JPH11322621A

JPH11322621A - 乳酸杆菌属の菌類を含有する膣感染症を治療するための薬学的組成物

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Publication number: JPH11322621A
Application number: JP10352873A
Authority: JP
Inventors: Ved Vesely Renata Maria Anna Cavaliere; レナータ・マリア・アンナ・キャバリエール・ベド・ベセリー; Simone Claudio De; クラウディオ・デ・シモーネ
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1998-04-30
Filing date: 1998-12-11
Publication date: 1999-11-24
Also published as: ES2165139T3; PL189577B1; CN1263467C; PT956858E; DK0956858T3; EP0956858A1; BR9900972A; PL329780A1; US6277370B1; ATE207755T1; USRE39892E1; HUP9802525A1; HUP9802525A3; EP0956858B1; AR017404A1; HU225491B1; CA2254548A1; HU9802525D0; HK1022439A1; AU745286B2

Abstract

(57)【要約】（修正有）【解決手段】膣疾患および膣炎を治療する薬学的組成物
を製造するためのラクトバチルス属菌類の群叢の使用。
前記の細菌群叢には、ラクトバチルス・ブレヴィスおよ
びラクトバチルス・サリヴァリウス・サリチニウス亜種
の種が含まれ、或いはこれらは、ラクトバチルス・サリ
ヴァリウス・サリヴァリウス亜種、ラクトバチルス・ジ
ェンセニイ、ラクトバチルス・カテナホルメ、ラクトバ
チルス・ミヌツスおよびラクトバチルス・ガスセリから
選択された 1 以上の種と配合されて含まれる。【効果】上記ラクトバチルス属菌類の群叢を含有する薬
学的組成物は、膣疾患および膣炎の治療に有効である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、乳酸杆菌属菌類(l
actobacilli)の特定の種を、膣感染症を治療する薬学的
組成物を製造するために使用すること、並びにこうして
製造された該薬学的組成物を使用することに関する。

【０００２】

【従来の技術】正常な膣および子宮頚には、胃腸系の細
菌に同化可能な種々の細菌が寄生する。これらの細菌
は、多くの場合、淋菌感染以外による女性生殖器系の感
染症［例えば、陰門膣性膿瘍およびバルトリン腺膿瘍
（または大前庭腺膿瘍）、子宮内膜炎、卵管炎、卵巣膿
瘍および骨盤腹膜炎等］に関与している。

【０００３】多くの場合、性病性疾患以外の炎症性骨盤
疾患の進行には、嫌気性微生物と好気微生物との混合物
が観察される；前述の細菌の分布域は、婦人科学的外科
手術、出産、流産の後における感染が原因となる可能性
があり、且つ精子侵入を予防するための子宮内装置（IU
D）の使用との相関関係が存在する。

【０００４】細菌性膣炎は、バクテロイデス属（Bacter
oides）、ペプトストレプトコッカス属（Peptostreptoc
occus）、ペプトコッカス属（Peptococcus）、モビルン
クス・G.バギナリス（Mobiluncus G. vaginalis）を初
めとする多数の嫌気性細菌が、乳酸杆菌属の菌類に代わ
って膣領域に置換されたことに起因する細菌類の相互作
用の結果、発症する。この症候群では顕著な刺激性分泌
は見られないが、悪臭が特徴である。軽度の掻痒を生
じ、性交疼痛は非常に希である。細菌性膣炎は、膣性の
障害を有する女性において一般的に診断されるが、細菌
性膣炎の診断基準に当てはまる女性の 50% は無症候性
である。細菌性膣炎は性的行動に関連し、性交相手の数
が増加すると共にその発症が増加する；しかしながら、
本疾患が性感染病であるとは見なされていない。

【０００５】細菌性膣炎は若干面倒な疾患であるが、生
殖器系の感染（特に妊娠期間における感染）はより重篤
な感染に発展する可能性を孕んでいる。

【０００６】次の４つのうちの３症状に当てはまる場合
には、細菌性膣炎と診断される：（１）膣壁に粘着する均一性の非炎症性膣分泌物；（２）pH 4.5 以上の膣流体；（３）指標細胞；および（４）10% 水酸化カリウムの添加前または添加後の膣分
泌物の催吐性の臭い（ホイフス試験；Whiff's test）。
一方で、膣炎は、異常膣分泌、局所性炎症および外陰部
掻痒を特徴とする。上記の症状は、膣トリコモナス（T.
vaginalis）またはカンジダ属（Candida；上記の全ての
Candida albicans）の局所感染により現われる。膣疾
患および症候性膣炎は、糖尿病、上皮小体不全、ホスト
生物の異常防御、コルチコステロイド療法、広域抗菌ス
ペクトル性抗生物質療法、経口避妊薬および妊娠薬に付
随する。掻痒および分泌物は、カンジダ属による膣炎の
主要な症状である。時には性交疼痛が現れる。外陰部紅
班および陰門膣鵞口瘡が認められる。如何なる支障もな
く、女性の膣がカンジタ属に感染することは日常的なこ
とであるので、カンジダ属を原因とする膣炎の診断には
局所症状の所見が必要となる。

【０００７】近年における研究の結果は、乳酸杆菌属菌
類が、膣等の動的生態系における正常な細菌均衡を維持
し、且つ病原性微生物による生殖器感染から該生態系を
守るために重要な役割を果たしている、という認識の普
及に貢献している。

【０００８】多数の乳酸杆菌属の菌類が健康な成人女性
の膣に内在することはよく知られている。乳酸杆菌類
は、膣粘膜から分泌されるグリコーゲンをエネルギー源
として利用することで繁殖し、且つ後方からの病原体と
競合して他の細菌による攻撃から膣腔を防御する。上述
の疾患（例えば、非特異的膣炎、膣疾患および外陰部掻
痒等）の治療には、主にスルホンアミド類、抗生物質お
よび抗菌剤類が使用される。とりわけ、近年における多
数の抗生物質の開発に伴い、患者への抗生物質製剤の投
与は頻繁なものとなった。これらの抗生物質類の投与は
膣に内在する乳酸杆菌類を死に至らせる。不運にも、病
原性細菌(例えば、ブドウ球菌属；Staphylococcus)は抗
生物質類に対する耐性を獲得するため、抗生物質投与に
よりこれらの疾患を治療することは困難化してしまっ
た。

【０００９】特許 US-A-5176911 は、婦人科学分野にお
ける膣感染症の治療に乳酸杆菌類を使用することを提案
している。

【００１０】この文書は、以下の細菌類：ラクトバシル
ス・カセイ（カセイ菌；Lactobacillus casei）、ラク
トバシルス・ガスセリ（Lactobacillus gasseri）、ラ
クトバシルス・フェルミンツム（発酵乳酸杆菌；Lactob
acillus fermintum）、ラクトバシルス・カセイ・シュ
ードプランタルム亜種（Lactobacillus casei subs. ps
eudoplantarum）およびラクトバシルス・クリスパツス
(Lactobacillus crispatus)：について言及し、10³ か
ら 10¹⁰ CFU/g、好ましくは約 10⁶ CFU/ｇの細菌濃度
を示唆している。

【００１１】しかしながら、この文書において例示され
る全組成物は、ラクトバシルス・カセイおよび／または
ラクトバシルス・フェルミンツム（Lactobacillus ferm
intum）を必須成分として、1x10⁶CFU/g の濃度で含んで
いる。従ってこの文書は、事実上、ラクトバシルス・カ
セイおよび／またはラクトバシルス・フェルミンツム
が、膣感染を治療する薬学的組成物を製造するための必
須成分であることと、これらの組成物が、細菌濃度で 1
x10⁶ CFU/g（略語「CFU」は「コロニー形成単位」を意
味する）で有効であることとを教示するものである。

【００１２】膣座薬または膣に使用するための錠剤形態
で製造され、且つ乳酸杆菌類を含有する公知技術の薬学
的組成物は、膣における集落形成を回復する程の十分な
効果を有するには至らなかった。更に、該細菌細胞の多
くの部分は、膣座剤を製造する時点で受ける物理的衝撃
により死に至り、更にその数は膣腔内に拡散する時点お
よび増殖が開始されるべき時点で減少してしまう、こと
についても特記しておく。

【００１３】従って、適切な種の乳酸杆菌属の菌類また
はその混合物、およびそれらを含有する薬学的組成物
（公知技術の組成物のような欠点はない）を処置ことが
必要である。

【００１４】特に、患者への投与により確かな有効性を
得られるような非常に優れた品質を有する、膣に使用す
るための薬学的組成物が必要である。

【００１５】加えて、該薬学的組成物の態様は、乳酸杆
菌類が安定して増殖できる数を維持する能力を有し、且
つ前記乳酸杆菌類が膣腔内で拡散する間に合って、この
乳酸杆菌類の持続的に安定した活性を確保できる能力を
有していなくてはならない。

【００１６】本出願人らは、乳酸杆菌属の菌類を基礎に
した薬学的組成物が、以下の性質を可能な限り高度に満
足する場合に限り、膣感染を治療する非常に優れた効果
を提供できることを見出した：（ａ）選択された乳酸杆菌属菌株は、膣上皮に対する高
親和性（即ち、膣の上皮細胞に接着する高い能力）を有
していなくてはならない。この性質により、生理的およ
び病理的条件の両方における膣粘膜に対する細菌の相互
作用が可能になり（これにより、上皮の受容部位におけ
る病原性微生物との競合的活性が示される）、並びに微
生物叢および最適なｐH 条件の回復が可能になる；（ｂ）選択された乳酸杆菌属菌株の少なくとも１が、該
病原性微生物に向けた阻害活性を示す過酸化水素を産生
する高い能力を有していなくてはならない；および（ｃ）選択された乳酸杆菌属菌株の少なくとも１が、He
La 細胞へのカンジダ・アルビカンスの接着を競合的に
阻害する高い能力により特徴付けられていなくてはなら
ない。

【００１７】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、上記の性質を可能な限り高度に満足し、それ故に、
その使用が膣感染症（例えば膣炎および膣疾患等）の効
果的な治療に適切な乳酸杆菌属菌類を基礎にした薬学的
組成物を提供することである。この点に関し、本出願人
らは、他種の乳酸杆菌属菌類よりも、乳酸杆菌属の種で
あるラクトバシルス・ブレヴィスおよびラクトバシルス
・サリヴァリウス・サリチニウス亜種が、上記の３性質
の全てを非常に高度に満足していることを見出した。

【００１８】本発明のもう一つの目的は、乳酸杆菌属菌
類を含有する膣投与に適応した薬学的組成物であって；
液体組成物、乳剤または軟膏形態の組成物、並びに詳し
くは膣座剤および錠剤形態である固体組成物；の形態で
製造された薬学的組成物を提供することである。

【００１９】本発明の更なる目的は、その中に含有さ
れ、時間的に差別化された様式で、乳酸杆菌類を放出す
ることが可能な固体の薬学的組成物を提供することであ
る。

【００２０】

【課題を解決するための手段】前記の目的および更なる
本発明の目的（以下の詳細な説明が進むに連れて明らか
になるであろう）は、本発明によって達成されるが、そ
の第一の側面は、本発明の目的が、経膣投与で用いられ
る膣感染（例えば、膣炎および膣疾患等）を治療する薬
学的組成物を製造するための、乳酸杆菌属の種であるラ
クトバシルス・ブレヴィスおよびラクトバシルス・サリ
ヴァリウス・サリチニウス亜種の群叢の使用を提供する
ことである。

【００２１】もう一つの側面において、本発明の目的
は、前記薬学的組成物を提供することである。

【００２２】

【発明の実施の形態】本発明の詳細な態様において、ラ
クトバシルス・ブレヴィスおよびラクトバシルス・サリ
ヴァリウス・サリチニウス亜種の種の細菌類を、ラクト
バシルス・サリヴァリウス・サリヴァリウス亜種(Lacto
bacillus salivarius subs. salivarius)、ラクトバシ
ルス・ジェンセニイ(Lactobacillus jensenii)、ラクト
バシルス・カテナホルメ(Lactobacillus catenaform
e)、ラクトバシルス・ミヌツス(Lactobacillus minutu
s)およびラクトバシルス・ガスセリ(Lactobacillus gas
seri)から選択された乳酸杆菌属の 1 以上の種との配合
物中で使用することが可能である。

【００２３】好ましくは、本発明の薬学的組成物中に使
用される細菌類の群叢は、ラクトバシルス・ブレヴィ
ス、ラクトバシルス・サリヴァリウス・サリチニウス亜
種およびラクトバシルス・ガスセリを含有し、またはこ
れらからなる。

【００２４】使用されるべき乳酸杆菌属の菌類を特定す
る例は： −ラクトバシルス・ブレヴィス ATCC 4006 および ATCC
14869 −ラクトバシルス・サリヴァリウス・サリチニウス亜種
ATCC 11742 −ラクトバシルス・ガスセリ ATCC 9857である。

【００２５】ATCC は、アメリカン・タイプ・カルチャ
ー・コレクション(12301 Parklawn Drive, Rockville,
Maryland 20852, USA)を意味する。

【００２６】好ましくは、本発明に従って使用される細
菌の群叢には、該細菌類が 10⁷ から 10¹³ CFU/g、より
好ましくは 10⁸ から 10¹² CFU/g、最も好ましくは 10⁹
から 10¹² CFU/g より高濃度となる濃度で含まれる。
好ましくは前記細菌類の群叢には、各種が 10⁸ から 10
¹² CFU/g の濃度で存在する。

【００２７】好ましい該細菌培養物は、凍結乾燥物であ
る。

【００２８】特定使用のための本発明の薬学的組成物
は、液体形態（洗浄用溶液）、乳剤若しくは軟膏形態、
または固体形態（即ち、膣座剤若しくは膣用錠剤、パケ
ット等）に製造される。錠剤形態に製造された薬学的組
成物は、1 層または差別化された放出時間を有する 2
以上の層の錠剤とすることが可能である。

【００２９】特に、本発明の薬学的組成物は、両層とも
に通常の賦形剤および添加剤と配合した前記種の乳酸杆
菌類を含んだ少なくとも 2 層を具備し、従って最外部
層の細菌放出速度が、最内部層の細菌放出速度よりも大
きい錠剤形態で製造できる。

【００３０】例えば、本発明の該薬学的組成物は、2 層
に製造された錠剤形態で製造することが可能である。前
述の 2 層は、外側層の細菌が 10-25 分（例えば、15-2
0 分）が経過する間に放出され、それに対して内側層の
細菌は、外側層に続いて 25-50 分（例えば、30-40
分）が経過する間に放出される、といったように製造す
ることが可能である。

【００３１】本発明の好ましい態様において、該薬学的
組成物は、また、投与後の数時間の間、膣内 pH を 3
と 5.5 間に含まれるように安定化し維持することが可
能な緩衝剤も含む。該緩衝剤は、例えば、硼酸、乳酸、
アルコルビン酸、クエン酸若しくは酢酸等の薬学的に許
容され得る無機若しくは有機の弱酸の何れかから選択さ
れた弱酸を、各々のナトリウム塩と配合して、または使
用された弱酸と塩基の共役した別の薬学的に許容される
塩と配合して含有する緩衝系である。好ましくは、該 p
H は 4.2 から 4.5 の間に緩衝化され、好ましくは緩衝
剤として使用される緩衝系は：乳酸および乳酸ナトリウ
ム、またはアスコルビン酸およびアスコルビン酸ナトリ
ウム：により製作される。

【００３２】更に、本発明の製剤に含むことが可能な構
成要素または成分は、香味剤、メントール、ユーカリノ
キ属の精油、一般的な清涼剤として使用されるメチルサ
リチレート若しくはサリチレート、ヒドロコルチゾン若
しくは他の抗炎症性ステロイド類（0.01 から 500 mg/
g）、抗炎症剤、抗生物質、および加湿剤（EDTA、ドデ
カエチレングリコールモノラウレート等）、エストリオ
ール（0.001 から 1 mg/g）および／または他のホルモ
ン物質またはホルモン様活性を示す物質、トウモロコシ
デンプン若しくはジャガイモデンプン、ビタミン類、抗
酸化剤、酵素類（ヒアルロニダーゼ）、ヘパリノイド
類、リコダイン（lycodaine）および他の局所麻酔薬、
植物抽出物（ベラドンナ）、亜鉛、カルシウムおよびビ
スマスである。洗浄用および灌注用の水剤類の調製には
小瓶類を使用し、これには凍結乾燥した微生物（使用前
に該小瓶中に別けて含有された適切な液体培地に溶解し
なくてはならない）を含有するリザーバーを備え付け
る。本発明の組成物は、事実上、如何なる毒性も有さ
ず、且つ如何なる全身性の吸収も生じないので、妊娠中
の患者への投与も、並びに抗生物質および抗細菌性薬剤
に対してアレルギーを有する患者への投与も可能であ
る。

【００３３】従来の獲得された臨床上の経験に従い、錠
剤、乳剤および膣座剤の形態にした本発明の該組成物を
就寝前に投与することと、続いて翌朝に洗浄剤により洗
浄することとを具備する治療スケジュールが、特に適切
且つ効果的であると考えられる。

【００３４】本発明を一般化して記述してきたが、同様
に本発明は、以下に挙げる幾つかの特定の例を引用する
ことにより更に深く理解されるであろう。また、これら
の例は説明の目的で記述したものであり、本発明を何ら
制限するものではない。

【００３５】

【実施例】［例１］乳酸杆菌類の HeLa 細胞への接着本試験により、HeLa 細胞（ヒト子宮頸癌に由来する細
胞系）に対する乳酸杆菌属の異なる菌株［アメリカン・
タイプ・カルチャー・コレクション(ATCC)から］の接着
能力が試験された。HeLa 細胞は、組織培養用ボトルの
10%(v/v) 胎児ウシ血清(FBS)を添加した MEM(最小必須
培地：Minimal Essential Medium)中で、単層として維
持した。接着反応は、多ウェル培養プレート上で、各ウ
ェル内に滅菌済みカバーグラス（24x24mm）を含む組織
を用いて実施した。各ウェルには、1ml の HeLa 細胞懸
濁液を 1.2x10⁵ cells/ml の濃度で播種し、該プレート
を24 時間、37℃、5% CO₂ 雰囲気下にてインキュベート
した。接着試験の前に、全ての細菌株を MES・ブロス・サ
ブカルチャー(Difco)中に置いた。嫌気性条件下（15% C
O₂）にて 24 時間、37℃ でインキュベーションした
後、該細菌を新しいブロス内において「耐性化(strengt
hened)」し、続いて同様の試験条件において一晩インキ
ュベーションした。嫌気性環境は、「アンアエロゲン(a
naerogen)」(Oxoid)と称する特殊なバッグを入れたジャ
ーの中で該細菌をインキュベートすることにより得た。
接着試験では、異なる希釈濃度で MEM 中に懸濁した細
菌の希釈物を、単層の細胞の上で、37℃、マクロ好気性
条件下において、１時間、インキュベートした。PBS で
数回、洗浄し、接着していない微生物を除去した後、該
細胞は、1 ウェル当たり 0.4ml のメイ-グリュンヴァル
ト染料で 4 分間、処理し、水で希釈したギムザ染色液
で 15 分間洗浄し、その後、光学顕微鏡により試験し
た。処理濃度は、接着する細菌を有する細胞のパーセン
テージと、細菌／細胞の数とを基に選択した。最大接着
は、5x10⁹ 細菌／ml の濃度で得られた。

【００３６】得られた結果を表 1 に示した。これによ
り、試験した乳酸杆菌類は HeLa 細胞に対する接着能力
を有し、夫々が該ホスト細胞に対して異なる接着度を有
していることが示された。ラクトバシルス・ブレヴィス
およびラクトバシルス・サリバリウス・サリチニウス亜種
の種において、最高接着度が得られた。加えて、ラクト
バシルス・カセイの接着度は低く、侵襲性を示したこと
から、本発明の薬学的組成物の製造には適切でないこと
が明らかとなった。

【００３７】〈表１〉 HeLa 細胞に対する異なる乳酸杆菌属菌株の接着乳酸杆菌類細菌接着接着した細菌が接着侵襲性細菌数／している（a）細胞細胞の割合(%) A)L.サリウ゛ァリウス・ 15 60 − サリチニウス亜種 (ATCC 11742) B)L.フ゛レウ゛ィス 35 100 − (ATCC 4006) C)L.フ゛レウ゛ィス 35 100 − (ATCC 14869) D)L.クリスハ゜ツス 10 45 ＋／− (ATCC 33197) E)L.カ゛スセリ 5 16 − (ATCC 9857) F)L.カセリ 8 19 ＋ (ATCC 8530)。

【００３８】量的な細菌接着を、細菌接着を伴なった任
意に選択した 300 の細胞のパーセンテージと、細胞当
たりに接着する細菌数の平均値とにより示した。

【００３９】 (ａ)＋＝侵襲性；+/-＝若干侵襲性；−＝非侵襲性。

【００４０】［例２］乳酸杆菌類の抗カンジダ作用種々の乳酸杆菌属の種について、HeLa 細胞へのカンジ
ダ・アルビカンスの接着（およびそれによるカンジダ・
アルビカンスの感染）との競合的拮抗力を測定した。

【００４１】乳酸杆菌類の感染を、ホスト細胞に対する
真菌(C.アルビカンス；C. albicans)の接着レベルで評
価するために、滅菌済みカバーグラスを含む 24 ウェル
プレート上に成長させた単層 HeLa 細胞を、夫々、5x10
⁹ 細菌／ml および 5x10⁸ 真菌／ml の最終濃度で PBS
中に希釈した乳酸杆菌類と C.アルビカンス(ヒト膣より
単離した２つの臨床試料であり、本例においては夫々 C
A2 および CA3 と称する)との 0.1ml の懸濁混合液と共
にインキュベートした。37℃での、マクロ好気性条件下
における 1 時間のインキュベーションの後、細胞を、P
BS 中で 5 回洗浄し、メイ-グリュンヴァルト染料およ
びギムザを処理した。次に、スライドグラスを光学顕微
鏡(倍率 1000x)で検査し、HeLa 細胞に接着した微生物
のレベルを評価した。表 2 に示した得られた結果は、
試験した乳酸杆菌類の全てが、HeLa 細胞に対する C.ア
ルビカンスの接着を減少する能力を有することを示して
いる。L.ブレヴィス ATCC 4006 が、最も高い阻害活性
値を有し、カンジダが接着した細胞数は約 50% に減少
し、且つ細菌／細胞の数が対照の数の約半分に減少し
た。

【００４２】〈表２〉 C.アルビカンスの HeLa 細胞への接着の乳酸杆菌類による競合的拮抗作用細菌類真菌を細菌を微生物／細胞の平均数伴う細胞 % 伴う細胞 % 真菌細菌 CA2 68 5 CA3 61 7 A)L.サリウ゛ァリウス・ 54 10 サリチニウス亜種 ATCC 11742 B)L.フ゛レウ゛ィス 95 20 ATCC 4006 C)L.カ゛スセリ 15 6 ATCC 9857 D)L.カセイ 13 8 ATCC 8530 CA2 + A 52 55 3 10 CA3 + A 43 54 3 11 CA2 + B 44 99 3 20 CA3 + B 34 99 2 20 CA2 + C 48 15 4 6 CA3 + C 57 16 5 5 CA2 + D 61 12 5 7 CA3 + D 58 12 5 7。

【００４３】本競合的拮抗試験のための乳酸杆菌類およ
び真菌類は、夫々、最終濃度 5x10⁹/ウェルおよび 5x10
⁹/ウェルで使用した。

【００４４】［例３］乳酸杆菌類による過酸化水素産
生乳酸杆菌属の 5 つの種の H₂O₂ 産生能について試験し
た。細菌を培養するために、テトラメチルベンジジンを
加えた寒天寒天プレート上に位置した。嫌気性条件下の
ジャー中、37℃で 3 日、インキュベーションした後、
該寒天寒天プレートを空気に暴露した。

【００４５】この方法により、培養用培地中に存在する
ペルオキシダーゼは乳酸杆菌類により産生された H₂O₂
と反応する。続くテトラメチルベンジジンの酸化によ
り、H₂O₂ 産生コロニーが青色に染色される。

【００４６】表３に示した得られた結果は、L.サリバリ
ウス・サリチニウス亜種 ATCC 11742 および L.ガスセ
リ ATCC 3857 が H₂O₂ の産生に対して陽性であったこ
とを示している。

【００４７】L.カセイ ATCC 8530 は何れの陽性も示さ
なかった。他の試験菌株は、何れの反応性もなかった。
これらの結果は、乳酸杆菌類による H₂O₂ 産生と、HeLa
細胞への C.アルビカンスの接着に対する細菌類による
競合的拮抗作用との間には相互関係が存在しないことが
示している。

【００４８】〈表３〉乳酸杆菌類による過酸化水素の産生乳酸杆菌類 H₂O₂ の産生 A)ラクトハ゛シルス・サリハ゛リウス・＋サリチニウス亜種(ATCC 11742) B)ラクトハ゛シルス・フ゛レウ゛ィス − (ATCC 4006) C)ラクトハ゛シルス・フ゛レウ゛ィス − (ATCC 14869) D)ラクトハ゛シルス・カ゛スセリ＋ (ATCC 3857) E)L.カセイ − (ATCC 8530) ＋ = 全細菌コロニーが青色に染色された +/- = 淡青色の染色あり − = 染色されたコロニーなし。

【００４９】好ましい薬学的組成物の幾つかの例を以下
に示すが、これらは、説明を目的とするものであって、
何ら制限を意図するのではない。これらの組成物は、幾
つかの微生物種の群叢を含有する微生物培養凍結乾燥産
物を膣内に投与するための錠剤、膣座剤、乳剤および洗
浄用液剤を製造することを意図している。

【００５０】《膣用製剤の例》［例４］担体と、 L.ブレヴィス ATCC 4006 および L.
サリヴァリウス・サリチニウス亜種 ATCC 11742（１：
１の割合）の群叢を含有する微生物培養凍結乾燥産物(1
x10¹⁰ CFU/g)とを含有する若干の発泡性を有する急速放
出性錠剤を調製するための単位組成：微生物培養凍結乾燥産物 500 mg 乳糖 350 mg トウモロコシデンプン 200 mg アジピン酸 67 mg 重炭酸ナトリウム 67 mg ステアリン酸マグネシウム 11 mg ステアリン酸 3 mg コロイド状シリカ 2 mg。

【００５１】上記の組成を有する錠剤を製造するため
に、顆粒またはペレットの前調製が必要である。

【００５２】潤滑化したペレットに、次に、前もって 3
00μm メッシュ上でふるいに掛けた500.0 g の前記の微
生物培養凍結乾燥産物を添加し、更に 15 分間、再度混
合した。このようにして得られたペレットを、続いて、
卵型の打錠用パンチを装備した回転圧搾機を用いた圧搾
操作に供し、それにより膣用錠剤は 1200 mg の平均重
量で得られる。

【００５３】イタリア薬局方に記載の装置を用いたとこ
ろ、得られた該錠剤の崩壊時間(disgregating time)
は、約 15 分である。

【００５４】［例５］担体と、例 4 と同様の微生物培
養凍結乾燥産物とを含有する低速放出錠剤を製造するた
めの単位組成：微生物培養凍結乾燥産物 500 mg マンニトール 560 mg ハイドロキシプロピルメチルセルロース 80 mg タルク 18 mg ステアリン酸マグネシウム 19 mg コロイド状シリカ 3 mg。

【００５５】該海面状材料を 270μm のメッシュに押し
付けることにより、該微生物培養凍結乾燥産物を調整す
る；ふるいに掛けた該産物に、予め 279 μm メッシュ
上でふるいに掛けたマンニトール、ヒドロキシプロピル
メチルセルロース、タルク、ステアリン酸マグネシウム
およびコロイド状シリカを添加する。全材料を、粉末に
なるまで、ターブラ T2A 型ミキサー(Turbula T2A type
mixer)中で 30 分間混合する。こうして得た混合物
を、続いて、卵型の打錠用パンチを装備した回転圧搾機
を用いた圧搾操作に供し、それにより膣用錠剤は 1200
mg の平均重量で得られる。

【００５６】イタリア薬局方に記載の装置を用いた測定
の結果、得られた該錠剤の崩壊時間(disgregating tim
e)は、約 30 分である。

【００５７】［例６］担体と、例４と同様の微生物培養
凍結乾燥産物とを含有する 2 層錠( 1 高速放出層と 1
低速放出層)の調製。

【００５８】高速放出層(若干の発泡性を有する層)を調
製するための単位組成：微生物培養凍結乾燥産物 250 mg 乳糖 240 mg トウモロコシデンプン 41 mg アジピン酸 30 mg 重炭酸ナトリウム 30 mg ステアリン酸マグネシウム 6 mg ステアリン酸 2 mg コロイド状シリカ 1 mg。

【００５９】低速放出層を調製するための単位組成：微生物培養凍結乾燥産物 250 mg マンニトール 280 mg ハイドロキシプロピルメチルセルロース 50 mg タルク 9 mg ステアリン酸マグネシウム 10 mg コロイド状シリカ 1 mg。

【００６０】高速放出層に使用するペレットは、例 4
に記載の方法に従って調製する；低速放出層に使用する
混合物は、例 5 に記載の方法に従って調製する。

【００６１】高速放出層の上記ペレットと、低速放出層
を調製する上記混合物とを、2 層錠(マネスティー・レ
イヤー・プレス・タイプ；Manesty Layer Press thpe)
を作製するのに適し、且つ卵型の打錠用パンチを備え付
けた適切な圧搾機の 2 つの別個の充填ホッパーに投入
する。

【００６２】該圧搾機は、総重量が 1200 mg であり、
これは夫々 600 mg の 2 層かなり、且つ各層が 250 mg
の該微生物培養凍結乾燥産物を含有する 2 層錠を得ら
れるように調整されている。得られた 2 層錠を、イタ
リア薬局方に記述の装置を使用した崩壊試験(disgregat
ing test)に供し、高速放出層に関しては約 15 分、ま
た低速放出層に関しては約 30-40 分の崩壊時間(disgre
gating time)を得た。

【００６３】［例７］活性成分：1 g の例４と同様の微生物培養凍結乾燥産物賦形剤：2.5 g の半合成グリセリド類およびジャガイモ
デンプン。

【００６４】［例８］膣用乳剤（10g のチューブ）活性成分：1 g の例４と同様の微生物培養凍結乾燥産物賦形剤：水素化ラノリン(2g)、ワセリン油(2g)、ジメチ
ルポリシロキサン(3g)、SiO₂(4g)。

【００６５】［例９］リザーバーを伴なった小瓶各小瓶は以下を含む： a)リザーバー：2 g の例４と同様の微生物培養凍結乾燥
産物 b)小瓶(10ml)：グリセロール 3g および 10ml に十分な
量の水。

【００６６】［例１０−１５］例４から９を、前記例の
夫々の条件に従う同じ方法に従って繰り返すが、唯一、
微生物培養凍結乾燥産物については異なるもの、即ち、
L.ブレヴィス ATCC 14869、L.サリヴァリウス・サリチ
ニウス亜種 ATCC 11742、および L.ガスセリ ATCC 9857
の種を 1：1：1 の割合からなる微生物培養凍結乾燥産
物(濃度 1x10¹⁰CFU/g)を使用した。

【００６７】例４から１５において得られた全ての薬学
的製剤が膣炎および膣疾患に罹患する患者の治療におい
て非常に有効であることは、既に証明されている。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者レナータ・マリア・アンナ・キャバリエール・ベド・ベセリーイタリア国、20123 ミラノ（エムアイ）、ビア・エス・オルソーラ、11 (72)発明者クラウディオ・デ・シモーネイタリア国、00040 アルデア（ローマ）、ビア・ヌオーロ、10

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】乳酸杆菌属の種であるラクトバシルス・
ブレヴィスおよびラクトバシルス・サリヴァリウス・サ
リチニウス亜種の群叢の使用であって、経膣投与で使用
することにより膣炎および膣疾患を治療する薬学的組成
物を調製するための使用。
【請求項２】請求項１に記載の使用であって、前記乳
酸杆菌属の菌類の群叢が、ラクトバシルス・サリヴァリ
ウス・サリヴァリウス亜種、ラクトバシルス・ジェンセ
ニイ、ラクトバシルス・カテナホルメ、ラクトバシルス
・ミヌツスおよびラクトバシルス・ガスセリから選択さ
れる乳酸杆菌属の１以上の種を含有する使用。
【請求項３】請求項１に記載の使用であって、前記乳
酸杆菌属の菌類の群叢が、ラクトバシルス・ブレヴィ
ス、ラクトバシルス・サリヴァリウス・サリチニウス亜
種およびラクトバシルス・ガスセリの種を含んでなる使
用。
【請求項４】請求項１乃至３の何れか１項に記載の使
用であって、前記乳酸杆菌属の菌類の群叢が 10⁷ 乃至
10¹³ CFU/g の濃度で使用される使用。
【請求項５】請求項１乃至４の何れか１項に記載の使
用であって、前記薬学的組成物が、液体形態、乳剤若し
くは軟膏形態、または膣座剤若しくは膣用錠剤のような
固体形態で製造される使用。
【請求項６】請求項５に記載の使用であって、前記薬
学的組成物が、その両層がともに通常の賦活剤および添
加剤と配合した前記の種の乳酸杆菌類を含有する少なく
とも２層を具備した錠剤形態で製造され、且つそれによ
り最外部層の細菌放出速度が、最内部層の細菌放出速度
よりも大きい組成物である使用。
【請求項７】経膣投与に使用して膣感染を治療するた
めの薬学的組成物であって、乳酸杆菌属の種であるラク
トバシルス・ブレヴィスおよびラクトバシルス・サリヴ
ァリウス・サリチニウス亜種の群叢を含有する薬学的組
成物。
【請求項８】請求項７に記載の組成物であって、前記
の乳酸杆菌類の群叢が更に、ラクトバシルス・サリヴァ
リウス・サリヴァリウス亜種、ラクトバシルス・ジェン
セニイ、ラクトバシルス・カテナホルメ、ラクトバシル
ス・ミヌツスおよびラクトバシルス・ガセリから選択さ
れる乳酸杆菌属の種の１以上を含有する組成物。
【請求項９】請求項７に記載の組成物であって、前記
乳酸杆菌類の群叢が、ラクトバシルス・ブレヴィス、ラ
クトバシルス・サリヴァリウス・サリチニウス亜種およ
びラクトバシルス・ガスセリの種を含んでなる組成物。
【請求項１０】請求項７乃至９の何れか１項に記載の
組成物であって、前記乳酸杆菌類の群叢が、10⁷ 乃至 1
0¹³ CFU/g の濃度で使用される組成物。
【請求項１１】液体形態、乳剤若しくは軟膏形態、ま
たは膣座剤若しくは膣用錠剤のような固体形態を有す
る、請求項７乃至１０の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１２】請求項１１に記載の組成物であって、
前記組成物が、その両層がともに通常の賦形剤および添
加剤と配合された前記の種の乳酸杆菌類を含有する少な
くとも２層を具備する錠剤形態で製造され、且つそれに
より最外部層の細菌放出速度が、最内部層の細菌放出速
度よりも大きい組成物。