JP5956575B2 - リファキシミンを含む医薬組成物、その調製方法及び膣感染の治療におけるその使用 - Google Patents

Description

（発明の目的）
本発明は、リファキシミンの顆粒を薬学的に許容可能な賦形剤とともに含む組成物であって、徐放性を有することを特徴とする組成物に関する。本発明はまた、前記組成物の調製方法及び膣感染、特に細菌性膣症の治療における前記組成物の使用も記載する。さらに、本発明はまた、前記疾患からの回復及び起こり得る再発の予防に有用かつ有効なリファキシミン投薬量も記載する。

（発明の背景）
リファキシミン（ＩＮＮ；メルクインデックス第１３版（The Merck Index、XIII ed.）、8304、CAS No. 80621-81-4（非特許文献１）参照）、ＩＵＰＡＣ命名法（２Ｓ，１６Ｚ，１８Ｅ，２０Ｓ，２１Ｓ，２２Ｒ、２３Ｒ，２４Ｒ，２５Ｓ，２６Ｓ，２７Ｓ，２８Ｅ）−５，６，２１，２３，２５ ペンタヒドロキシ−２７−メトキシ−２，４，１１，１６，２０，２２，２４，２６−オクタメチル−２，７−（エポキシペンタデカ−（１，１１，１３）トリエンイミノ）ベンゾフロ（４，５−ｅ）ピリド（１，２，−ａ）ベンズイミダゾール−１，１５（２Ｈ）−ジオン，２５−アセテート）は、リファンピシン群に属する半合成抗生物質である。より正確には、リファキシミンは、イタリア国特許第１１５４６５５号（特許文献１）に記載のピリド−イミダゾ−リファマイシンであり、一方、欧州特許第０１６１５３４号（特許文献２）には、リファマイシンＯ（メルクインデックス第１３版（The Merck Index、XIII ed.）、8301（非特許文献２））を出発物質としてリファキシミンを製造する方法が記載されている。

米国特許第７，０４５，６２０号（特許文献３）、欧州特許第１５５７４２１Ｂ１号（特許文献４）、欧州特許第１６７６８４７Ｂ１号（特許文献５）、欧州特許第１６７６８４８Ｂ１号（特許文献６）、ＷＯ２００５／０４４８２３（特許文献７）、ＷＯ２００６／０９４６６２（特許文献８）には、リファキシミンの結晶形α、β、γ、δ及びεが記載されている。ＷＯ２００８／１５５７２８（特許文献９）、米国特許出願第２００９／３１２３５７号（特許文献１０）及び米国特許出願第２００８／００８２５３号（特許文献１１）には、無定形を得るための方法が記載されている。

ＷＯ２００９／１０８７３０（特許文献１２）には、ζ形、η形、α−乾燥形、ι形、β−１形、β−２形及びε−乾燥形と名付けられたリファキシミンの多形が記載されている。

ＷＯ２０１１／１５３４４４（特許文献１３）には多形κ及びθが記載され、ＷＯ２０１１／１５６８９７（特許文献１４）にはＡＰＯ−１及びＡＰＯ−２と名付けられた多形が記載されている。

ヴィスコミ Ｇ．（Viscomi G.）らは、Cryst. Eng Comm., 2008, 10 1074-1081 (2008)（非特許文献３）において、多形α、β、γ、δ、ε、それらを得るための方法並びにそれらの化学物理学的特性及び生物学的特性を記載している。

リファキシミンは、グラム陽性及びグラム陰性細菌に対して活性な抗生物質であり、デコンブ Ｊ．Ｊ．（Descombe J. J.）ら、Int. J. Clin. Pharmacol. Res., 14 (2), 51-56, (1994)（非特許文献４）に記載のように、経口経路を介して投与されたとき、無視できる低い全身性吸収によって特徴付けられる。リファキシミンの抗菌活性について、例えば、腸感染、下痢及び過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を引き起こす、胃腸管に局在化した細菌に対して発揮されることが知られており、小腸における細菌増殖、すなわち、「小腸細菌過剰増殖（ＳＩＢＯ）」は、クローン病（ＣＤ）、膵不全、腸炎、線維筋肉痛に関係することも知られている。

この特徴のため、リファキシミンは、感染性及び炎症性腸疾患の治療において、急性期及び慢性期の両方で適切な役割を果たす。

異なる形態のリファキシミンは、異なるレベルの全身性吸収に関連する。リファキシミンは、現在、病因がグラム陽性及びグラム陰性腸内細菌に部分的に又は完全に帰することのできる急性及び慢性病状［腸微生物フローラの均衡変化によって生じる下痢症候群（夏季下痢、旅行者下痢症及び全腸炎など）など］の治療に認可されている。リファキシミンは、胃腸管の外科的処置における感染性合併症の手術前及び手術後の予防において、高アンモニア血症の治療における補助剤として有用であり、及び肝性脳症の急性エピソードのリスクの低減において有用である。

リファキシミンはまた、「下肢静止不能症候群」の治療においても役立たせることができ、肝不全患者のプロトンポンプ阻害剤の連用によって誘発される感染における突発性細菌性腹膜炎の予防にも役立たせることができる。

さらに、リファキシミンが全身性吸収に乏しいという事実は、前述の適用に有利である。なぜなら、リファキシミンは高用量であっても有毒ではなく、望まれない副作用［例えば、抗生物質耐性（抗生物質抵抗性）細菌株の選択及び起こり得る薬理学的相互作用のリスクなど］の発生率を低減させるからである。

リファキシミンは、その特徴により、局所治療に有用な化合物、例えば、膣感染（例えば、細菌性膣症）を治療するために有用な化合物になる。

細菌性膣症は極めて頻度の高い病状であり、すべての膣感染の４０〜５０％に相当する。症候的であり合併症を有さない場合、細菌性膣症は炎症性臨床像（膣症）に関連しない悪臭のある膣分泌物によって特徴付けられ、膣内生態系（vaginal ecosystem）の変化の結果であると考えられる。

健康な女性の正常な膣内フローラ（膣内微生物叢（vaginal flora））は、乳酸桿菌属（Lactobacilli）、特にラクトバチルス・クリスパタス（Lactobacillus crispatus）及びガセリ（gasseri）が優勢に存在していることから、過酸化水素を産生して酸性膣内ｐＨを維持する。そのため、ほとんどの病原性微生物の増殖が阻害される。

細菌性膣症において、通性嫌気性及び好気性細菌が正常値より千倍も高く過剰増殖することによって、乳酸桿菌属の細菌が置き換えられる。通性嫌気性及び好気性細菌は、主に、ガードネレラ・バギナリス（Gardnerella vaginalis）（これは細菌性膣症を患うほぼすべての女性に存在する）、マイコプラズマ・ホミニス（Mycoplasma hominis）、グラム陰性嫌気性細菌［バクテロイデス属（Bacteroides）及びプレボテラ属（Prevotella）など］、嫌気性菌［ペプトストレプトコッカス属（Peptostreptococcus）など］、グラム陽性嫌気性菌［５０％のケースにおいて存在するモビルンカス属（Mobiluncus）など］、及びグラム陽性桿菌（バチルス（bacilli））［細菌性膣症の９５％のケースにおいて存在するアトポビウム・バギナーレ（Atopobium vaginale）など］に代表される。

この疾患の発病の素因は、主に、社会経済的レベルが低く、黒色人種に属し、膣洗浄を定期的に使用し、喫煙し、そして数名の異なるパートナーと性交する、妊娠可能な年齢の女性において形成される。一方、エストロプロゲスチン薬（estroprogestinic drugs）を摂取することにより、保護的役割が果たされるようである。また、この病状は主に妊娠可能な年齢の女性にみられるので、ホルモン成分がその原因病理に関与することがわかった。

細菌性膣症は、例えば、不妊及び子宮外妊娠のよくある原因である骨盤炎症性疾患、婦人科医学的外科的処置後の外科的損傷の感染、妊婦の早期破水、早産及び流産などのいくつかの重大な婦人科医学的及び産科学的合併症に関連し得る。

さらに、性感染症とはみなされないが、細菌性膣症は、妊娠していない女性及び妊婦の両方について、性行為でうつる流行病（ＨＩＶウイルス感染を含む）にかかるリスクの増大に関連する。後者（妊婦）においては、母親から胎児へのＨＩＶウイルス感染のリスクの増大をも左右する。

細菌性膣症の診断は、臨床的及び／又は微生物学的基準に基づいて行うことができる。

臨床的診断は、アムセル Ｒ．（Amsel R.）ら、Am. J. Med. 1983; 74(1): 14-22（非特許文献５）に記載のアムセル（Amsel）の臨床的診断基準に従って行われる。この診断では、以下の４つの症状のうち少なくとも３つが示された場合に陽性となる：（１）均質でかつ膣壁に付着する膣分泌物、（２）臭気試験陽性（膣分泌物に１０％水酸化カリウムを添加すると「魚臭」を発する）、（３）４．５より高い膣内ｐＨ、及び（４）２０％を超える量のクルー細胞（新鮮標本の顕微鏡検査によって同定される、細菌で被覆された扁平上皮膣細胞）。

微生物学的診断は、グラム染色による膣分泌物の顕微鏡検査を含むニュージェント（Nugent）のスコアの計算に基づく。３つの異なる膣内細菌種の存在及び量が決定される。特に、乳酸桿菌属の濃度が高いと低いスコアが得られ、ガードネレラ属（Gardnerella）及びバクテロイデス属の存在が確認されるとスコアが増え、そしてモビルンカス属の存在をも確認されるとスコアはさらに高くなる。ニュージェント ＲＰ（Nugent RP）ら、J. Clin. Microbiol. 1991, 29(2), 297-301（非特許文献６）に記載のように、スコア結果０〜３は健康な女性の膣内フローラを表し、スコア４〜６は膣内フローラが変わり始めていることを示し、スコア７〜１０は細菌性膣症感染の確実な診断を示す。

また、近年、チョウ Ｘ（Zhou X）ら、Microbiology 2004, 150 (Pt8), 2565-2573（非特許文献７）及びAppl. Environ. Microbiol. 2004, 70(6), 3575-3581（非特許文献８）に記載のように、ＲＮＡの配列分析に基づくＰＣＲ−ＤＧＧＥ及びリアルタイムＰＣＲなどのさらなる診断的分子技術が開発されており、膣内生態系の微生物組成の同定が可能になっている。したがって、これらの技術は、この疾患を引き起こす病原因子の存在を決定するため、また定量的観点からこれらの病原因子に対する治療の効果を確認するために、直接的に使用できる。

細菌性膣症の病因は完全には理解されていないが、その治療は、臨床的回復及び微生物学的回復の両方を促すこと、そして可能であれば再発感染を回避することを目的とする。したがって、理想的な治療は、病原種の低減に有効であると同時に、起こり得る疾患再発の予防を目的として乳酸桿菌属保護種（Lactobacillus protective species）の復元及び増殖をも促進すべきである。

米国疾病予防管理センター（Center of Disease Control (CDC)）、2010, 59, NoRR-12のガイドライン（非特許文献９）には、症候的でありかつ妊娠していない細菌性膣症のすべての女性は、抗生物質療法により治療されるべきであると述べられている。

この点において、ＣＤＣは、最初の治療的アプローチとして、例えば、メトロニダゾール、経口錠剤５００ｍｇを１日２回７日間；又はメトロニダゾール、膣用ゲル、０．７５％、アプリケータ（５ｇ）を１日１回５日間もしくはクリンダマイシン、膣用クリーム、２％、アプリケータ（５ｇ）を１日１回７日間などの抗生物質療法を提案している。

メトロニダゾール及びクリンダマイシンはともに、全身性経路を介して（経口的）又は局所的経路を介して（経膣的）のいずれかで投与され、細菌性膣症の治療に有効である。しかし、シモンイス ＪＡ（Simoes JA）ら、Infect. Dis. Obstet. Gynecol. 2001, 9(1), 41-45（非特許文献１０）に記載のように、乳酸桿菌属保護フローラに対する両有効成分の阻害作用により、再発の予防においてその有効性が制限される。

さらに、たとえ膣経路を介して投与された場合でも、上記抗生物質はともに全身性副作用に関連し、副作用のいくつかは、例えば、メトロニダゾールの場合は神経反応に、クリンダマイシンの場合は偽膜性大腸炎などに、特に関連する。

また、繰り返し投与されると、メトロニダゾール及びクリンダマイシンはともに、膣投与されたとしても全身に吸収されるので、膣レベルのみならず全身レベルで微生物学的抵抗性を誘発し得る。

欧州特許第０５４７２９４号（特許文献１５）には、５０〜５００ｍｇのリファキシミン量を含む組成物が記載され、リファキシミンに感受性の微生物によって生じた膣感染の治療に有用であると述べられている。特に、欧州特許第０５４７２９４号（特許文献１５）には、リファキシミン２００ｍｇを含むリファキシミン膣用泡剤（フォーム剤）及びクリーム剤の製剤により行われた臨床試験が記載されており、クリーム剤と比較すると、泡剤のほうがより高い有効性を有すると述べられている。この文献には、カプセル剤、膣坐剤（ovule）及び錠剤中にリファキシミンを含む細菌性膣症治療用組成物も記載されており、膣分泌物中に一般に存在する細菌に対するリファキシミンの抗菌作用も記載されている。欧州特許第０５４７２９４号（特許文献１５）の表１には、リファキシミンが、ガードネレラ・バギナリス、バクテロイデス・ビビウス−ディシエンス（Bacteroides bivious-disiens）、モビルンカス属などの病原菌及び乳酸桿菌属などの非病原菌の両方に対して重要な抗菌活性を示すことが記載されている。

乳酸桿菌属の存在は健康な膣環境を維持するために有益であるので、乳酸桿菌属の阻害は治療有効性に関して有害な事象であるとみなされなければならない。実際には、既に述べたように、乳酸桿菌属によって生じた酸環境は、病原菌の定着（colonization）を予防するための必須条件である。

欧州特許第０５４７２９２号（特許文献１６）の表１には、乳酸桿菌属に対するリファキシミンの阻害作用（ＭＩＣ_５０及びＭＩＣ_９０）が、病原菌［例えば、ガードネレラ・バギナリス、モビルンカス属種（Mobiluncus spp）、バクテロイデス・ビビウス−ディシエンス（Bacteroides bivius-disiens）など］に対する阻害作用と等しいか又はさらに高いことも示されている。したがって、膣経路を介して投与される場合、リファキシミンは、乳酸桿菌属を含む細菌フローラ全体に対して無差別に作用する。

デッビア Ａ．（Debbia A.）らは、J. Chemother. 20, (2), 186-194, 2008（非特許文献１１）において、リファキシミンが時間依存的な細菌活性を示すことが記載され、それゆえに、膣感染の治療に有効であり、リファキシミンへの適切な曝露時間及び膣感染（細菌性膣症など）の治療に有用なリファキシミンの局所濃度を提供し、かつ膣感染の再発予防に重要な乳酸桿菌属の濃度を低減しない、新たなリファキシミン医薬組成物が必要である。また、前記組成物によって提供されるリファキシミン濃度は、高用量のリファキシミンを必要とすることなく有効であることが重要であった。

リファキシミンの強い色を考慮すると、リファキシミンを含む組成物が着色した分泌物（排出物）なしに患者に十分受け入れられたこと、及び前記組成物が固形剤形に好適であったことも重要であった。

前記医薬組成物が、欧州特許第０５４７２９４号（特許文献１５）の記載と比較して、より短い治療期間でかつ投与されたリファキシミンの少ない総量で、疾患（膣感染）の根絶及び再発回数の低減に有効であることも重要であった。

イタリア国特許第１１５４６５５号 欧州特許第０１６１５３４号 米国特許第７，０４５，６２０号 欧州特許第１５５７４２１Ｂ１号 欧州特許第１６７６８４７Ｂ１号 欧州特許第１６７６８４８Ｂ１号 ＷＯ２００５／０４４８２３ ＷＯ２００６／０９４６６２ ＷＯ２００８／１５５７２８ 米国特許出願第２００９／３１２３５７号 米国特許出願第２００８／００８２５３号 ＷＯ２００９／１０８７３０ ＷＯ２０１１／１５３４４４ ＷＯ２０１１／１５６８９７ 欧州特許第０５４７２９４号 欧州特許第０５４７２９２号

メルクインデックス第１３版（The Merck Index、XIII ed.）、8304、CAS No. 80621-81-4 メルクインデックス第１３版（The Merck Index、XIII ed.）、8301 Cryst. Eng Comm., 2008, 10 1074-1081 (2008) Int. J. Clin. Pharmacol. Res., 14 (2), 51-56, (1994) Am. J. Med. 1983; 74(1): 14-22 J. Clin. Microbiol. 1991, 29(2), 297-301 Microbiology 2004, 150 (Pt8), 2565-2573 Appl. Environ. Microbiol. 2004, 70(6), 3575-3581 米国疾病予防管理センター（Center of Disease Control (CDC)）、2010, 59, NoRR-12のガイドライン Infect. Dis. Obstet. Gynecol. 2001, 9(1), 41-45 J. Chemother. 20, (2), 186-194, 2008

本発明の目的は、現在、驚くべきことに達成されるべきものであり、固形（固体）医薬組成物、特に膣錠（膣用錠剤）の形態、具体的にはリファキシミンの顆粒と顆粒外賦形剤（付加的な賦形剤、extragranular excipient）とを圧縮することによって形成される錠剤形態の固形医薬組成物の提供である。

リファキシミンの顆粒が特徴付けられるのは、リファキシミンの顆粒が希釈剤、結合剤及び滑沢剤から選択される薬学的に許容可能な賦形剤を含み、少なくとも結合剤が存在することにある。顆粒外賦形剤が特徴付けられるのは、顆粒外賦形剤が少なくとも１つの崩壊剤を含み、必要に応じて結合剤、希釈剤及び滑沢剤から選択される他の顆粒外賦形剤で構成されることにある。本発明の医薬組成物は、膣内に生理学的に存在する程度の少ない水の量の環境においてさえも、顆粒中に含まれるリファキシミンを短時間に放出することを特徴とする。前記組成物は、膣内で顆粒を十分に崩壊させ、膣感染を治療するために有効な量でリファキシミンを提供する。

この新たな組成物は、当該分野において既知の異なるリファキシミン多形を用いて調製でき、細菌性膣症の治療及びこの疾患の再発予防に有用である。

特に、この新たな組成物は、膣内フローラに自然に存在する乳酸桿菌属の濃度を減少させるのではなく、意外にも、治療のクール（コース）の間に乳酸桿菌属の濃度を増大させることに好都合である。

本発明の目的である組成物は、用量２００ｍｇ／日未満で１週間より短い治療のクール（一連の治療）により膣感染、特に細菌性膣症の治療に有用であり、そして当該分野の専門家に利用可能な文献及び臨床実習において報告されるよりも短い治療のクールの間に、より低いリファキシミン量で回復をもたらす。したがって、欧州特許第０５４７２９４号に記載される投与リファキシミン総量よりも約１０倍少ない量で、この疾患からの回復が得られる。特に、本発明は、特にプラシーボと比較して、完全な回復を得るのに有用な有効用量及び治療のクールを提供する。

本発明の目的であるリファキシミンを含む医薬組成物は、プラシーボと比較した場合、２００ｍｇ／日より低い濃度で１週間より短い治療期間により、膣感染、特に細菌性膣症の治療に有効である。

用量（投与量）のほかに、本発明はまた、完全な回復を得るのに有用な治療期間を選択できる。

見出された組成物は、受け入れられ、許容性（忍容性）が良好（well tolerated）であり、そして副作用を有さないことがわかった。

（発明の概要）
本明細書に記載される代表的な実施形態は、膣感染、特に細菌性膣症の治療に有効な、リファキシミンを含む医薬組成物を提供することによって、従来のリファキシミン組成物の上記欠点を克服する。

本発明の一態様は、５００ｍｇ未満、例えば、２００ｍｇ未満、好ましくは２．５〜１００ｍｇ（例えば、１２．５ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ及び１００ｍｇ）の量のリファキシミンと、少なくとも１つの崩壊剤を含む１又は複数の顆粒外賦形剤とを有するリファキシミンの顆粒を含む医薬組成物であり、ここで、前記医薬組成物は、膣内病原菌に対する選択的殺菌活性を有する。本発明の別の態様は、治療のクール後の乳酸桿菌属の量を維持又は増加させる選択的抗菌作用を有することを特徴とする医薬組成物である。

前記医薬組成物は、好ましくは前記医薬組成物の２〜２０重量％の量で存在する少なくとも１つの顆粒外崩壊剤を有していてもよい。

前記医薬組成物は、徐放性処方物であってもよく、膣錠又は膣坐剤の形態であってもよい。好ましくは、前記医薬組成物は、膣錠の形態である。前記膣錠は、５分未満、好ましくは２分未満の崩壊時間を有していてもよい。

また、ここで、（ｉ）膣感染（例えば、細菌性膣症）を治療し、かつ（ｉｉ）膣感染（例えば、細菌性膣症）の再発を予防する新たな方法も記載する。この方法は、治療的有効量の上記医薬組成物を膣投与する工程を含み、ここで、前記治療的有効量は、治療のクールの間、乳酸桿菌属の量を維持又は増加させつつ膣内病原菌の量を選択的に減少させる。ここで開示された方法の一態様において、乳酸桿菌属の量は、治療のクールの間増加する。

一実施形態において、治療的有効量は、リファキシミン１日量５００ｍｇ未満、好ましくは２００ｍｇ未満、例えば、１００ｍｇ未満であってもよい。好ましくは、リファキシミン１日量は、１００ｍｇ、５０ｍｇ又は２５ｍｇである。

治療のクールは、好ましくは１０日又はそれ以下、例えば、１週間又はそれ以下である。治療のクールに亘って投与されるリファキシミンの量は、リファキシミン７００ｍｇ又はそれ以下、例えば、リファキシミン５００ｍｇ又はそれ以下であってもよい。

リファキシミンの治療的有効量は、治療のクール５日において、１日あたり１２．５又は２５ｍｇであってもよい。あるいは、別の実施形態において、治療のクール２日において、１日あたりのリファキシミンの治療的有効量は１００ｍｇであってもよい。

一実施形態において、本発明に従って膣感染を治療する方法は、治療のクールの後、ニュージェントのスコア（Nugent score）を３ポイント又はそれ以上低減させる。

さらに、リファキシミンと１又は複数の顆粒内賦形剤（顆粒に含有される賦形剤、intragranular excipient）との混合物を乾式造粒することによってリファキシミンの顆粒を形成する工程、前記リファキシミンの顆粒と、１又は複数の顆粒外賦形剤（少なくとも１つの崩壊剤を含む）とをまず混合し、次いで圧縮することによって錠剤を形成する工程を含む、医薬組成物を作製する方法も記載される。好ましい実施形態において、開示された方法を用いることにより、乾式造粒工程前のリファキシミンの形態及び乾式造粒工程後のリファキシミンの形態は、同じ形態である。

（発明の説明）
本発明は、固形、特に錠剤形態で、２００ｍｇ未満のリファキシミンを含む医薬組成物を開示し、この医薬組成物は、コントロールされた形態で（徐放様式で）リファキシミンを放出して、病原菌に対する選択的殺菌活性を与えることを特徴とする。

本発明の医薬組成物は、リファキシミンの顆粒及び／又は微小顆粒と、顆粒外賦形剤とを含むことを特徴とする。リファキシミンの顆粒は、希釈剤、結合剤及び滑沢剤の１又は複数から選択される賦形剤を含み、顆粒外賦形剤は、結合剤、希釈剤、滑沢剤及び崩壊剤の１又は複数を含む。

固形、特に錠剤形態の医薬組成物は、速やかに、例えば、５分未満で崩壊し、少ない量の水性液体（膣粘膜など）の存在下であってもリファキシミンの顆粒の放出を可能にする。

一実施形態において、前記医薬組成物は、２００ｍｇ未満のリファキシミン、好ましくは１００ｍｇ未満のリファキシミンを含むリファキシミンの顆粒及び／又は微小顆粒を含む。この新たな組成物は、さらに、１又は複数の顆粒内賦形剤と、少なくとも１つの崩壊剤を含む１又は複数の顆粒外賦形剤とを含む。顆粒内賦形剤は、希釈剤、結合剤、滑沢剤及びこれらの混合物からなる群より選択される。顆粒外賦形剤は、少なくとも１つの崩壊剤と、必要に応じて結合剤、希釈剤、滑沢剤及びそれらの混合物からなる群より選択されるさらなる顆粒外賦形剤とを含む。

リファキシミンを含む顆粒は、この顆粒の重量に対して、１〜８０％（ｗ／ｗ）量のリファキシミン、０．５〜２０％（ｗ／ｗ）量の１又は複数の結合剤、３０〜９０％（ｗ／ｗ）量の１又は複数の希釈剤、０．１〜５％量の１又は複数の滑沢剤を含むことを特徴とする。

本発明の好ましい実施形態によると、リファキシミンの顆粒は、この顆粒の重量に対して、５〜３０％（ｗ／ｗ）量のリファキシミン、１〜１０％（ｗ／ｗ）量の１又は複数の結合剤、５０〜９０％（ｗ／ｗ）量の１又は複数の希釈剤、及び０．５〜４％（ｗ／ｗ）量の１又は複数の滑沢剤を含む。

リファキシミンの顆粒の調製に適した希釈剤は、好ましくは、セルロース、微結晶セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、リン酸カルシウム、デンプン、カオリン、硫酸カルシウム二水和物、炭酸カルシウム、ラクトース無水物又は水和物、サッカロース、マンニトール、多糖、グルカン、キシログルカン及びこれらの混合物を含む群から選択される。

リファキシミンの顆粒の調製に適した結合剤は、コーンスターチ、アルファ化デンプン、アラビアガム、ラクトース、マルトデキストリン、１−ビニル−２−ピロリドンと酢酸ビニルとのコポリマー（コポビドン）、サッカロース及びこれらの混合物を含む群において選択される。

リファキシミンの顆粒の調製に適した滑沢剤は、ジベヘン酸グリセロール、ステアリン酸カルシウム又はマグネシウム、アルミニウム、フマル酸ステアリルナトリウム、硬化油、植物油、パルミチン酸、アルコール、デンプン、鉱物油、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、グリセリド、安息香酸ナトリウム及びこれらの混合物を含む群において選択される。

本発明の好ましい実施形態によると、結合剤は、コポビドン及びコーンスターチからなる群において選択される。より好ましくは、結合剤は、コポビドンである。

本発明の好ましい実施形態によると、希釈剤は、ラクトース一水和物又は無水物、セルロース及び巨大結晶性（macrocrystalline）セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースからなる群において選択される。より好ましくは、希釈剤は、ラクトース一水和物又は無水物である。

本発明の好ましい実施形態によると、滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウム及びジベヘン酸グリセロールからなる群において選択される。より好ましくは、滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウムである。

リファキシミンの顆粒は乾式造粒プロセスによって調製される。このプロセスにおいて、リファキシミンを選択された賦形剤（顆粒内賦形剤）と上記の量的割合で混合し、次いで、その全体を混合して均質な混合物を得る。次いで、この混合物を、顆粒を得るために圧縮機に入れる。

次いで、リファキシミンの顆粒をさらに処理して、少なくとも１つの前記開示の崩壊剤を含む顆粒外賦形剤と混合する。

さらなる顆粒外賦形剤は、結合剤、希釈剤及び滑沢剤並びにその組み合わせからなる群より選択される。

好ましい実施形態によると、結合剤は、コポビドン、アルファ化デンプン及びコーンスターチを含む群において選択され、希釈剤は、ラクトース、セルロース、微結晶セルロース及びヒドロキシプロピルメチルセルロースからなる群において選択され、滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウム及びジベヘン酸グリセロールからなる群において選択される。

本発明による組成物の調製に適した崩壊剤は、デンプングリコール酸ナトリウム、アルファ化デンプン、ポリビニルピロリドンコポリマー（ＰＰＰＶ又はクロスポビドン）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（カルメロースナトリウム）、架橋カルボキシメチルセルロース（クロスカルメロースナトリウム）、アルカリ金属及びアルカリ土類金属のケイ酸塩（例えば、ケイ酸カルシウム）並びにこれらの混合物からなる群において選択される。

好ましくは、顆粒外崩壊剤は、クロスポビドン、デンプングリコール酸ナトリウム、アルファ化デンプン、アルカリ金属のケイ酸塩及びこれらの混合物からなる群より選択される。

より好ましくは、顆粒外崩壊剤は、クロスポビドン、ケイ酸カルシウム及びこれらの混合物からなる群において選択される。特に好ましい実施形態において、崩壊剤は、クロスポビドン及びケイ酸カルシウムの混合物である。

本発明の好ましい実施形態によると、固形医薬組成物、好ましくは錠剤形態の医薬組成物は、表１に記載のように、最終組成物に対して、１０〜８５％（ｗ／ｗ）量のリファキシミンの顆粒；崩壊剤（単数又は複数）又はこれらの混合物（崩壊剤の総量は、これらの相対比とは独立して、２〜２０％（ｗ／ｗ）である。）；０．５〜５．０％（ｗ／ｗ）量の結合剤及び０．１〜１０．０％（ｗ／ｗ）量の滑沢剤を含んでいてもよい。

本発明の好ましい実施形態によると、顆粒外希釈剤は、ラクトース無水物又は一水和物、コーンスターチ及び結晶セルロースからなる群において選択され、顆粒外滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウムであり、結合剤は、アルファ化デンプン、コポビドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースから選択され、顆粒外崩壊剤は、クロスポビドン、アルファ化デンプン及びケイ酸カルシウム並びにこれらの混合物から選択される。

より好ましい実施形態によると、顆粒外希釈剤は、ラクトース無水物又は一水和物を含む群において選択され、顆粒外結合剤は、コポビドン及びアルファ化デンプンを含む群において選択され、顆粒外滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウムであり；顆粒外崩壊剤は、クロスポビドン、ケイ酸カルシウム、アルファ化デンプン及びグリコール酸デンプンを含む群において選択される。

より好ましい実施形態によると、リファキシミンを含む錠剤組成物は、表２に示される。

前記錠剤組成物は、さらにフィルム形成性（filmogen）コーティング剤などのコーティング剤を含んでいてもよい。

錠剤形態の固形組成物は、２．５〜５００ｍｇ、好ましくは２．５〜１００ｍｇ、より好ましくは１０〜５０ｍｇのリファキシミン量を含んでいてもよい。

錠剤形態の固形組成物はまた、好ましくは１０〜１００ｍｇ、１０〜５０ｍｇ及び１０〜２５ｍｇ、より好ましくは２５〜１００ｍｇ及び２５〜５０ｍｇ、並びに最も好ましくは２５ｍｇの量でリファキシミンを含んでいてもよい。

本発明による組成物は、必要に応じて、生体接着剤、防腐剤、緩衝剤、消毒剤、芳香剤をさらに含んでいてもよい。

生体接着剤が存在する場合、前記組成物は生体接着性を有することができる。このことは、リファキシミンの顆粒が膣粘膜に付着できることを意味する。

微小顆粒中に含有できるポリマー及びオリゴマー又はこれらの混合物の例は、ペクチン、ゼイン、カゼイン、ゼラチン、アルブミン、コラーゲン、キトサン、オリゴ糖及び多糖（例えば、セルロース、デキストラン、タマリンド種子由来の多糖など）、キサンタンガム、アラビアガム、ヒアルロン酸、アルギン酸、アルギン酸ナトリウムである。

生体接着剤が合成ポリマーである場合、ポリマーは、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、ポリアルキレンテレフタレート、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリビニルピロリドン、ポリシロキサン、ポリウレタン、ポリスチレン、アクリル酸とメタクリル酸エステルとのポリマー、メタクリル酸−アクリル酸エチルコポリマー、ポリアクチド、ポリバルビツール酸、ポリ無水物、ポリオルソエステル及びこれらの混合物の中から選択される。他の有用なポリマーは、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、セルロースアセテート、セルロースプロピオネート、セルロースアセテートブチレート、カルボキシメチルセルロース、セルローストリアセテート、セルロース硫酸ナトリウム塩、ポリメタクリル酸メチル、ポリメタクリル酸イソプロピル、ポリアクリル酸イソブチル、ポリ（アクリル酸オクタデシル）、ポリプロピレン、ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリエチレンテレフタレート、ポリ酢酸ビニル、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルフェノール及びこれらの混合物である。

生体接着性を得るために有用なポリマーの別の群は、少なくとも１つの結合した疎水性基を含む分岐基を有するポリマーであり、疎水性基は一般に非極性基である。このような疎水性基の限定されない例としては、アルキル基、アルケニル基及びアルキニル基が挙げられる。好ましくは、疎水性基は、ポリマーの生体接着性を増大させるために選択される。他のポリマーは、カルボキシ酸（カルボン酸）、スルホン酸及びホスホン酸、中性かつ正電荷を有するアミン、アミド及びイミンなどの少なくとも親水性基を有する疎水性分岐によって特徴付けられ、前記親水性基は、ポリマーの生体接着性を増大させるものである。

リファキシミンの顆粒は乾式造粒プロセスによって得られ、このプロセスにより、文献に記載されるような、水又は有機溶媒の存在下で生じる多形の変形を起こすことなく、出発時点のリファキシミン結晶形又は無定形を維持できる。

リファキシミン多形は異なる溶解度を有し、少なくとも二桁異なる血漿吸収を与えることが当該分野において公知であるので、前記組成物を得るための好ましい方法では、選択された多形を保持する。

用語「リファキシミン」は、広い意味において意図され、「リファキシミン」のみならず、その薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、水和物、誘導された鏡像異性体（エナンチオマー）、多形、無定形、共結晶（co-crystal）及び薬学的に許容可能な錯体を含み、これらに限定されない。

本発明の目的の医薬組成物に含まれるリファキシミンは、全身に吸収されることなく局所的に作用させて細菌性膣症を治療するために用いる場合、溶解しにくい形態が好ましい。このことにより、血漿中濃度が低くても、起こり得る抗生物質耐性細菌株の潜在的な選択リスクを全身レベルで回避する。

異なる溶解性及び吸収性を有することを特徴とするリファキシミンの異なる多形又はその混合物を選択することによって、膣感染の治療、より詳細には、異なる状態の感染の治療のための組成物、特に錠剤形態の組成物を調製することが可能である。

リファキシミンの顆粒を、次いで、表１に記載の顆粒外賦形剤を含む混合物と混合する。この混合物を、錠剤を得るために当該分野において公知の圧縮機で圧縮し、得られた錠剤は、好ましくはフィルム形成性コーティング剤でコーティングされる。

リファキシミンの顆粒とともに、本発明に記載の量で錠剤形態の医薬組成物中に存在する顆粒外成分は、リファキシミンの徐放を可能にする。

リファキシミンの顆粒は、水性液体の量が少ない環境（膣内に存在する生理学的環境など）にあっても、錠剤から放出される。膣腔において錠剤によって放出されたリファキシミンの顆粒は、急速な錠剤崩壊速度及び顆粒溶解の低減された速度の組み合わせ効果に起因して、適切な時間の間、膣粘膜において局所的作用を及ぼす。

本発明はまた、膣感染（例えば、特に細菌性膣症）を治療するためのリファキシミン医薬組成物の使用も記載する。

本発明はまた、前記新たな組成物を投与することによって細菌感染を治療する方法及び細菌感染の再発を予防する方法を提供する。特に、本発明の目的である医薬組成物は、開示された治療方法で投与される場合、乳酸桿菌属の濃度を低減しない。乳酸桿菌属は、膣内生態系の維持に必要であり、当該分野において公知の組成物について報告されたように感染の再発予防に有用である。

本発明の固形医薬組成物は、プラシーボと比較して完全な回復及び再発予防を得るために、リファキシミン１日あたりの投与量５００ｍｇ未満、好ましくは２００ｍｇ未満、より好ましくは１００ｍｇ未満であり、かつリファキシミン総投与量７００ｍｇ未満、より好ましくは５００ｍｇ未満で、細菌感染の治療において治療的に有効である。

特に、リファキシミンを含む錠剤形態の組成物は細菌感染の治療に有効であり、このことは、治療的に有効な１日あたりの投与量５００ｍｇ未満、好ましくは２００ｍｇ未満、及びより好ましくは１００ｍｇ未満、例えば、１００ｍｇ、５０ｍｇ、２５ｍｇ、１２．５ｍｇ又は２．５ｍｇを、１０日より短い治療期間、特に１週間より短い治療期間に投与することによって、プラシーボと比較して、ニュージェントのスコア及びアムセル（Amsel）の診断基準が低下することからも明らかである。

前記錠剤組成物は、１日１回又は数回、好ましくは１日１回投与できる。

記載された医薬組成物は、選択的な抗菌作用、好ましくは乳酸桿菌属に対してよりむしろ病原菌に対して抗菌作用を及ぼすことを特徴とする。

５００ｍｇ未満、特に２００ｍｇ未満、より詳細には１００ｍｇ未満の量でリファキシミンを含む錠剤形態の組成物は、プラシーボと比較して、治療のクールの終了後であっても乳酸桿菌属の濃度を増大させ高い濃度を保持する。

本発明の別の態様は、膣感染を治療し、細菌感染の患者の回復及び再発予防の両方を得るのに有用な組成物並びに治療のクールを提供することである。

特に、開示された組成物は、１週間より短い投与期間に１日あたり、用量２００ｍｇ未満、好ましくは１００ｍｇ未満を投与する治療の終了時点で、疾患からの回復を３０日より長い期間維持する。

１２．５ｍｇ〜１００ｍｇのリファキシミン量を含む新たな医薬組成物の別の特定の態様は、１週間より短い治療期間で膣感染の治療に有用であることである。より詳細には、リファキシミン２５ｍｇを含む組成物は、５日の治療期間で、細菌感染の治療に特に有用であることが示される。

リファキシミン２５ｍｇを含む組成物で治療され、１日１回５日間錠剤を投与された患者は、ニュージェントのスコア及びアムセルの診断基準によれば、プラシーボで治療された患者が示すよりも高い回復率（治療のクールの終了時点で回復を示す患者の割合）を示す。

特に、表１８に示されるように、リファキシミン２５ｍｇを含む組成物で５日間治療された患者は、１００ｍｇのリファキシミンで５日間治療された患者の回復率約２５．９％、１００ｍｇ／日で２日間治療された患者の回復率約３６％、及びプラシーボで治療された患者の回復率約１９．２％と比較して、より高い回復率（すなわち、４８％）を示す。

より詳細には、リファキシミン２５ｍｇを含む組成物で治療（処置）された患者は、ニュージェントのスコアによれば、他の治療群（処置群）で得られた回復率よりも高い回復率を示す。特に、１００ｍｇのリファキシミンで５日間治療された患者の回復率約２５％、２日間治療された患者の回復率約３６％、及びプラシーボで治療された患者の回復率約１９％と比較して、より高い回復率４７％を示す。

本発明の別の態様は、プラシーボで治療された患者と比較した場合、膣錠中にリファキシミンを含む組成物が、すべての治療患者においてニュージェントのスコアを３ポイント低下させるという事実によって与えられる。

特に、ニュージェントのスコアの３ポイント低下は、プラシーボで治療された患者の約１８％の割合で得られることと比較して、リファキシミン２５ｍｇを含む膣錠組成物で５日間治療された患者群において約６５％よりも高い割合で得られ、リファキシミン１００ｍｇを含む組成物で５日間治療された患者の５０％よりも高い割合で得られ、リファキシミン１００ｍｇを含む錠剤組成物で２日間治療された患者群の３０％よりも高い割合で得られる。

また、特に、リファキシミン２５ｍｇを含む膣錠組成物を、５日間の治療のクールで細菌性膣症の患者に投与した場合、治療された患者の約４８％でニュージェントのスコアが５ポイント低下し、リファキシミン１００ｍｇで５日間治療された患者の約２８％、及び１０ｍｇで２日間治療された患者の約２６％でニュージェントのスコアが５ポイント低下し、プラシーボで治療された患者では約０％であることと比較した。

さらに、より詳細には、リファキシミン２５ｍｇを含む膣錠組成物は、５日間の治療のクールにおいて、本研究に含まれる他の治療群と比較して、より高い割合でニュージェントのスコアを８〜１０ポイント低下させる。

開示された医薬組成物は、選択された顆粒及び顆粒外賦形剤の組み合わせの特性並びに調製方法に起因して、１日１回のみの投薬で有効であるなど、膣内でのリファキシミンのコントロールされた放出（徐放性）を提供する。

開示された医薬組成物は、１日量リファキシミン２００ｍｇ未満、特に１００〜２５ｍｇ、例えば、１００ｍｇ、５０ｍｇ、２５ｍｇ及び１２．５ｍｇの用量で、１週間より短いリファキシミン治療期間において、膣感染、特に細菌性膣症の患者の治療に有用かつ有効である。

リファキシミン２５ｍｇを含む膣錠形態の記載された組成物の別の態様は、膣感染、特に、高いニュージェントのスコア（≧６、好ましくは≧７、又はより好ましくは≧９、又はアムセルの診断基準の４つの要素のうち３つに当てはまること）を特徴とする深刻な細菌性膣症の患者の治療において有用であることである。

本発明の別の態様は、細菌性膣症を治癒し、かつその再発を予防するための開示された治療期間における、２００ｍｇ未満、特に１００ｍｇ、５０ｍｇ、２５ｍｇ及び１２．５ｍｇの濃度でリファキシミンを含むリファキシミン組成物の使用である。

本発明の別の態様は、投与された場合に許容性が良好でありかつ安全であること、特に血漿中で測定されるリファキシミンのレベルが無視できることからわかる全身性吸収の低下をもたらすことを特徴とする、リファキシミンを含む医薬組成物によって示される。

錠剤形態の固形医薬組成物は、予期されない特性を有し、膣内液体が少ない量であっても膣粘膜中にリファキシミンの顆粒を放出する。本発明の臨床試験の結果から、低用量のリファキシミン及び治療のクール（例えば、１０日以下、特に５日以下）での治療であっても、前記顆粒が細菌性膣症の患者に有効なリファキシミン量を放出でき、治療のクールの終了後４週間にわたって感染の再発を予防できることがわかる。

また、特に重要なことは、プラシーボと比較して、２００ｍｇ未満、特に１００ｍｇ未満のリファキシミン量を含む錠剤組成物が治療の終了後であっても乳酸桿菌属の濃度を増大させかつ高く保つということである。

実施例１には、リファキシミンの顆粒の調製及びリファキシミン２５ｍｇを含む膣錠の調製が記載されている。前記錠剤は、リファキシミンの顆粒を顆粒外賦形剤とともに混合することによって調製される。

得られた錠剤は、European Pharmacopeia Ed. 7.0, Chapter 2.9.8, ref. 01/2008:20908に記載のように測定した硬度が５Ｋｐより高く、その崩壊時間がEuropean Pharmacopeia Ed. 7.0, Chapter 2.9.2. ref. 01/2008:20902に記載の条件下で約１分であることを特徴とする。

実施例２には、リファキシミンの顆粒を顆粒外賦形剤とともに混合する、１００ｍｇリファキシミン錠剤の調製が記載されており、製品錠剤の重量を増大させることなくリファキシミンの量を可変させる場合にも、柔軟な製造方法により錠剤が得られる。実施例３には、実施例１で使用されたものとは異なる結合剤を用いて顆粒を調製して、この顆粒を顆粒外賦形剤と混合する、リファキシミン錠剤の調製が記載されている。

特に、実施例３には、実施例１及び２とは異なる賦形剤を使用する、組成物の調製が記載されている。

特に、崩壊剤は、ケイ酸カルシウム、クロスポビドン、デンプングリコール酸ナトリウム、又はこれらの混合物から選択され、結合剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースであり、希釈剤は、ラクトース一水和物である。

顆粒外賦形剤中に結合剤が存在しない組成７は、混合物の形成における問題を説明するものであり、目視検査により、この混合物は、結合剤の非存在下では均質でないように思われた。実施例４は、実施例１、２及び３に従って調製された組成１〜８におけるリファキシミン錠剤について、European Pharmacopoeia European Pharmacopoeia 7.0 2.9.2, ref. 01/2008:20902に従って得られた崩壊時間を示す。崩壊時間は、組成物に含まれる成分に依存して約１分〜１０分の間で変化する。崩壊剤を含まない組成（組成４）では、崩壊時間が約５分であり、クロスポビドンのみが存在する場合（組成３、５及び６）、崩壊時間は１’３０”〜５’３０”である。崩壊時間がより短い組成３は、より多量のクロスポビドンが添加された組成物に相当する。

組成１、組成２及び組成７によって示されるより短い崩壊時間が好ましいが、組成７は、現在のところ工業規模では好ましくない。

組成１及び２は、２５及び１００ｍｇの量でリファキシミンを含む錠剤に相当し、顆粒内結合剤がコポビドンであり、かつ顆粒外崩壊剤がクロスポビドンとケイ酸カルシウムとの混合物であることを特徴とする。これらの組成では、２分未満の時間内に崩壊して、作用部位でリファキシミンを放出できる。

実施例５には、親油性膣坐剤の調製が記載されており、この製剤では、リファキシミンは５０〜２００ｍｇであり、半グリセリド（semi glyceride）、界面活性剤及びキシログルカンが存在する。約２時間後に親油性膣坐剤によって放出されるリファキシミン量は、膣坐剤中に含まれる総リファキシミンに対して１５％〜２５％である。

実施例６には、親水性膣坐剤の調製が記載されており、この製剤では、リファキシミンは２５〜１００ｍｇ含まれており、２（２−エトキシエトキシ）エタノール、トランスクトール（Transcutol）、グリセリン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びキシログルカンが存在する。これらの組成物は、リファキシミンの急速な放出によって特徴付けられ、放出されたリファキシミンは、２０分後に７０％（ｗ／ｗ）より高い。

実施例７には、実施例１〜５で調製された錠剤及び膣坐剤について、膣内の生理学的条件に類似した容量及び温度条件を有する溶液中での組成物の放出が記載されている。リファキシミン２５〜１００ｍｇを含む異なる組成物と比較して、３７℃の恒温環境におけるリファキシミン放出を評価する。１０ｍｌ水溶液中に放出されるリファキシミンの量は、分光光度学的に決定される。実験から、実施例１に記載のように調製されたリファキシミン１００ｍｇを含み、実施例２に記載の組成を有する錠剤は、１時間後に約０．５ｍｇより少ないリファキシミン量を放出すること、リファキシミン１００ｍｇを含む親水性膣坐剤は、１時間後に約８．５ｍｇのリファキシミンを放出すること、リファキシミン２５ｍｇを含む親水性膣坐剤は、１時間後に約７ｍｇのリファキシミンを放出すること、及びリファキシミン約１００ｍｇを含む親油性膣坐剤は、１時間後に約４ｍｇのリファキシミンを放出することがわかる。

実施例８には、本発明に記載の錠剤形態の医薬組成物を用いて実施されたバイオアベイラビリティ研究が記載されており、実施例１及び４に記載されるのと同じ方法によって調製された１２．５ｍｇに相当するリファキシミン量を含む錠剤及び膣坐剤を、未経産かつ未妊娠の雌性ニュージーランドホワイトＳＰＦ（Specific Pathogen free）ウサギに投与した。対照群と比較して、処置の間、局所的な臨床的徴候は観察されず、処置に対する反応も処置された動物の体重変化も観察されなかった。

血漿中のリファキシミン濃度は、ＬＬＯＱ（定量下限（Lower Limit of Quantitation）が０．５ｎｇ／ｍｌである有効ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法によって決定された。

実施例８の表１５は、膣錠及び膣坐剤の投与後のウサギにおけるリファキシミンの薬物動態学的パラメータを示す。いくつかのケースにおいてのみ、薬物動態学的パラメータが、ＬＬＯＱをわずかに上回る。膣坐剤についての最高血漿中濃度（Ｃ_ｍａｘ）の平均値は錠剤のＣ_ｍａｘ値よりも約４倍高いのに対し、膣坐剤の血漿中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ_{０−ｔ ｌａｓｔ}）の値は、錠剤と比較して、約１２倍高い。

これらの結果から、同じ投薬量のリファキシミンの投与により、膣錠は、膣坐剤と比較して血漿吸収がより低いことがわかる。この結果は、実施例７に示される溶解プロファイル（dissolution profiles）と一致する。

実施例９には、動物モデルにおける膣坐剤及び錠剤形態のリファキシミン組成物の有効性が記載されており、この例において、膣感染は、細菌性膣症の女性から単離されたガードネレラ・バギナリスの接種によって誘発した。体重２〜３ｋｇのニュージーランドウサギを、持続感染を得させるために１０５より多いガードネレラ・バギナリス量を含む食塩水で感染させ、この接種を２回又は３回繰り返した。最終接種の７日後、この動物を、実施例１及び実施例４に従って調製した１．５〜１２．５ｍｇのリファキシミン量を含む錠剤及び膣坐剤の形態のリファキシミン組成物で治療した。前記実施例１及び実施例４の製剤において、異なる量でリファキシミンを含む組成物を得るために、賦形剤の割合を比例的に減少させた。１．５ｍｇ〜１２．５ｍｇのリファキシミン用量は、体表面積に基づき計算すると、女性において約１２．５ｍｇ〜１００ｍｇの用量に相当する。

前記組成物は、動物においていかなる有害事象も示さず、表１６及び１７に記載されることが示された。錠剤及び膣坐剤の両方において、試験されたリファキシミン投薬量により、治療の終了の７日後に、感染は完全に根絶する。

膣坐剤及び錠剤組成物はともに、前記動物に有効でありかつ動物に対して許容性が良好であることが明らかとなった。しかし、実施例８に記載のように、錠剤は、膣坐剤よりも全身性吸収レベルが低いので、細菌性膣症の患者に使用するためのより適した医薬製剤であるとみなされなければならない。

実施例１２に記載の臨床試験は、実施例１及び実施例２に記載のように調製されたリファキシミン２５ｍｇ及び１００ｍｇを含む錠剤を用いて実施された。

実施例１０及び１１には、健康なボランティアに対する臨床試験におけるリファキシミン錠剤の全身性吸収及び許容性が記載されている。この例から、リファキシミン１００ｍｇを含む錠剤の膣内経路を介して投与した後、リファキシミンの血漿中濃度は、常に機器のＬＬＯＱ０．５ｎｇ／ｍｌを下回っているので、無視できることがわかる。

細菌性膣症の治療での錠剤形態の組成物の有効性を、１８〜５０歳の妊娠していない女性１１４名に対して行われた臨床試験によって決定し、実施例１２に示した。実施例１２に記載の臨床試験を、実施例１及び２に記載のように調製したリファキシミン２５ｍｇ及び１００ｍｇを含む錠剤を用いて行った。

この試験のプライマリーエンドポイント（主要評価項目）は、治療終了の７〜１０日後、１回目の予定来院（control visit）（Ｖ３）でのニュージェントのスコア及びアムセルの診断基準に従う細菌性膣症からの回復の評価であった。

この試験のセカンダリーエンドポイント（副次的評価項目）は、治療終了の７〜１０日後の疾患からの回復（ニュージェントのスコア及びアムセルの診断基準に従って特に評価した（singularly evaluated）疾患からの回復）、治療終了の約１月後の２回目の予定来院（Ｖ４）での回復の維持、並びに分子技術、リアルタイムＰＣＲ−及びＰＣＲ−ＤＧＧＥ（ポリメラーゼ連鎖反応−変性剤濃度勾配ゲル電気泳動）による膣内微生物相（vaginal microbiota）の組成の評価であった。リアルタイムＰＣＲ−は、標的が１６Ｓ ｒＲＮＡ細菌遺伝子又は１６Ｓ−２３Ｓ ｒＲＮＡ領域である様々な性（gender）及び／又は種（species）特異的プライマーを用いて各ＤＮＡサンプルを増幅する定量的技術である。特に、乳酸桿菌属の性（ジェンダー）（Lactobacillus gender）、ガードネレラ・バギナリス、アトポビウム属（Atopobium）、プレボテラ属及びベイヨネラ属（Veillonella）については、特異的なプローブを用いた。なぜなら、細菌性膣症の場合、これらの菌は改変（modification）を受ける主な細菌群を示すからである。一方、ＰＣＲ−ＤＧＧＥは定性的技術であるので、本研究では、増幅は真正細菌のユニバーサルプライマーを用いて行った。

特に、細菌性膣症に罹っているが、ウイルス、原生生物及び真菌の膣内感染には同時に罹っていない患者を、中央無作為化手順及び二重盲検実験計画法を用いて以下の治療群の１つに割り当てた。

Ａ群：実施例２に従って調製されたリファキシミン１００ｍｇを含むリファキシミンの膣錠を、１日１回５日間夕方に投与される患者；
Ｂ群：実施例１に従って調製されたリファキシミン２５ｍｇを含むリファキシミンの膣錠を、１日１回５日間夕方に投与される患者；
Ｃ群：実施例２に従って調製されたリファキシミン１００ｍｇを含むリファキシミンの膣錠を、１日１回２日間夕方に投与され、さらに、プラシーボ膣錠を、残りの３日間１日１回夕方に投与される患者；
Ｄ群：リファキシミン量をラクトース水和物で置き換えて、実施例１に従って調製されたプラシーボ錠を、１日１回５日間夕方に投与される患者。

細菌性膣症の診断は、アムセルの診断基準（４つの陽性基準のうち少なくとも３つ）及びニュージェントのスコア（４又はそれより高い）に基づいた。この治験には、スクリーニング来院（Ｖ１）、次いで７日後の無作為化来院（Ｖ２）、治療終了の７〜１０日後の１回目の予定来院（Ｖ３）及び治療終了の２８〜３５日後の２回目かつ最後の予定来院（Ｖ４）が含まれた。プライマリーエンドポイントの到達の評価は来院Ｖ３の間に行われ、セカンダリーエンドポイントの到達の評価は来院Ｖ４の間に評価された。

表１８は、実施例１及び２に従って調製された組成物を用いる治療後の患者の割合値を、プラシーボで治療された場合と比較して示す。この臨床試験から、リファキシミン錠剤組成物で治療された患者のすべての群において、プラシーボで治療された場合よりも回復率が高かったことが示される。

実施例１に従って調製されたリファキシミン２５ｍｇを含む錠剤で５日間治療された群に属する患者は、他の群の患者よりも疾患からの回復率が大きいことが示された。

より詳細には、実施例１に従って調製されたリファキシミン２５ｍｇを含む錠剤で５日間治療された群に属する患者（Ｂ群）は、４０％より高い回復率を示し；リファキシミン１００ｍｇを含むリファキシミン錠剤で２日間治療された患者（Ｃ群）は、３０％より高い回復率を示し；リファキシミン１００ｍｇを含む錠剤で５日間治療された患者（Ａ群）は、２０％より高い回復率を示した。プラシーボで治療された群（Ｄ群）は、ほぼ１９％の回復率を示した。

表１９は、治療終了の７〜１０日後にアムセルの診断基準に従って計算された患者の割合値を示す。この結果から、リファキシミン２５ｍｇを含む組成物を５日間投与された群は、プラシーボで治療された群よりも高い回復率を示したことが確認される。

表２０には、来院Ｖ３でのニュージェントのスコアによると、疾患からの回復率はリファキシミン２５ｍｇを含む組成物で５日間治療された群に属する患者がより高く、Ｂ群は他の群及びプラシーボで治療された群よりも高いことが示される。

臨床試験を記載するこの例において、患者を、さらに、「細菌性膣症を再発した患者」及び「細菌性膣症を最初に発症した患者」に分類した。リファキシミンで治療されたすべての群において、疾患からの回復率は、細菌性膣症を再発した患者がより高かった。また、リファキシミン２５ｍｇで５日間治療された群は、この疾患を最初に発症した被験体であっても、より高い回復率を示した。

リファキシミンで治療されたすべての群においてニュージェントのスコア及びアムセルの診断基準に従って評価された疾患からの回復率は、細菌性膣症を初めて発症した患者と比較して、細菌性膣症感染の患者のほうが高いことが明らかとなった。さらに、リファキシミン２５ｍｇで５日間治療された群（Ｂ群）は、表２３に示されるように、疾患を初めて発症した被験体においても、より高い回復率を示した。

臨床試験においてリファキシミン２５ｍｇ及び１００ｍｇを含む膣錠で治療された患者は、著しい有害事象を示さず、治療された群はいずれも、治療の間リファキシミンに関連する外陰膣カンジダ症の問題を示さなかった。

報告された臨床試験から、実施例１に従って調製され、リファキシミン２５ｍｇを含む徐放性膣錠を用いて１日１回５日間細菌性膣症患者を治療することは、この疾患からの回復により有効であることがわかった。

実施例１３〜１６には、臨床試験でＡ、Ｂ、Ｃ及びＤ群に登録された４つ群の患者において、ニュージェントの基準に従う回復を得ることが記載されている。実施例１７は、膣内微生物相の組成を決定するために分子技術であるリアルタイムＰＣＲ−及びＰＣＲ−ＤＧＧＥを用いて、リファキシミン１００ｍｇ及び２５ｍｇで５日間治療された患者（Ａ群及びＢ群）並びにリファキシミン１００ｍｇで２日間治療された患者（Ｃ群）の膣リンス（vaginal rinses）に対して行われた微生物学的試験を報告する。

実施例１７の表２８は、微生物種について「ｎｇ標的ＤＮＡ／μｇ総ゲノムＤＮＡ」として表されるリアルタイムＰＣＲによって得られ、臨床試験の来院Ｖ３及びＶ４に関して患者の群に従って分析した結果を、治療前の分析によって得られたデータと比較して示す。

リアルタイムＰＣＲ分析から、乳酸桿菌属がリファキシミンで治療されたすべての群において増加する一方で、ガードネレラ・バギナリス、アトポビウム属及びプレボテラ属などの病原菌の濃度は、プラシーボと比較して、リファキシミンで治療されたすべての群において低減するため、錠剤中の組成物の有効性がわかった。

特に、実施例１に従って調製し、リファキシミン２５ｍｇを含むリファキシミン錠剤で５日間治療された患者は、来院Ｖ３において、他の治療群と比較して乳酸桿菌属の増加を示す。

さらに、リファキシミン２５ｍｇを含む徐放性錠剤を用いる５日間の治療は、嫌気性細菌に対する活性及び乳酸桿菌属の回復（復活）の両方にとって最も有効であり、従って、生理学的膣内微環境（microenvironment）に好都合であることが明らかとなった。

来院Ｖ４での膣サンプルの分析により、実施例１に従って調製されたリファキシミン２５ｍｇを含む膣錠形態の組成物で５日間治療された患者について治療終了時のＶ３で得られたデータを確認した。なぜなら、乳酸桿菌属の濃度が維持された一方で、病原菌がさらに減少していたからである。この結果により、実施例１及び２に記載の組成物が病原性膣内細菌間に選択的な殺菌作用を有し、乳酸桿菌属に対して殺菌作用を有さないことが確認される。

また、リファキシミン１００ｍｇを含む錠剤形態の組成物で５日間治療した患者群（Ａ群）は、来院Ｖ４において、治療終了の７〜１０日後の３回目の来院で観察された回復率を維持した。リアルタイムＰＣＲ法によって得られた結果を、ＰＣＲ−ＤＧＧＥデータによって確認し、膣内微生物相の組成を変えるリファキシミン治療の有効性を示す実施例１８に報告する。また、この技術を用いて、膣内微生物相の組成を変えるのに最も有効なリファキシミン投薬量は、リファキシミン２５ｍｇを含む錠剤による１日１回５日間の治療で得られる。

実施例１８には、本発明に記載のリファキシミンを含む錠剤形態の組成物によって得られた驚くべき予期せぬ結果が記載され、来院Ｖ４での膣内微生物相の濃度の結果が、表２９に示されている。リファキシミンを含む膣錠形態の記載された組成物は、１００ｍｇ／５日、２５ｍｇ／５日及び１００ｍｇ／２日の治療用量において、プラシーボと比較して、病原菌の低濃度の維持、及び乳酸桿菌属濃度の増大に有効である。

特に、リファキシミン１００ｍｇを含む錠剤を５日間投与された治療群Ａは、乳酸桿菌属の濃度を２０倍増大し、リファキシミン２５ｍｇを含む錠剤を５日間投与された治療群Ｂは、乳酸桿菌属の濃度を４０倍増大し、リファキシミン１００ｍｇを含む錠剤を２日間投与された治療群Ｃは、乳酸桿菌属の濃度を８倍増大する。

表２９に示される結果は選択的作用を示しており、この作用は、実施例１及び２のように調製された錠剤形態のリファキシミン組成物が乳酸桿菌属の定着に好都合である。Ｂ群及びＣ群、特にＢ群の来院Ｖ４での乳酸桿菌属の量は、リファキシミンで治療された患者に存在する病原種と比較して優勢であるが、プラシーボで治療された患者、また回復を示した患者における乳酸桿菌属の量は少ないままである。

この証拠により、リファキシミン製剤で治療された患者が回復を維持できる一方、他の患者はおそらく再発するであろうという仮説が支持される。

膣錠の前記組成物は、膣感染からの回復に有用であり、特に５日間投与されたリファキシミン２５ｍｇを含む組成物は、治療終了後約１月間、病原菌を低濃度に維持し、膣内の乳酸桿菌属の濃度を増大させる。

実施例１９には、リファキシミンで治療された女性のＤＧＧＥプロファイルの定義が記載され、出発プロファイルと比較して、バンドの数がより少ないことは、病原種の存在数がより少ないことを示す。

表３０は、「クラスター化（clusterizing）」プロファイルを有する女性の割合を示し、ここで、プラシーボで治療された女性と比較して、リファキシミンで治療された女性で内部変動性（intra-variability）がより高いことが確認される。特に、リファキシミン２５ｍｇを含む錠剤での５日間の治療は、膣内微生物相により強い影響を与え、他の治療群よりも割合値が小さくなる。

試験されたリファキシミン組成物の薬理作用を評価するために、異なる治療群を、いわゆる「類似度指数（Similarity Indexes）（ＳＩ）」によって比較した。

表３１はＳＩ（類似度指数）平均値を示し、この平均値は、リファキシミン治療により、複雑さが低く、より生理学的な膣内微環境が取り戻されることを支持する。

サンプルを評価するために用いられる別の基準は、いわゆる「豊富さ指数（Richness Index）（ＲＩ）」である。この基準は、各ＤＧＧＥプロファイルのバンドに基づくものであり、新たな病原種の反乱に対する疾患の徴候である細菌個体群の複雑さの尺度を与える。表３２は、来院Ｖ１及びＶ３で測定されたＲ１平均値を示す。

表３２の結果から、膣内微生物相プロファイルは、プラシーボで治療された群と比較して、リファキシミン製剤で治療された群において複雑さがより低くなることがわかる。

本発明は、全身性吸収が無視でき、細菌性膣症の治療に有用であり、少量の水性溶液の存在下においてもリファキシミンを放出できる、リファキシミンを含む徐放性錠剤形態の医薬組成物を開示する。特に、記載された組成物は、膣内フローラの乳酸桿菌属の増加を維持しかつその増加に好都合である発光細菌に対して選択的に作用する。

また、本発明の組成物は、たった１日の投薬後であっても発光細菌（photogenic bacteria）の低減に有効であり、膣内フローラの乳酸桿菌属に好都合である。

本明細書には、キット、例えば、膣感染の患者を治療するために有効な量のリファキシミンを含む膣錠、及び前記組成物を使用するための説明書を含むキットも提供される。

同様の例は、様々な量のリファキシミン及び賦形剤を含む膣錠、それらの製造方法に関し、動物及び膣感染を患う女性に対するin vivo研究が報告される。

実施例１
リファキシミンを含む膣錠の調製：組成１
リファキシミン２５ｍｇを含む固形組成物を、以下の工程を含む方法によって調製した：
（ａ）リファキシミンを含む顆粒を調製し、この顆粒を、崩壊剤の混合物を含むマトリックスと混合する工程；
（ｂ）顆粒を圧縮して錠剤を得る工程；
（ｃ）得られた錠剤をフィルムコーティング剤でコーティングする工程。

３７５ｇに相当する量のリファキシミンを、顆粒物を得るための賦形剤と、表３に示される各量で混合する。

賦形剤、コポビドン、ラクトース水和物、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びラクトース水和物は、あらかじめ１．０ｍｍメッシュの篩にかけた。ステアリン酸マグネシウムは、あらかじめ０．５メッシュの篩にかけ、次いで、表３に示される割合で上記混合物に添加した。

これらの成分を混合機に入れ、１５ｒｐｍで２０分間混合する。

次いで、顆粒を得るために、混合物を回転圧縮機に入れ、７５ｂａｒで加圧した。

得られた顆粒物を、あらかじめ１ｍｍメッシュの篩にかけたケイ酸カルシウム（Ｒｘｃｉｐｉｅｎｔ ＦＭ１０００）、クロスポビドン（Ｋｏｌｌｉｄｏｎ ＣＬ）、ラクトース水和物（Ｔａｂｌｅｔｔｏｓｅ ８０）及びコポビドン（Ｋｏｌｌｉｄｏｎ ＶＡ６４）と、表４に示される量で、８０ Ｉ ＢＩＮ様装置（Ｂｉｎ）を用いて１５ｒｐｍで２０分間混合した。次いで、あらかじめ０．５メッシュの篩にかけたステアリン酸マグネシウムを添加し、最終混合物を１０ｒｐｍで３分間攪拌した。

膣錠中の最終組成を表４に示す。

工程（ａ）において得られた混合物を、２２．８×１０．１５ｍｍサイズの錠剤を得るために圧縮機で圧縮した。

錠剤を、フィルムコーティング剤によってコーティングした。４５℃で予熱した錠剤をスチール容器に入れ、ここでフィルム形成性溶液をスプレーした。この溶液は、２．８８ｋｇの水中に０．２２ｋｇのＯｐａｄｒｙ ＩＩ Ｐｉｎｋを分散させたものであった。Ｏｐａｄｒｙ ＩＩ Ｐｉｎｋは、二酸化チタン、弁柄、鉄黄、ポリビニルアルコール及びポリエチレングリコールで形成された粉末混合物であった。

１２４８ｍｇ±５％（１１８５．６〜１３１０．４ｍｇ）に相当する錠剤平均重量が得られるまで、フィルム形成性分散液を錠剤にスプレーした。

スプレー工程は、錠剤の乾燥工程と同時に行われた。所望の重量に到達した後、スプレー工程を停止し、乾燥工程を継続して、水分量が５％以下になるまで錠剤の水分量を制御した。

次いで、錠剤を、水分保持容器（三層構造のアルミニウムコーティングされたＰＶＣ／ＰＥ／ＰＶＤＣ白色層にＰＶＤＣ層が塗布されたシートなど）の中で保存した。得られた錠剤の最終組成（組成１）を表５に示す。

得られた錠剤の平均重量は１１８５．６〜１３１０．４ｍｇであり、硬度は約１４．７５Ｋｐである。

実施例２
リファキシミン１００ｍｇを含む膣錠の調製
錠剤を実施例１に記載のように調製し、リファキシミン１００ｍｇを含む錠剤の最終組成を表６に示す。

表６に示される最終組成を得るために、実施例１、表３に示される顆粒物と同じ組成を有する顆粒物を出発物とし、後続の圧縮の前にこの顆粒物に賦形剤を混合して、錠剤を得た。

実施例３
リファキシミン２５ｍｇを含む膣錠の調製（組成３〜８）
リファキシミン２５ｍｇを含む組成３〜８を、実施例１に記載のような方法に従って調製した。

リファキシミン、結合剤、希釈剤及び滑沢剤を含む顆粒の組成を、表７に示す。

表７に記載の組成（組成Ａ、Ｂ、Ｃ）を有するリファキシミンを含む顆粒を、実施例１に記載のような顆粒外賦形剤と混合する。

組成３〜８を表８に示す。

組成７は、目視検査により、大きな凝集物が存在し、粉末の一貫した不均質性を示した。

実施例４
リファキシミン錠剤の崩壊時間の決定；組成１〜８
実施例１、２及び３に従って調製された組成１〜８を有する錠剤の崩壊時間を、European Pharmacopoeia 7.0 2.9.2, ref. 01/2008:20902に記載のようにして得た。

組成１〜８を有する錠剤を、３７℃に加熱した水浴中のネットの上に置き、錠剤の下部を水に接触させる。

錠剤の崩壊時間を、視覚的に、そして必要に応じて硬度（consistence）の低下を確認するためにガラス棒を用いての両方で評価する。この分析を、６つの錠剤について繰り返し行い、平均時間を計算した。

得られた結果を表９に示す。

実施例５
リファキシミンを含む親油性膣坐剤の調製及びリファキシミン放出の評価
界面活性剤を含む半グリセリド（Ｓｕｐｐｏｃｉｒｅ ＢＳ２Ｘ）の存在下、及びキシログルカンの存在下又は非存在下、リファキシミン５０ｍｇ及び２００ｍｇを含む膣坐剤を調製した。それぞれの組成は、表１０に示す量を有する。

この膣坐剤を、４０℃で半グリセリドを溶融し、続いてトリグリセリドの溶融物に他の成分を分散させることによって調製した。次いで、溶融した塊状物を専用の型に入れ、膣坐剤を得るために冷却した。

次いで、表１０に示される各ＯＶ−ＬＩＰ組成１〜５の膣坐剤を、３７℃で攪拌しながら水９００ｍｌを含むシリンダーに入れ、経時的に放出されるリファキシミンの量を分光光度学的に決定し、表１１に示す。

この実験を６つの異なる容器中で繰り返し行い、得られた平均値を決定した。

実施例６
リファキシミンを含む親水性膣坐剤の調製及びリファキシミン放出の評価
リファキシミン放出に対する賦形剤の効果を評価するために、リファキシミン１００ｍｇと様々な量の賦形剤とを含む膣坐剤を調製した。

親水性膣坐剤の６つの組成（ＯＶ−ＩＤＲ １〜６）及びその相対的な組成を、表１２に示す。

ＯＶ−ＩＤＲ組成１〜６を有する親水性膣坐剤を、水９０ｍｌを含むシリンダーに入れ、リファキシミン量を分光光度学的分析によって決定した。この試験を、６つの膣坐剤について繰り返し行った。

組成５〜９に関して、経時的に放出されるリファキシミン量を表１３に示す。

実施例７
膣錠、親水性及び親油性膣坐剤からのリファキシミンの放出の比較
実施例５に従って調製されたリファキシミン１００ｍｇを含む親油性膣坐剤、実施例６に従って調製された、それぞれリファキシミン２５及び１００ｍｇを含む親水性膣坐剤、並びに実施例２に従って調製されたリファキシミン１００ｍｇを含む錠剤を、３７℃に加熱した環境中で水１０ｍｌを含むバッグに入れた。放出されたリファキシミン量を、一定の時間間隔で測定した。この実験を各組成について３回繰り返し行った。

試験された組成によって放出されたリファキシミンを、ＵＶ分光光度計によって経時的に測定し、そのリファキシミン濃度を表１４に示す。

ＯＶ−ＩＤＲ．１：実施例６のように調製され、リファキシミン１００ｍｇを含む；
ＯＶ−ＩＤＲ．６：実施例６のように調製され、リファキシミン２５ｍｇを含む；
ＯＶ−ＬＩＰ．５：実施例２のように調製され、リファキシミン１００ｍｇを含む。

実施例８
膣錠及び膣坐剤で投与された場合のリファキシミンの膣内経路によるウサギのバイオアベイラビリティ研究
未経産かつ未妊娠の雌性ニュージーランドホワイトＳＰＦ（Specific Pathogen free）ウサギ１２匹（各群６匹）を、実施例１及び４のように調製されたリファキシミン１２．５を含む膣錠及び膣坐剤を用いて単回投与で処置した。処置の間、対照群と比較して、処置された動物において局所的な臨床的徴候も処置への反応も体重変化も観察されなかった。

ヘパリン添加血液を、投与前、並びに投与の約１、２、４、６及び２４時間後に耳翼辺縁静脈から採取した。血漿中のリファキシミン濃度を、ＬＬＯＱが０．５ｎｇ／ｍｌである有効ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法によって決定した。

薬物動態学的分析を標準的なノンコンパートメント解析に従って行い、以下の薬物動態学的パラメータを計算した：
Ｃ_ｍａｘ：血漿中で測定された最高濃度
ｔ_ｍａｘ：最高血漿中濃度への到達に必要な時間
ＡＵＣ_{（０−ｔ ｌａｓｔ）}：ｔ＝０（投与前）から最後（最終定量化濃度）までの血漿中濃度−時間曲線下面積
ＡＵＣ_{（ｉｎｆ）}：ｔ＝０からｔ＝無限大までの血漿中濃度−時間曲線下面積
表１５は、リファキシミン１２．５ｍｇを含む膣錠及び膣坐剤の投与後の薬物動態学的パラメータを示す。

実施例９
動物感染モデルにおける膣坐剤及び膣錠中のリファキシミン組成物の有効性の決定
リファキシミンを含む錠剤及び膣坐剤における膣用組成物の有効性を、ウサギにおける執拗な細菌感染の動物モデルで評価した。

膣感染モデルは、細菌性膣症を患う女性から単離したガードネレラ・バギナリスの接種によって生じさせた。細菌株を、３７℃でウシ赤血球の寒天中でＤＩＦＣＯ−Ｃサプリメントを添加することによって増殖させ、５％ＣＯ_２の制御雰囲気下で２４〜４８時間保った。

動物感染のモデルを作製するために、体重２〜３ｋｇのニュージーランドウサギ（アナウサギ（Oryctolagus cunicolis））を使用した。

この動物を、接種時と、錠剤又は膣坐剤におけるリファキシミンの投与時との両方において、ケタミン（３０ｍｇ／ｋｇ）とキシラジン（２ｍｇ／ｋｇ）とを含む混合物を、筋肉内経路を介して注射することによって麻酔した。

感染前、内在性乳酸桿菌属を低減させて病原因子の増殖を促進させるために、この動物を、１ｍｌの１０％エンロフロキサシン溶液で処置した。１０６−７ＵＦＣ（コロニー形成単位（Unit Forming Colony））のガードネレラ・バギナリスを含む１ｍｌの滅菌食塩水を、２２−２４Ｇテフロン（登録商標）カテーテルを用いて動物の膣内に接種することによって、感染を誘発させた。動物中のＧ．バギナリスの存在を、接種前並びに接種の２４時間後及び４８時間後に確かめた。

動物に、３日間隔で２回及び３回接種した。最終接種の１４日後、すべての動物を１ｍｌの１０％エンロフロキサシン溶液で処置して、抗生物質に対するモデル感受性を確かめた。この処置により感染は治癒したので、このモデルが、膣内経路を介して投与された抗生物質の有効性を評価するために使用できることを確認した。

Ｇ．バギナリスの存在を、最終接種の１、２、４、１０及び１４日後に膣緩衝液（vaginal buffer）によって確かめ、ＤＩＦＣＯ−Ｃサプリメントを含むウシ赤血球の寒天プレートに膣緩衝液を置き、そして３７℃で４８時間増殖させた。Ｇ．バギナリスの存在を、顕微鏡（１０００倍）形態学的同定及びグラム染色法によって確かめた。

次いで、執拗な感染を有する動物を、１．５、３、６及び１２．５ｍｇの量でリファキシミンを含む錠剤及び膣坐剤によって処置した。

動物研究用のリファキシミンを含む錠剤形態の組成物を、実施例１に従って調製した。この調製において、異なるリファキシミン量を有する組成物を得るために、賦形剤の割合を比例的に低減させる。

動物研究用の膣坐剤を、実施例５、組成ＯＶ−２に従って調製した。この調製において、異なるリファキシミン量を有する組成物を得るために、賦形剤を比例的に低減させた。

リファキシミンを含む膣坐剤又は膣錠を膣内に挿入し、膣錠の場合は、錠剤の崩壊を促進させるために、３７℃で１ｍｌの生理的溶液を加えた。処置の間、有害事象は観察されなかった。

リファキシミン処置終了の３日後及び７日後、ガードネレラ・バギナリスの存在を、前記のように膣緩衝液によって評価した。

膣緩衝液は、１０又はそれ以上のコロニーがカウントされた場合に陽性であるとみなされ、悪臭のある膣分泌物の存在は、生じた感染の臨床的徴候であった。

実施例１のように調製された膣錠の異なるリファキシミン用量での有効性を、ガードネレラ属種（Gardnerella spp.）によってウサギに引き起こされた感染の根絶率によって表し、表１６に示す。

ガードネレラ属種によってウサギに引き起こされた執拗な感染の根絶において、実施例４のように調製された膣坐剤の異なるリファキシミン用量での有効性を根絶率として表し、この根絶率を表１７に示す。

リファキシミンで処置されたウサギの分析は、処置終了後７日間陰性であったが、処置されていないウサギ（対照ウサギ）は感染されたままであった。

処置後、すべての臨床的徴候もなくなった。

実施例１０
リファキシミン膣錠の薬物動態学的研究（第Ｉ相臨床試験）による全身性吸収、局所性及び全身性許容性の決定
健康なボランティアに対する第Ｉ相試験を実施して、膣経路を通じて単回投与後に起こり得るリファキシミン膣錠の全身性吸収並びに局所性及び全身性の許容性を評価した。

実施例８に記載のように調製された単回用量のリファキシミン膣錠１００ｍｇを、１８〜５０歳の健康なボランティア２４名に投与した。

血液サンプルを、投与前（時間０）並びに投与後、すなわち、単回用量のリファキシミン膣錠１００ｍｇの投与の３０分、１、１．５、２、３、４、６、８、１０、１２、１６及び２４時間後に各被験体（Ｓ）から採取した。サンプルを、定量下限（ＬＬＯＱ）がリファキシミン濃度０．５ｎｇ／ｍｌである、質量分析検出器を備えた液体クロマトグラフィによって分析した。

分析された被験体における様々な時間での血漿中リファキシミン濃度はすべて、分析的検出限界未満であったことが明らかとなった。

実施例１１
リファキシミン膣錠の投与後の許容性の決定
第Ｉ相試験において、リファキシミン１００ｍｇを含む膣錠の単回投与後の、健康なボランティア２４名に対する局所性及び全身性許容性も評価した。

いずれの被験体も、投与後の様々な時間で膣のかゆみ又は痛みを示さなかったので、良好な局所性許容性が確認された。１名のボランティアのみが軽い膣の痛みを示したが、数時間後に自然に解消した。

全身性許容性の評価のために、ＥＣＧ、血液及び尿における生化学的パラメータなどの生命徴候並びにボランティアによって示された有害事象をモニター（観察）した。リファキシミンの検知し得る全身濃度及び全身性症状が現れないことは、リファキシミン１００ｍｇを含む膣錠の許容性が良好であることを示す。

実施例１２
リファキシミン膣錠による細菌性膣症の治療
この例では、１８〜５０歳の妊娠していない細菌性膣症患者１１４名に対して実施された第ＩＩ相臨床試験を記載している。

細菌性膣症の診断は、アムセルの診断基準（４つの項目のうち少なくとも３つが陽性でなければならない）及びニュージェントのスコア（４より高いスコアが病原性膣内細菌の存在を示す）に基づいて行われた。

この試験の目的は、治療終了の７〜１０日後にアムセルの診断基準（アムセル指数＜３）及びニュージェントのスコア（ニュージェント指数＜４）の両方に従って細菌性膣症からの回復を評価することであった。

この試験の副次的な目的は、１回目の予定来院（Ｖ３）においてアムセルの診断基準及びニュージェントのスコアに従って別々に評価された回復、２回目の予定来院（Ｖ４）における回復の継続、並びにＰＣＲ及びＰＣＲ−ＤＧＧＥによる膣内微生物相の組成の評価であった。

特に、細菌性膣症に罹っているがウイルス、原生生物及び真菌の膣内感染には罹っていない患者を、中央無作為化手順及び二重盲検実験計画法を用いて以下の治療群の１つに割り当てた。

Ａ群：実施例２に従って調製されたリファキシミン１００ｍｇを含むリファキシミンの膣錠を、１日１回５日間夕方に投与される患者２１名；
Ｂ群：実施例１に従って調製されたリファキシミン２５ｍｇを含むリファキシミンの膣錠を、１日１回５日間夕方に投与される患者２３名；
Ｃ群：実施例２に従って調製されたリファキシミン１００ｍｇを含むリファキシミンの膣錠を、１日１回２日間夕方に投与され、さらに、プラシーボ膣錠を、残りの３日間１日１回夕方に投与される患者１９名；
Ｄ群：リファキシミン量をラクトース水和物で置き換えて、実施例１に従って調製されたプラシーボ錠を、１日１回５日間夕方に投与される患者２２名。

この治験には、スクリーニング来院（Ｖ１）、次いで７日後の無作為化来院（Ｖ２）、治療終了の７〜１０日後の１回目の予定来院（Ｖ３）及び治療終了の２８〜３５日後の２回目かつ最後の予定来院（Ｖ４）が含まれた。主目的の到達の評価は来院Ｖ３の間に行われ、副次的目的の到達の評価は２回目かつ最後の予定来院（Ｖ４）の間に評価された。表１８は、両評価基準、すなわち、臨床的基準（アムセル）及び微生物学的基準（ニュージェント）に従う、来院Ｖ３における疾患からの回復率を示す。

来院Ｖ３においてアムセルの臨床的診断基準に従って評価された回復を、表１９に示す。

回復を、グラム染色したスライドを用いて、及び乳酸桿菌属と他の細菌（グラム不定又はグラム陰性球桿菌、グラム不定湾曲桿菌など）との割合を評価することによって、ニュージェントのスコアに従って評価した。

表２０は、ニュージェントの診断基準に従って、種々の群の治療患者において得られた値を示す。

回復の持続は、４回目の来院Ｖ４で評価した。表２１は、来院Ｖ４における疾患からの回復率を示す。

有害事象の決定を、リファキシミン錠剤を摂取する患者における局所性影響及び全身性影響の両方を評価することによって行った。

患者によって報告された有害事象を記載すると、最も頻繁な事象は、リファキシミンに関連した外陰膣のかゆみ及び焼け付くような痛みであった。

表２３は、全身性及び局所性（リファキシミンに関連した外陰膣のかゆみ及び焼け付くような痛み）の両方の有害事象を報告した患者の割合を、患者が属する治療群ごとに示す。

治療された群はいずれも、治療の間、リファキシミンに関連する外陰膣カンジダ症を示さなかった。

実施例１３
治療前の来院時と比較して、治療終了時の来院（Ｖ３）において３ポイントと等しいか又はそれより大きな低下を示す患者の評価
実施例１２に記載のように、臨床試験に登録された治療群Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤに属する患者は、治療前の来院においてニュージェントスコア値７〜１０を示した。

表２４は、治療終了時の来院において、ニュージェントスコアが３ポイントと等しいか又はそれ以上低下したことを示した患者の数及び割合を示す。

実施例１４
治療前の来院（Ｖ１）と比較して、治療終了時の来院（Ｖ３）において３ポイントと等しいか又はそれより大きな低下を示す患者の評価
実施例１２に記載のように、臨床試験に登録された治療群Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤに属する患者は、治療前の来院においてニュージェントスコア値７〜１０を示した。

表２５は、治療終了時の来院において、ニュージェントスコアが５ポイントと等しいか又はそれ以上低下したことを示した患者の数及び割合を示す。

実施例１５
治療前の来院（Ｖ１）と比較して、治療終了時の来院（Ｖ３）において８ポイントと等しいか又はそれより大きな低下を示す患者の評価
実施例１２に記載のように、臨床試験に登録された治療群Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤに属する患者は、治療前の来院においてニュージェントスコア値７〜１０を示した。

表２６は、治療終了時の来院において、ニュージェントスコアが８ポイントと等しいか又はそれ以上低下したことを示した患者の数及び割合を示す。

実施例１６
リファキシミンを含む膣錠による治療に反応しない患者の決定
実施例１２に記載のように、臨床試験に登録された治療群Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤに属する患者は、治療前の来院においてニュージェントスコア値７〜１０を示した。

表２７は、治療終了時の来院において、治療自体に反応せずにニュージェントスコアの低下が０ポイントと登録されたか、又は疾患が悪化してニュージェントスコアが増大したと登録された患者の数及び割合を示す。

実施例１７
来院Ｖ１及びＶ３における定量的リアルタイムＰＣＴ技術を用いる膣内微生物相の組成の決定
実施例１２に記載の臨床試験の間、膣洗浄（vaginal cleansing）のサンプルを回収し、膣内微生物相の組成を定量的リアルタイムＰＣＲによって決定した。

リアルタイムＰＣＲを用いて、ＤＮＡサンプルを、標的が１６Ｓ ｒＲＮＡ細菌遺伝子又は１６Ｓ−２３Ｓ ｒＲＮＡ領域である性及び／又は種特異的プライマーを用いて増幅する。

特に、乳酸桿菌属の性（ジェンダー）、ガードネレラ・バギナリス、アトポビウム属、プレボテラ属及びベイヨネラ属については、特異的なプローブを用いた。なぜなら、細菌性膣症の場合、これらの菌は改変を受ける主な細菌群を示すからである。

表２８は、来院Ｖ３において各群について試験された微生物種に対して、異なる治療群に属する女性の膣洗浄において定量された細菌の性及び種に関するリアルタイムＰＣＲの値（総標的ＤＮＡｎｇ／ゲノムＤＮＡμｇとして表される）を、来院Ｖ１と比較して示す。

来院Ｖ１での値と来院Ｖ４での値とを比較すると、この結果から、すべての病原種の量が減少している一方で、同じ比較において乳酸桿菌属が増加していることがわかる。特に、Ｂ群については、これらの相違が、ベイヨネラ属を除くすべてにおいて統計学的に顕著であった。

実施例１８
リファキシミン膣錠による治療後の来院Ｖ１及びＶ４における定量的リアルタイムＰＣＲ技術を用いる膣内微生物相の組成の決定
膣内微生物相の組成を、来院Ｖ４（治療終了の３０〜４０日後）において回復を維持する患者について、定量的リアルタイムＰＣＲ技術によって決定し、性及び／又は種特異的プライマーを用いて増幅されたＤＮＡサンプルを、リアルタイムＰＣＲ技術によって評価した。

特に、乳酸桿菌属の性（ジェンダー）、ガードネレラ・バギナリス、アトポビウム属、プレボテラ属及びベイヨネラ属については、特異的なプローブを用いた。なぜなら、細菌性膣症の場合、これらの菌は改変を受ける主な細菌群を示すからである。

表２９は、来院Ｖ４において各群について試験された微生物種に対して、異なる治療群に属する女性の膣リンスにおいて定量された標的となる細菌の性及び種に関するリアルタイムＰＣＲの値（総標的ＤＮＡｎｇ／ゲノムＤＮＡμｇとして表される）を、すべての治療された患者の来院Ｖ１において観察された値と比較して示す。

実施例１９
リファキシミン製剤による治療後のＰＣＲ−ＤＧＧＥを用いる膣内微生物相の組成の決定
臨床試験の間、膣リンスのサンプルを採取し、膣内微生物相の組成をＰＣＲ−ＤＧＧＥ技術で評価した。この技術は、電気泳動プロセス及び細菌性１６Ｓ ｒＲＮＡ領域のためのユニバーサルプライマーを用いるＤＮＡ増幅によって種々の細菌性ＤＮＡの同定を可能にする。この技法の結果は、クラスターと呼ばれる可視バンドの列であり、この各バンドは、検討されたサンプルに存在する細菌種のＤＮＡを表す。

サンプルのＤＧＧＥプロファイルのクラスターの分析は、ＦＰＱｕｅｓｔソフトウェア（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて行われ、２つのサンプルの類似度（類似性）に関する情報を与える。回復が病原種の低減を意味する特定の場合において、治療後の患者のサンプルは、治療前の同じ患者のサンプルとまったく異なる可能性がある。

この分析を、４つの治療群Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤの患者について、来院Ｖ１、Ｖ３及びＶ４における膣サンプルを用いて行った。表３０は、「クラスター化」プロファイルを有する患者の割合を示す。

表３０に記載の結果は、リファキシミン製剤で治療された患者においてＶ１、Ｖ３及びＶ４で同定された細菌個体群で高い可変性があることを示しており、そのため、膣内微生物相が、投与された製剤により放出された濃度において、リファキシミンの薬理作用によって有意に改変されたことがわかる。

特に、Ｂ群の患者に投与された製剤が来院Ｖ３において最も有効であることが明らかとなる。

リファキシミン製剤の効果を、特に細菌個体群が完全に改変されるＡ群及びＢ群において、来院Ｖ４後にさらに確認した。

試験されたリファキシミン製剤の薬理作用を評価するために、異なる治療群を、いわゆる類似度指数（ＳＩ）によって比較した。この分析は、ピアソン相関係数に基づいて計算される電気泳動的プロファイルの類似性の評価からなる。試験されたケースにおいて、ＳＩは、異なる来院日における同じ女性の２又はそれ以上のＤＧＧＥプロファイル間の類似率を示す。

表３１の結果は、比較ケースＶ１−Ｖ３において、リファキシミン製剤で治療された群の類似度指数が、プラシーボ群の類似度指数と有意に異なることを示す。

サンプルの評価に採用された別の基準は、いわゆる豊富さ指数（ＲＩ）である。この基準は、各ＤＧＧＥプロファイルのバンドに基づくものであり、新たな病原種の発生に対する疾患の徴候である細菌個体群の複雑さの尺度を与える。表３２は、来院Ｖ１及びＶ３で測定されたＲＩ平均値を示す。

表３２の結果から、膣内微生物相のプロファイルは、プラシーボで治療された群と比較して、リファキシミン製剤で治療された群において複雑さがより低くなることがわかる。

Claims (18)

1. （ａ）２．５ｍｇ〜２００ｍｇの量のリファキシミンと、少なくとも１つの結合剤を含む１又は複数の顆粒内賦形剤とを含む、リファキシミンの顆粒；及び
   （ｂ）少なくとも１つの崩壊剤を含む１又は複数の顆粒外賦形剤であって、前記顆粒外崩壊剤が、クロスポビドン、ケイ酸カルシウム及びこれらの混合物から選択される、１又は複数の顆粒外賦形剤
   を含む膣錠形態の医薬組成物であって、必要に応じてフィルムコーティング剤でコーティングされた医薬組成物。
2. リファキシミンの量が２．５〜１００ｍｇである請求項１記載の医薬組成物。
3. リファキシミンの量が１２．５ｍｇである請求項２記載の医薬組成物。
4. リファキシミンの量が２５ｍｇである請求項２記載の医薬組成物。
5. リファキシミンの量が１００ｍｇである請求項２記載の医薬組成物。
6. 顆粒内賦形剤が、さらに、希釈剤及び滑沢剤の少なくとも１つを含み；顆粒外賦形剤が、さらに、結合剤、希釈剤及び滑沢剤の少なくとも１つ、並びに必要に応じて生体接着剤、防腐剤、緩衝剤、消毒剤及び天然香料を含む請求項１記載の医薬組成物。
7. リファキシミンの顆粒が、リファキシミンの顆粒の重量に対して、
   リファキシミン：１〜８０％（ｗ／ｗ）；
   結合剤：０．５〜２０％（ｗ／ｗ）；
   希釈剤：３０〜９０％（ｗ／ｗ）；
   滑沢剤：０．１〜５％（ｗ／ｗ）
   を含む請求項１記載の医薬組成物。
8. リファキシミンの顆粒が、リファキシミンの顆粒の重量に対して、
   リファキシミン：５〜３０％（ｗ／ｗ）；
   結合剤：１〜１０％（ｗ／ｗ）；
   希釈剤：５０〜９０％（ｗ／ｗ）；
   滑沢剤：０．５〜４％（ｗ／ｗ）
   を含む請求項７記載の医薬組成物。
9. 医薬組成物が、医薬組成物の重量に対して、
   リファキシミンの顆粒：１０〜８５％（ｗ／ｗ）；
   滑沢剤：０．１〜１０％（ｗ／ｗ）；
   結合剤：０．５〜５％（ｗ／ｗ）；
   希釈剤：１０〜８０％（ｗ／ｗ）；
   崩壊剤：２〜２０％（ｗ／ｗ）
   を含む請求項１記載の医薬組成物。
10. 錠剤の重量に対して、
    リファキシミンの顆粒：２０〜６０％（ｗ／ｗ）；
    ステアリン酸マグネシウム：０．１〜１０％（ｗ／ｗ）；
    コポビドン：０．５〜４％（ｗ／ｗ）；
    ラクトース：１０〜８０％（ｗ／ｗ）；
    クロスポビドン及びケイ酸カルシウム：２〜２０％（ｗ／ｗ）
    を含む請求項９記載の医薬組成物。
11. 多形又は無定形の形態のリファキシミンを含む請求項１記載の医薬組成物。
12. ２．５ｍｇ〜２００ｍｇの量のリファキシミンと、少なくとも１つの結合剤を含む１又は複数の顆粒内賦形剤と、少なくとも１つの崩壊剤を含む１又は複数の顆粒外賦形剤であって、前記顆粒外崩壊剤が、クロスポビドン、ケイ酸カルシウム及びこれらの混合物から選択される１又は複数の顆粒外賦形剤とを含む錠剤形態の医薬組成物を製造する方法であって、以下の工程：
    リファキシミンと、１又は複数の顆粒内賦形剤との混合物を、乾式造粒することによってリファキシミンの顆粒を形成する工程；
    前記リファキシミンの顆粒と、崩壊剤を含む１又は複数の顆粒外賦形剤とをまず混合し、次いで圧縮することによって錠剤を形成する工程
    を含む方法。
13. 細菌性膣感染の治療又は予防のための請求項１記載の医薬組成物。
14. 膣内細菌が、ガードネレラ・バギナリス（Gardnerella vaginalis）、マイコプラズマ・ホミニス（Mycoplasma hominis）、バクテロイデス属（Bacteroides）、アトポビウム・バギナーレ（Atopobium vaginale）、ペプトストレプトコッカス属（Peptostreptococcus）、モビルンカス属（Mobiluncus）、プレボテラ属（Prevotella）、ベイヨネラ属（Veillonella）及びこれらの混合物からなる群より選択される請求項１記載の医薬組成物。
15. 細菌性膣症の治療における使用のための請求項１記載の医薬組成物であって、前記治療が、膣用組成物を、１週間より短い治療のクールにおいて、リファキシミン投薬量２００ｍｇ／日未満で被験体に投与する工程を含む医薬組成物。
16. 治療のクールにおけるリファキシミンの総量が７００ｍｇ未満である請求項１３記載の医薬組成物。
17. 細菌性膣症の患者におけるニュージェント（Nugent）及びアムセル（Amsel）の診断基準のスコア低減のための請求項１５記載の医薬組成物。
18. 膣感染の治療における２．５ｍｇ〜１００ｍｇの量のリファキシミンと許容可能な賦形剤とを含む膣錠形態の請求項１記載の医薬組成物であって、治療期間が１週間より短い医薬組成物。