JP2002281987A - Ｓｂｐｅｒｒ４ポリペプチドおよびポリヌクレオチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】 SBPERR4ポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ドを提供する。 【解決手段】 特定のアミノ酸配列に対して少なくとも
９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるSBPE
RR4ポリペプチド、および特定のヌクレオチド配列に対
して少なくとも９２％の同一性を有するヌクレオチド配
列を含んでなるSBPERR4ポリヌクレオチド。SBPERR4ポリ
ペプチドおよびポリヌクレオチドは骨粗しょう症、乳
癌、視覚喪失症および他の視覚障害を含む機能障害また
は疾病の治療と、このような疾病の診断アッセイに有用
である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリペプチド、該ポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチド、該ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの治療
の際のまたは治療に有効でありうるアゴニスト、アンタ
ゴニストおよび／またはインヒビターである化合物を同
定する際の使用、並びに該ポリペプチドおよびポリヌク
レオチドの生産方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】薬物探索プロセスには目下根本的な大変
化が生じている。というのは、それが「機能的ゲノム
学」(functional genomics) 、すなわち高処理量のゲノ
ムまたは遺伝子ベースの生物学に及んでいるからであ
る。このアプローチは「ポジショナルクローニング」に
基づいた比較的初期のアプローチに急速に取って代わり
つつある。表現型、つまり生物学的機能または遺伝病、
が同定され、続いてその遺伝子地図の位置を手がかりと
して病因遺伝子が突き止められるだろう。機能的ゲノム
学は、現在入手できる多くの分子生物学データベースか
ら興味のもてそうな遺伝子配列を同定するための生物情
報科学(bioinformatics)の様々なツールに大きく依存し
ている。依然として、まだ未解明の遺伝子およびその関
連ポリペプチド／タンパク質を薬物探索の標的として同
定し特性づける必要性が存在している。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、SBPERR4、
特にSBPERR4ポリペプチドおよびSBPERR4ポリヌクレオチ
ド、組換え物質、並びにその生産方法に関する。もう一
つの態様において、本発明は、とりわけ、骨粗しょう
症、乳癌、視覚喪失症および脳回転状萎縮(gyrate atro
phy)を含む他の視覚障害（以後まとめて「前記疾患」と
いう）の治療をはじめとする、前記ポリペプチドおよび
ポリヌクレオチドの使用方法に関する。他の態様では、
本発明は、本発明により提供される物質を用いてアゴニ
ストおよびアンタゴニスト／インヒビターを同定する方
法、並びに同定された化合物を用いてSBPERR4平衡異常
と関連した症状を治療することに関する。さらに他の態
様において、本発明は不適当なSBPERR4活性またはSBPER
R4レベルと関連した疾病を検出するための診断アッセイ
に関する。

【０００４】

【課題を解決するための手段】一つの態様において、本
発明はSBPERR4ポリペプチドに関する。この種のペプチ
ドには、配列番号２のアミノ酸配列に対して、配列番号
２の全長にわたり、少なくとも９７％の同一性、好まし
くは少なくとも９８〜９９％の同一性を有するアミノ酸
配列を含んでなる単離されたポリペプチドが含まれる。
こうしたポリペプチドとしては配列番号２のアミノ酸配
列を含むものがある。

【０００５】本発明の他のペプチドには、そのアミノ酸
配列が配列番号２のアミノ酸配列に対して、配列番号２
の全長にわたり、少なくとも９７％の同一性、好ましく
は少なくとも９８〜９９％の同一性を有する単離された
ポリペプチドが含まれる。こうしたポリペプチドとして
は配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあ
る。本発明の更なるペプチドには、配列番号１に含まれ
るヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチドによ
りコードされる単離されたポリペプチドが含まれる。

【０００６】本発明のポリペプチドはエストロゲン受容
体関連タンパク質ファミリーのメンバーであると考えら
れる。それゆえ、それらには興味がもてる。なぜなら、
エストロゲン受容体関連タンパク質は、その活性が内分
泌またはパラ分泌リガンドにより調節される転写因子で
あると思われるからである。ERR2は応答エレメントに結
合することが知られており、したがって、エストロゲン
受容体の機能に関連したまたは部分的に一致した機能を
有する。エストロゲンのレベルは骨粗しょう症や乳癌を
含めた種々の疾病状態において関係があるとされてき
た。エストロゲンはまた、様々な組織のオルニチン-δ-
アミノトランスフェラーゼ（ＯＡＴ）のレベルの増加と
も関連している。ＯＡＴの遺伝的欠損症はオルニチンの
蓄積をもたらし、盲目症である脳回転状網膜脈絡膜萎縮
を引き起こす。眼で発現されたエストロゲン受容体関連
タンパク質は網膜中のＯＡＴおよび他の遺伝子の候補調
節物質である。ERR2は胎盤発生に係わっており、ERR2を
欠くマウスは胎盤発生がひどく損なわれ、発生10.5日目
に死亡する。これらの特性を以後「SBPERR4活性」また
は「SBPERR4ポリペプチド活性」または「SBPERR4の生物
学的活性」という。これらの活性の中には、前記SBPERR
4ポリペプチドの抗原性および免疫原性、特に配列番号
２のポリペプチドの抗原性および免疫原性も含まれる。
本発明のポリペプチドはSBPERR4の少なくとも１つの生
物学的活性を示すことが好ましい。

【０００７】本発明のポリペプチドは「成熟」タンパク
質の形であっても、融合タンパク質のような、より大き
いタンパク質の一部であってもよい。しばしば、追加の
アミノ酸配列を含めることが有利であり、このようなア
ミノ酸配列としては、分泌すなわちリーダー配列、プロ
配列、多重ヒスチジン残基のような精製に役立つ配列、
または組換え生産の間の安定性を確保する付加的配列な
どがある。

【０００８】また、前記ポリペプチドの変異体、すなわ
ち同類アミノ酸置換（ある残基が性質の似ている他の残
基により置換される）により基準ポリペプチドと相違し
ているポリペプチドも本発明に含まれる。典型的なこう
した置換は、Ala, Val, Leuおよび Ileの間；Ser とThr
の間；酸性残基 AspとGlu の間；Asn とGln の間；塩
基性残基 LysとArg の間；または芳香族残基 PheとTyr
の間で起こる。特に、数個、５〜１０個、１〜５個、１
〜３個、１〜２個または１個のアミノ酸が任意の組合せ
で置換、欠失または付加されている変異体が好適であ
る。

【０００９】本発明のポリペプチドは任意の適当な方法
で製造することができる。このようなポリペプチドに
は、単離された天然のポリペプチド、組換え的に生産さ
れたポリペプチド、合成的に製造されたポリペプチド、
またはこれらの方法の組合せにより製造されたポリペプ
チドが含まれる。こうしたポリペプチドを製造するため
の手段は当業界でよく理解されている。

【００１０】本発明の更なる態様において、本発明は、
SBPERR4ポリヌクレオチドに関する。このようなポリヌ
クレオチドには、配列番号２の全長にわたる配列番号２
のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の同一性を有
するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含ん
でなる単離されたポリヌクレオチドがある。これに関し
て、少なくとも９８〜９９％の同一性を有するものが非
常に好ましく、少なくとも９９％の同一性を有するポリ
ペプチドが最も好ましいものである。かかるポリヌクレ
オチドとして、配列番号２のポリペプチドをコードする
配列番号１に含まれるヌクレオチド配列からなるポリヌ
クレオチドが挙げられる。

【００１１】本発明の更なるポリヌクレオチドには、配
列番号２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列
に対して、その全コード領域にわたって、少なくとも９
２％の同一性、好ましくは少なくとも９５％の同一性を
有するヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリヌ
クレオチドが含まれる。これに関して、少なくとも９７
％の同一性を有するポリヌクレオチドが一層好ましい
が、少なくとも９８〜９９％の同一性を有するものがよ
り一層好ましく、少なくとも９９％の同一性を有するポ
リヌクレオチドが最も好ましいものである。

【００１２】本発明の更なるポリヌクレオチドには、配
列番号１の全長にわたる配列番号１のポリヌクレオチド
に対して少なくとも９２％の同一性、好ましくは少なく
とも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列を含んで
なる単離されたポリヌクレオチドが含まれる。これに関
して、少なくとも９７％の同一性を有するポリヌクレオ
チドが一層好ましいが、少なくとも９８〜９９％の同一
性を有するものがより一層好ましく、少なくとも９９％
の同一性を有するポリヌクレオチドが最も好ましいもの
である。かかるポリヌクレオチドとして、配列番号１の
ポリヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドおよび
配列番号１のポリヌクレオチドが挙げられる。本発明は
また、上記の全てのポリヌクレオチドに対して相補的な
ポリヌクレオチドを提供する。

【００１３】配列番号１のヌクレオチド配列はステロイ
ドホルモン受容体hERR2(Giguere, Vら, Nature 331: 91
-94, 1988)のヒトｍＲＮＡとの相同性を示す。配列番号
１のヌクレオチド配列はｃＤＮＡ配列であり、５０８個
のアミノ酸からなる配列番号２のポリペプチドをコード
するポリペプチドコード配列（ヌクレオチド２１６−１
７３９）を含む。配列番号２のポリペプチドをコードす
るヌクレオチド配列は、配列番号１に含まれるポリペプ
チドコード配列と同一であっても、遺伝子コードの重複
性（縮重）のため、やはり配列番号２のポリペプチドを
コードする、配列番号１に含まれる配列以外の配列であ
ってもよい。配列番号２のポリペプチドはエストロゲン
受容体関連タンパク質ファミリーの他のタンパク質と構
造的に関連しており、ヒトステロイドホルモン受容体hE
RR2(Giguere, Vら, Nature 331:91-94, 1988)との相同
性および／または構造類似性を有する。

【００１４】本発明の好適なポリペプチドおよびポリヌ
クレオチドは、とりわけ、それと相同なポリペプチドお
よびポリヌクレオチドと同様の生物学的機能／性質をも
つことが期待される。さらに、本発明の好ましいポリペ
プチドおよびポリヌクレオチドは少なくとも１つのSBPE
RR4活性を有する。

【００１５】また、本発明は、配列番号１および配列番
号２の対応する全長配列の決定に先立って最初に同定さ
れた部分的なまたは他のポリヌクレオチドおよびポリペ
プチドに関する。したがって、更なる態様において、本
発明は、(a) 配列番号３のヌクレオチド配列に対して、
配列番号３の全長にわたり、少なくとも９０％の同一
性、好ましくは少なくとも９５％の同一性、より好まし
くは少なくとも９７〜９９％の同一性を有するヌクレオ
チド配列を含んでなるポリヌクレオチド、(b) 配列番号
３のヌクレオチド配列に対して、配列番号３の全長にわ
たり、少なくとも９０％の同一性、好ましくは少なくと
も９５％の同一性、より好ましくは少なくとも９７〜９
９％の同一性を有するヌクレオチド配列をもつポリヌク
レオチド、(c) 配列番号３のヌクレオチド配列からなる
ポリヌクレオチド、または(d) 配列番号４のアミノ酸配
列に対して、配列番号４の全長にわたり、少なくとも９
０％の同一性、好ましくは少なくとも９５％の同一性、
より好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性を有す
るポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んで
なるポリヌクレオチド、を提供する。

【００１６】本発明はさらに、(a) 配列番号４のアミノ
酸配列に対して、配列番号４の全長にわたり、少なくと
も９０％の同一性、好ましくは少なくとも９５％の同一
性、より好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性を
有するアミノ酸配列を含んでなるポリペプチド、(b) 配
列番号４のアミノ酸配列に対して、配列番号４の全長に
わたり、少なくとも９０％の同一性、好ましくは少なく
とも９５％の同一性、より好ましくは少なくとも９７〜
９９％の同一性を有するアミノ酸配列をもつポリペプチ
ド、(c) 配列番号４のアミノ酸配列を含んでなるポリペ
プチド、および(d) 配列番号４のアミノ酸配列からなる
ポリペプチド、ならびに配列番号３に含まれるヌクレオ
チド配列からなるポリヌクレオチドによりコードされる
ポリペプチドを提供する。

【００１７】配列番号３のヌクレオチド配列およびそれ
によりコードされるペプチド配列はエクスプレスド・シ
ーケンス・タグ（Expressed Sequence Tag：ＥＳＴ）配
列から誘導される。当業者であれば、ＥＳＴ配列中に若
干のヌクレオチド配列読み取り誤差が必然的に存在する
ことを理解するであろう（Adams, M.D.ら, Nature 377
(supp)3, 1995を参照のこと）。したがって、配列番号
３のヌクレオチド配列およびそれによりコードされるペ
プチド配列は配列精度において同一の固有の限界を受け
る。さらに、配列番号３によりコードされるペプチド
は、最も相同性または構造類似性が高いタンパク質と同
一の領域または高い相同性および／または高い構造類似
性（例えば、同類アミノ酸の差異）の領域を含む。

【００１８】本発明のポリヌクレオチドは、標準的なク
ローニングおよびスクリーニングにより、ヒト網膜また
は精巣の細胞中のｍＲＮＡから誘導されたｃＤＮＡライ
ブラリーから、ＥＳＴ分析（Adams, M.D.ら, Science
(1991) 252:1651-1656; Adams, M.D.ら, Nature (1992)
355:632-634; Adams, M.D.ら, Nature (1995) 377Sup
p:3-174）を用いて得ることができる。また、本発明の
ポリヌクレオチドはゲノムＤＮＡライブラリーのような
天然源から得ることができ、商業的に入手可能な公知の
技法を用いて合成することもできる。

【００１９】本発明のポリヌクレオチドを本発明のポリ
ペプチドの組換え体生産のために用いる場合、そのポリ
ヌクレオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列単
独、または他のコード配列（例えば、リーダーもしくは
分泌配列、プレ−、プロ−もしくはプレプロ−タンパク
質配列、または他の融合ペプチド部分をコードするも
の）と同じリーディングフレーム内にある成熟ポリペプ
チドのコード配列が含まれる。例えば、融合ポリペプチ
ドの精製を容易にするマーカー配列がコードされ得る。
本発明のこの態様の好ましい具体例として、マーカー配
列は、ｐＱＥベクター(Qiagen, Inc.)により提供されか
つ Gentzら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1989) 86:8
21-824に記載されるような、ヘキサ−ヒスチジンペプチ
ド、またはＨＡタグである。また、このポリヌクレオチ
ドは5'および3'非コード配列、例えば、転写されるが翻
訳されない配列、スプライシングおよびポリアデニル化
シグナル、リボソーム結合部位、およびｍＲＮＡ安定化
配列を含んでいてもよい。

【００２０】本発明の更なる具体例としては、数個、例
えば５〜１０個、１〜５個、１〜３個、１〜２個、また
は１個のアミノ酸残基が任意の組合せで置換、欠失また
は付加されている、配列番号２のアミノ酸配列を含んで
なるポリペプチド変異体をコードするポリヌクレオチド
がある。

【００２１】配列番号１に含まれるヌクレオチド配列と
同一であるか十分に同一であるポリヌクレオチドは、本
発明のポリペプチドをコードする全長ｃＤＮＡおよびゲ
ノムクローンを単離するために、また、配列番号１に対
して高い配列類似性を有する他の遺伝子（ヒト由来のパ
ラログ体およびヒト以外の種に由来するパラログ体とオ
ーソログ体(ortholog)をコードする遺伝子を含む）のｃ
ＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するために、ｃＤＮ
ＡおよびゲノムＤＮＡ用のハイブリダイゼーションプロ
ーブとして、または核酸増幅（ＰＣＲ）反応用のプライ
マーとして用いることができる。一般的に、これらのヌ
クレオチド配列は基準のヌクレオチド配列に対して７０
％、好ましくは８０％、より好ましくは９０％、最も好
ましくは９５％同一である。プローブまたはプライマー
はたいてい１５個以上のヌクレオチドを含み、好ましく
は３０個以上を含み、５０個以上のヌクレオチドを有し
ていてもよい。特に好ましいプローブは３０〜５０個の
範囲のヌクレオチドを有するものである。特に好ましい
プライマーは２０〜２５個の範囲のヌクレオチドを有す
るものである。

【００２２】本発明のポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチド（ヒト以外の種に由来する相同体を含む）
は、配列番号１のヌクレオチド配列またはその断片を有
する標識プローブを用いて、ストリンジェントなハイブ
リダイゼーション条件下で適当なライブラリーをスクリ
ーニングし、該ポリヌクレオチド配列を含む全長ｃＤＮ
Ａおよびゲノムクローンを単離する各工程を含んでなる
方法により得られる。このようなハイブリダイゼーショ
ン技法は当業者に公知である。好ましいストリンジェン
トなハイブリダイゼーション条件は、50% ホルムアミ
ド、５×SSC (150mMNaCl, 15mM クエン酸三ナトリウム)
、50mMリン酸ナトリウム (pH7.6)、５×Denhardt溶
液、10% デキストラン硫酸および20μg/mlの変性し剪断
したサケ精子ＤＮＡを含有する溶液中４２℃で一夜イン
キュベートし、次いでフィルターを 0.1×SSC 中約６５
℃で洗浄することを含む。かくして、本発明は、配列番
号１のヌクレオチド配列またはその断片を有する標識プ
ローブを用いて、ストリンジェントなハイブリダイゼー
ション条件下で適当なライブラリーをスクリーニングす
ることにより得られるポリヌクレオチドをも包含する。

【００２３】当業者には理解されるように、多くの場
合、ポリペプチドをコードする領域がそのｃＤＮＡの5'
末端で短く切断されることから、単離されたｃＤＮＡ配
列は不完全であるだろう。それは逆転写酵素のためであ
り、この酵素はもともと「プロセシビティ」（processi
vity：重合反応中に鋳型に結合した状態でいる該酵素の
能力の尺度）が低く、第一鎖ｃＤＮＡ合成の間にｍＲＮ
Ａ鋳型のＤＮＡコピーを完成させることができない。

【００２４】全長ｃＤＮＡを得るための、または短鎖ｃ
ＤＮＡを伸長させるための、当業者に公知で利用可能な
方法がいくつかあり、例えば、ｃＤＮＡ末端高速増幅法
（ＲＡＣＥ）に基づいた方法がある（例えば、Frohman
ら, PNAS USA 85, 8998-9002,1988を参照のこと）。例
えばMarathonＴＭ技術(Clontech Laboratories Inc.)に
より示されるような、上記技法の最近の改良により、よ
り長いｃＤＮＡの検索が大いに簡便化された。Marathon
ＴＭ技術では、所定の組織より抽出されたｍＲＮＡから
ｃＤＮＡを作製し、各末端に「アダプター」配列を連結
する。続いて、遺伝子特異的およびアダプター特異的な
オリゴヌクレオチドプライマーの組合せを用いて核酸増
幅（ＰＣＲ）を行い、ｃＤＮＡの「欠失」5'末端を増幅
する。次に、「nested」プライマー、すなわち増幅産物
の内部にアニールするように設計されたプライマー（典
型的には、アダプター配列のさらに3'側にアニールする
アダプター特異的プライマーおよび既知遺伝子配列のさ
らに5'側にアニールする遺伝子特異的プライマー）を用
いてＰＣＲ反応を繰り返す。その後、この反応の産物を
ＤＮＡ塩基配列決定により解析し、この産物を既存のｃ
ＤＮＡに直接結合するか、または5'プライマー設計用の
新たな配列情報を用いて別の全長ＰＣＲを行うことによ
り、全長ｃＤＮＡを構築することができる。

【００２５】本発明の組換え体ポリペプチドは、当業界
で公知の方法を用いて、発現系を含有する遺伝子操作宿
主細胞から生産することができる。したがって、更なる
態様において、本発明は、本発明の１以上のポリヌクレ
オチドを含有する発現系、該発現系により遺伝子操作さ
れた宿主細胞、および組換え法による本発明ポリペプチ
ドの生産に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導され
たＲＮＡを用いてこの種のタンパク質を生産するため
に、無細胞翻訳系を使用することもできる。

【００２６】組換え体生産に関しては、本発明のポリヌ
クレオチドの発現系またはその一部を組み込むために宿
主細胞を遺伝子操作する。宿主細胞へのポリヌクレオチ
ドの導入は、Davisら, Basic Methods in Molecular Bi
ology (1986) および Sambrookら, Molecular Cloning:
A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor
Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)
などの多くの標準的な実験室マニュアルに記載された方
法により行うことができる。好適なこうした方法とし
て、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、
ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、ト
ランスベクション(transvection)、マイクロインジェク
ション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エ
レクトロポレーション、形質導入、スクレープローディ
ング(scrape loading)、弾丸導入(ballistic introduct
ion)または感染などがある。

【００２７】適当な宿主の代表的な例として、細菌細胞
（例：ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、大腸
菌、ストレプトミセス、枯草菌）、真菌細胞（例：酵
母、アスペルギルス）、昆虫細胞（例：ドロソフィラＳ
２、スポドプテラＳｆ９）、動物細胞（例：ＣＨＯ、Ｃ
ＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ 127、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ 29
3、Bowes メラノーマ細胞）および植物細胞が挙げられ
る。

【００２８】多種多様な発現系を使用することができ
る。こうした発現系として、特に、染色体、エピソーム
およびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由
来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵
母エピソーム由来、挿入因子由来、酵母染色体エレメン
ト由来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ４０の
ようなパポバウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウ
イルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レトロウ
イルス）由来のベクター、およびこれらの組合せに由来
するベクター、例えば、コスミドやファージミドのよう
なプラスミドとバクテリオファージの遺伝的要素に由来
するものがある。これらの発現系は発現を起こさせるだ
けでなく発現を調節する制御配列を含んでいてもよい。
一般的に、宿主内でのポリペプチドの産生のためにポリ
ヌクレオチドを維持し、増やし、発現することができる
系またはベクターはどれも使用しうる。Sambrookら, Mo
lecular Cloning: A Laboratory Manual (前掲) に記載
されるような、日常的に用いられる公知の技法のいずれ
かにより、適当なヌクレオチド配列を発現系に挿入する
ことができる。翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔
に、細胞周辺腔に、または細胞外の環境に分泌させるた
めに、適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに組み
込むことができる。これらのシグナルは目的のポリペプ
チドに対して内因性であっても、異種シグナルであって
もよい。

【００２９】スクリーニングアッセイで使用するため本
発明のポリペプチドを発現させようとする場合、一般に
そのポリペプチドを細胞の表面に産生させることが好適
である。その場合は、スクリーニングアッセイでの使用
に先立って細胞を回収する。該ポリペプチドが培地に分
泌される場合は、そのポリペプチドを回収し精製するた
めに培地を回収する。細胞内に産生される場合は、その
細胞をまず溶解し、その後にポリペプチドを回収する必
要がある。

【００３０】組換え細胞培養物から本発明のポリペプチ
ドを回収し精製するには、硫酸アンモニウムまたはエタ
ノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロ
マトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィ
ー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含め
た公知の方法を用いることができる。最も好ましくは、
高性能液体クロマトグラフィーが精製に用いられる。ポ
リペプチドが細胞内合成、単離および／または精製中に
変性されるときは、タンパク質を再生させるための公知
の技法を用いて、活性のあるコンフォメーションを復元
することが可能である。

【００３１】本発明はまた、診断薬としての本発明のポ
リヌクレオチドの使用に関する。機能障害と関連した、
配列番号１のポリヌクレオチドにより特徴づけられる遺
伝子の変異型の検出は、該遺伝子の過少発現、過剰発現
または空間的もしくは時間的に変化した発現により生ず
る疾病またはその疾病への罹りやすさの診断に追加しう
る、またはその診断を下しうる診断用ツールを提供する
だろう。該遺伝子に突然変異がある個体を、さまざまな
技法によりＤＮＡレベルで見つけ出すことができる。

【００３２】診断用の核酸は、被験者の細胞、例えば血
液、尿、唾液、組織の生検または剖検材料由来の細胞か
ら得ることができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接
使用してもよいし、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を
使ってゲノムＤＮＡを酵素的に増幅してもよい。同様の
方法でＲＮＡまたはｃＤＮＡを使用することもできる。
欠失および挿入突然変異は、正常な遺伝子型と比較した
ときの増幅産物のサイズの変化により検出できる。点突
然変異は増幅ＤＮＡを標識SBPERR4ヌクレオチド配列と
ハイブリダイズさせることで同定できる。完全にマッチ
した配列とミスマッチの二重鎖とはＲＮアーゼ消化によ
り、または融解温度の差異により区別できる。また、Ｄ
ＮＡ配列の差異は、変性剤を含むもしくは含まないゲル
でのＤＮＡ断片の電気泳動の移動度の変化により、また
は直接ＤＮＡ塩基配列決定によっても検出できる（例え
ば、Myersら, Science (1985) 230:1242 を参照のこ
と）。特定位置での配列変化はヌクレアーゼプロテクシ
ョンアッセイ（例えば、ＲＮアーゼおよびＳ１プロテク
ション）または化学的開裂法によっても確認できる（Co
ttonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1985) 85:4397-
4401を参照のこと）。別の実施態様では、例えば、遺伝
子変異の効率のよいスクリーニングを行うため、SBPERR
4ヌクレオチド配列またはその断片を含むオリゴヌクレ
オチドプローブのアレイ(array)を構築することができ
る。アレイ技法は公知で、一般的な適用可能性を有し、
遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性を含めた分
子遺伝学のさまざまな問題を解きあかすために用いられ
ている（例えば、M. Cheeら, Science, Vol.274, pp.61
0-613 (1996) を参照のこと）。

【００３３】診断アッセイは、前記の方法によりSBPERR
4遺伝子の突然変異を検出することで、前記疾患への罹
りやすさを診断または判定する方法を提供する。さら
に、被験者から得られたサンプルからポリペプチドまた
はｍＲＮＡのレベルの異常な低下または増加を測定する
方法により、前記疾患の診断を下すことができる。発現
の低下または増加は、当業界で公知のポリヌクレオチド
の定量法、例えば核酸増幅（例：ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣ
Ｒ）、ＲＮアーゼプロテクション、ノーザンブロッティ
ング、その他のハイブリダイゼーション法のいずれかに
よりＲＮＡレベルで測定することができる。宿主から得
られたサンプル中の本発明ポリペプチドのようなタンパ
ク質のレベルを測定するアッセイ法は当業者によく知ら
れている。こうしたアッセイ法として、ラジオイムノア
ッセイ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロット分析、
ＥＬＩＳＡアッセイなどがある。

【００３４】かくして、もう一つの態様において、本発
明は、(a) 本発明のポリヌクレオチド（好ましくは、配
列番号１のヌクレオチド配列）もしくはその断片、(b)
(a) のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、
(c) 本発明のポリペプチド（好ましくは、配列番号２の
ポリペプチド）もしくはその断片、または(d) 本発明の
ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチ
ド）に対する抗体、を含んでなる診断用キットに関す
る。このようなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) また
は (d)が実質的な構成成分であることが理解されよう。
かかるキットは疾患または疾患への罹りやすさ、特に骨
粗しょう症、乳癌、視覚喪失症、および脳回転状萎縮(g
yrate atrophy)を含む他の視覚障害を診断するうえで有
用である。

【００３５】また、本発明のヌクレオチド配列は染色体
の位置決定にも有用である。この配列は個々のヒト染色
体上の特定の位置をターゲッティングし、その特定位置
とハイブリダイズすることができる。本発明に従って関
連配列の染色体地図を作成することは、これらの配列と
遺伝子関連疾患とを相関させるうえで重要な第一段階で
ある。ひとたび配列が正確な染色体位置にマップされた
ら、その染色体上のその配列の物理的位置を遺伝地図デ
ータと相関させることができる。この種のデータは、例
えば、V. McKusick, Mendelian Inheritance in Man (J
ohns Hopkins University Welch Medical Library から
オンラインで入手可能) 中に見いだせる。その後、同一
の染色体領域にマップされた遺伝子と疾患との関係を連
鎖解析（物理的に隣接した遺伝子の共遺伝）により確認
する。

【００３６】罹患個体と非罹患個体とのｃＤＮＡまたは
ゲノム配列の差異も調べることができる。罹患個体の一
部または全部に突然変異が観察されるが、どの正常個体
にも観察されない場合は、その突然変異が疾患の原因で
ある可能性がある。

【００３７】本発明のヌクレオチド配列は組織の位置決
定にも有用である。かかる技術を用いると、ヒトSBPERR
4ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを検出することで
組織における該ポリペプチドの発現パターンを調べるこ
とができる。こうした技術として、in situ ハイブリダ
イゼーション法およびヌクレオチド増幅法（例えば、Ｐ
ＣＲ）があり、これらは当業者に公知である。かかる研
究から得られる結果はその生物における該ポリペプチド
の正常な機能の指標を与える。さらに、ヒトSBPERR4の
ｍＲＮＡの正常な発現パターンとヒトSBPERR4遺伝子に
よりコードされるｍＲＮＡの発現パターンとの比較研究
により、疾病における変異型ヒトSBPERR4ポリペプチド
の役割または正常なヒトSBPERR4ポリペプチドの不適切
な発現の役割を洞察することができる。こうした不適切
な発現は時間的、空間的または単に量的なものでありう
る。

【００３８】本発明のポリペプチド、その断片もしくは
類似体、またはそれらを発現する細胞は、本発明のポリ
ペプチドに免疫特異的な抗体を生産するための免疫原と
しても使用することができる。「免疫特異的」とは、そ
の抗体が従来技術における他の関連ポリペプチドに対す
るその親和性よりも本発明のポリペプチドに対して実質
的に高い親和性を示すことを意味する。

【００３９】本発明のポリペプチドに対する抗体は、慣
用のプロトコールを用いて、動物（好ましくはヒト以外
の動物）に該ポリペプチドまたはエピトープを含む断
片、類似体もしくは細胞を投与することにより得られ
る。モノクローナル抗体の調製には、連続細胞系の培養
物から抗体を産生させる任意の技法を用いることができ
る。例を挙げると、ハイブリドーマ法 (Kohler, G.およ
びMilstein, C., Nature (1975) 256:495-497)、トリオ
ーマ法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法 (Kozborら,Immun
ology Today (1983) 4:72) およびＥＢＶ−ハイブリド
ーマ法 (Coleら, Monoclonal Antibodies and Cancer T
herapy, pp.77-96, Alan R. Liss, Inc., 1985) などが
ある。

【００４０】本発明のポリペプチドに対する単鎖抗体を
つくるために、米国特許第4,946,778 号に記載されるよ
うな単鎖抗体の調製法を適応させることができる。ま
た、ヒト化抗体を発現させるために、トランスジェニッ
クマウスまたは他の哺乳動物を含む他の生物を利用する
ことができる。前記の抗体を用いて、そのポリペプチド
を発現するクローンを単離・同定したり、アフィニティ
ークロマトグラフィーでそのポリペプチドを精製するこ
ともできる。本発明のポリペプチドに対する抗体は、と
りわけ、前記疾患の治療に使用することができる。

【００４１】本発明の更なる態様において、本発明は、
本発明のポリペプチドまたはその断片と、各種サブクラ
ス（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）の免疫グロブリ
ンのＨ鎖またはＬ鎖の定常領域の様々な部分と、を含ん
でなる遺伝子工学的に作製された可溶性融合タンパク質
に関する。免疫グロブリンとしてはヒトＩｇＧ、特にＩ
ｇＧ１のＨ鎖の定常部が好ましく、その場合は融合がヒ
ンジ領域で起こる。特定例では、血液凝固因子Ｘａで開
裂され得る開裂配列を組み込むことで、Ｆｃ部分を簡単
に除去できる。さらに、本発明は、これら融合タンパク
質の遺伝子工学的作製方法、並びに薬物スクリーニン
グ、診断および治療におけるそれらの使用に関する。ま
た、本発明の更なる態様はこのような融合タンパク質を
コードするポリヌクレオチドに関する。融合タンパク質
技術の例は国際特許出願 WO94/29458 およびWO94/22914
に見いだせる。

【００４２】本発明の更なる態様は哺乳動物において免
疫学的応答を引き出す方法に関し、この方法は、特に前
記疾患から該動物を防御するための抗体および／または
Ｔ細胞免疫応答を生ずるのに十分な本発明のポリペプチ
ドを哺乳動物に接種することを含んでなる。本発明のさ
らに別の態様は、哺乳動物を前記疾患から防御する抗体
を産生させるような免疫学的応答を引き出すために、in
vivo で本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチドの発現を指令するベクターを介して該ポリペプチ
ドを供給することを含んでなる、哺乳動物において免疫
学的応答を引き出す方法に関する。

【００４３】本発明の更なる態様は、哺乳動物宿主に導
入したとき、その哺乳動物において本発明のポリペプチ
ドに対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチン
製剤（組成物）に関し、この組成物は本発明のポリペプ
チドまたはポリヌクレオチドを含有する。ワクチン製剤
は適当な担体をさらに含んでいてもよい。ポリペプチド
は胃の中で分解される可能性があるので、非経口的に
（例えば、皮下、筋肉内、静脈内または皮内注射によ
り）投与することが好ましい。非経口投与に適した製剤
としては、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤およびこの製剤
を受容者の血液と等張にする溶質を含みうる水性および
非水性の無菌注射液、並びに懸濁化剤または増粘剤を含
みうる水性および非水性の無菌懸濁液がある。こうした
製剤は１回量容器または数回量容器（例えば、密閉アン
プルおよびバイアル）で提供することができ、また、使
用直前に無菌の液状担体を添加するだけでよい凍結乾燥
状態で保管することもできる。ワクチン製剤はこの製剤
の免疫原性を増強するためのアジュバント系、例えば水
中油型のアジュバント系や当業界で公知の他のアジュバ
ント系を含んでいてもよい。投与量はワクチンの比活性
により変化するが、ルーチンな実験操作により簡単に決
定できる。

【００４４】本発明のポリペプチドは、多くの病的状
態、特に前記疾患を含めて、さまざまな生物学的機能に
関与している。それゆえ、このポリペプチドの機能を刺
激または抑制する化合物を同定するスクリーニング法を
開発することが望ましい。したがって、更なる態様にお
いて、本発明は、このポリペプチドを刺激または抑制す
る化合物を同定するための化合物のスクリーニング法を
提供する。一般的には、前記疾患の治療および予防目的
のためにアゴニストまたはアンタゴニストが使用され
る。種々の供給源、例えば、細胞、無細胞調製物、化学
物質ライブラリーおよび天然産物の混合物から化合物を
同定することができる。このように同定されたアゴニス
ト、アンタゴニストまたはインヒビターは、場合によ
り、該ポリペプチドの天然のまたは修飾された基質、リ
ガンド、受容体、酵素などであってよく、また、その構
造的または機能的なミメティックであってもよい（Coli
ganら,Current Protocols in Immunology 1(2): Chapte
r 5 (1991)を参照のこと）。

【００４５】スクリーニング法では、本発明のポリペプ
チド、または該ポリペプチドを担持する細胞もしくは
膜、またはその融合タンパク質への候補化合物の結合
を、候補化合物に直接または間接的に結合された標識を
用いて簡単に測定できる。あるいはまた、スクリーニン
グ法では標識した競合物質との競合を用いることもあ
る。さらに、こうしたスクリーニング法では、候補化合
物がポリペプチドの活性化または抑制により生ずるシグ
ナルを結果的にもたらすか否かを、該ポリペプチドを担
持する細胞に適した検出系を用いて試験することができ
る。一般的には、既知のアゴニストの存在下で活性化の
インヒビターをアッセイして、アゴニストによる活性化
に候補化合物の存在が与える影響を調べる。アゴニスト
またはインヒビターの不在下で、候補化合物がポリペプ
チドの活性化を抑制するか否かを調べることによる逆ア
ゴニストまたはインヒビターのスクリーニング法では、
構成的に活性のあるポリペプチドが用いられる。さら
に、これらのスクリーニング法は、候補化合物と本発明
のポリペプチドを含む溶液とを混ぜ合わせて混合物をつ
くり、この混合物中のSBPERR4活性を測定し、そしてこ
の混合物のSBPERR4活性をスタンダードと比較する各ス
テップを単に含むだけでよい。本発明のポリペプチドの
アンタゴニストを同定する高処理量スクリーニングアッ
セイでは、上記のようなＦｃ部分とSBPERR4ポリペプチ
ドから作製されるような融合タンパク質も使用すること
ができる(D. Bennettら, J. Mol. Recognition, 8:52-5
8 (1995) およびK. Johansonら, J. Biol. Chem., 270
(16):9459-9471 (1995)を参照のこと）。

【００４６】また、本発明のポリヌクレオチド、ポリペ
プチドまたは該ポリペプチドに対する抗体を用いて、細
胞内でのｍＲＮＡまたはポリペプチドの産生に及ぼす添
加化合物の作用を検出するためのスクリーニング法を組
み立てることができる。例えば、当業界で公知の標準方
法によりモノクローナルまたはポリクローナル抗体を用
いて、ポリペプチドの分泌レベルまたは細胞結合レベル
を測定するためのＥＬＩＳＡアッセイを構築することが
でき、これは適切に操作された細胞または組織からのポ
リペプチドの産生を抑制または増強する物質（それぞれ
アンタゴニストまたはアゴニストともいう）の探索に用
いることができる。

【００４７】膜に結合した受容体または可溶性の受容体
が存在するのであれば、当業界で公知の標準的な受容体
結合法によりこの種の受容体を同定するために本発明の
ポリペプチドを用いることができる。こうした受容体結
合法には、限定するものではないが、リガンド結合アッ
セイおよび架橋アッセイがあり、これらのアッセイで
は、ポリペプチドを放射性アイソトープ（例：１２５
I）で標識するか、化学的に修飾（例：ビオチン化）す
るか、または検出や精製に適したペプチド配列に融合さ
せ、そして推定上の受容体源（細胞、細胞膜、細胞上
清、組織抽出物、体液など）とインキュベートする。そ
の他の方法としては、表面プラズモン共鳴および分光学
のような生物物理的方法がある。これらのスクリーニン
グ法は、該ポリペプチドまたは（存在するのであれば）
その受容体への結合と競合する該ポリペプチドのアゴニ
ストまたはアンタゴニストを同定するために用いること
もできる。スクリーニングアッセイを行うための標準的
な方法は当業界でよく理解されている。

【００４８】本発明のポリペプチドの潜在的なアンタゴ
ニストの例としては、抗体、ある場合には、該ポリペプ
チドのリガンド、基質、受容体、酵素などと密接な関係
があるタンパク質（例えば、リガンド、基質、受容体、
酵素などの断片）もしくはオリゴヌクレオチド、または
本発明のポリペプチドと結合するが応答を誘導しない
（それゆえ該ポリペプチドの活性を妨げる）小分子など
がある。

【００４９】かくして、他の態様において、本発明は、
本発明のポリペプチドのアゴニスト、アンタゴニスト、
リガンド、受容体、基質、酵素など、またはこの種のポ
リペプチドの産生を低下または増加させる化合物を同定
するためのスクリーニングキットに関し、このキット
は、(a) 本発明のポリペプチド、(b) 本発明のポリペプ
チドを発現している組換え細胞、(c) 本発明のポリペプ
チドを発現している細胞膜、または(d) 本発明のポリペ
プチドに対する抗体、を含んでなり、前記ポリペプチド
は好ましくは配列番号２のポリペプチドである。このよ
うなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) または (d)が実
質的な構成成分であることが理解されよう。

【００５０】当業者であれば、本発明のポリペプチド
は、その構造に基づいて該ポリペプチドのアゴニスト、
アンタゴニストまたはインヒビターを設計する方法にも
使用できることが容易に理解されよう。この方法は、
(a) 最初に該ポリペプチドの三次元構造を解析し、(b)
アゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターの確実
と思われる反応部位または結合部位の三次元構造を想定
し、(c) 想定された反応部位または結合部位と結合また
は反応すると予想される候補化合物を合成し、そして
(d) その候補化合物が実際にアゴニスト、アンタゴニス
トまたはインヒビターであるか否かを調べる、ことを含
んでなる。これは通常、反復プロセスであることがさら
に理解されよう。

【００５１】更なる態様において、本発明は、SBPERR4
ポリペプチド活性の過剰量と不足量のいずれかに関係し
た、例えば、骨粗しょう症、乳癌、視覚喪失症、および
脳回転状萎縮(gyrate atrophy)を含む他の視覚障害など
の異常な状態の治療法を提供する。

【００５２】該ポリペプチドの活性が過剰である場合
は、いくつかのアプローチが利用可能である。一つのア
プローチは、例えば、リガンド、基質、受容体、酵素な
どの結合をブロックすることにより、または第２のシグ
ナルを抑制することで異常な状態を軽減することによ
り、該ポリペプチドの機能を抑制するのに有効な量で、
上記のインヒビター化合物（アンタゴニスト）を製剤学
上許容される担体とともに患者に投与することを含んで
なる。もう一つのアプローチでは、内因性のポリペプチ
ドとの競合状態でリガンド、基質、酵素、受容体などと
結合する能力がまだある可溶性形態のポリペプチドを投
与することができる。このような競合物質の典型的な例
はSBPERR4ポリペプチドの断片である。

【００５３】さらに別のアプローチでは、発現阻止法を
使って内因性SBPERR4ポリペプチドをコードする遺伝子
の発現を抑制することができる。こうした公知技術は、
体内で産生されるか別個に投与されるアンチセンス配列
の使用を必要とする（例えば、Oligodeoxynucleotides
as Antisense Inhibitors of Gene Expression (遺伝子
発現のアンチセンスインヒビターとしてのオリゴデオキ
シヌクレオチド), CRCPress, Boca Raton, FL (1988)
中のO'Connor, J. Neurochem (1991) 56:560を参照のこ
と）。あるいはまた、この遺伝子と共に三重らせん（ト
リプレックス）を形成するオリゴヌクレオチドを供給す
ることもできる（例えば、Leeら, Nucleic Acids Res
(1979) 6:3073; Cooneyら, Science (1988) 241:456; D
ervanら,Science (1991) 251:1360 を参照のこと）。こ
れらのオリゴマーはそれ自体を投与することもできる
し、関連オリゴマーをin vivo で発現させることもでき
る。合成アンチセンスまたはトリプレックスオリゴヌク
レオチドは修飾塩基または修飾骨格を含んでいてもよ
い。後者の例にはメチルホスホネート、ホスホロチオエ
ートまたはペプチド核酸骨格が含まれる。このような骨
格はヌクレアーゼによる分解から保護するためにアンチ
センスまたはトリプレックスオリゴヌクレオチド中に組
み込まれ、当技術分野で公知である。これらのまたは他
の修飾骨格を用いて合成されたアンチセンスおよびトリ
プレックス分子も本発明の一部を構成する。

【００５４】さらに、ヒトSBPERR4ポリペプチドの発現
は、ヒトSBPERR4 ｍＲＮＡ配列に特異的なリボザイムを
用いることにより防止することができる。リボザイムは
触媒活性のあるＲＮＡであり、天然または合成のものが
ある（例えば、Usman, N.ら,Curr. Opin. Struct. Bio
l. (1996) 6(4), 527-33 を参照のこと）。合成リボザ
イムは所定の位置でヒトSBPERR4 ｍＲＮＡを特異的に切
断して、ヒトSBPERR4ｍＲＮＡの機能性ポリペプチドへ
の翻訳を妨害するように設計しうる。リボザイムはＲＮ
Ａ分子中に通常見られるような天然のリボースホスフェ
ート骨格と天然の塩基を用いて合成することができる。
あるいはまた、非天然骨格をもつように合成して（例え
ば、2'-O-メチルＲＮＡ）リボヌクレアーゼ分解から保
護してもよく、修飾塩基を含んでいてもよい。

【００５５】SBPERR4およびその活性の過少発現に関係
した異常な状態を治療する場合も、いくつかのアプロー
チを取ることができる。一つのアプローチは、治療に有
効な量の本発明ポリペプチドを活性化する化合物（すな
わち、前記アゴニスト）を製剤学上許容される担体とと
もに患者に投与して、異常な状態を緩和することを含ん
でなる。別法として、患者の関連細胞においてSBPERR4
を内因的に産生させるために遺伝子治療を用いることが
できる。例えば、上で述べたような複製欠損レトロウイ
ルスベクターによる発現のために本発明のポリヌクレオ
チドを遺伝子操作する。次にレトロウイルス発現構築物
を単離し、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを
含有するレトロウイルスプラスミドベクターで形質導入
されたパッケージング細胞に導入する。その結果、パッ
ケージング細胞は対象の遺伝子を含有する感染性のウイ
ルス粒子を産生するようになる。in vivo 細胞操作およ
びin vivo ポリペプチド発現のために、これらのプロデ
ューサー細胞を患者に投与する。遺伝子治療の概論に関
しては、Human Molecular Genetics, T Strachan and A
P Read, BIOS Scientific Publishers Ltd (1996)中の
Chapter 20, Gene Therapy and other Molecular Genet
ic-based Therapeutic Approaches(およびその中の引用
文献) を参照のこと。もう一つのアプローチは治療量の
本発明のポリペプチドを適当な製剤学上の担体とともに
投与することである。

【００５６】更なる態様において、本発明は、治療に有
効な量のポリペプチド（例えば、可溶性形態の本発明ポ
リペプチド）、アゴニストもしくはアンタゴニストペプ
チド、または小分子化合物を製剤学上許容される担体ま
たは賦形剤と共に含有する医薬組成物を提供する。この
種の担体としては、食塩水、生理食塩水、デキストロー
ス、水、グリセロール、エタノール、およびこれらの組
合せがあるが、これらに限らない。本発明はさらに、上
記の本発明組成物の１以上の成分を充填した１以上の容
器を含んでなる医薬パックおよびキットに関する。本発
明のポリペプチドおよび他の化合物は単独で使用して
も、他の化合物、例えば治療用化合物と一緒に使用して
もよい。

【００５７】医薬組成物は投与経路、例えば全身または
経口による投与経路に適合させることができる。全身投
与に適した形態は、注入（注射）、典型的には静注であ
る。皮下、筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も
使用できる。全身投与の別の手段には、胆汁酸塩、フシ
ジン酸、その他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経粘
膜および経皮投与がある。さらに、本発明のポリペプチ
ドまたは他の化合物を腸溶剤またはカプセル剤として製
剤化し得るのであれば、経口投与も可能である。これら
の化合物を軟膏、ペースト、ゲルなどの剤形で局所に投
与しても、かつ／または局在化させてもよい。

【００５８】必要な投与量範囲は、本発明のペプチドま
たは他の化合物の選択、投与経路、製剤の性質、患者の
状態、そして医師の判断に左右される。しかし、適当な
投与量は患者の体重１kgあたり0.1〜100μgの範囲であ
る。入手可能な化合物が多様であること、投与経路の効
率が異なることを考慮すれば、必要とされる投与量は広
範に変動することが予測される。例えば、経口投与は静
注による投与よりも高い投与量を必要とすると予想され
よう。こうした投与量レベルの変動は、当業界でよく理
解されているような、標準的経験的な最適化手順を用い
て調整することができる。

【００５９】治療に用いるポリペプチドは、上述したよ
うな「遺伝子治療」と称する治療法において、患者の体
内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞
を、ポリペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡのよ
うなポリヌクレオチドにより、例えばレトロウイルスプ
ラスミドベクターを用いて、ex vivo で遺伝子工学的に
操作する。その後、これらの細胞を患者に導入する。

【００６０】ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの配
列は、類似の相同性を有する別の配列を同定する際の価
値ある情報源を提供する。これは、こうした配列をコン
ピュータ読み取り可能媒体中に保存し、次に保存したデ
ータを用いてＧＣＧまたはLasergeneソフトウェアパッ
ケージにおけるような公知の検索ツールにより配列デー
タベースを検索することで最大限促進される。したがっ
て、更なる態様において、本発明は、配列番号１の配列
を含んでなるポリヌクレオチドおよび／またはそれによ
りコードされるポリペプチドを保存したコンピュータ読
み取り可能媒体を提供する。

【００６１】以下の定義は上記の説明中でしばしば用い
られた用語を理解しやすくするためのものである。本明
細書中で用いる「抗体」には、ポリクローナルおよびモ
ノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、ヒト化抗
体、さらにＦａｂまたは他の免疫グロブリン発現ライブ
ラリーの産物を含むＦａｂフラグメントが含まれる。
「単離された」とは、天然の状態から「人間の手によっ
て」改変されたことを意味する。「単離された」組成物
または物質が天然に存在するのであれば、それはそのも
との環境から変化しているか分離されており、またはそ
の両方である。例えば、生存している動物の体内に自然
界で存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは
「単離された」ものではないが、その天然状態の共存物
質から分離されたポリヌクレオチドまたはポリペプチド
は、本明細書中で用いられるように、「単離された」も
のである。

【００６２】「ポリヌクレオチド」とは、一般に任意の
ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオ
チドをさし、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤ
ＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得
る。「ポリヌクレオチド」には、制限するものではない
が、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、
一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡ
とＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも、または
より典型的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったものでもよい）が含まれる。加えて、
「ポリヌクレオチド」はＲＮＡまたはＤＮＡまたはＲＮ
ＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポ
リヌクレオチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩
基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性または
他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたは
ＲＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチ
ル化された塩基およびイノシンのような特殊な塩基があ
る。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾を行う
ことができる。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自
然界に一般的に存在するポリヌクレオチドの化学的、酵
素的または代謝的に修飾された形態、並びにウイルスお
よび細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を
包含する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオ
リゴヌクレオチドと称される比較的短いポリヌクレオチ
ドも包含する。

【００６３】「ポリペプチド」とは、ペプチド結合また
は修飾されたペプチド結合（すなわち、ペプチドアイソ
スター）により連結された２個以上のアミノ酸を含むペ
プチドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプチド」
は短鎖（通常はペプチド、オリゴペプチドまたはオリゴ
マーという）と長鎖（一般的にはタンパク質という）の
両方をさす。ポリペプチドは２０種類の遺伝子コード化
アミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。「ポリペプチ
ド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプロセス
で、または当業界で公知の化学的修飾法のいずれかで修
飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾は基本的
な教科書、より詳細な学術論文および研究文献に詳述さ
れている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側鎖、アミノ
またはカルボキシル末端を含めてポリペプチドのどこで
も行うことができる。同じタイプの修飾が所定のポリペ
プチドのいくつかの部位に同程度でまたはさまざまに異
なる程度で存在してもよい。また、所定のポリペプチド
が多くのタイプの修飾を含んでいてもよい。ポリペプチ
ドはユビキチン化のために分枝していても、分枝のある
又はない環状であってもよい。環状の、分枝した、また
は分枝した環状のポリペプチドは翻訳後の天然プロセス
から生じることがあり、また、合成法によって製造する
こともできる。修飾としては、アセチル化、アシル化、
ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、
ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド
誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、
ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、
ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有結合架橋の
形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形成、ホル
ミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩア
ンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミ
リストイル化、酸化、タンパク質分解プロセシング、リ
ン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸
化、アルギニル化のようなタンパク質へのアミノ酸の転
移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化などがある（例えば、
Proteins - Structure and Molecular Properties 2nd
Ed., T.E. Creighton, W.H. Freeman and Company, Ne
w York, 1993; Posttranslational Covalent Modificat
ion of Proteins, B.C. Johnson編, Academic Press, N
ew York,1983中のWold, F., Post-translational Prote
in Modifications: Perspectives and Prospects, pgs.
1-12; Seifterら, “Analysis for protein modificat
ions and nonprotein cofactors", Meth Enzymol (199
0) 182:626-646; および Rattanら, “Protein Synthes
is: Post-translational Modifications and Aging", A
nn NY Acad Sci (1992) 663:48-62 を参照のこと）。

【００６４】本明細書中で用いる「変異体」とは、基準
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、不
可欠な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変
異体は基準ポリヌクレオチドとヌクレオチド配列の点で
相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、基
準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド
のアミノ酸配列を変更しても、しなくてもよい。ヌクレ
オチドの変化は、以下で述べるように、基準配列により
コードされるポリペプチドのアミノ酸の置換、欠失、付
加、融合および末端切断（トランケーション）をもたら
しうる。典型的なポリペプチドの変異体は基準ポリペプ
チドとアミノ酸配列の点で相違する。一般的には、基準
ポリペプチドの配列と変異体の配列が全般的によく類似
しており、多くの領域で同一となるような相違に限られ
る。変異体と基準ポリペプチドは任意に組み合わせた１
以上の置換、欠失、付加によりアミノ酸配列が相違して
いてよい。置換または付加されるアミノ酸残基は遺伝子
コードによりコードされるものであっても、なくてもよ
い。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変異体はア
レル変異体のように天然に存在するものでも、天然に存
在することが知られていない変異体であってもよい。ポ
リヌクレオチドおよびポリペプチドの天然に存在しない
変異体は、突然変異誘発法または直接合成により作製す
ることができる。

【００６５】当技術分野で知られた「同一性」とは、ポ
リペプチド配列またはポリヌクレオチド配列の比較によ
り決定された、２以上のかかる配列間の関係のことであ
る。当技術分野ではまた、「同一性」はポリペプチド配
列またはポリヌクレオチド配列の鎖間のマッチ(match)
により決定された、このような配列間の配列関係の程度
を意味する。「同一性」および「類似性」は公知の方法
により難なく算出することができ、こうした方法とし
て、例えば Computational Molecular Biology,Lesk,
A.M.編, Oxford University Press, New York, 1988; B
iocomputing: Informatics and Genome Projects, Smit
h, D.W. 編, Academic Press, New York,1993; Compute
r Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M.
and Griffin, H.G. 編, Humana Press, New Jersey, 1
994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von H
einje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis
Primer, Gribskov, M. and Devereux, J. 編, M Stock
ton Press, New York, 1991;および Carillo, H. and L
ipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988)
に記載された方法があるが、これらに限らない。同一性
を決定するための好ましい方法は、検討する配列間で最
大級のマッチが得られるように設計される。さらに、同
一性および類似性を決定する方法は一般に入手可能なコ
ンピュータプログラムに編集されている。２配列間の同
一性および類似性を決定する好適なコンピュータプログ
ラム法としては、ＧＣＧプログラムパッケージ (Devere
ux, J.ら, Nucleic Acids Research 12(1):387 (198
4))、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮおよびＦＡＳＴＡ (A
tschul, S.F.ら, J. Molec. Biol. 215:403-410 (199
0))があるが、これらに限らない。ＢＬＡＳＴ Ｘプログ
ラムはＮＣＢＩおよび他のソースから一般に入手可能で
ある (BLAST Manual, Altschul, S.ら, NCBI NLM NIH B
ethesda, MD 20894; Altschul, S.ら, J. Mol. Biol. 2
15: 403-410 (1990))。公知のSmith Watermanアルゴリ
ズムも同一性の決定に使用することができる。

【００６６】ポリペプチド配列を比較するための好適な
パラメーターは次のものを含む： １）アルゴリズム：Needleman and Wunsch, J. Mol. Bi
ol. 48: 443-453 (1970)； 比較マトリックス：BLOSSU
M62 、Hentikoff and Hentikoff, Proc. Natl. Acad. S
ci. USA, 89: 10915-10919 (1992) ギャップペナルティー：１２ ギャップ長ペナルティー：４ これらのパラメーターと共に役に立つプログラムは Gen
etics Computer Group(Madison WI)から「ｇａｐ」プロ
グラムとして一般に入手可能である。前記のパラメータ
ーはペプチド比較のためのデフォルトパラメーター(def
ault parameter) である（末端ギャップのペナルティー
は無し）。

【００６７】ポリヌクレオチド配列を比較するための好
適なパラメーターは次のものを含む： １）アルゴリズム：Needleman and Wunsch, J. Mol. Bi
ol. 48: 443-453 (1970)； 比較マトリックス：マッチ
＝＋１０、ミスマッチ＝０ ギャップペナルティー：５０ ギャップ長ペナルティー：３ これらのパラメーターと共に役に立つプログラムは Gen
etics Computer Group(Madison WI)から「ｇａｐ」プロ
グラムとして入手可能である。前記のパラメーターはポ
リヌクレオチド比較のためのデフォルトパラメーターで
ある。

【００６８】例として、本発明のポリヌクレオチド配列
は配列番号１の基準配列と同一、すなわち１００％同一
であっても、該基準配列に対して、ある整数個までのヌ
クレオチド変異を含んでいてもよい。前記変異は少なく
とも１個のヌクレオチドの欠失、置換（トランジション
およびトランスバージョンを含む）または付加よりなる
群から選択され、こうした変異は基準ヌクレオチド配列
の5'もしくは3'末端位置、またはこれらの末端位置の間
のどこに存在してもよく、基準配列中のヌクレオチドの
間に個々に、または基準配列内に１以上の連続するグル
ープとして介在することができる。ヌクレオチド変異の
数は、配列番号１のヌクレオチドの総数に、それぞれの
（１００で割った）同一性％値を掛け、その積を配列番
号１のヌクレオチドの総数から差し引くことにより、す
なわち、次式： ｎ_ｎ ≦ｘ_ｎ −（ｘ_ｎ・ｙ） により求めることができる。式中、ｎ_ｎはヌクレオチド
変異の数であり、ｘ_ｎは配列番号１のヌクレオチドの総
数であり、ｙは例えば70％については0.70、80％につい
ては0.80、85％については0.85、90％については0.90、
95％については0.95などであり、ｘ_ｎとｙの非整数の積
は、その積をｘ_ｎから引く前に、最も近似する整数に切
り下げる。配列番号２のポリペプチドをコードするポリ
ヌクレオチド配列の改変は、そのコード配列にナンセン
ス、ミスセンスまたはフレームシフト突然変異を生じさ
せ、それにより、こうした変異後に該ポリヌクレオチド
によりコードされたポリペプチドを改変させることがで
きる。

【００６９】同様に、本発明のポリペプチド配列は配列
番号２の基準配列と同一、すなわち１００％の同一性で
あっても、該基準配列に対して、ある整数個までのアミ
ノ酸変異を含んでいてもよい。前記変異は少なくとも１
個のアミノ酸の欠失、置換（同類および非同類アミノ酸
置換を含む）または付加よりなる群から選択され、こう
した変異は基準ポリペプチド配列のアミノもしくはカル
ボキシ末端位置、またはこれらの末端位置の間のいずれ
に存在してもよく、基準配列中のアミノ酸の間に個々
に、または基準配列内に１以上の連続するグループとし
て介在することができる。所定の同一性％についてのア
ミノ酸変異の数は、配列番号２のアミノ酸の総数に、そ
れぞれの（１００で割った）同一性％値を掛け、その積
を配列番号２のアミノ酸の総数から差し引くことによ
り、すなわち、次式： ｎ_ａ ≦ｘ_ａ −（ｘ_ａ・ｙ） により求めることができる。式中、ｎ_ａはアミノ酸変異
の数であり、ｘ_ａは配列番号２中のアミノ酸の総数であ
り、ｙは例えば70％については0.70、80％については0.
80、85％については0.85などであり、ｘ_ａとｙの非整数
の積は、その積をｘ_ａから引く前に、最も近似する整数
に切り下げる。

【００７０】「相同体」とは、対象の配列に対して高度
の配列関連性を有するポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドを示すための当技術分野で使用される一般的な用語
である。こうした関連性は、上記のような比較すべき配
列間の同一性および／または類似性の程度を決定するこ
とにより定量化できる。別の種におけるポリヌクレオチ
ドまたはポリペプチドの機能的等価物であるポリヌクレ
オチドまたはポリペプチドを意味する「オーソログ体」
(ortholog)、および同一の種内で考えるときに機能的に
類似した配列を意味する「パラログ体」(paralog) とい
う用語はこの一般的な用語に含まれる。

【００７１】「融合タンパク質」とは、２つの、しばし
ば無関係の、融合された遺伝子またはその断片によりコ
ードされるタンパク質のことである。一例として、EP-A
-0 464には、免疫グロブリン分子の定常領域の様々な部
分と他のヒトタンパク質またはその一部とを含んでなる
融合タンパク質が記載されている。多くの場合、治療お
よび診断における使用には、融合タンパク質の一部とし
て免疫グロブリンＦｃ領域を使用することが有利であ
り、これにより例えば薬物速度論的性質が向上する（例
えば、EP-A- 0232 262を参照のこと）。一方、いくつか
の使用にとっては、その融合タンパク質を発現させ、検
出し、精製した後でＦｃ部分を除去することが望ましい
だろう。

【００７２】本明細書中に引用された、特許および特許
出願明細書を含めた全ての刊行物は、あたかも各刊行物
が明確にかつ個々に示されているかのように、その全体
を参考としてここに組み入れるものとする。

【００７３】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> SmithKline Beecham plc and SmithKline Beecham Corp <120> SBPERR4 Polypeptides and Polynucleotides <130> PA01-643 <150> GB 9818100.1 <151> 1998-8-19 <150> EP 98300266.8 <151> 1998-1-15 <160> 4 <170> FastSEQ for Windows（登録商標） Version 3.0 <210> 1 <211> 2278 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 cccacgcgtc cgccgcagaa ggtgtggtca gggacatttc ccctggccgg gagcccatgg 60 agcactgtcc tcagagatgc gcagaataaa agtttcctga ggtcaaggac ttccttttcc 120 ctgccaaaat ggtgtccaga actttgaggc cagaggtgat ccagtgattt gggagctgca 180 ggtcacacag gctgctcaga gggctgctga acaggatgtc ctcggacgac aggcacctgg 240 gctccagctg cggctccttc atcaagactg agccgtccag cccgtcctcg ggcatcgatg 300 ccctcagcca ccacagcccc agtggctcgt ccgacgccag cggcggcttt ggcctggccc 360 tgggcaccca cgccaacggt ctggactcgc cacccatgtt tgcaggcgcc gggctgggag 420 gcaccccatg ccgcaagagc tacgaggact gtgccagcgg catcatggag gactcggcca 480 tcaagtgcga gtacatgctc aacgccatcc ccaagcgcct gtgcctcgtg tgcggggaca 540 ttgcctctgg ctaccactac ggcgtggcct cctgcgaggc ttgcaaggcc ttcttcaaga 600 ggactatcca agggaacatt gagtacagct gcccggccac caacgagtgc gagatcacca 660 aacggaggcg caagtcctgc caggcctgcc gcttcatgaa atgcctcaaa gtggggatgc 720 tgaaggaagg tgtgcgcctt gatcgagtgc gtggaggccg tcagaaatac aagcgacggc 780 tggactcaga gagcagccca tacctgagct tacaaatttc tccacctgct aaaaagccat 840 tgaccaagat tgtctcatac ctactggtgg ctgagccgga caagctctat gccatgcctc 900 cccctggtat gcctgagggg gacatcaagg ccctgaccac tctctgtgac ctggcagacc 960 gagagcttgt ggtcatcatt ggctgggcca agcacatccc aggcttctca agcctctccc 1020 tgggggacca gatgagcctg ctgcagagtg cctggatgga aatcctcatc ctgggcatcg 1080 tgtaccgctc gctgccctac gacgacaagc tggtgtacgc tgaggactac atcatggatg 1140 aggagcactc ccgcctcgcg gggctgctgg agctctaccg ggccatcctg cagctggtac 1200 gcaggtacaa gaagctcaag gtggagaagg aggagtttgt gacgctcaag gccctggccc 1260 tcgccaactc cgattccatg tacatcgagg atctagaggc tgtccagaag ctgcaggacc 1320 tgctgcacga ggcactgcag gactacgagc tgagccagcg ccatgaggag ccctggagga 1380 cgggcaagct gctgctgaca ctgccgctgc tgcggcagac ggccgccaag gccgtgcagc 1440 acttctatag cgtcaaactg cagggcaaag tgcccatgca caaactcttc ctggagatgc 1500 tggaggccaa ggttggccaa gagcagctta gaggatctcc caaggatgaa agaatgtcaa 1560 gccatgatgg aaaatgcccc ttccaatcag ctgccttcac aagcagggat cagagcaact 1620 ccccggggat ccccaatcca cgcccttcta gtccaacccc cctcaatgag agaggcaggc 1680 agatctcacc cagcactagg acaccaggag gccagggaaa gcatctctgg ctcaccatgt 1740 aacatctggc ttggagcaag tgggtgttct gcacaccagg cagctgcacc tcactggatc 1800 tagtgttgct gcgagtgacc tcacttcaga gcccctctar cagagtgggg cggaagtcct 1860 gatggttggt gtccatgagg tggaagctgc ttttatactt aaaactcaga tcacaacagg 1920 aaatgtgtca gtaacaatgg aactccatcc aatgggaaag ttcctggtac tgaaggggtc 1980 cattggacac tcagaaaaga agttcagggg ccaacttctt agctggaatc ctggccagat 2040 gaggaccctc tccggggaag ggagaggact gacttagtgg aaggtggtga agtgaggaga 2100 gtttagggga accttccccc agtggaacag atctcaagtt taccctaaac ctgccatttc 2160 tggaaaatct gtaaagagga aacagcctgt ctcagctgta ctctcatgat acaggtcatt 2220 tgaaatgaac caagaaataa aacatgaaaa tccaaaaaaa aaaaaaaaaa gggcggcc 2278 <210> 2 <211> 508 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Ser Ser Asp Asp Arg His Leu Gly Ser Ser Cys Gly Ser Phe Ile 1 5 10 15 Lys Thr Glu Pro Ser Ser Pro Ser Ser Gly Ile Asp Ala Leu Ser His 20 25 30 His Ser Pro Ser Gly Ser Ser Asp Ala Ser Gly Gly Phe Gly Leu Ala 35 40 45 Leu Gly Thr His Ala Asn Gly Leu Asp Ser Pro Pro Met Phe Ala Gly 50 55 60 Ala Gly Leu Gly Gly Thr Pro Cys Arg Lys Ser Tyr Glu Asp Cys Ala 65 70 75 80 Ser Gly Ile Met Glu Asp Ser Ala Ile Lys Cys Glu Tyr Met Leu Asn 85 90 95 Ala Ile Pro Lys Arg Leu Cys Leu Val Cys Gly Asp Ile Ala Ser Gly 100 105 110 Tyr His Tyr Gly Val Ala Ser Cys Glu Ala Cys Lys Ala Phe Phe Lys 115 120 125 Arg Thr Ile Gln Gly Asn Ile Glu Tyr Ser Cys Pro Ala Thr Asn Glu 130 135 140 Cys Glu Ile Thr Lys Arg Arg Arg Lys Ser Cys Gln Ala Cys Arg Phe 145 150 155 160 Met Lys Cys Leu Lys Val Gly Met Leu Lys Glu Gly Val Arg Leu Asp 165 170 175 Arg Val Arg Gly Gly Arg Gln Lys Tyr Lys Arg Arg Leu Asp Ser Glu 180 185 190 Ser Ser Pro Tyr Leu Ser Leu Gln Ile Ser Pro Pro Ala Lys Lys Pro 195 200 205 Leu Thr Lys Ile Val Ser Tyr Leu Leu Val Ala Glu Pro Asp Lys Leu 210 215 220 Tyr Ala Met Pro Pro Pro Gly Met Pro Glu Gly Asp Ile Lys Ala Leu 225 230 235 240 Thr Thr Leu Cys Asp Leu Ala Asp Arg Glu Leu Val Val Ile Ile Gly 245 250 255 Trp Ala Lys His Ile Pro Gly Phe Ser Ser Leu Ser Leu Gly Asp Gln 260 265 270 Met Ser Leu Leu Gln Ser Ala Trp Met Glu Ile Leu Ile Leu Gly Ile 275 280 285 Val Tyr Arg Ser Leu Pro Tyr Asp Asp Lys Leu Val Tyr Ala Glu Asp 290 295 300 Tyr Ile Met Asp Glu Glu His Ser Arg Leu Ala Gly Leu Leu Glu Leu 305 310 315 320 Tyr Arg Ala Ile Leu Gln Leu Val Arg Arg Tyr Lys Lys Leu Lys Val 325 330 335 Glu Lys Glu Glu Phe Val Thr Leu Lys Ala Leu Ala Leu Ala Asn Ser 340 345 350 Asp Ser Met Tyr Ile Glu Asp Leu Glu Ala Val Gln Lys Leu Gln Asp 355 360 365 Leu Leu His Glu Ala Leu Gln Asp Tyr Glu Leu Ser Gln Arg His Glu 370 375 380 Glu Pro Trp Arg Thr Gly Lys Leu Leu Leu Thr Leu Pro Leu Leu Arg 385 390 395 400 Gln Thr Ala Ala Lys Ala Val Gln His Phe Tyr Ser Val Lys Leu Gln 405 410 415 Gly Lys Val Pro Met His Lys Leu Phe Leu Glu Met Leu Glu Ala Lys 420 425 430 Val Gly Gln Glu Gln Leu Arg Gly Ser Pro Lys Asp Glu Arg Met Ser 435 440 445 Ser His Asp Gly Lys Cys Pro Phe Gln Ser Ala Ala Phe Thr Ser Arg 450 455 460 Asp Gln Ser Asn Ser Pro Gly Ile Pro Asn Pro Arg Pro Ser Ser Pro 465 470 475 480 Thr Pro Leu Asn Glu Arg Gly Arg Gln Ile Ser Pro Ser Thr Arg Thr 485 490 495 Pro Gly Gly Gln Gly Lys His Leu Trp Leu Thr Met 500 505 <210> 3 <211> 456 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 aaacccccat gccgnaaaaa ctaacgagga actgttgcca gcggccatcc atggaggact 60 cggcccatcc aagtgccgaa gttacatgct caacgccatc ccccaagcgc ctgtgccctc 120 gtgtgcgggg acaatttcct ctggctacca ctnaggcgtt ggcctcctgc gaggcttgca 180 aggccttctt caagaggact atccaaggga acattgagta cagctgcccg gccaccaacg 240 agtgcgagat caccaaacgg aggcgcaagt cctgccaggc ctgccgcttc atgaaatgcc 300 tcaaagtggg gatgctgaag gaaggtgtgc gccttgatcg agtgcgtgga ggccgtcaga 360 aatacaagcg acggctggac tcagagagca gcccatacct gagcttacaa atttctccac 420 ctcctaaaaa gcctgaagtg cccctagtgc cgaatt 456 <210> 4 <211> 148 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Pro Xaa Lys Leu Thr Arg Asn Cys Cys Gln Arg Pro Ser Met Glu Asp 1 5 10 15 Ser Ala His Pro Ser Ala Glu Val Thr Cys Ser Thr Pro Ser Pro Lys 20 25 30 Arg Leu Cys Pro Arg Val Arg Gly Gln Phe Pro Leu Ala Thr Thr Xaa 35 40 45 Ala Leu Ala Ser Cys Glu Ala Cys Lys Ala Phe Phe Lys Arg Thr Ile 50 55 60 Gln Gly Asn Ile Glu Tyr Ser Cys Pro Ala Thr Asn Glu Cys Glu Ile 65 70 75 80 Thr Lys Arg Arg Arg Lys Ser Cys Gln Ala Cys Arg Phe Met Lys Cys 85 90 95 Leu Lys Val Gly Met Leu Lys Glu Gly Val Arg Leu Asp Arg Val Arg 100 105 110 Gly Gly Arg Gln Lys Tyr Lys Arg Arg Leu Asp Ser Glu Ser Ser Pro 115 120 125 Tyr Leu Ser Leu Gln Ile Ser Pro Pro Pro Lys Lys Pro Glu Val Pro 130 135 140 Leu Val Pro Asn 145

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 27/02 Ａ６１Ｐ 35/00 ４Ｃ０８４ 35/00 Ｃ０７Ｋ 14/705 ４Ｃ０８６ Ｃ０７Ｋ 14/705 16/28 ４Ｈ０４５ 16/28 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/68 33/50 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/50 5/00 Ａ (71)出願人 597173680 スミスクライン ビーチャム コーポレー ション アメリカ合衆国 19103 ペンシルベニア 州，フィラデルフィア，ワン フランクリ ン プラザ （番地なし) (72)発明者 ステファン エル．マサイアス イギリス国 シー エム19 ５エー ダブ ル エセックス，ハーロウ，サード アベ ニュー， ニュー フロンティアーズサイ エンス パーク サウス，スミス クライ ン ビーチャム ファーマシューティカル ズ (72)発明者 トゥルーディー アール．ドゥ イギリス国 シー エム19 ５エー ダブ ル エセックス，ハーロウ，サード アベ ニュー， ニュー フロンティアーズサイ エンス パーク サウス，スミス クライ ン ビーチャム ファーマシューティカル ズ (72)発明者 ニコラ バーゲス イギリス国 シー エム19 ５エー ダブ ル エセックス，ハーロウ，サード アベ ニュー， ニュー フロンティアーズサイ エンス パーク サウス，スミス クライ ン ビーチャム ファーマシューティカル ズ (72)発明者 デルク ジェー．バーグスマ アメリカ合衆国 19406 ペンシルバニア 州 キング オブ プラッシア，スウィー ドランド ロード 709 スミスクライン ビーチャム ファーマシューティカルー ズ (72)発明者 ジェフリー エル．ムーニー アメリカ合衆国 19406 ペンシルバニア 州 キング オブ プラッシア，スウィー ドランド ロード 709 スミスクライン ビーチャム ファーマシューティカルー ズ (72)発明者 ジョセフ ルー アメリカ合衆国 19406 ペンシルバニア 州 キング オブ プラッシア，スウィー ドランド ロード 709 スミスクライン ビーチャム ファーマシューティカルー ズ Ｆターム(参考） 2G045 AA34 AA35 DA13 DA36 4B024 AA01 AA11 AA12 BA63 CA04 DA02 EA04 GA11 HA12 HA15 4B063 QA01 QA19 QA20 QQ08 QQ43 QQ53 QR08 QR36 QR42 QS25 QS34 QX02 4B064 AG20 CA10 CA19 CC24 DA01 DA13 DA14 4B065 AA90X AA93Y AB01 BA02 CA24 CA44 CA46 4C084 AA17 NA14 ZA012 ZA332 ZA972 ZB262 4C086 AA01 AA03 EA16 MA01 MA04 NA14 ZA01 ZA33 ZA97 ZB26 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA40 DA50 DA75 EA20 EA28 EA50 EA51 FA72 FA74

Claims (22)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号２の全長にわたり、配列番号２
   のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の同一性を有
   するアミノ酸配列を含んでなる、単離されたポリペプチ
   ド。
2. 【請求項２】 前記のアミノ酸配列が少なくとも９９％
   の同一性を有する、請求項１に記載のポリペプチド。
3. 【請求項３】 配列番号２のアミノ酸配列を含んでな
   る、請求項１に記載のポリペプチド。
4. 【請求項４】 配列番号２のアミノ酸配列からなる、単
   離されたポリペプチド。
5. 【請求項５】 配列番号２のアミノ酸配列に対して、配
   列番号２の全長にわたり、少なくとも９７％の同一性を
   有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含
   んでなる単離されたポリヌクレオチド、または該ポリヌ
   クレオチドに相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌ
   クレオチド。
6. 【請求項６】 配列番号２のポリペプチドをコードする
   ヌクレオチド配列に対して、その全コード領域にわた
   り、少なくとも９２％の同一性を有するヌクレオチド配
   列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド、または該
   ポリヌクレオチドに相補的なヌクレオチド配列からなる
   ポリヌクレオチド。
7. 【請求項７】 配列番号１のヌクレオチド配列に対し
   て、配列番号１の全長にわたり、少なくとも９２％の同
   一性を有するヌクレオチド配列を含んでなる単離された
   ポリヌクレオチド、または該ポリヌクレオチドに相補的
   なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。
8. 【請求項８】 前記の同一性が少なくとも９５％であ
   る、請求項５〜７のいずれか１項に記載のポリヌクレオ
   チド。
9. 【請求項９】 以下の(a)〜(c)から選択される単離され
   たポリヌクレオチド、または該ポリヌクレオチドに相補
   的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド： (a) 配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチドを
   コードするヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオ
   チド、 (b) 配列番号１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレ
   オチド、および (c) 適当なライブラリーを、ストリンジェントなハイブ
   リダイゼーション条件下で、配列番号１のヌクレオチド
   配列またはその断片を有する標識プローブを用いてスク
   リーニングすることにより得られるポリヌクレオチド。
10. 【請求項１０】 下記発現系が適合性の宿主細胞内に存
    在するとき請求項１に記載のポリペプチドを産生し得る
    ポリヌクレオチドを含有する発現系。
11. 【請求項１１】 請求項１０に記載の発現系を含有する
    宿主細胞、または請求項１に記載のポリペプチドを発現
    しているその膜。
12. 【請求項１２】 請求項１に記載のポリペプチドを産生
    させるのに十分な条件下で請求項１１に記載の宿主細胞
    を培養し、この培養培地から該ポリペプチドを回収する
    ことを含んでなる、請求項１に記載のポリペプチドの生
    産方法。
13. 【請求項１３】 請求項１に記載のポリペプチドに対し
    て免疫特異的な抗体。
14. 【請求項１４】 請求項１に記載のポリペプチドの機能
    を刺激または抑制する化合物を同定するためのスクリー
    ニング法であって、 (a) 候補化合物と、該ポリペプチド（または該ポリペプ
    チドを担持している細胞もしくはその膜）またはその融
    合タンパク質と、の結合を、該候補化合物に直接または
    間接的に結合させた標識により測定すること、 (b) 候補化合物と、該ポリペプチド（または該ポリペプ
    チドを担持している細胞もしくはその膜）またはその融
    合タンパク質と、の結合を、標識競合物質の存在下で測
    定すること、 (c) 候補化合物が該ポリペプチドの活性化または抑制に
    より生ずるシグナルをもたらすか否かを、該ポリペプチ
    ドを担持している細胞または細胞膜に適した検出系を用
    いて調べること、 (d) 候補化合物と、請求項１に記載のポリペプチドを含
    有する溶液と、を一緒にして混合物を調製し、該混合物
    中の該ポリペプチドの活性を測定し、該混合物の活性を
    スタンダードと比較すること、および (e) 候補化合物が細胞における該ポリペプチドをコード
    するｍＲＮＡおよび該ポリペプチドの産生に及ぼす効果
    を検出すること、よりなる群から選択される方法を含ん
    でなるスクリーニング法。
15. 【請求項１５】 請求項１〜４のいずれか１項に記載の
    ポリペプチドに対するアンタゴニスト。
16. 【請求項１６】 治療に用いるための以下の(a)〜(c)か
    ら選択される化合物： (a) 請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド
    に対するアゴニストまたはアンタゴニスト、 (b) 請求項５〜９のいずれか１項に記載のポリヌクレオ
    チド、および (c) 請求項１に記載のポリペプチドをコードするヌクレ
    オチド配列の発現をモジュレートする核酸分子。
17. 【請求項１７】 被験者における請求項１に記載のポリ
    ペプチドの発現または活性に関連した疾病または該疾病
    への罹りやすさを検査する方法であって、 (a) 該被験者のゲノム内の該ポリペプチドをコードする
    ヌクレオチド配列に突然変異があるか否かを調べるこ
    と、および／または (b) 該被験者から得られたサンプルにおける該ポリペプ
    チド発現の存在または量を分析すること、を含んでなる
    方法。
18. 【請求項１８】 以下の(a)〜(d)から選択される単離さ
    れたポリヌクレオチド： (a) 配列番号３のヌクレオチド配列に対して、配列番号
    ３の全長にわたり、少なくとも９０％の同一性を有する
    ヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド、 (b) 配列番号３のヌクレオチド配列を含んでなるポリヌ
    クレオチド、 (c) 配列番号３のヌクレオチド配列からなるポリヌクレ
    オチド、および (d) 配列番号４のアミノ酸配列に対して、配列番号４の
    全長にわたり、少なくとも９０％の同一性を有するアミ
    ノ酸配列からなるポリペプチドをコードするヌクレオチ
    ド配列を含んでなるポリヌクレオチド。
19. 【請求項１９】 以下の(a)〜(e)から選択される単離さ
    れたポリペプチド： (a) 配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配
    列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸
    配列を含んでなるポリペプチド、 (b) アミノ酸配列が配列番号４の全長にわたる配列番号
    ４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を
    有するポリペプチド、 (c) 配列番号４のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチ
    ド、 (d) 配列番号４のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
    および (e) 配列番号３に含まれるヌクレオチド配列を含んでな
    るポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド。
20. 【請求項２０】 以下の(a)または(b)の単離されたポリ
    ペプチド： (a) 配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
    または (b) 配列番号２のアミノ酸配列において、少なくとも１
    個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
    配列からなり、かつSBPERR4活性を有するポリペプチ
    ド。
21. 【請求項２１】 請求項２０に記載のポリペプチドをコ
    ードするポリヌクレオチド。
22. 【請求項２２】 以下の(a)または(b)の単離されたポリ
    ヌクレオチド： (a) 配列番号１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレ
    オチド、または (b) (a) のポリヌクレオチドとストリンジェントな条件
    下でハイブリダイズしかつSBPERR4活性を有するポリペ
    プチドをコードするポリヌクレオチド。