JP2014176384A - ポリケチド、及び他の天然物の製造 - Google Patents

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Abstract

【課題】FKBP類似体を産生する菌株、及びクローン遺伝子、又は遺伝子カセットが、ポリケチド（特に、ラパマイシン）FKBP-リガンド類似体のような新規化合物を生成するように発現する組換え型細胞の効率的形質転換方法、及びこれらの調製、及びその中（例えば、核酸、ベクター、遺伝子カセット、及び遺伝学的に修飾された菌株）に使用される手段の提供。
【解決手段】ポリケチド、及び他の天然物の製造、及び化合物、及び個々の新規化合物のライブラリーであり、一つの重要な領域は、新規FKBP-リガンド類似体の単離、及び潜在的用途、並びにこれらの化合物を産生する宿主細胞。特に、FKBP類似体を産生する菌株、及びクローン遺伝子、又は遺伝子カセットが、ポリケチド（特にラパマイシン）FKBP-リガンド類似体のような新規化合物を生成するように発現する組換え型細胞の効率的形質転換方法。
【選択図】なし

Description

（本発明の分野）
本発明は、ポリケチド、及び他の天然物の製造、及び化合物、及び個々の新規化合物の
ライブラリーに関するものである。一つの重要な領域は、新規FKBP-リガンド類似体の単
離、及び潜在的用途、及びこれらの化合物を産生する宿主細胞である。特に、本発明は、
FKBP類似体を産生する菌株、及びクローン遺伝子、又は遺伝子カセットが、ポリケチド（
特に、ラパマイシン）FKBP-リガンド類似体のような新規化合物を生成するように発現す
る組換え型細胞の効率的形質転換方法、及びこれらの調製、及びその中（例えば、核酸、
ベクター、遺伝子カセット、及び遺伝学的に修飾された菌株）に使用される手段に関する
ものである。
（本発明の背景）
ラパマイシン（シロリムス）（図１）は、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスNRR
L 5491（Sehgalらの論文（1975）；Vezinaらの論文（1975）；米国特許第3,929,992号；
米国特許第3,993,749号）により生産され、ピペコリン酸ラクトン（Paivaらの論文（1991
））と結合した1,2,3-トリカルボニル部位を有する、親油性マクロライドである。他の関
連マクロライド（図２）には、FK506（タクロリムス）（Schreiber、及びCrabtreeの論文
（1992））、FK520（アスコマイシン（ascomycin）、又はイムノマイシン（immunomycin
））（Wuらの論文（2000））、FK525（Hatanaka H.らの論文（1989））、FK523（Hatanak
a H.らの論文（1988））、アンタスコマイシン（antascomicin）（Fehr, T.らの論文（19
96））、及びメリダマイシン（meridamycin）（Salituroらの論文（1995））がある。本
発明のためには、ラパマイシンは、Findlayらの番号付与慣例、又はケミカルアブストラ
クト（第１１番加インデックス、1982-1986 p60719CS）よりも、McAlpineら（1991）の番
号付与慣例により記述される。
ラパマイシン作用の多様な形態は、該化合物の薬理学的価値により示されており、かつ
薬としての新規誘導体を単離する必要性が強張されている。ラパマイシンは、適度の抗真
菌活性を示し、主にカンジダ（Candida）種に対してだけでなく、糸状菌に対しても活性
を示す（Bakerらの論文（1978）；Sehgalらの論文（1975）；Vezinaらの論文（1975）；
米国特許第3,929,992号；米国特許第3,993,749号））。ラパマイシンは、様々な細胞種の
シグナル伝達経路を狙うことで、細胞増殖を抑制する。例えば、細胞周期のG1からS-phas
eに進行するシグナル伝達経路を抑制する（Kuoらの論文（1992））。T細胞において、ラ
パマイシンは、IL-2レセプターからのシグナル、及び続く該T細胞の自己増殖を抑制し、
免疫抑制をもたらす。ラパマイシンの抑制効果は、T細胞に限らず、多くの哺乳類細胞種
の増殖を抑制する（Brunnらの論文（1996））。従って、ラパマイシンは、組織の同種移
植拒絶反応の予防、及び自己免疫疾患の治療において、治療的応用が確立、又は予測され
る、潜在的な免疫抑制剤である（Kahanらの論文（1991））。標準的な拒絶反応抑制治療
よりも、副作用が少ないようである（Naviaらの論文（1996））。40-O-（2-ヒドロキシ）
エチル-ラパマイシン（SDZ RAD、セルチカン、エベロリムス）は、ラパマイシンの半合成
類似体であり、免疫抑制の薬理効果を示す（Sedrani, R.らの論文（1998）；米国特許第5
,665,772号）。該薬剤の臨床効果は、Phase III臨床試験において、現在調査されている
（Kirchnerらの論文（2000））。該ラパマイシンエステルCCI-779（ワイエス-アイエルス
ト（Wyeth-Ayerst））は、インビトロにおいて、細胞増殖を抑制しかつ、インビボにおい
て腫瘍増殖を抑制する（Yuらの論文（2001））。現在、該薬剤は、Phase III臨床試験中
である。慢性プラーク乾癬の治療におけるラパマイシンの有用性（Kirby、及びGriffiths
の論文（2001））、PC12細胞における神経突起成長刺激のような効果の潜在的用途（Lyon
sらの論文（1994））、機械的損傷後の血管、及び平滑筋細胞による、サイトカインへの
増殖応答阻害（Gregoryらの論文（1993））、及び同種移植線維症予防におけるその役割
（Waller、及びNicholsonの論文（2001））は、集中的に調査されている領域である（Kah
an、及びCamardoの論文（2001））。最近の報告は、ラパマイシンが、他の免疫抑制療法
よりも、長期的な免疫抑制療法を受けている組織同種移植患者において、癌発生率の低下
に関わっており、かつこの癌発生率の低下は、血管形成阻害のためであることを示してい
る（Gubaらの論文（2002））。イムノフィリンリガンドの神経栄養性活性は、これらの免
疫抑制活性とは独立の関係にあり（Steinerらの論文（1997））、かつ神経成長刺激は、
特許出願WO 01/03692に略述されている成熟ステロイドレセプター複合体の破壊により、
促進されることが報告されている。高脂血症、及び血小板減少症、並びに潜在的催奇性作
用のような副作用が報告されている（Hentgesらの論文（2001）；Kahan、及びCamardoの
論文（2001））。
ラパマイシンのポリケチド骨格は、シクロヘキサンカルボン酸開始単位から誘導された
シキメート（シキミ酸塩、又はエステル）に対し、全部で、７つのプロピオネート（プロ
ピオン酸塩、又はエステル）と７つのアセテート（酢酸塩、又はエステル）単位との頭-
尾縮合により合成される（Paivaらの論文（1991））。L-リジン誘導イミノ酸、ピペコリ
ン酸は、該ポリケチド骨格の末端アセテートにアミド結合を介して縮合され（Paivaらの
論文（1993））、かつ続いて、マクロサイクルを形成するようにラクトン化される。生合
成遺伝子クラスターを含む、107 kbの遺伝子領域は、配列決定されている（Schweckeらの
論文（1995））。該オープンリーディングフレームの分析により、モジュラーポリケチド
シンテターゼ（PKS）をコードする、３つの大きな遺伝子が明らかにされた（Aparicioら
の論文（1996）；Schweckeらの論文（1995））。該PKS遺伝子間に組込まれるものは、非
リボソーム型ペプチドシンターゼの活性領域と類似する配列を有するタンパク質をコード
するrapP遺伝子であり、同様の作用を有すると考えられている（Konigらの論文（1997）
）。該PKS遺伝子をコードする領域は、ラパマイシンの生合成に必要であると考えられて
いる、酵素をコードする24付加オープンリーディングフレームの両側に位置する（Molnar
らの論文（1996））。これらは、下記ポスト-ポリケチド修飾酵素：RapJ、及びRapNと命
名された２つのシトクロムP-450モノオキシゲナーゼ、付随フェレドキシンRapO、及び３
つの潜在的SAM-依存性O-メチルトランスフェラーゼRapI、RapM、及びRapQを含む。他の隣
接遺伝子は、ラパマイシンの調節、及び輸送と推定されている役割を有する（Molnarらの
論文（1996））。また、該クラスターは、該遺伝子rapLを含み、その産物RapLは、L-リジ
ンのシクロ脱アミノ化を通して、ラパマイシン前駆体L-ピペコリン酸の形成を触媒するこ
とが提唱されている（Khawらの論文（1998）；Paivaらの論文（1993））。rapL中にフレ
ームシフト突然変異を導入することは、有効量のラパマイシン生成ができない変異体を生
じ、かつ該生育培地にL-ピペコリン酸を供給することにより、野生型水準量のラパマイシ
ン生成に復元される（Khawらの論文（1998））。ラパマイシンのシクロヘキサン環に対す
る該生合成前駆体は、シキミ酸経路が起源である（Lowdenらの論文（1996）；Lowdenらの
論文（2001））。FK506（タクロリムス）（Schreiber、及びCrabtreeの論文（1992））、
FK520（アスコマイシン、又はイムノマイシン）（Wuらの論文（2000））、アンタスコマ
イシン（Fehr, T.らの論文（1996））、及びメリダマイシン（Salituroらの論文（1995）
）のような、他の親密に関連したマクロライドは、共通の薬理作用団を共有しており、FK
506-結合タンパク（FKBPs）（図２）と相互作用する。従って、ラパマイシン、及び関連
化合物は、制限はないが、例えば、FK506、FK520、’hyg’、FK523、メリダマイシン、ア
ンタスコマイシン、FK525、及びツクバマイシン（tsukubamycin）は、”FKBP-リガンド”
と考えることができる。該FK506遺伝子クラスター（Motamediらの論文（1996）；Motamed
iらの論文（1997）；Motamedi、及びShafieeの論文（1998））、該’hyg’クラスター（R
uanらの論文（1997））の部分配列、及び該FK520遺伝子クラスターの完全配列は、公表さ
れている（Wuらの論文（2000）；米国特許第6,150,513号）。これらのクラスター、及び
該ラパマイシン生合成遺伝子クラスター内の遺伝子と酵素機能における類似点との間に、
有意な相同性がある（Motamediらの論文（1996））。
ラパマイシンの薬理作用は、データとして特徴付けされ、FKBPs、又はイムノフィリン
と称される細胞質ゾルレセプターの相互作用により媒介されると考えられている。イムノ
フィリン（この用語は、免疫抑制剤結合タンパクを意味するように使用される。）は、シ
ス、及びトランスペプチジル-プロリン結合の異性化を触媒し、かつ広く様々な生物で見
つかる、高度に保存された酵素群に属する（Rosen、及びSchreiberの論文（1992））。イ
ムノフィリン群に属する酵素の２つの大きなグループは、FKBPs、及びサイクロフィリン
に代表される（Schreiber、及びCrabtreeの論文（1992））。真核T-細胞内の該主要な細
胞内ラパマイシンレセプターは、FKBP12（DiLella、及びCraigの論文（1991））であり、
かつ得られる複合体は、標的タンパク質に特異的に相互作用し、該細胞のシグナル伝達カ
スケードを阻害する。また、ラパマイシンに構造的に関連した免疫抑制剤FK506も、FKBP1
2に特異的に結合するが、異なる機序により免疫抑制効果を示す（Changらの論文（1991）
；Sigal、及びDumontの論文（1992））。ラパマイシン、及びFK506は、同一の結合部位に
対し競合し、従って該２つの薬剤が一緒に使用された場合、FK506は、ラパマイシンと拮
抗作用を示し得る（Caoらの論文（1995））。該FKBP12-ラパマイシン複合体の結晶構造分
析は、「結合ドメイン」と称されるラパマイシン結合性薬理作用団が確認された（Van Du
yneらの論文（1993））（図１参照）。該「結合ドメイン」は、該イムノフィリンとの相
互作用に必須であり、かつFK506、及びラパマイシンに関し、エステル結合、ピペコニル
環（pipecolinyl ring）、ジカルボニル、及びヘミケタール環を含む、C-1からC-14領域
からなる（図２参照）。該相互作用は、多くの疎水的接触、及び該シクロヘキサン環上の
ヒドロキシル基に対する１を含む、若干の水素結合を特徴とする。その疎水性結合キャビ
ティーと結合する、高度に保存された芳香族アミノ酸残基により囲まれている場合、該ピ
ペコリニル環（C2〜N7）は、該タンパク質内の最も深くに侵入する。該C1、及びC8カルボ
ニル基は、水素結合に関与し、かつ該C9カルボニル基は、FKBP12内の３つの完全に保存さ
れた芳香族アミノ酸残基（１つのチロシン、及び２つのフェニルアラニン酸残基）により
形成されたポケット内に突き出る。標的タンパク質と相互作用する該イムノフィリン-リ
ガンド複合体のドメインは、FKBPから離れて突き出ている。
該ラパマイシン-FKBP12複合体の標的は、酵母菌中で、TOR（標的ラパマイシン）として
確認されており（Alarconらの論文（1999））、かつ哺乳類のタンパク質は、FRAP（FKBP-
ラパマイシン付随タンパク質）、又はmTOR（哺乳類の標的ラパマイシン）として知られて
いる（Brownらの論文（1994））。これらのタンパク質は、ホスファチジルイノシトール3
-キナーゼ類のホスホトランスフェラーゼドメインとの有意な類似性を示し、かつmTORのF
KBP12-ラパマイシン結合ドメイン（FRB）の点変異が、mTORキナーゼ活性を消滅させると
いう観測は、該キナーゼドメインの機能にFRBが関与しているという証拠を示している（V
ilella-Bachらの論文（1999））。従って、該FRBドメインを含むmTORの切断された形態を
有するFKBP12-ラパマイシンの結晶構造（Chenらの論文（1995））は、ラパマイシンの’
エフェクター’ドメインを規定している（Choiらの論文（1996）；Liangらの論文（1999
））。該結晶構造の分析は、タンパク質-タンパク質接触が、ラパマイシンと各タンパク
質との間の相互作用と比較して、比較的制限されることを示した。ラパマイシンとFRBと
の間に水素結合は同定されなかった。相互作用は、ラパマイシンのトリエン領域とFRBの
主要な芳香族残基との間の一連の疎水的接触に集中される（Liangらの論文（1999））。
ラパマイシンの最も深く埋められている原子は、C23に付いているメチル基である（図２
参照）。ラパマイシンのC23からC34領域、及びシクロヘキシル環は、FRBと表面的な疎水
的接触をする。ラパマイシンの小さな構造変化により、２成分の、及び３成分の複合体に
なることが、明らかとなった（Liangらの論文（1999））。
C16メトキシ基ラパマイシン類似体の生物学的作用とFKBP12に結合するその能力との相
違点が検出され、かつFKBP12とmTORとの間の界面空間に、C16置換基が配置されることが
仮定された（Luengoらの論文（1995））。非免疫抑制性28-O-メチルラパマイシンと結合
したFKBP12の結晶構造分析により、mTOR結合の開裂を起こし得る、該シクロヘキシル環の
配向で、有意な相違点が見出された（Kallenらの論文（1996））。
ラパマイシンは、リボソームタンパク質S6をリン酸化する高等真核生物内のセリン／ス
レオニンキナーゼであるp70S6kキナーゼの阻害により、該細胞内のシグナルカスケードに
影響を与える（Ferrariらの論文（1993）；Kuoらの論文（1992））。該S6タンパク質は、
リボソーム40Sサブユニット内にあり、かつtRNAとmRNAとの結合に関与する重要な機能部
位であると考えられている。p70S6kによる、S6リン酸化を介する、mRNA翻訳に対する調節
機能が、仮定されている（Kawasomeらの論文（1998））。ラパマイシンは、サイクリン-
依存キナーゼの活性、cAMP-応答性エレメントモジュレータ（CREM）リン酸化、及び延長
因子結合タンパク質4E-BP1（PHAS1）のリン酸化を含む、他の生育関連現象に対し、その
効果を通してタンパク質合成を阻害する（Hungらの論文（1996））。該薬剤は、該翻訳抑
制因子eIF-4Eに結合する、4E-BP1の脱リン酸化種の蓄積を誘導し、それにより、キャップ
-依存mRNAの翻訳開始を阻害する（Haraらの論文（1997）；Raughtらの論文（2001））。
mTORシグナル伝達とニューロン内における局在化されたタンパク質合成との間の関連性
；翻訳制御に伴うタンパク質リン酸化状態への影響；転写、及び翻訳レベルでの、該翻訳
機構の構成要素の存在量；アミノ酸透過酵素活性の制御、及び代謝経路に含まれる多くの
酵素の転写連携が記載されている（Raughtらの論文（2001））。また、ラパマイシン感受
性シグナル伝達経路は、胎児の脳発達、学習、及び記憶形成に重要な役割を担うようであ
る（Tangらの論文（2002））。また、酵母におけるTORタンパク質の研究により、栄養分
感受性シグナル伝達経路の調整におけるその機序が明らかになった（Hardwickらの論文（
1999））。同様に、mTORは、タンパク質キナーゼBの活性に対する直接的な標的物として
同定されており、かつインシュリンシグナル伝達において、重要な役割を有する（Shephe
rdらの論文（1998）；Naveらの論文（1999））。また、哺乳類のTORは、該アクチン細胞
骨格の極性化、及び翻訳開始の調節に関与している（Alarcon（1999））。mTORのような
ホファチジルイノシト-ル3-キナーゼは、細胞周期の進行、接着、細胞生存、及び血管新
生のような、幾つかの態様の腫瘍の病原性において機能する（Roymans、及びSlegers（20
01））。
FAP48、及びFAP1のような、FKBP-付随タンパク質（FAP）と称されるFKBPsの天然リガン
ドの候補が報告されているが、ほとんどのイムノフィリンは、免疫抑制活性に直接関与し
ないようであり、かつこれらの天然リガンドと関係があるものは、比較的少量であること
が知れらている。用量依存的な方法において、複合体形成の間のFKBPsとFAPsとの該特異
的相互作用は、ラパマイシンにより妨げられた（Chambraudらの論文（1996）；Kunzらの
論文（2000））。イムノフィリンは、タンパク質の折込み；タンパク質の組立て、及び輸
送；熱ショックタンパク質を含む、分子複合体の共調節；ステロイドレセプター；イオン
チャネル；細胞間相互作用、及び遺伝子の転写、及び翻訳のような、広範囲の細胞活性に
おいて、機能するようである（Galat（2000）；Hamilton、及びSteinerの論文（1998））
。すべてのイムノフィリンは、ペプチジル-プロリル シス-トランス異性化のタンパク質
折畳み特性を有し、かつ幾つかのイムノフィリンは、細胞内のタンパク質合成の主要部分
である小胞体内にあることが見い出された。FKBP12（米国特許第5,109,112号）に加えて
、他のイムノフィリンは、FKBP12.6（米国特許第5,457,182号）、FKBP13（Hendricksonら
の論文、1993；米国特許第5,498,597号）、FKBP25（Hung、及びSchreiberの論文（1992）
；Jinらの論文（1992））、FKBP14.6（米国特許第5,354,845号）、FKBP52（米国特許第5,
763,590号）、FKBP60（Yemらの論文（1992））、及びFKBP65（Patterson（2000））があ
る。
また、異なる細胞種の中にある、FKBPの多様性は、潜在的に変化する結合、及び／又は
エフェクタードメインを有する、新規FKBP-リガンド類似体の単離での利用性を明確にし
ている。
ラパマイシン、及びラパマイシン類似体の薬物動態学的研究は、溶液中でさらに安定で
あり、代謝攻撃にさらに耐性があり、生体利用可能性を改善し得る、新規ラパマイシン化
合物の開発の必要性を示している。該分子上の化学的利用可能な位置での修飾が行われて
いるが、このアプローチには、化学修飾に利用できる部位が制限され、かつ特定の位置を
選択的に修飾する能力に乏しいので利用が制限されている。新規ラパマイシン類似体を生
産する生物学的アプローチは、S.ハイグロスコピカスから、ラパマイシンの生合成遺伝子
クラスターの配列を利用できるにもかかわらず（Schweckeらの論文（1995））、該生体機
能において、直面する困難性のため、成功し難かった（Lomovskayaらの論文（1997）；Ki
eserらの論文（2000））。
該分子の化学的利用可能な部位を用いて、合成されたラパマイシン類似体の範囲が報告
されている。下記化合物の記載は、図１に記載されている該ラパマイシン分子の付番方式
を適合した。該分子の誘導体化、又は置換に対し、化学的利用可能な部位は、C40、及びC
28ヒドロキシル基（例えば、米国特許第5,665,772号；米国特許第5,362,718号）、C39、
及びC16メトキシ基（例えば、WO 96/41807；米国特許第5,728,710号））、C32、C26、及
びC9ケト基（例えば、米国特許第5,378,836号；米国特許第5,138,051号；米国特許第5,66
5,772号）がある。トリエンを狙った、C17、C19、及び／又はC21での水素化は、抗真菌活
性は保持されるが、免疫抑制性が低下する結果を得た（例えば、米国特許第5,391,730号
；米国特許第5,023,262号）。該分子の安定性において、有意な改善（例えば、C32、C40
、及び／又はC28で、オキシムの形成、米国特許第5,563,145号、米国特許第5,446,048号
）、代謝攻撃に対する耐性（例えば、米国特許第5,912,253号）、生体利用可能性（例え
ば、米国特許第5,221,670号；米国特許第5,955,457号；WO 98/04279）、及びプロドラッ
グの生産（例えば、米国特許第6,015,815号；米国特許第5,432,183号）は、誘導体化によ
り達成されている。しかし、化学修飾は、有意な量のラパマイシン鋳型を必要とし、かつ
塩基、及び酸に不安定な化合物であるので、作用させることが難しい。化学的誘導体化を
、基選択的とした場合、しばしば、部位選択的にすることは難しい。従って、常に、化学
修飾は、複数の保護、及び脱保護工程、及び手順を必要とし、変わりやすい収率の混合生
成物を生成する。
また、生体内変換、及びファージ-ベース遺伝子修飾のような生物学的方法を用いたラ
パマイシン類似体の単離も記載されている。変異株、及びラパマイシン産生株、双方から
の微量代謝産物の単離は、多くのラパマイシン類似体を少量提供する。多くの場合、これ
らの菌株は、低収率であり、かつラパマイシン類似体の混合物を産生する。S.ハイグロス
コピカスNCIMB 40319の培養液の上清から、27-O-デスメチルラパマイシン、及び27-デス
メトキシラパマイシンの単離が報告された（Boxらの論文（1995））。27-O-デスメチルラ
パマイシンの抗真菌活性は、ラパマイシンよりも低いが、FKBP12 PPIase活性の抑制は、
増加するようである。マウス脾臓T細胞のConA-刺激増殖の抑制、及びマウス脾臓B細胞のL
PS-刺激増殖の抑制は、ラパマイシンと比較した場合、低下した（Boxらの論文（1995））
。同様に、ラパマイシン誘導体プロリルラパマイシン、27-O-デスメチルラパマイシン、
及び27-デスメトキシラパマイシンの抗真菌活性は、ラパマイシンの活性よりも低かった
（Wongらの論文（1998））。また、ラパマイシン類似体（16-O-デスメチルラパマイシン
、27-O-デスメチルラパマイシン、39-O-デスメチルラパマイシン、16,27-O-ビスデスメチ
ルラパマイシン、プロリルラパマイシン、26-O-デスメチルプロリルラパマイシン、9-デ
オキソラパマイシン、27-デスメトキシラパマイシン、27-デスメトキシ-39-O-デスメチル
ラパマイシン、9-デオキソ-27-デスメトキシラパマイシン、28-デヒドロラパマイシン、9
-デオキソ-27-デスメトキシ-39-O-デスメチルラパマイシン）は、シトクロムP450阻害剤
、及び／又は該培養液に供給される前駆体の添加後、又は単離されたラパマイシンの生体
内変換後、アクチノプラネスsp N902-109から単離された（Nishidaらの論文（1995））。
しかし、そのような阻害剤の使用は、特定の酵素機能を標的とした時のみ可能であり、か
つ部位選択的ではない。単一の選択された類似体の合理的生産は、この方法からでは、不
可能である。所望される単一生成物よりもむしろ、ラパマイシン類似体の混合物から得ら
れた生成物は、収率に影響を与える。該化合物の混合リンパ球反応（MLR）阻害活性を評
価し、かつC27、又は／及びC16のメチル基の損失により、該活性の効果がなくなることが
発見された。さらに、9-デオキソラパマイシンは、活性において、さらに有意な低下を示
し、かつC27のメトキシ基の損失、C28のヒドロキシ基、及びプロリル基に対し、ピペコニ
リル基の置換は、効力の低下を起こした（Nishidaらの論文（1995））。同様に、ラパマ
イシンの生体内変換、及び16,39-O-ビスデスメチルラパマイシンの単離が、報告されてい
る（WO 94/09010）。例えば、SDZ RADなどの39-O-デスメチルラパマイシン、及びC40修飾
体である、シクロヘキシル環が修飾された化合物による細胞増殖アッセイにおける、阻害
活性の保持は、新規ラパマイシン類似体を生産することを標的として、該分子のこの領域
を同定する。S.ハイグロスコピカスの培養液に下記化合物を供給した後に、S.ハイグロス
コピカスの培養を行ったところ、新規ラパマイシン類似体が報告された：シクロヘキサン
カルボン酸、シクロヘプタンカルボン酸、シクロヘキサ-1-エンカルボン酸、3-メチルシ
クロヘキサンカルボン酸、シクロヘキサ-3-エンカルボン酸、3-ヒドロキシシクロヘキサ-
4-エンカルボン酸、及びシクロヘプタ-1-エンカルボン酸である。従って、それによりラ
パマイシンポリケチドシンターゼのロードモジュールにおいて、柔軟性が示されている（
P.A.S. Lowdenの博士論文、ケンブリッジ大学（1997））。これらの新規ラパマイシン類
似体は、該天然開始剤である、4、5-ジヒドロキシシクロヘキサ-1-エンカルボン酸と競合
し、収率の低下、及び混合生成物を生じる。
ファージ技術を介した生物学的方法（Lomovskayaらの論文（1997））を用いる、様々な
ラパマイシン類似体を産生する組換え型S.ハイグロスコピカス菌株の単離が報告されてい
る。添加されたプロリン誘導体の存在下、S.ハイグロスコピカスrapL除去変異株は、新規
ラパマイシン類似体、プロリルラパマイシン、4-ヒドロキシプロリルラパマイシン、及び
4-ヒドロキシプロリル-26-デスメトキシ-ラパマイシンを合成した（Khawらの論文（1998
））。同様に、該新規ラパマイシン類3-ヒドロキシ-プロリル-ラパマイシン、3-ヒドロキ
シ-プロリル-26-デスメトキシ-ラパマイシン、及びtrans-3-アザ-ビシクロ[3,1,0]ヘキサ
ン-2-カルボン酸ラパマイシンは、WO 98/54308に記載されているように同定されている。
プロリルラパマイシン、及び4-ヒドロキシプロリル-26-デスメトキシ-ラパマイシンの活
性は、増殖アッセイ内で評価され、かつ該後者の化合物の阻害活性は、ラパマイシンの該
活性よりも、有意に低かった（Khawらの論文（1998））。ファージ-ベースの方法論を用
い、S.ハイグロスコピカスATCC29253において、５つの隣接遺伝子rapQONML（C16、C27、
及びL-ピペコリン酸生成物のポスト-ポリケチド修飾体に関連する。）が除去され、かつ
ネオマイシン耐性マーカーを有するこれらの置換体は、ピペコリン酸を供給した場合、16
-O-デスメチル-27-デスメトキシラパマイシンを生じた（Chungらの論文（2001））。この
除去変異体の相補性がないことは、この技術を用いて示されている。さらに、rapM、及び
rapQの該部位特異的機能は、明らかとなっていない。従って、C16-OH、又はC27-OHでメチ
ル化を必要とするラパマイシン類似体の合理的設計はできていない。該ファージ-ベース
の方法論は、さらに詳細に下記に記載されているように、多くの欠点がある。それは技術
操作された菌株を得るための難しく、かつ長い工程があり、かつ本明細書中で開示してい
る方法論と比較して多様性が低い。
生物学的方法を用いて、ラパマイシン修飾遺伝子を操作する通常のアプローチは、宿主
株の染色体内の個々の遺伝子の変異、又は除去、又は／及び個々に相同的、又は非相同的
遺伝子の転写物、又は遺伝子カセットのような、個々の遺伝子の挿入を含む（WO 01/7952
0、WO 03/048375）。しかし、そのような生物学的方法を用いた新規ラパマイシン類似体
の単離は、ラパマイシン産生生物株S.ハイグロスコピカスの形質転換の困難性のため、制
限されている。通常に使用されるプラスミドDNAを用いた形質転換、又は接合伝達方法は
、該ラパマイシン産生株では失敗したことが報告されている（Lomovskyaらの論文（1997
）、Schwekeらの論文（1995）、Kieserらの論文（2000））。該技術の現状は、Lomovskya
ら（1997）の方法論を用いており、労働集中的なファージベースの方法は、S.ハイグロス
コピカスに形質転換されるクローンDNA断片のサイズにより、大幅に制限される（Kieser
らの論文（2000））。この技術は、最大6.4 kbのクローンDNAの形質転換に制限される。
従って、この技術を用いて除去変異体を補う場合、熟練者は、所望のプロモーター、相同
的領域、及び耐性マーカーの他に、〜２機能性遺伝子の包括に制限される。該ラパマイシ
ン生合成遺伝子クラスターの該遺伝情報は、1995から利用可能である（Schweckeらの論文
（1995））が、この分野における進歩は限られている（Khawらの論文（1998）；Chungら
の論文（2001）；WO 01/34816）。
本発明は、FKBPリガンドをコードする生合成クラスターを含む菌株に効率的に形質転換
するための組換え方法を提供することを目的とする。
（発明の要約）
本発明は、FKBPリガンドをコードする生合成クラスターを含む菌株に効率的に形質転換
するための組換え方法を提供し、該菌株には、制限はないが、例えば、ストレプトマイセ
ス ハイグロスコピカスsubsp.ハイグロスコピカス（Streptomyces hygroscopicus subsp.
hygroscopicus）NRRL 5491、アクチノプラネスsp.（Actinoplanes sp.）N902-109 FERM
BP-3832、ストレプトマイセス sp.（Streptomyces sp.）AA6554、ストレプトマイセス ハ
イグロスコピカスvar.アスコマイセティカス（Streptomyces hygroscopicus var. ascomy
ceticus）MA 6475 ATCC 14891、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイ
セティカスMA 6678 ATCC 55087、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマ
イセティカスMA 6674、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカ
スATCC 55276、ストレプトマイセス ツクバエンシス（Streptomyces tsukubaensis）No.9
993 FERM BP-927、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスsubsp.ヤクシマエンシス（St
reptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis）、ストレプトマイセスsp. DSM 4137
、ストレプトマイセスsp. DSM 7348、ミクロモノスポラn.sp.（Micromonospora n.sp.）A
92-306401 DSM 8429、ストレプトマイセスsp. MA 6858 ATCC 55098、ストレプトマイセス
sp. MA 6848がある。前記方法は、下記工程を含む：
（ａ）dam-、dcm-、又はdam-及びdcm-であるE.コリ株中に、接合性欠失プラスミドを構築
する工程；
（ｂ）接合に適した前記宿主株から胞子を生成する工程、ここで、前記菌株を、湿度10％
〜40％で生育させ、かつ該胞子を、5〜30日で収集し；
（ｃ）１リットルにつき：
i） コーン浸透粉0.5 g〜5 g；
ii） 酵母エキス0.1 g〜5 g；
iii） 炭酸カルシウム0.1 g〜10 g；及び
iv） 硫酸鉄0.01 g〜0.5 g；
を含む培地上で、工程（ａ）のE.コリ株と工程（ｂ）からの胞子とを接合させる工程であ
って、前記培地は、さらに、BACTO-寒天、及びデンプンを含み、かつ１〜20重量％減少す
るように乾燥させており；かつ
（ｄ）ポリケチド産生に適した条件下で、前記組換え型菌株を、任意に培養する工程。
好ましい実施態様において、前記方法は、下記菌株を形質転換に使用する：
ストレプトマイセス ハイグロスコピカスsubsp.ハイグロスコピカス（例えば、NRRL 5491
）、アクチノプラネスsp. N902-109（例えば、FERM BP-3832）、ストレプトマイセスsp.
AA6554、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカス（例えば、M
A 6475 ATCC 14891）、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカ
ス（例えば、MA 6678 ATCC 55087）、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスvar.アス
コマイセティカス（例えば、MA 6674）、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスvar.ア
スコマイセティカス（例えば、ATCC 55276）、ストレプトマイセス ツクバエンシスNo.99
93（例えば、FERM BP-927）、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスsubsp.ヤクシマエ
ンシス、ストレプトマイセスsp.（例えば、DSM 4137）、ストレプトマイセスsp.（例えば
、DSM 7348）、ミクロモノスポラn.sp. A92-306401（例えば、DSM 8429）、又はストレプ
トマイセスsp.（例えば、MA 6858 ATCC 55098）。さらに好ましい実施態様において、前
記方法は、下記菌株を形質転換に使用する：
S.ハイグロスコピカスsubsp.ハイグロスコピカス（例えば、NRRL 5491）、又はS.ハイグ
ロスコピカスvar.アスコマイセティカス（例えば、ATCC 14891）。また、さらに好ましい
実施態様において、前記方法を、ラパマイシン産生株S.ハイグロスコピカスsubsp.ハイグ
ロスコピカス（例えば、NRRL 5491）の形質転換に使用する。
従って、また、本発明は、FKBP-リガンドをコードする生合成クラスターを含む組換え
型菌株を提供し、ここで、一以上の補助遺伝子は、本明細書中で記載した方法を用いて除
去又は不活性化されている。
さらに、一態様において、本発明は、新規ポリケチド類似体を生成するように、ポリケ
チド修飾酵素の組合せを発現するための組換え方法、及び物質を提供する。特定の実施態
様において、本発明は、制限はないが、例えば、ラパマイシン、FK506、FK520、FK523、F
K525、アンタスコマイシン、メリダマイシン、ツクバマイシン、及びその類似体のような
FKBP-リガンドをコードする生合成クラスターから供給されるポスト-PKS修飾体、及び／
又は前駆体供給に関与する酵素の組合せを発現するための組換え方法、及び物質、及び組
換え型宿主細胞内に類似体を生産する方法を提供する。好ましい実施態様において、前記
組換え方法、及び物質は、ラパマイシン、FK520、FK506、及び’hyg’の生合成において
、ポスト-PKS修飾体、及び／又は前駆体供給に関与する酵素の組合せを発現するために、
かつ組換え型宿主細胞内にラパマイシン、FK520、FK506、及び’hyg’類似体を産生する
方法のために使用される。さらに高度に好ましい実施態様において、前記組換え方法、及
び物質は、ラパマイシンの生合成において供給されるポスト-PKS修飾体、及び／又は前駆
体供給に関与する酵素の組合せを発現するために、かつ組換え型宿主細胞内にラパマイシ
ン類似体を産生する方法のために使用される。
広く、本発明は、基礎生成物の生産に関与するコア部分を有する遺伝子システムの改変
、及び例えば、該基礎生成物の効果的なグリコシル化、酸化、還元、アルキル化、脱アル
キル化、アシル化、又は環化のような、該基礎生成物の比較的小さい効果的な修飾に関与
する修飾遺伝子の多様性、及び特定の前駆化合物（例えば、ピペコレート；4,5 ジヒドロ
キシシクロヘキサ-1-エンカルボン酸）の生産に伴う前駆体供給遺伝子の多様性に関連す
る。従って、該基礎生成物は、モジュールポリケチドとなることができ、かつ該修飾遺伝
子は、グリコシル化、及び／又はポリケチド鎖の他の修飾に関連され得、かつ該前駆体供
給遺伝子は、天然、又は非天然前駆体（例えば、該ラパマイシンシステムにおいて、ピぺ
コレート、及び／又は4,5ジヒドロキシシクロヘキサ-1-エンカルボン酸）の生産、及び／
又は取込みを伴い得る。
該コア部分は、前駆体供給遺伝子がない場合において、（天然、又は非天然前駆化合物
が供給され、又は他に利用されるまで）適切に、又は一様に全く機能しなくてもよい。
一態様において、本発明は、前駆体供給遺伝子の除去又は不活性化のため、機能するこ
とができないコア部分を有する遺伝子システムの改変方法を提供する。適切な遺伝子シス
テムは、制限はないが、該ラパマイシン、アンタスコマイシン、FK520、FK506、’hyg’
、FK523、メリダマイシン、FK525、及びツクバマイシン生合成クラスターを含む。本発明
のこの態様において、好ましくは、該欠如された前駆体供給遺伝子は、rapK、又は相同的
rapKである（例えば、該FK506、又はFK520遺伝子クラスター内のfkbO）。好ましくは、該
遺伝子システムは、該ラパマイシンクラスターである。さらに好ましくは、該欠如された
前駆体供給遺伝子は、rapKである。本発明のこの態様は、天然、又は非天然前駆体（例え
ば、4,5-ジヒドロキシシクロヘキサ-1-エンカルボン酸）の取込みを通して、多様な基礎
生成物を効果的に生産する方法を提供する。また、下記に示すように、方法は、態様を統
合することができる。
他の種類のシステムには、非リボソーム型ペプチド（”NRP”）システムがあり、ここ
で、該基礎生成物は、ペプチドであり、かつ該修飾遺伝子は、ペプチド修飾（グリコシル
化、還元等）に関与する遺伝子であり、かつ該前駆体供給遺伝子は、該ペプチドを取込む
べき特有のアミノ酸残基の生産を伴う遺伝子である。また、システムは、混合型でもよく
、例えば、ポリケチド部分と異なる生合成基点を有する部分を持ち、例えば、NRPがある
。実際には、該ピペコレート残基は、NRPシステムに見られるものと同じ酵素により付加
されたアミノ酸残基であるので、ラパマイシンは、これを例として見なされ得る。
これらの修飾遺伝子、及び前駆体供給遺伝子を、ポリケチド合成の補助遺伝子として見
なすことができ、かつ本明細書中で使用される該用語”補助遺伝子”は、修飾遺伝子、前
駆体供給遺伝子、又はその両方を意味することができる。
該遺伝子システムの改変は、一組の補助遺伝子が改変されている機能改変システムの作
成を含む。従って、一以上の補助遺伝子（及び好ましくは２以上、３以上、４以上、５以
上、６以上、又は７以上）を除去し（又は機能性をなくす）、かつ／又は異なる遺伝子に
置換してもよい。
これは、機能性補助遺伝子の多様性を欠いた遺伝子システムをコードする核酸を含む”
除去システム”を含むことができる。次いで、この除去システムを、一以上の機能性補助
遺伝子（置換される該遺伝子と同じ、又は異なっていてもよい）で補うことができる。こ
れは、組合せて行うことができ、除去システムは、異なる遺伝子、及び複数組の遺伝子の
多様性により補われる。
一以上の修飾機能を欠いた該天然システムと異なる改変システムは、
（a）除去システムを作り、かつ除去遺伝子の全てよりも少ない相補性により復元するこ
と；又は
（b）現行システムの遺伝子を選択的に除去又は不活性化することにより作り出すことが
できた。（b）に従い作られた改変システムにおいて、遺伝子を、タンパク質機能におい
て重要な活性部位に直接的に変異生成することにより、フレームシフト変異を通して該遺
伝子の切断により、その機能に重要な該遺伝子部位のインフレーム除去により、不活性化
することができ、活性部位；点変異により部分的除去又は不活性化がある。これらはすべ
て、変異遺伝子型の二重組換え、及び選択により、又は一つの組換えにより行うことがで
きた。好ましい実施態様において、該改変システムは、方法（a）により作られる。また
、そのような方法は、除去システムの作成に使用される。好ましくは、”復元された”遺
伝子は、同じ遺伝子クラスターからのものであるので、該”相補性”アプローチ（a）は
相同的であるが、該”復元された”遺伝子が、FKBP-リガンドをコードする異なる生合成
クラスターから選択された非相同的相補性も、本発明では意図される。好ましい実施態様
において、該”復元された”遺伝子は、該除去された遺伝子と本質的に同じであり、又は
同じ機能を持つその変異体である。
さらに、本発明の態様において、除去された（又は非機能化）前駆体供給遺伝子を用い
た改変システムは、変異生成物を生産するように、代わりの前駆体が供給されてもよい。
ポリケチドシンターゼ（”PKS”）システムに適用するように、一つの好ましい型の実
施態様は、ポリケチド生成方法であり、該方法は：
（a）機能性PKSを産生するように発現することが可能な、一以上のPKS遺伝子を含む生物
体の菌株を製造すること、例えば、FKBP-リガンドをコードするPKS遺伝子のように、該機
能性PKSは、該生物体内でポリケチドを生成することができ、該生物体は、該ポリケチド
の効果的な各修飾が可能である遺伝子産物をコードする前記PKS遺伝子に自然に付随した
、一以上の機能性補助遺伝子がなく；かつ
（b）前記生物体が、一以上の補助遺伝子を発現するように相補性をもたらすこと、該発
現された修飾遺伝子は、前記PKS遺伝子に自然に付随した一組の不完全な補助遺伝子を構
築し、かつ／又は一以上の変異補助遺伝子を含み；かつ
（c）前記菌株を培養し、かつ産生された該ポリケチド類似体を任意に単離することを含
む。
一以上のPKS遺伝子を含む生物体の菌株を製造する工程は、前記一以上のPKS遺伝子を含
み、かつ前記一以上の補助遺伝子が欠如された遺伝子クラスターをコードする核酸を提供
し；かつ前記核酸を、前記生物体内に導入する工程を含むことができる。
好ましくは、該PKS遺伝子は、ラパマイシン遺伝子である。該欠如された補助遺伝子は
、好ましくは一以上のrapK、rapI、rapQ、rapM、接触遺伝子rapN、及びO（本明細書中で
は、rapN/Oと表す。）、rapL、及びrapJである。本発明により意図される特定の実施態様
において：
i） １の補助遺伝子の欠如、例えば、rapK；rapI；rapQ；rapM；rapL、rapN/O、又はrap
Jの欠如；好ましくはrapK；rapI；rapQ；rapM；rapN/O、及びrapJからなる群から選択さ
れる一補助遺伝子を欠如する；
ii） １の補助遺伝子の欠如、例えば、：rapKrapI；rapKrapQ；rapKrapM；rapKrapN/O；
rapKrapL；rapKrapJ；rapkIrapQ；rapIrapM；rapIrapN/O；rapIrapL；rapIrapJ；rapQrap
M；rapQrapN/O；rapQrapL；rapQrapJ；rapMrapN/O；rapMrapL；rapMrapJ；rapN/OrapL；r
apN/OrapJ、又はrapLrapJを欠如する；
iii） ３の補助遺伝子の欠如、例えば：rapKrapIrapQ；rapKrapIrapM；rapKrapIrapN/O
；rapKrapIrapL；rapKrapIrapJ；rapKrapQrapM；rapKrapQRapN/O；rapKrapQrapL；rapKra
pQrapJ；rapKrapMrapN/O；rapKrapMrapL；rapKrapMrapJ；rapKrapN/OrapL；rapKrapN/Ora
pJ；rapKrapLrapJ；rapIrapQrapM；rapIrapQrapN/O；rapIrapQrapL；rapIrapQrapJ；rapI
rapMrapN/O；rapIrapMrapL；rapIrapMrapJ；rapIrapN/OrapL；rapIrapN/OrapJ；rapIrapL
rapJ；rapQrapMrapN/O；rapQrapMrapL；rapQrapMrapJ；rapQrapN/OrapL；rapQrapN/OrapJ
；rapQrapLrapJ；rapMrapN/OrapL；rapMrapN/OrapJ；rapMrapLrap、又はrapN/OrapLrapJ
を欠如する；
iv） ４の補助遺伝子の欠如、例えば：rapKrapIrapQrapM；rapKrapIrapQrapN/O；rapKra
pIrapQrapL；rapKrapIrapQrapJ；rapKrapIrapMrapN/O；rapKrapIrapMrapL；rapKrapIrapM
rapJ；rapKrapIrapN/OrapL；rapKrapIrapN/OrapJ；rapKrapIrapLrapJ；rapKrapQrapMrapN
/O；rapKrapQrapMrapL；rapKrapQrapMrapJ；rapKrapQrapN/OrapL；rapK、rapQ、rapN/O、
rapJ；rapKrapQrapLrapJ；rapKrapMrapN/OrapL；rapKrapMrapN/OrapJ；rapKrapMrapLrapJ
；rapKrapN/OrapLrapJ；rapIrapQrapMrapN/O；rapIrapQrapMrapL；rapIrapQrapMrapJ；ra
pIrapQrapN/OrapL；rapIrapQrapN/OrapJ；rapIrapQrapLrapJ；rapIrapMrapN/OrapL；rapI
rapMrapN/OrapJ；rapIrapMrapLrapJ；rapIrapN/OrapLrapJ；rapQrapMrapN/OrapL；rapQra
pMrapN/OrapJ；rapQrapMrapLrapJ；rapQrapN/OrapLrapJ、又はrapMrapN/OrapLrapJを欠如
する；
v） ５の補助遺伝子の欠如、例えば：rapKrapIrapQrapMrapN/O；rapKrapIrapQrapMrapL
；rapKrapIrapQrapMrapJ；rapKrapIrapQrapN/OrapL；rapKrapIrapQrapN/OrapJ；rapKrapI
rapQrapLrapJ；rapKrapIrapMrapN/OrapL；rapKrapIrapMrapN/OrapJ；rapKrapIrapMrapLra
pJ；rapKrapIrapN/OrapLrapJ；rapKrapQrapMrapN/OrapL；rapKrapQrapMrapN/OrapJ；rapK
rapQrapMrapLrapJ；rapKrapQrapN/OrapLrapJ；rapKrapMrapN/OrapLrapJ；rapIrapQrapMra
pN/OrapL；rapIrapQrapMrapN/OrapJ；rapIrapQrapN/OrapLrapJ；rapIrapMrapN/OrapLrapJ
；rapQrapMrapN/OrapLrapJ、又はrapIrapQrapMrapLrapJを欠如する;
vi） ６の補助遺伝子の欠如、例えば：
rapKrapIrapQrapMrapN/OrapL；rapKrapIrapQrapMrapN/OrapJ；
rapKrapIrapQrapMrapLrapJ；rapKrapIrapQrapN/OrapLrapJ；
rapKrapIrapMrapN/OrapLrapJ；rapKrapQrapMrapN/OrapLrapJ、又は
rapIrapQrapMrapN/OrapLrapJを欠如する；又は
vii） ７の補助遺伝子の欠如、例えば：rapKrapIrapQrapMrapN/OrapLrapJを欠如する。
該表現”一以上の機能性補助遺伝子を欠如する”は、遺伝子の欠如と遺伝子の存在と、
両方を包含するが、例えば、特異的に損傷されている、非機能性状態は包含しない。
一態様において、本発明は、FKBP-リガンド中に天然、又は非天然前駆体を効率的に取
込むための新規かつ迅速な経路を提供する。制限はないが、これらは、該ラパマイシン、
アンタスコマシン、FK520、FK506、’hyg’、FK523、メリダマイシン、FK525、及びツク
バマイシンポリケチドシンターゼ／非リボソーム型ペプチドシンターゼシステムを含み、
従って、本発明は、これらの各天然産物の新規類似体を提供する。特定の態様において、
本発明は、新規ラパマイシン類似体を提供する天然、又は非天然前駆体を効率的に取込む
ための新規かつ迅速な経路を提供する。
従って、一態様において、本発明は、非天然開始単位を組込んだFBKP-リガンド類似体
の生成方法を提供し、前記方法は：
（ａ）少なくとも該rapK相同体が除去又は不活性化された組換え型菌株を生成する工程；
及び
（ｂ）前記菌株に、非天然開始単位を供給する工程；
を含む。
好ましい実施態様において、該組換え型菌株を、本発明の方法を用いて製造する。
さらに態様において、本発明は、このようなシステムに利用できる化合物、及び個々の
化合物のライブラリーを提供する。従って、標準的化合物は、基礎生成物の生産に関与す
るコア部分、及び該基礎生成物の効果的な比較的小さい修飾に関与する補助遺伝子の多様
性を有する遺伝子システムにより自然に生産された化合物の変異体であり、該変異体は、
一以上の該補助遺伝子がなく、非機能的であり、又は機能性変異体により置換されるよう
に改変されたシステムにより生産可能である。化合物の好ましい種類は、ラパマイシンシ
ステム産物に対応するラパマイシン類似体であり、ここで、rapK、rapI、rapQ、rapM、ra
pN、rapO、rapL、及びrapJからなる群から選択された、一以上の該遺伝子がなく、非機能
的であり、又は変異体である。
さらに態様において、本発明は、新規FKBP-類似体を提供し、好ましい実施態様におい
て、本発明は、新規ラパマイシン類似体を提供する。そのような化合物は、一以上の有用
な特性を有していてもよく、制限はないが、例えば、免疫抑制剤、抗真菌剤、抗癌剤、神
経生成剤、又は乾癬、関節リウマチ、線維症及び他の高増殖性疾患の治療薬剤として利用
する。
（定義：）
本明細書中で使用される用語”修飾遺伝子”は、該ポリケチドのポスト-ポリケチドシ
ンターゼ修飾に必要な該遺伝子を含み、制限はないが、例えば、シトクロムP-450モノオ
キシゲナーゼ、フェレドキシン、及びSAM-依存性O-メチルトランスフェラーゼがある。該
ラパマイシンシステムにおいて、これらの修飾遺伝子は、rapN/O、rapM、rapI、rapQ、及
びrapJを含むが、当業者は、ラパマイシンに関するPKSシステム（制限はないが、例えば
：FK506、FK520、アンタスコマイシン、’hyg’、FK523、メリダマイシン、FK525、及び
ツクバマイシン）が、相同的なこれらの遺伝子の少なくとも一サブセットを有するであろ
うことを理解するであろう。その幾つかは、さらに下記で考察されている。
本明細書中で使用される用語”前駆体供給遺伝子”は、該天然、又は非天然前駆体の供
給に必要な遺伝子、すべての自然に、又は非自然に取込まれる前駆体の合成に必要な遺伝
子、及びすべての自然、非自然に取込まれる前駆体の取込みに必要な遺伝子を含む。制限
はないが、例えば、ラパマイシンシステムにおいて、これらの遺伝子は、rapL、rapK、及
びrapPを含むが、当業者は、ラパマイシンに関するPKSシステム（制限はないが、例えば
：FK506、FK520、アンタスコマイシン、’hyg’、FK523、メリダマイシン、FK525、及び
ツクバマイシン）が、相同的なこれらの遺伝子を有するであろうことを理解するであろう
。その幾つかは、さらに下記で議論されている。
本明細書中で使用される用語”補助遺伝子”は、修飾遺伝子、前駆体供給遺伝子、又は
修飾遺伝子、及び前駆体供給遺伝子の両方の意味を含む。
本明細書中で使用される用語”前駆体”は、該天然開始単位（すなわち、4,5-ジヒドロ
キシシクロヘキサ-1-エンカルボン酸）、非天然開始単位、及び自然に取込まれるアミノ
酸（すなわち、ピペコリン酸）、及び非自然に取込まれるアミノ酸を含む。
本明細書中で使用される用語”非天然開始単位”は、ポリケチド合成において、開始単
位として取込まれ得るすべての化合物のことを言い、PKSにより通常に選択された開始単
位ではない。
本明細書中で使用される用語”FKBP-リガンド”は、イムノフィリンFKBPに結合する化
合物のことを言い、そのような化合物は、α,β-ジケトアミドを優先的に含み、ここで、
該β-ケトは、ヘミアセタールとしてマスクされている。制限はないが、そのような化合
物には、ラパマイシン、FK520、FK506、アンタスコマイシン、’hyg’、FK523、メリダマ
イシン、FK525、及びツクバマイシンがある。
本明細書中で使用される用語”FKBP-リガンドをコードする生合成クラスター”は、制
限はないが、ラパマイシン、FK506、FK520、’hyg’、FK523、アンタスコマイシン、メリ
ダマイシン、FK525、及びツクバマイシンの合成を支配する遺伝子クラスターを含む。
本明細書中で使用される用語”FKBP-リガンドをコードする生合成クラスターを含む菌
株”は、制限はないが、下記菌株を含む：
ストレプトマイセス ハイグロスコピカスsubsp.ハイグロスコピカス（例えば、NRRL 5491
）、アクチノプラネスsp. N902-109（例えば、FERM BP-3832）、ストレプトマイセスsp.
AA6554、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスMA 6475（例
えば、ATCC 14891）、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカ
スMA 6678（例えば、ATCC 55087）、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスvar.アスコ
マイセティカスMA 6674、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティ
カス（例えば、ATCC 55276）、ストレプトマイセス ツクバエンシスNo.9993（例えば、FE
RM BP-927）、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスsubsp.ヤクシマエンシス、ストレ
プトマイセスsp.（例えば、DSM 4137）、ストレプトマイセスsp.（例えば、DSM 7348）、
ミクロモノスポラn.sp. A92-306401（例えば、DSM 8429）、又はストレプトマイセスsp.
MA 6858（例えば、ATCC 55098）。
本明細書中で使用される用語”rapK相同体”は、FKBP-リガンドをコードする他の生合
成クラスターからの該ラパマイシン遺伝子rapKの相同体のことを言い、制限はないが、例
えば：FK520クラスターからのfkbO遺伝子、FK506クラスターからのfkbO遺伝子、及び’hy
g’クラスター内のOrf5がある。そのようなrapK相同体は、これらの関連したFKBP-リガン
ドの合成において、rapKと同じように機能し、すなわち、該天然開始単位の供給に必要で
ある。好ましくは、そのようなrapK相同体は、rapKの配列に対し、少なくとも40％の同一
配列、好ましくは、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％
、又は図２７に示されているように、少なくとも95％の同一配列を有する（配列番号：13
）。
（図の簡単な説明）
ラパマイシンの構造、描線の左部分は結合領域を示し、かつ右部分はエフェクター領域を示す。 ラパマイシン（A）、FK-506（B）、FK-520（C）、及びメリダマイシン（D）の構造。 pMG55のプラスミドマップ、RpsLポジティブ選択、及び接合点oriTを有する二重の組換えベクター。 MG2-10を作成するため、pMAG144-16を単離するクローニング戦略を示すフローチャート。 遺伝子カセットの概観。 9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチルラパマイシンの構造。 9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチルプロリルラパマイシンの構造。 9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-デスメトキシラパマイシンの構造。 16-O-デスメチル-27-デスメトキシラパマイシンの構造。 化合物１、２、４、５、６、８、９、１５、１６、１７、１８、及び１９の構造。
化合物３、７、１０、１１、１２、１３、１４、２０、２１、２２、及び２３の構造。 化合物２４、２５、２７、２８、２９、３１、３２、３８、３９、４０、４１、及び４２の構造。 化合物２６、３０、３３、３４、３５、３６、３７、４３、４４、４５、及び４６の構造。 化合物４７、４８、５０、５１、５３、及び５７の構造。 化合物４９、５２、５４、５５、５６、及び５８の構造。 化合物６１、６４、６６、６７、６８、及び７０の構造。 化合物５９、６０、６２、６３、６５、及び６９の構造。 前駆ラパマイシンの異核多重結合コヒーレンス（HMBC）。 前駆ラパマイシンの異核多重量子コヒーレンス（HMQC）。 実線矢印で示された前駆ラパマイシンの相関分光法（COSY）、点線矢印で示された前駆ラパマイシンの全相関分光法（TOCSY）。
rapNのDNA配列の補正、該補正した配列を上に示し（配列番号：１）、かつ公表された配列（acc no：X86780、nt 91764-92978）を下に示す（配列番号：２）。 RapNのアミノ酸配列の補正、該補正した配列を上に示し（配列番号：３）、かつ公表された配列（acc no：X86780）を下に示す（配列番号：４）。 rapMのDNA配列の補正、該補正した配列を上に示し（配列番号：５）、かつ公表された配列（acc no：X86780、nt 92992-93945相補体）を下に示す（配列番号：６）。 RapMのアミノ酸配列の補正、該補正した配列を上に示し（配列番号：７）、かつ公表された配列（acc no：X86780）を下に示す（配列番号：８）。 rapLのDNA配列の補正、該補正した配列を上に示し（配列番号：９）、かつ公表された配列（acc no：X86780、nt 94047-95078相補体）を下に示す（配列番号：10）。 RapLのアミノ酸配列の補正、該補正した配列を上に示し（配列番号：11）、かつ公表された配列（acc no：X86780）を下に示す（配列番号：12）。 rapKのDNA配列の補正、該補正した配列を上に示し（配列番号：13）、かつ公表された配列（acc no：X86780、nt 95430-96434）を下に示す（配列番号：14）。 RapKのアミノ酸配列の補正、該補正した配列を上に示し（配列番号：15）、かつ公表された配列（acc no：X86780）を下に示す（配列番号：16）。 rapJのDNA配列の補正、該補正した配列を上に示し（配列番号：17）、かつ公表された配列（acc no：X86780、nt 96465-97625）を下に示す（配列番号：18）。 RapJのアミノ酸配列の補正、該補正した配列を上に示し（配列番号：19）、かつ公表された配列（acc no：X86780）を下に示す（配列番号：20）。
rapIのDNA配列の補正、該補正した配列を上に示し（配列番号：21）、かつ公表された配列（acc no：X86780、nt 97622-98404）を下に示す（配列番号：22）。 RapIのアミノ酸配列の補正、該補正した配列を上に示し（配列番号：23）、かつ公表された配列（acc no：X86780）を下に示す（配列番号：24）。 rapQのDNA配列の補正、該補正した配列を上に示し（配列番号：25）、かつ公表された配列（acc no：X86780、nt 90798-91433）を下に示す（配列番号：26）。 RapQのアミノ酸配列の補正、該補正した配列を上に示し（配列番号：27）、かつ公表された配列（acc no：X86780）を下に示す（配列番号：28）。 MG3を作成するため、pMG278-1を単離するクローニング戦略を示すフローチャート。 MG4を作成するため、pMG267-1を単離するクローニング戦略を示すフローチャート。
（発明の詳細な説明）
一態様において、本発明は、本発明は、S.ハイグロスコピカスを形質転換する新規かつ
迅速な方法を提供する。S.ハイグロスコピカスの遺伝学的に修飾された菌株を単離するフ
ァージ技術の使用は、以前に記載されている（Khawらの論文（1998）；Lomovskayaらの論
文（1997））。しかし、ラパマイシン産生株S.ハイグロスコピカス内にDNAを導入する、
トランスフェクション以外の方法は、未だ報告されていない。実際には、プラスミドDNA
、又は接合伝達を用いた、一般に使用される形質転換方法は、該ラパマイシン産生株では
、失敗に終ったことが以前に示されている（Lomovskayaらの論文（1997）、Kieserらの論
文（2000）；Schwekeらの論文（1995））。
本発明において、意外にも、実施例１に記載されているように、S.ハイグロスコピカス
の形質転換に成功した接合プロトコルが確立された。該方法論を、S.ハイグロスコピカス
MG2-10（実施例２）における、除去変異体の単離により、かつ実施例３、５、及び１５に
記載されている遺伝子、及び遺伝子組合せの発現により示した。
従って、一態様において、本発明は、一以上の補助遺伝子が、除去又は不活性化されて
いる、FKBP-リガンドをコードする生合成クラスターを含む組換え型菌株を製造する方法
を提供し、前記方法は下記工程を含む：
（ａ）dam-、dcm-、又はdam-、及びdcm-であるE.コリ株中に、接合性欠失プラスミドを構
築する工程；
（ｂ）接合に適した前記菌株から胞子を生成する工程、ここで、前記菌株を、湿度10％〜
40％で生育させ、かつ該胞子を、5〜30日で収集し；
（ｃ）１リットルにつき：
i） コーン浸透粉0.5 g〜5 g；
ii） 酵母エキス0.1 g〜5 g；
iii） 炭酸カルシウム0.1 g〜10 g；及び
iv） 硫酸鉄0.01 g〜0.5 g；
を含む培地上で、工程（ａ）のE.コリ株と工程（ｂ）から得られた胞子とを接合させる工
程であって、前記培地は、さらに、BACTO-寒天、及びデンプンを含み、かつ1〜20重量％
減少するように乾燥させており；かつ
（ｄ）ポリケチド産生に適した条件下で、前記菌株を、任意に培養する工程。
好ましくは、工程（a）の該E.コリ菌株は、dam-、及びdcm-である。
好ましくは、工程（b）の該胞子は、10〜25日で、又は14〜21日で収集される。他の実
施態様において、工程（b）において、該菌株は、湿度10〜20％で生育される。
特定の実施態様において、工程（c）の該培地中のデンプンは、小麦デンプンである。
好ましい実施態様において、工程（c）に使用される該培地は、1リットルあたり、コー
ン浸透粉1 g〜4 g、酵母エキス1 g〜4 g、炭酸カルシウム1 g〜5 g、及び硫酸鉄0.2 g〜0
.4 gを含む。さらに好ましい実施態様において、該培地は、1リットルあたり、コーン浸
透粉2.5 g、酵母エキス3 g、炭酸カルシウム3 g、及び硫酸鉄0.3 gを含む。
本発明において開示された相補性戦略は、各補助遺伝子（すなわち、ラパマイシン生合
成におけるrapK、rapQ、rapN/O、rapM、rapL、rapJ、及び／又はrapI）の機能を評価し、
かつ同定する迅速な方法を提供する。該遺伝子産物RapKは、以前に、ラパマイシン生合成
の酸化工程も触媒し得るプテリジン-依存性ジオキシゲナーゼの興味深い候補として同定
されている（Molnarらの論文（1996））。該相同的遺伝子fkbOは、FK506の生合成遺伝子
クラスターにおいて同定され、かつラパマイシン、及びFK506の構造同一性のため、C9 OH
基の酸化におけるrapKの役割が仮定された（Motamediらの論文（1996））。S.ハイグロス
コピカスMG2-10[pSGsetrapK]による前駆ラパマイシンのrapK-依存性産物を記載している
実施例３、４、及び６の結果は、ラパマイシン生合成において、RapKが少なくとも付加的
機能を有することを示唆している。
従って、他の態様において、本発明の方法は、RapKの機能解明へと導いた。すなわち、
該rapK遺伝子の発現は、すべての環化マクロライド生成物の集積が必要である。さらに態
様において、本発明は、該FK520クラスターからのrapK相同体であるfkbOを有するS.ハイ
グロスコピカスMG2-10の相補性を記載、S.ハイグロスコピカスMG2-10[pMG169-1]による前
駆ラパマイシンのfkbO依存性産物の意外な観測を有する（実施例１１）。当業者は、FK52
0生産において、fkbOが、前駆ラパマイシン生産における、rapK、及びfkbOと同じ機能を
果すように見ることができる。さらに、当業者は、制限はないが、FK506クラスター内のf
kbO、FK520クラスター内のfkbO、及び’hyg’クラスター内のOrf5を含む他のrapK相同体
が、同じ機能を果すことを理解するであろう。さらに、本発明の態様において、制限はな
いが、FK506、FK520、FK525、アンタスコマイシン、FK523、ツクバマイシン、及び’hyg
’を含む、FKBP-リガンドをコードする生合成クラスター内のrapK相同体を、除去又は不
活性化し、公知であるこれらの各天然産物を作ることのできない菌株を提供することがで
きる。同様に、上述された該相補性戦略は、他のポリケチド、又は非リボソーム型ペプチ
ドの生合成において、補助遺伝子の発現産物の機能、特異性、及び要求を調査する迅速な
方法を提供する。
実施態様の好ましい種類において、本発明は、ラパマイシン類似体の生産が可能な組換
え型宿主株の製造方法を提供し、さらに、ゲノム除去体の構築を伴い、制限はないが、S.
ハイグロスコピカス内に導入されるrapQONMLKJI、及び単一遺伝子、又は遺伝子組合せの
発現により、相補性、又は部分的相補性を含み、遺伝子カセット内に、制限はないが、ra
pK、rapI、rapQ、rapM、接触遺伝子rapN、及びO（本明細書中では、rapN/Oと表す。）、r
apL、及びrapJを含む。さらに、本発明は、前記組換え型宿主株を培養し、かつ生産され
た該ラパマイシン類似体を任意に単離することにより、前記ラパマイシン類似体を生産す
る方法を提供する。従って、ゲノム除去菌株S.ハイグロスコピカスMG2-10の相補性により
製造された、rapKを有する、該組換え型菌株MG2-10[pSGsetrapK]を培養し、9-デオキソ-1
6-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシン（前駆ラパマイシン）
を生産した。
さらに、本発明のこの種の態様において、該戦略は、上述の該S.ハイグロスコピカス除
去変異株内に、制限はないが、rapK、rapI、rapQ、rapM、rapN、rapO、rapL、及びrapJを
含む遺伝子のサブセットを含むベクターの組込みを伴う。様々な利用可能な組込み機能体
を用いて、そのような組込みを行うことができ、該機能体は、制限はないが：ΦC31-ベー
スベクター、pSAM2インテグラーゼ（例えば、pM927（Smovkinaらの論文（1990））、R4イ
ンテグラーゼ（例えば、pAT98（Matsuuraらの論文（1996））、ΦVWBインテグラーゼ（例
えば、pKT02（Van Mellaertらの論文（1998）））、ΦBT1インテグラーゼ（（例えば、pR
T801）Gregoryらの論文、印刷中）、及びL5インテグラーゼ（例えば、Leeらの論文（1991
））を基盤としたベクターがある。ある場合において、これは、該宿主株の改変を必要と
してもよく、インテグラーゼの特異的attB部位の付加により、高効率の組込みが可能とな
る。また、ΦC31-ベースベクターに置換、又は付加するように、複製ベクターを使用する
こともできる。これらは、制限はないが、pIJ101（例えば、pIJ487、Kieserらの論文（20
00））、pSG5（例えば、pKC1139、Biermanらの論文（1992））、及びSCP2*（例えば、pIJ
698、Kieserらの論文（2000））を基盤としたベクターを含む。この方法論は、ΦBT1、及
びΦC31部位特異的組込み機能体の使用により、本明細書中で実証されている。
S.ハイグロスコピカス内の遺伝子カセットの組込みは、本発明において、該ΦBT1、及
び該ΦC31部位特異的組込み機能体を用いて実証されているが、当業者は、原核生物の、
又はさらに好ましくは放線菌宿主株の中に、そのような遺伝子カセットの導入に使用する
ことができる上述のものを含む、文献に記載された多くの異なる戦略があることを理解す
るであろう。これらは、上述の、及び下記論文に記載されているような改変部位特異的組
込み型ベクターの使用を含む（Kieserらの論文（2000）；Van Mellaertらの論文（1998）
；Leeらの論文（1991）；Smovkinaらの論文（1990）；Matsuuraらの論文（1996））。代
わりに、該遺伝子カセットを含むプラスミドを、相同的組換え部分を用いて、染色体上の
中性部位に組込むことができる。さらに、S.ハイグロスコピカスを含む、多くの放射菌宿
主株に対し、該遺伝子カセットを、自己複製プラスミドに導入することができる（Kieser
らの論文（2000）；WO 98/01571）。
さらに、この種の態様において、本発明は、該組換え型S.ハイグロスコピカス除去菌株
の相補性のための遺伝子カセットを提供する。マクロライドをグリコシル化した混成体を
生産するように使用された遺伝子カセット及びこれらの非相同体の構築方法は、以前に記
載されている（Gaisserらの論文（2002）；WO 01/79520、WO 03/048375）。本発明の該遺
伝子カセットの単離に使用されたクローニング方法は、以前に記載されたアプローチと有
意に異なり、該遺伝子カセットは、pUC18/19-プラスミド内で遺伝子を前組立てするより
もむしろ、発現ベクター内で直接組立てられ、従って、迅速なクローニング手順である。
該アプローチは、実施例３、４、５、９、及び１５で実証されている。本明細書中で記載
するように、適切なベクター（制限はないが、例えばpSGLit1）を、前記遺伝子カセット
の構築に使用するために構築することができ、ここで、damメチル化に感受性の適切な制
限酵素認識部位（制限はないが、例えばXbaI）を、対象となる該遺伝子に対し5’に挿入
し、かつ第二の制限酵素認識部位（例えば、XbaI）を、対象となる該遺伝子に対し3’に
挿入することができる。当業者は、他の制限酵素認識部位を、XbaIの代わりとして使用す
ることができ、かつ該メチル化感受性部位を、対象となる該遺伝子に対し5’、又は3’に
することができることを理解するであろう。
遺伝子カセットの使用により、単一のS.ハイグロスコピカス除去菌株からの修飾遺伝子
の幾つかの組合せが除去された、多様性組換え型菌株の迅速、かつ平行した製造を行うこ
とができる。該クローニング戦略は、直接的、又は任意の方法において、遺伝子カセット
の組立てを容易にし、かつ従って、排他的な制限はないが、下記化合物を含む、新規ラパ
マイシン類似体の組合せ製造の有効な手段である：
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシン（前駆ラ
パマイシン）、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-ラパマイシン、
16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
9-デオキソ-27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-ラパマイシン、
27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-ラパマイシン、
9-デオキソ-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン
（前駆プロリルラパマイシン）、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン
、
15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-26-デスメトキシ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-26-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
15-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
26-デスメトキシ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
26-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-26-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
15-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
9-デオキソ-27-デスメトキシ-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
9-デオキソ-27-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
16-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
27-デスメトキシ-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
27-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
9-デオキソ-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン
、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン
、
15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-26-デスメトキシ-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-26-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
15-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
26-デスメトキシ-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
26-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（ヒドロキシシクロヘキセニル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（ジヒドロキシ シクロヘキシル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（ヒドロキシノルボルニル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（3-メチル-4-ヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（4-メチル ヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（3-フルオロ-4-ヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（3-ヒドロキシ-4-フルオロシクロヘキシル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（3-クロロ-4-ヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（3-ヒドロキシ-4-クロロシクロヘキシル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（3-cis-4-cis-ジヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（3-trans-4-trans-ジヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシ
ン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-O-デスメチル ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27O-デスメチル-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロキ
シシクロヘキシル）-36-（ヒドロキシシクロヘキセニル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（ヒドロキシノルボルニル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（4-メチル ヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン。
さらに、この種類の態様において、本発明は、ラパマイシン類似体を産生することがで
きる組換え型宿主株の組合せ製造システムを提供し、S.ハイグロスコピカス内に導入され
るゲノム除去rapQONMLKJIの構築、及び１の、又は複数の除去された補助遺伝子rapQ、rap
N/O、rapM、rapL、rapK、rapJ、及びrapIを含む遺伝子カセットの組合せライブラリーに
よる、その部分的相補性の構築を伴う。
略述した該アプローチは、遺伝子を組合せる、部分的なクローニング戦略として含まれ
、排他的な制限はないが、該遺伝子には、rapK、rapI、rapQ、rapM、rapN/O、rapL、及び
rapJ、及び／又は幾つかの可能な遺伝子の組合せ、及び遺伝子順序における、類似した遺
伝子機能を有する遺伝子がある。
本発明の他の態様は、遺伝子カセット内の遺伝子順序を変えることにより、遺伝子発現
の増加を可能にする。好ましい種類に適用されるものとして、該遺伝子は、一以上のrapK
、rapI、rapQ、rapM、rapN/O、rapL、及びrapJ、及び／又は類似した遺伝子機能を有する
遺伝子を含むことができ、実施例５に略述したように、多数の変更の中での該遺伝子の配
向が可能である。
また、本発明中に略述した該クローニング戦略は、遺伝子発現を高めるように、該遺伝
子カセットの3’のターミネータ配列と組合せて、ヒスチジンタグの導入が可能である。
当業者は、他のターミネータ配列を使用することができることを、理解するであろう。
本発明の他の態様は、遺伝子発現を最適化するように、組立てられた遺伝子カセット内
に、多様なプロモーターの使用を記載する。
現在、当業者は、S.ハイグロスコピカス除去菌株を構築することができることは、明ら
かであろう。該除去とは、制限はないが、該遺伝子rapQ、rapN/O、rapM、rapL、rapK、ra
pJ、及びrapIの遺伝子、又はサブセットを含む。この場合、通常、相補性、又は部分的相
補性のための遺伝子カセットは、該除去された遺伝子のサブセットから選択される、単一
の遺伝子、又は複数の遺伝子を含む。
当業者にとって、FK506（Motamediらの論文（1996）；Motamediらの論文（1997）；Mot
amedi、及びShafieeの論文（1998））、及びFK520（Wuらの論文（2000））を含む、密接
に関連したシステムの遺伝子クラスター内に、幾つかのラパマイシン修飾、及び前駆体供
給遺伝子の相同体があることは周知であろう。これらは、次の下記表1に記載されている
ようなものを含む。
他の密接に関連したシステムの遺伝子クラスターは、制限はないが、FK523、メリダマ
イシン、FK525、アンタスコマイシン、及びツクバマイシンの生合成のための、まだ配列
決定されていないクラスターを含み、これらは、決定されているその配列に、密接な類似
点を有することを示し、かつ特に、これらの遺伝子クラスターは、幾つかのラパマイシン
修飾、及び前駆体供給遺伝子と近い相同体を含むであろうことを予測することができる。
従って、さらに、本発明の態様において、制限はないが、FK506、FK520、FK523、アンタ
スコマイシン、メリダマイシン、FK525、’hyg’、及びツクバマイシンを含む、そのよう
な密接に関連したシステムからの非相同的遺伝子クラスターの遺伝子は、１つの遺伝子除
去、又は複数の遺伝子除去されている、ラパマイシン産生株の相補性、及び／又は部分的
相補性に対し、これらのラパマイシン類似体の代わり、又は追加として、遺伝子カセット
内に含むことができ、制限はないが、該遺伝子rapK、rapI、rapQ、rapM、rapN/O、rapL、
及びrapJを含む。
当業者にとって、ポリケチド遺伝子クラスターが、異種宿主中で発現してもよいことは
、周知のことである（Pfeifer、及びKhoslaの論文（2001））。結果的に、本発明は、異
種宿主中の相補性のため、耐性、及び調節遺伝子の有無にかかわらず、完全な、又は欠失
を含む、ラパマイシン生合成遺伝子クラスターの伝達を含む。そのような大きなDNA断片
の上記規定した該伝達のための方法、及びベクターは、当業者にとって、周知である（Ra
wlingsの論文（2001）；Staunton、及びWeissmanの論文（2001））、又は開示された方法
として、本明細書中に提供される。この状況において、好ましい宿主細胞株は、原核生物
であり、さらに好ましくは、放線菌、又はエシェリキアコリ、またさらに好ましくは、制
限はないが、下記菌株を含む：
S.ハイグロスコピカス、S.ハイグロスコピカスsp.、S.ハイグロスコピカスvar.アスコマ
イセティカス、ストレプトマイセス ツクバエンシス、ストレプトマイセス コエリコロー
、ストレプトマイセス リビダンス、サッカロポリスポラ エリスラエア、ストレプトマイ
セス フラジアエ、ストレプトマイセス アベルミチリス、ストレプトマイセス シナモネ
ンシス、ストレプトマイセス リモスス、ストレプトマイセス アルブス、ストレプトマイ
セス グリセオフスカス、ストレプトマイセス ロンギスポロフラバス、ストレプトマイセ
ス ベネズエラ、ミクロモノスポラ グリセオルビダ、アミコラトプシス メディテラーネ
イ、又はアクチノプラネスsp. N902-109。
他の態様において、本発明の該ラパマイシン類似体を、下記工程を含む、プロセスによ
り得ることができる：
a） 該遺伝子本発明の方法により、除去された菌株を構築する工程、該除去とは、制限
はないが、遺伝子rapK、rapQ、rapN/O、rapM、rapL、rapJ、及びrapI、又はそのサブセッ
トを含む；
b） ポリケチド産生に適切な条件下で、該菌株を培養する工程；
c） 産生されたラパマイシン類似中間体を任意に単離する工程；
d） 該除去された遺伝子のすべて、又はサブセットを含む遺伝子カセットを含有した、
生体内変換型菌株を構築する工程;
e） 培養液上清中の、又は工程c）において単離された、該ラパマイシン類似中間体を、
適切な生体内変換条件下で、該生体内変換型菌株の培養液に供給する工程；
f） 産生されたラパマイシン類似体を任意に単離する工程。
生体内変換型菌株の構築に適切な宿主株は、該ラパマイシン生合成遺伝子クラスターが
除去されている、又はポリケチド合成を廃止するように、実質的に除去され、又は不活性
化されている天然菌株、又は非相同的宿主株を含む。非相同的菌株内において、１つ、又
は複数修飾する、又は前駆体供給する遺伝子を含む、遺伝子カセットの発現方法は、WO 0
1/79520に記載されている。この状況において、前記FKBP-リガンド類似中間体の生体内変
換に適した非相同的菌株は、制限はないが、下記菌株がある：
S.ハイグロスコピカス、S.ハイグロスコピカスsp.、S.ハイグロスコピカスvar.アスコマ
イセティカス、ストレプトマイセス ツクバエンシス、ストレプトマイセス コエリコロー
、ストレプトマイセス リビダンス、サッカロポリスポラ エリスラエア、ストレプトマイ
セス フラジアエ、ストレプトマイセス アベルミチリス、ストレプトマイセス シナモネ
ンシス、ストレプトマイセス リモスス、ストレプトマイセス アルブス、ストレプトマイ
セス グリセオフスカス、ストレプトマイセス ロンギスポロフラバス、ストレプトマイセ
ス ベネズエラ、ミクロモノスポラ グリセオルビダ、アミコラトプシス メディテラーネ
イ、エシェリキアコリ、及びアクチノプラネスsp. N902-109。
ラパマイシンとFK506、FK520、FK523、’hyg’、メリダマイシン、アンタスコマイシン
、FK525、及びツクバマイシン、特にラパマイシンの生合成を伴う遺伝子とFK506、及びFK
520との間に構築された相同体（上記参照）との間の近い構造的な関連性は、これらの密
接に関連したシステムに対し、本発明の方法の適用を明確に示す。さらに態様において、
従って、本発明は、密接に関連した化合物：制限はないが、FK506、FK520、FK523、’hyg
’、アンタスコマイシン、メリダマイシン、FK525、及びツクバマイシンを含む、産生菌
株の除去菌株の構築を含み、遺伝子除去、又は修飾する、及び／又は前駆体を供給する遺
伝子の除去を含み、かつさらに特に、制限はないが、rapK、rapI、rapQ、rapM、rapN/O、
rapL、及びrapJと類似した機能を有する遺伝子、及び除去された相同的遺伝子のすべて、
又はサブセット、又は非相同的遺伝子クラスターからのこれらの機能性相同体を含む、遺
伝子、又は遺伝子カセットを有するこれらの相補性、又は部分的相補性を含み、制限はな
いが、代わりの前駆体の取込み、及び／又はポスト-PKS修飾の範囲において、本源ポリケ
チドから変わった、ポリケチド類似体を産生することができる組換え型菌株を製造するよ
うに、rapK、rapI、rapQ、rapM、rapN/O、rapL、及びrapJを含む。さらに、本発明は、前
記組換え型宿主株を培養し、かつ産生された該ポリケチド類似体を任意に単離することに
より、前記ポリケチド類似体を生産する方法を提供する。
さらに態様において、本発明は、代わりの前駆体の取込み、及び／又はポスト-PKS修飾
の範囲において、親ポリケチドから変わる、ポリケチドFKBP-リガンド類似体（ラパマイ
シン以外）を産生することができる組換え型宿主株の製造方法を提供し、該補助遺伝子の
すべて、又は一部が除去されている、ゲノム除去菌株の構築、及び１、又は複数除去され
た遺伝子、及び／又はこれらの相同体を含む遺伝子カセットによる、その部分的相補性を
含み、かつさらに、前記組換え型宿主株を培養し、かつ産生された該ポリケチド類似体を
任意に単離することにより、前記ポリケチド類似体を生産する方法を提供する。多くの場
合、補助遺伝子は、遺伝子クラスター内のポリケチドシンターゼ遺伝子と同位置にあり（
Hopwoodの論文（1997）；Motamedi、及びShafieeの論文（1998）；Wuらの論文（2000））
、従って、該除去菌株の作成が容易であることは、当業者にとって、周知のことである。
除去されるべき該補助遺伝子が、連続した配列を自然に形成しても、しなくてもよいが、
該除去菌株は、遺伝子カセットにより、該部分的相補性が作成されていると、１、又は複
数の前記遺伝子が除去されている組換え型菌株製造の迅速なアプローチを与える。従って
、さらに態様において、本発明は、代わりの前駆体の取込み、及び／又はポスト-PKS修飾
の範囲において、親ポリケチドから変化した、ポリケチドFKBP-リガンド類似体（ラパマ
イシン以外）を産生することができる組換え型宿主株の組合せ製造方法を提供し、１、又
は複数の除去遺伝子を含む遺伝子カセットの組合せライブラリーによる、ゲノム除去菌株
の部分的相補性を含み、かつさらに、ポリケチド産生に適した条件下で、前記組換え型宿
主株を培養し、かつ産生された該ポリケチド類似体を任意に単離することにより、前記ポ
リケチド類似体を生産する方法を提供する。この状況において、好ましい宿主細胞株は、
原核生物であり、さらに好ましくは、アクチノマイセート（actinomycete）、またさらに
好ましくは、下記から選択される宿主細胞株である：
S.ハイグロスコピカス、S.ハイグロスコピカスsp.、S.ハイグロスコピカスvar.アスコマ
イセティカス、ストレプトマイセス ツクバエンシス、ストレプトマイセス コエリコロー
、ストレプトマイセス リビダンス、サッカロポリスポラ エリスラエア、ストレプトマイ
セス フラジアエ、ストレプトマイセス アベルミチリス、ストレプトマイセス シナモネ
ンシス、ストレプトマイセス リモスス、ストレプトマイセス アルブス、ストレプトマイ
セス グリセオフスカス、ストレプトマイセス ロンギスポロフラバス、ストレプトマイセ
ス ベネズエラ、ミクロモノスポラ グリセオルビダ、アミコラトプシス メディテラーネ
イ、又はアクチノプラネスsp. N902-109。
当業者は、本発明が、遺伝子操作により、修飾ラパマイシン、又は他のポリケチド類似
体を発現するように、該ポリケチドシンターゼ（PKS）が改変されている組換え型宿主株
に応用され得ることを理解するであろう。先行技術には、個々のドメインの除去、又は不
活性化（WO 93/13663、WO 97/92358）、混成ポリケチドシンターゼの構築（WO 98/01546
、WO 00/00618、WO 00/01827）、又は部位特異的な突然変異生成によるドメイン特異性の
変化（WO 02/14482）による、新規ポリケチドの幾つかの生産方法を記載する。
当業者にとって、非リボソーム型ペプチドが、ポリケチド生合成と類似したプロセスに
おいて、連続的なアミノ酸成分の段階的縮合を介して、非リボソーム型ペプチドシンター
ゼ（NRPSs）により生合成されていることは周知である（参照：Marahielらの論文（1997
）；Schwarzer、及びMarahielの論文（2001））。幾つかの非リボソーム型ペプチドは、
特異的なアミノ酸残基、及びカルボキシ酸を含み、該生合成遺伝子は、該非リボソーム型
ペプチドシンターゼ遺伝子と同一位置にあることは、周知である（Marahielらの論文（19
97）；Konz、及びMarahielの論文（1999）；Blancらの論文（1997））。幾つかの場合に
おいて、最初に、該NRPSからされた該非リボソーム型ペプチドは、制限はないが、グリコ
シルトランスフェラーゼ、レダクターゼ、アシル化、又は複素環形成を含む、一組の酵素
によりさらに修飾される（Konz、及びMarahielの論文（1999）；Blancらの論文（1995）
）。これらは、抗生物質クロロエレモマイシン（chloroeremomycin）、プリスチナマイシ
ン、バンコマイシン、及びブレオマイシンを含む（Konz、及びMarahielの論文（1999）；
Duらの論文（2000））。また、通常、これらのポスト-NRPS酵素の該遺伝子は、該生合成
遺伝子クラスター内の同一位置にある（Marahielらの論文（1997）；Schwarzer、及びMar
ahielの論文（2001））。従って、さらに態様において、本発明は、代わりの前駆アミノ
酸の取込み、及び／又はポスト-NRPS修飾の範囲において、本源非リボソーム型ペプチド
から変化した、非リボソーム型ペプチド類似体の生産方法を含み、天然アミノ酸前駆体合
成、及び／又はポスト-NRPS酵素をコードする該遺伝子のすべて、又は一部が除去されて
いる、ゲノム除去菌株の構築、及び１、又は複数除去された遺伝子、及び／又はこれらの
相同体を含む遺伝子カセットによる、その部分的相補性を含み、かつさらに、前記組換え
型宿主株を培養し、かつ産生された非リボソーム型ペプチド類似体を任意に単離すること
により、非リボソーム型ペプチド類似体を生産する方法を含む。除去されるべき該ポスト
-NRPS、及び生合成遺伝子は、隣接する配列を自然に形成しても、しなくてもよいが、該
除去菌株は、遺伝子カセットにより、該部分的相補性が作成されていると、１、又は複数
の前記遺伝子が除去されている組換え型菌株製造の迅速なアプローチを与える。従って、
さらに態様において、本発明は、代わりの前駆体の取込み、及び／又はポスト-NRPS修飾
の範囲において、本源非リボソーム型ペプチドから変化した、非リボソーム型ペプチド類
似体を産生することができる、組合せ組換え型宿主株の製造方法を提供し、１、又は複数
除去された遺伝子を含む遺伝子カセットの組合せライブラリーによる、前記ゲノム除去菌
株の部分的相補性を含み、かつさらに、非リボソーム型ペプチド産生に適した条件下で、
前記組換え型宿主株を培養し、かつ産生された非リボソーム型ペプチド類似体を任意に単
離することにより、前記非リボソーム型ペプチド類似体を生産する方法を含む。この状況
において、好ましい組換え型宿主細胞株は、原核生物であり、さらに好ましくは、アクチ
ノマイセート、またさらに好ましくは、下記から選択される宿主細胞株である：
S.ハイグロスコピカス、S.ハイグロスコピカスsp.、S.ハイグロスコピカスvar.アスコマ
イセティカス、ストレプトマイセス ツクバエンシス、ストレプトマイセス コエリコロー
、ストレプトマイセス リビダンス、サッカロポリスポラ エリスラエア、ストレプトマイ
セス フラジアエ、ストレプトマイセス アベルミチリス、ストレプトマイセス シナモネ
ンシス、ストレプトマイセス リモスス、ストレプトマイセス アルブス、ストレプトマイ
セス グリセオフスカス、ストレプトマイセス ロンギスポロフラバス、ストレプトマイセ
ス ベネズエラ、ミクロモノスポラ グリセオルビダ、アミコラトプシス メディテラーネ
イ、又はアクチノプラネスsp. N902-109。
多くのアクチノマイセートは、ポリケチド、及び非リボソーム型合成ペプチドを含む、
種々の２次代謝産物の多重な生合成遺伝子クラスターを含むことがよく知られている。特
に、S.ハイグロスコピカスの菌株は、様々なポリケチド、及び非リボソーム型合成ペプチ
ド、さらにラパマイシン、FK506、FK520、FK523、メリダマイシン、FK525、アンタスコマ
イシン、及びツクバマイシンを産生することを示している。これらは、制限はないが、エ
ライオフィリン、ビアラホス、イグロマイシン、オーガストマイシン、エンドマイシン（
A、B）、グレボマイシン、ハイグロスコピン、オサマイシン、及びニゲリシンを含む。こ
れらの付加的生合成遺伝子クラスターは、生合成前駆体の競合する要求、及び該宿主株の
付加的な代謝要求を示す。従って、所望のラパマイシン、又は他のポリケチド類似体の生
産を向上させるため、該宿主株内に存在する他の生合成遺伝子クラスターのすべてを、除
去、又は不活性化するのに都合よくすることができる。生合成遺伝子クラスターの除去、
又は不活性化方法は、技術において、周知のものである。
さらに、この種の態様において、本発明は、組換え型除去菌株の相補性のための変異合
成方法論を提供する。
さらに態様において、rapL除去を含む、本発明のS.ハイグロスコピカス菌株に、自然に
取込まれるアミノ酸類似体、ピペコリン酸を供給することができ、該ピペコリル残基が置
換された、新しいラパマイシン類似体を生産する。先行技術は、該培養液にL-ピペコリン
酸を添加することにより、rapL変異が補われることを記載している（Khawらの論文（1998
））。同様に、ラパマイシン類似体は、L-ピペコリン酸類似体、L-プロリン、L-trans-4-
ヒドロキシプロリン、L-cis-4-ヒドロキシプロリン、L-cis-3-ヒドロキシプロリン、tran
s-3-アザ-ビシクロ[3,1,0]ヘキサン-2-カルボン酸の該供給、及び取込み後に単離さるこ
とを示している（WO 98/54308）。rapL、又はrapL相同体を含まない、ポスト-PKS修飾工
程をコードする遺伝子、又は遺伝子カセットを発現する菌株として、S.ハイグロスコピカ
スMG2-10を用い、S.ハイグロスコピカス菌株のライブラリーを作成し、L-ピペコリン酸類
似体を供給することにより、複数の修飾生成物を産生することができる。適切なL-ピペコ
リン酸類似体は、アルキル-、ハロ-、ヒドロキシ-、及びアミノ-置換ピペコリン酸、及び
プロリンを含み、かつさらに、特に、L-プロリン、L-trans-4-ヒドロキシプロリン、L-ci
s-4-ヒドロキシプロリン、L-cis-3-ヒドロキシプロリン、trans-3-アザ-ビシクロ[3、1、
0]ヘキサン-2-カルボン酸、及びL-ピペコリン酸類似体は、下記化合物を含む、改良され
たリップマンの方法（Nielsenらの論文（1991））により測定されたPP-ATP交換を触媒す
ることが示された：L-4-ヒドロキシプロリン、1-ヒドロキシプロリン、2-ヒドロキシプロ
リン、3- ヒドロキシプロリン、trans-3-メチル-L-プロリン、cis-3-メチルプロリン、ci
s-3-メチル-DL-プロリン、cis,trans-4-メチルプロリン、cis-4-メチル-DL-プロリン、tr
ans-4-メチル-DL-プロリン、trans-4-アミノプロリン、cis-4-クロロ-L-プロリン、5-イ
ミノプロリン塩酸塩、cis-5-メチル-DL-プロリン、（+）-ピペラジン酸、5-クロロピペコ
リン酸、5-ヒドロキシピペコリン酸、cis-4-ヒドロキシル-ピペコリン酸、trans-4-ヒド
ロキシ-D-ピペコリン酸、4-ヒドロキシアロピペコリン酸、チアゾリジン-4-カルボン酸（
Nielsenらの論文（1991））。このアプローチは、実施例７に例示されている。
該天然4,5-ジヒドロキシシクロヘキサ-1-エンカルボン酸開始単位に構造が近い類似体
を、S.ハイグロスコピカスの培養液に供給した後の限られた数の新規ラパマイシン類似体
の生産は、以前に記載されており、従って該ラパマイシンのロードモジュールは、該開始
酸に対して、幾らかの柔軟性を有することを示している（P.A.S. Lowdenの博士論文、ケ
ンブリッジ大学（1997））。しかし、これらの方法は、混合生成物が生産される。さらに
、態様において、本発明は、本発明の菌株に、自然に取込まれる4,5-ジヒドロキシシクロ
ヘキサ-1-エンカルボン酸開始単位の類似体を供給することにより、ラパマイシン、及び
関連したFKBP-リガンド類似体の生産を可能にし、制限はないが、下記化合物を含む、代
わりの開始単位を取込んだ、ラパマイシン類似体を生産する：
シクロヘキサンカルボン酸、
3-cis-trans-ジヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、
1-シクロヘキセンカルボン酸、
3-シクロヘキセンカルボン酸、
シクロヘプタンカルボン酸、
2-ノルボルナンカルボン酸、
3-ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、
4-ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、
3-メチルシクロヘキサンカルボン酸、
4-メチルシクロヘキサンカルボン酸、
3-（cis/trans）メトキシシクロヘキサンカルボン酸、
4-（cis/trans）メトキシシクロヘキサンカルボン酸、
4-オキソシクロヘキサンカルボン酸、
3-フルオロ-4-ヒドロキシカルボン酸、及び4-フルオロ-3-ヒドロキシカルボン酸、
3-シクロヘキサンオキシドカルボン酸、
3-cis-ジヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、
3-クロロ-4-ヒドロキシカルボン酸、及び4-クロロ-3-ヒドロキシカルボン酸（及び向かい
合うジアステレオマーの対）、
シクロヘキシルプロピオン酸、
4-tert-ブチルシクロヘキサンカルボン酸、及びそれらの単純エステル、及び塩。このア
プローチは、実施例８、１９、及び２０に例示されている。
さらに、4,5-ジヒドロキシシクロヘキサ-1-エンカルボン酸開始単位の生合成前駆体の
構造的類似体を、供給することができ（Lowdenらの論文（2001））、代わりの開始単位を
取込んだ、新規ラパマイシン類似体の生産を導く。
しかし、これらの方法は、生成物の混合されたグループの生産を導くことができ；従っ
て、さらに、本発明は、内生的に生産される開始単位と、新規ラパマイシン類似体の効率
的生産を改善するために供給された、代わりの開始酸類似体との間の競合を取り除く方法
を提供する。
該内生的に生産される開始単位と、該供給された代わりの開始酸との間の競合を取り除
くため、該天然4,5-ジヒドロキシシクロヘキサ-1-エンカルボン酸開始単位の生合成を中
断させることが好ましい。これは、シキミ酸からの天然4,5-ジヒドロキシシクロヘキサ-1
-エンカルボン酸開始単位の生合成（Lowdenらの論文（2001））、又はシキミ酸それ自身
の生合成を伴う、一以上の該遺伝子の除去、又は不活性化により達成することができる。
後者の場合、培養液を芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン）
で補う必要があってもよい。さらに、該天然4,5-ジヒドロキシシクロヘキサ-1-エンカル
ボン酸開始単位の内生的生成物を、シキミ酸生合成の化学的阻害剤の添加により、抑制し
てもよい。そのような阻害剤は、文献において、周知である。
さらに、局面において、本発明は、rapKが、ラパマイシンの4,5-ジヒドロキシシクロヘ
キサ-1-エンカルボン酸開始単位のような該生合成前駆体の供給に含まれるという意外な
発見に役立ち、かつ従って、rapK、又はrapK相同体の除去、又は不活性化は、該天然開始
単位と、供給される非天然開始単位との間の競合がない菌株を提供する。他の態様におい
て、本発明は、制限はないが、下記を含む供給酸の効率的取込み方法を提供する。
従って、本発明の一態様において、該方法は、下記式の開始単位を供給することを含む
。
式中X = 結合、又はCH2であり、かつR1、R2、R3、R4、R5、及びR6は、同一、又は異な
っていてもよく、かつ独立してCl、F、OH、SH、H、アルキル、CN、Br、R7、OR7、C（O）R
7、又はHNR7であってもよく、式中R7が、C1-C4アルキル；R1とR3、R2とR4、R3とR5、R4と
R6、R1とR5、又はR2とR6は、置換、又は無置換メチレン鎖、エーテル鎖、チア鎖、又はア
ミノ鎖として結合してもよく、R1とR2、R3とR4、又はR5とR6は、ケトンとしてまとめても
よく；R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の４つ以下が、Clであってもよい場合；R1、R2、R3、
R4、R5、又はR6の２つ以下がHNR7であってもよく；R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つ以
下が、SHであってもよく、かつ該環上の１つの炭素からの両方のR基はOHでない。
好ましい実施態様において、該開始単位は、シクロヘキサンカルボン酸、3-cis,4-tran
s-ジヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、シクロヘプタンカルボン酸、及び3-（cis/tr
ans）-メチルシクロヘキサンカルボン酸からなる群から選択されない。
好ましい実施態様において：式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6は、F、及びOH置換の組
合せであり、R1-6の３つ以下が置換されており、かつ残りは、Hである。式中R1、R2、R3
、R4、R5、又はR6は、Cl、及びOH置換の組合せであり、R1-6の３つ以下が置換されており
、かつ残りは、Hである。式中、R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の任意の２つが、OHであり
、残りR基の任意の２つが、一つの炭素上にFを有し、残りがHである。式中、R1、R2、R3
、R4、R5、又はR6の２つが、Clであり、残りがHである。式中、R1、R2、R3、R4、R5、又
はR6の２つが、Clであり、同一炭素が起源ではなく、かつさらにRが、OHであり、残りがH
である。式中、R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、アルキルであり、かつ残りがHで
ある；該アルキル基は、炭素３つ以下の直線的な長さを有するであろう。式中、R1、R2、
R3、R4、R5、又はR6の１つが、NHR7であり、残りがHである。
より高度に好ましい実施態様において：式中、R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが、
OHであり、かつ第三のR基がFであり、残りはHである。式中、R1、R2、R3、R4、R5、又はR
6の２つが、Fであり、残りはHである。式中、R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが、OH
であり、残りはHである。式中、R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが、OHであり、かつ
第三のR基がClであり、残りはHである。式中、R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが、F
であり、かつ第三のR基がOHであり、残りはHである。式中、R1、R2、R3、R4、R5、又はR6
の１つが、SHであり、残りはHである。式中、R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、SH
であり、かつ第二のR基がOHであり（同一炭素が起源ではない）、残りはHである。
さらに、より高度に好ましい実施態様において：式中、R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の
１つが、Fであり、残りはHである。R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の式中が、Clであり、残
りはHである。式中、R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、Fであり、かつ第二のR基がO
Hであり（同一炭素が起源ではない）、残りはHである。式中、R1、R2、R3、R4、R5、又は
R6の１つが、Clであり、かつ第二のR基がOHであり（同一炭素が起源ではない）、残りはH
である。式中、R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、アルキル基であり、かつ残りはH
である；該アルキル基は、４炭素以下を含み、かつ３炭素以下の直線的長さを有するであ
ろう。式中、R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、アルキルであり、かつ第二のR基がO
Hであり（同一炭素が起源ではない）、残りはHである；該アルキル基は、４炭素以下を含
み、かつ３炭素以下の直線的長さを有するであろう。
さらに、本発明の態様は、下記式の開始単位を供給することを含む。
式中X = 結合、又はCH2であり、かつR1、R2、R3、R4、R5、及びR6は、同一、又は異な
っていてもよく、かつ独立してCl、F、OH、SH、H、アルキル、CN、Br、R7、OR7、C（O）R
7、又はHNR7であってもよく、式中R7が、C1-C4アルキル；R1とR3、R2とR4、R3とR5、R4と
R6、R1とR5、又はR2とR6は、置換、又は無置換メチレン鎖、エーテル鎖、チア鎖、又はア
ミノ鎖として結合してもよく、R1とR2、R3とR4、又はR5とR6は、ケトンとしてまとめても
よく；R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の４つ以下が、Clであってもよい場合；R1、R2、R3、
R4、R5、又はR6の２つ以下がHNR7であってもよく；R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つ以
下が、SHであってもよく、かつ該環上の１つの炭素からの両方のR基はOHでない。
好ましい実施態様において、該開始単位は、1-シクロヘキセンカルボン酸、及び1-シク
ロヘプテンカルボン酸からなる群から選択されない。
好ましい実施態様において、式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6は、F、及びOH置換の組
合せであり、R1-6の３つ以下が置換されており、かつ残りは、Hである。式中R1、R2、R3
、R4、R5、又はR6は、Cl、及びOH置換の組合せであり、R1-6の３つ以下が置換されており
、かつ残りは、Hである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の任意の２つは、OHであり、
同一炭素上の残りのR基２つがFであり、残りは、Hである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又
はR6の２つが、Clであり、残りは、Hである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが
、Clであり、同一炭素が起源ではなく、かつさらにR基がOHであり、残りはHである。式中
R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、アルキルであり、かつ残りは、Hである；該アル
キル基は、炭素３つ以下の直線的長さを有するであろう。式中R1、R2、R3、R4、R5、又は
R6の１つが、NHR7であり、残りはHである。
より高度に好ましい実施態様において：式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが、OH
であり、かつ第三のR基がFであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の
２つが、Fであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが、OHであり
、かつ第三のR基がClであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが
、Fであり、かつ第三のR基がOHであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR
6の１つが、SHであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、SHで
あり、かつ第二のR基がOHであり（同一炭素が起源ではない）、残りはHである。
さらに、より高度に好ましい実施態様において:式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１
つが、Fであり、残りはHである。R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の式中が、Clであり、残り
はHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、Fであり、かつ第二のR基がOHで
あり（同一炭素が起源ではない）、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の
１つが、Clであり、第二のR基がOHであり（同一炭素が起源ではない）、残りはHである。
式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、アルキルであり、かつ残りはHである；該ア
ルキル基は、４炭素以下を含み、かつ３炭素以下の直線的長さを有するであろう。式中R1
、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、アルキルであり、かつ第二のR基がOHであり（同一
炭素が起源ではない）、残りはHである；該アルキル基は、４炭素以下を含み、かつ３炭
素以下の直線的長さを有するであろう。
さらに、本発明の態様は、下記式の開始単位を供給することを含む。
式中X = 結合、又はCH2であり、かつR1、及びR2は、同一、又は異なっていてもよく、
かつ独立してF、Cl、OH、SH、H、CN、OR7、C（O）R7、又はHNR7であってもよく、式中R7
が、C1-C4 アルキルであり、また、R1とR2は、ケトン、スピロシクロプロピル基、又は-O
CH2-、-CH2O-、-SCH2-、又は-CH2S-を形成するようにまとめられていてもよく；さらに、
該環上の一つの炭素からのR基両方がOHでない場合、R3とR4は同一、又は異なっていても
よく、かつ独立してF、Cl、Br、OR7、H、又はCNであってもよい。
好ましい実施態様において、該開始単位は、5-cis-ヒドロキシル-3-シクロヘキセンカ
ルボン酸とはならないであろう。
好ましい実施態様において：式中R1、R2、R3、又はR4の２つが、Fであり、残りはHであ
る。式中R1、R2、R3、又はR4の１つが、Clであり、残りはHである。式中R3、又はR4の１
つが、Fであり、R1、又はR2の一つがOHであり、残りはHである。式中R3、又はR4の１つが
、Clであり、かつR1、又はR2の一つがOHであり、残りはHである。式中R1、又はR2の１つ
が、SHであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、又はR4の１つが、アルキルであり、残
りはHである；該アルキル基は、４炭素以下を含み、３炭素以下の直線的長さを有するで
あろう。式中R3、又はR4の１つが、アルキルであり、かつR1、又はR2の一つがOHであり、
残りはHである；該アルキル基は、４炭素以下を含み、３炭素以下の直線的長さを有する
であろう。
より高度に好ましい実施態様において、式中R1、R2、R3、又はR4の１つが、Fであり、
残りはHである。式中R1、R2、R3、又はR4の１つが、Clであり、残りはHである。
さらに、本発明の態様は、下記式の開始単位を供給することを含む。
R1、R2、R3、R4、R5、及びR6は、同一、又は異なっていてもよく、かつ独立してCl、F
、OH、SH、H、アルキル、CN、Br、R7、OR7、C（O）R7、又はHNR7であってもよく、式中R7
が、C1-C4 アルキル；該環上の１つの炭素からの両方のR基はOHでない場合、R1とR3、R2
とR4、R3とR5、R4とR6、R1とR5、又はR2とR6は、置換、又は無置換メチレン鎖、エーテル
鎖、チア鎖、又はアミノ鎖として結合してもよく、R3とR4、又はR5とR6は、ケトンとして
まとめてもよい。
好ましい実施態様において：式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが、Fであり、残
りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが、OHであり、残りはHである。式
中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが、OHであり、かつ第三のR基がFであり、残りはH
である。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが、OHであり、かつ第三のR基がClであ
り、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが、Fであり、かつ第三のR
基がOHであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、Brであり、
残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、Brであり、かつ第二のR基が
OHであり、残りはHである。
さらに好ましい実施態様において：式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、Fであ
り、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、Clであり、残りはHであ
る。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、Fであり、かつ第二のR基がOHであり（同
一炭素が起源ではない）、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、C
lであり、かつ第二のR基がOHであり（同一炭素が起源ではない）、残りはHである。式中R
1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、SHであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、
R5、又はR6の１つが、SHであり、かつ第二のR基がOHであり（同一炭素が起源ではない）
、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、アルキルであり、かつ残
りはHである；該アルキル基は、４炭素以下を含み、かつ３炭素以下の直線的長さを有す
るであろう。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、アルキルであり、かつ第二のR
基がOHであり（同一炭素が起源ではない）、残りはHである；かつ該アルキル基は、４炭
素以下を含み、かつ３炭素以下の直線的長さを有するであろう。
さらに、本発明の態様は、下記式の開始単位を供給することを含む。
R1、R2、R3、R4、R5、及びR6は、同一、又は異なっていてもよく、かつ独立してCl、F
、OH、SH、H、アルキル、CN、Br、R7、OR7、C（O）R7、又はHNR7であってもよく、式中R7
が、C1-C4アルキル；該環上の１つの炭素からの両方のR基はOHでない場合、R1とR3、R2と
R4、R3とR5、R4とR6、R1とR5、又はR2とR6は、置換、又は無置換メチレン鎖、エーテル鎖
、チア鎖、又はアミノ鎖として結合してもよく、R3とR4、又はR5とR6は、ケトンとしてま
とめてもよい。
好ましい実施態様において：式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6は、F、及びOH置換の組
合せであり、R1-6の３つ以下が置換されており、かつ残りは、Hである。式中R1、R2、R3
、R4、R5、又はR6は、Cl、及びOH置換の組合せであり、R1-6の３つ以下が置換されており
、かつ残りは、Hである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つは、OHであり、一つの
炭素上の残りの２つのR基は、Fであり、残りは、Hである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又
はR6の２つが、Clであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、C
lであり（同一炭素が起源ではない）、第三のR基はOHであり、残りはHである。式中R1、R
2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、アルキルであり、かつ残りはHである；該アルキル基は
、３炭素以下の直線的長さを有するであろう。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが
、SHであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、HNR7であり、
残りはHである。
さらに好ましい実施態様において：式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが、Fであ
り、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが、OHであり、残りはHであ
る。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが、OHであり、かつ第三のR基はFであり、残
りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが、OHであり、かつ第三のR基がCl
であり、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の２つが、Fであり、かつ第三
のR基がOHであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、Brであり
、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、Brであり、かつ第二のR基
がOHであり（同一炭素が起源ではない）、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又
はR6の１つが、SHであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、S
Hであり、かつ第二のR基がOHであり（同一炭素が起源ではない）、残りはHである。
さらに好ましい実施態様において：式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、Fであ
り、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、Clであり、残りはHであ
る。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、Fであり、かつ第二のR基がOHであり（同
一炭素が起源ではない）、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、C
lであり、かつ第二のR基がOHであり（同一炭素が起源ではない）、残りはHである。式中R
1、R2、R3、R4、R5、又はR6の１つが、アルキルであり、かつ残りはHである；該アルキル
基は、４炭素以下を含み、かつ３炭素以下の直線的長さを有するであろう。式中R1、R2、
R3、R4、R5、又はR6の１つが、アルキルであり、かつ第二のR基がOHであり（同一炭素が
起源ではない）、残りはHである；かつ該アルキル基は、４炭素以下を含み、かつ３炭素
以下の直線的長さを有するであろう。
さらに、本発明の態様は、下記式の開始単位を供給することを含む。
R1、及びR2は、同一、又は異なっていてもよく、かつ独立してF、Cl、OH、SH、H、CN、
OR7、C（O）R7、又はHNR7であってもよく、式中R7が、C1-C4 アルキルであり、また、R1
とR2は、ケトン、スピロシクロプロピル基、又は-OCH2-、-CH2O-、-SCH2-、又は-CH2S-を
形成するようにまとめられていてもよく；さらに、該環上の一つの炭素からのR基両方がO
Hでない場合、R3とR4は同一、又は異なっていてもよく、かつ独立してF、Cl、Br、OR7、H
、又はCNであってもよい。
好ましい実施態様において:式中R1、R2、R3、又はR4の１つが、Fであり、残りはHであ
る。式中R1、R2、R3、又はR4の１つが、Clであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、又
はR4の１つが、Fであり、かつ第二のR基はOHであり（同一炭素が起源ではない）、残りは
Hである。式中R1、R2、R3、又はR4の１つが、Clであり、かつ第二のR基はOHであり（同一
炭素が起源ではない）、残りはHである。式中R1、R2、R3、又はR4の１つが、SHであり、
残りはHである。式中R1、R2、R3、又はR4の１つが、アルキルであり、かつ残りはHである
；該アルキル基は、４炭素以下を含み、かつ３炭素以下の直線的長さを有するであろう。
式中R1、R2、R3、又はR4の１つが、アルキルであり、かつ第二のR基はOHであり（同一炭
素が起源ではない）、残りはHである；かつ該アルキル基は、４炭素以下を含み、かつ３
炭素以下の直線的長さを有するであろう。式中R1、R2、R3、又はR4の２つが、Fであり、
残りはHである。
さらに、本発明の態様は、下記式の開始単位を供給することを含む。
式中X = 結合、又はCH2であり；かつR1、R2、R3、R4、又はR5は、同一、又は異なって
いてもよく、かつ独立してCl、F、OH、SH、H、アルキル、CN、Br、R7、OR7、C（O）R7、
又はHNR7であってもよく、式中R7が、C1-C4アルキルであり、R1とR3、R2とR4は、ケトン
としてまとめられるか、又は置換、又は無置換メチレン鎖、エーテル鎖、チア鎖、又はア
ミノ鎖として結合してもよく、R1とR2、又はR3とR4は、スピロシクロプロピル基、又は-O
CH2-、-CH2O-、-SCH2-、又は-CH2S-を形成するようにまとめられていてもよく；さらに、
R1、R2、R3、R4、又はR5の２つ以下はSHであり、かつ一つの炭素に固定されている、R基
両方がOHでない場合、R5はF、CL、OR7、H、又はCNであってもよい。
好ましい実施態様において:式中R1、R2、R3、R4、又はR5は、F、及びOHの組合せであり
、R1、R2、R3、R4、又はR5の３つ以下が置換されており、かつ残りはHである。式中R1、R
2、R3、R4、又はR5は、Cl、及びOHの組合せであり、R1-5の３つ以下が置換されており、
かつ残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、又はR5は、２つの組合せであり、OHであり（
同一炭素上ではない）かつ２つは、一つの炭素上のFであり、残りはHである。式中R1、R2
、R3、R4、又はR5の２つは、Clであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、又はR5の
２つは、Clであり（同一炭素が起源ではない）、かつ第三のR基がOHであり、残りはHであ
る。式中R1、R2、R3、R4、又はR5の１つが、アルキルであり、かつ残りはHである；かつ
該アルキル基は、３炭素以下の直線的長さを有するであろう。式中R1、R2、R3、R4、又は
R5の２つが、SHであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、又はR5の１つが、NHR7で
あり、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、又はR5の１つが、SHであり、残りはHである
。
より高度に好ましい実施態様において:式中R1、R2、R3、R4、又はR5の１つが、OHであ
り、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、又はR5の１つが、Fであり、残りはHである。
式中R1、R2、R3、R4、又はR5の１つが、Clであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4
、又はR5の１つが、Fであり、かつ第二のR基はOHであり（同一炭素が起源ではない）、残
りはHである。式中R1、R2、R3、R4、又はR5の１つが、Clであり、かつ第二のR基はOHであ
り（同一炭素が起源ではない）、残りはHである。式中R1、R2、R3、R4、又はR5の１つが
、SHであり、かつ第二のR基はOHであり（同一炭素が起源ではない）、残りはHである。式
中R1、R2、R3、R4、又はR5の１つが、アルキルであり、残りはHである；かつ該アルキル
基は、４炭素以下を含み、かつ３炭素以下の直線的長さを有するであろう。式中R1、R2、
R3、R4、又はR5の１つが、アルキルであり、かつ第二のR基がOHであり（同一炭素が起源
ではない）、残りはHである；かつ該アルキル基は、４炭素以下を含み、かつ３炭素以下
の直線的長さを有するであろう。式中R1、R2、R3、R4、又はR5の２つが、Fであり、残り
はHである。式中R1、R2、R3、R4、又はR5の２つが、OHであり、残りはHである。式中R1、
R2、R3、R4、又はR5の２つが、OHであり、かつ第三のR基はFであり、残りはHである。式
中R1、R2、R3、R4、又はR5の２つが、OHであり、かつ第三のR基はClであり、残りはHであ
る。式中R1、R2、R3、R4、又はR5の２つが、Fであり、かつ第三のR基はOHであり、残りは
Hである。
さらに、本発明の態様において、下記式の開始単位を供給することを含む。
R1、R2、R3、又はR4は、同一、又は異なっていてもよく、かつ独立してCl、F、OH、SH
、H、アルキル、CN、Br、R7、OR7、C（O）R7、又はHNR7であってもよく、式中R7が、C1-C
4アルキルであり、同一炭素に固定されている２つのR基が、両方OHではない場合、R1とR2
、又はR3とR4は、ケトンを形成するようにまとめられていてもよい。
好ましい実施態様において:式中R1、R2、R3、又はR4の１つが、Fであり、残りはHであ
る。式中R1、R2、R3、又はR4の１つが、Clであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、又
はR4の１つが、Brであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、又はR4の１つが、OHであり
、残りはHである。式中R1、R2、R3、又はR4の１つが、Fであり、かつ第二のR基はOHであ
り（同一炭素が起源ではない）、残りはHである。式中R1、R2、R3、又はR4の１つが、Cl
であり、かつ第二のR基はOHであり（同一炭素が起源ではない）、残りはHである。式中R1
、R2、R3、又はR4の１つが、SHであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、又はR4の１つ
が、SHであり、かつ第二のR基はOHであり（同一炭素が起源ではない）、残りはHである。
式中R1、R2、R3、又はR4の１つが、アルキルであり、残りはHである；該アルキル基は、
４炭素以下を含み、かつ３炭素以下の直線的長さを有するであろう。式中R1、R2、R3、又
はR4の１つが、アルキルであり、かつ第二のR基はOHであり（同一炭素が起源ではない）
、残りはHである；かつ該アルキル基は、４炭素以下を含み、かつ３炭素以下の直線的長
さを有するであろう。式中R1、R2、R3、又はR4の２つが、Fであり、残りはHである。式中
R1、R2、R3、又はR4の２つが、OHであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、又はR4の２
つが、OHであり、かつ第三のR基はFであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、又はR4の
２つが、OHであり、かつ第三のR基はClであり、残りはHである。式中R1、R2、R3、又はR4
の２つが、Fであり、かつ第三のR基はOHであり、残りはHである。
好ましい実施態様において、本発明は、除去された、又は不活性化されたrapK、又はra
pK相同体を有する菌株により、FKBP-リガンド類似体に、下記化合物を効率的に取込む方
法を提供する：
2-ノルボルナンカルボン酸;
2-（cis/trans）-ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸；
3-（cis/trans）-ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸；
4-（cis/trans）-ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸；
2-（cis/trans）-メチルシクロヘキサンカルボン酸；
4-（cis/trans）-メチルシクロヘキサンカルボン酸；
3-（cis/trans）-メトキシシクロヘキサンカルボン酸；
4-（cis/trans）-メトキシシクロヘキサンカルボン酸；
4-オキソシクロヘキサンカルボン酸；
2-オキソシクロヘキサンカルボン酸エチル；
4-trans-n-ペンチルシクロヘキサンカルボン酸；
2-trans-アミノシクロヘキサンカルボン酸；
4-cis-アミノシクロヘキサンカルボン酸；
4-（cis/trans）-アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸；
シクロペンタンカルボン酸；
シクロブタンカルボン酸；
1-メチルシクロヘキサンカルボン酸；
3-trans-ヒドロキシ-4-cis-フルオロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-trans-ヒドロキ
シ-3-cis-フルオロシクロヘキサンカルボン酸；
3-cis-ヒドロキシ-4-trans-フルオロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-cis-ヒドロキシ-
3-trans-フルオロシクロヘキサンカルボン酸；
3-cis-ヒドロキシ-4-trans-クロロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-cis-ヒドロキシ-3-
trans-クロロシクロヘキサンカルボン酸；
3-trans-ヒドロキシ-4-cis-クロロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-trans-ヒドロキシ-
3-cis-クロロシクロヘキサンカルボン酸；
3-trans-シクロヘキセンオキシドカルボン酸；
3-cis-シクロヘキセンオキシドカルボン酸；
3,4-cis-ジヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、及び3,4-trans-ジヒドロキシシクロヘ
キサンカルボン酸；
シクロヘキサン酢酸；
シクロヘキサンプロピオン酸、又は4-cis/trans-tert-ブチルシクロヘキサンカルボン酸
、又はそれらの単純エステル、又は塩。
さらに好ましい実施態様において、本発明は、除去された、又は不活性化されたrapK、
又はrapK相同体を有する菌株により、FKBP-リガンド類似体に、下記化合物を効率的に取
込む方法を提供する：
3-（cis/trans）-ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸；
4-（cis/trans）-ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸；
3-（cis/trans）-メトキシシクロヘキサンカルボン酸；
4-（cis/trans）-メトキシシクロヘキサンカルボン酸；
4-オキソシクロヘキサンカルボン酸；
シクロブタンカルボン酸；
3-trans-ヒドロキシ-4-cis-フルオロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-trans-ヒドロキ
シ-3-cis-フルオロシクロヘキサンカルボン酸；
3-cis-ヒドロキシ-4-trans-フルオロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-cis-ヒドロキシ-
3-trans-フルオロシクロヘキサンカルボン酸；
3-cis-ヒドロキシ-4-trans-クロロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-cis-ヒドロキシ-3-
trans-クロロシクロヘキサンカルボン酸；
3-trans-ヒドロキシ-4-cis-クロロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-trans-ヒドロキシ-
3-cis-クロロシクロヘキサンカルボン酸；
3-trans-シクロヘキセンオキシドカルボン酸；
3-cis-シクロヘキセンオキシドカルボン酸；
3,4-cis-ジヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、及び3,4-trans-ジヒドロキシシクロヘ
キサンカルボン酸；
シクロヘキサンプロピオン酸；
4-cis/trans-tert-ブチルシクロヘキサンカルボン酸、又はそれらの単純エステル、又は
塩。
本発明の特定の実施態様において、供給される開始単位は、下記化合物ではない：
シクロヘキサンカルボン酸、
3-cis,4-trans-ジヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、
1-シクロヘキセンカルボン酸、
3-シクロヘキセンカルボン酸、
シクロヘプタンカルボン酸、
3-（cis/trans）-メチルシクロヘキサンカルボン酸、
4-（cis/trans）-メチルシクロヘキサンカルボン酸、
1-シクロヘプテンカルボン酸、又は
5-cis-ヒドロキシル-3-シクロヘキセンカルボン酸。
上述した実施態様に使用される菌株は、下記菌株から選択される：
ストレプトマイセス ハイグロスコピカスsubsp.ハイグロスコピカスNRRL 5491、アクチノ
プラネスsp. N902-109 FERM BP-3832、ストレプトマイセスsp. AA6554、ストレプトマイ
セス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカス MA 6475 ATCC 14891、ストレプトマ
イセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカス MA 6678 ATCC 55087、ストレプト
マイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカス MA 6674、ストレプトマイセス
ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカス ATCC 55276、ストレプトマイセス ハイグ
ロスコピカスsubsp.アスコマイセティカス ATCC 14891、ストレプトマイセス ツクバエン
シス No.9993 FERM BP-927、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスsubsp.ヤクシマエ
ンシス、ストレプトマイセスsp. DSM 4137、ストレプトマイセスsp. DSM 7348、ミクロモ
ノスポラn.sp. A92-306401 DSM 8429、ストレプトマイセスsp. MA 6858 ATCC 55098、ス
トレプトマイセスsp. MA 6848。
好ましい実施態様において、前記菌株は、下記菌株からなる群から選択される：
ストレプトマイセス ハイグロスコピカスsubsp.ハイグロスコピカスNRRL 5491、アクチノ
プラネスsp. N902-109 FERM BP-3832、ストレプトマイセスsp. AA6554、ストレプトマイ
セス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカス MA 6475 ATCC 14891、ストレプトマ
イセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスMA 6678 ATCC 55087、ストレプト
マイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスMA 6674、ストレプトマイセス
ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスATCC 55276、ストレプトマイセス ハイグ
ロスコピカスsubsp.アスコマイセティカスATCC 14891、ストレプトマイセス ツクバエン
シスNo.9993 FERM BP-927、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスsubsp.ヤクシマエン
シス、ストレプトマイセスsp. DSM 4137、ストレプトマイセスsp. DSM 7348、ミクロモノ
スポラn.sp. A92-306401 DSM 8429、又はストレプトマイセスsp. MA 6858 ATCC 55098。
さらに高度に好ましい実施態様において、該菌株は、ラパマイシン産生株S.ハイグロス
コピカスsubsp.ハイグロスコピカスである。
上述した、供給されたカルボン酸の効率的な取込み方法において、該生産される化合物
は、本明細書中で記載したような、該FKBP-リガンド類似体であり、例えば、制限はない
が：ラパマイシン、FK506、FK520、FK523、FK525、アンタスコマイシン、メリダマイシン
、及びツクバマイシンがある。好ましい実施態様において、該生産される化合物は、ラパ
マイシン、FK506、又はFK520の類似体である。さらに高度に好ましい実施態様において、
該生産される化合物は、ラパマイシン類似体であり；これらの化合物は、下記式II、又は
式IIIに対応する。
さらに、上述した該方法を用いて、下記式Iに対応する新規FK506、及びFK520の類似体
を生成することができる。
R8 = H、OH、R9 = H、OH、ハロ、チオール、アルキル。
R2 = H、アルキル、ハロ、ヒドロキシル、チオール、R3 = H、アルキル、ハロ、ヒドロ
キシル、チオール、R4 = H、アルキル、ハロ、ヒドロキシル、チオール、R5 = OMe、Me、
又はH、R6 = OMe、Me、又はH、R7 = CH2CH3、又はCH2CH=CH2、Z = ケト、又はCH2、X = X
’= 結合；X=結合、及びX’= CH2、S、O、又はシクロプロピル単位を融合したX = CH2、S
、O、及びX’= 結合である。
好ましい実施態様において、
式中R8 = OH、及びR9= H、OH、ハロ、アルキル、又はチオールである。
さらに好ましい実施態様において
式中R8 = OH、及びR9= ハロである。
式中R8 = 4-trans-OH、R9 = 3-cis-OCH3、及びR2 = R3 = R4 = H、X = CH2、X’= 結合
、Z = ケト、R5 = R6 = OCH3、及びR7 = CH2CH3である。
式中R8 = 4-trans-OH、R9 = 3-cis-OCH3、及びR2 = R3 = R4 = H、X = CH2、X’= 結合
、Z = ケト、R5 = R6 = OCH3、及びR7 = CH2CH=CH2である。
従って、例えば、該組換え型菌株S.ハイグロスコピカスMG2-10を、シクロヘキサンカル
ボン酸の存在下で培養し、9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-デスメトキ
シ-ラパマイシンを生産することができる（実施例１２）。制限はないが、FK506、FK520
、FK523、FK525、メリダマイシン、ツクバマイシン、アンタスコマイシン、及び’hyg’
を含む、FKBP-リガンドをコードする、他の生合成クラスター内のrapK相同体を、新規類
似体の生産へと導く開始単位カルボン酸の効率的供給を可能にするように、除去し、又は
不活性化することができると、当業者は見ることができる。
他の態様において、本発明のS.ハイグロスコピカス菌株（rapL、又はrapL相同体を含む
、又はrapL、又はrapL相同体を含まない、及び／又はrapK、又はrapK相同体を含む、又は
rapK、又はrapK相同体を含まない。）に、上述した天然4,5-ジヒドロキシシクロヘキサ-1
-エンカルボン酸開始単位類似体と組合せて、上述したL-ピペコリン酸類似体を供給し、
該開始単位とピペコリル残基との両方が置換されているラパマイシン類似体を生産するこ
とができる。このアプローチは、実施例１０、１１、及び１２に例示されている。
本発明は、ポスト-PKS修飾の範囲内で変化している、及び／又はピペコリン酸残基が置
換されており、かつ任意の開始剤4,5-ジヒドロキシシクロヘキサ-1-エンカルボン酸残基
が置換されている、FKBP-リガンド類似体の生産方法を提供し、この方法は、該ラパマイ
シン ポリケチド／NRPS鋳型の生合成に要求される該前駆体化合物、L-ピペコリン酸、及
び／又は4,5-ジヒドロキシシクロヘキサ-1-エンカルボン酸の産生、及び／又はその後の
ポスト-PKS修飾を伴う、微生物宿主細胞内の一以上の遺伝子を除去、又は不活性化する工
程を含み、それによって、該天然産物の生産を抑制する。さらに、該方法は、ポリケチド
産生を復元するように、ポリケチド-修飾遺伝子をコードする核酸を有する該微生物宿主
細胞を形質転換し、該形質転換された宿主細胞をポリケチド産生に適した条件下で培養し
、かつ産生された該ラパマイシン類似体を任意に単離することを含む。
本発明は、制限はないが、ポスト-PKS修飾の範囲内で変化する、FK506、FK520、FK523
、FK525、ツクバマイシン、アンタスコマイシン、メリダマイシン、及び’hyg’を含み、
及び／又は該アミノ酸残基が置換されており、かつ任意の開始単位が置換されている、FK
BP-リガンド類似体の生産方法を提供する。この方法は、該ポリケチド/NRPS鋳型の生合成
に要求される、該前駆体アミノ酸残基、及び／又は開始単位の産生、及び／又はその後の
ポスト-PKS修飾を伴う、微生物宿主細胞内の一以上の遺伝子を除去、又は不活性化する工
程を含み、それによって、該天然産物の生産を抑制する。さらに、該方法は、ポリケチド
産生を復元するように、ポリケチド-修飾遺伝子をコードする核酸を有する該微生物宿主
細胞を形質転換し、該形質転換された宿主細胞をポリケチド産生に適した条件下で培養し
、かつ産生されたポリケチド類似体を任意に単離することを含む。
本発明は、新規FKBP-リガンド類似体を提供する。
さらに一態様において、本発明は、下記のFK520類似体を提供する：
31-デスメトキシ-FK520、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-FK520、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-FK520、
31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-FK520、
31-O-デスメチル-FK520、
31-デスメトキシ-31-メチル-FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-FK520、
31-デスメトキシ-31-フルオロ-FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-FK520、
31-デスメトキシ-31-クロロ-FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-FK520、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-FK520、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-F
K520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-メチル-FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-フルオロ-FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-クロロ-FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-FK520、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-FK520、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-FK520、
30-デスメトキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-メチル-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-フルオロ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-クロロ-プロリル-FK520、
30-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-プロリル-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-F
K520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK52
0、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-プロリル-FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-プロリル-FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK52
0、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK
520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-3
-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プ
ロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロ
リル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-
プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK5
20、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-3-ヒドロキシ-プロリル-
FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK52
0、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK
520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-4
-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プ
ロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロ
リル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-
プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK5
20、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-4-ヒドロキシ-プロリル-
FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
31-デスメトキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK
520、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK52
0、
31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]
FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-O-デスメチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-デスメトキシ-31-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-デスメトキシ-31-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-デスメトキシ-31-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-t
rans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシク
ロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[
3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシ
クロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK5
20、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]F
K520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK5
20、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0
.]FK520、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520。
好ましい実施態様において、本発明は、下記のFK520類似体を提供する：
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-FK520、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-FK520、
31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-FK520、
31-デスメトキシ-31-メチル-FK520、
31-デスメトキシ-31-フルオロ-FK520、
31-デスメトキシ-31-クロロ-FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-FK520、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-FK520、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-F
K520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-メチル-FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-フルオロ-FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-クロロ-FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-FK520、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-FK520、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-FK520、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-メチル-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-フルオロ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-クロロ-プロリル-FK520、
30-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-プロリル-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-F
K520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK52
0、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-プロリル-FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-プロリル-FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK52
0、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK
520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-3
-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プ
ロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロ
リル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-
プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK5
20、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-3-ヒドロキシ-プロリル-
FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK52
0、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK
520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-4
-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プ
ロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロ
リル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-
プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK5
20、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-4-ヒドロキシ-プロリル-
FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
31-デスメトキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK
520、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK52
0、
31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]
FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-O-デスメチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-デスメトキシ-31-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-デスメトキシ-31-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-デスメトキシ-31-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-t
rans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシク
ロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[
3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシ
クロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK5
20、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]F
K520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK5
20、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0
.]FK520、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520。
さらに高度に好ましい実施態様において、本発明は、下記の新規FK520類似体を提供す
る：
31-デスメトキシ-31-メチル-FK520、
31-デスメトキシ-31-フルオロ-FK520、
31-デスメトキシ-31-クロロ-FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-FK520、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-FK520、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-F
K520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-メチル-FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-フルオロ-FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-クロロ-FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-FK520、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-FK520、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-FK520、
30-デスメトキシ-30-メチル-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-フルオロ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-クロロ-プロリル-FK520、
30-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-プロリル-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-F
K520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK52
0、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-プロリル-FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-プロリル-FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK52
0、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK
520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-3
-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プ
ロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロ
リル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-
プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK5
20、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-3-ヒドロキシ-プロリル-
FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK52
0、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK
520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-デスメトキシ-30-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-4
-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プ
ロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロ
リル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-
プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK5
20、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-4-ヒドロキシ-プロリル-
FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
31-デスメトキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK
520、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK52
0、
31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]
FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-O-デスメチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-デスメトキシ-31-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-デスメトキシ-31-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-デスメトキシ-31-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-t
rans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシク
ロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[
3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシ
クロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK5
20、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]F
K520、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK5
20、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0
.]FK520、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520。
さらに態様において、本発明は、下記の新規FK506類似体を提供する：
31-デスメトキシ-FK506、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-FK506、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-FK506、
31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-FK506、
31-O-デスメチル-FK506、
31-デスメトキシ-31-メチル-FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-FK506、
31-デスメトキシ-31-フルオロ-FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-FK506、
31-デスメトキシ-31-クロロ-FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-FK506、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-FK506、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-F
K506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-メチル-FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-フルオロ-FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-クロロ-FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-FK506、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-FK506、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-FK506、
30-デスメトキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-メチル-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-フルオロ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-クロロ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-プロリル-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-F
K506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK50
6、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-プロリル-FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-プロリル-FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK50
6、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK
506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-3
-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プ
ロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロ
リル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-
プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK5
06、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-3-ヒドロキシ-プロリル-
FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK50
6、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK
506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-4
-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プ
ロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロ
リル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-
プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK5
06、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-4-ヒドロキシ-プロリル-
FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
31-デスメトキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK
506、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK50
6、
31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]
FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-O-デスメチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-デスメトキシ-31-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-デスメトキシ-31-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-デスメトキシ-31-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-t
rans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシク
ロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[
3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシ
クロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK5
06、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]F
K506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK5
06、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0
.]FK506、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506。
好ましい実施態様において、本発明は、下記のFK506類似体を提供する：
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-FK506、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-FK506、
31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-FK506、
31-デスメトキシ-31-メチル-FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-FK506、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-FK506、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-F
K506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-メチル-FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-FK506、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-FK506、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-FK506、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-メチル-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-プロリル-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-F
K506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK50
6、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-プロリル-FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-プロリル-FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK50
6、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK
506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-3
-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プ
ロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロ
リル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-
プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK5
06、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-3-ヒドロキシ-プロリル-
FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK50
6、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK
506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-4
-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プ
ロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロ
リル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-
プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK5
06、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-4-ヒドロキシ-プロリル-
FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
31-デスメトキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK
506、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK50
6、
31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]
FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-O-デスメチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-デスメトキシ-31-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-デスメトキシ-31-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-デスメトキシ-31-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-t
rans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシク
ロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[
3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシ
クロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK5
06、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]F
K506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK5
06、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0
.]FK506、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506。
さらに高度に好ましい実施態様において、本発明は、下記のFK506類似体を提供する：
31-デスメトキシ-31-メチル-FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-FK506、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-FK506、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-F
K506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-メチル-FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-FK506、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-FK506、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-FK506、
30-デスメトキシ-30-メチル-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-プロリル-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-F
K506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-プロリル-FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-プロリル-FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK50
6、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK
506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-3
-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プ
ロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロ
リル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-
プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK5
06、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-3-ヒドロキシ-プロリル-
FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK50
6、
30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK
506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-デスメトキシ-30-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-4
-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プ
ロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロ
リル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-
プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK5
06、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506
、
8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-4-ヒドロキシ-プロリル-
FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
31-デスメトキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK
506、
31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK50
6、
31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]
FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-O-デスメチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-デスメトキシ-31-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-デスメトキシ-31-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-デスメトキシ-31-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-t
rans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシク
ロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[
3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシ
クロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK5
06、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]F
K506、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK5
06、
9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0
.]FK506、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シク
ロヘプチル）-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノル
ボルニル）-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506。
さらに態様において、本発明は、下記化合物を提供する：
A:下記式の化合物：
式中:x = 結合、又はCHR11であるか、又はCHR6-x-CHR5が
であり、
R1 = OH、OCH3、R2 = H、OH、OCH3、R3 = H、OH、CH3、F、Cl、OCH3、R4 = H、OH、CH3
、F、Cl、R5 = H、OH、R6 = H、OH、R7 = H、R8 = H、ケト、R9 = H、ケト、R10 = H、R1
1 = H、R13 = H、R14 = H、R16 = OH、OCH3、R17 = H、OH、Cl、F、及びy = 結合、CH2で
あるが、但し、前記化合物は、下記のものを含まない：
i） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = H、R15 = C、R16 = cis-3-OH、R17 = trans-4-OH、R
5 = H、R6 = H、R7 = H、R8 = H、R9 = H、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ；
ii） 式中、R1 = OHの場合、R2 = OCH3、R15 = C、R16 = cis-3-OH、R17 = trans-4-OH
、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ；
iii） 式中、R1 = OHの場合、R2 = OH、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-OH
、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 =ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ；
iv） 式中、R1 = OH の場合、R2 = H、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-OH
、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ；
v） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = H、R15 = C、R16 = cis-3-OH、R17 = trans-4-OH、R
5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ；
vi） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = H、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-OH
、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8 = H、R9 = H、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ
；
vii） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OH、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-
OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8 = H、R9 = H、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合
せ以外；
viii） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OCH3、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans
-4-OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8 = H、R9 = H、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組
合せ；
ix） 式中、R1 = OHの場合、R2 = OCH3、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-O
H、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ
；
x） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OH、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-OH
、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ；
xi） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = H、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-OH
、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ；
xii） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OCH3、R15 = C、R16 = cis-3-OH、R17 = trans-4-
OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ
；
xiii） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = H、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-
OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8 = H、R9 = H、R10 = H、x = 結合との組合せ；
xiv） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OCH3、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-
4-OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8 = H、R9 = H、R10 = H、x = 結合との組合せ；
xv） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OH、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-O
H、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、x = 結合との組合せ；
xvi） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = H、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-O
H、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、x = 結合との組合せ；
xvii） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OCH3、R15 = C、R16 = H、R17 = OH、R5 = H、R6
= H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ；
xviii） 式中、CHR6-x-CHR5が
、かつR11 = H、R13 = H、R14 = Hの場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R15 = C、R16 = cis-
3-OCH3、R17 = trans-4-OH、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
xix） 式中、R15 = G、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-OH、y = 結合、の場合、R1 =
OCH3、R2 = H、R5 = H、R6 = OH、R7 = H、R11 = H、x = 結合、R8，R9 = ケト、R10 =
Hとの組合せ；
xx） 式中、R15 = G、R3 = H、R4 = trans-OH、y = 結合の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3
、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
xxi） 式中、R15 = G、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R5 =
H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
xxii） 式中、R15 = G、R3 = cis-OH、R4 = H、y = 結合の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3
、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
xxiii） 式中、R15 = G、R3 = CH3、R4 = OH、y = 結合の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3
、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
xxiv） 式中、R15 = G、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OH、R2 = OH、R5 = H
、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8 = R9 = H、R10 = Hとの組合せ；
xxv） 式中、R15 = G、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R5 =
H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8 = R9 = H、R10 = Hとの組合せ；
xxvi） 式中、R15 = G、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OH、R2 = OCH3、R5 =
H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8 = R9 = H、R10 = Hとの組合せ；
xxvii） 式中、R15 = G、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OH、R2 = H、R5 = H
、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8 = R9 = H、R10 = Hとの組合せ；
xxviii） 式中、R15 = G、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OH、R2 = OCH3、R5
= H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
xxix） 式中、R15 = G、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OCH3、R2 = H、R5 = H
、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ。
B.下記式の化合物：
式中：R1 = OH、OCH3、R2 = H、OH、OCH3、R3 = H、OH、CH3、OCH3、R4 = H、OH、R5 =
H、R6 = H、OH、R7 = H、R8 = H、ケト、R9 = H、ケト、R10 = H、x = 結合、CH2、又は
CHR6-x-CHR5が
であり、R11 = H、R13 = H、R14 = H、y = 結合、CH2；
但し、前記化合物は、下記のものを含まない：
i） 式中、R3 = H、R4 = trans-OH、y = 結合の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R5 = H、
R6 = H、R7 = H、x = CH2、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
ii） 式中、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R5 = H、R6 = H
、R7 = H、x = CH2、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
iii） 式中、R3 = cis-OH、R4 = H、y = 結合の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R5 = H、
R6 = H、R7 = H、x = CH2、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
iv） 式中、R3 = CH3、R4 = OH、y = 結合の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R5 = H、R6
= H、R7 = H、x = CH2、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
v） 式中、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OH、R2 = OH、R5 = H、R6 = H、R7
= H、x = CH2、R8 = R9 = H、R10 = Hとの組合せ；
vi） 式中、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R5 = H、R6 = H
、R7 = H、x = CH2、R8 = R9 = H、R10 = Hとの組合せ；
vii） 式中、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OH、R2 = OCH3、R5 = H、R6 = H
、R7 = H、x = CH2、R8 = R9 = H、R10 = Hとの組合せ；
viii） 式中、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OH、R2 = H、R5 = H、R6 = H、R
7 = H、x = CH2、R8 = R9 = H、R10 = Hとの組合せ；
ix） 式中、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OH、R2 = OCH3、R5 = H、R6 = H、
R7 = H、x = CH2、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
x） 式中、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OCH3、R2 = H、R5 = H、R6 = H、R7
= H、x = CH2、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
xi） 式中、R3 = OCH3、R4 = OH、y = 結合の場合、R1 = OCH3、R2 = H、R5 = H、R6 =
OH、R7 = H、x = 結合、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
xii） 式中、CHR6-x-CHR5が
、かつR11 = H、R13 = H、R14 = Hの場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R3 = OCH3、R4 = OH
、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
xiii） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = H、R3 = OCH3、R4 = OH、R5 = H、R6 = H、R7 =
H、R8 = H、R9 = H、R10 = H、x = 結合、y = 結合との組合せ；
xiv） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OCH3、R3 = OCH3、R4 = OH、R5 = H、R6 = H、R7
= H、R8 = H、R9 = H、R10 = H、x = 結合、y = 結合との組合せ；
xv） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OH、R3 = OCH3、R4 = OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H
、R8，R9 = ケト、R10 = H、x = 結合、y = 結合との組合せ；
xvi） 式中、R1 = OCH3の場合、R2 = H、R3 = OCH3、R4 = OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H
、R8，R9 = ケト、R10 = H、x = 結合、y = 結合との組合せ；
xvii） 式中、R1 = OCH3、R2 = H、R3 = OH、R4 = OH、R8 = H、R9 = H；
xviii） 式中、R1 = OCH3、R2 = H、R3 = OCH3、R4 = OH、R8 = H、R9 = H；
xix） 式中、R1 = OCH3、R2 = H、R3 = OH、R4 = OH、R8，R9 = ケト；
xx） 式中、R1 = OH、R2 = OH、R3 = OCH3、R4 = OH、R8，R9 = ケト；
xxi） 式中、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R3 = OH、R4 = OH、R8，R9 = ケト；
xxii） 式中、R1 = OCH3、R2 = OH、R3 = OCH3、R4 = OH、R8，R9 = ケト；
xxiii） 式中、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R3 = OCH3、R4 = OH、R8 = H、R9 = H。
C.下記化合物からなる群から選択される化合物：
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシン（前駆ラ
パマイシン）、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-ラパマイシン、
16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
9-デオキソ-27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-ラパマイシン、
27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-ラパマイシン、
9-デオキソ-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン
（前駆プロリルラパマイシン）、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン
、
15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-26-デスメトキシ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-26-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
15-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
26-デスメトキシ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
26-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-26-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
15-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
9-デオキソ-27-デスメトキシ-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
9-デオキソ-27-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
16-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
27-デスメトキシ-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
27-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
9-デオキソ-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン
、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン
、
15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-26-デスメトキシ-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-15-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-26-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
15-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
26-デスメトキシ-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
26-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
8-デオキソ-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（ヒドロキシシクロヘキセニル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（ジヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（ヒドロキシノルボルニル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（3-メチル-4-ヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（4-メチルヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（3-フルオロ-4-ヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（3-ヒドロキシ-4-フルオロシクロヘキシル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（3-クロロ-4-ヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（3-ヒドロキシ-4-クロロシクロヘキシル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（3-cis-4-cis-ジヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（3-trans-4-trans-ジヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシ
ン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-O-デスメチルラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（ヒドロキシシクロヘキセニル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（ヒドロキシノルボルニル）ラパマイシン、
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
キシシクロヘキシル）-36-（4-メチルヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン。
特定の実施態様において、本発明は、下記化合物を提供し、かつ任意に単離する方法を
記載する（図10、図11、図12、図13、及び図14、15、16、及び図17）：
さらに一態様において、本発明は、下記の新規ラパマイシン類似体を提供する：
さらに一態様において、本発明は、下記式IIの新規ラパマイシン類似体を提供する：
式中：x = 結合、又はCHR11であるか、又はCHR6-x-CHR5- が
であり、y = 結合、又はCHR12、R1 = OH、OCH3、R2 = H、OH、OCH3、R3 = H、OH、OCH3、
アルキル-、ハロ-、アミノ-、チオール-残基、R4 = H、OH、OCH3、アルキル-、ハロ-、ア
ミノ-、チオール-残基、R5 = H、アルキル-、ハロ-、ヒドロキシ-残基、R6 = H、アルキ
ル-、ハロ-、ヒドロキシ-残基、R7 = H、アルキル-、ハロ-、ヒドロキシ-残基、R8，R9 =
〓O、又はH，H、R10 = H、アルキル-、ハロ-、ヒドロキシ-残基、R11 = H、アルキル-、
ハロ-、ヒドロキシ-残基、R12 = H、アルキル-、ハロ-、ヒドロキシ-残基、R13 = H、ア
ルキル-、ハロ-、ヒドロキシ-残基、R14 = H、アルキル-、ハロ-、ヒドロキシ-残基であ
る。
さらに、また、本発明は下記式IIIの新規ラパマイシン類似体を提供する：
式中：x = 結合、又はCHR11であるか、又はCHR6-x-CHR5-が
であり、R1 = OH、OCH3、R2 = H、OH、OCH3、R5 = H、アルキル-、ハロ-、ヒドロキシ-残
基、R6 = H、アルキル-、ハロ-、ヒドロキシ-残基、R7 = H、アルキル-、ハロ-、ヒドロ
キシ-残基、R8，R9 = 〓O、又はH，H、R10 = H、アルキル-、ハロ-、ヒドロキシ-残基、R
11 = H、アルキル-、ハロ-、ヒドロキシ-残基、R12 = H、アルキル-、ハロ-、ヒドロキシ
-残基、R13 = H、アルキル-、ハロ-、ヒドロキシ-残基、R14 = H、アルキル-、ハロ-、ヒ
ドロキシ-残基、
R16 = OH、R17 = H、OH、ハロ-、チオール-、アルキル-である。
該新規ラパマイシン類似体は、直接的に、かつさらに半合成の、又は生物変換の鋳型と
して有用であり、免疫抑制剤、抗真菌剤、抗癌剤、神経再生剤、又は乾癬、関節リウマチ
、線維症、及び他の過剰増殖性疾患の治療用薬剤として有用である化合物を生成する。
従って、さらに一態様において、本発明は、癌治療用、真菌感染症治療用、自己免疫性
、炎症性、増殖性、及び過剰増殖性疾患治療用、又は免疫抑制維持用の薬剤製造において
、生成したFKBP-リガンド類似体の使用を提供する。
当業者は、慣例の実験により、及び例えば、制限は無いが、実施例１９に記載した方法
を用いて、真菌増殖を抑制するような（例えば、Baker, H.らの論文（1978）：酵母用培
養液希釈抗真菌試験のNCCLS参照方法：認定規格M27-A、17（9）（1997））、これらの化
合物の能力を測定することができるであろう。さらに、当業者は、慣例の実験により、例
えば制限は無いが、実施例１９に記載の方法を用いて、腫瘍細胞増殖を抑制するような、
これらの化合物の能力を測定することができるであろう（Dudkin, L.らの論文（2001）；
Yuらの論文（2001））。さらに一態様において、本発明の化合物は、免疫抑制の誘導に有
用であり、かつ従って器官、又は組織移植の拒絶反応の治療、又は予防のため、自己免疫
性、炎症性、増殖性、及び過剰増殖性疾患（包括的な制限はないが、例えば、自己免疫疾
患、一型糖尿病、器官、又は組織移植の急性、又は慢性の拒絶反応、喘息、腫瘍、又は過
剰増殖障害、乾癬、湿疹、関節リウマチ、線維症、アレルギー、及び食物に関連したアレ
ルギーがある。）の治療のため、人の、又は動物の免疫システムの抑制を、治療的に、又
は予防的に誘導する方法に関する。このようなアッセイは、当業者にとって周知のもので
あり、制限は無いが、例えば：免疫抑制活性-Warner L.M.らの論文（1992）、Kahanらの
論文（1991）、及びKahan、及びCamardoの論文（2001）；同種移植-Fishbein T.M.らの論
文（2002）、Kirchnerらの論文（2000）；自己免疫性/炎症性/喘息-Carlson R.P.らの論
文（1993）、Powell N.らの論文（2001）；一型糖尿病-Rabinovitch A.らの論文（2002）
；乾癬-Reitamo S.らの論文（2001）；関節リウマチ-Foey A.らの論文（2002）；線維症-
Zhu J.らの論文（1999）、Jain S.らの論文（2001）、Gregoryらの論文（1993）がある。
免疫抑制を誘導する本発明の化合物の能力を、この目的に用いられる標準試験、例えば
、制限は無いが、実施例１９に記載の方法を用いて、明らかにすることができる。さらに
一態様において、本発明の化合物は、抗線維性、神経再生、及び抗血管形成の機序に関し
て有用であり、当業者は、慣例の実験により、血管形成を防ぐようなこれらの化合物の能
力を測定することができるであろう（例えば、Guba M.らの論文（2002））。当業者は、
慣例の実験により、ステント内で、これらの化合物の有用性を測定することができるであ
ろう（例えば、Morice M.C.らの論文（2002））。さらに、当業者は、慣例の実験により
、これらの化合物の神経再生能力を測定することができるであろう（例えば、Myckatyn T
.M.らの論文（2002）、Steinerらの論文（1997））。
（材料、及び方法）
（材料）
分子生物学的酵素、及び試薬のすべては、商業的な提供先のものである。D/Lピペコリ
ン酸は、シグマ（Sigma）から得た。
（開始単位）
表４は、実験の項に記述した供給実験に使用した酸の提供先を示す。購入したこれらの
化合物にとって、該提供先の詳細を示す。会社内で合成した開始酸の簡単な合成方法を示
す。当業者は、記述した方法の変化は、慣例であり、かつ本発明の範囲内にあることを理
解するであろう。
3-cis,4-trans-ジヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸の合成
ラセミ体3-cis,4-trans-ジヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸を、商業的に入手可能
なラセミ体3-シクロヘキセンカルボン酸から容易に得ることができた。この酸を、メタ-
クロロ過安息香酸で処理することによりエポキシ化し、かつ塩基（トリエチルアミン）の
添加により、その場で、ラクトンへと変換し、それにより関連する立体化学配置とした。
次いで、このラクトンを、水酸化カリウム水溶液の作用により加水分解し、かつ最終生成
物をイオン交換樹脂で精製した（参照：PAS Lowdenの論文（1997）、Corey E. J.、及びH
uang H.の論文（1989））。
エポキシドＡ、及びＢを、標準的工程により合成した。シクロヘキサ-3-エンカルボン
酸を、イソブチルクロロホルメート、及びトリエチルアミンを用いて活性化した後、2-ト
リメチルシリルエタノールを用いて保護した。得られたエステルを、メタ-クロロ過安息
香酸で処理し、かつその結果得られたジアステレオマーのラセミ体混合物を、順相シリカ
で分離した。該エポキシドを、下記のように反応させるか、又はトリフルオロ酢酸の処理
により直接脱保護し、それぞれの遊離酸を遊離した。
保護されたエポキシドを、開環するように、無水HF-ピリジンで処理し、トランス配置
にＦ、及びOHを含む（先のシクロヘキセンオキシドで示したとおりの）、一対のラセミ位
置異性体を生成した。次いで、該エステルを、トリフルオロ酢酸で脱保護し、該遊離酸を
遊離した（Welch J.T.、及びSeper K.W.（1988））。
保護されたエポキシドを、開環するように、高濃度塩酸懸濁有機溶媒で処理し、トラン
ス配置に、Cl、及びOHを含む（先のシクロヘキセンオキシドで示したとおりの）、一対の
ラセミ位置異性体を生成した。次いで、該エステルをトリフルオロ酢酸で脱保護し、該遊
離酸を遊離した（参照：Chini M.、Crotti P.らの論文（1992））。
保護されたエポキシドを、共酸化剤とともに触媒量の四酸化オスミウムで処置すること
により、cis-ジヒドロキシシクロカルボン酸を生成した。次いで、該エステルをトリフル
オロ酢酸で脱保護し、該遊離酸を遊離した。
（細菌の菌株、及び増殖条件）
エシュリキア コリDH10B（GibcoBRL）を、Sambrookらの論文（1989）に記載されている
ように、2xTY培地中で増殖させ、かつMacNeilらの論文（1992）に記載されているE.コリE
T12567（pUB307）、及びPagetらの論文（1999）に記載されているE.コリET12567（pUZ800
2）を、カナマイシンを含む2xTY培地中で増殖させた。該ベクターpUC18、及びリトマス28
は、ニューイングランドバイオラボから得た。ベクターpSET152は、Biermanらの論文（19
92a）に記載されている。E.コリの形質転換体を、アンピシリン100μg/ml、又はアプラマ
イシン50μg/mlで選択した。
該ラパマイシン産生株S.ハイグロスコピカスATCC29253、及びその誘導株を、26℃で培
地１寒天プレート（下記参照）上に維持させ、かつ（Khawらの論文（1998））に記載され
ているTSBGM（グルコース1.0 ％、及びMES 100 mMを有し、pH 6.0であるトリプシン ソイ
ブロス）中で培養し、必要な場合、アプラマイシン100μg/mlを追加した。
液体培養液を、サイドバッフル三角フラスコ中、300 rpmで振盪しながら、25℃で増殖
させた。
該ストレプトマイシン耐性変異株S.ハイグロスコピカスMG1Cを、標準の手順を用いて選
択し、かつストレプトマイシン（50 mg/ml）を有する培地１上に維持させた。
（供給方法：）
全菌株の胞子ストックを、培地１上で増殖させた後に調製し、水で希釈した、グリセロ
ール20％w/v：ラクトース10％w/v中に保存し、かつ80℃で貯蔵した。栄養培養液を、250
mlフラスコ中、50 mlの培地６中に冷凍ストック100μlを接種させることにより調製した
。該培養液を、36〜48時間、28℃、250 rpmでインキュベートした。
供給手順：栄養培養液を、50 mlチューブ中、7 mlの培地7中に、0.5 ml接種した。培養
を、7日間、26℃、250 rpmで行った。該選択したカルボン酸（”非天然開始剤”、又は”
天然開始剤”）の供給／添加を、接種後24〜48時間で行い、かつ1 mM、又は3 mMを供給し
た。
（培地１：改質Ａ培地）
成分 提供先 カタログ＃ ｇ／ｌ
コーン浸透粉 シグマ Ｃ−８１６０ ２．５ ｇ
酵母エキス ディホック ０１２７−１７ ３ ｇ
炭酸カルシウム シグマ Ｃ５９２９ ３ ｇ
硫酸鉄 シグマ Ｆ８６３３ ０．３ ｇ
ＢＡＣＴＯ 寒天 ２０ ｇ
小麦デンプン シグマ Ｓ２７６０ １０ ｇ
水 １ Ｌ
次いで、該培地を１２１℃で１５分間、高圧蒸気滅菌した。
（培地２：（Boxらの論文（１９９５））
成分 ｇ／Ｌ
大豆ペプトン−ＳＬ（マルコル） １０
グルコース（シグマＧ−７０２１） ２０
パン酵母 ５
ＮａＣｌ（シグマ） ２
微量元素
ＺｎＳＯ４．７Ｈ２Ｏ ０．０５
ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ ０．１２５
ＭｎＳＯ４．４Ｈ２Ｏ ０．０１
ＦｅＳＯ４．７Ｈ２Ｏ ０．０２
ｐＨを、７．０に調節
（培地３：（Wilkinsonらの論文（２０００））
成分 ｇ／Ｌ
デキストロース（シグマ） １５
グリセロール（ＢＤＨ−メルク） １５
大豆ペプトン（マルコル−ＳＬ） １５
ＮａＣｌ（フィッシャー） ３
ＣａＣＯ ３ （シグマ） １
（培地４：（米国特許第3,993,749号）
成分 ｇ／Ｌ
大豆粉（アルカソイ５０） ３０
グルコース（シグマＧ−７０２１） ２０
硫酸アンモニウム １５
ＫＨ２ＰＯ４（シグマ） ５
微量元素
ＺｎＳＯ４．７Ｈ２Ｏ ０．０５
ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ ０．１２５
ＭｎＳＯ４．４Ｈ２Ｏ ０．０１
ＦｅＳＯ４．７Ｈ２Ｏ ０．０２
ｐＨを、６．０に調節
（培地５：（Boxらの論文（１９９５））
成分 ｇ／Ｌ
大豆粉（アルカソイ５０） ２０
グルコース（シグマＧ−７０２１） ２０
パン酵母 ６
Ｋ２ＨＰＯ４（シグマ） ２．５
ＫＨ２ＰＯ４（シグマ） ２．５
ＮａＣｌ（シグマ） ５
グリセロール（ＢＤＨ） ３０
大豆油 １０
微量元素
ＺｎＳＯ４．７Ｈ２Ｏ ０．０５
ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ ０．１２５
ＭｎＳＯ４．４Ｈ２Ｏ ０．０１
ＦｅＳＯ４．７Ｈ２Ｏ ０．０２
ｐＨを、６．４に調節
（培地６：ＲａｐＶ７種培地）
成分 １ Ｌにつき
大豆粉（滋養大豆） ５ ｇ
デキストリン（白、プロラボ） ３５ ｇ
コーン浸透固体（シグマ） ４ ｇ
グルコース １０ ｇ
（ＮＨ４）２ＳＯ４ ２ ｇ
乳酸（８０％） １．６ ｍｌ
ＣａＣＯ３（シグマ） ７ ｇ
ｐＨを、１ Ｍ ＮａＯＨで７．５に調節
（培地７：ＭＤ６培地（発酵培地））
成分 １ Ｌにつき
大豆粉（滋養大豆） ３０ ｇ
コーンスターチ（シグマ） ３０ ｇ
デキストリン（白、プロラボ） １９ ｇ
フルクトース ２０ ｇ
酵母（アリンソン） ３ ｇ
コーン浸透固体（シグマ） １ ｇ
Ｌ−リジン ２．５ ｇ
ＫＨ２ＰＯ４ ２．５ ｇ
Ｋ２ＨＰＯ４ ２．５ ｇ
（ＮＨ４）２ＳＯ４ １０ ｇ
ＮａＣｌ ５ ｇ
ＣａＣＯ３（カルテック） １０ ｇ
ＭｎＣＬ２ ｘ４Ｈ２Ｏ １０ ｍｇ
ＭｇＳＯ４ ｘ７Ｈ２Ｏ ２．５ ｍｇ
ＦｅＳＯ４ ｘ７Ｈ２Ｏ １２０ ｍｇ
ＺｎＳＯ４ ｘ７Ｈ２Ｏ ５０ ｍｇ
ＭＥＳ（２−モルホリノエタンスルホン酸−水和物） ２１．２ ｇ
ｐＨを、１Ｍ ＮａＯＨで６．０に合わせた
滅菌前に、シグマα-アミラーゼ（BAN 250）0.4 mlを、1 Lの培地に加えた。培地を、20
分間、121℃で滅菌した。
（培地８：ＭＤ３ 培地（発酵培地））
成分 １ Ｌにつき
大豆粉（滋養大豆） ３１．２５ ｇ
白デキストリン（プロラボ） １８．７５ ｇ
ＫＨ２ＰＯ４ ５ ｇ
（ＮＨ４）２ＳＯ４ １．２５ ｇ
ＭｎＣｌ２．４Ｈ２Ｏ １０ ｍｇ
ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ ２．５ ｍｇ
ＦｅＳＯ４．７Ｈ２Ｏ １２０ ｍｇ
ＺｎＳＯ４．７Ｈ２Ｏ ５０ ｍｇ
ＳＡＧ ４１７ １．２ ｍＬ
ｐＨを、ＮａＯＨで６．４に調節
Ｌ−リジン ０．６２５ ｇ
グルコース（４０％ｗ／ｖ） ５０ ｍＬ
（菌株の説明）
すべての菌株は、乳脂栄養菌体を有する野生型形態と、黒色に変わる灰色胞子を発芽さ
せ、かつ特徴的吸湿性を示す白気菌糸とに分けた。
好ましくは、本明細書中に記載した該組換え型菌株の生成に用いる胞子は、Fan 4、202
C〜Bで規定されている暗灰色であり、さらに好ましくは、Fan 4、202 Bで規定されてい
る色（英国王立園芸協会から利用可能な英国王立園芸協会カラーチャート（2001）、80ビ
ンセントスクウェア、ロンドン、SW1P 2PE）である。
（DNA操作、及び配列決定）
DNA操作、PCR、及び電気穿孔法手順を、Sambrookらの論文（1989）に記載されているよ
うに行った。サザンハイブリダイゼーションを、製造会社（ベーリンガーマンハイム）に
より記載されたようにDIG DNAラベリングキットを使用し、ジゴキシゲニンでラベルした
プローブを用いて行った。DNA配列決定を前述（Gaisserらの論文（2000））のように行っ
た。
（ストレプトマイセス ハイグロスコピカス菌株の発酵）
ストレプトマイセス ハイグロスコピカス菌株を、培地１（「物質、及び方法」を参照
）上で、冷凍保存中の冷凍胞子ストック（蒸留水中、20％ グリセロール、10％ ラクトー
スw/v）から培養し、かつ胞子を29℃で10〜20日間成長させた後に収集した。あるいは、
冷凍通常ストックからの胞子を、前培養培地中に直接接種した。第一前培養を、収集した
胞子で接種させ、かつ50 mlの培地６（「物質、及び方法」を参照）を含む、250 ml三角
フラスコ中で培養し、偏心距離5.08 cm（2インチ）、250 rpm、30℃で、２日間振盪した
。該第一前培養を用い、培地６（「物質、及び方法」を参照）の第二前培養を10％v/vで
接種させ、偏心距離2.54 cm（1インチ）、300 rpm、28℃で、さらに24時間振盪した。第
二前培養を用い、0.01％v/v SAG 417消泡剤を含む製造培地８（「物質、及び方法」を参
照）を10％v/vで接種し、かつ26℃で5〜7日間、攪拌したバイオリアクター中で発酵させ
ることができた。気流を0.75 vvmにし、全圧力を50 kPa（0.5 bar）、及び羽根車先端速
度を0.98 ms-1〜2.67 ms-1に制御した。さらにSAG 417を、要求に応じて添加した。アン
モニウム（10％v/v）、又は硫酸（1 M）を用いて、pHを6〜7に調製し、かつグルコース溶
液（40％w/v）を、アンモニウム要求の開始時に、滴下供給した。
（抽出、及び高速液体クロマトグラフィー（HPLC）分析方法（A））
遠心分離を、50 mlの該発酵液体培地に対して行い、かつ上清、及び菌糸体を下記のよ
うに、別々に分離した。該菌糸体を、H2Oで洗い、かつ4℃で16時間、50 mlのメタノール
で抽出した。該細胞片を遠心分離で除き、該メタノールを蒸留し、次いで200μlのメタノ
ールで溶解させた。該発酵液体培地の上清を、等量の酢酸エチルで2回抽出した。該有機
層を、Na2SO4で乾燥させ、蒸留し、かつ次いで200μlのメタノールで溶解させた。HPLC分
析を、可変波長検出器、又はフィニガンMAT LCQ（フィニガン、CA）装置を用い、ヒュー
レットパッカード（ブルカー、ブレーメン、RFG）HP1100液体クロマトグラフィーで行っ
た。高分解能スペクトルを、ブルカー バイオアペックスII 4.7 T フーリエ変換-イオン
サイクロトロン共鳴（FT-ICR）質量分析計（ブルカー、ブレーメン、FRG）により得た。
NMR分析のため、上述のように、細菌液体培地を遠心分離し、該上清を３等量の酢酸エ
チルで抽出し、かつ該菌糸体をメタノールで抽出した。該抽出液を混合し、乾燥（Na2SO4
）させ、かつ減圧下で蒸留し、白色固体を得た。
プロトン検出NMRスペクトル（1H、DQF-COSY、TOCSY、HMQC、HMBC、NOESY）を、27℃、5
00 MHzで作動（実施例６は除く）させた、ブルカーアドバンスDRX500分光計で記録した。
実施例６では、10℃、500 MHzで操作した、ブルカーアドバンスDRX500分光計で記録した
。化学シフトを、δスケール上、百万分率（ppm）で記述し、CHCl3のδH 7.26（1H）、及
びCHCl3のδC 77.0（13C）を参照した。J値は、ヘルツ（Hz）で示した。
（抽出、単離、及び分析手順（B））
（抽出、及び精製手順：）
該発酵液体培地を、遠心分離し、上清、及び細胞を得た。該上清を、商標Diaion HP20
樹脂（スペルコ）のカラム（16×15 cm）に流し、水、続いて75％ MeOH/H2Oで洗い、かつ
次いでMeOHで溶出した。該細胞を、等量のアセトンを用いて、均一に混合した。少なくと
も30分後、該アセトン懸濁液を、遠心分離し、かつ上清をデカントした。該沈殿物を、同
様にアセトンでさらに2回抽出した。該アセトン抽出液を、該HP20カラムからのMeOHと混
合し、かつ該溶媒を、真空中で除去し、水を含む濃縮物を得た。該水（通常1〜2 L）を、
EtOAc（3×12 L）で抽出し、かつ該溶媒を、真空中で除去し、油状粗抽出物を得た（通常
20 g）。該油状残渣を、最小量のEtOAc中に溶解させ、シリカ上で乾燥させた。該被覆シ
リカを、シリカカラム（400 g、36×6 cm）に適用し、アセトン／ヘキサン混合液を用い
、最初アセトン25％からアセトン100％に変化させ、連続的に溶出した。ラパマイシン類
似体を含む分画を、ここで記述した条件を用いて、HPLC（280 nm）により同定した。
該ラパマイシン類似体含有分画を、混合し、かつ該溶媒を真空下で除去した。さらに、
該残渣を、セファデックスLH20のクロマトグラフィーにかけ、10:10:1のクロロホルム／
ヘプタン／エタノールで溶出した。該半精製ラパマイシン類似体を、ギルソンのHPLC、21
mL/minで溶出するフェノメネックス21.2×250 mmルナ5μm C18 BDSカラム、該ラパマイ
シン類似体の極性に依存する50％〜70％ CH3CN/H2O混合液を有する定組成溶出液を用いて
、逆相（C18）高速液体クロマトグラフィーで精製した。
（培養液体培地の分析）
全液体培地（1 ml）の一定分量を、CH3CN（1 mL）で、30分間振盪した。該混合液を遠
心分離し、かつ該上清を、ダイオードアレイ検出器を有するHPLCで分析した。BDS HYPERS
IL C18 3μm 4.6×150 mmカラムを備えた、アギレントHP1100を含む、該HPLCシステムを
、40℃に加熱した。該勾配溶出は、10分で55％移動層B〜95％移動層Bにし、続いて、流速
1 mL/minで95％移動層Bを２分間、定組成に保持した。移動層Aは、酢酸アンモニウム10 m
M、及びトリフルオロ酢酸0.1％を含む、10％アセトニトリル:90％水であり、移動層Bは、
酢酸アンモニウム10 mM、及びトリフルオロ酢酸0.1％を含む、90％アセトニトリル:10％
水である。ラパマイシン類似体を、中心278 nmの特徴的なラパマイシントリエンの存在に
より同定した。FK506、及びFK520類似体を、LC-MS分析により同定した。
（LCMSによる分析）
上述した該HPLCシステムを、ブルカー ダルトニクス エスクワイヤ3000エレクトロスプ
レー質量分析計と組合せた。上述した同一のカラム、及び勾配溶出スキームを使用した。
移動層Aを水、移動層Bをアセトニトリルとした。ポシティブネガティブスイッチを、500
〜1000ダルトンの走査範囲で使用した。
（実施例１）
（S.ハイグロスコピカスの接合）
S.ハイグロスコピカス中に接合されるべきプラスミドを、MacNeilらの論文（1992）に
記載されているpUB307、又はPagetらの論文（1999）に記載されているpUZ8002を含む、da
m- dcm- ET12567 E.コリ菌株中に、電気穿孔法により形質転換した。前培養液を用い（30
℃で一晩培養）、1/25に希釈した新しい2xTY（アプラマイシン50μg/ml、及びカナマイシ
ン25μg/ml）を接種し、かつ595 nmにおける光学密度0.25〜0.6に至るまで37℃で振盪し
増殖した。この液体培地からの細胞を、2xTYで2度洗浄し、次いで原培養液25 mlにつき、
2xTY 0.5 mlを用いて、再懸濁した。使用した該胞子ストックの質は、この方法の成功に
重要である。この状況において、収集された場合、該胞子の時期、及び培地１の使用は、
高品質胞子懸濁液の単離に非常に重要である。S.ハイグロスコピカスの高品質胞子懸濁液
を単離するため、培地１寒天（「物質、及び方法」の項を参照）の前乾燥プレートに、標
準的な微生物学的技術を用いて、S.ハイグロスコピカス胞子、又は菌糸体を塗り広げ、続
いて、26〜28℃で、14〜21日間インキュベートした。胞子を、標準的技術により滅菌した
20％w/vグリセロール、又は水1〜2 mlの添加により収集した。該S.ハイグロスコピカス胞
子懸濁液200μlの一定分量を、500μlの2xTYで洗浄し、500μlの2xTYで再懸濁し、50℃で
10分間の熱ショックを与え、次いで氷上で冷やした。該E.コリ懸濁液0.5 mlの一定分量を
、該熱ショック胞子と混合し、かつこの混合液を培地１寒天プレート上で培養した。これ
らのプレートを、１プレートにつき、ナリジクス酸1 mg、及びアプラマイシン1 mgを塗る
前に、26〜28℃で16時間インキュベートした。通常、接合完了体コロニーは、3〜7日後に
現われた。
（別の組込み型ベクター（pRT801）のS.ハイグロスコピカスMG2-10における使用）
先に記載したように、また、接合を、S.ハイグロスコピカスMG2-10中に、該ΦBT1-基盤
組込み型ベクターpRT801を用いて行った。接合完了体を、アプラマイシン50μg/ml、及び
ナリジクス酸50μg/mlを含む培地１にパッチし、かつアプラマイシン耐性であることを示
した。
（実施例２）
（rapQONMLKJIの染色体除去を行った該S.ハイグロスコピカス変異株MG2-10の単離（図４
））
ラパマイシン改質遺伝子rapQ、rapO/N、rapM、rapL、rapK、rapJ、及びrapIが除去され
た該S.ハイグロスコピカス変異株（MG2-10）を、下記のように構築した。
（該ストレプトマイシン耐性変異株MG1Cの単離）
S.ハイグロスコピカスNRRL5491菌糸体を、ストレプトマイシン50 mg/mlを含む培地１の
プレート上に塗り広げた。３つのコロニーを単離し、かつMG1A、MG1B、及びMG1Cと名付け
た。S.リビダンス（S. lividans）TK24から該rpsL遺伝子を含むpSET152の誘導体であるプ
ラスミドpMG49で、実施例１のように接合した。培地１が、アプラマイシン50 mg/ml、及
びナリジクス酸50 mg/mlを含む場合、これらの接合体の各々から接合完了体を、プレート
上にパッチし、該プラスミドpMG49の存在を確認した。該最初の菌株MG1A、MG1B、及びMG1
Cとともに、抗生物質を含まない培地１のプレート、及びストレプトマイシン50 mg/mlを
含む培地１のプレート、両方の上に画線培養した。生育は、ストレプトマイシン上のMG1A
[pMG49]、MG1B[pMG49]、及びMG1C[pMG49]のストリークを除いて、すべての場合に見られ
、S.リビダンスTK24からのw.t. rpsL遺伝子は、これらの菌株に、優性のストレプトマイ
シン感受性を与えたことを示している。前駆ラパマイシンの産生を、MG1A、MG1B、及びMG
1Cにおいて測定し、かつ最良の産生株MG1Cを、さらに研究し続けた。
（S.ハイグロスコピカスMG1Cの接合）
接合を、実施例１に記載されているように、該ストレプトマイシン耐性株S.ハイグロス
コピカスMG1Cを用いて行い、かつ誘導されたベクターpMG55を構築した。
（接合性二重組換え型ベクターpMG55の構築（図３））
下記プライマーを用い、鋳型として該プラスミドpRPSL21（Shimaらの論文（1996））を
用いてS.リビダンスrpsL遺伝子を増幅した。該PCR断片を、SphI、及びHindIIIで消化し、
SphI、及びHindIIIで消化されたpSET152の3.2 kb断片を単離し、かつ連結した。E.コリDH
10B中に形質転換後、プラスミドpMG55を単離した。このプラスミドを、配列決定法により
確認した。プラスミドpMG55は、該rpsL遺伝子を含み、二重組換え体を選択できる（Hoste
d、及びBaltz（1997））：
MAG47：5’-GCAAGCTTGGTACCGACACGCTCGCCGAACAGG-3’（配列番号：29）；及び
MAG48：5’-GCGCATGCCCTAGGGTGTACATTACTTCTCC-3’（配列番号：30）。
（rapQONMLKJIの染色体除去を行うS.ハイグロスコピカス変異株MG2-10の単離（図４））
下記プライマーを用いて、S.ハイグロスコピカスNRRL5491から調整されたゲノムDNAを
、鋳型として使用し、相同関係の左側領域（Schweckeらの論文（1995））に記載されてい
るように、該ラパマイシンクラスターのnt 89298からnt 90798）を増幅した：
MAG23：5’-TATCTAGACTTCGCACGTGCCTGGGACA-3’（配列番号：31）；及び
MAG24：5’-AGAAGCTTACCCAATTCCAACATCACCT-3’（配列番号：32）。
1.5 kbのPCR産物をXbaI、及びHindIIIで消化し、かつXbaI、及びHindIIIで切ったpUC18
内に連結した。E.コリDH10B内に形質転換後、該プラスミドpMAG127-8を単離した。下記プ
ライマーを用いて、S.ハイグロスコピカスNRRL5491から調整されたゲノムDNAを、鋳型と
して使用し、相同関係の左側領域（Schweckeらの論文（1995））に記載されているように
、該ラパマイシンクラスターのnt 98404からnt 99904）を増幅した：
MAG25：5’-GGAAGCTTTGACCACACGCCGCCCGTTC-3’（配列番号：33）；及び
MAG26：5’-ATGCATGCCCGCCGCAACCCGCTGGCCT-3’（配列番号：34）。
1.5 kbのPCR産物をHindIII、及びSphIで消化し、かつHindIII、及びSphIで切ったpUC18
内に連結した。E.コリDH10B内に形質転換後、該プラスミドpMAG128-2を単離した（図４）
。両プラスミドを、配列分析により確認した。該プラスミドpMAG127-8をSphI、及びHindI
IIで消化し、該プラスミドpMAG128-2をXbaI、及びHindIIIで消化し、かつ該1.5 kb断片を
、両プラスミドから単離した。これらの断片を、SphI、及びXbaIで切ったpUC18内に連結
し、かつE.コリDH10Bの形質転換に使用した。該プラスミドpMAG131-1を単離した。このプ
ラスミドを、SphI、及びXbaIで消化し、該3 kb断片を単離し、かつSphI、及びAvrIIで切
ったpMG55内に連結し、そして該DNAを、E.コリDH10Bの形質転換に使用した。該プラスミ
ドpMAG144-16を単離し、かつS.ハイグロスコピカスMG1Cの接合に使用した。アプラマイシ
ン耐性S.ハイグロスコピカス コロニーを単離し、TSBGM中、26℃で24時間振盪し、生育し
、かつストレプトマイシン50μg/lを含む培地１の寒天プレート上に塗り広げた。ストレ
プトマイシン耐性コロニーを単離し、かつアプラマイシン感受性であることを示した。該
ラパマイシンクラスターのrapQONMLKJI領域の7606 nt染色体除去を、MAG23、及びMAG24の
1.5 kbのPCR産物を用いて、該変異株内に確認し、EcoRI-、及びBamHI-消化染色体DNAを探
査した。野生型S.ハイグロスコピカスの分析は、ハイブリッド形成後、予期された5.8 kb
EcoRI、及び5.9 kb BamHIバンドを示した。MG2-10の染色体DNAを同様に処理し、rapQONM
LKJIが除去されていることを示す、9.6 kb EcoRI、及び7.6 kb BamHIバンドを検出した。
（実施例３）
（rapQONMLKJIの染色体除去を行った該S.ハイグロスコピカス変異株MG2-10中のrapKの発
現）
（発現ベクターpSGset1の構築）
ベクターpCJR336（クリスティーヌ マーチン、及びコリーヌ スクワイヤーにより提供
）から誘導された該pSET152（Biermanらの論文（1992a））を、標準的な分子生物学的技
術を用いて、PvuII消化したpSET152内に、下記のプライマーダイマーをクローニングし、
そして、pSET152内の制限酵素SpeI、NdeI、及びXbaIの部位に導入することで作成した：
CR347：5’-TAAACTAGTCCATCTGAGAGTTTCATATGGCCCTATTCTGCCCAGCCGCTCTAGAAAT-3’（配列
番号：35）；及び
CR348：5’-ATTTCTAGAGCGGCTGGGCAGAATAGGGCCATATGAAACTCTCAGATGGACTAGTTTA-3’（配列
番号：36）。
該挿入部の配向を、配列決定法により確認した。プラスミドpCJR336を、該制限酵素Nde
I/SpeIを用いて消化し、かつベクターpSG142（Gaisserらの論文（2000））を、同様に消
化した。pCJR336の約5.4 kb、及びpSG142の約1.2 kbの得られたDNAバンドを単離し、続い
て連結をE.コリDH10Bを形質転換するために使用した。actII-ORF4調節領域を含むベクタ
ー構築体を単離し、かつ該制限酵素XbaIを用いて消化し、続いて標準プロトコルに従って
、アルカリホスファターゼ処理した。該単離されたDNAを、プラスミドpEXoleG2cas（制限
酵素XbaI、及びNheIで消化されたpSGcasOleG2（WO 01/79520）の約1.2 kb NdeI/BglII断
片を含む、pSG142誘導体）からの約200 bp断片と連結した。ベクターpSGset1を単離し、
かつ該挿入部の正確な配列を、制限消化、及び配列分析を用いて確認した。プラスミドpS
Gset1は、該actII-ORF4調節因子、該PactIプロモーター、及び6xHis-タグをコードする配
列、並びにラムダt0転写終結領域（プラスミドpQE-16由来）を含み、かつΦC31付着部位
に、部位特異的に組込むことができる。
（rapKのクローニング）
該遺伝子rapKを、下記プライマーを用いて、PCRにより増幅し、rapKの5’末端にNdeI部
位、及びrapKの3’端にXbaI部位を導入した：
BIOSG8：5’-GGGCATATGAGGCAATTGACTCCGCCGGTCACGGCACCGTACTGCC -3’（配列番号：37）
；及び
BIOSG9：5’-GGGGTCTAGAGGTCACGCCACCACACCCTCGATCTCGACC -3’（配列番号：38）。
プラスミドpR19（Schweckeらの論文（1995））を鋳型として使用した。標準的技術を用
いて、T4ポリヌクレオチドキナーゼで処理した後、該PCR産物を、SmaI-切断pUC18に連結
し、かつそれを用いてE.コリDH10Bを形質転換した。該単離されたプラスミドpUCrapKにお
けるrapKのDNA配列を、配列分析により確認した。公表された配列（acc. no. X86780）と
比較された該DNA配列の相違を、図27に示す。RapKで生じる変化を、図28に示す。
（pSGsetrapKの単離）
プラスミドpUCrapKを、NdeI、及びXbaIで消化し、かつ該挿入断片を単離し、かつ同様
に消化されたpSGset1内に連結した。該連結体を用いて、標準的手順を使用して、E.コリD
H10Bを形質転換し、かつ該形質転換体を分析した。プラスミドpSGsetrapKを単離し、かつ
該構築体を、制限消化、及び配列分析を使用して確認した。
（実施例４）
（9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシンの同定
（前駆ラパマイシン（図６））
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシン（前駆
ラパマイシン）を、実施例１に記載されたように、pSGsetrapKを用いて、該S.ハイグロス
コピカス菌株MG2-10に接合し、かつ発酵の時に生産された生成物を単離することにより得
た。これは、MG2-10菌株のrapKの除去を補うことが可能であり、もし、該菌株に、ピペコ
リン酸を供給した場合、ポスト-PKS改質を欠いた類似体である前駆ラパマイシンを生成す
ることを示している。
該プラスミドpSGsetrapKを、S.ハイグロスコピカスMG2-10中に接合し、かつ該菌株を、
ピペコリン酸2 mg/lが供給されたTSBGM中、25℃で振盪し、生育した。該菌糸体を、メタ
ノールで抽出し、かつ前述のように、該培養液体培地を酢酸エチルで抽出した。
280 nmのUV検出器を有するHPLCによる、該ピペコリン酸を供給したS.ハイグロスコピカ
ス変異株MG2-10[pSGsetrapK]の培養液体培地の分析は、保持時間4.0、及び5.1分の２つの
主要な新しいピークの存在を示した。これらのピークのエレクトロスプレー質量分析は、
双方ともMW841.5の化合物に対応するイオンを含むことを示した。これらのピークは、該r
apK発現プラスミドpSGsetrapKのない、該S.ハイグロスコピカスNRRL 5491菌株、又は該変
異菌株MG2-10の培養液抽出液には見られなかった。m/z 864の該イオン（前駆ラパマイシ
ンのナトリウム付加体に対応する）のMS/MS分析は、m/z 129（ピペコリン酸）の損失に対
応するm/z 735のイオン、又はm/z 308（前駆ラパマイシンのC28〜C42）の損失に対応する
m/z 556のイオンのフラグメントを示した。このイオン自身は、m/z 250（前駆ラパマイシ
ンのC14〜C27）の損失に対応するm/z 306のイオンに、さらにフラグメント化した。この
フラグメント化パターンは、ラパマイシンに見られたパターンと同じであったが、C39 O-
メチル基の損失に対応する14減少したm/z（-308）の第二損失、C27メトキシ、及びC16 O-
メチル基の損失に対応する44減少したm/z（-250）の第三損失、及びC9ケトン基の損失に
対応する14減少した質量を有する該最終イオン（306）を有していた。これは、MW 841.5
の化合物が、9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイ
シン（前駆ラパマイシン）を表していることを明らにした。
（実施例５）
（S.ハイグロスコピカスMG2-10中で発現する遺伝子カセットの調製）
様々なラパマイシン改質遺伝子の直接的発現が可能である遺伝子カセット、及び修飾遺
伝子の結合体を、下記のように構築した。
（rapN/Oのクローニング）
該隣接遺伝子rapK、及びrapO（以下rapN/Oと表す）を、下記プライマーを用いて、PCR
により増幅し、rapN/Oの5’末端にNdeI部位、及びrapN/Oの3’末端にXbaI部位を導入した
：
BIOSG2：5’-GGGCATATGTCGACGACCGATCAGGGTGAGACCGGAAAGGCCTG -3’（配列番号：39）；
及び
BIOSG3：5’-GGGGTCTAGAGGTCAGTCCTGGGGTTCGAGAAGCTCGCCGGTCTCCTT-3’（配列番号：40）
。
プラスミドpR19（Schweckeらの論文（1995））を鋳型として使用した。標準的技術を用
いて、T4ポリヌクレオチドキナーゼで処理した後、該PCR産物を、SmaI-切断pUC18に連結
し、かつそれを用いてE.コリDH10Bを形質転換した。該単離されたプラスミドpUCrapN/Oに
おけるrapN/OのDNA配列を、配列分析により確認した。公表された配列（acc. no. X86780
）と比較された該DNA配列の相違を、図21に示す。RapNで生じる変化を、図22に示す。
（rapMのクローニング）
該遺伝子rapMを、下記プライマーを用いて、PCRにより増幅し、rapMの5’末端にNdeI部
位、及びrapMの3’末端にXbaI部位を導入した：
BIOSG4：5’-GGGCATATGATCCAACCCGACGTCGTGACCGCCTTCACAGCGG -3’（配列番号：41）；及
び
BIOSG5：5’-GGGGTCTAGAGGTCACACGCGGACGGCGATCTGGTGCCGATAGG -3’（配列番号：42）。
プラスミドpR19（Schweckeらの論文、1995）を鋳型として使用した。標準的技術を用い
て、T4ポリヌクレオチドキナーゼで処理した後、該PCR産物を、SmaI-切断pUC18に連結し
、かつそれを用いてE.コリDH10Bを形質転換した。該単離されたプラスミドpUCrapMにおけ
るrapMのDNA配列を、配列分析により確認した。公表された配列（acc. no. X86780）と比
較された該DNA配列の相違を、図23に示す。RapMで生じる変化を、図24に示す。
（rapLのクローニング）
該遺伝子rapLを、下記プライマーを用いて、PCRにより増幅し、rapLの5’末端にNdeI部
位、及びrapLの3’末端にXbaI部位を導入した：
BIOSG6：5’-GGGCATATGCAGACCAAGGTTCTGTGCCAGCGTGACATCAAG -3’（配列番号：43）；及
び
BIOSG7：5’-GGGGTCTAGAGGTCACTACAGCGAGTACGGATCGAGGACGTCCTCGGGCG -3’（配列番号：4
4）。
プラスミドpR19（Schweckeらの論文（1995））を鋳型として使用した。標準的技術を用
いて、T4ポリヌクレオチドキナーゼで処理した後、該PCR産物を、SmaI-切断pUC18に連結
し、かつそれを用いてE.コリDH10Bを形質転換した。該単離されたプラスミドpUCrapLにお
けるrapLのDNA配列を、配列分析により確認した。公表された配列（acc. no. X86780）と
比較された該DNA配列の相違を、図25に示す。RapLで生じる変化を、図26に示す。
（rapLhisのクローニング）
該遺伝子rapLを、下記プライマーを用いて、PCRにより増幅し、rapLの5’末端にNdeI部
位、及びrapLの3’末端にBglII部位を導入した：
BIOSG6：5’-GGGCATATGCAGACCAAGGTTCTGTGCCAGCGTGACATCAAG -3’（配列番号：43）；及
び
BIOSG45：5’-GGAGATCTCAGCGAGTACGGATCGAGGACGTCCTCGGGCG -3’（配列番号：45）。
プラスミドpR19（Schweckeらの論文（1995））を鋳型として使用した。標準的技術を用
いて、T4ポリヌクレオチドキナーゼで処理した後、該PCR産物を、SmaI-切断pUC19に連結
し、かつそれを用いてE.コリDH10Bを形質転換した。該単離されたプラスミドpUC19rapLhi
sにおけるrapLのDNA配列を、配列分析により確認した。
（rapKのクローニング）
該遺伝子rapKを、下記プライマーを用いて、PCRにより増幅し、rapKの5’末端にNdeI部
位、及びrapKの3’末端にXbaI部位を導入した：
BIOSG8：5’-GGGCATATGAGGCAATTGACTCCGCCGGTCACGGCACCGTACTGCC -3’（配列番号：37）
；及び
BIOSG9：5’-GGGGTCTAGAGGTCACGCCACCACACCCTCGATCTCGACC -3’（配列番号：38）。
プラスミドpR19（Schweckeらの論文（1995））を鋳型として使用した。標準的技術を用
いて、T4ポリヌクレオチドキナーゼで処理した後、該PCR産物を、SmaI-切断pUC18に連結
し、かつそれを用いてE.コリDH10Bを形質転換した。該単離されたプラスミドpUCrapKにお
けるrapKのDNA配列を、配列分析により確認した。公表された配列（acc. no. X86780）と
比較された該DNA配列の相違を、図27に示す。RapKで生じる変化を、図28に示す。
（pSGsetrpaN/O、pSGsetrapJ、pSGsetrapM、pSGsetrapQ、pSGsetrapI、pSGsetrapK、及び
pSGsetrapLの単離）
プラスミドpUCrapN/O、pUCrapJ、pUCrapM、pUCrapI、pUCrapL、pUCrapK、及びpAHL42を
、NdeI、及びXbaIで消化し、かつ該挿入断片を単離し、かつ同様に消化されたpSGset1内
に連結した。該連結体を用いて、標準的手順を使用して、E.コリDH10Bを形質転換し、か
つ該形質転換体を分析した。プラスミドpSGsetrpaN/O、pSGsetrapJ、pSGsetrapM、pSGset
rapQ、pSGsetrapI、pSGsetrapK、及びpSGsetrapLを単離し、かつ該構築体を、制限消化、
及び配列分析を使用して確認した。
（rapJのクローニング）
該遺伝子rapJを、下記プライマーを用いて、PCRにより増幅し、rapJの5’末端にNdeI部
位、及びrapJの3’末端にXbaI部位を導入した：
BIOSG10：5’-GGGCATATGAGCACCGAAGCTCAGCAAGAGAGCACGCCCACCGCACGCT-3’（配列番号：46
）；及び
BIOSG11：5’-GGGGTCTAGAGGTCACTCCGCTCCCCAGGTGACCCGGAGCTCGGC -3’（配列番号：47）
。
プラスミドpR19（Schweckeらの論文、1995）を鋳型として使用した。標準的技術を用い
て、T4ポリヌクレオチドキナーゼで処理した後、該PCR産物を、SmaI-切断pUC18に連結し
、かつそれを用いてE.コリDH10Bを形質転換した。該単離されたプラスミドpUCrapJにおけ
るrapJのDNA配列を、配列分析により確認した。公表された配列（acc. no. X86780）と比
較された該DNA配列の相違を、図29に示す。RapJで生じる変化を、図30に示す。
（rapIのクローニング）
該遺伝子rapIを、下記プライマーを用いて、PCRにより増幅し、rapIの5’末端にNdeI部
位、及びrapIの3’末端にXbaI部位を導入した：
BIOSG12：5’-GGGCATATGAGCGCGTCCGTGCAGACCATCAAGCTGCC -3’（配列番号：48）；及び
BIOSG13：5’-GGGGTCTAGAGGTCAGGCGTCCCCGCGGCGGGCGACGACCT -3’（配列番号：49）。
該rapIを含むpUC18から誘導されたプラスミドpAHL2（Huai-Lo Leeにより提供）を鋳型
として使用した。標準的技術を用いて、T4ポリヌクレオチドキナーゼで処理した後、該PC
R産物を、SmaI-切断pUC18に連結し、かつそれを用いてE.コリDH10Bを形質転換した。該単
離されたプラスミドpUCrapIにおけるrapIのDNA配列を、配列分析により確認した。公表さ
れた配列（acc. no. X86780）と比較された該DNA配列の相違を、図31に示す。RapIで生じ
る変化を、図32に示す。
（rapQのクローニング）
該遺伝子rapQを、下記プライマーを用いて、PCRにより増幅し、rapQの5’末端にNdeI部
位、及びrapQの3’末端にXbaI部位を導入した：
AHL21：5’-CATATGTTGGAATTGGGTACCCGCCTG-3’（配列番号：50）；及び
AHL22：5’-TCTAGACGCTCACGCCTCCAGGGTG -3’（配列番号：51）。
プラスミドpR19（Schweckeらの論文（1995））を鋳型として使用した。標準的技術を用
いて、T4ポリヌクレオチドキナーゼで処理した後、該PCR産物を、SmaI-切断pUC18に連結
し、かつそれを用いてE.コリDH10Bを形質転換した。該単離されたプラスミドpAHL42にお
けるrapQのDNA配列を、配列分析により確認した。公表された配列（acc. no. X86780）と
比較された該DNA配列の相違を、図33に示す。RapQで生じる変化を、図34に示す。
（pUC18eryBVcasの単離）
該遺伝子eryBVを、下記プライマー、及び鋳型としてpSG142（Gaisserら（2000））を用
いて、PCRにより増幅した：
casOleG21（WO 01/79520）；及び
7966：5’-GGGGAATTCAGATCTGGTCTAGAGGTCAGCCGGCGTGGCGGCGCGTGAGTTCCTCCAGTCGCGGGACGAT
CT -3’（配列番号：52）。
該PCR断片を、標準的手順を用いてクローニングし、かつプラスミドpUC18eryBVcasを、
開始コドンeryBVと重複しているNdeI部位で、及び終止コドンの後のXbaI、及びBglII部位
で単離した。該構築体を、配列分析により確認した。
（ベクターpSGLit1の単離）
該遺伝子eryBVを、下記プライマーを用いて、PCRにより増幅し、eryBVの5’末端にdam
メチル化感受性XbaI部位、及びeryBVの3’末端にXbaI部位とBglII部位とを導入した：
BIOSG1：5’-GGGTCTAGATCCGGACGAACGCATCGATTAATTAAGGAGGACACATA -3’（配列番号：53）
；及び
7966：5’-GGGGAATTCAGATCTGGTCTAGAGGTCAGCCGGCGTGGCGGCGCGTGAGTTCCTCCAGTCGCGGGACGAT
CT -3’（配列番号：52）。
プラスミドpUC18eryBVcasを鋳型として使用した。標準的技術を用いて、T4ポリヌクレ
オチドキナーゼで処理した後、該PCR産物を、SmaI-切断pUC18に連結し、かつそれを用い
てE.コリDH10Bを形質転換した。次いで、該構築体をBamHI/BglIIで消化し、かつ約1.3 kb
のDNAバンドを、アガロースゲルから単離し、続いて、標準的手順を用いて、BamHI/BglII
消化リトマス28ベクターDNAに連結した。該ベクターpSGLit1を単離し、かつ該挿入体のDN
A配列を、配列分析により確認した。
（pSGsetrpaN/O、pSGsetrapJ、pSGsetrapM、pSGsetrapQ、pSGsetrapI、pSGsetrapK、及び
pSGsetrapLの単離）
プラスミドpUCrapN/O、pUCrapJ、pUCrapM、pUCrapI、pUCrapL、pUCrapK、及びpAHL42を
、NdeI、及びXbaIで消化し、かつ該挿入断片を、サイズ約1.3 kb〜0.7 kbの範囲で単離し
、かつ同様に消化されたpSGset1内に連結した。該連結体を用いて、標準的手順を使用し
て、E.コリDH10Bを形質転換し、かつ該形質転換体を分析した。プラスミドpSGsetrpaN/O
、pSGsetrapJ、pSGsetrapM、pSGsetrapQ、pSGsetrapI、pSGsetrapK、及びpSGsetrapLを単
離し、かつ該構築体を、制限消化、及び配列分析を使用して確認した。
（pSGLitrapN/O、pSGLitrapJ、pSGLitrapM、pSGLitrapQ、pSGLitrapI、pSGLitrapK、pSGL
itrapL、及びpSGLitrapLhisの単離）
pSGsetrpaN/O、pSGsetrapJ、pSGsetrapM、pSGsetrapQ、pSGsetrapI、pSGsetrapK、pSGs
etrapL、及びpUC19rapLhisを、NdeI／XbaI制限酵素で消化し、かつバンド約0.7 kb〜1.3
kbの範囲のバンドを単離し、続いてNdeI／BglIIで消化されたpSGLit1に連結した。該連結
体を用いて、標準的手順を使用して、E.コリDH10Bを形質転換し、かつ該形質転換体を分
析した。プラスミドpSGLitrapN/O、pSGLitrapJ、pSGLitrapM、pSGLitrapQ、pSGLitrapI、
pSGLitrapK、pSGLitrapL、及びpSGLitrapLhisを単離した。
（プラスミドpSGsetrapKI、pSGsetrapKM、pSGsetrapKN/O、pSGsetrapKL、pSGsetrapKQ、
及びpSGrapKJの単離）
プラスミドpSGLitrapN/O、pSGLitrapJ、pSGLitrapM、pSGLitrapQ、pSGLitrapI、及びpS
GLitrapLを、標準の分子生物学的技術を用いて、XbaIを用いて消化し、かつ約0.8 kb〜1.
3 kbの範囲の断片を単離し、続いてXbaIで消化されたpSGLit1に連結し、そしてアルカリ
ホスファターゼで処理した。該連結体を用いて、E.コリDH10Bを形質転換し、かつ該形質
転換体を分析した。プラスミドpSGsetrapKI、pSGsetrapKM、pSGsetrapKN/O、pSGsetrapKL
、pSGsetrapKQ、及びpSGrapKJを単離し、かつ該挿入の配向を、制限消化分析により確認
した。rapLhis付加のため、これらの構築体を、BglII／XbaIで消化し、続いて適切にBglI
Iで部分消化し、かつ該単離されたベクター断片を、pSGLitrapLhisの〜1 kb Xbal/BglII
断片に連結した。
（プラスミドpSGsetrapKIJ、pSGsetrapKIM、及びpSGsetrapKIQの単離）
該プラスミドpSGLitrapJ、pSGLitrapM、及びpSGLitrapQを、標準の分子生物学的技術を
用いて、XbaIを用いて消化し、かつ約0.8 kb〜1.3 kbの範囲の断片を単離し、続いてXbaI
で消化されたpSGsetrapKIに連結し、そしてアルカリホスファターゼで処理した。該連結
体を用いて、E.コリDH10Bを形質転換し、かつ該形質転換体を分析した。プラスミドpSGse
trapKIJ、pSGsetrapKIM、及びpSGrapKIQを単離し、かつ該挿入の配向を、制限消化分析に
より確認した。rapLhis付加のため、これらの構築体を、BglII／XbaIで消化し、続いて適
切にBglIIで部分消化し、かつ該単離されたベクター断片を、pSGLitrapLhisの〜1 kb Xba
l/BglII断片に連結した。
（プラスミドpSGsetrapKN/OI、pSGsetrapKN/OQ、pSGsetrapKN/OM、及びpSGsetrapKN/OJの
単離）
該プラスミドpSGLitrapI、pSGLitrapM、pSGLitrapJ、及びpSGLitrapQを、標準の分子生
物学的技術を用いて、XbaIを用いて消化し、かつ約0.8 kb〜1.3 kbの範囲の断片を単離し
、続いてXbaIで消化されたpSGsetrapKN/Oに連結し、そしてアルカリホスファターゼで処
理した。該連結体を用いて、E.コリDH10Bを形質転換し、かつ該形質転換体を分析した。
該連結体を用いて、E.コリDH10Bを形質転換し、かつ該形質転換体を分析した。プラスミ
ドpSGsetrapKN/OI、pSGsetrapKN/OQ、pSGsetrapKN/OM、及びpSGrapKN/OJを単離し、かつ
該挿入の配向を、制限消化分析により確認した。rapLhis付加のため、これらの構築体を
、BglII／XbaIで消化し、続いて適切にBglIIで部分消化し、かつ該単離されたベクター断
片を、pSGLitrapLhisの〜1 kb Xbal/BglII断片に連結した。
（プラスミドpSGsetrapKJM、及びpSGsetrapKJQの単離）
該プラスミドpSGLitrapM、及びpSGLitrapQを、標準の分子生物学的技術を用いて、XbaI
を用いて消化し、かつ約0.8 kb〜1.1 kbの範囲の断片を単離し、続いてXbaIで消化された
pSGsetrapKJに連結し、そしてアルカリホスファターゼで処理した。該連結体を用いて、E
.コリDH10Bを形質転換し、かつ該形質転換体を分析した。該連結体を用いて、E.コリDH10
Bを形質転換し、かつ該形質転換体を分析した。プラスミドpSGsetrapKJM、及びpSGrapKJQ
を単離し、かつ該挿入の配向を、制限消化分析により確認した。rapLhis付加のため、こ
れらの構築体を、BglII／XbaIで消化し、続いて適切にBglIIで部分消化し、かつ該単離さ
れたベクター断片を、pSGLitrapLhisの〜1 kb Xbal/BglII断片に連結した。上述の同じ方
法を用い、下記の遺伝子カセットを単離した：
pSGsetrapKIJM pSGsetrapKN/OJI pSGsetrapKIQN/OM
pSGsetrapKIJQ pSGsetrapKJMN/O pSGsetrapKJMN/OQ
pSGsetrapKIJN/O pSGsetrapKJQN/O pSGsetrapKIJN/OMQ
pSGsetrapKIMN/O pSGsetrapKIJN/OM pSGsetrapN/OQ
pSGsetrapKIQN/O pSGsetrapKIJN/OQ pSGsetrapKIJMN/OQ
pSGsetrapKN/OMQ pSGsetrapKIMN/OQ。
概観を図５に示す。rapLhis付加のため、これらのカセット構築体を、BglII／XbaIで、
又はXbaIで消化し、続いて適切にBglIIで部分消化し、かつ該単離されたベクター断片を
、pSGLitrapLhisの〜1 kb Xbal/BglII断片に連結した。
（実施例６）
（9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシン（前駆
ラパマイシン、図6）の単離）
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシン（前駆
ラパマイシン）を、下記のように、pSGsetrapKを用いて、該S.ハイグロスコピカス菌株MG
2-10に接合し、かつ生産された生成物を単離することにより得た。これは、該MG2-10菌株
内のrapK、及びrapLの除去を補うことが可能であり、ポスト-PKS改質を欠いた類似体であ
る前駆ラパマイシンを生成することを示している。rapLが、補足される場合、該ピペコリ
ン酸供給は必要なく、rapLがラパマイシン生成物内にピペコリン酸供給の役割を担うこと
を確認した。
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetrapKL]を、培地１上で、冷凍保存にある冷凍通常
胞子ストック（蒸留水中、20％グリセロール、10％ラクトースw/v）から培養し（「物質
、及び方法」を参照）し、胞子を、14日間、29℃で生育後収集した。第一前培養液を、収
集した胞子で接種させ、かつ50 mlの培地３（「物質、及び方法」を参照）を含む、２つ
の250 ml三角フラスコ中で培養し、偏心距離5.08 cm（2インチ）、250 rpm、30℃で、２
日間振盪した。該第一前培養液を用い、培地２（「物質、及び方法」を参照）、及び培地
３の２つの第二前培養液を10％v/vで接種させ、偏心距離2.54 cm（1インチ）、300 rpm、
25℃で、さらに24時間振盪した。培地４（「物質、及び方法」を参照）、及び培地５（「
物質、及び方法」を参照）を、プルロニックL101消泡剤（BASF）を0.01％v/v含むように
調整した。製造培地４に、培地２の第二前培養液を接種させ、かつ製造培地５に、培地３
の第二前培養液を10％v/v接種させ、かつ25℃で5〜7日間、7 Lの攪拌されたバイオリアク
ター内で、発酵させることができた。気流を0.75 vvmにし、かつ羽根車先端速度を0.98 m
s-1〜2.67 ms-1に制御した。さらにプルロニックL101を、要求に応じて添加した。
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシン（前駆
ラパマイシン）の構造を確認するため、培地４、及び培地５からの培養液を酢酸エチルで
抽出し、かつ蒸留により、粗抽出物になるまで減らした。該抽出物を、ヘキサン：メタノ
ール：水の分配により脱脂し、かつヘキサンで始まり、かつアセトンで終る、70 gのシリ
カカートリッジに通した。各発酵からの前駆ラパマイシン分画を、貯蔵し、かつ水で始ま
り、かつメタノールで終るC18カートリッジに通した。前駆ラパマイシン（8.5 mg）を、
移動層として、ヘプタン、クロロホルム、エタノールを用いたSephadex LH20のクロマト
グラフィー後に、単離した。この化合物を分析し、かつ該構造を、NMRにより十分に確認
した（図18〜20）。該1H、及び13C NMRデータを、下記表５に示す。
（実施例７）
（8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシ
ン（前駆プロリルラパマイシン、図７）の単離）
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSEGrapK]に、プロリン酸を供給することにより、下記の
ように前駆プロリルラパマイシン生成物を得た。これは、rapLがない場合、代わりにピペ
コリン酸類似体が、取込まれることを示している。
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetrapK]を、プロリン1 mg/lが供給されたTSBGM中、2
5℃で振盪し、生育した。該菌糸体を、メタノールで抽出し、かつ前述のように、該培養
液体培地を酢酸エチルで抽出した。280 nmのUV検出器を有するHPLCによる、該プロリンを
供給したS.ハイグロスコピカス変異株MG2-10[pSGsetrapK]の培養液体培地の分析は、保持
時間4.5、及び4.6分の２つの主要な新しいピークの存在を示した。これらのピークのエレ
クトロスプレー質量分析は、双方ともMW 827.5の化合物に対応するイオンを含むことを示
した。これらのピークは、該rapK発現プラスミドpSGsetrapKのない、S.ハイグロスコピカ
スNRRL 5491、S.ハイグロスコピカスMG1C、又はS.ハイグロスコピカスMG2-10の培養液中
には見られなかった。m/z 850の該イオン（前駆プロリルラパマイシンのナトリウム付加
体に対応する）のMS/MS分析は、m/z 115（プロリン）の損失に対応するm/z 735のイオン
、又はm/z 308（前駆プロリルラパマイシンのC27〜C41）の損失に対応するm/z 542のイオ
ンのフラグメントを示した。このイオン自身は、m/z 250（前駆プロリルラパマイシンのC
13〜C26）の損失に対応するm/z 292のイオンに、さらにフラグメント化した。このフラグ
メント化パターンは、ラパマイシンに見られたパターンと同じであったが、該アミノ酸に
とって、ピペコリン酸からプロリンへの変化に対応する14減少したm/z（-115）の第一損
失、C38 O-メチル基の損失に対応する、14減少したm/z（-308）の第二損失、C26メトキシ
、及びC15 O-メチル基の損失に対応する、44減少したm/z（-250）の第三損失、及びC8ケ
トン基の損失、及びピペコリン酸からプロリンへの変化に対応する14減少した質量を有す
る該最終イオン（306）を有していた。これは、MW 827.5の化合物が、8-デオキソ-15-O-
デスメチル-26-デスメトキシ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン（前駆プロリルラ
パマイシン）を表していることを明らにした。
（実施例８）
（9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-デスメトキシ-ラパマイシン（39-デ
ヒドロキシ前駆ラパマイシン、図８）の単離）
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetrapK]に、ピペコリン酸、及びシクロヘキサンカル
ボン酸を供給することにより、２つの主要な化合物、該天然開始単位の取込みに対応する
前駆ラパマイシン、及び該供給開始単位の取込みに対応する39-デヒドロキシ前駆ラパマ
イシンを生成した。
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetrapK]を、ピペコリン酸2 mg/l、及びシクロヘキサ
ンカルボン酸1 mMが供給されたTSBGM中、25℃で振盪し、生育した。該培養液体培地を、
前述のように酢酸エチルで抽出した。280 nmのUV検出器を有するHPLCによる、該シクロヘ
キサンカルボン酸を供給したS.ハイグロスコピカス変異株MG2-10[pSGsetrapK]の培養液体
培地の分析は、保持時間5.8分の１つの主要な新しいピークの存在を示した。このピーク
のエレクトロスプレー質量分析は、MW 825.5の化合物に対応するイオンを含むことを示し
た。このピークは、該rapK発現プラスミドpSGsetrapKのない、S.ハイグロスコピカスNRRL
5491、S.ハイグロスコピカスMG1C、又はS.ハイグロスコピカスMG2-10の培養液中には見
られなかった。m/z 848の該イオン（39-デヒドロキシ前駆ラパマイシンのナトリウム付加
体に対応する）のMS/MS分析は、m/z 129（ピペコリン酸）の損失に対応するm/z 719のイ
オン、又はm/z 292（39-デヒドロキシ前駆ラパマイシンのC28〜C42）の損失に対応するm/
z 556のイオンのフラグメントを示した。このイオン自身は、m/z 250（39-デヒドロキシ
前駆ラパマイシンC14〜C27）の損失に対応するm/z 306のイオンに、さらにフラグメント
化した。このフラグメント化パターンは、前駆ラパマイシンに見られたパターンと同じで
あったが、C39ヒドロキシ基の損失に対応する、16減少したm/z（-292）の第二損失を有し
ていた。これは、MW 825.5の化合物が、9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-3
9-デスメトキシ-ラパマイシン（39-デヒドロキシ-前駆ラパマイシン）を表していること
を明らかにした。
（実施例９）
（16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-ラパマイシン（図９）の単離）
該S.ハイグロスコピカス菌株MG2-10を、実施例１に記載されているように、pSGsetrapK
IJで接合した。この菌株にピペコリン酸を供給し、かつ発酵により生産された生成物を単
離することにより、16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-ラパマイシンを得た。該プラスミ
ドpSGsetrapKIJ（図５）を、S.ハイグロスコピカスMG2-10内に接合し、かつ該菌株を、ピ
ペコリン酸2 mg/lが供給されたTSBGM中、25℃で振盪し、生育した。該菌糸体を、メタノ
ールで抽出し、かつ前述のように、該培養液体培地を酢酸エチルで抽出した。
エレクトロスプレー質量分析による、該S.ハイグロスコピカス変異株MG2-10[pSGsetrap
KIJ]の抽出液の分析は、MW 869の化合物に対応するピークを含む、保持時間4.3分の一つ
の新しい主要なピークの存在を示した。このピークは、該rapK発現プラスミドpSGsetrapK
の有無にかかわらず、S.ハイグロスコピカスNRRL 5491、S.ハイグロスコピカスMG1C、S.
ハイグロスコピカスMG2-10の培養液中には見られなかった。m/z 892の該イオン（16-O-デ
スメチル-27-デスメトキシ-ラパマイシンのナトリウム付加体に対応する）のMS/MS分析は
、m/z 129（ピペコリン酸）の損失に対応するm/z 763のイオン、又はm/z 322（16-O-デス
メチル-27-デスメトキシ-ラパマイシンのC28〜C42）の損失に対応するm/z 570のイオンの
フラグメントを示した。このイオン自身は、m/z 250（16-O-デスメチル-27-デスメトキシ
-ラパマイシンのC14〜C27）の損失に対応するm/z 320のイオンに、さらにフラグメント化
した。このフラグメント化パターンは、ラパマイシンに見られたパターンと同じであった
が、C16メチル、及びC27メトキシ基の損失に対応する、44減少したm/z（-250）の第三損
失を有していた。これは、MW 869の化合物が、16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-ラパマ
イシンを表していることを明らにした。
（実施例１０）
（アレイ供給）
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetrapKI]を用い、アレイ供給を行った。主要栄養培
養液を、該「物質、及び方法」に記載されているような胞子ストック未接種培地により調
製した。TSB GM培地を、「物質、及び方法」欄に記載されているような方法を用いて、10
％v/v接種した。下記表６に示されている下記化合物を加えた。
該培養液を、「物質、及び方法」欄に記載されている技術を用いて、インキュベートし
、抽出し、かつ測定した。表７は、開始カルボン酸、及びアミノ酸の各々の組合せで観測
されたイオン（m/z）を示す分析結果を示す：
これらのデータは、該供給化合物の取込みを示している。
（実施例１１）
（fkbOを有するS.ハイグロスコピカスMG2-10の相補性）
S.ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカス、及びS.ツクバエンシス内のfkbOのよ
うなrapK相同的遺伝子、及び部分的配列決定された’hyg’クラスター内のorf5（Ruanら
の論文（1997））が同じ機能を果すかどうか評価するため、下記のようなfkbOを用いて、
相補性アッセイを行った。
（pMG169-1の単離）
FK520産生株であるストレプトマイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカス
（ATCC 14891）からの遺伝子fkbOを、下記プライマーを用いて、PCRで増幅し、fkbOの5’
端にNdeI部位、及び3’端にXbaI部位を導入した：
fkbof：5’-GGGCATATGACCGATGCCGGACGCCA-3’（配列番号：54）；及び
fkbor：5’-GGGGTCTAGATCACGCCACCATGCCTTCGA-3’（配列番号：55）。
S.ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカス（ATCC 14891）から単離されたゲノム
DNAを、鋳型として使用した。該増幅されたPCR産物を、NdeI、及びXbaIで消化し、かつpS
GsetIを切ったNdeI-XbaIで連結した。該連結体を用い、E.コリDH10Bを形質転換し、かつ
該形質転換体を、「物質、及び方法」欄に記載されている方法を用いて分析した。プラス
ミドpMG169-1を単離し、かつ制限消化により確認し、かつS.ハイグロスコピカスMG2-10を
、「物質、及び方法」欄に記載されている方法を用いて、形質転換した。
（fkbOによる、rapKの非相同的相補性）
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pMG169-1]を、ピペコリン酸2 mg/lが供給されたTSBGM中
、25℃で振盪し、生育した。該培養液体培地、及び菌糸体を、「物質、及び方法」（方法
A）に記載されている方法を用いて抽出した。280 nmのUV検出器を用いた、該抽出液の分
析は、保持時間4.5、及び4.6分の２つの主要な新しいピークの存在を示した。これらのピ
ークのエレクトロスプレー質量分析は、双方とも、前駆ラパマイシンの２つの異性体に対
応する、MW 827.5のイオンを含んでいることを示した（実施例７）。
（実施例１２）
（rapKノックアウト変異株に供給する内在性開始単位により、競合性がない場合における
、9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-デスメトキシ-ラパマイシン（39-デ
ヒドロキシ前駆ラパマイシン、図８）の効率的生成）
異なる開始単位、シクロヘキサンカルボン酸を取込む、S.ハイグロスコピカス菌株MG2-
10、及びMG2-10[pSGsetrapK]の能力を、下記のように比較した。シクロヘキサンカルボン
酸、及びピペコリン酸を供給した場合、MG2-10は、供給された開始単位の取込みにのみ対
応する単一化合物（39-デヒドロキシ前駆ラパマイシン）のみを生成した。一方、MG2-10[
pSGsetrapK]は、1:1の比で二つの化合物、39-デヒドロキシ前駆ラパマイシン、及び前駆
ラパマイシンを生成した。これは、rapKが、天然内在性開始単位の取込みを必要とし、か
つrapKノックアウト菌株は、供給開始単位と内在性開始単位との競合はないことを示して
いる。
S.ハイグロスコピカスMG2-10を、ピペコリン酸2 mg/L、及びシクロヘキサンカルボン酸
1 mMを供給したTSBGM上で、25℃で振盪し、増殖させた。該培養液体培地を、前述のよう
に酢酸エチルで抽出した。280 nmのUV検出器を有するHPLCによる抽出液の分析は、保持時
間5.8分の一つの新しい主要なピークの存在を示した。しかし、S.ハイグロスコピカスMG2
-10[pSGsetrapK]（実施例４）は、シクロヘキサンカルボン酸（実施例８、図８）を供給
した場合、〜1:1の比に加えて前駆ラパマイシン（図６）を生産する。意外にも、S.ハイ
グロスコピカスMG2-10に、シクロヘキサンカルボン酸を供給することにより、単一生成物
、39-デドロキシ前駆ラパマイシンを得た。該内在性開始剤、4,5-ジヒドロキシシクロヘ
キサ-1-エン カルボン酸は、rapKのない場合に取込まれない。従って、該供給カルボン酸
、及び該内在性開始剤の取込みの間に競合はない。
（実施例１３）
（RapMの機能の解明）
ストレプトマイセス リビダンスTK24、S.リビダンスTK24[pSGsetrapM]、及びS.リビダ
ンスTK24[pSGsetrapQ]の培養液を、TSBGM中、30℃で振盪して、生育し、かつ前駆ラパマ
イシン20μg/mlを供給した。コントロールは、供給せずに残した。さらに5日間インキュ
ベーションした後、該培養液を酢酸エチルで抽出し、乾燥させた。再構築、及びLC-MSに
よる分析により、未供給コントロールにおいて、ラパマイシン類似体の生成がないことを
確認した。前駆ラパマイシンを供給したS.リビダンスTK24[pSGsetrapM]の抽出液中に、１
つは2.5分であり、かつ一つは7.9分である、２つの主要な新しいピークを、確認した。こ
れらのピークのエレクトロスプレー質量分析は、双方ともに9-デオキソ-16-O-メチル-27-
デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシン（16-O-メチル-前駆ラパマイシン）と一致
するMW 855.6の化合物に対応するイオンを含むことを示した。TFAの欠如において、抽出
液をLC-MSで分析した場合、通常２つの異性体が観測された。新たなピークは、S.リビダ
ンスTK24、又はS.リビダンスTK24[pSGsetrapQ]の抽出液中には確認されなかった。未修飾
前駆ラパマイシンであることは、明らかである。RapMは、明らかにC16ヒドロキシルでの
メチル化に関与しており、RapQは、この部位に特異的でない。
（実施例１４）
（RapJの機能の解明）
S.リビダンスTK24、S.リビダンスTK24[pSGsetrapK]、S.リビダンスTK24[pSGsetrapJ]、
及びS.リビダンスTK24[pSGsetrapKJ]の培養液を、TSBGM中、30℃で振盪して、生育し、か
つ前駆ラパマイシン40μg/lを供給した。コントロールは、供給せずに残した。さらに5日
間インキュベーションした後、該培養液を酢酸エチルで抽出し、乾燥させた。再構築、及
びLC-MSによる分析により、未供給コントロールにおいて、ラパマイシン類似体の生成が
ないことを確認した。前駆ラパマイシンを供給したS.リビダンスTK24[pSGsetrapKJ]、及
びS.リビダンスTK24[pSGsetrapJ]の抽出液中に、4.9分の１つの主要な新しいピークを確
認した。このピークのエレクトロスプレー質量分析は、16-O-デスメチル-27-デスメトキ
シ-39-O-デスメチル-ラパマイシン（C9オキソ-前駆ラパマイシン）と一致するMW 855.5の
化合物に対応するイオンを含むことを示した。前駆ラパマイシンが供給されたS.リビダン
スTK24、及びS.リビダンスTK24[pSGsetrapK]の抽出液において、新しいピークは確認され
なかった。未修飾前駆ラパマイシンであることは、明らかであった。
該FK506、及びFK520クラスターのFkbDとRapJの同一性のため、RapJは、前駆ラパマイシ
ンのC9を酸化し、9-ヒドロキシ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラ
パマイシン（C9 OH-前駆ラパマイシン）にすると仮定されている。さらに、RapKは、ケト
ンへの変換に関与すると仮定されている。意外にも、RapJの存在下、RapKの非存在下、16
-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシン（C9ケト-前駆ラパマイ
シン）が、形成された。明らかにRapJは、C9での酸化機能を有し、ケトンに完全に変換す
ることが観測された。RapKは、C9での酸化機能を有していない。
（実施例１５）
ラパマイシン修飾遺伝子の下記組合せを含むプラスミドを、下記のように構築した：pM
G260（rapI、rapJ、rapN、rapO、及びrapL）、pMG261（rapI、rapJ、rapN、rapO、rapM、
及びrapL）、pMG262（rapI、rapJ、rapN、rapO、rapM、rapQ、及びrapL）、pMG236（rapN
、rapO、rapQ、及びrapL）、及びpMG238（rapJ、及びrapL）。
（プラスミドpMG236、及びpMG238の単離）
該プラスミドpSGsetrapNOQ、及びpSGsetrapJを、BglII/XbaIを用いて消化し、かつ該単
離されたベクター断片に、pSGLitrapLhisのXbaI/BglII断片1 kbを連結した。プラスミドp
MG236（rapN、rapO、rapQ、及びrapLを発現する）、及びpMG238（rapJ、及びrapLを発現
する）をそれぞれ単離した。
（プラスミドpMG260、pMG261、及びpMG262の単離）
該プラスミドpSGSetrapKIJNOL、pSGSetrapKIJMNOL、及びpSGSetrapKIJMNOQLを、BglII
を用いて消化し、かつ単離された挿入断片（rapIのBglII部位から、rapLの後のBglII部位
に該ラパマイシンクラスター遺伝子を含む）を、BglIIで消化されたpSGSetrapIからのベ
クター含有断片で連結した。プラスミドpMG260（rapI、rapJ、rapN、rapO、及びrapLを発
現する）、pMG261（rapI、rapJ、rapN、rapO、rapM、及びrapLを発現する）、及びpMG262
（rapI、rapJ、rapN、rapO、rapM、rapQ、及びrapLを発現する）を、単離した。
（実施例１６）
rapKの染色体除去を行ったS.ハイグロスコピカス変異株（MG3）を、下記のように構築
した。次いで、fkbOを有するrapKの相同的相補性を、記載のように行うことができ、かつ
ラパマイシン生成物の復元を起こすであろう。fkbOは、S.ハイグロスコピカスのrapKの機
能を補うことができることを示している。
（rapKの染色体除去を行ったS.ハイグロスコピカス変異株MG3の単離）
下記プライマーを用い、該遺伝子rapKの外側の相同的左側領域（Schweckeらの論文（19
95）に記載されている、該ラパマイシンクラスター中、nt94403からnt95429）を、S.ハイ
グロスコピカスNRRL5491から調製したゲノムDNAを鋳型として用いて増幅した：
RAPKF1：5’-CAAAGCTTCCTGGCGCGGTTCGGCCGGCA-3’（配列番号：56）；及び
RAPKF2：5’-TGGCATGCCCTTCCCCGCCGTTCCCTGGC-3’（配列番号：57）。
該PCR産物1kbを、T4ポリヌクレオチドキナーゼを用いてリン酸化し、かつ脱リン酸化さ
れたSmaI切断pUC18内に連結した。E.コリDH10B中に形質転換した後、該プラスミドpMG233
-7を単離した。下記プライマーを用いて、該遺伝子rapKの外側の相同性左側領域（Schwec
keらの論文（1995）に記載されている、該ラパマイシンクラスター中、nt96435からnt974
28）を、S.ハイグロスコピカスNRRL5491から調製したゲノムDNAを鋳型として用いて増幅
した：
RAPKR1：5’-TGGCATGCCCCCGCCGAGCTGACCTGGAA-3’（配列番号：58）；及び
RAPKR2：5’-GTTCTAGAGCTTACGCGTGATGTCGAACG-3’（配列番号：59）。
該1 kb PCR産物1kbを、T4ポリヌクレオチドキナーゼを用いてリン酸化し、かつ脱リン
酸化されたSmaI切断pUC18中に連結した。E.コリDH10B中に形質転換した後、該プラスミド
pMG257-7を単離した。両方のプラスミドは、配列分析により確認した。該プラスミドpMG2
33-7をSphI/XbaIで消化し、3.7kb断片を単離し、pMG257-7をSphI/XbaIで消化し、かつ1kb
断片を単離した。これらの断片を連結し、かつE.コリDH10Bの形質転換に使用した。該プ
ラスミドpMG268-12を単離した。このプラスミドを、HindIII/XbaIで消化し、かつ2 kb断
片を単離し、かつHindIII/XbaIで切ったpMG55中に連結し、かつ該DNAを用いて、E.コリDH
10Bを形質転換した。該プラスミドpMG278-1を単離し、かつS.ハイグロスコピカスMG1Cの
接合に用いた。
アプラマイシン耐性コロニーを単離し、かつTSBGM中24時間、30℃で振盪し、生育し、
かつストレプトマイシン50 ug/lを含む培地１寒天プレート上に塗り広げた。ストレプト
マイシン耐性コロニーを単離し、かつアプラマイシン感受性になることを示した。rapKの
1004nt染色体除去を、該変異株MG3において、サザンブロッティングにより確認すること
ができる。図35に概観を示す。
S.ハイグロスコピカスMG3を、TSBGM中、26℃で振盪し、生育した。該培養液体培地、及
び菌糸体を、「物質、及び方法」欄に記載されている方法を用いて抽出した。UV検出器を
用いた、該抽出液の分析は、特徴的ラパマイシントリエンのピークがないことを示した。
（rapK染色体除去を行ったS.ハイグロスコピカス変異株MG3中のfkbOの発現）
プラスミドpMG169-1（実施例１１に記載）を、「物質、及び方法」欄に記載されている
方法を用いて、S.ハイグロスコピカス変異株MG3中に形質転換した。
（fkbOによるrapKの非相同的相補性）
S.ハイグロスコピカスMG3pMG169-1を、TSBGM中、26℃で振盪し、生育した。該培養液体
培地、及び菌糸体を、「物質、及び方法」欄に記載されている方法を用いて抽出した。28
0 nmのUV検出器を用いた、該抽出液の分析は、２つの主要な新しいピークの存在を示した
。これらのピークのエレクトロスプレー質量分析は、これらはラパマイシンに対応するMW
913のイオンを含むことを示した。
（実施例１７）
（fkbO染色体除去を行った、該S.ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカス変異株MG
4の単離、及び非相同的相補性）
（fkbO染色体除去を行った、該S.ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカス変異株MG
4の単離）
下記プライマーを用いてS.ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスATCC14891か
ら調製されたゲノムDNAを、鋳型として使用し、相同関係の左側領域（Wuらの論文（2000
）に記載されているように、該アスコマシインクラスターのnt45750からnt46751）を増幅
した：
FKOF1：5’-GCTCTAGAGCCCGCGGCTCGCCGGACACG-3’（配列番号： 60）；及び
FKOF2：5’-CCCCTGCAGGCGTCCGGCATCGGTCATCAG-3’（配列番号：61）。
該PCR産物1 kbを、T4ポリヌクレオチドキナーゼを用いてリン酸化し、かつ脱リン酸化
されたSmaI切断pUC18内に連結した。E.コリDH10B中に形質転換した後、該プラスミドpMG2
58-4を単離した。下記プライマーを用い、S.ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカ
スATCC14891から調整されたゲノムDNAを、鋳型として使用し、相同関係の左側領域（Wuら
の論文（2000）に記載されているように、該ラパマイシンクラスターのnt47785からnt487
81）を増幅した：
FKOR1：5’-CGCCTGCAGGGATACGGTCCGCCGGGTCTGC-3’（配列番号：62）；及び
FKOR2：5’-CCAAGCTTGTACGGTTCGCCACGGGCGTGC-3’（配列番号：63）。
該PCR産物1 kbを、T4ポリヌクレオチドキナーゼを用いてリン酸化し、かつ脱リン酸化
されたSmaI切断pUC18内に連結した。E.コリDH10B中に形質転換した後、該プラスミドpMG2
59-5を単離した。両プラスミドを、配列分析により確認した。該プラスミドpMG258-4をSb
fI/HindIIIで消化し、かつ該3.7 kb断片を単離し、pMG259-5をSbfI/HindIIIで消化し、か
つ該1 kb断片を単離した。これらの断片を連結し、かつE.コリDH10Bの形質転換に使用し
た。該プラスミドpMG265-1を単離した。このプラスミドを、HindIII/EcoRIで消化し、か
つ該2 kb断片を単離し、かつHindIII/EcoRIで切ったpMG55内に連結し、そして該DNAを、E
.コリDH10Bの形質転換に使用した。該プラスミドpMG267-1を単離し、かつS.ハイグロスコ
ピカスvar.アスコマイセティカスATCC14891の接合に使用した。
アプラマイシン耐性コロニーを単離し、かつTSBGM中、30℃で24時間振盪し、生育し、
かつストレプトマイシン50μg/lを含む培地１の寒天プレート上に塗り広げた。ストレプ
トマイシン耐性コロニーを単離し、かつアプラマイシン感受性であることを示した。fkbO
の該1034nt染色体除去を、サザンブロッティングにより、該変異株MG4内に確認した。概
観を図３６に示す。
（fkbOの染色体除去を行った、該S.ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカス変異株
MG4のRapKの発現）
プラスミドpSGsetRapKを、「物質、及び方法」欄に記載されているように、S.ハイグロ
スコピカス変異株MG4内に形質転換した。
（rapKによる、fkbOの非相同的相補性）
S.ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスMG4 pSGSetRapKを、TSBGM中26℃で振
盪し、生育した。該培養液体培地、及び菌糸体を、「物質、及び方法」欄に記載されてい
る方法を用いて抽出する。該抽出液のLC-MS分析は、１つの主要な新しいピークを示し、
かつFK520（アスコマイシン）に対応するイオンを含むことを示した。
（実施例１８）
該rapK相同体が、ここに記載されている方法を用いて、除去又は不活性化されるように
、FKBP-リガンド（例えば、FK506）をコードする他の生合成クラスターを改質することが
できることは、当業者にとって、明らかである。FK506において、例えば、これは、該fkb
O遺伝子（配列受入番号AF082099、AF082100）のどちらか側の領域に対し、PCR産物を増幅
すること、pMG55のようなベクター中に共にこれらを連結すること、FK506-産生菌株を形
質転換すること、該二重の重複部分を選択すること、及びサザンブロッティングにより該
fkbO遺伝子の除去を確認することにより、行うことができる。
（実施例１９）
（内在性天然開始単位による競合のない場合に、該rapK除去菌株、S.ハイグロスコピカス
MG2-10によるラパマイシン類似体中への非天然開始単位の取込み）
実施例１０、及び１２で示されているように、該ラパマイシンPKSは、非天然開始単位
にとって、高度の柔軟性を有し、かつrapKのない場合、該システムは、該天然開始剤から
の競合性がなくなる。この実施例において、柔軟性の度合いを、さらに説明する。
S.ハイグロスコピカスMG2-10を、「物質、及び方法（方法B）」に概説した供給、抽出
、及び分析方法に従って生育し、供給し、かつ抽出した。生成された化合物とともに、供
給されたカルボン酸類の範囲を下記に記載する。意外にも、記載した該カルボン酸のすべ
てが取込まれ、278 nmの特徴的UV発色団、及びエレクトロスプレー質量分析の観測により
測定され、かつラパマイシン類似体の生成物を得た。
生成した該ラパマイシン類似体は、表８に記載されている下記式に対応していた。
R16 = OH、R17 = H、OH、ハロ、チオール、アルキル、y = 結合、CH2
（実施例２０）
（内在性天然開始単位による競合のない場合に、該rapK除去菌株、S.ハイグロスコピカス
MG2-10[pSGsetrapN/OQLhis]による、ラパマイシン類似体中への非天然開始単位の取込み
）
実施例１０、１２、及び１９で示されているように、該ラパマイシンPKSは、非天然開
始単位にとって、高度の柔軟性を有し、かつrapKのない場合、該システムは、該天然開始
剤からの競合性がなくなる。この実施例において、柔軟性の度合いを、さらに説明する。
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetrapN/OQLhis]を、「物質、及び方法（方法B）」に
概説した供給、抽出、及び分析方法に従って生育し、供給し、かつ抽出した。生成された
化合物とともに、供給されたカルボン酸類の範囲を下記に記載する。意外にも、記載した
該カルボン酸のすべてが取込まれ、278 nmの特徴的UV発色団、及びエレクトロスプレー質
量分析の観測により測定され、かつラパマイシン類似体の生成物を得た。
生成した該ラパマイシン類似体は、表９に記載されている下記式に対応していた。
R16 = OH、R17 = H、OH、ハロ、チオール、アルキル、y = 結合、CH2
（実施例２０）
（内在性天然開始単位による競合のない場合に、該rapK除去菌株、S.ハイグロスコピカス
MG3による、ラパマイシン類似体中への非天然開始単位の取込み）
実施例１０、１２、及び１９で示されているように、該ラパマイシンPKSは、非天然開
始単位にとって、高度の柔軟性を有し、かつrapKのない場合、該システムは、該天然開始
剤からの競合性がなくなる。この実施例において、柔軟性の度合いを、さらに説明する。
S.ハイグロスコピカスMG3を、「物質、及び方法（方法B）」に概説した供給、抽出、及
び分析方法に従って生育し、供給し、かつ抽出した。生成された化合物とともに、供給さ
れたカルボン酸類の範囲を下記に記載する。記載した該カルボン酸の取込み、及びラパマ
イシンの生成は、278 nmの特徴的UV発色団、及びエレクトロスプレー質量分析の観測によ
り決定された。
供給することができるカルボン酸開始単位は、下記化合物を含む：
シクロヘキサンカルボン酸、
3-cis,4-trans-ジヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、
1-シクロヘキセンカルボン酸、
3-シクロヘキセンカルボン酸、
シクロヘプタンカルボン酸、
2-ノルボルナンカルボン酸メチル、
3-ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、
4-ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、
3-メチルシクロヘキサンカルボン酸、
4-メチルシクロヘキサンカルボン酸、
3-（cis/trans）メトキシシクロヘキサンカルボン酸、
4-（cis/trans）メトキシシクロヘキサンカルボン酸、
4-シクロヘキサノンカルボン酸エチル、
3-フルオロ-4-ヒドロキシカルボン酸、及び4-フルオロ-3-ヒドロキシカルボン酸、
3-シクロヘキサンオキシドカルボン酸、
3,4-cis-ジヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、
3-クロロ-4-ヒドロキシカルボン酸、及び4-クロロ-3-ヒドロキシカルボン酸（及び向かい
合うジアステレオマーの対）、
シクロヘキシルプロピオン酸、及び4-tert-ブチルシクロヘキサンカルボン酸。
（実施例２１）
（内在性天然開始単位による競合のない場合に、該fkbO除去菌株、S.ハイグロスコピカス
var.アスコマイセティカスMG4による、FK520類似体中への非天然開始単位の取込み）
実施例１０、１２、１９、及び２０で示されているように、該ラパマイシンPKSは、非
天然開始単位にとって、高度の柔軟性を有し、かつfkbOのない場合、該FK520システムは
、該天然開始剤からの競合性がなくなる。この実施例において、該FK520 PKSの柔軟性の
度合いを調査し、該天然開始剤からの競合性がないことを示す。
S.ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスMG4を、「物質、及び方法（方法B）」
に概説した供給、抽出、及び分析方法に従って生育し、供給し、かつ抽出した。供給する
ことができるカルボン酸類の範囲の例を、表４に示す。記載した該カルボン酸の取込み、
及びFK520類似体の生成は、エレクトロスプレー質量分析により決定された。
（実施例２２）
（内在性天然開始単位による競合のない場合に、該fkbO除去菌株、S.ツクバエンシスによ
る、FK506類似体中への非天然開始酸の取込み）
S.ツクバエンシスのfkbO除去変異株を、「物質、及び方法」に概説した供給方法に従っ
て生育し、かつ供給した。表４に記載した該カルボン酸のサブセットを供給した。分析を
、「物質、及び方法」の方法（B）に記載されているように行った。
（実施例２３）
（S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetrapKILh]の発酵からの生成物の単離）
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-ラパマイシンを、該S.ハイグロスコピ
カス菌株MG2-10を、pSGsetrapKILhで接合し、かつ下記のように生成された発酵生成物を
単離することにより得た。これは、該MG2-10菌株のrapK、rapI、及びrapLの除去を補うこ
とが可能であり、ポスト-PKS修飾を欠いた類似体である9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-
デスメトキシ-ラパマイシンを生成することを示している。rapLが補われる場合、ピペコ
リン酸の供給は必要とせず、ラパマイシンの生成において、rapLが、ピペコリン酸供給の
役割を果すことを確認した。
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKILhis]を、発酵し（「物質、及び方法」参照）、
「物質、及び方法」に概説されている方法（B）を用いて抽出し、かつ単離した。分取HPL
Cに使用された該定組成溶媒システムは、60％ CH3CN/H2Oとした。
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシラパマイシン（化合物６）は、下記特徴
を有する。
単離収量：22 mg
分子量：856
分子式：C49H77NO11
UV（HPLC分析の間のダイオードアレイ検出器による）：268 nm、278 nm、288 nm
エレクトロスプレーMS：MNa+のm/z = 878、M-Hのm/z = 854。
下記表１０は、CDCl3中での9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシラパマイシ
ンの1H、及び13C NMRデータをまとめたものである。
a：H4aに代えて割当て得る。
b：仮の割当て。
c：該割当ては相互に変え得る。
d：該割当ては相互に変え得る。
化合物６は、CDCl3中、配座異性体の1:1混合物として存在する。上記の該データは、配
座異性体両方である。点線は、該表を横切って書かれており、スピンシステムの間の結合
性を測定することはできなく、従って、特定の配座異性体に対するデータを割当てること
はできない。
（実施例２４）
（S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetrapKIMLh]の発酵からの産物の単離）
9-デオキソ-27-デスメトキシ-ラパマイシンを、実施例１に記載されているように、S.
ハイグロスコピカスMG2-10菌株を、pSGsetKIMLhisで接合し、かつ発酵により生成された
生成物を単離することにより得た。これは、該MG2-10菌株のrapK、rapI、及びrapLの除去
を補うことが可能であり、幾らかのポスト-PKS修飾を欠いたラパマイシン類似体を生成す
ることを示している。
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKIMLhis]を、「物質、及び方法」に概説した方法
（B）を用いて、発酵し（「物質、及び方法」を参照）、抽出し、かつ単離した。分取HPL
Cに使用された該定組成溶媒システムは、75％ CH3CN/H2Oとした。9-デオキソ-27-デスメ
トキシ ラパマイシン（化合物１６）は、下記特徴を有する。
単離収量：24 mg
分子量：870
分子式：C50H79NO11
UV（HPLC分析の間のダイオードアレイ検出器による）：268 nm、278 nm、288 nm
エレクトロスプレーMS：MNa+のm/z = 892、M-Hのm/z = 868。
下記表１１は、CDCl3中での9-デオキソ-27-デスメトキシラパマイシンの1H、及び13C N
MRデータをまとめたものである。
（実施例２５）
（S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKIN/OLh]の発酵からの生成物の単離）
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-ラパマイシンを、実施例１に記載され
ているように、S.ハイグロスコピカスMG2-10 菌株を、pSGsetKIN/OLhisで接合し、かつ発
酵により生成された生成物を単離することにより得た。これは、該MG2-10菌株のrapK、ra
pI、rapN/O、及びrapLの除去を補うことが可能であり、幾らかのポスト-PKS修飾を欠いた
ラパマイシン類似体を生成することを示している。
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKIN/OLhis]を、「物質、及び方法」に概説した方
法（B）を用いて、発酵し（「物質、及び方法」を参照）、抽出し、かつ単離した。
分取HPLCに使用された該定組成溶媒システムは、60％ CH3CN/H2Oとした。9-デオキソ-1
6-O-デスメチル-27-O-デスメチルラパマイシン（化合物９）は、下記特徴を有する。
単離収量：77 mg
分子量：872
分子式：C49H77NO12
UV（HPLC分析の間のダイオードアレイ検出器による）：268 nm、278 nm、288 nm
エレクトロスプレーMS：MNa+のm/z = 894、M-Hのm/z = 870。
下記表１２は、CDCl3中での9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチルラパマイシ
ンの1H、及び13C NMRデータをまとめたものである。
（実施例２６）
（S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKJLh]の発酵からの生成物の単離）
16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシンを、実施例１に記載
されているように、S.ハイグロスコピカスMG2-10菌株を、pSGsetKJLhisで接合し、かつ発
酵により生成された生成物を単離することにより得た。これは、該MG2-10菌株のrapK、ra
pJ、及びrapLの除去を補うことが可能であり、幾らかのポスト-PKS修飾を欠いたラパマイ
シン類似体を生成することを示している。
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKJLhis]を、「物質、及び方法」に概説した方法（
B）を用いて、発酵し（「物質、及び方法」を参照）、抽出し、かつ単離した。
分取HPLCに使用された該定組成溶媒システムは、55％ CH3CN/H2Oとした。16-O-デスメ
チル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチルラパマイシン（化合物３）は、下記特徴を有する
。
単離収量：176 mg（２つの相互変換する異性体の混合物）
分子量：856
分子式：C48H73NO12
UV（HPLC分析の間のダイオードアレイ検出器による）：268 nm、278 nm、288 nm
エレクトロスプレーMS：MNa+のm/z = 878、M-Hのm/z = 854。
MSフラグメント：ナトリウム付加体（m/z 878）は、３つのフラグメントを与えるよう
に、フラグメント化された：C8-C42、m/z MNa+ 749；C1-C27、m/z MNa+ 570；C28-C42+C1
-C14、m/z MNa+ 628。該フラグメントイオン628、及び570は、同じフラグメントを与える
ようにさらにフラグメント化された：C1-C14、m/z MNa+ 320。このC1-C14フラグメントの
質量は、9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチルラパマイシン（
化合物１）のナトリウム付加体のフラグメント化からの等価フラグメントよりも、14質量
単位大きく、C9での酸化体と一致する。
（実施例２７）
（S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKMNOLh]の発酵からの生成物の単離）
9-デオキソ-27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシンを、実施例１に記載され
ているように、S.ハイグロスコピカスMG2-10菌株を、pSGsetKMN/OLhisで接合し、かつ発
酵により生成された生成物を単離することにより得た。これは、該MG2-10菌株のrapK、ra
pM、rapN/O、及びrapLの除去を補うことが可能であり、幾らかのポスト-PKS修飾を欠いた
ラパマイシン類似体を生成することを示している。
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKMN/OLhis]を、「物質、及び方法」に概説した方
法（B）を用いて、発酵し（「物質、及び方法」を参照）、抽出し、かつ単離した。
分取HPLCに使用された該定組成溶媒システムは、60％ CH3CN/H2Oとした。9-デオキソ-2
7-O-デスメチル-39-O-デスメチルラパマイシン（化合物８）は、下記特徴を有する。
単離収量：6 mg
分子量：872
分子式：C49H77NO12
UV（HPLC分析の間のダイオードアレイ検出器による）：268 nm、278 nm、288 nm
エレクトロスプレーMS：MNa+のm/z = 894、M-Hのm/z = 870。
MSフラグメント：ナトリウム付加体（m/z 894）は、３つのフラグメントを与えるよう
に、フラグメント化された：C8-C42、m/z MNa+ 765；C1-C27、m/z MNa+ 586；C28-C42+C1
-C14、m/z MNa+ 614。該フラグメントイオン614、及び586は、同じフラグメントを与える
ようにさらにフラグメント化された：C1-C14、m/z MNa+ 306。このC1-C14フラグメントの
質量は、9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチルラパマイシン（
化合物１）のナトリウム付加体のフラグメント化から得られるフラグメントと同じである
；該化合物は、9-デオキソ体である。該C1-C27フラグメントは、9-デオキソ-16-O-デスメ
チル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチルラパマイシンからの等価フラグメントよりも、30
質量単位大きく、１つのヒドロキシル化、及び１つのメチル化と一致する。RapMは、C-16
のヒドロキシ基をメチル化（pSGsetKIMLhisの実施例２３とともに、pSGsetKILhisの実施
例２２を参照）し、かつRapOと組合せたRapNは、C27をヒドロキシル化し、それにより該
データは、該化合物が、9-デオキソ-27-O-デスメチル-39-O-デスメチルラパマイシン（化
合物８）であることと一致する。
（実施例２８）
（S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKIJLh]の発酵からの生成物の単離）
16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-ラパマイシンを、実施例１に記載されているように
、S.ハイグロスコピカスMG2-10菌株を、pSGsetKIJLhisで接合し、かつ発酵により生成さ
れた生成物を単離することにより得た。これは、該MG2-10菌株のrapK、rapI、rapJ、及び
rapLの除去を補うことが可能であり、幾らかのポスト-PKS修飾を欠いたラパマイシン類似
体を生成することを示している。
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKIJLhis]を、「物質、及び方法」に概説した方法
（B）を用いて、発酵し（「物質、及び方法」を参照）、抽出し、かつ単離した。
分取HPLCに使用された該定組成溶媒システムは、60％ CH3CN/H2Oとした。16-O-デスメ
チル-27-デスメトキシラパマイシン（化合物１２）は、下記特徴を有する。
単離収量：11 mg
分子量：870
分子式：C49H75NO12
UV（HPLC分析の間のダイオードアレイ検出器による）：268 nm、278 nm、288 nm
エレクトロスプレーMS：MNa+のm/z = 892、M-Hのm/z = 868。
（実施例２９）
（S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKLhis]の発酵からの生成物の単離）
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシンを、実
施例１に記載されているように、S.ハイグロスコピカスMG2-10菌株を、pSGsetKLhis で接
合し、かつ発酵により生成された生成物を単離することにより得た。これは、該MG2-10菌
株のrapK、及びrapLの除去を補うことが可能であり、幾らかのポスト-PKS修飾を欠いたラ
パマイシン類似体（前駆ラパマイシン）を生成することを示している。
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKLhis]を、「物質、及び方法」に概説した方法を
用いて、発酵し、抽出し、かつ単離した。
分取HPLCに使用された該定組成溶媒システムは、60％ CH3CN/H2Oとした。9-デオキソ-1
6-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチルラパマイシン（化合物１）は、下記特
徴を有する。
単離収量：24 mg
分子量：842
分子式：C48H75NO11
UV（HPLC分析の間のダイオードアレイ検出器による）：268 nm、278 nm、288 nm
エレクトロスプレーMS：MNa+のm/z = 864、M-Hのm/z = 840。
MSフラグメント：ナトリウム付加体（m/z 864.5）は、４つのフラグメントを与えるよ
うに、フラグメント化された：C8-C42、m/z MNa+ 735；C1-C27、m/z MNa+ 556；C28-C42+
C1-C14、m/z MNa+ 614、C1-C14、m/z MNa+ 306。これらのフラグメントの予期されるm/z
は、報告されているラパマイシンのフラグメント（J. A. Reather、博士論文、ケンブリ
ッジ大学（2000））と比較して決定された。これらのフラグメントは、9-デオキソ-16-O-
デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチルラパマイシンのフラグメントの予期された
m/zと同じm/zを有する。
（実施例３０）
（シクロヘキサンカルボン酸を供給したS.ハイグロスコピカスMG2-10の発酵からの生成物
の単離）
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシンを、S.
ハイグロスコピカスMG2-10に、シクロヘキサンカルボン酸を供給し、かつ発酵により生成
された生成物を単離することにより得た。得られた変異合成体は、該MG2-10菌株のrapKの
除去を補うことが可能であり、天然内在性開始剤がない場合、ポスト-PKS修飾を欠いた、
ラパマイシン類似体の生成物を得ることを示している。
S.ハイグロスコピカスMG2-10を、「物質、及び方法」に概説した方法（B）を用いて、
発酵し（「物質、及び方法」を参照）、抽出し、かつ単離した。
分取HPLCに使用された該定組成溶媒システムは、60％ CH3CN/H2Oとした。99-デオキソ-
16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-デスメトキシラパマイシン（化合物４７）は、下
記特徴を有する。
単離収量：12 mg
分子量：826
分子式：C48H75NO10
UV（HPLC分析の間のダイオードアレイ検出器による）：268 nm、278 nm、288 nm
エレクトロスプレーMS：MNa+のm/z = 848.5、M-Hのm/z = 825。
MSフラグメント：ナトリウム付加体（m/z 848.5）は、４つのフラグメントを与えるよ
うに、フラグメント化された：C8-C42、m/z MNa+ 719；C1-C27、m/z MNa+ 556；C28-C42+
C1-C14、m/z MNa+ 598、C1-C14、m/z MNa+ 306。これらのデータは、化合物４７と9-デオ
キソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチルラパマイシン（化合物１）との
間の相違が、C28-C42の範囲にあることを示している。化合物４７にとって、このフラグ
メントは、化合物１よりも16質量単位小さく、化合物４７は、9-デオキソ-16-O-デスメチ
ル-27-デスメトキシ-39-デスメトキシラパマイシンであることと一致する。
（実施例３１）
（S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKNOLh]の発酵からの生成物の単離）
9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシンを、実
施例１に記載されているように、S.ハイグロスコピカスMG2-10菌株に、pSGsetKN/OLhisを
接合し、かつ発酵により生成された生成物を単離することにより得る。これは、該MG2-10
菌株のrapK、rapN/O、及びrapLの除去を補うことが可能であり、幾らかのポスト-PKS修飾
を欠いたラパマイシン類似体（前駆ラパマイシン）を生成することを示している。
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKN/OLhis]を、「物質、及び方法」に概説した方法
（B）を用いて、発酵し（「物質、及び方法」を参照）、抽出し、かつ単離した。分取HPL
Cに使用された該定組成溶媒システムは、60％ CH3CN/H2Oとした。9-デオキソ-16-O-デス
メチル-27-O-デスメチル-39-O-デスメチルラパマイシン（化合物２）は、下記特徴を有す
る。
分子量：858
分子式：C48H75NO12
UV（HPLC分析の間のダイオードアレイ検出器による）：268 nm、278 nm、288 nm
エレクトロスプレーMS：MNa+のm/z = 896、M-Hのm/z = 856。
（実施例３２）
（S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKJNOLh]の発酵からの生成物の同定）
16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシンを、実施例１に記載
されているように、S.ハイグロスコピカスMG2-10菌株に、pSGsetKJN/OLhisを接合し、か
つ発酵により生成された生成物を分析することにより得た。これは、該MG2-10菌株のrapK
、rapJ、rapN/O、及びrapLの除去を補うことが可能であり、幾らかのポスト-PKS修飾を欠
いたラパマイシン類似体を生成することを示している。
該発酵培養液（1 mL）を、「物質、及び方法」に記載されている抽出、単離、及び分析
の方法（B）に記載されているように処理した。該HPLCクロマトグラム（280 nm）は、特
徴的ラパマイシントリエン（268 nm、278 nm、288 nm）を有するピークを得た。このピー
クは、該カセットのないS.ハイグロスコピカスMG2-10から抽出されたコントロール試料の
該クロマトグラムでは観測されなかった。該新規ラパマイシン類似体ピークのLCMS（「物
質、及び方法」の方法Bを参照）は、m/z 895（MNa+）、及び871（M-H）のイオンを与えた
。これらのイオンは、該新規ラパマイシン類似体の分子量が872であり、9-デオキソ-16-O
-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチルラパマイシン（化合物１）よりも30質量
単位大きく、C9での酸化（rapJ）、及びC27でのヒドロキシル化（rapN/O）と一致するこ
とを確認する。これらのデータは、該化合物が、16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-O
-デスメチルラパマイシン（化合物７）であることと一致する。
（実施例３３）
（S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKJNOLh]の発酵からの生成物の単離）
16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシンを、実施例１に記載
されているように、S.ハイグロスコピカスMG2-10菌株に、pSGsetKJN/OLhisを接合し、か
つ発酵により生成された生成物を単離することにより得た。これは、該MG2-10菌株のrapK
、rapJ、rapN/O、及びrapLの除去を補うことが可能であり、幾らかのポスト-PKS修飾を欠
いたラパマイシン類似体を生成することを示している。
S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKJN/OLhis]を、「物質、及び方法」に概説した方
法（B）を用いて、発酵し（「物質、及び方法」を参照）、抽出し、かつ単離した。
分取HPLCに使用された該定組成溶媒システムは、60％ CH3CN/H2Oとした。16-O-デスメ
チル-27-O-デスメチル-39-O-デスメチルラパマイシン（化合物７）は、下記特徴を有する
。
分子量：872
分子式：C48H73NO13
UV（HPLC分析の間のダイオードアレイ検出器による）：268 nm、278 nm、288 nm
エレクトロスプレーMS：MNa+のm/z = 895、M-Hのm/z = 871。
（実施例３４）
（S.ハイグロスコピカスMG2-10[pSGsetKIJNOQLh]の発酵からの生成物の同定）
16-O-デスメチル-ラパマイシンを、実施例１に記載されているように、S.ハイグロスコ
ピカスMG2-10菌株に、pSGsetKIJN/OQLhisを接合し、かつ発酵により生成された生成物を
分析することにより得た。これは、該MG2-10菌株のrapK、rapI、rapJ、rapN/O、rapQ、及
びrapLの除去を補うことが可能であり、C16-OHでのメチル化を欠いたラパマイシン類似体
の生成を示している。さらに、明らかに、C27-OHのメチル化に関与する該SAM-依存性O-メ
チルトランスフェラーゼとして、RapQが同定された。
S.ハイグロスコピカス[pSGsetKIJN/OQLhis]を、「物質、及び方法」に概説した方法（B
）を用いて、発酵し（「物質、及び方法」を参照）、抽出し、かつ分析した。
該発酵培養液（1 mL）を、「物質、及び方法」に記載されているように処理した。該HP
LCクロマトグラム（280 nm）は、特徴的ラパマイシントリエン（268 nm、278 nm、288 nm
）を有するピークを得た。このピークは、該カセットのないS.ハイグロスコピカスMG2-10
から抽出されたコントロール試料の該クロマトグラムでは観測されなかった。該新規ラパ
マイシン類似体ピークのLCMS（「物質、及び方法」を参照）は、m/z 923（MNa+）、及び8
99（M-H）のイオンを与えた。これらのイオンは、該新規ラパマイシン類似体の分子量が9
00であり、ラパマイシンよりも14質量単位小さいことを確認する。該ポスト-PKS遺伝子は
、C16-OHをメチル化する該カセットrapMのみを含まず、従って該新規ラパマイシンは、16
-O-デスメチルラパマイシン（化合物２０）であり、かつrapQは、C27でのO-メチル化に機
能し、かつ行うことを示すことがすでに定着している。
（実施例３５）
（ラパマイシン類似体のバイオアッセイ：）
（1） = 9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシ
ン（前駆ラパマイシン）、
（6） = 9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-ラパマイシン、
（16） = 9-デオキソ-27-デスメトキシ-ラパマイシン、
（3） = 16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
（9） = 9-デオキソ-16-Oデスメチル-27-O-デスメチル-ラパマイシン、
（8） = 9-デオキソ-27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシン。
（癌細胞系統：）
悪性腫瘍HT29（結腸）、及びMCF-7（乳房）の付随的な人腫瘍細胞系統の成長阻害を、
マイクロ滴定プレートを使用し、MTT（3-（4,5-ジメチルチアゾール-2-イル）-2,5-ジフ
ェニルテトラゾリウムブロミド）アッセイを用いて、インビトロで処理した（Sieuwerts
A.M.らの論文（1995））。全細胞系統を、ATCC（American Type Culture Collection）、
又はECACC（European Collection of Cell Cultures）から得た。すべての細胞系統を冷
凍ストックから生育し、かつRPMI 1640に使用する前に、少なくとも一度、RPMI 1640内に
通過させた。細胞を、最小のトリプシン処理を用いてサブ-融合性培養液から収集した。
細胞を、RPMI 1640内の各細胞系統にとって、適切な密度に希釈し（細胞倍加時間に依存
）、１ウェルにつき100μlの容量で、96ウェルプレートの60ウェル内に接種した（すなわ
ち、該プレートの外側のウェルを使用しなかった。）。プレートを、37℃で一晩、インキ
ュベートした。このインキュベーション後、参照、及び試験物質のログスケール希釈液を
、１ウェルにつき100μl加え、６つの複製を使用し、すべての試験化合物、参照化合物、
及び培地コントロールを試験した。分析の前に、プレートを、さらに72時間インキュベー
トした。MTT（5 mg/ml）を、各ウェルに加え、かつプレートを、3〜4時間、再びインキュ
ベートした。未反応MTTを、該ウェルから除去し、かつ該MTTから形成されたホルマザン結
晶を、DMSO中に溶解し、そして570 nmの特徴的な吸収を示した。最大阻害度の50％（IC50
）を得るように、各試験化合物、及び参照化合物の濃度（nM）を、各ウェル系統に対して
計算し、かつ観測される阻害の最大パーセンテージ（Im）とともに見積もった（表１３参
照）。参考として、ラパマイシンは、該HT-29細胞系統内で、200nMのIC50、及び40％のIm
、及び該MCF-7細胞系統内で、0.03 nMのIC50、及び56％のImを有する。
（混合リンパ球反応（MLR）：）
同種移植に先立ち、組織適合性評価に独創的に開発されたMLRは、インビトロにおける
免疫反応の確立されたモデルを提供する（SOULILLOU J.P.らの論文（1975）；T. Meo.”
免疫学的方法”、L. Lefkovits、及びB. Pernisの論文、アカデミックプレス社、N.Y. pp
. 227-239（1979））。MLRを、C57BL/6マウス（5×105細胞）から単離した脾臓リンパ球
と、CBAマウス（2.5×105細胞）からの阻害された脾臓リンパ球とを混合することにより
行った。該阻害CBAリンパ球は、C57BL/6リンパ球において、増殖応答を示し、かつこれは
、C57BL/6マウスから単離された脾臓リンパ球増殖の測定として、DNA内に取込まれた[3H]
thymidineにより測定した。増殖阻害効果を、参照化合物、試験化合物、及び培地コント
ロールのログスケール希釈液の存在下、72時間、終了まで37℃で評価した。リンパ球増殖
が50％阻害（IC50）される、各試験化合物、及び参照化合物の濃度を、コントロールの増
殖と比較し、各ウェル系統に対して計算し、かつリンパ球増殖の50％阻害に必要なラパマ
イシン濃度（rIC50）の比として見積もった（表１４参照）
（抗真菌アッセイ：）
参照、及び試験化合物の比較の抗真菌活性を、病原性真菌のカンジダ アルビカンスDSM
5816、カンジダ アルビカンスDSM 1386、及びカンジダ グラブラータDSM 11226に対して
測定した。これは、酵母菌用培養液希釈抗真菌感受性試験：認定規格（M27-A、vol. 17 N
o. 9.（1997））のNCCLS参考方法のマイクロタイタープレート適合を用いて達成された。
酵母菌株を、MOPS 0.165 mMを含む、pH 7のRPMI 1640培地に接種した（104 cfu/ml）。37
℃で振盪し、インキュベーション後、生育を、参照化合物、試験化合物、及び培地コント
ロールのログスケール希釈液の存在下で測定した。最小阻止濃度（MIC）、及び最小殺真
菌活性（MFC）を、試験化合物に対し測定し、かつラパマイシン最小阻止濃度（rMIC）の
比として表した（表１５参照）。
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Claims (66)

  1. 宿主株を、一以上の遺伝子が除去又は不活性化されている、FKBP-リガンドをコードす
    る生合成クラスターを含む組換え型菌株に転換する方法であって、下記工程を含む前記方
    法：
    （ａ）dam-、dcm-、又はdam-及びdcm-であるE.コリ株中に、接合性欠失プラスミドを構築
    する工程；
    （ｂ）接合に適した前記宿主株から胞子を生成する工程、ここで、前記菌株を、湿度10％
    〜40％で成長させ、かつ該胞子を、5〜30日で収集し；
    （ｃ）１リットルにつき：
    i） コーン浸透粉0.5 g〜5 g；
    ii） 酵母エキス0.1 g〜5 g；
    iii） 炭酸カルシウム0.1 g〜10 g；及び
    iv） 硫酸鉄0.01 g〜0.5 g；
    を含む培地上で、工程（ａ）のE.コリ株と工程（ｂ）から得られた胞子とを接合させる工
    程であって、前記培地は、さらに、BACTO-寒天、及びデンプンを含み、かつ1〜20重量％
    減少するように乾燥させており；かつ
    （ｄ）ポリケチド産生に適した条件下で、前記組換え型菌株を、任意に培養する工程。
  2. 除去又は不活性化されるべき該遺伝子が、ポリケチドシンターゼ遺伝子クラスター、又
    は非リボソーム型ペプチドシンターゼ遺伝子クラスターからのものである、請求項１に記
    載の方法。
  3. 該遺伝子が、補助遺伝子である、請求項２に記載の方法。
  4. 工程（ａ）の該E.コリ株が、damである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
  5. 工程（ａ）の該E.コリ株が、dcmである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
  6. 工程（ａ）の該E.コリ株が、dam、及びdcmである、請求項１〜５のいずれか１項に記載
    の方法。
  7. 工程（ｂ）において、該胞子を10〜25日で収集する、請求項１〜６のいずれか１項に記
    載の方法。
  8. 工程（ｂ）において、該胞子を14〜21日で収集する、請求項７に記載の方法。
  9. 工程（ｂ）において、該胞子を湿度10〜20％で成長させる、請求項１〜８のいずれか１
    項に記載の方法。
  10. 工程（ｃ）において、該培地が、デンプン、及びBACTO-寒天に加えて、１リットルあた
    り：
    i） コーン浸透粉1 g〜4 g；
    ii） 酵母エキス1 g〜4 g；
    iii） 炭酸カルシウム1 g〜5 g；及び
    iv） 硫酸鉄0.2 g〜0.4 g；
    を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
  11. 工程（ｃ）において、該培地が、デンプン、及びBACTO-寒天に加えて、１リットルあた
    り：
    i） コーン浸透粉2.5 g；
    ii） 酵母エキス3 g；
    iii） 炭酸カルシウム3 g；及び
    iv） 硫酸鉄0.3 g；
    を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
  12. 該菌株が、下記菌株からなる群から選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載
    の方法：ストレプトマイセス ハイグロスコピカスsubsp.ハイグロスコピカスNRRL 5491、
    アクチノプラネスsp. N902-109 FERM BP-3832、ストレプトマイセスsp. AA6554、ストレ
    プトマイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスMA 6475 ATCC 14891、スト
    レプトマイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスMA 6678 ATCC 55087、ス
    トレプトマイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスMA 6674、ストレプトマ
    イセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスATCC 55276、ストレプトマイセス
    ハイグロスコピカスsubsp.アスコマイセティカスATCC 14891、ストレプトマイセス ツク
    バエンシスNo.9993 FERM BP-927、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスsubsp.ヤクシ
    マエンシス、ストレプトマイセスsp. DSM 4137、ストレプトマイセスsp. DSM 7348、ミク
    ロモノスポラn. sp. A92-306401 DSM 8429、及びストレプトマイセスsp. MA 6858 ATCC 5
    5098。
  13. 該菌株が、S.ハイグロスコピカスsubsp.ハイグロスコピカスNRRL 5491、及びS.ハイグ
    ロスコピカスvar.アスコマイセティカスATCC 14891からなる群から選択される、請求項１
    ２に記載の方法。
  14. 該菌株が、ラパマイシン産生株S.ハイグロスコピカスsubsp.ハイグロスコピカスNRRL 5
    491である、請求項１３に記載の方法。
  15. 収集された該胞子が、暗灰色である、請求項１４に記載の方法。
  16. ポリケチドシンターゼ、又は非リボソーム型ペプチドシンターゼ遺伝子クラスターから
    、一以上の遺伝子が除去又は不活性化されている、FKBP-リガンドをコードする生合成ク
    ラスターを含む組換え型菌株の生産方法であって、一以上の前記除去又は不活性化された
    遺伝子が、相補性により復元されている、前記方法。
  17. 前記除去又は不活性化された遺伝子が、ポリケチドシンターゼ、又は非リボソーム型ペ
    プチドシンターゼ遺伝子クラスターの補助遺伝子である、請求項１６に記載の方法。
  18. 該組換え型菌株が、請求項１〜１５のいずれか１項に従って生産される、請求項１６、
    又は１７に記載の方法。
  19. 該除去された遺伝子の復元プロセスが：
    （ａ）一以上の該除去された遺伝子を含む遺伝子カセットを構築すること、及び
    （ｂ）FKBP-リガンドをコードする生合成クラスターを含む前記組換え型菌株を、前記遺
    伝子カセットを用いて形質転換することを含む、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載
    の方法。
  20. 前記遺伝子カセットが、直接、発現ベクター内で組み立てられる、請求項１９に記載の
    方法。
  21. 前記発現ベクターが、二つの制限酵素認識部位を含み、その一つが、damメチル化に感
    受性である、請求項２０に記載の方法。
  22. 該damメチル化感受性制限酵素認識部位が、復元されるべき補助遺伝子に対し5’である
    、請求項２１に記載の方法。
  23. 該相補性が、相同的である、請求項１６〜２２のいずれか１項に記載の方法。
  24. 該相補性が、非相同的である、請求項１６〜２２のいずれか１項に記載の方法。
  25. 前記一以上の除去され又は不活性化された補助遺伝子が、開始単位供給遺伝子、アミノ
    酸前駆体供給遺伝子、シトクロムP-450モノオキシゲナーゼ、フェレドキシン、及びSAM-
    依存性O-メチルトランスフェラーゼからなる群から選択される、請求項３〜１５、又は請
    求項１７〜２４のいずれか１項に記載の方法。
  26. 該除去され又は不活性化された遺伝子が、rapL、rapN、rapO、rapM、rapK、rapQ、rapI
    、及びrapJからなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
  27. 工程（ｃ）において、前記デンプンが、小麦デンプンである、請求項１〜２６のいずれ
    か１項に記載の方法。
  28. 請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法を用いて生産された組換え型菌株を培養す
    ることを含む、FBKP-リガンド類似体の生産方法。
  29. さらに、一以上の天然、又は非天然開始単位、及び／又はピペコリン酸、又はピペコリ
    ン酸類似体を供給することを含む、請求項２８に記載の方法。
  30. さらに、そのようにして生産された該化合物を単離する工程を含む、請求項２８、又は
    ２９に記載の方法。
  31. ポリケチドシンターゼ遺伝子クラスター、又は非リボソーム型シンターゼ遺伝子クラス
    ターから、一以上の遺伝子が、除去又は不活性化された、FKBP-リガンドをコードする生
    合成クラスターを含む組換え型菌株のコロニーライブラリーを構築する方法であって、
    （ａ）一以上の前記遺伝子を除去する工程、
    （ｂ）一以上の前記除去された遺伝子を含む遺伝子カセットの混合物を用いて、前記コロ
    ニーを形質転換する工程、
    （ｃ）該形質転換された細胞を、個々のコロニーに分離する工程、及び
    （ｄ）該コロニーを培養する工程、を含む前記方法。
  32. 該遺伝子が、補助遺伝子である、請求項３１に記載の方法。
  33. 工程（ａ）が、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法を用いる、前記遺伝子の除
    去、又は不活性化を含む、請求項３１、又は３２に記載の方法。
  34. 前記遺伝子カセットが、直接、発現ベクター中で組み立てられる、請求項３１〜３３の
    いずれか１項に記載の方法。
  35. 前記発現ベクターが、二つの制限酵素認識部位を含み、その一つが、damメチル化に感
    受性である、請求項３４に記載の方法。
  36. 該damメチル化感受性制限酵素認識部位が、復元すべき該補助遺伝子に対し5’である、
    請求項３５に記載の方法。
  37. 請求項３１〜３６のいずれか１項に記載の方法により得たコロニーライブラリーを、前
    記FBKP-リガンド類似体が産生される条件下で培養することを含む、FKBP-リガンド組換え
    ライブラリーの製造方法。
  38. 請求項３１〜３７のいずれか１項に記載の方法で製造された、FBKP-リガンド類似体の
    ライブラリー。
  39. 該菌株が、下記菌株からなる群から選択される、請求項３１〜３７のいずれか１項に記
    載の方法：ストレプトマイセス ハイグロスコピカスsubsp.ハイグロスコピカスNRRL 5491
    、アンチノプラネスsp. N902-109 FERM BP-3832、ストレプトマイセスsp. AA6554、スト
    レプトマイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスMA 6475 ATCC 14891、ス
    トレプトマイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスMA 6678 ATCC 55087、
    ストレプトマイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスMA 6674、ストレプト
    マイセス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスATCC 55276、ストレプトマイセ
    ス ハイグロスコピカスsubsp.アスコマイセティカスATCC 14891、ストレプトマイセス ツ
    クバエンシスNo.9993 FERM BP-927、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスsubsp.ヤク
    シマエンシス、ストレプトマイセスsp. DSM 4137、ストレプトマイセスsp. DSM 7348、ミ
    クロモノスポラn. sp. A92-306401 DSM 8429、及びストレプトマイセスsp. MA 6858 ATCC
    55098。
  40. 該菌株が、S.ハイグロスコピカスsubsp.ハイグロスコピカスNRRL 5491、及びS.ハイグ
    ロスコピカスvar.アスコマイセティカスATCC 14891からなる群から選択される、請求項３
    ９に記載の方法。
  41. 該菌株が、ラパマイシン産生株S.ハイグロスコピカスsubsp.ハイグロスコピカスである
    、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記遺伝子カセットが、直接、発現ベクター内で組み立てられる、請求項３１〜３７、
    又は請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の方法。
  43. 少なくとも該rapK相同体が除去又は不活性化されている、FKBP-リガンドをコードする
    生合成クラスターを含む組換え型菌株。
  44. 該菌株が下記菌株からなる群から選択された、請求項４３に記載の組換え型菌株：スト
    レプトマイセス ハイグロスコピカスsubsp.ハイグロスコピカスNRRL 5491、アンチノプラ
    ネスsp. N902-109 FERM BP-3832、ストレプトマイセスsp. AA6554、ストレプトマイセス
    ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスMA 6475 ATCC 14891、ストレプトマイセス
    ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスMA 6678 ATCC 55087、ストレプトマイセ
    ス ハイグロスコピカスvar.アスコマイセティカスMA 6674、ストレプトマイセス ハイグ
    ロスコピカスvar.アスコマイセティカスATCC 55276、ストレプトマイセス ハイグロスコ
    ピカスsubsp.アスコマイセティカスATCC 14891、ストレプトマイセス ツクバエンシスNo.
    9993 FERM BP-927、ストレプトマイセス ハイグロスコピカスsubsp.ヤクシマエンシス、
    ストレプトマイセスsp. DSM 4137、ストレプトマイセスsp. DSM 7348、ミクロモノスポラ
    n. sp. A92-306401 DSM 8429、及びストレプトマイセスsp. MA 6858 ATCC 55098。
  45. 該菌株が、S.ハイグロスコピカスsubsp.ハイグロスコピカスNRRL 5491、及びS.ハイグ
    ロスコピカスvar.アスコマイセティカスATCC 14891からなる群から選択される、請求項４
    ４に記載の組換え型菌株。
  46. 該菌株が、ラパマイシン産生株S.ハイグロスコピカスsubsp.ハイグロスコピカスNRRL 5
    491である、請求項４５に記載の組換え型菌株。
  47. 該除去又は不活性化された補助遺伝子が、欠失したrapK、rapL、rapN/O、rapQ、rapM、
    rapI、及びrapJからなる群から選択され、ここで前記欠失が、rapQrapN/OrapMrapLではな
    い、請求項４６に記載の組換え型菌株。
  48. 該除去又は不活性化された遺伝子がrapK、rapL、rapN/O、rapQ、rapM、rapI、及びrapJ
    である、請求項４７に記載の組換え型菌株。
  49. 非天然開始単位を組込んだFBKP-リガンド類似体の製造方法であって、
    （ａ）少なくとも該rapK相同体が除去又は不活性化された組換え型菌株を製造する工程；
    及び
    （ｂ）前記菌株に、非天然開始単位を与える工程、を含む前記方法。
  50. さらに、一以上の補助遺伝子を除去する工程を含む、請求項４９に記載の方法。
  51. さらに、相補性により、一以上の該除去された遺伝子を復元する工程を含む、請求項４
    ９、又は５０に記載の方法。
  52. さらに、産生した該FKBP-リガンド類似体を単離し、かつ精製する工程を含む、請求項
    ４９〜５１のいずれか１項に記載の方法。
  53. 非天然開始単位を組込んだFBKP-リガンド類似体の製造方法であって、
    （ａ）請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法を用いて、少なくとも該rapK相同体が
    除去又は不活性化された組換え型菌株を製造する工程、及び
    （ｂ）前記菌株に、非天然開始単位を与える工程、を含む前記方法。
  54. さらに、一以上の補助遺伝子を除去する工程を含む、請求項５３に記載の方法。
  55. さらに、相補性により、一以上の該除去された遺伝子を復元する工程を含む、請求項５
    ３、又は５４に記載の方法。
  56. さらに、産生した該FKBP-リガンド類似体を単離し、かつ精製する工程を含む、請求項
    ５１〜５５のいずれか１項に記載の方法。
  57. 前記非天然開始単位が、下記化合物からなる群から選択される、請求項５１〜５６のい
    ずれか１項に記載の方法：
    2-ノルボルナンカルボン酸；
    2-（cis/trans）-ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸；
    3-（cis/trans）-ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸；
    4-（cis/trans）-ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸；
    2-（cis/trans）-メチルシクロヘキサンカルボン酸；
    4-（cis/trans）-メチルシクロヘキサンカルボン酸；
    3-（cis/trans）-メトキシシクロヘキサンカルボン酸；
    4-（cis/trans）-メトキシシクロヘキサンカルボン酸；
    4-オキソシクロヘキサンカルボン酸；
    2-オキソシクロヘキサンカルボン酸；
    4-trans-n-ペンチルシクロヘキサンカルボン酸；
    2-trans-アミノシクロヘキサンカルボン酸；
    4-cis-アミノシクロヘキサンカルボン酸；
    4-（cis/trans）-アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸；
    シクロペンタンカルボン酸；
    シクロブタンカルボン酸；
    1-メチルシクロヘキサンカルボン酸；
    3-trans-ヒドロキシ-4-cis-フルオロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-trans-ヒドロキ
    シ-3-cis-フルオロシクロヘキサンカルボン酸；
    3-cis-ヒドロキシ-4-trans-フルオロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-cis-ヒドロキシ-
    3-trans-フルオロシクロヘキサンカルボン酸；
    3-cis-ヒドロキシ-4-trans-クロロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-cis-ヒドロキシ-3-
    trans-クロロシクロヘキサンカルボン酸;
    3-trans-ヒドロキシ-4-cis-クロロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-trans-ヒドロキシ-
    3-cis-クロロシクロヘキサンカルボン酸；
    3-trans-シクロヘキセンオキシドカルボン酸；
    3-cis-シクロヘキセンオキシドカルボン酸；
    3,4-cis-ジヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、及び3,4-trans-ジヒドロキシシクロヘ
    キサンカルボン酸；シクロヘキサン酢酸；
    シクロヘキサンプロピオン酸、及び4-cis/trans-tert-ブチルシクロヘキサンカルボン酸
    、又はこれらの単純エステル、又はこれらの塩。
  58. 前記非天然開始単位が、下記化合物からなる群から選択される、請求項５７に記載の方
    法：
    3-（cis/trans）-ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸；
    4-（cis/trans）-ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸；
    3-（cis/trans）-メトキシシクロヘキサンカルボン酸；
    4-（cis/trans）-メトキシシクロヘキサンカルボン酸；
    4-オキソシクロヘキサンカルボン酸；
    シクロブタンカルボン酸；
    3-trans-ヒドロキシ-4-cis-フルオロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-trans-ヒドロキ
    シ-3-cis-フルオロシクロヘキサンカルボン酸；
    3-cis-ヒドロキシ-4-trans-フルオロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-cis-ヒドロキシ-
    3-trans-フルオロシクロヘキサンカルボン酸；
    3-cis-ヒドロキシ-4-trans-クロロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-cis-ヒドロキシ-3-
    trans-クロロシクロヘキサンカルボン酸；
    3-trans-ヒドロキシ-4-cis-クロロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-trans-ヒドロキシ-
    3-cis-クロロシクロヘキサンカルボン酸；
    3-trans-シクロヘキセンオキシドカルボン酸；
    3-cis-シクロヘキセンオキシドカルボン酸；
    3,4-cis-ジヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、及び3,4-trans-ジヒドロキシシクロヘ
    キサンカルボン酸；
    シクロヘキサンプロピオン酸；
    4-cis/trans-tert-ブチルシクロヘキサンカルボン酸、又はこれらの単純エステル、又は
    これらの塩。
  59. 請求項４９〜５６のいずれか１項に記載の方法により製造される化合物、ただし、前記
    組換え型菌株に与えられる該非天然開始剤は：
    シクロヘキサンカルボン酸、
    3-cis,4-trans-ジヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、
    1-シクロヘキセンカルボン酸、
    3-シクロヘキセンカルボン酸、
    シクロヘプタンカルボン酸、
    3-（cis/trans）-メチルシクロヘキサンカルボン酸、
    4-（cis/trans）-メチルシクロヘキサンカルボン酸、
    1-シクロヘプテンカルボン酸、又は5-cis-ヒドロキシル-3-シクロヘキセンカルボン酸で
    はないものとする。
  60. 前記組換え型菌株に与えられる該非天然開始が、下記化合物からなる群から選択される
    、請求項４９〜５６のいずれか１項に記載の方法により提供される化合物：
    3-（cis/trans）-ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸；
    4-（cis/trans）-ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸；
    3-（cis/trans）-メトキシシクロヘキサンカルボン酸；
    4-（cis/trans）-メトキシシクロヘキサンカルボン酸；
    4-オキソシクロヘキサンカルボン酸；
    シクロブタンカルボン酸；
    3-trans-ヒドロキシ-4-cis-フルオロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-trans-ヒドロキ
    シ-3-cis-フルオロシクロヘキサンカルボン酸；
    3-cis-ヒドロキシ-4-trans-フルオロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-cis-ヒドロキシ-
    3-trans-フルオロシクロヘキサンカルボン酸；
    3-cis-ヒドロキシ-4-trans-クロロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-cis-ヒドロキシ-3-
    trans-クロロシクロヘキサンカルボン酸；
    3-trans-ヒドロキシ-4-cis-クロロシクロヘキサンカルボン酸、及び4-trans-ヒドロキシ-
    3-cis-クロロシクロヘキサンカルボン酸；
    3-trans-シクロヘキセンオキシドカルボン酸；
    3-cis-シクロヘキセンオキシドカルボン酸；
    3,4-cis-ジヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、及び3,4-trans-ジヒドロキシシクロヘ
    キサンカルボン酸；シクロヘキサンプロピオン酸；
    4-cis/trans-tert-ブチルシクロヘキサンカルボン酸。
  61. より高度な好ましい実施態様において、本発明が提供する下記のFK520類似体から選択
    される化合物：
    31-デスメトキシ-31-メチル-FK520、
    31-デスメトキシ-31-フルオロ-FK520、
    31-デスメトキシ-31-クロロ-FK520、
    31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-FK520、
    29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
    -FK520、
    29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-F
    K520、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-メチル-FK520、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-フルオロ-FK520、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-クロロ-FK520、
    9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-FK520、
    9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シク
    ロヘプチル）-FK520、
    9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノル
    ボルニル）-FK520、
    30-デスメトキシ-30-メチル-プロリル-FK520、
    30-デスメトキシ-30-フルオロ-プロリル-FK520、
    30-デスメトキシ-30-クロロ-プロリル-FK520、
    30-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-プロリル-FK520、
    28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
    -FK520、
    28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-F
    K520、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK520
    、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-プロリル-FK52
    0、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
    ロヘプチル）-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
    ボルニル）-プロリル-FK520、
    30-デスメトキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK52
    0、
    30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520
    、
    30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK
    520、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-O-デスメチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-デスメトキシ-30-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-デスメトキシ-30-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
    -3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-3
    -ヒドロキシ-プロリル-FK520、8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-3-ヒドロキ
    シ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プ
    ロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロ
    リル-FK520、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-
    プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520
    、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK5
    20、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520
    、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-3-ヒドロキシ-プロリル-
    FK520、
    8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
    ロヘプチル）-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
    ボルニル）-3-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-デスメトキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK52
    0、
    30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520
    、
    30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK
    520、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-O-デスメチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、30-デスメトキシ-30-メチル-4-ヒドロ
    キシ-プロリル-FK520、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-デスメトキシ-30-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-デスメトキシ-30-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
    -4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-4
    -ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プ
    ロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロ
    リル-FK520、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-
    プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520
    、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK5
    20、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520
    、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-4-ヒドロキシ-プロリル-
    FK520、
    8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
    ロヘプチル）-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
    ボルニル）-4-ヒドロキシ-プロリル-FK520、
    31-デスメトキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK
    520、
    31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK52
    0、
    31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]
    FK520、
    31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    31-O-デスメチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    31-デスメトキシ-31-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    31-デスメトキシ-31-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    31-デスメトキシ-31-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
    -trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-t
    rans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシク
    ロ[3.1.0.]FK520、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[
    3.1.0.]FK520、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシ
    クロ[3.1.0.]FK520、
    9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    9-デオキソ-31-O-デスメチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK5
    20、
    9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]F
    K520、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK5
    20、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0
    .]FK520、
    9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シク
    ロヘプチル）-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520、
    9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノル
    ボルニル）-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK520。
  62. 下記化合物からなる群から選択された化合物：
    31-デスメトキシ-31-メチル-FK506、
    31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-FK506、
    29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
    -FK506、
    29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-F
    K506、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-メチル-FK506、
    9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-FK506、
    9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シク
    ロヘプチル）-FK506、
    9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノル
    ボルニル）-FK506、
    30-デスメトキシ-30-メチル-プロリル-FK506、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-プロリル-FK506、
    28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
    -FK506、
    28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-F
    K506、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
    ロヘプチル）-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
    ボルニル）-プロリル-FK506、
    30-デスメトキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK50
    6、
    30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506
    、
    30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK
    506、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-O-デスメチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-デスメトキシ-30-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-デスメトキシ-30-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
    -3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-3
    -ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プ
    ロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロ
    リル-FK506、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-
    プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506
    、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK5
    06、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506
    、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-3-ヒドロキシ-プロリル-
    FK506、
    8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
    ロヘプチル）-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
    ボルニル）-3-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-デスメトキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK50
    6、
    30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506
    、
    30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK
    506、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-O-デスメチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-デスメトキシ-30-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-デスメトキシ-30-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-デスメトキシ-30-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
    -4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-4
    -ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-31-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プ
    ロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-cis-ヒドロキシ-31-cis-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロ
    リル-FK506、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-trans-ヒドロキシ-31-trans-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-
    プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-メチル-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506
    、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK5
    06、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-フルオロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-クロロ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506
    、
    8-デオキソ-30-デスメトキシ-30-クロロ-3-ヒドロキシ-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-30-O-デスメチル-31-デヒドロキシ-31-tert-ブチル-4-ヒドロキシ-プロリル-
    FK506、
    8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-シク
    ロヘプチル）-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    8-デオキソ-28-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-28-（ヒドロキシ-ノル
    ボルニル）-4-ヒドロキシ-プロリル-FK506、
    31-デスメトキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK
    506、
    31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK50
    6、
    31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]
    FK506、
    31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    31-O-デスメチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    31-デスメトキシ-31-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    31-デスメトキシ-31-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    31-デスメトキシ-31-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シクロヘプチル）
    -trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノルボルニル）-t
    rans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシク
    ロ[3.1.0.]FK506、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-cis-ヒドロキシ-32-cis-ヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[
    3.1.0.]FK506、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-trans-ヒドロキシ-32-trans-ヒドロキシ-trans-3-ビシ
    クロ[3.1.0.]FK506、
    9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    9-デオキソ-31-O-デスメチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-メチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK5
    06、
    9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]F
    K506、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-フルオロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK5
    06、
    9-デオキソ-31-デスメトキシ-31-クロロ-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    9-デオキソ-31-O-デスメチル-32-デヒドロキシ-32-tert-ブチル-trans-3-ビシクロ[3.1.0
    .]FK506、
    9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-シク
    ロヘプチル）-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506、
    9-デオキソ-29-デ（3-メトキシ-4-ヒドロキシ-シクロヘキシル）-29-（ヒドロキシ-ノル
    ボルニル）-trans-3-ビシクロ[3.1.0.]FK506。
  63. 下記式の化合物：
    式中：x =結合、又はCHR11であるか、又はCHR6-x-CHR5が、
    であり、
    R1 = OH、OCH3、R2 = H、OH、OCH3、R3 = H、OH、CH3、F、Cl、OCH3、R4 = H、OH、CH3
    、F、Cl、R5 = H、OH、R6 = H、OH、R7 = H、R8 = H、ケト、R9 = H、ケト、R10 = H、R1
    1 = H、R13 = HR14 = H、R16 = OH、OCH3、R17 = H、OH、Cl、F、及びy = 結合、CH2であ
    るが、
    但し、前記化合物は、下記のものを含まない：
    i） 該式中、R1 = OCH3の場合、R2 = H、R15 = C、R16 = cis-3-OH、R17 = trans-4-OH
    、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8 = H、R9 = H、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ
    ；
    ii） 該式中、R1 = OHの場合、R2 = OCH3、R15 = C、R16 = cis-3-OH、R17 = trans-4-O
    H、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H R11 = H、x = CHR11との組合せ；
    iii） 該式中、R1 = OHの場合、R2 = OH、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-
    OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 =ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ
    ；
    iv） 該式中、R1 = OHの場合、R2 = H、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-OH
    、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ；
    v） 該式中、R1 = OCH3の場合R2 = H、R15 = C、R16 = cis-3-OH、R17 = trans-4-OH、R
    5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ；
    vi） 該式中、R1 = OCH3の場合、R2 = H、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-
    OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8 = H、R9 = H、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合
    せ；
    vii） 該式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OH、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-
    4-OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8 = H、R9 = H、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組
    合せを除く；
    viii） 該式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OCH3、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = tra
    ns-4-OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8 = H、R9 = H、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との
    組合せ；
    ix） 該式中、R1 = OHの場合、R2 = OCH3、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4
    -OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合
    せ；
    x） 該式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OH、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-
    OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ
    ；
    xi） 該式中、R1 = OCH3の場合、R2 = H、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-
    OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ
    ；
    xii） 該式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OCH3、R15 = C、R16 = cis-3-OH、R17 = trans-
    4-OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合
    せ；
    xiii） 該式中、R1 = OCH3の場合、R2 = H、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-
    4-OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8 = H、R9 = H、R10 = H、x = 結合との組合せ；
    xiv） 該式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OCH3、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = tran
    s-4-OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8 = H、R9 = H、R10 = H、x = 結合との組合せ；
    xv） 該式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OH、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4
    -OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、x = 結合との組合せ；
    xvi） 該式中、R1 = OCH3の場合、R2 = H、R15 = C、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4
    -OH、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、x = 結合との組合せ；
    xvii） 該式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OCH3、R15 = C、R16 = H、R17 = OH、R5 = H、
    R6 = H、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = H、R11 = H、x = CHR11との組合せ；
    xviii） 該式中、CHR6-x-CHR5が
    、かつR11 = H、R13 = H、R14 = Hの場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R15 = C、R16 = cis-
    3-OCH3、R17 = trans-4-OH、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
    xix） 該式中、R15 = G、R16 = cis-3-OCH3、R17 = trans-4-OH、y = 結合の場合、R1 =
    OCH3、R2 = H、R5 = H、R6 = OH、R7 = H、R11 = H、x = 結合、R8，R9 = ケト、R10 =
    Hとの組合せ；
    xx） 該式中、R15 = G、R3 = H、R4 = trans-OH、y = 結合の場合、R1 = OCH3、R2 = OC
    H3、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8，R9 = ケト、R10 = H との組合
    せ；
    xxi） 該式中、R15 = G、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R5
    = H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
    xxii） 該式中、R15 = G、R3 = cis-OH、R4 = H、y = 結合の場合、R1 = OCH3、R2 = OC
    H3、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ
    ；
    xxiii） 該式中、R15 = G、R3 = CH3、R4 = OH、y = 結合の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH
    3、R5 = H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ
    ；
    xxiv） 該式中、R15 = G、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OH、R2 = OH、R5 =
    H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8 = R9 = H、R10 = Hとの組合せ；
    xxv） 該式中、R15 = G、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R5
    = H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8 = R9 = H、R10 = Hとの組合せ；
    xxvi） 該式中、R15 = G、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OH、R2 = OCH3、R5
    = H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8 = R9 = H、R10 = Hとの組合せ；
    xxvii） 該式中、R15 = G、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OH、R2 = H、R5 =
    H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8 = R9 = H、R10 = Hとの組合せ；
    xxviii） 該式中、R15 = G、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OH、R2 = OCH3、R
    5 = H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
    xxix） 該式中、R15 = G、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OCH3、R2 = H、R5 =
    H、R6 = H、R7 = H、R11 = H、x = CHR11、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ。
  64. 下記式の化合物：
    式中：R1 = OH、OCH3、R2 = H、OH、OCH3、R3 = H、OH、CH3、OCH3、R4 = H、OH、R5 =
    H、R6 = H、OH、R7 = H、R8 = H，ケト、R9 = H，ケト、R10 = H、x = 結合、CH2、又は
    CHR6-x-CHR5が
    であり、R11 = H、R13 = H、R14 = H、y = 結合、CH2；
    但し、前記化合物は、下記のものを含まない：
    i） 該式中、R3 = H、R4 = trans-OH、y = 結合の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R5 = H
    、R6 = H、R7 = H、x = CH2、R8，R9 = ケト、R10 = H との組合せ；
    ii） 該式中、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R5 = H、R6 =
    H、R7 = H、x = CH2、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
    iii） 該式中、R3 = cis-OH、R4 = H、y = 結合の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R5 = H
    、R6 = H、R7 = H、x = CH2、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
    iv） 該式中、R3 = CH3、R4 = OH、y = 結合の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R5 = H、R
    6 = H、R7 = H、x = CH2、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
    v） 該式中、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OH、R2 = OH、R5 = H、R6 = H、R
    7 = H、x = CH2、R8 = R9 = H、R10 = Hとの組合せ；
    vi） 該式中、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R5 = H、R6 =
    H、R7 = H、x = CH2、R8 = R9 = H、R10 = Hとの組合せ；
    vii） 該式中、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OH、R2 = OCH3、R5 = H、R6 =
    H、R7 = H、x = CH2、R8 = R9 = H、R10 = H との組合せ；
    viii） 該式中、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OH、R2 = H、R5 = H、R6 = H
    、R7 = H、x = CH2、R8 = R9 = H、R10 = Hとの組合せ；
    ix） 該式中、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OH、R2 = OCH3、R5 = H、R6 = H
    、R7 = H、x = CH2、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
    x） 該式中、R3 = H、R4 = OH、y = CH2の場合、R1 = OCH3、R2 = H、R5 = H、R6 = H、
    R7 = H、x = CH2、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
    xi） 該式中、R3 = OCH3、R4 = OH、y = 結合の場合、R1 = OCH3、R2 = H、R5 = H、R6
    = OH、R7 = H、x = 結合、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
    xii） 該式中、CHR6-x-CHR5が
    、かつR11 = H、R13 = H、R14 = Hの場合、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R3 = OCH3、R4 = OH
    、R7 = H、R8，R9 = ケト、R10 = Hとの組合せ；
    xiii） 該式中、R1 = OCH3の場合、R2 = H、R3 = OCH3、R4 = OH、R5 = H、R6 = H、R7
    = H、R8 = H、R9 = H、R10 = H、x = 結合、y = 結合との組合せ；
    xiv） 該式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OCH3、R3 = OCH3、R4 = OH、R5 = H、R6 = H、R
    7 = H、R8 = H、R9 = H、R10 = H、x = 結合、y = 結合との組合せ；
    xv） 該式中、R1 = OCH3の場合、R2 = OH、R3 = OCH3、R4 = OH、R5 = H、R6 = H、R7 =
    H、R8，R9 = ケト、R10 = H、x = 結合、y = 結合との組合せ；
    xvi） 該式中、R1 = OCH3の場合、R2 = H、R3 = OCH3、R4 = OH、R5 = H、R6 = H、R7 =
    H、R8，R9 = ケト、R10 = H、x = 結合、y = 結合との組合せ；
    xvii） 該式中、R1 = OCH3、R2 = H、R3 = OH、R4 = OH、R8 = H、R9 = H;
    xviii） 該式中、R1 = OCH3、R2 = H、R3 = OCH3、R4 = OH、R8 = H、R9 = H;
    xiv） 該式中、R1 = OCH3、R2 = H、R3 = OH、R4 = OH、R8，R9 = ケト;
    xv） 該式中、R1 = OH、R2 = OH、R3 = OCH3、R4 = OH、R8，R9 = ケト;
    xvi） 該式中、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R3 = OH、R4 = OH、R8，R9 = ケト;
    xvii） 該式中、R1 = OCH3、R2 = OH、R3 = OCH3、R4 = OH、R8，R9 = ケト;
    xviii） 該式中、R1 = OCH3、R2 = OCH3、R3 = OCH3、R4 = OH、R8 = H、R9 = H。
  65. 下記からなる群から選択された化合物：
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシン（前駆ラ
    パマイシン）、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
    16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-ラパマイシン、
    16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
    9-デオキソ-27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-ラパマイシン、
    27-O-デスメチル-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-ラパマイシン、
    9-デオキソ-39-O-デスメチル-ラパマイシン、
    8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン
    （前駆プロリルラパマイシン）、
    8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン
    、
    15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
    8-デオキソ-26-デスメトキシ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
    8-デオキソ-15-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
    8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
    15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
    8-デオキソ-26-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
    8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
    15-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
    15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
    15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
    26-デスメトキシ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
    26-O-デスメチル-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
    8-デオキソ-15-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
    8-デオキソ-26-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
    8-デオキソ-38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
    15-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
    38-O-デスメチル-プロリルラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
    16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
    9-デオキソ-27-デスメトキシ-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
    16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
    9-デオキソ-27-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
    16-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
    27-デスメトキシ-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
    27-O-デスメチル-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
    9-デオキソ-39-デスメトキシ-ラパマイシン、
    8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン
    、
    8-デオキソ-15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン
    、
    15-O-デスメチル-26-デスメトキシ-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
    8-デオキソ-26-デスメトキシ-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
    8-デオキソ-15-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
    15-O-デスメチル-26-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
    8-デオキソ-26-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
    15-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
    26-デスメトキシ-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
    26-O-デスメチル-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
    8-デオキソ-38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
    38-デスメトキシ-プロリルラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
    キシシクロヘキシル）-36-（ヒドロキシシクロヘキセニル）ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
    キシシクロヘキシル）-36-（ジヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
    キシシクロヘキシル）-36-（ヒドロキシノルボルニル）ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
    キシシクロヘキシル）-36-（3-メチル-4-ヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
    キシシクロヘキシル）-36-（4-メチル ヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
    キシシクロヘキシル）-36-（3-フルオロ-4-ヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
    キシシクロヘキシル）-36-（3-ヒドロキシ-4-フルオロシクロヘキシル）ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
    キシシクロヘキシル）-36-（3-クロロ-4-ヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
    キシシクロヘキシル）-36-（3-ヒドロキシ-4-クロロシクロヘキシル）ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
    キシシクロヘキシル）-36-（3-cis-4-cis-ジヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-デスメトキシ-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
    キシシクロヘキシル）-36-（3-trans-4-trans-ジヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシ
    ン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-39-O-デスメチルラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27O-デスメチル-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロキ
    シシクロヘキシル）-36-（ヒドロキシシクロヘキセニル）ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
    キシシクロヘキシル）-36-（ヒドロキシノルボルニル）ラパマイシン、
    9-デオキソ-16-O-デスメチル-27-O-デスメチル-36-デ（3-cis-メトキシ-4-trans-ヒドロ
    キシシクロヘキシル）-36-（4-メチルヒドロキシシクロヘキシル）ラパマイシン。
  66. 癌治療用、真菌感染症治療用、増殖性疾患治療用、又は免疫抑制維持用の薬剤製造にお
    ける、請求項５９〜６５のいずれか１項で規定した化合物の使用。
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