JPH01100129A - 血漿または血漿分画の滅菌方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は血漿または、血液凝固因子■含有製剤を含めた
血漿分画の滅菌方法に関する。

（従来の技術並びに発明が解決しようとする課題）ヒト
の血漿またはこれから製造した血漿誘導体は、これらの
製剤の受血者をＢ形肝炎ウィルス、非Ａ／非Ｂ肝炎（Ｎ
ＡＮＢ）ウィルスまたはヒト免疫不全ウィルス（エイズ
ウィルス）による感染の危険性にさらす潜在的なヒト病
原ウィルスを含む。

それ故、ヒト血漿製剤に例えば加熱処理、化学薬品処理
または照射処理による有効な滅菌方法を施さなければな
らない。血液凝固因子は６０℃で１時間加熱しただけで
も破壊するので、血液凝固因子含有製剤には加熱処理は
適さない。

ヒト血漿をβ−プロピオラクトンによって処理し、この
処理に紫外線照射を組合わせる滅菌方法がログリッポ（
ＬｏＧｒＩＩ）Ｉ）ｏ）によって提案されている［ジー
、エイ、ログリッポＣＧ、Ａ。

ＬｏＧｒｌｐｐｏ）等、「血漿滅菌のための化学的方法
および他方法との組合せ方法Ｊ　　（Ｃｈｅｍｉｃａｌ
　ａｎｄＣｏａ＋ｂｌｎｅｄ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｆｏｒ
　Ｐｌａｓｍａ　５ｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　）」、
ビブル・ヘマトル、　ｌ３１ｂ１．ＩＩａｃｍａＬｏｌ
、）　、７巻（１９５ｇ）　、２２５〜２３０頁参照］
。この方法によって、関連するヒト病原ウィルス、ヒト
Ｂ型肝炎ウィルス、ヒト非Ａ／非Ｂ型肝炎ウィルス、エ
イズウィルスは、高い効率で不活化され、バクテリオフ
スージ、センダイウィルスおよび他の多くのウィルスも
、ウィルスの大きさ、ゲノムおよびエンベロープ構造に
関係なく、不活化される。ＲＮＡウィルスおよびＤＮＡ
ウィルス、脂質エンベロープを有するウィルス（脂質ウ
ィルス）または蛋白質エンベロープを有するウィルス（
ｆｆｌ白質ウィルス）−も同様に不活化される。

β−プロピオラクトン／紫外線照射法の効率は非常に高
いので、敏感な血漿蛋白質、特に血液凝固因子■（Ｆ■
）もまた活性を失う。保存血清、プロトロンビン複合体
（ＰＰ５Ｂ）またはフィブリノゲンなどの他の血漿蛋白
質に対してはこの方法はきわめて効果的に適用できるが
、β−プロピオラクトン／紫外線照射法によって第■因
子を充分な収率で滅菌することには今まで成功していな
い。

β−プロピオラクトンはＲＮＡ　（リボ核酸）またはＤ
ＮＡ　　（デオキシリボ核酸）と反応し、小程度ながら
蛋白質と反応し、さらには水との反応で分解して、β−
ヒドロキシプロピオン酸になる。

ＲＮＡまたはＤＮＡは紫外線照射により、分子内反応の
みならず分離を起こして分解する。

この場合、紫外線照射の効果は蛋白質溶液が希薄であれ
ばあるほど、また２５４１１１１における光学密度が低
ければ低いほど高くなる。

西ドイツ特許明細書第３０３３９３２号には血液凝固因
子■含有製剤の低温滅菌法が開示されている。この方法
によれば、第■因子含有蛋白質溶液は、非イオン界面活
性剤による処理、紫外線の照射、β−プロピオラクトン
による処理、およびコロイド状ケイ酸による吸着処理と
いう４段階処理を受ける。しかし、この入念な方法の場
合にも、第■囚子活性の良好な収率はまだ得られていな
い。

トランスフュージョン（Ｔｒａｎｓｌ’ｕｓ１ｏｎ　）
　２５巻、６頁（１９８５）　、５１８〜５２２頁には
他の低温滅菌法が開示されている。この方法によれば脂
質エンベロープを有するウィルス（脂質ウィルス）はト
リ−ｎ−ブチルホスフェート／コール酸ナトリウム（Ｔ
ＮＢＰ／　ＮＣ）による処理によって不活化される。こ
の方法ではＢ型肝炎ウィルス、非Ａ／非Ｂ肝炎ウィルス
、およびエイズウィルスの不活化が確認されており、第
■因子も活性の決定的な損失を受けることなく滅菌され
る。しかしこのＴＮＢＰ／　ＮＣ法はエンベロープが脂
質成分を含まないようなウィルスを不活化することはで
きない。「蛋白質ウィルス」　（例えばΦＸ１７４）は
不活化されないので、この方法は脂質ウィルスに限定さ
れる。

本発明は、血漿または、血液凝固因子■含有分画を含め
た血漿分画をβ−プロピオラクトンによる処理および／
または紫外線照射により滅菌する方法であって、一方で
は第■因子活性の収率を改良し、他方ではヒト病原性脂
質ウィルスとヒト病原性蛋白質ウィルスの両方を不活化
する方法を提供するという課題に基づいている。

（課題を解決するための手段） この課題は本発明によって、β−プロピオラクトンによ
る処理または紫外線照射に先立ってまたはこれと同時に
、トリ−ｎ−ブチルホスフェートおよびコール酸ナトリ
ウムまたはトウビーン８０等のポリオキシエチレンリソ
ルビタンΦモノステアレートによる処理を行うことによ
って解決される。

（発明の作用並びに効果） 本発明によると、β−プロピオラクトンによる処理また
は紫外線照射と、トリ−ロープチルホスフェートとコー
ル酸ナトリウムまたはトウビーン８０等のポリオキシエ
チレン・ソルビタン・モノステアレートによる処理との
組合せが、トリ−ｎ−ブチルホスフェートとコール酸ナ
トリウムまたはトウビーン８０等のポリオキシエチレン
・ソルビタン・モノステアレートのみでは蛋白質ウィル
スに対して殆んどまたは全く効果が生じないのに反して
、脂質ウィルスと蛋白質ウィルスの両方の不活化の明白
な、相乗的改良をもたらすことが、意外にも確証された
。トリ−ｎ−ブチルホスフェートとコール酸ナトリウム
またはトウビーン８０等のポリオキシエチレン・ソルビ
タン・モノステアレートによって、血漿内および血漿分
画内に存在するβ−プロピオラクトン分解活性が除去さ
れ、これによってβ−プロピオラクトンの効力が明白に
上昇することが明らかである。紫外線照射とトリ−ｎ−
ブチルホスフェートとコール酸ナトリウムまたはトウビ
ーン８０等のポリオキシエチレン・ソルビタン・モノス
テアレートによる処理との相乗効果は溶剤／界面活性剤
処理による蛋白質ウィルスおよび脂質ウィルスのある種
の不安定化に起因すると考えられる。紫外線照射との組
合せ方法は個々の工程の和よりも大きい不活化をもたら
す。さらに、本発明による組合せ滅菌方法によると、第
■因子活性が本質的に低下することはない。

（実施例） 本発明による滅菌方法は血漿すなわちヒト血液血漿およ
び血漿分画に対して実施される。血液凝固因子■含有血
漿分画として、寒冷沈降物、またはコーン（Ｃｏｈｎ）
分画Ｉを用いることができる。滅菌はｐＨ値４．５〜８
．３、好ましくはｐＨ値７．２および温度４〜３７℃、
好ましくは温度２３℃において実施する。トリ−ロープ
チルホスフェートとコール酸ナトリウムまたはトウビー
ン８０等のポリオキシエチレン・ソルビタン・モノステ
アレートによる処理は、β−プロピオラクトンによる処
理または紫外線照射に先立ってまたはこれと同時に実施
する。最初にトリ−ｎ−ブチルホスフェートとコール酸
ナトリウムまたはトウィーン８０等のポリオキシエチレ
ン・ソルビタン・モノステアレートによる処理を６０〜
９０分間実施し、次にβ−プロピオラクトンによる処理
または紫外線照射をさらに６０〜９０分間実施するのが
好ましい。この場合に、０．０５〜０．５％、好ましく
は０．３％濃度のトリ−ｎ−ブチルホスフェートと０．
０３〜０．４％、好ましくは０．２％濃度のコール酸ナ
トリウムを用いる。コール酸塩の代りにトウビーン８０
等のポリオキシエチレン・ソルビタン・モノステアレー
トを用いる場合には、これを好ましくは１％濃度で用い
る。β−プロピオラクトンは０、吋〜０．３％の濃度で
用いる。

第■因子含有血漿分画を滅菌する場合には、０、Ｏ１〜
０．２５％、好ましくは０，０５％濃度のβ−プロピオ
ラクトンを用いる。ｐＨ値は苛性ソーダの添加によって
一定に維持される。

紫外線照射は、ウィルスの確実な不活化のために充分で
あるような強度で実施する。例えば、２本の２０ワツト
の紫外線ランプ５００〜７００ＬＩＰＭを備え、１關の
層の厚さの場合に１時間にっき２０１の貫流速度である
回転貫流装置内での照射を１ＣＩ１１の距離をおいて実
施する。

次の実施例では、本発明による組合せ方法によって第■
因子の活性が本質的に低下しないこと、ならびにβ−プ
ロピオラクトンによる処理および／または紫外線照射と
トリ−ローブチルホスフェートとコール酸ナトリウムま
たはトウィーン８０等のポリオキシエチレン・ソルビタ
ン・モノステアレートによる前処理または同時処理との
組合せによる蛋白質ウィルスの不活化が、トリ−ローブ
チルホスフェートとコール酸ナトリウムまたはトウィー
ン８０等のポリオキシエチレン拳ソルビタン・モノステ
アレートのみによる処理がこのような不活化のために殆
んどまたは全く効果が無いのに反して、β−プロピオラ
クトンによる処理および／または紫外線照射のみによる
不活化に比べて明らかに上昇することが示される。

従って、トリ−ｎ−ブチルホスフェート／コール酸ナト
リウムまたはトリ−ｎ−ブチルホスフェート／トウィー
ン８０等のポリオキシエチレン・ソルビタン・モノステ
アレートはこの場合にウィルスの不活化に役立つのでは
なく、β−プロピオラクトンによる処理または紫外線照
射の効果の増大に役立つ。

本発明を次の実施例によってさらに詳細に説明する。

実施例１ 寒冷沈降物を含まないヒト血ｙ！１１００ｍｌに０．３
％トリ−〇−ブチルホスフェートと０，２％コール酸ナ
トリウムを加え、ｐＨ７，２，２３℃において６０分間
処理した。

次にβ−プロピオラクトン（０，０５％）５０μＩを加
え、血漿をｐＨ７，２，２３℃においてさらに６０分間
インキュベートした。β−プロピオラクトンの単独使用
、またはこれとＴＮＢＰとの併用の場合の第■因子活性
を測定した。血漿中の第■因子活性の中、β−プロピオ
ラクトン処理後には７８％、ＴＮＢＰ−コール酸塩処理
後には５８％、また組合せ処理後には６２％が保持され
る（非処理対照を１００％とする）。

実施例２ 血漿１００ｍ１を実施例１と同様にトリ−ローブチルホ
スフェート／コール酸ナトリウムによって前処理し、続
いて０．２５％β−プロピオラクトンによって滅菌した
。予め加えたバクテリオファージΦＸ　１７４の不活化
をＴＮＢＰ−コール酸塩で前処理しなかった血漿に比べ
て評価した。ＴＮＢＰ−コール酸塩で前処理しなかった
β−プロピオラクトン滅菌血漿に比べて約７２０００倍
のΦ×１７４不活化の増大が認められた。

実施例３ ０．１５Ｍグリシンに溶解した寒冷沈降物（第■因子）
　１００　ｍｌにβ−プロピオラクトン（０，０５％）
５０ｕ　１を加え、ｐＨ１７，２，２３℃にお１．’で
９０分間インキュベートした。

予め加えたバクテリオファージΦ×１７４の不活化を評
価した。ＴＮＢＰ−コール酸塩とβ−プロピオラクトン
との組合せによると、β−プロピオラクトン処理のみに
比べて不活化のほぼ２０倍の増大が達成される。

実施例４ ０．１５Ｍ　ＮａＣｊに溶解した第■因子濃縮物１００
ｍ１に０６３％トリ−〇−ブチルホスフェートと０．２
％コール酸ナトリウムとを加え、ｐＨ７，２，２３℃に
おいて６０分間インキュベートした。続いてβ−プロピ
オラクトン（０，０５％）　５０μｌを加え、この溶液
をｐＨ７，２，２３℃において９０分間インキュベート
した。次の表１はトリ−ｎ−ブチルホスフェート／コー
ル酸ナトリウムにより予めインキュベートした後にβ−
プロピオラクトンで処理した場合の第■因子活性の収率
を示す。第■因子活性はほぼ完全に保持される。

実施例５ 血漿および第■囚子濃縮物のそれぞれ１００ｍ１にバク
テリオファージΦＸ　１７４を加え、トリ−ｎ−ブチル
ホスフェート／コール酸ナトリウム（ＴＮＢＰ／　ＮＣ
）による前処理をした場合としながった場合についてβ
−プロピオラクトン（０，０５％）による滅菌を行った
。結果は次の表１に示す。

バクテリオファージΦＸ１７４は脂質エンベロープを有
さず、予想どおりＴＮＢＰ／　ＮＣによって不活化され
ない。しかし、ＴＮＢＰ／ＮＣによる前処理を施すとβ
−プロピオラクトンの殺ウイルス作用の明白な増大が観
察される。

表　　１ ＴＮＢＰ／　ＮＣ，β−ＰＬ及びβ−ＰＬ／　ＴＮＢＰ
／　ＮＧによるΦＸ１７４の不活化 ・Ｘ１７４の　　　　　　効力の　　　Ｆ■の＊　　　
０．２％〜０．３％ 実施例６ 第■囚子濃縮物１００ｍ１ずつバクテリオファージカッ
パ（Ｋａｐｐａ　）を加え、これを０．３％トリ−ｎ−
ブチルホスフェートと１％トウイーン８０により前処理
し、または前処理しないままで、紫外線照射した（２０
ワット管２本）。ＴＮＢＰ／　トウイーン８０によって
前処理しないサンプルを紫外線照射後に、ＴＮＢＰ／　
トウイーン８０によって処理した。結果は表２に示す。

表　　２ カッパの　　　　第■囚子 ＴＮＢＰ／　）ウィーン８０による処理に続いて紫外線
照射した場合（Ｉｏｇ５．４）は蛋白質ウィルスカッパ
の不活化において、紫外線照射のみの場合（ｌｏｇ３．
６）に比べて約６０倍有効である。ＴＮＢＰ／トウィー
ン８０のみでは殆んど効果がない。

特許出願人　　ビオテスト　ファルマ ゲゼルシャフト　ミツト ベシュレンクター　ハフツング 、　第１頁の続き ０発　明　者　　ヴオルフガング　ステ　　トイファン
　　　　　　　　　ブー 〇発明者　　　ハンス　シュロイステ　　トイツ連邦共
和国　デー−６０７２ドライアイヒ　フイリツホルツマ
ンーストラーセ　８４ ソ連邦共和国　デー−６０００フランクフルト／エムナ
ンセンリンヨ　２６

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、血漿または、血液凝固因子VIII含有分画を含めた血
   漿分画をβ−プロピオラクトンによる処理または紫外線
   照射により滅菌する方法において、該β−プロピオラク
   トンによる処理または紫外線照射に先立ってまたはこれ
   と同時に、トリ−ｎ−ブチルホスフェートとコール酸ナ
   トリウムまたはトウィーン（Ｔｗｅｅｎ）８０等のポリ
   オキシエチレン・ゾルビタン・モノステアレートによる
   処理を実施することを特徴とする血漿または血漿分画の
   滅菌方法。 ２、４．５〜８．３のｐＨ値および４〜３７℃の温度に
   おいて滅菌を実施することを特徴とする請求項１記載の
   方法。 ３、０．０５〜０．５％の濃度のトリ−ｎ−ブチルホス
   フェートおよび０．０３〜０．４％の濃度のコール酸ナ
   トリウムを用いることを特徴とする請求項１または２に
   記載の方法。 ４、０．３％濃度のトリ−ｎ−ブチルホスフェートと０
   ．２％濃度のコール酸ナトリウムを用いることを特徴と
   する請求項１乃至３のいずれか１項に記載の方法。 ５、０．３％濃度のトリ−ｎ−ブチルホスフェートおよ
   び０．１５〜２％濃度のトウィーン８０を用いることを
   特徴とする請求項１乃至３のいずれか１項に記載の方法
   。 ６、０．０１〜０．３％濃度のβ−プロピオラクトンを
   用いることを特徴とする請求項１乃至５のいずれか１項
   に記載の方法。 ７、７．２のｐＨ値および２３℃の温度において滅菌を
   実施することを特徴とする請求項１乃至６のいずれか１
   項に記載の方法。 ８、血液凝固因子VIII含有製剤の滅菌に０．０１〜０．
   ２５％濃度のβ−プロピオラクトンを用いることを特徴
   とする請求項１乃至７のいずれか１項に記載の方法。 ９、０．０５％濃度のβ−プロピオラクトンを用いるこ
   とを特徴とする請求項１乃至８のいずれか１項に記載の
   方法。 １０、好ましくは２５４ｍｍの紫外線による照射を特徴
   とする請求項１乃至９のいずれか１項に記載の方法。