JP2904687B2 - 新規オリゴ糖 - Google Patents
新規オリゴ糖Info
- Publication number
- JP2904687B2 JP2904687B2 JP5254748A JP25474893A JP2904687B2 JP 2904687 B2 JP2904687 B2 JP 2904687B2 JP 5254748 A JP5254748 A JP 5254748A JP 25474893 A JP25474893 A JP 25474893A JP 2904687 B2 JP2904687 B2 JP 2904687B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- galactopyranosyl
- oligosaccharide
- glucose
- peak
- lactose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 title description 43
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 title description 42
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 9
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 23
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 23
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 12
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 12
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 description 8
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 7
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 6
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 5
- 235000021255 galacto-oligosaccharides Nutrition 0.000 description 5
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 150000003271 galactooligosaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- -1 trisaccharide galacto-oligosaccharide Chemical class 0.000 description 3
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N Heavy water Chemical compound [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N diphenylamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC1=CC=CC=C1 DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 2
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 241001655328 Bifidobacteriales Species 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- MOOAHMCRPCTRLV-UHFFFAOYSA-N boron sodium Chemical class [B].[Na] MOOAHMCRPCTRLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 235000020124 milk-based beverage Nutrition 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- CTYRPMDGLDAWRQ-UHFFFAOYSA-N phenyl hydrogen sulfate Chemical compound OS(=O)(=O)OC1=CC=CC=C1 CTYRPMDGLDAWRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000006276 transfer reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005918 transglycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008939 whole milk Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規なオリゴ糖に関す
る。本発明の新規なオリゴ糖は、生体内でビフィズス菌
に対して優れた増殖作用を示すことから、機能性食品の
素材として利用することができる。
る。本発明の新規なオリゴ糖は、生体内でビフィズス菌
に対して優れた増殖作用を示すことから、機能性食品の
素材として利用することができる。
【０００２】
【従来の技術】乳糖の糖転移反応あるいは縮合反応によ
り生成したガラクトース−グルコース系のオリゴ糖は、
一般的にはガラクトオリゴ糖と称し、ビフィズス菌の増
殖因子として注目されている。そして、これらのガラク
トオリゴ糖を製造する方法としては、乳糖にアスペルギ
ルス・オリゼ起源のβ−ガラクトシダーゼを作用させる
方法（特公昭５８−２０２２６号公報）、乳糖にクリベ
ロマイセス属起源のβ−ガラクトシダーゼを作用させる
方法（特公昭６３−４９９８３号公報）、乳糖にバチル
ス・サーキュランス起源の酵素を作用させる方法（特公
平３−５４５５９号公報）、乳糖に起源の異なる二種類
以上のβ−ガラクトシダーゼを作用させる方法（特開昭
６３−９１０９２号公報）などの酵素法や乳糖にクリプ
トコッカス属の微生物を作用させる方法（特開昭６０−
２５１８９６号公報、特開昭６１−２３６７９０号公
報）、乳糖に乳糖資化性のアスペルギルス属、ペニシリ
ウム属あるいはトリコデルマ属の微生物を作用させる方
法（特開昭６２−７９７９１号公報）、乳糖にブレラ属
の微生物を作用させる方法（特開昭６２−２０８２９３
号公報）などの発酵法が知られている。
り生成したガラクトース−グルコース系のオリゴ糖は、
一般的にはガラクトオリゴ糖と称し、ビフィズス菌の増
殖因子として注目されている。そして、これらのガラク
トオリゴ糖を製造する方法としては、乳糖にアスペルギ
ルス・オリゼ起源のβ−ガラクトシダーゼを作用させる
方法（特公昭５８−２０２２６号公報）、乳糖にクリベ
ロマイセス属起源のβ−ガラクトシダーゼを作用させる
方法（特公昭６３−４９９８３号公報）、乳糖にバチル
ス・サーキュランス起源の酵素を作用させる方法（特公
平３−５４５５９号公報）、乳糖に起源の異なる二種類
以上のβ−ガラクトシダーゼを作用させる方法（特開昭
６３−９１０９２号公報）などの酵素法や乳糖にクリプ
トコッカス属の微生物を作用させる方法（特開昭６０−
２５１８９６号公報、特開昭６１−２３６７９０号公
報）、乳糖に乳糖資化性のアスペルギルス属、ペニシリ
ウム属あるいはトリコデルマ属の微生物を作用させる方
法（特開昭６２−７９７９１号公報）、乳糖にブレラ属
の微生物を作用させる方法（特開昭６２−２０８２９３
号公報）などの発酵法が知られている。
【０００３】一方、三糖のガラクトオリゴ糖について
は、上述したように起源の異なるβ−ガラクトシダーゼ
を乳糖に作用させることにより、Ｏ−β−Ｄ−ガラクト
ピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノ
シル−（１→４）−Ｄ−グルコース、Ｏ−β−Ｄ−ガラ
クトピラノシル−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノシル−（１→４）−Ｄ−グルコース、Ｏ−β−Ｄ−
ガラクトピラノシル−（１→３）−Ｏ−β−Ｄ−ガラク
トピラノシル−（１→４）−Ｄ−グルコース、Ｏ−β−
Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−ガ
ラクトピラノシル−（１→６）−Ｄ−グルコース、Ｏ−
β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−〔Ｏ−β−
Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）〕−Ｄ−グルコー
ス及びＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−
〔Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→２）〕Ｄ−
グルコースの６種類のオリゴ糖が生成されることが報告
されているに過ぎない。特に、バチルス・サーキュラン
ス起源のβ−ガラクトシダーゼを乳糖に作用させた場合
に生成するオリゴ糖は、Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→４）−Ｄ−グルコース１種類のみである。
は、上述したように起源の異なるβ−ガラクトシダーゼ
を乳糖に作用させることにより、Ｏ−β−Ｄ−ガラクト
ピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノ
シル−（１→４）−Ｄ−グルコース、Ｏ−β−Ｄ−ガラ
クトピラノシル−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノシル−（１→４）−Ｄ−グルコース、Ｏ−β−Ｄ−
ガラクトピラノシル−（１→３）−Ｏ−β−Ｄ−ガラク
トピラノシル−（１→４）−Ｄ−グルコース、Ｏ−β−
Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−ガ
ラクトピラノシル−（１→６）−Ｄ−グルコース、Ｏ−
β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−〔Ｏ−β−
Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）〕−Ｄ−グルコー
ス及びＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−
〔Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→２）〕Ｄ−
グルコースの６種類のオリゴ糖が生成されることが報告
されているに過ぎない。特に、バチルス・サーキュラン
ス起源のβ−ガラクトシダーゼを乳糖に作用させた場合
に生成するオリゴ糖は、Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−
（１→４）−Ｄ−グルコース１種類のみである。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、酵素法
によるオリゴ糖の製造について鋭意検討を行った結果、
乳糖にバチルス・サーキュランス起源のβ−ガラクトシ
ダーゼを長時間作用させることにより、以下の新規なオ
リゴ糖が生成することを見出し、本発明を完成するに至
った。すなわち、本発明は、新規な結合をもつガラクト
オリゴ糖を提供することを課題とする。さらに本発明
は、生体内でビフィズス菌に対して優れた増殖作用など
を示す新規なオリゴ糖を提供することを課題とする。
によるオリゴ糖の製造について鋭意検討を行った結果、
乳糖にバチルス・サーキュランス起源のβ−ガラクトシ
ダーゼを長時間作用させることにより、以下の新規なオ
リゴ糖が生成することを見出し、本発明を完成するに至
った。すなわち、本発明は、新規な結合をもつガラクト
オリゴ糖を提供することを課題とする。さらに本発明
は、生体内でビフィズス菌に対して優れた増殖作用など
を示す新規なオリゴ糖を提供することを課題とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明の新規なオリゴ糖
は、乳糖にバチルス・サーキュランス起源のβ−ガラク
トシダーゼを長時間作用させ、この反応生成物から三糖
類のガラクトオリゴ糖を採取することより得ることがで
きる。出発原料の乳糖としては、市販の乳糖は勿論のこ
と、全乳、脱脂乳、ホエーなど乳糖を含有するものを用
いることもできる。また、出発原料の乳糖に作用させる
バチルス・サーキュランス起源のβ−ガラクトシダーゼ
は、市販されているものを用いることができる。まず、
出発原料の乳糖濃度を５〜６０重量％に調製した溶液
に、バチルス・サーキュランス起源のβ−ガラクトシダ
ーゼを１〜１，０００単位／ｍｌで添加し、ｐＨ３〜
８、温度５〜６０℃で２時間〜数日間、好ましくは、１
８〜２４時間程度の長時間酵素反応を行う。そうすると
ガラクトース転移反応あるいは縮合反応が起こり、オリ
ゴ糖が生成する。次に、このオリゴ糖を含む反応混合液
を９０℃以上で３〜５分間加熱して酵素を失活させた
後、常法に従って分離、精製を行うことにより、上述し
た新規なオリゴ糖を得ることができる。
は、乳糖にバチルス・サーキュランス起源のβ−ガラク
トシダーゼを長時間作用させ、この反応生成物から三糖
類のガラクトオリゴ糖を採取することより得ることがで
きる。出発原料の乳糖としては、市販の乳糖は勿論のこ
と、全乳、脱脂乳、ホエーなど乳糖を含有するものを用
いることもできる。また、出発原料の乳糖に作用させる
バチルス・サーキュランス起源のβ−ガラクトシダーゼ
は、市販されているものを用いることができる。まず、
出発原料の乳糖濃度を５〜６０重量％に調製した溶液
に、バチルス・サーキュランス起源のβ−ガラクトシダ
ーゼを１〜１，０００単位／ｍｌで添加し、ｐＨ３〜
８、温度５〜６０℃で２時間〜数日間、好ましくは、１
８〜２４時間程度の長時間酵素反応を行う。そうすると
ガラクトース転移反応あるいは縮合反応が起こり、オリ
ゴ糖が生成する。次に、このオリゴ糖を含む反応混合液
を９０℃以上で３〜５分間加熱して酵素を失活させた
後、常法に従って分離、精製を行うことにより、上述し
た新規なオリゴ糖を得ることができる。
【０００６】このようなオリゴ糖には、次のような
（ａ）〜（ｅ）よりなる群から選択される少くとも１種
のオリゴ糖がある。 （ａ）Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−
Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−Ｄ−グ
ルコース。 （ｂ）Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−
Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→２）−Ｄ−グ
ルコース。 （ｃ）Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−
〔Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→２）〕−Ｄ
−グルコース。 （ｄ）Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−
Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−Ｄ−グ
ルコース。 （ｅ）Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−
〔Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）〕−Ｄ
−グルコース。
（ａ）〜（ｅ）よりなる群から選択される少くとも１種
のオリゴ糖がある。 （ａ）Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−
Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−Ｄ−グ
ルコース。 （ｂ）Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−
Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→２）−Ｄ−グ
ルコース。 （ｃ）Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−
〔Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→２）〕−Ｄ
−グルコース。 （ｄ）Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−
Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−Ｄ−グ
ルコース。 （ｅ）Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−
〔Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）〕−Ｄ
−グルコース。
【０００７】以下に実施例を示して本発明を具体的に説
明する。
明する。
【実施例１】乳糖６００ｇを温水４００ｇに溶解し、ｐ
Ｈを６．０に調整した後、バチルス・サーキュランス起
源のβ−ガラクトシダーゼ（大和化成（株）製）３００
ｍｇを加えて、６０℃で１８時間酵素反応を行った。こ
のようにして得られた反応混合液を１００℃で５分間加
熱して酵素反応を停止させた後、活性炭カラム（１０ｃ
ｍ×５０ｃｍ）に通して未反応の乳糖及び生成したオリ
ゴ糖を吸着させた。次に、水２０ｌをカラムに通して単
糖を溶出させた後、５％エタノール２０ｌをカラムに通
して吸着した乳糖を完全に溶出、除去した。そして、３
０％エタノール１５ｌをカラムに通してオリゴ糖を溶出
し、その溶出液を減圧濃縮した後、凍結乾燥してオリゴ
糖粉末１８０ｇを得た。さらに、このオリゴ糖をゲル濾
過カラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏ ｇｅｌ Ｐ２、
２．０ｃｍ×１００ｃｍ＋Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ４、２．０
ｃｍ×１００ｃｍ）で三糖の画分のみを分取した後、凍
結乾燥して本発明の新規なオリゴ糖を含むオリゴ糖粉末
１００ｇを得た。
Ｈを６．０に調整した後、バチルス・サーキュランス起
源のβ−ガラクトシダーゼ（大和化成（株）製）３００
ｍｇを加えて、６０℃で１８時間酵素反応を行った。こ
のようにして得られた反応混合液を１００℃で５分間加
熱して酵素反応を停止させた後、活性炭カラム（１０ｃ
ｍ×５０ｃｍ）に通して未反応の乳糖及び生成したオリ
ゴ糖を吸着させた。次に、水２０ｌをカラムに通して単
糖を溶出させた後、５％エタノール２０ｌをカラムに通
して吸着した乳糖を完全に溶出、除去した。そして、３
０％エタノール１５ｌをカラムに通してオリゴ糖を溶出
し、その溶出液を減圧濃縮した後、凍結乾燥してオリゴ
糖粉末１８０ｇを得た。さらに、このオリゴ糖をゲル濾
過カラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏ ｇｅｌ Ｐ２、
２．０ｃｍ×１００ｃｍ＋Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ４、２．０
ｃｍ×１００ｃｍ）で三糖の画分のみを分取した後、凍
結乾燥して本発明の新規なオリゴ糖を含むオリゴ糖粉末
１００ｇを得た。
【０００８】この三糖の画分についてＨＰＬＣで分析し
たところ、図１に示したようにピーク１〜８（Ｐ１〜
８）が確認された。そこで、このピーク１〜８を活性炭
カラム（グラジェント法）及びＨＰＬＣ法で繰り返し分
離、精製し、得られたオリゴ糖について性質を調べた。 （イ）構成糖 分離、精製したピーク１〜８について、１Ｎ−トリフル
オロ酢酸で加水分解を行い構成糖を測定した結果、いず
れも、ガラクトース：グルコース＝２：１のモル比で生
成していることが判った。 （ロ）分子量 分離、精製したピーク１〜８について、Ｎｅｇａｔｉｖ
ｅイオンモードで質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ）を行った結
果、いずれも、ｍ／ｅ５０３（Ｍ−Ｈ）- が確認され
た。したがって、ピーク１〜８のオリゴ糖はいずれも三
糖であることが判った。
たところ、図１に示したようにピーク１〜８（Ｐ１〜
８）が確認された。そこで、このピーク１〜８を活性炭
カラム（グラジェント法）及びＨＰＬＣ法で繰り返し分
離、精製し、得られたオリゴ糖について性質を調べた。 （イ）構成糖 分離、精製したピーク１〜８について、１Ｎ−トリフル
オロ酢酸で加水分解を行い構成糖を測定した結果、いず
れも、ガラクトース：グルコース＝２：１のモル比で生
成していることが判った。 （ロ）分子量 分離、精製したピーク１〜８について、Ｎｅｇａｔｉｖ
ｅイオンモードで質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ）を行った結
果、いずれも、ｍ／ｅ５０３（Ｍ−Ｈ）- が確認され
た。したがって、ピーク１〜８のオリゴ糖はいずれも三
糖であることが判った。
【０００９】（ハ）理化学的性質 分離、精製したピーク１〜８は、いずれも以下の理化学
的性質を示した。 （１）色調： 乾燥粉末状態で白色 （２）溶解性： 水に可溶 （３）呈色反応： アニリン、ジフェニルアミン反応 ＋ フェノール硫酸反応 ＋ ニンヒドリン反応 （ニ）糖の結合様式 分離、精製したピーク１〜８について、あらかじめ重水
素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＤ４）で還元した後、常
法に従ってメチル化、加水分解及びアセチル化を行い、
ガスクロマトグラフィー−質量分析計（ＧＣ−ＭＳ）で
同定した結果、表１に示した部分メチル化アルジトール
アセテートを確認した。このメチル化分析の結果によ
り、ピーク３はＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１
→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）
−Ｄ−グルコース、ピーク７はＯ−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノシル−（１→６）−〔Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノ
シル−（１→２）〕−Ｄ−グルコース、ピーク８はＯ−
β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−〔Ｏ−β−
Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）〕−Ｄ−グルコー
スであり、既に報告されているオリゴ糖であることが確
認された。しかしながら、ピーク１、ピーク２、ピーク
４、ピーク５及びピーク６は、新規オリゴ糖である可能
性があるため、次に１Ｈ−ＮＭＲによる確認を行った。
的性質を示した。 （１）色調： 乾燥粉末状態で白色 （２）溶解性： 水に可溶 （３）呈色反応： アニリン、ジフェニルアミン反応 ＋ フェノール硫酸反応 ＋ ニンヒドリン反応 （ニ）糖の結合様式 分離、精製したピーク１〜８について、あらかじめ重水
素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＤ４）で還元した後、常
法に従ってメチル化、加水分解及びアセチル化を行い、
ガスクロマトグラフィー−質量分析計（ＧＣ−ＭＳ）で
同定した結果、表１に示した部分メチル化アルジトール
アセテートを確認した。このメチル化分析の結果によ
り、ピーク３はＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１
→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）
−Ｄ−グルコース、ピーク７はＯ−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノシル−（１→６）−〔Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノ
シル−（１→２）〕−Ｄ−グルコース、ピーク８はＯ−
β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−〔Ｏ−β−
Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）〕−Ｄ−グルコー
スであり、既に報告されているオリゴ糖であることが確
認された。しかしながら、ピーク１、ピーク２、ピーク
４、ピーク５及びピーク６は、新規オリゴ糖である可能
性があるため、次に１Ｈ−ＮＭＲによる確認を行った。
【００１０】（ホ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）吸収 ５００ＭＨｚの分光計を用いて、重水中で測定した１Ｈ
−ＮＭＲのスペクトルを図２〜図７に示した。ピーク１
のスペクトルを図２に、ピーク２，４，５及び６のスペ
クトルを図３〜６に順次示す。
−ＮＭＲのスペクトルを図２〜図７に示した。ピーク１
のスペクトルを図２に、ピーク２，４，５及び６のスペ
クトルを図３〜６に順次示す。
【００１１】上記の（イ）、（ロ）、（ハ）、（ニ）及
び（ホ）に示した性質より、ピーク１はＯ−β−Ｄ−ガ
ラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクト
ピラノシル−（１→３）−Ｄ−グルコース、ピーク２は
Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−β
−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→２）−Ｄ−グルコー
ス、ピーク４はＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１
→４）−〔Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→
２）〕−Ｄ−グルコース、ピーク５はＯ−β−Ｄ−ガラ
クトピラノシル−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノシル−（１→６）−Ｄ−グルコース、ピーク６はＯ
−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−〔Ｏ−β
−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）〕−Ｄ−グルコ
ースであるとそれぞれ同定された。
び（ホ）に示した性質より、ピーク１はＯ−β−Ｄ−ガ
ラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクト
ピラノシル−（１→３）−Ｄ−グルコース、ピーク２は
Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−β
−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→２）−Ｄ−グルコー
ス、ピーク４はＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１
→４）−〔Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→
２）〕−Ｄ−グルコース、ピーク５はＯ−β−Ｄ−ガラ
クトピラノシル−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノシル−（１→６）−Ｄ−グルコース、ピーク６はＯ
−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−〔Ｏ−β
−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）〕−Ｄ−グルコ
ースであるとそれぞれ同定された。
【００１２】
【実施例２】乳糖６００ｇを温水４００ｇに溶解し、ｐ
Ｈを６．０に調整した後、バチルス・サーキュランス起
源のβ−ガラクトシダーゼ（大和化成（株）製）３００
ｍｇを加えて、６０℃で２４時間酵素反応を行った。こ
のようにして得られた反応混合液を１００℃で５分間加
熱して酵素反応を停止させた後、活性炭カラム（１０ｃ
ｍ×５０ｃｍ）に通して未反応の乳糖及び生成したオリ
ゴ糖を吸着させた。次に、水２０１をカラムに通して単
糖を溶出させた後、５％エタノール２０１をカラムに通
して吸着した乳糖を完全に溶出、除去した。そして、３
０％エタノール１５１をカラムに通してオリゴ糖を溶出
し、その溶出液を減圧濃縮した後、凍結乾燥してオリゴ
糖粉末１８０ｇを得た。さらに、このオリゴ糖をゲル濾
過カラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏ ｇｅｌ Ｐ２、
２．０ｃｍ×１００ｃｍ＋Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ４、２．０
ｃｍ×１００ｃｍ）で三糖の画分のみを分取した後、凍
結乾燥して本発明の新規なオリゴ糖を含むオリゴ糖粉末
１００ｇを得た。得られたオリゴ糖粉末には、ピーク３
のオリゴ糖、ピーク７及びピーク８のオリゴ糖が含まれ
ていたので、活性炭カラム（グラジェント法）でピーク
３のオリゴ糖を除去した後、ＨＰＬＣ法でピーク７及び
ピーク８のオリゴ糖を除去して本発明の新規なオリゴ糖
を得た。
Ｈを６．０に調整した後、バチルス・サーキュランス起
源のβ−ガラクトシダーゼ（大和化成（株）製）３００
ｍｇを加えて、６０℃で２４時間酵素反応を行った。こ
のようにして得られた反応混合液を１００℃で５分間加
熱して酵素反応を停止させた後、活性炭カラム（１０ｃ
ｍ×５０ｃｍ）に通して未反応の乳糖及び生成したオリ
ゴ糖を吸着させた。次に、水２０１をカラムに通して単
糖を溶出させた後、５％エタノール２０１をカラムに通
して吸着した乳糖を完全に溶出、除去した。そして、３
０％エタノール１５１をカラムに通してオリゴ糖を溶出
し、その溶出液を減圧濃縮した後、凍結乾燥してオリゴ
糖粉末１８０ｇを得た。さらに、このオリゴ糖をゲル濾
過カラムクロマトグラフィー（Ｂｉｏ ｇｅｌ Ｐ２、
２．０ｃｍ×１００ｃｍ＋Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ４、２．０
ｃｍ×１００ｃｍ）で三糖の画分のみを分取した後、凍
結乾燥して本発明の新規なオリゴ糖を含むオリゴ糖粉末
１００ｇを得た。得られたオリゴ糖粉末には、ピーク３
のオリゴ糖、ピーク７及びピーク８のオリゴ糖が含まれ
ていたので、活性炭カラム（グラジェント法）でピーク
３のオリゴ糖を除去した後、ＨＰＬＣ法でピーク７及び
ピーク８のオリゴ糖を除去して本発明の新規なオリゴ糖
を得た。
【００１３】
【試験例１】実施例２で調製した本発明の新規なオリゴ
糖を用い、ビフィズス菌増殖作用についてヒト腸内細菌
に対する醗酵試験により検討を行った。濃度が０．５％
となるようにオリゴ糖を添加した液体培地に、各腸内細
菌を接種し、嫌気的条件下、３７℃で２４時間培養した
後、ＯＤ．６６０ｎｍにおける濁度を測定した。また、
対照としてグルコースを添加した液体培地で同様の試験
を行った。その結果を表２に示す。本発明の新規なオリ
ゴ糖は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎ
ｔｉｓを除き他のビフィズス菌によく利用されることが
判った。また、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉ
ｎｇｅｎｅｓ及びＥ．ｃｏｌｉには殆ど利用されないこ
とが判った。したがってこの結果から、本発明の新規な
オリゴ糖は、ビフィズス菌の増殖因子であることが明ら
かとなった。
糖を用い、ビフィズス菌増殖作用についてヒト腸内細菌
に対する醗酵試験により検討を行った。濃度が０．５％
となるようにオリゴ糖を添加した液体培地に、各腸内細
菌を接種し、嫌気的条件下、３７℃で２４時間培養した
後、ＯＤ．６６０ｎｍにおける濁度を測定した。また、
対照としてグルコースを添加した液体培地で同様の試験
を行った。その結果を表２に示す。本発明の新規なオリ
ゴ糖は、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎ
ｔｉｓを除き他のビフィズス菌によく利用されることが
判った。また、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉ
ｎｇｅｎｅｓ及びＥ．ｃｏｌｉには殆ど利用されないこ
とが判った。したがってこの結果から、本発明の新規な
オリゴ糖は、ビフィズス菌の増殖因子であることが明ら
かとなった。
【００１４】
【表１】
【００１５】
【表２】
【００１６】
【発明の効果】本発明により、ビフィズス菌を増殖促進
する作用を示す新規なオリゴ糖を提供する。本発明の新
規オリゴ糖は、粉乳、乳飲料その他の食品に添加するビ
フィズス菌増殖促進作用をもつ機能性食品素材として有
用である。
する作用を示す新規なオリゴ糖を提供する。本発明の新
規オリゴ糖は、粉乳、乳飲料その他の食品に添加するビ
フィズス菌増殖促進作用をもつ機能性食品素材として有
用である。
【図１】実施例１による三糖類画分のＨＰＬＣを示す。
【図２】実施例１のＨＰＬＣにより得られるピーク１の
核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
【図３】実施例１のＨＰＬＣにより得られるピーク２の
核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
【図４】実施例１のＨＰＬＣにより得られるピーク４の
核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
【図５】実施例１のＨＰＬＣにより得られるピーク５の
核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
【図６】実施例１のＨＰＬＣにより得られるピーク６の
核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
フロントページの続き (56)参考文献 Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．201 （１），115〜123（1990) 雪印乳業研究所報告 86号、133頁及 び135〜139頁、1988年 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C07H 3/06 C12P 19/18 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- 【請求項１】 次の（ａ）〜（ｅ）よりなる群から選択
される少くとも１種であるＯ−β−Ｄ−ガラクトピラノ
シル−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｄ−グルコー
ス。 （ａ）Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−
Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−Ｄ−グ
ルコース。 （ｂ）Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−
Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→２）−Ｄ−グ
ルコース。 （ｃ）Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−
〔Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→２）〕−Ｄ
−グルコース。 （ｄ）Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−
Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−Ｄ−グ
ルコース。 （ｅ）Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−
〔Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）〕−Ｄ
−グルコース。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5254748A JP2904687B2 (ja) | 1993-09-17 | 1993-09-17 | 新規オリゴ糖 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5254748A JP2904687B2 (ja) | 1993-09-17 | 1993-09-17 | 新規オリゴ糖 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0789976A JPH0789976A (ja) | 1995-04-04 |
| JP2904687B2 true JP2904687B2 (ja) | 1999-06-14 |
Family
ID=17269332
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5254748A Expired - Lifetime JP2904687B2 (ja) | 1993-09-17 | 1993-09-17 | 新規オリゴ糖 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2904687B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3138848A4 (en) * | 2014-05-02 | 2017-03-08 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Preparation method for high-purity 4'-galactosyl-lactose composition |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MXPA05010349A (es) | 2003-06-30 | 2006-03-08 | Clasado Inc | Composicion novedosa de galactooligosacaridos y preparacion de la misma. |
| GB0525857D0 (en) | 2005-12-20 | 2006-02-01 | Product and process | |
| GB0601901D0 (en) | 2006-01-31 | 2006-03-08 | Product and Process | |
| GB0606112D0 (en) | 2006-03-28 | 2006-05-03 | Product and process | |
| AU2009347008B2 (en) | 2009-05-27 | 2013-08-15 | Clasado Limited | Method of preventing diarrhoea |
| JP6072516B2 (ja) * | 2012-11-19 | 2017-02-01 | 雪印メグミルク株式会社 | アレルギー改善剤 |
-
1993
- 1993-09-17 JP JP5254748A patent/JP2904687B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．２０１（１），１１５〜１２３（１９９０） |
| 雪印乳業研究所報告 ８６号、１３３頁及び１３５〜１３９頁、１９８８年 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3138848A4 (en) * | 2014-05-02 | 2017-03-08 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Preparation method for high-purity 4'-galactosyl-lactose composition |
| US10221204B2 (en) | 2014-05-02 | 2019-03-05 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Preparation method for high-purity 4′-galactosyl-lactose composition |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0789976A (ja) | 1995-04-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR19980042215A (ko) | 코지비오스 포스포릴라아제, 그 제조방법 및 용도 | |
| CN111448322B (zh) | 使用苹果乳杆菌制造转果糖基化甜菊醇配糖物的方法 | |
| JPS5953834B2 (ja) | ビフイズス菌増殖促進物質 | |
| DE69308531T2 (de) | Cycloisomaltooligosaccharide; Enzym und Verfahren zu ihrer Herstellung, und Verfahren zur Herstellung von dem Enzym | |
| JPH0789976A (ja) | 新規オリゴ糖 | |
| CA2019614C (en) | Antihypertensives and food and drinks | |
| JP3028258B2 (ja) | α−ガラクトオリゴ糖組成物 | |
| US5965127A (en) | Exocellular polysaccharide produced by streptococcus thermophilus | |
| JPS603319B2 (ja) | アミノ糖誘導体 | |
| JPH0633309B2 (ja) | 新規なステビオール配糖体、その製造方法及びこれを用いた甘味料 | |
| US4632917A (en) | Pseudooligosaccharides with an α-glucosidase-inhibiting action, their use and pharmaceutical products | |
| JP3556704B2 (ja) | β−ガラクトシダーゼ | |
| WO1995034570A1 (en) | Process for producing disaccharides and novel saccharides | |
| CN113453565B (zh) | 甜味剂组合物及其制备方法 | |
| JPH11155564A (ja) | β−ＤＦＡの製造方法および使用酵素 | |
| US6054443A (en) | Exocellular polysaccharide produced by Streptococcus thermophilus | |
| JP3079183B2 (ja) | 褐藻分解物の製造法 | |
| JP4417465B2 (ja) | 新規二糖、甘味剤、該二糖の製法および酵素 | |
| JP2722110B2 (ja) | 増殖促進剤およびその製造法 | |
| WO1996039155A1 (en) | Immunopotentiator | |
| JP2989217B2 (ja) | エキソ‐β‐１，４‐ガラクタナーゼ及びその利用 | |
| JP3690612B2 (ja) | フェネチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシドの製造方法 | |
| JP2796634B2 (ja) | 新規糖アルコール、その製造方法及びその利用 | |
| JP3045509B2 (ja) | マンノース含有オリゴ糖の製造法 | |
| JP3961053B2 (ja) | 新規なリン酸化多糖類、その製造法及び用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090326 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090326 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100326 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110326 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110326 Year of fee payment: 12 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120326 Year of fee payment: 13 |
|
| R371 | Transfer withdrawn |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R371 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120326 Year of fee payment: 13 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120326 Year of fee payment: 13 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120326 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130326 Year of fee payment: 14 |