JP6050902B2

JP6050902B2 - 即効型インスリン組成物

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Publication number: JP6050902B2
Application number: JP2015563152A
Authority: JP
Inventors: エドワードクリスト，マイケル; アンドリューハーディ，トーマス
Original assignee: イーライリリーアンドカンパニー
Priority date: 2014-05-08
Filing date: 2015-05-04
Publication date: 2016-12-21
Anticipated expiration: 2035-05-04
Also published as: CA2945188A1; TN2016000443A1; PH12016502195B1; EA201691911A1; US20160367640A1; DK3536380T3; EP3140008B1; LT3536380T; CN106456717A; JP2016523807A; TW201625291A; PH12016502195A1; KR101858890B1; CY1121669T1; AU2015256355A1; CA2945188C; EP3536380B8; HRP20211415T1; EP3536380A1; PE20161408A1

Description

本発明は、食後の血液グルコース変動幅を弱めるために糖尿病の治療において使用するためおよび高血糖の急性治療のための医薬品インスリン組成物である。組成物には、ヒトインスリンまたはインスリン類似体およびトレプロスチニルが含まれる。組成物は、既存の市販のインスリン組成物よりも速い注射部位からのインスリンの摂取を有し、かつ長期間の保管に対して十分に安定である。組成物は、インスリンが必要とされる場合の食事時間インスリン活性または高血糖の急性治療を提供するために有用である。

インスリンの時間−作用プロファイルは、食後の血液グルコースレベルをコントロールするために重要である。健常者において、膵臓は、吸収された食物に反応してインスリンのスパイクを分泌し、これが数分以内に血液インスリンレベルの増加をもたらす。１型糖尿病を有する個体および２型糖尿病を有するある種の個体では、インスリンを投与しなければならない。しかしながら、投与されたインスリンは、血液に徐々に入る。食事の初めのインスリンの緩慢過ぎる開始および不十分な放出は、食後の高血糖に繋がる。作用の長すぎる持続期間および食間の過剰なインスリンは、食後の低血糖を引き起こしかつ体重増加に寄与し得る。

インスリン製品の時間−作用を低減するために先行の取り組みがなされてきた。こうした製品を開発するための初期の取り組みには、ヒトインスリンにおけるアミノ酸鎖の配列からのアミノ酸配列の変更によって即効作用を達成した、インスリンリスプロ（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標））およびインスリンアスパルト（ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））のような新規の「即効型」インスリン類似体の開発が含まれた。別の類似体、インスリングルリジン（ＡＰＩＤＲＡ（登録商標））は、亜鉛が不足しており安定化六量体を形成しない。ＡＰＩＤＲＡ（登録商標）は、したがって追加的な安定剤、ポリソルベート２０を必要とする。即効型インスリン類似体は、１９９０年代および２０００年代初期に利用可能になった。いわゆる即効型インスリン類似体でさえ、最大インスリンレベルには、注射後５０〜９０分まで達しない。これは、正常に機能している膵臓によって放出されるインスリンより遅くかつ炭水化物吸収プロファイルと常には一致しない。

調査された即効作用を達成するための別の手段は、インスリンと組み合わせて提供された場合にインスリンの時間作用プロファイルを改善する成分を探すことである。例えば、１９８０年代にプロスタグランジンＥ_１はインスリンと組み合わせて投与された場合にインスリン吸収を促進することが述べられた（非特許文献１）。プロスタグランジンＥ_１は、しかしながら、化学的に不安定であり、最小限に水溶性であり、かつ急速に異化し、これはインスリン組成物において使用するために望ましくない特色である。インスリン吸収を促進すると述べられた別の薬剤は、プロテアーゼ阻害剤アプロチニンであるが、アプロチニンはその免疫反応を誘発する可能性が原因で反復投与には不適当である（非特許文献２）。より最近、ニコチン性化合物、例えばニコチンアミド、ならびにアミノ酸アルギニン、および場合によってはグルタミン酸を添加することによって既存のインスリン療法と比較してより速い作用の開始が達成され得ることが述べられた。特許文献１を参照されたい。

それにもかかわらず、既存のインスリン製品よりも急速な注射部位からのインスリンの摂取および急速な作用の開始を有し；安全性リスクを最小化するためならびに用量正確性および有効性を保証するために長期間の保管中に化学的および物理的に安定であり；許容できないレベルの注射部位疼痛をもたらさず；かつ／あるいは十分な安定性を維持しながら時間作用の改善を達成するために最小数の成分および／または賦形剤を必要とする、食事時間における使用のためのインスリン組成物の必要性は依然として存在する。

米国特許第８，３２４，１５７号

Ｗｉｌｌｉａｍｓら、１ＤｉａｂｅｔｉｃＭｅｄ．１０９−１３（１９８４年）Ｄ．Ｒ．Ｏｗｅｎｓら、２５ＢＲ．Ｊ．ＣＬＩＮ．ＰＨＡＲＭＡＣ．４５３〜４５６（１９８８年）

本発明は、これらの要求を満たす配合物を提供することを目的とする。具体的には、本発明は、血液中へのインスリンのより急速な摂取を有するインスリンおよびトレプロスチニルの配合物を提供する。本発明は、既存の市販のインスリン製品よりも急速な作用および／または吸収の開始も提供する。さらに、本発明の配合物は、十分に安定である。さらに、本発明の配合物の投与は、許容できない注射部位疼痛をもたらさない。本発明の配合物は、最小数の追加的構成要素を用いながらこれらの効果を達成する。

本発明の第１の態様に従って、インスリンおよびトレプロスチニルを含む組成物が提供される。

一実施形態において、インスリンは、ヒトインスリン、またはヒトインスリンの即効型構造変異体、突然変異体、もしくは類似体、例えばインスリンリスプロ、インスリンアスパルトおよびインスリングルリジンからなる群から選択される。好ましい実施形態において、インスリンは、インスリンリスプロである。一実施形態において、インスリンリスプロ濃度は、約４０から約５００ＩＵ／ｍＬである。好ましくは、インスリンリスプロ濃度は、１００ＩＵ／ｍＬまたは２００ＩＵ／ｍＬのいずれかである。

組成物におけるトレプロスチニルの量は、トレプロスチニルを含まないインスリン配合物よりも速い作用および／または吸収の開始をもたらすのに十分でなければならない。本発明の組成物において用いられるトレプロスチニルの濃度は、約０．０１から約３０μＭの範囲、具体的には約０．０５から約２６μＭ、約０．０５から０．３μＭ、約０．１から０．５μＭ、約０．３から１．５μＭ、約０．５から５．１μＭ、約１．５から５．９μＭ、約５．１から１２．８μＭ、約５．９から２０μＭ、約１２．８から２４μＭ、約２０から２６μＭ、または約２６から３０μＭ、具体的には約０．０５、０．１、０．３、０．５、１．５、５．１、５．９、１２．８、２０、２４または２６μＭのいずれかである。インスリンおよびトレプロスチニルは、固定用量配合剤中に存在する。

本発明の一実施形態において、組成物は、１種または複数の防腐剤を含む。好ましい実施形態において、１種または複数の防腐剤は、フェノール、メタ−クレゾール、およびベンジルアルコールからなる群から選択される。好ましくは、防腐剤は、メタ−クレゾールである。一実施形態において、メタ−クレゾール濃度は、約２．５ｍｇ／ｍＬから約３．８ｍｇ／ｍＬである。好ましくは、メタ−クレゾール濃度は、約３．１５ｍｇ／ｍＬである。

本発明の一実施形態において、組成物は、等張化剤を含む。一実施形態において、等張化剤は、グリセロールおよび塩化ナトリウムからなる群から選択される。好ましい実施形態において、等張化剤は、グリセロールである。別の好ましい実施形態において、グリセロール濃度は、約５から約２０ｍｇ／ｍＬである。好ましくは、グリセロール濃度は、約１６ｍｇ／ｍＬである。

一実施形態において、組成物は、１種または複数の安定剤をさらに含んでよい。好ましい実施形態において、１種または複数の安定剤は、亜鉛、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、およびアルギニンからなる群から選択される。好ましくは、安定剤は、亜鉛である。酸化亜鉛は、所望の数の亜鉛原子を提供するのに十分な量で組成物において提供され得る。本発明の特定の実施形態の組成物は、インスリンの６分子当り約２〜４亜鉛原子の比率で亜鉛を含む。特定の好ましい組成物は、インスリンの６分子当り亜鉛の約２．５−３．５個の原子を有するであろう。特定の実施形態において、亜鉛の濃度は、約０．００５２５ｍｇ／ｍＬから約０．１３１ｍｇ／ｍＬである。好ましくは、インスリン濃度が約１００ＩＵ／ｍＬである場合、亜鉛濃度は約０．０１９７ｍｇ／ｍＬである。

一実施形態において、組成物は、緩衝剤をさらに含んでよい。特定の実施形態において、緩衝剤は、リン酸緩衝液、例えば二塩基性リン酸ナトリウム、ＴＲＩＳ（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−プロパン−１，３−ジオール；トロメタミン）または酢酸ナトリウムからなる群から選択される。特定の好ましい実施形態において、緩衝剤は、リン酸塩またはＴＲＩＳである。

本発明の特定の実施形態において、組成物のｐＨは、約７．０から約７．８である。好ましくは、ｐＨは、約７．４である。

一実施形態において、組成物は、約４０から約６００ＩＵ／ｍＬの濃度のインスリンリスプロ、約０．０１から約３０μＭの濃度のトレプロスチニル、約２．５から約３．８ｍｇ／ｍＬの濃度のメタ−クレゾール、約５から約２０ｍｇ／ｍＬの濃度のグリセロール、約０．００５２５から約０．１３１ｍｇ／ｍＬの濃度の亜鉛を含み、かつ組成物のｐＨは、約７．０から約７．８である。好ましい実施形態において、インスリン濃度は約１００ＩＵ／ｍＬ、トレプロスチニル濃度は約０．０５から約２６μＭ、亜鉛濃度は約０．０１９７ｍｇ／ｍＬ、メタ−クレゾール濃度は約３．１５ｍｇ／ｍＬ、グリセロール濃度は約１６ｍｇ／ｍＬ、および組成物のｐＨは約７．４である。

本発明の第２の態様に従って、前述の組成物のいずれかの有効量をそれを必要とするヒトに投与することを含む糖尿病を治療する方法が提供される。

本発明の第３の態様に従って、薬物として使用するための前述の組成物のいずれかが提供される。一実施形態において、組成物の使用は、糖尿病の治療における使用のためである。本発明は、糖尿病の治療用の薬物の製造のための前述の組成物のいずれかの使用も提供する。

本発明の第４の態様に従って、前述の組成物のいずれかを含む製造物が提供される。一実施形態において、製造物は、多目的バイアルである。別の実施形態において、製造物は、再使用可能なペン型注射器である。別の実施形態において、製造物は、連続的皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置である。

別の態様において、本発明は、トレプロスチニルと組み合わせて使用するためのインスリンを提供する。別の態様において、本発明は、インスリンと組み合わせて使用するためのトレプロスチニルを提供する。

インスリン製品のための作用および／または吸収の開始プロファイルは、いくつかの方法で測定され得る。例えば、血清インスリン濃度は、時間作用に関連する薬物動態学的パラメータ、例えば最大インスリン濃度までの時間（Ｔｍａｘ）、ならびに最大インスリン濃度（Ａ）、および０から無限大までのインスリン濃度曲線下の総面積（ＡＵＣｉｎｆ）として測定される、総インスリン暴露に達するまでの時間を計算するために測定され得る。同様に、インスリン投与後に正常血清グルコース濃度を維持するために必要なグルコース注入率（ＧＩＲ）は、インスリンの薬力学的作用の直接的尺度を提供する。本発明は、例えば、より短いＴｍａｘ、より短いＣｍａｘの５０％に達するまでの時間（前半５０％Ｔｍａｘ）、より短いＣｍａｘの５０％がクリアされる時間（後半５０％Ｔｍａｘ）、より短いＡＵＣｉｎｆの１０％、２０％または５０％に達するまでの時間、より短い最大ＧＩＲまたは最大の５０％ＧＩＲまでの時間、ならびに／あるいはインスリンのより急速な吸収または作用を反映するであろう他の薬物動態学的および／または薬力学的パラメータにおいて反映されるように、既存の市販のインスリン製品より急速なインスリンの血液中への摂取および／またはより急速な作用の開始を提供する。

本明細書において用いられる場合、「組成物」と言う語は、インスリン、トレプロスチニル、および任意の他の成分または賦形剤が、単一の組み合わせられた配合物において組み合わせられる、インスリンおよびトレプロスチニルの固定用量配合剤を指す。

本明細書において用いられる場合、「インスリン」は、ヒトインスリンまたは即効型の構造変異体、突然変異体、あるいはヒトインスリンの機能活性を有するがヒトインスリンより作用の開始が速いヒトインスリンの類似体を意味する。ヒトインスリンの特定の即効型類似体は、インスリンリスプロ、インスリンアスパルト、およびインスリングルリジンである。市販の製品のためのインスリンは、組み換えＤＮＡ法を用いてまたは化学合成によって生成され得る。組み換え法は、よく知られておりかつ非常に好ましい。ヒトインスリンの分子（ＣＡＳ番号１１０６１−６８−０）は、２つのアミノ酸鎖、ＡおよびＢからなり、その配列はよく知られている。

ヒトインスリンＡ鎖は、次のアミノ酸の配列を有する：
ＧｌｙＩｌｅＶａｌＧｌｕＧｌｎＣｙｓＣｙｓＴｈｒＳｅｒＩｌｅＣｙｓＳｅｒＬｅｕＴｙｒＧｌｎＬｅｕＧｌｕＡｓｎＴｙｒＣｙｓＡｓｎ（配列番号１）。

ヒトインスリンＢ鎖は、次のアミノ酸の配列を有する：
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙ
ＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈｒＰｒｏＬｙｓＴｈｒ（配列番号２）。
鎖は、２つのジスルフィド結合：ＣｙｓＡ７−ＣｙｓＢ７およびＣｙｓＡ２０−ＣｙｓＢ１９によって連結される。Ａ鎖は、ＣｙｓＡ６−ＣｙｓＡ１１において鎖内ジスルフィド結合を有する。ヒトインスリンは、実験式Ｃ_２５７Ｈ_３８３Ｎ_６５Ｏ_７７Ｓ_６および５８０８の分子量を有する。

ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）における原薬である、インスリンリスプロ（時にＫＰＢと呼ばれる）は、位置２８および２９（２８^Ｂ−Ｌ−リジン−２９^Ｂ−Ｌ−プロリンヒトインスリン）におけるＢ鎖上の天然のプロリン−リジン配列の転化を除きその一次アミノ酸配列に関してヒトインスリンと同一である。インスリンリスプロ（ＣＡＳ番号１３３１０７−６４−９）は、モルベースでヒトインスリンと等力であるが皮下注射後のその効果は、注射された可溶性のヒトインスリンのそれよりも急速かつ持続時間が短いことが分かっている。ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）は、防腐剤および安定剤としてｍ−クレゾール、浸透張力調節剤（グリセリン）、緩衝剤（二塩基性リン酸ナトリウム）、安定剤（酸化亜鉛）ならびにビヒクルのためのｐＨ調整剤を含有する。

ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｍａ．ｅｕｒｏｐａ．ｅｕ／ｄｏｃｓ／ｅｎ＿ＧＢ／ｄｏｃｕｍｅｎｔ＿ｌｉｂｒａｒｙ／ＥＰＡＲ＿−＿Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＿Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ／ｈｕｍａｎ／００００８８／ＷＣ５０００５０３２９．ｐｄｆ．を参照されたい。インスリンリスプロの分子は、アミノ酸配列が下記の配列番号３によって与えられる、インスリンリスプロＢ鎖と架橋したヒトインスリンＡ鎖（配列番号１）からなる：
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙ
ＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈｒＬｙｓＰｒｏＴｈｒ（配列番号３）。
インスリンリスプロの化学式はＣ_２５７Ｈ_３８３Ｎ_６５Ｏ_７７Ｓ_６でありその分子量は約５８０８である。インスリンリスプロの１単位は、０．０３４７ｍｇのインスリンリスプロに相当する。ｈｔｔｐ：／／ｎｉｂ．ｇｏｖ．ｉｎ／Ｂｏｘ％２０３．ｐｄｆ．を参照されたい。

ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標）における原薬である、インスリンアスパルト（ＣＡＳ番号１１６０９４−２３−６）は、別の即効性インスリン類似体である。その構造は、次のアミノ酸配列に反映されるように、ヒトインスリン（配列番号１）のＡ鎖およびＢ２８においてＰｒｏがＡｓｐで置き換えられたＢ鎖（Ｐｒｏ−Ｂ２８−Ａｓｐヒトインスリン）からなる：
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙ
ＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈｒＡｓｐＬｙｓＴｈｒ（配列番号４）。
インスリンアスパルト（２８^Ｂアスパラギン酸−ヒトインスリン）は、実験式Ｃ_２５６Ｈ_３８１Ｎ_６５Ｏ_７９Ｓ_６および約５８２６の分子量を有する。インスリンアスパルトの１単位は、６ｎｍｏｌに相当し、０．０３５ｍｇの無塩無水インスリンアスパルトと一致する。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｏｖｏｎｏｒｄｉｓｋ．ｃｏｍ．ａｕ／ｍｅｄｉａ／ＰＩｓ／ＮｏｖｏＲａｐｉｄ＿ＮｏｖｏＭｉｘ＿ＰＩ３ａ．ｐｄｆ．を参照されたい。

ＡＰＩＤＲＡ（登録商標）における原薬である、インスリングルリジン（ＣＡＳ番号２０７７４８−２９−６）は、さらに別の即効性インスリン類似体である。インスリングルリジンの分子は、次のアミノ酸配列において反映されるように、ヒトインスリンＡ鎖（配列番号１）およびヒトインスリンに比較して変性されたＢ鎖（Ａｓｎ−Ｂ３−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｂ２９−Ｇｌｕ）からなる：
ＰｈｅＶａｌＬｙｓＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙ
ＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈｒＰｒｏＧｌｕＴｈｒ（配列番号５）。

インスリングルリジン（３^Ｂ−リジン−２９^Ｂ−グルタミン酸−ヒトインスリン）は、実験式Ｃ_２５８Ｈ_３８４Ｎ_６４Ｏ_７８Ｓ_６および５８２３の分子量を有する。インスリングルリジンの１単位は、インスリングルリジンの０．０３４９ｍｇにほぼ相当する。

次の図式は、血液グルコースの食事時間変動幅の治療における使用について現在認可されている即効型インスリン製品におけるヒトインスリンおよび原薬のアミノ酸配列およびジスルフィド結合を描く：

本発明の組成物は、０．２４から３ｍＭの間（４０〜５００ＩＵ／ｍＬ、１．４ｍｇ／ｍＬ〜１７．５ｍｇ／ｍＬ）のインスリンの濃度を有する。本発明の組成物は、４０、１００、２００、３００、４００、および５００ＩＵ／ｍＬ（１．４、３．５、７、１０．５、１４、および１７．５ｍｇ／ｍＬ）の特有の濃度を有する可能性が高い。好ましい組成物は、１００ＩＵ／ｍＬまたは２００ＩＵ／ｍＬの濃度を有する。

本発明において実証された上述のインスリン類似体の時間作用プロファイルにおける改善は、少量のプロスタサイクリン類似体トレプロスチニル（ＣＡＳ番号８１８４６−１９−７）の使用によって達成される。トレプロスチニルの化学名は、（１Ｒ，２Ｒ，３ａＳ，９ａＳ）−［［２，３，３ａ，４，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−ヒドロキシ−１−［（３Ｓ）−３−ヒドロキシオクチル］−１Ｈ−ベンゾ［ｆ］インデン−５−イル］オキシ］酢酸である。これは、３９０．５２の分子量およびＣ_２３Ｈ_３４Ｏ_５の分子式を有する。トレプロスチニルは、Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ（登録商標）、Ｔｙｖａｓｏ（登録商標）およびＯｒｅｎｉｔｒａｎ（商標）の商品名で販売されている市販の薬剤製品における有効成分であり、運動に関連した症状を軽減するため（Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ（登録商標））ならびに運動能力を改善する（Ｔｙｖａｓｏ（登録商標）およびＯｒｅｎｉｔｒａｎ（商標））ために肺動脈性肺高血圧症の治療に適応される。Ｔｙｖａｓｏ（登録商標）およびＯｒｅｎｉｔｒａｎ（商標）は、それぞれ、吸入および経口剤形であり、かつＲｅｍｏｄｕｌｉｎ（登録商標）は、連続的注入として皮下または静脈内使用に適応される。Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ（登録商標）は、１、２．５、５および１０ｍｇ／ｍＬの投与量強度（ｄｏｓａｇｅｓｔｒｅｎｇｔｈ）で現在入手可能であり、かつ１ｍＬ毎に３ｍｇのメタクレゾール、６．３ｍｇのクエン酸ナトリウム、５．３ｍｇ（１，２．５および５ｍｇ／ｍＬ強度）または４．０ｍｇ（１０ｍｇ／ｍＬ強度）いずれかの塩化ナトリウム、および注射用水も含有する。

本発明の組成物のための投与経路は、典型的には自己投与皮下注射によって、例えば、注射器もしくはペン型装置の使用によって、または静脈内、皮内を通して、インスリンポンプ装置を用いて、連続的な皮下インスリン注入療法によってなされ、あるいは腹腔内経路も用いてよい。好ましくは、投与経路は、自己投与皮下注射による。注射される活性薬剤の用量は、患者の医師と相談して患者によって決定されるであろう。

組成物は、最初生成された時は無菌である。組成物が多目的バイアルまたはカートリッジにおいて提供される場合、配合物の他の構成要素と親和性がある抗菌性防腐剤化合物または化合物の混合物が、典型的には規制当局および薬局方抗菌性防腐剤要件に適合する十分な強度で添加される。米国薬局方モノグラフ、Ｉｎｓｕｌｉｎｌｉｓｐｒｏｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．ＵＳＰ２９−ＮＦ２４；英国薬局方モノグラフ２００８第ＩＩＩ巻：Ｉｎｓｕｌｉｎａｓｐａｒｔｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；米国薬局方モノグラフ、Ｉｎｓｕｌｉｎａｓｓａｙｓ；および米国薬局方モノグラフ総則ＵＳＰ２９−ＮＦ２４．ロックビル、メリーランド州：米国薬局方協会；２００５．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓｔｅｓｔｉｎｇ；２４９９〜２５００頁を参照されたい。好ましい防腐剤は、アリール酸およびフェノール性化合物、またはこうした化合物の混合物である。有効濃度は、上述の方法を用いて容易に確認され得る。インスリン製品において最も一般的に用いられる防腐剤は、フェノール、ｍ−クレゾール、およびベンジルアルコールである。現在の市販の組成物は、例えば、３．１５ｍｇ／ｍＬのｍ−クレゾール（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）およびＡＰＩＤＲＡ（登録商標））、１．７２ｍｇ／ｍＬのｍ−クレゾールおよび１．５０ｍｇ／ｍＬのフェノール（ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））、ならびに２．５ｍｇ／ｍＬのｍ−クレゾール（ＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）ＲＵ−５００）を含有する。

体液と近似的に等張ではない溶液は投与された時に刺痛感覚を生じ得るので、組成物を投与した時に注射部位における体液の張性（すなわち、重量オスモル濃度）と可能な限り近く近似的に一致することが望ましい。したがって、組成物は、注射の部位において体液と近似的に等張であることが望ましい。等張化剤の非存在下での組成物の重量オスモル濃度が組織の重量オスモル濃度より十分に低い場合（血液については、約３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、重量オスモル濃度に関する欧州薬局方要件＞２４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）、等張化剤は、一般には組成物の張性を約３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇまで上昇させるために加えられるべきである。典型的な等張化剤は、グリセロール（グリセリン）および塩化ナトリウムである。加える等張化剤の量は、標準の技術を用いて容易に決定される。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ、ＤａｖｉｄＢ．ＴｒｏｙおよびＰａｕｌＢｅｒｉｎｇｅｒ編、ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、２００６年、２５７〜２５９頁、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＥｓｓｅｎｔｉａｌｓｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、ＬｉｎｄａＥｄＦｅｌｔｏｎ、ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰｒｅｓｓ、２０１３年、２７７〜３００頁。

必要な場合、組成物は、１種または複数の安定剤、例えば亜鉛、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、およびアルギニンをさらに含んでよい。亜鉛は、一般的に使用される安定剤であり、かつ酸化亜鉛は、所望の数の亜鉛原子を提供するために加えてよい。一部の市販のインスリン組成物は、インスリン（ＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）ＲＵ−５００）の６分子当り約２．４原子の亜鉛を有し、かつ一部は、インスリン（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）、ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））の６分子当り約３．０原子の亜鉛を有する。

必要な場合、緩衝化合物が含まれていてよい。こうした緩衝化合物の例は、リン酸緩衝液、例えば二塩基性リン酸ナトリウム、ＴＲＩＳまたは酢酸ナトリウムである。リン酸塩またはＴＲＩＳ緩衝剤は、好ましい。

市販のインスリン配合物に関するｐＨは、７．４±０．１を一般的目標ｐＨとして、通常は７．２から７．６の範囲である。本発明のｐＨは、典型的には７．０から７．８でありかつ生理学的に適切な酸および塩基、典型的には塩酸１０％および水酸化ナトリウム１０％を用いて調整される。好ましくは、ｐＨは、約７．４である。

一実施形態において、本発明の組成物の作用および／または吸収の開始プロファイルは、例えば、これに限らないが、Ｔｍａｘ、前半５０％Ｔｍａｘ、後半５０％Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘ、および／または総ＡＵＣｉｎｆの１０％、２０％もしくは５０％に達するまでの時間を含めた、薬物動態学的パラメータ、ならびに／あるいは薬力学的パラメータ、例えば最大ＧＩＲに達するまでの時間または５０％最大ＧＩＲに達するまでの時間によって測定されるように同一インスリンを含有するがトレプロスチニルを含有しない組成物より少なくとも約２０％速い。別の実施形態において、本発明の組成物の作用および／または吸収の開始プロファイルは、例えば上述の物を含めた、薬物動態学的および／または薬力学的パラメータによって測定されるように、同一インスリンを含有するがトレプロスチニルを含有しない組成物より少なくとも約２５％速い。別の実施形態において、本発明の組成物の作用および／または吸収の開始プロファイルは、例えば上述の物を含めた、薬物動態学的および／または薬力学的パラメータによって測定されるように、同一インスリンを含有するがトレプロスチニルを含有しない組成物より少なくとも約３０％速い。

本発明は、本明細書の他の場所でさらに記述されている、以下の非限定的な実施形態の一覧も企図する：

インスリン、トレプロスチニル、１種または複数の防腐剤、等張化剤、１種または複数の安定剤、および、場合によっては、緩衝剤を含む医薬組成物。

インスリンが、ヒトインスリン、インスリンリスプロ、インスリンアスパルトおよびインスリングルリジンからなる群から選択され、１種または複数の防腐剤が、フェノール、メタ−クレゾール、およびベンジルアルコールからなる群から選択され、等張化剤が、グリセロールおよび塩化ナトリウムからなる群から選択され、１種または複数の安定剤が、亜鉛、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、およびアルギニンからなる群から選択されかつ緩衝剤が、リン酸塩、ＴＲＩＳまたは酢酸ナトリウムからなる群から選択される、インスリン、トレプロスチニル、１種または複数の防腐剤、等張化剤、１種または複数の安定剤、および、場合によっては、緩衝剤を含む医薬組成物。

インスリンが、インスリンリスプロであり、防腐剤が、メタ−クレゾールであり、等張化剤が、グリセロールであり、安定剤が、亜鉛であり、かつ緩衝剤が、ＴＲＩＳである、インスリン、トレプロスチニル、１種または複数の防腐剤、等張化剤、１種または複数の安定剤、および、場合によっては、緩衝剤を含む医薬組成物。

インスリンが、インスリンリスプロであり、防腐剤が、メタ−クレゾールであり、等張化剤が、グリセロールであり、安定剤が、亜鉛であり、かつ緩衝剤が、リン酸塩である、インスリン、トレプロスチニル、１種または複数の防腐剤、等張化剤、１種または複数の安定剤、および、場合によっては、緩衝剤を含む医薬組成物。

インスリンが、インスリンリスプロであり、防腐剤が、メタ−クレゾールであり、等張化剤が、塩化ナトリウムであり、安定剤が、亜鉛であり、かつ緩衝剤が、ＴＲＩＳである、インスリン、トレプロスチニル、１種または複数の防腐剤、等張化剤、１種または複数の安定剤、および、場合によっては、緩衝剤を含む医薬組成物。

インスリンが、インスリンリスプロであり、防腐剤が、メタ−クレゾールであり、等張化剤が、塩化ナトリウムであり、安定剤が、亜鉛であり、かつ緩衝剤が、リン酸塩であり、かつインスリンリスプロ濃度が、約４０から約５００ＩＵ／ｍＬであり、トレプロスチニル濃度が、約０．０１から約３０μＭであり、亜鉛濃度が、約０．００５２５ｍｇ／ｍＬから約０．１３１ｍｇ／ｍＬであり、メタ−クレゾール濃度が、約２．５ｍｇ／ｍＬから約３．８ｍｇ／ｍＬであり、かつグリセロール濃度が、約５から約２０ｍｇ／ｍＬである、インスリン、トレプロスチニル、１種または複数の防腐剤、等張化剤、１種または複数の安定剤、および場合によっては、緩衝剤を含む医薬組成物。

インスリンが、インスリンリスプロであり、防腐剤が、メタ−クレゾールであり、等張化剤が、塩化ナトリウムであり、安定剤が、亜鉛であり、かつ緩衝剤が、リン酸塩であり、かつインスリンリスプロ濃度が、約１００ＩＵ／ｍＬであり、トレプロスチニル濃度が、約０．０５から約２６μＭであり、亜鉛濃度が、約０．０１９７ｍｇ／ｍＬであり、メタ−クレゾール濃度が、約３．１５ｍｇ／ｍＬであり、かつグリセロール濃度が、約１６ｍｇ／ｍＬである、インスリン、トレプロスチニル、１種または複数の防腐剤、等張化剤、１種または複数の安定剤、および場合によっては、緩衝剤を含む医薬組成物。

インスリンが、インスリンリスプロであり、防腐剤が、メタ−クレゾールであり、等張化剤が、塩化ナトリウムであり、安定剤が、亜鉛であり、かつ緩衝剤が、ＴＲＩＳであり、かつインスリンリスプロ濃度が、約１００ＩＵ／ｍＬであり、トレプロスチニル濃度が、約０．０５から約２６μＭであり、亜鉛濃度が、約０．０１９７ｍｇ／ｍＬであり、メタ−クレゾール濃度が、約３．１５ｍｇ／ｍＬであり、かつグリセロール濃度が、約１６ｍｇ／ｍＬであり、かつ組成物のｐＨが、約７．４である、インスリン、トレプロスチニル、１種または複数の防腐剤、等張化剤、１種または複数の安定剤、および場合によっては、緩衝剤を含む医薬組成物。

例えば、Ｔｍａｘ、前半５０％Ｔｍａｘ、後半５０％Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘ、総ＡＵＣｉｎｆの１０％、２０％もしくは５０％に達するまでの時間、最大ＧＩＲに達するまでの時間、および／または５０％最大ＧＩＲに達するまでの時間で測定されるような、組成物の作用および／または吸収の開始プロファイルが、同一インスリンを含有するがトレプロスチニルを含有しない組成物よりも少なくとも約２０％速い、前述の組成物のいずれかを含む医薬組成物。例えば、Ｔｍａｘ、前半５０％Ｔｍａｘ、後半５０％Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘ、総ＡＵＣｉｎｆの１０％、２０％もしくは５０％に達するまでの時間、最大ＧＩＲに達するまでの時間、および／または５０％最大ＧＩＲに達するまでの時間で測定されるような、組成物の作用および／または吸収の開始プロファイルが、同一インスリンを含有するがトレプロスチニルを含有しない組成物よりも少なくとも約２５％速い、前述の組成物のいずれかを含む医薬組成物。例えば、Ｔｍａｘ、前半５０％Ｔｍａｘ、後半５０％Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘ、総ＡＵＣｉｎｆの１０％、２０％もしくは５０％に達するまでの時間、最大ＧＩＲに達するまでの時間、および／または５０％最大ＧＩＲに達するまでの時間で測定されるような、組成物の作用および／または吸収の開始プロファイルが、同一インスリンを含有するがトレプロスチニルを含有しない組成物よりも少なくとも約３０％速い、前述の組成物のいずれかを含む医薬組成物。

組成物が、皮下注射によって投与される、前述の組成物のいずれかを含む医薬組成物。

インスリンはインスリンリスプロ、防腐剤はメタ−クレゾール、等張化剤はグリセロールまたは塩化ナトリウムのいずれか、安定剤は亜鉛、および緩衝剤はリン酸塩またはＴＲＩＳであり、かつ例えば、Ｔｍａｘ、前半５０％Ｔｍａｘ、後半５０％Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘ、総ＡＵＣｉｎｆの１０％、２０％もしくは５０％に達するまでの時間、最大ＧＩＲに達するまでの時間および／または５０％最大ＧＩＲに達するまでの時間によって、測定されるような、組成物の作用のおよび／または吸収開始プロファイルが、同一インスリンを含有するがトレプロスチニルを含有しない組成物よりも少なくとも約２０％速い、インスリン、トレプロスチニル、１種または複数の防腐剤、等張化剤、１種または複数の安定剤、および場合によっては、緩衝剤を含む有効量の医薬組成物をそれを必要とするヒトに投与することを含む糖尿病を治療する方法。インスリンはインスリンリスプロ、防腐剤はメタ−クレゾール、等張化剤はグリセロールまたは塩化ナトリウムのいずれか、安定剤は亜鉛、および緩衝剤はリン酸塩またはＴＲＩＳであり、かつ例えば、Ｔｍａｘ、前半５０％Ｔｍａｘ、後半５０％Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘ、総ＡＵＣｉｎｆの１０％、２０％もしくは５０％に達するまでの時間、最大ＧＩＲに達するまでの時間、および／または５０％最大ＧＩＲに達するまでの時間によって、測定されるような、組成物の作用のおよび／または吸収開始プロファイルが、同一インスリンを含有するがトレプロスチニルを含有しない組成物よりも少なくとも約２５％速い、インスリン、トレプロスチニル、１種または複数の防腐剤、等張化剤、１種または複数の安定剤、および場合によっては、緩衝剤を含む有効量の医薬組成物をそれを必要とするヒトに投与することを含む糖尿病を治療する方法。インスリンはインスリンリスプロ、防腐剤はメタ−クレゾール、等張化剤はグリセロールまたは塩化ナトリウムのいずれか、安定剤は亜鉛、および緩衝剤はリン酸塩またはＴＲＩＳであり、かつ例えば、Ｔｍａｘ、前半５０％Ｔｍａｘ、後半５０％Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘ、総ＡＵＣｉｎｆの１０％、２０％もしくは５０％に達するまでの時間、最大ＧＩＲに達するまでの時間、および／または５０％最大ＧＩＲに達するまでの時間によって、測定されるような、組成物の作用のおよび／または吸収開始プロファイルが、同一インスリンを含有するがトレプロスチニルを含有しない組成物よりも少なくとも約３０％速い、インスリン、トレプロスチニル、１種または複数の防腐剤、等張化剤、１種または複数の安定剤、および場合によっては、緩衝剤を含む有効量の医薬組成物をそれを必要とするヒトに投与することを含む糖尿病を治療する方法。

本発明は、限定するとは解釈されない、以下の実施例によってさらに例示される。

安定性調査
安定性調査を、トレプロスチニルと共配合された場合のインスリンリスプロの安定性を評価するために行う。安定性試料を、インスリンリスプロ（ＬｉｌｌｙＭａｔｅｒｉａｌ＃ＱＡ４１５Ｑ）の配合物と１ｍｇ／ｍＬのトレプロスチニル、３ｍｇ／ｍＬのｍ−クレゾール、６．３ｍｇのクエン酸ナトリウム、５．３ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、および注射用水を含有する市販製品である、Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ（登録商標）（ＵｎｉｔｅｄＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｂａｔｃｈ９２２０１７）とを組み合わせることにより調製する。安定に置かれた配合物の１ミリリットル毎に、インスリンリスプロ１００単位、１６ｍｇのグリセリン、２．１３ｍｇの二塩基性リン酸ナトリウム、３．１８ｍｇのｍ−クレゾール、０．０１９７ｍｇの亜鉛イオン、０．０１ｍｇのトレプロスチニル、０．０６３ｍｇのクエン酸ナトリウム、０．０５３ｍｇの塩化ナトリウム、０．００２４ｍｇの水酸化ナトリウム、およびミリＱ水を含有する。ｐＨを、塩酸１Ｎおよび／または水酸化ナトリウム１Ｎの水溶液の追加によって７．４の最終ｐＨになるように調整する。

溶液を、０．２２μｍＰＥＳ薄膜を備えた５０ｍｌのＳｔｅｒｉｆｌｉｐＶａｃｕｕｍろ過器を用いてろ過して（カタログ＃：ＳＣＧＰ００５２５、ＥＭＤＭｉｌｌｉｐｏｒｅ、ビルリカ、メリーランド州）コルク裏付きアルミニウム箔裏を有するねじ蓋式白色尿素密閉容器を備えた７ｍＬのシンチレーションバイアルに分配し（バイアルおよび蓋：カタログ＃：０３−３４０−４Ａ、ＫｉｍｂｌｅＣｈａｓｅ、ロックウッド、テネシー州）、それぞれ５℃、２５℃、３０℃および３７℃でインキュベーションして、初期、１週、２週、３週、４週および３６日時点において分析のために取り出す。試料を、５℃、２５℃および３０℃でインキュベーションした溶液について４４日、５４日および６６日時点でも分析のために取り出す。

高圧サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰ−ＳＥＣ）を用いてタンパク質安定性を評価して２１４ｎｍにおけるＵＶ検出でＡｇｉｌｅｎｔ１２００ｓｙｓｔｅｍ（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、サンタクララ、カリフォルニア州）を用いてそれぞれの配合物における高分子量種を定量する。それぞれの試料（５μＬ）を、ＴｏｓｏｈＴＳＫｇｅｌＧ２０００ＳＷｘｌカラム（ＴｏｓｏｈＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅＬＬＣ、キングオブプラシャ、ペンシルベニア州；３０００ｍｍ×７．８ｍｍ）に注入してｐＨ７．４で１０ｍＭリン酸ナトリウム、１０％アセトニトリル（ＡＣＮ）、および３００ｍＭのＮａＣｌを含有する移動相を用いて０．５ｍＬ／ｍｉｎの流速で分離する。高分子量の百分率（％ＨＭＷ）を、２１４ｎｍにおけるクロマトグラフのＨＭＷピーク面積を総ピーク面積で割ることによって計算する。

ＳＥＣ結果（％ＨＭＷ）を、下表に示す。

ＨＭＷ形成は、３７℃において３６日間および３０℃において６６日間まで完全に全ての試料について１％未満であり、これは不安定性の低いリスクを示す。

逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）分析を行って２１４ｎｍにおけるＵＶ検出でＡｇｉｌｅｎｔ１２００ｓｙｓｔｅｍを用いて（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、サンタクララ、カリフォルニア州）安定時点におけるタンパク質純度を評価する。それぞれの試料（５μＬ）を、６０℃において４．６×１００ｍｍ（３．５μｍ）ＳｙｍｍｅｔｒｙＳｈｉｅｌｄＲＰ１８（Ｗａｔｅｒｓ、ハンティンドンバレー、ペンシルベニア州）を用いることによって移動相Ａ（水中０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ））および移動相Ｂ（アセトニトリル中０．１％ＴＦＡ）を用いて０．９ｍＬ／分の流速で分離する。０、３、５、２０、２５、２７および３０分における移動相Ｂの勾配は、それぞれ、１０、１０、２０、４５、９０、１０および１０％である。

インスリン濃度を、インスリンピーク面積の積分およびインスリンリスプロ標準に対する比較によって計算する。結果を、ＩＵ／ｍＬで報告し、下記に示す。

あるとしても、最小のインスリン損失が、３７℃において３６日および３０℃において６６日まで完全に全ての試料について観察された。

主要ピークの外側の試料の百分率を、クロマトグラフの主要ピーク面積を総ピーク面積で割ることによって計算する。結果（主要ピークの外側％）を、下記に示す。

主要ピーク面積の外側の百分率は、３６日に関して３７℃における全ての試料について３％未満でありかつ６６日に関して３０℃における全ての試料について３．５％未満であり、これはインスリン配合物のために許容可能である。

薬物動態学的および薬力学的調査
１５匹の糖尿病の（アロキサン誘発した）、去勢された、前もって取り付けた血管アクセスポートを有する雄のユカタンミニブタ（平均月齢２０か月および平均体重４２ｋｇ）を用いる。糖尿病の動物は、個別に飼育しかつ常に淡水へのその場のアクセスを有する。それらを、小屋食餌（ｈｏｕｓｅｄｉｅｔ）Ｓ−９の１日当たり２回の食餌を与えかつそれらの糖尿病の状態を管理するために１日当たり２回の適切な維持基礎および食事インスリンを受けさせた。

試験物（下表における配合物Ａ、ＢおよびＣ）を、配合して一晩コールドパック上で試験場まで輸送する。Ｈｕｍａｌｏｇインスリン対照は、試験場に保管された１００ＩＵ／ｍＬの市販材料である。

試験物は、投薬の時間まで冷蔵して保管し次いで全ての動物の投薬が完了した後に冷却装置に戻す。試験物は投薬期間の間、引き出されていない時は断熱された箱に入ったままにする。

調査は、４方向クロスオーバーデザインである。このデザインは、各試験日１試験物（それぞれ７日間あけて４日）の投薬によってそれぞれの個々の動物が３種の試験物および対照インスリンのそれぞれを受けることができるようにする。

調査の前日に、動物にそれらの一日の割当量の半分を与えて０．２Ｕ／ｋｇのＨｕｍａｌｏｇＭｉｘ７５／２５インスリンをそれらの朝の維持投与として受けさせる。全ての調査動物は、一晩絶食してそれらの夜のインスリンまたは調査日の薬剤投与の前の食餌を受けさせない。

調査の朝、全ての動物を拘束用の吊りひも内に置いてそれらの血管アクセスポート（血液試料採取のために装備した）にアクセスして開存性を確認する。動物を、無作為に処置群に入れる（１群当りｎ＝３〜４で４群で任意の除外前の処置当りｎ＝１５が得られる）。２つのベースライン血液試料を収集した後（−３０および−２０分）、動物をそれらの檻に戻して約３００ｇのＳ−９食餌を与える。２匹の動物を、２００ｍｇ／ｄＬを超えるベースライン血液グルコースの組み入れ基準に適合しないためインスリンリスプロ＋トレプロスチニル１０ｎｇの処置群から除外し、かつ１匹の動物を、投与前インスリン値＞１０，０００ｐＭが原因でその群のデータ分析から除外し、その処置群についてｎ＝１２を得る。１匹の動物を、２００ｍｇ／ｄＬを超えるベースライン血液グルコースの組み入れ基準に適合しないためインスリンリスプロ＋トレプロスチニル１ｎｇの処置群から除外し、その処置群についてｎ＝１４を得る。

完全に消費された食餌の提示後２０分で、Ｔｅｒｕｍｏインスリン注射器（０．５ｍｌ１／２インチ針）で動物に試験物０．２Ｕ／ｋｇ（インスリン濃度に基づいて、平均９単位／ブタ）を脇腹の皮下に注射する（０分）。全ての調査動物は、残りの採血期間を通してきれいな、淡水への自由アクセスを有する。

血圧を、ベースラインのために−３０および０分（投与前）においておよび次いで投与後３０および６０分においてＣａｒｄｅｌｌＭｏｎｉｔｏｒによって（尻尾上の獣医学用カフを用いて）評価する。これらの連続測定を、それぞれの時点＋／−５分において測る。提示したデータは、個々のブタ当り３回の読み取り値の平均である。

連続的な血液試料（それぞれ２．０ｍＬ）を、次の時点においてそれぞれの動物から収集する：皮下（ｓｃ）投薬の後−３０、−２０（次いで、直ちに餌を与える）、０（投与直前）、５、１０、１５、３０、４５、６０、７５、９０、１０５、１２０、１５０、１８０、２４０、および３６０分。

実験の継続期間に関して有害事象は観察されない。血液グルコースを、手持ち式血糖計で実時間で観測しかつ全ての動物を、低血糖の臨床的兆候について定期的に観察する。血圧を、ベースライン値のために−３０および０分において記録し次いで投与後３０および６０分で観測して任意の発生誘発低血圧を評価する。有意な変化は生じない。局所的注射部位反応は確認されない。

血液試料（抗凝血性：無し［血清］）を、周囲温度に少なくとも３０分間だが２時間以下維持し、凝固させる。血清を、次いで遠心分離によって分離して２つのアリコートに分割し約−７０℃で冷凍保管する。

血清グルコース濃度を、自動化Ｃｏｂａｓｃ３１１ＣｌｉｎｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙＡｎａｌｙｚｅｒ（ＲｏｃｈｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、インディアナポリス、インディアナ州）を用いて測定する。一元配置分散分析に続いて群平均比較のダネットの検定を、グルコース上でＳＡＳによるＪＭＰ９ＳｔａｔｉｓｔｉｃａｌＤｉｓｃｏｖｅｒｙによってｐ≦０．０５における有意性を有するＨｕｍａｌｏｇ対照と比較して行う。対照および試験配合物（時間０において０．２Ｕ／ｋｇ）で処置後の血清グルコース濃度（ｍｇ／ｄＬ）を、下表に示す。

インスリンプラストレプロスチニルは、Ｈｕｍａｌｏｇ単独と比較してグルコース低下反応の用量依存的なシフトを生じた。インスリンプラストレプロスチニルは、Ｈｕｍａｌｏｇ単独よりも大きい規模のベースラインからのグルコース低下も生じた。Ｈｕｍａｌｏｇ（９０分）の中間値Ｔｍａｘにおけるベースラインからの平均グルコース変化（ベースライン＝−３０および−２０分の試料の平均）は、Ｈｕｍａｌｏｇについて−１２９ｍｇ／ｄＬ、インスリンリスプロ＋１ｎｇトレプロスチニルについて−１９７ｍｇ／ｄＬ、インスリンリスプロ＋１０ｎｇトレプロスチニルについて−２３４ｍｇ／ｄＬ、およびインスリンリスプロ＋４００ｎｇトレプロスチニルについて−２３７ｍｇ／ｄＬであった。ダネット法を用いる平均グルコース比較は、４５分（ｐ＝０．０１４８）と早いＨｕｍａｌｏｇ対照としてインスリンリスプロ＋４００ｎｇトレプロスチニル試料の間の統計的に有意な差を実証する。６０分までおよび１５０分を通してインスリンリスプロ＋４００ｎｇトレプロスチニルおよびインスリンリスプロ＋１０ｎｇトレプロスチニルについてのグルコース減少は、Ｈｕｍａｌｏｇ対照と統計的に異なる。Ｈｕｍａｌｏｇ対照と比較してベースライン（−３０＆０分）またはインスリンリスプロ＋トレプロスチニルの３種の投与のいずれかでの処置後において平均収縮期または拡張期血圧における認識できるまたは統計上の（ダネットの）差は無い。

薬物動態学に関して、全ての血清ＰＫ試料に関するインスリンレベルを、総インスリン放射免疫測定（ＲＩＡ）を用いて測定する。アッセイのための定量の下限および上限は、それぞれ、２０ｐＭおよび５０００ｐＭである。定量の下限未満の値は、２０ｐＭであると仮定する。ノンコンパートメント薬物動態学的解析を、ＰｈｏｅｎｉｘＷｉｎＮｏｎｌｉｎｖ６．３を用いて実行する。

略語：Ｔｍａｘ−最大インスリン濃度までの時間、Ｃｍａｘ−最大インスリン濃度、ＡＵＣ_ＩＮＦ−０から無限大までのインスリン濃度曲線下の面積、ＣＬ／Ｆ−クリアランス／生物学的利用能。

インスリンリスプロのトレプロスチニルとの組み合わせは、Ｈｕｍａｌｏｇ単独と比較して、インスリンＰＫプロファイルにおける用量依存的シフトを生じた。中間Ｔ_ｍａｘ値は、Ｈｕｍａｌｏｇ単独、インスリンリスプロ＋トレプロスチニル１ｎｇ、インスリンリスプロ＋トレプロスチニル１０ｎｇおよびインスリンリスプロ＋トレプロスチニル４００ｎｇについてそれぞれ９０分、６０分、４５分および３０分であった。トレプロスチニルの追加も、Ｈｕｍａｌｏｇ単独と比較してインスリンＣ_ｍａｘの増加につながった。より早く、より高いＣ_ｍａｘは、増加した吸収率について予想されるであろう物と一致する。総インスリン暴露（ＡＵＣ_ＩＮＦ）は、Ｈｕｍａｌｏｇ単独と比較して、トレプロスチニルを含有する全ての３つの群について約３０％高かった。

総合すると、トレプロスチニルがインスリンリスプロと一緒に投与された場合のインスリンＰＫプロファイルおよび得られるグルコースプロファイルの両方におけるシフトは、Ｈｕｍａｌｏｇ単独に対して、トレプロスチニルがより急速なインスリン吸収を促進することを示す。時間作用における改善は、これらの動物における血圧へのいかなる認識できる影響も伴わずに達成される。
調査：Ｓ１０６１５．０５６Ｃｏｈｏｒｔ４Ｂ調査日：２０１３年１０月８、１５、２２日、および２９日

上述の調査は、インスリンリスプロを含有する配合物への少量のトレプロスチニルの追加が、インスリン薬物動態学的プロファイルにおけるより早いＴｍａｘおよびより高いＣｍａｘならびにより早くかつより大きいグルコース低下効果を生じ得ること、ならびにこうした配合物が十分に安定であることを実証する。

配列表
ヒトインスリンＡ鎖
Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gln Leu Glu Asn Tyr Cys Asn （配列番号１).

ヒトインスリンＢ鎖
Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly
Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr （配列番号２）.

インスリンリスプロＢ鎖
Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly
Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Lys Pro Thr （配列番号３）.

インスリンアスパルトＢ鎖
Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly
Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Asp Lys Thr （配列番号４）.

インスリングルリジンＢ鎖
Phe Val Lys Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly
Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Glu Thr （配列番号５）.

本発明は以下を提供する。
［１］
インスリンおよびトレプロスチニルを含む医薬組成物であって、前記トレプロスチニル濃度が、約０．０１から約３０μＭである医薬組成物。
［２］
前記インスリンが、ヒトインスリン、インスリンリスプロ、インスリンアスパルトおよびインスリングルリジンからなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
［３］
前記インスリンが、インスリンリスプロである、請求項２に記載の医薬組成物。
［４］
前記インスリン濃度が、約４０から約５００ＩＵ／ｍＬである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［５］
前記インスリン濃度が、約１００ＩＵ／ｍＬである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［６］
前記トレプロスチニル濃度が、約０．０５から約２６μＭである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［７］
１種または複数の防腐剤をさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［８］
前記１種または複数の防腐剤が、フェノール、メタ−クレゾール、およびベンジルアルコールからなる群から選択される、請求項７に記載の医薬組成物。
［９］
前記防腐剤が、メタ−クレゾールである、請求項８に記載の医薬組成物。
［１０］
前記メタ−クレゾール濃度が、約２．５ｍｇ／ｍＬから約３．８ｍｇ／ｍＬである、請求項９に記載の医薬組成物。
［１１］
前記メタ−クレゾール濃度が、約３．１５ｍｇ／ｍＬである、請求項１０に記載の医薬組成物。
［１２］
等張化剤をさらに含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［１３］
前記等張化剤が、グリセロールおよび塩化ナトリウムからなる群から選択される、請求項１２に記載の医薬組成物。
［１４］
前記等張化剤が、グリセロールである、請求項１３に記載の医薬組成物。
［１５］
前記グリセロール濃度が、約５から約２０ｍｇ／ｍＬである、請求項１４に記載の医薬組成物。
［１６］
前記グリセロール濃度が、約１６ｍｇ／ｍＬである、請求項１５に記載の医薬組成物。
［１７］
１種または複数の安定剤をさらに含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［１８］
前記１種または複数の安定剤が、亜鉛、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、およびアルギニンからなる群から選択される、請求項１７に記載の医薬組成物。
［１９］
前記安定剤が、亜鉛である、請求項１８に記載の医薬組成物。
［２０］
前記亜鉛の濃度が、約０．００５２５ｍｇ／ｍＬから約０．１３１ｍｇ／ｍＬである、請求項１９に記載の医薬組成物。
［２１］
前記亜鉛の濃度が、約０．０１９７ｍｇ／ｍＬである、請求項２０に記載の医薬組成物。
［２２］
緩衝剤をさらに含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［２３］
前記緩衝剤が、リン酸ナトリウム、ＴＲＩＳまたは酢酸ナトリウムからなる群から選択される、請求項２２に記載の医薬組成物。
［２４］
前記緩衝剤が、リン酸ナトリウムまたはＴＲＩＳのいずれかである、請求項２３に記載の医薬組成物。
［２５］
前記組成物のｐＨが、約７．０から約７．８である、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［２６］
前記組成物のｐＨが、約７．４である、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［２７］
前記インスリンがインスリンリスプロであり、前記防腐剤がメタ−クレゾールであり、前記等張化剤がグリセロールであり、前記安定剤が亜鉛でありかつ前記緩衝剤がリン酸ナトリウムまたはＴＲＩＳのいずれかである、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［２８］
ａ．前記インスリンリスプロ濃度が、約４０から約５００ＩＵ／ｍＬであり、
ｂ．前記トレプロスチニル濃度が、約０．０１から約３０μＭであり、
ｃ．前記メタ−クレゾール濃度が、約２．５から約３．８ｍｇ／ｍＬであり、
ｄ．前記グリセロール濃度が、約５から約２０ｍｇ／ｍＬであり、
ｅ．前記亜鉛濃度が、約０．００５２５から約０．１３１ｍｇ／ｍＬであり、かつ
ｆ．前記組成物のｐＨが、約７．０から約７．８である、
請求項２７に記載の医薬組成物。
［２９］
ａ．前記インスリンリスプロ濃度が、約１００ＩＵ／ｍＬであり、
ｂ．前記トレプロスチニル濃度が、約０．０５から約２６μＭであり、
ｃ．前記亜鉛濃度が、約０．０１９７ｍｇ／ｍＬであり、
ｄ．前記メタ−クレゾール濃度が、約３．１５ｍｇ／ｍＬであり、
ｅ．前記グリセロール濃度が、約１６ｍｇ／ｍＬであり、かつ
ｆ．前記組成物のｐＨが、約７．４である、
請求項２８に記載の医薬組成物。
［３０］
請求項１〜２９のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効量をそれを必要とするヒトに投与するステップを含む、糖尿病を治療する方法。
［３１］
療法において使用するための請求項１〜２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［３２］
糖尿病の治療において使用するための請求項１〜２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［３３］
請求項１〜２９に記載の医薬組成物のうちのいずれか一つを含む製造物。
［３４］
多目的バイアルである、請求項３３に記載の製造物。
［３５］
再使用可能なペン型注射器である、請求項３４に記載の製造物。
［３６］
連続的皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置である、請求項３５に記載の製造物。
［３７］
トレプロスチニルと組み合わせて使用するためのインスリン。
［３８］
インスリンと組み合わせて使用するためのトレプロスチニル。

Claims

インスリンおよびトレプロスチニルを含む医薬組成物であって、前記トレプロスチニル濃度が、約０．０１から約３０μＭである医薬組成物。
前記インスリンが、ヒトインスリン、インスリンリスプロ、インスリンアスパルトおよびインスリングルリジンからなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
前記インスリンが、インスリンリスプロである、請求項２に記載の医薬組成物。
前記インスリン濃度が、約４０から約５００ＩＵ／ｍＬである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記インスリン濃度が、約１００ＩＵ／ｍＬである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記トレプロスチニル濃度が、約０．０５から約２６μＭである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
１種または複数の防腐剤をさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記１種または複数の防腐剤が、フェノール、メタ−クレゾール、およびベンジルアルコールからなる群から選択される、請求項７に記載の医薬組成物。
前記防腐剤が、メタ−クレゾールである、請求項８に記載の医薬組成物。
前記メタ−クレゾール濃度が、約２．５ｍｇ／ｍＬから約３．８ｍｇ／ｍＬである、請求項９に記載の医薬組成物。
前記メタ−クレゾール濃度が、約３．１５ｍｇ／ｍＬである、請求項１０に記載の医薬組成物。
等張化剤をさらに含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記等張化剤が、グリセロールおよび塩化ナトリウムからなる群から選択される、請求項１２に記載の医薬組成物。
前記等張化剤が、グリセロールである、請求項１３に記載の医薬組成物。
前記グリセロール濃度が、約５から約２０ｍｇ／ｍＬである、請求項１４に記載の医薬組成物。
前記グリセロール濃度が、約１６ｍｇ／ｍＬである、請求項１５に記載の医薬組成物。
１種または複数の安定剤をさらに含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記１種または複数の安定剤が、亜鉛、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、およびアルギニンからなる群から選択される、請求項１７に記載の医薬組成物。
前記安定剤が、亜鉛である、請求項１８に記載の医薬組成物。
前記亜鉛の濃度が、約０．００５２５ｍｇ／ｍＬから約０．１３１ｍｇ／ｍＬである、請求項１９に記載の医薬組成物。
前記亜鉛の濃度が、約０．０１９７ｍｇ／ｍＬである、請求項２０に記載の医薬組成物。
緩衝剤をさらに含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記緩衝剤が、リン酸ナトリウム、ＴＲＩＳまたは酢酸ナトリウムからなる群から選択される、請求項２２に記載の医薬組成物。
前記緩衝剤が、リン酸ナトリウムまたはＴＲＩＳのいずれかである、請求項２３に記載の医薬組成物。
前記組成物のｐＨが、約７．０から約７．８である、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記組成物のｐＨが、約７．４である、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
ａ．約４０から約５００ＩＵ／ｍＬの濃度のインスリンリスプロと、
ｂ．約０．０１から約３０μＭの濃度のトレプロスチニルと、
ｃ．約２．５から約３．８ｍｇ／ｍＬの濃度のメタ−クレゾールと、
ｄ．約０．００５２５から約０．１３１ｍｇ／ｍＬの濃度の亜鉛とを含む、
医薬組成物であって、
ｅ．前記組成物のｐＨが、約７．０から約７．８である、
医薬組成物。
ａ．前記インスリンリスプロ濃度が、約１００ＩＵ／ｍＬであり、
ｂ．前記トレプロスチニル濃度が、約０．０５から約２６μＭであり、
ｃ．前記亜鉛濃度が、約０．０１９７ｍｇ／ｍＬであり、
ｄ．前記メタ−クレゾール濃度が、約３．１５ｍｇ／ｍＬであり、かつ
ｅ．前記組成物のｐＨが、約７．４である、
請求項２７に記載の医薬組成物。
療法において使用するための請求項１〜２８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
糖尿病の治療のための請求項１〜２８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
請求項１〜２８に記載の医薬組成物のうちのいずれか一つを含む製造物。
多目的バイアルである、請求項３１に記載の製造物。
再使用可能なペン型注射器である、請求項３１に記載の製造物。
連続的皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置である、請求項３１に記載の製造物。