JPH07110328A - 染色試薬とその調整方法およびその使用方法 - Google Patents
染色試薬とその調整方法およびその使用方法Info
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- JPH07110328A JPH07110328A JP5252699A JP25269993A JPH07110328A JP H07110328 A JPH07110328 A JP H07110328A JP 5252699 A JP5252699 A JP 5252699A JP 25269993 A JP25269993 A JP 25269993A JP H07110328 A JPH07110328 A JP H07110328A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 サンプル中の有形成分の視認性に優れ、サン
プル中の蛋白質、糖、糖蛋白質などの溶解物の凝集を引
き起こさない有用性の高い染色試薬を提供する。 【構成】 約０．２〜１０．０×１／１０2ｍｏｌ／ｌ
のエバンスブル−１容量と、約０．２〜１０．０×１／
１０2ｍｏｌ／ｌのエリトロシン約０．５〜２．０容量
とを混合し、前記混合溶液に約０．０１〜１．０％の濃
度となるようにアジ化ナトリウムまたはパラハイドロキ
シフェニル酢酸またはデヒドロ酢酸あるいはエチレンジ
アミンテトラ硫酸のいずれかを添加し、溶媒として１／
３０〜１／５ｍｏｌ／ｌのリン酸液またはコハク酸液あ
るいはトリス酸液のいずれかを用い、ｐＨが５．７〜
７．９になるようしたものである。
プル中の蛋白質、糖、糖蛋白質などの溶解物の凝集を引
き起こさない有用性の高い染色試薬を提供する。 【構成】 約０．２〜１０．０×１／１０2ｍｏｌ／ｌ
のエバンスブル−１容量と、約０．２〜１０．０×１／
１０2ｍｏｌ／ｌのエリトロシン約０．５〜２．０容量
とを混合し、前記混合溶液に約０．０１〜１．０％の濃
度となるようにアジ化ナトリウムまたはパラハイドロキ
シフェニル酢酸またはデヒドロ酢酸あるいはエチレンジ
アミンテトラ硫酸のいずれかを添加し、溶媒として１／
３０〜１／５ｍｏｌ／ｌのリン酸液またはコハク酸液あ
るいはトリス酸液のいずれかを用い、ｐＨが５．７〜
７．９になるようしたものである。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、赤血球、白血球、上皮
細胞などの生体試料染色用の染色試薬に関するもので、
特に尿のように赤血球、白血球、上皮細胞などの細胞成
分のほか同一試料内に色素の沈殿物、尿中成分の析出・
凝集物、粉塵混入物などの夾雑物と識別が難しい細胞外
有形成分、すなわち結晶、円柱などを含む生体試料を染
色するような染色試薬とその調製方法およびその使用方
法に関するものである。
細胞などの生体試料染色用の染色試薬に関するもので、
特に尿のように赤血球、白血球、上皮細胞などの細胞成
分のほか同一試料内に色素の沈殿物、尿中成分の析出・
凝集物、粉塵混入物などの夾雑物と識別が難しい細胞外
有形成分、すなわち結晶、円柱などを含む生体試料を染
色するような染色試薬とその調製方法およびその使用方
法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】本発明の染色試薬および調製方法に最も
近い公知例としては、検査と技術 医学書院刊 ｖｏ
ｌ．１０ Ｎｏ．９ （１９８２：９） ｐ８４６〜ｐ
８５０、特開平５−４０１１８号公報等記載の技術が挙
げられる。従来の尿沈渣染色試薬には、上記の検査と技
術 医学書院刊 ｖｏｌ．１０Ｎｏ．９（１９８２：
９） ｐ８４６〜ｐ８５０、特開平５−４０１１８号公
報等記載の技術にもあるように、ステルンハイマー（Ｓ
ｔｅｒｎｈｅｉｍｅｒ）染色試薬、ステルンハイマー変
法（Ｎｅｗ Ｓｔｅｒｎｈｅｉｍｅｒ）染色試薬、ステ
ルンハイマー・マルビン（ＳｔｅｒｎｈｅｉｍｅｒーＭ
ａｌｂｉｎ）染色試薬などが存在する。
近い公知例としては、検査と技術 医学書院刊 ｖｏ
ｌ．１０ Ｎｏ．９ （１９８２：９） ｐ８４６〜ｐ
８５０、特開平５−４０１１８号公報等記載の技術が挙
げられる。従来の尿沈渣染色試薬には、上記の検査と技
術 医学書院刊 ｖｏｌ．１０Ｎｏ．９（１９８２：
９） ｐ８４６〜ｐ８５０、特開平５−４０１１８号公
報等記載の技術にもあるように、ステルンハイマー（Ｓ
ｔｅｒｎｈｅｉｍｅｒ）染色試薬、ステルンハイマー変
法（Ｎｅｗ Ｓｔｅｒｎｈｅｉｍｅｒ）染色試薬、ステ
ルンハイマー・マルビン（ＳｔｅｒｎｈｅｉｍｅｒーＭ
ａｌｂｉｎ）染色試薬などが存在する。
【０００３】前記ステルンハイマー染色試薬は、２％ナ
ショナルファーストブルー（Ｎａｔｉｏｎａｌ ｆａｓ
ｔ ｂｌｕｅ）水溶液のＩ液と、１．５％ピロニンＢ
（ＰｙｒｏｎｉｎＢ）水溶液のII液とからなり、この染
色試薬を調製するには、Ｉ液とII液を１：１の割合で混
合していた。また、ステルンハイマー変法染色試薬は、
２％アルシアンブルー（Ａｌｃｉａｎ ｂｌｕｅ）水溶
液のＩ液と、１．５％ピロニンＢ（ＰｙｒｏｎｉｎＢ）
水溶液のII液とからなり、この染色試薬を調製するに
は、Ｉ液とII液を２：１の割合で混合していた。
ショナルファーストブルー（Ｎａｔｉｏｎａｌ ｆａｓ
ｔ ｂｌｕｅ）水溶液のＩ液と、１．５％ピロニンＢ
（ＰｙｒｏｎｉｎＢ）水溶液のII液とからなり、この染
色試薬を調製するには、Ｉ液とII液を１：１の割合で混
合していた。また、ステルンハイマー変法染色試薬は、
２％アルシアンブルー（Ａｌｃｉａｎ ｂｌｕｅ）水溶
液のＩ液と、１．５％ピロニンＢ（ＰｙｒｏｎｉｎＢ）
水溶液のII液とからなり、この染色試薬を調製するに
は、Ｉ液とII液を２：１の割合で混合していた。
【０００４】前記ステルンハイマー・マルビン染色試薬
は、クリスタルバイオレット３．０ｇを９５％エチルア
ルコール２０．０ｍｌに溶解し、これにシュウ酸アンモ
ニウム０．８ｇを添加して精製水８０．０ｍｌで希釈し
てなるI液と、サフラニンＯ０．２５ｇを９５％エチル
アルコール１０．０ｍｌに溶解し、これを精製水１０
０．０ｍｌで希釈してなるII液とからなり、この染色試
薬を調製するには、Ｉ液とII液を３：９７の割合で混合
していた。
は、クリスタルバイオレット３．０ｇを９５％エチルア
ルコール２０．０ｍｌに溶解し、これにシュウ酸アンモ
ニウム０．８ｇを添加して精製水８０．０ｍｌで希釈し
てなるI液と、サフラニンＯ０．２５ｇを９５％エチル
アルコール１０．０ｍｌに溶解し、これを精製水１０
０．０ｍｌで希釈してなるII液とからなり、この染色試
薬を調製するには、Ｉ液とII液を３：９７の割合で混合
していた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】上記従来のステルンハ
イマー染色試薬およびステルンハイマー変法染色試薬を
用いた尿沈渣の染色法は、尿中有形成分の視認性に優れ
た有用性の高い超生体染色法である。しかし、前記染色
試薬は、その構成色素分子内の電荷分布が偏在する有極
性分子であるため尿との混和時、尿中蛋白質、糖、糖蛋
白質などの溶解物の凝集が引き起こされ、これを円柱と
見誤ったり、凝集塊の中に細胞、円柱、血球などが隠さ
れた場合、前記各種有形成分を見落とすことがある。さ
らに、前記各種有形成分を画像処理する場合、画像処理
装置の誤動作の原因となるという大きな課題があった。
イマー染色試薬およびステルンハイマー変法染色試薬を
用いた尿沈渣の染色法は、尿中有形成分の視認性に優れ
た有用性の高い超生体染色法である。しかし、前記染色
試薬は、その構成色素分子内の電荷分布が偏在する有極
性分子であるため尿との混和時、尿中蛋白質、糖、糖蛋
白質などの溶解物の凝集が引き起こされ、これを円柱と
見誤ったり、凝集塊の中に細胞、円柱、血球などが隠さ
れた場合、前記各種有形成分を見落とすことがある。さ
らに、前記各種有形成分を画像処理する場合、画像処理
装置の誤動作の原因となるという大きな課題があった。
【０００６】また、ステルンハイマー・マルビン染色試
薬を用いた尿沈渣の染色法は、上記染色法より尿中有形
成分の視認性に劣り、かつ、ときとしてチロジン様の針
状の結晶を生じ、尿中由来の結晶と見誤ってしまうとい
う大きな課題を有していた。また、赤血球溶血作用によ
る赤血球数の算定が不正確になるという課題があった。
薬を用いた尿沈渣の染色法は、上記染色法より尿中有形
成分の視認性に劣り、かつ、ときとしてチロジン様の針
状の結晶を生じ、尿中由来の結晶と見誤ってしまうとい
う大きな課題を有していた。また、赤血球溶血作用によ
る赤血球数の算定が不正確になるという課題があった。
【０００７】そこで本発明は、上記技術的課題を解決す
るためになされたもので、尿中蛋白質、糖、糖蛋白質な
どの溶解物の凝集を引き起さず、チロジン様の結晶を生
じさせず、染色液起因の赤血球溶血作用がなく、尿中有
形成分の視認性にすぐれ、赤血球数の算定が正確であ
り、画像処理にも適する染色像が得られる染色試薬とそ
の調整方法およびその使用方法を提供することを目的と
する。
るためになされたもので、尿中蛋白質、糖、糖蛋白質な
どの溶解物の凝集を引き起さず、チロジン様の結晶を生
じさせず、染色液起因の赤血球溶血作用がなく、尿中有
形成分の視認性にすぐれ、赤血球数の算定が正確であ
り、画像処理にも適する染色像が得られる染色試薬とそ
の調整方法およびその使用方法を提供することを目的と
する。
【０００８】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に本発明に係る生体試料の染色試薬は、細胞・組織染色
用色素とｐＨ緩衝液と安定剤とからなる生体試料の染色
試薬であって、前記細胞・組織染色用色素は、無極性分
子の複数の染色用色素からなり、相互に混和しても反応
して凝集・沈殿を起さず、かつ、前記生体試料中の糖、
蛋白質、糖蛋白質などの溶解物を析出、凝集させず、か
つ、複数の染色対象物については、その種類ごとに異な
った色調または染色強度により染め分け、同一の対象物
については、その構成物ごとに異なった色調あるいは染
色強度で染め分けるようにしたことを特徴とする。
に本発明に係る生体試料の染色試薬は、細胞・組織染色
用色素とｐＨ緩衝液と安定剤とからなる生体試料の染色
試薬であって、前記細胞・組織染色用色素は、無極性分
子の複数の染色用色素からなり、相互に混和しても反応
して凝集・沈殿を起さず、かつ、前記生体試料中の糖、
蛋白質、糖蛋白質などの溶解物を析出、凝集させず、か
つ、複数の染色対象物については、その種類ごとに異な
った色調または染色強度により染め分け、同一の対象物
については、その構成物ごとに異なった色調あるいは染
色強度で染め分けるようにしたことを特徴とする。
【０００９】複数の染色用色素は、超生体染色に用いら
れるアゾ染料とキサンテン染料とであることを特徴とす
る。アゾ染料は、エバンスブルーまたはトリパンブルー
のいずれかであることを特徴とする。キサンテン染料
は、エリトロシンまたはフロキシンあるいはエオシンの
いずれかであることを特徴とする。ｐＨ緩衝液は、リン
酸液またはコハク酸液あるいはトリス酸液のいずれかで
あることを特徴とする。安定剤は、抗菌剤であることを
特徴とする。前記抗菌剤は、アジ化ナトリウム物または
パラハイドロキシフェニル酢酸またはデヒドロ酢酸ある
いはエチレンジアミンテトラ硫酸のいずれかであること
を特徴とする。
れるアゾ染料とキサンテン染料とであることを特徴とす
る。アゾ染料は、エバンスブルーまたはトリパンブルー
のいずれかであることを特徴とする。キサンテン染料
は、エリトロシンまたはフロキシンあるいはエオシンの
いずれかであることを特徴とする。ｐＨ緩衝液は、リン
酸液またはコハク酸液あるいはトリス酸液のいずれかで
あることを特徴とする。安定剤は、抗菌剤であることを
特徴とする。前記抗菌剤は、アジ化ナトリウム物または
パラハイドロキシフェニル酢酸またはデヒドロ酢酸ある
いはエチレンジアミンテトラ硫酸のいずれかであること
を特徴とする。
【００１０】上記目的を達成するために本発明に係る生
体試料の染色試薬の調整法は、約０．２〜１０．０×１
／１０2ｍｏｌ／ｌのエバンスブルーまたはトリパンブ
ルーのいずれか１容量と、約０．２〜１０．０×１／１
０2ｍｏｌ／ｌのエリトロシン約０．５〜２．０容量と
を混合し、前記混合溶液に約０．０１〜１．０％の濃度
となるようにアジ化ナトリウムまたはパラハイドロキシ
フェニル酢酸またはデヒドロ酢酸あるいはエチレンジア
ミンテトラ硫酸のいずれかを混合し、溶媒として１／３
０〜１／５ｍｏｌ／ｌのリン酸液またはコハク酸液ある
いはトリス酸液のいずれかを用い、ｐＨが５．７〜７．
９になるようにすることを特徴とする。
体試料の染色試薬の調整法は、約０．２〜１０．０×１
／１０2ｍｏｌ／ｌのエバンスブルーまたはトリパンブ
ルーのいずれか１容量と、約０．２〜１０．０×１／１
０2ｍｏｌ／ｌのエリトロシン約０．５〜２．０容量と
を混合し、前記混合溶液に約０．０１〜１．０％の濃度
となるようにアジ化ナトリウムまたはパラハイドロキシ
フェニル酢酸またはデヒドロ酢酸あるいはエチレンジア
ミンテトラ硫酸のいずれかを混合し、溶媒として１／３
０〜１／５ｍｏｌ／ｌのリン酸液またはコハク酸液ある
いはトリス酸液のいずれかを用い、ｐＨが５．７〜７．
９になるようにすることを特徴とする。
【００１１】上記目的を達成するために本発明に係る生
体試料の染色試薬の使用方法は、細胞・組織染色用色素
とｐＨ緩衝液と安定剤とからなる染色試薬に固定化剤を
添加して使用することを特徴とする。約０．２〜１０．
０×１／１０2ｍｏｌ／ｌのエバンスブルーまたはトリ
パンブルーのいずれか１容量と、約０．２〜１０．０×
１／１０2ｍｏｌ／ｌのフロキシン約０．５〜２．０容
量とを混合し、前記混合溶液に約０．０１〜１．０％の
濃度となるようにアジ化ナトリウムまたはパラハイドロ
キシフェニル酢酸またはデヒドロ酢酸あるいはエチレン
ジアミンテトラ硫酸のいずれかを混合し、溶媒として１
／３０〜１／５ｍｏｌ／ｌのリン酸液またはコハク酸液
あるいはトリス酸液のいずれかを用い、ｐＨが５．７〜
７．９になるように調整した染色試薬に、固定化剤とし
て、０．０２〜５．０％と濃度となるようにグルタール
アルデヒドまたはホルムアルデヒドまたはパラホルムア
ルデヒドのいずれかを添加して使用することを特徴とす
る。
体試料の染色試薬の使用方法は、細胞・組織染色用色素
とｐＨ緩衝液と安定剤とからなる染色試薬に固定化剤を
添加して使用することを特徴とする。約０．２〜１０．
０×１／１０2ｍｏｌ／ｌのエバンスブルーまたはトリ
パンブルーのいずれか１容量と、約０．２〜１０．０×
１／１０2ｍｏｌ／ｌのフロキシン約０．５〜２．０容
量とを混合し、前記混合溶液に約０．０１〜１．０％の
濃度となるようにアジ化ナトリウムまたはパラハイドロ
キシフェニル酢酸またはデヒドロ酢酸あるいはエチレン
ジアミンテトラ硫酸のいずれかを混合し、溶媒として１
／３０〜１／５ｍｏｌ／ｌのリン酸液またはコハク酸液
あるいはトリス酸液のいずれかを用い、ｐＨが５．７〜
７．９になるように調整した染色試薬に、固定化剤とし
て、０．０２〜５．０％と濃度となるようにグルタール
アルデヒドまたはホルムアルデヒドまたはパラホルムア
ルデヒドのいずれかを添加して使用することを特徴とす
る。
【００１２】また、細胞・組織染色用色素とｐＨ緩衝液
と安定剤とからなる染色試薬に固定化剤と界面活性剤と
を添加して使用することを特徴とする。約０．２〜１
０．０×１／１０2ｍｏｌ／ｌのエバンスブルー１容量
と、約０．２〜１０．０×１／１０2ｍｏｌ／ｌのエオ
シン約０．５〜２．０容量とを混合し、前記混合溶液に
約０．０１〜１．０％の濃度となるようにアジ化ナトリ
ウムまたはパラハイドロキシフェニル酢酸またはデヒド
ロ酢酸あるいはエチレンジアミンテトラ硫酸のいずれか
を混合し、溶媒として１／３０〜１／５ｍｏｌ／ｌのリ
ン酸液またはコハク酸液あるいはトリス酸液のいずれか
を用い、ｐＨが５．７〜７．９になるように調整した染
色試薬に、固定化剤として、０．０２〜５．０％と濃度
となるようにグルタールアルデヒドまたはホルムアルデ
ヒドまたはパラホルムアルデヒドのいずれかと、界面活
性剤として、０．０１〜０．５％の濃度となるようにド
デシル硫酸ナトリウムとを添加して使用することを特徴
とする。
と安定剤とからなる染色試薬に固定化剤と界面活性剤と
を添加して使用することを特徴とする。約０．２〜１
０．０×１／１０2ｍｏｌ／ｌのエバンスブルー１容量
と、約０．２〜１０．０×１／１０2ｍｏｌ／ｌのエオ
シン約０．５〜２．０容量とを混合し、前記混合溶液に
約０．０１〜１．０％の濃度となるようにアジ化ナトリ
ウムまたはパラハイドロキシフェニル酢酸またはデヒド
ロ酢酸あるいはエチレンジアミンテトラ硫酸のいずれか
を混合し、溶媒として１／３０〜１／５ｍｏｌ／ｌのリ
ン酸液またはコハク酸液あるいはトリス酸液のいずれか
を用い、ｐＨが５．７〜７．９になるように調整した染
色試薬に、固定化剤として、０．０２〜５．０％と濃度
となるようにグルタールアルデヒドまたはホルムアルデ
ヒドまたはパラホルムアルデヒドのいずれかと、界面活
性剤として、０．０１〜０．５％の濃度となるようにド
デシル硫酸ナトリウムとを添加して使用することを特徴
とする。
【００１３】また、約０．２〜１０．０×１／１０2ｍ
ｏｌ／ｌのトリパンブルー１容量と、約０．２〜１０．
０×１／１０2ｍｏｌ／ｌのエオシン約０．５〜２．０
容量とを混合し、前記混合溶液に約０．０１〜１．０％
の濃度となるようにアジ化ナトリウムまたはパラハイド
ロキシフェニル酢酸またはデヒドロ酢酸あるいはエチレ
ンジアミンテトラ硫酸のいずれかを混合し、溶媒として
１／３０〜１／５ｍｏｌ／ｌのリン酸液またはコハク酸
液あるいはトリス酸液のいずれかを用い、ｐＨが５．７
〜７．９になるように調整した染色試薬に、固定化剤と
して、０．０２〜５．０％と濃度となるようにグルター
ルアルデヒドまたはホルムアルデヒドまたはパラホルム
アルデヒドのいずれかと、界面活性剤として、０．０１
〜０．５％の濃度となるようにドデシル硫酸ナトリウム
とを添加して使用することを特徴とする。染色対象の生
体試料が、尿沈渣有形成分であることを特徴とする。
ｏｌ／ｌのトリパンブルー１容量と、約０．２〜１０．
０×１／１０2ｍｏｌ／ｌのエオシン約０．５〜２．０
容量とを混合し、前記混合溶液に約０．０１〜１．０％
の濃度となるようにアジ化ナトリウムまたはパラハイド
ロキシフェニル酢酸またはデヒドロ酢酸あるいはエチレ
ンジアミンテトラ硫酸のいずれかを混合し、溶媒として
１／３０〜１／５ｍｏｌ／ｌのリン酸液またはコハク酸
液あるいはトリス酸液のいずれかを用い、ｐＨが５．７
〜７．９になるように調整した染色試薬に、固定化剤と
して、０．０２〜５．０％と濃度となるようにグルター
ルアルデヒドまたはホルムアルデヒドまたはパラホルム
アルデヒドのいずれかと、界面活性剤として、０．０１
〜０．５％の濃度となるようにドデシル硫酸ナトリウム
とを添加して使用することを特徴とする。染色対象の生
体試料が、尿沈渣有形成分であることを特徴とする。
【００１４】本発明に係る尿沈渣染色用試薬の組成とそ
の調製方法とを決定するにあたって下記の実験を行なっ
た。各実験結果は表１〜２、図１〜４に示した。 〔実験例 １〕まず、細胞・組織染色用色素を中心に、
分子内の電荷が偏在していないと推察される構造式を持
つ色素約４０種類をアジン系色素、キサンテン系色素、
アゾ系色素、チアジン系色素、トリフェニルメタン系色
素等を中心に選択した。
の調製方法とを決定するにあたって下記の実験を行なっ
た。各実験結果は表１〜２、図１〜４に示した。 〔実験例 １〕まず、細胞・組織染色用色素を中心に、
分子内の電荷が偏在していないと推察される構造式を持
つ色素約４０種類をアジン系色素、キサンテン系色素、
アゾ系色素、チアジン系色素、トリフェニルメタン系色
素等を中心に選択した。
【００１５】そして、６．３×１／１０3ｍｏｌ／ｌに
調製した染色液８０μｌに健常人尿２００μｌを添加
し、尿中蛋白質、糖、糖蛋白質などの凝集が起こるか、
顕微鏡観察にて確認した。その結果、凝集を引き起こさ
ない色素として〔表１〕に示す１３種類（赤系６種類、
青系７種類）の色素を得た。
調製した染色液８０μｌに健常人尿２００μｌを添加
し、尿中蛋白質、糖、糖蛋白質などの凝集が起こるか、
顕微鏡観察にて確認した。その結果、凝集を引き起こさ
ない色素として〔表１〕に示す１３種類（赤系６種類、
青系７種類）の色素を得た。
【００１６】〔表１〕は、細胞・組織染色用色素を検討
した結果、尿中溶解物の凝集能がないことが明らかにな
った色素のリストである。なお、Ｃ．Ｉ．Ｎｏ．とは、
カラーインデックスナンバーを意味する。
した結果、尿中溶解物の凝集能がないことが明らかにな
った色素のリストである。なお、Ｃ．Ｉ．Ｎｏ．とは、
カラーインデックスナンバーを意味する。
【表１】
【００１７】〔実験例 ２〕つぎに、〔表２〕に示すマ
トリクスに従って、赤系の色素と青系の色素の組合せに
よる凝集による沈殿物発生の有無を顕微鏡観察にて確認
した。そして、６．３×１／１０3ｍｏｌ／ｌに調製し
た染色液を５０μｌづつ混合した結果、表中○または◎
で示す２５通りの色素組み合わせによる沈殿物、または
色素固有の結晶が発生しないことを確認した。
トリクスに従って、赤系の色素と青系の色素の組合せに
よる凝集による沈殿物発生の有無を顕微鏡観察にて確認
した。そして、６．３×１／１０3ｍｏｌ／ｌに調製し
た染色液を５０μｌづつ混合した結果、表中○または◎
で示す２５通りの色素組み合わせによる沈殿物、または
色素固有の結晶が発生しないことを確認した。
【００１８】〔表２〕は、複数の色素の組み合わせにお
ける沈殿物の発生の有無を示すもので、沈殿物を発生す
るものは×、発生しないものは○、発生せず、かつ、細
胞の染色性が良好なものは◎の表記とした。
ける沈殿物の発生の有無を示すもので、沈殿物を発生す
るものは×、発生しないものは○、発生せず、かつ、細
胞の染色性が良好なものは◎の表記とした。
【表２】
【００１９】さらに、２５通りの組合せから細胞の染色
性の良い組合せを得るため、染色液８０μｌと健常人尿
２００μｌを混合し、上皮細胞の核と細胞質の染めわけ
ができる組合せを検討した。その結果、上記〔表２〕中
において、◎で示す４通りの組合せで良好な染色性を得
た。
性の良い組合せを得るため、染色液８０μｌと健常人尿
２００μｌを混合し、上皮細胞の核と細胞質の染めわけ
ができる組合せを検討した。その結果、上記〔表２〕中
において、◎で示す４通りの組合せで良好な染色性を得
た。
【００２０】図１は、細胞質の相対色調と核の相対色調
とを示す線図である。図１においては、エバンスブルー
（Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ）とエリトロシン（Ｅｒｙｔｈ
ｒｏｓｉｎｅ）の組み合わせで染色したときの上皮細胞
の核と細胞質の色調を測光スポット径約２μｍの顕微分
光光度計で測定し、エバンスブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌ
ｕｅ）のピークとエリトロシン（Ｅｒｙｔｈｒｏｓｉｎ
ｅ）のピークの比を求めた結果を示している。これよ
り、本発明に係る染色色素が、細胞核を青く、細胞質を
赤く染色することを確認した。
とを示す線図である。図１においては、エバンスブルー
（Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ）とエリトロシン（Ｅｒｙｔｈ
ｒｏｓｉｎｅ）の組み合わせで染色したときの上皮細胞
の核と細胞質の色調を測光スポット径約２μｍの顕微分
光光度計で測定し、エバンスブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌ
ｕｅ）のピークとエリトロシン（Ｅｒｙｔｈｒｏｓｉｎ
ｅ）のピークの比を求めた結果を示している。これよ
り、本発明に係る染色色素が、細胞核を青く、細胞質を
赤く染色することを確認した。
【００２１】〔実験例 ３〕特に、染色性の良好であっ
た４通りの組合せ中、エバンスブルー（Ｅｖａｎｓｂｌ
ｕｅ）とエリトロシン（Ｅｒｙｔｈｒｏｓｉｎｅ）、エ
バンスブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ）とフロキシン
（Ｐｈｌｏｘｉｎｅ）の２通りの組合せについて、尿中
溶解物（蛋白質、糖、糖蛋白質など）の凝集能を、ステ
ルンハイマー変法（Ｎｅｗ Ｓｔｅｒｎｈｅｉｍｅｒ）
染色試薬、ステルンハイマー・マルビン（Ｓｔｅｒｎｈ
ｅｉｍｅｒーＭａｌｂｉｎ）染色試薬と比較検討した。
各染色液４００μｌ（無染色は生理食塩水４００μｌ）
と健常人尿１ｍｌを混合し、粒子カウンターを用いて粒
子数を比較した。
た４通りの組合せ中、エバンスブルー（Ｅｖａｎｓｂｌ
ｕｅ）とエリトロシン（Ｅｒｙｔｈｒｏｓｉｎｅ）、エ
バンスブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ）とフロキシン
（Ｐｈｌｏｘｉｎｅ）の２通りの組合せについて、尿中
溶解物（蛋白質、糖、糖蛋白質など）の凝集能を、ステ
ルンハイマー変法（Ｎｅｗ Ｓｔｅｒｎｈｅｉｍｅｒ）
染色試薬、ステルンハイマー・マルビン（Ｓｔｅｒｎｈ
ｅｉｍｅｒーＭａｌｂｉｎ）染色試薬と比較検討した。
各染色液４００μｌ（無染色は生理食塩水４００μｌ）
と健常人尿１ｍｌを混合し、粒子カウンターを用いて粒
子数を比較した。
【００２２】なお、染色液の組成は以下の通りである。 染色尿１…ステルンハイマー・マルビン（Ｓｔｅｒｎｈ
ｅｉｍｅｒーＭａｌｂｉｎ）染色試薬＋健常人尿 染色尿２…エバンスブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ）と
フロキシン（Ｐｈｌｏｘｉｎｅ）＋健常人尿 染色尿３…エバンスブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ）と
エリトロシン（Ｅｒｙｔｈｒｏｓｉｎｅ）＋健常人尿 染色尿４…ステルンハイマー変法（Ｎｅｗ Ｓｔｅｒｎ
ｈｅｉｍｅｒ）染色試薬＋健常人尿
ｅｉｍｅｒーＭａｌｂｉｎ）染色試薬＋健常人尿 染色尿２…エバンスブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ）と
フロキシン（Ｐｈｌｏｘｉｎｅ）＋健常人尿 染色尿３…エバンスブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ）と
エリトロシン（Ｅｒｙｔｈｒｏｓｉｎｅ）＋健常人尿 染色尿４…ステルンハイマー変法（Ｎｅｗ Ｓｔｅｒｎ
ｈｅｉｍｅｒ）染色試薬＋健常人尿
【００２３】図２は、染色尿とその尿中の凝集物との関
係を示す線図である。その結果は、図２の棒グラフに示
すごとく、ステルンハイマー変法（ＮｅｗＳｔｅｒｎｈ
ｅｉｍｅｒ）尿のカウント数は１９６個／μｌで、無染
色尿のカウント数（２個／μｌ）の９０倍の値を示し尿
中溶解物の凝集が確認された。
係を示す線図である。その結果は、図２の棒グラフに示
すごとく、ステルンハイマー変法（ＮｅｗＳｔｅｒｎｈ
ｅｉｍｅｒ）尿のカウント数は１９６個／μｌで、無染
色尿のカウント数（２個／μｌ）の９０倍の値を示し尿
中溶解物の凝集が確認された。
【００２４】上記２通りの組合せは、ステルンハイマー
変法（Ｎｅｗ Ｓｔｅｒｎｈｅｉｍｅｒ）と同等の染色
性を示す一方で凝集能のないこと（カウント数はいずれ
も２個／μｌ）が確認できた。トリパンブルー（Ｔｒｙ
ｐａｎ ｂｌｕｅ）をエバンスブルー（Ｅｖａｎｓｂｌ
ｕｅ）の代わりに用いても同様の作用が得られる。な
お、ステルンハイマー変法は、染色性を上げるために染
色液の添加量を増加すると凝集能も増加することが確認
できた。
変法（Ｎｅｗ Ｓｔｅｒｎｈｅｉｍｅｒ）と同等の染色
性を示す一方で凝集能のないこと（カウント数はいずれ
も２個／μｌ）が確認できた。トリパンブルー（Ｔｒｙ
ｐａｎ ｂｌｕｅ）をエバンスブルー（Ｅｖａｎｓｂｌ
ｕｅ）の代わりに用いても同様の作用が得られる。な
お、ステルンハイマー変法は、染色性を上げるために染
色液の添加量を増加すると凝集能も増加することが確認
できた。
【００２５】〔実験例 ４〕また、染色液が赤血球に与
える影響を調べるため、生理食塩水に健常人全血を加え
た試料１ｍｌにエバンスブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌｕ
ｅ）、エリトロシン（Ｅｒｙｔｈｒｏｓｉｎｅ）、フロ
キシン（Ｐｈｌｏｘｉｎｅ）、ステルンハイマー・マル
ビン（ＳｔｅｒｎｈｅｉｍｅｒーＭａｌｂｉｎ）染色試
薬を４００μｌ添加し、溶血しない赤血球をフックス・
ローゼンタール計算盤により算定した。
える影響を調べるため、生理食塩水に健常人全血を加え
た試料１ｍｌにエバンスブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌｕ
ｅ）、エリトロシン（Ｅｒｙｔｈｒｏｓｉｎｅ）、フロ
キシン（Ｐｈｌｏｘｉｎｅ）、ステルンハイマー・マル
ビン（ＳｔｅｒｎｈｅｉｍｅｒーＭａｌｂｉｎ）染色試
薬を４００μｌ添加し、溶血しない赤血球をフックス・
ローゼンタール計算盤により算定した。
【００２６】図３は、各染色試薬と赤血球生存率との関
係を示す線図である。図３の棒グラフに示すようにフロ
キシン（Ｐｈｌｏｘｉｎｅ）では溶血作用があり、それ
以外の色素には溶血作用の無いことが確認できた。
係を示す線図である。図３の棒グラフに示すようにフロ
キシン（Ｐｈｌｏｘｉｎｅ）では溶血作用があり、それ
以外の色素には溶血作用の無いことが確認できた。
【００２７】さらに、フロキシン（Ｐｈｌｏｘｉｎｅ）
については、赤血球の形態保持を目的としてグルタール
アルデヒドを３％となるよう添加した。図４は、フロキ
シンに固定化剤を添加した場合の赤血球生存率の関係を
示す線図である。図４に示す通り固定化剤の溶血作用の
抑制効果が顕著である。
については、赤血球の形態保持を目的としてグルタール
アルデヒドを３％となるよう添加した。図４は、フロキ
シンに固定化剤を添加した場合の赤血球生存率の関係を
示す線図である。図４に示す通り固定化剤の溶血作用の
抑制効果が顕著である。
【００２８】〔実験例 ５〕また、染色性がやや低いエ
バンスブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ）またはトリパン
ブルー（Ｔｒｙｐａｎ ｂｌｕｅ）のいずれかと、エオ
シン（Ｅｏｓｉｎ）の組み合わせにおいて、染色性の向
上を目的としてドデシル硫酸ナトリウムを０．１％とな
るよう添加したところ、各種有形成分の顕微鏡による目
視観察において染色むらがなくなることを確認した。な
お、このとき、形態保持を目的としてグルタールアルデ
ヒドを３％となるよう添加した。
バンスブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ）またはトリパン
ブルー（Ｔｒｙｐａｎ ｂｌｕｅ）のいずれかと、エオ
シン（Ｅｏｓｉｎ）の組み合わせにおいて、染色性の向
上を目的としてドデシル硫酸ナトリウムを０．１％とな
るよう添加したところ、各種有形成分の顕微鏡による目
視観察において染色むらがなくなることを確認した。な
お、このとき、形態保持を目的としてグルタールアルデ
ヒドを３％となるよう添加した。
【００２９】
【作用】上記各技術的手法の働きは、次のとおりであ
る。本発明に係る染色試薬は、例えば尿沈渣物あるいは
遠心前の尿試料と混合すると有形成分のみ特異的に染色
し、視認性の良い染色像を提供できる。特に、試料中の
糖、蛋白質、糖蛋白質などの溶解物の凝集作用がなく、
凝集物を円柱と見誤ったり、凝集塊の中に細胞、円柱、
血球などの各種有形成分を取り込むことにより生ずる実
在個数と算定個数との不一致を防止することができる。
さらに、画像処理を行う場合には、画像処理装置の誤動
作を防止することができる。
る。本発明に係る染色試薬は、例えば尿沈渣物あるいは
遠心前の尿試料と混合すると有形成分のみ特異的に染色
し、視認性の良い染色像を提供できる。特に、試料中の
糖、蛋白質、糖蛋白質などの溶解物の凝集作用がなく、
凝集物を円柱と見誤ったり、凝集塊の中に細胞、円柱、
血球などの各種有形成分を取り込むことにより生ずる実
在個数と算定個数との不一致を防止することができる。
さらに、画像処理を行う場合には、画像処理装置の誤動
作を防止することができる。
【００３０】また、前記染色試薬は、染色液に起因する
結晶を生じさせず、それらの色素を複数混和させても沈
殿物を発生しないので、染色液固有の夾雑物の発生を抑
制し、試料中に存在する細胞外有形成分の識別精度を向
上できる。さらに、溶血作用のない色素を選択すること
で赤血球の溶血を防止することができる。
結晶を生じさせず、それらの色素を複数混和させても沈
殿物を発生しないので、染色液固有の夾雑物の発生を抑
制し、試料中に存在する細胞外有形成分の識別精度を向
上できる。さらに、溶血作用のない色素を選択すること
で赤血球の溶血を防止することができる。
【００３１】本発明に係る染色試薬の使用方法は、溶血
作用のある染色試薬に関しても、固定化剤を添加して使
用することにより、赤血球の溶血を防止することができ
る。また、染色性のやや低い染色試薬に関しても、界面
活性剤を添加し使用することにより、染色むらをなく
し、染色性を向上できる。上記染色試薬は、尿沈渣物ま
たは遠心分離処理前の尿中有形成分を含む尿試料を検査
することができる。
作用のある染色試薬に関しても、固定化剤を添加して使
用することにより、赤血球の溶血を防止することができ
る。また、染色性のやや低い染色試薬に関しても、界面
活性剤を添加し使用することにより、染色むらをなく
し、染色性を向上できる。上記染色試薬は、尿沈渣物ま
たは遠心分離処理前の尿中有形成分を含む尿試料を検査
することができる。
【００３２】
〔実施例 １〕本発明の一実施例に係る染色試薬および
その調製方法を説明する。溶媒として１／１５ｍｏｌ／
ｌのリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）を用い、３．２×１／
１０2ｍｏｌ／ｌのエバンスブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌ
ｕｅ）溶液のＩ液と、６．３×１／１０2ｍｏｌ／ｌの
エリトロシン（Ｅｒｙｔｈｒｏｓｉｎｅ）溶液のII液を
それぞれ１容量づつ混合して調製し、さらに安定剤とし
て、アジ化ナトリウムを０．１％になるように添加後、
濾過して尿沈渣用染色試薬を調製した。上記試薬１に対
し尿沈渣物あるいは遠心前の尿試料を１０の比率で混合
して、試料中に溶解している糖、蛋白質、糖蛋白質の凝
集を引き起こすことなく、有形成分のみに対して視認性
の良好な染色を行なうことができた。
その調製方法を説明する。溶媒として１／１５ｍｏｌ／
ｌのリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）を用い、３．２×１／
１０2ｍｏｌ／ｌのエバンスブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌ
ｕｅ）溶液のＩ液と、６．３×１／１０2ｍｏｌ／ｌの
エリトロシン（Ｅｒｙｔｈｒｏｓｉｎｅ）溶液のII液を
それぞれ１容量づつ混合して調製し、さらに安定剤とし
て、アジ化ナトリウムを０．１％になるように添加後、
濾過して尿沈渣用染色試薬を調製した。上記試薬１に対
し尿沈渣物あるいは遠心前の尿試料を１０の比率で混合
して、試料中に溶解している糖、蛋白質、糖蛋白質の凝
集を引き起こすことなく、有形成分のみに対して視認性
の良好な染色を行なうことができた。
【００３３】〔実施例 ２〕本発明の他の一実施例に係
る染色試薬およびその調製方法および使用方法を説明す
る。溶媒に１／１５ｍｏｌ／ｌのリン酸緩衝液（ｐＨ
６．８）を用い、２×１／１０2ｍｏｌ／ｌのエバンス
ブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ）溶液のＩ液と、６．３
×１／１０2ｍｏｌ／ｌのフロキシン（Ｐｈｌｏｘｉｎ
ｅ）溶液のII液をそれぞれ１容量づつ混合して調製し
た．さらに安定剤としてアジ化ナトリウムを〔実施例
１〕と同様に混合したのち、濾過して尿沈渣用染色試薬
を調製した。
る染色試薬およびその調製方法および使用方法を説明す
る。溶媒に１／１５ｍｏｌ／ｌのリン酸緩衝液（ｐＨ
６．８）を用い、２×１／１０2ｍｏｌ／ｌのエバンス
ブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ）溶液のＩ液と、６．３
×１／１０2ｍｏｌ／ｌのフロキシン（Ｐｈｌｏｘｉｎ
ｅ）溶液のII液をそれぞれ１容量づつ混合して調製し
た．さらに安定剤としてアジ化ナトリウムを〔実施例
１〕と同様に混合したのち、濾過して尿沈渣用染色試薬
を調製した。
【００３４】上記試薬１の容量に対し尿沈渣物あるいは
遠心前の尿試料を１０の容量の比率で混合して、試料中
に溶解している糖、蛋白質、糖蛋白質の凝集を引き起こ
すことなく、有形成分のみの視認性が良い染色を行なう
ことができた。しかし、本染色試薬のフロキシン（Ｐｈ
ｌｏｘｉｎｅ）溶液は、赤血球の溶血作用があることか
ら赤血球保護のため固定化剤としてグルタールアルデヒ
ドを３％となるよう添加して使用し、有形成分安定化の
効果を得た。
遠心前の尿試料を１０の容量の比率で混合して、試料中
に溶解している糖、蛋白質、糖蛋白質の凝集を引き起こ
すことなく、有形成分のみの視認性が良い染色を行なう
ことができた。しかし、本染色試薬のフロキシン（Ｐｈ
ｌｏｘｉｎｅ）溶液は、赤血球の溶血作用があることか
ら赤血球保護のため固定化剤としてグルタールアルデヒ
ドを３％となるよう添加して使用し、有形成分安定化の
効果を得た。
【００３５】〔実施例 ３〕本発明の他の一実施例に係
る染色試薬およびその調製方法および使用方法を説明す
る。溶媒に１／１５ｍｏｌ／ｌのリン酸緩衝液（ｐＨ
６．８）を用いて調製した３．２×１／１０2ｍｏｌ／
ｌのエバンスブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ）溶液のＩ
液と、６．３×１／１０2ｍｏｌ／ｌのエオシン（Ｅｏ
ｓｉｎ）溶液のII液をそれぞれ１容量づつ混合し、さら
に安定剤を〔実施例 １〕と同様に混合し、濾過して尿
沈渣用染色試薬を調製した。
る染色試薬およびその調製方法および使用方法を説明す
る。溶媒に１／１５ｍｏｌ／ｌのリン酸緩衝液（ｐＨ
６．８）を用いて調製した３．２×１／１０2ｍｏｌ／
ｌのエバンスブルー（Ｅｖａｎｓ ｂｌｕｅ）溶液のＩ
液と、６．３×１／１０2ｍｏｌ／ｌのエオシン（Ｅｏ
ｓｉｎ）溶液のII液をそれぞれ１容量づつ混合し、さら
に安定剤を〔実施例 １〕と同様に混合し、濾過して尿
沈渣用染色試薬を調製した。
【００３６】上記試薬の１容量に対し尿沈渣物あるいは
遠心前の尿試料を１０容量の比率で混合して、試料中に
溶解している糖、蛋白質、糖蛋白質の凝集を引き起こす
ことなく、有形成分のみ視認性良い染色を行なうことが
できた。しかし、本染色試薬のエオシン（Ｅｏｓｉｎ）
溶液は、各種有形成分の染色において染色むらがあるこ
とから、染色性の統一のため界面活性剤のドデシル硫酸
ナトリウムを０．１％となるよう添加して使用し、安定
した染色効果を得た。なお、形態保持を目的としてグル
タールアルデヒドを３％となるよう添加した。
遠心前の尿試料を１０容量の比率で混合して、試料中に
溶解している糖、蛋白質、糖蛋白質の凝集を引き起こす
ことなく、有形成分のみ視認性良い染色を行なうことが
できた。しかし、本染色試薬のエオシン（Ｅｏｓｉｎ）
溶液は、各種有形成分の染色において染色むらがあるこ
とから、染色性の統一のため界面活性剤のドデシル硫酸
ナトリウムを０．１％となるよう添加して使用し、安定
した染色効果を得た。なお、形態保持を目的としてグル
タールアルデヒドを３％となるよう添加した。
【００３７】
【発明の効果】以上、詳細に説明した如く、本発明によ
れば、尿中蛋白質、糖、糖蛋白質などの溶解物の凝集を
引き起さず、チロジン様の結晶を生じさせず、染色液起
因の赤血球溶血作用がなく、尿中有形成分の視認性にす
ぐれ、赤血球数の算定が正確であり、画像処理にも適す
る染色像が得られる染色試薬とその調製法およびその使
用方法を提供することができる。
れば、尿中蛋白質、糖、糖蛋白質などの溶解物の凝集を
引き起さず、チロジン様の結晶を生じさせず、染色液起
因の赤血球溶血作用がなく、尿中有形成分の視認性にす
ぐれ、赤血球数の算定が正確であり、画像処理にも適す
る染色像が得られる染色試薬とその調製法およびその使
用方法を提供することができる。
【図１】細胞質の相対色調と核の相対色調とを示す線図
である。
である。
【図２】染色尿とその尿中の凝集物との関係を示す線図
である。
である。
【図３】各染色試薬と赤血球生存率との関係を示す線図
である。
である。
【図４】フロキシンに固定化剤を添加した場合の赤血球
生存率の関係を示す線図である。
生存率の関係を示す線図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 川瀬 一光 茨城県勝田市大字市毛882番地 株式会社 日立製作所計測器事業部内
Claims (14)
- 【請求項１】 細胞・組織染色用色素とｐＨ緩衝液と安
定剤とからなる生体試料の染色試薬であって、 前記細胞・組織染色用色素は、無極性分子の複数の染色
用色素からなり、相互に混和しても反応して凝集・沈殿
を起さず、かつ、前記生体試料中の糖、蛋白質、糖蛋白
質などの溶解物を析出、凝集させず、かつ、複数の染色
対象物については、その種類ごとに異なった色調または
染色強度により染め分け、同一の対象物については、そ
の構成物ごとに異なった色調あるいは染色強度で染め分
けるようにしたことを特徴とする染色試薬。 - 【請求項２】 複数の染色用色素は、超生体染色に用い
られるアゾ染料とキサンテン染料とであることを特徴と
する請求項１記載の染色試薬。 - 【請求項３】 アゾ染料は、エバンスブルーまたはトリ
パンブルーのいずれかであることを特徴とする請求項２
記載の染色試薬。 - 【請求項４】 キサンテン染料は、エリトロシンまたは
フロキシンあるいはエオシンのいずれかであることを特
徴とする請求項２または３記載のいずれか染色試薬。 - 【請求項５】 ｐＨ緩衝液は、リン酸液またはコハク酸
液あるいはトリス酸液のいずれかであることを特徴とす
る請求項１ないし４記載のいずれかの染色試薬。 - 【請求項６】 安定剤は、抗菌剤であることを特徴とす
る請求項１ないし５記載のいずれかの染色試薬。 - 【請求項７】 抗菌剤は、アジ化ナトリウム物またはパ
ラハイドロキシフェニル酢酸またはデヒドロ酢酸あるい
はエチレンジアミンテトラ硫酸のいずれかであることを
特徴とする請求項６記載の染色試薬。 - 【請求項８】 約０．２〜１０．０×１／１０2ｍｏｌ
／ｌのエバンスブルーまたはトリパンブルーのいずれか
１容量と、約０．２〜１０．０×１／１０2ｍｏｌ／ｌ
のエリトロシン約０．５〜２．０容量とを混合し、前記
混合溶液に約０．０１〜１．０％の濃度となるようにア
ジ化ナトリウムまたはパラハイドロキシフェニル酢酸ま
たはデヒドロ酢酸あるいはエチレンジアミンテトラ硫酸
のいずれかを混合し、溶媒として１／３０〜１／５ｍｏ
ｌ／ｌのリン酸液またはコハク酸液あるいはトリス酸液
のいずれかを用い、ｐＨが５．７〜７．９になるように
することを特徴とする染色試薬の調製方法。 - 【請求項９】 細胞・組織染色用色素とｐＨ緩衝液と安
定剤とからなる染色試薬に固定化剤を添加して使用する
ことを特徴とする染色試薬の使用方法。 - 【請求項１０】 約０．２〜１０．０×１／１０2ｍｏ
ｌ／ｌのエバンスブルーまたはトリパンブルーのいずれ
か１容量と、約０．２〜１０．０×１／１０2ｍｏｌ／
ｌのフロキシン約０．５〜２．０容量とを混合し、前記
混合溶液に約０．０１〜１．０％の濃度となるようにア
ジ化ナトリウムまたはパラハイドロキシフェニル酢酸ま
たはデヒドロ酢酸あるいはエチレンジアミンテトラ硫酸
のいずれかを混合し、溶媒として１／３０〜１／５ｍｏ
ｌ／ｌのリン酸液またはコハク酸液あるいはトリス酸液
のいずれかを用い、ｐＨが５．７〜７．９になるように
調整した染色試薬に、固定化剤として、０．０２〜５．
０％と濃度となるようにグルタールアルデヒドまたはホ
ルムアルデヒドまたはパラホルムアルデヒドのいずれか
を添加して使用することを特徴とする請求項９記載の染
色試薬の使用方法。 - 【請求項１１】 細胞・組織染色用色素とｐＨ緩衝液と
安定剤とからなる染色試薬に固定化剤と界面活性剤とを
添加して使用することを特徴とする染色試薬の使用方
法。 - 【請求項１２】 約０．２〜１０．０×１／１０2ｍｏ
ｌ／ｌのエバンスブルー１容量と、約０．２〜１０．０
×１／１０2ｍｏｌ／ｌのエオシン約０．５〜２．０容
量とを混合し、前記混合溶液に約０．０１〜１．０％の
濃度となるようにアジ化ナトリウムまたはパラハイドロ
キシフェニル酢酸またはデヒドロ酢酸あるいはエチレン
ジアミンテトラ硫酸のいずれかを混合し、溶媒として１
／３０〜１／５ｍｏｌ／ｌのリン酸液またはコハク酸液
あるいはトリス酸液のいずれかを用い、ｐＨが５．７〜
７．９になるように調整した染色試薬に、固定化剤とし
て、０．０２〜５．０％と濃度となるようにグルタール
アルデヒドまたはホルムアルデヒドまたはパラホルムア
ルデヒドのいずれかと、界面活性剤として、０．０１〜
０．５％の濃度となるようにドデシル硫酸ナトリウムと
を添加して使用することを特徴とする請求項１１記載の
染色試薬の使用方法。 - 【請求項１３】 約０．２〜１０．０×１／１０2ｍｏ
ｌ／ｌのトリパンブルー１容量と、約０．２〜１０．０
×１／１０2ｍｏｌ／ｌのエオシン約０．５〜２．０容
量とを混合し、前記混合溶液に約０．０１〜１．０％の
濃度となるようにアジ化ナトリウムまたはパラハイドロ
キシフェニル酢酸またはデヒドロ酢酸あるいはエチレン
ジアミンテトラ硫酸のいずれかを混合し、溶媒として１
／３０〜１／５ｍｏｌ／ｌのリン酸液またはコハク酸液
あるいはトリス酸液のいずれかを用い、ｐＨが５．７〜
７．９になるように調整した染色試薬に、固定化剤とし
て、０．０２〜５．０％と濃度となるようにグルタール
アルデヒドまたはホルムアルデヒドまたはパラホルムア
ルデヒドのいずれかと、界面活性剤として０．０１〜
０．５％の濃度となるようにドデシル硫酸ナトリウムと
を添加して使用することを特徴とする請求項１１記載の
染色試薬の使用方法。 - 【請求項１４】 染色対象の生体試料が、尿沈渣有形成
分であることを特徴とする請求項１ないし１３のいずれ
かの染色試薬の使用方法。
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