JP2017014205A - トリプターゼ阻害剤組成物 - Google Patents

Abstract

【課題】
本発明の課題は、安全性およびトリプターゼ阻害作用に優れたトリプターゼ阻害剤組成物、および該トリプターゼ阻害剤組成物を含有するシワ改善用組成物を提供することを課題とする。
【解決手段】
本発明は、トラネキサム酸またはその塩を含有することを特徴とするトリプターゼ阻害剤組成物、および該トリプターゼ阻害剤組成物を含有するシワ改善用組成物に関するものであり、特にこれらの組成物が経口用組成物であるものを提供する。
【選択図】図１

Description

本発明はトリプターゼ阻害剤組成物に関し、さらに詳しくは皮膚のシワ形成に影響を与えるトリプターゼ阻害作用を有し、皮膚の老化を防止することができるトリプターゼ阻害剤組成物に関する。

トラネキサム酸またはその塩、特にトラネキサム酸は、抗プラスミン作用、抗アレルギー作用、抗炎症作用が知られており、その効能・効果は、全身性線溶亢進が関与すると考えられる出血傾向（白血病、再生不良性貧血、紫斑病等および手術中・術後の異常出血）；局所線溶亢進が関与すると考えられる異常出血（肺出血、鼻出血、性器出血、腎出血、前立腺手術中・術後の異常出血）；湿疹およびその類症、蕁麻疹、薬疹・中毒疹における紅斑・腫脹・そう痒等の症状；扁桃炎、咽喉頭炎における咽頭痛・発赤・充血・腫脹等の症状；口内炎における口内痛および口内粘膜アフタ（非特許文献１参照）である。上記の作用や効能・効果以外にトラネキサム酸またはその塩が色素沈着症の治療薬となり得ることも知られているが（特許文献１参照）、更なる有用性の研究が行われている。

トリプターゼは、１９８４年にスミスらによってヒトの肺から単離精製された細胞内のトリプシン型プロテアーゼ（非特許文献２）であり、マスト細胞から単離されたトリプターゼＭ（非特許文献３）、Ｔ４リンパ球から単離されたトリプターゼＴＬ１、ＴＬ２、ＴＬ３（非特許文献４）、クララ細胞から単離されたトリプターゼクララ（非特許文献５）等が知られている。トリプターゼはヒト皮膚において紫外線の照射により増加および活性化することが知られており、Ｉ型コラーゲンを分解すること（非特許文献６）、ＩＶ型コラーゲンを分解し、基底膜を損傷すること（非特許文献７）、末梢血管の透過性亢進作用による好中球の遊走を引き起こし、好中球由来エラスターゼによるエラスチンの分解を促進すること（非特許文献８）、創傷治癒において角化遅延を引き起こすこと（非特許文献９）が知られている。

以上のようにトリプターゼは、紫外線による真皮におけるコラーゲン、エラスチン等の細胞外マトリックス成分（ＥＣＭ）の減少・変性、基底膜損傷や表皮肥厚による皮膚の老化（しわ、肌理の消失、弾力性の低下等）に関与していると考えられている。また、肥満細胞の脱顆粒促進作用が報告されており（非特許文献１０）紫外線による炎症の発生にも関与していると考えられている。

したがって、トリプターゼ活性を阻害することは皮膚のシワ、たるみ、肌荒れ、かゆみ、炎症等の予防および改善に有効であると考えられる。

トリプターゼ阻害活性を有する化合物としては、６’−アミジノ−２’−ナフチル４−グアニジノベンゾエート又はその薬学的に許容される塩（特許文献２）、カテキン類および／又はその配糖体、フラボン類および／又はその配糖体、フラボノール類および／又はその配糖体、フラバノン類および／又はその配糖体、タンニン類（特許文献３）、シャクヤク（Paeoni lactiflar Pallas）（特許文献４）等が知られているが、未だ効果が十分とはいえず、より強力なトリプターゼ阻害活性を有する化合物が待ち望まれている。

特開平４−２４３８２５号公報 特開２００３−２４６７３０号公報 特開２００７−１８６４５７号公報 特開２０１３−１２９６１７号公報

財団法人日本医薬情報センター 医療 日本医薬品 ２００２（第２５版 株式会社じほう １３６９頁 T. J. Smith et al., Journal of Biological Chemistry Vol.259, P.11046-11051(1984) L. B. Schwart et al. Journal of Biological Chemistry Vol.256, P.11939-11943(1981) H. Kido et al. Journal of Biological Chemistry Vol.265, P.21979-21985(1991) H. Kido et al. Journal of Biological Chemistry Vol.267, P.13573-13579(1992) Fajard et al. The Journal of Immunology Vol.171,P1493-1499(2003) Jouko Lohi, et al. Journal of Cellular Biochemistry Vol.50,P337-349(1992) Shaoheng He et al. European Journal of Pharmacology Vol.328, P.89-97(1997) M. Huttunen et al. Experimental Dermatology Vol.9, P258-265(2000) Shaohen He, Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics Vol.286,P.289-297(1998)

本発明の課題は、安全性およびトリプターゼ阻害作用に優れたトリプターゼ阻害剤組成物、および該トリプターゼ阻害剤組成物を含有するシワ改善用組成物を提供することである。

本発明者らは、これらの問題を解決するため、様々な物質のトリプターゼ阻害作用を検討した結果、トラネキサム酸が優れたトリプターゼ阻害作用を有することを見出し、本発明を完成した。

すなわち本発明は、トラネキサム酸またはその塩を含有することを特徴とするトリプターゼ阻害剤組成物に関する。さらに、本発明は前記トリプターゼ阻害剤組成物を含有するシワ改善用組成物に関するものであり、特にこれらの組成物が経口用組成物であるものに関する。

本発明の組成物は、トリプターゼの酵素活性を確実に阻害し得る安全性の高いトリプターゼ阻害剤組成物である。そのため、該組成物を用いることによりトリプターゼ阻害作用に基づく様々な疾患、病変の改善、特に加齢や紫外線の影響によるシワの改善を行うことができる。また、本発明のトリプターゼ阻害剤組成物、および該トリプターゼ阻害剤組成物を含有するシワ改善用組成物は、内服剤、飲食品組成物、サプリメント、外用剤、化粧料等の形態で利用可能であるが、特に内服剤、飲食品組成物、サプリメント等の経口投与組成物として用いた場合に有効である。

図１は、トラネキサム酸溶液または対照投与液を用いたトリプターゼ阻害活性試験の試験結果を示す図である。図中におけるＴＡはトラネキサム酸を意味する。 図２は、被験動物に被験物質または対照物質を２０日間投与した後に測定した水分蒸散量の測定結果を示す図である。 図３は、被験動物に被験物質または対照物質を２０日間投与した後に測定した皮膚水分量の測定結果を示す図である。 図４は、被験動物に被験物質または対照物質を２０日間投与した後に観察した表皮厚みを示す写真および測定結果を示す図である。 図５は、被験動物に被験物質または対照物質を２０日間投与した後に観察したマウス背部状態を示す写真である。 図６は、被験動物に被験物質または対照物質を２０日間投与した後に観察した染色後の皮膚中マスト細胞の写真である。 図７は、被験動物に被験物質または対照物質を２０日間投与した後に測定した皮膚中コラーゲンＩタンパク量の測定結果を示す図である。 図８は、被験動物に被験物質または対照物質を２０日間投与した後に測定した皮膚中セラミド量の測定結果を示す図である。

本発明に用いるトラネキサム酸は公知の化合物（（トランス−４−アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸、ＣＡＳ登録番号：１１９７−１８−８）であり、その製法は特に限定されるものでなく、市販品を用いても、公知の方法に基づき製造したものを用いてもよい。トラネキサム酸の塩としては、塩酸塩、硝酸塩、硫酸塩等の鉱酸塩、メタンスルホン酸塩等の有機酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩等を用いることができる。本発明において用いるトラネキサム酸またはその塩としては、トラネキサム酸が特に好ましい。

本発明のトリプターゼ阻害剤組成物およびシワ改善用組成物は経口または非経口の剤型で投与することが可能である。経口投与組成物の形態としては、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、丸剤、液剤、シロップ剤、トローチ剤、ゼリー剤等が挙げられ、これらを医薬品、食品等として投与することが可能である。また、非経口投与組成物の形態としては、軟膏剤、硬膏剤、液剤、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、乳液、エアゾール剤、リニメント剤、テープ剤、パップ剤、外用散剤、注射剤、点滴剤、パック、浴用剤等を挙げることができ、これらを医薬品、医薬部外品、化粧品等として投与することが可能である。本発明においては、経口投与組成物とすることが好ましい。

本発明に係る組成物の製剤化は、所望の剤型に応じて公知の製造技術により製造することができ、必要に応じて公知の賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、安定化剤、防腐剤、着色剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、矯味剤、風味剤、甘味剤、保存剤、香料、水性成分、アルコール類、糖類、水等を添加成分として配合することができる。また、本願発明に係る組成物の効果を減弱させない範囲において、抗老化剤、抗酸化剤、美白剤、各種生薬等の成分を配合することもできる。

本発明のトリプターゼ阻害剤組成物の一日の使用量は、使用者の性別、年齢、症状、投与方法、投与回数、投与時期等を鑑み適宜決定すればよく、副作用が生じない範囲で使用することができ、特に限定されるものではない。例えば経口投与組成物として用いる場合、トラネキサム酸またはその塩の投与量は、１日当たり１〜５０００ｍｇであり、好ましくは１日当たり１０〜３０００ｍｇであり、さらに好ましくは１日当たり２００〜１０００ｍｇであり、特に好ましくは１日当たり４２０〜７５０ｍｇである。また、非経口投与組成物として用いる場合、トラネキサム酸またはその塩は非経口投与組成物中、０．０１〜２０．０質量％、好ましくは０．６〜５．０質量％、さらに好ましくは０．６〜３．０質量％の割合で配合される。

以下に、実施例により本発明をさらに詳細に説明する。なお、本発明はこれにより限定されるものではない。

（実施例１）トリプターゼ阻害活性試験
１．試料の調製
トラネキサム酸（第一ファインケミカル製）を最終濃度が１，３，９，３６ｍＭとなるよう蒸留水に溶解させ、試料トラネキサム酸溶液を調製した。

２．トリプターゼ阻害活性の評価
トリプターゼとしてrh skin b1 Tryptase（プロメガ（株）社製）を使用した。蒸留水を用いてトリプターゼ溶液（最終濃度１６．７ｎｇ／ｍＬ）を調製し、上記各濃度の試料トラネキサム酸溶液と混合し、酵素混合液とした。基質としてはN-(p-Tosyl)-Gly-Pro-Lys4-nitroanilid acetate salt（シグマ アルドリッチ社製）を用い、最終濃度が１．５ｍＭとなるよう１００ｍＭ Tris-Hcl（ｐＨ８．０）を用いて溶解し、基質溶液とした。

各濃度の酵素混合液５０μＬ／ｗｅｌｌに基質溶液を５０μＬ／ｗｅｌｌ添加し、３７℃で５分間インキュベートを行った後、吸光光度計（測定条件：４１０ｎｍ）により吸光度の測定を行った。ブランクには、基質溶液の代わりに１００ｍＭ Tris-Hcl（ｐＨ８．０）を添加し測定を行った。

３．トリプターゼ活性
トラネキサム酸によるトリプターゼ阻害率を以下の計算式により算出した。
トリプターゼ阻害率（％）＝１００×（１−試料の吸光度／対照の吸光度）
阻害率の算出結果を図１に示す。

上記試験の結果から、トラネキサム酸は濃度依存的にトリプターゼ阻害作用を示すことが確認された。

（実施例２）抗シワ試験
１．被験物質の調製
トラネキサム酸（第一ファインケミカル製）を投与量７５０ｍｇ／ｋｇとなるよう蒸留水に溶解したものを被験物質として用い、以下の実験を行った。

２．被験動物
３週齢ＮＯＡ／Ｊｃｌマウス（雄性、雌性）を日本クレア（株）から購入し、１群５匹を１週間予備飼育した後、肉眼で健康状態を観察し良好なものを被験動物として使用した。ＮＯＡ／Ｊｃｌマウスは乾燥皮膚を発現したマウスであり、外用保湿剤の効果検証モデルとして利用されるものである。

３．被験物質の投与
被験動物マウス体重１０ｇ当たり、被験物質０．１ｍＬを１日１回、２０日間経口投与した群を被験群とし、蒸留水のみ０．１ｍＬを１日１回、２０日間経口投与した群を対照群とした。これら各群はそれぞれｎ＝５として構成した。

４．測定
２０日間の経口投与期間後、水分蒸散量（ＴＥＷＬ；ｇ／ｍ²／ｈ）、皮膚水分量（Corneometer value）、表皮の厚み（μｍ）を測定し、マウス背部状態の観察、皮膚中マスト細胞の観察、皮膚中コラーゲンＩ量の比較、皮膚中セラミド量の比較をそれぞれ以下の測定法に基づき行った。

水分蒸散量の測定は、Tewameter（登録商標）TM300（Courage+Khazaka Electronic GmbH社製）を用いて行った。水分蒸散量の測定結果を図２に示す。

皮膚水分量の測定は、Corneometer（登録商標）CM825（Courage&Khazaka Electronic GmbH社製)を用いて行った。皮膚水分量の測定結果を図３に示す。

表皮厚みの測定は、皮膚切片をhaematoxylin and eosin (H&E)染色により染色し行った。厚みは１視野においてランダムに５カ所の表皮の厚みを測定、これを５視野について行い平均値を表皮厚みとした。表皮厚みを示す写真および測定結果を図４に示す。

マウス背部状態の観察は、被験動物の背部を目視にて観察し、シワ形成の有無、その程度を確認した。マウス背部状態を示す写真を図５に示す。

皮膚中マスト細胞の観察は、皮膚切片をtoluidine blueを用いて染色し、青紫に染色されたマスト細胞の数を観察した。染色後の皮膚中マスト細胞の写真を図６に示す。図中、矢印で示す細胞がマスト細胞である。

皮膚中コラーゲンＩタンパク量の測定、および皮膚中セラミド量の測定は、western blotting を用いて行い、被験群サンプルと対照群サンプルの解析はMulti-Gauge software (富士フイルム（株）社製)を用いて行った。皮膚中コラーゲンＩタンパク量の測定結果を図７、皮膚中セラミド量の測定結果を図８に示す。

５．試験結果
トラネキサム酸投与群のマウスはコントロール群のマウスと比較してＴＥＷＬ測定値において低値を、皮膚水分量測定値で高値を、表皮厚みに関しても高値を示した。このことから、トラネキサム酸投与により皮膚における水分量が改善されたと認められる。

また、トラネキサム酸投与により皮膚中マスト細胞の減少、皮膚中コラーゲンＩ量の増加が認められた。さらに、マウス背部写真の観察からトラネキサム酸投与群のマウスは、コントロール群のマウスに比べシワの形成が抑制されていることが確認された。

以上の結果から、トラネキサム酸がトリプターゼ阻害作用を有し、さらには皮膚における水分蒸散量、皮膚水分量、表皮厚みの改善作用、皮膚中マスト細胞の減少作用、皮膚中コラーゲンＩ量の増加作用、シワの改善作用を有することが明らかとなった。

本発明により、トリプターゼ阻害剤組成物、特にシワを改善するのに有効な経口用組成物が提供される。

Claims (3)

1. トラネキサム酸を含有することを特徴とするトリプターゼ阻害剤組成物。
2. 請求項１に記載のトリプターゼ阻害剤組成物を含有するシワ改善用組成物。
3. 経口投与組成物である請求項１−２に記載の組成物。