JP4860703B2

JP4860703B2 - 最適化された抗ｃｄ３０抗体

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Publication number: JP4860703B2
Application number: JP2008534748A
Authority: JP
Inventors: グレゴリーアランラザー; ジョンアールデジャルレ; フィリップダブリューハモンド; ディヴィッドエフカーマイケル; バオリュチェン; スンワイチュー; シャーバハデュアカルキ; ロリークンケル
Original assignee: Xencor Inc
Current assignee: Xencor Inc
Priority date: 2005-10-06
Filing date: 2006-10-06
Publication date: 2012-01-25
Anticipated expiration: 2026-10-06
Also published as: CA2625998C; US9574006B2; US7973136B2; CA2625998A1; AU2011202115A1; US20120014943A1; WO2007044616A2; AU2006302254A1; WO2007044616A3; JP2009511495A; EP1951757B1; AU2006302254B2; EP1951757A2; US20080267976A1

Description

本件特許出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）に基づき、２００６年２月２４日に出願された米国仮特許出願第６０／７７６，５９８号明細書、２００５年１１月１１日に出願された同第６０／７３７，９９８号明細書、２００５年１０月６日に出願された同第６０／７２４，６２４号明細書、２００５年１２月１２日に出願された同第６０／７５０，６９７号明細書、２００６年４月２５日に出願された同第６０／７４５，５３６号明細書の優先権の利益を主張するものである。

本発明は、ＣＤ３０を標的する最適化されたタンパク質と、その用途、特に治療目的での用途に関するものである。

健康な個体の活性化されたＢリンパ球およびＴリンパ球に発現される１２０ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質に、ＣＤ３０がある。リンパ腫様丘疹症をはじめとするいくつかの非悪性疾患ならびに、ウイルス形質転換Ｂ細胞およびＴ細胞で、ＣＤ３０の発現が観察されている。また、ＣＤ３０は、ホジキン病、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、免疫芽球性リンパ腫、多発性骨髄腫、成人Ｔ細胞リンパ腫白血病、菌状息肉腫、胚細胞悪性腫瘍および甲状腺腫をはじめとするいくつかのタイプの悪性腫瘍でも発現される。健康な個体の血清中ならびに、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）をはじめとする何種類かのウイルスのうちのひとつに感染した個体には、可溶性ＣＤ３０が低濃度で検出され、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、橋本甲状腺炎のある個体には、これよりも高い濃度で検出される。未分化大細胞リンパ腫またはホジキン病に羅患した患者から得られる血清中での可溶性ＣＤ３０の濃度上昇が、予後の悪さと相関していると報告されている（Ｙｏｕｎｅｓ＆Ｋａｄｉｎ、２００３、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ、２１（１８）：３５２６〜３５３４；Ａｌ−Ｓｈａｍｋｈａｎｉ、２００４、ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、４：３５５〜３５９）。

ＣＤ３０Ｌ（ＣＤ１５３）は、ＴＮＦファミリに属し、活性化Ｔ細胞、活性化マクロファージ、Ｂ細胞、好中球、好酸球（ｅｏｓｉｎｉｐｈｉｌ）、肥満細胞をはじめとする多種多様な造血細胞に発現されるＩＩ型膜貫通タンパク質である。これらの細胞のＣＤ３０ＬとＨ−ＲＳ細胞表面のＣＤ３０とが結合すると、成長と活性化ならびに、胸腺髄質の上皮細胞およびハッサル小体が調節される。また、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、濾胞Ｂ細胞リンパ腫、毛様細胞白血病、Ｔ細胞リンパ芽球性リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫をはじめとする多数の造血器腫瘍もＣＤ３０Ｌを発現する（Ｙｏｕｎｅｓ＆Ｋａｄｉｎ、２００３、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ、２１（１８）：３５２６〜３５３４；Ａｌ−Ｓｈａｍｋｈａｎｉ、２００４、ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、４：３５５〜３５９、いずれもその全体を援用する）。

一般的な治療用タンパク質の一クラスに、モノクローナル抗体がある。標的に対する特異性、免疫エフェクター機序を媒介する機能、血清中での半減期の長さを含むがこれに限定されるものではない抗体の多数の有益な特性によって、抗体は強力な治療薬となる。ＣＤ３０を標的する多数の抗体が、さまざまな癌の処置用として承認または臨床実験段階にある。また、開発中の抗ＣＤ３０抗体もある。腫瘍細胞と正常な細胞とではＣＤ３０の有益な発現差異があり、なおかつ相応な数の抗ＣＤ３０抗体が開発中であるにもかかわらず、いまだ抗ＣＤ３０抗体は臨床的には成功していない。

抗体が腫瘍細胞を破壊する機序には、必要な成長経路を遮断することによる抗増殖、アポトーシスを引き起こす細胞内シグナル伝達、レセプターの下方制御および／または代謝回転の亢進、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、適応免疫応答の促進をはじめとして、多数の考え得る機序がある（Ｃｒａｇｇら、１９９９、ＣｕｒｒＯｐｉｎＩｍｍｕｎｏｌ１１：５４１〜５４７；Ｇｌｅｎｎｉｅら、２０００、ＩｍｍｕｎｏｌＴｏｄａｙ２１：４０３〜４１０、両方ともその全体を援用する）。これらの機序の組み合わせで抗腫瘍効力が生じている可能性があり、臨床治療におけるその相対的な重要度は癌依存性であるように見受けられる。

抗体の抗腫瘍力価を高める有望な手段のひとつに、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、ＣＤＣなどの細胞毒性エフェクター機能を媒介する抗体機能を亢進することによるものがある。抗体の抗癌活性に対するＦｃγＲによるエフェクター機能の重要性がマウスで示されて（Ｃｌｙｎｅｓら、１９９８、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ９５：６５２〜６５６；Ｃｌｙｎｅｓら、２０００、ＮａｔＭｅｄ６：４４３〜４４６、両方ともその全体を援用する）おり、細胞ベースのアッセイではＦｃと特定のＦｃγＲとの相互作用の親和性が標的の細胞毒性と相関している（Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００１、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７６：６５９１〜６６０４；Ｐｒｅｓｔａら、２００２、ＢｉｏｃｈｅｍＳｏｃＴｒａｎｓ３０：４８７〜４９０；Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００２、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７７：２６７３３〜２６７４０、各々その内容を全体として援用する）。加えて、ヒトでの臨床効力とＦｃγＲＩＩＩａの高（Ｖ１５８）親和性または低（Ｆ１５８）親和性多形であるヒトのアロタイプとの相関が観察されている（Ｃａｒｔｒｏｎら、２００２、Ｂｌｏｏｄ９９：７５４〜７５８；Ｗｅｎｇ＆Ｌｅｖｙ、２００３、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ、２１：３９４０〜３９４７、両方ともその全体を援用する）。これらのデータを総じると、特定のＦｃγＲに結合するよう最適化された抗体のほうが、患者でエフェクター機能をうまく媒介して癌細胞を一層効率的に破壊するのではないかと考えられる。活性化レセプターと抑制性レセプターとのバランスは考慮すべき重要な事項のひとつであり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ／ｃ、ＦｃγＲＩＩＩａなどの活性化レセプターとの親和性は亢進されるが抑制レセプターＦｃγＲＩＩｂとの親和性は低減された抗体から、最適なエフェクター機能が得られる可能性がある。さらに、ＦｃγＲは抗原提示細胞による抗原の取り込みとプロセシングを媒介できるため、ＦｃγＲ親和性が亢進されると適応免疫応答を引き出す抗体治療薬の応用幅が改善される可能性もある。ＣＤ３０に関しては、ＡＤＣＣがいくつかの抗ＣＤ３０抗体の抗腫瘍細胞毒性能力の重要なエフェクター機序であるとみなされている（Ｂｌｅｅｋｅｒら、２００４、ＪＩｍｍｕｎｏｌ．１７３（７）：４６９９〜７０７；Ｂｉｅｒら、１９９８、ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ４６：１６７〜１７３、両方ともその全体を援用する）。

ＦｃγＲへの結合を選択的に亢進させたＦｃ変異体が、すでにある程度は得られており、場合によっては細胞ベースのエフェクター機能アッセイでこれらのＦｃ変異体の力価と効力とが亢進されることも明らかになっている。たとえば、米国特許第５，６２４，８２１号明細書、ＰＣＴ国際公開第００／４２０７２号パンフレット、米国特許第６，７３７，０５６号明細書、米国特許出願第１０／６７２，２８０号明細書、ＰＣＴＵＳ０３／３０２４９、米国特許出願第１０／８２２，２３１号明細書、さらには２００４年１１月１２日に出願され、「ＯｐｔｉｍｉｚｅｄＦｃＶａｒｉａｎｔｓ」という名称の米国特許出願第６０／６２７，７７４号明細書ならびにそこに引用された文献（各々その内容を全体として援用する）を参照のこと。また、改変細胞系または変異体細胞系での抗体発現によって生成される改変糖型を用いて、ＦｃγＲに対するＦｃの親和性も高められている（Ｕｍａｎａら、１９９９、ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１７：１７６〜１８０；Ｄａｖｉｅｓら、２００１、ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ７４：２８８〜２９４；Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００２、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７７：２６７３３〜２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａら、２００３、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７８：３４６６〜３４７３、各々その内容を全体として援用する）。

本発明では、亢進されたエフェクター機能を提供する抗ＣＤ３０抗体の変異体が得られる。また、臨床特性を最適化した抗ＣＤ３０抗体が提供されるさまざまな改変例についても説明する。さらに、抗ＣＤ３０抗体の多岐にわたる応用例が企図される。

一態様では、本発明は、変異体のＦｃ領域を含む抗ＣＤ３０抗体を対象にしたものである。この抗体は、親抗体とは異なる親和性でＦｃγＲと結合する。特定の実施形態では、親のＦｃ領域に対して２２１、２２２、２２４、２２７、２２８、２３０、２３１、２２３、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４９、２５０、２５８、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７８、２８０、２８１、２８３、２８５、２８６、２８８、２９０、２９１、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０２、３１３、３１７、３１８、３２０、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５３３６および４２８からなる群から選択される位置でＦｃ領域に少なくとも１つのアミノ酸置換、ここで、番号付けはＫａｂａｔの分類によるＥＵ指標に基づくものである。他の態様では、この抗体は、Ｆｃに１つ以上のアミノ酸置換を含み、それが２３０、２４０、２４４、２４５、２４７、２６２、２６３、２６６、２７３、２７５、２９９、３０２、３１３、３２３、３２５、３２８，および３３２から選択される。さらに別の変形例では、置換が、Ｈ２６８Ｅ、Ａ３３０Ｙ、Ａ３３０Ｌ、Ｇ２３６Ａからなる群から選択される。

他の態様では、抗体はヒト化抗体である。この抗体は、配列番号２、４、７〜９および１１からなる群から選択される可変重鎖配列および／または配列番号１、３、５、６および１０からなる群から選択される可変軽鎖配列を含む。特定の変形例では、この抗体は、配列番号１３〜１９からなる群から選択される重鎖定常領域および／または配列番号１２の軽鎖定常領域を含む。さらに他の変形例では、この抗体は、配列番号１９の重鎖配列および／または配列番号２０の軽鎖配列を含む。

この抗体は、改変糖型を含み得る。特定の変形例では、抗ＣＤ３０抗体のフコシル化率を親抗体に比して低くすることができる。

特定の変形例では、抗体が、ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａからなる群から選択されるＦｃγＲに対して、変化した結合を呈する。特定の変形例では、抗体が、親抗体よりも高い親和性でＦｃγＲに結合する。他の変形例では、抗体が、親抗体よりも低い親和性でＦｃγＲに結合する。

この抗体は、親のＦｃ領域と比較してエフェクター機能の変化したものであっても構わない。特定の実施形態では、エフェクター機能がＡＤＣＣである。たとえば、ＡＤＣＣは親抗体よりも亢進されていてもよいし、親抗体よりも抑制されていてもよい。

他の態様では、本発明は、抗ＣＤ３０抗体を投与することでＣＤ３０に関連した１つ以上の兆候の方法を対象とするものである。特定の変形例では、この兆候は、癌、自己免疫疾患、感染症、炎症性疾患を含む。抗ＣＤＥ３０抗体は、本願明細書に開示するどのようなバリエーションのものであっても構わない。

さらに、本発明は、抗ＣＤ３０抗体を含む医薬品組成物を対象とするものである。抗ＣＤ３０抗体を含む製剤も含まれる。この医薬品組成物は、抗ＣＤ３０抗体と薬学的に許容されるキャリアとを含み得るものである。

また、本発明は、抗ＣＤ３０抗体を含む別の組成物をも対象とするものである。一実施形態では、この組成物は、抗ＣＤ３０抗体と、塩化ナトリウムと、界面活性剤とを含む。特定の実施形態では、界面活性剤がソルビトールである。他の実施形態では、界面活性剤がポリソルベート２０またはポリソルベート８０である。さらに他の実施形態では、組成物のｐＨを６．０〜７．０の範囲とすることができる。

以下の図面は、本発明の態様をさらに説明するものであり、本発明の範囲を限定するものではない。

本発明は、抗ＣＤ３０抗体およびその使用方法を対象とするものである。特定の態様では、抗ＣＤ３０抗体は、変異体のＦｃ領域を含む。他の実施形態では、抗体がヒト化されている。本発明はさらに、抗ＣＤ３０抗体をさまざまな疾患の兆候に使用する方法も対象とするものである。

本発明をなお一層完全に理解できるようにするために、下記にいくつかの定義をしておく。このような定義には、文法的に等価な語句を包含することを意図している。

「ＡＤＣＣ」または「抗体依存性細胞媒介性細胞毒性」を本願明細書で使用する場合、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞毒性細胞が標的細胞の結合抗体を認識し、次いで標的細胞の溶解を引き起こす、細胞による反応を意味する。

「ＡＤＣＰ」または抗体依存性細胞による貪食を本願明細書で使用する場合、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞毒性細胞が標的細胞の結合抗体を認識し、次いで標的細胞の貪食を引き起こす、細胞による反応を意味する。

本願明細書における「アミノ酸修飾」は、ポリペプチド配列におけるアミノ酸置換、挿入および／または欠失を意味する。本願明細書において好ましいアミノ酸修飾は置換である。本願明細書における「アミノ酸置換」または「置換」は、ポリペプチドの親配列の特定の位置においてアミノ酸が他のアミノ酸と交換されることを意味する。たとえば、置換Ｉ３３２Ｅは、３３２位のイソロイシンがグルタミン酸と交換された、この場合はＦｃ変異体である変異体ポリペプチドを示す。

「アミノ酸」および「アミノ酸アイデンティティ（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」を本願明細書で使用する場合、天然に存在する２０種類のアミノ酸あるいは、特定の決まった位置に存在し得る非天然の任意の類似体のうちの１つを意味する。本願明細書における「タンパク質」は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチドおよびペプチドをはじめとする、少なくとも２つの共有結合的に結合されたアミノ酸を意味する。このタンパク質は、天然に存在するアミノ酸とペプチド結合とで構成されていてもよいし、特にＬＣペプチドを患者に投与するような場合はペプトイド（Ｓｉｍｏｎら、１９９２、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ８９（２０）：９３６７（その全体を援用する）を参照のこと）などの合成のペプチド模倣構造すなわち「類似体」であってもよい。よって、本願明細書で使用する場合の「アミノ酸」または「ペプチド残基」は、天然に存在するアミノ酸と合成アミノ酸の両方を意味する。たとえば、ホモフェニルアラニン、シトルリンおよびノレロイシン（ｎｏｒｅｌｅｕｃｉｎｅ）が本発明の目的で考慮されるアミノ酸である。また、「アミノ酸」には、プロリンおよびヒドロキシプロリンなどのイミノ酸残基も含む。側鎖は（Ｒ）配置であっても（Ｓ）配置であってもよい。好ましい実施形態では、アミノ酸は（Ｓ）またはＬ配置である。非天然型の側鎖を用いる場合、非アミノ酸置換基を利用して、たとえばｉｎｖｉｖｏでの分解を妨害または遅らせてもよい。

「エフェクター機能」を本願明細書で使用する場合、抗体Ｆｃ領域とＦｃレセプターまたはリガンドとの相互作用に起因する生化学的イベントを意味する。エフェクター機能には、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、ＣＤＣを含むがこれに限定されるものではない。「エフェクター細胞」を本願明細書で使用する場合、１つ以上のＦｃレセプターを発現し、１つ以上のエフェクター機能を媒介する免疫系の細胞を意味する。エフェクター細胞は、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、肥満細胞、血小板、Ｂ細胞、大顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、γγＴ細胞を含むがこれに限定されるものではなく、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、サルを含むがこれに限定されるものではない、どのような生物体由来のものであっても構わない。本願明細書における「ライブラリ」は、精製された形または未精製の形の、核酸またはアミノ酸配列の一覧、可変位置での核酸またはアミノ酸置換、ライブラリ配列をコードする核酸を含む物理的なライブラリまたはＦｃ変異体タンパク質を含む物理的なライブラリを含むが、これに限定されるものではない、あらゆる形態のＦｃ変異体を意味する。

「Ｆｃ」または「Ｆｃ領域」を本願明細書で使用する場合、最初の定常領域免疫グロブリンドメインを除く抗体の定常領域を含むポリペプチドを意味する。よって、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、これらのドメインに対する可撓性ヒンジのＮ末端を示す。ＩｇＡおよびＩｇＭの場合、ＦｃにはＪ鎖が含まれることがある。ＩｇＧの場合、Ｆｃは免疫グロブリンドメインＣガンマ２およびＣガンマ３（Ｃγ２およびＣγ３）と、Ｃガンマ１（Ｃγ１）とＣガンマ２（Ｃγ２）との間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は変わることがあるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、カルボキシル末端に残基Ｃ２２６またはＰ２３０を含むものと定義される（番号付けはＫａｂａｔの分類によるＥＵ指標に基づく）。Ｆｃはこの領域を単独で示すこともあるし、後述するようにＦｃポリペプチドとの関連でこの領域を示すこともある。「Ｆｃポリペプチド」を本願明細書で使用する場合、Ｆｃ領域全体またはその一部を含むポリペプチドを意味する。Ｆｃポリペプチドは、抗体、Ｆｃ融合物、単離Ｆｃ、Ｆｃフラグメントを含む。

「Ｆｃガンマレセプター」または「ＦｃγＲ」を本願明細書で使用する場合、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域を結合し、ＦｃγＲ遺伝子によって実質的にコードされるタンパク質のファミリのメンバを意味する。ヒトでは、このファミリは、アイソフォームＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂおよびＦｃγＲＩｃをはじめとするＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；アイソフォームＦｃγＲＩＩａ（アロタイプＨ１３１およびＲ１３１を含む）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ−１およびＦｃγＲＩＩｂ−２を含む）およびＦｃγＲＩＩｃをはじめとするＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；アイソフォームＦｃγＲＩＩＩａ（アロタイプＶ１５８およびＦ１５８を含む）およびＦｃγＲＩＩＩｂ（アロタイプＦｃγＲＩＩＩｂ−ＮＡ１およびＦｃγＲＩＩＩｂ−ＮＡ２を含む）をはじめとするＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）（Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、２００２、ＩｍｍｕｎｏｌＬｅｔｔ８２：５７〜６５、その全体を援用する）ならびに、未発見のあらゆるヒトＦｃγＲまたはＦｃγＲアイソフォームまたはアロタイプを含むがこれに限定されるものではない。ＦｃγＲは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、サルを含むがこれに限定されるものではない、どのような生物体由来のものであっても構わない。マウスＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）およびＦｃγＲＩＩＩ−２（ＣＤ１６〜２）ならびに、未発見のあらゆるマウスＦｃγＲまたはＦｃγＲアイソフォームまたはアロタイプを含むがこれに限定されるものではない。

「Ｆｃリガンド」を本願明細書で使用する場合、抗体のＦｃ領域に結合してＦｃリガンド錯体を形成する、任意の生物体由来の分子、好ましくはポリペプチドを意味する。Ｆｃリガンドは、ＦｃγＲ、ＦｃγＲ、ＦｃγＲ、ＦｃＲｎ、Ｃ１ｑ、Ｃ３、マンナン結合レクチン、マンノースレセプター、ブドウ球菌タンパク質Ａ、連鎖球菌タンパク質Ｇ、ウイルスＦｃγＲを含むがこれに限定されるものではない。また、Ｆｃリガンドは、ＦｃγＲと相同的であるＦｃレセプターのファミリであるＦｃレセプター相同体（ＦｃＲＨ）も含む（Ｄａｖｉｓら、２００２、ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓ１９０：１２３〜１３６）。Ｆｃリガンドには、Ｆｃを結合する未発見の分子も含み得る。

「ＩｇＧ」を本願明細書で使用する場合、認識された免疫グロブリンガンマ遺伝子によって実質的にコードされる抗体のクラスに属するポリペプチドを意味する。ヒトでは、このクラスには、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４が含まれる。マウスでは、このクラスには、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３が含まれる。本願明細書における「免疫グロブリン（Ｉｇ）」は、免疫グロブリン遺伝子によって実質的にコードされる１つ以上のポリペプチドからなるタンパク質を意味する。免疫グロブリンは、抗体を含むがこれに限定されるものではない。また、免疫グロブリンは、全長抗体、抗体フラグメント、個々の免疫グロブリンドメインを含むがこれに限定されるものではない、多数の構造形態を有することがある。本願明細書における「免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン」は、タンパク質構造の当業者によって解明されたような独特な構造的実体として存在する免疫グロブリンの領域を意味する。Ｉｇドメインは一般に、特徴的なβサンドイッチ構造のフォールディングトポロジーを有する。抗体のＩｇＧクラスの周知のＩｇドメインは、Ｖ_H、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｖ_L、Ｃ_Lである。

「親ポリペプチド」または「前駆体ポリペプチド」（Ｆｃの親または前駆体を含む）を本願明細書で使用する場合、後から修飾されて変異体を生成するポリペプチドを意味する。前記親ポリペプチドは、天然に存在するポリペプチドであってもよいし、天然に存在するポリペプチドの変異体または改変されたものであってもよい。親ポリペプチドは、ポリペプチド自体、親ポリペプチドを含む組成物、あるいはこれをコードするアミノ酸配列を示すこともある。したがって、「親のＦｃポリペプチド」を本願明細書で使用する場合、修飾されて変異体を生成するＦｃポリペプチドを意味し、「親抗体」を本願明細書で使用する場合、修飾されて変異体抗体を生成する抗体を意味する。

上記にて概説したように、Ｆｃ分子の特定の位置を変化させることが可能である。「位置」を本願明細書で使用する場合、タンパク質配列中の場所を意味する。位置には連番を付してもよいし、Ｋａｂａｔの分類によるＥＵ指標などの確立された形式で番号を付しても構わない。たとえば、位置２９７はヒト抗体ＩｇＧ１の一位置である。対応する位置については、一般に他の親配列と整列させることで上記にて概説したようにして判断する。

「残基」を本願明細書で使用する場合、タンパク質およびその関連するアミノ酸アイデンティティにおける位置を意味する。たとえば、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７とも呼ばれ、Ｎ２９７とも呼ばれる）はヒト抗体ＩｇＧ１の残基である。

「標的抗原」を本願明細書で使用する場合、特定の抗体の可変領域に特異的に結合される分子を意味する。標的抗原は、タンパク質、炭水化物、脂質または他の化合物であってもよい。

「標的細胞」を本願明細書で使用する場合、標的抗原を発現する細胞を意味する。

「可変領域」を本願明細書で使用する場合、それぞれ、カッパ、λ、重鎖免疫グロブリン遺伝子の遺伝子座を構成するＶκ、Ｖλおよび／またはＶＨ遺伝子のうちのいずれかで実質的にコードされる１つ以上のＩｇドメインを含む免疫グロブリンの領域を意味する。

「変異体タンパク質」、「タンパク質変異体」、「変異体ポリペプチド」または「ポリペプチド変異体」を本願明細書で使用する場合、少なくとも１つのアミノ酸修飾が理由で親ポリペプチド配列のものとは異なるポリペプチド配列を意味する。変異体ポリペプチドは、ポリペプチド自体、ポリペプチドを含む組成物またはこれをコードするアミノ配列を示すこともある。好ましくは、変異体ポリペプチドは、親ポリペプチドとの比較で約１から約１０のアミノ酸修飾などの少なくとも１つのアミノ酸修飾を有し、好ましくは親との比較で約１から約５つのアミノ酸修飾を有する。本願明細書の変異体ポリペプチド配列は、親ポリペプチド配列に対して好ましくは少なくとも約８０％相同性であり、最も好ましくは少なくとも約９０％相同性、より一層好ましくは少なくとも約９５％相同性である。したがって、「変異体Ｆｃ」または「Ｆｃ変異体」を本願明細書で使用する場合、少なくとも１つのアミノ酸修飾が理由で親のＦｃ配列のものとは異なるＦｃ配列を意味する。Ｆｃ変異体は、Ｆｃ領域を包含するだけでもよいし、抗体との関連で、Ｆｃ融合物またはＦｃで実質的にコードされる他のポリペプチドが存在してもよい。Ｆｃ変異体は、Ｆｃポリペプチド自体、Ｆｃ変異体ポリペプチドを含む組成物またはこれをコードするアミノ酸配列を示すこともある。したがって、「変異体抗ＣＤ３０抗体」または「抗ＣＤ３０抗体変異体」を本願明細書で使用する場合、少なくとも１つのアミノ酸修飾が理由で親の抗ＣＤ３０抗体配列のものとは配列の異なる上記にて定義したような抗ＣＤ３０抗体を意味する。変異体抗ＣＤ３０抗体は、タンパク質自体、タンパク質を含む組成物またはこれをコードするアミノ酸配列を示すこともある。

本発明において述べるすべての免疫グロブリン重鎖定常領域位置について、番号付けはＫａｂａｔの分類によるＥＵ指標に基づくものである（Ｋａｂａｔら、１９９１、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ、ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ）。「Ｋａｂａｔの分類によるＥＵ指標」とは、ヒトＩｇＧ１ＥＵ抗体の残基の番号付けを示す。

抗ＣＤ３０抗体
抗ＣＤ３０抗体は、ＣＤ３０に結合する抗体である。抗ＣＤ３０抗体は、ＣＤ３０のどのようなエピトープまたは領域でも結合でき、ＣＤ３０のフラグメント、スプライスフォームまたは異常（ａｂｅｒｒｅｎｔ）型に対して特異的なことがある。本件特許出願は、抗ＣＤ−３０抗体を対象とするものである。さまざまな抗ＣＤ３０抗体が、発明の名称「ＭｅｔｈｏｄｓｏｆＧｅｎｅｒａｔｉｎｇＶａｒｉａｎｔＰｒｏｔｅｉｎｓｗｉｔｈＩｎｃｒｅａｓｅｄＨｏｓｔＳｔｒｉｎｇＣｏｎｔｅｎｔａｎｄＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓＴｈｅｒｅｏｆ」で２００４年１２月３日に出願された米国特許出願第１１／００４，５９０号明細書；発明の名称「Ａｎｔｉ−ＣＤ３０Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」で２００５年１０月６日に出願された米国仮特許出願第６０／７２４，６２４号明細書；発明の名称「Ａｎｔｉ−ＣＤ３０Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」で２００５年１１月１８日に出願された同第６０／７３７，９９８号明細書；発明の名称「Ａｎｔｉ−ＣＤ３０Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」で２００５年１２月１５日に出願された同第６０／７５０，６９７号明細書；発明の名称「Ａｎｔｉ−ＣＤ３０Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」で２００６年２月２４日に出願された同第６０／７７６，５９８号明細書（各々その内容を全体として援用する）に開示されている。抗ＣＤ３０抗体は、たとえば、従来の抗体、抗体フラグメント、二重特異性抗体または他の免疫グロブリン形式または抗体融合物であればよい。抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体または完全ヒト抗体であってもよい。また、本願明細書で説明するように、抗体には標識された抗体または共有結合的に修飾された抗体も含む。

抗体
抗体とは、特定の抗原を結合する免疫タンパク質である。ヒトやマウスを含むほとんどの哺乳動物では、抗体は一対の重ポリペプチド鎖と軽ポリペプチド鎖で構成される。軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、抗体間で有意な配列多様性を示し、標的抗原の結合を担っている。各々の鎖は、個々の免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインで構成されるため、そのようなタンパク質に対して総称としての免疫グロブリンを用いる。

特定の実施形態では、抗体はモノクローナルであってもポリクローナルであってもよい。抗体は、アンタゴニスト抗体、アゴニスト抗体、中和抗体、抑制抗体または刺激抗体であっても構わない。

従来の抗体構造単位は一般に、四量体を含む。各四量体は一般に、同一の２対のポリペプチド鎖で構成され、各対が１つの「軽」鎖（一般に分子量約２５ｋＤａ）と１つの「重」鎖（一般に分子量約５０〜７０ｋＤａ）とを有する。ヒトの軽鎖は、カッパおよびλ軽鎖として分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファまたはエプシロンとして分類され、この抗体のアイソタイプをそれぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥと規定する。ＩｇＧには、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４を含むがこれに限定されるものではない、いくつかのサブクラスがある。ＩｇＭには、ＩｇＭ１およびＩｇＭ２を含むがこれに限定されるものではない、サブクラスがある。ＩｇＡには、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含むがこれに限定されるものではない、いくつかのサブクラスがある。よって、「アイソタイプ」を本願明細書で使用する場合、その定常領域の化学的および抗原的な特徴によって定義される免疫グロブリンの任意のサブクラスを意味する。周知のヒト免疫グロブリンアイソタイプには、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ１、ＩｇＭ２、ＩｇＤ、ＩｇＥがある。

軽鎖および重鎖は各々、可変領域および定常領域と呼ばれる２つの別々の領域で構成される。ＩｇＧ重鎖は、それぞれ重鎖可変ドメイン、重鎖定常ドメイン１、重鎖定常ドメイン２、重鎖定常ドメイン３を示す、Ｖ_H−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３の順でＮ末端からＣ末端にリンクした４つの免疫グロブリンドメインで構成される（それぞれ、重鎖可変ドメイン、定常ガンマ１ドメイン、定常ガンマ２ドメイン、定常ガンマ３ドメインを示す、Ｖ_H−Ｃγ１−Ｃγ２−Ｃγ３とも呼ばれる）。ＩｇＧ軽鎖は、それぞれ、軽鎖可変ドメインおよび軽鎖定常ドメインを示す、Ｖ_L−Ｃ_Lの順でＮ末端からＣ末端にリンクした２つの免疫グロブリンドメインで構成される。定常領域は、配列多様性が少なく、重要な生化学的イベントを引き出す多数の天然タンパク質の結合を担っている。これらの抗体クラス間の際だった特長は、その定常領域であるが、Ｖ領域にこれよりも微妙な差異が存在する場合もある。

抗体の可変領域は、分子の抗原結合決定基を含有するため、抗体の標的抗原に対する特異性を左右する。可変領域は、同じクラス内で他の抗体とは配列が最も異なるため、このように呼ばれる。各鎖のアミノ末端部分には、主に抗原認識を担う約１００から１１０個またはこれより多いアミノ酸からなる可変領域が含まれる。可変領域では、重鎖および軽鎖のＶドメイン各々に３つのループが集まって抗原結合部位を形成している。このループは各々、相補性決定領域と呼ばれ（本願明細書では、以下「ＣＤＲ」と呼ぶ）、そこではアミノ酸配列のばらつきが最も顕著である。重鎖と軽鎖それぞれに３つずつ、合計で６つのＣＤＲがあるが、これをＶ_H ＣＤＲ１、Ｖ_H ＣＤＲ２、Ｖ_H ＣＤＲ３、Ｖ_L ＣＤＲ１、Ｖ_L ＣＤＲ２、Ｖ_L ＣＤＲ３とする。ＣＤＲの外の可変領域をフレームワーク（ＦＲ）領域と呼ぶ。ＣＤＲほどの多様性はないが、ＦＲ領域でも異なる抗体間で配列の違いが生じる。全体で、この抗体の特徴的なアーキテクチャがゆえに、免疫系によってかなりの抗原結合多様性（ＣＤＲ）を探索し、多岐にわたる抗原に対する特異性を得ることが可能な安定した足場（ＦＲ領域）を得られる。異なる生物体由来のさまざまな可変領域フラグメントについて多数の高分解能構造を利用でき、未結合のものもあれば抗原との複合体を形成しているものもある。抗体可変領域の配列および構造的な特長については、たとえば、Ｍｏｒｅａら、１９９７、ＢｉｏｐｈｙｓＣｈｅｍ６８：９〜１６；Ｍｏｒｅａら、２０００、Ｍｅｔｈｏｄｓ２０：２６７〜２７９、（ここにその全体を援用する）に開示されており、また、抗体の保存された特長については、たとえば、Ｍａｙｎａｒｄら、２０００、ＡｎｎｕＲｅｖＢｉｏｍｅｄＥｎｇ２：３３９〜３７６（ここにその全体を援用する）に開示されている。

各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を担う定常領域を定義する。Ｋａｂａｔらは、重鎖および軽鎖の可変領域の多数の一次配列を収集した。配列の保存度合いに応じて、彼らは個々の一次配列をＣＤＲとフレームワークとに分類し、その一覧を作成した（ＳＥＱＵＥＮＣＥＳＯＦＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬＩＮＴＥＲＥＳＴ、第５版、ＮＩＨｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ、Ｎｏ．９１−３２４２、Ｅ．Ａ．Ｋａｂａｔらを参照のこと）。

免疫グロブリンのＩｇＧサブクラスでは、重鎖にいくつかの免疫グロブリンドメインがある。本願明細書における「免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン」は、別々の三次構造を有する免疫グロブリンの領域を意味する。本発明において興味深いのは、定常重（ＣＨ）ドメインおよびヒンジドメインをはじめとする重鎖ドメインである。ＩｇＧ抗体との関連で、ＩｇＧアイソタイプは各々３つのＣＨ領域を有する。したがって、ＩｇＧとの関連で、「ＣＨ」ドメインは以下のとおりである。「ＣＨ１」はＫａｂａｔの分類によるＥＵ指標に基づく位置１１８〜２２０を示し、「ＣＨ２」はＫａｂａｔの分類によるＥＵ指標に基づく位置２３７〜３４０を示し、「ＣＨ３」はＫａｂａｔの分類によるＥＵ指標に基づく位置３４１〜４４７を示す。

重鎖の他のタイプのＩｇドメインのひとつがヒンジ領域である。本願明細書における「ヒンジ」または「ヒンジ領域」または「抗体ヒンジ領域」または「免疫グロブリンヒンジ領域」は、抗体の第１の定常ドメインと第２の定常ドメインとの間にアミノ酸を含む可撓性ポリペプチドを意味する。構造的には、ＩｇＧのＣＨ１ドメインはＥＵ位置２２０で終端し、ＩｇＧのＣＨ２ドメインが残基ＥＵ位置２３７で開始される。よって、ＩｇＧの場合、本願明細書では抗体ヒンジを位置２２１（ＩｇＧ１のＤ２２１）から２３６（ＩｇＧ１のＧ２３６）を含むものと定義し、この場合の番号付けはＫａｂａｔの分類によるＥＵ指標に基づくものである。いくつかの実施形態では、たとえば、Ｆｃ領域との関連で、下側の（ｌｏｗｅｒ）ヒンジが含まれるが、この「下側のヒンジ」とは一般に、位置２２６または２３０を示す。「抗体」の定義に具体的に含まれるのは、Ｆｃ変異体部分を含有する全長抗体である。本願明細書における「全長抗体」は、可変領域および定常領域を含む、抗体の天然の生物学的形状をなす構造を意味する。たとえば、ヒトやマウスをはじめとするほとんどの哺乳動物では、ＩｇＧクラスの全長抗体は四量体であり、２つの免疫グロブリン鎖の同一の２対からなり、各対が１つの軽鎖と１つの重鎖とを有し、各軽鎖が免疫グロブリンドメインＶ_LおよびＣ_Lを含み、各重鎖が免疫グロブリンドメインＶ_H、Ｃγ１、Ｃγ２，およびＣγ３を含む。たとえばラクダやラマなどの何種類かの哺乳動物では、ＩｇＧ抗体が２つの重鎖のみからなり、各重鎖がＦｃ領域に結合した可変ドメインを含む場合もある。「ＩｇＧ」を本願明細書で使用する場合、認識された免疫グロブリンガンマ遺伝子で実質的にコードされる抗体のクラスに属するポリペプチドを意味する。ヒトでは、このクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４を含む。マウスでは、このクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３を含む。

従来技術において周知のように、ヒトの個体群には免疫グロブリン多型が存在する。Ｇｍ型の多型は、ヒトのマーカーであるＩｇＧ１分子、ＩｇＧ２分子、ＩｇＧ３分子に対してＧ１ｍ、Ｇ２ｍ、Ｇ３ｍアロタイプと呼ばれるアロタイプ抗原決定基をコードするアレルを有するＩＧＨＧ１遺伝子、ＩＧＨＧ２遺伝子、ＩＧＨＧ３遺伝子によって判断される（ガンマ４鎖にはＧｍアロタイプが見つかっていない）。マーカーについては、「アロタイプ」と「イソアロタイプ」とに分類してもよい。これらは、アイソタイプ間の強い配列相同性に応じた異なる血清学的根拠に基づいて区別される。アロタイプとは、Ｉｇ遺伝子のアレル型によって特定される抗原決定基である。アロタイプでは、異なる個体の重鎖または軽鎖のアミノ酸配列にわずかな差異が認められる。１つのアミノ酸の違いだけでもアロタイプ決定基が生じる可能性があるが、多くの場合はいくつかのアミノ酸置換が発生している。アロタイプは、サブクラスのアレル間の配列の差であり、これによって抗血清はアレルの違いだけを認識する。イソアロタイプは、１つ以上の他のアイソタイプの非多型相同領域と共通のエピトープを産生するひとつのアイソタイプにおけるアレルであり、これがゆえに、抗血清が関連のアロタイプと関連の相同的アイソタイプの両方と反応する（Ｃｌａｒｋ、１９９７、ＩｇＧｅｆｆｅｃｔｏｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ、ＣｈｅｍＩｍｍｕｎｏｌ．６５：８８〜１１０；Ｇｏｒｍａｎ＆Ｃｌａｒｋ、１９９０、ＳｅｍｉｎＩｍｍｕｎｏｌ２（６）：４５７〜６６（両方ともその内容を全体としてここに援用する））。

ヒト免疫グロブリンのアレル型は十分にキャラクタライズされている（ＷＨＯＲｅｖｉｅｗｏｆｔｈｅｎｏｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅａｌｌｏｔｙｐｉｃａｎｄｒｅｌａｔｅｄｍａｒｋｅｒｓｏｆｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ．ＪＩｍｍｕｎｏｇｅｎ１９７６、３：３５７〜３６２；ＷＨＯＲｅｖｉｅｗｏｆｔｈｅｎｏｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅａｌｌｏｔｙｐｉｃａｎｄｒｅｌａｔｅｄｍａｒｋｅｒｓｏｆｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ．１９７６、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６、５９９〜６０１；ＬｏｇｈｅｍＥｖａｎ、１９８６、Ａｌｌｏｔｙｐｉｃｍａｒｋｅｒｓ、ＭｏｎｏｇｒＡｌｌｅｒｇｙ１９：４０〜５１、いずれもその全体を援用する）。加えて、他の多型もキャラクタライズされている（Ｋｉｍら、２００１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．５４：１〜９、その内容を全体としてここに援用する）。現時点では、Ｇ１ｍ（１、２、３、１７）またはＧ１ｍ（ａ、ｘ、ｆ、ｚ）、Ｇ２ｍ（２３）またはＧ２ｍ（ｎ）、Ｇ３ｍ（５、６、１０、１１、１３、１４、１５、１６、２１、２４、２６、２７、２８）またはＧ３ｍ（ｂ１、ｃ３、ｂ５、ｂ０、ｂ３、ｂ４、ｓ、ｔ、ｇ１、ｃ５、ｕ、ｖ、ｇ５）という１８種類のＧｍアロタイプが知られている（Ｌｅｆｒａｎｃら、ＴｈｅｈｕｍａｎＩｇＧｓｕｂｃｌａｓｓｅｓ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｐｅｒｇａｍｏｎ、Ｏｘｆｏｒｄ、第４３〜７８ページ（１９９０）；Ｌｅｆｒａｎｃ、Ｇ．ら、１９７９、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．：５０、１９９〜２１１、両方ともその全体をここに援用する）。決まった組み合わせで受け継がれるアロタイプがＧｍハプロタイプと呼ばれる。位置と関連のアミノ酸置換を示す図３に、ヒトＩｇＧ１（図３ａ）およびＩｇＧ２（図３ｂ）のガンマ鎖の一般的なハプロタイプを示す。本発明のＦｃ変異体は、どのような免疫グロブリン遺伝子のどのようなアロタイプ、イソアロタイプまたはハプロタイプで実質的にコードされてもよい。

あるいは、この抗体には、抗体フラグメント、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ドメイン抗体、合成抗体（本願明細書では「抗体模倣物」と呼ぶ場合もある）、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体融合物（「抗体コンジュゲート」）、それぞれのフラグメントを含むがこれに限定されるものではない、さまざまな構造のものが可能である。

抗体フラグメント、二重特異性抗体および他の免疫グロブリン形式
一実施形態では、抗体は抗体フラグメントである。特に興味深いのは、Ｆｃ領域、Ｆｃ融合物および重鎖の定常領域（ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）を含む抗体であり、ここでも定常重領域融合物が含まれる。

具体的な抗体フラグメントとしては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、（ｉｉｉ）単一抗体のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｉｖ）単一の可変からなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４〜５４６）、（ｖ）単離ＣＤＲ領域、（ｖｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメントすなわち、リンクしたＦａｂフラグメント２つを含む二価のフラグメント、（ｖｉｉ）単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、この場合、２つのドメインを関連させて抗原結合部位の形成を可能にするペプチドリンカーによってＶＨドメインとＶＬドメインとがリンクしている（Ｂｉｒｄら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３〜４２６、Ｈｕｓｔｏｎら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：５８７９〜５８８３）、（ｖｉｉｉ）二重特異性単鎖Ｆｖ二量体（ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５）、（ｉｘ）遺伝子融合物で構成される「ダイアボディ」または「トライアボディ」、多価または多選択性フラグメント（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、２０００、ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．３２６：４６１〜４７９；国際公開第９４／１３８０４号パンフレット；Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４〜６４４８）を含むがこれに限定されるものではない。また、抗体フラグメントを修飾してもよい。たとえば、ＶＨドメインとＶＬドメインとをリンクしているジスルフィドブリッジを取り入れることで、分子を安定化させることができる（Ｒｅｉｔｅｒら、１９９６、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．１４：１２３９〜１２４５）。

一実施形態では、本発明の抗体は多選択性抗体、とりわけ二重特異性抗体、「ダイアボディ」と呼ばれることもある。これらは、２つ（またはそれよりも多く）の異なる抗原と結合する抗体である。ダイアボディは、化学的に調製またはハイブリッドハイブリドーマから調製するなど、従来技術において周知のさまざまな方法で製造可能なものである（ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＷｉｎｔｅｒ、１９９３、ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４：４４６〜４４９）。一実施形態では、抗体はミニボディである。ミニボディは、ＣＨ３ドメインに連結されたｓｃＦｖを含む最小化抗体様タンパク質である。Ｈｕら、１９９６、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５６：３０５５〜３０６１。場合によっては、ｓｃＦｖはＦｃ領域に連結可能であり、ヒンジ領域の一部または全部がこれに含まれることもある。

キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体
いくつかの実施形態では、異なる種からの混合物を足場成分とすることが可能である。それ自体では、抗体が抗体である場合、このような抗体はキメラ抗体および／またはヒト化抗体であってもよい。一般に、「キメラ抗体」および「ヒト化抗体」はいずれも、２つ以上の種からの領域を組み合わせた抗体を示す。たとえば、「キメラ抗体」は従来、マウス（または場合によってはラット）由来の可変領域とヒト由来の定常領域とを含む。「ヒト化抗体」は一般に、可変ドメインフレームワーク領域をヒト抗体にみられる配列と入れ換えた非ヒト抗体を示す。通常、ヒト化抗体では、ＣＤＲを除く抗体全体がヒト由来のポリヌクレオチドでコードされるか、ＣＤＲ内以外はそのような抗体と同一である。非ヒト生物体に由来する核酸で一部または全部がコードされるＣＤＲを、ヒト抗体の可変領域のベータシートフレームワークに移植して抗体を作製するが、その特異性に関しては移植されたＣＤＲによって判断する。このような抗体の作製については、たとえば、国際公開第９２／１１０１８号パンフレット、Ｊｏｎｅｓ、１９８６、Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２〜５２５、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４〜１５３６に記載されている。最初の移植コンストラクトで失われた親和性を回復するには選択されたアクセプターフレームワーク残基の対応するドナー残基への「逆変異」が必要になることが多い（米国特許第５５３０１０１号明細書；米国特許第５５８５０８９号明細書；米国特許第５６９３７６１号明細書；米国特許第５６９３７６２号明細書；米国特許第６１８０３７０号明細書；米国特許第５８５９２０５号明細書；米国特許第５８２１３３７号明細書；米国特許第６０５４２９７号明細書；米国特許第６４０７２１３号明細書）。ヒト化抗体は、一般にヒト免疫グロブリンの定常領域である免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含むものであると最適であり、よって、一般にヒトＦｃ領域を含む。また、遺伝子改変した免疫系を持つマウスを用いてヒト化抗体を生成することも可能である。Ｒｏｑｕｅら、２００４、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：６３９〜６５４。非ヒト抗体をヒト化して再形成するためのさまざまな手法および方法が従来技術において周知である（Ｔｓｕｒｕｓｈｉｔａ＆Ｖａｓｑｕｅｚ、２００４、ＨｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎｏｆＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆＢＣｅｌｌｓ、５３３〜５４５、ＥｌｓｅｖｉｅｒＳｃｉｅｎｃｅ（ＵＳＡ）ならびにそこに引用されている参考文献を参照のこと）。ヒト化方法には、Ｊｏｎｅｓら、１９８６、Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２〜５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８；Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３〜３２９；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４〜１５３６；Ｑｕｅｅｎら、１９８９、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉ、ＵＳＡ８６：１００２９〜３３；Ｈｅら、１９９８、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９〜１０３５；Ｃａｒｔｅｒら、１９９２、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ８９：４２８５〜９、Ｐｒｅｓｔａら、１９９７、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５７（２０）：４５９３〜９；Ｇｏｒｍａｎら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：４１８１〜４１８５；Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒら、１９９８、ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ１１：３２１〜８に記載されている方法を含むがこれに限定されるものではない。ヒト化または非ヒト抗体の可変領域の免疫原性を減らすための他の方法には、たとえばＲｏｇｕｓｋａら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：９６９〜９７３に記載されているような表面再処理方法を含んでもよい。一実施形態では、親抗体は、従来技術において周知のように親和性成熟されている。ヒト化および親和性成熟には、たとえば米国特許出願第１１／００４，５９０号明細書に記載されているような構造ベースの方法を利用してもよい。Ｗｕら、１９９９、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９４：１５１〜１６２；Ｂａｃａら、１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１６）：１０６７８〜１０６８４；Ｒｏｓｏｋら、１９９６、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（３７）：２２６１１〜２２６１８；Ｒａｄｅｒら、１９９８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：８９１０〜８９１５；Ｋｒａｕｓｓら、２００３、ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ１６（１０）：７５３〜７５９に記載されている方法を含むがこれに限定されるものではない選択ベースの方法を利用して、抗体の可変領域をヒト化および／または親和性成熟させてもよい。また、米国特許出願第０９／８１０，５０２号明細書；Ｔａｎら、２００２、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９〜１１２５；ＤｅＰａｓｃａｌｉｓら、２００２、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６〜３０８４に記載されている方法を含むがこれに限定されるものではない他のヒト化方法では、ＣＤＲの一部のみを移植する必要がある。

一実施形態では、抗体が、本願明細書にて概説するような少なくとも１つの修飾を有する完全ヒト抗体である。「完全ヒト抗体」または「完全なヒト抗体」は、本願明細書にて概説する修飾がなされたヒト染色体由来の抗体の遺伝子配列を有するヒト抗体である。完全ヒト抗体を得るには、たとえば、トランスジェニックマウス（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、１９９７、ＣｕｒｒＯｐｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ８：４５５〜４５８）または選択方法との組み合わせでのヒト抗体ライブラリ（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、１９９８、ＣｕｒｒＯｐｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ９：１０２〜１０８）を利用すればよい。

抗体融合物
一実施形態では、本発明の抗体が抗体融合タンパク質（本願明細書では「抗体コンジュゲート」と呼ぶこともある）である。抗体融合物のひとつのタイプがＦｃ融合物であり、これはＦｃ領域をコンジュゲートパートナーと連結する。「Ｆｃ融合物」を本願明細書で使用する場合、１つ以上のポリペプチドがＦｃ領域に作動的に結合されたタンパク質を意味する。Ｆｃ融合物は、本願明細書では、従来技術において用いられているように、用語「イムノアドヘシン」、「Ｉｇ融合物」、「Ｉｇキメラ」および「レセプターグロブリン」（ダッシュがある場合もある）の同義語を意味する（Ｃｈａｍｏｗら、１９９６、ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１４：５２〜６０；Ａｓｈｋｅｎａｚｉら、１９９７、ＣｕｒｒＯｐｉｎＩｍｍｕｎｏｌ９：１９５〜２００）。Ｆｃ融合物は、免疫グロブリンのＦｃ領域と融合パートナーとの組み合わせであり、一般にどのようなタンパク質または小分子でも可能である。事実上どのようなタンパク質または小分子でもＦｃにリンクさせてＦｃ融合物を生成することができる。タンパク質融合パートナーには、あらゆる抗体の可変領域、レセプターの標的結合領域、接着分子、リガンド、酵素、サイトカイン、炎症性細胞遊走因子または他のいくつかのタンパク質またはタンパク質ドメインを含み得るが、これに限定されるものではない。小分子融合パートナーには、Ｆｃ融合物を治療標的とするあらゆる治療薬を含み得る。このような標的は、疾患に関与するどのような分子であってもよく、好ましくは細胞外レセプターであればよい。

抗体に加えて、研究および治療において拡大しつつある役割を担う抗体様タンパク質に、Ｆｃ融合物がある（Ｃｈａｍｏｗら、１９９６、ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１４：５２〜６０；Ａｓｈｋｅｎａｚｉら、１９９７、ＣｕｒｒＯｐｉｎＩｍｍｕｎｏｌ９：１９５〜２００、両方ともここにその全体を援用する）。Ｆｃ融合物は、１つ以上のポリペプチドがＦｃに作動的に結合されたタンパク質である。Ｆｃ融合物は、抗体のＦｃ領域、よって、その有益なエフェクター機能および薬物動態と、レセプター、リガンドまたは他のいくつかのタンパク質またはタンパク質ドメインの標的結合領域とを組み合わせたものである。後者の役割は、標的認識を媒介することであり、よって、これは機能的には抗体可変領域と類似である。Ｆｃ融合物は抗体と構造的および機能的にオーバーラップするため、本発明での抗体に関する説明はＦｃ融合物にも適用される。

Ｆｃ融合物に加え、抗体融合物は、重鎖の定常領域と１つ以上の融合パートナー（ここでもあらゆる抗体の可変領域を含む）との融合物を含むのに対し、他の抗体融合物は融合パートナーとの実質的または完全な全長抗体である。一実施形態では、融合パートナーの役割のひとつに標的結合の媒介があり、よって、これは機能的には抗体の可変領域と類似である（事実、あり得る）。実質的にどのようなタンパク質または小分子でもＦｃにリンクしてＦｃ融合物（または抗体融合物）を生成できる。タンパク質融合パートナーには、レセプターの標的結合領域、接着分子、リガンド、酵素、サイトカイン、炎症性細胞遊走因子または他のいくつかのタンパク質またはタンパク質ドメインを含み得るが、これに限定されるものではない。小分子融合パートナーには、Ｆｃ融合物を治療標的とするあらゆる治療薬を含み得る。このような標的は、疾患に関与するどのような分子であってもよく、好ましくは細胞外レセプターであればよい。

コンジュゲートパートナーは、タンパク質性であっても非タンパク質性であっても構わない。後者の場合は一般に、抗体およびコンジュゲートパートナーの官能基を用いて生成される。たとえば、リンカーが従来技術において周知であり、たとえば、ホモ−またはヘテロ−二官能性リンカーは周知である（１９９４ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙｃａｔａｌｏｇ、架橋剤に関する技術セクション、第１５５〜２００ページ（本願明細書に援用する）を参照のこと）。

好適なコンジュゲートとしては、後述するような標識、薬剤ならびに、細胞毒性薬剤（化学療法薬など）または毒素またはこのような毒素の活性フラグメントを含むがこれに限定されるものではない細胞毒剤があげられるが、これに限定されるものではない。好適な毒素ならびにその対応するフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、クルシン、クロタン、フェノマイシン、エノマイシンなどがあげられる。また、細胞毒剤には、抗体にラジオアイソトープをコンジュゲートするか、あるいは共有結合的に抗体と結合したキレート剤に放射性核種を結合させて生成される放射化学物質も含まれる。別の実施形態では、カリケアマイシン、アウリスタチン、ゲルダナマイシン、メイタンシン、デュオカルマイシンおよび類似体を利用している；後者の場合、米国特許出願公開第２００３／００５０３３１号明細書（その内容を全体としてここに援用する）を参照のこと。

抗体の共有結合修飾
抗体の共有結合修飾は、本発明の範囲内に含まれるものであり、翻訳後に行われるのが一般的であるが常にそうだというわけではない。たとえば、抗体の特定のアミノ酸残基と、選択された側鎖またはＮまたはＣ末端残基と反応できる有機誘導体化剤とを反応させることで、抗体のいくつかのタイプの共有結合修飾を分子に導入する。

システイニル残基は、最も一般的にはクロロ酢酸またはクロロアセトアミドなどのα−ハロアセテート（ならびに対応するアミン）と反応し、カルボキシメチルまたはカルボキシアミドメチル誘導体を生成する。また、システイニル残基は、ブロモトリフルオロアセトン、α−ブロモ−β−（５−イミドゾイル）プロピオン酸、クロロアセチルホスフェート、Ｎ−アルキルマレイミド、３−ニトロ−２−ピリジルジスルフィド、メチル２−ピリジルジスルフィド、ｐ−クロロマーキュリーベンゾエート、２−クロロマーキュリー−４−ニトロフェノールまたはクロロ−７−ニトロベンゾ−２−オキサ−１，３−ジアゾールとの反応によって誘導体化される。

ヒスチジル残基は、ｐＨ５．５〜７．０でのジエチルピロカルボネートとの反応によって誘導体化される。これは、この薬剤が比較的ヒスチジル側鎖に特異的であるためである。パラ−ブロモフェナシルブロミドも有用である。この反応は、好ましくはｐＨ６．０の０．１Ｍカコジル酸ナトリウム中にて行われる。

リシニルおよびアミノ末端残基を無水コハク酸または他のカルボン酸無水物と反応させる。これらの薬剤での誘導体化には、リシニル残基の電荷を逆にする作用がある。アルファ−アミノ含有残基の誘導体化のための他の好適な試薬としては、メチルピコリンイミデートなどのイミドエステル；リン酸ピリドキサール；ピリドキサール；クロロボロハイドライド；トリニトロベンゼンスルホン酸；Ｏ−メチルイソ尿素；２，４−ペンタンジオン；グリオキシレートとのトランスアミナーゼ触媒反応物があげられる。

アルギニル残基は１または数種類の従来の試薬、なかでもフェニルグリオキサール、２，３−ブタンジオン、１，２−シクロヘキサンジオン、ニンヒドリンとの反応により修飾される。グアニジン官能基のｐＫａが高いがゆえに、アルギニン残基の誘導体化にはアルカリ条件下で反応を行う必要がある。さらに、これらの試薬をリシンの基ならびにアルギニンイプシロン−アミノ基と反応させることもできる。

チロシル残基の特異的修飾は、芳香族ジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタンとの反応によりスペクトル標識をチロシル残基に導入することに特に関心を払って行うことのできるものである。最も一般的には、Ｎ−アセチルイミジゾール（Ｎ−ａｃｅｔｙｌｉｍｉｄｉｚｏｌｅ）およびテトラニトロメタンを用いて、それぞれＯ−アセチルチロシル種および３−ニトロ誘導体を生成する。１２５Ｉまたは１３１Ｉを用いてチロシル残基をヨウ素化し、ラジオイムノアッセイに用いる標識タンパク質を調製するが、上述したクロラミンＴ法が適している。

カルボキシル側基（アスパルチルまたはグルタミル）は、カルボジイミド（Ｒ’−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒ’）との反応によって選択的に修飾される（式中、ＲおよびＲ’は任意に異なるアルキル基（１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニル−４−エチル）カルボジイミドまたは１−エチル−３−（４−アゾニア−４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミドなど）である）。さらに、アスパルチル残基およびグルタミル残基は、アンモニウムイオンとの反応によりアスパラギニル残基およびグルタミニル残基に変換される。

後述する方法以外にもさまざまな方法で用いられる水不溶性支持体マトリクスまたは表面に抗体を架橋させるには、二官能性薬剤での誘導体化が有用である。一般に用いられる架橋剤としては、たとえば、１，１−ビス（ジアゾアセチル）−２−フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、たとえば、４−アジドサリチル酸とのエステル、３，３’−ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）などのジスクシンイミジルエステルをはじめとするホモ二官能性イミドエステル、さらには、ビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタンなどの二官能性マレイミドがあげられる。メチル−３−［（ｐ−アジドフェニル）ジチオ］プロピオイミデートなどの誘導体化剤を用いると、光の存在下で架橋を形成できる光で活性化可能な中間体が得られる。あるいは、米国特許第３，９６９，２８７号明細書；同第３，６９１，０１６号明細書；同第４，１９５，１２８号明細書；同第４，２４７，６４２号明細書；同第４，２２９，５３７号明細書；同第４，３３０，４４０号明細書に記載されている臭化シアン活性化炭水化物などの反応性水不溶性マトリクスおよび反応性基質をタンパク質の固定化に利用する。

グルタミニル残基およびアスパラギニル残基は、脱アミノ化してそれぞれ対応するグルタミル残基およびアスパルチル残基になることが多い。あるいは、穏やかな酸性条件下でこれらの残基を脱アミノ化する。どちらの形態の残基も本発明の範囲に包含される。

他の修飾としては、プロリンおよびリシンのヒドロキシル化、セリルまたはスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニン、ヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：ＳｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．、ＳａｎＦｒａｎｃｉｓｃｏ、第７９〜８６ページ（１９８３））、Ｎ末端アミンのアセチル化、Ｃ末端カルボキシル基のアミド化があげられる。

抗体に対する他のタイプの共有結合修飾として、米国特許第４，６４０，８３５号明細書；同第４，４９６，６８９号明細書；同第４，３０１，１４４号明細書；同第４，６７０，４１７号明細書；同第４，７９１，１９２号明細書または同第４，１７９，３３７号明細書に記載されているような方法で、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールまたはポリオキシアルキレンなどのさまざまなポリオールを含むがこれに限定されるものではないさまざまな非タンパク質性ポリマーに、抗体をリンクさせることがある。また、従来技術において周知のように、抗体内のさまざまな位置でアミノ酸置換を生成して、ＰＥＧなどのポリマーの添加を容易にすることができる。たとえば、米国特許出願公開第２００５／０１１４０３７号明細書（全体として本願明細書に援用する）を参照のこと。

標識抗体
いくつかの実施形態では、本発明の抗体の共有結合修飾には１つ以上の標識を付加することが含まれる。場合によっては、これらも抗体融合物とみなされる。

「標識基」という用語は、検出可能なあらゆる標識を意味する。いくつかの実施形態では、さまざまな長さのスペーサーアームを介して標識基を抗体に連結させ、潜在的な立体障害を低減する。さまざまなタンパク質標識方法が従来技術において周知であり、本発明を実施するにあたって利用できる。

一般に標識には、ａ）放射活性または重アイソトープであってもよいアイソトープ標識；ｂ）磁気標識（磁性粒子など）；ｃ）酸化還元活性種；ｄ）光学色素；酵素基（ｅｎｚｙｍａｔｉｃｇｒｏｕｐ）（ホースラディッシュペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼなど）；ｅ）ビオチニル化基；ｆ）二次レポーター（ロイシンジッパーペア配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグなど）によって認識されるあらかじめ定められたポリペプチドエピトープなど、これらの標識が検出されるアッセイに応じてさまざまなクラスがある。いくつかの実施形態では、さまざまな長さのスペーサーアームを介して標識基を抗体に連結させ、潜在的な立体障害を低減する。さまざまなタンパク質標識方法が従来技術において周知であり、本発明を実施するにあたって利用できる。

具体的な標識としては、発色団、蛍光体およびフルオロフォアを含むがこれに限定されるものではない光学色素があげられ、後者が多くの場合の具体例である。フルオロフォアは「小分子」フルオレ（ｆｌｕｏｒｅ）であってもよいし、タンパク質性フルオレであっても構わない。

「蛍光標識」とは、固有の蛍光特性によって検出可能なあらゆる分子を意味する。好適な蛍光標識としては、フルオレセイン、ローダミン、テトラメチルローダミン、エオシン、エリスロシン、クマリン、メチル−クマリン、ピレン、マラカイトグリーン、スチルベン、ルシファーイエロー、カスケードブルーＪ、テキサスレッド、ＩＡＥＤＡＮＳ、ＥＤＡＮＳ、ＢＯＤＩＰＹＦＬ、ＬＣＲｅｄ６４０、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、ＬＣＲｅｄ７０５、オレゴングリーン、Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ染料（ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ３５０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４３０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５４６、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５６８、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５９４、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６３３、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６６０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６８０）、カスケードブルー、カスケードイエロー、Ｒ−フィコエリスリン（ＰＥ）（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）、ＦＩＴＣ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ、ＴｅｘａｓＲｅｄ（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７（ＡｍｅｒｓｈａｍＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ））があげられるが、これに限定されるものではない。フルオロフォアをはじめとする好適な光学色素が、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓＨａｎｄｂｏｏｋｂｙＲｉｃｈａｒｄＰ．Ｈａｕｇｌａｎｄ（ここに明示的に援用する）に記載されている。

好適なタンパク質性蛍光標識には、ＧＦＰのＲｅｎｉｌｌａ、ＰｔｉｌｏｓａｒｃｕｓまたはＡｅｑｕｏｒｅａ種を含む緑色蛍光タンパク質（Ｃｈａｌｆｉｅら、１９９４、Ｓｃｉｅｎｃｅ２６３：８０２〜８０５）、ＥＧＦＰ（ＣｌｏｎｔｅｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、ＧｅｎｂａｎｋＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｕｍｂｅｒＵ５５７６２）、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ、ＱｕａｎｔｕｍＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．１８０１ｄｅＭａｉｓｏｎｎｅｕｖｅＢｌｖｄ．Ｗｅｓｔ，８ｔｈＦｌｏｏｒ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，ＣａｎａｄａＨ３Ｈ１Ｊ９；Ｓｔａｕｂｅｒ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ２４：４６２〜４７１；Ｈｅｉｍら、１９９６、Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．６：１７８〜１８２）、強化型黄色蛍光タンパク質（ＥＹＦＰ、ＣｌｏｎｔｅｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、ルシフェラーゼ（Ｉｃｈｉｋｉら、１９９３、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：５４０８〜５４１７）、βガラクトシダーゼ（Ｎｏｌａｎら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：２６０３〜２６０７）およびＲｅｎｉｌｌａ（国際公開第９２／１５６７３号パンフレット、国際公開第９５／０７４６３号パンフレット、国際公開第９８／１４６０５号パンフレット、国際公開第９８／２６２７７号パンフレット、国際公開第９９／４９０１９号パンフレット、米国特許第５２９２６５８号明細書、同第５４１８１５５号明細書、同第５６８３８８８号明細書、同第５７４１６６８号明細書、同第５７７７０７９号明細書、同第５８０４３８７号明細書、同第５８７４３０４号明細書、同第５８７６９９５号明細書、同第５９２５５５８号明細書）も含まれるが、これに限定されるものではない。上記にて引用した参考文献をすべて明示的に本願明細書に援用する。

周知または未発見のあらゆる抗ＣＤ３０抗体の可変領域を本発明において利用できる。ＣＤ３０を標的する多数の有用な抗体が発見されている。

本発明の抗ＣＤ３０抗体にはＦｃフラグメントを含むことができる。本発明のＦｃフラグメントには、１〜９０％のＦｃ領域を含むことができ、１０〜９０％が好ましく、３０〜９０％が最も好ましい。よって、たとえば、本発明のＦｃフラグメントには、ＩｇＧ１のＣγ２ドメイン、ＩｇＧ１のＣγ２ドメインおよびヒンジ領域、ＩｇＧ１のＣγ３ドメイン等を含むことができる。一実施形態では、本発明のＦｃフラグメントにはさらに、融合パートナーを含むようにして、これを効果的にＦｃフラグメント融合物にすることができる。Ｆｃフラグメントは、他にもポリペプチド配列を含有するものであっても含有しなくても構わない。

本発明の抗ＣＤ３０抗体は、ヒト、マウスおよびラットを含むがこれに限定されるものではない齧歯類、ウサギおよびノウサギを含むがこれに限定されるものではないウサギ目、ラクダ、ラマ、ヒトコブラクダを含むがこれに限定されるものではないラクダ科、原猿亜目（Ｐｒｏｓｉｍｉａｎｓ）、広鼻下目（Ｐｌａｔｙｒｒｈｉｎｉ）（新世界ザル）、オナガザル類（Ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｏｉｄｅａ）（旧世界ザル）を含むがこれに限定されるものではない非ヒト霊長類、テナガザル科（Ｇｉｂｂｏｎｓ）、小型類人猿（ＬｅｓｓｅｒＡｐｅｓ）および大型類人猿（ＧｒｅａｔＡｐｅｓ）をはじめとするヒト上科（Ｈｏｍｉｎｏｉｄｅａ）を含むがこれに限定されるものではない、好ましくは哺乳動物である、どのような生物体由来の遺伝子でも実質的にコードできるものである。最も好ましい実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体は実質的にヒトである。本発明の抗ＣＤ３０抗体は、抗体クラスのうちのどこに属する免疫グロブリン遺伝子でも実質的にコードできるものである。最も好ましい実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、ヒトサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４をはじめとする抗体のＩｇＧクラスに属する配列を含む。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、抗体のＩｇＡ（ヒトサブクラスＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧまたはＩｇＭクラスに属する配列を含む。本発明の抗ＣＤ３０抗体は、２以上のタンパク質鎖を含むものであってもよい。すなわち、本発明は、ホモ−またはヘテロ−オリゴマーを含むモノマーまたはオリゴマーである抗ＣＤ３０抗体において利用できるものである。

２００６年１０月３日に出願され、全体として本願明細書に援用する米国特許出願第＿号明細書に参照されるように、位置２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２９５、２９６、２９８、２９９、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０および３３２での特定の組み合わせのアミノ酸修飾によって、ＦｃγＲ結合特性、エフェクター機能、さらには潜在的に抗体およびＦｃ融合物を含むＦｃポリペプチドの臨床特性を修飾することができる。特に、ＦｃγＲＩＩｂと比して１つ以上のヒト活性化レセプターに対する結合を選択的に改善する、あるいは、１つ以上の活性化レセプターに比してＦｃγＲＩＩｂに対する結合を選択的に改善するＦｃ変異体には、本願明細書にて説明するように、２３４Ｇ、２３４Ｉ、２３５Ｄ、２３５Ｅ、２３５Ｉ、２３５Ｙ、２３６Ａ、２３６Ｓ、２３９Ｄ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、２６７Ｑ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、２９３Ｒ、２９５Ｅ、３２４Ｇ、３２４Ｉ、３２７Ｈ、３２８Ａ、３２８Ｆ、３２８Ｉ、３３０Ｉ、３３０Ｌ、３３０Ｙ、３３２Ｄ、３３２Ｅからなる群から選択される置換を含み得る。

組み合わせることのできる別の置換例として、２９８Ａ、２９８Ｔ、３２６Ａ、３２６Ｄ、３２６Ｅ、３２６Ｗ、３２６Ｙ、３３３Ａ、３３３Ｓ、３３４Ｌ、３３４Ａを含むがこれに限定されるものではない、ＦｃγＲの親和性と補体価とを調節する他の置換があげられる（米国特許第６，７３７，０５６号明細書；Ｓｈｉｅｌｄｓら、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００１、２７６（９）：６５９１〜６６０４；米国特許第６，５２８，６２４号明細書；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、２００１、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１６６：２５７１〜２５７２）。本発明の変異体と組み合わせるのに特に有用となり得る好ましい変異体としては、置換２９８Ａ、３２６Ａ、３３３Ａ、３３４Ａを含む変異体があげられる。これらの置換を含むＦｃ変異体の、ヒト活性化レセプターＶ１５８およびＦ１５８ＦｃγＲＩＩＩａおよび抑制レセプターＦｃγＲＩＩｂに対する結合を測定するＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎデータ。本発明のＦｃγＲ選択的変異体と組み合わせてもよい別の置換としては２４７Ｌ、２５５Ｌ、２７０Ｅ、３９２Ｔ、３９６Ｌおよび４２１Ｋ（米国特許出願第１０／７５４，９２２号明細書；米国特許出願第１０／９０２，５８８号明細書）および２８０Ｈ、２８０Ｑおよび２８０Ｙ（米国特許出願第１０／３７０，７４９号明細書）が挙げられ、いずれも本願明細書に明示的に援用する。

他の実施形態では、本発明のＦｃ変異体をＦｃＲｎ結合を変化させるＦｃ変異体と組み合わせてもよい。特に、ＦｃＲｎへのＦｃ結合を高める変異体として、２５０Ｅ、２５０Ｑ、４２８Ｌ、４２８Ｆ、２５０Ｑ／４２８Ｌ（Ｈｉｎｔｏｎら、２００４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（８）：６２１３〜６２１６、Ｈｉｎｔｏｎら、２００６ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１７６：３４６〜３５６、米国特許出願第１１／１０２６２１号明細書、ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０３３０３７、ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１１２１３、米国特許出願第１０／８２２３００号明細書、米国特許出願第１０／６８７１１８号明細書、ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３４４４０、米国特許出願第１０／９６６６７３号明細書（各々その内容を全体として援用する）、２５６Ａ、２７２Ａ、２８６Ａ、３０５Ａ、３０７Ａ、３１１Ａ、３１２Ａ、３７６Ａ、３７８Ｑ、３８０Ａ、３８２Ａ、４３４Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓら、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００１、２７６（９）：６５９１〜６６０４、米国特許出願第１０／９８２４７０号明細書、米国特許第６７３７０５６号明細書、米国特許出願第１１／４２９７９３号明細書、米国特許出願第１１／４２９７８６号明細書、ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２９５１１、米国特許出願第１１／２０８４２２号明細書、各々その内容を全体として援用する）、２５２Ｆ、２５２Ｔ、２５２Ｙ、２５２Ｗ、２５４Ｔ、２５６Ｓ、２５６Ｒ、２５６Ｑ、２５６Ｅ、２５６Ｄ、２５６Ｔ、３０９Ｐ、３１１Ｓ、４３３Ｒ、４３３Ｓ、４３３Ｉ、４３３Ｐ、４３３Ｑ、４３４Ｈ、４３４Ｆ、４３４Ｙ、２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅ、４３３Ｋ／４３４Ｆ／４３６Ｈ、３０８Ｔ／３０９Ｐ／３１１Ｓ（ＤａｌｌＡｃｑｕａら、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２００２、１６９：５１７１〜５１８０、米国特許第７０８３７８４号明細書、ＰＣＴ／ＵＳ９７／０３３２１、米国特許第６８２１５０５号明細書、ＰＣＴ／ＵＳ０１／４８４３２、米国特許出願第１１／３９７３２８号明細書、各々その内容を全体として援用する）、２５７Ｃ、２５７Ｍ、２５７Ｌ、２５７Ｎ、２５７Ｙ、２７９Ｅ、２７９Ｑ、２７９Ｙ、２８１の後のＳｅｒの挿入、２８３Ｆ、２８４Ｅ、３０６Ｙ、３０７Ｖ、３０８Ｆ、３０８Ｙ３１１Ｖ、３８５Ｈ、３８５Ｎ、（ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０４１２２０、米国特許出願第１１／２７４０６５号明細書、米国特許出願第１１／４３６，２６６号明細書、各々その内容を全体として援用する）２０４Ｄ、２８４Ｅ、２８５Ｅ、２８６Ｄおよび２９０Ｅ（ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３７９２９、これを全体として援用する）を含むがこれに限定されるものではない。

Ｆｃ領域の鍵となる特長のひとつに、Ｎ２９７で発生する保存Ｎ−連結グリコシル化がある。ときにはオリゴ糖とも呼ばれるこの炭水化物が、抗体の構造および機能の点で重要な役割を果たし、哺乳動物の発現系を使って抗体を産生しなければならない主な理由のひとつとなっている。ＦｃγＲおよびＣ１ｑへの効率的なＦｃ結合には、この修飾が必要であり、Ｎ２９７炭水化物の組成の違いやその除去が、これらのタンパク質に対する結合に影響する（Ｕｍａｎａら、１９９９、ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１７：１７６〜１８０；Ｄａｖｉｅｓら、２００１、ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ７４：２８８〜２９４；Ｍｉｍｕｒａら、２００１、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７６：４５５３９〜４５５４７．；Ｒａｄａｅｖら、２００１、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７６：１６４７８〜１６４８３；Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００１、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７６：６５９１〜６６０４；Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００２、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７７：２６７３３〜２６７４０；Ｓｉｍｍｏｎｓら、２００２、ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ２６３：１３３〜１４７、各々その内容を全体として援用する）。

本発明のＦｃ変異体は、ヒト、マウスおよびラットを含むがこれに限定されるものではない齧歯類、ウサギおよびノウサギを含むがこれに限定されるものではないウサギ目、ラクダ、ラマ、ヒトコブラクダを含むがこれに限定されるものではないラクダ科、原猿亜目（Ｐｒｏｓｉｍｉａｎｓ）、広鼻下目（Ｐｌａｔｙｒｒｈｉｎｉ）（新世界ザル）、オナガザル類（Ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｏｉｄｅａ）（旧世界ザル）を含むがこれに限定されるものではない非ヒト霊長類、テナガザル科（Ｇｉｂｂｏｎｓ）、小型類人猿（ＬｅｓｓｅｒＡｐｅｓ）および大型類人猿（ＧｒｅａｔＡｐｅｓ）をはじめとするヒト上科（Ｈｏｍｉｎｏｉｄｅａ）を含むがこれに限定されるものではない、好ましくは哺乳動物である、どのような生物体由来の遺伝子でも実質的にコードできるものである。特定の実施形態では、本発明のＦｃ変異体は実質的にヒトである。

最も好ましい実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、ヒトＩｇＧ配列をベースにしているため、ヒトＩｇＧ配列を「基本」配列として利用し、これを基準にして、たとえば齧歯類や霊長類の配列などの他の生物体由来の配列ならびに、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧＤ、ＩｇＧＭなどの他の免疫グロブリンクラスの配列を含むがこれに限定されるものではない他の配列を比較する。本発明の抗ＣＤ３０抗体は１つの親の抗ＣＤ３０抗体との関連で改変されるが、他の第２の親の抗ＣＤ３０抗体の背景状況（ｃｏｎｔｅｘｔ）に変異体を改変または「導入」してもよいことを企図している。これは、一般に２つの抗ＣＤ３０抗体配列間での配列または構造上の相同性に基づいて、第１および第２の抗ＣＤ３０抗体間の「等価な」または「対応する」残基と置換を判断することによってなされる。相同性を確認するために、本願明細書にて概説する第１の抗ＣＤ３０抗体のアミノ酸配列を第２の抗ＣＤ３０抗体の配列と直接比較する。配列を整列した後、従来技術において周知の１つ以上の相同性アライメントプログラムを用いて（たとえば種のうちどれを取るかと言われれば保存残基を用いる）、アライメントを維持するために必要な挿入および欠失を考慮して（すなわち、任意の欠失および挿入による保存残基の除去を回避して）、第１の抗ＣＤ３０抗体の一次配列の特定のアミノ酸と等価な残基を定義する。保存残基のアライメントは、好ましくは、そのような残基を１００％保存するものとすべきである。しかしながら、保存残基の７５％を超えるアライメントまたは５０％と少ないアライメントも等価な残基を定義するのには適している。また、構造がすでに分かっている抗ＣＤ３０抗体に対する三次構造のレベルである第１の抗ＣＤ３０抗体と第２の抗ＣＤ３０抗体との間の構造的な相同性を判断して等価な残基を定義してもよい。この場合、等価な残基は、親または前駆体の特定のアミノ酸残基の２以上の主鎖原子の原子座標（ＮｏｎＮ、ＣＡｏｎＣＡ、ＣｏｎＣおよびＯｏｎＯ）がアライメント後に０．１３ｎｍ以内、好ましくは０．１ｎｍ以内になるものとしてとして定義される。アライメントは、最良のモデルが正しい向きで位置決めされ、タンパク質の非水素タンパク質原子の原子座標のオーバーラップが最大になった後に達成される。等価な残基または対応する残基をどのように判断するかとは関係なく、かつ、抗ＣＤ３０抗体が作られる親の抗ＣＤ３０抗体のアイデンティティとも関係なく、伝達対象となることを意味しているのは、本発明で発見された抗ＣＤ３０抗体を改変して、有意な配列または前記抗ＣＤ３０抗体との構造相同性を有する任意の第２の親の抗ＣＤ３０抗体にしてもよい点である。よって、たとえば、等価な残基を判断するための上述した方法または他の方法を利用して、親の抗ＣＤ３０抗体がヒトＩｇＧ１である変異体抗ＣＤ３０抗体を生成すると、前記変異体抗ＣＤ３０抗体を、ヒトＩｇＧ２親の抗ＣＤ３０抗体、ヒトＩｇＡ親の抗ＣＤ３０抗体、マウスＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ２ｂ親の抗ＣＤ３０抗体などで改変できる。繰り返すが、上述したように、親の抗ＣＤ３０抗体の背景状況は、本発明の抗ＣＤ３０抗体を他の親の抗ＣＤ３０抗体に導入する性能には影響しない。たとえば、１つのＣＤ３０エピトープを標的するヒトＩｇＧ１抗体において改変された変異体抗ＣＤ３０抗体を、異なるＣＤ３０エピトープを標的するヒトＩｇＧ２抗体に導入できるといった具合である。

本発明の抗ＣＤ３０抗体は、ＣＤ３０を結合する事実上どのような抗体であってもよい。本発明の抗ＣＤ３０抗体は、ＣＤ３０か他のＲＴＫなどの他の標的かに対する選択性あるいは、ＣＤ３０標的の特定の形態か他の形態かに対する選択性を示すことがある。一例としては、全長かスプライスバリアントか、細胞表面か可溶性の形態か、さまざまな多型変異体に対する選択性、あるいは標的の特定のコンホメーション形に対する選択性があげられる。本発明の抗ＣＤ３０抗体は、ＣＤ３０のどのようなエピトープまたは領域でも結合でき、ＣＤ３０のフラグメント、バリアントフォーム、スプライスフォームまたは異常型に対して特異的なことがある。

本発明の抗ＣＤ３０抗体は、広範囲にわたる製品において利用できるものである。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、治療用、診断用または研究調査用の試薬であり、好ましくは治療薬である。あるいは、本発明の抗ＣＤ３０抗体を農業または工業用途に用いてもよい。本発明の抗ＣＤ３０抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルである抗体組成物において利用できるものである。本発明の抗ＣＤ３０抗体は、アゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、中和抗体、抑制抗体または刺激抗体であっても構わない。好ましい実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体を利用して、ＣＤ３０標的抗原、たとえば癌細胞を持つ標的細胞を殺す。別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体を利用して、ＣＤ３０標的抗原をブロック、アンタゴナイズ、アゴナイズする。別の好ましい実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体を利用して、標的抗原をブロック、アンタゴナイズまたはアゴナイズし、標的抗原を持つ標的細胞を殺す。

修飾
本発明は、多数の治療的に関連する特性に合わせて最適化された変異体抗ＣＤ３０抗体を提供するものである。変異体抗ＣＤ３０抗体は、親の抗ＣＤ３０抗体に関連した１つ以上のアミノ酸修飾を含み、ここで、前記アミノ酸修飾（単数または複数）は、１つ以上の最適化された特性を提供するものである。よって、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、変異体抗ＣＤ３０抗体である。本発明の抗ＣＤ３０抗体は、少なくとも１つのアミノ酸修飾が理由で、アミノ酸配列の点でその親の抗ＣＤ３０抗体とは異なっている。よって、本発明の変異体抗ＣＤ３０抗体は、親と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾を有する。あるいは、本発明の変異体抗ＣＤ３０抗体は、親と比較してたとえば約１から５０のアミノ酸修飾、好ましくは約１から１０のアミノ酸修飾、最も好ましくは約１から約５のアミノ酸修飾など、親と比較して２以上のアミノ酸修飾を有していてもよい。よって、変異体抗ＣＤ３０抗体の配列と親の抗ＣＤ３０抗体の配列は実質的に相同である。たとえば、本願明細書にて記載の変異体抗ＣＤ３０抗体配列は、親の抗ＣＤ３０抗体配列に対して約８０％相同であり、好ましくは少なくとも約９０％相同、最も好ましくは少なくとも約９５％相同である。

最も好ましい実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、親よりも最適化されたエフェクター機能特性の得られるアミノ酸修飾を含む。最も好ましい置換ならびに最適化されたエフェクター機能特性が、米国特許出願第１０／６７２，２８０号明細書、ＰＣＴＵＳ０３／３０２４９、米国特許出願第１０／８２２，２３１号明細書、２００４年１１月１２日に発明の名称「ＯｐｔｉｍｉｚｅｄＦｃＶａｒｉａｎｔｓ」で出願された米国特許出願第６０／６２７，７７４号明細書に記載されている。最適化できる特性には、ＦｃγＲに対して亢進された親和性または低減された親和性を含むがこれに限定されるものではない。好ましい実施形態では、ヒト活性化ＦｃγＲ、好ましくはＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂ、最も好ましくはＦｃγＲＩＩＩａに対する親和性が亢進されるように本発明の抗ＣＤ３０抗体を最適化する。別の好ましい実施形態では、ヒト抑制レセプターＦｃγＲＩＩｂに対する親和性が低減されるように抗ＣＤ３０抗体を最適化する。これらの好ましい実施形態では、ヒトにおける治療特性が亢進された、たとえばエフェクター機能が亢進され、かつ抗癌力価の高められた抗ＣＤ３０抗体を得ることを見込んでいる。別の実施形態では、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂを含むがこれに限定されるものではないヒトＦｃγＲに対する親和性が低減または除去されるように本発明の抗ＣＤ３０抗体を最適化する。これらの実施形態では、ヒトにおける治療特性が亢進された、たとえばエフェクター機能が低減され、かつ毒性が低減された抗ＣＤ３０抗体を得ることを見込んでいる。他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、１つ以上のＦｃγＲに対する親和性が亢進されるが、１つ以上の他のＦｃγＲに対する親和性は低減される。たとえば、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａに対する結合が亢進されるが、ＦｃγＲＩＩｂへの結合は低減されるものであってもよい。あるいは、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩに対する結合が亢進されるが、ＦｃγＲＩＩｂへの結合は低減されるものであってもよい。さらに他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、ＦｃγＲＩＩｂに対する親和性が亢進されるが、１つ以上の活性化ＦｃγＲへの親和性は低減されるものであってもよい。

好ましい実施形態は、ヒトＦｃγＲへのＦｃ結合の最適化を含むが、別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、齧歯類および非ヒト霊長類を含むがこれに限定されるものではない非ヒト生物体からのＦｃγＲに対する親和性が亢進または低減される。非ヒトＦｃγＲへの結合が最適化された抗ＣＤ３０抗体は、実験において利用できる。たとえば、特定の薬剤候補の効力、毒性、薬物動態などの特性の試験を可能にする、さまざまな疾患についてのマウスモデルが得られる。従来技術において周知のように、癌細胞をマウスに移植または注射して、ヒトの癌を模倣することができる（異種移植と呼ばれるプロセス）。１つ以上のマウスＦｃγＲに合わせて最適化された抗ＣＤ３０抗体を含む抗ＣＤ３０抗体の試験を行うことで、タンパク質の効力、その作用機序などに関する貴重な情報を得られることがある。また、本発明の抗ＣＤ３０抗体を、グリコシル化フォームにおいて亢進された官能性および／または溶液特性に合わせて最適化してもよい。好ましい実施形態では、グリコシル化された本発明の抗ＣＤ３０抗体は、親の抗ＣＤ３０抗体のグリコシル化フォームよりも高い親和性でＦｃリガンドを結合する。前記Ｆｃリガンドは、ＦｃγＲ、Ｃ１ｑ、ＦｃＲｎおよびタンパク質ＡおよびＧを含むがこれに限定されるものではなく、ヒト、マウス、ラット、ウサギまたはサル、好ましくはヒトを含むがこれに限定されるものではない、どのような起源に由来するものであってもよい。別の好ましい実施形態では、親の抗ＣＤ３０抗体のグリコシル化フォームよりも一層安定および／または一層可溶性になるように抗ＣＤ３０抗体を最適化する。

本発明のＣＤ３０標的タンパク質は、相補体タンパク質、ＦｃＲｎ、Ｆｃレセプター相同体（ＦｃＲＨ）を含むがこれに限定されるものではない、ＦｃγＲ以外のＦｃリガンドとの相互作用を調節する修飾を含むものであってもよい。ＦｃＲＨは、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、ＦｃＲＨ４、ＦｃＲＨ５、ＦｃＲＨ６を含むがこれに限定されるものではない（Ｄａｖｉｓら、２００２、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｉｅｗｓ１９０：１２３〜１３６）。

好ましくは、本発明の抗ＣＤ３０抗体のＦｃリガンド特異性によって、その治療面での有用性が決まることになる。特定の抗ＣＤ３０抗体の治療目的での有用性は、エピトープまたはＣＤ３０標的抗原の形ならびに処置対象となる疾患または兆候に左右されることになる。標的と兆候によっては、亢進されたＦｃγＲによるエフェクター機能が好ましいこともある。これは、抗癌抗ＣＤ３０抗体の場合に特に有益となり得る。よって、活性化ＦｃγＲに対する親和性が亢進および／または抑制ＦｃγＲに対する親和性が低減される抗ＣＤ３０抗体を含む抗ＣＤ３０抗体を利用することができる。標的と兆候によっては、異なる活性化ＦｃγＲに対して異なる選択性の得られる抗ＣＤ３０抗体を利用すると、さらに有益なこともある。たとえば、場合によっては、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩａへの結合は亢進されるがＦｃγＲＩに対してはそうではないと望ましいこともあれば、他の場合には、ＦｃγＲＩＩａのみに対して結合の亢進が好ましいこともある。特定の標的および兆候では、ＦｃγＲ−媒介および相補体−媒介エフェクター機能の両方を亢進する抗ＣＤ３０抗体を利用すると好ましいこともあれば、他の場合には、ＦｃγＲ−媒介または相補体−媒介エフェクター機能のいずれかを亢進する抗ＣＤ３０抗体を利用すると都合がよいこともある。ＣＤ３０標的または癌兆候によっては、たとえば、Ｃ１ｑ、１つ以上のＦｃγＲ’、ＦｃＲｎまたは１つ以上の他のＦｃリガンドへの結合をノックアウトすることで、１つ以上のエフェクター機能を低減または除去すると都合がよいこともある。他の標的および兆候では、抑制ＦｃγＲＩＩｂに対する結合は亢進されるが、ＷＴレベル、活性化ＦｃγＲへの結合が低減または除去される抗ＣＤ３０抗体を利用すると好ましいことがある。これは、たとえば、抗ＣＤ３０抗体の目的が、炎症または自己免疫疾患の抑制あるいは免疫系を何らかの方法で調節することである場合に特に有用となり得る。

特定の疾患を処置するための特定の抗ＣＤ３０抗体の最も有益な選択性を判断する上で明らかに重要なパラメータのひとつに、抗ＣＤ３０抗体の背景状況すなわち、どのようなタイプの抗ＣＤ３０抗体を利用するのかということがある。よって、特定の抗ＣＤ３０抗体のＦｃリガンド選択性または特異性がゆえに、融合物またはコンジュゲートパートナーが連結された抗体または抗ＣＤ３０抗体を構成するか否か次第で異なる特性が得られる。たとえば、毒素、ラジオヌクレオチドまたは他のコンジュゲートのほうが、これを含む抗ＣＤ３０抗体の１つ以上のＦｃリガンドに対する結合が低減または除去されると、正常な細胞よりも毒性が低くなることがある。もうひとつの例として、炎症または自己免疫疾患を抑制するために、活性化ＦｃγＲに対する親和性が亢進された（これらのＦｃγＲを結合してその活性化を妨害するなど）抗ＣＤ３０抗体を利用すると好ましいことがある。反対に、ＦｃγＲＩＩｂ親和性が亢進された２以上のＦｃ領域を含む抗ＣＤ３０抗体が、免疫細胞表面でこのレセプターを共エンゲージすると、これらの細胞の増殖が抑制されることもある。一方、場合によっては、抗ＣＤ３０抗体が、ある細胞タイプでその標的抗原をエンゲージするが、標的抗原からの別の細胞ではＦｃγＲをエンゲージすることもあれば、他の場合には、標的抗原と同じ細胞の表面でＦｃγＲをエンゲージすると都合がよいこともある。たとえば、１つ以上のＦｃγＲを発現する細胞上の抗原を抗体が標的する場合、その細胞の表面でのＦｃγＲへの結合を亢進または低減させる抗ＣＤ３０抗体を利用すると有益なことがある。これは、たとえば、抗ＣＤ３０抗体を抗癌剤として利用し、同じ細胞表面での標的抗原とＦｃγＲの共エンゲージによって、成長阻害、アポトーシスまたは他の抗増殖作用につながるシグナル伝達イベントがその細胞内で促進されるような場合であろう。あるいは、免疫系を何らかの方法で調節するのに抗ＣＤ３０抗体を利用する場合に、同じ細胞での抗原およびＦｃγＲの共エンゲージが都合がよいこともある（この場合、標的抗原とＦｃγＲの共エンゲージによって何らかの増殖作用または抗増殖作用が得られる）。同様に、２以上のＦｃ領域を含む抗ＣＤ３０抗体が、ＦｃγＲ選択性または特異性を調節して同じ細胞の表面でＦｃγＲを共エンゲージする抗ＣＤ３０抗体から恩恵をうけることもある。

本発明の抗ＣＤ３０抗体のＦｃリガンド特異性を調節して、特定のＣＤ３０エピトープ、兆候または患者個体群に適することがある異なるエフェクター機能プロファイルを生成することが可能である。表１に、さまざまなレセプターとの結合の改善、結合の低減または結合に対する影響なし（このような変化が特定の状況において有益になり得る）を含むレセプター結合プロファイルのいくつかの好ましい実施形態を示す。以下の表に示すレセプター結合プロファイルは、ここに明記したレセプターに対して増減可能なものである。加えて、ここに明記した結合の変化は、たとえば、相補体活性化を遮断するためにＣ１ｑに対する結合を除去することと組み合わせることで、あるいは、相補体活性化を増すためにＣ１ｑへの結合を亢進させることと組み合わせることで、Ｃ１ｑまたはＦｃＲｎなどの他のレセプターに対する他の結合の変化と関連するものとなり得る。他のレセプター結合プロファイルを持つ他の実施形態が可能であり、ここに列挙したレセプター結合プロファイルは一例である。

ＦｃγＲに異なる多型形態が存在することで、本発明の抗ＣＤ３０抗体の治療的な有用性に影響するさらに他のパラメータが得られる。異なるクラスのＦｃγＲに対する特定の抗ＣＤ３０抗体の特異性および選択性は、特定の疾患を処置するための特定の抗原を標的する抗ＣＤ３０抗体の能力に大きく影響するのに対し、これらのレセプターの異なる多型形態に対する抗ＣＤ３０抗体の特異性または選択性を利用すれば、どの研究調査前または前臨床実験が試験に適しているか、つまり最終的にはどの患者個体群が処置に応答するのかしないのかを、ある程度まで判断できる。よって、ＦｃγＲ、Ｃ１ｑ、ＦｃＲｎおよびＦｃＲＨ多型を含むがこれに限定されるものではないＦｃリガンド多型に対する本発明の抗ＣＤ３０抗体の特異性または選択性を利用して、有効な研究調査および前臨床実験、臨床試験設計、患者の選択、用量依存性および／または臨床試験に関する他の態様の選択肢を導き出すことができる。

本発明の抗ＣＤ３０抗体を、ＦｃγＲ、Ｃ１ｑ、ＦｃＲｎ、ＦｃＲ相同体および／または現時点では未発見のＦｃリガンドを含むがこれに限定されるものではない１つ以上のＦｃリガンドとの間の相互作用を変化または最適化させるＦｃ領域の他のアミノ酸修飾と組み合わせてもよい。追加の修飾によって、Ｆｃリガンドに対する親和性および／または特異性を変化または最適化させてもよい。また、追加の修飾によって、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、ＣＤＣおよび／または血清半減期を含むがこれに限定されるものではないエフェクター機能を変化または最適化させてもよい。このような組み合わせによって、抗体に、付加的、相乗的または新規な特性が得られることがある。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体を、周知のＦｃ変異体（Ｄｕｎｃａｎら、１９８８、Ｎａｔｕｒｅ３３２：５６３〜５６４；Ｌｕｎｄら、１９９１、ＪＩｍｍｕｎｏｌ１４７：２６５７〜２６６２；Ｌｕｎｄら、１９９２、ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ２９：５３〜５９；Ａｌｅｇｒｅら、１９９４、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ５７：１５３７〜１５４３；Ｈｕｔｃｈｉｎｓら、１９９５、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ９２：１１９８０〜１１９８４；Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、１９９５、ＩｍｍｕｎｏｌＬｅｔｔ４４：１１１〜１１７；Ｌｕｎｄら、１９９５、ＦａｓｅｂＪ９：１１５〜１１９；Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、１９９６、ＩｍｍｕｎｏｌＬｅｔｔ５４：１０１〜１０４；Ｌｕｎｄら、１９９６、ＪＩｍｍｕｎｏｌ１５７：４９６３〜４９６９；Ａｒｍｏｕｒら、１９９９、ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ２９：２６１３〜２６２４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、２０００、ＪＩｍｍｕｎｏｌ１６４：４１７８〜４１８４；Ｒｅｄｄｙら、２０００、ＪＩｍｍｕｎｏｌ１６４：１９２５〜１９３３；Ｘｕら、２０００、ＣｅｌｌＩｍｍｕｎｏｌ２００：１６〜２６；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、２００１、ＪＩｍｍｕｎｏｌ１６６：２５７１〜２５７５；Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００１、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７６：６５９１〜６６０４；Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、２００２、ＩｍｍｕｎｏｌＬｅｔｔ８２：５７〜６５；Ｐｒｅｓｔａら、２００２、ＢｉｏｃｈｅｍＳｏｃＴｒａｎｓ３０：４８７〜４９０；Ｈｉｎｔｏｎら、２００４、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７９：６２１３〜６２１６）（米国特許第５，６２４，８２１号明細書；米国特許第５，８８５，５７３号明細書；米国特許第６，１９４，５５１号明細書；ＰＣＴ国際公開第００／４２０７２号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第９９／５８５７２号パンフレット；米国特許出願公開第２００４／０００２５８７Ａ１）号明細書、米国特許第６，７３７，０５６号明細書、ＰＣＴＵＳ２００４／０００６４３、米国特許出願第１０／３７０，７４９号明細書，およびＰＣＴ／ＵＳ２００４／００５１１２）と組み合わせることができる。たとえば、米国特許第６，７３７，０５６号明細書、ＰＣＴＵＳ２００４／０００６４３、米国特許出願第１０／３７０，７４９号明細書およびＰＣＴ／ＵＳ２００４／００５１１２に記載されているように、置換Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ｄ、Ｋ３２６Ｅ、Ｋ３２６Ｄ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４ＡおよびＰ３９６ＬによってＦｃγＲ結合の最適化および／またはＡＤＣＣの亢進が得られる。さらに、Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、２００１、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１６６：２５７１〜２５７２に開示されているように、置換Ｋ３２６Ｗ、Ｋ３２６ＹおよびＥ３３３Ｓによって、相補体タンパク質Ｃ１ｑに対する結合が亢進され、ＣＤＣも亢進される。最後に、Ｈｉｎｔｏｎら、２００４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（８）：６２１３〜６２１６に記載されているように、置換Ｔ２５０Ｑ、Ｔ２５０Ｅ、Ｍ４２８ＬおよびＭ４２８Ｆによって、ＦｃＲｎへの結合が亢進され、薬物動態が改善される。上記の参考文献については、いずれもその全体を援用する。

ＦｃγＲ、Ｃ１ｑおよびＦｃＲｎの結合部位はＦｃ領域にあるため、Ｆｃ領域のＩｇＧの差がＦｃγＲ−およびＣ１ｑ−媒介エフェクター機能の差を担っている可能性が高い。また、たとえば、抗体のＦａｂおよびヒンジ領域などの抗ＣＤ３０抗体の他の非Ｆｃ領域で修飾を行うことができる可能性がある。たとえば、米国仮特許出願第６０／６１４，９４４号明細書、米国仮特許出願第６０／６１９，４０９号明細書、米国特許出願第１１／０９０，９８１号明細書（各々その内容を全体として援用する）に開示されているように、抗体のＦａｂおよびヒンジ領域が、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞による貪食（ＡＤＣＰ）、相補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）などのエフェクター機能に影響することがある。よって、本発明の抗ＣＤ３０抗体のＦｃ領域の外での修飾も企図される。たとえば、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、抗体のＶＬ、ＣＬ、ＶＨ、ＣＨ１および／またはヒンジ領域に１つ以上のアミノ酸修飾を含み得る。

他の修飾によって、たとえば、２００３年１２月２２日に出願された米国特許出願第６０／５３１，７５２号明細書（その全体を援用する）に記載されているように、たとえば別のまたは新規なＦｃレセプター結合部位など、抗ＣＤ３０抗体への別の結合決定基または新規な結合決定基を得られることもある。一実施形態では、一抗体アイソタイプの抗ＣＤ３０抗体を、異なるアイソタイプのＦｃレセプターに結合するように改変してもよい。これは、それぞれのＦｃレセプターに対するＦｃ結合部位が大きくオーバーラップしないようなときに特に適用可能である。たとえば、ＦｃγＲＩに対するＩｇＡ結合の構造決定基をＩｇＧ抗ＣＤ３０抗体に改変してもよい。

本発明の抗ＣＤ３０抗体は、抗ＣＤ３０抗体のｉｎｖｉｖｏ薬物動態特性を調節する修飾を含み得る。これには、新生児のＦｃレセプターＦｃＲｎに対する親和性を亢進する修飾（米国特許出願第１０／０２０３５４号明細書；国際公開第２００１ＵＳ００４８４３２号パンフレット；ＥＰ２００１０００９９７０６３；米国特許第６２７７３７５号明細書；米国特許出願第０９／９３３４９７号明細書；国際公開第１９９７ＵＳ０００３３２１号パンフレット；米国特許第６７３７０５６号明細書；国際公開第２０００ＵＳ００００９７３号パンフレット；Ｓｈｉｅｌｄｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７６（９）、６５９１〜６６０４（２００１）；Ｚｈｏｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３３２、９０１〜９１３（２００３）、各々その内容を全体として援用する）を含むがこれに限定されるものではない。これにはまた、ＦｃＲｎ親和性をｐＨ特異的に修飾する修飾も含む。ｉｎｖｉｖｏ半減期の増大（ｅｎｈａｎｃｅ）が望ましいいくつかの実施形態では、高めのｐＨ（７〜８）に対して低めのｐＨ（５．５〜６）でＦｃＲｎ親和性を特異的に亢進させる修飾が好ましい（Ｈｉｎｔｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（８）、６２１３〜６２１６（２００４）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．１６９、５１７１〜５１８０（２００２）；Ｇｈｅｔｉｅら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１５（７）、６３７〜６４０（１９９７）；国際公開第２００３ＵＳ００３３０３７号パンフレット；国際公開第２００４ＵＳ００１１２１３号パンフレット、各々その内容を全体として援用する）。たとえば、Ｈｉｎｔｏｎら、２００４、「ＥｎｇｉｎｅｅｒｅｄＨｕｍａｎＩｇＧＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓｗｉｔｈＬｏｎｇｅｒＳｅｒｕｍＨａｌｆ−ｌｉｖｅｓｉｎＰｒｉｍａｔｅｓ」、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（８）：６２１３〜６２１６に記載されているように、置換Ｔ２５０Ｑ、Ｔ２５０Ｅ、Ｍ４２８ＬおよびＭ４２８Ｆによって、ＦｃＲｎへの結合が亢進され、薬物動態が改善される。加えて、好ましい修飾は、高めのｐＨに対して低めのｐＨで野生型Ｆｃの改善された結合を維持する修飾である。急速なｉｎｖｉｖｏクリアランスが望ましい別の実施形態では、ＦｃＲｎに対する親和性を低減する修飾が好ましい（米国特許第６１６５７４５号明細書；国際公開第１９９３ＵＳ０００３８９５号パンフレット；ＥＰ１９９３０００９１０８００；国際公開第１９９７ＵＳ００２１４３７号パンフレット；Ｍｅｄｅｓａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５８（５）、２２１１〜２２１７（１９９７）；ＧｈｅｔｉｅおよびＷａｒｄ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１８、７３９〜７６６（２０００）；Ｍａｒｔｉｎら、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｅｌｌ、７、８６７〜８７７（２００１）；Ｋｉｍら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９、２８１９〜２８２５（１９９９）、各々その内容を全体として援用する）。

本発明のＣＤ３０標的タンパク質は、エフェクター機能それ自体には特異的に関連していない特性を最適化する１つ以上の修飾を含むものであってもよい。前記修飾は、アミノ酸修飾であってもよいし、酵素的または化学的になされる修飾であってもよい。このような修飾によって、たとえば、その安定性の亢進、溶解性、機能または臨床用途などの点で、抗ＣＤ３０抗体がいくらか改善される可能性が高い。本発明は、本発明の抗ＣＤ３０抗体と追加の修飾とを組み合わせることでなされ得るさまざまな改善を企図したものである。

好ましい一実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、ヒトにおける免疫原性を低減するための修飾を含むものであってもよい。最も好ましい実施形態では、２００４年１０月１４日に出願された米国仮特許出願第６０／６１９，４８３号明細書ならびに、発明の名称「ＭｅｔｈｏｄｓｏｆＧｅｎｅｒａｔｉｎｇＶａｒｉａｎｔＰｒｏｔｅｉｎｓｗｉｔｈＩｎｃｒｅａｓｅｄＨｏｓｔＳｔｒｉｎｇＣｏｎｔｅｎｔａｎｄＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓＴｈｅｒｅｏｆ」の米国特許出願第１１／００４，５９０号明細書（その全体を援用する）に記載の方法を用いて、本発明の抗ＣＤ３０抗体の免疫原性を低減させる。別の実施形態では、本発明の抗体をヒト化する（Ｃｌａｒｋ、２０００、ＩｍｍｕｎｏｌＴｏｄａｙ２１：３９７〜４０２、その全体を援用する）。「ヒト化」抗体を本願明細書で使用する場合、非ヒト（通常はマウスまたはラット）抗体からのヒトフレームワーク領域（ＦＲ）と１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含む抗体を意味する。ＣＤＲを提供している非ヒト抗体を「ドナー」と呼び、フレームワークを提供しているヒト免疫グロブリンを「アクセプター」と呼ぶ。ヒト化は主に、ドナーＣＤＲをアクセプター（ヒト）のＶＬおよびＶＨフレームワークに移植してなされる（Ｗｉｎｔｅｒの米国特許第５２２５５３９号明細書、その全体を援用する）。このストラテジーを「ＣＤＲ移植」と呼ぶ。最初に移植したコンストラクトで失われた親和性を回復するには、選択されたアクセプターフレームワーク残基の対応するドナー残基への「逆変異」が必要になることが多い（米国特許第５５３０１０１号明細書；米国特許第５５８５０８９号明細書；米国特許第５６９３７６１号明細書；米国特許第５６９３７６２号明細書；米国特許第６１８０３７０号明細書；米国特許第５８５９２０５号明細書；米国特許第５８２１３３７号明細書；米国特許第６０５４２９７号明細書；米国特許第６４０７２１３号明細書、各々その内容を全体として援用する）。また、ヒト化抗体は、最適には免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部、一般にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部を含み、よって、一般にヒトＦｃ領域を含むことになる。非ヒト抗体をヒト化して再形成するためのさまざまな手法および方法が従来技術において周知である（Ｔｓｕｒｕｓｈｉｔａ＆Ｖａｓｑｕｅｚ、２００４、ＨｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎｏｆＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆＢＣｅｌｌｓ、５３３〜５４５、ＥｌｓｅｖｉｅｒＳｃｉｅｎｃｅ（ＵＳＡ）ならびにそこに引用されている参考文献（各々その内容を全体として援用する）を参照のこと）。ヒト化方法には、Ｊｏｎｅｓら、１９８６、Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２〜５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８；Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３〜３２９；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４〜１５３６；Ｑｕｅｅｎら、１９８９、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉ、ＵＳＡ８６：１００２９〜３３；Ｈｅら、１９９８、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９〜１０３５；Ｃａｒｔｅｒら、１９９２、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ８９：４２８５〜９、Ｐｒｅｓｔａら、１９９７、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５７（２０）：４５９３〜９；Ｇｏｒｍａｎら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：４１８１〜４１８５；Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒら、１９９８、ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ１１：３２１〜８（各々その内容を全体として援用する）に記載されている方法を含むがこれに限定されるものではない。ヒト化または非ヒト抗体の可変領域の免疫原性を減らすための他の方法には、たとえばＲｏｇｕｓｋａら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：９６９〜９７３（その全体を援用する）に記載されているような表面再処理方法を含んでもよい。一実施形態では、Ｗｕら、１９９９、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９４：１５１〜１６２；Ｂａｃａら、１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１６）：１０６７８〜１０６８４；Ｒｏｓｏｋら、１９９６、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（３７）：２２６１１〜２２６１８；Ｒａｄｅｒら、１９９８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：８９１０〜８９１５；Ｋｒａｕｓｓら、２００３、ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ１６（１０）：７５３〜７５９（各々その内容を全体として援用する）に記載されている方法を含むがこれに限定されるものではない選択ベースの方法を利用して、抗体の可変領域をヒト化および／または親和性成熟させてもよい。また、米国特許出願第０９／８１０，５０２号明細書；Ｔａｎら、２００２、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９〜１１２５；ＤｅＰａｓｃａｌｉｓら、２００２、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６〜３０８４（その全体を援用する）に記載されている方法を含むがこれに限定されるものではない他のヒト化方法では、ＣＤＲの一部のみを移植する必要がある。ヒト化および親和性成熟には、たとえば米国特許出願第１０／１５３，１５９号明細書および関連の出願（各々その内容を全体として援用する）に記載されているような構造ベースの方法を利用してもよい。

実施例２で一層完全に説明するような特定の変形例では、２００４年１０月１４日に出願された米国仮特許出願第６０／６１９，４８３号明細書ならびに、発明の名称「ＭｅｔｈｏｄｓｏｆＧｅｎｅｒａｔｉｎｇＶａｒｉａｎｔＰｒｏｔｅｉｎｓｗｉｔｈＩｎｃｒｅａｓｅｄＨｏｓｔＳｔｒｉｎｇＣｏｎｔｅｎｔａｎｄＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓＴｈｅｒｅｏｆ」で２００４年１２月３日に出願された米国特許出願第１１／００４，５９０号明細書（両方ともその全体を援用する）に記載されている方法で、抗体の免疫原性を低減させている。別の実施形態では、本発明の抗体は完全ヒトすなわち、抗体の配列が完全にまたは実質的にヒトであってもよい。トランスジェニックマウス（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、１９９７、ＣｕｒｒＯｐｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ８：４５５〜４５８（全体として本願明細書に援用する））または選択方法との組み合わせでのヒト抗体ライブラリ（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、１９９８、ＣｕｒｒＯｐｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ９：１０２〜１０８、全体として本願明細書に援用する）を利用することをはじめとして、完全ヒト抗体を生成するための多数の方法が従来技術において周知である。

免疫原性を低減させるための修飾には、親の配列由来の処理済（ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ）ペプチドのＭＨＣタンパク質に対する結合を低減させる修飾を含んでもよい。たとえば、高親和性で、あらゆる一般的なＭＨＣアレルに結合すると予想されるエピトープが全く存在しないか最小限の数で存在するように、アミノ酸修飾が改変される。タンパク質配列におけるＭＨＣ−結合エピトープを同定するいくつかの方法が従来技術において周知であり、これを利用して本発明の抗ＣＤ３０抗体のエピトープをスコアすることができる。たとえば、国際公開第９８／５２９７６号パンフレット；国際公開第０２／０７９２３２号パンフレット；国際公開第００／３３１７号パンフレット；米国特許出願第０９／９０３，３７８号明細書；米国特許出願第１０／０３９，１７０号明細書；米国仮特許出願第６０／２２２，６９７号明細書；米国特許出願第１０／３３９７８８号明細書；ＰＣＴ国際公開第０１／２１８２３号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０２／００１６５号パンフレット；Ｍａｌｌｉｏｓ、１９９９、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ１５：４３２〜４３９；Ｍａｌｌｉｏｓ、２００１、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ１７：９４２〜９４８；Ｓｔｕｒｎｉｏｌｏら、１９９９、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．１７：５５５〜５６１；国際公開第９８／５９２４４号パンフレット；国際公開第０２／０６９２３２号パンフレット；国際公開第０２／７７１８７号パンフレット；Ｍａｒｓｈａｌｌら、１９９５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５９２７〜５９３３；Ｈａｍｍｅｒら、１９９４、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８０：２３５３〜２３５８（各々その内容を全体として援用する）を参照のこと。配列ベースの情報を利用して、特定のペプチド−ＭＨＣ相互作用の結合スコアを判断することが可能である（たとえば、Ｍａｌｌｉｏｓ、１９９９、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ１５：４３２〜４３９；Ｍａｌｌｉｏｓ、２００１、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ１７：第９４２〜９４８ページ；Ｓｔｕｒｎｉｏｌｏら、１９９９、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．１７：５５５〜５６１（各々その内容を全体として援用する）を参照のこと）。特定のペプチドをコンピュータ的に特定のＭＨＣ分子のペプチド−結合グルーブに入れ、相互作用エネルギを求める、構造ベースの方法を用いることができる（たとえば、国際公開第９８／５９２４４号パンフレットおよび国際公開第０２／０６９２３２号パンフレット（両方ともその全体を援用する）を参照のこと）。このような方法は、「スレッディング」法と呼ばれることがある。あるいは、純粋に実験的な方法を用いることも可能である。たとえば、該当するタンパク質由来の一組のオーバーラップペプチドを、Ｔ細胞活性化および／または他の免疫応答態様を誘導する能力について実験的に試験することができる（たとえば、国際公開第０２／７７１８７号パンフレット（その全体を援用する）を参照のこと）。好ましい一実施形態では、マトリクス法を利用して、タンパク質配列に沿って９−残基フレーム各々についてＭＨＣ結合プロペンシティスコアを計算する（Ｓｔｕｒｎｉｏｌｏら、上掲；Ｍａｒｓｈａｌｌら、１９９５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５９２７〜５９３３、Ｈａｍｍｅｒら、１９９４、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８０：２３５３〜２３５８（各々その内容を全体として援用する）を参照のこと）。また、これらの残基のサブセットについてのみスコアを考慮することもできるし、該当する９−残基フレーム前後のペプチド残基のアイデンティティをも考慮の対象にすることもできる。このマトリクスは、異なるヒトクラスＩＩのＭＨＣ分子のペプチド結合ポケットと相互作用する特異アミノ酸についての結合スコアを含む。最も好ましい実施形態では、実験的なペプチド結合研究でマトリクスのスコアを得る。別の好ましい実施形態では、そのポケットにライニングしている同一または類似の残基を含む別のアレルに対して実験的にキャラクタライズしたアレルから特定のポケットに対する特定のアミノ酸結合のスコアを外挿する。外挿によって得られるマトリクスを「仮想マトリクス」と呼ぶ。別の実施形態では、別のアミノ酸修飾を改変し、無傷の分子がＢ細胞レセプターおよび循環抗体と相互作用するプロペンシティを低減させてもよい。

本発明の抗ＣＤ３０抗体は、たとえば抗体Ｆａｂ領域など、Ｆｃ領域外の１つ以上の領域に、最適な特性の得られるアミノ酸修飾を含むものであってもよい。一実施形態では、本発明の抗体の可変領域を親和性成熟させる、すなわち、抗体のＶＨおよび／またはＶＬドメインでアミノ酸修飾をしておき、標的抗原に対する抗体の結合を亢進することができる。このようなタイプの修飾によって、標的抗原への結合の会合および／または解離キネティクスが改善されることがある。他の修飾には、標的抗原ｖｓ．別の標的に対する選択性を改善する修飾がある。これには、標的ｖｓ．非標的細胞で発現される抗原に対する選択性を改善する修飾がある。追加の修飾を加えることで、標的認識特性を他の形で改善できることもある。このような特性としては、特異的動態特性（すなわち会合および解離キネティクス）、特定の標的か別の標的かの選択性、特定の形態の標的か他の形態かの選択性があげられるが、これに限定されるものではない。一例としては、全長かスプライスバリアントか、細胞表面か可溶性の形態か、さまざまな多型変異体に対する選択性、あるいはＣＤ３０標的の特定のコンホメーション形に対する選択性があげられる。

本発明のＣＤ３０標的タンパク質は、抗ＣＤ３０抗体の内部移行を低減または亢進させる１つ以上の修飾を含むものであってもよい。一実施形態では、１つ以上のＦｃリガンドとの相互作用によって生じる抗ＣＤ３０抗体の細胞内部移行を低減させるために、本発明の抗ＣＤ３０抗体を利用するか、あるいは追加の修飾と組み合わせることが可能である。この特性は、エフェクター機能を亢進させ、本発明の抗ＣＤ３０抗体の免疫原性を潜在的に低減するのではないかと想定される。あるいは、１つ以上のＦｃリガンドとの相互作用によって生じる抗ＣＤ３０抗体の細胞内部移行を亢進させるために、本発明の本抗ＣＤ３０抗体の抗ＣＤ３０抗体を直接に利用するか、または追加の修飾と組み合わせることが可能である。たとえば、好ましい実施形態では、ＦｃγＲＩに対する結合を亢進させる抗ＣＤ３０抗体を利用するが、これは樹状細胞で発現され、免疫応答の早い段階で活性になる。抗ＣＤ３０抗体内または、ＭＣＨ分子によるＦｃペプチドフラグメントの認識および提示を促進する、結合された融合物またはコンジュゲートパートナーで、追加の修飾と組み合わせることによって、このストラテジーをさらに強める（ｅｎｈａｎｃｅ）ことができよう。これらのストラテジーでは、ヒト免疫系による一層大きな標的細胞傷害（ｇｒｅａｔｅｒｔａｒｇｅｔｃｅｌｌｋｉｌｌｉｎｇ）ならびに適応免疫応答を促進しつつ、標的抗原プロセシングが亢進されることで、標的抗原の抗原性が改善されると思われる（ＢｏｎｎｅｒｏｔおよびＡｍｉｇｏｒｅｎａ、１９９９、ＩｍｍｕｎｏｌＲｅｖ．１７２：２７９〜８４、その全体を援用する）。これらのストラテジーは、標的された抗原が細胞表面から脱落する場合に、特に都合がよいことがある。また、これらのコンセプトの別の用途が、患者のリンパ腫細胞によって産生されたクローン特異的抗体を利用して患者にワクチン接種をするイデオタイプワクチン免疫療法にみられる。

好ましい一実施形態では、修飾を行って、安定性、溶解性およびオリゴマー状態を含むがこれに限定されるものではない本発明の抗ＣＤ３０抗体の生物物理的な特性を改善する。修飾には、たとえば、安定性が高まるなど、抗ＣＤ３０抗体で一層有益な分子内相互作用が得られる置換あるいは、露出した非極性アミノ酸を、これよりも溶解性の高い極性アミノ酸に入れ換える置換を含み得る。最適化の多数の目的および方法が、米国特許出願第１０／３７９，３９２号明細書（その全体を援用する）に記載されており、追加の修飾を改変して本発明の抗ＣＤ３０抗体をさらに最適化する際にこれを利用することができる。また、必要に応じて腫瘍の侵入を亢進させる、あるいはｉｎｖｉｖｏでのクリアランス率を高めるように、オリゴマーの状態またはサイズを低減する追加の修飾と本発明の抗ＣＤ３０抗体とを組み合わせることも可能である。

本発明の抗ＣＤ３０抗体に対する他の修飾には、ホモ二量体分子またはホモ多量体分子の特異的生成を可能にする修飾がある。このような修飾には、改変されたジスルフィドならびに、共有結合のホモ二量体またはホモ多量体を生成するための機序が得られる化学修飾または凝集法を含むがこれに限定されるものではない。たとえば、改変方法およびそのような分子の組成が、Ｋａｎら、２００１、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００１、１６６：１３２０〜１３２６；Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、２００２、ＲｅｃｅｎｔＲｅｓｕｌｔｓＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１５９：１０４〜１２；米国特許第５，６８１，５６６号明細書；Ｃａｒｏｎら、１９９２、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１１９１〜１１９５およびＳｈｏｐｅｓ、１９９２、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（９）：２９１８〜２２（各々その内容を全体として援用する）に記載されている。本発明の変異体に対する追加の修飾には、ヘテロ二量体分子、ヘテロ多量体分子、二官能性分子および／または多官能性分子の特異的生成を可能にする修飾がある。このような修飾は、ＣＨ３ドメインでの１つ以上のアミノ酸置換を含むがこれに限定されるものではなく、この置換によってホモ二量体の形式量が減少してヘテロ二量体の形式量が増える。たとえば、改変方法およびそのような分子の組成が、Ａｔｗｅｌｌら、１９９７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０（１）：２６〜３５およびＣａｒｔｅｒら、２００１、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２４８：７〜１５（両方ともその全体を援用する）に記載されている。追加の修飾に、修飾によって二量体形成のプロペンシティが低減される、ヒンジおよびＣＨ３ドメインでの修飾がある。

さらに別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、タンパク質分解部位を除去する修飾を含む。これには、たとえば、産生収率（ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｙｉｅｌｄｓ）を低減するプロテアーゼ部位ならびに、投与したタンパク質をｉｎｖｉｖｏで分解するプロテアーゼ部位が含まれることもある。好ましい一実施形態では、追加の修飾を行って、アミド分解（すなわちグルタミニルおよびアスパラギニル残基の対応するグルタミルおよびアスパルチル残基へのアミド分解）、酸化、タンパク質分解部位などの共有結合分解部位を除去する。除去するのに特に有用なアミド分解部位は、グリシンが続くアスパラギニル残基およびグルタミル残基（ＮＧモチーフおよびＱＧモチーフ）を含むが、これに限定されるものではない、アミド分解のプロペンシティが亢進された部位である。このような場合、いずれかの残基の置換によって、アミド分解の傾向を大幅に低減することが可能である。一般的な酸化部位には、メチオニンおよびシステイン残基がある。導入可能であるか、あるいは除去可能な他の共有結合修飾には、プロリンおよびリシンのヒドロキシル化、セリルまたはスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニン、ヒスチジン側鎖の”−アミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：ＳｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．、ＳａｎＦｒａｎｃｉｓｃｏ、第７９〜８６ページ（１９８３）、その全体を援用する）、Ｎ末端アミンのアセチル化、Ｃ末端カルボキシル基のアミド化がある。また、追加の修飾には、Ｎ−リンクまたはＯ−リンクグリコシル化およびリン酸化などの翻訳後修飾を含み得るがこれに限定されるものではない。

修飾には、一般に生物製剤の製造に用いられる宿主または宿主細胞からの発現および／または精製収率を改善する修飾を含み得る。これには、さまざまな哺乳動物細胞系（ＣＨＯなど）、イースト細胞系、細菌細胞株および植物を含むがこれに限定されるものではない。追加の修飾には、重鎖が鎖間ジスルフィドリンケージを形成する能力を除去または低減する修飾がある。追加の修飾には、重鎖が鎖内ジスルフィドリンケージを形成する能力を除去または低減する修飾がある。

本発明の抗ＣＤ３０抗体は、たとえば、Ｃｒｏｐｐ＆Ｓｈｕｌｔｚ、２００４、ＴｒｅｎｄｓＧｅｎｅｔ．２０（１２）：６２５〜３０、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、２００４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０１（２）：７５６６〜７１、Ｚｈａｎｇら、２００３、３０３（５６５６）：３７１〜３およびＣｈｉｎら、２００３、Ｓｃｉｅｎｃｅ３０１（５６３５）：９６４〜７（各々その内容を全体として援用する）に記載されている方法を含むがこれに限定されるものではない、Ｓｃｈｕｌｔｚおよび同僚らによって開発された技術を用いて取り込まれた非天然アミノ酸の使用を含む修飾を含むものであってもよい。いくつかの実施形態では、これらの修飾によって、機能的、生物物理的、免疫学的または製造上の上述したさまざまな特性を操作することが可能になる。別の実施形態では、これらの修飾によって、他の目的での追加の化学修飾が可能になる。他の修飾も本願明細書にて企図される。たとえば、抗ＣＤ３０抗体を、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、あるいはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーなどのさまざまな非タンパク質性ポリマーのうちのひとつとリンクさせることができる。追加のアミノ酸修飾を行って、抗ＣＤ３０抗体の特異的または非特異的な化学修飾または翻訳後修飾を可能なようにしてもよい。このような修飾には、ＰＥＧ化およびグリコシル化を含むがこれに限定されるものではない。ＰＥＧ化を可能にする目的で利用可能な特異的置換には、効率的かつ特異的なカップリング化学を利用してＰＥＧまたはそれ以外のポリマー部分を結合できる新規なシステイン残基または非天然アミノ酸の導入を含むがこれに限定されるものではない。特異的グリコシル化部位の導入については、新規なＮ−Ｘ−Ｔ／Ｓ配列を本発明の抗ＣＤ３０抗体に導入して達成可能である。

糖型修飾
抗体をはじめとする多くのポリペプチドに、オリゴ糖でのグリコシル化などの炭水化物部分を必要とするさまざまな翻訳後修飾がなされる。グリコシル化に影響し得る要因にはいくつかある。種、組織および細胞タイプはいずれも、グリコシル化が起こるという点で重要であることが分かっている。加えて、血清濃度などの変化した培養条件で、細胞外環境がグリコシル化に直接的な影響を持つ場合もある。（Ｌｉｆｅｌｙら、１９９５、Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ５（８）：８１３〜８２２）。

すべての抗体が、重鎖の定常領域の保存された位置に炭水化物を含有している。各々の抗体アイソタイプには、別々の多様なＮ−リンク炭水化物構造がある。重鎖に結合した炭水化物を除けば、ヒトＩｇＧの最大３０％がグリコシル化されたＦａｂ領域を有する。ＩｇＧには、ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に単一のＮ−リンク二分岐炭水化物がある。血清由来あるいは、ハイブリドーマまたは改変された細胞でｅｘｖｉｖｏにて産生されたＩｇＧの場合、ＩｇＧは、Ａｓｎ２９７リンク炭水化物にとっては異質である。Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、１９９８、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１６３：５９〜７６；Ｗｒｉｇｈｔら、１９９７、ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈ１５：２６〜３２。ヒトＩｇＧでは、コアオリゴ糖が通常、外側の残基の数の異なるＧｌｃＮＡｃ₂Ｍａｎ₃ＧｌｃＮＡｃからなる。

本発明の炭水化物部分について、オリゴ糖の説明に一般に用いられている命名法を用いて説明する。この命名法を用いた炭水化物化学の概要が、Ｈｕｂｂａｒｄら、１９８１、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５０：５５５〜５８３に見られる。この命名法は、たとえば、マンノースを示すＭａｎ、２−Ｎ−アセチルグルコサミンを示すＧｌｃＮＡｃ、ガラクトースを示すＧａｌ、フコースのＦｕｃ、ブドウ糖を示すＧｌｃを含む。シアル酸を５−Ｎ−アセチルノイラミン酸の場合に簡単な表記法ＮｅｕＮＡｃで記述し、５−グリコイルノイラミンの場合にＮｅｕＮＧｃで記述する。

「グリコシル化」という用語は、オリゴ糖（２から約１２個の単糖がリンクしているなど、２以上の単糖がリンクした炭水化物）の糖タンパク質への結合を意味する。オリゴ糖側鎖は一般に、Ｎ−リンケージまたはＯ−リンケージのいずれかを介して糖タンパク質のバックボーンにリンクしている。本発明のオリゴ糖は、一般に発生するＮ−リンクオリゴ糖としてＦｃ領域のＣＨ２ドメインに結合した。「Ｎ−リンクグリコシル化」は、炭水化物部分が糖タンパク質鎖のアスパラギン残基に結合することを示す。たとえば、マウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＧ３ならびにヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡおよびＩｇＤＣＨ２ドメインの各々について、アミノ酸残基２９７にＮ−リンクグリコシル化のための単一部位がある（Ｋａｂａｔら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ、１９９１）ことは、当業者であれば分かるであろう。

本願明細書での目的で、「成熟コア炭水化物構造」は、一般に二分岐のオリゴ糖に典型的な以下の炭水化物構造ＧｌｃＮＡｃ（フコース）−ＧｌｃＮＡｃ−Ｍａｎ−（Ｍａｎ−ＧｌｃＮＡｃ）₂からなるＦｃ領域に結合された、処理されたコア炭水化物構造を示す。成熟コア炭水化物構造は、一般にＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ−リンケージを介して糖タンパク質のＦｃ領域に結合される。成熟コア炭水化物構造のβ１，４マンノースに結合されたＧｌｃＮＡｃ残基が、「バイセクティングＧｌｃＮＡｃ」である。バイセクティングＧｌｃＮＡｃは、β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ酵素（ＧｎＴＩＩＩ）によって酵素的に成熟コア炭水化物構造に結合させることが可能なものである。ＣＨＯ細胞は、通常はＧｎＴＩＩＩを発現しない（Ｓｔａｎｌｅｙら、１９８４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１：１３３７０〜１３３７８）が、そのように改変できるものである（Ｕｍａｎａら、１９９９、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６〜１８０）。

本発明は、修飾された糖型または改変された糖型を含むＦｃ変異体を企図している。「修飾された糖型」または「改変された糖型」を本願明細書で使用する場合、ＩｇＧに共有結合的に結合された炭水化物組成物を意味し、前記炭水化物組成物は、親のＩｇＧの炭化水素組成物とは化学的に異なる。改変された糖型は、ＦｃγＲによるエフェクター機能の亢進または低減を含むがこれに限定されるものではない、さまざまな目的で有用なことがある。好ましい一実施形態では、本発明のＦｃ変異体を改変し、Ｆｃ領域に共有結合的に結合されたフコシル化および／またはバイセクティングオリゴ糖のレベルを制御する。修飾された糖型の生成には、さまざまな方法が従来技術において周知である（Ｕｍａｎａら、１９９９、ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１７：１７６〜１８０；Ｄａｖｉｅｓら、２００１、ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ７４：２８８〜２９４；Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００２、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７７：２６７３３〜２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａら、２００３、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７８：３４６６〜３４７３）；（米国特許第６，６０２，６８４号明細書；米国特許出願第１０／２７７，３７０号明細書；米国特許出願第１０／１１３，９２９号明細書；ＰＣＴ国際公開第００／６１７３９Ａ１号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０１／２９２４６Ａ１号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０２／３１１４０Ａ１号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０２／３０９５４Ａ１号パンフレット）；（Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（商標）テクノロジー［Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ］；ＧｌｙｃｏＭＡｂ（商標）グリコシル化改変テクノロジー［ＧＬＹＣＡＲＴｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＡＧ、Ｚｕｅｒｉｃｈ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ］；すべて明示的に援用する）。これらの手法では、たとえば、改変されているかそうでないさまざまな生物体または細胞系（たとえばＬｅｃ−１３ＣＨＯ細胞またはラットハイブリドーマＹＢ２／０細胞）でＩｇＧを発現させたり、グリコシル化経路に関与する酵素（たとえばＦＵＴ８［α１，６−フコシルトランセラーゼ（ｆｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｅｒａｓｅ）］および／またはβ１−４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ［ＧｎＴＩＩＩ］）を調節したり、あるいは、ＩｇＧの発現後に炭水化物を修飾したりすることによって、Ｆｃ領域に共有結合的に結合されたフコシル化および／またはバイセクティングオリゴ糖のレベルを制御する。修飾された糖型を生成する特定のモードの使用、たとえば、Ｌｅｃ−１３細胞系を本研究に用いることは、本発明をその特定の実施形態に制約することを意味しない。むしろ、本発明は、どのように産生されたかとは関係なく修飾された糖型を持つＦｃ変異体を企図している。改変された糖型は一般に、異なる炭水化物またはオリゴ糖を示す。よって、抗ＣＤ３０抗体、たとえば抗ＣＤ３０抗体は、改変された糖型を含むものであってもよい。あるいは、改変された糖型は、異なる炭水化物またはオリゴ糖を含む抗ＣＤ３０抗体を示すものであってもよい。

改変された糖型は一般に、異なる炭水化物またはオリゴ糖を示す。よって、ＩｇＧ変異体、たとえば抗体またはＦｃ融合物は、改変された糖型を含み得る。あるいは、改変された糖型は、異なる炭水化物またはオリゴ糖を含むＩｇＧ変異体を示すものであってもよい。本願明細書の目的で、フコースが成熟コア炭水化物構造に結合されていること以外、本発明の改変された糖型と同一のアミノ酸配列および成熟コア炭水化物構造を有するグリコシル化されたＦｃポリペプチドが、「親のＦｃポリペプチド」である。たとえば、親の糖タンパク質を含む組成物では、親の糖タンパク質の約５０〜１００％または約７０〜１００％が、フコースが結合された成熟コア炭水化物構造を含む。

本発明は、Ｆｃ領域を有するグリコシル化されたＦｃポリペプチドを含む組成物であって、組成物のグリコシル化されたＦｃポリペプチドの約５１〜１００％が、ＦｃポリペプチドのＦｃ領域に結合された、フコースのない成熟コア炭水化物構造を含む、組成物を提供するものである。一層好ましくは、組成物のＦｃポリペプチドの約８０〜１００％が、フコースのない成熟コア炭水化物構造を含み、最も好ましくは、組成物のＦｃポリペプチドの約９０〜９９％が、成熟コア炭水化物構造に結合されたフコースを欠く。最も好ましい実施形態では、組成物のＦｃポリペプチドがいずれも、フコースのない成熟コア炭水化物構造を含み、さらにＦｃ領域に少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む。最も好ましい実施形態では、改変された糖型とアミノ酸修飾とを組み合わせることで、Ｆｃポリペプチドに対する最適なＦｃレセプター結合特性が得られる。本発明の抗ＣＤ３０抗体を、１つ以上の他の分子またはポリペプチドに融合またはコンジュゲートしてもよい。コンジュゲートおよび融合パートナーは、小分子化合物およびポリペプチドをはじめとして、どのような分子であっても構わない。たとえば、さまざまな抗体コンジュゲートおよび方法が、Ｔｒａｉｌら、１９９９、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：５８４〜５８８（その全体を援用する）に記載されている。可能なコンジュゲートパートナーには、サイトカイン、細胞毒剤、毒素、ラジオアイソトープ、化学治療薬、抗血管形成剤、チロシンキナーゼ阻害剤、他の治療的活性薬剤を含むがこれに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、コンジュゲートパートナーは、どちらかというとペイロードすなわち、コンジュゲートの目的が、抗ＣＤ３０抗体による、たとえば癌細胞または免疫細胞などの標的細胞へのコンジュゲートパートナーの標的送達であるといえる。よって、たとえば、抗ＣＤ３０抗体への毒素のコンジュゲーションでは、ＣＤ３０抗原を発現している細胞への前記毒素の送達を標的としている。当業者であれば明らかなように、実際には、融合物およびコンジュゲートの概念と定義は重複している。抗ＣＤ３０抗体を融合物またはコンジュゲートと称することは、本発明の特定の実施形態に制約することを意味するものではない。むしろ、これらの用語は、本発明の抗ＣＤ３０抗体を、遺伝的、化学的またはそれ以外の方法で、１つ以上のポリペプチドまたは分子にリンクさせて、望ましいいくつかの特性を得られるという広い概念を伝えるために、大まかに用いているものである。

一実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体をサイトカインに融合またはコンジュゲートする。「サイトカイン」を本願明細書で使用する場合、細胞間メディエータとして他の細胞に作用するひとつの細胞個体群によって放出されるタンパク質の総称を意味する。たとえば、Ｐｅｎｉｃｈｅｔら、２００１、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２４８：９１〜１０１（その全体を援用する）に記載されているように、サイトカインを抗体に融合させ、多くの望ましい特性を得ることができる。このようなサイトカインの例として、リンフォカイン、モノカイン、従来のポリペプチドホルモンがある。サイトカインに含まれるのは、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパク質ホルモン；肝細胞増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子−アルファおよび−ベータ；ミュラー管抑制性物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮細胞増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−ベータなどの神経成長因子；血小板成長因子；ＴＧＦ−アルファおよびＴＧＦ−ベータなどのトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様成長因子−Ｉおよび−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン−アルファ、ベータおよび−ガンマなどのインターフェロン；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２などのインターロイキン（ＩＬ）；ＩＬ−１５、ＴＮＦ−アルファまたはＴＮＦ−ベータなどの瘍壊死因子；Ｃ５ａ；ＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子である。本願明細書で使用する場合、サイトカインという用語は、天然起源または組換え細胞培養物由来のタンパク質ならびに、ネイティブ配列サイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。

別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体を、細菌、真菌、植物または動物由来（そのフラグメントおよび／または変異体を含む）の酵素的に活性のある毒素および小分子毒素を含むがこれに限定されるものではない毒素に融合させ、コンジュゲートし、または作動的に結合させる。たとえば、さまざまな免疫毒素および免疫毒素方法が、Ｔｈｒｕｓｈら、１９９６、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：４９〜７１（その全体を援用する）に記載されている。小分子毒素には、カリケアマイシン、メイタンシン（米国特許第５，２０８，０２０号明細書、その全体を援用する）、トリコセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｎｅ）およびＣＣ１０６５を含むがこれに限定されるものではない。本発明の一実施形態では、抗ＣＤ３０抗体を１つ以上のメイタンシン分子（抗体分子１つあたり約１から約１０個のメイタンシン分子など）にコンジュゲートさせる。メイタンシンについては、たとえば、Ｍａｙ−ＳＳ−Ｍｅに変換し、これをＭａｙ−ＳＨ３に還元（ｒｅｄｕｃｅ）して修飾抗体と反応させ（Ｃｈａｒｉら、１９９２、ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ５２：１２７〜１３１、その全体を援用する）、メイタンシノイド−抗体コンジュゲートを生成することができる。興味の対象となる他のコンジュゲートは、１以上のカリケアマイシン分子にコンジュゲートさせた抗ＣＤ３０抗体を含む。抗生物質のカリケアマイシンファミリは、二本鎖ＤＮＡの切断をサブピコモル濃度で生成する機能を有する。使用できるカリケアマイシンの構造類似体には、γ１¹、α２¹、α３、Ｎ−アセチル−γ１¹、ＰＳＡ、ＧおよびΘ¹１（Ｈｉｎｍａｎら、１９９３、ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ５３：３３３６〜３３４２；Ｌｏｄｅら、１９９８、ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ５８：２９２５〜２９２８）（米国特許第５，７１４，５８６号明細書；米国特許第５，７１２，３７４号明細書；米国特許第５，２６４，５８６号明細書；米国特許第５，７７３，００１号明細書、各々その内容を全体として援用する）。アウリスタチンＥ（ＡＥ）およびモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）などのドラスタチン１０類似体に、本発明の抗ＣＤ３０抗体向けのコンジュゲートとしての用途がある場合がある（Ｄｏｒｏｎｉｎａら、２００３、ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ２１（７）：７７８〜８４；Ｆｒａｎｃｉｓｃｏら、２００３Ｂｌｏｏｄ１０２（４）：１４５８〜６５、両方ともその全体を援用する）。酵素的に活性のある有用な毒素には、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンシン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａｃｈａｒａｎｔｉａインヒビター、クルシン、クロタン、ｓａｐａｏｎａｒｉａｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニン、マイトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン、エノマイシンおよびトリコテセンを含むがこれに限定されるものではない。たとえば、ＰＣＴ国際公開第９３／２１２３２号パンフレット（その全体を援用する）を参照のこと。本発明はさらに、本発明の抗ＣＤ３０抗体と、たとえばリボヌクレアーゼまたはＤＮＡエンドヌクレアーゼ（デオキシリボヌクレアーゼ（Ｄｎａｓｅ）など）などの核酸分解活性のある化合物とのコンジュゲートを企図するものである。

別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体を、ラジオアイソトープに融合、コンジュゲートまたは作動的に結合させ、ラジオコンジュゲートを形成することができる。ラジオコンジュゲート抗体の作製には、さまざまな放射活性アイソトープを利用できる。一例として、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２およびＬｕの放射活性アイソトープがあげられるが、これに限定されるものではない。たとえば、参考文献を参照のこと。

さらに他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体を、腫瘍の事前標的に利用するための「レセプター」（このようなストレプトアビジン）にコンジュゲートさせることができ、この場合、抗ＣＤ３０抗体−レセプターコンジュゲートを患者に投与した後、洗浄剤（ｃｌｅａｒｉｎｇａｇｅｎｔ）を使って未結合のコンジュゲートを循環から除去し、続いて、細胞毒剤（ラジオヌクレオチドなど）にコンジュゲートされた「リガンド」（アビジンなど）を投与する。別の実施形態では、抗体依存性酵素媒介性プロドラッグ療法（ＡＤＥＰＴ）を利用するために、抗ＣＤ３０抗体を、酵素にコンジュゲートまたは作動的に結合させる。抗ＣＤ３０抗体をプロドラッグ（ペプチジル化学治療薬など。ＰＣＴ国際公開第８１／０１１４５号パンフレット（その全体を援用する）を参照のこと）を活性抗癌薬剤に変換するプロドラッグ活性化酵素にコンジュゲートまたは作動的に結合させることで、ＡＤＥＰＴを利用することができる。たとえば、ＰＣＴ国際公開第８８／０７３７８号パンフレットおよび米国特許第４，９７５，２７８号明細書（両方ともその全体を援用する）を参照のこと。ＡＤＥＰＴに有用な免疫コンジュゲートの酵素成分としては、プロドラッグで、これを一層活性のある細胞毒性の形態に変換できるような方法で作用できるあらゆる酵素があげられる。本発明の方法で有用な酵素には、ホスフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアルカリホスファターゼ；スルフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアリールスルファターゼ；非毒性５−フルオロシトシンを抗癌薬剤である５−フルオロウラシルに変換するのに有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用な、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼおよびカテプシン（カテプシンＢおよびＬなど）などのプロテアーゼ；Ｄ−アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを変換するのに有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化されたプロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用な、β−ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼなどの炭水化物切断酵素；α−ラクタムで誘導体化された薬剤を遊離薬物に変換するのに有用なベータ−ラクタマーゼ；そのアミン窒素の部分で、フェノキシアセチルまたはフェニルアセチル基で誘導体化された薬剤を遊離薬物に変換するのに有用な、それぞれペニシリンＶアミダーゼまたはペニシリンＧアミダーゼなどのペニシリンアミダーゼを含むがこれに限定されるものではない。あるいは、従来技術において「アブザイム」として周知でもある酵素活性のある抗体を利用して、本発明のプロドラッグを活性のある遊離薬物に変換することが可能である（たとえば、Ｍａｓｓｅｙ、１９８７、Ｎａｔｕｒｅ３２８：４５７〜４５８（その全体を援用する）を参照のこと）。抗ＣＤ３０抗体−アブザイムコンジュゲートについては、アブザイムを腫瘍細胞個体群に送達する用途で調製可能である。本発明の抗ＣＤ３０抗体ではさまざまな別のコンジュゲートが企図される。抗ＣＤ３０抗体コンジュゲートとしての用途があり得るさまざまな化学治療薬、抗血管形成剤、チロシンキナーゼ阻害剤および他の治療薬については、後述する。

また、同様に融合物およびコンジュゲートパートナーとして企図されるのが、Ｆｃポリペプチドである。よって、抗ＣＤ３０抗体は、２つ以上のＦｃ領域を含む多量体Ｆｃポリペプチドであってもよい。このような分子の利点のひとつに、１つのタンパク質分子でＦｃレセプター用に複数の結合部位を得られるということがある。一実施形態では、化学的な改変手法を用いてＦｃ領域をリンクさせることができる。たとえば、ヒンジのシステイン残基から開始されるチオエーテル結合によってＦａｂ’およびＦｃ’をリンクさせ、ＦａｂＦｃ₂などの分子を生成することができる（Ｋａｎら、２００１、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００１、１６６：１３２０〜１３２６；Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、２００２、ＲｅｃｅｎｔＲｅｓｕｌｔｓＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１５９：１０４〜１２；米国特許第５，６８１，５６６号明細書、各々その内容を全体として援用する）。Ｆｃ領域については、たとえば、Ｃａｒｏｎら、１９９２、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１１９１〜１１９５およびＳｈｏｐｅｓ、１９９２、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（９）：２９１８〜２２に記載されているように、ジスルフィド改変および／または化学的架橋を用いてリンクさせてもよい。好ましい一実施形態では、Ｆｃ領域を遺伝的にリンクさせてもよい。たとえば、複数のＣγ２ドメインを抗体のＦａｂ領域とＦｃ領域との間に融合させてある（Ｗｈｉｔｅら、２００１、ＰｒｏｔｅｉｎＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ２１：４４６〜４５５、その全体を援用する）。好ましい一実施形態では、２００３年１２月２２日に出願された、発明の名称「ＦｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓｗｉｔｈｎｏｖｅｌＦｃｒｅｃｅｐｔｏｒｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｓ」の米国特許出願第６０／５３１，７５２号明細書（その全体を援用する）に記載されているように、抗ＣＤ３０抗体のＦｃ領域を、生成された（ｇｅｎｅｒａｔｅｄ）タンデムリンクしたＦｃ領域に遺伝的にリンクさせる。タンデムにリンクされたＦｃポリペプチドは、２以上のＦｃ領域、好ましくは１から３、最も好ましくは２つのＦｃ領域を含むものであってもよい。構造特性と化学的特性が最も有益なホモ型またはヘテロ型のタンデムにリンクされた抗ＣＤ３０抗体を得るために、多数のエンジニアリング（ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）コンストラクトを探索すると都合がよいことがある。タンデムにリンクされた抗ＣＤ３０抗体は、ホモ型のタンデムにリンクされた抗ＣＤ３０抗体すなわち、同じアイソタイプの他の抗ＣＤ３０抗体に遺伝的に融合されたひとつのイソＩ型の抗ＣＤ３０抗体であってもよい。タンデムにリンクされたＦｃポリペプチドには複数のＦｃγＲ、Ｃ１ｑ、および／またはＦｃＲｎ結合部位があるため、エフェクター機能および／または薬物動態を亢進できることを見込んでいる。別の実施形態では、異なるアイソタイプからの抗ＣＤ３０抗体がタンデムにリンクされたものであってもよい（これをヘテロ型のタンデムにリンクされた抗ＣＤ３０抗体と呼ぶ）。たとえば、ＦｃγＲおよびＦｃαＲＩレセプターを標的する能力がゆえに、ＦｃγＲおよびＦｃαＲＩの両方に結合する抗ＣＤ３０抗体を用いて臨床面で有意な改善を行うことができる。

融合物およびコンジュゲートパートナーについては、Ｎ末端またはＣ末端または末端間の何らかの残基を含む本発明の抗ＣＤ３０抗体のどの領域にリンクさせてもよい。好ましい一実施形態では、融合物またはコンジュゲートパートナーを、抗ＣＤ３０抗体のＮ末端またはＣ末端で、最も好ましくはＮ末端でリンクさせる。抗ＣＤ３０抗体を融合物またはコンジュゲートパートナーに共有結合的にリンクさせるのに、さまざまなリンカーを本発明で利用できる。「リンカー」、「リンカー配列」、「スペーサ」、「鎖繋（ｔｅｔｈｅｒｉｎｇ）配列」またはこれと文法的に等価な語句は、本願明細書では、２つの分子を連結し、２つの分子を好ましいコンフィギュレーションにする機能を果たすことも多い分子または分子群（モノマーまたはポリマーなど）を意味する。分子同士を共有結合的にリンクさせるには、多数のストラテジーを利用することができる。それには、タンパク質またはタンパク質ドメインのＮ末端とＣ末端との間のポリペプチドリンケージ、ジスルフィド結合によるリンケージ、化学的架橋試薬によるリンケージがあげられるが、これに限定されるものではない。この実施形態の一態様では、リンカーは、組換え手法またはペプチド合成によって生成されるペプチド結合である。２つのポリペプチド鎖が連結される場である好適なリンカーの具体的な事例ごとの選択肢は、２つのポリペプチド鎖の性質（これらが自然にオリゴマー化するか否かなど）、連結されるＮ末端とＣ末端との間の距離が分かる場合は距離および／またはタンパク質分解および酸化に対するリンカーの安定性を含むがこれに限定されるものではない、さまざまなパラメータに左右される。さらに、リンカーは、可撓性を与えるアミノ酸残基を含むものであってもよい。よって、リンカーペプチドは、アミノ酸残基：Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、ＡｌａまたはＴｈｒを優先的に含むものであってもよい。リンカーペプチドは、２つの分子が所望の活性を保つよう、これらの分子が互いに正しいコンホメーションになるような方法で２つの分子をリンクできる適切な長さでなければならない。この目的で好適な長さとしては、少なくとも１アミノ酸残基から５０アミノ酸残基以下がある。好ましくは、リンカーは約１から３０アミノ酸長であり、１から２０アミノ酸長のリンカーが最も好ましい。加えて、リンカーペプチドに入れるために選択されるアミノ酸残基は、ポリペプチドの活性に大きく干渉しない特性を呈するものでなければならない。よって、リンカーペプチドを全体でみると、ポリペプチドの活性と矛盾する電荷を呈したり、あるいは内部の畳み込みに干渉したり、レセプターモノマードメインの結合を甚だしく邪魔する、１つ以上のモノマーでのアミノ酸残基との結合または他の相互作用を形成することのないものでなければならない。有用なリンカーとしては、当業者であれば明らかなように、グリシン−セリンポリマー（たとえば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎおよび（ＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎは少なくとも１の整数である）を含む）、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマーならびに、Ｓｈａｋｅｒ型カリウムチャネル用の繋鎖などの他の可撓性リンカー、さらには多種多様な他の可撓性リンカーがあげられる。２つのアミノ酸がいずれも比較的非構造的であって、成分間の中立の繋鎖として機能できる可能性があるため、グリシン−セリンポリマーが好ましい。第２に、セリンは親水性であり、球状グリシン鎖の可能性があるものを可溶化できる。第３に、単鎖抗体などの組換えタンパク質のサブユニットの連結に、同様の鎖が有効であることが明らかになっている。また、２つのポリペプチド鎖間のギャップをブリッジできる、天然に存在するモチーフについての周知の三次元構造のデータベースをスクリーニングすることで、好適なリンカーを同定できることもある。好ましい一実施形態では、リンカーは、ヒト患者に投与したときに免疫原性ではない。よって、免疫原性が低いまたは免疫原性が低いと思われるリンカーを選択すればよい。たとえば、ヒトに天然に存在するリンカーを選択すればよい。最も好ましい実施形態では、リンカーは抗体のヒンジ領域の配列すなわち、抗体ＦａｂとＦｃ領域をリンクする配列を有する。あるいは、リンカーは、ヒンジ領域の一部を有する配列、あるいは実質的に抗体のヒンジ領域と類似の配列を有する。好適なリンカーを得るための他の方法のひとつに、単純なリンカー、たとえば（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎなどを、ランダム突然変異誘発によって最適化することがある。あるいは、好適なポリペプチドリンカーを同定したら、別のリンカーポリペプチドを作製して、リンク対象となるドメインと一層最適に相互作用するアミノ酸を選択することが可能である。本発明で使用できる他のタイプのリンカーとしては、人工ポリペプチドリンカーおよびインテリンがあげられる。もうひとつの実施形態では、２つの分子間をリンクするようにジスルフィド結合を設計する。もうひとつの実施形態では、リンカーが化学的架橋剤である。たとえば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣＬなど）、活性エステル（ジスクシンイミジルスベラートなど）、アルデヒド（グルタルエルデヒド（ｇｌｕｔａｒｅｌｄｅｈｙｄｅ）など）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアナート（トリエン２，６−ジイソシアナートなど）、ビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）を含むがこれに限定されるものではない、さまざまな二官能性タンパク質カップリング剤を利用できる。たとえば、Ｖｉｔｅｔｔａら、１９７１、Ｓｃｉｅｎｃｅ２３８：１０９８（その全体を援用する）に記載されているようにして、リシン免疫毒素を調製することが可能である。化学的リンカーは、アイソトープのキレート化を行うことができる場合がある。たとえば、炭素−１４−標識した１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）が、抗体に対するラジオヌクレオチドのコンジュゲーション用のキレート剤の一例である（ＰＣＴ国際公開第９４／１１０２６号パンフレット（その全体を援用する）を参照のこと）。リンカーは、細胞中の細胞毒性の薬剤の放出を容易にする、切断可能なものであってもよい。たとえば、酸解離性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉら、１９９２、ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ５２：１２７〜１３１（その全体を援用する）など）を利用してもよい。あるいは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレンまたはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーを含むがこれに限定されるものではない、さまざまな非タンパク質性ポリマーを、リンカーとして利用できることがある、すなわち、本発明の抗ＣＤ３０抗体を融合物またはコンジュゲートパートナーと結合させるか、本発明の抗ＣＤ３０抗体をコンジュゲートに結合させるのに利用できることがある。

抗ＣＤ３０抗体の実験的な作製
本発明は、抗ＣＤ３０抗体を作製して実験的に試験するための方法を提供するものである。ここに記載の方法は、特定の用途または動作理論を制約することを意味するものではない。むしろ、ここで得られる方法では、１つ以上の抗ＣＤ３０抗体を作製して実験的に試験し、変異体抗ＣＤ３０抗体を得られることを大枠で示すことを意図している。抗体分子生物学、発現、精製およびスクリーニングの基本方法については、ＡｎｔｉｂｏｄｙＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｄｕｅｂｅｌ＆Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ編）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、２００１；Ｈａｙｈｕｒｓｔ＆Ｇｅｏｒｇｉｏｕ、２００１、ＣｕｒｒＯｐｉｎＣｈｅｍＢｉｏｌ５：６８３〜６８９；Ｍａｙｎａｒｄ＆Ｇｅｏｒｇｉｏｕ、２０００、ＡｎｎｕＲｅｖＢｉｏｍｅｄＥｎｇ２：３３９〜７６；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌｂｙＨａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ、ＮｅｗＹｏｒｋ：ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、１９８８（各々その内容を全体として援用する）に記載されている。

本発明の一実施形態では、抗ＣＤ３０抗体をコードし、なおかつ必要に応じて宿主細胞へのクローニング、発現、アッセイを行える核酸を作製する。よって、各タンパク質配列をコードする核酸、特にＤＮＡを作製できる。これらのプラクティスについては、周知の手法を用いて実施する。たとえば、本発明において利用できるさまざまな方法が、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ − ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、第３版（Ｍａｎｉａｔｉｓ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、２００１）およびＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）（両方ともその全体を援用する）に記載されている。当業者であれば明らかなように、多数の配列を含むライブラリで厳密な配列を生成するには、かなりの費用と時間を要する可能性がある。したがって、本発明のライブラリを効率的に生成するのに利用できるさまざまな手法がある。本発明において利用できるこのような方法が、米国特許第６，４０３，３１２号明細書；米国特許出願第０９／７８２，００４号明細書；米国特許出願第０９／９２７，７９０号明細書；米国特許出願第１０／２１８，１０２号明細書；ＰＣＴ国際公開第０１／４００９１号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０２／２５５８８号パンフレット（各々その内容を全体として援用する）に記載されているか、あるいは引用されている。このような方法には、遺伝子アセンブリ法、ＰＣＲベースの方法、ＰＣＲのバリエーションを用いる方法、リガーゼ連鎖反応ベースの方法、合成シャッフリングで用いられているものなどのプールされたオリゴ法（ｐｏｏｌｅｄｏｌｉｇｏｍｅｔｈｏｄ）、変異性増幅方法、ランダム変異のあるオリゴを用いる方法、伝統的な部位特異的突然変異誘発方法、カセット突然変異誘発、他の増幅および遺伝子合成法を含むがこれに限定されるものではない。従来技術において周知のように、遺伝子アセンブリ、突然変異誘発、ベクターサブクローニングなどには、さまざまな商業入手可能なキットおよび方法があり、本発明では抗ＣＤ３０抗体をコードする核酸の生成にこのような商業入手可能な製品を利用する。

本発明の抗ＣＤ３０抗体については、タンパク質の発現を誘導または引き起こす適切な条件下で、核酸を培養、好ましくは抗ＣＤ３０抗体をコードする核酸を含む発現ベクターで形質転換した宿主細胞を培養して作製できる。発現に適した条件は、発現ベクターと宿主細胞に何を用いるかによって変わってくるものであり、型どおりの実験をすることで当業者が容易に特定できるものである。哺乳動物細胞、細菌、昆虫細胞およびイーストを含むがこれに限定されるものではない、多種多様な適切な宿主細胞を利用できる。たとえば、本発明において利用できるさまざまな細胞系が、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手可能なＡＴＣＣ（登録商標）細胞系カタログに記載されている。

好ましい一実施形態では、レトロウイルスまたはアデノウイルスなどのウイルスを用いて発現コンストラクトが哺乳動物細胞に導入される系を含む哺乳動物発現系で、抗ＣＤ３０抗体を発現させる。どのような哺乳動物細胞でも利用できるが、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、霊長類の細胞が特に好ましい。また、好適な細胞としては、ＪｕｒｋａｔＴ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＣＯＳ、ＨＥＫ２９３、ＰＥＲＣ．６、ＨｅＬａ、Ｓｐ２／０、ＮＳ０細胞およびその変異体を含むがこれに限定されるものではない、周知の研究調査用細胞もあげられる。別の好ましい実施形態では、細菌細胞でライブラリタンパク質を発現させる。細菌発現系は従来技術において周知であり、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ、ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｃｒｅｍｏｒｉｓおよびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｌｉｖｉｄａｎｓがあげられる。別の実施形態では、昆虫細胞（Ｓｆ２１／Ｓｆ９、ＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａｎｉＢｔｉ−Ｔｎ５ｂ１−４など）またはイースト細胞（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｐｉｃｈｉａなど）で抗ＣＤ３０抗体を作製する。別の実施形態では、無細胞翻訳系を用いてｉｎｖｉｔｒｏにて抗ＣＤ３０抗体を発現させる。原核生物（Ｅ．ｃｏｌｉなど）と真核生物（コムギ胚芽、ウサギ網状赤血球など）の両方の細胞から得たｉｎｖｉｔｒｏ翻訳系を利用でき、該当するタンパク質の発現レベルと機能的特性とに応じて選択することができる。たとえば、当業者であれば明らかなように、たとえばリボソームディスプレイなどのディスプレイ技術によってはｉｎｖｉｔｒｏ翻訳が必要である。また、化学合成方法によって抗ＣＤ３０抗体を作製することもできる。さらに、トランスジェニック発現系両方の動物（雌ウシ、ヒツジまたはヤギ乳、有胚のメンドリ卵、全昆虫（ｗｈｏｌｅｉｎｓｅｃｔ）の幼虫など）と植物（トウモロコシ、タバコ、ウキクサなど）。

タンパク質を発現させるために、発明の抗ＣＤ３０抗体をコードする核酸を発現ベクターに取り込んでもよい。タンパク質の発現には、さまざまな発現ベクターを利用できる。発現ベクターは、自己複製染色体外ベクターあるいは、宿主ゲノムに組み込まれるベクターを含むものであってもよい。発現ベクターは、宿主細胞のタイプと両立して構築される。よって、本発明において使用できる発現ベクターには、哺乳動物細胞、細菌、昆虫細胞、イースト、ｉｎｖｉｔｒｏ系でタンパク質発現が可能なベクターを含むがこれに限定されるものではない。従来技術において周知のように、抗ＣＤ３０抗体を発現させるために本発明において利用できる商業入手可能またはそれ以外のさまざまな発現ベクターを用いることができる。

発現ベクターは一般に、制御（ｃｏｎｔｒｏｌ）配列または制御（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ）配列と作動的に結合されたタンパク質、選択可能なマーカー、任意の融合パートナーおよび／または別の要素を含む。本願明細書における「作動的に結合された」は、核酸が他の核酸配列との間で機能的な関係におかれていることを意味する。通常、これらの発現ベクターは、抗ＣＤ３０抗体をコードする核酸に作動的に結合された転写および翻訳調節核酸を含み、一般に、タンパク質の発現に用いられる宿主細胞に適している。一般に、転写および翻訳制御配列は、プロモーター配列、リボソーム結合部位、転写開始配列および転写終結配列、翻訳開始配列および翻訳終結配列、エンハンサーまたはアクチベーター配列を含むものであってもよい。また、従来技術において周知のように、発現ベクターは一般に、発現ベクターを含有する形質転換宿主細胞の選択が可能になるように、選択遺伝子またはマーカーを含有する。選択遺伝子は従来技術において周知であり、使用する宿主細胞によって変わってくる。

ＣＤ３０標的タンパク質を融合パートナーに作動的に結合し、発現されたタンパク質、精製、スクリーニング、ディスプレイなどを標的可能なようにしてもよい。融合パートナーについては、リンカー配列を介して抗ＣＤ３０抗体配列にリンクさせることができる。リンカー配列は通常、一般に１０未満と少数のアミノ酸を含むが、これよりも長いリンカーも利用できる。一般に、リンカー配列は、可撓性かつ分解に耐えられるように選択される。当業者であれば明らかなように、多種多様な配列のうちのどれをリンカーとして利用してもよい。たとえば、一般的なリンカー配列は、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳを含む。融合パートナーが、抗ＣＤ３０抗体および関連する任意の融合パートナーを所望の細胞部位または細胞外メディアに指向する標的配列またはシグナル配列であってもよい。従来技術において周知のように、特定のシグナル配列は、増殖培地あるいは、細胞の内膜と外膜との間に存在するペリプラズム間隙に分泌されるように、タンパク質を標的することができる。また、融合パートナーは、精製および／またはスクリーニングを可能にするペプチドまたはタンパク質をコードする配列であってもよい。このような融合パートナーには、ポリヒスチジンタグ（Ｈｉｓ−タグ）（たとえばＨ₆およびＨ₁₀またはＩｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄＭｅｔａｌＡｆｆｉｎｉｔｙＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＩＭＡＣ）系で用いられる他のタグ（Ｎｉ⁺²親和性カラムなど））、ＧＳＴ融合物、ＭＢＰ融合物、Ｓｔｒｅｐ−タグ、細菌酵素ＢｉｒＡのＢＳＰビオチン化標的配列、抗体に標的されるエピトープタグ（たとえばｃ−ｍｙｃタグ、ｆｌａｇ−タグなど）を含むがこれに限定されるものではない。当業者であれば明らかなように、このようなタグは、精製、スクリーニングまたはその両方で有用なことがある。たとえば、Ｈｉｓ−タグを使って、これをＮｉ⁺²親和性カラムに固定化することで抗ＣＤ３０抗体を精製することができ、精製後には、同じＨｉｓ−タグを利用して抗体をＮｉ＋２コートしたプレートに固定化し、ＥＬＩＳＡまたは他の結合アッセイ（後述）を行うことができる。融合パートナーを用いることで、抗ＣＤ３０抗体をスクリーニングするための選択方法を利用できるようになることがある（下記参照）。さまざまな選択方法を可能にする融合パートナーが従来技術において周知であり、いずれも本発明において利用できるものである。たとえば、抗ＣＤ３０抗体ライブラリのメンバを遺伝子ＩＩＩタンパク質に融合させることで、ファージディスプレイを利用することが可能である（Ｋａｙら、Ｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙｏｆｐｅｐｔｉｄｅｓａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｓ：ａｌａｂｏｒａｔｏｒｙｍａｎｕａｌ、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、ＳａｎＤｉｅｇｏ、ＣＡ、１９９６；Ｌｏｗｍａｎら、１９９１、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３０：１０８３２〜１０８３８；Ｓｍｉｔｈ、１９８５、Ｓｃｉｅｎｃｅ２２８：１３１５〜１３１７、その全体を援用する）。融合パートナーは抗ＣＤ３０抗体の標識も可能にする。あるいは、融合パートナーは、発現ベクターの特異的配列に結合して、融合パートナーおよび関連の抗ＣＤ３０抗体を、共有結合的にまたは非共有結合的に、これをコードする核酸にリンクできるようにすることができる。たとえば、米国特許出願第０９／６４２，５７４号明細書；米国特許出願第１０／０８０，３７６号明細書；米国特許出願第０９／７９２，６３０号明細書；米国特許出願第１０／０２３，２０８号明細書；米国特許出願第０９／７９２，６２６号明細書；米国特許出願第１０／０８２，６７１号明細書；米国特許出願第０９／９５３，３５１号明細書；米国特許出願第１０／０９７，１００号明細書；米国特許出願第６０／３６６，６５８号明細書；ＰＣＴ国際公開第００／２２９０６号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０１／４９０５８号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０２／０４８５２号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０２／０４８５３号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０２／０８０２３号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０１／２８７０２号パンフレット；およびＰＣＴ国際公開第０２／０７４６６号パンフレット（各々その内容を全体として援用する）に、このような融合パートナーならびに本発明において利用できる手法が記載されている。

外来性の核酸を宿主細胞に導入する方法は従来技術において周知であり、使用する宿主細胞によって変わってくる。手法には、デキストランによるトランスフェクション、リン酸カルシウム沈降、塩化カルシウム処理、ポリブレンによるトランスフェクション、プロトプラスト融合、電気穿孔、ウイルス感染またはファージ感染、ポリヌクレオチド（単数または複数）のリポソームへの封入、核へのＤＮＡの直接的なマイクロインジェクションを含むがこれに限定されるものではない。哺乳動物細胞の場合は、トランスフェクションは一過性であっても安定したものであってもよい。

好ましい一実施形態では、発現後に抗ＣＤ３０抗体を精製または単離する。タンパク質については、当業者に周知のさまざまな方法で単離または精製することができる。標準的な精製方法としては、ＦＰＬＣおよびＨＰＬＣなどの系を用いて大気圧または高圧で行われる、イオン交換クロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、親和性クロマトグラフィ、サイジングまたはゲル濾過クロマトグラフィ、逆相クロマトグラフィをはじめとするクロマトグラフ法があげられる。また、精製方法には、電気泳動法、免疫学的方法、沈降法、透析、クロマト分画法もある。タンパク質濃度とともに、限外濾過および膜分離法も有用である。従来技術において周知のように、さまざまな天然タンパク質がＦｃおよび抗体を結合し、これらのタンパク質は、抗ＣＤ３０抗体の精製目的で本発明において利用可能である。たとえば、細菌タンパク質ＡおよびＧはＦｃ領域に結合する。同様に、細菌タンパク質Ｌは、もちろん抗体の標的抗原として、いくつかの抗体のＦａｂ領域に結合する。精製に関しては、特定の融合パートナーによって可能になることが多い。たとえば、ＧＳＴ融合物を利用するのであればグルタチオン樹脂を用いて、Ｈｉｓ−タグを利用するのであればＮｉ⁺²親和性クロマトグラフィを用いて、ｆｌａｇ−タグを利用するのであれば、固定化した抗ｆｌａｇ抗体を用いて、抗ＣＤ３０抗体を精製できる。好適な精製手法の概要については、たとえば、その全体を援用する、ＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅ、第３版、Ｓｃｏｐｅｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、ＮＹ、１９９４（その全体を援用する）を参照のこと。必要な精製の度合いは、スクリーンまたは抗ＣＤ３０抗体の用途によって変わってくる。場合によっては、精製は必要ない。たとえば、一実施形態では、抗ＣＤ３０抗体が分泌される場合、培地から直接スクリーニングを行ってもよい。従来技術において周知のように、選択方法の中にはタンパク質の精製を必要としないものもある。よって、たとえば、抗ＣＤ３０抗体のライブラリをファージディスプレイライブラリにするのであれば、タンパク質精製を行わないこともある。

抗ＣＤ３０抗体の実験的試験
アッセイ
ＣＤ３０標的タンパク質のスクリーニングには、ｉｎｖｉｔｒｏアッセイ、ｉｎｖｉｖｏおよび細胞ベースのアッセイ、選択技術を用いる方法を含むがこれに限定されるものではない、さまざまな方法を用いることができる。スクリーニング法に自動で高スループットのスクリーニング技術を利用してもよい。スクリーニングでは、融合パートナーまたは標識を使用することを採用しても構わない。融合パートナーを使うことについては上述してある。本願明細書における「標識された」は、本発明の抗ＣＤ３０抗体に、スクリーニング時に検出が可能なように１つ以上の要素、アイソトープまたは化合物が結合されていることを意味する。一般に、標識は次の３つのクラスに分けられる。ａ）抗体に認識される融合パートナーとして取り込まれるエピトープであってもよい免疫標識、ｂ）放射活性または重アイソトープであってもよいアイソトープ標識、ｃ）蛍光染料および比色染料あるいは、ビオチンなどの他の標識方法を可能にする分子を含むものであってもよい小分子標識。標識は、どの位置で化合物に取り込まれてもよく、タンパク質発現の際にｉｎｖｉｔｒｏで取り込まれてもよいしｉｎｖｉｖｏで取り込まれてもよい。

好ましい一実施形態では、抗ＣＤ３０抗体の機能的および／または生物物理的な特性をｉｎｖｉｔｒｏアッセイでスクリーニングする。ｉｎｖｉｔｒｏアッセイを用いると、関心のあるスクリーニング特性について広いダイナミックレンジが可能になることがある。スクリーニングできる抗ＣＤ３０抗体の特性には、安定性、溶解性ならびに、たとえばＦｃγＲなどのＦｃリガンドに対する親和性を含むがこれに限定されるものではない。複数の特性を同時にスクリーニングしてもよいし、個々にスクリーニングしてもよい。タンパク質は、アッセイの要件に応じて精製したものであっても未精製であってもよい。一実施形態では、スクリーンは、抗ＣＤ３０抗体に結合することが知られているか、結合するのではないかと考えられているタンパク質または非タンパク質分子に対する抗ＣＤ３０抗体の結合についての定性的または定量的結合アッセイである。好ましい一実施形態では、スクリーンは、ＣＤ３０標的抗原への結合を測定するための結合アッセイである。別の好ましい実施形態では、スクリーンは、ＦｃγＲのファミリ、新生児のレセプターＦｃＲｎ、相補体タンパク質Ｃ１ｑ、細菌タンパク質ＡおよびＧを含むがこれに限定されるものではない、Ｆｃリガンドに対する抗ＣＤ３０抗体の結合についてのアッセイである。前記Ｆｃリガンドは、どのような生物体由来のものであってもよいが、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、サルが好ましい。結合アッセイは、ＦＲＥＴ（ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＲｅｓｏｎａｎｃｅＥｎｅｒｇｙＴｒａｎｓｆｅｒ）およびＢＲＥＴ（ＢｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅＲｅｓｏｎａｎｃｅＥｎｅｒｇｙＴｒａｎｓｆｅｒ）ベースのアッセイ、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）（ＡｍｐｌｉｆｉｅｄＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔＰｒｏｘｉｍｉｔｙＨｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓＡｓｓａｙ）、ＳｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎＰｒｏｘｉｍｉｔｙＡｓｓａｙ、ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ−ＬｉｎｋｅｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔＡｓｓａｙ）、ＳＰＲ（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）としても知られるＳｕｒｆａｃｅＰｌａｓｍｏｎＲｅｓｏｎａｎｃｅ）、等温滴定熱量測定、示差走査熱量測定、ゲル電気泳動、ゲル濾過をはじめとするクロマトグラフィを含むがこれに限定されるものではない、従来技術において周知のさまざまな方法を用いて実施可能なものである。これらの方法および他の方法では、抗ＣＤ３０抗体のいくつかの標識または融合パートナーを活用することができる。アッセイでは、発色性、蛍光、ルミネッセントまたはアイソトープ標識を含むがこれに限定されるものではないさまざまな検出方法を採用できる。

たとえば安定性および溶解性など、抗ＣＤ３０抗体の生物物理的な特性をスクリーニングするには、従来技術において周知のさまざまな方法を用いることができる。フォールドな状態とアンフォールドな状態との熱力学的平衡を測定すれば、タンパク質安定性を判断することができる。たとえば、化学的変性剤、熱またはｐＨを用いて本発明の抗ＣＤ３０抗体をアンフォールドすることができ、円偏光二色性分光法、蛍光分光法、吸光度分光法、ＮＭＲ分光法、熱量測定，およびタンパク質分解を含むがこれに限定されるものではない方法で、この遷移を監視することができる。当業者であれば明らかなように、これらの手法および他の手法を用いて、フォールドとアンフォールドとの遷移の動態パラメータを監視してもよい。抗ＣＤ３０抗体の溶解性および全体としての構造的完全性については、従来技術において周知の広範囲にわたる方法を用いて定量的または定性的に判断することができる。抗ＣＤ３０抗体の生物物理的な特性のキャラクタライズに本発明において利用できる方法としては、ゲル電気泳動、等電点電気泳動、細管部電気泳動、さらには、サイズ排除クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィおよび逆相高速クロマトグラフィなどのクロマトグラフィ、ペプチドマッピング、オリゴ糖マッピング、質量分析、紫外線吸光度分光法、蛍光分光法、円偏光二色性分光法、等温滴定熱量測定、示差走査熱量測定、分析超遠心分離、動的光散乱、タンパク質分解および架橋、濁度測定、フィルタ遅延（ｆｉｌｔｅｒｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ）アッセイ、免疫学的アッセイ、蛍光染料結合アッセイ、タンパク質染色アッセイ、マイクロコピー、さらにはＥＬＩＳＡまたは他の結合アッセイでの凝集体の検出があげられる。Ｘ線結晶学的手法およびＮＭＲ分光法を採用した構造解析も利用できる。一実施形態では、規定された時間経過後にタンパク質溶液の量を判断して、安定性および／または溶解性を測定することができる。このアッセイでは、たとえば高温、低ｐＨまたは変性剤の存在などの極限条件にタンパク質を曝露しても曝露しなくてもよい。機能（ｆｕｎｃｔｉｏｎ）には一般に、安定して可溶および／または十分にフォールドされた／構造化されたタンパク質が必要であるため、上述した機能的および結合アッセイによってこのような測定を行うための方法も得られる。たとえば、抗ＣＤ３０抗体を含む溶液を、その標的抗原を結合する能力についてアッセイした後、規定された１つ以上の時間にわたって高温に曝露し、続いて抗原結合について再度アッセイすることが可能である。アンフォールド状態かつ凝集されたタンパク質は抗原を結合できることは想定されていないため、残っている活性の量が抗ＣＤ３０抗体の安定性および溶解性を示す指標となる。

好ましい一実施形態では、細胞ベースのアッセイまたはｉｎｖｉｔｒｏアッセイを１つ以上用いて、ライブラリをスクリーニングする。このようなアッセイでは、細胞がライブラリに属する個体変異体または変異体群に曝露されるように、精製後または未精製の抗ＣＤ３０抗体を、一般には外から加える。これらのアッセイは一般に、ＣＤ３０に結合することならびに、たとえば細胞溶解のようなエフェクター機能などのいくつかの生化学的イベントを媒介する、抗ＣＤ３０抗体の持つ能力のバイオロジー、貪食、リガンド／レセプター結合抑制、成長および／または増殖の抑制、アポトーシスなどに基づくものであるが、常にそうというわけではない。このようなアッセイでは、たとえば細胞生存、細胞死、細胞貪食、細胞溶解、細胞形態の変化あるいは、天然遺伝子またはレポーター遺伝子の細胞発現などの転写活性化など、抗ＣＤ３０抗体に対する細胞の応答の監視が必要になることが多い。たとえば、このようなアッセイでは、抗ＣＤ３０抗体がＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたはＣＤＣを引き出す能力を測定することができる。アッセイによっては、別の細胞または成分すなわち標的細胞以外に、たとえば血清相補体あるいは、末梢血単球（ＰＢＭＣ）、ＮＫ細胞、マクロファージなどのエフェクター細胞を加える必要があることもある。このような別の細胞は、どのような生物体に由来するものであってもよいが、好ましくはヒト、マウス、ラット、ウサギ、サル由来である。架橋抗体またはモノマー抗体によって、抗体の標的抗原を発現する特定の細胞系のアポトーシスが生じることがあり、あるいは、アッセイに加えられた免疫細胞による標的細胞への攻撃が媒介されることもある。細胞死または生存度を監視するための方法は従来技術において周知であり、染料、フルオロフォア、免疫化学、細胞化学および放射活性試薬を用いることがあげられる。たとえば、カスパーゼアッセイまたはアネキシン−小麦粉コンジュゲート（ｆｌｏｕｒｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を用いることで、アポトーシスを測定できるようになることがあり、放射活性基質（クロム−５１放出アッセイ）の取り込みまたは放出あるいは、ａｌａｍａｒｂｌｕｅなどの蛍光染料の代謝還元を用いると、細胞成長、増殖または活性化を監視できるようになることがある。好ましい一実施形態では、ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）ＥｕＴＤＡベースの細胞毒性アッセイ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＭＡ）を用いる。あるいは、たとえば乳酸脱水素酵素などの１つ以上の天然細胞内タンパク質の放出を測定して、死んだ標的細胞または損傷した標的細胞を監視してもよい。転写活性化も細胞ベースのアッセイで機能をアッセイするための方法のひとつとして役立つことがある。この場合、上方制御または下方制御されていてもよい天然の遺伝子またはタンパク質のアッセイによって応答を監視すればよく、たとえば、特定のインターロイキンの放出を測定することができるし、あるいは、ルシフェラーゼまたはＧＦＰ−レポーターコンストラクトを介して読み取るようにしてもよい。また、細胞ベースのアッセイでは、抗ＣＤ３０抗体の存在に対する応答として細胞の形態学的変化を測定する必要があることもある。このようなアッセイでの細胞タイプは、原核生物細胞であっても真核生物細胞であってもよく、従来技術において周知のさまざまな細胞系を利用できる。あるいは、抗ＣＤ３０抗体をコードする核酸で形質転換またはトランスフェクトしておいた細胞を用いて、細胞ベースのスクリーンを実施する。

ｉｎｖｉｔｒｏでのアッセイには、結合アッセイ、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、細胞毒性、増殖、ペルオキシド／オゾン放出、エフェクター細胞の化学走性、低減されたエフェクター機能抗体によるこのようなアッセイの阻害；＞１００×改善または＞１００×低減などの活性の範囲、レセプター活性化と、このようなレセプタープロファイルで想定されるアッセイ成果とのブレンド混合を含むがこれに限定されるものではない。

動物モデル
本発明の抗ＣＤ３０抗体の生物学的特性については、細胞、組織および生物体そのものを利用した実験でキャラクタライズできる。従来技術において周知のように、疾患または疾患モデルに対する処置での薬剤の効力を測定したり、あるいは薬剤の薬物動態、毒性，および他の特性を測定するために、薬剤を、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、サルを含むがこれに限定されるものではない動物で試験することが多い。前記動物は疾患モデルとも呼べる。本発明の抗ＣＤ３０抗体に関しては、動物モデルを使用して候補ポリペプチドの人体内での効力の潜在性を評価するにあたって、特に取り組むべき課題が出てきている。これは、少なくともある程度は、ヒトＦｃレセプターに対する親和性に特異的な作用を持つ抗ＣＤ３０抗体が、オルソロガスな動物レセプターで同様の親和作用を持つわけではないためである。これらの問題は、真のオルソログを正しく割り振ることに関連した不可避な曖昧さと、オルソログによっては単に動物には存在しない（ヒトはＦｃγＲＩＩａを持つのに対し、マウスは持たないなど）ことがゆえに、さらに悪くなる可能性がある（Ｍｅｃｈｅｔｉｎａら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ、２００２、５４：４６３〜４６８、その全体を援用する）。治療薬については、ヌードマウス、ＳＣＩＤマウス、異種移植マウスおよびトランスジェニックマウス（ノックインおよびノックアウトを含む）を含むがこれに限定されるものではないマウスで試験することが多い。たとえば、抗癌治療剤として想定されている本発明の抗ＣＤ３０抗体を、たとえば異種移植片マウスなどのマウス癌モデルで試験することができる。この方法では、腫瘍または腫瘍細胞系をマウスに移植または注射し、続いてこのマウスを治療剤で処置して抗ＣＤ３０抗体が癌の増殖と転移を低減または抑制する能力を判断する。別の方法のひとつに、ＳＣＩＤマウスモデルを用いることがある。この場合は、ヒトＦｃＲの適切なアレイを用いて、免疫欠損マウスにヒトＰＢＬを注射し、注射したヒト腫瘍細胞を標的する抗体またはＦｃ−ポリペプチドを注射しておいたマウスに半機能的なヒト免疫系を与える。このようなモデルでは、所望の抗原（ＳｋＯＶ３卵巣癌細胞上のｈｅｒ２／ｎｅｕなど）を標的するＦｃ−ポリペプチドがマウス体内でヒトＰＢＬと相互作用し、殺腫瘍性エフェクター機能とエンゲージする。このような実験では、前記抗ＣＤ３０抗体を治療剤として用いる潜在的な可能性を判断するための意味のあるデータが得られることがある。好ましくは哺乳動物であるどのような生物体を利用して試験を行ってもよい。たとえば、ヒトと遺伝的に類似していることから、サルが好適な治療モデルになることがあるため、本発明の抗ＣＤ３０抗体の効力、毒性、薬物動態または他の特性の試験にサルを用いるようにしてもよい。最終的には、薬剤としての承認を得るには本発明の抗ＣＤ３０抗体をヒトで試験する必要があるため、もちろん、これらの実験も企図される。よって、本発明の抗ＣＤ３０抗体をヒトで試験して、その治療的な効力、毒性、薬物動態および／または他の臨床特性を判断してもよい。

本発明の抗ＣＤ３０抗体は、動物モデルまたはヒトでのＦｃ含有治療薬に優れた性能を与えることができる。このような抗ＣＤ３０抗体のレセプター結合プロファイルを、本件明細書で説明するように、たとえば、細胞毒性の薬剤の力価を高める、あるいは、特異的エフェクター機能またはエフェクター細胞を標的する目的で選択し、薬剤作用の選択性を改善するようにしてもよい。さらに、一部またはすべてのエフェクター機能を低減することで、このようなＦｃ含有薬剤の副作用または毒性を低減できるレセプター結合プロファイルを選択することも可能である。たとえば、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩおよびＦｃγＲＩＩａへの結合が低減された抗ＣＤ３０抗体を選択して、細胞によるほとんどのエフェクター機能を除去することが可能であり、あるいは、Ｃ１ｑへの結合が低減された抗ＣＤ３０抗体を選択して、相補体によるエフェクター機能を制限してもよい。状況によっては、このようなエフェクター機能は潜在的な毒性作用を有することが知られているため、これを除去するとＦｃのある薬剤の安全性を高められる場合があり、このような改善後の安全性を動物モデルでキャラクタライズしてもよい。状況によっては、このようなエフェクター機能は所望の治療活性を媒介することが知られているため、これを亢進するとＦｃのある薬剤の活性または力価を高められることがあり、このような改善後の活性または力価を動物モデルでキャラクタライズしてもよい。

さまざまな同所腫瘍モデルで最適な抗ＣＤ３０抗体を試験することが可能である。これらの臨床的に関連した動物モデルは、病態生理の研究や、膵臓癌、前立腺癌、乳癌などの攻撃的な癌の治療法において重要である。ドナー患者のヒト腫瘍細胞またはフラグメントを臓器内（膵臓、前立腺または乳腺など）注射した部位からの腫瘍の局所性および全身の蔓延のスコアリングに、胸腺欠損ヌードマウスまたはＳＣＩＤマウスを含むがこれに限定されるものではない、免疫欠損マウスが用いられることが多い。

好ましい実施形態では、さまざまなヒト疾患の臨床的に関連した動物モデルで、本発明の抗ＣＤ３０抗体の効力を見極めることができる。多くの場合、関連モデルには、特異的腫瘍抗原のさまざまなトランスジェニック動物が含まれる。

ヒトＦｃレセプター（ガンマ鎖、ＦｃγＲ１、ＲＩＩａ／ｂなどを含むＣＤ１６など）を発現するモデルなどの関連のトランスジェニックモデルを利用して、抗ＣＤ３０抗体およびＦｃ−融合物の効力を評価および試験することが可能である。腫瘍毒性または自己免疫疾患およびＲＡなどの他の疾患での効力を生理学的研究を可能にし得るマウスまたは他の齧歯類に、エフェクター機能を直接または間接的に媒介するヒト遺伝子を導入することによる抗ＣＤ３０抗体の評価。ＦｃγＲＩＩＩａなどのヒトＦｃレセプターは、齧歯類へのヒト多型の特異的および組み合わせ（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｄｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ）の導入を可能にする位置１５８ＶまたはＦの多型などの多型を有することがある。多型特異的ＦｃＲに関するさまざまな研究は本セクションの内容に限定されず、本件特許出願全体に明記されているようなＦｃＲに関する一般的な説明および用途をすべて包含する。本発明の抗ＣＤ３０抗体を用いると、このようなトランスジェニックモデルでＦｃ含有薬剤に優れた活性を与えることができ、特に、ヒトＦｃγＲＩＩＩａによる活性に合わせて結合プロファイルを最適化した変異体は、トランスジェニックＣＤ１６マウスで優れた活性を示すことがある。他のヒトＦｃレセプター（ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩなど）用のマウストランスジェニックでの効力の点での同様の改善が、それぞれのレセプターに合わせて結合プロファイルを最適化した抗ＣＤ３０抗体でも観察されることがある。また、たとえば表１に概要を示したように、複数のヒトレセプター用のマウストランスジェニックで、対応する複数のレセプターに合わせて結合プロファイルを最適化した抗ＣＤ３０抗体の活性が改善される。

候補となる治療用抗体のヒト患者における潜在的な効力を動物モデルでキャラクタライズすることは困難かつ曖昧であるがゆえに、本発明の変異体ポリペプチドによっては、人体内での潜在的な効力を見極めるための代理（ｐｒｏｘｙ）としての用途があるものがある。このような代理分子は、動物の系において、対応する候補ヒト抗ＣＤ３０抗体のＦｃＲおよび／または相補体の生物学（ｂｉｏｌｏｇｙ）を好ましくは模倣する。この模倣は、特異的抗ＣＤ３０抗体および動物ｖｓ．ヒトレセプターの相対会合親和性（ｒｅｌａｔｉｖｅａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎａｆｆｉｎｉｔｙ）によって現れる可能性が最も高い。たとえば、ヒトＦｃγＲＩＩＩａへの親和性が亢進された抗ＣＤ３０抗体の人体内での潜在的な効力を、マウスモデルを用いて見極める場合、適切な代理変異体はマウスＦｃγＲＩＩＩ−２（マウスＣＤ１６−２）への親和性が亢進されたものとなろう。あるいは、抑制ヒトＦｃγＲＩＩｂへの親和性が低減された抗ＣＤ３０抗体の人体内での潜在的な効力を、マウスモデルを用いて見極める場合、適切な代理変異体はマウスＦｃγＲＩＩへの親和性が低減されたものとなろう。また、ヒト抗ＣＤ３０抗体、動物抗ＣＤ３０抗体またはその両方との関連で代理の抗ＣＤ３０抗体を作製できる点にも注意されたい。

好ましい一実施形態では、抗ＣＤ３０抗体の試験は、霊長類（カニクイザルモデル）で効力の試験を行って、ＣＤ３０抗原を持つ特異的標的細胞の枯渇の評価を容易にすることを含むものであってもよい。別の霊長類モデルには、アカゲザルのモデルならびに、自己免疫性、移植および癌の治療研究におけるＦｃポリペプチドを含むがこれに限定されるものではない。

標準的な薬理学プロファイルでは評価できないか、薬剤を繰り返し投与した後にのみ起こる、抗体またはＦｃ−融合物に関連した作用を判断するために、毒性研究を行う。ほとんどの毒性試験は、新たな治療実体を人間に導入する前に想定外の副作用を見落とさないよう、齧歯類と非齧歯類の２つの種で行われる。一般に、これらのモデルを用いると、遺伝毒性、慢性毒性、免疫原性、生殖／発達毒性および発癌性をはじめとするさまざまな毒性を測定できる。上述したパラメータに含まれるのは、摂食量、体重、抗体形式、臨床化学、標準臓器／組織の肉眼および顕微鏡での検査（心毒性）の標準測定値である。別の測定パラメータに、注射部位の外傷ならびに、中和抗体が存在する場合はその測定値がある。従来、正常な組織との交差反応性、免疫原性／抗体生成、コンジュゲートまたはリンカー毒性、放射線標識した種の「バイスタンダー」毒性について、裸またはコンジュゲートされたモノクローナル抗体治療薬を評価している。それにもかかわらず、具体的な懸案事項に対処し、ＩＣＨＳ６（上述したバイオテクノロジー製品の安全性の研究）によって定められたガイダンスに従うために、個々のケースにこのような研究を合わせなければならないことがある。それ自体、原則は、製品が十分にキャラクタライズされ、それに対する不純物／混入物質が除去されており、なおかつ試験物質が、開発全体およびＧＬＰコンプライアンスをとおして矛盾しないことである。

本発明の抗ＣＤ３０抗体の薬物動態（ＰＫ）については、さまざまな動物系で研究することが可能であるが、最も関連しているのはカニクイザル、アカゲザルなどの非ヒト霊長類である。血漿濃度とクリアランスを用いて、用量範囲６０００倍（０．０５〜３００ｍｇ／ｋｇ）での静脈注射／皮下注射の単回または繰り返し投与を、半減期（数日から数週間）について評価することが可能であり、定常状態での分配量と体内吸収レベルを測定することが可能である。このような測定パラメータの例には一般に、観察された最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）、Ｃｍａｘに達するまでの時間（Ｔｍａｘ）、時刻０から無限大までの血漿濃度−時間曲線下の面積［ＡＵＣ（０−ｉｎｆ］および見かけ上の除去半減期（Ｔ１／２）が含まれる。測定される別のパラメータには、静脈注射での投与後に得られる濃度−時間データのコンパートメント解析結果およびバイオアベイラビリティを含み得る。カニクイザルを用いた薬理学的／毒物学的研究の例が、ＲｉｔｕｘａｎおよびＺｅｖａｌｉｎについて構築されているが、そこではＣＤ２０に対するモノクローナル抗体が交差反応性である。生体内分布、線量測定（放射線標識した抗体用）およびＰＫ研究も齧歯類モデルで行うことが可能である。このような研究では、投与するすべての用量での寛容、局所組織への毒性、齧歯類異種移植動物モデルの優先局在化、標的細胞の枯渇（ＣＤ２０陽性細胞など）を評価できよう。

本発明の抗ＣＤ３０抗体は、動物系またはヒトでのＦｃ含有治療薬に優れた薬物動態を与えることのできるものである。たとえば、ＦｃＲｎとの結合が増すことで、Ｆｃ含有薬剤の半減期と曝露量を増やせる場合がある。あるいは、ＦｃＲｎとの結合が減ることで、このような薬剤に副作用がある場合など、曝露量を減らすことが有益な場合に、Ｆｃ含有薬剤の半減期と曝露量を減らせる場合がある。

Ｆｃレセプターのアレイはさまざまな免疫細胞タイプならびに異なる組織で差次的に発現されることが、従来技術において周知である。Ｆｃレセプターの組織分布の差異が、最終的には本発明の抗ＣＤ３０抗体の薬力学的（ＰＤ）および薬物動態（ＰＫ）特性に影響する場合がある。提示の抗ＣＤ３０抗体は、Ｆｃレセプターのアレイごとに親和性が異なり、ポリペプチドをＰＤおよび／またはＰＫ特性についてさらにスクリーニングすることが、各候補ポリペプチドによって得られるＰＤ、ＰＫ、治療効力の最適なバランスを定める上で極めて有用な場合がある。

薬理学的研究には、特異的腫瘍細胞の標的またはシグナル伝達機序のブロック、標的抗原発現細胞またはシグナルの枯渇の測定などを含むことができるがこれに限定されるものではない。本発明の抗ＣＤ３０抗体は、特定のエフェクター細胞個体群を標的でき、よって、力価を改善または特に有益な生理学的コンパートメントへの浸透を増すための特定の活動を漸加するＦｃ含有薬剤を指向することができる。たとえば、ＦｃγＲＩＩＩｂを優先的に標的する抗ＣＤ３０抗体により、好中球の活性および局在化を標的することが可能である。このような薬力学的作用を動物モデルまたはヒトで示すことができる。

抗ＣＤ３０抗体の臨床利用
本発明の抗ＣＤ３０抗体を、さまざまな治療目的に利用することができる。当業者であれば明らかなように、本発明の抗ＣＤ３０抗体を、その抗体などを利用できる治療目的で利用することができる。好ましい一実施形態では、患者に抗ＣＤ３０抗体を投与して、自己免疫性疾患および炎症性疾患、感染性疾患および癌を含むがこれに限定されるものではない機能障害を処置する。

本発明の目的での「患者」は、ヒトと他の動物の両方を含み、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトである。よって、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、人間での治療と動物用の両方である。本発明での「処置する」または「処置」という用語は、疾患または機能障害に対する治療ならびに、予防的または抑制性の対応策を含むことを意図している。よって、たとえば、疾患発症前に抗ＣＤ３０抗体の投与に成功すると、疾患を処置したことになる。もうひとつの例として、疾患の症状と戦うための疾患の臨床所見後に最適化した抗ＣＤ３０抗体の投与に成功すると、その疾患を処置したことになる。また、「処置する」および「処置」には、疾患を完全に取り除くために疾患の出現後に最適化された抗ＣＤ３０抗体を投与することも包含される。発症後かつ臨床症状が出てきた後に、考え得る臨床症状の軽減と、おそらくは疾患の寛解を伴う薬剤投与の成功も、その疾患を処置したことになる。「処置が必要」な対象には、疾患または機能障害がすでにある哺乳動物ならびに、疾患または機能障害を防止することになる哺乳動物をはじめとして、疾患または機能障害にかかりやすい哺乳動物が含まれる。

兆候
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体を、タンパク質または他の分子の不適切な発現を伴う疾患を持つ患者に投与する。本発明の範囲内で、これは、たとえばタンパク質の存在量の変動、タンパク質の局在化、翻訳後修飾、コンホメーション状態、変異体または病原体タンパク質の存在などが原因で生じる異常なタンパク質を特徴とする疾患および機能障害を含むことを意図している。同様に、疾患または機能障害は、多糖およびガングリオシドを含むがこれに限定されるものではない変動分子（ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）を特徴とするものであってもよい。過剰については、正常に比して分子レベルでの過発現、作用部位での遷延または蓄積された出現またはタンパク質の活性増大を含むがこれに限定されるものではない、どのような原因によるものであってもよい。この定義に含まれるのは、タンパク質の減少を特徴とする疾患および機能障害である。この減少は、正常に比べて分子レベルでの発現の減少、作用部位での短縮または減少された出現、タンパク質のバリアントフォームまたはタンパク質の活性低下を含むがこれに限定されるものではない、どのような原因によるものであってもよい。このようなタンパク質の過剰または減少については、正常な発現、出現またはタンパク質の活性との比較で測定可能であり、前記測定は、本発明の抗ＣＤ３０抗体の開発および／または臨床試験で重要な役割を果たすことがある。

本願明細書にて「癌」および「癌性」は、一般に細胞の増殖が無秩序になることを特徴とする哺乳動物での生理学的症状を示すまたは説明するものである。癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫（脂肪肉腫を含む）、神経内分泌腫瘍、中皮腫、神経鞘腫、髄膜腫、腺癌、黒色腫および白血病またはリンパ球悪性腫瘍を含むがこれに限定されるものではない。

特に、このような癌の例としては、ホジキンリンパ腫などの造血器腫瘍；非ホジキンリンパ腫（バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ種／慢性リンパ性白血病、菌状息肉腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、毛様細胞白血病およびリンパ形質細胞性白血病）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫およびＴ細胞急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫をはじめとするリンパ球前駆細胞の腫瘍、胸腺腫、末梢Ｔ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／Ｔ細胞リンパ腫および大顆粒リンパ性白血病をはじめとする成熟Ｔ細胞およびＮＫ細胞の腫瘍、ランゲルハンス細胞組織球増多症、成熟ＡＭＬ、分化のないＡＭＬ、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病および急性単球性白血病をはじめとする急性骨髄性白血病などの骨髄腫瘍、骨髄異形成症候群、慢性骨髄性白血病を含む慢性骨髄増殖性疾患；神経膠腫、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、星状膠細胞、髄芽細胞腫、上衣腫および網膜芽細胞腫などの中枢神経系の腫瘍；頭部および頸部（上咽頭癌、唾液腺癌および食道癌など）、肺（小細胞肺癌、非小細胞性肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌腫など）、消化器系（消化器癌をはじめとする胃（ｇａｓｔｒｉｃ）癌または胃（ｓｔｏｍａｃｈ）癌、胆管または胆道の癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、肛門癌など）、生殖系（精巣癌、陰茎癌または前立腺癌、子宮癌、膣癌、外陰癌、子宮頚癌、卵巣癌および子宮内膜癌など）、皮膚（黒色腫、基底細胞癌腫、扁平上皮細胞癌、日光角化症など）、肝臓（肝臓癌、肝癌、肝細胞癌および肝細胞腫など）、骨（骨巨細胞腫および溶骨性骨癌など）、別の組織および臓器（膵臓癌、膀胱癌、腎臓癌または腎癌、甲状腺癌、乳癌、腹膜の癌、カポジ肉腫）の固形腫瘍、脈管系の腫瘍（血管肉腫および血管周囲細胞腫など）があげられる。

本願明細書の「自己免疫疾患」には、同種間膵島移植拒絶、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、抗好中球細胞質自己抗体（ＡＮＣＡ）、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性心筋炎、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性卵巣炎および精巣炎、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性蕁麻疹、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、キャッスルマン症候群、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素症、クローン病、皮膚筋炎、円板状狼瘡、本態性混合型クリオグロブリン血症、第ＶＩＩＩ因子欠乏症、線維筋痛−線維筋炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギラン・バレー、グッドパスチャー症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、橋本甲状腺炎、血友病Ａ、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ神経障害、ＩｇＭ多発ニューロパチー、免疫性の血小板減少、若年性関節炎、川崎病、扁平苔癬、紅斑性狼瘡、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、Ｉ型糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎および皮膚筋炎、ｐｒｉｍａｒｙａｇａｍｍａｇｌｏｂｉｎｕｌｉｎｅｍｉａ、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー（Ｒｅｙｎａｕｌｄ）現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン（Ｓｊｏｒｇｅｎ）症候群、実質臓器移植拒絶、全身硬直症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎（ｔｅｍｐｏｒａｌａｒｔｅｒｉｓｔｉｓ）／巨細胞性動脈炎、血小板減少性紫斑病、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、疱疹状皮膚炎脈管炎（ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓｈｅｒｐｅｔｉｆｏｒｍｉｓｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）などの血管炎、白斑およびウェゲナー（Ｗｅｇｎｅｒ）肉芽腫症がある。

本願明細書の「炎症性疾患」は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、急性化膿性関節炎、アジュバント関節炎（Ｐｒａｋｋｅｎら、ＳｐｒｉｎｇｅｒＳｅｍｉｎＩｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．、２００３年８月；２５（１）：４７〜６３、その全体を援用する）、若年性特発性関節炎（ｄｅＫｌｅｅｒら、ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ．２００３年７月；４７（７）：２００１〜１０、その全体を援用する）、アレルギー性脳脊髄炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー性血管炎、アレルギー、喘息、アテローム性動脈硬化症、慢性細菌感染またはウイルス感染による慢性炎症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、冠動脈疾患、脳炎、炎症性腸疾患、炎症性骨溶解、急性および遅延型過敏反応に関連した炎症、腫瘍に関連した炎症、末梢神経損傷または脱髄疾患、火傷および虚血などの組織外傷に関連した炎症、髄膜炎による炎症、多臓器損傷症候群、肺線維症、敗血症および敗血症ショック、スティーブンス・ジョンソン症候群、未分化関節化膿症（ａｒｔｈｒｏｐｙ）および未分化脊椎関節症を含む。

本願明細書の「感染性疾患」は、ウイルス、細菌、真菌、原虫および寄生虫などの病原体によって引き起こされる疾患を含む。感染性疾患は、アデノウイルス、サイトメガロウイルス、デング熱、エプスタイン・バー、ハンタ、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、単純ヘルペスＩ型、単純ヘルペスＩＩ型、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、インフルエンザ、麻疹、流行性耳下腺炎、パポバウイルス、ポリオ、呼吸器多核体ウイルス、牛疫、ライノウイルス、ロタウイルス、風疹、ＳＡＲＳウイルス、天然痘、ウイルス性髄膜炎などをはじめとするウイルスによって引き起こされることがある。また、感染疾患（ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓｄｉｓｅａｓｅｓ）は、Ｂａｃｉｌｌｕｓａｎｔｒａｃｉｓ、Ｂｏｒｒｅｌｉａｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒｊｅｊｕｎｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｔｅｔａｎｉ、Ｄｉｐｔｈｅｒｉａ、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｎｅｓｉｓｓｅｒｉａ、Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｖｉｂｒｉａｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｙｅｒｓｉｎｉａｐｅｓｔｉｓなどをはじめとする細菌によって引き起こされることもある。また、感染性疾患は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓｉｍｍｉｔｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｍａｒｎｅｆｆｅｉなどの真菌によって引き起こされることもある。さらに、感染性疾患は、クラミジア、ｋｏｋｚｉｄｉｏａ、リーシュマニア、マラリア、リケッチア、トリパノソーマなどの原虫および寄生虫によって引き起こされることもある。

さらに、本発明の抗体を利用して、鬱血性心不全（ＣＨＦ）、心筋炎および心筋の他の症状などの心臓病；酒さ（ｒｏｓｅｃｅａ）、ざ瘡および湿疹などの皮膚症状；骨量減少、骨粗鬆症、パジェット病、ランゲルハンス細胞性組織球症、歯周病、廃用性骨減少症、骨軟化症、単骨性線維性骨異形成症、多骨性線維性骨異形成症、骨転移、骨痛管理、体液性悪性高カルシウム血症、歯周組織再生、脊髄損傷および骨折などの骨および歯の症状；ゴーシェ病などの代謝症状；クッシング症候群などの内分泌症状；神経症状を含むがこれに限定されるものではない、別の症状を防止または処置することができる。

製剤
本発明の抗ＣＤ３０抗体と１つ以上の治療的活性薬剤とを配合した医薬品組成物が企図される。本発明の抗ＣＤ３０抗体の製剤は、純度が所望の程度の前記抗ＣＤ３０抗体と、薬学的に許容される最適なキャリア、賦形剤または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．編、１９８０）とを、凍結乾燥製剤または水溶液の形で混合することで、貯蔵用に調製される。許容可能なキャリア、賦形剤または安定剤は、使用する薬用量と濃度でレシピエントにとって非毒性のものであり、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンをはじめとする酸化防止剤；保存剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノールアルコール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；メチルパラベンまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；ｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリシンなどのアミノ酸；ブドウ糖、マンノースまたはデキストリンをはじめとする単糖類および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；甘味料および他の香味料；微結晶セルロース、ラクトース、コーンスターチおよび他のスターチなどのフィラー；結合剤；添加剤；着色料；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（Ｚｎ−タンパク質錯体など）；および／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン界面活性剤を含む。好ましい一実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体を含む医薬品組成物は、酸と塩基の両方の付加塩を含むことを意図した薬学的に許容される塩として存在するなど、水溶性の形態でもよい。「薬学的に許容される酸付加塩」は、遊離塩基の生物学的有効性を保持し、かつ、生物学的またはそれ以外の観点で望ましくないものではなく、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸ならびに、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などの有機酸との間で形成される塩を示す。「薬学的に許容される塩基付加塩」には、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウムの塩などの無機塩基由来のものが含まれる。特に好ましいのが、アンモニウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩である。薬学的に許容される非毒性有機塩基由来の塩としては、第１級、第２級および第３級アミンの塩、天然に存在する置換アミンをはじめとする置換アミン、環状アミン、さらには、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミンおよびエタノールアミンなどの塩基性イオン交換樹脂がある。ｉｎｖｉｖｏでの投与に使用される製剤は、好ましくは滅菌されたものである。これは、滅菌濾過膜で濾過するか、それ以外の方法などで容易に実現できるものである。

また、本願明細書にて開示する抗ＣＤ３０抗体を、免疫リポソームとして配合することもできる。リポソームは、治療薬を哺乳動物に送達するのに有用なさまざまなタイプの脂質、リン脂質および／または界面活性剤を含む小さなベシクルである。抗ＣＤ３０抗体を含有するリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎら、１９８５、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ、８２：３６８８；Ｈｗａｎｇら、１９８０、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ、７７：４０３０；米国特許第４，４８５，０４５号明細書；米国特許第４，５４４，５４５号明細書；ＰＣＴ国際公開第９７／３８７３１号パンフレット（各々その内容を全体として援用する）に記載されているものなどの従来技術において周知の方法で調製される。循環時間を増したリポソームが、米国特許第５，０１３，５５６号明細書に開示されている。リポソームの成分は一般に、生物学的膜の脂質構造と同様の二重膜形式で作られる。ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物での逆相蒸発法を用いると、特に有用なリポソームを生成することが可能である。規定の孔サイズのフィルタを使ってリポソームを押し出し、所望の直径のリポソームを得る。リポソームに、化学治療薬または他の治療的活性薬剤を任意に含有させる（Ｇａｂｉｚｏｎら、１９８９、ＪＮａｔｉｏｎａｌＣａｎｃｅｒＩｎｓｔ８１：１４８４、その全体を援用する）。

また、抗ＣＤ３０抗体および他の治療的活性薬剤を、コアセルベーション法、界面重合（たとえばヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルまたはポリ−（メチルメタシレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセルを利用）、コロイド薬剤送達系（たとえば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）およびマクロエマルジョンを含むがこれに限定されるものではない方法で調製されたマイクロカプセルに封入してもよい。このような手法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ編、１９８０（その全体を援用する）に開示されている。徐放性調製物を調製してもよい。徐放性調製物の好適な例としては、固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスがあげられるが、この場合のマトリクスは、フィルムまたはマイクロカプセルなどの造形品の形である。徐放性マトリクスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（たとえば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号明細書、その全体を援用する）、Ｌ−グルタミン酸とガンマエチル−Ｌ−グルタミン酸塩とのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬｕｐｒｏｎＤｅｐｏｔ（登録商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーと酢酸リュープロリドで構成される注射可能なミクロスフェア）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、ポリ−ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド（ＰＬＧ）のマトリクスに取り込まれた所望の生物活性分子で構成されたミクロスフェアベースの送達系である、ポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸およびＰｒｏＬｅａｓｅ（登録商標）（Ａｌｋｅｒｍｅｓから商業入手可能）があげられる。

投与
好ましくは滅菌水溶液の形で本発明の抗ＣＤ３０抗体を含む医薬品組成物の投与については、経口的、皮下、静脈内、鼻腔内、ｉｎｔｒａｏｔｉｃａｌｌｙ、経皮的、局所的（ゲル、軟膏、ローション、クリームなど）、腹腔内、筋肉内、肺内、経膣的、非経口的、経直腸的または眼内への投与を含むがこれに限定されるものではない、さまざまな方法で行うことができる。たとえば創傷や炎症などの処置など場合によっては、抗ＣＤ３０抗体を溶液またはスプレーとして直接塗布してもよい。従来技術において周知のように、導入方法に応じて医薬品組成物を配合してもよい。

状況によっては、患者が医薬品組成物を自己投与できるがゆえに皮下投与が好ましいことがある。多くのタンパク質治療薬は、治療的に有効な用量の製剤を皮下投与に許容可能な最大容量で投与できるほどの効き目はない。アルギニン−ＨＣｌ、ヒスチジンおよびポリソルベートを含むタンパク質製剤を用いることで、この問題にある程度は対処できる（国際公開第０４０９１６５８号明細書（その全体を援用する）を参照のこと）。本発明の抗ＣＤ３０抗体は、たとえば、力価が増し、血清半減期が改善され、あるいは溶解性が亢進されることから、皮下投与に合わせやすくなることがある。

従来技術において周知のように、タンパク質治療薬は、ＩＶ注入またはボーラス投与で送達されることが多い。また、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、このような方法を用いて送達されることもある。たとえば、投与は、注入ビヒクルとして０．９％塩化ナトリウムを用いて、点滴静注による静脈へのものであってもよい。

また、吸入器またはネブライザと、エアロゾル化剤を含む製剤とを用いて、肺送達を実現してもよい。たとえば、Ａｒａｄｉｇｍから商業入手可能なＡＥＲｘ（登録商標）吸入可能（ｉｎｈａｌａｂｌｅ）技術あるいは、ＮｅｋｔａｒＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓから商業入手可能なＩｎｈａｎｃｅ（商標）肺送達系を利用することができる。本発明の抗ＣＤ３０抗体は、肺内送達に合わせやすくなることがある。ＦｃＲｎが肺内に存在し、肺から血流への搬送を促進できることがある（Ｓｙｎｔｏｎｉｘ国際公開第０４００４７９８号パンフレット、Ｂｉｔｏｎｔｉら（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０１：９７６３〜８、両方ともその全体を援用する）。したがって、肺内でＦｃＲｎを一層効果的に結合する、あるいは、血流中に一層効果的に放出される抗ＣＤ３０抗体では、肺内への投与後にバイオアベイラビリティが改善されることがある。本発明の抗ＣＤ３０抗体は、たとえば溶解性が改善される、あるいは等電点が変化することで、肺内への投与に合わせやすくなることもある。

さらに、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、たとえば、胃のｐＨでの安定性が改善され、タンパク質分解に対する耐性が増すことで、経口送達に合わせやすくなることもある。さらに、ＦｃＲｎは、成人の腸上皮で発現されるようにみえる（Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎら（１９９９）、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０４：９０３〜１１、その全体を援用する）ため、ＦｃＲｎ相互作用プロファイルが改善された本発明の抗ＣＤ３０抗体を経口投与後に、そのバイオアベイラビリティが亢進されることがある。抗ＣＤ３０抗体のＦｃＲｎによる搬送は、胃腸管、気道、生殖器における膜など他の粘膜で起こる場合もある（Ｙｏｓｈｉｄａら（２００４）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ２０：７６９〜８３、その全体を援用する）。

加えて、多数の送達系のうちのいずれも従来技術において周知であり、本発明の抗ＣＤ３０抗体の投与に利用できるものである。例としては、リポソーム、微粒子、ミクロスフェア（ＰＬＡ／ＰＧＡミクロスフェアなど）への封止などがあげられるが、これに限定されるものではない。あるいは、膜や線維をはじめとする、多孔性、非多孔性またはゼラチン質の物質の植え込みを利用してもよい。徐放性の系は、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリ（ビニルアルコール）、ポリラクチド、Ｌ−グルタミン酸とエチル−Ｌ−グルタミン酸塩とのコポリマー、エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮＤＥＰＯＴ（登録商標）などの乳酸−グリコール酸コポリマー、ポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸などのポリマー材料またはマトリクスを含むものであってもよい。また、本発明の抗ＣＤ３０抗体をコードする核酸を、たとえばレトロウイルス感染、直接注射あるいは、脂質、細胞表面レセプターまたは他のトランスフェクションエージェント（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎａｇｅｎｔ）でのコーティングによって投与することも可能である。いずれの場合も、徐放（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｒｅｌｅａｓｅ）系を利用して、抗ＣＤ３０抗体を所望の作用部分またはその近くに放出すればよい。

用量
投薬量および投与頻度は、好ましい実施形態では、治療的または予防的に効果的なように選択される。従来技術において周知のように、タンパク質分解、全身送達なのか局所送達なのか、新たなプロテアーゼの合成率ならびに、年齢、体重、全体的な健康状態、性別、食事、投与時刻、薬剤相互作用、症状の重篤度の調整が必要な場合があり、当業者であればこれを日常の実験で特定することができよう。

製剤中の治療的に活性な抗ＣＤ３０抗体の濃度は、約０．１から１００重量％で可変である。好ましい一実施形態では、抗ＣＤ３０抗体の濃度は０．００３から１．０モルの範囲である。患者を処置するには、治療的に有効な用量の本発明の抗ＣＤ３０抗体を投与すればよい。本願明細書における「治療的に有効な用量」は、投与の目的である効果が得られる用量を意味する。厳密な用量は、処置の目的によって異なり、周知の手法を用いて当業者が特定できるものである。薬用量は、体重１ｋｇあたり０．０００１から１００ｍｇ以上の範囲であればよく、たとえば体重１ｋｇあたり０．１、１、１０または５０ｍｇで、１から１０ｍｇ／ｋｇが好ましい。

いくつかの実施形態では、単回用量の抗ＣＤ３０抗体のみを用いる。他の実施形態では、複数用量の抗ＣＤ３０抗体を投与する。投与から次の投与までの経過時間は、１時間未満、約１時間、約１〜２時間、約２〜３時間、約３〜４時間、約６時間、約１２時間、約２４時間、約４８時間、約２〜４日間、約４〜６日間、約１週間、約２週間または２週間を超える時間であればよい。

他の実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体を、持続点滴または頻回投与のいずれかで、休薬期間を延ばさない、メトロノームのような投薬レジメンで投与する。こうしたメトロノームのような投与では、休薬期間をとらずに一定間隔での投薬が必要になることがある。一般に、このようなレジメンには、たとえば１〜２日間、１〜２週間、１〜２ヶ月間、あるいは最大６ヶ月間またはそれを超える長期にわたる慢性的な低用量点滴または持続点滴が包含される。用量を減らして用いると、副作用と休薬期間の必要性を最小限に抑えられることがある。

特定の実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体と１つ以上の他の予防薬または治療薬を、周期的に患者に投与する。サイクリング療法では、第１の薬剤をある時点で投与し、第２の薬剤を別の時点で投与し、任意にさらに別の薬剤を別の時点で投与して、任意に休薬期間をとった後、この投与シーケンスを１回以上繰り返すことになる。サイクル数は一般に、２〜１０である。サイクリング療法を用いると、１つ以上の薬剤に対する耐性の発達を低減することができ、副作用を最小限に抑えることができ、あるいは、処置効力を改善することができる。

併用療法
本発明の抗ＣＤ３０抗体を、１つ以上の他の治療レジメンまたは治療剤と併用して投与してもよい。別の治療レジメンまたは治療剤を利用すると、抗ＣＤ３０抗体の効力または安全性を改善できることがある。また、別の治療レジメンまたは治療剤を用いて、抗ＣＤ３０抗体の作用を変化させるのではなく同じ疾患または併存症を処置してもよい。たとえば、本発明の抗ＣＤ３０抗体を、化学療法、放射線療法との併用あるいは、化学療法と放射線療法の両方との併用で患者に投与することができる。本発明の抗ＣＤ３０抗体は、細胞毒剤、化学治療薬、サイトカイン、成長阻害剤、抗ホルモン剤、キナーゼインヒビター、抗血管形成剤、心血管保護薬、免疫賦活剤、免疫抑制剤、さらには、血液細胞、血管形成インヒビター、タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）インヒビター、別の抗ＣＤ３０抗体、ＦｃγＲＩＩｂまたは他のＦｃレセプターインヒビターの増殖を促進する薬剤または他の治療薬を含むがこれに限定されるものではない、１つ以上の他の予防薬または治療薬との組み合わせで投与できるものである。

「組み合わせで」および「同時投与」という表現は、前記予防薬または治療薬を厳密に同時に投与することに限定されるものではない。そうではなく、本発明の抗ＣＤ３０抗体および他の薬剤（単数または複数）を、これらが一緒に作用して、本発明の抗ＣＤ３０抗体または他の薬剤（単数または複数）のいずれかだけを用いて処置した場合よりも大きな利点が得られるように、一定時間内に順に投与することを意味する。抗ＣＤ３０抗体と他の薬剤（単数または複数）とが相加的に作用すると好ましく、相乗的に作用すると特に好ましい。このような分子は、意図した目的で有効な量で適宜組み合わせられて存在する。熟練した医師であれば、経験的にあるいは薬剤の薬物動態と作用モードとを考慮して、各治療薬の適切な用量（単数または複数）ならびに適切な投与タイミングと投与方法を判断することが可能である。

一実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体を、抗体またはＦｃを含む１つ以上の別の分子と一緒に投与する。本発明の抗ＣＤ３０抗体は、同じ疾患または別の併用症の処置にあたって効力のある１つ以上の他の抗体と同時投与できるものである；たとえば、特定のタイプの癌で過発現される２種類の抗原、あるいは、自己免疫疾患または感染性疾患の発病を媒介する２種類の抗原を認識する２種類の抗体を投与してもよい。

同時投与できる抗癌抗体の例として、Ｐａｎｏｒｅｘ（商標）（エドレコロマブ）などの抗１７−ＩＡ細胞表面抗原抗体；抗４〜１ＢＢ抗体；抗４Ｄｃ抗体；Ａ３３およびＣＤＰ−８３３などの抗Ａ３３抗体；ナタリズマブなどの抗α４β１インテグリン抗体；ＬＤＰ−０２などの抗α４β７インテグリン抗体；Ｆ−２００、Ｍ−２００およびＳＪ−７４９などの抗αＶβ１インテグリン抗体；アブシキシマブ、ＣＮＴＯ−９５、Ｍａｂ−１７Ｅ６およびＶｉｔａｘｉｎ（商標）などの抗αＶβ３インテグリン抗体；５Ｇ１．１などの抗補体因子５（Ｃ５）抗体；ＯｖａＲｅｘ（登録商標）（オレゴボマブ）などの抗ＣＡ１２５抗体；Ｎｕｖｉｏｎ（登録商標）（ビジリズマブ）およびＲｅｘｏｍａｂなどの抗ＣＤ３抗体；ＩＤＥＣ−１５１、ＭＤＸ−ＣＤ４、ＯＫＴ４Ａなどの抗ＣＤ４抗体；ＯｎｃｏｌｙｓｉｎＢおよびＯｎｃｏｌｙｓｉｎＣＤ６などの抗ＣＤ６抗体；ＨＢ２などの抗ＣＤ７抗体；Ｂ４３、ＭＴ−１０３およびＯｎｃｏｌｙｓｉｎＢなどの抗ＣＤ１９抗体；２Ｈ７、２Ｈ７．ｖ１６、２Ｈ７．ｖ１１４、２Ｈ７．ｖ１１５、Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）（トシツモマブ）、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）およびＺｅｖａｌｉｎ（登録商標）（イブリツモマブ・チウキセタン）などの抗ＣＤ２０抗体；Ｌｙｍｐｈｏｃｉｄｅ（商標）（エピラツズマブ）などの抗ＣＤ２２抗体；ＩＤＥＣ−１５２などの抗ＣＤ２３抗体；バシリキシマブおよびＺｅｎａｐａｘ（登録商標）（ダクリズマブ）などの抗ＣＤ２５抗体；ＡＣ１０、ＭＤＸ−０６０およびＳＧＮ−３０などの抗ＣＤ３０抗体；Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）（ゲムツズマブ・オゾガマイシン）、ＯｎｃｏｌｙｓｉｎＭおよびＳｍａｒｔＭ１９５などの抗ＣＤ３３抗体；抗ＣＤ３８抗体；ＳＧＮ−４０およびトラリズマブなどの抗ＣＤ４０抗体；５ｃ８、Ａｎｔｏｖａ（商標）およびＩＤＥＣ−１３１などの抗ＣＤ４０Ｌ抗体；ビバツズマブ（ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ）などの抗ＣＤ４４抗体；抗ＣＤ４６抗体；Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）（アレムツズマブ）などの抗ＣＤ５２抗体；ＳＣ−１などの抗ＣＤ５５抗体；ｈｕＮ９０１−ＤＭ１などの抗ＣＤ５６抗体；ＭＤＸ−３３などの抗ＣＤ６４抗体；ＸＲ−３０３などの抗ＣＤ６６ｅ抗体；ＩＭＭＵ−１１０などの抗ＣＤ７４抗体；ガリキシマブおよびＩＤＥＣ−１１４などの抗ＣＤ８０抗体；ＭＤＸ−２１４などの抗ＣＤ８９抗体；抗ＣＤ１２３抗体；Ｂ−Ｂ４−ＤＭ１などの抗ＣＤ１３８抗体；ＡＡ−９８などの抗ＣＤ１４６抗体；抗ＣＤ１４８抗体；ｃＴ８４．６６、ラベツズマブ（ｌａｂｅｔｕｚｕｍａｂ）およびＰｅｎｔａｃｅａ（商標）などの抗ＣＥＡ抗体；ＭＤＸ−１０１などの抗ＣＴＬＡ−４抗体；抗ＣＸＣＲ４抗体；ＡＢＸ−ＥＧＦ、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ）、ＩＭＣ−Ｃ２２５およびＭｅｒｃｋＭａｂ４２５などの抗ＥＧＦＲ抗体；Ｃｒｕｃｅｌｌ’の抗ＥｐＣＡＭ、ＩＮＧ−１およびＩＳ−ＩＬ−２などの抗ＥｐＣＡＭ抗体；抗エフリンＢ２／ＥｐｈＢ４抗体；Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、ＭＤＸ−２１０などの抗Ｈｅｒ２抗体；シブロツズマブ（ｓｉｂｒｏｔｕｚｕｍａｂ）などの抗ＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質）抗体；ＮＸＴ−２１１などの抗フェリチン抗体；抗ＦＧＦ−１抗体；抗ＦＧＦ−３抗体；抗ＦＧＦ−８抗体；抗ＦＧＦＲ抗体、抗フィブリン抗体；ＷＸ−Ｇ２５０およびＲｅｎｃａｒｅｘ（登録商標）などの抗Ｇ２５０抗体；ＥＭＤ−２７３０６３およびＴｒｉＧｅｍなどの抗ＧＤ２ガングリオシド抗体；ＢＥＣ２、ＫＷ−２８７１およびミツモマブなどの抗ＧＤ３ガングリオシド抗体；ＲｅｏＰｒｏなどの抗ｇｐＩＩｂ／ＩＩＩａ抗体；抗ヘパリナーゼ抗体；Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）、ＭＤＸ−２１０およびペルツズマブなどの抗Ｈｅｒ２／ＥｒｂＢ２抗体；Ｏｎｃｏｌｙｍ（登録商標）、Ｓｍａｒｔ１Ｄ１０などの抗ＨＬＡ抗体；抗ＨＭ１．２４抗体；ＩＣＭ３などの抗ＩＣＡＭ抗体；抗ＩｇＡレセプター抗体；ＣＰ−７５１８７１およびＥＭ−１６４などの抗ＩＧＦ−１抗体；ＩＭＣ−Ａ１２などの抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体；ＣＮＴＯ−３２８およびエルシリモマブ（ｅｌｓｉｌｉｍｏｍａｂ）などの抗ＩＬ−６抗体；ＨｕＭａｘ（商標）−ＩＬ１５などの抗ＩＬ−１５抗体；抗ＫＤＲ抗体；抗ラミニン５抗体；Ｈｕ３Ｓ１９３およびＩＧＮ−３１１などの抗ルイスＹ抗原抗体；抗ＭＣＡＭ抗体；ＢｒａｖａＲｅｘおよびＴｒｉＡｂなどの抗Ｍｕｃ１抗体；ＥＲＩＣ−１およびＩＣＲＴなどの抗ＮＣＡＭ抗体；ＴｈｅｒａｇｙｎおよびＴｈｅｒｅｘなどの抗ＰＥＭ抗原抗体；抗ＰＳＡ抗体；ＩＧ８などの抗ＰＳＣＡ抗体；抗Ｐｔｋ抗体；抗ＰＴＮ抗体；ＡＭＧ−１６２などの抗ＲＡＮＫＬ抗体；抗ＲＬＩＰ７６抗体；ＭｏｎｏｐｈａｒｍＣなどの抗ＳＫ−１抗原抗体；抗ＳＴＥＡＰ抗体；ＣＣ４９−ＳＣＡおよびＭＤＸ−２２０などの抗ＴＡＧ７２抗体；ＣＡＴ−１５２などの抗ＴＧＦ−β抗体；ＣＤＰ５７１、ＣＤＰ８７０、Ｄ２Ｅ７、Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）（アダリムマブ）およびＲｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）（インフリキシマブ）などの抗ＴＮＦ−α抗体；抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ１およびＴＲＡＩＬ−Ｒ２抗体；抗ＶＥ−カドヘリン−２抗体；Ａｎｔｅｇｒｅｎ（商標）などの抗ＶＬＡ−４抗体があげられるが、これに限定されるものではない。さらに、ＧＤ３エピトープ抗体ＢＥＣ２およびｇｐ７２エピトープ抗体１０５ＡＤ７を含むがこれに限定されるものではない抗イディオタイプ抗体を利用してもよい。加えて、抗ＣＤ３／ＣＤ２０抗体Ｂｉ２０を含むがこれに限定されるものではない二重特異性抗体を利用してもよい。

自己免疫疾患または炎症性疾患、移植片拒絶、ＧＶＨＤなどの処置のために同時投与できる抗体の例としては、ＬＤＰ−０２などの抗α４β７インテグリン抗体、ＬＤＰ−０１などの抗ベータ２インテグリン抗体、５Ｇ１．１などの抗補体（Ｃ５）抗体、ＢＴＩ−３２２、ＭＥＤＩ−５０７などの抗ＣＤ２抗体、ＯＫＴ３などの抗ＣＤ３抗体、ＳＭＡＲＴ抗ＣＤ３、ＩＤＥＣ−１５１、ＭＤＸ−ＣＤ４、ＯＫＴ４Ａなどの抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ１１ａ抗体、ＩＣ１４などの抗ＣＤ１４抗体、抗ＣＤ１８抗体、ＩＤＥＣ１５２などの抗ＣＤ２３抗体、Ｚｅｎａｐａｘなどの抗ＣＤ２５抗体、５ｃ８、Ａｎｔｏｖａ、ＩＤＥＣ−１３１などの抗ＣＤ４０Ｌ抗体、ＭＤＸ−３３などの抗ＣＤ６４抗体、ＩＤＥＣ−１１４などの抗ＣＤ８０抗体、ＡＢＸ−ＣＢＬなどの抗ＣＤ１４７抗体、ＣＤＰ８５０などの抗Ｅ−セレクチン抗体、ＲｅｏＰｒｏ／Ａｂｃｉｘｉｍａなどの抗ｇｐＩＩｂ／ＩＩＩａ抗体、ＩＣＭ３などの抗ＩＣＡＭ−３抗体、ＶＸ−７４０などの抗ＩＣＥ抗体、ＭＤＸ−３３などの抗ＦｃγＲ１抗体、ｒｈｕＭａｂ−Ｅ２５などの抗ＩｇＥ抗体、ＳＢ−２４０６８３などの抗ＩＬ−４抗体、ＳＢ−２４０５６３、ＳＣＨ５５７００などの抗ＩＬ−５抗体、ＡＢＸ−ＩＬ８などの抗ＩＬ−８抗体、抗インターフェロンガンマ抗体、ＣＤＰ５７１、ＣＤＰ８７０、Ｄ２Ｅ７、Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ、ＭＡＫ−１９５Ｆなどの抗ＴＮＦａ抗体、Ａｎｔｅｇｒｅｎなどの抗ＶＬＡ−４抗体があげられるが、これに限定されるものではない。自己免疫疾患または炎症性疾患、移植片拒絶、ＧＶＨＤなどの処置のために同時投与できる他のＦｃ含有分子の例としては、ｐ７５ＴＮＦレセプター／Ｆｃ融合Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）（エタネルセプト）およびＲｅｇｅｎｅｒｏｎ社のＩＬ−１ｔｒａｐがあげられるが、これに限定されるものではない。

感染性疾患の処置のために同時投与できる抗体の例としては、ＡＢｔｈｒａｘなどの抗炭疽抗体、ＣｙｔｏＧａｍおよびセビルマブ（ｓｅｖｉｒｕｍａｂ）などの抗ＣＭＶ抗体、ＣｒｙｐｔｏＧＡＭ、Ｓｐｏｒｉｄｉｎ−Ｇなどの抗クリプトスポリジウム抗体、Ｐｙｌｏｒａｎなどの抗ヘリコバクター抗体、ＨｅｐｅＸ−Ｂ、Ｎａｂｉ−ＨＢなどの抗Ｂ型肝炎抗体、ＨＲＧ−２１４などの抗ＨＩＶ抗体、フェルビズマブ（ｆｅｌｖｉｚｕｍａｂ）、ＨＮＫ−２０、パリビズマブ、ＲｅｓｐｉＧａｍなどの抗ＲＳＶ抗体、Ａｕｒｅｘｉｓ、Ａｕｒｏｇｒａｂ、ＢＳＹＸ−Ａ１１０およびＳＥ−Ｍａｂなどの抗ブドウ球菌抗体があげられるが、これに限定されるものではない。

あるいは、本発明の抗ＣＤ３０抗体を、同時投与あるいは、１つ以上のＦｃレセプターへの結合と競合する１つ以上の他の分子と一緒に投与してもよい。たとえば、抑制性レセプターであるＦｃγＲＩＩｂのインヒビターを同時投与することで、エフェクター機能が増す場合がある。同様に、ＦｃγＲＩＩＩａなどの活性化レセプターのインヒビターを同時投与することで、不要なエフェクター機能を最小限に抑えられる場合がある。Ｆｃレセプターインヒビターとしては、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａまたは他のＦｃレセプターに対する結合の競合的阻害剤として作用するように改変されたＦｃ分子ならびに他の免疫グロブリンおよび具体的にはＩＶＩｇ（静脈内免疫グロブリン）と呼ばれる処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）があげられるが、これに限定されるものではない。一実施形態では、抗ＣＤ３０抗体の投与前にインヒビターを投与して作用させる。逐次投薬の効果を発揮するための別の方法として、Ｆｃレセプターインヒビターの即時型剤形を提供した後、本発明の抗ＣＤ３０抗体の徐放性製剤を提供することがある。この即時型製剤と徐放性（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｒｅｌｅａｓｅ）製剤については、別々に投与することも可能であるし、組み合わせてひとつの単位剤形にすることも可能である。また、ＦｃγＲＩＩｂインヒビターの投与を利用して、たとえば血友病患者への第ＶＩＩＩ因子投与後の抗第ＶＩＩＩ因子抗体応答などの不要な免疫応答を制限することもできる。

一実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体を化学治療薬と一緒に投与する。「化学治療薬」を本願明細書で使用する場合、癌の処置に有用な化合物を意味する。化学治療薬の例としては、チオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））などのアルキル化剤；ブスルファン、イソプロスルファンおよびピポスルファンなどのアルキルスルホネート；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎；フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロライドおよびゴセレリンなどの抗アンドロゲン；アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルチノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなどの抗生物質；たとえば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ抑制性４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストンおよびトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）をはじめとする抗エストロゲン；メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの代謝拮抗薬；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスファオラミド（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈａｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）をはじめとするエチレンイミンおよびメチルメラミン；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃａｃｉｄ）などの葉酸補充薬；クロランブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロ尿素；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン；白金；アルギニンデイミナーゼおよびアスパラギナーゼなどのタンパク質；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵなどのピリミジン類似体；たとえば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂＯｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｎｅ−ＰｏｕｌｅｎｃＲｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００などのタキサン；チミジル酸合成酵素インヒビター（Ｔｏｍｕｄｅｘなど）；アセグラトンをはじめとする別の化学治療薬；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）；ジアジクォン；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍａｃｅｔａｔｅ）；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃａｃｉｄ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクォン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン（ｕｒｅｔｈａｎ）；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；クロランブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；レチノイン酸；エスペラマイシン；カペシタビンを含むがこれに限定されるものではない。上記のうち任意の物質の薬学的に許容される塩、酸または誘導体も利用できる。

化学療法剤または他の細胞毒剤をプロドラッグとして投与してもよい。「プロドラッグ」を本願明細書で使用する場合、親の薬剤よりも腫瘍細胞に対する細胞毒性が低く、酵素的に付活または活性の高い親の形態に変換可能な、薬学的に活性な物質の前駆体または誘導体の形態を意味する。たとえば、Ｗｉｌｍａｎ、１９８６、ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙＴｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ、６１５ｔｈＭｅｅｔｉｎｇＢｅｌｆａｓｔ、１４：３７５〜３８２；Ｓｔｅｌｌａら、「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：ＡＣｈｅｍｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈｔｏＴａｒｇｅｔｅｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙ」ＤｉｒｅｃｔｅｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙ；およびＢｏｒｃｈａｒｄｔら（編）：２４７〜２６７、ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ、１９８５（各々その内容を全体として援用する）を参照のこと。本発明で利用できるプロドラッグには、ホスフェート含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、スルフェート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸修飾プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、ベータ−ラクタム含有プロドラッグ、任意に置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグまたは任意に置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、５−フルオロシトシンおよび他の５−フルオロウリジンプロドラッグ（一層活性が高い細胞毒性の遊離薬物に変換可能）を含むがこれに限定されるものではない。本発明の抗ＣＤ３０抗体とともに用いるプロドラッグ形態への誘導体化可能な細胞毒性薬剤の例としては、上述した化学治療薬のいずれをも含むがこれに限定されるものではない。

さまざまな他の治療薬を本発明の抗ＣＤ３０抗体の投与に利用できる。一実施形態では、抗ＣＤ３０抗体を抗血管形成剤と一緒に投与する。「抗血管形成剤」を本願明細書で使用する場合、血管の形成をある程度ブロックまたは干渉する化合物を意味する。抗血管新生因子は、たとえば、小分子またはタンパク質、たとえば、血管形成の促進に関与する成長因子または成長因子受容体に結合する抗体、Ｆｃ融合物またはサイトカインであってもよい。本願明細書にて好ましい抗血管新生因子は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）と結合する抗体である。たとえば、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ−Ｒ発現のレベルを低減させるＲＮＡベースの治療薬、ＶＥＧＦ−毒素融合物、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ社のＶＥＧＦ−ｔｒａｐなど、ＶＥＧＦによるシグナル伝達を抑制する他の薬剤や、ＶＥＧＦ−Ｒを結合する抗体などを利用してもよい。別の実施形態では、抗ＣＤ３０抗体を、ＣＴＬＡ−４を標的する抗体など、適応免疫応答を誘導または亢進させる治療薬と一緒に投与する。別の抗血管形成剤として、アンジオスタチン（プラスミノーゲンフラグメント）、抗トロンビンＩＩＩ、ａｎｇｉｏｚｙｍｅ、ＡＢＴ−６２７、Ｂａｙ１２〜９５６６、ベネフィン、ベバシズマブ、ビスホスホネート、ＢＭＳ−２７５２９１、軟骨由来のインヒビター（ＣＤＩ）、ＣＡＩ、ＣＤ５９相補フラグメント、ＣＥＰ−７０５５、Ｃｏｌ３、コンブレタスタチンＡ−４、エンドスタチン（コラーゲンＸＶＩＩＩフラグメント）、ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター、フィブロネクチンフラグメント、ｇｒｏ−ｂｅｔａ、ハロフジノン、ヘパリナーゼ、ヘパリン六糖（ｈｅｐａｒｉｎｈｅｘａｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）フラグメント、ＨＭＶ８３３、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、ＩＭ−８６２、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、インターフェロン誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）、インターロイキン−１２、クリングル５（プラスミノーゲンフラグメント）、ｍａｒｉｍａｓｔａｔ、メタロプロテイナーゼインヒビター（ＴＩＭＰなど）、２−メソディエストラジオール（ｍｅｔｈｏｄｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、ＭＭＩ２７０（ＣＧＳ２７０２３Ａ）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ）、血小板因子−４（ＰＦ４）、プリノマスタット、プロラクチン１６ｋＤａフラグメント、プロリフェリン慰安連タンパク質（ＰＲＰ）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５９４、レチノイド、ｓｏｌｉｍａｓｔａｔ、スクアラミン、ＳＳ３３０４、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＳＵ１１２４８、テトラヒドロコルチゾール−Ｓ、テトラチオモリブデン酸塩、サリドマイド、トロンボスポンジン−１（ＴＳＰ−１）、ＴＮＰ−４７０、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ−β）、バスキュロスタチン（ｖａｓｃｕｌｏｓｔａｔｉｎ）、バソスタチン（カルレティキュリンフラグメント）、ＺＳ６１２６、ＺＤ６４７４があげられるが、これに限定されるものではない。

好ましい一実施形態では、抗ＣＤ３０抗体をチロシンキナーゼ阻害剤と一緒に投与する。「チロシンキナーゼ阻害剤」を本願明細書で使用する場合、チロシンキナーゼのチロシンキナーゼ活性をある程度阻害する分子を意味する。このような阻害剤には、ＰＤ１５３０３５、４−（３−クロロアニリノ）キナゾリンなどのキナゾリン；ピリドピリミジン；ピリミドピリミジン；ＣＧＰ５９３２６、ＣＧＰ６０２６１およびＣＧＰ６２７０６などのピロロピリミジン；ピラゾロピリミジン、４−（フェニルアミノ）−７Ｈ−ピロロ（２，３−ｄ）ピリミジン；クルクミン（ジフェルロイルメタン、４，５−ビス（４−フルオロアニリノ）フタルイミド）；ニトロチオフェン部分を含有するチルホスチン；ＰＤ−０１８３８０５（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ）；アンチセンス分子（ＥｒｂＢコード核酸に結合するものなど）；キノキサリン（米国特許第５，８０４，３９６号明細書）；トリホスチン（米国特許第５，８０４，３９６号明細書）；ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ−７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／ＳｃｈｅｒｉｎｇＡＧ）；Ｃ１−１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）などのｐａｎ−ＥｒｂＢインヒビター；Ａｆｆｉｎｉｔａｃ（ＩＳＩＳ３５２１；Ｉｓｉｓ／Ｌｉｌｌｙ）；メシル酸イマチニブ（ＳＴＩ５７１、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＰＫＩ１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＧＷ２０１６（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；Ｃ１−１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＥＫＢ−５６９（Ｗｙｅｔｈ）；Ｓｅｍａｘｉｎｉｂ（Ｓｕｇｅｎ）；ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ−７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／ＳｃｈｅｒｉｎｇＡＧ）；ＩＮＣ−１Ｃ１１（Ｉｍｃｌｏｎｅ）；または以下の特許公報のいずれかに記載されているようなもの：米国特許第５，８０４，３９６号明細書；ＰＣＴ国際公開第９９／０９０１６号パンフレット（ＡｍｅｒｉｃａｎＣｙａｎｉｍｉｄ）；ＰＣＴ国際公開第９８／４３９６０号パンフレット（ＡｍｅｒｉｃａｎＣｙａｎａｍｉｄ）；ＰＣＴ国際公開第９７／３８９８３号パンフレット（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＰＣＴ国際公開第９９／０６３７８号パンフレット（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＰＣＴ国際公開第９９／０６３９６号パンフレット（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＰＣＴ国際公開第９６／３０３４７号パンフレット（Ｐｆｉｚｅｒ、Ｉｎｃ）；ＰＣＴ国際公開第９６／３３９７８号パンフレット（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＰＣＴ国際公開第９６／３３９７（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＰＣＴ国際公開第９６／３３９８０号パンフレット（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（商標）、ＺＤ１８３９、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）およびＯＳＩ−７７４（Ｔａｒｃｅｖａ（商標）、ＯＳＩＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を含むがこれに限定されるものではない。

もうひとつの実施形態では、抗ＣＤ３０抗体を１つ以上の免疫調節剤と一緒に投与する。このような薬剤は、１つ以上のサイトカインの生成量を増加または減少させ、自己抗原提示を上方制御または下方制御し、ＭＨＣ抗原をマスクし、あるいは、１つ以上のタイプの免疫細胞の増殖、分化、遊走または活性化状態を促進することができる。免疫調節剤としては、アスピリン、イブプロフェド（ｉｂｕｐｒｏｆｅｄ）、セレコキシブ、ジクロフェナク、エトドラク、フェノプロフェン、インドメタシン、ケトララック（ｋｅｔｏｒａｌａｃ）、オキサプロジン、ナブメントン、スリンダク、トルメンチン（ｔｏｌｍｅｎｔｉｎ）、ロフェコキシブ、ナプロキセン、ケトプロフェンおよびナブメトンなどの非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）；ステロイド（糖質コルチコイド、デキサメサゾン、コルチゾン、ヒドロキシコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、プロスタグランジン、トロンボキサンおよびロイコトリエンなどのアズルフィジンイコサノイド（ａｚｕｌｆｉｄｉｎｅｉｃｏｓａｎｏｉｄ）；ならびにアンスラリン、カルシポトリエン、クロベタゾールおよびタザロテンなどの局所用ステロイド）；ＴＧＦｂ、ＩＦＮａ、ＩＦＮｂ、ＩＦＮｇ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１０などのサイトカイン；ＢＡＦＦ、Ｂ７、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１１、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１７、ＣＤ１８、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１４７、ＣＤ１５２、補体因子（Ｃ５、Ｄ）ＣＴＬＡ４、エオタキシン、Ｆａｓ、ＩＣＡＭ、ＩＣＯＳ、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＦＮＡＲ、ＩｇＥ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−４、ＩＬ−５Ｒ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３Ｒ１、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−２３、インテグリン、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−３、ＭＨＣ、セレクチン、ＴＧＦβ、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＴＮＦ−Ｒ１、Ｔ細胞レセプター（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）（エタネルセプト）、Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）（アダリムマブ）およびＲｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）（インフリキシマブ）を含む）に対する抗体、可溶性レセプターおよびレセプターＦｃ融合物を含むサイトカイン、炎症性細胞遊走因子またはレセプターアンタゴニスト；異種抗リンパ球グロブリン；２−アミノ−６−アリール−５置換ピリミジン、ＭＨＣ結合ペプチドおよびＭＨＣフラグメントの抗イデオタイプ抗体、アザチオプリン、ブレキナール、ブロモクリプチン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、Ｄ−ペニシラミン、デオキシスパガリン、ＦＫ５０６、グルタルアルデヒド、金、ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、マロノニトリロアミド（ｍａｌｏｎｏｎｉｔｒｉｌｏａｍｉｄｅ）（レフルノミドなど）、メトトレキサート、ミノサイクリン、ミゾリビン、ミコフェノール酸モフェチル、ラパマイシンおよびサルファササジン（ｓｕｌｆａｓａｓａｚｉｎｅ）などの他の免疫調節分子があげられるが、これに限定されるものではない。

別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体をサイトカインと一緒に投与する。「サイトカイン」を本願明細書で使用する場合、細胞間メディエータとして特定の細胞に作用する、別の細胞個体群から放出されるタンパク質の総称を意味する。このようなサイトカインの例として、リンフォカイン、モノカイン、従来のポリペプチドホルモンがある。サイトカインに含まれるのは、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパク質ホルモン；肝細胞増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子−アルファおよび−ベータ；ミュラー管抑制物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮細胞増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−ベータなどの神経成長因子；血小板成長因子；ＴＧＦ−アルファおよびＴＧＦ−ベータなどのトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様成長因子−Ｉおよび−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン−アルファ、ベータおよび−ガンマなどのインターフェロン；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２；ＩＬ−１５などのインターロイキン（ＩＬ）、ＴＮＦ−アルファまたはＴＮＦ−ベータなどの腫瘍壊死因子；ＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）をはじめとする他のポリペプチド因子である。本願明細書で使用する場合、サイトカインという用語には、天然起源または組換え細胞培養物由来のタンパク質ならびに、ネイティブ配列サイトカインの生物学的に活性な等価物が含まれる。

好ましい一実施形態では、免疫系の細胞を刺激するサイトカインまたは他の薬剤を本発明の抗ＣＤ３０抗体と同時投与する。このような処置モードによって、所望のエフェクター機能が亢進されることがある。たとえば、ＩＬ−２を含むがこれに限定されるものではないＮＫ細胞を刺激する薬剤を同時投与することができる。もうひとつの実施形態では、Ｃ５ａ、Ｎ−ホルミル−メチオニル−ロイシル−フェニルアラニンなどのホルミルペプチド（Ｂｅｉｇｉｅｒ−Ｂｏｍｐａｄｒｅら（２００３）、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５７：２２１〜８、その全体を援用する）を含むがこれに限定されるものではないマクロファージを刺激する薬剤を同時投与することができる。また、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦなどを含むがこれに限定されるものではない好中球を刺激する薬剤を投与することもできる。さらに、このような免疫賦活性サイトカインの遊走を促進する薬剤を用いてもよい。また、インターフェロンガンマ、ＩＬ−３およびＩＬ−７を含むがこれに限定されるものではない別の薬剤が、１つ以上のエフェクター機能を促進することもある。

別の実施形態では、エフェクター細胞機能を阻害するサイトカインまたは他の薬剤を本発明の抗ＣＤ３０抗体と同時投与する。このような処置モードによって、不要なエフェクター機能が制限されることがある。

別の実施形態では、抗ＣＤ３０抗体を、アミノグリコシド抗生物質（アプラマイシン、アルベカシン、バンベルマイシン、ブチロシン、ジベカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、パロモマイシン、リボスタマイシン、シソマイシン、スペクトリノマイシン（ｓｐｅｃｔｒｉｎｏｍｙｃｉｎ）など）、アミノシクリトール（スペクチノマイシン（ｓｐｒｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）など）、アムフェニコール抗生物質（アジダムフェニコール、クロラムフェニコール、フロルフルニコール（ｆｌｏｒｆｒｎｉｃｏｌ）およびチアンフェニコール（ｔｈｉａｍｐｈｅｍｉｃｏｌ）など）、アンサマイシン抗生物質（リファミドおよびリファンピンなど）、カルバペネム（イミペネム、メロペネム、パニペネムなど）；セファロスポリン（セファクロル、セファドロキシル、セファマンドール、セファトリジン、セファゼドン、セフォゾプラン、セフピミゾール、セフピラミド、セフピロム、セフプロジル、セフロキシン、セフィキシム、セファレキシン、セフラジンなど）、セファマイシン（セフブペラゾン、セフォキシチン、セフミノクス、セフメタゾールおよびセフォテタンなど）；リンコスアミド（クリンダマイシン、リンコマイシンなど）；マクロライド（アジスロマイシン、ブレフェルジンＡ、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、トブラマイシンなど）、モノバクタム（アズトレオナム、カルモナムおよびチゲモナム（ｔｉｇｅｒｎｏｎａｍ）など）；ムピロシン；オキサセフェム（フロモキセフ、ラタモキセフおよびモキサラクタムなど）；ペニシリン（アムジノシリン、アムジノシリンピボキシル、アモキシシリン、バカンピシリン、ベンジルペニシリン酸、ベンジルペニシリンナトリウム、エピシリン、フェンベニシリン（ｆｅｎｂｅｎｉｃｉｌｌｉｎ）、フロキサシリン、ペナメシリン、ペネタメートハイドリオダイド（ｐｅｎｅｔｈａｍａｔｅｈｙｄｒｉｏｄｉｄｅ）、ペニシリンｏ−ベネタミン、ペニシリンＯ、ペニシリンＶ、ペニシリンＶベンゾエート、ペニシリンＶヒドラバミン、ペニメピサイクリンおよびフェンシヒシリン（ｐｈｅｎｃｉｈｉｃｉｌｌｉｎ）カリウムなど）；ポリペプチド（バシトラシン、コリスチン、ポリミキシンＢ、テイコプラニン、バンコマイシンなど）；キノロン（アミフロキサシン、シノキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン、エンロフロキサシン、フェロキサシン（ｆｅｒｏｘａｃｉｎ）、フルメキン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、グレパフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナリジキシン酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、オキソリン酸、ペフロキサシン、ピペミド酸、ロソキサシン、ルフロキサシン、スパルフロキサシン、テマフロキサシン、トスフロキサシン、トロバフロキサシンなど）；リファンピン；ストレプトグラミン（キヌプリスチン、ダルホプリスチンなど）；スルホンアミド（スルファニルアミド、スルファメトキサゾール）；テトラサイクレン（クロルテトラサイクリン、塩酸デメクロサイクリン、デメチルクロルテトラサイクリン、ドキシサイクリン、デュラマイシン、ミノサイクリン、ネオマイシン、オキシテトラサイクリン、ストレプトマイシン、テトラサイクリン、バンコマイシン）を含むがこれに限定されるものではない１つ以上の抗生物質と一緒に投与する。

アムホテリシンＢ、シクロピロクス、クロトリマゾール、エコナゾール、フルコナゾール、フルシトシン、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ニコナゾール、ナイスタチン、テルビナフィン、テルコナゾールおよびチオコナゾールなどの抗真菌剤も利用できる。

Ｉ型インターフェロン、ウイルス融合インヒビターおよびノイラミダーゼインヒビターをはじめとする、プロテアーゼインヒビター、逆転写酵素インヒビターなどの抗ウイルス薬も利用できる。抗ウイルス薬の例としては、アシクロビル、アデフォビル、アマンタジン、アンプレナビル、クレバジン（ｃｌｅｖａｄｉｎｅ）、エンフビルチド、エンテカビル、ホスカルネット、ガングシクロビル、イドクスウリジン、インジナビル、ロピナビル、プレコナリル、リバビリン、リマンタジン、リトナビル、サキナビル、トリフルリジン、ビダラビンおよびジドブジンがあげられるが、これに限定されるものではなく、利用できる。

本発明の抗ＣＤ３０抗体については、他の治療レジメンと組み合わせることができる。たとえば、一実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体での処置対象となる患者に、放射線療法も施してもよい。この放射線療法は、従来技術において一般に採用され、当業者らに周知のプロトコールに基づいて施すことが可能なものである。このような治療法は、セシウム、イリジウム、ヨウ素またはコバルト放射を含むがこれに限定されるものではない。放射線療法は、全身照射であってもよいし、肺、膀胱または前立腺などの体内または体表面の特定の部位または組織に局所的に向けられたものであってもよい。一般に、放射線療法は、約１から２週間の期間にわたって断続的に施される。しかしながら、これよりも長い期間にわたって放射線療法を施してもよい。たとえば、頭部および頚部の癌がある患者に約６から約７週間の放射線療法を施すことができる。任意に、単回線量または複数の逐次（ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ）線量で放射線療法を施すことができる。熟練した医師であれば、本願明細書にて有用な放射線療法の適切な線量（単数または複数）を経験的に判断することが可能である。本発明のもうひとつの実施形態によれば、本発明の抗ＣＤ３０抗体および１つ以上の他の抗癌治療薬を用いて、癌細胞をｅｘｖｉｖｏで処置する。このようなｅｘｖｉｖｏでの処置は、骨髄移植、特に自家の骨髄移植で有用であろうと企図される。たとえば、癌細胞のある細胞または組織（単数または複数）を抗ＣＤ３０抗体と上述したような１つ以上の他の抗癌治療薬とで処置して、レシピエント患者での移植前に癌細胞を激減または実質的に激減させることが可能である。

また、放射線療法には、抗体などの同位体的に標識した分子での処置も含むことができる。放射免疫療法の例としては、Ｚｅｖａｌｉｎ（商標）（Ｙ−９０標識抗ＣＤ２０）、ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（商標）（Ｙ−９０標識抗ＣＤ２２）およびＢｅｘｘａｒ（商標）（Ｉ−１３１標識抗ＣＤ２０）以外を含む（ｉｎｃｌｕｄｅｂｕｔ）。

もちろん、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、外科手術または光線療法などのさらに他の治療手法との組み合わせで、採用できることが企図される。

本発明の抗ＣＤ３０抗体と相互作用できる多数のレセプターは、ヒト個体群において多型性である。特定の患者または患者個体群について、本発明の抗ＣＤ３０抗体の効力が、タンパク質の特異的多型の有無に影響されることがある。たとえば、ＦｃγＲＩＩＩＡは位置１５８での多型であり、一般にはＶ（高親和性）またはＦ（低親和性）のいずれかである。Ｖ／Ｖホモ接合遺伝子型を持つ患者は、おそらくはこれらの患者がより強いＮＫ応答を開始するがゆえに、抗ＣＤ２０抗体であるＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）での処置に対してより良い臨床応答を示すことが観察されている（Ｄａｌｌ’Ｏｚｚｏら（２００４）、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．６４：４６６４〜９、その全体を援用する）。別の多型としては、ＦｃγＲＩＩＡＲ１３１またはＨ１３１があげられるがこれに限定されるものではなく、このような多型は、多型次第でＦｃ結合とこれに続く生物活性を増すか低下させることが知られている。本発明の抗ＣＤ３０抗体は、たとえばＦｃγＲＩＩＩＡ１５８Ｖなどのレセプターの特定の多型形態と優先的に結合できるか、たとえばＦｃγＲＩＩＩＡの１５８Ｖと１５８Ｆの両方の多型などレセプターの特定の位置で同じ親和性ですべての多型と結合することができる。好ましい一実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、多型に対して等価な結合を有することができ（ｍａｙｈａｖｅ）、多型の異なる患者に見られる効力の差をなくすための抗体で使用できる（ｍａｙｂｅｕｓｅｄ）。このような特性によって、治療応答に一層高い一貫性を得て、なおかつ応答しない患者個体群を減らすことができる。レセプター多型への結合が等しいこのような変異体Ｆｃでは、関連のＦｃレセプターへの結合の調節によって、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたは循環半減期などの生物活性が増しているか減少している場合がある。好ましい一実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体は、既存の結合の差を倍加させるか、この差をなくしつつ、レセプターの多型のうちのひとつと高めまたは低めの親和性で結合することができるものである。このような特性によって、特にこのような多型を有する患者個体群での効力に合わせた治療薬の生成が可能になることがある。たとえば、ＦｃγＲＩＩＢなどの抑制レセプターへの親和性の高い多型を有する患者個体群に、レセプターのこのような多型形態への結合を抑えて抗ＣＤ３０抗体を含有する薬剤を与えることで、一層有効な薬剤を生成することが可能である。

好ましい一実施形態では、本発明の抗ＣＤ３０抗体の効力を予測するために、１つ以上の多型について患者をスクリーニングする。この情報を、たとえば、臨床試験に入れるまたは臨床試験から除外する患者の選択、あるいは承認後に、適切な薬用量および処置の選択肢に関して医者や患者にガイダンスを提供するのに用いることができる。たとえば、抗ＣＤ２０ｍＡｂなどのＦｃγＲＩＩＩＡ１５８Ｆ抗体薬剤に対してホモ接合またはヘテロ接合の患者では、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂは有効性が最低限である（Ｃａｒｔｏｎ２００２Ｂｌｏｏｄ９９：７５４〜７５８；Ｗｅｎｇ２００３Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２１：３９４０〜３９４７、両方ともその全体を援用する）；このような患者は、本発明の抗体に対して一層良い臨床応答を示すことがある。一実施形態では、患者の遺伝子型から、１つ以上の現在用いられている抗体治療薬に比して本発明の抗体に対して一層良く応答するであろうことが示された場合に、これらの患者を本発明の抗体の臨床試験に含める対象として選択する。もうひとつの実施形態では、このような遺伝子型情報を用いて適切な薬用量および治療計画を求める。もうひとつの実施形態では、患者の多型遺伝子型に基づいて、臨床試験に含める対象として、あるいは、治療承認後（ｔｈｅｒａｐｙｐｏｓｔ−ａｐｐｒｏｖａｌ）のレシピエントの対象として患者を選択するが、この場合、このような治療には、このような個体群に対して特異的に効果のあるように改変された抗ＣＤ３０抗体を含むか、あるいは、このような治療に、多型の異なる形態に対して活性の差を示さない抗ＣＤ３０抗体を含む。

本発明に含まれるのは、本発明の抗ＣＤ３０抗体に対して有益な臨床応答を示すであろう患者、あるいは、１つ以上の現在用いられている抗体治療薬に比して本発明の抗ＣＤ３０抗体で処置した場合に有意に一層良い応答を呈するであろう患者を特定するための診断テストである。従来技術において周知のヒトにおけるＦｃγＲ多型を求めるための多数の方法のうちのいずれを用いてもよい。

さらに、本発明は、血液および組織試料などの臨床試料に対して実施される予後判定検査を含む。このような検査では、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、貪食およびオプソニン化を含むがこれに限定されるものではないエフェクター機能活性あるいは、機序とは関係なく、癌性またはそれ以外の病原体性細胞の死滅をアッセイすることができる。好ましい一実施形態では、上述したものなどのＡＤＣＣアッセイを利用し、特定の患者について、特定の本発明の抗ＣＤ３０抗体の効力を予測する。このような情報を用いて、臨床試験に入れるまたは臨床試験から除外する患者を特定したり、適切な薬用量および処置レジメンに関する決定事項を通知したりすることができる。また、このような情報を利用して、このようなアッセイで高めの活性を示す特定の抗ＣＤ３０抗体を含有する薬剤を選択してもよい。

以下、本発明について例示するための実施例を説明する。これらの実施例は、特定の用途または動作理論のいずれをも制約することを意図したものではない。

免疫グロブリンの可変領域に言及するために、Ｋａｂａｔの番号付けスキームに基づいて位置に番号を振る。免疫グロブリンの定常領域に言及するために、Ｋａｂａｔの分類によるＥＵ指標に基づいて位置に番号を振る（Ｋａｂａｔら、１９９１、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ、ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ）。

実施例１．ＣＤ３０を標的する抗体Ｆｖ領域
米国特許出願第１１／００４，５９０号明細書（本願明細書にてその全体を援用する）に記載されているように、ストリング最適化アルゴリズムを適用してヒトでの免疫原性を低減するために抗ＣＤ３０抗体ＡＣ１０の変異体（Ｂｏｗｅｎら、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９３、１５１：５８９６）（図１に示す配列）を生成した。このアルゴリズムは、多様なヒトＶＬκおよびＶＨ生殖系列配列に存在する複数のアミノ酸変異を発見的にサンプリングし、宿主ストリングコンテント（ｈｏｓｔｓｔｒｉｎｇｃｏｎｔｅｎｔ）（ＨＳＣ）を計算するものである。変異体配列の構造的および機能的完全性についても、最近接構造ベースのスコアリング法（２００３年１２月８日に出願された、発明の名称ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｗｉｔｈＡｎａｌｏｇｏｕｓＣｏｎｔａｃｔＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓの米国仮特許出願第６０／５２８，２２９号明細書）を用いて評価した。実験的にキャラクタライズする目的で、一連の変異体重鎖（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３と呼ぶ）および軽鎖（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３と呼ぶ）ＡＣ１０配列を選択した。

再帰的（ｒｅｃｕｒｓｉｖｅ）ＰＣＲを用いてＡＣ１０のＷＴ（Ｌ０およびＨ０）および変異体（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）の可変領域の遺伝子を作出し、全長軽カッパ（ＣＬκ）および重鎖ＩｇＧ１定常領域を含む哺乳動物の発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１Ｚｅｏ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にサブクローニングした。すべての配列を配列決定して、配列の忠実度を確認した。重鎖遺伝子（ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）（野生型または変異体）を含有するプラスミドを、すべての組み合わせ（Ｌ０／Ｈ０、Ｌ０／Ｈ１、Ｌ０／Ｈ２、Ｌ０／Ｈ３、Ｌ１／Ｈ０、Ｌ１／Ｈ１、Ｌ１／Ｈ２、Ｌ１／Ｈ３、Ｌ２／Ｈ０、Ｌ２／Ｈ１、Ｌ２／Ｈ２、Ｌ２／Ｈ３、Ｌ３／Ｈ０、Ｌ３／Ｈ１、Ｌ３／Ｈ２、Ｌ３／Ｈ３）で、軽鎖遺伝子（ＶＬ−ＣＬκ）を含有するプラスミドと一緒に２９３Ｔ細胞に同時トランスフェクトした。ここで、たとえば、Ｌ２／Ｈ３は、Ｌ２ＡＣ１０ＶＬとＨ３ＡＣ１０ＶＨとの対を示す。トランスフェクションの５日後に培地を回収し、タンパク質Ａ親和性クロマトグラフィ（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｃａｔａｌｏｇ＃２０３３４）を用いて上清から抗体を精製した。

ＷＴ抗体と変異体抗体がＣＤ３０抗原を結合する能力について、実験的に試験した。定量的かつ極めて感受性の高い方法であるＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイを用いて、ＡＣ１０のＷＴ抗体と変異体抗体が持つ、ヒトＣＤ３０に対する結合親和性を測定した。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイは、ビーズを利用した非放射活性ルミネッセント近接アッセイである。ドナービーズのレーザー励起によって酸素が励起され、これがアクセプタービーズに十分に近づくと、化学ルミネッセントイベントのカスケードが生成されて、最終的には５２０〜６２０ｎｍの蛍光が発光される。このＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイを、抗体スクリーニング用の競合アッセイとして適用した。ストレプトアビジンのドナービーズ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）への結合用の標準的な方法で、ＷＴのＡＣ１０抗体をビオチン化した。抗ＤＩＧアクセプタービーズ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）への結合用として、業務用ＣＤ３０をジゴキシゲニン（ＤＩＧ）（ＲｏｃｈｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）にコンジュゲートさせた。競合するＡＣ１０変異体が存在しない状態で、ＷＴ抗体とＣＤ３０とが相互作用し、５２０〜６２０ｎｍのシグナルが生成される。タグの付いていないＡＣ１０変異体を加えると、ＷＴＡＣ１０／ＣＤ３０相互作用に競合し、蛍光が定量的に減少するため相対的な結合親和性を判断できるようになる。図２ａおよび図２ｂに、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイを用いた場合のＷＴ（Ｈ０Ｌ０）およびＡＣ１０変異体の抗体のＣＤ３０への結合を示す。このデータを、非線形回帰を用いてひとつの部位競合モデルにフィットさせた。これらのフィットを図では曲線で示す。これらのフィットから、抗体ごとの５０％抑制濃度（ＩＣ５０）（すなわち５０％抑制に必要な濃度）が分かるため、ＷＴに対する相対的な結合親和性を判断できるようになる。これらの結合曲線へのフィットについての、ＷＴに対するＩＣ５０とＦｏｌｄＩＣ５０とを図３にあげておく。ＡＣ１０変異体は、親和性がＷＴのＡＣ１０の親和性に匹敵するかこれよりも良い、ＣＤ３０を結合する多数の変異体を含む、ＣＤ３０結合親和性のアレイを示している。

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（Ｂｉａｃｏｒｅ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて、ＡＣ１０変異体の抗原親和性も測定した。ＳＰＲは、タンパク質−タンパク質相互作用の親和性と直接結合率を測定できるようにするものであるため、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイを補う素晴らしい結合アッセイとなる。ＩｇＧ１のＦｃ領域に融合されたＣＤ３０（Ｒ＆Ｄ系）をタンパク質ＡのＳＰＲチップに固定化し、表面をＦｃでブロックし、ＷＴおよび変異体のＡＣ１０抗体を一定の濃度範囲でチップの上に流した。このようにして得られるセンサーグラムを図４に示す。ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎ曲線フィッティングソフトウェアを用いて、その曲線についてのオンレート定数（ｋａ）、オフレート定数（ｋｄ）、平衡結合定数（ＫＤ＝ｋｄ／ｋａ）として、一連の濃度（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｓｅｒｉｅｓ）についてＧｌｏｂａｌＬａｎｇｍｕｉｒフィットを実施した。ＳＰＲデータでのＷＴに対するＫＤおよびＦｏｌｄＫＤを図３にあげておく。

これらのデータならびに、配列および構造スコアに基づいて、以後の研究用の候補としてＨ３Ｌ３のＡＣ１０変異体を選択した。Ｈ３とＬ３のアミノ酸配列を図５にあげておく。

Ｈ３Ｌ３のＡＣ１０変異体配列は、構造的に重要な位置の置換が許されない（または阻止される）ＨＳＣ増加法を用いて得られるものであるため、これらの位置の変化が二次解析で許容されるのであれば、ＨＳＣを別の形で最適化できる可能性が高い。ここで、残基マスクがゆえに、変異体の変異はＣＤＲおよびＶＬ／ＶＨ界面から離れた遠位で発生する点に注意されたい。たとえば、計算でマスクした残基および／またはＣＤＲまたはＶＬ／ＶＨ界面内またはこれの近くにある残基を突然変異させることで、以後の１つ以上の置換を探索して抗原親和性を高めるまたはＨＳＣをさらに改善することができる。よって、Ｈ３／Ｌ３変異体を、以後の最適化用の一次変異体またはテンプレートと考えることが可能であり、Ｈ３／Ｌ３の変異体を二次変異体と考えることが可能である。ＣＤＲ移植抗体での突然変異（ｂａｃｋｍｕｔａｔｉｎｇ）とは対照的に、本発明の変異体での二次置換は、宿主生殖系列に関して正変異または中立変異を含むことになるため、改善するのみまたは影響のないＨＳＣが想定される。二次変異体を生成することのもうひとつの利点は、品質構造的（ｑｕａｌｉｔｙｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ）およびストリングの多様性を探索することで、たとえば親和性、活性、特異性、溶解性、発現レベル、エフェクター機能などの他の特性を最適化可能なこともあり得ることである。

Ｈ３／Ｌ３配列のストリング解析を実施し、ＨＳＣに対して当たり障りのない影響、プラスの影響または最低限の影響を持つおよび／または抗原親和性および／またはエフェクター機能を最適化できる有意な潜在的可能性を持つ一組の二次置換を設計した。図６に、この７０ＶＬ（図６ａ）と６４ＶＨ（図６ｂ）の単一変異の組を示す。Ｈ３の列にはＷＴのＨ３アミノ酸を、Ｓｕｂの列には設計した置換を示してある。位置にはＫａｂａｔの番号付け形式で番号を振り、ＫａｂａｔのＣＤＲ位置を太字にしてある。参照ストリングａｐｐで規定される、得られるストリングによる影響は、ここではＨ３／Ｌ３である一次変異体配列と二次変異体配列とのＨＳＣの差を説明している。

クイックチェンジ法による突然変異誘発を利用して二次Ｈ３／Ｌ３変異体を作製し、全長抗体を発現させ、上述したようにして精製した。Ｈ３変異体はＬ３ＶＬとの組み合わせでＨ３変異体ＶＨ鎖（Ｈ３．１−Ｈ３．６４）を含んでおり、Ｌ３変異体はＨ３ＶＨとの組み合わせでＬ３変異体ＶＬ鎖（Ｌ３．１−Ｌ３．７０）を含んでいた。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイを利用し、ストレプトアビジンのドナービーズとタンパク質Ａのアクセプタービーズに直接に結合されたビオチン化ＡＣ１０を用いて（上述したような）Ｈ３／Ｌ３二次変異体のＣＤ３０およびＦｃγＲＩＩＩａへの結合ならびにタンパク質Ａへの結合を測定した。選択ＡＣ１０変異体のＣＤ３０への結合についてのＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）結合曲線を図７にあげておく。ＣＤ３０、ＦｃγＲＩＩＩａおよびタンパク質Ａと結合させた場合のＷＴのＨ３／Ｌ３に対するＦｏｌｄＩＣ５０を図６に示す。多数のＨ３／Ｌ３二次変異体では、ＣＤ３０抗原への結合がＨ３／Ｌ３の親と匹敵するか親よりも改善され、これらの置換の組み合わせを含む別の変異体を改変できるようになるが、それによってＨＳＣおよび／または抗原親和性がさらに亢進されることもある。

抗原親和性、エフェクター機能、安定性、溶解性、発現などに関して有益な特性を示す二次置換を、以後の変異体で組み合わせて、一層最適化された治療候補を生成することができる。ここで説明した二次置換の組み合わせを含む、２つの新たなＶＬと３つの新たなＶＨ変異体を設計した。これをＬ３．７１、Ｌ３．７２、Ｈ３．６８、Ｈ３．６９、Ｈ３．７０と呼ぶ。これらの新たなＡＣ１０ＶＬおよびＶＨ変異体の各々の配列を図８に示す。これらの変異体は、以下の番号すなわちＬ３．７１−１５、Ｌ３．７２−１５、Ｈ３．６８−２３、Ｈ３．６９−２７、Ｈ３．７０−３０の変異がＷＴ（Ｈ０／Ｌ０）のＡＣ１０とは異なる。

これらの変異体を作製し、発現させ、精製した。ヒトＣＤ３０への結合を測定しているＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎデータを図９に示し、これらのデータに対するＩＣ５０の親和性およびＦｏｌｄ親和性を図１０に示す。

さらなるキャラクタリゼーションを行うために、Ｈ３．６９／Ｌ３．７１変異体を選択した。図６のデータに基づいて、Ｈ３．６９／Ｌ３．７１のＡＣ１０変異体で一組の変異体を作製した。これらの変異体を図１１にあげておく。データを図１２に示し、ＩＣ５０の親和性およびＦｏｌｄ親和性については図１１に示す。また、Ｈ３．６９＿Ｖ２／Ｌ３．７１ＡＣ１０変異体の配列を図１３にあげておく。

実施例２．エフェクター機能を亢進するアミノ酸修飾を持つ抗ＣＤ３０抗体
ここで提供するＡＣ１０変異体抗体は、抗癌治療法の臨床候補であるため、そのエフェクター機能を最適化すると好都合なことがある。上述したように、抗体の定常領域の置換を改変し、有益な臨床特性を得ることが可能である。エフェクター機能を変化させるＦｃ修飾と本発明の変異体との組み合わせが、見込まれている。最も好ましい実施形態では、米国特許出願第１０／６７２，２８０号明細書、ＰＣＴＵＳ０３／３０２４９および米国特許出願第１０／８２２，２３１号明細書ならびに、２００４年１１月１２日に発明の名称「ＯｐｔｉｍｉｚｅｄＦｃＶａｒｉａｎｔ」で出願された米国仮特許出願第６０／６２７，７７４号明細書（各々その内容を全体として援用する）に記載されているＦｃγＲへの結合を最適化および／またはエフェクター機能を亢進させる１つ以上のアミノ酸修飾を、本発明のＡＣ１０変異体と組み合わせる。最適な抗ＣＤ３０臨床候補は、親の抗ＣＤ３０抗体よりも免疫原性を低減させ、かつエフェクター機能を亢進させるアミノ酸修飾を含むものであってもよい。

クイックチェンジ法による突然変異誘発（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を利用して、Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ、Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＳ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅをはじめとする最適化された多数のＦｃ変異体を、Ｈ０／Ｌ０およびＨ３／Ｌ０のＡＣ１０ＩｇＧ１抗体で作製した。上述したように抗体を発現させ、精製した。

ＡＣ１０変異体がＣＤ３０発現細胞に対するエフェクター機能を媒介する能力を見極めるために、細胞ベースのＡＤＣＣアッセイでＡＣ１０変異体を試験した。ヒト末梢血単球（ＰＢＭＣ）を軟膜から単離してエフェクター細胞として利用し、ＣＤ３０陽性Ｌ５４０ホジキンリンパ腫細胞を標的細胞として利用した。Ｌ５４０標的細胞については、９６ウェルのプレートに１ウェルあたり細胞２０，０００個で播種し、１μｇ／ｍｌで開始して１／２ｌｏｇステップで希釈しながら、指定された抗体で３重に処置した。フィコール勾配を用いて単離し、ＦｃγＲＩＩＩａ１５８Ｖ／ＦとしてアロタイプしたＰＢＭＣをＬ５４０細胞の２５倍過剰で加え、４時間かけて同時培養した後に細胞毒性検出キット（ＬＤＨ、ＲｏｃｈｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）を製造業者の指示どおり用いてＬＤＨ活性を処理した。プレートの読み取りにはＷａｌｌａｃ１４２０Ｖｉｃｔｏｒ²（商標）を利用した。図１４ａおよび図１４ｂに、最適化されたＦｃ変異体との組み合わせで、ＷＴ（Ｈ０／Ｌ０）とＨ３／Ｌ３のＡＣ１０とを比較する形で、ＡＤＣＣアッセイの結果を示す。これらのグラフから、それぞれの抗体は、そのＥＣ５０（その相対力価を反映している）だけでなく、飽和濃度で抗体によって達成可能なＡＤＣＣの最大レベル（その相対効力を反映している）も異なっていることが分かる。力価と効力という２つの用語は、望ましい臨床特性を示す目的で曖昧に用いられることがある。しかしながら、現在の実験背景では、これらの語は比状態量を示すため、ここでは明確に定義している。現在の実験背景で「力価」を使用する場合、これは抗ＣＤ３０抗体のＥＣ５０を意味する。現在の実験背景で「効力」を使用する場合、これは飽和レベルで得られると思われる抗体の最大限のエフェクター機能を意味する。Ｆｃ変異体抗体では、Ｈ０／Ｌ０およびＨ３／Ｌ３のＡＣ１０の場合に比して力価と効力のかなりの亢進が観察される。

ヒトＩｇＧ１は、治療用抗体で最も一般的に用いられる定常領域であるが、他の実施形態では他のＩｇＧ免疫グロブリン鎖の定常領域またはその変異体を利用してもよい。ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、ＣＤＣおよび血清半減期などのエフェクター機能は、たとえば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ（Ｍｉｃｈａｅｌｓｅｎら、１９９２、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２９（３）：３１９〜３２６、その全体を援用する）をはじめとするクラスの異なる抗体間で大きく異なる。抗体間のエフェクター機能差の決定基を研究調査するために、多くの研究で、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４変異体を探索している。たとえば、Ｃａｎｆｉｅｌｄ＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、１９９１、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１４８３〜１４９１；Ｃｈａｐｐｅｌら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８（２０）：９０３６〜９０４０；Ｃｈａｐｐｅｌら、１９９３、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２６８：２５１２４〜２５１３１；Ｔａｏら、１９９１、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１０２５〜１０２８；Ｔａｏら、１９９３、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７８：６６１〜６６７；Ｒｅｄｐａｔｈら、１９９８、ＨｕｍａｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、５９、７２０〜７２７（各々その内容を全体として援用する）を参照のこと。従来技術において周知の方法を用いて、タンパク質の互いに有意な配列相同性または構造相同性を有する対応の残基または等価な残基を判断することができる。同様に、このような方法を用いて、たとえば米国仮特許出願第６０／６２１，３８７号明細書および同第６０／６２９，０６８号明細書（両方ともその全体を援用する）に記載されているような他の免疫グロブリンクラスからの定常領域を含む抗体のアミノ酸修飾を改変し、最適な特性を得ることが可能である。一例として、鍵となるＦｃγＲ結合残基を、これよりもエフェクター機能の良いＩｇＧの対応するアミノ酸（たとえばＩｇＧ１など）で置き換えることで、ＩｇＧ２の比較的良くないエフェクター機能を改善できることがある。たとえば、ＦｃγＲ結合に関しては、ＩｇＧ２とＩｇＧ１との間の鍵となる残基の差には、Ｐ２３３、Ｖ２３４、Ａ２３５、−２３６（ＩｇＧ１に比してＩｇＧ２での欠失を指す）、Ｇ３２７が含まれることがある。よって、これらの残基のうちの１つ以上を対応するＩｇＧ１アミノ酸すなわちＰ２３３Ｅ、Ｖ２３４Ｌ、Ａ２３５Ｌ、−２３６Ｇ（位置２３６でのグリシンの挿入を指す）、Ｇ３２７Ａで置き換えた、親のＩｇＧ２における１つ以上のアミノ酸修飾によって、エフェクター機能が亢進されることがある。さらに、たとえばＳ２３９Ｄ、Ｖ２６４Ｉ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅまたは上述したようなこれらの組み合わせなどの１つ以上の別のアミノ酸修飾によって、ＦｃγＲ結合およびエフェクター機能が親のＩｇＧ２よりも亢進されることがある。

本発明の抗ＣＤ３０抗体で使用できる定常領域のアミノ酸配列を、図１５にあげておく。これには、定常軽鎖のカッパ領域、４つのＩｇＧアイソタイプすなわちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４、ＩｇＧ２ＥＬＬＧＧ定常領域、ＩｇＧ（１／２）ＥＬＬＧＧ定常領域が含まれる。これらの配列は、本発明をこれらの定常領域に制約することを想定したものではない。たとえば、現在の研究ではカッパ定常鎖（Ｃκ）が用いられていたが、ラムダ定常鎖（Ｃλ）を採用してもよい。上述したように、さらに修飾をするのであれば、これらの配列を親の分子として機能させてもよい。本発明の抗ＣＤ３０抗体、具体的にはＨ３．６９＿Ｖ２／Ｌ３．７１ＡＣ１０ＩｇＧ（１／２）ＥＬＬＧＧ抗体のうちの１つの全長軽鎖および重鎖のアミノ酸配列を、図１６にあげておく。

Ｈ３．６９＿Ｖ２／Ｌ３．７１ＩｇＧ１およびＩｇＧ（１／２）ＥＬＬＧＧ抗体のＦｃ領域で一連のアミノ酸修飾を行い、ＦｃγＲ親和性が亢進されることで、ＣＤ３０を標的する抗体のエフェクター機能にどのような影響がおよぶのかを研究調査した。これらの変異体を図１７にあげておく。上述したようにして、これらの変異体を作製し、発現させ、精製した。エフェクター機能を媒介する能力の差を探索するために、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイを利用してＦｃγＲＩＩＩａに対するＡＣ１０変異体の親和性を測定した。ＭａｍｍａｌｉａｎＧｅｎｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＭＧＣ：２２６３０）で得られたクローンから、ＰＣＲを用いてヒトＶ１５８ＦｃγＲＩＩＩａの細胞外領域を得て、レセプターにグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を融合させて、スクリーニングが可能なようにした。タグを付けたＦｃγＲＩＩＩａを２９３Ｔ細胞でトランスフェクトし、分泌されたＦｃγＲＩＩＩａを含有する培地を収穫して精製した。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイを、ＦｃγＲＩＩＩａに対するＡＣ１０変異体の結合をスクリーニングするための競合アッセイとして適用した。ビオチン化したＷＴＡＣ１０抗体をストレプトアビジンのドナービーズ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）に結合させ、ＧＳＴ融合ヒトＶ１５８ＦｃγＲＩＩＩａを抗ＧＳＴアクセプタービーズ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）に結合させた。結合データを図１８に示し、ＷＴに対して得られるＩＣ５０およびＦｏｌｄＩＣ５０を図１９にあげておく。

抗ＣＤ３０抗体変異体について細胞ベースのＡＤＣＣアッセイを実施し、そのエフェクター機能特性を研究調査した。ＡＤＣＣの測定には、ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）ＥｕＴＤＡベースの細胞毒性アッセイ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）またはＬＤＨ細胞毒性検出キット（ＲｏｃｈｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）を用いた。フィコール勾配を利用して、ヒトのＰＢＭＣをロイコパックから精製した。ユーロピウムベースの検出では、まずは１×１０⁶細胞／ｍｌで標的細胞にＢＡＴＤＡを導入し、４回洗浄した。ユーロピウムベースの検出とＬＤＨベースの検出の両方で、ＣＤ３０＋Ｌ５４０ホジキンリンパ腫標的細胞を９６ウェルのプレートに１ウェルあたり細胞１０，０００個で播種し、指示された最終濃度でＦｃ変異体またはＷＴ抗体を用いてオプソニン化した。主としてトリトン×１００およびＰＢＭＣ単独を対照として用いた。エフェクター細胞をＰＢＭＣと標的細胞との比２５：１で加え、プレートを３７℃で４時間インキュベートした。Ｅｕ３＋溶液またはＬＤＨ反応混合物のいずれかを用いて細胞をインキュベートし、相対蛍光単位を測定した。データを最大（トリトン）と最小（ＰＢＭＣ単独）溶解に正規化し、非線形回帰を用いてシグモイド用量−応答モデルにフィットさせた。これらのデータを図２０にあげておく。これらの結果から、ＩｇＧ変異体のＦｃγＲ結合特性が最適化されるとエフェクター機能が改善されることが分かる。

実施例３．エフェクター機能を亢進させる、修飾された炭水化物を含む抗ＣＤ３０抗体
本願明細書にて説明した抗体に結合された炭水化物を、修飾してもよい。たとえば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ＆Ｗｕ、２００５、Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：１１〜２４（全体として本願明細書に援用する）に記載されているようにして抗体を修飾することができる。

糖改変。ＩｇＧ分子には、その重鎖各々とＦｃ部分の一部にＡｓｎ２９７と結合された２つのＮ−リンクグリカン鎖が含まれる。哺乳動物細胞ではＩｇＧが糖型の異種個体群として産生されることは周知である。Ｆｃグリコシル化は、Ｆｃレセプターとの相互作用にとって重要である。この相互作用は、Ｆｃ領域のオリゴ糖構造の変化に対して敏感であることが知られている（Ｗｒｉｇｈｔ＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、１９９８、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：３３９３〜３４０２；Ｌｕｎｄら、１９９６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：４９６３〜４９６９。通常ヒトＩｇＧＦｃに結合されて見いだされるオリゴ糖コアは二分岐のタイプのものであり、Ａｓｎ２９７にリンクしたＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）−ＧｌｃＮＡｃ−Ｍａｎ−（Ｍａｎ−ＧｌｃＮＡｃ）₂で構成される。個々のＩｇＧ分子は、末端ＧｌｃＮＡｃおよび／または第３のＧｌｃＮＡｃ（バイセクティングＧｌｃＮＡｃ）の結合のうちの一方または両方で、末端ガラクトースまたはガラクトース−シアル酸の点で異なっている。また、これらの分子は、Ａｓｎ２９７にリンクしたＧｌｃＮＡｃに結合されたフコース残基の有無の点でも異なっている。ＡＤＣＣを改善するための糖改変では、バイセクティングＧｌｃＮＡｃおよびコアフコースとに焦点があてられている。

バイセクティングＧｌｃＮＡｃ改変。ＣＨＯ細胞は、誘導可能なプラスミドからβ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩを産生するように改変されると、ＩｇＧのグリカン鎖を二分された二分岐タイプに改変し、得られるＩｇＧのＡＤＣＣ活性が増すことが、Ｕｍａｎａらによる研究（Ｕｍａｎａら、１９９９、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：１７６〜１８０、その全体を援用する）で明らかになった。しかしながら、本研究では、ＡＤＣＣの増加につながる最適なレベルのβ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ発現があることが見いだされた。この最適なレベル未満またはこれを上回るレベルで酵素が発現されると、産生されるＩｇＧのＡＤＣＣ活性が低下する。バイセクティングＧｌｃ−ＮＡｃを加えると、Ｎ−リンクグリカン鎖のコアフコシル化が低減されることがあり、これがＡＤＣＣ活性増大の一因の可能性がある。

コアフコシル化。Ｓｈｉｅｌｄｓら（Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００２、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３〜２６７４０、その全体を援用する）は、２種類の抗体すなわち抗ＨＥＲ２抗体であるＨｕ４Ｄ５と抗ＩｇＥ抗体であるＨｕＥ２７とにおけるフコシル化の作用に目を向け、ＦｃＮ−リンクグリカンのコアからフコース部分を除去すると、ＦｃγＲへの結合とＡＤＣＣ活性が大幅に改善されることを見いだした。この研究では、正常なＣＨＯ細胞から産生されるＩｇＧの約９８％がフコシル化されることが明らかになったが、一方、Ｌｅｃ１３と呼ばれるＣＨＯ株の変異体から産生されるＩｇＧのわずか１０％にしかフコース残基がなかった。フコースの有無はＡＤＣＣ活性に大きく影響する。しかしながら、フコシル化（または脱フコシル化）は、ＦｃγＲＩ、Ｃ１ｑまたはＦｃＲｎへのＩｇＧ１の結合に影響するようにはみえなかった。Ｌｅｃ１３細胞から得られた低フコシル化ＩｇＧの二量体形では、ＦｃγＲＩＩａ（Ｒ１３１）およびＦｃγＲＩＩｂへの結合にわずかな増加が認められた。高フコシル化および低フコシル化ＩｇＧ間の差は、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合に関してのほうが著しかった。この場合、低フコシル化ＩｇＧ二量体では、高フコシル化ＩｇＧ二量体と比較してＦｃγＲＩＩＩａ（Ｆ１５８）アロタイプへの結合が少なくとも４２倍になり、ＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８）アロタイプへの結合が約１９倍になった。ＡＤＣＣ活性に関して、低フコシル化ＩｇＧは、ＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８／Ｆ１５８）およびＦｃγＲＩＩＩａ（Ｆ１５８／Ｆ１５８）を持つ個体由来のＰＢＭＣを用いたときに、親の高フコシル化ＩｇＧと比較して活性の亢進が示された。したがって、これらのデータから、低フコシル化ＩｇＧによるＦｃγＲＩＩＩａへの結合の改善が、ＡＤＣＣ活性の改善という形で現れているのではないかと思われる。また、低減されたフコシル化についても、ラットのハイブリドーマ細胞系ＹＢ２／０（Ｓｈｉｎｋａｗａら、２００３、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７８：３４６６〜３４７３；Ｎｉｗａら、２００４、ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ６４：２１２７〜２１３３；Ｏｋａｚａｋｉら、２００４、ＪＭｏｌＢｉｏｌ３３６：１２３９〜１２４９（各々その内容を全体として援用する）を用いて研究調査されている。

「改変された糖型」を本願明細書で使用する場合、抗ＣＤ３０抗体に共有結合的に結合された炭水化物組成物（ここで、前記炭水化物組成物は、親の抗ＣＤ３０抗体のものとは化学的に異なる）を意味する。前記抗体を「糖改変された」と言う。改変された糖型は、エフェクター機能の亢進または低減を含むがこれに限定されるものではない、さまざまな目的で有用なことがある。改変された糖型は、従来技術において周知のさまざまな方法（Ｕｍａｎａら、１９９９、ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１７：１７６〜１８０；Ｄａｖｉｅｓら、２００１、ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ７４：２８８〜２９４；Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００２、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７７：２６７３３〜２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａら、２００３、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７８：３４６６〜３４７３）；（米国特許第６，６０２，６８４号明細書；米国特許出願第１０／２７７，３７０号明細書；米国特許出願第１０／１１３，９２９号明細書；ＰＣＴ国際公開第００／６１７３９Ａ１号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０１／２９２４６Ａ１号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０２／３１１４０Ａ１号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０２／３０９５４Ａ１号パンフレット）；（Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（商標）テクノロジー［Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ］；ＧｌｙｃｏＭＡｂ（商標）グリコシル化改変テクノロジー［ＧＬＹＣＡＲＴｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＡＧ、Ｚｕｅｒｉｃｈ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ］）（いずれも全体として本願明細書に援用する）で生成できるものである。

これらの手法の多くが、たとえば、抗ＣＤ３０抗体の発現後に炭水化物（単数または複数）を改変あるいは、グリコシル化経路に関与する酵素（たとえばＦＵＴ８［α１，６−フコシルトランセラーゼ］および／またはβ１−４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ［ＧｎＴＩＩＩ］）を調節して、改変されたまたはそれ以外の（たとえばＬｅｃ−１３ＣＨＯ細胞またはラットのハイブリドーマＹＢ２／０細胞）さまざまな生物体または細胞系で抗ＣＤ３０抗体を発現させることによって、Ｆｃ領域に共有結合的に結合されたフコシル化および／またはバイセクティングオリゴ糖のレベルを制御することに基づいている。改変された糖型は一般に、異なる炭水化物またはオリゴ糖を示す。よって、抗ＣＤ３０抗体、たとえば抗ＣＤ３０抗体は、改変された糖型を含むものであってもよい。あるいは、改変された糖型は、異なる炭水化物またはオリゴ糖を含む抗ＣＤ３０抗体を示すものであってもよい。

Ｌｅｃ１３細胞系（Ｒｉｐｋａら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．４９：５３３〜５４５（１９８６））を利用して、フコース含有量を減らしたヒト抗体を発現させた。Ｌｅｃ１３は、フコース代謝に欠陥があるため錯体炭水化物にフコースを付加する能力が衰えたレクチン耐性チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）変異体細胞系を示す。その細胞系は、Ｒｉｐｋａ＆Ｓｔａｎｌｅｙ、１９８６、ＳｏｍａｔｉｃＣｅｌｌ＆Ｍｏｌｅｃ．Ｇｅｎ．１２（１）：５１〜６２；およびＲｉｐｋａら、１９８６、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９（２）：５３３〜５４５に記載されている。Ｌｅｃ１３細胞には、フコース代謝の鍵になる酵素であるＧＤＰ−Ｄ−マンノース−４，６−デヒドラターゼへのトランスクリプトが欠けていると考えられている。Ｏｈｙａｍａら、１９８８、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３（２３）：１４５８２〜１４５８７。ＧＤＰ−Ｄ−マンノース−４，６−デヒドラターゼは、ＧＤＰ−マンノースからＧＤＰ−マンノース−４−ケト−６−Ｄ−デオキシマンノースを生成し、これがＦＸタンパク質によってＧＤＰ−Ｌ−フコースに変換される。フコシル化オリゴ糖の発現は、ＧＤＰ−Ｌ−フコースドナー基質およびフコシルトランスフェラーゼに左右される。Ｌｅｃ１３ＣＨＯ細胞系は、フコースを付加する機能が不十分であるが、オリゴ糖を持つこと以外は正常なＣＨＯ細胞系において、また、ヒト血清から得られるものと類似しているＩｇＧを提供するものである（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ，Ｒ．ら、１９９０、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２６８、５２９〜５３７；Ｒａｊｕ，Ｓ．ら、２０００、Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ１０、４７７〜４８６；Ｒｏｕｔｉｅｒ，Ｆ．Ｈ．ら、１９９７、Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ．Ｊ．１４、２０１〜２０７）。正常なＣＨＯおよびＨＥＫ２９３細胞は、フコースを一般に８０〜９８％と高い度合いでＩｇＧオリゴ糖に付加し、血清由来のＩｇＧも高度にフコシル化される（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ，Ｒ．ら、１９９０、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２６８、５２９〜５３７；Ｒａｊｕ，Ｓ．ら、２０００、Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ１０、４７７〜４８６；Ｒｏｕｔｉｅｒ，Ｆ．Ｈ．ら、１９９７、Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ．Ｊ．１４、２０１〜２０７；Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００２、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７７（９０）：２６７３３〜２６７４０）。トランスフェクトされたＬｅｃ１３細胞で発現される抗体は、一貫して約１０％フコシル化された炭水化物を産生するということは十分に確立されている（Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００２、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７７（９０）：２６７３３〜２６７４０）。

上述したようにして、ＷＴ抗体、Ｇ２３６Ａ抗体、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ変異体抗ＥｐＣＡＭ抗体を各々、２９３ＴおよびＬｅｃ１３細胞で一過的に発現させ、精製した。上述したＳＰＲ実験を利用して、ヒトＦｃγＲＩ、Ｈ１３１ＦｃγＲＩＩａ、Ｒ１３１ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂおよびＶ１５８ＦｃγＲＩＩＩａに対する、Ｆｃ変異体抗ＥｐＣＡＭ抗体の結合親和性を測定した。図１９は、全レセプターについてＳＰＲデータのフィットから得られた平衡定数ならびに、ＷＴに対するｆｏｌｄＫＤの計算値とＫＤのマイナスｌｏｇ（−ｌｏｇ（ＫＤ）である。一組のヒトＦｃγＲへの抗体の結合についてのＫＤのマイナスｌｏｇのプロットを図２０にあげておく。これらのデータは、フコシル化が低減されても親和性が増すのはＦｃγＲＩＩＩａの場合だけで、他のＦｃγＲではいずれも親和性が変わらないことを裏付けるものである。しかしながら、ここではＧ２３６ＡであるＦｃγＲＩＩｂの場合よりもＦｃγＲＩＩａの場合にＦｃγＲ親和性を選択的に改善する置換と糖改変とを組み合わせることで、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩａの場合に抑制レセプターＦｃγＲＩＩｂよりも選択的に改善された親和性の最適なＦｃγＲ親和性プロファイルが得られる。上記にてあげたマクロファージ貪食およびＤＣ活性化データを用いて、この糖改変およびアミノ酸置換と選択的ＦｃγＲ親和性プロファイルとの新規な組み合わせには、糖改変単独よりも有効な治療用抗体を製造できる潜在的な可能性がある。Ｌｅｃ１３細胞系の使用は、フコース含有量を低減させるその特定のモードに本発明を限定することを意図したものではない。改変されているかそうでないさまざまな生物体または細胞系（たとえばＬｅｃ−１３ＣＨＯ細胞またはラットハイブリドーマＹＢ２／０細胞）で発現させる、グリコシル化経路に関与する酵素（たとえばＦＵＴ８［α１，６−フコシルトランセラーゼ］および／またはβ１〜４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ［ＧｎＴＩＩＩ］）を調節する、ＩｇＧの発現後に修飾炭水化物（単数または複数）を修飾する（Ｕｍａｎａら、１９９９、ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１７：１７６〜１８０；Ｄａｖｉｅｓら、２００１、ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ７４：２８８〜２９４；Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００２、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７７：２６７３３〜２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａら、２００３、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７８：３４６６〜３４７３）；（米国特許第６，６０２，６８４号明細書；米国特許出願第１０／２７７，３７０号明細書；米国特許出願第１０／１１３，９２９号明細書；ＰＣＴ国際公開第００／６１７３９Ａ１号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０１／２９２４６Ａ１号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０２／３１１４０Ａ１号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０２／３０９５４Ａ１号パンフレット）ことをはじめとして、Ｆｃ領域に共有結合的に結合された、フコシル化および／またはバイセクティングオリゴ糖のレベルを制御するためのさまざまな他の方法が従来技術において周知である。

実施例４．抗ＣＤ３０抗体のｉｎｖｉｔｒｏ生物活性
Ｈ３．６９＿Ｖ２／Ｌ３．７１のＡＣ１０ＩｇＧ（１／２）ＥＬＬＧＧ抗体を以後の研究のために選択した。これをＸｍＡｂ２５１３または単に２５１３と称する。図２２は、本発明の抗ＣＤ３０抗体の相対的発現および細胞系を表にしたものである。図２３は、標的とエフェクター細胞との比を何通りかに変えた場合のＣＤ３０＋細胞に対するＸｍＡｂ２５１３の細胞毒性を示している。図２４は、ＣＤ３０＋細胞系Ｌ５４０およびＫＭＨ２に対する細胞毒性を示している。図２５は、ヒトおよびカニクイザル細胞系に対するＨ０Ｌ０ＡＣ１０およびＸｍＡｂ２５１３の結合を示している。

ｉｎｖｉｔｒｏでの抗増殖作用を観察するには、多くの抗体では通常は二次抗体によって実現される架橋が必要である。これらの抗体での対応するｉｎｖｉｖｏ作用は、Ｆｃレセプターによる架橋に左右されるのではないかということが言われている。ＸｍＡｂ２５１３は、Ｆｃレセプターとの親和性が高いためこれに対応して高いｉｎｖｉｖｏ抗増殖作用を持つことがある。ＦｃγＲＩＩＩａによる抗体架橋を測定するために、架橋にヤギ抗ＧＳＴ抗体を用いて、ＢＳＡまたはＦｃγＲＩＩＩａ−ＧＳＴの濃度を変えて、Ｋａｒｐａｓ２９９細胞を１００ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３０と一緒に増殖させた。このアッセイを図２６に示す。図２７は、本発明の抗体のｉｎｖｉｔｒｏでの抗増殖作用を示している。図から明らかなように、エフェクター機能亢進抗ＣＤ３０抗体のＦｃγＲ親和性が高まると、抗増殖作用も亢進される。

実施例５：製剤
プレフォーミュレーションキャラクタリゼーション研究のステージＩにおいて、一例としての配列番号１９および２０を含む抗ＣＤ３０抗体の安定性を１２種類の製剤で検討した。目的は、抗体を最も安定させる条件を特定するための製剤パラメータについて研究することであった。

ＳＥＣ−ＨＰＬＣおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびを用いて抗体の安定性を監視した。

温度保管下での回収についての略式の安定性プロットでは、ｐＨ６．０〜７．０にて、すべてのインキュベーション温度で塩化ナトリウム製剤の安定性がよいことが裏付けられたが、純度プロットでは、ｐＨ６．０にて、２９〜３７℃という高めのインキュベーション温度でソルビトール製剤の安定性がよいことが示された。有数の製剤間の回収プロットおよび純度プロットにおける矛盾は、ソルビトール製剤に不溶な凝集体を過小評価したことによる可能性がある。

最長８週間までの結果から、ソルビトールを含有する抗体製剤ではｐＨ範囲４．０〜６．０でＳＥＣ−ＨＰＬＣでの高めの純度が示されていたが、後にこれは、回収性のほうが対応して低下することから分かるように凝集体の不溶性によるものであることが明らかになった。通常、塩化ナトリウム製剤のほうが多くの凝集体を含むにもかかわらず、塩化ナトリウムは回収性がよいため優れた等張調整剤であるようにみえる。ソルビトールまたは塩化ナトリウムのいずれかを含むｐＨ６〜７での製剤は、本研究の期間である８週間の保管期間のあいだ、４℃で有意な変化を示さなかった。

ポリソルベート２０およびポリソルベート８０などの界面活性剤が含まれていても、試験した製剤の温度安定性には何ら影響がおよばないようにみえた。しかしながら、攪拌および凍結−融解のストレス条件では、界面活性剤を含まない製剤では沈殿物が形成された。

等張調整剤は、攪拌研究では影響があるようにはみえなかったが、凍結−融解研究ではソルビトール製剤のほうが良かった。抗体については、等張調整剤とは無関係に、試験したすべての製剤でＵＶ光線による凝集がわずかに認められた。

この研究の主な目的は、ＸＥＮＰ２５１３の安定化に最適な条件を判断するための製剤パラメータを研究調査することであり、これには、鍵になるストレスおよび分解生成物の特定、信頼できる安定性指示アッセイの開発も含んでいた。

製剤パラメータ：
（１）ｐＨ：４．０、５．０、６．０、７．０、８．０；
（２）緩衝液：１０ｍＭ濃度のナトリウムリン酸緩衝液（ｐＨ６．０〜８．０）と酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０〜５．０）；
（３）等張調整剤：１５０ｍＭ濃度の塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）または５％ソルビトール；
（４）界面活性剤：なし、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０；
（５）６．３ｍｇ／ｍＬのＸＥＮＰ２５１３標準品を４℃で保管し、研究期間のあいだ分析用に１ｍｇ／ｍＬまで希釈；
（６）ＸＥＮＰ２５１３の濃度は、初期スクリーニング研究では１ｍｇ／ｍＬとする。

目視観察
ｐＨ５．５以下のクエン酸緩衝液中で抗体を配合すると、この溶液が曇った。これは、クエン酸緩衝液、ｐＨまたは等張調整剤による可能性がある。

抗体物質の要件を最小限に抑えるために、目視観察研究を行って低ｐＨ試料での曇りの存在と原因とを監視した。ＩｎｔｅｇｒｉｔｙＢｉｏｓｏｌｕｔｉｏｎで６．３ｍｇ／ｍｌの抗体０．２５ｍｌを以下の緩衝液に透析した。
（１）１０ｍＭ酢酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ４．０
（２）１０ｍＭ酢酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ５．０
（３）１０ｍＭ酢酸ナトリウム、５％ソルビトール、ｐＨ４．０
（４）１０ｍＭ酢酸ナトリウム、５％ソルビトール、ｐＨ５．０
透析後、試料バイアルの目視検査を行い、対応する緩衝液を用いて抗体濃度を１ｍｇ／ｍＬまで希釈して、目視検査した。試料を２９℃で２４時間保管し、再度目視検査した。

ｐＨが製剤の曇りの原因であれば、ｐＨ４．０〜５．０を安定性マトリクスから排除することになる。クエン酸緩衝液が原因であれば、安定性マトリクスをそのままにしておく。等張調整剤が曇りの原因であれば、このｐＨでの特定の等張調整剤を安定性マトリクスから除外することになる。

ＳＥＣ−ＨＰＬＣ法：
ＳＥＣ−ＨＰＬＣ：タンパク質凝集
カラム：ＴＳＫ−ＧＥＬＳｕｐｅｒＳＷ３０００、０．４６×３０ｃｍ（ガードカラムなし）
移動相Ａ：１×ＰＢＳ、ＣａまたはＭｇなし
流量：０．３５ｍＬ／分
勾配：アイソクラチック
実施時間：１５分
カラム温度：周囲温度
ｃＩＥＸ−ＨＰＬＣ法
ＣＥＸ−ＨＰＬＣ：タンパク質アミド分解およびその他
カラム：ＤｉｏｎｅｘＰｒｏＰａｃＷＣＸ−１０（４ｍｍ×２５０ｍｍ）
移動相Ａ：１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０
移動相Ｂ：１０ｍＭ酢酸ナトリウム、１Ｍ塩化ナトリウム、ｐＨ５．０
流量：１．０ｍＬ／分
勾配

ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法：
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：タンパク質凝集
ゲルのタイプ：ＮｕＰＡＧＥＮｏｖｅｘ４〜１２％ビストリスゲル、１５ウェル
泳動緩衝液：１×ＭＥＳＳＤＳ泳動緩衝液
染色試薬：ＳｉｍｐｌｙＢｌｕｅＳａｆｅＳｔａｉｎ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
ロード量：１５μＬ
試料ロード：２．５μｇ

試料プレップ：１０μＬ希釈試料、１２．５水、７．５４×ＬＤＳ試料緩衝液を、１５ウェルのゲルの各ウェルに加えた。試料を５分間７０℃まで加熱した。次に、この試料を室温まで冷却し、軽くボルテックスした。Ｍａｒｋ１２ＭＷ標準１０μＬ、標準品１５μＬ、試料１５μＬを４〜１２％のビストリスゲルに入れたものを、１５ウェルにロードした。ゲルを用いたＭｉｎｉ−Ｃｅｌｌ電気泳動装置を１５０Ｖで７０分稼働させた。Ｍｉｎｉ−Ｃｅｌｌ装置からゲルカセットを取り除き、微粉砕ｉ−Ｑ水で５分間ずつ３回すすいだ。ＳｉｍｐｌｙＢｌｕｅＳａｆｅｓｔａｉｎを１時間ゲルに加えた。Ｓａｆｅｓｔａｉｎをデカントし、追加（ａｄｄ）微粉砕−Ｑ水を加えて３時間脱染した。ゲルを乾燥させた。

透析後、塩化ナトリウムを含有する抗体製剤は曇っていたが、ソルビトールを含有する抗体製剤は透明のままであった。

続いて、曇った抗体塩化ナトリウム製剤を４℃でインキュベートし、透明な抗体ソルビトール製剤については２９℃でインキュベートした。

抗体ソルビトール製剤は２９℃で２４時間のインキュベーション後も透明のままであり、４℃で２４時間インキュベートした抗体塩化ナトリウム製剤も同様であった。しかしながら、塩化ナトリウム製剤では、低めの濃度での読み取り値に、凝集体が２４時間のインキュベーション後に再溶解化されるのではなくガラスバイアルの底に沈んでいる兆候が見られた。

時刻０（透析直後）と２４時間の時点で抗体濃度を測定した。２４時間後、タンパク質濃度は抗体塩化ナトリウム製剤のほうが約１．５倍低かったのに対し、ソルビトール製剤／ｐＨが高めの製剤では、顕著な損失はわずかに見られただけであった。

ｐＨ５．０のソルビトール製剤とｐＨ７．０の対照ではタンパク質の損失は認められなかった。

ｐＨ４．０〜５．０の抗体塩化ナトリウム製剤はいずれも、２４時間のインキュベーション後に濃度が約１．５倍低かった；そこで、以後は安定性マトリクスから排除した。ｐＨ４．０〜５．０のソルビトール製剤ではタンパク質の有意な損失は認められず、研究マトリクスに含めることになる。

温度保管時の安定性
ＳＥＣ−ＨＰＬＣの結果
時刻０および１週目では、すべての製剤で比較的同じような結果であった。概して、メインピーク純度に関してはｐＨ４．０〜６．０でソルビトール製剤のほうが良く働くようにみえるが、３７℃で１週間インキュベートしたソルビトールのｐＨ５．０の試料だけは例外であった。また、界面活性剤が含まれる場合も含まれない場合も、製剤間に有意な差は観察されなかった。

２週目に、ｐＨ５．０〜６．０のソルビトール製剤は−２０〜２９℃で最高メインピーク純度約９７％を維持し続けた。しかしながら、３７℃では、ｐＨ５．０のソルビトール製剤でメインピーク純度が８３．７１％と最低になり、ｐＨ６．０のソルビトール製剤でメインピーク純度が９７．２４％と最高であった。しかしながら、後者には前の時点ならびに塩化ナトリウムの対応物と比較したときに、若干の回収ロスが認められた。

４週目に、ｐＨ５．０〜６．０のソルビトール製剤は−２０℃および４℃で最も安定しているようにみえたが、ｐＨ５．０のソルビトール試料は最悪であり、ｐＨ６．０のソルビトール試料が２９〜３７℃で最適な製剤として浮上した。しかしながら、ｐＨ６．０のソルビトール試料では、１週目のデータならびに塩化ナトリウムの対応物と比較したときに、３７℃での回収性が低下した。

８週目に、ｐＨ５．０〜６．０のソルビトール製剤は−２０℃および４℃で最適な安定性を維持していたが、ｐＨ５．０のソルビトールは最悪であり、ｐＨ６．０のソルビトールが２９〜３７℃で最適な製剤であった。繰り返すが、ｐＨ６．０のソルビトール試料は３７℃でその塩化ナトリウム対応物よりも回収性が低く、これは３７℃の時点でさらに顕著になった。

抗体での簡単な不溶性研究を行って、ソルビトール製剤において凝集体の量を過小評価していたという判断に至った。よって、ソルビトール製剤の純度データが良かったのにもかかわらず、実際には塩化ナトリウムのほうが好ましい等張調整剤である。

２種類の機械で実行し、２つのグラフに分けた。

ＩＥＸ−ＨＰＬＣでの結果
１週目から開始してＩＥＸ−ＨＰＬＣ法を実施した。このデータは、分解ピークとメインピークとが一緒になっていたため解釈が困難であり、決して明確なピーク積分ではなかった。

また、すべての時点で、保持時間の微妙なシフトすなわちＤｉｏｎｅｘカラムで普通に起こる現象があった。したがって、ＩＥＸ−ＨＰＬＣでの結果は、せいぜい、定性的なものとして利用すべきであり、タンパク質安定性の定量分析用にはならない。

１週目では、４℃の試料のデータが得られない。２週目を実施した。

１週目に、開始メインピーク純度は−２０℃および２９℃で約６８％であった。−２０℃および２９℃という低めのインキュベーション温度では、すべての製剤が比較的同じような感じで安定していた。ｐＨ８．０の塩化ナトリウムおよびソルビトール製剤で、３７℃のときに最も有意な（約３６％）分解が認められた。

２週目に、−２０℃および４℃の試料では、対応する１週目の試料と比較して有意な差は認められなかった。２９℃において、ｐＨ８．０の製剤でメインピーク純度が平均約３６％まで落ちたが、ｐＨ４．０〜５．０のソルビトール試料以外、ほとんどの製剤で３７℃でのプレピーク分解が約５０％の劇的な増加が見られた。

４週目に、結果は２週目の傾向をなぞっていた。全体としてのメインピーク純度は約６７％であり、分解の変化は−２０℃および４℃で最低であった。２９℃では、ｐＨ８．０の製剤のメインピーク純度が平均約４０％であった。３７℃では、ｐＨ４．０のソルビトール試料以外、ほとんどの製剤で一方または両方のプレピークにわたって分解が増し、約５８％のメインピーク純度が保たれた。

８週目に、製剤は−２０℃および４℃で約６８〜６９％のメインピーク純度を維持した。２９℃では、ｐＨ４．０のソルビトール試料以外、ほとんどの製剤でプレピーク分解の顕著な増加が観察され、約６８％のメインピーク純度が保たれた。３７℃でインキュベートした試料では、正確に積分できないほどピークが悪くなったため、データ積分を行わなかった。

ＳＤＳ−ＰＡＧＥでの結果
１週目のＳＥＣ−ＨＰＬＣでの結果に一致して、還元ゲル中３７℃で培養したｐＨ８．０の製剤で高めの分子量のかすかなバンドが見られた。−２０〜２９℃で試料間の有意な差は観察されなかった。

２週目に、還元ゲル中で３７℃でインキュベートしたｐＨ７．０〜８．０の製剤で高めの分子量のかすかなバンドが観察され、ｐＨ８．０の試料のほうが強烈であった。−２０〜２９℃で試料間の有意な差は観察されなかった。

４週目に、ｐＨ８．０の製剤で−２０℃で還元ゲル中、高めの分子量のバンドが観察された。ｐＨ８．０のソルビトール製剤で４℃で還元ゲル中、分解バンドが見られたが、これは外れ値の可能性もある。また、どちらの製剤でも３７℃で還元ゲル中、ｐＨ７．０〜８．０で高めの分子量のかすかなバンドが観察されたが、ｐＨ８．０の試料のほうが強烈であった。

８週目に、すべての製剤において３７℃で還元ゲル中、高めと低めの分子量のバンドが観察されたが、ｐＨ８．０の試料が最も激しかった。３７℃で、ｐＨ６．０以上の製剤には第１のメインバンドのすぐ下にダブルバンドが含まれており、塩化ナトリウム製剤ではそれが一層顕著であった。ｐＨ６．０のソルビトール製剤は最小のバンドを示し、ｐＨ６．０の塩化ナトリウム製剤も同じであった。

攪拌、凍結−融解およびＵＶ時の安定性
以下の条件下でＸＥＮＰ２５１３の安定性を試験した。
−ＶＷＲＭｉｎｉＶｏｒｔｅｘｅｒにて周囲温度かつ低設定（ｓｅｔｔｉｎｇ）で試料を４時間攪拌；
−試料を−２０℃で凍結させ、２５℃で融解を連続５サイクル；
−試料を周囲温度でＵＶ光に２４時間曝露；
−標準品を４℃で保管し、攪拌、凍結−融解またはＵＶ光にはさらさなかった。

攪拌および凍結−融解後、ポリソルベートを含まない製剤に粒子が見られ、これを試料分析前に濾過した。

ＳＥＣ−ＨＰＬＣでの結果
攪拌後の試料は、ポリソルベートを含まない製剤以外ほぼ同じであったが、これは濾過後に実行（ｒｕｎ）され、続いて凝集体が減っていた。

塩化ナトリウムを含有する凍結−融解試料では、プレピーク２の増加が認められた；濾過した試料では、濾過していない試料と比較して有意な違いは見られなかった。

ＵＶ暴露試料ではプレピーク２の顕著な増加が見られ、これはｐＨと共に増加したのに対し、ポストピークはすべての製剤で増加した。

ＩＥＸ−ＨＰＬＣでの結果
濾過した試料をはじめとして、攪拌および凍結−融解試料に有意な違いは認められなかった。しかしながら、ＵＶ試料はすべての試料で有意なプレピークを示し、これはｐＨと共に増加した。

ＳＤＳ−ＰＡＧＥでの結果
非還元ゲルと還元ゲルの両方で、ポリソルベートを含有しない攪拌試料でかすかなバンドが観察された。還元ゲルで凍結−融解試料の高めの分子量のバンドが観察された。ＵＶ暴露試料では、非還元ゲルおよび還元ゲルの両方について、高めの分子量のバンドが観察され、これはｐＨが高くなるにつれて強度が増した。

略式の安定性プロット
温度保管（−２０℃、４℃、２９℃、３７℃）でのＳＥＣ−ＨＰＬＣ純度および回収性に基づく１２種類の製剤すべての安定性プロットを以下のとおり提示する。

ＳＥＣ−ＨＰＬＣ純度
ｐＨ５．０〜６．０のソルビトール製剤では、８週間のインキュベーション後に最大４℃までは最高の結果であった。しかしながら、３７℃で、ｐＨ５．０のソルビトール試料が最悪になったのに対し、ｐＨ６．０のソルビトール試料は最適な製剤であった。後に、凝集体の不溶性がソルビトール製剤中の凝集体の過小評価の原因である旨が明らかになった点に注意されたい。

ＳＥＣ−ＨＰＬＣ回収
ｐＨ６．０〜７．０の塩化ナトリウム製剤がすべての温度で８週間のインキュベーション後に、最高の回収性を維持した。

このプレフォーミュレーション研究での所見に基づいて、ソルビトールを等張調整剤として含有するｐＨが低めの製剤のほうがＳＥＣ−ＨＰＬＣでの純度が高めであり、これは８週間の期間にわたる回収性の低下からも分かる凝集体の不溶性によるものであることが明らかになった。したがって、一実施形態では、ｐＨ６．０〜７．０で塩化ナトリウムを含有する製剤が、存在する凝集体の数が他より多いのにもかかわらず好ましい製剤条件である。

界面活性剤は、温度保管中はＸＥＮＰ２５１３製剤の安定性に有意に影響しなかったが、攪拌および凍結−融解研究の際に役立つことが明らかになった。

ＷＴのＡＣ１０ＶＬ（図１ａ）およびＶＨ（図１ｂ）の配列である。ＡＣ１０変異体と標的抗原ＣＤ３０との結合を測定するＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイ。競合する変異体抗体の存在下、特徴的な抑制曲線がルミネセンスシグナルの減少として観察される。結合データについては、それぞれ低抗体濃度と高抗体濃度でのベースラインによって得られた、個々の曲線ごとに最大および最小ルミネセンスシグナルに正規化した。これらの曲線は、非線形回帰を用いてのひとつの部位競合モデルに対するデータのフィットを示し、このフィットから各抗体のＩＣ５０が得られる。ＡＣ１０Ｆｖ変異体のＣＤ３０親和性の表である。ＣＤ３０標的抗原へのＡＣ１０ＷＴおよび変異体全長抗体の結合を示すＳＰＲセンサーグラム。この曲線は、会合相と解離相とからなり、曲線ごとに小さなスパイクで区切りを示してある。Ｌ３ＡＣ１０ＶＬ（図２ａ）およびＨ３ＡＣ１０ＶＨ（図２ｂ）の配列である。Ｈ３およびＬ３のＡＣ１０変異体の表である。選択（ｓｅｌｅｃｔ）Ｈ３Ｌ３のＡＣ１０二次変異体と標的抗原ＣＤ３０間の結合を測定するＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイ。Ｌ３．７１ＡＣ１０ＶＬ、Ｌ３．７２ＡＣ１０ＶＬ、Ｈ３．６８ＡＣ１０ＶＨ、Ｈ３．６９ＡＣ１０ＶＨおよびＨ３．７０ＡＣ１０ＶＨの配列である。Ｈ３．６８、Ｈ３．６９、Ｈ３．７０、Ｌ３．７１およびＬ３．７２のＡＣ１０変異体と標的抗原ＣＤ３０との結合を測定するＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイ。図９のデータを表にしたもの。Ｈ３．６９／Ｌ３．７１ＡＣ１０変異体およびデータである。ＣＤ３０、タンパク質ＡおよびＶ１５８ＦｃγＲＩＩＩａへのＨ３．６９／Ｌ３．７１ＡＣ１０変異体の結合を測定するＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイ。Ｈ３．６９＿Ｖ２／Ｌ３．７１ＡＣ１０抗体の可変軽（ＶＬ）および重（ＶＨ）鎖のアミノ酸配列。エフェクター機能を亢進させるＦｃ変異体を含むＷＴ（Ｈ０／Ｌ０）およびＨ３／Ｌ３のＡＣ１０抗体のＡＤＣＣ能力を測定する細胞ベースのアッセイ。生データを、標的細胞のトリトン−Ｘ１００溶解によって求めたパーセント規模（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓｃａｌｅ）の最大細胞毒性に正規化した。定常鎖アミノ酸配列。変異Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ｇ３２７Ａを含むＨ３．６９＿Ｖ２／Ｌ３．７１ＡＣ１０ＩｇＧ（１／２）ＥＬＬＧ抗体の軽鎖および重鎖。重鎖配列中、ＥＵ残基２３３〜２３６、２３９、３２７、３３２を太字で示してある。抗ＣＤ３０のＩｇＧ（１／２）ＥＬＬＧＧ変異体。各変異体に新規な修飾およびアイソタイプの修飾を与える。ＩｇＧ変異体はいずれも、抗ＣＤ３０抗体Ｈ３．６９＿Ｖ２＿Ｌ３．７１ＡＣ１０の可変領域を含む。変異体は、図１８に示すようなＩｇＧ（１／２）ＥＬＬＧＧ定常領域を含み、潜在的に１つ以上の別のアイソタイプ修飾および／または１つ以上の新規な修飾を含む。図１８ａ〜図１８ｃ。ヒトＶ１５８ＦｃγＲＩＩＩａへのＷＴおよび変異体ＩｇＧ抗体の結合を示す競合ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイ。ＩｇＧ変異体はＩｇＧ１またはＩｇＧ（１／２）ＥＬＬＧＧのいずれかの定常領域プラス表記の修飾を含む。Ｉ３３２ＥおよびＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥＩｇＧ１以外、すべてのＩｇＧ変異体は抗ＣＤ３０抗体Ｈ３．６９＿Ｖ２＿Ｌ３．７１ＡＣ１０の可変領域を含む。変異体Ｉ３３２ＥＩｇＧ１およびＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥＩｇＧ１は、抗ＣＤ３０抗体Ｈ３．６９＿Ｌ３．７１ＡＣ１０の可変領域を含む。競合ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎで測定したヒトＶ１５８ＦｃγＲＩＩＩａに対する抗ＣＤ３０ＩｇＧ変異体の結合データ。変異体ごとにＨ３．６９＿Ｖ２＿Ｌ３．７１ＡＣ１０ＩｇＧ１に対するＩＣ５０（Ｍ）とＦｏｌｄＩＣ５０をあげてある。図２０ａ〜図２０ｄ。抗ＣＤ３０抗体Ｈ３．６９＿Ｖ２＿Ｌ３．７１ＡＣ１０またはＨ３．６９＿Ｌ３．７１ＡＣ１０の可変領域（Ｉ３３ＥおよびＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥＩｇＧ１）を持つＷＴおよび変異体ＩｇＧの細胞ベースのＡＤＣＣアッセイ。細胞毒性検出キット（ＬＤＨ、ＲｏｃｈｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）またはＤＥＬＦＩＡ（登録商標）ＥｕＴＤＡベースの細胞毒性アッセイ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＭＡ）を用いて、ＬＤＨ活性によってＡＤＣＣを測定した。すべてのアッセイで、Ｌ５４０ホジキンリンパ腫細胞を標的細胞とし、ヒトＰＢＭＣをエフェクター細胞とした。図は、それぞれ低抗体濃度と高抗体濃度でのベースラインによって得られた、個々の曲線ごとに最小および最大蛍光シグナルに正規化した表記の抗体の抗体濃度に対するＡＤＣＣの用量−依存性を示す。これらの曲線は、非線形回帰を用いてのシグモイド用量−応答モデルに対するデータのフィットを示す。２１ａ。２９３Ｔ細胞および糖改変細胞系Ｌｅｃ１３で発現されたＨ３．６９＿Ｖ２／Ｌ３．７１ＡＣ１０ＩｇＧ（１／２）ＥＬＬＧＧおよびＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥＩｇＧ（１／２）ＥＬＬＧＧ抗体のＦｃγＲ親和性。図２１ｂ。これらの抗体の細胞ベースのＡＤＣＣアッセイ。標的抗原ＣＤ３０の相対的発現および細胞系。ＸｍＡｂ２５１３標的の細胞毒性対エフェクター細胞比滴定。低レベルおよび高レベルのＣＤ３０標的抗原を発現している細胞系に対する細胞毒性。ヒトおよびマカクザルのＣＤ３０＋細胞系への２５１３の結合。ＦｃγＲによる抗増殖を測定するためのアッセイの図。親抗体に比して２５１３のｉｎｖｉｔｒｏでの亢進された抗増殖作用。

Claims

配列番号１１の可変重鎖配列および配列番号１０の可変軽鎖配列を含む、抗ＣＤ３０抗体。
更に、親のＦｃ領域に対して２３９Ｄ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、３３０Ｌ、及び３３２Ｅからなる群から選択される位置でＦｃ領域に少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、親抗体とは異なる親和性でＦｃγＲと結合する（番号付けはＫａｂａｔの分類によるＥＵ指標に基づくものである）、請求項１に記載の抗体。
配列番号１９の軽鎖配列及び配列番号２０の重鎖配列を含む、請求項１又は２に記載の抗体。
改変糖型（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｇｌｙｃｏｆｏｒｍ）である、請求項１〜３のいずれかに記載の抗体。
親抗体に比してフコシル化率の低いものである、請求項４に記載の抗体。
前記ＦｃγＲが、ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ及びＦｃγＲＩＩＩａからなる群から選択される、請求項２に記載の抗体。
親抗体よりも高い親和性で前記ＦｃγＲＩＩＩａに結合する、請求項６に記載の抗体。
親抗体と比較してエフェクター機能の変化したものである、請求項１〜７のいずれかに記載の抗体。
前記エフェクター機能がＡＤＣＣである、請求項８に記載の抗体。
前記ＡＤＣＣが親抗体よりも亢進されている、請求項９に記載の抗体。
癌、自己免疫疾患または炎症性疾患から選択される兆候を治療するための、請求項１〜１０のいずれかに記載の抗体。
前記癌が、ホジキンスリンパ腫または小細胞性肺癌である、請求項１１に記載の抗体。
請求項１〜１２のいずれかに記載の抗体と、塩化ナトリウムまたは界面活性剤を含む、組成物。
界面活性剤がソルビトールである、請求項１３に記載の組成物。
前記界面活性剤がポリソルベート２０またはポリソルベート８０である、請求項１４に記載の組成物。
前記組成物のｐＨがｐＨ６．０〜７．０の間である、請求項１５に記載の組成物。
請求項１〜１６のいずれかに記載された抗体及び医薬的に許容できる賦形剤を含む、医薬組成物。