JP2017167149A - 生体試料の組織処理のための溶液 - Google Patents

Abstract

【課題】生体試料の組織処理のための細胞染色液を提供する。
【解決手段】０．５ｇ／Ｌ〜５．０ｇ／ＬのエオシンＹ；５ｍＭ〜２５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；０．５ｍＬ／Ｌ〜２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；１ｇ／Ｌ〜２０ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；５ｍＬ／Ｌ〜５０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；０．２ｐｐｍ〜５０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含み、ｐＨ５．８〜６．２である細胞染色液。
【選択図】なし

Description

［関連出願に関する相互参照］
本出願は、２０１１年６月１７日に出願された米国仮特許出願第６１／４９８，１５９号、２０１１年７月６日に出願された米国仮特許出願第６１／５０５，０１１号、および２０１１年７月２１日に出願された米国仮特許出願番号第６１／５１０，１８０号に基づく優先権を主張する。この先に提出された各出願は、全体として参照により本明細書に組み込まれる。

本開示は、生体標本の調製のための処方、より詳細には固定、染色およびリンス処方に関する。

数年間で、検査中の標本のコントラストを改善するために、実験室の技術は、生体標本を調製するためのロマノスフキー染色に使用されるような染料や染料を使用してきている。このような検査は、通常、顕微鏡、標本の画像を取り込む自動装置、または、他の例では、肉眼外観検査を利用する。検査用標本を調製するためのいくつかの異なるシステムおよび方法が知られている。たとえば、特許文献１〜６は、標本処理中に基板を染色するための機構および方法に関する。これらの刊行物は、検査用標本の染色および調製に関する種々の詳細を提供している。

米国特許第６，０９６，２７１号明細書 米国特許第７，３１８，９１３号明細書 米国特許第５，４１９，２７９号明細書 米国特許第５，９４８，３６０号明細書 米国特許公開第２００８／０１０２００６号明細書 米国特許公開第２００６／００７３０７４号明細書

本開示は、検査用標本を調製するための処方、システムおよび方法に関する。標本としては、顕微鏡スライドまたはカバースリップなどの基板に塗布された、血液試料などの生体試料由来の赤血球細胞、白血球細胞および血小板を含む血液試料などが挙げられる。種々の実施形態は、骨髄、尿、膣組織、上皮組織、腫瘍、精液、唾液および他の体液などの生体試料から標本を調製するために使用することができる。本開示のさらなる態様は、本開示の処方を用いる、標本を固定、染色、リンスおよび攪拌するためのシステムおよび方法を含む。通常、本明細書において開示される処方、システムおよび方法は、なるべく少ない液体量を用い、迅速で、効率的かつ高度に均一な標本調製および処理を提供する。その方法は、１回以上の固定、染色およびリンス段階を含み、たとえば１回以上の固定、染色およびリンス段階の各段階後の１回または複数回の攪拌段階を含む。システムは、独立型装置として、または標本を調製および検査するためのより大きいシステムにおける１構成要素として実行され得る。

第１の態様において、本開示は、アズールＢ；界面活性剤；メタノール；およびエチレングリコールを含む細胞固定液を特徴とする。

たとえば、細胞固定液は、約０．５ｇ／Ｌ〜約５．０ｇ／ＬのアズールＢ；約０．５ｍＬ／Ｌ〜約２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約５ｍＬ／Ｌ〜約５０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール、プロピレングリコールまたはポリプロピレングリコール；約０．１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／ＬのＨＥＰＥＳナトリウム塩；およびメタノールを含み得る。

別の例としては、細胞固定液は、約０．８ｇ／Ｌ〜約１．２ｇ／ＬのアズールＢ；約０．８ｍＬ／Ｌ〜約１．２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約９ｍＬ／Ｌ〜約１１ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約０．２５ｇ／Ｌ〜約０．３８ｇ／ＬのＨＥＰＥＳナトリウム塩；およびメタノールを含み得る。

たとえば、細胞固定液は、約１ｇ／ＬのアズールＢ；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約０．３２ｇ／ＬのＨＥＰＥＳナトリウム塩；およびメタノールを含み得る。

別の例としては、細胞固定液は、約１ｇ／ＬのアズールＢ；約０．５ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１０ｍＬ／Ｌのプロピレングリコール；約０．３２ｇ／ＬのＨＥＰＥＳナトリウム塩；およびメタノールを含み得る。

さらなる例としては、細胞固定液は、約１ｇ／ＬのアズールＢ；約１．５ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１０ｍＬ／Ｌのポリプロピレングリコール；約０．３２ｇ／ＬのＨＥＰＥＳナトリウム塩；およびメタノールを含み得る。

第２の態様において、本開示は、エオシンＹ；緩衝剤；界面活性剤；塩化ナトリウム；エチレングリコール；および水を含む第１の細胞染色液を特徴とする。

たとえば、第１の細胞染色液は、約０．５ｇ／Ｌ〜約５．０ｇ／ＬのエオシンＹ；約５ｍＭ〜約２５０ｍＭのビス−トリス緩衝液またはリン酸緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌ〜約２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１ｇ／Ｌ〜約２０ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約５ｍＬ／Ｌ〜約５０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約０．２ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは約５．８〜約６．２である。

別の例としては、第１の細胞染色液は、約０．６ｇ／Ｌ〜約０．９ｇ／ＬのエオシンＹ；約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのビス−トリス緩衝液；約０．８ｍＬ／Ｌ〜約１．２ｍＬ／Ｌポリソルベート２０；約３ｇ／Ｌ〜約５ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約９ｍＬ／Ｌ〜約１１ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約１０ｐｐｍ〜約２０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは約５．８〜約６．２である。

たとえば、第１の細胞染色液は、約０．７５ｇ／ＬのエオシンＹ；約５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約４ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約１０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは約５．８〜約６．２である。

別の例としては、第１の細胞染色液は、約０．７５ｇ／ＬのエオシンＹ；約５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約６ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約２０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは約５．８〜約６．２である。

さらなる例としては、第１の細胞染色液は、約０．７５ｇ／ＬのエオシンＹ；約５０ｍＭのリン酸緩衝液；約２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約４ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約５０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは約５．８〜約６．２である。

第３の態様において、本開示は、アズールＢ；メチレンブルー；緩衝剤；界面活性剤；塩化ナトリウム；および水を含む第２の細胞染色液を特徴とする。

たとえば、第２の細胞染色液は、約０．２５〜約２．５ｇ／ＬのアズールＢ；約０．２５ｇ／Ｌ〜約２．５ｇ／Ｌのメチレンブルー；約５ｍＭ〜約２５０ｍＭのビス−トリス緩衝液またはＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌ〜約２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０、約１ｇ／Ｌ〜約２０ｇ／Ｌの塩化ナトリウム、および約０．２ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは約６．８〜約７．２である。

別の例としては、第２の細胞染色液は、約０．４〜約０．６ｇ／ＬのアズールＢ；約０．４ｇ／Ｌ〜約０．５ｇ／Ｌのメチレンブルー；約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのビス−トリス緩衝液；約０．８ｍＬ／Ｌ〜約１．２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１．８ｇ／Ｌ〜約２．２ｇ／Ｌの塩化ナトリウム、および約１０ｐｐｍ〜約２０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは約６．８〜約７．２である。

たとえば、第２の細胞染色液は、約０．５ｇ／ＬのアズールＢ；約０．４５ｇ／Ｌのメチレンブルー；約５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約２ｇ／Ｌの塩化ナトリウム、および約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは約６．８〜約７．２である。

別の例としては、第２の細胞染色液は、約０．５ｇ／ＬのアズールＢ；約０．４５ｇ／Ｌのメチレンブルー；約５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０、約２ｇ／Ｌの塩化ナトリウム、および約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは約６．８〜約７．２である。

さらなる例としては、第２の細胞染色液は、約０．５ｇ／ＬのアズールＢ；約０．４５ｇ／Ｌのメチレンブルー；約５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０、約１ｇ／Ｌの塩化ナトリウム、および約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは約６．８〜約７．２である。

第４の態様において、本開示は、ポリエチレングリコール；緩衝剤；界面活性剤；メタノール；および水を含む自動標本調製装置のためのリンス液を特徴とする。

たとえば、リンス液は、約０．２ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約１ｍＭ〜約２５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ＭＥＳまたはビス−トリス緩衝液；約０．１ｍＬ／Ｌ〜約２．４０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約０．０４ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約９ｍＬ／Ｌ〜約２００ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは約６．６〜約７．０である。

たとえば、リンス液は、約１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約５ｍＭ〜約２５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ＭＥＳまたはビス−トリス緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌ〜約２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約０．２ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約１０ｍＬ／Ｌ〜約２００ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは約６．６〜約７．０である。

別の例としては、リンス液は、約４．５ｇ／Ｌ〜約５．５ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．８ｍＬ／Ｌ〜約１．２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１０ｐｐｍ〜約２０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約４５ｍＬ／Ｌ〜約５５ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは約６．６〜約７．０である。

たとえば、リンス液は、約５ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約５０ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは約６．６〜約７．０である。

別の例としては、リンス液は、約１０ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約５０ｍＭのＭＥＳ緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約５０ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは約６．６〜約７．０である。

さらなる例としては、リンス液は、約１０ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約５０ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは約６．６〜約７．０である。

たとえば、リンス液は、約０．２ｇ／Ｌ〜約２ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約１ｍＭ〜約５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．１６ｍＬ／Ｌ〜約０．２４ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約０．０４ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約９ｍＬ／Ｌ〜約１１ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは約６．６〜約７．０である。

別の例としては、リンス液は、約０．９ｇ／Ｌ〜約１．１ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約９ｍＭ〜約１１ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．１６ｍＬ／Ｌ〜約０．２４ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約２ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約９ｍＬ／Ｌ〜約１１ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは約６．６〜約７．０である。

なお別の例としては、リンス液は、約１ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約１０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約３ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約１０ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは約６．６〜約７．０である。

第５の態様において、本開示は、細胞固定液；第１の細胞染色液；第２の細胞染色液；およびリンス液を含む標本調製キットを特徴とする。いくつかの実施形態においては、標本調製キットは、個別に包装された細胞固定液；個別に包装された第１の細胞染色液；個別に包装された第２の細胞染色液；および個別に包装されたリンス液を含む。

第６の態様において、本開示は、検査用基板上に標本を調製する方法であって、（ａ）標本が表面に対向し、基板が、その表面と基板の少なくとも１部との間に少なくとも約１００ミクロンの分離を形成するように配置されるように、基板をその表面に関して位置決めすること；（ｂ）（ｉ）固定液を基板と表面との間の分離中に標本と表面とが接触するのに十分な量を分配すること；（ii）少なくとも、第１の攪拌段階であって、固定液が第１の攪拌段階の間標本に接触しながら、基板と表面との間の距離を変化させる第１の攪拌段階を行うこと；および（iii）固定液を分離および標本から除去することを含む固定段階を行うこと；（ｃ）第１の染色段階を行うこと；（ｄ）第２の染色段階を行うこと；および（ｅ）第１のリンス段階を行うことを含む方法を特徴とする。

第７の態様において、本開示は、自動標本分析機、ならびに細胞固定液；第１の細胞染色液；第２の細胞染色液；および／またはリンス液を含む標本を画像化するためのシステムを特徴とする。いくつかの実施形態においては、標本を画像化するためのシステムは、自動標本分析機および、細胞固定液；第１の細胞染色液；第２の細胞染色液；および／またはリンス液で調製された標本を含む。

本明細書において説明される細胞固定液、第１の細胞染色液、第２の細胞染色液、リンス液、方法、キットおよびシステムは、任意の１つ以上のつぎの特徴を含み得る。

いくつかの実施形態において、細胞固定液は、約０．５〜約５ｇ／ＬのアズールＢ（たとえば、約１ｇ／ＬのアズールＢ）を含み得る。たとえば、水で１：１０００希釈した細胞固定液は、約６４０〜約６５０ｎｍのピーク波長で約０．１〜約１のＵＶ吸光度を有する。

いくつかの実施形態において、細胞固定液は、１つ（またはそれ以上）の赤色染料（たとえば１つまたはそれ以上の従来の当技術分野において既知の赤色染料、たとえばエオシンＹ、およびフルオレセイン誘導体）を含まないか、または実質的に含まない。

細胞固定液は、約０．０５〜約０．５容量または重量％の界面活性剤（たとえば、約０．０５〜約０．３容量または重量％の界面活性剤、約０．０５〜約０．１容量または重量％の界面活性剤）を含み得る。界面活性剤は、非イオン性、カチオン性、アニオン性および両性イオン性界面活性剤からなる群より選択することができる。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、非イオン性であり、たとえば、ポリソルベート２０が挙げられる。たとえば、細胞固定液は、約０．５ｍＬ／Ｌ〜約２ｍＬ／Ｌ（たとえば、約０．５ｍＬ／Ｌ〜約１．５ｍＬ／Ｌ、約１ｍＬ／Ｌ）のポリソルベート２０を含み得る。

いくつかの実施形態において、細胞固定液は、さらに、ビス−トリス緩衝液、リン酸緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ＭＥＳ緩衝液および／またはトリス緩衝液などの緩衝剤を含み得る。たとえば、水で１：１０希釈した細胞固定液は、約６〜約８（たとえば、約６．７〜約７．３）のｐＨを有し、かつ約０．５ｍＭ〜約１０ｍＭのＨＥＰＥＳを含み得る。

細胞固定液は、約０．５〜約５容量％（たとえば、約１容量％）のエチレングリコールを含み得る。

いくつかの実施形態において、細胞固定液は、約１ｇ／ＬのアズールＢ；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約０．３２ｇ／ＬのＨＥＰＥＳナトリウム塩；およびメタノールを含み得る。

いくつかの実施形態において、第１の細胞染色液は、抗菌剤（たとえば、約０．２〜約５０ｐｐｍの抗菌剤）を含み得、抗菌剤としては、たとえば、塩化ベンザルコニウム、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、ＰｒｏＣｌｉｎ（登録商標）（たとえば、ＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標））、アジド、メルチオレート、抗生物質、およびそれらの任意の組み合わせが挙げられる。たとえば、抗菌剤としては、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンが挙げられる。いくつかの実施形態において、抗菌剤は、ＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）である。たとえば、第１の細胞染色液は、約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）を含み得る。

第１の細胞染色液は、約０．５〜約１ｇ／Ｌ（たとえば、約０．７５ｇ／Ｌ）のエオシンＹを含み得る。たとえば、水で１：５００希釈した溶液は、約５１０〜約５３０ｎｍのピーク波長で約０．１〜約１のＵＶ吸光度を有する。

いくつかの実施形態において、第１の細胞染色液は、１つ（またはそれ以上）の他の赤色染料（たとえば、１つ以上の当技術分野において既知の従来の他の赤色染料、たとえば他のフルオレセイン誘導体）を含まないかまたは実質的に含まない。

いくつかの実施形態において、第１の細胞染色液は、１つ（またはそれ以上）の青色染料（たとえば、１つ以上の当技術分野において既知の従来の青色染料、たとえばアズールＢ、メチレンブルーおよび／または他のチアジン染料）を含まないかまたは実質的に含まない。

いくつかの実施形態において、第１の細胞染色液は、１つ（またはそれ以上）の他の赤色染料（たとえば、１つ以上の当技術分野において既知の従来の他の赤色染料、たとえば他のフルオレセイン誘導体）を含まないかまたは実質的に含まず、かつ第１の細胞染色液は、１つ（またはそれ以上）の青色染料（たとえば、１つまたはそれ以上の当技術分野において既知の従来の青色染料、たとえばアズールＢ、メチレンブルーおよび／または他のチアジン染料）を含まないかまたは実質的に含まない。

第１の細胞染色液は、約０．５〜約５容量％（たとえば、約１容量％）のエチレングリコールを含み得る。

いくつかの実施形態において、第１の細胞染色液は、約５〜約８のｐＨと、約５〜約２５０ｍＭの緩衝剤濃度とを有し得る。

緩衝剤としては、ビス−トリス、リン酸、ＨＥＰＥＳ、ＭＥＳ、トリスおよびそれらの任意の混合物が挙げられる。たとえば、第１の細胞染色液は、約５．８〜約６．２のｐＨと、約５ｍＭ〜約２５０ｍＭのビス−トリス緩衝液濃度とを有し得る。いくつかの実施形態において、第１の細胞染色液は、さらに酢酸（たとえば、約２〜約３ｍＬ／Ｌの酢酸）を含み得る。

いくつかの実施形態において、第１の細胞染色液は、約０．０５〜約０．５容量または重量％（たとえば、約０．０５〜約０．３容量または重量％、約０．０５〜約０．１容量または重量％）の界面活性剤を含み得る。界面活性剤は、非イオン性、カチオン性、アニオン性および両性イオン性界面活性剤からなる群より選択することができる。たとえば、界面活性剤は、ポリソルベート２０などの非イオン性であり得る。いくつかの実施形態においては、第１の細胞染色液は、約０．５ｍＬ／Ｌ〜約２ｍＬ／Ｌ（たとえば、約０．５ｍＬ／Ｌ〜約１．５ｍＬ／Ｌ、約１ｍＬ／Ｌ）のポリソルベート２０を含み得る。

いくつかの実施形態において、第１の細胞染色液は、約１〜約２０ｇ／Ｌの塩化ナトリウムを含み得る。

いくつかの実施形態において、第１の細胞染色液は、約０．７５ｇ／ＬのエオシンＹ；約５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約４ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約１０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは約５．８〜約６．２である。

いくつかの実施形態において、第２の細胞染色液は、抗菌剤（たとえば、約０．２〜約５０ｐｐｍの抗菌剤）を含むことができ、抗菌剤としては、たとえば、塩化ベンザルコニウム、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、ＰｒｏＣｌｉｎ（登録商標）（たとえば、ＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標））、アジド、メルチオレート、抗生物質、およびそれらの任意の組み合わせが挙げられる。たとえば、抗菌剤としては、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンが挙げられる。いくつかの実施形態において、第２の細胞染色液は、ＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）（たとえば、約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標））を含み得る。

いくつかの実施形態において、第２の細胞染色液は、約０．２５〜約１ｇ／Ｌ（たとえば、約０．５ｇ／Ｌ）のアズールＢを含み得る。第２の細胞染色液は、約０．２５〜約１ｇ／Ｌ（たとえば、約０．４５ｇ／Ｌ）のメチレンブルーを含み得る。たとえば、水で１：１０００希釈した第２の細胞染色液は、約６４０〜約６６０ｎｍのピーク波長で約０．１〜約１のＵＶ吸光度を有し得る。

いくつかの実施形態において、第２の細胞染色液は、１つ（またはそれ以上）の他の青色染料（たとえば、１つ以上の当技術分野において既知の従来の他の青色染料、たとえばアズールＢ、メチレンブルーおよび／または他のチアジン染料）を含まないかまたは実質的に含まない。

いくつかの実施形態において、第２の細胞染色液は、１つ（またはそれ以上）の赤色染料（たとえば、１つ以上の当技術分野において既知の従来の赤色染料、たとえばフルオレセイン誘導体）を含まないかまたは実質的に含まない。

いくつかの実施形態において、第２の細胞染色液は、１つ（またはそれ以上）の他の青色染料（たとえば、１つ以上の当技術分野において既知の従来の他の青色染料、たとえば他のチアジン染料）を含まないかまたは実質的に含まず、かつ第２の細胞染色液は、１つ（またはそれ以上）の赤色染料（たとえば、１つ以上の当技術分野において既知の従来の赤色染料、たとえばフルオレセイン誘導体）を含まないかまたは実質的に含まない。

いくつかの実施形態において、第２の細胞染色液は、約５〜約８のｐＨおよび約５ｍＭ〜約２５０ｍＭの緩衝剤濃度（たとえば、約６．８〜約７．２のｐＨおよび約２５ｍＭ〜約１００ｍＭのビス−トリス緩衝液濃度）を有し得る。緩衝剤としては、ビス−トリス緩衝液、リン酸緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ＭＥＳ緩衝液、トリス緩衝液およびそれらの任意の混合物が挙げられる。いくつかの実施形態において、第２の細胞染色液は、さらに酢酸を含み得る。

いくつかの実施形態において、第２の細胞染色液は、約０．０５〜約０．５容量または重量％（たとえば、約０．０５〜約０．３容量または重量％、約０．０５〜約０．１容量または重量％）の界面活性剤を有し得、界面活性剤としては、非イオン性、カチオン性、アニオン性および両性イオン性界面活性剤が挙げられる。いくつかの実施形態においては、界面活性剤は非イオン性であり、ポリソルベート２０を含むことができ、第２の細胞染色液は、約０．５ｍＬ／Ｌ〜約２ｍＬ／Ｌ（たとえば、約０．５ｍＬ／Ｌ〜約１．５ｍＬ／Ｌ、約１ｍＬ／Ｌ）のポリソルベート２０を含み得る。

いくつかの実施形態において、第２の細胞染色液は、約１〜約２０ｇ／Ｌの塩化ナトリウムを含み得る。

いくつかの実施形態において、第２の細胞染色液は、約０．５ｇ／ＬのアズールＢ；約０．４５ｇ／Ｌのメチレンブルー；約５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約２ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；および約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含み得る。この溶液は、約６．８〜約７．２のｐＨを有し得る。

いくつかの実施形態において、リンス液は、抗菌剤（たとえば、約０．２〜約５０ｐｐｍの抗菌剤、または約０．０４〜約１０ｐｐｍの抗菌剤）を含むことができ、抗菌剤としては、たとえば、塩化ベンザルコニウム、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、ＰｒｏＣｌｉｎ（登録商標）（たとえば、ＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標））、アジド、メルチオレート、抗生物質、およびそれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態において、抗菌剤には、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンが挙げられる。たとえば、リンス液は、ＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）（たとえば、約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）〜約３ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標））を含み得る。

リンス液は、約１〜約１０ｇ／Ｌ（たとえば、約５ｇ／Ｌ）のポリエチレングリコールを含み得る。

リンス液は、約０．２〜約２ｇ／Ｌ（たとえば、約１ｇ／Ｌ）のポリエチレングリコールを含み得る。

リンス液は、５〜８のｐＨと、約５ｍＭ〜約２５０ｍＭの緩衝剤濃度（たとえば、約５〜約８のｐＨと約５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液濃度）とを有し得る。緩衝剤としては、ビス−トリス緩衝液、リン酸緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ＭＥＳ緩衝液、トリス緩衝液およびそれらの任意の混合物が挙げられる。

リンス液は、５〜８のｐＨおよび約１ｍＭ〜約５０ｍＭの緩衝剤濃度（たとえば、約５〜約８のｐＨと約１０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液濃度）とを有し得る。緩衝剤としては、ビス−トリス緩衝液、リン酸緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ＭＥＳ緩衝液、トリス緩衝液およびそれらの任意の混合物が挙げられる。

いくつかの実施形態において、リンス液は、約０．０５〜約０．５容量または重量％（たとえば、約０．０５〜約０．３容量または重量％、約０．０５〜約０．１容量または重量％）の界面活性剤を含む。界面活性剤は、非イオン性、カチオン性、アニオン性および両性イオン性界面活性剤からなる群より選択することができる。たとえば、界面活性剤は、非イオン性であり、ポリソルベート２０（たとえば、約０．５ｍＬ／Ｌ〜約２ｍＬ／Ｌ、約０．５ｍＬ／Ｌ〜約１．５ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０）を含み得る。

いくつかの実施形態において、リンス液は、約０．０１〜約０．１容量または重量％（たとえば、約０．０１〜約０．０６容量または重量％、約０．０１〜約０．０２容量または重量％）の界面活性剤を含む。界面活性剤は、非イオン性、カチオン性、アニオン性および両性イオン性界面活性剤からなる群より選択することができる。たとえば、界面活性剤は、非イオン性であり得、ポリソルベート２０（たとえば、約０．１ｍＬ／Ｌ〜約０．４ｍＬ／Ｌ、約０．１ｍＬ／Ｌ〜約０．３ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０）を含み得る。

いくつかの実施形態において、リンス液は、約４５〜約５５ｍＬ／Ｌ（たとえば、約５０ｍＬ／Ｌ）のメタノールを含む。

いくつかの実施形態において、リンス液は、約９〜約１１ｍＬ／Ｌ（たとえば、約１０ｍＬ／Ｌ）のメタノールを含む。

いくつかの実施形態において、リンス液は、約５ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１５ｐｐｍＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約５０ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含む。そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０であり得る。

いくつかの実施形態において、リンス液は、約１ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約１０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約３ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約１０ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含む。そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０であり得る。

いくつかの実施形態において、細胞固定液は、染料特許ブルーＶＦを含まない（たとえば、全く含まないか、または国際公開第２００７／１１７７９８号に開示された処方に存在する量の特許ブルーＶＦよりも少ない量を含む）。

いくつかの実施形態において、第１の細胞染色液は、染料特許ブルーＶＦを含まない（たとえば、全く含まないか、または国際公開第２００７／１１７７９８号に開示された処方に存在する量の特許ブルーＶＦよりも少ない量を含む）。

いくつかの実施形態において、第２の細胞染色液は、染料特許ブルーＶＦを含まない（たとえば、全く含まないか、または国際公開第２００７／１１７７９８号に開示された処方に存在する量の特許ブルーＶＦよりも少ない量を含む）。

いくつかの実施形態において、リンス液は、染料特許ブルーＶＦを含まない（たとえば、全く含まないか、または国際公開第２００７／１１７７９８号に開示された処方に存在する量の特許ブルーＶＦよりも少ない量を含む）。

いくつかの実施形態において、細胞固定液は、タンパク質分解酵素を含まない（たとえば、全く含まないか、または国際公開第２００７／１１７７９８号に開示された処方に存在する量のタンパク質分解酵素よりも少ない量を含む）。

いくつかの実施形態において、第１の細胞染色液は、タンパク質分解酵素を含まない（たとえば、全く含まないか、または国際公開第２００７／１１７７９８号に開示された処方に存在する量のタンパク質分解酵素よりも少ない量を含む）。

いくつかの実施形態において、第２の細胞染色液は、タンパク質分解酵素を含まない（たとえば、全く含まないか、または国際公開第２００７／１１７７９８号に開示された処方に存在する量のタンパク質分解酵素よりも少ない量を含む）。

いくつかの実施形態において、リンス液は、タンパク質分解酵素を含まない（たとえば、全く含まないか、または国際公開第２００７／１１７７９８号に開示された処方に存在する量のタンパク質分解酵素よりも少ない量を含む）。

いくつかの実施形態において、第１の染色段階を行うことは、（ｉ）第１の細胞染色液を、基板と表面との間の分離に、標本と表面が接触するのに十分な量で分配すること；（ii）少なくとも第２の攪拌段階を行うこと（第２の攪拌段階は、基板と表面との間の距離を、第１の染色液が第２の攪拌段階の間、標本と接触しながら変化させることを含む）；および（iii）第１の染色液を分離および標本から除去することを含む。

いくつかの実施形態において、第２の染色段階を行うことは、（ｉ）第２の細胞染色液を、基板と表面との間の分離に、標本と表面が接触するのに十分な量で分配すること；（ii）少なくとも第３の攪拌段階を行うこと（第３の攪拌段階は、基板と表面との間の距離を、第２の染色液が第３の攪拌段階の間、標本と接触しながら変化させることを含む）；および（iii）第２の染色液を分離および標本から除去することを含む。

いくつかの実施形態において、第１のリンス段階を行うことは、（ｉ）リンス液を、基板と表面との間の分離に、標本と表面が接触するのに十分な量で分配すること；（ii）少なくとも第４の攪拌段階を行うこと（第４の攪拌段階は、基板と表面との間の距離を、リンス液が第４の攪拌段階の期間、標本と接触しながら変化させることを含む）；および（iii）リンス液を分離および標本から除去することを含む。

いくつかの実施形態において、自動標本分析機は、基板把持部を含む基板アーム；基板アームに接続され、基板アームを開放位置と標本処理位置との間で移動させるように設定される第１のアクチュエータ；基板把持部により基板アーム上に把持された基板を攪拌するように配置および設定される第２のアクチュエータ；基板アームが標本処理位置にある場合に基板と向かい合って位置する上面を有するプラットホーム；およびプラットホームの上面上に配置される２つ以上のオフセットであって、基板が基板処理位置においてすべてのオフセットと接触する場合、基板およびプラットホームの上面が実質的に平行であり、少なくとも約５０ミクロンの分離を形成するように配置される２つ以上のオフセットを含む。

自動標本検査システムの実施形態は、本明細書に開示される標本調製装置の任意の１つ以上の特徴などの、特徴本明細書に、適切なものとして開示されている任意の１つ以上の特徴を含み得る。

本明細書に開示された方法、キットおよびシステムの実施形態においては、（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）および（Ｄ）のうちの１つ、２つ、３つまたは４つ（たとえば４つ）を適用することができる。

（Ａ） 細胞固定液は、アズールＢ；界面活性剤；メタノールおよびエチレングリコールを含む。

たとえば、細胞固定液は、約０．５ｇ／Ｌ〜約５．０ｇ／ＬのアズールＢ；約０．５ｍＬ／Ｌ〜約２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約５ｍＬ／Ｌ〜約５０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール、プロピレングリコール、またはポリプロピレングリコール；約０．１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／ＬのＨＥＰＥＳナトリウム塩；およびメタノールを含み得る。

別の例として、細胞固定液は、約０．８ｇ／Ｌ〜約１．２ｇ／ＬのアズールＢ；約０．８ｍＬ／Ｌ〜約１．２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約９ｍＬ／Ｌ〜約１１ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約０．２５ｇ／Ｌ〜約０．３８ｇ／ＬのＨＥＰＥＳナトリウム塩；およびメタノールを含み得る。

たとえば、細胞固定液は、約１ｇ／ＬのアズールＢ；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約０．３２ｇ／ＬのＨＥＰＥＳナトリウム塩；およびメタノールを含み得る。

別の例としては、細胞固定液は、約１ｇ／ＬのアズールＢ；約０．５ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１０ｍＬ／Ｌのプロピレングリコール；約０．３２ｇ／ＬのＨＥＰＥＳナトリウム塩；およびメタノールを含み得る。

さらなる例としては、細胞固定液は、約１ｇ／ＬのアズールＢ；約１．５ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１０ｍＬ／Ｌのポリプロピレングリコール；約０．３２ｇ／ＬのＨＥＰＥＳナトリウム塩；およびメタノールを含み得る。

実施形態は、上述したおよび／または発明の詳細な説明に記載したおよび／または特許請求の範囲に記載した特徴のいずれか１つ以上を含み得る。

（Ｂ） 第１の細胞染色液は、エオシンＹ；緩衝剤；界面活性剤；塩化ナトリウム；エチレングリコール；および水を含む。

たとえば、第１の細胞染色液は、約０．５ｇ／Ｌ〜約５．０ｇ／ＬのエオシンＹ；約５ｍＭ〜約２５０ｍＭのビス−トリス緩衝液またはリン酸緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌ〜約２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１ｇ／Ｌ〜約２０ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約５ｍＬ／Ｌ〜約５０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約０．２ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは、約５．８〜約６．２である。

別の例としては、第１の細胞染色液は、約０．６ｇ／Ｌ〜約０．９ｇ／ＬのエオシンＹ；約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのビス−トリス緩衝液；約０．８ｍＬ／Ｌ〜約１．２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約３ｇ／Ｌ〜約５ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約９ｍＬ／Ｌ〜約１１ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約１０ｐｐｍ〜約２０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは、約５．８〜約６．２である。

たとえば、第１の細胞染色液は、約０．７５ｇ／ＬのエオシンＹ；約５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約４ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約１０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは、約５．８〜約６．２である。

別の例としては、第１の細胞染色液は、約０．７５ｇ／ＬのエオシンＹ；約５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約６ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約２０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは、約５．８〜約６．２である。

さらなる例としては、第１の細胞染色液は、約０．７５ｇ／ＬのエオシンＹ；約５０ｍＭのリン酸緩衝液、約２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約４ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約５０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは、約５．８〜約６．２である。

実施形態は、上述したおよび／または発明の詳細な説明に記載したおよび／または特許請求の範囲に記載した特徴のいずれか１つ以上を含み得る。

（Ｃ） 第２の細胞染色液は、アズールＢ；メチレンブルー；緩衝剤；界面活性剤；塩化ナトリウム；および水を含む。

たとえば、第２の細胞染色液は、約０．２５〜約２．５ｇ／ＬのアズールＢ；約０．２５ｇ／Ｌ〜約２．５ｇ／Ｌのメチレンブルー；約５ｍＭ〜約２５０ｍＭのビス−トリスまたはＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌ〜約２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１ｇ／Ｌ〜約２０ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；および約０．２ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは、約６．８〜約７．２である。

別の例としては、第２の細胞染色液は、約０．４〜約０．６ｇ／ＬのアズールＢ；約０．４ｇ／Ｌ〜約０．５ｇ／Ｌのメチレンブルー；約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのビス−トリス緩衝液；約０．８ｍＬ／Ｌ〜約１．２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１．８ｇ／Ｌ〜約２．２ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；および約１０ｐｐｍ〜約２０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは、約６．８〜約７．２である。

たとえば、第２の細胞染色液は、約０．５ｇ／ＬのアズールＢ；約０．４５ｇ／Ｌのメチレンブルー；約５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約２ｇ／Ｌの塩化ナトリウム、および約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは、約６．８〜約７．２である。

別の例としては、第２の細胞染色液は、約０．５ｇ／ＬのアズールＢ；約０．４５ｇ／Ｌのメチレンブルー；約５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約２ｇ／Ｌの塩化ナトリウム、および約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは、約６．８〜約７．２である。

さらなる例としては、第２の細胞染色液は、約０．５ｇ／ＬのアズールＢ；約０．４５ｇ／Ｌのメチレンブルー；約５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０、約１ｇ／Ｌの塩化ナトリウム、および約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、その溶液のｐＨは、約６．８〜約７．２である。

溶液は、約６．８〜約７．２のｐＨを有し得る。

実施形態は、上述したおよび／または発明の詳細な説明に記載したおよび／または特許請求の範囲に記載した特徴のいずれか１つ以上を含み得る。

（Ｄ） 自動標本調製装置用のリンス液は、ポリエチレングリコール；緩衝剤；界面活性剤；メタノール；および水を含む。

たとえば、リンス液は、約０．２ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約１ｍＭ〜約２５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ＭＥＳまたはビス−トリス緩衝液；約０．１ｍＬ／Ｌ〜約２．４０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約０．０４ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約９ｍＬ／Ｌ〜約２００ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

別の例としては、リンス液は、約１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約５ｍＭ〜約２５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ＭＥＳまたはビス−トリス緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌ〜約２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約０．２ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約１０ｍＬ／Ｌ〜約２００ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

さらなる例としては、リンス液は、約４．５ｇ／Ｌ〜約５．５ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．８ｍＬ／Ｌ〜約１．２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１０ｐｐｍ〜約２０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約４５ｍＬ／Ｌ〜約５５ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

たとえば、リンス液は、約５ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約５０ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

別の例としては、リンス液は、約１０ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約５０ｍＭのＭＥＳ緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約５０ｍＬ／Ｌのメタノール；を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

さらなる例としては、リンス液は、約１０ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約５０ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

たとえば、リンス液は、約０．２ｇ／Ｌ〜約２ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約１ｍＭ〜約５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．１６ｍＬ／Ｌ〜約０．２４ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約０．０４ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約９ｍＬ／Ｌ〜約１１ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

別の例としては、リンス液は、約０．９ｇ／Ｌ〜約１．１ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約９ｍＭ〜約１１ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．１６ｍＬ／Ｌ〜約０．２４ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約２ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約９ｍＬ／Ｌ〜約１１ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

なお別の例としては、リンス液は、約１ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約１０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約３ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約１０ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

本明細書において使用する場合、溶液が１つ以上の物質を「含まない」という場合、これは、その溶液が、ＨＰＬＣ、ＵＶ分光法、電気泳動、および／または酵素アッセイ検出により測定した場合、その１つ以上の物質を５％未満（たとえば、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０％（ｗ／ｗまたはｗ／ｖまたはｖ／ｖ））含むことを意味する。

定義されない限りは、本明細書で用いる技術用語および科学用語は、本発明の属する技術分野の当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと同様または同等の方法および材料は、本発明の実施または検査において用いられ得るが、適切な方法および材料が以下に記載される。本明細書で言及される全ての出版物、特許出願、特許、および他の参考文献は、それらの全体が参照により組み込まれている。矛盾する場合には、定義を含めて本明細書が考慮される。また、材料、方法および実施例は、単に例示に過ぎず、また限定を意図するものでもない。

本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかとなる。

固定液の一実施形態のＨＰＬＣクロマトグラフである。 固定液の一実施形態の紫外−可視吸収スペクトルである。 第１の染色液の一実施形態のＨＰＬＣクロマトグラフである。 第１の染色液の一実施形態の紫外−可視吸収スペクトルである。 第２の染色液の一実施形態のＨＰＬＣクロマトグラフである。 第２の染色液の一実施形態の紫外−可視吸収スペクトルである。 開放位置で両試料把持部２０Ａおよび２０Ｂを備えた検査用標本の調製のための装置の一実施形態の斜視図である。 図７記載の装置の一部のもう１つの斜視図である（基板アームおよび試料把持部が示されていない）。 開放位置の試料把持部２０Ａおよび閉鎖（標本処理）位置の試料把持部２０Ｂを備えた図７記載の装置の別の斜視図である。 図７記載の装置のインデキシング機構の斜視図である。 複数の液体ルートによる装置と液体容器との間の接続を示す図７の装置の斜視図である。 自動基板移動手段および本明細書に記載される標本調製装置の一実施形態を含む標本検査システムの斜視図である。 標本把持部２０Ｂ、プラットホーム６０Ｂおよびブロック８０Ｂを詳細に示す図７の装置の一部の拡大斜視図である。 図７の装置のボールジョイント機構の斜視図である。 図１２Ｂのボールジョイント機構の断面図である。 基板アームを開放位置から閉鎖（標本処理）位置へ移動させるための一連の工程を示すフローチャートである。 本明細書に記載される標本調製装置の一実施形態の概略図である。 基板アームを開放位置から標本処理位置へ移動させるための別の一連の工程を示すフローチャートである。 ２つのアクチュエータを含む検査用標本を調製するための装置の概略図である。 標本に固定剤を適用するための一連の工程を示すフローチャートである。 標本に染色剤を適用するための一連の工程を示すフローチャートである。 基板から過剰な液体を除去するための一連の工程を示すフローチャートである。 基板から過剰な液体を除去するための別の一連の工程を示すフローチャートである。 標本をリンスするための一連の工程を示すフローチャートである。 標本を攪拌するための一連の工程を示すフローチャートである。 標本を乾燥するための一連の工程を示すフローチャートである。 より大きな標本検査システムにおいて使用される場合の標本調製装置の斜視図である。 基板上に載せた標本を処理するための一連の工程を示すフローチャートである。 図２２のフローチャートにおいて、時間の関数として消費される液体の容量を示すグラフである。 自動基板移動手段により基板アーム上への基板の設置を示す図７の装置の斜視図である。 自動基板移動手段により基板アーム上への基板の設置を示す図７の装置の斜視図である。 固定液、第１の染色液、第２の染色液およびリンス液を含むキットの一実施形態である。

種々の図における同様の参照符号は同様の要素を示す。

本明細書に開示されるのは、自動標本処理のための処方、方法およびシステムである。本明細書に記載される自動標本処理方法およびシステムは、手動方法および他の自動処理方法に対して、手動または他のシステムによって処理される場合の染色剤、固定化剤および他の試薬の適用に関連したばらつきを有意に減少させると同時に高度に均一な染色で、最少の試薬量を用いる増強された処理速度といった利点を提供する。固定液、染色液およびリンス液は、標本のコントラストを増強し、自動標本処理システムから容易に分配され得る。さらに、固定液、染色液およびリンス液は、従来の固定液、染色液およびリンス液に対して改善された細胞同定および細胞分類を提供し得る。

従来の固定液、染色液およびリンス液は、通常、淡色の染色または生体試料の非特異的染色（たとえば、細胞質の非特異的染色）などの芳しくない染色結果を提供するか、または大量の処理液を必要とする。本明細書において開示する処方は、たとえば自動標本処理システムに用いられる場合、高コントラストおよび生体試料の選択的染色を低用量の処理液で可能とする。

さらに、従来の自動処理方法は、通常、比較的高スループットであるが同時に大量の処理液を消費するか、または比較的低スループットであるが処理液の消費量が少ない。しかしながら、多くの適用のためには、ハイスループット操業と低い液体消費量の両方が望ましい。ハイスループットを維持することにより、標本を効率的に処理および検査できる。液体消費量を低く抑えることにより、処理廃棄物の量が処理試薬の必要量と共に減少され、稼働コストが低く維持される。本明細書に開示された処方、システムおよび方法は、低用量の処理液（たとえば、標本につき液体約１ｍＬ未満、標本につき液体約１．５ｍＬ未満、標本につき液体約２ｍＬ未満）を用いて、迅速な標本の自動処理（たとえば、単独の機械で１時間当たり１００標本より多く）を可能とする一方で、高度に均一で再現性のある結果を生み出す。

標本調製システムでの使用のための処方
固定液、１つ以上の染色液およびリンス液が本明細書において提供され、それらは自動標本調製システムにおいて使用され得る。各溶液は、特定の処方を有し得る。たとえば、固定液は、細胞学的染料、界面活性剤、有機溶媒、非特異的結合を最小化するための薬剤、および緩衝剤を含み得る。第１の染色水溶液は、細胞学的染料、緩衝剤、界面活性剤、塩、非特異的結合を最小化するための薬剤、および抗菌剤を含み得る。第２の染色水溶液は、１つ以上の細胞学的染料、緩衝剤、界面活性剤、塩および抗菌剤を含み得る。リンス液は、緩衝剤、界面活性剤、抗菌剤、有機溶媒および水溶性ポリマーを含み得る。処方組成は、ＨＰＬＣによって純度が分析でき、および／または精製できる。処方は、ｐＨを調製するための酸も含み得る。各処方を、さらに詳細に以下に説明する。

固定液
固定液に含めることができる固定化剤としては、生体試料を腐敗から保護するために使用される化学薬品が挙げられる。そのような固定化剤は、標本に生じる生物学的反応を防ぐことができ、標本の機械的強度と安定性を増加させる。種々の固定化剤を固定液に含めることができ、たとえば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、ＥＤＴＡ、界面活性剤、金属塩、金属イオン、尿素およびアミノ化合物などが挙げられる。いくつかの実施形態において、固定液は、画像化の目的のために、有機溶媒または、細胞内の成分（たとえば、タンパク質）を沈殿、架橋もしくは保存させることができる固定化を含む。たとえば、固定化剤としては、メタノール、エタノールおよびイソプロパノールなどの１つ以上のアルコールなどの有機溶媒、またはアセトンおよびエーテルなどの他の有機溶媒などが挙げられる。いくつかの実施形態において、固定液は、メタノールなどの有機溶媒を含む。有機溶媒は、水が約０．１％未満のＡＣＳグレード（たとえば、水が約０．０５％未満、水が約０．０１％未満）を有し得る。有機溶媒は、溶液において、固定液に他の成分が添加された後の残りの量で存在し得る。有機溶媒は、標本用の乾燥剤としても働くことができ、そして標本から水分を排除することができる。

いくつかの実施形態において、固定液は、細胞学的染料を含む。染料は、標本の染色を増加させることができ、たとえば、アズールＢ、メチレンブルー、エオシン、チアジン染色剤、およびフルオレセイン誘導体などが含まれる。染料は、純度約８０％以上（たとえば、純度約８５％以上、純度約９０％以上、純度約９５％以上、または純度約９９％以上）であり得る。アズールＢの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムは、たとえば図１に示される。染料は、固定液中、およそ０．５ｇ／Ｌ（たとえば、およそ０．７５ｇ／Ｌ、およそ１ｇ／Ｌ、およそ２ｇ／Ｌ、およそ３ｇ／Ｌ、およそ４ｇ／Ｌ）から、およそ５ｇ／Ｌ（たとえば、およそ４ｇ／Ｌ、およそ３ｇ／Ｌ、およそ２ｇ／Ｌ、およそ１ｇ／Ｌ、またはおよそ０．７５ｇ／Ｌ）の濃度であり得る。たとえば、固定液は、およそ１ｇ／ＬのアズールＢを含み得る。いくつかの実施形態において、固定液は、およそ０．８ｇ／ＬのアズールＢを含み得る。

固定液は、界面活性剤を含み得る。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、界面活性剤は、溶媒の表面張力を減少させ、図１３Ｂに示されるように、分離９２で試料基板上への溶液の良好な塗布性を提供するものであると考えられる。いくつかの実施形態において、界面活性剤は非イオン性であり、そして、イオン的に帯電した染料などの処方内の成分とのイオン相互作用から生じ得る溶液からの沈殿の可能性を最小化し得る。沈殿をほとんどまたは全く含まない溶液は、より容易に分配ノズルから排出され得、分配ノズルが詰まる可能性や、液体の流れが徐々に弱まる可能性を減少させることができる。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、固定液内の成分の標本への非選択的結合の可能性を減少させることができ、これにより、画像アーチファクトを最小化できる。

固定液は、液体界面活性剤の場合は容量％で、または固体界面活性剤の場合は重量％で、およそ０．０５％から（たとえば、およそ０．０７５％から、およそ０．１％から、およそ０．２％から、およそ０．３％から、またはおよそ０．４％から）、およそ０．５％（たとえば、およそ０．４％、およそ０．３％、およそ０．２％、およそ０．１％、またはおよそ０．０７５％）の界面活性剤を含み得る。いくつかの実施形態において、固定液は、およそ０．５〜およそ２ｍＬ／Ｌの界面活性剤（たとえば、非イオン性界面活性剤）を含み得る。たとえば、固定液は、およそ１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０（たとえば、Ｔｗｅｅｎ２０）を含み得る。

界面活性剤は、非イオン性、カチオン性、アニオン性または両性イオン性であってもよい。界面活性剤の混合物が使用されてもよい。界面活性剤の具体的な分類には、アルコールエーテル硫酸塩、アルコール硫酸塩、アルカノールアミド、アルキルスルホネート、アミンオキサイド、両性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、ベタイン誘導体、カチオン性界面活性剤、ジスルホネート、ドデシルベンゼン、スルホン酸、エトキシ化アルコール、エトキシ化アルキルフェノール、エトキシ化脂肪酸、グリセロールエステルヒドロトロピー剤（hydrotropes）、ラウリル硫酸塩、モノおよびジグリセリド、非イオン性界面活性剤、リン酸エステル、第４級界面活性剤ならびにソルビタン誘導体が挙げられる。

具体的な非イオン界面活性剤としては、たとえば、ＢｉｇＣＨＡＰ（Ｎ，Ｎ−ビス［３−（Ｄ−グルコンアミド）プロピル］コールアミド）、ビス（ポリエチレングリコールビス［イミダゾイルカルボニル］）、Ｂｒｉｊ（登録商標）３０（ポリオキシエチレン４ラウリルエーテル）、Ｂｒｉｊ（登録商標）３５（ポリオキシエチレン２３ラウリルエーテル）、Ｂｒｉｊ（登録商標）５２（ポリオキシエチレン２セチルエーテル）、Ｂｒｉｊ（登録商標）５６（ポリオキシエチレン１０セチルエーテル）、Ｂｒｉｊ（登録商標）５８（ポリオキシエチレン２０セチルエーテル）、Ｂｒｉｊ（登録商標）７２（ポリオキシエチレン２ステアリルエーテル）、Ｂｒｉｊ（登録商標）７６（ポリオキシエチレン１０ステアリルエーテル）、Ｂｒｉｊ（登録商標）７８（ポリオキシエチレン２０ステアリルエーテル）、Ｂｒｉｊ（登録商標）９２（ポリオキシエチレン２オレイルエーテル）、Ｂｒｉｊ（登録商標）９７（ポリオキシエチレン１０オレイルエーテル）、Ｂｒｉｊ（登録商標）９８（ポリオキシエチレン２０オレイルエーテル）、Ｂｒｉｊ（登録商標）７００（ポリオキシエチレン１００ステアリルエーテル）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ（ヒマシ油／エチレンオキシドポリエーテル）、デカエチレングリコールモノドデシルエーテル、オクタノイル−Ｎ−メチルグルカミド（ＭＥＣＡ−８）、デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド（ＭＥＣＡ−１０）、ｎ−オクチルグルコシド、ｎ−ドデシルグルコシド、イソトリデシルポリ（エチレングリコールエーテル）_n、Ｎ−デカノイル−Ｎ−メチルグルカミン、ｎ−デシルα−Ｄグルコピラノシド、デシルβ−Ｄ−マルトピラノシド、ｎ−ドデカノイル−Ｎ−メチルグルカミド、ｎ−ドデシルα−Ｄ−マルトシド、ｎ−ドデシルβ−Ｄ−マルトシド、ヘプタエチレングリコールモノデシルエーテル、ヘプタエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、ｎ−ヘキサデシルβ−Ｄ−マルトシド、ヘキサエチレングリコールモノドデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、Ｉｇｅｐａｌ（登録商標）ＣＡ−６３０（オクチルフェニル−ポリエチレングリコール）、Ｉｇｅｐａｌ（登録商標）ＣＡ−２１０（ポリオキシエチレン（２）イソオクチルフェニルエーテル）、Ｉｇｅｐａｌ（登録商標）ＣＡ−５２０（ポリオキシエチレン（５）イソオクチルフェニルエーテル）、Ｉｇｅｐａｌ（登録商標）ＣＯ−６３０（ポリオキシエチレン（９）ノニルフェニルエーテル）、Ｉｇｅｐａｌ（登録商標）ＣＯ−７２０（ポリオキシエチレン（１２）ノニルフェニルエーテル）、Ｉｇｅｐａｌ（登録商標）ＣＯ−８９０（ポリオキシエチレン（４０）ノニルフェニルエーテル）、Ｉｇｅｐａｌ（登録商標）ＣＯ−９９０（ポリオキシエチレン（１００）ノニルフェニルエーテル）、Ｉｇｅｐａｌ（登録商標）ＤＭ−９７０（ポリオキシエチレン（１５０）ジノニルフェニルエーテル）、メチル−６−Ｏ−（Ｎ−ヘプチルカルバモイル）−α−Ｄ−グルコピラノシド、ノナエチレングリコールモノドデシルエーテル、Ｎ−ノナノイル−Ｎ−メチルグルカミン、オクタエチレングリコールモノデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノドデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド、ペンタエチレングリコールモノデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノヘキシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノオクチルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールエーテルＷ−１、ポリオキシエチレン１０トリデシルエーテル、ポリオキシエチレン１００ステアレート、ポリオキシエチレン２０イソヘキサデシルエーテル、ポリオキシエチレン２０オレイルエーテル、ポリオキシエチレン４０ステアレート、ポリオキシエチレン５０ステアレート、ポリオキシエチレン８ステアレート、ポリオキシエチレンビス（イミダゾリルカルボニル）、ポリオキシエチレン２５プロピレングリコールステアレート、サポニン、Ｓｐａｎ（登録商標）２０（ソルビタンラウリン酸モノエステル）、Ｓｐａｎ（登録商標）４０（ソルビタンパルミチン酸モノエステル）、Ｓｐａｎ（登録商標）６０（ソルビタンステアリン酸モノエステル）、Ｓｐａｎ（登録商標）６５（ソルビタンステアリン酸トリエステル）、Ｓｐａｎ（登録商標）８０（ソルビタンオレイン酸モノエステル）、Ｓｐａｎ（登録商標）８５（ソルビタンオレイン酸トリエステル）、任意の形態でのＴｅｒｇｉｔｏｌ（１５−Ｓ−５、１５−Ｓ−７、１５−Ｓ−９、１５−Ｓ−１２、１５−Ｓ−３０、ＮＰ−４、ＮＰ−７、ＮＰ−９、ＮＰ−１０、ＮＰ−４０、ＮＰＸ（Ｉｍｂｅｎｔｉｎ−Ｎ／６３）、ＴＭＮ−３（ポリエチレングリコールトリメチルノニルエーテル）、ＴＭＮ−６（ポリエチレングリコールトリメチルノニルエーテル）、ＴＭＮ−１０（ポリエチレングリコールトリメチルノニルエーテル）、ＭＩＮ ＦＯＡＭ ｌｘ、およびＭＩＮ ＦＯＡＭ ２ｘなど）、テトラデシル−β−Ｄ−マルトシド、テトラエチレングリコールモノデシルエーテル、テトラエチレングリコールモノドデシルエーテル、テトラエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、トリエチレングリコールモノデシルエーテル、トリエチレングルコールモノドデシルエーテル、トリエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、トリエチレングリコールモノオクチルエーテル、トリエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）ＣＦ−２１、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）ＣＦ−３２、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）ＤＦ−１２、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）ＤＦ−１６、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）ＧＲ−５Ｍ、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｎ−１０１（ポリオキシエチレン分岐ノニルフェニルエーテル）、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）ＱＳ−１５、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）ＱＳ−４４、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）ＲＷ−７５（ポリエチレングリコール２６０モノ（ヘキサデシル／オクタデシル）エーテルおよび１−オクタデカノール）、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００（ポリエチレングリコールtert−オクチルフェニルエーテル）、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１０２、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１５、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１５１、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−２００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−２０７、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１１４、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１６５、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−３０５、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−４０５（ポリオキシエチレン（４０）イソオクチルフェニルエーテル）、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−４０５還元（ポリオキシエチレン（４０）イソオクチルシクロヘキシルエーテル）、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−４５（ポリエチレングリコール４−tert−オクチルフェニルエーテル）、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−７０５−７０、任意の形態のＴＷＥＥＮ（登録商標）（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０（ポリオキシエチレンソルビタンラウリン酸モノエステル、すなわちポリソルベート２０）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）２１（ポリオキシエチレンソルビタンラウリン酸モノエステル）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンパルミチン酸モノエステル）ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０（ポリエチレングリコールソルビタンステアリン酸モノエステル）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）６１（ポリエチレングリコールソルビタンステアリン酸モノエステル）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）６５（ポリオキシエチレンソルビタンステアリン酸トリエステル）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０（ポリオキシエチレンソルビタンオレイン酸モノエステル）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８１（ポリオキシエチレンソルビタンオレイン酸モノエステル）およびＴＷＥＥＮ（登録商標）８５（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンオレイン酸トリエステル）など）、Ｔｙｌｏｘａｐｏｌ（ホルムアルデヒドとオキシランとの４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノールポリマー）、およびｎ−ウンデシルβ−Ｄ−グルコピラノシドが挙げられる。

具体的なアニオン性界面活性剤としては、ケノデオキシコール酸、コール酸、デヒドロコール酸、デオキシコール酸、ジギトニン、ジギトキシゲニン、Ｎ，Ｎ−ジメチルドデシルアミンＮ−オキシド、ドキュセートナトリウム、グリコケノデオキシコール酸ナトリウム、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、グリコリトコール酸３−硫酸二ナトリウム塩、グリコリトコール酸エチルエステル、Ｎ−ラウロイルサルコシン、リチウムドデシル硫酸塩、Ｌｕｇｏｌ（ヨードヨウ化カリウム）、Ｎｉａｐｒｏｏｆ（２−エチルヘキシル硫酸ナトリウム塩）、Ｎｉａｐｒｏｏｆ４（７−エチル−２−メチル−４−ウンデシル硫酸ナトリウム塩）、任意に置換されたアルキルスルホン酸塩（１−ブタンスルホン酸の塩、ペンタンスルホン酸の塩、ヘキサンスルホン酸の塩、１−オクタンスルホン酸の塩、１−デカンスルホン酸の塩、１−ドデカンスルホン酸の塩、１−ヘプタンスルホン酸の塩、１−ヘプタンスルホン酸の塩、１−ノナンスルホン酸の塩、１−プロパンスルホン酸の塩、および２−ブロモエタンスルホン酸の塩、特にナトリウム塩など）、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、任意に置換されているドデシル硫酸ナトリウム、オクチル硫酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、タウロケノデオキシコール酸ナトリウム、タウロヒオデオキシコール酸ナトリウム、タウロリトコール酸３−硫酸二ナトリウム塩、タウロウルソデオキシコール酸ナトリウム塩、Ｔｒｉｚｍａ（登録商標）ドデシル硫酸、ウルソデオキシコール酸などが挙げられる。アニオン性界面活性剤は、酸または塩の形態、またはその両方で提供され得る。

具体的なカチオン性界面活性剤としては、臭化アルキルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウム、塩化ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウム、臭化ベンジルドデシルジメチルアンモニウム、テトラクロロヨウ素酸ベンジルトリメチルアンモニウム、臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム、臭化ドデシルエチルジメチルアンモニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、臭化エチルヘキサデシルジメチルアンモニウム、ジラード試薬Ｔ、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−ポリオキシエチレンン（１０）−Ｎ−タロー−１，３−ジアミノプロパン、臭化トンゾニウム、および臭化トリメチル（テトラデシル）アンモニウムが挙げられる。

具体的な両性イオン性界面活性剤としては、ＣＨＡＰＳ（スルホン酸３−｛（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ｝−Ｉ−プロパン）、ＣＨＡＰＳＯ（スルホン酸３−｛（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ｝−２−ヒドロキシ−１−プロパン）、スルホン酸３−（デシルジメチルアンモニオ）プロパン、スルホン酸３−（ドデシルジメチルアンモニオ）プロパン、スルホン酸３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルミリスチルアンモニオ）プロパン、スルホン酸３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルオクタデシルアンモニオ）プロパン、スルホン酸３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルオクチルアンモニオ）プロパン、およびスルホン酸３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルパルミチルアンモニオ）プロパンが挙げられる。

界面活性剤には、既知のものまたは本技術分野において発見可能なものが含まれる。界面活性剤は、合成することができ、または任意の様々な販売者（たとえば、シグマアルドリッチ社、セントルイス、ＭＯ、米国、www.sigmaaldrich.com）から購入することもできる。所定の界面活性剤は、アーチファクトを減少させるその能力について、試験界面活性剤で処理したサンプルを、界面活性剤処理なしで処理したサンプルに対して、また汚染アーチファクトを減少させることが知られている界面活性剤または他の陽性コントロールに対して評価することにより調べてもよい。所定の界面活性剤は、処方中の成分の沈殿を減少させるその能力について、界面活性剤を含有する溶液を、界面活性剤なしの溶液に対して、溶液を少なくとも２週間静置した後に目視検査することにより調べてもよい。

固定液は、細胞成分への染料の非特異的結合を最小化するための薬剤、たとえばエチレングリコール、プロピレングリコールおよび／またはポリエチレングリコールを含み得る。いくつかの実施形態において、固定液は、液体の非特異的結合最小化剤の場合は容量％で、または固体の非特異的結合最小化剤の場合は重量％で、およそ０．５％（たとえば、およそ０．７５％、およそ１％、およそ２％、およそ３％、またはおよそ４％）から、およそ５％（たとえば、およそ４％、およそ３％、およそ２％、およそ１％、またはおよそ０．７５％）の非特異的結合最小化剤を含み得る。たとえば、固定液は、およそ５ｍＬ／Ｌ（たとえば、およそ１０ｍＬ／Ｌ、およそ１５ｍＬ／Ｌ、およそ２０ｍＬ／Ｌ、およそ２５ｍＬ／Ｌ、およそ３０ｍＬ／Ｌ、およそ３５ｍＬ／Ｌ、およそ４０ｍＬ／Ｌ、またはおよそ４５ｍＬ／Ｌ）から、およそ５０ｍＬ／Ｌ（たとえば、およそ４５ｍＬ／Ｌ、およそ４０ｍＬ／Ｌ、およそ３５ｍＬ／Ｌ、およそ３０ｍＬ／Ｌ、およそ２５ｍＬ／Ｌ、およそ２０ｍＬ／Ｌ、およそ１５ｍＬ／Ｌ、またはおよそ１０ｍＬ／Ｌ）のエチレングリコールを含み得る。いくつかの実施形態において、固定液は、およそ１０ｍＬ／Ｌ（たとえば、およそ１５ｍＬ／Ｌ、およそ２０ｍＬ／Ｌ、またはおよそ２５ｍＬ／Ｌ）のエチレングリコールを含む。

固定液は、緩衝剤を含み得る。緩衝剤の例としては、ＨＥＰＥＳ緩衝液（たとえば、ＨＥＰＥＳナトリウム塩および／またはＨＥＰＥＳ遊離酸）、ＭＥＳ、ビス−トリス、および他の有機緩衝液が挙げられる。固定液は、およそ０．５ｍＭ（たとえば、およそ１ｍＭ、およそ３ｍＭ、およそ５ｍＭ、およそ７ｍＭ、またはおよそ９ｍＭ）から、およそ１０ｍＭ（たとえば、およそ９ｍＭ、およそ７ｍＭ、およそ５ｍＭ、およそ３ｍＭ、またはおよそ１ｍＭ）の緩衝剤を含み得る。たとえば、固定液は、およそ１．５ｍＭ（たとえば、およそ２ｍＭまたはおよそ１ｍＭ）のＨＥＰＥＳナトリウム塩を含み得る。固定液は、およそ０．１ｇ／Ｌ〜およそ１０ｇ／ＬのＨＥＰＥＳ（たとえば、およそ０．５ｇ／Ｌ〜およそ１０ｇ／Ｌ、およそ０．２５ｇ／Ｌ〜およそ０．３８ｇ／Ｌ、およそ０．３２ｇ／Ｌ）を含み得る。

固定液は、固定液対水約１：１０の比率で水に希釈した場合、およそ６〜およそ８のｐＨ（たとえば、およそ６．３〜およそ７．７のｐＨ、およそ６．５〜およそ７．５のｐＨ、およそ６．７〜およそ７．３のｐＨ、およそ６．８〜およそ７．２のｐＨ、およそ６．９〜およそ７．１のｐＨ、またはおよそ７．０のｐＨ）を有し得る。いくつかの実施形態において、固定液は、固定液対水１：１０００の希釈で、約６４０〜約６５０ｎｍ（たとえば、約６４６〜約６４８ｎｍ）のピーク波長で、およそ０．１から１（たとえば、およそ０．１〜０．８、およそ０．１〜０．７、およそ０．１〜０．５、およそ０．１〜０．４、およそ０．１〜０．３、およそ０．１５〜０．３、およそ０．１５〜０．２、およそ０．１８５〜０．２０５、およそ０．１９、またはおよそ０．２）の吸光度を有し得る。

例として、固定液を作るために、メタノールなどの有機溶媒を最初に、最終の所望の容量の１００％未満（たとえば、およそ９０％）まで混合容器に加え得る。非特異的結合最小化剤（たとえば、エチレングリコール）、界面活性剤（たとえば、ポリソルベート２０）、細胞学的染料（たとえば、アズールＢ）および緩衝剤（たとえば、ＨＥＰＥＳナトリウム塩）の計算された量をメタノールに添加し得る。さらに、メタノールを、溶液をその最終所望容量とするように添加することができる。混合物をマグネチック攪拌プレート／攪拌棒および／または羽（impeller）で最低約３０分間混合し得る。混合後、固定液を蒸留水で１：１０希釈したものが調製され、ｐＨ測定がｐＨメーター（たとえば、メトラーｐＨメーター）を用いて行なわれ得る。いくつかの実施形態においては、ｐＨが所望の範囲内でない場合、その後、さらに緩衝剤が、希釈していない固定液に、固定液の蒸留水への１：１０希釈が所望のｐＨに達するまで添加され得る。

固定液の吸光度は、ＵＶ−分光光度計（たとえば、日立ＵＶ−分光光度計）を用いて測定することができる。最初にベースラインを分光光度計に走らせることができる。たとえば、１０ｍＬの固定液の試料を０．４５μｍシリンジフィルタを通してろ過することができ、溶液を蒸留水で１：１０００に希釈し、およそ５００とおよそ７００ｎｍとの間で分光光度計にかけることができる。約６４０〜約６５０ｎｍでの吸光度が記録され得る。アズールＢを含む固定液の代表的な紫外−可視吸収スペクトルは、たとえば図２に示されている。必要であれば、追加的な細胞学的染料を固定液に添加し、所望の範囲に吸光度を持ってくることができる。追加的な細胞学的染料が固定液に添加された場合、溶液は、最低約３０分間混合され、測定プロセス（たとえば、１０ｍＬアリコートをろ過し、アリコートを蒸留水で１：１０００の比率で希釈し、そして吸光度測定を行う）が繰り返される。溶液のｐＨも再度測定され得、（必要な場合）上述の方法により調整され得る。

最後に、固定液は、ボトリングの前に任意の粒状物質を取り除くために０．４５μｍフィルタを通してろ過してもよい。いくつかの実施形態において、微小なフィルタまたは粗いフィルタが使用され得る。たとえば、０．１〜１μｍのフィルタ（たとえば、０．２μｍフィルタ、０．４μｍフィルタ、または０．８μｍフィルタ）が、固定液中の任意の微生物および／または粒状物質を取り除くために使用され得る。いくつかの実施形態において、固定化剤は、５００ｍＬボトルにおいて保存され得、秤で測定した場合、３９６ｇ±１ｇまで充填され得る。最終製品のｐＨは必要に応じて測定することができる。いくつかの実施形態において、固定液のＨＰＬＣクロマトグラムは、たとえば溶液純度を評価するために取得することができる。

いくつかの実施形態において、固定液は、メタノールに溶解し、アズールＢに適合し、および／または約７．８にｐＨを調整し得るため、ＨＥＰＥＳ緩衝液（たとえば、ＨＥＰＥＳナトリウム塩および／またはＨＥＰＥＳ遊離酸）を含む。アズールＢは、特定の細胞成分（たとえば、細胞核、好塩基球、細胞質、顆粒球など）を優先的に染色し、コントラストを向上させ得る。ポリソルベート２０は、基板（たとえば、顕微鏡スライド）上への固定液の塗布性を向上させることができ、および／またはその後の水溶液の送達のためにノズルを準備し得る。エチレングリコールは、染色された標本において良好なコントラストを提供するために細胞成分（たとえば、核と比較して明るい色に染色された核小体を提供するためのクロマチン）への染料の非特異的な結合を減少させ得る。

たとえば、細胞固定液は、約０．５ｇ／Ｌ〜約５．０ｇ／ＬのアズールＢ；約０．５ｍＬ／Ｌ〜約２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約５ｍＬ／Ｌ〜約５０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール、プロピレングリコールまたはポリプロピレングリコール；約０．１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／ＬのＨＥＰＥＳナトリウム塩；およびメタノールを含み得る。

別の例として、細胞固定液は、約０．８ｇ／Ｌ〜約１．２ｇ／ＬのアズールＢ；約０．８ｍＬ／Ｌ〜約１．２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約９ｍＬ／Ｌ〜約１１ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約０．２５ｇ／Ｌ〜約０．３８ｇ／ＬのＨＥＰＥＳナトリウム塩；およびメタノールを含み得る。

たとえば、細胞固定液は、約１ｇ／ＬのアズールＢ；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約０．３２ｇ／ＬのＨＥＰＥＳナトリウム塩；およびメタノールを含み得る。

別の例として、細胞固定液は、約１ｇ／ＬのアズールＢ；約０．５ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１０ｍＬ／Ｌのプロピレングリコール；約０．３２ｇ／ＬのＨＥＰＥＳナトリウム塩；およびメタノールを含み得る。

別の例として、細胞固定液は、約１ｇ／ＬのアズールＢ；約１．５ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１０ｍＬ／Ｌのポリプロピレングリコール；約０．３２ｇ／ＬのＨＥＰＥＳナトリウム塩；およびメタノールを含み得る。

第１および第２の染色液
通常、第１の染色液は水溶液であり得る。溶媒としては、蒸留水または脱イオン水が挙げられる。第１の染色液は細胞学的染料を含む。第１の染色液は赤色染色剤を提供し得る。染料は、標本の染色を向上させることができ、たとえば、エオシンＹおよびフルオレセイン誘導体が挙げられる。いくつかの実施形態においては、エオシンＹは、たとえば血液試料から調製される標本内の細胞の細胞質および核を染めることができる。いくつかの実施形態においては、好酸球および好中球がエオシンＹにより優先的に染色される。染料は、純度約８０％以上（たとえば、純度約８５％以上、純度約９０％以上、純度約９５％以上、または純度約１００％）であり得る。エオシンＹの代表的なＨＰＬＣクロマトグラムは、たとえば図３に示されている。染料は、第１の染色液において、およそ０．５ｇ／Ｌ（たとえば、およそ０．７５ｇ／Ｌ、およそ１ｇ／Ｌ、およそ２ｇ／Ｌ、およそ３ｇ／Ｌ、またはおよそ４ｇ／Ｌ）から、およそ５ｇ／Ｌ（たとえば、およそ４ｇ／Ｌ、およそ３ｇ／Ｌ、およそ２ｇ／Ｌ、およそ１ｇ／Ｌ、またはおよそ０．７５ｇ／Ｌ）の濃度を有し得る。たとえば、第１の染色液は、およそ０．７５ｇ／Ｌ（たとえば、およそ１ｇ／Ｌ、およそ２ｇ／Ｌ、およそ３ｇ／Ｌ、およそ４ｇ／Ｌ、または５ｇ／Ｌ）のエオシンＹを含み得る。

通常、第２の染色液は水溶液であり得る。溶媒としては、蒸留水または脱イオン水が挙げられる。第２の染色液は２つ以上の細胞学的染料を含み得る。第２の染色液は、青色染料を提供し得る。染料は、標本の染色を向上させることができ、たとえば、アズールＢ、メチレンブルー、および／または他のチアジン染料の少なくとも２つを含み得る。いくつかの実施形態においては、アズールＢは、細胞核を優先的に染色することができ、一方、メチレンブルーは、たとえば血液サンプルから調製される標本内の細胞質を優先的に染色することができ、核をわずかに染めることができる。染料は、それぞれ独立して、純度約８０％以上（たとえば、純度約８５％以上、純度約９０％以上、純度約９５％以上、または純度約１００％）であり得る。各染料は、独立して、第２の染色液において、およそ０．２５ｇ／Ｌ（たとえば、およそ０．３ｇ／Ｌ、およそ０．４ｇ／Ｌ、およそ０．４５ｇ／Ｌ、およそ０．５ｇ／Ｌ、およそ０．７５ｇ／Ｌ、およそ１ｇ／Ｌ、およそ１．５ｇ／Ｌ、またはおよそ２ｇ／Ｌ）から、およそ２．５ｇ／Ｌ（たとえば、およそ２ｇ／Ｌ、およそ１．５ｇ／Ｌ、およそ１ｇ／Ｌ、およそ０．７５ｇ／Ｌ、０．５ｇ／Ｌ、およそ０．４５ｇ／Ｌ、およそ０．４ｇ／Ｌ、またはおよそ０．３ｇ／Ｌ）の濃度を有し得る。たとえば、第２の染色液は、およそ０．５ｇ／ＬのアズールＢおよびおよそ０．４５ｇ／Ｌのメチレンブルー水和物を含み得る。いくつかの実施形態においては、第２の染色液は、吸光度が各染料の最大吸光度に対応する波長（たとえば、約６３０ｎｍおよび約６６０ｎｍ）でモニターされる場合、各染料の最大ＨＰＬＣピーク面積によって評価した場合、およそ１：４〜およそ４：１（たとえば、およそ３：１、およそ２：１、およそ１：１、およそ１：２、またはおよそ１：３）の比率で２つの染料を含み得る。アズールＢのメチレンブルーに対する比率およそ１：１で含む第２の染色液の代表的なＨＰＬＣクロマトグラフは、たとえば図５に示されている。

第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、界面活性剤を含み得る。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、界面活性剤は、溶媒の表面張力を減少させ、サンプル基板上への溶液の良好な塗布性を提供することができると考えられる。いくつかの実施形態において、界面活性剤は非イオン性であり、たとえば、イオン的に帯電した染料などの処方内の成分とのイオン相互作用から生じ得る溶液からの沈殿の可能性を最小化することができる。沈殿をほとんどまたは全く含まない溶液は、より容易に分配ノズルから排出され得、分配ノズルが詰まる可能性や、液体の流れが弱まる可能性を減少させ得る。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、非特異的結合の可能性を減少させ得るか、または非特異的結合の結果として生じ得るアーチファクトを最小化し得る。沈殿のほとんどない、または沈殿のない溶液は、試料に存在し得るアーチファクトを最小化することもできる。

第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、液体の界面活性剤の場合容量％で、または固体の界面活性剤の場合重量％で、およそ０．０５％（たとえば、およそ０．０７５％、およそ０．１％、およそ０．２％、およそ０．３％、またはおよそ０．４％）から、およそ０．５％（たとえば、およそ０．４％、およそ０．３％、およそ０．２％、およそ０．１％、またはおよそ０．０７５％）の界面活性剤を含み得る。いくつかの実施形態においては、第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、およそ０．５〜およそ２ｍＬ／Ｌの界面活性剤（たとえば、非イオン性界面活性剤）を含み得る。たとえば、第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、およそ１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０（たとえば、Ｔｗｅｅｎ２０）を含み得る。

界面活性剤は、非イオン性、カチオン性、アニオン性または両性イオン性であってもよい。界面活性剤の混合物もまた使用できる。界面活性剤の具体的な分類には、アルコールエーテル硫酸塩、アルコール硫酸塩、アルカノールアミド、アルキルスルホネート、アミンオキサイド、両性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、ベタイン誘導体、カチオン性界面活性剤、ジスルホネート、ドデシルベンゼン、スルホン酸、エトキシ化アルコール、エトキシ化アルキルフェノール、エトキシ化脂肪酸、グリセロールエステルヒドロトロピー剤、ラウリル硫酸塩、モノおよびジグリセリド、非イオン性界面活性剤、リン酸エステル、第４級界面活性剤、およびソルビタン誘導体が挙げられる。具体的な界面活性剤は、「固定液」の項ですでに記載されたものである。

第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、染料の細胞成分への非特異的結合を最小化するための薬剤、たとえばエチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールを含み得る。いくつかの実施形態において、第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、液体の非特異的結合最小化剤の場合は容量％で、または固体の非特異的結合最小化剤の場合は重量％で、およそ０．５％（たとえば、およそ０．７５％、およそ１％、およそ２％、およそ３％、またはおよそ４％）から、およそ５％（たとえば、およそ４％、およそ３％、およそ２％、およそ１％、またはおよそ０．７５％）の非特異的結合最小化剤を含み得る。たとえば、第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、およそ５ｍＬ／Ｌ（たとえば、およそ１０ｍＬ／Ｌ、およそ１５ｍＬ／Ｌ、およそ２０ｍＬ／Ｌ、およそ２５ｍＬ／Ｌ、およそ３０ｍＬ／Ｌ、およそ３５ｍＬ／Ｌ、およそ４０ｍＬ／Ｌ、またはおよそ４５ｍＬ／Ｌ）から、およそ５０ｍＬ／Ｌ（たとえば、およそ４５ｍＬ／Ｌ、およそ４０ｍＬ／Ｌ、およそ３５ｍＬ／Ｌ、およそ３０ｍＬ／Ｌ、およそ２５ｍＬ／Ｌ、およそ２０ｍＬ／Ｌ、およそ１５ｍＬ／Ｌ、またはおよそ１０ｍＬ／Ｌ）のエチレングリコールを含み得る。いくつかの実施形態において、第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、およそ１０ｍＬ／Ｌ（たとえば、およそ１５ｍＬ／Ｌ、およそ２０ｍＬ／Ｌ、またはおよそ２５ｍＬ／Ｌ）のエチレングリコールを含む。

第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、緩衝剤を含み得る。緩衝剤の例としては、ビス−トリス緩衝液、リン酸緩衝液、ＨＥＰＥＳ、ＭＥＳ、トリス、および約５と約８との間のｐＨを有する他の有機緩衝液が挙げられる。第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、およそ５ｍＭ（たとえば、およそ２５ｍＭ、およそ５０ｍＭ、およそ１００ｍＭ、およそ１５０ｍＭ、またはおよそ２００ｍＭ）から、およそ２５０ｍＭ（たとえば、およそ２００ｍＭ、およそ１５０ｍＭ、およそ１００ｍＭ、およそ５０ｍＭ、またはおよそ２５ｍＭ）の緩衝剤を含み得る。たとえば、第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、およそ５０ｍＭのビス−トリスを含み得る。いくつかの実施形態において、第２の染色液中の緩衝剤は、染色液間の相溶性を増加させるために第１の染色液中の緩衝剤と同じである。

第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、塩化ナトリウム、塩化カリウム、酢酸ナトリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウムおよび硫酸アンモニウムなどの塩を含み得る。第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、およそ１ｇ／Ｌ（たとえば、およそ２ｇ／Ｌ、およそ５ｇ／Ｌ、およそ１０ｇ／Ｌ、またはおよそ１５ｇ／Ｌ）から、およそ２０ｇ／Ｌ（たとえば、およそ１５ｇ／Ｌ、およそ１０ｇ／Ｌ、およそ５ｇ／Ｌ、またはおよそ２ｇ／Ｌ）の塩濃度を含み得る。たとえば、第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、およそ４ｇ／Ｌ（およそ３ｇ／Ｌまたはおよそ２ｇ／Ｌ）の塩化ナトリウムなどの塩を含み得る。たとえば、第２の染色液は、およそ２ｇ／Ｌ（たとえば、およそ３ｇ／Ｌ、またはおよそ４ｇ／Ｌ）の塩化ナトリウムなどの塩を含み得る。塩は、細胞学的染料の標本への非特異的結合をなくすことができる。任意の理論により拘束されることを望むものではないが、塩の陰イオンおよび陽イオンが、たとえば、標本内の荷電種に結合するなどして、染料と標本との間の非特異的電荷−電荷相互作用を遮蔽することができる。

第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、抗菌剤を含み得る。抗菌剤は、微生物の増殖を阻害し、染色液の保存可能期間を延ばすことができる。抗菌剤としては、塩化ベンザルコニウム、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、ＰｒｏＣｌｉｎ（登録商標）（たとえば、ＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標））、アジド、メルチオレートおよび／または抗生物質が挙げられる。いくつかの実施形態において、抗菌剤は、５−クロロ２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンを含む。たとえば、抗菌剤は、シグマ−アルドリッチから入手可能な、約２．３％の５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび約０．７％の２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンを不活性溶媒（たとえば、修飾グリコールおよびアルキルカルボキシレート）中に含み得るＰｒｏＣｌｉｎ（登録商標）３００であり得る。第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、およそ０．２ｐｐｍ（たとえば、およそ１ｐｐｍ、およそ５ｐｐｍ、およそ１０ｐｐｍ、およそ２０ｐｐｍ、およそ３０ｐｐｍ、またはおよそ４０ｐｐｍ）から、およそ５０ｐｐｍ（たとえば、およそ４０ｐｐｍ、およそ３０ｐｐｍ、およそ２０ｐｐｍ、およそ１０ｐｐｍ、およそ５ｐｐｍ、またはおよそ１ｐｐｍ）の濃度で抗菌剤を含み得る。いくつかの実施形態において、第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、およそ１５ｐｐｍ（およそ１０ｐｐｍ、およそ５ｐｐｍ、またはおよそ２ｐｐｍ）のＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）を含み得る。

いくつかの実施形態において、第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、さらにｐＨを調整するために酸を含み得る。酸は、溶液のｐＨを調整するために伝統的に使用される任意の酸であり得る。たとえば、酢酸、硝酸、塩酸、リン酸、ギ酸、スルホン酸、またはクエン酸が使用できる。

第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、およそ５〜およそ８のｐＨ（たとえば、およそ５．５〜およそ８、およそ５．５〜およそ７．５、およそ５．５〜およそ７、およそ５．５〜およそ６、およそ５．８〜およそ６．２、およそ５．９〜およそ６．１、およそ６のｐＨ、またはおよそ７のｐＨ）を有し得る。いくつかの実施形態において、第１の染色液は、第１の染色液対水１：５００の希釈で約５１０〜約５３０ｎｍ（たとえば、約５１０〜約５２０ｎｍ、または約５１５〜約５１７ｎｍ）の最大ピーク波長で、およそ０．１〜およそ１（たとえば、およそ０．１〜およそ０．８、およそ０．１〜およそ０．７、およそ０．１〜およそ０．５、およそ０．１〜およそ０．４、およそ０．１〜およそ０．３、およそ０．１５〜およそ０．３、およそ０．１５〜およそ０．２、およそ０．１８５〜およそ０．２０５、およそ０．１９、またはおよそ０．２）の吸光度を有し得る。いくつかの実施形態において、第２の染色液は、第２の染色液対水１：１０００の希釈で約６３０〜約６６０ｎｍ（たとえば、約６４０〜約６６０ｎｍ、約６４０〜約６５５ｎｍ、約６４５〜約６５５ｎｍ、約６５０〜約６５５ｎｍ、または約６５０．５〜約６５２．５ｎｍ）のピーク波長で、およそ０．１〜およそ１（たとえば、およそ０．１〜およそ０．８、およそ０．１〜およそ０．７、およそ０．１〜およそ０．５、およそ０．１〜およそ０．４、およそ０．１〜およそ０．３、およそ０．１５〜およそ０．３、およそ０．１５〜およそ０．２、およそ０．１８５〜０．２０５、およそ０．１９、またはおよそ０．２）の吸光度を有し得る。

いくつかの実施形態において、第１または第２の染色液を作るために、蒸留水または脱イオン水を最初に、最終の所望の容量の１００％未満（たとえば、およそ９０％）まで混合容器に加える。非特異的結合最小化剤（たとえば、エチレングリコール）、界面活性剤（たとえば、ポリソルベート２０）、１つ以上の細胞学的染料（たとえば、エオシンＹ、またはアズールＢおよびメチレンブルー）、塩（たとえば、ＮａＣｌ）、抗菌剤（たとえば、ＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標））、酸（たとえば、酢酸）、および／または緩衝剤（たとえば、ビストリス）の計算された量が水に添加され得る。さらに、水を、溶液をその最終所望容量とするように添加することができる。混合物はマグネチック攪拌プレート／攪拌棒および／または羽で最低約３０分間混合され得る。混合後、ｐＨ測定はｐＨメーター（たとえば、メトラーｐＨメーター）を用いて第１または第２の染色液のアリコートに行い得る。いくつかの実施形態において、ｐＨが所望の範囲内（たとえば、５〜８）でない場合、その後、さらに酸を、第１または第２の染色液に、所望のｐＨが得られるまで添加することができる。

第１の染色液の吸光度は、ＵＶ−分光光度計（たとえば、日立ＵＶ−分光光度計）を用いて測定することができる。最初にベースラインを分光光度計に走らせることができる。たとえば、１０ｍＬの第１の染色液の試料を０．４５μｍシリンジフィルタを通してろ過することができ、溶液を蒸留水で１：５００に希釈し、その後、５００〜７００ｎｍの間で分光光度計にかけることができる。５１０〜５３０ｎｍでの吸光度が記録され得る。エオシンＹを含む第１の染色液の代表的な紫外−可視吸収スペクトルは、たとえば図４に示されている。必要であれば、追加的な細胞学的染料を第１の染色液に添加し、所望の範囲に吸光度を持ってくることができる。追加的な細胞学的染料（たとえば、エオシン）が第１の染色液に添加された場合、溶液は、最低約３０分間混合され、測定プロセス（たとえば、１０ｍＬアリコートをろ過し、アリコートを蒸留水で１：５００の比率で希釈し、そして吸光度測定を行う）が繰り返される。溶液のｐＨも再度測定され得、（必要な場合）上述の方法によりｐＨ５〜８に調整され得る。

第２の染色液の吸光度は、ＵＶ−分光光度計（たとえば、日立ＵＶ−分光光度計）を用いて測定することができる。最初にベースラインを分光光度計に走らせることができる。たとえば、１０ｍＬの第２の染色液の試料を０．４５μｍシリンジフィルタを通してろ過することができ、溶液を蒸留水で１：１０００に希釈し、その後、５００〜７００ｎｍの間で分光光度計にかけることができる。６３０〜６６０ｎｍでの吸光度が記録され得る。１：１でメチレンブルーとアズールＢを含む第２の染色液の代表的な紫外−可視吸収スペクトルは、たとえば図６に示されている。必要であれば、追加的な細胞学的染料を第２の染色液に添加し、所望の範囲に吸光度を持ってくることができる。ろ過した試料の一部を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いてクロマトグラフィーにかけることができ、試料内の各染料に対応する最も高い吸光度ピークの面積を記録することができる。ピーク面積は、異なる染料成分におよそ均等であり得る。

第２の染色液内の染料についてのＨＰＬＣピーク面積が均等でない場合、追加の細胞学的染料（たとえば、アズールＢおよび／またはメチレンブルー）を、溶液が各染料をおよそ等量（ピーク面積によって評価したように）含み得るまで第２の染色液に添加し得る。１つ以上の染料を添加した後、第２の染色液は、最低約３０分間混合され、測定プロセス（たとえば、１０ｍＬアリコートをろ過し、アリコートを蒸留水で１：５００の比率で希釈し、そして吸光度測定およびＨＰＬＣ測定を行う）が繰り返され得る。溶液のｐＨも再度測定され得、（必要な場合）上述の方法により所望の範囲に調整され得る。

最後に、第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、ボトリングの前に任意の粒状物質を取り除くために０．４５μｍフィルタを通してろ過され得る。いくつかの実施形態において、微小なフィルタまたは粗いフィルタが使用され得る。たとえば、０．１〜１μｍのフィルタ（たとえば、０．２μｍフィルタ、０．４μｍフィルタ、または０．８μｍフィルタ）が第１または第２の染色液中の任意の微生物および／または粒状物質を取り除くために使用され得る。いくつかの実施形態において、第１または第２の染色液は、それぞれ独立して、２５０ｍＬボトルにおいて保存され得、秤で測定した場合、２５０ｇ±１ｇまで充填され得る。最終製品のｐＨは必要に応じて測定することができる。いくつかの実施形態において、第１の染色液のＨＰＬＣクロマトグラムは、たとえば溶液純度を評価するために取得することができる。いくつかの実施形態において、第２の染色液のＨＰＬＣクロマトグラムは、たとえば溶液純度を評価するために、および／または溶液内の染料の比率を得るために取得することができる。

いくつかの実施形態において、第１の染色液は、たとえば、血液試料から調製される標本の特定の細胞（たとえば、好塩基球、好中球）を染色することができる。第１の染色液は、ビス−トリス緩衝液を含み得、得られる染色液は、赤みがかった色調およびより視覚的に満足のいく染色された標本を提供することができる。ビス−トリス緩衝液は、エオシンＹと適合し得る。いくつかの実施形態において、アズールＢは、固定液および第２の染色液においてなど、１つの処方より多くの処方に含まれる。標本が１回より多くアズールＢに曝された場合、アズールＢへの１回の暴露と比較して標本のより良い染色が生じ得ると考えられる。

第１および第２の染色液は、それぞれ独立して、ＮａＣｌおよびエチレングリコールを含み得、それらは一緒に、非特異的結合に相乗的な遮蔽効果を提供し得る。すなわち、ＮａＣｌおよびエチレングリコールの両方を含む処方は、ＮａＣｌまたはエチレングリコールのいずれかの相当する濃度を含む処方よりも少ない非特異的結合を有し得る。たとえば、ＮａＣｌおよびエチレングリコールの両方を含む処方は、核小体を残りの核よりも薄く着色することができ、一方、ＮａＣｌおよびエチレングリコールを含まない処方は、一様に暗い核を与え得る。いくつかの実施形態において、ＮａＣｌを含む染色液は、ＮａＣｌを含まない染色液と比較してバックグラウンド染色を減少することができる。

たとえば、第１の細胞染色液は、約０．５ｇ／Ｌ〜約５．０ｇ／ＬのエオシンＹ；約５ｍＭ〜約２５０ｍＭのビス−トリスまたはリン酸緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌ〜約２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１ｇ／Ｌ〜約２０ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約５ｍＬ／Ｌ〜約５０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約０．２ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、この溶液のｐＨは約５．８〜約６．２である。

別の例として、第１の細胞染色液は、約０．６ｇ／Ｌ〜約０．９ｇ／ＬのエオシンＹ；約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのビス−トリス緩衝液；約０．８ｍＬ／Ｌ〜約１．２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約３ｇ／Ｌ〜約５ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約９ｍＬ／Ｌ〜約１１ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約１０ｐｐｍ〜約２０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、この溶液のｐＨは約５．８〜約６．２である。

たとえば、第１の細胞染色液は、約０．７５ｇ／ＬのエオシンＹ；約５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約４ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約１０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、この溶液のｐＨは約５．８〜約６．２である。

別の例として、第１の細胞染色液は、約０．７５ｇ／ＬのエオシンＹ；約５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約６ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約２０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、この溶液のｐＨは約５．８〜約６．２である。

別の例として、第１の細胞染色液は、約０．７５ｇ／ＬのエオシンＹ；約５０ｍＭのリン酸緩衝液；約２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約４ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約５０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、この溶液のｐＨは約５．８〜約６．２である。

たとえば、第２の細胞染色液は、約０．２５ｇ／Ｌ〜約２．５ｇ／ＬのアズールＢ；約０．２５ｇ／Ｌ〜約０．５ｇ／Ｌのメチレンブルー；約５ｍＭ〜約２５０ｍＭのビス−トリスまたはＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌ〜約２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１ｇ／Ｌ〜約２０ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；約０．２ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、この溶液のｐＨは約６．８〜約７．２である。

別の例として、第２の細胞染色液は、約０．４ｇ／Ｌ〜約０．６ｇ／ＬのアズールＢ；約０．４ｇ／Ｌ〜約０．５ｇ／Ｌのメチレンブルー；約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのビス−トリス緩衝液；約０．８ｍＬ／Ｌ〜約１．２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１．８ｇ／Ｌ〜約２．２ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；および約１０ｐｐｍ〜約２０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、この溶液のｐＨは約６．８〜約７．２である。

たとえば、第２の細胞染色液は、約０．５ｇ／ＬのアズールＢ；約０．４５ｇ／Ｌのメチレンブルー；約５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約２ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；および約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、この溶液のｐＨは約６．８〜約７．２である。

別の例として、第２の細胞染色液は、約０．５ｇ／ＬのアズールＢ；約０．４５ｇ／Ｌのメチレンブルー；約５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約２ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；および約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、この溶液のｐＨは約６．８〜約７．２である。

また別の例として、第２の細胞染色液は、約０．５ｇ／ＬのアズールＢ；約０．４５ｇ／Ｌのメチレンブルー；約５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；および約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；酢酸；および水を含むことができ、この溶液のｐＨは約６．８〜約７．２である。

リンス液
通常、リンス液は水溶液であり得る。溶媒としては、蒸留水または脱イオン水が挙げられる。リンス液は、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、多糖および／または他の親水性水溶性ポリマーなどの非特異的結合最小化剤を含み得る。いくつかの実施形態において、非特異的結合最小化剤は、エチレングリコールまたはプロピレングリコールを含み得る。任意の理論に拘束されることを望むものではないが、非特異的結合最小化剤は、標本調製の間、標本に乾燥プロセスの準備をさせることができると考えられる。非特異的結合最小化剤は、標本の表面にラッカーを提供し、標本の視覚的外観を向上させることができる。非特異的結合最小化剤は、リンス液において、およそ１ｇ／Ｌ（たとえば、およそ２ｇ／Ｌ、およそ３ｇ／Ｌ、およそ４ｇ／Ｌ、およそ５ｇ／Ｌ、およそ６ｇ／Ｌ、およそ７ｇ／Ｌ、およそ８ｇ／Ｌ、またはおよそ９ｇ／Ｌ）から、およそ１０ｇ／Ｌ（たとえば、およそ９ｇ／Ｌ、およそ８ｇ／Ｌ、およそ７ｇ／Ｌ、およそ６ｇ／Ｌ、およそ５ｇ／Ｌ、およそ４ｇ／Ｌ、およそ３ｇ／Ｌ、またはおよそ２ｇ／Ｌ）の濃度を有し得る。たとえば、リンス液は、およそ５ｇ／Ｌのポリエチレングリコール（たとえば、ポリエチレングリコール１４５０）を含み得る。

リンス液は界面活性剤を含み得る。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、界面活性剤は、溶媒の表面張力を減少させ、試料基板上への溶液の良好な塗布性を提供することができると考えられる。いくつかの実施形態において、界面活性剤は非イオン性であり、たとえばイオン的に帯電した染料などの処方内の成分とのイオン相互作用から生じ得る溶液成分の沈殿の可能性を最小化することができる。沈殿をほとんどまたは全く含まない溶液は、より容易に分配ノズルから排出され得、分配ノズルが詰まる可能性や、液体の流れが弱まる可能性を減少できる。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、非特異的結合の可能性を減少することができるか、または非特異的結合の結果として生じ得るアーチファクトを最低限に抑えることができる。沈殿のほとんどない、または沈殿のない溶液は、標本に存在することができるアーチファクトを最低限に抑えることができる。

リンス液は、液体の界面活性剤の場合容量％で、または固体の界面活性剤の場合重量％で、およそ０．０５％（たとえば、およそ０．０７５％、およそ０．１％、およそ０．２％、およそ０．３％、またはおよそ０．４％）から、およそ０．５％（たとえば、およそ０．４％、およそ０．３％、およそ０．２％、およそ０．１％、またはおよそ０．０７５％）の界面活性剤を含み得る。いくつかの実施形態において、リンス液は、およそ０．５〜およそ２ｍＬ／Ｌの界面活性剤（たとえば、非イオン性界面活性剤）を含み得る。たとえば、リンス液は、およそ１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０（たとえば、Ｔｗｅｅｎ２０）を含み得る。

界面活性剤は、非イオン性、カチオン性、アニオン性または両性イオン性であってもよい。界面活性剤の混合物もまた使用できる。界面活性剤の具体的な分類には、アルコールエーテル硫酸塩、アルコール硫酸塩、アルカノールアミド、アルキルスルホネート、アミンオキサイド、両性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、ベタイン誘導体、カチオン性界面活性剤、ジスルホネート、ドデシルベンゼン、スルホン酸、エトキシ化アルコール、エトキシ化アルキルフェノール、エトキシ化脂肪酸、グリセロールエステルヒドロトロピー剤、ラウリル硫酸塩、モノおよびジグリセリド、非イオン性界面活性剤、リン酸エステル、第４級界面活性剤およびソルビタン誘導体が挙げられる。具体的な界面活性剤は、「固定液」の項ですでに記載されたものである。

リンス液は緩衝剤を含み得る。緩衝剤の例としては、ＨＥＰＥＳ緩衝液（たとえば、ＨＥＰＥＳナトリウム塩および／またはＨＥＰＥＳ遊離酸）、ビス−トリス緩衝液、リン酸緩衝液、ＭＥＳ、トリスおよび約５と約８との間のｐＨを有する他の有機緩衝液が挙げられる。リンス液は、およそ５ｍＭ（たとえば、およそ２５ｍＭ、およそ５０ｍＭ、およそ１００ｍＭ、およそ１５０ｍＭ、またはおよそ２００ｍＭ）から、およそ２５０ｍＭ（たとえば、およそ２００ｍＭ、およそ１５０ｍＭ、およそ１００ｍＭ、およそ５０ｍＭ、またはおよそ２５ｍＭ）の緩衝剤を含み得る。たとえば、リンス液は、およそ５０ｍＭのＨＥＰＥＳを含み得る。

リンス液は抗菌剤を含み得る。抗菌剤は、微生物の増殖を阻害し、リンス液の保存可能期間を延ばすことができる。抗菌剤としては、塩化ベンザルコニウム、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、ＰｒｏＣｌｉｎ（登録商標）（ＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標））、アジド、メルチオレートおよび／または抗生物質が挙げられる。いくつかの実施形態において、抗菌剤は、５−クロロ２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンを含む。たとえば、抗菌剤は、シグマ−アルドリッチから入手可能な、約２．３％の５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび約０．７％の２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンを不活性溶媒（たとえば、修飾グリコールおよびアルキルカルボキシレート）中に含むＰｒｏＣｌｉｎ（登録商標）３００であり得る。抗菌剤は、およそ０．２ｐｐｍ（たとえば、およそ１ｐｐｍ、およそ５ｐｐｍ、およそ１０ｐｐｍ、およそ２０ｐｐｍ、およそ３０ｐｐｍ、またはおよそ４０ｐｐｍ）から、およそ５０ｐｐｍ（たとえば、およそ４０ｐｐｍ、およそ３０ｐｐｍ、およそ２０ｐｐｍ、およそ１０ｐｐｍ、およそ５ｐｐｍ、またはおよそ１ｐｐｍ）の濃度で存在し得る。いくつかの実施形態において、リンス液は、およそ１５ｐｐｍ（およそ１０ｐｐｍ、およそ５ｐｐｍ、またはおよそ２ｐｐｍ）のＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）を含み得る。

いくつかの実施形態において、リンス液はｐＨを調整するためにさらに酸を含み得る。酸は、溶液のｐＨを調整するために伝統的に使用される任意の酸であり得る。たとえば、酢酸、硝酸、塩酸、リン酸、ギ酸、スルホン酸、またはクエン酸が使用できる。

リンス液は、メタノール、エタノールまたはプロパノールなどのアルコールを含み得る。アルコールは、過剰な染料を除去することができ、標本および／または基板上のリンス液の高速乾燥を促進することができる。いくつかの実施形態において、ＤＭＳＯまたは染料が溶解する他の有機溶媒がリンス液において使用され得、分配ノズルからの完全な液体の真空排気をもたらし得る。たとえば、リンス液は、およそ１０ｍＬ／Ｌ（たとえば、およそ２５ｍＬ／Ｌ、およそ５０ｍＬ／Ｌ、およそ７５ｍＬ／Ｌ、およそ１００ｍＬ／Ｌ、およそ１２５ｍＬ／Ｌ、およそ１５０ｍＬ／Ｌ、またはおよそ１７５ｍＬ／Ｌ）から、およそ２００ｍＬ／Ｌ（たとえば、およそ１７５ｍＬ／Ｌ、およそ１５０ｍＬ／Ｌ、およそ１２５ｍＬ／Ｌ、およそ１００ｍＬ／Ｌ、およそ７５ｍＬ／Ｌ、およそ５０ｍＬ／Ｌ、またはおよそ２５ｍＬ／Ｌ）のアルコールを含み得る。いくつかの実施形態において、リンス液は、およそ５０ｍＬ／Ｌのメタノールを含む。いくつかの実施形態において、リンス液は、リンス液が過剰の量の所望の染料を染色した生体試料から洗浄することができないように、有機溶媒を最大およそ２００ｍＬ／Ｌとすることができる。

リンス液のｐＨは、およそ５〜およそ８（たとえば、およそ５．５〜およそ８、およそ５．５〜およそ７．５、およそ５．５〜およそ７、およそ５．５〜およそ６、およそ５．８〜およそ６．２、およそ５．９〜およそ６．１、およそ７、またはおよそ６）であり得る。たとえば、リンス液のｐＨは、およそ７．０であり得る。

リンス液を作るために、蒸留水または脱イオン水は、最終の所望容量の１００％未満（たとえば、およそ９０％）まで混合容器に加え得る。アルコール（たとえば、メタノール）、非特異的結合最小化剤（たとえば、ＰＥＧ）、緩衝剤（たとえば、ＨＥＰＥＳナトリウム塩およびＨＥＰＥＳ遊離酸）、界面活性剤（たとえば、ポリソルベート２０）、酸（使用する場合）および抗菌剤（たとえば、ＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標））の計算された量が水に添加され得る。さらに、水を、溶液をその最終所望容量とするように添加することができる。混合物はマグネチック攪拌プレート／攪拌棒および／または羽で最低約３０分間混合され得る。混合後、ｐＨ測定がｐＨメーター（たとえば、メトラーｐＨメーター）を用いてリンス液のアリコートに行なわれ得る。いくつかの実施形態において、ｐＨが所望の範囲内（たとえば、約５〜約８）でない場合、その後、さらに酸を、リンス液に、所望のｐＨが得られるまで添加することができる。

最後に、リンス液は、ボトリングの前に任意の粒状物質を取り除くために０．４５μｍフィルタを通してろ過され得る。いくつかの実施形態において、微小なフィルタまたは粗いフィルタが使用され得る。たとえば、０．１〜１μｍのフィルタ（たとえば、０．２μｍフィルタ、０．４μｍフィルタ、または０．８μｍフィルタ）をリンス液中の任意の微生物および／または粒状物質を取り除くために使用することができる。いくつかの実施形態において、リンス液は、５００ｍＬボトルにおいて保存され得、秤で測定した場合、５００ｇ±１ｇまで充填され得る。最終製品のｐＨは必要に応じて測定することができる。

いくつかの実施形態において、染色塗布の最後に適用されるポリエチレングリコールを含むリンス液は、ポリエチレングリコールを含まないリンス液で処理した標本と比較して、標本の視覚的外観を改善することができる。いくつかの実施形態においては、ＨＥＰＥＳ緩衝液を含みおよそｐＨ６．８のリンス液は、赤血球細胞などの細胞の外観を、赤色と青色の間の良好な色のバランスを提供することにより改善することができる。

いくつかの実施形態において、リンス液の成分は、上述したものよりも低い（たとえば、５分の１）濃度で存在し得る。

リンス液のポリエチレングリコール成分は、およそ０．２ｇ／Ｌ（たとえば、およそ０．４ｇ／Ｌ、およそ０．６ｇ／Ｌ、およそ０．８ｇ／Ｌ、およそ１ｇ／Ｌ、およそ１．２ｇ／Ｌ、およそ１．４ｇ／Ｌ、およそ１．６ｇ／Ｌ、またはおよそ１．８ｇ／Ｌ）から、およそ２ｇ／Ｌの濃度を有し得る。たとえば、リンス液は、およそ１ｇ／Ｌのポリエチレングリコール（たとえば、ポリエチレングリコール１４５０）を含み得る。

リンス液は、液体の界面活性剤の場合容量％で、または固体の界面活性剤の場合重量％で、およそ０．０１％（たとえば、およそ０．０１５％、およそ０．０２％、およそ０．０４％、およそ０．０６％、またはおよそ０．８％）から、およそ０．１％の界面活性剤を含み得る。いくつかの実施形態において、リンス液は、およそ０．０５０１〜０．３０６％の界面活性剤を含み得る。いくつかの実施形態において、リンス液は、およそ０．１〜およそ０．４ｍＬ／Ｌの界面活性剤（たとえば、非イオン性界面活性剤）を含み得る。たとえば、リンス液は、およそ０．２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０（たとえば、Ｔｗｅｅｎ２０）を含み得る。

リンス液は、およそ１ｍＭ（たとえば、およそ５ｍＭ、およそ１０ｍＭ、およそ２０ｍＭ、およそ３０ｍＭ、またはおよそ４０ｍＭ）から、およそ５０ｍＭの緩衝剤を含み得る。たとえば、リンス液は、およそ１０ｍＭのＨＥＰＥＳを含み得る。

抗菌剤は、およそ０．０４ｐｐｍ（たとえば、およそ０．２ｐｐｍ、およそ１ｐｐｍ、およそ２ｐｐｍ、およそ５ｐｐｍ、およそ６ｐｐｍ、またはおよそ８ｐｐｍ）から、およそ１０ｐｐｍの濃度で存在し得る。いくつかの実施形態において、リンス液は、およそ３ｐｐｍ（およそ２ｐｐｍ、およそ１ｐｐｍ、またはおよそ０．４ｐｐｍ）のＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）を含む。

リンス液は、およそ２ｍＬ／Ｌ（たとえば、およそ５ｍＬ／Ｌ、およそ１０ｍＬ／Ｌ、およそ１５ｍＬ／Ｌ、およそ２０ｍＬ／Ｌ、およそ２５ｍＬ／Ｌ、およそ３０ｍＬ／Ｌ、またはおよそ３５ｍＬ／Ｌ）から、およそ４０ｍＬ／Ｌのアルコールを含み得る。いくつかの実施形態において、リンス液はおよそ１０ｍＬ／Ｌのアルコールを含む。いくつかの実施形態において、リンス液は、リンス液が過剰の量の所望の染料を染色した生体試料から洗浄することができないように、有機溶媒を最大およそ４０ｍＬ／Ｌとすることができる。

たとえば、リンス液は、約０．２ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約１ｍＭ〜約２５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ＭＥＳまたはビス−トリス緩衝液；約０．１ｍＬ／Ｌ〜約２．４０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約０．０４ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約９ｍＬ／Ｌ〜約２００ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

たとえば、リンス液は、約１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約５ｍＭ〜約２５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ＭＥＳまたはビス−トリス緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌ〜約２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約０．２ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約１０ｍＬ／Ｌ〜約２００ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

別の例として、リンス液は、約４．５ｇ／Ｌ〜約５．５ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．８ｍＬ／Ｌ〜約１．２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１０ｐｐｍ〜約２０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約４５ｍＬ／Ｌ〜約５５ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

たとえば、リンス液は、約５ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約５０ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

別の例として、リンス液は、約１０ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約１ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約５０ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

さらなる例として、リンス液は、約１０ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；約０．５ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約１５ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約５０ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

たとえば、リンス液は、約０．２ｇ／Ｌ〜約２ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約１ｍＭ〜約５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．１６ｍＬ／Ｌ〜約０．２４ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約０．０４ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約９ｍＬ／Ｌ〜約１１ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

別の例として、リンス液は、約０．９ｇ／Ｌ〜約１．１ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約９ｍＭ〜約１１ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．１６ｍＬ／Ｌ〜約０．２４ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約２ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約９ｍＬ／Ｌ〜約１１ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

さらに別の例として、リンス液は、約１ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；約１０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；約０．２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；約３ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；約１０ｍＬ／Ｌのメタノール；および水を含むことができ、そのリンス液のｐＨは、約６．６〜約７．０である。

キット
いくつかの実施形態において、キットは、固定液、第１の染色液、第２の染色液および／またはリンス液のそれぞれに１つ以上のボトルを含み得る。キットは、取り扱い説明書とラベルとを含み得る。ラベルは、たとえば、ロット情報および有効期限を含み得る。図２５は、固定液、第１および第２の染色液およびリンス液を含むキットの例を示している。

いくつかの実施形態において、処理工程は、固定液を塗布すること、固定液を塗布すること、第１の染色液を塗布すること、第２の染色液を塗布すること、リンス液を塗布すること、リンス液を塗布することを含む。

標本調製システムおよび方法
上述の固定、染色、およびリンス処方は、標本調製のための装置または機械（たとえば、２０１１年１１月９日に出願された米国特許出願番号１３／２９３０５０号（本明細書に全体が参照により組み込まれる）に記載したような）において、標本中の特定の特徴の視覚的外観を向上させるために使用することができる。図７は、検査や画像化のために、顕微鏡スライド、カバースリップまたは他の透明な表面などの基板２上に標本を調製するための装置すなわち機構１の一実施形態を説明する。機構１は、図２１に示されまた以下に記載されるシステム２０００などの細胞を含む体液または他の生体試料を含む標本を調製および分析するための総合的なシステム中に組み込まれ得る。機構１は、通常、標本を得る第１の工程、基板に標本を適用する第２の工程、標本を固定および染色するためのそれぞれ第３および第４の工程、標本を乾燥する第５の工程、標本を撮影する第６の工程、および標本から得られた画像およびデータを分析するための第７の工程を特徴とするシステムを含むか、またはその一部を形成することができる。機構１のある実施形態は、システム２０００に適合し；機構１のいくつかの実施形態は、他の標本調製システムにおいて、および／または独立型装置として使用され得る。

通常、機構１は、１つ以上（たとえば、２、３、４、５、または５より多くの）プラットホーム６０Ａおよび６０Ｂを図７〜９に示されるように標本処理のために備えてもよい。図８に示されるように、プラットホーム６０Ａは、プラットホームの上面を支えるための側面を含み得る。図７および９に示されているシールド１００は、液体がプラットホーム６０間にはね散るのを防止するためにプラットホーム６０Ａおよび６０Ｂの間に配置され得る。いくつかの実施形態において、シールド１００は、プラットホーム６０Ａおよび６０Ｂの１つから液体が他のプラットホームに混入するのを阻止する透明な材料から形成され得る。ある実施形態においては、シールド１００は、半透明または不透明な材料から形成され得る。図７および９において、シールド１００は、シールド１００の裏側に位置する他の構成要素を同じ図に示すことができるように透明な材料から形成されているものとして描かれている。シールド１００は、不透明材料から形成されているように示すこともできるが、その場合、プラットホーム６０Ａおよびブロック８０Ａなどのいくつかの構成要素の一部がよく見えないであろう。

図９Ｂは、基板把持部２０Ａ、２０Ｂの各々から標本処理のための位置に基板２を提供するために機構１を移動させるために使用し得るインデキシング機構５０Ａを示す。インデキシング機構５０Ａは、電気機械装置（たとえば、電気モータを備えたラックアンドピニオン式のギア）、線形アクチュエータ（たとえば、空気圧式アクチュエータ、油圧アクチュエータ、または電磁アクチュエータ）など多くのタイプであり得る。説明された実施形態において、インデキシング機構５０Ａは、２つの位置の間で機構１を直線状に移動させているが、他の移動経路も機構１に含まれるプラットホームの数によって、また円形または半円形（たとえば、弓型経路で動くことができるインデキシングテーブル）などのそれらの構成やレイアウトによって可能である。示されるように、インデキシング機構５０Ａは、機構１のベース５０Ｃに取り付けられたギアラック５０Ｂと、ベース５０Ｃに固定されている電気モータ５０Ｅに取り付けられたピニオンギア５０Ｄを含み得る。機構１は、機構１がインデキシング機構５０Ａにより移動される際に滑らかに動くことができるように、１つ以上のスライド装置５０Ｆを用いてベース５０Ｃに取り付けることができる。使用の間、インデキシング機構５０Ａは、機構１の複数の基板把持部２０Ａおよび／または２０Ｂが基板移動手段１２０から基板２を受け取ることができるように（図１１に示される）、基板上に沈着させた試料が機構１により調製できるように、そして一旦調製されたら基板把持部２０Ａおよび／または２０Ｂが調製された試料を有する基板２を標本処理のために基板移動手段１２０に提供できるように、機構１を動かし得る。

２つのプラットホーム６０Ａおよび６０Ｂを有する機構のため、説明した実施形態におけるように、基板２は、典型的には交互に基板移動手段１２０に、そして基板移動手段１２０から提供される。いくつかの実施形態において、第１の基板２は、第１のプラットホーム６０Ａで処理されるために、基板移動手段１２０から第１の基板把持部２０Ａに提供され、一方機構１は最初の位置にある。第１の基板２が第１のプラットホーム６０Ａで処理されている間、インデキシング機構５０Ａは、第２の基板把持部２０Ｂが、第２のプラットホーム６０Ｂで処理されるべく、基板移動手段１２０から第２の基板を受け取れるように、機構１を第２の位置に移動させることができる。第２の基板が第２のプラットホーム６０Ｂで処理されている間、インデキシング機構５０Ａは、基板移動手段１２０が第１の基板２を第１の基板把持部２０Ａから取り除くことができるように、機構１を移動させて最初の位置に戻すことができる。一旦基板２が第１の把持プラットホーム２０Ａから取り除かれたら、つぎの基板が第１の把持プラットホーム２０Ａに提供され得る。基板を交互に把持プラットホームに提供するためのこの方法は、２つより多く（たとえば、３、４、５または５より多く）のプラットホームで実施でき、それによりさらなる評価のために調製される標本の処理能力を高められる。

プラットホーム６０Ａおよび６０Ｂは、典型的には、標本処理の間に使用される液体に対して比較的化学的に不活性であり、そして適切な表面張力を提供する１つ以上の材料から形成される。プラットホーム６０Ａおよび６０Ｂを形成するために使用することができる具体的な材料としては、それらが、処理液を基板２とプラットホームとの間の空間に一様に分配し、閉じ込め、そしてその上処理液の適切な真空排気をなされるのを助けるために作用する適切な表面張力を提供するために、提供され、製造されおよび／または処理されるならば、ポリオキシメチレン（たとえば、デュポン社製のＤｅｌｒｉｎ（登録商標））などの工業熱可塑性物質、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）（たとえば、デュポン社製のＴｅｆｌｏｎ（登録商標））などの高分子量フルオロカーボン、ならびにアルミニウム、スチールおよびチタニウムなどの金属が挙げられる。適切な材料の選択により、プラットホームは、分配されたとき、液体内の泡または空間の形成を有利に減少または解消することもできると共に、同時にプラットホームと基板２との間の分離の外への液体の漏れを減少または削減するように十分な表面張力を維持することもできる。

通常、プラットホーム６０Ａおよび６０Ｂの表面積は、基板の取扱および液体送達のために望まれるように選択され得る。プラットホーム６０Ａおよび６０Ｂの表面積などの因子は、基板２の選択された表面積にも影響し得る。たとえば、いくつかの実施形態において、プラットホーム６０Ａの表面積（たとえば、基板２に接するプラットホーム６０Ａの表面の面積）は、プラットホーム６０Ａに接する基板２の表面の面積よりもわずかに小さい。プラットホーム６０Ａおよび基板２の接面の面積の間のそのような関係を維持することにより、表面間の領域からの液体の漏れを減少または解消することができる。典型的には、たとえば、基板２に接するプラットホーム６０Ａの表面の面積は、基板２の表面の面積よりも２％以上（たとえば、３％以上、５％以上、７％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上）分小さい。

プラットホーム６０Ａおよび６０Ｂは、それぞれブロック８０Ａおよび８０Ｂに取り付けられ得る。ブロック８０Ａは、図８に示されるように、上面８５Ａを支える側面８１Ａ〜８４Ａを含む。ブロック８０Ａおよび８０Ｂは、金属、セラミックス、および／またはプラスチックなどの、プラットホームに使用されるものと同じまたは同様の材料で作ることができる。したがって、Ｄｅｌｒｉｎ（登録商標）などの材料は、特に、標本のロマノスフキー染色を実施する態様において、ブロック８０Ａおよび８０Ｂを形成するために使用され得る。態様において使用することができる他の材料には、金属、およびＴｅｆｌｏｎ（登録商標）ブランドのポリテトラフルオロエチレンコートアルミニウム、スチールまたはチタニウムが挙げられる。

いくつかの実施形態において、プラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂは、図７〜９に示されるように持ち上げられ得る。あるいは、ある実施形態においては、プラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂは、ブロック８０Ａおよび８０Ｂの上部表面とそれぞれ一体とすることもできる。いずれの場合にも、機構１の特定の特徴ならびに液体の表面張力およびプラットホームまたはブロックの表面エネルギーは、過剰な液体が、プラットホーム６０Ａ／６０Ｂおよび／またはブロック８０Ａ／８０Ｂの縁を越えて流れるのを防ぐ。

図７および８に示されるように、プラットホーム６０Ａは、プラットホーム６０Ａと基板２との間の分離を提供し、基板２がプラットホーム６０Ａと接触するのを防止するためにオフセット７０Ａ〜７０Ｄを含み得る。プラットホーム６０Ｂは、対応するオフセットのセット７１Ａ〜７１Ｄを含み得る。オフセットとしては、スタンドオフ、ピン、くぎ、棒、ビーズ、壁または、プラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂの表面と基板２との間に分離を提供できる他の構造物が挙げられる。オフセット７０Ａ〜７０Ｄおよび７１Ａ〜７１Ｄは、プラットホーム６０Ａおよび６０Ｂと基板２との表面を、基板２がオフセットに接触している場合に実質的に平行なままでいることを確保する。これらの２つの表面を平行に維持することの利益は、これらの２つの表面の間で囲まれる容積がそれにより規定され、正確に制御できるということである。２つの表面が実質的に平行でなく、それらの間の角度が変化する場合、それらの間の容積も変化し、固定されず、正確に制御されない。加えて、そのような２つの表面が実質的に平行でない場合、液体は、標本に均一に適用できないおそれがある。

本明細書において使用される場合、語句「実質的に平行」とは、基板２がオフセットと接触したとき、基板２の表面平坦性の不完全性が減少または解消できるように、２つの表面が正確に平行であるか、またはほぼ平行であることを意味する。たとえば、基板の製造に細心の注意を払っても、ある基板が歪みおよび／または角が同一平面にないといった欠陥を有し得る。本明細書に開示されるシステムおよび方法においては、オフセットの使用が、必要な場合基板２の表面平坦性を改善し、プロセスにおいてプラットホーム６０Ａおよび６０Ｂに対して実質的に平行な関係に基板２を位置決めすることによりこれらの欠点を修正するのを助ける。語句「実質的に平行」は、少なくとも基板表面のオフセットとの接点が、同一平面状にあるように、２つの表面が完全に平坦ではないが、しかしオフセットが全て同じサイズまたは高さである状況を含める。

図１２Ａは、基板２、基板把持部２０Ｂ、ブロック８０Ａ、８０Ｂ、プラットホーム６０Ａ、６０Ｂ、オフセット７０Ａ〜７０Ｄおよび７１Ａ〜７１Ｄ、および基板２とプラットホーム６０Ｂとの間の分離９２を示している。分離９２は、液体を、ポート４０Ｂ〜４５Ｂを含むプラットホーム６０Ｂの表面と基板２との間に移動させる。最適な標本固定、染色、およびリンスのために必要とされる分離距離は、ポート４０Ｂ〜４５Ｂ（および／またはポート４０Ａ〜４５Ａ）から分配される液体の流速、ポートの直径、処理中に適用される液体の粘度、および基板、分離およびプラットホームから液体を除去するのに使用可能な吸引量によって変化する。

いくつかの実施形態において、たとえば、プラットホーム６０Ｂの表面と基板２との間に約１００〜２００ミクロンの分離９２を提供するオフセットは、５００〜１５００ミクロンの範囲の直径を有するポート４０Ｂ〜４５Ｂから１秒間に約５０〜約３００μＬの範囲の流速で液体を分配できる実施形態において、赤血球を含む標本の固定、染色およびリンスを可能とする。通常、分離９２のサイズまたは高さは、そのような実施形態が標本処理の間、液体を分配および除去しながら分離における液体の表面張力を克服することができる限り、特定の実施形態に対して約５０ミクロン〜１０００ミクロン（たとえば、約５０〜５００ミクロン、約７５〜２５０ミクロン、約１００〜２００ミクロン）変化し得る。さらに、ある実施形態においては、プラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂ上に位置されるポートの直径は、約１２５ミクロン〜５０００ミクロンまで変化し得る。

図１２Ｂおよび６Ｃは、基板把持部２０Ａをプラットホーム６０Ａと平行になるように整列させるために使用し得るボールジョイント機構２５を示している。ボールジョイント機構２５は、基板把持部２０Ａに堅く固定されるボール部材２５Ａ、たわみ部材２５Ｂ（たとえば、ばね）、基板アーム１０Ａに堅く接続されている下部ソケット２５Ｃ、上部ソケット２５Ｄ、下部ソケット２５Ｃに固定される（たとえば留め具を用いて）キャップ２５Ｅ、および止めねじ２５Ｆを含み得る。いくつかの実施形態において、機構１および基板把持部２０Ａおよび／または２０Ｂの製造および／または組立の間、ボールジョイント機構２５は、交差累積または成形上の問題のために存在するかもしれない整合不良を補うために調整され得る。いくつかの実施形態において、ボールジョイント機構２５を調整するために、止めねじ２５Ｆがゆるめられ、基板アーム１０Ａが閉鎖位置に移動される。止めねじ２５Ｆが緩められるので、基板把持部２０Ａは、基板２を掴みながら、基板２が接触オフセット７０に沿って配置される間、プラットホーム６０Ａと実質的に平行に置くことができる。あるいは、いくつかの実施形態においては、プラットホーム６０上のオフセットの数が減少または完全になくされ、所望の分離距離に対応する厚さのシムが、標本処理のための所望の距離で分離９２を設定するためにボールジョイント機構２５と併せて機構１の設定または校正の間一時的に使用できる。ボールジョイント機構２５はゆるめられるが、たわみ部材２５Ｂは、基板アーム１０Ａに半固定された基板把持部２０Ａを、それが独立して動くことができるが、ゆる過ぎず、また機構１の他の構成要素と干渉し、または損傷を生じさせるほど自由に動けないように、維持するために力をかける。基板２が閉鎖位置に押し付けられて固定されると、基板２は実質的にプラットホーム６０Ａに平行となるので、止めねじ２５Ｆを堅く締め、ボールジョイント機構２５を確実に固定することができる。示されているように、堅く締めると、止めねじ２５Ｆは、上部ソケット２５Ｄ上に下向きの力をかけ、それにより、上部ソケット２５Ｄを介してボール部材２５Ａの上部に摩擦力をかける。下部ソケット２５Ｃはキャップ２５Ｅに固定されているので、止めねじ２５Ｆにより生じた力は、下部ソケット２５Ｃが摩擦力をボール部材２５Ａの底側にかけてボール部材２５Ａを上部および下部ソケット２５Ｃ、２５Ｄ内に拘束するように下部ソケット２５Ｃを持ち上げもする。一旦ボール部材２５Ａに拘束されると、基板把持部２０Ａは、基板アーム１０Ａに固定されるようになる。

典型的には、一旦基板把持部２０Ａが配置され、止めねじ２５Ｆで拘束されると、ボールジョイント機構２５は、正常使用の間は再び調整する必要はない。しかしながら、基板把持部２０Ａが正しく整列していないようになり、それによりボールジョイント機構２５が調整を必要とする場合（たとえば、損傷、機構の修理、性能不良、または他の理由により）、止めねじ２５Ｆを緩めることができ、基板把持部２０Ａは閉鎖位置、基板把持部２０Ａにより掴まれた基板が実質的にプラットホーム６０Ａと平行になるような位置に動かすことができ、その後止めねじ２５Ｆを堅く締めてボールジョイント機構２５を確実に固定することができる。

通常、アクチュエータ３０Ａおよび／または３０Ｂは、プラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂの表面と基板２との間の分離の程度を変化させるために基板アーム１０Ａおよび／または１０Ｂの位置を調整するように設定することができる。この分離の変化により、各ポートに割り当てられる液体、流速、液体の粘度およびプラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂからの排気力を調整することを可能にする実施形態における大きな柔軟性が与えられる。たとえば、１００ミクロンの分離９２は、プラットホーム６０Ａから適用された液体が１１５μＬ／秒の流速で５００ミクロン〜１５００ミクロンの範囲のポート直径を有するポート４０Ａ〜４５Ａから分配される場合、十分な標本の固定、染色およびリンスを提供できる。あるいは、プラットホーム６０Ａの表面と基板２との間の分離９２の距離がおよそ２００ミクロンでは、ポート４０Ａ〜４５Ａから分配される液体は、１４０μＬ／秒などのより速い流速を標本処理に使用することができる。

上述したように、機構１は、標本処理の間に適用される液体を分配および除去するための一連のポートおよびチューブを含み得る。以下の議論は、プラットホーム６０Ａと関連して様々なポート、チューブ、および他の構成要素を説明するが、同様の考察はプラットホーム６０Ｂおよびその関連構成要素に適用される。図８は、図７に示されている装置の拡大図を示し、プラットホーム６０Ａ上のポート４０Ａ〜４５Ａおよびブロック８０Ａに接続されたチューブ５０Ａ〜５５Ａを詳細に示す。１つ以上の固定液、染色液およびリンス液などの特定の液体をプラットホーム全域に、分離中に、そして基板上に分配する。図８に示されているように、プラットホーム６０Ａの上面は、チューブ５０Ａ〜５５Ａに接続されている６つのポート４０Ａ〜４５Ａを含む。液体は、１つ以上のポンプによりチューブおよびポートを通って基板上に推し出される。たとえば、図１０に示すような、１つ以上の液体容器２１０Ａ〜２１３Ａ（第１の染色剤容器２１１Ａ、第２の染色剤容器２１２Ａ、固定化剤容器２１０Ａおよびリンス液容器２１３Ａ）は、液体をプラットホーム６０Ａおよび基板２上に向かわせることができる。図７〜９に示されているポート４０Ａ〜４５Ａの直径は、およそ５００ミクロンから１５００ミクロンの範囲であるが、直径は、特定の実施形態においては、より小さくもまたはより大きくもなり得る。いくつかの実施形態においては、真空ポート４０Ａおよび４１Ａの直径は、液体ポート４２Ａ〜４５Ａの直径の２倍より大きい。

各ポート４０Ａ〜４５Ａは、典型的には、特定の液体または真空源に専用とする。あるいは、１つよりも多くのポートを、各液体または真空源のために使用してもよく、様々な液体および真空源からの複数のチューブをプラットホーム６０Ａ上に配置される単一のポートに接続してもよい。たとえば、いくつかの実施形態においては、プラットホーム６０Ａ上のただ１つのポートが、廃棄物除去のために使用されてもよいが、より粘性のある液体を用いる場合には、単一のポートでは、プラットホームから残った液体を排気するための十分な吸引を提供することができない場合がある。したがって、ある実施形態においては、図８のポート４０Ａ〜４１Ａで示されるように、過剰な染色液、固定液およびリンス液を除去するために、プラットホームの異なる位置に２つの吸引ポートを備える（たとえば、プラットホームの各端に１つの吸引ポート）ことが望ましい場合がある。さらに液体対ポートの配置の多様性を強調すると、ある実施形態においては、プラットホーム６０Ａ上の単一のポートを、特定の染色剤に専用としてもよく、一方、他の実施形態においては、複数のポートを標本処理の間に染色剤を適用するために使用する。実際、ポートの数、ポート配置、ならびに各ポートおよび液体チューブに割り当てられる液体に関する様々な組み合わせは、本発明の種々の実施形態において使用が可能である。

ポート４０Ａ〜４５Ａは、通常、基板２への液体の送達および基板２からの液体の除去を導くために、プラットホーム６０Ａ上に要望通りに配置することができる。典型的には、各液体ポートは、標本が処理を受けている際、ポート開口部が直接基板２上の標本３に隣接または真下に配置されないようにプラットホーム６０Ａ上に配置される。標本および染料の特定の組み合わせでは、たとえば、仮に染色剤が標本３の一部に直接隣接または真下に位置するポートから分配される場合、より多くの量の染色剤が、標本の他の部分の細胞よりもその部分（ポートの開口部のある部分）の細胞に適用され得る。結果として、より多くの量の染色剤を受けた細胞は、標本画像においてより濃く見える可能性があり、この不均一な標本細胞染色は、画像に基づく診断測定および分析的結果に誤りを引き起こし得る。したがって、標本３に染色剤を送達する液体ポートは、染色結果を改善するために、基板（たとえば、スライド）の標本含有領域から特定の距離を開けて置くことができる。

加えて、互いに反対側に配置された対のポート、たとえば複数の対のポートの使用も染色の均一性を向上させ得る。たとえば、いくつかの実施形態において、２つのポートが標本３に染色剤を送達するために使用される。その２つのポートは、プラットホーム６０Ａ上に、標本３の縁から特定の距離（たとえば、オフセット）を開けた位置に配置され、かつプラットホーム６０Ａの短い縁に平行な方向に互いに向かい合って配置され得る。染色剤が２つの間隔をあけたポートから分配されると、染色剤の相対的に均一な量が標本３の異なる領域の細胞に沈着され、染色の均一性の改善が標本画像により観察される。

同様に、ポート４０Ａ〜４５Ａは通常、１つ以上の真空源を用いて基板２の表面から過剰な液体を除去するために要望通りに配置することができるが、いくつかの実施形態においては、液体の除去のために使用されるポートは、基板２上の標本３内の細胞の直接真下にあるプラットホーム６０Ａの位置から一定の距離を空けて置かれる。このやり方で廃棄物除去ポートを配置すると、そのようなポートを基板２から液体を排気するために作用させる場合、標本３から細胞が、不注意にも液体除去ポートに引き込まれる可能性が減少する。ある実施形態においては、プラットホーム６０Ａの長い側面と短い側面の長さの違いにより、廃棄物除去ポートは、標本領域の縁から離れて置かれ、プラットホーム６０Ａの長い縁に平行な方向に沿ってお互いに向かい合って配置される。

機構１は、機構１の別の斜視図を提供する図１０に示されるように、制御システム５を含むかまたは制御システム５に接続されることができる。制御システム５としては、それぞれ、ハードドライブ、光学ディスクまたはメモリなどのコンピュータ読み取り可能な媒体に格納されたソフトウェアの指示を実行することができる中央処理ユニットを含む１つ以上のコンピュータを含み得る。加えて、制御システム５は、ソフトウェアの指示を実行するための電気回路を含み得る。制御システム５は、機構１の操作を制御するための使用者コマンドを受けるための使用者インターフェースを含み得る。コンピュータに格納されたまたはコンピュータに提供されるソフトウェアは、標本処理の間に液体ポンプやバキュームなどの機構１の構成要素の操作を制御するプログラムを含み得る。たとえば、ソフトウェアは、機構１に種々の固定化剤、染料およびリンスを標本に適用させ、また標本処理の間に数回の攪拌工程を行わせるための指示を含み得る。

さらに、ソフトウェアは、初期設定を含むことができ、そして使用者インターフェースは、これらの初期設定を変更する能力を使用者に与えるためのカスタマイズ機能を含んでもよい。たとえば、使用者インターフェースは、使用者にスピード、頻度または固定化、染色およびリンス段階の指示ならびに攪拌パラメータ（さらに以下に説明される）をカスタマイズすることを許可するためのカスタマイズ機能を含み得る。制御システム５は、ネットワークプロトコル（Ａｐｐｌｅｔａｌｋ（登録商標）、ＩＰＸまたはＴＣＰ／ＩＰなど）を通じて通信することもできる。たとえば、ネットワークプロトコルは、ケーブル（ツイストペアケーブルなど）および／またはＷｉＦｉなどのワイヤレス接続を使用し得る。制御システムは、ネットワークプロトコルを用いて実験室情報システムに接続し得る。実験室情報システムは、機構１において処理される標本に関連する情報を保存するためのサーバーおよび／またはデータベースを含み得る。たとえば、データベースは、標本のヒトまたは源についての情報（たとえば、名前、誕生日（ＤＯＢ）、住所、標本採取時間、性別など）、標本処理に関する情報（処理日＃＃／＃＃／＃＃＃＃、標本番号＃、など）、標本の既得の任意の画像のコピー、および画像を分析することにより得られるあらゆる結果のコピーを提供する表を含み得る。

図７は、機構１は、デバイスをシステム内の位置に固定するための支持体１１０Ａおよび１１０Ｂまたは実験室のワークステーションを含み得ることも示している。機構１は、それぞれアクチュエータ３０Ａおよび３０Ｂにそれらの土台で接続された１つ以上の基板アーム１０Ａおよび１０Ｂも含む。基板アーム１０Ａおよび１０Ｂの反対端は、標本処理の間、基板を受け取り保持するための基板把持部２０Ａおよび２０Ｂを含む。各基板把持部２０Ａおよび２０Ｂは、機構１がすべての標本処理工程を完了する間、基板２を受け取り保持する（以下に説明する）。基板は、顕微鏡スライド、カバースリップ、または標本処理の間および標本処理後の顕微鏡検査の間、標本を保持するのに適切な他の透明な材料であるか、またはそれを含み得る。図７の実施形態は、ガラス顕微鏡スライド、標本３を含む基板２を描いている。吸引ポートを用い、基板把持部２０Ａ、２０Ｂは、基板２を基板アーム１０Ａ、１０Ｂに標本処理の間、保持することができる。吸引チューブ２３は、吸引ポート２１Ａおよび２１Ｂ、および２２Ａおよび２２Ｂにより基板把持部２０Ａおよび２０Ｂに吸引をもたらす（図７においてポート２１Ａおよび２２Ａは、スライド２の後ろに位置しており、破線で示されていることに留意）。

図７〜９に示されている機構１の実施形態は、基板アーム１０Ａおよび１０Ｂのそれぞれの上の基板を保持および処理することができる二重基板機構である。別の実施形態は、単一の基板または３つもしくはそれ以上の基板を、順にまたは同時に処理することを提供する。さらに、図７〜１２に描かれている実施形態は、基板アーム１０Ａおよび１０Ｂに基板２を取り付けるために吸引を使用するが、代替的な実施形態は、標本処理の間基板アーム１０Ａに基板２を取り付けるために様々な種類のクランプ、フィンガーまたは磁石（基板が磁化されている場合）を使用する。

図１１および２４Ａ〜Ｂに示される実施形態において、機構１は、標本３を担持する基板２を自動基板移動手段１２０または手動で個人から受け取る。例として、基板移動手段１２０は、位置間（たとえば、位置１２１から位置１２２へ、位置１２３へ、位置１２４へ、そして位置１２５へ）に基板を移送するデバイスである。図１１は、第１のレベルリーダー位置１２１、アプリケータ位置１２２、機構１を含む染色位置１２３、カメラまたは画像化位置１２４、および第２のラベルリーダー位置１２５を有するシステムを示す。第１のラベルリーダー位置１２１は、特定の基板２およびその上の標本３を同定するために使用されるバーコードおよび／または「フィンガープリント」情報などの基板２からの情報を読むために設定される。第２のラベルリーダー位置１２５は、同じ方法で機能し、それが読む情報は、位置１２４で画像化された標本３が処理された基板のもとの同じであることを確認するために使用される。

基板移動手段１２０は、基板を保持するための把持部１２７、および基板２が移動手段１２０に載せられるかどうかを移動手段１２０が決定できるようにするための登録回路またはソフトウェアを含み得る。１つの実施形態においては、基板移動手段１２０は、基板２を第１の位置１２１から第２の位置１２２へ移動させるための水圧シリンダーを含み得る。標本処理後、基板移動手段１２０は、処理した基板を染色位置１２３から取り除き、基板２を顕微鏡または位置１２４などの基板検査のための別の位置に移送し得る。あるいは、個人は、手動で基板を機構１から標本処理後に取り除き得る。

基板アーム１０Ａおよび１０Ｂは、ロードするために開放位置から標本処理位置への基板の移動を可能にし、標本処理後にアンロードするために開放位置に戻すことを可能にするために軸の周りに回転することができる。図１３Ａは、開放位置から処理位置に基板アームを動かすための一連の工程を含むフローチャート５００を示す。フローチャート５００は、機構１の概略図を示す図１３Ｂを参照して以下さらに説明される。

図７における機構１は、２つの基板を受け入れて検査するために設定されていることに留意すべきである。以下の議論および図においては、参照は機構１におけるただ１組の構成要素についてなされ得る（たとえば、基板把持部２０Ａ、アクチュエータ３０Ａ、基板アーム１０Ａなど）。しかしながら、１組の構成要素に関連して開示されている同じ工程、特徴および特性が、機構１における他の組の構成要素（たとえば、基板把持部２０Ｂ、アクチュエータ３０Ｂ、基板アーム１０Ｂなど）にも適用できることが理解されるべきである。したがって、本明細書における議論は、明確にそして簡単にするため１組の構成要素にのみ焦点を当てているが、機構１などの標本検査のための機構は、２つまたはさらにそれより多くの組の構成要素を含むことができ、各組は本明細書に説明されている特徴のいくつかまたはすべてを有することが理解される。

図１３Ａおよび１３Ｂに戻って、フローチャート５００の第１の工程５０２において、基板移動手段１２０は、基板２を基板把持部２０Ａに接触させて置く。工程５０４において、基板２は、「標本が上（specimen up）」または「開放」位置で基板把持部に配置される。次に、工程５０６において、アクチュエータ３０Ａは、基板が工程５１０において処理位置となるように、基板アーム１０Ａをおよそ１８０°（図１３Ｂ参照）回転させ、基板２を「標本下（specimen down）」または「標本処理」または「閉鎖」位置でプラットホーム６０Ａの真上に配置する（工程５０８）。

その後、工程５１２において、機構１は、ポート４２Ａ、４３Ａ、４４Ａおよび４５Ａを通って標本３に接触するように容器２１０Ａ、２１１Ａ、２１２Ａおよび２１３Ａから送り出される染色剤、リンス液および固定化剤を含む適切な液体を向けることにより、基板２上に置かれた標本３を染色する。過剰な液体は標本３から真空ポンプによりポート４０Ａおよび４１Ａを通って除去され、廃棄物回収器２３０および２３１に回収される。

工程５１４において、標本３の染色に続き、アクチュエータ３０Ａは基板アーム１０をおよそ１８０°（工程５０６の回転とは逆に）回転し基板を「標本上」配置に戻す。最終的に、工程５１６において、基板移動手段１２０は、処理した基板を基板把持部２０Ａから取り除く。他の開放、または「標本上」配置も、オペレーターまたは自動基板移動手段がロードでき、機構１から基板をアンロードできる限り使用することができる。たとえば、標本上配置は、標本処理位置から１００°以上（たとえば、１２０°以上、１３０°以上、１４０°以上）回転させることができる。いくつかの実施形態においては、標本上配置は、オペレーターまたは自動基板移動手段がロードでき、機構１から基板をアンロードできるならば、標本処理位置から１００°未満（たとえば、９０°未満、８０°未満、７０°未満）回転させることができる。

アクチュエータ３０Ａおよび／または３０Ｂは、アーム１０Ａおよび／または１０Ｂを動かすために、電気モータ、油圧、磁力システム、または他のハードウェア（たとえば、ウォーム・ギヤ）を含み得る。基板アーム１０Ａおよび１０Ｂが図７に描かれているように開放位置にある場合、把持部２０Ａおよび２０Ｂは、は、それぞれ基板２を受け取ることができる。一旦基板把持部２０Ａまたは２０Ｂ上にロードされたら、アクチュエータ３０Ａおよび／または３０Ｂはその後アーム１０Ａおよび／または１０Ｂを、したがって基板２を、開放（「標本上」）配置から、攪拌工程を含む固定化剤、染色剤およびリンスの適用のために処理位置（「標本下」図９におけるアーム１０Ｂに示されるように）に回転し、処理後アンロードするための開放位置に戻す。

図９Ａに関して、アクチュエータ３０Ｂは、基板アーム１０Ｂを図１に描かれている開放位置から「閉鎖」または処理位置に回転させる。図９Ａは、基板アーム１０Ｂ上の基板２が反転し、そしておよそ１８０°その図７に示されているロード位置から、基板２上の標本３がプラットホーム６０Ｂの表面に実質的に平行となる下向きに面した位置に回転する。上記図１３Ａに関連して議論されるように、機構１は、基板２上の標本３に種々の固定化剤、染色剤およびリンスをいくつかの処理段階により適用し、この段階はより詳細に以下に説明される。基板２を処理位置から取り除くために、アクチュエータ３０Ｂは、基板アーム１０Ｂを回転し、図７（両アーム）および図９Ａ（１つのアーム１０Ａのみが開放位置にある）に示されるように開放位置に戻す。

ある実施形態においては、制御システム５は、インジケータアーム１０１Ａおよび１０１Ｂ（図７および９に示されるように）を検出するための１つ以上のセンサ１０５Ａおよび１０５Ｂを用いて、アームの位置を検出することができる。センサ１０５Ａおよび１０５Ｂは、アームの存否を検出するために、たとえば赤外線または種々の他の技術（レーザー、動作感知装置など）を使って、たとえば光電子センサなどの近接センサであり得る。たとえば、近接センサ１０５Ａまたは１０５Ｂは、検出フィールドを有し、センサは基板アーム（たとえば、アーム１０Ａおよび／または１０Ｂ）または基板把持部（たとえば、把持部２０Ａおよび／または２０Ｂ）が検出フィールド内にあるかどうかをインジケータアーム１０１Ａおよび／または１０１Ｂを検出することにより決定することができる。制御システム５は、基板アーム１０の位置を決定するためにセンサから情報を受け取ることができる。たとえば、基板アーム１０Ｂ（図９には示されていない）が処理位置に回転すると、インジケータアーム１０１Ｂの近接端上の近接センサ１０５Ｂは標的基板把持部２０Ｂを感知し、基板アーム１０Ｂが標本処理位置に回転することを制御システム５に知らせる。この位置において、センサは任意の標的（たとえば、基板アームまたは基板把持部）を検出しないので、インジケータ１０１Ｂの遠位端上の近接センサ１０５Ｂは、制御システム５にシグナルを送らない。

基板アーム１０Ｂが開放位置（図７に示されるような）に回転した場合、インジケータアーム１０１Ｂの遠位端上の近接センサ１０５Ｂは、標的の基体把持部２０Ｂを感知し、制御システム５に、基板アーム１０Ｂが開放位置に回転したことを知らせる。言い方を変えれば、基板アーム１０Ｂがセンサ１０５Ｂから離れて回転すると、センサは、制御システム５に「存在しない」シグナルを送る。アーム１０Ｂが開放位置に回転すると、アーム１０Ｂはセンサ１０５Ｂに近づき、センサが制御システム５に「存在する」シグナルを送る。代替的な設定においては、センサは、基板１０Ｂが開放位置上に載せられ、インジケータアーム１０１Ｂの存在を検出することができる。いくつかの実施形態においては、制御システム５は、開放位置および標本処理位置を知るために、および／または制御シグナルおよび／またはアクチュエータ３０Ａおよび３０Ｂから受けたフィードバックに基づき基板アーム１０Ａおよび１０Ｂの動きおよび位置を積極的にモニタするためにアクチュエータ３０Ａおよび３０Ｂの位置を調整するために使用することができる。

図７における基板アーム１０Ａおよび１０Ｂの回転の構造および軸は、本発明の他の実施形態においては変えられ得る。図１４Ａは、開放位置から処理位置に基板アームを動かすための別の一連の工程を含むフローチャート６００を示す。フローチャート６００は、さらに、図１４Ｂに関連して以下に説明される。図１４Ｂは機構１の概略図を示す。

フローチャート６００の工程６０２において、基板移動手段１２０は、「標本上」の方向で基板２を基板把持部２０Ａに置く。次に、工程６０４において、第１のアクチュエータ３０Ａは、基板２が、プラットホーム６０Ａの上側に「標本上」配置で方向付けられたままとなるように、基板２を図１４Ｂの平面に垂直面でおよそ１８０°基板２を回転する。工程６０６において、第２のアクチュエータ３５Ａは、「標本上」配置に方向付けられた基板２を受け取る。その後、工程６０８において、第２のアクチュエータ３５Ａ（たとえば、基板アーム１０Ａおよび基板把持部２０Ａの間の位置）は、基板２を「標本下」方向に回転させる。第２のアクチュエータ３５Ａは、基板２がオフセット７０Ａおよび７０Ｂに接触するように、基板２をプラットホーム６０Ａの方に下向きに動かすこともできる。

次に、工程６１０において、処理位置の基板２を用い、機構１は基板２上の標本３を、フローチャート５００の工程５１２に関連して上述したように、染色液、固定液およびリンス液を適用することにより染色する。染色が完了した後、第２のアクチュエータ３５Ａは、基板２を「標本下」方向から「標本上」方向に回転し（工程６１４）、そしてその後、第１のアクチュエータ３０Ａが、基板が「標本上」配置に方向付けられたままとなるように、基板２をおよそ１８０°（たとえば、図１４Ｂの平面に垂直な面で、工程６０６において適用される回転と逆に）回転させる。最終的に、工程６１８において、基板移動手段１２０は、基板把持部２０Ａから処理した基板を取り除く。

固定段階
図１０によれば、液体チューブ５２Ａ〜５５Ａおよび５２Ｂ〜５５Ｂは、標本処理の間、固定化剤をプラットホーム６０Ａおよび６０Ｂ、分離９２、基板２および標本３に送達するために配置することができる。１つ以上の液体チューブ５２〜５５Ａは、プラットホーム６０Ａおよび個々の固定化剤容器２１０Ａ内のポートに接続することができる。液体チューブは、固定化剤を容器から、チューブおよびプラットホーム上に位置するポートを通って基板および標本上に移動させることができるポンプ２００Ａおよび／またはバルブへの継手を含む。例として、ポンプ２００Ａは、固定液をチューブ５４Ａを通してブロック８０Ａの外へ、ポート４４Ａを通してプラットホーム６０Ａ上に、プラットホーム６０Ａと基板２との間の分離９２中に、標本３を含む基板２上に運ばれ得る。特定量の固定液を基板２に適用した後、真空または他の吸引源２２０Ａおよび／または２２１Ａが、残りの固定液をプラットホーム６０Ａ、分離９２、および基板２から、１つ以上のポート４０Ａおよび／または４１Ａを経て廃棄物チューブ５０Ａおよび５１Ａを通って廃棄物容器２３０Ａおよび／または２３１Ａに排気することができる。

図１５は、固定液を標本に適用するための一連の工程を含むフローチャート７００を示す。工程７０２において、ポンプ（たとえば、ポンプ２００Ａ）が、固定液（たとえば、メタノール）を保存容器（たとえば、保存容器２１０Ａ）から固定液チューブ（たとえば、チューブ５４Ａ）に向かわせる。工程７０４において、固定液は、ブロック８０Ａに取り付けられたポート４４Ａの中に向かわせられる。その後、工程７０６において、固定液は、プラットホーム６０Ａにおいてポート４４Ａの外に移動される。工程７０８において、固定液は、ポート４４Ａを通して外、および基板２とプラットホーム６０Ａとの間の分離９２中に移動される。最終的には、工程７１０において、基板２上の標本３は、固定液により固定される。

いくつかの実施形態において、ポンプ２００Ａは、固定液を、チューブ５４Ａおよびポート４４Ａを通って、プラットホーム６０Ａの上に、そして分離９２の中に１秒間に約５０μＬ以上（たとえば、７５μＬ以上、１００μＬ以上、１５０μＬ以上、２００μＬ以上、または２５０μＬ以上）および／または約３００μＬ以下（たとえば、２５０μＬ以下、２００μＬ以下、１５０μＬ以下、１００μＬ以下、または７５μＬ以下）の流速で約２（たとえば、３、４または５）秒間移動させる。たとえば、流速は、約１１５μＬ／ｓ（約７０μＬ／ｓ、約１００μＬ／ｓ、約１５０μＬ／ｓ）で約２秒間（たとえば、３秒間または４秒間）であり得る。真空または他の吸引源２２０Ａおよび／または２２１Ａは、その後、分離９２中および／またはプラットホーム６０Ａおよび基板２上に存在する残りの固定液を、ポート４０Ａおよび／または４１Ａおよび廃棄物チューブ５０Ａおよび／または５１Ａを用いて取り除くことができる（さらに以下で説明）。次に、ポンプ２００Ａは、再び、固定液をチューブ５４Ａおよびポート４４Ａを通して、プラットホーム６０Ａ上に、１秒間に約５０μＬ以上（たとえば、７５μＬ以上、１００μＬ以上、１５０μＬ以上、２００μＬ以上、または２５０μＬ以上）および／または約３００μＬ以下（たとえば、２５０μＬ以下、２００μＬ以下、１５０μＬ以下、１００μＬ以下、または７５μＬ以下）の流速で約２（たとえば、３、４または５）秒間移動させる。たとえば、流速は、約１１５μＬ／ｓ（約７０μＬ／ｓ、約１００μＬ／ｓ、約１５０μＬ／ｓ）で約２秒間（たとえば、３秒間または４秒間）であり得る。この固定および排気のプロセスは、固定を必要とする標本の種類によって同じまたは異なる固定化剤を用いてもう１度繰り返すことができる。さらに、機構１は、各固定段階について頻度と流速を変化させることができる。分離９２に位置する液体の表面張力を乗り越えるのに十分な他の流速も使用することができる。固定段階の頻度および／または流速を調整することにより、機構１は、様々な標本に対していくつかの異なる固定化剤を用いて最適な固定化を達成することができる。異なる種類の標本に対する機械指令が、制御ユニット５において、ハードウェアに組み込まれるかまたはプログラムされ、必要に応じてシステムオペレーターにより選択されることができる。

一般に、固定段階の間、試料に多種多様な固定化剤を適用することができる。たとえば、８５％メタノールを固定化剤として使用することができる。いくつかの染料について、エチルアルコールまたはホルムアルデヒドベースの固定化剤が使用できる。本明細書において開示される固定液の実施形態は、検査用標本の調製のために使用することができる。

染色段階
機構１は、１回以上の染色段階において、１つ以上の染料または染料を基板に固定された試料に適用するように構成されたチューブおよびポートも含む。標本の染色は、それを顕微鏡または他の画像処理装置のもとで見るまたは撮影する場合、標本のコントラストを向上させる。

図１６は、標本に染色剤を適用するための一連の工程を含むフローチャート８００である。工程８０２において、ポンプ（たとえば、ポンプ２０１Ａ）は、染色液を容器（たとえば、容器２１１Ａ）から染色チューブ（たとえば、チューブ５２Ａ）に送る。工程８０４において、染色液は、ブロック８０Ａに取り付けられたポート（たとえば、ポート４２Ａ）に送られる。つぎに、工程８０６において、染色液は、プラットホーム６０Ａにおいてポート４２Ａの外に出てくる。工程８０８において、染色液は、基板２とプラットホーム６０Ａとの間の分離９２の中に流れる。最終的に、工程８１０において、染料が基板２上の標本３に適用される。

いくつかの実施形態において、複数のチューブおよびポートが、染色剤を標本３に適用するために使用され得る。たとえば、第２のポンプ（たとえば、ポンプ２０２Ａ）は、染色液（たとえば、容器２１１Ａから分配されるものと同じ染料または異なる染料）を容器２１２Ａからチューブ５３Ａおよびポート４３Ａを通って、プラットホーム６０Ａ上に送ることができる。ある実施形態において、２つ以上の液体チューブは、染色剤をポートを通してプラットホーム上に送るために使用される、共通染色容器またはポンプおよび／またはバルブに接続され得る。図８を振り返って、チューブ５２Ａは、エオシンＹなどの赤色染料をプラットホーム、基板３および標本２に送達し得る。チューブ５３Ａは、チアジン染料（たとえば、アズールＢ、メチレンブルー）などの青色染料を送達し得る。図７〜１２において、プラットホーム６０Ａ上のポートの部材、配置、およびサイズは、基板に固定される標本への染料の適用を最適化するために選択される。別の染料が選択される場合、ポートの異なる部材、配置およびサイズが染料の粘度に好ましくは左右される。

各ポート４０Ａ〜４５Ａ（および４０Ｂ〜４５Ｂ）は、液体を受けるためのインプットチャネルおよび液体を出力するためのアウトプットチャネルの両方を含み得る。いくつかの実施形態においては、リンス剤４５Ａ、固定化剤４４Ａおよび染色ポート４２Ａ〜４３Ａのアウトプットチャネルは、プラットホーム６０Ａの上面上にあり、そして真空ポート４０Ａおよび４１Ａのインプットチャネルは、プラットホーム６０Ａの上面の反対側の端にあり得る。リンス剤４５Ａ、固定化剤４４Ａおよび染色ポート４２Ａ〜４３Ａのインプットチャネルを、ブロック８０Ａの同じ側面上に位置させてもよく、そして真空ポート４０Ａおよび４１Ａのアウトプットチャネルを、ブロック８０Ａの反対の側面上に配置することができる。

例として、そして図８および１６を参照して、制御システム５は、工程８０２において、ポンプ（たとえば、ポンプ２０１Ａ）に第１の染色液（たとえば、エオシンＹを含む染料）を染料容器から液体チューブ５２Ａに送らせる。工程８０４において、第１の染色液は、液体チューブからポート４２に入る。つぎに、工程８０６において、第１の染色液は、ポート４２Ａから出て、工程８０８において、第１の染色液は、プラットホーム６０Ａと基板２との間の分離９２中に、１秒につき約５０μＬ以上（たとえば、７５μＬ以上、１００μＬ以上、１５０μＬ以上、２００μＬ以上、または２５０μＬ以上）および／または約３００μＬ以下（たとえば、２５０μＬ以下、２００μＬ以下、１５０μＬ以下、１００μＬ以下、または７５μＬ以下）の流速で約２（たとえば、３、４または５）秒間置かれる。たとえば、流速は、約１１５μＬ／ｓ（たとえば、約７０μＬ／ｓ、約１００μＬ／ｓ、または１５０μＬ／ｓ）で、約２秒（たとえば、３秒または４秒）の間とすることができる。工程８１０において、基板２上の標本３は、第１の染色液で染色される。染色につづき、真空または他の吸引源（たとえば、ポンプ２２０および／または２２１）は、その後、分離９２中、プラットホーム６０Ａ上および基板３上に残存する第１の染色液を、ポート４０Ａ〜４１Ａおよび廃棄物チューブ５０Ａ〜５１Ａを用いて排気し得る。

機構１は、第１の染色段階の後、遅れ（たとえば、３秒と１０秒の間の遅れ、５秒の遅れなど）の後、これらの染色および排気段階を繰り返すためにプログラムされることができる。第２のポンプ２０２Ａは、制御システム５により、第２の染色液（チアジン染料を含む溶液）を、染色容器から液体チューブ５３Ａを通って、ポート４３Ａの外に、１秒につき約５０μＬ以上（たとえば、７５μＬ以上、１００μＬ以上、１５０μＬ以上、２００μＬ以上、または２５０μＬ以上）および／または約３００μＬ以下（たとえば、２５０μＬ以下、２００μＬ以下、１５０μＬ以下、１００μＬ以下、または７５μＬ以下）の流速で約２（たとえば、３、４または５）秒間、プラットホーム６０Ａ上に送るように指示される。たとえば、流速は、約１１５μＬ／ｓ（たとえば、約７０μＬ／ｓ、約１００μＬ／ｓ、または１５０μＬ／ｓ）で、約２秒（たとえば、３秒または４秒）の間とすることができる。真空または他の吸引源（たとえば、ポンプ２２０Ａおよび／または２２１）は、その後、分離９２中、および／またはプラットホーム６０Ａ上および／または基板２上に残存する第２の染色液を、ポート４０Ａ〜４１Ａおよび廃棄物チューブ５０Ａ〜５１Ａを用いて排気し得る。固定段階と同じように、機構１は、各染色段階に対して頻度と流速を変化させることができる。流速は、たとえば、５０〜３００μＬ／秒の範囲であり得、流速が、分離９２中に位置する液体の任意の表面張力に打ち勝つのに十分なものであれば、この範囲の外側限界よりもより小さいまたはより大きい（たとえば、１０〜５００μＬ／秒）であってもよい。

標本に適用できる典型的な染色には、特に限定されるものではないが、ライト−ギムザ染色、ギムザ染色およびロマノフスキー染色などがあり、本明細書に開示される第１および第２の染色液の実施形態を含む。免疫細胞化学的試薬などの他の試薬や特異的細胞成分の他のマーカーも標本に適用できる。

不用な液体の除去
上述したように、真空または他の吸引源２２０および／または２２１は、基板２、分離９２およびプラットホーム６０Ａから、固定および染色段階の間中、または間に残余液体を排気できる。図７によれば、１つ以上の廃棄物チューブが、ブロック８０Ａの側面８２Ａおよび８４Ａに接続されることができる。廃棄物または真空チューブ５０Ａおよび５１Ａは、プラットホーム６０Ａ、分離９２および基板２から廃棄物容器または機構１から離れた他の場所に液体および小さな粒状物質を回収するために使用される。図８に関して、廃棄物チューブ５１Ａおよび５１Ｂは、廃棄物チューブの先端で別々の真空源２２０および２２１、そして廃棄物容器２３０および２３１に接続され得る。あるいは、２つ以上の廃棄物チューブが、単一の真空源、そして同じ廃棄物容器に図１０に示すように接続されることもできる。廃棄物チューブ５０Ａおよび５０Ｂは、それぞれピンチバルブ９０Ａおよび９０Ｂにより拡張し得る。

吸引するための真空または他の吸引源（たとえば、真空ポンプ２２０および／または２２１）は、液体をプラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂ、分離９２および基板２から廃棄物容器２３０および２３１に引き込むために廃棄物チューブ５０Ａ、５０Ｂ、５１Ａおよび５１Ｂの１つ以上に接続し得る。廃棄物チューブ内に適用される真空力は、基板２とプラットホームとの間の分離が、１００〜２００ミクロンの間である場合、液体を除去するための十分な吸引を提供するためにマイナス１〜マイナス５ポンド／平方インチ（「ｐｓｉ」）に相当するものとし得る。一般に、本明細書において使用される場合、「マイナス」圧力は、機構１内の周囲の圧力または機構１のまわりの環境よりも低い圧力を意味する。たとえば、いくつかの実施形態においては、機構１の周りの環境は、およそ１気圧の周囲の大気圧である。「マイナス」圧力は、この周囲の大気圧よりも低い圧力を意味する（たとえば、液体に適用されるマイナス１ｐｓｉの圧力は、液体にかけられる周囲の大気圧よりも１ｐｓｉ低い圧力である）。０．１ｐｓｉ〜１４ｐｓｉまたはそれより大きい範囲の他の真空は、そのような真空が、分離中に存在する液体の任意の表面張力に打ち勝つのに十分なものであれば、使用することができる。加えて、分離から液体を排気するために真空をかける直前に、アクチュエータ３０Ａは、標本処理位置から１５〜３５ミクロンの距離に基板２の近接する縁を持ち上げることができる。このように基板２とプラットホーム６０との間の分離を増加させることにより、真空段階の間の分離９２における任意の残留液体の排気を改善することができる。

いくつかの実施形態においては、制御システム５は、標本処理の間、液体の除去に適用される頻度および真空を変化させるように構成される。図１７Ａは、基板から過剰な液体を除去するための一連の工程を特徴づけるフローチャート９００を含む。固定段階につづき、たとえば、制御システム５は、ピンチバルブ９０Ａおよび／または９０Ｃを工程９０２において開け、廃棄物チューブ（たとえば、廃棄物チューブ５０Ａおよび５１Ａ）に５ｐｓｉの真空を５秒間かけることができる。この間、固定液は、分離、基板およびプラットホームからポート４０Ａおよび４１Ａを通って除去される（工程９０４）。液体は、工程９０６において廃棄物チューブを通って進み、工程９０８において１つ以上の廃棄物容器（たとえば、容器２３０および／または２３１）中に入れられる。一旦排気期間が終了すると、制御システム５は、工程９１０において、１つ以上のピンチバルブ９０Ａ、９０Ｃに廃棄物チューブ５０Ａおよび／または５１Ａを閉鎖させることができ、それにより、真空２２０〜２２１によるさらなる排気を防止する。制御システム５は、機構１に各固定段階の後にこの液体除去工程を繰り返させ得る。

図１７Ｂは、基板から過剰な液体を取り除くための代替的な一連の工程を特徴付けるフローチャート１０００を含む。フローチャート１０００の方法は、廃棄物チューブを封止するためにピンチバルブを使用しない。代わりに、染色段階の後、吸引源２２０および／または２２１は、工程に１００２において初期化され、工程１００４において活性状態に入る。吸引源は、廃棄物チューブ５０Ａおよび／または５１Ａに３ｐｓｉの圧力を４秒間かけて、工程１００６において分離９２、基板２およびプラットホーム６０Ａからポート４０Ａおよび４１Ａを通して染料を取り除く。排気された液体は、工程１００８において、廃棄物チューブ５０Ａおよび／または５１Ａを通って進み、工程１０１０において、１つ以上の廃棄物容器２３０、２３１に入れられる。機構１は、各染色段階の後にこの液体除去工程を繰り返し得る。液体除去工程の間にかけられる頻度および圧力を変えることにより、機構１は、標本の最適な固定および染色を達成し得る。

ピンチバルブ９０Ａ、９０Ｂ、９０ｃおよび９０Ｄは、図７に示されるように、廃棄物チューブ５０Ａ、５０Ｂ、５１Ａおよび５１Ｂを閉鎖する。ピンチバルブ９０Ａ〜９０Ｄは、バルブ内部に含まれる、またバルブ外部のアクチュエータにより、機械的に、電気的に、油圧でまたは空気圧で作動され得る。ピンチバルブ９０Ａ〜９０Ｄは、廃棄物チューブ５０Ａ、５０Ｂ、５１Ａおよび５１Ｂを通る液体流を妨げるために機能する。たとえば、満たされた廃棄物容器２３０を、機構１から交換する、または空にする場合、廃棄物チューブに存在する残留液体の漏れを防止するため、ピンチバルブ（９０Ａ〜９０Ｄ）を閉鎖することが望ましい。異なる種類のバルブまたはクランプもしくはストッパーなどの他の機構は、廃棄物チューブ５０Ａ、５０Ｂ、５１Ａおよび５１Ｂを閉鎖するために機構１の実施形態で使用され得る。

リンス段階
リンス液は、機構１による標本処理の間、１回以上のリンス段階で適用することができる。たとえば、固定段階間、染色段階間、および／または固定段階と染色段階との間、基板２、分離９２およびプラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂを洗浄することが望ましい。

図１８は、標本をリンスするための一連の工程を特徴付けるフローチャート１１００を含む。工程１１０２において、ポンプ（たとえば、ポンプ２０３Ａ）は、リンス液（たとえば、蒸留水を含む）を容器（たとえば、容器２１３Ａ）からリンスチューブ（たとえば、リンスチューブ５５Ａ）に送る。工程１１０４において、リンス液は、基板２とプラットホーム６０Ａとの間の分離９２に入る。工程１１１０において、標本３のリンスが行われる。最終的に、工程１１１２において、真空源２２０、２２１は、廃棄物チューブ５０Ａおよび５１Ａの１つ以上に吸引をかけ、分離９２および基板２からリンス液を除去し、リンス液は、廃棄物容器２３０および／または２３１に移送される。いくつかの実施形態においては、前述の工程が第２のリンス段階において繰り返される。

いくつかの実施形態においては、制御システム５は、ポンプ２０３Ａにリンス液を、１秒につき約５０μＬ以上（たとえば、７５μＬ以上、１００μＬ以上、１５０μＬ以上、２００μＬ以上、または２５０μＬ以上）および／または約３００μＬ以下（たとえば、２５０μＬ以下、２００μＬ以下、１５０μＬ以下、１００μＬ以下、または７５μＬ以下）の流速で約２（たとえば、３、４または５）秒間適用させる。たとえば、流速は、約１１５μＬ／ｓ（たとえば、約７０μＬ／ｓ、約１００μＬ／ｓ、または１５０μＬ／ｓ）で、約２秒（たとえば、３秒または４秒）の間とすることができる。固定段階と同じように、制御システム５は、各リンス段階の継続時間および流速ならびにリンス段階の数を変化させることができる。加えて、制御システム５は、標本処理の間、１回以上のリンス段階の配置を調整し得る。制御システム５は、たとえば、リンス段階が、すべての固定段階の完了後に１度起こり、すべての染色段階の完了後に第２のリンス段階が１度起こることを指示し得る。あるいは、リンス段階は、２以上の固定段階の間、または２以上の染色段階の間に組み入れられ得る。

いくつかの実施形態においては、染色手順は、（１）固定段階、（２）第２の固定段階、（３）第１の染色液を用いる第１の染色段階、（４）第２の染色液を用いる第２の染色段階、（５）リンス段階、および（６）第２のリンス段階を含み得る。いくつかの実施形態においては、様々な（たとえば、第１および第２）染色段階および／または溶液は、任意の順序で使用することができ、および／または任意の順序で繰り返すことができる。たとえば、第１および第２の染色段階および／または溶液は、入れ替えることができる。各段階は、１秒につき約５０μＬ以上（たとえば、７５μＬ以上、１００μＬ以上、１５０μＬ以上、２００μＬ以上、または２５０μＬ以上）および／または約３００μＬ以下（たとえば、２５０μＬ以下、２００μＬ以下、１５０μＬ以下、１００μＬ以下、または７５μＬ以下）の沈着流速で約２（たとえば、３、４または５）秒間を含み得る。たとえば、流速は、約１１５μＬ／ｓ（たとえば、約７０μＬ／ｓ、約１００μＬ／ｓ、または１５０μＬ／ｓ）で、約２秒（たとえば、３秒または４秒）の間とすることができる。

攪拌段階
ある実施形態における標本処理は、固定段階、染色段階および／またはリンス段階の間、分離９２、基板２およびプラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂのあらゆる場所に固定液、染色液および／またはリンス液を分散させるために１回以上の攪拌段階を含む。図１９は、標本を攪拌するための一連の工程を特徴付けるフローチャート１２００を含む。図９に示されるアクチュエータ３０Ａおよび／または３０Ｂは、基板２のプラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂに対する位置を変化するために微細運動調整を提供することができる。

制御システム５は、アクチュエータ３０Ａおよび／または３０Ｂに攪拌段階の開始を指示するためのソフトウェアおよび／またはハードウェアを含み得る。アクチュエータ３０Ａおよび／または３０Ｂは、制御システムからの攪拌開始指令により基板アーム２０Ａおよび／または２０Ｂを上下に動かすために構成することができる。攪拌段階は、所定のサイクル数繰り返し得る。本明細書において使用される場合、用語「サイクル」は、開始位置からの上向きの動きとそれに続く上向きとは反対の下向きの動きを意味する。いくつかの実施形態においては、１回以上の攪拌サイクルは、各サイクルの最後に、または少なくともいくつかのサイクルの最後に基板２を開始位置に戻す。ある実施形態においては、基板２は、いくつかの攪拌サイクルまたはすべての攪拌サイクルの最後に開始位置に戻らず、各サイクルは、なお上向きの動きとそれに続く下向きの動きを含む。アクチュエータ３０Ａおよび／または３０Ｂは、典型的に、１回以上の攪拌サイクルにおいて停止指令が制御システム５からアクチュエータに送られるまで基板２を動かし続ける。攪拌段階は、基板２とプラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂの表面との間の分離サイズ（分離距離）を一時的に増加させ得、その後、基板を標本処理位置に戻し得る。加えて、攪拌段階は、プラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂの表面に対する角度位置と標本処理位置との間で基板２を移動させる一連の動きを含み得る。プラットホームと基板２との間の分離中に分配された液体の表面張力は、基板が攪拌段階の間に標本処理位置から動く際に基板上の液体分子の再分配を引き起こし、標本全域での液体の分配を有利に改善できる。

攪拌段階の間プラットホームに対して基板２を動かすために他の方法使用することができる。たとえば、いくつかの実施形態においては、１つ以上のオフセット７０Ａ〜Ｄおよび／または７１Ａ〜Ｄ（たとえば、オフセットがプラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂの表面上に拡張する量）の位置が、標本３の攪拌のために迅速に調整されることができる。ある実施形態においては、プラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂの位置は、標本３の攪拌を生じるように調整されることができる。たとえば、プラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂは、標本３の攪拌を生じるように上下に交互に動かすことができる（たとえば、上述の基板２の動きの方向に対応して）。

いくつかの実施形態においては、標本３の攪拌は、下記に説明するように、基板アームを収縮する材料で作製する場合、アクチュエータ３０Ａおよび／または３０Ｂが、基板２をオフセット７０Ａ〜Ｄおよび／または７１Ａ〜Ｄの方へ動かす程度を変化させることによりなすこともできる。歪みゲージは、時間の関数として基板アームにおける歪みの変動を検出することにより、基板２に適用される攪拌の頻度を測定し調整するために使用することができる。

図１９によれば、第１の工程１２０２において、攪拌段階が開始される。工程１２０４において、制御システム５は、アクチュエータ３０Ａに攪拌サイクルを始めさせる。この指示に対して、アクチュエータ３０Ａは、工程１２０６において基板２を上向きに回転し、基板２とプラットホーム６０Ａとの間の距離を増加させる。次に、工程１２０８において、アクチュエータ３０Ａは、基板２をプラットホーム６０Ａの方に下向きに回転し、基板とプラットホーム６０Ａとの間の距離が減少する。決定工程１２１０において、攪拌段階が継続される場合、制御が工程１２０４に戻り、アクチュエータ３０Ａによる基板２の回転が別の攪拌サイクルにおいて再び起こる。攪拌段階が終結した場合、その後、制御が工程１２１０から工程１２１２に通過し、基板２は攪拌完了でその初期位置に返却される。

攪拌段階は、アクチュエータ３０Ａおよび／または３０Ｂにより適用される１つ以上の攪拌サイクルを含み得る。さらに、攪拌段階は、固定液、染色液および／またはリンス段階それぞれの間に１回または複数回、固定段階、染色段階および／またはリンス段階のそれぞれの間の様々な頻度で起こすことができる。たとえば、図９によれば、アクチュエータ３０Ａおよび／または３０Ｂは、基板２の近接した縁を、標本処理位置から３５ミクロンの距離に垂直に持ち上げ、その後、基板２を標本処理位置に３回、固定段階、染色段階およびリンス段階のそれぞれの後１回戻し得る。アクチュエータ３０Ａおよび／または３０Ｂは、各攪拌サイクルを２秒で完了し得る（たとえば、基板２の近接した縁を標本処理位置から３５ミクロンの距離に垂直に持ち上げるのに１秒、そして標本処理位置に基板を戻すのに１秒）。機構１は、各攪拌サイクルおよび／または段階に対して攪拌頻度および距離を変化する指令を実施できる。たとえば、攪拌段階は、１秒に１０〜２０回、基板２の近接した縁を標本処理位置から垂直に５ミクロンの距離に持ち上げ、その後基板を標本処理位置に戻すアクチュエータ３０Ａおよび／または３０Ｂを含み得る。

攪拌距離と頻度の代替的な組み合わせも使用することができる。たとえば、いくつかの実施形態において、攪拌距離は２５ミクロン以上（たとえば、５０ミクロン以上、１００ミクロン以上、１５０ミクロン以上、２００ミクロン以上、２５０ミクロン以上、３００ミクロン以上、５００ミクロン以上、７００ミクロン以上、１ｍｍ以上）である。たとえば、ある実施形態においては、攪拌距離は３５ミクロンおよび３５０ミクロンの間である。

いくつかの実施形態においては、攪拌サイクル頻度は、１秒に１サイクル以上（たとえば、１秒に２サイクル以上、１秒に３サイクル以上、１秒に４サイクル以上、１秒に５サイクル以上、１秒に７サイクル以上、１秒に１０サイクル以上）である。

付加的な攪拌技術も使用することができる。たとえば、いくつかの実施形態においては、基板把持部２０Ａおよび／または２０Ｂは、図７および９に描くように、基板をアクチュエータ３０Ａおよび／または３０Ｂの回転軸に垂直な軸の周りに回転させるアクチュエータを含み得る。

あるいは、プラットホーム６０Ａおよび／またはプラットホーム６０Ｂは、固定段階、染色段階およびリンス段階の間に１つ以上のオフセット７０Ａ〜Ｄおよび／または７１Ａ〜Ｄを上げ下げするためのオフセットアジャスターを備え得る。オフセットアジャスターを組み込むために、プラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂは、プラットホームの内部プレートに取り付けられているオフセットを含み得る。プレートの高さは、内部アクチュエータを用いて変化し得、それによりオフセットの高さが変化する。あるいは、オフセット７０Ａ〜Ｄおよび７１Ａ〜Ｄの基板２に対する位置は、アクチュエータに指示してプラットホーム６０Ａおよび／または６０Ｂ、またはブロック８０Ａおよび／または８０Ｂを動かすことにより変化させることができ、それにより、攪拌段階の間、分離距離が変化する。制御システム５は、標本をより効率的に処理するために、従来の染色および調製技術と比べて標本調製処理の間かなり少ない液量を用いて、液体サイクル、流速、オフセットの高さ、分離距離、および攪拌パラメータおよび頻度を調整することができる。

いくつかの実施形態においては、基板アームは、標本処理位置において基板がプラットホームから延びる２つのオフセットのみ支えられる場合、アクチュエータまたは他の原動力要素が、スライドが４つすべてのオフセットに支えられるまでプラットホーム表面の方にさらにスライドを回転し得るように収縮する材料で作製し得る。これらの２つの位置の間の基板の位置の変化は、標本処理の間の十分な攪拌が成し遂げられ得る。基板アームは、基板アームの歪みをモニターするために歪みゲージを含み、プラットホームオフセットに対する基板の位置を制御システム５に知らせるために使用され得る。加えて、制御システムは、制御システムが標本処理位置においてまたは攪拌段階の間、基板を置く際に説明し得る、基板の厚さ欠陥に対応する情報を含み得る。

乾燥段階
ある実施形態においては、制御システム５は、機構１に取り付けられた乾燥機４を用いて標本を乾燥することができる。図２０は、標本を乾燥するための一連の工程を特徴付けるフローチャート１３００を含む。染色およびその他の段階（たとえば、１回以上のリンス段階）の完了が確認される開始工程１３０２に続き、工程１３０４において、乾燥機４は、標本全域に空気の流れを送る。乾燥プロセスは、信号が乾燥を停止するために制御ユニットから受信されるまで、工程１３０６において続けられる。信号が受信されると、乾燥機が標本全域への空気の流れを止め、乾燥段階が工程１３０８で終了する。

一般に、機構１は、標本３を乾燥するために、空気の温度、流速、適用される空気の流れの持続時間、標本処理の間の段階を変えるために制御される。たとえば、染色段階を完了した後、乾燥機４が、標本全域に７秒間１０Ｌ／分の流速でおよそ１２０°Ｆで空気の流れを送ることができる。他の空気の温度（たとえば、周囲温度から３００°Ｆまで）、空気の流速（たとえば、１Ｌ／分から１００Ｌ／分）、および空気を流す期間（たとえば、２、３秒から数分）も使用することができる。

標本検査システム
本明細書に開示される自動標本調製機構および装置は、機構１を含み、通常、米国出願番号第１２／４３０８８５号および同１３／２９３０５０号（これらの全体は、参照により本明細書に組み込まれる）明細書に開示されるものなどのより大きい標本検査システムと共に使用することができ、および／またはそこに組み込まれルことができる。たとえば、図２１は、標本検査システム２０００の１つの可能な実施形態を説明する概略図を示す。システム２０００は、プラットホーム２１００、受光デバイス２２００、コンピュータ２３００、塗布器２４００、ガス循環デバイス２５００、光源２６００、ディスペンサー２８００、排出デバイス２９００、スライドラベラー３０００、およびスライドラベルリーダー３１００を含む。アドバンサー２１１０は、１つ以上のスライドまたは他の基板２７００受け取るように構成され得る。アドバンサー２１１０は、プラットホームの表面、上面２１０１などに取り付けられ得る。アドバンサー２１１０は、ベルト形状とし得、システムは、基板に載せた標本をプラットホームの表面２１０１に沿って動かすために、機械アーム、重力、磁力、水圧、ギア、または他の移動技術を用いることができる。

プラットホーム２１００は、フィーダー２１０２およびコレクター２１０６を、それぞれ基板２７００（たとえば、スライド）を、スタックまたはラックからまたはスタックまたはラックへ供給および回収するために含み得る。フィーダー２１０２は、アドバンサー２１１０上の標本を押すためのフィーダー推進機構２１０３（ゴム車輪など）を備えていてもよい。あるいは、基板２７００をつかみ、直接アドバンサー上に基板を置くために機械アームを使用することができる。フィーダー２１０２の外へ基板を進ませるための代替的な機構は、磁石または水圧などを使用し得る。フィーダーは、スライドがどのくらい存在するか測定するためのセンサを含み得る。センサは、たとえばどのくらいの基板が存在するかを決定するために基板２７００の重量を測定する。コレクター２１０６は、どれだけの基板が存在するかを決定するためのセンサを含むこともできる。センサは、セットする前の標本の数を分析するとすぐにコンピュータ２３００に知らせるために構成することができ、および／または基板上に載せられた標本の受け取りを継続的にコンピュータに知らせることができる。

受光デバイス２２０は、顕微鏡（明視野顕微鏡など）、ビデオカメラ、スチールカメラ、または他の光を受ける光学デバイスであり得る。標準的な明視野顕微鏡を含む実施形態は、自動ステージ（たとえば、基板移動手段２２０１）および自動フォーカスも含み得る。いくつかの実施形態において、顕微鏡は、モータを付けたステージおよびフォーカスモータを取り付けることができる。顕微鏡は、コンピュータ２３００の制御下で種々の倍率のレンズを選択させるためのモータを付けた対物レンズ取り付け台を有することができる。フィルタホイールは、コンピュータ２３００が光経路における狭帯域カラーフィルタを自動的に選択できるように使用されることができる。ＬＥＤ証明をフィルタに代替させることができ、ＬＥＤの使用は、フィルタホイールの回転に必要な時間と比べて画像収集時間を減少させることができる。たとえば、狭帯域光観察を収集するために１６００×１２００画素のＦｉｒｅＷｉｒｅ（登録商標）（ＩＥＥＥ１３９４高速シリアルバス）カメラを使用することができる。

いくつかの実施形態においては、受光デバイス２２００は、基板２７００から反射された光を受け、反射光により形成される１つ以上の画像を保存する。あるいは、または加えて、いくつかの実施形態においては、基板上の標本からの蛍光発光が、受光デバイス２２００により検出されることができる。

ある実施形態においては、受光デバイス２２００は、基板上の標本の透過像を得るために構成される。たとえば、発光源２６００をプラットホームの下に配置し、光をプラットホーム２１００および基板２７００を通って受光デバイス２２００に通過するように向けることができる。

受光デバイス２２００および図２１に示されるあらゆる他の構成要素は、リンク（２０１１〜２０１４）によりコンピュータ２３００と連動させることができ、その結果、コンピュータにエネルギーを供給でき、コンピュータ２３００から構成要素に指示を与えることができ、および／または構成要素にコンピュータ２３００に情報を送らせることができる。リンク２０１１〜２０１４は、有線リンクであっても無線リンクであってもよい。

受光デバイス２２００は、Ｘ、ＹおよびＺ軸方向の動きが可能である（他の実施形態においては、モータのつけられたステージまたは基板移動手段２２０１がＸ、ＹおよびＺ軸方向への動きを備え得る）。受光デバイス２２００は、コンピュータ２３００が受光デバイス２２００を適切な位置に配置することができるよう、パン、チルトおよび／または移動アクチュエータを含み得る。受光デバイス２２００は、入射光を焦点に収束させるレンズ２２１０を含み得る。

受光デバイス２２００は、白黒および／またはカラー画像を捕えるために選択することができる。いくつかの実施形態においては、２つ以上の受光デバイスが画像の取得と関連する処理時間を分担するために使用することができる。たとえば、低倍率造影工程を受けて、次に高倍率造影工程とすることができる。同様に、いくつかの実施形態においては、システム２０００、プラットホーム２１００、コンピュータ２３００および／または受光デバイス２２００は、基板移動手段２２０１に基板２７００を、基板上または基板の特定部分上の細胞のすべてまたはほとんどの１つ以上の画像の取得および保存を確実にするために動かすことができる。

コンピュータ２３００は、ノート型、サーバー、ワークステーション、または他の種類のコンピュータ装置であってよい。コンピュータは、プロセッサ、ディスプレイ２３２０、インターフェイス２３１０、および内部メモリおよび／またはディスクドライブを含み得る。コンピュータ２３００は、メモリ内にまたは光学ディスクなどのコンピュータに読み取り可能な有形型媒体上に格納されたソフトウェアを含み得る。ソフトウェアは、受光デバイス２２００、アプリケータ２４００、ガス循環デバイス２５００、プラットホーム２１００、アドバンサー２１１０、光源２６００、ディスペンサー２４５０および／または２８００、標本調製機構１、またはこれらの構成要素の１つの中にある、または接続されている任意の構成要素をコンピュータに操作させるための指令を含み得る。同様に、コンピュータは、これらの構成要素のいずれかから情報を受けるように配置される。

たとえば、ソフトウェアは、フィーダー２１０２からの基板の分散速度を制御し得、フィーダー２１０２は、コンピュータに存在する基板の数についての情報を知らせ得る。加えて、コンピュータ２３００は、受光デバイス２２００により捕えられた画像の分析の実行を担当することもできる。分析プロセスにより、コンピュータは、特定の血液量中の特定の種類の細胞の数、たとえば、血液、赤血球、白血球および血小板算定、ならびにヘモグロビン含有量、赤血球形態または算出可能である白血球百分率などの完全血球算定の他の測定または誘導される成分などを計算するために整えられ、制御されることができる。画像分析ソフトウェアは、各個々の領域を分析し、全体の赤血球計数および白血球計数を合計することができる。患者の血液サンプルにおける１μＬ当たりの合計計数を計算するために、スライド上で計数された数に希釈率およびサブサンプルの容量を乗じることができる。スライドからの計数の結果、形態学的測定、および赤血球細胞および白血球細胞の画像がディスプレイ２３２０上に示され得る。

いくつかの実施形態においては、コンピュータ２３００は、数値データ、細胞集団ヒストグラム、散布図およびモニター上に表示される赤血球の画像を用いる細胞形態の直接評価を表示するために構成される。細胞形態を表示する能力は、経験を積んだ技術者または他の専門家による手動の再調査のための追加のスライドを調製することを保証し得る細胞形態学における異常の存否を迅速に立証する能力をシステム２０００の使用者に提供する。ソフトウェアは、コンピュータに、受光デバイスから受ける画像２３３１を表示させる指示を与得ることもでき、またディスプレイ２３３０に、画像分析の結果２３３２（おそらく、たとえばチャートまたはグラフ）を示させ得る。同様に、コンピュータ２３００は、特定の血液量における特定の種類の細胞の数を数えあげる、または特定の血液量における損傷細胞、がん様細胞または溶解細胞の数を数えあげるために制御されることもできる。ソフトウェアは、コンピュータが分析プロセスを実行できるようにする。コンピュータは、分析中、１つ以上の拡大図（magnification）を使用することができる。

１つの構成要素として示されているが、コンピュータ２３００は、複数のコンピュータ；第１のコンピュータはシステム２０００の構成要素を制御するために使用することができ、第２のコンピュータは受光デバイス２２００からの画像を処理するために使用することができる。種々のコンピュータは、コンピュータに情報を共有させるために一緒にリンクさせることができる。コンピュータ２３００は、コンピュータに他のコンピュータの情報を送受信させるためにネットワークや実験室の情報システムに接続させることもできる。

ある実施形態においては、アプリケータ２４００は、シリンジ、手動またはモータ駆動のピペッター、またはチューブでピペットチップに取り付けられたモータ制御のポンプを含み得る。アプリケータ２４００は、制御された様式で標本を基板２７００に適用する。具体的な特徴、特性およびアプリケータ２４００を使用する方法は、たとえば、米国特許公開第２００９／０２６９７９９号公報に開示されている。標本には、１つ以上の血液成分、細胞、組織、または他の生物学的成分が挙げられる。

標本は一旦基板２７００に適用されると、適用した標本が機構１により処理される。機構１は本明細書において説明したように機能し、１つ以上の染色液、固定液および／または他の溶液を基板上の標本に適用する。

いくつかの実施形態においては、システム２０００は、アプリケータ２４００のチップから細胞の非接触の行を置くことによって、基板２７９９上におかれた細胞間の重なりを最小化するように構成されることができる。希釈された液体の粘度の増加、または希釈剤の種類や量は、アプリケータからの標本流れの最終的な定着位置の幅に影響し得る。血液サンプルにおける典型的な変化を許容する行間の距離を選択することにより、すべての細胞をすべてのサンプルにおいて計数することができる。

ガス移動デバイス２５００は、図２１に示されているように個別のデバイスであってもよく、前述したように機構１に組み込まれていてもよいが、ファンを含むことができ、および／またはたとえばコンプレッサや送風機などの他のガス移動デバイスを含んでもよい。ガス移動デバイス２５００は、コンピュータ２３００に直接接続されてもよく、またはプラットホーム２１００またはアプリケータ２４００などの別の構成要素により接続されていてもよい。ガス移動デバイスは、基板上の標本を乾燥する速度を制御するために、ガス（ある場合には大気）を基板全域に押し出す。基板を横切る空気の量が多すぎたり、速さが速過ぎたりすると（すなわち、ファンのスピードが高すぎる）、急速な乾燥により標本中の細胞が破裂することがあり、空気が少な過ぎたり基板を横切るのが遅過ぎたりすると（すなわち、ファンのスピードが低すぎる）、細胞の乾燥が遅すぎ、収縮がみられることがある。

コンピュータ２３００は、一定時間に基盤を横切る空気の量（たとえば、空気の立方フィートまたは立方センチメーター／秒）を、ガス移動デバイスの基板からの距離、分析される液体の種類、流れの幅、ガス（たとえば、空気）の温度、および流れの平均の厚さに基づいて選択および制御することができる。ガス移動デバイス２５００は、ガスが約１５〜２０秒間、３０°〜６０°（たとえば、４５°）の角度で基板にあたるようにデバイスがガスを送ることができるように配置することができる。いくつかの実施形態においては、コンピュータ２３００は、ガス移動デバイス２５００を使用せずに乾燥プロセスを行うためにシステムの近くで湿度および温度設定を制御することができる。

発光デバイス２６００、およびその様々な構成要素は、米国特許公開第２００９／０２６９７９９号明細書に例として説明されている。様々な波長の光を発光デバイス２６００により発生させることができ、受光デバイス２２００により検出させることができる。たとえば、４１５ｎｍなどの波長は、ＲＢＣ形態学およびヘモグロビン含有量を評価するために、ヘモグロビンのみの画像を得るのに有用である。６００ｎｍで発光する光は、血小板および核の高コントラスト画像を提供するのに有用であり得る。他の波長は、好塩基球、単球、リンパ球（すべて青色の色調）、好酸球（赤色）および好中球（中間色）の色を最も良好に区別するために選択され得る。

以下の実施例によりさらに本開示を説明するが、以下の実施例は、特許請求の範囲に記載された本発明の範囲を限定することを意図するものではない。

実施例１
図２２は、基板上に載せた標本を処理するための典型的な一連の工程を示すフローチャート１４００である。フローチャート１４００における工程は、検査用標本を調製するために使用され得る。このプロセスの説明は、時には特定の範囲を有する特定の工程を引用し、または特定の順序で発生する工程を開示するが、その説明は１つのプロセス例を説明するに過ぎないことを意図するものである。図２２を参照して、機構１は、処理工程の間、種々の機構構成要素の操作を命令するための制御システム５に接続されている。標本開始工程において、血液のアリコート由来の赤血球、白血球および血小板を含む標本３は、ガラス顕微鏡スライドからなる基板２に載せられる。これは、同時係属米国特許出願公開第２００８／０１０２００６号に記載された１つ以上の工程（station）などの種々の工程を用いて行うことができる。配置工程１４０２において、標本３を含む基板２は、図７に示すような基板アーム１０Ａの基板把持部２０Ａ上にロードされる。制御システム５は吸引源２２２に基板把持部２０Ａから空気を真空排気するように指示する（工程１４０４）。吸引ポート２１および２２を通して適用された吸引は（工程１４０６）、標本処理の間、基板２を基板把持部２０Ａに付着させる。制御システム５は、基板３を図７に示す開放位置から図９Ａに示す標本処理位置へと回転させるようにアクチュエータ３０Ａに指示する（工程１４０８）。標本処理位置において、標本３は、プラットホーム６０Ａの表面に向けられ、基板２は図８に示されるオフセット７０Ａ〜Ｄに支えられる。このオフセットは、基板２がプラットホーム６０Ａの表面と接触するのを防ぐ。この典型的なプロセスにおいて、基板２の標本接触表面とプラットホーム６０Ａの表面との間の分離９２は、およそ１００ミクロンから２００ミクロン（たとえば２００ミクロン）である。

第１の固定段階（工程１４１２、図１５も参照）の間、ポンプは、工程１４１４において固定液を標本３に適用する。図８に示される液体チューブ５４Ａに接続されたポンプ２００Ａは、メタノールを含む固定液を固定剤容器２１０からチューブ５４Ａを通して、ポート４４Ａの外、プラットホーム６０Ａ上、基板２上、およびプラットホーム６０Ａと基板２との間の分離９２中に推し進める。ポンプ２００Ａは、固定液をポート４４Ａから１１５μＬ／秒の流速で２秒間Ｔ１押し出し、それにより合計２３０μＬの固定液Ｖ１を基板２上に移動させる。

次に、第１の攪拌工程１４１６において、制御システム５は、アクチュエータ３０Ａを基板２の近接した縁を標本処理位置から垂直に３５ミクロンの距離上昇するように動かし、そして標本をその標本処理位置に戻すことにより基板を攪拌する。機構１はこの攪拌工程をもう４回繰り返す。機構１は、図２３に示すように５回の攪拌動作をおよそ１０秒、Ｔ２で完了する。攪拌後、制御システムは、真空工程１４２０を開始する。−０．１０ｐｓｉの真空力が１秒半、Ｔ３の間かけられ、分離中、プラットホームの上、または基板上に存在する残りの固定液を、ポート４０Ａおよび４１Ａ、ならびに廃棄物チューブ５０Ａおよび５１Ａを経て真空排気する（工程１４２２）。真空排気された固定液は、廃棄物容器２３０および／または２３１に回収される。

その後、第２の攪拌工程を含む第２の固定段階において、第１の固定段階および第１の攪拌段階の上述の工程が繰り返される。

固定段階の後、制御システム５は、第１の染色段階を開始する（工程１４２４）。その際、制御システム５は、機構１に標本を染色させる（工程１４２６）。図８および図１６のフローチャートを参照すると、液体チューブ５２Ａに接続されたポンプ２０１は、エオシンＹを含む第１の染色液を染色容器２１１Ａからポート４２Ａの外、プラットホーム６０Ａ上、基板２上およびプラットホーム６０Ａと基板２との間の分離９２中に押し出す。ポンプ２０１は、第１の染色液をポート４２Ａ中に、１１５μｌ／秒の流速で２秒間、Ｔ４注入し、それにより、２３０μｌの第１の染色液Ｖ２が基板上に導かれる。

第１の染色液を標本３に適用した後、機構１は、第２の攪拌工程１４２８を、アクチュエータ３０Ａに、基板２の近接した縁を標本処理位置から垂直方向に３５ミクロンの距離に上昇させ（工程１４３０）、その後、標本をその標本処理位置に戻すことにより行う。

制御システム５は、機構１にこの攪拌工程をもう２回繰り返させ、図２３に示されるおよそ６秒の期間Ｔ５にわたって３回の攪拌が完了する。

つぎに、第２の真空段階が工程１４３２で開始される。５ｐｓｉの真空が、工程１４３４において、３秒間、Ｔ６適用され、分離９２中またはプラットホームおよび基板上に存在する残りの第１の染色液を、ポート４０Ａおよび／または４１Ａおよび廃棄物チューブ５０Ａおよび５１Ａを経て真空排気する。真空排気された第１の染色液は、廃棄物容器２３０Ａおよび／または２３１Ａに回収される。

エオシンＹを含む第１の染色液で標本を染色した後、機構１は、工程１４３６において、アズールＢおよびメチレンブルーを含む第２の染色液を用いて第２の染色段階を開始する。液体チューブ５３Ａに接続されたポンプ２０２は、第２の染色液を染色剤容器からポート４３Ａを通ってプラットホーム６０Ａ上、基板２上、プラットホーム６０Ａと基板２との間の分離９２中に押し出す（工程１４３８）。機構１は、第２の染色液をポート４３Ａを通って１１５μｌ／秒の速度で２秒間、Ｔ７分配し、それにより第２の染色液を合計で２３０μｌ、Ｖ３基板上に移動させる。

標本３に染色剤を適用した後、機構１は、工程１４４０において、アクチュエータ３０Ａを基板２の近接する縁を標本処理位置から３５ミクロンの距離に上昇させ（工程１４４２）、その後標本３をその標本処理位置に戻すことにより第３の攪拌段階を開始する。機構１は、この攪拌工程をもう３回繰り返す。機構は、約８秒間、Ｔ８かけて４回の攪拌動作を完了する。

第３の真空工程１４４４が次に開始される。５ｐｓｉの真空が、２秒間、Ｔ９適用され、攪拌後、分離中またはプラットホーム６０Ａおよび基板２上に残った第２の染色液を工程１４４６において、ポート４０Ａおよび／または４１Ａ、および廃棄物チューブ５０Ａおよび／または５１Ａを経て真空排気する。真空排気された第２の染色液は、廃棄物容器２３０Ａおよび／または２３１Ａに回収される。

機構１は、その後、２回の一連のリンス−攪拌−真空段階を行う。第１回目の一連の段階は、制御システム５が機構１に第１のリンス段階を開始させるよう指示するとき工程１４４８で開始される。リンス液を含む容器２１３Ａは、ポンプ２０３および液体チューブ５５Ａに接続される。ポンプ２０３は、リンス液を、ポート４５Ａに供給する洗浄チューブ５５Ａを通って、分離９２の中に入って、プラットホーム６０Ａおよび基板２上に移動させ、工程１４５０において標本３をリンスする。あるいは、いくつかの実施形態において、リンス液は、２つ以上の液体ポート４２Ａ〜４５Ａに通される。ポンプ２０３は、リンス液を、流速１１５μｌ／秒で２秒間、Ｔ１０、ポート４５Ａの外へ送り、それにより合計２３０μｌ、Ｖ４の水が基材上に送られる。

次に、制御システム５は、工程１４５２において、アクチュエータ３０Ａを基板２の近接する縁を標本処理位置から垂直に５ミクロンの距離に上昇させ（工程１４５４）、標本をその標本処理位置に戻すことにより第４の攪拌段階を開始する。制御システム５は、機構１にこの攪拌段階を繰り返させ、およそ４秒間、Ｔ１１に２回の攪拌を完了する。

その後、真空段階が工程１４５６において開始される。工程１４５８において、５秒半、Ｔ１２かけた５ｐｓｉの真空は、攪拌後に、分離９２中、またはプラットホーム６０Ａおよび基板２の上に存在する残存リンス液を、ポート４０Ａおよび／または４１Ａ、および廃棄物チューブ５０Ａおよび／または５１Ａを経て排気する。

その後、工程１４６０において、制御システム５は、機構１に、第２のリンス段階を開始することにより、第２回目のリンス−攪拌−真空段階を開始させる。第２のリンス段階（工程１４６０、１４６２）、第５の攪拌段階（工程１４６４、１４６６）、および第５の真空段階（工程１４６８、１４７０）が、１回目のリンス−攪拌−真空段階について上述したのと同様に行われる。２回目のリンス−攪拌−真空段階の間、リンス液の量、Ｖ５、および処理時間、Ｔ１３、Ｔ１４、およびＴ１５は、通常、１回目のリンス−攪拌−真空段階工程におけるものと同じである。

標本を固定し、エオシンＹを含む第１の染色液ならびにアズールＢおよびメチレンブルーを含む第２の染色液で染色し、そしてリンスした後、機構１は、工程１４７２において乾燥段階を開始する。乾燥器４は、およそ１２０°で流速１０Ｌ／分の気流を標本全域に８秒間、Ｔ１６送る（工程１４７４）。

この工程の完了後、基板２は、工程１４７６においてその元の位置に戻される。この工程において、アクチュエータ３０Ａは、図７に示すように基板２を標本処理位置から開放位置に回転させる。基板２は、その後基板移動手段により取り除かれ、そして新しい基板が新しい標本を処理するためにロードされてもよい。

上述および図２３に示される典型的な標本処理工程において説明されるように、本明細書に開示されるシステムおよび方法は、自動および手動標本調製技術などの従来の標本処理方法と比較してより少ない試薬の消費により、より効率的な標本処理のために提供される。図２３によれば、たとえば、機構１は、標本の固定、染色およびリンスのために典型的な処理工程の間に１．５ｍＬ未満の試薬を消費する（たとえば、固定液４６０μＬ＋第１の染色液２３０μＬ＋第２の染色液２３０μＬ＋リンス液４６０μＬ＝試薬１３８０μＬ）。いくつかの実施形態においては、およそ１３８０μＬの液体が標本処理の間に使用され得る。たとえば、標本の処理において使用される液体の量は、およそ１１５０μＬ（たとえばリンス段階を１回除外することにより）とすることができる。

上記液体の容量は、通常、基板とプラットホームとの間のおよそ１００ミクロンの間隔と関係している。基板とプラットホームとの間の間隔がより大きいと、標本処理の間により多くの容量の液体が通常消費される。たとえば、間隔がおよそ２００ミクロンである場合、消費される液体の合計容量は、１３８０μＬよりも多くなければならないであろう。

より一般的には、消費される液体の合計容量は、５００μＬ以上（たとえば、５２０μＬ以上、５４０μＬ以上、５６０μＬ以上、５８０μＬ以上、６００μＬ以上、６５０μＬ以上、７００μＬ以上、７５０μＬ以上）および／または２ｍＬ以下（たとえば、１．５ｍＬ以下、１．４ｍＬ以下、１．３ｍＬ以下、１．２ｍＬ以下、１．１ｍＬ以下、１．０ｍＬ以下、９００μＬ以下）である。

再び図２３によれば、標本調製プロセスは、１分を少し上回る時間（たとえば、各固定段階の間に１３．５秒経過し、固定に合計２７秒＋第１の染色段階の間に１１秒経過＋第２の染色段階の間に１２秒経過＋リンス段階の間に２３秒経過＋乾燥段階の間に８秒経過＝合計経過時間８１秒）で完了する。ある実施形態において、標本調製は、大体８１秒で完了され得る。たとえば、標本処理は、１８０秒以下（たとえば、１５０秒以下、１２０秒以下、９０秒以下、８０秒以下、７０秒以下、６０秒以下、５０秒以下、または４０秒以下）で完了され得る。

さらに、上述の典型的なプロセスは、単一の標本についての処理時間を説明しているが、複数の基板を処理するためのシステムおよび方法（たとえば、２つの基板を処理するように構成されている図７の機構１、および／または３つ以上の基板を処理するように構成されているシステム）では、１時間に１００以上の標本を処理することが可能である（たとえば、１時間に６０標本と１２０標本の間）。本明細書に開示されるシステムおよび方法の実験室での使用は、結果として、標本当たりでより速い処理能力をもたらし、一方、液体（たとえば、固定液、染色液、およびリンス液）の消費量は、従来の自動および手動標本調製技術と比較して減少される。

実施例２
実施例１について上述された処理工程は、以下のように本発明の他の実施形態において調整され得る。加えて、本明細書に記載される固定液処方、染色液処方およびリンス液処方は、以下の実施例の処理工程において使用され得る。

第１の固定段階（工程１４１２、図２２も参照）の間、ポンプは、工程１４１４において固定液を標本３に塗布する。図８に示される液体チューブ５４Ａに接続されるポンプ２００Ａは、メタノールを含む固定液を固定剤容器２１０からチューブ５４Ａを通って、ポート４４Ａの外、プラットホーム６０Ａの上、基板２の上、そしてプラットホーム６０Ａと基板２との間の分離９２中に押し出す。ポンプ２００Ａは、ポート４４Ａから固定液を、１１５μＬ／秒の流速で２秒間Ｔ１押出し、それにより合計２３０μＬの固定液Ｖ１が基板２上に送られる。

つぎに、第１の攪拌工程１４１６において、制御システム５が、アクチュエータ３０Ａ（工程１４１８）に、基板２の近接の縁を、標本処理位置から垂直に３５ミクロン上昇させ、そして、標本をその標本処理位置に戻すことにより基板を攪拌する。機構１は、この攪拌工程をさらに５回繰り返す。機構１は、およそ１２秒で６回の攪拌動作を完了する。攪拌後、制御システムは、真空工程１４２０を開始する。−６ｐｓｉの真空力を１秒半の間（Ｔ３）かけ、分離中、プラットホーム上、または基板上に残存した固定液を、ポート４０Ａおよび４１Ａ、および排気チューブ５０Ａおよび５１Ａを経て真空排気する（工程１４２２）。排気された固定液は、廃棄物容器２３０および／または２３１に回収される。

その後、第２の攪拌工程を含む第２の固定段階において、上述した第１の固定段階および第１の攪拌工程が繰り返される。

固定段階に続いて、制御システム５は、第１の染色段階を開始する（工程１４２４）。その際に、制御システム５は、機構１に標本を染色させる（工程１４２６）。図８および図１６のフローチャートによれば、液体チューブ５２Ａに接続されるポンプ２０１は、エオシンＹを含む第１の染色液を、染色剤容器２１１Ａからポート４２Ａの外、プラットホーム６０Ａの上、標本３を含む基板２の上、およびプラットホーム６０Ａと基板２との間の分離９２中に押し出す。ポンプ２０１は、第１の染色液を、ポート４２Ａを通って、１１５μＬ／秒の流速で２秒間、Ｔ４、分配し、それにより２３０μＬの第１の染色液、Ｖ２、が基板上に送られる。

第１の染色液を標本３に適用した後、機構１は、第２の攪拌工程１４２８を、アクチュエータ３０Ａに、工程１４３０において、基板２の近接した縁を標本処理位置から垂直３５ミクロンの距離に上昇させ、そして、その後、標本をその標本処理位置に戻すことにより行う。制御システム５は、機構１にこの攪拌工程をさらに２回繰り返させ、図２３に示すように、およそ６秒間、Ｔ５、かけて３回の攪拌を完了する。

つぎに、第２の真空段階が工程１４３２において開始される。−５ｐｓｉの真空を工程１４３４において３秒間（Ｔ６）かけ、分離９２中、またはプラットホームおよび基板上に残存した第１の染色液を、ポート４０Ａおよび／または４１Ａ、および廃棄物チューブ５０Ａおよび５１Ａを経て真空排気する。排気された第１の染色液は、廃棄物容器２３０Ａおよび／または２３１Ａに回収される。

エオシンＹを含む第１の染色液で標本を染色した後、機構１は、第２の染色段階を工程１４３６において、アズールＢおよびメチレンブルーを含む第２の染色液を用いて開始する。液体チューブ５３Ａに接続されるポンプ２０２は、第２の染色液を、染色剤容器からポート４３Ａを通って、プラットホーム６０Ａの上、基板２の上、およびプラットホーム６０Ａと基板２との間の分離９２中に押し出す（工程１４３８）。機構１は、第２の染色液を、ポート４３Ａを通って、１１５μＬ／秒の流速で２秒間、Ｔ７、分配し、それにより２３０μＬの第２の染色液、Ｖ３、が基板上に送られる。

染色剤を標本３に適用した後、機構１は、第３の攪拌段階を、工程１４４０において、アクチュエータ３０Ａに、基板２の近接した縁を標本処理位置から垂直に３５ミクロン上昇させ（工程１４４２）、そして、その後、標本３をその標本処理位置に戻すことにより開始する。機構１は、この攪拌工程をさらに２回繰り返す。機構は、およそ６秒間、Ｔ８、かけて３回の攪拌動作を完了する。

つぎに第３の真空工程１４４４が開始される。−６ｐｓｉの真空を２秒間（Ｔ９）かけ、工程１４４６において、分離中、またはプラットホーム６０Ａおよび基板２上に残存した第２の染色液を、ポート４０Ａおよび／または４１Ａ、および廃棄物チューブ５０Ａおよび／または５１Ａを経て攪拌後真空排気する。排気された第２の染色液は、廃棄物容器２３０Ａおよび／または２３１Ａに回収される。

機構１は、次に、一連のリンス−攪拌−真空段階を２回行う。第１回目は、工程１４４８で制御システム５が機構１に第１のリンス段階の開始を指示すると開始される。リンス液を含む容器２１３Ａは、ポンプ２０３および液体チューブ５５Ａに接続される。ポンプ２０３は、リンス液を、ポート４５Ａに供給する洗浄チューブ５５Ａを通して、分離９２中に、およびプラットホーム６０Ａおよび基板２上に移動させ、工程１４５０において標本３をリンスする。あるいは、いくつかの実施形態においては、リンス液は、２つ以上の液体ポート４２Ａ〜４５Ａを通って送られる。ポンプ２０３は、リンス液を、ポート４５Ａの外へ、１１５μＬ／秒の流速で２秒間、Ｔ１０、移動させ、それにより合計２３０μＬ、Ｖ４、の水が基板上に送られる。

つぎに、制御システム５は、第４の攪拌段階を、工程１４５２において、アクチュエータ３０Ａに、基板２の近接した縁を標本処理位置から垂直に３５ミクロン上昇させ（工程１４５４）、そして、標本をその標本処理位置に戻すことにより開始する。制御システム５は、その後、機構１に、この攪拌工程をさらに３回繰り返させ、およそ８秒、Ｔ１１、で４回の攪拌を完了する。

つぎに真空段階が工程１４５６において開始される。５ｐｓｉの真空を５秒半の間（Ｔ１２）かけ、工程１４５８において、分離９２中、またはプラットホーム６０Ａおよび基板２上に残存したリンス液を、ポート４０Ａおよび／または４１Ａ、および廃棄物チューブ５０Ａおよび／または５１Ａを経て攪拌後真空排気する。

その後、工程１４６０において、制御システム５は、機構１に、２回目のリンス−攪拌−真空段階を、第２のリンス段階を開始することにより始めさせる。第２のリンス段階（工程１４６０、１４６２）、およそ１２秒間に完了される６回の攪拌を含む第５の攪拌段階、および第５の真空段階（工程１４６８、１４７０）が、先に１回目のリンス−攪拌−真空段階について開示したのと同じ方法で行われる。２回目のリンス−攪拌−真空段階の間、リンス液の量、Ｖ５、および処理時間、Ｔ１３、Ｔ１４およびＴ１５は、通常、１回目のリンス−攪拌−真空段階におけるものと同じである。加えて、真空段階の直前に、アクチュエータ３０Ａは、標本処理位置から１５〜３５ミクロンの距離に基板２の近接した縁を上昇させる。基板２とプラットホーム６０との間のこの増加した分離は、最終的な真空段階の間の分離９２に残った液体の真空排気を改善する。

標本が固定され、エオシンＹを含む第１の染色液およびアズールＢおよびメチレンブルーを含む第２の染色液で染色され、リンスされたのち、機構１は、工程１４７２において乾燥段階を開始する。乾燥機４は、およそ１２０°の気流を１０Ｌ／分の流速（工程１４７４）で８秒間、Ｔ１６、標本全域に流す。

これらの工程の完了後、基板２は、その元の位置に工程１４７６において戻される。この工程において、アクチュエータ３０Ａは、基板２を標本処理位置から図７に示される開放位置に回転させる。基板２は、その後、基板移動手段により取り除かれ、新しい基板が新しい標本を処理するためにロードされ得る。

上述の例示的な標本処理工程において説明されるように、本明細書に開示されるシステムおよび方法は、自動および手動標本調製技術などの従来の標本処理方法と比較してより少ない試薬の消費により、より効率的な標本処理のために提供される。実施例２によれば、機構１は、標本の固定、染色およびリンスのために典型的な処理工程の間に１．５ｍＬ未満の試薬を消費する（たとえば、固定液４６０μＬ＋第１の染色液２３０μＬ＋第２の染色液２３０μＬ＋リンス液４６０μＬ＝試薬１３８０μＬ）。いくつかの実施形態においては、およそ１３８０μＬの液体を標本処理の間に使用することができる。たとえば、標本の処理において使用される液体の量は、およそ１１５０μＬ（たとえばリンス段階を１回除外することにより）または１０００μＬ未満（たとえば、さらに固定段階を１回除外することにより）とすることができる。

実施例１に関する図２３については、機構１は、標本の固定、染色およびリンスのために典型的な処理工程の間に１ｍＬ未満の試薬を消費した（たとえば、メタノール固定化剤１４０μＬ＋フルオレセイン染料１４０μＬ＋チアジン染料１４０μＬ＋リンス液２８０μＬ＝試薬７００μＬ）。いくつかの実施形態においては、大体７００μＬの液体が標本処理の間に使用され得る。たとえば、標本の処理において使用される液体の量は、およそ５６０μＬ（たとえばリンス段階を１回除外することにより）とすることができる。

通常、消費される液体の合計容量は、５００μＬ以上（たとえば、５２０μＬ以上、５４０μＬ以上、５６０μＬ以上、５８０μＬ以上、６００μＬ以上、６５０μＬ以上、７００μＬ以上、７５０μＬ以上）および／または２ｍＬ以下（たとえば、１．５ｍＬ以下、１．４ｍＬ以下、１．３ｍＬ以下、１．２ｍＬ以下、１．１ｍＬ以下、１．０ｍＬ以下、９００μＬ以下）である。

図２３および実施例１によれば、標本調製プロセスは、１分を少し上回る時間（たとえば、固定段階の間に１３．５秒経過＋フルオレセイン染色段階の間に１１秒経過＋チアジン染色段階の間に１２秒経過＋リンス段階の間に２３秒経過＋乾燥段階の間に８秒経過＝合計経過時間６７．５秒）で完了する。ある実施形態においては、標本調製は、実施例２に示すようにおよそ６７．５秒で完了することができる。たとえば、標本処理は、１８０秒以下（たとえば、１５０秒以下、１２０秒以下、９０秒以下、８０秒以下、７０秒以下、６０秒以下、５０秒以下、または４０秒以下）で完了することができる。

さらに、上述の典型的なプロセスは、単一の標本についての処理時間を説明しているが、複数の基板を処理するためのシステムおよび方法（たとえば、２つの基板を処理するように構成されている図７の機構１、および／または３つ以上の基板を処理するように構成されているシステム）では、１時間に１００以上の標本を処理することが可能である（たとえば、１時間に６０標本と１２０標本の間）。本明細書に開示されるシステムおよび方法の実験室での使用は、結果として、標本当たりでより速い処理能力をもたらし、一方、液体（たとえば、固定化液、染色液、およびリンス液）の消費量は、従来の自動および手動標本調製技術と比較して減少される。

実施例３
表１における各一連の実験について、血液サンプルは、たとえば、米国特許公開第２００９０２６９７９９号公報に記載されているサンプル調製技術を用いて調製した。つぎに、サンプルを、一般的に実施例１にしたがった固定化、染色、およびリンスにより処理した。流速は、固定液、染色液、およびリンス液の各々について２秒間、１１５μＬ／ｓであった。以下に挙げる実験の各セットについて、基板（たとえば、顕微鏡スライド）は、少なくとも５つの血液サンプルから調製した。つぎに、処理したサンプルを手動で評価し、サンプル染色および調製（たとえば、染色の全体的な均一性、色、細胞特徴の区別（differentiation of cellular features）、バックグラウンドにおけるデブリの有無、など）の質を顕微鏡下で少なくとも１０×の倍率で評価した。手動の評価は、サンプル標本の染色およびサンプル調製の質をコントロール標本の染色およびサンプル調製の質に対して比較するために行った。典型的には、「継続制御条件（rolling control condition）」を採用し、最適な染色およびサンプル調製品を提供する先の処方を、新しい適応を様々な処方と比較するためのコントロールとして用いた。したがって（以下に特段の規定がない限り）、表１の任意の行は、典型的にはつぎの行にまとめられた一連の実験のコントロール条件を表す。限られた数のサンプルであるため、また手動の検査の後、仮にあるとすれば、標本に存在する５つのタイプのＷＢＣｓを分類するための画像装置の能力に処方がどのように影響を与えるかを調べるためにサンプルは米国特許公開第２００９０２６９７９９号公報に記載されたような画像装置で処理された。これらの結果を表２に報告する。

表２に挙げるＷＢＣ分類結果を、サンプル中のＡＢＣｓの手動分類に対して、本明細書においてそのすべてを組み込んでいる米国特許公開第２００９０２６９７９９号公報に記載されているような自動機械ＷＢＣ分類結果と比較する。その百分率は、サンプル中のＷＢＣｓの手動検査および分類と比較して自動機械分類の正確度を反映する。３つの実験（２−１、２−２および２−３）それぞれについて、そこで最新の固定液および染色液を用いて調製した最低１０個のサンプルを、システム上で処理し、各サンプル中のＷＢＣｓの手動検査と比較した。ＷＢＣｓ区別から構成される各手動検査は、サンプル中の少なくとも１００ＷＢＣｓに行われた。

実施例４
数十の市販の血液固定および染色製品を、本明細書に記載するシステムにおいて検査した。そのような製品は、一般的に、本明細書に記載する細胞同定、計数、および分類システムでの使用に適していなかった。たとえば、これらの製品で達成される染色の暗度を本明細書に記載する処方で達成されるものと比較した。概して、調べた製品は、本明細書に記載する処方のようには最適なサンプル調製結果を生み出さなかった（たとえば、サンプルは濃く、または均一なものとして染色されなかった）。市販の製品は、本明細書に記載する処方と比較した場合、たとえば、薄く染色された核および細胞質を生じた。

他の実施形態
本発明は、詳細な説明と併せて説明されているので、上記説明は、例示を意図したものであり、開示の範囲を限定するものではなく、開示の範囲は添付の特許請求の範囲により規定される。その他の態様、利点、および改変は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。

特許出願、特許公報および特許などの本明細書に引用されたすべての参考資料は、それらの全体として参照することにより本明細書に組み込まれる。

Claims (60)

1. エオシンＹ；
   緩衝剤；
   界面活性剤；
   塩化ナトリウム；
   エチレングリコール；および
   水
   を含む細胞染色液。
2. 抗菌剤をさらに含む請求項１記載の細胞染色液。
3. ０．２〜５０ｐｐｍの抗菌剤を含む請求項２記載の細胞染色液。
4. 抗菌剤が、塩化ベンザルコニウム、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、ＰｒｏＣｌｉｎ（登録商標）、アジド、メルチオレート、抗生物質、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される請求項２記載の細胞染色液。
5. 抗菌剤が、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンを含む請求項２記載の細胞染色液。
6. 抗菌剤がＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）である請求項５記載の細胞染色液。
7. 酢酸をさらに含む請求項１記載の細胞染色液。
8. ０．５〜５容量％のエチレングリコールを含む請求項１記載の細胞染色液。
9. ５〜８のｐＨ、および５〜２５０ｍＭの緩衝剤濃度を有する請求項１記載の細胞染色液。
10. 緩衝剤が、ビス−トリス、リン酸、ＨＥＰＥＳ、ＭＥＳ、トリスおよびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される請求項１記載の細胞染色液。
11. ５．８〜６．２のｐＨ、および５ｍＭ〜２５０ｍＭのビス−トリス緩衝液濃度を有する請求項１０記載の細胞染色液。
12. ０．０５〜０．５容量％の界面活性剤を含む請求項１記載の細胞染色液。
13. ０．０５〜０．３容量％の界面活性剤を含む請求項１２記載の細胞染色液。
14. 界面活性剤が、非イオン性、カチオン性、アニオン性および両性イオン性界面活性剤からなる群より選択される請求項１記載の細胞染色液。
15. 非イオン性界面活性剤がポリソルベート２０である請求項１４記載の細胞染色液。
16. ０．５ｍＬ／Ｌ〜２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０を含む請求項１５記載の細胞染色液。
17. １〜２０ｇ／Ｌの塩化ナトリウムを含む請求項１記載の細胞染色液。
18. 溶液の水での１：５００希釈物が、５１０〜５３０ｎｍのピーク波長で０．１〜１のＵＶ吸光度を有する請求項１記載の細胞染色液。
19. 界面活性剤が非イオン性である請求項１記載の細胞染色液。
20. ０．５ｇ／Ｌ〜５．０ｇ／ＬのエオシンＹ；
    ５ｍＭ〜２５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；
    ０．５ｍＬ／Ｌ〜２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；
    １ｇ／Ｌ〜２０ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；
    ５ｍＬ／Ｌ〜５０ｍＬ／Ｌのエチレングリコール；
    ０．２ｐｐｍ〜５０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；
    酢酸；および
    水
    を含み、ｐＨ５．８〜６．２である細胞染色液。
21. アズールＢ；
    メチレンブルー；
    緩衝剤；
    界面活性剤；
    塩化ナトリウム；および
    水
    を含む細胞染色液。
22. 抗菌剤をさらに含む請求項２１記載の細胞染色液。
23. ０．２〜５０ｐｐｍの抗菌剤を含む請求項２２記載の細胞染色液。
24. 抗菌剤が、塩化ベンザルコニウム、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、ＰｒｏＣｌｉｎ（登録商標）、アジド、メルチオレート、抗生物質およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される請求項２２記載の細胞染色液。
25. 抗菌剤が、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンを含む請求項２２記載の細胞染色液。
26. 抗菌剤がＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）である請求項２５記載の細胞染色液。
27. 酢酸をさらに含む請求項２１記載の細胞染色液。
28. ０．２５〜１ｇ／ＬのアズールＢを含む請求項２１記載の細胞染色液。
29. ０．２５〜１ｇ／Ｌのメチレンブルーを含む請求項２１記載の細胞染色液。
30. ５〜８のｐＨ、および５ｍＭ〜２５０ｍＭの緩衝剤濃度を有する請求項２１記載の細胞染色液。
31. 緩衝剤が、ビス−トリス、リン酸、ＨＥＰＥＳ、ＭＥＳ、トリスおよびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される請求項２１記載の細胞染色液。
32. ６．８〜７．２のｐＨ、および２５ｍＭ〜１００ｍＭのビス−トリス緩衝液濃度を有する請求項３１記載の細胞染色液。
33. ０．０５〜０．５容量％の界面活性剤を含む請求項２１記載の細胞染色液。
34. ０．０５〜０．３容量％の界面活性剤を含む請求項３３記載の細胞染色液。
35. 界面活性剤が、非イオン性、カチオン性、アニオン性および両性イオン性界面活性剤からなる群より選択される請求項２１記載の細胞染色液。
36. 非イオン性界面活性剤がポリソルベート２０である請求項３５記載の細胞染色液。
37. ０．５ｍＬ／Ｌ〜２ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０を含む請求項３６記載の細胞染色液。
38. １〜２０ｇ／Ｌの塩化ナトリウムを含む請求項２１記載の細胞染色液。
39. 溶液の水での１：１０００希釈物が、６４０〜６６０ｎｍのピーク波長で０．１〜１のＵＶ吸光度を有する請求項２１記載の細胞染色液。
40. 界面活性剤が非イオン性である請求項２１記載の細胞染色液。
41. ０．２５ｇ／Ｌ〜２．５ｇ／ＬのアズールＢ；
    ０．２５ｇ／Ｌ〜２．５ｇ／Ｌのメチレンブルー；
    ５ｍＭ〜２５０ｍＭのビス−トリス緩衝液；
    ０．５ｍＬ／Ｌ〜２．０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；
    １．０ｇ／Ｌ〜２０ｇ／Ｌ塩化ナトリウム；および
    ０．２ｐｐｍ〜５０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；
    酢酸；および
    水
    を含み、ｐＨが６．８〜７．２である細胞染色液。
42. ポリエチレングリコール；
    緩衝剤；
    界面活性剤；
    メタノール；および
    水
    を含む自動標本調製装置用のリンス液。
43. 抗菌剤をさらに含む請求項４２記載のリンス液。
44. ０．２〜５０ｐｐｍの抗菌剤を含む請求項４３記載のリンス液。
45. 抗菌剤が、塩化ベンザルコニウム、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、ＰｒｏＣｌｉｎ（登録商標）、アジド、メルチオレート、抗生物質およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される請求項４３記載のリンス液。
46. 抗菌剤が、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンを含む請求項４３記載のリンス液。
47. 抗菌剤がＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）である請求項４６記載のリンス液。
48. ０．２〜２ｇ／Ｌのポリエチレングリコールを含む請求項４２記載のリンス液。
49. ５〜８のｐＨ、および１ｍＭ〜５０ｍＭの緩衝剤濃度を有する請求項４２記載のリンス液。
50. 緩衝剤が、ビス−トリス緩衝液、リン酸、ＨＥＰＥＳ、ＭＥＳ、トリスおよびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される請求項４２記載のリンス液。
51. ０．０１〜０．１容量％の界面活性剤を含む請求項４２記載のリンス液。
52. ０．０５０１〜０．３０６容量％の界面活性剤を含む請求項５１記載のリンス液。
53. 界面活性剤が、非イオン性、カチオン性、アニオン性および両性イオン性界面活性剤からなる群より選択される請求項４２記載のリンス液。
54. 非イオン性界面活性剤がポリソルベート２０である請求項５３記載のリンス液。
55. ０．１ｍＬ／Ｌ〜０．４ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０を含む請求項５４記載のリンス液。
56. ９〜１１ｍＬ／Ｌのメタノールを含む請求項４２記載のリンス液。
57. 界面活性剤が非イオン性である請求項４２記載のリンス液。
58. ０．２ｇ／Ｌ〜１０ｇ／Ｌのポリエチレングリコール；
    １ｍＭ〜２５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液；
    ０．１０ｍＬ／Ｌ〜２．４０ｍＬ／Ｌのポリソルベート２０；
    ０．０４ｐｐｍ〜５０ｐｐｍのＰｒｏＣｌｉｎ３００（登録商標）；
    ９ｍＬ／Ｌ〜２００ｍＬ／Ｌメタノール；および
    水
    を含み、ｐＨが６．６〜７．０であるリンス液。
59. 細胞固定液；
    請求項２０記載の細胞染色液；
    請求項４１記載の細胞染色液：および
    請求項５８記載のリンス液
    を含む標本調製キット。
60. 細胞固定液で標本を処理すること、
    請求項２０記載の細胞染色液で標本を処理すること、
    請求項４１記載の細胞染色液で標本を処理すること、および
    請求項５８記載のリンス液で標本を処理すること
    を含む標本を調製する方法。

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