JP3260760B2 - ヒルジンを含んでなる医薬組成物 - Google Patents
ヒルジンを含んでなる医薬組成物Info
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/55—Protease inhibitors
- A61K38/57—Protease inhibitors from animals; from humans
- A61K38/58—Protease inhibitors from animals; from humans from leeches, e.g. hirudin, eglin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は、ヒルジン含有の組成物に関し、特に安定な
粉末製剤に関する。
粉末製剤に関する。
ヒルジン、ヒル（Hirudo medicinalis）において天然
に産生する抗凝固剤は、単一のポリペプチド種ではな
く、ヒルジン変異体１（HV1）、ヒルジン変異体２
（注、ヨーロッパ特許出願第158564号）、ヒルジン変異
体３（PA）〔注、PCT出願第86/03493号〕および“デス
−（Val）２−ヒルジン”（注、ヨーロッパ特許出願第1
58986号）と命名された少なくとも４つの代表例から成
る、同等に作用するポリペプチドのクラスである。変異
体は、アミノ酸の数により互いに構造が異なる（特に、
HV1のＮ末端配列はVal−Val−Tyrであり、HV2およびHV3
のそれはIle−Thr−Tyrでありそして“des−（Val）２
−ヒルジン”のそれはThr−Thr−Thrである）が、しか
しＮ末端に疎水性アミノ酸およびＣ末端に極性アミノ酸
の蓄積、スルファトモノエステルとして存在するチロシ
ン残基（Tyr63）、３つのジスルフィドブリッジおよび
一般に抗凝血作用を有する。
に産生する抗凝固剤は、単一のポリペプチド種ではな
く、ヒルジン変異体１（HV1）、ヒルジン変異体２
（注、ヨーロッパ特許出願第158564号）、ヒルジン変異
体３（PA）〔注、PCT出願第86/03493号〕および“デス
−（Val）２−ヒルジン”（注、ヨーロッパ特許出願第1
58986号）と命名された少なくとも４つの代表例から成
る、同等に作用するポリペプチドのクラスである。変異
体は、アミノ酸の数により互いに構造が異なる（特に、
HV1のＮ末端配列はVal−Val−Tyrであり、HV2およびHV3
のそれはIle−Thr−Tyrでありそして“des−（Val）２
−ヒルジン”のそれはThr−Thr−Thrである）が、しか
しＮ末端に疎水性アミノ酸およびＣ末端に極性アミノ酸
の蓄積、スルファトモノエステルとして存在するチロシ
ン残基（Tyr63）、３つのジスルフィドブリッジおよび
一般に抗凝血作用を有する。
過去２年にわたって、ヒルジン変異体をクローニング
するcDNAおよび合成遺伝子がクローン化されそして微生
物宿主中で発現された。発現生産物は、Tyr63でスルフ
ァトモノエステル基を欠いている（そして従って“デス
ルファトヒルジン（desulphatohirudins）”と命名され
た）けれども、それらは天然のスルファトヒルジンとほ
ゞ同じ生物学的活性を示すことが判明した。デスルファ
トヒルジン変異体HV1は、エシェリキア・コリ中で発現
され（ヨーロッパ特許出願第158564号および第168342
号）そしてサッカロミセス セレビジエ（Saccharomyce
s cerevisiae）中で発現され（ヨーロッパ特許出願第20
0655号、PCT出願第86/01224号）そしてデス−（Val）２
−デスルファトヒルジンは、エシェリキア・コリ中で発
現された（ヨーロッパ特許出願第158986号）。
するcDNAおよび合成遺伝子がクローン化されそして微生
物宿主中で発現された。発現生産物は、Tyr63でスルフ
ァトモノエステル基を欠いている（そして従って“デス
ルファトヒルジン（desulphatohirudins）”と命名され
た）けれども、それらは天然のスルファトヒルジンとほ
ゞ同じ生物学的活性を示すことが判明した。デスルファ
トヒルジン変異体HV1は、エシェリキア・コリ中で発現
され（ヨーロッパ特許出願第158564号および第168342
号）そしてサッカロミセス セレビジエ（Saccharomyce
s cerevisiae）中で発現され（ヨーロッパ特許出願第20
0655号、PCT出願第86/01224号）そしてデス−（Val）２
−デスルファトヒルジンは、エシェリキア・コリ中で発
現された（ヨーロッパ特許出願第158986号）。
本発明によれば、語句「ヒルジン」は、それぞれ文献
で示されるヒルジン、デスルファトヒルジン、ヒルジン
変異体又はデスルファトヒルジン変異体又はその突然変
異体を包含することを意図しそして特にデスルファトヒ
ルジン化合物又はデスルファトヒルジン又はその突然変
異体をコードするDNAを含有する形質転換微生物菌株か
ら得ることのできるその突然変異体を包含することを意
図する。そのようなデスルファトヒルジンは、例えばデ
スルファトヒルジン変異体HV1,HV1修飾（a,b）、HV2修
飾（a,b,c）、HV3、HV3の変異体およびデス（Val）２−
デスルファトヒルジンである。
で示されるヒルジン、デスルファトヒルジン、ヒルジン
変異体又はデスルファトヒルジン変異体又はその突然変
異体を包含することを意図しそして特にデスルファトヒ
ルジン化合物又はデスルファトヒルジン又はその突然変
異体をコードするDNAを含有する形質転換微生物菌株か
ら得ることのできるその突然変異体を包含することを意
図する。そのようなデスルファトヒルジンは、例えばデ
スルファトヒルジン変異体HV1,HV1修飾（a,b）、HV2修
飾（a,b,c）、HV3、HV3の変異体およびデス（Val）２−
デスルファトヒルジンである。
好ましいデスルファトヒルジンは、次の式（配列番
号:1） （ここで ａ）27,36そして47のXaaは各々Lysであり、51のXaaはHi
sでありそして62のXaaはペプチド残基Glu−Tyr−Leu−G
lnである（HV1）、又は ）27のXaaは、Ile又はGluでありそして36,47,51および6
2のXaaはａ）で定義されたものである（HV1修飾ａ）、
又は ｃ）36のXaaはIle又はGluでありそして27,47,51および6
2のXaaはａ）で定義されたものである（HV1修飾ａ）、
又は ｄ）47のXaaはIle又はGluでありそして27,36,51および6
2のXaaはａ）で定義されたものである（HV1修飾ａ）、
又は ｅ）51のXaaはLeu又はAspでありそして27,36,47および6
2のXaaはａ）で定義されたものである（HV1修飾ａ）、
又は ｆ）62のXaaは、Glu−Tyr,Glu−Tyr−Leu,Glu−Asp−Le
u−Gln,Glu−Glu−Leu−Gln,Glu−Tyr−Lys−Arg,Glu−
Asp−Lys−Arg,Glu−Lys−Leu−Gln,Ser−Phe−Arg−Ty
r,Trp−Glu−Leu−Arg,Glu−Tyr−Leu−Gln−Proおよび
Glu−Tyr−Leu−Gln−Argから成る群から選ばれそして2
7,36,47および51のXaaはａ）で定義されたものである
（HV1修飾ｂ）） を有するものであるか、又は次の式（配列番号:2） を有するものであるか、又は次式（配列番号:3） （ここで、 ａ）は47のXaaはAsnでありそして63のXaaはTyrであり
（HV2）、又は ｂ）47のXaaはLys,Arg又はHisでありそして63のXaaはTy
rであり（HV2修飾ａ）、又は ｃ）63のXaaはGlu又はAspでありそして47のXaaはAsnで
ある（HV2修飾ｂ）） を有するものであるか、又は次の式（配列番号:4） を有するものであるか、又は次の式（配列番号:5） を有するものである。
号:1） （ここで ａ）27,36そして47のXaaは各々Lysであり、51のXaaはHi
sでありそして62のXaaはペプチド残基Glu−Tyr−Leu−G
lnである（HV1）、又は ）27のXaaは、Ile又はGluでありそして36,47,51および6
2のXaaはａ）で定義されたものである（HV1修飾ａ）、
又は ｃ）36のXaaはIle又はGluでありそして27,47,51および6
2のXaaはａ）で定義されたものである（HV1修飾ａ）、
又は ｄ）47のXaaはIle又はGluでありそして27,36,51および6
2のXaaはａ）で定義されたものである（HV1修飾ａ）、
又は ｅ）51のXaaはLeu又はAspでありそして27,36,47および6
2のXaaはａ）で定義されたものである（HV1修飾ａ）、
又は ｆ）62のXaaは、Glu−Tyr,Glu−Tyr−Leu,Glu−Asp−Le
u−Gln,Glu−Glu−Leu−Gln,Glu−Tyr−Lys−Arg,Glu−
Asp−Lys−Arg,Glu−Lys−Leu−Gln,Ser−Phe−Arg−Ty
r,Trp−Glu−Leu−Arg,Glu−Tyr−Leu−Gln−Proおよび
Glu−Tyr−Leu−Gln−Argから成る群から選ばれそして2
7,36,47および51のXaaはａ）で定義されたものである
（HV1修飾ｂ）） を有するものであるか、又は次の式（配列番号:2） を有するものであるか、又は次式（配列番号:3） （ここで、 ａ）は47のXaaはAsnでありそして63のXaaはTyrであり
（HV2）、又は ｂ）47のXaaはLys,Arg又はHisでありそして63のXaaはTy
rであり（HV2修飾ａ）、又は ｃ）63のXaaはGlu又はAspでありそして47のXaaはAsnで
ある（HV2修飾ｂ）） を有するものであるか、又は次の式（配列番号:4） を有するものであるか、又は次の式（配列番号:5） を有するものである。
HV3および該HV3の変異体は、Ｎ末端で１又は２個のア
ミノ酸又はＣ末端で18,10,9,6,4又は２個のアミノ酸だ
け一次構造を短かくすることによって特徴づけられる。
ミノ酸又はＣ末端で18,10,9,6,4又は２個のアミノ酸だ
け一次構造を短かくすることによって特徴づけられる。
特に好ましいデスルファトヒルジン化合物は、式Ｉ
（式中、Xaa基はａ）のもとで定義されたものである）
の化合物であるか又は式III（式中、47のXaaはLysであ
りそして63のXaaはTyrである）の化合物である。
（式中、Xaa基はａ）のもとで定義されたものである）
の化合物であるか又は式III（式中、47のXaaはLysであ
りそして63のXaaはTyrである）の化合物である。
最も好ましいヒルジンは、式Ｉ（式中、27,36および4
7のXaaは各々Lysであり、51のXaaはHisでありそして62
のXaaはペプチド残基である）を有するデスルファトヒ
ルジンHV1である。
7のXaaは各々Lysであり、51のXaaはHisでありそして62
のXaaはペプチド残基である）を有するデスルファトヒ
ルジンHV1である。
本発明で用いられるヒルジンは、合成的に、例えば化
学的に製造できるか又は組換え技術により、又はヒルか
ら単離することにより製造できる。
学的に製造できるか又は組換え技術により、又はヒルか
ら単離することにより製造できる。
本発明によれば、語句“突然変異体”は、簡単な又は
多重の変異により天然のヒルジン又はデスルファトヒル
ジンとは異なる抗凝血作用を示すタンパク質（ムテイン
（mutein））を意味する。（注、ヨーロッパ特許出願第
352227号および第352228号）。当業者に公知の方法、例
えば部位特異的変異誘発により生産される該突然変異体
をコードするDNAをクローン化し次いでエシェリキア・
コリ（Escherichia coli）およびサッカロミセス セレ
ビジエ（Saccharomyces cerevisiae）の如き微生物宿主
中で発現する。
多重の変異により天然のヒルジン又はデスルファトヒル
ジンとは異なる抗凝血作用を示すタンパク質（ムテイン
（mutein））を意味する。（注、ヨーロッパ特許出願第
352227号および第352228号）。当業者に公知の方法、例
えば部位特異的変異誘発により生産される該突然変異体
をコードするDNAをクローン化し次いでエシェリキア・
コリ（Escherichia coli）およびサッカロミセス セレ
ビジエ（Saccharomyces cerevisiae）の如き微生物宿主
中で発現する。
本発明で用いられるヒルジン化合物は、遊離形をとり
得るがしかしそれらの塩の形であってもよい。該化合物
は幾つかのアミノ酸残基中に遊離アミノ基を含有してい
るので、化合物は酸付加塩の形をとることができる。適
当な酸付加塩は、通常の治療的に許容し得る酸と特に薬
理学的に許容し得る塩である。代表的無機酸はハロゲン
化水素酸（例えば塩素）、および硫酸、リン酸およびポ
リリン酸である。代表的有機酸はアレーンスルホン酸
（例えばベンゼンスルホン酸又はｐ−トルエンスルホン
酸）、又は低級アルカンスルホン酸（例えば、メタンス
ルホン酸）、並びにカルボン酸例えば酢酸、乳酸、パル
ミチン酸、ステアリン酸、リンゴ酸、酒石酸、アスコル
ビン酸およびクエン酸である。しかし、本発明で用いら
れる化合物は幾つかのアミノ酸残基中に遊離カルボキシ
ル基（このカルボキシル基はペプチド全体に酸性特性を
付与する）を含有しているので、それらは無機もしくは
有機塩基との塩、例えばナトリウム、カリウム、カルシ
ウム又はマグネシウム塩、又はアンモニアは薬理的に許
容し得る有機窒素含有塩基から誘導されるアンモニウム
塩の形をとり得る。しかし、それらは遊離カルボキシル
基と遊離アミノ基を同時に含有するので、それらはまた
分子内塩の形をとり得る。薬理的に許容し得る塩は好ま
しい。
得るがしかしそれらの塩の形であってもよい。該化合物
は幾つかのアミノ酸残基中に遊離アミノ基を含有してい
るので、化合物は酸付加塩の形をとることができる。適
当な酸付加塩は、通常の治療的に許容し得る酸と特に薬
理学的に許容し得る塩である。代表的無機酸はハロゲン
化水素酸（例えば塩素）、および硫酸、リン酸およびポ
リリン酸である。代表的有機酸はアレーンスルホン酸
（例えばベンゼンスルホン酸又はｐ−トルエンスルホン
酸）、又は低級アルカンスルホン酸（例えば、メタンス
ルホン酸）、並びにカルボン酸例えば酢酸、乳酸、パル
ミチン酸、ステアリン酸、リンゴ酸、酒石酸、アスコル
ビン酸およびクエン酸である。しかし、本発明で用いら
れる化合物は幾つかのアミノ酸残基中に遊離カルボキシ
ル基（このカルボキシル基はペプチド全体に酸性特性を
付与する）を含有しているので、それらは無機もしくは
有機塩基との塩、例えばナトリウム、カリウム、カルシ
ウム又はマグネシウム塩、又はアンモニアは薬理的に許
容し得る有機窒素含有塩基から誘導されるアンモニウム
塩の形をとり得る。しかし、それらは遊離カルボキシル
基と遊離アミノ基を同時に含有するので、それらはまた
分子内塩の形をとり得る。薬理的に許容し得る塩は好ま
しい。
ヒルジンを含有する剤形を開発する際の１つの問題
は、水性溶液および粉末形においてその溶解性が劣って
いることである。
は、水性溶液および粉末形においてその溶解性が劣って
いることである。
劣った溶解性は、ヒルジンをクロマトグラフィー法例
えば逆相HPLC（RP−HPLC）により分析するとき見られ得
る。
えば逆相HPLC（RP−HPLC）により分析するとき見られ得
る。
RP−HPLC法:LiChroCART 125−４カラムを用いる（Merck
LiChrospher 100 RP−18 5μｍ）。溶剤Ａはアセトニ
トリル／水（10:90）、（v:v）中0.5％酢酸アンモニウ
ムであり；溶剤Ｂはアセトニトリル／水（25:75）中0.5
％酢酸アンモニウムである。溶出は0.5ml/分の流速を用
い45℃で行なわれる。二つの溶出は、23％溶剤Ｂを用い
零時から出発しそして24分後46％溶剤に達する線状グラ
ジエントである。２分後70％溶剤Ｂで、カラムは23％溶
剤Ｂで７分間平衡化される。
LiChrospher 100 RP−18 5μｍ）。溶剤Ａはアセトニ
トリル／水（10:90）、（v:v）中0.5％酢酸アンモニウ
ムであり；溶剤Ｂはアセトニトリル／水（25:75）中0.5
％酢酸アンモニウムである。溶出は0.5ml/分の流速を用
い45℃で行なわれる。二つの溶出は、23％溶剤Ｂを用い
零時から出発しそして24分後46％溶剤に達する線状グラ
ジエントである。２分後70％溶剤Ｂで、カラムは23％溶
剤Ｂで７分間平衡化される。
RP−HPLC（1mg/mlヒルジン）を用い水中での組換えヒ
ルジンHV1（CGP39393）の典型的クロマトグラムを図１
に示す。
ルジンHV1（CGP39393）の典型的クロマトグラムを図１
に示す。
図１において主ピークの相対的ピークは95.15％であ
る。室温で水中でヒルジンを保存すると、時間と共に生
成物が増加する。このことはそれ自身主ピークの領域の
減少および複数の小ピークの領域の増加により示され
る。生起する変化は、温度ストレス実験を用いることに
より、すなわち高温での保存により加促できる。
る。室温で水中でヒルジンを保存すると、時間と共に生
成物が増加する。このことはそれ自身主ピークの領域の
減少および複数の小ピークの領域の増加により示され
る。生起する変化は、温度ストレス実験を用いることに
より、すなわち高温での保存により加促できる。
今や、本発明者等はリン酸カリウムがヒルジンの安定
性を増加するために使用できることを見出した。
性を増加するために使用できることを見出した。
従って、本発明は、ヒルジン、リン酸カリウムおよび
糖を含んでなる凍結乾燥医薬組成物を提供する。
糖を含んでなる凍結乾燥医薬組成物を提供する。
本発明の組成物は、成分の水性溶液を形成し次いでそ
れを常法で凍結乾燥することにより製造できる。
れを常法で凍結乾燥することにより製造できる。
リン酸カリウムは好ましくはリン酸水素二カリウムで
ある。それは、凍結乾燥前、溶液中、0.1〜0.5のモル濃
度、好ましくは0.1〜0.3のモル濃度で使用できる。
ある。それは、凍結乾燥前、溶液中、0.1〜0.5のモル濃
度、好ましくは0.1〜0.3のモル濃度で使用できる。
適当な糖には、マンニトール、トレハロース、スクロ
ース、ソルビトール、フルクトース、グルコース、マル
トース、ラクトースおよびデキストランが含まれる。好
ましい糖は、マンニトールおよびトレハロースである。
ース、ソルビトール、フルクトース、グルコース、マル
トース、ラクトースおよびデキストランが含まれる。好
ましい糖は、マンニトールおよびトレハロースである。
凍結乾燥前の溶液中の糖の量は、５〜50％（w/v）、
好ましくは５〜20％（w/v）の温度をもたらすそのよう
な量であってよい。凍結乾燥前の溶液は、好ましくは等
張である。
好ましくは５〜20％（w/v）の温度をもたらすそのよう
な量であってよい。凍結乾燥前の溶液は、好ましくは等
張である。
凍結乾燥前の溶液のpHは、４〜10、好ましくは６〜
９、そして最も好ましくは6.5〜８であってよい。
９、そして最も好ましくは6.5〜８であってよい。
所望により、シトラート緩衝剤を、例えばクエン酸を
添加することにより、凍結乾燥前の溶液に添加できる。
シトラートのモル濃度は、0.1〜0.5、好ましくは0.1〜
0.3である。
添加することにより、凍結乾燥前の溶液に添加できる。
シトラートのモル濃度は、0.1〜0.5、好ましくは0.1〜
0.3である。
凍結乾燥前の溶液中のヒルジンの濃度は、0.5〜500mg
/ml、好ましくは20〜25mg/mlである。
/ml、好ましくは20〜25mg/mlである。
凍結乾燥生成物は、冷凍保存に対する必要性はなく、
長期間安定である。加えて、生成物を水に再溶解した
後、生成溶液はまた長期間安定であるがしかし溶液中の
安定性は凍結乾燥粉末の安定性程良好でない。
長期間安定である。加えて、生成物を水に再溶解した
後、生成溶液はまた長期間安定であるがしかし溶液中の
安定性は凍結乾燥粉末の安定性程良好でない。
凍結乾燥生成物を再溶解することによって製造される
溶液は、標準アンプル、予備充てん二重チャンバ注射
器、又はマルチ投与システムの製造に用いることができ
る。溶液は、勿論、投与に対し直ちに使用できる。
溶液は、標準アンプル、予備充てん二重チャンバ注射
器、又はマルチ投与システムの製造に用いることができ
る。溶液は、勿論、投与に対し直ちに使用できる。
本発明を次の実施例により説明する。
例 １ 組換えデスルファトヒルジンHV1（チバガイギーから
のCGP39393）の水性溶液は、それを（ａ）水；（ｂ）５
％トレハロース溶液の70容量部およびクエン酸/K2HPO4
混合物の30容量部、pH7.4で150mM;（ｃ）５％マンニト
ール溶液の30容量部およびクエン酸/K2HPO4混合物70
部、pH7.4で150mM;および（ｄ）５％マンニトール溶液
の30容量部およびK2HPO4の70重量部、pH7.4で150mM中に
溶解することにより製造される。各々の場合、ヒルジン
の濃度は30mg/mlである。
のCGP39393）の水性溶液は、それを（ａ）水；（ｂ）５
％トレハロース溶液の70容量部およびクエン酸/K2HPO4
混合物の30容量部、pH7.4で150mM;（ｃ）５％マンニト
ール溶液の30容量部およびクエン酸/K2HPO4混合物70
部、pH7.4で150mM;および（ｄ）５％マンニトール溶液
の30容量部およびK2HPO4の70重量部、pH7.4で150mM中に
溶解することにより製造される。各々の場合、ヒルジン
の濃度は30mg/mlである。
溶液を凍結乾燥しそして46℃で保存する。異なる時
間、サンプルを水に溶解し1mg/mlヒルジンとし次いで主
ピークをRP−HPLCにより測定する。得られた結果を下記
の表１に示す。
間、サンプルを水に溶解し1mg/mlヒルジンとし次いで主
ピークをRP−HPLCにより測定する。得られた結果を下記
の表１に示す。
安定性は、46℃で拡大された期間保存されたときでさ
え高いレベルで維持されていることがわかる。
え高いレベルで維持されていることがわかる。
例 ２ 組換えデスルファトヒルジンHV1（チバ−ガイギーか
らのCGP39393）の水性溶液を、次の如くそれを種々の糖
／シトラート／ホスフェート混合物に溶解することによ
り製造する。各々の場合、30容量部の糖を、70容量部の
シトラート／ホスフェートと混合する。
らのCGP39393）の水性溶液を、次の如くそれを種々の糖
／シトラート／ホスフェート混合物に溶解することによ
り製造する。各々の場合、30容量部の糖を、70容量部の
シトラート／ホスフェートと混合する。
man 5％:CKP−100mM K2HPO4（1.74％）;7mMクエン酸
（0.134％）;82mMマンニトール（1.5％）;4mMヒルジン
（0.3％）． suc 10％:CKP−100mM K2HPO4（1.74％）;7mMクエン酸
（0.134％）;87.6mMスクロース（３％）;4mMヒルジン
（0.3％）． tre 10％:CKP−100mM K2HPO4（1.74％）;7mMクエン酸
（0.134％）;87.6mMトレハロース（３％）;4mMヒルジン
（0.3％）． 溶液を凍結乾燥しそして種々の温度で保存する。一定
の保存時間後、サンプルを水に溶解し1mg/mlヒルジンと
し次いで主ピークをRP−HPLCにより測定する。
（0.134％）;82mMマンニトール（1.5％）;4mMヒルジン
（0.3％）． suc 10％:CKP−100mM K2HPO4（1.74％）;7mMクエン酸
（0.134％）;87.6mMスクロース（３％）;4mMヒルジン
（0.3％）． tre 10％:CKP−100mM K2HPO4（1.74％）;7mMクエン酸
（0.134％）;87.6mMトレハロース（３％）;4mMヒルジン
（0.3％）． 溶液を凍結乾燥しそして種々の温度で保存する。一定
の保存時間後、サンプルを水に溶解し1mg/mlヒルジンと
し次いで主ピークをRP−HPLCにより測定する。
粉末を種々の温度で保存するとき改善された安定性が
認められる。通常の周囲条件よりも恐らくはわずかによ
り高い26℃で、132日後に顕著な分解は認められない。
認められる。通常の周囲条件よりも恐らくはわずかによ
り高い26℃で、132日後に顕著な分解は認められない。
配列表 一般情報： （ｉ）出願人： （Ａ）名称：チバ−ガイギー AG （Ｂ）街：クレーベックストラーセ 141 （Ｃ）市：バーゼル （Ｅ）国：スイス （Ｆ）郵便番号:4002 （Ｇ）電話:0619691111 （Ｈ）テレファックス:0619697976 （Ｉ）テレックス:962991 （ii）発明の名称：医薬組成物 （iii）配列の数:5 （iv）コンピューター読みとり方式 （Ａ）媒体のタイプ：フロッピーディスク （Ｂ）コンピューター:IBM PCコンパチブル （Ｃ）作動システム:PC−DOS/MS−DOS （Ｄ）ソフトウェア：ケムテクトバージョン1.50 配列番号:1 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ:63−66個のアミノ酸 （Ｂ）タイプ：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル:no （iv）アンチセンス:no 配列番号:2 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ:65個のアミノ酸 （Ｂ）タイプ：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル:no （iv）アンチセンス:no 配列番号:3 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ:65個のアミノ酸 （Ｂ）タイプ：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル:no （iv）アンチセンス:no 配列番号:4 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ:65個のアミノ酸 （Ｂ）タイプ：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル:no （iv）アンチセンス:no 配列番号:5 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）長さ:66個のアミノ酸 （Ｂ）タイプ：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：タンパク質 （iii）ハイポセティカル:no （iv）アンチセンス:no
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｐ 7/02 Ａ６１Ｋ 35/62 // Ａ６１Ｋ 35/62 Ｃ０７Ｋ 14/435 ＺＮＡ Ｃ０７Ｋ 14/435 ＺＮＡ Ａ６１Ｋ 37/64 (72)発明者 アービント，チュダー スイス国，ツェーハー−4142 ミュンヘ ンステイン，シュラッカーシュトラーセ 13 審査官 瀬下 浩一 (56)参考文献 特開 平２−119792（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 38/55 A61K 9/19 A61K 47/04 A61K 47/12 A61K 47/26 A61P 7/02 A61K 35/62 C07K 14/435 ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ) ＣＡＰＬＵＳ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＥＭＢＡＳＥ（ＳＴＮ)
Claims (9)
- 【請求項１】ヒルジン、リン酸カリウム、糖およびシト
ラートを含んでなる凍結乾燥医薬組成物。 - 【請求項２】リン酸カリウムが、燐酸水素二カリウムで
ある、請求の範囲第１項記載の組成物。 - 【請求項３】糖が、マンニトール、トレハロース、スク
ロース、ソルビトール、フルクトース、グルコース、マ
ルトース、ラクトース又はデキストランである、請求の
範囲第１又は２項記載の組成物。 - 【請求項４】ヒルジンが、デスルファトヒルジン（desu
lphatohirudin）変異体又はその突然変異体である、請
求の範囲第１〜３項のいずれか１項に記載の組成物。 - 【請求項５】ヒルジンが、デスルファトヒルジンHV1で
ある、請求の範囲第１〜４項のいずれか１項に記載の組
成物。 - 【請求項６】前記成分を水に溶解し、次いでその溶液を
凍結乾燥することによって得られた、請求の範囲第１〜
５項のいずれか１項に記載の組成物。 - 【請求項７】凍結乾燥前の前記溶液のpHが４〜10であ
る、請求の範囲第６項記載の組成物。 - 【請求項８】凍結乾燥前の前記溶液中のヒルジンの濃度
が、0.1〜500mg/mlである、請求の範囲第６又は７項に
記載の組成物。 - 【請求項９】凍結乾燥前の前記溶液が等張性である、請
求の範囲第６〜８項のいずれか１項に記載の組成物。
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