下の位置：である。反応は、実施例ＶＩＩＩ．３に記載のように３０サイクルで行う。 S-400上で過剰なプライマーを除去およびP10カラム上で脱塩後、１μｌの試料を同じ条件下で、以下のプライマー対：を用いて再度２５サイクル増幅する。増幅産物を１％アガロースゲル上での電気泳動に処する(図１９−Ａ)。２）制限酵素ＳｔｙＩでの消化試料を予めP10カラムで脱塩し、次いで制限酵素ＳｔｙＩ（BRL15442-015）を用いて、以下の組成：５０ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ８、１００ｍＭＮａＣｌ、１０ｍＭＭｇＣｌ₂のバッファー中３７℃にて３０分間消化する。消化産物を１％アガロースゲル上での電気泳動（ＴＡＥバッファー）によって分析する。エチジウムブロミド染色によって視覚化を行う(図１９−Ｂ)。４８２塩基対のバンドは、Ｇ^-30／Ｃ^-20対立遺伝子を特徴付ける(図１３および１９)。３７６塩基対のバンドおよび１０６塩基対のバンドの存在は、Ａ^-30／Ｔ^-20対立遺伝子（ＳｔｙＩ切断部位を有する対立遺伝子）を特徴付ける。１０人の集団にて、２人はＧ^-30／Ｃ^-20およびＡ^-30／Ｔ^-20対立遺伝子を示し、他の８人はＧ^-30／Ｃ^-20対立遺伝子を有するホモ接合体である。９人の新たな集団の研究は、３人のヘテロ接合体がＧ^-30／Ｃ^-20およびＡ^-30／Ｔ^-20対立遺伝子を示し、他の６人がＧ^-30／Ｃ^-20対立遺伝子に関してホモ接合体であることを証明した。実施例ＸＩＩ SR-p70ｃＤＮＡでのトランスフェクションによるSK-N-AS系統の形質転換の復帰試験使用される発現ベクターは実施例ＩＩ．５に記載されており、図１５において図式で示される。使用される方法は、Grahamら（Virology1973，54，2，536-539 ）によって記載されたいわゆるリン酸カルシウム法である。該系統を５ｍｌの実施例Ｉ．１に記載の培地中５ｘ１０⁵細胞／皿６ｃｍ直径の群に接種する。細胞を３７℃にて、５％ＣＯ₂で一晩培養する。トランスフェクション培地を以下の方法：順に、１ｍｌのＨＥＢＳバッファー(８ｍｇ／ｍｌＮａＣｌ、３７０μ ｇ／ｍｌＫＣｌ、１２５μｇ／ｍｌＮａ₂ＨＰＯ₄・２Ｈ₂Ｏ、１ｍｇ／ｍｌデキストロース、５ｍｇ／ｍｌＨｅｐｅｓｐＨ７．０５)、１０μｇのトランスフェクトされるべきプラスミドおよび滴下で５０μｌの２．５ＭＣａＣｌ₂ を加えることによって、混合物を調製するにおいて調製する。トランスフェクション培地を室温にて３０分間放置し、次いで培養皿中に含まれた培地に滴下する。細胞を３７℃／５％ＣＯ₂にて５〜６時間インキュベートする。培地を吸引後、２％の胎児ウシ血清を含有する新たな培地の５ｍｌを加える。３７℃／５％ＣＯ₂にて４８時間後、細胞をＰＢＳでリンスし、トリプシン処理によって分離し、１０ｍｌの培養培地（５％胎児ウシ血清）中に希釈し、直径１０ｃｍの皿に播く(希釈はトランスフェクションの能率にしたがって調整する)。さらに１０時間（細胞が付着する時間）培養後、細胞を最終濃度６００μｇ／ｍｌジェネティシン等量にてG148を加えることによって１５〜２０日間、選択に処する(培地は毎日取り替える)。次いで、得られたクローンをＰＢＳでリンスし、７０％エタノール中で固定し、乾燥し、１％クリスタルバイオレットで染色し、次いでカウントする。４プラスミドトランスフェクションが全く同一に行われた： -挿入断片なしのプラスミドpCDNA3 -ヒトSR-p70aｃＤＮＡを含むプラスミドpCDNA3/SR-p70 ‐p53のＤＮＡ-結合ドメインにおける突然変異２７３（Ｒ→Ｈ）に類似する２９３ＡＡ位置での突然変異（Ｒ→Ｈ）を有するSR-p70acＤＮＡを含むプラスミド pCDNA3/SR-p70Mut ‐プラスミド無しの対照。結果は、皿あたりのクローン数として表す。プラスミドpCDNA3/SR-p70でのトランスフェクションによって得られたクローンの数は、対照pCDNA3で得られたクローン数より２５倍少なく、pCDNA3/SR-p70M utで得られたクローン数より９倍少なく、SR-p70ｃＤＮＡでトランスフェクトした細胞の細胞分裂の死滅率または阻止を示す。該結果は、突然変異したSR-p70ｃＤＮＡで得られたクローンを考慮して毒性の結果ではないが、p53タンパク質に関して証明されたように、おそらくアポトーシスの結果である(Koshlandet al. ，1993，262，1953-1981)。実施例ＸＩＩＩ SR-p70タンパク質の生物学的役割 p53のＤＮＡ-結合ドメインとSR-p70タンパク質の中央領域の間の構造的ホモロジーは、SR-p7Oが転写因子であることを推断させる(図１および２参照)。実際、 p53（３９３アミノ酸）は、数個の機能的ドメインよりなる。Ｎ−末端領域（１ −９１アミノ酸）は、転写の活性化に関連し、異なる細胞性およびウイルス性タンパク質との相互反応のための部位を含む。中央部分（アミノ酸９２〜２９２）は、特定の遺伝子のプロモーター領域に位置する特異的ＤＮＡ配列への結合を可能にし(p53を不活性にする大部分の点突然変異は、該領域に位置される)、また、その活性を阻害するウイルス性タンパク質との相互作用のための非常に多くの部位を有する。最後に、p53の少なくとも１００個のアミノ酸は、そのオリゴマー化ならびに後者のレギュレーションの原因となる(Hainaut P.，Current O pinion in Oncology，1995，7，76-82；Prokocimer M.，Blood，1994，84 No.8, 2391-2411)。 p53およびSR-p70の間の配列ホモロジーは、特にＤＮＡとの相互作用において直接関係のあるアミノ酸に関して有意であり、SR-p70がＤＮΛ上のp53部位に結合することを示す。これらのアミノ酸は、非常に正確に「ホットスポット(hot s pots)」と称されるアミノ酸、ヒト腫瘍においてしばしば突然変異されるアミノ酸に相当する(SWISS PROT：SW：p53_human and Prokocimer M.，Blood,1994,84N o．8，2391-2411)。該ホモロジーから、SR-p70タンパク質が、後者とは無関係に p53によって、またはそれとともにヘテロオリゴマーを形成することによって調節された遺伝子の活性に対する制御を行うことが推定され得る。それゆえ、p53様、SR-p70遺伝子の産物は、サイクルを終了させる（直ちにまたは永久に）細胞サイクルの制御およびレギュレーション、およびＤＮＡ修復、分化または細胞死のごときプログラムの手段に関連するにちがいない。「p53-様」活性の存在の見込みは、電離放射線に応じるＤＮＡ修復および細胞死の活性の p53/マウスにおける証明によって、強く感じられた(Strasser et al.，Cell，19 94，79，329-339)。本発明の発明者らは、染色体１の短いアーム（arm）のテロメア領域において、ヒトSR-p70遺伝子を正確に1p36.2-36.3、神経芽腫および他の型の腫瘍（黒色腫および肉腫）の大部分にありがちな最小の欠失領域（ＳＲＯ）に位置決定した(White et al.，PNAS，1995，92，5520-5524)。ヘテロ接合性の喪失領域（ＬＯＨ）は、その活性の喪失が腫瘍形成の原因であると考えられる腫瘍-抑制遺伝子の位置を決定する。また、該領域が「母方のインプリンテイング(maternal imprinting)」;（母方対立遺伝子が、好ましくは、1p36欠失を有する神経芽腫において失われている(N-Mycの増幅無しに)）に従属することを思い出すことが重要である(Caron et al.，Hum．Mol．Gen.，1995，4，535-539)。神経芽腫細胞に組み込まれ、そこで発現された幅広い型のSR-p70遺伝子は、それらの形質転換の復帰を可能にする。したがって、該抗-腫瘍形成活性の喪失は、腫瘍の発達に関係する。1p36領域は、マウス染色体４の末端セグメントと同系のホモロジーを有する。該領域において、カーリー尾部（ｃｔ）遺伝子（Beier et al.，Mamnlalian Genome，1995，6，269-272)は、神経管の先天的奇形（NTM：脊椎破裂、無脳症など）に関係した。ｃｔマウスは、これらの奇形を研究するための最も良い動物モデルである。これらの奇形は細胞増殖の異常が原因であるとされている。SR-p70遺伝子の性質およびその染色体位置決定を考慮すると、仮定の１つは、SR-p7Oがｃｔのヒト相同物であり、これに基づいて、該遺伝子に影響を及ぼす初期の突然変異の欠失および染色体異常が、例えば、応用として、危険な状態のヒトの同定（ＮＴＭによって影響される新生児の０．５−１％）および予防処理の手段を可能にすることである(Neumann et al.，Nature Genentics，1994，6，357-362；Di Vinci et al.，Int．J．Ca ncer，1994，59，422-426；Moll et al.，PNAS，1995，92，4407-4411；Chen et al.，Development，1995，121，681-691)。実施例ＸＩＶ SR-p70遺伝子の対立遺伝子研究ＧＣおよびＡＴ対立遺伝子は、エキソン２のＰＣＲ産物のＳｔｙＩ切断によって容易に同定される(実施例ＸＩ参照)。したがって、該方法で、混入する健康な組織の存在にもかかわらず、ＧＣ／ＡＴヘテロ接合体において神経芽腫腫瘍、SR -p70対立遺伝子（ＧＣまたはＡＴ）の喪失を有する個体を決定することが可能であった。驚くべきことに、同じ分析をＲＮＡで行うと、１つの対立遺伝子が欠失の存在または別の方法に無関係に、まだ驚くべきことに、健康な組織の存在のにもかかわらず証明される。これは、インプリント（２個の対立遺伝子の異なる発現）も混入組織に存在するであろうことを示す。これを証明するために、同じ分析を健康なＧＣ／ＡＴヘテロ接合個体の血液細胞から生じるＲＮＡで繰り返した。また、転写産物の２つの型のうちたった１つがこれらの細胞において検出された。該結果は、SR-p70遺伝子のための全身の遺伝子インプリントの存在に関して腫瘍試料で行われた観察を確認する。活性SR-p70対立遺伝子を不活性化する１つのときどき起こる突然変異は、活性の喪失を生じ、これは潜在的に全組織で起こるであろうことが仮定されるので、該発見の含蓄は重要である。 SR-p70の生物学的機能における正確なデータが存在しないことは、細胞に関するSR-p70活性の喪失の結果を測定できなくする。それにもかかわらず、p53腫瘍抑制タンパク質との強いホモロジー、ならびにSR-p70がP21^Wafプロモーターを利用できる転写因子であることの証明は、細胞サイクルの制御および分化における該タンパク質の役割を示す。 KnudsonおよびMeadows，1980（New Eng．J．Med．302：1254-56）は、IV-S神経芽腫を通常の分化を妨害する突然変異を有する神経冠由来の非-悪性細胞の集合物であると考えている。 SR-p70活性の喪失、細胞サイクルに対するp53制御の喪失が異数体、増幅（神経芽腫の場合に記載された）および細胞形質転換を引き起こすことのできる他の遺伝認識のごとき細胞の異常の出現を助力することが考えられる(Livingstone e t al.，1992，Cell 71:923-25；Yin et al.，1992，Cell72:937-48；Cross et a l.，1995，Science 267:1353-56；Fukusawa et al.，1996，Science 271:1744-4 7)。したがって、神経芽腫は、本来SR-p70の活性の一時的または恒久的な喪失から生じ、それにより腫瘍形成事象の発生およびしたがって腫瘍進行を助力し得る。 Bjegel et al.,1993（Am．J．Hum．Genet．52:176-82)によって記載された1p3 6構成上の欠失の場合、IV-S神経芽腫は本当に起こり、影響される遺伝子はNBS-1 （SR-p70）である。結論として、神経芽腫に関して記載されることは、また他の型の腫瘍、特に、染色体１の短いアームの末端の再編成に関連するものにも応用し得る(Report２ international workshop on human chr l mapping 1995，Cytogenetics and Cell Genet．72:113−154)。治療的見地から、腫瘍の発生におけるSR-p70のかかわりは、突然変異誘発性試薬の産物による細胞形質転換の危険性を考慮に入れて、化学治療における突然変異誘発性試薬の使用の回避および、これらの産物よりはむしろ、分化を刺激する非−突然変異誘発性物質の使用へ導くであろう。さらに、ＧＣおよびＡＴ突然変異の発生頻度は、以下のようである：集団において、頻度（ＡＴ）＝０．１５、および２５（神経芽腫）患者の試料、Ｆ（ＡＴ）＝０．３０。これらの統計は、ＡＴ対立遺伝子が素因を作る因子であり得ることを示す。

【手続補正書】【提出日】平成１０年９月１６日（１９９８．９．１６）【補正内容】（Ｉ）明細書（１）第４頁１１行、１５行および１６行、各々、「別法でのスプライシング」とあるを、「可変スプライシング」と補正する。（２）第５頁９〜１０行、「隣接する配列」とあるを、「近位配列」と補正する。（３）第１５頁１３行、「活性素因」とあるを、「活性成分」と補正する。（４）第２２頁１７行、「別法のスプライシング」とあるを、「可変スプライシング」と補正する。（ＩＩ）請求の範囲別紙の通り。（別紙）補正した請求の範囲１．ａ）配列番号２の配列；ｂ）配列番号４の配列；ｃ）配列番号６の配列；ｄ）配列番号８の配列；ｅ）配列番号10の配列；ｆ）配列番号13の配列；ｇ）配列番号15の配列；ｈ）配列番号17の配列；ｉ）配列番号19の配列；およびｊ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番１０、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７または配列番号１９から由来のいずれかの生物学的に活性な配列よりなる群から選択されたアミノ酸配列を含む精製されたポリペプチド。２．配列番号６、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７および配列番号１９よりなる群から選択されたアミノ酸配列を含むことを特徴とする請求項１記載のポリペプチド。３．配列番号２または６の残基１１０〜残基３１０；配列番号８の残基６０〜残基２６０に位置する配列を含むことを特徴とする請求項１記載のポリペプチド。４．対応する遺伝子のメッセンジャーＲＮＡの可変スプライシングから生じることを特徴とする請求項１記載のポリペプチド。５．融合タンパク質の形態で製造される組換えポリペプチドであることを特徴とする、＿請求項１〜４のいずれか１項記載のポリペプチド。６．＿請求項１〜５のいずれか１項記載のボリペプチドをコードする単離された核酸配列。７．請求項６記載の単離された核酸配列であって：ａ）配列番号１の配列；ｂ）配列番号３の配列；ｃ）配列番号５の配列；ｄ）配列番号７の配列；ｅ）配列番号９の配列，ｆ）配列番号１１の配列；ｇ）配列番号１２の配列；ｈ）配列番号１４の配列，ｉ）配列番号１６の配列；ｊ）配列番号１８の配列；ｋ）配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６もしくは配列番号１８の配列またはそれらに相補的な配列と特異的にハイブリダイズする、あるいはそれらの近位配列と特異的にハイブリダイズすることができる核酸配列；およびｌ）遺伝コードの縮重、突然変異、欠失、挿入、および可変スプライシングまたは対立遺伝子変異性により、配列ａ)、ｂ)、ｃ)、ｄ)、ｅ)、ｆ)、ｇ)、ｈ)、ｉ)、ｊ)またはｋ)から得られた配列よりなる群から選択されることを特徴とする核酸配列。８．請求項６記載の核酸配列であって、各々、配列番号６、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７および配列番号１９の配列のポリペプチドをコードする配列番号５、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６および配列番号１８から選択される配列であることを特徴とする核酸配列。９．請求項６〜８のいずれか１項記載の核酸配列を含むクローニングおよび／または発現ベクター。１０．プラスミドpSE1であることを特徴とする請求項９記載のベクター。１１．請求項９または１０記載のベクターによってトランスフェクトされた宿主細胞。１２．イー・コリMC 1061であることを特徴とする請求項１１記載のトランスフェクトされた宿主細胞。１３．請求項６〜８記載の配列またはそれらに相補的な配列または対応するメッセンジャーＲＮＡまたは対応する遺伝子のうちいずれか１つと、ストリンジェントな条件下で特異的にハイブリダイズすることを特徴とする、ヌクレオチドプローブまたはヌクレオチドプライマー。１４．少なくとも１６個のヌクレオチドを含むことを特徴とする請求項１３記載のプローブまたはプライマー。１５．請求項１３記載のプローブまたはプライマーであって、請求項１のポリペプチドの１つをコードする遺伝子の配列の全てを含むことを特徴とするプローブまたはプライマー。１６．で示されるオリゴヌクレオチドまたはそれらに相補的な配列よりなる群から選択されるヌクレオチドプローブまたはプライマー。１７．請求項６〜８のいずれか１項記載の配列を用いることを特徴とする、配列決定反応あるいはＰＣＲ技法またはそのいずれかの変法による特異的増幅反応用のオリゴヌクレオチドプライマーの製造方法。１８．以下の配列：よりなる群から選択されたプライマーからなることを特徴とするヌクレオチドプライマー対。１９．＿請求項６〜８のいずれか１項記載の配列を含む遺伝子治療用医薬組成物。２０．請求項６〜８のいずれか１項記載の配列を用いることを特徴とする、診断用ヌクレオチドプローブまたはプライマー、あるいは遺伝子治療用アンチセンス配列の製造方法。２１．＿請求項１７の方法により製造されたヌクレオチドプライマーを用いることを特徴とする配列決定方法。２２．請求項１３〜１６のいずれか１項記載のプローブまたはプライマーを使用することを特徴とするハイブリダイゼーション実験による生物学的試料における請求項１〜４のいずれか１項記載のポリペプチドをコードする核酸配列の検出方法、または異常型の合成もしくは遺伝子異常の証明のためのイン・ビトロ＿診断方法。２３．請求項１〜４のいずれか１項記載のポリペプチドをコードする核酸配列における異常型の合成または遺伝子異常の検出のためのイン・ビトロ＿診断方法であって：適当には前記のヌクレオチド配列の増幅の前工程後に、請求項１３〜１６のいずれか１項記載のヌクレオチドプローブと前記のヌクレオチド配列との間のハイブリダイゼーション複合体の形成を可能にする条件下で、該プローブを生物学的試料へ接触させること；おそらく形成されるハイブリダイゼーション複合体の検出；適当には、本発明のプローブとハイブリダイゼーション複合体を形成するヌクレオチド配列の配列決定を含むことを特徴とする方法。２４．請求項６〜８のいずれか１項記載の核酸配列を用いることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項記載の組換えポリペプチドの製造方法。２５．組換えSR-p70タンパク質の製造方法であって、請求項１１または１２に記載のトランスフェクト細胞を、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７または配列番号１９の配列またはいずれかの生物学的に活性なフラグメントもしくは誘導体の組換えポリペプチドの発現を可能にする条件下で培養すること、および該組換えポリペプチドを回収することを特徴とする方法。２６．請求項１〜４のいずれか１項記載のポリペプチドを特異的に認識できることを特徴とする、モノ−またはポリクローナル抗体またはそれらのフラグメント、キメラ抗体またはイムノコンジュゲート。２７．＿請求項２６記載の抗体を用いることを特徴とする、生物学的試料における請求項１〜４のいずれか１項記載のポリペプチドの精製または検出方法。２８．生物学的試料由来のSR-p70タンパク質の発現または異常な蓄積に相関する病状、特に発癌現象のイン・ビトロでの診断方法であって、請求項２６記載の少なくとも１つの抗体を、SR-p70タンパク質と該抗体または複数の抗体間の特異的免疫学的複合体の可能な形成をさせる条件下で該生物学的試料に接触させること、およびおそらく形成される特異的免疫学的複合体を検出することを特徴とする方法。２９．生物学的試料においてSR-p70タンパク質の発現または異常な蓄積をイン・ビトロで診断するための、および／または該試料においてこれらのタンパク質の発現レベルを測定するためのキットであって：支持体に結合されていてもよい、請求項２６記載の少なくとも１つの抗体 SR -p70タンパク質と該抗体間の特異的抗原-抗体複合体の形成の視覚化方法、および／またはこれらの複合体の定量方法を含むキット。３０．腫瘍形成の初期診断方法であって、支持体に結合されていてもよい本発明のポリペプチドと個体から得られた血清試料中におそらく存在する自己抗体間の特異的免疫学的複合体の形成を可能にする条件下で、血清試料を該ポリペプチドに接触させることよりなる工程によって、SR-p70タンパク質に向けられた自己抗体を個体から得られた血清試料において証明すること、およびおそらく形成される特異的免疫学的複合体を検出することを特徴とする方法。３１．対立遺伝子変異性、突然変異、欠失、挿入、ヘテロ接合性の喪失または SR-p70遺伝子の遺伝子異常の決定方法であって、請求項６〜８のいずれか１項記載の少なくとも１つのヌクレオチド配列を利用することを特徴とする方法。３２．病理に関連し得るエキソン２の開始ＡＴＧに関して−３０および−２０位置でのSR-p70遺伝子の対立遺伝子変異性の決定方法であって、少なくとも：標的配列を有するSR-p70遺伝子のエキソン２を請求項６〜８のいずれか１項記載のオリゴヌクレオチドプライマー対を用いるＰＣＲによって増幅する間の工程；切断部位が目的の対立遺伝子に対応する制限酵素で増幅産物を処理する間の工程；酵素反応の産物の少なくとも１つを検出またはアッセイする間の工程を含むことを特徴とする方法。３３．請求項１〜４のいずれか１項記載のポリペプチドを活性成分として含む医薬組成物。３４．請求項２記載のポリペプチドを含むことを特徴とする＿請求項３３記載の医薬組成物。３５．SR-p70活性の阻害剤または活性剤を含有する医薬組成物。３６．請求項１〜５のいずれか１項記載のポリペプチドから由来のポリペプチドを含有する医薬組成物であって、SR-p70の阻害剤または活性剤であることを特徴とする医薬組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 35/00 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ０７Ｋ 14/47 16/18 16/18 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｐ 21/02 21/08 21/08 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ

Claims

【特許請求の範囲】１．ａ）配列番号２の配列；ｂ）配列番号４の配列；ｃ）配列番号６の配列；ｄ）配列番号８の配列；ｅ）配列番号１０の配列；ｆ）配列番号１３の配列；ｇ）配列番号１５の配列；ｈ）配列番号１７の配列；ｉ）配列番号１９の配列；およびｊ）配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７または配列番号１９から由来のいずれかの生物学的に活性な配列よりなる群から選択されたアミノ酸配列を含む精製されたペプチド。２．配列番号６、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７および配列番号１９よりなる群から選択されたアミノ酸配列を含むことを特徴とする請求項１記載のポリペプチド。３．‐配列番号２または６の残基１１０〜残基３１０； ‐配列番号８の残基６０〜残基２６０に位置する配列を含むことを特徴とする請求項１記載のポリペプチド。４．対応する遺伝子のメッセンジャーＲＮＡの別法でのスプライシングの結果生じることを特徴とする請求項１記載のポリペプチド。５．融合タンパク質の形態で製造される組換えポリペプチドであることを特徴とする、前記の請求項のいずれか１項記載のポリペプチド。６．前記の請求項のいずれか１項記載のポリペプチドをコードする単離された核酸配列。７．請求項６記載の単離された核酸配列であって：ａ）配列番号１の配列；ｂ）配列番号３の配列；ｃ）配列番号５の配列；ｄ）配列番号７の配列；ｅ）配列番号９の配列；ｆ）配列番号１１の配列；ｇ）配列番号１２の配列；ｈ）配列番号１４の配列；ｉ）配列番号１６の配列；ｊ）配列番号１８の配列；ｋ）配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６もしくは配列番号１８の配列またはそれらに相補的な配列と特異的にハイブリダイズする、あるいはそれらの隣接する配列と特異的にハイブリダイズすることができる核酸配列；およびｌ）遺伝コードの縮重、突然変異、欠失、挿入、および別法のスプライシングまたは対立遺伝子変異性の結果として、配列ａ)、ｂ)、ｃ)、ｄ)、ｅ)、ｆ) 、ｇ)、ｈ)、ｉ)、ｊ）またはｋ）から得られた配列よりなる群から選択されることを特徴とする核酸配列。８．請求項６記載の核酸配列であって、各々、配列番号６、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７および配列番号１９の配列のポリペプチドをコードする配列番号５、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６および配列番号１８から選択される配列であることを特徴とする核酸配列。９．請求項６〜８のいずれか１項記載の核酸配列を含むコーディングおよび／または発現ベクター。１０．プラスミドpSE1であることを特徴とする請求項９記載のベクター。１１．請求項９または１０記載のベクターによてトランスフェクトされた宿主細胞。１２．イー・コリMC 1061であることを特徴とする請求項１１記載のトランスフェクトされた宿主細胞。１３．請求項６〜８記載の配列またはそれらに相補的な配列または対応するメッセンジャーＲＮＡまたは対応する遺伝子のうちいずれか１つと、ストリンジェントな条件下で特異的にハイブリダイズすることを特徴とする、ヌクレオチドプローブまたはヌクレオチドプライマー。１４．少なくとも１６個のヌクレオチドを含むことを特徴とする請求項１３記載のプローブまたはプライマー。１５．請求項１３記載のプローブまたはプライマーであつて、請求項１のポリペプチドの１つをコードする遺伝子の配列の全てを含むことを特徴とするプローブまたはプライマー。１６．で示されるオリゴヌクレオチドまたはそれらに相補的な配列よりなる群から選択されるヌクレオチドプローブまたはプライマー。１７．請求項６〜８のいずれか１項記載の配列の使用であって、配列決定反応あるいはＰＣＲ技法またはそのいずれかの変法による特異的増幅反応のためのオリゴヌクレオチドプライマーの製造に関する使用。１８．以下の配列：よりなる群から選択されたプライマーを含むことを特徴とするヌクレオチドプライマー対。１９．遺伝子治療に使用できる請求項６〜８のいずれか１項記載の配列の使用。２０．請求項６〜８のいずれか１項記載の配列の使用であって、診断上のヌクレオチドプローブまたはプライマー、あるいは遺伝子治療に使用できるアンチセンス配列の製造に関する使用。２１．配列決定に関する請求項６〜８のいずれか１項記載のヌクレオチドプライマーの使用。２２．請求項１３〜１６のいずれか１項記載のプローブまたはプラィマーの使用であって、ハイブリダイゼーション実験による生物学的試料における請求項１〜４のいずれか１項記載のポリペプチドをコードする核酸配列の検出のための、または異常型の合成もしくは遺伝子異常の証明のためのイン・ビトロでの診断道具としての使用。２３．請求項１〜４のいずれか１項記載のポリペプチドをコードする核酸配列における異常型の合成または遺伝子異常の検出のためのイン・ビトロでの診断方法であって： ‐適当には前記のヌクレオチド配列の増幅の前工程後に、請求項１３〜１６のいずれか１項記載のヌクレオチドプローブと前記のヌクレオチド配列との間のハイブリダイゼーション複合体の形成を可能にする条件下で、該プローブを生物学的試料へ接触させること； ‐おそらく形成されるハイブリダイゼーション複合体の検出； ‐適当には、本発明のプローブとハィブリダイゼーション複合体を形成するヌクレオチド配列の配列決定を含むことを特徴とする方法。２４．請求項６〜８のいずれか１項記載の核酸配列の使用であって、請求項１〜５のいずれか１項記載の組換えポリペプチドの製造に関する使用。２５．組換えSR-p70タンパク質の製造方法であって、請求項１０または１１に記載のトランスフェクト細胞を、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７または配列番号１９の配列またはいずれかの生物学的に活性なフラグメントもしくは誘導体の組換えポリペプチドの発現を可能にする条件下で培養すること、および該組換えポリペプチドを回収することを特徴とする方法。２６．請求項１〜４のいずれか１項記載のポリペプチドを特異的に認識できることを特徴とする、モノ−またはポリクローナル抗体またはそれらのフラグメント、キメラ抗体またはイムノコンジュゲート。２７．前記の請求項記載の抗体の使用であって、生物学的試料において請求項１〜４のいずれか１項記載のポリペプチドの精製または検出に関する使用。２８．生物学的試料由来のSR-p70タンパク質の発現または異常な蓄積に相関する病状、特に発癌現象のイン・ビトロでの診断方法であって、請求項２５記載の少なくとも１つの抗体を、SR-p70タンパク質と該抗体または複数の抗体間の特異的免疫学的複合体の可能な形成を可能にする条件下で該生物学的試料に接触させること、およびおそらく形成される特異的免疫学的複合体を検出することを特徴とする方法。２９．生物学的試料においてSR-p70タンパク質の発現または異常な蓄積をイン・ビトロで診断するための、および／または該試料においてこれらのタンパク質の発現レベルを測定するためのキットであって： ‐支持体に結合されていてもよい、請求項２５記載の少なくとも１つの抗体 ‐SR-p70タンパク質と該抗体間の特異的抗原-抗体複合体の形成の視覚化方法、および／またはこれらの複合体の定量方法を含むキット。３０．腫瘍形成の初期診断方法であって、支持体に結合されていてもよい本発明のポリペプチドと個体から得られた血清試料中におそらく存在する自己抗体間の特異的免疫学的複合体の形成を可能にする条件下で、血清試料を該ポリペプチドに接触させることよりなる工程によつて、SR-p70タンパク質に向けられた自己抗体を個体から得られた血清試料において証明すること、およびおそらく形成される特異的免疫学的複合体を検出することを特徴とする方法。３１．対立遺伝子変異性、突然変異、欠失、挿入、ヘテロ接合性の喪失または SR-p70遺伝子の遺伝子異常の決定方法であって、請求項６〜８のいずれか１項記載の少なくとも１つのヌクレオチド配列を利用することを特徴とする方法。３２．病状を伴い得るエキソン２の開始ＡＴＧに関して−３０および−２０位置でのSR-p70遺伝子の対立遺伝子変異性の決定方法であって、少なくとも： ‐標的配列を有するSR-p70遺伝子のエキソン２を請求項６〜８のいずれか１項記載のオリゴヌクレオチドプライマー対を用いるＰＣＲによって増幅する間の工程； ‐切断部位が目的の対立遺伝子に対応する制限酵素で増幅産物を処理する間の工程； ‐酵素反応の産物の少なくとも１つを検出またはアッセイする間の工程を含むことを特徴とする方法。３３．請求項１〜４のいずれか１項記載のポリペプチドを活性素因として含む医薬組成物。３４．請求項２記載のポリペプチドを含むことを特徴とする前記の請求項記載の医薬組成物。３５．SR-p70活性の阻害剤または活性剤を含有する医薬組成物。３６．請求項１〜５のいずれか１項記載のポリペプチドから由来のポリペプチドを含有する医薬組成物であって、SR-p70の阻害剤または活性剤であることを特徴とする医薬組成物。