JP2013136584A - 癌におけるｅｄｇレセプター結合剤の使用 - Google Patents

Abstract

【課題】 所望により化学治療剤と組み合わせて、スフィンゴシン−１−ホスフェートレセプターアゴニストを用いる、固形腫瘍、たとえば腫瘍侵襲の処置方法、および特に脱調節性血管形成の阻害または制御方法を提供すること。
【解決手段】 所望により化学治療剤と組み合わせた、スフィンゴシン−１−ホスフェートレセプターアゴニストが、固形腫瘍、たとえば腫瘍侵襲の処置に有用であることを見いだした。
【選択図】なし

Description

本発明は、特に癌の処置における、スフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）レセプターアゴニストの新規使用に関する。

Ｓ１Ｐレセプターアゴニストは、リンパ球ホーミング（ＬＨ）促進剤であり、これは、全身的な免疫抑制を惹起することなく、循環から二次リンパ組織への再分布、好ましくは可逆的な再分布に由来するリンパ球減少を引き起こす。ナイーブ細胞が隔離される；血液からのＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞およびＢ細胞を刺激すると、リンパ節（ＬＮ）およびパイエル板（ＰＰ）に移動し、その結果、たとえば移植器官への細胞の湿潤が阻害される。

Ｓ１Ｐレセプターアゴニストは、典型的には、スフィンゴシンアナログ、たとえば２−置換２−アミノ−プロパン−１,３−ジオールまたは２−アミノ−プロパノール誘導体、たとえば式Ｘ

〔式中、
ＺはＨ；Ｃ_１−６アルキル；Ｃ_２−６アルケニル；Ｃ_２−６アルキニル；フェニル；ＯＨにより置換されたフェニル；ハロゲン、Ｃ_３−８シクロアルキル、フェニル、およびＯＨにより置換されたフェニルからなる群から選択される１〜３個の置換基により置換されたＣ_１−６アルキル；またはＣＨ_２−Ｒ_４z［式中、Ｒ_４zはＯＨ、アシルオキシもしくは式（ａ）

（式中、Ｚ_１は直接結合またはＯ、好ましくはＯであり；Ｒ_５zおよびＲ_６zは、それぞれ独立してＨ、または所望により１、２もしくは３個のハロゲン原子により置換されていてもよいＣ_１−４アルキルである。）
で示される残基である。］であり；
Ｒ_１zは、ＯＨ、アシルオキシまたは式（ａ）の残基であり；そしてＲ_２zおよびＲ_３zは、それぞれ独立してＨ、Ｃ_１−４アルキルまたはアシルである。〕
で示される基を含んでなる化合物である。

式Ｘの基は、親水性または親油性であり得、そして得られる基（ＺおよびＲ_１zの少なくとも一方が式（ａ）の残基であるかまたはそれを含む）が、１またはそれ以上のスフィンゴシン−１−ホスフェートレセプターにてアゴニストとしてシグナルを送る限り、１またはそれ以上の脂肪族、脂環族、芳香族および／または複素環残基を含む部分に末端の基として結合した官能基である。

Ｓ１Ｐレセプターアゴニストは、１またはそれ以上のスフィンゴシン−１ ホスフェートレセプター、たとえばＳ１Ｐ１からＳ１Ｐ８にてアゴニストとしてシグナルを送る化合物である。Ｓ１Ｐレセプターに結合するアゴニストは、たとえば細胞内ヘテロ三量体Ｇタンパク質の、Ｇα−ＧＴＰおよびＧβγ−ＧＴＰへの解離、ならびに／またはアゴニスト結合レセプターのリン酸化および下流へのシグナル伝達／キナーゼの活性化の増加をもたらし得る。Ｓ１Ｐレセプターアゴニストの結合親和性は、下記パラグラフＩにて記載したように測定され得る。

適当なＳ１Ｐレセプターアゴニストの例は、たとえば：
− ＥＰ６２７４０６Ａ１において開示された化合物、たとえば式Ｉ

〔式中、Ｒ_１は、直鎖−または分枝鎖（Ｃ_{１２−２２}）炭素鎖［ここで、
− 当該炭素鎖は、鎖中に、二重結合、三重結合、Ｏ、Ｓ、ＮＲ_６（ここで、Ｒ_６は、Ｈ、アルキル、アラルキル、アシルまたはアルコキシカルボニルである。）、およびカルボニルから選択される結合またはヘテロ原子を有していてもよく、そして／あるいは
− 当該炭素鎖は、置換基としてアルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシイミノ、ヒドロキシまたはカルボキシを有してもよい。］であるか；あるいは
Ｒ_１は、
− アルキルが直鎖−または分枝鎖（Ｃ_６−２０）炭素鎖であるフェニルアルキル；あるいは
− アルキルが直鎖−または分枝鎖（Ｃ_１−３０）炭素鎖であるフェニルアルキル［当該フェニルアルキルは、
− 所望によりハロゲンにより置換されていてもよい直鎖−または分枝鎖（Ｃ_６−２０）炭素鎖、
− 所望によりハロゲンにより置換されていてもよい直鎖−または分枝鎖（Ｃ_６−２０）アルコキシ鎖、
− 直鎖−または分枝鎖（Ｃ_６−２０）アルケニルオキシ、
− フェニルアルコキシ、ハロフェニルアルコキシ、フェニルアルコキシアルキル、フェノキシアルコキシまたはフェノキシアルキル、
− Ｃ_６−２０アルキルにより置換されたシクロアルキルアルキル、
− Ｃ_６−２０アルキルにより置換されたヘテロアリールアルキル、
− 複素環Ｃ_６−２０アルキル、または
− Ｃ_２−２０アルキルにより置換された複素環アルキル
により置換されている。］であり、
そして
前記アルキル部分は、
− 炭素鎖において、二重結合、三重結合、Ｏ、Ｓ、スルフィニル、スルホニル、またはＮＲ_６（Ｒ_６は、上で定義したとおりである。）から選択される結合またはヘテロ原子、ならびに
− 置換基としてアルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシまたはカルボキシを有し得、そして
Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_５は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ_１−４アルキルまたはアシルである。〕
で示される化合物または医薬上許容されるその塩；

−ＥＰ １００２７９２Ａ１において開示された化合物、たとえば式ＩＩ

〔式中、ｍは１〜９であり、そしてＲ’_２、Ｒ’_３、Ｒ’_４およびＲ’_５は、それぞれ独立してＨ、アルキルまたはアシルである。〕
で示される化合物、または医薬上許容されるその塩；

−ＥＰ０７７８２６３ Ａ１において開示された化合物、たとえば式ＩＩＩ

〔式中、ＷはＨ；Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニルまたはＣ_２−６アルキニル；非置換またはＯＨにより置換されたフェニル；Ｒ’’_４Ｏ（ＣＨ_２）_ｎ；あるいはハロゲン、Ｃ_３−８シクロアルキル、フェニル、およびＯＨにより置換されたフェニルからなる群から選択される１〜３個の置換基により置換されたＣ_１−６アルキルであり；
ＸはＨまたはｐ個の炭素原子を有する非置換もしくは置換直鎖アルキルであるか、または（ｐ−１）個の炭素原子を有する非置換もしくは置換直鎖アルコキシ、たとえばＣ_１−６アルキル、ＯＨ、Ｃ_１−６アルコキシ、アシルオキシ、アミノ、Ｃ_１−６アルキルアミノ、アシルアミノ、オキソ、ハロＣ_１−６アルキル、ハロゲン、非置換フェニル、ならびにＣ_１−６アルキル、ＯＨ、Ｃ_１−６アルコキシ、アシル、アシルオキシ、アミノ、Ｃ_１−６アルキルアミノ、アシルアミノ、ハロＣ_１−６アルキルおよびハロゲンからなる群から選択される１〜３個の置換基により置換されたフェニルからなる群から選択される１〜３個の置換基により置換された直鎖アルコキシ；ＹはＨ、Ｃ_１−６アルキル、ＯＨ、Ｃ_１−６アルコキシ、アシル、アシルオキシ、アミノ、Ｃ_１−６アルキルアミノ、アシルアミノ、ハロＣ_１−６アルキルまたはハロゲンであり、Ｚ_２は単結合またはｑ個の炭素原子を有する直鎖アルキレンであり、
ｐおよびｑは、それぞれ独立して１〜２０の整数であるが、６＜ｐ＋ｑ＜２３であるものとし、ｍ’は１、２または３であり、ｎは２または３であり、
Ｒ’’_１、Ｒ’’_２、Ｒ’’_３およびＲ’’_４は、それぞれ独立してＨ、Ｃ_１−４アルキルまたはアシルである。〕
で示される化合物、または医薬上許容されるその塩、

−ＷＯ ０２／１８３９５において開示された化合物、たとえば式ＩＶａまたはＩＶｂ

〔式中、Ｘ_ａはＯ、Ｓ、ＮＲ_１sまたは−（ＣＨ_２）_ｎａ−であり、この基は非置換または１〜４個のハロゲンにより置換されており；ｎ_ａは１または２であり、Ｒ_１ｓはＨまたは（Ｃ_１−４）アルキルであり、当該アルキルは非置換またはハロゲンにより置換されており；Ｒ_１ａはＨ、ＯＨ、（Ｃ_１−４）アルキルまたはＯ（Ｃ_１−４）アルキルであり、前記アルキルは非置換または１〜３個のハロゲンにより置換されており；Ｒ_１ｂはＨ、ＯＨまたは（Ｃ_１−４）アルキルであり、前記アルキルは非置換またはハロゲンにより置換されており；各Ｒ_２ａは、独立してＨまたは（Ｃ_１−４）アルキルから選択され、前記アルキルは非置換またはハロゲンにより置換されており；Ｒ_３ａはＨ、ＯＨ、ハロゲンまたはＯ（Ｃ_１−４）アルキルであり、前記アルキルは非置換またはハロゲンにより置換されており；そしてＲ_３ｂはＨ、ＯＨ、ハロゲン、（Ｃ_１−４）アルキルであり、前記アルキルは非置換またはヒドロキシ、もしくはＯ（Ｃ_１−４）アルキル［ここで、アルキルは非置換もしくはハロゲンにより置換されている。］により置換されており；Ｙ_aは−ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＯＨ）−、ＯまたはＳであり、そしてＲ_４ａは（Ｃ_４−１４）アルキルまたは（Ｃ_４−１４）アルケニルである。〕
で示される化合物、または医薬上許容されるその塩もしくは水和物、

− ＷＯ ０２／０７６９９５において開示された化合物、たとえば式Ｖ

〔式中、
ｍ_ｃは１、２または３であり；
Ｘ_ｃはＯまたは直接結合であり；
Ｒ_１ｃはＨ；所望によりＯＨ、アシル、ハロゲン、Ｃ_３−１０シクロアルキル、フェニルもしくはヒドロキシ−フェニレンにより置換されていてもよいＣ_１−６アルキル；Ｃ_２−６アルケニル；Ｃ_２−６アルキニル；または所望によりＯＨにより置換されていてもよいフェニルであり；
Ｒ_２ｃは

｛式中、Ｒ_５ｃはＨまたは所望により１、２もしくは３個のハロゲン原子により置換されていてもよいＣ_１−４アルキルであり、そしてＲ_６ｃはＨまたは所望によりハロゲンにより置換されていてもよいＣ_１−４アルキルである。｝
であり；
Ｒ_３ｃおよびＲ_４ｃは、それぞれ独立してＨ、所望によりハロゲンにより置換されていてもよいＣ_１−４アルキル、またはアシルであり、そして
Ｒ_ｃは、鎖中に所望により酸素原子を有していてもよく、そして所望によりニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシもしくはカルボキシにより置換されていてもよいＣ_{１３−２０}アルキル；または式（ａ）

｛式中、Ｒ_７ｃはＨ、Ｃ_１−４アルキルまたはＣ_１−４アルコキシであり、そしてＲ_８ｃは置換Ｃ_１−２０アルカノイル、フェニルＣ_１−１４アルキル［ここで、Ｃ_１−１４アルキルは、ハロゲンもしくはＯＨにより置換されていてもよい。］、シクロアルキルＣ_１−１４アルコキシまたはフェニルＣ_１−１４アルコキシ［ここで、シクロアルキルまたはフェニル環は、所望によりハロゲン、Ｃ_１−４アルキルおよび／またはＣ_１−４アルコキシにより置換されていてもよい。］、フェニルＣ_１−１４アルコキシ−Ｃ_１−１４アルキル、フェノキシＣ_１−１４アルコキシまたはフェノキシＣ_１−１４アルキルである。｝
で示される残基であり、
Ｒ_ｃは、また、Ｒ_１ｃがＣ_１−４アルキル、Ｃ_２−６アルケニルまたはＣ_２−６アルキニルである場合には、Ｒ_８ｃがＣ_１−１４アルコキシである式（ａ）の残基である。〕
で示される化合物、
あるいは式ＶＩ

〔式中、
ｎ_ｘは２、３または４であり、
Ｒ_１ｘはＨ；所望によりＯＨ、アシル、ハロゲン、シクロアルキル、フェニルもしくはヒドロキシ−フェニレンにより置換されていてもよいＣ_１−６アルキル；Ｃ_２−６アルケニル；Ｃ_２−６アルキニル；または所望によりＯＨにより置換されていてもよいフェニルであり；
Ｒ_２ｘはＨ、Ｃ_１−４アルキルまたはアシルであり、
Ｒ_３ｘおよびＲ_４ｘは、それぞれ独立してＨ、所望によりハロゲンにより置換されていてもよいＣ_１−４アルキル、またはアシルであり、
Ｒ_５ｘはＨ、Ｃ_１−４アルキルまたはＣ_１−４アルコキシであり、そして
Ｒ_６ｘはシクロアルキルにより置換されたＣ_１−２０アルカノイル；シクロアルキルアルキルＣ_１−１４アルコキシ［ここで、シクロアルキル環は、所望によりハロゲン、Ｃ_１−４アルキルおよび／またはＣ_１−４アルコキシにより置換されていてもよい。］；フェニルＣ_１−１４アルコキシ［ここで、フェニル環は所望によりハロゲン、Ｃ_１−４アルキルおよび／またはＣ_１−４アルコキシにより置換されていてもよい。］であり、
Ｒ_６ｘは、また、Ｒ_１ｘがＯＨにより置換されたＣ_２−４アルキルである場合には、Ｃ_４−１４アルコキシであり、またはＲ_１ｘがＣ_１−４アルキルである場合には、ペンチルオキシまたはヘキシルオキシである。
ただし、Ｒ_５ｘがＨであるか、またはＲ_１ｘがメチルである場合、Ｒ_６ｘはフェニル−ブチレンオキシでないものとする。〕
で示される化合物、または医薬上許容されるその塩；

−ＷＯ ０２／０６２６８ＡＩにおいて開示された化合物、たとえば式ＶＩＩ

〔式中、Ｒ_１ｄおよびＲ_２ｄは、それぞれ独立して、Ｈまたはアミノ−保護基であり；
Ｒ_３ｄは水素またはヒドロキシ−保護基であり；
Ｒ_４ｄは低級アルキルであり；
ｎ_ｄは１〜６の整数であり；
Ｘ_ｄはエチレン、ビニレン、エチニレン、式−Ｄ−ＣＨ_２−（式中、Ｄはカルボニル、−ＣＨ（ＯＨ）−、Ｏ、ＳまたはＮである。）を有する基、アリール、または以下で定義した基から選択される３までの置換基により置換されたアリールであり；
Ｙ_ｄは単結合、Ｃ_１−１０アルキレン、群ａおよびｂから選択される３までの置換基により置換されたＣ_１−１０アルキレン、炭素鎖の中途または末端にＯまたはＳを有するＣ_１−１０アルキレン、あるいは群ａおよびｂから選択される３までの置換基により置換された炭素鎖の中途または末端にＯまたはＳを有するＣ_１−１０アルキレンであり；
Ｒ_５ｄは水素、シクロアルキル、アリール、ヘテロ環、群ａおよびｂから選択される３までの置換基により置換されたシクロアルキル、群ａおよびｂから選択される３までの置換基により置換されたアリール、あるいは群ａおよびｂから選択される３までの置換基により置換されたヘテロ環であり；そして
Ｒ_６ｄおよびＲ_７ｄは、それぞれ独立してＨまたは群ａから選択される置換基であり；
＜群ａ＞は、ハロゲン、低級アルキル、ハロゲノ 低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、カルボキシル、低級アルコキシカルボニル、ヒドロキシ、低級脂肪族アシル、アミノ、モノ−低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノ、低級脂肪族アシルアミノ、シアノまたはニトロであり；
＜群ｂ＞は、シクロアルキル、アリール、ヘテロ環であり、これらはそれぞれ、所望により群ａから選択される３までの置換基により置換されていてもよい。
ただし、Ｒ_５ｄが水素である場合、Ｙ_ｄは単結合または直鎖Ｃ_１−１０アルキレンであるものとする。〕
で示される化合物、または薬理学的に許容されるその塩もしくはエステル；

−ＪＰ−１４３１６９８５（ＪＰ２００２３１６９８５）において開示された化合物、たとえば式ＶＩＩＩ:

〔式中、Ｒ_１ｅ、Ｒ_２ｅ、Ｒ_３ｅ、Ｒ_４ｅ、Ｒ_５ｅ、Ｒ_６ｅ、Ｒ_７ｅ、ｎ_ｅ、Ｘ_ｅおよびＹ_ｅはＪＰ−１４３１６９８５において定義されたとおりである。〕
で示される化合物、または薬理学的に許容されるその塩もしくはエステル；

−ＷＯ ０３／２９１８４およびＷＯ ０３／２９２０５において開示された化合物、たとえば式ＩＸ

〔式中、Ｘ_ｆはＯまたはＳであり、そしてＲ_１ｆ、Ｒ_２ｆ、Ｒ_３ｆおよびｎ_ｆはＷＯ ０３／２９１８４およびＯ３／２９２０５において開示されたとおりである。〕
で示される化合物、たとえば２−アミノ−２−［４−（３−ベンジルオキシフェノキシ）−２−クロロフェニル］プロピル−１,３−プロパン−ジオールまたは２−アミノ−２−［４−（ベンジルオキシフェニルチオ）−２−クロロフェニル］プロピル−１,３−プロパン−ジオール
である。

特許出願が引用されたそれぞれの場合において、化合物に関する発明主題は、出典明示により本願の一部とする。
アシルは、Ｒ_ｙ−ＣＯ−〔式中、Ｒ_ｙは、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_３−６シクロアルキル、フェニルまたはフェニル−Ｃ_１−４アルキルである。〕の残基であり得る。特記しない限り、アルキル、アルコキシ、アルケニルまたはアルキニルは直鎖または分枝鎖であり得る。

式Ｉの化合物において、Ｒ_１としての炭素鎖が置換されている場合、それは、好ましくは、ハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシまたはカルボキシにより置換されている。炭素鎖に、所望により置換されていてもよいフェニレンが割り込んでいる場合、当該炭素鎖は、好ましくは非置換である。フェニレン部分が置換されている場合、それは、好ましくはハロゲン、ニトロ、アミノ、メトキシ、ヒドロキシまたはカルボキシにより置換されている。

好適な式Ｉの化合物は、Ｒ_１がＣ_{１３−２０}アルキル（これは、所望によりニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシまたはカルボキシにより置換されていてもよい。）である化合物であり、そして、さらに好ましくは、Ｒ_１が、Ｃ_６−１４−アルキル鎖（これは、所望によりハロゲンにより置換されていてもよい。）により置換されたフェニルアルキルであり、そしてアルキル部分がＣ_１−６アルキル（これは、所望によりヒドロキシにより置換されていてもよい。）である化合物である。さらに好ましくは、Ｒ_１は、フェニルが直鎖または分枝鎖、好ましくは直鎖、Ｃ_６−１４アルキル鎖により置換されたフェニル−Ｃ_１−６アルキルである。Ｃ_６−１４アルキル鎖は、オルト、メタまたはパラ位、好ましくはパラ位に存在し得る。
好ましくは、Ｒ_２〜Ｒ_５はそれぞれＨである。

好適な式Ｉの化合物は、２−アミノ−２−テトラデシル−１,３−プロパンジオールである。特に好適な式ＩのＳ１Ｐレセプターアゴニストは、遊離の形態または医薬上許容される塩の形態のＦＴＹ７２０、すなわち２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１,３−ジオール（以下、「化合物Ａ」という）、たとえば以下：

に示すような塩酸塩である。

好適な式ＩＩの化合物は、Ｒ’_２〜Ｒ’_５がそれぞれＨであり、そしてｍが４である化合物、すなわち遊離の形態または医薬上許容される塩の形態の２−アミノ−２−{２−［４−（１−オキソ−５−フェニルペンチル）フェニル］エチル}プロパン−１,３−ジオール（以下、「化合物Ｂ」という）、たとえばその塩酸塩である。

好適な式ＩＩＩの化合物は、ＷがＣＨ_３であり、Ｒ’’_１〜Ｒ’’_３がそれぞれＨであり、Ｚ_２がエチレンであり、Ｘがヘプチルオキシであり、そしてＹがＨである化合物、すなわち遊離の形態または医薬上許容される塩の形態の２−アミノ−４−（４−ヘプチルオキシフェニル）−２−メチル−ブタノール（以下、「化合物Ｃ」という）、たとえばその塩酸塩である。Ｒ−エナンチオマーが特に好適である。

好適な式ＩＶａの化合物は、ＦＴＹ７２０−ホスフェート（Ｒ_２ａがＨであり、Ｒ_３ａがＯＨであり、Ｘ_ａがＯであり、Ｒ_１ａおよびＲ_１ｂがＯＨである。）である。好適な式ＩＶｂの化合物は、「化合物Ｃ」−ホスフェート（Ｒ_２ａがＨであり、Ｒ_３ｂがＯＨであり、Ｘ_ａがＯであり、Ｒ_１ａおよびＲ_１ｂがＯＨであり、Ｙ_ａがＯであり、そしてＲ_４ａがヘプチルである。）である。好適な式Ｖの化合物は、「化合物Ｂ」−ホスフェートである。

好適な式Ｖの化合物は、リン酸 モノ−［（Ｒ）−２−アミノ−２−メチル−４−（４−ペンチルオキシ−フェニル）−ブチル］エステルである。

好適な式ＶＩＩＩの化合物は、（２Ｒ）−２−アミノ−４−［３−（４−シクロヘキシルオキシブチル）ベンゾ［ｂ］チエン−６−イル］−２−メチルブタン−１−オールである。

式Ｉ〜ＩＸの化合物が分子内に１またはそれ以上の不斉中心を有する場合、本発明は、さまざまな光学異性体、ならびにラセミ体、ジアステレオ異性体およびこれらの混合物を包含するものとして理解されるべきである。式ＩＩＩまたはＩＶｂの化合物は、アミノ基を担持する炭素原子が不斉である場合、好ましくこの炭素原子においてＲの立体配置である。

式Ｉ〜ＩＸの化合物の医薬上許容される塩の例には、無機酸との塩、たとえば塩酸塩、臭化水素酸塩および硫酸塩、有機酸との塩、たとえば酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、メタンスルホン酸塩およびベンゼンスルホン酸塩が含まれ、または適当な場合には、ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびアルミニウムのような金属との塩、アミン、たとえばトリエチルアミンのような塩、および二塩基性アミノ酸、たとえばリジンとの塩が含まれる。本発明の方法の化合物および塩には、水和物および溶媒和物の形態が含まれる。

Ｓ１Ｐレセプターアゴニストは、観察された活性、たとえばリンパ球のホーミングに基づいて、たとえばＥＰ ６２７４０６Ａ１またはＵＳＰ ６,００４,５６５において記載されたように、急性同種移植片拒絶の処置において、たとえば免疫抑制剤として有用であることが見いだされた。今回、Ｓ１Ｐレセプターアゴニストは、特に固形腫瘍、とりわけ進行性固形腫瘍の癌化学療法に有用な興味深い特性を有することが見いだされた。現在でも、とりわけ抗癌化合物での処置が疾患後退または安定化に関連しない場合において、固形腫瘍の癌処置の手段を広げる必要性が存在している。

本発明の特定の知見に関連して、
１.１ 固形腫瘍の処置方法であって、それを必要としている対象において、当該対象に、式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニストまたは医薬上許容されるその塩の治療上有効量を投与することを含んでなる方法、
１.２ 固形腫瘍の増殖を阻害する方法であって、それを必要としている対象において、当該対象に、式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニストまたは医薬上許容されるその塩の治療上有効量を投与することを含んでなる方法、
１.３ 腫瘍後退、たとえば腫瘍重量減少を誘導する方法であって、それを必要としている対象において、当該対象に、式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニストまたは医薬上許容されるその塩の治療上有効量を投与することを含んでなる方法、
１.４ 固形腫瘍侵襲もしくはかかる腫瘍増殖に関係する症状の処置方法であって、それを必要としている対象において、当該対象に、式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニストまたは医薬上許容されるその塩の治療上有効量を投与することを含んでなる方法、
１.５ 腫瘍の転移性進展の予防方法、または微小転移の増殖の予防もしくは阻害方法であって、それらを必要としている対象において、当該対象に、式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニストまたは医薬上許容されるその塩の治療上有効量を投与することを含んでなる方法、
１.６ 脱調節性血管形成、たとえばスフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）介在性血管形成の阻害または制御方法であって、それらを必要としている対象において、当該対象に、式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニストまたは医薬上許容されるその塩の治療上有効量を投与することを含んでなる方法、
１.７ 血管新生プロセスにより仲介されるかまたは脱調節性血管形成に関係する疾患の予防または処置方法であって、それらを必要としている対象において、当該対象に、式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニストまたは医薬上許容されるその塩の治療上有効量を投与することを含んでなる方法、
が提供される。

「固形腫瘍」は、リンパ腺癌以外の腫瘍および／または転移（位置はどこでもよい）、たとえば脳および他の中枢神経系腫瘍（たとえば髄膜、脳、脊髄、脳神経および他の中枢神経系の腫瘍、たとえばグリア芽腫または骨髄細胞腫）；頭部および／または頚部癌；乳房腫瘍；循環器系の腫瘍（たとえば心臓、縦隔および胸膜、ならびに他の胸郭内器官、血管腫瘍および腫瘍関連性血管組織）；排泄系の腫瘍（たとえば腎臓、腎盂、尿管、膀胱、他のおよび非特定の泌尿器）；消化管の腫瘍（たとえば食道、胃、小腸、結腸、結腸直腸、直腸Ｓ状結腸移行部、直腸、肛門および肛門管）、肝臓および肝内胆管、胆嚢、胆管の他のおよび非特定の部分、膵臓、他のおよび消化のための器官に関係する腫瘍；口腔（口唇、舌、歯肉、口腔底、口蓋、および口の他の部分、耳下腺、および唾液腺の他の部分、扁桃腺、中咽頭、鼻咽頭、梨状陥凹、下咽頭、ならびに口唇、口腔および咽頭の他の部位）；生殖器官の腫瘍（たとえば陰門、膣、子宮頚、子宮体、子宮、卵巣、および女性生殖器に関連する他の部位、胎盤、陰茎、前立腺、精巣、ならびに男性生殖器に関連する他の部位）；呼吸器の腫瘍（たとえば鼻腔および中耳、副洞、喉頭、気管、気管支および肺、たとえば小細胞肺癌または非小細胞肺癌）；骨格系の腫瘍（たとえば骨および手足の関節軟骨、骨関節軟骨および他の部位）；皮膚の腫瘍（たとえば皮膚の悪性黒色腫、非メラノーマ性皮膚癌、皮膚基底細胞のカルシノーマ、皮膚扁平上皮細胞のカルシノーマ、中皮腫、カポジ肉腫）；ならびに末梢神経および自律神経系、結合組織および軟組織、後腹膜および腹膜、目および付属器、甲状腺、副腎および他の内分泌腺および関連構造、リンパ節の二次的かつ非特定の悪性腫瘍、呼吸器および消化器の二次的悪性腫瘍、ならびに他の部位の二次的悪性腫瘍を含む他の組織に関係する腫瘍を意味する。

本明細書における前記または後記の腫瘍、腫瘍疾患、カルシノーマまたは癌という場合、腫瘍および／または転移の位置が何であれ、元の器官もしくは組織におけるおよび／または他の任意の位置における転移も代替的または追加的に含意する。

１つの実施態様においてＳ１Ｐレセプターアゴニストが式Ｉの化合物、たとえば「化合物Ａ」、または式ＩＶａまたはＩＶｂの化合物である場合、それは、乳房、前立腺、膀胱、腎臓または肺腫瘍以外の固形腫瘍のために、処置方法１.１、１.２、１.３または１.４において使用される。

一連のさらなる特定または代替的実施態様において、本発明は、また、
１.８ 化学療法剤の活性の促進方法または化学療法剤に対する耐性の克服方法であって、それらを必要としている対象において、当該対象に、式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニストまたは医薬上許容されるその塩の治療上有効量を前記化学療法剤と同時使用的または逐次的に投与することを含んでなる方法。
１.９ 化学療法剤は、宿主細胞または腫瘍形成および／もしくは転移形成に関係するプロセスに対して指令するか、あるいは増殖、生存、分化または薬剤耐性の獲得のために腫瘍細胞により利用されるシグナル伝達経路のインヒビターである、１.８に記載の方法。
１.１０ Ｓ１Ｐレセプターアゴニストが断続的に投与される、上に示した方法。

一連のさらなる特定または代替的実施態様において、本発明は、また、
２.１ 好ましくはＳ１Ｐレセプターアゴニストが式Ｉの化合物、たとえば「化合物Ａ」、あるいは式ＩＶａまたはＩＶｂの化合物である場合に乳房、前立腺、膀胱、腎臓または肺以外の固形腫瘍のために、前記１.１から１.４で定義したいずれかの方法において使用するための、式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニスト、または医薬上許容されるその塩、
２.２ 前記１.５から１.１０または後記７で定義したいずれかの方法において使用するための、Ｓ１Ｐレセプターアゴニスト、たとえば式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニスト、または医薬上許容されるその塩、
３.１ 好ましくはＳ１Ｐレセプターアゴニストが式Ｉの化合物、たとえば「化合物Ａ」、あるいは式ＩＶａまたはＩＶｂの化合物である場合に乳房、前立腺、膀胱、腎臓または肺以外の固形腫瘍のために、前記１.１から１.４で定義したいずれかの方法において使用するための医薬組成物の製造において使用するための、式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニスト、または医薬上許容されるその塩、
３.２ 前記１.５から１.１０または後記７で定義したいずれかの方法において使用するための医薬組成物の製造において使用するための、Ｓ１Ｐレセプターアゴニスト、たとえば式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニスト、または医薬上許容されるその塩、
４.１ 好ましくはＳ１Ｐレセプターアゴニストが式Ｉの化合物、たとえば「化合物Ａ」、あるいは式ＩＶａまたはＩＶｂの化合物である場合に乳房、前立腺、膀胱、腎臓または肺以外の固形腫瘍のために、１またはそれ以上の医薬上許容される希釈剤または担体とともに、式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニスト、または医薬上許容されるその塩を含んでなる、前記１.１から１.４で定義したいずれかの方法において使用するための医薬組成物、
４.２ １またはそれ以上の医薬上許容される希釈剤または担体とともに、Ｓ１Ｐレセプターアゴニスト、たとえば式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニスト、または医薬上許容されるその塩を含んでなる、前記１.５から１.１０または後記７で定義したいずれかの方法において使用するための医薬組成物、
５.１ ａ）Ｓ１Ｐレセプターアゴニスト、たとえば式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニストまたは医薬上許容されるその塩である第１の剤、およびｂ）化学療法剤、たとえば以下で定義したものである併用剤（co-agent）を含んでなる、医薬組合せ剤（pharmaceutical combination）、
５.２ 相乗的治療効果を生み出すための、ある量のａ）Ｓ１Ｐレセプターアゴニスト、たとえば式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニストまたは医薬上許容されるその塩である第１の剤、およびｂ）以下のセクションｘi）で定義した化合物から選択される化学療法剤である併用剤を含む、医薬組合せ剤、
６. 治療上有効量のＳ１Ｐレセプターアゴニスト、たとえば式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニスト、または医薬上許容されるその塩、ならびに化学療法剤、たとえば以下に示したものである第２の医薬物質の共投与（たとえば同時使用的または逐次的投与）を含んでなる前記の方法、
７. リンパ増殖性または骨髄増殖性障害の処置方法、たとえば腫瘍侵襲またはかかる腫瘍増殖に関連する症状の処置方法であって、それらを必要としている対象において、当該対象に、Ｓ１Ｐレセプターアゴニスト、たとえば式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニスト、または医薬上許容されるその塩、および化学療法剤、たとえば以下に示したものである第２の医薬物質の共投与（たとえば同時使用的または逐次的投与）を含んでなる方法、
が提供される。

「リンパ腺癌（lymphatic cancer）」なる用語は、たとえば血液およびリンパ系の腫瘍（たとえばホジキン病、非ホジキン病性リンパ腫、バーキットリンパ腫、ＡＩＤＳ−関連リンパ腫、悪性免疫増殖疾患、多発性骨髄腫および悪性形質細胞新生物（malignant plasma cell neoplasm）、リンパ性白血病、急性または慢性骨髄性白血病、急性または慢性リンパ性白血病、単球性白血病、特定の細胞型の他の白血病、特定されていない細胞型の白血病、リンパ球の他の特定されていない悪性腫瘍、造血および関連組織、たとえばびまん性大細胞型リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫または皮膚Ｔ細胞リンパ腫）を意味する。骨髄癌（myeloid cancer）には、たとえば急性または慢性骨髄性白血病が含まれる。

「化学療法剤」なる用語は、とりわけ、Ｓ１Ｐレセプターアゴニスト以外の任意の化学療法剤を意味する。これには、
ｉ．アロマターゼインヒビター、
ｉｉ．抗エストロゲン、抗アンドロゲン（とりわけ前立腺癌において）またはゴナドレリンアゴニスト、
ｉｉｉ．トポイソメラーゼＩインヒビターまたはトポイソメラーゼＩＩインヒビター、
ｉｖ．微小管活性化剤、アルキル化剤、抗悪性腫瘍性代謝拮抗薬または白金化合物、
ｖ．タンパク質もしくは脂質キナーゼ活性またはタンパク質もしくは脂質ホスファターゼ活性を標的化／減少化する化合物、さらなる抗血管形成化合物あるいは細胞分化プロセスを誘導する化合物、
ｖｉ．ブラジキニン１レセプターまたはアンギオテンシンＩＩアンタゴニスト、
ｖｉｉ．シクロオキシゲナーゼインヒビター、ビスホスホネート、ヒストンデアセチラーゼインヒビター、ヘパラナーゼインヒビター（ヘパラン硫酸の分解を防ぐ）、たとえばＰＩ−８８、生物学的応答修飾因子、好ましくはリンホカインまたはインターフェロン、たとえばインターフェロンγ、ユビキチン化インヒビター、抗アポトーシス経路をブロックするインヒビター、
ｖｉｉｉ．Ｒａｓ発癌性アイソフォームのインヒビター、たとえばＨ−Ｒａｓ、Ｋ−ＲａｓもしくはＮ−Ｒａｓ、またはファルネシルトランスフェラーゼインヒビター、たとえばＬ−７４４,８３２もしくはＤＫ８Ｇ５５７、
ｉｘ．テロメラーゼインヒビター、たとえばテロメスタチン、
ｘ．プロテアーゼインヒビター、マトリックスメタロプロテイナーゼインヒビター、メチオニンアミノペプチダーゼインヒビター、たとえばベンガミドまたはその誘導体、またはプロテオソームインヒビター、たとえば、ＰＳ−３４１、および／または
ｘｉ．ｍＴＯＲインヒビター、
を含むが、これらに限定されるわけではない。

本明細書において使用される「アロマターゼインヒビター」なる用語は、エストロゲン産生、すなわち、基質アンドロステンジオンおよびテストステロンの、それぞれ、エストロンおよびエストラジオールへの変換を阻害する化合物に関する。該用語は、ステロイド、とりわけアタメスタン（atamestane）、エキセメスタンおよびホルメスタン（formestane）ならびに、特に、非ステロイド、とりわけアミノグルテチミド、ログレチミド（roglethimide）、ピリドグルテチミド（pyridoglutethimide）、トリロスタン、テストラクトン、ケトコナゾール（ketokonazole）、ボロゾール、ファドロゾール、アナストロゾールおよびレトロゾールを含むが、これらに限定されるわけではない。エキセメスタンは、たとえばＡＲＯＭＡＳＩＮ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。

ホルメスタンは、たとえばＬＥＮＴＡＲＯＮ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。ファドロゾールは、たとえばＡＦＥＭＡ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。アナストロゾールは、たとえばＡＲＩＭＩＤＥＸ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。レトロゾールは、たとえばＦＥＭＡＲＡ（商標）またはＦＥＭＡＲ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。アミノグルテチミドは、たとえばＯＲＩＭＥＴＥＮ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。アロマターゼインヒビターである化学療法剤を含んでなる本発明の組合せ剤は、特に、ホルモンレセプター陽性腫瘍、たとえば乳房の腫瘍の処置に有用である。

本明細書において使用される「抗エストロゲン剤」なる用語は、エストロゲンレセプターのレベルでエストロゲンの効果に拮抗する化合物に関する。該用語は、タモキシフェン、フルベストラント、ラロキシフェンおよび塩酸ラロキシフェンを含むが、これらに限定されるわけではない。タモキシフェンは、たとえばＮＯＬＶＡＤＥＸ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。塩酸ラロキシフェンは、たとえばＥＶＩＳＴＡ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。フルベストラントは、ＵＳ ４，６５９，５１６において開示されているように製剤化され得るか、またはそれは、たとえばＦＡＳＬＯＤＥＸ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。抗エストロゲン性の化学療法剤を含んでなる本発明の組合せ剤は、特に、エストロゲンレセプター陽性腫瘍、たとえば乳房の腫瘍の処置に有用である。

本明細書において使用される「抗アンドロゲン剤」なる用語は、アンドロゲンホルモンの生物学的効果を阻害することができるあらゆる物質に関し、そして、たとえばＵＳ ４，６３６，５０５において開示されたように製剤化され得るビカルタミド（ＣＡＳＯＤＥＸ（商標））を含むが、これに限定されるわけではない。

本明細書において使用される「ゴナドレリンアゴニスト」なる用語は、アバレリックス（abarelix）、ゴセレリンおよび酢酸ゴセレリンを含むが、これらに限定されるわけではない。ゴセレリンはＵＳ ４，１００，２７４において開示されており、そして、たとえばＺＯＬＡＤＥＸ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。アバレリックスは、たとえばＵＳ ５，８４３，９０１において開示されているように製剤化され得る。

本明細書において使用されるように「トポイソメラーゼＩインヒビター」なる用語は、トポテカン（topotecan）、イリノテカン、９−ニトロカンプトテシン（nitrocamptothecin）および大分子カンプトテシンコンジュゲートＰＮＵ−１６６１４８（ＷＯ９９／１７８０４における化合物Ａ１）を含むが、これらに限定されるわけではない。イリノテカンは、たとえばＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。トポテカンは、たとえばＨＹＣＡＭＴＩＮ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。

本明細書において使用される「トポイソメラーゼＩＩインヒビター」なる用語には、ドキソルビシン（リポソーム製剤、たとえばＣＡＥＬＹＸ（商標）を含む）、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシンおよびネモルビシン（nemorubicin）のようなアンスラサイクリン類、アンスラキノン類のミトキサントロンおよびロソキサントロン（losoxantrone）、ならびにポドフィロトキシン類のエトポシドおよびテニポシドが含まれるが、これらに限定されるわけではない。エトポシドは、たとえばＥＴＯＰＯＰＨＯＳ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。テニポシドは、たとえばＶＭ ２６−ＢＲＩＳＴＯＬ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。ドキソルビシンは、たとえばＡＤＲＩＢＬＡＳＴＩＮ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。エピルビシンは、たとえばＦＡＲＭＯＲＵＢＩＣＩＮ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。イダルビシンは、たとえばＺＡＶＥＤＯＳ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。ミトキサントロンは、たとえばＮＯＶＡＮＴＲＯＮ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。

「微小管活性化剤」なる用語は、タキサン類、たとえばパクリタキセルおよびドセタキセル、ビンカアルカロイド類、たとえばビンブラスチン、とりわけ硫酸ビンブラスチン、ビンクリスチン、とりわけ硫酸ビンクリスチン、およびビノレルビン、ディスコデルモリド類およびエポチロン類ならびにそれらの誘導体、たとえばエポチロンＢまたはその誘導体を含むが、これらに限定されない微小管安定化剤および微小管脱安定化剤に関する。パクリタキセルは、たとえばＴＡＸＯＬ（商標）として市販されている形態で投与され得る。ドセタキセルは、たとえばＴＡＸＯＴＥＲＥ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。硫酸ビンブラスチンは、たとえばＶＩＮＢＬＡＳＴＩＮ Ｒ．Ｐ．（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。硫酸ビンクリスチンは、たとえばＦＡＲＭＩＳＴＩＮ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。ディスコデルモリドは、たとえばＵＳ ５，０１０，０９９において開示されているように、入手することができる。

本明細書において使用される「アルキル化剤」なる用語は、ブスルファン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファランまたはニトロソウレア（ＢＣＮＵまたはＧｌｉａｄｅｌ（商標））を含むが、これらに限定されるわけではない。シクロホスファミドは、たとえばＣＹＣＬＯＳＴＩＮ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。イホスファミドは、たとえばＨＯＬＯＸＡＮ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。

「抗腫瘍性代謝拮抗薬」なる用語は、５−フルオロウラシル、カペシタビン、ゲムシタビン、シタラビン、フルダラビン、チオグアニン、メトトレキサートおよびエダトレキセート（edatrexate）を含むが、これらに限定されるわけではない。カペシタビンは、たとえばＸＥＬＯＤＡ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。ゲムシタビンは、たとえばＧＥＭＺＡＲ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。

本明細書において使用される「白金化合物」なる用語は、カルボプラチン、シスプラチンおよびオキサリプラチン（oxaliplatin）を含むが、これらに限定されるわけではない。カルボプラチンは、たとえばＣＡＲＢＯＰＬＡＴ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。オキサリプラチンは、たとえばＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。

本明細書において使用される「タンパク質もしくは脂質キナーゼ活性を標的化／減少化する化合物、またはさらなる抗血管形成化合物」なる用語は、プロテインチロシンキナーゼならびに／もしくはセリンおよび／またはトレオニンキナーゼのインヒビター、あるいは脂質キナーゼインヒビター、たとえばレセプターチロシンキナーゼの上皮細胞成長因子ファミリー（ホモ−またはヘテロダイマーとしてのＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４）、レセプターチロシンキナーゼの血管内皮成長因子ファミリー（ＶＥＧＦＲ）、血小板由来成長因子−レセプター（ＰＤＧＦＲ）、繊維芽細胞成長因子−レセプター（ＦＧＦＲ）、インスリン様成長因子レセプター１（ＩＧＦ−１Ｒ）、Ｔｒｋレセプターチロシンキナーゼファミリー、Ａｘｌレセプターチロシンキナーゼファミリー、Ｒｅｔレセプターチロシンキナーゼ、Ｋｉｔ／ＳＣＦＲレセプターチロシンキナーゼ、ｃ−Ａｂｌファミリーのメンバーおよびそれらの遺伝子の融合生成物（たとえば、ＢＣＲ−Ａｂｌ）、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）のメンバーおよびセリン／トレオニンキナーゼのＲａｆファミリー、ＭＥＫ、ＳＲＣ、ＪＡＫ、ＦＡＫ、ＰＤＫまたはＰＩ（３）キナーゼファミリーのメンバー、またはＰＩ（３）−キナーゼ−関連キナーゼファミリーのメンバー、および／またはサイクリン依存性キナーゼファミリー（ＣＤＫ）のメンバー、ならびにそれらの活性と別のメカニズムを有する抗血管形成化合物、たとえばプロテインまたは脂質キナーゼ阻害に無関係のものの活性を標的化、減少化または阻害する化合物、を含むがこれらに限定されるわけではない。

ＶＥＧＦＲの活性を標的化、減少化または阻害する化合物は、とりわけ、ＶＥＧＦレセプターチロシンキナーゼを阻害するか、ＶＥＧＦレセプターを阻害するか、またはＶＥＧＦに結合する化合物、タンパク質または抗体であり、そして特に、ＷＯ ９８／３５９５８において総括的におよび具体的に開示された化合物、タンパク質またはモノクローナル抗体、たとえば１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジンまたは医薬上許容されるその塩、たとえばコハク酸塩、ＷＯ ００／２７８２０において開示されたもの、たとえばＮ−アリール（チオ）アントラニル酸アミド誘導体、たとえば２−［（４−ピリジル）メチル］アミノ−Ｎ−［３−メトキシ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］ベンズアミドまたは２−［（１−オキシド−４−ピリジル）メチル］アミノ−Ｎ−［３−トリフルオロメチルフェニル］ベンズアミド、またはＷＯ ００／０９４９５、ＷＯ ００／５９５０９、ＷＯ ９８／１１２２３、ＷＯ ００／２７８１９およびＥＰ ０ ７６９ ９４７において開示されたもの；Ｍ． ＰｒｅｗｅｔｔらによりＣａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５９ （１９９９） ５２０９−５２１８において、Ｆ． ＹｕａｎらによりＰｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ｖｏｌ． ９３， ｐｐ． １４７６５−１４７７０， Ｄｅｃ． １９９６において、Ｚ． ＺｈｕらによりＣａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５８， １９９８， ３２０９−３２１４において、およびＪ． ＭｏｒｄｅｎｔｉらによりＴｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． ２７， ｎｏ． １， ｐｐ １４−２１， １９９９において開示されたもの；ＷＯ ００／３７５０２およびＷＯ ９４／１０２０２において開示されたもの；Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ（商標）（Ｍ． Ｓ． Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ， Ｃｅｌｌ ７９， １９９４， ３１５−３２８により記載された）；Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ（商標）（Ｍ． Ｓ． Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ， Ｃｅｌｌ ８８， １９９７， ２７７−２８５により記載された）；アントラニル酸アミド；ＺＤ４１９０；ＺＤ６４７４；ＳＵ５４１６；ＳＵ６６６８；または抗−ＶＥＧＦ抗体または抗−ＶＥＧＦレセプター抗体、たとえばＲｈｕＭａｂである。

抗体なる用語は、インタクトのモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクトの抗体から形成された多選択性抗体、およびそれらが所望の生物学的活性を示す限りにおいて抗体のフラグメントを意味する。

上皮成長因子レセプターファミリーの活性を標的化、減少化または阻害する化合物は、とりわけ、ＥＧＦレセプターチロシンキナーゼファミリーのメンバー、たとえばＥＧＦレセプター、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３およびＥｒｂＢ４を阻害するかまたはＥＧＦもしくはＥＧＦ関連リガンドに結合する化合物、タンパク質または抗体であり、そして特に、ＷＯ ９７／０２２６６、たとえば実施例３９の化合物、またはＥＰ ０ ５６４ ４０９、ＷＯ ９９／０３８５４、ＥＰ ０５２０７２２、ＥＰ ０ ５６６ ２２６、ＥＰ ０ ７８７ ７２２、ＥＰ ０ ８３７ ０６３、ＵＳ ５，７４７，４９８、ＷＯ ９８／１０７６７、ＷＯ ９７／３００３４、ＷＯ ９７／４９６８８、ＷＯ ９７／３８９８３、およびとりわけ、ＷＯ ９６／３０３４７（たとえば、ＣＰ ３５８７７４として知られる化合物）、ＷＯ ９６／３３９８０（たとえば、化合物ＺＤ １８３９）およびＷＯ ９５／０３２８３（たとえば、化合物ＺＭ１０５１８０）またはＰＣＴ／ＥＰ０２／０８７８０において総括的かつ具体的に記載された化合物、タンパク質またはモノクローナル抗体；たとえばトラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））、セツキシマブ（cetuximab）、イレッサ、ＯＳＩ−７７４、ＣＩ−１０３３、ＥＫＢ−５６９、ＧＷ−２０１６、Ｅ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３またはＥ７．６．３である。

ＰＤＧＦＲの活性を標的化、減少化または阻害する化合物は、とりわけ、ＰＤＧＦレセプターを阻害する化合物、たとえば、Ｎ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、たとえばイマチニブである。

ｃ−ＡｂＩファミリーのメンバーおよびそれらの遺伝子融合産物の活性を標的化、減少化または阻害する化合物、たとえばＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、たとえばイマチニブ；ＰＤ１８０９７０；ＡＧ９５７；またはＮＳＣ ６８０４１０。

プロテインキナーゼＣ、Ｒａｆ、ＭＥＫ、ＳＲＣ、ＪＡＫ、ＦＡＫおよびＰＤＫファミリーのメンバー、またはＰＩ（３）キナーゼまたはＰＩ（３）キナーゼ−関連ファミリーのメンバー、および／またはサイクリン−依存性キナーゼファミリー（ＣＤＫ）のメンバーの活性を標的化、減少化または阻害する化合物は、とりわけ、ＥＰ ０ ２９６ １１０に開示されたスタウロスポリン誘導体、たとえばミドスタウリンであり；さらなる化合物の例としては、たとえばＵＣＮ−０１、サフィンゴール（safingol）、ＢＡＹ ４３−９００６、ブリオスタチン１、ペリフォシン（Perifosine）；ＵＯ １２６；イルモフォジン（Ilmofosine）；ＲＯ ３１８２２０およびＲＯ ３２０４３２；ＧＯ ６９７６；Ｉｓｉｓ ３５２１；またはＬＹ３３３５３１／ＬＹ３７９１９６が挙げられる。

さらなる抗血管形成化合物は、たとえばサリドマイド（ＴＨＡＬＯＭＩＤ）およびＴＮＰ−４７０である。

タンパク質または脂質ホスファターゼの活性を標的化、減少化または阻害する化合物は、たとえば、ホスファターゼ１、ホスファターゼ２Ａ、ＰＴＥＮまたはＣＤＣ２５のインヒビター、たとえばオカダ酸またはその誘導体である。

細胞分化プロセスを誘導する化合物は、たとえば、レチノイン酸、α−、γ−もしくはδ−トコフェロール、またはα−、γ−もしくはδ−トコトリエノールである。

本明細書において使用される「シクロオキシゲナーゼインヒビター」なる用語は、たとえばセレコキシブ（Celebrex^R）、ロフェコキシブ（Vioxx^R）、エトリコキシブ、バルデコキシブまたは５−アルキル−２−アリールアミノフェニル酢酸、たとえば５−メチル−２−（２’−クロロ−６’−フルオロアニリノ）フェニル酢酸を含むが、これらに限定されるわけではない。

本明細書において使用される「ヒストンデアセチラーゼインヒビター」は、ＭＳ−２７−２７５、ＳＡＨＡ、ピロキサミド（pyroxamide）、ＦＲ−９０１２２８またはバルプロ酸を含むが、これらに限定されるわけではない。

本明細書において使用される「ビスホスホネート」なる用語には、エトリドロン酸（etridonic acid）、クロドロン酸、チルドロン酸、パミドロン酸、アレンドロン酸、イバンドロン酸（ibandronic acid）、リセドロン酸およびゾレドロン酸が含まれるが、これらに限定されるわけではない。「エトリドロン酸」は、たとえばＤＩＤＲＯＮＥＬ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。「クロドロン酸」は、たとえばＢＯＮＥＦＯＳ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。「チルドロン酸」は、たとえばＳＫＥＬＩＤ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。「パミドロン酸」は、たとえばＡＲＥＤＩＡ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。「アレンドロン酸」は、たとえばＦＯＳＡＭＡＸ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。「イバンドロン酸」は、たとえばＢＯＮＤＲＡＮＡＴ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。「リセドロン酸」は、たとえばＡＣＴＯＮＥＬ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。「ゾレドロン酸」は、たとえばＺＯＭＥＴＡ（商標）の商標名にて市販されている形態で投与され得る。

本明細書において使用される「マトリックスメタロプロテイナーゼインヒビター」なる用語には、コラーゲンペプチド類似およびペプチド非類似インヒビター、テトラサイクリン誘導体、たとえばヒドロキサメートペプチド類似インヒビター バチマスタット（batimastat）およびその経口的に生物利用可能なアナログ、マリマスタット、プリノマスタット（prinomastat）、ＢＭＳ−２７９２５１、ＢＡＹ １２−９５６６、ＴＡＡ２１１またはＡＡＪ９９６が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。

本明細書において使用される「ｍＴＯＲインヒビター」なる用語は、ラパマイシン（シクロリムス）またはその誘導体を含むが、これらに限定されるわけではない。ラパマイシンは、ストレプトマイシス・ハイグロスコピクス（Streptomyces hygroscopicus）により生産される既知のマクロリド抗生物質である。適当なラパマイシン誘導体とは、たとえば式Ａ

〔式中、
Ｒ_１ａａは、ＣＨ_３またはＣ_３−６アルキニルであり、
Ｒ_２ａａは、Ｈまたは−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＯＨ、３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチル−プロパノイルまたはテトラゾリルであり、そして
Ｘ_ａａは、＝Ｏ、（Ｈ,Ｈ）または（Ｈ,ＯＨ）であり、
ただし、Ｘ_ａａが＝Ｏであり、Ｒ_１ａａがＣＨ_３である場合、Ｒ_２ａａはＨではないものとする。〕
の化合物、またはＲ_２ａａが−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＯＨであるとき、そのプロドラッグ、たとえばその生理学的に加水分解可能なエーテルを包含する。

式Ａの化合物は、たとえばＷＯ ９４／０９０１０、ＷＯ ９５／１６６９１、ＷＯ ９６／４１８０７、ＵＳＰ ５,３６２,７１８またはＷＯ ９９／１５５３０において開示されており、これらを、出典明示により本明細書の一部とする。それらは、開示されたとおりに、またはこれらの文献において記載された手順と同様に、製造され得る。

好適なラパマイシン誘導体は、３２−デオキソラパマイシン、１６−ペンタ−２−イニルオキシ−３２−デオキソラパマイシン、１６−ペンタ−２−イニルオキシ−３２（Ｓ）−ジヒドロ−ラパマイシン、１６−ペンタ−２−イニルオキシ−３２（Ｓ）−ジヒドロ−４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン、さらに好ましくは、４０−０−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシンである。ラパマイシン誘導体のさらなる例としては、たとえばＣＣＩ７７９または４０−［３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパノエート］−ラパマイシンまたは医薬上許容されるその塩、ＵＳＰ ５,３６２,７１８において開示されたもの、ＡＢＴ５７８または４０−（テトラゾリル）−ラパマイシン、特に４０−エピ−（テトラゾリル）−ラパマイシン、たとえばＷＯ ９９／１５５３０において開示されたもの、またはたとえばＷＯ ９８／０２４４１およびＷＯ ０１／１４３８７において開示されたもの、たとえばＡＰ２３５７３が含まれる。

特許出願または科学刊行物が引用されたそれぞれの場合において、その化合物に関連する主題発明を、引用により本願の一部とする。同様に、医薬上許容されるそれらの塩、対応するラセミ体、ジアステレオ異性体、エナンチオマー、互変異性体ならびに、存在する場合には上の開示された化合物の対応する結晶変態（crystal modification）、たとえば、溶媒和物、水和物および多形（これらはそれらの中に開示されている。）も含まれる。本発明の組合せ剤において活性成分として使用される化合物は、それぞれ、引用文献において記載されたように製造および投与され得る。また、上に示した２を超える別々の活性成分の組合せも本発明の範囲内である。すなわち、本発明の範囲内の組合せ医薬は、３またはそれ以上の活性成分を含み得る。さらに、第１の剤および併用剤の両方が、同一の成分ということはない。

上で特定した固形腫瘍の処置におけるＳ１Ｐアゴニスト、たとえば式Ｘの基を含むＳ１Ｐアゴニストの有用性は、動物試験法ならびに臨床、たとえば後記の方法にしたがって証明され得る。

Ａ. インビトロ
Ａ.１ 抗腫瘍活性
乳癌（mammary carcinoma）から最初に単離したマウス乳癌セルライン、たとえばＪｙｇＭＣ（Ａ）を使用する。細胞数を、手順の前に新鮮培地での培養のために５×１０^５に調整した。細胞を、２．５ｍＭチミジンを含有し、ＦＣＳを含まない新鮮培地で１２時間インキュベートし、次いで、ＰＢＳで２回洗浄し、続いて１０％ＦＣＳ含有新鮮培地を添加し、そしてさらに１２時間インキュベートする。その後、細胞を、２．５ｍＭチミジンを含有し、ＦＣＳを含まない新鮮培地で１２時間インキュベートする。ブロックから細胞を遊離させるために、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、そして１０％ＦＣＳ含有新鮮培地で培養する。同期化後、種々の濃度の式Ｉの化合物とともにまたはこれを入れずに３、６、９、１２、１８または２４時間インキュベートする。０．２％ＥＤＴＡでの処置後に細胞を回収し、氷冷７０％エタノール溶液で固定し、２５０μｇ／ｍｌのＲＮａｓｅＡ（type 1-A: Sigma Chem. Co.）で３７℃にて３０分間加水分解し、そしてヨウ化プロピジウムで１０ｍｇ／ｍｌにて２０分間染色する。インキュベーション期間後、細胞の数を、Ｃｏｕｌｔｅｒカウンター中の細胞を計数することおよびＳＲＢ比色アッセイの両方により測定する。これらの条件下で、Ｓ１Ｐアゴニスト、たとえば塩酸塩の形態の「化合物Ｂ」は、１０^−１２〜１０^−６Ｍの範囲で腫瘍細胞の増殖を阻害する。

Ａ.２ Ｓ１Ｐ−介在性ＨＵＶＥＣ管形成アッセイ
管形成アッセイ（tube formation assay）のために、２〜８継代のＨＵＶＥＣを使用し、そして回収前に決して７０％コンフルエントを超えないようにする。細胞を、Herpes Balanced Saline Solution（CloneticsからのＨＢＳＳ）で洗浄することによりアッセイのために調製し、次いで、トリプシン／ＥＤＴＡ（０.２５ｍｇ／ｍｌ、Cloneticsから）でトリプシン処理する。約９０％の細胞がプレートから離昇した後、等容積のトリプシン中和液（Trypsin Neutralizing Solution, CloneticsからのＴＮＳ）を添加し、そして細胞を、少なくとも１０ｍｌのＥＢＭ−２（Clonetics）＋０.１％ＢＳＡ（Sigma）培地を含有する円錐管に集める。細胞を１０００ｒｐｍにて５分間遠心分離し、そして上清を除去し、そして５ｍｌの新鮮ＥＢＭ−２＋０.１％ＢＳＡで置き換える。細胞を、血球計を用いて計数し、そして細胞懸濁液の容積を調節して、５００,０００細胞／ｍｌの濃度にする。円錐管を、試験化合物で１００ｎＭに、そして百日咳毒素（ＰＴｘ）で１０ｎｇ／ｍｌにそれぞれ調節し、次いで１ｍｌの細胞懸濁液をそれぞれの管に添加する。次いで、管を３７℃、５％ＣＯ_２にて３０分間インキュベートする。

遊走アッセイを、２４ウェルプレート中の個々のインサートの代わりにフィブロネクチン（８μｍポアサイズ、Falcon #351147）で被覆したFluoro-Blok 24-Multiwell Insert Platesを用いて実施する。細胞および試験化合物を上記のように製造およびプレインキュベートし、次いで１００μｌを、インサートプレート（Insert Plate）中の個々の適当なウェルに添加する。３００μｌのＥＢＭ−２＋２％活性炭剥離培地（Ｓ１Ｐ無し）を、刺激無し（−）と記載したウェルの底部に添加し、そして３００μｌのＳ１Ｐ含有培地（５００ｎＭ）を刺激有り（＋）と記載したウェルの底部に添加する。次いで、プレートを３７℃、５％ＣＯ_２にて４時間インキュベートする。

カルセイン（Calcein）ＡＭ、５０μｇ／バイアル（Molecular Probes #C3100）を、最初に、バイアルに２０μｌのＤＭＳＯを添加することにより調製する。次いで、１２.５ｍｌのＨＢＳＳ（プレートあたり）を３７℃に加温し、そして１５０μｌをバイアルに添加する。次いで、バイアルの内容物を残りのＨＢＳＳに戻し、最終濃度４μｇ／ｍｌカルセインＡＭを製造する。

Ｆｌｕｏｒｏ−Ｂｌｏｋプレートをインキュベーターから取り出し、そして最上部のインサートプレートを分離し、そして「軽く叩いて（flick）」、インサートにひっついた過剰の培地を除去する。次いで、インサートプレートを、４μｇ／ｍｌのカルセインＡＭ（５００μｌ／ウェル）を含有する新たな２４−ウェルプレートに移す。次いで、プレートを３７℃、５％ＣＯ_２にて１．５時間インキュベートする。

インキュベーション後、プレートを４８５ｎｍの励起および５３０ｎｍの発光にてＣｙｔｏｆｌｕｏｒ ＩＩで読み取る。インサートにおけるＦｌｕｏｒｏ−Ｂｌｏｋコーティングは、底部に移動した細胞のみを計数することを可能にする。計算のためにデータをエクセル（Excel）に移し、シグマプロット（SigmaPlot）グラフを作製し、そしてシグマスタット（SigmaStat）を、有意検定（ｔ−検定）のために使用する（図７）。

管形成を、３つの独立した領域における分岐点（２つの独立した管が接続）を４倍に拡大して計数することにより定量する。結果を以下に示す：

これらの結果は、単独で血管形成のアゴニストとして作用するが、驚くべきことにＳ１Ｐ−介在性血管形成のアンタゴニストとしても作用するＦＴＹ７２０−ホスフェートまたは「化合物Ｃ」−ホスフェートの独特の能力を証明している。「化合物Ｃ」−ホスフェートは、好ましくはラセミ体またはＲ−エナンチオマーである。ＰＴｘはＧｉα（ＥＤＧ−１）介在性活性を阻害するためのコントロールとして使用される。

Ｂ. インビボ
Ｂ.１ 抗腫瘍活性
抗腫瘍活性は、Ｔ／Ｃ％（処置動物の腫瘍容積の平均増加を対照動物の腫瘍容積の平均増加で除し、１００を乗じたもの）で表される。

癌細胞のアリコート（１×１０^７）、たとえばヒトＡ３７５メラノーマ細胞を、ＢＡＬＢ／ｃ−ｎｕ／ｎｕマウスに移植する。腫瘍の大きさが約１０×１０ｍｍに達したとき、動物を無作為に４つのサブグループに振り分け、そして式Ｉの化合物での処置を開始する。２週間の処置後に動物を屠殺し、この時点で、腫瘍および組織を形態的および分子的解析のために回収および調製する。腫瘍のサイズをカリパスで測定する。このアッセイにおいて、Ｓ１Ｐアゴニスト、たとえば（塩酸塩の形態の）「化合物ＢまたはＣ」は、０.５〜５ｍｇ／ｋｇの用量で投与された場合に、生理食塩水対照と比較して腫瘍増殖を遅延させる：たとえば、「化合物Ｃ」−ＨＣｌは、２.５ｍｇ／ｋｇの用量にて週に５回投与された場合に、３０％の最終Ｔ／Ｃ値をもたらす。

Ｂ.２ ＶＥＧＦ−Ｒプロテインチロシンキナーゼインヒビターとの組合せ
ヒトＭＤＡ−ＭＢ−４３５乳房腫瘍を移植されたヌードマウスを、２週間にわたってＶＥＧＦ−Ｒプロテインチロシンキナーゼインヒビター、たとえば１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジン サクシネートで１００ｍｇ／ｋｇ（経口）の用量にて週に５回処置するか、もしくはＳ１Ｐレセプターアゴニスト、たとえば「化合物Ｃ」（塩酸塩）で２.５ｍｇ／ｋｇ（静脈内）の用量にて週に５回処置するか、または両方を組み合わせて処置する。抗腫瘍を、上で示したようにＴ／Ｃ％で表す。「化合物Ｃ」−ＨＣｌと１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジン サクシネートの組合せは、いずれかの剤の単独（「化合物Ｃ」−ＨＣｌ、Ｔ／Ｃ ６６％；１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジン サクシネート、Ｔ／Ｃ％ ９１）と比べてより大きい抗腫瘍効果をもたらす（Ｔ／Ｃ％ ２７）。

ヌードマウスにヒトＡ３７５メラノーマ細胞を移植し、そして上記組合せで同様に処置した場合、優れた抗腫瘍応答が得られる：個々の剤単独では、それぞれＴ／Ｃ％ ３５および４４をもたらすのに対し、組合せ処置はＴ／Ｃ％ １５をもたらす。

Ｂ.３ 抗血管形成活性
０.５ｍｌの０.８％ｗ／ｖ寒天（ヘパリン、２０Ｕ／ｍｌを含む）中に（ｉ）スフィンゴシン−１−ホスフェート（５μＭ／チャンバー）または（ｉｉ）ヒトＶＥＧＦ（１μｇ／チャンバー）を含有する多孔性チャンバーをマウスの脇腹の皮下に埋め込む。Ｓ１ＰまたはＶＥＧＦは、チャンバーの周りに血管新生化した組織（vascularized tissue）の増殖を誘導する。この応答は用量依存性であり、そして組織の重量および血液含有量を測定することにより定量され得る。マウスを、（ｉ）経口的に「化合物Ａ」（０.３、３、３０もしくは５０ｍｇ／ｋｇ）で、または（ｉｉ）経静脈的に「化合物Ｃ」のＲエナンチオマー（２.５ｍｇ／ｋｇ）で、または（ｉｉｉ）経静脈的に「化合物Ｃ」のＳエナンチオマー（２.５ｍｇ／ｋｇ）で、または（ｉｖ）経口的または経静脈的にビヒクル（５％グルコース、１０ｍｌ／ｋｇ）で１日１回処置する。これを、チャンバーの埋め込みの４〜６時間前に開始し、そして４日間継続する。動物を、最後の投与の２４時間後に血管新生化した組織の測定のために屠殺する。チャンバーの周りの血管新生化した組織の重量および血液含有量を測定する。「化合物Ａ」でまたは「化合物Ｃ」のＲもしくはＳエナンチオマーで処置された動物は、ビヒクル単独で処置された動物と比べて、血管新生化した組織の重量および／または血液含有量の減少を示す。

Ｃ. 臨床試験
Ｃ.１ Ｓ１Ｐレセプターアゴニスト、たとえば式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物、たとえば「化合物Ａ、ＢまたはＣ」の臨床的利点の調査
標準的治療に抵抗性または難治性の、進行性、進行期の固形腫瘍を有する２０名の患者に、用量漸増試験により決定した用量の当該化合物を投与する。患者の一般的臨床状態を、身体および臨床検査により毎週調べる。腫瘍および転移の負荷の変化を、放射線検査により２ヶ月毎に評価する。最初に、患者は２ヶ月間処置を受ける。その後、彼らの疾患が進行せず、かつ、薬物が十分に認容性である限り、彼らは処置にとどまる。

評価についての主要な変数：安全性（有害事象）、標準血清生化学および血液学、コンピュータートモグラフィー（ＣＴ）スキャンまたは磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）による腫瘍の大きさ。

Ｃ.２ 組合せ処置
適当な臨床試験は、たとえば進行性固形腫瘍を有する患者における、オープンラベル非無作為化、用量漸増試験である。かかる試験は、特に本発明の組合せ剤の活性成分の相乗作用を証明する。増殖性疾患に対する有利な効果は、これらの試験の結果を通して直接的に、または当業者に自体既知の試験デザインの変法により測定され得る。かかる試験は、特に、活性成分を用いる単剤療法の効果と本発明の剤の効果を比較するのに適している。好ましくは、最大許容用量に達するまで、剤（ａ）の用量を漸増し、そして併用剤（ｂ）を固定用量で投与する。あるいは、剤（ａ）を固定用量で投与し、そして併用剤（ｂ）の用量を漸増する。各患者は、毎日または断続的に、剤（ａ）を投与される。処置の効果は、かかる試験において、６週間毎の腫瘍の放射線評価により、たとえば１２、１８または２４週間後に決定され得る。

あるいは、本明細書に記載した本発明の組合せ剤の利点を証明するために、プラセボ−コントロール、二重盲検試験が使用され得る。

Ｓ１Ｐレセプターアゴニストが単独で使用される場合に本発明の方法の実施に必要とされる１日用量は、たとえば、使用される化合物、宿主、投与様式および処置されるべき病状の重度に依存して変動する。好適な１日用量は、単回用量として、または分割用量で、約０.１〜１００ｍｇである。患者に適した１日用量は、たとえば０.１〜５０ｍｇ（経口）のオーダーである。Ｓ１Ｐレセプターアゴニストは、任意の慣用的経路で、特に経腸的に、たとえば経口的に、たとえば錠剤、カプセル剤、内用液の形態で、経鼻的に、経肺的に（吸入により）または非経腸的に、たとえば注射可能な溶液または懸濁液の形態で投与され得る。経口投与に適した単位用量形態は、１種またはそれ以上の医薬上許容される希釈剤または担体とともに、約０.１〜３０ｍｇ、通常０.２５〜３０ｍｇのＳ１Ｐレセプターアゴニストを含んでなる。血管形成を阻害するために、十分に高用量のＳ１Ｐレセプターアゴニストを選択することが重要である。というのは、低濃度のＳ１Ｐレセプターアゴニストは血管形成を促進するからである。Ｓ１Ｐアゴニストが患者に投与される場合に抗血管形成作用を提供するのに適した用量は、上のＡ、Ｂ、およびＣに記載した濃度−および用量−漸増試験により選択され得る。

本発明の組合せ剤は、また、外科的インターベンション、軽度の延長した全身性高熱および／または放射線治療と組み合せて適用され得る。

本発明の医薬組合せ剤の投与は、たとえば腫瘍形成の減速、阻止、または反転、転移性進展または増殖またはより長時間の腫瘍応答または血管形成の阻害に関して、有利な効果、たとえば相乗的治療効果をもたらし；また、本発明の組合せ剤において使用された医薬活性成分のうちの１つのみを適用する単剤療法と比べた場合、特に抗癌剤として知られる他の化学療法剤に難治性の腫瘍の処置において、他の有利な効果、たとえば、より少ない副作用、改善されたクオリティー・オブ・ライフまたは減少した死亡率および罹患率をもたらし得る。

さらに有利な点は、より少ない投与量の本発明の組合せ剤の活性成分が使用され得ることである。たとえば、有利な点は、しばしばより少ない量の投与量が必要されることのみならず、より少ない頻度で適用されること、または腫瘍形成の増殖を制御しながら、副作用の発生を抑えるために使用され得ることである。これは、処置される患者の要望および要求にしたがうものである。

本発明の１つの実施態様にしたがって、好適な医薬組合せ剤は、
ａ）式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＶまたはＶＩの化合物、たとえば「化合物Ａ、ＢまたはＣ」、および
ｂ）併用剤としての、上記パラグラフ（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉｉ）または（ｘｉ）で示した１またはそれ以上の化合物、たとえばカルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ゲムシタビンまたはドキソルビシン、レセプターチロシンキナーゼの血管内皮成長因子ファミリー（ＶＥＧＦＲ）または血小板由来成長因子レセプター（ＰＤＧＦＲ）の活性を標的化、減少化または阻害する化合物、ビスホスホネートまたはｍＴＯＲインヒビター
を含んでなる。

本発明のさらなる実施態様は、リンパ腺癌または骨髄性癌、たとえば上で開示したものの処置において化学療法剤（ｂ）と組み合わせたＳ１Ｐレセプターアゴニスト（ａ）の使用に関する。組合せ剤は、さらなる併用剤（ｂ）として、たとえばブスルファン、シタラビン、６−チオグアニン、フルダラビン、ヒドロキシウレア、プロカルバジン、ブレオマイシンまたはメトトレキサートを含み得る。トポイソメラーゼＩＩインヒビター、ダウノルビシンまたは、特に、ＰＤＧＦＲまたはｃ−ＡｂＩファミリーメンバーおよびそれらの遺伝子融合産物の活性を標的化、減少化または阻害する化合物、たとえばイマチニブが、たとえばリンパ腺癌の処置において使用するために、併用剤（ｂ）として好適である。

本明細書において使用される「共投与（co-administration）」または「組合せ投与（combined administration）」などの用語は、単一の患者に、選択された複数の治療剤の投与を包含することを意味し、そして、該治療剤が必ずしも同じ投与経路により、または同時に投与されるわけではない処置レジメン（treatment regimen）を含むことを意図する。

本発明の組合せ剤を含んでなる増殖性悪性疾患に対して共同で治療上有効な量を含む医薬組成物を提供することが本発明の目的の１つである。本組成物において、第１の剤（ａ）および併用剤（ｂ）は、１つの組合せ単位用量形態もしくは２つの個別的単位用量形態で一緒に投与するか、一方の後に他方を投与するか、または個別的に投与することが可能である。単位投与形態は、また、固定された組合せ剤であってもよい。

本発明の医薬組成物は、自体公知の方法で製造され、そしてヒトを含む哺乳動物（温血動物）への経腸、たとえば経口または経直腸、および非経腸投与に適したものである。これは、治療上有効量の少なくとも１種の薬理活性組合せパートナーを、単独で、たとえば上で示したように、あるいは１種またはそれ以上の医薬上許容される担体または希釈剤、とりわけ経腸または非経腸投与に適したものと組み合わせて含んでなる。

適当な医薬組成物は、たとえば、約０．１％〜約９９．９％、好ましくは約１％〜約６０％の活性成分（複数も可）を含有する。経腸または非経腸投与用組合せ治療のための医薬調製物は、たとえば単位用量形態のもの、たとえば糖衣錠、錠剤、カプセル剤または坐剤、およびさらにアンプル剤である。特記しない限り、これらは自体公知の方法、たとえば慣用的混合、造粒、シュガーコーティング、溶解または凍結乾燥プロセスにより製造される。各投与のそれぞれの用量に含まれる組合せパートナーの単位含有量は、それ自体で有効な用量を形成する必要はないことが分かる。というのは、必要な有効量は、複数の投与単位により達成され得るからである。

特に、治療上有効量の本発明の組合せ剤の個々の組合せパートナーは、同時的または逐次的におよび任意の順序で投与され得、そしてその構成成分は、個別的または固定された組合せ剤として投与され得る。たとえば、本発明にしたがう増殖性悪性疾患の進行遅延または処置方法は、同時的または任意の順序で逐次的に、共同で治療上有効になる量で、好ましくは相乗的有効量で、たとえば本明細書に記載の量に対応する投与量で毎日または断続的に、（ｉ）遊離または医薬上許容される塩の形態の第１の剤（ａ）を投与すること、および（ｉｉ）遊離または医薬上許容される塩の形態の併用剤（ｂ）を投与することを含み得る。

本発明の組合せ剤の個々の組合せパートナーは、治療過程の間の異なる時点で別々に、または分割もしくは単一の組合せ形態で同時一体的に、投与され得る。さらに、「投与」なる用語は、また、インビボでそれ自体組合せパートナーに変換される組合せパートナーのプロドラッグの使用を包含する。本発明は、したがって、このような同時的または交互的処置のすべてレジメンを包含するものとして理解されるべきであり、そして「投与」なる用語は、そのように解釈されるべきである。

本発明の組合せ剤において使用される個々の組合せパートナーの有効用量は、使用される特定の化合物または医薬組成物、投与様式、処置される病状、処置される病状の重度に依存して変動し得る。したがって、本発明の組合せ剤の投与レジメンは、投与経路ならびに患者の腎および肝機能を含むさまざまな要因にしたがって選択される。通常の知識を有する医師、臨床医または獣医師は、該病状の進行を予防、抑制、または阻止するのに必要とされる単一の活性成分の有効量を容易に決定および処方することができる。毒性なしに効力を生ずる範囲内の活性成分の濃度を達成する最適値を正確に求めるには、標的部位に対する活性成分の利用能の動力学に基づくレジメンが必要とされる。

第１の剤または構成成分（ａ）の１日用量は、もちろん、さまざまな要因、たとえば選択される化合物、処置されるべき特定の疾患および所望の効果に依存して変動する。しかしながら、一般に、満足な結果が、単回投与または分割投与として、約０．１〜１００ｍｇのオーダーの１日用量の割合での、Ｓ１Ｐレセプターアゴニスト、たとえば「化合物Ａ、ＢまたはＣ」の投与により達成される。Ｓ１Ｐレセプターアゴニストは、任意の慣用的経路、特に経腸的に、たとえば経口的に、たとえば錠剤、カプセル剤、内用液の形態で、または非経腸的に、たとえば注射可能な溶液または懸濁液の形態で、投与され得る。経口投与に適した単位投与形態は、１種またはそれ以上の医薬上許容される希釈剤またはその担体とともに、約０．１〜３０ｍｇの構成成分（ａ）、たとえば０．１〜２５ｍｇを含んでなる。

ファドロゾールは、約０．５〜約１０ｍｇ／日、好ましくは約１〜約２．５ｍｇ／日の間を変動する用量範囲でヒトに経口的に投与され得る。エキセメスタンは、ヒトに、約５〜約２００ｍｇ／日、好ましくは約１０〜約２５ｍｇ／日の間を変動して経口的に、または約５０〜５００ｍｇ／日、好ましくは約１００〜約２５０ｍｇ／日の間を変動して非経腸的に、投与され得る。該薬物が別々の医薬組成物で投与される場合には、ＧＢ ２，１７７，７００において開示された形態で投与され得る。ホルメスタンは、約１００〜５００ｍｇ／日、好ましくは約２５０〜約３００ｍｇ／日の間を変動する用量範囲でヒトに非経腸的に投与され得る。

アナストロゾールは、約０．２５〜２０ｍｇ／日、好ましくは約０．５〜約２．５ｍｇ／日の間を変動する用量範囲でヒトに経口的に投与され得る。アミノグルテミドは、約２００〜５００ｍｇ／日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。

クエン酸タモキシフェンは、約１０〜４０ｍｇ／日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。

ビンブラスチンは、約１．５〜１０ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。硫酸ビンクリスチンは、約０．０２５〜０．０５ｍｇ／ｋｇ（体重）＊週の間を変動する用量範囲でヒトに非経腸的に投与され得る。ビノレルビンは、約１０〜５０ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。

リン酸エトポシドは、約２５〜１１５ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲で、たとえば５６．８または１１３．６ｍｇ／ｍ^２日でヒトに投与され得る。

テニポシドは、ほぼ隔週で約７５〜１５０ｍｇの間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。ドキソルビシンは、約１０〜１００ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲で、たとえば２５または５０ｍｇ／ｍ^２日でヒトに投与され得る。エピルビシンは、約１０〜２００ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。

イダルビシンは、約０．５〜５０ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。ミトキサントロンは、約２．５〜２５ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。

パクリタキセルは、約５０〜３００ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。ドセタキセルは、約２５〜１００ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。

シクロホスファミドは、約５０〜１５００ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。メルファランは、約０．５〜１０ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。

５−フルオロウラシルは、約５０〜１０００ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲で、たとえば５００ｍｇ／ｍ^２日でヒトに投与され得る。カペシタビンは、約１０〜１０００ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。塩酸ゲムシタビンは、約１０００ｍｇ／ｍ^２／週から変動する用量範囲でヒトに投与され得る。メソトレキセートは、約５〜５００ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。

トポテカンは、約１〜５ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。イリノテカンは、約５０〜３５０ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。

カルボプラチンは、おおよそ４週ごとに、約２００〜４００ｍｇ／ｍ^２の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。シスプラチンは、おおよそ３週ごとに、約２５〜７５ｍｇ／ｍ^２の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。オキサリプラチンは、隔週で、約５０〜８５ｍｇ／ｍ^２の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。

イマチニブは、約２．５〜８５０ｍｇ／日、さらに好ましくは５〜６００ｍｇ／日および最も好ましくは２０〜３００ｍｇ／日の範囲の投与量でヒトに投与され得る。

アレンドロン酸は、約５〜１０ｍｇ／日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。クロドロン酸は、たとえば、約７５０〜１５００ｍｇ／日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。エトリドロン酸は、約２００〜４００ｍｇ／日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。イバンドロン酸は、３〜４週ごとに、約１〜４ｍｇの間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。

リセドロン酸は、約２０〜３０ｍｇ／日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。パミドロン酸は、３〜４週ごとに、約１５〜９０ｍｇの間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。チルドロン酸は、約２００〜４００ｍｇ／日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。

トラスツズマブは、約１〜４ｍｇ／ｍ^２／週の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。
ビカルタミドは、約２５〜５０ｍｇ／ｍ^２日の間を変動する用量範囲でヒトに投与され得る。

１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジンまたはその塩、たとえばコハク酸塩は、約５０〜１５００、さらに好ましくは約１００〜７５０、および最も好ましくは２５０〜５００ｍｇ／日の範囲でヒトに投与され得る。

ラパマイシンまたはその誘導体、たとえば４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシンは、約０.１〜２５ｍｇの用量範囲で投与され得る。

製剤実施例：ソフトカプセル剤

Ｓ１Ｐレセプターアゴニスト、たとえば式Ｘの基を含むＳ１Ｐレセプターアゴニストは、本発明にしたがう使用に必要とされる用量で十分に認容性である。たとえば、「化合物Ａ」の急性ＬＤ_５０は、ラットおよびサルにおいて＞１０ｍｇ／ｋｇ（経口）である。

さらなる態様において、本発明は、プロ血管形成薬（pro-angiogenic drug）としてのＳ１Ｐアゴニストの使用に関する。血管新生の誘導は、近年、数多くの病状（たとえば心筋血管形成、創傷治癒または糖尿病性血管機能不全／脈管障害）における優れた標的として認識されている。

上記のように、高濃度のＳ１Ｐレセプターアゴニスト（２μＭまたはそれ以上、たとえば２〜５μＭまたは約５μＭ）は抗血管形成作用を示し、そしてＳ１ＰレセプターアゴニストはＶＥＧＦ−誘導性血管形成を阻害し得る。対照的に、低濃度（０.１〜１μＭ、たとえば０.１〜０.５μＭまたは０.５〜１μＭ）のＳ１Ｐアゴニストは、血管形成を促進する効果を有し、そしてＶＥＧＦ−介在性血管形成を増強することができる。したがって、Ｓ１Ｐアゴニストは血管形成において二相性効果を有し得る。

したがって、本発明はさらに以下のものを提供する：
８. たとえば血管形成の促進が示される適応症において、たとえばプロ血管形成剤として、血管新生プロセスの誘導における、Ｓ１Ｐアゴニスト、たとえば式Ｘの基を含むＳ１Ｐアゴニスト、たとえば「化合物Ａ」または「化合物Ａ」−ホスフェートの使用；

９. 血管新生プロセスの阻害により仲介される、たとえば血管形成の促進が示される適応症における、たとえば創傷治癒における、または心筋梗塞もしくは糖尿病性血管機能不全／脈管障害の処置における抗血管形成因子により仲介される疾患の処置または予防のための医薬の製造方法であって、活性成分としてＳ１Ｐレセプターアゴニスト、たとえば式Ｘを含むＳ１Ｐアゴニスト、たとえば「化合物Ａ」または「化合物Ａ」−ホスフェートを用いることを含んでなる方法；

１０. 血管新生プロセスの阻害により仲介される、たとえば血管形成の促進が示される適応症における、たとえば創傷治癒における、または心筋梗塞もしくは糖尿病性血管機能不全／脈管障害の処置における抗血管形成因子により仲介される疾患の処置または予防方法であって、かかる処置を必要とする対象に、活性成分として有効量のＳ１Ｐレセプターアゴニスト、たとえば式Ｘを含むＳ１Ｐアゴニスト、たとえば「化合物Ａ」または「化合物Ａ」−ホスフェートを投与することを含んでなる方法。

血管形成を促進するのに適したＳ１Ｐアゴニストとしては、癌の処置に関して上で定義したもの、たとえば式Ｘを含むＳ１Ｐアゴニストもしくは式Ｉ〜ＩＸの化合物、または医薬上許容されるその塩もしくはエステルが挙げられる。好ましくは、Ｓ１Ｐアゴニストは「化合物Ａ」−ホスフェートである。Ｓ１Ｐアゴニストは、単独で、または血管形成、たとえばＶＥＧＦを促進する１もしくはそれ以上のさらなる剤と組み合わせて使用され得る。

血管形成を促進するためには、十分に低い用量のＳ１Ｐレセプターアゴニストを選択することが重要である。というのは、高濃度のＳ１Ｐレセプターアゴニストは血管形成を阻害するからである。Ｓ１Ｐアゴニストが患者に投与される場合にプロ血管形成作用を提供するのに適した用量は、上のＡ、Ｂ、およびＣで記載したような濃度−および用量−漸増試験により選択され得る。

図面の説明
図１は、「化合物Ａ」−ホスフェートが０.５μＭ付近に最大活性を示す釣り鐘型用量依存性様式でキャピラリー様ネットワーク形成を強力に促進することを示す。

図２は、「化合物Ａ」−ホスフェートおよび「化合物Ａ」の両方が、０.５〜１μＭにて、ＶＥＧＦ−介在性リモデリングを減弱させるのではなく、むしろポリペプチド性成長因子と協働することを示す。

図３は、「化合物Ａ」−ホスフェートならびにＳ１Ｐ−刺激性管形成が百日咳毒素（ＰＴＸ、５０ｎｇ／ｍｌ）、すなわちα_ｉ／ｏ−型のヘテロ三量体Ｇタンパク質のインヒビターにより事実上完全に阻害されることを示す。このことは、「化合物Ａ」−ホスフェート−刺激性生体応答におけるＥＤＧ−１（Ｓ１Ｐ_１）レセプター−介在性シグナル伝達事象が関与している可能性として解釈され得る。

図４は、スフィンゴシンが、１μＭ（これ自体は、Ｓ１Ｐよりも弱いようである。）にて、ＶＥＧＦ−誘導性管形成に対する阻害性作用を有することなく、キャピラリー様構造を誘導するＳ１Ｐおよび「化合物Ａ」−ホスフェートの両方の能力を減弱させることを示す。この点において、スフィンゴシンは「化合物Ａ」と異なる挙動をする。このデータは、スフィンゴシンとＳ１Ｐの間のバランスは、ほとんどＥＤＧレセプターファミリーを介して、内皮細胞活性化／血管形成のために極めて重要に見えることを示す。重要なことに、高濃度のスフィンゴシンおよび「化合物Ａ」（２〜５μＭ）はＶＥＧＦ−誘発性管形成を阻害する。

図５は、０.５μＭの「化合物Ａ」−ホスフェートでのＨＵＶＥＣの処置が１０分でのリン酸化／活性化のピークを有するＥＲＫ１／２の一過性活性化をもたらし、そして２０分までにベースラインに戻り得ることを示す。

図６は、「化合物Ａ」、「化合物Ａ」−ホスフェート、スフィンゴシンまたはＳ１ＰがＨＵＶＥＣの組織因子を誘導するか否かを試験したものである。得られたデータは、これらの化合物が、単独または組合せで、図６に示すように組織因子活性を上昇させないことを示す。「化合物Ａ」および「化合物Ａ」−ホスフェートは、ＶＥＧＦ−誘導性組織因子をわずかに促進するが、ＴＮＦ−α−誘導性組織因子を誘導しない。

図７は、Ｓ１Ｐ−介在性ＨＵＶＥＣ管形成アッセイにおける「化合物Ｃ」の効果を示す。

以下の略語が使用される：

血管形成の促進におけるＳ１Ｐレセプターアゴニスト、たとえば式Ｘを含むＳ１Ｐアゴニストの有用性は、たとえば本明細書において後記した方法にしたがって証明され得る。

Ｄ. 細胞培養および材料
ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、２０％ＳＣＳ（HyClone, Logan, UT）、１Ｕ／ｍｌヘパリン、５０μｇ／ｍｌ ＥＣＧＳ、２ｍＭグルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび０.１ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンを補った培地Ｍ１９９中３７℃および５％ＣＯ_２にて培養する。細胞を継代数５まで実験のために使用する。短期飢餓（short-starved）ＨＵＶＥＣは、１％ＳＣＳ含有Ｍ１９９で５時間飢餓状態にすることにより得られる。組換えヒトＶＥＧＦ_１６５を、ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ（Heidelberg, Germany）から入手する。リン酸特異的（phospho-specific）ＥＲＫ１／２、ｐ３８キナーゼポリクローナル抗体、非リン酸特異的ＥＲＫ１／２抗体およびＬｕｍｉＧＬＯケミルミネッセンス試薬（chemiluminescent reagent）は、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ（Beverly, MA）から、ポリクローナルＩκＢ抗体は、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Santa Cruz, Calif.）からのものである。ペルオキシダーゼ結合ロバ−抗ウサギイムノグロブリンＧ（ＩｇＧ）およびヒツジ抗−マウスＩｇＧをＡｍｅｒｓｈａｍ ＬＩＦＥ ＳＣＩＥＮＣＥ（Amersham Place, England）から購入する。イモビロン−ＰトランスファーメンブレンはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（Bedford, MA）の製品である。ＳはＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ.からのものであり；Ｓ１ＰはＢｉｏｍｏｌからのものである。「化合物Ａ」−ホスフェートストック溶液を以下のプロトコルにより調製する。「化合物Ａ」−ホスフェートを、痕跡量の濃ＨＣｌが入ったメタノールに溶かす（５００μｌのメタノールおよび２μｌのＨＣｌ中０.５ｍｇの「化合物Ａ」−ホスフェート）。得られた溶液から溶媒を真空下で蒸発させ、そして得られた残渣を、滅菌脱塩水（５００μｌ）中０.１％の脱脂ＢＳＡ溶液に再び溶かす（バリアント１）か、または脱塩水中０.５％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００に再び溶かす（バリアント２）。得られるストック溶液（２.５ｍＭ）を超音波処理し、そして４℃にて貯蔵する。

凝固アッセイ
細胞を、６ウェルプレートで８０〜９０％密集度にて播種し、そして一夜増殖させる。細胞をプレートから掻き取り、そしてClauss, M., J. Biol. Chem. 271, 17629-17634 (1996), Mechtcheriakova, D., Blood 93, 3811-3823 (1999) に記載された方法にしたがって組織因子活性について分析する。簡単に言うと、ＶＥＧＦ（１.５ｎＭ）、ＴＮＦ−α（１００Ｕ／ｍｌ）、Ｓ（０.５〜２μＭ）、Ｓ１Ｐ（０.５〜２μＭ）、「化合物Ａ」（０.５〜２μＭ）、および「化合物Ａ」−ホスフェート（０.５〜２μＭ）で４時間誘導後、細胞を２回洗浄し、次いで細胞を１ｍｌの凝固バッファー（１２ｍＭ酢酸ナトリウム、７ｍＭバルビツール酸ジエチルおよび１３０ｍＭ塩化ナトリウム；ｐＨ ７.４）中で掻き取る。５０μｌの再懸濁細胞を５０μｌのクエン酸血漿と混合し、そして凝固時間を、３７℃５０μｌの２０ｍＭ ＣａＣｌ_２溶液でのカルシウム再沈着後に測定する。ＴＦ−相当物は、ウサギ脳トロンボプラスチンから得られる標準曲線を用いることにより測定される。

Ｅ. ウエスタンブロット解析
種々の処置後、細胞を冷ＰＢＳで２回洗浄し、１００μｌのＬａｅｍｍｌｉバッファーに溶解させ、掻き取り、そして９５℃で５分間加熱する。全細胞溶解物をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、そしてイモビロン−Ｐメンブレンに移す。メンブレンを、０.１％ Ｔｗｅｅｎ−２０および３％スキムミルクを含有するＰＢＳで３０分間ブロックし、そしてブロック用バッファー中で希釈した一次抗体で室温にて１時間インキュベートする。得られたメンブレンを、０.１％ Ｔｗｅｅｎ−２０含有ＰＢＳで５分間３回洗浄し、そしてペルオキシダーゼ結合二次抗体とともに室温にて１時間インキュベートする。洗浄工程の後、メンブレンをＥＣＬ試薬で１分間インキュベートし、そして必要なフィルムに曝す。別の抗体での再プローブ化のために、メンブレンをＰＢＳ中で２回洗浄し、剥離用バッファー（stripping buffer）（６２.５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、ｐＨ ６.８、２％ ＳＤＳ、１００ｍＭ ２−メルカプトエタノール）で５５℃にて３０分間剥離させ、そしてＰＢＳで室温にて５分間３回洗浄する。メンブレンを、個々の免疫検出後にサランラップ（SaranWrap）中で４℃にて湿密封保存する。

マトリゲル（Matrigel）でのインビトロ血管形成アッセイ
成長因子低減化マトリゲルマトリックス（Growth Factor Reduced Matrigel Matrix）（BD Bioscience）上のキャピラリー様構造への内皮細胞の形態形成を、製造者の手順にしたがって行う。簡単に言うと、ＨＵＶＥＣをトリプシン処理し、大豆トリプシンインヒビター（１ｍｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ）含有血清フリーＭ１９９培地中に再懸濁する。遠心分離後、細胞を０.５×１０^５細胞／ｍｌの密度で血清フリー培地中に再懸濁させ、そして細胞懸濁液を種々の刺激：１.５ｎＭのＶＥＧＦ、０.１〜２μＭのＳ１Ｐ、０.５〜２μＭのＳ、０.５〜２μＭの「化合物Ａ」、および０.１〜２μＭの「化合物Ａ」−ホスフェートの不存在下または存在下で５０μｌのマトリゲルで予め被覆した９６ウェル細胞培養プレート（Costar, Corning Incorporated）に播種する。８時間後、マトリゲル上の細胞をＰＢＳ中３％ホルムアルデヒドで固定し、そして４℃にて維持する。結果を、デュプリケートにて各ウェルから、顕微鏡視野２箇所の分岐部位の直接計数により、冷却ＣＣＤカメラ（Kappa GmbH, Gleichen, Germany）を備えたニコン・ダイアフォト（Nikon Diaphot）顕微鏡で作成されたイメージから定量する。

Ｆ. マトリゲルでのインビトロ管形成アッセイにおける内皮細胞の「化合物Ａ」−ホスフェート−誘導性形態形成およびＧ_ｉ−介在性シグナル伝達経路（複数も可）が関与している可能性
内皮細胞の形態形成分化に対する「化合物Ａ」および「化合物Ａ」−ホスフェートの作用を、マトリゲル上でのインビトロ血管形成アッセイを用いて測定する。内皮細胞形態形成は、細胞−細胞外マトリックス相互作用、続いてマトリックスリモデリング、刺激された遊走、細胞−細胞相互作用、および血管周囲のタンパク質分解を必要とする複雑なプロセスである。図１に示すように、「化合物Ａ」−ホスフェートは、０.５μＭ付近に最大活性を示す釣り鐘型用量依存性様式でキャピラリー様ネットワーク形成を強力に促進し得る。顕微鏡視野あたりの分岐点の数（これは、刺激の誘導能を反映する。）は、「化合物Ａ」−ホスフェートおよびＳ１Ｐで匹敵し、そしてＶＥＧＦ−誘発性作用を有意に上回り得る。０.５〜１μＭの「化合物Ａ」は、「化合物Ａ」−ホスフェートと比較して、弱いが一貫した促進効果を有する。０.５〜１μＭの「化合物Ａ」−ホスフェートおよび「化合物Ａ」は、ともに、ＶＥＧＦ−介在性リモデリングを減少化しないが、むしろポリペプチド性成長因子と協働する（たとえば図２参照）。さらに、「化合物Ａ」−ホスフェート−ならびにＳ１Ｐ−刺激管形成は、百日咳毒素（ＰＴＸ、５０ｎｇ／ｍｌ）、α_ｉ／ｏ−型のヘテロ三量体Ｇタンパク質のインヒビターにより完全に阻害される。このことは、「化合物Ａ」−ホスフェート−刺激性生体応答においてＥＤＧ−１（Ｓ１Ｐ_１）レセプター−介在性シグナル伝達事象が関与している可能性として解釈され得る（たとえば図３参照）。１μＭのＳ（これ自体は、Ｓ１Ｐより弱いようである。）は、ＶＥＧＦ−誘導性管形成に対する阻害性作用を有することなく、キャピラリー様構造を誘導するＳ１Ｐおよび「化合物Ａ」−ホスフェートの両方の能力を減弱させる。（たとえば図４参照）。この点において、スフィンゴシンは「化合物Ａ」と異なる挙動をする。このデータは、スフィンゴシンとＳ１Ｐの間のバランスは、ほとんどＥＤＧレセプターファミリーを介して、内皮細胞活性化／血管形成のために極めて重要に見えることを示す。重要なことに、高濃度のスフィンゴシンおよび「化合物Ａ」（２〜５μＭ）はＶＥＧＦ−誘発性管形成を阻害する。このデータは、インビトロ血管形成に対する「化合物Ａ」および「化合物Ａ」−ホスフェートの二相性用量依存性作用を示唆している。

Ｇ. 「化合物Ａ」−ホスフェートによるＥＲＫ１／２ ＭＡＰキナーゼの活性化
ＭＡＰキナーゼを介するシグナル伝達は、種々の内皮細胞機能において重要な役割を果たす。０.５μＭの「化合物Ａ」−ホスフェートでのＨＵＶＥＣの処置は、１０分にリン酸化／活性化のピークを有するＥＲＫ１／２の一過性活性化、および２０分までにベースラインへの復帰をもたらし得る（たとえば図５参照）。「化合物Ａ」−ホスフェートによるｐ３８キナーゼおよびＪＮＫ１／２の活性化はＨＵＶＥＣにおいて検出されない。さらに、「化合物Ａ」−ホスフェートは、２μＭでより強い活性を示す、用量依存性様式でＥＲＫ１／２の活性化を引き起こし得る。これは、２μＭの「化合物Ａ」−ホスフェートが０.５μＭより弱いこともある、管形成アッセイの結果と対照的である。「化合物Ａ」およびＳはいずれも、５分から６０分処置の範囲の動力学における内皮細胞のＭＡＰキナーゼ活性化を誘導することができない。内皮細胞の「化合物Ａ」−ホスフェート−刺激生体応答における炎症性／ＮＦκＢ−依存性プログラムの可能性のある役割を推定するために、膜を抗−ＩκＢ抗体で再プローブ化する。ＩκＢレベルは、「化合物Ａ」−ホスフェート処置により影響されない。さらに、「化合物Ａ」−ホスフェートでの内皮細胞の処置は、ＮＦκＢ−依存性二次応答性遺伝子としてＥ−セレクチン発現を誘導することができない。したがって、このデータは、内皮細胞の急性炎症応答における「化合物Ａ」−ホスフェートシグナル伝達は、ＮＦκＢ活性化−主要カスケードに関与しないことを強く示している。

Ｈ. 「化合物Ａ」および「化合物Ａ」−ホスフェートは、内皮細胞上の組織因子発現を誘導しない
内皮細胞に対する古典的炎症刺激ＴＮＦ−αおよび主要血管形成成長因子ＶＥＧＦの両方の重要な特性は、組織因子をアップレギュレートするそれらの能力である。「化合物Ａ」、「化合物Ａ」−ホスフェート、ＳまたはＳ１Ｐは、それらがＨＵＶＥＣの組織因子も誘導するか否かについて試験される。得られたデータは、これらの化合物が、単独または組合せで、組織因子活性を増大させないことを証明する（たとえば図６参照）。「化合物Ａ」および「化合物Ａ」−ホスフェートにより、ＶＥＧＦ−誘導性組織因子は僅かに上昇するが、ＴＮＦ−α−誘導性組織因子は上昇しない。得られたデータは、ともに、「化合物Ａ」、「化合物Ａ」−ホスフェート、ＳおよびＳ１Ｐは、血管形成性ＶＥＧＦおよび炎症性ＴＮＦ−αに機構的に明確に機能することを示す。

Ｉ. 個々のヒトＳ１Ｐレセプターに対するＳ１Ｐレセプターアゴニストの結合親和性を以下のアッセイにおいて測定し得る：

ＨＥＫ２９３細胞へのヒトＳ１Ｐレセプターの一過性トランスフェクション
ＥＤＧレセプターおよびＧ_ｉタンパク質をクローン化し、そしてＥＤＧレセプター、Ｇ_i−α、Ｇ_i−βおよびＧ_i−γのための等量の４種のｃＤＮＡを混合し、そしてリン酸カルシウム沈澱法（M. Wigler et al., Cell. 1977; 11; 223 および DS. Im et al., Mol. Pharmacol. 2000; 57; 753）を用いるＨＥＫ２９３細胞の単層をトランスフェクトするために使用する。簡単に言うと、２５μｇのＤＮＡおよび０.２５Ｍ ＣａＣｌを含むＤＮＡ混合物を、ＨＥＰＥＳ−緩衝性２ｍＭ Ｎａ_２ＨＰＯ_４に添加する。ＨＥＫ２９３細胞のコンフルエントに達していない単層を２５ｍＭクロロキンで毒し、次いでＤＮＡ沈澱を細胞に加える。４時間後、単層をリン酸緩衝性生理食塩水で洗浄し、そして培地に栄養補給する（９０％ １：１ ダルベッコ修正必須培地（ＤＭＥＭ）：Ｆ−１２＋１０％ウシ胎児血清）。氷上で１０％スクロースを含有するＨＭＥバッファー（ｍＭ表記：２０ ＨＥＰＥＳ、５ ＭｇＣｌ_２、１ ＥＤＴＡ、ｐＨ ７.４）中で掻き取ることによるＤＮＡの添加の４８〜７２時間後に細胞を回収し、そしてＤｏｕｎｃｅホモジナイザーを用いて破壊する。８００×ｇでの遠心分離後、上清をスクロース不含有ＨＭＥで希釈し、そして１００,０００×ｇにて１時間遠心分離する。得られたペレットを、再びホモジナイズし、そして１００,０００×ｇにてさらに１時間遠心分離する。この粗膜ペレットをスクロース含有ＨＭＥに再懸濁させ、アリコートに分け、そして液体窒素に浸して急速冷凍する。膜を７０℃にて保存する。タンパク質の濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄプロテインアッセイにより分光的に測定する。

Ｓ１Ｐレセプター／ＨＥＫ２９３膜調製物を用いるＧＴＰγＳ結合アッセイ
ＧＴＰγＳ結合実験を、DS. Im et al., Mol. Pharmacol. 2000; 57: 753により記載されたように行う。Ｇタンパク質に結合する、リガンド介在性ＧＴＰγＳを、一過性にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞からの２５μｇの膜調製物を用いて、ＧＴＰ結合バッファー（ｍＭ表記：５０ ＨＥＰＥＳ、１００ ＮａＣｌ、１０ ＭｇＣｌ_２、ｐＨ ７.５）中で測定する。リガンドを、１０μＭ ＧＤＰおよび０.１ｎＭ ［^３５Ｓ］ＧＴＰγＳ（１２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で膜に添加し、そして３０℃にて３０分間インキュベートする。結合したＧＴＰγＳを、Ｂｒａｎｄｅｌハーベスター（Gaithersburg, MD）を用いて結合していないものから分離し、そして液体シンチレーションカウンターで計数する。

図１は、「化合物Ａ」−ホスフェートが０.５μＭ付近に最大活性を示す釣り鐘型用量依存性様式でキャピラリー様ネットワーク形成を強力に促進することを示す。 図２は、「化合物Ａ」−ホスフェートおよび「化合物Ａ」の両方が、０.５〜１μＭにて、ＶＥＧＦ−介在性リモデリングを減弱させるのではなく、むしろポリペプチド性成長因子と協働することを示す。 図３は、「化合物Ａ」−ホスフェートならびにＳ１Ｐ−刺激性管形成が百日咳毒素（ＰＴＸ、５０ｎｇ／ｍｌ）、すなわちα_ｉ／ｏ−型のヘテロ三量体Ｇタンパク質のインヒビターにより事実上完全に阻害されることを示す。このことは、「化合物Ａ」−ホスフェート−刺激性生体応答におけるＥＤＧ−１（Ｓ１Ｐ_１）レセプター−介在性シグナル伝達事象が関与している可能性として解釈され得る。 図４は、スフィンゴシンが、１μＭ（これ自体は、Ｓ１Ｐよりも弱いようである。）にて、ＶＥＧＦ−誘導性管形成に対する阻害性作用を有することなく、キャピラリー様構造を誘導するＳ１Ｐおよび「化合物Ａ」−ホスフェートの両方の能力を減弱させることを示す。この点において、スフィンゴシンは「化合物Ａ」と異なる挙動をする。このデータは、スフィンゴシンとＳ１Ｐの間のバランスは、ほとんどＥＤＧレセプターファミリーを介して、内皮細胞活性化／血管形成のために極めて重要に見えることを示す。重要なことに、高濃度のスフィンゴシンおよび「化合物Ａ」（２〜５μＭ）はＶＥＧＦ−誘発性管形成を阻害する。 図５は、０.５μＭの「化合物Ａ」−ホスフェートでのＨＵＶＥＣの処置が１０分でのリン酸化／活性化のピークを有するＥＲＫ１／２の一過性活性化をもたらし、そして２０分までにベースラインに戻り得ることを示す。 図６は、「化合物Ａ」、「化合物Ａ」−ホスフェート、スフィンゴシンまたはＳ１ＰがＨＵＶＥＣの組織因子を誘導するか否かを試験したものである。得られたデータは、これらの化合物が、単独または組合せで、図６に示すように組織因子活性を上昇させないことを示す。「化合物Ａ」および「化合物Ａ」−ホスフェートは、ＶＥＧＦ−誘導性組織因子をわずかに促進するが、ＴＮＦ−α−誘導性組織因子を誘導しない。 図７は、Ｓ１Ｐ−介在性ＨＵＶＥＣ管形成アッセイにおける「化合物Ｃ」の効果を示す。

Claims (13)

1. 固形腫瘍の処置または固形腫瘍の増殖阻害方法であって、かかる処置を必要とする対象において、当該対象に治療上有効量のＳ１Ｐレセプターアゴニストを投与することを含む方法。ただし、Ｓ１ＰレセプターアゴニストがＦＴＹ７２０またはＦＴＹ７２０−ホスフェートである場合には、腫瘍は乳房、前立腺、膀胱、腎臓または肺腫瘍ではないものとする。
2. 固形腫瘍侵襲もしくはかかる腫瘍増殖に関係する症状の処置方法、腫瘍の転移性進展の予防方法、または微小転移の増殖の予防もしくは阻害方法であって、それらを必要としている対象において、当該対象に治療上有効量のＳ１Ｐレセプターアゴニストを投与することを含んでなる方法。
3. 脱調節性血管形成、たとえばスフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）介在性血管形成の阻害または制御方法であって、それらを必要としている対象において、当該対象に治療上有効量のＳ１Ｐレセプターアゴニストを投与することを含んでなる方法。
4. 血管新生プロセスにより仲介されるかまたは脱調節性血管形成に関係する疾患の予防または処置方法であって、かかる処置を必要とする対象において、当該対象に治療上有効量のＳ１Ｐレセプターアゴニストを投与することを含んでなる方法。
5. 化学療法剤の活性の促進方法または化学療法剤に対する耐性の克服方法であって、それらを必要としている対象において、当該対象に治療上有効量のＳ１Ｐレセプターアゴニストを当該化学療法剤と同時使用的または逐次的に投与することを含んでなる方法。
6. Ｓ１Ｐレセプターアゴニストが断続的に投与される、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
7. 治療上有効量のＳ１Ｐレセプターアゴニストおよび化学療法剤である第２の医薬物質の同時使用的または逐次的共投与を含んでなる、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
8. リンパ増殖性または骨髄増殖性障害の処置方法であって、当該対象に、同時使用的または逐次的にＳ１Ｐレセプターアゴニスト、および化学療法剤である第２の医薬物質を共投与することを含んでなる方法。
9. Ｓ１Ｐレセプターアゴニストが式Ｘ:
   

   

   〔式中、
   ＺはＨ；Ｃ_１−６アルキル；Ｃ_２−６アルケニル；Ｃ_２−６アルキニル；フェニル；ＯＨにより置換されたフェニル；ハロゲン、Ｃ_３−８シクロアルキル、フェニル、およびＯＨにより置換されたフェニルからなる群から選択される１〜３個の置換基により置換されたＣ_１−６アルキル；またはＣＨ_２−Ｒ_４z［式中、Ｒ_４zはＯＨ、アシルオキシもしくは式（ａ）
   

   

   （式中、Ｚ_１は直接結合またはＯ、好ましくはＯであり；Ｒ_５zおよびＲ_６zは、それぞれ独立してＨ、または所望により１、２もしくは３個のハロゲン原子により置換されていてもよいＣ_１−４アルキルである。）
   で示される残基である。］であり；
   Ｒ_１zは、ＯＨ、アシルオキシまたは式（ａ）の残基であり；そしてＲ_２zおよびＲ_３zは、それぞれ独立してＨ、Ｃ_１−４アルキルまたはアシルである。〕
   で示される基を含んでなる、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
10. ａ）Ｓ１Ｐレセプターアゴニストである第１の剤およびｂ）化学療法剤である併用剤を含んでなる医薬組合せ剤。
11. 併用剤が
    ｉ．アロマターゼインヒビター、
    ｉｉ．抗エストロゲン、抗アンドロゲンまたはゴナドレリンアゴニスト、
    ｉｉｉ．トポイソメラーゼＩインヒビターまたはトポイソメラーゼＩＩインヒビター、
    ｉｖ．微小管活性化剤、アルキル化剤、抗悪性腫瘍性代謝拮抗薬または白金化合物、
    ｖ．タンパク質もしくは脂質キナーゼ活性またはタンパク質もしくは脂質ホスファターゼ活性を標的化／減少化する化合物、さらなる抗血管形成化合物あるいは細胞分化プロセスを誘導する化合物、
    ｖｉ．ブラジキニン１レセプターまたはアンギオテンシンＩＩアンタゴニスト、
    ｖｉｉ．シクロオキシゲナーゼインヒビター、ビスホスホネート、ヒストンデアセチラーゼインヒビター、ヘパラナーゼインヒビター、生物学的応答修飾因子、ユビキチン化インヒビター、抗アポトーシス経路をブロックするインヒビター、
    ｖｉｉｉ．Ｒａｓ発癌性アイソフォームのインヒビター、
    ｉｘ．テロメラーゼインヒビター、
    ｘ．プロテアーゼインヒビター、マトリックスメタロプロテイナーゼインヒビター、メチオニンアミノペプチダーゼインヒビター、またはプロテオソームインヒビター、および／または
    ｘｉ．ｍＴＯＲインヒビター
    から選択される、請求項１０に記載の組合せ剤。
12. 血管新生プロセスの阻害により仲介される疾患の処置または予防方法であって、有効量のＳ１Ｐレセプターアゴニストをかかる処置を必要としている対象に投与することを含んでなる方法。
13. Ｓ１Ｐレセプターアゴニストが請求項９において定義した式Ｘの基を含む、請求項１２に記載の方法。

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