JP2008537101A - 薬物応答を予測するための前立腺特異的抗原の使用 - Google Patents

Abstract

対象が薬物に反応する見込みを判定する方法であって、ＰＳＡ関連障害を患っており、かつ上記ＰＳＡ関連障害を治療するための薬物を投与されている対象で、少なくとも１つのＰＳＡ関連値を測定する工程と、上記ＰＳＡ関連値をそれぞれの対照値と比較する工程と、上記対象が上記薬物に反応する見込みを判定する工程とを含み、上記ＰＳＡ関連値が、ＢＰＳＡ量、ｐｒｏＰＳＡ量、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率、ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率、ＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率、およびこれらの組合せからなる群から選択され、かつ上記ＢＰＳＡ量、上記ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率、上記ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率、または上記ＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率がそれぞれの対照値よりそれぞれの第１既定値高い場合、上記ｐｒｏＰＳＡ量がそれぞれの対照値より第２の既定値低い場合、またはこれらの組合せの場合、対象が上記薬物に反応する見込みが高いことを示す方法を開示する。

Description

（発明の分野）
本発明は概ね、薬物反応の指標としての前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）の使用に関する。詳細には、本発明は、対象における様々な形態のＰＳＡの濃度およびそれらの比率の変化によって、対象が薬物治療に反応するかどうかを予測する方法に関する。

（発明の背景）
本出願を通して、様々な参考文献を括弧内に示すか、あるいは直接的に引用する。本発明が属する技術分野の現況をより完全に記述するために、これらの出版物の開示をそれらの全体において参照により本出願に組み込む。これらの参考文献の完全な引用文献目録は、本出願の最後、特許請求の範囲の前に見出すことができよう。

ＰＳＡは、セリンプロテアーゼのヒトカリクレインファミリーのメンバーであり（（１）に広範に概説されている）、キモトリプシン様の酵素活性を有するセリンエンドペプチダーゼである。成熟型ＰＳＡは、Ｎ末端残基としてイソロイシンを有し、分子量２８４００Ｄを有する２３７アミノ酸残基である（２、３）。

ＰＳＡは、血清中で遊離型のＰＳＡ（遊離ＰＳＡ、ｆＰＳＡ）として存在しているが、ＰＳＡの大部分は、アルファ−１−抗キモトリプシン（ＡＣＴ）との複合体中に存在している。血清中の遊離ＰＳＡは酵素的に不活性であることが一般的に認められている。ＰＳＡは、血清プロテアーゼ阻害剤と複合体形成できるセリンプロテアーゼである。ヒト血清は、高レベルのＡＣＴおよびアルファ−２−マクログロブリンを含有しており、これらは両方ともＰＳＡと複合体形成することが示されている（４）。血清中における、イムノアッセイで検出できるＰＳＡの７０％から９５％までがＡＣＴとの複合体中に存在する。残りは複合体形成していない遊離ＰＳＡである（５、６）。

血清中の遊離ＰＳＡ、すなわち複合体形成していないＰＳＡのレベルによって、前立腺肥大症（ＢＰＨ）からの前立腺癌の識別を改善できることが実証されている（５、７）。遊離ＰＳＡ対総ＰＳＡ（遊離ＰＳＡプラス複合体ＰＳＡ）の比率が高いことは、ＢＰＨとさらに強い相関関係にある。最近の研究によって、前立腺の移行領域（ＴＺ）および辺縁領域（ＰＺ）に存在している異なった形態のＰＳＡが同定された。これらの領域は、当技術分野で詳細に定義されている（８）。簡潔には、ＴＺは、緻密な間質中に包埋された小さい単純な腺という特徴を有し、一方、ＰＺは、ゆるい間質中に包埋された小さい腺という特徴を有する。ＴＺ組織は、ＰＺと明確な境界を形成している。癌は主としてＰＺに局在し、一方、ＢＰＨはＴＺの組織拡大の結果であるため、ＰＺおよびＴＺは、最も注目される領域である。広域に及んだＢＰＨを有すると、ＴＺが他の前立腺領域の体積の数倍にまで成長する。ＴＺ組織は、近位の前立腺尿道を囲んでおり、これが理由で、尿流量の制限が、しばしばＢＰＨの結果として起こるＴＺ拡張の症候となっている。

組織中のＰＳＡ形態の検査によって、遊離ＰＳＡは、以下の３つの主要な形態からなることを示した（９）。１）末端欠失型ｐｒｏＰＳＡ形態を含めた、前駆体形態のＰＳＡ（ｐｒｏＰＳＡ）。この形態は、前立腺腫瘍で増大しており、初期および高悪性度の前立腺癌を検出するための良い血清マーカーであることが示されている（１０〜１２）。２）ＢＰＳＡ。この形態は、結節性過形成の移行領域組織で増大しており（１３）、ＢＰＨを有する男性の血清中で増大している（１４）。３）ｉｎＰＳＡとして知られている第３の形態の遊離ＰＳＡ。この形態は、遊離ＰＳＡからＢＰＳＡ形態およびすべてのｐｒｏＰＳＡ形態を引くことによって計算される（９、１５）。ｉｎＰＳＡは、ＢＰＳＡのように内部で切断されたペプチド結合を含有せず、かつｐｒｏＰＳＡ形態のようなプロリーダーペプチドを含有せず、なおそれでも酵素的に不活性であり、したがって血清プロテアーゼ阻害剤と共有結合した複合体を形成しない、完全で不活性なＰＳＡで構成されていると考えられている。ひとたび総ｐｒｏＰＳＡ、ＢＰＳＡ、および総遊離ＰＳＡがイムノアッセイによって測定されれば、ｉｎＰＳＡは、遊離ＰＳＡからｐｒｏＰＳＡおよびＢＰＳＡを引くことによって計算される残りの遊離ＰＳＡである。したがって、遊離ＰＳＡは、ｐｒｏＰＳＡと、癌に、より関連した形態のＰＳＡである末端欠失型アイソフォームのｐｒｏＰＳＡ（１２、１６）と、ＢＰＨに関連した形態のＰＳＡであるＢＰＳＡと、ｉｎＰＳＡとを含有する。研究によって、ｐｒｏＰＳＡは癌の血清マーカーとして使用できること、そして、ＢＰＳＡは生検陰性の男性の血清中で増大していることが示されている（１４）。

臨床的なＢＰＨを患っている男性は、尿流量の制限、膀胱からの不完全な排尿、および頻繁な排尿の必要など、尿流量に関連した医学的症候を有する（１７）。症候は、５−アルファ−レダクターゼ阻害剤（５ＡＲＩ）と呼ばれる薬物、および一般的にアルファ遮断薬と呼ばれるアルファアドレナリン受容体遮断薬で治療できる。アルファ遮断薬は、前立腺のアドレナリン受容体を遮断することによって迅速に作用する。アルファ遮断薬は、数時間以内に症候の軽減をもたらすが、ＢＰＨ進行の生理学には影響を与えない。したがって、ＢＰＨは、何カ月も何年間にもわたって、アルファ遮断薬がもはや無効となるまで進行し続けることができる。一方、５ＡＲＩは、テストテスロンがその生理的に活性な形態であるジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）に転換するのを阻止することによって作用する。５ＡＲＩは、症候を軽減するのに通常６から１２カ月かかるが、この薬物は、前立腺におけるテストテスロン活性化の生化学経路を変化させ、それによって疾患進行の過程を改変することによって作用する。前立腺における主要な活性アンドロゲンであるＤＨＴがないと、多くの生理的経路が影響を受ける。５ＡＲＩの投与に起因するＤＨＴレベルの低下によって、前立腺組織が縮小し、それによって、最終的な症候の軽減が一部の男性で得られた。

しかし、５ＡＲＩは、有益効果が完全に認識されるであろうときまで、最長１２カ月までの期間がなければならないので、５ＡＲＩ治療からの利益享受が見られない男性の１２カ月間にわたる薬物の費用に加えて、患者の薬剤服用遵守に関する問題がある。したがって、反応する可能性が最も高い男性を同定するマーカー、または５ＡＲＩ治療に生化学的に反応する男性、また前立腺の収縮に関連した最終的な症候の軽減を受けることが予期されるであろう男性を示すマーカーを有することが望ましい。現行の診療では、短期と長期とを組み合わせた症候軽減を得るためにアルファ遮断薬と５ＡＲＩとを共に与えることができる。

ＰＳＡ発現はアンドロゲンによって調節されているので、５ＡＲＩの別の効果は、ＰＳＡレベルを、薬物投与前のレベルの約半分に低下させることである。前立腺体積の相関物として、すなわち５ＡＲＩ治療を男性に与えるべきステージを示すマーカーとして、総ＰＳＡが用いられている（１８、１９）。５ＡＲＩの投与は、ＰＳＡの血清濃度を治療前のレベルの約半分にまで低下させることが示されている。しかし、薬物治療に反応するであろう男性がどれかを予測する総ＰＳＡの能力は中程度であり、改善されたマーカーが必要である。

（発明の概要）
本発明は、対象における様々なＰＳＡ形態の濃度およびそれらの比率の変化が、ある薬物を用いた治療にその対象が反応する見込みと相関しているという予想外の発見に基づいている。したがって、そのような変化を、その対象が薬物に反応するものであるかどうか予測するのに用いることができる。

したがって、本発明の一態様は、対象が薬物に反応する見込みを判定する方法を提供する。この方法は、ＰＳＡ関連障害を患っており、かつ上記ＰＳＡ関連障害を治療するための薬物を投与されている対象で、少なくとも１つのＰＳＡ関連値を測定する工程と、上記ＰＳＡ関連値をそれぞれの対照値と比較する工程と、上記対象が上記薬物に反応する見込みを判定する工程とを含む。上記ＰＳＡ関連値は、ＢＰＳＡ量、ｐｒｏＰＳＡ量、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率、ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率、ＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率、およびこれらの組合せからなる群から選択される。上記ＢＰＳＡ量、上記ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率、上記ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率または上記ＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率がそれぞれの対照値よりそれぞれの第１既定値高い場合、上記ｐｒｏＰＳＡ量がそれぞれの対照値より第２の既定値低い場合、またはこれらの組合せの場合、上記対象が上記薬物に反応するものとされる。

例えば、上記対照値は、薬物投与前に測定された、上記対象における上記ＰＳＡ関連値でよく、上記ＰＳＡ関連障害は、前立腺肥大症、前立腺癌、または前立腺炎でよい。

薬物投与の１２カ月後に上記対象の前立腺体積が１０％以上減少している場合、薬物投与の１２カ月後に上記対象の国際前立腺症状スコア（ＩＰＳＳ）が２以上減少している場合、あるいは薬物投与の１２カ月後に上記対象の最大尿流速が１ｃｃ以上増加している場合に、上記対象が上記薬物に反応するものとされる。

ＰＳＡ関連障害を治療するのに用いられる薬物には、５−アルファ−レダクターゼ阻害剤（５ＡＲＩ）、ビカルタミド、およびフルタミドなどのアンドロゲン遮断薬が含まれるが、これらに限定されない。５ＡＲＩの例には、例えば、デュタステライドおよびフィナステリドが含まれる。

本発明の目的では、ＰＳＡ関連値は、対象からの生理学的流体または前立腺組織試料中で測定したものでよい。生理学的流体試料は、例えば、血液、血清、精漿、尿または血漿の試料でよい。

一実施形態では、上記第１または第２の既定値が５％以上である。別の実施形態では、上記第１または第２の既定値が、それぞれの第１または第２の既定オッズ比に対応している。例えば、上記第１または第２の既定オッズ比は２以上でよい。

上記ＰＳＡ関連値は、様々な時点、例えば薬物投与の１週間後と３カ月後との間に測定したものでよい。例えば、上記ＰＳＡ関連値は、薬物投与の１カ月後に測定したものでよい。一実施形態では、上記第１の既定値が、上記ＢＰＳＡ量には８６％以上であり、上記ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率には４５０％以上であり、上記ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率には７８％以上であり、上記ＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率には５２％以上である場合、上記第２の既定値が４８％以上である場合、またはこれらの組合せの場合に、上記対象が上記薬物に反応する可能性が高い。

別の実施形態では、上記第１の既定値が、上記ＢＰＳＡ量には２５％以上であり、上記ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率には２３０％以上であり、上記ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率には５９％以上であり、上記ＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率には４４％以上である場合、上記第２の既定値が４１％以上である場合、またはこれらの組合せの場合に、上記対象が上記薬物に反応する可能性が高い。

さらに別の実施形態では、オッズ比が２以上である場合に、上記対象が上記薬物に反応する可能性が高く、これは、上記ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率に関する第１の既定値が２５０％以上である場合、または上記ＢＰＳＡ量に関する第１の既定値が２０％以上である場合に対応している。

上記ｐｒｏＰＳＡは、［−１］ｐｒｏＰＳＡ、［−２］ｐｒｏＰＳＡ、［−３］ｐｒｏＰＳＡ、［−４］ｐｒｏＰＳＡ、［−５］ｐｒｏＰＳＡ、［−６］ｐｒｏＰＳＡ、［−７］ｐｒｏＰＳＡ、およびこれらの組合せからなる群から選択したものでよい。

別の態様では、本発明は、対象のＢＰＳＡ量を測定するための第１の因子と、上記対象の遊離ＰＳＡ量を測定するための第２の因子と、上記対象の総ＰＳＡ量またはｐｒｏＰＳＡ量を測定するための第３の因子とを含むキットを提供する。

本発明は、対象のＢＰＳＡ量を測定するための第１の因子と、上記対象のｐｒｏＰＳＡ量を測定するための第２の因子と、上記対象の総ＰＳＡ量を測定するための第３の因子と、上記対象の遊離ＰＳＡ量を測定するための第４の因子とを含むキットをさらに提供する。

本発明のキットは、対象が薬物に反応する見込みを上述の方法に従って測定するのに使用できる。上記因子の例には、抗体、例えばモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体が含まれるが、これらに限定されない。

本発明は、ＰＳＡ関連障害を治療するための薬物に対象が反応するかどうか予測するための方法およびキットを提供する。これらの方法およびキットは、上記薬物を用いた継続的な治療を行う対象の初期選択を可能にする。

本発明の上述した特徴および他の特徴、ならびにそれらを得る方法は、添付図面と合わせて、以下の説明を参照することによって、より明らかとなり、かつ最も良く理解されるであろう。これらの図面は、本発明の典型的な実施形態のみを示すものであり、したがって、本発明の範囲を制限しない。

（発明の詳細な説明）
本発明は、血中のＢＰＳＡが、５ＡＲＩ治療約１カ月目に増大しており、また、薬物治療に最終的に反応する男性においてこの増大がより顕著であるという予想外の発見に基づいている。別の驚くべき発見は、ｐｒｏＰＳＡが、５ＡＲＩ治療約１カ月目に予測されたのよりも早くに有意な低減を示すこと、および薬物治療に最終的に反応する男性においてこの低減がより顕著であることであった。予想外なことに、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率は、ＢＰＳＡまたはｐｒｏＰＳＡのどちらか単独にまさる追加の識別能を生み出す。

下記の実施例ＩおよびＩＩで示す通り、薬物投与の１２カ月後に前立腺体積の１０％以上の縮小を示した男性において、薬物投与の約１カ月後におけるＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率は、ベースライン比率より４５０％増大した。ベースライン比率からの１カ月目比率の識別能の差は、個別のＢＰＳＡの増大（８６％）またはｐｒｏＰＳＡの低減（４８％）よりも有意に大きい。ＢＰＳＡ対ＰＳＡおよびＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率はそれぞれ７８％および５２％増大した。薬物反応の指標として、薬物投与の１２カ月後における２以上のＩＰＳＳ低下を用いる場合、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率の増大は、ベースラインを２３０％超えるものであった。ＢＰＳＡ（２５％）には有意な増大がなかったが、ｐｒｏＰＳＡ（４１％）は有意に低減した。ＢＰＳＡ／総ＰＳＡおよびＢＰＳＡ／遊離ＰＳＡの比率の増大は、それぞれ５９％および４４％であった。明らかに、総ＰＳＡレベルおよび遊離ＰＳＡレベルは比較的一定にとどまり、これらの比率は約１カ月における初期薬物治療では有意に変化せず、そして、これらのレベルは、薬物によるＤＨＴ阻害のため、３カ月目に低下する。したがって、ＢＰＳＡ、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡ比、ＢＰＳＡ対総ＰＳＡ比、およびＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡ比の有意な増大ならびにｐｒｏＰＳＡの有意な低減は予想外であった。また、これらのどの変化も薬物反応と有意に相関したものでありうる。

したがって、一態様では、本発明は、対象が薬物に反応する見込みを判定する方法を提供する。この方法は、以下の工程、すなわち、（１）ＰＳＡ関連障害を患っており、かつ上記ＰＳＡ関連障害を治療するための薬物を投与されている対象で、少なくとも１つのＰＳＡ関連値を測定する工程と、（２）上記ＰＳＡ関連値をそれぞれの対照値と比較する工程と、（３）上記対象が上記薬物に反応する見込みを判定する工程とを含む。上記ＰＳＡ関連値は、例えば、ＢＰＳＡ量、ｐｒｏＰＳＡ量、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率、ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率、ＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率、またはこれらの組合せでよい。上記ＢＰＳＡ量、上記ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率、上記ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率もしくは上記ＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率がそれぞれの対照値より、それぞれの第１既定値高い場合、上記ｐｒｏＰＳＡ量がそれぞれの対照値より第２の既定値低い場合、上記対象における上記値変化の任意の組合せが生じた場合に、上記対象が上記薬物に反応する可能性が高い。

「ＢＰＳＡ」という用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも１箇所、Ｌｙｓ１８２に、成熟型ＰＳＡアミノ酸配列の切断を含むＰＳＡの一形態を指す。成熟型ＰＳＡのアミノ酸配列は参照文献（２０）に完全に記載されており、この開示の関連内容を参照により本明細書に組み込む。成熟型ＰＳＡは、分子質量２８４００Ｄを有する２３７アミノ酸残基を有する（２１）。本発明のＢＰＳＡは、上記ＢＰＳＡのポリペプチド鎖が残基１８２と１８３との間で加水分解されていることを除いて、成熟型ＰＳＡと同じアミノ酸配列を有する。本発明の実施形態によれば、ＢＰＳＡは、成熟型ＰＳＡのアミノ酸配列におけるＩｌｅ１、Ｌｙｓ１４５、およびＬｙｓ１４６に１つまたは複数の追加切断を含みうる。本発明の一実施形態では、ＢＰＳＡは、Ｌｙｓ１４５およびＬｙｓ１８２に２箇所の切断を含む。

「ｐｒｏＰＳＡ」という用語は、本明細書で使用される場合、ＰＳＡの前駆体形態を指す。ＰＳＡの完全長前駆体形態は、７アミノ酸のプロペプチド（すなわちリーダーペプチド）、すなわち配列番号１として特定されているＡＰＬＩＬＳＲと、それに続く２３７アミノ酸の成熟型ＰＳＡタンパク質とを含有する。ｐｒｏＰＳＡの完全長アミノ酸配列は、当技術分野で知られており、その関連内容が参照により本明細書に組み込まれている参考文献（２０）に完全に記載されている。本発明の目的では、プロペプチド配列の最終アミノ酸である「Ｒ」を、［−１］アミノ酸と数える。例えば、［−７］ｐｒｏＰＳＡは、その末端がプロペプチドの−７アミノ酸で開始しているｐｒｏＰＳＡである。これは完全長ｐｒｏＰＳＡを含有している。［−５］ｐｒｏＰＳＡは、そのｐｒｏＰＳＡの末端がプロペプチドの−５アミノ酸で開始することを示し、それはプロペプチド配列の最終５アミノ酸配列を含有している。本発明の目的では、ｐｒｏＰＳＡに、完全長型のｐｒｏＰＳＡと、上記プロペプチドにおける任意のアミノ酸で末端が開始する末端欠失型のｐｒｏＰＳＡとの両方が含まれる。すなわち、上記ｐｒｏＰＳＡは、［−１］ｐｒｏＰＳＡ、［−２］ｐｒｏＰＳＡ、［−３］ｐｒｏＰＳＡ、［−４］ｐｒｏＰＳＡ、［−５］ｐｒｏＰＳＡ、［−６］ｐｒｏＰＳＡ、［−７］ｐｒｏＰＳＡ、またはこれらの組合せでよい。

本発明の目的では、「総ＰＳＡ」という用語は、遊離ＰＳＡおよびＡＣＴとのＰＳＡ複合体を含めたすべての形態のＰＳＡを指す。「遊離ＰＳＡ」という用語は、本明細書で使用される場合、ＡＣＴと複合体形成していないＰＳＡを指す。

「ＰＳＡ関連値」は、例えば、総ＰＳＡ、ｐｒｏＰＳＡ、遊離ＰＳＡ、およびＢＰＳＡを含めた、ＰＳＡファミリーの任意のメンバーの量に数学的に関連したいかなる値も指す。ＰＳＡ関連値の例には、ＢＰＳＡ量、ｐｒｏＰＳＡ量、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率、ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率、ＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率などが含まれるが、これらに限定されない。

ＰＳＡ関連値に対応する「対照値」は、例えば、ＰＳＡ関連障害を患っていない対象、またはＰＳＡ関連障害を治療するための薬物を投与されていない対象でそれぞれの値を測定することによって得ることができる。

「ＰＳＡ関連障害」は、ある対象における、対照とする対象と比較して高レベルのＰＳＡに関連した障害を指す。例えば、高レベルのＰＳＡは、血液、血清、または血漿中の総ＰＳＡが０．２ｎｇ／ｍｌを超えるものでありうる。これには、血液、血清、血漿、精漿もしくは尿などの生理学的流体中における高レベルの総ＰＳＡまたはＢＰＳＡもしくはｐｒｏＰＳＡなどの１つもしくは複数の他の形態のＰＳＡも、前立腺組織中のものも含みうる。そのような障害には、ＢＰＨ、前立腺癌、および前立腺炎が含まれるが、これらに限定されない。

ある対象が薬物に対して「反応する可能性が高い」、もしくは薬物に反応する「見込み」を有するというのは、その対象がその薬物に反応する確率が、対照とする対象、例えばその薬物によって処理されていない対象よりも統計的に高い場合である。例えば、オッズ比が２以上である場合に、対象が薬物に反応する可能性が高い。「オッズ」は、ある群（反応者群または対照群）における、事象（すなわち薬物に反応すること）を伴った対象の数と、同じ群における事象を伴っていない対象の数との比率である。「オッズ比」は、本明細書で使用される場合、反応者群のオッズ対対照群のオッズの比率を指す。

「治療する」という用語は、障害、上記障害の症候、上記障害に続発した病態、または上記障害に対する素因を治療、緩和、軽減、治癒、または回復させることを目的とした薬物の投与と定義する。

「薬物」という用語は、本明細書で使用される場合、ＰＳＡ関連障害を治療するためにヒトに投与される化学物質、生物学的産物、または複数の化学物質もしくは生物学的産物の組合せを指す。化学物質または生物学的産物は、低分子量化合物またはより大きな化合物、例えば、限定されるものではないが、タンパク質、オリゴヌクレオチド、リボザイム、ＤＮＡザイム、糖タンパク質、リポタンパク質、ならびにそれらの改変物および組合せを含めた核酸、アミノ酸、または糖のオリゴマーでよい。

ＰＳＡ関連障害を治療するのに使用できるいかなる薬物も本発明に包含される。詳細には、下記の実施例ＩおよびＩＩは、５−アルファ−レダクターゼ阻害剤であるデュタステライドの、ＢＰＨを治療するための使用について記述する。５ＡＲＩの別の例はフィナステリドである。フィナステリドおよびデュタステライドは、いくつかの異なった薬物動態学的パラメータおよび生化学的特性を有するが、両方とも、ＤＨＴの産生を阻害するという同一の特異的作用を有する（２２、２３）。ＤＨＴの阻害、ならびにそれに附随する前立腺組織およびＰＳＡ産生への影響が、ＢＰＳＡの予想外の増大を引き起こしている主要機構であると考えられるので、あらゆる５ＡＲＩの使用が本発明に包含される。５ＡＲＩはＢＰＨの治療に用いられているが、アンドロゲン産生を阻害し、それによって、テストテスロンおよびＤＨＴ産生を阻害する、前立腺癌に使用されている薬物および治療を用いて、ＢＰＳＡにおける同様な予想外の増大、ならびに予測よりも早いｐｒｏＰＳＡの低減が予期されよう。詳細には、ビカルタミドおよびフルタミドなどの薬物は完全なアンドロゲン遮断のために使用され、同様に、前立腺のアンドロゲン刺激の生理的供給源すべてを消滅させる去勢へと作用する。これらの薬物は、進行した前立腺癌の場合に使用され、通常は、前立腺におけるＰＳＡ産生の完全な消滅をもたらす。これらの場合、ＢＰＳＡの増大またはｐｒｏＰＳＡの低減が、５ＡＲＩよりさらに顕著であるか、あるいはより急速であろうと予測されよう。したがって、本発明における予想外のＢＰＳＡの増大および急速なｐｒｏＰＳＡの低減は、テストテスロンまたはＤＨＴなどのアンドロゲンを遮断し、かつＰＳＡの発現を有意に低減または消滅させる効果を有するいかなる薬物とも連動している。

通常、ＰＳＡ関連障害と関連しているパラメータまたは症候の、そのような障害を治療する薬物を投与した後におけるいかなる改善も、上記薬物に対する反応を示すのに使用できる。例えば、前立腺体積の減少が、ＢＰＨ症候の軽減と相関していることが知られている。国際前立腺症状スコア（ＩＰＳＳ）の低下は、有効なＢＰＨ治療の別の指標である。下記の実施例ＩおよびＩＩに示す通り、薬物治療の約１カ月後における、予想外のＢＰＳＡの増大、予想外の早いｐｒｏＰＳＡの低減、ならびにＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡ、ＢＰＳＡ対総ＰＳＡ、およびＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率の増大は、薬物投与の１２カ月後における前立腺体積およびＩＰＳＳの低減と関連している。したがって、前立腺体積の減少およびＩＰＳＳの低下は、ＢＰＨの薬物治療に対する反応の有用な指標である。さらに、最大尿流速（Ｑｍａｘ）の増大も、ＢＰＨの薬物治療に対する反応の指標として用いることができる。

薬物投与の後における、ＰＳＡ関連値を測定するタイムポイントは、下記の実施例に例示する方法または当技術分野で知られている任意の他の方法を用いて決定できる。例示的実施形態では、ＰＳＡ関連障害を患っている対象を、上記対象または医療専門家の判断で同定できる。そのような判断は、主観的なもの（例えば意見）でも、客観的なもの（例えば試験または診断方法によって判定可能なもの）でもよい。ＰＳＡ関連障害を治療するための薬物を投与する前（例えば１週間前）に、上記対象から試料（例えば血液）を収集することができ、各試料のＰＳＡ関連値を測定する。その後、薬物またはプラセボを上記対象に投与する。間隔をおいて（例えば薬物投与の１週間後と３カ月後との間に毎週）上記対象から試料を再び収集し、ＰＳＡ関連値を測定する。薬物で処理された対象は、その後、上述の判断基準（例えば、薬物投与の１２カ月後における、ＢＰＨを患っている対象の前立腺体積の少なくとも１０％の減少またはＩＰＳＳの少なくとも２の低下）に従って、反応者群と不反応者群とに分割する。薬物投与の前後におけるＰＳＡ関連値は、統計的分析にかけられる。対象が上記薬物に反応する見込みを予測するために、ＰＳＡ関連値を測定するタイムポイントは、例えば、不反応者群またはプラセボ群と比較して、上記薬物の投与による任意のＰＳＡ関連値の変化が反応者群で最も顕著であるタイムポイントあるいは不反応者群またはプラセボ群と比較して、反応者群における任意のＰＳＡ関連値の変化の相違が有意となる最も早いタイムポイントを選択することによって決定できる。不反応者群またはプラセボ群と比較して、反応者群におけるＰＳＡ関連値の変化の相違が有意となるのは、ｐ値が、例えば０．０５以下となる場合である。

例えば、対象が上記薬物に反応する見込みを予測するために、ＢＰＳＡ量、ｐｒｏＰＳＡ量、またはそれらの比率を、５ＡＲＩ投与の約１カ月後に測定することができる。下記の実施例ＩおよびＩＩに示す通り、薬物投与の約１カ月後における、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率の有意な増大は、薬物投与の１２カ月後における前立腺体積およびＢＰＨ症候の低減に相関した、薬物に対する反応を示す。約１カ月の名目上の期間は、理想的には４週間の治療を示すだろうが、４週間の最大５日前または後までの期間も含みうる。しかし、本発明の最も広い定義では、下記に記載の本発明の他の態様に示す通り、意味のある測定は、薬物投与の１週間後から３カ月後のいかなる期間でも可能でありうる。５ＡＲＩを用いた５−アルファ−レダクターゼの阻害は、投与後１から２週間以内における、５−アルファ−レダクターゼのレベルに何らかの影響を有することが知られているので、薬物投与開始の１週間後と３カ月後との間における任意のときに、予想外のＢＰＳＡ血清レベルの増大およびｐｒｏＰＳＡ濃度の予想外に急速な低減の変化の振幅に有意な相違があると仮定しても妥当である。この後者の日は、図１において、ＢＰＳＡがベースラインレベル下に明確に低減することが示されているときである。ＢＰＳＡの増大およびｐｒｏＰＳＡの低減は、１カ月よりもいくらか早いときに始まり、１週間後と３カ月後との間のある時点で最大ピークに達するであろうこと、そして、薬物投与の１２カ月後に観測される、異なったタイムポイントでのＢＰＳＡおよびｐｒｏＰＳＡのそれぞれ増大および低減の速度は、異なった速度と、それ故にその薬物反応に対する異なった相関関係パラメータとを与えるであろうことが予期されよう。したがって、予想外のＢＰＳＡの増大およびｐｒｏＰＳＡの低減の効果的な使用は、任意の初期期間を包含しうるが、この期間は、その後では５ＡＲＩがＤＨＴの産生に何らかの影響を有することが知られているものであり、その際、薬物治療開始の前にはＢＰＳＡがベースライン値より有意に高く、但し３カ月目にはＢＰＳＡレベルがベースラインの下まで低下する。

対象が薬物に反応する見込みを予測するために、ＰＳＡ関連値の変化を、それらのそれぞれの既定値（すなわちカットオフ値）と比較する。それらの変化（増大または低減）が既定値以上である場合には、上記対象は、上記薬物に反応する可能性が高いと予測される。通常、上記既定値は、少なくとも５％（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％）であり、統計的な有意性を備えている。

上記既定値は、下記に記載の方法または当技術分野で知られている任意の他の方法に従って取得できる。例えば、薬物投与後の選択されたタイムポイントにおける、反応者群および対照群のＰＳＡ関連値の変化を測定することができる。「対照群」は、例えば、不反応者群またはプラセボで処理された群でありうる。これらの変化を、統計分析、例えば、マンホイットニー検定にかけて、反応者群の変化が、対照群の変化から有意に相違しているかどうか判定する。例えば、ｐ値が０．０５以下である場合に、反応者群におけるＰＳＡ関連値の平均変化は、対照群におけるそれから統計的に有意に相違しており、薬物治療に反応するであろうものを識別する補助となる既定値として選択できる。

例えば、下記の実施例Ｉに示す通り、薬物投与の１カ月後におけるＢＰＳＡ濃度の８６％の増大は、薬物投与の１２カ月後における前立腺体積の１０％以上の低下を実感するであろうものの有意な薬物反応の指標である（ｐ＝０．０４５、表１）。同様に、ｐｒｏＰＳＡの４８％の減少およびＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率の４５０％の増大は、統計的に有意であり（それぞれｐ＝０．０００２、および＜０．０００１）、したがって、これらの男性が１２カ月目に薬物治療に反応する見込みを有することの指標としてのカットオフ値として使用できる。

上記薬物に対する陽性反応を有するオッズ比は、薬物反応の適した指標としてのカットオフ値を決定するのに使用できる。例えば、上記第１または第２の既定値が、２以上の既定オッズ比（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０）に対応している場合、対象が薬物に反応する可能性が高い。

例えば、下記の実施例ＩＩに示す通り、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡ比が２５０％超である場合、２５０％未満の比率値と比較した、薬物治療の１２カ月後にＩＰＳＳに２の改善を有するオッズ比は２．２７である。したがって、この場合、約１カ月目におけるＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡ比の２５０％の増大は、有意な臨床上の有用性を有するカットオフ値として見ることができる。本発明の好ましい実施形態は、臨床上の有用性を有すると考えられる有意なカットオフ値を確立するために、少なくとも２のオッズ比を用いるであろう。

様々な形態のＰＳＡを測定する方法は当技術分野で周知である。例えば、米国特許第６４２３５０３号および第６４８２５９９号を参照のこと。例えば、ＢＰＳＡ、ｐｒｏＰＳＡ、総ＰＳＡ、または遊離ＰＳＡの量は、そのような測定を実施できるものである限り、本明細書に記載されている方法、または当技術分野で知られている方法、または後で開発された方法のいかなるものによってでも測定できる。本発明の一実施形態によれば、試料中に含有されている特定のＰＳＡ形態（すなわち標的ＰＳＡ）の量は、標的ＰＳＡに特異的に結合する因子を、上記標的ＰＳＡおよび上記因子を含む二元複合体の形成を可能にする条件下で、上記試料と接触させる工程と、上記標的ＰＳＡの量の尺度として上記複合体の量を検出および測定する工程とを含む方法によって測定できる。

本発明の目的では、因子は、十分な特異性で標的ＰＳＡに結合できるものならいかなる分子種であってもよい。結合特異性が十分であるのは、その結合によって、上記因子および上記標的ＰＳＡを含む複合体の形成および複合体の量の測定が可能となる場合である。潜在的な分子種の例には、抗体、抗体由来の抗原結合性断片、および限定されるものではないが、アプタマーなどの抗体の等価物が含まれるが、これらに限定されない。本発明の目的では、標的ＰＳＡに特異的な因子は、当技術分野で知られている方法によって選択できる。例えば、任意の既知な結合アッセイを用いて、任意の所与の因子の特異的な結合活性が測定できる。

組織標本中の抗原を検出するための免疫組織化学法は当技術分野で周知である。例えば、抗原を免疫組織化学的に検出する方法は、全般的に、Ｔａｙｌｏｒ、Ａｒｃｈ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．、１０２：１１３（１９７８年）に記載されている。簡潔には、本発明との関連において、対象から得られた組織標本を、標的ＰＳＡを認識する抗体、好ましくはモノクローナル抗体と接触させる。本発明の一実施形態では、組織標本は、対象の前立腺から得られた組織標本である。上記前立腺組織は、例えば、正常な前立腺組織、癌の前立腺組織、または前立腺肥大症組織でよい。

同様に、イムノアッセイ手順による、液体試料中の抗原性物質のｉｎ ｖｉｔｒｏ検出の一般的な方法も、当技術分野で周知である。例えば、イムノアッセイ手順は、全般的に、Ｐａｔｅｒｓｏｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎ．、３７：６５９（１９８６年）およびＢｕｒｃｈｅｌｌら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎ．、３４：７６３（１９８４年）に記載されている。本発明の一実施形態では、生物試料中の標的ＰＳＡを検出するためのイムノアッセイは、（ａ）標的ＰＳＡに特異的に結合する一定量の因子を、上記因子および上記標的ＰＳＡを含む二元複合体の形成を可能にする条件下で、上記試料と接触させる工程と、（ｂ）上記標的ＰＳＡの量の尺度として上記複合体の量を測定する工程とを含む。

本発明の目的では、上記生物試料は、上記標的ＰＳＡを含有するいかなる生理学的流体試料でもよい。生理学的流体試料の例には、血液、血清、精液、尿、および血漿が含まれるが、これらに限定されない。

本発明の目的では、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体は両方とも、そのような抗体が、本発明によって提供された抗原に対する必要な特異性を有する限り使用できる。モノクローナル抗体を使用することが好ましい。

モノクローナル抗体は、液相中でも、固相担体に結合した状態でも利用できる。モノクローナル抗体は、多くの異なった担体に結合でき、本発明の標的ＰＳＡを測定するのに使用できる。周知の担体の例には、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然および修飾セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、および磁鉄鉱が含まれる。担体の性質は、本発明の目的に応じて、可溶性または不溶性でありうる。不溶性の担体の例には、ビーズおよびマイクロタイタープレートが含まれるが、これらに限定されない。当業者ならば、モノクローナル抗体を結合するための他の適した担体を知っているか、あるいは、そのようなものを通常の実験で確かめることができるだろう。

加えて、これらのイムノアッセイにおけるモノクローナル抗体は、様々な方法で検出可能に標識することができる。例えば、本発明のモノクローナル抗体を低分子量ハプテンと結合させることができる。これらのハプテンは、その後、第２の反応によって特異的に検出することができる。例えば、通常は、アビジンと反応するビオチン、または特異的な抗ハプテン抗体と反応できるジニトロフェニル、ピリドキサール、およびフルオレセインなどのハプテンを用いる。加えて、本発明のモノクローナル抗体は、酵素、放射性同位元素、蛍光化合物、金属、化学発光化合物、または生物発光性化合物などの検出可能な標識とも結合できる。さらに、所望の分子へのこれらの標識の結合は、当業者には共通の一般的な技法を用いて実施できる。

抗体を検出可能に標識できる方法の１つは、それを酵素に連結することである。次にこの酵素が、後にその基質に暴露された際に、例えば分光光度法または蛍光定量の手段（ＥＬＩＳＡシステム）によって検出できる化学部分を産生するように上記基質と反応するであろう。検出可能な標識として使用できる酵素の例には、ホースラディシュペルオキシダーゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ−５−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、アルファグリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、ブドウ糖酸化酵素、ベータガラクトシダーゼ、ＲＮＡ分解酵素、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−燐酸塩デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、およびアセチルコリンエステラーゼがある。ＥＬＩＳＡシステムの感度を増強させるために、アビジン−ペルオキシダーゼ結合体と反応するビオチン化抗体を用いて、記載した手順を修正することができる。

上記抗体を放射性同位元素で標識することによって、抗原の量を測定することもできる。その後、放射性同位元素の存在は、ガンマカウンターまたはシンチレーションカウンターの使用などの手段によって測定されるだろう。特に有用な同位元素は、^３Ｈ、^１２５Ｉ、^１２３Ｉ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^１４Ｃ、^５１Ｃｒ、^３６Ｃｌ、^５７Ｃｏ、^５８Ｃｏ、^５９Ｆｅ、^７５Ｓｅ、^１１１Ｎ、^９９ｍＴｃ、^６７Ｇａ、および^９０Ｙである。

抗原の測定は、上記抗体を蛍光化合物で標識することによっても可能である。蛍光標識された分子は、適切な波長の光に暴露させた際に、色素の蛍光によってその存在を検出することができる。最も重要な蛍光標識化合物の中には、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フトアルデヒド（ｏ−ｐｈｔｈａｌｄｅｈｙｄｅ）、およびフルオレサミンがある。Ｅｕ（ユーロピウム）などの蛍光発光金属原子、および他のランタニドを用いることもできる。これらは、ＤＴＰＡまたはＥＤＴＡなどの金属キレート基によって所望の分子に結合させることができる。

抗体を検出可能に標識することができる別の方法は、それを化学発光化合物と結合させることである。化学発光タグ付き免疫グロブリンの存在は、その後、化学反応の過程で起こる発光の存在を検出することによって測定する。特に有用な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、芳香族アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、およびシュウ酸塩エステルである。

同様に、生物発光性化合物も標識として使用できる。生物発光は、生物系で見出される特別なタイプの化学発光である。生物発光では、触媒タンパク質が化学発光反応の効率を増強する。生物発光性分子の存在は、発光の存在を検出することによって測定されるだろう。標識の目的において重要な生物発光性化合物は、ルシフェリン、ルシフェラーゼ、およびエクオリンである。

試料中にある本発明の標的ＰＳＡの定量は、直接的または間接的型式での競合的または非競争的イムノアッセイ手順によって実現できる。そのようなイムノアッセイの例は、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）およびサンドイッチ（イムノメトリック）アッセイである。本発明のモノクローナル抗体を用いた抗原の検出は、生理的試料での免疫組織化学的アッセイを含めたフォワード型、リバース型、または同時型で行われたイムノアッセイを用いて実施できる。当業者ならば、他のイムノアッセイ型式も知っているだろう。あるいは、当業者ならば、過度の実験をしないでも、容易に他のイムノアッセイ型式を識別できる。

「イムノメトリックアッセイ」または「サンドイッチイムノアッセイ」という用語には、同時サンドイッチ型、フォワードサンドイッチ型、および逆サンドイッチ型のイムノアッセイが含まれる。これらの用語は、当業者ならば十分に理解しているものであろう。本発明による抗体が、現在知られているか、もしくは将来開発されうる他の変形形態または形式のアッセイでも有用であろうことも、当業者ならば理解するであろう。これらも、本発明の範囲内に含まれるものとする。

本発明の別の態様は、上述の方法に従って、対象が薬物に反応する見込みを判定するためのキットを提供する。一実施形態では、上記キットは、対象のＢＰＳＡ量を測定するための第１の因子と、上記対象のｐｒｏＰＳＡ量を測定するための第２の因子と、上記対象の総ＰＳＡ量または遊離ＰＳＡ量を測定するための第３の因子とを含む。別の実施形態では、上記キットは、対象のＢＰＳＡ量を測定するための第１の因子と、上記対象の総ＰＳＡ量を測定するための第２の因子と、上記対象の遊離ＰＳＡ量を測定するための第３の因子とを含む。さらに別の実施形態では、上記キットは、対象のＢＰＳＡ量を測定するための第１の因子と、上記対象のｐｒｏＰＳＡ量を測定するための第２の因子と、上記対象の総ＰＳＡ量を測定するための第３の因子と、上記対象の遊離ＰＳＡ量を測定するための第４の因子とを含む。上記キットは、説明書を伴った挿入物をさらに含有してもよく、この説明書は、ＰＳＡ関連障害を治療するための薬物に対象が反応する可能性が高いのは、上記ＢＰＳＡ量、上記ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率、上記ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率もしくは上記ＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率が、上記薬物の投与によって、それぞれの対照値と比較してそれぞれの第１既定値増大している場合、上記ｐｒｏＰＳＡ量が、上記薬物の投与によって、それぞれの対照値と比較して第２の既定値低減している場合、またはこれらの組合せの場合であることを示す。

上記因子の例は、抗体、例えばモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体が含まれるが、これらに限定されない。様々な形態のＰＳＡに対する抗体は、当技術分野で周知である。例えば、米国特許第６４２３５０３号および第６４８２５９９号を参照のこと。本発明で使用される場合、「抗体」という用語には、完全な分子、ならびにＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、およびＦｖなど、標的ＰＳＡ上のエピトープ決定基に結合できるその断片が含まれる。これらの抗体断片は、その抗原または受容体に選択的に結合する能力をある程度保持し、以下の通りに定義される。（１）Ｆａｂ、この断片は、抗体分子の一価抗原結合断片を含有し、抗体全体をパパイン酵素で消化して、１本の完全な軽鎖と、１本の重鎖の一部とを産生することによって産生されうる。（２）Ｆａｂ’、この抗体分子断片は、抗体全体をペプシンで処理し、それに続いて還元して、１本の完全な軽鎖と１本の重鎖の一部を産生することによって得ることができる。１つの抗体分子あたり２つのＦａｂ’断片が得られる。（３）Ｆ（ａｂ’）_２、この抗体断片は、抗体全体をペプシン酵素で処理し、その後に還元しないことによって得られる。Ｆ（ａｂ’）_２は、２本のジスルフィド結合によって結合された２つのＦａｂ’断片の２量体である。（４）Ｆｖ、２本の鎖として発現された、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含有する遺伝子操作された断片として定義される。（５）一本鎖抗体（「ＳＣＡ」）、遺伝学的に融合された一本鎖分子として、軽鎖可変領域、重鎖可変領域、およびそれらを連結する適当なポリペプチドリンカーを含有する遺伝子操作された分子として定義される。これらの断片を作製する方法は当技術分野で知られている（例えば、参照により本明細書に組み込まれているＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ社、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８年）を参照のこと）。

以下の実施例は、特許請求の範囲を限定するものではなく、それを例示するものと意図されている。そのような実施例は、使用されうるものの典型的なものであるが、当業者に知られている他の手順を代替的に用いることもできる。実際、当業者ならば、本明細書における教示に基づいて、過度の実験をしないでも容易に別の実施形態を想起および産生することができる。

材料および方法
患者の特徴
ＢＰＨを患っている５０歳以上の男性からの血清試料の同齢集団を用いた。ＰＳＡの範囲は、１．５〜１０ｎｇ／ｍｌ（中央値は３．２ｎｇ／ｍｌ）であった。参加者の国際前立腺症状スコア（ＩＰＳＳ）は１１〜３２であった（中程度から重度、中央値は１８．５）。Ｑｍａｘ（ｃｃ／秒での尿流速）は９．３であった。時間０に、男性に前立腺体積に関するＴＲＵＳを行い、その後、盲検様式、１日あたり０．５ｍｇの割合でデュタステライドを投与した。０、１、３、および１２カ月目に血清を採取し、総ＰＳＡ、ｐｒｏＰＳＡ、遊離ＰＳＡ、およびＢＰＳＡに関してアッセイした。０、１、および１２カ月目にＩＰＳＳ症状スコアを測定した。前立腺体積に関する追加のＴＲＵＳを、薬物治療開始後の１２カ月目に行った。
（実施例Ｉ）
５−アルファ−レダクターゼ阻害剤であるデュタステライドを用いた治療の後における、前立腺体積の減少と、血清ＢＰＳＡ、ｐｒｏＰＳＡ、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡ比、ＢＰＳＡ対総ＰＳＡ比、およびＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡ比との関連性
時間０（処理前のベースライン）およびプラセボまたは薬物治療開始の１、３、および１２カ月後に、プラセボ男性および薬物処理男性からの血清を、ＰＳＡ形態のレベルに関して試験した。図１は、総ＰＳＡ（ＰＳＡ）、遊離ＰＳＡ（ｆＰＳＡ）、ｐｒｏＰＳＡ、およびＢＰＳＡの変化％を示す。このプロットでは、前立腺体積の１０％以上の減少を薬物反応の定義として用いた。結果は、薬物治療と比較したプラセボを示す。Ａ）プラセボ処理男性、１２カ月後にこの人の前立腺体積は１０％以上減少しなかった。Ｂ）薬物処理男性、１２カ月後に前立腺体積が１０％以上減少した（薬物反応者）。

この研究からの主要な観察は、薬物治療の１カ月後に、ＢＰＨに関連したＢＰＳＡレベルは有意に増大しており、一方ｐｒｏＰＳＡレベルは有意に低減したことであった。これは、有意に変化しなかった総ＰＳＡレベルおよび遊離ＰＳＡレベルとは対照的である。図２は、プラセボおよび薬物治療における、総ＰＳＡ、遊離ＰＳＡ、ｐｒｏＰＳＡ、およびＢＰＳＡの１カ月変化のみを示した図１の再プロットである。

表１は、１カ月目における、ＢＰＳＡ血清濃度（ｎｇ／ｍｌ）の有意な増大（ｐ＜０．０５）と、ｐｒｏＰＳＡの有意な減少（ｐ＝０．０００２）とを示す。ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率におけるベースラインから１カ月目までの変化が、最も広幅な分離と最も高い有意性（ｐ＜０．００００１）とを示した。１２カ月の治療の後における前立腺体積の１０％以上の低減（薬物反応者）として定義される薬物反応に対応する、１カ月目の総ＰＳＡ、遊離ＰＳＡ、または遊離対総ＰＳＡの比率における有意な変化はなかった。１２カ月目の前立腺体積の減少が１０％未満であった薬物処理された男性では、ＢＰＳＡの有意な増大がなかった。プラセボでは、いかなるＰＳＡ関連のパラメータにも有意な変化がなかった。

したがって、各パラメータ、すなわち、ＢＰＳＡの増大、ｐｒｏＰＳＡの低減、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率の増大、ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率の増大、およびＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率の増大は、薬物治療開始の１カ月後に有意な変化を示し、１２カ月後における前立腺体積の減少と有意に関連していた。総ＰＳＡ、遊離ＰＳＡ、および遊離対総ＰＳＡの比率に有意な変化は観察されなかった。

表１．１２カ月目の前立腺体積に１０％以上の減少があった男性における、時間０と、薬物またはプラセボを用いた治療の１カ月後との間の測定の中央値変化の有意性（ｐ値、マンホイットニー検定）。

反応対薬物治療のオッズ比を図３に示す。この場合、薬物に反応する（１２カ月目における前立腺体積の１０％以上の低下）オッズが、１カ月目における血清ＢＰＳＡ濃度の増大と共に増大している。１カ月目のＢＰＳＡ濃度がベースラインより２０％以上増大しているものでは、１２カ月目に薬物反応を有するオッズに２倍の増大がある。２５％以上のＢＰＳＡ増大は、３倍の、好ましい薬物反応を有する見込みを示している。
（実施例ＩＩ）
５−アルファ−レダクターゼ阻害剤であるデュタステライドを用いた治療の後における、国際前立腺症状スコア（ＩＰＳＳ）の低下と、血清ＢＰＳＡ、ｐｒｏＰＳＡ、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡ比、ＢＰＳＡ対総ＰＳＡ比、およびＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡ比の変化との関連性
総ＰＳＡ、遊離ＰＳＡ、ｐｒｏＰＳＡ、およびＢＰＳＡの濃度を時間０（処理前のベースライン）および薬物投与の１カ月後に検査した。１２カ月の治療の後に、ＩＰＳＳの２以上の改善（低下）を有した男性として薬物反応を定義した。表２は、この試料セットでは１カ月目のＢＰＳＡ濃度の増大が統計的な有意性に達しなかったが、ｐｒｏＰＳＡの低減（ｐ＝０．０００２）およびＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率の増大（ｐ＜０．０００１）は有意であったことを示す。ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率およびＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率の増大も、極めて顕著であった。プラセボ試料、またはＩＰＳＳの改善が２未満である男性（薬物不反応者）はいずれも、いかなるＰＳＡ関連のパラメータにも統計的に有意な相違を示さなかった。しかし、薬物治療後におけるＢＰＳＡ濃度は、１カ月目に、プラセボより有意に増大していた（表３）。同様に、ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率およびＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率も、薬物治療の１カ月目に、プラセボより有意に増大していた。これらの結果は、５ＡＲＩを用いたＢＰＨ薬物治療の１カ月後における、ＢＰＳＡの増大、ｐｒｏＰＳＡの低減、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡ比の増大、ＢＰＳＡ対総ＰＳＡ比の増大、ＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡ比の増大が、１２カ月目に薬物治療に反応する男性と有意に関連していることを示している。

表２．１２カ月目の国際前立腺症状スコアに２以上の改善があった男性における、時間０と、薬物またはプラセボを用いた治療の１カ月後と間の測定の中央値変化の有意性（ｐ値、マンホイットニー検定）。

表３．国際前立腺症状スコアの２以上の低減があった試料における、薬物対プラセボ治療の１カ月目の中央値の有意性（ｐ値、マンホイットニー検定）。＜０．０５であるｐ値は、薬物を投与されている男性における、測定されたＢＰＳＡ、ＢＰＳＡ対総ＰＳＡ比、またはＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡ比が、プラセボと比較して有意に相違していることを示す。

臨床上の有用性があるカットオフ値を決定する別の方法は、１カ月における測定パラメータの変化パーセントに基づいて、１２カ月目における薬物治療に対する反応のオッズ比を計算することである。この場合、薬物に反応する（１２カ月目におけるＩＰＳＳの２以上の低下）オッズが、１カ月目におけるＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率の増大と共に増大している。計算は、１カ月目におけるＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡ比が＜２５０％の増大である男性と比較して、１カ月目のＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡ比がベースラインより＞２５０％大きい場合、１２カ月目に薬物に対して反応を有するオッズ比が２．３であることを示している。１カ月目のＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡ比がベースラインより＞２５０％の増大である場合、１２カ月目に薬物反応を有するオッズに、少なくとも２倍の増大がある。オッズ比が少なくとも２であるものが、本発明の好ましい実施形態である。ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率の増大に関するカットオフ値を設定する手段としてオッズ比を用いると、２５０％が好ましいカットオフ値となるであろう。

症状スコアの何らかの側面を反映するＢＰＨ症候パラメータの１つがＱｍａｘ、すなわち最大尿流速（１秒あたりの立方センチメートル）である。この研究集団における中央値は１秒あたり９．３ｃｃであった。薬物治療の１カ月後に、ＢＰＳＡの２５％の増大を有した男性は、１２カ月目に流速の２ｃｃの増大を有するオッズ比３．３を有する。
（実施例ＩＩＩ）
５−アルファ−レダクターゼ阻害剤であるデュタステライドを投与した後１週間から３カ月までの期間における、ＢＰＳＡ、ｐｒｏＰＳＡ、およびＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率の変化の診断有用性を判定する方法
前の実施例では、約１カ月目における、予想外のｐｒｏＰＳＡの低減およびＢＰＳＡおよびＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率の増大が、１２カ月目における薬物反応と有意に関連づけられた。しかし、５ＡＲＩは、投与されて１〜２週間以内に５ＡＲの産生に影響をもち始める。したがって、薬物投与に関連した予想外のＢＰＳＰの増大およびｐｒｏＰＳＡの低減は、約１カ月目とは異なる時点では、異なった速度の変化および振幅を有する可能性がある。薬物に反応するであろう男性を同定するために、相対的なＢＰＳＰの増大およびｐｒｏＰＳＡの低減を使用するには、実施例ＩおよびＩＩに示した通りの約１カ月目とは異なる最適な診断有用性が存在するかもしれない可能性がある。予想外のＢＰＳＰの増大およびｐｒｏＰＳＡの低減の付加的または改善された診断有用性を決定するために、実施例ＩおよびＩＩで実証したデータ分析を用いて、同じ濃度の薬物を使用し、同一もしくは同様の薬物反応の指標を用いて、同様の実験を合理的に設計することができよう。ｐｒｏＰＳＡの急速な低下の生物学的機構は、ＤＨＴ産生の阻害と関係しているので、この影響は、すべての形態のｐｒｏＰＳＡに影響を与えると予測されよう。これは、天然に発現されたｐｒｏＰＳＡは、７アミノ酸のリーダーペプチドと、末端欠失型のｐｒｏＰＳＡ形態、すなわち、翻訳後プロテアーゼ活性による１から６アミノ酸のリーダーペプチドを含有しているｐｒｏＰＳＡ形態とを含有しているからである。したがって、実施例ＩおよびＩＩに示した通り、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率には、未改変もしくは末端欠失型のｐｒｏＰＳＡのいかなる単一の形態、またはｐｒｏＰＳＡの複合形態も含まれうる。

この方法の１つの実験的実施例は、以下の工程を含むだろう。すなわち、１）上記の材料および方法セクション中に記載した患者の参加判定規準を満たす男性を同定する。２）デュタステライドまたはフィナステリドを投与する前の１週間以内に血液試料を採取する。３）薬物投与後の１週間目から薬物投与後の３カ月目まで、１週間間隔で血液試料を採取する。４）これらの試料中のＢＰＳＡおよびｐｒｏＰＳＡを測定する。５）どのタイムポイントで、薬物投与前のベースライン値と比較して統計的に有意なｐｒｏＰＳＡの低減、ＢＰＳＡの増大、またはＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡ比の増大があるか測定する。６）これらのパラメータと、薬物投与の６から１２カ月後における薬物反応との関連性に関して、実施例ＩおよびＩＩに示した通りにデータを解析する。７）薬物反応は前立腺体積の１０％以上の減少、ＩＰＳＳの２以上の低下、尿流量（Ｑｍａｘ）の増大、または徴候的なＢＰＨと通常関連する他のクオリティオブライフパラメータの改善と定義することができる。８）最高の統計的相関関係を、ａ）プラセボまたは対照と比較した、ｐｒｏＰＳＡの低減、またはＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率の増大の反応平均または中央値によって、あるいはｂ）実施例ＩおよびＩＩに示した通りに、薬物反応を有するオッズ比によって判定する。９）薬物治療に１２カ月目に反応するであろう男性を同定するのに使用でき、実施例ＩおよびＩＩに示した通りに計算される、薬物投与後における最適な時間を同定する。

薬物治療に反応するであろう男性を同定するのに使用される、薬物投与後における最適な時間を同定するために適用すべき追加要件は、ａ）薬物反応者を同定することができる、薬物投与の後における最短の時間、ｂ）オッズ比またはこれに匹敵する他の統計的手法によって決定される最大または最高の予測値、ｃ）癌を同定するための前立腺生検と同時に薬物投与が開始された場合には、１カ月目より遅いときが望ましい場合がある。ｃ）の場合には、前立腺生検は、生検による血清ＰＳＡレベルの一時的な上昇を引き起こすことが知られており、これらのＰＳＡレベルがＢＰＳＡ試験を妨害する可能性がある。したがって、場合によっては、前立腺生検を行った男性に最適なときを選択するため、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率を計算するためのＢＰＳＡ試験およびｐｒｏＰＳＡ試験を、１カ月より遅い期間において、しかし３カ月目より前に行うことが望ましい場合がある。

予想外のＢＰＳＡの増大、ｐｒｏＰＳＡの低減、またはＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率の増大の診断有用性の効果的な評価を決定するための判定規準を、実施例ＩおよびＩＩで実証した。これらには、少なくとも２つの異なった判定規準が関与する。１）１２カ月目に薬物治療に反応する男性の集団の、薬物投与後の所与の時点における、ｐｒｏＰＳＡの低減、ＢＰＳＡの増大、またはｐｒｏＰＳＡとの共存比率の平均または中央値は、薬物反応判定規準を満たさなかった男性におけるプラセボ対照レベルの平均または中央値より統計的に有意に高くなければならない。この判定規準を用いて、薬物治療に反応するであろう男性を同定するのに最も役立つ、薬物投与後の所与の時点におけるＢＰＳＡおよびｐｒｏＰＳＡのカットオフ値を確立することができる。２）実施例ＩおよびＩＩで実証された第２の方法は、臨床的薬物反応を与えるオッズ比が少なくとも２倍になるｐｒｏＰＳＡの低減、ＢＰＳＡの増大、またはＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの共存比率のパーセンテージを決定することである。この場合、カットオフ値は、少なくとも２倍のオッズ比を与えるＢＰＳＡまたはｐｒｏＰＳＡとのＢＰＳＡの共存比率の増大濃度またはパーセントとして定義される。実施例ＩＩでは、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率における２５０％の増大が、少なくとも２のオッズ比を与えており、本発明の好ましい実施形態となる。

（参考文献リスト）

図１は、薬物投与の１、３、および１２カ月後における、プラセボ群および５−アルファ−レダクターゼ阻害剤であるデュタステライドで処理された群の総ＰＳＡ（ＰＳＡ）、遊離ＰＳＡ（ｆＰＳＡ）、ｐｒｏＰＳＡ、およびＢＰＳＡ血清濃度の、ベースラインからの変化％を示すプロットである。 図２は、薬物投与の１カ月後における、プラセボ群および５−アルファ−レダクターゼ阻害剤であるデュタステライドで処理された群の総ＰＳＡ（ＰＳＡ）、遊離ＰＳＡ（ｆＰＳＡ）、ｐｒｏＰＳＡ、およびＢＰＳＡ血清濃度の、ベースラインからの変化％を示すプロットである。 図３は、薬物治療に対する反応のオッズ比とＢＰＳＡの増大との関係を示す。

Claims (28)

1. 対象が薬物に反応する見込みを判定する方法であって、
   ＰＳＡ関連障害を患っており、かつ前記ＰＳＡ関連障害を治療するための薬物を投与されている対象において、少なくとも１つのＰＳＡ関連値を測定する工程と、
   前記ＰＳＡ関連値をそれぞれの対照値と比較する工程と、
   前記対象が前記薬物に反応する見込みを判定する工程と
   を含み、
   前記ＰＳＡ関連値が、ＢＰＳＡ量、ｐｒｏＰＳＡ量、ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率、ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率、ＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率、およびこれらの組合せからなる群から選択され、かつ
   前記ＢＰＳＡ量、前記ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率、前記ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率または前記ＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率が、それぞれの対照値よりそれぞれの第１既定値高い場合、前記ｐｒｏＰＳＡ量がそれぞれの対照値より第２の既定値低い場合、またはこれらの組合せの場合、前記対象が前記薬物に反応する見込みが高いことを示す、方法。
2. 前記対照値が、薬物投与前に測定された、前記対象のＰＳＡ関連値である、請求項１に記載の方法。
3. 前記ＰＳＡ関連障害が良性前立腺肥大症である、請求項１に記載の方法。
4. 薬物投与の１２カ月後に前記対象の前立腺体積が１０％以上減少している場合に、前記対象が前記薬物に反応するものとされる、請求項３に記載の方法。
5. 薬物投与の１２カ月後に前記対象の国際前立腺症状スコアが２以上減少している場合に、前記対象が前記薬物に反応するものとされる、請求項３に記載の方法。
6. 薬物投与の１２カ月後に前記対象の最大尿流速が１ｃｃ以上増加している場合に、前記対象が前記薬物に反応するものとされる、請求項３に記載の方法。
7. 前記ＰＳＡ関連障害が前立腺癌または前立腺炎である、請求項１に記載の方法。
8. 前記薬物がアンドロゲン遮断薬である、請求項１に記載の方法。
9. 前記薬物が５−アルファ−レダクターゼ阻害剤（５ＡＲＩ）、ビカルタミド、およびフルタミドからなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
10. 前記５ＡＲＩがデュタステライドまたはフィナステリドである、請求項９に記載の方法。
11. 前記ＰＳＡ関連値が、前記対象からの生理学的流体または前立腺組織試料中で測定される、請求項１に記載の方法。
12. 前記生理学的流体が、血液、血清、精漿、尿、および血漿からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
13. 前記第１または第２の既定値が５％以上である、請求項１に記載の方法。
14. 前記第１または第２の既定値が、それぞれ第１または第２の既定オッズ比に対応している、請求項１に記載の方法。
15. 前記第１または第２の既定オッズ比が２以上である、請求項１４に記載の方法。
16. 前記ＰＳＡ関連値が、薬物投与の１週間後と３カ月後との間に測定される、請求項１に記載の方法。
17. 前記ＰＳＡ関連値が、薬物投与の１カ月後に測定される、請求項１６に記載の方法。
18. 前記第１の既定値が、前記ＢＰＳＡ量には８６％以上であり、前記ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率には４５０％以上であり、前記ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率には７８％以上であり、前記ＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率には５２％以上であり、かつ前記第２の既定値が４８％以上である、請求項１７に記載の方法。
19. 前記第１の既定値が、前記ＢＰＳＡ量には２５％以上であり、前記ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率には２３０％以上であり、前記ＢＰＳＡ対総ＰＳＡの比率には５９％以上であり、前記ＢＰＳＡ対遊離ＰＳＡの比率には４４％以上であり、かつ前記第２の既定値が４１％以上である、請求項１７に記載の方法。
20. 前記第１の既定値が、前記ＢＰＳＡ対ｐｒｏＰＳＡの比率には２５０％以上である、請求項１７に記載の方法。
21. 前記第１の既定値が前記ＢＰＳＡ量には２０％以上である、請求項１７に記載の方法。
22. 前記ｐｒｏＰＳＡが、［−１］ｐｒｏＰＳＡ、［−２］ｐｒｏＰＳＡ、［−３］ｐｒｏＰＳＡ、［−４］ｐｒｏＰＳＡ、［−５］ｐｒｏＰＳＡ、［−６］ｐｒｏＰＳＡ、［−７］ｐｒｏＰＳＡ、およびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
23. 対象のＢＰＳＡ量を測定するための第１の因子と、
    前記対象の遊離ＰＳＡ量を測定するための第２の因子と、
    前記対象の総ＰＳＡ量またはｐｒｏＰＳＡ量を測定するための第３の因子と
    を含むキット。
24. 前記因子のうちの１つまたは複数が抗体である、請求項２３に記載のキット。
25. 前記抗体のうち１つまたは複数がモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である、請求項２４に記載のキット。
26. 対象のＢＰＳＡ量を測定するための第１の因子と、
    前記対象のｐｒｏＰＳＡ量を測定するための第２の因子と、
    総ＰＳＡ量を測定するための第３の因子と、
    前記対象の遊離ＰＳＡ量を測定するための第４の因子と
    を含むキット。
27. 前記因子のうちの１つまたは複数が抗体である、請求項２６に記載のキット。
28. 前記抗体のうち１つまたは複数がモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である、請求項２７に記載のキット。

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