JP2003137894A - アミノアルコールリン酸化合物、製造方法、及びその利用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】Edg（ endothelial differentiation gene、
血管内皮細胞分化遺伝子）受容体へ拮抗する医薬を提供
する。 【解決手段】一般式Ｉ 【化１】 （式中、Ｒは、置換されてもよい直鎖状または分岐鎖状
のＣＨ₃Ｃ_nＨ_(2n-2m)−（ｎは、２から１９の間のいず
れかの整数であり、ｍは、不飽和数を表し、０から３の
間のいずれかの整数である）または置換されてもよいア
リール基である）で表される、スレオ型（2S, 3S）アミ
ノアルコール−１−リン酸化合物またはその製薬学的に
許容される塩。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規なアミノアルコ
ールリン酸化合物、その製造方法、及びその利用方法に
関するものである。かかる化合物は 内皮分化遺伝子end
othelial differentiation gene (Edg)受容体に拮抗
し、抗循環器系疾患性（例えば、抗動脈硬化性、抗心臓
疾患性（例えば、抗不整脈性、抗心筋梗塞性））、抗リ
ウマチ性、抗がん性、抗糖尿病性網膜症性や抗呼吸器系
疾患性を示す医薬として有用である。

【０００２】

【従来の技術】近年の医学・生化学分野における研究に
より、生体におけるスフィンゴ脂質類の重要性が明らか
になってきており、スフィンゴ糖脂質は細胞間相互認
識、細胞増殖調節、発生・分化の調節、感染及び細胞の
悪性化等において重要な役割を果たすことが示唆されて
いる。

【０００３】一方、スフィンゴ脂質類の分解代謝産物で
あるスフィンゴシン−１−リン酸（SPN-1P）

【化１０】 についてはその役割が未知であったが、近年、SPN-1Pを
内因性リガンドとするオーファン受容体endothelial di
fferentiation gene (Edg)が見出され、生理作用が次第
に明らかになってきた。

【０００４】Edgは1990年にオーファン受容体として遺
伝子がクローニングされた[ Edg - 1(J B C, `90, 265,
p. 9308)]が、その後、 Edg - 1のホモログとして、Ed
g -3( BB R C, `96, 227, p. 608) 、Edg - 5 (AGR 16
/ H 218)(J C B, `96, 135,p. 1071)が得られたもの
の、その生理的役割は不明だった。ところが、`98年、S
PN- 1PがEdg - 1の内因性リガンドとなっている可能性
が示唆され (Science, `98, 279, p. 1552)、その後、E
dg - 3、及びEdg - 5もSPN - 1 P特異的受容体である事
が示された (BBRC `99, 260, p. 263、 J B C `99, 27
4, p. 18997)。

【０００５】血管内皮細胞上の Edg - 1が SPN - 1Pの
刺激によって、カドヘリンなど接着タンパク質をアップ
レギュレートし (Science, `98, 279, p. 1552)、Tリン
パ球由来株化細胞が、SPN - 1Pの刺激によって、in vit
ro疑似血管モデルでの血管層侵入を増長する (EMBO J.,
`98, vol. 17, No. 14, p. 4066)。また、岡島らはEdg
- 1、或いは Edg - 3を強制発現させた CHO細胞を用
い、疑似血管遊走試験を行ったところ、どちらの場合
も、SPN - 1P濃度依存的に遊走が促進した（`99年日本
生化学会大会要旨集 p. 883）。一方、五十嵐らは、が
ん細胞株 F10が疑似血管モデルにてSPN - 1 P 10<sup>-8</sup>〜10
<sup>-6</sup> Mにて濃度依存的に最大80%ほど遊走抑制を受ける事
を示したが、F10細胞では Edg - 1、或いは Edg - 3は
殆ど発現しておらず、Edg - 5が発現していた（`99年日
本生化学会）。発現亜種が異なる事が原因となって、SP
N - 1Pが遊走抑制を示した可能性が指摘されている（`9
9年生化学会大会要旨集 p. 675、883）。

【０００６】血管平滑筋細胞 (Eur. J. Biochem. `98,
257, p. 403)、或いは気道平滑筋細胞 (Biochem. J. `9
9, 338, p. 643)で、どちらも、SPN - 1 P応答性にMAP
キナーゼ活性化が観察されており、SPN - 1Pが血管平滑
筋増殖の方向に作用する可能性が指摘されている。

【０００７】杉山らは、ラットにSPN - 1Pを尾静脈経路
で投与し血行動態を観察したところ、収縮期血圧、及び
左心室圧時間微分の二指標の有意な低下を観察し、SPN
- 1Pが、in vivoにおいて、心機能低下の方向に作用し
ている可能性を示した（`00年薬理学会要旨集 P. 12
7）。モルモット、マウス、及びヒトの冠動脈平滑筋培
養細胞において、ムスカリン受容体内向き K⁺整流を、
Edg - 3経由で SPN - 1Pが活性化し、SPN - 1Pが呼吸困
難などを引き起こす迷走神経を刺激している可能性が指
摘されている (Mollecular Pharmacology, '00, 58, 44
9)。また、ウサギ洞房細胞の培養において、自発的ペー
スメーカーの周期を SPN - 1 Pが伸長する事より、SPN
- 1 Pが心臓の拍動周期に対し負の作用を示している可
能性が示唆されている (Pfuger Arch - Eur J Physiol
'99, 438, 642)。

【０００８】血管内皮細胞に及ぼすSPN - 1Pの作用を、
血管新生動物モデルを用いて検討した結果、VEGFやFGF
- 2などの増殖因子による血管新生を、SPN - 1Pが Edg
- 1、Edg - 3と結合する事によって相乗的に促進させ、
Edgがリウマチ、固形がんや糖尿病性網膜症の進行に作
用している可能性が指摘されている (Cell `99, p. 30
1)。

【０００９】SPN - 1PとEdg受容体の結合によって引き
起こされる過剰な炎症や気道のリモデリングの結果、肺
炎、慢性閉塞性気道疾患 (COPD: chronic obstructive
airway disease)、呼吸器系高血圧が進行する可能性が
指摘されている (Pulmonary Pharmacology & Therapeut
ics, 2000, 13, p. 99)。

【００１０】原虫トリパノゾーマの撲滅薬、スラミンが
Edg - 3特異的な拮抗性を示し、SPN- 1Pと Edgの結合
のシグナルを阻止する事が報じられている(J. B. C. `9
9, 274, 27, p. 18997)。スラミンは動脈硬化病態モデ
ルに治癒的に奏効する事が示されている（Circulation,
` 99, 100, p. 861、 Cardiovascular Res., `94, 28,
p. 1166）が、この薬効の機作にEdg拮抗性が絡んでいる
可能性が考えられる。

【００１１】以上の知見を総合すると、SPN - 1Pが Edg
と結合すると、炎症性細胞活性化や血管平滑筋細胞増
殖、血行動態悪化など動脈硬化促進的に作用する。ま
た、血管新生を促進し、リウマチ、固形ガン、糖尿病性
網膜症の進行の方向に作用する可能性が示されている事
になる。即ち、Edgに拮抗する物質が、抗動脈硬化性、
抗心臓疾患性などの抗循環器系疾患性、抗リウマチ性、
抗ガン性、抗糖尿病性網膜症性及び抗呼吸器系疾患性を
示す可能性が考えられる。したがって、スフィンゴ脂質
類を各種合成し、Edg拮抗活性を有する物質を見出すこ
とはこれらの疾患の治療薬を創製する上で極めて重要で
ある。しかしながら、スフィンゴ脂質類の合成には多く
の段階を要するため、これまで構造活性相関研究はほと
んどなされていない。

【００１２】これまでは主に天然型基本骨格として最も
多く存在する３位水酸基の立体異性体に相当するＤ−エ
リスロ型（2S, 3R体）スフィンゴシンの化学合成法が研
究され、多くの報告がなされている。しかしながら、天
然型とは立体配置の異なるＬ−スレオ型（2S, 3S体）を
選択的に合成することは以下に説明するように容易では
なく、また、そのリン酸化体は合成されていなかった。

【００１３】これまでの合成例としては不斉アルドール
型反応を利用する方法（伊藤ら, Tetrahedron Lett., 1
988, Vol. 29, p. 239; E. J. Coreyら, Tetrahedron L
ett., 2000, Vol. 41, p. 2765）等が報告されている
が、途中の工程で用いる試薬が特殊である、あるいは煩
雑な操作を要するなどの問題点があった。また天然エリ
スロ型の３位水酸基を反転させる方法も知られている
が、隣接した４位に二重結合があるため位置異性体を生
じやすいなどの問題点があった。

【００１４】アミノ酸Ｌ−セリンを出発原料としてスレ
オ型スフィンゴシンを製造する方法も知られている(P.
Herold, Helv. Chim. Acta, 1988, Vol. 71, p. 354;
I. Van Overmeireら, J. Med. Chem., 1999, Vol. 42,
p. 2697）が、この方法ではスレオ型のプロパルギルア
ルコール類を得てから、三重結合を還元してアルケン
（二重結合）化しており、簡便とはいえない。

【００１５】アルデヒド化合物に対して直接、アルケニ
ル化剤（アルケニル化金属試薬）を作用させて、保護さ
れたスフィンゴシンの３位水酸基に関する２つの立体異
性体、エリスロ体とスレオ体を生成する方法は知られて
いる。しかし、これらの異性体の生成比は金属種、溶
媒、添加する触媒、反応温度等により変化しやすいため
選択的に異性体を製造するための条件設定がむずかし
く、また、クロマトグラフィー等による異性体の分離が
困難である。さらに、エリスロ選択的に得られる方法は
知られているが（特開平７−291904号公報、J. Chem. S
oc., Perkin Trans.1, 1994, p. 1257）、スレオ選択的
に得られる方法は知られていない。したがって、スレオ
体を立体選択性の高い反応により得る簡便な方法が望ま
れる。

【００１６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、Edg
受容体拮抗活性を有する新規なアミノアルコールリン酸
化合物、その簡便な製造方法及び利用方法を提供するこ
とにある。

【００１７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決するために鋭意研究を重ねた結果、スレオ型アミノ
アルコール化合物はEdg受容体拮抗作用がないにもかか
わらず、そのリン酸体である以下の一般式Ｉ化合物（以
下、「本発明化合物」という）がEdg受容体拮抗作用を
有すること、また、その化合物を立体選択性に優れた合
成経路により簡便に製造できることを見出し、本発明を
完成するに至った。

【００１８】本発明は、下記一般式Ｉ

【化１１】 （式中、Ｒは、置換されてもよい直鎖状または分岐鎖状
のＣＨ₃Ｃ_nＨ_(2n-2m)−（ｎは、２から１９の間のいず
れかの整数であり、ｍは、不飽和数を表し、０から３の
間のいずれかの整数である）または置換されてもよいア
リール基である）で表される、スレオ型（2S, 3S）アミ
ノアルコール−１−リン酸化合物またはその製薬学的に
許容される塩に関する。

【００１９】

【発明の実施の形態】前記一般式Ｉにおける置換基につ
いて説明する。「置換されてもよいＣＨ₃Ｃ_nＨ_(2n-2m)
−」の置換されたＣＨ₃Ｃ_nＨ_(2n-2m)−とは、例えば、
水酸基、ハロゲン原子、炭素数 1から 10の直鎖でも分
岐鎖でもよいアルキル基若しくはアルコキシ基及びアリ
ール基からなる群から選択される１つ以上で置換された
ＣＨ₃Ｃ_nＨ_(2n-2m)−をいう。「アリール基」の具体例
としては、フェニル基、１−ナフチル基および２−ナフ
チル基などがあげられる。「置換されてもよいアリール
基」の置換されたアリール基とは、例えば、炭素数 1か
ら 10の直鎖でも分岐鎖でもよいアルキル基若しくはア
ルコキシ基、ニトロ基及びハロゲン原子からなる群から
選択される１つ以上で置換されたアリール基をいう。

【００２０】Ｒの好ましい態様としては、以下のものが
あげられる。ｎは、好ましくは５−１６であり、さらに
好ましくは9−１２である。ｍは、好ましくは０−１で
あり、さらに好ましくは０である。不飽和結合の位置
は、ｎが１２のとき、８位が好ましい。

【００２１】本発明の式Ｉ化合物の特に好ましい化合物
を以下にあげる。

【化１２】

【化１３】

【化１４】

【００２２】本発明の化合物の塩としては、製薬学的に
許容されるものであれば特に制限されず、例えば、メタ
ンスルホン酸塩、トリフロオロメタンスルホン酸塩、エ
タンスルホン酸塩などの低級アルキルスルホン酸塩、ベ
ンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩などの
アリールスルホン酸塩、酢酸塩、フマル酸塩、コハク酸
塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩
などのカルボン酸塩、グリシン塩、アラニン塩、グルタ
ミン酸塩、アスパラギン酸塩などのアミノ酸塩、ナトリ
ウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩などがあげら
れる。

【００２３】本発明化合物はいずれも内皮分化遺伝子
（Ｅｄｇ）受容体拮抗性を示し、Edgに対するSPN - 1 P
などのＥｄｇ受容体作動物質の結合に拮抗し、これらに
よる細胞内シグナル伝達系を阻止することができる。ま
た、本発明化合物は、これらを医薬の必須成分として使
用した場合、医薬の通常の他の成分と配合しても、前記
特性が有効に発現することが認められた。従って、本発
明は、本発明化合物を有効成分として含有する、内皮分
化遺伝子（Ｅｄｇ）受容体に拮抗する医薬を提供する。
また、本発明は、炎症性細胞活性化や血管平滑筋増殖、
血行動態悪化、さらに血管新生によって生じる疾患、例
えば、循環器系疾患（例えば、動脈硬化、心臓疾患（例
えば、心筋梗塞、不整脈））、リウマチ（例えば、慢性
関節リウマチ）、がん、糖尿病性網膜症、呼吸器系疾患
（例えば、肺炎、慢性閉塞性気道疾患、呼吸器系高血
圧）を予防若しくは治療するための上記医薬を提供す
る。ここで、「循環器系疾患」とは、血液、リンパなど
の循環状態が障害され、組織や細胞に障害をおこしてい
る疾患をいい、例としては、動脈硬化性疾患（例えば、
アテローム（粥状）硬化症）、心臓疾患（例えば、心筋
梗塞、不整脈）がある。ここで、「呼吸器系疾患」と
は、気管、気管支、肺などの呼吸器が障害されている疾
患及びそれに関連した症候をいい、例としては、喘息
（即時型、遅発型、アレルギー性喘息等）、気管支喘
息、アレルギー性鼻炎、好酸球浸潤、気管支炎（慢性気
管支炎等）、気道炎症、肺気腫、肺炎、慢性閉塞性肺疾
患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群、呼吸器系高血
圧、呼吸困難、疼痛、咳、痰、嘔吐、息切れがある。

【００２４】本発明の化合物を医薬として用いるために
は、固体組成物、液体組成物、及びその他の組成物のい
ずれの形態でもよく、必要に応じて最適のものが選択さ
れる。医薬組成物は、本発明の化合物に製薬学的に許容
されるキャリヤー、すなわち常用の賦形剤、増量剤、結
合剤、崩壊剤、 pH調整剤、溶解剤、などを添加し、常
用の製剤技術によって、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒
剤、粉剤、液剤、乳剤、懸濁剤、注射剤、などに調製す
る事ができる。賦形剤、増量剤としては、たとえば、乳
糖、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、タルク、ゼ
ラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、オリーブ油、
ゴマ油、カカオバター、エチレングリコールなどやその
他常用されるものをあげる事ができる。製剤の酸化を防
止するためには、酸化防止剤（トコフェロール等）を添
加したり、シクロデキストリン等の包接剤で包接した
り、ゼラチン等の皮膜でカプセル化することができる。
更に、前記化合物を、乳化剤として、リン脂質あるいは
非イオン界面活性剤を用いて、Ｏ／Ｗ型製剤として、特
開平６−２９８６４２に記載のように調製することがで
きる。乳化剤は、単独あるいは２種以上組み合わせて使
用でき、添加量は、適宜でよいが、０．００１〜１０％
（Ｗ／Ｖ）、好ましくは０．０１〜５％（Ｗ／Ｖ）であ
る。リン脂質としては、大豆由来リン脂質、卵黄由来リ
ン脂質、リゾレシチン、フォスファチジルコリン（レシ
チン）、フォスファチジルセリンなどの単独あるいは組
み合わせが使用可能である。非界面活性剤としては、分
子量５００〜１５０００のポリオキシエチレン−ポリオ
キシプロピレンブロック共重合体（例えば、プルロニッ
クＦ−６８）、分子量１０００〜１００００のポリアル
キレングリコール、分子量１０００〜２００００のポリ
オキシアルキレン共重合体、硬化ヒマシ油ポリオキシア
ルキレン誘導体、ヒマシ油ポリオキシアルキレン誘導
体、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸
エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチ
レンヒマシ油、硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンアル
キルエーテル、ショ糖脂肪酸エステルなどの単独あるい
は組み合わせが好適に用いられるがこれに限定されな
い。本発明に於ける各化合物の配合量は医薬を基準とし
て 約0.0001〜約100 mg /kg体重／日を１日１回又は数
回に分けて経口又は非経口で投与することができる。こ
の投与量は、疾患の種類、患者の年齢、体重、症状によ
り適宜増減することができる。

【００２５】本発明の化合物は、以下の製造法によって
製造することができる。式Ｉの化合物の製造法につい
て、反応原料の調製例を含めて以下に説明する。（１）反応原料の調製例 （Ａ）アルケニル化剤の合成 一般式Ｖ

【化１５】 （式中、Ｒは、置換されてもよい直鎖状または分岐鎖状
のＣＨ₃Ｃ_nＨ_(2n-2m)−（ｎは、２から１９の間のいず
れかの整数であり、ｍは、不飽和数を表し、０から３の
間のいずれかの整数である）または置換されてもよいア
リール基であり、Cpはシクロペンタジエニル基を表す）
で表される有機ジルコニウム化合物に、ジアルキル亜鉛
を以下のように作用させてアルケニル化剤を調製する。

【化１６】 上記反応は、一般式Ｖで表される有機ジルコニウム化合
物に対し、好ましくは当モル量のジアルキル亜鉛を用い
て行うことができる。ジアルキル亜鉛としては低級ジア
ルキル亜鉛（例えば、ジメチル亜鉛またはジエチル亜
鉛）が好適である。一般式Ｖで表される有機ジルコニウ
ム化合物は、公知の方法（J. Schwartzら,Org. Synth.,
1992, Vol. 71, p. 83）により、水素化ジルコノセン
クロリドと１−アルキンまたはアリールアセチレン類を
有機溶媒中で作用させることにより調製される。一般式
Ｖで表される有機ジルコニウム化合物の生成に用いる水
素化ジルコノセンクロリドは市販品を用いることがで
き、また公知の方法（S.L. Buchwaldら, Org. Synth.,
1992, Vol. 71, p. 77）により安価な二塩化ジルコノセ
ンから調製することもできる。一般式Ｖで表される有機
ジルコニウム化合物の生成に用いる１−アルキンは炭素
数５から２２の直鎖状または分岐状のものを用いること
ができ、また分子内に二重結合が含まれていてもよい。
具体的には１−オクチン、１−ドデシン、１−ペンタデ
シン等であり、特に炭素数１５の１−ペンタデシンの場
合は天然物中に最も多いＣ18スフィンゴシンが得られ
る。また、アリールアセチレン類を用いることもでき、
アリール上に置換基を有してもよい。具体的には、フェ
ニルアセチレン、４−クロロフェニルアセチレン、１−
ナフチルアセチレン等である。

【００２６】（Ｂ）Ｎ−保護した（Ｓ）−ホルミルオキ
サゾリジン誘導体の合成 下記式ＩＩＩのＮ−保護した（Ｓ）−ホルミルオキサゾ
リジン誘導体は従来法で合成することができ、例えば、
（Ｓ）−セリンからGarnerらの方法（J. Org.Chem., 19
87, Vol. 52, 2361, Org. Synth., 1991, Vol. 70, p.
18） によって合成することができ、また市販品を用い
ることもできる。

【化１７】 （式中ＡはＮの保護基であり、Ｂ及びＣはアルキル基
（例えば、メチル基、エチル基など）または、Ｂ及びＣ
はこれらが結合する炭素原子と一緒になって環状アルキ
ル基（例えば、シクロペンチル基、シクロヘキシル基な
ど）を形成してもよい）ここで、Ｎの保護基Ａとして
は、例えば、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、ｔ−ブ
トキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｔ−アミルオキシカルボ
ニル（Ａｏｃ）、イソボニルオキシカルボニル、ｐ−メ
トキシベンジルオキシカルボニル、２−クロル−ベンジ
ルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、
などの基が挙げられる。好ましくは、Ｂｏｃが用いられ
る。

【００２７】（２）式Ｉの化合物の合成 式Ｉの化合物の合成スキームを以下に示す。

【化１８】

【００２８】第１工程： 上記（１）（Ａ）で得たアル
ケニル化剤と、上記（１）（Ｂ）で得た式ＩＩＩのＮ−
保護した（Ｓ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体とを反
応させて、式ＩＩのスレオ体を選択的に得る。

【化１９】 上記反応溶媒としては、スレオ体を選択的に得るために
は塩化メチレンなどのハロゲン化炭化水素が好適であ
る。反応温度は−30〜30℃、特に−20〜０℃が好まし
い。反応時間は数時間程度で十分である。これにより天
然型と水酸基の立体配置が異なるスレオ体ＩＩが選択的
（スレオ／エリスロ＝９／１以上）に得られる。

【００２９】次に、式ＩＩ化合物に対し、下記に示す第
２−４工程に対応する、アセタール型保護基の除去、
１級水酸基の選択的リン酸エステル化、全保護基の
除去、の３工程の順序で行うことによりスレオ体を得る
簡便な製造法が本発明により確立された。以下に詳しく
説明する。なお、特表平８−500816号公報、Bioorg. Me
d. Chem. Lett., 1992, Vol. 2,p. 973記載のエリスロ
体を製造する方法と同様の方法を用いることにより化合
物ＩＩからスレオ型式Ｉを製造することができるが、こ
の方法では２級水酸基の保護を要するため５工程であ
り、各工程間でクロマトグラフィーによる精製を要し、
操作が極めて煩雑であるので、下記の方法のほうが簡便
である。

【００３０】第２工程： 化合物ＩＩのオキサゾリンを
開環してアセタール型保護基を除去し、一般式ＶＩ

【化２０】 （式中のＲ及びＡは前記と同じ）で表されるアミノ基が
保護されたアルコール化合物を得る。反応は溶媒中で塩
酸、p-トルエンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、
強酸性イオン交換樹脂等の酸を用いて、−２０〜１００
℃において、数十分から数十時間で行うことができる。
ただし、アミノの保護基が除去されないような反応条件
を選ぶことが重要である。約９０％酢酸水溶液中で約50
℃に加熱して行うのが特に好ましく、数時間で反応が完
了する。

【００３１】第３工程： 第２工程で得られたアミノ基
が保護されたアルコール化合物（化合物ＶＩ）から下記
の1-リン酸類縁体（化合物ＶＩＩ）へ変換する。

【化２１】 （式中Ｒ及びＡは前記と同じ、Ｒ'は低級アルキル基
（例えば、メチル基又はエチル基）である） 上記反応は、化合物ＶＩの２つの水酸基のうち１級水酸
基を選択的に反応させるために有効な公知のリン酸化剤
を用いて行うことができる。最も簡便で好ましい方法
は、以下に詳細を説明する、A. Bielawskaらにより報告
された方法（Tetrahedron Lett., 2000, Vol. 41, p. 7
821）である。なお、選択的リン酸化法としてホスホロ
アミダイト法も提案されている（A. Boumendjelら, J.
Lipid. Res., 1994, Vol. 35, p. 2305）が、リン試薬
を調製する必要があること、酸化の工程が必要であるの
で、下記方法の方が好ましい。A. Bielawskaらの方法に
よれば、化合物ＶＩに対して亜リン酸トリアルキルと四
臭化炭素を有機塩基（例えば、ピリジン）中で作用させ
る。リン酸化剤としては亜リン酸トリメチルまたは亜リ
ン酸トリエチルが好適であり、使用量は化合物ＶＩに対
し１〜３当量で十分である。また四臭化炭素の使用量も
ＶＩに対し１〜３当量が好適である。反応は、−２０℃
〜５０℃、好ましくは０℃〜室温で、数十分間から十数
時間で行うことができる。

【００３２】第４工程： 化合物ＶＩＩのアミノ基及び
リン酸基の各保護基を除去する。第４工程の反応は溶媒
中、酸性物質を作用させて行うことができる。酸性物質
としては、臭化トリメチルシラン、ヨウ化トリメチルシ
ラン、又は塩化トリメチルシランとヨウ化ナトリウムの
組み合わせ等が好適であり、使用量はＶＩＩに対し３〜
10当量、特に５〜６当量が好適である。溶媒としては塩
化メチレンなどのハロゲン化炭化水素が好適である。反
応温度は、室温〜４０℃が好ましい。また、リン酸基上
の保護基が、用いる酸性物質によって他の基（例えば、
トリメチルシリル（ＴＭＳ）基）に変換される場合に
は、変換された基は、反応溶媒を留去した後、反応液を
酸性にし、加水分解することにより、除去することがで
きる。最後に、濃縮後、揮発性酸性物質を共沸留去し再
結晶（例えば、THF−水混合溶媒等から）することによ
り、純粋な化合物Ｉを得ることができる。結晶が析出し
難い場合は、シリカゲルクロマトグラフィーによる精製
を行い、必要があればさらに再結晶を行う。

【００３３】

【実施例】本発明を実施例によりさらに具体的に説明す
るが、これは本発明の技術範囲を限定するものではな
い。 （実施例１）スレオ−Ｃ15−スフィンゴシン−１−リン
酸（化合物Ｉにおいて、Ｒ＝n-C₁₀H₂₁）の合成 １．スレオ−Ｃ15−N-Boc-N,1O-イソプロピリデン−ス
フィンゴシン（化合物ＩＩにおいてＲ＝n-C₁₀H₂₁、Ａ＝
Ｂｏｃ、Ｂ＝ＣＨ₃、Ｃ＝ＣＨ₃）の合成 アルゴン雰囲気下、水素化塩化ジルコノセン490mg (1.8
mmol)を塩化メチレン２mlに懸濁させ、氷冷しながら、
１−ドデシン（Ｒ＝n-C₁₀H₂₁）310 mg (1.8 mmol)の塩
化メチレン溶液２ mlを加え、室温下１時間攪拌して化
合物Ｖを調製した。この反応液を−20℃に冷却した後、
ジエチル亜鉛の1.0 Mヘキサン溶液1.8 ml(1.8 mmol)を
加え、約10分間攪拌した。そこへアルデヒド化合物ＩＩ
Ｉ（Ａ＝Ｂｏｃ、Ｂ＝ＣＨ₃、Ｃ＝ＣＨ₃）118 mg (1.0
mmol)の塩化メチレン溶液２ mlを加え、−20〜０℃で
３時間攪拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、
酢酸エチルを加えてしばらく攪拌した。生じた沈殿を濾
過し、酢酸エチルにて洗浄した。層を分離し、有機層を
飽和食塩水で洗浄した後、水層をまとめて酢酸エチルで
２回抽出した。有機層をまとめて無水硫酸ナトリウムを
加えて乾燥し、濾過・濃縮乾固を行うと淡黄色オイルが
600mg残った。これをシリカゲルクロマトグラフィー
（ヘキサン／酢酸エチル＝９：１→６：１→４：１）で
精製することにより標題化合物を無色油状物質として35
0 mg(収率88％)得た。 [α]_D −41.4°(c 1.26, CHCl₃)¹ H-NMR（C₆D₆, 80 ℃）:δ (ppm) 0.89 (3H, t, J = 6.
6 Hz), 1.28 (16H, s),1.40 (9H, s), 1.45 (3H, s),
1.64 (3H, s), 1.99 (2H, q, J = 6.7 Hz), 3.69(1H,
d, J = 6.3, 9.3 Hz), 3.90 (1H, dd, J = 1.8, 9.3 H
z), 3.95 (1H, dt,J = 1.5, 6.6 Hz), 4.41 (1H, t, J
= 7.0 Hz), 5.53 (1H, dd, J = 7.1, 15.4Hz), 5.71 (1
H, dt, J = 6.7, 15.4 Hz),m/z (CI): C₂₃H₄₄NO₄ (M+H)
⁺としての計算値, 398.3200, 実測値 398.3212

【００３４】２．スレオ−Ｃ15−Boc-スフィンゴシン
（化合物ＶＩにおいてＲ＝n-C₁₀H₂₁、Ａ＝Ｂｏｃ）の合
成 １で得られた化合物95mg（0.24 mmol）を酢酸0.9mlと水
0.1mlに溶かし、50℃で５時間攪拌した。溶媒留去後、
ヘプタン１mlを加えて濃縮乾固すると淡黄色オイルが残
った。これをシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン
／酢酸エチル＝２：１→１：１）で精製することにより
標題化合物を無色油状物質として70 mg（収率82%）得
た。 [α]_D −1.6°(c 1.78, CHCl₃)¹ H-NMR（270 MHz, CDCl₃）:δ (ppm) 0.87 (3H, t, J =
6.7 Hz), 1.25 (14H, s), 1.34 (2H, m), 1.43 (9H,
s), 2.02 (2H, q, J = 6.7 Hz), 2.82 (1H, ブロード),
3.61 (1H, m), 3.77 (2H, d-様, 3.7 Hz), 4.33 (1H,
m), 5.18 (1H, d,J = 7.6 Hz), 5.50 (1H, dd, J = 6.
3, 15.6 Hz), 5.74 (1H, dt, J = 6.7, 15.4 Hz)¹³ C-NMR (CDCl₃) 14.1, 22.6, 28.3, 28.4, 29.0, 29.
2, 29.3, 29.5, 29.6, 31.9, 32.3, 55.5, 64.2, 73.4,
79.7, 128.9, 134.0, 156.6 元素分析値（C₂₀H₃₉NO₄として） 実測値（％）：C 67.08; H11.15; N 3.87 計算値（％）：C 67.19; H10.99; N 3.92

【００３５】３．スレオ−Ｃ15−スフィンゴシン−１−
リン酸エステル（化合物ＶＩＩにおいてＲ＝n-C₁₀H₂₁、
Ａ＝Ｈ、Ｒ’＝ＣＨ₃）の合成 窒素雰囲気下、２で得られた化合物65 mg (0.18 mmol)
と四臭化炭素135 mg（0.4 mmol）をピリジン1 mlに溶か
し、冷却しながら亜リン酸トリメチル50 mg（0.4 mmo
l）を加え、室温下５時間攪拌した。そこへ飽和塩化ア
ンモニウム水溶液と酢酸エチルを加えてしばらく攪拌し
た後、層を分離した。有機層を飽和食塩水で洗浄した
後、水層をまとめて酢酸エチルで２回抽出した。有機層
をまとめて無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥し、濾過・
濃縮乾固を行うと淡黄色オイルが残った。これをシリカ
ゲルクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１：
１→１：２）で精製することにより標題化合物が無色油
状物として59 mg (収率70％）得られ、出発物質（２で
得られた化合物）が9 mg（14％）回収された。 [α]_D −5.4°(c 1.4, CHCl₃)¹ H-NMR（270 MHz, CDCl₃）:δ (ppm) 0.87 (3H, t, J =
6.6 Hz), 1.25 (14H, s), 1.33 (2H, m), 1.42 (9H,
s), 2.02 (2H, q, J = 6.7 Hz), 3.77 (3H, d, J= 11.2
Hz), 3.78 (3H, d, J = 11.2 Hz), 3.79 (1H, m), 4.0
9 (2H, m), 4.33(1H, m), 5.03 (d, J = 9.0 Hz), 5.46
(1H, dd, J = 6.0, 15.4 Hz), 5.76 (1H, dt, J = 6.
7, 15.4 Hz)¹³ C-NMR (CDCl₃) 14.1, 22.7, 28.3, 29.1, 29.2, 29.
3, 29.5, 29.57, 29.61,29.7, 31.9, 32.3, 54.0, 54.
4, 54.7, 66.1, 70.0, 79.7, 128.4, 134.0, 156.0 m/z
(CI): C₂₂H₄₅NO₇P (M+H)⁺としての計算値, 466.2863,
実測値, 466.2855

【００３６】４．スレオ−Ｃ15−スフィンゴシン−１−
リン酸（化合物ＩにおいてＲ＝n-C₁₀H ₂₁）の合成 ３で得られた化合物23 mg（0.05 mmol）を塩化メチレン
１mlに溶かして冷却し、臭化トリメチルシラン50 micro
L（0.3 mmol）を加え、室温下３時間攪拌した。この溶
液を濃縮後、ジオキサン0.5 mlと水0.5 mlを加え、約２
時間攪拌した。これを濃縮し、メタノール１mlを加え再
び濃縮した。残さ20 mgをＴＨＦ−水（２：１）から再
結晶することにより標題化合物を無色固体として12 mg
（収率71％）得た。¹ H-NMR（270 MHz, CD₃OD-CD₃CO₂D, 3:1）:δ (ppm) 0.8
7 (3H, t, J = 6.7 Hz),1.27 (14H, s), 1.39 (2H, m),
2.07 (2H, q, J =6.6 Hz), 3.41 (1H, m), 3.92 (1H,
dd, J = 7.0, 12.1 Hz), 4.06 (1H, m), 4.17 (1H, t,
J = 7.8 Hz), 5.45 (1H, dd, J = 7.7, 15.3 Hz), 5.86
(1H, dt, J=6.6, 15.1 Hz)m/z (CI): C₁₅H₃₄NO₅P (M+
H)⁺としての計算値, 338.2026, 実測値, 338.2051.

【００３７】（実施例２）スレオ−Ｃ18−スフィンゴシ
ン−１−リン酸（化合物Ｉにおいて、Ｒ＝n-C₁₃H₂₇）の
合成 １．スレオ−Ｃ18−N-Boc-N,1O-イソプロピリデン−ス
フィンゴシン（化合物ＩＩにおいて、Ｒ＝n-C₁₃H₂₇、Ａ
＝Ｂｏｃ、Ｂ＝ＣＨ₃、Ｃ＝ＣＨ₃）の合成 実施例１の１と同様に合成した。無色油状物。収率86％ [α]_D −37.8°(c 0.84, CHCl₃)¹ H-NMR（C₆D₆, 80 ℃）:δ (ppm) 0.89 (3H, t, J = 6.
7 Hz), 1.31 (22H, s),1.40 (9H, s), 1.45 (3H, s),
1.64 (3H, s), 1.99 (2H, q, J = 6.8 Hz), 3.69(1H, d
d, J = 6.3, 9.0 Hz), 3.90 (1H, dd, J = 1.5, 9.3 H
z), 3.95 (1H, dt, J = 1.5, 6.6 Hz), 4.41 (1H, t, J
= 7.0 Hz), 5.53 (1H, dd, J = 6.8, 15.3 Hz), 5.71
(1H, dt, J = 6.7, 15.4 Hz),¹³ C-NMR (C₆D₆) 14.1, 23.0, 24.3, 27.1, 28.4, 28.5,
29.5, 29.6, 29.7, 29.9, 30.1, 32.3, 32.6, 62.5, 6
4.8, 74.8, 80.3, 94.6, 130.6, 134.0, 156.6 m/z (C
I): C₂₆H₅₀NO₄ (M+H)⁺としての計算値: 440.3670, 実測
値:440.3652

【００３８】２．スレオ−Ｃ18−Boc-スフィンゴシン
（化合物ＶＩにおいて、Ｒ＝n-C₁₃H₂₇、Ａ＝Ｂｏｃ）の
合成 実施例１の２と同様に合成した。無色固体。収率80％ 融点：58〜60℃ [α]_D −0.7°(c 1.6, CHCl₃)¹ H-NMR（270 MHz, CDCl₃）:δ (ppm) 0.87 (3H, t, J =
6.7 Hz), 1.25 (20H, s), 1.34 (2H, m), 1.44 (9H,
s), 2.03 (2H, q, J = 6.8 Hz), 2.60 (1H, ブロード),
3.61 (1H, m), 3.78 (2H, d-様, 3.7 Hz), 4.34 (1H,
dd, J = 2.9, 6.1Hz), 5.18 (1H, d, J = 7.6 Hz), 5.5
0 (1H, dd, J = 6.5, 15.5 Hz), 5.74 (1H, dt, J = 6.
8, 15.4 Hz)¹³ C-NMR (CDCl₃) 14.1, 22.7, 28.3, 28.4, 29.0, 29.
2, 29.3, 29.5, 29.58, 29.63, 29.7, 31.9, 32.3, 55.
5, 64.3, 73.4, 79.7, 128.9, 134.0, 156.6 元素分析値（C₂₃H₄₅NO₄として） 実測値（％）：C 69.22; H11.45; N 3.47 計算値（％）：C 69.13; H11.35; N 3.51

【００３９】３．スレオ−Ｃ18−スフィンゴシン−１−
リン酸エステル（化合物ＶＩＩにおいて、Ｒ＝n-C
₁₃H₂₇、Ａ＝Ｈ、Ｒ’＝ＣＨ₃）の合成 実施例１の３と同様に合成した。無色油状物。収率65％ [α]_D −3.5°(c 1.0, CHCl₃)¹ H-NMR（270 MHz, CDCl₃）:δ (ppm) 0.87 (3H, t, J =
6.6 Hz), 1.25 (22H, s), 1.42 (9H, s), 2.02 (2H,
q, J = 6.7 Hz), 3.77 (3H, d, J = 11.2 Hz), 3.78 (3
H, d, J = 11.2 Hz), 3.79 (1H, m), 4.09 (2H, m), 4.
33 (1H, m), 5.03(d, J = 9.0 Hz), 5.46 (1H, dd, J =
6.0, 15.4 Hz), 5.76 (1H, dt, J = 6.7,15.4 Hz)¹³ C-NMR (CDCl₃) 14.1, 22.7, 28.3, 29.1, 29.2, 29.
3, 29.4, 29.5, 29.58, 29.63, 29.7, 31.9, 32.3, 54.
3, 54.5, 54.6, 66.2, 70.1, 79.7, 128.4, 134.0, 15
6.0 m/z (CI): C₂₅H₅₁NO₇P (M+H)⁺としての計算値, 50
8.3333, 実測値, 508.3335

【００４０】４．スレオ−Ｃ18−スフィンゴシン−１−
リン酸（化合物Ｉにおいて、Ｒ＝n-C_{1 3}H₂₇）の合成 実施例１の４と同様に合成した。無色固体。収率62％¹ H-NMR（270 MHz, CD₃OD-CD₃CO₂D, 3:1）:δ (ppm) 0.8
7 (3H, t, J = 6.6 Hz),1.26 (20H, s), 1.38 (2H, m),
2.06 (2H, q, J =6.6 Hz), 3.37 (1H, m), 3.95 (1H,
dd, J = 7.0, 12.1 Hz), 4.07 (1H, m), 4.19 (1H, t,
J = 7.8 Hz), 5.44 (1H, dd, J = 7.7, 15.3 Hz), 5.86
(1H, dt, J = 6.6, 15.2 Hz) 元素分析値（C₁₈H₃₈NO₅Pとして） 実測値（％）：C 56.82; H11.35; N 3.57 計算値（％）：C 56.97; H10.09; N 3.69

【００４１】（実施例３）スレオ−２−アミノ−３−シ
ンナミル−１，３−ジオール−１−リン酸（化合物Ｉに
おいて、Ｒ＝C₆H₅）の合成 １． スレオ−シンナミルアルコール誘導体（化合物Ｉ
Ｉにおいて、Ｒ＝C₆H₅、Ａ＝Ｂｏｃ、Ｂ＝ＣＨ₃、Ｃ＝
ＣＨ₃）の合成 フェニルアセチレン103 mg (1.0 mmol)、水素化塩化ジ
ルコノセン265 mg (1.0mmol)、ジエチル亜鉛1.0 Mヘキ
サン溶液0.9 ml (0.9 mmol)、アルデヒド化合物ＩＩＩ
（Ａ＝Ｂｏｃ、Ｂ＝ＣＨ₃、Ｃ＝ＣＨ₃）135 mg (0.6 mm
ol)を用いて実施例１の１と同様に合成したところ、標
題化合物が無色油状物質として180 mg（収率92％）得ら
れた。 [α]_D −89.1°(c 1.48, CHCl₃)¹ H-NMR（C₆D₆, 80 ℃）:δ (ppm) 1.39 (9H, s), 1.42
(3H, s), 1.59 (3H, s),3.67 (1H, dd, J = 6.3, 9.3 H
z), 3.94 (1H, dd, J = 2.0, 9.3 Hz), 4.02 (1H, dt,
J = 2.0, 6.4 Hz), 4.60 (1H, t, J = 6.7 Hz), 6.22
(1H, dd, J = 7.1, 15.9 Hz), 6.62 (1H, d, J = 15.9
Hz), 7.00-7.15 (3H, m), 7.26 (2H, m)¹³ C-NMR (C₆D₆, 80 ℃) 24.3, 27.1, 28.5, 62.5, 64.
5, 74.4, 80.4, 94.6, 127.0, 127.1, 128.8, 128.9, 1
29.9, 132.7, 156.6m/z (CI): C₁₉H₂₈NO₄ (M+H)⁺として
の計算値：334.1948, 実測値：334.1962

【００４２】２．シンナミル型スレオ−Ｂｏｃアミノア
ルコール誘導体（化合物ＶＩにおいて、Ｒ＝C₆H₅、Ａ＝
Ｂｏｃ）の合成 実施例１の２と同様に合成した。化合物ＩＩ（Ｒ＝C
₆H₅）84 mg (0.25mmol)から標題化合物が無色固体とし
て66 mg（収率89％）得られた。 融点：78〜80℃ [α]_D ＋11.3°(c 1.32, CHCl₃)¹ H-NMR（270 MHz, CDCl₃）:δ (ppm) 1.43 (9H, s), 2.
03 (2H, q, J = 6.8 Hz), 3.75 (1H, ブロード), 3.79
(1H, m), 3.85 (2H, ), 4.64 (1H, m), 5.37 (1H, d, J
= 8.3 Hz), 6.27 (1H, dd, J = 5.9, 15.9 Hz), 6.69
(1H, d, J = 15.9Hz), 7.22-7.42 (5H, m)¹³ C-NMR (CDCl₃) 28.2, 55.6, 63.5, 72.6, 79.9, 126.
5 (2C), 127.7, 128.5 (2C), 128.8, 131.4, 136.5, 15
6.6 元素分析値（C₁₆H₂₃NO₄として） 実測値（％）：C 65.24; H 8.03; N 4.67 計算値（％）：C 65.51; H 7.90; N 4.77

【００４３】３．シンナミル型スレオ−Ｂｏｃアミノア
ルコールリン酸エステル（化合物ＶＩＩにおいて、Ｒ＝
C₆H₅、Ａ＝Ｈ、Ｒ’＝ＣＨ₃）の合成 実施例１の３と同様に合成した。無色油状物。収率65％ [α]_D +0.9°(c 0.9, CHCl₃)¹ H-NMR（270 MHz, CDCl₃）:δ (ppm) 1.37 (9H, s), 3.
76 (3H, d, J = 11.2 Hz), 3.78 (3H, d, J = 11.1 H
z), 3.93 (1H, m), 4.15 (2H, m), 4.58 (1H, m),5.12
(d, J = 8.3 Hz), 6.20 (1H, dd, J = 5.4, 16.0 Hz),
6.70 (1H, d, J =16.0 Hz), 7.18-7.40 (5H, m)¹³ C-NMR (CDCl₃) 28.2, 54.3, 54.5, 54.6, 66.0, 66.
9, 79.8, 126.5 (2C), 127.6, 128.3, 128.5 (2C), 13
1.6, 136.6, 156.0m/z (CI): C₁₈H₂₉NO₇P (M+H)⁺として
の計算値：402.1611, 実測値：402.1632

【００４４】４．スレオ−２−アミノ−３−シンナミル
−１，３−ジオール−１−リン酸（化合物Ｉにおいて、
Ｒ＝C₆H₅）の合成 実施例１の４と同様に合成した。反応後の濃縮物からは
結晶化できなかったため、シリカゲルクロマトグラフィ
ー（展開溶媒：n-ブタノール／酢酸／水＝６：１：１）
により精製した。無色固体。収率41％¹ H-NMR（270 MHz, CD₃OD-CD₃CO₂D, 4:1）:δ (ppm) 3.6
5 (1H, m), 4.03 (1H, m), 4.14 (2H, m), 6.22 (1H, d
d, J = 6.0, 16.0 Hz), 6.80 (1H, d, J = 16.0Hz), 7.
22-7.40 (5H, m)

【００４５】（実施例４） Edg受容体応答性試験 HL 60細胞を細胞銀行より入手し、BBRC `98, 263, p. 2
53記載の方法に従って、10%ウシ胎児血清を含有したRPM
I -1640培地 (Gibco)を用いて約50継代培養し、Edg受容
体を細胞表面に発現している前骨髄芽腫細胞株 HL60を
調製した。このEdg受容体を細胞表面に発現している HL
60を用いて、被験物質の細胞応答性を検討した。細胞応
答の指標として、細胞内Ca<sup>2+</sup>濃度の上昇を測定した。な
お、HL60細胞表面上のEdg受容体は、SPN - 1 Pと結合す
ると、Gタンパク質をリン酸化し、IP<sub>3</sub>キナーゼを活性化
した後に細胞内 Ca<sup>2+</sup>濃度が上昇する事が報告されてい
る(FEBS Letter `96, 379, p. 260, BBRC `98, 253, p.
253)ので、細胞内 Ca²⁺濃度がEdg受容体応答性の指標
となる。Ca²⁺キレート試薬Fura - 2 AMをHL 60細胞に取
り込ませた。石英製セル内に細胞懸濁液 1.2 mlを充填
し、蛍光光度計 LS - 50 B（パーキンエルマー、細胞測
定用）に装着し、0.5秒毎に励起波長を340 nm（Ca²⁺を
キレートしたFura - 2を励起）と380 nm（未反応Fura -
2を励起）に交互に切り替え、510 nmの蛍光光度を測定
した。被験物質（実施例１、２または３の化合物）を30
microM終濃度で、マイクロシリンジを用いて加えた後
蛍光光度を追跡してCa²⁺が増加するかどうか検討した。
また、被験物質添加後に 1 microMのSPN - 1Pを追加し
た際、Ca²⁺が増加するかどうか確認し、各物質のSPN -
1P拮抗性について検討した。実施例１または２の化合物
を添加した後、SPN - 1P追加による細胞内Ca²⁺濃度増加
が阻止された事より、これらの物質が Edg拮抗性である
可能性が示唆された。次に、拮抗の可能性が示唆された
実施例１、２または３の化合物による細胞内Ca²⁺増加阻
止作用の用量依存性を検討した。対照として、既に拮抗
作用が確認されているスラミンを用いた。実験手法は、
各濃度の被験物質添加後 SPN - 1 P（1 micro M)を添加
した以外は上述と同様に行った。また、Ca²⁺濃度増加
は、陰性対照群（薬剤無添加）でのCa²⁺増加濃度に対す
る相対値として、Ca²⁺増加濃度%で評価した。その結
果、実施例１の化合物が0.003〜0.03 microM濃度におい
て、実施例２の化合物および実施例３の化合物が0.01〜
0.1 microM濃度において、用量依存的にSPN - 1Pによる
Ca²⁺濃度増加を抑制した。その結果を図１に示す。ま
た、細胞内Ca²⁺増加の50%阻止濃度（ED₅₀値）が、実施
例１の化合物で 0.015±0.007 microM、実施例２の化合
物で 0.030±0.002 microM、実施例３の化合物で 0.037
±0.014 microMであったが、既に Edg拮抗性が報告され
ているスラミンの ED₅₀値 1.8±0.1 microMと比較する
と実施例１の化合物の作用強度は凡そ100倍、実施例２
の化合物の作用強度は凡そ 60倍強かった。その結果を
表１に示す。

【表１】

【００４６】（実施例５） 血管平滑筋に及ぼす作用 被験物質について血管平滑筋増殖への作用を検討した。
動脈硬化症の進行に伴って血管平滑筋細胞が収縮型から
合成型に形質転換し、炎症性サイトカインを分泌しなが
ら血管平滑筋細胞が増殖し動脈硬化巣が進展すると考え
られている（ロスの仮説）。血管平滑筋細胞の表面には
Edg受容体が発現している事が報告されており（ The A
merican Society for Pharmacology andExperimental T
herapeutics' 00, Vol. 58, 449頁）、SPN - 1 Pと同
様、Edg受容体に作動するスフィンゴシルフォスフォリ
ルコリンに応答して血管平滑筋細胞が増殖する事が報じ
られている ( The American Physiological Society 9
8, C1255頁)。従って、今回、実施例 1の化合物による
血管平滑筋増殖への作用を検討した。陽性対照として、
Edg受容体拮抗性が確認されているスラミンを用いた。
ラット頚動脈内膜をバルーニングによって擦過し、 2週
間後にエクスプラント法 (Explant culture)によって調
製した血管平滑筋細胞を 10%牛胎児血清を含んだDMEM培
地 (Gibco)にて培養し、数回継代し安定させた後、 5×
10³細胞 / cm²の細胞密度に蒔種し実験に用いた。増殖
因子スフィンゴシルフォスフォリルコリン ( 10 microM
)と併せて実施例1の化合物、或いはスラミンを上述細
胞に添加し、24時間後、BrdUアッセイ (Science '82, 2
18, p.474)によって細胞密度を測定した。その結果、実
施例 1の化合物は 0.3〜3 microM濃度において、用量依
存的に血管平滑筋細胞増殖を抑制した。なお、陽性対照
として用いたスラミンについては30、 100 microM濃度
において血管平滑筋細胞増殖を抑制した。その結果を図
２に示す。

【００４７】(実施例 ６) ³H - SPN - 1 Pを用いた競
合実験 実施例４と同じＥｄｇ受容体を細胞表面に発現している
前骨髄芽腫細胞株ＨＬ６０を用いた。ＨＬ60細胞を遠心
分離によって回収後 F- 12培地（ 4℃保存、 10 ml）に
懸濁し、 RI実験室に搬入した。細胞懸濁液 200 micro
l（ 1×10⁶ 細胞/ml F- 12）に、終濃度 1 nMの³H- SPN
- 1 P( 15 micro Ci/1 mM) と終濃度 100 nMの非標識
化合物（実施例 1化合物、実施例 2化合物、実施例３化
合物）を加え、 4℃にて 30分間（時々撹拌して）結合
試験を行った。 7分間 12,000 rpmにて遠心分離後、上
澄を素早く（細胞ペレットを傷付けない様に）マイクロ
ピペッターで捨て去り、細胞ペレットをレディソルブ
(ベックマン) 1.5 mlで懸濁後バイアルに移し液体シン
チレーションカウンター L 2100(ベックマン)で放射活
性を測定した。 その結果を以下の表２に示す。この結
果より、 SPN - 1 Pと同様、実施例 1化合物、実施例
2化合物、実施例３の化合物が、 ³H - SPN - 1 Pに競
合した事より、これらの物質が Edgと特異的に結合して
いると考えられた。

【表２】

【００４８】（実施例７） 疑似血管モデルを用いた抗
炎症試験 体内の損傷部位で、露出を受けたコラーゲン（細胞外マ
トリックス）が損傷シグナルとして標的になり、血小板
が凝集してくるが、凝集して活性化した血小板から放出
される PDGFなどの炎症性サイトカインは、炎症を進行
させ、また重度の炎症は循環器の恒常性を破錠させ、動
脈硬化を進行させると考えられている。ＳＰＮ−１Ｐ
も、PDGFと同様の作用を有すると考えられている。そこ
で、ＳＰＮ−１Ｐを炎症惹起剤として用いて、疑似血管
in vitroモデルを確立し、そのモデルを用いて、本発
明化合物が抗炎症作用を示すかどうか、それによって循
環器の恒常性を維持し、病態を改善する方向に作用する
可能性があるか否か検討した。

【００４９】（１）疑似血管in vitro炎症モデルの確
立 ３μｍ孔の多孔膜により上室と下室とに区切られたトラ
ンスウェルを用い、トランスウェル上室底面の孔膜上に
一層のウシ内皮細胞を培養し、トランスウェル上室に蛍
光標識した好中球浮遊液を加え、下室にＳＰＮ−１Ｐを
終濃度 0.1〜10microMとなるように懸濁した。即ち、ト
ランスウェルの上室と下室は内皮層を隔てて隔離され、
上室が血管内部、下室が血管外の炎症部に対応する疑似
血管 in vitro炎症モデルとなっている。上室から内皮
層を潜り抜けて下室へ透過した好中球数、及び、内皮層
に粘着した好中球数を５３０ｎｍの蛍光強度より測定
し、相対的好中球数を以下のように算出した。 相対的好中球数％＝[実験群での好中球（透過及び粘
着）数]／[コントロールでの好中球（透過及び粘着）
数]ｘ１００ （コントロールは、ＳＰＮ−１Ｐ無添加の場合であ
る）。 その結果、ＳＰＮ−１Ｐ 10 microMにて、有意に好中球
の内皮層透過、及び、粘着が促進を受けた（図３参
照）。つまり、ＳＰＮ−１Ｐが炎症惹起物質として作用
していると考えられた。

【００５０】（２）炎症細胞 - 血管内皮細胞相互作用
に及ぼす本発明化合物の作用 次に、上記疑似血管in vitro炎症モデルを用いて、好
中球と血管内皮細胞との相互作用に、実施例２の化合物
がどのように影響するか検討した。即ち、トランスウェ
ル下室に実施例２の化合物を 0.01〜1 microMで添加
し、ＳＰＮ−１Ｐ 10 micro Mを下室に入れて炎症を惹
起した。コントロールは、薬剤無添加で上記と同様に炎
症を惹起したものを用いた。内皮層に粘着した好中球
数、或いは内皮層を抜け下室へ透過した好中球数を５３
０ｎｍの蛍光強度より測定し、相対的好中球数を上記式
より算出した。その結果を図４に示す。図に示されるよ
うに、実施例２の化合物は、好中球透過及び粘着を抑制
した。従って、疑似血管 in vitroモデルに於て、ＳＰ
Ｎ−１Ｐを炎症惹起剤として用いた場合、実施例２の化
合物は抗炎症的に作用する事より、循環器の恒常性を維
持し、病態を改善する方向に作用する可能性が考えられ
る。

【００５１】

【発明の効果】本発明の化合物は、優れたＥｄｇ受容体
拮抗作用を示し、本発明の化合物を有効成分とする医薬
は循環器系疾患（例えば、動脈硬化症、心臓疾患）、が
ん、リウマチ、糖尿病性網膜症、呼吸器系疾患に対して
優れた予防または治療効果を示す。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の化合物が用量依存的にＥｄｇ拮抗性を
示すグラフである（スラミン：対照）。

【図２】本発明の化合物が用量依存的に血管平滑筋細胞
増殖の抑制作用を示すグラフである（スラミン：対
照）。図中、白四角は、被験物質をいれない場合のデー
タであり、また、＊：陰性対照に対し、危険率ｐ≦５％
にて有意に抑制、＊＊：陰性対照に対し、危険率ｐ≦１
％にて有意に抑制を示す。

【図３】内皮細胞-好中球相互作用に及ぼすＳＰＮ−１
Ｐの作用を示す。 *：薬剤無添加のコントロールと比較して危険率 5%にて
有意に促進

【図４】本発明化合物が好中球の血管内皮細胞への移動
に抑制的に作用していることを示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 11/00 Ａ６１Ｐ 11/00 27/02 27/02 29/00 １０１ 29/00 １０１ 35/00 35/00 (72)発明者 西川 正純 茨城県つくば市和台16−２ マルハ株式会 社中央研究所内 (72)発明者 村上 悌一 茨城県つくば市東１−１−１ 独立行政法 人産業技術総合研究所 つくばセンター内 Ｆターム(参考） 4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 DA34 MA01 MA04 NA14 ZA33 ZA36 ZA37 ZA40 ZA45 ZA59 ZA96 ZB15 ZB26 4H050 AA01 AA02 AA03 AB20 AB23 AB25 AB27 AB28 AC40 AC80 BD70

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式Ｉ 【化１】 （式中、Ｒは、置換されてもよい直鎖状または分岐鎖状
   のＣＨ₃Ｃ_nＨ_(2n-2m)−（ｎは、２から１９の間のいず
   れかの整数であり、ｍは、不飽和数を表し、０から３の
   間のいずれかの整数である）または置換されてもよいア
   リール基である）で表される、スレオ型（2S, 3S）アミ
   ノアルコール−１−リン酸化合物またはその製薬学的に
   許容される塩。
2. 【請求項２】一般式Ｉが下記式： 【化２】 で表される、請求項１に記載の化合物またはその製薬学
   的に許容される塩。
3. 【請求項３】一般式Ｉが下記式： 【化３】 で表される、請求項１に記載の化合物またはその製薬学
   的に許容される塩。
4. 【請求項４】一般式Ｉが下記式： 【化４】 で表される、請求項１に記載の化合物またはその製薬学
   的に許容される塩。
5. 【請求項５】（１）一般式Ｖ 【化５】 （式中、Ｒは、置換されてもよい直鎖状または分岐鎖状
   のＣＨ₃Ｃ_nＨ_(2n-2m)−（ｎは、２から１９の間のいず
   れかの整数であり、ｍは、不飽和数を表し、０から３の
   間のいずれかの整数である）または置換されてもよいア
   リール基であり、Cpはシクロペンタジエニル基を表す）
   で表される有機ジルコニウム化合物に、ジアルキル亜鉛
   を作用させて調製したアルケニル化剤と、一般式ＩＩＩ
   のＮ−保護した（Ｓ）−ホルミルオキサゾリジン化合
   物： 【化６】 （式中ＡはＮの保護基であり、Ｂ及びＣはアルキル基で
   ある）とを反応させて、一般式ＩＩのスレオ体（2S, 3
   S）を選択的に得ること、 【化７】 （式中、Ｒ、Ａ、Ｂ及びＣは前記定義と同じ） （２） 化合物ＩＩのオキサゾリンを開環してアセター
   ル型保護基を除去し、アミノ基が保護された一般式ＶＩ
   のアルコール化合物を得ること： 【化８】 （式中、Ｒ及びＡは前記定義と同じ） （３） 一般式ＶＩの化合物から下記一般式ＶＩＩの1-
   リン酸類縁体化合物へ変換すること： 【化９】 （式中、Ｒ及びＡは前記定義と同じであり、Ｒ’は低級
   アルキル基である） （４） 一般式ＶＩＩの化合物のアミノ基及びリン酸基
   の各保護基を除去することを含む、請求項１の化合物の
   製造法。
6. 【請求項６】請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載
   の化合物またはその製薬学的に許容される塩を有効成分
   として含有する、内皮分化遺伝子(Edg)受容体に拮抗す
   る医薬。
7. 【請求項７】循環器系疾患を治療または予防するための
   請求項６の医薬。
8. 【請求項８】循環器系疾患が動脈硬化症である請求項７
   の医薬。
9. 【請求項９】ガンを治療または予防するための請求項６
   の医薬。
10. 【請求項１０】リウマチを治療または予防するための請
    求項６の医薬。
11. 【請求項１１】糖尿病性網膜症を治療または予防するた
    めの請求項６の医薬。
12. 【請求項１２】呼吸器系疾患を治療または予防するため
    の請求項６の医薬。
13. 【請求項１３】循環器系疾患が心臓疾患である請求項７
    の医薬。